特許 5738412 ｃ−ＭＥＴ阻害剤としての６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３−（２−メチル−２Ｈ−インダゾール−５−イルチオ）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5738412

(24)【登録日】2015年5月1日

(45)【発行日】2015年6月24日

(54)【発明の名称】ｃ−ＭＥＴ阻害剤としての６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３−（２−メチル−２Ｈ−インダゾール−５−イルチオ）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン

(51)【国際特許分類】

   C07D 487/04 20060101AFI20150604BHJP

   A61K 31/5025 20060101ALI20150604BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20150604BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20150604BHJP

【ＦＩ】

   C07D487/04 145

   C07D487/04CSP

   A61K31/5025

   A61P35/00

   A61P43/00 111

【請求項の数】3

【全頁数】17

(21)【出願番号】特願2013-521838(P2013-521838)

(86)(22)【出願日】2011年7月22日

(65)【公表番号】特表2013-532687(P2013-532687A)

(43)【公表日】2013年8月19日

(86)【国際出願番号】US2011044926

(87)【国際公開番号】WO2012015677

(87)【国際公開日】20120202

【審査請求日】2014年7月18日

(31)【優先権主張番号】61/369,335

(32)【優先日】2010年7月30日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】594197872

【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー

(74)【代理人】

【識別番号】100068526

【弁理士】

【氏名又は名称】田村 恭生

(74)【代理人】

【識別番号】100100158

【弁理士】

【氏名又は名称】鮫島 睦

(74)【代理人】

【識別番号】100138900

【弁理士】

【氏名又は名称】新田 昌宏

(74)【代理人】

【識別番号】100162684

【弁理士】

【氏名又は名称】呉 英燦

(74)【代理人】

【識別番号】100176474

【弁理士】

【氏名又は名称】秋山 信彦

(72)【発明者】

【氏名】ジペイ・ウ

【審査官】 天野 皓己

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２００９／０５６６９２（ＷＯ，Ａ２）

【文献】 特表２０１０−５０７５７８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００９−５４３７８９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００９−５１８２９６（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ ４８７／０４

Ａ６１Ｋ ３１／５０２５

Ａ６１Ｐ ３５／００

Ａ６１Ｐ ４３／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

以下の式の化合物

【化1】

またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項2】

前記塩が、塩酸塩、重硫酸塩、またはメタンスルホン酸塩である、請求項１に記載の塩。

【請求項3】

請求項１または請求項２に記載の化合物または塩と、１種以上の薬学的に許容可能な担体または希釈剤とを含む、医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は医化学の分野である。本発明は癌の治療に関する。より具体的には、本発明は、癌の治療に有用なｃ−Ｍｅｔ受容体シグナル伝達経路の阻害剤に関する。

【背景技術】

【0002】

ｃ−Ｍｅｔ発現は、内皮、上皮、および間葉細胞において生じる。ＨＧＦ／ｃ−Ｍｅｔシグナル伝達経路の異常調節は、腫瘍形成および腫瘍進行に関与する。腫瘍細胞ｃ−Ｍｅｔ受容体のＤｙｓ調節は、腫瘍細胞増殖、侵入／転移、およびアポトーシス抵抗性を高める（非特許文献１）。

【0003】

種々のｃ−Ｍｅｔ受容体阻害剤（ｃ−Ｍｅｔ阻害剤）が報告されている。例えば、特許協力条約（ＰＣＴ）による特許文献１、特許文献２および特許文献３は、癌の治療に有用な化合物を開示している。

【0004】

ｃ−Ｍｅｔの阻害剤を含む種々の癌の治療に有用な化合物が報告されているが、これらの化合物の一部は十分に効果的ではない。一部の化合物は持続性の有効性を欠き、一部は、十分でない薬物動態／薬力学（ＰＫ／ＰＤ）を有し、一部は不十分な代謝プロファイルを有する（非特許文献２；非特許文献３も参照のこと）。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【特許文献1】国際公開第２００８０５１８０８（Ａ２）号

【特許文献2】国際公開第２００８／０５１８０５（Ａ３）号

【特許文献3】国際公開第２００９／１０６５７７（Ａ１）号

【非特許文献】

【0006】

【非特許文献1】Ｐｏｒｔｅｒら，Ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｃ−Ｍｅｔ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｒｅｃｅｎｔ ｐａｔｅｎｔｓ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｐａｔｅｎｔｓ，（２０１０），２０（２），１５９−１７７

【非特許文献2】Ｘｉａｎｇｄｏｎｇら，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０１０）１６（１），４１−４２；

【非特許文献3】Ｄｉａｍｏｎｄ Ｓら，Ｓｐｅｃｉｅｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｏｆ ＳＧＸ５２３ ｂｙ ａｌｄｅｈｙｄｅ ｏｘｉｄａｓｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓｐｏｓ．２０１０，３８（８）：１２７７−８５

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

従って、癌の治療に有効かつ効果的な新規化合物の必要性が存在する。特に、有効な化合物についての必要性が存在する。加えて、持続した効果を有する化合物についての必要性が存在する。さらに、癌の治療のために許容可能なＰＫ／ＰＤプロファイルを有する化合物についての必要性が存在する。本発明は、ｃ−Ｍｅｔにより媒介される癌を治療するための高い有効性、持続した前臨床効果、および許容可能なＰＫ／ＰＤプロファイルを示す新規化合物を提供する。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明の化合物は、以下の式の化合物

【化1】

またはその薬学的に許容可能な塩である。

【0009】

本発明は、本発明の治療有効量の化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、１種以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。

【0010】

本発明は、１種以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と、必要に応じて、１種以上の他の治療剤と共に本発明の化合物を含む医薬組成物を提供する。

【0011】

本発明は、治療有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を、それを必要とする患者に投与する工程を含む、癌を治療する方法を提供する。

【0012】

本発明は、治療有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を、それを必要とする患者に投与する工程を含む、結腸直腸癌、乳癌、頭頸部癌、前立腺癌、胃癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、肺癌、白血病、黒色腫、膠芽腫および肉腫から選択される癌を治療する方法を提供する。

【0013】

本発明は、治療有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を、それを必要とする患者に投与する工程を含む、胃癌、膠芽腫、および膵臓癌から選択される癌を治療する方法に関する。

【0014】

本発明は、治療有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を、それを必要とする患者に投与する工程を含む、乳癌または結腸直腸癌を治療する方法を提供する。

【0015】

本発明は、治療に使用するための本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。

【0016】

本発明は、癌の治療に使用するための本発明の化合物を提供する。

【0017】

本発明は、胃癌、膵臓癌、膠芽腫、乳癌または結腸直腸癌の治療に使用するための本発明の化合物を提供する。

【0018】

本発明は、癌を治療するための医薬の製造における本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用に関する。

【0019】

本発明は、胃癌、膵臓癌および膠芽腫から選択される癌を治療するための医薬の製造における本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用に関する。

【0020】

本明細書で使用する場合、「Ｍｅｔ」、「ｃ−Ｍｅｔ」、「ｃＭｅｔ」または「ｃ−Ｍｅｔ受容体」とは、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）受容体およびその形態を指す。

【0021】

「ＨＧＦ／ｃ−Ｍｅｔシグナル伝達経路の異常調節」という用語は、ＨＧＦ／ｃ−Ｍｅｔシグナル伝達経路を介する上昇したまたは不適切なレベルのシグナル伝達を意味する。

【0022】

「治療有効量」の本発明の化合物は、癌の治療を達成するために１以上の用量においてｃ−Ｍｅｔ受容体活性の阻害を達成できる前記化合物の量である。有効量は、例えば、大きさ、年齢、患者の全体的な健康、処理される特定の癌または同時に提示している疾患（複数も含む）、重症度、投与様式、投与計画、併用薬の使用などの当業者に知られている多くの要因を考慮することにより、当業者として担当医または診断医により容易に決定できる。

【0023】

本明細書で使用する場合、「治療」または「治療している」という用語は、腫瘍増殖停止、腫瘍増殖の阻害、腫瘍増殖の発生もしくは再発の防止および／または癌の重症度もしくは作用の減少を意味する。

【0024】

本明細書で使用する場合、「持続された効果」という用語は、四（４）時間より長い間の持続されたレベルの薬力学的効果、例えば腫瘍増殖の阻害、または本発明の化合物の血漿濃度を指す。持続された効果の利点は、用量の低い頻度および／または量を含む。

【0025】

本明細書で使用する場合、「許容可能なＰＫ／ＰＤ特性」という用語は、意図した目的のため、すなわち癌の治療として、化合物を１日に１回（ＱＤ）または１日に２回（ＢＩＤ）投与することができる薬物動態（ＰＫ）および薬力学（ＰＤ）特性のプロファイルを指す。考慮されるＰＫ／ＰＤ特性は、生物学的利用能、クリアランス、および代謝安定性などのパラメータを含む。

【0026】

本発明の化合物はまた、酸付加塩として存在してもよい。薬学的に許容可能な塩およびそれらを調製するための一般的な方法は当業者に公知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌら，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｕｓｅ（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００）；Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら，「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ」Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．６６，Ｎｏ．１，１９７７年１月を参照のこと。本発明の化合物の好ましい塩は、塩酸塩、メタンスルホン酸塩および重硫酸塩を含む。当業者は、酸塩、特に本発明の好ましい酸塩を生成するための手順を知っている。

【0027】

好ましくは、本発明は、乳癌、結腸直腸癌、乳癌、頭頸部癌、前立腺癌、胃癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、肺癌、黒色腫、肉腫、白血病または進行性転移癌を治療するための方法を提供する。より好ましくは、本発明は、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、膵臓癌、および進行性転移癌からなる群から選択される癌を治療する方法を提供する。また、乳癌または結腸直腸癌を治療するための治療有効量の本発明の化合物を投与する工程を含む本発明の実施形態が好ましい。最も好ましい実施形態において、本発明は、治療有効量の本発明の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を、それを必要とする患者に投与する工程を含む胃癌または膵臓癌を治療する方法を提供する。

【0028】

好ましい実施形態において、本発明はまた、１種以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と共に本発明の化合物を含む医薬組成物を提供する。特定の実施形態において、組成物はさらに、１種以上の他の治療剤を含む。

【発明を実施するための形態】

【0029】

本発明の化合物は、以下の実施例に記載されるように実質的に調製され得る。
略語
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＲＴ 室温
ＡＣＮ アセトニトリル
ＩＰＡ イソプロピルアルコール

【0030】

調製物１
３−クロロ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリダジン

【化2】

１，４−ジオキサン（１２００ｍＬ）中の１−メチル−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール（７６ｇ、３６５．３ｍｍｏｌ）、３，６−ジクロロピリダジン（６８ｇ、４５６．４ｍｍｏｌ）の溶液を含む３０００ｍＬ丸底フラスコに、水（４８０ＭＬ）中のＫ_２ＣＯ_３（１２７ｇ、９１９ｍｍｏｌ）の水溶液を加える。［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］塩化パラジウム（ＩＩ）（７．５ｇ，９．２ｍｍｏｌ）を加えた後、混合物をＮ_２で２０分間パージし、８０℃で１６時間攪拌する。反応混合物を水（３００ｍＬ）およびジクロロメタン（２０００ｍＬ）に注ぎ、水層をＤＣＭ（３×８００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空下で濃縮する。粗生成物をＤＣＭ／メタノール（４０：１）で溶出するシリカゲルカラムで精製して、標題化合物を淡黄色固体（５６ｇ、６３．１％）として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１９５．１（Ｍ＋Ｈ）。

【0031】

調製物２
３−ヒドラジニル−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリダジン

【化3】

エタノール（３００ｍＬ）中のヒドラジン一水和物の溶液（２８０ｍＬ、４．８９ｍｏｌ）を含む１０００ｍＬ丸底フラスコに、３−クロロ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリダジン（６０ｇ、３０８．３ｍｍｏｌ）を４℃にて加える。得られた透明溶液を加熱し、１８時間還流させ、次いで１０℃迄冷却する。沈殿させた生成物を濾過により回収し、真空下で乾燥させて、標題化合物を白色固体（５３ｇ、９０．４％）として得て、それをそのまま使用する。

【0032】

調製物３
６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−チオール

【化4】

エタノール（５５０ｍｌ）中の３−ヒドラジニル−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリダジン（５３ｇ、２７８．６ｍｍｏｌ）の溶液に、水（１３０ｍＬ）中のＫＯＨ（１７．２ｇ、３０６．６ｍｍｏｌ）の水溶液を加え、その後、ＣＳ_２（３６ｍＬ、５９６．７ｍｍｏｌ）を加える。混合物をＮ_２雰囲気下で３時間６０〜６７℃にて攪拌し、室温まで冷却する。溶媒を真空下で除去し、残留物を１ＮのＮａＯＨ（３５０ｍＬ）の水溶液に溶解する。不溶性物質を濾過し、濾過物を１ＮのＨＣｌの水溶液でｐＨ２〜３に酸化させる。濾過物を回収し、水で洗浄し、真空下で乾燥させ、標題化合物（５０ｇ、７７．３％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２３３．０（Ｍ＋Ｈ）。

【0033】

調製物４
１Ｈ−インダゾール−５−アミン
Ｈ_２注入口、温度計、およびメカニカルスターラーを備えた５０００ｍＬオートクレーブに、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、３５００ｍＬ）中の５−ニトロ−１Ｈ−インダゾール（５００ｇ、３．０６ｍｏｌ）の溶液を加え、その後パラジウム炭素（１０％、５０ｇ、１４１ｍｍｏｌ）を加える。得られた混合物を一晩２５℃でＨ_２雰囲気下（５ｋｇ圧）で攪拌する。それをＮ_２でパージした後、混合物を濾過し、濾過物を真空下で濃縮して、標題化合物（４２０ｇ、１００％）を茶色固体として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１３４．１（Ｍ＋Ｈ）。

【0034】

調製物５
５−ヨード−１Ｈ−インダゾール
水（３．５Ｌ）中の濃ＨＣｌ（１．３Ｌ、１５．８ｍｏｌ）の溶液に、１Ｈ−インダゾール−５−アミン（５００ｇ、３．８ｍｏｌ）を加え、その後水（１Ｌ）中のＮａＮＯ_２（２８５ｇ、４．１ｍｏｌ）の溶液を、少量ずつ０〜５℃にて加える。得られた赤色懸濁物を、ゆっくりと水（３Ｌ）中のＫＩ（３．１ｋｇ、１８．７ｍｏｌ）の溶液に５０℃にて加え、ガス生成を制御し続ける。得られた混合物を５０℃にて１．５時間攪拌し、１０℃迄冷却し、飽和Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液でｐＨ８に塩基性化する。固体を濾過により回収し、ＥＴＯＡｃ（２０Ｌ）中に再溶解する。溶液を飽和Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液（３×５Ｌ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、ショートシリカゲルカラムで濾過する。濾過物を真空下で濃縮して、標題化合物（６８０ｇ、７４．２％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２４４．９（Ｍ＋Ｈ）。

【0035】

調製物６
５−ヨード−２−メチル−２Ｈ−インダゾール
ＥｔＯＡｃ（４Ｌ）中の５−ヨード−１Ｈ−インダゾール（５００ｇ、２．０５ｍｏｌ）の溶液に、トリメチルオキソニウムテトラフルオロホウ酸塩（４５０ｇ、３．０４ｍｏｌ）を加える。得られた白色懸濁物を室温にて２時間攪拌した後、それを真空下で濃縮する。氷水（１Ｌ）を残留物に加え、それを１０％ＮａＯＨ水溶液でｐＨ１２に塩基性化する。固体を濾過により回収し、ＤＣＭ（５Ｌ）中に再溶解する。不溶性物質を濾過し、濾過物を１０％ＮａＯＨ水溶液（２×１００ｍＬ）で洗浄する。有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、ショートシリカゲルカラムで濾過し、濃縮する。メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルを残留物に加え、スラリーを得て、生成物を濾過により回収し、標題化合物（３６０ｇ、６８．０％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２５９．０（Ｍ＋Ｈ）。

【実施例】

【0036】

実施例１
６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３−（２−メチル−２Ｈ−インダゾール−５−イルチオ）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン

【化5】

ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−チオール（２．３ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）に、５−ヨード−２−メチル−２Ｈ−インダゾール（２．６ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（４６０ｍｇ；５０２．７μｍｏｌ）、４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（５８０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（４ｍＬ、２２．９ｍｍｏｌ）を加える。混合物をＮ_２でパージし、１００℃にて１８時間攪拌する。ＤＭＦを真空下で除去し、残留物を、ＤＣＭ／メタノール（２０：１）で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉ−Ｆｌａｓｈ、シリカゲル）により精製して、粗生成物を得る。粗生成物を２０ｍＬのＤＣＭ中に懸濁してスラリーを得て、純生成物を濾過により回収して、標題化合物（１．９ｇ、５２．５％）を黄色固体として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３６３．１（Ｍ＋Ｈ）。

【0037】

実施例１ａ
６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３−（２−メチル−２Ｈ−インダゾール−５−イルチオ）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン

【化6】

ＤＭＦ（７５０ｍＬ）中の６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−チオール（５０ｇ、２６８ｍｍｏｌ）の溶液に、５−ヨード−２−メチル−２Ｈ−インダゾール（５５．５ｇ、２１５．１ｍｍｏｌ）、２−ピリジンカルボン酸（５．５ｇ、４４．７ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）（４ｇ、２１．０ｍｍｏｌ）、および炭酸セシウム（２１２．５ｇ、６５２．２ｍｏｌｅ）を加える。混合物をＮ_２下で１００℃にて１０時間攪拌する。次いで反応混合物を室温まで冷却し、水（２０００ｍＬ）中に注ぐ。室温にて３０分間攪拌した後、混合物を混合溶媒（２ＬＸ２、ＣＨＣｌ_３／ＩＰＡ＝３／１）で抽出する。次いで合わせた有機層を混合溶液（２５％ＮＨ_４ＯＨ_（ａｑ）／ブライン＝１／４；８００ｍＬ）、飽和ＬｉＣｌ_（ａｑ）（１Ｌ）、飽和ブライン（１．５Ｌ×２）で４回洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させる。有機溶液を減圧下で濃縮し、茶色の粗固体生成物を得る。粗生成物を酢酸エチル（８００ｍＬ）で室温にて３時間粉砕し、純生成物を濾過により回収して、標題化合物（６８ｇ、８７．２％）を白色固体として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３６３．０（Ｍ＋Ｈ）。

【0038】

本発明の化合物は、高い効力、ｃ−Ｍｅｔ受容体に対する高い選択性が観察されており、これは許容可能なＰＫ／ＰＤ特性を示し、持続的な有効性を実証している。

【0039】

本願明細書において記載される以下のアッセイを実質的に実施し、これらのアッセイは、本発明の化合物が、細胞中のｃ−Ｍｅｔリン酸化を強力に阻害すること、インビボ中でｃ−Ｍｅｔを強力に阻害することを実証し、また、特定の異種移植片モデル中での用量依存的抗腫瘍活性を実証する。

【0040】

ｃＭｅｔ均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）インビトロアッセイ
このアッセイは、ＨＴＲＦ技術に基づいており、ｃＭｅｔ酵素によりビオチン標識されたチロシンペプチドのリン酸化を検出するために用いられる。反応が完了した後に、ＸＬ６６５標識されたストレプトアビジンを用いてビオチンユニットを認識し、ユーロピウム（Ｅｕ３＋）標識された抗リン酸チロシン抗体を用いてリン酸化チロシンを認識する。検出プロセスは、励起されたＥｕ３＋とＸＬ６６５標識されたストレプトアビジンとの間のエネルギー移動に依存する。このプロトコルの目的は、この反応における生成物のリン酸化を阻害する試験化合物の能力を計算することと、これらの相対ＩＣ_５０値を計算することである。

【0041】

参照化合物は、必要であれば、１００％ＤＭＳＯ中の１ｍＭのストック溶液として調製してもよく、試験化合物は、１００％ＤＭＳＯ中の１０ｍＭのストック溶液として調製する。１ｍＭ参照化合物および１０ｍＭ試験化合物を９６ウェル希釈プレート中で８μＭと８０μＭの１０％ＤＭＳＯ溶液に予め希釈する。化合物をＴｅｃａｎ Ｆｒｅｅｄｏｍ ＥＶＯ ２００を用いて連続的に希釈（１：３）し、１０点の希釈曲線を試験された各化合物について生成する。１０μＬの連続的に希釈された化合物をＴｅｍｏ（Ｔｅｃａｎ）を用いて９６ウェルアッセイプレートに移動する。各アッセイプレートは、酵素最高活性および酵素最低活性のコントロールを含む。最高活性のコントロールのウェルは、１０μＬの１０％ＤＭＳＯを含み、最低活性のコントロールのウェルは、１０％ＤＭＳＯ中に溶解された１０μＬの５００ｍＭエチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）を含む。２０μＬの基質溶液［酵素希釈バッファ（ＥＤＢ）トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン中で調製されたＢｉｏ−ＰｏｌｙＧＴ（ＣｉｓＢｉｏ）（０．５７６μＭ）およびＡＴＰ（６５．１４ｕＭ）；Ｔｒｉｚｍａ（登録商標）塩基性バッファ、ｐＨ７．５、５０ｍＭ；ＤＬ−ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、２ｍＭ；０．０００５％ＴＸ−１００；ＭｇＣｌ_２、１０ｍＭ；およびＥＤＴＡ、２５０μＭ）］をＭｕｌｔｉｄｒｏｐ（Ｔｈｅｒｍｏ）を用いてアッセイプレートに加える。１０μＬの酵素混合物［ＥＤＢ中で調製されたｃＭＥＴ（１２ｎＭ）］をＭｕｌｔｉｄｒｏｐ（Ｔｈｅｒｍｏ）を用いてアッセイプレートに加えて、反応を開始する。アッセイプレートを３０秒間振り、次いで室温で９０分間インキュベートする。９０分間のインキュベーションの後、４０μＬの検出バッファを、アッセイプレート［２．６^＊ＫＦ／ＥＤＴＡ４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸中で調製されたストレプトアビジン−ＸＬ６６５（ＳＡ−ＸＬ６６５）（Ｃｉｓｂｉｏ）（１４４ｎＭ）およびＥｕ３＋標識された抗リン酸チロシン抗体（ＥｕＫ）（ＣｉｓＢｉｏ）（６ｎＭ）；Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）バッファ、ｐＨ７．０、５０ｍＭ；ＢＳＡ、０．２％；ＥＤＴＡ、２０ｍＭ；ＫＦ、８００ｍＭ）］に、Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ（Ｔｈｅｒｍｏ）を用いて加える。アッセイプレートを室温にて６０分間インキュベートし、その後Ｖｉｃｔｏｒ３機器（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）において６２０ｎｍ発光および６６５ｎｍ励起にて蛍光信号を読む。６６５／６２０比を各プレートについて正規化し、阻害値パーセントを化合物濃度に対してプロットして、相対ＩＣ_５０値を計算する。実施例１の化合物についてのＩＣ_５０値は、標準偏差０．０００７１およびサンプルサイズ２で０．０１０μＭである。実施例１のメシラート塩形態についてのＩＣ_５０値は、標準偏差０．００８２およびサンプルサイズ２で０．０２５μＭである。これらのデータは、本発明の化合物がｃ−Ｍｅｔの強力な阻害剤であることを実証している。

【0042】

ＨＧＦ刺激性Ｍｅｔ（ｐＹ１３４９）ＮＣＩ−Ｈ４６０セルベースＥＬＩＳＡ
ＮＣＩ−Ｈ４６０細胞（ＡＴＣＣから購入）を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）で補充され、９６ウェル平底プレート中にプレーティングされた（７０％コンフルエンスになる前）ＲＰＭＩ １６４０培地（Ｉｎｖｉｔｏｒｇｅｎ）中で、８０μＬ容量でウェルあたり２０，０００細胞の密度で培養する。次いで、細胞を細胞培養インキュベータ（５％ＣＯ_２、９５％相対湿度（ＲＨ）および３７℃）中で一晩インキュベートし、プレートに取り付け得る。次の朝に、細胞を２容量の減少させた血清培地（ＲＳＭ、０．５％ＦＢＳで補充されたＲＰＭＩ１６４０培地）で洗浄する。最後の洗浄物を除去した後、８０μＬのＲＳＭを、セルプレートの各ウェルに加える。セルプレートを細胞培養インキュベータ中で２．５時間インキュベートし、次いで化合物を投与する。化合物阻害物を、１００％ＤＭＳＰ中で１０ｍＭで最初可溶化し、次いで２％ＤＭＳＯ ＲＳＭで１００μＭに希釈する。続いて、化合物の連続希釈（１：３）を１００μＭから０．００５μＭの範囲にわたって調製する。細胞に、２０μＬの化合物ストックを加えて投与して、最終ＤＭＳＯ濃度を０．４％および最終化合物濃度投与範囲を２０から０．００１μＭの間にする。化合物を投与した後、セルプレートを穏やかに攪拌して混合し、次いで細胞培養インキュベータ中で３０分間インキュベートさせる。投与完了後、ウェル当たり２０μＬの肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）をＲＳＭ中で最終濃度１００ｎｇ／ｍＬにて加えて、細胞を刺激する（ＭＩＮウェルを除いて全ウェルを刺激する；ＭＩＮウェルには２０μＬのＲＳＭが投与される）。細胞培養インキュベータ中で１０分間インキュベートした後に、液体を細胞プレートウェルから除去し、ホスファターゼＩおよびＩＩとプロテアーゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で補充された、５０μＬの氷冷Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（登録商標）（ＭＳＤ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，Ｍａｒｙｌａｎｄ）１×溶解バッファ（１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２０ ｍＭトリス、ｐＨ７．５、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭエチレングリコールテトラ酢酸、および１％ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ−１００）を追加して、細胞を溶解する。室温にて３０分間溶解後、溶解物を、ＭＳＤ（登録商標）マルチスポット９６ウェル４スポットのリン酸Ｍｅｔプレート上に移動させて捕捉する。このプレートはＢＳＡブロックされている（１×トリス洗浄バッファ中で３０ｍｇ／ｍＬのブロックＡにて）。次いで、溶解物をトリス洗浄バッファで１回洗浄する。２時間捕捉した後（室温にて）、溶解物をＭＳＤ（登録商標）プレートから除去し、プレートを１×トリス洗浄バッファで洗浄する。ブロッティング後、２５μＬの５ｎＭのスルフォタグ抗全Ｍｅｔ抗体（検出抗体、１０ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡおよび０．１％Ｂｌｏｃｋｅｒ Ｄ−Ｒ（ＭＳＤ（登録商標）で補充された１×トリス洗浄バッファ中で調製されたＭＳＤ（登録商標））をＭＳＤ（登録商標）プレートのウェルに加える。１時間捕捉した後（室温にて）、ＭＳＤ（登録商標）プレートウェルを１×トリス洗浄バッファで洗浄し、次いで１５０μＬの１×リードバッファ Ｔ（界面活性剤を含む、ＭＳＤ（登録商標））を加える。リードバッファを追加した直後、プレートをＳＥＣＴＯＲ ６０００ ＭＳＤ（登録商標）撮像プレートリーダーで分析する。相対ＩＣ_５０値を、ＭＳＤ活性ユニットを用いて、プレート「ＭＩＮ」および「ＭＡＸ」上のコントロールと比べて阻害率を計算し、次いで阻害率および１０点投与反応データを４パラメータロジスティック方程式にフィッティングすることで、決定する。実施例１の化合物は、相対ＩＣ_５０値０．０３６μＭ、ｎ＝１（メシラート塩形態について０．０３８μＭ、ｎ＝１） を示した。これは、実施例Ｉの化合物が細胞インビトロ中でｃ−Ｍｅｔリン酸化を強力に阻害することを示している。

【0043】

ｃ−Ｍｅｔインビボ標的阻害（ＩＶＴＩ）アッセイ
Ｓ１１４細胞（ヒトＨＧＦおよびヒトｃ−Ｍｅｔの両方とも過剰発現）を、１０％ウシ胎仔血清が補充され、拡張された増殖培地（ダルベッコ改変イーグル培地）中で培養する。細胞を採取し、リン酸緩衝化生理食塩水で２回洗浄し、２×１０^６細胞を等量のＢＤ Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）マトリックス（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ，ＮＪ）と混合し、ヌードマウス（Ｈａｒｌａｎ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮからの無胸線ヌード）のわき腹に皮下注入する。注入後８日目において、化合物（懸濁液として１０％アカシアまたは１％カルボキシメチルセルロース／０．５％ラウリル硫酸ナトリウム／０．０５％消泡剤中で調製された）を、５０ｍｇ／ｋｇにて強制経口投与により動物に投与する。動物を投与後２時間で死傷させ、腫瘍を採取し、必要となるまで凍結保存する。

【0044】

凍結腫瘍を乳棒と乳鉢を用いて粉砕する。粉砕された組織を溶解マトリックスＤビーズ（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ，Ｓｏｌｏｎ，ＯＨ）および６００μＬ溶解バッファ（Ｂｏｓｔｏｎ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓからの５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ＮＰ−４０、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、０．１％ＳＤＳを含むＲＩＰＡバッファ、ホスファターゼ阻害剤ＩおよびＩＩとプロテアーゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｓｉ，ＭＯ））を含むチューブに移す。ＦａｓｔＰｒｅｐ（登録商標）細胞破壊器（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）を用いて、組織を破壊し、細胞を溶解させる。溶解物を２０ゲージ針を通し、無菌チューブへ移す。タンパク質濃度を当業者に公知のブラッドフォード法により決定する。

【0045】

腫瘍溶解物をＭＳＤ（登録商標）リン光体（ｐｈｏｓｐｈｏｒ）−Ｍｅｔ ＥＬＩＳＡプレート上にロードし、リン光体−ｃ−ＭｅｔレベルをＨ４６０セルベースＥＬＩＳＡと同様のプロトコルを用いて決定する。実施例１の化合物に対するＳ１１４インビボ阻害ＥＤ_５０値は、０．２３ｍｇ／ｋｇと０．４１ｍｇ／ｋｇで囲まれた９５％信頼区間で、０．３２ｍｇ／ｋｇである。実施例１のＴＥＣ_５０は、０．１３μＭと０．２３μＭで囲まれた９５％信頼区間で、０．１８μＭである。これらの結果は、実施例１がインビボでの強力なｃ−Ｍｅｔ阻害剤であることを示している。

【0046】

異種移植片腫瘍モデル
ヒト膠芽腫細胞Ｕ８７ＭＧ、ヒト胃癌細胞ＭＫＮ４５、またはヒト膵臓ＫＰ４細胞を培養し、販売元から受け取った後に動物施設内で１週間順化させていたメスＣＤ−１ｎｕ／ｎｕ株マウスのひ腹に皮下注入する。マウスは、グループ当たり１０匹のマウスのグループへ無作為化する。試験化合物を適切なビヒクル中で調製し、腫瘍が樹立したとき（注入後７〜２１日、または、平均腫瘍体積が約１００ｍｍ^３に達したとき）、強制経口投与によって投与する。腫瘍反応を、治療期間の間に１週間に２回実施する腫瘍体積測定により決定する。体重における変動もまた、毒性の一般的な測定としてモニターする。実施例１の化合物を２８日間の間に１日に２回経口投与する。

【0047】

統計解析のために、個々の被験体腫瘍体積をログ体積に変換し、時間による二元配置反復測定分散分析、および、ＳＡＳソフトウェア（バージョン８．２）のＭＩＸＥＤ手順を用いる処理を使用して分析する。反復測定のための相関モデルは、空間電力（ｓｐａｔｉａｌ ｐｏｗｅｒ）である。治療グループを最終時点でのコントロールグループと比較する。また、ＭＩＸＥＤ手順を各治療グループについて別個に使用し、各時点での調製平均および標準誤差を計算する。両方の分析は、各被験体内の自己相関を考慮する。

【0048】

【表1】

【0049】

【表2】

【0050】

【表3】

【0051】

これらのデータは、本発明の化合物がインビボで腫瘍増殖を阻害することを実証している。

【0052】

本発明の化合物は、統計的に関連付けられた化合物（例えば、国際公開第２００８０５１８０８（Ａ２）号の実施例２５、以下本願明細書において「参照化合物」と呼ぶ）と比較して優れたインビボ特性を示すことが見出された。参照化合物および本発明の化合物は、類似する分子量および比較可能なインビトロ特性を有し、これらは最小有意比（ＭＳＲ）内であるため、統計的な差異はない（０．０１５μＭの参照化合物と比較した、０．０１０μＭの実施例１の化合物についてｃ−ＭｅｔＩＣ_５０）。Ｈ４６０アッセイは、０．０６５μＭの参照化合物と比較して、実施例１の化合物について０．０３６μＭのＩＣ_５０を示した。Ｈ４６０アッセイについて、効力値は、ＭＳＲ内であり、互いに統計的な差異はない。

【0053】

同様に、実施例１の化合物および参照化合物の両方は、ｃ−Ｍｅｔ受容体に対して高度に選択的である。Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｋｉｎａｓｅ Ｐｒｏｆｉｌｅ（商標）を利用する９９キナーゼのＣｅｒｅｐスクリーニングにおいて、両方の化合物は、ｃ−Ｍｅｔのみを阻害した。Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｋｉｎａｓｅ Ｐｒｏｆｉｌｅ（商標）は、Ｃｅｒｅｐ ＳＡ（Ｐａｒｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ）により開発されたスクリーニングサービスである。アッセイ条件および／または連絡先情報の詳細は、それらのウェブサイト（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｅｒｅｐ．ｆｒ／ｃｅｒｅｐ／ｕｓｅｒｓ／ｐａｇｅｓ／ｃａｔａｌｏｇ／ｐｒｏｆｉｌｅｓ／ｃａｔａｌｏｇ．ａｓｐ）から見出すことができる。

【0054】

しかしながら、参照化合物に対する実施例Ｉの化合物のヘッドツーヘッド（ｈｅａｄ ｔｏ ｈｅａｄ）比較は、８時間後に式Ｉの化合物が、以下の表４に示すようなインビボ腫瘍阻害研究における参照化合物と比較して、プラズマ照射における有意な平均とＳ１１４腫瘍におけるリン酸ｃＭＥＴ阻害とを示すことを示している。

【0055】

【表4】

【0056】

上記結果は、実施例１の化合物が、参照化合物と比較して、より持続した薬力学的効果（８時間を超える）をもたらすことを示している。上記データは、実施例１の化合物が、それほど頻繁に（例えば、ＢＩＤまたは毎日の処方）投与しなくともよく、一方で、参照化合物は、介護者または患者によるコンプライアンス問題を生じさせ得るより頻繁な投与計画が求められ得ることを示唆している。リン酸（ｐｈｏｓ）−Ｍｅｔ阻害データ（％）の分析は、実施例１の化合物の両方の用量（８ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇ）の血漿濃度が、ｐ値が＜０．０００１での参照化合物の対応する用量と比較して、統計的な差異があることを示している。さらに、実施例１の化合物の用量の両方は、ビヒクルグループと統計的な差異があり（ｐ＜０．０００１）、また、互いに統計的な差異がある（ｐ＝０．００５８）。これらのデータは、一元配置分散分析を用いて分析した。全ての一対比較について第１種の誤りをおかす確率（ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｗｉｓｅ ｅｒｒｏｒ ｒａｔｅ）を、多重検定のためのターキー法を用いて５％に厳重に制御した。

【0057】

ＩＶＴＩの研究において、各化合物を経口投与し、１０％ｗ／ｖアカシア中で調製する。マウス血液サンプルを心穿刺技術を用いて、投与後に抗凝固チューブ（ＥＤＴＡ−紫色先端バキュティナチューブ）に回収する。チューブを３〜５回反転させ、血漿を得るために３０００ＲＰＭ（１８００×ｇ）で１０分間４℃にて遠心分離するまで氷上に置く。血漿のアリコートをピペットで取り、無菌９６ウェルプレート内に保存する。血漿サンプルを迅速に８０℃に保存する。血漿サンプルの積荷（ｓｈｉｐｍｅｎｔｓ）はドライアイス中に包装し、サンプルを分析まで−８０℃で凍結させる。

【0058】

各薬物の０．１ｍｇ／ｍＬストック溶液を調製し、プールされたマウス血漿へ連続的に希釈して、１〜５０００ｎｇ／ｍＬの範囲の標準を調製する。９６ウェルプレート中の血漿標準またはサンプル（０．０２５ｍＬ）を、内部標準を含む０．１〜０．２ｍｌのメタノール：アセトニトリル（１／１、ｖ／ｖ）を追加した状態で、タンパク質沈殿により処理する。混合物を４０００ｒｐｍで４℃にて１０分間遠心分離し、得られた上清の画分のアリコート（０．０５ｍＬ）を、異なる９６ウェルプレートに移す。サンプルおよび標準を、島津ＨＰＬＣシステム（ＬＣ−ＩＯＡＤ，Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）およびＧｉｌｓｏｎ２１５オートサンプラーを取り付けたＳｃｉｅｘ ＡＰＩ ４０００三連四重極質量分析計（Ｓｃｉｅｘ，Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ ＭＤＳ Ｉｎｃ．，Ｔｏｒｏｎｔｏ，Ｃａｎａｄａ）を用いて、分析する。サンプル（０．０１ｍＬ）を、５μｍＢｅｔａｓｉｌ Ｃ１８ ２０×２．１ｍｍ Ｊａｖｅｌｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｃｏｒｐ．カタログ番号７０１０５−０２２１０６）のＨＰＬＣカラム上に注入し、勾配で溶出する。クロマトグラフィー条件は、１．５ｍＬ／分の流速で２．５分にわたって勾配させる、水／１Ｍ ＮＨ_４ＨＣＯ_３（２０００：１０、ｖ／ｖ）の移動相ＡおよびＭｅＯＨ／１Ｍ Ｎ ＮＨ_４ＨＣＯ_３（２０００：１０、ｖ／ｖ）の移動相Ｂからなる。ターボスプレイでの陽イオンモード、および、７４０℃でのイオン供給源温度を、質量分析検出に用いる。定量を、以下の遷移条件で多重反応モニタリング（ＭＲＭ）を用いて実施する。実施例１（ｍ／ｚ３６３．０５〜ｍ／ｚ１６３．１０）および参照化合物（ｍ／ｚ３６３．０５〜ｍ／ｚ１６３．１０）。内部標準ピーク領域比対薬物濃度に関する化合物の線形回帰プロットを、１／ｘ^２二次式で生成する。

【0059】

本発明の化合物はまた、参照化合物よりも有意により可溶性である。

【0060】

実施例１および参照化合物（‘８０８文献の実施例２５）の溶解度を、各ガラス瓶中に実施例１および参照化合物を少量を入れ、キャップし、周囲条件で一晩（１８時間）瓶を回転させることで測定する。培地は、０．０１Ｎ ＨＣｌ、０．０５％ラウリル硫酸ナトリウム、および０．２％ＮａＣｌからなる擬似胃液（ＳＧＦ）；２９ｍＭ ＮａＨ_２ＰＯ_４、３ｍＭ Ｎａタウロコール、０．７５ｍＭレシチン、１０３ｍＭ ＮａＣｌ、およびＮａＯＨ ｐＨ６．５からなる絶食状態擬似腸液（ＳＩＦ絶食）；１４４ｍＭ酢酸、１５ｍＭ Ｎａタウロコール、３．７５ｍＭレシチン、２０４ｍＭ ＮａＣｌ、およびＮａＯＨ（ｐＨ５．０）からなる摂食状態擬似腸液（ＳＩＦ摂食）；および２８−５６ｍＭリン酸バッファであるｐＨ４．５、６、７．５バッファを含む。化合物濃度は、ＵＶ検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ １２００ ＨＰＬＣ（ＬＣ５）を用いて決定する。移動相は、０．１％ＴＦＡを含む水であるＡ（８５％）と、ＡＣＮであるＢ（１５％）を、１ｍＬ／分の流速および１０分の実行時間にて用いる。Ｚｏｒｂａｘ，Ｂｏｎｕｓ−ＲＰ（３．５μｍ、４．６×７５ｍｍ；ＳＮ：ＵＳＴＭ００２４２８）のカラムを研究に用いる。

【0061】

以下のデータは、実施例１の化合物が、絶食状態および摂食状態にてそれぞれ参照化合物と比較した場合に、擬似腸液（ＳＩＦ）中で約１３倍および１４倍以上、より可溶性であることを示している。

【0062】

【表5】

【0063】

溶解度２：動態溶解度スクリーン
アッセイを用いて、化合物が１０ｍＭにてＤＭＳＯ中の予め溶解されて溶液から沈殿するような濃度範囲を決定する。アッセイを９６ウェルプレート上のスクリーニングフォーマットにおいて実施し、リン酸バッファ（５０ｍＭ；ｐＨ７．４）水溶液中の沈殿化合物から比濁度（光散乱）を測定する。この方法は、１０、２０、４０、６０、８０および１００μＭ（この場合、ＤＭＳＯ％を一定に保つ）の濃度にてバッファ中の化合物を２時間ＲＴ（室温）でインキュベートすることからなる。プレートを比濁計により予め読んで、散乱または塵粒子が存在するかを決定し、これをバックグラウンド除去に用いる。報告値は、最後の可溶性物質および最初の不溶性物質が達成されたときの濃度である。これらのアッセイを最適化することなく、平衡溶解度を評価するか、または、「真」の動態溶解度を決定する。

【0064】

以下のスクリーニングデータは、実施例１の化合物が、参照化合物と比較した場合にｐＨ７．４バッファ中で少なくとも３倍以上、より可溶性であることを示している。

【0065】

【表6】

【0066】

本発明の化合物は、ラットの生物学的利用能研究において参照化合物と比較して薬物動態的パラメータにおける有意な差異を示している。本発明の化合物は、溶液調製物中の１ｍｇ／ｋｇ静脈内投与後、１８倍低い血漿クリアランスおよび４倍長い最終排泄相の半減期を提供する。１０％のアカシア懸濁液組成物中の１０ｍｇ／ｋｇ経口投与後、本発明の化合物は、ピーク血漿濃度またはカーブ（ＡＵＣ）下の血漿領域により測定される、それぞれ５７倍および９３倍高い露出（ｅｘｐｏｓｕｒｅ）を提供する。本発明の化合物の経口生物学的利用能は、参照化合物についての１４．６％と比較して、６５．８％であり、４．５倍増加している。

【0067】

ラット生物学的利用能研究において、各化合物を、静脈内（ＩＶ）投与または経口（ＰＯ）投与する。静脈内投与物を溶液調製物中で調製し、経口投与物を１０％ｗ／ｖアカシア中で調製する。ラット血液サンプルを、抗凝固（ＥＤＴＡ）回収チューブを用いて回収し、遠心分離を実施して、血漿サンプルを得る。血漿のアリコートを、ピペットで取り、迅速に−２０℃未満にて保存する。血漿サンプルの積荷は必要であればドライアイス中に包装し、サンプルを分析まで−２０℃未満で凍結させる。

【0068】

各薬物のストック溶液を調製し、プールされたラット血漿へ希釈して、標準を調製する。血漿標準またはサンプルを、内部標準を含む有機溶媒を用いてタンパク質沈殿または液液抽出により処理する。混合物を遠心分離し、得られた上清画分のアリコートを移す。タンパク質沈殿の場合、上清を希釈し、ＨＰＬＣシステムおよびオートサンプラーを取り付けた質量分析計を用いて分析する。液液抽出の場合、上清をＮ_２下で４０℃にて乾燥させ、再構成し、ＨＰＬＣシステムおよびオートサンプラーを取り付けた質量分析計を用いて分析する。定量を、多重反応モニタリング（ＭＲＭ）を用いて実施し、内部標準ピーク領域比対薬物濃度に関する化合物の線形回帰プロットを生成する。

【0069】

【表7】

【0070】

上記データは、実施例１の化合物のメシラート塩が参照化合物よりも生物学的に利用可能であることを示している。さらに、経口投与のために、利用可能なデータは、実施例１の化合物の塩基形態および塩形態について類似の露出レベルを示唆している。

【0071】

実施例１の化合物はまた、適切な抗癌剤または他の補助療法を組み合わせたレジメンにおいて、調製および／または投与することができる。このような組み合わせは、異なる治療の個々の用量が一緒に、連続的に、または、適切な間隔の後に投与される場合のカクテルの形態で有り得る。

【0072】

本発明の化合物は、好ましくは医薬組成物として調製され、これに限定されないが、経口、直腸、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、および、鼻腔内を含む種々の経路により投与される。本発明の化合物は、好ましくは、経口投与または静脈内投与される。化合物は、好ましくは投与前に調製され、どの経路を使用するかの選択は、主治医または資格のある介護者によりなされる。最も好適には、本発明の化合物の組成物は、経口投与のために調製される。本発明の化合物の特に好ましい投与形態は、タブレット、カプレット、またはカプセルである。また好ましくは、迅速に放出する固体形態である。この固体形態には、患者の年齢または好みに応じて治療のコンプライアンスが容易となるように適切なコーティングまたは風味付けがされ得る。さらに別の好ましい形態において、本発明の医薬組成物は更に、１つ以上の追加の治療剤を含む。

【0073】

医薬組成物およびそれらを調製するプロセスは、当該技術分野において周知である。例えば、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ：ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＹ（Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏら，，ｅｄｓ．，１９^ｔｈｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，１９９５）を参照のこと。よって、当業者は、本発明の化合物を、固体、液体、静脈内、皮下デポー、経皮貼布、または、他の調製物として、過度の実験を行うことなく調製することができる。

【0074】

本発明の化合物は、一般的に広範な用量範囲にわたって有効である。例えば、一日当たりの用量は、約１ｍｇから約１０００ｍｇの１日当たりの総量の範囲内、好ましくは、１０ｍｇから５００ｍｇの１日当たりの総量の範囲内であり得る。より好ましくは、用量は一日当たり約５０〜２００ｍｇである。最も好ましくは、用量は、日に二度（ｂ．ｉ．ｄ）約５０〜８０ｍｇである。場合によっては、上述の範囲の下限以下の用量がより適切であり得、一方で他の場合は、更に大きい用量が用いられ得る。上述の用量範囲は、本発明の範囲を限定することを何ら意図していない。実際に投与される本発明の化合物の量は、治療される病態、選択される投与経路、カクテルまたは固定用量併用治療の場合に投与される化合物、年齢、体重、個々の患者の反応性、および、他の要因の中の患者の症状の重篤度を含む、関連する状況に基づいて医師により決定される。

【0075】

ｃ−Ｍｅｔ関連腫瘍および異種移植片モデル
ｃ−Ｍｅｔ過剰発現は、肺、胸、結腸直腸、胃、腎臓、膵臓、頭頸部を含む多くのヒト腫瘍について共通の特徴である（１，２）。キナーゼドメイン内のｃ−Ｍｅｔ活性化変異は、例えば遺伝性乳頭状腎臓細胞癌、小児肝細胞癌、および、胃癌等のいくつかの腫瘍の原因として関係がある（３−７）。Ｐｆｉｚｅｒからのｃ−Ｍｅｔ阻害剤は、Ｕ８７ＭＧ、ＧＴＬ１６、Ｈ４４１、Ｃａｋｉ−１、およびＰＣ３を含む多くのヒト異種移植片腫瘍における抗腫瘍効能を実証した（８）。

【0076】

１．Ｃｈｒｉｓｔｉｎｓｅｎ，ＪＧ．，Ｂｕｒｒｏｗｓ，Ｊ．，ａｎｄ Ｓａｌｇｉａ，Ｒ．Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔｅｒｓ２２５：１−２６，２００５．
２．Ｂｉｒｃｈｍｅｉｅｒ，Ｃ．，Ｂｉｒｃｈｍｅｉｅｒ，Ｗ．，Ｇｈｅｒａｒｄｉ，Ｅ．，ａｎｄ Ｖａｎｄｅ Ｗｏｕｄｅ，ＧＦ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ４：９１５−９２５，２００３．
３．Ｄｉ Ｒｅｎｚｏ，ＭＦ．，Ｏｌｉｖｅｒｏ，Ｍ．，Ｍａｒｔｏｎｅ，Ｔ．Ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １９：１５４７−１５５５，２０００．
４．Ｌｅｅ，ＪＨ．，Ｈａｎ，ＳＵ，Ｃｈｏ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ１９：４９４７−４９５３，２０００．
５．Ｍａ，ＰＣ．，Ｋｉｊｉｍａ，Ｔ．，Ｍａｕｌｉｋ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６３：６２７２−６２８１，２００３．
６．Ｐａｒｋ，ＷＳ．，Ｄｏｎｇ，ＳＭ．，Ｋｉｍ，ＳＹ．ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ５９：３０７−３１０，１９９９．
７．Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ｌ．，Ｄｕｈ，ＦＭ．，Ｃｈｅｎ，Ｆ．，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ １６：６８−７３，１９９７．
８．Ｚｏｕ，Ｈ−ｙｌｉ，Ｑｉｕｈｕａ．，Ｌｅｅ， ＪＨ．，ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６７：４４０８−４４１７，２００７．