特許 5652078 新規４−ビニルカテコール重合化合物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5652078

(24)【登録日】2014年11月28日

(45)【発行日】2015年1月14日

(54)【発明の名称】新規４−ビニルカテコール重合化合物

(51)【国際特許分類】

   C07C 39/21 20060101AFI20141218BHJP

   A61K 31/05 20060101ALI20141218BHJP

   A61K 8/34 20060101ALI20141218BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20141218BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20141218BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20141218BHJP

   A61Q 19/10 20060101ALI20141218BHJP

   C07C 37/11 20060101ALI20141218BHJP

   A23L 1/30 20060101ALI20141218BHJP

【ＦＩ】

   C07C39/21CSP

   A61K31/05

   A61K8/34

   A61P3/04

   A61P17/00

   A61P35/00

   A61Q19/10

   C07C37/11

   A23L1/30 Z

【請求項の数】7

【全頁数】16

(21)【出願番号】特願2010-209701(P2010-209701)

(22)【出願日】2010年9月17日

(65)【公開番号】特開2012-62293(P2012-62293A)

(43)【公開日】2012年3月29日

【審査請求日】2013年9月9日

(73)【特許権者】

【識別番号】390020189

【氏名又は名称】ユーハ味覚糖株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100074561

【弁理士】

【氏名又は名称】柳野 隆生

(74)【代理人】

【識別番号】100124925

【弁理士】

【氏名又は名称】森岡 則夫

(74)【代理人】

【識別番号】100141874

【弁理士】

【氏名又は名称】関口 久由

(72)【発明者】

【氏名】來住 明宣

(72)【発明者】

【氏名】松川 泰治

(72)【発明者】

【氏名】土井 聡

(72)【発明者】

【氏名】野島 正朋

(72)【発明者】

【氏名】松居 雄毅

(72)【発明者】

【氏名】山田 泰正

(72)【発明者】

【氏名】山田 一郎

【審査官】 高橋 直子

(56)【参考文献】

【文献】 欧州特許出願公開第１３７１３６８（ＥＰ，Ａ１）

【文献】 韓国公開特許第１０−２００９−００８９１８７（ＫＲ，Ａ）

【文献】 中国特許出願公開第１８５３６１８（ＣＮ，Ａ）

【文献】 Bull. Soc. Chim. Fr.，１９９６年，133，1005−1010

【文献】 Tetrahedron Letters，２０００年，41，1535−1538

【文献】 Chem. Pharm. Bull. ，２００５年，53（9），1204−1206

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｃ ３９／２１

Ａ２３Ｌ １／３０

Ａ６１Ｋ ８／３４

Ａ６１Ｋ ３１／０５

Ａ６１Ｐ ３／０４

Ａ６１Ｐ １７／００

Ａ６１Ｐ ３５／００

Ａ６１Ｑ １９／１０

Ｃ０７Ｃ ３７／１１

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記式（１）で表される新規４−ビニルカテコール重合化合物又はその薬学的に許容可能な塩。

【化1】

【請求項2】

請求項１記載の新規４−ビニルカテコール重合化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有するリパーゼ阻害剤。

【請求項3】

請求項１記載の新規４−ビニルカテコール重合化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有する抗肥満剤。

【請求項4】

請求項１記載の新規４−ビニルカテコール重合化合物又はその薬学的に許容可能な塩からなる皮膚疾患治療剤。

【請求項5】

請求項１記載の新規４−ビニルカテコール重合化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有する抗癌剤。

【請求項6】

請求項１に記載の新規４−ビニルカテコール重合化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とする食品、医薬品又は化粧品。

【請求項7】

カフェ酸を金属塩存在下で加熱処理することにより下記式（１）で表される新規４−ビニルカテコール重合化合物を生成させることを特徴とする、式（１）で表される新規４−ビニルカテコール重合化合物の製造方法。

【化2】

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、抗癌活性を有する新規４−ビニルカテコール重合化合物及びその製造方法、前記新規４−ビニルカテコール重合化合物を含むリパーゼ阻害剤、抗肥満剤、皮膚疾患治療剤、抗癌剤、食品、医薬品、又は化粧品に関するものである。

【背景技術】

【0002】

カフェ酸は植物の二次代謝産物の一つであり、例えば樹木の主成分であるリグニンやリグナンの前駆体となるほか、クロロゲン酸やロズマリン酸などの機能性成分の前駆体にもなっており、天然界に比較的多く存在する成分である。クロロゲン酸としてコーヒー豆などに、ロズマリン酸としてシソ科の植物に多く含まれている。また、カフェ酸としては、多くの果物の果実や果皮に含まれている。これらは全て食経験があり人に対する安全性も高い成分である。カフェ酸の有用性や、有用なカフェ酸誘導体等の開示があるが、カフェ酸から４−ビニルカテコール重合化合物を生成させる製造方法は見出されていない。

【0003】

カフェ酸の生理機能に関連した先行技術がある。例えば、カフェ酸とフェルラ酸からなる高血圧予防・治療剤（特許文献１）、カフェ酸を有効成分とする自律神経機能向上剤（特許文献２）、カフェ酸を有効成分とする血管内皮機能改善剤（特許文献３）、カフェ酸を有効成分とする血液流動性改善剤（特許文献４）、カフェ酸を有効成分とする大脳疲労回復剤（特許文献５）、カフェ酸を有効成分とする二次胆汁酸低下剤（特許文献６）が知られている。

【0004】

また、カフェ酸誘導体に関連した先行技術がある。例えば、カフェ酸アミド誘導体を有効成分とする化粧料用又は皮膚外用剤用組成物（特許文献７）、カフェ酸の糖転移物を有効成分とする抗微生物剤（特許文献８）、カフェ酸誘導体を有効成分とする神経突起伸長剤（特許文献９）、カフェ酸のセロトニンアミドやその配糖体を有効成分とする血行動態改善剤（特許文献１０）、カフェオイルキナ酸を有効成分とするアルツハイマー病予防又は治療剤（特許文献１１）、プロポリス中の微量成分であるカフェ酸フェネチルエステルを効率的に製造する方法（特許文献１２）、桂皮酸誘導体の酵素合成法（特許文献１３）、２−カフェ酸シクロヘキサエステル等のカフェ酸誘導体を有効成分とする抗がん剤（特許文献１４）、カフェ酸等を原料の一つとして酵素合成におり得た新規ポリフェノール化合物（特許文献１５）が知られている。

【0005】

このようにカフェ酸、そしてカフェ酸誘導体は優れた有用性を示すものが多いことから、原料やリード化合物としてのカフェ酸を効率的に製造する技術開示もなされている。例えば、コーヒー粕から製造する方法（特許文献１６）、ゴボウ葉からの製造方法（特許文献１７）、甘しょ焼酎蒸留粕からの製造方法（特許文献１８）が知られている。

【0006】

すなわち、原料としてのカフェ酸の価値の高さから、効率的なカフェ酸の製造方法は進歩しており、このような現状ではカフェ酸を用いた更なる新規素材の開発やカフェ酸を用いた素材の更なる用途拡大が望まれている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0007】

【特許文献1】特許第３５４８１０２号公報

【特許文献2】特許第４０７７１４９号公報

【特許文献3】特開２００３−２６１４４４号公報

【特許文献4】特開２００４−１６８７４９号公報

【特許文献5】特開２００７−２９７３０４号公報

【特許文献6】特開２００９−２２７６０９号公報

【特許文献7】特許第３９３４９３７号公報

【特許文献8】特開２００４−３１５３８６号公報

【特許文献9】特開２００７−２３０９４６号公報

【特許文献10】国際公開第２００７／０３２５５１号パンフレット

【特許文献11】国際公開第２００７／０９１６１３号パンフレット

【特許文献12】特開２０１０−１５８２２３号公報

【特許文献13】特開２００９−２０７４９２号公報

【特許文献14】特開２０１０−１８０１６７号公報

【特許文献15】国際公開第２０１０／０３８８４２号パンフレット

【特許文献16】特開２００９−２０１４７３号公報

【特許文献17】特許第４３５５７９７号公報

【特許文献18】特許第４３３６７４６号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

本発明者らはカフェ酸や該化合物を用いた有用化合物に関する前記の状況を鑑みて、新規な生理活性を有するカフェ酸関連化合物の探索と、その製造方法を確立すべく鋭意検討した結果、驚くべきことにカフェ酸を金属塩存在下で加熱処理することのみで、原料であるカフェ酸には認められない優れたリパーゼ阻害活性、抗癌活性を有する新規４−ビニルカテコール重合化合物を生成させることを初めて見出し、本発明を完成するに至った。

【0009】

したがって、本発明は、新規な４−ビニルカテコール重合化合物を提供し、さらに新規化合物を、効率よく、安全に生成する方法を提供することを目的とする。
また、この新規４−ビニルカテコール重合化合物は、極めて優れたリパーゼ阻害活性、抗癌活性を有することから、本発明は、前記新規化合物を有効成分として含有するリパーゼ阻害剤、抗肥満剤、皮膚疾患治療剤及び抗癌剤、さらには前記前記式（１）で示した新規４−ビニルカテコール重合化合物を含有する食品、医薬品、又は化粧品を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0010】

本発明の要旨は、
〔１〕下記式（１）で表される新規４−ビニルカテコール重合化合物又はその薬学的に許容可能な塩、

【0011】

【化1】

【0012】

〔２〕前記〔１〕記載の新規４−ビニルカテコール重合化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有するリパーゼ阻害剤、
〔３〕前記〔１〕記載の新規４−ビニルカテコール重合化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有する抗肥満剤、
〔４〕前記〔１〕記載の新規４−ビニルカテコール重合化合物又はその薬学的に許容可能な塩からなる皮膚疾患治療剤、
〔５〕前記〔１〕記載の新規４−ビニルカテコール重合化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有する抗癌剤、
〔６〕前記〔１〕記載の新規４−ビニルカテコール重合化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とする食品、医薬品又は化粧品、
〔７〕カフェ酸を金属塩存在下で加熱処理することにより前記式（１）で表される新規４−ビニルカテコール重合化合物を生成させることを特徴とする、式（１）で表される新規４−ビニルカテコール重合化合物の製造方法、
に関する。

【発明の効果】

【0013】

本発明により、前記のように生理活性に優れた新規な４−ビニルカテコール重合化合物及びその製造方法を提供することができる。また、本発明により原料のカフェ酸が持たないリパーゼ阻害活性、抗癌活性を有することから優れた抗肥満剤、皮膚疾患治療剤及び抗癌剤を提供することができる。
本発明の新規４−ビニルカテコール重合化合物は、前記のような生理活性に優れることに加えて、安全性にも優れることから、食品、医薬品、又は、化粧品に配合することができる。

【図面の簡単な説明】

【0014】

【図1】図１は、実施例１で行ったＨＰＬＣの分析結果を示す。上図が反応前、中図が1回目の反応、下図が２回目の反応の結果であり、「Ｂ」が新規４−ビニルカテコール重合化合物のピークを示す。

【図2】図２は実施例４の細胞増殖抑制試験より得られた結果を示すグラフである。 図２の縦軸は細胞生存率を、横軸は各試料の濃度を示している。

【発明を実施するための形態】

【0015】

以下、本発明について詳細に説明する。

【0016】

本発明の４−ビニルカテコール重合化合物は、式（１）：

【0017】

【化2】

【0018】

で表される構造式を有する。

【0019】

また、本発明では、前記式（１）で表される新規４−ビニルカテコール重合化合物（以下、本発明の新規４−ビニルカテコール重合化合物ともいう）は、薬学的に許容可能な塩でもよい。薬学的に許容可能な塩としては、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；マグネシウム塩、カルシウム塩、バリウム塩等のアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩；アルミニウムヒドロキシド塩等の金属ヒドロキシド塩；アルキルアミン塩、ジアルキルアミン塩、トリアルキルアミン塩、アルキレンジアミン塩、シクロアルキルアミン塩、アリールアミン塩、アラルキルアミン塩、複素環式アミン塩等のアミン塩；α−アミノ酸塩、ω−アミノ酸塩等のアミノ酸塩；ペプチド塩又はそれらから誘導される第１級、第２級、第３級若しくは第４級アミン塩等が挙げられる。これらの薬理的に許容し得る塩は、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。

【0020】

本発明の新規４−ビニルカテコール重合化合物は、カフェ酸を含有する組成物を、金属塩存在下で加熱処理することで生成することができる。

【0021】

前記金属塩としては、酸性塩、塩基性塩、正塩のいずれでもよく、また、単塩、複塩、錯塩のいずれでもよい。さらに、金属塩は１種類であっても、複数種類の混合物であってもよい。金属塩の例としては、食品添加物として認可されているものが安全性の面で好ましい。例えば、食品に添加することが認められているマグネシウム塩、カルシウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、亜鉛塩、銅塩などが挙げられる。

【0022】

また、前記金属塩の混合物としては、例えば、ミネラルプレミックス（田辺製薬株式会社、グルコン酸亜鉛、クエン酸鉄アンモニウム、乳酸カルシウム、グルコン酸銅、リン酸マグネシウムを主成分としたミネラル混合物）のように金属塩を数種類含む物質が挙げられる。また、複数の金属塩を含む混合物として、ミネラルウォーターも挙げることができる。

【0023】

本発明の新規４−ビニルカテコール重合化合物は、カフェ酸以外の原料を用いて化学合成することも可能ではあるが、その場合には反応工程が複雑であり有害な試薬や工程を必要とする。また、不純物を除去するという安全性の観点から精製を徹底する必要もあり、工業的には不向きな方法である。これに対して、前記の本発明の新規４−ビニルカテコール重合化合物の製造方法は、安価で入手できるカフェ酸を金属塩存在下で加熱処理する工程を有するものであり、有害な試薬や、危険な工程を必要としない効率的で安全な製造方法である。

【0024】

本発明の新規４−ビニルカテコール重合化合物の前駆体としてカフェ酸が必要である。カフェ酸は、天然由来のものであっても、化学合成された純度の高い化成品であっても良い。天然由来のカフェ酸を用いる場合は、完全に精製されたものである必要はなく、その後の所望の反応が進み最終的に新規化合物が得られるから、混合物であっても問題ない。ただし、回収量の観点からは、カフェ酸が５重量％以上含有された混合物が原料として望ましい。このような原料としては、様々な果実やジュース、濃縮果汁、又は、破棄されることの多い果皮の抽出物、あるいは先行技術に示されるような微生物発酵によるカフェ酸含有培養液や酵素反応後のカフェ酸含有溶液等が挙げられる。

【0025】

カフェ酸の純品、あるいはカフェ酸含有混合物を、適切な溶媒に溶解させる。この際、溶媒が水のみであればカフェ酸の溶解度が著しく低いために、水と有機溶媒の混液や、有機溶媒のみに溶解させればよい。水と有機溶媒の配合比や、有機溶媒の種類に特に制限はなく、カフェ酸が十分に溶解すれば良い。望ましくは、メタノールやエタノールのみか、水とメタノール、水とエタノールの混液を使用することが、安全性やコスト面から望ましい。最終的な精製を十分に適用せずに食品に使用する場合には、安全性や法規面からエタノールや含水エタノールの使用が望ましい。

【0026】

本発明において、金属塩を含有したカフェ酸含有溶液を加熱する。所望の反応を効率的に進ませるために、加熱温度は９０℃以上が必要である。溶媒の沸点から考え、加圧加温が望ましい。開放容器にカフェ酸含有溶液を入れ高温で容器を加温する、密閉容器にカフェ酸含有溶液を入れ加温する、レトルト装置やオートクレーブを用いて加圧加温する等、少なくとも部分的に溶液温度が９０℃以上に達することが必要である。回収効率面から、溶液温度が均一に９０℃〜１５０℃になることが、さらに好ましい。加熱時間も加熱温度と同様に限られたものではなく、効率的に目的の反応が進行する時間条件とすればよい。特に、加熱時間は加熱温度との兼ね合いによるものであり、加熱温度に応じた加熱時間にすることが望ましい。例えば、１３０℃付近で加熱する場合は、５分〜３００分の加熱時間が望ましい。また、加熱反応は、一度でも良いし、複数回に分けて繰り返し加熱しても良い。効率面から判断すればよい。

【0027】

また、本発明では、前記金属塩を含有したカフェ酸含有溶液のｐＨは、９未満の範囲に調整することが好ましい。４−ビニルカテコールのオリゴマーは、もともとｐＨが４．９〜６．５付近では非常に不安定であることが知られている（Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．２０１０， ５８， ３７２０−３７２８）。しかしながら、本発明では、金属塩存在下で加熱することにより、ｐＨが４．９〜６．５付近の範囲としても安定して新規４−ビニルカテコール重合化合物又は薬学的に許容可能な塩を製造することができる。

【0028】

前記の金属塩存在下で加熱処理することでカフェ酸同士が反応し、４−ビニルカテコールが生成され、さらに反応が進み、前記式（１）で表される新規４−ビニルカテコール重合化合物を含有した混合物が得られると考えられる。安全な原料のみを用いた工程で得られた場合には、混合物の状態で使用することが可能である。例えば、天然由来のカフェ酸を含水エタノール溶媒に溶解し、ミネラルミックスやミネラルウォーターを加え、加熱反応させた場合には、混合物として食品原料の一つとして使用が可能である。

【0029】

風味面での改良やさらなる高機能化を望む場合は、本発明の新規４−ビニルカテコール重合化合物を濃縮して濃度を高める、あるいは精製し純品を得ることができる。濃縮、精製は、公知の方法で実施可能である。例えば、クロロホルム、酢酸エチル、エタノール、メタノール等の溶媒抽出法や炭酸ガスによる超臨界抽出法等で抽出して濃縮できる。カラムクロマトグラフィーを利用して濃縮や精製を施すことも可能である。再結晶法や限外ろ過膜等の膜処理法も適用可能である。最後に減圧乾燥や凍結乾燥により溶媒除去すると、粉末状の本発明の新規４−ビニルカテコール重合化合物の純品を得ることができる。

【0030】

本発明の新規４−ビニルカテコール重合化合物は、後述のように、優れたリパーゼ阻害活性、抗癌活性を有する。

【0031】

ここで、従来から、からだの脂肪組織及び種々の臓器に異常な脂肪沈着を来し、その結果起こる肥満、あるいは血清脂質が異常に高い症状を示す高脂血症は、高血圧、動脈硬化、糖尿病などの各種生活習慣病の発症に密接に関与していることがわかっている。例えば、ヒトが食べた食餌中の脂肪は、膵臓のリパーゼで分解されて小腸から体内に吸収されるため、リパーゼ阻害剤を用て、肥満を防止したり、高脂血症状を改善したり、ニキビ等の皮膚疾患を治療することが可能とされており、その相関性も確認されている（例えば、特許第３６８９０９９号公報、特許第３８２６６９８号公報）。
したがって、本発明の新規４−ビニルカテコール重合化合物又は薬学的に許容可能な塩を有効成分として含有する抗肥満剤、皮膚疾患治療剤及び抗癌剤として使用することができる。また、前記抗肥満剤、皮膚疾患治療剤及び抗癌剤では、他の有効成分を含有しても良い。

【0032】

また、本発明の新規４−ビニルカテコール重合化合物は、前記抗肥満効果、皮膚疾患治療効果及び抗癌効果を目的として、液状、ペースト状、ゲル状、及び固形状の食品、医薬品又は、化粧品等として使用することができる。

【0033】

例えば、食品の場合には、水、アルコール、澱粉質、蛋白質、繊維質、糖質、脂質、ビタミン、ミネラル、着香料、着色料、甘味料、調味料、安定剤、防腐剤のような食品に通常配合される原料又は素材と組み合わせて、また医薬品の場合には、担体、賦形剤、希釈剤、安定剤と組み合わせて、本発明の新規４−ビニルカテコール重合化合物を使用することが出来る。特に、本発明の新規４−ビニルカテコール重合化合物の有する生理活性分野を考慮すると、抗肥満効果によるメタボリックシンドロームなどの生活習慣病の予防、癌予防・癌治療等の健康維持増進、さらには疾病治癒分野において用いることが好ましい。また、ニキビ治療や予防を目的とした美容分野における化粧品などで用いることが望ましい。

【0034】

本発明の新規４−ビニルカテコール重合化合物が持つさらなる効果効能は、得られた生理活性データより類推できる範囲で使用できる。

【0035】

本発明の新規４−ビニルカテコール重合化合物を医薬用途で使用する場合、例えば、本発明の新規４−ビニルカテコール重合化合物の摂取量は、所望の改善、治療又は予防効果が得られるような量であれば特に制限されず、通常その態様、患者の年齢、性別、体質その他の条件、疾患の種類並びにその程度等に応じて適宜選択される。１日当たり約０．１ｍｇ〜１，０００ｍｇ程度とするのがよく、これを１日に１〜４回に分けて摂取することができる。

【0036】

本発明の新規４−ビニルカテコール重合化合物は、機能性食品、健康食品、健康志向食品等の食品に使用することができる。食品の形態としては、例えば、飲料、アルコール飲料、ゼリー、菓子等、どのような形態でもよく、例えば、菓子類の中でも、その容量等から保存や携帯に優れた、ハードキャンディ、ソフトキャンディ、グミキャンディ、タブレット等が挙げられるが、特に限定はない。

【0037】

また、本発明の新規４−ビニルカテコール重合化合物を医薬品又は食品として経口から投与又は摂取する場合には、常法に基づいて、錠剤、丸剤、カプセル剤、細粒剤、顆粒剤等としてもよい。錠剤、丸剤、顆粒剤、顆粒を含有するカプセル剤の顆粒は、必要により、ショ糖等の糖類、マルチトール等の糖アルコールで糖衣を施したり、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等でコーティングを施したりすることもできる。又は胃溶性もしくは腸溶性物質のフィルムで被覆してもよい。また、製剤の溶解性を向上させるために、公知の可溶化処理を施すこともできる。常法に基づいて、注射剤、点滴剤に配合して使用してもよい。

【0038】

前記化粧品としては、ローション、乳液、クリーム、パック剤、仕上げ化粧品、頭髪用化粧品、洗顔剤、浴剤、制汗剤等が挙げられる。これらの化粧品では、リパーゼ阻害効果からニキビ治癒に特に効果が期待され、ニキビ予防・治癒等の目的で利用することができる。

【0039】

前記の医薬品又は食品は、安全性に優れたものであるので、ヒトに対してだけでなく、例えば、非ヒト動物、例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジー等の哺乳類、鳥類、両生類、爬虫類等の治療剤又は飼料に配合してもよい。

【0040】

次に、本発明を実施例に基づいて詳細に説明するが、本発明はかかる実施例にのみ限定されるものではない。

【実施例】

【0041】

（実施例１：新規４−ビニルカテコール重合化合物の生成）
カフェ酸（和光純薬工業（株）製）１ｇをエタノール２０ｍｌに溶解し、ミネラルウォーター（商品名「ゲロルシュタイナー」サッポロ飲料（株）製）２０ｍｌを加えた混合液（ｐＨ５．０）をオートクレーブ（商品名「ＳＡＮＹＯ ＬＡＢＯ ＡＵＴＯＣＬＡＶＥ」、三洋電機（株）製）にて１３０℃、４０分間加熱した（１度目の加熱処理）。得られた反応後組成物１ｍｌをメタノールにて５０ｍｌにメスアップし、このうちの１０μｌをＨＰＬＣにより分析した。
さらに、エタノール１０ｍｌ、ミネラルウォーター１０ｍｌを加え（ｐＨ５．４）、再度オートクレーブにて１３０℃、４０分間加熱し（２度目の加熱処理）、同様に希釈後、ＨＰＬＣ分析した。
ＨＰＬＣ分析は以下条件にて行った。
カラム：逆相用カラム「Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ（登録商標）Ｃ−３０−ＵＧ−５」（４．６ｍｍｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）
移動相：Ａ・・・Ｈ₂Ｏ（０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ））， Ｂ・・・アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ
注入：１０μｌ
検出：２５４ｎｍ
勾配（容量％）：８０％Ａ／２０％Ｂから２０％Ａ／８０％Ｂまで３０分間、２０％Ａ／８０％Ｂから１００％Ｂまで５分間、１００％Ｂで１０分間（全て直線）

【0042】

得られたクロマトグラムを図１に示す。上からカフェ酸、１度目の加熱、２度目の加熱のクロマトグラムを示している。上図ではカフェ酸のピークが示されている。次いで、１度目の加熱でＡのピーク（中図）で示された４−ビニルカテコールが増大し、さらに、２度目の加熱で、カフェ酸、とＡのピークが減少し、増大したピークがいくつか確認されたことから、複数の化合物が生成されていることが確認された。中でも、Ｂのピークで示された化合物は、カフェ酸から、４−ビニルカテコールを経て、生成されていることがわかる。

【0043】

（実施例２：新規４−ビニルカテコール重合化合物の単離・構造決定）
実施例１で得られた反応物のうち、図１のＢで示したピークに含まれる化合物を分取ＨＰＬＣにより単離し、常法により乾燥したところ新規化合物（以下ＵＨＡ６００６）を１０ｍｇ得た。単離精製したＵＨＡ６００６は、褐色粉末状物質となった。

【0044】

次いで、前記ＵＨＡ６００６の分子量を高分解能電子イオン化質量分析法（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ−Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）にて測定したところ、測定値は４０８．４４４０であり、理論値との比較から、以下の分子式を得た。
理論値Ｃ２４Ｈ２４Ｏ６（Ｍ⁺） ： ４０８．４４３８
分子式Ｃ₂₄Ｈ₂₄Ｏ₆

【0045】

次に、前記ＵＨＡ６００６を核磁気共鳴（ＮＭＲ）測定に供し、１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ及び各種２次元ＮＭＲデータの解析から、前記ＵＨＡ６００６が式（１）で表される構造を有することを確認した。式（１）で表される４−ビニルカテコール重合化合物は本発明の方法で効率的に生成できることが示された。

【0046】

なお、ＮＭＲ測定値について、式（１）で表されるＵＨＡ６００６の各部位を

【0047】

【化3】

【0048】

として、それぞれの¹Ｈ核磁気共鳴スペクトル、¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトルをそれぞれ表１に示す。
値はδ、ｐｐｍで、溶媒はメタノール−ｄ３で測定した値である。

【0049】

【表1】

【0050】

また、前記ＵＨＡ６００６の物理化学的性状は、以下のようになった。
（性状）
褐色粉末
（溶解性）
水： 不溶
メタノール： 可溶
エタノール： 可溶
ＤＭＳＯ： 可溶
クロロホルム： 可溶
酢酸エチル： 可溶

【0051】

（実施例３：ＵＨＡ６００６のリパーゼ阻害作用）
リパーゼに対する各化合物の阻害作用を見るため、ラット腸由来リパーゼを用いての阻害作用試験を行った。
リパーゼは、ラット腸アセトンパウダー（シグマアルドリッチジャパン（株）製）１００ｍｇを１００ｍＭクエン酸バッファー（ｐＨ６．０）１ｍｌに懸濁して４℃で１時間撹拌し、これを遠心分離（１５０００ｒｐｍ、４５分間、４℃）した上清を４００倍希釈したものをリパーゼ溶液として使用した。
試料は、カフェ酸（和光純薬工業（株）製）と、本発明品であるＵＨＡ６００６、従来よりリパーゼ阻害作用が高いとされる緑茶成分のエピガロカテキンガレート（ＥＧＣｇ、和光純薬工業（株）製）の３種類を用いた。試料調製については、各々の化合物をＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド、和光純薬工業（株）製）にて溶解し、０．１ｍＭ、０．５ｍＭ、１ｍＭ、２ｍＭ、４ｍＭに調製したものを使用した。
活性測定には「リパーゼキットＳ」（商品名、大日本製薬（株）製）を使用した。まず、リパーゼキットＳのカタログに記載の調製法に従い発色液を調製した。発色液を７０μｌ、エステラーゼ阻害剤を２μｌ、リパーゼ溶液を１０μｌ、試料を１０μｌ（終濃度１０μＭ、５０μＭ、１００μＭ、２００μＭ、４００μＭ）混合した反応液を調製し、３０℃で５分間プレインキュベートした後に基質溶液を８μｌ添加して反応を開始した。１０分間の反応後、リパーゼキットＳのカタログに記載の調製法に従い調製した反応停止液を１５０μｌ添加して反応を停止した。これを測定波長４１５ｎｍの吸光度測定をおこなった。試料の溶媒であるＤＭＳＯのみを添加した反応液をポジティブコントロールとし、リパーゼ溶液の代わりに１００ｍＭクエン酸バッファー（ｐＨ６．０）１０μｌを添加したものをネガティブコントロールとした。これらから得られたデータを基に算出したリパーゼ阻害率と各化合物濃度の関係から、リパーゼ活性を５０％阻害する濃度ＩＣ₅₀（５０％阻害濃度：ｈａｌｆ ｍａｘｉｍａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）を算出した（表２）。これらの結果からＵＨＡ６００６には高いリパーゼ阻害活性が認められた。この効果はカフェ酸では認められず、エピガロカテキンガレートと比べても２倍程度高い活性を有していることからカフェ酸を４−ビニルカテコール重合化合物に変換する有意性が強く示唆された。

【0052】

したがって、ＵＨＡ６００６は優れたリパーゼ阻害作用を奏することから、抗肥満剤として、さらにはメタボリックシンドローム予防剤として有用であると考えられる。また、皮膚におけるリパーゼ阻害はニキビ予防・治癒に有効であるから、ニキビ予防・治癒などの皮膚疾患治療剤としても有用であると考えられる。

【0053】

【表2】

【0054】

（実施例４：ＵＨＡ６００６の抗癌作用）
次に癌細胞に対する各化合物の効果を見るため、ＨＬ−６０細胞（Ｈｕｍａｎ ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ ｌｅｏｋｅｍｉａ ｃｅｌｌｓ：ヒト骨髄球性白血病細胞）を用いた癌細胞増殖抑制作用について試験した。

【0055】

ＨＬ−６０細胞の培養には、４ｍＭグルタミン（Ｌ−Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ、シグマアルドリッチジャパン（株）製）、１０％ＦＢＳ（Ｆｏｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ、バイオロジカルインダストリーズ社製）を含む高栄養培地ＲＰＭＩ−１６９０（シグマアルドリッチジャパン（株）製）を使用した。試験には細胞培養用９６ウェルプレート（コーニングジャパン（株）製）を用い、５×１０⁵ｃｅｌｌｓ／ｍｌとなるように細胞数を調整したＨＬ−６０細胞を１ウェルあたり１００μｌずつ播種した。

【0056】

試料は、カフェ酸と、本発明品であるＵＨＡ６００６の２種類を用いた。試料調製については、各々の化合物をＤＭＳＯにて溶解し、ＨＬ−６０細胞培養液中の最終濃度がそれぞれ６．３μＭ、１２．５μＭ、２５μＭ、５０μＭ、及び１００μＭとなるように調整し、試験を開始した。

【0057】

生存細胞数の定量は「Ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔｉｎｇ ｋｉｔ−８」（商品名、ドージンドー・モレキュラー・テクノロジー（株）製）を用いたＭＴＴ法にて行った。試験開始より２４時間後、各ウェルにＣｅｌｌ ｃｏｕｎｔｉｎｇ ｋｉｔ−８溶液を１０μｌ添加し、よく攪拌した。１時間の遮光反応後にプレートリーダー（「ＢＩＯ−ＲＡＤ Ｍｏｄｅｌ ６８０」、バイオ・ラッドラボラトリーズ（株）製）を用いて測定波長４５０ｎｍの吸光度測定を行い、得られたデータをもとに細胞生存率を算出した（図２）。細胞生存率とは、溶媒であるＤＭＳＯのみを添加した培養液の生存細胞数を１００％とし、各化合物の濃度下における細胞の生存細胞数を相対値として算出した値である。各化合物濃度と細胞生存率の関係から、細胞増殖を５０％抑制する濃度ＩＣ₅₀（５０％阻害濃度：ｈａｌｆ ｍａｘｉｍａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）を算出した（表３）。これらの結果から、ＵＨＡ６００６には、強い癌細胞増殖抑制能が認められた。この効果は、カフェ酸には全く認められず、カフェ酸を４−ビニルカテコール重合化合物に変換する有意性が強く示唆された。

【0058】

【表3】

【0059】

（実施例５：加熱温度によるＵＨＡ６００６の生成量の違い）
カフェ酸１００ｍｇ、エタノール１ｍｌ、ミネラルウォーター１ｍｌの混合溶液（ｐＨ＝５．０）を、オートクレーブにて７０℃、９０℃、１１０℃、１３０℃の各温度条件で２０分間加熱した。それぞれの温度条件で得られた反応後組成物１ｍｌをメタノールにて５０ｍｌにメスアップし、実施例１と同様にＨＰＬＣにより分析した。

【0060】

その結果、７０℃を除きＵＨＡ６００６の生成は確認できた。カフェ酸からの生成費比率（重量％）は、７０℃が非生成、９０℃が極微量、１１０℃が極微量、１３０℃が１％となり、１３０℃での加熱がもっとも多くＵＨＡ６００６が生成していた。

【0061】

（実施例６：ＵＨＡ６００６含有エキスの調製）
キウィフルーツジュース濃縮物１０ｇ、エタノール１０ｍｌ、ミネラルウォーターを１０ｍｌ加えて調製した混合溶液を、オートクレーブにて１３０℃、６０分間加熱した。得られた反応溶液を減圧加熱させて乾固し、ＵＨＡ６００６含有エキスを１０ｇ得た。得られたＵＨＡ６００６エキス１０ｇ中には、実施例５と同様の手法で確認したところＵＨＡ６００６が０．００５ｇ含有されていた。必要に応じてこの作業を繰り返した。

【0062】

（実施例７：ＵＨＡ６００６を含有する食品）
実施例６で得たＵＨＡ６００６含有エキス１ｇをあらかじめ１００ｍＬのエタノールに溶解させ、これに砂糖５００ｇ、水飴４００ｇを混合溶解し、生クリーム１００ｇ、バター２０ｇ、練乳７０ｇ、乳化剤１．０ｇを混合した後、真空釜にて−５５０ｍｍＨｇ減圧させ、１１５℃の条件下で濃縮し、水分値３．０重量％のミルクハードキャンディを得た。このミルクハードキャンディは、菓子として食べ易いものであることはもちろん、肥満予防による、メタボリックシンドロームなどの生活習慣病の予防や、癌患者における癌の拡散のリスクを低減したり、癌の発症のリスクを低減したり、癌の予防を期待した機能性食品としても利用できる。

【0063】

（実施例８：ＵＨＡ６００６を含有する医薬品）
実施例１，２と同様の方法で得たＵＨＡ６００６をエタノールに溶解し、これを微結晶セルロースに吸着させた後に、減圧乾燥させた。これを常法に従い、打錠品を得た。処方は、フラバン化合物を１０重量部、コーンスターチ２３重量部、乳糖１２重量部、カルボキシメチルセルロース８重量部、微結晶セルロース３２重量部、ポリビニルピロリドン４重量部、ステアリン酸マグネシウム３重量部、タルク８重量部の通りである。本打錠品は、癌治癒を目的とする医薬品として有効に利用できる。

【0064】

（実施例９：ＵＨＡ６００６を含有する化粧品）
テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビット１重量部、ポリオキシエチレンステアリルエーテル０．５重量部、親油型モノステアリン酸グリセリン１重量部、ピルビン酸０．５重量部、ステアリルアルコール０．５重量部、アボガド油１重量部、実施例１及び２と同様の方法で得たＵＨＡ６００５の０．１重量部を、常法に従って溶解させ、これに、乳酸ナトリウム１重量部、プロピレングリコール５重量部、カルボキシビニルポリマー０．１重量部、ごく少量の香料及び精製水８９．３重量部を加え、ホモゲナイザーにかけ乳化し、乳液を得た。本乳液は、ニキビなどの皮膚疾患治療や予防効果をもつ薬用化粧品として有効に利用できる。

【図1】

【図2】