特許 5730896 トリシクロピラゾール誘導体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5730896

(24)【登録日】2015年4月17日

(45)【発行日】2015年6月10日

(54)【発明の名称】トリシクロピラゾール誘導体

(51)【国際特許分類】

   C07D 471/14 20060101AFI20150521BHJP

   C07D 487/14 20060101ALI20150521BHJP

   A61K 31/437 20060101ALI20150521BHJP

   A61K 31/55 20060101ALI20150521BHJP

   A61K 31/496 20060101ALI20150521BHJP

   A61K 31/5377 20060101ALI20150521BHJP

   A61K 31/541 20060101ALI20150521BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20150521BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20150521BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20150521BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20150521BHJP

【ＦＩ】

   C07D471/14 102

   C07D487/14CSP

   A61K31/437

   A61K31/55

   A61K31/496

   A61K31/5377

   A61K31/541

   A61P43/00 111

   A61P43/00 121

   A61P35/00

   A61P35/02

   A61K45/00

【請求項の数】15

【全頁数】87

(21)【出願番号】特願2012-541409(P2012-541409)

(86)(22)【出願日】2010年11月24日

(65)【公表番号】特表2013-512868(P2013-512868A)

(43)【公表日】2013年4月18日

(86)【国際出願番号】EP2010068129

(87)【国際公開番号】WO2011067145

(87)【国際公開日】20110609

【審査請求日】2013年11月20日

(31)【優先権主張番号】09178074.2

(32)【優先日】2009年12月4日

(33)【優先権主張国】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】307012403

【氏名又は名称】ネルビアーノ・メデイカル・サイエンシーズ・エツセ・エルレ・エルレ

(74)【代理人】

【識別番号】110001173

【氏名又は名称】特許業務法人川口國際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】デイシングリーニ，テレサ

(72)【発明者】

【氏名】マンテガーニ，セルジオ

(72)【発明者】

【氏名】バラスイ，マリオ

【審査官】 吉田 直裕

(56)【参考文献】

【文献】 特表平１０−５１０２４２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００４−５１７８４３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００５−５２９８５０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２００８／０６５０５４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 欧州特許出願公開第０１７４６１００（ＥＰ，Ａ１）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）の化合物および医薬的に許容されるその塩：

【化1】

［式中、
ｎは、０または１であり；
Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は、それぞれ互いに独立して、−Ｒ^ａ、−ＣＯＲ^ａ、−ＣＯＮＨＲ^ａ、−ＳＯ_２Ｒ^ａおよび−ＣＯＯＲ^ａからなる群より選択され；
Ｒ３は、−ＮＲ^ａＲ^ｂ基または−ＯＲ^ａ基であり；
ここで、同じであるかまたは異なっているＲ^ａおよびＲ^ｂは、それぞれ独立して水素であるか、もしくは直鎖状または分枝鎖状のＣ_１−Ｃ_６アルキル、直鎖状または分枝鎖状のＣ_２−Ｃ_６アルケニル、直鎖状または分枝鎖状のＣ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、シクロアルキルＣ_１−Ｃ_６アルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルＣ_１−Ｃ_６アルキル、アリール、アリールＣ_１−Ｃ_６アルキル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールＣ_１−Ｃ_６アルキルより選択される場合により置換された基であるか、またはＲ^ａおよびＲ^ｂのいずれかが、結合している窒素原子と一緒になって、Ｓ、Ｏ、ＮもしくはＮＨより選択されるさらなる１つのヘテロ原子またはヘテロ原子基を場合により含む、場合により置換された３から８員の複素環を形成し得る］。

【請求項2】

Ｒ１は、−ＣＯＮＨＲ^ａ基であり、ここで、Ｒ^ａは、水素であるか、または直鎖状または分枝鎖状のＣ_１−Ｃ_６アルキル、直鎖状または分枝鎖状のＣ_２−Ｃ_６アルケニル、アリールおよびアリールＣ_１−Ｃ_６アルキルより選択される場合により置換された基である請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。

【請求項3】

Ｒ１は、−ＣＯＲ^ａ基であり、ここで、Ｒ^ａは、水素であるか、または直鎖状または分枝鎖状のＣ_１−Ｃ_６アルキル、直鎖状または分枝鎖状のＣ_２−Ｃ_６アルケニル、アリールおよびアリールＣ_１−Ｃ_６アルキルより選択される場合により置換された基である請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。

【請求項4】

Ｒ１は、−ＳＯ_２Ｒ^ａ基であり、ここで、Ｒ^ａは、水素であるか、または直鎖状または分枝鎖状のＣ_１−Ｃ_６アルキル、直鎖状または分枝鎖状のＣ_２−Ｃ_６アルケニル、アリールおよびアリールＣ_１−Ｃ_６アルキルより選択される場合により置換された基である請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。

【請求項5】

Ｒ２は、水素である請求項１から４のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物。

【請求項6】

Ｒ３は、−ＮＲ^ａＲ^ｂ基であり、ここで、Ｒ^ａおよびＲ^ｂは、両方とも水素であるか、またはＲ^ａおよびＲ^ｂの一方が水素であり、ならびにＲ^ａまたはＲ^ｂの残った一方が直鎖状または分枝鎖状のＣ_１−Ｃ_６アルキル、直鎖状または分枝鎖状のＣ_２−Ｃ_６アルケニル、アリールおよびアリールＣ_１−Ｃ_６アルキルより選択される場合により置換された基である請求項１から５のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物。

【請求項7】

Ｒ４は、水素である請求項１から６のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物。

【請求項8】

Ｒ１およびＲ２は、それぞれ互いに独立してコードＡ１−Ａ５４のいずれかによって示される置換基であり、ならびにＲ３は、コードＢ１−Ｂ４３のいずれかによって示される置換基である請求項１から７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物：

【表1】

（表中、Ｍは、式（Ｉ）Ａまたは式（Ｉ）Ｂ：

【化2】

の中心コアを表す）。

【請求項9】

２種以上の式（Ｉ）の化合物および医薬的に許容されるその塩のライブラリー：

【化3】

［式中、
ｎは、０または１であり；
Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は、それぞれ互いに独立して、−Ｒ^ａ、−ＣＯＲ^ａ、−ＣＯＮＨＲ^ａ、−ＳＯ_２Ｒ^ａおよび−ＣＯＯＲ^ａからなる群より選択され；
Ｒ３は、−ＮＲ^ａＲ^ｂ基または−ＯＲ^ａ基であり；
ここで、同じであるかまたは異なっているＲ^ａおよびＲ^ｂは、それぞれ独立して水素であるか、もしくは直鎖状または分枝鎖状のＣ_１−Ｃ_６アルキル、直鎖状または分枝鎖状のＣ_２−Ｃ_６アルケニル、直鎖状または分枝鎖状のＣ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、シクロアルキルＣ_１−Ｃ_６アルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルＣ_１−Ｃ_６アルキル、アリール、アリールＣ_１−Ｃ_６アルキル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールＣ_１−Ｃ_６アルキルより選択される場合により置換された基であるか、またはＲ^ａおよびＲ^ｂのいずれかが結合している窒素原子と一緒になって、Ｓ、Ｏ、ＮもしくはＮＨより選択されるさらなる１つのヘテロ原子またはヘテロ原子基を場合により含む、場合により置換された３から８員の複素環を形成し得る］。

【請求項10】

化合物は、以下の式を有する、請求項９に記載のライブラリー：

【化4】

式中、置換基ＡおよびＢは、請求項８に記載のとおりであり、ならびにここで前記化合物は、以下に挙げられた化合物のうちの１つである：

【表2】

【請求項11】

タンパク質キナーゼ活性を阻害するためのインビトロの方法であって、キナーゼを、有効量の請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物と接触させることを含む方法。

【請求項12】

治療有効量の請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物ならびに少なくとも１種の医薬的に許容される賦形剤、キャリアおよび／または希釈剤を含む医薬的組成物。

【請求項13】

請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物または請求項１２に記載の医薬的組成物と、１種以上の化学治療剤とを抗癌治療において同時、別個または連続して使用する組み合わせ調製剤として含む製品またはキット。

【請求項14】

医薬としての使用のための、請求項１に記載される式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容されるその塩。

【請求項15】

タンパク質キナーゼ活性異常によって発症する疾患および／またはタンパク質キナーゼ活性異常を伴う疾患を処置するための医薬の製造における、請求項１に記載される式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容されるその塩の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、タンパク質キナーゼの活性を調節する特定のトリシクロピラゾール化合物の置換誘導体に関する。従って、本発明の化合物は、タンパク質キナーゼ活性調節不全によって起こる疾患を処置する際に有用である。本発明はまた、これらの化合物、これらの化合物のコンビナトリアルライブラリーおよびこれらの化合物を含む医薬的組成物を調製するための方法ならびにこれらの化合物を含む医薬的組成物を用いて疾患を処置する方法にも関する。

【背景技術】

【0002】

タンパク質キナーゼ（ＰＫ）の機能不良は、多くの疾患の顕著な特徴である。ヒトの癌に関わる癌遺伝子および癌原遺伝子の大部分は、ＰＫをコードしている。ＰＫの発現の増大もまた、多くの非悪性疾患、例えば良性の前立腺肥大、家族性腺腫症、ポリポージス、神経繊維腫症、乾癬、アテローム性動脈硬化症に関連した血管平滑細胞増殖、肺線維症、関節炎糸球体腎炎ならびに手術後の狭窄および再狭窄に関係する。

【0003】

ＰＫはまた、炎症状態ならびにウイルスおよび寄生虫の増殖に関係している。ＰＫはまた、神経変性障害の病理学および発症においても、主要な役割を果たす。

【0004】

ＰＫの機能不良または調節不全に関する一般的な参照については、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １９９９，３，４５９−４６５およびＣａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ２００８，２９，１０８７−１９１を参照されたい。

【0005】

抗糖尿病剤、抗鬱剤、降圧剤および血小板凝集抑制剤として有用な置換ヘキサヒドロアリールキノリジン誘導体は、Ｍｅｒｃｋ ａｎｄ Ｃｏ．の名の下のＥＰ１５４１４２Ａに開示されている。１Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン誘導体の合成は、Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ（１９９０），３８（９），２３５２−６において、何ら生物学的活性の報告がなく記載されている。

【0006】

炎症状態、喘息、関節炎、気管支炎、慢性閉塞性気道疾患、乾癬、アレルギー性鼻炎、皮膚炎ならびにＡＩＤＳ、敗血症および悪液質のような他の疾患の処置のために有用なホスホジエステラーゼインヒビターとしての三環式５，６−ジヒドロ−９Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン誘導体は、Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．名でＷＯ９６３９４０８に開示されている。

【0007】

抗悪性腫瘍活性を賦与されているピロロ［２，１−ａ］イソキノリン、ピロロ［１，２−ａ］キノリン、ピロロ［２，１−ａ］イソベンゾアゼピンおよびピロロ［１，２−ａ］ベンゾアゼピン誘導体は、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９８８），３１（１１），２０９７−１０２に記載されている。

【0008】

癌を処置するために有用なホスホジエステラーゼ１０ａインヒビターとしてのピロロ［２，１−ａ］イソキノリンは、Ｂａｙｅｒ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ名でＷＯ２００２０４８１４４に開示されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0009】

【特許文献1】欧州特許出願公開第１５４１４２号明細書

【特許文献2】国際公開第９６／３９４０８号

【特許文献3】国際公開第２００２／０４８１４４号

【非特許文献】

【0010】

【非特許文献1】Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １９９９，３，４５９−４６５

【非特許文献2】Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ２００８，２９，１０８７−１９１

【非特許文献3】Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ（１９９０），３８（９），２３５２−６

【非特許文献4】Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９８８），３１（１１），２０９７−１０２

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0011】

ここで、本発明者らは、下記の新規な式（Ｉ）の化合物が、キナーゼインヒビターであり、従って、抗腫瘍剤として治療に有用であることを発見した。

【0012】

従って、本発明の第１の目的は、式（Ｉ）で表される三環式化合物および式（Ｉ）で表される三環式化合物の医薬的に許容される塩を提供することである：

【0013】

【化1】

式（Ｉ）中、
ｎは、０または１であり；
Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は、それぞれ互いに独立して、−Ｒ^ａ、−ＣＯＲ^ａ、−ＣＯＮＨＲ^ａ、−ＳＯ_２Ｒ^ａおよび−ＣＯＯＲ^ａからなる群より選択され；
Ｒ３は、−ＮＲ^ａＲ^ｂ基または−ＯＲ^ａ基であり；
ここで、同じであるかまたは異なっているＲ^ａおよびＲ^ｂは、それぞれ独立して水素であるか、もしくは直鎖状または分枝鎖状のＣ_１−Ｃ_６アルキル、直鎖状または分枝鎖状のＣ_２−Ｃ_６アルケニル、直鎖状または分枝鎖状のＣ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、シクロアルキルＣ_１−Ｃ_６アルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルＣ_１−Ｃ_６アルキル、アリール、アリールＣ_１−Ｃ_６アルキル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールＣ_１−Ｃ_６アルキルより選択される場合により置換された基であるか、またはＲ^ａおよびＲ^ｂのいずれかが、結合している窒素原子と一緒になって、Ｓ、Ｏ、ＮもしくはＮＨより選択されるさらなる１つのヘテロ原子またはヘテロ原子基を場合により含む、場合により置換された３から８員の複素環を形成し得る。

【0014】

本発明はまた、従来技術ならびに非常に汎用性のある固相の方法および／またはコンビナトリアルな方法に従って実施される周知の反応を含む合成方法を通して調製される、式（Ｉ）で表される置換化合物の合成の方法も、提供する。

【0015】

本発明はまた、特に、以下のタンパク質キナーゼ活性調節不全によって発症する疾患および／またはタンパク質キナーゼ活性調節不全を伴う疾患を処置するための方法も、提供し、具体的には：ＡＢＬ，ＡＣＫ１，ＡＫＴ１，ＡＬＫ，ＡＵＲ１，ＡＵＲ２，ＢＲＫ，ＢＵＢ１，ＣＤＣ７／ＤＢＦ４，ＣＤＫ２／ＣＹＣＡ，ＣＨＫ１，ＣＫ２，ＥＥＦ２Ｋ，ＥＧＦＲ１，ＥｐｈＡ２，ＥｐｈＢ４，ＥＲＫ２，ＦＡＫ，ＦＧＦＲ１，ＦＬＴ３，ＧＳＫ３ｂｅｔａ，Ｈａｓｐｉｎ，ＩＧＦＲ１，ＩＫＫ２，ＩＲ，ＪＡＫ１，ＪＡＫ２，ＪＡＫ３，ＫＩＴ，ＬＣＫ，ＬＹＮ，ＭＡＰＫＡＰＫ２，ＭＥＬＫ，ＭＥＴ，ＭＮＫ２，ＭＰＳ１，ＭＳＴ４，ＮＥＫ６，ＮＩＭ１，Ｐ３８ａｌｐｈａ，ＰＡＫ４，ＰＤＧＦＲ，ＰＤＫ１，ＰＥＲＫ，ＰＩＭ１，ＰＩＭ２，ＰＫＡａｌｐｈａ，ＰＫＣｂｅｔａ，ＰＬＫ１，ＲＥＴ，ＲＯＳ１，ＳＵＬＵ１，Ｓｙｋ，ＴＬＫ２，ＴＲＫＡ，ＴＹＫ，ＶＥＧＦＲ２，ＶＥＧＦＲ３，ＺＡＰ７０。

【0016】

本発明の好ましい方法は、癌、ウイルス感染、ＨＩＶに感染した個体におけるＡＩＤＳ発症の予防、細胞増殖障害、自己免疫障害および神経変性障害からなる群より選択されるタンパク質キナーゼ活性調節不全によって発症する疾患および／またはタンパク質キナーゼ活性調節不全を伴う疾患を処置するものである。

【0017】

本発明の別の好ましい方法は、以下を含むがこれらに限定されない特定の型の癌を処置するものである：癌腫、例えば膀胱癌腫、乳房癌腫、結腸癌腫、腎臓癌腫、肝臓癌腫、小細胞肺癌を含む肺癌腫、食道癌腫、胆嚢癌腫、卵巣癌腫、膵臓癌腫、胃癌腫、頚部癌腫、甲状腺癌腫、前立腺癌腫、および扁平上皮癌を含む皮膚癌腫；白血病、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、毛様細胞リンパ腫およびバーキットリンパ腫を含むリンパ系の造血器腫瘍；急性および慢性の骨髄性白血病、骨髄異形成症候群ならびに前骨髄球性白血病を含む骨髄系の造血器腫瘍；繊維肉腫および横紋筋肉腫を含む間充織起源の腫瘍；星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫および神経鞘腫を含む、中枢神経系および末梢神経系の腫瘍；黒色腫、精上皮腫、奇形癌、骨肉腫、色素性乾皮症、角膜黄色腫（ｋｅｒａｔｏｘａｎｔｈｏｍａ）、甲状腺濾胞癌およびカポジ肉腫を含む他の腫瘍。

【0018】

本発明の別の好ましい方法は、例えば、良性前立腺肥大、家族性腺腫症ポリポージス、神経繊維腫症、乾癬、アテローム性動脈硬化症に関連した血管平滑細胞増殖、肺線維症、関節炎、糸球体腎炎ならびに手術後の狭窄および再狭窄のような特定の細胞増殖障害を処置するものである。

【0019】

本発明の化合物は、腫瘍の血管形成および転移の阻害ならびに器官移植拒絶および宿主対移植片疾患の処置において有用であり得る。

【0020】

本発明は、抗癌治療において、同時に、別個にまたは連続して組み合わせた使用のための、放射線治療または化学療法レジメンと、式（Ｉ）の化合物とを含む処置の方法を、さらに提供する。

【0021】

その上、本発明は、タンパク質キナーゼ活性を阻害するためのインビトロの方法を提供し、この方法は、このタンパク質キナーゼを有効量の式（Ｉ）の化合物に接触させることを含む。

【0022】

本発明はまた、１種以上の式（Ｉ）の化合物または式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容される塩および医薬的に許容される賦形剤、キャリアまたは希釈剤を含む医薬的組成物も提供する。

【0023】

本発明はまた、抗癌治療における、同時に、別個にまたは連続して組み合わせた使用のための、公知の細胞増殖抑制性剤または細胞毒性剤、抗生物質型薬剤、ＤＮＡ損傷剤またはＤＮＡ挿入剤、白金ベースの薬剤、アルキル化剤、抗代謝物剤、ホルモン剤、抗エストロゲン剤、抗アンドロゲン剤およびアロマターゼインヒビターなどの抗ホルモン剤、免疫剤、インターフェロン型薬剤、シクロオキシダーゼインヒビター（例えばＣＯＸ−２インヒビター）、マトリックスメタロプロテアーゼインヒビター、チロシンキナーゼインヒビター、他のキナーゼインヒビター、抗増殖因子レセプター剤、抗ＨＥＲ剤、抗ＥＧＦＲ剤、抗血管形成剤、（例えば、血管形成インヒビター）、ファルネシルトランスフェラーゼインヒビター、ｒａｓ−ｒａｆシグナルトランスダクション経路インヒビター、細胞周期インヒビター、他のｃｄｋインヒビター、チューブリン結合剤、トポイソメラーゼＩインヒビター、トポイソメラーゼＩＩインヒビター、キネシンのインヒビター、治療用モノクローナル抗体、ｍＴＯＲのインヒビター、ヒストンデアセチラーゼインヒビター、低酸素応答のインヒビターなどと、式（Ｉ）の化合物とを含む医薬的組成物も、提供する。

【0024】

さらに、本発明は、抗癌治療における同時の、別個のまたは連続した使用のための組み合わせ調製剤として、上で定義された式（Ｉ）の化合物もしくは式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容される塩または式（Ｉ）の化合物の医薬的組成物と、１種以上の化学治療剤とを含む製品またはキットを、提供する。

【0025】

本発明のなお別の局面において、医薬としての使用のための、上で定義された式（Ｉ）の化合物または式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容される塩を、提供する。

【0026】

その上、本発明は、上で定義された式（Ｉ）の化合物または式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容される塩の、抗腫瘍活性を有する医薬の製造における使用を、提供する。

【0027】

最後に、本発明は、癌を処置する方法における使用のための、上で定義された式（Ｉ）の化合物または式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容される塩を、提供する。

【0028】

本書中で使用される場合、ｎが０でありならびにＲ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が上で定義されたとおりである式（Ｉ）の化合物、即ち４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｇ］インドリジン誘導体は、一般式（Ｉ）Ａで表され得る：

【0029】

【化2】

ならびに、ｎが１でありならびにＲ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が上で定義されたとおりである式（Ｉ）の化合物、即ち１，４，５，６−テトラヒドロピラゾロ［３，４−ｃ］ピロロ［１，２−ａ］アゼピン誘導体は、一般式（Ｉ）Ｂで表され得る；

【0030】

【化3】

【0031】

他に特定されない限り、式（Ｉ）の化合物自体および式（Ｉ）の化合物の任意の医薬的組成物または式（Ｉ）の化合物を含む処置の任意の治療方法をいう場合、本発明は、本発明の化合物の全ての水和物、溶媒和物、複合体、代謝物、プロドラッグ、キャリア、Ｎ−酸化物および医薬的に許容される塩を含む。

【0032】

式（Ｉ）の化合物の代謝物は、この同じ式（Ｉ）の化合物がインビボで、例えば、この化合物を必要としている哺乳動物への投与の際に変換される任意の化合物である。代表的には、限定された例を示すものではないが、式（Ｉ）の化合物の投与の際、この同じ誘導体は、例えば容易に排出されるヒドロキシル化誘導体のようなより可溶性の誘導体を含む種々の化合物に変換され得る。従って、このように起こる代謝経路に依存して、これらの任意のヒドロキシル化誘導体が、式（Ｉ）の化合物の代謝物と考えられ得る。

【0033】

プロドラッグは、式（Ｉ）に従う活性な親薬物をインビボで放出する、任意の共有結合した化合物である。

【0034】

Ｎ−酸化物は、窒素および酸素が供与結合を介して繋留されている式（Ｉ）の化合物である。

【0035】

全ての形態のキラル異性体または光学異性体およびジアステレオマーを含む他の形態の異性体が、本書中で対照とされることが企図される。キラル中心を含む化合物は、ラセミ体混合物としてまたは光学異性体的に富化された混合物として使用され得るか、またはラセミ体混合物は、周知の技術を用いて分離され得、それぞれの光学異性体が、単独で使用され得る。

【0036】

化合物が、他の互変異性型、例えばケト−エノール互変異性型で存在し得る場合、それぞれの互変異性型は、均等に存在していようと一方の形態が優勢に存在していようと、本発明の範囲内に含まれることが企図される。

【0037】

このように、他に提示されない限り、式（Ｉ）の化合物において、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が上で定義されたとおりであり、Ｒ４が水素でありならびに以下の式（Ｉ）ａまたは式（Ｉ）ｂの互変異性型の一方のみが示されている場合、残った一方もまた本発明の範囲内に含まれることが意図される：

【0038】

【化4】

【0039】

本記載において、他に示されない限り、用語「直鎖状または分枝鎖状のＣ_１−Ｃ_６アルキル」について、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルなどの任意の基を意図する。

【0040】

用語「直鎖状または分枝鎖状のＣ_２−Ｃ_６アルケニル」または「直鎖状または分枝鎖状のＣ_２−Ｃ_６アルキニル」について、例えば、ビニル、アリル、１−プロペニル、イソプロペニル、１−、２−または３−ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、エチニル、１−または２−プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキニシルなどを含む任意の２から６個の炭素原子を有する不飽和のアルケニル基またはアルキニル基を意図する。用語「Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル」について、他に特定されない限り、１つ以上の二重結合を含み得るが完全に共役したπ電子系を有さない３から６員の全炭素単環式環を意図する。シクロアルキル基の例は、限定しないが、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロペンテン、シクロヘキサン、シクロヘキセンおよびシクロヘキサジエンである。

【0041】

用語「ヘテロシクリル」について、１つ以上の炭素原子が窒素、酸素および硫黄のようなヘテロ原子によって置き換えられている、３から７員の飽和のまたは部分的に不飽和の炭素環を意図する。ヘテロシクリル基の非限定の例は、例えば、ピラン、ピロリジン、ピロリン、イミダゾリン、イミダゾリジン、ピラゾリジン、ピラゾリン、チアゾリン、チアゾリジン、ジヒドロフラン、テトラヒドロフラン、１，３−ジオキソラン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリンなどである。

【0042】

用語「アリール」について、単結合によって場合により互いにさらに縮合されるかまたは結合している１から４環系の一炭素環式、二炭素環式または多炭素環式炭化水素を意図していて、ここで、炭素環の少なくとも１つは、「芳香族」であり、ここで、用語「芳香族」は、π電子結合系によって完全に共役しているものをいう。このようなアリール基の非限定の例は、フェニル基、α−もしくはβ−ナフチル基またはビフェニル基である。

【0043】

用語「ヘテロアリール」について、Ｎ、ＯまたはＳの中から選択される１から３個までのヘテロ原子を有する芳香族複素環、代表的には５から７員の複素環を意図している；ヘテロアリール環は、場合により芳香族および非芳香族の炭素環または複素環とさらに縮合され得るかまたは結合され得る。このようなヘテロアリール基の非限定の例は、例えば、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、インドリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、フェニル−ピロリル、フリル、フェニル−フリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピラゾリル、チエニル、ベンゾチエニル、イソインドリニル、ベンゾイミダゾリル、キノリニル、イソキノリニル、１，２，３−トリアゾリル、１−フェニル−１，２，３−トリアゾリル、２，３−ジヒドロインドリル、２，３−ジヒドロベンゾフラニル、２，３−ジヒドロベンゾチオフェニル；ベンゾピラニル、２，３−ジヒドロベンゾオキサジニル、２，３−ジヒドロキノキサリニルなどである。

【0044】

Ｒ^ａおよびＲ^ｂに与えられた意味に従って、任意の上記の基は、これらの任意の自由位置において、１つ以上の基例えば１から６の基によって場合によりさらに置換され得る：例えば：ハロゲン、ニトロ、オキソ基（＝Ｏ）、カルボキシ、シアノ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、多フッ化アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール；例えば、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ウレイド、アルキルウレイドもしくはアリールウレイドのようなアミノ基およびアミノ基の誘導体；例えば、ホルミルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アルケニルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アルコキシカルボニルアミノのようなカルボニルアミノ基およびカルボニルアミノ基の誘導体；例えば、アルコキシ、多フッ化アルコキシ、アリールオキシ、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、シクロアルケニルオキシもしくはアルキリデンアミノオキシのようなヒドロキシ基およびヒドロキシ基の誘導体；例えば、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、シクロアルキルオキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニルのようなカルボニル基およびカルボニル基の誘導体；例えば、アルキルチオ、アリールチオ、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アルキルスルフィニル、アリールスルフィニル、アリールスルホニルオキシ、アミノスルホニル、アルキルアミノスルホニルもしくはジアルキルアミノスルホニルのような硫化誘導体より選択される基。

【0045】

同様に、適切な場合であれば、上記の置換基のそれぞれは、１つ以上の上記の基によってさらに置換され得る。

【0046】

本記載において、他に特定されない限り、用語「シアノ」について、−ＣＮ残基を意図する。

【0047】

用語「ニトロ」について、−ＮＯ_２基を意図する。

【0048】

用語「ハロゲン」について、フッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子を意図する。

【0049】

用語「多フッ化アルキルまたはアルコキシ」について、上で定義されたとおり、１つ以上の水素原子がフッ素原子によって置き換えられている直鎖状または分枝鎖状のＣ_１−Ｃ_６アルキルまたはアルコキシ基、例えば、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、２，２，２−トリフルオロエチル、２，２，２−トリフルオロエトキシ、１，２−ジフルオロエチル、１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロプロピル−２−イルなどを意図する。

【0050】

上記の全てから、例えば、シクロアルキルアルキル、アリールアルキル、ヘテロシクリルアルキル、アルコキシ、アルキルチオ、アリールオキシ、アリールアルキルオキシ、アルキルカルボニルオキシなどのような複合名称である名称で識別されている任意の基は、由来する部分から従来解釈されることが意図されていることが、当業者に明らかである。従来、例として、用語ヘテロシクリル−アルキルおよびシクロアルキル−アルキルは、上で定義されたとおり、複素環式基またはシクロアルキル基によってそれぞれさらに置換されている直鎖状または分枝鎖状のアルキル基を表す。

【0051】

用語「医薬的に許容される塩」は、アルカリ金属塩を形成するためおよび遊離酸または遊離塩基の付加塩を形成するために一般に使用される塩を含む。塩の性質は、医薬的に許容される限り重要ではない。本発明の化合物の酸付加塩は、無機酸または有機酸から調製され得る。このような無機酸の例は、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、炭酸、硫酸およびリン酸である。適切な有機酸は、脂肪族クラス、脂環式クラス、芳香族クラス、芳香脂肪族（ａｒａｌｉｐｈａｔｉｃ）クラス、複素環式クラス、カルボン酸クラスおよびスルホン酸クラスの有機酸より選択され得、例は、蟻酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、グルクロン酸、マレイン酸、フマル酸、ピルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、安息香酸、アントラニル酸、メシル酸、サリチル酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、フェニル酢酸、マンデル酸、エンボン（パモ）酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パントテン酸、トルエンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、スルファニル酸、ステアリン酸、シクロヘキシルアミノスルホン酸、アルギン酸、ヒドロキシ酪酸、ガラクタル酸およびガラクツロン酸である。本発明の化合物の好適な医薬的に許容される塩基付加塩は、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウムおよび亜鉛から作られる金属塩またはＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ−メチル−グルカミン）およびプロカインから作られる有機塩を含む。これらの塩の全ては、対応する本発明の化合物から従来手段によって、例えば適切な酸または塩基と反応させることによって、調製され得る。

【0052】

好ましいクラスの式（Ｉ）の化合物は、Ｒ１が−ＣＯＮＨＲ^ａ基であって、ここでＲ^ａが水素であるかまたは直鎖状または分枝鎖状のＣ_１−Ｃ_６アルキル、直鎖状または分枝鎖状のＣ_２−Ｃ_６アルケニル、アリールおよびアリールＣ_１−Ｃ_６アルキルより選択される場合により置換された基である化合物である。

【0053】

別の好ましいクラスの式（Ｉ）の化合物は、Ｒ１が−ＣＯＲ^ａ基であり、ここでＲ^ａが水素であるか、または直鎖状または分枝鎖状のＣ_１−Ｃ_６アルキル、直鎖状または分枝鎖状のＣ_２−Ｃ_６アルケニル、アリールおよびアリールＣ_１−Ｃ_６アルキルより選択される場合により置換された基である化合物である。

【0054】

別の好ましいクラスの式（Ｉ）の化合物は、Ｒ１が−ＳＯ_２Ｒ^ａ基であり、ここでＲ^ａが水素であるかまたは直鎖状または分枝鎖状のＣ_１−Ｃ_６アルキル、直鎖状または分枝鎖状のＣ_２−Ｃ_６アルケニル、アリールおよびアリールＣ_１−Ｃ_６アルキルより選択される場合により置換された基である化合物である。

【0055】

さらに好ましいクラスの式（Ｉ）の化合物は、Ｒ２が水素である化合物である。

【0056】

より好ましいクラスの式（Ｉ）の化合物は、Ｒ３が−ＮＲ^ａＲ^ｂ基であり、ここでＲ^ａおよびＲ^ｂは、両方とも水素であるか、またはＲ^ａおよびＲ^ｂの一方が水素でありならびにＲ^ａまたはＲ^ｂの残った一方が直鎖状または分枝鎖状のＣ_１−Ｃ_６アルキル、直鎖状または分枝鎖状のＣ_２−Ｃ_６アルケニル、アリールおよびアリールＣ_１−Ｃ_６アルキルより選択される場合により置換された基である化合物である。

【0057】

最も好ましいクラスの式（Ｉ）の化合物は、Ｒ４が水素である化合物である。

【0058】

本発明の任意の特定の、場合により医薬的に許容される塩の形態の式（Ｉ）の化合物の参照については、実施例の節を参照されたい。

【0059】

本発明はまた、上で定義された式（Ｉ）の化合物の調製のための方法を提供し、方法は、以下の工程を含むことを特徴とする：
ａ）式（ＩＩ）の化合物と：

【0060】

【化5】

式（ＩＩＩ）のアルコールとの反応：
Ｒ^ａ’−ＯＨ（ＩＩＩ）
式（ＩＩＩ）中、Ｒ^ａ’は、直鎖状または分枝鎖状のＣ_１−Ｃ_６アルキル基である；
ｂ）得られた式（ＩＶ）の化合物のフリーデル・クラフツ反応によるアシル化：

【0061】

【化6】

式（ＩＶ）中、Ｒ^ａ’は、上で定義されたとおりである；
ｃ）得られた式（Ｖ）の化合物と好適な上で定義された式（ＩＩＩ）のアルコールとの反応：

【0062】

【化7】

式（Ｖ）中、Ｒ^ａ’は、上で定義されたとおりである；
ｄ）得られた式（ＶＩ）の化合物の好適な式（ＸＸＩ）のハロ−シアノアルカンによるアルキル化：

【0063】

【化8】

【0064】

【化9】

式（ＶＩ）中、両Ｒ^ａ’は、それぞれ互いに独立して、上で定義されたとおりであり、式（ＸＸＩ）中、ｎは、０または１である；
ｅ）得られた式（ＶＩＩ）の化合物の分子内縮合：

【0065】

【化10】

式（ＶＩＩ）中、ｎは、上で定義されたとおりでありならびにＲ^ａ’は、それぞれ互いに独立して、上で定義されたとおりである；
ｆ）得られた式（ＶＩＩＩ）の化合物のヒドラジンまたはヒドラジンのヒドラジン塩による処理：

【0066】

【化11】

式（ＶＩＩＩ）中、ｎおよびＲ^ａ’は、上で定義されたとおりであり、
式（Ｉ）の化合物を生じる：

【0067】

【化12】

式（Ｉ）中、ｎは、０または１であり；Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は、水素でありならびにＲ３は、−ＯＲ^ａ’であり、ここで、Ｒ^ａ’は、直鎖状または分枝鎖状のＣ_１−Ｃ_６アルキル基である；
場合により、得られた式（Ｉ）の化合物の、単一の異性体への分離；および／もしくは−ＯＲ^ａ’基とＲ３が表す異なる基との置き換えおよび／もしくはＲ４基の導入および／もしくはアミノ部分の誘導体化および／もしくはＲ４基の除去による、得られた式（Ｉ）の化合物の異なる式（Ｉ）の化合物への変換ならびに／または所望される場合、式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容される塩への変換。

【0068】

式（Ｉ）の化合物の上記の必要に応じた変換は、以下のスキームＡにまとめられる。

【0069】

スキームＡ

【0070】

【化13】

ここで、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、上で定義されたとおりでありならびにＲ^ａ’は、直鎖状または分枝鎖状のＣ_１−Ｃ_６アルキル基である。

【0071】

本発明は、上で定義された式（Ｉ）の化合物の調製のための方法をさらに提供し、該方法は、式（Ｉ）の化合物が、
式（Ｉ）中、ｎは、式（Ｉ）に定義されたとおりであり；Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は、水素でありおよびＲ^ａ’は、直鎖状または分枝鎖状のＣ_１−Ｃ_６アルキル基であり、場合により、−ＯＲ^ａ’基をＲ３で表される異なる基と置き換えることによって、対応する式（Ｉ）の化合物に変換されることを特徴とし、この変換は、工程ｇ）において１つ以上の以下の反応により実施される：
ｇ．１）塩基性条件下で加水分解し、Ｒ３がＯＨである対応する式（Ｉ）の化合物を得、場合により、その後、得られた化合物と式（ＩＸ）のアミンとをカップリングすることにより、Ｒ３が−ＮＲ^ａＲ^ｂでありならびにＲ^ａおよびＲ^ｂが請求項１に記載のとおりである対応する式（Ｉ）の化合物を得ること：
ＨＮＲ^ａＲ^ｂ（ＩＸ）
式（ＩＸ）中、Ｒ^ａおよびＲ^ｂは、請求項１に記載のとおりである、または
ｇ．２）上で定義された式（ＩＩＩ）の化合物との反応によるエステル交換反応によって、Ｒ３がＯＲ^ａ’でありならびにＲ^ａ’が異なるＣ_１−Ｃ_６アルキルである対応する式（Ｉ）の化合物を得ること、または
ｇ．３）式（ＩＸ）のアミンとのカップリングにより、Ｒ３が−ＮＲ^ａＲ^ｂでありならびにＲ^ａおよびＲ^ｂが式（Ｉ）で定義されたとおりである対応する式（Ｉ）の化合物を得ること：
ＨＮＲ^ａＲ^ｂ（ＩＸ）
式（ＩＸ）中、Ｒ^ａおよびＲ^ｂは、式（Ｉ）で定義されたとおりである。

【0072】

本発明は、上で定義された式（Ｉ）の化合物の調製のための方法をさらに提供し、該方法は、式（Ｉ）の化合物が、ｎおよびＲ３が式（Ｉ）で定義されたとおりでありならびにＲ１、Ｒ２およびＲ４が水素であり、場合により、Ｒ４基を導入することによって対応する式（Ｉ）の化合物に変換されることを特徴とし、この変換は、工程ｈ）において１つ以上の以下の反応により実施される：
ｈ．１）等量の式（Ｘ）のハライドとのカップリングにより、Ｒ４がＲ^ａでありならびにＲ^ａが式（Ｉ）で定義されたとおりであるが水素ではない対応する式（Ｉ）の化合物を得ること：
Ｒ^ａＺ（Ｘ）
式（Ｘ）中、Ｒ^ａは、式（Ｉ）で定義されたとおりであるが水素ではなくならびにＺは、ハロゲンである、または
ｈ．２）等量の式（ＸＩ）のアシルハライドとのカップリングにより、Ｒ４が−ＣＯＲ^ａでありならびにＲ^ａが上で定義されたとおりである対応する式（Ｉ）の化合物を得ること：
Ｒ^ａＣＯＺ（ＸＩ）
式（ＸＩ）中、Ｒ^ａおよびＺは、上で定義されたとおりである、または
ｈ．３）等量の式（ＸＩＩ）のアルコキシカルボニルハライドとのカップリングにより、Ｒ４が−ＯＣＯＲ^ａでありならびにＲ^ａが上で定義されたとおりである対応する式（Ｉ）の化合物を得ること：
Ｒ^ａＯＣＯＺ（ＸＩＩ）
式（ＸＩＩ）中、Ｒ^ａおよびＺは、上で定義されたとおりである、または
ｈ．４）等量の式（ＸＩＩＩ）のスルホニルハライドとのカップリングにより、Ｒ４が−ＳＯ_２Ｒ^ａでありならびにＲ^ａが上で定義されたとおりである対応する式（Ｉ）の化合物を得ること：
Ｒ^ａＳＯ_２Ｚ（ＸＩＩＩ）
式（ＸＩＩＩ）中、Ｒ^ａおよびＺは、上で定義されたとおりである、または
ｈ．５）等量の式（ＸＩＶ）のイソシアナートとのカップリングにより、Ｒ４が−ＣＯＮＨＲ^ａでありならびにＲ^ａが上で定義されたとおりである対応する式（Ｉ）の化合物を得ること：
Ｒ^ａＮＣＯ（ＸＩＶ）
式（ＸＩＶ）中、Ｒ^ａは、上で定義されたとおりである。

【0073】

本発明は、上で定義された式（Ｉ）の化合物の調製のための方法をさらに提供し、該方法は、式（Ｉ）の化合物が、ｎおよびＲ３が式（Ｉ）で定義されたとおりであり；Ｒ１およびＲ２が水素でありならびにＲ４が式（Ｉ）で定義されたとおりであるが水素ではなく、場合により、アミノ部分の誘導体化によって対応する式（Ｉ）の化合物に変換されることを特徴とし、この変換は、工程ｉ）において１つ以上の以下の反応により実施される：
ｉ．１）等量の式（ＸＩ）のアシルハライドとのカップリングにより、Ｒ１またはＲ２の一方が水素でありならびに他方が−ＣＯＲ^ａでありならびにＲ^ａが上で定義されたとおりである対応する式（Ｉ）の化合物を得ること：
Ｒ^ａＣＯＺ（ＸＩ）
式（ＸＩ）中、Ｒ^ａは、式（Ｉ）で定義されたとおりであり、水素ではなく、ならびにＺは、ハロゲンである、または
ｉ．２）等量の式（ＸＩＩ）のアルコキシカルボニルハライドとのカップリングにより、Ｒ１またはＲ２の一方が水素でありならびに他方が−ＯＣＯＲ^ａでありならびにＲ^ａが上で定義されたとおりである対応する式（Ｉ）の化合物を得ること：
Ｒ^ａＯＣＯＺ（ＸＩＩ）
式（ＸＩＩ）中、Ｒ^ａおよびＺは、上で定義されたとおりである、または
ｉ．３）等量の式（ＸＩＩＩ）のスルホニルハライドとのカップリングにより、Ｒ１またはＲ２の一方が水素でありならびに他方が−ＳＯ_２Ｒ^ａでありならびにＲ^ａが上で定義されたとおりである対応する式（Ｉ）の化合物を得ること：
Ｒ^ａＳＯ_２Ｚ（ＸＩＩＩ）
式（ＸＩＩＩ）中、Ｒ^ａおよびＺは、上で定義されたとおりである、または
ｉ．４）等量の式（ＸＩＶ）のイソシアナートとのカップリングにより、Ｒ１またはＲ２の一方が水素でありならびに他方が−ＣＯＮＨＲ^ａでありならびにＲ^ａが上で定義されたとおりである対応する式（Ｉ）の化合物を得ること：
Ｒ^ａＮＣＯ（ＸＩＶ）
式（ＸＩＶ）中、Ｒ^ａは、上で定義されたとおりである、または
ｉ．５）等量の式（ＸＶ）のカルボニル化合物とのカップリングにより、Ｒ１またはＲ２の一方が水素でありならびに他方が−ＣＯＲ^ａでありならびにＲ^ａが上で定義されたとおりである対応する式（Ｉ）の化合物を得ること：
Ｒ^ａＣＯＲｂ^ｅ（ＸＶ）
式（ＸＶ）中、Ｒ^ａおよびＲ^ｂは、式（Ｉ）で定義されたとおりである。

【0074】

本発明は、上で定義された式（Ｉ）の化合物の調製のための方法をさらに提供し、該方法は、式（Ｉ）の化合物が、ｎおよびＲ３が式（Ｉ）で定義されたとおりであり；Ｒ１およびＲ２の一方が水素でありならびに他方が式（Ｉ）で定義されたとおりであるが水素ではなくならびにＲ４が式（Ｉ）で定義されたとおりであるが水素ではなく、場合により、アミノ部分のさらなる誘導体化によって対応する式（Ｉ）の化合物に変換されることを特徴とし、この変換は、工程ｊ）において、上述の工程ｉ．１）からｉ．５）において記載された反応の１つ以上により実施される。

【0075】

本発明は、上で定義された式（Ｉ）の化合物の調製のための方法をさらに提供し、該方法は、式（Ｉ）の化合物が、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が式（Ｉ）で定義されたとおりでありならびにＲ４が式（Ｉ）で定義されたとおりであるが水素ではなく、場合により、塩基性溶液での処理によりＲ４基を除去してＲ４が水素である式（Ｉ）の化合物を得ることによって対応する式（Ｉ）の化合物に変換することを特徴とし、この変換は、工程ｋ）において実施される。

【0076】

上記の方法は、周知の方法に従って実施され得る同様の方法である。

【0077】

本発明の対象である方法の開始材料は、任意の存在し得る改変体および改変体の任意の反応物の全てを含めて、公知の化合物であり、それ自体が市販されていないとしても、周知の方法に従って調製され得る。

【0078】

例えば、式（ＩＩ）および（ＸＸＩ）の化合物が、市販されている。

【0079】

式（ＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、（Ｘｌｌｌｌ）、（ＸＩＶ）、（ＸＶ）および（ＸＸＩ）の化合物は、市販されているか、または公知であって、公知の方法に従って容易に得られる。一般的参照については、以下を参照されたい：Ｓｍｉｔｈ，Ｍｉｃｈａｅｌ−Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：ｒｅａｃｔｉｏｎｓ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍｉｃｈａｅｌ Ｂ．Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｊｅｒｒｙ Ｍａｒｃｈ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（ＮＹ），２００１。

【0080】

方法の工程ａ）に従って、２，２，２−トリクロロ−１−（１Ｈ−ピロール−２−イル）エタノンは、エタノールと反応させられてエチル１Ｈ−ピロール−２−カルボキシラートを得る。この反応は、縮合反応について当該分野で周知である種々の方法および実験条件で行われ得る。実践条件についての一般的参照については、以下を参照されたい：Ｎｉｓｈｉｗａｋｉ，Ｅ．ｅｔ ａｌ，Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ［ＨＴＣＹＡＭ］１９８８，２７，１９４５；Ｆｒｅｅｄｌａｎｄｅｒ，Ｒ．Ｓ．ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ［ＪＯＣＥＡＨ］１９８１，４６，３５１９；Ｈａｒｂｕｃｋ，Ｊ．Ｗ．ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ［ＪＯＣＥＡＨ］１９７２，３７，３６１８；およびＢｏｏｔｈ，Ｃ ｅｔ ａｌ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ［ＴＥＬＥＡＹ］１９９２，３３（３），４１３。好ましくは、この反応は、トリアルキルアミン、炭酸ナトリウムもしくは炭酸カルシウム、アルカリ水酸化物またはアルカリ水素化物のような塩基の存在下で実施される。溶媒は、同じエタノールではない場合、ＴＨＦ、ＡＣＮ、ジオキサンまたはこれらの混合物のような好適な溶媒であり得、ならびに温度は、室温から還流までの範囲である。

【0081】

方法の工程ｂ）に従って、式（ＩＶ）の化合物は、ＡｌＣ_３、ＺｎＣｌ_２、ピリジン、ＦｅＣｌ_３またはＳｍ（ＯＴｆ）_３のような強ルイス酸の存在下で、エーテル、ＤＣＭ、ＴＨＦのような脱水溶媒中でトリクロロアセチルクロリドと反応させられる。好ましくは、この反応は、還流温度にて実施される。

【0082】

方法の工程ｃ）に従って、式（Ｖ）の化合物は、エタノールと反応させられ、およびこの反応は、工程（ａ）の下で記載されるように実施される。

【0083】

方法の工程ｄ）に従って、式（ＶＩ）の化合物のハロ−シアノアルカンとの反応は、縮合反応について当該分野で周知である種々の方法および実験条件で行われ得る。実践条件についての一般的参照については、以下を参照されたい：Ｓｔｅｖｅｎｓ，Ｃ．Ｖ．ｅｔ ａｌ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ［ＴＥＬＥＡＹ］２００７，４８（４０），７１０８−７１１１およびＤｕｍａｓ，Ｄ．Ｊ．，Ｊ Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ［ＪＯＣＥＡＨ］１９８８，５３，４６５０。好ましくは、この反応は、アルカリ炭酸塩、アルカリ水酸化物のような塩基の存在下で、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、アセトニトリル、１，４−ジオキサンまたはジメチルアミドのような好適な溶媒中で実施される。

【0084】

方法の工程ｅ）に従って、式（ＶＩＩ）の化合物の分子内縮合は、当該分野で周知である種々の方法および実験条件で実施され得る。一般的参照については、以下を参照されたい：Ｃｒｏｗｌｅｙ，Ｊ．Ｉ．ｅｔ ａｌ，Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ［ＪＡＣＳＡＴ］１９７０，９２，６３６３−６３６５。好ましくは、この反応は、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、トルエンまたはアルコール溶媒中のアルコキシドカリウムまたはアルコキシドナトリウムによるディークマン反応の条件に従って実施される。

【0085】

方法の工程ｆ）に従って、式（ＶＩＩＩ）の化合物とヒドラジンまたはヒドラジン塩との間の反応は、当該分野で周知である種々の方法および実験条件で実施され得る。好ましくは、この反応は、触媒量の酸、例えば塩酸、酢酸または硫酸の存在下で、例えばテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、アセトニトリル、メタノールまたはエタノールのような好適な溶媒中で、およそ室温から還流までの範囲内の温度で、約３０分間から約８時間まで変動する時間の間、実施される。

【0086】

方法の工程ｇ．１）からｇ．３）のいずれか１つに従って、工程ｅ）で得られた式（Ｉ）のアルコキシカルボニル誘導体の、−ＯＲ^ａ’基のＲ３で表される異なる基での置き換えによる、異なる式（Ｉ）の化合物への変換は、従来の方法に従う種々の方法において実施され得る。

【0087】

方法の工程ｇ．１）に従って、対応するカルボン酸誘導体への変換のための、酸性または塩基性条件下でのアルコキシカルボニル誘導体の加水分解は、Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｅｓｔｅｒｓ，Ｓａｕｌ Ｐａｔａｉ，Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ １９６９）において報告された標準的方法に従って実施される。

【0088】

方法の工程ｇ．２）に従って、アルコキシカルボニル誘導体のエステル交換反応は、Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｅｓｔｅｒｓ，Ｓａｕｌ Ｐａｔａｉ，Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ １９６９）において報告された標準的方法に従って実施される。

【0089】

方法の工程ｇ．３）に従って、アルコキシカルボニルまたは対応するカルボン酸誘導体のアミンとのカップリングは、Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｍｉｄｅｓ，Ｓａｕｌ Ｐａｔａｉ，Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ １９７０）において報告された標準的方法に従って実施される。好ましくは、この反応は、好適な縮合剤、例えばジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＨＢＴＯＨ）、Ｏ−ベンゾトリアゾリルテトラメチルイソウロニウムテトラフルオロボレアート（ＴＢＴＵ）またはベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＰｙＢＯＰ）の存在下で、ジクロロメタンまたはジメチルホルムアミドのような適切な溶媒中で、当業者に周知の設定下で実施される。

【0090】

方法の工程ｈ．１）からｈ．５）のいずれか１つに従って、Ｒ４基の導入は、従来の方法に従って種々の方法で実施され得る。

【0091】

１位または２位におけるピラゾール窒素上のＲ４基の選択的導入は、互変異性平衡ゆえに、化学量論量のアルキル化剤、アシル化剤、カルボニル化剤、スルホリル化剤またはそれぞれ式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、（ＸＩＩＩ）、（ＸＩＶ）のイソシアナートと共に作用させ、この結果、３位におけるアミノ基においてすら、多重誘導体化を防止することにより得られ得る。この反応は、Ｒ４置換基が導入されるまさにその位置で開裂する塩基を用いることなく、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフランまたはジオキサンのような好適な溶媒中で実施される。

【0092】

方法の工程ｉ．１）からｉ．５）のいずれか１つに従って、アミノ部分の誘導体化は、従来の方法に従って種々の方法で実施され得る。参照については、以下を参照されたい：Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｍｉｎｏ Ｇｒｏｕｐ，Ｓａｕｌ Ｐａｔａｉ，Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ １９６８）またはＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．ｏｒ Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１９７１，９３，２８９７またはＣｏｍｐｒｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔｒｏｓｔ Ｂ．Ｎ．，Ｆｌｅｍｉｎｇ Ｌ（Ｅｄｓ．Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１；Ｖｏｌ．８）。

【0093】

好ましくは、方法の工程ｉ．１）からｉ．４）のいずれか１つに従って、式（Ｉ）の化合物は、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサンなどのような好適な溶媒中に溶解され、および好適な塩基、例えばピリジン、トリエチルアミン、ジイソプロピルアミンまたは炭酸ナトリウムがこれに添加される。次いで、式（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、（ＸＩＩＩ）の化合物が、それぞれ添加され、混合物は、約２０℃から約８０℃の範囲内の温度で約２時間から約１５時間の時間にわたって撹拌される。式（ＸＩＶ）のイソシアナートの場合、塩基の使用は、場合による。

【0094】

好ましくは、方法の工程ｉ．５）に従って、式（Ｉ）の化合物は、式（ＸＶ）のアルデヒド誘導体またはケトン誘導体と、還元条件下で反応させられる。上記から、Ｒ^ａおよびＲ^ｂの一方が水素である式（ＸＶ）のアルデヒド誘導体を使用することにより、Ｒ１が−ＣＨ_２Ｒ^ａである対応する誘導体が得られることは、当業者に明らかである。同様に、ケトン誘導体を使用することにより、Ｒ１が−ＣＨＲ^ａＲ^ｂであり、ここで、Ｒ^ａおよびＲ^ｂは上で定義されたとおりであるが水素ではない、対応する誘導体が、得られる。

【0095】

方法の工程ｊ．１）からｊ．５）のいずれか１つに従って、アミノ部分のさらなる誘導体化は、従来の方法に従って種々の方法で実施され得る。アミノ部分のさらなる誘導体化は、上述の工程ｉ）で報告されたのと同じ条件で実施されて、３位の窒素におけるビス−置換が得られることは、当業者に明らかである。

【0096】

方法の工程ｋ）に従って、Ｒ４基の除去は、従来の方法に従って種々の方法で実施され得、好ましくは、この除去は、式（Ｉ）の化合物を塩基性溶液、例えばヒドラジン、アンモニア、水酸化金属などと反応させることによって実施され得る。最強の塩基により、最終的に３位に存在するイミドが、加水分解され得る。

【0097】

式（Ｉ）の化合物はまた、当業者に公知である標準的方法に従って医薬的に許容される塩に変形され得る。または、塩として得られる式（Ｉ）の化合物は、当業者に公知の標準的方法に従って遊離塩基または遊離酸に変形され得る。

【0098】

上記に加えて、式（Ｉ）の化合物は、当該分野で周知であるコンビナトリアル化学技術に従い、中間産物間の連続的様式での上述の反応によって、ならびに固相合成（ＳＰＳ）条件下で作用することによって、有利に調製され得る。

【0099】

本発明はまた、上で定義された式（Ｉ）の化合物の調製のための方法も提供し、この方法は、以下の工程を含むことを特徴とする：
ｌ）上述の工程（ｆ）で得られた式（Ｉ）のアルコキシカルボニル誘導体のトリフルオロ無水酢酸によるアシル化；
ｍ）得られた化合物のピラゾロ環の１位または２位からのトリフルオロアセチル基の除去；
ｎ）３位においてトリフルオロアセチル化された得られた式（Ｉ）の化合物の好適な固体支持体としての樹脂へのローディングであって、この樹脂は、例えばＢｒ−Ｗａｎｇ樹脂、トリチル樹脂、Ｃｌ−トリチル樹脂、Ｍｅｒｒｉｅｆｉｅｌｄ樹脂、ＭＡＭＰ樹脂またはイソシアナート樹脂およびこれらの誘導体などの市販のポリスチレン樹脂である；
ｏ）得られた式（ＸＶＩ）の化合物のアルコキシカルボニル基およびトリフルオロアセチル基の酸性条件下または塩基性条件下での加水分解；
ｐ）得られた式（ＸＶＩＩ）の化合物のカルボキシル基と上述の式（ＩＸ）のアミンとのカップリング；
ｑ）得られた式（ＸＶＩＩＩ）化合物の３位におけるアミノ部分の誘導体化；
Ｒ）得られた式（ＸＩＸ）化合物からの樹脂の分割により、所望の式（Ｉ）の化合物を得ること、場合により、得られた式（Ｉ）の化合物を異なる式（Ｉ）の化合物に変換することおよび／または所望される場合、得られた式（Ｉ）の化合物を医薬的に許容される塩に変換すること。

【0100】

上記の固相合成（ＳＰＳ）は、以下のスキームＢにまとめられる。

【0101】

スキームＢ

【0102】

【化14】

ここで、樹脂は、例えば、Ｂｒ−Ｗａｎｇ樹脂、トリチル樹脂、Ｃｌ−トリチル樹脂、Ｍｅｒｒｉｅｆｉｅｌｄ樹脂、ＭＡＭＰ樹脂またはイソシアナート樹脂およびこれらの誘導体などの市販のポリスチレン樹脂であり；ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、式（Ｉ）で定義されたとおりでありならびにＲ^ａ’は、直鎖状または分枝鎖状のＣ_１−Ｃ_６アルキル基である。

【0103】

任意の上記の反応は、公知の方法に従って、以前に報告されているように行うことによって実施され、上記の式（Ｉ）の化合物を得させる。

【0104】

工程ｌ）は、工程ｉ．１）に記載されるように実施される。

【0105】

工程ｍ）は、工程ｋ）に記載されるように実施される。

【0106】

工程ｎ）に従って、式（Ｉ）の化合物は、トリチルクロリド樹脂（コポリスチレン−１％ＤＶＢ）上にローディングされ、式（ＸＶＩ）の化合物を得る。ローディング反応は、好適な溶媒、例えばジクロロメタンまたはテトラヒドロフラン中で、塩基、例えばトリエチルアミン、ピリジン、ジイソプロピルアミンなどの存在下で実施され得る。この反応は、１８時間と２４時間との間の時間で室温にてゆっくりと進む（ｓｈａｃｋｅｄ）。参照については、以下を参照されたい：Ｍ．Ａ．Ｙｏｕｎｇｍａｎ，ｅｔ ａｌ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９７，３８，６３４７；Ｋ．Ｂａｒｌｏｓ，ｅｔ ａｌ．Ｐｏｓｔｅｒ Ｐ３１６，２４ｔｈ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ，Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈ，１９９６。

【0107】

工程ｏ）は、工程ｇ．１）に記載されるように実施される。

【0108】

工程ｐ）は、工程ｇ．３）に記載されるように実施される。

【0109】

工程ｑ）は、工程ｉ）およびｊ）に記載されるように実施される。

【0110】

工程（ｒ）に従って、樹脂の開裂は、好適な酸、例えば、塩酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸またはｐ−トルエンスルホン酸の存在下において酸性条件で実施される。好ましくは、この反応は、溶媒としてのジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸を用いて実施される。

【0111】

明らかに、以前に示されたコンビナトリアル化学技術に従う作業により、複数の式（Ｉ）の化合物が、得られ得る。

【0112】

従って、本発明の好ましい実施形態に従う、２種以上の式（Ｉ）の化合物および式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容される塩のライブラリーが、本発明のさらなる目的である。

【0113】

【化15】

式（Ｉ）中、
ｎは、０または１であり；
Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は、それぞれ互いに独立して、−Ｒ^ａ、−ＣＯＲ^ａ、−ＣＯＮＨＲ^ａ、−ＳＯ_２Ｒ^ａおよび−ＣＯＯＲ^ａからなる群より選択され；
Ｒ３は、−ＮＲ^ａＲ^ｂ基または−ＯＲ^ａ基であり；
ここで、同じであるかまたは異なっているＲ^ａおよびＲ^ｂは、それぞれ独立して水素であるかまたは直鎖状または分枝鎖状のＣ_１−Ｃ_６アルキル、直鎖状または分枝鎖状のＣ_２−Ｃ_６アルケニル、直鎖状または分枝鎖状のＣ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、シクロアルキルＣ_１−Ｃ_６アルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルＣ_１−Ｃ_６アルキル、アリール、アリールＣ_１−Ｃ_６アルキル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールＣ_１−Ｃ_６アルキルより選択される場合により置換された基であるかまたは結合している窒素原子と一緒になって、Ｒ^ａおよびＲ^ｂのいずれかは、場合によりＳ、Ｏ、ＮまたはＮＨより選択されるさらなる１つのヘテロ原子またはヘテロ原子基を含む場合により置換された３から８員の複素環を形成し得る。

【0114】

式（Ｉ）の化合物の上記のライブラリーについての一般的参照については、実施例の節を参照されたい。上記の全てから、このような誘導体のライブラリー、例えば約１０００種類の式（Ｉ）の化合物を含むライブラリーが一旦調製されたら、このライブラリーは、以前に報告されているように、所定のキナーゼに対するスクリーニングのために非常に有利に使用され得ることが、当業者に明らかである。

【0115】

化合物のライブラリーおよび生物学的活性についてのスクリーニングの道具としてのその使用に対する一般的な参照については、以下を参照されたい：Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９９，４２，２３７３−２３８２；およびＢｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１０（２０００），２２３−２２６。

【発明を実施するための形態】

【0116】

薬理学
推定キナーゼインヒビターの阻害活性および選択された化合物の能力は、Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）発光キナーゼアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから市販され、Ｋｏｒｅｓａｗａ，Ｍ．ａｎｄ Ｏｋａｂｅ，Ｔ．（２００４）Ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｗｉｔｈ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ ＡＴＰ ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ：Ａ ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ｎｏｎ−ｒａｄｉｏｉｓｏｔｏｐｅ，ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ．Ａｓｓａｙ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．２，１５３−６０）に記載される。）の使用に基づくアッセイの方法を通して決定される。

【0117】

キナーゼ活性の結果としてのＡＴＰの枯渇は、ルシフェリン、酸素およびＡＴＰを、オキシルシフェリンおよび光を産生する反応における基質として用いるＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）またはＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｐｌｕｓ試薬の使用を通して非常に感度の高い様式でモニタリングされ得る。

【0118】

本書中で使用される省略形および略称は、以下の意味を有する：
ａＣＮ アセトニトリル
ｂＳＡ ウシ血清アルブミン
Ｔｒｉｓ ２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール
Ｈｅｐｅｓ Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン酸）
ｄＴＴ トレオ−１，４−ジメルカプト−２，３−ブタンジオール
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴｅｒｔＢｕＯＫ ｔｅｒｔ−ブトキシカリウム
ＭＴＢＥ メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル
ｄＩＰＥＡ ジイソプロピルエチルアミン
ＰｙＢＯＰ ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリ（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート
ＥＤＣ １−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
ｄＨＢＴＯＨ ３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン
ＴＥＡ トリエチルアミン
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＦＡＡ トリフルオロ無水酢酸
ＴＭＯＦ トリメチルオルトホルマート
ｄＣＥ ジクロロエタン
ｄＣＭ ジクロロメタン
ｄＭＦ ジメチルホルムアミド
ｄＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＨＯＢＴ ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＫＤａ キロダルトン
ｍｇ ミリグラム
μｇ マイクログラム
ｎｇ ナノグラム
Ｌ リットル
ｍＬ ミリリットル
μＬ マイクロリットル
Ｍ モル濃度
ｍＭ ミリモル濃度
μＭ マイクロモル濃度
ｎＭ ナノモル濃度
キナーゼ反応条件は、標的（酵素）依存的であり、従って、それぞれの適応を受ける。Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）発光キナーゼアッセイは、実質的にいかなるキナーゼと基質との組み合わせにも使用され得る。

【0119】

また、緩衝液条件も、目的のキナーゼに依存して変動し得る（例えば、ＰＫＡについては、最終容量５０μｌ中、４０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．５、２０ｍＭ ＭｇＣｌ_２、０．１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡの組成物が使用される。）。代表的には、ＡＴＰ力価の範囲は、０．１μＭから１０μＭである。

【0120】

最適なキナーゼ基質は、キナーゼ反応ウェルと非キナーゼウェルとを比較した際に、発光において最大の変化を生じる。

【0121】

最適量のキナーゼは、最適量のＡＴＰおよび最適なキナーゼ基質を用いて、プレート間で２倍の連続希釈を作ることによって決定される。その後の化合物スクリーニングおよびＩＣ５０決定における使用に最適な量のキナーゼは、発光がキナーゼ力価曲線（シグモイド用量反応）の比例領域の範囲内であることが必要とされる量である。

【0122】

自動化Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイ
このアッセイを、キナーゼ活性および／または阻害の測定のために設定した。

【0123】

これは、タンパク質キナーゼの全ての種、例えばＰＬＫファミリーであるＡＢＬ，ＡＣＫ１，ＡＫＴ１，ＡＬＫ，ＡＵＲ１，ＡＵＲ２，ＢＲＫ，ＣＤＣ７／ＤＢＦ４，ＣＤＫ２／ＣＹＣＡ，ＣＨＫ１，ＣＫ２，ＥＥ２ＦＫ，ＥＧＦＲ１，ＥＲＫ２，ＦＡＫ，ＦＧＦＲ１，ＦＬＴ３，ＧＳＫ３ｂｅｔａ，ＩＧＦＲ１，ＩＫＫ２，ＩＲ，ＪＡＫ２，ＪＡＫ３，ＫＩＴ，ＬＣＫ，ＬＹＮ，ＭＡＰＫＡＰＫ２，ＭＥＬＫ，ＭＥＴ，ＭＰＳ１，ＭＳＴ４，ＮＥＫ６，ＮＩＭ１，Ｐ３８ａｌｐｈａ，ＰＡＫ４，ＰＤＧＦＲ，ＰＤＫ１，ＰＥＲＫ，ＰＩＭ１，ＰＩＭ２，ＰＩＭ３，ＰＫＡａｌｐｈａ，ＰＫＣｂｅｔａ，ＰＬＫ１，ＲＥＴ，ＳＵＬＵ１，ＳＹＫ，ＴＲＫＡ，ＶＥＧＦＲ２，ＶＥＧＦＲ３またはＺＡＰ７０に対し、均質、迅速、非放射性および好適である。

【0124】

このアッセイを３８４ウェルプレート内で確立した：試験混合物は、以下からなっていた：
１）３×酵素混合物（３×キナーゼ緩衝液中）、５μｌ／ウェル
２）３×基質およびＡＴＰ混合物（ｄｄＨ_２Ｏ中）、５μｌ／ウェル
３）３×式（Ｉ）の化合物（ｄｄＨ_２Ｏ−３％ ＤＭＳＯ中に希釈）、５μｌ／ウェル）
結果として、１０μＭにおける阻害の百分率を、試験した各化合物について評価した：化合物希釈およびアッセイスキームについては、以下を参照されたい。各酵素は、それぞれの緩衝液構成、基質型および濃度を有した。代わりに、インキュベーション時間は、全ての標的に対して９０分間であった。

【0125】

試験化合物を、１００％ ＤＭＳＯ中の１ｍＭ溶液として、９６ウェルプレートに入れた。このプレートを、３０μＭまでｄｄＨ_２Ｏ、３％ ＤＭＳＯ中で希釈した；各９６ウェルプレートの５μｌを３８４ウェルプレート内の４箇所の４分の１部分に分配することにより、４枚のプレートを、３８４ウェルプレート内に再構成した。Ｐ２３ウェルおよびＰ２４ウェルに、内部標準インヒビターであるスタウロスポリンを添加した。

【0126】

アッセイスキーム
まず、試験プレートに、５μｌの化合物希釈物（３０μＭ、３×希釈に相当）を添加し、次いで、研究中の各標的に特異的な酵素混合物（３×）のための１つのリザーバーおよびＡＴＰ混合物（３×）のための１つのリザーバーと一緒に、ロボットステーション上にローディングした。

【0127】

アッセイを開始するために、ロボットは、チップの内側にエアギャップ（５μｌ）を作って５μｌのＡＴＰ／基質混合物を吸引し、５μｌの酵素混合物を吸引した。その後、試験プレート内への分配により、ロボット自体が上昇下降ピペッティングによって行う３周期の混合の後に、キナーゼ反応を開始させた。この時点で、正確な濃度を、全ての試薬について再現した。

【0128】

ロボットは、プレートを９０分間室温にてインキュベートし、次いで、１５μｌのキナーゼ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬を反応混合物中にピペッティングすることにより、反応を停止させた。試薬の添加後、３周期の混合を直ちに行った。

【0129】

Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）技術の原則は、試薬混合物中における酸素、ルシフェリンおよびルシフェラーゼ酵素の存在である：キナーゼ反応物から残留するＡＴＰの存在下で、ＡＴＰの量に直接的に依存して、オキシルシフェリンが発光と共に産生される。この技術の最適な性能のために、キナーゼ反応は、少なくとも１５−２０％の利用可能なＡＴＰを使用しなければならない。

【0130】

発光シグナルを安定化させるためのさらなる６０分間のインキュベーションの後、プレートを、ＶｉｅｗＬｕｘ（登録商標）装置で読み取った。データを、百分率阻害データを提供するＡｓｓａｙ Ｅｘｐｌｏｒｅｒ（登録商標）ソフトウェアパッケージを用いて分析した。本書中の例として、ＡＬＫｔｉｄｅ ＹＦＦ ＡＰＣｏキナーゼに対する式（Ｉ）の化合物を試験するために使用したアッセイ条件を報告する；
ａＴＰ濃度：１μＭ
酵素濃度：１００ｎＭ
反応緩衝液：Ｈｅｐｅｓ ５０ｍＭ ｐＨ７．５、ＭｇＣｌ_２ ５ｍＭ、ＭｎＣｌ_２１ｍＭ、ＤＴＴ １ｍＭ、Ｎａ_３ＶＯ_４ ３μＭ、０．２ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ。

【0131】

アッセイ方法：５μｌの式（Ｉ）の化合物（３×）を添加し、５μｌの１×緩衝液中ＡＴＰ／Ｓ混合物（３×）を添加し；２×緩衝液＋３×ＢＳＡ中５μｌの酵素を添加し；ブランクについて、５μｌの酵素非含有の２×緩衝液＋３×ＢＳＡを添加する。９０分間のインキュベーション後、１５μｌ／ウェルのＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ試薬を添加する。発光シグナルを安定化させるための６０−９０分間のインキュベーション後、プレートを、ＶｉｕｗＬｕｘ装置上で読み取る。

【0132】

推定キナーゼインヒビターの阻害活性および選択された化合物の能力はまた、リン酸基転移反応アッセイを用いても決定された。

【0133】

特異的なペプチド基質またはタンパク質基質は、その特異的なｓｅｒ−ｔｈｒキナーゼまたはｔｙｒキナーゼによって、^３３Ｐ−γ−ＡＴＰによって追跡されるＡＴＰの存在下ならびにそれぞれの最適な緩衝液および補助因子の存在下でリン酸基転移される。リン酸化反応の最後に、９８％を超える未標識ＡＴＰおよび放射性ＡＴＰが、過剰量のイオン交換ｄｏｗｅｘ樹脂によって捕捉される；次いで、この樹脂は、重力によって反応プレートの底に落ちる。その後、上清を取り除いてカウンティングプレート内に移動させ、β−カウンティングによって評価する。

【0134】

反応条件は、標的（酵素）依存的であり、従って、個々の適応を受ける。また、緩衝液条件も、目的のキナーゼに依存して変動し得る。アッセイは、実質的にいかなるキナーゼと基質との組み合わせにも使用され得、例えば以下のような全ての種のタンパク質キナーゼについて好適である：ＡＢＬ，ＡＣＫ１，ＡＫＴ１，ＡＬＫ，ＡＵＲ１，ＡＵＲ２，ＢＲＫ，ＢＵＢ１，ＣＤＣ７／ＤＢＦ４，ＣＤＫ２／ＣＹＣＡ，ＣＨＫ１，ＣＫ２，ＥＥＦ２Ｋ，ＥＧＦＲ１，ＥｐｈＡ２，ＥｐｈＢ４，ＥＲＫ２，ＦＡＫ，ＦＧＦＲ１，ＦＬＴ３，ＧＳＫ３ｂｅｔａ，Ｈａｓｐｉｎ，ＩＧＦＲ１，ＩＫＫ２，ＩＲ，ＪＡＫ１，ＪＡＫ２，ＪＡＫ３，ＫＩＴ，ＬＣＫ，ＬＹＮ，ＭＡＰＫＡＰＫ２，ＭＥＬＫ，ＭＥＴ，ＭＮＫ２，ＭＰＳ１，ＭＳＴ４，ＮＥＫ６，ＮＩＭ１，Ｐ３８ａｌｐｈａ，ＰＡＫ４，ＰＤＧＦＲ，ＰＤＫ１，ＰＥＲＫ，ＰＩＭ１，ＰＩＭ２，ＰＫＡａｌｐｈａ，ＰＫＣｂｅｔａ，ＰＬＫ１，ＲＥＴ，ＲＯＳ１，ＳＵＬＵ１，Ｓｙｋ，ＴＬＫ２，ＴＲＫＡ，ＴＹＫ，ＶＥＧＦＲ２，ＶＥＧＦＲ３，ＺＡＰ７０。

【0135】

本書中の例として、ｃｄｃ７キナーゼおよびｃｄｋ２キナーゼに対する式（Ｉ）の化合物を試験するために使用されるアッセイ条件を、報告する。

【0136】

ｃｄｃ７活性の阻害アッセイ
推定Ｃｄｃ７インヒビターの阻害活性および選択された化合物の能力は、Ｄｏｗｅｘ樹脂捕捉技術の使用に基づくアッセイの方法を通して決定される。

【0137】

このアッセイは、キナーゼによる放射性標識ホスファート部分の受容体基質への移動からなる。得られた３３Ｐ−標識産物は、未反応のトレーサーから分離され、シンチレーションカクテル内に移動され、シンチレーションカウンターにおいて放出された光が測定される。

【0138】

Ｃｄｃ７／Ｄｂｆ４活性の阻害アッセイは、以下のプロトコールに従って行われる。

【0139】

ＭＣＭ２基質は、Ｃｄｃ７／Ｄｂｆ４複合体によって、γ^３３−ＡＴＰによって追跡されるＡＴＰの存在下でリン酸基転移される。この反応を、蟻酸の存在下で、Ｄｏｗｅｘ樹脂の添加によって停止する。Ｄｏｗｅｘ樹脂粒子は、未反応のγ^３３−ＡＴＰを捕捉し、ウェルの底へと引き込む。一方、^３３Ｐリン酸化ＭＣＭ２基質は、溶液中に残留する。上清を集めて、Ｏｐｔｉｐｌａｔｅプレートに移し、基質リン酸化の程度を、βカウンティングによって評価する。

【0140】

Ｃｄｃ７／Ｄｂｆ４活性の阻害アッセイを、以下のプロトコールに従って、９６プレート中で実施した。

【0141】

プレートの各ウェルに、以下を添加した：
１０μｌの試験化合物（用量反応曲線を作るため、ｎＭからμＭの範囲で濃度を１０倍ずつ増加した。）。試験化合物についての溶媒は、３％ ＤＭＳＯを含んだ（最終濃度１％）。

【0142】

１０μｌの基質ＭＣＭ２（最終濃度６Ｍ）、冷ＡＴＰ（最終濃度２Ｍ）と放射性ＡＴＰとの混合物（ＡＴＰとの１／５０００モル比）。

【0143】

１０μｌの酵素（Ｃｄｃ７／Ｄｂｆ４、最終濃度２ｎＭ）により、反応を開始した。反応の緩衝液は、１５ｍＭ ＭｇＣｌ_２、２ｍＭ ＤＴＴ、３μＭ ＮａＶＯ_３、２ｍＭグリセロホスファートおよび０．２ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ含有の５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．９からなった。

【0144】

室温にて６０分間のインキュベーション後、反応を、各ウェルに１５０ｌのＤｏｗｅｘ樹脂を、１５０ｍＭの蟻酸の存在下で添加することによって停止させた。さらに６０分間のインキュベーション後、５０Ｌの懸濁液を取り、１５０ｌのＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ ４０（Ｐａｃｋａｒｄ）を含む９６ウェルＯＰＴＩＰＬＡＴＥに移した。５−１０分の振とう後、プレートを、Ｐａｃｋａｒｄ ＴＯＰ−Ｃｏｕｎｔ放射性リーダーにおいて１分間読み取った。

【0145】

ＩＣ５０決定：インヒビターを、０．０００５から１０Ｍまでにわたる異なる濃度で試験した。実験データを、Ａｓｓａｙ Ｅｘｐｌｏｒｅｒコンピュータープログラムにより、４パラメータロジスティック方程式を用いて分析した：
ｙ＝ｂｏｔｔｏｍ＋（ｔｏｐ−ｂｏｔｔｏｍ）／（１＋１０＾（（ｌｏｇＩＣ５０−ｘ）^＊ｓｌｏｐｅ））
式中、ｘは、インヒビター濃度の対数であり、ｙは、反応である；ｙは、シグモイド形状の底から始まり、頂点へ行く。

【0146】

ｃｄｋ２／サイクリンＡ活性の阻害アッセイ
キナーゼ反応：最終容量１００ｌの緩衝液（ＴＲＩＳ ＨＣｌ １０ｍＭ ｐＨ７．５、ＭｇＣｌ_２ １０ｍＭ、７．５ｍＭ ＤＴＴ）中１．５μＭのヒストンＨ１基質、２５μＡＴＰ（０．２μＣｉ Ｐ３３−ＡＴＰ）、３０ｎｇのバキュロウイルス共発現Ｃｄｋ２／サイクリンＡ、１０Ｍインヒビターを、９６Ｕ底ウェルプレートの各ウェルに添加した。３７℃で１０分間のインキュベーション後、反応を、２０ｌのＥＤＴＡ １２０ｍＭによって停止した。

【0147】

捕捉：１００μｌを、各ウェルからＭｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎプレートに移し、基質をホスホセルロースフィルターに結合させた。次いで、プレートを、１５０ｌ／ウェルのＣａ^＋＋／Ｍｇ^＋＋非含有ＰＢＳで３回洗浄し、Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ濾過システムで濾過した。

【0148】

検出：フィルターを、３７℃で乾燥させ、次いで１００ｌ／ウェルのシンチラントを加え、３３Ｐ標識ヒストンＨ１を、Ｔｏｐ−Ｃｏｕｎｔ装置にて放射性カウンティングによって検出した。

【0149】

結果：データを、第１アッセイについての％阻害または第２アッセイにおけるＩＣ_５０決定のための１０倍希釈曲線のシグモイド適合／ヒット確定ルーチンのいずれかを提供する「Ａｓｓａｙ Ｅｘｐｌｏｒｅｒ」ソフトウェアパッケージの内部カスタマイズバージョンによって分析する。

【0150】

例として、表Ａは、異なるキナーゼに対して試験した際に、１０μＭ未満のＩＣ_５０を示す、幾つかの本発明の化合物を報告する。

【0151】

表Ａ：ＩＣ_５０（μＭ）

【0152】

【表1】

【0153】

本発明の化合物は、単一の薬剤として、または公知の抗癌治療、例えば放射線治療または化学療法レジメンと組み合わせて、細胞増殖抑制性剤または細胞毒性剤、抗生物質型薬剤、アルキル化剤、抗代謝物剤、ホルモン剤、免疫剤、インターフェロン型薬剤、シクロオキシダーゼインヒビター（例えばＣＯＸ−２インヒビター）、マトリックスメタロプロテアーゼインヒビター、テロメラーゼインヒビター、チロシンキナーゼインヒビター、抗増殖因子レセプター剤、抗ＨＥＲ剤、抗ＥＧＦＲ剤、抗血管形成剤（例えば、血管形成インヒビター）、ファルネシルトランスフェラーゼインヒビター、ｒａｓ−ｒａｆシグナルトランスダクション経路インヒビター、細胞周期インヒビター、他のｃｄｋインヒビター、チューブリン結合剤、トポイソメラーゼＩインヒビター、トポイソメラーゼＩＩインヒビターなどと組み合わせてのいずれかで、投与され得る。

【0154】

固定用量として処方される場合、このような組み合わせ製品は、以下で記載される用量範囲内の本発明の化合物および認可された用量範囲内の他の医薬的に活性な薬剤を使用する。

【0155】

式（Ｉ）の化合物は、組み合わせ処方物が不適切である場合、公知の抗癌剤と連続的に使用され得る。

【0156】

哺乳動物、例えばヒトへの投与のために好適な本発明の式（Ｉ）の化合物は、通常の経路によって投与され得、用量レベルは患者の年齢、体重、状態および投与経路に依存する。

【0157】

例えば、式（Ｉ）の化合物の経口投与のために採用される好適な用量は、１用量あたり約１０から約５００ｍｇまで、１日１から５回までの範囲内であり得る。本発明の化合物は、種々の剤形、例えば経口で、丸剤、カプセル、糖衣丸剤もしくはフィルムコート丸剤、液体溶液または懸濁液の形態で；直腸で、坐剤の形態で；非経口、例えば筋肉内または静脈内および／またはクモ膜下および／または髄腔内の注射または注入で、投与され得る。

【0158】

本発明はまた、式（Ｉ）の化合物または式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容される塩を、キャリアまたは希釈剤であり得る医薬的に許容される賦形剤と共に含む医薬的組成物も含む。

【0159】

本発明の化合物を含む医薬的組成物は、通常、従来の方法に従って調製され、好適な医薬的形態で投与される。例えば、固形経口形態は、活性化合物と共に、希釈剤、例えばラクトース、デキストロース、サッカロース、スクロース、セルロース、トウモロコシデンプンまたはバレイショデンプン；滑沢剤、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸、マグネシウムステアラートまたはカルシウムステアラートおよび／またはポリエチレングリコール；結合剤、例えば、デンプン、アラビアゴム、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースまたはポリビニルピロリドン；崩壊剤、例えば、デンプン、アルギン酸、アルギネートまたはグリコール酸デンプンナトリウム；発泡混合物；染料；甘味料；湿潤剤、例えば、レシチン、ポリソルベート、ラウリルスルファート；および、一般的には、医薬的処方物に使用される非毒性であり医薬的に不活性な物質を含み得る。これらの医薬的調製物は、公知の様式、例えば、混合、粒状化、糖衣またはフィルムコート方法により、製造され得る。

【0160】

経口投与のための液体分散物は、例えば、シロップ、エマルジョンおよび懸濁液であり得る。例として、シロップは、キャリアとして、サッカロースまたサッカロースならびにグリセリンおよび／もしくはマンニトールおよびソルビトールを含み得る。

【0161】

懸濁液およびエマルジョンは、キャリアの例として、天然ゴム、アガー、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースまたはポリビニルアルコールを含み得る。筋肉内注射のための懸濁液または溶液は、活性化合物と共に、医薬的に許容されるキャリア、例えば、滅菌水、オリーブオイル、エチルオレアート、グリコール、例えば、プロピレングリコールおよび、所望される場合、好適な量のリドカインヒドロクロリドを含み得る。

【0162】

静脈内注射または注入のための溶液は、キャリアとして、滅菌水を含み得るか、または好ましくは、無菌の、水性の、等張の、生理食塩水溶液の形態であり得るか、キャリアとしてプロピレングリコールを含み得る。

【0163】

坐剤は、活性化合物と共に、医薬的に許容されるキャリア、例えば、ココアバター、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル界面活性剤またはレシチンを含み得る。

【0164】

本発明をより良く説明する目的で、いかなる限定もすることなく、以下の実施例をここで示す。

【実施例】

【0165】

一般的方法
フラッシュクロマトグラフィーを、シリカゲル（Ｍｅｒｃｋ ｇｒａｄｅ ９３９５，６０Ａ）上で実施した。高圧液体クロマトグラフィー保持時間（ＨＰＬＣ：ｒ．ｔ．値）を、以下のように決定した。

【0166】

ＨＰＬＣ方法１Ａおよび１Ｂ：
可変ＵＶ検出機ｍｏｄ ２４８７、化学発光窒素検出機（ＣＬＮＤ，Ａｎｔｅｋ ８０６０）およびＷａｔｅｒｓ ＺＱ２０００質量検出機（ＥＳＩインターフェース）を備えたＷａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ＬＣ ｍｏｄ．２７９５を、本適用において使用した。全流量は、固定比（６４：１５：２１ ＵＶ：ＭＳ：ＣＬＮＤ）で３つの検出機に分岐されて分配された。液体クロマトグラフに、３０×３．０ｍｍ Ｉ．Ｄ．カラム（Ｗａｔｅｒｓ ｘＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８，３．５μｍ粒子）を備え、サーモスタットで５０℃に温度管理した。２つの移動相を、使用した：相Ａは、０．０５％ ｗ／ｖの蟻酸（１ｍＬ／Ｌの５０％蟻酸、高純水中Ｆｌｕｋａ ０９６７６）であり、相Ｂは、０．０３５％ ｗ／ｖの蟻酸（７００μＬ／Ｌの５０％蟻酸、Ｆｌｕｋａ ０９６７６）を含む７０／２５／５（ｖ／ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ｉＰｒＯＨ／Ｈ_２Ｏであった。

【0167】

５μｌ容量のＤＭＳＯ中１ｍＭ名目サンプル溶液を注入し（連続的、部分的ループモード、エアギャップ無し）、一般的な逆相勾配分析を、以下の表に示すとおり、急速変数（方法１Ａ）またはより低速な変数（方法１Ｂ）のいずれかで、０．８ｍＬ／分で実施した。

【0168】

【表2】

【0169】

ＵＶ検出機を、２２０ｎｍ、５Ｈｚサンプリング速度で操作した。ＭＳデバイスを、３．２ｋＶキャピラリー電圧、３０Ｖ ｃｏｎｅ、２Ｖ抽出機、０．５Ｖ ＲＦレンズ、４００Ｌ／ｈｒ 脱溶媒和流、１００Ｌ／時間ｃｏｎｅ流、１００℃供給源温度、１５０℃溶媒和温度、ＥＳＩ（＋）フルスキャン１２０−１２００ ａｍｕ取得、１．７Ｈｚサンプリング速度にて操作した。ＣＬＮＤ検出機を、１０５０℃の炉温度、２８０ｍＬ／分の入口酸素流、８０ｍＬ／分入口アルゴン、２５ｍＬ／分の補給アルゴン、３０ｍＬ／分のオゾン、２８ｔｏｒｒ減圧、７５０Ｖ ＰＭＴ電圧、＋１０℃でのＰＭＴチャンバー、高感度、選択５、４Ｈｚサンプリング速度で操作した。

【0170】

ＨＰＬＣ方法２：
ＨＰＬＣ−ＭＳ分析を、ＥＳＩ（エレクトロスプレー）イオン供給源を備えたＦｉｎｎｉｇａｎ ＭＡＴ ｍｏｄ．ＬＣＱイオントラップ質量分析計において実施した。質量分析計を、自動サンプリング機Ｌｃ Ｐａｌ（ＣＴＣ分析）およびＵＶ６０００ＬＰ ＰＤＡ検出機を備えたＨＰＬＣ ＳＳＰ４０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ）に直接繋ぐ。

【0171】

ＨＰＬＣ条件：
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ Ｃ１８、３μｍ、５０×４．６ｍｍ（デフォルト）
温度 ４０℃
移動相Ａ：酢酸緩衝液 ５ｍＭ ｐＨ４．５：アセトニトリル ９５：５（ｖ：ｖ）
移動相Ｂ：酢酸緩衝液 ５ｍＭ ｐＨ４．５：アセトニトリル ５：９５（ｖ：ｖ）
溶出勾配：

【0172】

【表3】

【0173】

流速：１ｍＬ／分
注入容量：１０μＬ
カラム温度：４０℃
ＭＳ条件：
ＬＣＱ質量分析計を、表１に報告した操作パラメータに従ってエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）インターフェースで、陽イオンモードおよび陰イオンモードにおいて操作する。ＭＳ／ＭＳ実験を、Ｘｃａｌｉｂｕｒソフトウェアにより、自動的に各スキャンの最大強度イオンにおいて実施する。４５％衝突エネルギーを、前駆体イオンの断片化のために使用する。

【0174】

【表4】

【0175】

ＨＰＬＣ方法３：
ＨＰＬＣ−ＭＳ分析を、ＥＳＩ（エレクトロスプレー）イオン供給源を備えたＦｉｎｎｉｇａｎ ＭＡＴ ｍｏｄ．ＬＣＱイオントラップ質量分析計において実施した。質量分析計を、自動サンプリング機Ｌｃ Ｐａｌ（ＣＴＣ分析）およびＵＶ６０００ＬＰ ＰＤＡ検出機を備えたＨＰＬＣ ＳＳＰ４０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ）に直接繋ぐ。

【0176】

ＨＰＬＣ条件：
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ Ｃ１８，３μｍ、５０×４．６ｍｍ（デフォルト）
温度 ４０℃
移動相Ａ：酢酸緩衝液 ５ｍＭ ｐＨ４．５：アセトニトリル ９５：５（ｖ：ｖ）
移動相Ｂ：酢酸緩衝液 ５ｍＭ ｐＨ４．５：アセトニトリル ５：９５（ｖ：ｖ）
溶出勾配：

【0177】

【表5】

【0178】

流速：１ｍＬ／分
注入容量：１０μＬ
カラム温度：４０℃
ＭＳ条件：
ＬＣＱ質量分析計を、表１に報告した操作パラメータに従ってエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）インターフェースで、陽イオンモードおよび陰イオンモードにおいて操作する。ＭＳ／ＭＳ実験を、Ｘｃａｌｉｂｕｒソフトウェアにより、自動的に各スキャンの最大強度イオンにおいて実施する。４５％衝突エネルギーを、前駆体イオンの断片化のために使用する。

【0179】

【表6】

【0180】

保持時間（ＨＰＬＣ ｒ．ｔ．）を、分単位で、２２０ｎｍまたは２５４ｎｍにて得た。質量を、ｍ／ｚ比で得た。

【0181】

必要である場合、化合物を、Ｗａｔｅｒｓ Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ Ｐｒｅｐ Ｓｈｉｅｌｄ ＲＰ１８（１９×１００ｍｍ、５μｍ）カラムまたはＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ Ｃ１８（２１．２×２５０ｍｍ、１０μｍ）カラム上の、９９６ Ｗａｔｅｒｓ ＰＤＡ検出機およびＭｉｃｒｏｍａｓｓ ｍｏｄ．ＺＱ単一四極子質量分析機、エレクトロスプレーイオン化、陽モードを備えたＷａｔｅｒｓ ＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘ Ａｕｔｏｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍを用いた分取ＨＰＬＣによって精製している。移動相Ａは、水０．０５％ ＮＨ_３／アセトニトリル ９５：５、移動相Ｂは、アセトニトリルであった。８分または１５分での１０から９０％までの勾配Ｂ。流速２０ｍｌ／分。

【0182】

１Ｈ−ＮＭＲ分光測定法を、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ ４００ＭＨｚ単スパン装置において勾配で実施した。これは、ＱＮＰプローブ（相互交換可能４核プローブ−^１Ｈ、１３Ｃ、１９Ｆおよび３１Ｐ）（ＮＭＲ方法１）を備えられているか、または４００．４５ＭＨｚで操作されるＭｅｒｃｕｒｙ ＶＸ ４００において、５ｍｍの二重共鳴プローブ［１Ｈ（１５Ｎ−３１Ｐ）ＩＤ＿ＰＦＧ Ｖａｒｉａｎ］（ＮＭＲ方法２）を備えられている。

【0183】

非対称の炭素原子を有しラセミ体混合物として得られた式（Ｉ）の化合物を、キラルカラム上でのＨＰＬＣ分離によって解析した。詳細には、例えば、分取カラムＣＨＩＲＡＬＰＡＣＫ（登録商標）ＡＤ、ＣＨＩＲＡＬＰＡＣＫ（登録商標）ＡＳ、ＣＨＩＲＡＬＣＥＬＬ（登録商標）ＯＪが使用され得る。

【0184】

以前に示されたとおり、幾つかの本発明の式（Ｉ）の化合物が、溶液およびコンビナトリアル化学技術に従って合成されている。

【0185】

この観点において、このように調製された幾つかの化合物は、ＨＰＬＣ保持時間（方法１Ａ、１Ｂ、２および３）および質量と共に示される表ＩＩＩのコードシステムにより、便利に、明白に同定されている。

【0186】

単一の特定の式（Ｉ）の化合物を識別する各コードは、Ａ−Ｍ−Ｂの３つの単位からなる。

【0187】

Ａは、任意の置換基Ｒ１およびＲ２［式（Ｉ）を参照されたい］を表し、３位の窒素を介してＭ中央コアに付着する；各Ａ置換基は、以下の表Ｉで表される。

【0188】

Ｂは、任意の置換基Ｒ３［式（Ｉ）を参照されたい］を表し、カルボニル基の炭素原子を介して残ったＭ中央コアに付着している；各Ｂ置換基は、以下の表ＩＩで表される。

【0189】

Ｍは、中央コアを表し、より正確には、Ｍ１は、４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｇ］インドリジンコア［式（Ｉ）Ａを参照されたい］を表すが、Ｍ２は、１，４，５，６−テトラヒドロピラゾロ［３，４−ｃ］ピロロ［１，２−ａ］アゼピンコア［式（Ｉ）Ｂを参照されたい］を表す；各コアは、実質的には以下のように、３位においてＡ基に、カルボニル基においてＢ基に置換される。

【0190】

【化16】

【0191】

参照しやすいように、表Ｉおよび表ＩＩのＡ基およびＢ基それぞれは、適切な化学式によって同定されていて、また、分子Ｍ１または分子Ｍ２の残りの付着の位置を示している。

【0192】

単なる例として、化合物Ａ１−Ｍ１−Ｂ１（表ＩＩＩの項目１）は、４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｇ］インドリジン（中央コアＭ１）を表し、３位における窒素がＡ１基によって置換されていて、カルボニル基においてＢ１基によって置換されている；同様に、化合物Ａ４４−Ｍ２−Ｂ２８（表ＩＩＩの項目１１１６）は、１，４，５，６−テトラヒドロピラゾロ［３，４−ｃ］ピロロ［１，２−ａ］アゼピン（中央コアＭ２）を表し、３位における窒素がＡ４４基によって置換されていて、カルボニル基においてＢ２８基によって置換されている。

【0193】

【化17】

【0194】

【表7】

【0195】

【表8】

【0196】

調製１
エチル１Ｈ−ピロール−２−カルボキシラート（ＩＶ、ここでＲａ’は、−ＣＨ_２−ＣＨ_３である。）の調製
２，２，２−トリクロロ−１−（１Ｈ−ピロール−２−イル）−エタノン（２５ｇ、０．１２ｍｏｌｉ）のエタノール中溶液（２００ｍＬ）を、炭酸カリウム（５ｇ）で処理した。次いで、混合物を、還流まで１時間加熱した。この時間の後、残った固体を濾別し、溶液を減圧下で濃縮した。エチルアセタート（２００ｍＬ）を添加し、水で２回洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで脱水させ、淡黄色固体を得た（１８ｇ）。

【0197】

ＨＰＬＣ（方法２）：ｍ／ｚ １４０．１２［Ｍ＋Ｈ］＋＠Ｒｔ＝４．０１分．１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ １．２９（ｔ，Ｊ＝７．０７，３Ｈ）４．２３（ｑ，Ｊ＝７．０７，２Ｈ）６．０４−６．２５（ｍ，１Ｈ）６．６５−６．８６（ｍ，１Ｈ）７．００−７．０６（ｍ，１Ｈ）１１．８３（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）

【0198】

調製２
エチル ４−（トリクロロアセチル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシラート（Ｖ、ここでＲａ’は、−ＣＨ_２−ＣＨ_３である。）の調製
ＤＣＭ（２００ｍＬ）中に溶解したエチル１Ｈ−ピロール−２−カルボキシラート（１８ｇ、０．１２）ｍｏｌに、無水ＡｌＣｌ３（４０ｇ）を加えた。１０分間の激しい撹拌後、トリクロロ−アセチルクロリド（２０ｍＬ）のＤＣＭ中溶液（１００ｍＬ）を滴下した。反応物を、還流まで３時間加熱した。次いで、混合物を、室温にし、氷冷したＨＣｌ ６Ｎと共に２Ｌビーカーに注ぎ、２時間撹拌した。ＤＣＭを抽出し、ＮａＨＣＯ_３および水で２回洗浄した。精製されていない暗色固体を得た。ＨＰＬＣ（方法２）：：ｍ／ｚ ２８２．４５［Ｍ−Ｈ］＠Ｒｔ＝６．５５分．１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ １．３２（ｓ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，３Ｈ）４．３０（ｓ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，２Ｈ）７．２６−７．４０（ｍ，１Ｈ）７．８５−８．０９（ｍ，１Ｈ）１３．０６（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．

【0199】

調製３
ジエチル１Ｈ−ピロール−２，４−ジカルボキシラート（ＶＩ、ここで両Ｒａ’は、−ＣＨ_２−ＣＨ_３である。）の調製
エチル４−（トリクロロアセチル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシラート（３０ｇ、０．１２ｍｏｌｉ）のエタノール中溶液（２５０ｍＬ）に、炭酸カリウム（７ｇ）を添加した。次いで、混合物を、還流まで１時間加熱した。この時間の後、残った固体を濾別し、溶液を真空下で濃縮した。エチルアセタート（２００ｍＬ）を添加し、水で２回洗浄した。有機相を、無水硫酸ナトリウムで脱水させて、茶色固体（２８ｇ）を得た。

【0200】

ＨＰＬＣ（方法２）：ｍ／ｚ ２１２．３４［Ｍ＋Ｈ］＋＠Ｒｔ＝４．７９分．１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ １．２６（ｔ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，３Ｈ）１．２８（ｔ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，３Ｈ）４．１９（ｑ，Ｊ＝７．１１Ｈｚ，２Ｈ）４．２５（ｑ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，２Ｈ）７．０６（ｄｄ，Ｊ＝２．５０，１．６５Ｈｚ，１Ｈ）７．５４（ｄｄ，Ｊ＝３．３５，１．６５Ｈｚ，１Ｈ）１２．５０（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）

【0201】

調製４
ジエチル１−（３−シアノプロピル）−１Ｈ−ピロール−２，４−ジカルボキシラート（ＶＩＩ、ここで、ｎは０であり、両Ｒａ’は、−ＣＨ_２−ＣＨ_３である。）の調製
ＡＣＮ中に溶解したジエチル１Ｈ−ピロール−２，４−ジカルボキシラート（２８ｇ、０．１３ｍｏｌ）に、３０ｇの炭酸カリウム（０．２１ｍｏｌ）および１７ｍＬの４−ブロモ−ブチロニトリル（０．１４ｍｏｌ、ｄ＝１．３）を添加した。反応物を、一晩還流させた。次いで、溶媒を、減圧下で蒸発させ、残留物を、エチルアセタート中に溶解し、水で２回洗浄した。粗生成物を、シリカカラム（１０ｐシリカ）、溶離剤シクロエサン（ｃｙｃｌｏｅｓａｎｅ）／エチルアセタート７：３で精製した。２０ｇの白色固体を得た。

【0202】

ＨＰＬＣ（方法２）：ｍ／ｚ ２９６．５１［Ｍ＋ＮＨ４＋］＋＠Ｒｔ＝５．８８分．１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ １．２４（ｔ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，３Ｈ）１．２７（ｔ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，３Ｈ）２．０３（ｍ，２Ｈ）２．４８（ｔ，Ｊ＝７．１９Ｈｚ，２Ｈ）４．１９（ｑ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，２Ｈ）４．２４（ｑ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，２Ｈ）４．３８（ｔ，Ｊ＝７．１９Ｈｚ，２Ｈ）７．１６（ｄ，Ｊ＝１．９５Ｈｚ，１Ｈ）７．８０（ｄ，Ｊ＝１．８３Ｈｚ，１Ｈ）

【0203】

調製５
エチル７−シアノ−８−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドリジン−２−カルボキシラート（ＶＩＩＩ、ここで、ｎは０であり、Ｒａ’は−ＣＨ_２−ＣＨ_３である。）の調製
無水ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中に溶解したジエチル１−（３−シアノプロピル）−１Ｈ−ピロール−２，４−ジカルボキシラート（７ｇ）に、窒素雰囲気下で、ＴｅｒｔＢｕＯＫの１Ｎ ＴＨＦ中溶液（５０ｍＬ）を滴下した。反応物を、撹拌し続けた。１５分後、水およびクエン酸を添加し（ｐＨ＝５）、激しい３０分間の撹拌の後、この溶液を、１００ｍＬのエチルアセタートで抽出した。次いで、有機相を、水およびＮａＨＣＯ_３（ｐＨ＝１０）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４において脱水させた。５ｇの白色固体を得た（収率８７％）。ＨＰＬＣ（方法２）：ｍ／ｚ ２５０．３１［Ｍ＋ＮＨ_４＋］＋＠Ｒｔ＝４．２３分。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）（互変異生体ケト／エノール形態比５６：４４の混合物）δｐｐｍ １．２６（ｔ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，３Ｈ ５６％）１．２８（ｔ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，３Ｈ ４４％）２．６２（ｍ，２Ｈ）４．０６（ｔ，Ｊ＝６．８３Ｈｚ，２Ｈ ４４％）４．１７（ｑ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，２Ｈ ５６％）４．２０（ｑ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，２Ｈ ４４％）４．３８（ｄｔ，Ｊ＝１２．１９ Ｊ＝４．０２Ｈｚ，２Ｈ ５６％）４．５１（ｄｄ，Ｊ＝１ １．２４ Ｊ＝５．０８Ｈｚ，１Ｈ ５６％）７．００（ｄ，Ｊ＝１．５９Ｈｚ，１ Ｈ ４４％）７．２３（ｄ，Ｊ＝１．７１，１Ｈ ５６％）７．６５（ｄ，Ｊ＝１．５９，１Ｈ ４４％）７．８５（ｄ，Ｊ＝１．５９，１Ｈ ５６％）１０．９６（ｓ，１Ｈ ４４％ ＯＨ エノール型）

【0204】

［実施例１］
エチル３−アミノ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｇ］インドリジン−８−カルボキシラート（Ｉ、ここで、ｎは０であり、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は水素であり、Ｒ３は−Ｏ−ＣＨ_２−ＣＨ_３である。）の調製
エタノール中エチル７−シアノ−８−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドリジン−２−カルボキシラート（１２ｇ、５２ｍｍｏｌ）に、ヒドラジン一水和物溶液（６．５ｇ、１３０ｍｍｏｌ）および酢酸（９ｇ、１５０ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、６２時間還流させ、減圧下で濃縮した。残留物を、エチルアセタート中に溶解し、水およびＮＨ_３で洗浄した。有機相を、Ｎａ_２ＳＯ_４において脱水させた。１０ｇの淡黄色固体を得た（収率７８％）。

【0205】

ＨＰＬＣ（方法２）：ｍ／ｚ ２４７．２５［Ｍ＋Ｈ］＋＠Ｒｔ＝３．１７分．１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ １．２５（ｔ，Ｊ＝７．１３Ｈｚ，３Ｈ）２．６９（ｔ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，２Ｈ）４．０５（ｔ，Ｊ＝６．７１Ｈｚ，２Ｈ）４．１７（ｑ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，２Ｈ）４．４０−５．１３（ｍ，２Ｈ）６．４８（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）７．４９（ｓ，１Ｈ）１１．４９（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）

【0206】

［実施例２］
化合物エチル３−［（トリフルオロアセチル）アミノ］−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｇ］インドリジン−８−カルボキシラート（Ｉ、ここで、ｎは０であり、Ｒ１は−ＣＯＣＦ_３であり、Ｒ２およびＲ４は水素であり、Ｒ３は−Ｏ−ＣＨ_２−ＣＨ_３である。）の調製
ＤＣＭ中化合物エチル３−アミノ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｇ］インドリジン−８−カルボキシラート（５ｇ、２０．３ｍｍｏｌ）に、ＴＥＡ（１１ｇ、１１０ｍｍｏｌ）およびＴＦＡＡ（２１ｇ １００ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、室温にて３時間撹拌し、次いで、真空中で濃縮した。ＮＨ_３で希釈した残留物に、ＭｅＯＨを添加し、１時間撹拌した。次いで、溶液を濃縮した。１００ｍＬの水を添加し、エチルアセタートで抽出した（３×１００ｍＬ）。有機相を無水硫酸ナトリウムで脱水し、淡黄色固体を得た（６．５ｇ、９２％）。

【0207】

ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ 方法２）：ｍ／ｚ ３４３［Ｍ＋Ｈ］＋＠Ｒｔ ４．７５分（ＥＬＳ検出により１００％）。

【0208】

１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ １３．１３（ｓ，１Ｈ）１１．６１（ｓ，１Ｈ）７．６２（ｓ，１Ｈ）６．６８（ｓ，１Ｈ）４．２１（ｑ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，２Ｈ）４．１３（ｔ，Ｊ＝６．８３Ｈｚ，２Ｈ）２．８１（ｔ，Ｊ＝６．７７Ｈｚ，２Ｈ）１．２８（ｔ，Ｊ＝７．１３Ｈｚ，３Ｈ）

【0209】

調製６
固体支持された３−アミノ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｇ］インドリジン−８−カルボン酸（ＸＶＩＩ、ここで、ｎは、０である。）の調製
ＤＣＭ中で膨潤させたポリスチレントリチルクロリド樹脂（Ａｌｄｒｉｃｈ、ローディング１．７３ｍｍｏｌ／ｇ）に、エチル３−［（トリフルオロアセチル）アミノ］−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｇ］インドリジン−８−カルボキシラート溶液（１．５等量）およびＤＣＭ中ＴＥＡ（２等量）（１０ｍｌ／ｇ）を添加した。混合物を、２４時間室温にて振とうさせた。樹脂を、濾別し、ＤＭＦ（３×）、ＤＣＭ（３×）、ＭｅＯＨ（３×）、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（３×）で洗浄し、未反応のクロリドをキャップし、樹脂をＴＥＡ／ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１：２：７）の溶液で洗浄した（２×）。次いで、樹脂を、ＤＣＭ（３×）、ＭｅＯＨ（３×）、ＤＣＭ（３×）で洗浄し、真空下で脱水した。通常ローディングは、９０％を超えた：重量の増大により計算されたローディングは、１．００ｍｍｏｌ／ｇであった。次いで、樹脂を、次の工程で使用した。

【0210】

第１工程から得られた樹脂を、次いで、ＮａＯＨの溶液（４０等量）、Ｈ_２Ｏ（１ｍｌ／１２ｍｍｏｌ ＮａＯＨ）、ＴＨＦ（２ｍｌ／１２ｍｍｏｌ ＮａＯＨ）および最小量のＭｅＯＨで処理し、均一な溶液を得た。
反応物を、７２時間５０℃で振とうした。次いで、濾別し、連続的に、ＤＭＦ（３×）、ＭｅＯＨ（３×）、水、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（３×）で洗浄した。

【0211】

開裂を確認した後（ＤＣＭ中４０％ＴＦＡ、ｒ．ｔ．３０分）、ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ方法２）ｍ／ｚ ２１９［Ｍ＋Ｈ］＋＠Ｒｔ１．０２分（ＥＬＳ検出で１００％）、表題化合物を得た。

【0212】

調製７
ジエチル１−（４−シアノブチル）−１Ｈ−ピロール−２，４−ジカルボキシラート（ＶＩＩ、ここで、ｎは１であり、両Ｒａ’は−ＣＨ_２−ＣＨ_３である。）の調製
ＡＣＮ中溶解されたジエチル１Ｈ−ピロール−２，４−ジカルボキシラート（２８ｇ、０．１３ｍｏｌ）に、３０ｇの炭酸カリウム（０．２１ｍｏｌ）および１６．５ｍＬの５−ブロモ−ペンタンニトリル（０．１４ｍｏｌ、ｄ＝１．３７７）を添加した。反応物を、一晩還流させた。次いで、溶媒を減圧下で蒸発させ、残留物を、エチルアセタート中に溶解し、水で２回洗浄した。組成生物を、シリカカラム（１０ｐシリカ）、溶離剤シクロエサン（ｃｙｃｌｏｅｓａｎｅ）／エチルアセタート７：３で精製した。２０ｇの白色固体を得た。ＨＰＬＣ（方法２）：
ｍ／ｚ ２９３．５１［Ｍ＋Ｈ＋］＋＠Ｒｔ＝５．６１分．１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ １．２３−１．３４（ｍ，６Ｈ），１．４２−１．５６（ｍ，２Ｈ），１．７３−１．８５（ｍ，２Ｈ），３．２７−３．２８（ｍ，２Ｈ），４．１６−４．３０（ｍ，４Ｈ），４．３６（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）．

【0213】

調製８
エチル８−シアノ−９−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］アゼピン−２−カルボキシラート（ＶＩＩＩ、ここで、ｎは１であり、Ｒａ’は−ＣＨ_２−ＣＨ_３である。）の調製
無水ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中に溶解したジエチル１−（４−シアノブチル）−１Ｈ−ピロール−２，４−ジカルボキシラート（７ｇ）に、窒素雰囲気下で、ＴｅｒｔＢｕＯＫ １Ｎ ＴＨＦ中溶液（５０ｍＬ）を、滴下した。反応物を、撹拌し続けた。１５分後、水およびクエン酸を添加し（ｐＨはほぼ５である。）、３０分間の激しい撹拌の後、溶液を、１００ｍＬのエチルアセタートで抽出した。次いで、有機相を、水およびＮａＨＣＯ_３（ｐＨはほぼ１０である。）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４において脱水した。５ｇの白色固体を得た（収率８７％）。ＨＰＬＣ（方法２）：ｍ／ｚ ２６４［Ｍ＋ＮＨ_４＋］＋＠Ｒｔ＝４．６分。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）（互変異性体ケト／エノール形態比５５：４５の混合物）ｐｐｍ １．３５（ｔ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，３Ｈ）１．９１−２．２３（ｍ，６Ｈ）２．３５（ｍ，２Ｈ）３．９５（ｔ，Ｊ＝６．８３Ｈｚ，２Ｈ ４５％）４．２１（ｑ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，２Ｈ ５５％）４．２３（ｑ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，２Ｈ ４５％）４．５１（ｄｔ，Ｊ＝１２．１９ Ｊ＝４．０２Ｈｚ，２Ｈ ５５％）４．５７（ｍ，１Ｈ ５５％）７．１２（ｄ，Ｊ＝１．５９Ｈｚ，１Ｈ ４５％）７．１７（ｄ，Ｊ＝１．７１，１Ｈ ５５％）７．３１（ｄ，Ｊ＝１．５９，１Ｈ ４５％）７．７０（ｄ，Ｊ＝１．５９，１Ｈ ５５％）１０．８２（ｓ，１Ｈ ４５％ ＯＨ エノール型）

【0214】

［実施例３］
エチル３−アミノ−１，４，５，６−テトラヒドロピラゾロ［３，４−ｃ］ピロロ［１，２−ａ］アゼピン−９−カルボキシラート（Ｉ、ここで、ｎは１であり、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は水素であり、Ｒ３は−Ｏ−ＣＨ_２−ＣＨ_３である。）の調製
エタノール中エチル８−シアノ−９−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］アゼピン−２−カルボキシラート（１２ｇ、４９ｍｍｏｌ）に、ヒドラジン一水和物の溶液（６．５ｇ、１３０ｍｍｏｌ）および酢酸（９ｇ、１５０ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、６２時間還流させ、減圧下で濃縮した。残留物を、エチルアセタート中に溶解し、水およびＮＨ_３で洗浄した。有機相を、Ｎａ_２ＳＯ_４において脱水させた。１０ｇの淡黄色固体を得た（収率７８％）。

【0215】

ＨＰＬＣ（方法２）：ｍ／ｚ ２６１．３［Ｍ＋Ｈ］＋＠Ｒｔ＝３．１３分．１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ １．２５（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）２．５４（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），４．１７（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），４．１０−４．２３（ｍ，２Ｈ），４．４４（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），１１．７０（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）

【0216】

［実施例４］
化合物エチル３−［（トリフルオロアセチル）アミノ］−１，４，５，６−テトラヒドロピラゾロ［３，４−ｃ］ピロロ［１，２−ａ］アゼピン−９−カルボキシラート（Ｉ、ここで、ｎは１であり、Ｒ１は−ＣＯＣＦ_３であり、Ｒ２およびＲ４は水素であり、Ｒ３は−Ｏ−ＣＨ_２−ＣＨ_３である。）の調製
ＤＣＭ中化合物エチル３−アミノ−１，４，５，６−テトラヒドロピラゾロ［３，４−ｃ］ピロロ［１，２−ａ］アゼピン−９−カルボキシラート（５ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）に、ＴＥＡ（１１ｇ、１１０ｍｍｏｌ）およびＴＦＡＡ（２１ｇ １００ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、室温にて３時間撹拌し、次いで、真空下で濃縮した。残留物を、ＮＨ_３で希釈し、ＭｅＯＨを添加して、１時間撹拌した。次いで、溶液を濃縮した。１００ｍＬの水を添加し、エチルアセタート（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機相を、無水硫酸ナトリウムで脱水し、淡黄色固体を得た（６．５ｇ、９２％）。ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ方法２）：ｍ／ｚ ３５７［Ｍ＋Ｈ］＋＠Ｒｔ４．７６分（ＥＬＳ検出によって１００％）。

【0217】

１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ １．２６（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）１．９４−２．０５（ｍ，２Ｈ），２．５４−２．６０（ｍ，２Ｈ），４．１６−４．２１（ｍ，２Ｈ），４．２１−４．２４（ｍ，２Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），１１．２７（ｓ，１Ｈ），１２．９６（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．

【0218】

調製９
固体支持された３−アミノ−１，４，５，６−テトラヒドロピラゾロ［３，４−ｃ］ピロロ［１，２−ａ］アゼピン−９−カルボン酸（ＸＶＩＩ、ここで、ｎは１である。）の調製
ＤＣＭ中で膨潤させたポリスチレントリチルクロリド樹脂（Ａｌｄｒｉｃｈ、ローディング１．７３ｍｍｏｌ／ｇ）に、エチル３−［（トリフルオロアセチル）アミノ］−１，４，５，６−テトラヒドロピラゾロ［３，４−ｃ］ピロロ［１，２−ａ］アゼピン−９−カルボキシラート溶液（１．５等量）およびＤＣＭ中ＴＥＡ（２等量）（１０ｍｌ／ｇ）を、添加した。混合物を、室温にて２４時間振とうした。樹脂を、濾別し、ＤＭＦ（３×）、ＤＣＭ（３×）、ＭｅＯＨ（３×）、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（３×）で洗浄し、未反応のクロリドをキャップし、樹脂をＴＥＡ／ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１：２：７）の溶液で洗浄した（２×）。次いで、樹脂をＤＣＭ（３×）、ＭｅＯＨ（３×）、ＤＣＭ（３×）で洗浄し、真空下で脱水した。通常ローディングは、９０％を超える：重量の増大により計算されたローディングは、１．００ｍｍｏｌ／ｇであった。次いで、樹脂を、次の工程で使用した。

【0219】

次いで、第１工程で得られた樹脂を、ＮａＯＨ（４０等量）の溶液、Ｈ_２Ｏ（１ｍｌ／１２ｍｍｏｌ ＮａＯＨ）、ＴＨＦ（２ｍｌ／１２ｍｍｏｌ ＮａＯＨ）および最小量のＭｅＯＨで洗浄し、均一な溶液を得た。

【0220】

反応物を、７２時間５０℃で振とうし続けた。次いで、濾別し、連続的に、ＤＭＦ（３×）、ＭｅＯＨ（３×）、水、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（３×）で洗浄した。

【0221】

開裂を確認後（ＤＣＭ中４０％ ＴＦＡ、３０分間室温）、ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ方法２）ｍ／ｚ ２３３［Ｍ＋Ｈ］＋＠Ｒｔ１．１５分（ＥＬＳ検出で１００％）、表題化合物を得た。

【0222】

［実施例６］
調製Ａ５−Ｍ１−Ｂ３６（項目４４３、表ＩＩＩ）
ＤＣＭ／ＤＭＦの１：１ ｖ／ｖ溶液中に懸濁した樹脂上に結合した３−アミノ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｇ］インドリジン−８−カルボン酸（ＸＶＩＩ、調製６で記載のとおりに調製）に、１．５等量のＥＤＣ、１．５等量のＨＯＢＴ、５等量のＴＥＡおよび５等量のアリルアミンを添加した。懸濁液を、２４時間室温にて振とうし続けた。樹脂を濾別し、ＤＭＦ（３×）、ＤＣＭ（３×）、ＭｅＯＨ（３×）、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（３×）で洗浄した。開裂後（ＴＦＡ／ＤＣＭ ４０％）、生成物を、ＬＣＭＳ ９０％の純度で見出した。

【0223】

ＤＣＭ中に懸濁した得られた３−アミノ−Ｎ−プロプ−２−エン−１−イル−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｇ］インドリジン−８−カルボキサミド結合樹脂（ローディング１ｍｍｏｌ／ｇ）（ＸＶＩＩＩ）に、５等量の２−クロロ−ベンゾイルクロリドおよび５．１等量のピリジンを添加した。懸濁液を、一晩振とうし続けた。樹脂を濾別し、ＤＭＦ（３×）、ＤＣＭ（３×）、ＭｅＯＨ（３×）、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（３×）で洗浄した。得たが単離されていない、得られた３−｛ビス［（２−クロロフェニル）カルボニル］アミノ｝−Ｎ−プロプ−２−エン−１−イル−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｇ］インドリジン−８−カルボキサミド（ＸＩＸ）を、ＮａＯＨ １Ｎ ＤＭＦ中溶液（１：４ ｖ／ｖ）中に懸濁し、一晩室温にて振とうし続けた。次いで、ＤＭＦ（３×）、ＭｅＯＨ（３×）、水、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（３×）で洗浄した。開裂後（ＴＦＡ／ＤＣＭ ４０％）、表題生成物を回収し、分析した。

【0224】

ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ方法１Ａ）ｍ／ｚ ３９２［Ｍ＋Ｈ］＋＠Ｒｔ２．７２分（ＵＶ：ＭＳ：ＣＬＮＤ検出で１００％）。

【0225】

［実施例７］
調製Ａ４２−Ｍ２−Ｂ４２（項目１１８７、表ＩＩＩ）
ＤＣＭ／ＤＭＦ １：１ ｖ／ｖ溶液中に懸濁した、樹脂上に結合した３−アミノ−１，４，５，６−テトラヒドロピラゾロ［３，４−ｃ］ピロロ［１，２−ａ］アゼピン−９−カルボン酸（ＸＶＩＩ、調製９で記載のとおりに調製）に、１．５等量のＥＤＣ、１．５等量のＨＯＢＴ、５等量のＴＥＡおよび５等量のピペリジンを、添加した。懸濁液を、２４時間室温にて振とうし続けた。樹脂を、濾別し、ＤＭＦ（３×）、ＤＣＭ（３×）、ＭｅＯＨ（３×）、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（３×）で洗浄した。開裂の確認後（ＴＦＡ／ＤＣＭ ４０％）、生成物が、ＬＣＭＳにおいて９０％の純度であることを見出した。

【0226】

ＤＣＭ中に懸濁した、得られた（３−アミノ−１，４，５，６−テトラヒドロピラゾロ［３，４−ｃ］ピロロ［１，２−ａ］アゼピン−９−イル）（ピペリジン−１−イル）メタノン結合樹脂（ローディング１ｍｍｏｌ／ｇ）（ＸＶＩＩＩ）に、５等量のエタンスルホニルクロリドおよび５．１等量のピリジンを、添加した。懸濁液を、２４時間室温にて振とうし続けた。樹脂を濾別し、ＤＭＦ（３×）、ＤＣＭ（３×）、ＭｅＯＨ（３×）、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（３×）で洗浄した。所望の化合物とビス−スルホニル誘導体の混合物を、検出した。

【0227】

化合物樹脂（ローディング１ｍｍｏｌ／ｇ）の得られた混合物に、０．１Ｍ ＴＢＡＦのＴＨＦ中溶液を添加し、３５時間室温にて振とうして、その後、樹脂をＤＭＦ ３×、ＭｅＯＨ、ＤＭＦ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ ３×で洗浄した。開裂後（ＴＦＡ／ＤＣＭ ４０％）、表題生成物を回収し、分析した。

【0228】

ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ方法１Ａ）ｍ／ｚ ３９６［Ｍ＋Ｈ］＋＠Ｒｔ２．６８分（ＵＶ：ＭＳ：ＣＬＮＤ検出で１００％）。

【0229】

［実施例８］
調製Ａ４７−Ｍ２−Ｂ２７（項目１５２６、表ＩＩＩ）
ＤＣＭ／ＤＭＦ １：１ ｖ／ｖ溶液中に懸濁した、樹脂上に結合した３−アミノ−１，４，５，６−テトラヒドロピラゾロ［３，４−ｃ］ピロロ［１，２−ａ］アゼピン−９−カルボン酸（ＸＶＩＩ、調製９で記載のとおりに調製）に、１．５等量のＥＤＣ、１．５等量のＨＯＢＴ、５等量のＴＥＡおよび５等量のラセミ体ブタン−２−アミンを、添加した。懸濁液を、２４時間室温にて振とうし続けた。樹脂を濾別し、ＤＭＦ（３×）、ＤＣＭ（３×）、ＭｅＯＨ（３×）、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（３×）で洗浄した。開裂の確認後（ＴＦＡ／ＤＣＭ ４０％）、生成物が、ＬＣＭＳ ９０％純度であることを見出した。

【0230】

ＤＣＭ中で膨潤させた、得られた３−アミノ−Ｎ−（ブタン−２−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロピラゾロ［３，４−ｃ］ピロロ［１，２−ａ］アゼピン−９−カルボキサミド結合樹脂（ローディング１ｍｍｏｌ／ｇ）（ＸＶＩＩＩ）に、ＴＥＡ（１０等量）および１−イソシアナート−２−メトキシベンゼン（１０等量）を添加し、一晩室温にて振とうし続けた。樹脂を濾別し、ＤＭＦ（３×）、ＤＣＭ（３×）、ＭｅＯＨ（３×）、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（３×）で洗浄した。開裂後（ＴＦＡ／ＤＣＭ ４０％）、表題生成物を回収し、分析した。

【0231】

ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ方法１Ａ）ｍ／ｚ ４３７［Ｍ＋Ｈ］＋＠Ｒｔ３．４２分（ＵＶ：ＭＳ：ＣＬＮＤ検出で１００％）。

【0232】

［実施例９］
調製Ａ１−Ｍ１−Ｂ１（項目１、表ＩＩＩ）
ＴＨＦの溶液中に溶解したエチル３−アミノ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｇ］インドリジン−８−カルボキシラート（実施例１に記載のとおりに調製）に、５等量のＴＥＡ、その後、２．５等量のベンゾイルクロリドを、添加した。懸濁液を、６時間室温にて振とうし続けた。ＬＣＭＳはポリ−アセチル化を明らかにした。溶媒を蒸発させ、次いで、残留物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した（２×）。合わせた有機相を、Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、溶媒を真空下で蒸発させたが、生成物は単離されていなかった。第１工程から得られたポリ−アセチル化混合物に、２Ｎ ＮａＯＨ溶液を添加した。懸濁液を、６０℃まで、澄んだ溶液が得られるまで加熱した。次いで、エチルエーテルを加え、相を分離した。次いで、ＨＣｌ ２Ｎを、中性に達するまで水溶液に加えた。形成された沈殿物を分離し、真空下で脱水した。３−［（フェニルカルボニル）アミノ］−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｇ］インドリジン−８−カルボン酸を回収した。

【0233】

ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ方法２）ｍ／ｚ ３２３［Ｍ＋Ｈ］＋＠Ｒｔ１．３５分（ＥＬＳ検出で１００％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）：δｐｐｍ：２．６２（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），４．１３（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），６．６５（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｔ，Ｊ＝７．１９Ｈｚ，１Ｈ），８．０１（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），１０．５１（ｓ，１Ｈ），１１．８１（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）１２．８８（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．

【0234】

得られた誘導されたカルボン酸に、２等量のＥＤＣおよび３等量のＨＯＢＴを加えた。ＮＨ_４を、ＤＭＦ中に溶解し、一晩室温にて振とうした。次いで、水およびＥｔＯＡｃを加え、層分離し、水をエチルアセタートで２回抽出した。有機層を合わせ、脱水し、真空下で蒸発させた。表題化合物を、分取ＨＰＬＣで精製した。

【0235】

ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ３３９［Ｍ＋ＮＨ４］＋＠Ｒｔ ２．８７分．１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）：δｐｐｍ：１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）：δｐｐｍ＝２．８６（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），４．０８（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），６．６９（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），６．７７（ｂｒ．Ｓ，１Ｈ），７．３４（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５１−７．５７（ｍ，２Ｈ），７．６２（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），８．０２（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１０．５４（ｓ，１Ｈ）．
実施例１から９に記載の方法に従い、本発明の方法による任意の適切な反応物を用いて、表ＩＩＩの以下の化合物もまた、調製された。

【0236】

【表9】

【0237】

［実施例１０］
２，４−ジメチル−Ｎ−［１−メチル−８−（ピロリジン−１−イルカルボニル）−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｇ］インドリジン−３−イル］ベンズアミド（Ｉ）の調製
実施例９に記載のように得られた化合物２，４−ジメチル−Ｎ−［８−（ピロリジン−１−イルカルボニル）−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｇ］インドリジン−３−イル］ベンズアミド（Ａ３５−Ｍ１−Ｂ８、項目２００、表ＩＩＩ）をジクロロメタン中に溶解した後、２等量のヨウ化メチルを添加した。４時間の室温での撹拌後、水を添加し、相を分離した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、粗生成物を、分取ＨＰＬＣを介して精製した。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ ４１８［Ｍ＋Ｈ］＋＠Ｒｔ２．８７分。

【0238】

１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４０１ＭＨｚ）：δｐｐｍ＝１．７６−１．９６（ｍ，４Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），２．３９（ｓ，３Ｈ），２．８６（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），３．４０−３．７２（ｍ，４Ｈ），４．０９（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），４．１９（ｓ，３Ｈ），６．６５（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），７．０４−７．１４（ｍ，２Ｈ），７．３９（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），７．４０（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），１０．５４（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．
２種の存在し得る互変異性体は、単離されなかった。