特許 5721729 活性産生送達分子

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5721729

(24)【登録日】2015年4月3日

(45)【発行日】2015年5月20日

(54)【発明の名称】活性産生送達分子

(51)【国際特許分類】

   C07C 237/06 20060101AFI20150430BHJP

   A61K 47/18 20060101ALI20150430BHJP

   A61K 47/44 20060101ALI20150430BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20150430BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20150430BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20150430BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20150430BHJP

   A61P 3/06 20060101ALI20150430BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20150430BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20150430BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20150430BHJP

   A61P 19/08 20060101ALI20150430BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20150430BHJP

【ＦＩ】

   C07C237/06

   A61K47/18

   A61K47/44

   A61K48/00

   A61K31/7088

   A61P35/00

   A61P1/16

   A61P3/06

   A61P29/00

   A61P3/00

   A61P19/02

   A61P29/00 101

   A61P19/08

   A61P9/00

【請求項の数】12

【全頁数】62

(21)【出願番号】特願2012-538001(P2012-538001)

(86)(22)【出願日】2010年11月4日

(65)【公表番号】特表2013-510165(P2013-510165A)

(43)【公表日】2013年3月21日

(86)【国際出願番号】US2010055516

(87)【国際公開番号】WO2011057020

(87)【国際公開日】20110512

【審査請求日】2013年11月1日

(31)【優先権主張番号】61/258,115

(32)【優先日】2009年11月4日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】507328184

【氏名又は名称】マリーナ バイオテック，インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100081422

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 光雄

(74)【代理人】

【識別番号】100084146

【弁理士】

【氏名又は名称】山崎 宏

(74)【代理人】

【識別番号】100156122

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 剛

(72)【発明者】

【氏名】ファム， リナータ

(72)【発明者】

【氏名】アダミー， ロジャー シー．

(72)【発明者】

【氏名】フォスナウ， キャシー エル．

(72)【発明者】

【氏名】ハービー， ピエロ

(72)【発明者】

【氏名】ジョーンズ， レイチェル イー．

(72)【発明者】

【氏名】セス， シャグナ

(72)【発明者】

【氏名】ハウストン， マイケル イー． ジュニア

(72)【発明者】

【氏名】テンプリン， マイケル ブイ．

【審査官】 近藤 政克

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２００８／１３７７５８（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｃ ２３７／０６

Ａ６１Ｋ ３１／７０８８

Ａ６１Ｋ ４７／１８

Ａ６１Ｋ ４７／４４

Ａ６１Ｋ ４８／００

Ａ６１Ｐ １／１６

Ａ６１Ｐ ３／００

Ａ６１Ｐ ３／０６

Ａ６１Ｐ ９／００

Ａ６１Ｐ １９／０２

Ａ６１Ｐ １９／０８

Ａ６１Ｐ ２９／００

Ａ６１Ｐ ３５／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

以下：(18:1(3))-DAP-(18:1(3))、(18:1(5))-DAP-(18:1(5))、(18:1(7))-DAP-(18:1(7))、(18:1(9))-DAP-(18:1(9))、(18:1(11))-DAP-(18:1(11))、(18:1(12))-DAP-(18:1(12))、(18:1(3))-DAP-(18:1(5))、(18:1(3))-DAP-(18:1(7))、(18:1(3))-DAP-(18:1(9))、(18:1(3))-DAP-(18:1(11))、(18:1(3))-DAP-(18:1(12))、(18:1(5))-DAP-(18:1(7))、(18:1(5))-DAP-(18:1(9))、(18:1(5))-DAP-(18:1(11))、(18:1(5))-DAP-(18:1(12))、(18:1(7))-DAP-(18:1(9))、(18:1(7))-DAP-(18:1(11))、(18:1(7))-DAP-(18:1(12))、(18:1(9))-DAP-(18:1(11))、(18:1(9))-DAP-(18:1(12))、(18:1(11))-DAP-(18:1(12))、(18:1(3))-DAP-(18:2(9,12))、(18:1(5))-DAP-(18:2(9,12))、(18:1(7))-DAP-(18:2(9,12))、(18:1(9))-DAP-(18:2(9,12))、(18:1(11))-DAP-(18:2(9,12))、(18:1(12))-DAP-(18:2(9,12))、(18:2(9,12))-DAP-(18:1(3))、(18:2(9,12))-DAP-(18:1(5))、(18:2(9,12))-DAP-(18:1(7))、(18:2(9,12))-DAP-(18:1(9))、(18:2(9,12))-DAP-(18:1(11))、(18:2(9,12))-DAP-(18:1(12))、(18:2(9,12))-DAP-(18:2(9,12))
および上述のいずれかのカチオン形態から選択される化合物。

【請求項2】

請求項１に記載の化合物を、活性剤と接触させて含む、組成物。

【請求項3】

請求項１に記載の化合物を、活性核酸剤と接触させて含む、組成物。

【請求項4】

請求項１に記載の化合物を、活性ＲＮＡ剤と接触させて含む、組成物。

【請求項5】

請求項１に記載の化合物を、ＵｓｉＲＮＡ剤と接触させて含む、組成物。

【請求項6】

請求項１に記載の化合物を、ｓｉＲＮＡ剤と接触させて含む、組成物。

【請求項7】

請求項１に記載の化合物を、脂質、カチオン性脂質または非カチオン性脂質と混和して含む、組成物。

【請求項8】

治療用核酸を細胞に送達するための、請求項１に記載の化合物および核酸剤を含有する医薬組成物。

【請求項9】

細胞における遺伝子の発現を阻害するための、請求項１に記載の化合物および核酸剤を含有する医薬組成物。

【請求項10】

哺乳動物における遺伝子の発現を阻害するための、請求項１に記載の化合物および核酸剤を含有する医薬組成物。

【請求項11】

ヒトにおけるがん、膀胱がん、頸部のがん、肝がん、肝疾患、高コレステロール血症、炎症性疾患、代謝病、炎症、関節炎、関節リウマチ、脳炎、骨折、心疾患およびウイルス性疾患を治療するための、請求項１に記載の化合物および核酸剤を含有する医薬組成物。

【請求項12】

がん、膀胱がん、頸部のがん、肝がん、肝疾患、高コレステロール血症、炎症性疾患、代謝病、炎症、関節炎、関節リウマチ、脳炎、骨折、心疾患およびウイルス性疾患を包含する疾患を治療するための医薬組成物の調製における、請求項１に記載の化合物の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、概して、選択された細胞、組織および器官に、ならびに被験体に作用物質を送達することにより、生物学的活性剤および治療剤の活性を産生するための、分子、組成物、方法および使用に関する。より詳細には、本発明の実施形態は、核酸剤（ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ａｇｅｎｔ）を包含する治療剤の送達に有用な分子および組成物、ならびに、薬物送達を実現し、生物学的活性を産生するための方法および使用を包含する。

【背景技術】

【0002】

選択された標的に対して生物学的にまたは薬理学的に活性となるように設計された生体分子およびバイオ医薬品分子は、アッセイにおいて立証され得る活性を有する。アッセイは、数ある中でも、選ばれた標的に対して最も活性な分子を探すために使用される。活性分子または部分が同定されたら、目標は、所望の標的に到達し薬物効果を誘発することができる、被験体への投与用薬物を開発することである。

【0003】

いくつかの生物学的活性分子は、被験体への投与時に、様々な機序による攻撃および分解の影響を受けやすい。治療用分子の送達は、標的細胞もしくは組織に到達する化合物の限定された能力によって、または、膜を通る侵入もしくは細胞内での化合物のトラフィッキングの制限によって妨害され得る。

【0004】

したがって、生物学的活性分子の薬物としての使用は、該分子を細胞内部へ輸送および送達する能力に全面的に依存し得る。活性分子を送達するための１つの戦略は、該分子を合成担体分子と組み合わせるまたは対にすることである。担体分子は、細胞、組織または他の標的において生物学的活性を産生する輸送および送達特性を提供することができる。これは、治療体系の探索が、本質的には、有効な合成担体分子の探索となり得ることを意味する。

【0005】

担体分子は、例えば活性剤を封入するまたは活性剤と結合することにより、活性剤を分解から保護することができる。加えて、担体分子は、負に帯電した細胞膜と相互作用して膜を横断する輸送を開始することにより、活性剤の細胞内取り込みを大幅に増大させることができる。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

例えば、最近の進歩により、活性核酸剤を細胞に導入する有効な手段の必要性が増大してきた。遺伝子サイレンシング剤、遺伝子調節剤、ＲＮＡ干渉剤、アンチセンス剤、ならびにペプチド核酸剤、リボザイム剤、ＲＮＡ剤およびＤＮＡ剤等の核酸剤は、概して、担体分子を用いて有利に送達され得る。

【0007】

必要なのは、核酸剤を包含する薬物および生物学的活性分子の全身および局所送達のためのプロセス、組成物および使用である。数ある中でも、生物学的活性分子および治療用分子の送達効率を増大させることができる送達組成物、構造および担体が長期にわたって必要とされている。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本開示は、概して細胞保護および比較的低い毒性を維持する治療法として最終的に使用するために、薬物剤の細胞内およびインビボ送達のための新規プロセス、組成物および製剤を提供する。本開示の方法および組成物は、選択された細胞、組織および器官への薬物剤の送達に有用である。

【0009】

いくつかの態様において、本開示は、活性核酸剤または分子を細胞へ送達するための、プロセス、組成物および方法を提供する。活性剤は、医薬品作用を介して、あるいはＲＮＡ干渉、またはアンチセンスもしくはリボザイムの効果の応答を生成することによってのいずれかで、治療的または薬理学的効果を提供し得る。本開示の活性剤は、ゲノム発現の調節において、または遺伝子療法に有用となり得る。

【0010】

本発明の実施形態は、Ｎ末端に長鎖アルケノイル基、およびＣ末端に長鎖アルケニルアミノ基を有するアミノ酸を含み、各長鎖基が、１２から２４個までの炭素原子および１個または複数の炭素−炭素二重結合を有する、活性産生送達分子を包含する。

【0011】

いくつかの実施形態において、活性産生送達分子は、２個以上の炭素−炭素二重結合を持つ少なくとも１個の長鎖基を有し得る。

【0012】

本発明の実施形態は、式Ｉに示される構造：Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｘａａ−ＮＨ−Ｒ^４（式Ｉ）［式中、Ｘａａは、一般式−ＮＲ^Ｎ−ＣＲ^１Ｒ^２−（Ｃ＝Ｏ）−（式中、Ｒ^１は、アミノ酸の水素ではない置換側鎖または非置換側鎖であり、
Ｒ^２、Ｒ^Ｎは、独立に、水素、または、炭素、酸素、窒素、硫黄および水素原子からなり、１から２０個までの炭素原子を有する有機基、または、Ｃ（１〜５）アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ（３〜５）アルケニル、Ｃ（３〜５）アルキニル、Ｃ（１〜５）アルカノイル、Ｃ（１〜５）アルカノイルオキシ、Ｃ（１〜５）アルコキシ、Ｃ（１〜５）アルコキシ−Ｃ（１〜５）アルキル、Ｃ（１〜５）アルコキシ−Ｃ（１〜５）アルコキシ、Ｃ（１〜５）アルキル−アミノ−Ｃ（１〜５）アルキル−、Ｃ（１〜５）ジアルキル−アミノ−Ｃ（１〜５）アルキル−、ニトロ−Ｃ（１〜５）アルキル、シアノ−Ｃ（１〜５）アルキル、アリール−Ｃ（１〜５）アルキル、４−ビフェニル−Ｃ（１〜５）アルキル、カルボキシルもしくはヒドロキシルである）を有する任意のＤ−またはＬ−アミノ酸残基であり、
Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は、独立に、天然に存在するリン脂質、糖脂質、トリアシルグリセロール、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシドもしくはガングリオシドから誘導され得る長鎖基（前記長鎖基は、１個または複数の炭素−炭素二重結合を含有する）、または置換もしくは非置換Ｃ（１２〜２４）アルケノイルであり、
−ＮＨ−Ｒ^４は、独立に、天然に存在するリン脂質、糖脂質、トリアシルグリセロール、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシドもしくはガングリオシドから誘導され得る長鎖基（前記長鎖基は、１個または複数の炭素−炭素二重結合を含有する）、または置換もしくは非置換Ｃ（１２〜２４）アルケニルアミノである］
を含む化合物およびその塩を包含する。

【0013】

活性産生送達分子は、独立に、置換または非置換Ｃ（１２〜２４）アルケノイルであるＲ^３−（Ｃ＝Ｏ）−、および、独立に、置換または非置換Ｃ（１２〜２４）アルケニルアミノである−ＮＨ−Ｒ^４を有し得る。

【0014】

活性産生送達分子は、それぞれ独立に、Ｃ１２アルケニル、Ｃ１３アルケニル、Ｃ１４アルケニル、Ｃ１５アルケニル、Ｃ１６アルケニル、Ｃ１７アルケニル、Ｃ１８アルケニル、Ｃ１９アルケニル、Ｃ２０アルケニル、Ｃ２１アルケニル、Ｃ２２アルケニル、Ｃ２３アルケニルまたはＣ２４アルケニルであるＲ^３、Ｒ^４を有し得る。

【0015】

活性産生送達分子は、
独立に、Ｃ１２アルケノイル、Ｃ１３アルケノイル、Ｃ１４アルケノイル、Ｃ１５アルケノイル、Ｃ１６アルケノイル、Ｃ１７アルケノイル、Ｃ１８アルケノイル、Ｃ１９アルケノイル、Ｃ２０アルケノイル、Ｃ２１アルケノイル、Ｃ２２アルケノイル、Ｃ２３アルケノイルまたはＣ２４アルケノイルであるＲ^３−（Ｃ＝Ｏ）−、および
独立に、Ｃ１２アルケニルアミノ、Ｃ１３アルケニルアミノ、Ｃ１４アルケニルアミノ、Ｃ１５アルケニルアミノ、Ｃ１６アルケニルアミノ、Ｃ１７アルケニルアミノ、Ｃ１８アルケニルアミノ、Ｃ１９アルケニルアミノ、Ｃ２０アルケニルアミノ、Ｃ２１アルケニルアミノ、Ｃ２２アルケニルアミノ、Ｃ２３アルケニルアミノまたはＣ２４アルケニルアミノである−ＮＨ−Ｒ^４を有し得る。

【0016】

活性産生送達分子は、
独立に、Ｃ（１２：１）アルケノイル、Ｃ（１２：２）アルケノイル、Ｃ（１２：３）アルケノイル、Ｃ（１４：１）アルケノイル、Ｃ（１４：２）アルケノイル、Ｃ（１４：３）アルケノイル、Ｃ（１６：１）アルケノイル、Ｃ（１６：２）アルケノイル、Ｃ（１６：３）アルケノイル、Ｃ（１８：１）アルケノイル、Ｃ（１８：２）アルケノイル、Ｃ（１８：３）アルケノイル、Ｃ（１８：４）アルケノイル、Ｃ（２０：１）アルケノイル、Ｃ（２０：２）アルケノイル、Ｃ（２０：３）アルケノイル、Ｃ（２０：４）アルケノイル、Ｃ（２０：５）アルケノイル、Ｃ（２２：１）アルケノイル、Ｃ（２２：４）アルケノイル、またはＣ（２２：６）アルケノイルであるＲ^３−（Ｃ＝Ｏ）−、および
独立に、Ｃ（１２：１）アルケニルアミノ、Ｃ（１２：２）アルケニルアミノ、Ｃ（１２：３）アルケニルアミノ、Ｃ（１４：１）アルケニルアミノ、Ｃ（１４：２）アルケニルアミノ、Ｃ（１４：３）アルケニルアミノ、Ｃ（１６：１）アルケニルアミノ、Ｃ（１６：２）アルケニルアミノ、Ｃ（１６：３）アルケニルアミノ、Ｃ（１８：１）アルケニルアミノ、Ｃ（１８：２）アルケニルアミノ、Ｃ（１８：３）アルケニルアミノ、Ｃ（１８：４）アルケニルアミノ、Ｃ（２０：１）アルケニルアミノ、Ｃ（２０：２）アルケニルアミノ、Ｃ（２０：３）アルケニルアミノ、Ｃ（２０：４）アルケニルアミノ、Ｃ（２０：５）アルケニルアミノ、Ｃ（２２：１）アルケニルアミノ、Ｃ（２２：４）アルケニルアミノ、またはＣ（２２：６）アルケニルアミノである−ＮＨ−Ｒ^４
を有し得る。

【0017】

活性産生送達分子は、
独立に、Ｃ（１４：１（５））アルケノイル、Ｃ（１４：１（９））アルケノイル、Ｃ（１６：１（７））アルケノイル、Ｃ（１６：１（９））アルケノイル、Ｃ（１８：１（３））アルケノイル、Ｃ（１８：１（５））アルケノイル、Ｃ（１８：１（７））アルケノイル、Ｃ（１８：１（９））アルケノイル、Ｃ（１８：１（１１））アルケノイル、Ｃ（１８：１（１２））アルケノイル、Ｃ（１８：２（９，１２））アルケノイル、Ｃ（１８：２（９，１１））アルケノイル、Ｃ（１８：３（９，１２，１５））アルケノイル、Ｃ（１８：３（６，９，１２））アルケノイル、Ｃ（１８：３（９，１１，１３））アルケノイル、Ｃ（１８：４（６，９，１２，１５））アルケノイル、Ｃ（１８：４（９，１１，１３，１５））アルケノイル、Ｃ（２０：１（９））アルケノイル、Ｃ（２０：１（１１））アルケノイル、Ｃ（２０：２（８，１１））アルケノイル、Ｃ（２０：２（５，８））アルケノイル、Ｃ（２０：２（１１，１４））アルケノイル、Ｃ（２０：３（５，８，１１））アルケノイル、Ｃ（２０：４（５，８，１１，１４））アルケノイル、Ｃ（２０：４（７，１０，１３，１６））アルケノイル、Ｃ（２０：５（５，８，１１，１４，１７））アルケノイル、Ｃ（２０：６（４，７，１０，１３，１６，１９））アルケノイル、Ｃ（２２：１（９））アルケノイル、Ｃ（２２：１（１３））アルケノイル、またはＣ（２４：１（９））アルケノイルであるＲ^３−（Ｃ＝Ｏ）−、および
独立に、Ｃ（１４：１（５））アルケニルアミノ、Ｃ（１４：１（９））アルケニルアミノ、Ｃ（１６：１（７））アルケニルアミノ、Ｃ（１６：１（９））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：１（３））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：１（５））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：１（７））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：１（９））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：１（１１））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：１（１２））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：２（９，１２））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：２（９，１１））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：３（９，１２，１５））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：３（６，９，１２））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：３（９，１１，１３））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：４（６，９，１２，１５））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：４（９，１１，１３，１５））アルケニルアミノ、Ｃ（２０：１（９））アルケニルアミノ、Ｃ（２０：１（１１））アルケニルアミノ、Ｃ（２０：２（８，１１））アルケニルアミノ、Ｃ（２０：２（５，８））アルケニルアミノ、Ｃ（２０：２（１１，１４））アルケニルアミノ、Ｃ（２０：３（５，８，１１））アルケニルアミノ、Ｃ（２０：４（５，８，１１，１４））アルケニルアミノ、Ｃ（２０：４（７，１０，１３，１６））アルケニルアミノ、Ｃ（２０：５（５，８，１１，１４，１７））アルケニルアミノ、Ｃ（２０：６（４，７，１０，１３，１６，１９））アルケニルアミノ、Ｃ（２２：１（９））アルケニルアミノ、Ｃ（２２：１（１３））アルケニルアミノ、またはＣ（２４：１（９））アルケニルアミノである−ＮＨ−Ｒ^４
を有し得る。

【0018】

いくつかの実施形態において、本発明は、活性産生送達分子を、活性剤と接触させて含む、組成物を提供する。

【0019】

いくつかの実施形態において、本発明は、活性産生送達分子を、活性核酸剤と接触させて含む、組成物を提供する。

【0020】

いくつかの実施形態において、本発明は、活性産生送達分子を、活性ＲＮＡ剤と接触させて含む、組成物を提供する。

【0021】

いくつかの実施形態において、本発明は、活性産生送達分子を、ＵｓｉＲＮＡ剤と接触させて含む、組成物を提供する。

【0022】

いくつかの実施形態において、本発明は、活性産生送達分子を、ｓｉＲＮＡ剤と接触させて含む、組成物を提供する。

【0023】

いくつかの実施形態において、本発明は、活性産生送達分子を、脂質、カチオン性脂質または非カチオン性脂質と混和して含む、組成物を提供する。

【0024】

本発明は、治療用核酸を細胞に送達するための方法であって、該細胞を、活性産生送達分子および核酸剤を含有する製剤と接触させるステップを含む方法をさらに提供し得る。

【0025】

ある特定の態様において、本発明は、細胞における遺伝子の発現を阻害するための方法であって、該細胞を、活性産生送達分子および核酸剤を含有する製剤と接触させるステップを含む方法を包含する。

【0026】

さらなる態様において、本発明は、哺乳動物における遺伝子の発現を阻害するための方法であって、該哺乳動物に、活性産生送達分子および核酸剤を含有する製剤を投与するステップを含む方法を包含する。

【0027】

いくつかの実施形態において、本開示は、ヒトにおける疾患を治療するための方法であって、活性産生送達分子および核酸剤を含有する製剤を、該ヒトに投与するステップを含み、該疾患は、がん、膀胱がん、頸部のがん（ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ）、肝がん、肝疾患、高コレステロール血症、炎症性疾患、代謝病、炎症、関節炎、関節リウマチ、脳炎、骨折、心疾患およびウイルス性疾患である方法を包含する。

【0028】

ある特定の実施形態において、活性産生送達分子は、がん、膀胱がん、頸部のがん、肝がん、肝疾患、高コレステロール血症、炎症性疾患、代謝病、炎症、関節炎、関節リウマチ、脳炎、骨折、心疾患およびウイルス性疾患を包含する、ヒトにおける疾患を治療する際に使用され得る。

【0029】

本発明は、がん、膀胱がん、頸部のがん、肝がん、肝疾患、高コレステロール血症、炎症性疾患、代謝病、炎症、関節炎、関節リウマチ、脳炎、骨折、心疾患およびウイルス性疾患を包含する疾患を治療するための、活性産生送達分子および核酸剤を含有する製剤の使用を包含する。

【0030】

本発明は、がん、膀胱がん、頸部のがん、肝がん、肝疾患、高コレステロール血症、炎症性疾患、代謝病、炎症、関節炎、関節リウマチ、脳炎、骨折、心疾患およびウイルス性疾患を包含する疾患を治療するための薬剤の調製における、活性産生送達分子および核酸剤を含有する製剤の使用を包含する。

【0031】

本発明の付加的な特色および利点は、以下の詳細な説明から、ならびに添付の図面および請求項から明白であり、これらをまとめると本発明の開示を包括する。

【図面の簡単な説明】

【0032】

【図1】図１は、本発明の活性産生送達分子Ｃ１８：２−ＤＡＰ（Ｎ，Ｎ−ｄｉＭｅ）−Ｃ１８：２を包含する製剤での尾静脈注射によって投与される因子Ｖ−ＩＩに対するＵｓｉＲＮＡについての遺伝子サイレンシング用量応答インビボマウスの図表を示す図である。算出されたＥＤ５０は、３０μｇ／ｋｇであった。

【図2】図２は、示差走査熱量測定によって評価した化合物ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１６（ＣＯ）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ（ＣＨ_２）_１７ＣＨ_３の第二の融解挙動の図表を示す図である。大ピークは、有意な熱または融解転移の存在を指示する。

【図3】図３は、本発明の実施形態を代表する示差走査熱量測定によって評価した化合物Ｃ（１８：２）オレオイル−ＤＡＢ−Ｃ（１８：２）アルケニルアミノの第二の融解挙動の図表を示す図である。図３のＤＳＣ走査は、ＤＳＣにおける熱転移ピークの完全な欠如を明らかにする。

【発明を実施するための形態】

【0033】

本開示は、治療学ならびに疾患および状態の診断および治療を包含する、最終的に薬物送達に向けられる幅広い化合物、組成物、製剤および使用を提供する。

【0034】

いくつかの実施形態において、本発明は、細胞または被験体における遺伝子発現または遺伝子活性を変調するための幅広い化合物、組成物、製剤および使用を提供する。より具体的には、本開示は活性産生送達分子に関する。

【0035】

いくつかの態様において、活性産生送達分子は、ナノ粒子形態、または層構造もしくはベシクル、または他の形態の送達増強組成物に構成され得る。

【0036】

ある特定の態様において、本発明の活性産生送達分子は、低減した、または有意でないサーモトロピックまたは融解転移を有することにより区別され得る。

【0037】

本開示の分子および組成物はさらに、核酸剤等の治療、予防および診断剤、ポリヌクレオチド、ペプチド、タンパク質、ならびに小分子化合物および薬物の送達にも使用され得る。

【0038】

本発明の分子および組成物は、ナノ粒子または層状ビヒクル内に封入されている等の形態での治療剤の送達に有用である。これらの形態は、種々の直径のナノ粒子、または二層もしくは多層構造を包含し得る。

【0039】

活性産生送達分子
本発明は、幅広い合成活性産生送達分子を提供する。

【0040】

本発明の合成活性産生送達化合物は、アミノ酸のＮ末端およびＣ末端の両方において送達増強基を置換することによって調製できる。

【0041】

本開示の送達増強基は、長鎖基、もしくは親油性尾部、もしくは長鎖アルケニル、または前述のいずれか１つの置換変化形を包含し得、該送達増強基は不飽和であり、１個または複数の炭素−炭素二重結合を含有し得る。

【0042】

いくつかの実施形態において、本発明の合成活性産生送達分子は、アミノ酸のＮ末端およびＣ末端の両方に長鎖アルケニル基を有する。

【0043】

さらなる実施形態において、本発明の合成活性産生送達分子は、アミノ酸の各末端が、１個または複数の炭素−炭素二重結合を有する長鎖置換基に結合するように、アミノ酸のＮ末端およびＣ末端の両方に長鎖アルケニル基を有する。

【0044】

追加の実施形態において、本発明の合成活性産生送達分子は、アミノ酸の各末端が、２個以上の炭素−炭素二重結合を有する長鎖置換基に結合するように、アミノ酸のＮ末端およびＣ末端の両方に長鎖アルケニル基を有する。

【0045】

本開示の送達増強または長鎖基は、炭素、酸素、窒素、硫黄および水素原子からなり、１２から２４個までの炭素原子または１２から４０個までの炭素原子を有する有機基を包含し得る。

【0046】

いくつかの実施形態において、本発明は、式Ｉに示される通りの幅広い活性産生送達分子：
Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｘａａ−ＮＨ−Ｒ^４ 式Ｉ
［式中、
Ｘａａは、一般式−ＮＲ^Ｎ−ＣＲ^１Ｒ^２−（Ｃ＝Ｏ）−（式中、
Ｒ^１は、アミノ酸の水素ではない置換側鎖または非置換側鎖であり、
Ｒ^２、Ｒ^Ｎは、独立に、水素、または、炭素、酸素、窒素、硫黄および水素原子からなり、１から２０個までの炭素原子を有する有機基、または、Ｃ（１〜５）アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ（３〜５）アルケニル、Ｃ（３〜５）アルキニル、Ｃ（１〜５）アルカノイル、Ｃ（１〜５）アルカノイルオキシ、Ｃ（１〜５）アルコキシ、Ｃ（１〜５）アルコキシ−Ｃ（１〜５）アルキル、Ｃ（１〜５）アルコキシ−Ｃ（１〜５）アルコキシ、Ｃ（１〜５）アルキル−アミノ−Ｃ（１〜５）アルキル−、Ｃ（１〜５）ジアルキル−アミノ−Ｃ（１〜５）アルキル−、ニトロ−Ｃ（１〜５）アルキル、シアノ−Ｃ（１〜５）アルキル、アリール−Ｃ（１〜５）アルキル、４−ビフェニル−Ｃ（１〜５）アルキル、カルボキシルもしくはヒドロキシルである）
を有する任意のＤ−またはＬ−アミノ酸残基であり、
Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は、独立に、天然に存在するリン脂質、糖脂質、トリアシルグリセロール、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシドもしくはガングリオシドから誘導され得る長鎖基（前記長鎖基は、１個または複数の炭素−炭素二重結合を含有する）、または置換もしくは非置換Ｃ（１２〜２４）アルケノイルであり、
−ＮＨ−Ｒ^４は、独立に、天然に存在するリン脂質、糖脂質、トリアシルグリセロール、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシドもしくはガングリオシドから誘導され得る長鎖基（前記長鎖基は、１個または複数の炭素−炭素二重結合を含有する）、または置換もしくは非置換Ｃ（１２〜２４）アルケニルアミノである］
およびその塩を提供する。

【0047】

いくつかの実施形態において、Ｒ^１は、アミノ酸の水素ではない置換側鎖または非置換側鎖であり、側鎖の置換基は、水素、炭素、酸素、窒素および硫黄原子から選択される１から４０個の原子からなる有機基であってよい。

【0048】

さらなる実施形態において、本発明は、上記式Ｉに示される通りの幅広い活性産生送達分子［式中、
Ｘａａは、一般式−ＮＲ^Ｎ−ＣＲ^１Ｒ^２−（Ｃ＝Ｏ）−（式中、
Ｒ^１は、アミノ酸の水素ではない置換側鎖または非置換側鎖であり、
Ｒ^２、Ｒ^Ｎは、独立に、水素、または、炭素、酸素、窒素、硫黄および水素原子からなり、１から２０個までの炭素原子を有する有機基、または、Ｃ（１〜５）アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ（３〜５）アルケニル、Ｃ（３〜５）アルキニル、Ｃ（１〜５）アルカノイル、Ｃ（１〜５）アルカノイルオキシ、Ｃ（１〜５）アルコキシ、Ｃ（１〜５）アルコキシ−Ｃ（１〜５）アルキル、Ｃ（１〜５）アルコキシ−Ｃ（１〜５）アルコキシ、Ｃ（１〜５）アルキル−アミノ−Ｃ（１〜５）アルキル−、Ｃ（１〜５）ジアルキル−アミノ−Ｃ（１〜５）アルキル−、ニトロ−Ｃ（１〜５）アルキル、シアノ−Ｃ（１〜５）アルキル、アリール−Ｃ（１〜５）アルキル、４−ビフェニル−Ｃ（１〜５）アルキル、カルボキシルもしくはヒドロキシルである）を有する任意のＤ−またはＬ−アミノ酸残基であり、
Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は、独立に、置換もしくは非置換Ｃ（１４〜２４）アルケノイルであり、
−ＮＨ−Ｒ^４は、独立に、置換もしくは非置換Ｃ（１４〜２４）アルケニルアミノである］
およびその塩を提供する。

【0049】

さらなる実施形態において、本発明は、式Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｘａａ−ＮＨ−Ｒ^４を有する幅広い活性産生送達分子［式中、Ｘａａは、任意のＤ−またはＬ−アミノ酸残基であり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は、独立に、置換または非置換Ｃ（１４〜２４）アルケノイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は、独立に、置換または非置換Ｃ（１４〜２４）アルケニルアミノである］およびその塩を提供する。

【0050】

本発明の活性産生送達分子は、中性、アニオン性、カチオン性、両性イオン性または非イオン性であってよい。

【0051】

本明細書において使用される場合、分子の物理的電荷、状況またはイオン性は、別段の指定がない限り、ｐＨ７を有する環境を指す。

【0052】

いくつかの実施形態において、本発明は、構造

【0053】

【化1】

［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^Ｎ、Ｒ^３およびＲ^４は、上記の通り定義される］
によって表される式Ｉに対応する幅広い活性産生送達分子を提供する。

【0054】

いくつかの実施形態において、Ｒ^３およびＲ^４は、水／オクタノール分配によって定義されるもの等の十分な親油性特徴または脂溶性を付与して膜を横断する送達または細胞による取り込みを提供する、独立に選択される基である。

【0055】

ある特定の実施形態において、Ｒ^３およびＲ^４は、親油性特徴を付与して膜を横断する送達または細胞による取り込みを提供する、独立に選択される長鎖基である。

【0056】

いくつかの実施形態において、Ｒ^３、Ｒ^４は、独立に、Ｃ１２アルケニル、Ｃ１３アルケニル、Ｃ１４アルケニル、Ｃ１５アルケニル、Ｃ１６アルケニル、Ｃ１７アルケニル、Ｃ１８アルケニル、Ｃ１９アルケニル、Ｃ２０アルケニル、Ｃ２１アルケニル、Ｃ２２アルケニル、Ｃ２３アルケニルまたはＣ２４アルケニルであってよい。ある特定の実施形態において、Ｒ^３、Ｒ^４は、独立に、Ｃ（１４〜２４）アルケニル、Ｃ（１６〜２４）アルケニルまたはＣ（１８〜２４）アルケニルであってよい。

【0057】

いくつかの実施形態において、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は、独立に、Ｃ１２アルケノイル、Ｃ１３アルケノイル、Ｃ１４アルケノイル、Ｃ１５アルケノイル、Ｃ１６アルケノイル、Ｃ１７アルケノイル、Ｃ１８アルケノイル、Ｃ１９アルケノイル、Ｃ２０アルケノイル、Ｃ２１アルケノイル、Ｃ２２アルケノイル、Ｃ２３アルケノイルまたはＣ２４アルケノイルであってよい。ある特定の実施形態において、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は、独立に、Ｃ（１４〜２４）アルケノイル、Ｃ（１６〜２４）アルケノイルまたはＣ（１８〜２４）アルケノイルであってよい。

【0058】

いくつかの実施形態において、−ＮＨ−Ｒ^４は、独立に、Ｃ１２アルケニルアミノ、Ｃ１３アルケニルアミノ、Ｃ１４アルケニルアミノ、Ｃ１５アルケニルアミノ、Ｃ１６アルケニルアミノ、Ｃ１７アルケニルアミノ、Ｃ１８アルケニルアミノ、Ｃ１９アルケニルアミノ、Ｃ２０アルケニルアミノ、Ｃ２１アルケニルアミノ、Ｃ２２アルケニルアミノ、Ｃ２３アルケニルアミノまたはＣ２４アルケニルアミノであってよい。ある特定の実施形態において、−ＮＨ−Ｒ^４は、独立に、Ｃ（１４〜２４）アルケニルアミノ、Ｃ（１６〜２４）アルケニルアミノまたはＣ（１８〜２４）アルケニルアミノであってよい。

【0059】

いくつかの実施形態において、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は、独立に、Ｃ（１２：１）アルケノイル、Ｃ（１２：２）アルケノイルまたはＣ（１２：３）アルケノイルであってよい。

【0060】

いくつかの実施形態において、−ＮＨ−Ｒ^４は、独立に、Ｃ（１２：１）アルケニルアミノ、Ｃ（１２：２）アルケニルアミノまたはＣ（１２：３）アルケニルアミノであってよい。

【0061】

いくつかの実施形態において、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は、独立に、Ｃ（１４：１（５））アルケノイルつまりミリストレイン酸およびＣ（１４：１（９））アルケノイルを包含する、Ｃ（１４：１）アルケノイル、Ｃ（１４：２）アルケノイルまたはＣ（１４：３）アルケノイルであってよい。

【0062】

いくつかの実施形態において、−ＮＨ−Ｒ^４は、独立に、Ｃ（１４：１（５））アルケニルアミノおよびＣ（１４：１（９））アルケニルアミノを包含する、Ｃ（１４：１）アルケニルアミノ、Ｃ（１４：２）アルケニルアミノまたはＣ（１４：３）アルケニルアミノであってよい。

【0063】

いくつかの実施形態において、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は、独立に、Ｃ（１６：１（７））アルケノイルつまりパルミトレイン酸およびＣ（１６：１（９））アルケノイルを包含する、Ｃ（１６：１）アルケノイル、Ｃ（１６：２）アルケノイルまたはＣ（１６：３）アルケノイルであってよい。

【0064】

いくつかの実施形態において、−ＮＨ−Ｒ^４は、独立に、Ｃ（１６：１（７））アルケニルアミノおよびＣ（１６：１（９））アルケニルアミノを包含する、Ｃ（１６：１）アルケニルアミノ、Ｃ（１６：２）アルケニルアミノまたはＣ（１６：３）アルケニルアミノであってよい。

【0065】

いくつかの実施形態において、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は、独立に、Ｃ（１８：１（３））アルケノイル、Ｃ（１８：１（５））アルケノイル、Ｃ（１８：１（７））アルケノイルつまりｃｉｓ−バクセン酸、Ｃ（１８：１（９））アルケノイルつまりオレイン酸、Ｃ（１８：１（１１））アルケノイル、およびＣ（１８：１（１２））アルケノイルつまりペトロセリン酸を包含する、Ｃ（１８：１）アルケノイル、Ｃ（１８：２）アルケノイルまたはＣ（１８：３）アルケノイルであってよい。

【0066】

いくつかの実施形態において、−ＮＨ−Ｒ^４は、独立に、Ｃ（１８：１（３））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：１（５））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：１（７））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：１（９））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：１（１１））アルケニルアミノおよびＣ（１８：１（１２））アルケニルアミノを包含する、Ｃ（１８：１）アルケニルアミノ、Ｃ（１８：２）アルケニルアミノまたはＣ（１８：３）アルケニルアミノであってよい。

【0067】

いくつかの実施形態において、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は、独立に、ｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１２−オクタデカジエノイルであってよいＣ（１８：２（９，１２））アルケノイル、またはＣ（１８：２（９，１１））アルケノイルであってよい。

【0068】

いくつかの実施形態において、−ＮＨ−Ｒ^４は、独立に、Ｃ（１８：２（９，１２））アルケニルアミノ、またはＣ（１８：２（９，１１））アルケニルアミノであってよい。

【0069】

いくつかの実施形態において、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は、独立に、Ｃ（１８：３（９，１２，１５））アルケノイルまたは９，１２，１５−オクタデカトリエノイルであってよい。

【0070】

いくつかの実施形態において、−ＮＨ−Ｒ^４は、独立に、Ｃ（１８：３（９，１２，１５））アルケニルアミノであってよい。

【0071】

いくつかの実施形態において、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は、独立に、Ｃ（１８：３（６，９，１２））アルケノイル、または６，９，１２−オクタデカトリエノイルであってよい。

【0072】

いくつかの実施形態において、−ＮＨ−Ｒ^４は、独立に、Ｃ（１８：３（６，９，１２））アルケニルアミノであってよい。

【0073】

いくつかの実施形態において、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は、独立に、Ｃ（１８：３（９，１１，１３））アルケノイルまたは９，１１，１３−オクタデカトリエノイルであってよい。

【0074】

いくつかの実施形態において、−ＮＨ−Ｒ^４は、独立に、Ｃ（１８：３（９，１１，１３））アルケニルアミノであってよい。

【0075】

いくつかの実施形態において、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は、独立に、Ｃ（１８：４（６，９，１２，１５））アルケノイル、またはＣ（１８：４（９，１１，１３，１５））アルケノイルであってよい。

【0076】

いくつかの実施形態において、−ＮＨ−Ｒ^４は、独立に、Ｃ（１８：４（６，９，１２，１５））アルケニルアミノ、またはＣ（１８：４（９，１１，１３，１５））アルケニルアミノであってよい。

【0077】

いくつかの実施形態において、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は、独立に、Ｃ（２０：１（９））アルケノイル、Ｃ（２０：１（１１））アルケノイル、Ｃ（２２：１（９））アルケノイル、Ｃ（２２：１（１３））アルケノイル、またはＣ（２４：１（９））アルケノイルであってよい。

【0078】

いくつかの実施形態において、−ＮＨ−Ｒ^４は、独立に、Ｃ（２０：１（９））アルケニルアミノ、Ｃ（２０：１（１１））アルケニルアミノ、Ｃ（２２：１（９））アルケニルアミノ、Ｃ（２２：１（１３））アルケニルアミノ、またはＣ（２４：１（９））アルケニルアミノであってよい。

【0079】

いくつかの実施形態において、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は、独立に、Ｃ（２０：２（８，１１））アルケノイルまたは８，１１−イコサジエノイル、Ｃ（２０：２（５，８））アルケノイル、またはＣ（２０：２（１１，１４））アルケノイルであってよい。

【0080】

いくつかの実施形態において、−ＮＨ−Ｒ^４は、独立に、Ｃ（２０：２（８，１１））アルケニルアミノ、Ｃ（２０：２（５，８））アルケニルアミノ、またはＣ（２０：２（１１，１４））アルケニルアミノであってよい。

【0081】

いくつかの実施形態において、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は、独立に、Ｃ（２０：３（５，８，１１））アルケノイルまたは５，８，１１−イコサトリエノイルであってよい。

【0082】

いくつかの実施形態において、−ＮＨ−Ｒ^４は、独立に、Ｃ（２０：３（５，８，１１））アルケニルアミノであってよい。

【0083】

いくつかの実施形態において、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は、独立に、Ｃ（２０：４（５，８，１１，１４））アルケノイル、またはＣ（２０：４（７，１０，１３，１６））アルケノイルであってよい。

【0084】

いくつかの実施形態において、−ＮＨ−Ｒ^４は、独立に、Ｃ（２０：４（５，８，１１，１４））アルケニルアミノ、またはＣ（２０：４（７，１０，１３，１６））アルケニルアミノであってよい。

【0085】

いくつかの実施形態において、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は、独立に、Ｃ（２０：５（５，８，１１，１４，１７））アルケノイルであってよい。

【0086】

いくつかの実施形態において、−ＮＨ−Ｒ^４は、独立に、Ｃ（２０：５（５，８，１１，１４，１７））アルケニルアミノであってよい。

【0087】

いくつかの実施形態において、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は、独立に、Ｃ（２０：６（４，７，１０，１３，１６，１９））アルケノイルであってよい。

【0088】

いくつかの実施形態において、−ＮＨ−Ｒ^４は、独立に、Ｃ（２０：６（４，７，１０，１３，１６，１９））アルケニルアミノであってよい。

【0089】

いくつかの実施形態において、Ｒ^３およびＲ^４は、独立に、下記の構造：

【0090】

【化2】

の１つであってよい。

【0091】

ある特定の実施形態において、Ｒ^３およびＲ^４は、独立に、オレイン酸（Ｃ１８：１、炭素９における二重結合）アルケニル、リノール酸（Ｃ１８：２、炭素９または１２における二重結合）アルケニル、リノレン（ｌｉｎｏｎｅｎｉｃ）酸（Ｃ１８：３、炭素９、１２または１５における二重結合）アルケニル、アラキドン酸（Ｃ２０：４、炭素５、８、１１または１４における二重結合）アルケニル、およびエイコサペンタエン酸（Ｃ２０：５、炭素５、８、１１、１４または１７における二重結合）アルケニルの尾部等の脂肪酸様尾部から誘導され得る。脂肪酸様尾部の他の例は、Ｄｏｎａｌｄ ＶｏｅｔおよびＪｕｄｉｔｈ Ｖｏｅｔ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第３版（２００５年）、３８３頁において見られる。

【0092】

アミノ酸の定義
本明細書において使用される場合、用語「アミノ酸」は、天然に存在するアミノ酸および天然に存在しないアミノ酸を包含する。故に、本発明の活性産生送達分子は、遺伝的にコードされたアミノ酸、天然に存在する遺伝的にコードされていないアミノ酸、または合成アミノ酸から作製され得る。

【0093】

アミノ酸の例は、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒおよびＶａｌを包含する。

【0094】

アミノ酸の例は、アゼチジン、２−アミノオクタデカン酸、２−アミノアジピン酸、３−アミノアジピン酸、２，２−ジアミノ酢酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、２−アミノ酪酸、４−アミノ酪酸、２，３−ジアミノ酪酸、２，４−ジアミノ酪酸、２−アミノイソ酪酸、４−アミノイソ酪酸、２−アミノピメリン酸、２，２’−ジアミノピメリン酸、６−アミノヘキサン酸、６−アミノカプロン酸、２−アミノヘプタン酸、デスモシン、オルニチン、シトルリン、Ｎ−メチルイソロイシン、ノルロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、フェニルグリシン、ｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチルグリシン、サルコシン、Ｎ−エチルグリシン、シクロヘキシルグリシン、４−オキソ−シクロヘキシルグリシン、Ｎ−エチルアスパラギン、シクロヘキシルアラニン、ｔ−ブチルアラニン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、３−クロロアラニン、３−ベンゾチエニルアラニン、４−ハロフェニルアラニン、４−クロロフェニルアラニン、２−フルオロフェニルアラニン、３−フルオロフェニルアラニン、４−フルオロフェニルアラニン、ペニシラミン、２−チエニルアラニン、メチオニン、メチオニンスルホキシド、ホモアルギニン、ノルアルギニン、ノル−ノルアルギニン、Ｎ−アセチルリジン、４−アミノフェニルアラニン、Ｎ−メチルバリン、ホモシステイン、ホモセリン、ヒドロキシリジン、アロ−ヒドロキシリジン、３−ヒドロキシプロリン、４−ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロ−イソロイシン、６−Ｎ−メチルリジン、ノルバリン、Ｏ−アリル−セリン、Ｏ−アリル−スレオニン、アルファ−アミノヘキサン酸、アルファ−アミノ吉草酸およびピログルタミン酸を包含する。

【0095】

本明細書において使用される場合、用語「アミノ酸」は、アルファ−およびベータ−アミノ酸を包含する。

【0096】

他のアミノ酸残基は、Ｆａｓｍａｎ、ＣＲＣ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．、（１９８９年）において見ることができる。

【0097】

概して、化合物は１つまたは複数のキラル中心を含有し得る。１つまたは複数のキラル中心を含有する化合物は、「異性体」、「立体異性体」、「ジアステレオマー」、「鏡像異性体」、「光学異性体」として、または「ラセミ混合物」として記述されるものを包含し得る。立体化学命名法に関する協定、例えば、Ｃａｈｎ、ＩｎｇｏｌｄおよびＰｒｅｌｏｇの立体異性体命名規則、ならびに、立体化学の決定および立体異性体の分離のための方法は、当技術分野において公知である。例えば、Ｍｉｃｈａｅｌ Ｂ． ＳｍｉｔｈおよびＪｅｒｒｙ Ｍａｒｃｈ、Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第５版、２００１年を参照されたい。本開示の化合物および構造は、考えられるすべての異性体、立体異性体、ジアステレオマー、鏡像異性体、および／またはそのラセミまたは別様の任意の混合物を包含する規定の化合物もしくは構造について存在することが理解されるであろう光学異性体を包括するように意味付けられている。

【0098】

特に、長鎖基Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−および−ＮＨ−Ｒ^４は、その任意の混合物を包含する、存在すると理解されるであろうシスまたはトランス異性体の任意の組合せであってよい。

【0099】

本発明の活性産生送達分子の名称
本明細書において使用される場合、呼称「（１８：１（９））−ｎｏｒＡｒｇ−（１８：１（９））」は、例えば、（Ｃ１７：１（９）アルケニル）−（Ｃ＝Ｏ）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８：１（９）アルケニル）を指し、これは（Ｃ１８：１（９）アルケノイル）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８：１（９）アルケニル）と同じであり、これは（Ｃ１８：１（９）アルケノイル）−ｎｏｒＡｒｇ−（Ｃ１８：１（９）アルケニルアミノ）と同じである。この命名において、内括弧における数字、例えば１８：１（９）における９は、（Ｃ＝Ｏ）から数えた、または第一位としてのＮＨに結合している炭素原子から数えた二重結合の位置を指す。

【0100】

ＤＡＰ活性産生送達分子
本発明の活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｘａａ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、Ｒ^３およびＲ^４は上記で定義された通りであり、ＸａａはＤ−またはＬ−ジアミノプロピオン（ｄｉａｍｉｎｏｐｒｏｐｒｉｏｎｉｃ）酸残基である］を包含する。

【0101】

本発明の活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−ＤＡＰ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＤＡＰはＤ−またはＬ−ジアミノプロピオン酸残基であり、Ｒ^３およびＲ^４は、置換または非置換Ｃ（１４〜２４）アルケニルである］およびその塩を包含する。

【0102】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−ＤＡＰ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＤＡＰはＤ−またはＬ−ジアミノプロピオン酸残基であり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：１）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は（１８：１）アルケニルアミノである］を包含し、（１８：１）アルケニルアミノは、Ｃ（１８：１（３））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：１（５））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：１（７））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：１（９））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：１（１１））アルケニルアミノおよびＣ（１８：１（１２））アルケニルアミノを包含する。

【0103】

活性産生送達分子の例は、

【0104】

【化3】

Ｎ−（３−アミノ−１−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）オレアミド
を包含する。

【0105】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−ＤＡＰ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＤＡＰはＤ−またはＬ−ジアミノプロピオン酸残基であり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：１）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は（１８：２）アルケニルアミノである］を包含し、（１８：２）アルケニルアミノはＣ（１８：２（９，１２））アルケニルアミノを包含する。

【0106】

活性産生送達分子の例は、

【0107】

【化4】

Ｎ−（３−アミノ−１−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）オレアミド
を包含する。

【0108】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−ＤＡＰ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＤＡＰはＤ−またはＬ−ジアミノプロピオン酸残基であり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：２）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は上記で定義された通りの（１８：１）アルケニルアミノである］を包含する。

【0109】

活性産生送達分子の例は、

【0110】

【化5】

（９Ｚ，１２Ｚ）−Ｎ−（３−アミノ−１−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）オクタデカ−９，１２−ジエンアミド
を包含する。

【0111】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−ＤＡＰ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＤＡＰはＤ−またはＬ−ジアミノプロピオン酸残基であり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：２）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は（１８：２）アルケニルアミノである］を包含する。

【0112】

活性産生送達分子の例は、

【0113】

【化6】

（９Ｚ，１２Ｚ）−Ｎ−（３−アミノ−１−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）オクタデカ−９，１２−ジエンアミド
を包含する。

【0114】

活性産生送達分子の例は、

【0115】

【化7】

を包含する。

【0116】

活性産生送達分子の例は、

【0117】

【化8】

を包含する。

【0118】

活性産生送達分子の例は、

【0119】

【化9】

を包含する。

【0120】

活性産生送達分子の例は、（１８：２（９，１２））−ＤＡＰ−（１８：２（９，１２））を包含する。

【0121】

ＸａａがＤ−またはＬ−ジアミノプロピオン酸残基である前述の活性産生送達分子のいずれかは、水素によって四級化されて−ＮＨ_３^＋を形成する、または１個もしくは複数のメチル、エチル、プロピルもしくはブチル基（「Ｒ」基）によって四級化されて−ＮＨ_２Ｒ^＋、−ＮＨＲ_２^＋もしくは−ＮＲ_３^＋を形成する残基の側鎖アミノ基を有し得、これらはいずれも側鎖第四級アンモニウム基またはカチオン形態である。

【0122】

ＤＡＢ活性産生送達分子
本発明の活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｘａａ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、Ｒ^３およびＲ^４は上記で定義された通りであり、ＸａａはＤ−またはＬ−２，４−ジアミノ酪酸残基である］を包含する。

【0123】

本発明の活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−ＤＡＢ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＤＡＢはＤ−またはＬ−２，４−ジアミノ酪酸残基であり、Ｒ^３およびＲ^４は、置換または非置換Ｃ（１４〜２４）アルケニルである］およびその塩を包含する。

【0124】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−ＤＡＢ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＤＡＢはＤ−またはＬ−２，４−ジアミノ酪酸残基であり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：１）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は上記で定義された通りの（１８：１）アルケニルアミノである］を包含する。

【0125】

活性産生送達分子の例は、

【0126】

【化10】

Ｎ−（４−アミノ−１−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルアミノ）−１−オキソブタン−２−イル）オレアミド
を包含する。

【0127】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−ＤＡＢ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＤＡＢはＤ−またはＬ−２，４−ジアミノ酪酸残基であり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：１）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は上記で定義された通りの（１８：２）アルケニルアミノである］を包含する。

【0128】

活性産生送達分子の例は、

【0129】

【化11】

Ｎ−（４−アミノ−１−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルアミノ）−１−オキソブタン−２−イル）オレアミド
を包含する。

【0130】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−ＤＡＢ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＤＡＢはＤ−またはＬ−２，４−ジアミノ酪酸残基であり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：２）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は（１８：１）アルケニルアミノである］を包含する。

【0131】

活性産生送達分子の例は、

【0132】

【化12】

（９Ｚ，１２Ｚ）−Ｎ−（４−アミノ−１−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルアミノ）−１−オキソブタン−２−イル）オクタデカ−９，１２−ジエンアミド
を包含する。

【0133】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−ＤＡＢ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＤＡＢはＤ−またはＬ−２，４−ジアミノ酪酸残基であり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：２）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は、本明細書においてＣ（１８：２）オレオイル−ＤＡＢ−Ｃ（１８：２）アルケニルアミノとも称される（１８：２）アルケニルアミノ、またはＣ１８：２−ＤＡＢ−Ｃ１８：２である］を包含する。

【0134】

活性産生送達分子の例は、

【0135】

【化13】

（９Ｚ，１２Ｚ）−Ｎ−（４−アミノ−１−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルアミノ）−１−オキソブタン−２−イル）オクタデカ−９，１２−ジエンアミド
を包含する。

【0136】

この分子のイオン形態は、Ｃ（１８：２）オレオイル−ＤＡＢ（ＮＨ_３^＋Ｃｌ⁻）−Ｃ（１８：２）アルケニルアミノまたはＣ１８：２−ＤＡＢ（ＮＨ_３^＋Ｃｌ⁻）−Ｃ１８：２である。

【0137】

【化14】

活性産生送達分子の例は、

【0138】

【化15】

を包含する。

【0139】

活性産生送達分子の例は、

【0140】

【化16】

を包含する。

【0141】

活性産生送達分子の例は、

【0142】

【化17】

を包含する。

【0143】

活性産生送達分子の例は、（１８：２（９，１２））−ＤＡＢ−（１８：２（９，１２））を包含する。

【0144】

ＸａａがＤ−またはＬ−２，４−ジアミノ酪酸残基である前述の活性産生送達分子のいずれかは、水素によって四級化されて−ＮＨ_３^＋を形成する、または１個もしくは複数のメチル、エチル、プロピルもしくはブチル基（「Ｒ」基）によって四級化されて−ＮＨ_２Ｒ^＋、−ＮＨＲ_２^＋もしくは−ＮＲ_３^＋を形成する残基の側鎖アミノ基を有し得、これらはいずれも側鎖第四級アンモニウム基またはカチオン形態である。

【0145】

ＤＡＡ活性産生送達分子
本発明の活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｘａａ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、Ｒ^３およびＲ^４は上記で定義された通りであり、ＸａａはＤ−またはＬ−２，２−ジアミノ酢酸残基である］を包含する。

【0146】

本発明の活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−ＤＡＡ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＤＡＡはＤ−またはＬ−２，２−ジアミノ酢酸残基であり、Ｒ^３およびＲ^４は、置換または非置換Ｃ（１４〜２４）アルケニルである］およびその塩を包含する。

【0147】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−ＤＡＡ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＤＡＡはＤ−またはＬ−２，２−ジアミノ酢酸残基であり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：１）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は（１８：１）アルケニルアミノである］を包含し、（１８：１）アルケニルアミノは、Ｃ（１８：１（３））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：１（５））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：１（７））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：１（９））アルケニルアミノ、Ｃ（１８：１（１１））アルケニルアミノおよびＣ（１８：１（１２））アルケニルアミノを包含する。

【0148】

活性産生送達分子の例は、

【0149】

【化18】

Ｎ−（１−アミノ−２−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルアミノ）−２−オキソエチル）オレアミド
を包含する。

【0150】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−ＤＡＡ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＤＡＡはＤ−またはＬ−２，２−ジアミノ酢酸残基であり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：１）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は（１８：２）アルケニルアミノである］を包含し、（１８：２）アルケニルアミノはＣ（１８：２（９，１２））アルケニルアミノまたはｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１２−オクタデカジエニルアミノを包含する。

【0151】

活性産生送達分子の例は、

【0152】

【化19】

Ｎ−（１−アミノ−２−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルアミノ）−２−オキソエチル）オレアミド
を包含する。

【0153】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−ＤＡＡ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＤＡＡはＤ−またはＬ−２，２−ジアミノ酢酸残基であり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：２）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は（１８：１）アルケニルアミノである］を包含する。

【0154】

活性産生送達分子の例は、

【0155】

【化20】

（９Ｚ，１２Ｚ）−Ｎ−（１−アミノ−２−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルアミノ）−２−オキソエチル）オクタデカ−９，１２−ジエンアミド
を包含する。

【0156】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−ＤＡＡ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＤＡＡはＤ−またはＬ−２，２−ジアミノ酢酸残基であり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：２）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は（１８：２）アルケニルアミノである］を包含する。

【0157】

活性産生送達分子の例は、

【0158】

【化21】

（９Ｚ，１２Ｚ）−Ｎ−（１−アミノ−２−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルアミノ）−２−オキソエチル）オクタデカ−９，１２−ジエンアミド
を包含する。

【0159】

活性産生送達分子の例は、

【0160】

【化22】

を包含する。

【0161】

活性産生送達分子の例は、

【0162】

【化23】

を包含する。

【0163】

活性産生送達分子の例は、

【0164】

【化24】

を包含する。

【0165】

活性産生送達分子の例は、（１８：２（９，１２））−ＤＡＡ−（１８：２（９，１２））を包含する。

【0166】

ＸａａがＤ−またはＬ−２，２−ジアミノ酢酸残基である前述の活性産生送達分子のいずれかは、水素によって四級化されて−ＮＨ_３^＋を形成する、または１個もしくは複数のメチル、エチル、プロピルもしくはブチル基（「Ｒ」基）によって四級化されて−ＮＨ_２Ｒ^＋、−ＮＨＲ_２^＋もしくは−ＮＲ_３^＋を形成する残基の側鎖アミノ基を有し得、これらはいずれも側鎖第四級アンモニウム基またはカチオン形態である。

【0167】

Ｏｒｎ活性産生送達分子
本発明の活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｘａａ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、Ｒ^３およびＲ^４は上記で定義された通りであり、ＸａａはＤ−またはＬ−オルニチンである］を包含する。

【0168】

本発明の活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏｒｎ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＯｒｎはＤ−またはＬ−オルニチンであり、Ｒ^３およびＲ^４は、置換または非置換Ｃ（１４〜２４）アルケニルである］およびその塩を包含する。

【0169】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏｒｎ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＯｒｎはＤ−またはＬ−オルニチンであり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：１）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は上記で定義された通りの（１８：１）アルケニルアミノである］を包含する。

【0170】

活性産生送達分子の例は、

【0171】

【化25】

Ｎ−（５−アミノ−１−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルアミノ）−１−オキソペンタン−２−イル）オレアミド
を包含する。

【0172】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏｒｎ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＯｒｎはＤ−またはＬ−オルニチンであり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：１）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は上記で定義された通りの（１８：２）アルケニルアミノである］を包含する。

【0173】

活性産生送達分子の例は、

【0174】

【化26】

Ｎ−（５−アミノ−１−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルアミノ）−１−オキソペンタン−２−イル）オレアミド
を包含する。

【0175】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏｒｎ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＯｒｎはＤ−またはＬ−オルニチンであり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：２）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は（１８：１）アルケニルアミノである］を包含する。

【0176】

活性産生送達分子の例は、

【0177】

【化27】

（９Ｚ，１２Ｚ）−Ｎ−（５−アミノ−１−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルアミノ）−１−オキソペンタン−２−イル）オクタデカ−９，１２−ジエンアミド
を包含する。

【0178】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏｒｎ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＯｒｎはＤ−またはＬ−オルニチンであり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：２）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は（１８：２）アルケニルアミノである］を包含する。

【0179】

活性産生送達分子の例は、

【0180】

【化28】

（９Ｚ，１２Ｚ）−Ｎ−（５−アミノ−１−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルアミノ）−１−オキソペンタン−２−イル）オクタデカ−９，１２−ジエンアミド
を包含する。

【0181】

活性産生送達分子の例は、

【0182】

【化29】

を包含する。

【0183】

活性産生送達分子の例は、

【0184】

【化30】

を包含する。

【0185】

活性産生送達分子の例は、

【0186】

【化31】

を包含する。

【0187】

活性産生送達分子の例は、（１８：２（９，１２））−Ｏｒｎ−（１８：２（９，１２））を包含する。

【0188】

ＸａａがＤ−またはＬ−オルニチンである前述の活性産生送達分子のいずれかは、水素によって四級化されて−ＮＨ_３^＋を形成する、または１個もしくは複数のメチル、エチル、プロピルもしくはブチル基（「Ｒ」基）によって四級化されて−ＮＨ_２Ｒ^＋、−ＮＨＲ_２^＋もしくは−ＮＲ_３^＋を形成するオルニチンの側鎖アミノ基を有し得、これらはいずれも側鎖第四級アンモニウム基またはカチオン形態である。

【0189】

Ｌｙｓ活性産生送達分子
本発明の活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｘａａ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、Ｒ^３およびＲ^４は上記で定義された通りであり、ＸａａはＤ−またはＬ−リシンである］を包含する。

【0190】

本発明の活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｌｙｓ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＬｙｓはＤ−またはＬ−リシンであり、Ｒ^３およびＲ^４は、置換または非置換Ｃ（１４〜２４）アルケニルである］およびその塩を包含する。

【0191】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｌｙｓ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＬｙｓはＤ−またはＬ−リシンであり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：１）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は上記で定義された通りの（１８：１）アルケニルアミノである］を包含する。

【0192】

活性産生送達分子の例は、

【0193】

【化32】

Ｎ−（６−アミノ−１−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルアミノ）−１−オキソヘキサン−２−イル）オレアミド
を包含する。

【0194】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｌｙｓ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＬｙｓはＤ−またはＬ−リシンであり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：１）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は上記で定義された通りの（１８：２）アルケニルアミノである］を包含する。

【0195】

活性産生送達分子の例は、

【0196】

【化33】

Ｎ−（６−アミノ−１−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルアミノ）−１−オキソヘキサン−２−イル）オレアミド
を包含する。

【0197】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｌｙｓ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＬｙｓはＤ−またはＬ−リシンであり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：２）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は（１８：１）アルケニルアミノである］を包含する。

【0198】

活性産生送達分子の例は、

【0199】

【化34】

（９Ｚ，１２Ｚ）−Ｎ−（６−アミノ−１−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルアミノ）−１−オキソヘキサン−２−イル）オクタデカ−９，１２−ジエンアミド
を包含する。

【0200】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｌｙｓ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＬｙｓはＤ−またはＬ−リシンであり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：２）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は（１８：２）アルケニルアミノである］を包含する。

【0201】

活性産生送達分子の例は、

【0202】

【化35】

（９Ｚ，１２Ｚ）−Ｎ−（６−アミノ−１−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルアミノ）−１−オキソヘキサン−２−イル）オクタデカ−９，１２−ジエンアミド
を包含する。

【0203】

活性産生送達分子の例は、

【0204】

【化36】

を包含する。

【0205】

活性産生送達分子の例は、

【0206】

【化37】

を包含する。

【0207】

活性産生送達分子の例は、

【0208】

【化38】

を包含する。

【0209】

活性産生送達分子の例は、（１８：２（９，１２））−Ｌｙｓ−（１８：２（９，１２））を包含する。

【0210】

ＸａａがＤ−またはＬ−リシンである前述の活性産生送達分子のいずれかは、水素によって四級化されて−ＮＨ_３^＋を形成する、または１個もしくは複数のメチル、エチル、プロピルもしくはブチル基（「Ｒ」基）によって四級化されて−ＮＨ_２Ｒ^＋、−ＮＨＲ_２^＋もしくは−ＮＲ_３^＋を形成するリシンの側鎖アミノ基を有し得、これらはいずれも側鎖第四級アンモニウム基またはカチオン形態である。

【0211】

ＮｏｒＡｒｇ活性産生送達分子
本発明の活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｘａａ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、Ｒ^３およびＲ^４は上記で定義された通りであり、ＸａａはＤ−またはＬ−ノルアルギニンである］を包含する。

【0212】

本発明の活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ｎｏｒＡｒｇはＤ−またはＬ−ノルアルギニンであり、Ｒ^３およびＲ^４は、置換または非置換Ｃ（１４〜２４）アルケニルである］およびその塩を包含する。

【0213】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ｎｏｒＡｒｇはＤ−またはＬ−ノルアルギニンであり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：１）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は上記で定義された通りの（１８：１）アルケニルアミノである］を包含する。

【0214】

活性産生送達分子の例は、

【0215】

【化39】

Ｎ−（４−グアニジノ−１−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルアミノ）−１−オキソブタン−２−イル）オレアミド
を包含する。

【0216】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ｎｏｒＡｒｇはＤ−またはＬ−ノルアルギニンであり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：１）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は上記で定義された通りの（１８：２）アルケニルアミノである］を包含する。

【0217】

活性産生送達分子の例は、

【0218】

【化40】

Ｎ−（４−グアニジノ−１−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルアミノ）−１−オキソブタン−２−イル）オレアミド
を包含する。

【0219】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ｎｏｒＡｒｇはＤ−またはＬ−ノルアルギニンであり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：２）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は（１８：１）アルケニルアミノである］を包含する。

【0220】

活性産生送達分子の例は、

【0221】

【化41】

（９Ｚ，１２Ｚ）−Ｎ−（４−グアニジノ−１−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルアミノ）−１−オキソブタン−２−イル）オクタデカ−９，１２−ジエンアミド
を包含する。

【0222】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ｎｏｒＡｒｇはＤ−またはＬ−ノルアルギニンであり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：２）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は（１８：２）アルケニルアミノである］を包含する。

【0223】

活性産生送達分子の例は、

【0224】

【化42】

（９Ｚ，１２Ｚ）−Ｎ−（４−グアニジノ−１−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルアミノ）−１−オキソブタン−２−イル）オクタデカ−９，１２−ジエンアミド
を包含する。

【0225】

活性産生送達分子の例は、

【0226】

【化43】

を包含する。

【0227】

活性産生送達分子の例は、

【0228】

【化44】

を包含する。

【0229】

活性産生送達分子の例は、

【0230】

【化45】

を包含する。

【0231】

活性産生送達分子の例は、（１８：２（９，１２））−ｎｏｎＡｒｇ−（１８：２（９，１２））を包含する。

【0232】

ＸａａがＤ−またはＬ−ノルアルギニンである前述の活性産生送達分子のいずれかは、水素によって四級化されて＝ＮＨ_２^＋を形成する、または１個もしくは複数のメチル、エチル、プロピルもしくはブチル基によって四級化されて＝ＮＨＲ^＋もしくは＝ＮＲ_２^＋を形成するノルアルギニンのグアニジノ基の窒素原子を有し得、これらはカチオン形態であり、かつ任意の互変異性形態を包含する。

【0233】

Ｈｉｓ活性産生送達分子
本発明の活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｘａａ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、Ｒ^３およびＲ^４は上記で定義された通りであり、ＸａａはＤ−またはＬ−ヒスチジンである］を包含する。

【0234】

本発明の活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｈｉｓ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＨｉｓはＤ−またはＬ−ヒスチジンであり、Ｒ^３およびＲ^４は、置換または非置換Ｃ（１４〜２４）アルケニルである］およびその塩を包含する。

【0235】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｈｉｓ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＨｉｓはＤ−またはＬ−ヒスチジンであり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：１）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は上記で定義された通りの（１８：１）アルケニルアミノである］を包含する。

【0236】

活性産生送達分子の例は、

【0237】

【化46】

Ｎ−（３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）オレアミド
を包含する。

【0238】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｈｉｓ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＨｉｓはＤ−またはＬ−ヒスチジンであり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：１）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は上記で定義された通りの（１８：２）アルケニルアミノである］を包含する。

【0239】

活性産生送達分子の例は、

【0240】

【化47】

Ｎ−（３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）オレアミド
を包含する。

【0241】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｈｉｓ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＨｉｓはＤ−またはＬ−ヒスチジンであり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：２）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は上記で定義された通りの（１８：１）アルケニルアミノである］を包含する。

【0242】

活性産生送達分子の例は、

【0243】

【化48】

（９Ｚ，１２Ｚ）−Ｎ−（３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）オクタデカ−９，１２−ジエンアミド
を包含する。

【0244】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｈｉｓ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＨｉｓはＤ−またはＬ−ヒスチジンであり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：２）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は（１８：２）アルケニルアミノである］を包含する。

【0245】

活性産生送達分子の例は、

【0246】

【化49】

（９Ｚ，１２Ｚ）−Ｎ−（３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）オクタデカ−９，１２−ジエンアミド
を包含する。

【0247】

活性産生送達分子の例は、

【0248】

【化50】

を包含する。

【0249】

活性産生送達分子の例は、

【0250】

【化51】

を包含する。

【0251】

活性産生送達分子の例は、

【0252】

【化52】

を包含する。

【0253】

活性産生送達分子の例は、（１８：２（９，１２））−Ｈｉｓ−（１８：２（９，１２））を包含する。

【0254】

ＸａａがＤ−またはＬ−ヒスチジンである前述の活性産生送達分子のいずれかは、メチル、エチル、プロピルまたはブチル基によって置換されて側鎖Ｎ−メチルヒスチジン誘導体を形成するヒスチジンの側鎖の水素原子を有し得る。

【0255】

ＸａａがＤ−またはＬ−ヒスチジンである前述の活性産生送達分子のいずれかは、水素によって四級化されて

【0256】

【化53】

を形成する、またはメチル、エチルもしくはプロピル基によって四級化されて

【0257】

【化54】

を形成するヒスチジンの側鎖の窒素原子を有し得、これらはカチオン形態であり、かつ任意の互変異性形態を包含する。

【0258】

活性産生促進送達分子
本発明の活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｘａａ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、Ｒ^３およびＲ^４は上記で定義された通りであり、ＸａａはＤ−またはＬ−プロリンである］を包含する。

【0259】

本発明の活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｐｒｏ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＰｒｏはＤ−またはＬ−プロリンであり、Ｒ^３およびＲ^４は、置換または非置換Ｃ（１４〜２４）アルケニルである］およびその塩を包含する。

【0260】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｐｒｏ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＰｒｏはＤ−またはＬ−プロリンであり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：１）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は上記で定義された通りの（１８：１）アルケニルアミノである］を包含する。

【0261】

活性産生送達分子の例は、

【0262】

【化55】

Ｎ−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルアミノ）−１−オレオイルピロリジン−２−カルボキサミド
を包含する。

【0263】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｐｒｏ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＰｒｏはＤ−またはＬ−プロリンであり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：１）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は（１８：２）アルケニルアミノである］を包含する。

【0264】

活性産生送達分子の例は、

【0265】

【化56】

Ｎ−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イル）−１−オレオイルピロリジン−２−カルボキサミド
を包含する。

【0266】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｐｒｏ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＰｒｏはＤ−またはＬ−プロリンであり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：２）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は（１８：１）アルケニルアミノである］を包含する。

【0267】

活性産生送達分子の例は、

【0268】

【化57】

Ｎ−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イル）−１−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエノイル）ピロリジン−２−カルボキサミド
を包含する。

【0269】

活性産生送達分子の例は、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｐｒｏ−ＮＨ−Ｒ^４［式中、ＰｒｏはＤ−またはＬ−プロリンであり、Ｒ^３−（Ｃ＝Ｏ）−は（１８：２）オレオイルであり、−ＮＨ−Ｒ^４は（１８：２）アルケニルアミノである］を包含する。

【0270】

活性産生送達分子の例は、

【0271】

【化58】

Ｎ−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イル）−１−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエノイル）ピロリジン−２−カルボキサミド
を包含する。

【0272】

活性産生送達分子の例は、

【0273】

【化59】

を包含する。

【0274】

活性産生送達分子の例は、

【0275】

【化60】

を包含する。

【0276】

活性産生送達分子の例は、

【0277】

【化61】

を包含する。

【0278】

活性産生送達分子の例は、（１８：２（９，１２））−Ｐｒｏ−（１８：２（９，１２））を包含する。

【0279】

ＸａａがＤ−またはＬ−プロリンである前述の活性産生送達分子のいずれかは、アミノ基によって置換されて下記の図：

【0280】

【化62】

４−アミノ−Ｎ−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イル）−１−オレオイルピロリジン−２−カルボキサミド
に示される通りの４−アミノプロリンまたはＰｒｏ（４−アミノ）を形成するプロリンの側鎖を有し得る。

【0281】

ＸａａがＤ−またはＬ−アミノプロリンである前述の活性産生送達分子は、水素によって四級化されて−ＮＨ_３^＋を形成する、または１個もしくは複数のメチル、エチル、プロピルもしくはブチル基（「Ｒ」基）によって四級化されて−ＮＨ_２Ｒ^＋、−ＮＨＲ_２^＋もしくは−ＮＲ_３^＋を形成するアミノプロリンのアミノ基の窒素原子を有し得、これらはカチオン形態であり、任意の互変異性形態を包含する。

【0282】

活性産生化合物およびその製剤を合成するための方法
本開示の活性産生送達分子は、当技術分野において公知の方法によって合成され得る。

【0283】

種々の有機基および保護基を調製するための方法は当技術分野において公知であり、それらの使用および修飾は、概して当業者の能力内である。例えば、Ｓｔａｎｌｅｙ Ｒ． ＳａｎｄｌｅｒおよびＷｏｌｆ Ｋａｒｏ、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｒｏｕｐ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ（１９８９年）；Ｇｒｅｇ Ｔ． Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（１９９６年）；Ｌｅｒｏｙ Ｇ． Ｗａｄｅ、Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ Ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ（１９８０年）を参照されたく、保護基の例は、Ｔ． Ｗ． ＧｒｅｅｎｅおよびＰ． Ｇ． Ｍ． Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ Ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（第３版、１９９１年）において見られる。

【0284】

活性剤を含有するナノ粒子含有組成物を作製するための方法およびプロセスの例は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＵＳ２０１０−０１１２０４２ Ａ１において記述されている。

【0285】

核酸剤
ある特定の態様において、本発明は、細胞または被験体における核酸剤の活性を産生するための分子および方法を提供する。概して、核酸は、細胞または血液に導入された場合、限られた時間の間だけ安定である。しかしながら、核酸ベースの作用物質は、組成物および製剤中で安定化することができ、次いでこれを細胞送達のために投与および分散させてよい。

【0286】

核酸剤の例は、遺伝子サイレンシング剤、遺伝子調節剤、アンチセンス剤、ペプチド核酸剤、リボザイム剤、ＲＮＡ剤およびＤＮＡ剤等、任意の核酸含有部分を包含する。

【0287】

本開示の活性核酸剤の例は、ＵｓｉＲＮＡを包含する。核酸剤のさらなる例は、二または三本鎖ＲＮＡ構造、ＲＮＡペプチド共役体、縮合ＲＮＡナノ粒子、ダイサー基質ＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ヘアピンＲＮＡ、および他の活性ＲＮＡ形態を包含する。

【0288】

本開示の活性剤は、活性ＲＮＡ剤のペプチド縮合物であってよい。例えば、活性ＲＮＡ剤をペプチドまたは他の生体分子と縮合することによって形成されたナノ粒子、ＲＮＡとポリマー種との縮合物は、本開示のナノ粒子組成物に積荷として充填され得る。ナノ粒子は架橋していてよい。

【0289】

本開示の活性剤の例は、ＵｓｉＲＮＡを包含する。ＵｓｉＲＮＡはＵＮＡ含有ｓｉＲＮＡであり、ＵＮＡは「アンロック核酸塩基類似体」である。本開示の核酸剤の例は、ＰＣＴ国際出願公開第ＷＯ２００８／１４７８２４号において記述されている１つまたは複数の非環式単量体を含有し得る。

【0290】

加えて、本明細書において使用される場合、用語「ｄｓＲＮＡ」、「ＲＮＡｉ誘発剤」および「ＲＮＡｉ剤」は、メロデュープレックスＲＮＡ（ｍｄＲＮＡ）、ニックｄｓＲＮＡ（ｎｄｓＲＮＡ）、ギャップｄｓＲＮＡ（ｇｄｓＲＮＡ）、低分子干渉核酸（ｓｉＲＮＡ）、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、一本鎖ＲＮＡ、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、低分子干渉オリゴヌクレオチド、低分子干渉置換オリゴヌクレオチド、低分子干渉修飾オリゴヌクレオチド、化学修飾ｄｓＲＮＡ、および転写後遺伝子サイレンシングＲＮＡ（ｐｔｇｓＲＮＡ）、ならびに上記のいずれかの前駆体を包含する配列特異的ＲＮＡｉを媒介することができる核酸分子を記述するために使用される他の用語と同義になるように意味付けられている。

【0291】

用語「大型二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡ」は、約４０塩基対（ｂｐ）から約１００ｂｐ以上よりも長い、特に最大約３００ｂｐから約５００ｂｐの任意の二本鎖ＲＮＡを指す。大型ｄｓＲＮＡの配列は、ｍＲＮＡの断片またはｍＲＮＡ全体を表し得る。二本鎖構造は、自己相補的な核酸分子によって、または２本以上の別個の相補的な核酸分子鎖のアニーリングによって形成され得る。

【0292】

追加の活性剤
本開示の化合物および組成物は、任意の生理学的または生物学的活性剤、ならびに上記した通りのまたは当技術分野において公知である活性剤の任意の組合せの送達に使用され得る。活性剤は、本開示の組成物および使用において、所望の生理学的または寛解性効果を提供するのに十分な量で存在し得る。

【0293】

本開示の化合物および組成物は、小分子化合物および薬物、ペプチド、タンパク質、抗体、モノクローナル抗体、抗体ベースの薬物、ならびにワクチン剤を包含する、哺乳類被験体における幅広い薬物剤および生物学的活性剤の送達を増強することに向けられる。

【0294】

活性剤の例は、ペプチド、タンパク質、プロテアーゼ、抗体、モノクローナル抗体、抗体ベースの薬物、ワクチン剤、または小分子薬物を包含する。

【0295】

活性剤の例は、ペプチド、タンパク質、核酸、二本鎖ＲＮＡ、造血薬、抗感染薬、抗認知症薬、抗ウイルス薬、抗腫瘍薬、解熱薬、鎮痛薬、抗炎症薬、抗潰瘍薬、抗アレルギー薬、抗鬱薬、向精神薬、強心薬、抗不整脈薬（ａｎｔｉａｒｒｙｔｈｍｉｃ）、血管拡張薬、降圧薬、降圧利尿薬、抗糖尿病薬、抗凝血薬、コレステロール低下剤、骨粗しょう症の治療薬、ホルモン、抗生物質、ワクチン、サイトカイン、ホルモン、成長因子、心血管因子、細胞接着因子、中枢または末梢神経系因子、液性電解質因子（ｈｕｍｏｒａｌ ｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅ ｆａｃｔｏｒ）、血液有機物質、骨成長因子、胃腸因子、腎臓因子、結合組織因子、感覚器官因子、免疫系因子、呼吸器系因子、生殖器因子、アンドロゲン、エストロゲン、プロスタグランジン、ソマトトロピン、ゴナドトロピン、インターロイキン、ステロイド、細菌性トキソイド、抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、抗体フラグメント、および免疫グロブリン（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｉｎ）を包含する。

【0296】

活性剤の例は、エリスロポイエチン、顆粒球コロニー刺激因子、インスリン、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、インターフェロン、ヘパリン、ヒルゲン、ヒルロス（ｈｉｒｕｌｏｓ）、およびヒルジンを包含する。

【0297】

活性剤の例は、モルヒネ、ヒドロモルホン、オキシモルホン、レボルファノール（ｌｏｖｏｒｐｈａｎｏｌ）、レバロルファン、コデイン、ナルメフェン、ナロルフィン、ナロキソン（ｎａｌｏｚｏｎｅ）、ナルトレキソン、ブプレノルフィン、ブトルファノール、またはナルブフィン、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、フルドロコルチゾン、プレドニソン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、パラメタゾン、フルオシノロン、コルセチン、アセトアミノフェン、非ステロイド性抗炎症剤ＮＳＡＩＤ、アシクロビール、リバビリン（ｒｉｂａｖａｒｉｎ）、トリフルオロチミジン（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｔｈｙｒｉｄｉｎｅ）、Ａｒａ−Ａアラビノフラノシルアデニン、アシクログアノシン（ａｃｙｌｇｕａｎｏｓｉｎｅ）、ノルデオキシグアノシン、アジドチミジン、ジデオキシアデノシン、ジデオキシシチジン、スピロノラクトン、テストステロン、エストラジオール、プロゲスチン、ゴナドトロピン、エストロゲン、プロゲステロン、パパベリン、ニトログリセリン、血管活性腸管ペプチド、カルシトニン遺伝子に関係するペプチド、シプロヘプタジン、ドクセピン、イミプラミン、シメチジン、デキストロメトルファン、クロザリル、スーパーオキシドジスムターゼ、ニューロエンケファリナーゼ（ｎｅｕｒｏｅｎｋｅｐｈａｌｉｎａｓｅ）、アンホテリシンＢ、グリセオフルビン、ミコナゾール、ケトコナゾール、チオコナゾール、イトラコナゾール、フルコナゾール、セファロスポリン、テトラサイクリン、アミノグルコシド、エリスロマイシン（ｅｒｙｔｈｒｏｍｉｃｉｎ）、ゲンタマイシン、ポリミキシンＢ、５−フルオロウラシル、ブレオマイシン、メトトレキサート、ヒドロキシ尿素、ジデオキシイノシン、フロクシウリジン、６−メルカプトプリン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、タキソール、パクリタキセル、トコフェロール、キニジン、プラゾシン、ベラパミル、ニフェジピン、ジルチアゼム、組織プラスミノゲン活性化因子ＴＰＡ、上皮成長因子ＥＧＦ、線維芽細胞成長因子ＦＧＦ酸性または塩基性、血小板由来成長因子ＰＤＧＦ、形質転換成長因子ＴＧＦ−アルファまたはベータ、血管活性腸管ペプチド、腫瘍壊死因子ＴＮＦ、視床下部（ｈｙｐｏｔｈａｌｍｉｃ）放出因子、プロラクチン、甲状腺刺激ホルモンＴＳＨ、副腎皮質刺激ホルモンＡＣＴＨ、副甲状腺ホルモンＰＴＨ、卵胞刺激ホルモンＦＳＦ、黄体形成ホルモン放出ホルモンＬＨＲＨ、エンドルフィン、グルカゴン、カルシトニン、オキシトシン、アルドエテコン（ａｌｄｏｅｔｅｃｏｎｅ）、エンケファリン（ｅｎｋａｐｈａｌｉｎ）、ソマトスタチン（ｓｏｍａｔｏｓｔｉｎ）、ソマトトロピン、ソマトメジン、アルファ−メラニン細胞刺激ホルモン、リドカイン、スフェンタニル（ｓｕｆｅｎｔａｉｎｉｌ）、テルブタリン、ドロペリドール、スコポラミン、ゴナドレリン、シクロピロックス、ブスピロン、クロモグリク酸ナトリウム、ミダゾラム、シクロスポリン、リシノプリル、カプトプリル、デラプリル、ラニチジン、ファモチジン、スーパーオキシドジスムターゼ、アスパラギナーゼ、アルギナーゼ、アルギニンデアミナーゼ（ｄｅａｍｉｎｅａｓｅ）、アデノシンデアミナーゼリボヌクレアーゼ、トリプシン、キモトリプシン（ｃｈｅｍｏｔｒｙｐｓｉｎ）、パパイン、ボンベシン、物質Ｐ、バソプレッシン、アルファ−グロブリン、トランスフェリン、フィブリノーゲン、ベータ−リポタンパク質、ベータ−グロブリン、プロトロンビン、セルロプラスミン、アルファ２−糖タンパク質、アルファ２−グロブリン、フェチュイン、アルファ１−リポタンパク質、アルファ１−グロブリン、アルブミン、およびプレアルブミンを包含する。

【0298】

活性剤の例は、モルヒネ、ヒドロモルホン、オキシモルホン、レボルファノール、レバロルファン、コデイン、ナルメフェン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ブプレノルフィン、ブトルファノールおよびナルブフィン等のオピオイドまたはオピオイドアンタゴニスト；コルチゾン、ヒドロコルチゾン、フルドロコルチゾン、プレドニソン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、パラメタゾンおよびフルオシノロン等のコルチコステロン；コルセチン、イブプロフェン、インドメタシンおよびピロキシカム等の他の抗炎症薬；アシクロビール、リバビリン、トリフルオロチミジン、Ａｒａ−Ａ（アラビノフラノシルアデニン）、アシクログアノシン、ノルデオキシグアノシン、アジドチミジン、ジデオキシアデノシンおよびジデオキシシチジン等の抗ウイルス剤；スピロノラクトン等の抗アンドロゲン；テストステロン等のアンドロゲン；エストラジオール等のエストロゲン；プロゲスチン；パパベリン等の筋弛緩薬；ニトログリセリン、血管活性腸管ペプチドおよびカルシトニンに関係する遺伝子ペプチド等の血管拡張薬；シプロヘプタジン等の抗ヒスタミン薬；ドクセピン、イミプラミンおよびシメチジン等のヒスタミン受容体部位遮断活性を持つ作用物質；デキストロメトルファン等の鎮咳薬；クロザリル等の神経弛緩薬；抗不整脈薬；抗てんかん薬；スーパーオキシドジスムターゼおよびニューロエンケファリナーゼ等の酵素；アンホテリシンＢ、グリセオフルビン、ミコナゾール、ケトコナゾール、チオコナゾール、イトラコナゾールおよびフルコナゾール等の抗真菌剤；ペニシリン、セファロスポリン、テトラサイクリン、アミノグルコシド、エリスロマイシン、ゲンタマイシン、ポリミキシンＢ等の抗菌薬；５−フルオロウラシル、ブレオマイシン、メトトレキサートおよびヒドロキシ尿素、ジデオキシイノシン、フロクシウリジン、６−メルカプトプリン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、タキソールおよびパクリタキセル等の抗がん剤；トコフェロール、レチノイド、カロテノイド、ユビキノン、金属キレート剤およびフィチン酸等の酸化防止剤；キニジン等の抗不整脈剤；プラゾシン、ベラパミル、ニフェジピンおよびジルチアゼム等の降圧剤；アセトアミノフェンおよびアスピリン等の鎮痛薬；ヒト化抗体を包含するモノクローナルおよびポリクローナル抗体ならびに抗体フラグメント；アンチセンスオリゴヌクレオチド；ならびに、ＲＮＡ、調節ＲＮＡ、干渉ＲＮＡ、ＤＮＡ、および治療用ペプチドおよびタンパク質をコードする遺伝子を含むウイルスベクターを包含する。

【0299】

ＲＮＡ剤を持つ製剤における活性産生送達分子の使用
本開示の活性産生送達分子は、薬物剤または生物学的活性剤の、様々な細胞、組織または器官へのインビボでの送達に使用され得る。作用物質をインビボで送達するためのモダリティーは、局所、経腸および非経口経路を包含する。作用物質をインビボで送達するためのモダリティーの例は、粒子または液滴の吸入、経鼻もしくは鼻咽頭（ｎａｓａｌ−ｐｈａｒｎｇｙｌ）滴下剤、粒子または懸濁液の送達、経皮および経粘膜経路、ならびに、筋肉内、皮下、静脈内、動脈内、心臓内、くも膜下、骨内（ｉｎｔｒａｏｓｓｅｕｓ）、腹腔内および硬膜外経路による注射または注入を包含する。いくつかの実施形態において、作用物質は、哺乳類被験体由来の細胞、組織または器官への直接暴露により、エクスビボで投与され得る。

【0300】

いくつかの実施形態において、本開示は、哺乳類被験体における疾患または障害を治療するための方法を提供する。活性ＲＮＡ剤および１種または複数の活性産生送達分子を含有する治療有効量の本開示の組成物を、他の添加剤とともに、該組成物によって低減、減少、下方調節またはサイレンシングされ得る遺伝子の発現または過剰発現に関連する疾患または障害を有する被験体に投与してよい。

【0301】

治療的使用に許容される溶媒、ビヒクルまたは賦形剤は、薬学分野において周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．（Ａ．Ｒ． Ｇｅｎｎａｒｏ編、１９８５年）において記述されている。

【0302】

病状を予防し、その発生を阻害し、病状を治療し、またはその症状を軽減するために必要とされる薬学的有効用量は、１日当たり体重１ｋｇにつき０．０１ｍｇから５０ｍｇの投与されるべき活性核酸の量を包含する。

【0303】

本開示は、がん、膀胱がん、肝がん、肝疾患、高コレステロール血症、炎症性疾患、代謝病、炎症、関節炎、関節リウマチ、脳炎、骨折、心疾患、ウイルス性疾患、肝炎およびインフルエンザを包含する疾患を治療するための方法を包括する。

【0304】

本開示の組成物または製剤を使用して送達される薬物剤または生物学的活性剤は、例えば、純粋形態、結晶形態、固体形態、ナノ粒子、縮合形態、複合形態または共役形態を包含する任意の形態のものが見出され得る。

【0305】

本開示は、核酸剤または遺伝子サイレンシングＲＮＡの治療的送達のための、種々の活性産生送達分子を持つ幅広い薬学的に許容される核酸組成物をさらに提供する。

【0306】

特に、本開示は、活性産生送達分子の製剤、および、標的核酸配列の翻訳または遺伝子の発現を減少させ、下方調節し、またはサイレンシングするための活性ＲＮＡ剤の、インビトロまたはインビボ送達方法を提供する。これらの活性産生送達分子の製剤は、哺乳動物における疾患の予防または治療に使用され得る。

【0307】

いくつかの態様において、本開示は、本開示の１種または複数の活性産生送達分子ならびに核酸剤の送達および投与に使用され得る１種または複数の脂質を包含する幅広い製剤を提供する。

【0308】

より詳細には、本開示の組成物は、本発明の１種または複数の活性産生送達分子を、１種または複数のカチオン性脂質または非カチオン性脂質とともに包含し得る。本開示の組成物は、本発明の１種または複数の活性産生送達分子を、１種または複数のカチオン性脂質および１種または複数の非カチオン性脂質とともに包含し得る。

【0309】

カチオン性脂質は、モノカチオン性であってもポリカチオン性であってもよい。いくつかのカチオン性脂質は、中性脂質、および特定のｐＨにおいておよそゼロの正味荷電を有する脂質、例えば両性イオン脂質を包含する。非カチオン性脂質は、アニオン性脂質も包含する。

【0310】

中性脂質の例は、コレステロール、ＤＯＰＣ、ＤＯＰＥ、ＤＤＰＣ、ＤＤＰＥ、ＤＬＰＣ、ＤＬＰＥ、ＤＭＰＣ、ＤＭＰＥ、ＤＰＰＣ、ＤＰＰＥ、ＤＳＰＣ、ＤＳＰＥ、ＤＰｈｙＰＥ、スフィンゴミエリン（ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｌｉｎ）、セラミド、ジアシルグリセロールおよびスフィンゴシンを包含する。

【0311】

カチオン性脂質の例は、ＤＯＴＡＰ、ＤＣ−ＣＨＯＬ、ＤＯＴＭＡ、エチルＰＣ、ＤＤＡＢおよびＤＯＤＡＰを包含する。

【0312】

アニオン性脂質の例は、ＣＨＥＭＳ、ＤＯＰＳ、ＰＯＰＳ、ＤＬＰＳ、ＤＭＰＳ、ＤＰＰＳ、ＤＯＰＩ、ＰＯＰＩ、ＤＭＰＩまたはＤＰＰＩを包含する。

【0313】

非カチオン性脂質は、中性、両性イオン性およびアニオン性脂質を包含する。故に、非カチオン性両性イオン脂質は、カチオン性頭部基を含有し得る。

【0314】

本開示の活性産生送達分子を、種々の標的リガンド、または活性剤を生物の細胞、組織、器官もしくは領域へ送達するための作用物質と混和、またはそれらに結合させてよい。標的化剤の例は、抗体、受容体用リガンド、ペプチド、タンパク質、レクチン、ポリ（サッカリド）、ガラクトース、マンノース、シクロデキストリン、核酸、ＤＮＡ、ＲＮＡ、アプタマー、およびポリアミノ酸を包含する。

【0315】

本発明の活性産生送達分子の核酸組成物を作製するための方法は、エタノール注射法、および規定細孔径の積層ポリカーボネート膜フィルター付きＮｏｒｔｈｅｒｎ Ｌｉｐｉｄｓリペックスエクストゥルーダーシステムを使用する押出法を包含する。プローブチップおよび浴ソニケーターを使用する音波破砕を用いて、均一経の粒子を生成することができる。相同かつ単分散の粒径は、核酸成分を添加することなく取得できる。インビトロトランスフェクション組成物では、トランスフェクション剤を作製し、緩衝剤成分によって安定化させた後に、核酸成分が添加され得る。インビボ送達組成物では、核酸成分は製剤の一部である。

【0316】

本開示の活性産生送達分子を含有する製剤は、例えば、静脈内、非経口または腹腔内経路を介して全身送達を実現するための種々の経路によって投与され得る。いくつかの実施形態において、作用物質は、例えば、肺もしくは肝臓等の標的組織の細胞内、または炎症組織内に、細胞内送達され得る。本開示に包含されるのは、被験体の細胞を除去し、除去した細胞に作用物質を送達し、該細胞を被験体に再導入することによる作用物質の送達のための、組成物および方法である。いくつかの実施形態において、本開示は、作用物質のインビボでの送達方法を提供する。組成物は被験体に、静脈内、皮下または腹腔内投与され得る。いくつかの実施形態において、本開示は、哺乳類被験体の肺への、作用物質のインビボ送達方法を提供する。

【0317】

本開示の活性産生送達分子を含有する製剤は、活性剤の医薬組成物においてインビボで使用され得る。本開示の活性剤組成物の被験体への投与は、非経口、経口、吸入、局所、経粘膜、直腸、または口腔内経路によるものであってよい。非経口使用は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、滑液嚢内、髄腔内（ｉｎｔｒａｓｔｅｍａｌ）、くも膜下、病巣内、および頭蓋内注射または注入技術を包含する。

【0318】

特定の疾患を治療するための、本開示の活性剤組成物の有効量は、概して、疾患の症状を寛解または低減させるのに十分な量である。組成物を単回投薬量として投与してよく、または反復投薬によって投与してよい。

【0319】

化学的定義
明示的な電荷を有する本開示における分子の図面は、対イオンが図面内に明らかに包含されていようがいまいが、薬学的に許容される対イオンを包含するものであることが理解されよう。

【0320】

本明細書において使用される場合、用語「ホモ」は、アミノ酸に言及する場合、追加の炭素が側鎖に付加されていることを意味し、一方で、用語「ノル」は、アミノ酸に言及する場合、炭素が側鎖から減じられていることを意味する。故に、ホモリジンは側鎖：（ＣＨ_２）_５ＮＨ_２を指す。

【0321】

概して、本明細書において使用される場合、一般的な化学用語は、別段の指定がない限り、任意の数および種類の原子を有する基を包含する、指定されている種類のすべての基を指す。例えば、「アルケニル」は、以下で定義する通りの２から２４個の炭素原子を有するアルキルを広く指し、一方で、（Ｃ１８：１）アルケニルは、１８個の炭素原子および１個の二重結合を有するアルケニルを指す。

【0322】

用語「アルキル」は、本明細書において使用される場合、１〜２４個までの炭素原子を含有する飽和、分枝鎖または非分枝鎖、置換または非置換脂肪族基を指す。この定義は、例えば、アルコキシ、アルカノイル、アラルキル、および以下で定義する他の基等、他の基のアルキル部にも当てはまる。用語「シクロアルキル」は、本明細書において使用される場合、３から１２個までの炭素原子を含有する飽和、置換または非置換環式アルキル環を指す。

【0323】

アルキル基の置換基の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ビニルまたはエテニル、アリルまたは２−プロペニル、１−プロペニル、イソプロペニルまたは１−メチルビニル、２−ブテニル、１，３−ブタジエニル、２−ペンテニル、フェニル、およびナフチルを包含する、アルキル、アルケニルおよびアリール置換基を包含する。

【0324】

アルキル基の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチルおよびｓｅｃ−ブチルを包含する。シクロアルキルの例は、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサンおよびシクロヘプタンを包含する。

【0325】

アルキル基の置換基の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ビニルまたはエテニル、アリルまたは２−プロペニル、１−プロペニル、イソプロペニルまたは１−メチルビニル、２−ブテニル、１，３−ブタジエニル、２−ペンテニル、フェニル、およびナフチルを包含する、アルキル、アルケニルおよびアリール置換基を包含する。

【0326】

用語「アルケニル」は、本明細書において使用される場合、２から２４個の炭素原子および少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を有する、不飽和、分枝鎖または非分枝鎖、置換または非置換アルキルまたはシクロアルキルを指す。用語「アルキニル」は、本明細書において使用される場合、２から２４個の炭素原子および少なくとも１個の炭素−炭素三重結合を有する、不飽和、分枝鎖または非分枝鎖、置換または非置換アルキルまたはシクロアルキルを指す。

【0327】

アルケニル基の例は、ビニルまたはエテニル、アリルまたは２−プロペニル、１−プロペニル、イソプロペニルまたは１−メチルビニル、２−ブテニル、１，３−ブタジエニル、および２−ペンテニルを包含する。

【0328】

アルケニル基の置換基の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ビニルまたはエテニル、アリルまたは２−プロペニル、１−プロペニル、イソプロペニルまたは１−メチルビニル、２−ブテニル、１，３−ブタジエニル、２−ペンテニル、フェニル、およびナフチルを包含する、アルキル、アルケニルおよびアリール置換基を包含する。

【0329】

用語「アルコキシ」は、本明細書において使用される場合、酸素原子と共有結合しているアルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニル基を指す。用語「アルカノイル」は、本明細書において使用される場合、代替として「アシル」と称され得る−Ｃ（＝Ｏ）−アルキルを指す。用語「アルカノイルオキシ」は、本明細書において使用される場合、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基を指す。用語「アルキルアミノ」は、本明細書において使用される場合、ＲおよびＲ’がそれぞれ水素またはアルキルのいずれかであり、ＲおよびＲ’の少なくとも一方がアルキルである、基−ＮＲＲ’を指す。アルキルアミノは、ＲおよびＲ’が環を形成する、ピペリジノ等の基を包含する。用語「アルキルアミノアルキル」は、−アルキル−ＮＲＲ’を指す。

【0330】

用語「アリール」は、本明細書において使用される場合、各環中４から１２個までの原子の、任意の安定な単環式、二環式または多環式炭素環系を指し、少なくとも１個の環は芳香族である。アリールのいくつかの例は、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニルおよびビフェニルを包含する。任意の置換基が二環式であり、かつ１個の環が非芳香族である場合、その結合は芳香族環とのものであることが理解される。

【0331】

アリールは、置換されていても非置換であってもよい。アリール基の置換基の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ビニルまたはエテニル、アリルまたは２−プロペニル、１−プロペニル、イソプロペニルまたは１−メチルビニル、２−ブテニル、１，３−ブタジエニル、２−ペンテニル、フェニルおよびナフチルを包含するアルキル、アルケニルおよびアリール置換基を包含する。

【0332】

用語「ヘテロアリール」は、本明細書において使用される場合、各環中４から１２個までの原子の、任意の安定な単環式、二環式または多環式炭素環系を指し、少なくとも１個の環は芳香族であり、酸素、窒素および硫黄から選択される１から４個までのヘテロ原子を含有する。ヘテロアリールのいくつかの例は、アクリジニル、キノキサリニル、ピラゾリルまたはピラゾリジニル、インドリル、ベンゾトリアゾリル、フラニル、チエニル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、キノリニル、イソキノリニル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、イミダゾリル、ピリダゾリル、ピラゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、ピリジニルまたはピリジル、ピリミジニル、ピロリル、およびテトラヒドロキノリニルを包含する。ヘテロアリールは、窒素含有ヘテロアリールのＮ−オキシド誘導体を包含する。

【0333】

用語「複素環」または「ヘテロシクリル」は、本明細書において使用される場合、５から２２個までの原子の芳香族または非芳香族環系を指し、該環原子の１から４個までは、酸素、窒素および硫黄から選択されるヘテロ原子である。故に、複素環は、ヘテロアリールまたはそのジヒドロもしくはテトラヒドロ型であってよい。

【0334】

複素環基または部分の例は、炭素原子の１つまたは複数、例えば１、２または３個が、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）およびＳ（Ｏ）_２から選択される部分で置き換えられている、単環式非芳香族、飽和または不飽和Ｃ_５〜Ｃ_１０炭素環式環を包含する。適切なヘテロシクリル基および部分は、ピラゾリジニル、ピペリジル、ピペラジニル、チオモルホリニル、Ｓ−オキソ−チオモルホリニル、Ｓ，Ｓ−ジオキソ−チオモルホリニル、モルホリニル、ピロリジニル、ピロリニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、１，３−ジオキソラニル、１，４−ジオキソリルおよびピラゾリニル基および部分を包含する。

【0335】

用語「アロイル」は、本明細書において使用される場合、置換安息香酸等の芳香族カルボン酸から誘導されるアリールラジカルを指す。用語「アラルキル」は、本明細書において使用される場合、アルキル基、例えばベンジル基と結合しているアリール基を指す。

【0336】

用語「カルボキシル」は、本明細書において使用される場合、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ⁻の基を表す。用語「カルボニル」および「アシル」は、本明細書において使用される場合、酸素原子が炭素原子＞Ｃ＝Ｏと二重結合している基を指す。用語「ヒドロキシル」は、本明細書において使用される場合、−ＯＨまたは−Ｏ⁻を指す。用語「ニトリル」または「シアノ」は、本明細書において使用される場合、−ＣＮを指す。用語「ハロゲン」または「ハロ」は、フルオロ（−Ｆ）、クロロ（−Ｃｌ）、ブロモ（−Ｂｒ）およびヨード（−Ｉ）を指す。

【0337】

用語「置換されている」は、本明細書において使用される場合、同じであっても異なっていてもよく、かつ水素置換基を包含し得る、１つまたは複数の置換または置換基を有する原子を指す。故に、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アルカノイルオキシ、アルキルアミノ、アルキルアミノアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素環、アロイルおよびアラルキルという用語は、本明細書において使用される場合、置換されている変形形態を包含する基を指す。置換されている変形形態は、線形、分枝鎖および環式変形形態、ならびに基の任意の炭素原子に結合している１個または複数の水素を置き換える置換基（複数可）を有する基を包含する。該基の炭素原子に結合し得る置換基は、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アルカノイルオキシ、アルキルアミノ、アルキルアミノアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素環、アロイル、アラルキル、アシル、ヒドロキシル、シアノ、ハロ、ハロアルキル、アミノ、アミノアシル、アルキルアミノアシル、アシルオキシ、アリールオキシ、アリールオキシアルキル、メルカプト、ニトロ、カルバミル、カルバモイルおよび複素環を包含する。例えば、エチルという用語は、−ＣＨ_２ＣＨ_３、−ＣＨＦＣＨ_３、−ＣＦ_２ＣＨ_３、−ＣＨＦＣＨ_２Ｆ、−ＣＨＦＣＨＦ_２、−ＣＨＦＣＦ_３、−ＣＦ_２ＣＨ_２Ｆ、−ＣＦ_２ＣＨＦ_２、−ＣＦ_２ＣＦ_３、および上記した通りの他の変形形態を包含するがこれらに限定されない。概して、置換基は、任意の原子または原子群でさらに置換されていてよい。

【0338】

置換基の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ビニルまたはエテニル、アリルまたは２−プロペニル、１−プロペニル、イソプロペニルまたは１−メチルビニル、２−ブテニル、１，３−ブタジエニル、２−ペンテニル、フェニルおよびナフチルを包含するアルキル、アルケニルおよびアリール置換基を包含する。

【0339】

十分に塩基性である本開示の活性産生送達分子の薬学的に許容される塩は、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、二リン酸、クロロスルホン酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、マレイン酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸、フマル酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸または酒石酸等の無機または有機酸、ならびに、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、クロロベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸およびカンファースルホン酸等のアルカン−またはアレーンスルホン酸との酸付加塩であってよい。

【0340】

十分に酸性である本開示の活性産生送達分子の薬学的に許容される塩は、アルカリ金属塩、例えば、ナトリウムもしくはカリウム塩、またはアルカリ土類金属塩、例えば、カルシウムもしくはマグネシウム塩、または亜鉛もしくはマンガン塩、またはアンモニウム塩、または、生理学的に許容されるカチオンを提供する有機塩基との塩、例えば、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、エチレンジアミン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミン、ピペリジン、モルホリンもしくはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミンとの、アルギン酸塩等のアミノ酸の塩を包含する塩、ならびに、グルクロン酸またはガラクツロン（ｇａｌａｃｔｕｎｏｒｉｃ）酸等の有機酸の塩であってよい。例えば、Ｂｅｒｇｅら、Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ．、６６巻：１〜１９頁、１９７７年を参照されたい。

【0341】

本開示のいくつかの化合物は、化合物を塩基または酸付加塩のいずれかにすることができる塩基性および酸性官能性の両方を含有し得る。

【0342】

本開示のいくつかの化合物、ペプチドおよび／またはタンパク質組成物は、１つまたは複数のキラル中心および／または幾何異性体中心（Ｅ−およびＺ−異性体）を有し得、本開示は、１つの異性体しか図面に出現していない場合であっても、すべてのそのような光学異性体、ジアステレオ異性体、幾何異性体、およびそれらの混合物を包括することを理解すべきである。

【0343】

本開示は、本明細書において開示されている化合物、ペプチドおよび／またはタンパク質組成物の、ありとあらゆる互変異性、溶媒和または非溶媒和、水和または非水和形態、および任意の原子同位体形態を包括する。

【0344】

１つまたは複数のキラル中心を含有する本開示の化合物は、鏡像異性的にもしくはジアステレオ異性的に純粋な形態で、または異性体の混合物の形態で使用され得る。誤解を避けるために付言すれば、本開示の化合物を、必要に応じて、溶媒和物の形態で使用してよい。さらに、誤解を避けるために付言すれば、本発明の化合物を任意の互変異性形態で使用してよい。

【0345】

追加の実施形態
本明細書において引用されるすべての刊行物、参考文献、特許、特許公報および特許出願は、参照によりその全体がそれぞれ個別に本明細書に組み込まれる。

【0346】

ある特定の実施形態との関係で本開示について記述し、例証目的で多くの詳細を説明してきたが、本開示は追加の実施形態を包含すること、および本明細書において記述されている詳細のいくつかは本開示から逸脱することなく大幅に変動し得ることが当業者には明白であろう。本開示は、そのような追加の実施形態、修正形態および均等物を包含する。特に、本開示は、種々の例証的な構成成分および例の特色、用語または要素の任意の組合せを包含する。

【0347】

本開示を記述する際および請求項中での、用語「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」および同様の用語の本明細書における使用は、単数形および複数形の両方を包含するものと解釈すべきである。

【0348】

用語「を含む」、「を有する」、「を包含する」および「を含有する」は、例えば「を包含するがこれらに限定されない」を意味するオープンエンドタームとして解釈されるべきである。故に、「を含む」、「を有する」、「を包含する」および「を含有する」等の用語は、排他的ではなく包含的であるとして解釈されるべきである。

【0349】

本明細書における値の範囲の列挙は、範囲内の値のいくつかが明らかに列挙されていようがいまいが、本明細書においてそれが個々に列挙されているかの如く、範囲内に収まる各任意の別々の値を個々に指す。例えば、範囲「４から１２」は、値５、５．１、５．３５、および４以上かつ１２以下である任意の他の全体値、整数値、分数値または有理数値を包含するがこれらに限定されない。本明細書において用いられる特定値は、本開示の範囲を限定するものとしてではなく、例示的なものとして理解されるであろう。

【0350】

本明細書における炭素原子数の範囲の列挙は、範囲内の値のいくつかが明らかに列挙されていようがいまいが、本明細書においてそれが個々に列挙されているかの如く、範囲内に収まる各任意の別々の値を個々に指す。例えば、用語「Ｃ１〜２４」は、種Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１５、Ｃ１６、Ｃ１７、Ｃ１８、Ｃ１９、Ｃ２０、Ｃ２１、Ｃ２２、Ｃ２３およびＣ２４を包含するがこれらに限定されない。

【0351】

本明細書において提供されている術語の定義は、列挙されていなくても、当業者に公知であるこれらの用語に関連する意味を包含すると解釈されるべきであり、本開示の範囲を限定することは意図されていない。本明細書において提供されている術語の定義は、当技術分野における代替的な定義に、または代替的な定義が本明細書において提供されている定義と矛盾する程度まで参照により本明細書に組み込まれる定義に優先すると解釈されるものとする。

【0352】

本明細書において記される例、および本明細書において使用される例示的な言葉は、単に例証を目的とするものであり、本開示の範囲を限定することは意図されていない。

【0353】

本開示に適切な化合物または分子の一覧等、例の一覧が記されている場合、収載されている化合物または分子の混合物も適切であることが当業者には明白であろう。

【実施例】

【0354】

（実施例１）
Ｃ１８：２−ＤＡＰ（Ｎ，Ｎ−ｄｉＭｅ）−Ｃ１８：２の製剤で産生されるインビボ遺伝子サイレンシング活性
本発明の合成活性産生送達分子は、有利にも、ＲＮＡ干渉のための作用物質により、遺伝子サイレンシング活性をインビボで提供する。

【0355】

図１において、活性産生送達分子Ｃ１８：２−ＤＡＰ（Ｎ，Ｎ−ｄｉＭｅ）−Ｃ１８：２を包含する製剤での尾静脈注射によって投与される第ＶＩＩ因子に対するＵｓｉＲＮＡについての遺伝子サイレンシング用量応答インビボマウスの図表が示されている。算出されたＥＤ５０は、３０μｇ／ｋｇであった。図１のｘ軸は、薬学的慣習により、体重１ｋｇ当たりの活性ＵｓｉＲＮＡのｍｇであるｍｇＡ／ｋｇを指す。ここでは、二重になっており、活性産生送達分子によって封入または担持されているＵｓｉＲＮＡの画分を指す。

【0356】

このデータは、０．５、０．１、０．０５、０．０２５、０．０１、０．００５および０．００１ｍｇ／ｋｇの用量レベルで、正常Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいて取得した。動物にはそれぞれ単回の尾静脈ＩＶ注射を投与し、投薬４８時間後、血清Ｆ−ＶＩＩの分析のために屠殺した。

【0357】

活性産生分子Ｃ１８：２−ＤＡＰ（Ｎ，Ｎ−ｄｉＭｅ）−Ｃ１８：２は、コレステロール、第二の活性産生分子Ｃ１８：２−ＤＡＢ−Ｃ１６、およびＤＳＰＥ−ＰＥＧ２ｋとともに、それぞれ５１：３１：１７：１モル％の濃度で製剤化した。

【0358】

【化63】

（実施例２）
Ｃ１８：２−ＤＡＰ（Ｎ，Ｎ−ｄｉＭｅ）−Ｃ１８：２の調製
Ｂｏｃ−ＤＡＰ（Ｎ，Ｎ−ｄｉＭｅ）−ＯＨの合成
ＣＨ_３ＣＮ中のトリフェニルホスフィンの溶液を０℃に冷却し、アゾジカルボン酸ジイソプロピル（ＤＩＡＤ）をシリンジで滴下添加した。得られた淡黄色溶液を０℃で１５分間（すべての固体が溶解するまで）撹拌し、ＣＨ_３ＣＮ中のＢｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨの溶液をゆっくり添加した。添加完了後、混合物を０℃で１０分間撹拌し、冷却浴を除去し、混合物を撹拌しながらゆっくり加温した。撹拌を終夜続け、減圧下で溶媒を除去し、ヘキサン／酢酸エチル勾配溶媒系でのフラッシュクロマトグラフィーによって残留物を直ちに精製した。減圧下で溶媒を除去した後、精製化合物をＣＨ_３ＣＮに溶解し、Ｎ，Ｎ−ジメチルトリメチルシリルアミンをラクトンの溶液に添加した。撹拌を室温で１．５続け、次いで、反応混合物を濃縮し、メタノール、続いてクエン酸を添加した。５時間後、得られた固体を濾過除去し、減圧下で溶媒を除去した。残留物をＤＣＭ／Ｈ２Ｏに取り、水相をＤＣＭで逆抽出し、濃縮し、凍結乾燥して、オフホワイトの固体を生じさせた。

【0359】

リノレイルアミンの合成
フタルイミドカリウム（１当量）およびリノレイルメタンスルホネート（１当量）の混合物を、窒素雰囲気下７０℃で撹拌した。４時間の撹拌後、出発材料の１００％変換がＴＬＣによって観察された。約５０℃まで冷却後、反応混合物を水に注ぎ入れ、生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機画分を水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で溶媒を除去し、油性固体残留物をヘキサンで処理した。固体を濾過除去し、濾液を蒸発乾固させ、粗リノレイルフタルイミドを次のステップにおいて使用した。残留物をＥｔＯＨに溶解し、ヒドラジンを添加した。混合物を２時間穏やかに還流させた（８５〜９０℃）。混合物を約５０℃に冷却しながら、得られた濃厚な白色固体を濾過し、温エタノールで洗浄した。濾液をほぼ濃縮乾固し、クロロホルムを添加した。得られた白色固体を再度濾過除去し、有機相を水で２回洗浄し、Ｎａ_２ＣＯ_３で乾燥させた。溶媒を除去して、粗黄色油（収率９５％）を得た。

【0360】

Ｃ１８：２−ＤＡＰ（Ｎ，Ｎ−ｄｉＭｅ）−Ｃ１８：２の合成
Ｂｏｃ−ＤＡＰ（Ｎ，Ｎ−ｄｉＭｅ）−ＯＨを、ＴＨＦ／ＤＣＭ溶媒混合物中の３−（ジエトキシホスホリルオキシ）−１，２，３−ベンゾトリアジン−４（３Ｈ）−オン（ＤＥＰＢＴ）および２当量のＤＩＰＥＡで１０分間予め活性化させ、続いてリノレイルアミンを添加し、その後３０分間撹拌した。粗化合物を、フラッシュクロマトグラフィー：１）順相シリカゲル（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ勾配）および２）アミンキャップシリカゲル（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ勾配）によって２回精製した。純粋なモノアルキル化中間体を１Ｍ ＨＣｌ／酢酸エチル溶液に溶解し、Ｂｏｃ基を１時間以内に除去し、続いて減圧下で溶媒を除去した。リノール酸の遊離カルボキシル基を、ＤＭＦおよびＤＣＭの１：１混合物中の（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩）（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）で１０分間予め活性化させることにより、第二アルキル鎖を結合させ、続いてＤＣＭに溶解したモノアルキル化ｄｉＭｅＤＡＰ（ＤＩＰＥＡでｐＨを６に調整したもの）を添加し、その後３０分間撹拌した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ勾配）によって精製し、１Ｍ ＨＣｌ／ＡｃＯＥｔとともに撹拌することにより、塩酸塩に変換した。最終生成物を凍結乾燥させた。

【0361】

ＴＮＳ色素アッセイによって計測した際の、この化合物のｐＫａは、５．８であった。

【0362】

（実施例３）
Ｃ１８：１−ＤＡＰ（ＮＨ_３^＋Ｃｌ⁻）−Ｃ１８：１の調製
Ｃ１８：１−ＤＡＰ−Ｃ１８：１は、下記の通りに合成した。Ｆｍｏｃ−Ｎβ−Ｂｏｃ−Ｌ−２，３−ジアミノプロピオン酸を、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、２当量のジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）に溶解し、得られた溶液を２−クロロトリチルクロリド樹脂に添加した。１時間後、樹脂をＤＣＭで洗浄し、ＤＭＦ中２０％のピペリジンでの処理によってＦｍｏｃ基を除去し、遊離α−アミンを生み出した。オレイン酸を、２−（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアンモニウム（ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｉｕｍ）ヘキサフルオロホスフェート（ＨＣＴＵ）および２当量のＤＩＰＥＡで予め活性化させ、樹脂に添加すると、陰性カイザー試験により反応は完了したと思われた。ジクロロメタン中１％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）での複数回処理により、脂質付加化合物を樹脂から開裂し、続いて減圧下で蒸発させて、遊離カルボキシレート中間体を生み出した。遊離カルボキシル基を、ＤＭＦおよびＤＣＭの１：１混合物中の（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩）（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）で１０分間予め活性化させることにより、第二アルキル鎖を結合させ、続いて同溶媒中のＣ（１８：１）アミンを添加し、その後３０分間撹拌した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ勾配）によって精製した。純粋なジアルキル化中間体を１Ｍ ＨＣｌ／酢酸エチル溶液に溶解し、１時間以内にＢｏｃ基を除去し、続いて減圧下で溶媒を除去し、得られた残留物を水で洗浄し、乾燥させた。

【0363】

ＴＮＳ色素アッセイによって計測した際の、この化合物のｐＫａは、６．０および９．７であった。

【0364】

（実施例４）
Ｃ１８：２−ＤＡＡ（ＮＨ_３^＋Ｃｌ⁻）−Ｃ１８：２の調製
Ｃ１８：２−ＤＡＡ−Ｃ１８：２は、実施例３での方法に準じ、適正な成分を用いて合成した。

【0365】

ＴＮＳ色素アッセイによって計測した際の、この化合物のｐＫａは、４．９であった。

【0366】

（実施例５）
Ｃ１８：２−ＤＡＰ（ＮＨ_３^＋Ｃｌ⁻）−Ｃ１８：２の調製
Ｃ１８：２−ＤＡＰ−Ｃ１８：２は、実施例３での方法に準じ、適正な成分を用いて合成した。ＴＮＳ色素アッセイによって計測した際の、この化合物のｐＫａは、７．６であった。

【0367】

（実施例６）
Ｃ１８：２−ＤＡＰ（Ｍｅ，Ｍｅ）−Ｃ１８：１の調製
Ｃ１８：２−ＤＡＰ（Ｍｅ，Ｍｅ）−Ｃ１８：１は、実施例３での方法に準じ、適正な成分および下記の追加ステップを用いて合成した。ＭｅＯＨに溶解した前ステップからの２本の脂肪族鎖を持つアミノ酸の粗塩酸塩に、１０当量のＡｃＯＨおよび１０当量の３７％ホルムアルデヒドを添加し、反応溶液を非常に緩やかに加熱還流した。次いで、１０当量のトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムを添加した。反応物を３０分間撹拌し、室温まで冷却し、Ｈ２Ｏおよび飽和ＮａＨＣＯ３の添加によってワークアップした。生成物をＤＣＭで抽出し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で有機溶媒を除去した。粗ジメチル化生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ勾配）によって精製した。

【0368】

ＴＮＳ色素アッセイによって計測した際の、この化合物のｐＫａは、５．３であった。

【0369】

（実施例７）
Ｃ１８：２−ＤＡＰ（ＮＨ_３^＋Ｃｌ⁻）−Ｃ１８：１の調製
Ｃ１８：２−ＤＡＰ−Ｃ１８：１は、実施例３での方法に準じ、適正な成分を用いて合成した。

【0370】

（実施例８）
Ｃ１８：３−ＤＡＰ（ＮＨ_３^＋Ｃｌ⁻）−Ｃ１８：３の調製
Ｃ１８：３−ＤＡＰ−Ｃ１８：３は、実施例３での方法に準じ、適正な成分を用いて合成した。ＴＮＳ色素アッセイによって計測した際の、この化合物のｐＫａは、５．７であった。

【0371】

（実施例９）
Ｃ１８：１−ＤＡＢ−Ｃ１８：１の調製
Ｃ１８：１−ＤＡＢ−Ｃ１８：１は、実施例３での方法に準じ、適正な成分を用いて合成した。

【0372】

（実施例１０）
Ｃ１８：１−ＤＡＢ（Ｎ−Ｍｅ，Ｎ−Ｍｅ）−Ｃ１８：１の調製
Ｃ１８：１−ＤＡＢ（Ｍｅ，Ｍｅ）−Ｃ１８：１は、実施例３での方法に準じ、適正な成分および下記の追加ステップを用いて合成した。ＭｅＯＨに溶解した前ステップからの２本の脂肪族鎖を持つアミノ酸の粗塩酸塩に、１０当量のＡｃＯＨおよび１０当量の３７％ホルムアルデヒドを添加し、反応溶液を非常に緩やかに加熱還流した。次いで、１０当量のトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムを添加した。反応物を３０分間撹拌し、室温まで冷却し、Ｈ２Ｏおよび飽和ＮａＨＣＯ３の添加によってワークアップした。生成物をＤＣＭで抽出し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で有機溶媒を除去した。粗ジメチル化生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ勾配）によって精製した。

【0373】

ＴＮＳ色素アッセイによって計測した際の、この化合物のｐＫａは、３．９および７．３であった。

【0374】

（実施例１１）
Ｃ１８：２−ＤＡＢ−Ｃ１８：２の調製および熱特性
Ｃ１８：２−ＤＡＢ−Ｃ１８：２は、実施例３での方法に準じ、適正な成分を用いて合成した。

【0375】

示差走査熱量測定を使用して、本発明の活性産生送達分子Ｃ（１８：２）−ＤＡＢ−Ｃ（１８：２）の特性を他の化合物から区別した。

【0376】

例えば、図２において、化合物ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１６（ＣＯ）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ（ＣＨ_２）_１７ＣＨ_３の、示差走査熱量測定によって評価した第二の融解挙動および熱相特性の図表が示されている（ＵＳ２００８−０３１７８３９ Ａ１参照）。図２の大ピークは、有意な熱または融解転移の存在を指示する。

【0377】

比較のために、図３において、本発明の実施形態を代表する示差走査熱量測定によって評価した化合物Ｃ（１８：２）オレオイル−ＤＡＢ−Ｃ（１８：２）アルケニルアミノの第二の融解挙動および熱相特性の図表が示されている。図３のＤＳＣ走査は、化合物における熱転移ピークの完全な欠如を明らかにする。

【0378】

（実施例１２）
Ｃ１８：２−ＤＡＢ（Ｍｅ，Ｍｅ）−Ｃ１８：２の調製
Ｃ１８：２−ＤＡＢ（Ｍｅ，Ｍｅ）−Ｃ１８：２は、実施例３での方法に準じ、適正な成分および下記の追加ステップを用いて合成した。ＭｅＯＨに溶解した前ステップからの２本の脂肪族鎖を持つアミノ酸の粗塩酸塩に、１０当量のＡｃＯＨおよび１０当量の３７％ホルムアルデヒドを添加し、反応溶液を非常に緩やかに加熱還流した。次いで、１０当量のトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムを添加した。反応物を３０分間撹拌し、室温まで冷却し、Ｈ２Ｏおよび飽和ＮａＨＣＯ３の添加によってワークアップした。生成物をＤＣＭで抽出し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で有機溶媒を除去した。粗ジメチル化生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ勾配）によって精製した。

【0379】

（実施例１３）
Ｃ１８：２−Ｏｒｎ−Ｃ１８：２の調製
Ｃ１８：２−Ｏｒｎ−Ｃ１８：２は、実施例３での方法に準じ、適正な成分を用いて合成した。

【0380】

（実施例１４）
Ｃ１８：２−Ｌｙｓ（ＮＨ_３^＋Ｃｌ⁻）−Ｃ１８：２の調製
Ｃ１８：２−Ｌｙｓ−Ｃ１８：２は、実施例３での方法に準じ、適正な成分を用いて合成した。

【0381】

（実施例１５）
Ｃ１８：１−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１８：１の調製
Ｃ１８：１−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１８：１は、下記の通りに合成した。Ｆｍｏｃ−Ｎγ−Ｂｏｃ−Ｌ−２，３−ジアミノ酪酸を、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、２当量のジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）に溶解し、得られた溶液を２−クロロトリチルクロリド樹脂に添加した。１時間後、樹脂をＤＣＭで洗浄し、ＤＭＦ中２０％のピペリジンでの処理によってＦｍｏｃ基を除去し、遊離α−アミンを生み出した。オレイン酸を、２−（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアンモニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＣＴＵ）および２当量のＤＩＰＥＡで予め活性化させ、樹脂に添加すると、陰性カイザー試験により反応は完了したと思われた。ジクロロメタン中１％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）での複数回処理により、脂質付加化合物を樹脂から開裂し、続いて減圧下で蒸発させて、遊離カルボキシレート中間体を生み出した。遊離カルボキシル基を、ＤＭＦおよびＤＣＭの１：１混合物中の（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩）（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）で１０分間予め活性化させることにより、第二アルキル鎖を結合させ、続いて同溶媒中のオレイルアミンを添加し、その後３０分間撹拌した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ勾配）によって精製した。純粋なジアルキル化中間体を１Ｍ ＨＣｌ／酢酸エチル溶液に溶解し、１時間以内にＢｏｃ基を除去し、続いて減圧下で溶媒を除去した。得られた白色固体をＤＣＭに溶かし、これにＴＥＡを添加して溶解を容易にし、続いて１，３ジ−Ｂｏｃ−２−（トリフルオロメチルスルホニル）グアニジンで１時間処理した。反応が完了したら、ＤＣＭを、２Ｍ重硫酸ナトリウム、飽和重炭酸ナトリウムで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で除去した。得られた残留物を無水エタノールに溶解し、溶解化合物を１２Ｎ ＨＣｌに滴下添加することによって２個のＢｏｃ基を除去した。反応中に最終生成物が沈殿し、ＥｔＯＨから結晶化させた。

【0382】

（実施例１６）
Ｃ１８：２−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１８：２の調製
Ｃ１８：２−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１８：２は、実施例１５での方法に準じ、適正な成分を用いて合成した。

【0383】

（実施例１７）
Ｃ１８：１−Ｍｅ−Ｈｉｓ−Ｃ１８：１の調製
Ｃ１８：１−Ｍｅ−Ｈｉｓ−Ｃ１８：１は、実施例３での方法に準じ、適正な成分を用いて合成した。ＴＮＳ色素アッセイによって計測した際の、この化合物のｐＫａは、３．９であった。

【0384】

（実施例１８）
Ｃ１８：２−アミノ−Ｐｒｏ−Ｃ１８：２の調製
Ｃ１８：２−アミノ−Ｐｒｏ−Ｃ１８：２は、実施例３での方法に準じ、適正な成分を用いて合成した。

【0385】

（実施例１９）
Ｃ１８：２−アミノ−Ｐｒｏ（Ｎ，Ｎ−ジＭｅ）−Ｃ１８：２の調製
Ｃ１８：２−アミノ−Ｐｒｏ（Ｍｅ，Ｍｅ）−Ｃ１８：２は、実施例３での方法に準じ、適正な成分および下記の追加ステップを用いて合成した。ＭｅＯＨに溶解した前ステップからの２本の脂肪族鎖を持つアミノ酸の粗塩酸塩に、１０当量のＡｃＯＨおよび１０当量の３７％ホルムアルデヒドを添加し、反応溶液を非常に緩やかに加熱還流した。次いで、１０当量のトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムを添加した。反応物を３０分間撹拌し、室温まで冷却し、Ｈ２Ｏおよび飽和ＮａＨＣＯ３の添加によってワークアップした。生成物をＤＣＭで抽出し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で有機溶媒を除去した。粗ジメチル化生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ勾配）によって精製した。

【0386】

ＴＮＳ色素アッセイによって計測した際の、この化合物のｐＫａは、６．６であった。

【0387】

（実施例２０）
ｐＫａについてのＴＮＳアッセイ
ｐＨ応答性蛍光を計測するために、ＴＮＳ／リポソーム反応混合物を下記の通りに調製した：１６μＬのＴＮＳを１ｍｇ／ｍＬで（２０％ＤＭＦに溶解したもの）、１６０μＬのリポソーム試験試料を１ｍＭで、および３８２４μＬのＨ２Ｏ。手短に述べると、Ｃｏｓｔａｒ９６ウェルプレート中に、１００μＬ／ウェルの２倍汎用緩衝液を添加した（５０ｍＭのシトレート；４０ｍＭのリン酸ナトリウム；４０ｍＭの酢酸アンモニウム；３００ｍＭのＮａＣｌ、２倍緩衝液を、ｐＨ３．０からｐＨ１１．０までの０．５ｐＨ増分で、ＮａＯＨまたはＨＣｌを使用して、異なるｐＨに滴定した）。次いで、１００μＬの汎用緩衝液を含有する各ウェルに、１００μＬのＴＮＳ／リポソーム反応混合物を添加して、ウェル当たり、２００μＬの最終体積、５．９２μＭのＴＮＳ濃度および２０μＭの最終脂質濃度を達成した。３７℃で３０分後、３２２ｎｍの励起波長および４３１ｎｍの発光波長で蛍光を読み取った。シグモイド当てはめソフトウェアを利用して、最大および最小蛍光強度の間の中点に相当するｐＨでｐＫａを決定した。

【0388】

ＴＮＳ色素（２，６−ＴＮＳ（２−（ｐ−トルイジニル）ナフタレン−６−スルホン酸、ナトリウム塩；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｔ５３；ＭＷ ３３５．４）。

【0389】

（実施例２１）
融解挙動についてのＤＳＣ計測
活性産生送達分子の第二の融解挙動は、０．５から１．５ｍｇの粉末をアルミニウム皿に秤量し、２０℃／分で１７５℃に加熱し、１０℃／分で−５０℃に冷却し、２０℃／分で２００℃に加熱することによる加熱／冷却／加熱サイクルにおいて、ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｑ２００示差走査熱量計で評価した。

【0390】

いかなる特定の理論にも縛られることを意図しないが、活性産生送達分子の融解挙動は、層状、二層、または、相互作用し、細胞内コンパートメントに入って薬理学的もしくは生物学的活性を産生する活性剤を担持するために有用となり得る他の秩序構造を形成するその能力と関係し得る。有意なサーモトロピック相または転移を呈する高秩序構造と、サーモトロピック転移をほとんどまたは全く呈さない低秩序構造との間の平衡が望ましいものとなり得る。低秩序構造を有する物質は、細胞への活性剤の送達に必要となり得る優れた膜融合能力を提供できる。このように、示差走査熱量測定を使用して、ある特定の有意なサーモトロピック相または転移を持つ化合物の特性を、異なる特性およびあまり有意でないサーモトロピック相または転移を持つ化合物から区別することができる。

【0391】

（実施例２２）
ＲＮＡ含有ナノ粒子製剤を調製するための方法
本実施例は、ＲＮＡ含有ナノ粒子製剤を作製するための方法の実施形態について記述する。該方法において使用されるいくつかの材料を以下にまとめる：
Ｃ１８：１−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１６（パルミトイルオレイルノル−アルギニン、ＰＯＮＡ）（Ｍａｒｉｎａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）（式量６８３．３）
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（アンモニウム塩）（ＤＭＰＥ−ＰＥＧ２ｋ）（Ｇｅｎｚｙｍｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓ．）
コレステロール（Ｓｏｌｖａｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）
コレステリル−ヘミスクシネート（ＣＨＥＭＳ）ＧＭＰ（Ｍｅｒｃｋ Ｅｐｒｏｖａ ＡＧ）
エタノール（無水、２００プルーフ）；注射用滅菌水
リン酸ナトリウム：一塩基、無水物、二塩基、無水物
スクロース、９９＋％
５Ｎ水酸化ナトリウム；２Ｎ塩酸；氷酢酸
トロメタミン（トリス）ＵＳＰグレード（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｏｒｇａｎｉｃｓ）
１５０ｍＬ容量０．２μｍフィルターボトル、ＰＥＳ
目盛付きのＲａｉｎｉｎ ２０μＬ、２００μＬおよび１ｍＬピペッター
Ｉｓｏ−ディスクフィルターＰＴＦＥ２５−１０
Ｃｏｌｅ−Ｐａｒｍｅｒインライン静止混合器
Ｗａｔｓｏｎ Ｍａｒｌｏｗ５２０Ｄｉポンプ；Ｗａｔｓｏｎ Ｍａｒｌｏｗ５２３ポンプ；Ｆｉｌｔｅｒｔｅｃポンプ
ビバフロー５０ １００，００ＭＷＣＯ ＰＥＳ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）
スライド−ａ−ライザー透析カセット１０，０００ＭＷＣＯ（Ｐｉｅｒｃｅ） 。

【0392】

緩衝溶液スクロースホスフェート（ＳＵＰ）製剤緩衝液（２０ｍＭのリン酸ナトリウム、２１５ｍＭのスクロース、ｐＨ７．４）を、下記の通りに調製した。２．１７ｇの無水リン酸二水素ナトリウムおよび８．７９ｇの無水リン酸水素ナトリウムを、メスシリンダー中の３６００ｍＬのミリＱ ＤＩ水に添加し、撹拌子で徹底的に混合した。５Ｎ水酸化ナトリウムまたは２Ｎ塩化水素で、ｐＨをｐＨ７．４に調整した。２９４．３８ｇのスクロースをゆっくり添加し、徹底的に溶解した。最終水体積を４Ｌに調整した。溶液を０．２μｍのフィルターで濾過した。

【0393】

９０％ｖ／ｖエタノールＵＳＰ中のナノ粒子形成分子の２５ｍＭストック溶液を、下記の通りに調製した。９０ｍＬのエタノールＵＳＰ（２００プルーフ）を、クリーンオートクレーブにかけた１００ｍＬのパイレックス（登録商標）ボトルに分注した。エタノールに、１２９１ｕｍｏｌのＣ１８：１−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１６（ＰＯＮＡ）、７２１．６ｕｍｏｌのコレステリル−ヘミスクシネート（ＣＨＥＭＳ）粉末、６１．７ｕｍｏｌのＤＭＰＥ−ＰＥＧ２Ｋ粉末および５１５ｕｍｏｌのコレステロールを連続的に添加した。原料をそれぞれ溶液に添加し、撹拌子で徹底的に混合した。混合物を１５分間音波破砕した。１０ｍＬの注射用滅菌水ＵＳＰを、徹底的に混合しながら添加した。ストック溶液を、ＩＳＯ−ディスクフィルターＰＴＦＥ−２５ｍｍ、１ｕｍ細孔径に通して濾過した。ストック溶液を８０℃で貯蔵し、蒸発光散乱検出を用いる逆相ＨＰＬＣにより、Ｃ１８：１−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１６および脂質成分について分析した。

【0394】

ｓｉＲＮＡストック溶液を、下記の通りにして注射用滅菌水中に調製した。５ｍＬの注射用滅菌水を滅菌１５ｍＬファルコンチューブに分注した。１００ｍｇのｓｉＲＮＡ粉末をチューブに添加し、徹底的にボルテックスした。１０ｍＬのシリンジを使用し、溶液を０．２２ｕＭのマイレクスＧＰフィルターユニットに通して濾過した。ｓｉＲＮＡ溶液を−２０℃で貯蔵し、ＯＤ（Ａ２６０およびＡ２８０）により、１：１０００希釈で純度および濃度について試験した。

【0395】

Ｗａｔｓｏｎ Ｍａｒｌｏｗ５２０Ｄｉ蠕動ポンプを、４０ｍＬ／分の流速に較正した。ポンプを２１０ｒｐｍに設定し、管類から外した。４０ｍＬの９０％エタノールをポンプで通して、ラインをすすいだ。エタノールを１５秒間ビーカーに投入し、秤量して、流速をｍＬ／分で決定した。ポンプ速度を調整して、４０±０．５ｍＬ／分の流速を提供した。ｓｉＲＮＡおよびスクロースホスフェート溶液用のポンプを、同様の様式で較正した。

【0396】

３つの溶液を使用し、下記の通りにしてｓｉＲＮＡ製剤を調製した。（ａ）ポンピング用の第一溶液は、ｓｉＲＮＡ溶液であった。第一溶液は、ｓｉＲＮＡを５０ｍＬの円錐チューブ中のＳＵＰ緩衝液で希釈し、徹底的にボルテックスすることによって作製した。（ｂ）ポンピング用の第二溶液は、Ｃ１８：１−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１６プラス３種の脂質の溶液であった。下記の脂質：ＣＨＥＭＳ、コレステロールおよびＤＭＰＥ−ＰＥＧを含有する、９０％エタノール中の混合脂質ストックを調製した。脂質ストックに、Ｃ１８：１−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１６を添加した。脂質ストックに、注射用滅菌水中アリコートのトリスを添加して、溶液中１：１モル濃度のトリス：ＣＨＥＭＳ濃度とした。ポンピング用の第二溶液は、混合脂質ストックを用い、容積式ピペットで取って５０ｍＬの円錐チューブに移し、９０％エタノールで希釈し、徹底的にボルテックスすることによって作製した。（ｃ）ポンピング用の第三溶液は、ＳＵＰ緩衝溶液であった。

【0397】

ｓｉＲＮＡ製剤は、下記の通りに調製した。第一のｓｉＲＮＡ溶液およびナノ粒子形成分子の第二溶液を、衝突流に同時に投入した。流出衝突流の最初の１ｍＬを廃棄し、次いで、ｓｉＲＮＡ製剤を容器中に収集した。Ｗａｔｓｏｎ Ｍａｒｌｏｗ３２３ポンプを使用して、ＳＵＰ緩衝溶液を容器に投入し、エタノールの濃度を約３３％に調整した。容器内のｓｉＲＮＡ製剤を、緩やかにかき混ぜながら磁気撹拌プレート上で１時間インキュベートした。

【0398】

インキュベーション後、製剤をＰｉｅｒｃｅスライド−Ａ−ライザー透析カセットに１０，０００ＭＷＣＯで充填し、１００体積のＳＵＰに対し４℃で１２〜１８時間透析した。

【0399】

本実施例はさらに、接線流および血液透析濾過によってＲＮＡ含有ナノ粒子製剤を作製するための方法の実施形態について記述する。最後の透析ステップを接線流濾過（ＴＦＦ）プロセスに置き換えたことを除き、ｓｉＲＮＡ製剤を上記した通りに準備した。

【0400】

ｓｉＲＮＡ製剤を、緩やかにかき混ぜながら磁気撹拌プレート上で２分間、１０％（ｖ／ｖ）最終エタノール濃度に希釈した。

【0401】

Ｓａｒｔｏｒｉｕｓビバフロー５０ １００，０００ＭＷＣＯ ＰＥＳ膜を使用するＴＦＦシステムを、５０ｍＬの７０％エタノールＵＳＰですすぎ、次いで、１００ｍＬの７０％エタノールとともに６０ｍＬ／分のポンプ流速で再循環させた。ＴＦＦシステムを５０ｍＬの滅菌水ですすぎ、次いで、１００ｍＬの滅菌水とともに６０ｍＬ／分のポンプ流速で再循環させた。ＴＦＦシステムを５０ｍＬのＳＵＰですすぎ、次いで、１００ｍＬのＳＵＰとともに６０ｍＬ／分のポンプ流速で再循環させた。

【0402】

希釈したｓｉＲＮＡ製剤をＴＦＦ容器に充填し、５倍に濃縮して０．５ｍｇ／ｍＬの最終ｓｉＲＮＡ濃度とした（フィード圧約２０ｐｓｉ、リテンテート圧＜０．２ｐｓｉ、および約２ｍＬ／分の透過流速）。膜ｃｍ^２当たり、ナノ粒子組成物に製剤化された最大１ｍｇのｓｉＲＮＡを加工した。

【0403】

濃縮したｓｉＲＮＡ製剤を、エタノールが除去された５体積のＳＵＰに対する血液透析濾過によって、流速２ｍＬ／分で濾過した。

【0404】

濃縮したｓｉＲＮＡ製剤をさらに濃縮して、１ｍｇ／ｍｌ ｓｉＲＮＡの所望の体積とした。

【0405】

本実施例はさらに、ｓｉＲＮＡナノ粒子製剤の滅菌濾過によってＲＮＡ含有ナノ粒子製剤を作製するための方法の実施形態について記述する。ｓｉＲＮＡ製剤を上記した通りに準備した。１０ｍＬのｓｉＲＮＡ製剤を１０ｍＬのポリプロピレンシリンジ中に作り、気泡を除去した。ｓｉＲＮＡ製剤を、０．２２ｕＭのマイレクスＧＰフィルターユニットに通して濾過した。１０ｍｇのｓｉＲＮＡ製剤（１ｍｇ ｓｉＲＮＡ／ｍＬ）を、シリンジ上にて中圧で、マイレクスＧＰフィルターユニットに通して濾過した。１ｍＬアリコートのこの薬物生成物を、使用前に、３ｍＬのＩ型滅菌ガラスバイアル中、８０℃で貯蔵した。

【0406】

（実施例２３）
活性産生送達分子のインビトロ遺伝子サイレンシング活性を決定する
活性産生送達分子のインビトロ遺伝子サイレンシング活性を決定するための方法は、下記の通りであった。Ｈｅｐ３Ｂ細胞を、活性産生送達分子の製剤およびＵｓｉＲＮＡとともに、ＡｐｏＢに対して三通りの９６ウェルフォーマットでトランスフェクトした。２４時間後、細胞ＲＮＡを調製し、標的ＡｐｏＢおよび正規化群３６Ｂ４についての定量的ＲＴ−ＰＣＲおよびＧＡＰＤＨ発現レベルによって評定した。

【0407】

（実施例２４）
活性ＲＮＡ剤を持つＣ１８：１−Ｍｅ−Ｈｉｓ−Ｃ１８：１の製剤
本発明の活性産生送達分子を含有する製剤例を、表１に示す。

【0408】

【表1】

（実施例２５）
活性ＲＮＡ剤を持つＣ１８：１−ＤＡＰ−Ｃ１８：１の製剤
本発明の活性産生送達分子を含有する製剤例を、表２に示す。

【0409】

【表2】

（実施例２６）
ＵｓｉＲＮＡを持つＣ１８：２−アミノＰｒｏ（Ｎ−Ｍｅ，Ｎ−Ｍｅ）−Ｃ１８：２の製剤によって産生されるインビトロ活性
本発明の活性産生送達分子を含有する製剤例を、表３に示す。インビトロ活性は、Ｈｅｐ３Ｂ細胞中のＡｐｏＢに対し、ＵｓｉＲＮＡによって産生された。

【0410】

【表3】

（実施例２７）
ＵｓｉＲＮＡを持つＣ１８：２−Ｄａｐ（Ｎ−Ｍｅ，Ｎ−Ｍｅ）−Ｃ１８：１の製剤によって産生されるインビトロ活性
本発明の活性産生送達分子を含有する製剤例を、表４に示す。インビトロ活性は、Ｈｅｐ３Ｂ細胞中のＡｐｏＢに対し、ＵｓｉＲＮＡによって産生された。

【0411】

【表4】

（実施例２８）
ＵｓｉＲＮＡを持つＣ１８：２−ＤＡＰ（Ｎ−Ｍｅ，Ｎ−Ｍｅ）−Ｃ１８：２の製剤によって産生されるインビトロ活性
本発明の活性産生送達分子を含有する製剤例を、表５に示す。インビトロ活性は、Ｈｅｐ３Ｂ細胞中のＡｐｏＢに対し、ＵｓｉＲＮＡによって産生された。

【0412】

【表5】

（実施例２９）
ＵｓｉＲＮＡを持つＣ１８：１−ＤＡＰ（ＮＨ_３＋Ｃｌ−）−Ｃ１８：１の製剤によって産生されるインビトロ活性
本発明の活性産生送達分子を含有する製剤例を、表６に示す。インビトロ活性は、Ｈｅｐ３Ｂ細胞中のＡｐｏＢに対し、ＵｓｉＲＮＡによって産生された。

【0413】

【表6】

（実施例３０）
ＵｓｉＲＮＡを持つＣ１８：２−Ｄａｐ（ＮＨ_３＋Ｃｌ−）−Ｃ１８：１の製剤によって産生されるインビトロ活性
本発明の活性産生送達分子を含有する製剤例を、表７に示す。インビトロ活性は、Ｈｅｐ３Ｂ細胞中のＡｐｏＢに対し、ＵｓｉＲＮＡによって産生された。

【0414】

【表7】

（実施例３１）
ＵｓｉＲＮＡを持つＣ１８：２−ＤＡＰ（ＮＨ_３^＋Ｃｌ⁻）−Ｃ１８：１の製剤によって産生されるインビトロ活性
本発明の活性産生送達分子を含有する製剤例を、表８に示す。インビトロ活性は、Ｈｅｐ３Ｂ細胞中のＡｐｏＢに対し、ＵｓｉＲＮＡによって産生された。

【0415】

【表8】

（実施例３２）
ＵｓｉＲＮＡを持つＣ１８：２−アミノＰｒｏ（Ｎ，Ｎ−ｄｉＭｅ）−Ｃ１８：２の製剤によって産生されるインビボ活性
本発明の活性産生送達分子を含有する製剤例を、表９に示す。インビボ遺伝子ノックダウン活性は、活性産生送達分子と第ＶＩＩ因子 ｍＲＮＡに対するＵｓｉＲＮＡとを包含する製剤が尾静脈注射によって投与されたＢａｌｂ／ｃマウスにおいて産生された。

【0416】

【表9】

【図1】

【図2】

【図3】