特許 5763772 ガドリニウム錯体を含有するＭＲＩ造影剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5763772

(24)【登録日】2015年6月19日

(45)【発行日】2015年8月12日

(54)【発明の名称】ガドリニウム錯体を含有するＭＲＩ造影剤

(51)【国際特許分類】

   C07D 257/02 20060101AFI20150723BHJP

   A61K 49/00 20060101ALI20150723BHJP

   C07F 5/00 20060101ALN20150723BHJP

【ＦＩ】

   C07D257/02CSP

   A61K49/00 C

   !C07F5/00 D

【請求項の数】9

【全頁数】26

(21)【出願番号】特願2013-531463(P2013-531463)

(86)(22)【出願日】2010年12月21日

(65)【公表番号】特表2013-540120(P2013-540120A)

(43)【公表日】2013年10月31日

(86)【国際出願番号】KR2010009151

(87)【国際公開番号】WO2012043933

(87)【国際公開日】20120405

【審査請求日】2013年5月24日

(31)【優先権主張番号】10-2010-0095471

(32)【優先日】2010年9月30日

(33)【優先権主張国】KR

(73)【特許権者】

【識別番号】510229201

【氏名又は名称】キョンブク ナショナル ユニバーシティ インダストリー−アカデミック コーオペレーション ファウンデーション

(74)【代理人】

【識別番号】100107515

【弁理士】

【氏名又は名称】廣田 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100107733

【弁理士】

【氏名又は名称】流 良広

(74)【代理人】

【識別番号】100115347

【弁理士】

【氏名又は名称】松田 奈緒子

(72)【発明者】

【氏名】キム・テジョン

(72)【発明者】

【氏名】チャン・ヨン ミン

(72)【発明者】

【氏名】キム・ヒギョン

(72)【発明者】

【氏名】ク・ソンウク

【審査官】 春日 淳一

(56)【参考文献】

【文献】 米国特許出願公開第２０１０／０２２７７９４（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 特表２００５−５０４７４５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２００４／０６５４０７（ＷＯ，Ａ２）

【文献】 Raghunand N et al，J Med Chem，２０１０年，Vol.53，p.6747-57

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ，Ａ６１Ｋ

ＣＡｐｌｕｓ，ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記一般式１の構造を有するＤＯ３Ａ−トラネキサム酸又はそのエステル化合物：

【化1】

式中、Ｒは、Ｈ、Ｍｅ、Ｅｔ、（ＣＨ_２）_２ＯＨ、ＣＨ_２ＯＭｅ、及びＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２から選択される基である。

【請求項2】

下記工程を含む請求項１に記載のＤＯ３Ａ−トラネキサム酸又はそのエステル化合物の製造方法：
ａ）トランス−４（アミノメチル）シクロヘキサンエチルカルボキシレートハイドロクロライドにブロモアセチルブロマイドを添加し、撹拌する工程；
ｂ）前記混合物にＤＯ３Ａ−（^ｔＢｕＯ）_３を添加し、撹拌する工程；
ｃ）前記混合物にＴＦＡを添加し、ｔｅｒｔ−ブチル基を脱保護させる工程；
ｄ）減圧下で溶媒を完全に除去し、メタノールを加えて前記混合物を溶解した後、シリカゲルクロマトグラフィーを行う工程；及び
ｅ）前記クロマトグラフィーから得た物質を、真空下で乾燥し、ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸又はそのエステル化合物を得る工程。

【請求項3】

工程ａ）のトランス−４（アミノメチル）シクロヘキサンエチルカルボキシレートハイドロクロライドの代わりに、アリル−トランス−４（アミノメチル）シクロヘキサンカルボキシレートハイドロクロライドを添加する請求項２に記載の製造方法。

【請求項4】

請求項１に記載のＤＯ３Ａ−トラネキサム酸又はそのエステル化合物を含む錯体リガンド（Ｌ）用組成物。

【請求項5】

請求項１に記載のＤＯ３Ａ−トラネキサム酸又はそのエステル化合物をリガンド（Ｌ）として含み、前記リガンドに配位結合する金属原子を含む錯体。

【請求項6】

金属原子が、ガドリニウム（Ｇｄ）である請求項５に記載の錯体。

【請求項7】

請求項５〜６のいずれかに記載の錯体を、有効成分として含有する磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）造影剤。

【請求項8】

造影剤が、肝特異性と血管プールとの二重造影機能を有する請求項７に記載の磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）造影剤。

【請求項9】

造影剤が、高緩和率、向上した熱力学的及び速度論的な安定性を有する請求項７に記載の磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）造影剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ガドリニウム錯体を含有するＭＲＩ造影剤に関し、より具体的には、一般式１で表されるＤＯ３Ａ−トラネキサム酸又はそのエステル化合物に関する。

【背景技術】

【0002】

磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）は、磁場中で水素原子のスピンが緩和する現象を用いて、身体の解剖学的、生理学的、生化学的情報画像を得る方法であって、ヒト又は動物の身体機関を非侵襲的に、リアルタイムで画像化できる優れた画像化技術の一つである。

【0003】

生命科学及び医学分野において、ＭＲＩを多様かつ精密に活用するために、外部から物質を注入し、画像コントラストを増加させるが、この時用いられる物質を造影剤と呼ぶ。ＭＲＩイメージ上で組織間のコントラストは、組織内の水分子核スピンの平衡状態に戻る緩和作用が組織によって異なるため生じる現象であり、造影剤は、このような緩和作用に影響を及ぼし、組織間緩和度の差を広げ、ＭＲＩシグナルの変化を誘発して、組織間のコントラストをより鮮明にする役割をする。造影剤は、その特徴と機能、注入する対象により精密さに差が生じる。造影剤を用いて増強されたコントラストは、特定生体器官と組織との周辺と画像信号を上げたり下げたりして、より鮮明に画像化するようにする。ＭＲＩイメージを得ようとする身体部位の画像信号を相対的に高くする造影剤を‘ポジ造影剤’といい、これとは逆に、周囲より相対的に低くする造影剤を‘ネガ造影剤’という。

【0004】

ヒトにおける磁気共鳴画像法での使用のために承認された造影剤には、磁気緩和率が約４．７ｍＭ^−１ｓ^−１（２０ＭＨｚ、２９８Ｋ）を示すジエチレントリアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’−ペンタアセテート、（Ｎ−Ｍｅ−クルカミン）_２［Ｇｄ（ＤＴＰＡ）（Ｈ_２Ｏ）］（マグネビスト、シェリング社製）のようなイオン化Ｇｄ（ＩＩＩ）錯体と、磁気緩和率が４．４ｍＭ^−１ｓ^−１（２０ＭＨｚ、２９８Ｋ）を示す［Ｇｄ（ＤＴＰＡ−ビスメチルアミド）（Ｈ_２Ｏ）］（オムニスキャン、ナイコメッド社製）のような中性Ｇｄ（ＩＩＩ）錯体とがある。

【0005】

このような磁気共鳴画像法の造影剤としての必要な性質は、熱力学的な安定性、水溶性及び常磁性Ｇｄ（ＩＩＩ）イオンを形成する多座配位構造、即ち少なくとも一分子の水と結合して、高い水との磁気緩和を示すことである。また、ＭＲＩ造影剤は、化学的活性を持っていてはならず、生体内で細胞毒性が低く、診断後には生体外に完全に排出されるべきである。

【0006】

しかし、これらの造影剤は、水溶性と磁気緩和率が比較的低く、生体内で細胞毒性が比較的高いという問題がある。したがって、依然として、最適化したＭＲＩ造影剤の開発が切実な実情である。

【0007】

これに対し、本発明者らは、前記従来技術の問題を克服するために、鋭意研究努力した結果、本発明により合成されたＤＯ３Ａ−トラネキサム酸又はそのエステル化合物を用いて、ガドリニウム錯体を製造する場合、前記ガドリニウム錯体を含有するＭＲＩ造影剤は、肝特異性及び血液プールの二重造影効果があり、高緩和率を有することを確認し、本発明を完成するに至った。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

したがって、本発明の主な目的は、一般式１の構造を有するＤＯ３Ａ−トラネキサム酸又はそのエルテル化合物を提供することにある。

【0009】

本発明の他の目的は、前記化合物を含む錯体リガンド（Ｌ）用の組成物、及び前記化合物をリガンドとして含むガドリニウム錯体を提供することにある。

【0010】

さらに、本発明の他の目的は、高緩和率と熱力学的及び速度論的な安定性を有するガドリニウム錯体を含有する磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）造影剤を提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0011】

本発明の一態様によれば、本発明は、下記一般式１の構造を有するＤＯ３Ａ−トラネキサム酸又はそのエステル化合物を提供する：

【化1】

式中、Ｒは、Ｈ、Ｍｅ、Ｅｔ、（ＣＨ_２）_２ＯＨ、ＣＨ_２ＯＭｅ、及びＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２から選択される基である。

【0012】

本発明の他の態様によれば、本発明は、下記工程を含む前記ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸又はそのエステル化合物の製造方法を提供する：
ａ）トランス−４（アミノメチル）シクロヘキサンエチルカルボキシレートハイドロクロライドにブロモアセチルブロマイドを添加し、撹拌する工程；
ｂ）前記混合物にＤＯ３Ａ−（^ｔＢｕＯ）_３を添加し、撹拌する工程；
ｃ）前記混合物にＴＦＡを添加し、ｔｅｒｔ−ブチル基を脱保護させる工程；
ｄ）減圧下で溶媒を完全に除去し、メタノールを加えて前記混合物を溶解した後、シリカゲルクロマトグラフィーを行う工程；及び
ｅ）前記クロマトグラフィーから得た物質を、真空下で乾燥し、ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸又はそのエステル化合物を得る工程。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】図１は、本発明に係るガドリニウム錯体の合成を模式的に示す図である。

【図2】図２は、ガドリニウム錯体（化合物５ａ〜５ｃ）と、市販されているＭＲＩ造影剤との常磁性緩和率の変化（Ｒ_１^Ｐ（ｔ）／Ｒ_１^Ｐ（０））を測定した結果を示す図である。

【図3】図３は、ガドリニウム錯体（化合物５ａ〜５ｃ）とドータレム（登録商標）について、緩和時間と緩和率のマップを示す図である。

【図4A】図４Ａは、実験用マウスにガドリニウム錯体を投与した後、投与経過時間によるＭＲイメージを測定した結果を示す図である。

【図4B】図４Ｂは、実験用マウスにガドリニウム錯体を投与した後、投与経過時間によるＭＲイメージを測定した結果を示す図である。

【図5】図５は、実験用マウスにガドリニウム錯体を投与した後、投与経過時間によるＭＲイメージを測定した結果を示す図である。

【図6】図６は、測定されたＭＲイメージを用いてＣＮＲを計算したプロフィールを示す図である。

【図7】図７は、本発明に係るガドリニウム錯体の濃度による細胞生存率を測定した結果を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0014】

前記製造方法により生成される化合物の模式図を図１に示した。本発明をより詳しく説明すると、下記の通りである。

【0015】

前記工程ａ）のトランス−４（アミノメチル）シクロヘキサンエチルカルボキシレートハイドロクロライド（化合物１ｂ）は、トランス−４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸を用いて合成した。この後、前記工程ａ）が完了すると、化合物２ｂのエチル４−（（２−ブロモアセトアミド）メチル）シクロヘキサンカルボキシレートが合成される。そして、工程ｂ）が完了すると、化合物３ｂのｔｅｒｔ−ブチルＮ，Ｎ’，Ｎ’’−（Ｎ’’’−（２−（（４−エトキシカルボニル）シクロヘキシル）メチルアミノ−２−オキソエチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−トリイル）トリアセテートが合成され、これを用いて工程ｃ）が完了した後、工程ｄ）と工程ｅ）を経ると、最終的に、ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸エステル誘導体１が得られる。

【0016】

前記ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸エステル誘導体１は、図１に示した合成模式図のうち、化合物４ｂである。

【0017】

本発明の化合物製造方法において、前記工程ａ）のトランス−４（アミノメチル）シクロヘキサンエチルカルボキシレートハイドロクロライドの代わりに、アリル−トランス−４（アミノメチル）シクロヘキサンエチルカルボキシレートハイドロクロライドを添加してもよい。

【0018】

前記アリル−トランス−４（アミノメチル）シクロヘキサンエチルカルボキシレートハイドロクロライドは、トランス−４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸（化合物１ｃ）を用いて合成した。化合物１ｃを用いて製造方法の工程ａ）を経ると、化合物２ｃのアリル４−（（２−ブロモアセトアミド）メチル）シクロヘキサンカルボキシレートが合成される。そして、化合物２ｃを用いて工程ｂ）が完了すると、化合物３ｃのｔｅｒｔ−ブチルＮ，Ｎ’，Ｎ’’−（Ｎ’’’−（２−（（４−アリルオキシカルボニル）シクロヘキシル）メチルアミノ−２−オキソエチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−トリイル）トリアセテートが合成され、これを用いて工程ｃ）が完了した後、工程ｄ）と工程ｅ）を経ると、最終的に、ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸エステル誘導体２が得られる。

【0019】

前記ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸エステル誘導体２は、図１に示した合成模式図のうち、化合物４ｃである。

【0020】

このように合成されたＤＯ３Ａ−トラネキサム酸エステル誘導体１である化合物４ｂを用いて、ＤＯ３Ａ−トランスアミクサニン（化合物４ａ）を製造することができる。より具体的な製造過程は、実施例で説明した。

【0021】

本発明の他の態様によれば、本発明は、前記ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸又はそのエステル化合物を含む錯体リガンド（Ｌ）用組成物を提供する。

【0022】

本発明において、”リガンド（Ｌ）”は、金属原子を配位結合することができるキレートを意味する。

【0023】

本発明の一態様によれば、本発明は、前記ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸又はそのエステル化合物をリガンド（Ｌ）として含み、前記リガンドに配位結合する金属原子を含む錯体を提供する。

【0024】

本発明において、前記金属原子は、ガドリニウム（Ｇｄ）であってもよい。

【0025】

また、前記リガンドに配位結合する金属原子を含む錯体は、［Ｇｄ（Ｌ）（Ｈ_２Ｏ）・ｘＣＨ_３ＣＯＯＨ・ｙＨ_２Ｏ］の式で表されてもよい。

【0026】

本発明の金属原子を含む錯体は、上述のように合成されたＤＯ３Ａ−トラネキサム酸又はそのエステル化合物（化合物４ａ〜４ｃ）を用いて製造する。それぞれの化合物４ａ〜４ｃとＧｄＣｌ_３・６Ｈ_２Ｏとを反応させてガドリニウム錯体を製造する。

【0027】

本発明の一態様によれば、前記錯体を有効成分として含有する磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）造影剤を提供する。

【0028】

本発明において、前記造影剤は、肝特異性と血液プールの二重造影機能を有する。また、前記造影剤は、高緩和率、向上した熱力学的及び速度論的な安定性を有する。

【0029】

具体的には、本発明の実施例から分かるように、本発明により製造されたガドリニウム錯体を有効成分として含有するＭＲＩ造影剤の常磁性緩和率の変化（Ｒ_１^Ｐ（ｔ）／Ｒ_１^Ｐ（０））を測定する場合、本発明により合成されたガドリニウム錯体（化合物５ａ、５ｂ及び５ｃ）は、７２時間を基準として全て高緩和率を示し、非常に良好な速度論的安定性（約９８％以上）を示していることを確認した。現在市販されているＭＲＩ造影剤に比べると、ドータレム（Ｄｏｔａｒｅｍ（登録商標））とほぼ類似の効果を示すものである。また、本発明に係るガドリニウム錯体の緩和時間（Ｔ_１、Ｔ_２）と緩和率（Ｒ_１、Ｒ_２）とを測定する場合、商用化されている造影剤と比べて、化合物５ｂと化合物５ｃが非常に高いＲ_１値を持っていることを確認した。特に最も高いＲ_１値を持つ化合物５ｃは、ドータレム（登録商標）と比べるとき、２．６倍高い。現在のシステムにおいて、このような高いＲ_１値は、ドータレム（登録商標）と比べて、分子量が大きいためであると考えられる。分子量の増加は、回転関連の時間を増加させるため、Ｒ_１緩和率を向上させる。高緩和率を有する造影剤は、相対的に少ない量を投与しても高いコントラスト増強効果を示すため、本発明に係るＭＲＩ造影剤は、優れたコントラスト増強効果を示すことが期待される。実際に、実験用マウスを介してコントラスト効果を確認した場合、本発明のＭＲＩ造影剤を投与した後、肝臓、心臓、血液において高いコントラスト効果があることが分かる。

【0030】

本発明により製造されたガドリニウム錯体を有効成分として含有するＭＲＩ造影剤は、現在市販されている造影剤に比べ、高緩和率を有する。加えて、本発明に係るＭＲＩ造影剤は、肝特異的及び血液プールの二重造影機能を有する。したがって、本発明に係るガドリニウム錯体を含有するＭＲＩ造影剤は、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）の造影剤として必要とされる主要な特性を満たすことで、ＭＲＩ造影剤として広く適用可能であり、特に既存の造影剤よりコントラスト増強効果を高められる。

【実施例】

【0031】

以下、実施例を挙げて、本発明をより詳しく説明する。これらの実施例は、単に本発明を例示するためであり、本発明の範囲は、これらの実施例に限定されない。

【0032】

実施例１．ＤＯ３Ａコンジュゲート製造
ＤＯ３Ａコンジュゲートを製造するための合成過程は、下記に詳しく示したが、合成されたそれぞれの化合物を、ＮＭＲを用いて確認した。^１Ｈ及び^１３Ｃ ＮＭＲは、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｄｖａｎｃｅ ４００又は５００スペクトロメータ（Ｋｏｒｅａ Ｂａｓｉｃ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ社製）を用いて行った。ＮＭＲの結果から化学的移動は、ＴＭＳ（ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｓｉｌａｎｅ）を基準として、δ値で示した。結合定数（ｃｏｕｐｌｉｎｇ ｃｏｎｓｔａｎｔ）は、Ｈｚ単位で示した。

【0033】

１−１．ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸エステル誘導体１の合成
（１）トランス−４−（アミノメチル）シクロヘキサンエチルカルボキシレートハイドロクロライド（１ｂ）の合成
まず、東京化成工業株式会社（Ｊａｐａｎ）から購入したトランス−４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸を用いてトランス−４−（アミノメチル）シクロヘキサンエチルカルボキシレートハイドロクロライドを合成した。

【0034】

０℃で、エタノール（４０ｍＬ）に、トランス−４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸（１．５７ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加えて撹拌し、ゆっくり塩化チオニル（０．９ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）を加え、１０分間冷たいまま保持ながら、撹拌した。この後、前記反応混合物を１時間７０℃で還流した後、常温まで冷却した。溶媒を減圧下で完全に除去した後、残りの成分をヘキサン（２５ｍＬ）で二回に分けて洗浄して、残留溶媒を除去した。溶媒が完全に除去された混合物を６時間真空下で乾燥させて、トランス−４−（アミノメチル）シクロヘキサンエチルカルボキシレートハイドロクロライドが得られた。収量は２．１３ｇ（９６％）であった。

【0035】

^１Ｈ ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ＝４．０３（ｑ，Ｊ＝７．０８，２Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），２．６１（ｍ，１Ｈ，Ｈ１３），２．２１（ｍ，１Ｈ，Ｈ１０），１．８５（ｍ，２Ｈ，Ｈ９），１．２７（ｍ，４Ｈ，Ｈ１２ Ｈ１１），１．１６（ｔ，Ｊ＝７．０６，３Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_３），０．９６（ｍ，４Ｈ，Ｈ１２ Ｈ１１）．分析 Ｃ_１０Ｈ_２０ＣｌＮＯ_２に対する計算値：Ｃ，５４．１７；Ｈ，９．０９；Ｎ，６．３２．実測値：Ｃ，５３．７８；Ｈ，８．９１；Ｎ，６．３４．

【0036】

（２）エチル４−（（２−ブロモアセトアミド）メチル）シクロヘキサンカルボキシレート（２ｂ）の合成
０℃で合成されたトランス−４−（アミノメチル）シクロヘキサンエチルカルボキシレートハイドロクロライド（３．００ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）とＫ_２ＣＯ_３（３．７３ｇ、２７．１ｍｍｏｌ）とをＣＨ_３ＣＮ（１００ｍＬ）に加え、混合物を製造した後、前記混合物にブロモアセチルブロマイド（１．１ｍｏｌ ｅｑ ｉｎ ２０ｍＬ ＣＨ_３ＣＮ）を１時間にかけて、ゆっくり添加し、８０℃で１８時間撹拌した。撹拌が完了した後、混合物をろ過して無機塩を除去し、減圧下で有機溶媒を全て留去した。残りの成分を、３０ｍＬの蒸溜水で３回洗浄し、ＣＨ_２Ｃｌ_２を加え溶解した。この後、粗合成物質を得るために、前記物質をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、ろ過し、蒸発させて、溶媒を完全に除去した。それから、シリカゲルクロマトグラフィー（勾配溶離 ＣＨ_２Ｃｌ_２から３０％酢酸エチル（ＥＡ）−ＣＨ_２Ｃｌ_２、Ｒｆ＝０．５（ＥＡ：ＣＨ_２Ｃｌ_２＝４：６））を行って、完全に精製した。その結果、合成されたエチル４−（（２−ブロモアセトアミド）メチル）シクロヘキサンカルボキシレートを白色固体として得た。収量は、２．４９ｇ（６０％）であった。

【0037】

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ＝６．５４（ｂｒ，１Ｈ，−ＣＯＮＨ−），４．１２（ｑ，２Ｈ，−ＯＣＨ_２ＣＨ_３），３．９０（ｓ，２Ｈ，ＢｒＣＨ_２ＣＯ−），３．１６（ｔ，２Ｈ，−ＣＯＮＨＣＨ_２−），２．２２（ｍ，１Ｈ，ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＯＯＣＨ−，シクロヘキシル），１．８０−２．１０（ｍ，４Ｈ，ＣＨ_２−，シクロヘキシル），１．５２（ｍ，１Ｈ，ＮＨＣＨ_２ＣＨ−，シクロヘキシル），１．４９−１．３７（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ_２−，シクロヘキシル），１．２４（ｔ，３Ｈ，−ＣＯＯＣＨ_２ＣＨ_３），１．０８−０．９２（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ_２−，シクロヘキシル）。^１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ＝１７５．７９（ＢｒＣＨ_２ＣＯＮＨ−），１６５．５７（−ＣＯＯＣＨ_２ＣＨ_３），６０．２３（−ＣＯＯＣＨ_２ＣＨ_３），４５．９６（−ＣＯＯＣＨ−，シクロヘキシル），４３．１７（−ＮＨＣＨ_２ＣＨ−），３７．１２（−ＮＨＣＨ_２ＣＨ−，シクロヘキシル），２９．６８（ＢｒＣＨ_２ＣＯ−），２９．３５（−ＣＨ_２−，シクロヘキシル），２８．３４（−ＣＨ_２−，シクロヘキシル），１４．２２（−ＣＯＯＣＨ_２ＣＨ_３）．分析 Ｃ_１２Ｈ_２０ＢｒＮＯ_３に対する計算値：Ｃ，４７．０７；Ｈ，６．５８；Ｎ，４．５７。実測値：Ｃ，４７．７８；Ｈ，６．８５；Ｎ，４．７２（純度＞９５％）。ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ_１２Ｈ_２１ＢｒＮＯ_３に対する計算値，３０６．０７（［ＭＨ］^＋）．実測値：３０６．２０．

【0038】

（３）ＤＯ３Ａ−（^ｔＢｕＯ）_３・ＨＢｒの合成
０℃で、ＣＨ_３ＣＮ（１２０ｍＬ）にシクレン（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン）（ｓｔｒｅｍ、ＵＳＡ）（５．３４ｇ、３０ｍｍｏｌ）とＮａＨＣＯ_３（８．３４ｇ、９９ｍｍｏｌ）とを加えて撹拌しながら、ｔｅｒｔ−ブチルブロモアセテート（１９．３５ｇ、９９ｍｍｏｌ）を３０分にかけて、ゆっくり滴下して添加した。この後、前記反応混合物を常温で４８時間撹拌した。反応が完了すると、前記混合物をろ過して無機固体を除去し、さらにろ過して溶媒を除去した。ろ過して残った固体状の物質をクロロホルムに加えた後、不溶の固体懸濁物をろ去した。この後、ろ過液を濃縮させて得た固体状物質をトルエンで再結晶させた。その結果、合成されたＤＯ３Ａ−（^ｔＢｕＯ）_３・ＨＢｒを白色固体として得た。収量は、１１．３０ｇ（６１％）であった。

【0039】

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ＝３．３７（ｓ，４Ｈ，２×ＣＨ_２ 酢酸），３．２９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２ ユニーク酢酸），３．１０（ｂｒ，４Ｈ，−ＣＨ_２ＣＨ_２−リング），２．８８−２．９３（ｂｒｍ，１２Ｈ，−ＣＨ_２ＣＨ_２−リング），１．５５（ｓ，２７Ｈ，Ｃ（ＣＨ_３）_３）．^１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ＝２８．１９（−Ｃ（ＣＨ_３）），４７．５２（−ＣＨ_２ＣＨ_２−，環状リング，非対称），４９．１５（−ＣＨ_２ＣＨ_２−，環状リング，非対称），５１．３１（−ＣＨ_２ＣＨ_２−，環状リング，非対称），５８．１７（−ＣＨ_２ＣＯＯ−，酢酸），８１．６６（−Ｃ（ＣＨ_３）），１６９．６２（−ＣＨ_２ＣＯＯ−，ユニーク酢酸），１７０．５１（−ＣＨ_２ＣＯＯ−，酢酸）．分析 Ｃ_２６Ｈ_５１Ｎ_４Ｏ_６・ＨＢｒに対する計算値：Ｃ，５２．４３；Ｈ，８．６３；Ｎ，９．４１．実測値：Ｃ，５２．１０；Ｈ，８．９０；Ｎ，９．００（純度＞９５％）．Ｍａｌｄｉ−ＴｏｆＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ_２６Ｈ_５１Ｎ_４Ｏ_６に対する計算値，５１５．３８（［ＭＨ］^＋）．実測値：５１５．３９．

【0040】

（４）ｔｅｒｔ−ブチルＮ，Ｎ’，Ｎ’’−（Ｎ’’’−（２−（（４−エトキシカルボニル）シクロヘキシル）メチルアミノ−２−オキソエチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−トリイル）トリアセテート（３ｂ）の合成
前記において合成したエチル４−（（２−ブロモアセトアミド）メチル）シクロヘキサンカルボキシレート（１．１３ｇ、３．６９ｍｍｏｌ）を加えて撹拌しながら、ＣＨ_３ＣＮ（５０ｍＬ）にＤＯ３Ａ−（^ｔＢｕＯ）_３・ＨＢｒ（２ｇ、３．３６ｍｍｏｌ）と、Ｋ_２ＣＯ_３（１．４ｇ、１１．０７ｍｍｏｌ）とを加えて製造した混合物を、ＣＨ_３ＣＮ １０ｍＬにゆっくり添加した。この後、前記混合物を常温で２４時間撹拌した後、ろ過した。ろ過液を減圧下で留去して、黄色の固体状物質を得た。精製していない前記固体状物質をシリカゲルクロマトグラフィー（勾配溶離 ＣＨ_２Ｃｌ_２から１０％ＭｅＯＨ−ＣＨ_２Ｃｌ_２、Ｒｆ＝０．５（ＭｅＯＨ：ＣＨ_２Ｃｌ_２＝１：９））を行い、完全に精製し、最終的に、合成されたｔｅｒｔ−ブチルＮ，Ｎ’，Ｎ’’−（Ｎ’’’−（２−（（４−エトキシカルボニル）シクロヘキシル）メチルアミノ−２−オキソエチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−トリイル）トリアセテートを白色固体として得た。収量は、２．１１ｇ（８５％）であった。

【0041】

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ＝４．１１（ｑ，２Ｈ，−ＣＯＯＣＨ_２ＣＨ_３），３．３８（ｓ，４Ｈ，２×ＣＨ_２ 酢酸），３．２９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２ ユニーク酢酸），３．０５−３．１５（ｂｒ ｍ，６Ｈ，重複−ＣＨ_２ＣＨ_２−リング及びＣＨ_２ 酢酸アーム），２．８５−２．９４（ｂｒ ｍ，１２Ｈ，−ＣＨ_２ＣＨ_２−リング），２．１８−２．２４（ｍ，１Ｈ，ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＯＯＣＨ−），１．８８−２．００（ｍ，４Ｈ，−ＣＨ_２−，シクロヘキシル），１．６０（ｍ，１Ｈ，−ＮＨＣＨ_２ＣＨ−，シクロヘキシル），１．４６（ｓ，２７Ｈ，−Ｃ（ＣＨ_３）_３），１．４１−１．４５（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ_２−，シクロヘキシル），１．２５（ｔ，３Ｈ，−ＯＣＨ_２ＣＨ_３），１．０１−１．０５（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ_２−，シクロヘキシル）．ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ_３８Ｈ_７０Ｎ_５Ｏ_９に対する計算値：７４０．５２（［ＭＨ］^＋）；Ｃ_３８Ｈ_６９Ｎ_５Ｏ_９Ｎａに対する計算値：７６２．５０（［ＭＮａ］^＋）．実測値：７４０．４０（［ＭＨ］^＋），７６２．４０（［ＭＮａ］^＋）．Ｍａｌｄｉ−ＴｏｆＭＳ（ｍ／ｚ）：実測値，７４０．５０（［ＭＨ］^＋），７６２．５０（［ＭＮａ］^＋）．純度＜９０％．

【0042】

（５）ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸エステル誘導体１（４ｂ）の合成
前記において合成されたｔｅｒｔ−ブチルＮ，Ｎ’，Ｎ’’−（Ｎ’’’−（２−（（４−エトキシカルボニル）シクロヘキシル）メチルアミノ−２−オキソエチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−トリイル）トリアセテート（２．０ｇ、２．７０ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（１０ｍＬ）に加え、２４時間常温で撹拌した。その後、前記溶液をジエチルエーテル（５０ｍＬ）で希釈し、ろ過し、ジエチルエーテルで洗浄した後、真空下で乾燥して、白色の固体状物質を得た。前記物質をＮａＯＨで酸滴定をした後、元素分析をして、合成された物質がＣ_２６Ｈ_４５Ｎ_５Ｏ_９・ＣＦ_３ＣＯＯＨであることを確認した。前記合成された物質の収量は、２．２５ｇ（９１％）であった。

【0043】

^１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ）：δ＝３．９５−４．０１（ｑ，２Ｈ，−ＯＣＨ_２ＣＨ_３），３．６２（ｂｒ ｓ，８Ｈ，酢酸アーム−ＣＨ_２−），３．１４（ｂｒ ｓ，１６Ｈ，−ＣＨ_２ＣＨ_２−環状リング），２．９０−２．９２（ｄ，２Ｈ，−ＣＯＮＨＣＨ_２−），２．１３−２．２０（ｍ，１Ｈ，ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＯＯＣＨ−），１．７９−１．８２（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ_２−，シクロヘキシル），１．６２−１．６５（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ_２−，シクロヘキシル），１．３１−１．３５（ｍ，１Ｈ，−ＮＨＣＨ_２ＣＨ−，シクロヘキシル），１．１９〜１．２７（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ_２−，シクロヘキシル），１．０６−１．１０（ｔ，３Ｈ，−ＯＣＨ_２ＣＨ_３），０．７９−０．８９（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ_２−，シクロヘキシル）．^１３ＣＮＭＲ（５００ ＮＭＲ，Ｄ_２Ｏ）：δ＝１３．３（−ＣＨ_２ＣＨ_３），２８．１０（−ＣＨ_２ＣＨ_２−，シクロヘキシル），２９．１０（−ＣＨ_２ＣＨ_２−，シクロヘキシル），３６．５６（−（ＣＨ_２）_２ＣＨＣＨ_２ＮＨ−，シクロヘキシル），４３．１６（−（ＣＨ_２）_２ＣＨＣＨ_２ＮＨ−），４５．２９（−（ＣＨ_２）_２ＣＨＣＯＯＣＨ_２ＣＨ_３），４９．１２（−ＣＨ_２ＣＨ_２−，環状リング，非対称），５０．２５（−ＣＨ_２ＣＨ_２−，環状リング，対称），５２．２２（−ＣＨ_２ＣＯＯＮＨ−），５５．１７（−ＣＨ_２ＣＯＯＨ，酢酸），１７１．０１（−ＣＨ_２ＣＯＮＨ−），１７９．３２（−ＣＨ_２ＣＯＯＣＨ_２ＣＨ_３），１８１．３６（−ＣＨ_２ＣＯＯＨ）．分析 Ｃ_２６Ｈ_４５Ｎ_５Ｏ_９・３ＣＦ_３ＣＯＯＨに対する計算値：Ｃ，４２．０６；Ｈ，５．２９；Ｎ，７．６６．実測値：Ｃ，４２．０９；Ｈ，５．８５；Ｎ，８．２６（純度＞９５％）．Ｍａｌｄｉ−Ｔｏｆ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ_２６Ｈ_４６Ｎ_５Ｏ_９に対する計算値：５７２．３３（［ＭＨ］^＋），Ｃ_２６Ｈ_４５Ｎ_５Ｏ_９Ｎａに対する計算値：５９４．３１（［ＭＮａ］^＋）．実測値：５７２．４４（［ＭＨ］^＋），５９４．４４（［ＭＮａ］^＋）．

【0044】

１−２．ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸エステル誘導体２の合成
（１）アリル−トランス−４−（アミノメチル）シクロヘキサンエチルカルボキシレートハイドロクロライド（１ｃ）の合成
まず、東京化成工業株式会社（Ｊａｐａｎ）から購入したトランス−４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸を用いて、アリル−トランス−４−（アミノメチル）シクロヘキサンエチルカルボキシレートハイドロクロライドを合成した。

【0045】

０℃で、アリルアルコール（５０ｍＬ）に、トランス−４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸（３．９３ｇ、２５ｍｍｏｌ）を加え、撹拌しながら、ゆっくりチオニルクロライド（３．５７ｇ、３０ｍｍｏｌ）を加え、１０分の間冷たいまま保持し、撹拌した。この後、前記反応混合物を、１時間７５℃で還流した後、常温で冷却した。溶媒を減圧下で完全に除去した後、残りの成分をヘキサン（３０ｍＬ）で３回洗浄して、残留溶媒を除去した。溶媒が完全に除去された混合物を６時間真空下で乾燥して、アリル−トランス−４−（アミノメチル）シクロヘキサンエチルカルボキシレートハイドロクロライドを得た。収量は、４．７９ｇ（８２％）であった。

【0046】

^１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，４００ ＭＨｚ）：δ＝７．８１（ｂｒ ｓ，３Ｈ，ＮＨ_２ＨＣｌ），５．７１（ｍ，１Ｈ），５．１６（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），４．３２（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），２．４０（ｄ，Ｊ＝７．００，２Ｈ，Ｈ９），２．０７（ｍ，１Ｈ，Ｈ１３），１．６６（ｍ，４Ｈ，Ｈ１１／Ｈ１２），１．３３（ｍ，１Ｈ，Ｈ１０），０．９２（ｍ，４Ｈ，Ｈ１１／Ｈ１２）．^１３Ｃ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，１００ ＭＨｚ）：δ＝１７４．７７（Ｃ１），１３３．１２（ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），１１７．７８（ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），６４．４６（ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），４４．０１（ＣＨ_２ＮＨ_２），４２．３２（Ｃ２），３５．１２（Ｃ４），２９．０２（Ｃ３，Ｃ５），２８．２０（Ｃ２，Ｃ６）．分析 Ｃ_１１Ｈ_１９ＮＯ_２・ＨＣｌに対する計算値：Ｃ，５６．５２；Ｈ，８．６２；Ｎ，５．９９．実測値：Ｃ，５６．３７；Ｈ，８．５４；Ｎ，５．７６％．ＦＡＢＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ_１１Ｈ_２０ＮＯ_２に対する計算値，１９８．２８（［ＭＨ］^＋）；実測値，１９８．１０．

【0047】

（２）アリル４−（（２−ブロモアセトアミド）メチル）シクロヘキサンカルボキシレート（２ｃ）の合成
前記実施例１−１の（２）の合成過程において、トランス−４−（アミノメチル）シクロヘキサンエチルカルボキシレートハイドロクロライドの代わりにアリル−トランス−４−（アミノメチル）シクロヘキサンエチルカルボキシレートハイドロクロライド（３．０２ｇ、１２．８３ｍｍｏｌ）を用いる以外は、同様の方法で合成した。得られた生成物は、白色固体であった。収量は、２．８６ｇ（７０％）であった。

【0048】

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ＝６．５４（ｂｒ，１Ｈ，−ＣＯＮＨ−），５．８７−５．９２（ｍ，１Ｈ，−ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），５．２４−５．３２（ｍ，２Ｈ，−ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），４．５７（ｄ，２Ｈ，−ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），３．８９（ｓ，２Ｈ，ＢｒＣＨ_２ＣＯＮＨ−），３．１６（ｔ，２Ｈ，−ＣＨ_２ＮＨＣＯ−），２．２７（ｍ，１Ｈ，ＣＨ_２＝ＣＨＣＨ_２ＣＯＯＣＨ−），１．８２−２．０３（ｍ，４Ｈ，−ＣＨ_２−，シクロヘキシル），１．５２（ｍ，１Ｈ，−ＮＨＣＨ_２ＣＨ−），１．４６−１．５１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_２−，シクロヘキシル），０．９２−１．１０（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ_２−，シクロヘキシル）．^１３Ｃ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ）：δ＝１７５．３２（ＢｒＣＨ_２ＣＯＮＨ−），１６５．３３（−ＣＯＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），１３２．２９（−ＣＯＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），１１８．０１（−ＣＯＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），６４．９２（−ＣＯＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），４５．９８（−ＣＯＯＣＨ−，シクロヘキシル），４３．１７（−ＮＨＣＨ_２ＣＨ−），３７．１２（−ＮＨＣＨ_２ＣＨ−，シクロヘキシル），２９．６８（ＢｒＣＨ_２ＣＯ−），２９．４４（−ＣＨ_２−，シクロヘキシル），２８．３５（−ＣＨ_２−，シクロヘキシル）．分析 Ｃ_１３Ｈ_２０ＢｒＮＯ_３に対する計算値：Ｃ，４９．０７；Ｈ，６．３４；Ｎ，４．４０．実測値：Ｃ，４８．９０；Ｈ，６．３９；Ｎ，４．２７（純度＞９５％）．ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ_１３Ｈ_２１ＢｒＮＯ_３に対する計算値：３１８．０７（［ＭＨ］^＋）．実測値：３１８．３０．

【0049】

（３）ｔｅｒｔ−ブチルＮ，Ｎ’，Ｎ’’−（Ｎ’’’−（２−（（４−アリルオキシカルボニル）シクロヘキシル）メチルアミノ−２−オキソエチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−トリイル）トリアセテート（３ｃ）の合成
前記実施例１−１の（４）の合成過程において、エチル４−（（２−ブロモアセトアミド）メチル）シクロヘキサンカルボキシレートの代わりに、アリル４−（（２−ブロモアセトアミド）メチル）シクロヘキサンカルボキシレート（１．１７ｇ、３．６９ｍｍｏｌ）を用いる以外は、同様の方法で合成した。得られた生成物は、白色固体であった。収量は、２．１０ｇ（８３％）であった。

【0050】

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ＝５．８５−５．９５（ｍ，１Ｈ，−ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），５．１９−５．３１（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），４．５４（ｄ，２Ｈ，−ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），０．９５−１．０５（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ_２−，シクロヘキシル），１．３７−１．４５（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ_２−，シクロヘキシル），１．４６（ｓ，２７Ｈ，−Ｃ（ＣＨ_３）_３），２．２１−３．５１（ｂｒ ｍ，２７Ｈ，重複−ＣＨ_２ＣＨ_２−環状リング（１６Ｈ），−ＣＨ_２−酢酸アーム（８Ｈ），−ＮＨＣＨ_２ＣＨ−（２Ｈ），−ＮＨＣＨ_２ＣＨ−（１Ｈ）），１．９０−２．００（ｂｒ ｍ，４Ｈ，−ＣＨ_２−，シクロヘキシル），１．６０（ｍ，１Ｈ，−ＯＯＣＣＨ_２ＣＨ−）．Ｍａｌｄｉ−Ｔｏｆ ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｃ_３９Ｈ_６９Ｎ_５Ｏ_９Ｎａに対する計算値：７７４．５０（［ＭＮａ］^＋），Ｃ_３９Ｈ_６９Ｎ_５Ｏ_９Ｋに対する計算値：７９０．４７（［ＭＫ］^＋）．実測値：７７４．５８［ＭＮａ］^＋，７９０．６０［ＭＫ］^＋．純度＜９０％．

【0051】

（４）ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸エステル誘導体２（４ｃ）の合成
前記実施例１−１の（５）の合成過程において、ｔｅｒｔ−ブチルＮ，Ｎ’，Ｎ’’−（Ｎ’’’−（２−（（４−エトキシカルボニル）シクロヘキシル）メチルアミノ−２−オキソエチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−トリイル）トリアセテートの代わりに、ｔｅｒｔ−ブチルＮ，Ｎ’，Ｎ’’−（Ｎ’’’−（２−（（４−アリルオキシカルボニル）シクロヘキシル）メチルアミノ−２−オキソエチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−トリイル）トリアセテート（２．０３ｇ、２．７０ｍｍｏｌ）を用いた以外は、同様の方法で合成した。得られた生成物は、白色固体であった。収量は、２．６０ｇ（８９％）であった。

【0052】

^１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ）：δ＝５．８４−５．９４（ｍ，１Ｈ，−ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），５．１８−５．２８（ｍ，２Ｈ，−ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），４．５３−４．５５（ｄ，２Ｈ，−ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），３．６１−３．７２（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ_２−酢酸 アームｓ），３．１４−３．２７（ｂｒ ｍ，１６Ｈ，−ＣＨ_２ＣＨ_２−環状リング），２．９８−２．９９（ｄ，２Ｈ，−ＣＯＮＨＣＨ_２−），２．２７−２．３４（ｍ，１Ｈ，ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＯＯＣＨ−，シクロヘキシル），１．９１−１．９３（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ_２−，シクロヘキシル），１．７２−１．７４（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ_２−，シクロヘキシル），１．４０−１．４８（ｍ，１Ｈ，−ＮＨＣＨ_２ＣＨ−，シクロヘキシル），１．２８−１．３７（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ_２−，シクロヘキシル），０．８８−０．９８（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ_２−，シクロヘキシル）．^１３ＣＮＭＲ（５００ ＮＭＲ，Ｄ_２Ｏ）：δ＝２８．０９（−ＣＨ_２ＣＨ_２−，シクロヘキシル），２９．０５（−ＣＨ_２ＣＨ_２−，シクロヘキシル），３６．５１（−（ＣＨ_２）_２ＣＨＣＨ_２ＮＨ−，シクロヘキシル），４３．０６（−（ＣＨ_２）_２ＣＨＣＨ_２ＮＨ−），４５．３５（−（ＣＨ_２）_２ＣＨＣＯＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），４９．５２（−ＣＨ_２ＣＨ_２−，環状リング），５２．２１（−ＣＨ_２ＣＯＯＮＨ−），５５．１２（−ＣＨ_２ＣＯＯＨ，酢酸），６５．５８（−ＣＯＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），１１８．０３（−ＣＯＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），１３２．０６（−ＣＯＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），１７１．９９（−ＣＨ_２ＣＯＮＨ−），１７９．７３（−ＣＨ_２ＣＯＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２），１８１．２８（−ＣＨ_２ＣＯＯＨ）．分析 Ｃ_２７Ｈ_４５Ｎ_５Ｏ_９・２．４ＣＦ_３ＣＯＯＨに対する計算値：Ｃ，４３．７６；Ｈ，５．６５；Ｎ，８．２８．実測値：Ｃ，４３．６５；Ｈ，６．０３；Ｎ，９．０７（純度＞９５％）．Ｍａｌｄｉ−Ｔｏｆ ＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ_２７Ｈ_４６Ｎ_５Ｏ_９に対する計算値：５８４．３３（［ＭＨ］^＋），Ｃ_２７Ｈ_４５Ｎ_５Ｏ_９Ｎａに対する計算値：６０６．３１（［ＭＮａ］^＋）．実測値：５８４．３６（［ＭＨ］^＋），６０６．３２（［ＭＮａ］^＋）．

【0053】

１−３．ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸（４ａ）の合成
ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸は、前記において合成したＤＯ３Ａ−トラネキサム酸エステル誘導体１を用いて合成した。

【0054】

エタノール（２０ｍＬ）に、前記実施例１−１で合成した化合物４ｂ（１．０ｇ、１．０ｍｍｏｌ）を加えた後、前記溶液に５ＮのＮａＯＨを添加してｐＨを１０まで滴定した。ｐＨ滴定が完了した後、減圧下で溶媒を除去し、メタノール（１０ｍＬ）を加え溶解した。この後、溶液を、メタノールを通過させる短いシリカゲル（６０メッシュ）クロマトグラフィーを行った後、さらに溶媒を除去した。溶媒が完全に除去されて残った物質をジエチルエーテルで粉砕し、真空下で乾燥させて白色の固体状合成物質を得た。このように合成されたＤＯ３Ａ−トラネキサム酸の収量は、０．５０ｇ（８５％）であった。

【0055】

^１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ）：δ＝０．８５−０．９４（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ_２−，シクロヘキシル），１．２０−１．２９（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ_２−，シクロヘキシル），１．４１（ｂｒ ｓ，１Ｈ，−ＮＨＣＨ_２ＣＨ−，シクロヘキシル），１．６８−１．７１（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ_２−，シクロヘキシル），１．８０−１．８３（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ_２−，シクロヘキシル），１．９８−２．０４（ｍ，１Ｈ，ＨＯＯＣＣＨ−，シクロヘキシル），２．３５−３．４５（ｂｒ ｍ，２６Ｈ，重複−ＣＨ_２ＣＨ_２−環状リング（１６Ｈ），−ＣＨ_２−酢酸アーム（８Ｈ），−ＣＯＮＨＣＨ_２−（２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ）：δ＝２９．０２（−ＣＨ_２ＣＨ_２−，シクロヘキシル），２９．７４（−ＣＨ_２ＣＨ_２−，シクロヘキシル），３７．１０（−（ＣＨ_２）_２ＣＨＣＨ_２ＮＨ−，シクロヘキシル），４４．８０（−（ＣＨ_２）_２ＣＨＣＨ_２ＮＨ−），４５．６３（−（ＣＨ_２）_２ＣＨＣＯＯＨ），４８．６７（−ＣＨ_２ＣＨ_２−，環状リング，対称），５１．５６（−ＣＨ_２ＣＨ_２−，環状リング，非対称），５２．０６（−ＣＨ_２ＣＨ_２−，環状リング，非対称），５５．５１（−ＣＨ_２ＣＯＯＮＨ−），５５．８０（−ＣＨ_２ＣＯＯＨ，ユニーク酢酸），５７．１２（−ＣＨ_２ＣＯＯＨ，酢酸（複数）），１７０．８４（−ＣＨ_２ＣＯＮＨ−），１７１．９２（−ＣＨ_２ＣＯＯＨ，ユニーク），１７７．０２（−ＣＨ_２ＣＯＯＨ），１８３．７０（−（ＣＨ_２）_２ＣＨＣＯＯＨ）．Ｍａｌｄｉ−Ｔｏｆ ＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ_２４Ｈ_４２Ｎ_５Ｏ_９に対する計算値：５４４．３０（［ＭＨ］^＋），Ｃ_２４Ｈ_４１Ｎ_５Ｏ_９Ｎａに対する計算値：５６６．２８（［ＭＮａ］^＋）；実測値，５４４．３５（［ＭＨ］^＋），５６６．３３（［ＭＮａ］^＋）．純度＜９０％．

【0056】

実施例２．ガドリニウム錯体の製造
前記実施例１において合成したＤＯ３Ａコンジュゲートを用いて、ガドリニウム錯体を製造した。ガドリニウム錯体を製造するための合成過程は、下記に詳しく示されており、それぞれの合成された化合物は、ＦＡＢ−Ｍａｓｓを用いて確認した。ＦＡＢ−Ｍａｓｓスペクトルは、ＪＭＳ−７００ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ（日本電子株式会社製、Ｊａｐａｎ）を用いて得た。

【0057】

２−１．ガドリニウム錯体１（５ａ）の合成
蒸溜水１０ｍＬに、前記において合成したＤＯ３Ａ−トラネキサム酸（４ａ）（０．５ｇ、０．９ｍｍｏｌ）を加えて溶液を作成し、前記溶液にＧｄＣｌ_３６Ｈ_２Ｏ（０．３４ｇ、０．９２ｍｍｏｌ）を添加した後、常温で１８時間撹拌した。撹拌完了後、前記反応混合物をＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５に通過させ、反応しないＧｄイオンを除去した。この後、０℃で、生成物をエタノール溶液に溶解させ、ジエチルエーテルをゆっくり添加して、白色の固体状合成物質としてガドリニウム錯体を得た。最終生成物におけるＧｄ^３＋イオンの除去は、キシレノールオレンジ指示薬で確認した。前記ガドリニウム錯体の収量は、０．７１ｇ（９０％）であった。

【0058】

分析 ＮａＣ_２４Ｈ_３７ＧｄＮ_５Ｏ_９・ＣＦ_３ＣＯＯＨ・Ｈ_２Ｏに対する計算値：Ｃ，３６．６６；Ｈ，４．７３；Ｎ，８．２２．実測値：Ｃ，３６．８６；Ｈ，４．９７；Ｎ，７．５０（純度＞９５％）．ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ_２４Ｈ_３８ＧｄＮ_５Ｏ_９Ｎａに対する計算値，７２１．１８（［ＭＮａ（Ｈ_２Ｏ）］^＋）．実測値：７２１．１９．ＨＲ−ＦＡＢＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ_２４Ｈ_３９ＧｄＮ_５Ｏ_９に対する計算値，６９９．１９８９（［ＭＨ−（Ｈ_２Ｏ）］^＋）；実測値，６９９．１９８４．

【0059】

２−２．ガドリニウム錯体２（５ｂ）の合成
前記実施例２−１の合成過程において、ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸（４ａ）の代わりに、ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸エステル誘導体１（４ｂ）（０．９１３ｇ、１ｍｍｏｌ）を用いた以外は、同様の方法で合成した。収量は、１．１２ｇ（９５％）であった。

【0060】

分析 Ｃ_２６Ｈ_４４ＧｄＮ_５Ｏ_１０・２．５ＣＦ_３ＣＯＯＨ・８Ｈ_２Ｏに対する計算値：Ｃ，３１．７４；Ｈ，５．３７；Ｎ，５．９７．実測値：Ｃ，３１．５１；Ｈ，５．０２；Ｎ，６．０１（純度＞９５％）．ＨＲ−ＦＡＢＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｃ_２６Ｈ_４２ＧｄＮ_５Ｏ_９Ｎａに対する計算値，７４９．２１２８（［ＭＮａ−（Ｈ_２Ｏ）］^＋）．実測値：７４９．２１２６．

【0061】

２−３．ガドリニウム錯体３（５ｃ）の合成
前記実施例２−１の合成過程において、ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸（４ａ）の代わりに、ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸エステル誘導体２（４ｃ）（０．８５７ｇ、１ｍｍｏｌ）を用いた以外は、同様の方法で合成した。収量は、１．０１ｇ（９０％）であった。

【0062】

分析 Ｃ_２７Ｈ_４４ＧｄＮ_５Ｏ_１０・２ＣＦ_３ＣＯＯＨ・８Ｈ_２Ｏに対する計算値：Ｃ，３３．０１；Ｈ，５．５４；Ｎ，６．２１．実測値：Ｃ，３２．６９；Ｈ，５．２２；Ｎ，６．７０（純度＞９５％）．ＨＲ−ＦＡＢＭｓ（ｍ／ｚ）：Ｃ_２７Ｈ_４３ＧｄＮ_５Ｏ_９に対する計算値，７３９．２３０８（［ＭＨ−（Ｈ_２Ｏ）］^＋）；実測値，７３９．２３０７．

【0063】

実施例３．プロトン化定数（Ｐｒｏｔｏｎａｔｉｏｎ ｃｏｎｓｔａｎｔｓ）、安定度定数、選択性定数、条件付安定度定数及びｐＭ値測定
前記において製造したＤＯ３Ａコンジュゲート及びガドリニウム錯体のプロトン化定数、安定度定数、選択性定数、条件付安定度定数及びｐＭ値を測定した。ＤＯ３Ａコンジュゲート（４ａ〜４ｃ）のプロトン添加反応によるプロトン化定数（Ｋ_ｉ^Ｈ）及びガドリニウム錯体（５ａ〜５ｃ）の安定度定数は、下記したそれぞれの数式１及び２により定義した。下記の数式において、ＨｉＬ（Ｌ＝４；ｉ＝１、２、．．）はプロトン化されたリガンドであり、Ｌは脱プロトン化された自由リガンドであり、Ｍは非加水分解されたアクア金属イオン（ｕｎｈｙｄｒｏｌｙｚｅｄ ａｑｕａ ｍｅｔａｌ ｉｏｎ；Ｇｄ、Ｃａ、Ｚｎ，Ｃｕ）であり、ＭＬは非プロトン化及び非加水分解された錯体を示す。
［数式１］
Ｋ_ｉ^Ｈ ＝ ［Ｈ_ｉＬ］／［Ｈ_ｉ−１Ｌ］［Ｈ^＋］
［数式２］
Ｋ_ＭＬ（ｔｈｅｒｍ） ＝ ［ＭＬ］／［Ｍ］［Ｌ］

【0064】

それぞれのＤＯ３Ａコンジュゲートのプロトン化定数及びそれらのガドリニウム（Ｇｄ（ＩＩＩ））、カルシウム（Ｃａ（ＩＩ））、亜鉛（Ｚｎ（ＩＩ））及び銅（Ｃｕ（ＩＩ））錯体の安定度定数は、電位差滴定法により決定した。その結果は、下記の表１に示されており、対照群としてＤＯＴＡ、ＤＴＰＡ、ＥＯＢ−ＤＴＰＡ、ＢＯＴＰＡ及びＤＴＰＡ−ＢＭＡのような非環状類似体の値を比較のために用いた。

【0065】

表１に示したように、ＤＯ３Ａコンジュゲート（４ａ〜４ｃ）のプロトン化定数（ｌｏｇＫ_ｉ^Ｈ）及び全塩基性度（ｏｖｅｒａｌｌ ｂａｓｉｃｉｔｙ；ΣｐＫ_ａ）は、非環状や、開環したものより高いか、若しくは類似の値を示した。全塩基性度は、金属及びリガンドの供与原子との間の静電気的相互作用の強度と直接に相互関連があるため、キレートの安定性と関連がある。高い塩基性度のリガンドは、熱力学的な観点から、より安定した錯体を形成することが明らかであり、これはそれぞれのＤＯ３Ａコンジュゲートを用いて製造したガドリニウム錯体により証明される。

【0066】

また、ＤＯ３Ａコンジュゲートのうち４ａが、最も高いｌｏｇＫ_ＧｄＬ値（１８．７３）を示し、これはＤＯＴＡ（１８．３３）よりも高い。このことは、生理的条件においてＧｄ−リガンド（Ｌ）の結合安定性がＤＯＴＡより高いことを意味する。４ａにより得られた高い結合安定性は、４ａとＧｄ（ＩＩＩ）イオン（Ｌ^４−⇔Ｇｄ^３＋及びＬ^３−⇔Ｇｄ^３＋）との静電気的相互作用が４ｂ及び４ｃに比べて強いためであると説明される。

【0067】

そして、ｐＭ値（リガンドと金属間の結合力を表す値）は、リガンドの塩基度及び混合物のプロトン化を反映する。したがって、ｐＭ値が大きいと、与えられた条件下で金属イオンに対するリガンドの親和性が大きい。表１に示したように、ＧｄのｐＭ値がカルシウム（Ｃａ（ＩＩ））、亜鉛（Ｚｎ（ＩＩ））及び銅（Ｃｕ（ＩＩ））のｐＭ値に比べて高いことが分かる。これは、ＤＯ３ＡコンジュゲートのＧｄ（ＩＩＩ）錯体が、他の内因金属（ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｍｅｔａｌ）イオンのものよりも影響を受けずに安定化されることを意味する。

【0068】

［表１］プロトン化定数、安定度定数、選択性定数、条件付安定度定数及びｐＭ値

【表1】

^ｂデータは参考文献１，２から得た。^ｃデータは参考文献３から得た。^ｄデータは参考文献４，５から得た。^ｆデータは参考文献７から得た。

【0069】

実施例４．金属交換反応速度
Ｇｄ錯体は、たとえ熱力学的に安定しても、速度論的には、生体内イオンによって金属交換が生じることもあり、この過程で常磁性ガドリニウム（Ｇｄ（ＩＩＩ））イオンが錯体から抜け出すことになる。こうような生体内のイオンとしては、銅、カルシウム、マンガンなどがある。銅イオンは、生体内の血液にごく少量（１ｍｏｌ／Ｌ〜１０ｍｏｌ／Ｌ）が存在し、カルシウムイオンは、ＤＴＰＡ又はＤＯＴＡに比べ、相対的に低い結合程度を示す（Ｇｄに比べて略ｌｏｇ１０程度低い）。マンガンのみが、唯一、血液内において、ガドリニウムイオンとの交換ができるほど十分な量（５５ｍｏｌ／Ｌ〜１２５ｍｏｌ／Ｌ）含まれているだけでなく、熱力学的にガドリニウムに比べて４倍程度低い。したがって、マンガンイオンが存在する状態においてのＧｄ錯体の安定性は、非常に重要である。体内において生体内のイオンによって金属交換反応が発生すると、自由ガドリニウムイオンを生成し、腎臓を通して体外に排出される。

【0070】

もしマンガンイオンにより常磁性ガドリニウム錯体において金属交換反応が発生すると、リン酸塩緩衝溶液により自由ガドルリニウムイオンがＧｄＰＯ_４形態となるが、水溶性が非常に低く（Ｋ_ｓｐ＝１０^{−２２．２}ｍｏｌ^２／Ｌ^２）、これによって水プロトン緩和率に影響を及ぼさないようになる。したがって、時間による相対的な値、Ｒ_１^Ｐ（ｔ）／Ｒ_１^Ｐ（０）は、金属交換を測定する良い方法である。時間に応じたＲ_１^Ｐ（ｔ）／Ｒ_１^Ｐ（０）の変化は、反応速度について、ある程度の情報を提供し、理論的には時間が無限大（ｔ＝∞）になると、定常値となり、熱力学的な面を反映する。

【0071】

したがって、本発明に係るガドリニウム錯体の金属交換反応を確認するために、２．５ｍｍｏｌ／ＬのＧｄ錯体とＺｎＣｌ_２とがリン酸塩緩衝溶液（ｐＨ７．４）中で、時間によって変化する水のプロトン緩和率（Ｒ_１^Ｐ）を測定した。緩和率の変化を確認するために、１ｍＬのＧｄ錯体緩衝溶液に１０μＬ（２５０ｍｍｏｌ／Ｌ）のＺｎＣｌ_２溶液を添加した後、十分に振とうして、よく混ざり合うようにした。また、対照効果を確認するために、ドータレム（登録商標）、オムニスキャン（Ｏｍｎｉｓｃａｎ（登録商標））、マルチハンス（Ｎｕｌｔｉｈａｎｃｅ（登録商標））、プリモビスト（Ｐｒｉｍｏｖｉｓｔ（登録商標））及びエチルトラネキサメート（６）を酢酸亜鉛で前記と同様の実験を行った。実験結果は、室温で、３Ｔ ｗｈｏｌｅ ｂｏｄｙ ｓｙｓｔｅｍ（Ｍａｇｎｅｔｏｍ Ｔｉｍ Ｔｒｉｐ；Ｓｉｍｅｎｓ社製、Ｇｅｒｍａｎｙ）により測定した。測定結果を、図２に示した。

【0072】

図２は、常磁性緩和率の変化（Ｒ_１^Ｐ（ｔ）／Ｒ_１^Ｐ（０））を示す。図２に示したように、緩和率の進行程度によって二つのグループに分けられる。即ち、（Ａ）ドータレム（登録商標）、５ａ〜５ｃの大環状キレート、及び（Ｂ）その他の非環状キレートである。本発明により合成されたガドリニウム錯体１〜３（５ａ、５ｂ及び５ｃ）は、７２時間を基準として、全て非常に良い速度論的な安定性（略９８％以上）を示していることが分かる。このような特性は、ドータレム（登録商標）とほとんど類似する。これは、ガドリニウム錯体の構造的な類似性に起因すると考えられる。ガドリニウム錯体は、大環状モチーフで同数の５角の環を有している。最初の５分間で緩和率の上昇を見ることができるが、これは、ガドリニウムが脱錯化過程において水とよりよく接触して、上昇効果が生じたと見られる。その他のオムニスキャン（登録商標）、マルチハンス（登録商標）、プリモビスト（登録商標）においては、急激な減少効果が示されるが、これは、非環状開鎖ＤＴＰＡ−ビス（アミド）ミチーフによって、発生したと考えられる。特にオムニスキャン（登録商標）においては、同じ測定時間帯において、最初緩和率の３０％まで減少することを確認することができた。また、エチルトラネキサメート（６）の位置は、二つのグループ（大環状と非環状）の中間的位置にある。これは、ＤＴＰＡ−ビス（アミド）において、トラネキサム部分が熱力学的な安定性だけでなく、速度論的に重要な役割をすると予想することができる。このことに関して、ＤＴＰＡ−ＢＭＡと比較して、トラネキサム部分の存在が回転相関時間を増加させ、Ｒ_１緩和率を非常に増加させたといえる。

【0073】

実施例５．緩和時間及び緩和率
前記のガドリニウム錯体の緩和時間（Ｔ_１、Ｔ_２）と緩和率（Ｒ_１、Ｒ_２）を測定した。高緩和率を有する造影剤は、相対的に少ない量を投与しても高いコントラスト増強効果を示す。

【0074】

Ｔ_１測定は、１．５Ｔにおいて、多様な反転時間（ＴＩ：ｉｎｖｅｒｓｉｏｎ ｔｉｍｅ）の反転回復法を用いて確認した。ＭＲイメージは、３５種類の異なるＴＩ値（５０ｍｓｅｃ〜１７５０ｍｓｅｃ）から得られた。Ｔ_１緩和時間は、各ＴＩ値で測定された信号強度の非線形最小二乗適合法によって得られた。Ｔ_２測定は、多様なスピンエコー測定のため、ＣＰＭＧ（Ｃａｒｒ−Ｐｕｒｃｅｌｌ−Ｍｅｉｂｏｏｎ−Ｇｉｌｌ）パルスシーケンスを適用して行われた。３４種類の他の画像は、３４種類の異なるエコー時間（ＴＥ）値から得られた。Ｔ_２緩和時間は、それぞれのエコー時間において、多様なスピンエコー測定のためのピクセルの中間値を非線形最小二乗適合法によって得られた。緩和率は、緩和時間当りｍＭの逆数（Ｒ＝１／ｓ・ｍＭ）で計算した。決定された緩和時間と緩和率とは、最終的にファントムｍａｐに変換された。ファントムイメージは、比較の目的で、同一濃度でドータレム（登録商標）と、ガドリニウム錯体について得られた。測定結果は、図３及び表２に示した。図３は、本発明に係るガドリニウム錯体（５ａ〜５ｃ）とドータレム（登録商標）との緩和時間と緩和率マップを示す図であり、表２には、本発明のガドリニウム錯体と他のガドリニウム錯体の緩和時間及び緩和率を示した。

【0075】

表２から、市販されている造影剤と比べて、５ｂと５ｃが非常に高いＲ１値を持っていることが確認でき、特に最も高いＲ１値を持つ５ｃは、ドータレム（登録商標）と比べて、２．６倍高い。現在のシステムにおいて、このような高いＲ１値は、ドータレム（登録商標）と比べて、増加した分子量のためであると考えられる。分子量の増加は、回転相関時間を増加させるため、Ｒ１緩和率を向上させる。また、追加的に、内圏水分子とカルボキシル基との相互作用も緩和率上昇の因子として作用するかもしれない。即ち、５ｂ、５ｃの水分子交換率が疏水性アルキルエステル基によって増加したと見られ、対照的にカルボン酸のような親水性基（５ａ）は、水素結合により内圏水分子との交換速度が遅れ、緩和率が低いと考えられる。

【0076】

［表２］ガドリニウム錯体の緩和時間及び緩和率

【表2】

各値は平均値（±ＳＤ）である。^ｂ出典は参考文献８から得た。^ｃ出典は参考文献９から得た。

【0077】

実施例６．インビボ（Ｉｎ ｖｉｖｏ）ＭＲＩテスト
本発明に係るＭＲＩ造影剤のコントラスト効果を調べるために６週齢の雄性のＩＣＲマウス（体重：２９ｇ〜３１ｇ）を準備した。テストのため、マウスを、酸素存在下で、１．５％イソフルランで麻酔した後、本発明のガドリニウム錯体（５ｃ）を０．１ｍｍｏｌ（Ｇｄ／ｋｇ）で注入処理した。処理完了後、麻酔から覚めたマウスをケージに入れ、水と食べ物を自由に摂取するようにして、動物を約３７℃となるようにウォーターブランケットで温度を保持した。

【0078】

ＭＲイメージは、１．５Ｔ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ、ＵＳＡ）で自作した動物用ＲＦコイルを用いて測定した。このコイルは、内径が５０ｍｍ程度のレシーバータイプである。３Ｄ ｆａｓｔ ＳＰＧＲ（ｓｐｏｉｌｅｄ ＧＲＡＳＳ ｉｍａｇｅｓ）の定数を使用して、イメージを得た：反復時間（ＴＲ）＝８．８ ｍｓ；エコー時間（ＴＥ）＝３．９ ｍｓ；１０ｍｍ視野（ＦＯＶ）；２５６×１９２マトリックスサイズ；１．０ｍｍ スライス厚み；取得数（ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ；ＮＥＸ）＝４。スピンエコーのためのイメージ要素は、次の通りである：ＴＲ＝５００ｍｓ；ＴＥ＝１３ｍｓ；６ｍｍＦＯＶ；１９２×１２８マトリックスサイズ；１．５ｍｍスライス厚み；ＮＥＸ＝４。それぞれのイメージは、３分１６秒の間隔で測定され、ガドリニウム錯体（０．１ｍｍｏｌ／ｋｇの５ｃ）を注入した後、２６時間までのＭＲイメージを得た。そして、得られたＭＲイメージ分析は、Ａｄｖａｎｔａｇｅ Ｗｉｎｄｏｗ ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＧＥ Ｍｅｄｉｃａｌ社製、ＵＳＡ）を用いて、特定関心領域（ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｒｅｓｔ；ＲＯＩ）においての信号強度を測定した。また、ＣＮＲ（コントラスト−ノイズ比）は、下記数式３を用いて計算し、数式３においてＳＮＲは、信号−ノイズ比を意味する。
［数式３］
ＣＮＲ ＝ ＳＮＲ_ｐｏｓｔ − ＳＮＲ_ｐｒｅ

【0079】

測定結果は、図４Ａ〜４Ｂ、図５及び図６に示した。

【0080】

まず、図４Ａ〜４Ｂ及び図５は、測定されたＭＲイメージを示す。図４Ａから、ガドリニウム錯体を注入してから初期１時間以後肝臓で強い信号が観察され、同時間以後、心臓と動脈とも類似した血液プール効果が観察されることが分かる。そして、図４Ｂから確認できるように、注入５分後、肝臓、腎臓、大動脈でコントラスト効果が同時に観察される。したがって、本発明に係るガドリニウム錯体は、肝臓だけでなく血液プールでの二重造影効果を示すことが分かる。

【0081】

また、図５は、胆管を通して排出される姿を確認した結果である。初期には、胆管に造影剤が存在せず、画像が暗く見えるが、造影剤投与後、時間が経つにつれて肝臓の肝胆道吸収後に、ゆっくり胆管を通して、造影剤が腸へ排出されることが分かる。これは、造影剤（５ｃ）が、肝臓を造影し、次いで排出されることを証明する明白な根拠である。

【0082】

そして、ＩＣＰ（Ｉｎｄｕｃｔｉｖｅｌｙ Ｃｏｕｐｌｅｄ Ｐｌａｓｍａ）測定を通して、投与時間によるＧｄ（ＩＩＩ）イオンの含有量を調べることにより、胆管を通しての排出の有無をさらに確認した。確認の結果、表３に示したように、時間が経つほど肝臓と腎臓でＧｄ（ＩＩＩ）イオンの含有量が減少することを確認することができ、投与して６時間以後には、腸においてもＧｄ（ＩＩＩ）イオンが測定されることから、肝臓と胆管を通して排出されることが証明された。

【0083】

［表３］ＩＣＰ測定結果

【表3】

【0084】

係る本発明のガドリニウム錯体の二重造影効果は、ガドリニウム錯体の構造的な特異性に起因したと考えられる。既存の市販の造影剤と異なり、非環状ＤＴＰＡの代りに、大環状キレートＤＯ３Ａが用いられている。特に、キレート骨格上に芳香族置換基を有する造影剤は、これまでに報告がない。前記芳香族置換基と臓器又は血球との間の親油性相互作用により、血液プールにおける強調が起こると予測される。一方、現在市販されているマルチハンス（登録商標）とプリモビスト（登録商標）とは、非環状ＤＴＰＡ部分を利用し、これらの骨格が芳香族残基によって誘導され、これらの存在は、ＭＲＩ造影剤と臓器又は血球との間の非共有性の親油性相互作用を増加させると予想される。したがって、ＭＲＩ造影剤と臓器又は血球との間の非共有性の親油性相互作用のためには、芳香族化合物の存在が必須要素ではないことを本発明を通して確認できる。

【0085】

また、前記測定されたＭＲイメージのＣＮＲ（コントラスト−ノイズ比）を測定した結果、図６に示したように、強い肝細胞吸収が観察されるが、これは、投与されたＭＲＩ造影剤が膽管を通して、ゆっくり排出されるためであると考えられる。このような排出特性は、ＭＲＩ造影剤の生体内における長い循環時間により説明される。

【0086】

実施例７．細胞生存率
ＨＥＫ−２９３ヒト胎児腎臓細胞の生存率をＭＴＴ試験により測定した。

【0087】

まず、ＨＥＫ−２９３細胞を加熱不活性化したＦＣＳ（１０％）、ペニシリン（１００ＩＵ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００ｍｇ／ｍＬ）及びゼンタマイシン（２００ｍｇ／ｍＬ）を含むＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｅａｇｌｅ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ、Ｇｉｂｃｏ社製）培地に、１×１０^４細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレートに接種し、３７℃、５％ＣＯ_２条件下で、培養した。培養１日後、本発明のガドリニウム錯体５ａ〜５ｃ（ガドリニウム濃度；０．０１ｍＭ〜１．０ｍＭ）をペニシリン（１００ＩＵ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００ｍｇ／ｍＬ）及びゼンタマイシン（２００ｍｇ／ｍＬ）を含むＤＭＥＭ培地に希釈した後、培地を取り替え、２４時間培養した。培養完了後、５ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ（３−［４、５−ジメチルチアゾル−２−イル］−２、５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド、Ｓｉｇｍａ社製）溶液１０μＬで処理し、同一条件下で４時間反応させた。反応完了後、上澄みを除去した細胞にＤＭＳＯ（ジイメチルスルホキシド）１００μＬを添加して、ＭＴＴポルマザンを溶解し、マイクロプレートリーダー（Ｂｉｏ−ｒａｄ ５５０ Ｒｅａｄｅｒ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅ社製、ＵＳＡ）を用いて、５７０ｎｍで吸光度（Ｏ．Ｄ．）を測定した。測定結果を、図７に示した。

【0088】

図７に示したように、ガドリニウム錯体と２４時間培養したときに、細胞増殖及び生存に影響を及ぼさないことが確認できる。即ち、試験群の細胞生存率が１００％に近接することから、本発明のガドリニウム錯体造影剤は、細胞毒性を示さないことが確認できる。

【0089】

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７．Ｃａｃｈｅｒｉｓ，Ｗ．Ｐ．；Ｑｕａｙ，Ｓ．Ｃ．；Ｒｏｃｋｌａｇｅ，Ｓ．Ｍ．Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃｓ ａｎｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ｇａｄｏｌｉｎｉｕｍ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．Ｉｍａｇｉｎｇ １９９０，８（４），４６７−８１．
８．Ｒｏｈｒｅｒ，Ｍ．；Ｂａｕｅｒ，Ｈ．；Ｍｉｎｔｏｒｏｖｉｔｃｈ，Ｊ．；Ｒｅｑｕａｒｄｔ，Ｍ．；Ｗｅｉｎｍａｎｎ，Ｈ．Ｊ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ＭＲＩ ｃｏｎｔｒａｓｔ ｍｅｄｉａ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｆｉｅｌｄ ｓｔｒｅｎｇｔｈｓ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｒａｄｉｏｌ．２００５，４０（１１），７１５−２４．
９．Ｄｕｔｔａ，Ｓ．；Ｐａｒｋ，Ｊ．Ａ．；Ｊｕｎｇ，Ｊ．Ｃ．；Ｃｈａｎｇ，Ｙ．；Ｋｉｍ，Ｔ．Ｊ．Ｇｄ−ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ｏｆ ＤＴＰＡ−ｂｉｓ（ａｍｉｄｅ） ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｏｆ ｔｒａｎｅｘａｍｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｓｔｅｒｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｒｅｌａｘｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｆｏｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｉｍａｇｉｎｇ．Ｄａｌｔｏｎ．Ｔｒａｎｓ．２００８（１６），２１９９−２０６．

【産業上の利用可能性】

【0090】

上述のように、本発明によれば、ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸又はそのエステル化合物を製造することができ、前記化合物を用いて、ガドリニウム錯体を製造することができる。本発明により製造されたガドリニウム錯体を有効成分として含有するＭＲＩ造影剤は、現在市販されている造影剤に比べ、高緩和率を有する。加えて、本発明に係るＭＲＩ造影剤は、肝特異的及び血液プールの二重造影機能を有する。したがって、本発明に係るガドリニウム錯体を含有するＭＲＩ造影剤は、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）の造影剤として必要とされる主要な特性を満たすことで、ＭＲＩ造影剤として広く適用可能であり、特に既存の造影剤よりコントラスト増強効果を高められる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6】

【図7】