特許 5726416 ＨＳＰ９０の阻害剤としてのヒドロベンズアミド誘導体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5726416

(24)【登録日】2015年4月10日

(45)【発行日】2015年6月3日

(54)【発明の名称】ＨＳＰ９０の阻害剤としてのヒドロベンズアミド誘導体

(51)【国際特許分類】

   C07D 209/44 20060101AFI20150514BHJP

   A61K 31/496 20060101ALI20150514BHJP

   A61P 3/06 20060101ALI20150514BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20150514BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20150514BHJP

   A61P 9/06 20060101ALI20150514BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20150514BHJP

   A61P 9/12 20060101ALI20150514BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20150514BHJP

   A61P 25/04 20060101ALI20150514BHJP

   A61P 25/06 20060101ALI20150514BHJP

   A61P 29/02 20060101ALI20150514BHJP

   A61P 31/10 20060101ALI20150514BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20150514BHJP

   A61P 33/00 20060101ALI20150514BHJP

   A61P 33/02 20060101ALI20150514BHJP

   A61P 33/06 20060101ALI20150514BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20150514BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20150514BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20150514BHJP

   C07C 235/60 20060101ALI20150514BHJP

   C07C 69/92 20060101ALI20150514BHJP

【ＦＩ】

   C07D209/44CSP

   A61K31/496

   A61P3/06

   A61P3/10

   A61P9/00

   A61P9/06

   A61P9/10

   A61P9/12

   A61P17/02

   A61P25/04

   A61P25/06

   A61P29/02

   A61P31/10

   A61P31/12

   A61P33/00

   A61P33/02

   A61P33/06

   A61P35/00

   A61P37/06

   A61P43/00 105

   A61P43/00 111

   C07C235/60

   C07C69/92

【請求項の数】12

【全頁数】140

(21)【出願番号】特願2009-531915(P2009-531915)

(86)(22)【出願日】2007年10月12日

(65)【公表番号】特表2010-505930(P2010-505930A)

(43)【公表日】2010年2月25日

(86)【国際出願番号】GB2007003871

(87)【国際公開番号】WO2008044034

(87)【国際公開日】20080417

【審査請求日】2010年10月12日

(31)【優先権主張番号】0620259.2

(32)【優先日】2006年10月12日

(33)【優先権主張国】GB

(31)【優先権主張番号】60/829.243

(32)【優先日】2006年10月12日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】504162110

【氏名又は名称】アステックス、セラピューティックス、リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＡＳＴＥＸ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ ＬＩＭＩＴＥＤ

(74)【代理人】

【識別番号】100075812

【弁理士】

【氏名又は名称】吉武 賢次

(74)【代理人】

【識別番号】100091487

【弁理士】

【氏名又は名称】中村 行孝

(74)【代理人】

【識別番号】100094640

【弁理士】

【氏名又は名称】紺野 昭男

(74)【代理人】

【識別番号】100107342

【弁理士】

【氏名又は名称】横田 修孝

(74)【代理人】

【識別番号】100143971

【弁理士】

【氏名又は名称】藤井 宏行

(72)【発明者】

【氏名】マーティン、フレデリクソン

(72)【発明者】

【氏名】ジョン、フランシス、ライアンズ

(72)【発明者】

【氏名】ニール、トーマス、トンプソン

(72)【発明者】

【氏名】ムラデン、ビンコビク

(72)【発明者】

【氏名】ブライアン、ジョン、ウィリアムス

(72)【発明者】

【氏名】アンドリュー、ジェームズ、ウッドヘッド

(72)【発明者】

【氏名】アリソン、ジョ‐アンヌ、ウルフォード

【審査官】 深谷 良範

(56)【参考文献】

【文献】 Agricultural and Biological Chemistry，１９６３年，Vol.27, No.10，p.700-705

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ，Ｃ０７Ｃ，Ａ６１Ｋ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（１）の化合物の乳酸で形成された酸付加塩：

【化1】

【請求項2】

Ｌ−乳酸で形成された、請求項１に記載の式（１）の化合物の酸付加塩。

【請求項3】

結晶形態が下記の形態から選ばれる、請求項１または２に記載の実質的に結晶形態である酸付加塩：
ＦＬ１：６．５３、１３．１０、１４．１３、１４．４０、１７．２２、１８．６５、１９．５２、１９．８２、２２．３３、２２．８４、および２３．０９に回折角（２θ／°）ピークを示すＸＲＰＤパターンにより特徴づけられる、
ＦＬ２：８．０３、１０．７１、１１．９８、１３．１３、１５．３９、１６．０９、１６．６１、１７．２６、１８．１７、１８．８２、２０．４０、２１．０１、２１．５３、２２．３４、２２．５６、２３．７１および２７．７０に回折角（２θ／°）ピークを示すＸＲＰＤパターンにより特徴づけられる。

【請求項4】

式（２）の化合物の調製方法であって、

【化2】

（式中、Ｒ^１はＣ_１−４アルキルである）
式（３）の化合物を接触水素化に供すること、

【化3】

（式中、ＰＧは水素化条件下で除去可能な保護基であり、Ａ−ＢはＣ＝ＣＨ_２である）およびその後、式（２）の化合物が遊離塩基の形態で調製された場合、任意に前記遊離塩基を酸付加塩に変換することを含む方法。

【請求項5】

式（６）の化合物の調製方法であって、

【化4】

（式中、Ｒ^２およびＲ^３は同一または異なって、それぞれＣ_１−４アルキルであるか、ＮＲ^２Ｒ^３は、Ｏ、ＮおよびＳから選ばれるさらなるヘテロ原子を場合により含み１個または２個のＣ_１−４アルキル基により場合により置換されている４〜７員の飽和複素環を形成し；Ｒ^４は水素、ハロゲン、Ｃ_１−５アルキルおよびＣ_３−４シクロアルキル基から選ばれる）
（ａ−ｉｉ）式（７）の化合物：

【化5】

（式中、ＰＧは水素化条件下で除去可能な保護基であり、Ｒ^４’は水素、ハロゲン、Ｃ_１−５アルキル、Ｃ_２−５アルケニルおよびＣ_３−４シクロアルキル基から選ばれる）と式（８）の化合物：

【化6】

とを遷移金属触媒の存在下で反応させて、式（９）の化合物を得ること

【化7】

および
（ｂ）保護基ＰＧを除去するため、およびＲ^４’がＣ_２−５アルケニルである場合は基Ｒ^４’をＣ_２−５アルキルに還元させるために、式（９）の化合物を接触水素化に供すること；およびその後、式（６）の化合物が遊離塩基の形態で調製された場合、任意に遊離塩基を酸付加塩に変換することを含む方法。

【請求項6】

式（９）の化合物の調製方法であって、

【化8】

（式中、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４’およびＰＧは、請求項５と同義である）（ａ−ｉｉ）式（７）の化合物：

【化9】

（式中、ＰＧは水素化条件下で除去可能な保護基であり、Ｒ^４’は水素、ハロゲン、Ｃ_１−５アルキル、Ｃ_２−５アルケニルおよびＣ_３−４シクロアルキル基から選ばれる）と式（８）の化合物：

【化10】

とを遷移金属触媒存在下で反応させることを含む方法。

【請求項7】

請求項４に定義される、式（３）の化学中間体。

【請求項8】

請求項５または６に定義される、式（７）の化学中間体。

【請求項9】

請求項５または６に定義される、式（９）の化学中間体。

【請求項10】

下記のための、請求項１〜３のいずれか一項に記載の塩を含む医薬組成物：
i．薬剤としての使用、
ii．Ｈｓｐ９０の阻害剤としての使用、
iii．哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の治療、
iv．Ｈｓｐ９０の阻害方法であって、Ｈｓｐ９０と、Ｈｓｐ９０阻害性化合物、結晶形態、または酸付加塩とを接触させることを含む方法、
v．膀胱癌、乳癌、結腸癌、腎臓癌、表皮癌、肝臓癌、肺癌、食道癌、胆嚢癌、卵巣癌、膵臓癌、胃癌、子宮頚癌、甲状腺癌、前立腺癌、消化管系の癌、または皮膚癌、リンパ球系列の造血系腫瘍、骨髄細胞系列の造血系腫瘍、甲状腺瀘胞癌、間葉由来の腫瘍、中枢または末梢神経系の腫瘍、黒色腫、精上皮腫、奇形腫、骨肉腫、色素性乾皮症、角化棘細胞腫、甲状腺濾胞癌、またはカポジ肉腫の癌腫から選択される増殖性疾患の治療、
vi．真菌性、原虫性もしくは寄生虫性の病態または症状（熱帯熱マラリア原虫による病態または症状以外）の予防または治療用薬剤の製造、
vii．抗真菌剤、抗原虫剤もしくは抗寄生虫剤に対する耐性の発達を防止、低減または後退させるために、前記抗真菌剤、抗原虫剤または抗寄生虫剤と併用投与するための薬剤の製造、
viii．患者における抗真菌剤に対する耐性の発達の防止または低減方法であって、抗真菌剤、抗原虫剤または抗寄生虫剤と、化合物、結晶形態、または酸付加塩との組合せを前記患者に投与することを含む方法、
ix．疼痛を患う患者における疼痛の低減または除去に用いる薬剤の製造、
x．痛覚、体性痛、内臓痛、急性疼痛、慢性疼痛、痛覚過敏、異痛症、術後疼痛、知覚過敏による疼痛、頭痛、炎症性疼痛、神経学的疼痛、筋骨格系疼痛、癌性疼痛または血管痛のいずれか１種以上の治療用薬剤の製造、
xi．卒中を患う患者における神経損傷の防止または低減方法であって、化合物、結晶形態、または酸付加塩を神経保護に有効な量で前記患者に投与することを含む方法、
xii．卒中の危険性がある患者における卒中の危険性の防止または低減用薬剤の製造、
xiii．ウイルス感染またはウイルス性疾患の予防または治療、
xiv．宿主生物におけるウイルス複製の遮断または阻害、
xv．宿主生物におけるウイルス複製の遮断または阻害方法であって、化合物、結晶形態、または酸付加塩を前記宿主生物に投与することを含む方法、
xvi．（ｉ）抗癌薬剤に対して悪性細胞を感作させる、（ｉｉ）抗癌薬剤に対する耐性の発生率を緩和または低減させる、（ｉｉｉ）抗癌薬剤に対する耐性を後退させる、（ｉｖ）抗癌薬剤の活性を増強させる、（ｖ）抗癌薬剤に対する耐性の発現を遅延または防止させる方法であって、化合物、結晶形態、または酸付加塩をその必要のある被験体に投与することを含む方法、
xvii．癌の治療方法であって、化合物、結晶形態、または酸付加塩をその必要のある被験体に投与することを含み、薬剤耐性が現れないことを特徴とする方法、
xviii．治療薬で治療を受けている被験体におけるＨｓｐ９０により仲介される病態もしくは症状の予防または治療（またはその罹患率の緩和または低減）方法であって、化合物、結晶形態、または酸付加塩を前記被験体に投与することを含み、前記Ｈｓｐ９０により仲介される病態もしくは症状が該治療薬に対する耐性の発達である方法、
xix．（ｉ）抗癌剤に対して悪性細胞を感作させる、（ｉｉ）抗癌剤に対する耐性の発生率を緩和または低減させる、（ｉｉｉ）抗癌剤に対する耐性を後退させる、（ｉｖ）抗癌剤の活性を増強させる、（ｖ）抗癌剤に対する耐性の発現を遅延または防止させる方法であって、化合物、結晶形態、または酸付加塩を該抗癌剤で治療を受けている被験体に投与することを含む方法、または
xx．抗癌剤で治療を受けている被験体における癌の治療方法であって、化合物、結晶形態、または酸付加塩をその必要のある被験体に投与することを含み、前記抗癌剤に対する薬剤耐性が現れないことを特徴とする方法。

【請求項11】

式（１４）の化合物とウィッティヒ試薬ＭｅＰＰｈ_３ＢｒとをＴＨＦ中でカリウムｔ−ブトキシドの存在下で反応させることによる、式（１５）の化合物の調製方法。

【化11】

【請求項12】

下記式（５）の化合物の調製方法であって、

【化12】

（式中、Ｒ^１はＣ_１−４アルキルである）、式（２４）の化合物

【化13】

（式中、ＰＧは保護基であり、ＬＧ^１は脱離基である）と、式（２２）の化合物とを反応させることを含む方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、熱ショックタンパク質Ｈｓｐ９０の活性を阻害または修飾する新規な結晶形態および塩形態の化合物、ならびにＨｓｐ９０により仲介される病状または症状の治療または予防における前記化合物の使用に関する。また前記化合物および新規な化学中間体を製造する新規な方法を提供する。

【背景技術】

【0002】

熱、毒素、放射線、感染、炎症および酸化体を含む細胞ストレスに応答して、すべての細胞は共通の一連の熱ショックタンパク質（Ｈｓｐ）を産生する（マカリオ（Macario）およびデマカリオ（de Macario）２０００年）。大部分の熱ショックタンパク質は分子シャペロンとして作用する。シャペロンは、折りたたみの中間段階でタンパク質と結合し安定させ、タンパク質がその機能的状態に折りたたまれることを可能にする。Ｈｓｐ９０は正常条件下で最も豊富にあるサイトゾルＨｓｐである。Ｈｓｐ９０の２つのヒトアイソフォーム（メジャーな誘導される型のＨｓｐ９０αおよびマイナーな構成的に発現される型のＨｓｐ９０β）、および細胞内局在が限定される２つの他の非常によく関連したシャペロン（小胞体のＧＰ９６／ＧＲＰ９４；ミトコンドリアのＴＲＡＰ１）がある。明示されないならば、本明細書で使用されるＨＳＰ９０なる語はこれらのアナログをすべて包含する。Ｈｓｐ９０は折りたたみの後期段階でタンパク質を結合し、大部分のそのタンパク質基質がシグナル伝達に関与するという点で他のＨｓｐとは区別される。Ｈｓｐ９０は、細菌性ジャイレース、トポイソメラーゼおよびヒスチジンキナーゼのベルジュラ（Ｂｅｒｇｅｒａｔ）折りたたみの特徴を含む、固有のＡＴＰ結合部位を有する。Ｈｓｐ９０のＮ末端ポケットで結合したＡＴＰは加水分解されていることが示されている。このＡＴＰアーゼ活性は、クライアントタンパク質におけるコンフォメーション変化を可能にするために必要とされるＨｓｐ９０におけるコンフォメーション変化をもたらす。

【0003】

二量体化ドメインおよび第２のＡＴＰ結合部位（それはＡＴＰアーゼ活性を調節できる）は、Ｈｓｐ９０のＣ末端の近くで見出される。Ｈｓｐ９０の二量体化はＡＴＰ加水分解のために重要な意味を持つと思われる。Ｈｓｐ９０の活性化は様々な他のシャペロンタンパク質との相互作用を介してさらに調節され、Ｈｓｐ７０、Ｈｉｐ、Ｈｏｐ、ｐ２３およびｐ５０ｃｄｃ３７を含む他のシャペロンとの複合体中に単離することができる。他の多くのコシャペロンタンパク質もまたＨｓｐ９０を結合することが実証されている。アミノ末端ポケットへのＡＴＰの結合が、マルチシャペロン複合体との会合を可能にするようにＨｓｐ９０コンフォメーションを変更するという、単純化されたモデルが提出された。第一に、クライアントタンパク質はＨｓｐ７０／Ｈｓｐ４０複合体へ結合される。次にこの複合体はＨｏｐを介してＨｓｐ９０と会合する。ＡＤＰがＡＴＰにより置換される場合、Ｈｓｐ９０のコンフォメーションが変化し、ＨｏｐおよびＨｓｐ７０が遊離され、ｐ５０ｃｄｃ３７およびｐ２３を含むコシャペロンの異なるセットが動員される。ＡＴＰ加水分解は、成熟複合体からのこれらのコシャペロンおよびクライアントタンパク質の遊離を結果的にもたらす。アンサマイシン抗生物質のハービマイシン、ゲルダナマイシン（ＧＡ）および１７−アリルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン（１７−ＡＡＧ）は、ＡＴＰの結合をブロックし、成熟複合体への変換を妨害する、ＡＴＰ結合部位阻害剤である。（グレナート（Grenert）ら、１９９７年、ジャーナル・オブ・バイオロジカルケミストリー（J. Biol. Chem.）、２７２：２３８３４−２３８５０）。

【0004】

Ｈｓｐ９０が普遍的に発現されているにもかかわらず、ＧＡは、正常細胞株に比べて腫瘍細胞株に由来するＨｓｐ９０に対してより高い結合親和性を有する（カマル（Kamal）ら、ネイチャー（Nature）、２００３年；４２５：４０７−４１０）。ＧＡは、腫瘍細胞においてより強力な細胞毒性活性もまた示し、異種移植片マウスモデルにおける腫瘍の内部でより高い濃度で隔離される（ブラジデック（Brazidec）、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（J. Med. Chem.）２００４年、４７、３８６５−３８７３）。さらに、Ｈｓｐ９０のＡＴＰアーゼ活性は癌細胞において上昇し、これらの細胞におけるストレスレベルの増加の指標である。Ｈｓｐ９０の遺伝子増幅が癌の後期段階において生じることもまた報告されている（ジョリー（Jolly）およびモリモト（Morimoto）、ジャーナル・オブ・ザ・ナショナル・キャンサー・インスティテュート（JNCI）第９２巻、１９、１５６４−１５７２、２０００年）。

【0005】

癌表現型に関連する遺伝的不安定性の増加は、変性タンパク質または変異タンパク質の産生の増加をもたらす。ユビキチン経路はまた、プロテアソームによる分解のために変性タンパク質または誤って折りたたまれたタンパク質を標的とすることにより、これらのタンパク質から細胞を防御する働きをする。変異タンパク質はそれらの天然にはない性質のため、したがって構造不安定性を示す可能性があり、シャペロンシステムに対する必要性が増加する（ジャンニーニ（Giannini）ら、モレキュラー・セル・バイオロジー（Mol.Cell Biol.）２００４年；２４（１３）：５６６７−７６）。

【0006】

Ｈｓｐ９０は、正常細胞中の「潜在的」複合体とは異なって、主として腫瘍細胞中の「活性化」マルチシャペロン複合体内で見出されるといういくつかの証拠がある。マルチシャペロン複合体のうちの１つの成分は、ｃｄｃ３７コシャペロンである。ｃｄｃ３７はＡＴＰ結合部位の基部でＨｓｐ９０を結合し、「活性化」状態のＨｓｐ９０へ結合した阻害剤の解離速度に影響し得る（ロー（Roe）ら、セル（Cell）１１６、（２００４年）、ｐｐ．８７−９８）。シャペロン複合体のＨｓｐ９０−Ｈｓｐ７０型へ結合したクライアントタンパク質は、ユビキチン化に対してより感受性があり、分解のためにプロテアソームへ標的化されると考えられる。Ｅ３ユビキチンリガーゼはシャペロン相互作用モチーフを有すると同定され、これらのうちの１つ（ＣＨＩＰ）はＨｓｐ９０クライアントタンパク質のユビキチン化および分解を促進することが示された（コネル（Connell）ら、２００１年。シュー（Xu）ら、２００２年）。

【0007】

Ｈｓｐ９０クライアントタンパク質
報告されているＨｓｐ９０クライアントタンパク質の数は現在１００を越える。そのクライアントタンパク質の多くが細胞のシグナリング、増殖および生存に関与するので、Ｈｓｐ９０は腫瘍学の標的として大きな関心を得ている。特に２つのグループのクライアントタンパク質（細胞シグナリングプロテインキナーゼおよび転写因子）は、Ｈｓｐ９０の調節が抗癌療法として利点がある可能性があることを示唆している。

【0008】

細胞増殖および生存に関係するＨｓｐ９０プロテインキナーゼクライアントタンパク質は、下記を含む。

【0009】

ｃ−Ｓｒｃ
細胞Ｓｒｃ（ｃ−Ｓｒｃ）は、表皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、コロニー刺激因子−１（ＣＳＦ−１Ｒ）および塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦＲ）についての受容体を含む複数の増殖因子受容体によって開始される有糸分裂誘発のために必要とされる受容体チロシンキナーゼである。ｃ−Ｓｒｃもまた、ＥＧＦＲおよびＥｒｂＢ２を過剰発現する同じヒト癌の多くにおいて、過剰発現および活性化される。Ｓｒｃは、破骨細胞機能のその調節を介して通常の骨ホメオスタシスの維持のためにもまた必要とされる。

【0010】

ｐ１８５ｅｒｂＢ２
ＥｒｂＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）は、乳癌、卵巣癌、前立腺癌および胃癌を含む様々な悪性腫瘍において過剰発現される受容体チロシンキナーゼである。ＥｒｂＢ２は、もとは癌遺伝子として同定され、Ｈｓｐ９０の阻害はｅｒｂＢ２のポリユビキチン化および分解をもたらす。

【0011】

ポロ有糸分裂キナーゼ
ポロ様キナーゼ（Ｐｌｋ）はＭ期の間の細胞周期進行に重要なレギュレーターである。Ｐｌｋは、紡錘体装置の集合およびＣＤＫ／サイクリン複合体の活性化に関与する。Ｐｌｋ１は、Ｃｄｃ２５Ｃのリン酸化および活性化を介してＣＤＫのチロシン脱リン酸化を調節する。ＣＤＫ１活性化は、次に紡錘体形成およびＭ期への侵入を導く。

【0012】

Ａｋｔ（ＰＫＢ）
Ａｋｔは、細胞増殖の刺激およびアポトーシスの抑制によって細胞増殖を調節する経路に関与する。アンサマイシンによるＨｓｐ９０阻害は、ユビキチン化およびプロテアソームによる分解を介してＡｋｔ半減期の減少をもたらす。Ｈｓｐ９０に対してｃｄｃ３７を結合することもまたＡｋｔのダウンレギュレーションのために必要とされる。アンサマイシン処理に続いて、癌細胞は処理の２４時間後に細胞周期のＧ２／Ｍ期において停止し、２４〜４８時間後にアポトーシスへと進行する。正常細胞もまたアンサマイシン処理の２４時間後に停止するが、アポトーシスへは進行しない。

【0013】

ｃ−Ｒａｆ、Ｂ−ＲＡＦ、Ｍｅｋ
ＲＡＳ−ＲＡＦ−ＭＥＫ−ＥＲＫ−ＭＡＰキナーゼ経路は、増殖シグナルに対する細胞応答を仲介する。ＲＡＳはヒト癌のおよそ１５％において腫瘍形成性型へ変異している。３つのＲＡＦ遺伝子は、ＲＡＳの結合によって調節されるセリン／スレオニンキナーゼである。

【0014】

ＥＧＦＲ
表皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）は、細胞の成長、分化、増殖、生存、アポトーシスおよび移動に関係する。ＥＧＦＲの過剰発現は様々な癌において見出され、ＥＧＦＲのキナーゼドメインの活性化変異は肺の腺癌のサブセットにおいて病因性であると思われる。

【0015】

Ｆｌｔ３
ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）は、細胞の増殖、分化およびアポトーシスに関与する受容体チロシンキナーゼである。Ｆｌｔ３活性化もまた、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）およびＲＡＳシグナル伝達カスケードの活性化を導く。

【0016】

ｃ−Ｍｅｔ
ｃ−ｍｅｔは、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）を結合し、細胞運動性および細胞増殖の両方を調節する受容体チロシンキナーゼである。ｃ−ｍｅｔは、甲状腺癌、胃癌、膵臓癌および結腸癌を含む腫瘍において過剰発現される。ＨＧＦもまた肝転移を含む腫瘍の周囲で検出される。このことは、ｃ−ｍｅｔおよびＨＧＦが浸潤および転移に重要な役割を果たすことを示唆する。

【0017】

Ｃｄｋ１、Ｃｄｋ２、Ｃｄｋ４、Ｃｄｋ６
Ｃｄｋ１、Ｃｄｋ２、Ｃｄｋ４およびＣｄｋ６は、細胞周期を駆動する。ＣＤＫの活性は、サイクリン、阻害性因子および集合因子などの特異的なサブユニットへそれらが結合することによって調節される。ＣＤＫ活性の基質特異性およびタイミングは、特異的なサイクリンとのそれらの相互作用によって規定される。Ｃｄｋ４／サイクリンＤおよびＣｄｋ６／サイクリンＤはＧ１期において、Ｃｄｋ２／サイクリンＥおよびＣｄｋ２／サイクリンＡはＳ期において、ならびにＣｄｃ２／サイクリンＡおよびＣｄｃ２／サイクリンＢはＧ２／Ｍ期において活性がある。

【0018】

サイクリン依存性キナーゼタイプ４（ＣＤＫ４）は、細胞周期のＧ１期からＳ期移行を細胞が通過できるようにすることにおいて重要な役割を果たし、多くのヒト癌において構成的に活性化される。様々なヒト腫瘍において、ＣＤＫ４活性化因子（サイクリンＤ１）は過剰発現され、ＣＤＫ４阻害剤（ｐ１６）は欠損する。

【0019】

Ｇ１／Ｓ期において、またはＧ２／Ｍ境界でのいずれかで、正常細胞を可逆的にブロックするＣｄｋ１／Ｃｄｋ２阻害剤が開発されている。一般にＧ２／Ｍ停止は、細胞の耐容性はそれほど良好ではなく、それゆえ細胞はアポトーシス性細胞死を起こす。Ｈｓｐ９０もまた細胞生存経路に影響することが公知であるので、この効果はさらにＨｓｐ９０阻害剤により増幅されうる。

【0020】

Ｗｅｅ−１
Ｗｅｅ−１プロテインキナーゼは、チロシン１５（Ｔｙｒ１５）でＣＤＣ２の阻害性リン酸化を行なう。これはＤＮＡ損傷に応答してＧ２期チェックポイントの活性化のために必要とされる。細胞の増殖および生存に関係するＨｓｐ９０転写因子は下記を含む。

【0021】

変異ｐ５３
Ｐ５３は、細胞周期停止を引き起こし、アポトーシスを誘導する腫瘍サプレッサータンパク質である。Ｐ５３はすべての癌のおよそ半分で変異している。変異ｐ５３はＨｓｐ９０と会合し、Ｈｓｐ９０阻害剤により処理された癌株においてダウンレギュレートされるが、野生型ｐ５３レベルは影響されなかった。

【0022】

プロゲステロン受容体／エストロゲン受容体／アンドロゲン受容体
乳癌を発症する閉経後の女性のおよそ７０％は、エストロゲン受容体を発現する腫瘍を有している。これらの患者の第一選択治療は、この経路を介してシグナリングを妨害し、したがって腫瘍増殖を阻害することに向けられる。これは卵巣除去、性腺刺激ホルモン放出ホルモンアゴニストによる治療、アロマターゼ阻害、またはエストロゲン受容体へ結合するがさらなるシグナリングを妨害する特異的アゴニストによる治療によって行うことができる。最終的には、細胞膜上に位置するエストロゲン受容体と増殖因子受容体との間のクロストークの結果として、患者は多くの場合、これらの介入に対する耐性を発達させる。リガンドが結合されていない状態において、エストロゲン受容体は、ホルモン結合を促進するＨｓｐ９０と共に複合体を形成する。成熟受容体Ｈｓｐ９０複合体への結合に続いて、リガンドが結合した受容体は、細胞増殖の維持に関与する標的遺伝子の制御領域内のホルモン応答エレメント（ＨＲＥ）に対して結合できる。Ｈｓｐ９０の阻害は、エストロゲン受容体のプロテオソームによる（ｐｒｏｔｅｏｓｏｍａｌ）分解を開始させ、したがってこの経路を介するさらなる増殖シグナリングを妨害する。前立腺癌は、テストステロンの血中循環レベルを減少させるか、またはアンドロゲン受容体へのテストステロン結合を妨害する治療的介入に対して応答する、ホルモン依存性の悪性腫瘍である。患者は最初のうちは応答するが、続いて大部分はこれらの治療に対して、アンドロゲン受容体を介するシグナリングの回復によって耐性を発達させる。リガンド結合の前に、アンドロゲン受容体は、Ｈｓｐ９０、ならびにｐ２３およびイムノフィリンを含む他のコシャペロンと共に複合体中に存在する。この相互作用は、高親和性のリガンド結合コンフォメーションでアンドロゲン受容体を維持する。Ｈｓｐ９０の阻害は、さらなるホルモン療法への腫瘍の感受性を高めることができるアンドロゲン受容体および他のコシャペロンのプロテオソームによる（ｐｒｏｔｅｏｓｏｍａｌ）分解を導く。

【0023】

例えば抗ホルモン療法の間に生じる変異したステロイドホルモン受容体（およびそれはそのような療法に対して耐性を持ちうる）は、それらの安定性およびホルモン結合機能についてＨＳＰ９０に対してより高い依存性を有するであろう。

【0024】

Ｈｉｆ−１ａ
低酸素誘導因子−１ａ（ＨＩＦ−１ａ）は、血管形成において役割を果たす遺伝子の発現を制御する転写因子である。ＨＩＦ−１ａは大多数の転移において発現され、Ｈｓｐ９０と会合することが公知である。腎癌細胞株のアンサマイシン処理は、ＨＩＦ−１ａのユビキチン化およびプロテアソームによる分解を導く。

【0025】

Ｈｓｐ９０阻害剤は、腫瘍細胞増殖におけるシグナル伝達に対する多数の標的に有意に影響することができる。単一標的の活性を調節するシグナル伝達阻害剤は、シグナリング経路の冗長性および耐性の急速な発達のために、同程度には効果的ではないかもしれない。

【0026】

細胞シグナリングおよび細胞増殖に関与する複数の標的の調節によって、ＨＳＰ９０阻害剤は、広い範囲の増殖障害の治療において有用であることが証明される。

【0027】

ＺＡＰ７０
ＺＡＰ−７０（Ｓｙｋ−ＺＡＰ−７０タンパク質チロシンキナーゼファミリーの一員）は、通常はＴ細胞およびナチュラルキラー細胞において発現され、Ｔ細胞シグナリングの開始において重大な役割を有する。しかしながら、ＺＡＰ−７０はＣＬＬの症例のおよそ５０％においてもまた異常に発現され、通常はそれらの場合には変異していないＢ細胞受容体遺伝子を持っている。慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）の白血病細胞における免疫グロブリン重鎖可変領域（ＩｇＶ_Ｈ）遺伝子の変異状態は、重要な予後因子である。ＣＬＬ細胞のＺＡＰ−７０の発現は、ＩｇＶ_Ｈの変異状態、疾患進行および生存と相関する。ＺＡＰ−７０陽性ＣＬＬはＺＡＰ−７０陰性ＣＬＬよりも侵攻性であり、ＺＡＰ−７０がこの疾患における悪性度の重要な原動力かもしれないことを示す。ＺＡＰ−７０は、Ｂ−ＣＬＬリンパ芽球においてＨＳＰ９０と物理的に会合し、したがってＨｓｐ９０の阻害により既存の化学療法またはモノクローナル抗体療法に対するこれらの細胞の感受性を高めることができる。

【0028】

熱ショックタンパク質および抗腫瘍薬耐性
任意の与えられたポリペプチドの天然の三次コンフォメーションは、その一次（アミノ酸）配列によって決定されることが長い間認識されている。しかしながら上で説明されるように、インビボの多くのタンパク質の適切な折りたたみが、分子シャペロンとして作用する熱ショックタンパク質（Ｈｓｐ）の支援を必要とすることは現在明らかである。このシャペロン機能はすべての条件下で通常の細胞機能にとって重要であるが、それはストレスを受けた（例えば熱、低酸素またはアシドーシスによって）細胞において決定的なものになる。

【0029】

そのような条件は、不利な宿主環境中に存在する腫瘍細胞において典型的には優勢である。したがって、そのような細胞においてしばしば見られるＨｓｐのアップレギュレーションは、タンパク質の折りたたみを損なう条件下で、悪性細胞がプロテオームの全体性を維持するメカニズムを表わすだろう。したがって、一般にストレスタンパク質（および特にＨｓｐ９０）のモジュレーターまたは阻害剤は、複数の異常なシグナリング経路を同時に阻害するユニークな能力の化学療法薬の類を表わす。したがってそれらは、他の治療パラダイムと比較して、耐性を消失させる（または耐性の発生率を減少させる）が、抗腫瘍の効果を発揮することができる。

【0030】

さらに、すべてのタイプの治療的抗癌性介入は、標的腫瘍細胞に課されたストレスを必然的に増加させる。そのようなストレスの有害作用を緩和する際に、Ｈｓｐは制癌剤および治療投与計画の効果への耐性に直接関係する。したがって、一般にストレスタンパク質機能（および特にＨｓｐ９０）のモジュレーターまたは阻害剤は、以下の能力を有する化学療法薬の類を表わす。（ｉ）抗癌薬剤および／または治療に対して悪性細胞を感作させること；（ｉｉ）抗癌薬剤および／または治療に対する耐性の発生率を緩和または低減させること；（ｉｉｉ）抗癌薬剤および／または治療に対する耐性を後退させること；（ｉｖ）抗癌薬剤および／または治療の活性を増強させること；（ｖ）抗癌薬剤および／または治療に対する耐性の発現を遅延または防止させること。

【0031】

抗真菌剤、抗原生動物剤および抗寄生虫剤としてのＨＳＰ９０阻害剤
真菌感染は、利用可能な抗真菌剤の数が限定的であるため、およびアゾールなどの承認された抗真菌剤に対する耐性を持つ種の発生率が増加しているため、近年大きな懸念材料となっている。さらに、免疫障害を持つ患者（例えば臓器移植患者、化学療法を受ける癌患者、熱傷患者、ＡＩＤＳ患者、または糖尿病性ケトアシドーシスに罹患する患者などの患者）の集団の増加は、カンジダ属（Candida）、クリプトコッカス属（Cryptoccocus）およびアスペルギルス属（Aspergillus）の種ならびに場合によってはフザリウム属（Fusarium）、トリコスポロン属（Trichosporon）およびドレシュレラ属（Dreschlera）の種などの、真菌剤による日和見真菌症の発生率の増加を引き起こした。

【0032】

それゆえ、真菌感染、および特に既存の抗真菌薬に対する耐性を持つようになった真菌に起因する感染に罹患する患者が増加してきたが、これらを治療するために使用できる、新しい抗真菌剤に対する必要性がある。

【0033】

ＨＳＰ９０は進化を通じて保存され、細菌（例えば大腸菌（E. coli）におけるＨＴＰＧ）および酵母（例えばＨＳＣ８２およびＨＳＰ８２）において見出される。クライアントは大腸菌型については正式に同定されていないが、酵母およびすべての高等生物において、ＨＳＰ９０ファミリーは、上述されるような多くの必須タンパク質に対するシャペロンとして機能することが示された。

【0034】

広範囲にわたる病原体による感染は、ＨＳＰ９０に対する抗体応答と関連している。例えば、カンジダ・アルビカンス（Candida albicans）感染患者において、ＨＳＰ９０の４７ｋＤａのＣ末端フラグメントは免疫優勢エピトープである。更にこの抗体応答は予後良好と関連しており、感染に対する防護効果を示唆している。このポリペプチド中のエピトープに対する組換え抗体もまた、侵襲性カンジダ症のマウスモデルにおいて感染に対して防御する(マシュース（Mathews）ら、抗生物質および化学療法（Antimicrobial Agents and Chemotherapy）２００３年、４７巻、２２０８−２２１６、およびその中の参照文献を参照）。同様に表面に発現するＨＳＰ９０は、シャーガス病、回虫症、リーシュマニア症、トキソプラモシス（toxoplamosis）、およびマンソン住血吸虫に起因する感染における抗原としての機能を果たし、ＨＳＰ９０に対する抗体はプラモディウム（plamodium）感染およびマラリアに対する防御を伝えることが提唱されている。

【0035】

マイコグラブ（Mycograb）（ニューテック・ファーマ／ノバルティス（NeuTec Pharma/Novartis）社）は、カンジダ属に対する治療として開発されている熱ショックタンパク質９０に対するヒト組換えモノクローナル抗体であり、初期の治験において有意な応答を示した。更に、天然産物のＨＳＰ９０阻害剤のゲルダナマイシン、ハービマイシンおよびラディシコールは、もとはそれらの抗真菌活性によって同定された。重要な必須タンパク質は、いくつかのヒト病原体においてＨＳＰ９０クライアントとして同定された（カウエン（Cowen）およびリンドキスト（Lindquist）、サイエンス（Science）、２００５年９月３０日；３０９（５７４４）：２１７５−６参照）。したがってＨＳＰ９０はカンジダ属の種などの病原体の増殖に重要役割を果たすことができ、ＨＳＰ９０阻害剤はカンジダ症を含む広範囲にわたる感染症に対する治療として有用になりえる。

【0036】

Ｈｓｐ９０が、抗真菌薬耐性を発達させる真菌の能力を増加させることもまた見出されている（カウエン（Cowen）ＬＥ、リンドキスト（Lindquist）Ｓ「Ｈｓｐ９０は、新しい形質の急速な進化を促進する：多様な真菌における薬剤耐性（Hsp90 potentiates the rapid evolution of new traits: drug resistance in diverse fungi）。」サイエンス（Science）、２００５年９月３０日；３０９（５７４４）：２１８５−９参照）。したがって、抗真菌薬とＨｓｐ９０阻害剤の共投与は、抗真菌薬の効能を促進し、耐性表現型の出現を予防することによって耐性を減少できる。

【0037】

疼痛、ニューロパシー症状および卒中の治療におけるＨＳＰ９０阻害剤
Ｃｄｋ５は、セリン／スレオニンキナーゼのＣｄｋファミリーの一員であり、それらの大部分は細胞周期の重要なレギュレーターである。Ｃｄｋ５活性は、そのニューロン特異的な活性化因子（ｐ３５およびｐ３９）との会合を介して調節される。最近の証拠は、ＣＤＫ５が、タウタンパク質、ならびにＮＵＤＥ−１、シナプシン１、ＤＡＲＰＰ３２およびＭｕｎｃ１８／シンタキシン１Ａ複合体などの多数の他の神経タンパク質をリン酸化できることを示唆する。この証拠は、アルツハイマー病（ＡＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）およびニーマン・ピック病タイプＣ（ＮＰＤ）などの神経変性疾患の病因において、ｐ３５がｐ２５へ変換されることによって誘導される異常なＣｄｋ５活性が役割を果たすこともまた示唆する。Ａβ１−４２処理の後のタウの異常な過剰リン酸化は微小管を不安定にし、神経突起の変性、および神経原線維濃縮体（ＮＦＴ）を含む対らせんフィラメント（ＰＨＦ）の形成（ＡＤの主要な病変のうちの１つ）に寄与する。ｃｄｋ５が適切な神経発生のために必要であることがさらに見出されている。

【0038】

ＣＤＫ５活性のレギュレーターとして作用するｐ３５タンパク質は、ＨＳＰ９０に対するクライアントタンパク質として最近同定され、したがってＣＤＫ５の活性は、ＨＳＰ９０のレベルおよび活性の変化によって調節することができる。したがってＨＳＰ９０の阻害は、ｐ３５の減少、ＣＤＫ５の阻害、感受性のある個体におけるリン酸化されたタウタンパク質の減少を導くことができ、アルツハイマー病の罹患者に対して利益をもたらすことになる。

【0039】

加えて、公知の薬剤を使用するＨＳＰ９０の阻害は、細胞システムにおけるタウタンパク質凝集体の蓄積をインビトロで減少させることが示されている（ディッキー（Dickey）ら、カレント・アルツハイマー・リサーチ（Curr Alzheimer Res）、２００５年、４月；２（２）：２３１−８）。

【0040】

Ｃｄｋ５は、疼痛シグナリングの仲介においてもまた役割を有することが示されている。Ｃｄｋ５およびｐ３５の両方は、侵害受容ニューロンにおいて発現されることが示された。ｐ３５ノックアウトマウス（それらは実質的に減少したＣｄｋ５活性を示す）では、疼痛熱刺激に対する応答は遅れる（パリーク（Pareek, T.K.）ら、米国科学アカデミー紀要（Proceedings of the National Academy of Sciences）、１０３：７９１−７９６（２００６））。加えて、サイクリン依存性キナーゼ５（Ｃｄｋ５）阻害剤のロスコビチンの投与は、ラットにおけるホルマリン誘導性の侵害刺激反応を弱化することが示されている（ワング（Wang）、チェン−ハン（Cheng-haung）ら、アクタ・ファルマコロジカ・シニカ（Acta Pharmacologica Sinica）、２６：４６−５０（２００５））。カルパインの活性化はカルシウム依存性であり、ＮＭＤＡ受容体カルシウムチャンネルの活性化によって影響されることが公知である（アマドロ（Amadoro, G.）；米国科学アカデミー紀要（Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America）、１０３、２８９２−２８９７（２００６））。ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストは、神経障害性疼痛症状に対して臨床的に効果的であることが公知である（クリストフ（Christoph, T.）ら、ニューロファルマコロジー（Neuropharmacology）、５１、１２−１７（２００６））。この効能は、カルパイン活性についてのＮＭＤＡ受容体関連性カルシウム流入の効果およびＣｄｋ５の活性についてのその後続効果に結び付けてられ得る。Ｃｄｋ５活性を修飾する化合物は、疼痛の治療または予防のために有用となることが期待され、したがってＨＳＰ９０の阻害によるＣＤＫ５レギュレーターｐ３５の修飾はＣＤＫ５の阻害を導き得る。

【0041】

疼痛の待期的療法（すなわち疼痛の原因である基礎疾患または病状の改良の結果の疼痛の軽減に加えて、疼痛の直接的な軽減）のための薬剤を有することが望ましい。

【0042】

様々なＣｄｋ（特にＣｄｋ４、Ｃｄｋ５およびＣｄｋ６）は、低酸素性傷害または虚血性傷害に後続する神経死と関連するか、またはそれらを仲介することが示された（ラシダン（Rashidan, J.）ら；米国科学アカデミー紀要（Proceedings of the National Academy of Sciences）、１０２：１４０８０−１４０８５（２００５）。更にＣｄｋ阻害剤のフラボピリドールは、局所性脳虚血のラットモデルにおける神経死を有意に減少させることが示された（オオスガ（Osuga, H.）；米国科学アカデミー紀要（Proceedings of the National Academy of Sciences）、９７：１０２５４−１０２５９（２０００））。Ｃｄｋ５阻害剤は、神経細胞死の壊死性例およびアポトーシス性例において防護効果を有することが示されている（ワイスハウプト（Weishaupt, J.）ら；モレキュラー・アンド・セルラー・ニューロサイエンス（Molecular and Cellular Neuroscience）、２４：４８９−５０２（２００３））。

【0043】

卒中は、脳への通常の血流が破壊される場合に生じる脳血管性の事象であり、多すぎる血液または少なすぎる血液が脳へ流れる。卒中は世界中で代表的な死因のうちの１つであり、神経系障害の最も一般的な原因のうちの１つでもある。

【0044】

最も一般的なタイプの卒中である虚血性脳卒中は、動脈血の流入の閉塞によって引き起こされる不十分な血液の脳循環に起因する。通常は、適切な大脳血液の供給は、脳内の動脈のシステムによって保証される。しかしながら、炎症およびアテローム性動脈硬化症を含む様々な障害は、血栓（すなわち血管中に生ずる血餅）を引き起こす場合がある。血栓は動脈血流を妨げて、脳虚血および結果として生ずる神経学的症状を引き起こし得る。虚血性脳卒中は頭蓋内血管中の心臓からの塞栓（気泡）が留まることによってもまた引き起こされ、不適正な脳血流により潅流圧の低下または血液粘性の増加が引き起こされる。塞栓は心房細動およびアテローム性動脈硬化症を含む様々な障害によって引き起こされ得る。

【0045】

第２のタイプの卒中（出血性卒中）は、脳に達する動脈の出血または破壊を含んでいる。出血性卒中は、脳の硬膜上腔、硬膜下腔またはクモ膜下腔を含む脳組織の中への出血をもたらす。出血性卒中は、典型的には動脈性高血圧症または血栓症にさらされた動脈硬化性血管の破壊に起因する。

【0046】

卒中における介入の１つの機会は、卒中のリスクがある患者における卒中のリスクの予防または低減である。血管炎症、アテローム性動脈硬化症、動脈性高血圧症、糖尿病、高脂血症および心房細動を含む、卒中についての多くの公知のリスクファクターがある。リスクのある患者は血圧を制御または血中脂質レベルを管理するために薬剤により治療され、抗血小板剤（クロピドロゲル（ｃｌｏｐｉｄｒｏｇｅｌ）などの）および抗凝血剤により治療されている。第２の機会は急性卒中の治療である。しかしながら、急性卒中の治療ための現在の薬理療法は、卒中後の３時間以下の狭い治療時間ウィンドウ内での血流の回復に限定されている。より長い治療時間ウィンドウ内で効果的な薬剤の必要性がある。別の機会は、急性卒中期間後の回復または修復（すなわち周辺部における二次的な細胞損傷の減少または予防）である。卒中後の二次的な細胞損傷の減少または予防に効果的な薬剤の必要性がある。

【0047】

卒中を治療する上述の機会のうちの１つ以上において使用することができる単一の医薬用薬剤を得ることが望ましいだろう。そのような薬剤は、卒中のリスクがある患者に投与でき、急性卒中に罹患する患者、または急性卒中期間後の回復または修復のための治療を受ける患者に投与できる。そのような薬剤はまた、卒中の生化学的なカスケードにおける１つ以上の別のメカニズムも標的にできる。

【0048】

ＨＳＰ９０阻害剤、ならびにＣ型肝炎および他のウイルス病の治療
ウイルスＲＮＡ／ＤＮＡによる宿主細胞の感染により、細胞タンパク質の合成は、ウイルス性核酸によってコードされる鍵となるウイルスタンパク質に向けて実質的に再び方向付けられる。タンパク質合成負荷の増加は、エネルギーおよび合成の前駆体の需要増加の結果として細胞にストレスを与える。熱ショックタンパク質のアップレギュレーションは、しばしば、少なくとも部分的にはこのストレスに起因するウイルス感染の帰結である。ＨＳＰ誘導の１つの機能は、ウイルス複製に備えて産生される高レベルの「外来」タンパク質の安定化および折りたたみを支援することでありえる。特に、最近の研究ではＣ型肝炎（ＨＣＶ）レプリコン感染細胞における機能的なＮＳ２／３プロテアーゼの安定した産生のために、ＨＳＰ９０が必要とされることを示唆されている。ＨＳＰ９０阻害剤は、インビトロのシステムにおけるウイルス複製をブロックすることもまた実証されている（ナカガワ（Nagkagawa, S.）、ウメハラ（Umehara, T. ）、マツダ（Matsuda, C.）ら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Biochem. Biophys. Res Commun.）３５３（２００７年）８８２−８８８；ワックスマン（Waxman, L.）、ウイットニー（Witney, M.）ら、米国科学アカデミー紀要（PNAS）９８（２００１年）１３９３１−１３９３５）。

【0049】

我々の以前の出願ＰＣＴ／ＧＢ２００６／００１３８２（この文献の内容は全て参照により本書に援用される）は、Ｈｓｐ９０阻害剤として２，４−ジヒドロキシ安息香酸のイソインドリンアミドを開示している。ＰＣＴ／ＧＢ２００６／００１３８２において具体的に開示および例示された化合物の１つは、以下に示された構造を有する化合物（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンである。この化合物は、本出願において便宜上化合物１または式（１）の化合物と呼ばれる可能性がある。

【化1】

【発明の概要】

【0050】

本発明は、Ｈｓｐ９０阻害活性または修飾活性を有し、Ｈｓｐ９０に仲介される病態もしくは症状の予防または治療において有用である式（１）の化合物の酸性塩（特にＬ−乳酸塩）、結晶形態および新規なアナログを提供する。その発明はまた、式（１）の化合物およびその酸付加塩（特にＬ−乳酸塩）およびそのアナログ、ならびに新規な化学中間体の製造方法を提供する。また、発明の範囲には前記化合物の治療上の使用が含まれる。

【発明の具体的説明】

【0051】

本明細書において、「本発明の化合物（compounds）」または「本発明の化合物（compound）」なる語は、文脈上他の意味に解す場合を除き、（ａ）新規な式（１０）の化合物およびその塩、溶媒和物、Ｎ−オキシドおよび互変異性体、（ｂ）化合物（１）の酸付加塩（特にＬ−乳酸塩塩）、ならびに（ｃ）式（１）の化合物の結晶形態およびその酸付加塩（特にＬ−乳酸塩）の全てを意味する。

【0052】

本明細書では、「治療」なる語ならびに関連する語である「治療する」および「治療すること」は、痛みの予防的または防止的治療の両方、そして治癒的または緩和的治療を意味する。したがって前記用語は、被験者または患者が既に痛みを感じている状況、ならびに現時点では痛みを感じていないが、痛みが出現すると予想される状況を含む。「治療」、「治療する」、「治療すること」および関連する語は、完全および部分的の両方で痛みを軽減または予防させることを包含する。したがって、例えば、本発明の化合物は、既存の痛みが悪化することを防ぐ可能性があるか、あるいは痛みを軽減またはさらには除去する可能性がある。予防的な意味で使われた場合、前記化合物はいかなる痛みが生じることも防ぐ可能性があるか、あるいは生じ得る痛みの程度を低減させる可能性がある。

【0053】

本明細書では、「修飾」なる語は、熱ショックタンパク質Ｈｓｐ９０の活性に対して適用されるとき、熱ショックタンパク質の生物学的活性のレベルの変化を明確にすることを意図している。したがって、修飾は、関連する熱ショックタンパク質活性の増加または減少をもたらす生理学的変化を包含する。後者の場合では、修飾は「阻害」として記載されてもよい。修飾は、直接的または間接的に生じてもよく、任意のメカニズムにより、ならびに例えば遺伝子発現のレベル（例えば、転写、翻訳および／または翻訳後修飾を含む）、熱ショックタンパク質活性のレベルに直接的または間接的に作用する修飾エレメントをコードする遺伝子発現のレベルを含む、任意の生理的なレベルで仲介されてもよい。したがって、修飾は、遺伝子増幅（すなわち複数の遺伝子コピー）を含む熱ショックタンパク質の増加した発現／抑制された発現または過剰発現もしくは低発現および／または転写効果による増加した発現または減少した発現に加えて、変異による（（脱）活性化を含む）熱ショックタンパク質の過剰活性（または低活性）および（脱）活性化を意味してもよい。「修飾された」、「修飾している」および「修飾する」なる語は適宜解釈されるべきである。

【0054】

本明細書では、例えば、本明細書において記載される（および例えば、様々な生理的な過程、疾病、状態、症状、処置、治療あるいは介入に対して適用される）ような、熱ショックタンパク質と共に使用される、「仲介される」なる語は、この用語が適用される様々な過程、疾病、状態、症状、治療および介入は熱ショックタンパク質Ｈｓｐ９０が生物学的役割を果たすものであるように、制限的に働くことを意図するものである。この用語が、疾病、状態または症状に対して適用される場合において、熱ショックタンパク質Ｈｓｐ９０により果たされる生物学的役割は、直接的または間接的であってもよく、疾患、状態または症状の病徴の発現（またはその病因または進行）のために、必要および／または十分であってもよい。したがって、熱ショックタンパク質Ｈｓｐ９０活性（特に異常なレベルの熱ショックタンパク質Ｈｓｐ９０活性（例えば、Ｈｓｐ９０過剰発現））は、必ずしも疾患、状態または症状の近因である必要がなく、むしろ熱ショックタンパク質Ｈｓｐ９０に仲介される疾病、状態または症状は、Ｈｓｐ９０が部分的にのみ関わる、多元的な病因および複雑な進行を有するものを含んでいると理解される。この用語が、治療、予防または介入に対して適用される場合において（例えば、本発明の「Ｈｓｐ９０に仲介される治療」および「Ｈｓｐ９０に仲介される予防」において）、Ｈｓｐ９０により果たされる役割は直接的または間接的であってもよく、または、治療、予防または介入の転帰の操作のために必要および／または十分であってもよい。したがって、Ｈｓｐ９０により仲介される病態もしくは症状は、ある特定の抗癌薬剤あるいは治療に対する耐性（特に本明細書に記載される１種以上のシグナル伝達阻害剤に対する耐性を含む）の発達を含む。

【0055】

本明細書では、「修飾」なる語は、サイクリン依存性キナーゼ５（ＣＤＫ５）の活性に対して適用されるとき、キナーゼの生物学的活性のレベルの変化を明確にすることを意図している。したがって、修飾は、関連するキナーゼ活性の増加または減少をもたらす生理学的変化を包含する。後者の場合では、修飾は「阻害」として記載されてもよい。修飾は、直接的または間接的に生じてもよく、任意のメカニズムにより、ならびに例えば遺伝子発現のレベル（例えば、転写、翻訳および／または翻訳後修飾を含む）、サイクリン依存性キナーゼ５（ＣＤＫ５）のレベルに直接的または間接的に作用する修飾エレメントをコードする遺伝子発現のレベル、または酵素(例えば、サイクリン依存性キナーゼ５（ＣＤＫ５）活性のレベル（例えば、アロステリック機構、拮抗的阻害、活性部位不活性化、フィードバックの抑制性経路の摂動などにより）を含む、任意の生理的なレベルで仲介されてもよい。したがって、修飾は、遺伝子増幅（すなわち複数の遺伝子コピー）を含むサイクリン依存性キナーゼ５（ＣＤＫ５）の増加した発現／抑制された発現または過剰発現もしくは低発現および／または転写効果による増加した発現または減少した発現に加えて、変異による（（脱）活性化を含む）サイクリン依存性キナーゼ５（ＣＤＫ５）の過剰活性（または低活性）および（脱）活性化を意味してもよい。「修飾された」、「修飾している」および「修飾する」なる語は適宜解釈されるべきである。

【0056】

本明細書では、例えば、本明細書において記載される（および例えば、様々な生理的な過程、疾病、状態、症状、処置、治療あるいは介入に対して適用される）ような、サイクリン依存性キナーゼ５（ＣＤＫ５）と共に使用される、「仲介される」なる語は、この用語が適用される様々な過程、疾病、状態、症状、治療および介入はサイクリン依存性キナーゼ５（ＣＤＫ５）が生物学的役割を果たすものであるように、制限的に働くことを意図するものである。この用語が、疾病、状態または症状に対して適用される場合において、サイクリン依存性キナーゼ５（ＣＤＫ５）により果たされる生物学的役割は、直接的または間接的であってもよく、疾病、病状または症状の病徴の発現（またはその病因または進行）のために、必要および／または十分であってもよい。したがって、サイクリン依存性キナーゼ５（ＣＤＫ５）の活性（特に異常なレベルのサイクリン依存性キナーゼ５（ＣＤＫ５）の活性（例えば、サイクリン依存性キナーゼ５（ＣＤＫ５）過剰発現））は、必ずしも疾患、状態または症状の近因である必要がなく、むしろＣＤＫ５に仲介される疾病、状態または症状は、ＣＤＫ５における、多元的な病因および複雑な進行を有するものを含んでいると理解される。この用語が、治療、予防または介入に対して適用される場合において（例えば、本発明の「ＣＤＫ５に仲介される治療」において)、ＣＤＫ５により果たされる役割は直接的または間接的であってもよく、または、治療、予防または介入の転帰の操作のために必要および／または十分であってもよい。

【0057】

「介入」なる語は、任意のレベルで生理学的変化をもたらす任意の作用を定義するために本明細書において使用される技術用語である。したがって介入は、任意の生理的なプロセス、事象、生化学的経路または細胞の事象／生化学的事象の誘導または抑制を含んでもよい。本発明の介入は、典型的には、疾病もしくは症状の療法、治療または予防を行う（またはそれらに寄与する）。

【0058】

本明細書では、「組合せ」なる語は、２種以上の化合物および／または薬剤（本明細書において成分とも呼ばれる）に対して使用されたとき、物質の中で前記２種以上の化合物／薬剤が結合していることを意味することを意図している。この文脈における「組合せた」および「組合せる」なる語は適宜解釈されるべきである。

【0059】

組合せ中の２種以上の化合物／薬剤の結合は物理的または非物理的であってもよい。物理的に結合された組合せ化合物／薬剤の例としては以下のものが挙げられる。

【0060】

混合剤（例えば、同一の単位用量内に）中に２種以上の化合物／薬剤を含む組成物（例えば、一体型の製剤）、
２種以上の化合物／薬剤が化学的に／物理化学的に結合している（例えば、架橋、分子的な凝集または共通の賦形剤部分への結合により）物質を含む組成物、
２種以上の化合物／薬剤が化学的に／物理化学的に共にパックされている（例えば、脂質小胞、粒子（例えば、ミクロ粒子またはナノ粒子）またはエマルジョン滴上に、またはそれらの内部に配置された）物質を含む組成物、
２種以上の化合物／薬剤が共にパックされているか、または共に提供されている（例えば、一連の単位用量の一部として）、薬学的キット、薬学的パックまたは患者パック。

【0061】

非物理的に結合された組合せ化合物／薬剤の例としては以下のものが挙げられる。

【0062】

２種以上の化合物／薬剤のうちの少なくとも一方と、前記２種以上の化合物／薬剤の物理的結合を形成するための、前記少なくとも一方の化合物の即時結合のための説明書とを含む物質（例えば、非一体型の製剤）、
２種以上の化合物／薬剤のうちの少なくとも一方と、前記２種以上の化合物／薬剤による併用療法のための説明書とを含む物質（例えば、非一体型の製剤）、
２種以上の化合物／薬剤のうちの少なくとも一方と、前記２種以上の化合物／薬剤の他方が投与された（または投与されている）患者集団への投与のための説明書とを含む物質、
２種以上の化合物／薬剤のうちの少なくとも一方を、前記２種以上の化合物／薬剤の他方と組合せて使用するために特に適した量または形態で含む物質。

【0063】

「組合せ」なる語は、全体として同一の治療計画の一部として投与される化合物／薬剤を指してもよい。それゆえ、２種以上の化合物／薬剤の各々の薬量は異なってもよく、各々は同時にまたは異なる時間で投与されてもよい。したがって、組合せの化合物／薬剤は順次に（例えば、前後して）または同時に投与されてもよい（同一の医薬製剤（すなわち一緒に）、または異なる医薬製剤（すなわち個別に）のどちらかにおいて）。同一の製剤での同時投与は一体型の製剤であるが、異なる医薬製剤での同時投与は非一体型である。併用療法の２種以上の化合物／薬剤の各々の薬量はまた投与経路に関連して異なってよい。

【0064】

本明細書では「薬学的キット」なる語は、任意にすべて共通の外装内に含まれる、投薬手段（例えば、計測装置）および／または送達手段（例えば、吸入器またはシリンジ）と共にある、医薬組成物の１種以上の単位用量の一群を意味する。２種以上の化合物／薬剤の組合せを含む薬学的キットにおいて、個々の化合物／薬剤は一体型の製剤または非一体型の製剤のいずれであってもよい。単位用量はブリスターパック内に含まれていてもよい。薬学的キットは任意に使用説明書をさらに含んでもよい。

【0065】

本明細書では「薬学的パック」なる語は、任意に共通の外装内に含まれる、医薬組成物の１種以上の単位用量の一群を意味する。２種以上の化合物／薬剤の組合せを含む薬学的パックにおいて、個々の化合物／薬剤は、一体型の製剤または非一体型の製剤であってもよい。単位用量はブリスターパック内に含まれていてもよい。薬学的パックは任意に使用説明書をさらに含んでもよい。

【0066】

本明細書では、「患者パック」なる語は、治療コース全体に対する医薬組成物を含む、患者に対して処方されたパッケージを定義する。患者パックは、通常１種以上のブリスターパックを含んでいる。患者パックは、調剤師がバルク供給から患者分の医薬を分配する従来の処方箋調剤に優る利点があり、患者は患者パックに入っている、患者の処方箋調剤では見ることができない添付文書をいつでも見ることができる。添付文書を包含しておけば、患者が医師の指示をよりよく遵守することが示されている。

【0067】

酸付加塩
第１の態様では、本発明は式（１）の化合物の酸付加塩を提供する。

【化2】

これは（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンという化学名を有する。

【0068】

「塩（salt）」および「酸付加塩（acid addition salt）」なる語は本願において区別なく使用されてもよく、「塩（salts）」および「酸付加塩（acid addition salts）」なる語も同様である。文脈より他の意味に解す場合を除き、「塩（salt）」および「塩（salts）」なる語は本明細書では酸付加塩を意味する。

【0069】

化合物（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンおよびその酸付加塩に対する言及はこれらの範囲内にすべての溶媒和物、互変異性体および同位体ならびに、文脈が許す場合はＮ−オキシドおよび他のイオン形を含む。

【0070】

酸付加塩は、無機および有機双方の多様な酸で形成できる。酸付加塩の例としては、酢酸、２，２−ジクロロ酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸（例えば、Ｌ−アスコルビン酸）、アスパラギン酸（例えば、Ｌ−アスパラギン酸）、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、ブタン酸、ショウノウ酸（例えば、（＋）ショウノウ酸）、ショウノウ−スルホン酸、（＋）−（１Ｓ）−ショウノウ−１０−スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、炭酸、ケイ皮酸、クエン酸、シクラミン酸、ドデカン酸、ドデシル硫酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチジン酸、グルコヘプトン酸、Ｄ−グルコン酸、グルクロン酸（例えば、Ｄ−グルクロン酸）、グルタミン酸（例えば、Ｌ−グルタミン酸）、α−オキソグルタル酸、グリコール酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸、イセチオン酸、イソ酪酸、乳酸（例えば、（＋）−Ｌ−乳酸（本明細書において他の箇所では単にＬ−乳酸として言及される可能性がある）および（±）−ＤＬ−乳酸）、ラウリルスルホン酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、（−）−Ｌ−リンゴ酸、マロン酸、（±）−ＤＬ−マンデル酸、メタンスルホン酸、ムチン酸、ナフタレンスルホン酸（例えば、ナフタレン−２−スルホン酸、およびナフタレン−１，５−ジスルホン酸）、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、オロチン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、リン酸、プロピオン酸、Ｌ−ピログルタミン酸、サリチル酸、４−アミノ−サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫黄、タンニン酸、酒石酸（例えば、（＋）−Ｌ−酒石酸）、チオシアン酸、トルエンスルホン酸（例えば、ｐ−トルエンスルホン酸）、ウンデシレン酸、吉草酸およびキシナホ酸からなる群から選ばれる酸により形成された塩が挙げられる。

【0071】

具体的な酸付加塩としては、塩酸、乳酸（例えば、Ｌ−乳酸）または硫酸により形成された塩がある。

【0072】

好ましい塩は、乳酸（すなわち、乳酸塩、特にＬ−乳酸塩）から形成された塩である。

【0073】

酸付加塩は、典型的には薬学上許容される塩であり、薬学上許容される塩の例は、ベルジュ（Berge）ら、１９７７年、「薬学的許容塩（Pharmaceutically Acceptable Salts）」、ジャーナル・オブ・ファーマシューティカルサイエンス（J. Pharm. Sci.）、第６６巻、１〜１９ページで検討されている。しかしながら、医薬上許容されない塩も中間体として製造してもよく、これをその後薬学上許容される塩に変換してもよい。このような薬学上許容されない塩の形態も、例えば、本発明の化合物の精製または分離に際して有用なことがあり、本発明の一部分を形成する。

【0074】

固体の状態では、本発明の塩は、結晶性またはアモルファスまたはその混合物であってもよい。

【0075】

一実施形態では、塩はアモルファスである。

【0076】

アモルファス固体では、結晶形態で通常存在する３次元構造は存在せず、アモルファス形態での分子のお互いに対する位置は実質的にランダムである。例えば、ハンコック（Hancock）ら、ジャーナル・オブ・ファーマシューティカルサイエンス（J. Pharm. Sci.）、１９９７年、８６、１参照。

【0077】

別の実施形態では、塩は実質的に結晶性である。

【0078】

本発明の塩は、「医薬用塩：特性、選択および使用（Pharmaceutical Salts: Properties,Selection,and Use）」、ハインリヒスタール（P.Heinrich Stahl）（編者）、カミールワーマス（Camille G.Wermuth）（編者）、ＩＳＢＮ：３−９０６３９−０２６−８、ハードカバー、３８８ページ、２００２年８月に記載されている方法のような従来の化学的方法により親化合物から合成することができる。そのような塩は一般的に、水、有機溶媒、またはそれら２つの混合物中で適切な酸と式（１）の化合物の遊離塩基形態を反応させることにより調製することができる。

【0079】

別の態様では、本発明は、（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの酸付加塩を調製する方法を提供し、前記方法は溶媒（典型的には有機溶媒）または混合溶媒中で（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの遊離塩基の溶液を形成する工程および酸で前記溶液を処理して付加塩の沈澱物を形成する工程を含む。

【0080】

酸は、遊離塩基が溶解している溶媒と混和性がある溶媒に溶液として加えられてもよい。遊離塩基がまず溶解される溶媒は、付加塩が不溶性のものであってもよい。あるいは、遊離塩基がまず溶解される溶液は、付加塩が少なくとも部分的に溶解するものであってもよく、塩が溶液から析出するように、付加塩がそれほど可溶でない別の溶媒が続いて加えられる。

【0081】

酸付加塩を形成する別の方法では、（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンは揮発性酸および場合により共溶媒を含む溶媒に溶解し、これにより揮発性酸との酸付加塩の溶液を形成し、得られた溶液をその後に濃縮または蒸発させて塩を単離する。このように調製することができる酸付加塩の一例は酢酸塩である。

【0082】

塩は、典型的には有機溶媒から形成されると共に析出し、したがって溶液から固体の分離（例えば、濾過）により単離することができる。

【0083】

本発明のある塩形態は、当業者に公知の方法により遊離塩基および場合により他の塩形態に変換することができる。例えば、遊離塩基はアミン固定相（例えば、ストラタ（Strata）−ＮＨ２カラム）を有するカラムに塩溶液を通すことにより形成することができる。あるいは、塩の水溶液を重炭酸ナトリウムで処理し、塩を分解し遊離塩基を沈殿させることができる。その後、遊離塩基は上述または本明細書の他の箇所に記載された方法の１つにより酸と組み合わされてもよい。

【0084】

このような酸付加塩は、対応する遊離塩基と比較して多くの長所を有する。例えば、塩は遊離塩基と比較して下記の１つまたはそれ以上の利点がある：
より溶解度が大きく、したがって静脈内投与（例えば、点滴によって）により適している、
より安定性が高い（例えば、より長い保存期間）、
より高い熱安定性を有する、
さほど塩基性ではなく、したがって静脈内投与により適している、
生産に関して利点を有する、
水溶液に対してより高い溶解度を有する、
より好ましい物理化学的性質を有する、
向上した抗癌活性を有し得る、かつ
向上した治療指数を有し得る。

【0085】

式（１）の化合物のＬ−乳酸塩の具体的な利点としては次のものが挙げられる：
水和されないので、処方がより容易である、
試験された遊離塩基や他の塩形態（すなわち、塩酸および硫酸により形成された塩）よりも多型が少ない、
吸湿性ではない、かつ
試験された遊離塩基や他の塩よりもよりよい溶解性の度合いを有する。

【0086】

本明細書で用いる「安定」または「安定性」なる語は、化学的安定性と固体状態（物理的）安定性を含む。「化学的安定性」なる語は、化合物が単離された形態で保存できることを意味するか、または化合物が、例えば、本明細書に記載される薬学的に許容される担体、希釈剤またはアジュバントとともに混合物として提供される製剤の形態で、例えば、６か月またはそれ以上の期間、より通常には１２か月またはそれ以上、例えば、１８か月またはそれ以上の期間、通常の貯蔵条件下でほとんどもしくは全く化学的に劣化または分解しないことを意味する。「固体状態安定性」は、化合物が単離された形態で保存できることを意味するか、または化合物が、例えば、本明細書に記載される薬学的に許容される担体、希釈剤またはアジュバントとともに混合物として提供される固体製剤の形態で、通常の貯蔵条件下で、ほとんどもしくは全く固体変換（例えば、水和、失水、溶媒和物化、脱溶媒和物化、結晶化、再結晶化または固体相転移）しないことを意味する。

【0087】

本明細書で使用される「吸湿性ではない」および「非吸湿性」なる語ならびに関連する語は、物質が高い相対湿度（例えば９０％相対湿度）条件にさらされた場合に、水を５重量％（物質自体の重量に対して）以上吸収しない、かつ／または高湿度条件で結晶形態に変化をきたさない、かつ／または高相対湿度条件で結晶体内に水を吸収（内水）しないことを意味する。

【0088】

結晶形態
別の態様では、本発明は実質的に結晶形態の式（１）の化合物：

【化3】

またはその酸付加塩を提供する。

【0089】

「実質的に結晶性」により、式（１）の化合物またはその酸付加塩は、５０％〜１００％結晶性であることが意味され、より具体的には、式（１）の化合物またはその塩は少なくとも５０％結晶性、または少なくとも６０％結晶性、または少なくとも７０％結晶性、または少なくとも８０％結晶性、または少なくとも９０％結晶性、または少なくとも９５％結晶性、または少なくとも９８％結晶性、または少なくとも９９％結晶性、または少なくとも９９．５％結晶性、または少なくとも９９．９％結晶性、例えば１００％結晶性であってもよい。

【0090】

より好ましくは、式（１）の化合物またはその塩は、９５％〜１００％結晶性のものであってもよい（または９５％〜１００％結晶性のものから成る群から選ばれてもよい）、例えば、少なくとも９８％結晶性、または少なくとも９９％結晶性、または少なくとも９９．５％結晶性、または少なくとも９９．６％結晶性、または少なくとも９９．７％結晶性、または少なくとも９９．８％結晶性、または少なくとも９９．９％結晶性、例えば１００％結晶性である。

【0091】

本発明の結晶形態は、固体の状態で、溶媒和されていても（例えば、水和）溶媒和されていなくてもよい（例えば、無水）。

【0092】

一実施形態では、結晶形態は溶媒和されていない（例えば、無水）。

【0093】

本明細書で用いる「無水」なる語は、塩（例えば、塩の結晶）のまわり、またはその中にいくらかの水分が存在する可能性を排除しない。例えば、塩（例えば、塩結晶）の表面に存在するいくらかの水分、あるいは塩（例えば、結晶）の塊の中に少量の水分が存在してもよい。典型的には、無水形態は、化合物の分子１個当たり水分子を０．４個未満の含んでおり、より好ましくは化合物の分子１個当たり水分子を０．１個未満、例えば、水の分子を０個含んでいる。

【0094】

別の実施形態では、結晶形態は溶媒和されている。結晶形態が水和されている場合、塩は例えば結晶水の分子を最大３個まで、より通常は水の分子を最大２個まで、例えば水の分子１個または水の分子２個を含み得る。存在する水の分子の数が１個未満すなわち非整数である非化学量論的水和物が形成される可能性がある。例えば１個未満の水の分子が存在する場合、例えば、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８または０．９個の水の分子が化合物の分子１個当たりに存在する可能性がある。

【0095】

他の溶媒和物としては、エタノラートやイソプロパノラートのようなアルコラートが挙げられる。

【0096】

本明細書に記載される結晶形態、その個々の結晶およびそれらの結晶構造は、本発明のさらなる態様である。

【0097】

結晶形態およびその結晶構造は、単結晶Ｘ線結晶学、粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）、示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）および赤外線分光法、例えば、フーリエ変換赤外線分光法（ＦＴＩＲ）を含む多くの手法を使い特性決定できる。様々な湿度条件下での結晶の性質は重量蒸気収着法によって、またＸＲＰＤによって分析することができる。

【0098】

化合物の結晶構造の測定は、Ｘ線結晶学的方法により行なうことができ、本明細書や「結晶学の基礎（Fundamentals of Crystallography）」、ジャコバッツォ（C. Giacovazzo）、モナコ（H. L. Monaco）、ビテルボ（D. Viterbo）、スコルダリ（F. Scordari）、ジリ（G. Gilli）、ザノッティ（G. Zanotti）およびキャッティ（M. Catti）、（国際結晶学連合（International Union of Crystallography）／オックスフォード大学出版（Oxford University Press）、１９９２年、ＩＳＢＮ：０−１９−８５５５７８−４（ｐ／ｂ）、０−１９−８５５７９−２（ｈ／ｂ））に記載されたような従来の方法によって行なうことができる。この手法は、単結晶のＸ線回折の分析および解釈を伴う。

【0099】

あるいは、化合物の結晶構造は粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）固体法により分析することができる。ＸＲＰＤは、本明細書および粉末Ｘ線回折入門（Introduction to X-ray Powder Diffraction）、（ロンジェンキンス（Ron Jenkins）およびロバートスナイダー（Robert L. Snyder）（ジョンワイリー＆サンズ、ニューヨーク、１９９６年）に記載のような従来の方法にしたがって行なうことができる。ＸＲＰＤ回折図中で明確なピーク（ランダムなバックグラウンドノイズとは対照的に）の存在は、化合物が結晶化度を有していることを示す。

【0100】

化合物の粉末Ｘ線図形は、Ｘ線回折スペクトルの回折角（２θ）パラメーターおよび面間隔（ｄ）パラメーターで特徴付けられる。これらは、ブラッグの式、ｎλ＝２ｄＳｉｎθ（ここでｎ＝ｌ、λ＝使用されるカソードの波長、ｄ＝面間隔、およびθ＝回折角）により関連づけられる。本明細書では、面間隔、回折角および全体的な図形は、データの特徴により、粉末Ｘ線回折における結晶の識別のために重要である。結晶成長の方向、粒径および測定条件によって相対強度は変わりうるので、相対強度は厳密に解釈されるべきでない。さらに、回折角は通常２θ±０．２°の範囲内で一致する角度を意味する。ピークは主要ピークを意味し、上述した以外の回折角で半分までの大きさのピークを含む。

【0101】

式（１）の化合物およびその酸付加塩の化合物は多くの異なった結晶形態で存在し、これらは下記により詳細に記載され、実施例において特性決定される。

【0102】

（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの遊離塩基の結晶形態
式（１）の化合物の遊離塩基は、少なくとも６つの異なる結晶形態で存在することが分かっており、そのうちの３つ（本明細書においてＦＢ１、ＦＢ２およびＦＢ５と表される）は空気中で不安定であり、そのうちの３つ（本明細書においてＦＢ３、ＦＢ４およびＦＢ６と表される）は空気中で安定である。遊離塩基の結晶形態の特性は、下記実施例６Ａに記載されている。

【0103】

形態ＦＢ１
一実施形態では本発明は、ＸＲＰＤパターンが５．５２に回折角ピーク（２θ／°）を有することに特徴付けられる結晶形態の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンを提供する。

【0104】

好ましくは、このＸＲＰＤパターンはまた、１５．２１、１６．１１、１６．７２、１８．２１および２０．２９の回折角（２θ／°）にピークを示す。

【0105】

より好ましくは、このＸＲＰＤパターンはまた、９．４４、１１．０５、１１．９９、１７．０９、１９．２３、１９．７３、２１．０９および２６．７２の回折角（２θ／°）にピークを示す。

【0106】

最も好ましくは、このＸＲＰＤパターンは実質的に本明細書の図１に示されたとおりである。

【0107】

別の態様では、本発明は結晶形態ＦＢ１の調製方法を提供し、この方法は（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンをｎ−ブタノールに溶解し飽和溶液を形成させ、その後ジ（イソプロピル）エーテルを加え結晶形態ＦＢ１を析出させることを含む。

【0108】

結晶形態ＦＢ１は空気中で不安定であり、放置された場合には変化してＦＢ３を形成する（下記参照）。

【0109】

したがって、本発明はまた、本明細書に定義される結晶形態ＦＢ３の調製方法を提供し、この方法はＦＢ３への変換が起こるのに十分な期間形態ＦＢ１を空気に暴露することを含む。

【0110】

形態ＦＢ２
別の実施形態では本発明は、ＸＲＰＤパターンが５．３５に回折角ピーク（２θ／°）を有することにより特徴付けられる結晶形態の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンを提供する。

【0111】

好ましくは、このＸＲＰＤパターンはまた、１４．６８、１７．００、１８．６１、１９．８６および２０．１５に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0112】

より好ましくは、このＸＲＰＤパターンはさらに、６．７３、１０．４０、１０．６７、１８．２６、１８．８７、１９．２４、２１．１３、２１．４４および２６．８６に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0113】

最も好ましくは、このＸＲＰＤパターンは実質的に本明細書の図２に示されたとおりである。

【0114】

別の態様では、本発明は結晶形態ＦＢ２の調製方法を提供し、この方法は（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンをＴＨＦに溶解し飽和溶液を形成させ、その後酢酸イソプロピルを加え結晶形態ＦＢ２を析出させることを含む。

【0115】

結晶形態ＦＢ２も空気中で不安定であり、放置された場合には変化してＦＢ３を形成する（下記参照）。

【0116】

したがって、本発明はまた、本明細書に定義される結晶形態ＦＢ３の調製方法を提供し、この方法はＦＢ３への変換が起こるのに十分な期間形態ＦＢ２を空気に暴露することを含む。

【0117】

形態ＦＢ３
別の実施形態では本発明は、ＸＲＰＤパターンが６．０５に回折角ピーク（２θ／°）を有することにより特徴付けられる結晶形態の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンを提供する。

【0118】

好ましくは、このＸＲＰＤパターンはまた、１２．１５、１３．６０、１５．７７、１７．８２、１８．８９、１９．６４、２０．２０および２０．９３に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0119】

より好ましくは、このＸＲＰＤパターンはさらに、７．８７、９．１５、１０．２２、１６．６２、１７．１６、２２．１９、２３．３３および２４．５３に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0120】

最も好ましくは、このＸＲＰＤパターンは実質的に本明細書の図３に示されたとおりである。

【0121】

形態ＦＢ３は、少なくとも１か月間４０℃および相対湿度７５％の空気中で安定であり、したがって固形医薬組成物における使用に適している。したがって、別の態様では本発明は、本明細書に定義される結晶形態ＦＢ３の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの遊離塩基を含む固形医薬組成物を提供する。

【0122】

形態ＦＢ４
別の実施形態では本発明は、ＸＲＰＤパターンが６．２９に回折角ピーク（２θ／°）を有することにより特徴付けられる結晶形態の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンを提供する。

【0123】

好ましくは、このＸＲＰＤパターンはまた、８．９１、９．９６、１４．１１、１６．１１、１７．１１、１８．４８、１９．９１、２１．５７、２２．４６、２３．５９および２４．８８に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0124】

より好ましくは、このＸＲＰＤパターンはさらに、１２．６２、１７．４０、１７．８８、１９．３３、２０．３５および２７．２５に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0125】

最も好ましくは、このＸＲＰＤパターンは実質的に本明細書の図４に示されたとおりである。

【0126】

Ｘ線結晶学的研究から、形態ＦＢ４は、正方晶系空間群Ｐ４_２／ｎに属し２９３Ｋでａ＝ｂ＝２８．２、ｃ＝６．０Å、α＝β＝γ＝９０°の結晶格子パラメーターを有する結晶構造を有することが分かっている。結晶のパッキング図を図５に示す。

【0127】

したがって別の実施形態では本発明は、結晶性であり以下の特性を有する（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの遊離塩基を提供する：
（ａ）図５に示される結晶構造を有する、かつ／または
（ｂ）本明細書の表５の座標により定義される結晶構造を有する、かつ／または
（ｃ）２９３Ｋでａ＝ｂ＝２８．２、ｃ＝６．０Å、α＝β＝γ＝９０°の結晶格子パラメーターを有する、かつ／または
（ｄ）Ｐ４_２／ｎなどの正方晶系空間群に属する結晶構造を有する。

【0128】

結晶形態ＦＢ４は安定した二水和物であり、固形医薬組成物の調製に使用してもよい。したがって、別の態様では本発明は、本明細書に定義される結晶形態ＦＢ４の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの遊離塩基を含む固形医薬組成物を提供する。

【0129】

別の態様では、本発明は結晶形態ＦＢ４の調製方法を提供し、この方法は（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンをエタノールに溶解し飽和溶液を形成させ、その後ジ（イソプロピル）エーテルを加え結晶形態ＦＢ４を析出させることを含む。

【0130】

形態ＦＢ５
別の実施形態では本発明は、ＸＲＰＤパターンが７．１２に回折角ピーク（２θ／°）を有することにより特徴付けられる結晶形態の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンを提供する。

【0131】

好ましくは、このＸＲＰＤパターンはまた、９．７１、１０．１４、１３．７３、１６．５８、１８．７１、１９．４６、２０．１５および２２．３５に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0132】

より好ましくは、このＸＲＰＤパターンはさらに、１１．５０、１４．６０、１５．３４、１６．９４、２１．９７、２３．４３および２６．３６に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0133】

最も好ましくは、このＸＲＰＤパターンは実質的に本明細書の図６に示されたとおりである。

【0134】

別の態様では、本発明は結晶形態ＦＢ５の調製方法を提供し、この方法は（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンをイソプロパノールに溶解し飽和溶液を形成させ、その後酢酸イソプロピルを加え結晶形態ＦＢ５を析出させることを含む。

【0135】

形態ＦＢ６
別の実施形態では本発明は、ＸＲＰＤパターンが１８．６６に回折角ピーク（２θ／°）を有することにより特徴付けられる結晶形態の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンを提供する。

【0136】

好ましくは、このＸＲＰＤパターンはまた、９．０９、９．６８、１６．０８、１６．４６、１６．９４、１８．１３、２０．０５および２２．４８に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0137】

より好ましくは、このＸＲＰＤパターンはさらに、４．６０および２６．５３に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0138】

最も好ましくは、このＸＲＰＤパターンは実質的に本明細書の図７に示されたとおりである。

【0139】

（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンと塩酸とで形成された塩の結晶形態
式（１）の化合物の塩酸塩は、少なくとも５つの異なる結晶形態で存在することが分かっており、そのうちの１つ（本明細書においてＦＨ３と表される）は空気中で安定しており、そのうちの４つ（本明細書においてＦＨ１、ＦＨ２、ＦＨ４およびＦＨ５と表される）は空気中で不安定である。

【0140】

形態ＦＨ１
別の実施形態では本発明は、ＸＲＰＤパターンが７．３４に回折角ピーク（２θ／°）を有することにより特徴付けられる結晶形態の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの塩酸塩を提供する。

【0141】

好ましくは、このＸＲＰＤパターンはまた、５．５９、７．９９、１０．３３、１４．３２、１５．２９、１８．５９および２５．３２に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0142】

より好ましくは、このＸＲＰＤパターンはさらに、１１．７０、１３．９５、１４．７２、１６．３７、１６．８２、１９．９９、２０．４０、２０．８２、２１．２６、２２．５７、２３．０１、２４．６０、２５．８２、２７．１０、２８．２７および２８．７８に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0143】

最も好ましくは、このＸＲＰＤパターンは実質的に本明細書の図８に示されたとおりである。

【0144】

別の態様では、本発明は結晶形態ＦＨ１の調製方法を提供し、この方法は（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの遊離塩基に酢酸エチル／ＨＣｌおよびメタノールを加えて溶液にし、その後溶媒を除去して二塩酸塩を残すことを含む。

【0145】

形態ＦＨ２
別の実施形態では本発明は、ＸＲＰＤパターンが３．４０に回折角ピーク（２θ／°）を有することにより特徴付けられる結晶形態の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの塩酸塩を提供する。

【0146】

好ましくは、このＸＲＰＤパターンはまた、６．８１、９．０３、１１．８４、１５．７０、１６．１０、１８．１３、２０．８４、２３．１９、２３．９４、２４．７８および２５．６５に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0147】

より好ましくは、このＸＲＰＤパターンはさらに、６．０４、１３．０１、１３．６９、１６．５９、１７．１７、２１．３９、２１．８７、２４．７８、２５．９７、２６．９４、２７．５９、２８．０６および２９．５３に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0148】

最も好ましくは、このＸＲＰＤパターンは実質的に本明細書の図９に示されたとおりである。

【0149】

形態ＦＨ２は、貧溶媒としてアセトンを使用して、形態ＦＨ１の飽和ＤＭＦ溶液からの析出により調製することができる。したがって、別の態様では本発明は、結晶形態ＦＨ２の調製方法を提供し、この方法は、ＤＭＦ中の形態ＦＨ１の飽和溶液を形成し、その後アセトンを加えて形態ＦＨ２を析出させることを含む。

【0150】

形態ＦＨ３
別の実施形態では本発明は、ＸＲＰＤパターンが９．３５に回折角ピーク（２θ／°）を有することにより特徴付けられる結晶形態の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの塩酸塩を提供する。

【0151】

好ましくは、このＸＲＰＤパターンはまた、１０．４０、１０．７８、１２．５１、１４．７８、１８．７４、１９．０９、２１．６８、２２．３２、２３．０７、２４．８６、２５．１４および２９．０２に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0152】

より好ましくは、このＸＲＰＤパターンはさらに、５．８３、１０．７８、１１．３５、１１．７１、１３．３５、１３．８１、１４．１０、１７．１８、１７．６５、１９．４６、２０．１１、２１．１８、２３．７１、２６．４９、２７．０３、２８．０９、２８．７０および２９．５２に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0153】

最も好ましくは、このＸＲＰＤパターンは実質的に本明細書の図１０に示されたとおりである。

【0154】

形態ＦＨ３は、（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの遊離塩基のエタノール溶液にジオキサン中のＨＣｌを加えることにより調製することができる。したがって別の態様では本発明は、形態ＦＨ３の塩酸塩の調製方法を提供し、この方法は（ｉ）（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの遊離塩基をエタノールに溶解すること、（ｉｉ）これに塩化水素のジオキサン溶液を加えること、（ｉｉｉ）得られる混合物を蒸発乾固させること、（ｉｖ）温エタノール：水（９：１、５ｍｌ）中に残基を溶解させること、（ｖ）この溶液をシーディングし、少なくとも２時間（例えば、少なくとも４または６または８または１０または１２または１４時間）溶液を撹拌し、沈殿した形態ＦＨ３を取り出すことを含む。

【0155】

形態ＦＨ４
別の実施形態では本発明は、ＸＲＰＤパターンが１１．６２に回折角ピーク（２θ／°）を有することにより特徴付けられる結晶形態の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの塩酸塩を提供する。

【0156】

好ましくは、このＸＲＰＤパターンはまた、７．０４、１１．６２、１５．５４、１６．６８、１８．５４、２０．７３、２２．２６、２２．９４、２３．７７および２５．０７に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0157】

より好ましくは、このＸＲＰＤパターンはさらに、９．８９、１２．３０、１３．２７、１４．１４、１６．０６、１７．９９、１９．２４、２３．３６、２４．６３、２５．７２、２６．９１および２７．６３に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0158】

最も好ましくは、このＸＲＰＤパターンは実質的に本明細書の図１１に示されたとおりである。

【0159】

形態ＦＨ４は、貧溶媒として１，４−ジオキサンを使用して、ＤＭＦ溶液からの析出により調製することができる。したがって、別の態様では本発明は、結晶形態ＦＨ４の調製方法を提供し、この方法は、形態ＦＨ１の飽和ＤＭＦ溶液を形成し、その後１，４−ジオキサンを加えて形態ＦＨ４を析出させることを含む。

【0160】

形態ＦＨ５
別の実施形態では本発明は、ＸＲＰＤパターンが２．３２に回折角ピーク（２θ／°）を有することにより特徴付けられる結晶形態の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの塩酸塩を提供する。

【0161】

好ましくは、このＸＲＰＤパターンはまた、６．１５、１１．７９、１５．７９、２０．８１、２２．７６および２３．７６に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0162】

最も好ましくは、このＸＲＰＤパターンは実質的に本明細書の図１２に示されたとおりである。

【0163】

形態ＦＨ５は、貧溶媒としてアセトンを使用して、飽和メタノール溶液からの析出により調製することができる。

【0164】

（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンとＬ−乳酸とで形成された塩の結晶形態
式（１）の化合物の乳酸塩は、１つの不安定な形態（ＦＬ３）および２つの安定した形態（ＦＬ１とＦＬ２）で存在する。

【0165】

形態ＦＬ１
別の実施形態では本発明は、ＸＲＰＤパターンが１６．８１に回折角ピーク（２θ／°）を有することにより特徴付けられる結晶形態の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンのＬ−乳酸塩を提供する。

【0166】

好ましくは、このＸＲＰＤパターンはまた、６．５３、１３．１０、１４．１３、１４．４０、１７．２２、１８．６５、１９．５２、１９．８２、２２．３３、２２．８４および２３．０９に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0167】

より好ましくは、このＸＲＰＤパターンはさらに、６．１８，８．３９，１１．０８、１５．２１、１６．２１、２０．４９、２０．７６、２１．１３、２２．０２、２３．９４、２５．１９、２６．４１、２６．９５および２７．８１に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0168】

最も好ましくは、このＸＲＰＤパターンは実質的に本明細書の図１３に示されたとおりである。

【0169】

形態ＦＬ１は、（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの遊離塩基をエタノールとＥｔＯＡｃとの混合物（例えば、体積比３：５で）に懸濁すること；前記混合物にＬ−乳酸を加えること（例えば、Ｌ−乳酸はエタノール溶液の形態である）；前記混合物を清澄化すること（例えば、透明になるまで加熱することによりおよび／または残留する固体をすべてろ過することにより）；シーディングしながら清澄化した混合物を撹拌し結晶化した形態ＦＬ１を、例えば、ろ過により取り出すことにより調製できる。

【0170】

形態ＦＬ２
別の実施形態では本発明は、ＸＲＰＤパターンが２２．３４に回折角ピーク（２θ／°）を有することにより特徴付けられる結晶形態の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンのＬ−乳酸塩を提供する。

【0171】

好ましくは、このＸＲＰＤパターンはまた、８．０３、１０．７１、１１．９８、１３．１３、１５．３９、１６．０９、１６．６１、１７．２６、１８．１７、１８．８２、２０．４０、２１．０１、２１．５３、２２．３４、２２．５６、２３．７１および２７．７０に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0172】

より好ましくは、このＸＲＰＤパターンはさらに、２４．３０、２４．６５、２６．５６および２８．２９に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0173】

最も好ましくは、このＸＲＰＤパターンは実質的に本明細書の図１４に示されたとおりである。

【0174】

Ｘ線結晶学的研究から、形態ＦＬ２は、単斜晶系空間群Ｐ２_１に属し２９３Ｋでａ＝５．８、ｂ＝１６．６、ｃ＝１４．９Å、β＝９８、α＝γ＝９０°の結晶格子パラメーターを有する結晶構造を有することが分かっている。ＦＬ２の結晶のパッキング図を本明細書の図１５に示す。

【0175】

したがって別の実施形態では本発明は、結晶性であり以下の特性を有する（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンのＬ−乳酸塩を提供する：
（ａ）図１５に示される結晶構造を有する、かつ／または
（ｂ）本明細書の表１６の座標により定義される結晶構造を有する、かつ／または
（ｃ）２９３Ｋでａ＝５．８、ｂ＝１６．６、ｃ＝１４．９Å、β＝９８、α＝γ＝９０°の結晶格子パラメーターを有する、かつ／または
（ｄ）Ｐ２_１などの単斜晶系空間群に属する結晶構造を有する。

【0176】

結晶形態ＦＬ２は、３つの結晶が存在することから名目上は三水和物である安定した水和物であるが、非対称ユニットにおける水の位置は、室内の温度および湿度では完全に（１００％）占有されていない。形態ＦＬ２は固体の医薬組成物の調製に使用されてもよい。したがって、別の態様では本発明は、本明細書に定義される結晶形態ＦＬ２の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンのＬ−乳酸塩を含む固形医薬組成物を提供する。

【0177】

形態ＦＬ２は、貧溶媒としてアセトンを使用して、飽和メタノール水溶液からの析出により調製することができる。したがって、別の態様では本発明は、結晶形態ＦＬ２の調製方法を提供し、この方法は、メタノール：水（好ましくは９：１の比率で）形態ＦＬ１の飽和溶液を形成すること、その後アセトンを加えて形態ＦＬ２を析出させることを含む。

【0178】

形態ＦＬ３
別の実施形態では本発明は、ＸＲＰＤパターンが５．５３に回折角ピーク（２θ／°）を有することにより特性付けられる結晶形態の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンのＬ−乳酸塩を提供する。

【0179】

好ましくは、このＸＲＰＤパターンはまた、１１．０７、１３．１６、１６．６９、１７．１７、１８．００、１８．４９、１９．２８、２１．０５、２２．４７および２２．８４に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0180】

より好ましくは、このＸＲＰＤパターンはさらに、８．３６、１３．８５、１９．７９、２０．３４、２１．４７、２１．９３、２４．５６、２６．２８、２７．０６、２７．４７および２９．１１に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0181】

最も好ましくは、このＸＲＰＤパターンは実質的に本明細書の図１６に示されたとおりである。

【0182】

形態ＦＬ３は、貧溶媒としてヘプタンを使用して、飽和ＴＨＦ溶液からの析出により調製することができる不安定な形態である。したがって、別の態様では本発明は、結晶形態ＦＬ３の調製方法を提供し、この方法は、形態ＦＬ１の飽和ＴＨＦ溶液を形成し、その後ヘプタンを加えて形態ＦＬ３を析出させることを含む。

【0183】

（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンと硫酸とで形成された塩の結晶形態
硫酸塩は、２つの不安定な形態（ＦＳ１およびＦＳ２）および４つの安定な形態（ＦＳ３、ＦＳ４、ＦＳ５およびＦＳ６）で存在する。

【0184】

１：１の塩は（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの遊離塩基を硫酸に溶解し、そして次に蒸発乾固させることにより調製することができる。

【0185】

形態ＦＳ１
別の実施形態では本発明は、ＸＲＰＤパターンが４．７９に回折角ピーク（２θ／°）を有することにより特徴付けられる結晶形態の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの硫酸塩を提供する。

【0186】

好ましくは、このＸＲＰＤパターンはまた、１０．０２、１１．２８、１４．３８、１５．２７、１６．９１、１８．２９、２０．１２、２１．７６および２２．３２に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0187】

より好ましくは、このＸＲＰＤパターンはさらに、１０．６８、１２．８９、１７．６４、１８．８６、１９．２８、２０．８２、２１．２１、２２．８９、２３．８３、２４．２２、２４．４２、２５．１３および２９．０４に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0188】

最も好ましくは、このＸＲＰＤパターンは実質的に本明細書の図１７に示されたとおりである。

【0189】

形態ＦＳ１は、室温にて１：１の塩（上記参照）の飽和水溶液を調製し、その後ゆっくりとアセトニトリルを加え形態ＦＳ１を析出させることにより調製することができる。

【0190】

したがって、別の態様では本発明は、結晶形態ＦＳ１の調製方法を提供し、この方法は、水中で１：１の塩の形態の飽和溶液を形成し、その後アセトニトリルを加えて形態ＦＳ１を析出させることを含む。

【0191】

形態ＦＳ２
別の実施形態では本発明は、ＸＲＰＤパターンが７．４３に回折角ピーク（２θ／°）を有することにより特徴付けられる結晶形態の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの硫酸塩を提供する。

【0192】

好ましくは、このＸＲＰＤパターンはまた、７．０３、８．６７、１１．７６、１３．８４、１７．５０および２３．２０に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0193】

より好ましくは、このＸＲＰＤパターンはさらに、４．１７、８．０９、９．２７、９．６５、１０．４１、１０．９８、１２．５３、１４．５５、１５．３９、１６．２４、１６．８９、１８．０５、１８．９３、１９．４７、２４．２１、２５．２１、２５．７５、２６．６２および２７．６７に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0194】

最も好ましくは、このＸＲＰＤパターンは実質的に本明細書の図１８に示されたとおりである。

【0195】

別の態様では本発明は、形態ＦＳ２の製造方法を提供し、この方法は、濃縮Ｈ_２ＳＯ_４に化合物（１）を溶解し、アセトニトリル（例えば、Ｈ_２ＳＯ_４に対して４容量）を添加して形態ＦＳ２を析出させることを含む。

【0196】

形態ＦＳ３
別の実施形態では本発明は、ＸＲＰＤパターンが５．４３に回折角ピーク（２θ／°）有することにより特徴付けられる結晶形態の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの硫酸塩を提供する。

【0197】

好ましくは、このＸＲＰＤパターンはまた、１０．３０、１１．２４、１４．２６、１４．９１、１６．４１、１７．５３、１８．３８、１８．６１、１９．０１、１９．９２、２１．７７、２２．６７、２４．２３および２５．３６に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0198】

より好ましくは、このＸＲＰＤパターンはさらに、４．８１、１２．９４、１３．９８、１５．６２、１９．３８、２０．２７、２０．７１、２１．１９、２３．７９、２７．３８および２８．８２に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0199】

最も好ましくは、このＸＲＰＤパターンは実質的に本明細書の図１９に示されたとおりである。

【0200】

形態ＦＳ３は、形態ＦＳ１を空気中で２日間乾燥させることにより調製することができる。

【0201】

形態ＦＳ４
別の実施形態では本発明は、ＸＲＰＤパターンが７．４８に回折角ピーク（２θ／°）を有することにより特徴付けられる結晶形態の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの硫酸塩を提供する。

【0202】

好ましくは、このＸＲＰＤパターンはまた、７．１６、７．９７、８．８２、９．０９、９．３７、１０．４５、１１．７７、１４．３６、１６．２１、１６．９９、１７．２８、１７．５９、１８．９０、２３．１３、２３．６８および２３．９６に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0203】

より好ましくは、このＸＲＰＤパターンはさらに、４．６４、８．４２、１３．２５、１３．５４、１５．０３、１７．９６、１９．４３、１９．８３、２１．３６、２４．７７、２５．６４、２６．１９、２６．７３、２７．２０、２７．７６および２８．６４に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0204】

最も好ましくは、このＸＲＰＤパターンは実質的に本明細書の図２０に示されたとおりである。

【0205】

形態ＦＳ４は、形態ＦＳ２を数週間４０℃および７５％ＲＨで培養することにより調製することができる。

【0206】

形態ＦＳ５
別の実施形態では本発明は、ＸＲＰＤパターンが７．９９に回折角ピーク（２θ／°）を有することにより特徴付けられる結晶形態の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの硫酸塩を提供する。

【0207】

好ましくは、このＸＲＰＤパターンはまた、７．１１、９．３３、９．５７、１０．４５、１１．６４、１３．２７、１４．２８、１５．６０、１６．９８、１７．６５、１８．０１、１８．８０、２３．２１、２３．５１、２３．９２、２５．０６および２６．２４に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0208】

より好ましくは、ＸＲＰＤパターンはさらに、４．７０、１４．６５、１５．１２、１９．３２、この１９．８３、２１．０８、２４．３０、２７．２８および２８．６７に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0209】

最も好ましくは、このＸＲＰＤパターンは実質的に本明細書の図２１に示されたとおりである。

【0210】

形態ＦＳ５は、形態ＦＳ２を空気中で乾燥させることにより調製することができる。

【0211】

形態ＦＳ６
別の実施形態では本発明は、ＸＲＰＤパターンが４．８２に回折角ピーク（２θ／°）を有することにより特徴付けられる結晶形態の（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの硫酸塩を提供する。

【0212】

好ましくは、このＸＲＰＤパターンはまた、９．９８、１４．４５、１５．３８、１６．９７、１８．１８、２０．２３、２０．９３および２２．２９に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0213】

より好ましくは、このＸＲＰＤパターンはさらに、１１．３５、１２．９２、１７．５２、１９．４２、２１．３１、２１．６６、２１．８９、２２．８４、２３．０４、２３．９４、２４．５１、２５．２６および２９．１８に回折角（２θ／°）ピークを示す。

【0214】

最も好ましくは、このＸＲＰＤパターンは実質的に本明細書の図２２に示されたとおりである。

【0215】

形態ＦＳ６は、１：１の塩（上記参照）の飽和ＤＭＦ溶液を調製し、その後トルエンを加え形態ＦＳ６を析出させることにより調製することができる。

【0216】

化合物（１）の酸付加塩および結晶形態の製薬学的用途
他の態様では、本発明は以下のものを提供する：
Ｈｓｐ９０が仲介する病態もしくは症状の予防または治療における使用のための、本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態。

【0217】

Ｈｓｐ９０が仲介する病態もしくは症状の予防または治療用薬剤の製造のための、本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態の使用。

【0218】

Ｈｓｐ９０が仲介する病態もしくは症状の予防または治療方法であって、本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態をその必要のある被験体に投与することを含む方法。

【0219】

Ｈｓｐ９０が仲介する病態もしくは症状の罹患率の緩和または低減に用いる、本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態。

【0220】

Ｈｓｐ９０が仲介する病態もしくは症状の罹患率の緩和または低減用薬剤の製造のための、本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態の使用。

【0221】

Ｈｓｐ９０が仲介する病態もしくは症状の罹患率の緩和または低減方法であって、本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態をその必要のある被験体に投与することを含む方法。

【0222】

哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の治療に用いる、本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態。

【0223】

哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の治療用薬剤の製造のための、本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態の使用。

【0224】

哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の治療方法であって、本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態を異常な細胞増殖を阻害するのに有効な量で前記哺乳類に投与することを含む方法。

【0225】

哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の罹患率の緩和あるいは低減に用いる、本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態。

【0226】

哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の罹患率の緩和あるいは低減用薬剤の製造のための、本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態の使用。

【0227】

哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の罹患率の緩和あるいは低減方法であって、本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態を異常な細胞増殖を阻害するのに有効な量で前記哺乳類に投与することを含む方法。

【0228】

哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の治療方法であって、本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態をＨｓｐ９０の活性を阻害するのに有効な量で前記哺乳類に投与することを含む方法。

【0229】

哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の罹患率の緩和あるいは低減方法であって、本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態をＨｓｐ９０の活性を阻害するのに有効な量で前記哺乳類に投与することを含む方法。

【0230】

Ｈｓｐ９０の阻害剤としての使用のための本明細書で定義される式（１０）の化合物。

【0231】

Ｈｓｐ９０の阻害方法であって、Ｈｓｐ９０と本明細書に定義される式（１）の化合物のＨｓｐ９０阻害性酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態とを接触させることを含む方法。

【0232】

Ｈｓｐ９０の活性を阻害することによる細胞過程（例えば、細胞分裂）の修飾に用いる、本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態。

【0233】

本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態を使用する、Ｈｓｐ９０の活性を阻害することによる細胞過程（例えば、細胞分裂）の修飾方法。

【0234】

本明細書に記載される病態の予防または治療における使用のための、本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態。

【0235】

本明細書に定義される１種以上の用途のため薬剤の製造のための、本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態の使用。

【0236】

本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。

【0237】

本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態と薬学的に許容される担体とを含む、経口投与に適した形態の医薬組成物。

【0238】

本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態と薬学的に許容される担体とを含む、非経口投与（例えば、静脈内投与（ｉ．ｖ．）による）に適した形態の医薬組成物。

【0239】

本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態と薬学的に許容される担体とを含む、注射または点滴による静脈内投与（ｉ．ｖ．）に適した形態の医薬組成物。

【0240】

薬剤に使用するための、本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態。

【0241】

上記および本明細書の他の箇所に記載のいずれかの使用および方法のための、本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態。

【0242】

スクリーニングされ、Ｈｓｐ９０に対して活性を有する化合物による治療に感受性のある疾病もしくは症状に罹患している、または罹患する危険性があると判定された患者における病態または症状の治療あるいは予防における使用のための、本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態。

【0243】

スクリーニングされ、Ｈｓｐ９０に対して活性を有する化合物による治療に感受性のある疾病もしくは症状に罹患している、または罹患する危険性があると判定された患者における病態または症状の治療あるいは予防用薬剤の製造のための、本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態の使用。

【0244】

Ｈｓｐ９０により仲介される病態もしくは症状の診断および治療方法であって、（ｉ）患者が罹患している、もしくは罹患している可能性のある疾病または症状が、Ｈｓｐ９０に対する活性を有する化合物による治療に感受性があるものかどうかを判定すべく患者をスクリーニングすること、ならびに（ｉｉ）患者の疾病または症状が感受性があることが示された場合、その後、本明細書に定義される式（１）の化合物の酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）あるいは本明細書に定義される式（１）の化合物またはその酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の結晶形態を患者に投与することを含む方法。

【0245】

新規な方法
また、本発明は、式（１）の化合物、そのアナログ、およびそれらの酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）の新規な調製方法、ならびに式（１）の化合物の合成において重要な中間体の新規な調製方法を提供する。

【0246】

したがって、他の態様において、本発明は、式（２）の化合物の調製方法であって、

【化4】

（式中、Ｒ^１はＣ_１−４アルキルである）
式（３）の化合物を接触水素化に供すること、

【化5】

（式中、ＰＧは水素化条件下で除去可能な保護基であり、Ａ−ＢはＣＨ−ＣＨ_３またはＣ＝ＣＨ_２である）および
その後、上記方法の生成物が遊離塩基である場合、場合により式（２）の化合物を酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）に変換することを含む方法を提供する。

【0247】

保護基ＰＧは、好ましくはベンジル基である。

【0248】

部分Ａ−Ｂは、ＣＨ−ＣＨ_３またはＣ＝ＣＨ_２であり得る。

【0249】

一実施形態において、部分Ａ−Ｂは、Ｃ＝ＣＨ_２である。

【0250】

他の実施形態において、部分Ａ−Ｂは、ＣＨ−ＣＨ_３である。

【0251】

接触水素化は、典型的には、パラジウム触媒、例えばパラジウム炭素（palladium on carbon（palladium on charcoal））を用いて行われる。

【0252】

上記の方法は、式（１）の化合物、またはそのエチル、プロピルおよびブチルホモログの調製に用いてもよい。好ましくは、上記の方法は、Ｒ^１がメチルまたはエチルである化合物の調製に用いられる。

【0253】

一実施形態において、Ｒ^１はメチルである。すなわち、上記の方法は、式（１）の化合物の調製に用いられる。

【0254】

他の実施形態において、Ｒ^１はエチルである。

【0255】

式（３）の化合物は、式（３ａ）の化合物

【化6】

と、基−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_３を基Ｃ（＝ＣＨ_２）−ＣＨ_３に変換するのに適したウィッティヒ試薬または他の試薬とを反応させることにより調製可能である。例えば、アセトフェノン化合物（３ａ）とウィッティヒ試薬ＭｅＰＰｈ_３Ｂｒとを、ＴＨＦ中でブチルリチウムまたはカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドなどの塩基の存在下で反応させて、式（３）の化合物（式中、Ａ−ＢはＣ＝ＣＨ_２である）を得ることが可能である。

【0256】

よって、他の態様において、本発明は、本明細書で定義される式（３）の化合物の調製方法であって、上記で定義された式（３ａ）の化合物と、基−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_３を基Ｃ（＝ＣＨ_２）−ＣＨ_３基に変換するのに適したウィッティヒ試薬または他の試薬とを反応させることを含む方法を提供する。

【0257】

あるいは、より好ましくは、式（３）の化合物は、下記式（４）の置換安息香酸またはその活性型もしくは誘導体と、下記式（５）のイソインドリンとを反応させることにより調製可能である。

【0258】

したがって、さらなる態様において、本発明は、本明細書で定義される式（３）の化合物の調製方法であって、
（ａ−ｉ）式（４）の化合物またはその活性型もしくは誘導体と、式（５）の化合物とをアミド形成条件下で反応させることを含む方法を提供する。

【化7】

【0259】

また、本発明は、本明細書で定義される式（２）の化合物の調製方法であって、
（ａ−ｉ）本明細書で定義される式（４）の化合物またはその活性型もしくは誘導体と、本明細書で定義される式（５）の化合物とをアミド形成条件下で反応させて、式（３）の化合物を得ること、ならびに
（ｂ）保護基ＰＧを除去するため、および、Ａ−ＢがＣ＝ＣＨ_２の場合、Ａ−Ｂ基をイソプロピル基に還元するために、式（３）の化合物を接触水素化に供し、前記方法の生成物が遊離塩基である場合、場合により式（２）の化合物を酸付加塩（例えば、Ｌ−乳酸塩）に変換することを含む方法を提供する。

【0260】

安息香酸（４）とイソインドリン（５）とを反応させる前に、塩化チオニルでの処理、触媒量のジメチルホルムアミドの存在下での塩化オキサリルとの反応、または、前記酸のカリウム塩と塩化オキサリルとの反応により、安息香酸をまず酸塩化物に変換してもよい。次いで、酸塩化物とイソインドリン（５）とをトリエチルアミンなどの非干渉性塩基の存在下で反応させ得る。反応は、室温程度の温度でジオキサンなどの極性溶媒中で行ってもよい。

【0261】

上記の酸塩化物による方法を用いる代わりに、安息香酸（４）とイソインドリン（５）とをアミドまたはペプチド結合の形成に一般的に用いられる種類のアミドカップリング試薬の存在下で反応させ得る。このような試薬の例としては１，１’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（シーハン（Sheehan）ら、ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサエティー（J. Am. Chem. Soc.）、１９５５年、７７，１０６７）、１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ここではＥＤＣまたはＥＤＡＣと呼ばれるが、当該分野ではＥＤＣＩおよびＷＳＣＤＩとしても知られる）（シーハン（Sheehan）ら、ジャーナル・オブ・オーガニックケミストリー（J. Org. Chem.）、１９６１年、２６，２５２５）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）などのウロニウム系カップリング剤、および１−ベンゾ−トリアゾリルオキシトリス−（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）（カストロ（Castro）ら、テトラへドロンレターズ（Tetrahedron Letters）、１９９０、３１、２０５）などのホスホニウム系カップリング剤が挙げられる。カルボジイミド系カップリング剤は、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）（カルピノ（L. A. Carpino）、米国化学会誌（J. Amer. Chem. Soc.）、１９９３、１１５、４３９７）または１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（ケーニッヒ（Konig）ら、ケミシェベリヒテ（Chem. Ber.）、１０３、７０８、２０２４〜２０３４）と組み合わせて使用するのが有利である。好ましいカップリング試薬としては、ＥＤＣ（ＥＤＡＣ）およびＤＣＣとＨＯＡｔまたはＨＯＢｔとの組合せが挙げられる。

【0262】

１つの特定のカップリング試薬は、ＥＤＣとＨＯＢｔとの組み合わせを含む。

【0263】

好ましいカップリング剤は、１，１’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）である。

【0264】

カップリング反応は、典型的にはアセトニトリル、ジオキサン、ジメチルスルホキシド、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミドまたはＮ−メチルピロリジンなどの非水性非プロトン性溶媒中、または１以上の混和性補助溶媒を伴ってもよい水性溶媒中で行なわれる。反応は室温で行なってもよい。反応は、非干渉性塩基、例えば、トリエチルアミンまたはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンなどの三級アミンの存在下で行ってもよい。

【0265】

式（４）の化合物（式中、Ａ−ＢはＣ＝ＣＨ_２）は、スキーム１に示す一連の反応により調製可能である。

【化8】

【0266】

スキーム１の原料としては２，４−ジヒドロキシ安息香酸メチルエステル（１１）が用いられ、これを、Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジンの存在下で無水酢酸と反応させることによりモノアセチル化して、ジエステル（１２）を得る。化合物（１２）とトリフルオロメタンスルホン酸および場合により塩化アセチルとを反応させてアセトフェノン（１３）を得ることにより、ジエステル（１２）を置換アセトフェノン（１３）に変換する。アセトフェノン（１３）を、炭酸カリウムなどの塩基の存在下で臭化ベンジルで処理してジベンジル化合物（１４）を得、これとウィッティヒ試薬ＭｅＰＰｈ_３ＢｒとをＴＨＦ中でブチルリチウムまたはカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドなどの塩基の存在下で反応させて、イソプロペニル化合物（１５）を得る。カルボン酸（１６）へのエステル加水分解は、典型的には、水酸化カリウム／ナトリウムなどのアルカリ金属水酸化物水溶液で処理することにより行われる。加水分解反応は、アルコール（例えば、メタノール）などの有機補助溶媒を用いて行ってもよく、反応混合物は、典型的には最大約５０〜９０℃の非極限温度まで加熱される。

【0267】

式（４）の化合物（式中、Ａ−ＢはＣＨ−ＣＨ_３）は、イソプロペニル化合物（１５）を、接触水素化により対応するイソプロピル化合物に還元すること、および、生じたジヒドロキシ化合物を、上記のように塩基の存在下で臭化ベンジルと反応させて再ベンジル化すること以外は、スキーム１と同様に調製可能である。

【0268】

上記スキーム１に示す反応シーケンスは、ＰＣＴ／ＧＢ２００６／００１３８２のスキーム４における対応する工程での収率よりも有意によい収率を示し、製造規模での合成により適切な試薬および条件の利用を可能とする。また、大規模の合成の見地から最も重要なことに、スキーム１に示す反応シーケンスは、クロマトグラフィー精製の必要がない。

【0269】

したがって、本発明は、式（１３）の化合物の調製方法（「中間方法Ａ」）であって、

【化9】

（ｉ）式（１１）の化合物

【化10】

と、（ａ）無水酢酸とを４−ジメチルアミノピリジンの存在下で（典型的には、最大約６０℃の温度まで加熱しながら）反応させ、次いで、（ｂ）トリフルオロメタンスルホン酸および場合により塩化アセチルとを（典型的には、室温で）反応させること、または
（ｉｉ）式（１１）の化合物と塩化アセチルとをアンバーリスト１５（Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ１５、商標）樹脂などのカチオン性イオン交換樹脂の存在下で反応させることを含む方法を提供する。

【0270】

中間方法Ａは、ＰＣＴ／ＧＢ２００６／００１３８２における対応する方法で開示される収率よりもよい化合物（１３）の収率を示す。

【0271】

また、本発明は、式（１５）の化合物の調製方法（「中間方法Ｂ」）であって、式（１４）の化合物とウィッティヒ試薬ＭｅＰＰｈ_３ＢｒとをＴＨＦ中でカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドの存在下で反応させることを含む方法を提供する。

【化11】

【0272】

中間方法Ｂは、ウィッティヒ反応においてｎ−ブチルリチウムが塩基として用いられるＰＣＴ／ＧＢ２００６／００１３８２における対応する方法工程で開示される収率よりも有意によい製品収率を示す。さらに、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド塩基は、ｎ−ブチルリチウムよりも製造規模での方法により適する。また、ｎ−ブチルリチウムを使用した場合、典型的には反応混合物を０℃以下に冷却する必要があるのに対して、本方法では、室温でまたは穏やかな冷却を伴って反応を行うことができる。クロマトグラフィー精製は不要である。

【0273】

他の態様において、本発明は、本明細書で定義される式（１６）の化合物の調製方法であって、中間方法Ｂを行うこと、次いで、化合物（１５）中のメチルエステル基を水酸化カリウムなどのアルカリ金属水酸化物を用いて加水分解して式（１６）の化合物を得ることを含む方法を提供する。

【0274】

イソインドリン化合物（５）は、スキーム２に示す合成経路により調製可能である。

【化12】

【0275】

スキーム２において、ジプロパギルアミン（１７）とＮ−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）コハク酸イミド（１７ａ）とを酢酸エチル中で炭酸カリウムの存在下で反応させて、Ｚ−保護ジプロパギルアミン（１８）（「Ｚ」という語は、ベンジルオキシカルボニル基を指す）を得る。Ｎ−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）コハク酸イミドの代わりに、クロロギ酸ベンジルを用いてベンジルオキシカルボニル保護基を導入してもよい。次いで、化合物（１８）とプロパルギルアルコール（１９）とをウィルキンソン触媒の存在下で２＋２＋２付加環化反応中に反応させて、Ｚ−保護イソインドリン（２０）を得る。次いで、ＴＨＦなどの極性溶媒中でトリエチルアミンなどの非干渉性塩基の存在下でメタンスルホニルクロリドと反応させることにより、イソインドリン（２０）上のヒドロキシメチル基をメシルオキシ基に変換して、メシル化合物（２１）を得る。メシル化合物（２１）とアルキルピペラジン（２２）とをアセトン溶液中で反応させて、Ｚ−保護イソインドリン（２３）を得る。パラジウム炭素触媒上で水素化を行うことによりベンジルオキシカルボニル基を除去して、非保護イソインドリン化合物（５）を得る。

【0276】

スキーム２の反応シーケンスの変更例をスキーム２ａに示す。

【化13】

【0277】

スキーム２ａにおいて、メシラート（２１）に変換する代わりに、ジクロロメタン中で二酸化マンガンを用いてヒドロキシメチルインドリン（２０）を対応するアルデヒド（２１ａ）に酸化させ、次いで、式（２２）の化合物と還元アミノ化条件下で、例えば、トリアセトキシボロヒドリドナトリウムの存在下で反応させることにより、アルデヒドを式（２３）の化合物に変換する。次いで、上記スキーム２のように水素化によりＺ−基を除去し、中間体（５）を得る。

【0278】

したがって、別の態様において、本発明は、本明細書で定義される式（５）の化合物の調製方法であって、
（ｉ）式（２４）の化合物

【化14】

（式中、ＰＧは保護基（例えば、ベンジルオキシカルボニル）であり、ＬＧ^１は離脱基（例えば、メシルオキシ）である）と、本明細書で定義される式（２２）の化合物とを反応させること、または
（ｉｉ）式（２５）の化合物

【化15】

（式中、ＰＧは保護基（例えば、ベンジルオキシカルボニル）である）と、本明細書で定義される式（２２）の化合物とを還元アミノ化条件下で（例えば、トリアセトキシボロヒドリドナトリウムの存在下で）反応させること、および
次いで、例えばＰＧがベンジルオキシカルボニル基である場合、水素化などにより保護基ＰＧを除去することを含む方法を提供する。

【0279】

スキーム２および２ａにおいて、中間体（２０）は、遷移金属触媒の存在下で２＋２＋２付加環化反応により調製される。２＋２＋２付加環化反応の代わりに、中間体（２０）は、スキーム３に示す一連の反応により調製可能である。

【化16】

【0280】

スキーム３において、ビス−ブロモ安息香酸メチルエステル（２６）とベンジルアミンとをテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）などの極性非プロトン性溶媒中でトリエチルアミンなどの非干渉性塩基の存在下で反応させて、Ｎ−ベンジルジヒドロイソインドール中間体（２７）を得る。次いで、水素化アルミニウムリチウムを用いてＴＨＦ中で中間体（２７）中のエステル基を対応するアルコールに還元して、ヒドロキシメチルジヒドロイソインドール中間体（２８）を得る。次いで、アルコール（例えば、エタノール）溶媒中で少し上昇させた温度（例えば、約５０℃まで）でパラジウム炭素触媒上で水素化を行うことにより、ヒドロキシメチルジヒドロイソインドール中間体（２８）を脱ベンジル化して、中間体（２９）を得る。次いで、ベンジルオキシカルボニル（「Ｚ」）基をジヒドロイソインドール環の窒素原子上に導入するのに適した試薬と反応させることにより、中間体（２９）を中間体（２０）に変換する。例えば、中間体（２９）とクロロギ酸ベンジルとをＴＨＦなどの極性非プロトン性溶媒中でトリエチルアミンなどの非干渉性塩基の存在下で反応させて、中間体（２０）を得ることができる。

【0281】

スキーム２、２ａ、および３に示す合成経路の実質的な利点は、当該経路により形成される種々の中間体が、大規模の合成において非常に有用な優れた物理化学的特性を有する点にある。よって、スキーム１の一連の工程と組み合わせた場合、本発明者らの先の出願ＰＣＴ／ＧＢ２００６／００１３８２における対応する合成経路よりも有意な利点を有する合成経路が得られる。特に、主たる利点には次のものがある：
より高い収率、
より容易な精製（クロマトグラフィー精製が不要）、
中間体の物理化学的特性が向上することによる、より容易な操作性、
製造方法へのより容易な規模拡大。

【0282】

別の態様において、本発明は、式（６）の化合物の調製方法であって、

【化17】

（式中、Ｒ^２およびＲ^３は同一または異なって、それぞれＣ_１−４アルキルである、またはＮＲ^２Ｒ^３は、Ｏ、Ｎ、およびＳから選ばれるさらなるヘテロ原子を場合により含み、１個または２個のＣ_１−４アルキル基により場合により置換されている４〜７員の飽和複素環を形成する；Ｒ^４は水素、ハロゲン、Ｃ_１−５アルキル、およびＣ_３−４シクロアルキル基から選ばれる）
（ａ−ｉｉ）式（７）の化合物

【化18】

（式中、ＰＧは水素化条件下で除去可能な保護基であり、Ｒ^４’は、水素、ハロゲン、Ｃ_１−５アルキル、Ｃ_２−５アルケニル、およびＣ_３−４シクロアルキル基から選ばれる）と
式（８）の化合物

【化19】

とを遷移金属触媒の存在下で反応させて式（９）の化合物を得ること、

【化20】

および（ｂ）式（９）の化合物を接触水素化に供して、保護基ＰＧを除去し、Ｒ^４’がＣ_２−５アルケニルの場合、Ｒ^４’基をＣ_２−５アルキルに還元し、その後、式（６）の化合物が遊離塩基の形態で調製された場合、場合により遊離塩基を酸付加塩に変換することを含む方法を提供する。

【0283】

また、本発明は、本明細書で定義される式（９）の化合物の調製方法であって、
（ａ−ｉｉ）本明細書で定義される式（７）の化合物と本明細書で定義される式（８）の化合物とを遷移金属触媒の存在下で反応させることを含む方法を提供する。

【0284】

式（７）の化合物と式（８）の化合物との反応は、２＋２＋２付加環化（デル（C. P. DELL）によるレビュー（ジャーナル・オブ・ケミカル・ソサイエティ（J. Chem. Soc.）、パーキン・トランザクションズ（Perkin Trans.）１、１９９８年、３８７３〜３９０５頁）および同レビューにおける言及を参照）の一例である。反応は、典型的には、トルエンなどの不活性溶媒中で（例えば、室温〜１００℃の範囲の温度まで）加熱しながら遷移金属触媒の存在下で行う。好ましい触媒は、ウィルキンソン触媒−クロロトリス（トリフェニルホスフィン）ロジウム（ＲｈＣｌ（ＰＰｈ_３）_３）である。

【0285】

特定の一実施形態において、式（８）の化合物は式（８ａ）の化合物である。

【化21】

（式中、Ｒ^１は本明細書で定義される通りであり、好ましくはメチルまたはエチルである）
式（８ａ）の化合物は、臭化プロパルギルと式（２２）の化合物（スキーム２を参照）とをアセトンなどの極性溶媒中で炭酸カリウムなどの塩基の存在下で反応させることにより調製可能である。

【0286】

一実施形態において、Ｒ^１はメチルである。すなわち、上記の方法は、式（１）の化合物の調製に用いられる。

【0287】

別の実施形態において、Ｒ^１はエチルである。

【0288】

式（７）および（９）において、Ｒ^４’は、水素、ハロゲン、Ｃ_１−５アルキル、Ｃ_２−５アルケニル、およびＣ_３−４シクロアルキル基から選ばれる。好ましい一実施形態において、Ｒ^４’は、イソプロピルまたはイソプロペニルであり、より具体的にはイソプロペニルである。

【0289】

新規な化学中間体
上記式（３）、（３ａ）、（５）、（７）、（９）、（１４）、（１５）、（１６）、（２０）、（２０ａ）、（２１）、および（２３）の化学中間体は新規であると考えられ、各々が本発明のさらなる態様を形成する。

【0290】

新規なＨｓｐ９０阻害剤化合物
別の態様において、本発明は、本明細書で定義されるＲ^１がエチルである式（２）の新規化合物を提供する。新規化合物は式（１０）で表すことが可能である。

【化22】

【0291】

式（１０）は、そのいかなる塩、溶媒和物、結晶形態、互変異性体、Ｎ−オキシド、および同位体も含む。

【0292】

また、本発明は、とりわけ以下を提供する。

【0293】

Ｈｓｐ９０により仲介される病態もしくは症状の予防または治療に用いるための、本明細書で定義される式（１０）の化合物。

【0294】

Ｈｓｐ９０により仲介される病態もしくは症状の予防または治療用薬剤を製造するための、本明細書で定義される式（１０）の化合物の使用。

【0295】

その必要のある被験体に本明細書で定義される式（１０）の化合物を投与することを含む、Ｈｓｐ９０により仲介される病態もしくは症状の予防または治療方法。

【0296】

Ｈｓｐ９０により仲介される病態もしくは症状の罹患率の緩和または低減に用いるための、本明細書で定義される式（１０）の化合物。

【0297】

Ｈｓｐ９０により仲介される病態もしくは症状の罹患率の緩和または低減用薬剤を製造するための、本明細書で定義される式（１０）の化合物の使用。

【0298】

その必要のある被験体に本明細書で定義される式（１０）の化合物を投与することを含む、Ｈｓｐ９０により仲介される病態もしくは症状の罹患率の緩和または低減方法。

【0299】

哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の治療に用いるための、本明細書で定義される式（１０）の化合物。

【0300】

哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の治療用の薬剤を製造するための、本明細書で定義される式（１０）の化合物の使用。

【0301】

哺乳類に、本明細書で定義される式（１０）の化合物を異常な細胞増殖を阻害するのに有効な量で投与することを含む、哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の治療方法。

【0302】

哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の罹患率の緩和または低減に用いるための、本明細書で定義される式（１０）の化合物。

【0303】

哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の罹患率の緩和あるいは低減用の薬剤を製造するための、本明細書で定義される式（１０）の化合物の使用。

【0304】

哺乳類に、本明細書で定義される式（１０）の化合物を異常な細胞増殖を阻害するのに有効な量で投与することを含む、哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の罹患率の緩和あるいは低減方法。

【0305】

哺乳類に、本明細書で定義される式（１０）の化合物をＨｓｐ９０活性を阻害するのに有効な量で投与することを含む、哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の治療方法。

【0306】

哺乳類に、本明細書で定義される式（１０）の化合物をＨｓｐ９０活性を阻害するのに有効な量で投与することを含む、哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の罹患率の緩和あるいは低減方法。

【0307】

Ｈｓｐ９０の阻害剤として用いるための、本明細書で定義される式（１０）の化合物。

【0308】

Ｈｓｐ９０を本明細書で定義される式（１０）のＨｓｐ９０阻害化合物に接触させることを含む、Ｈｓｐ９０の阻害方法。

【0309】

Ｈｓｐ９０の活性を阻害することによる細胞過程（例えば、細胞分裂）の修飾に用いるための、本明細書で定義される式（１０）の化合物。

【0310】

本明細書で定義される式（１０）の化合物を用いた、Ｈｓｐ９０の活性を阻害することによる細胞過程（例えば、細胞分裂）の修飾方法。

【0311】

本明細書に記載される病態の予防または治療に用いるための、本明細書で定義される式（１０）の化合物。

【0312】

本明細書に記載される１以上の使用のための薬剤を製造するための、本明細書で定義される式（１０）の化合物の使用。

【0313】

本明細書で定義される式（１０）の化合物および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。

【0314】

本明細書で定義される式（１０）の化合物および薬学的に許容される担体を経口投与に適切な形態で含む医薬組成物。

【0315】

本明細書で定義される式（１０）の化合物および薬学的に許容される担体を静脈内（ｉ．ｖ．）投与などの非経口投与に適切な形態で含む医薬組成物。

【0316】

本明細書で定義される式（１０）の化合物および薬学的に許容される担体を注射または注入による静脈内（ｉ．ｖ．）投与に適切な形態で含む医薬組成物。

【0317】

医療に用いるための、本明細書で定義される式（１０）の化合物。

【0318】

上記で示した、また、本明細書の他所に記載されるいずれかの使用および方法のための、本明細書において記載される化合物。

【0319】

スクリーニングを受けた患者であって、Ｈｓｐ９０に対して活性を有する化合物を用いた治療への感受性を有し得る疾病もしくは症状に罹患している、または罹患するリスクがあると判定された患者の病態または症状の治療あるいは予防に用いるための、本明細書で定義される式（１０）の化合物。

【0320】

スクリーニングを受けた患者であって、Ｈｓｐ９０に対して活性を有する化合物を用いた治療への感受性を有し得る疾病もしくは症状に罹患している、または罹患するリスクがあると判定された患者の病態または症状の治療あるいは予防用の薬剤を製造するための、本明細書で定義される式（１０）の化合物の使用。

【0321】

（ｉ）患者をスクリーニングして、患者が罹患している、もしくは罹患している可能性のある疾病または症状が、Ｈｓｐ９０に対して活性を有する化合物を用いた治療への感受性を有し得るものか否かを判定すること、ならびに（ｉｉ）患者の疾病または症状がそのような感受性を有することが示された場合、患者に、本明細書で定義される式（１０）の化合物を投与することを含む、Ｈｓｐ９０により仲介される病態または症状の診断ならびに治療方法。

【0322】

式（１０）の化合物への言及は、例えば、以下に記載するように、そのイオン形態、塩、溶媒和物、互変異性体、同位元素、および保護形態をも含む。

【0323】

式（１０）には１個以上の同位元素置換を有する化合物を含み、具体的な元素への言及はその範囲内に上記元素の全同位体を含む。例えば、水素への言及はその範囲内に^１Ｈ、^２Ｈ（Ｄ）および^３Ｈ（Ｔ）を含む。同様に、炭素と酸素への言及はそれらの範囲内にそれぞれ^１２Ｃ、^１３Ｃおよび^１４Ｃならびに^１６Ｏおよび^１８Ｏを含む。

【0324】

同位体は放射性であってもよいし非放射性であってもよい。本発明の一実施形態において、化合物は放射性同位元素を含有していない。そのような化合物は治療上の使用に好ましい。しかしながら、他の実施形態では、化合物が１種以上の放射性同位元素を含有してもよい。そのような放射性同位体を含んでいる化合物は診断の場合に役立つ。

【0325】

式（１０）には、化合物の多形体、溶媒和物（例えば、水和物）、および化合物の錯体（例えば、シクロデキストリンなどの化合物との包接複合体または包接化合物、または金属との錯体）も含まれる。

【0326】

生物学的活性および治療上の使用
式（１０）および（１）の化合物、ならびにその塩（特に、Ｌ−乳酸塩）および結晶形態はＨｓｐ９０の阻害剤であることから、広範な増殖性疾患の治療に有用となる。このような増殖性疾患の例としては、限定されるものではないが、癌腫、例えば、膀胱癌、乳癌、結腸癌（例えば、直腸腺癌および直腸腺腫などの結腸直腸癌）、腎臓癌、表皮癌、肝臓癌、肺癌（例えば、腺癌、小細胞肺癌および非小細胞肺癌）、食道癌、胆嚢癌、卵巣癌、膵臓癌（例えば、外分泌膵臓癌）、胃癌、子宮頚癌、甲状腺癌、前立腺癌、消化管系の癌（例えば、消化管間質性腫瘍）、または皮膚癌（例えば、扁平上皮癌）；リンパ球系列の造血系腫瘍（例えば、白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、Ｂ細胞リンパ腫（びまん性大Ｂ細胞リンパ腫など）、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ヘアリーセルリンパ腫またはバーケットリンパ腫）；骨髄細胞系列の造血系腫瘍（例えば、急性および慢性骨髄性白血病、イマチニブ感受性および抵抗性の慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、ボルテゾミブ感受性および抵抗性の多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患または前骨髄球性白血病）；甲状腺瀘胞癌；間葉由来の腫瘍（例えば、線維肉腫または横紋筋肉種）；中枢または末梢神経系の腫瘍（例えば、星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫または神経鞘腫）；黒色腫；精上皮腫；奇形腫；骨肉腫；色素性乾皮症；角化棘細胞腫；甲状腺濾胞癌；またはカポジ肉腫が挙げられる。間葉由来の腫瘍としては、さらにユーイング肉腫が挙げられる。

【0327】

これらの癌はＨｓｐ９０阻害に感受性のある癌であり得、このような癌は「診断方法」と題された節に示される方法により判定することができる。

【0328】

癌の１つの群として、ヒト乳癌（例えば、原発性乳癌、リンパ節転移陰性乳癌、浸潤性乳管癌、非類内膜乳癌）；およびマントル細胞リンパ腫が挙げられる。さらに、他の癌として、結腸直腸癌および子宮内膜癌がある。

【0329】

癌の別のサブセットとしては、リンパ球系列の造血系腫瘍、例えば、白血病、慢性リンパ性白血病、マントル細胞リンパ腫およびＢ細胞リンパ腫（びまん性大Ｂ細胞リンパ腫など）が挙げられ、さらに、場合によっては慢性骨髄性白血病および多発性骨髄腫が挙げられる。

【0330】

癌の好ましいサブセットは、ＥｒｂＢ２陽性の乳癌、前立腺癌、肺癌、および胃癌；慢性骨髄性白血病；アンドロゲン受容体依存性前立腺癌；Ｆｌｔ３依存性急性骨髄性白血病；Ｂｒａｆ変異関連黒色腫；多発性骨髄腫；ベルケイド抵抗性の多発性骨髄腫；および消化管間質性腫瘍（ＧＩＳＴ）からなる。

【0331】

これらのうち特定の好ましい癌は、本明細書で定義される多発性骨髄腫およびベルケイド抵抗性の腫瘍タイプである。

【0332】

他の癌の好ましいサブセットは、ホルモン抵抗性の前立腺癌、転移性黒色腫、ＨＥＲ２陽性乳癌、変異ＥＧＦＲ陽性非小細胞肺癌、およびグリベック抵抗性の消化管間質性腫瘍からなる。

【0333】

式（１０）および（１）のＨｓｐ９０阻害剤化合物、ならびにその塩（特に、Ｌ−乳酸塩）および結晶形態は、ウイルス感染、寄生虫性疾患、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症および紅斑性狼瘡）、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病）、炎症、Ｉ型およびＩＩ型糖尿病、アテローム性動脈硬化症、ならびに心疾患などの他の症状の治療にも使用することができる。

【0334】

また、式（１０）および（１）のＨｓｐ９０阻害剤化合物、ならびにその塩（特に、Ｌ−乳酸塩）および結晶形態は、移植および免疫抑制にも臨床上の利益を示し得る。

【0335】

また、式（１０）および（１）のＨｓｐ９０阻害剤化合物、ならびにその塩（特に、Ｌ−乳酸塩）および結晶形態は、既存治療薬または新規治療薬と併用した場合に上記の疾病に臨床上の利益を示し得る。

【0336】

Ｈｓｐ９０クライアントタンパク質の活性と実験的証拠に基づけば、以下の疾患が、式（１０）および（１）のＨｓｐ９０阻害剤化合物、ならびにその塩（特に、Ｌ−乳酸塩）および結晶形態による治療に特に感受性を持つと考えられる。

【0337】

ＥｒｂＢ２陽性の乳癌、前立腺癌、肺癌、および胃癌
ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ−２）の過剰発現は乳癌の約３０％に見られ、ハーセプチンによるＥｒｂＢ２受容体のダウンレギュレーションにより、細胞がタキソールに対して感受性を持つようになる。ＥｒｂＢ２の過剰発現は予後の悪さと薬剤耐性に関連している（ツガワ（Tsugawa）ら）１９９３年、『オンコロジー（Oncology）』、１９９３年；５０：４１８）。

【0338】

肺癌における変異ＥＧＦＲ
Ｌ８５８Ｒおよびエクソン１９の欠失を含む、上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）のキナーゼドメインの体細胞変異は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）におけるゲフィチニブおよびエルロチニブ応答性の基礎にある。これらのチロシンキナーゼ阻害剤に対する獲得耐性には、いくつかの場合、第２の変異Ｔ７９０Ｍにより仲介される。ゲルダナマイシンなどのアンサマイシン系抗生物質は熱ショックタンパク質９０（Ｈｓｐ９０）を強力に阻害し、適切なコンフォメーションへの折りたたみにシャペロンを必要とする発癌性キナーゼのユビキチン仲介性の分解を促進する。ＥＧＦＲ変異の細胞株をゲルダナマイシンに曝露すると、リン酸化ＡｋｔおよびサイクリンＤ１の著しい枯渇ならびにアポトーシスが誘導された。これらのデータは、ＥＧＦＲの変異による活性化は、安定性についてＨｓｐ９０依存性に関連し、Ｈｓｐ９０の阻害がＥＧＦＲ変異のＮＳＣＬＣ治療のための新たな戦略となり得ることを示唆する。

【0339】

慢性骨髄性白血病
異常なＢＣＲ−Ａｂｌタンパク質は染色体の転座により作り出され、構成的に活性のあるＡｂｌキナーゼドメインが生じる。この転座はＣＭＬの原因であることが示されている。Ｐ２１０ＢｃｒＡｂｌはＨｓｐ９０の既知のクライアントタンパク質である。ＢＣＲ−Ａｂｌ細胞株Ｋ５６２をＨｓｐ９０阻害剤で処理するとアポトーシスが誘導された。Ｂｃｒ−Ａｂｌ阻害剤グリベック（Gleevec、登録商標）もまたＫ５６２細胞においてアポトーシスを誘導するが、グリベック（登録商標）耐性Ｋ５６２細胞はＨｓｐ９０阻害剤に対する感受性を維持する（ゴレ（Gorre）ら、２００２年、『ブラッド（Blood）』１００：３０４１〜３０４４頁）。

【0340】

アンドロゲン受容体依存性前立腺癌
アンドロゲン受容体キナーゼはＨｓｐ９０クライアントタンパク質である。通常、外科手術で癌を治癒できない場合にホルモン補充療法が採用される。受容体の変異により癌はこのホルモン操作への抵抗性を有するようになる。受容体のＨｓｐ９０調節は変異後であってもやはり有効である。

【0341】

同じことがエストロゲン依存性乳癌についても言える。

【0342】

Ｆｌｔ３依存性急性骨髄性白血病
チロシンキナーゼ受容体Ｆｌｔ３の内部重複により、その構成的活性化および発癌性がもたらされる。これらの内部重複は報告されている全ＡＭＬ癌の２０％で見られ、予後の悪さの指標となる。ＣＭＬにおけるのＡＢＬキナーゼの活性化とほぼ同様に、これは悪性腫瘍を生じる単一の遺伝子障害のもう１つの例に当たる。Ｆｌｔ３はＨｓｐ９０クライアントタンパク質であることから、Ｈｓｐ９０阻害剤はこれらの患者に臨床上有益であるものと推測される（バリ（Bali）ら、２００４年、『キャンサー・リサーチ（Cancer Res.）』６４（１０）：３６４５〜５２頁）。

【0343】

Ｂｒａｆ変異関連黒色腫
Ｂｒａｆはセリン／スレオニンキナーゼをコードし、全ての黒色腫の７０％で変異している。これらの８０％は、ＢＲＡＦに増加したキナーゼ活性を与える単一のＶ５９９Ｅ点変異を示す。この変異はＮＩＨ３Ｔ３細胞においてもまた変化する（ビグネル（Bignell）ら、２００２年、『ネイチャー（Nature）』４１７（６８９２）：９４９〜５４頁）。

【0344】

多発性骨髄腫
Ｈｓｐ９０阻害剤１７−ＡＡＧは、ボルテゾミブ抵抗性の多発性骨髄腫細胞株の増殖を強力に阻害する。ＩＧＦ−１ＲおよびＩＬ−６Ｒの細胞表面レベルは、１７−ａａｇで処理されたＭＭ−１細胞でも減少する（ミチエーズ（Mitsiades）ら、『ブラッド（Blood）』、１０７：１０９２〜１１００頁、２００６年）。また、ＩＬ−６による多発性骨髄腫細胞のオートクライン刺激ならびに骨髄間質細胞のパラクライン刺激もＨｓｐ９０クライアントＩＫＫのダウンレギュレーションを介して減少する。

【0345】

ベルケイド抵抗性の多発性骨髄腫
式（１０）および（１）のＨｓｐ９０阻害剤化合物、ならびにその塩（特に、Ｌ−乳酸塩）および結晶形態は、セカンドライン治療中のマントル細胞リンパ腫、緩徐進行性非ホジキンリンパ腫、第ＩＩＩＢ期およびＩＶ期細気管支肺胞上皮癌、進行性非小細胞肺癌、乳癌、前立腺癌および卵巣癌ならびに非ホジキンリンパ腫患者の治療を含む、ベルケイド抵抗性の腫瘍タイプの治療に使用することができる。

【0346】

消化管間質性腫瘍（ＧＩＳＴ）
ＧＩＳＴ疾患は、特に、増殖因子（例えば、ｃ−ｋｉｔ）の活性化または過剰発現に依存する疾患である。

【0347】

Ｈｓｐ９０阻害剤が臨床上有益であり得る他の症状または疾患としては、限定されるものではないが、次のものがある。

【0348】

神経変性疾患
ハンチントン病（ＨＤ）は、有効な治療の無い進行性の神経変性疾患である。Ｈｓｐ９０のＧＡ阻害およびその結果としてのＨｓｐのアップレギュレーションは、神経細胞におけるハンチントンタンパク質の凝集の阻害に有効である（シトラー（Sittler）ら、２００１年、『ヒューマン・モレキュラー・ジェネティックス（Human Molecular Genetics）』、１０巻、１２号、１３０７〜１３１５頁）。Ｈｓｐのアップレギュレーションはまた、他のタンパク質の異常な折りたたみに起因する疾患、例えば、ＣＪＤおよびアルツハイマー病にも臨床上有益である可能性がある。

【0349】

関節リウマチ、喘息、慢性閉塞性肺疾患、および炎症性腸疾患を含む炎症性疾患
ＧＡはＨｓｐ９０からＨＳＦ−１を解離してＨＳＦ−１の活性化と核移行をもたらすことが示されている。ＨＳＦ−１は次に転写因子として働き、Ｈｓｐ９０およびＨｓｐ７０を誘導する。浮腫誘導マウスモデルにおいて、Ｈｓｐ７０の誘導は炎症の緩和に関連づけられている（イアナロ（Ianaro）ら、２００４年、『ヒューマン・モレキュラー・ジェネティックス（Human Molecular Genetics）』、２００１年、１０巻、１２号、１３０７〜１３１５頁）。さらに、ＧＡ処理は、ＴＮＦ−αまたはＰＭＡによるＩκＢキナーゼ（ＩＫＫ）の活性化を阻害した。ＩκＢａはＮｆ−κＢおよびＡｐ−１のレギュレーターである（ボロエマー（Broemer）ら、２００４年）。Ａｐ−１およびＮｆ−κＢは炎症誘発性サイトカインの産生をもたらす主要な転写因子である（エオ（Yeo）ら、２００４年、『バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Biochem Biophys Res Commun.）』３０；３２０（３）：８１６〜２４頁）。炎症誘発性サイトカイン転写産物の安定性もまたｐ３８ＭａｐＫの阻害を介して調節される（ワックス（Wax）ら、２００３年、『リューマチズム（Rheumatism）』、４８巻、２号、５４１〜５５０頁）。

【0350】

アテローム性動脈硬化症
ヒトアテローム性動脈硬化症の発症および進行において、炎症性細胞および免疫細胞が中心的役割を担うことが知られており（リガノ（Rigano）ら、『ニューヨークアカデミー・オブ・サイエンス年報（Ann. N. Y. Acad. Sci.）』、２００７年、１１０７：１〜１０頁）、Ｈｓｐ９０が頚動脈アテローム性動脈硬化症における自己抗原として作用することが提案されている。リガノらは、頚動脈アテローム硬化性プラークに罹患している６０％の被験者の血清中に、Ｈｓｐ９０に特異的な抗体および細胞が存在するが、健康な被験者の血清中にはＨｓｐ９０に特異的な抗体およびＴ細胞は存在しないことを見出した。したがって、式（１０）および（１）のＨｓｐ９０阻害剤化合物、ならびにその塩（特に、Ｌ−乳酸塩）および結晶形態は、アテローム性動脈硬化症の治療または予防に有用である。

【0351】

腫瘍血管形成、乾癬、関節リウマチ、および糖尿病性網膜症を含むが、これらに限定されない血管形成関連疾患
内皮細胞にける、血管形成の誘導は、Ｈｓｐ９０クライアントタンパク質であるｅＮＯＳおよびＡｋｔにより調節される（サン（Sun）およびリャオ（Liao）、２００４年、『アーティリオスクローシス・スランボーシス・アンド・ヴァスキュラー・バイオロジー（Arterioscler Thromb Vasc Biol.）』２４（１２）：２２３８〜４４頁）。また、マウスモデルでは、低酸素誘導性因子（ＨＩＦ）−１αの抑制は、胃腫瘍の増殖、血管形成および血管成熟を損ない得る（ストールツィング（Stoeltzing）ら、２００４年、『ジャーナル・オブ・ナショナル・キャンサー・インスティテュート（J Natl Cancer Inst）』；９６：９４６〜９５６頁）。

【0352】

Ｉ型およびＩＩ型糖尿病
Ｈｓｐ９０の阻害は、Ａｋｔシグナル伝達ならびにｅ−ｎｏｓに著しい作用を示す。これらは、Ｉ型糖尿病の高グルコースにより誘導される内皮細胞アポトーシス（リン（Lin）ら、２００５年、『ジャーナル・オブ・セルラー・バイオケミストリー（J Cell Biochem.）』１；９４（１）：１９４〜２０１頁）およびＩＩ型糖尿病の高血圧症の発症（コバヤシ（Kobayashi）ら、２００４年、『ハイパーテンション（Hypertension）』４４（６）：９５６〜６２頁）における２つの重要なレギュレーターである。

【0353】

免疫抑制および移植
Ｈｓｐ９０阻害は、Ｔ細胞の活性化に必要なＴ細胞特異的チロシンキナーゼであるＬｃｋをダウンレギュレーションすることが示されている（ヨルギン（Yorgin）ら、２０００年、『ジャーナル・オブ・イムノロジー（J Immunol.）』１５；１６４（６）：２９１５〜２３頁）。

【0354】

心疾患
心虚血は、西洋諸国において最も多い死因である。Ｈｓｐ、特に、Ｈｓｐ７０（ラディシコール処理により誘導）はラット心筋細胞において心臓保護活性を示す（グリフィン（Griffin）ら、２００４年）。Ｈｓｐ９０が阻害されると、シャペロン複合体からＨＳＦ−１が遊離し、次に、Ｈｓｐ遺伝子の活性化が起こる。Ｈｓｐ９０の阻害はまた、ＨＩＦ−１のダウンレギュレーションをもたらし、これが虚血性心疾患および卒中の病因と関連づけられている。

【0355】

感染症
Ｃ型肝炎ウイルスＮＳ２／３プロテアーゼはＨｓｐ９０クライアントタンパク質であり、Ｈｓｐ９０活性はウイルスのプロセシングおよび複製に必要である（ウィトニー（Whitney）ら、２００１年、『米国科学アカデミー紀要（Proc Natl Acad Sci USA）』、２０；９８（２４）：１３９３１〜５頁）。

【0356】

寄生虫性疾患
ＧＡに関しては、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）のＨｓｐ９０オーソログに対する抗マラリア活性が報告されている。マラリア原虫の増殖は、クロロキンにより見られるものと同じようなＩＣ_５０でＧＡにより阻害された。ＧＡはまた、熱帯熱マラリア原虫のクロロキン耐性株に対しても有効である（カマール（Kamar）ら、２００３年、『マラリア・ジャーナル（Malar J.）』１５；２（１）：３０）。

【0357】

薬剤耐性発達への阻害、防止または後退
上記のように、一般的なストレスタンパク質機能（特に、Ｈｓｐ９０）の修飾剤または阻害剤は、以下の能力を有する化学療法剤のクラスを表す。（ｉ）抗癌剤および／または治療に対して悪性細胞を感作させる、（ｉｉ）抗癌剤および／または治療に対する耐性の発生率を緩和または低減する、（ｉｉｉ）抗癌剤および／または治療に対する耐性を後退させる、（ｉｖ）抗癌剤および／または治療の活性を増強させる、ならびに（ｖ）抗癌剤および／または治療に対する耐性の発現を遅延または防止する。

【0358】

さらに、本発明は以下を提供する。

【0359】

Ｈｓｐ９０により仲介される病態または症状の予防または治療（あるいはその罹患率の緩和または低減）方法であって、その必要のある被験体に本発明の化合物を投与することを含み、上記Ｈｓｐ９０により仲介される病態または症状が抗癌薬剤に対する耐性の発達である方法。

【0360】

（ｉ）抗癌剤に対して悪性細胞を感作させ、（ｉｉ）抗癌剤に対する耐性の発生率を緩和または低減し、（ｉｉｉ）抗癌剤に対する耐性を後退させ、（ｉｖ）抗癌剤の活性を増強させ、（ｖ）抗癌剤に対する耐性の発現を遅延または防止する方法であって、その必要のある被験体に本発明の化合物を投与することを含む方法。

【0361】

癌の治療方法であって、その必要のある被験体に本発明の化合物を投与することを含み、薬剤耐性が現れないことを特徴とする方法。

【0362】

治療薬（例えば、抗癌剤）を用いた治療を受けている被験体におけるＨｓｐ９０により仲介される病態または症状の予防または治療（あるいはその罹患率の緩和または低減）方法であって、被験体に本発明の化合物を投与することを含み、上記Ｈｓｐ９０により仲介される病態または症状が当該治療薬に対する耐性の発達である方法。

【0363】

（ｉ）抗癌剤に対して悪性細胞を感作させ、（ｉｉ）抗癌剤に対する耐性の発生率を緩和または低減し、（ｉｉｉ）抗癌剤に対する耐性を後退させ、（ｉｖ）抗癌剤の活性を増強させ、（ｖ）抗癌剤に対する耐性の発現を遅延または防止する方法であって、当該抗癌剤を用いた治療を受けている被験体に本発明の化合物を投与することを含む方法。

【0364】

抗癌剤を用いた治療を受けている被験体における癌の治療方法であって、その必要のある被験体に本発明の化合物を投与することを含み、薬剤耐性が現れないことを特徴とする方法。

【0365】

生物学的活性
式（１０）および（１）の化合物、ならびにその塩（特に、Ｌ−乳酸塩）および結晶形態、例えばＨｓｐ９０の阻害剤、の生物学的活性は、以下の実施例で示されるアッセイ、例えば、実施例６に記載される等温滴定熱量測定法（ＩＴＣ）および実施例７に記載される抗増殖活性アッセイを用いて測定することができる。ＩＴＣアッセイにおいて、ある化合物が示す活性レベルはＫ_ｄ値として定義することができ、本発明の化合物は、１マイクロモル未満のＫ_ｄ値を有する。抗増殖活性アッセイでは、アッセイにおいて、ある化合物が示す活性レベルはＩＣ_５０値として定義することができ、本発明の化合物は０．１マイクロモル未満のＩＣ_５０値を有する。

【0366】

ｈＥＲＧ
１９９０年代末頃、米国ＦＤＡによって認可された多くの医薬品が、心機能不全による死亡に関係していることが見出されたため、米国市場からの撤退を余儀なくされた。後に、これらの医薬品の副作用は、心臓細胞におけるｈＥＲＧチャネルのブロッキングによる不整脈の発生であることが分かった。ｈＥＲＧチャネルは、カリウムイオンチャネルファミリーの１つであり、その最初のメンバーは、１９８０年代末頃に、ショウジョウバエの一種であるキイロショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）の変異体で見出された（ジャン（Jan，L．Y．）およびジャン（Jan，Y．N．）（１９９０年）「イオンチャネルのスーパーファミリー（A Superfamily of Ion Channels）」、『ネイチャー（Nature）』、３４５（６２７７）：６７２を参照）。ｈＥＲＧカリウムイオンチャネルの生物物理特性は、サンギネッチ（Sanguinetti，M．C．）、ジアング（Jiang、C．）、クラン（Curran，M．E．）、およびキーティング（Keating，M．T．）（１９９５年）「遺伝性心不整脈と後天性心不整脈との機構的関連：ＨＥＲＧはＩｋｒカリウムチャネルをコードする（A Mechanistic Link Between an Inherited and an Acquired Cardiac Arrhythmia：HERG encodes the Ikr potassium channel）」、『セル（Cell）』、８１：２９９〜３０７頁、ならびにトルード（Trudeau，M．C．）、ウォームク（Warmke，J．W．）、ゲネツキー（Ganetzky，B．）、およびロバートソン（Robertson，G．A．）（１９９５年）「ＨＥＲＧ、電位依存性カリウムチャネルファミリーにおけるヒトの内向き整流（HERG，a Human Inward Rectifier in the Voltage-Gated Potassium Channel Family）」、『サイエンス（Science）』、２６９：９２〜９５頁に記載されている。

【0367】

ｈＥＲＧをブロックする活性の除去は、依然としてあらゆる新規な医薬品の開発における重要な懸案事項である。

【0368】

式（１）の化合物は、ｈＥＲＧ活性が低く、Ｈｓｐ９０阻害活性とｈＥＲＧ活性とを確実に分離する。特に、式（１）の化合物は、細胞増殖アッセイにおけるこの化合物のＩＣ_５０値の３０倍よりも大きい、ｈＥＲＧに対する平均ＩＣ_５０値を有する。式（１）の化合物は、１５μＭよりも大きい、ｈＥＲＧに対する平均ＩＣ_５０値を有する。

【0369】

本発明の化合物は有利なＡＤＭＥ特性を有し、特に、腫瘍分布が良好である。

【0370】

疼痛、神経障害、卒中、および関連する症状の治療
本発明の化合物はＨｓｐ９０を阻害または修飾する活性を有するため、ｃｄｋ５により仲介される特定の疾病および症状を治療、緩和、または防止するのに有用に用いられる。

【0371】

したがって、第１の態様において、本発明は、疼痛の治療用薬剤を製造するための、本明細書で定義される本発明の化合物の使用を提供する。

【0372】

別の態様において、本発明は、卒中の予防または治療用の薬剤を製造するための、本明細書で定義される本発明の化合物の使用を提供する。

【0373】

別の態様において、本発明は、神経保護剤として用いる薬剤を製造するための、本明細書で定義される本発明の化合物の使用を提供する。

【0374】

さらなる態様では、本発明は以下のものを提供する。

【0375】

疼痛の治療に用いる、本明細書で定義される本発明の化合物。

【0376】

疼痛を患う患者（例えば、ヒトなどの哺乳類）の疼痛の低減または除去に用いる、本明細書で定義される本発明の化合物。

【0377】

疼痛を患う患者（例えば、ヒトなどの哺乳類）の疼痛の低減または除去に用いる薬剤を製造するための、本明細書で定義される本発明の化合物の使用。

【0378】

痛覚、体性痛、内臓痛、急性疼痛、慢性疼痛、痛覚過敏、異痛、術後疼痛、知覚過敏による疼痛、頭痛、炎症性疼痛（リューマチ痛、歯痛、月経痛、および感染痛）、神経学的疼痛、筋骨格系疼痛、癌性疼痛、および血管痛のうちのいずれか１つ以上の治療用の薬剤を製造するための、本明細書で定義される本発明の化合物の使用。

【0379】

痛覚、体性痛、内臓痛、急性疼痛、慢性疼痛、痛覚過敏、異痛、術後疼痛、知覚過敏による疼痛、頭痛、炎症性疼痛（リューマチ痛、歯痛、月経痛、および感染痛）、神経学的疼痛、筋骨格系疼痛、癌性疼痛、および血管痛のうちのいずれか１つ以上の治療に用いるための、本明細書で定義される本発明の化合物。

【0380】

哺乳類（例えば、ヒト）などの患者の疼痛の治療方法であって、本明細書で定義される本発明の化合物を治療上有効な量で患者に投与することを含む方法。

【0381】

疼痛を患う患者（例えば、ヒトなどの哺乳類）の疼痛の低減または除去方法であって、本明細書で定義される本発明の化合物を疼痛を低減または除去するのに有効な量で患者に投与することを含む方法。

【0382】

痛覚、体性痛、内臓痛、急性疼痛、慢性疼痛、痛覚過敏、異痛、術後疼痛、知覚過敏による疼痛、頭痛、炎症性疼痛（リューマチ痛、歯痛、月経痛、および感染痛）、神経学的疼痛、筋骨格系疼痛、癌性疼痛、および血管痛のうちのいずれか１つ以上の治療方法であって、本明細書で定義される本発明の化合物を治療上有効な量で患者に投与することを含む方法。

【0383】

卒中の予防または治療に用いるための、本明細書で定義される本発明の化合物。

【0384】

哺乳類（例えば、ヒト）などの患者における卒中の予防または治療方法であって、本明細書で定義される本発明の化合物を治療上有効な量で患者に投与することを含む方法。

【0385】

神経保護剤として用いるための、本明細書で定義される本発明の化合物。

【0386】

卒中を患う患者における神経損傷の防止または低減方法であって、本明細書で定義される本発明の化合物を神経保護に有効な量で患者に投与することを含む方法。

【0387】

卒中の危険性がある患者、例えば、血管炎症、アテローム性動脈硬化症、動脈高血圧、糖尿病、高脂血症、および心房細動から選ばれる１つ以上の危険因子を有する患者における卒中の危険性の防止または低減用の薬剤を製造するための、本明細書で定義される本発明の化合物の使用。

【0388】

卒中の危険性がある患者、例えば、血管炎症、アテローム性動脈硬化症、動脈高血圧、糖尿病、高脂血症、および心房細動から選ばれる１つ以上の危険因子を有する患者における卒中の危険性を防止または低減するための、本明細書で定義される本発明の化合物。

【0389】

卒中の危険性がある患者、例えば、血管炎症、アテローム性動脈硬化症、動脈高血圧、糖尿病、高脂血症、および心房細動から選ばれる１つ以上の危険因子を有する患者における卒中の危険性を防止または低減するための方法であって、本明細書で定義される本発明の化合物を治療上有効な量で患者に投与することを含む方法。

【0390】

サイクリン依存性キナーゼ５により仲介される病態または症状の予防または治療に用いるための、本明細書で定義される本発明の化合物。

【0391】

サイクリン依存性キナーゼ５により仲介される病態または症状の予防または治療用の薬剤を製造するための、本明細書で定義される本発明の化合物の使用。

【0392】

サイクリン依存性キナーゼ５により仲介される病態または症状の予防または治療方法であって、その必要のある被験体に本明細書で定義される本発明の化合物を投与することを含む方法。

【0393】

サイクリン依存性キナーゼ５により仲介される病態または症状の罹患率の緩和または低減方法であって、その必要のある被験体に本明細書で定義される本発明の化合物を投与することを含む方法。

【0394】

ｃｄｋ５またはｐ３５により仲介される病態または症状の予防または治療用の薬剤を製造するための、本明細書で定義される本発明の化合物の使用。

【0395】

ｃｄｋ５またはｐ３５により仲介される病態または症状の予防または治療用の薬剤を製造するための、本明細書で定義される本発明の化合物の使用であって、当該病態または症状がアルツハイマー病、ハンチントン病、またはクロイツフェルト−ヤコブ病以外である使用。

【0396】

ｃｄｋ５またはｐ３５により仲介される病態または症状の予防または治療用の薬剤を製造するための、本明細書で定義される本発明の化合物の使用であって、当該病態または症状が神経変性疾患以外である使用。

【0397】

上昇したレベルのｃｄｋ５またはｐ３５を特徴とする病態または症状の予防または治療用の薬剤を製造するための、本明細書で定義される本発明の化合物の使用。

【0398】

ｃｄｋ５またはｐ３５により仲介される病態または症状の予防または治療に用いるための、本明細書で定義される本発明の化合物であって、当該病態または症状がアルツハイマー病、ハンチントン病、またはクロイツフェルト−ヤコブ病以外である化合物。

【0399】

ｃｄｋ５またはｐ３５により仲介される病態または症状の予防または治療に用いるための、本明細書で定義される本発明の化合物であって、当該病態または症状が神経変性疾患以外である化合物。

【0400】

ｃｄｋ５またはｐ３５のレベルの上昇を特徴とする病態または症状の予防または治療に用いるための、本明細書で定義される本発明の化合物。

【0401】

ｃｄｋ５またはｐ３５により仲介される病態または症状の予防または治療方法であって、当該病態または症状がアルツハイマー病、ハンチントン病、またはクロイツフェルト−ヤコブ病以外であり、その必要のある患者に本明細書で定義される本発明の化合物を治療上有効な量で投与することを含む方法。

【0402】

ｃｄｋ５またはｐ３５により仲介される病態または症状の予防または治療方法であって、当該病態または症状が神経変性疾患以外であり、その必要のある患者に本明細書で定義される本発明の化合物を治療上有効な量で投与することを含む方法。

【0403】

ｃｄｋ５またはｐ３５のレベルの上昇を特徴とする病態または症状の予防または治療方法であって、その必要のある患者に本明細書で定義される本発明の化合物を治療上有効な量で投与することを含む方法。

【0404】

神経障害、例えば、アルツハイマー病、ハンチントン病、またはクロイツフェルト−ヤコブ病以外の末梢神経障害の予防または治療に用いるための、本明細書で定義される本発明の化合物。

【0405】

神経障害、例えば、アルツハイマー病、ハンチントン病、またはクロイツフェルト−ヤコブ病以外の末梢神経障害の予防または治療用の薬剤を製造するための、本明細書で定義される本発明の化合物の使用。

【0406】

神経障害、例えば、アルツハイマー病、ハンチントン病、またはクロイツフェルト−ヤコブ病以外の末梢神経障害の予防または治療方法であって、その必要のある患者に本明細書で定義される本発明の化合物を治療上有効な量で投与することを含む方法。

【0407】

抗真菌活性、抗原虫活性、抗ウイルス活性、および抗寄生虫活性
本発明の化合物、ならびにそれらの酸付加塩および結晶形態は、抗真菌活性、抗原虫活性、および抗寄生虫活性を有する。

【0408】

特に、本発明の化合物は、病原菌、原虫、および寄生虫による感染の治療に有用である。通常、病原体による感染はＨｓｐ９０に対する抗体反応を伴う。

【0409】

一実施形態において、本発明は、抗真菌剤として用いるための、本明細書で定義される式（Ｉ）の化合物およびそのサブグループを提供する。

【0410】

真菌としては、例えば、以下のようなヒトおよび他の動物において病因となる真菌が挙げられる：
カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属の種、例えばカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）およびカンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）；
クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属の種、例えばクリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）およびクリプトコッカス・メナンジャイタス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃａｌ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ）；
アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属の種、例えばアスペルギルス・フミガタス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、アスペルギルス・フラーブス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ）およびアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）；
ミクロスポルム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ）属の種、例えばミクロスポルム・カニス（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｃａｎｉｓ）およびミクロスポルム・ジプセウム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｇｙｐｓｅｕｍ）；
エピデルモフィトン（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ）属の種；
トリコフィトン（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ）属の種、例えばトリコフィトン・エクイヌム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｅｑｕｉｎｕｍ）、トリコフィトン・メンタグロフィテス（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ）およびトリコフィトン・ルブルム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｒｕｂｒｕｍ）；
エピデルモフィトン・フロッコースム（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ ｆｌｏｃｃｏｓｕｍ）；
エキソフィアラ・ベルネッキ（Ｅｘｏｐｈｉａｌａ ｗｅｒｎｅｃｋｉｉ）；
フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属の種、例えばフザリウム・ソラニ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ）；
スポロトリクス・シェンキィ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ）；
ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属の種、例えばペニシリウム・ルブルム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｒｕｂｒｕｍ）；
アルテルナリア（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）属の種；
セラトシィスティス・ピリフェラ（Ｃｅｒａｔｏｃｙｓｔｉｓ ｐｉｌｉｆｅｒａ）；
クリソスポリウム・プルイノスム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｐｒｕｉｎｏｓｕｍ）；
ヘルミンソスポリアム（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ）属の種；
ペシロミセス・バリオッティ（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｖａｒｉｏｔｉｉ）；
酵母、例えばサッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、およびピチロスポルム（Ｐｉｔｙｒｏｓｐｏｒｕｍ）属の種、例えばピチロスポルム・オルビクラーレ（Ｐｉｔｙｒｏｓｐｏｒｕｍ ｏｒｂｉｃｕｌａｒｅ）およびピチロスポルム・オバーレ（Ｐｉｔｙｒｏｓｐｏｒｕｍ ｏｖａｌｅ）；
ヒストプラズマ（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）属の種、例えばヒストプラズマ・カプスラツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）；
コクシジオイデス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ）属の種；
パラコクシジオイデス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ）属の種；ならびに
ブラストミセス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ）属の種。

【0411】

他の実施形態において、本発明は、抗原虫剤として用いるための、本明細書で定義される式（Ｉ）の化合物およびそのサブグループを提供する。

【0412】

原虫としては、例えば、以下が挙げられる：
トリパノソーマ・クルージ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ）；
リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）属の種；例えば、ドノバンリーシュマニア（Ｌ.ｄｏｎｏｖａｎｉ）コンプレックス（ドノバンリーシュマニア、幼児リーシュマニア（Ｌ.ｉｎｆａｎｔｕｍ）およびシャガシリーシュマニア（Ｌ.ｃｈａｇａｓｉ））；メキシコリーシュマニア（Ｌ.ｍｅｘｉｃａｎａ）コンプレックス（３大種−メキシコリーシュマニア、アマゾンリーシュマニア（Ｌ.ａｍａｚｏｎｅｎｓｉｓ）およびベネズエラリーシュマニア（Ｌ.ｖｅｎｅｚｕｅｌｅｎｓｉｓ））；熱帯リーシュマニア（Ｌ.ｔｒｏｐｉｃａ）；大形リーシュマニア（Ｌ.ｍａｊｏｒ）；エチオピアリーシュマニア（Ｌ.ａｅｔｈｉｏｐｉｃａ）；およびビアーニア（Ｖｉａｎｎｉａ）亜属−４大種（ブラジルリーシュマニア（Ｌ.（Ｖ.）ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｉｓ）、ギアナリーシュマニア（Ｌ.（Ｖ.）ｇｕｙａｎｅｎｓｉｓ）、パナマリーシュマニア（Ｌ.（Ｖ.）ｐａｎａｍｅｎｓｉｓ）およびペルーリーシュマニア（Ｌ.（Ｖ.）ｐｅｒｕｖｉａｎａ））；
トキソプラズマ・ゴンヂ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）；ならびに
膣トリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ）。

【0413】

さらなる実施形態において、本発明は、抗寄生虫剤として用いるための、本明細書で定義される式（Ｉ）の化合物およびそのサブグループを提供する。

【0414】

寄生虫としては、例えば、以下の寄生虫が挙げられる：
寄生回虫、例えば、アスカリス・ルンブリコイデス（Ａｓｃａｒｉｓ ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ）；および
寄生扁形虫、例えば、マンソン住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉ）などの寄生吸虫。

【0415】

また、本発明は、とりわけ以下を提供する。

【0416】

（熱帯熱マラリア原虫による病態または症状以外の）真菌性、原虫性、または寄生虫性の病態または症状、例えば、Ｈｓｐ９０に対する抗体反応を特徴とする病態または症状の予防または治療に用いるための、本明細書で定義される本発明の化合物。

【0417】

（熱帯熱マラリア原虫による病態または症状以外の）真菌性、原虫性、または寄生虫性の病態または症状、例えば、Ｈｓｐ９０に対する抗体反応を特徴とする病態または症状の予防または治療用の薬剤を製造するための、本明細書で定義される本発明の化合物の使用。

【0418】

（熱帯熱マラリア原虫による病態または症状以外の）真菌性、原虫性、または寄生虫性の病態または症状、例えば、Ｈｓｐ９０に対する抗体反応を特徴とする病態または症状の予防または治療方法であって、その必要のある被験体に本明細書で定義される本発明の化合物を投与することを含む方法。

【0419】

真菌性の病態または症状、例えば、Ｈｓｐ９０に対する抗体反応を特徴とする病態または症状の予防または治療に用いるための、本明細書で定義される本発明の化合物。

【0420】

真菌性の病態または症状、例えば、Ｈｓｐ９０に対する抗体反応を特徴とする病態または症状の予防または治療用の薬剤を製造するための、本明細書で定義される本発明の化合物の使用。

【0421】

真菌性の病態または症状、例えば、Ｈｓｐ９０に対する抗体反応を特徴とする病態または症状の予防または治療方法であって、その必要のある被験体に本明細書で定義される本発明の化合物を投与することを含む方法。

【0422】

動物（例えば、ヒトなどの哺乳類）の病原菌による感染の防止、阻止、または後退に用いるための、本明細書で定義される本発明の化合物。

【0423】

動物（例えば、ヒトなどの哺乳類）の病原菌による感染の防止、阻止、または後退のための薬剤を製造するための、本明細書で定義される本発明の化合物の使用。

【0424】

動物（例えば、ヒトなどの哺乳類）の病原菌による感染の防止、阻止、または後退方法であって、その必要のある被験体に本明細書で定義される本発明の化合物を投与することを含む方法。

【0425】

上記で示した、また、本明細書の他所に記載されるいずれかの使用および方法のための、本明細書で定義される本発明の化合物。

【0426】

本明細書で定義される病態または症状のいずれかの予防または治療用の薬剤を製造するための、本明細書で定義される本発明の化合物の使用。

【0427】

本明細書で定義される本発明の化合物と抗真菌剤（例えば、アゾール抗真菌剤）である補助化合物との組合せ。

【0428】

本明細書で定義される本発明の化合物と抗真菌剤（例えば、アゾール抗真菌剤）である補助化合物とを含む医薬組成物。

【0429】

併用投与する抗真菌剤、抗原虫剤、または抗寄生虫剤（好ましくは抗真菌剤）に対する耐性の発達の防止、低減、または後退に用いるための、本明細書で定義される本発明の化合物。

【0430】

抗真菌剤、抗原虫剤、または抗寄生虫剤に対する耐性の発達を防止、低減、または後退させるために、抗真菌剤、抗原虫剤、または抗寄生虫剤（好ましくは抗真菌剤）との併用投与用の薬剤を製造するための、本明細書で定義される本発明の化合物の使用。

【0431】

患者（例えば、ヒト患者）における抗真菌剤に対する耐性の発達の防止または低減方法であって、抗真菌剤、抗原虫剤、または抗寄生虫剤（好ましくは抗真菌剤）と、本明細書で定義される本発明の化合物との組合せを患者に投与することを含む方法。

【0432】

Ｈｓｐ９０により仲介される病態または症状の予防または治療（あるいはその罹患率の緩和または低減）方法であって、その必要のある被験体に本明細書で定義される本発明の化合物と、抗真菌剤、抗原虫剤、または抗寄生虫剤との組合せを投与することを含み、上記Ｈｓｐ９０により仲介される病態または症状が抗真菌剤、抗原虫剤、または抗寄生虫剤に対する耐性の発達である方法。

【0433】

（ｉ）抗真菌剤、抗原虫剤、または抗寄生虫剤に対して真菌性、原虫性、または寄生虫性の細胞を感作させ、（ｉｉ）抗真菌剤、抗原虫剤、または抗寄生虫剤に対する耐性の発生率を緩和または低減し、（ｉｉｉ）抗真菌剤、抗原虫剤、または抗寄生虫剤に対する耐性を後退させ、（ｉｖ）抗真菌剤、抗原虫剤、または抗寄生虫剤の活性を増強させ、（ｖ）抗真菌剤、抗原虫剤、または抗寄生虫剤に対する耐性の発現を遅延または防止する方法であって、その必要のある被験体に本明細書で定義される本発明の化合物と、上記抗真菌剤、抗原虫剤、または抗寄生虫剤との組合せを投与することを含む方法。

【0434】

真菌性、原虫性、または寄生虫性の疾病または症状の治療方法であって、その必要のある被験体に本明細書で定義される本発明の化合物と、抗真菌剤、抗原虫剤、または抗寄生虫剤との組合せを投与することを含み、薬剤耐性が現れないことを特徴とする方法。

【0435】

抗真菌剤、抗原虫剤、または抗寄生虫剤を用いた治療を受けている被験体における、Ｈｓｐ９０により仲介される病態または症状の予防または治療（あるいはその罹患率の緩和または低減）方法であって、上記被験体に本明細書で定義される本発明の化合物を投与することを含み、上記Ｈｓｐ９０により仲介される病態または症状が上記抗真菌剤、抗原虫剤、または抗寄生虫剤に対する耐性の発達である方法。

【0436】

（ｉ）抗真菌剤、抗原虫剤、または抗寄生虫剤に対して真菌性、原虫性、または寄生虫性の細胞を感作させ、（ｉｉ）抗真菌剤、抗原虫剤、または抗寄生虫剤に対する耐性の発生率を緩和または低減し、（ｉｉｉ）抗真菌剤、抗原虫剤、または抗寄生虫剤に対する耐性を後退させ、（ｉｖ）抗真菌剤、抗原虫剤、または抗寄生虫剤の活性を増強させ、（ｖ）抗真菌剤、抗原虫剤、または抗寄生虫剤に対する耐性の発現を遅延または防止する方法であって、上記補助化合物を用いた治療を受けている被験体に本明細書で定義される本発明の化合物を投与することを含む方法。

【0437】

抗真菌剤、抗原虫剤、または抗寄生虫剤を用いた治療を受けている被験体における、真菌性、原虫性、または寄生虫性の疾病の治療方法であって、その必要のある被験体に本明細書で定義される本発明の化合物を投与することを含み、（例えば、上記抗真菌剤、抗原虫剤、または抗寄生虫剤への）薬剤耐性が現れないことを特徴とする方法。

【0438】

本出願の導入部に記載したように、Ｈｓｐ９０阻害活性を有する化合物は、強力な抗真菌活性を示し、抗真菌性物質に対する耐性、特に抗真菌性物質に対するＨｓｐ９０依存性耐性の発達を防止することが分かっている。さらに、Ｈｓｐ９０活性の阻害により、一般的な抗真菌剤、例えば、アゾールに対する耐性の発達が低減可能となることが分かっている。したがって、本発明の化合物は、真菌性の疾病および症状の範囲の予防または治療に有用であり、アゾールなどの他の抗真菌剤と併用投与した場合に、抗真菌剤の活性を増強させるのに有用であり得る。

【0439】

本発明の化合物の抗真菌活性は、最小真菌発育（阻止）濃度（ｍ.ｉ.ｃ.）を求めることにより評価され得る。通常、試験は、適切な栄養培地および各々異なる濃度の試験化合物を含む一連のプレートまたはチューブを調製し、培地に真菌種を接種することにより行われる。インキュベーション期間後、プレートを目視して、真菌増殖の有無を確認する。ｍ.ｉ.ｃ.とは、真菌増殖を防止するために必要な最小濃度を意味する。

【0440】

化合物は、動物医療（例えば、ヒトなどの哺乳類の治療）において用いてもよい。

【0441】

本明細書で定義される本発明の化合物が用いられ得る、動物における真菌感染は、以下を含む：
表在性真菌症−すなわち、皮膚および毛髪の最外層に限定される真菌感染；
皮膚真菌症−すなわち、表皮のより深い箇所ではあるが、典型的には皮膚、毛髪、および爪のケラチン化層に限定される真菌感染；
皮下真菌症−すなわち、真皮、皮下組織、筋肉、および筋膜を含む真菌感染；
一次病原体による全身性真菌症−（典型的には、肺において最初に発生し、他の器官系に広まる）；および
日和見病原体による全身性真菌症−（通常なら感染しない、免疫不全患者の感染）。

【0442】

本明細書で定義される本発明の化合物が用いられ得る、真菌性の病態の具体例は、以下を含む。
皮膚糸状菌感染、例えば、癜風（皮膚の表在性真菌感染）、足部白癬（水虫）、頭部白癬（頭部の表在性真菌感染）、白癬性毛瘡（髭部位の真菌感染）、体部白癬（滑らかな皮膚部位の真菌感染）
粘膜カンジダ症、例えば口腔カンジダ症、食道炎、および膣カンジダ症
侵襲性または深部器官のカンジダ症（例えば、真菌血症、心内膜炎、および眼内炎）
クリプトコッカス感染、例えばクリプトコッカス・メナンジャイタス感染
ヒストプラズマ症
ブラストミセス症、肺および場合により皮膚の真菌感染
免疫系が弱まっている、あるいは抗癌剤または抗ＡＩＤ剤を用いた治療を受けている患者における侵襲性真菌感染、例えば侵襲性カンジダ症および侵襲性アスペルギルス症
アスペルギルス症、例えばアレルギー性気管支肺アスペルギルス症
アスペルギローマ
間擦疹感染（皮膚と皮膚の間、例えば、足趾または手指の間、腋下部位、あるいは鼠蹊部位に生じる真菌感染）
マズラ菌症（マズラ足としても知られる、足組織の真菌の侵襲）
コクシジオイデス症
ムーコル症
ブラストミセス症
ゲオトリクム症
クロモブラストミコーシス
コニジオスポローシス
ヒストプラズマ症
リノスポリジウム症
ノカルジア症
パラアクチノミセス症
ペニシリウム症
モノリアシス
スポロトリクム症
特に注目されている真菌感染は、カンジダ症およびアスペルギルス症である。

【0443】

また、本発明の化合物は、抗原虫活性および抗寄生虫活性を有する。本発明の化合物の抗原虫活性は、例えば最小発育阻止濃度（ｍ.ｉ.ｃ.）または５０％阻害濃度（ＩＣ_５０）などを求めるという従来方法により評価し得る。

【0444】

本発明の化合物が有用であると証明し得る原虫性および寄生虫性の疾病または症状は、例えば、以下を含む。
シャーガス病（（トリパノソーマ症）−寄生虫トリパノソーマ・クルージにより引き起こされる感染
回虫症−寄生回虫アスカリス・ルンブリコイデスにより引き起こされるヒトの疾病
リーシュマニア症−リーシュマニア属の寄生虫により引き起こされる疾病
トキソプラズマ症−原虫トキソプラズマ・ゴンヂにより引き起こされる寄生虫性の疾病
住血吸虫症（ビルハルツ住血吸虫症）−寄生虫マンソン住血吸虫により引き起こされる疾病
トリコモナス症−寄生原虫膣トリコモナスにより引き起こされる性感染疾病

【0445】

抗ウイルス活性
本出願の導入部に記載したように、ウイルスＲＮＡ／ＤＮＡを有する宿主細胞の感染により、細胞タンパク質合成を、ウイルス核酸によりコードされる重要なウイルスタンパク質へと実質的に向けなおし、これにより、熱ショックタンパク質のアップレギュレーションがしばしば起こる。Ｈｓｐ誘導の機能の１つは、ウイルス複製のための準備において生成される高レベルの「外来」タンパク質の安定化および折りたたみを補助することであり得ると考えられており、Ｈｓｐ９０阻害剤がウイルス複製を遮断可能であることが示されている（ナカガワ（Ｎａｇｋａｇａｗａ）ら）。したがって、本発明の化合物は、例えば、ウイルス複製の遮断または阻害によってウイルス感染に対して対抗するのに有用である。

【0446】

したがって、別の態様において、本発明は、ウイルス感染（またはウイルス疾患）の予防または治療に用いるための、本明細書で定義される本発明の化合物を提供する。

【0447】

さらなる態様では、本発明は以下を提供する。

【0448】

ウイルス感染（またはウイルス疾患）の予防または治療用の薬剤を製造するための、本明細書で定義される本発明の化合物の使用。

【0449】

ウイルス感染（またはウイルス疾患）の予防または治療方法であって、その必要のある被験体に本明細書で定義される本発明の化合物を投与することを含む方法。

【0450】

宿主生物（例えば、哺乳類などの動物（例えば、ヒト））におけるウイルス複製の遮断または阻害に用いるための、本明細書で定義される本発明の化合物。

【0451】

宿主生物（例えば、哺乳類などの動物（例えば、ヒト））におけるウイルス複製の遮断または阻害に用いる薬剤を製造するための、本明細書で定義される本発明の化合物の使用。

【0452】

宿主生物（例えば、哺乳類などの動物（例えば、ヒト））におけるウイルス複製の遮断または阻害方法であって、本明細書で定義される本発明の化合物を宿主生物に投与することを含む方法。

【0453】

本発明の化合物を用いて治療し得るウイルス感染は、例えば、以下のウイルスのうちいずれか１つ以上による感染が挙げられる：
ピコルナウイルス、例えば、ライノウイルス（一般的な風邪ウイルス）、コクサッキーウイルス（例えば、コクサッキーＢウイルス）；および口蹄疫ウイルス；
肝炎ウイルス、例えば、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｄ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）、およびＥ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）；
コロナウイルス（例えば、一般的な風邪ウイルスおよび重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス）；
アデノウイルス、例えば、ヒトアデノウイルス（呼吸器および結膜感染の原因）；
アストロウイルス（インフルエンザ様症状の原因）；
フラビウイルス、例えば、黄熱病ウイルス；
オルソミクソウイルス、例えば、インフルエンザウイルス（例えば、インフルエンザＡ型、Ｂ型、およびＣ型ウイルス）；
パラインフルエンザウイルス；
呼吸器多核体ウイルス；
エンテロウイルス、例えば、ポリオウイルス（灰白脊髄炎ウイルス）；
パラミクソウイルス、例えば、麻疹（はしか）ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、呼吸器多核体ウイルス（ＲＳＶ）、およびイヌジステンパーウイルス（ＣＤＶ）；
トガウイルス、例えば、風疹（ドイツ麻疹）ウイルスおよびシンドビスウイルス；
以下のようなヘルペスウイルス：
単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、例えば、熱性疱疹（口唇疱疹）、歯肉口内炎、疱疹性角膜炎、疱疹性湿疹；およびＨＳＶ脳炎を引き起こすＨＳＶ−１、ならびに生殖器病変、新生児感染、ＨＳＶ髄膜炎、およびＨＳＶ直腸炎を引き起こすＨＳＶ−２；
水痘、先天性水痘症候群、および帯状疱疹を引き起こす水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）；
伝染性単核細胞増加症、バーキットリンパ腫、および鼻咽頭癌を引き起こすエプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）；
サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、例えば、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）；
突発性発疹または小児薔薇疹を引き起こすヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ−６）；
多くのＡＩＤＳ患者の唾液中に見られ、カポジ肉腫関連ヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ−８）またはカポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）；
パポバウイルス、例えば、ポリオーマウイルスおよびヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）；
パルボウイルス；
ポックスウイルス、例えば、痘瘡ウイルス（ヒト天然痘ウイルス）；
ラブドウイルス、例えば、狂犬病ウイルスおよび水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）；ならびに
レトロウイルス、例えば、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の原因となるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）；およびヒトＴリンパ球向性ウイルス（ＨＴＬＶ）。

【0454】

本発明の化合物が用いられ得る特定のウイルス感染は、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、エプスタイン−バーウイルス、シンドビスウイルス、アデノウイルス、ＨＩＶ（ＨＩＶに感染した個体のＡＩＤＳ発症の防止）、ＨＰＶ、ＨＣＶ、およびＨＣＭＶウイルスを含む。

【0455】

ウイルス感染は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染以外であってもよい。

【0456】

宿主生物または宿主細胞におけるウイルス複製を遮断または防止する薬剤としての本発明の化合物の活性は、当業者に公知の標準的な手法に従って求めることが可能である。

【0457】

本発明の化合物は、単独の抗ウイルス剤として用いてもよく、アクシロビル、ガンシクロビル、オセルタミビル（タミフル（登録商標））、およびザナミビル（リレンザ（登録商標））、アマンチジン、リマンタジン、アデホビルジピボキシル、インターフェロン（例えば、インターフェロンアルファ−２ｂおよびペグインターフェロンアルファ−２ａ）、ラミブジン、エンテカビル、リバビリン、ファムシクロビル、バルシシロビル（valcicylovir）、バラシクロビル、アジドチミジン（ＡＺＴ−レトロビル（登録商標））、アタザナビル、ホスアンプレナビル、ラミブジン、ラミブジン＋アバカビル、フマル酸テノホビルジソプロキシル、フマル酸テノホビルジソプロキシル＋エムトリシタビン、チプラナビル、ネルフィナビル、インジナビル、ラルテグラビル、リトナビル、ロピナビル＋リトナビル、ダルナビル、アンプレナビル、エンフビルチド、サキナビル、ヒドロキシ尿素、ＶＧＶ−１および抗ウイルス性ワクチンなどの抗ウイルス剤と併用してもよい。

【0458】

また、本発明は、以下を提供する。

【0459】

本明細書で定義される本発明の化合物と抗ウイルス剤である補助化合物との組合せ。

【0460】

本明細書で定義される本発明の化合物と抗ウイルス剤である補助化合物とを含む医薬組成物。

【0461】

医薬製剤
前記有効化合物を単体で投与することも可能であるが、１つまたはそれ以上の薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤、希釈剤、フィラー、緩衝剤、安定剤、保存剤、滑沢剤、または当業者に周知の他の物質と、任意で他の治療または予防剤（例えば、化学療法に伴う副作用のいくつかを減少させるまたは緩和する薬剤）と一緒に、少なくとも１種の本発明の有効化合物を含有する医薬組成物（例えば、製剤）として提供することが好ましい。このような薬剤の具体例としては、制吐剤、および化学療法に伴う好中球減少の持続性を防止または減少させる薬剤、および赤血球レベルまたは白血球レベルの減少から生じる合併症を予防する薬剤、例えば、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、および顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）が挙げられる。

【0462】

したがって、本発明はさらに、上記に定義される医薬組成物ならびに、本明細書に記載される１種以上の薬学的に許容される担体、賦形剤、緩衝剤、アジュバント、安定剤、または他の物質と一緒に、上記に定義される少なくとも１つの有効化合物を混合することからなる、医薬組成物の製造方法を提供する。

【0463】

本明細書において「薬学上許容される」なる語は、適切な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症なく、被験体(例えば、ヒト)の組織との接触に用いるのに適しており、妥当な利益／リスク比で釣り合いがとれた化合物、物質、組成物および／または投与形態を意味する。担体、賦形剤などの各々はまた、その製剤の他の成分と適合するという点で「許容される」ものでなければならない。

【0464】

したがって、さらなる態様において本発明は本明細書で定義される本発明の化合物、特に式（１０）および（１）の化合物ならびにその結晶および塩形態を医薬組成物の形態で提供する。

【0465】

前記医薬組成物は、経口投与、非経口投与、局所投与、鼻腔内投与、点眼投与、点耳投与、直腸投与、膣内投与または経皮投与に適したいずれの形態であってもよい。前記組成物が非経口投与を意図したものである場合、静脈内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、皮下投与用に処方することもでき、あるいは注射、点滴または他の送達手段により標的臓器または組織に直接送達するために処方することもできる。送達はボーラス注射、短時間点滴または長時間点滴によるものとすることもでき、また、受動的送達であっても、または適切な点滴ポンプの利用を介したものでもよい。

【0466】

非経口投与に適した医薬製剤としては、酸化防止剤、緩衝液、静菌剤、共溶媒、有機溶媒混合物、シクロデキストリン複合体形成剤、乳化剤(エマルジョン製剤を形成および安定化するため)、リポソーム形成のためのリポソーム成分、高分子ゲルを形成するためのゲル化可能なポリマー、凍結乾燥保護剤、ならびにとりわけ有効成分を可溶形態で安定化させるための薬剤、および製剤を意図するレシピエントの血液と等張にする薬剤の組合せを含んでもよい水性および非水性の無菌注射液が挙げられる。非経口投与用医薬製剤はまた、懸濁化剤および増粘剤を含み得る水性および非水性懸濁液の形態をとってもよい（ストライクリー（R.G. Strickly）、経口および注射製剤における賦形剤の溶解（Solubilizing Excipients in oral and injectable formulations）、ファーマシューティカルリサーチ（Pharmaceutical Research）、第２１巻２号、２００４年、２０１−２３０ページ。

【0467】

イオン化可能な薬剤分子は、その薬剤のｐＫ_ａが製剤のｐＨ値と十分に離れている場合には、ｐＨ調整により所望の濃度まで可溶化させることができる。許容される範囲は、静脈内投与および筋肉内投与ではｐＨ２〜１２であるが、皮下ではｐＨ２．７〜９．０である。溶液のｐＨは塩形態の薬剤、塩酸もしくは水酸化ナトリウムなどの強酸／強塩基、緩衝剤溶液（限定されるものではないが、グリシン、クエン酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、ヒスチジン、リン酸塩、トリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン（ＴＲＩＳ）、または炭酸塩が挙げられる）のいずれかにより制御される。

【0468】

注射製剤では多くの場合、水溶液と水溶性有機溶媒／界面活性剤（すなわち、共溶媒）との組合せが用いられる。注射製剤に用いられる水溶性有機溶媒および界面活性剤としては、限定されるものではないが、プロピレングリコール、エタノール、ポリエチレングリコール３００、ポリエチレングリコール４００、グリセリン、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ；ファーマソルブ（Pharmasolve））、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ソルトール（Ｓｏｌｕｔｏｌ）ＨＳ１５、クレモホールＥＬ、クレモホールＲＨ６０およびポリソルベート８０が挙げられる。このような製剤は、必ずというわけではないが、通常、注射前に希釈される。

【0469】

プロピレングリコール、ＰＥＧ３００、エタノール、クレモホールＥＬ、クレモホールＲＨ６０およびポリソルベート８０は市販の注射製剤に用いられている、完全に水混和性の有機溶媒および界面活性剤であり、互いに併用が可能である。得られる有機注射製剤は通常、静脈内ボーラスまたは静注前に少なくとも２倍希釈される。

【0470】

あるいは、水に対する溶解度の上昇はシクロデキストリンとの分子複合体形成によっても達成することができる。

【0471】

リポソームは外側の脂質二重膜および内側の水性核からなる、閉じられた球状小胞であり、全体の直径が１００μｍ未満である。疎水性の程度によって、中程度の疎水性薬剤であれば、薬剤をリポソーム内に封入またはインターカレーションした場合に、リポソームにより可溶化させることができる。疎水性薬剤はまた、薬剤分子を脂質二重膜の一体部分とした場合にも、リポソームにより可溶化させることができ、この場合、この疎水性薬剤は脂質二重膜の脂質部分に溶解される。典型的なリポソーム製剤はリン脂質を５〜２０ｍｇ／ｍｌで含む水、等張剤、ｐＨ５〜８の緩衝液、および必要に応じてコレステロールを含む。

【0472】

前記製剤は単回用量容器または複数用量容器、例えば、密閉アンプルおよびバイアルで提供することもできるし、使用直前に無菌液体担体、例えば、注射水を加えるだけのフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存することもできる。

【0473】

前記医薬製剤は、本発明の化合物またはその酸付加塩を凍結乾燥させることによる調製することができる。凍結乾燥とは、組成物をフリーズドライする手順をさす。よって、本明細書においてフリーズドライと凍結乾燥は同義語として用いられる。典型的な方法としては、化合物を可溶化させ、得られた製剤を明澄化し、濾過除菌し、凍結乾燥に適当な容器（例えば、バイアル）に無菌的に移すことである。バイアルの場合には、リオストッパー（lyo-stopper）で軽く栓をする。製剤は標準条件下で凍結するまで冷却し、凍結乾燥を行った後に密閉キャップをし、安定な凍結乾燥製剤を形成させることができる。この組成物は典型的には残留水分含量が低く、例えば、凍結乾燥物の重量の５重量％未満、例えば１重量％未満である。

【0474】

前記凍結乾燥製剤は、他の賦形剤、例えば、増粘剤、分散剤、緩衝剤、酸化防止剤、保存剤および張力調整剤を含み得る。典型的な緩衝剤としては、リン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩およびグリシンが挙げられる。酸化防止剤の例としては、アスコルビン酸、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、モノチオグリセロール、チオ尿素、ブチル化ヒドロキシトルエン、ブチル化ヒドロキシルアニソールおよびエチレンジアミン四酢酸塩が挙げられる。保存剤としては、安息香酸およびその塩、ソルビン酸およびその塩、パラ−ヒドロキシ安息香酸のアルキルエステル、フェノール、クロロブタノール、ベンジルアルコール、チメロサール、塩化ベンザルコニウムおよび塩化セチルピリジニウムが挙げられる。必要に応じて張力調整のために、上述の緩衝剤ならびにデキストロースおよび塩化ナトリウムを使用することができる。

【0475】

凍結乾燥技術では一般に、プロセスを容易にするため、かつ／または凍結乾燥塊に嵩および／または機械的強度をもたせるために増量剤を用いる。増量剤は、前記化合物またはその塩とともに凍結乾燥した際に物理的に安定な凍結乾燥塊を生じ、より適切な凍結乾燥プロセスとし、さらに、迅速かつ完全な再構成をもたらす、水溶性の高い固体粒子希釈剤を意味する。増量剤はまた溶液を等張とするためにも利用することができる。

【0476】

水溶性増量剤は、凍結乾燥に典型的に用いられる薬学上許容される不活性の固体材料のいずれのものであってもよい。このような増量剤としては、例えば、グルコース、マルトース、スクロースおよびラクトースなどの糖類、ソルビトールまたはマンニトールなどのポリアルコール、グリシンなどのアミノ酸、ポリビニルピロリジンなどのポリマー、ならびにデキストランなどの多糖類が挙げられる。

【0477】

有効化合物の重量に対する増量剤の重量比は典型的には、約１〜約５の範囲、例えば、約１〜約３、例えば、約１〜２の範囲である。

【0478】

あるいは、医薬製剤は、濃縮および適当なバイアルへの密封が可能な溶液の形態で提供することもできる。投与形態の滅菌は、製剤過程の適当な段階で、濾過によるか、またはバイアルとその内容物とをオートクレーブ処理することにより行うことができる。供給された製剤は、例えば、適切な無菌注入パック中に希釈するなど、送達前にさらなる希釈または調製が必要な場合がある。

【0479】

即時調合注射溶液および懸濁液は無菌粉末、顆粒および錠剤から調製することができる。

【0480】

本発明の好ましい一実施形態では、前記医薬組成物は、例えば注射または点滴による静注投与に適切な形態である。

【0481】

別の好ましい実施形態では、前記医薬組成物は皮下（ｓ．ｃ．）投与に適した形態である。

【0482】

経口投与に適した医薬投与形としては、錠剤、カプセル剤、カプレット剤、丸剤、トローチ剤、シロップ剤、液剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤および懸濁剤、舌下錠、ウエハー剤またはパッチ剤ならびにバッカルパッチ剤が挙げられる。

【0483】

式（Ｉ）の化合物を含有する医薬組成物は、公知の技術にしたがって処方することができる。例えば、レミントンの薬学（Remington’s Pharmaceutical Sciences）、マック（Mack）出版社、イーストン、ペンシルベニア州、米国、参照。

【0484】

したがって、錠剤組成物は、単位用量の有効化合物を、不活性希釈剤または担体、例えば、糖または糖アルコール（例えば、ラクトース、スクロース、ソルビトールまたはマンニトール）；および／または非糖由来希釈剤（炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、炭酸カルシウムまたはセルロースもしくはその誘導体、例えば、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびデンプン（コーンスターチなど）など）とともに含有することができる。錠剤はまた、標準的な成分、例えば、結合剤および造粒剤、例えば、ポリビニルピロリドン、崩壊剤（例えば、架橋カルボキシメチルセルロースなどの膨潤性架橋ポリマー）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸塩）、保存剤（例えば、パラベン）、酸化防止剤（例えば、ＢＨＴ）、緩衝剤（例えば、リン酸緩衝液またはクエン酸緩衝液）、および発泡剤（例えば、クエン酸塩／重炭酸塩混合物）を含有してもよい。このような賦形剤は公知であり、ここでは詳細に記載する必要はない。

【0485】

カプセル製剤は、硬質ゼラチン種であっても軟質ゼラチン種であってもよく、固体、半固体または液体状の有効成分を含有することができる。ゼラチンカプセルは、動物ゼラチンまたはその合成もしくは植物由来の均等物から形成することができる。

【0486】

固形投与形態（例えば、錠剤、カプセル剤など）はコーティングを施しても施さなくともよいが、典型的には例えば、保護フィルムコーティング（例えば、ワックスまたはワニス）または放出制御コーティングを有する。前記コーティング（例えば、オイドラギット（Eudragit）（商標）型ポリマー）は、胃腸管内の所望の位置で有効成分が放出されるように設計することができる。したがって、コーティングは胃腸管内の特定のｐＨ条件下で分解するように選択することができ、これにより選択的に胃または回腸もしくは十二指腸で化合物を放出する。あるいはまたはさらに、コーティングは、苦味のある薬剤など不快な味を消すために矯味剤として使用することができる。コーティングは、不快な味を消す手助けをする糖分または他の物質を含んでもよい。

【0487】

コーティングの代わりにまたはコーティングに加えて、放出制御剤、例えば、胃腸管において酸性度またはアルカリ性度が変化する条件下で化合物を選択的に放出するようにすることができる放出遅延剤を含んでなる固体マトリックス中に薬剤を提供してもよい。あるいは、マトリックス材料または放出遅延コーティングは、投与形態が胃腸管を通過するにつれて実質的に連続的に崩壊する崩壊性ポリマー（例えば、無水マレイン酸ポリマー）の形態をとることができる。さらなる別法としては、有効化合物を、化合物の放出の浸透圧制御をもたらす送達系に処方することもできる。浸透圧放出性および他の遅延放出性または徐放性製剤は当業者に周知の方法にしたがって製造することができる。

【0488】

前記医薬製剤は単一のパッケージ、通常はブリスターパック中に全コースの治療薬を含んだ「患者パック」として患者に提供することができる。患者パックは、調剤師がバルク供給から患者分の医薬を分配する従来の処方箋調剤に優る利点があり、患者は患者パックに入っている、患者の処方箋調剤では見ることができない添付文書をいつでも見ることができる。添付文書を包含しておけば、患者が医師の指示をよりよく遵守することが示されている。

【0489】

局所使用のための組成物としては、軟膏、クリーム、スプレー、パッチ、ゲル、液滴および挿入物（例えば、眼内挿入物）が挙げられる。このような組成物は、公知の方法にしたがって処方することができる。非経口投与用の組成物は典型的には無菌水性もしくは油性溶液または微細懸濁液として提供されるか、あるいは注射用無菌水で即時構成できる微細無菌粉末の形態で提供されてもよい。

【0490】

直腸投与または膣内投与用の製剤の例としては、ペッサリーおよび坐剤が挙げられ、これらは、例えば、有効化合物を含有する付形成形材またはワックス材から形成することができる。したがって、単位用量の坐剤またはペッサリーは、１種以上の従来の固形担体（例えば、コカバター）と前記有効成分とを混合し、得られる混合物を成形することにより調製することができる。成形ワックス剤のさらなる例としては、高分子量ポリアルキルエングリコール（例えば、高分子量ポリエチレングリコール）などのポリマーが挙げられる。

【0491】

あるいは、膣内投与の場合、前記製剤は、有効成分と場合により１種以上の賦形剤または希釈剤とを含浸させたタンポンとして提供されてもよい。直腸および膣内投与に適した他の製剤としては、クリーム、ゲル、発泡体、ペーストおよびスプレーが挙げられる。

【0492】

局所組成物のさらなる例としては、有効成分と場合により１種以上の賦形剤または希釈剤とを含浸させた包帯および絆創膏などの包帯材を含んでいる。使用され得る担体としては、例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールまたはグリセロールなどの多価アルコールが挙げられる。適切な賦形剤は、当該技術分野において適切であると知られているものである。

【0493】

吸入投与用組成物は、吸入可能な粉末組成物または液状もしくは粉末スプレーの形態をとってもよく、粉末吸入装置またはエアゾールディスペンシング装置を用いた標準的な形態で投与することができる。このような装置は周知である。吸入投与用の粉末製剤は、典型的には有効化合物をラクトースなどの不活性固体粉末希釈剤とともに含む。

【0494】

本発明の化合物は、一般的には単位投与形態で提供され、それ自体、所望の生物活性レベルを与えるのに十分な化合物を典型的に含んでいる。例えば、製剤は１ナノグラム〜２グラムの有効成分、例えば１ナノグラム〜２ミリグラムの有効成分を含んでいてもよい。この範囲内での化合物の具体的な部分範囲としては、０．１ミリグラム〜２グラムの有効成分（より通常は、１０ミリグラム〜１グラム、例えば、５０ミリグラム〜５００ミリグラム）、または１マイクログラム〜２０ミリグラム（例えば、１マイクログラム〜１０ミリグラム、例えば、０．１ミリグラム〜２ミリグラムの有効成分）である。

【0495】

経口投与用の組成物に関しては、単位投与形態は１ミリグラム〜２グラム、より典型的には、１０ミリグラム〜１グラム、例えば、５０ミリグラム〜１グラム、例えば、１００ミリグラム〜１グラムの有効化合物を含んでいてもよい。

【0496】

有効化合物は、投与を必要とする患者（例えば、ヒトまたは動物患者）に、所望の治療効果を達成するのに十分な量で投与する。

【0497】

治療方法
本発明の化合物は、Ｈｓｐ９０クライアントタンパク質により仲介される様々な病態もしくは症状の予防または治療において有用である。このような病態および症状の例は上述されている。

【0498】

上記化合物は、一般的にこのような投与を必要とする被験体（例えば、ヒトまたは動物の患者、好ましくはヒト）に対して投与される。

【0499】

上記化合物は、治療上または予防上有用であり一般的に毒性のない量で典型的に投与されることになる。しかしながら、特定の状況において（例えば、生命を脅かす疾病の場合には）、式（Ｉ）の化合物を投与する利点は、いかなる毒性効果または副作用の短所に勝ることがあり、この場合には化合物を毒性を伴う量で投与することが望ましいと考えられる可能性がある。

【0500】

前記化合物は、有用な治療上の効果を維持するために長期間にわたって投与されてもよいし、または短期間のみ投与されてもよい。あるいは、該化合物はパルス的投与または継続的投与されてもよい。

【0501】

本発明の化合物の典型的な１日量は、体重１キログラムあたり１００ピコグラム〜１００ミリグラム、より典型的には体重１キログラムあたり５ナノグラム〜２５ミリグラム、およびより通常には体重１キログラムあたり１０ナノグラム〜１５ミリグラム（例えば、１０ナノグラム〜１０ミリグラム、およびより典型的には１キログラムあたり１マイクログラム〜１キログラムあたり２０ミリグラム、例えば、１キログラムあたり１マイクログラム〜１０ミリグラム）の範囲でありえるが、必要な場合はより高用量またはより低用量で投与されてもよい。前記化合物は、例えば、毎日、または２もしくは３もしくは４もしくは５もしくは６もしくは７もしくは１０もしくは１４もしくは２１もしくは２８日ごとに繰り返し投与することができる。

【0502】

一具体的服薬スケジュールでは、患者に１日に１時間、最大１０日間、特に１週間に最大５日間点滴を施し、この処置は所望の間隔（例えば、２〜４週間、特に３週間毎）で繰り返される。

【0503】

より詳しくは、患者に１日に１時間、５日間の期間点滴を施し、この処置を３週間毎に繰り返す。

【0504】

別の具体的服薬スケジュールでは、患者に、３０分〜１時間にわたり点滴を施し、続いて様々な継続時間（例えば、１〜５時間、例えば、３時間）の維持点滴を施す。

【0505】

さらなる具体的服薬スケジュールでは、患者に１２時間〜５日間の持続点滴、特に２４時間から７２時間の持続点滴を施す。

【0506】

しかしながら、最終的には投与量および使用する組成物の種類は、治療する疾病または生理状態の性質と見合うものとなり、医師の裁量によることになる。

【0507】

本明細書で定義される化合物は、単独の薬剤として投与することもでき、前記化合物は特定の病態（例えば、上記で定義される癌などの新生物疾患）の治療用の１種以上の別の化合物との併用療法において投与することもできる。

【0508】

本発明の化合物とともに投与されてもよい（同時にまたは異なる時間間隔であるかどうかにかかわらず）、他の治療用薬剤または治療の例としては、限定されるものではないが、以下のものが挙げられる。
トポイソメラーゼＩ阻害剤
代謝拮抗剤
チューブリン標的化薬剤
ＤＮＡ結合剤およびトポイソメラーゼＩＩ阻害剤
アルキル化剤
モノクローナル抗体
抗ホルモン
シグナル伝達阻害剤
プロテアソーム阻害剤
ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ
サイトカインおよびレチノイド
クロマチン標的化療法剤、例えば、ＨＤＡＣまたはＨＡＴモジュレーター、
放射線療法、および、
他の治療剤または予防薬；例えば、化学療法に伴う副作用のいくつかを減少または緩和する薬剤。そのような薬剤の具体的な例としては、制吐剤、および化学療法に伴う好中球減少の持続性を防止または減少させる薬剤、および赤血球レベルまたは白血球レベルの減少から生じる合併症を予防する薬剤、例えば、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）および顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）が挙げられる。また、ビスフォスフォネート剤（例えば、ゾレドネート、パミドロネートおよびイバンドロネート）などの骨吸収を阻害する薬剤、炎症反応を抑制する薬剤（デキサメタゾン、プレドニゾンおよびプレドニゾロンなど）、および天然ホルモンのソマトスタチンの薬理学的特性を模倣する薬理学的特性を備えた長時間作用性のオクタペプチドである酢酸オクトレオチドを含む、脳ホルモンソマトスタチンの合成型のような、先端肥大症患者において成長ホルモンおよびＩＧＦ−Ｉの血中濃度を減少させるために使用される薬剤が挙げられる。さらには、ロイコボリン（葉酸レベルを減少させる薬剤に対する解毒剤として使用される）またはフォリン酸それ自体などの薬剤、および浮腫および血栓塞栓症発作を含む副作用の治療のために使用することができる酢酸メゲストロールのような薬剤が挙げられる。

【0509】

他の療法剤と組合せたＨｓｐ９０阻害剤の場合、前記２種以上の治療剤は、個別に違う用量スケジュールで、および異なる経路を通じて投与されてもよい。

【0510】

前記化合物は、１、２、３、４種またはそれ以上の他の治療薬（好ましくは１または２種、より好ましくは１種）との併用療法で投与される場合は、前記化合物は同時にまたは順次に投与できる。順次に投与される場合、それらは短い間隔で（例えば、５〜１０分の期間にわたって)、またはより長い間隔（例えば、１、２、３、４時間またはそれ以上離れて、または必要とされる場合には、さらにより長い期間離れて）で投与することができるが、正確な投与レジメンは治療用薬剤の特性に対応する。

【0511】

本発明の化合物はまた、放射線療法、光力学療法、遺伝子療法などの非化学療法的治療；手術および栄養制限食と併用して投与されてもよい。

【0512】

別の化学療法剤との併用療法における使用に関して、前記化合物および１、２、３、４種またはそれ以上の他の治療剤は、例えば、２、３、４種またはそれ以上の治療剤を含む投薬形態で、ともに製剤化することができる。あるいは、個々の治療剤は個別に製剤化され、キットの形態で一緒に提供されてもよく、任意でそれらの使用説明書が添付される。

【0513】

当業者は、通常の知識により、用いる投与レジメンおよび組合せ療法が分かるであろう。

【0514】

診断方法
化合物の投与前に、患者が罹患している、もしくは罹患している可能性のある疾病または症状が、Ｈｓｐ９０に対する活性を有する化合物による治療に対して感受性のある疾病または症状であるかどうかを決定するために患者をスクリーニングしてもよい。

【0515】

例えば、患者から採取した生体サンプルを分析し、その患者が罹患している、もしくは罹患している可能性のある癌などの症状または疾病がＨｓｐ９０クライアントタンパク質の変異または過剰な活性化をもたらす遺伝的異常または異常なタンパク質発現を特徴とするものかどうかを判定することができる。Ｈｓｐ９０クライアントタンパク質の活性化をもたらすそのような異常の例としては、Ｂｃｒ−ＡＢＬ転座、Ｆｌｔ−３内部重複、およびＢｒａｆの変異、またはＥｒｂＢ２の過剰発現が挙げられる。

【0516】

よって、患者をアップレギュレーションに特徴的なマーカーを検出するための診断試験に供してもよい。診断なる語はスクリーニングも含む。本発明者らはマーカーなる語に、例えば、Ｂｒａｆ、ＢＣＲ−ａｂｌおよびＦｌｔ３またはの突然変異または影響を受けた他のクライアントタンパク質の変異を同定するためのＤＮＡ組成の指標をはじめとする遺伝マーカーも含む。マーカーなる語はまた、ＥｒｂＢ２などのタンパク質を含み、前記タンパク質またはいくらかのフラグメントまたは分解産物のレベルまたは濃度を含み、酵素に関しては酵素活性を含む。前記タンパク質のタンパク質（例えば、リン酸化されていても、されていなくても）レベルおよびｍＲＮＡレベルもまた活性の変化を特徴づけるために評価され得る。例えば、リン酸化ＡＫＴレベルはＨＳＰ９０阻害剤に対する感受性の指標となり得る。

【0517】

診断試験は典型的には、例えば、腫瘍生検サンプル、血液サンプル(脱落した腫瘍細胞の単離および濃縮)、糞便生検、痰、染色体分析、胸膜液、腹水、頬内からの塗抹標本、生検または尿から選ばれる生体サンプルに対して行なわれる。

【0518】

このスクリーニング方法は典型的には、直接配列決定、オリゴヌクレオチドまたはタンパク質マイクロアレイ分析、質量分析によるプロテオーム解析、免疫組織化学法、または特異抗体を用いた検出を含む。

【0519】

タンパク質の変異およびアップレギュレーションの同定および分析方法は、は当業者に周知である。スクリーニング方法としては、限定されるものではないが、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）またはｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションハイブリダイゼーション、または免疫ブロット法などの標準的な方法が挙げられる。

【0520】

ＲＴ−ＰＣＲによるスクリーニングでは、腫瘍におけるｍＲＮＡのレベルは、該ｍＲＮＡのｃＤＮＡコピーを作成した後、該ｃＤＮＡをＰＣＲにより増幅することにより評価する。ＰＣＲ増幅の方法、プライマーの選択、および増幅条件は当業者に公知である。核酸の操作およびＰＣＲは、例えば、オースベル（Ausubel, F. M.）ら（編者）、分子生物学における現在のプロトコル（Current Protocols in Molecular Biology）、２００４年、ジョンワイリー＆サンズ、またはイニス（Innis, M. A.）ら（編者）、ＰＣＲプロトコル：方法および応用の手引き（PCR Protocols:a guide to methods and applications）、１９９０年、アカデミックプレス（Academic Press）、サンディエゴ、に記載のような標準的な方法により行う。核酸技術に関する反応および操作はまた、サムブルック（Sambrook）ら、２００１年、第３版、モレキュラークローニング：レボラトリーマニュアル（Molecular Cloning: A Laboratory Manual）、コールドスプリングハーバーラボラトリー出版（Cold Spring Harbor Laboratory Press）に記載されている。あるいは、ＲＴ−ＰＣＲ用の市販キット（例えば、ロシュモレキュラーバイオケミカルズ（Roche Molecular Biochemicals）社）、または米国特許第４，６６６，８２８号；第４，６８３，２０２号；第４，８０１，５３１号；第５，１９２，６５９号；第５，２７２，０５７号；第５，８８２，８６４号および第６，２１８，５２９号に開示の方法が使用でき、これらは参照により本書に援用される。

【0521】

ｍＲＮＡの発現を評価するためのｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション技術の例として、蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）がある（アンゲラー（Angerer）、１９８７年、メソッズ・イン・エンザイモロジー（Meth. Enzymol）、１５２：６４９参照）。

【0522】

一般に、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションは以下の主要な工程を含む：（１）分析する組織の固定；（２）標的核酸の接近性を高めるためそして非特異的結合を軽減するためのサンプルのプレハイブリダイゼーション処理；（３）核酸混合物と生物学的構造または組織中の核酸とのハイブリダイゼーション；（４）ハイブリダイゼーションにおいて結合しなかった核酸断片を除去するためのハイブリダイゼーション後の洗浄；および（５）ハイブリダイズした核酸断片の検出。このような用途に用いるプローブは典型的には、例えば、放射性同位元素または蛍光リポーターで標識される。好ましいプローブは、ストリンジェント条件下で標的核酸との特異的ハイブリダイゼーションを可能とするに十分な長さ、例えば、約５０、１００、または２００ヌクレオチド〜約１０００以上のヌクレオチドである。また、白血病細胞集団でＦｌｔ３およびＢｃｒ−Ａｂｌ転座を検出するために使用できる染色体再配列の細胞遺伝学的検出用の市販のＦＩＳＨプローブも存在する。ＦＩＳＨを行うための標準的な方法は、オースベル（Ausubel, F. M.）ら（編者）、分子生物学における現在のプロトコル（Current Protocols in Molecular Biology）、２００４年、ジョンワイリー＆サンズ、およびバートレット（John M. S. Bartlett）による、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにおける蛍光：癌の分子診断、方法およびプロトコルにおける技術的概観（Fluorescence In Situ Hybridization: Technical Overview in Molecular Diagnosis of Cancer，Methods and Protocols、第２版；ＩＳＢＮ：１−５９２５９−７６０−２；２００４年３月、０７７−０８８ページ；シリーズ：分子医学における方法（Series: Methods in Molecular Medicine）に記載されている。

【0523】

遺伝子発現プロファイリング法は、デプリモ（DePrimo）ら、ＢＭＣキャンサー、２００３年、３：３に記載されている。要するに、このプロトコルは次の通りである：第一鎖ｃＤＮＡ合成を誘導するための（ｄＴ）２４オリゴマーを用い、全ＲＮＡから二本鎖ｃＤＮＡを合成した後、ランダムヘキサマープライマーを用い、第二鎖ｃＤＮＡを合成する。この二本鎖ｃＤＮＡを、ビオチン化リボヌクレオチドを用いるｃＲＮＡのin vitro転写の鋳型として用いる。アフィメトリクス（Affymetrix）(サンタクララ、カリフォルニア州、米国）が記載しているプロトコルに従い、ｃＲＮＡを化学的にフラグメント化した後、ヒトゲノムアレイ上で一晩ハイブリダイズさせる。

【0524】

あるいは、ｍＲＮＡから発現されたタンパク質産物を、腫瘍サンプルの免疫組織化学、マイクロタイタープレートを用いる固相イムノアッセイ、ウエスタンブロット、二次元ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリーおよび特定のタンパク質を検出するための当技術分野で公知の他の方法により評価することができる。検出方法には、部位特異的抗体の使用が含まれる。当業者であれば、ＢＣＲ−ＡＢＬ転座の指標となる「フィラデルフィア染色体」を検出するためのこのような周知の技術を認識しているであろう。

【0525】

したがって、これらの技術はいずれも、本発明の化合物による治療に特に適した腫瘍を同定するために使用することができる。

【実施例】

【0526】

以下の実施例に記載される具体的実施形態を参照して本発明を説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

【0527】

実施例において、次の略語を用いる場合がある。

【0528】

ＡｃＯＨ 酢酸
ＢＯＣ ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
Ｂｎ ベンジル
ＣＤＩ １，１−カルボニルジイミダゾール
ＤＭＡＷ９０ 溶媒混合物：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、ＡｃＯＨ、Ｈ_２Ｏ（９０：１８：３：２）
ＤＭＡＷ１２０ 溶媒混合物：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、ＡｃＯＨ、Ｈ_２Ｏ（１２０：１８：３：２）
ＤＭＡＷ２４０ 溶媒混合物：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、ＡｃＯＨ、Ｈ_２Ｏ（２４０：２０：３：２）
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＥＤＣ １−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド
Ｅｔ_３Ｎ トリエチルアミン
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
Ｅｔ_２Ｏ ジエチルエーテル
ｈ 時間
ＨＯＡｔ １−ヒドロキシアザベンゾトリアゾール
ＨＯＢｔ １−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＭｅＣＮ アセトニトリル
ＭｅＯＨ メタノール
ｍｉｎ． 分
Ｍｓ メシル
ＭｓＯ メチレート
Ｐ．Ｅ． 石油エーテル
ＰＧ 保護基
ｒ．ｔ． 室温
ＳｉＯ_２ シリカ
ＴＢＴＵ Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムテトラフルオロボレート
ＴＨＦ テトラヒドロフラン

【0529】

プロトン磁気共鳴（^１Ｈ ＮＭＲ）スペクトルは特に断らない限り、４００．１３ＭＨｚで、ＤＭＳＯ−ｄ_６またはＭｅＯＨ−ｄ_４（示されている通り）中、２７℃で作動するＢｒｕｋｅｒ ＡＶ４００機器に記録され、次のように報告される：化学シフトδ／ｐｐｍ（陽子数、多重度：ｓ＝シングレット、ｄ＝ダブレット、ｔ＝トリプレット、ｑ＝カルテット、ｍ＝マルチプレット、ｂｒ＝ブロード）。残存するプロトン性溶媒を内部標準として使用した。

【0530】

実施例では、調製した化合物を、以下に示すシステムおよび操作条件を用いて液体クロマトグラフィーおよび質量分析により特性決定した。種々の同位体を有する原子が存在し単一の質量で示される場合には、その化合物に関して表示されている質量はモノアイソトピック質量である（すなわち、^３５Ｃｌ；^７９Ｂｒなど）。以下に記載するように種々のシステムを用い、これらシステムは極めて類似した操作条件を備え、極めて類似した操作条件下で実施されるように設定を行った。使用した操作条件は以下にも記載する。

【0531】

システムの説明：
システム１（分析システム）：
ＨＰＬＣシステム：Ｗａｔｅｒｓ ２７９５
質量検出器：Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ Ｐｌａｔｆｏｒｍ ＬＣ
ＰＤＡ検出器： Ｗａｔｅｒｓ ２９９６ ＰＤＡ

【0532】

システム２（分取および分析システム）：
ＨＰＬＣシステム：Ｗａｔｅｒｓ Ｆｒａｃｔｉｏｎｌｙｎｘシステム
質量検出器：Ｗａｔｅｒｓ ＺＱ
ＰＤＡ検出器：Ｗａｔｅｒｓ ２９９６ ＰＤＡ

【0533】

システム３（分取および分析システム）：
ＨＰＬＣシステム：Ａｇｉｌｅｎｔ １１００システム
質量検出器：ＬＣ／ＭＳＤ
ＵＶ検出器：Ａｇｉｌｅｎｔ ＭＷＤ

【0534】

操作条件：
酸性分析条件：
溶出剤Ａ：Ｈ_２Ｏ（０．１％ギ酸）
溶出剤Ｂ：ＣＨ_３ＣＮ（０．１％ギ酸）
勾配：３．５分間で５〜９５％溶出剤Ｂ（１５分ｗ／カラム２）
流速：０．８ｍｌ／分
カラム１：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ ４μ ＭＡＸ−ＲＰ ８０Ａ、２．０×５０ｍｍ
カラム２：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ ４μ ＭＡＸ−ＲＰ ８０Ａ、２．０×１５０ｍｍ

【0535】

塩基性分析条件：
溶出剤Ａ：Ｈ_２Ｏ（１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３バッファー、ＮＨ_４ＯＨでｐＨ＝９．２に調整）
溶出剤Ｂ：ＣＨ_３ＣＮ
勾配：３．５分間で５〜９５％溶出剤Ｂ
流速：０．８ｍｌ／分
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ ５μ ２．０×５０ｍｍ

【0536】

ＭＳ条件（Ｗａｔｅｒｓシステム）：
キャピラリー電圧：３．６ｋＶ（ＥＳネガティブでは３．４０ｋＶ）
コーン電圧：２５Ｖ
ソース温度：１２０℃
走査範囲：１２５〜８００ａｍｕ
イオン化モード：エレクトロスプレーポジティブ、ネガティブまたはポジティブ・ネガティブ

【0537】

ＭＳ条件（Ａｇｉｌｅｎｔシステム）：
キャピラリー電圧：４０００Ｖ（ＥＳネガティブでは３５００Ｖ）
フラグメンター／ゲイン：１５０／１
乾燥ガス温度／流速：３５０℃／１３．０Ｌ／分^−１
噴霧圧：５０ｐｓｉｇ
走査範囲：１２５〜８００ａｍｕ
イオン化モード：エレクトロスプレーポジティブまたはネガティブ

【0538】

各実施例の出発材料は特に断りのない限り市販されている。

【0539】

（実施例１）
工程１
４−アセトキシ−２−ヒドロキシ−安息香酸メチルエステル

【化23】

トルエン０．２Ｌに、レゾルシノールメチルエステル（５０ｇ、０．２９８ｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（０．２７ｇ、０．００２２ｍｏｌ、０．７４ｍｏｌ％）を加え、次いで無水酢酸（３０ｍｌ、０．３１８ｍｏｌ）を加えた。この溶液を５０℃まで２時間加熱した。溶媒を５０℃で小容量になるまで蒸発させて除去し、残渣をトルエンと１回共沸させた。まだ温かいうちに残油に直ちにトルエン（１００ｍｌ）を加え、溶液をさらなる精製を行わずに工程２に用いた。

【0540】

工程２
５−アセチル−２，４−ジヒドロキシ−安息香酸メチルエステル

【化24】

Ｎ_２下、工程１からのトルエン溶液を氷浴にて冷却し、トリフルオロメタンスルホン酸（２６ｍｌ）を３０分間かけてゆっくりと加えた。撹拌したしたところ、白色の微細固体が形成され、これを撹拌しながら室温で１６時間溶解させて、黄色溶液を得た。この溶液に塩化アセチル（２ｍｌ）を加え、溶液を室温でさらに１時間撹拌した。この溶液を、ＥｔＯＡｃ（６００ｍｌ）と水（４００ｍｌ）に溶解したＮａＯＡｃ．３Ｈ_２Ｏ（４０ｇ）との撹拌冷却（０^ｏＣ）溶液にカニューレを用いて導入した。有機相を水（２回、２００ｍｌ）および飽和塩水で洗浄し、乾燥させずに小容量になるまで蒸発させた。残渣をヘプタンと共沸させ（２回、１００ｍｌ）、ヘプタン（１００ｍｌ）を加え、結晶性固体を濾去し、焼結体上でヘプタンでよく洗浄し、乾燥させて４９．５ｇ（７９％）を得た。

【0541】

合わせたバッチの最終精製
合わせた固形物のバッチ（９６．３ｇ）を１０％ＩＰＡ／ヘプタン（２５０ｍｌ）で沸騰するまで加熱した後、室温そして最終的には０^ｏＣまで冷却し、濾過し、残渣を７２時間乾燥させて（油ポンプ）、高速液体クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーおよびＮＭＲによれば純粋なものを得た（８８．０４ｇ、９１．５％）。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）１２．５８（１Ｈ，ｓ），１１．２２（１Ｈ，ｓ），８．３３（１Ｈ，ｓ），６．４５（１Ｈ，ｓ），３．９０（３Ｈ，ｓ），２．６２（３Ｈ，ｓ）．

【0542】

工程３
５−アセチル−２，４−ジヒドロキシ−安息香酸メチルエステル（別の手順）

【化25】

レゾルシノールメチルエステル（５０ｇ、０．２９８ｍｏｌ）およびアンバーリスト（Amberlyst）１５樹脂（４０ｇ）をトルエン１５０ｍｌ中に（窒素雰囲気下で）懸濁させ、溶液を油浴にて７０^ｏＣ（内部温度５６^ｏＣ）で加熱した。塩化アセチル（２２ｍｌ、３０８ｍｍｏｌ）を５ｍｌずつ３０分間かけて加え、気体ＨＣｌを発生させた（これをＮａＯＨ水溶液に窒素気流を通過させることで除去した）。この溶液を７０^ｏＣで４．５時間撹拌した後、油浴温度（内部温度９６^ｏＣ）で３．５時間加熱した。溶液を５０^ｏＣまで冷却し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）を加え、この溶液をこの温度で濾過した。残留樹脂をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で洗浄し、合わせた濾液を結晶性固体（固体と溶媒との総重量１２８ｇ）のスラリーなるまで濃縮した。このスラリーにヘプタン（１００ｍｌ）を加え、室温で１０分経過後、固体を濾去した。残渣をヘプタン：トルエン（２：１、６０ｍｌ）、次いでｂｐ４０〜６０^ｏＣの石油エーテルで洗浄し、真空乾燥させ、収穫物１ ２９ｇ（４６．４％）を得た（ＮＭＲは、メチルエステルの鹸化から得られた物質（３％）を示した）。

【0543】

濾液を小容量まで蒸発させ、ヘプタン（１００ｍｌ）中の２０％ＥｔＯＡｃを加えた。室温で１６時間放置した後、４．７５ｇ（７．６％）の第２の収穫物を得た（収穫物１と同一のＮＭＲ）。

【0544】

工程４
５−アセチル−２，４−ビス−ベンジルオキシ−安息香酸メチルエステル

【化26】

アセトニトリル（８００ｍｌ）中の５−アセチル−２，４−ジヒドロキシ安息香酸メチル（６０．７ｇ、０．２９ｍｏｌ）および無水炭酸カリウム（８７．８ｇ、０．６４ｍｏｌ）の撹拌混合物に臭化ベンジル（７０ｍｌ、０．５９ｍｏｌ）を加え、この混合物を撹拌し、還流下で１６時間保持した。室温まで冷却したところでこの混合物を水（３Ｌ）に注ぎ、２時間激しく撹拌した。固体を濾取し、水（２Ｌ）ですすぎ、減圧下で吸引乾燥させ、真空炉にて一晩６０℃で一定質量になるまで乾燥させて、５−アセチル−２，４−ビス−ベンジルオキシ安息香酸メチル（１１２．１ｇ、９９％）をクリーム色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）８．２１（１Ｈ，ｓ），７．５５（４Ｈ，ｍ），７．４３（４Ｈ，ｍ），７．３７（２Ｈ，ｍ），７．０４（１Ｈ，ｓ），５．３８（４Ｈ，ｓ），３．７９（３Ｈ，ｓ），２．４８（３Ｈ，ｓ）．ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋３９１．

【0545】

工程５
２，４−ビス−ベンジルオキシ−５−イソプロペニル−安息香酸メチルエステル

【化27】

無水テトラヒドロフラン（１Ｌ）中の臭化メチルトリフェニルホスホニウム（９２．８ｇ、０．２６ｍｏｌ）の撹拌懸濁液にカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（２９．１ｇ、０．２６ｍｏｌ）を加え、この混合物を室温で１０分間撹拌し、５−アセチル−２，４−ビス−ベンジルオキシ安息香酸メチル（７８．０ｇ、０．２ｍｏｌ）を加え、この混合物を室温でさらに３０分間撹拌した。メタノール（１００ｍｌ）を加えて過剰のリンイリドをクエンチさせ、溶媒を真空下で除去して橙色油状物を得、これを放置すると結晶化した。残渣をメタノール（３３０ｍｌ）から再結晶化させた。固体を吸引濾過により採取し，メタノール（５０ｍｌ）で洗浄し、減圧下で吸引乾燥させて２，４−ビス−ベンジルオキシ−５−イソプロペニル−安息香酸メチルを淡黄色の針状物として得た。一晩放置したところ母液から物質の第２の収穫物（合わせた収率：５６．５５ｇ、７３％）が析出した。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．５９（１Ｈ，ｓ），７．５２（２Ｈ，ｄ），７．６４−７．３２（８Ｈ，ｍ），６．９７（１Ｈ，ｓ），５．２８（２Ｈ，ｓ），５．２２（２Ｈ，ｓ），５．０９（１Ｈ，ｓ），５．０４（１Ｈ，ｓ），３．７６（３Ｈ，ｓ），２．０２（３Ｈ，ｓ）．ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋３８９．
エステルのさらなる収穫物は以下のようにして得られた。結晶化残渣を真空下で蒸発乾固し、油状固体をヘプタン（２５０ｍｌ）中の５％酢酸エチルで処理した。激しく撹拌した混合物に、残渣から大量の固体のトリフェニルホスフィンオキシドが析出するまで酢酸エチルを少量ずつ加えた。固体を濾去し、濾液を真空下で蒸発乾固して橙色油状物を得た。メタノールからの再結晶化（上述のとおり）により、さらなる２，４−ビス−ベンジルオキシ−５−イソプロペニル−安息香酸メチルを淡黄色の結晶性固体として得た（全収率８５〜９０％）。

【0546】

工程６
２，４−ビス−ベンジルオキシ−５−イソプロペニル−安息香酸

【化28】

メタノール（７５０ｍｌ）および水（２５０ｍｌ）中の２，４−ビス−ベンジルオキシ−５−イソプロペニル−安息香酸メチル（６１．０ｇ、０．１６ｍｏｌ）の撹拌懸濁液に水酸化カリウム（１０．９６ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を撹拌し、還流下で１６時間保持した。冷却したところで有機溶媒を真空下で除去し、２Ｍ塩酸（２００ｍｌ）を加えることで混合物をｐＨ２以下に酸性化した。この混合物を水（２Ｌ）で希釈し、酢酸エチル（２Ｌ）で抽出し，有機層を分離し、溶媒を真空下で除去して２，４−ビス−ベンジルオキシ−５−イソプロペニル−安息香酸（５８．８ｇ、１００％）を無色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．５２（２Ｈ，ｄ），７．４７−７．２９（９Ｈ，ｍ），６．８２（１Ｈ，ｓ），５．２０（２Ｈ，ｓ），５．１７（２Ｈ，ｓ），５．０６（１Ｈ，ｓ），５．０４（１Ｈ，ｓ），２．０３（３Ｈ，ｓ）．ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋３７５．

【0547】

工程７
ジ−プロプ−２−イニル−カルバミン酸ベンジルエステル

【化29】

ＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）および１０％Ｋ_２ＣＯ_３水溶液（７００ｍｌ、５０７ｍｍｏｌ）中のジプロパルギルアミン（４６．７ｇ、５０２ｍｍｏｌ）の冷却（０^ｏＣ）溶液に、ＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）中のＮ−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）スクシンイミド（１２５ｇ、５０２ｍｍｏｌ）の溶液を２０分間かけてゆっくりと加えた。この溶液を０℃で２時間、次いで室温で１６時間撹拌した。相を分離し、有機相を１０％Ｋ_２ＣＯ_３水溶液（７００ｍｌ、５０７ｍｍｏｌ）、次いで飽和塩水（５００ｍｌ）で洗浄し、ＥｔＯＡｃで１０００ｍｌに希釈して０．５Ｍ溶液を得た。

【0548】

工程８
５−ヒドロキシメチル−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸ベンジルエステル

【化30】

トルエン（１２０ｍｌ）中のプロパルギルアルコール（２６．４ｍｌ、４２４ｍｍｏｌ）溶液を脱気した。上記０．５Ｍジイン（diyne）溶液（４４０ｍｌ、２２０ｍｍｏｌ）を蒸発させ、残渣をトルエン（８０ｍｌ）に溶解させた。この保護ジイン溶液およびウィルキンソン触媒（２．２６ｇ、２．４４ｍｍｏｌ、１．１１％）を、温度が５０〜１００^ｏＣに保たれるように内部温度をモニタリングしながら１４等分に分けて２時間かけて加えた。この溶液を３０分間かけて５０℃まで冷却し、溶液を蒸発させた（過剰のプロパルギルアルコールを除去した）。残渣をトルエン（５００ｍｌ）および木炭（Ｄａｒｃｏ４〜１２メッシュ、２０ｇ）を用いて１００℃で３０分間加熱した後、セライトベッドで高温濾過し、褐色溶液を蒸発させた。残渣を８０℃のＥｔＯＡｃ（４００ｍｌ）に溶解させ、シリカゲル（クロマトグラフィーグレード、６５ｇ）を加え、加熱を２０分間続けた。この溶液を熱いうちに濾過した後、蒸発させ（シード添加しながら）、淡褐色の固体を得た。１０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（ｖ／ｖ、１００ｍｌ）を加え、固体を濾去した。固体を焼結体上でヘプタン（１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（５０℃、油ポンプ、１６時間）、５９．０ｇ（９５％）の標題化合物を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｍｅ−ｄ３−ＯＤ）：７．５１−７．１６（ｍ，８Ｈ），５．２１（ｓ，２Ｈ），４．７４（ｓ，２Ｈ），４．７０（ｓ，２Ｈ），４．６１（ｓ，２Ｈ）．

【0549】

工程９
５−メタンスルフォニルオキシメチル−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸ベンジルエステル

【化31】

ＴＨＦ（４７０ｍｌ）およびＥｔＯＡｃ（７７０ｍｌ）中の５−ヒドロキシメチル−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸ベンジルエステル（６５．７５ｇ、０．２３２ｍｏｌ）の溶液にＥｔ_３Ｎ（３９ｍｌ、０．２８ｍｏｌ）を加えた。この溶液を氷浴にて冷却し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）に溶解した塩化メタンスルホニル（１９ｍｌ、０．２４５ｍｏｌ）の溶液を加えた（内部温度＜１２℃となるようにした）。氷浴にて２時間撹拌した後、塩化メタンスルホニル（１．９ｍｌ、０．９５ｍｌ）およびＥｔ_３Ｎ（３．９ｍｌ）をさらに加えた（１時間のさらなる撹拌後に出発物質が残存しない（薄層クロマトグラフィーにより）ようにした）。ＮａＨＣＯ_３（５５０ｍｌ）を加え、溶液を２０分間撹拌した後、飽和塩水（２００ｍｌ）を加え、相を分離した。有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、シード添加しながら蒸発させて湿った固体を得、これを完全乾燥させずに次の工程で用いた。

【0550】

工程１０
５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸ベンジルエステル二塩酸塩

【化32】

工程９からの固体（０．２３２ｍｏｌとして）をアセトン（７００ｍｌ）に溶解させ、この溶液をアセトン（３３０ｍｌ）中のＫ_２ＣＯ_３（４８ｇ）およびＮ−メチルピペラジン（５０ｍｌ、０．４５ｍｏｌ）の冷却（内部温度１５〜１７℃）懸濁液に４５分間かけて加えた。この懸濁液を１５℃で３時間撹拌し（薄層クロマトグラフィーによる出発物質の完全除去）、溶液を小容量まで蒸発させ、残渣をＥｔＯＡｃ（１０００ｍｌ）および水（５００ｍｌ）と飽和塩水（５０ｍｌ）との混合物で分液した。有機相を水（５００ｍｌ）と飽和塩水（１５０ｍｌ）との混合物で洗浄し、最後に飽和塩水（３００ｍｌ）で洗浄した。この溶液を乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、この溶液にＭｅＯＨ（４３０ｍｌ、０．４３ｍｏｌ）中の１ＭのＨＣｌを加えた。懸濁液を冷却し（０^ｏＣで３０分間）、固体を濾去し、これを焼結体上でＥｔＯＡｃ次いでヘプタンで洗浄した後、固体を乾燥させ（油ポンプ、室温７２時間）、６６．３４ｇ（６５％）の標題化合物の収穫物１を無色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｍｅ−ｄ３−ＯＤ）：７．６４−７．５１（ｍ，２Ｈ），７．５１−７．２９（ｍ，６Ｈ），５．２３（ｓ，２Ｈ），４．７９（ｄｄ，Ｊ＝１６．２，６．１Ｈｚ，４Ｈ），４．４９（ｓ，２Ｈ），３．６６（ｓ，８Ｈ），３．０３（ｓ，３Ｈ）．

【0551】

別の工程１０Ａ
５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸ベンジルエステル二塩酸塩

【化33】

工程１０Ａを別の経路として用いて上記工程９および１０に代えることができる。

【0552】

ＤＣＭ（１００ｍｌ）中の二酸化マンガン（１５．５ｇ、１７８ｍｍｏｌ）懸濁液に５−ヒドロキシメチル−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸ベンジルエステル（３．３５ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）を加え、室温で６時間撹拌した後、二酸化マンガン（５ｇ、５７ｍｍｏｌ）をさらに加えた。さらに室温で１時間撹拌した後、セライト（７ｇ）を加え、溶液をセライト（商標）ベッドで濾過し、澄んだ淡黄色溶液を得た。セライト（登録商標）をＤＣＭで洗浄し、合わせた有機溶液の容量を蒸発により１００ｍｌに調整した。Ｎ−メチルピペラジン（１．３１ｍｌ、１１．８ｍｍｏｌ）および酢酸（０．６８ｍｌ）、次いでトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（４．９８ｇ、２３．５ｍｍｏｌ）を加えた。黄色溶液を１６時間撹拌し、無色の溶液を得た。この溶液に２ＭのＨＣｌ（１０ｍｌ、２０ｍｍｏｌ）を加えると沸騰した。３０分後、水（１０ｍｌ）およびＫ_２ＣＯ_３（５．５ｇ、３９．８ｍｍｏｌ）を加え、有機相を乾燥させた（Ｎａ_２ＳＯ_４）。濾過後、ジオキサン（６ｍｌ）中の４ＭのＨＣｌを撹拌しながら加え、懸濁液を蒸発乾固した。残渣を温めながらＭｅＯＨに溶解させ、蒸発後、固体を焼結体上でＥｔＯＡｃ次いで石油（ｂｐ４０〜６０^ｏＣ）で洗浄した後、５０^ｏＣで真空乾燥させて３．６１ｇ（７０％）の標題化合物を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｍｅ−ｄ３−ＯＤ）：７．６５−７．５１（２Ｈ，ｍ），７．５１−７．２７（６Ｈ，ｍ），５．２３（２Ｈ，ｓ），４．８３−４．６９（４Ｈ，ｍ），４．４９（２Ｈ，ｓ），３．６６（８Ｈ，ｄ），３．０３（３Ｈ，ｓ）

【0553】

工程１１
５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール

【化34】

５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸ベンジルエステル二塩酸塩（工程１０、５９．８ｇ、１３６．７ｍｍｏｌ）にＥｔＯＡｃ（４００ｍｌ）および１０％Ｋ_２ＣＯ_３水溶液（４００ｍｌ）を加えた。有機相を飽和塩水（２００ｍｌ）で洗浄した後、乾燥させた（ＭｇＳＯ_４）。この溶液を濾過し、蒸発させて油状物とした（これを石油エーテル（ｂｐ４０〜６０^ｏＣ）とともに放置すると結晶化した）。この固体を真空乾燥させて無色の固体を得た。４８．８ｇ（１３３．５ｍｍｏｌ）。

【0554】

この固体の一部（２４．４ｇ、６６．８ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１７０ｍｌ）に溶解させ、溶液を窒素で脱気およびパージした後、１０％Ｐｄ／Ｃ（１．２２ｇ）を加え、この混合物を１気圧で２．５時間水素化した。溶液を濾過し、蒸発させ、残渣をトルエンと３０〜４０^ｏＣで２回共沸させた。残渣をＤＭＦ（９２ｍｌ）に溶解させ、溶液を直ちにＮ_２で脱気およびパージした。
（注：この段階での生成物は、空気の影響を受けやすく、酸素と接触すると暗く変色する。ＤＭＦ溶液を直ちに用いたが、Ｎ_２雰囲気下で脱気およびパージすることにより保存することができる）

【0555】

工程１２
（２，４−ビス−ベンジルオキシ−５−イソプロペニル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノン

【化35】

レゾルシン酸（工程６、２３．７ｇ、６３．４ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１０．２１ｇ、６６．７ｍｍｏｌ）の溶液をＤＭＦ（９２ｍｌ）に溶解させ、この溶液にＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（１２．８ｇ、６６．８ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を室温で４０分間撹拌し、この溶液を工程１１からのアミンの溶液（６６．８ｍｍｏｌ）にＤＭＦ（５ｍｌ）洗液とともに加えた。この溶液を脱気し、室温で１６時間撹拌した。この溶液に１０％Ｋ_２ＣＯ_３（５００ｍｌ）およびＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）を加え、有機相を１０％Ｋ_２ＣＯ_３（５００ｍｌ）、水（４×１００ｍｌ）および飽和塩水（２００ｍｌ）で順次洗浄した。この溶液を小容量になるまで蒸発させ、ヘプタン（２５０ｍｌ）中の２０％ＥｔＯＡｃを加え、０^ｏＣで保存した。生じた固体を濾去し、ヘプタンで２回洗浄し、真空乾燥させて３５．０５ｇ（９４．４％）の標題化合物を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｍｅ−ｄ３−ＯＤ）：７．４９−７．１０（ｍ，１４Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），５．１７（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，４Ｈ），５．０９（ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，２Ｈ），４．８８（ｓ，２Ｈ），４．６３（ｓ，２Ｈ），３．５４（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．５０（ｓ，７Ｈ），２．２８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ），２．１１（ｓ，３Ｈ）．

【0556】

工程１３
（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノン

【化36】

工程１２からの生成物（４．７ｇ）を１：１のＭｅＯＨ／水（９８ｍｌ）に溶解させ、Ｎ_２でパージした後、１０％Ｐｄ／ＣおよびＫ_２ＣＯ_３（２．３８ｇ、１７．２ｍｍｏｌ）を加え、懸濁液をＨ_２雰囲気下で１６時間水素化した。この溶液を濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣に２ＭのＨＣｌ水溶液（４０ｍｌ）を加え、溶液を１：１のＥｔＯＡｃ／石油（４０ｍｌ×２）で洗浄した後、ＮａＯＨを加えることでｐＨをｐＨ８．５に調整し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）を加えた。この溶液を６０℃まで加熱し、水相を除去した。高温の有機相を水（３０ｍｌ）で洗浄した後、小容量（約５ｍｌ）になるまで蒸発させ、シード添加しながら室温で１６時間放置した。この結晶性物質に、１：１のＥｔＯＡｃ／石油（１０ｍｌ）を加え、この混合物を濾過し、乾燥させて標題化合物を遊離塩基１．７６ｇとして得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｍｅ−ｄ３−ＯＤ）：７．２９（ｓ，３Ｈ），７．１９（ｓ，１Ｈ），６．３９（ｓ，１Ｈ），４．９１（ｓ，４Ｈ），３．５６（ｓ，２Ｈ），３．２８−３．１５（ｍ，１Ｈ），２．５３（ｓ，８Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），１．２３（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，７Ｈ）．

【0557】

任意の工程１４
（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの精製
いくつかの生成物のバッチにおいて、標題化合物（式中、Ｘ＝Ｈ）は、少量の不純物２，４−ジヒドロキシ−５−（２−ヒドロキシプロプ−２−イル）−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノン（式中、Ｘ＝ＯＨ）を含み得る。不純物は以下の方法によって除去することができる。

【化37】

トルエン（２０ｍｌ）中の不純物２−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピルベンゾイル）−５−（４−メチルピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロイソインドール（２．０５ｇ、５．０ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に無水酢酸（１．０４ｍｌ、１１．０ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を撹拌し、１００℃で１６時間保持した。室温まで冷却したところで溶媒を真空下で除去して褐色油状物を得、これをメタノール（２０ｍｌ）に溶解させた。濃塩酸（１ｍｌ）を加え、この混合物を撹拌し、還流下で５時間保持した。室温まで冷却したところで、有機溶媒および揮発性物質を真空下で除去し、残渣水溶液を水（２５ｍｌ）で希釈し、激しく撹拌しながら１０％炭酸カリウム水溶液を注意深く加えることでｐＨ８に塩基性化した。ヘプタン（５０ｍｌ）中の５０％酢酸エチルを加え、この混合物を室温で１６時間激しく撹拌した。固体物質を吸引濾過により採取し、ヘプタン（５０ｍｌ）中の５０％酢酸エチルですすぎ、減圧下で吸引乾燥し、真空炉にて５０℃で一晩乾燥させて２−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピルベンゾイル）−５−（４−メチルピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロイソインドール（１．８５ｇ、９０％）を灰白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）１０．０７（１Ｈ，ｂｒ ｓ），９．６０（１Ｈ，ｂｒ ｓ），７．２４（３Ｈ，ｍ），７．０６（１Ｈ，ｓ），６．４０（１Ｈ，ｓ），４．７６（４Ｈ，ｂｒ ｓ），３．４４（２Ｈ，ｓ），３．１０（１Ｈ，ｍ），２．３２（８Ｈ，ｍ），２．１４（３Ｈ，ｓ），１．１５（６Ｈ，ｄ）．ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋４１０．

【0558】

（実施例２）
（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンＬ−乳酸塩（形態ＦＬ１）
実施例１の生成物（１．２４ｇ、３．３０３ｍｍｏｌ）をエタノール（３ｍｌ）およびＥｔＯＡｃ（５ｍｌ）に懸濁させ、エタノール（３ｍｌ）に溶解したＬ−乳酸（０．２８５ｇ、３．１３ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。溶液を透明になるまで加熱し、濾過した。ＥｔＯＡｃ（５ｍｌ）を用いて洗浄し、濾過し、合わせた濾液を室温で２時間シード添加しながら撹拌した。形成された結晶性の塊を濾過により除去し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、５０℃で真空乾燥させ、標題化合物１．２９ｇを得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｍｅ−ｄ３−ＯＤ）：７．３０（ｓ、３Ｈ）、７．１８（ｓ、１Ｈ）、６．３９（ｓ、１Ｈ）、４．９１（ｓ、４Ｈ）、４．０８（ｑ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．７０−３．６３（ｍ、２Ｈ）、３．２８−３．１５（ｍ、１Ｈ）、３．０１（ｓ、４Ｈ）、２．６８（ｍ、７Ｈ）、１．３６（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、１．２３（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、６Ｈ）。

【0559】

実施例２Ａ
（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンＬ−乳酸塩
実施例２Ａでは、実施例１および２で説明した経路と本質的に同一の処理工程を含むが、より大きい規模の反応により適した処理条件を有する合成経路を説明する。

【0560】

工程１
４−アセトキシ−２−ヒドロキシ−安息香酸メチルエステル
トルエン（６６Ｌ）中のレゾルシノールメチルエステル（１６．５Ｋｇ、９８．１ｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（８９．１ｇ、０．７３ｍｏｌ、７．４ｍｏｌ％）の加熱溶液（５０^ｏＣ）に無水酢酸（９．９Ｌ、１０４．９ｍｏｌ）をゆっくりと（２時間かけて）加えた。この溶液をさらに１．５時間５０℃まで加熱し、その後、溶媒を５０℃で小容量になるまで蒸発させて除去し、残渣をトルエンと１回共沸させた。温かいうちに残油に直ちにトルエン（３３Ｌ）を加え、この溶液をさらなる精製をせずに工程２で用いた。

【0561】

工程２
５−アセチル−２，４−ジヒドロキシ−安息香酸メチルエステル
Ｎ_２下、工程１からのトルエン溶液を氷浴にて冷却し、トリフルオロメタンスルホン酸（９．４４Ｌ）を３時間かけてゆっくりと加えた。撹拌したところで微細な白色固体が形成され、これを室温まで温めながら２０時間かけて溶解させた後、室温で３７時間撹拌して黄色溶液を得た。この溶液に塩化アセチル（７２６ｍｌ）を加え、溶液を室温でさらに１時間撹拌した。この溶液をＥｔＯＡｃ（２１７．８Ｌ）と水（１４５Ｌ）に溶解したＮａＯＡｃ．３Ｈ_２Ｏ（１４．５２Ｋｇ）との撹拌冷却（０^ｏＣ）溶液にカニューレを用いて導入した。有機相を飽和塩水で洗浄し（２回、７２．６Ｌ）、５．５Ｋｇまで蒸発させた。トルエン：イソプロパノール（２：３）を加え、結晶性固体を濾去し、乾燥させて融点１２４〜１２６℃の１２．６Ｋｇ（二段階で６１％）を得た。

【0562】

工程３
５−アセチル−２，４−ビス−ベンジルオキシ−安息香酸メチルエステル
アセトニトリル（１８４．５Ｌ）中の臭化ベンジル（１６．１４Ｌ、１３６ｍｏｌ）および無水炭酸カリウム（２０．２５Ｋｇ、１４７．６ｍｏｌ）の撹拌溶液に５−アセチル−２，４−ジヒドロキシ安息香酸メチル（１４Ｋｇ、６６．６ｍｏｌ、工程２）を６つに分けて５時間かけて加えた。この混合物を撹拌し、還流下で２０時間保持し、室温まで冷却し、混合物を水（６８２Ｌ）の上に注ぎ、２時間激しく撹拌した。固体を遠心分離により採取し、減圧下で一晩真空炉にて６０℃で一定質量まで乾燥させ、５−アセチル−２，４−ビス−ベンジルオキシ安息香酸メチル（２３．５Ｋｇ、９７．３％）を融点１１４〜１１５℃のクリーム色の固体として得た。

【0563】

工程４
２，４−ビス−ベンジルオキシ−５−イソプロペニル−安息香酸メチルエステル
無水ＴＨＦ（６０Ｌ）中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド溶液（６．７２Ｋｇ、６０．１ｍｏｌ）を、１５℃の無水テトラヒドロフラン（２１３Ｌ）中の臭化メチルトリフェニルホスホニウム（２１．４３Ｋｇ、６０．１ｍｏｌ）および５−アセチル−２，４−ビス−ベンジルオキシ安息香酸メチル（２１．３Ｋｇ、５４．６ｍｏｌ、工程３）の撹拌懸濁液に３時間かけて加えた。この混合物を１５℃で７０分間撹拌し、６０分間かけて２０℃まで温めた。メタノール（２７．３Ｌ）を加えて過剰のリンイリドをクエンチさせ、溶媒を真空濃縮した後、ＥｔＯＡｃおよび水を加えた。有機相を活性炭で処理し、濾過し、小容量になるまで蒸発させた。残渣を沸騰ＭｅＯＨから結晶化させ、固体を吸引濾過により採取し、メタノールで洗浄し、減圧下で乾燥させて、１８．１Ｋｇ（８５％）の２，４−ビス−ベンジルオキシ−５−イソプロペニル−安息香酸メチルを融点９２〜９４℃の淡黄色針状物として得た（高速液体クロマトグラフィーによる純度９９．６％）。

【0564】

工程５
２，４−ビス−ベンジルオキシ−５−イソプロペニル−安息香酸
メタノール（１８．６Ｌ）および水（１２．４Ｌ）中の２，４−ビス−ベンジルオキシ−５−イソプロペニル−安息香酸メチル（３．１Ｋｇ、８ｍｏｌ、工程４）の撹拌懸濁液に水酸化カリウム（０．５２７Ｋｇ、９．４ｍｏｌ）を加え、この混合物を撹拌し、還流下で３時間保持した。メタノールを部分真空下で容器から除去し、残りの溶液にトルエン（６２Ｌ）を加えた。この溶液を４０℃まで加熱し、この混合物に濃縮ＨＣｌ（１．３６Ｌ）を加えた。この二相混合物を５０℃まで加熱し、相を分離する。有機相を５０℃の水（３１Ｌ）で洗浄し、有機相を減圧下で蒸発させて、２．８５１Ｋｇ（９５％収率）の２，４−ビス−ベンジルオキシ−５−イソプロペニル−安息香酸を無色の固体として得た。

【0565】

工程６
ジ−プロプ−２−イニル−カルバミン酸ベンジルエステル
水（１７．５Ｌ）およびトルエン（１２．５Ｌ）中のＫ_２ＣＯ_３（４Ｋｇ、２９．０ｍｏｌ）の冷却（５℃）溶液にジプロパルギルアミン（２．５０Ｋｇ、２６．８８ｍｏｌ）を加えた。クロロギ酸ベンジルオキシ（４．８Ｋｇ、２８．１４ｍｏｌ）をＴ＜１０℃となるような速度で加えた。この溶液を５℃で１０分間撹拌した後、室温まで温めた。水相を分離し、有機相を０．２ＭのＨＣｌ（１２．５Ｌ）、飽和ＮａＨＣＯ_３（１３．５Ｌ）および塩水（１７Ｌ）で洗浄し、得られた溶液を工程７で用いた（６．２３Ｋｇの含有量を示した、蒸発部分に基づいて１０２％）。

【0566】

工程７
５−ヒドロキシメチル−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸ベンジルエステル
トルエン（３２．４８Ｌ）中のプロパルギルアルコール溶液（２．１１Ｋｇ、３７．７ｍｏｌ）を脱気し、５５℃まで加熱した。トルエン中のジ−プロプ−２−イニル−カルバミン酸ベンジルエステル（４．０６Ｋｇ、１７．８６ｍｏｌ、工程６）の溶液およびウィルキンソン触媒（０．１６２Ｋｇ）を、温度＜６５℃となるように１０等分に分けて加えた（発熱は、次の添加が行われるまでに緩和させた）。次いで、この溶液を５５℃で１時間撹拌した後、２０℃まで冷却した。ＤＣＭ（８．１２Ｌ）を加え、混合物を小容量になるまで濃縮した。トルエン（８Ｌ）を加え、溶液を一定重量になるまで蒸発させて５．７２Ｋｇ（１１３％）の標題化合物を得た。

【0567】

工程８
５−メタンスルフォニルオキシメチル−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸ベンジルエステル
ＤＣＭ（５５Ｌ）中の５−ヒドロキシメチル−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸ベンジルエステル（１１Ｋｇ、３８．８ｍｏｌ、工程７）とＥｔ_３Ｎ（７．０４Ｌ、５０．６ｍｏｌ）との冷却溶液（５℃）に、内部温度＜１０℃となるように塩化メタンスルホニル（２．９７Ｌ、３８．４ｍｏｌ）を加えた。５℃で０．５時間撹拌した後、この溶液を以下の工程９で用いた。

【0568】

工程９
５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸ベンジルエステル二塩酸塩

【化38】

工程８からの固体（０．２３２ｍｏｌとする）をアセトン（７００ｍｌ）に溶解させ、この溶液をアセトン（３３０ｍｌ）中のＫ_２ＣＯ_３（４８ｇ）とＮ−メチルピペラジン（５０ｍｌ、０．４５ｍｏｌ）との冷却（内部温度１５〜１７℃）懸濁液に４５分間かけて加えた。この懸濁液を１５℃で３時間撹拌し（薄層クロマトグラフィーによる出発物質の完全除去）、溶液を小容量になるまで蒸発させ、残渣をＥｔＯＡｃ（１０００ｍｌ）および水（５００ｍｌ）と飽和塩水（５０ｍｌ）との混合物で分液した。有機相を水（５００ｍｌ）と飽和塩水（１５０ｍｌ）との混合物で洗浄し、最後に飽和塩水（３００ｍｌ）で洗浄した。この溶液を乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、この溶液にＭｅＯＨ（４３０ｍｌ、０．４３ｍｏｌ）中の１ＭのＨＣｌを加えた。この懸濁液を冷却し（０℃で３０分間）、固体を濾去し、これを焼結体上でＥｔＯＡｃ次いでヘプタンで洗浄し、固体を乾燥させ（油ポンプ、室温７２時間）、６６．３４ｇ（６５％）の標題化合物の収穫物１を無色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｍｅ−ｄ３−ＯＤ）：７．６４−７．５１（ｍ，２Ｈ），７．５１−７．２９（ｍ，６Ｈ），５．２３（ｓ，２Ｈ），４．７９（ｄｄ，Ｊ＝１６．２，６．１Ｈｚ，４Ｈ），４．４９（ｓ，２Ｈ），３．６６（ｓ，８Ｈ），３．０３（ｓ，３Ｈ）．

【0569】

工程９
５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸ベンジルエステル
ＤＣＭ（３３Ｌ）およびＮ−メチルピペラジン（２１．４５Ｌ、１９３．４ｍｏｌ）を２５℃で撹拌し、工程８からの溶液を温度が２０〜３０℃となるように最低３０分間かけて加えた。この溶液をさらに３０分間撹拌した後、水（５５Ｌ）を加え、有機相を水で洗浄した（２×５５Ｌ）。生成物を０．８ＭのＨＣｌ（６６Ｌ）中に抽出し、層を分離した。水相をＤＣＭ（５５Ｌ）で洗浄した後、２ＭのＮａＯＨでｐＨ１０〜１１に塩基性化し、生成物をＥｔＯＡｃ中に抽出した（２×５５Ｌ）。合わせた有機相を濾過して固体を除去し、蒸発させた後、トルエンと共沸させ、一定重量になるまで乾燥させて６．６３ｋｇ（４７％収率、高速液体クロマトグラフィーによる純度９８％）の標題化合物を得た。

【0570】

工程１０
５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール
ＥｔＯＨ（１３Ｌ）に溶解した５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸ベンジルエステル（工程９、１．３Ｋｇ、３．５５ｍｏｌ）の脱気溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（０．０６５Ｋｇ）を加えた。この混合物に３０℃で４時間またはＮＭＲによる反応終了まで水素を通過させた。次いで、この溶液をＮ_２雰囲気下で１時間撹拌した後、ＧＦ／Ｆフィルタに通して触媒を濾去し、次いで、キュノ（Ｃｕｎｏ）フィルタを通して濾過した。濾液を小容量になるまで蒸発させ、トルエン（３．９Ｌ）と共沸させ、一定重量になるまで乾燥させて標題化合物を赤色／黒色の油状固体（０．７８Ｋｇ）として得、これを必要となるまで窒素下で保存した。

【0571】

工程１１
（２，４−ビス−ベンジルオキシ−５−イソプロペニル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノン
２５℃のＤＭＦ（２１．２Ｌ）中の２，４−ビス−ベンジルオキシ−５−イソプロペニル−安息香酸（１０．５８Ｋｇ、２８．３ｍｏｌ、工程５）の溶液に１，１’−カルボニルジイミダゾール（４．８２Ｋｇ、２９．８ｍｏｌ）を加えた。２５℃で２０分後、ＤＭＦ（７．２Ｌ）中の５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール（７．２Ｋｇ、３１．１ｍｏｌ、工程１０）の溶液を３５℃未満の温度に維持し、この溶液を２５℃で最低１２時間撹拌した。生じた固体を濾去し、酢酸イソプロピルで洗浄し（２×２１．６Ｌ）、３５℃で一定重量になるまで乾燥させて、８．７Ｋｇ（７７％収率、高速液体クロマトグラフィーによる純度９７．５％）の標題化合物を得た。

【0572】

工程１２
（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノン
工程１１からの生成物（０．９Ｋｇ、１．５３ｍｏｌ）をイソプロパノール（６．８Ｌ）および水（１．０４Ｌ）に溶解させ、Ｎ_２でパージした後、１０％Ｐｄ／Ｃ（９０ｇ）およびＫ_２ＣＯ_３（０．２１２Ｋｇ、１．５３ｍｏｌ）を加え、懸濁液を圧力３バールのＨ_２下で６０〜７０分間水素化した。この溶液を水（０．５Ｌ）で洗浄し、濾過した。濾液にＨＣｌ水溶液（３０％塩酸、０．８５Ｋｇ（水５．４２Ｋｇで希釈））を加え、溶液を６０℃で真空濃縮した（１０Ｌのイソプロパノールを除去）。この溶液に水（０．４５Ｌ）を加え、濃縮を継続した（さらに１０Ｌのイソプロパノールが除去されるまで）。水相をＥｔＯＡｃ（４．６１Ｌ）で洗浄し、アセトニトリル（４．０６Ｌ）で希釈し、濃縮アンモニア溶液（０．３５Ｋｇ）を加えｐＨ７．５〜８．５に中和した。懸濁液を２．５時間撹拌した後、固体を濾去した。残渣をアセトニトリルで洗浄し（２×０．８Ｌ）、４０℃で一定重量に乾燥させて５８８ｇ（９４％収率）の標題化合物を得た。

【0573】

工程１３
（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンＬ−乳酸塩（形態ＦＬ１）
工程１２の生成物（６４６ｇ、１．５８ｍｏｌ）をエタノール（５．１７Ｌ）に溶解し、溶液を濾過した。エタノール（２．５９Ｌ）に溶解したＬ−乳酸（１４２ｇ、１．５８ｍｏｌ）の溶液を濾過し、濾過後の溶液（上記）に添加し、混合物をＥｔＯＡｃ（７．７５Ｌ）に添加した。懸濁液を室温で１２時間撹拌し、さらに２時間５℃まで冷却した。形成された固形物を濾過により除去し、ＥｔＯＡｃ（２×２．５８Ｌ）およびヘプタン（２×１．９４Ｌ）で洗浄し、一定の重量になるまで３５℃で乾燥させ、標題化合物（５８１ｇ、収率７４％）を得た。

【0574】

（実施例３）
（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンジヒドロクロリド塩（形態ＦＨ３）
実施例１の生成物（０．４９ｇ、１ｍｍｏｌ）をエタノール（１０ｍｌ）に溶解し、ジオキサン（０．５ｍｌ、２ｍｍｏｌ）中の４Ｍ ＨＣｌを暖めながら溶解し、溶液を蒸発乾固させた。残渣を暖めながらエタノール：水（９：１;５ｍｌ）に溶解した。溶液をシード添加しながら１６時間撹拌し、形成された固形物を濾過により除去し、真空乾燥させ、標題化合物を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｍｅ−ｄ３−ＯＤ）：７．６３−７．５２（ｍ、２Ｈ）、７．４７（ｓ、１Ｈ）、７．１７（ｓ、１Ｈ）、６．４０（ｓ、１Ｈ）、４．９６（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、４Ｈ）、４．４７（ｓ、２Ｈ）、３．８７−３．４０（ｍ、８Ｈ）、３．３０−３．１６（ｍ、１Ｈ）、３．０２（ｓ、３Ｈ）、１．２３（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、６Ｈ）。

【0575】

（実施例４）
（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの合成
４Ａ．２，４−ビス−ベンジルオキシ−５−イソプロペニル−Ｎ，Ｎ−ジ−プロプ−２−イニル−ベンズアミドの合成

【化39】

ジクロロメタン（１０ｍｌ）中の２，４−ビス−ベンジルオキシ−５−イソプロペニル−安息香酸（実施例１工程６）（１当量）の撹拌した溶液を、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（１．２当量）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１．２当量）、およびジプロパギルアミン（１．５当量）で順に処理し、混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を２Ｍ塩酸および２Ｍ水酸化ナトリウムで順に洗浄し、有機相を分離し、溶媒を真空除去し、純粋な形態で得られる、あるいはシリカカラムクロマトグラフィー（石油エーテル中の酢酸エチルまたは酢酸エチル中のメタノールの混合物で適宜溶出させる）で精製される生成物を得た。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋４５０

【0576】

４Ｂ．１−エチル−４−プロプ−２−イニル−ピペラジンの合成

【化40】

アセトン（２７ｍｌ）中の１−エチルピペラジン（２．３３ｇ、２０．２ｍｍｏｌ）およびＫ_２ＣＯ_３（２．７９ｇ、２０．２ｍｍｏｌ）に、臭化プロパルギル（２．００ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）を０℃でＮ_２下で滴下した。反応物を室温で一晩撹拌した。反応物を濾過し、塩を少量のアセトンで洗浄した。濾液を合わせ、蒸発させることにより緩やかに濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃに取り、水で洗浄した。水相をＥｔＯＡｃで再抽出し、合わせた有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。生成物を濾過し、蒸発乾固させ、残存する淡オレンジ色の油を得た。

【0577】

４Ｃ．（２，４−ビス−ベンジルオキシ−５−イソプロペニル−フェニル）−［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの合成

【化41】

標題化合物を、塩生成の代わりにカラムクロマトグラフィーを用いて精製を行ったこと以外は、実施例５Ｂの方法を用いて調製した。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋６０２。

【0578】

４Ｄ．（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの合成

【化42】

（２，４−ビス−ベンジルオキシ−５−イソプロペニル−フェニル）−［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンの水素添加を、後処理および精製手順を変更したこと以外は、実施例１の工程１３に記載の方法を用いて行った。すなわち、水素添加に続いて、触媒を濾過し、濾液を蒸発させた。水およびＥｔＯＡｃを生成物に添加し、水相を中和した。生成物をＥｔＯＡｃ（×３）で抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。生じた溶液を濾過し、蒸発乾固させ、残存する淡黄色の油分／固形物を得た。生成物をカラムクロマトグラフィー（勾配溶出：１００％ＤＣＭ〜ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）を用いて精製し、生成物を淡黄色の固形物として得た。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋４２４。

【0579】

（実施例５）
５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドールの別の合成
５Ａ．１−メチル−４−プロプ−２−イニル−ピペラジンの合成

【化43】

アセトン（３８０ｍｌ）中の１−メチルピペラジン（３７．７ｍｌ、３３７ｍｍｏｌ）およびＫ_２ＣＯ_３（４６．６ｇ、３３７ｍｍｏｌ）にアセトン（７０ｍｌ）中の臭化プロパルギル（２５ｍｌ、２２５ｍｍｏｌ、トルエン中８０％）を、Ｎ_２下、０°Ｃで滴下した。反応物の内部温度を＜１０°Ｃに維持した。反応物を室温で３時間撹拌した。反応物を濾過し、その塩を少量のアセトンで洗浄した（２回）。濾液を合わせ、蒸発させて濃縮した（静かに）。残渣に水を加え、生成物をＤＣＭで抽出した（３回）。合わせた有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。生成物を濾過し、蒸発乾固して１−メチル−４−プロプ−２−イニル−ピペラジンを黄色油状物として得た。

【0580】

５Ｂ．５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの合成

【化44】

ＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ）中のＮ−ｂｏｃ−ジプロパルギルアミン溶液（３６．３ｍｌ、２２６ｍｍｏｌ、純度８６％）を調製し、分液漏斗にてＮ_２を通気させることにより脱気した。別の分液漏斗にて予め脱気したＥｔＯＡｃ（１５ｍｌ）にトリス（トリフェニルホスフィン）ロジウム（Ｉ）クロリド（１．３９ｇ、１．５０ｍｍｏｌ、１ｍｏｌ％）を加えた。（注：ＣｐＲｕ（ＣＯＤ）Ｃｌ）を別の触媒として用いてもよい）。

【0581】

メインの反応フラスコにて、１−プロパルギル−４−メチルピペラジン（３２．３ｍｌ、１５０ｍｍｏｌ、純度９０％）をＥｔＯＡｃ（７５ｍｌ）で希釈し、混合物にＮ_２を通気することによって脱気した。この混合物を氷−水浴にて冷却した後、ＥｔＯＡｃ中のトリス（トリフェニルホスフィン）ロジウム（Ｉ）クロリド（１．３９ｇ、１ｍｏｌ％）を加えた。Ｎ−ｂｏｃ−ジプロパルギルアミン／ＥｔＯＡｃをゆっくりと加え、穏やかな発熱を生じさせた。内部温度は２５°Ｃまで上昇し、この温度を維持した。添加が約３分の１（約４５分）終了した後、発熱は次第に弱まった（Ｎ−ｂｏｃ−ジプロパルギルアミン／ＥｔＯＡｃをゆっくりと加え続けたにもかかわらず）。ＥｔＯＡｃ（１５ｍｌ、予め脱気）中のトリス（トリフェニルホスフィン）ロジウム（Ｉ）クロリド触媒（１．３９ｇ、１ｍｏｌ％）の別の分量を調製し、反応物に極めてゆっくりと加えた。数分の後、新たな発熱が開始し、３０℃まで進んだ。水浴に少量の氷をくわえることで反応物の温度をゆるやかに冷却した。一旦発熱が収まると、Ｎ−ｂｏｃ−ジプロパルギルアミン／ＥｔＯＡｃのゆっくりとした添加を続けた。添加は全体で２時間かけて行われた。その後、反応混合物を室温で一晩放置した後、ＥｔＯＡｃで希釈し、ＮＨ_４Ｃｌで洗浄し（２回）（水溶液、飽和）、過剰の１−プロパルギル−４−メチルピペラジンを除去した。混合物を少量の水で希釈してその塩を溶解させた。有機層を水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。生成物を濾過し、蒸発乾固すると褐色油状物が残った。

【0582】

得られた残油にｎ−ヘプタンを加えた。油／ヘプタンを赤色析出物が形成されるまで（約１０分間）放置した。この析出物を濾過し、新らたなｎ−ヘプタンで洗浄した（２回）。濾液を乾燥させ、生成物を赤色油状物として得た。

【0583】

この所望の生成物をトルエンスルホン酸（ＴｓＯＨ）塩を形成することによりさらに精製した。したがって、粗生成物をＭｅＯＨ（２０ｍｌ）に取り、ＴｓＯＨ．Ｈ_２Ｏ（ＮＭＲによる予測純度に対して１当量）を加えた。この溶液を蒸発乾固した後、トルエンに溶解させ（１回）、再蒸発させた。得られた生成物をエーテルに取った。数分後、析出物および溶液が生じた。析出物を濾過し、濾液が無色になるまでさらなるエーテルで洗浄した（２回）。黄色固体を乾燥させ、生成物をＴｓＯＨ塩として得た。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋３３２。

【0584】

５Ｃ．５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドールの合成

【化45】

トシル酸イソインドリンをＤＣＭ（０．３Ｍ）に取り、ＴＦＡ（１２当量）を０℃でゆっくりと加えた。反応物を室温で一晩撹拌した。反応物を蒸発乾固した後、トルエン／ＭｅＯＨとともに蒸発させ（３回）、生成物を酸付加塩の混合物として得た。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋２３２。

【0585】

実施例５Ｃの化合物は、実施例８０の方法の工程１２に用いることができる。

【0586】

（実施例６）
５−ヒドロキシメチル−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸ベンジルエステルの別の合成
６Ａ．２−ベンジル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸メチル

【化46】

無水テトラヒドロフラン（２５ｍｌ）中のベンジルアミン（３．２１ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフラン（５０ｍｌ）中の３，４−ビス−（ブロモメチル）安息香酸メチル（９．６６ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）（フルオロケム（Fluorochem）から入手）とトリエチルアミン（９ｍｌ、６４．７ｍｍｏｌ）との撹拌混合物に加え、得られた混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を真空下４０℃で除去し、残渣を酢酸エチル（１００ｍｌ）と水（１００ｍｌ）とで分液した。有機層をさらなる分量の水（１００ｍｌ）で洗浄し、分離し、溶媒を真空下４０℃で除去して、２−ベンジル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸メチルを淡橙色固体として得、これを以下に示すようにさらなる精製をせずに直ちに用いた。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．８２（２Ｈ，ｍ），７．４０−７．２５（６Ｈ，ｍ），３．９０（３Ｈ，ｓ），３．８８（２Ｈ，ｓ），３．８４（４Ｈ，ｓ）。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋２６８。

【0587】

６Ｂ．（２−ベンジル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−イル）−メタノール

【化47】

２−ベンジル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−カルボン酸メチル（上記からの）を無水テトラヒドロフラン（７５ｍｌ）に溶解させ、無水テトラヒドロフラン（７５ｍｌ）中の水素化アルミニウムリチウム（１．７１ｇ、４５．０ｍｍｏｌ）の急速に撹拌した懸濁液に１５分間かけて滴下した。この混合物を室温で２時間撹拌し、１Ｍ硫酸ナトリウム溶液（１２ｍｌ）をゆっくりと滴下することで過剰の水素化アルミニウムリチウムを無効化した。固体を濾去し、酢酸エチルですすぎ（２×５０ｍｌ）、吸引乾燥させた。溶媒を真空下で除去し、（２−ベンジル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−イル）−メタノール（７．１５ｇ、９９％）を黄褐色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．４０−７．３０（４Ｈ，ｍ），７．２８（１Ｈ，ｍ），７．１７−７．１０（３Ｈ，ｍ），５．１０（１Ｈ，ｔ），４．４７（２Ｈ，ｄ），３．８５（２Ｈ，ｓ），３．８２（２Ｈ，ｓ），３．８０（２Ｈ，ｓ）．ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋２４０．

【0588】

６Ｃ．（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−イル）−メタノール

【化48】

エタノール（６０ｍｌ）中の（２−ベンジル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−イル）−メタノール溶液（２．３９ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）に１０％パラジウム活性炭素（２００ｍｇ）を加え、得られた混合物をパー（Ｐａｒｒ）装置に入れ、５０℃まで加熱し、水素雰囲気下６０ｐｓｉで３０時間振盪した。室温まで冷却したところで混合物を重力下で濾過し，固体をエタノールですすぎ（２×１０ｍｌ）、溶媒を真空下で除去し、（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−イル）−メタノール（１．４９ｇ、１００％）を灰白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．２０（１Ｈ，ｓ），７．１８（１Ｈ，ｄ），７．１２（１Ｈ，ｄ），５．１０（１Ｈ，ｂｒ ｓ），４．４６（２Ｈ，ｓ），４．０５（４Ｈ，ｓ）．ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋１５０．

【0589】

６Ｄ．５−ヒドロキシメチル−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸ベンジルエステル

【化49】

無水テトラヒドロフラン（５０ｍｌ）中の（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−イル）−メタノール（１．３４ｇ、９．０ｍｍｏｌ）の混合物を静かに温めて溶解を促進し、室温まで冷却した。トリエチルアミン（１．５ｍｌ、１０．８ｍｍｏｌ）を加え、撹拌混合物をクロロギ酸ベンジル（１．３５ｍｌ、９．５ｍｍｏｌ）を滴下して処理し、室温で３時間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、残渣を酢酸エチル（３０ｍｌ）と２Ｍ塩酸（３０ｍｌ）とで分液した。有機層を水（３０ｍｌ）で洗浄し、分離し、溶媒を真空下で除去して桃色油状物を得、これを放置したところ固化した。固体をヘキサン（１０ｍｌ）中１０％酢酸エチルで析出させ、濾過し、ヘプタン（１０ｍｌ）ですすぎ、吸引乾燥させて標題化合物（２．５ｇ、９８％）を淡桃色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．４５−７．２１（８Ｈ，ｍ），５．２０（１Ｈ，ｔ），５．１７（２Ｈ，ｓ），４．７１（２Ｈ，ｂｒ ｓ），４．６４（２Ｈ，ｂｒ ｓ），４．５０（２Ｈ，ｄ）．ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋２８４．
標題化合物は、実施例１の工程９において用いることができる。

【0590】

生物学的活性
（実施例７）
等温滴定熱量測定
本発明の化合物の、ヒトＨｓｐ９０タンパク質と結合する能力は、等温滴定熱量測定法を用いて測定した。

【0591】

等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）実験は、ＶＰ−ＩＴＣ滴定熱量計（マイクロカル社（Microcal Inc.）、ノーザンプトン、マサチューセッツ州、米国）を用いて行った。ヒトＨｓｐ９０αＮ末端ドメインのクローニング、発現および精製は、出版済みの方法（ジェズ（Jez, J.M.）ら、ケミストリーアンドバイオロジー（Chem Biol.）、２００３年、４月；１０（４）：３６１−８）に従って行った。ヒトＨｓｐ９０αＮ末端ドメインと化合物との溶液は、２５ｍＭ Ｔｒｉｓ、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ ＴＣＥＰ、５％ＤＭＳＯ、ｐＨ７．４を含む緩衝液中で調製した。溶液は全て滴定を行う前に濾過し脱気した。リガンドの注入毎に生じるエンタルピーの変化は、熱量シグナルの積分によって得た。データはＯｒｉｇｉｎ７．０（マイクロカルソフトウェア社（Microcal Software Inc.）、ノーザンプトン、マサチューセッツ州）を用いて解析した。希釈液の熱を個々の各滴定の最終の注入を用いて予測し、データフィッティングの前に差し引いた。広範な親和性にわたって化合物解離定数（Ｋｄ）を得るために、種々のＩＴＣ試験形式を用いた。結合の弱い化合物には、低ｃ値ＩＴＣ法を用いた（ターンブル（Turnbull W.B.）およびダラナス（Daranas A.H.）、ジャーナル・オブ・アメリカンケミカルソサエティー（J. Am. Chem. Soc.）、２００３年１２月３日；１２５（４８）：１４８５９−６６）、この場合、タンパク質は熱量測定セル中に１０〜２０μＭで存在し、化合物濃度は注入シリンジ中で１〜２０ｍＭであった。この種の試験では、化学量論パラメーター（Ｎ）はデータフィッティングのため１で固定した。２０〜０．００４μＭ範囲におけるＫｄについて、結合部位濃度をＫｄ（ｃ値）で割ったものが５〜１０００の間となるように試験を構成した。これらの試験の大部分では、熱量測定セル中のタンパク質濃度は４〜１００μＭの範囲であり、注入シリンジ中のリガンド濃度は５０〜１５００μＭの範囲であった。まれではあるが化合物の溶解度が限定的である場合には、化合物溶液を熱量測定セルに入れ、ｃ値を５〜１０００の間に維持しつつ、注射シリンジからのタンパク質で滴定した。競合的ＩＴＣ試験を用い、シグルスキヨルド（Sigurskjold, B.W.）、アナリティカルバイオケミストリー（Anal Biochem.）、２０００年１月１５日；２７７（２）：２６０−６に記載の方法により、より弱い結合競合物の存在下で滴定を行うことにより、Ｋｄ＜４ｎＭにアクセスした。

【0592】

化合物（１）は、０．１マイクロモル未満のＫ_ｄ値を有する。

【0593】

（実施例８）
抗増殖活性
ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ１１６などの多くの細胞株における細胞増殖を阻害する化合物の能力を測定することにより、本発明の化合物の抗増殖活性を測定することができる。細胞増殖の阻害はアラマーブルー（Alamar Blue）アッセイ（ノシアリ（Nociari, M.M）、シャレフ（Shalev, A.）、ベナイアス（Benias, P.）、ルッソ（Russo, C.）、ジャーナル・オブ・イミュノロジカルメソッズ（Journal of Immunological Methods）１９９８年、２１３、１５７〜１６７）を用いて測定される。前記方法はレザズリンをその蛍光産物レゾルフィンへ還元する生細胞の能力に基づいている。各増殖アッセイにおいては、細胞を９６ウェルプレートに入れ、１６時間培養してから、さらに７２時間阻害剤化合物を加える。インキュベーションの終了時に１０％（ｖ／ｖ）アラマーブルー（Alamar Blue）を加え、さらに６時間インキュベートしてから、５３５ｎＭ ｅｘ／５９０ｎＭ ｅｍにより蛍光産物を調べる。非増殖細胞アッセイの場合には、細胞を９６時間集密状態で維持してから、さらに７２時間阻害剤化合物を加える。生細胞の数を前記のようにアラマーブルーアッセイで調べる。細胞株はＥＣＡＣＣ（ヨーロピアンコレクションオブセルカルチャー（European Collection of cell Cultures））から入手できる。

【0594】

化合物（１）は、ＨＣＴ１１６細胞株に対して０．１マイクロモル未満のＩＣ_５０値を有する。

【0595】

（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンＬ−乳酸塩の抗増殖活性は、オンコデザイン（Oncodesign）(ディジョン、フランス)により１００個の細胞株に対するアッセイ中で試験された。各細胞株に対するＩＣ_５０値は、下記表に記載され、表中の数字はナノモル濃度を表す。化合物は最大１００００ナノモルの濃度まで試験された。

【表1】

【0596】

結果は（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンＬ−乳酸塩が広範囲の異種細胞株に対して強力な抗増殖活性を有していることを実証する。

【0597】

医薬製剤
（実施例９）
（ｉ）錠剤製剤
式（１）または式（２）の化合物を含有する錠剤組成物は、化合物５０ｍｇと、希釈剤としてのラクトース（ＢＰ）１９７ｍｇと、滑沢剤としてのステアリン酸マグネシウム３ｍｇとを混合し、公知の方法で打錠することにより調製される。

【0598】

（ｉｉ）カプセル製剤
カプセル製剤は、式（１）または式（２）の化合物１００ｍｇとラクトース１００ｍｇとを混合し、得られた混合物を標準的な不透明硬ゼラチンカプセルに充填することにより調製される。

【0599】

（ｉｉｉ）注射用製剤Ｉ
注射投与用の非経口組成物は式（１）または式（２）の化合物（例えば、塩形態で）を、１０％プロピレングリコールを含有する水に溶解し、有効化合物濃度１．５重量％とすることにより調製することができる。この溶液は次に濾過除菌され、アンプルに充填および密閉される。

【0600】

（ｉｖ）注射用製剤ＩＩ
注射用の非経口組成物は、式（１）（例えば、塩形態で）または式（２）の化合物（２ｍｇ／ｍｌ）およびマンニトール（５０ｍｇ／ｍｌ）を水に溶解し、溶液を濾過滅菌し、密封可能な１ｍｌバイアルまたはアンプルに充填することにより調製される。

【0601】

（ｖ）注射用製剤ＩＩＩ
注射または点滴による静脈内送達用の製剤は、水に式（１）（例えば、塩形態で）または式（２）の化合物を２０ｍｇ／ｍｌで溶解することにより調製できる。次いで、バイアルは密封され、オートクレーブ処理により滅菌される。

【0602】

（ｖｉ）注射用製剤ＩＶ
注射または点滴による静脈内送達用の製剤は、緩衝剤（例えば、０．２Ｍ酢酸、ｐＨ４．６)を含有した水に式（１）（例えば、塩形態で）または式（２）の化合物を２０ｍｇ／ｍｌで溶解することにより調製できる。次いで、バイアルは密封され、オートクレーブ処理により滅菌される。

【0603】

（ｖｉｉ）皮下注射製剤
皮下投与用組成物は、式（１）または（２）の化合物を医薬級のコーン油と混合して濃度５ｍｇ／ｍｌとすることにより調製される。この組成物を滅菌し、適切な容器に充填する。

【0604】

（ｖｉｉｉ）凍結乾燥製剤
式（１）または式（２）の処方化合物のアリコートを５０ｍｌバイアルへ入れ凍結乾燥する。凍結乾燥の間、−４５℃でワンステップ凍結プロトコルを用いて組成物を凍結する。温度をアニーリングのために−１０℃に上げ、次いで低下させて−４５℃で凍結し、次いでほぼ３４００分かけて＋２５℃で一次乾燥させ、徐々に５０℃まで昇温して二次乾燥を行う。一次乾燥および二次乾燥中の圧力は８０ミリトルに設定する。

【0605】

（ｉｘ）２％局所用ゲル製剤
％ｗ／ｗ
化合物 ２．００
ヒドロキシプロピルメチルセルロース（Ｍｅｔｈｏｃｅｌ Ｆ４Ｍ）
２．５０
ポリエチレンオキシド（Ｐｏｌｙｏｘ ＷＳＲ−２０５） ０．２５
プロピレングリコール １０．００
メチルパラベン ０．１５
プロピルパラベン ０．０５
精製水 １００．００まで

【0606】

（実施例１０）
結晶構造研究
式（１）の化合物およびその塩は数多くの異なる結晶形態で存在する。これらは、以下に記載の方法を用いて同定され、特性決定される。

【0607】

一般的方法
単結晶回折方法論
φゴニオメーターを装着したＥＳＲＦ ＩＤ２３．１ビームラインからのシンクロトロン照射（λ＝０．７７５Å）およびＡＤＳＣクアンタム（Quantum）３１５ＣＣＤ検出器を用いて、結晶学的データを室温（２０℃）で収集した。一方は高放射線量であり他方は低放射線量である２つのφ走査（φ＝０〜１８０°およびΔφ＝１°）で画像を収集した。検出器と結晶との間の距離は１１０ｍｍであった。データ収集は、ＰｒｏＤＣソフトウェアで制御し、画像の処理や目盛付けはＤｔｒｅｋで行った。

【0608】

結晶構造は、ＳＨＥＬＸＳ−９７で実行される直接法を用いて解析され、ＳＨＥＬＸＬ−９７で精緻化された。水素原子は幾何学的見地で捉え、一方で、へテロ原子に結合した水素原子の位置はＦｏ−Ｆｃ差マップの調査により確認した。水素原子の位置パラメータおよび熱パラメータは対応する非水素原子上にあるものとした。非水素原子の熱運動は異方性温度要因によりモデル化した。

【0609】

粉体回折方法論
Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）データ収集用の試料を大理石乳鉢で静かに粉砕し、結晶解析用キャピラリー（ハンプトンリサーチ（Hampton Research）、石英またはガラスタイプ１０、０．４または０．７ｍｍ径）中へ投入した。回折パターンは、リガク（Rigaku）回転陽極ＲＵ３ＨＲからのＣｕＫα線（λ＝１．５４１８Å）、オスミックブルー（Osmic blue）共焦点光学機器、１／４ｃゴニオメーターおよびリガクＨＴＣイメージプレート検出器を使用して、室温で収集した。２５０ｍｍの検出器対結晶距離でφ軸を回転させながら、２Ｄ画像を収集した。データ収集はクリスタルクリア（CrystalClear）ソフトウェアにより制御し、２Ｄ画像はデータスクイーズ（Datasqueeze）により１Ｄプロット（２θ対強度）に変換した（０．０２°工程で２θ範囲３〜３０°にわたり方位角０＜χ＜３６０°で平均した強度）。自社のプログラムＡｓｔｅｘ ＸＲＰＤを１Ｄ ＸＲＰＤパターンの操作および視覚化に用いた。

【0610】

滴定実験による塩化学量の測定
塩に関係し、塩の化学量が与えられる以下の実施例において、化学量は以下の滴定方法を用いて求めた。

【0611】

１５０ｍＭのＫＣｌと２０ｍＭのＨＣｌとの溶液（ＫＣｌ／ＨＣｌ溶液）を、滴定実験のバッチ毎に新しく調製した。一定分量１ｍｌの溶液を滴定し、このように作成された電位差滴定曲線を対照曲線として用いた。全ての滴定は、メトラートレド（Mettler Toledo）ＭＰ２２０ｐＨ計測器を用いて、２５℃で２μｌ工程で３００ｍＭのＫＯＨを用いて行った。電極電位読取り値は、毎日のバッチ計測の前後に４つの標準緩衝剤で記録した。化合物（１）塩の試料（１〜３ｍｇ）を１ｍｌのＫＣｌ／ＨＣｌ溶液に溶解し、小型のマグネットスターラーを用いて激しく撹拌しながら滴定した。記録された電極電位を、４つの標準緩衝剤からの検量線を用いてｐＨ値へと変換した。試料および対照滴定データを処理して、ｐＨ範囲２〜１２のビヨラム（Bjerrum）プロットを作成した。ビヨラムプロットの計算および分析方法は、レビュー「物理化学的プロファイリング（溶解度、透磁率、帯電状態）（Physicochemical Profiling（Solubility, Permeability and Charge State））」、アブディーフ（A. Avdeef）、カレントトピックス・イン・メディカルケミストリー（Current Topics in Medicinal Chemistry）、２００１年、２７７〜３５１頁）に記載されている。

【0612】

化合物（１）塩の化学量は、開始ｎＨ（ｐＨ＝２でのプロトン数）より推論される（すなわち、遊離塩基は−２のプロトンで開始し、単塩は−１のプロトンで開始し（化合物（１）^＋酸⁻）、一方、複塩はｎＨ＝０で開始する（化合物（１）^２＋酸^２−または化合物（１）^２＋２^*酸⁻））。

【0613】

１０Ａ．遊離塩基塩形態
（Ａ−ｉ）遊離塩基結晶形態ＦＢ１
化合物（１）の飽和１−ブタノール溶液を室温で調製した。約４倍の体積のジ（イソプロピル）エーテルでゆっくりと沈殿させることにより、結晶形態ＦＢ１を得た。形成直後の試料をＸＲＰＤ分析することにより、図１に示すパターンおよび表１に挙げる主たるピークを得た。空気中で３日間乾燥後、結晶形態ＦＢ１が完全に結晶形態ＦＢ３に変換されたことを示す新規なＸＲＰＤパターンを得た。

【0614】

表１．化合物（１）の形態ＦＢ１の主たるＸＲＰＤピーク

【表2】

【0615】

（Ａ−ｉｉ）遊離塩基結晶形態ＦＢ２
化合物（１）の飽和ＴＨＦ溶液を室温で調製した。約４倍の体積の酢酸イソプロピルでゆっくりと沈殿させることにより、結晶形態ＦＢ２を得た。形態ＦＢ２の形成直後の試料のＸＲＰＤパターンを図２に示す。ＸＲＰＤパターンにおける主たるピークを表２に挙げる。試料を空気中で３日間乾燥させ、結晶形態ＦＢ２が結晶形態ＦＢ３に変化したことを示す新規なＸＲＰＤパターンを得た。

【0616】

表２．化合物（１）結晶形態ＦＢ２の主たるＸＲＰＤピーク

【表3】

【0617】

（Ａ−ｉｉｉ）遊離塩基結晶形態ＦＢ３
上記のように形態ＦＢ１およびＦＢ２から、または遊離塩基の溶液を蒸発させることにより結晶形態ＦＢ３を得た。結晶形態ＦＢ３のＸＲＰＤパターンを図３に示す。主たるピークを表３に挙げる。結晶形態ＦＢ３は、空気中４０℃かつ７５％ＲＨで少なくとも１カ月間安定していたことが分かった。

【0618】

表３．化合物（１）結晶形態ＦＢ３の主たるＸＲＰＤピーク

【表4】

【0619】

（Ａ−ｉｖ）遊離塩基結晶形態ＦＢ４
結晶形態ＦＢ４は化合物（１）のエタノール溶液の析出実験において観察された。単結晶Ｘ線分析により、結晶形態が二水和物であることが分かった。化合物（１）の飽和エタノール溶液を室温で調製した。約４倍の体積のイソプロピルエーテルでゆっくりと沈殿させることにより、結晶形態ＦＢ４を得た。結晶形態ＦＢ４は、空気中で安定していることが分かった。形態ＦＢ４のＸＲＰＤパターンを図４に示す。主たるピークを表４に挙げる。結晶のパッキング図および原子座標を図５および表５に示す。

【0620】

表４．化合物（１）結晶形態ＦＢ４の主たるＸＲＰＤピーク

【表5】

【0621】

表５．化合物（１）結晶形態ＦＢ４の結晶構造の単位胞パラメータおよびｃｉｆ形式での座標

【表6】

【0622】

（Ａ−ｖ）遊離塩基結晶形態ＦＢ５
形態ＦＢ５は、化合物（１）のイソプロパノール溶液を用いた結晶化実験でのみ観察された不安定な形態である。形態ＦＢ５は空気中でＦＢ６に形質転換する。いずれの理論によっても拘束されることを望まないが、ＦＢ５はイソプロパノール溶媒和物であると考えられる。

【0623】

形態ＦＢ５は、化合物（１）の飽和イソプロパノール溶液を室温で調製し、次いで、約４倍の体積の酢酸イソプロピルでゆっくりと析出させることにより形成された。形成直後の試料のＸＲＰＤパターンを図６に示す。主たるピークを表６に挙げる。ＦＢ５の試料を空気中で２日間乾燥させた。その後に行われたＸＲＰＤ分析により、形態ＦＢ６に変換されていることが分かった。

【0624】

表６．化合物（１）のＦＢ５の主たるＸＲＰＤピーク

【表7】

【0625】

（Ａ−ｖｉ）遊離塩基結晶形態ＦＢ６
形態ＦＢ６は、形態ＦＢ５の経時変化により生成される生成物としてのみ観察された。形態ＦＢ６は空気中で安定している。形態ＦＢ５を２日間空気中で乾燥させて調製した形態ＦＢ６の試料のＸＲＰＤパターンを図７に示す。主たるピークのリストを表７に挙げる。

【0626】

表７．化合物（１）の形態ＦＢ６の主たるＸＲＰＤピーク

【表8】

【0627】

１０Ｂ．化合物（１）の塩酸塩の１：２塩結晶形態
（Ｂ−ｉ）化合物（１）の塩酸塩（形態ＦＨ１）
ＥｔＯＡｃ／ＨＣｌ次いでＭｅＯＨを、溶液が形成されるまで、２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンに添加した。溶媒を蒸発させ、トルエン次いでＭｅＯＨで再蒸発させることにより乾燥させ、２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−メタノンをジ−ＨＣｌ塩として得た。当該形態は吸湿性が高く、空気中の水分に溶解する。ＸＲＰＤパターンを図８に示す。主たるピークを表８に挙げる。

【0628】

表８．化合物（１）の塩酸塩形態（ＦＨ１）の主たるＸＲＰＤピーク

【表9】

【0629】

（Ｂ−ｉｉ）化合物（１）の塩酸塩（形態ＦＨ２）
形態ＦＨ２は、形態ＦＨ１のＤＭＳＯまたはＤＭＦ溶液を用いた析出実験において観察された。当該形態は、空気中で形態ＦＨ３に形質転換する。形態ＦＨ１（Ｂ−ｉ）の飽和ＤＭＦ溶液を室温で調製した。約４倍の体積のアセトンでゆっくりと析出させることにより、形態ＦＨ２を得た。形態ＦＨ２の形成直後の試料のＸＲＰＤパターンを図９に示す。主たるピークを表９に挙げる。形態ＦＨ２の試料を空気中で２日間乾燥させた。その後に行われたＸＲＰＤ分析により、形態ＦＨ３に変換されていることが分かった。

【0630】

表９．化合物（１）の塩酸塩（形態ＦＨ２）の主たるＸＲＰＤピーク

【表10】

【0631】

（Ｂ−ｉｉｉ）化合物（１）の塩酸塩（形態ＦＨ３）
形態ＦＨ３は、形態ＦＨ２の経時変化だけではなく、形態ＦＨ１のエタノールまたはイソプロパノール溶液を用いた析出実験においても観察された。形態ＦＨ３は、空気中４０℃かつ７５％ＲＨで少なくとも１カ月間安定している。形態ＦＨ３の調製は上記実施例３に記載されている。形態ＦＨ３のＸＲＰＤパターンを図１０に示す。主たるピークを表１０に挙げる。

【0632】

表１０．化合物（１）の塩酸塩（形態ＦＨ３）の主たるＸＲＰＤピーク

【表11】

【0633】

（Ｂ−ｉｖ）化合物（１）の塩酸塩（形態ＦＨ４）
形態ＦＨ４は１つの析出実験（ＤＭＦ／ジオキサン）においてのみ観察された。当該形態は不安定であり、空気中で崩壊する。ＤＭＦ中の形態ＦＨ１の飽和溶液を室温で調製した。約４倍の体積の１，４−ジオキサンでゆっくりと析出させることにより、形態ＦＨ４を得た。ＦＨ４の形成直後の試料のＸＲＰＤパターンを図１１に示す。主たるピークを表１１に挙げる。試料は空気中で崩壊した。

【0634】

表１１．化合物（１）の塩酸塩（形態ＦＨ４）の主たるＸＲＰＤピーク

【表12】

【0635】

（Ｂ−ｖ）化合物（１）の塩酸塩（形態ＦＨ５）
形態ＦＨ５は、１つの析出実験（メタノール／アセトン）においてのみ観察された。当該形態は不安定であり、湿気を帯びた空気に溶解する。形態ＦＨ１の飽和メタノール溶液を室温で調製した。約４倍の体積のアセトンでゆっくりと析出させることにより、形態ＦＨ５を得た。ＦＨ５の形成直後の試料のＸＲＰＤパターンを図１２に示す。主たるピークを表１２に挙げる。試料は空気中で崩壊する。

【0636】

表１２．化合物（１）塩酸塩（形態ＦＨ５）の主たるＸＲＰＤピーク

【表13】

【0637】

１０Ｃ．化合物（１）のＬ−乳酸塩の１：１塩結晶形態
（Ｃ−ｉ）化合物（１）のＬ−乳酸塩（形態ＦＬ１）
Ｌ−乳酸塩形態ＦＬ１を上記実施例２に記載の通りに調製した。

【0638】

形態ＦＬ１は、空気中４０℃かつ７５％ＲＨで少なくとも１カ月間安定している。形態ＦＬ１のＸＲＰＤパターンを図１３に示す。主たるピークを表１３に挙げる。

【0639】

表１３．化合物（１）の乳酸塩（形態ＦＬ１）の主たるＸＲＰＤピーク

【表14】

【0640】

（Ｃ−ｉｉ）化合物（１）のＬ−乳酸塩（形態ＦＬ２）
形態ＦＬ２は、形態ＦＬ１のメタノール溶液の析出実験において観察された。単結晶Ｘ線分析により、形態ＦＬ２が水和されていることが分かった。３つの結晶水位置が非対称ユニットに存在するために見かけ上は三水和物であるが、室温かつ実験室湿度で完全に（１００％）占有されていない。メタノール：水９：１中の形態ＦＬ１の飽和溶液を室温で調製した。約４倍の体積のアセトンでゆっくりと沈殿させることにより、空気中で安定した形態ＦＬ２を得た。形態ＦＬ２のＸＲＰＤパターンを図１４に示す。主たるピークを表１４に挙げる。結晶のパッキング図を図１５に示し、原子座標を表１５に挙げる。

【0641】

表１４．化合物（１）の乳酸塩（形態ＦＬ２）の主たるＸＲＰＤピーク

【表15】

【0642】

表１５．化合物（１）の乳酸塩（形態ＦＬ２）の結晶構造の単位胞パラメータおよびｃｉｆ形式での座標

【表16】

【0643】

（Ｃ−ｉｉｉ）化合物（１）のＬ−乳酸塩（形態ＦＬ３）
形態ＦＬ３は、形態ＦＬ１のＴＨＦ溶液の析出実験において観察された。形態ＦＬ３は、空気中で形態ＦＬ１に形質転換する。形態ＦＬ１の飽和ＴＨＦ溶液を室温で調製した。約４倍の体積のヘプタンでゆっくりと析出させることにより、形態ＦＬ３を得た。形態ＦＬ３の形成直後の試料のＸＲＰＤパターンを図１６に示す。主たるピークを表１６に挙げる。ＦＬ３の試料を空気中で２日間乾燥させた。その後に行われたＸＲＰＤ分析により、形態ＦＬ１に変換されていることが分かった。

【0644】

表１６．化合物（１）の乳酸塩（形態ＦＬ３）の主たるＸＲＰＤピーク

【表17】

【0645】

１０Ｄ．化合物（１）の硫酸塩の１：１塩結晶形態
（Ｄ−ｉ）化合物（１）の硫酸塩（形態ＦＳ１）
形態ＦＳ１は、アセトニトリルを析出剤として用いた結晶化実験において観察された。形態ＦＳ１は空気中で不安定であり、形態ＦＳ３に形質転換する。水中の化合物（１）の１：１塩の飽和溶液（化合物（１）をＨ_２ＳＯ_４に溶解させ、蒸発乾固させることによって調製）を室温で調製した。約４倍の体積のアセトニトリルでゆっくりと析出させることにより、形態ＦＳ１を得た。ＦＳ１のＸＲＰＤパターンを図１７に示す。主たるピークを表１７に挙げる。

【0646】

表１７．化合物（１）の硫酸塩（形態ＦＳ１）の主たるＸＲＰＤピーク

【表18】

【0647】

化合物（１）の硫酸塩（形態ＦＳ２）
形態ＦＳ２は空気中で不安定であり、形態ＦＳ５に形質転換する。４０℃かつ７５％ＲＨで保持された場合、形態ＦＳ２は形態ＦＳ４に形質転換する。化合物（１）を１ｍｏｌ当量の濃Ｈ_２ＳＯ_４に溶解し、約４倍の体積のアセトニトリルで析出させ、形成された結晶性の塊を濾過した。ＦＳ２のＸＲＰＤパターンを図１８に示す。主たるピークを表１８に挙げる。

【0648】

表１８．化合物（１）の硫酸塩（形態ＦＳ２）の主たるＸＲＰＤピーク

【表19】

【0649】

化合物（１）の硫酸塩（形態ＦＳ３）
形態ＦＳ３は、空気中で経時変化後の形態ＦＳ１から得られる生成物、および暖かく湿気のある環境（４０℃、７５％ＲＨ）で形態ＦＳ６が形質転換することにより得られる生成物として観察された安定した形態である。形態ＦＳ１を２日間空気中で乾燥させて調製した形態ＦＳ３の試料のＸＲＰＤパターンを図１９に示す。主たるピークを表１９に挙げる。

【0650】

表１９．化合物（１）の硫酸塩（形態ＦＳ３）の主たるＸＲＰＤピーク

【表20】

【0651】

化合物（１）の硫酸塩（形態ＦＳ４）
形態ＦＳ４は、暖かく湿気のある環境（４０℃、７５％ＲＨ）で形態ＦＳ２が形質転換することにより得られる生成物としてのみ観察された安定した形態である。形態ＦＳ２を数週間４０℃かつ７５％ＲＨでインキュベートして調製した形態ＦＳ４の試料のＸＲＰＤパターンを図２０に示す。主たるピークを表２０に挙げる。

【0652】

表２０．化合物（１）の硫酸塩（形態ＦＳ４）の主たるＸＲＰＤピーク

【表21】

【0653】

化合物（１）の硫酸塩（形態ＦＳ５）
形態ＦＳ５３は、形態ＦＳ２の空気中での経時変化により生成される生成物、および乾燥した環境（２０℃、１１％ＲＨ）で形態ＦＳ４が形質転換することにより得られる生成物として観察された安定した形態である。形態ＦＳ２を２日間空気中で乾燥させて調製した形態ＦＳ５の試料のＸＲＰＤパターンを図２１に示す。主たるピークを表２１に挙げる。

【0654】

表２１．化合物（１）の硫酸塩（形態ＦＳ５）の主たるＸＲＰＤピーク

【表22】

【0655】

化合物（１）の硫酸塩（形態ＦＳ６）
形態ＦＳ６は、形態スクリーニング中に数多くの異なる結晶化実験において同定された。形態ＦＳ６は空気中で安定しているが、暖かく湿気のある環境（４０℃、７５％ＲＨ）で形態ＦＳ３に形質転換する。

【0656】

化合物（１）の１：１硫酸塩の飽和ＤＭＦ溶液（化合物（１）をＨ_２ＳＯ_４に溶解させ、蒸発乾固させることによって調製）を室温で調製した。約４倍の体積のトルエンでゆっくりと析出させることにより、形態ＦＳ６を得た。ＦＳ６のＸＲＰＤパターンを図２２に示す。主たるピークを表２２に挙げる。

【0657】

表２２．化合物（１）の硫酸塩（形態ＦＳ６）の主たるＸＲＰＤピーク

【表23】

【0658】

（実施例１１）
抗真菌活性の測定
式（Ｉ）の化合物の抗真菌活性を、以下のプロトコルを用いて測定する。

【0659】

化合物を、カンジダ・パラプシロシス（Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）−ＡＴＣＣ３６０８２、およクリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）を含む真菌のパネルに対して試験する。試験生物を、サブローデキストロース寒天斜面培地の斜面で４℃で保持する。０．０５モルホリンプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）を含むアミノ酸含有酵母窒素基礎培地（ＹＮＢ）（ディフコ社（Difco）、ミシガン州デトロイト）（ｐＨ７．０）中で、回転ドラム上で２７℃で一晩酵母を増殖させることにより、各生物の単一体懸濁液を調製する。次に、この懸濁液を遠心分離し、０．８５％ＮａＣｌで２回洗浄した後、洗浄した細胞懸濁液を４秒間超音波処理する（ブランソン社（Branson）製ソニファイアー（Sonifier）、３５０型、コネチカット州ダンバリー）。単一体出芽胞子を血球計算盤でカウントし、０．８５％ＮａＣｌで所望の濃度に調節する。

【0660】

試験化合物の活性を、微量液体希釈法の改良法を用いて測定する。試験化合物を、ＤＭＳＯ中に希釈して１．０ｍｇ／ｍｌの比率とした後、ＭＯＰＳを含むＹＮＢ培地（ｐＨ７．０）で６４μｇ／ｍｌに希釈し（対照としてフルコナゾールを使用）、各化合物の使用液を調製する。９６ウェルプレートを用い、ウェル１およびウェル３〜１２を、ＹＮＢ培地を用いて調製し、化合物溶液の１０倍希釈液を、ウェル２〜１１（濃度範囲は６４〜０．１２５μｇ／ｍｌ）中に調製する。ウェル１は、無菌対照および分光光度アッセイのブランクとして用いる。ウェル１２は増殖対照として用いる。このマイクロタイタープレートのウェル２〜１１に各々１０μｌを接種する（最終接種量は、１０^４生体／ｍｌである）。接種したプレートを、３５℃で４８時間インキュベートする。ＭＩＣ値は、ボルテックスミキサー（ボルテックス・ジェニー（Vortex-Genie）ミキサー、サイエンティフィック・インダストリーズ社（Scientific Industries, Inc.）、ニューヨーク州ボヘミア）で２分間プレートを撹拌した後、４２０ｎｍで吸光度を測定することにより（自動マイクロプレートリーダー（Ａｕｔｏｍａｔｉｃ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ）、デュポン・インストルメンツ社（DuPont Instruments）、デラウエア州ウィルミントン）、分光光度法で測定する。ＭＩＣ終点は、対照ウェルと比較して増殖の約５０％（またはそれ以上）の減少を示す最低薬剤濃度として定義される。濁度アッセイによれば、これは、ウェルにおける濁度が対照の５０％未満である最低薬剤濃度（ＩＣ５０）として定義される。９６ウェルプレートの全てのウェルをサブローデキストロース寒天（ＳＤＡ）プレートで継代培養し、３５℃で１〜２日間インキュベートした後、生存率を確認することにより、最小細胞溶解濃度（ＭＣＣ）を測定する。

【0661】

（実施例１２）
疼痛低減または疼痛防止活性の試験方法
（ｉ）炎症性痛覚過敏試験
機械的痛覚過敏は、炎症性疼痛のラットモデルで検査可能である。増加する圧迫刺激に対する足底逃避閾値は、左後足底へのフロイント完全アジュバント（ＦＣＡ）の足底内注射前の未処理の動物において、鎮痛効果測定装置（ウゴバジレ社（Ugo Basile）、ミラノ）を用いたランダルセリット（Randal-Sellito）法により測定される。２４時間後、足底逃避閾値を、薬剤または賦形剤投与に先立って（投与前）再び測定し、投与後１０分間〜６時間にも測定する。同側足底における痛覚過敏の後退は、以下の式にしたがって計算する。

【数1】

【0662】

（ｉｉ）神経障害性痛覚過敏試験
機械的痛覚過敏は、左座骨神経の部分的結紮により引き起こされる神経障害性疼痛のラットモデルにおいて検査可能である。外科手術の約１４日間後、結紮を行った足底（同側）および結紮を行わない足底（対側）の両方の機械的逃避閾値を、薬剤または賦形剤投与に先立って（投与前）測定し、投与後１０分間〜６時間にも測定する。各時点における痛覚過敏の後退は、以下の式にしたがって計算する。

【数2】

【0663】

全ての実験は、６体の動物群を用いて行なう。薬剤の固形濃縮物を蒸留水中に溶解し、体積４ｍｌ／ｋｇで皮下投与するために０．９％食塩水中に希釈した。全ての薬剤をプラスチックのバイアル中に調製し、暗所に保存する。

【0664】

測定を繰り返し行いＡＮＯＶＡ次いで、テューキーＨＳＤ検定を用いて、逃避閾値読取り値（ｇ）の統計分析を行う。有効性とは、採用された投与量で観察される最大の痛覚過敏の後退を意味する。

【0665】

（ｉｉｉ）骨癌疼痛のラットモデルにおける式（０）の化合物効果の試験
成体雌ラットに、ＭＲＭＺ−１ラット乳腺癌腫細胞（３μｌ、１０^７細胞／ｍｌ）を脛骨内注射する。典型的には、細胞注射後１２〜１４日目から、機械的痛覚過敏、機械的異痛（非侵害刺激に対する皮膚過敏）、および後肢の擁護動作（hind limb sparing）が徐々に動物に現れる。式（０）の化合物（例えば、投与量１０および３０μｇ／Ｋｇ皮下）を細胞注射の日から週３回投与し、後肢保護および機械的異痛の阻害の程度を、賦形剤を用いて治療した対照と比較して測定する。

【0666】

均等
上記の実施例は、本発明を説明する目的で記載したものであり、本発明の範囲を何ら限定するものではない。上記に記載し、また、実施例で示す本発明の特定の実施形態に対して、本発明の原理から逸脱することなく、多くの改変および変更をなし得ることは容易に明らかである。このような改変および変更は総て本願に含まれるものとする。
また、本発明によれば以下の発明が提供される。
（１）式（１）の化合物の酸付加塩。

【化50】

（２）薬学的に許容される（１）に記載の酸付加塩。
（３）塩酸、乳酸または硫酸で形成された塩である、（１）または（２）に記載の酸付加塩。
（４）Ｌ−乳酸で形成された塩である、（３）に記載の酸付加塩。
（５）実質的に結晶形態である式（１）の化合物、

【化51】

またはその酸付加塩。
（６）結晶形態が本明細書に定義される形態ＦＢ３、ＦＢ４、ＦＢ６、ＦＨ３、ＦＬ１、ＦＬ２、ＦＳ３、ＦＳ４およびＦＳ７から選ばれる、（５）に記載の実質的に結晶形態である化合物またはその酸付加塩。
（７）結晶形態が本明細書に定義される形態ＦＬ１およびＦＬ２から選ばれる、（６）に記載の酸付加塩。
（８）式（２）の化合物の調製方法であって、

【化52】

（式中、Ｒ^１はＣ_１−４アルキルである）
式（３）の化合物を接触水素化に供すること、

【化53】

（式中、ＰＧは水素化条件下で除去可能な保護基であり、Ａ−ＢはＣＨ−ＣＨ_３またはＣ＝ＣＨ_２である）およびその後、式（２）の化合物が遊離塩基の形態で調製された場合、任意に前記遊離塩基を酸付加塩に変換することを含む方法。
（９）ＰＧがベンジル基である、（８）に記載の方法。
（１０）Ａ−ＢがＣ＝ＣＨ_２である、（８）または（９）に記載の方法。
（１１）Ａ−ＢがＣＨ−ＣＨ_３である、（８）または（９）に記載の方法。
（１２）接触水素化がパラジウム触媒を用いて行なわれる、（８）〜（１１）のいずれかに記載の方法。
（１３）パラジウム触媒がパラジウム炭素である、（１２）に記載の方法。
（１４）Ｒ^１がメチルまたはエチルである、（８）〜（１３）のいずれかに記載の方法。
（１５）Ｒ^１がメチルである、（１４）に記載の方法。
（１６）Ｒ^１がエチルである、（１４）に記載の方法。
（１７）（８）で定義される式（２）の化合物の調製方法であって、
（ａ−ｉ）アミド形成条件下で式（４）の化合物またはその活性型もしくは誘導体と式（５）の化合物とを反応させて、

【化54】

（式中、Ｒ^１、ＰＧ、ＡおよびＢは、（８）〜（１１）および（１４）〜（１６）のうちのいずれかと同義である）式（３）の化合物

【化55】

を得ること、および
（ｂ）保護基ＰＧを除去するため、およびＡ−ＢがＣ＝ＣＨ_２である場合、基Ａ−Ｂをイソプロピル基に還元するために、式（３）の化合物を接触水素化に供すること、およびその後式（２）の化合物が遊離塩基の形態で調製された場合、任意に遊離塩基を酸付加塩に変換することを含む方法。
（１８）式（３）の化合物の調製方法であって、

【化56】

（式中、Ｒ^１、ＰＧ、ＡおよびＢは、（８）〜（１１）および（１４）〜（１６）のうちのいずれかと同義である）
（ａ−ｉ）アミド形成条件下で式（４）の化合物またはその活性型もしくは誘導体と式（５）の化合物とを反応させることを含む方法。

【化57】

（１９）Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドなどのカルボジイミド誘導体であるカルボン酸活性化剤の存在下で式（４）の化合物と式（５）の化合物とを反応させる、（１７）または（１８）に記載の方法。
（２０）反応が、ＨＯＡｔまたはＨＯＢｔなど触媒性補助求核試薬の存在下で行なわれる、（１９）に記載の方法。
（２１）式（６）の化合物の調製方法であって、

【化58】

（式中、Ｒ^２およびＲ^３は同一または異なって、それぞれＣ_１−４アルキルであるか、ＮＲ^２Ｒ^３は、Ｏ、ＮおよびＳから選ばれるさらなるヘテロ原子を場合により含み１個または２個のＣ_１−４アルキル基により場合により置換されている４〜７員の飽和複素環を形成し；Ｒ^４は水素、ハロゲン、Ｃ_１−５アルキルおよびＣ_３−４シクロアルキル基から選ばれる）
（ａ−ｉｉ）式（７）の化合物

【化59】

（式中、ＰＧは水素化条件下で除去可能な保護基であり、Ｒ^４’は水素、ハロゲン、Ｃ_１−５アルキル、Ｃ_２−５アルケニルおよびＣ_３−４シクロアルキル基から選ばれる）と
式（８）の化合物

【化60】

とを遷移金属触媒の存在下で反応させて、式（９）の化合物を得ること

【化61】

および
（ｂ）保護基ＰＧを除去するため、およびＲ^４’がＣ_２−５アルケニルである場合は基Ｒ^４’をＣ_２−５アルキルに還元させるために、式（９）の化合物を接触水素化に供すること；およびその後、式（６）の化合物が遊離塩基の形態で調製された場合、任意に遊離塩基を酸付加塩に変換することを含む方法。
（２２）式（９）の化合物の調製方法であって、

【化62】

（式中、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４’およびＰＧは、（２１）と同義である）
（ａ−ｉｉ）式（７）の化合物

【化63】

（式中、ＰＧは水素化条件下で除去可能な保護基であり、Ｒ^４’は水素、ハロゲン、Ｃ_１−５アルキル、Ｃ_２−５アルケニルおよびＣ_３−４シクロアルキル基から選ばれる）と
式（８）の化合物

【化64】

とを遷移金属触媒存在下で反応させることを含む方法。
（２３）遷移金属触媒がウィルキンソン触媒である、（２１）または（２２）に記載の方法。
（２４）式（８）の化合物が式（８ａ）の化合物

【化65】

（式中、Ｒ^１は、（８）、（１５）または（１６）のいずれかと同義である）
である、（２１）〜（２３）のいずれかに記載の方法。
（２５）Ｒ^４’がイソプロピルまたはイソプロペニルである、（２１）〜（２４）のいずれかに記載の方法。
（２６）Ｒ^４’がイソプロペニルである、（２４）に記載の方法。
（２７）本明細書に定義される式（３）、（５）、（７）、（９）、（１４）、（１５）、（１６）、（２０）、（２０ａ）、（２１）または（２３）の化学中間体。
（２８）Ｒ^１がエチルである、（８）で定義される式（２）の化合物またはその塩、溶媒和物もしくはＮ−オキシド。
（２９）薬剤で用いるための（例えば、Ｈｓｐ９０の阻害剤として用いるための）（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩。
（３０）Ｈｓｐ９０により仲介される病態もしくは症状の予防または治療に用いる（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩。
（３１）Ｈｓｐ９０により仲介される病態もしくは症状の予防または治療方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩をその必要のある被験体に投与することを含む方法。
（３２）Ｈｓｐ９０により仲介される病態もしくは症状の罹患率の緩和または低減に用いる（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩。
（３３）Ｈｓｐ９０により仲介される病態もしくは症状の罹患率の緩和または低減方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩をその必要のある被験体に投与することを含む方法。
（３４）哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の治療に用いる（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩。
（３５）哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の治療方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩を異常な細胞増殖を阻害するのに有効な量で前記哺乳類に投与することを含む方法。
（３６）哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の罹患率の緩和あるいは低減に用いる（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩。
（３７）哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の罹患率の緩和あるいは低減方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩を異常な細胞増殖を阻害するのに有効な量で前記哺乳類に投与することを含む方法。
（３８）哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の治療方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩をＨｓｐ９０の活性を阻害するのに有効な量で前記哺乳類に投与することを含む方法。
（３９）哺乳類における異常な細胞増殖からなる、もしくはそれから生じる疾病または症状の罹患率の緩和あるいは低減方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩をＨｓｐ９０の活性を阻害するのに有効な量で前記哺乳類に投与することを含む方法。
（４０）Ｈｓｐ９０の阻害方法であって、Ｈｓｐ９０と（２８）に記載のＨｓｐ９０阻害性化合物または（１）〜（７）のいずれかで定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩を接触させることを含む方法。
（４１）（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩を使用する、Ｈｓｐ９０の活性を阻害することによる細胞過程（例えば、細胞分裂）の修飾方法。
（４２）本明細書に記載される病態の予防または治療に用いる（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩。
（４３）本明細書に定義される１つまたは複数の用途のための薬剤の製造のための、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩の使用。
（４４）（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
（４５）（８）〜（１１）のいずれかで定義される式（３）の化合物の調製方法であって、
式（３ａ）の化合物

【化66】

と、基−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_３を基−Ｃ（＝ＣＨ_２）−ＣＨ_３に変換するのに適したウィッティヒ試薬または他の試薬とを反応させることを含む方法。
（４６）式（１３）の化合物の調製方法であって、

【化67】

（ｉ）式（１１）の化合物

【化68】

と、（ａ）無水酢酸とを４−ジメチルアミノピリジンの存在下で（典型的には加熱しながら（例えば、最大約６０°の温度まで））反応させ、（ｂ）次にトリフルオロメタンスルホン酸および場合により塩化アセチルとを反応させること（典型的には室温で）、または
（ｉｉ）式（１１）の化合物と塩化アセチルとをアンバーリスト１５（Amberlyst15、商標）樹脂などのカチオン性イオン交換樹脂の存在下で反応させることを含む方法。
（４７）式（１４）の化合物とウィッティヒ試薬ＭｅＰＰｈ_３ＢｒとをＴＨＦ中でカリウムｔ−ブトキシドの存在下で反応させることによる、式（１５）の化合物の調製方法。

【化69】

（４８）（１８）で定義される式（５）の化合物の調製方法であって、
（ｉ）式（２４）の化合物

【化70】

（式中、ＰＧは保護基（例えば、ベンジルオキシカルボニル）であり、ＬＧ^１は脱離基（例えば、メシルオキシ）である）と、本明細書で定義される式（２２）の化合物とを反応させること、または
（ｉｉ）式（２５）の化合物

【化71】

（式中、ＰＧは保護基（例えば、ベンジルオキシカルボニル）と、本明細書で定義される式（２２）の化合物とを還元的アミノ化条件下（例えば、トリアセトキシボロヒドリドナトリウムの存在下）で反応させること；および
その後、保護基ＰＧを除去（例えば、ＰＧがベンジルオキシカルボニルである場合は水素化により）することを含む方法。
（４９）真菌性、原虫性もしくは寄生虫性の病態または症状（熱帯熱マラリア原虫による病態または症状以外）、例えば、Ｈｓｐ９０に対する抗体反応により特徴づけられる病態もしくは症状の予防または治療用薬剤の製造のための、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩の使用。
（５０）真菌性、原虫性もしくは寄生虫性の病態または症状（熱帯熱マラリア原虫による病態または症状以外）、例えば、Ｈｓｐ９０に対する抗体反応により特徴づけられる病態もしくは症状の予防または治療方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩をその必要のある被験体に投与することを含む方法。
（５１）抗真菌剤、抗原虫剤もしくは抗寄生虫剤（好ましくは抗真菌剤）に対する耐性の発達を防止、低減または後退させるために、前記抗真菌剤、抗原虫剤または抗寄生虫剤と併用投与するための薬剤の製造のための、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩の使用。
（５２）患者（例えば、ヒト患者）における抗真菌剤に対する耐性の発達の防止または低減方法であって、抗真菌剤、抗原虫剤または抗寄生虫剤（好ましくは抗真菌剤）と（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩との組合せを前記患者に投与することを含む方法。
（５３）疼痛を患う患者（例えば、ヒトなどの哺乳類）における疼痛の低減または除去に用いる薬剤の製造のための、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩の使用。
（５４）痛覚、体性痛、内臓痛、急性疼痛、慢性疼痛、痛覚過敏、異痛症、術後疼痛、知覚過敏による疼痛、頭痛、炎症性疼痛（リューマチ痛、歯痛、月経痛または感染痛）、神経学的疼痛、筋骨格系疼痛、癌性疼痛または血管痛のいずれか１種以上の治療用薬剤の製造のための、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩の使用。
（５５）痛覚、体性痛、内臓痛、急性疼痛、慢性疼痛、痛覚過敏、異痛症、術後疼痛、知覚過敏による疼痛、頭痛、炎症性疼痛（リューマチ痛、歯痛、月経痛または感染痛）、神経学的疼痛、筋骨格系疼痛、癌性疼痛または血管痛のいずれか１種以上の治療に用いる、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩。
（５６）哺乳類（例えば、ヒト）などの患者における疼痛の治療方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩を治療上有効な量で前記患者に投与することを含む方法。
（５７）疼痛を患う患者（例えば、ヒトなどの哺乳類）における疼痛の低減または除去方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩を疼痛を低減するまたは除去するのに有効な量で前記患者に投与することを含む方法。
（５８）痛覚、体性痛、内臓痛、急性疼痛、慢性疼痛、痛覚過敏、異痛症、術後疼痛、知覚過敏による疼痛、頭痛、炎症性疼痛（リューマチ痛、歯痛、月経痛または感染痛）、神経学的疼痛、筋骨格系疼痛、癌性疼痛または血管痛のいずれか１種以上の治療方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩を治療上有効な量で患者に投与することを含む方法。
（５９）卒中を患う患者における神経損傷の防止または低減方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩を神経保護に有効な量で前記患者に投与することを含む方法。
（６０）卒中の危険性がある患者、例えば、血管炎症、アテローム性動脈硬化症、動脈高血圧、糖尿病、高脂血症および心房細動から選ばれる１種以上の危険因子を有する患者における卒中の危険性の防止または低減用薬剤の製造のための、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩の使用。
（６１）卒中の危険性がある患者、例えば、血管炎症、アテローム性動脈硬化症、動脈高血圧、糖尿病、高脂血症および心房細動から選ばれる１種以上の危険因子を有する患者における卒中の危険性の防止または低減に用いる（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩。
（６２）卒中の危険性がある患者、例えば、血管炎症、アテローム性動脈硬化症、動脈高血圧、糖尿病、高脂血症および心房細動から選ばれる１種以上の危険因子を有する患者における卒中の危険性の防止または低減方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩を治療上有効な量で前記患者に投与することを含む方法。
（６３）ウイルス感染（またはウイルス性疾患）の予防または治療に用いる（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩。
（６４）ウイルス感染（またはウイルス性疾患）の予防または治療用薬剤の製造のための（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩の使用。
（６５）ウイルス感染（またはウイルス性疾患）の予防または治療方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩をその必要のある被験体に投与することを含む方法。
（６６）宿主生物（例えば、哺乳類（例えば、ヒト）などの動物）におけるウイルス複製の遮断または阻害に用いる（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩。
（６７）宿主生物（例えば、哺乳類（例えば、ヒト）などの動物）におけるウイルス複製の遮断または阻害用薬剤の製造のための（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩の使用。
（６８）宿主生物（例えば、哺乳類（例えば、ヒト）などの動物）におけるウイルス複製の遮断または阻害方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩を前記宿主生物に投与することを含む方法。
（６９）アテローム性動脈硬化症の予防または治療のための（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩。
（７０）アテローム性動脈硬化症の予防または治療用薬剤の製造のための（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩の使用。
（７１）アテローム性動脈硬化症の予防または治療方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩をその必要のある被験体に投与することを含む方法。
（７２）ユーイング肉腫の予防または治療のための（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩。
（７３）ユーイング肉腫の予防または治療用薬剤の製造のための（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩の使用。
（７４）ユーイング肉腫の予防または治療方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩をその必要のある被験体に投与することを含む方法。
（７５）紅斑性狼瘡の予防または治療のための（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩。
（７６）紅斑性狼瘡の予防または治療用薬剤の製造のための（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩の使用。
（７７）紅斑性狼瘡の予防または治療方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩をその必要のある被験体に投与することを含む方法。
（７８）Ｈｓｐ９０により仲介される病態もしくは症状の予防または治療（またはその罹患率の緩和または低減）方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩をその必要のある被験体に投与することを含み、前記Ｈｓｐ９０により仲介される病態もしくは症状が抗癌薬剤に対する耐性の発達である方法。
（７９）（ｉ）抗癌薬剤に対して悪性細胞を感作させる、（ｉｉ）抗癌薬剤に対する耐性の発生率を緩和または低減させる、（ｉｉｉ）抗癌薬剤に対する耐性を後退させる、（ｉｖ）抗癌薬剤の活性を増強させる、（ｖ）抗癌薬剤に対する耐性の発現を遅延または防止させる方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩をその必要のある被験体に投与することを含む方法。
（８０）癌の治療方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩をその必要のある被験体に投与することを含み、薬剤耐性が現れないことを特徴とする方法。
（８１）治療薬（例えば、抗癌剤）で治療を受けている被験体におけるＨｓｐ９０により仲介される病態もしくは症状の予防または治療（またはその罹患率の緩和または低減）方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩を前記被験体に投与することを含み、前記Ｈｓｐ９０により仲介される病態もしくは症状が該治療薬に対する耐性の発達である方法。
（８２）（ｉ）抗癌剤に対して悪性細胞を感作させる、（ｉｉ）抗癌剤に対する耐性の発生率を緩和または低減させる、（ｉｉｉ）抗癌剤に対する耐性を後退させる、（ｉｖ）抗癌剤の活性を増強させる、（ｖ）抗癌剤に対する耐性の発現を遅延または防止させる方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩を該抗癌剤で治療を受けている被験体に投与することを含む方法。
（８３）抗癌剤で治療を受けている被験体における癌の治療方法であって、（２８）に記載の化合物または（１）〜（７）のいずれかに定義される化合物、結晶形態もしくは酸付加塩をその必要のある被験体に投与することを含み、前記抗癌剤に対する薬剤耐性が現れないことを特徴とする方法。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】