特許 5778667 ナノ粒子のテルミサルタン組成物及びその調製方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5778667

(24)【登録日】2015年7月17日

(45)【発行日】2015年9月16日

(54)【発明の名称】ナノ粒子のテルミサルタン組成物及びその調製方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/4184 20060101AFI20150827BHJP

   A61K 47/32 20060101ALI20150827BHJP

   A61K 9/10 20060101ALI20150827BHJP

   A61K 9/06 20060101ALI20150827BHJP

   A61K 9/12 20060101ALI20150827BHJP

   A61K 9/107 20060101ALI20150827BHJP

   A61K 9/19 20060101ALI20150827BHJP

   A61K 9/20 20060101ALI20150827BHJP

   A61K 9/48 20060101ALI20150827BHJP

   A61P 9/12 20060101ALI20150827BHJP

   C07D 235/20 20060101ALN20150827BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/4184

   A61K47/32

   A61K9/10

   A61K9/06

   A61K9/12

   A61K9/107

   A61K9/19

   A61K9/20

   A61K9/48

   A61P9/12

   !C07D235/20

【請求項の数】12

【全頁数】24

(21)【出願番号】特願2012-515568(P2012-515568)

(86)(22)【出願日】2010年6月18日

(65)【公表番号】特表2012-530124(P2012-530124A)

(43)【公表日】2012年11月29日

(86)【国際出願番号】HU2010000070

(87)【国際公開番号】WO2010146406

(87)【国際公開日】20101223

【審査請求日】2013年6月5日

(31)【優先権主張番号】P0900383

(32)【優先日】2009年6月19日

(33)【優先権主張国】HU

(31)【優先権主張番号】P1000215

(32)【優先日】2010年4月19日

(33)【優先権主張国】HU

(73)【特許権者】

【識別番号】511306985

【氏名又は名称】ナノフォーム ハンガリー リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110000855

【氏名又は名称】特許業務法人浅村特許事務所

(74)【代理人】

【識別番号】100066692

【弁理士】

【氏名又は名称】浅村 皓

(74)【代理人】

【識別番号】100072040

【弁理士】

【氏名又は名称】浅村 肇

(74)【代理人】

【識別番号】100102897

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 幸弘

(74)【代理人】

【識別番号】100088926

【弁理士】

【氏名又は名称】長沼 暉夫

(72)【発明者】

【氏名】フィリプクセイ、ジェノベバ

(72)【発明者】

【氏名】エトフェス、ソルト

(72)【発明者】

【氏名】ポングラクツ、カタリン

(72)【発明者】

【氏名】ダルバス、フェレンク

【審査官】 磯部 洋一郎

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２００８／０１３４１６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特開２００８−１６８１９７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００２−５３５３７９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００７−０６１６８８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２００５／０１３９３８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特開２００８−２８５５０１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００６−５０４５１１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０４−２３１９６０（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３１／４１８４

Ａ６１Ｋ ９／０６

Ａ６１Ｋ ９／１０

Ａ６１Ｋ ９／１０７

Ａ６１Ｋ ９／１２

Ａ６１Ｋ ９／１９

Ａ６１Ｋ ９／２０

Ａ６１Ｋ ９／４８

Ａ６１Ｋ ４７／０２

Ａ６１Ｋ ４７／０８

Ａ６１Ｋ ４７／１０

Ａ６１Ｋ ４７／１２

Ａ６１Ｋ ４７／１４

Ａ６１Ｋ ４７／１８

Ａ６１Ｋ ４７／２０

Ａ６１Ｋ ４７／２４

Ａ６１Ｋ ４７／２８

Ａ６１Ｋ ４７／３２

Ａ６１Ｋ ４７／３４

Ａ６１Ｋ ４７／３６

Ａ６１Ｋ ４７／３８

Ａ６１Ｋ ４７／４２

Ａ６１Ｐ ９／１２

Ｃ０７Ｄ ２３５／２０

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ａ）６００ｎｍ未満の平均粒径を有するナノ構造のテルミサルタン、及び
（ｂ）ポリ（ビニルピロリドン）から選ばれた少なくとも１つの安定剤
を含む安定なナノ構造のテルミサルタン医薬組成物であって、該組成物は、マイクロ流体系の連続流反応器内で、以下の
（１）テルミサルタン及びポリ（ビニルピロリドン）安定剤を水酸化ナトリウム溶液に溶解するステップ、
（２）ステップ（１）の溶液を、供給ユニットを使用してマイクロ流体系の連続流反応器の反応器ユニットを通過させ、一方、該反応器の第２の供給ユニットを使用して、薬学的に許容される酸の水溶液を該反応器の混合ユニットに通過させ、そこで第１の反応器ユニットから送り出されるテルミサルタンを含有する溶液と該薬学的に許容される酸の水溶液とを混合するステップ、及び
（３）ステップ（２）から製剤を沈殿させるステップ
を含む方法により調製され、該調製された安定なナノ構造のテルミサルタン組成物が部分的に非晶質構造を有する、上記安定なナノ構造のテルミサルタン医薬組成物。

【請求項2】

平均粒径が、６００ｎｍ〜５０ｎｍである、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

平均粒径が、２００ｎｍ〜５０ｎｍである、請求項１に記載の組成物。

【請求項4】

薬学的に許容される酸が、酢酸、クエン酸、マレイン酸、シュウ酸、ギ酸又は安息香酸である、請求項１から３までのいずれか一項に記載の組成物。

【請求項5】

（１）テルミサルタン及びポリ（ビニルピロリドン）安定剤を水酸化ナトリウム溶液に溶解するステップ、
（２）ステップ（１）の溶液を、供給ユニットを使用してマイクロ流体系の連続流反応器の反応器ユニットを通過させ、一方、該反応器の第２の供給ユニットを使用して、薬学的に許容される酸の水溶液を該反応器の混合ユニットに通過させ、そこで第１の反応器ユニットから送り出されるテルミサルタンを含有する溶液と該薬学的に許容される酸の水溶液とを混合するステップ、及び
（３）ステップ（２）から製剤を沈殿させるステップ
を含む、請求項１から４までのいずれか一項に記載のナノ構造のテルミサルタン組成物を調製する方法。

【請求項6】

薬学的に許容される酸が、酢酸、クエン酸、マレイン酸、シュウ酸、ギ酸又は安息香酸である、請求項５に記載の方法。

【請求項7】

互いに混和するが、テルミサルタンがその一方にしか溶解しない２つの異なる溶媒を使用することを含む、請求項５又は６に記載の方法。

【請求項8】

請求項１から４までのいずれか一項に記載のナノ構造の医薬組成物を、薬学的に許容される補助材料と一緒に含む、医薬組成物。

【請求項9】

水酸化ナトリウム分を含まない、請求項８に記載の医薬組成物。

【請求項10】

医薬品の調製のための、請求項１から４のいずれか一項に記載のナノ構造の医薬組成物の使用。

【請求項11】

高血圧を治療するための、請求項１から４までのいずれか一項に記載のナノ構造の医薬組成物又は請求項８若しくは９に記載の医薬組成物。

【請求項12】

組成物が、使用される投与量を低減するために、以下の少なくとも１つの性質：
−水への少なくとも０．４ｍｇ／ｍｌの溶解度、
−生理的媒体への即時再分散性、
−低減された食品効果、
−増大されたヒト胃腸管での吸収、
−急速な作用発現
を有する、請求項１０に記載の医薬品。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ナノ構造の（ナノ粒子状の）テルミサルタン（Ｔｅｌｍｉｓａｒｔａｎ）組成物、その調製方法及びそれらを含有する医薬組成物を対象とする。

【0002】

本発明のテルミサルタンのナノ粒子は、約６００ｎｍ未満の平均粒径を有する。テルミサルタンは、高血圧の管理に使用されるアンギオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト（ＡＲＢ）である。

【背景技術】

【0003】

Ａ．ナノ粒子形成／生成に関する背景
医薬品としての適用のためのナノ粒子の開発は、薬物送達系に合わせてカスタマイズされた溶液剤を開発する新規技術の振興に取り組むものである。薬物送達系は、身体における薬物又は他の関連化学物質の吸収、分布、代謝及び排泄速度に良い影響を与えるべきである。さらに薬物送達系は、薬物をその標的受容体に結合させ、受容体のシグナル伝達及び活性に影響を及ぼすべきである。薬物送達材料は、特定の薬物と相溶性があり、容易に結合し、使用後は、正常な排泄経路を介して代謝又は排出される断片に分解され得るべきである。

【0004】

異なる一手法は、活性成分（ＡＰＩ）をナノ粒子の形態で生成することである。

【0005】

テルミサルタン組成物は、ＵＳ２００２００９４９９７、ＵＳ２００９／００３００５７Ａ１、ＵＳ２００９００１２１４０及びＥＰ１７９７８７２Ａ１特許出願に記載されている。

【0006】

ＡＰＩナノ粒子は、当技術分野で公知の、例えば製粉、ホモジナイズ、沈殿技術、又は超臨界流体技術を使用して生成することができる。ナノ粒子組成物の生成方法は、ＵＳ５，７１８，３８８、ＵＳ５，８６２，９９９、ＵＳ５，６６５，３３１、ＵＳ５，５４３，１３３、ＵＳ５，５３４，２７０にも記載されている。

【0007】

Ｂ．テルミサルタンに関する背景
テルミサルタンは、化学的には４’−［（１，４’−ジメチル−２’−プロピル［２，６’−ビ−１Ｈ−ベンズイミダゾール］−１’−イル）メチル］−［１，１’−ビフェニル］−２−カルボン酸と記載される。この実験式はＣ_３３Ｈ_３０Ｎ_４Ｏ_２であり、その分子量は５１４．６３であり、その構造式は、

【化1】

である。

【0008】

テルミサルタンは、白色からわずかに黄色がかった固体である。テルミサルタンは、実質的に水不溶性であり、３〜９のｐＨ範囲であり、強酸にわずかに可溶性であり（塩酸には不溶性であることを除く）、強塩基には可溶性である。

【0009】

テルミサルタンは、２０ｍｇ、４０ｍｇ又は８０ｍｇのテルミサルタンを含有する経口投与用の錠剤として利用可能である。この錠剤は、以下の不活性成分、水酸化ナトリウム、メグルミン、ポビドン、ソルビトール及びステアリン酸マグネシウムを含有する。錠剤は吸湿性であり、湿気からの保護を必要とする。

【0010】

薬理学的特性
経口投与後、テルミサルタンのピーク濃度（Ｃｍａｘ）は、投与の０．５〜１時間以内に達する。食品によって、テルミサルタンの生体利用能はわずかに低下し、血漿濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、４０ｍｇの錠剤で約６％、１６０ｍｇの投与後で約２０％減少する。テルミサルタンの絶対的な生体利用能は、用量依存性である。生体利用能は、４０ｍｇ及び１６０ｍｇにおいてそれぞれ４２％及び５８％であった。経口投与されたテルミサルタンの薬物動態は、２０〜１６０ｍｇの用量範囲にわたって非線形であり、血漿濃度（Ｃｍａｘ及びＡＵＣ）は、用量の増大に伴って比例を上回って増大する。テルミサルタンは、双指数関数的減衰動態を示し、終末排出半減期は約２４時間である。１日１回の投与によるテルミサルタンの血漿濃度は、ピーク血漿濃度の約１０〜２５％である。テルミサルタンは、１日１回の投与を反復すると１．５〜２．０の血漿内蓄積指数を有する。

【0011】

代謝及び排出
^１４Ｃ−標識化テルミサルタンを静脈内又は経口投与した後、投与した用量の大部分（＞９７％）は、胆汁による排泄によって糞中にそのまま排出されるが、尿中に極微量が見出された（それぞれ全放射活性の０．９１％及び０．４９％）。

【0012】

テルミサルタンは、共役によって代謝されて、薬理学的に不活性なアシルグルクロニドを形成する。親化合物のグルクロニドは、ヒトの血漿及び尿中において同定されている唯一の代謝産物である。単回投与後、グルクロニドは、血漿において測定される放射活性の約１１％に相当する。チトクロームＰ４５０アイソザイムは、テルミサルタンの代謝に関与しない。

【0013】

テルミサルタンの総血漿クリアランスは、＞８００ｍＬ／分である。終末相半減期及び総クリアランスは、用量には無関係であると思われる。

【0014】

分布
テルミサルタンは、血漿タンパク質（＞９９．５％）、主にアルブミン及びα１−酸性糖タンパク質に高度に結合する。血漿タンパク質の結合は、推奨用量で達成される濃度範囲にわたって一定である。テルミサルタンの分布体積は約５００リットルであり、これはさらなる組織結合を示すものである。

【0015】

副作用
最もしばしば自然発生的に報告される副作用には、頭痛、浮動性めまい、無力症、咳嗽、悪心、疲労、脱力感、浮腫、顔面浮腫、下肢浮腫、血管神経性浮腫、じんま疹、過敏症、発汗増大、紅斑症、胸痛、心房細動、うっ血性心不全、心筋梗塞、血圧上昇、高血圧の悪化、低血圧症（体位性低血圧を含む）、高カリウム血症、失神、消化不良、下痢、疼痛、尿路感染症、勃起不全、背痛、腹痛、筋痙攣（下肢痙攣を含む）、筋肉痛、徐脈、好酸球増加症、血小板減少症、尿酸の増大、異常な肝機能／肝障害、急性腎不全を含む腎機能障害、貧血及びＣＰＫの増大が含まれる。

【0016】

テルミサルタンは水不溶性なので、従来の慣習的なテルミサルタン製剤の使用に関連する問題を克服するために、親油性／生体利用能の強化／吸収の増大／副作用の低減／投与量の低減／食品効果の低減が、当技術分野では必要とされている。さらにこれらの問題は、テルミサルタンの表面を改質して初回通過効果を低減し、又は代謝を改質することによって解決することができる。テルミサルタンの従来の製剤の他に、経皮適用によって、テルミサルタンの所望の効果を達成するのに必要な時間を低減することができる。本発明は、この需要を満たすものである。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0017】

本発明は、親油性／生体利用能の強化／吸収及び溶解速度の増大／副作用の低減／投与量の低減を伴う、ナノ構造の（ナノ粒子状の）テルミサルタン組成物を記載する。

【0018】

以下の例に例示する通り、安定剤のすべての組合せが安定なナノ粒子を形成するわけではない。安定なテルミサルタンナノ粒子は、選択された安定剤を使用して、連続流による方法、好ましくはマイクロ流体系の連続流による方法によって生成され得ることが発見された。

【課題を解決するための手段】

【0019】

本発明は、約６００ｎｍ未満の平均粒径を有するナノ構造のテルミサルタンを含む。

【0020】

本発明のナノ構造のテルミサルタンは、６００ｎｍ〜５０ｎｍ、好ましくは２００ｎｍ〜５０ｎｍの平均粒径を有する。
本発明のさらなる態様は、
（ａ）約６００ｎｍ未満の平均粒径を有するナノ構造のテルミサルタン、及び
（ｂ）少なくとも１つの安定剤
を含む、安定なナノ構造のテルミサルタン組成物である。

【図面の簡単な説明】

【0021】

【図1】３０ｍｇ／ｋｇのナノ構造及び参照試験物質の経口投与後のテルミサルタンの血清濃度

【図2】３０ｍｇ／ｋｇのナノ構造及びＰｒｉｔｏｒ試験物質の経口投与後のテルミサルタンの血清濃度

【図3】摂食状態におけるｐＨ＝５の３０ｍｇ／ｋｇのナノ構造及びＰｒｉｔｏｒ試験物質の経口投与後のテルミサルタンの血清濃度

【図4a】絶食状態における、４０ｍｇのナノ構造のテルミサルタン及び参照試験物質の経口投与後のテルミサルタンの血清濃度

【図4b】摂食状態における、４０ｍｇのナノ構造のテルミサルタン及び参照試験物質の経口投与後のテルミサルタンの血清濃度

【図4c】絶食状態及び摂食状態における、ＮａＯＨを伴うナノ構造のテルミサルタンの経口投与後のテルミサルタンの血清濃度

【図5】テルミサルタンの溶解度の増大

【図6】テルミサルタンの溶解度の増大

【図7】参照テルミサルタン及びナノ構造のテルミサルタンの溶解比較試験

【図8】参照テルミサルタン、本発明のナノ構造のテルミサルタン組成物及び安定剤のＸ線ディフラクトグラム

【図9】蒸留水におけるナノ構造のテルミサルタンの即時再分散性

【図10】再分散の前及び後のテルミサルタンナノ粒子の大きさ及びサイズ分布

【図11】立体顕微鏡によって１００×拡大率で観測した参照テルミサルタン（ａ）及びナノ構造のテルミサルタン（ｂ）の湿潤性

【図12】異なる安定剤を使用する、テルミサルタンナノ粒子の粒径及びサイズ分布

【図13】テルミサルタンナノ粒子の粒径及びサイズ分布に対する安定剤の濃度の効果

【図14】テルミサルタンナノ粒子の粒径及びサイズ分布

【図15】ラットにおける薬物動態試験の結果

【図16】図４ａ及び４ｂに提示の結果から算出した、雌性ビーグル犬のテルミサルタンの主な薬物動態パラメーター

【図17】テルミサルタンの粒径に対する流速の効果

【発明を実施するための形態】

【0022】

本発明の組成物は、連続流反応器内で、好ましくはマイクロ流体系の連続流反応器内で調製される。

【0023】

本発明の組成物では、テルミサルタンの平均粒径は、好ましくは６００ｎｍ〜５０ｎｍ、好ましくは２００ｎｍ〜５０ｎｍである。

【0024】

本発明の組成物では、（ａ）テルミサルタンは、テルミサルタンと他の添加剤（賦形剤）を含まない少なくとも１つの安定剤との混合総重量に対して、重量で約９９．５％〜約０．００１％、約９５％〜約０．１％、及び約９０％〜約０．５％からなる群から選択される量で存在し、（ｂ）安定剤は、テルミサルタンと他の添加剤（賦形剤）を含まない少なくとも１つの安定剤との混合総乾燥重量に対して、重量で約０．５％〜約９９．９９９％、約５．０％〜約９９．９％、及び約１０％〜約９９．５％からなる群から選択される量で存在し、又は（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の組合せである。

【0025】

本発明の組成物では、テルミサルタンは、結晶相、非晶質相、半結晶相、半非晶質相及び共結晶、並びに任意の多形体でのその混合物として使用することができる。

【0026】

本発明の組成物の調製では、安定剤には、非イオン性、アニオン性、カチオン性、イオン性ポリマー／界面活性剤が含まれ、双性イオン性界面活性剤を使用することができる。本発明では、２つ以上の安定剤の組合せを使用することもできる。本発明で使用できる有用な安定剤には、それに限定されるものではないが、公知の医薬品用の有機及び無機添加剤（賦形剤）が含まれる。かかる添加剤（賦形剤）には、様々なポリマー、低分子量オリゴマー、天然産物及び界面活性剤が含まれる。

【0027】

安定剤の代表例には、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリ（ビニルピロリドン）、ラウリル硫酸ナトリウム、ゼラチン、デキストラン、ステアリン酸、グリセロールモノステアレート、セトステアリルアルコール、ソルビタンエステル、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０及びＴｗｅｅｎ（登録商標）８０（ＩＣＩ Ｓｐｅｃｉａｌｉｔｙ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）などの、例えば市販のＴｗｅｅｎ（登録商標）製品；ポリエチレングリコール（例えば、Ｃａｒｂｏｗａｘ（登録商標）３５５０及び９３４（Ｕｎｉｏｎ Ｃａｒｂｉｄｅ）、ポリ（メタ）アクリレート系ポリマー及びコポリマー（Ｅｕｄａｒｇｉｔ（登録商標））、１−エテニル−２−ピロリジノンとの酢酸エテニルエステルポリマー（ＰＶＰ／ＶＡコポリマー）、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、トコフェリルポリエチレングリコールスクシネート、ポリエトキシ化ヒマシ油及びその誘導体、ポリオキシエチレンステアリン酸エステル、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、酢酸フタル酸セルロース、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、エチレンオキシド及びホルムアルデヒドとの４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）−フェノールポリマー（チロキサポール、スペリオン（ｓｕｐｅｒｉｏｎｅ）及びトリトンとしても公知）、ポロキサマー（例えば、エチレンオキシド及びプロピレンオキシドのブロックコポリマーであるＰｌｕｒｏｎｉｃｓ）；ポロキサミン（例えば、プロピレンオキシド及びエチレンオキシドをエチレンジアミンに逐次的に付加することによって得られる四官能性ブロックコポリマーである、Ｐｏｌｏｘａｍｉｎｅとしても公知のＴｅｔｒｏｎｉｃ（ＢＡＳＦ Ｗｙａｎｄｏｔｔｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ニュージャージー州Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ））；ＰＥＧ−リン脂質、ＰＥＧ−コレステロール、ＰＥＧ−コレステロール誘導体、ＰＥＧ−ビタミンＡ、ＰＥＧ−ビタミンＥ、リゾチーム、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）、ポリ（メチルビニルエーテル）、Ｐｌａｓｄｏｎｅ Ｓ６３０などのビニルピロリドン及び酢酸ビニルのランダムコポリマー等が含まれる。

【0028】

有用なイオン性安定剤の例には、それに限定されるものではないが、ポリマー、生体用ポリマー、多糖、セルロース、アルギン酸塩、リン脂質、及び双性イオン性安定剤などの非ポリマー性化合物、ポリ−ｎ−メチルピリジニウム、塩化アントリウル（ａｎｔｈｒｙｕｌ）ピリジニウム、カチオン性リン脂質、キトサン、ポリリジン、ポリビニルイミダゾール、ポリブレン、ポリメチルメタクリレートトリメチルアンモニウムブロミドブロミド（ＰＭＭＴＭＡＢｒ）、塩化ベンザルコニウム、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、臭化ヘキシルデシルトリメチルアンモニウム（ＨＤＭＡＢ）、及びポリ（ビニルピロリドン）−２−ジメチルアミノエチルメタクリレートジメチルスルフェートが含まれる。

【0029】

本発明の組成物の利点には、それに限定されるものではないが、（１）錠剤又は他の固体剤形の大きさがより小さく、有益な経皮／外用適用をもたらすこと、（２）慣習的なテルミサルタンの形態と比較して、同じ薬理学的効果を得るのに必要な薬物の用量が少ないこと、（３）慣習的なテルミサルタンの形態と比較して、生体利用能が高いこと、（４）薬物動態プロファイルが改善されていること、（５）慣習的な同じ活性化合物の形態と比較して、テルミサルタンナノ粒子の溶解速度が速いこと、（６）テルミサルタンナノ粒子の代謝が改質されていることが含まれる。

【0030】

本発明の組成物の調製では、１つ若しくは複数の安定剤を使用する連続的な溶媒−逆溶媒沈殿、又は１つ若しくは複数の安定剤を使用する連続的な化学的沈殿によって、テルミサルタンの形態が変換されることも非晶質薬物が形成されることもなく、事前の滅菌なしにナノ粒子を形成するステップを含む方法を使用することができる。

【0031】

本発明の別の態様は、連続流反応器内で、１つ又は複数の安定剤を含むテルミサルタンの適切な溶液から、所望に応じて薬学的に許容される酸の存在下でナノ構造のテルミサルタンを沈殿させるステップを含む、ナノ構造のテルミサルタンを調製する方法である。

【0032】

連続流反応器として、マイクロ流体系の連続流反応器を使用することができる。

【0033】

使用されるマイクロ流体系の連続流反応器は、Ｉ．Ｈｏｒｎｙａｋ、Ｂ．Ｂｏｒｃｓｅｋ及びＦ．Ｄａｒｖａｓによる刊行物「マイクロ流体ナノ流体（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄ Ｎａｎｏｆｌｕｉｄ）」ＤＯＩ １０．１００７／ｓ１０４０４−００８−０２５７−９に記載されている。

【0034】

好ましくは、この方法は、（１）テルミサルタン及び任意選択により１つ又は複数の安定剤を適切な溶媒に溶解するステップと、（２）ステップ（１）の製剤を、任意選択により安定剤（単数又は複数）を含む溶液に、所望に応じて薬学的に許容される酸の存在下で添加するステップと、（３）ステップ（２）から製剤を沈殿させるステップによって実施することができる。

【0035】

この方法の他の好ましい実施形態は、該方法が、（１）テルミサルタン及び任意選択により１つ又は複数の安定剤を適切な溶媒に溶解するステップと、（２）ステップ（１）の製剤を、１つ又は複数の安定剤を含む溶液に、所望に応じて薬学的に許容される酸の存在下で添加するステップと、（３）ステップ（２）から製剤を沈殿させるステップによって実施される実施形態である。

【0036】

最も好ましくは、本発明の方法は、（１）テルミサルタン及び１つ又は複数の安定剤をアルカリ水酸化物溶液に溶解するステップと、（２）ステップ（１）の製剤を、任意選択により１つ又は複数の安定剤を含む薬学的に許容される酸の溶液に添加するステップと、（３）ステップ（２）から製剤を沈殿させるステップによって実施される。

【0037】

溶媒として、（ａ）互いに混和するが、テルミサルタンがその一方にしか溶解しない２つの異なる溶媒を使用することができ、又は（ｂ）テルミサルタンの高分子電解質複合体が実質的にナノ構造の粒子を形成する２つのステップにおいて同じ溶媒を使用することができ、但し、適用される安定剤は、使用する溶媒に溶解するという制限が付く。

【0038】

かかる溶媒は、アルカリ水酸化物溶液、好ましくは水酸化ナトリウム溶液、ジメチルスルホキシド（ｓｕｌｆｌｏｘｉｄｅ）、エタノール、ｉ−プロパノール、テトラヒドロフラン、アセトン、メチル−エチル−ケトン、ジメチル−ホルムアミド、好ましくはジエチレン−グリコール−エチル−エーテルであってよい。

【0039】

薬学的に許容される酸として、酢酸、クエン酸、マレイン酸、シュウ酸、ギ酸、安息香酸等を使用することができる。

【0040】

ナノ粒子のテルミサルタンの粒径は、使用する溶媒、流速、及びテルミサルタンと安定剤の比によって影響を受けることがある。

【0041】

本発明の別の態様は、生物学的に関連する媒体、例えば生理食塩水、ｐＨ＝２．５のＨＣｌ溶液における、テルミサルタンのナノサイズの固体形態の良好な／即時再分散性を対象とする。

【0042】

本発明の別の態様は、本発明の安定なナノ粒子のテルミサルタン又はその組成物、及び任意選択により薬学的に許容される補助材料を含む医薬組成物である。

【0043】

本発明の医薬組成物は、（ａ）経口、肺、直腸、結腸、非経口、大槽内、腟内、腹腔内、眼、耳、局所、頬側、経鼻及び外用投与からなる群から選択される投与に合わせて製剤化され、（ｂ）液体分散剤、ゲル剤、エアゾール剤、軟膏剤、クリーム剤、凍結乾燥させた製剤、錠剤、カプセル剤からなる群から選択される剤形に製剤化され、（ｃ）制御放出製剤、急速溶融製剤、遅延放出製剤、延長放出製剤、拍動的放出製剤、並びに即時放出及び制御放出の混合製剤からなる群から選択される剤形に製剤化され、又は（ｄ）（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の任意の組合せに製剤化され得る。

【0044】

組成物は、固体、液体での経口投与、腟内、直腸、局所（散剤、軟膏剤又はドロップ剤）、又は外用投与等のための様々な種類の添加剤（賦形剤）を添加することによって製剤化することができる。

【0045】

本発明の好ましい剤形は、固体又は液体（クリーム／軟膏）剤形であるが、任意の薬学的に許容される剤形を利用することができる。

【0046】

ヒトの身体への経口送達のために、ナノ粒子をそれらの水性分散液として、最終的な剤形として投与することもできる。これは、ナノ粒子の形成後のさらなる処理なしに送達する一手段である。しかし、水性環境における薬物若しくはポリマーの安定性の低さ、又は薬物の味の悪さにより、コロイド粒子を固体剤形に、すなわちカプセル剤及び錠剤に組み込む必要があり得る。

【0047】

或いは、例えば適切な充填剤をコロイド分散液と共に造粒して造粒物（ｇｒａｎｕｌａｔｉｏｎ）を形成することによって、コロイド粒子の水性分散液を液体として固体剤形に組み込むことができる。その後、かかる顆粒はカプセルに充填され、又は錠剤に圧縮され得る。或いは、例えば流動床内の担体としての糖ペレット（ｓｕｇａｒ−ｐｅｌｌｅｔ）上に、分散液を積層することによって、ナノ粒子の固体形態を生成することができる。錠剤のコア、又は顆粒若しくはペレットのこれらの製造方法では、その後コーティングステップを実施することにより、フィルムコーティングされた錠剤又はカプセル剤におけるフィルムコーティングされた顆粒を最終的な剤形として提示する潜在的な可能性が生じ得る。

【0048】

非経口注入に適した組成物は、生理的に許容される水性又は非水性の滅菌溶液剤、分散剤、懸濁剤又はエマルジョン、及び注入可能な滅菌溶液剤又は分散剤に再構成するための滅菌散剤を含むことができる。適切な水性及び非水性の担体、賦形剤（希釈剤）、溶媒又はビヒクルの例には、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレン−グリコール、グリセロール等）、適切なその混合物、植物油（オリーブ油など）及びオレイン酸エチルなどの注入可能な有機エステルが含まれる。適切な流動性は、例えばレシチンなどのコーティングを使用すること、分散剤の場合には必要な粒径を維持すること、及び界面活性剤を使用することによって維持することができる。

【0049】

経口投与のための固体剤形には、それに限定されるものではないが、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤及び顆粒が含まれる。かかる固体剤形では、活性剤は、以下の（ａ）クエン酸ナトリウム又はリン酸二カルシウムなどの１つ又は複数の不活性な添加剤（賦形剤）（又は担体）、（ｂ）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール及びケイ酸などの充填剤又は増量剤、（ｃ）カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリ（ビニルピロリドン）、スクロース及びアカシアなどの結合剤、（ｄ）グリセロールなどの湿潤剤、（ｅ）寒天、炭酸カルシウム、バレイショ又はタピオカデンプン、アルギン酸、特定の複合ケイ酸塩及び炭酸ナトリウムなどの崩壊剤、（ｆ）パラフィンなどの溶解遅延剤（ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｒｅｔａｒｄｅｒ）、（ｇ）第４級アンモニウム化合物などの吸収促進剤、（ｈ）セチルアルコール及びグリセロールモノステアレートなどの湿潤剤、（ｉ）カオリン及びベントナイトなどの吸着剤、並びに（ｊ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム又はその混合物などの滑沢剤の少なくとも１つと混合される。カプセル剤、錠剤及び丸剤では、剤形は、緩衝剤を含むこともできる。

【0050】

経口投与のための液体剤形には、薬学的に許容されるエマルジョン、溶液剤、懸濁剤、シロップ及びエリキシル剤が含まれる。液体剤形は、テルミサルタンに加えて、水又は他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤などの、当技術分野で一般に使用される不活性賦形剤（希釈剤）を含むことができる。例示的な乳化剤は、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、綿実油、落花生油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油及びゴマ油などの油、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、ソルビタンの脂肪酸エステル、又はこれらの物質の混合物等である。

【0051】

かかる不活性賦形剤（希釈剤）以外では、組成物は、湿潤剤、乳化剤及び懸濁化剤、甘味剤、香味剤、並びに賦香剤などのアジュバントを含むこともできる。

【0052】

本発明の医薬組成物は、親油性の増大／生体利用能／吸収及び溶解速度の増大／副作用の低減／より急速な作用発現を示すことにより、高血圧の治療において、慣習的なテルミサルタンの形態と比較して少ない投与量で使用することができる。

【0053】

本発明はまた、本明細書に開示のテルミサルタンナノ粒子を用いる、高血圧の管理方法を対象とする。

【0054】

Ａ．本発明のテルミサルタンナノ粒子の好ましい特徴
１．高い生体利用能
本発明のナノ粒子のテルミサルタン組成物は、従来公知の慣習的なテルミサルタン製剤と比較して、高い生体利用能、急速な作用発現、食品効果の低減及び必要用量の低減を示すことが提案される。

【実施例】

【0055】

（例１）
絶食状態の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットのインビボ薬物動態試験：参照としての活性な医薬品成分である市販のＰｒｉｔｏｒ錠剤とナノ構造のテルミサルタンの比較
実験プロトコル
絶食状態の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおけるインビボ薬物動態の比較試験
参照テルミサルタンの単回経口用量を３０ｍｇ／ｋｇとし、例８のナノ構造のテルミサルタン製剤の単回経口用量を、３０ｍｇ／ｋｇの活性剤に相当する２２３．８ｍｇ／ｋｇとした。両方の試験物質を、胃管を介して５ｍｌ／ｋｇの投与体積で投与した。試験品目のビヒクルは０．９％ＮａＣｌ滅菌溶液とし、処理中、継続的に撹拌することによって懸濁液を均質に保ち、沈降から生じる誤差を最小限に抑えた。

【0056】

ｐＨ＝５のナノ構造の懸濁液及びＰｒｉｔｏｒ懸濁液を投与する、摂食状態の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおけるインビボ薬物動態の比較試験
参照テルミサルタンの単回経口用量を３０ｍｇ／ｋｇとし、例８のナノ構造のテルミサルタン製剤の単回経口用量を、３０ｍｇ／ｋｇの活性剤に相当する２２３．８ｍｇ／ｋｇとした。両方の試験物質を、胃管を介して５ｍｌ／ｋｇの投与体積で投与した。試験品目のビヒクルは０．９％ＮａＣｌ滅菌溶液とし、それを１ＮのＨＣｌ溶液によってｐＨ＝５に調節した。処理中、継続的に撹拌することによって懸濁液を均質に保ち、沈降から生じる誤差を最小限に抑えた。

【0057】

動物
雄性Ｗｉｓｔａｒラット（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｎｔｅｒ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｚｅｇｅｄから購入）を、温度及び光制御条件下で水道水を自由に摂取できるようにし、げっ歯類用の標準ペレット食（Ｂｉｏｐｌａｎ Ｌｔｄ、Ｉｓａｓｚｅｇ、ハンガリー）で維持した。順化期間は少なくとも４日とした。ラットを、各群６匹の複数群に無作為化し、各群を使用して、テルミサルタン処理後の様々な時間に採血した。すべての動物を、経口処理前に１６時間絶食させた。動物をハロタンで麻酔し、テルミサルタン処理の１５、３０、４５、６０、１２０及び３６０分後に、心穿刺によって血液を採取した。すべての動物について、処理後すぐに水を摂取できるようにした。最後の群のラット（３６０分後に屠殺した）には、処理の１２０分後にげっ歯類用の標準食を摂取できるようにした。６０分以内に凝固血液を遠心分離（７０００ｒｐｍ、１０分、４℃）することによって血清試料を調製し、分析まで−２０℃で保存した。

【0058】

試料調製
一定分量２００μｌの血清を、内部標準の使用溶液２０μｌ及びタンパク質の沈殿のためのアセトニトリル１．２ｍｌと混合した。混合物を１分間ボルテックスし、４℃において１２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離にかけた。上清を、窒素流の下で４０℃において蒸発乾固させ、水−メタノール（５０：５０ｖ／ｖ）２００μｌで再構成し、２０μｌをＨＰＬＣ系に注入した。

【0059】

統計的分析
対応のない（ｕｎｐａｉｒｅｄ）ｔ−検定を使用して、同じ時点に属する血清濃度を統計的に比較した。統計的分析及びグラフ描画を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ４．０（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、ＵＳＡ、サンディエゴ）で実施した。

【0060】

結果
ａ）参照とナノ構造のテルミサルタンの比較
参照の活性な医薬品及びナノ構造のテルミサルタンの両方の処理によって、３０ｍｇ／ｋｇの試験物質の経口投与後に、１５〜３６０分の間隔で二相性プロファイルを示す検出可能な血清濃度が得られた。ナノ構造の処方からのテルミサルタンの吸収は、参照物質の投与後よりも明らかに急速であり、完全である。ナノ構造のテルミサルタンによる処理では４５分後に最大血清濃度（Ｃ_ｍａｘ）が決定されたが、参照調製物は１２０分後にＣ_ｍａｘを示した（図１）。

【0061】

１５〜３６０分の血清濃度曲線下面積（ＡＵＣ_{１５〜３６０分}）を算出して、試験品目の吸収度を特徴付けた。ナノ構造のテルミサルタンは、６４１２μｇ・分／ｍｌのＡＵＣ_{１５〜３６０分}値を示したが、参照処理後のこの値は９４０．１μｇ・分／ｍｌであった。２つのＡＵＣ値の比（ＡＵＣ_{１５〜３６０ｍｍ（ナノサイズ）}／ＡＵＣ_{１５〜３６０分（参照）}）は、６．８２であった。

【0062】

図１：３０ｍｇ／ｋｇのナノ構造及び参照試験物質の経口投与後のテルミサルタンの血清濃度

【0063】

ｂ）市販のＰｒｉｔｏｒ錠剤とナノ構造のテルミサルタンの比較
参照の活性な医薬品及びナノ構造のテルミサルタンの両方の処理によって、３０ｍｇ／ｋｇの試験物質の経口投与後に、１５〜３６０分の間隔で二相性プロファイルを示す検出可能な血清濃度が得られた。同じ時間に対応する２つの処理（対応のないｔ−検定）の間に、統計的に異なる血清濃度は見出されなかった。ナノ構造のテルミサルタンによる処理では４５分後に最大血清濃度（Ｃ_ｍａｘ）が決定されたが、Ｐｒｉｔｏｒ４０ｍｇ錠剤は６０分後にＣ_ｍａｘを示した。

【0064】

１５〜３６０分の血清濃度曲線下面積（ＡＵＣ_{１５〜３６０分}）を算出して、試験品目の吸収度を特徴付けた。ナノ構造のテルミサルタンは、６４１２μｇ・分／ｍｌのＡＵＣ_{１５〜３６０分}値を示したが、Ｐｒｉｔｏｒ４０ｍｇ錠剤による処理後のこの値は８０６９μｇ・分／ｍｌであった。２つのＡＵＣ値の比（ＡＵＣ_{１５〜３６０ｍｍ（ナノ構造）}／ＡＵＣ_{１５〜３６０分（Ｐｒｉｔｏｒ４０ｍｇ錠剤）}）は、０．７９５であった。

【0065】

投与の３０分後のテルミサルタンの血清濃度は、最小限を示す。しかし、１５、３０及び４５分における濃度の比較では（ＡＮＯＶＡに続いてＮｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ事後試験）、統計的有意差はなかった。全体的に見て、提示された結果は、ナノ構造のテルミサルタンの吸収が、市販の薬物調製物（Ｐｒｉｔｏｒ４０ｍｇ錠剤）の投与後に得られた吸収と統計的に同一であることを明示している（図２）。

【0066】

図２：３０ｍｇ／ｋｇのナノ構造及びＰｒｉｔｏｒ試験物質の経口投与後のテルミサルタンの血清濃度

【0067】

ｃ）ＮａＯＨの存在による効果の排除
溶解度に対する水酸化ナトリウムの効果を評価するために、ｐＨ＝５に調節した生理食塩水中Ｐｒｉｔｏｒ錠剤及び例８のナノ構造のテルミサルタンを投与して、ＰＫ試験を実施した。テルミサルタンの吸収は、摂食状態後のものであった。

【0068】

参照の活性な医薬品及びナノ構造のテルミサルタンの両方の処理によって、摂食状態における３０ｍｇ／ｋｇの試験物質の経口投与後に、１５〜３６０分の間隔で二相性プロファイルを示す検出可能な血清濃度が得られた。ナノ構造の処方からのテルミサルタンの吸収は、参照物質の投与後よりも明らかに急速であり、完全である。ナノ構造のテルミサルタンによる処理では３０分後に最大血清濃度（Ｃ_ｍａｘ）が決定されたが、参照調製物は１２０分後にＣ_ｍａｘを示した。

【0069】

１５〜３６０分の血清濃度曲線下面積（ＡＵＣ_{１５〜３６０分}）を算出して、試験品目の吸収度を特徴付けた。ナノ構造のテルミサルタンは、２７４４μｇ・分／ｍｌのＡＵＣ_{１５〜３６０分}値を示したが、参照処理後のこの値は１２４２μｇ・分／ｍｌであった。２つのＡＵＣ値の比（ＡＵＣ_{１５〜３６０ｍｍ（ナノサイズ）}／ＡＵＣ_{１５〜３６０分（参照）}）は、２．２１であった（図３）。

【0070】

図３：摂食状態におけるｐＨ＝５の３０ｍｇ／ｋｇのナノ構造及びＰｒｉｔｏｒ試験物質の経口投与後のテルミサルタンの血清濃度

【0071】

表１：ラットにおける薬物動態試験の結果

【0072】

（例２）
摂食／絶食状態の雌性ビーグル犬でのインビボ薬物動態の比較試験
この試験は、摂食及び絶食させた動物における様々なテルミサルタン製剤の経口投与後に得られた薬物動態パラメーターを比較するように設計した。次の製剤を使用した。
−試験製剤：例８のナノ構造のテルミサルタン製剤
−試験製剤：投与用に測定してカシェ剤（ｗａｆｅｒ ｃａｐｓｕｌｅ）にした、例８のナノ構造のテルミサルタン製剤及びＮａＯＨ
−参照製剤：Ｐｆｉｚｅｒ ＡＧ製の市販のＰｒｉｔｏｒ４０ｍｇ錠剤（カシェ剤で投与する）

【0073】

実験プロトコル
インビボ薬物動態の比較試験は、単回用量による２つの期間の交差試験であった。３匹の雌性ビーグル犬に、同量のテルミサルタンを含有する試験製剤及び参照製剤の単回経口用量を投与した。活性成分の用量は、動物１匹当たり４０ｍｇであった。テルミサルタンの血漿濃度を、信頼できる生体分析法を使用して定量化した。

【0074】

テルミサルタンの全身曝露を特徴付けるために、主な薬物動態パラメーター（Ｃ_ｍａｘ、Ｔ_ｍａｘ及びＡＵＣ）を、個々の血漿レベル対時間曲線について決定した。試験製剤の投与後に得られたパラメーターを、参照錠剤について得られたパラメーターと比較した。

【0075】

動物
ビーグル犬は、薬物動態試験に適した非げっ歯類種であり、規制当局に許容されている。ビーグル犬は、容易に利用可能であり、扱い、飼育及び投与が容易であり、各個々の動物における全血漿レベル曲線の調査に適している。全身曝露を、６匹のビーグル犬で調査した。

【0076】

試験は、「実験動物の管理と使用に関する指針（Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ）」、ＮＲＣ、１９９６年に従い、動物保護を規制するＨｕｎｇａｒｉａｎ Ａｃｔ １９９８：ＸＸＶＩＩＩの原則に従って実施した。

【0077】

食餌及び摂食
動物に、Ｓｓｎｉｆｆ、Ｓｐｅｚｉａｌｄｉａｅｔｅｎ ＧｍｂＨ製のイヌ用のｓｓｎｉｆｆ Ｈｄ−Ｈ食を与えた。食餌は、ビーグル犬１匹につき１日３００ｇをほぼ同時に与えた。翌朝、残りの食餌を撤去した。投与の前に、動物を終夜（少なくとも１２時間）絶食させた。処理当日、絶食群に無作為化した動物には、投与の約４時間後に食餌を与えた。摂食群に無作為化した動物には、標準食約１５０ｇを与えた。投与の約４時間後にも、別の食餌１５０ｇを与えた。

【0078】

採血及び血漿分離
テルミサルタンの血漿レベルを決定するために、血液約３ｍｌを、抗凝固剤としてリチウムヘパリンを入れたプラスチックバイアルに収集した。採血の時点は、以下の投与前（０分）と、投与の１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、２４時間、４８時間及び７２時間後の両方であった。

【0079】

血液を、前腕の橈側皮静脈（ｖ．ｃｅｐｈａｌｉｃａ ａｎｔｅｂｒａｃｈｉｉ）又は伏在静脈（ｖ．ｓａｐｈｅｎａ）から、使い捨ての滅菌針を用いて採取した。

【0080】

採取後、血液を遠心分離にかけるまで、クラッシュアイス上で冷却し続けた。採血後６０分以内に、血液を４℃で１０分間、２，０００ｇで遠心分離にかけることによって、血漿試料を調製した。分離した血漿（約１ｍｌ）を、エッペンドルフ管に移した。血漿試料をすぐに凍結させ、分析まで超低温フリーザー（−２０±５℃）で保存した。

【0081】

テルミサルタンの濃度を、信頼できるクロマトグラフィーによる生体分析法を使用して決定した。

【0082】

薬物動態評価
薬物動態評価を、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ Ｖｅｒｓｉｏｎ ４．０．１ソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ＵＳＡ）を使用することによって実施した。個々の血漿レベル対時間曲線を、非コンパートメント法を使用して評価した。

【0083】

結果
市販薬物の経口投与によって、絶食状態及び摂食状態の両方において、テルミサルタンの血清濃度が急速に増加した。この濃度増加速度は、非常に大きい個体間変動を示した。ナノサイズのテルミサルタン製剤の投与では、特に摂食状態において血漿濃度がゆっくり増加し、個体間差異は著しく小さかった（図４ａ〜ｂは、絶食（ａ）及び摂食（ｂ）動物に関して経口投与後の最初の８時間に決定された血漿濃度を示す）。

【0084】

すべての試験期間（０〜７２時間）についての曲線下面積（ＡＵＣ_ｌａｓｔ）、ｃ_ｍａｘ及びｔ_ｍａｘを、曲線から決定し、市販薬物と比較したナノサイズの製剤の相対的な生体利用能（Ｆ_ｒｅｌ）を算出した（表２）。各数値は、ナノサイズの製剤の長いｔ_ｍａｘ及び低いＣ_ｍａｘを示しているが、ＡＵＣ_ｌａｓｔ値は実質的に同一であり、相対的な生体利用能の数値は、絶食及び摂食状態においてそれぞれ１０２％及び１０８％であった。

【0085】

市販薬物の急速な溶解及び吸収パラメーターは、固体ＮａＯＨを含有する独特の製剤であるＰｒｉｔｏｒ錠剤によって引き起こされる。この製剤は、化合物の溶解を可能にするが、非常に急速な吸収ももたらし、このことは薬理学的に不利になり得る。臨床薬理学においては、一時的な高いピーク濃度が副作用をもたらすことがあるため、急速に生じる高いピーク値は望ましくない。この場合、非常に急速な血圧降下によって、重症の一時的低血圧症が生じ得る。強いアルカリ環境が、同時に摂取される他の薬物の吸収を改質することもある。また、大きい個体間差異は、異なる度合いのアルカリ化、及び結果として生じる溶解したテルミサルタンの量の差異にも起因し得る。

【0086】

例８の製剤はＮａＯＨを含有しておらず、したがってこの仮説を試験するために、ナノ構造のテルミサルタン及びＮａＯＨを含有するカシェ剤（ｗａｆｅｒ ｔａｂｌｅｔ）を用いて動物研究を実施した。ナノ構造のテルミサルタンのみの投与と比較して、より大きい個体間変動が観測された。また、絶食及び摂食状態の両方において、血漿濃度の急速な増加が観測された（図８ｃは、経口投与後の最初の８時間に決定された血漿濃度を示す）。市販薬物と比較して、相対的な生体利用能の数値は類似していた（絶食及び摂食状態について、それぞれ９７．３％及び１３３％）。

【0087】

結局、ＮａＯＨを添加していないナノ製剤化ＡＰＩは、より好ましいＰＫプロファイルを有するＮａＯＨを含まない市販の薬物錠剤との生物学的同等性を示す。

【0088】

図４：絶食（ａ）及び摂食（ｂ）状態における、４０ｍｇのナノ構造のテルミサルタン及び参照試験物質の経口投与後のテルミサルタンの血清濃度。絶食状態及び摂食状態における、ＮａＯＨを伴うナノ構造のテルミサルタンの経口投与後のテルミサルタンの血清濃度（ｃ）。

【0089】

表２：図４ａ及び４ｂに提示の結果から算出した、雌性ビーグル犬のテルミサルタンの主な薬物動態パラメーター

【0090】

２．本発明のナノ粒子のテルミサルタン組成物の溶解プロファイル
本発明のナノ粒子のテルミサルタン組成物は、小さい粒径及び独特のナノ構造の粒子形成に起因して、高い溶解度及び溶解プロファイルを有する。より急速な溶解は、一般に、より急速な作用発現及び高い生体利用能をもたらすため、投与される活性剤が急速に溶解することが好ましい。

【0091】

（例３）
実験プロトコル
溶解度（Ｃ_ｍａｘ）の決定
参照ＡＰＩと比較した例８のナノ構造のテルミサルタンの溶解度を、蒸留水中、ＵＶ−ＶＩＳ測定（Ｈｅｌｉｏｓ Ａｌｆａ ＵＶ分光光度計）によって波長２９６ｎｍ及び室温で決定した。０．２０μｍの使い捨てシリンジフィルターによって、再分散した試料を濾過した。溶液中のナノ粒子の存在を調べるために、赤色レーザーポインターを波長６７０ｎｍで操作してその溶液に照射した。散乱が観測されなかった場合は、濾過が成功し、溶液はナノ粒子を含有していないものとした。

【0092】

水酸化ナトリウムの存在下での溶解度（Ｃ_ｍａｘ）の決定
Ｐｒｉｔｏｒ錠剤は、酸性状態を中和し、吸収中にテルミサルタンを溶解する機能を果たす水酸化ナトリウムを含有する。溶解度に対する水酸化ナトリウムの効果を評価するために、ナノ構造のテルミサルタンを、Ｐｒｉｔｏｒ錠剤が含有する水酸化ナトリウムと同量の水酸化ナトリウムの存在下で溶解させた。

【0093】

例８のナノ構造の活性成分２７０．１ｍｇ（テルミサルタン４０ｍｇ）、同じナノ構造の活性成分２７０．１ｍｇ（テルミサルタン４０ｍｇ）とＮａＯＨ１．８７ｍｇの混合物、及びＰｒｉｔｏｒ錠剤１錠を、ｐＨ＝２．５のＨＣｌ溶液１００ｍＬに溶解した。０．２０μｍの使い捨てシリンジフィルターによって、懸濁液を濾過した。溶液中のナノ粒子の存在を調べるために、赤色レーザーポインターを波長６７０ｎｍで操作してその溶液に照射した。散乱が観測されなかった場合には、濾過が成功し、溶液はナノ粒子を含有していないものとした。テルミサルタン濃度は、ＵＶ−ＶＩＳ測定（Ａｇｉｌｅｎｔ ８４５３）によって決定した。

【0094】

溶解試験
参照テルミサルタン５ｍｇと、テルミサルタン５ｍｇを含有するナノ構造のテルミサルタン粉末３４．７ｍｇとを、蒸留水１０ｍＬに再分散させることによって、溶解試験を実施した。懸濁液を、１、５、１０、２０及び６０分間撹拌し、次いでそれを０．２μｍの使い捨てシリンジフィルターによって濾過した。テルミサルタン濃度を、ＵＶ−ＶＩＳ分光光度計（Ａｇｉｌｅｎｔ ８４５３）によって決定した。

【0095】

結果
Ｃ_ｍａｘの決定
ナノ構造のテルミサルタンの溶解度を決定するために、再分散性試験を実施した。再分散したナノ構造のテルミサルタンの粒径は、強度に基づく平均では１０４ｎｍであり、数平均では２６ｎｍであった。ｄ（９０）値は、強度に基づく平均及び数平均で、それぞれ１８５ｎｍ及び４０ｎｍであった。ナノ構造のテルミサルタンの溶解度は０．４ｍｇ／ｍＬであったが、これは、蒸留水におけるテルミサルタンの溶解度よりも１２４．５倍高い（図５）。

【0096】

図５：テルミサルタンの溶解度の増大

【0097】

水酸化ナトリウムの存在下での溶解度試験
Ｐｒｉｔｏｒ錠剤は、酸性状態を中和し、吸収中にテルミサルタンを溶解する機能を果たす水酸化ナトリウムを含有する。溶解度に対する水酸化ナトリウムの効果を評価するために、例８のナノ構造のテルミサルタンを、Ｐｒｉｔｏｒ錠剤が含有する水酸化ナトリウムと同量（４６．８μｍｏｌ）の水酸化ナトリウムの存在下で溶解させた。水酸化ナトリウムの存在下では、ｐＨ＝２．５のＨＣｌ溶液におけるナノ構造のテルミサルタンの溶解度は、Ｐｒｉｔｏｒ錠剤のテルミサルタンの溶解度よりも２．９倍高かった（図６）。

【0098】

図６：テルミサルタンの溶解度の増大

【0099】

溶解比較試験
例８のナノ構造のテルミサルタンの即時再分散性に起因して、組成物のテルミサルタン含量の２４％超が、再分散の際にすぐに溶解する。１０分以内に、再分散したナノ構造の粒子を含有する溶液は、その飽和状態に達し、溶解したテルミサルタンの含量は、ナノ構造のテルミサルタンの溶解度との良好な相関において０．４ｍｇ／ｍＬになる（図７）。

【0100】

蒸留水中の参照テルミサルタンの含量は、ＵＶ−ＶＩＳ方法では検出することができない。

【0101】

図７：参照テルミサルタン及びナノ構造のテルミサルタンの溶解比較試験

【0102】

３．本発明のナノ粒子のテルミサルタン組成物の結晶学的構造
固体薬物の化学的安定性は、薬物の結晶状態によって影響を受ける。多くの薬物物質は、多形を示す。それぞれの結晶状態は、異なる化学反応性を有する。薬物のそれらの非晶質形での安定性は、非晶質状態の自由エネルギーレベルが高いことから、それらの結晶形の薬物の安定性よりも一般に低い。

【0103】

粉砕などの機械的ストレスによってもたらされる固体薬物の化学的安定性の低下は、結晶状態の変化によるものである。

【0104】

固体薬物の化学的安定性は、表面積の差異により、薬物の結晶状態の影響も受ける。薬物の固体表面上で進行する反応について、表面積の増加は、反応に関与する薬物の量を増大し得る。

【0105】

（例４）
結晶学的構造の決定
本発明の安定な部分結晶、結晶、多形体又は非晶質のナノ構造のテルミサルタン組成物は、参照結晶と比較して、その表面積の広さに起因して著しく高い溶解度を示す。

【0106】

例８の連続流ナノ沈殿法によって調製されたテルミサルタン粒子の構造を、Ｘ線回折分析（Ｐｈｉｌｉｐｓ ＰＷ１０５０／１８７０ ＲＴＧ粉末回折計）によって調査した。測定によって、ナノ構造のテルミサルタン組成物は、部分結晶又は非晶質であることが示された（図８参照）。ナノサイズのテルミサルタンのＸＲＤディフラクトグラムによって、結晶テルミサルタンの特徴的な反射を見出すことができるものの、強度は低い（図８ａ）。

【0107】

図８：参照テルミサルタン、本発明のナノ構造のテルミサルタン組成物及び安定剤のＸ線ディフラクトグラム

【0108】

４．本発明のナノ粒子のテルミサルタン組成物の再分散性プロファイル
本発明のナノ粒子のテルミサルタン組成物のさらなる特徴は、界面活性剤（単数又は複数）／ポリマー（単数又は複数）によって安定化した乾燥ナノ粒子が、即座に、又はマンニトール、スクロースなどの従来の再分散剤を使用することによって再分散できるということである。

【0109】

（例５）
例８のナノ構造のテルミサルタン粉末の再分散化は、ナノサイズのテルミサルタン粉末１０ｍｇを、蒸留水５ｍＬに分散させることによって実施した。蒸留水への添加後に、バイアルを手動で穏やかに振とうさせて、図９に示す通り、ナノ構造のテルミサルタン粒子のコロイド分散液を得た。再分散した粒子の粒径及びサイズ分布は、図１０に示すことができる。

【0110】

図９：蒸留水におけるナノ構造のテルミサルタンの即時再分散性。

【0111】

図１０：再分散の前及び後のテルミサルタンナノ粒子の大きさ及びサイズ分布。

【0112】

５．本発明のナノ粒子のテルミサルタン組成物の吸収及び透過性プロファイルを増大する親油性の強化
細胞膜のリン脂質性に起因して、経口投与後に腸管壁から吸収されるだけでなく、標的組織においてその薬理学的作用を発揮することができる薬物化合物には、特定の度合いの親油性が必要とされることが多い（Ｆ．Ｋｅｓｉｓｏｇｌｏｕら、「薬物送達の進展の概説（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ）」５９（２００７年）６３１〜６４４頁）。

【0113】

テルミサルタンの親油性は、ナノ粒子が沈殿する際に、親油性の安定剤又は／及びポリマー主鎖上に親油性側鎖基を有する安定剤及び／又は両親媒性安定剤を使用することによって増大することができる。適用される安定剤の親油性の性質又は親油性の側鎖基に起因して、本発明のテルミサルタンナノ粒子の親油性だけでなく、吸収及び透過性が増大し得る。

【0114】

例えばキトサンを使用して、経粘膜の吸収強化に起因する腸上皮の傍細胞透過性を増大することができる。

【0115】

薬物送達の目的で使用される大部分の両親媒性コポリマーは、疎水性セグメントとしてポリエステル又はポリ（アミノ酸）誘導体のいずれかを含有する。医薬品の対象となるポリエーテルの大部分は、ポロキサマーファミリー、すなわちポリプロピレングリコール及びポリエチレングリコールのブロックコポリマーに属する。

【0116】

６．本発明のナノ粒子のテルミサルタン組成物の急速な表面湿潤プロファイル
テルミサルタンが溶解するためには、まずその表面が周りの流体によって湿潤されなければならない。ナノサイズの非晶質／部分結晶形は、安定剤（単数又は複数）及び活性な医薬品成分の性質により、疎水性及び親水性の相互反応を発現する化学的に無作為化された表面を有し、それによって湿潤性を改善することができる。本発明のテルミサルタンナノ粒子の表面が、親水性の基／安定剤（単数又は複数）によって官能化される場合、親水性（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｔｙ）が高度であるほど、元の結晶形と比較して表面は急速に湿潤し、急速に溶解する。本発明のテルミサルタンナノ粒子のこの進化した特性は、再分散性試験の結果によって支持される。ナノ構造のテルミサルタン粒子のより大きい表面積及び安定剤（単数又は複数）（例えば、ポロキサマー、ポリ（ビニルピロリドン））の親水性（ｈｙｄｒｏｆｉｌｉｃ）基に起因して、表面の湿潤は、参照の結晶形よりも急速である。

【0117】

（例６）
ナノ粒子のテルミサルタン湿潤性の視覚的観測
例８のナノ構造のテルミサルタン粒子の湿潤性を、蒸留水中で調査し、ＣＣＤカメラを備えた実体顕微鏡によって視覚化した。０．１ｍｇの参照及びナノ構造のテルミサルタン粉末を、スライドに置き、次いで一滴の蒸留水を粉末に添加した。ナノ構造のテルミサルタン粉末は、すぐに膨潤し始め、湿潤し終えたが、参照テルミサルタン粒子は、図１１に示す通り凝集状態を維持した。

【0118】

図１１：立体顕微鏡によって１００×拡大率で観測した参照テルミサルタン（ａ）及びナノ構造のテルミサルタン（ｂ）の湿潤性

【0119】

Ｂ．組成物
本発明は、立体的に及び／又は静電気的に粒子を安定にする少なくとも１つの安定剤を含む、ナノサイズのテルミサルタンナノ構造粒子の形成を提供する。

【0120】

安定剤は、好ましくは、テルミサルタンと関連又は相互作用するが、テルミサルタン又は安定剤自体とは化学的に反応しない。

【0121】

本発明のテルミサルタンのナノ粒子は、安定剤（単数又は複数）を使用する溶媒−逆溶媒沈殿法によって形成することができる。ナノサイズのテルミサルタンの調製したコロイド溶液の安定性は、第２の立体的又は静電気的安定剤として作用し得るさらなる安定剤（単数又は複数）の組合せによって増大することができる。さらに追加の安定剤を使用して、本発明のテルミサルタンの粒径を低減し、制御することができる。

【0122】

テルミサルタンナノ粒子の粒径
本発明は、動的光散乱法によって測定して約６００ｎｍ未満の平均粒径を有するテルミサルタンナノ粒子を含有する。

【0123】

「約６００ｎｍ未満の平均粒径」とは、テルミサルタンナノ粒子の少なくとも９０％が、前述の技術によって測定して数／強度による平均未満、すなわち約６００ｎｍ未満等の粒径を有することを意味する。

【0124】

（例７）
ナノ構造のテルミサルタンの生成
実験中、テルミサルタンナノ粒子を、マイクロ流体系の連続流反応器で調製した。出発溶液として、ＤＭＳＯ１００ｍＬに溶解した１００ｍｇのテルミサルタン、２０ｍｇのドデシル硫酸ナトリウム及び２００ｍｇのポリ（ビニルピロリドン）、ＰＶＰ Ｋ−２５を使用した。調製した溶液を、供給ユニットを使用して流速０．５ｍＬ／分で反応器ユニットを通過させた。一方、第２の供給ユニットを使用して、蒸留水を流速２ｍＬ／分で混合ユニットを通過させ、そこで第１の反応器ユニットから送り出されるテルミサルタンを含有する溶液と蒸留水とを混合した。混合ユニットを通過する水によって化学的に沈殿させることにより、ナノ粒子を大気圧で連続的に生成する。生成されたコロイド溶液は、第２の反応器ユニットを介して流れ、装置と統合された動的光拡散ユニット（Ｎａｎｏｔｒａｃ）に達し、それによって、得られたナノ粒子の粒径を連続的に検出することができる。ナノ粒子の大きさは、流速、圧力及び安定剤の種類を変更することによって、広範に制御することができる（図１２参照）。テルミサルタン粒子の粒径及びサイズ分布は、図１３に示す通り、安定剤（ＰＶＰ Ｋ−２５）の量によって制御することができる。テルミサルタン粒子の粒径は、最良の場合２０５ｎｍであった。

【0125】

図１２：異なる安定剤を使用する、テルミサルタンナノ粒子の粒径及びサイズ分布

【0126】

図１３：テルミサルタンナノ粒子の粒径及びサイズ分布に対する安定剤の濃度の効果

【0127】

（例８）
ナノ構造のテルミサルタンの生成
実験中、テルミサルタンナノ粒子を、マイクロ流体系の連続流反応器で調製した。出発溶液として、０．１ＭのＮａＯＨ溶液８０ｍＬに溶解した１６０ｍｇのテルミサルタン及び３２０ｍｇのポリ（ビニルピロリドン）、ＰＶＰ４０を使用した。調製した溶液を、供給ユニットを使用して流速４ｍＬ／分で反応器ユニットを通過させた。一方、第２の供給ユニットを使用して、０．１Ｍの酢酸溶液を流速３．７ｍＬ／分で混合ユニットを通過させ、そこで第１の反応器ユニットから送り出されるテルミサルタンを含有する溶液と酢酸溶液とを混合した。混合ユニットを通過する酢酸によって化学的に沈殿させることにより、ナノ粒子を大気圧で連続的に生成する。生成されたコロイド溶液は、第２の反応器ユニットを介して流れ、装置と統合された動的光拡散ユニット（Ｎａｎｏｔｒａｃ）に達し、それによって、得られたナノ粒子の粒径を連続的に検出することができる。ナノ粒子の大きさは、流速を変更することによって、広範に制御することができる。テルミサルタン粒子の粒径は、最良の場合、図１４及び表３に示す通り１６５ｎｍであった。

【0128】

図１４：テルミサルタンナノ粒子の粒径及びサイズ分布

【0129】

表３：テルミサルタンの粒径に対する流速の効果

【0130】

（例９）
クリーム製剤に取り込んだテルミサルタンナノ粒子
テルミサルタンナノ粒子１．３ｇを含有するゲル１００ｍＬの調製。Ｃａｒｂｏｐｏｌ ９７１を、例８に記載の方法によって合成したテルミサルタンコロイド溶液１００ｍＬに、激しく撹拌しながら室温で溶解した。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4a】

【図4b】

【図4c】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8a】

【図8b】

【図9】

【図10】

【図11a-11b】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】