特許 5738775 ジスキネジア関連障害の治療

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5738775

(24)【登録日】2015年5月1日

(45)【発行日】2015年6月24日

(54)【発明の名称】ジスキネジア関連障害の治療

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/4741 20060101AFI20150604BHJP

   A61P 25/16 20060101ALI20150604BHJP

   A61P 25/14 20060101ALI20150604BHJP

   A61K 31/137 20060101ALI20150604BHJP

   A61K 31/381 20060101ALI20150604BHJP

   A61K 31/4045 20060101ALI20150604BHJP

   A61K 31/428 20060101ALI20150604BHJP

   A61K 31/48 20060101ALI20150604BHJP

   A61K 31/4985 20060101ALI20150604BHJP

   A61K 31/4439 20060101ALI20150604BHJP

   C07D 491/056 20060101ALN20150604BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/4741

   A61P25/16

   A61P25/14

   A61K31/137

   A61K31/381

   A61K31/4045

   A61K31/428

   A61K31/48

   A61K31/4985

   A61K31/4439

   !C07D491/056

【請求項の数】8

【全頁数】32

(21)【出願番号】特願2011-551409(P2011-551409)

(86)(22)【出願日】2010年2月26日

(65)【公表番号】特表2012-519157(P2012-519157A)

(43)【公表日】2012年8月23日

(86)【国際出願番号】DK2010050051

(87)【国際公開番号】WO2010097092

(87)【国際公開日】20100902

【審査請求日】2013年2月20日

(31)【優先権主張番号】PA200900281

(32)【優先日】2009年2月27日

(33)【優先権主張国】DK

(31)【優先権主張番号】61/155,943

(32)【優先日】2009年2月27日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】PA200900273

(32)【優先日】2009年2月27日

(33)【優先権主張国】DK

(31)【優先権主張番号】61/155,953

(32)【優先日】2009年2月27日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】PA200900280

(32)【優先日】2009年2月27日

(33)【優先権主張国】DK

(31)【優先権主張番号】61/155,966

(32)【優先日】2009年2月27日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】591143065

【氏名又は名称】ハー・ルンドベック・アクチエゼルスカベット

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 浩

(74)【代理人】

【識別番号】100120134

【弁理士】

【氏名又は名称】大森 規雄

(74)【代理人】

【識別番号】100156476

【弁理士】

【氏名又は名称】潮 太朗

(74)【代理人】

【識別番号】100104282

【弁理士】

【氏名又は名称】鈴木 康仁

(72)【発明者】

【氏名】ウィクストレム・ホーカン

(72)【発明者】

【氏名】イェルゲンセン・モルテン

(72)【発明者】

【氏名】メールク・ニエルス

(72)【発明者】

【氏名】ラーセン・ジェニファー

(72)【発明者】

【氏名】トルプ・ラース

(72)【発明者】

【氏名】バング−アンダーセン・ベンニュ

【審査官】 上條 のぶよ

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００４−５００４２６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 Bioorg. Med. Chem.，２００８年，Vol.16，p.3438-3444

【文献】 Neuropharmacology，１９８２年，Vol.21，p.953-961

【文献】 脳の科学，２００４年，Vol.26, 増刊号，p.317-319

【文献】 Brain Medical，２００２年，Vol.14, No.2，p.139-144

【文献】 Progress in Medicine，２００８年，Vol.28, No.10，p.2357-2362

【文献】 Pharma Medica，２００６年，Vol.24, No.12，p.106-110

【文献】 日本薬理学雑誌，２００７年，Vol.130, No.4，p.313-319

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３１／００−３３／４４

Ｃ０７Ｄ ４９１／０５６

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

低いジスキネジア誘導プロファイルを維持しながらパーキンソン病を治療するための（６ａＲ，１０ａＲ）−７−ｎ−プロピル−６，６ａ，７，８，９，１０，１０ａ，１１−オクタヒドロ−１，３−ジオキサ−７−アザシクロペンタ［ａ］アントラセンまたは薬学上許容可能なその塩を含む医薬組成物。

【請求項2】

パーキンソン病に関連するジスキネジアから回復させるための（６ａＲ，１０ａＲ）−７−ｎ−プロピル−６，６ａ，７，８，９，１０，１０ａ，１１−オクタヒドロ−１，３−ジオキサ−７−アザシクロペンタ［ａ］アントラセンまたは薬学上許容可能なその塩を含む医薬組成物。

【請求項3】

前記ジスキネジアが特発性パーキンソン病または脳炎後パーキンソン症候群に関連するものである、請求項１または２に記載の医薬組成物。

【請求項4】

前記ジスキネジアがパーキンソン病におけるオフ期ジストニー（ｏｆｆ−ｄｙｓｔｏｎｉａ）に関連するものである、請求項３に記載の医薬組成物。

【請求項5】

前記ジスキネジアが、パーキンソン病を治療するための治療剤の副作用として生じる、請求項４に記載の医薬組成物。

【請求項6】

前記ジスキネジアがドパミン補充療法に関連するものである、請求項５に記載の医薬組成物。

【請求項7】

前記ドパミン補充療法の薬剤が、ロチゴチン、ロピニロール、プラミペキソール、カベルゴリン、ブロモクリプチン、リスリド、ペルゴリド、Ｌドパおよびアポモルヒネから成る群から選択される、請求項６に記載の医薬組成物。

【請求項8】

前記ジスキネジアがＬドパの反復投与の結果として生じる、請求項７に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明の態様は、低いジスキネジア（ｄｙｓｋｉｎｅｓｉａ）誘導プロファイルを維持しながらパーキンソン病を治療する方法、および、治療上有効量の本明細書中で開示する化合物を投与することを含むジスキネジアから回復させる方法に関する。さらに、本発明は、同疾患、または、ハンチントン舞踏病など他の運動障害の治療における医薬の製造における前記化合物の使用および医薬組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

パーキンソン病（ＰＤ）の対症治療におけるドパミン補充剤（ｄｏｐａｍｉｎｅ−ｒｅｐｌａｃｉｎｇ ａｇｅｎｔ）の使用は、疑いの余地なく、患者のクオリティー・オブ・ライフの向上に成功を収めてきている。長年にわたり使用されており依然としてＰＤ治療のゴールド・スタンダードであるＬドパは、運動の緩慢さ（運動緩徐）、硬直および／または振戦を特徴とするＰＤの運動症状を緩和する。Ｌドパは、生体内代謝されて（ｂｉｏ−ｍｅｔａｂｏｌｉｚｅｄ）ドパミン（ＤＡ）となるプロドラッグとして作用することは理解される。次いでＤＡは脳内のドパミン受容体を活性化するが、これらの受容体は２つのクラス、すなわちＤ１受容体およびＤ２受容体に分けられる。Ｄ１受容体は、Ｄ_１受容体およびＤ_５受容体に分けることができ、Ｄ２受容体は、Ｄ_２受容体、Ｄ_３受容体およびＤ_４受容体に分けることができる。しかし、ドパミン補充療法（ｄｏｐａｍｉｎｅ−ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｔｈｅｒａｐｙ）は、特に長期の治療後には制限を有する。Ｌドパの投与に対する継続期間の応答は、年を経るにつれ進行性に短くなり、患者が薬物に応答する期間は、さまざまな副作用の出現により複雑になる。

【0003】

この副作用はジスキネジアとして現れることがあり、患者がドパミン補充療法（ｄｏｐａｍｉｎｅ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｔｈｅｒａｐｙ）を受けている場合、または患者が療法を受けていない場合でも、そのいずれにおいても見られることがある。ジスキネジアは、異常な不随意運動障害である。この異常な運動は、舞踏病（顔、腕、脚または胴体に影響を及ぼす不随意、急速、不規則、痙攣性の運動）、バリスム（舞踏病に似ているが、より激しく強力な性質を有する不随意運動）、ジストニー（持続的な筋収縮で、通常、ねじるような反復性の運動または異常な姿勢もしくは体位が生じる）および／またはアテトーシス（反復性で不随意の、ゆっくりとした、くねるような、のたうつような運動であり、手において特に激しい）として現れることがある。

【0004】

ＰＤに苦しむ患者は、ジスキネジアを伴う「オン」期間と、患者が重度にパーキンソン病症状を呈する「オフ」期間とを繰り返すことがある。疾患の経過を通じＬドパが依然として有効な抗パーキンソン病剤であるという事実にも関わらず、結果としてＰＤ患者は、深刻な身体的障害を経験することがある（Obesoら、Neurology、2000、55、S13〜23頁（非特許文献１））。ブロモクリプチン、リスリド、プラミペキソール、ロピニロールおよびペルゴリドなどのドパミン作動薬は、とりわけ中〜重度のＰＤにおいてはＬドパより有効性が低い。しかし、その副作用プロファイルは、Ｌドパのものとは異なる。ＤＡ作動薬が実際にＬドパよりジスキネジアを引き起こしにくいことは注目に値するが、これはジスキネジアを有するＰＤ患者に限られた価値であり、その理由は、ＰＤ患者の多くは中〜重度のＰＤを有することからＬドパの有効性を必要とするからである。

【0005】

基底核の機能不全に由来するジスキネジアおよび他の運動障害は、大きな社会経済的重要性を有する。ジスキネジアを防止および／または治療する薬剤を開発するために多くの試みがなされてきたが、そのような試みは、限られた成功しか収めていない。したがって、ジスキネジアを治療する新規の薬剤を提供する必要がある。

【0006】

ラットにおけるパーキンソン症候群の６−ヒドロキシドパミン（６−ＯＨＤＡ）病変モデルは、前臨床レベルでのＰＤの調査において、また、新規の治療選択肢の評価用に、貴重な手段となっている（Schwarting and Huston、Prog. Neurobiol.、1996、50、275〜331頁（非特許文献２））。最も広く使用される６−ＯＨＤＡパラダイムの１つは、ドパミン作動性の黒質線条体経路の不連続性の変性を有するラットにおける回転行動の評価である（Ungerstedt and Arbuthnott、Brain Res.、1970、24、485頁（非特許文献３））。このモデルにおいては、６−ＯＨＤＡは、黒質線条体経路、線条体または内側前脳束（ＭＦＢ）中に片側性に注入され、ドパミン作動性の黒質線条体系間に機能的な不均衡をもたらす。ドパミンに代謝される前駆体Ｌドパおよびドパミン作動薬アポモルヒネなどドパミン受容体を直接刺激する薬物を投与すると、６−ＯＨＤＡが注入されている側の半身から離れた側で回転行動が生じる。

【0007】

運動関連の欠損に加え、６−ＯＨＤＡモデルは、ＰＤの他の特徴を再現するためにも使用できる。線条体中またはＭＦＢ中のいずれかに６−ＯＨＤＡを注射し、Ｌドパで長期的に処置したラットにおいて、感作性の回転行動ならびに異常な不随意運動（ＡＩＭ）が両方とも生じることが観察されていることから、さらにＬドパ誘導性ジスキネジアの試験用の動物モデルともなっている（Lundbladら、Eur. J Neurosci.、2002、15、120〜132頁（非特許文献４）））。長期的な処置の間、このモデルにおいては、ＬドパはＡＩＭの漸次的な発症を誘導するが、ブロモクリプチンはこれを誘導しない。こうした観察に基づき、６−ＯＨＤＡで病変を生じさせたラットは、パーキンソン病のジスキネジアと本質的な機能的類似性を共有する運動欠損（ｍｏｔｏｒ ｄｅｆｉｃｉｔ）を呈し、ジスキネジア用の治療を提供するための治療の可能性の評価に使用できると受け取られている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0008】

【特許文献1】欧州特許第１２７４４１１号

【非特許文献】

【0009】

【非特許文献1】Obesoら、Neurology、2000、55、S13〜23頁

【非特許文献2】Schwarting and Huston、Prog. Neurobiol.、1996、50、275〜331頁

【非特許文献3】Ungerstedt and Arbuthnott、Brain Res.、1970、24、485頁

【非特許文献4】Lundbladら、Eur. J Neurosci.、2002、15、120〜132頁

【非特許文献5】Stocchi and Olanow、Neurology、2004、2004、62、S56〜S63頁

【非特許文献6】Hilaryら、Journal of Neurology、2004、251、11、1370〜1374頁

【非特許文献7】Journal of Pharmaceutical Science、1977、66、2〜19頁

【非特許文献8】「SMART and SAINT, Area Detector Control and Integration Software」、Version 5.054、Bruker Analytical X-Ray Instruments Inc.、Madison、USA (1998)

【非特許文献9】Sheldrick、「SADABS, Program for Empirical Correction of Area Detector Data」、Version 2.03、University of Goettingen、ドイツ(2001)

【非特許文献10】Sheldrick、「SHELXTL, Structure Determination Programs」、Version 6.12、Bruker Analytical X-Ray Instruments Inc.、Madison、USA、(2001)

【非特許文献11】Taberら、J. Am. Chem. Soc.、124(42)、12416頁、(2002)

【非特許文献12】Setlerら、Eur. J. Pharmacol.、1978、50(4)、419頁

【非特許文献13】Ungerstedtら、「Advances in Dopamine Research」、(Kohsaka編)、Pergamon Press、1982、Oxford、219頁

【非特許文献14】Arnt and Hyttel、Psychopharmacology、1985、85(3)、346頁

【非特許文献15】Sonsallaら、J. Pharmacol Exp. Ther.、1988、247(1)、180頁

【非特許文献16】Lundbladら、Eur. J Neurosci.、15、120頁、(2002)

【非特許文献17】Smithら、Mov. Disord.、2002、17(5)、887頁

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0010】

ジスキネジアおよび他の関連運動障害を治療するための新しい治療薬を同定する試みにおいて、出願人らは、驚くべきことに、強力なＤ１／Ｄ２作動薬としての（４ａＲ，１０ａＲ）−１−ｎ−プロピル−１，２，３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−オクタヒドロベンゾ［ｇ］キノリン−６，７−ジオール［本明細書中では化合物１０と呼ぶ］、（６ａＲ，１０ａＲ）−７−ｎ−プロピル−６，６ａ，７，８，９，１０，１０ａ，１１−オクタヒドロ−１，３−ジオキサ−７−アザシクロペンタ［ａ］アントラセン［本明細書中では化合物１１と呼ぶ］および（４ａＲ，１０ａＲ）−１−ｎ−プロピル−２，３，４，４ａ，５，７，８，９，１０，１０ａ−デカヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｇ］キノリン−６−オン［本明細書中では化合物１２と呼ぶ］が、片側性の６−ＯＨＤＡ病変を有するラットにおいて好ましいプロファイルを有することを見出した。これらの化合物は、Ｌドパおよびアポモルヒネより少ないジスキネジアを誘導し、プラミペキソールにより例証されるように、Ｄ２作動薬より有効にＬドパ誘導性ジスキネジアを減少させる。したがって、化合物１０、１１および１２は、ジスキネジアの誘導という点だけでなく、ジスキネジアの回復用の薬物として、その両方の点でもＬドパ様の有効性と好ましいプロファイルとを有する第１のＰＤ薬となる可能性がある。

【課題を解決するための手段】

【0011】

したがって、同定された前述の化合物は、ジスキネジア、および、ハンチントン舞踏病など他の関連運動障害を治療するために使用できると期待される。さらに、本発明は、対応するラセミ・トランス混合物の使用を企図する。本発明は、さらに、治療上有効量の前記化合物を投与することを含む、低いジスキネジア誘導プロファイルでパーキンソン病を治療する方法を提供する。一態様では、このパーキンソン病の治療は、Ｌドパ治療と同様に有効である。さらに提供されるのは、前記化合物およびその医薬組成物を投与することを含む、ジスキネジアから回復させる方法またはパーキンソン病を治療する方法である。

【0012】

本発明の一態様は、低いジスキネジア誘導プロファイルを維持しながらパーキンソン病を治療するための医薬の製造における（４ａＲ，１０ａＲ）−１−ｎ−プロピル−１，２，３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−オクタヒドロベンゾ［ｇ］キノリン−６，７−ジオールまたは薬学上許容可能なその塩の使用に関する。

【0013】

別の態様は、低いジスキネジア誘導プロファイルを維持しながらパーキンソン病を治療するための医薬の製造におけるラセミ・トランス−１−ｎ−プロピル−１，２，３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−オクタヒドロベンゾ［ｇ］キノリン−６，７−ジオールの使用に関する。

【0014】

本発明の独立の一態様は、パーキンソン病を治療する医薬の製造における（４ａＲ，１０ａＲ）−１−ｎ−プロピル−１，２，３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−オクタヒドロベンゾ［ｇ］キノリン−６，７−ジオールまたは薬学上許容可能なその塩の使用に関する。

【0015】

別の態様は、パーキンソン病を治療するための医薬の製造におけるラセミ・トランス−１−ｎ−プロピル−１，２，３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−オクタヒドロベンゾ［ｇ］キノリン−６，７−ジオールの使用に関する。

【0016】

本発明の独立の一態様は、ジスキネジアから回復させるための医薬の製造における（４ａＲ，１０ａＲ）−１−ｎ−プロピル−１，２，３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−オクタヒドロベンゾ［ｇ］キノリン−６，７−ジオールまたは薬学上許容可能なその塩の使用に関する。

【0017】

別の態様は、ジスキネジアから回復させるための医薬の製造におけるラセミ・トランス−１−ｎ−プロピル−１，２，３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−オクタヒドロベンゾ［ｇ］キノリン−６，７−ジオールの使用に関する。

【0018】

別の態様は、低いジスキネジア誘導プロファイルを維持しながらパーキンソン病を治療するための、（４ａＲ，１０ａＲ）−１−ｎ−プロピル−１，２，３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−オクタヒドロベンゾ［ｇ］キノリン−６，７−ジオールまたは薬学上許容可能なその塩を含む医薬組成物に向けたものである。

【0019】

本発明の独立の態様は、低いジスキネジア誘導プロファイルを維持しながらパーキンソン病を治療するための医薬の製造における、ラセミ・トランス−１−ｎ−プロピル−１，２，３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−オクタヒドロベンゾ［ｇ］キノリン−６，７−ジオールを含む医薬組成物に関する。

【0020】

別の態様は、治療上有効量の（４ａＲ，１０ａＲ）−１−ｎ−プロピル−１，２，３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−オクタヒドロベンゾ［ｇ］キノリン−６，７−ジオールまたは薬学上許容可能なその塩を投与することを含む、低いジスキネジア誘導プロファイルを維持しながらパーキンソン病を治療する方法に向けたものである。

【0021】

独立の一態様は、治療上有効量のラセミ・トランス−１−ｎ−プロピル−１，２，３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−オクタヒドロベンゾ［ｇ］キノリン−６，７−ジオールを投与することを含む、低いジスキネジア誘導プロファイルを維持しながらパーキンソン病を治療する方法に関する。

【0022】

別の態様は、治療上有効量の（４ａＲ，１０ａＲ）−１−ｎ−プロピル−１，２，３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−オクタヒドロベンゾ［ｇ］キノリン−６，７−ジオールまたは薬学上許容可能なその塩を投与することを含むジスキネジアから回復させる方法に向けたものである。

【0023】

また別の態様は、治療上有効量のラセミ・トランス−１−ｎ−プロピル−１，２，３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−オクタヒドロベンゾ［ｇ］キノリン−６，７−ジオールまたは薬学上許容可能なその塩を投与することを含むジスキネジアから回復させる方法に向けたものである。

【0024】

本発明の一態様は、低いジスキネジア誘導プロファイルを維持しながらパーキンソン病を治療するための医薬の調製における（６ａＲ，１０ａＲ）−７−ｎ−プロピル−６，６ａ，７，８，９，１０，１０ａ，１１−オクタヒドロ−１，３−ジオキサ−７−アザシクロペンタ［ａ］アントラセンまたは薬学上許容可能なその塩の使用に関する。

【0025】

本発明の独立の一態様は、ジスキネジアから回復させるための医薬の調製における（６ａＲ，１０ａＲ）−７−ｎ−プロピル−６，６ａ，７，８，９，１０，１０ａ，１１−オクタヒドロ−１，３−ジオキサ−７−アザシクロペンタ［ａ］アントラセンまたは薬学上許容可能なその塩の使用に関する。

【0026】

別の態様は、低いジスキネジア誘導プロファイルを維持しながらパーキンソン病を治療するための、（６ａＲ，１０ａＲ）−７−ｎ−プロピル−６，６ａ，７，８，９，１０，１０ａ，１１−オクタヒドロ−１，３−ジオキサ−７−アザシクロペンタ［ａ］アントラセンまたは薬学上許容可能なその塩を含む医薬組成物に向けたものである。

【0027】

本発明の独立の態様は、低いジスキネジア誘導プロファイルを維持しながらパーキンソン病を治療するための医薬の調製における、（６ａＲ，１０ａＲ）−７−ｎ−プロピル−６，６ａ，７，８，９，１０，１０ａ，１１−オクタヒドロ−１，３−ジオキサ−７−アザシクロペンタ［ａ］アントラセンまたは薬学上許容可能なその塩を含む医薬組成物に関する。

【0028】

別の態様は、治療上有効量の（６ａＲ，１０ａＲ）−７−ｎ−プロピル−６，６ａ，７，８，９，１０，１０ａ，１１−オクタヒドロ−１，３−ジオキサ−７−アザシクロペンタ［ａ］アントラセンまたは薬学上許容可能なその塩を投与することを含む、低いジスキネジア誘導プロファイルを維持しながらパーキンソン病を治療する方法に向けたものである。

【0029】

別の態様は、治療上有効量の（６ａＲ，１０ａＲ）−７−ｎ−プロピル−６，６ａ，７，８，９，１０，１０ａ，１１−オクタヒドロ−１，３−ジオキサ−７−アザシクロペンタ［ａ］アントラセンまたは薬学上許容可能なその塩を投与することを含むジスキネジアから回復させる方法に向けたものである。

【0030】

本発明の一態様は、低いジスキネジア誘導プロファイルを維持しながらパーキンソン病を治療するための医薬の調製における（４ａＲ，１０ａＲ）−１−ｎ−プロピル−２，３，４，４ａ，５，７，８，９，１０，１０ａ−デカヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｇ］キノリン−６−オンまたは薬学上許容可能なその塩の使用に関する。

【0031】

本発明の独立の一態様は、パーキンソン病を治療するための医薬の調製における（４ａＲ，１０ａＲ）−１−ｎ−プロピル−２，３，４，４ａ，５，７，８，９，１０，１０ａ−デカヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｇ］キノリン−６−オンまたは薬学上許容可能なその塩の使用に関する。

【0032】

また別の態様は、ジスキネジアから回復させるための医薬の調製における（４ａＲ，１０ａＲ）−１−ｎ−プロピル−２，３，４，４ａ，５，７，８，９，１０，１０ａ−デカヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｇ］キノリン−６−オンまたは薬学上許容可能なその塩の使用に関する。

【0033】

別の態様は、低いジスキネジア誘導プロファイルを維持しながらパーキンソン病を治療するための、（４ａＲ，１０ａＲ）−１−ｎ−プロピル−２，３，４，４ａ，５，７，８，９，１０，１０ａ−デカヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｇ］キノリン−６−オンまたは薬学上許容可能なその塩を含む医薬組成物に向けたものである。

【0034】

本発明の独立の態様は、低いジスキネジア誘導プロファイルを維持しながらパーキンソン病を治療するための医薬の調製における、（４ａＲ，１０ａＲ）−１−ｎ−プロピル−２，３，４，４ａ，５，７，８，９，１０，１０ａ−デカヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｇ］キノリン−６−オンまたは薬学上許容可能なその塩を含む医薬組成物に関する。

【0035】

別の態様は、治療上有効量の（４ａＲ，１０ａＲ）−１−ｎ−プロピル−２，３，４，４ａ，５，７，８，９，１０，１０ａ−デカヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｇ］キノリン−６−オンまたは薬学上許容可能なその塩を投与することを含む、低いジスキネジア誘導プロファイルを維持しながらパーキンソン病を治療する方法に向けたものである。

【0036】

別の態様は、治療上有効量の（４ａＲ，１０ａＲ）−１−ｎ−プロピル−２，３，４，４ａ，５，７，８，９，１０，１０ａ−デカヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｇ］キノリン−６−オンまたは薬学上許容可能なその塩を投与することを含むジスキネジアから回復させる方法に向けたものである。

【図面の簡単な説明】

【0037】

【図1】化合物ｅｎｔ−１０の結晶構造を示す図である。「重い」臭素原子の異常散乱により絶対配置を決定した。

【図2】ｈＤ_５をトランスフェクトしたＣＨＯ−Ｇａ１６細胞中での、ドパミンによる細胞内Ｃａ^２＋放出の濃度依存刺激についての用量応答曲線を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0038】

本発明の化合物は、２つのキラル中心（以下の式において^＊で示す）を有する。

【0039】

【化1】

【0040】

本発明の化合物は、２つの異なるジアステレオマー体、すなわちシス異性体およびトランス異性体の形で存在でき、その両方とも、２つのエナンチオマー体の形で存在できる。本発明は、トランス・ラセミ体および（４ａＲ，１０ａＲ）エナンチオマーのみに関する。

【0041】

【化2】

【0042】

前述のように、本発明は、（４ａＲ，１０ａＲ）−１−ｎ−プロピル−１，２，３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−オクタヒドロベンゾ［ｇ］キノリン−６，７−ジオール（本明細書中では「化合物１０」と呼ぶ）が、６−ＯＨＤＡで病変を生じさせたラットにおいてＬドパ／ベンセラジドおよびアポモルヒネにより誘導されたジスキネジアから回復させたという発見に基づく。対応するトランス・ラセミ体も本発明の範囲内にある。

【0043】

加えて、本発明の化合物は、２つのキラル中心（以下の式において^＊で示す）を有する。

【0044】

【化3】

【0045】

本発明の化合物は、２つの異なるジアステレオマー体、すなわちシス異性体およびトランス異性体の形で存在でき、その両方とも、２つのエナンチオマー体の形で存在できる。本発明は、トランス・ラセミ体および（６ａＲ，１０ａＲ）エナンチオマーのみに関する。

【0046】

【化4】

【0047】

前述のように、本発明は、（６ａＲ，１０ａＲ）−７−ｎ−プロピル−６，６ａ，７，８，９，１０，１０ａ，１１−オクタヒドロ−１，３−ジオキサ−７−アザシクロペンタ［ａ］アントラセン（本明細書中では「化合物１１」と呼ぶ）が、６−ＯＨＤＡで病変を生じさせたラットにおいてＬドパ／ベンセラジドおよびアポモルヒネにより誘導されたジスキネジアから回復させたという発見に基づく。

【0048】

さらに、本発明は、（４ａＲ，１０ａＲ）−１−ｎ−プロピル−２，３，４，４ａ，５，７，８，９，１０，１０ａ−デカヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｇ］キノリン−６−オン（本明細書中では化合物１２と呼ぶ）が、片側性の６−ＯＨＤＡ病変を有するラットにおいて好ましいプロファイルを有するという発見に基づく。この化合物は、Ｌドパおよびアポモルヒネより少ないジスキネジアを誘導し、プラミペキソールにより例証されるように、Ｄ２作動薬より有効にＬドパ誘導性ジスキネジアを減少させる。

【0049】

本発明を以下により詳細に説明するが、この説明は、本発明が実行される可能性のある全ての異なる方式または本発明に加えてもよい全ての特徴の詳細な目録であることを意図したものではない。

【0050】

定義
本明細書中で使用する場合、「ジスキネジア（ｄｙｓｋｉｎｅｓｉａ）」は、基底核として公知の脳領域の障害を伴う異常な不随意運動を特徴とする状態を指す。ジスキネジアは、パーキンソン病（最も一般的な基底核疾患）の治療の合併症である「Ｌドパ誘導性ジスキネジア」である場合がある。ジスキネジアは、２つの形態、すなわち、舞踏病およびジストニーの形態で身体的に現れる可能性がある。舞踏病は、体の一部から別の部分へ伝わる、不随意、連続的、無目的、突然、急速、短時間、非持続性および不規則な運動から成る。ジストニーは、ねじるような反復性の運動または異常な姿勢の原因となる持続的な筋収縮を指す。

【0051】

「治療する（こと）」または「治療」は、疾患または障害を、物理的（例えば、認識できる症状の安定化）、生理学的（例えば、物理的パラメーターの安定化）のいずれかまたは両方で阻害すること、および、患者に認識できない可能性がある少なくとも１つの物理的パラメーターを阻害することを指す。さらに、「治療する（こと）」または「治療」は、ある疾患もしくは障害が顕在化するまたはその素因がある可能性のある患者において、当該患者が該疾患もしくは障害の症状を未だ経験しないもしくは示さない場合であっても、該疾患もしくは障害の発症または少なくともその症状を遅らせることを指す。

【0052】

「治療上有効量」は、疾患または障害を治療するために患者に投与した際、該疾患または障害の当該治療に影響するのに十分な化合物の量を指す。「治療上有効量」は、化合物、疾患または障害およびその重症性、ならびに、治療されることになる患者の年齢および体重により変動すると考えられる。

【0053】

本明細書中で使用する場合、語句「低いジスキネジアプロファイルを維持しながら」は、連続的なドパミン作動性の刺激により治療を受けている患者において見られるようなジスキネジアプロファイルを指す。連続的なドパミン作動性の刺激を含む治療は、Stocchi and Olanow、Neurology、2004、2004、62、S56〜S63頁（非特許文献５）およびHilaryら、Journal of Neurology、2004、251、11、1370〜1374頁（非特許文献６）に記載されている。

【0054】

本明細書中で使用する場合、強力なＤ１／Ｄ２作動薬としての（４ａＲ，１０ａＲ）−１−ｎ−プロピル−１，２，３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−オクタヒドロベンゾ［ｇ］キノリン−６，７−ジオールは、化合物１０と呼ばれる。

【0055】

本明細書中で使用する場合、（６ａＲ，１０ａＲ）−７−ｎ−プロピル−６，６ａ，７，８，９，１０，１０ａ，１１−オクタヒドロ−１，３−ジオキサ−７−アザシクロペンタ［ａ］アントラセンは、化合物１１と呼ばれる。

【0056】

本明細書中で使用する場合、（４ａＲ，１０ａＲ）−１−ｎ−プロピル−２，３，４，４ａ，５，７，８，９，１０，１０ａ−デカヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｇ］キノリン−６−オンは本明細書中では化合物１２と呼ばれる。

【0057】

化合物１０、１１または１２は、単独療法（すなわち化合物単独の使用）として、組成物が原因のジスキネジー性副作用を防止するための該組成物の補助剤として（例えば、パーキンソン症候群の患者を治療するために投与されるＬドパもしくはアポモルヒネの補助剤として）ジスキネジアを治療するために使用してもよく、または、代替的に、同化合物は、同様にジスキネジアを低下させる他の治療（例えば、オピオイド受容体拮抗薬、（α２−アドレナリン作動性受容体拮抗薬、カンナビノイドＣＢＩ拮抗薬、ＮＭＤＡ受容体拮抗薬、コリン作動性受容体拮抗薬、ヒスタミンＨ３受容体作動薬および淡蒼球／視床下核病変／深部脳刺激）と組み合わせて投与してもよい。

【0058】

本発明は、さらに、治療上有効量の化合物１０、１１もしくは１２または薬学的なその塩を投与することを含む、Ｌドパまたはドパミン作動薬により誘導されるジスキネジアを減少させながらのパーキンソン病の治療における併用的、独立的または逐次的な使用に関する。

【0059】

一実施形態では、ジスキネジアは基底核関連の運動障害に関連するものである。

【0060】

別の実施形態では、ジスキネジアはパーキンソン病に関連するものである。

【0061】

一実施形態は、特発性パーキンソン病または脳炎後パーキンソン症候群に関連するジスキネジアに関する。

【0062】

一実施形態では、ジスキネジアは、パーキンソン病におけるオフ期ジストニー（ｏｆｆ−ｄｙｓｔｏｎｉａ）に伴うものである。

【0063】

独立の一実施形態では、ジスキネジアは、パーキンソン病を治療するための治療剤の副作用として生じる。

【0064】

また別の実施形態では、ジスキネジアはドパミン補充療法に関連するものである。一実施形態では、ドパミン補充療法用の薬剤は、ロチゴチン、ロピニロール、プラミペキソール、カベルゴリン、ブロモクリプチン、リスリド、ペルゴリド、Ｌドパおよびアポモルヒネから成る群から選択される。

【0065】

一実施形態では、ジスキネジアはＬドパの反復投与の結果として生じる。

【0066】

前述のように、本発明は、低いジスキネジア誘導プロファイルを維持しながらパーキンソン病を治療するための医薬の調製における化合物１０、１１もしくは１２または薬学上許容可能なその塩を含む医薬組成物、および、低いジスキネジア誘導プロファイルを維持しながらパーキンソン病を治療するための医薬の調製におけるラセミ・トランス−１−ｎ−プロピル−１，２，３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−オクタヒドロベンゾ［ｇ］キノリン−６，７−ジオールを含む医薬組成物を提供する。

【0067】

一実施形態では、該医薬組成物はＭＡＯ−Ｂ阻害薬をさらに含む。

【0068】

一実施形態では、該ＭＡＯ−Ｂ阻害薬はセレギンである。独立の一実施形態では、該ＭＡＯ−Ｂ阻害薬はラサギリンである。

【0069】

別の実施形態では、本発明は、治療上有効量の化合物１０、１１もしくは１２または薬学的に許容可能なその酸付加塩と、１つまたは複数の薬学的に許容可能な担体、希釈剤および賦形剤とを含む医薬組成物に関する。

【0070】

本発明の特定の一実施形態では、哺乳動物はヒト対象である。

【0071】

化合物１０、１１または１２の治療上有効量は、遊離塩基としての前述の化合物１０、１１または１２の１日用量として計算した場合、適切には０．０１〜１２５ｍｇ／日の間、より適切には０．０５〜１００ｍｇ／日の間、例えば、好ましくは０．１〜５０ｍｇ／日の間である。

【0072】

特定の一実施形態では、化合物１０、１１または１２の１日用量は１．０〜１０ｍｇ／日の間である。

【0073】

別の実施形態では、化合物１０、１１または１２の１日用量は約１．０ｍｇ／日未満である。

【0074】

独立の一実施形態では、化合物１０、１１または１２の１日用量は約０．１０ｍｇ／日である。

【0075】

さらなる一実施形態では、本発明は、０．００１ｍｇ〜１２５ｍｇの化合物１０、１１または１２を含む経口製剤を提供する。

【0076】

さらなる一実施形態では、本発明は、０．００１ｍｇ〜０．１００ｍｇの化合物１０、１１または１２を含む経口製剤を提供する。

【0077】

さらなる一実施形態では、本発明は、０．０１ｍｇ〜１．０ｍｇの化合物１０、１１または１２を含む経口製剤を提供する。

【0078】

さらなる一実施形態では、本発明は、０．１０ｍｇ〜１０ｍｇの化合物１０、１１または１２を含む経口製剤を提供する。

【0079】

薬学上許容可能な塩
化合物１０、１１または１２は、多種多様な有機酸および無機酸と共に薬学上許容可能な酸付加塩を形成する。そのような塩も本発明の一部である。化合物１０、１１または１２の薬学上許容可能な酸付加塩は、当技術分野で周知のように、薬学上許容可能な酸から形成される。そのような塩としては、Journal of Pharmaceutical Science、1977、66、2〜19頁（非特許文献７）に掲載されている薬学上許容可能な塩が挙げられ、当業者に公知である。そのような塩の形成に使用される典型的な無機酸としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸、次リン酸、メタリン酸、ピロリン酸などが挙げられる。脂肪族のモノカルボン酸およびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸およびヒドロキシアルカンジオン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族のスルホン酸などの有機酸から誘導される塩も使用できる。したがって、そのような薬学上許容可能な塩としては、以下が挙げられる：塩化物塩、臭化物塩、ヨウ化物塩、硝酸塩、酢酸塩、フェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アクリル酸塩、アスコルビン酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ｏ−アセトキシ安息香酸塩、イソ酪酸塩、フェニル酪酸塩、α−ヒドロキシ酪酸塩、ブチン−１，４−ジカルボン酸塩、ヘキシン−１，４−ジカルボン酸塩、カプリン酸塩、カプリル酸塩、ケイ皮酸塩、クエン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グリコール酸塩、ヘプタン酸塩、馬尿酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、ニコチン酸塩、イソニコチン酸塩、シュウ酸塩、フタル酸塩、テラフタル酸塩（ｔｅｒａｐｈｔｈａｌａｔｅ）、プロピオール酸塩、プロピオン酸塩、フェニルプロピオン酸塩、サリチル酸塩、セバシン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−ブロモベンゼンスルホン酸塩、クロロベンゼンスルホン酸塩、エチルスルホン酸塩、２−ヒドロキシエチルスルホン酸塩、メチルスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、ナフタレン−１，５−スルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、酒石酸塩など。

【0080】

医薬組成物
固体の医薬組成物の調製の方法も、当技術分野で周知である。したがって、錠剤は、活性成分を通常の佐剤、増量剤および希釈剤と混合し、次いで、簡便な打錠機でこの混合物を圧縮することにより調製できる。佐剤、増量剤および希釈剤の例は、微晶性セルロース、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、乳糖、マンニトール、ソルビトール タルカム、ステアリン酸マグネシウム、ゼラチン、乳糖、ゴムなどを含む。活性成分と適合することを条件に、着色剤、アロマ、保存剤など任意の他の佐剤または添加物を使用してもよい。

【0081】

とりわけ、本発明による錠剤製剤は、慣用的な佐剤または希釈剤との混合物における化合物１０、１１または１２を直接圧縮することにより調製できる。あるいは、化合物１０、１１または１２の湿った粒状物または溶融した粒状物（場合により慣用的な佐剤または希釈剤との混合物における）を錠剤の圧縮用に使用してもよい。

【0082】

注射剤用の化合物１０、１１または１２の溶液は、活性成分と使用可能な添加物とを、注射剤用の溶媒、好ましくは滅菌水の一部に溶解し、溶液を所望の体積に調節し、溶液を滅菌し、適当なアンプルまたはバイアル中に充填することにより調製してもよい。等張化剤、保存剤、酸化防止剤、可溶化剤など、当技術分野において慣用的に使用される任意の適当な添加物を加えてもよい。

【実施例】

【0083】

実験の部
大気圧光イオン化を装備したＰＥ Ｓｃｉｅｘ ＡＰＩ １５０ＥＸ装置および島津ＬＣ−８Ａ／ＳＬＣ−１０Ａ ＬＣシステムでＬＣ／ＭＳ分析データを入手した。ＵＶ（２５４ｎｍ）およびＥＬＳＤトレースを積分することにより、純度を決定した。ＭＳ装置は、ＡＰＰＩイオン源を装備したＰｅｓｋｉｅｒ（ＡＰＩ）製のもので、正イオン・モードで運転した。ＵＶトレースの保持時間（ＲＴ）を、分単位で表す。溶媒Ａは、水中の０．０５％ＴＦＡから成るものであり、溶媒Ｂは、アセトニトリル中の０．０３５％ＴＦＡおよび５％水から成るものであった。いくつか異なる方法を用いた：
方法２５：ＡＰＩ １５０ＥＸおよび島津ＬＣ１０ＡＤ／ＳＬＣ−１０Ａ ＬＣシステム。カラム：ｄＣ−１８ ４．６×３０ｍｍ、３μｍ（Ａｔｌａｎｔｉｓ、Ｗａｔｅｒｓ）。カラム温度：４０℃。勾配：イオン対形成を用いた逆相。流速：３．３ｍＬ／分。注入体積：１５μＬ。勾配：Ａ中の２％Ｂから１００％Ｂに２．４分かけてから、Ａ中の２％Ｂを０．４分間。合計通液時間：２．８分。
方法１４：ＡＰＩ １５０ＥＸおよび島津ＬＣ８／ＳＬＣ−１０Ａ ＬＣシステム。カラム：Ｃ−１８ ４．６×３０ｍｍ、３．５μｍ（Ｓｙｍｍｅｔｒｙ、Ｗａｔｅｒｓ）。カラム温度：室温。勾配：イオン対形成を用いた逆相。流速：２ｍＬ／分。注入体積：１０μＬ。勾配：Ａ中の１０％Ｂから１００％Ｂに４分かけてから、Ａ中の１０％Ｂを１分間。合計通液時間：５分。

【0084】

Ｘ線結晶構造の決定を以下のように実施した。クライオストリーム窒素ガス冷却システムを用いて、化合物の結晶を１２０Ｋに冷却した。ＣＣＤ面積高感度検出器付きのＳｉｅｍｅｎｓ ＳＭＡＲＴプラットフォーム回折計でデータを収集した。直接法により構造を解析し、全てのデータのＦ^２に対する全行列最小二乗法により精密化した。構造中の水素原子は、電子密度差マップ中で見出すことができた。水素以外の原子を異方的に精密化した。全ての水素原子は、Ｏ−Ｈ＝０．８４Å、Ｃ−Ｈ＝０．９９〜１．００Å、Ｎ−Ｈ＝０．９２〜０．９３Åのライディング・モデル（ｒｉｄｉｎｇ ｍｏｄｅｌ）を用いた算出位置にあった。全ての水素原子について、熱パラメーターを固定した［Ｕ（Ｈ）＝結合している原子については１．２Ｕ］。Ｆｌａｃｋ ｘ−パラメーターは０．０（１）〜０．０５（１）の範囲であり、絶対構造が正しいことが示唆される。データ収集、データ整理および吸収に用いたプログラムは、ＳＭＡＲＴ、ＳＡＩＮＴおよびＳＡＤＡＢＳであった［「SMART and SAINT, Area Detector Control and Integration Software」、Version 5.054、Bruker Analytical X-Ray Instruments Inc.、Madison、USA (1998)（非特許文献８）、Sheldrick、「SADABS, Program for Empirical Correction of Area Detector Data」、Version 2.03、University of Goettingen、ドイツ(2001)（非特許文献９）を参照のこと］。構造解析および分子グラフィックスには、プログラムＳＨＥＬＸＴＬ［Sheldrick、「SHELXTL, Structure Determination Programs」、Version 6.12、Bruker Analytical X-Ray Instruments Inc.、Madison、USA、(2001)（非特許文献１０）を参照のこと］を使用した。

【0085】

本発明の化合物の合成（化合物１０および１１）
Taberら、J. Am. Chem. Soc.、124(42)、12416頁、(2002)（非特許文献１１）に記載されている要領で調製した、合成が文献中に記載されている化合物１から開始して、本明細書に記載する要領で８つのステップで化合物８を調製できる。この材料を、本明細書に記載のようにキラルＳＦＣにより分離すると、化合物９およびｅｎｔ−９を得ることができる。Ｂｏｃ−保護基の開裂後、還元的アミノ化を用いて、窒素原子上にｎ−プロピル基を導入することができる。その結果得られる遮蔽されたカテコールアミンを４８％ＨＢｒで処理することにより、またはＢＢｒ_３と反応させることにより、標準条件下で脱保護すると、化合物１０およびｅｎｔ−１０を得ることができる。塩基の存在下での１０とＣＨ_２ＣｌＢｒまたは関連試薬とのさらなる反応を適用して本発明の化合物（化合物１１）を得ることができる。

【0086】

【化5】

【0087】

化合物１０およびｅｎｔ−１０の合成。
７−ヨード−１，２，６−トリメトキシナフタレン（化合物２）。

【0088】

【化6】

【0089】

乾燥ＴＨＦ（２００ｍＬ）中の化合物１（２６．２ｇ、Taberら、J. Am. Chem. Soc.、124(42)、12416頁、(2002)（非特許文献１１）に記載されている要領で調製）の撹拌溶液に、アルゴン下、−７８℃でｓ−ブチルリチウム（１．２Ｍ、シクロヘキサン中、１１０ｍＬ）をゆっくり加えた。この溶液を−７８℃で３時間撹拌した。乾燥ＴＨＦ（５０ｍＬ）中のヨウ素溶液（３０．５ｇ）を１０分間にわたり加えた。次に、その結果得られた混合物を−７８℃でさらに１０分間撹拌した。飽和ＮＨ_４Ｃｌ（１００ｍＬ）、水（２４０ｍＬ）およびＥｔ_２Ｏ（２４０ｍＬ）を加えることにより反応混合物をクエンチした。有機層を１０％亜硫酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）させてから真空中で濃縮した。粗材料を蒸留により精製して、未反応の出発物質を除去した。残留物をシリカゲル・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）によりさらに精製すると不純な固形材料が生成し、これをＥｔＯＡｃ／ヘプタンからの沈殿により精製すると、１１．４６ｇの化合物２が得られた。

【0090】

（Ｅ／Ｚ）−３−（３，７，８−トリメトキシナフタレン−２−イル）−アクリロニトリル（化合物３）。

【0091】

【化7】

【0092】

マイクロ波反応器用バイアルに入った乾燥アセトニトリル（１０．７ｍＬ）中の化合物２（３．４１ｇ）の懸濁液に、アクリロニトリル（１．１９ｍＬ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２（７３ｍｇ）およびトリエチルアミン（１．４８ｍＬ）を加えた。バイアルを密封し、この混合物をマイクロ波照射下で１４５℃にて４０分間加熱した。この手順をさらに２回実施した（合計１０．２３ｇの化合物５を用いた）。未精製の反応混合物を合わせ、触媒を濾過により除去し、真空中で濾液を濃縮した。残留物をＥｔ_２Ｏ（３００ｍＬ）と２Ｍ ＨＣｌ（１５０ｍＬ）との間で分離した。有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）させてから真空中で濃縮した。粗材料（７．３４ｇ）をシリカゲル・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）により精製すると、オレフィン異性体の混合物としての５．２３ｇの化合物３が生成した。

【0093】

３−（３，７，８−トリメトキシナフタレン−２−イル）−プロピオニトリル（化合物４）。

【0094】

【化8】

【0095】

化合物３（５．２３ｇ）をＣＨＣｌ_３（１５ｍＬ）および９９％ＥｔＯＨ（１００ｍＬ）に溶解した。１０％Ｐｄ／Ｃ（０．８ｇ）を加え、Ｐａｒｒ振とう器を用いて水素圧３バール下で４５分間この溶液を水素化した。触媒を濾過により除去し、濾液は小プラウ（ｐｌｏｕｇｈ）のシリカゲル（溶出剤：９９％ＥｔＯＨ）を通過させた。収量：白色の固体物としての４．９１ｇの化合物４。

【0096】

［３−（３，７，８−トリメトキシ−１，４−ジヒドロナフタレン−２−イル）プロピル］カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（化合物５）。

【0097】

【化9】

【0098】

化合物４（５．０ｇ）を９９％ＥｔＯＨ（１５０ｍＬ）に溶解し、この混合物を窒素雰囲気下で加熱して還流させた。ナトリウム金属（５ｇ）を小さな塊の状態で３時間にわたり加えた。この混合物をさらに２時間還流させてから、室温で２日間撹拌した。次に、この混合物を再び加熱して還流させ、さらなるナトリウム金属（３．６８ｇ）を加え、この混合物を一晩還流させた。氷／水浴で冷却した後、固形の塩化アンモニウム（２０ｇ）および水（２５ｍＬ）を加えることにより反応をクエンチした。その結果得られた混合物を濾過し、真空中で濾液を濃縮した。残留物をジエチルエーテル（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）との間で分離した。水層を３７％ＨＣｌで中和させ、ジエチルエーテルで抽出した（２×５０ｍＬ）。有機抽出物を合わせたものをブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させてから真空中で濃縮すると、油が得られた。この材料をＴＨＦ（５０ｍＬ）に溶解し、室温にてＢｏｃ_２Ｏ（２．３４ｇ）およびＥt_３Ｎ（１．７８ｍＬ）で処理した。６日後、揮発性物質を真空中で除去し、残留物をシリカゲル・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）により精製した。これにより不純な化合物５（１．５２ｇ）が得られた。

【0099】

ラセミ６，７−ジメトキシ−２，３，４，４ａ，５，１０−ヘキサヒドロ−ベンゾ［ｇ］キノリンヒドロクロリド（化合物６）。

【0100】

【化10】

【0101】

化合物５（先のステップからの１．５２ｇ）をＭｅＯＨ（２０ｍＬ）に溶解した。３７％ＨＣｌ（３．５ｍＬ）を加え、この混合物を４時間還流させた。共沸的に水を除去するためにトルエンを用い、真空中で揮発性物質を除去した。これにより、不純な化合物６（０．８９ｇ）が黄色の油として得られた。

【0102】

ラセミ・トランス−６，７−ジメトキシ−３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］キノリン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル（化合物８）。

【0103】

【化11】

【0104】

化合物６（０．８９ｇ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解し、ＮａＣＮＢＨ_３（０．１９ｇ）を加えた。この反応物を室温で一晩撹拌した。粗混合物を氷／水浴で冷却してから、これをＥｔ_２Ｏ（１ｍＬ）中の２Ｍ ＨＣｌでクエンチした。この混合物をＥｔ_２Ｏ（５０ｍＬ）、水（５０ｍＬ）および２Ｍ ＮａＯＨ（１０ｍＬ）の間で分離した。水層をジエチルエーテルで抽出した（３×５０ｍＬ）。有機層を合わせたものを乾燥（ＭｇＳＯ_４）させてから真空中で濃縮すると、不純な遊離アミン（化合物７）が得られた。この材料をＴＨＦ（２５ｍＬ）に溶解し、Ｂｏｃ_２Ｏ（０．６８ｇ）およびＥｔ_３Ｎ（０．８６ｍＬ）で室温にて１時間処理した。粗混合物を真空中で濃縮し、残留物をシリカゲル・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）により精製すると、わずかに不純な１．１８ｇのラセミ化合物８が得られた。

【0105】

ラセミ・トランス−６，７−ジメトキシ−３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］キノリン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステルのエナンチオマーのＳＦＣ分離（化合物９およびｅｎｔ−９）。

【0106】

【化12】

【0107】

Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ ２１．２×２５０ｍｍカラムを装備したＢｅｒｇｅｒ ＳＦＣマルチグラムＩＩ装置でのキラルＳＦＣを用いて、化合物８（１９．７ｇ）をそのエナンチオマーに分離した。溶媒系：ＣＯ_２／ＥｔＯＨ（８５：１５）、方法：一定勾配、流速５０ｍＬ／分。ＵＶ２３０ｎｍ検出により画分収集を実施した。早く溶出してくるエナンチオマー（４ａＲ，１０ａＲエナンチオマー、化合物９）：９．０ｇの白色の固形物。遅く溶出してくるエナンチオマー（４ａＳ，１０ａＳエナンチオマー、化合物ｅｎｔ−９）：８．１ｇの白色の固形物。

【0108】

（４ａＳ，１０ａＳ）−６，７−ジメトキシ−１，２，３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−オクタヒドロベンゾ［ｇ］キノリンヒドロクロリド（化合物ｅｎｔ−９’）。

【0109】

【化13】

【0110】

化合物ｅｎｔ−９（０．５２ｇ）をＭｅＯＨ（１５ｍＬ）に溶解し、Ｅｔ_２Ｏ（７．５ｍＬ）中の５Ｍ ＨＣｌで室温にて２時間処理した。この混合物を真空中で濃縮し、固形物を真空中で乾燥させると、化合物ｅｎｔ−９’が白色の固形物として得られた。ＬＣ／ＭＳ（方法１４）：室温、１．３１分。

【0111】

（４ａＲ，１０ａＲ）−１−プロピル−１，２，３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−オクタヒドロベンゾ［ｇ］キノリン−６，７−ジオールヒドロブロミド（化合物１０）。

【0112】

【化14】

【0113】

化合物９（０．５ｇ）を９９％ＥｔＯＨ（５ｍＬ）に溶解し、Ｅｔ_２Ｏ（４ｍＬ）中の２Ｍ ＨＣｌで室温にて一晩処理した。粗混合物を真空中で濃縮し、残留物をＥｔＯＡｃと１０％水性ＮａＯＨ（５ｍＬ）との間で分離した。水層をＥｔＯＡｃで抽出し、有機層を合わせたものをブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、真空中で濃縮した。残留物を９９％ＥｔＯＨ（５ｍＬ）に溶解し、プロピオンアルデヒド（０．５２ｍＬ）、ＮａＣＮＢＨ_３（０．４５ｇ）およびＡｃＯＨ（３滴）で、室温にて一晩処理した。粗混合物を飽和水性ＮａＨＣＯ_３（１２．５ｍＬ）、水（１２．５ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（２×２５ｍＬ）の間で分配した。有機層を合わせたものをブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、真空中で濃縮した。残留物をシリカゲル・クロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）により精製した。得られた中間体を、マイクロ波条件下で、４８％ＨＢｒ（３ｍＬ）で１５０℃にて１時間処理してから、粗混合物を４℃で一晩保管した。沈殿した材料を濾過により単離し、真空中で乾燥させた。化合物１０の収量：固形物として１０３ｍｇ。ＬＣ／ＭＳ（方法２５）：室温０．７７分。

【0114】

（４ａＳ，１０ａＳ）−１−プロピル−１，２，３，４，４ａ，５，１０，１０ａ−オクタヒドロベンゾ［ｇ］キノリン−６，７−ジオールヒドロブロミド（化合物ｅｎｔ−１０）。

【0115】

【化15】

【0116】

化合物１０について記載した手順は、化合物ｅｎｔ−９’（０．５ｇ、還元的アミノ化ステップの前にＥｔＯＡｃと１０％水性ＮａＯＨとの間で分離することによりＨＣｌ塩を遊離させた）からの出発に従った。化合物ｅｎｔ−１０の収量：固形物として７０ｍｇ。ＬＣ／ＭＳ（方法２５）：室温０．７０分。化合物ｅｎｔ−１０の小量試料をＭｅＯＨに溶解し、ゆっくり室温で２カ月にわたり結晶化させた。形成された白色の結晶を回収し、Ｘ線分析にかけた（図１を参照のこと）。Ｘ線結晶学により化合物ｅｎｔ−１０の絶対配置を決定し、化合物９および１０、ひいてはその誘導体の立体化学の明確な測定を可能にした。

【0117】

（６ａＲ，１０ａＲ）−７−ｎ−プロピル−６，６ａ，７，８，９，１０，１０ａ，１１−オクタヒドロ−１，３−ジオキサ−７−アザシクロペンタ［ａ］アントラセンヒドロクロリド（化合物１１）。

【0118】

【化16】

【0119】

化合物１０（７．８０ｇ）、Ｃｓ_２ＣＯ_３（１８．６ｇ）、ＣＨ_２ＢｒＣｌ（２．２ｍＬ）およびＤＭＦ（１８０ｍＬ）をアルゴン雰囲気下で１時間、１００℃に加熱した。未精製の反応混合物を分液漏斗に加えて氷／水（３００ｍＬ）で希釈した。その結果得られる混合物をＥｔ_２Ｏで抽出した（３×３００ｍＬ）。有機層を合わせたものをブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させてから真空中で濃縮した。残留物をシリカゲル・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ）により精製すると薄い赤色の固形物が得られ、これをＭｅＯＨ（２５ｍＬ）に溶解し、Ｅｔ_２Ｏ（２０ｍＬ）中の２Ｍ ＨＣｌおよびＥｔ_２Ｏ（１００ｍＬ）を加えることにより、塩酸塩として沈殿させた。沈殿生成物を濾過により単離し、真空中で乾燥させた。化合物１１の収量：５．１ｇ。ＬＣ／ＭＳ（方法１１１）：室温０．７０分。ＥＬＳＤ１００％。ＵＶ９７．０％。ＭＨ^＋：２７４．０。

【0120】

（４ａＲ，１０ａＲ）−ｎ−１−プロピル−２，３，４，４ａ，５，７，８，９，１０，１０ａ−デカヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｇ］キノリン−６−オン（化合物１２）
欧州特許第１２７４４１１号（特許文献１）に記載されている要領で化合物１２の合成を調製でき、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。化合物１２は、前記の特許において（−）−ＧＭＣ６６５０と呼ばれている。

【0121】

実験の部

【0122】

例１
化合物１１および１２は、ｉｎ−ｖｉｖｏ投与すると、化合物１０のカテコール含有活性代謝物に転換する。

【0123】

【化17】

【0124】

この活性代謝物（すなわち化合物１０）は、ｉｎ−ｖｉｔｒｏにおいてＤ１受容体およびＤ２受容体の両方で強力な作動薬として機能することが見出された。以下でより詳細に考察するように、ｉｎ−ｖｉｖｏ実験から得られたデータは、この活性代謝物は他のドパミン作動薬より優れたプロファイルを有し、Ｌドパ／アポモルヒネ治療で見られる有効性と同等であることを示す。

【0125】

例２
化合物１０の薬理学的試験
Ｄ_１ ｃＡＭＰアッセイ
本化合物が、ヒトの組換えＤ_１受容体を安定に発現するＣＨＯ細胞においてＤ_１受容体介在性のｃＡＭＰ形成を刺激または阻害するいずれかの能力を次のように測定した。細胞を９６ウェル・プレート中に、１１０００細胞／ウェルの濃度で実験の３日前に播種した。実験当日、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水））中の予熱したＧ緩衝液（１ｍＭ ＭｇＣｌ_２、０．９ｍＭ ＣａＣｌ_２、１ｍＭ ＩＢＭＸ（３−ｉ−ブチル−１−メチルキサンチン）中で細胞を１回洗浄し、３０ｎＭ Ａ６８９３０と、Ｇ緩衝液（アンタゴニズム）中で希釈した試験化合物、またはＧ緩衝液（アゴニズム）中で希釈した試験化合物との混合物１００マイクロＬを加えることにより、アッセイを開始した。

【0126】

細胞を３７℃で２０分間インキュベートし、１００マイクロＬのＳ緩衝液（０．１Ｍ ＨＣｌおよび０．１ｍＭ ＣaＣl_２）を加えることにより反応を停止させ、プレートを４℃で１時間置いた。６８マイクロＬのＮ緩衝液（０．１５Ｍ ＮａＯＨおよび６０ｍＭ ＮａＯＡｃ）を加え、プレートを１０分間振盪させた。６０マイクロｌの反応物を、４０マイクロＬの６０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６．２を含有するｃＡＭＰ ＦｌａｓｈＰｌａｔｅｓ（ＤｕＰｏｎｔ、ＮＥＮ）に移し、１００マイクロＬのＩＣミックス（５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６．２、０．１％アジ化ナトリウム、１２ｍＭ ＣａＣｌ_２、１％ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）および０．１５マイクロ−Ｃｉ／ｍＬの^１２５Ｉ−ｃＡＭＰ）を加えた。４℃での１８時間のインキュベーションに次いでプレートを１回洗浄し、Ｗａｌｌａｃ ＴｒｉＬｕｘ計数器で計数した。化合物１０は、このアッセイにおいてＤ_１作動薬として作用することが実証された。

【0127】

Ｄ_２ ｃＡＭＰアッセイ
本化合物が、ヒトＤ_２受容体でトランスフェクトしたＣＨＯ細胞においてＤ_２受容体介在性のｃＡＭＰ形成阻害を刺激または阻害するいずれかの能力を次のように測定した。細胞を９６ウェル・プレート中に、８０００細胞／ウェルの濃度で実験の３日前に播種した。実験当日、予熱したＧ緩衝液（ＰＢＳ中の１ｍＭ ＭｇＣｌ_２、０．９ｍＭ ＣａＣｌ_２、１ｍＭ ＩＢＭＸ）中で細胞を１回洗浄し、Ｇ緩衝液（アンタゴニズム）中の、１マイクロＭキンピロール、１０マイクロＭフォルスコリンおよび試験化合物の混合物１００マイクロｌ、または、Ｇ緩衝液（アゴニズム）中の１０マイクロＭフォルスコリンおよび試験化合物を加えることにより、アッセイを開始した。

【0128】

細胞を３７℃で２０分インキュベートし、１００マイクロｌのＳ緩衝液（０．１Ｍ ＨＣｌおよび０．１ｍＭ ＣaＣl_２）を加えることにより反応を停止させ、プレートを４℃で１時間置いた。６８マイクロＬのＮ緩衝液（０．１５Ｍ ＮａＯＨおよび６０ｍＭ酢酸ナトリウム）を加え、プレートを１０分間振盪させた。６０マイクロＬの反応物を、４０マイクロＬの６０ｍＭ ＮａＯＡｃ、ｐＨ６．２を含有するｃＡＭＰ ＦｌａｓｈＰｌａｔｅｓ（ＤｕＰｏｎｔ、ＮＥＮ）に移し、１００マイクロＬのＩＣミックス（５０ｍＭ ＮａＯＡｃ、ｐＨ６．２、０．１％アジ化ナトリウム、１２ｍＭ ＣａＣｌ_２、１％ＢＳＡおよび０．１５マイクロ−Ｃｉ／ｍｌの^１２５Ｉ−ｃＡＭＰ）を加えた。４℃での１８時間のインキュベーションに次いでプレートを１回洗浄し、Ｗａｌｌａｃ ＴｒｉＬｕｘ計数器で計数した。化合物１０は、このアッセイにおいてＤ_２作動薬として作用することが実証された。

【0129】

Ｄ_５アッセイ
ｈＤ_５でトランスフェクトしたＣＨＯ−Ｇａ１６細胞におけるドパミンによる細胞内Ｃａ^２＋放出の濃度依存刺激。細胞にカルシウム指示色素フルオロ−４を１時間載せた。カルシウム応答（蛍光変化）をＦＬＩＰＲ（蛍光定量的な画像化プレート・リーダー）により２．５分間モニターした。２つ組のウェルのピーク応答（ＥＣ_５０）を各データ点について平均し、薬物濃度と共にプロットした（ドパミンについては図２を参照のこと）。化合物１０はこのアッセイにおいてＤ_５作動薬として作用することが実証された。

【0130】

６−ＯＨＤＡラット・モデル
ドパミン作動薬は、Ｄ１受容体、Ｄ２受容体のいずれか、またはその両方で活性を有する場合がある。両方の受容体タイプを刺激し回転を誘導する能力について化合物を評価するために、片側性の６−ＯＨＤＡ病変を有するラットにおける回転応答を用いることができる（Ungerstedt and Arbuthnott、Brain Res.、1970、24、485頁（非特許文献３）、Setlerら、Eur. J. Pharmacol.、1978、50(4)、419頁（非特許文献１２）およびUngerstedtら、「Advances in Dopamine Research」、(Kohsaka編)、Pergamon Press、1982、Oxford、219頁（非特許文献１３））。６−ＯＨＤＡ（６−ヒドロキシドパミン）は、神経生物学者が実験動物の脳内において注射部位でドパミン作動性ニューロンを選択的に殺すために使用する神経毒である。６−ＯＨＤＡモデルにおいては、黒質線条体のドパミン細胞は、黒質の前面に位置する内側前脳束中に６−ＯＨＤＡを注射することにより脳の一側（片側）上で破壊される。この片側性の注射がアポモルヒネなどのドパミン作動薬による刺激と合わさると、脳の一側のみが刺激されることから回転行動が誘導されることになる。実験は、当該化合物について回転を誘導する最小有効用量（ＭＥＤ）を決定することから成る。一旦ＭＥＤを決定したら、第２の実験を実施して、ネモナプリド遮断を克服するための、化合物のＭＥＤ（ＭＥＤ_{ネモナプリド}）を決定した。ネモナプリドは、Ｄ２受容体を遮断するＤ２拮抗薬であることから、観察されるいずれの回転もＤ１受容体での活性に依存することになろう。最後に、一旦ＭＥＤ_{ネモナプリド}がわかったら、ＭＥＤ_{ネモナプリド}用量を用い、Ｄ１拮抗薬ＳＣＨ２３３９０単独、Ｄ２拮抗薬ネモナプリド単独の効果を、最後に、ＳＣＨ２３３９０とネモナプリドとを用いた併用処置の効果を観察する第３の実験を行う。この第３の実験は、両方の受容体での化合物の活性を確認するものであるが、その理由は、いずれかの拮抗薬単独では試験化合物により誘導される回転応答を部分的に阻害することができるだけであるのに対し、併用処置ではラットにおける全ての回転が完全に遮断されるからである［Arnt and Hyttel、Psychopharmacology、1985、85(3)、346頁（非特許文献１４）およびSonsallaら、J. Pharmacol Exp. Ther.、1988、247(1)、180頁（非特許文献１５）］。このモデルを、Ｄ１／Ｄ２混合作動薬の原理実証用化合物としてアポモルヒネを使用して検証した。

【0131】

このモデルにおいて、化合物１０は、Ｄ１／Ｄ２比率が約２〜４（これに対しアポモルヒネの場合は比率が約３）である「アポモルヒネ」様のプロファイルを有する。さらに、観察された作用の継続期間は、この化合物については約１８時間であり、これは、Ｌドパ／アポモルヒネで見られる継続期間より有意に長い。Ｄ１成分は、プラミペキソールおよびロチゴチンにより例証されたようにはＤ２作動薬については観察できなかった。

【0132】

優越性モデル
アポモルヒネおよびＬドパは、重度のドパミン枯渇のマウスモデルにおいて運動欠損（ｍｏｔｉｌｉｔｙ ｄｅｆｉｃｉｔ）から回復させることが可能である。アポモルヒネおよびＬドパは両方ともドパミンのＤ１受容体およびＤ２受容体を刺激する。Ｄ２受容体での作動薬であるプラミペキソールは、このモデルにおいては効果がない。

【0133】

実験を次のように実施した：ＭＰＴＰ（２×１５ｍｇ／ｋｇ、皮下）でそれまでに処置を受け安定な病変を発症したマウスを使用し、ビヒクル処置したマウスを正常対照とする。ＭＰＴＰ（１−メチル−４−フェニル−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン）は、脳の黒質中のあるニューロンを殺すことによりパーキンソン病の永久的な症状を引き起こす神経毒である。サルおよびマウスにおける疾患を試験するためにＭＰＴＰを使用する。実験当日、マウスをＡＭＰＴ（２５０ｍｇ／ｋｇ、皮下）で処置してからホームケージに１．５時間戻し、その後マウスを運動ユニット（ｍｏｔｉｌｉｔｙ ｕｎｉｔ）中の個々のケージ内に置いた。ＡＭＰＴ（α−メチル−ｐ−チロシン）は、脳のカテコールアミン活性（この場合、特にドパミン・レベル）を一時的に低下させる薬物である。ＡＭＰＴ注射の３時間後、化合物１０で運動欠損の救済を試み、さらに１．５時間活性を記録した。救済処置後に収集した最初の３０分のデータには「ノイズが含まれて（ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅｄ）」いたが、これは、ビヒクル対照におけるレベル増加により明らかなように、取扱いおよび注射で動物にストレスがかかっていたことによるものであり、このため、記録されたデータの最後の１時間を用いてデータを分析した。多様なドパミン作動性化合物を、このモデルにおいて生じた運動欠損から回復させる能力について試験した。Ｌドパ／ベンセラジドおよびアポモルヒネの両方は、マウスにおいて用量依存的な形で運動力を回復した。ベンセラジドは、血液脳関門を通過できないＤＯＰＡデカルボキシラーゼ阻害薬であり、脳外でのＬドパのドパミンへの代謝を防止するために使用される。これに対し、Ｄ２作動薬であるプラミペキソールおよびブロモクリプチンは、マウスにおける運動力を回復しなかった。

【0134】

このモデルを使用して、化合物１０は、Ｄ２作動薬に勝るＬドパおよびアポモルヒネと同様の優越性を呈するか否かを評価した。化合物１０について用量応答実験を実施したところ、内因性ドパミンの重度の枯渇により誘導された運動性低下障害から回復させる用量依存的な傾向が見られた。このモデルにおけるアポモルヒネ、プラミペキソールおよび化合物１０の効果を直接比較する最終実験を実施し、化合物１０は、処置したＭＰＴＰマウスにおいて運動力を回復でき、プラミペキソールより優れていたことを確認した。

【0135】

未投薬の６−ＯＨＤＡラットを用いたジスキネジアモデルの誘導
片側性の６−ＯＨＤＡ病変を有する２０匹のオスのＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットを使用して、化合物１０（皮下投与、ｎ＝７、第１群）によるジスキネジアの誘導を、Ｌドパ／ベンセラジド（６ｍｇ／ｋｇ ／ １５ｍｇ／ｋｇ、皮下、ｎ＝７、第２群）およびアポモルヒネ（１ｍｇ／ｋｇ、皮下、ｎ＝６、第３群）との比較で試験した。ベンセラジドは、血液脳関門を通過できないＤＯＰＡデカルボキシラーゼ阻害薬であり、脳外でのＬドパのドパミンへの代謝を防止するために使用される。６−ＯＨＤＡの手術後３週間、同側性の旋回を誘導する２．５ｍｇ／ｋｇアンフェタミンにより誘導された回転応答について動物を試験した（アンフェタミンは、病変が生じていない側の無傷のニューロンを介して脳内のドパミンレベルを増加させる結果、脳の有病変側で主に作用するＬドパおよびアポモルヒネなどの直接作動薬に対する動物の応答とは対照的に、動物を逆方向に回転させる）。この試験に含めた全ての動物は、６０分に３５０回転超という基準を満たした。次に、アンフェタミンに対する動物の回転応答について群をバランスさせながら、３つの処置群にラットをランダムに割り付けた。

【0136】

実際のジスキネジア実験の間、ラットに１日１回試験化合物を皮下注射し、注射後３時間観察した。先に記載したとおりの異常不随意運動尺度（ＡＩＭＳ）（Lundbladら、Eur. J Neurosci.、15、120頁、(2002)（非特許文献１６））を用い、ジスキネジアの存在について各動物を２０分毎に１分間、３時間にわたり観察した。ラットに連続１４日間薬物を投与し、１日目、２日目、３日目、４日目、５日目、８日目、１０日目および１２日目に評点付けを行った。二元配置反復測定ＡＮＯＶＡにより、有意な処置効果、時間効果および処置×時間の相互作用（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｂｙ ｔｉｍｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）があったことが明らかになった（全てのケースにおいてｐ＜０．００１）。Ｈｏｌｍ−Ｓｉｄａｋ法を用いた事後比較により、化合物１０で処置された動物は、Ｌドパまたはアポモルヒネのいずれかで処置された動物（評点は約７０）と比較して有意に少ないジスキネジアを有した（評点は約３０）ことが示される。Ｌドパ処置群とアポモルヒネ処置群との間に差はなかった。この実験後、アポモルヒネ群およびＬドパ群において見られたジスキネジアの重症性に例Ｉがどのように影響するかを確認するために、全てのラットに１５日目〜１９日目に化合物１０の皮下注射を行った。実験の１９日目（化合物１０については５日に相当する）にジスキネジアの評点付けを実施した。データから、Ｌドパおよびアポモルヒネにより誘導されたジスキネジアが、化合物１０により誘導されたジスキネジアのレベル程度まで部分的に回復したことが示された（化合物１０は、処置の１２日後に観察された評点約３０と比較して、第１群においてジスキネジアの増加を引き起こさなかった）。

【0137】

ジスキネジアラット・モデル
独立のジスキネジア試験は、プラミペキソールまたは化合物１０のいずれかを用いてのＬドパ誘導性ジスキネジアの回復を検討するものであった。簡潔に言えば、１８匹の動物をＬドパ／ベンセラジド（１ｋｇ当たり６ｍｇ／１５ｍｇ、皮下）で７日間処置した。動物を１日目、３日目および５日目に観察し、ＡＩＭＳの評点付けを行った。次に、５日目の評点を用いて動物を動物６匹ずつ３つの群に分けた。第１群は毎日Ｌドパ処置を続けた。第２群は化合物１０（皮下投与）で処置した。第３群はプラミペキソール（０．１６ｍｇ／ｋｇ、皮下）で処置した。処置は１０日間毎日続け、ジスキネジアの量を１日目、５日目、９日目および１０日目に評点付けした。二元配置反復測定分散分析により、化合物１０で処置された動物は、プラミペキソール群およびＬドパ／ベンセラジド群のいずれより有意に少ないジスキネジアを有したことが示唆される。プラミペキソール群は、Ｌドパ／ベンセラジド群より有意に少ないジスキネジアを有した。したがって、化合物１０は、Ｌドパにより誘導されたジスキネジアからの回復に関し、プラミペキソールに勝る優れたプロファイルを有した。

【0138】

ＭＰＴＰ処置した普通のマーモセットにおける抗パーキンソン病効果
この実験は、ＭＰＴＰ処置した６匹のマーモセットを用いて行った（１日２．０ｍｇ／ｋｇ、最長で連続５日間、滅菌済の０．９％生理食塩溶液に溶解）。全ての動物は、それまでに、ジスキネジアを誘導するために、最長３０日間毎日投与されるＬドパ（１２．５ｍｇ／ｋｇ、経口、＋カルビドパ１２．５ｍｇ／ｋｇ、経口）で処置しておいた。試験に先立ち、全ての対象は、基本的な自発運動の顕著な低下、運動の協調不足、異常な、および／または硬直した姿勢、機敏性の低下および頭部のチェック運動（ｃｈｅｃｋｉｎｇ ｍｏｖｅｍｅｎｔ）など安定な運動欠損を呈した。試験化合物のいずれかの前にドンペリドンを６０分投与した。ドンペリドンは、悪心および嘔吐を抑制する抗ドパミン作動薬である。ケージ内に戦略的に置かれた８つの赤外線ビームから成る８つの光電性のスイッチから成る試験用ケージを用いて自発運動を評価し、ビームの妨害を１回として記録する。次に、時間区分当たりのビームの回数の合計数を時間の経過に従いプロットするか、または、総合的な活動について曲線下面積（ＡＵＣ）として示す。処置について知らされていない、訓練を受けた観察者により、運動障害の評価を実施した。

【0139】

これまでに記載されているように、Ｌドパ（１２．５ｍｇ／ｋｇ、経口）は自発運動を増加させ、運動障害から回復させた（Smithら、Mov. Disord.、2002、17(5)、887頁（非特許文献１７））。この挑戦のために選んだ用量は、この薬物の用量応答曲線の最高用量である。化合物１０（皮下投与）は、自発運動の用量依存的な増加および運動障害からの回復をもたらし、Ｌドパ（１２．５ｍｇ／ｋｇ、経口）の場合より大きい応答をもたらす傾向があった。 試験化合物は両方とも、Ｌドパと比較して運動障害からの持続的な回復をもたらし、Ｌドパ同様に有効であった。化合物１０は、Ｌドパと比較して運動障害からの持続的な回復をもたらし、Ｌドパ同様に有効であった。

【0140】

例３
化合物１１の薬理学的試験
Ｄ_１ ｃＡＭＰアッセイ
本化合物が、ヒトの組換えＤ_１受容体を安定に発現するＣＨＯ細胞においてＤ_１受容体介在性のｃＡＭＰ形成を刺激または阻害するいずれかの能力を次のように測定した。細胞を９６ウェル・プレート中に、１１０００細胞／ウェルの濃度で実験の３日前に播種した。実験当日、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）中の予熱したＧ緩衝液（１ｍＭ ＭｇＣｌ_２、０．９ｍＭ ＣａＣｌ_２、１ｍＭ ＩＢＭＸ（３−ｉ−ブチル−１−メチルキサンチン））中で細胞を１回洗浄し、３０ｎＭ Ａ６８９３０と、Ｇ緩衝液（アンタゴニズム）中で希釈した試験化合物、またはＧ緩衝液（アゴニズム）中で希釈した試験化合物との混合物１００マイクロＬを加えることにより、アッセイを開始した。

【0141】

細胞を３７℃で２０分間インキュベートし、１００マイクロＬのＳ緩衝液（０．１Ｍ ＨＣｌおよび０．１ｍＭ ＣａＣｌ_２）を加えることにより反応を停止させ、プレートを４℃で１時間置いた。６８マイクロＬのＮ緩衝液（０．１５Ｍ ＮａＯＨおよび６０ｍＭ ＮａＯＡｃ）を加え、プレートを１０分間振盪させた。６０マイクロｌの反応物を、４０マイクロＬの６０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６．２を含有するｃＡＭＰ ＦｌａｓｈＰｌａｔｅｓ（ＤｕＰｏｎｔ、ＮＥＮ）に移し、１００マイクロＬのＩＣミックス（５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６．２、０．１％アジ化ナトリウム、１２ｍＭ ＣａＣｌ_２、１％ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）および０．１５マイクロ−Ｃｉ／ｍＬの^１２５Ｉ−ｃＡＭＰ）を加えた。４℃での１８時間のインキュベーションに次いでプレートを１回洗浄し、Ｗａｌｌａｃ ＴｒｉＬｕｘ計数器で計数した。本活性代謝物または化合物１０は、このアッセイにおいてＤ_１作動薬であることが見出された。

【0142】

Ｄ_２ ｃＡＭＰアッセイ
本化合物が、ヒトＤ_２受容体でトランスフェクトしたＣＨＯ細胞においてＤ_２受容体介在性のｃＡＭＰ形成阻害を刺激または阻害するいずれかの能力を次のように測定した。細胞を９６ウェル・プレート中に、８０００細胞／ウェルの濃度で実験の３日前に播種した。実験当日、予熱したＧ緩衝液（ＰＢＳ中の１ｍＭ ＭｇＣｌ_２、０．９ｍＭ ＣａＣｌ_２、１ｍＭ ＩＢＭＸ）中で細胞を１回洗浄し、Ｇ緩衝液（アンタゴニズム）中の、１マイクロＭキンピロール、１０マイクロＭフォルスコリンおよび試験化合物の混合物１００マイクロｌ、または、Ｇ緩衝液（アゴニズム）中の１０マイクロＭフォルスコリンおよび試験化合物を加えることにより、アッセイを開始した。

【0143】

細胞を３７℃で２０分インキュベートし、１００マイクロｌのＳ緩衝液（０．１Ｍ ＨＣｌおよび０．１ｍＭ ＣａＣｌ_２）を加えることにより反応を停止させ、プレートを４℃で１時間置いた。６８マイクロＬのＮ緩衝液（０．１５Ｍ ＮａＯＨおよび６０ｍＭ酢酸ナトリウム）を加え、プレートを１０分間振盪させた。６０マイクロＬの反応物を、４０マイクロＬの６０ｍＭ ＮａＯＡｃ、ｐＨ６．２を含有するｃＡＭＰ ＦｌａｓｈＰｌａｔｅｓ（ＤｕＰｏｎｔ、ＮＥＮ）に移し、１００マイクロＬのＩＣミックス（５０ｍＭ ＮａＯＡｃ、ｐＨ６．２、０．１％アジ化ナトリウム、１２ｍＭ ＣａＣｌ_２、１％ＢＳＡおよび０．１５マイクロ−Ｃｉ／ｍｌの^１２５Ｉ−ｃＡＭＰ）を加えた。４℃での１８時間のインキュベーションに次いでプレートを１回洗浄し、Ｗａｌｌａｃ ＴｒｉＬｕｘ計数器で計数した。本活性代謝物または化合物１０は、このアッセイにおいてＤ_２作動薬であることが見出された。

【0144】

Ｄ_５アッセイ
ｈＤ_５でトランスフェクトしたＣＨＯ−Ｇａ１６細胞におけるドパミンによる細胞内Ｃａ^２＋放出の濃度依存刺激。細胞にカルシウム指示色素フルオロ−４を１時間載せた。カルシウム応答（蛍光変化）をＦＬＩＰＲ（蛍光定量的な画像化プレート・リーダー）により２．５分間モニターした。２つ組のウェルのピーク応答（ＥＣ_５０）を各データ点について平均し、薬物濃度と共にプロットした。本活性代謝物または化合物１０は、このアッセイにおいてＤ_５作動薬であることが見出された。

【0145】

６−ＯＨＤＡラット・モデル
ドパミン作動薬は、Ｄ１受容体、Ｄ２受容体のいずれか、またはその両方で活性を有する場合がある。両方の受容体タイプを刺激し回転を誘導する能力について化合物を評価するために、片側性の６−ＯＨＤＡ病変を有するラットにおける回転応答を用いることができた［Ungerstedt and Arbuthnott、Brain Res.、24、485頁、(1970)（非特許文献３）、Setlerら、Eur. J. Pharmacol.、50(4)、419頁、(1978)（非特許文献１２）およびUngerstedtら、「Advances in Dopamine Research」、(Kohsaka編)、Pergamon Press、1982、Oxford、219頁（非特許文献１３）］。６−ＯＨＤＡ（６−ヒドロキシドパミン）は、神経生物学者が実験動物の脳内において注射部位でドパミン作動性ニューロンを選択的に殺すために使用する神経毒である。６−ＯＨＤＡモデルにおいては、黒質線条体のドパミン細胞は、黒質の前面に位置する内側前脳束中に６−ＯＨＤＡを注射することにより脳の一側（片側）上で破壊される。この片側性の注射がアポモルヒネなどのドパミン作動薬による刺激と合わさると、脳の一側のみが刺激されることから回転行動が誘導されることになる。実験は、当該化合物について回転を誘導する最小有効用量（ＭＥＤ）を決定することから成る。一旦ＭＥＤを決定したら、第２の実験を実施して、ネモナプリド遮断を克服するための、化合物のＭＥＤ（ＭＥＤ_{ネモナプリド}）を決定する。ネモナプリドは、Ｄ２受容体を遮断するＤ２拮抗薬であることから、観察されるいずれの回転もＤ１受容体での活性に依存することになろう。最後に、一旦ＭＥＤ_{ネモナプリド}がわかったら、ＭＥＤ_{ネモナプリド}用量を用い、Ｄ１拮抗薬ＣＨ２３３９０単独、Ｄ２拮抗薬ネモナプリド単独の効果を、最後に、ＳＣＨ２３３９０とネモナプリドとを用いた併用処置の効果を観察する第３の実験を行う。この第３の実験は、両方の受容体での化合物の活性を確認するものであるが、その理由は、いずれかの拮抗薬単独では試験化合物により誘導される回転応答を部分的に阻害することができるだけであるのに対し、併用処置ではラットにおける全ての回転が完全に遮断されるからである［Arnt and Hyttel、Psychopharmacology、85(3)、346頁、(1985)（非特許文献１４）およびSonsallaら、J. Pharmacol Exp. Ther.、247(1)、180頁、(1988)（非特許文献１５）］。このモデルを、Ｄ１／Ｄ２混合作動薬の原理実証用化合物としてアポモルヒネを使用して検証した。

【0146】

このモデルにおいては、本活性代謝物または化合物１０および化合物１１は、Ｄ１／Ｄ２比率が約２（これに対しアポモルヒネの場合は比率が約３）である「アポモルヒネ」様のプロファイルを有する。さらに、観察された作用の継続期間は、この化合物については約１８時間であり、これは、Ｌドパ／アポモルヒネで見られる継続期間より有意に長い。Ｄ１成分は、プラミペキソールおよびロチゴチンにより例証されたようにはＤ２作動薬については観察できなかった。

【0147】

優越性モデル
アポモルヒネおよびＬドパは、重度のドパミン枯渇のマウスモデルにおいて運動欠損（ｍｏｔｉｌｉｔｙ ｄｅｆｉｃｉｔ）から回復させることが可能である。アポモルヒネおよびＬドパは両方とも、ドパミンのＤ１受容体およびＤ２受容体を刺激する。Ｄ２様受容体での作動薬であるプラミペキソールは、このモデルにおいては効果がない。

【0148】

実験を次のように実施した：ＭＰＴＰ（２×１５ｍｇ／ｋｇ、皮下）でそれまでに処置を受け安定な病変を発症したマウスを使用し、ビヒクル処置したマウスを正常対照とした。ＭＰＴＰ（１−メチル−４−フェニル−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン）は、脳の黒質中のあるニューロンを殺すことによりパーキンソン病の永久的な症状を引き起こす神経毒である。サルおよびマウスにおける疾患を試験するためにＭＰＴＰを使用する。実験当日、マウスをＡＭＰＴ（２５０ｍｇ／ｋｇ、皮下）で処置してからホームケージに１．５時間戻し、その後マウスを運動ユニット（ｍｏｔｉｌｉｔｙ ｕｎｉｔ）中の個々のケージ内に置いた。ＡＭＰＴ（α−メチル−ｐ−チロシン）は、脳のカテコールアミン活性（この場合、特にドパミン・レベル）を一時的に低下させる薬物である。ＡＭＰＴ注射の３時間後、本活性代謝物または化合物１０で運動力欠損の救済を試み、さらに１．５時間活性を記録した。救済処置後に収集した最初の３０分のデータには「ノイズが含まれて（ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅｄ）」いたが、これは、ビヒクル対照におけるレベル増加により明らかなように、取扱いおよび注射で動物にストレスがかかっていたことによるものであり、このため、記録されたデータの最後の１時間を用いてデータを分析した。多様なドパミン作動性化合物を、このモデルにおいて生じた運動欠損を回復する能力について試験する。Ｌドパ／ベンセラジドおよびアポモルヒネは両方とも、マウスにおいて用量依存的な形で運動力を回復した。ベンセラジドは、血液脳関門を通過できないＤＯＰＡデカルボキシラーゼ阻害薬であり、脳外でのＬドパのドパミンへの代謝を防止するために使用される。これに対し、Ｄ２作動薬であるプラミペキソールおよびブロモクリプチンは、マウスにおいて運動力を回復しなかった。

【0149】

このモデルを使用して、本活性代謝物または化合物１０は、Ｄ２作動薬に勝るＬドパおよびアポモルヒネと同様の優越性を呈するか否かを評価した。用量応答実験を実施したところ、内因性ドパミンの重度の枯渇により誘導された運動性低下障害から回復する用量依存的な傾向が見られた。アポモルヒネ、プラミペキソールおよび化合物１０の効果を直接比較する最終実験を実施した。化合物１０は、処置したＭＰＴＰマウスにおいて運動力を回復でき、プラミペキソールより優れていることが確認された。

【0150】

ジスキネジアラット・モデル
文献（Lundbladら、Eur. J Neurosci.、2002、15、120頁（非特許文献１６））中で報告されているジスキネジアラット・モデルを使用して、ジスキネジアに関する本活性代謝物対Ｌドパ／ベンセラジドの効果を調べ、ジスキネジアを「パーキンソン病症状を呈する」ラットにおける異常な不随意運動（ＡＩＭ）として評価した。

【0151】

試験デザイン
試験を通して、動物には１日１回ｔ＝−２０分、０〜１８０分でＬドパ／ベンセラジド（６ｍｇ／ｋｇおよび１５ｍｇ／ｋｇ、皮下）または本活性代謝物（化合物１０）（Ｂ群）を投与した。ジスキネジアについて動物を評点付けした。１〜１４日目：全ての動物にＬドパ／ベンセラジド（Ａ群）または本活性代謝物（化合物１０）（Ｂ群）を投与した。

【0152】

１日目、３日目、５日目、８日目および１２日目に、先に記載したとおりの異常不随意運動尺度（ＡＩＭＳ）（Lundbladら、Eur. J Neurosci.、2002、15、120頁（非特許文献１６））を用いてジスキネジアを記録することによるＡＩＭ評点法（ＡＩＭ−ｓｃｏｒｉｎｇ）により、動物を評点付けした。１５〜２６日目：Ａ群の動物を、Ｌドパ／ベンセラジドの代わりに試験薬で処置した（Ｂ群として）。１５日目、１６日目、１７日目、１９日目、２２日目、２４日目および２６日目：ＡＩＭ評点法により、動物を評点付けした。

【0153】

６−ＯＨＤＡラットにおけるＬドパ誘導性ジスキネジアからの回復
処置の８日後、Ａ群の動物のジスキネジア評点は１０〜１２であり、この数値は１２日目まで一定であった。これに対し、Ｂ群の動物は有意に少ないジスキネジアを有した（評点は２〜４）。Ｂ群については、ジスキネジアの度合いは試験の間中変化しなかった。Ａ群の動物をＬドパ／ベンセラジドから試験薬に変更させた後、この群の動物のジスキネジアレベルは、他方の群の動物について観察されたレベルまで徐々に低下した。したがって、化合物１１は、Ｌドパより有意に少ないジスキネジアを誘導し、Ｌドパにより誘導されるジスキネジアを減少させることができた。

【0154】

ＭＰＴＰ処置した普通のマーモセットにおける抗パーキンソン病効果
この実験は、ＭＰＴＰ処置した６匹のマーモセットを用いて行った（１日２．０ｍｇ／ｋｇ、最長で連続５日間、滅菌済の０．９％生理食塩溶液に溶解）。全ての動物は、それまでに、ジスキネジアを誘導するために、最長３０日間毎日投与されるＬドパ（１２．５ｍｇ／ｋｇ、経口、＋カルビドパ１２．５ｍｇ／ｋｇ、経口）で処置しておいた。試験に先立ち、全ての対象は、基本的な自発運動の顕著な低下、運動の協調不足、異常な、および／または硬直した姿勢、機敏性の低下および頭部のチェック運動（ｃｈｅｃｋｉｎｇ ｍｏｖｅｍｅｎｔ）など安定な運動欠損を呈した。試験化合物のいずれかの前にドンペリドンを６０分投与した。ドンペリドンは、悪心および嘔吐を抑制する抗ドパミン作動薬である。ケージ内に戦略的に置かれる８つの赤外線ビームから成る８つの光電性のスイッチから成る試験用ケージを用いて自発運動を評価し、ビームの妨害を１回として記録する。次に、時間区分当たりのビームの回数の合計数を時間の経過に従いプロットするか、または、総合的な活動について曲線下面積（ＡＵＣ）として示す。処置について知らされていない、訓練を受けた観察者により、運動障害の評価を実施した。

【0155】

これまでに記載されているように、Ｌドパ（１２．５ｍｇ／ｋｇ、経口）は自発運動を増加させ、運動障害を回復した（Smithら、Mov. Disord.、2002、17(5)、887頁（非特許文献１７））。この挑戦のために選んだ用量は、この薬物の用量応答曲線の最高用量である。化合物１１（経口投与）ならびに化合物１０（皮下投与）は自発運動の用量依存的な増加および運動障害からの回復をもたらし、こうした増加および回復はＬドパ（１２．５ｍｇ／ｋｇ、経口）の場合より大きい応答で生じる傾向があった。試験化合物は両方とも、Ｌドパと比較して運動障害からの持続的な回復をもたらし、Ｌドパ同様に有効であった。

【0156】

ｉｎ ｖｉｔｒｏ肝細胞アッセイ
凍結保存したオスのラットの肝細胞プール（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ）、および、１０名のドナー（男女）に由来するヒト肝細胞プールをＩｎ Ｖｉｔｒｏ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．、ＢＡ、ＵＳＡから購入した。細胞を水浴中で３７℃にて解凍し、生細胞を計数し、各ウェルがラットおよびヒトの肝細胞についてそれぞれ２５０，０００細胞／ｍＬおよび５００，０００細胞／ｍＬを含有する９６ウェル・プレート中の５ｍＭ Ｈｅｐｅｓ緩衝液を添加したダルベッコ改変イーグル培地（高グルコース）中の合計１００マイクロＬに播種した。インキュベーションは、プレ・インキュベーションの１５分後に開始し、ラットについては０分、５分、１５分、３０分および６０分時点、ならびに、ヒト肝細胞については０分、３０分、６０分、９０分および１２０分時点で停止させた。インキュベーションは、１０％１Ｍ ＨＣｌを含有する等体積の氷冷のアセトニトリルを加えることにより停止させた。遠心分離に次ぎ、２０マイクロＬの上清をＨＰＬＣカラムＡｔｌａｎｔｉｓ、ｄＣ１８、３マイクロｍ、１５０×内径２．１ｍｍ（Ｗａｔｅｒｓ、ＭＡ、ＵＳＡ）上に注射した。移動相は以下の組成を有した：Ａ：５％アセトニトリル、９５％Ｈ_２Ｏ、３．７ｍｌ／ｌ ２５％ＮＨ_３水溶液、１．８ｍＬ／Ｌギ酸。移動相Ｂ：１００％アセトニトリルおよび０．１％ギ酸。流速は０．３ｍｌ／分であった。勾配は０％〜７５％Ｂ、５分〜２０分で運転し、Ｑ−ＴＯＦマイクロ質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ、ＭＡ、ＵＳＡ）を用いて溶出液を分析した。生成物／代謝産物の形成を、精密質量測定、および、合成した標準との比較により確認すると、一致する保持時間が得られた。このアッセイにおいては、化合物１１が化合物１０に代謝されることが実証された。

【0157】

例４
化合物１２の薬理学的試験
Ｄ_１ ｃＡＭＰアッセイ
本化合物が、ヒトの組換えＤ_１受容体を安定に発現するＣＨＯ細胞においてＤ_１受容体介在性のｃＡＭＰ形成を刺激または阻害するいずれかの能力を次のように測定した。細胞を９６ウェル・プレート中に、１１０００細胞／ウェルの濃度で実験の３日前に播種した。実験当日、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）中の予熱したＧ緩衝液（１ｍＭ ＭｇＣｌ_２、０．９ｍＭ ＣａＣｌ_２、１ｍＭ ＩＢＭＸ（３−ｉ−ブチル−１−メチルキサンチン））中で細胞を１回洗浄し、３０ｎＭ Ａ６８９３０と、Ｇ緩衝液（アンタゴニズム）中で希釈した試験化合物、またはＧ緩衝液（アゴニズム）中で希釈した試験化合物との混合物１００マイクロＬを加えることにより、アッセイを開始した。

【0158】

細胞を３７℃で２０分間インキュベートし、１００マイクロＬのＳ緩衝液（０．１Ｍ ＨＣｌおよび０．１ｍＭ ＣａＣｌ_２）を加えることにより反応を停止させ、プレートを４℃で１時間置いた。６８マイクロＬのＮ緩衝液（０．１５Ｍ ＮａＯＨおよび６０ｍＭ ＮａＯＡｃ）を加え、プレートを１０分間振盪させた。６０マイクロｌの反応物を、４０マイクロＬの６０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６．２を含有するｃＡＭＰ ＦｌａｓｈＰｌａｔｅｓ（ＤｕＰｏｎｔ、ＮＥＮ）に移し、１００マイクロＬのＩＣミックス（５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６．２、０．１％アジ化ナトリウム、１２ｍＭ ＣａＣｌ_２、１％ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）および０．１５マイクロ−Ｃｉ／ｍＬの^１２５Ｉ−ｃＡＭＰ）を加えた。４℃での１８時間のインキュベーションに次いでプレートを１回洗浄し、Ｗａｌｌａｃ ＴｒｉＬｕｘ計数器で計数した。本活性代謝物（すなわち化合物１０）は、このアッセイにおいてＤ_１作動薬であることが見出された。

【0159】

Ｄ_２ ｃＡＭＰアッセイ
本化合物が、ヒトＤ_２受容体でトランスフェクトしたＣＨＯ細胞においてＤ_２受容体介在性のｃＡＭＰ形成阻害を刺激または阻害するいずれかの能力を次のように測定した。細胞を９６ウェル・プレート中に、８０００細胞／ウェルの濃度で実験の３日前に播種した。実験当日、予熱したＧ緩衝液（ＰＢＳ中の１ｍＭ ＭｇＣｌ_２、０．９ｍＭ ＣａＣｌ_２、１ｍＭ ＩＢＭＸ）中で細胞を１回洗浄し、Ｇ緩衝液（アンタゴニズム）中の、１マイクロＭキンピロール、１０マイクロＭフォルスコリンおよび試験化合物の混合物１００マイクロｌ、または、Ｇ緩衝液（アゴニズム）中の１０マイクロＭフォルスコリンおよび試験化合物を加えることにより、アッセイを開始した。

【0160】

細胞を３７℃で２０分インキュベートし、１００マイクロｌのＳ緩衝液（０．１Ｍ ＨＣｌおよび０．１ｍＭ ＣａＣｌ_２）を加えることにより反応を停止させ、プレートを４℃で１時間置いた。６８マイクロＬのＮ緩衝液（０．１５Ｍ ＮａＯＨおよび６０ｍＭ酢酸ナトリウム）を加え、プレートを１０分間振盪させた。６０マイクロＬの反応物を、４０マイクロＬの６０ｍＭ ＮａＯＡｃ、ｐＨ６．２を含有するｃＡＭＰ ＦｌａｓｈＰｌａｔｅｓ（ＤｕＰｏｎｔ、ＮＥＮ）に移し、１００マイクロＬのＩＣミックス（５０ｍＭ ＮａＯＡｃ、ｐＨ６．２、０．１％アジ化ナトリウム、１２ｍＭ ＣａＣｌ_２、１％ＢＳＡおよび０．１５マイクロ−Ｃｉ／ｍｌの^１２５Ｉ−ｃＡＭＰ）を加えた。４℃での１８時間のインキュベーションに次いでプレートを１回洗浄し、Ｗａｌｌａｃ ＴｒｉＬｕｘ計数器で計数した。本活性代謝物（すなわち化合物１０）は、このアッセイにおいてＤ_２作動薬であることが見出された。

【0161】

Ｄ_５アッセイ
ｈＤ_５でトランスフェクトしたＣＨＯ−Ｇａ１６細胞におけるドパミンによる細胞内Ｃａ^２＋放出の濃度依存刺激。細胞にカルシウム指示色素フルオロ−４を１時間載せた。カルシウム応答（蛍光変化）をＦＬＩＰＲ（蛍光定量的な画像化プレート・リーダー）により２．５分間モニターした。２つ組のウェルのピーク応答（ＥＣ_５０）を各データ点について平均し、薬物濃度と共にプロットした（ドパミンについては図１を参照のこと）。本活性代謝物（すなわち化合物１０）は、このアッセイにおいてＤ_５作動薬であることが見出された。

【0162】

６−ＯＨＤＡラット・モデル
ドパミン作動薬は、Ｄ１受容体、Ｄ２受容体のいずれかまたは両方で活性を有する場合がある。両方の受容体タイプを刺激し回転を誘導する能力について化合物を評価するために、片側性の６−ＯＨＤＡ病変を有するラットにおける回転応答を用いることができる［Ungerstedt and Arbuthnott、Brain Res.、24、485頁、(1970)（非特許文献３）、Setlerら、Eur. J. Pharmacol.、50(4)、419頁、(1978)（非特許文献１２）およびUngerstedtら、「Advances in Dopamine Research」、(Kohsaka編)、Pergamon Press、1982、Oxford、219頁（非特許文献１３）］。６−ＯＨＤＡ（６−ヒドロキシドパミン）は、神経生物学者が実験動物の脳内において注射部位でドパミン作動性ニューロンを選択的に殺すために使用する神経毒である。６−ＯＨＤＡモデルにおいては、黒質線条体のドパミン細胞は、黒質の前面に位置する内側前脳束中に６−ＯＨＤＡを注射することにより脳の一側（片側）上で破壊される。この片側性の注射がアポモルヒネなどのドパミン作動薬による刺激と合わさると、脳の一側のみが刺激されることから回転行動が誘導されることになる。実験は、当該化合物について回転を誘導する最小有効用量（ＭＥＤ）を決定することから成る。一旦ＭＥＤを決定したら、第２の実験を実施して、ネモナプリド遮断を克服するための、化合物のＭＥＤ（ＭＥＤ_{ネモナプリド}）を決定する。ネモナプリドは、Ｄ２受容体を遮断するＤ２拮抗薬であることから、観察されるいずれの回転もＤ１受容体での活性に依存することになろう。最後に、一旦ＭＥＤ_{ネモナプリド}がわかったら、ＭＥＤ_{ネモナプリド}用量を用い、Ｄ１拮抗薬ＳＣＨ２３３９０単独、Ｄ２拮抗薬ネモナプリド単独の効果を、最後に、ＳＣＨ２３３９０とネモナプリドとを用いた併用処置の効果を観察する第３の実験を行う。この第３の実験は、両方の受容体での化合物の活性を確認するものであるが、その理由は、いずれかの拮抗薬単独では試験化合物により誘導される回転応答を部分的に阻害することができるだけであるのに対し、併用処置ではラットにおける全ての回転が完全に遮断されるからである［Arnt and Hyttel、Psychopharmacology、1985、85(3)、346頁（非特許文献１４）およびSonsallaら、J. Pharmacol Exp. Ther.、1988、247(1)、180頁（非特許文献１５）］。このモデルを、Ｄ１／Ｄ２混合作動薬の原理実証用化合物としてアポモルヒネを使用して検証した。

【0163】

このモデルにおいては、化合物１０および１２は、Ｄ１／Ｄ２比率が約２〜４（これに対しアポモルヒネの場合は比率が約３）である「アポモルヒネ」様のプロファイルを有する。さらに、観察された作用の継続期間は、この化合物については約１８時間であり、これは、Ｌドパ／アポモルヒネで見られる継続期間より有意に長い。Ｄ１成分は、プラミペキソールおよびロチゴチンにより例証されたようにはＤ２作動薬については観察できなかった。

【0164】

優越性モデル
アポモルヒネおよびＬドパは、重度のドパミン枯渇のマウスモデルにおいて運動欠損から回復することが可能である。アポモルヒネおよびＬドパは両方とも、Ｄ１受容体およびＤ２受容体を刺激する。Ｄ２受容体での作動薬であるプラミペキソールは、このモデルにおいては効果がない。

【0165】

実験を次のように実施した：ＭＰＴＰ（２×１５ｍｇ／ｋｇ、皮下）でそれまでに処置を受け安定な病変を発症したマウスを使用し、ビヒクル処置したマウスを正常対照とした。ＭＰＴＰ（１−メチル−４−フェニル−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン）は、脳の黒質中のあるニューロンを殺すことによりパーキンソン病の永久的な症状を引き起こす神経毒である。サルおよびマウスにおける疾患を試験するためにＭＰＴＰを使用する。実験当日、マウスをＡＭＰＴ（２５０ｍｇ／ｋｇ、皮下）で処置してからホームケージに１．５時間戻し、その後マウスを運動ユニット中の個々のケージ内に置いた。ＡＭＰＴ（α−メチル−ｐ−チロシン）は、脳のカテコールアミン活性（この場合、特にドパミン・レベル）を一時的に低下させる薬物である。ＡＭＰＴ注射の３時間後、化合物１０で運動力欠損の救済を試み、さらに１．５時間活性を記録した。救済処置後に収集した最初の３０分のデータには「ノイズが含まれて」いたが、これは、ビヒクル対照におけるレベル増加により明らかなように、取扱いおよび注射で動物にストレスがかかっていたことによるものであり、このため、記録されたデータの最後の１時間を用いてデータを分析した。多様なドパミン作動性化合物を、このモデルにおいて生じた運動欠損から回復させる能力について試験した。Ｌドパ／ベンセラジドおよびアポモルヒネは両方とも、マウスにおいて用量依存的な形で運動力を回復した。ベンセラジドは、血液脳関門を通過できないＤＯＰＡデカルボキシラーゼ阻害薬であり、脳外でのＬドパのドパミンへの代謝を防止するために使用した。これに対し、Ｄ２作動薬であるプラミペキソールおよびブロモクリプチンは、マウスにおいて運動力を回復しなかった。

【0166】

このモデルを使用して、化合物１０は、Ｄ２作動薬に勝るＬドパおよびアポモルヒネと同様の優越性を呈するか否かを評価した。用量応答実験を実施したところ、内因性ドパミンの重度の枯渇により誘導された運動性低下障害から回復させる用量依存的な傾向が見られた。アポモルヒネ、プラミペキソールおよび化合物１０の効果を直接比較する最終実験を実施した。化合物１０は、処置したＭＰＴＰマウスにおいて運動力を回復でき、プラミペキソールより優れていることが確認された。

【0167】

ジスキネジアラット・モデル
文献（Lundbladら、Eur. J Neurosci.、2002、15、120頁（非特許文献１６））中で報告されているジスキネジアラット・モデルを使用して、ジスキネジアに関する化合物１２対Ｌドパ／ベンセラジドの効果を調べ、ジスキネジアを「パーキンソン病症状を呈する」ラットにおける異常な不随意運動（ＡＩＭ）として評価した。

【0168】

試験デザイン
試験を通して、動物には１日１回ｔ＝−２０分、０〜１８０分でＬドパ／ベンセラジド（６ｍｇ／ｋｇおよび１５ｍｇ／ｋｇ、皮下）または化合物１２（Ｂ群）を投与した。ジスキネジアについて動物を評点付けした。１〜１４日目：全ての動物にＬドパ／ベンセラジド（Ａ群）または化合物１２（Ｂ群）を投与した。

【0169】

１日目、３日目、５日目、８日目および１２日目に、先に記載したとおりの異常不随意運動尺度（ＡＩＭＳ）を用いてジスキネジアを記録することによるＡＩＭ評点法により、動物を評点付けした。１５〜２６日目：Ａ群の動物を、Ｌドパ／ベンセラジドの代わりに化合物１２で処置した（Ｂ群として）。１５日目、１６日目、１７日目、１９日目、２２日目、２４日目および２６日目：ＡＩＭ評点法により動物を評点付けした。

【0170】

結果
処置の８日後、Ａ群の動物のジスキネジア評点は７０〜８０であり、この数値は１５日目まで一定であった。これに対し、Ｂ群の動物は有意に少ないジスキネジアを有した（評点は１０〜２５）。Ｂ群については、ジスキネジアの度合いは試験の間中変化しなかった。Ａ群の動物をＬドパ／ベンセラジドから化合物１２に１０日間変更させた後、この群の動物のジスキネジアレベルは、３０〜３５の評点まで徐々に低下した。したがって、化合物１２は、Ｌドパより有意に少ないジスキネジアを誘導し、Ｌドパにより誘導されるジスキネジアを減少させることができた。

【0171】

ＭＰＴＰ処置した普通のマーモセットにおける抗パーキンソン病効果
この実験は、ＭＰＴＰ処置した６匹のマーモセットを用いて行った（１日２．０ｍｇ／ｋｇ、最長で連続５日間、滅菌済の０．９％生理食塩溶液に溶解）。全ての動物は、それまでに、ジスキネジアを誘導するために、最長３０日間毎日投与されるＬドパ（１２．５ｍｇ／ｋｇ、経口、＋カルビドパ１２．５ｍｇ／ｋｇ、経口）で処置しておいた。試験に先立ち、全ての対象は、基本的な自発運動の顕著な低下、運動の協調不足、異常な、および／または硬直した姿勢、機敏性の低下および頭部のチェック運動など安定な運動欠損を呈した。試験化合物のいずれかの前にドンペリドンを６０分投与した。ケージ内に戦略的に置かれる８つの赤外線ビームから成る８つの光電性のスイッチから成る試験用ケージを用いて自発運動を評価し、ビームの妨害を１回として記録する。次に、時間区分当たりのビームの回数の合計数を時間の経過に従いプロットするか、または、総合的な活動について曲線下面積（ＡＵＣ）として示す。処置について知らされていない、訓練を受けた観察者により、運動障害の評価を実施した。

【0172】

これまでに記載されているように、Ｌドパ（１２．５ｍｇ／ｋｇ、経口）は自発運動を増加させ、運動障害から回復させた（Smithら、Mov. Disord.、2002、17(5)、887頁（非特許文献１７））。この挑戦のために選んだ用量は、この薬物の用量応答曲線の最高用量である。化合物１２（経口投与）ならびに化合物１０（経口投与）は自発運動の用量依存的な増加および運動障害からの回復をもたらし、こうした増加および回復はＬドパ（１２．５ｍｇ／ｋｇ、経口）の場合より大きい応答で生じる傾向があった。試験化合物は両方とも、Ｌドパと比較して運動障害からの持続的な回復をもたらし、Ｌドパ同様に有効であった。

【図1】

【図2】