特許 5738272 ６’−シアリルラクトース塩並びに６’−シアリルラクトース塩及び他のＡ−シアリルオリゴ糖の合成方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5738272

(24)【登録日】2015年5月1日

(45)【発行日】2015年6月24日

(54)【発明の名称】６’−シアリルラクトース塩並びに６’−シアリルラクトース塩及び他のＡ−シアリルオリゴ糖の合成方法

(51)【国際特許分類】

   C07H 7/027 20060101AFI20150604BHJP

   A61K 31/702 20060101ALI20150604BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20150604BHJP

   A61P 19/08 20060101ALI20150604BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20150604BHJP

   A23L 1/30 20060101ALI20150604BHJP

【ＦＩ】

   C07H7/027CSP

   A61K31/702

   A61K47/26

   A61P19/08

   A61P43/00 105

   A23L1/30 Z

【請求項の数】9

【全頁数】23

(21)【出願番号】特願2012-502871(P2012-502871)

(86)(22)【出願日】2010年4月6日

(65)【公表番号】特表2012-522761(P2012-522761A)

(43)【公表日】2012年9月27日

(86)【国際出願番号】IB2010051470

(87)【国際公開番号】WO2010116317

(87)【国際公開日】20101014

【審査請求日】2013年4月3日

(31)【優先権主張番号】FI2009A000071

(32)【優先日】2009年4月6日

(33)【優先権主張国】IT

(73)【特許権者】

【識別番号】502350799

【氏名又は名称】イナルコ ソシエタ ペル アチオニ

(74)【代理人】

【識別番号】110001416

【氏名又は名称】特許業務法人 信栄特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】タメルラーニ， ジャンカルロ

(72)【発明者】

【氏名】ロンバルディ， イラリア

(72)【発明者】

【氏名】バルタルッチ， デボラ

(72)【発明者】

【氏名】ダネシ， アンドレア

(72)【発明者】

【氏名】サルシーニ， リアナ

(72)【発明者】

【氏名】マノニ， マルコ

(72)【発明者】

【氏名】チポレッティ， ジョヴァンニ

【審査官】 東 裕子

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第９４／００３１８４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００７／０９０８９４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第９２／０１１０１７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 CARBOHYD.RES.，１９７１年，Vol.19，pp.272-275

【文献】 TETRAHEDON LETTERS，２００２年，Vol.43，pp.8011-8013

【文献】 RENCUROSI A，HUMAN MILK OLIGOSACCHARIDES: AN ENZYMATIC PROTECTION STEP SIMPLIFIES THE SYNTHESIS 以下備考，CARBOHYDRATE RESEARCH，NL，ELSEVIER SCIENTIFIC PUBLISHING COMPANY，２００２年 ３月１５日，V337 N6，P473-483，OF 3'- AND 6'-O-SIALYLLACTOSE AND THEIR ANALOGUES

【文献】 MULLER H E，OCCURRENCE AND SOME PROPERTIES OF NEURAMINIDASES IN HAEMOPHILUS AVIUM AND HAEMOPHILUS PARAGALLINARUM，VETERINARY MICROBIOLOGY，NL，ELSEVIER BV，１９７７年１２月 １日，V2 N4，P303-312

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｈ ７／０２７

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉｂ）

【化1】

［式中、Ｍ^ｎ＋は、Ｋ^＋、Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｓｒ^２＋、Ｆｅ^２＋及びＡｌ^３＋からなる群の中から選択される］の化合物。

【請求項2】

Ｍ^ｎ＋が、Ｋ^＋、Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋からなる群の中から選択される、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

６’−シアリルラクトース（６’ＳＬ）から始まる、請求項１又は２で定義された式（Ｉｂ）の化合物の調製方法であって、６’ＳＬ溶液にＭ^（ｎ＋）を含む塩基を添加して８〜１０のｐＨ値を得ることを含む方法。

【請求項4】

式（Ｉ）

【化2】

［式中、Ｒは、遊離の水酸基を有する単糖、二糖、又はオリゴ糖の残基である］のα−シアリルオリゴ糖の化合物の調製方法であって、以下の少なくとも１つのステップ
ａ）式（ＩＩ）のシアル酸供与体

【化3】

［式中、Ｐは適切な保護基であり、Ｒ_１はアルキル基であり、Ｘはハロゲンである］の、式Ｒ’ＯＨの受容体［式中、Ｒ’は保護基Ｐ’により適切に保護された単糖、二糖、又はオリゴ糖の残基であり、０個、１個又は複数の遊離の水酸基を含み、前記保護基Ｐ’は同一でも互いに異なっていても、前記供与体中に存在する保護基と異なっていてもよい］とのケーニッヒ・クノール反応によるカップリングによって、式（ＩＩＩ）の中間体

【化4】

［式中、Ｐ、Ｒ_１及びＲ’は上記で定義した通りである］を得るステップであって、
前記ケーニッヒ・クノール反応は、Ａｇ（Ｉ）系の金属プロモーターを受容体のモル数に対して０．５〜２．０当量のモル量で使用し、この混合物を５日〜１０日間、２０℃〜４０℃の温度で撹拌して達成することを特徴とするステップを含む方法。

【請求項5】

ステップ（ａ）の後に、以下のステップ
ｂ）保護基Ｐ、Ｐ’及びＲ_１を除去し、請求項４で定義した式（Ｉ）の化合物を得るステップ
を更に含む請求項４に記載の方法。

【請求項6】

Ｒが６’−ラクトースである請求項４又は５に記載の６’ＳＬの調製方法。

【請求項7】

式（Ｉｂ）

【化5】

［式中、Ｍ^ｎ＋は、Ｎａ^＋、Ｋ^＋、ＮＨ_４^＋、Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｓｒ^２＋、Ｆｅ^２＋、又はＡｌ^３＋である］の化合物の調製方法であって、請求項６に記載の方法による６’ＳＬの調製を含む式（Ｉｂ）の化合物の調製方法。

【請求項8】

薬剤及び食品インテグレーターとして使用するための請求項１又は２に記載の式（Ｉｂ）の化合物。

【請求項9】

請求項１又は２に記載の式（Ｉｂ）の化合物と少なくとも薬剤として又は食品として許容される他の成分とを含有する医薬組成物及び食品組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、６’−シアリルラクトースの塩の分野に関する。本発明はまた、α−シアリルオリゴ糖の合成方法、特に６’−シアリルラクトース及びその塩の合成方法の分野に関する。

【背景技術】

【0002】

式（Ｉ）

【化1】

［式中、Ｒは遊離の水酸基を有する単糖、二糖、又はオリゴ糖の残基である］で示されるα−シアリルオリゴ糖は、哺乳動物や鳥類の組織にリポオリゴ糖、リポ多糖、又は糖タンパク質の糖鎖の主要な形態で存在する。α−シアリルオリゴ糖は種々のグリコシド結合、より典型的には、α（２−３）ガラクトース、α（２−６）ガラクトース又はα（２−３）ラクトース、α（２−６）ラクトースに存在する。これらのシアロシドの機能は、オリゴ糖部分の構造不均一性により動物に依って大きく異なる。シアロシドは多くの病原体の生理と成長に特に重要な役割を果たす細胞間及び細胞内イベントのメディエイターである（ＤＫ Ｒｅｓｓ他、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２００４，１，３１〜４６）。

【化2】

【0003】

人乳１リットル中には、約５〜１０ｇの遊離オリゴ糖が含まれているが、この含量はタンパク質の含量とほぼ等しく、脂質の含量を上回る。１３０種を超える異なるオリゴ糖が人乳中で確認されているが（人乳オリゴ糖−ＨＭＯ）、乳児用人工調合乳は牛乳由来であり、人類に特異なオリゴ糖は微量にしか含んでいない。人乳のオリゴ糖の基本構築ブロックは、Ｄ−グルコース（Ｇｌｃ）、Ｄ−ガラクトース（Ｇａｌ）、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、Ｌ−フコース（Ｆｕｃ）及びシアル酸（Ｎ−アセチルノイラミン酸、Ｎｅｕ５Ａｃ）の５つの単糖である。還元性末端は、ラクトース（Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ）又はより多くの反復ユニット（最大１５ユニット）のＮ−アセチルラクトサミン（Ｇａｌβ１−３／４ＧｌｃＮＡｃ）により形成することができる。ラクトース又はポリラクトサミンは、α２−３結合及び／又はα２−６結合によりシアル化することができる。人乳のシアロシドの例として、３’−シアリル−３−フコシルラクトース（３’Ｓ３ＦＬ）、６’−シアリルラクトース（６’ＳＬ）、３’−シアリルラクトース（３’ＳＬ）、３’−シアリルラクトサミン（３’ＳＬＮ）及び６’−シアリルラクトサミン（６’ＳＬＮ）がある。

【0004】

主に哺乳動物の組織や人乳に存在するシアロシドの中で、式（Ｉａ）の化合物である６’−シアリルラクトース（Ｎ−アセチルノイラミニル−ラクトース、α−ＮｅｕＮＡｃ−（２→６）−β−Ｄ−Ｇａｌ−（１→４）−Ｄ−Ｇｌｃ又は６’−ＳＬ）が特に重要である。その理由は、この化合物が、細胞認識や免疫反応などの様々な細胞経路イベントに関係する糖タンパク質及び糖脂質の重要な構成要素だからである。６’−ＳＬ及びその塩は、乳幼児用の配合食品のサプリメントとして注目に値する。６’−シアリルラクトースの塩について文献では、ナトリウム塩（ＣＡＳ番号：１５７５７４−７６−０；ＦＷ：Ｃ２３Ｈ３８ＮＯ１９Ｎａ、６’−シアリルラクトースナトリウム塩、６’−Ｎ−アセチルノイラミニル−ラクトースナトリウム塩）とアンモニウム塩だけが知られている。ナトリウム塩は食品及び薬剤として許容されるが、アンモニウム塩はアンモニウムイオンにより潜在的に毒性がある。したがって、６’ＳＬを既に知られている塩形態の代替となる食品や薬剤として許容される別の塩形態で入手することが必要である。

【0005】

現在の技術水準では、シアリルオリゴ糖（６’ＳＬを含む）を合成するための様々な戦略が知られており、全ての戦略は、活性化シアル酸フラグメント（供与体）を位置選択的又は立体選択的にオリゴ糖部分（受容体）に結合するという収束的手法を見越している。この重要なカップリングのステップに関して、文献では、酵素的手法のみ、化学的手法のみ、又は化学酵素的手法のみを予測する３つの異なる合成戦略が知られている。

【0006】

酵素経路に関して、シアリルトランスフェラーゼ及びトランスシアリダーゼ（極めて特殊な方法でシアル酸をオリゴ糖に添加する酵素）の系列が使用された。この合成経路の例が、Ａ．Ｔ．Ｂｅｙｅｒ他、Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１９８１，５２，２３〜１７５、Ｊ．Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９８２，２５７，１３８４５〜１３８５３に報告されている。

【0007】

しかしながら、これらの酵素を使用するにはいくつかの制限がある。
１）酵素の入手可能性が限られていること
２）活性化基質ＣＭＰ−ＮｅｕＡｃ又はＰＮＰ−ＮｅｕＡｃの供与体の合成が必要であること
３）天然シアロシド合成のための使用での柔軟性を低下させるシアリルトランスフェラーゼの厳密な特異性（Ｉｃｈｉｇａｗａ Ｙ．他、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ １９９２，２０２，２１５〜２３８，Ｓ．Ｓａｂｅｓａｎ他、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９８６，１０８，２０６８〜２０８０，Ｏ．Ｈｉｎｄｓｇａｕｌ他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９１，２６６，１７８５８〜１７８６２，Ｈ．Ｊ．Ｇｒｏｓｓ他、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８８，１７７，５８３〜５８９）。

【0008】

化学−酵素経路に関しては、Ｓ．Ｓａｂｅｓａｎ他、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９８６，１０８，２０６８〜２０８０に記載されているように、受容体の化学合成、次いで酵素的シアリル化を含む。

【0009】

化学的手法だけに焦点を合わせると、シアル酸によるグリコシド結合の形成は、供与体がジェミナルのカルボシキル基によって電子的及び立体的に妨害されることにより妨害されるため、非常に困難な反応であることが強調される。更に、Ｃ−３上に官能基がないことにより、立体化学を制御する隣接基関与が除外され、脱離反応による副生物の生成が誘導される。最終的に、α配置を伴う結合形成は、アノマー効果に関して熱力学的に不利となる。現在の技術水準におけるこれらの欠点を改善するために、適切な活性化シアル酸供与体及び種々のグリコシル化法により反応する、適切に保護された水酸基を持つ受容体を調製するための様々な戦略が開発されてきた。

【0010】

シアル酸供与体に関して、複雑な分子構造により、その合成、保護、活性化が相当に困難になることを強調するべきである。多官能性（３個の第二級水酸基）及び第三級アノマー中心が合成化学者の仕事を複雑なものにしている。現在の技術水準では、シアル酸供与体は２−キサンテート（Ａ．Ｍａｒｒａ他、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，１９８９，１８７，３５）、２−アリールスルホン（Ｙ．Ｄｕ他、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，１９９８，３０８，１６１）、２−ホスファイト（ＲＲ Ｓｃｈｍｉｄｔ他、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９２，３３，６１２３又はＣＨ Ｗｏｎｇ他、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９９２，１１４，８７４８）又は２−ハロ誘導体として活性化できることが知られている。全てのこれらの群の中で、ホスファイトとしてはハロゲン誘導体が好ましく、チオ誘導体は、その合成に有害な試薬を必要とし、工業的に取り扱うのは簡単ではない。ハロゲンの中では、安定性があり、容易に合成できるので、クロロ誘導体が好ましく、実際、ブロモ誘導体は不安定であり、グリコシル化反応中に、容易に脱離して、アノマー混合物を誘導する傾向がある。フルオロ誘導体は、クロロ誘導体よりも複雑な合成を必要とし、βグリコシド結合を形成し易い。クロロ誘導体は、その生成や使用が最も容易な供与体である。

【0011】

供与体の構造に関して、前述のものより更に複雑な他の合成経路では、２，３の位置での競争脱離を防止するために、グリコシル化反応で隣接基関与を提供する官能基をシアル酸をＣ−３上に含む必要がある。このため、フェニルチオやフェニルセレンなどの基が導入されてきた（Ｙ．Ｉｔｏ他、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９８８，２９，３９８７、又はＬ．Ｏ．Ｋｏｎｏｎｏｖ他、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９７，３８，１５９９）。これらの経路は、一般に２，３−デヒドロ−Ｎ−アセチルノイラミン酸から始まるグリコシル化反応のための活性供与体を得るために複数のステップを必要とし、その終了は得られる特異性、中間体の精製の容易さによって異なる。

【0012】

したがって、式（Ｉ）のシアリルオリゴ糖、特に６’ＳＬの合成には、式（ＩＩ）の２−クロロ−供与体のような単純なシアリル誘導体を効率よく使用するのが好ましいであろう

【化3】

［式中、Ｐは適切な保護基であり、Ｒ１はアルキル基であり、Ｘは塩素である］（Ｒ．Ｋｕｈｎ他、Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，１９６６，９９，６１１、Ａ．Ｍａｒｒａ他、Ｃａｒｂ．Ｒｅｓ．，１９８９，１９０，３１７〜３２２、及びＮＦ Ｂｙｒａｍｏｖａ他、Ｃａｒｂ．Ｒｅｓ，１９９２，２３７，１６１〜１７５で報告される方法により得られる）。この理由は、単純なシアリル誘導体は、非常に毒性の強い反応物質を使用することなく簡単に工業的規模に合成することができ、グリコシル化反応中にα結合の特異的な形成を誘導するからである。しかし、シアル酸供与体は最初に使用された後、その使用は著しく減少し、現在の技術は、より一段と複雑な供与体を目指して取り組んでいる。

【0013】

６’ＳＬの合成のための受容体の活性化に関して、文献では、エーテル保護基、例えば、その除去が、水素添加を必要とするため、容易に管理できず（Ｇ．Ｐａｚｙｎｉｎａ他、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ，２００２，４３，８０１１−８０１３）、したがって、工業的に利用することは難しいベンジル基で置換された受容体がある。

【0014】

シアル酸のα−グリコシドが、Ａｇ（Ｉ）をプロモーターとして使用するケーニッヒ・クノール反応［Ｋｏｅｎｉｇｓ，Ｗ．，Ｋｎｏｒｒ，Ｅ．Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，１９０１，３４，９５７］、又はＨｇ（ＩＩ）をプロモーターとして使用する改変Ｈｅｌｆｅｒｉｃｈ法［Ｈｅｌｆｅｒｉｃｈ，Ｂ．；Ｚｉｒｎｅｒ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，１９６２，９５，２６０４］によって調製された。これらの反応で選択された基質は、β−ハロゲン化グリコシルである。これらの古典的な方法には、使用する機会と収率を改善するために設計された多様な変形形態が知られている。これら変形形態間の主な相違は、金属プロモーターの対アニオンの選択と関係する。最も一般的に用いられているプロモーターは、ＡｇＯＴｆ、Ａｇ_２ＣＯ_３、ＨｇＸ_２（Ｘはハロゲン化物）及びＨｇ（ＣＮ）_２である。一般に、以下のことが知られている。Ａｇ（Ｉ）プロモーターは、活性と立体選択性がより強い（Ｐａｚｙｎｉｎａ Ｇ他、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ，２００２，４３，８０１１〜８０１３）が、多量に使用するべきであり（前記受容体に関しては６〜７当量）、その結果、合成コスト（生産廃棄物の処理を含む）が増加する。これに対して、Ｈｇ（ＩＩ）プロモーターは、より高い収率をもたらす（Ｈ．Ｐａｕｌｓｅｎ他、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ，１９８２，９２７〜９２８）が、その毒性のために取扱いが困難になる可能性がある。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0015】

したがって、簡単で経済的で、工業的規模で利用でき、その結果、前記文献で知られる方法に関連した上述の技術上の問題を克服できる式（Ｉ）の化合物を合成する方法の必要性は明白である。

【課題を解決するための手段】

【0016】

本発明は、上記の問題を式（Ｉｂ）の化合物

【化4】

［式中、Ｍ^ｎ＋は、Ｋ^＋、Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｓｒ^２＋、Ｆｅ^２＋及びＡｌ^３＋からなる群より選択される］により解決する。更に本発明の主題は、式（Ｉ）のα−シアリルオリゴ糖の化合物

【化5】

［式中、Ｒは、遊離水酸基を有する単糖、二糖、又はオリゴ糖の残基である］の合成方法である。前記方法は、以下の少なくとも１つのステップ
ａ）式（ＩＩ）のシアル酸供与体

【化6】

［式中、Ｐは適切な保護基であり、Ｒ１はアルキル基であり、Ｘはハロゲンである］の、式Ｒ’ＯＨの受容体［式中、Ｒ’は保護基Ｐ’により適切に保護された単糖、二糖、又はオリゴ糖の残基であり、０個、１個又は複数の遊離の水酸基を含み、これらの保護基Ｐ’は同一でも互いに異なっていても、前記供与体中に存在する保護基と異なってもよい］とのケーニッヒ・クノール反応によるカップリングによって、式（ＩＩＩ）の中間体

【化7】

［式中、Ｐ、Ｒ１及びＲ’は、上記で定義された通りである］
を得るステップであって、
このケーニッヒ・クノール反応は、Ａｇ（Ｉ）系の金属プロモーターを受容体のモル数に対して０．５〜２．０当量のモル量で使用すること特徴とするステップを含む。

【0017】

特に、上述した方法は、式（Ｉｂ）［式中、Ｍ^ｎ＋は、Ｎａ^＋、Ｋ^＋、ＮＨ_４^＋、Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｓｒ^２＋、Ｆｅ^２＋、Ａｌ^３＋である］で示す６’ＳＬ及びその塩を合成するのに便利な経路を提供する。

【0018】

本発明の他の利点は、後に詳細な説明で記述されている。

【発明を実施するための形態】

【0019】

本発明の主題は、式（Ｉｂ）

【化8】

［式中、Ｍ^ｎ＋は、Ｋ^＋、Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｓｒ^２＋、Ｆｅ^２＋、Ａｌ^３＋からなる群より選択され、Ｍの酸化状態に対応して、ｎ＝１、２、３である］の化合物である。好ましくは、Ｍ^ｎ＋は、Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋、又はＫ^＋である。

【0020】

式（Ｉｂ）の化合物は、全て食品及び薬剤として許容され、潜在的活性成分又はフードサプリメント（乳幼児用の人工調合乳のサプリメントなど）として有用である。

【0021】

特に、６’ＳＬについては、以下のことが挙げられる。
カルシウム塩は、骨の成長を促進するのに潜在的に有用である。
カリウム塩及びマグネシウム塩は、生体膜を通る適切な輸送及び生理学的な膜内外の電位差を維持、促進及び回復するのに潜在的に有用である。
鉄塩は、Ｆｅの集成が必要な全ての病的状態に潜在的に有用である。

【0022】

カルシウム塩は、特に、周知のナトリウム塩より優れた化学物理的特性を有し、結晶化がより容易である。実際、結晶化の段階で、処理が容易な結晶性固体が形成され、したがって工業的な規模においても管理がより容易であり、その結晶性固体の濾過は問題なく迅速に行われ、固体の効率的洗浄が可能になる。

【0023】

他方、ナトリウム塩の場合は、結晶化の段階で、最初にゴム状の固体が得られるが、撹拌するのが困難で、研磨する必要がある。その結果、濾過は遅くなり労力を要することになる。この２種類の塩の安定性は類似していると思われる。

【0024】

カルシウム塩のもう１つの肯定的側面は、酸の形態で同一の６’ＳＬマトリックスから開始する場合、カルシウム塩はより高純度で得られることである。例えば、同一の６’ＳＬマトリックスから、ナトリウム塩の結晶は８７％のＨＰＬＣ純度で、カルシウム塩の結晶は９３％のＨＰＬＣ純度で得られた。

【0025】

カリウム塩及びマグネシウム塩の両者は、その結晶化傾向がナトリウム塩と類似しているが、同様に化学物理的特性に関してもナトリウム塩と類似した傾向を示す。

【0026】

上記の式（Ｉｂ）の化合物は、６’ＳＬにより、当業技術で公知である、対応するカルボン酸から塩を調製する方法に従って、６‘ＳＬにより調製することができる。例えば、好ましくは式（Ｉｂ）の化合物は、ｐＨが８〜１０になるまで、水酸化物、炭酸塩、重炭酸塩（すなわち、ＫＯＨ、Ｃａ（ＯＨ）_２、Ｍｇ（ＯＨ）_２など、Ｋ_２ＣＯ_３、ＣａＣＯ_３、ＭｇＣＯ_３など、ＫＨＣＯ_３など）などのＭ^ｎ＋を含む塩基を添加することにより、６’ＳＬ溶液から調製することができる。溶媒を除去した後、得られた塩をアルコール、又は水／アルコールの混合物、好ましくはメタノール、エタノール、及びこれらと水との混合物からの結晶化により精製する。

【0027】

場合によって、溶解していない過剰の塩基が存在する場合には、溶媒を除去する前に、それらを濾過により除去することが可能である。

【0028】

別の態様では、本発明は式（Ｉ）のα−シアリル−オリゴ糖

【化9】

［式中、Ｒは、遊離の水酸基を有する単糖、二糖、又はオリゴ糖の残基であり、好ましくは、Ｒは、ガラクトース、グルコース、グルコサミン、ラクトース、ラクトサミン、フコシルラクトースの中から選択され、より好ましくは、Ｒは６’−ガラクトース、３’−グルコース、３’−グルコサミン、６’−ラクトース、３’−ラクトース、６’−ラクトサミン、３’−ラクトサミン、３’−３−フコシルラクトースの中から選択される］の合成方法に関する。
前記方法は、以下の少なくとも１つのステップ：
ａ）式（ＩＩ）のシアル酸供与体

【化10】

［式中、
Ｐは適切な保護基であり、
Ｒ１はアルキル基、好ましくはＭｅ、Ｅｔ、又はＰｒであり、
Ｘはハロゲン、好ましくは塩素である］の
式Ｒ’ＯＨの適切に保護された受容体［式中、Ｒ’は保護基Ｐ’により適切に保護された単糖、二糖、又はオリゴ糖の残基であり、０個、１個又は複数の遊離の水酸基を含み、これらの保護基Ｐ’は同一でも互いに異なっていても、前記供与体中に存在する保護基と異なっていてもよい］とのケーニッヒ・クノール反応によるカップリングによって、式（ＩＩＩ）の中間体

【化11】

［式中、Ｐ、Ｒ１及びＲ’は上記に定義された通りである］を得るステップであって、
このケーニッヒ・クノール反応は、Ａｇ（Ｉ）系の金属プロモーターを受容体のモル数に対して０．５〜２．０当量のモル量で使用すること特徴とするステップを含む。

【0029】

より好ましい実施態様では、本方法はまた、ステップ（ａ）の後に、以下のステップ
ｂ）保護基Ｐ、Ｐ’及びＲ１を除去して、上記の式（Ｉ）の化合物を得るステップ
を含む。

【0030】

保護基の除去ｂ）は、現在の技術水準で知られている方法に従って実施される（ＴＷ Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ ＰＧＭ ＷＵＴＳ．Ｇｒｅｅｎ’ｓ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ｅｄ Ｗｉｌｅｙ ｅｄ ４．２００６）。

【0031】

好適な実施態様では、金属プロモーターは受容体のモル数に対して０．７５〜０．８５モル当量のモル量で使用される。

【0032】

好適な実施態様では、前記金属プロモーターはＡｇＯＴｆ、Ａｇ_２ＣＯ_３などのＡｇ（Ｉ）塩から選択され、より好適にはＡｇ_２ＣＯ_３である。

【0033】

好適な実施態様では、前記カップリングａ）は、非プロトン性極性溶媒中で実施する。ジクロロメタン中で実施することが好ましい。

【0034】

好適な実施態様では、前記カップリングａ）は、前記混合物を５日〜１０日間、２０℃〜４０℃の温度で撹拌して達成し、好ましくは、前記混合物を、３０℃で７日間撹拌する。

【0035】

好適な実施態様では、Ｐ及びＰ’はベンジル及びアシルから独立に選択し、好ましくは、Ｐ及びＰ’は、アセチル、ベンゾイル、又は、アルコキシル基、ハロゲン基、ニトロ基で一置換又は二置換されたベンゾイルから独立に選択される。

【0036】

好適な実施態様では、Ｐ及びＰ’はアシルである。より好適な実施態様では、Ｐ及びＰ’は同一であり、アセチルである。Ｒが６’−ラクトースであり、Ｐ＝Ｐ’＝Ａｃである本発明の方法では、周知の６’ＳＬ合成方法と別の相違がある。このケースでは、本発明で使用される受容体は、ベンジル基を示さないので、結果的に保護基を除去するための触媒水素化を回避するという利点がある。

【0037】

好適な実施態様では、この適切に保護された受容体Ｒ’ＯＨは、ガラクトシド部分Ｃ−６に遊離の反応性水酸基を有する。特に好適な実施態様では、前記受容体は式（ＩＶ）のラクトース誘導体

【化12】

［式中、Ｐ’は適切な保護基であり、好ましくはＰ’はアシルであり、より好ましくはアセチルである］である。

【0038】

特に好適な実施態様では、本発明は、上記の方法［式中、Ｐ及びＰ’はＡｃであり、Ｘは塩素であり、Ｒ１はメチルである］による、式（Ｉａ）（式中、Ｒ＝６’−ラクトース）の６’ＳＬの合成に関する。この特別な組み合わせでは、受容体が式（ＩＶａ）、

【化13】

の化合物であるこのカップリング反応は、式（ＩＩＩａ）

【化14】

の化合物を提供する。式（ＩＩＩａ）の化合物は、粗製混合物から得られるので、驚くべきことに、シアル酸のアノマー炭素及び式（Ｉａ）の化合物６’ＳＬの生成に対する水酸基及びカルボキシル官能基の連続的脱保護の後続反応に使用できる。好適には、最初にアセチル基の除去を始め、次にメチルエステルの加水分解を進めるべきである。

【0039】

この連続的脱保護は、当業技術で周知のように実施される。好適には、Ａｃ基の除去は、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、又は水酸化ナトリウムなどの塩基、より好適にはナトリウムメトキシドを使用し、溶媒にはメタノールやエタノールなどの第一級アルコール、最も好適にはメタノールを使用して行われる。好適には、シアル酸のアノマー炭素におけるメチルエステルの加水分解は、ＮａＯＨ １Ｍの塩基性条件下で行われる。

【0040】

好適には、メチルエステルの加水分解が完了したら、イオン交換樹脂、特に、強カチオン樹脂及び弱アニオン樹脂により、反応混合物の最終的な酸性化を行い、６’ＳＬを含有する溶出液を得る。

【0041】

上記の方法で使用されるシアル酸供与体は、特にＸが塩素であり、Ｒ’が式（ＩＶ）（式中、Ｐ＝Ｐ’＝Ａｃ）で保護されたラクトースの場合、調製及び使用がシンプルで簡単である。当業技術が、よりいっそう複雑な供与体を求めてきたにもかかわらず、驚くべきことにこの選択は、公知の方法の問題を解決するのに十分であることを示した。

【0042】

ステップａ）で使用されるプロモーター金属の量は、公知の当業技術の現状と比較して驚くほど減少し、０．５〜２．０当量対６〜７当量である。その結果、合成コスト及び廃棄物の処理コストが低下する。

【0043】

カップリング反応の生成は、脱保護の後続反応で使用するのに驚くほど十分な純度で達成され、脱保護されたシアリルオリゴ糖を高収率、高純度で得る。更に、本発明の前記カップリング反応の方法は、α異性体だけが唯一得られるので、立体選択的であることに留意すべきである。

【0044】

したがって、本発明の方法は、工業的規模での実施が可能である。

【0045】

本発明はまた、Ｍ^ｎ＋が、Ｎａ^＋、Ｋ^＋、ＮＨ^４＋、Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｓｒ^２＋、Ｆｅ^２＋、又はＡｌ^３＋である式（Ｉｂ）の化合物の合成方法であって、当該方法は上記で説明した方法による６’ＳＬの調製を含む方法について言及している。好ましくは、式（Ｉｂ）の塩は、６’ＳＬを含有する溶出液で直接調製し、イオン交換樹脂処理後、またメチルエステルの加水分解後に、例えば、水酸化物、炭酸塩、重炭酸塩（ＫＯＨ、Ｃａ（ＯＨ）_２、Ｍｇ（ＯＨ）_２など、Ｋ_２ＣＯ_３、ＣａＣＯ_３、ＭｇＣＯ_３など、ＫＨＣＯ_３など）などのＭ（^ｎ＋）を含有する塩基をｐＨが８〜１０になるまで添加して得られる。

【0046】

式（ＩＩ）の化合物は、（Ｒ．Ｋｕｈｎ他、Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，１９６６，９９，６１１，Ａ．Ｍａｒｒａ他、Ｃａｒｂ．Ｒｅｓ，１９８９，１９０，３１７〜３２２ ａｎｄ ＮＦ Ｂｙｒａｍｏｖａ他、Ｃａｒｂ．Ｒｅｓ，１９９２，２３７，１６１−１７５）で報告される公知の当業技術で得ることができる。

【0047】

適切に保護された受容体の合成は、当業者の知識に従って行うことができる。特に、式（ＩＩＩａ）（式中、ＰはＡｃである）の受容体の合成は、図式１に基づいた公知の方法に従って実施された。

【化15】

【0048】

本発明によれば、アルコキシは、例えば−ＯＭｅ、−ＯＥｔ、−ＯｎＰｒ、−ＯｉＰｒ、−ＯｎＢｕ、−ＯｊＢｕ、−ＯｔＢｕを意味する。

【0049】

本発明によれば、ハロゲンは、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素を意味する。

【0050】

本発明によれば、アルキルは、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロから選択される１つ又は複数の基で置換されていてもよい、１〜６個の炭素原子を含む直鎖アルキル鎖、又は分岐状アルキル鎖を意味する。

【0051】

本発明によれば、アリールは、ハロゲン、アルコキシ、ニトロから選択される１つ又は複数の基で最終的に置き換えられているベンゼンを意味する。

【0052】

本発明によれば、アシルは、−ＯＣＯ−アルキル、又は−ＯＣＯ−アリールの基を意味し、ここで、アルキル及びアリールは上記で定義した通りである。

【0053】

本発明によれば、単糖は、ポリオキシアルデヒド（アルドース）、ポリオキシケトン（ケトース）、又は式（ＣＨ_２Ｏ）_ｎ、Ｃ_ｎＨ_２ｎＯ_ｎ−１、Ｃ_ｎＨ_２ｎＯ_ｎ−１ＮＨ_２、又はＣ_ｎＨ_２ｎＯ_ｎ−１ＮＨＡｃ（式中、ｎ＝３、４、５、６、７）で示される単純な糖を意味する。単糖は、定義に該当するあり得る全ての立体異性体及び全ての非環状形又は環状形のもの、若しくは分子内セミアセタール及び分子内セミケタールを意味する。一例として、ピラノシル型とフラノシル型が挙げられる。例えば、グリセリンアルデヒド、アロース、アルトロース、アラビノース、エリトロース、フコース、ガラクトース、グルコース、グルコサミン、Ｎ−アセチル−グルコサミン、イドース、リキソース、マンノース、プシコース、リボース、デオキシリボース、ソルボース、タガトース、トレオース、キシロース、及び対応するケトースがこの定義に含まれる。

【0054】

本発明によれば、二糖はアセタール結合又はグリコシド（Ｏ−グリコシド、又はＮ−グリコシド）結合で、連結された２種類の単糖よりなるポリオキシ化合物を意味する。上記定義では、あり得る全ての立体異性体及び全ての開放形又は環状形のもの、例えば、ラクトース、ラクトサミン、Ｎ−アセチル−ラクトサミン、マルトース、セロビオース、スクロース、スレアロース、ツラノースなどが含まれる。

【0055】

本発明によれば、オリゴ糖は、グリコシド結合で３〜６個の単糖が結合して形成され直鎖型糖鎖又は分岐型糖鎖を形成するポリマーを意味する。例えば、ラフィノース、メレジトース、マルトトリオース、アカルボース、スタキオースが含まれる。

【実施例】

【0056】

実験の部

【0057】

実施例１
４’，６’−ジ−Ｏ−ベンジリデンラクトースの調製

【0058】

ラクトース一水和物２００ｇ（０．５５５ｍｏｌ）を撹拌しながらＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１．４Ｌに添加し、次いでベンズアルデヒドジメチルアセタール２０９ｍｌ（１．３９ｍｏｌ）とｐ−トルエンスルホン酸一水和物５．２８ｇ（０．０２８ｍｏｌ）を添加した。得られた懸濁液を５５℃に加熱し、ＴＬＣが成功するまで（１６〜１８時間）（薬局方）この温度を維持した。室温まで冷却した後、ｐＨが７〜８になるまでトリエチルアミン４．７ｍｌを添加した。前記混合物を濃縮して、溶液７００ｍｌを得た。溶液を激しく撹拌しながら、高温のアセトン３Ｌ（５０〜５５℃）でドレインした。当該混合物を０±５℃に冷却して、沈殿は完了させた。沈殿物を濾過し、冷たいアセトン０．７Ｌで洗浄し、乾燥させて、白色生成物として４’，６’−ジ−Ｏ−ベンジリデンラクトース（αアノマー及びβアノマーの混合物）２０８ｇを得た（分析結果 ＨＰＬＣ６６％、０３１９ｍｏｌ、収率５７％）。

【0059】

二重結晶化（最初はＭｅＯＨ、次いでＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ ４／１ 体積／体積による）により、αアノマーに濃縮された分析試料が得られた。ＮＭＲキャラクタリゼーションが以下に報告される。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ_６，３００ＭＨｚ）：δ ｐｐｍ ７．５１〜７．３４（５Ｈ，ｍ，Ｐｈ）；６．３６（ｄ，Ｊ_ＯＨ−１＝４．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１−ＯＨ）；５．５８（ｓ，１Ｈ，ＰｈＣＨ）；５．２８（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ，ＯＨ）；５．０１（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，ＯＨ）；４．９２（擬似ｔ，Ｊ_１−ＯＨ＝Ｊ_１〜２＝４．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１）；４．６８（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ，ＯＨ）；４．４５（ｍ，２Ｈ，２×ＯＨ）；４．３７（ｄ，Ｊ_{１’−２’}＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’）；４．１６〜３．９５（ｍ，３Ｈ）；３．８４〜３．１１（ｍ，９Ｈ）（Ｈ−２，Ｈ−３，Ｈ−４，Ｈ−５，ＣＨ_２−６，Ｈ−２’，Ｈ−３’，Ｈ−４’，Ｈ−５’，ＣＨ_２−６’）。
^１３Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ_６，７５ＭＨｚ）：δ ｐｐｍ １３８．５、１２８．６、１２７．９、１２６．２（Ｐｈ）；１０３．１（Ｃ−１’）；９９．８（ＰｈＣＨ）；９２．１（Ｃ−１）；７９．６、７５．８、７２．２、７１．６、７１．３、６９．９、６９．８、６８．５（Ｃ２，Ｃ２’，Ｃ３，Ｃ３’，Ｃ４，Ｃ４’，Ｃ５，Ｃ５’）；６６．２（Ｃ６’）；６０．３（Ｃ６）。
Ｒｆ（薬局方、可視紫外分光法及びナフトレゾルシン）＝０．７

【0060】

実施例２
４’，６’−Ｏ−ｐ−メトキシベンジリデンラクトースの調製

【0061】

ラクトース一水和物２００ｇ（０．５５５ｍｏｌ）を撹拌しながら、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１．４Ｌに添加し、次いでｐ−メトキシベンズアルデヒドジメチルアセタール２３７ｍｌ（１．３９ｍｏｌ）とｐ−トルエンスルホン酸一水和物５．２８ｇ（０．０２８ｍｏｌ）を添加した。得られた懸濁液を５５℃に加熱し、好ましいＴＬＣ結果になるまで（１６〜１８時間）（薬局方）この温度を維持した。室温まで冷却した後、ｐＨが７〜８になるまでトリエチルアミン５．０ｍｌを添加した。当該混合物を濃縮し、高温のアセトン３Ｌ（５０〜５５℃）中で残留物を結晶化した。混合物を０−５℃に冷却して沈殿を完結させた。沈殿物を濾過し、２×２００ｍｌの冷たいアセトンで洗浄し、淡黄色固体で４’，６’−Ｏ−ｐ−メトキシベンジリデンラクトース（αアノマー及びβアノマーの混合物）２１９ｇを得た（分析結果 ＨＰＬＣ７６％、０３６１ｍｏｌ、収率６５％）。高温のアセトン／水 ４／１ 体積／体積による結晶化により、αアノマー及びβアノマーの混合物（１／１ ｍｏｌ／ｍｏｌ）の分析試料が得られた。ＮＭＲキャラクタリゼーションが以下に報告される。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ_６，３００ＭＨｚ）：δ ｐｐｍ ７．３８（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ）、６．９３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ）（Ｐｈ）；６．７０（ｄ，Ｊ_ＯＨ−１＝６．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１−ＯＨ β）；６．３６（ｄ，Ｊ_ＯＨ−１＝４．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１−ＯＨ α）；５．５２（ｓ，１Ｈ，ＰｈＣＨ α＋β）；５．２７（ｍ，１Ｈ，ＯＨα＋β）；５．０４〜４．９５（ｍ，１Ｈ，ＯＨα＋β）；４．９２（擬似ｔ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，Ｈ−１ α）；４．７２〜４．６０（ｍ，１Ｈ，ＯＨα＋β）；４．５６〜４．２８（ｍ，Ｈ−１’ α＋β＋Ｈ−１ β＋２×ＯＨα＋β）；４．１２〜３．９２（ｍ，３Ｈ）；３．７６（ｓ，３Ｈ，ＯＭｅ）；３．８０〜３．１１（ｍ，９Ｈ）；２．９８（ｍ，１Ｈ β）。
^１３Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ_６，７５ＭＨｚ）：δ ｐｐｍ １５９．４、１３０．９、１２７．６、１１３．２（Ｐｈ）；１０３．０（Ｃ−１’ α＋β）；９９．７（ＰｈＣＨα＋β）；９６．７（Ｃ−１β）；９２．１（Ｃ−１α）；７９．６、７９．２、７５．７、７４．９、７４．８、７４．６、７２．２、７１．６、７１．３、６９．９、６９．８、６８．４（Ｃ２，Ｃ２’，Ｃ３，Ｃ３’，Ｃ４，Ｃ４’，Ｃ５，Ｃ５’ α＋β）；６６．２（Ｃ６’ α＋β）；６０．４，６０．３（Ｃ６α＋β）；５５．１（ＯＭｅα＋β）。
Ｒｆ（薬局方、可視紫外分光法及びナフトレゾルシン）＝０．８

【0062】

実施例３
１，２，３，６，２’，３’−ヘキサ−Ｏ−アセチル−４’，６’−Ｏ−ベンジリデン−β−Ｄ−ラクトースの調製

【0063】

実施例１に従って得られた４’，６’−Ｏ−ベンジリデンラクトース１００ｇ（ＨＰＬＣで０．１５３ｍｏｌ）とトリエチルアミン２５６ｍｌ（１．８４ｍｏｌ）をメチルエチルケトン６００ｍｌに加えた。反応混合物を６０℃に加熱し、無水酢酸１７４ｍｌ（１．８４ｍｏｌ）を滴下し、内部温度を７０℃未満に維持した。ＴＬＣが成功するまで（１０〜１２時間）、反応混合物を７０℃で撹拌した（ＡｃＯＥｔ）。この溶媒を蒸発させ、残留物をジクロロメタン２７０ｍｌ及び水２００ｍｌに溶解した。ｐＨが９〜９．５になるまで撹拌しながらＮａＯＨ３０％を添加し、次いで層を分離した。水層をジクロロメタン７５ｍｌで再度抽出した。集めた有機層を水２００ｍｌで洗浄した後、ｐＨが１〜１．５になるまで撹拌しながらＨＣＬ溶液３２％を添加した。酸性水層をジクロロメタン７５ｍｌで抽出した。次いで、集めた有機層をＮａＣｌ（２０％）３７０ｍｌで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、活性炭及びベントナイトで脱色した。当該溶媒を濃縮し、その残留物をそのまま次の反応で使用した。ＨＰＬＣ定量では、１，２，３，６，２’，３’−ヘキサ−Ｏ−アセチル−４’，６’−Ｏ−ベンジリデンラクトース１０３ｇ（０．１５１ｍｏｌ）が、基本的にβアノマーとして示された（αアノマー＜１０ｍｏｌ％）（収率９９％）。αアノマー９ｍｏｌ％を含有する分析試料が、高温のＭｅＯＨからの結晶化により得られた。ＮＭＲキャラクタリゼーション（βアノマー）を以下に示す。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ ｐｐｍ ７．５４〜７．３４（ｍ，５Ｈ，Ｐｈ）；５．６８（ｄ，Ｊ_１〜２＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１）、５．４７（擬似ｓ，１Ｈ，ＣＨＰｈ）；５．３２〜５．２１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３＋Ｈ−２’）、５．０７（ｄｄ，Ｊ_２〜３＝９．６Ｈｚ ｅ Ｊ_２〜１＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−２）、４．８７（ｄｄ，Ｊ_{３’−２’}＝１０．４Ｈｚ ｅ Ｊ_{３’−４’}＝３．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．５４〜４．４３（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１’＋Ｈ−６ａ）、４．３８〜４．２５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４’＋Ｈ−６’ａ）、４．１４（ｄｄ，Ｊ_{６ｂ−６ａ}＝１２．２ ｅ Ｊ_６ｂ−５＝４．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６ｂ）、４．０４（ｄ，Ｊ_{６’ｂ−６’ａ}＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６’ｂ）、３．９０〜３．７０（ｍ，２Ｈ，Ｈ４＋Ｈ５）；３．４６（擬似ｓ，１Ｈ，Ｈ−５’）、２．１４〜２．００（６×ＣＯＣＨ_３）。
^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ）：δ ｐｐｍ １７０．８、１７０．４、１７０．１、１６９．７、１６９．０、１６８．９（６×ＣＯＣＨ_３）；１３７．５、１２９．３、１２８．３、１２６．６（Ｐｈ）；１０１．４（ＣＨＰｈ）；１０１．１（Ｃ−１’）；９１．８（Ｃ−１）；７５．５、７３．８、７３．２、７２．４、７２．２、７０．５、６９．０、６８．５（Ｃ−２，Ｃ−３，Ｃ−４，Ｃ−５，Ｃ−２’，Ｃ−３’，Ｃ−４’，Ｃ−５’）；６６．６（Ｃ−６’）；６１．８（Ｃ−６）、２０．９〜２０．７（６×ＣＯＣＨ_３）。
Ｒｆ（ＡｃＯＥｔ：ヘキサン＝１：１、可視紫外分光法及びＨ_２ＳＯ_４／ＭｅＯＨ）＝０．３

【0064】

実施例４
１，２，３，６，２’，３’−ヘキサ−Ｏ−アセチル−４’，６’−Ｏ−ｐ−メトキシベンジリデン−β−Ｄ−ラクトースの調製

【0065】

実施例２に従って得られた４’，６’−Ｏ−ｐ−メトキシベンジリデンラクトース１００ｇ（ＨＰＬＣ定量 ０．１６５ｍｏｌ）とトリエチルアミン２４２ｍｌ（１．７４ｍｏｌ）をメチルエチルケトン６００ｍｌに加えた。当該懸濁液を６０℃に加熱し、無水酢酸１６４ｍｌ（１．７４ｍｏｌ）を滴下し、内部温度を７０℃未満に維持した。好ましくＴＬＣが成功するまで（１０〜１２時間）、反応混合物を７０℃で撹拌した（ＡｃＯＥｔ：ヘキサン＝１：１）。当該溶媒を蒸発させ、残留物をジクロロメタン２７０ｍｌ及び水２００ｍｌに溶解した。ｐＨが９〜９．５になるまで撹拌しながらＮａＯＨ３０％を添加し、次いで層を分離した。水層をジクロロメタン７５ｍｌで再度抽出した。集めた有機層を水２００ｍｌで洗浄した後、ｐＨが１〜１．５になるまで撹拌しながらＨＣＬ溶液３２％を添加した。酸性水層をジクロロメタン７５ｍｌで抽出した。次いで、集めた有機層を飽和ＮａＨＣＯ_３４００ｍｌ、ＮａＣｌ（２０％）４００ｍｌで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、活性炭及びベントナイトで漂白した。当該溶媒を濃縮し、その残留物をそのまま次の反応で使用した。ＨＰＬＣ定量では、１，２，３，６，２’，３’−ヘキサ−Ｏ−アセチル−４’，６’−Ｏ−ｐ−メトキシベンジリデンラクトース１１０ｇ（０．１５５ｍｏｌ）が、基本的にβアノマーとして示された（収率９４％）。分析試料が、高温のＭｅＯＨからの結晶化により得られた。ＮＭＲキャラクタリゼーション（βアノマー）を以下に示す。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ ｐｐｍ ７．３６（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ）、６．８８（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ）（Ｐｈ）；５．６６（ｄ，Ｊ_１〜２＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１）；５．４０（擬似ｓ，１Ｈ，ＣＨＰｈ）；５．２４（擬似ｔ，Ｊ_３〜２＝Ｊ_３〜４＝９．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３）；５．２３（ｄｄ，Ｊ_{２’−３’}＝１０．２Ｈｚ ｅ Ｊ_{２’−１’}＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−２’）；５．０４（ｄｄ，Ｊ_２〜３＝９．６Ｈｚ ｅ Ｊ_２〜１＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−２）；４．８４（ｄｄ，Ｊ_{３’−２’}＝１０．２Ｈｚ ｅ Ｊ_{３’−４’}＝３．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．４６（ｄｄ，Ｊ_{６ａ−６ｂ}＝１２．０Ｈｚ ｅ Ｊ_６ａ−５＝１．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６ａ）；４．４４（ｄ，Ｊ_{１’−２’}＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’）；４．２８（ｄ，Ｊ_{４’−３’}＝３．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４’）；４．２５（ｄ，Ｊ_{６’ａ−６’ｂ}＝１２．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６’ａ）；４．１２（ｄｄ，Ｊ_{６ｂ−６ａ}＝１２．０ ｅ Ｊ_６ｂ−５＝４．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６ｂ）、４．００（ｄｄ，Ｊ_{６’ｂ−６’ａ}＝１２．６Ｈｚ ｅ Ｊ_{６’ｂ−５’}＝１．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６’ｂ）；３．８７〜３．６９（ｍ，２Ｈ，Ｈ４＋Ｈ５）；３．７９（ｓ，３Ｈ，ＯＭｅ）；３．４２（擬似ｓ，１Ｈ，Ｈ−５’）；２．０９、２．０７、２．０３、２．０２、２．００（６×ＣＯＣＨ_３）。
^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ）：δ ｐｐｍ １７０．８、１７０．４，１７０．１、１６９．６、１６８．９３、１６８．８９（６×ＣＯＣＨ_３）；１６０．３、１３０．１、１２７．９、１１３．７（Ｐｈ）；１０１．３（ＣＨＰｈ）；１０１．１（Ｃ−１’）；９１．８（Ｃ−１）；７５．５、７３．８、７３．２、７２．４、７２．１、７０．５、６９．０、６８．４（Ｃ−２，Ｃ−３，Ｃ−４，Ｃ−５，Ｃ−２’，Ｃ−３’，Ｃ−４’，Ｃ−５’）；６６．５（Ｃ−６’）；６１．８（Ｃ−６）、５５．４（ＯＭｅ）；２０．９〜２０．６（６×ＣＯＣＨ_３）。
Ｒｆ（ＡｃＯＥｔ：ヘキサン＝１：１、可視紫外分光法及びＨ_２ＳＯ_４／ＭｅＯＨ）＝０．２

【0066】

実施例５
１，２，３，６，２’，３’−ヘキサ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ラクトースの調製

【0067】

実施例３に従って得られた１，２，３，６，２’，３’−ヘキサ−Ｏ−アセチル−４’，６’−Ｏ−ベンジリデンラクトース１００ｇ（０．１５ｍｏｌ）を含むシロップを、氷酢酸４００ｍｌに溶解した。反応混合物を８０℃に加熱し、次にこの混合物を１．５時間この温度で撹拌しながら、水１００ｍｌ（８０℃に予熱）を加えた。次に、反応混合物を急激に室温まで冷却し、トルエン５００ｍｌと水３５０ｍｌを加えて、抽出した。水層を、トルエン１５０ｍｌで抽出した。合一したトルエン層には、別の反応で使用可能な未反応の１，２，３，６，２’，３’−ヘキサ−Ｏ−アセチル−４’，６’−Ｏ−ベンジリデンラクトースが含有していた。１，２，３，６，２’，３’−ヘキサ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ラクトースを含む水層を、塩化メチレン５００ｍｌ及び１５０ｍｌで連続して抽出した。有機抽出液を、水（３×１５０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、更に濃縮した。残留物を高温の酢酸イソプロピル（５０〜５５℃）５８０ｍｌから結晶化して、乾燥させた後、１，２，３，６，２’，３’−ヘキサ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ラクトース（０．０５ｍｏｌ）３０．８ｇを白亜色の固体で得た。合一したトルエン層で未反応の１，２，３，６，２’，３’−ヘキサ−Ｏ−アセチル−４’，６’−Ｏ−ベンジリデンラクトース（０．０３ｍｏｌ）２０．２ｇが回収されたことを考慮すると、収率は４２％である。
融点 １８８〜１９０℃
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ ｐｐｍ ５．６８（ｄ，Ｊ_１〜２＝８．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１）、５．２４（擬似ｔ，Ｊ_３〜２＝Ｊ_３〜４＝９．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３）、５．１９（ｄｄ，Ｊ_{２’−３’}＝１０．２Ｈｚ ｅ Ｊ_{２’−１’}＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．０５（ｄｄ，Ｊ_２〜３＝９．３Ｈｚ ｅ Ｊ_２〜１＝８．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−２）、４．８８（ｄｄ，Ｊ_{３’−２’}＝１０．２Ｈｚ ｅ Ｊ_{３’−４’}＝３．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．４９（ｄ，Ｊ_{１’−２’}＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．４９（ｄｄ，Ｊ_{６ａ−６ｂ}＝１１．１Ｈｚ ｅ Ｊ_６ａ−５＝１．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６ａ）、４．１５〜４．０５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４’＋Ｈ−６ｂ）、４．００〜３．７０（ｍ，４Ｈ，Ｈ−４＋Ｈ−５＋Ｈ−６’ａ＋Ｈ−６’ｂ）、３．５６（擬似ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−５’）、２．９６（ｄ，Ｊ_{ＯＨ−４’}＝４．２Ｈｚ，Ｃ４’−ＯＨ）、２．５９（ｄｄ，Ｊ_{ＯＨ−６’}＝７．５ ｅ ４．８Ｈｚ，Ｃ６’−ＯＨ）、２．１１、２．０９、２．０８、２．０７ ２．０４、２．０３（６×ＣＯＣＨ_３）。
^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ）：δ ｐｐｍ １７０．６、１７０．４、１７０．３、１６９．７、１６９．６、１６９．０（６×ＣＯＣＨ_３）；１０１．２（Ｃ−１’）、９１．７（Ｃ−１）、７５．９（Ｃ−４）、７４．６（Ｃ−５’）、７３．７（Ｃ−３’）、７３．６（Ｃ−５）、７３．１（Ｃ−３）、７０．７（Ｃ−２）、６９．７（Ｃ−２’）、６７．８（Ｃ−４’）、６２．１、６２．０（Ｃ−６，Ｃ−６’）、２０．９、２０．８、２０．７（６×ＣＯＣＨ_３）。
Ｒｆ（ＡｃＯＥｔ、可視紫外分光法及びＨ_２ＳＯ_４／ＭｅＯＨ）＝０．４

【0068】

実施例６
ジ１，２，３，６，２’，３’−ヘキサ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ラクトースの調製

【0069】

実施例４に従って得られた１，２，３，６，２’，３’−ヘキサ−Ｏ−アセチル−４’，６’−Ｏ−ｐ−メトキシベンジリデンラクトース１００ｇ（０．１４ｍｏｌ）を含むシロップを、氷酢酸４００ｍｌに溶解した。次に、水１００ｍｌを加えて、混合物を室温で４．５時間撹拌した。トルエン５００ｍｌと水３５０ｍｌを添加した後、抽出した。水層を、トルエン１５０ｍｌで抽出した。集めたトルエン層には、別の反応で使用可能な未反応の１，２，３，６，２’，３’−ヘキサ−Ｏ−アセチル−４’，６’−Ｏ−ｐ−メトキシベンジリデンラクトースが含有していた。１，２，３，６，２’，３’−ヘキサ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ラクトースを含む水層を、塩化メチレン５００ｍｌ及び１５０ｍｌで連続して抽出した。有機抽出液を、水（３×１５０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、更に濃縮した。残留物を高温の酢酸イソプロピル（５０〜５５℃）５８０ｍｌから結晶化して、乾燥させた後、１，２，３，６，２’，３’−ヘキサ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ラクトース（０．０７ｍｏｌ、収率５０％）４０．６ｇを白色粉末状の固体で得た。当該白色粉末状固体の特性は、実施例５で得られた固体の特性と類似する。

【0070】

実施例７
（メチル５−アセトアミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−ノノ−２−ウロピラノシルオナート）−（２→６）−２，３−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−１，２，３，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノースの調製

【0071】

実施例３に従って得られた１，２，３，６，２’，３’−ヘキサ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ラクトース１００ｇ（０．１６８ｍｏｌ）をジクロロメタン６００ｍｌに溶解し、次いでモレキュラーシーブ３Ａを２５０ｇ添加した。当該溶液を５〜１０分間撹拌した後、炭酸銀（０．１４ｍｏｌ）３８．０ｇを添加した。ジクロロメタン５００ｍｌ中の式（ＩＩ）（式中、Ｐはアセチルであり、Ｘは塩素であり、Ｒ１はメチルである）の塩素誘導体１２８．５（０．２５２ｍｏｌ）（１．５ｅｑ）の溶液を添加して、その懸濁液を塩素誘導体が消滅するまで７日間３０℃で激しく撹拌し続けた（ＴＬＣ、ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＭｅＯＨ＝１０：１）。次に、その混合反応物をジカライト上で濾過し、溶媒を除去し、縮合生成物、１，２，３，６，２’，３’−ヘキサ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ラクトース及び式（ＩＩ）の２，３脱離生成物の混合物と微量の４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−ＮＡＮＡを含有する脆性固体の残留物（約２３０ｇ）を得た。^１３ＣのＮＭＲにより、約９０％のモル転化率が評価された。縮合生成物の分析試料を、エタノール：イソプロピルエーテル＝１：３ 体積／体積からの結晶化により白色非晶質固体で得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ）：δ ｐｐｍ ５．６６（ｄ，Ｊ_１〜２＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１）；５．４２〜５．１０（ｍ，５Ｈ，Ｈ−３＋Ｈ−２’＋Ｈ−７”＋Ｈ−８”＋ＮＨ）；５．０１（擬似ｔ，Ｊ_２〜１＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−２）；４．９４〜４．７８（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３’＋Ｈ−４”）；４．５３〜４．２７（ｍ，３Ｈ，Ｈ−１’＋Ｈ−６ａ＋Ｈ−９”）；４．２４〜３．９２（ｍ，５Ｈ，Ｈ−６ｂ＋Ｈ−４’＋Ｈ−５”＋Ｈ−６”＋Ｈ−９”ｂ）；３．９２〜３．５０（ｍ，５Ｈ，Ｈ−４＋Ｈ−５＋Ｈ−５’＋Ｈ−６’ａ＋Ｈ−６’ｂ）；３．８０（ｓ，３Ｈ，ＣＯＯＣＨ_３）、２．９３（広幅なｓ，１Ｈ，ＯＨ）；２．５５（ｄｄ，Ｊ_{３”ｅｑ−３”ａｘ}＝１２．６ ｅ Ｊ_{３”ｅｑ−４”}＝４．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３”ｅｑ）；２．１７〜１．９７（３１Ｈ，１０×ＣＨ_３ＣＯ ｅ Ｈ−３”ａｘ）、１．８６（ｓ，３Ｈ，ＮＨＣＯＣＨ_３）。
^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，７５ＭＨｚ）：δ ｐｐｍ １７１．０５、１７０．９８、１７０．５、１７０．４、１７０．２９、１７０．２８、１７０．２４、１７０．０、１６９．６、１６９．４、１６９．０、１６８．０（ＯＡｃ，ＮＨＡｃ，ＣＯＯＭｅ）；１００．８（Ｃ−１’）；９９．１（Ｃ−２”）；９１．７（Ｃ−１）；７５．７、７３．７、７３．６、７２．９４、７２．９０、７２．４、７０．７、６９．７、６８．９５、６８．８７、６７．４、６６．３（Ｃ−２，Ｃ−３，Ｃ−４，Ｃ−５，Ｃ−２’，Ｃ−３’，Ｃ−４’，Ｃ−５’，Ｃ−４”，Ｃ−６”，Ｃ−７”，Ｃ−８”）；６２．６、６２．４、６２．１（Ｃ−６，Ｃ−６’，Ｃ−９”）；５３．２（ＯＣＨ_３）；４９．４（Ｃ−５”）；３７．４（Ｃ−３”）；２３．２（ＮＨＣＯＣＨ_３）、２１．１、２０．９、２０．８、２０．７４、２０．６７（１０×ＣＨ_３ＣＯ）。

【0072】

実施例８
（メチル５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄガラクト−ノノ−２−ウロピラノシルオナート）−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−（α／β）−Ｄ−グルコピラノースの調製

【0073】

実施例７に従って得られた粗生成物２３０ｇをＭｅＯＨ１．４Ｌに溶解し、次いでメタノール２５重量％中のナトリウムメトキシド２９．６ｍｌを添加した。溶液を室温で１２時間撹拌し続けた。好ましいＴＬＣ制御（薬局方）下で、当該溶液を乾燥したＩＲ１２０（Ｈ^＋）３９ｇで中和した。樹脂を濾過し、溶媒をロータベーパーで除去して、残留物１４３ｇを得た。残留物は次の反応で使用された。収率は、定量的であった。
^１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，３００ＭＨｚ）：δ ｐｐｍ ５．２１（ｄ，Ｊ_１〜２ ３．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１α）、４．６６（ｄ，Ｊ_１〜２ ７．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１β）、４．４２（ｄ，Ｊ_{１’−２’}：７．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．１５〜３．４５（ｍ，１９Ｈ）、３．８９（ｓ，３Ｈ，ＣＯＯＣＨ_３）、３．２９（ｍ，１Ｈ）、２．７０（ｄｄ，Ｊ_{３”ｅｑ−３”ａｘ} １２．９ ｅ Ｊ_{３”ｅｑ−４”} ４．８Ｈｚ，Ｈ−３”ｅｑ）、２．０３（ｓ，３Ｈ，ＮＨＣＯＣＨ_３）、１．８８（擬似ｔ，Ｊ_{３”ａｘ−３”ｅｑ}＝Ｊ_{３”ａｘ−４”} １２．９Ｈｚ，Ｈ−３”ａｘ）。
^１３Ｃ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，７５ＭＨｚ）：δ ｐｐｍ １７５．５（ＮＨＣＯＣＨ_３）、１７０．４（ＣＯＯＭｅ）、１０３．９（Ｃ−１’）、９９．６（Ｃ−２”）、９６．３（Ｃ−１β）、９２．５（Ｃ−１α）、８０．５，８０．４，７５．２（２Ｃ）、７４．４、７４．０、７３．５、７３．０、７２．２、７１．７、７１．３、７１．２、７０．５、６９．０（２Ｃ）、６７．９（Ｃ−２，Ｃ−３，Ｃ−４，Ｃ−５，Ｃ−２’，Ｃ−３’，Ｃ−４’，Ｃ−５’，Ｃ−４”，Ｃ−６”，Ｃ−７”，Ｃ−８”）、６４．０（Ｃ−６’）、６３．８（Ｃ−９”）、６０．８ ｅ ６０．７（Ｃ−６α＋β）、５４．１（ＣＯＯＣＨ_３）、５２．３（Ｃ−５”）、３９．６（Ｃ−３”）、２２．８（ＮＨＣＯＣＨ_３）。

【0074】

実施例９
ナトリウム５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−ノノ−２−ウロピラノシルオナート）−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−（α／β）−Ｄ−グルコピラノースの調製

【0075】

実施例８に従って得られた脱アセチル化粗生成物１４３ｇを水７１５ｍｌに溶解し、溶液を４℃に冷却した。ＮａＯＨ水溶液でｐＨを中性に調整し、次いでＮａＯＨ（３０％）２３ｍｌを加えて溶液の温度を１０℃未満に維持した。当該溶液を、室温で２４時間撹拌した。好ましいＴＬＣ制御（薬局方）下で、溶液をＩＲ１２０（Ｈ^＋）／ＩＲＡ９６（ＯＨ⁻）に通した。溶出液をＮａＯＨでｐＨ９に調整し、シロップに濃縮し、脆性の白色固体を得るまで無水ＥｔＯＨで数回揮散させた。この白色固体をＥｔＯＨ９６％から再結晶して、７７．３ｇを得た。
当該化合物の^１Ｈ ＮＭＲデータ及び^１３Ｃ ＮＭＲデータは、文献（Ｌ．Ｄｏｒｌａｎｄ他、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９７８，８７，３２３；Ｊ．Ｐ．Ｋａｍｅｒｌｉｎｇ他、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．１９８２，１００，３３１）で報告されるデータと一致した。
^１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，３００ＭＨｚ）：δ ｐｐｍ ５．２２（ｄ，Ｊ_１〜２ ３．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１α）、４．６６（ｄ，Ｊ_１〜２ ７．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１β）、４．４３（ｄ，Ｊ_{１’−２’}：７．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．０２〜３．４８（ｍ，１９Ｈ）、３．３１（ｍ，１Ｈ）、２．７１（ｄｄ，Ｊ_{３”ｅｑ−３”ａｘ} １２．５ ｅ Ｊ_{３”ｅｑ−４”} ４．７Ｈｚ，Ｈ−３”ｅｑ）、２．０３（ｓ，３Ｈ，ＮＨＣＯＣＨ_３）、１．７４（擬似ｔ，Ｊ_{３”ａｘ−３”ｅｑ}＝Ｊ_{３”ａｘ−４”} １２．５Ｈｚ，Ｈ−３”ａｘ）。
^１３Ｃ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，７５ＭＨｚ，外部標準アセトン）：δ ｐｐｍ １７５．６（ＮＨＣＯＣＨ_３）、１７４．１（ＣＯＯ⁻）、１０３．９（Ｃ−１’）、１００．９（Ｃ−２”）、９６．３（Ｃ−１β）、９２．５（Ｃ−１α）、８０．４、８０．３、７５．３０、７５．２６、７４．４、７４．３、７３．２、７３．０、７２．４、７２．３、７１．７、７１．４、７０．６、６９．２、６９．０４、６９．０１（Ｃ−２，Ｃ−３，Ｃ−４，Ｃ−５，Ｃ−２’，Ｃ−３’，Ｃ−４’，Ｃ−５’，Ｃ−４”，Ｃ−６”，Ｃ−７”，Ｃ−８”）、６４．２（Ｃ−６’）、６３．３（Ｃ−９”）、６０．９ ｅ ６０．８（Ｃ−６α＋β）、５２．４（Ｃ−５”）、４０．７（Ｃ−３”）、２２．７（ＮＨＣＯＣＨ_３）。
［α］_Ｄ^２０℃：＋９．３°（ｃ：１％，Ｈ_２Ｏ）
融点： １９１．４−１９４．２°Ｃ（Ｔ 分解）

【0076】

実施例１０
カルシウム５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−ノノ−２−ウロピラノシルオナート）−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−（α／β）−Ｄ−グルコピラノースの調製

【0077】

実施例８に従って得られた脱アセチル化粗生成物１００ｇを水５００ｍｌに溶解し、溶液を４℃に冷却した。ＮａＯＨ水溶液でｐＨを中性に調整し、次いでＮａＯＨ（３０％）２３ｍｌを加えて溶液の温度を１０℃未満に維持した。生成した溶液を室温で２４時間撹拌し続けた。好ましいＴＬＣ制御（薬局方）下で、溶液をＩＲ１２０（Ｈ^＋）／ＩＲＡ９６（ＯＨ⁻）に通した。溶出液をＣａ（ＯＨ）_２でｐＨ８．７に調整し、濾過し、次いで、６５°Ｂｒｉｘでシロップに濃縮した。当該シロップを５０℃でメタノール５４０ｍｌに滴下した。生成した懸濁液を５０℃で１時間激しく撹拌し続けた。更に室温で１時間撹拌した後、真空下で濾過した。当該固体をメタノール１６０ｍｌで洗浄し、真空下、５０−５５℃で乾燥させ、４６．２ｇを得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，３００ＭＨｚ）：δ ｐｐｍ ５．２２（ｄ，Ｊ_１〜２ ３．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１α）、４．６６（ｄ，Ｊ_１〜２ ７．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１β）、４．４３（ｄ，Ｊ_{１’−２’}：７．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．０２〜３．４８（ｍ，１９Ｈ）、３．３１（ｍ，１Ｈ）、２．７１（ｄｄ，Ｊ_{３”ｅｑ−３”ａｘ} １２．０ ｅ Ｊ_{３”ｅｑ−４”} ４．５Ｈｚ，Ｈ−３”ｅｑ）、２．０３（ｓ，３Ｈ，ＮＨＣＯＣＨ_３）、１．７４（擬似ｔ，Ｊ_{３”ａｘ−３”ｅｑ}＝Ｊ_{３”ａｘ−４”} １２．０Ｈｚ，Ｈ−３”ａｘ）。
^１３Ｃ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，７５ＭＨｚ，内部標準アセトニトリル）：δ ｐｐｍ １７５．５（ＮＨＣＯＣＨ_３）、１７４．１（ＣＯＯ⁻）、１０３．８（Ｃ−１’）、１００．９（Ｃ−２”）、９６．２（Ｃ−１β）、９２．４（Ｃ−１α）、８０．３、８０．３、７５．２６、７５．２２、７４．４、７４．３、７３．１、７３．０、７２．４、７２．２、７１．７、７１．４、７０．５、６９．１、６９．１３、６９．００（Ｃ−２，Ｃ−３，Ｃ−４，Ｃ−５，Ｃ−２’，Ｃ−３’，Ｃ−４’，Ｃ−５’，Ｃ−４”，Ｃ−６”，Ｃ−７”，Ｃ−８”）、６４．２（Ｃ−６’）、６３．２（Ｃ−９”）、６０．９ ｅ ６０．７（Ｃ−６α＋β）、５２．４（Ｃ−５”）、４０．７（Ｃ−３”）、２２．７（ＮＨＣＯＣＨ_３）。
Ｃａ^２＋の分析 ９８．３％
［α］_Ｄ^２０°Ｃ：＋１０°（ｃ：１％、Ｈ_２Ｏ）
融点：２０４，５−２０６，６°Ｃ（Ｔ 分解）
ＩＲν^ＫＢｒ_ｍａｘ：３４００、１６１２、１３８０、１０３３ｃｍ^−１．

【0078】

実施例１１
カリウム５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−ノノ−２−ウロピラノシルオナート）−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−（α／β）−Ｄ−グルコピラノースの調製

【0079】

実施例８に従って得られた脱アセチル化粗生成物１００ｇを水５００ｍｌに溶解し、溶液を４℃に冷却した。ＮａＯＨ水溶液でｐＨを中性に調整し、次いでＮａＯＨ（３０％）２３ｍｌを加えて溶液の温度を１０℃未満に維持した。溶液を室温で２４時間撹拌し続けた。好ましいＴＬＣ制御（薬局方）下で、溶液をＩＲ１２０（Ｈ^＋）／ＩＲＡ９６（ＯＨ⁻）に通した。溶出液をＫＯＨでｐＨ１０に調整し、シロップに濃縮し、脆性の白色固体を得るまで無水ＥｔＯＨで数回揮散させた。この白色固体を無水ＥｔＯＨから再結晶した。当該固体を真空下、５０−５５℃で乾燥させ、３５．７ｇを得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，２００ＭＨｚ）：δ ｐｐｍ ５．２２（ｄ，Ｊ_１〜２ ３．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１α）、４．６６（ｄ，Ｊ_１〜２ ７．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１β）、４．４３（ｄ，Ｊ_{１’−２’}：７．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．０２〜３．４８（ｍ，１９Ｈ）、３．３１（ｍ，１Ｈ）、２．７１（ｄｄ，Ｊ_{３”ｅｑ−３”ａｘ} １２．０ ｅ Ｊ_{３”ｅｑ−４”} ４．４Ｈｚ，Ｈ−３”ｅｑ）、２．０３（ｓ，３Ｈ，ＮＨＣＯＣＨ_３）、１．７４（擬似ｔ，Ｊ_{３”ａｘ−３”ｅｑ}＝Ｊ_{３”ａｘ−４”} １２．０Ｈｚ，Ｈ−３”ａｘ）。
^１３Ｃ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，７５ＭＨｚ，内部標準アセトン）：δ ｐｐｍ １７５．５（ＮＨＣＯＣＨ_３）、１７４．０（ＣＯＯ⁻）、１０３．８（Ｃ−１’）、１００．９（Ｃ−２”）、９６．２（Ｃ−１β）、９２．４（Ｃ−１α）、８０．３、８０．２、７５．２２、７５．１９、７４．４、７４．３、７３．１、７２．９、７２．４、７２．２、７１．７、７１．４、７０．５、６９．１、６９．０４、６９．０１（Ｃ−２，Ｃ−３，Ｃ−４，Ｃ−５，Ｃ−２’，Ｃ−３’，Ｃ−４’，Ｃ−５’，Ｃ−４”，Ｃ−６”，Ｃ−７”，Ｃ−８”）、６４．１（Ｃ−６’）、６３．２（Ｃ−９”）、６０．８ ｅ ６０．７（Ｃ−６α＋β）、５２．４（Ｃ−５”）、４０．７（Ｃ−３”）、２２．６（ＮＨＣＯＣＨ_３）。
［α］_Ｄ ^２０℃：＋９．８°（ｃ：１％，Ｈ_２Ｏ）
融点１７９．３−１８２．８°Ｃ（Ｔ 分解）
ＩＲν^ＫＢｒ _ｍａｘ：３３９１、１６１２、１３７９、１０３４ｃｍ^−１

【0080】

実施例１２
マグネシウム５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−ノノ−２−ウロピラノシルオナート）−（２→６）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−（α／β）−Ｄ−グルコピラノースの調製

【0081】

実施例８に従って得られた脱アセチル化粗生成物１００ｇを水５００ｍｌに溶解し、溶液を４℃に冷却した。ＮａＯＨ水溶液でｐＨを中性に調整し、次いでＮａＯＨ（３０％）２３ｍｌを加えて溶液の温度を１０℃未満に維持した。溶液を室温で２４時間撹拌し続けた。好ましいＴＬＣ制御（薬局方）下で、溶液をＩＲ１２０（Ｈ^＋）／ＩＲＡ９６（ＯＨ⁻）に通した。溶出液をＭｇＯでｐＨ９．８に調整し、残留物に濃縮し、脆性の白色固体を得るまで無水ＥｔＯＨで数回揮散させた。当該白色固体を無水ＥｔＯＨから再結晶して、５０．８ｇを得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，３００ＭＨｚ）：δ ｐｐｍ ５．２２（ｄ，Ｊ_１〜２ ３．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１α）、４．６６（ｄ，Ｊ_１〜２ ８．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１β）、４．４３（ｄ，Ｊ_{１’−２’}：７．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．０２〜３．４８（ｍ，１９Ｈ）、３．３１（ｍ，１Ｈ）、２．７１（ｄｄ，Ｊ_{３”ｅｑ−３”ａｘ} １２．３ ｅ Ｊ_{３”ｅｑ−４”} ４．５Ｈｚ，Ｈ−３”ｅｑ）、２．０３（ｓ，３Ｈ，ＮＨＣＯＣＨ_３）、１．７４（擬似ｔ，Ｊ_{３”ａｘ−３”ｅｑ}＝Ｊ_{３”ａｘ−４”} １２．３Ｈｚ，Ｈ−３”ａｘ）。
^１３Ｃ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，７５ＭＨｚ，内部標準アセトニトリル）：δ ｐｐｍ １７５．５（ＮＨＣＯＣＨ_３）、１７４．１（ＣＯＯ⁻）、１０３．８（Ｃ−１’）、１００．９（Ｃ−２”）、９６．３（Ｃ−１β）、９２．４（Ｃ−１α）、８０．３、８０．２、７５．２６、７５．２３、７４．４、７４．３、７３．１、７３．０、７２．４、７２．２、７１．７、７１．４、７０．６、６９．１、６９．００、６８．９６（Ｃ−２，Ｃ−３，Ｃ−４，Ｃ−５，Ｃ−２’，Ｃ−３’，Ｃ−４’，Ｃ−５’，Ｃ−４”，Ｃ−６”，Ｃ−７”，Ｃ−８”）、６４．２（Ｃ−６’）、６３．３（Ｃ−９”）、６０．９ ｅ ６０．７（Ｃ−６α＋β）、５２．４（Ｃ−５”）、４０．７（Ｃ−３”）、２２．７（ＮＨＣＯＣＨ_３）。
Ｍｇ^２＋の分析９７．５％
［α］_Ｄ^２０°Ｃ＋９．８°（ｃ：１％、Ｈ_２Ｏ）
融点１８３．１−１８５．１°Ｃ（Ｔ 分解）
ＩＲν^ＫＢｒ_ｍａｘ：３３９１、１６３４、１３７９、１０３５ｃｍ^−１