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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】5658139
(24)【登録日】2014年12月5日
(45)【発行日】2015年1月21日
(54)【発明の名称】ＢＡＣＥ阻害剤
(51)【国際特許分類】
C07D 417/10 20060101AFI20141225BHJP
A61K 31/541 20060101ALI20141225BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20141225BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20141225BHJP
【ＦＩ】
C07D417/10CSP
A61K31/541
A61P25/28
A61P43/00 111
【請求項の数】4
【全頁数】56
(21)【出願番号】特願2011-507529(P2011-507529)
(86)(22)【出願日】2009年4月15日
(65)【公表番号】特表2011-519854(P2011-519854A)
(43)【公表日】2011年7月14日
(86)【国際出願番号】US2009040589
(87)【国際公開番号】WO2009134617
(87)【国際公開日】20091105
【審査請求日】2012年4月13日
(31)【優先権主張番号】61/049,881
(32)【優先日】2008年5月2日
(33)【優先権主張国】US
【前置審査】
(73)【特許権者】
【識別番号】594197872
【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー
(74)【代理人】
【識別番号】100100158
【弁理士】
【氏名又は名称】鮫島 睦
(74)【代理人】
【識別番号】100068526
【弁理士】
【氏名又は名称】田村 恭生
(74)【代理人】
【識別番号】100138900
【弁理士】
【氏名又は名称】新田 昌宏
(74)【代理人】
【識別番号】100162684
【弁理士】
【氏名又は名称】呉 英燦
(74)【代理人】
【識別番号】100176474
【弁理士】
【氏名又は名称】秋山 信彦
(72)【発明者】
【氏名】ジェイムズ・エドマンド・オーディア
(72)【発明者】
【氏名】ダスティン・ジェイムズ・マーゴット
(72)【発明者】
【氏名】スコット・マーティン・シーハン
(72)【発明者】
【氏名】ブライアン・モーガン・ワトソン
【審査官】
爾見 武志
(56)【参考文献】
【文献】
国際公開第２００７／０４９５３２（ＷＯ，Ａ１）
【文献】
国際公開第２００８／１３３２７３（ＷＯ，Ａ１）
【文献】
国際公開第２００９／１５１０９８（ＷＯ，Ａ１）
(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）
Ｃ０７Ｄ ４１７／１０
ＣＡ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
下式化合物、４−（２，４−ジフルオロ−５−（ピリミジン−５−イル）フェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−アミン
またはその薬理学的に許容される塩。
【化1】
【請求項2】
下式、（Ｓ）−４−（２，４−ジフルオロ−５−（ピリミジン−５−イル）フェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−アミン
で表される、請求項１に記載の化合物またはその薬理学的に許容される塩。
【化2】
【請求項3】
請求項１〜２のいずれかに記載の化合物あるいはその薬理学的に許容される塩を、薬理学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と併せて含む医薬製剤。
【請求項4】
アルツハイマー病の治療剤を製造するための請求項１〜２のいずれかに記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、アルツハイマー病ならびにアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の神経毒かつ高い凝集ペプチドセグメントである、アミロイドβ（Ａβ）ペプチドに関連する他の疾患および障害を治療する分野である。具体的には、β−セクレターゼまたはβ部位アミロイド前駆体タンパク質切断酵素（ＢＡＣＥ）の強力な阻害剤を提供する。ＢＡＣＥの完全または部分的阻害は、マウスモデルにおいてプラーク関連およびプラーク依存性病変に対して顕著な効果を有することが示されており、Ａβレベルの低い減少でさえ、プラーク断面積およびシナプス欠損において長期間の顕著な減少を生じる場合があることが示唆されており、従って顕著な治療有効性を与える。
【背景技術】
【0002】
現在記載されているＢＡＣＥ阻害剤はペプチド模倣剤の遷移状態類似体であり、典型的にヒドロキシエチル部分を含む。これらの化合物の多くは、ＢＡＣＥの強力な阻害剤であるが、それらの高分子量および低い膜透過性により、それらは不十分な薬物候補となっている。種々のヒドロキシエチルアミン骨格および複素環を含む骨格などのペプチド模倣剤の高分子から低分子への進行が存在する。例えば、非特許文献１を参照のこと。特定のアミノチアジン化合物は、特許文献１においてＢＡＣＥ阻害剤として記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0003】
【特許文献1】国際公開第２００７／０４９５３２号パンフレット
【非特許文献】
【0004】
【非特許文献1】ＤｕｒｈａｍおよびＳｈｅｐｈｅｒｄ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＆ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２００６年，９（６），ｐ．７７６−７９１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
強力かつより有効なＢＡＣＥ阻害剤は、アルツハイマー病などのＡβペプチドにより媒介される疾患についての治療を与えるために必要である。本発明は新規の強力かつ有効なＢＡＣＥの阻害剤を提供する。
【課題を解決するための手段】
【0006】
本発明は、式Ｉの化合物【化1】
ｎは、０、１、または２であり、
Ｒ１は、ピリミジニル、クロロもしくはフルオロで必要に応じて置換されたピラジニル、またはクロロ、フルオロ、およびＣ１−Ｃ３アルコキシから各々独立して選択される１つもしくは２つの置換基で必要に応じて置換されたピリジニルであり、
Ｒ２は、各々の場合においてクロロおよびフルオロから独立して選択され、
Ｒ３は、水素またはヒドロキシで必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ４アルキルであり、
Ｒ４は、水素またはＣ１−Ｃ３アルキルである）
あるいはその薬理学的に許容可能な塩を提供する。
【0007】
本発明はまた、患者におけるアルツハイマー病を治療する方法を提供し、そのような治療を必要とする患者に有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む。
【0008】
本発明はさらに、患者における軽度認識障害のアルツハイマー病への進行を予防する方法を提供し、そのような治療を必要とする患者に有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む。
【0009】
本発明はさらに、アルツハイマー病を進行する危険性のある患者における進行を予防する方法を提供し、そのような治療を必要とする患者に有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む。
【0010】
本発明はまた、患者におけるＢＡＣＥを阻害する方法を提供し、そのような治療を必要とする患者に有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む。
【0011】
本発明はまた、アミロイド前駆体タンパク質のβ−セクレターゼにより媒介される切断を阻害する方法を提供し、そのような治療を必要とする患者に有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む。
【0012】
本発明はさらに、Ａβペプチドの産生を阻害するための方法を提供し、そのような治療を必要とする患者に有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む。
【0013】
本発明はまた、式Ｉの化合物を、薬理学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤と併せて含む医薬製剤を提供する。
【0014】
さらに、本発明は、治療、特にアルツハイマー病の治療または軽度認識障害のアルツハイマー病への進行の予防に使用するための式Ｉの化合物を提供する。本発明はまた、アルツハイマー病を治療するための医薬の製造のための式Ｉの化合物の使用を提供する。本発明はさらに、軽度認識障害のアルツハイマー病への進行を予防するための医薬の製造のための式Ｉの化合物の使用を提供する。本発明はまた、ＢＡＣＥを阻害するための医薬の製造のための式Ｉの化合物の使用を提供する。本発明はさらに、Ａβペプチドの産生を阻害するための医薬の製造のための式Ｉの化合物の使用を提供する。
【0015】
さらに、本発明は、アルツハイマー病の治療に適した医薬製剤を提供する。さらに、本発明は、軽度認識障害のアルツハイマー病への進行の予防に適した医薬製剤を提供する。本発明はまた、ＢＡＣＥの阻害に適した医薬製剤を提供する。
【0016】
さらに、本発明は、アミロイド前駆体タンパク質のβ−セクレターゼにより媒介される切断の阻害に適した医薬製剤を提供する。本発明はまた、過剰レベルのＡβペプチドから生じる状態の治療に適した医薬製剤を提供し、それは、式Ｉの化合物またはその薬理学的に許容可能な塩と、１つ以上の薬理学的に許容可能な賦形剤、担体、または希釈剤とを併せて含む。
【発明を実施するための形態】
【0017】
上記の式に使用される一般的化学用語は、それらの通常の意味を有する。例えば、用語「Ｃ１−Ｃ３アルキル」とは、メチル、エチル、プロピルおよびイソプロピルを指す。用語「Ｃ１−Ｃ４アルキル」とは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチル部分を指す。
【0018】
「ヒドロキシで必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ４アルキル」は、水素原子の１つがヒドロキシ部分で置換されるＣ１−Ｃ４アルキル基である。
【0019】
用語「Ｃ１−Ｃ３アルコキシ」は、酸素原子に結合されるＣ１−Ｃ３アルキル基であり、メトキシ、エトキシ、プロポキシおよびイソ−プロポキシを指す。
【0020】
用語「窒素保護基」は、計画された反応条件に安定であり、さらに、試薬および再生成されるアミンと適合される反応条件により選択的に除去できる部分を意味するととられる。そのような基は当業者により周知であり、文献に記載される。例えば、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第３版，第７章，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．，（１９９９）を参照のこと。
【0021】
用語「Ａβペプチドの産生の阻害」とは、過剰な場合、正常または必要とされる場合、正常以下まで患者におけるＡβペプチドのインビボでのレベルを減少させることを意味するととられる。
【0022】
用語「有効量の式Ｉの化合物」とは、正常または正常以下のレベルまで患者におけるＡβペプチドのインビボでのレベルを減少させるのに十分なＢＡＣＥを阻害するのに必要とされる式Ｉの化合物の用量（複数も含む）を意味するととられる。
【0023】
用語「治療」とは、患者における疾患の進行を遅延させるかまたは停止させることを含むととられる。
【0024】
軽度認知障害は、臨床所見および軽度認知障害を示す患者の経時的なアルツハイマー型認知症への進行に基づいたアルツハイマー疾患に関連する認知症の潜在的な前駆期と定義される（Ｍｏｒｒｉｓら，Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．，５８，３９７−４０５（２００１）；Ｐｅｔｅｒｓｅｎら，Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．，５６，３０３−３０８（１９９９））。用語「軽度認知障害のアルツハイマー病への進行の予防」とは、患者における軽度認知障害のアルツハイマー病への進行を遅延、停止、または反転させることを含む。
【0025】
当業者は、図（１）に描かれるように式Ｉの化合物が互変異性型で存在できることを理解するだろう。本出願において、式Ｉの化合物の特定の互変異性体の１つに対する任意の参照が与えられる場合、互変異性型およびそれらの全ての混合物の両方を含むことが理解される。【化2】
【0026】
当業者は、式Ｉの化合物が少なくとも１つのキラル中心を含むコアから構成されることを理解するだろう。【化3】
【0027】
本発明は、全ての個々の鏡像異性体、およびラセミ体を含む、前記化合物の鏡像異性体の混合物を意図するが、図（２）に例示される原子標識された１位で絶対配置を有する化合物が好ましい式Ｉの化合物である。
【0028】
【化4】
【0029】
さらに、当業者は、さらなるキラル中心が、特定の可変物の選択により本発明の化合物において作製され得ることを理解するだろう。本発明は、全ての個々の鏡像異性体またはジアステレオマーならびにラセミ体を含む、前記化合物の鏡像異性体およびジアステレオマーの混合物を意図する。
【0030】
当業者はまた、全てのキラル中心についてのカーン・インゴルド・プレローグ（Ｒ）または（Ｓ）規則が、特定の化合物の置換パターンに依存して変化することを理解するだろう。単一の鏡像異性体またはジアステレオマーは、キラル試薬と開始することで、または立体選択的もしくは立体特異的合成技術によって調製され得る。あるいは、単一の鏡像異性体またはジアステレオマーは、本発明の化合物の合成における任意の都合の良い点での標準的なキラルクロマトグラフまたは結晶化技術により混合物から単離され得る。本発明の化合物の単一の鏡像異性体およびジアステレオマーは、本発明の好ましい実施形態である。
【0031】
本発明の化合物はアミンであり、従って、任意の数の無機酸および有機酸と反応して、薬理学的に許容可能な酸付加塩を形成する。薬理学的に許容可能な塩およびそれらを調製するための一般的な方法は、当該分野において周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌら，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ，（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００２）；Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら，「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．６６，Ｎｏ．１，１９７７年１月を参照のこと。好ましい薬理学的に許容可能な塩は、塩酸で形成されたものである。
【0032】
式Ｉの化合物の全ては有用なＢＡＣＥの阻害剤であるが、特定のクラスの化合物が好ましい。以下の項はそのような好ましいクラスを記載する。ａ）Ｒ１はピリミジニルであり、
ｂ）Ｒ１はフルオロで必要に応じて置換されたピラジニルであり、
ｃ）Ｒ１はクロロ、フルオロ、またはメトキシから独立して選択される各々場合において１回または２回必要に応じて置換されたピリジニルであり、
ｄ）Ｒ１はフルオロまたはメトキシで必要に応じて置換されたピリジニルであり、
ｅ）Ｒ１はフルオロで必要に応じて置換されたピリジニルであり、
ｆ）Ｒ２はフルオロであり、
ｇ）Ｒ２はクロロであり、
ｈ）ｎは０であり、
ｉ）ｎは１であり、
ｊ）ｎは２であり、
ｋ）Ｒ３は水素であり、
ｌ）Ｒ３はヒドロキシで置換されたメチルであり、
ｍ）Ｒ３はメチルであり、
ｎ）Ｒ３はヒドロキシで置換されたイソプロピルであり、
ｏ）Ｒ４は水素であり、
ｐ）Ｒ４はメチルであり、
ｑ）式Ｉの化合物は、アミノチアジン環の窒素に隣接するキラル中心に（Ｓ）の絶対配置を有し
ｒ）式Ｉの化合物は遊離塩基であり、
ｓ）式Ｉの化合物は薬理学的に許容可能な塩であり、
ｔ）式Ｉの化合物は塩酸塩であり、
ｕ）式Ｉの化合物は二塩酸塩である。
【0033】
本発明の好ましい化合物は式Ｉの化合物（式中、Ｒ１はピリミジニル、クロロ、フルオロ、もしくはメトキシから独立して選択される各々の場合において１回または２回必要に応じて置換されたピリジニル、またはフルオロで必要に応じて置換されたピラジニルであり、Ｒ２はクロロまたはフルオロであり、Ｒ３は水素、メチル、ヒドロキシで置換されたメチル、またはヒドロキシで置換されたイソプロピルであり、Ｒ４は水素またはメチルであり、ｎは０、１または２である）あるいはその薬理学的に許容可能な塩に関する。前記実施形態において、アミノチアジン環の窒素に隣接するキラル中心の絶対配置が（Ｓ）である化合物またはその薬理学的に許容可能な塩が好ましい。
【0034】
本発明の別の好ましい実施形態は、式Ｉの化合物（式中、Ｒ１はピリミジニル、クロロ、フルオロ、またはメトキシから独立して選択される各々の場合において１回または２回必要に応じて置換されたピリジニル、フルオロで必要に応じて置換されたピラジニルであり、Ｒ２はクロロまたはフルオロであり、Ｒ３は水素、メチル、ヒドロキシで置換されたメチル、またはヒドロキシで置換されたイソプロピルであり、Ｒ４は水素であり、ｎは０、１または２である）あるいはその薬理学的に許容可能な塩に関する。前記実施形態において、アミノチアジン環の窒素に隣接するキラル中心の絶対配置が（Ｓ）である化合物またはその薬理学的に許容可能な塩が好ましい。
【0035】
本発明のより好ましい実施形態は、式Ｉの化合物（式中、Ｒ１はピリミジニル、クロロまたはフルオロから独立して選択される各々の場合において１回または２回必要に応じて置換されたピリジニル、またはフルオロで必要に応じて置換されたピラジニルであり、Ｒ２はクロロまたはフルオロであり、Ｒ３は水素、メチルであり、Ｒ４は水素であり、ｎは０、１または２である）あるいはその薬理学的に許容可能な塩に関する。前記実施形態において、アミノチアジン環の窒素に隣接するキラル中心の絶対配置が（Ｓ）である化合物またはその薬理学的に許容可能な塩が好ましい。
【0036】
本発明のさらなる実施形態は、式Ｉの化合物（式中、Ｒ１はピリミジニル、フルオロもしくはメトキシで必要に応じて置換されたピリジニル、またはフルオロで必要に応じて置換されたピラジニルであり、Ｒ２はフルオロであり、Ｒ３は水素またはメチルであり、Ｒ４は水素であり、ｎは１または２である）あるいはその薬理学的に許容可能な塩に関する。前記実施形態において、アミノチアジン環の窒素に隣接するキラル中心の絶対配置が（Ｓ）である化合物またはその薬理学的に許容可能な塩が好ましい。
【0037】
本発明の最も好ましい実施形態は、式Ｉの化合物（式中、Ｒ１はピリミジニル、フルオロで必要に応じて置換されたピリジニル、またはフルオロで必要に応じて置換されたピラジニルであり、Ｒ２はフルオロであり、Ｒ３は水素またはメチルであり、Ｒ４は水素であり、ｎは１または２である）またはその薬理学的に許容可能な塩に関する。前記実施形態において、アミノチアジン環の窒素に隣接するキラル中心の絶対配置が（Ｓ）である化合物またはその薬理学的に許容可能な塩が好ましい。
【0038】
本発明の特に好ましい実施形態は、式Ｉの化合物（式中、Ｒ１はピリミジニルであり、Ｒ２はフルオロであり、Ｒ３は水素であり、Ｒ４は水素であり、ｎは２である）またはその薬理学的に許容可能な塩に関する。前記実施形態において、アミノチアジン環の窒素に隣接するキラル中心の絶対配置が（Ｓ）である化合物またはその薬理学的に許容可能な塩が好ましい。
【0039】
式Ｉの化合物に関する本発明のさらに特に好ましい実施形態は【化5】
【0040】
式Ｉの化合物に関する本発明の別の特に好ましい実施形態は【化6】
【0041】
式Ｉの化合物はＢＡＣＥの阻害剤である。従って、本発明はまた、患者におけるＢＡＣＥを阻害する方法を提供し、そのような治療を必要とする患者に、ＢＡＣＥを阻害する量の式Ｉの化合物を投与することを含む。式Ｉの化合物の投与により治療される患者はヒトであることが好ましい。
【0042】
ＢＡＣＥの阻害剤として、本発明の化合物は、Ａβペプチドの産生を抑制するのに有用であり、従って、Ａβペプチドの過剰産生および／または低下したクリアランスに起因する過剰なＡβペプチドレベルから生じる障害の治療に有用である。本発明のさらなる実施形態は、ＢＡＣＥの阻害によって改善または予防できる疾患または状態を治療するための医薬を製造するための式Ｉの化合物の使用である。従って、式Ｉの化合物は、アルツハイマー病、軽度認識障害、ダウン症候群、Ｄｕｔｃｈ型アミロイド症を伴う遺伝性脳出血、脳アミロイド血管症、混合型の血管および進行性起源の認知症などの他の変性認知症、パーキンソン病に伴う認知症、進行性核上麻痺に伴う認知症、大脳皮質基底核変性症に伴う認知症、およびアルツハイマー病のびまん性Ｌｅｗｙ小体型の治療または予防に有用であると考えられる。
【0043】
本発明の化合物は当該分野において公知の種々の手順によって調製され得、そのうちのいくつかは以下のスキームに例示される。以下のスキームにおける個々の工程は、式Ｉの化合物を与えるために変更されてもよいことは、当業者により認識されるだろう。式Ｉの化合物を生成するために必要とされる工程の特定の順序は、合成される特定の化合物、出発化合物、および置換部分の相対的不安定性に依存する。以下のスキームにおける各々の工程の生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、濾過、粉砕、および結晶化を含む、従来の方法によって回収することができる。
【0044】
明確さの目的のために以下のスキームにおいて、特定の立体化学的中心は指定されないままであり、特定の置換基は除去されており、スキームの教示を限定することを決して意図するものではない。さらに、個々の異性体、鏡像異性体、またはジアステレオマーは、キラルクロマトグラフィーなどの方法によって式Ｉの化合物の合成における任意の都合の良い点で分離されてもよい。
【0045】
さらに、以下のスキームに記載される中間体は、多くの窒素保護基を含む。可変の保護基は、実施される特定の反応条件および特定の変換に依存する各々の発生において同じであってもよいか、または異なっていてもよい。保護および脱保護条件は当業者に周知であり、文献に記載されている。例えば、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，前出を参照のこと。
【0046】
以下のスキームにおいて、他に示されない限り、全ての置換基は以前に定義されている。理解されるように、式（１ａ）〜（１ｅ）、（２）および（３）の化合物は、本明細書に記載されるものと同様の方法および手順を含む、当該分野において周知かつ確立された方法によって容易に調製され得る。必要な出発物質は、商業的に利用可能であるか、または当業者に周知の方法によって商業的に利用可能な物質から調製され得るかのいずれかである。
【0047】
【化7】
【0048】
式（１ａ）〜（１ｅ）のいずれかの化合物は、炭酸セシウム、炭酸ナトリウム、または炭酸カリウムなどの適切な塩基の存在下において、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド、パラジウムテトラキストリフェニルホスフィン、ＰｄＣｌ２、または酢酸パラジウム（ＩＩ）などの適切なパラジウム試薬を用いて、Ｓｕｚｕｋｉカップリング反応において式（２）の化合物と反応する。そのような反応は、１，２−ジメトキシエタン、水、エタノール、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、またはジオキサン、あるいはそれらの混合物などの適切な溶媒中で実施される。
【0049】
あるいは、式（１ａ）〜（１ｅ）のいずれかの化合物は、塩化リチウムまたはフッ化セシウムなどの適切な添加剤の存在下において、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド、ＰｄＣｌ２、またはパラジウムテトラキスフェニルホスフィンなどの適切なパラジウム試薬を用いて、Ｓｔｉｌｌｅカップリング反応において式（３）の化合物と反応される。そのような反応は、トルエンまたはＤＭＦ、あるいはそれらの混合物などの適切な溶媒中で実施される。
【0050】
任意の工程において、式Ｉの化合物の薬理学的に許容可能な塩が、標準的な条件下で適切な溶媒において、式Ｉの適切な遊離塩基と、適切な薬理学的に許容可能な酸との反応によって形成されてもよい。さらに、そのような塩の形成は、窒素保護基の脱保護時に同時に生じ得る。そのような塩の形成は周知であり、当該分野において理解される。
【0051】
式（１ａ）の化合物は２つの変形体によって調製できる。スキームＩＩおよびＩＩＩは、式（ｉ）の適切な化合物で出発する合成工程を示し、式（１ａ）の化合物を得る（式中、Ｒ６はメチルまたはエチルであり、Ｒ５は、アセチル、ベンゾイル、またはｔ−ブトキシカルボニルなどの適切な窒素保護基である）。
【0052】
【化8】
【0053】
【化9】
【0054】
【化10】
【0055】
【化11】
【0056】
【化12】
【0057】
式（ｘｖｉｉ）の化合物はまず、ＴＨＦなどの適切な溶媒中で（メチル）トリフェニルホスホニウムブロミドとｎ−ブチルリチウムとを反応させることによって調製される。この溶液に、式（ｘｖｉ）の化合物を、例えば添加漏斗またはシリンジポンプによってゆっくりと加える。式（ｘｖｉｉｉ）の化合物は、アセトニトリルなどの適切な溶媒中の式（ｘｖｉｉ）の化合物にグリオキシル酸エチルおよびトリフルオロメタンスルホン酸イッテルビウムを加えることによって調製される。
【0058】
式（ｘｉｘ）の化合物は３つの工程プロセスによって調製される：まず、式（ｘｖｉｉｉ）の化合物のアルコールが、例えば、塩化メチレンなどの適切な溶媒中で２，６−ルチジンまたはジイソプロピルエチルアミンなどの適切なアミン塩基の存在下においてトリフルオロメタンスルホン酸無水物との反応により離脱基に変換される。過剰なチオ尿素を加え、次いで得られる中間体を過剰な硫酸に加える。式（ｘｉｘ）の化合物の得られるアミノ基を、当該分野において周知かつ記載される方法によって適切な窒素保護基で保護して、式（ｘｘ）の化合物を得る。式（ｘｘ）の化合物の反応を、２つの変形体で実施して、式（１ｄ）の化合物または式（１ｅ）の化合物のいずれかを得ることができる。
【0059】
（１ｄ）の化合物は、当該分野において周知または記載される方法、例えばＴＨＦなどの適切な溶媒中の過剰な水素化ホウ素リチウムによって化合物（ｘｘ）のエステルの還元によって調製できる。
【0060】
（１ｅ）の化合物は、ＴＨＦなどの適切な溶媒中で式（ｘｘ）の化合物と過剰な塩化メチルマグネシウムとを反応させることによって調製できる。
【0061】
調製物および実施例以下の調製物および実施例は、本発明を更に示す。
【0062】
本発明の化合物に関する名称は、ＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）Ｕｌｔｒａ，バージョン１０．０により提供される。
【0063】
本明細書において用いられる略語は、Ａｌｄｒｉｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，第１７巻，第１号，１９８４年に従って定義される。その他の略語は、以下にように定義される。「ＳＣＸ」は、強カチオン交換；「ｃａ．」は、約またはおよそ；「ＥｔＯＡｃ」は、酢酸エチル；「ＭｅＯＨ」は、メタノール；「ＤＣＭ」は、ジクロロメタン；「ＴＨＦ」は、 テトラヒドロフラン；「Ｅｔ２Ｏ」は、ジエチルエーテル；「（ＯＥｔ）」は、エトキシド；「ｅｑｕｉｖ」は、当量；「ＦＲＥＴ」は、蛍光共鳴エネルギー移動；「ＲＦＵ」は、相対蛍光単位；「ＤＭＥＭ」は、ダルベッコ改変イーグル培地；「Ｆ１２」は、ハムＦ１２倍地；「ＦＢＳ」は、ウシ胎児血清を示す。
【0064】
質量分析データは、特に指定されない限り、ＬＣ／ＭＳ（Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８（２．１×５０μｍ×３．５μｍ）カラム、５０℃＋／−１０℃の温度にて１ｍＬ／分間のフローレート）を介して得られる。溶離系は、５〜１００重量％のＡＣＮ／１０ｍＭの重炭酸アンモニウム（ｐＨ１０）で７．０分間、その後、１００％のＡＣＮで１．０分間保持し、エレクトロスプレーイオン化で結合させる（１００〜８００の原子質量単位（ａｍｕ）スキャンレンジ；０．２の原子質量単位ステップ；８０ｖのフラグメンター（Ｆｒａｇｍｅｎｔｏｒ）；１．０ゲイン（ｇａｉｎ）；８０の閾値）。
【0065】
特定の化合物は、ＨＰＬＣを介して精製される。方法Ａ：Ｘｔｅｒｒａ（登録商標）ＲＰ１８（３０×３００ｍｍ）カラム、周囲温度にて４０ｍＬ／分間のフローレート。溶離系は、１〜５分間における０：１００（アセトニトリル：（０．１％のＨＣｌ入りのＨ２Ｏ））のアイソクラチックグラジェントで構成され、その後、２０分間にわたる０：１００（アセトニトリル：（０．１％のＨＣｌ入りのＨ２Ｏ））から５０：５０（アセトニトリル：（０．１％のＨＣｌ入りのＨ２Ｏ））までのリニアグラジェントが続く。その他にもあらゆるＨＰＬＣ条件が考えられ、特に限定されない。
【0066】
調製物１（Ｒ）−２−メチル−プロパン−２−スルフィン酸［１−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロ−フェニル）−エチリデン］−アミド
【化13】
【0067】
以下の表１中の化合物を、（Ｒ）−２−メチル−プロパン−２−スルフィン酸［１−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロ−フェニル）−エチリデン］−アミドの調製物において基本的に記載されたように調製する。
【0068】
【表1】
【0069】
調製物２（Ｓ）−３−（（Ｒ）−２−メチル−プロパン−２−スルフィニルアミノ）−３−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロ−フェニル）−酪酸メチルエステル
【化14】
【0070】
以下の表２中の化合物を、（Ｓ）−３−（（Ｒ）−２−メチル−プロパン−２−スルフィニルアミノ）−３−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロ−フェニル）−酪酸メチルエステルの調製物において基本的に記載されたように調製する。
【0071】
【表2】
【0072】
調製物３（Ｓ）−メチル３−アミノ−３−（２，４−ジフルオロフェニル）−ブタノエート塩酸塩
【化15】
【0073】
以下の表３中の化合物を、（Ｓ）−メチル３−アミノ−３−（２，４−ジフルオロフェニル）−ブタノエート塩酸塩の調製物において基本的に記載されたように調製する。
【0074】
【表3】
【0075】
調製物４（Ｓ）−３−アミノ−３−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロフェニル）ブタン−１−オール
【化16】
【0076】
調製物５（Ｓ）−３−アミノ−３−（３−ブロモ−フェニル）−ブタン−１−オール
【化17】
【0077】
以下の表４中の化合物を、（Ｓ）−３−アミノ−３−（３−ブロモ−フェニル）−ブタン−１−オールの調製物に従って基本的に調製する。
【0078】
【表4】
【0079】
調製物６（Ｓ）−１−ベンゾイル−３−［１−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロ−フェニル）−３−ヒドロキシ−１−メチル−プロピル］−チオ尿素
【化18】
【0080】
以下の表５中の化合物を、（Ｓ）−１−ベンゾイル−３−［１−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロ−フェニル）−３−ヒドロキシ−１−メチル−プロピル］−チオ尿素の調製物において基本的に記載されたように調製する。
【0081】
【表5】
【0082】
調製物７（Ｓ）−４−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロフェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−アミン
【化19】
【0083】
以下の表６中の化合物を、（Ｓ）−４−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロフェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−アミンの調製物に従って基本的に調製する。
【0084】
【表6】
【0085】
調製物８（Ｓ）−［４−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］チアジン−２−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（Ｓ）−１−ベンゾイル−３−［１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３−ヒドロキシ−１−メチル−プロピル］−チオ尿素（０．７９ｇ，１．８ｍｍｏｌ）および含水ＨＣｌ（５Ｎ，２５ｍＬ，７１ｍｍｏｌ）の溶液を１００℃まで温める。６時間攪拌後、反応物を周囲温度まで冷却し、一晩置く。反応物を減圧下で濃縮して、粗（Ｓ）−４−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−アミン塩酸塩を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０３，３０５（Ｍ＋１）。
【0086】
（Ｓ）−４−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−アミン塩酸塩入りのＴＨＦ（３０ｍＬ）および飽和炭酸水素ナトリウム（１５ｍＬ）水溶液に、ジ−ｔ−二炭酸ブチル（０．７７ｇ，３．５ｍｍｏｌ）を加える。４時間後、反応物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出し、硫酸ナトリウムを介して乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、ヘキサンからヘキサン：酢酸エチル（３：１）までのリニアグラジェントで溶離して、標題の化合物（６９％の収率）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０３，４０５（Ｍ＋１）。
【0087】
調製物９（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロフェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イルカルバメート
【化20】
【0088】
以下の表７中の化合物を、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロフェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イルカルバメートの調製物において基本的に記載されたように調製する。
【0089】
【表7】
【0090】
調製物１０２−ブロモ−３−イル−ブト−３−エン−２−オール
【化21】
【0091】
調製物１１２−［３−（３−ブロモ−フェニル）−ブト−２−エニル］−イソチオ尿素塩酸塩
【化22】
【0092】
調製物１２４−（３−ブロモ−フェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］チアジン−２−イルアミン
【化23】
【0093】
調製物１３Ｎ−（４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イル）アセトアミド
【化24】
【0094】
調製物１４（Ｓ）−Ｎ−［４−（３−ブロモ−フェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］チアジン−２−イル］−アセトアミド
４−（３−ブロモ−フェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］チアジン−２−イルアミン（２０ｇ，６１ｍｍｏｌ）を、ＨＰＬＣキラル分離［カラム：８×３２ｃｍ ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ；溶離液：６０：４０：０．２（イソプロピルアルコール：ヘプタン：ジメチルエチルアミン）；フロー：３５０ｍＬ／分間にてＵＶ２６０ｎｍ］により精製する。第２の溶離異性体を単離して、鏡像異性的に濃縮された標題の化合物（３５％の収率）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３２７，３２９（Ｍ＋１）。
【0095】
調製物１５（Ｓ）−［４−（２，４−ジフルオロ−５−ピリミジン−５−イル−フェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］チアジン−２−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化25】
【0096】
以下の表８中の化合物を、（Ｓ）−［４−（２，４−ジフルオロ−５−ピリミジン−５−イル−フェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］チアジン−２−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの調製物において基本的に記載されたように調製する。
【0097】
【表8】
【0098】
調製物１６（Ｓ）−４−（３−（２−フルオロピリジン−３−イル）フェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−アミン
【化26】
【0099】
調製物１７（Ｓ）−４−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−アミン
【化27】
【0100】
調製物１８（Ｓ）−Ｎ−（４−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イル）アセトアミド
（Ｓ）−４−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−アミン（５５０ｍｇ，１．８ｍｍｏｌ，１．０当量）入りのテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）の溶液に、ピリジン（７２０ｍｇ，９．０ｍｍｏｌ，５当量）および無水酢酸（２２０ｍｇ，２．２ｍｍｏｌ，１．２当量）を加える。１０分後、反応物を水に注ぎ、水性混合物をジクロロメタンで抽出する。有機層を分離し、１ＮのＨＣｌおよびＮａＣｌ飽和水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムを介して乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、標題の化合物（８３％の収率）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）３４５，３４７（Ｍ＋１）。
【0101】
調製物１９（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−フルオロ−３−（ピラジン−２−イル）フェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イルカルバメート
【化28】
【0102】
調製物２０（Ｓ）−Ｎ−（４−（４−フルオロ−３−（３−フルオロピラジン−２−イル）フェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イル）アセトアミド
（Ｓ）−Ｎ−（４−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イル）アセトアミド（５００ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ，１当量）、２−フルオロ−３−（トリブチルスタンニル）ピラジン（１．７ｇ，４．３ｍｍｏｌ，３．０当量）入りのトルエン（１５ｍＬ）の溶液に、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（５１ｍｇ，７２μｍｏｌ，０．０５当量）および塩化リチウム（９２ｍｇ，２．２ｍｍｏｌ，１．５当量）を加える。反応物に、１３０℃の温度まで、研究室級の電子レンジ内で放射線照射を受けさせ、３時間保持する。溶媒を減圧下で除去し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、ヘキサンからヘキサン：酢酸エチル（１：１）勾配（ｒａｍｐ）までのリニアグラジェントで２０分間溶離して、標題の化合物（３１％の収率）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３６３（Ｍ＋１）。
【0103】
以下の表９中の化合物を、（Ｓ）−Ｎ−（４−（４−フルオロ−３−（３−フルオロピラジン−２−イル）フェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イル）アセトアミドの調製物において基本的に記載されたように調製する。
【0104】
【表9】
【0105】
調製物２１（Ｒ）−Ｎ−（（Ｓ）−２−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−４−メチルペンタ−４−エン−２−イル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド
【化29】
【0106】
調製物２２（Ｓ）−２−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−４−メチルペンタ−４−エン−２−アミン
【化30】
【0107】
調製物２３（Ｓ）−Ｎ−（２−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−４−メチルペンタ−４−エン−２−イルカルバモチオイル）ベンズアミド
【化31】
【0108】
調製物２４Ｎ−（（４Ｓ）−４−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−６−（ヨードメチル）−４，６−ジメチル５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イル）ベンズアミド
【化32】
【0109】
調製物２５（Ｓ）−Ｎ−（４−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−４，６，６−トリメチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イル）ベンズアミド
【化33】
【0110】
調製物２６（Ｓ）−Ｎ−（４−（４−フルオロ−３−（ピリミジン−５−イル）フェニル）−４，６，６−トリメチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イル）ベンズアミド
【化34】
【0111】
調製物２７（Ｓ）−３−（３−ブロモ−フェニル）−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−３−（Ｒ）−（２−メチル−プロパン−２−スルフィニルアミノ）−ブチルアミド
【化35】
【0112】
以下の表１０中の化合物を、（Ｓ）−３−（３−ブロモ−フェニル）−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−３−（Ｒ）−（２−メチル−プロパン−２−スルフィニルアミノ）−ブチルアミドの調製物において基本的に記載されたように調製する。
【0113】
【表10】
【0114】
調製物２８（Ｒ）−２−メチル−プロパン−２−スルフィン酸 ［（Ｓ）−１−（３−ブロモ−フェニル）−１−メチル−３−オキソ−ブチル］−アミド
【化36】
【0115】
以下の表１１中の化合物を、（Ｒ）−２−メチル−プロパン−２−スルフィン酸［（Ｓ）−１−（３−ブロモ−フェニル）−１−メチル−３−オキソ−ブチル］−アミドの調製物において基本的に記載されたように調製する。
【0116】
【表11】
【0117】
調製物２９（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ）−２−（３−ブロモフェニル）−４−ヒドロキシペンタン−２−イル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド
【化37】
【0118】
以下の表１２中の化合物を、（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ）−２−（３−ブロモフェニル）−４−ヒドロキシペンタン−２−イル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミドの調製物において基本的に記載されたように調製する。
【0119】
【表12】
【0120】
調製物３０（Ｓ）−４−アミノ−４−（３−ブロモ−フェニル）−ペンタン−２−オール
【化38】
【0121】
以下の表１３中の化合物を、（Ｓ）−４−アミノ−４−（３−ブロモ−フェニル）−ペンタン−２−オールの調製物において基本的に記載されたように調製する。
【0122】
【表13】
【0123】
調製物３１Ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ，６Ｒ）−４−（３−ブロモフェニル）−４，６−ジメチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イルカルバメート
【化39】
【0124】
調製物３２Ｔｅｒｔ−ブチル−（４Ｓ，６Ｒ）−４−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−４，６−ジメチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イルカルバメート
ジアステレオマーの１：５の混合物としての（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ）−２−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−４−ヒドロキシペンタン−２−イル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（２ｇ，１．０当量）入りのジオキサンの溶液（５ｍＬ）に、４Ｎの塩化水素入りのジオキサン（２０ｍＬ，８０ｍｍｏｌ）の溶液を０℃において液滴にて加える。反応物を室温まで温め、５分間攪拌する。溶媒を減圧下で除去し、残留物を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で塩基性にする。水層をジクロロメタンで抽出する。有機層を硫酸ナトリウムを介して乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。
【0125】
得られた残留物をＴＨＦ（５０ｍＬ）中に溶解し、０℃まで冷却する。イソチオシアン酸ベンゾイル（１．７ｇ，１０．５ｍｍｏｌ）を液滴にて加える。反応物を１時間攪拌する。反応混合物を減圧下で濃縮する。残留物をジオキサン（５ｍＬ）中に溶解し、壁の厚いガラス反応管に移動させる。溶液に５Ｎの塩化水素（７５ｍＬ，３７５ｍｍｏｌ）を加える。反応管を覆って、１００℃まで加熱する。２４時間後、溶媒を減圧下で除去し、残留物をＴＨＦ（２０ｍＬ）および炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（１０ｍＬ）の間で分ける。混合物に、ジ−ｔｅｒｔ−二炭酸ブチル（１．７ｇ，７．９ｍｍｏｌ）を加え、反応物を２時間攪拌する。反応混合物を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出する。有機層を硫酸ナトリウムを介して乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。残留物をシリカゲル（３４０ｇ）を用いてカラムクロマトグラフィーにより精製し、２５分間にわたって（０：１００）酢酸エチル：ヘキサンから（５０：５０）酢酸エチル：ヘキサンまでのグラジェントで溶離する。第２の溶離ジアステレオマーを収集し、溶媒を減圧下で除去して、以下に示す５９５ｍｇの混合物を得る。調製物３２：標題の化合物，ｔｅｒｔ−ブチル−（４Ｓ，６Ｒ）−４−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−４，６−ジメチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イルカルバメート：ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１７，４１９（Ｍ＋１）；および
調製物３２ａ：Ｎ−（（４Ｓ，６Ｒ）−４−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−４，６−ジメチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イル）ベンズアミド：ＭＳ（ｍ／ｚ）４２１，４２３（Ｍ＋１）。
【0126】
調製物３３（４Ｓ）−４−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロフェニル）−４，６−ジメチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−アミン
【化40】
【0127】
酢酸エチル抽出物を硫酸ナトリウムを介して乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去する。得られた残留物をＭｅＯＨ−平衡化ＳＣＸカラムに通し、メタノールで洗浄し、その後、２ＮのＮＨ３入りのＭｅＯＨ（５０ｍＬ）で溶離する。２ＮのＮＨ３入りのＭｅＯＨの洗浄物（ｗａｓｈ）を収集し、溶媒を減圧下で除去する。残留物をクロロホルム：ＩＰＡ抽出物からの標題の化合物と合わせ、標題の化合物を、（６Ｒおよび６Ｓ）（４Ｓ）−４−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロフェニル）−４，６−ジメチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−アミン（６４％の収率，ＬＣＭＳにより決定された８０％の純度）の混合物として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３５，３３７（Ｍ＋１）。
【0128】
調製物３４ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ，６Ｒ）−４−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロフェニル）−４，６−ジメチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イルカルバメート
【化41】
【0129】
調製物３５［（４Ｓ，６Ｒ）−４，６−ジメチル−４−（３−ピリミジン−５−イル−フェニル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］チアジン−２−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化42】
【0130】
以下の表１４中の化合物を、［（４Ｓ，６Ｒ）−４，６−ジメチル−４−（３−ピリミジン−５−イル−フェニル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］チアジン−２−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの調製物において基本的に記載されたように調製する。
【0131】
【表14】
【0132】
調製物３６１−ブロモ−３−（プロパ−１−エン−２−イル）ベンゼン
【化43】
【0133】
表１５における以下の化合物を、１−ブロモ−３−（プロパ−１−エン−２−イル）ベンゼンの調製に従って本質的に調製する。
【0134】
【表15】
【0135】
調製物３７エチル４−（３−ブロモフェニル）−２−ヒドロキシペント−４−エノエート
【化44】
【0136】
表１６における以下の化合物を、エチル４−（３−ブロモフェニル）−２−ヒドロキシペント−４−エノエートの調製に従って本質的に調製する。
【0137】
【表16】
【0138】
調製物３８エチル２−アミノ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−６−カルボキシレート
【化45】
【0139】
表１７における以下の化合物を、エチル２−アミノ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−６−カルボキシレートの調製に記載されるように本質的に調製する。
【0140】
【表17】
【0141】
調製物３９エチル４−（３−ブロモフェニル）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−６−カルボキシレート
【化46】
【0142】
表１８における以下の化合物を、エチル４−（３−ブロモフェニル）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−６−カルボキシレートの調製に従って本質的に調製する。
【0143】
【表18】
【0144】
調製物４０（４Ｓ，６Ｓ）−エチル４−（３−ブロモフェニル）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−６−カルボキシレート
【化47】
【0145】
調製物４１（＋／−）Ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ，６Ｓ）−４−（３−ブロモフェニル）−６−（ヒドロキシメチル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イルカルバメート
【化48】
【0146】
調製物４２Ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ，６Ｓ）−４−（３−ブロモフェニル）−６−（ヒドロキシメチル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イルカルバメート
（＋／−）Ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ，６Ｓ）−４−（３−ブロモフェニル）−６−（ヒドロキシメチル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イルカルバメート（８７０ｍｇ，２．１ｍｍｏｌ）を、ＨＰＬＣキラル分離：（カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ８×３６ｃｍ×２０μｍ；溶離液：１００％ ３Ａ エチルアルコール；フロー：ＵＶ２５０ｎｍで４００ｍＬ／分）により精製する。第２の溶離異性体を分離して、鏡像異性的に濃縮された標題の化合物（３８．５％収率）を得る：ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１５，４１７（Ｍ＋１）。
【0147】
調製物４３（＋／−）Ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ，６Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−４−メチル−４−（３−（ピリミジン−５−イル）フェニル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イルカルバメート
【化49】
【0148】
表１９における以下の化合物を、（＋／−）ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ，６Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−４−メチル−４−（３−（ピリミジン−５−イル）フェニル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イルカルバメートの調製に従って本質的に調製する。
【0149】
【表19】
【0150】
調製物４４（＋／−）Ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ，６Ｓ）−４−（３−ブロモフェニル）−６−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イルカルバメート
【化50】
【0151】
表２０における以下の化合物を、（＋／−）ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ，６Ｓ）−４−（３−ブロモフェニル）−６−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イルカルバメートの調製に従って本質的に調製する。
【0152】
【表20】
【0153】
調製物４５（＋／−）Ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ，６Ｓ）−４−（４−フルオロ−３−（ピリミジン−５−イル）フェニル）−６−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イルカルバメート
【化51】
調製物４５：標題の化合物（４６０ｍｇ,４１％収率）：ＭＳ（ｍ／ｚ）：４６１（Ｍ＋１）；および
調製物４５ａ：（＋／−）２−（（４Ｓ，６Ｓ）−２−アミノ−４−（４−フルオロ−３−（ピリミジン−５−イル）フェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−６−イル）プロパン−２−オール、（１４５ｍｇ）：ＭＳ（ｍ／ｚ）：３６１（Ｍ＋１）。
【0154】
表２１における以下の化合物を、（＋／−）ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ，６Ｓ）−４−（４−フルオロ−３−（ピリミジン−５−イル）フェニル）−６−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イルカルバメートの調製に従って本質的に調製する。
【0155】
【表21】
【0156】
調製物４６Ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ，６Ｓ）−４−（４−フルオロ−３−（ピリミジン−５−イル）フェニル）−６−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イルカルバミメート
【化52】
【実施例】
【0157】
実施例１（Ｓ）−４−（３−（２−フルオロピリジン−３−イル）フェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−アミン二塩酸塩
【化53】
【0158】
実施例２（Ｓ）−４−［３−（５−クロロ−２−フルオロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］チアジン−２−イルアミン二塩酸塩
【化54】
【0159】
表２２の以下の化合物を、（Ｓ）−４−［３−（５−クロロ−２−フルオロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］チアジン−２−イルアミン二塩酸の調製に記載されるように本質的に調製する。
【0160】
【表22】
【0161】
実施例５（Ｓ）−４−（２，４−ジフルオロ−５−ピリミジン−５−イル−フェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］チアジン−２−イルアミン
【化55】
【0162】
表２３の以下の化合物を、（Ｓ）−４−（２，４−ジフルオロ−５−ピリミジン−５−イル−フェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］チアジン−２−イルアミンの調製に従って本質的に調製する。
【0163】
【表23-1】
【表23-2】
【0164】
実施例１８（Ｓ）−４−メチル−４−（３−ピリミジン−５−イル−フェニル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］チアジン−２−イルアミン二塩酸塩
１００℃にて、（Ｓ）−Ｎ−［４−メチル−４−（３−ピリミジン−５−イル−フェニル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］チアジン−２−イル］−アセトアミド（２．７ｇ，８．３ｍｍｏｌ，１．０当量）の溶液を、５Ｎの塩化水素（５０ｍＬ，２５０ｍｍｏｌ，３０当量）中で２時間攪拌する。反応物を冷却し、揮発性物質を減圧下で除去する。得られた残留物を水に溶解し、酢酸エチルで抽出する。水層を飽和炭酸水素ナトリウムで中和し、酢酸エチルで抽出する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、残留物を得る。その残留物をシリカゲルプラグで濾過し、酢酸エチルで洗浄する。シリカゲルプラグをさらに、酢酸エチルおよび１０％のイソプロピルアミンを含む酢酸エチルで洗浄する。酢酸エチル洗浄液中の１０％のイソプロピルアミンを回収し、減圧下で溶媒を除去する。得られた遊離アミンを、１４ｍＬの１Ｎ ＨＣｌを含む１００ｍＬの水溶液に溶解する。得られた溶液を凍結乾燥して、標題の化合物（８１％収率）を得る：ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８５（Ｍ＋１）。
【0165】
表２４の以下の化合物を、（Ｓ）−４−メチル−４−（３−ピリミジン−５−イル−フェニル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］チアジン−２−イルアミン二塩酸塩の調製に記載されるように本質的に調製する。
【0166】
【表24】
【0167】
実施例２２（４Ｓ，６Ｒ）−４−（４−フルオロ−３−（ピリミジン−５−イル）フェニル）−４，６−ジメチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−アミン二塩酸塩
周囲温度にて、ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ，６Ｒ）−４−（４−フルオロ−３−（ピリミジン−５−イル）フェニル）−４，６−ジメチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イルカルバミン酸塩とＮ−（（４Ｓ，６Ｒ）−４−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−４，６−ジメチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イル）ベンズアミドの１：１混合物（３６０ｍｇ）を、１分間ＨＣｌガスで泡立てる。反応物をセプタムで密閉し、１８時間攪拌する。溶媒を減圧下で除去する。得られた残留物を水に溶解し、酢酸エチルで抽出する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、残留物としてＮ−（（４Ｓ，６Ｒ）−４−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−４，６−ジメチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イル）ベンズアミドを得る。得られた残留物に５Ｎ ＨＣｌ（５ｍＬ）を加え、反応物を２時間１００℃まで加熱する。溶媒を減圧下で除去して、粗標題の化合物を得る。
【0168】
最初の酢酸エチル洗浄液からの水層を飽和炭酸水素ナトリウムで中和し、（３：１）ＣＨＣｌ３：イソプロピルアルコールで抽出する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮する。この物質を粗生成物と合わせ、周囲温度および４０ｍＬ／分のフローにて分取ＨＰＬＣ：Ｘｔｅｒｒａ（登録商標）ＲＰ１８（３０×３００ｍｍ）カラムにより精製する。溶離系は、１〜５分間、０：１００（アセトニトリル：（Ｈ２Ｏ中の０．１％ ＨＣｌ））のアイソクラチックグラジェント、続いて、２０分にわたって１０：９０（アセトニトリル：（Ｈ２Ｏ中の０．１％ ＨＣｌ））から３０：７０（アセトニトリル：（Ｈ２Ｏ中の０．１％ ＨＣｌ））までのリニアグラジェントからなる。画分を合わせ、減圧下で濃縮して、標題の化合物（５０％収率）を得る：ＭＳ（ｍ／ｚ）：３１７（Ｍ＋１）。
【0169】
実施例２３（＋／−）２−（（４Ｓ，６Ｓ）−２−アミノ−４−（４−フルオロ−３−（ピリミジン−５−イル）フェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−６−イル）プロパン−２−オール
塩化水素ガスを、ジクロロメタン（５ｍＬ）中の（＋／−）ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ，６Ｓ）−６−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−４−メチル−（３−（ピリミジン−５−イル）フェニル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−２−イルカルバメート（３３ｍｇ，０．０７５ｍｍｏｌ）の溶液に通して泡立て、得られた混合物を密閉し、室温にて１６時間攪拌する。反応混合物を減圧下で濃縮し、ＭｅＯＨ中の７Ｎ ＮＨ３で溶離する、ＭｅＯＨにより平衡化したＳＣＸカラムを通過させることにより精製する。得られた遊離塩基をＭｅＯＨに溶解し、Ｅｔ２Ｏ中の１Ｎ ＨＣｌ（約５当量）を加える。混合物を濃縮し、Ｅｔ２Ｏとともに２回共蒸発させて、標題の化合物（８７％収率）を得る：ＭＳ（ｍ／ｚ）：３４３（Ｍ＋１）。
【0170】
実施例２４２−（（４Ｓ，６Ｓ）−２−アミノ−４−（４−フルオロ−３−（ピリミジン−５−イル）フェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−６−イル）プロパン−２−オール
【化56】
【0171】
表２５の以下の化合物を、２−（（４Ｓ，６Ｓ）−２−アミノ−４−（４−フルオロ−３−（ピリミジン−５−イル）フェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−チアジン−６−イル）プロパン−２−オールの調製に記載されるように本質的に調製する。
【0172】
【表25】
【0173】
インビトロでのアッセイ手順インビトロでの酵素および細胞アッセイのために、試験化合物をＤＭＳＯ中で調製して、１０ｍＭのストック溶液を作製する。そのストック溶液をＤＭＳＯ中で連続希釈して、９６ウェル丸底プレート中で最終化合物濃度が１０ｍＭ〜１ｐＭの範囲である１０点の希釈曲線を得て、その後、インビトロでの酵素および全細胞アッセイを実施する。
【0174】
インビトロでのプロテアーゼ阻害アッセイＢＡＣＥ ＦＲＥＴアッセイ
試験化合物の連続希釈を上記のように調製する。化合物をさらにＫＨ２ＰＯ４緩衝液中で２０倍に希釈する。各希釈液の１０μＬを、反応混合物（２５μＬの５０ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ４．６、１ｍＭ ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ−１００、１ｍｇ／ｍＬ ウシ血清アルブミン、および１５μＭのＦＲＥＴ基質）（Ｙａｎｇら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，９１（６）１２４９−５９（２００４）を参照のこと）を含む対応する低タンパク質結合ブラックプレートの列Ａ〜Ｈで各ウェルに加える。内容物を１０分間プレートシェーカーでウェル中で混合する。ＫＨ２ＰＯ４緩衝液中の１５μＬの２００ｐＭのヒトＢＡＣＥ（１〜４６０）：Ｆｃ（Ｖａｓｓｅｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８６，７３５−７４１（１９９９））を、基質および試験化合物を含むそのプレートに加えて、反応を開始する。プレートシェーカーで簡単に混合した後、０時の混合物のＲＦＵを３５５ｎｍの励起波長および４６０ｎｍの発光波長で記録する。反応プレートをアルミニウム箔で覆い、室温で１６〜２４時間、暗所の加湿オーブン中に維持する。インキュベーションの終わりにＲＦＵを、同じ励起および発光の設定で記録する。インキュベーションの０時と終了時でのＲＦＵの差は、化合物処理下でのＢＡＣＥの活性を表す。ＲＦＵの差を阻害濃度に対してプロットし、曲線を４−パラメーターロジスティック式にフィットさせて、ＥＣ５０およびＩＣ５０値を得る（Ｓｉｎｈａら，Ｎａｔｕｒｅ，４０２，５３７−５４０（２０００）を参照のこと）。
【0175】
本明細書に例示した化合物を上記のように本質的に試験すると、１μＭ未満のＢＡＣＥについてのＩＣ５０値を示した。以下の例示した化合物を上記のように本質的に試験すると、ＢＡＣＥについて以下の活性を示した。
【0176】
【表26】
【0177】
これらのデータは、表２６の化合物が、インビトロにおいて精製された組み換えＢＡＣＥ酵素活性を阻害することを示す。
【0178】
ヒトＢＡＣＥの発現ヒト（受託番号：ＡＦ１９０７２５）を、室温ＰＣＲによって全脳ｃＤＮＡからクローニングする。アミノ酸配列＃１〜４６０に対応するヌクレオチド配列を、ヒトＩｇＧ１（Ｆｃ）ポリペプチド（Ｖａｓｓａｒら，１９９９）をコードするｃＤＮＡに挿入する。ｈｕＢＡＣＥ：Ｆｃと名付けたＢＡＣＥ（１〜４６０）およびヒトＦｃのこの融合タンパク質をｐＪＢ０２ベクター中に構築する。ヒトＢＡＣＥ（１〜４６０）：Ｆｃ（ｈｕＢＡＣＥ：Ｆｃ）を、ＨＥＫ２９３細胞において一過性に発現する。各構築物の２５０μｇのｃＤＮＡをＦｕｇｅｎｅ６と混合し、１リットルのＨＥＫ２９３細胞に加える。トランスフェクションの４日後、馴化培地を精製のために収集する。
【0179】
ｈｕＢＡＣＥ：Ｆｃの精製ｈｕＢＡＣＥ：ＦｃをプロテインＡクロマトグラフィーにより精製する。酵素を少ないアリコートで−８０℃にて保存する。
【0180】
β−セクレターゼ活性の阻害を測定するための全細胞アッセイＨＥＫ２９３Ｓｗｅ 全細胞アッセイ
β−セクレターゼ活性の阻害を測定するための慣例の全細胞アッセイは、一般にＳｗｅｄｉｓｈ変異（ＨＥＫ２９３／ＡＰＰ７５１ｓｗと記される）と呼ばれ、Ａｂｅｔａを過剰産生することが示されている（Ｃｉｔｒｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３６０，６７２−６７４（１９９２））、天然の二重変異Ｌｙｓ６５１Ｍｅｔ６５２からＡｓｎ６５１Ｌｅｕ６５２を含むヒトＡＰＰ７５１ ｃＤＮＡを安定に発現するヒト胎児腎臓細胞株ＨＥＫ２９３ｐ（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−１５７３）を利用する。インビトロでのＡβ減少アッセイは文献に記載されている（Ｄｏｖｅｙら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，７６，１７３−１８１（２００１）；Ｓｅｕｂｅｒｔら，Ｎａｔｕｒｅ，３６１，２６０（１９９３）；およびＪｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４，１５５０−１５５５（１９９７）を参照のこと）。
【0181】
細胞（２００μＬの培地（１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ）を含む、３．５×１０４細胞／ウェルでのＨＥＫ２９３／ＡＰＰ７５１ｓｗ）を、所望の濃度で阻害剤（ＤＭＳＯで希釈した）の存在／非存在下において４〜２４時間３７℃でインキュベートする。インキュベーションの終わりに、馴化培地を、例えばＡｂｅｔａペプチドの解析によって、β−セクレターゼ活性を証明するために解析する。全Ａｂｅｔａペプチド（Ａｂｅｔａ １〜ｘ）を、捕捉抗体としてモノクローナル２６６および報告している抗体としてビオチン化３Ｄ６を用いてサンドイッチＥＬＩＳＡによって測定する。あるいは、Ａｂｅｔａ １〜４０およびＡｂｅｔａ １〜４２ペプチドを、Ａｂｅｔａ １〜４０についての捕捉抗体としてモノクローナル２Ｇ３、およびＡｂｅｔａ １〜４２についての捕捉抗体としてモノクローナル２１Ｆ２１を用いてサンドイッチＥＬＩＳＡによって測定する。Ａｂｅｔａ １〜４０およびＡｂｅｔａ １〜４２ ＥＬＩＳＡの両方は、報告している抗体としてビオチン化３Ｄ６を使用する。化合物の処理後に馴化培地に放出されるＡｂｅｔａの濃度は、このような条件下でＢＡＣＥの活性に対応する。１０点の阻害曲線をプロットし、４−パラメーターロジスティック式にフィットさせ、Ａｂｅｔａにより低下した効果についてＥＣ５０およびＩＣ５０値を得る。以下の例示した化合物を上記のように本質的に試験すると、Ａｂｅｔａにより低下した効果について以下の活性を示した。
【0182】
【表27】
【0183】
これらのデータは、表２７の化合物がインビトロで細胞において生来の内因性ヒトＢＡＣＥを阻害することを示す。
【0184】
ＰＤＡＰＰ初代ニューロンアッセイ確認全細胞アッセイもまた、ＰＤＡＰＰトランスジェニック胎仔マウスから生成した初代ニューロン培地中で実施する。初代皮質ニューロンを、１６日の胎仔のＰＤＡＰＰ胚から調製し、９６ウェルプレート（ＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）および１０％ ＦＢＳ中に１５×１０４細胞／ウェル）で培養する。インビトロで４〜６日後、培地を、Ｂ２７補足物を含む無血清ＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）と取替え、ニューロンを、所望の濃度で阻害剤（ＤＭＳＯ中で希釈する）の存在／非存在下において２４時間３７℃でインキュベートする。インキュベーションの終わりに、馴化培地を、例えばＡｂｅｔａペプチドの解析によって、β−セクレターゼ活性の証明のために解析する。全Ａｂｅｔａペプチド（Ａｂｅｔａ １〜Ｘ）を、捕捉抗体としてモノクローナル２６６および報告している抗体としてビオチン化３Ｄ６を用いてサンドイッチＥＬＩＳＡによって測定する。あるいは、Ａｂｅｔａ １〜４０およびＡｂｅｔａ １〜４２ペプチドを、Ａｂｅｔａ １〜４０についての捕捉抗体としてモノクローナル２Ｇ３、およびＡｂｅｔａ １〜４２についての捕捉抗体としてモノクローナル２１Ｆ１２を用いてサンドイッチＥＬＩＳＡによって測定する。Ａｂｅｔａ １〜４０およびＡｂｅｔａ １〜４２ ＥＬＩＳＡの両方は、報告している抗体としてビオチン化３Ｄ６を使用する。化合物処理後に馴化培地に放出されるＡｂｅｔａの濃度は、このような条件下でＢＡＣＥの活性に対応する。１０点の阻害曲線をプロットし、４−パラメーターロジスティック式にフィットさせて、Ａｂｅｔａにより低下した効果についてＥＣ５０およびＩＣ５０値を得る。以下の例示した化合物を上記のように本質的に試験すると、Ａｂｅｔａにより低下した効果について以下の活性を示した。
【0185】
【表28】
【0186】
これらのデータは、表２８の化合物がインビトロで細胞において生来の内因性マウスＢＡＣＥを阻害することを示す。
【0187】
β−セクレターゼのインビボでの阻害マウス、モルモット、イヌおよびサルを含む、いくつかの動物モデルを、化合物処理後のインビボでのβ−セクレターゼ活性の阻害をスクリーニングするために使用できる。本発明に使用する動物は、野生型、トランスジェニック、または遺伝子ノックアウト動物であってもよい。例えば、Ｇａｍｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ ３７３，５２３−５２７（１９９５）に記載されるように調製されるＰＤＡＰＰマウスモデル、および他の非トランスジェニックまたは遺伝子ノックアウト動物は、阻害化合物の存在下においてＡｂｅｔａのインビボでの阻害およびｓＡＰＰｂｅｔａ産生を解析するのに有用である。一般に、２〜１２ヶ月齢のＰＤＡＰＰマウス、遺伝子ノックアウトマウス、または非トランスジェニック動物に、コーンオイル、シクロデキストラン、リン酸緩衝液、ＰＨＡＲＭＡＳＯＬＶＥ（登録商標）などのビヒクル、または他の適切なビヒクルで処方される化合物を投与する。化合物の投与の１〜２４時間後、動物を屠殺し、脳ならびに脳脊髄液および血漿を、Ａｂｅｔａ、Ｃ９９およびｓＡＰＰフラグメントの解析のために除去する（Ｄｏｖｅｙら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，７６，１７３−１８１（２００１）；およびＪｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４，１５５０−１５５５（１９９７）を参照のこと）。
【0188】
標準的な有効性研究のために、動物に種々の濃度の化合物を投与し、同じ時間に投与したビヒクル処置したコントロール群と比較する。いくらかの経時変化研究のために、脳組織、血漿または脳脊髄液を選択した動物から得て、０時で開始し、ベースラインを確立する。化合物を他の群に投与し、投与後、種々の時間で屠殺する。脳組織、血漿または脳脊髄液を選択した動物から得て、例えば特異的サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイによって、Ａｂｅｔａペプチド、ｓＡＰＰｂｅｔａおよび他のＡＰＰフラグメントを含む、ＡＰＰ切断産物の存在について解析する。試験期間の終わりに、動物を屠殺し、脳組織、血漿または脳脊髄液を、Ａｂｅｔａペプチド、Ｃ９９およびｓＡＰＰｂｅｔａの存在について解析する。ＡＰＰトランスジェニック動物の脳組織もまた、化合物の処置後のβ−アミロイドプラークの量について解析する。
【0189】
阻害化合物を投与した動物（ＰＤＡＰＰまたは他のＡＰＰトランスジェニックまたは非トランスジェニックマウス）は、ビヒクル処置したコントロールまたは０時のコントロールと比較した場合、脳組織、血漿または脳脊髄液におけるＡｂｅｔａまたはｓＡＰＰｂｅｔａの減少および脳組織におけるβアミロイドプラークの低下を示し得る。例えば、若い雄性ＰＤＡＰＰマウスに対する実施例１９の化合物の１００ｍｇ／ｋｇの皮下投与の３時間後、Ａｂｅｔａ １〜ｘペプチド、Ｃ９９およびｓＡＰＰｂレベルは、ビヒクル処置したマウスと比較して、それぞれ、大脳皮質において約３０％、５０％および２０％低下する。同様に、若い雄性ＰＤＡＰＰマウスに対する実施例５の化合物の３０ｍｇ／ｋｇの皮下投与の３時間後、Ａｂｅｔａ １〜Ｘペプチド、Ｃ９９およびｓＡＰＰｂレベルは、ビヒクル処置したマウスと比較して、それぞれ、約５０％、４５％および３０％低下する。実施例５の化合物の１０ｍｇ／ｋｇ用量の経口投与の３時間後、脳Ａｂｅｔａ、Ｃ９９およびｓＡＰＰｂの変化と一致して、血漿およびＣＳＦ Ａｂｅｔａ １〜ｘレベルは、それぞれ、約５０％および６０％減少する。
【0190】
国際公開第２００７／０４９５３２号に例示される化合物およびその鏡像異性体を上記のアッセイに本質的に記載されるように試験すると、以下の活性を示した。
【0191】
【表29】
【0192】
本発明の化合物は好ましくは、種々の経路によって投与される医薬組成物として処方される。最も好ましくは、このような化合物は経口投与用である。このような医薬組成物およびそれを調製するためのプロセスは、当該分野において周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏら，ｅｄｓ．，第１９版，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，１９９５）を参照のこと。
【0193】
式Ｉの化合物は、通常、広い用量範囲にわたって有効である。例えば、１日あたりの用量は、通常、体重１ｋｇあたり約０．０１〜約３０ｍｇの範囲内である。一部の例において、前述の範囲の下限より低い用量レベルがより適切であってもよく、一方、他の場合において、さらに多い用量が、いかなる有害な副作用も引き起こさずに利用されてもよく、従って、上記の用量範囲は、本発明の範囲を限定することを決して意図するものではない。実際に投与される化合物の量は、治療される状態、選択される投与経路、投与される実際の化合物（複数も含む）、年齢、体重、および個々の患者の反応、ならびに患者の症状の重症度を含む、関連する状況を考慮して医師によって決定されることは理解されるだろう。