特許 5786169 発酵茶、発酵茶からの抽出物およびこれを含有する薬効性組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5786169

(24)【登録日】2015年8月7日

(45)【発行日】2015年9月30日

(54)【発明の名称】発酵茶、発酵茶からの抽出物およびこれを含有する薬効性組成物

(51)【国際特許分類】

   A23F 3/06 20060101AFI20150910BHJP

   A61K 36/18 20060101ALI20150910BHJP

   A61K 36/00 20060101ALI20150910BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20150910BHJP

   A61P 3/06 20060101ALI20150910BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20150910BHJP

   A61P 7/04 20060101ALI20150910BHJP

   A61P 7/06 20060101ALI20150910BHJP

【ＦＩ】

   A23F3/06 T

   A61K35/78 C

   A61K35/78 X

   A61P1/16

   A61P3/06

   A61P3/10

   A61P7/04

   A61P7/06

【請求項の数】3

【全頁数】23

(21)【出願番号】特願2009-68709(P2009-68709)

(22)【出願日】2009年3月19日

(65)【公開番号】特開2010-220489(P2010-220489A)

(43)【公開日】2010年10月7日

【審査請求日】2011年8月18日

【審判番号】不服2013-1120(P2013-1120/J1)

【審判請求日】2013年1月22日

【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成２０年度、経済産業省、地域資源活用型研究開発事業、産業技術力強化法第１９条の適用を受ける特許出願

(73)【特許権者】

【識別番号】599035339

【氏名又は名称】株式会社 レオロジー機能食品研究所

(73)【特許権者】

【識別番号】591027927

【氏名又は名称】福岡県醤油醸造協同組合

(73)【特許権者】

【識別番号】504145342

【氏名又は名称】国立大学法人九州大学

(73)【特許権者】

【識別番号】595123760

【氏名又は名称】一番食品株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100069903

【弁理士】

【氏名又は名称】幸田 全弘

(72)【発明者】

【氏名】馬渡 志郎

(72)【発明者】

【氏名】船津 軍喜

(72)【発明者】

【氏名】藤野 武彦

(72)【発明者】

【氏名】野田 義治

(72)【発明者】

【氏名】植木 達朗

(72)【発明者】

【氏名】園元 謙二

(72)【発明者】

【氏名】善藤 威史

(72)【発明者】

【氏名】猪熊 健太郎

(72)【発明者】

【氏名】有吉 崇

(72)【発明者】

【氏名】仁田原 寿一

(72)【発明者】

【氏名】吉岡 哲也

(72)【発明者】

【氏名】堺田 輝貴

(72)【発明者】

【氏名】中園 健太郎

【合議体】

【審判長】 千壽 哲郎

【審判官】 鳥居 稔

【審判官】 紀本 孝

(56)【参考文献】

【文献】 特開２００５−３３３９２９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００２−９５４１３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００５−３４１８７６（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

A23F 3/00-3/42

A61K 35/00-35/76

C07G 1/00-99/00

C12P 1/00-41/00

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

原料茶葉を、黒麹を用いて温度３０〜４５℃、期間３〜６日間で好気発酵させた後、蒸煮処理することにより調製されたこと
を特徴とする発酵茶。

【請求項2】

原料茶葉を、黒麹を用いて温度３０〜４５℃、期間３〜６日間で好気発酵させた後、蒸煮処理することにより調製された発酵茶から、熱水を用いて分離されたこと
を特徴とする熱水による抽出物。

【請求項3】

請求項２に記載の抽出物を含有すること
を特徴とする薬効性組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

この発明は、茶葉の発酵によって産生させた発酵茶、この発酵茶からの抽出物および前記抽出物を含有する薬効性組成物に関するものである。
特に、この発明は、風味において優れ、健康により貢献する発酵茶、さらには、その発酵茶から抽出・分離された各種疾病の予防、又は治療用の医薬として使用される可能性のある抽出物ないし薬効性化合物、ならびに前記抽出物ないし薬効性化合物を含む薬効性組成物に関するもので、製茶技術、健康食品調製技術および医薬調製技術に属するものである。

【背景技術】

【0002】

嗜好品としてのお茶は、非常に古くから、また全世界的に愛用されている。
その多くは、茶葉に湯を注いで、その浸出液を飲むというものである。
前記浸出液には、茶葉から抽出された種々の成分が含まれているため、独特の香と味とを有し、特有の機能を有するものである。
そのため、茶葉の成分に関しての研究が、幅広く行われ、その成分に関しても、以下のようなことが知られている。

【0003】

すなわち、茶の特徴的な成分は、カフェインとタンニン系の物質のカテキンである。
このカフェインは、人に興奮作用を与え、苦味を呈し、利尿作用も有する。
前記カテキンは、茶の成分としては一番量の多いもので、茶の渋味の成分である。
さらに、それら以外にも、テアニンに代表されるアミノ酸、ビタミンＣに代表されるビタミン類、クロロフィル類、カリウムやカルシウムなどの無機成分、ジメチルスルフィド、青葉アルコール、テルペンアルコールなどの香料成分など幅広く知られている。

【0004】

これらの成分が茶葉からの製茶の段階で、変化することも知られている。
例えば、釜炒茶、ほうじ茶では、ピラジン、ピロール等の含窒素化合物が多くなり、発酵茶では、花香をもつテルペンアルコールが、非常に多くなることが知られている（平凡社発行：世界大百科事典参照）。

【0005】

このように茶葉には、各種の有用な成分が多く含まれているため、その成分を効率よく抽出することや、茶葉を加工して有効成分を多く取得する試みが、古くから多くなされている。
特に、発酵茶に関するものでは、例えば、特開２００２−３７０９９４号公報（特許文献１）においては、黒茶、すなわち、黒麹菌等による後発酵法により長期熟成した黒茶から、熱水抽出により血糖値抑制物質が得られたことが報告されている。

【0006】

特開２００５−３４１８７６号公報（特許文献２）においては、茶葉に麹菌又は麹を加え、これを発酵させることによって、マルターゼ阻害効果を有するお茶が得られることが報告されている。

【0007】

一方、本願の発明者らは、先に酢酸による抽出で、発酵茶葉から肝機能の悪化の防止等が図れる薬効性組成物が得られることを見出して、特許出願を行なった。
その内容は、特開２００７−２３８５８４号公報（特許文献３）に開示されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0008】

【特許文献1】特開２００２−３７０９９４号公報（特許請求の範囲）

【特許文献2】特開２００５−３４１８７６号公報（特許請求の範囲）

【特許文献3】特開２００７−２３８５８４号公報（特許請求の範囲）

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

前記特許文献３に記載の発明は、茶葉における有効成分を抽出し、健康食品や医薬の原料として用い、より効率的に茶葉を、しかも製茶に利用できない茶葉（刈捨葉）も利用できる、薬効性の高い組成物を提供することを目的としたものである。
この特許文献３における有効成分は、粉末状態でも、酢酸あるいは水又はエタノール溶液としても使用することができ、使用されていなかった刈捨葉からでも調製されるため、環境に優しく、エコロジカルな面でも優れたものである。

【0010】

特に、この薬効性組成物は、肝機能（ＡＳＴ、ＡＬＴ）の悪化の防止、ＨＤＬコレステロール（善玉コレステロール）の増大、血糖値の上昇防止、血小板の減少防止、酸化ストレスによる赤血球変形能の低下の防止など優れた医学的効果を奏するものである。

【0011】

かかる状況において、発明者らは、さらに発酵茶（後発酵茶・黒茶）の有する各種成分の特性をより深く追求するとともに、発酵茶の調製条件、原料茶葉による含有成分の変化等について検討し、幅広く利用されている茶葉を、さらに有効活用するために、茶葉における有効成分について、また、その発酵条件による変化について鋭意検討を行った。

【0012】

その結果、発明者らは、黒麹を用いて醗酵させた茶葉には、発酵条件によるが、未だ構造は解明されていないが、従来の茶葉には存在しない化合物が産生して存在すること、この化合物の存在した茶葉は風味がよいこと、また、この化合物は、水、特には熱水や冷水さらには希酢酸による抽出により分離され、それらが薬効性を有することを見出し、この発明を完成させたものである。

【課題を解決するための手段】

【0013】

すなわち、この発明の請求項１に記載の発明は、
原料茶葉を、黒麹を用いて温度３０〜４５℃、期間３〜６日間で好気発酵させた後、蒸煮処理することにより調製されたこと
を特徴とする発酵茶である。

【0014】

この発明の請求項２に記載の発明は、
原料茶葉を、黒麹を用いて温度３０〜４５℃、期間３〜６日間で好気発酵させた後、蒸煮処理することにより調製された発酵茶から、熱水を用いて分離されたこと
を特徴とする熱水による抽出物である。

【0015】

この発明の請求項３に記載の発明は、
請求項２に記載の抽出物を含有すること
を特徴とする薬効性組成物である。

【発明の効果】

【0016】

この発明にかかる発酵茶は、薬効性化合物の存在により、赤血球変形能に及ぼす効果が大きいものである。
したがって、健康維持のためのお茶として有効なばかりでなく、その風味は、玉露から調製された発酵茶を凌ぐものであって、風味の高い健康飲料として、茶葉のさらなる活用が図れるものである。
しかも、この発明によれば、このような薬効性化合物を高含量で含有する発酵茶を、３〜６日間で得ることができる。

【0017】

特に、この発明にかかる発酵茶は、各種の機能を有する薬効性化合物を含んでいる。
当該発酵茶からの抽出液、さらには精製された、薬効性化合物は、以下のような優れた薬効性を奏するもので、健康食品の素材として、医薬の原料として、有効に利用される可能性の高いものである。
１．赤血球変形能低下防止
２．抗酸化活性、ラジカル捕捉活性
３．α−グルコシダーゼ／リパーゼ阻害活性

【0018】

この発明にかかる薬効性化合物は、粉末状態でも、酢酸あるいは水又はエタノール溶液としても使用することができるため、上記のような効果を発現させるために、健康食品や医薬として利用する際に、効率的、効果的に活用することを可能とするものである。

【0019】

この発明にかかる薬効性組成物は、前記抽出物ないし薬効性化合物を含有するので、各種疾病の予防や治療用の医薬として使用することが可能なものである。

【図面の簡単な説明】

【0020】

【図1】発酵処理１日後の、発酵茶サンプルの抽出液のＨＰＬＣチャートである。

【図2】発酵処理３日後の、発酵茶サンプルの抽出液のＨＰＬＣチャートである。

【図3】発酵処理期間による抽出液の成分の変化を示す図である。

【図4】カテキンの蛍光検出法による抽出液の検出結果を示す図である。

【図5】７０％アセトンを用いる重合カテキンの検出法による抽出液の検出結果を示す図である。

【図6】加チオール分解でのＸ成分の検出結果を示す図である。

【図7】発酵茶の４．５％酢酸抽出物のＨＰＬＣ分析の結果を示す図である。

【図8】図７の各ピークの紫外線吸収スペクトルである。

【図9】発酵茶の４．５％酢酸抽出物のＢｉｏ−Ｇｅｌカラムによる分画図である。

【図10】発酵茶酢酸抽出物からの酢酸エチル抽出のＢｉｏ−Ｇｅｌカラムによる分画図である。

【図11】図１０の３画分のＨＰＬＣチャートである。

【図12】図１０の画分５のＳｅｐｈｄｅｘ ＬＨカラム（２×２７ｃｍ）による吸着クロマトの図である。

【図13】図１５の３００ｎｍに吸収を持つ画分のＨＰＬＣチャートである。

【図14】画分５のＨＰＬＣで精製したＸ成分のＨＰＬＣチャートである。

【図15】画分５のＨＰＬＣで精製したＸ成分の紫外線吸収スペクトルである。

【図16】Ｘ成分の結晶写真である。

【図17】Ｘ成分の赤血球変形能低下抑制効果を示す図である。

【図18】Ｘ成分の抗酸化活性を示す図である。

【図19】Ｘ成分のＤＨＨＰラジカル捕捉活性を示す図である。

【図20】Ｘ成分の酵素阻害活性を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0021】

この発明の発酵茶は、従来公知の黒麹を用いた発酵方法で調製されるものである。
その方法自体には、格別新規な条件は存在しないが、今回、発明者らが見出した薬効性化合物が産生し、発酵茶が、薬効性化合物を含有する状態を維持することが必要である。

【0022】

前記発酵茶が、薬効性化合物を含有する状態を維持する発酵条件として、一番重要な条件は、発酵期間である。
優れた黒茶の製造には、長い場合には数ヶ月要するとされ、特許文献２においても好ましくは３週間程度（段落００３０）とされているが、上記条件を満たすための期間として、この発明にとり好ましい発酵期間は、３〜１０日間、より好ましくは３〜６日間で、それにより薬効性化合物を高含量で含有する発酵茶が得られる。
前記発酵期間は、３〜６日間が採用される。
前記発酵は、好気発酵が採用される。

【0023】

この発明に使用される原料茶葉としては、得られる発酵茶の風味の点から二番茶、すなわち、５月頃に収穫した一番茶の後に出てくる芽を６月頃に収穫した茶葉を用いるのが好ましい。
この二番茶を用いた発酵茶は、玉露、一番茶、三番茶、秋冬番茶を用いた発酵茶に比べて、優れた風味を有するものとなる。

【0024】

その他の発酵条件、すなわち、原料黒麹、発酵中の温度（通常温度３０〜４５℃）、発酵中の水分（通常２５〜３５％）など、一般に、黒麹を用いて発酵茶を調製する条件に従って行なうことによって、目的とする発酵茶および薬効性化合物を得ることができる。

【実施例】

【0025】

以下、この発明にかかる発酵茶、この発酵茶からの抽出物、およびこれらに含まれる薬効性化合物、ならびに前記抽出物ないし薬効性化合物を含有する薬効性組成物を、実施例に基づいて詳細に説明する。

【0026】

＜発酵茶の調製＞
原料茶葉として、玉露、一番茶、二番茶、三番茶、秋冬番茶を用い、以下の工程で発酵茶を調製した。

【0027】

原料茶葉（荒茶）２４０ｋｇをドラム回転式自動製麹装置に投入し、ドラムの回転により攪拌しながら水２１０ｋｇを加えて、原料茶葉を膨潤させた。
別途、原料茶葉（粉茶）３０ｋｇと黒麹により調製した種麹２１０ｇ混和したものを、膨潤させた原料茶葉に添加し、撹拌しながら設定温度３５℃で６日間発酵させた。
発酵時の温度上昇は、空冷ファンを用いて抑え、設定温度を維持するように努めた。
発酵した茶葉は、温度１００℃の蒸煮殺菌と、温度５５℃の乾燥を経て製品としての発酵茶とした。

【0028】

＜発酵茶の官能試験＞
各原料から得られた発酵茶について、男女各５名による風味試験を、５点法（５：良い、３：普通、１：悪い）で行ったところ、下記表１に示される結果が得られた。
表１から明らかなように、原料茶葉（荒茶）においては、玉露が一番高く評価され、次いで一番茶である。
上記条件で調整された発酵茶においては、玉露の評価が大きく落ち、それに変わって二番茶を原料とする発酵茶が最も風味が良いという結果になっている。

【0029】

【表1】

【0030】

＜発酵茶の赤血球変形能低下抑制＞
上記の発酵茶のうち、原料を玉露、二番茶、秋冬番茶とするものについて、その原料、発酵茶および当該発酵茶を、さらに、通常の発酵条件で１５日間嫌気発酵させた二次発酵茶について、その熱湯抽出液に関する、下記に示す方法で測定した赤血球変形能低下抑制効果を表２に示す。
なお、表中の数字は、赤血球変形能を低下させる酸化剤ＡＡＰＨ添加時（Ｂ）と、ＡＡＰＨと試料液添加時（Ｃ）との相対変化（％）で表したものである。

【0031】

【表2】

【0032】

＜赤血球変形能測定方法＞
３．８％クエン酸ソーダ溶液１．０ｍｌを含む採血管に、採血した血液１０．０ｍｌを２，５００ｒｐｍ×１０分遠心分離して赤血球を沈殿させたのち、洗浄し、ＨＥＰＥＳを加え、６．０％赤血球浮遊液を調製した。
この６．０％赤血球浮遊液３．０ｍｌに、ＨＥＰＥＳを（（Ａ）３．０ｍｌ、（Ｂ）２．４０ｍｌ、（Ｃ）：２．３４ｍｌ）加え、温度３７．０℃で予備インキュベートしたのち、前記（Ｂ）には、５００ｍＭのＡＡＰＨ溶液０．６ｍｌを、前記（Ｃ）には、５００ｍＭのＡＡＰＨ溶液０．６ｍｌと醗酵茶の抽出物溶液０．０６ｍｌ（１０ｍｇ／２ｍｌ）を添加し、温度３７．０℃で４５分インキュベートした。
その後、測定するまで氷冷し、測定は、温度２５．０℃で７分、再度インキュベートしてから行なった。
なお、前記（Ａ）はコントロールである。

【0033】

前記測定は、垂直に立てたガラス管（ｖｅｒｔｉｃａｌ ｔｕｂｅ）に、タイゴンチューブを介してニッケルメッシュホルダーを接続し、通常１５ｃｍの高さ（ｈｅｉｇｈｔ：ｈ）より、ＨＥＰＥＳバッファーで調整した生理食塩水を用いて作成した赤血球浮遊液を、濾過させて行う。
前記ガラス管の周囲は、恒温水を還流させて、試料を定温に保っている。
ガラス管のゼロレベルに設置した圧力（ｐｒｅｓｓｕｒｅ：Ｐ）トランスデューサーで、試料を濾過中の圧力降下を連続的に検出し、これを増幅器とＡＤ変換器を介してパソコンに取り込み、流量（ｆｌｏｗｒａｔｅ：Ｑ）を計算する。
流量は、圧力を高さに変換し（Ｐ＝ｐｇｈ）、高さ‐時間（ｈ−ｔ）曲線の微分値（ｄｈ／ｄｔ）を取って、これにガラス管の断面積（ａ）を乗じて得られる（Ｑ＝ｄｈ／ｄｔ・ａ）。

【0034】

血球を含まないコントロールｘ（ＨＥＰＥＳバッファー調整生食水：ニュートン流体）の圧−流量曲線を対照として、赤血球浮遊液の圧‐流量曲線を検討し、ある一定圧（通常１００ｍｍ・Ｈ_２Ｏ）での、対照液の流量に対する赤血球浮遊液の流量（％）をもって赤血球変形能を評価した。

【0035】

＜発酵茶抽出液の成分変化＞
二番茶に基づく発酵茶の調製時に、１日毎にサンプリングした茶葉について、熱湯抽出を行ない、得られた抽出物をＨＰＬＣにより分析した。

【0036】

図１は、１日後のサンプルの抽出液、図２は、３日後のサンプルの抽出液のＨＰＬＣチャートである。
それらの結果に基づいて得られた抽出液の成分の変化を、図３に示した。
なお、図中の略号は、以下の化合物を示すものである。
ＧＡ ；没食子酸
ＥＣ ；エピカテキン
ＥＣＧ ；エピカテキンガレート
ＥＧＣ ；エピガロカテキン
ＥＧＣＧ；エピガロカテキンガレート

【0037】

Ｘ、Ｙ、Ｚはポリフェノールとも思われるが、現状不明成分であり、なかでもＸ成分の量が飛び抜けて多いものである。
それらの抽出液の赤血球変形能は、以下の表３の通りであった。
なお、表には表されていないが、発酵後に行われる蒸煮処理によっても、香味の向上や赤血球変形能低下抑制効果が向上し、例えば、４日間発酵させたもので３７％を示したものは、蒸煮処理後に７９％と上昇していた。

【0038】

【表3】

【0039】

＜Ｘ成分の同定＞
図３から明らかなように、図中、Ｘ成分を除いて、他の成分の殆どは、発酵開始１日〜２日後に最大値を有し、その後減少傾向にある。
これに対し、成分Ｘは、１日目には存在が認められなかったのに対し、２日目から顕著に増加し、５日目において最大値を有しており、表３に示された赤血球変形能との関連が強い化合物であると推定された。

【0040】

現在のところ、Ｘ成分の同定はなされていないが、下記のデータから、カテキン、重合カテキン、加水分解型タンニンではないことは確認された。
１）カテキンの蛍光検出法（２８０ｎｍＥｘ，３１０ｎｍＥｍ）では、図４に示されるように、抽出液に、カテキンの存在は認められない。
２）７０％アセトンを用いる重合カテキンの検出法では、図５に認められるように重合カテキンは検出されない。
３）図６に示されるように、Ｘ成分の加チオール分解でカテキンが検出されない。
なお、没食子酸起因化合物が加水分解型タンニンであることも考慮されるが、４Ｍ塩酸を用い、温度８５℃で５時間、Ｘ成分を加水分解したところ、分解により生じたものは幾つかのフェノール酸であって、加水分解型タンニンではないことが確認された。

【0041】

＜Ｘ成分の抽出・精製＞
Ｘ成分の抽出・精製を、以下の手順で行った。
まず、２００ｇの発酵茶を用い、抽出媒体として４．５％酢酸を用い、減圧濃縮・凍結乾燥によって、７２．６ｇの抽出物（収率：３６．３％）を得た。
この抽出物について、前記と同様にＨＰＬＣ分析を行い、その結果を図７に、図８に、
各ピークの紫外線吸収スペクトルを示す。
図７において、ピークａ〜ｃは、その溶出位置と吸収スペクトルから、それぞれＥＧＣ、Ｃａｆｅｉｎ、ＥＣで、ピークｄは、図１の条件下でＸ成分と同一溶出位置を示し、Ｘ成分であることがわかった。

【0042】

前記抽出物を、Ｂｉｏ−Ｇｅｌ Ｐ−１０カラム（２×２８ｃｍ）を用い、１％酢酸水溶液を展開液として分画した結果を、図９および表４に示した。
各画分を前記と同様にＨＰＬＣで分析した結果、Ｘ成分は画分５に、褐色のカテキン重合体と一緒に含まれることが分かった。

【0043】

【表4】

【0044】

上記分画により得られた、Ｘ成分を含有する画分５について、酢酸エチルによる抽出を行なった。
その結果、Ｘ成分は酢酸エチル層に抽出され、カテキン重合体は水層に残ることが確認され、Ｘ成分含有酢酸エチルを濃縮した後脱イオン水を加えて希釈した溶液を、Ｂｉｏ−Ｇｅｌ Ｐ−１０カラム（ラボラトリーズ社製：３×２８ｃｍ）に供し、１％酢酸水溶液で展開したときの溶出パターンを図１０に示す。
その画分４〜６について、前記と同様にして、ＨＰＬＣ分析を行った結果、図１１に示すように、いずれもＸ成分を含むことが分かった。

【0045】

凍結乾燥した画分５にメタノールを加えて撹拌、遠心分離して得られた上清を、予めメタノールで平衡化したＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨカラム（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製：２×２７ｃｍ）に供し、メタノールで展開した。
その溶出パターンを図１２に、３００ｎｍに吸収をもつ画分のＨＰＬＣパターンを図１３に示す。

【0046】

この画分を上記と同様に、ＴＦＡ−ＭｅＣＮ系のＨＰＬＣで精製したところ、図１４に示されるように、精製されたＸ成分が得られた。
その紫外線吸収スペクトルは、図１５に示す通りであった。
この画分を減圧乾固し、脱イオン水を加え、暖めて溶解した後、冷却した結果、図１６のような結晶が得られた。

【0047】

得られたＸ成分の機能を測定し、その結果を図１７〜２０に示した。
なお、図１７〜２０の内容は、以下の通りである。
これらの結果から、Ｘ成分は優れた薬効性を有する化合物であることが明らかで、この発明においては、このＸ成分を薬効性化合物と云う。
−図１７：赤血球変形能
−図１８：抗酸化活性
−図１９：ＤＨＨＰラジカル捕捉活性
−図２０：酵素阻害活性
赤血球変形能以外の測定法は、以下の通りである。

【0048】

＜抗酸化活性の測定方法＞
前記で得られた各試料の抗酸化活性を、リノ−ル酸の酸化物がβ−カロチンを退色させる作用を利用したＭｉｌｌｅｒらの方法に準じ、以下の方法で測定した。
試料を分注した分光光度計用試験管セルに、リノ−ル酸−β−カロチン溶液を加えて攪拌し、温度５０℃の恒温槽で、２０分間反応させた場合のβ−カロチンの退色度を４７０ｎｍの吸光度によって求め、合成抗酸化剤ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）による吸光度の減少量を測定し、試料と同じ減少量を与えるＢＨＡの濃度によって、試料の抗酸化活性を表した。

【0049】

＜ラジカル捕捉活性測定法＞
試料溶液に、等量のＤＰＰＨ（１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル）溶液、ＭＥＳ緩衝液、２０％エタノールを加え、室温で２０分間反応させた後、５２０ｎｍでの吸光度を測定した。
その活性は、同様にして行ったアスコルビン酸（ＡｓＡ）で、ＤＰＰＨラジカル捕捉活性の検量線を作成し、試料ｇ当たりのラジカル捕捉活性を、ＡｓＡ当量（μｍｏｌ／ｇ又はｍｍｏｌ／ｇ）で表した。

【0050】

＜酵素阻害活性測定方法＞
試料溶液５０μｌ又は２５μｌに、小腸α−グルコシダーゼ溶液又は膵リパーゼ溶液２５μｌを加え、温度３７℃で１０分間インキュベートしたのち、４−メチルウンベリフェロンのα−Ｄ−グルコース又はオレイン酸エステル（基質）溶液２５μｌ又は５０μｌを添加してインキュベートした。
０．２モル濃度のＮａ_２ＣＯ₃溶液又は０．１モル濃度のクエン酸緩衝液（ｐＨ４．２）を加えて反応を停止したのち、生成した４−メチルウンベリフェロンの蛍光度を４５０ｎｍで測定して阻害率を算出した。

【産業上の利用可能性】

【0051】

この発明における発酵茶、この発酵茶からの抽出物、およびこれらに含まれる薬効性化合物、ならびに前記抽出物ないし薬効性化合物を含む薬効性組成物は、前記のような優れた特性を有し、かつ前記抽出物および薬効性化合物は、粉末ないし水、酢酸又はエタノールの無毒の溶媒溶液として供給可能なものであるため、この発明は製茶業界を始めとして、健康食品産業や医薬業界で広く利用される可能性の高いものである。

【図3】

【図1】

【図2】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

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【図20】