特許 5750443 オキシトシン受容体アゴニスト

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5750443

(24)【登録日】2015年5月22日

(45)【発行日】2015年7月22日

(54)【発明の名称】オキシトシン受容体アゴニスト

(51)【国際特許分類】

   C07K 7/06 20060101AFI20150702BHJP

   A61K 38/00 20060101ALI20150702BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20150702BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20150702BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20150702BHJP

   A61P 15/10 20060101ALI20150702BHJP

   A61P 15/08 20060101ALI20150702BHJP

   A61P 15/04 20060101ALI20150702BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20150702BHJP

   A61P 25/04 20060101ALI20150702BHJP

   A61P 25/22 20060101ALI20150702BHJP

   A61P 7/04 20060101ALI20150702BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20150702BHJP

   A61P 1/10 20060101ALI20150702BHJP

   A61P 25/24 20060101ALI20150702BHJP

   A61P 25/20 20060101ALI20150702BHJP

   A61P 19/10 20060101ALI20150702BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20150702BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20150702BHJP

【ＦＩ】

   C07K7/06

   A61K37/02

   A61P1/00

   A61P1/04

   A61P25/00

   A61P15/10

   A61P15/08

   A61P15/04

   A61P15/00

   A61P25/04

   A61P25/22

   A61P7/04

   A61P35/00

   A61P1/10

   A61P25/24

   A61P25/20

   A61P19/10

   A61P17/02

   A61P29/00

【請求項の数】20

【全頁数】21

(21)【出願番号】特願2012-529981(P2012-529981)

(86)(22)【出願日】2010年9月21日

(65)【公表番号】特表2013-505269(P2013-505269A)

(43)【公表日】2013年2月14日

(86)【国際出願番号】US2010049714

(87)【国際公開番号】WO2011035330

(87)【国際公開日】20110324

【審査請求日】2013年8月27日

(31)【優先権主張番号】61/244,327

(32)【優先日】2009年9月21日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】500297535

【氏名又は名称】フェリング ベスローテン フェンノートシャップ

(74)【代理人】

【識別番号】230104019

【弁護士】

【氏名又は名称】大野 聖二

(74)【代理人】

【識別番号】230111590

【弁護士】

【氏名又は名称】金本 恵子

(74)【代理人】

【識別番号】100105991

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 玲子

(74)【代理人】

【識別番号】100119183

【弁理士】

【氏名又は名称】松任谷 優子

(74)【代理人】

【識別番号】100114465

【弁理士】

【氏名又は名称】北野 健

(74)【代理人】

【識別番号】100156915

【弁理士】

【氏名又は名称】伊藤 奈月

(72)【発明者】

【氏名】ウィズニウスキー，カジミエルツ，エー．

(72)【発明者】

【氏名】シュタインガルト，クラウディオ ダニエル

(72)【発明者】

【氏名】アラガルサミー，スダールコディ

(72)【発明者】

【氏名】ガリヤン，ロバート

【審査官】 松浦 安紀子

(56)【参考文献】

【文献】 米国特許第０４４８３７９４（ＵＳ，Ａ）

【文献】 特開昭５７−０５３４４８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開昭５４−０２０１４０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開昭５６−１５００５０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 BARTH T，MILK-EJECTING AND UTEROTONIC ACTIVITIES OF OXYTOCIN ANALOGUES IN RATS，ENDOCRINOLOGIA EXPERIMENTALIS，VEDA，１９７５年 １月 １日，V9 N1，P35-42

【文献】 Journal fuer Praktische Chemie ，１９７２年，314, 5-6，p.769-79

【文献】 J. Indian Chem. Soc.，１９７６年，53, 7，p.670-2

【文献】 Indian Journal of Chemistry，１９６６年，4, 11，p.488-92

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

構造式Ｉによって表される化合物：

【化1】

［式中、ＷおよびＸは、ＣＨ₂およびＳから独立に選択されるが、両方ともＣＨ₂であることはなく、
Ａは、側鎖が５または６員の芳香族複素環で置換されているアラニン；チロシン；およびフェニル環がハロゲン、Ｃ₁〜₄アルコキシ、Ｃ₁〜₄アルキルヒドロキシ、Ｃ₁〜₄アルキルまたはアミノで置換されているフェニルアラニンから選択されるアミノ酸であり、
Ｂは、イソロイシン；およびα−炭素がＣ₄〜₆シクロアルキルで置換されているグリシンから選択されるアミノ酸であり、
Ｃは、側鎖がヒドロキシル、Ｃ₁〜₄アルコキシ、ハロゲンまたはアジドで置換されていてもよいプロリン、および側鎖がヘテロ原子によって中断されていてもよく、この中断されていてもよい側鎖がＣ₁〜₄アルキルで置換されていてもよいプロリンから選択されるアミノ酸であり、
Ｄは、ロイシン；イソロイシン；およびα−炭素がＣ₄〜₆シクロアルキルで置換されているグリシンから選択されるアミノ酸であり、
Ｅは、グリシンおよびアザグリシンから選択されるアミノ酸であり、
但し、Ｃがプロリンである場合には、Ｅは、アザグリシンでなければならないことを条件とし、さらに、Ｃが４−ヒドロキシプロリンである場合には、Ｂはイソロイシンではないか、あるいはＤはロイシンでないか、あるいはＡはフェニル環がハロゲン、Ｃ₁〜₄アルコキシ、またはＣ₁〜₄アルキルヒドロキシで置換されているフェニルアラニンでなければならないことを条件とし、さらに、Ｃが４−ヒドロキシプロリンでありかつＡがフェニル環がハロゲンで置換されているフェニルアラニンである場合には、Ｂはイソロイシンではないか、またはＤはロイシンでないことを条件とする］。

【請求項2】

Ａが４−ハロフェニルアラニンである、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

Ａが、側鎖が５または６員の芳香族複素環で置換されているアラニンである、請求項１に記載の化合物。

【請求項4】

Ａがチロシンである、請求項１に記載の化合物。

【請求項5】

Ａが、４−メトキシで置換されているフェニルアラニンである、請求項１に記載の化合物。

【請求項6】

Ａが、４−ヒドロキシメチルで置換されているフェニルアラニンである、請求項１に記載の化合物。

【請求項7】

Ｂがイソロイシンである、請求項１に記載の化合物。

【請求項8】

Ｂが、シクロブチルまたはシクロペンチルで置換されているグリシンである、請求項１に記載の化合物。

【請求項9】

Ｃが４−ヒドロキシプロリンである、請求項１に記載の化合物。

【請求項10】

Ｃが４−フルオロプロリンである、請求項１に記載の化合物。

【請求項11】

Ｃがプロリンである、請求項１に記載の化合物。

【請求項12】

Ｄがロイシンである、請求項１に記載の化合物。

【請求項13】

Ｄがイソロイシンである、請求項１に記載の化合物。

【請求項14】

Ｄが、シクロブチルまたはシクロペンチルで置換されているグリシンである、請求項１に記載の化合物。

【請求項15】

Ｅがグリシンである、請求項１に記載の化合物。

【請求項16】

Ｅがアザグリシンである、請求項１に記載の化合物。

【請求項17】

【化2-1】

【化2-2】

【化2-3】

からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。

【請求項18】

医薬品としての使用のための、請求項１から１７のいずれかに記載の化合物。

【請求項19】

活性成分としての治療有効量の請求項１から１７のいずれかに記載の化合物を、薬学的に許容されるアジュバント、賦形剤または担体と併せて含む、医薬組成物。

【請求項20】

腹痛、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、自閉症、勃起機能不全、女性の性的機能不全、陣痛誘発および維持、泌乳誘発および維持、分娩後出血、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、疼痛、不安、外科失血、がん診断、便秘、鬱病、不眠症、乳腺炎、ＯＢ診断（胎盤機能不全について）、骨粗しょう症、胎盤娩出、ならびに創傷治癒／炎症の１つまたは複数の治療のための、請求項１から１７のいずれかに記載の化合物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、オキシトシン受容体アゴニスト化合物、それを含む医薬組成物、そのような化合物の、とりわけ、腹痛、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、自閉症、勃起機能不全、女性の性的機能不全、陣痛誘発および維持、泌乳誘発および維持、分娩後出血、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、疼痛、不安ならびに他の状態の治療用薬剤の製造のための使用、加えて、そのような化合物が投与される、そのような状態の治療方法に関する。

【背景技術】

【0002】

ペプチド性オキシトシン受容体アゴニストは、天然ホルモンオキシトシンおよびカルベトシンを含む。

【0003】

【化1】

【0004】

オキシトシンは、陣痛を誘発するために臨床的に使用される強力な子宮収縮剤であり、泌乳の開始および維持を強化することが示されている（Ｇｉｍｐｌら、Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．、８１、（２００１）、６２９〜６８３；Ｒｕｉｓら、ＢＭＪ、２８３、（１９８１）、３４０〜３４２）。カルベトシン（１−デアミノ−１−カルバ−２−チロシン（Ｏ−メチル）−オキシトシン）も、子宮弛緩および出血多量の制御のために臨床的に使用される強力な子宮収縮剤である。さらなる研究は、オキシトシンアゴニストが、腹痛および腰痛（ｂａｃｋ ｐａｉｎ）を含む炎症および疼痛（Ｙａｎｇ、Ｓｐｉｎｅ、１９、（１９９４）、８６７〜７１）；男性（Ｌｉｄｂｅｒｇら、Ｐｈａｒｍａｋｏｐｓｙｃｈｉａｔ．、１０、（１９７７）、２１〜２５）および女性（Ａｎｄｅｒｓｏｎ−Ｈｕｎｔら、ＢＭＪ、３０９（１９９４）、９２９）両方の性的機能不全；過敏性腸症候群（ＩＢＳ；Ｌｏｕｖｅｌら、Ｇｕｔ、３９、（１９９６）、７４１〜４７）、便秘および胃腸管閉塞（Ｏｈｌｓｓｏｎら、Ｎｅｕｒｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｍｏｔｉｌ．、１７、（２００５）、６９７〜７０４）；自閉症（Ｈｏｌｌａｎｄｅｒら、Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍ．、２８、（２００８）、１９３〜９８）、ストレス（心的外傷後ストレス障害、ＰＴＳＤを含む；Ｐｉｔｍａｎら、Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、４８、１０７〜１１７）、不安（不安障害を含む）および鬱病（Ｋｉｒｓｃｈら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、２５（４９）、１１４８９〜９３；Ｗａｌｄｈｅｒｒら、ＰＮＡＳ、１０４、（２００７）、１６６８１〜８４）；外科失血、分娩後出血の制御（Ｆｕｊｉｍｏｔｏら、Ａｃｔａ Ｏｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．、８５、（２００６）、１３１０〜１４）、陣痛誘発および維持（Ｆｌａｍｍら、Ｏｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．、７０、（１９８７）７０９〜１２）、創傷治癒および感染；乳腺炎および胎盤娩出；ならびに骨粗しょう症の治療に有用であることを示唆している。加えて、オキシトシンアゴニストは、がんおよび胎盤機能不全の両方の診断に有用であり得る。

【0005】

ヒトオキシトシン受容体において十分な効力を持つ化合物を同定および開発するための取り組みが続けられている。オキシトシンの類似体が合成されている。そのような類似体は、Ｇｒｚｏｎｋａら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２６、（１９８３）、５５５〜５５９およびＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２６、（１９８３）、１７８６〜１７８７において、ならびにＥｎｇｓｔｒｏｍら、Ｅ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、３５５、（１９９８）、２０３〜２１０において記載されている。加えて、オキシトシン受容体におけるアンタゴニスト活性を持つオキシトシン類似体が、Ｆｒａｇｉａｄａｋｉら、Ｅ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、（２００７）、７９９〜８０６において記載されている。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明は、強力な長時間作用性化合物を提供することができ、例えば、腹痛、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、自閉症、勃起機能不全、女性の性的機能不全、陣痛誘発および維持、泌乳誘発および維持、分娩後出血、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、疼痛、不安、外科失血、がん診断、便秘、鬱病、不眠症、乳腺炎、ＯＢ診断（胎盤機能不全について）、骨粗しょう症、胎盤娩出、ならびに創傷治癒／炎症の治療において実行可能な代替案および／または改善を提供する。

【発明を実施するための形態】

【0007】

本発明は、構造式（Ｉ）によって表される化合物：

【0008】

【化2】

または薬学的に許容されるその塩
［式中、
ＷおよびＸは、ＣＨ₂およびＳから独立に選択されるが、両方ともＣＨ₂であることはなく、
Ａは、側鎖が５または６員の芳香族複素環で置換されているアラニン；チロシン；および、フェニル環が、例えばフェニル環の４位において、ハロゲン、Ｃ₁〜₄アルコキシ、Ｃ₁〜₄アルキルヒドロキシ、Ｃ₁〜₄アルキルまたはアミノで置換されているフェニルアラニンから選択されるアミノ酸であり、
Ｂは、イソロイシン；およびα−炭素がＣ₄〜₆シクロアルキルで置換されているグリシンから選択されるアミノ酸であり、
Ｃは、例えば側鎖の４位において、ヒドロキシル、Ｃ₁〜₄アルコキシ、ハロゲンまたはアジドで置換されていてもよいプロリン；および側鎖がヘテロ原子によって中断されて（ｉｎｔｅｒｒｕｐｔｅｄ）いてもよく、この中断されていてもよい側鎖がＣ₁〜₄アルキルで置換されていてもよいプロリンから選択されるアミノ酸であり、
Ｄは、ロイシン；ホモロイシン；イソロイシン；およびα−炭素がＣ₄〜₆シクロアルキルで置換されているグリシンから選択されるアミノ酸であり、
Ｅは、グリシンおよびアザグリシンから選択されるアミノ酸であり、
但し、Ｃが４−ヒドロキシプロリンである場合には、Ａは、フェニル環がハロゲンで置換されているフェニルアラニン、またはＣ₁〜₄アルキルヒドロキシのいずれかでなければならず、Ｃが４−ヒドロキシプロリンでありかつＡがフェニル環がハロゲンで置換されているフェニルアラニンである場合には、ＢまたはＤのいずれかは、α−炭素がＣ₄〜₆シクロアルキルで置換されているグリシンでなければならないか、あるいはＤはイソロイシンでなければならないことを条件とし、
さらに、Ａが、フェニル環がＣ₁〜₄アルキルまたはハロゲンで置換されているフェニルアラニンである場合には、Ｃは、プロリン、または側鎖がハロゲンで置換されているプロリンでなければならないことを条件とし、
さらに、Ａが、フェニル環がハロゲンで置換されているフェニルアラニンである場合には、ＢまたはＤのいずれかは、α−炭素がＣ₄〜₆シクロアルキルで置換されているグリシンでなければならないか、あるいはＤはイソロイシンでなければならないことを条件とする］
に関する。

【0009】

上記の式Ｉによって表されるさらなる化合物［式中、Ａは、４−ハロフェニルアラニン、例えばＣｐａ（４−クロロフェニルアラニン）；４−ブロモフェニルアラニンである、あるいは、式中、Ａは、側鎖が５または６員の芳香族複素環で置換されているアラニン、例えば、Ａｌａ（２−Ｆｕｒ）（２−フリルアラニン）、Ａｌａ（３−Ｆｕｒ）（３−フリルアラニン）；２−Ｔｈｉ（２−チエニルアラニン）；３−Ｔｈｉ（３−チエニルアラニン）；２−または３−ピロリルアラニン；２−、３−または４−ピリジルアラニン；２−、４−または５−イミダゾリルアラニン；２−、４−または５−チアゾリルアラニン；２−または５−チアジアゾリル；５−テトラゾリル等である］が、本発明において提供される。上記の式Ｉによって表されるさらなる化合物［式中、Ａはチロシンであるか、あるいはＡは、フェニル環の４位においてＣ₁〜₄アルコキシ基またはアミノ基で置換されているフェニルアラニン、例えば、Ｔｙｒ（Ｍｅ）（４−メトキシフェニルアラニン）；４−エトキシフェニルアラニン；Ａｐｈ（４−アミノフェニルアラニン）；４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニルアラニン等である］もまた本発明において提供される。上記の式Ｉによって表されるさらなる化合物［式中、Ａは、フェニル環の４位においてＣ₁〜₄アルキルヒドロキシル、Ｃ₁〜₄アルキルまたはハロで置換されているフェニルアラニン、例えば、Ｐｈｅ（４−Ｅｔ）（４−エチルフェニルアラニン）；４−メチルフェニルアラニン；Ｐｈｅ（４−ＣＨ₂ＯＨ）（４−ヒドロキシメチルフェニルアラニン）；４−ヒドロキシエチルフェニルアラニン；Ｐｈｅ（Ｂｒ）（４−ブロモフェニルアラニン）；４−クロロフェニルアラニン；４−フルオロフェニルアラニン等である］もまた本発明において提供される。

【0010】

上記の式Ｉによって表されるさらなる化合物［式中、Ｂはイソロイシンであるか、または、Ｇｌｙ（ｃＰｅ）（シクロペンチルグリシン）、Ｇｌｙ（ｃＢｕ）（シクロブチルグリシン）、シクロヘキシルグリシン等、Ｃ₄〜₆シクロアルキルで置換されているグリシンである］が、本発明において提供される。

【0011】

上記の式Ｉによって表されるさらなる化合物［式中、Ｃは、プロリン環の４位においてヒドロキシ、Ｃ₁〜₄アルコキシ、ハロまたはアジド基で置換されていてもよいプロリン、例えば、Ｈｙｐ（４−ヒドロキシプロリン）；Ｈｙｐ（Ｍｅ）（４−メトキシプロリン）；Ｐｒｏ（Ｆ）（４−フルオロプロリン）；Ｐｒｏ（Ｎ₃）（４−アジドプロリン）等である］が、本発明において提供される。上記の式Ｉによって表されるさらなる化合物［式中、Ｂは、プロリン環においてヘテロ原子で中断され、かつプロリン環をＣ₁〜₄アルキルで置換されていてもよいプロリン、例えば、Ｔｈｚ（４−チアプロリン）またはＤｍｔ（５，５−ジメチルチアプロリン）等である］もまた、本発明において提供される。

【0012】

上記の式Ｉによって表されるさらなる化合物［式中、Ｄは、ロイシン、Ｈｏｌ（ホモロイシン）、イソロイシン、および、Ｇｌｙ（ｃＰｅ）（シクロペンチルグリシン）、Ｇｌｙ（ｃＢｕ）（シクロブチルグリシン）、シクロヘキシルグリシン等、Ｃ₄〜₆シクロアルキルで置換されているグリシンである］が、本発明において提供される。

【0013】

上記の式Ｉによって表されるさらなる化合物［式中、ＥはグリシンまたはＡｚＧｌｙ（アザグリシン）である］が、本発明において提供される。

【0014】

医薬品としての使用のための、一般構造式Ｉによって上記で記載した化合物およびその特定の構造変異体もまた、本発明において提供される。活性成分としての治療有効量の少なくとも１種の上記で記載した化合物を、少なくとも１種の薬学的に許容されるアジュバント、賦形剤または担体と併せて含む医薬組成物もまた、本発明において提供される。

【0015】

本発明の目的のために、下記の術語が使用される。

【0016】

Ｃ₁〜₄アルキルは、該表現が、問題となっているアルキル鎖の結合部位ともその構造異性体とも関係していない場合、ｉｓｏ−、ｓｅｃ−およびｔｅｒｔ−立体配置を含む１から４個までの炭素原子を有する置換基を意味する。

【0017】

Ｃ₄〜₆シクロアルキルは、４から６個までの炭素原子を含有する炭素環系を意味する。該環系は、炭素原子間に不飽和結合を含有してもよく、例えば、シクロヘキセニル、シクロペンテニル、シクロヘキサジエニル等を含み得る。

【0018】

５員の芳香族複素環系は、５個の環原子を有する単環式芳香族環系であり、ここで、１、２、３または４個の環原子は、Ｎ、ＯおよびＳから独立に選択される。そのような環系は、例えば、チエニル、フリル、イミダゾリル、ピロリル、ピラゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル等であり得る。

【0019】

６員の芳香族複素環系は、６個の環原子を有する単環式芳香族環系であり、ここで、１、２、３または４個の環原子は、Ｎ、ＯおよびＳから独立に選択される。そのような環系は、例えば、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル等であり得る。

【0020】

置換基部分は、例えば、ハロゲン（フッ素、塩素、臭素）原子、およびアルキル、シクロアルキル、ヒドロキシ（−ＯＨ）、アルコキシ（−Ｏ−アルキル）、アルキルチオ（−Ｓ−アルキル）、アルキルヒドロキシ（−アルキル−ＯＨ）、アジド（Ｎ₃）、アミノ（−ＮＲ₁Ｒ₂、ここで、Ｒ₁およびＲ₂は、独立に、水素またはＣ₁〜₄アルキルであってよい）、または５もしくは６員の複素環式芳香族基であってよい。

【0021】

薬学的に許容される塩の例は、酸付加塩、例えば、塩酸等のヒドロハロゲン酸、ならびに硫酸、リン酸および硝酸等の鉱酸、ならびに、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、エンボン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、ハロベンゼンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トルエンスルホン酸およびナフタレンスルホン酸等の、脂肪族、脂環式、芳香族または複素環式のスルホン酸またはカルボン酸との反応によって形成される塩を含む。

【0022】

特に、本明細書は、以下に開示するもの等の特に例示される化合物に関するが、これらに限定されない。

【0023】

【化3-1】

【化3-2】

【化3-3】

または薬学的に許容されるその塩。

【0024】

さらに、本発明は、医薬品としての使用のための上記で説明した化合物に関する。

【0025】

したがって、本発明は、活性成分としての上記で説明した化合物を、薬学的に許容されるアジュバント、賦形剤または担体と併せて含む医薬組成物にも関する。

【0026】

医薬組成物は、経口、静脈内、筋肉内、局所、腹腔内、経鼻、口腔内、眼内、耳内、舌下もしくは皮下投与用に、または、例えば、エアゾールもしくは空気懸濁微粉末の形態で、気道を介する投与用に適合され得る。故に、該組成物は、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、微粒子剤、顆粒剤、シロップ剤、懸濁剤、液剤、経皮パッチ剤または坐剤の形態であってよい。

【0027】

本発明による組成物は、上記で概説した化合物の２つ以上を含んでもよいことに留意すべきである。

【0028】

本医薬組成物は、例えば、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、香味剤、保存剤、着色剤およびそれらの任意の混合物から選択される少なくとも１種のさらなる添加物を含んでもよい。そのようなおよび他の添加物の例は、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ」；Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ編、第３版、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、ＵＳＡおよびＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ ＵＫ、２０００において見られる。

【0029】

本医薬組成物は、例えば、皮下、静脈内または筋肉内投与用に適合され得る。該組成物は、好ましくはレシピエントの血液と等張の、本発明の化合物の滅菌水性調製物を含み得る。この水性調製物は、適切な分散剤または浸潤剤および懸濁化剤を使用し、公知の方法に従って製剤化され得る。静脈内製剤ＤＵＲＡＴＯＣＩＮ（登録商標）（カルベトシン）は、本明細書において開示される発明化合物にも適用可能である適切な医薬製剤の例示である。水、リンゲル液および等張塩化ナトリウム溶液は、例示的な許容される賦形剤である。調製物は、リン酸ナトリウム、クエン酸、塩化ナトリウム、グリセリン、ソルビトール溶液、メチルパラベン、プロピルパラベンおよびクロロブタノール等の添加剤も含み得る。

【0030】

加えて、本発明は、腹痛、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、自閉症、勃起機能不全、女性の性的機能不全、陣痛誘発および維持、泌乳誘発および維持、分娩後出血、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、疼痛、不安、外科失血、がん診断、便秘、鬱病、不眠症、乳腺炎、ＯＢ診断（胎盤機能不全について）、骨粗しょう症、胎盤娩出、ならびに創傷治癒／炎症等の１つまたは複数の医学的状態の治療のための、またはその治療用薬剤の製造のための、上記で概説した化合物の使用に関する。本明細書において、不安という用語は不安障害を含む。不安障害は、副次的適応症（ｓｕｂ ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ）である全般性不安障害、パニック障害、広場恐怖、恐怖症、社会不安障害、強迫神経障害、心的外傷後ストレス障害、および分離不安を含む。

【0031】

別の実施形態において、本発明は、腹痛、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、自閉症、勃起機能不全、女性の性的機能不全、陣痛誘発および維持、泌乳誘発および維持、分娩後出血、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、疼痛、不安、外科失血、がん診断、便秘、鬱病、不眠症、乳腺炎、ＯＢ診断（胎盤機能不全について）、骨粗しょう症、胎盤娩出、ならびに創傷治癒／炎症の治療方法に関する。

【0032】

本発明による化合物の典型的な投薬量は、広範囲内で変動し、各患者の個々のニーズおよび投与経路等の種々の要因によって決まることになる。当技術分野において通常の技術を有する医師であれば、目の前の状況に合わせて投薬量を最適化することができよう。

【0033】

例えば、本発明の組成物が分娩後出血用（例えば、静脈内または筋肉内投与用）のものであれば、典型的な用量は、体重１ｋｇ当たり０．５から２００μｇの範囲内とすることができる。当業者または医師は、目の前の状況に適応させるために、この投薬量範囲および実用的な実施に関係する変形形態を考慮することができる。

【0034】

さらなる例において、本発明の組成物は、例えば、過敏性腸症候群、泌乳促進および維持、または性的機能不全の治療のために、鼻腔内剤形として投与され得る。この例において、該組成物は、例えば１、２または３回分の小用量（例えばパフ（ｐｕｆｆｓ））に分割した投薬量で投与されてもよく、例えば、一方または両方の鼻孔に到達されてもよい。鼻腔内経路による投与の投薬量例は、体重１ｋｇ当たり０．０５〜１５．０μｇとすることができる。

【0035】

さらなる例において、本発明の組成物は、例えば不安障害または鬱病を治療するための、皮下（ｓｃ）、鼻腔内または口腔内投与用のものであってよい。皮下（ｓｃ）または口腔内投与の投薬量例は、体重１ｋｇ当たり０．５〜１０００μｇである。投薬量は、例えば、必要に応じて日に何度でも、例えば１日１回または２回投与するためのものであってよい。

【0036】

使用される略号は、
ＡｃＯＨ 酢酸
Ｂｏｃ ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
Ｂｕａ 酪酸
ＣＨ₃ＣＮ アセトニトリル
ＤＣＣ Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＩＣ Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
Ｆｍｏｃ ９−フルオレニルメトキシカルボニル
ｈ 時間（複数可）
ＨＢＴＵ Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＯＢｔ １−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＭｅＯＨ メタノール
ＮＭＭ ４−メチルモルホリン
ＰｙＢＯＰ ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリスピロリジンホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ｔＢｕ ｔｅｒｔ−ブチル
ｔＢｕＯＨ ｔｅｒｔ−ブチルアルコール
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＩＳ トリイソプロピルシラン
Ｔｒｔ トリチル［トリフェニルメチル、（Ｃ₆Ｈ₅）₃Ｃ−］
である。

【0037】

別段の指定がない限り、Ｌ−アミノ酸を使用し、従来のアミノ酸用語に準拠している。

【0038】

実験（合成）
アミノ酸誘導体および樹脂（ｒｅｓｉｎ）は、商業的供給業者（Ｂａｃｈｅｍ、ＢｉｏＱｕａｄｒａｎｔ、ＣｈｅｍＩｍｐｅｘ、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、ＲＳＰ Ａｍｉｎｏ ＡｃｉｄｓおよびＳｙｎｔｈｅｔｅｃｈ）から購入した。Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（ｔ−ブトキシカルボニルプロピル）−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｈｃｙ（ｔ−ブトキシカルボニルエチル）−ＯＨは、文献［Ｐｒｏｃｈａｚｋａら、Ｃｏｌｌｅｃｔ．Ｃｚｅｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．、５７、（１９９２）、１３３５、およびＷｉｓｎｉｅｗｓｋｉら、ＷＯ０３／０７２５９７］に従って合成した。他の化学物質および溶媒は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ＦｌｕｋａおよびＡｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓから提供された。

【0039】

本明細書における化合物は、Ｆｍｏｃ方法論を利用する固相ペプチド化学において、標準的な方法により合成した。Ｆｍｏｃ保護アミノ酸のカップリングはすべて、ＤＩＣ／ＨＯＢｔ／ＤＭＦで媒介した。Ｆｍｏｃ基の除去は、ＤＭＦ中２０％のピペリジンで実施した。

【0040】

別段の定めがない限り、反応はすべて室温で実施した。上で引用した参考文献に加えて、下記の標準的な参考文献が、一般的な実験設定について、ならびに必要とされる出発材料および試薬の有用性について、さらなるガイダンスを提供する。
ＫａｔｅｓおよびＡｌｂｅｒｉｃｉｏ編、「Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ」、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｂａｓｅｌ、２０００；
ＳｔｅｗａｒｔおよびＹｏｕｎｇ、「Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、１９８４；
Ｂｉｓｅｌｌｏら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、（１９９８）、２７３、２２４９８〜２２５０５；ならびに
Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６３）、８５、２１４９〜２１５４。

【0041】

合成されたペプチドの純度は、分析用逆相ＨＰＬＣによって決定できる。該ペプチドの構造的完全性（ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ）は、アミノ酸分析およびエレクトロスプレー質量分析を使用して確認できる。

【0042】

別段の指定がない限り、アミノ酸カップリングはすべてＦｍｏｃ方法論に従った。

【0043】

６位に導入されたアミノ酸誘導体は、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｈｃｙ（ｔ−ブトキシカルボニルエチル）−ＯＨまたはＦｍｏｃ−Ｃｙｓ（ｔ−ブトキシカルボニルプロピル）−ＯＨの１つであった。６位がＦｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨであるペプチド類似体は、Ｍｐａ（Ｔｒｔ）−ＯＨと樹脂に結合したオクタペプチド残基のＮ末端とのカップリングを必要とした。

【0044】

リンクアミド樹脂支持体を使用して合成したペプチドを、Ｂｏｃ、トリチルおよびｔ−ブチル等の酸に不安定な保護基と一緒に、ＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ₂Ｏ ９５／２．５／２．５（ｖ／ｖ／ｖ）溶液で樹脂から切断した。樹脂からの切断後、前記ペプチドを環化した。

【0045】

ジスルフィド（環）形成を経由する直鎖状ノナペプチドの環化は、１０％ＴＦＡ（水溶液）に溶解した直鎖状ペプチドの、ヨウ素での酸化によって実現した。アミド結合形成を経由する直鎖状ノナペプチドの環化は、高希釈のＨＢＴＵ／ＤＩＰＥＡ／ＤＭＦまたはＰｙＢＯＰ／ＤＩＰＥＡ／ＤＭＦでの媒介によって実現した。

【0046】

トリエチルアンモニウムリン酸緩衝液（水溶液）中での分取ＨＰＬＣによってペプチドを精製し、酢酸（水溶液）／アセトニトリル緩衝系で脱塩した。９７％を超える純度を持つ画分をプールし、凍結乾燥させた。

【0047】

すべての合成において、分析用ＨＰＬＣは、Ｖｙｄａｃ Ｃ１８、５μｍ、４．６×２５０ｍｍカラムを使用するｗａｔｅｒｓ６００液体クロマトグラフにおいて、２ｍｌ／分の流速で実施した。分取ＨＰＬＣは、プレパック４７×３００ｍｍカートリッジを使用するＷａｔｅｒｓ２０００液体クロマトグラフにおいて、１００ｍｌ／分の流速で実施した。最終化合物分析は、Ｖｙｄａｃ Ｃ１８、５μｍ、２．１×２５０ｍｍカラムを使用する１１００Ａｇｉｌｅｎｔ液体クロマトグラフにおいて、０．３ｍｌ／分の流速で実施した。質量スペクトルは、Ｆｉｎｎｉｇａｎ ＭＡＴ分光計で記録した。

【0048】

合成をさらに例証するために、下記の詳細な例が提供される。

【0049】

化合物７；カルバ−１−［Ｃｐａ²，Ｐｒｏ（４−Ｆ）⁷］ｄＯＴの調製：
使用したアミノ酸誘導体は、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ（４−Ｆ）−ＯＨ（ＢｉｏＱｕａｄｒａｎｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（ｔ−ブトキシカルボニルプロピル）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨおよびＢｏｃ−Ｃｐａ−ＯＨ（Ｓｙｎｔｈｅｔｅｃｈ）であった。製造業者が明記されていない誘導体は、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌから入手したものである。Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（ｔ−ブトキシカルボニルプロピル）−ＯＨを上記の通りに合成した。

【0050】

完全に保護されたペプチド樹脂は、０．５ｇ（０．１２５ｍｍｏｌ）のテンタゲルリンクアミド樹脂（Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）から出発し、手作業により合成した。３倍過剰のアミノ酸誘導体とのＤＩＣ／ＨＯＢｔ／ＤＭＦに媒介される単一カップリングを実施した。Ｆｍｏｃ基をＤＭＦ中２０％のピペリジンで除去した。固相合成が完了したら、樹脂をＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ₂Ｏ ９６／２．５／１．５（ｖ／ｖ／ｖ）溶液（３０ｍｌ）で１．５時間処理し、濾過除去した。濾液を真空濃縮し、粗製の直鎖状ペプチドをジエチルエーテルで沈殿させた。沈殿物をＤＭＦ（１５０ｍｌ）に溶解し、ＤＩＰＥＡ（０．１７４ｍｌ）およびＨＢＴＵ（５０ｍｇ）を、激しく撹拌した溶液に添加した。反応を分析用ＨＰＬＣによってモニターした。反応溶液を真空濃縮し、残渣をＡｃＯＨ／ＣＨ₃ＣＮ／Ｈ₂Ｏに溶解した。混合物をＨＰＬＣカラムに注入し（ｌｏａｄｅｄ ｏｎｔｏ）、ｐＨ５．２のトリエチルアンモニウムリン酸緩衝液を使用して精製した。化合物をアセトニトリルの勾配で溶出した。９７％を超える純度を持つ画分をプールし、水（２倍量）で希釈し、２％ＡｃＯＨ（水溶液）で予め平衡させたカラムに注入した。所望の化合物をＣＨ₃ＣＮの高速（３％／分）勾配で溶出した。所望の生成物を含有する画分をプールし、凍結乾燥させた。５７．９ｍｇ（約４０％収率；出発樹脂の注入量（ｌｏａｄｉｎｇ）に基づく、およびペプチド含有量８５％と推定）の白色非晶質粉末が得られた。ＨＰＬＣ：Ｒｔ＝１２．４分、勾配：０．５分間５％Ｂ、０．５分以内５→４０％Ｂ、２０分にわたって４０→６０％Ｂ、および５分間１００％Ｂ、ｔ＝４０℃、溶媒Ａ ０．０１％ＴＦＡ（水溶液）、溶媒Ｂ ７０％ＣＨ₃ＣＮ、０．０１％ＴＦＡ（水溶液）；純度：９９．６％；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ⁺）：予測値１０１０．４、観測値１０１０．５。

【0051】

化合物１２；カルバ−６−［Ｃｐａ²，Ｈｙｐ⁷，Ｇｌｙ（ｃＰｅ）⁸］ｄＯＴの調製：
使用したアミノ酸誘導体は、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ（ｃＰｅ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｙｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）、Ｆｍｏｃ−Ｈｃｙ（ｔ−ブトキシカルボニルエチル）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨおよびＢｏｃ−Ｃｐａ−ＯＨ（Ｓｙｎｔｈｅｔｅｃｈ）であった。製造業者が明記されていない誘導体は、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌから入手した。Ｆｍｏｃ−Ｈｃｙ（ｔ−ブトキシカルボニルエチル）−ＯＨは上記の通りに合成した。

【0052】

完全に保護されたペプチド樹脂は、０．２ｇのテンタゲルリンク樹脂（０．０５ｍｍｏｌ、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）から出発し、手作業により合成した。３倍過剰のアミノ酸誘導体とのＤＩＣ／ＨＯＢｔ／ＤＭＦに媒介される単一カップリングを実施した。Ｆｍｏｃ基をＤＭＦ中２０％のピペリジンで除去した。固相合成が完了したら、樹脂をＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ₂Ｏ ９６／２．５／１．５（ｖ／ｖ／ｖ）溶液（２０ｍｌ）で１．５時間処理し、濾過除去した。濾液を真空濃縮し、粗製の直鎖状ペプチドをジエチルエーテルで沈殿させた。沈殿物をＤＭＦ（１００ｍｌ）に溶解し、ＤＩＰＥＡ（０．０７ｍｌ）およびＨＢＴＵ（２０ｍｇ）を、激しく撹拌した溶液に添加した。反応を分析用ＨＰＬＣによってモニターした。反応溶液を真空濃縮し、残渣をＡｃＯＨ／ＣＨ₃ＣＮ／Ｈ₂Ｏに溶解した。混合物をＨＰＬＣカラムに注入し、ｐＨ５．２のトリエチルアンモニウムリン酸緩衝液を使用して精製した。化合物をアセトニトリルの勾配で溶出した。９７％を超える純度を持つ画分をプールし、水（２倍量）で希釈し、２％ＡｃＯＨ（水溶液）で予め平衡させたカラムに注入した。所望の化合物を高速（３％／分）勾配で溶出した。所望の生成物を含有する画分をプールし、凍結乾燥させた。

【0053】

４０．０ｍｇ（約６６％収率；出発樹脂の注入量に基づく、およびペプチド含有量８５％と推定）の白色非晶質粉末が得られた。ＨＰＬＣ：Ｒｔ＝１０．８分、勾配：０．５分間５％Ｂ、０．５分以内５→４０％Ｂ、２０分にわたって４０→６０％Ｂ、および５分間１００％Ｂ、ｔ＝４０℃、溶媒Ａ ０．０１％ＴＦＡ（水溶液）、溶媒Ｂ ７０％ＣＨ₃ＣＮ、０．０１％ＴＦＡ（水溶液）；純度：１００．０％；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ⁺）：予測値１０２０．５、観測値１０２０．１。

【0054】

化合物２０；［ＡｚＧｌｙ⁹］ｄＯＴの調製：
化合物は、完全に保護されたＮ末端ヘプタペプチドカルボン酸およびＣ末端ジペプチドＨ−Ｌｅｕ−ＡｚＧｌｙ−ＮＨ₂のフラグメント縮合によって得られた。使用したアミノ酸誘導体は、ヘプタペプチドにはＦｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨおよびＭｐａ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、ならびにＣ末端ジペプチドにはＢｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（Ｂａｃｈｅｍ）であった。製造業者が明記されていない誘導体は、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌから入手した。

【0055】

完全に保護されたヘプタペプチド樹脂は、１．５ｇ（０．９ｍｍｏｌ）のＨ−Ｐｒｏ−２−ＣｌＴｒｔ樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）から出発し、手作業により合成した。３倍過剰のアミノ酸誘導体とのＤＩＣ／ＨＯＢｔ／ＤＭＦに媒介される単一カップリングを実施した。Ｆｍｏｃ基をＤＭＦ中２０％のピペリジンで除去した。保護された（１〜７）ペプチドを、３０％ＨＦＩＰ／ＤＣＭ（６０ｍｌ）で１．５時間、樹脂から切断した。溶媒を蒸発させ、生成物をジエチルエーテルで沈殿させ、それ以上精製することなくその後のフラグメント縮合において使用した。Ｃ末端ジペプチドは、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨの、ＤＣＣ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡによって媒介されるセミカルバジド（Ｈ₂Ｎ−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ₂・ＨＣｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）とのカップリングにより、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＡｚＧｌｙ−ＮＨ₂として合成した。ジペプチド（０．４６ｇ）を、ＴＦＡ／ＤＣＭ（４０ｍｌ）で１時間処理した。溶媒を蒸発させ、残渣をＤＭＦ（５ｍｌ）に溶解した。次いで、ＤＭＦ（１０ｍｌ）中のヘプタペプチド（１．６７ｇ）の溶液、続いてＤＩＰＥＡ（３ｍｌ）およびＰｙＢＯＰ（０．５４６ｇ）を添加した。１時間後、溶媒を蒸発させ、残渣をＴＩＳ／ＴＦＡ ９８／２（ｖ／ｖ）カクテル（５０ｍｌ）で１時間処理した。反応混合物を真空濃縮し、粗製の直鎖状ペプチドをジエチルエーテルで沈殿させた。沈殿物を未希釈のＴＦＡ（５０ｍｌ）に溶解し、磁気撹拌した５％アセトニトリル水溶液（５００ｍｌ）に注ぎ、メタノール中０．１ＭのＩ₂を黄色が持続するまで添加することによってペプチドを酸化させた。過剰のヨウ素を固体アスコルビン酸（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で還元し、濃アンモニア（水溶液）を添加することによって溶液のｐＨを約４に調整した。混合物をＨＰＬＣカラムに注入し、ｐＨ５．２のトリエチルアンモニウムリン酸緩衝液を使用して精製した。化合物をアセトニトリルの勾配で溶出した。９７％を超える純度を持つ画分をプールし、水（２倍量）で希釈し、２％ＡｃＯＨ（水溶液）で予め平衡させたカラムに注入した。所望の化合物をアセトニトリルの高速（３％／分）勾配で溶出した。所望の生成物を含有する画分をプールし、凍結乾燥させた。４１１．９ｍｇ（約３９％収率；使用したＮ末端ヘプタペプチドの量に基づき、およびペプチド含有量８５％と推定）の白色非晶質粉末が得られた。ＨＰＬＣ：Ｒｔ＝１７．３分、勾配：１分以内０→２０％Ｂ、２０分にわたって２０→４０％Ｂ、および５分間１００％Ｂ、ｔ＝４０℃、溶媒Ａ ０．０１％ＴＦＡ（水溶液）、溶媒Ｂ ７０％ＣＨ₃ＣＮ、０．０１％ＴＦＡ（水溶液）；純度：１００．０％；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ⁺）：予測値９９３．４、観測値９９３．２。

【0056】

他の化合物は、これらの合成手順の類似の変形形態によって調製した。

【0057】

【表1-1】

【表1-2】

【0058】

実験（生物学的試験）
インビトロ受容体アッセイ：
ｈＯＴ受容体に対する例示化合物のアゴニスト活性は、蛍ルシフェラーゼの発現を調節する細胞内カルシウム応答性プロモーター要素を含有するレポーターＤＮＡとともに、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株にｈＯＴ受容体発現ＤＮＡを一過性にトランスフェクトすること、またはｈＯＴ受容体を安定発現しているＣＨＯ細胞株に同じレポーターＤＮＡ構成をトランスフェクトすることのいずれかによる、転写レポーター遺伝子アッセイにおいて決定した。このアッセイについてのさらなるガイダンスは、例えば、Ｂｏｓｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、（１９９６）、２７１（１８）、１０４２９〜１０４３２を参照されたい。細胞を、用量当たり１０倍に希釈した化合物の連続希釈物に５時間暴露し、続いて、細胞の溶解、ルシフェラーゼ活性の決定、ならびに非線形回帰により化合物の効能およびＥＣ₅₀値の決定を行った。各実験において、カルベトシンを内部標準として使用した。データは、実施した個々のアッセイにおいて正規変動（ｎｏｒｍａｌ ｖａｒｉａｔｉｏｎ）を示した。

【0059】

本明細書において具体的に記載されている化合物についてのインビトロアッセイ結果（ナノモル／ｌ（ｎＭ）で表現される幾何平均としてのｈＯＴ効力を表すＥＣ₅₀値）は、約０．０１ｎＭから約３．９０ｎＭまで、例えば約０．０１ｎＭから約０．７５ｎＭまで、または、例えば約０．０１ｎＭから約０．５０ｎＭまで、または約０．０１ｎＭから約０．２５ｎＭまで、または約０．０１ｎＭから約０．１０ｎＭまでの範囲内であった。試験した各化合物は、これらのアッセイで、ｈＯＴにおいてカルベトシンよりも強力であった。

【0060】

前述の結果は、本明細書において開示される化合物が本発明の範囲内であり、例えば、腹痛、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、自閉症、勃起機能不全、女性の性的機能不全、陣痛誘発および維持、泌乳誘発および維持、分娩後出血、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、疼痛、不安、外科失血、がん診断、便秘、鬱病、不眠症、乳腺炎、ＯＢ診断（胎盤機能不全について）、骨粗しょう症、胎盤娩出、ならびに創傷治癒／炎症を含む状態について、ヒトの安全かつ効果的な治療において有用となり得ることを示している。

【0061】

本発明の範囲を、下記の請求項においてさらに定義する。