特許 5797756 ベータ−セクレターゼ（ＢＡＣＥ）の阻害剤として有用な４，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イルアミン誘導体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5797756

(24)【登録日】2015年8月28日

(45)【発行日】2015年10月21日

(54)【発明の名称】ベータ−セクレターゼ（ＢＡＣＥ）の阻害剤として有用な４，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イルアミン誘導体

(51)【国際特許分類】

   C07D 487/04 20060101AFI20151001BHJP

   A61K 31/4985 20060101ALI20151001BHJP

   A61K 31/506 20060101ALI20151001BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20151001BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20151001BHJP

【ＦＩ】

   C07D487/04 141

   C07D487/04CSP

   A61K31/4985

   A61K31/506

   A61P25/28

   A61P43/00 111

【請求項の数】7

【全頁数】77

(21)【出願番号】特願2013-528719(P2013-528719)

(86)(22)【出願日】2011年9月20日

(65)【公表番号】特表2013-540740(P2013-540740A)

(43)【公表日】2013年11月7日

(86)【国際出願番号】EP2011066343

(87)【国際公開番号】WO2012038438

(87)【国際公開日】20120329

【審査請求日】2014年5月9日

(31)【優先権主張番号】11157858.9

(32)【優先日】2011年3月11日

(33)【優先権主張国】EP

(31)【優先権主張番号】10178315.7

(32)【優先日】2010年9月22日

(33)【優先権主張国】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】390033008

【氏名又は名称】ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプ

【氏名又は名称原語表記】ＪＡＮＳＳＥＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡ ＮＡＡＭＬＯＺＥ ＶＥＮＮＯＯＴＳＣＨＡＰ

(74)【代理人】

【識別番号】110000741

【氏名又は名称】特許業務法人小田島特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】トラバンコ−スアレス，アンドレス・アベリノ

(72)【発明者】

【氏名】トレサダーン，ゲイリー・ジヨン

(72)【発明者】

【氏名】デルガド−ヒメネス，フランシスカ

【審査官】 瀬下 浩一

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２００７／０５８５８３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００６／１３８２６５（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ ４８７／０４

Ａ６１Ｋ ３１／４９８５

Ａ６１Ｋ ３１／５０６

Ａ６１Ｐ ２５／２８

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）

【化1】

［式中、
Ｒ¹およびＲ²は、独立して、水素およびＣ_1-3アルキルより選択され、
Ｒ³は、Ｃ_1-3アルキルおよびＣ_3-6シクロアルキルより選択され、
Ｘ¹、Ｘ²、Ｘ³、Ｘ⁴は、独立して、Ｃ（Ｒ⁴）であり、ここでＲ⁴は水素およびハロより選択され、
Ｌは、結合または−Ｎ（Ｒ⁵）ＣＯ−であり、ここでＲ⁵は水素であり、
Ｒ⁶は、水素またはトリフルオロメチルであり、
Ａｒは、ホモアリールまたはヘテロアリールであり、
ホモアリールは、フェニル、またはハロ、シアノ、Ｃ_1-3アルキルおよびＣ_1-3アルキルオキシから成る群より選択される１または２個の置換基で置換されているフェニルであり、
ヘテロアリールは、各々が場合によりハロ、シアノ、Ｃ_1-3アルキルおよびＣ_1-3アルキルオキシから成る群より選択される１または２個の置換基で置換されていてもよいピリジル、ピリミジルおよびピラジルから成る群より選択される］
で表される化合物またはこれの互変異性体もしくは立体異性形態物、またはこれの付加塩もしくは溶媒和物。

【請求項2】

Ｒ¹およびＲ²が水素であり、
Ｘ¹、Ｘ²、Ｘ³、Ｘ⁴がＣＨであり、
Ｌが結合または−Ｎ（Ｒ⁵）ＣＯ−であり、かつＲ⁵が水素であり、
Ａｒがホモアリールまたはヘテロアリールであり、
ホモアリールがクロロで置換されているフェニルであり、
ヘテロアリールが各々が場合によりクロロ、フルオロ、シアノ、メチルおよびメトキシから成る群より選択される１または２個の置換基で置換されていてもよいピリジルおよびピリミジルから成る群より選択される、
請求項１記載の化合物またはこれの付加塩もしくは溶媒和物。

【請求項3】

Ｒ³で置換されている炭素原子がＲ配置を有する請求項１記載の化合物。

【請求項4】

製薬学的に許容される担体および請求項１から３のいずれか１項記載の化合物を治療的に有効な量で含有して成る製薬学的組成物。

【請求項5】

請求項４記載の製薬学的組成物の製造方法であって、製薬学的に許容される担体を治療的に有効な量の請求項１から３のいずれか１項記載の化合物と混合することを特徴とする方法。

【請求項6】

アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害、老衰、認知症、レビー小体認知症、ダウン症候群、卒中に関連した認知症、パーキンソン病に関連した認知症またはベータアミロイドに関連した認知症の治療または予防で用いるための請求項１から３のいずれか１項記載の化合物。

【請求項7】

アルツハイマー病、軽度認知障害、老衰、認知症、レビー小体認知症、ダウン症候群、卒中に関連した認知症、パーキンソン病に関連した認知症およびベータアミロイドに関連した認知症から成る群より選択される障害を治療するための、請求項１から３のいずれか１項記載の化合物を治療的に有効な量で含んで成る製薬学的組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ベータ−セクレターゼ（またベータ−サイトアミロイド開裂酵素、ＢＡＣＥ、ＢＡＣＥ１、Ａｓｐ２またはメマプシン２としても知られる）の阻害剤としての新規な４，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル−アミン誘導体に関する。本発明はまたそのような化合物を含有して成る製薬学的組成物、そのような化合物および組成物の製造方法およびそのような化合物および組成物をベータ−セクレターゼが関与する障害、例えばアルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害、老衰、認知症、レビー小体認知症、ダウン症候群、卒中に関連した認知症、パーキンソン病に関連した認知症またはベータアミロイドに関連した認知症などを予防および治療する目的で用いることにも関する。

【背景技術】

【0002】

アルツハイマー病（ＡＤ）は加齢に関連した神経変成性疾患である。ＡＤ患者は認知欠損および記憶障害に加えて行動的問題、例えば不安などに苦しむ。ＡＤにかかった患者の９０％以上が散発型の障害を示す一方で家族性または遺伝性はその症例の１０％未満である。米国では６５歳でＡＤにかかるのは１０人中約１人であるが、８５歳でＡＤにかかるのは２人に１人である。最初に診断されてからの平均余命は７−１０年であり、そしてＡＤ患者は非常に費用のかかる介護付住宅または家族いずれかによる広範な介護を必要とする。老齢者人口の数が増えるにつれてＡＤの医療的懸念が増している。現在利用可能なＡＤ療法は単にその病気の症状を取り扱うだけであり、それには認知性を改善するためのアセチルコリンエステラーゼ阻害剤に加えてこの病気に関連した行動問題を制御するための抗不安薬および抗精神病薬が含まれる。

【0003】

ＡＤ患者の脳に顕著な病理学的特徴は神経原線維のもつれであり、これはタウ蛋白質の過燐酸化およびアミロイド班によって生じ、それらはベータ−アミロイド１−４２（Ａｂｅｔａ １−４２）ペプチドの凝集によって生じる。Ａｂｅｔａ １−４２はオリゴマーを形成した後に原線維を形成しそして最終的アミロイド班を形成する。そのオリゴマーおよび原線維が特に神経毒を示すと考えられており、それによってＡＤに関連した神経学的障害の大部分が引き起こされる可能性がある。Ａｂｅｔａ １−４２の産生を防止する薬剤は、ＡＤを治療するための予防維持薬になる可能性がある。Ａｂｅｔａ １−４２は、７７０個のアミノ酸で構成されるアミロイド前駆体蛋白質（ＡＰＰ）から生じる。Ａｂｅｔａ １−４２のＮ末端をベータ−セクレターゼ（ＢＡＣＥ）が開裂させた後、ガンマ−セクレターゼがＣ末端を開裂させる。ガンマ−セクレターゼはＡｂｅｔａ １−４２に加えてまたＡｂｅｔａ １−４０（これが主要な開裂生成物である）ばかりでなくＡｂｅｔａ １−３８およびＡｂｅｔａ １−４３も遊離させる。これらのＡｂｅｔａ形態物もまた凝集してオリゴマーおよび原線維を生じ得る。このように、ＢＡＣＥの阻害剤はＡｂｅｔａ １−４２ばかりでなくＡｂｅｔａ １−４０、Ａｂｅｔａ １−３８およびＡｂｅｔａ １−４３の産生も防止すると期待されることで、ＡＤ治療における治療薬になる可能性がある。

【発明の概要】

【0004】

発明の要約
本発明は、式（Ｉ）

【0005】

【化1】

【0006】

［式中、
Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、水素、フルオロ、シアノ、Ｃ_１−３アルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ_１−３アルキルおよびＣ_３−６シクロアルキルから成る群より選択されるか、或はＲ^１とＲ^２がこれらが結合している炭素原子と一緒になってＣ_３−６シクロアルカンジイル環を形成していてもよく、
Ｒ^３は、水素、Ｃ_１−３アルキル、Ｃ_３−６シクロアルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ_１−３アルキル、ホモアリールおよびヘテロアリールから成る群より選択され、
Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、Ｘ^４は、独立して、Ｃ（Ｒ^４）またはＮであるが、但しＮを表すのはそれらの中の２つ以下であることを条件とし、各Ｒ^４は、水素、ハロ、Ｃ_１−３アルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ_１−３アルキル、シアノ、Ｃ_１−３アルキルオキシ、モノ−およびポリハロ−Ｃ_１−３アルキルオキシから成る群より選択され、
Ｌは、結合または−Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ−であり、かつＲ^５は水素またはＣ_１−３アルキルであり、
Ｒ^６は、水素またはトリフルオロメチルであり、
Ａｒは、ホモアリールまたはヘテロアリールであり、
ホモアリールは、フェニル、またはハロ、シアノ、Ｃ_１−３アルキル、Ｃ_１−３アルキルオキシ、モノ−およびポリハロ−Ｃ_１−３アルキルおよびモノ−およびポリハロ−Ｃ_１−３アルキルオキシから成る群より選択される１、２または３個の置換基で置換されているフェニルであり、
ヘテロアリールは、各々が場合によりハロ、シアノ、Ｃ_１−３アルキル、Ｃ_１−３アルキルオキシ、モノ−およびポリハロ−Ｃ_１−３アルキルおよびモノ−およびポリハロ−Ｃ_１−３アルキルオキシから成る群より選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよいピリジル、ピリミジル、ピラジル、ピリダジル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、オキサゾリルおよびオキサジアゾリルから成る群より選択される］
で表される化合物またはこれの互変異性体もしくは立体異性形態物、またはこれの付加塩もしくは溶媒和物に向けたものである。

【0007】

本発明の実例は、製薬学的に許容される担体およびこの上に記述した化合物のいずれかを含有して成る製薬学的組成物である。本発明の実例は、この上に記述した化合物のいずれかと製薬学的に許容される担体を混合することで生じさせた製薬学的組成物である。本発明の実例は、この上に記述した化合物のいずれかと製薬学的に許容される担体を混合することを含んで成る製薬学的組成物製造方法である。

【0008】

本発明の実例は、ベータ−セクレターゼ酵素が媒介する障害を治療する方法であり、この方法は、それを必要としている被験体にこの上に記述した化合物または製薬学的組成物のいずれかを治療的に有効な量で投与することを含んで成る。

【0009】

本発明のさらなる実例は、ベータ−セクレターゼ酵素を阻害する方法であり、この方法
は、それを必要としている被験体にこの上に記述した化合物または製薬学的組成物のいずれかを治療的に有効な量で投与することを含んで成る。

【0010】

本発明の一例は、アルツハイマー病、軽度認知障害、老衰、認知症、レビー小体認知症、ダウン症候群、卒中に関連した認知症、パーキンソン病に関連した認知症およびベータアミロイドに関連した認知症から成る群より選択される障害、好適にはアルツハイマー病を治療する方法であり、この方法は、それを必要としている被験体にこの上に記述した化合物または製薬学的組成物のいずれかを治療的に有効な量で投与することを含んで成る。

【0011】

本発明の別の例は、この上に記述した化合物のいずれかを下記の治療を必要としている被験体に用いる例である：（ａ）アルツハイマー病、（ｂ）軽度認知障害、（ｃ）老衰、（ｄ）認知症、（ｅ）レビー小体認知症、（ｆ）ダウン症候群、（ｇ）卒中に関連した認知症、（ｈ）パーキンソン病に関連した認知症および（ｉ）ベータアミロイドに関連した認知症。

【発明を実施するための形態】

【0012】

発明の詳細な説明
本発明は、本明細書の上で定義した如き式（Ｉ）で表される化合物およびこれらの製薬学的に許容される塩および溶媒和物に向けたものである。前記式（Ｉ）で表される化合物はベータ−セクレターゼ酵素（またベータ−サイト開裂酵素、ＢＡＣＥ、ＢＡＣＥ１、Ａｓｐ２またはメマプシン２としても知られる）の阻害剤であり、アルツハイマー病、軽度認知障害、老衰、認知症、卒中に関連した認知症、レビー小体認知症、ダウン症候群、パーキンソン病に関連した認知症またはベータアミロイドに関連した認知症、好適にはアルツハイマー病、軽度認知障害または認知症、より好適にはアルツハイマー病の治療で用いるに有用である。

【0013】

本発明の１つの態様またはこれの付加塩もしくは溶媒和物では、
Ｒ^１およびＲ^２が独立して水素およびＣ_１−３アルキルから選択され、
Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、Ｘ^４が独立してＣ（Ｒ^４）でありかつ各Ｒ^４が水素およびハロから選択され、
Ｌが結合または−Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ−であり、かつＲ^５が水素であり、
Ａｒがホモアリールまたはヘテロアリールであり、
ホモアリールがフェニル、またはハロ、シアノ、Ｃ_１−３アルキルおよびＣ_１−３アルキルオキシから成る群より選択される１または２個の置換基で置換されているフェニルであり、
ヘテロアリールが各々が場合によりハロ、シアノ、Ｃ_１−３アルキルおよびＣ_１−３アルキルオキシから成る群より選択される１または２個の置換基で置換されていてもよいピリジル、ピリミジルおよびピラジルから成る群より選択される。

【0014】

本発明の別の態様またはこれの付加塩もしくは溶媒和物では、Ｒ^１およびＲ^２が水素であり、
Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、Ｘ^４がＣＨであり、
Ｌが結合または−Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ−であり、かつＲ^５が水素であり、
Ａｒがホモアリールまたはヘテロアリールであり、
ホモアリールがクロロで置換されているフェニルであり、
ヘテロアリールが各々が場合によりクロロ、フルオロ、シアノ、メチルおよびメトキシから成る群より選択される１または２個の置換基で置換されていてもよいピリジルおよびピリミジルから成る群より選択される。

【0015】

別の態様では、Ｒ^３で置換されている炭素原子がＲ配置を有する。

【0016】

本発明の別の態様またはこれの付加塩もしくは溶媒和物では、Ｒ^１およびＲ^２が水素であり、
Ｘ^１がＣＨまたはＣＦでありそしてＸ^２、Ｘ^３、Ｘ^４がＣＨであり、
Ｌが−Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ−であり、かつＲ^５が水素であり、
Ａｒが１または２個のハロ原子で置換されているピリジニルまたはメトキシで置換されているピラジニルである。

【0017】

定義
「ハロ」はフルオロ、クロロおよびブロモを表し、「Ｃ_１−３アルキル」は炭素原子数が１、２または３の直鎖もしくは分枝飽和アルキル基、例えばメチル、エチル、１−プロピルおよび２−プロピルなどを表し、「Ｃ_１−３アルキルオキシ」はＣ_１−３アルキルがこの上で定義した通りであるエーテル基を表し、「モノ−およびポリハロＣ_１−３アルキル」は１、２、３または可能ならばそれ以上のハロ原子（この上で定義した如き）で置換されているこの上で定義した如きＣ_１−３アルキルを表し、「モノ−およびポリハロＣ_１−３アルキルオキシ」はモノ−およびポリハロＣ_１−３アルキルがこの上で定義した通りであるエーテル基を表し、「Ｃ_３−６シクロアルキル」はシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルを表し、「Ｃ_３−６シクロアルカンジイル」はシクロプロパンジイル、シクロブタンジイル、シクロペンタンジイルおよびシクロヘキサンジイルなどの如き二価基を表す。

【0018】

本明細書で用いる如き用語「被験体」は、治療、観察または実験の対象であるか或はであった動物、好適には哺乳動物、最も好適にはヒトを指す。

【0019】

本明細書で用いる如き用語「治療的に有効な量」は、研究者、獣医、医者または他の臨床医が探求している組織、動物またはヒトにおける生物学的または医学的反応（治療すべき病気または障害の症状の軽減を包含）を引き出す活性化合物もしくは薬剤の量を意味する。

【0020】

本明細書で用いる如き用語「組成物」は、特定材料を特定量で含有して成る製品ばかりでなく特定材料を特定量で組み合わせることによって直接または間接的にもたらされる生成物のいずれも包含することを意図する。

【0021】

式（Ｉ）に従う化合物およびこれらの付加塩、水和物および溶媒和物のいくつかはキラリティーの中心を１個以上含有していることで立体異性形態物として存在する可能性があることは理解されるであろう。

【0022】

本明細書の上または以下で用いる如き用語「立体異性形態物」は、式（Ｉ）に従う化合物およびこれらの付加塩が取り得る可能な立体異性形態物の全部を定義するものである。別の方法で記述もしくは表示しない限り、化合物の化学的表示はあらゆる可能な立体化学的異性形態物の混合物［前記混合物は基本的分子構造を有するあらゆるジアステレオマーおよび鏡像異性体を含有する］ばかりでなく他の異性体を実質的に含有しない、即ち伴う他の異性体の含有量が１０％未満、好適には５％未満、特に２％未満、最も好適には１％未満の式（Ｉ）に従う個々の異性形態物の各々およびこれらの塩、溶媒和物を表す。

【0023】

本発明に従う化合物がキラル中心を少なくとも１個有する場合、相当して、それらは鏡像異性体として存在する可能性がある。本化合物がキラル中心を２個以上有する場合、それらは追加的にジアステレオマーとして存在する可能性もある。そのような異性体およびこれらの混合物の全部が本発明の範囲内に含まれると理解されるべきである。本化合物が鏡像異性体として存在する場合、その鏡像異性体は好適には鏡像異性体過剰度が約８０％
に等しいか或はそれ以上、より好適には鏡像異性体過剰度が約９０％に等しいか或はそれ以上、更により好適には鏡像異性体過剰度が約９５％に等しいか或はそれ以上、更により好適には鏡像異性体過剰度が約９８％に等しいか或はそれ以上、最も好適には鏡像異性体過剰度が約９９％に等しいか或はそれ以上の状態で存在する。同様に、本化合物がジアステレオマーとして存在する場合、そのジアステレオマーはジアステレオマー過剰度が約８０％に等しいか或はそれ以上、より好適にはジアステレオマー過剰度が約９０％に等しいか或はそれ以上、更により好適にはジアステレオマー過剰度が約９５％に等しいか或はそれ以上、更により好適にはジアステレオマー過剰度が約９８％に等しいか或はそれ以上、最も好適にはジアステレオマー過剰度が約９９％に等しいか或はそれ以上の状態で存在する。

【0024】

更に、本発明の化合物が示す結晶形態のいくつかは多形体としても存在する可能性があり、このように、それらを本発明に包含させることを意図する。加うるに、本発明の化合物のいくつかは水と一緒に溶媒和物（即ち水和物）または一般的有機溶媒と一緒に溶媒和物を生じる可能性があり、そのような溶媒和物もまた本発明の範囲内に含めることを意図する。

【0025】

本発明の化合物の塩を薬剤で用いる場合、それは無毒の「製薬学的に許容される塩」を指す。しかしながら、本発明に従う化合物またはこれらの製薬学的に許容される塩を製造しようとする時には他の塩も有用であり得る。本化合物の適切な製薬学的に許容される塩には、例えば本化合物の溶液と製薬学的に許容される酸、例えば塩酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、こはく酸、酢酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、炭酸または燐酸などの溶液を混合することなどで生じ得る酸付加塩が含まれる。更に、本発明の化合物が酸部分を持つ場合、それの適切な製薬学的に許容される塩にはアルカリ金属の塩、例えばナトリウム塩またはカリウム塩など、アルカリ土類金属の塩、例えばカルシウム塩またはマグネシウム塩など、および適切な有機配位子を用いて生じさせた塩、例えば第四級アンモニウム塩などが含まれ得る。

【0026】

製薬学的に許容される塩を生じさせようとする時に使用可能な代表的な酸には、これらに限定するものでないが、下記が含まれる：酢酸、２，２−ジクロロ酢酸、アシル化アミノ酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、（＋）−樟脳酸、樟脳スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、桂皮酸、クエン酸、シクラミン酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸、蟻酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチシン酸、グルコヘプトン酸、Ｄ−グルコン酸、Ｄ−グルコロン酸、Ｌ−グルタミン酸、ベータ−オキソ−グルタル酸、グリコール酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、（＋）−Ｌ−乳酸、（±）−ＤＬ−乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、（−）−Ｌ−リンゴ酸、マロン酸、（±）−ＤＬ−マンデル酸、メタンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトン酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、オロチン酸、しゅう酸、パルミチン酸、パモ酸、燐酸、Ｌ−ピログルタミン酸、サリチル酸、４−アミノ−サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、こはく酸、硫酸、タンニン酸、（＋）−Ｌ−酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロメチルスルホン酸およびウンデシレン酸。製薬学的に許容される塩を生じさせようとする時に使用可能な代表的な塩基には、これらに限定するものでないが、下記が含まれる：アンモニア、Ｌ−アルギニン、ベネタミン、ベンザチン、水酸化カルシウム、コリン、ジメチルエタノールアミン、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、２−（ジエチルアミノ）−エタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチル−グルカミン、ヒドラバミン、１Ｈ−イミダゾール、Ｌ−リシン、水酸化マグネシウム、４−（２−ヒドロキシエチル）−モルホリン、ピペラジン、水酸化カリウム、１−（２−ヒドロキシエチル）−ピロリジン、第二級アミン、水酸化ナトリウム、トリエタノー
ルアミン、トロメタミンおよび水酸化亜鉛。

【0027】

本発明の化合物の化学名はＣｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ Ｓｅｒｖｉｃｅが同意する命名規則に従って生じさせたものである。式（Ｉ）に従う化合物はまた互変異性形態としても存在し得る。そのような形態をこの上に示した式に明確には示していないが、それらも本発明の範囲内に包含させることを意図する。

【0028】

Ａ． 最終的化合物の調製
実験手順１
式（Ｉ）に従う最終的化合物の調製は、式（ＩＩ）で表される中間体化合物と適切なアンモニア源、例えば塩化アンモニウムまたはアンモニア水溶液などを反応スキーム（１）に従って反応させることで実施可能であり、反応を反応に不活性な適切な溶媒、例えば水またはメタノールなど中で熱条件、例えば反応混合物を６０℃に例えば６時間加熱することなどで実施する。反応スキーム（１）に示す変項は全部式（Ｉ）で定義した通りである。

【0029】

【化2】

【0030】

実験手順２
Ｌが−Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ−である式（Ｉ−ａ）に従う最終的化合物の調製は、式（ＩＩＩ−ａ）で表される中間体化合物と式（ＩＶ）で表される中間体を反応スキーム（２）に従って反応させることで実施可能であり、反応を反応に不活性な適切な溶媒、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなど中で適切な塩基、例えばＫ_３ＰＯ_４など、銅触媒、例えばＣｕＩなどおよびジアミン、例えば（１Ｒ，２Ｒ）−（−）−１，２−ジアミノシクロヘキサンなどを存在させて熱条件、例えば反応混合物をマイクロ波照射下で１８０℃に例えば１３５分間加熱することなどで実施する。反応スキーム（２）に示す変項は全部式（Ｉ）で定義した通りでありそしてＷはハロである。

【0031】

【化3】

【0032】

実験手順３
加うるに、式（Ｉ−ａ）に従う最終的化合物の調製は、式（ＩＩＩ−ｂ）で表される中
間体化合物と式（Ｖ）で表される中間体を反応スキーム（３）に従って反応させることで実施可能であり、反応を反応に不活性な適切な溶媒、例えばジクロロメタンなど中で適切な塩基、例えばトリエチルアミンなどを存在させ、縮合剤、例えばヘキサフルオロ燐酸Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム［ＨＡＴＵ、ＣＡＳ １４８８９３−１０−１］などを存在させて熱条件、例えば反応混合物を２５℃に例えば２時間加熱することなどで実施する。反応スキーム（３）に示す変項は全部式（Ｉ）で定義した通りである。

【0033】

【化4】

【0034】

実験手順４
加うるに、式（Ｉ−ａ）に従う最終的化合物の調製は、式（ＩＩＩ−ｂ）で表される中間体化合物と式（ＶＩ）で表される中間体を反応スキーム（４）に従って反応させることで実施可能であり、反応を反応に不活性な適切な溶媒、例えばジクロロメタンなど中で適切な塩基、例えばピリジンなどを存在させて熱条件、例えば反応混合物を２５℃に例えば２時間加熱することなどで実施する。反応スキーム（４）に示す変項は全部式（Ｉ）で定義した通りでありそしてＹはハロである。

【0035】

【化5】

【0036】

実験手順５
Ｌが結合である式（Ｉ−ｂ）に従う最終的化合物の調製は、式（ＩＩＩ−ａ）で表される中間体化合物と式（ＶＩＩ）で表される中間体を反応スキーム（５）に従って反応させることで実施可能であり、反応を反応に不活性な適切な溶媒、例えば不活性溶媒の混合物、例えば１，４−ジオキサン／エタノールなど中で適切な塩基、例えばＫ_３ＣＯ_３水溶液など、Ｐｄ錯体触媒、例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）［ＣＡＳ １４２２１−０１−３］などを存在させて熱条件、例えば反応混合物を８０℃に例えば２０時間加熱するか或は例えば反応混合物をマイクロ波照射下で１５０℃に１０分から３０分間加熱することなどで実施する。反応スキーム（５）に示す変項は全部式（Ｉ）で定義した通りでありそしてＷはハロである。Ｒ^７およびＲ^８は水素またはアルキルであってもよいか或は一緒になって例えば式−ＣＨ_２ＣＨ_２−、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−ま
たは−Ｃ（ＣＨ_３）_２Ｃ（ＣＨ_３）_２−などで表される二価基を形成していてもよい。

【0037】

【化6】

【0038】

この上の調製に示した数多くの中間体および出発材料は公知化合物（これらの調製は当該技術で公知の前記もしくは同様な化合物の調製方法に従って実施可能である）であり、そしていくつかの中間体は新規である。そのような数多くの調製方法を本明細書の以下により詳細に記述する。

【0039】

Ｂ． 中間体化合物の調製
実験手順６
式（ＩＩ）に従う中間体の調製は、式（ＶＩＩＩ）で表される中間体化合物とチオアミドの合成に適した硫黄供与反応体、例えば五硫化燐または２，４−ビス−（４−メトキシフェニル）−１，３−ジチア−２，４−ジフォスフェタン２，４−ジスルフィド［Ｌａｗｅｓｓｏｎ試薬、ＣＡＳ １９１７２−４７−５］などを反応スキーム（６）に従って反応させることで実施可能であり、反応を反応に不活性な溶媒、例えばテトラヒドロフランまたはトルエンなど中で適切な塩基、例えばピリジンなどを存在させて熱条件、例えば反応混合物を９０℃に例えば１８時間加熱することなどで実施する。反応スキーム（６）に示す変項は全部式（Ｉ）で定義した通りである。

【0040】

【化7】

【0041】

実験手順７
Ｌが結合である式（ＶＩＩＩ）に従う中間体の調製は、式（ＩＸ−ａ）で表される中間体化合物と式（ＶＩＩ）で表される中間体を反応スキーム（７）に従って反応させることで実施可能であり、反応を不活性な溶媒の適切な混合物、例えば１，４−ジオキサン／水など中で適切な塩基、例えばＮａ_２ＣＯ_３水溶液など、Ｐｄ錯体触媒、例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）［ＣＡＳ １４２２１−０１−３］などを存在させて熱条件、例えば反応混合物を８０℃に例えば２０時間加熱するか或は例えば反応混合物をマイクロ波照射下で１５０℃に１５分間加熱することなどで実施する。反応ス
キーム（７）に示す変項は全部式（Ｉ）で定義した通りでありそしてＷはハロである。Ｒ^７およびＲ^８は水素またはアルキルであってもよいか或は一緒になって例えば式−ＣＨ_２ＣＨ_２−、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−または−Ｃ（ＣＨ_３）_２Ｃ（ＣＨ_３）_２−などで表される二価基を形成していてもよい。

【0042】

【化8】

【0043】

実験手順８
式（ＩＩＩ−ｂ）に従う中間体の調製は、式（ＩＩＩ−ａ）で表される相当する中間体化合物を用いて反応スキーム（８）に従って当該技術分野で公知のＢｕｃｈｗａｌｄ−Ｈａｒｔｗｉｇ型カップリング手順に従うことで実施可能である。前記カップリングは式（ＩＩＩ−ａ）で表される中間体化合物に式（Ｘ）で表される中間体を用いた処理を反応に不活性な適切な溶媒、例えばエタノールまたは不活性溶媒の混合物、例えばエタノールまたは不活性溶媒の混合物、例えば１，２−ジメトキシエタン／水／エタノールなど中で適切な塩基、例えばＫ_３ＰＯ_４水溶液またはＣｓ_２ＣＯ_３など、Ｐｄ錯体触媒、例えば［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］−ジクロロパラジウム（ＩＩ）［ＣＡＳ ７２２８７−２６−４］または二酢酸トランス−ビス（ジシクロヘキシルアミン）パラジウム［ＤＡＰＣｙ、ＣＡＳ ６２８３３９−９６−８］などを存在させて熱条件、例えば反応混合物を８０℃に例えば２０時間加熱するか或は例えば反応混合物をマイクロ波照射下で１３０℃に例えば１０時間加熱することなどで実施可能である。反応スキーム（８）に示す変項は全部式（Ｉ）で定義した通りでありそしてＷはハロである。Ｒ^５は水素またはＣ_１−３アルキルである。

【0044】

【化9】

【0045】

実験手順９
加うるに、Ｒ^５が水素である式（ＩＩＩ−ｂ）に従う中間体の調製は、式（ＩＩＩ−ｃ）で表される相当する中間体を用いて反応スキーム（９）に従って当該技術分野で公知のニトロからアミノを生じさせる還元手順に従うことで実施可能である。前記還元は便利に当該技術分野で公知の接触水添手順に従って実施可能である。例えば、前記還元は反応体を水素雰囲気下で適切な触媒、例えば炭に担持されているパラジウム、炭に担持されてい
る白金、ラネーニッケルなどの触媒を存在させて撹拌することで実施可能である。適切な溶媒は、例えば水、アルカノール、例えばメタノール、エタノールなど、エステル、例えば酢酸エチルなどである。前記還元反応速度を速めようとする場合には、反応混合物の温度を高くしそして／または圧力を高くするのが有利であり得る。反応体および反応生成物が有する特定の官能基の好ましくないさらなる水添を防止しようとする場合には、触媒毒、例えばチオフェンなどを反応混合物に添加することでそれを行うことができる。反応スキーム（９）に示す変項は全部式（Ｉ）で定義した通りである。

【0046】

【化10】

【0047】

実験手順１０
式（ＩＩＩ−ａ）および（ＩＩＩ−ｃ）で表される中間体化合物の調製は一般に以下の反応スキーム（１０）、（１１）、（１２）および（１３）に示す反応段階に従って実施可能である。

【0048】

反応スキーム（１０）に示す式（ＩＩＩ−ａ）および（ＩＩＩ−ｃ）で表されるアミジン誘導体の調製は便利に式（ＸＩ−ａ）および（ＸＩ−ｃ）で表される相当するチオアミド誘導体を用いて当該技術分野で公知のチオアミドからアミジンを生じさせる変換手順（反応段階Ａ）に従うことで実施可能である。前記変換は便利に式（ＸＩ−ａ）および（ＸＩ−ｃ）で表される中間体化合物にアンモニア源、例えば塩化アンモニウムまたはアンモニア水溶液などを用いた処理を反応に不活性な適切な溶媒、例えば水またはメタノールなど中で熱条件、例えば反応混合物を６０℃に例えば６時間加熱することなどで受けさせることで実施可能である。

【0049】

反応スキーム（１０）に示す式（ＸＩ−ａ）および（ＸＩ−ｃ）で表されるチオアミド誘導体の調製は、式（ＩＸ−ａ）および（ＩＸ−ｃ）で表されるアミド誘導体を用いて当該技術分野で公知のチオン化手順（反応段階Ｂ）に従うことで実施可能である。前記変換は便利に式（ＩＸ−ａ）および（ＩＸ−ｃ）で表される中間体化合物にチオン化剤、例えば五硫化燐または２，４−ビス−（４−メトキシ−フェニル）−１，３−ジチア−２，４−ジフォスフェタン２，４−ジスルフィド［Ｌａｗｅｓｓｏｎ試薬、ＣＡＳ １９１７２−４７−５］などを用いた処理を反応に不活性な溶媒、例えばテトラヒドロフランまたは１，４−ジオキサンなど中で熱条件、例えば反応混合物を５０℃に例えば５０分間加熱することなどで受けさせることで実施可能である。

【0050】

反応スキーム（１０）に示す式（ＩＸ−ａ）および（ＩＸ−ｃ）で表されるアミド誘導体の調製は、式（ＸＩＩ−ａ）および（ＸＩＩ−ｃ）で表される相当する中間体化合物を用いて当該技術分野で公知の環化手順（反応段階Ｃ）に従うことで実施可能である。前記環化は便利に式（ＸＩＩ−ａ）および（ＸＩＩ−ｃ）で表される中間体化合物に適切な塩基、例えば水素化ナトリウムなどを用いた処理を反応に不活性な適切な溶媒、例えばテトラヒドロフランなど中で−８０℃から１００℃、好適には−１５℃から２５℃で３０分か
ら１００時間、好適には１時間から２４時間受けさせることで実施可能である。

【0051】

【化11】

【0052】

前記反応スキーム（１０）に示す式（ＸＩＩ−ａ）および（ＸＩＩ−ｃ）で表される中間体化合物の調製は、式（ＸＩＩＩ−ａ）および（ＸＩＩＩ−ｃ）で表される相当する中間体化合物を用いて当該技術分野で公知のＮ−アシル化手順（反応段階Ｄ）に従うことで実施可能である。前記Ｎ−アシル化は便利に式（ＸＩＩＩ−ａ）および（ＸＩＩＩ−ｃ）
で表される中間体化合物に式（ＸＩＶ）で表される中間体化合物を用いた処理を塩基、例えば重炭酸ナトリウムなど、または塩基混合物、例えば重炭酸ナトリウム／Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンなどを存在させて反応に不活性な適切な溶媒、例えばエタノールまたは不活性溶媒混合物、例えばエタノール／ジクロロメタンなど中で−８０℃から１００℃、好適には−１５℃から２５℃で３０分から１００時間、好適には１時間から２４時間受けさせることで実施可能である。

【0053】

反応スキーム（１１）に示す式（ＸＩＩＩ−ａ）および（ＸＩＩＩ−ｃ）に従う中間体の調製は、Ｚ^１がピラゾール系の適切な保護基、例えばジメチルスルファモイル基などでありそしてＺ^２がアミンの適切な保護基、例えばｔ−ブタンスルフィニル基などである式（ＸＶ−ａ）および（ＸＶ−ｃ）で表される相当する中間体化合物を用いて当該技術分野で公知のＮ−脱保護手順（反応段階Ｅ）に従うことで実施可能である。前記Ｎ−脱保護は便利に式（ＸＶ−ａ）および（ＸＶ−ｃ）で表される相当する中間体化合物に適切な酸性作用剤、例えば塩酸などを用いた処理を適切な不活性溶媒、例えば１，４−ジオキサンなど中で中程度に高い温度、例えば２５℃などで例えば１時間受けさせることで実施可能である。

【0054】

反応スキーム（１１）に示す式（ＸＶ−ａ）および（ＸＶ−ｃ）に従う中間体の調製は、式（ＸＶＩＩ−ａ）および（ＸＶＩＩ−ｃ）で表される中間体化合物の反応を当該技術分野で公知のイミンからアルキルアミンへの変換手順（反応段階Ｆ）に従って起こさせることで実施可能である。前記変換は便利に式（ＸＶＩＩ−ａ）および（ＸＶＩＩ−ｃ）で表される相当する中間体化合物にＹがハロである式（ＸＶＩ）で表される中間体化合物を用いた処理を反応に不活性な適切な溶媒、例えばテトラヒドロフランなど中で低温、例えば０℃などで例えば２時間受けさせることで実施可能である。

【0055】

【化12】

【0056】

前記反応スキーム（１１）に示す式（ＸＶＩＩ−ａ）および（ＸＶＩＩ−ｃ）に従う中間体の調製は、式（ＸＩＸ−ａ）および（ＸＩＸ−ｃ）で表される中間体化合物の反応を当該技術分野で公知のケトンからイミンへの変換手順（反応段階Ｇ）に従って起こさせることで実施可能である。前記変換は便利に式（ＸＩＸ−ａ）および（ＸＩＸ−ｃ）で表される相当する中間体化合物にＺ^２がアルキルスルフィニル基、例えばｔ−ブタンスルフィニル基などである式（ＸＶＩＩＩ）で表される中間体化合物を用いた処理を適切なルイス
酸触媒、例えばチタン（ＩＶ）イソプロポキサイドなどを存在させて反応に不活性な適切な溶媒、例えばトルエンなど中で熱条件、例えば反応混合物を１１０℃に例えば２４時間加熱することなどで受けさせることで実施可能である。

【0057】

前記反応スキーム（１１）に示す式（ＸＩＸ−ａ）および（ＸＩＸ−ｃ）に従う中間体の調製は、式（ＸＸ−ａ）および（ＸＸ−ｃ）で表される中間体化合物の反応を当該技術分野で公知のアルコールからカルボニルへの酸化手順（反応段階Ｈ）に従って起こさせることで実施可能である。前記酸化は便利に式（ＸＸ−ａ）および（ＸＸ−ｃ）で表される相当する中間体化合物に酸化剤、例えばＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペリオジナン［ＣＡＳ：８７４１３−０９−０］を用いた処理を反応に不活性な適切な溶媒、例えばジクロロメタンなど中で低温、例えば０℃などで例えば１０分間に続いて中程度に高い温度、例えば２５℃などで例えば１時間受けさせることで実施可能である。

【0058】

前記反応スキーム（１１）に示す式（ＸＸ−ａ）および（ＸＸ−ｃ）に従う中間体の調製は、式（ＸＸＩＩ−ａ）および（ＸＸＩＩ−ｃ）で表される中間体化合物の反応を当該技術分野で公知のオルト−リチオ化−アルキル化手順（反応段階Ｉ）に従って起こさせることで実施可能である。前記変換は便利に式（ＸＸＩＩ−ａ）および（ＸＸＩＩ−ｃ）で表される相当する中間体化合物に適切な有機リチウム反応体、例えばｎ−ブチルリチウムなどを用いた処理を反応に不活性な適切な溶媒、例えばテトラヒドロフランなど中で低温、例えば−７８℃で例えば４５分間受けさせた後に式（ＸＸＩ−ａ）および（ＸＸＩ−ｃ）で表される中間体化合物を用いた処理を低温、例えば−７８℃で例えば４５分間受けさせることで実施可能である。

【0059】

Ｚ^１がピラゾール系の適切な保護基、例えばジメチルスルファモイル基などである式（ＸＸＩＩ−ａ）および（ＸＸＩＩ−ｃ）で表される中間体化合物の調製は一般に文献に記述されている当該技術分野で公知のＮ−保護型の手順に従って実施可能である。

【0060】

【化13】

【0061】

加うるに、前記反応スキーム（１２）に示すＲ^６が水素である式（ＸＩＸ−ａ）および（ＸＩＸ−ｃ）に従う中間体の調製は、式（ＸＸＩＶ−ａ）および（ＸＸＩＶ−ｃ）で表される中間体化合物の反応を当該技術分野で公知のＷｅｉｎｒｅｂアミドからケトンへの変換手順（反応段階Ｊ）に従って起こさせることで実施可能である。前記変換は便利に式（ＸＸＩＶ−ａ）および（ＸＸＩＶ−ｃ）で表される相当する中間体化合物にＹがハロである式（ＸＸＩＩＩ−ａ）および（ＸＸＩＩＩ−ｃ）で表される中間体化合物を用いた処理を反応に不活性な適切な溶媒、例えばテトラヒドロフランなど中で低温、例えば−７８℃で例えば１時間に続いて中程度に高い温度、例えば２５℃で例えば５時間受けさせることで実施可能である。

【0062】

前記反応スキーム（１２）に示す式（ＸＸＩＶ−ａ）および（ＸＸＩＶ−ｃ）に従う中間体の調製は、式（ＸＸＶ−ａ）および（ＸＸＶ−ｃ）で表される中間体化合物の反応を当該技術分野で公知のＷｅｉｎｒｅｂアミド生成手順（反応段階Ｋ）に従って起こさせることで実施可能である。前記変換は便利に式（ＸＸＶ−ａ）および（ＸＸＶ−ｃ）で表される相当する中間体化合物にＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミンを用いた処理を適切な塩基、例えばイソプロピルマグネシウムクロライドなどを存在させて反応に不活性な適切な溶媒、例えばジクロロメタンなど中で低温、例えば−７８℃などで例えば１時間に続いて中程度に高い温度、例えば２５℃などで例えば２４時間受けさせることで実施可能である。

【0063】

Ｚ^１がピラゾール系の適切な保護基、例えばジメチルスルファモイル基などである式（ＸＸＶ−ａ）および（ＸＸＶ−ｃ）で表される中間体化合物は商業的に入手可能である。

【0064】

加うるに、前記反応スキーム（１３）に示すＲ^６が水素である式（ＸＩＩＩ−ａ）および（ＸＩＩＩ−ｃ）に従う中間体の調製は、Ｚ^３がアミンの保護基、例えばｔ−ブトキシカルボニル基などである式（ＸＸＶＩ−ａ）および（ＸＸＶＩ−ｃ）で表される相当する中間体化合物（反応段階Ｅ）を用いて当該技術分野で公知のＮ−脱保護手順、例えば反応スキーム（１１）に記述した手順と同じ手順などに従うことで実施可能である（反応段階Ｅ）。

【0065】

前記反応スキーム（１３）に示す式（ＸＸＶＩ−ａ）および（ＸＸＶＩ−ｃ）に従う中間体の調製は、式（ＸＸＶＩＩ−ａ）および（ＸＸＶＩＩ−ｃ）で表される中間体化合物の反応を当該技術分野で公知のピラゾール環形成手順（反応段階Ｌ）に従って起こさせることで実施可能である。前記ピラゾール環形成は便利に式（ＸＸＶＩＩ−ａ）および（ＸＸＶＩＩ−ｃ）で表される相当する中間体化合物に処理を適切な不活性溶媒、例えばエタノールなど中でヒドラジンを存在させて中程度に高い温度、例えば２５℃で例えば１時間受けさせることで実施可能である。

【0066】

前記反応スキーム（１３）に示す式（ＸＸＶＩＩ−ａ）および（ＸＸＶＩＩ−ｃ）に従う中間体の調製は、式（ＸＸＶＩＩＩ−ａ）および（ＸＸＶＩＩＩ−ｃ）で表される中間体化合物の反応を当該技術分野で公知のアルコールからカルボニルへの酸化手順、例えば反応スキーム（１１）に記述した手順などに従って起こさせることで実施可能である（反応段階Ｈ）。

【0067】

【化14】

【0068】

前記反応スキーム（１３）に示す式（ＸＸＶＩＩＩ−ａ）および（ＸＸＶＩＩＩ−ｃ）に従う中間体の調製は、式（ＸＸＩＸ−ａ）および（ＸＸＩＸ−ｃ）で表される中間体化合物の反応を当該技術分野で公知のアルデヒドからヒドロキシアルキニルへの変換手順（反応段階Ｍ）に従って起こさせることで実施可能である。前記変換は便利に式（ＸＸＩＸ−ａ）および（ＸＸＩＸ−ｃ）で表される相当する中間体化合物に適切なマグネシウム反
応体、例えばエチニルマグネシウムブロマイドなどを用いた処理を反応に不活性な適切な溶媒、例えばテトラヒドロフランなど中で低温、例えば０℃で例えば１０分間に続いて中程度に高い温度、例えば２５℃で例えば３０分間受けさせることで実施可能である。

【0069】

前記反応スキーム（１３）に示す式（ＸＸＩＸ−ａ）および（ＸＸＩＸ−ｃ）に従う中間体の調製は、式（ＸＸＸ−ａ）および（ＸＸＸ−ｃ）で表される中間体化合物の反応を当該技術分野で公知のアルコールからカルボニルへの酸化手順、例えば反応スキーム（１１）に記述した手順などに従って起こさせることで実施可能である（反応段階Ｈ）。

【0070】

Ｚ^３がアミンの保護基、例えばｔ−ブトキシカルボニル基などである式（ＸＸＸ−ａ）および（ＸＸＸ−ｃ）で表される中間体化合物の調製は一般に文献に記述されている当該技術分野で公知のＳｔｒｅｃｋｅｒ型手順に従って実施可能である。

【0071】

製薬学的組成物
本発明は、また、ベータ−セルレターゼの阻害が有益である病気、例えばアルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害、老衰、認知症、レビー小体認知症、ダウン症候群、卒中に関連した認知症、パーキンソン病に関連した認知症およびベータアミロイドに関連した認知症などを予防または治療するための組成物も提供する。前記組成物は治療的に有効な量の式（Ｉ）に従う化合物および製薬学的に許容される担体または希釈剤を含有して成る。

【0072】

本有効成分を単独で投与することも可能ではあるが、それを製薬学的組成物として存在させる方が好適である。従って、本発明は、更に、本発明に従う化合物を製薬学的に許容される担体または希釈剤と一緒に含有して成る製薬学的組成物も提供する。そのような担体または希釈剤は本組成物に含める他の材料と適合しかつそれの受益者にとって有害ではない意味で「許容される」べきである。

【0073】

本発明の製薬学的組成物の調製は薬学的技術で良く知られている方法のいずれかを用いて実施可能である。治療的に有効な量の個々の化合物を有効成分として塩基形態または付加塩形態で製薬学的に許容される担体との密な混合物として一緒にするが、前記担体に持たせる形態は投与に望まれる製剤の形態に応じて幅広く多様であり得る。本製薬学的組成物を好ましくは単位投薬形態物、好適には全身投与、例えば経口、経皮または非経口投与など、または局所投与、例えば吸入、鼻スプレー、点眼液など、またはクリーム、ゲル、シャンプーなどの形態にする。例えば、本組成物を経口投薬形態物として調製する時、通常の製薬学的媒体のいずれも使用可能であり、例えば液状の経口用製剤、例えば懸濁液、シロップ、エリキシルおよび溶液などの場合には水、グリコール、油、アルコールなど、または粉末、ピル、カプセルおよび錠剤の場合には固体状担体、例えば澱粉、糖、カオリン、滑剤、結合剤、崩壊剤などを用いてもよい。投与が容易なことから錠剤およびカプセルが最も有利な経口投薬単位形態物に相当し、この場合には明らかに固体状の製薬学的担体を用いる。非経口用組成物の場合の担体は少なくとも大部分が一般に無菌水を含んで成るが、他の材料、例えば溶解性を補助する材料などを含有させることも可能である。例えば、注射可能溶液を調製することも可能であり、その場合の担体は食塩水溶液、グルコース溶液、または食塩水とグルコース溶液の混合物を含んで成る。また、注射可能懸濁液を調製することも可能であり、この場合には適切な液状担体、懸濁剤などを用いてもよい。経皮投与に適した組成物の場合、その担体に場合により浸透促進剤および／または適切な湿潤剤を含めてもよく、それらを場合によりいずれかの性質を有する適切な添加剤と少しの比率で組み合わせてもよく、そのような添加剤は、皮膚に対して有害な影響を大きな度合では引き起こさない添加剤である。前記添加剤は皮膚への投与を助長しそして／または所望組成物の調製に役立ち得る。そのような組成物はいろいろな様式で投与可能であり、例えば経皮パッチ、スポットオン（ｓｐｏｔ−ｏｎ）、軟膏などとして投与可能である。

【0074】

上述した製薬学的組成物を投薬単位形態に構築するのが特に有利である、と言うのは、その方が投与が容易でありかつ投薬が均一であるからである。本明細書および本明細書の請求項で用いる如き「投薬単位形態物」は、各単位が要求される製薬学的担体と一緒に所望治療効果をもたらすように計算して前以て決めておいた量の有効成分を含有する単位投薬物として用いるに適した物理的に個々別々の単位を指す。そのような投薬単位形態物の例は錠剤（切り目が入っている錠剤または被覆されている錠剤を包含）、カプセル、ピル、粉末パケット、ウエハース、注射可能溶液もしくは懸濁液、茶サジ１杯、テーブルスプーン１杯など、そしてそれらを複数に分割したものである。

【0075】

投与の正確な用量および頻度は、当業者に良く知られているように、使用する前記式（Ｉ）で表される個々の化合物、治療すべき個々の状態、治療すべき状態のひどさ、個々の患者の年齢、体重、性、障害の度合および一般的身体状態ばかりでなく個人が服用している可能性のある他の薬剤にも依存する。その上、１日当たりの有効量をその治療を受けさせる被験体の反応に応じてそして／または本発明の化合物を処方する医者の評価に応じて少なくするか或は多くしてもよいことも明らかである。

【0076】

本製薬学的組成物の有効成分含有量を投与様式に応じて０．０５から９９重量％、好適には０．１から７０重量％、より好適には０．１から５０重量％にしかつ製薬学的に許容される担体の含有量を１から９９．９５重量％、好適には３０から９９．９重量％、より好適には５０から９９．９重量％にする（パーセントは全部当該組成物の総重量を基準）。

【0077】

本化合物は全身投与、例えば経口、経皮または非経口投与など、または局所投与、例えば吸入、鼻スプレー、点眼液など、またはクリーム、ゲル、シャンプーなどで使用可能である。本化合物を好適には経口投与する。投与の正確な用量および頻度は、当業者に良く知られているように、使用する前記式（Ｉ）に従う個々の化合物、治療すべき個々の状態、治療すべき状態のひどさ、個々の患者の年齢、体重、性、障害の度合および一般的身体状態ばかりでなく個人が服用している可能性のある他の薬剤にも依存する。その上、１日当たりの有効量をその治療を受けさせる被験体の反応に応じてそして／または本発明の化合物を処方する医者の評価に応じて少なくするか或は多くしてもよいことも明らかである。

【0078】

単一の投薬形態物を生じさせる目的で担体材料と一緒にすることが可能な式（Ｉ）で表される化合物の量は、治療すべき病気、哺乳動物種および個々の投与様式に応じて変わるであろう。しかしながら、一般的指針として、本発明の化合物の適切な単位用量に含める活性化合物の量は好適には例えば０．１ｍｇから約１０００ｍｇであり得る。好適な１単位用量は１ｍｇから約５００ｍｇの範囲である。より好適な１単位用量は１ｍｇから約３００ｍｇの範囲である。更により好適な１単位用量は１ｍｇから約１００ｍｇの範囲である。そのような単位用量を日に２回以上、例えば日に２、３、４、５または６回、好適には日に１または２回投与することで７０ｋｇの成人の総投薬量が被験者の体重１ｋｇ当たり投与毎に０．００１から約１５ｍｇの範囲内になるようにしてもよい。好適な投薬量は被験者の体重１ｋｇ当たり投与毎に０．０１から約１．５ｍｇであり、そのような治療を数週間または数カ月、ある場合には数年延長してもよい。しかしながら、個々の患者いずれかに特定の投与量は様々な要因に依存すると理解し、そのような要因には、当該分野の技術者が充分に理解するように、用いる具体的化合物が示す活性、治療すべき個人の年齢、体重、一般的健康状態、性および食事、投与時間および経路、排泄率、以前に投与されていた他の薬剤、および治療を行う個々の病気のひどさが含まれる。

【0079】

当業者に明らかであろうように、ある場合には前記範囲外の投薬量を用いる必要もあり得る。その上、臨床医または治療を行う医者は個々の患者の反応に関連させて治療を開始
、中断、調整または終える方法および時を認識するであろうことを特記する。

【0080】

以下に示す実施例は例示を意図したものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものでない。

【実施例】

【0081】

実験部分
本明細書の以下に示す「ｍ．ｐ．」は融点を意味し、「ａｑ．」は水溶液を意味し、「ｒ．ｍ．」は反応混合物を意味し、「ｒ．ｔ．」は室温を意味し、「ＤＩＰＥＡ」はジイソプロピルエチルアミンを意味し、「ＤＩＰＥ」はジイソプロピルエーテルを意味し、「Ｅｔ_２Ｏ」はジエチルエーテルを意味し、「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを意味し、「ＤＭＦ」はジメチルホルムアミドを意味し、「ＤＣＭ」はジクロロメタンを意味し、「ＡｃＯＥｔ」は酢酸エチルを意味し、「ＡｃＯＨ」は酢酸を意味し、「ＭｅＯＨ」はメタノールを意味し、「ＥｔＯＨ」はエタノールを意味し、「ｒａｃ」はラセミを意味し、「ｓａｔ．」は飽和を意味し、「ＳＦＣ」は超臨界液クロを意味し、「ＳＦＣ−ＭＳ」は超臨界液クロ／質量分析を意味し、「ＬＣＭＳ」は液クロ／質量分析を意味し、「ＨＰＬＣ」は高性能液クロを意味し、「ＤＭＴＭＭ」は４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライドを意味し、「ＨＡＴＵ」はヘキサフルオロ燐酸Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニイウムを意味する。

【0082】

Ａ．中間体の製造
実施例Ａ１
中間体１：ラセミ−２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）−プロパンニトリルの製造

【0083】

【化15】

【0084】

３−ブロモアセトフェノン（２０ｇ、１００ミリモル）とＮＨ_４Ｃｌ（１１ｇ、２００ミリモル）をＮＨ_３／ＭｅＯＨ（４００ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を撹拌しながらこれにトリメチルシリルシアニド（２０ｇ、２００ミリモル）を加えた。その混合物を室温で４日間撹拌した。次に、溶媒を真空下で蒸発させた後、その残留物をＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）で取り上げた。固体を濾過で除去した後、その濾液に蒸発を真空下で受けさせることでラセミ−２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）−プロパンニトリル（２０ｇ、８６％の収率）を得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。

【0085】

実施例Ａ２
中間体２：ラセミ−２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）プロピオン酸メチルの製造

【0086】

【化16】

【0087】

ラセミ−２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）−プロピオニトリル（２０ｇ、８８．９ミリモル）をＨＣｌ／ＭｅＯＨ（５００ｍＬ）に溶解させた後、その混合物を４日間還流させた。室温に冷却した後、ＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）を加えて、その混合物にＡｃＯＥｔ（２ｘ１００ｍＬ）を用いた抽出を受けさせた。その水層を一緒にしてアンモニア水溶液でｐＨが８になるまで塩基性にした後、ＡｃＯＥｔ（５ｘ１００ｍＬ）を用いた抽出を実施した。その有機層を一緒にして乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させることでラセミ−２−アミノ−２−（３−ブロモ−フェニル）−プロピオン酸メチルエステル（１０．６ｇ、４６％の収率）を油として得た。

【0088】

実施例Ａ３
中間体３：ラセミ−２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）プロパン−１−オールの製造

【0089】

【化17】

【0090】

ラセミ−２−アミノ−２−（３−ブロモ−フェニル）−プロピオン酸メチルエステル（７．５ｇ、２９．１ミリモル）をＴＨＦ（２００ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を−１５℃で撹拌しながらこれに水素化リチウムアルミニウム（ＴＨＦ中１Ｍ、２２ｍＬ、２２ミリモル）を滴下した。その混合物を放置して１時間かけてゆっくりと０℃になるまで温めた。次に、更にＴＨＦ（１５０ｍＬ）を加えた後、飽和Ｎａ_２ＳＯ_４を水素がそれ以上生じなくなるまで滴下した。次に、無水Ｎａ_２ＳＯ_４を加えた後、室温で一晩撹拌したままにした。その混合物の濾過をケイソウ土を用いて行い、ＴＨＦで濯いだ後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＤＣＭに０／１００から３／９７）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）プロパン−１−オール（５．７０ｇ、８５％の収率）を油として得た。

【0091】

実施例Ａ４
中間体４：（Ｒ）−２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）プロパン−１−オールの製造

【0092】

【化18】

【0093】

ラセミ−２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）プロパン−１−オールのサンプル（１５．４ｇ）を調製用ＳＦＣ［Ｃｈｉｒａｌｐａｋ（商標）Ｄａｉｃｅｌ ＡＤ ｘ ２５０ｍｍを使用、可動相（ＣＯ_２、ｉＰｒＮＨ_２が０．２％のＭｅＯＨ］で相当する鏡像異性体に分離することで（Ｒ）−２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）プロパン−１−オール（７．２１ｇ、４０％の収率）を得た。
α_Ｄ：−１４．９゜（５８９ｎｍ、ｃ ０．２９４６％（重量／体積）、ＭｅＯＨ、２０
℃）

【0094】

実施例Ａ５
中間体５：ラセミ−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−２−ヒドロキシ−１−メチルエチル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造

【0095】

【化19】

【0096】

ラセミ−２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）プロパン−１−オール（１．７ｇ、７．３９ミリモル）を飽和ＮａＨＣＯ_３（１５ｍＬ）とＴＨＦ（１５ｍＬ）の混合物に入れることで生じさせた溶液を０℃で撹拌しながらこれにジ−ｔ−ブチルジカーボネート（４．８４ｇ、２２．１６ミリモル）を分割して加えた。その混合物を０℃で１０分間そして室温で１５時間撹拌した。その混合物を氷水浴で冷却しそして撹拌しながらＫＨＳＯ_４でｐＨが１−２になるまで酸性にした。有機層を分離した後、水層にさらなる抽出をＡｃＯＥｔを用いて受けさせた。その有機層を一緒にして分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から２０／８０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−２−ヒドロキシ−１−メチルエチル］カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（２．３６ｇ、９３％の収率）を無色の油として得た。

【0097】

実施例Ａ６
中間体６：ラセミ−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−メチル−２−オキソ−エチル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造

【0098】

【化20】

【0099】

ラセミ−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−２−ヒドロキシ−１−メチルエチル］カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（２．３ｇ、６．９７ミリモル）を無水ＤＣＭ（４５ｍＬ）に入れることで生じさせた０℃の溶液にＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペリオジナン（３．５５ｇ、８．３６ミリモル）を分割して５分かけて加えた。その混合物を０℃で１０分間そして室温で１時間撹拌した。その反応混合物の反応をＮａＨＣＯ_３（飽和水溶液）に続いてＮａＨＳＯ_３（飽和水溶液）で消滅させた。次に、Ｅｔ_２Ｏを加えた後の混合物を室温で３０分間撹拌した。有機層を分離した後、水層にさらなる抽出をＥｔ_２Ｏを用いて受けさせた。その有機層を一緒にして分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−メチル−２−オキソ−エチル］カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（２ｇ、８８％の収率）を無色の油として得た。

【0100】

実施例Ａ７
中間体７：ラセミ−［１−（３−ブロモフェニル）−２−ヒドロキシ−１−メチル−ブト−３−イニル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造

【0101】

【化21】

【0102】

ラセミ−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−メチル−２−オキソ−エチル］カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（１．９６ｇ、５．９７ミリモル）をＴＨＦ（６０ｍＬ）に入れることで生じさせた０℃の溶液に窒素下でＴＨＦ中０．５Ｍのエチニルマグネシウムブロマイド（２３．８９ｍＬ、１１．９４ミリモル）を滴下した。その混合物を０℃で１５分間そして室温で３０分間撹拌した。その混合物にＮＨ_４Ｃｌ（飽和水溶液）を用いた希釈そしてＤＣＭを用いた抽出を受けさせた。有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させることでラセミ−［１−（３−ブロモフェニル）−２−ヒドロキシ−１−メチル−ブト−３−イニル］カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（２．１１ｇ、９９％の収率）を油として得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。

【0103】

実施例Ａ８
中間体８：ラセミ−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−メチル−２−オキソ−ブト−３−イニル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造

【0104】

【化22】

【0105】

ラセミ−［１−（３−ブロモフェニル）−２−ヒドロキシ−１−メチル−ブト−３−イニル］カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（２．１２ｇ、５．９７ミリモル）を無水ＤＣＭ（２０ｍＬ）に入れることで生じさせた０℃の溶液にＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペリオジナン（３．０４ｇ、７．１６ミリモル）を分割して５分かけて加えた。その混合物を０℃で１０分間そして室温で１時間撹拌した。その反応混合物の反応をＮａＨＣＯ_３（飽和水溶液）に続いてＮａＨＳＯ_３（飽和水溶液）で消滅させた。次に、Ｅｔ_２Ｏを加えた後の混合物を室温で３０分間撹拌した。有機層を分離した後、水層にさらなる抽出をＥｔ_２Ｏを用いて受けさせた。その有機層を一緒にして分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−メチル−２−オキソ−ブト−３−イニル］カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（１．８９ｇ、９０％の収率）を油として得た。

【0106】

実施例Ａ９
中間体９：ラセミ−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−
イル）エチル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造

【0107】

【化23】

【0108】

ラセミ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−メチル−２−オキソ−ブト−３−イニル］カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（１．８ｇ、５．１１ミリモル）をＥｔＯＨ（３０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液に水加ヒドラジン（２．４８ｇ、５１．１０ミリモル）を加えた後、その混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、その残留物をＤＣＭに溶解させた後、水で洗浄した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から５０／５０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル］カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（１．６２ｇ、８７％の収率）を白色の固体として得た。

【0109】

実施例Ａ１０
中間体１０：ラセミ−１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタンアミンの製造

【0110】

【化24】

【0111】

ラセミ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル］カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（１．６５ｇ、４．５１ミリモル）に室温でジオキサン中４Ｍの塩酸（７．８８ｍＬ、３１．５４ミリモル）を加えた。その混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。その残留物をＤＣＭに入れて懸濁させた後、ＮａＨＣＯ_３（飽和水溶液）で洗浄した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させることでラセミ−１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチルアミン（１．２ｇ、１００％の収率）を白色の固体として得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。

【0112】

実施例Ａ１１
中間体１１：ラセミ−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル］２−クロロ−アセトアミドの製造

【0113】

【化25】

【0114】

ラセミ−１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチルアミン（１．２ｇ、４．５１ミリモル）をＤＣＭ（２０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液にＤＩＰＥＡ（１．１８ｍＬ、６．７７ミリモル）を加えた後、その混合物を氷浴で冷却した。次に、クロロアセチルクロライド（０．４０ｍＬ、４．９６ミリモル）を加えた後の混合物を０℃で３時間撹拌した。その混合物にＮＨ_４Ｃｌ（飽和水溶液）を用いた希釈そしてＤＣＭを用いた抽出を受けさせた。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から２０／８０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮した。その残留物をＥｔＯＨ（１０ｍＬ）とＮａＨＣＯ_３（飽和水溶液）（１ｍＬ）に溶解させた後、その混合物を室温で３０分間撹拌した。その混合物を水で希釈した後、生成物をＤＣＭで抽出した。その有機層を一緒にして真空下で濃縮することでラセミ−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル］２−クロロ−アセトアミド（１．２２ｇ、７９％の収率）を無水の油として得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。

【0115】

実施例Ａ１２
中間体１２：ラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オンの製造

【0116】

【化26】

【0117】

水素化ナトリウム（０．２８ｇ、７．１２ミリモル）をＴＨＦ（４０ｍＬ）に入れることで生じさせた０℃の懸濁液に窒素下でラセミ−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル］２−クロロ−アセトアミド（１．２２ｇ、３．５６ミリモル）をＴＨＦ（４０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を滴下した。その混合物を０℃で１時間撹拌した。その混合物を水で希釈した後、生成物をＤＣＭで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに５０／５０から１００／０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オン（０．７ｇ、６４％の収率）を白色の固体として得た。

【0118】

実施例Ａ１３
中間体１３：ラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオンの製造

【0119】

【化27】

【0120】

ラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オン（０．７ｇ、２．２９ミリモル）をピリジン（１０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液に五硫化燐（１．０２ｇ、４．５７ミリモル）を加えた後、その混合物を９５℃に１８時間加熱した。次に、溶媒を真空下で蒸発させた後、その残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から１００／０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオン（０．４５ｇ、６１％の収率）を白色の固体として得た。

【0121】

実施例Ａ１４
中間体１４：ラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造

【0122】

【化28】

【0123】

ラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオン（０．４５ｇ、１．４０ミリモル）をＥｔＯＨ（５０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を撹拌しながらこれにＮＨ_４Ｃｌ（０．１５ｇ、２．７９ミリモル）を加えた後、その混合物を８０℃に２８時間加熱した。溶媒を真空下で除去した後、その残留物をＤＣＭに溶解させて、水で洗浄した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＡｃＯＥｔに０／１００から２０／８０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イルアミン（０．４２ｇ、９９％の収率）を黄色の固体として得た。

【0124】

実施例Ａ１５
中間体１５：ラセミ−４−［３−（ベンゾヒドリリデンアミノ）−フェニル］−４−メチル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造

【0125】

【化29】

【0126】

窒素下の密封型管内でラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イルアミン（０．３９ｇ、１．２８ミリモル）とトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．１２ｇ、０．１３ミリモル）とラセミ−２、２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（０．２４ｇ、０．３８ミリモル）とナトリウムｔ−ブトキサド（０．２２ｇ、２．３ミリモル）の混合物に室温でトルエン（１０ｍＬ）を加えた。その混合物を窒素で数分間フラッシュ洗浄した後、ベンゾフェノンイミン（０．４３ｍＬ、２．５６ミリモル）を加えて、その混合物を１００℃で２時間撹拌した。その混合物を冷却した後、水で希釈しそしてＤＣＭを用いた抽出を実施した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＤＣＭに０／１００から３／９７）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−４−［３−（ベンゾヒドリリデンアミノ）−フェニル］−４−メチル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イルアミン（０．３７ｇ、７０％の収率）を黄色の発泡体として得た。

【0127】

実施例Ａ１６
中間体１６：ラセミ−４−（３−アミノフェニル）−４−メチル−４，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造

【0128】

【化30】

【0129】

ラセミ−４−［３−（ベンゾヒドリリデンアミノ）−フェニル］−４−メチル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イルアミン（０．３７ｇ、０．９ミリモル）をイソプロパノール（１０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液にＨ_２Ｏ中３７％の塩酸（０．１４ｍＬ）を加えた。その混合物を室温で３時間撹拌した。Ｅｔ_２Ｏを加えた後の混合物を１５分間撹拌した。沈澱してきた固体を濾過で取り出し、Ｅｔ_２Ｏで洗浄した後、真空下で乾燥させた。その残留物をＤＣＭに入れて懸濁させた後、ＮａＨＣＯ_３（飽和水溶液）で洗浄した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させることで白色の固体（０．２１ｇ、９７％の収率）として得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。

【0130】

実施例Ａ１７
中間体１７：１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸の製造

【0131】

【化31】

【0132】

３−メチルピラゾール（４．２ｇ、５．１５ミリモル）を水（１００ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液に過マンガン酸カリウム（１６．１７ｇ、１０２．３１ミリモル）を水（１５０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を加えた後、その混合物を一晩還流させた。室温に冷却した後、不溶な物質を濾過で除去した。その濾液を濃縮して３０ｍＬにした後、２ＮのＨＣｌを固体が沈澱するまで加えた。その固体を濾過で取り出し、冷水で洗浄した後、真空下で乾燥させることで１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（３．１ｇ、５４％の収率）を白色の固体として得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。

【0133】

実施例Ａ１８
中間体１８：１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸メチルの製造

【0134】

【化32】

【0135】

１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（１ｇ、８．９２ミリモル）をＭｅＯＨ（６５ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を０℃で撹拌しながらこれに硫酸（５．８ｍＬ）を滴下した。この滴下が終了した後の混合物を室温に温めて１８時間撹拌した。その混合物を真空下で濃縮した後、その残留物を水に溶解させそしてＮａＨＣＯ_３（飽和水溶液）で塩基性にした。その混合物にＡｃＯＥｔを用いた抽出を受けさせた。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させることで１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸メチルエステル（０．７ｇ、６２％の収率）を白色の固体として得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。

【0136】

実施例Ａ１９
中間体１９：１−（ジメチルスルファモイル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸メチルの製造

【0137】

【化33】

【0138】

１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸メチルエステル（３．４５ｇ、２７．３６ミリモル）をＴＨＦ（２０ｍＬ）に入れることで生じさせた０℃の溶液に水素化ナトリウム（１．５７ｇ、４１．０３ミリモル）を加えた。その混合物を０℃で３０分間撹拌した。次に、塩化ジメチルスルファモイル（４．４１ｍＬ、４１．０３ミリモル）を加えた後の混合物を室温に温めて１８時間撹拌した。その混合物を水で希釈した後、生成物をＡｃＯＥｔで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で
蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から１０／９０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで１−ジメチルスルファモイル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸メチルエステル（４．８ｇ、７５％の収率）を無色の油として得た。

【0139】

実施例Ａ２０
中間体２０：１−（ジメチルスルファモイル）−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシレートの製造

【0140】

【化34】

【0141】

１−ジメチルスルファモイル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸メチルエステル（４ｇ、１７．１５ミリモル）と塩酸Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン（２．１８ｇ、２２．２９ミリモル）をＤＣＭ（２０ｍＬ）に入れて撹拌した。その混合物を窒素でフラッシュ洗浄した後、−７８℃に冷却した。次に、イソプロピルマグネシウムクロライドの溶液（ＴＨＦ中２Ｍ）（２４．０１ｍＬ、４８．０２ミリモル）を滴下した。この滴下が終了した後の混合物を室温に温めて一晩撹拌した。その混合物の反応をＮＨ_４Ｃｌ（飽和水溶液）で消滅させた後、生成物をＡｃＯＥｔで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から１００／０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで１−ジメチルスルファモイル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸メトキシ−メチル−アミド（３．２ｇ、７１％の収率）を淡黄色の油として得た。

【0142】

実施例Ａ２１
中間体２１：３−（３−クロロフェニル）カルボニル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造

【0143】

【化35】

【0144】

１−ジメチルスルファモイル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸メトキシ−メチル−アミド（１．６０ｇ、６．１１ミリモル）をＴＨＦ（２０ｍＬ）に入れることで生じさせた−７８℃の溶液に窒素下で３−クロロフェニルマグネシウムブロマイドの溶液（ＴＨＦ中０．５Ｍ）（１５．８９ｍＬ、７．９５ミリモル）を加えた。その混合物を−７８℃で１時間撹拌した後、更に室温で５時間撹拌した。その混合物の反応をＮＨ_４Ｃｌ（飽和水溶液）で消滅させた後、生成物をＡｃＯＥｔで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から１０／９０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで３−（３−クロロ−ベンゾイル
）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホン酸ジメチルアミド（１．６８ｇ、８８％の収率）を淡黄色の固体として得た。

【0145】

実施例Ａ２２
中間体２２：３−｛［（ｔ−ブチルスルフィニル）イミノ］（３−クロロフェニル）メチル｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造

【0146】

【化36】

【0147】

３−（３−クロロ−ベンゾイル）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホン酸ジメチルアミド（１．６８ｇ、５．３５ミリモル）と２−メチル−２−プロパンスルフィンアミド（０．７１ｇ、５．８９ミリモル）をトルエン（３２ｍＬ）に入れることで生じさせた混合物に窒素下でチタン（ＩＶ）イソプロポキサイド（３．２２ｍＬ、１０．７１ミリモル）を加えた。その混合物を１１０℃で２４時間撹拌した。その混合物を冷却した後、食塩水を急速撹拌しながらこれに注ぎ込んだ。その混合物の濾過をケイソウ土に通して行った後、その濾過ケーキをＡｃＯＥｔで洗浄した。その濾液を分液漏斗に移して、有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から１０／９０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで３−［（３−クロロ−フェニル）−（２−メチル−プロパン−２−スルフィニルイミノ）−メチル］−ピラゾール−１−スルホン酸ジメチルアミド（２．１７ｇ、９７％の収率）を黄色の油として得た。

【0148】

実施例Ａ２３
中間体２３：３−［１−（ｔ−ブチルスルフィニルアミノ）−１−（３−クロロフェニル）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造

【0149】

【化37】

【0150】

３−［（３−クロロ−フェニル）−（２−メチル−プロパン−２−スルフィニルイミノ）−メチル］−ピラゾール−１−スルホン酸ジメチルアミド（２．２ｇ、５．２８ミリモル）をＴＨＦ（２５ｍＬ）に入れることで生じさせた０℃の溶液に窒素下でメチルマグネシウムブロマイド（１５．０８ｍＬ、２１．１１ミリモル）を加えた。その混合物を０℃で２時間撹拌し、ＮＨ_４Ｃｌ（飽和水溶液）で反応を消滅させた後、生成物をＤＣＭで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔを
ＤＣＭに０／１００から１００／０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで３−［１−（３−クロロ−フェニル）−１−（２−メチル−プロパン−２−スルフィニルアミノ）−エチル］−ピラゾール−１−スルホン酸ジメチルアミド（２．２８ｇ、９９％の収率）を無色の油として得たが、これを放置すると固化した。

【0151】

実施例Ａ２４
中間体２４：ラセミ−１−（３−クロロフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタンアミンの製造

【0152】

【化38】

【0153】

３−［１−（３−クロロ−フェニル）−１−（２−メチル−プロパン−２−スルフィニルアミノ）−エチル］−ピラゾール−１−スルホン酸ジメチルアミド（２．２９ｇ、５．２８ミリモル）をＭｅＯＨ（５ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液にジオキサン中４Ｍの塩酸（１９．７９ｍＬ、７９．１５ミリモル）を加えた後、その混合物を密封型管に入れて８０℃で１８時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。その残留物をＮａＨＣＯ_３（飽和水溶液）の中に注ぎ込んだ後、ＤＣＭを用いた抽出を実施した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させることでラセミ−１−（３−クロロフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチルアミン（１ｇ、８６％の収率）を淡黄色の固体として得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。

【0154】

実施例Ａ２５
中間体２５：ラセミ−２−クロロ−Ｎ−［１−（３−クロロフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル］−アセトアミドの製造

【0155】

【化39】

【0156】

中間体２５の合成を実施例Ａ１１に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体２４（１ｇ、４．５１ミリモル）を用いて出発することで中間体２５を白色の固体として得た（０．７３ｇ、５４％の収率）。

【0157】

実施例Ａ２６
中間体２６：ラセミ−４−（３−クロロフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オンの製造

【0158】

【化40】

【0159】

中間体２６の合成を実施例Ａ１２に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体２５（０．７３ｇ、２．４３ミリモル）を用いて出発することで中間体２６を白色の固体として得た（０．４５ｇ、７１％の収率）。

【0160】

実施例Ａ２７
中間体２７：ラセミ−４−メチル−４−（３−ピリミジン−５−イルフェニル）−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オンの製造

【0161】

【化41】

【0162】

ラセミ−４−（３−クロロフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オン（０．１３ｇ、０．５０ミリモル）とピリミジン−５−ボロン酸（０．１９ｇ、１．４９ミリモル）と２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジメトキシビフェニル（０．０６１ｇ、０．１４９ミリモル）と燐酸カリウム（０．２１ｇ、０．９９ミリモル）をトルエン（５ｍＬ）とＥｔＯＨ（０．５ｍＬ）に入れることで生じさせた懸濁液を室温で撹拌しながらこれに窒素下で酢酸ジパラジウム（ＩＩ）（０．０１７ｇ、０．０７５ミリモル）を加えた。その混合物をマイクロ波照射下において１５０℃で３０分間撹拌した。次に、その混合物をケイソウ土に通して濾過した後、ＡｃＯＥｔで洗浄した。その濾液に蒸発を真空下で受けさせた。その残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−４−メチル−４−（３−ピリミジン−５−イルフェニル）−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オン（０．０９ｇ、５９％の収率）を白色の固体として得た。

【0163】

実施例Ａ２８
中間体２８：ラセミ−４−メチル−４−（３−ピリミジン−５−イルフェニル）−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオンの製造

【0164】

【化42】

【0165】

ラセミ−４−メチル−４−（３−ピリミジン−５−イルフェニル）−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオン（０．０９ｇ、０．３０ミリモル）をピリジン（２ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を室温で撹拌しながらこれにＬａｗｅｓｓｏｎ試薬（０．１４ｇ、０．３５ミリモル）を加えた。その混合物を９５℃で１８時間加熱した。溶媒を真空下で蒸発させた後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から２０／８０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−４−メチル−４−（３−ピリミジン−５−イルフェニル）−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオン（０．０２ｇ、２１％の収率）を白色の固体として得た。

【0166】

実施例Ａ２９
中間体２９：ラセミ−４−［３−（５−メトキシピリジン−３−イル）フェニル］−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オンの製造

【0167】

【化43】

【0168】

ラセミ−４−（３−クロロ−フェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オン（０．１７ｇ、０．６５ミリモル）と５−メトキシピリジン−３−ボロン酸（０．１５ｇ、０．９７ミリモル）と２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジメトキシビフェニル（０．０８０ｇ、０．１９５ミリモル）と燐酸カリウム（０．２８ｇ、１．３０ミリモル）をトルエン（２ｍＬ）とＥｔＯＨ（０．２ｍＬ）に入れることで生じさせた懸濁液を室温で撹拌しながらこれに窒素下で酢酸ジパラジウム（ＩＩ）（０．０２２ｇ、０．０９７ミリモル）を加えた。その混合物をマイクロ波照射下において１５０℃で３０分間撹拌した。次に、その混合物をケイソウ土に通して濾過した後、ＡｃＯＥｔで洗浄した。その濾液に蒸発を真空下で受けさせた。その残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−４−［３−（５−メトキシピリジン−３−イル）フェニル］−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オン（０．１１ｇ、５１％の収率）を白色の固体として得た。

【0169】

実施例Ａ３０
中間体３０：ラセミ−４−［３−（５−メトキシピリジン−３−イル）フェニル］−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオンの製造

【0170】

【化44】

【0171】

ラセミ−４−［３−（５−メトキシピリジン−３−イル）フェニル］−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オン（０．１１ｇ、０．３１ミリ
モル）と五硫化燐（０．０７ｇ、０．３１ミリモル）の混合物にピリジン（３ｍＬ）を加えた後、その混合物を８０℃に５時間加熱した。次に、更に五硫化燐（０．０７ｇ、０．３１ミリモル）を加えた後の混合物を１００℃に１８時間加熱した。次に、溶媒を真空下で蒸発させた後、その残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨをＤＣＭに０／１００から３／９７）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−４−［３−（５−メトキシピリジン−３−イル）フェニル］−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオン（０．１ｇ、９３％の収率）を白色の固体として得た。

【0172】

実施例Ａ３１
中間体３１：ラセミ−４−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオンの製造

【0173】

【化45】

【0174】

ラセミ−４−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロ−フェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オン（３ｇ、８．７７ミリモル）［中間体ラセミ−４−（３−ブロモ−フェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オンに関してこの上で記述した手順と同じ手順に従って調製］をピリジン（３０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液に五硫化燐（２．５３ｇ、１１．４０ミリモル）を加えた後、その混合物を９５℃に１８時間加熱した。次に、溶媒を真空下で蒸発させた後、その残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から４０／６０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−４−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオン（２．４ｇ、７６％の収率）を白色の固体として得た。

【0175】

実施例Ａ３２
中間体３２：ラセミ−４−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造

【0176】

【化46】

【0177】

ラセミ−４−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオン（２．４ｇ、６．７ミリモル）をＥｔＯＨ中２Ｍのアンモニア（６７ｍＬ）に入れることで生じさせた懸濁液を撹拌しながらこれにＮＨ_４Ｃｌ（０．７２ｇ、１３．４ミリモル）を加えた後、その混合物を８５℃に１８時間加熱した。溶媒を真空下で除去した後、その残留物をＤＣＭに入れて懸濁させそ
して水で洗浄した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＡｃＯＥｔに０／１００から２０／８０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−４−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イルアミン（１．８ｇ、７８％の収率）を黄色の固体として得た。

【0178】

実施例Ａ３３
中間体３３：（Ｒ）−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−２−ヒドロキシ−１−メチルエチル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造

【0179】

【化47】

【0180】

中間体３３の合成を実施例Ａ５に記述した方策と同じ方策に従って実施した。（Ｒ）−２−アミノ−２−（３−ブロモ−フェニル）−プロパン−１−オール（４．７ｇ、２０．４３ミリモル）を用いて出発することで中間体３３を無色の油（６．４ｇ、９５％の収率）として得たが、これは放置すると固化した。

【0181】

実施例Ａ３４
中間体３４：（Ｒ）−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−メチル−２−オキソ−エチル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造

【0182】

【化48】

【0183】

中間体３４の合成を実施例Ａ６に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体３３（６．４ｇ、１９．３８ミリモル）を用いて出発することで中間体３４を無色の油（５．７ｇ、９０％の収率）として得たが、これは放置すると固化した。

【0184】

実施例Ａ３５
中間体３５：（１Ｒ，２Ｒ）と（１Ｒ，２Ｓ）−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−２−ヒドロキシ−１−メチル−ブト−３−ニイル］カルバミン酸ｔ−ブチルのジアステレオ異性体混合物の製造

【0185】

【化49】

【0186】

中間体３５の合成を実施例Ａ７に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体３４（５．７ｇ、１７．３８ミリモル）を用いて出発することで中間体３５をジアステレオ異性体混合物（５．４ｇ、８８％の収率）として油の状態で得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。

【0187】

実施例Ａ３６
中間体３６：（Ｒ）−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−メチル−２−オキソ−ブト−３−イニル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造

【0188】

【化50】

【0189】

中間体３６の合成を実施例Ａ８に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体３５（５．４ｇ、１５．２４ミリモル）を用いて出発することで中間体３６を淡黄色の油（５．３ｇ、９９％の収率）として得た。

【0190】

実施例Ａ３７
中間体３７：（Ｒ）−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造

【0191】

【化51】

【0192】

中間体３７の合成を実施例Ａ９に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体３６（５．３ｇ、１５．０５ミリモル）を用いて出発することで中間体３７を発泡体（５ｇ、９１％の収率）として得た。

【0193】

実施例Ａ３８
中間体３８：（Ｒ）−１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタンアミンの製造

【0194】

【化52】

【0195】

中間体３８の合成を実施例Ａ１０に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体
３７（５ｇ、１３．６５ミリモル）を用いて出発することで中間体３８を白色の固体（３．５ｇ、９６％の収率）として得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。

【0196】

実施例Ａ３９
中間体３９：（Ｒ）−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−エチル］−２−クロロ−アセトアミドの製造

【0197】

【化53】

【0198】

中間体３９の合成を実施例Ａ１１に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体３８（３．５ｇ、１３．１５ミリモル）を用いて出発することで中間体３９を無色の油（３．５ｇ、７８％の収率）として得た。

【0199】

実施例Ａ４０
中間体４０：（Ｒ）−４−（３−ブロモフェニル）−４−エチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オンの製造

【0200】

【化54】

【0201】

中間体４０の合成を実施例Ａ１２に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体３９（３．５ｇ、１０．２２ミリモル）を用いて出発することで中間体４０を白色の固体（２．１５ｇ、６９％の収率）として得た。

【0202】

実施例Ａ４１
中間体４１：（Ｒ）−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオンの製造

【0203】

【化55】

【0204】

中間体４１の合成を実施例Ａ１３に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体４０（２．１ｇ、６．８６ミリモル）を用いて出発することで中間体４１を発泡体（１．８ｇ、８１％の収率）として得た。

【0205】

実施例Ａ４２
中間体４２：（Ｒ）−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造

【0206】

【化56】

【0207】

（Ｒ）−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオン（１．８ｇ、５．５９ミリモル）をメタノール中７Ｎのアンモニア溶液（１１．９７ｍＬ、８３．７９ミリモル）に入れることで生じさせた混合物を密封型管内で撹拌しながらこれに３２％のアンモニア水溶液（１１．９ｍＬ、２０１．１ミリモル）を加えた。その混合物を６０℃で９０分間撹拌した。室温に冷却した後の混合物を水およびＮａ_２ＣＯ_３（飽和水溶液）で希釈した後、ＤＣＭを用いた抽出を実施した。その有機層を分離し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＤＣＭに０／１００から２／９８から３／９７から１０／９０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで（Ｒ）−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミン（１．４ｇ、８２％の収率）を黄色の固体として得た。

【0208】

実施例Ａ４３
中間体４３：Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造

【0209】

【化57】

【0210】

３−（トリフルオロメチル）ピラゾール（５．５ｇ、４０．４２ミリモル）をアセトニトリル（５０ｍＬ）に入れることで生じさせた０℃の溶液に１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（５．４４ｇ、４８．５ミリモル）およびジメチルスルファモイルクロライド（４．７６ｍＬ、４４．４６ミリモル）を加えた。その混合物を室温に温めて１８時間撹拌した。その混合物を真空下で濃縮した後、その残留物を水で希釈した。生成物をＡｃＯＥｔで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体４３（９．４ｇ、９５％の収率）を無色の油として得た。

【0211】

実施例Ａ４４
中間体４４：５−［（３−ブロモフェニル）（ヒドロキシル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造

【0212】

【化58】

【0213】

中間体４３（８．４ｇ、３４．５４ミリモル）をＴＨＦ（１２５ｍＬ）に入れることで生じさせた−７８℃の溶液に窒素下でブチルリチウムの溶液（ヘキサン中２．５Ｍ）（１５．２ｍＬ、３７．９ミリモル）を加えた。その混合物を−７８℃で４５分間撹拌した後、２−ブロモベンズアルデヒド（６ｍＬ、５１．８ミリモル）を滴下した。その反応混合物を−７８℃で３０分間撹拌した後、室温に温めて１時間撹拌した。その混合物の反応をＮＨ_４Ｃｌ（飽和水溶液）で消滅させた後、生成物をＡｃＯＥｔで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭをヘプタンに０／１００から１０／９０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体４４（１３．２ｇ、８９％の収率）を無色の油として得た。

【0214】

実施例Ａ４５
中間体４５：５−［（３−ブロモフェニル）カルボニル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造

【0215】

【化59】

【0216】

中間体４４（１４．５ｇ、３３．８６ミリモル）を１，４−ジオキサン（１５０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液に二酸化マンガン（１５．４ｇ、１６９．３ミリモル）を加えた。その混合物を１２０℃で３時間撹拌した。その反応混合物を４０℃に冷却した後、ケイソウ土に通して濾過した。溶媒を真空下で蒸発させることで中間体４５（２５．６ｇ、９７％の収率）を白色の固体として得て、これをそのまま次の段階で用いた。

【0217】

実施例Ａ４６
中間体４６：５−［（３−ブロモフェニル）［（ｔ−ブチルスルフィニル）イミノ］メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造

【0218】

【化60】

【0219】

中間体４５（１０ｇ、２３．４６ミリモル）と２−メチル−２−プロパンスルフィンアミド（３．１２８ｇ、２５．８１ミリモル）をトルエン（１４０ｍＬ）に入れることで生じさせた混合物に窒素下でチタン（ＩＶ）イソプロポキサイド（１１．３５ｍＬ、４６．９ミリモル）を加えた。その混合物を１１０℃で８時間撹拌した。その混合物を冷却した後、食塩水に急速撹拌しながら注ぎ込んだ。その混合物をケイソウ土に通して濾過した後、濾過ケーキをＡｃＯＥｔで洗浄した。その濾液を分液漏斗に移し、その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から１０／９０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体４６（４ｇ、３２％の収率）を黄色の油として得た。

【0220】

実施例Ａ４７
中間体４７：ラセミ−５−［１−（３−ブロモフェニル）−１−［（ｔ−ブチルスルフィニル）アミノ］エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造

【0221】

【化61】

【0222】

中間体４６（４ｇ、７．５６ミリモル）をＴＨＦ（５６ｍＬ）に入れることで生じさせた−７８℃の溶液に窒素下でメチルマグネシウムブロマイド（ジエチルエーテル中３Ｍ、６．３ｍＬ、１８．８９ミリモル）を加えた。その混合物を−７８℃で３０分間撹拌した後、室温に温めて１８時間撹拌した。その反応混合物の反応をＮＨ_４Ｃｌ（飽和水溶液）で消滅させた後、生成物をＤＣＭで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から１００／０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体４７（３．６ｇ、８７％の収率）を無色の油として得たが、これは放置すると固化した。

【0223】

実施例Ａ４８
中間体４８：ラセミ−５−［１−アミノ−１−（３−ブロモフェニル）エチル］−Ｎ，Ｎ
−ジメチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造

【0224】

【化62】

【0225】

中間体４７（３．６ｇ、６．６ミリモル）をＭｅＯＨ（５ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液にジオキサン中４Ｍの塩酸（２４．７ｍＬ、９９ミリモル）を加えた後、その混合物を密封型管に入れて８０℃で１８時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。その残留物をＮａＨＣＯ_３（飽和水溶液）の中に注ぎ込んだ後、ＤＣＭを用いた抽出を実施した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノールをＤＣＭに０／１００から２／９８）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体４８（１．５ｇ、５４％の収率）を淡黄色の固体として得た。

【0226】

実施例Ａ４９
中間体４９：ラセミ−Ｎ−｛１−（３−ブロモフェニル）−１−［３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］エチル｝−２−クロロアセトアミドの製造

【0227】

【化63】

【0228】

中間体４８（１．５ｇ、４．４９ミリモル）をＤＣＭ（２０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液にＤＩＰＥＡ（１．９ｍＬ、１１．２ミリモル）を加えた後、その混合物を氷浴で冷却した。次に、クロロアセチルクロライド（０．４２９ｍＬ、５．３８ミリモル）を加えた後の混合物を０℃で３時間撹拌した。その混合物をＮＨ_４Ｃｌ（飽和水溶液）で希釈した後、ＤＣＭを用いた抽出を実施した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から３０／７０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体４９（１．１ｇ、６０％の収率）を淡黄色の固体として得た。

【0229】

実施例Ａ５０
中間体５０：ラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オンの製造

【0230】

【化64】

【0231】

水素化ナトリウム（０．２１４ｇ、５．３６ミリモル）をＴＨＦ（４０ｍＬ）に入れることで生じさせた０℃の懸濁液に窒素下で中間体４９（１．１ｇ、２．６８ミリモル）をＴＨＦ（４０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を滴下した。その混合物を０℃で１時間撹拌した。その混合物を水で希釈した後、生成物をＤＣＭで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から２０／８０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体５０（０．９２ｇ、９２％の収率）を白色の固体として得た。

【0232】

実施例Ａ５１
中間体５１：ラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオンの製造

【0233】

【化65】

【0234】

中間体５０（０．９２ｇ、２．４６ミリモル）をピリジン（１０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液に五硫化燐（０．８２ｇ、３．６９ミリモル）を加えた後、その混合物を９０℃に１８時間加熱した。その反応混合物を真空下で濃縮した後、その残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から１００／０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体５１（０．２７ｇ、２８％の収率）を淡黄色の固体として得た。

【0235】

実施例Ａ５２
中間体５２：ラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造

【0236】

【化66】

【0237】

中間体５１（０．２７ｇ、０．６９ミリモル）をＥｔＯＨ中２Ｍのアンモニア（６ｍＬ）に入れることで生じさせた懸濁液を撹拌しながらこれにＮＨ_４Ｃｌ（０．１４８ｇ、２．７７ミリモル）を加えた後、その混合物を８０℃に１８時間加熱した。溶媒を真空下で除去した後、その残留物をＤＣＭに入れて懸濁させて、水で洗浄した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＤＣＭに０／１００から２／９８）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体５２（０．１９５ｇ、７５％の収率）をベージュ色の固体として得た。

【0238】

実施例Ａ５３
中間体５３：ラセミ−５−［（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造

【0239】

【化67】

【0240】

中間体５３の合成を実施例Ａ４４に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体４３（１７ｇ、６９．９ミリモル）を用いて出発することで中間体５３を無色の油（２８ｇ、７６％の収率）として得た。

【0241】

実施例Ａ５４
中間体５４：ラセミ−５−［（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）カルボニル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造

【0242】

【化68】

【0243】

中間体５４の合成を実施例Ａ４５に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体５３（２８ｇ、５３．３ミリモル）を用いて出発することで中間体５４を白色の固体（２５．６ｇ、９７％の収率）として得て、これをそのまま次の段階で用いた。

【0244】

実施例Ａ５５
中間体５５：ラセミ−５−［（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）［（ｔ−ブチルスルフィニル）イミノ］メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造

【0245】

【化69】

【0246】

中間体５５の合成を実施例Ａ４６に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体５４（２５．６ｇ、５７．６ミリモル）を用いて出発することで中間体５５を淡黄色の固体（２１ｇ、６７％の収率）として得た。

【0247】

実施例Ａ５６
中間体５６：ラセミ−５−［１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−［（ｔ−ブチルスルフィニル）アミノ］エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造

【0248】

【化70】

【0249】

中間体５６の合成を実施例Ａ４７に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体５５（２１ｇ、３８．３６ミリモル）を用いて出発することで中間体５６を無色の油（１９ｇ、８８％の収率）として得たが、これは放置すると固化した。

【0250】

実施例Ａ５７
中間体５７：ラセミ−１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−［３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］エタンアミンの製造

【0251】

【化71】

【0252】

中間体５６（１８．７ｇ、３３．２ミリモル）にメタノール中１．２５Ｍの塩酸（１５９ｍＬ、１９９ミリモル）を加えた後、その混合物を密封型管に入れて６０℃で３時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。その残留物をＮａＨＣＯ_３（飽和水溶液）の中に注ぎ込んだ後、ＤＣＭを用いた抽出を実施した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させることで中間体５７（１１．５ｇ、９８％の収率）を淡黄色の固体として得て、これをさらなる精製なしにそのまま次の段階で用いた。

【0253】

実施例Ａ５８
中間体５８：ラセミ−Ｎ−｛１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−［３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］エチル｝−２−クロロアセトアミドの製造

【0254】

【化72】

【0255】

中間体５８の合成を実施例Ａ４９に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体５７（１１．５ｇ、３２．６６ミリモル）を用いて出発することで中間体５８を淡黄色の固体（６．６ｇ、４７％の収率）として得た。

【0256】

実施例Ａ５９
中間体５９：ラセミ−４−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オンの製造

【0257】

【化73】

【0258】

中間体５９の合成を実施例Ａ５０に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体５８（６．６ｇ、１５．４ミリモル）を用いて出発することで中間体５９を白色の固体（６ｇ、９９％の収率）として得た。

【0259】

実施例Ａ６０
中間体６０：ラセミ−４−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオンの製造

【0260】

【化74】

【0261】

中間体５９（４ｇ、１０．２ミリモル）をジオキサン（８０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液に五硫化燐（２．２７ｇ、１０．２ミリモル）を加えた後、その混合物を８０℃に１８時間加熱した。その反応混合物をケイソウ土に通して濾過した。次に、その濾液に蒸発を真空下で受けさせた後、その残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体６０（２．３ｇ、５５％の収率）を淡黄色の固体として得た。

【0262】

実施例Ａ６１
中間体６１：ラセミ−４−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造

【0263】

【化75】

【0264】

中間体６１の合成を実施例Ａ５２に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体６０（２ｇ、４．９ミリモル）を用いて出発することで中間体６１を白色の固体（１．５ｇ、７８％の収率）として得た。

【0265】

実施例Ａ６２
中間体６２：ラセミ−４−［５−（ベンズヒドリリデンアミノ）−２−フルオロフェニル］−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造

【0266】

【化76】

【0267】

中間体６２の合成を実施例Ａ１５に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体６１（０．６７ｇ、１．５９ミリモル）を用いて出発することで中間体６２を淡黄色の固
体（０．５３ｇ、６７％の収率）として得た。

【0268】

実施例Ａ６３
中間体６３：ラセミ−４−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造

【0269】

【化77】

【0270】

中間体６３の合成を実施例Ａ１６に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体６２（０．５２５ｇ、１．０７ミリモル）を用いて出発することで中間体６３を淡黄色の固体（０．２２５ｇ、６４％の収率）として得た。

【0271】

実施例Ａ６４
中間体６４：（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）（オキソ）酢酸の製造

【0272】

【化78】

【0273】

５’−ブロモ−２’−フルオロアセトフェノン［（ＣＡＳ １９８４７７−８９−３）、７０ｇ、３２２ミリモル）および二酸化セレン（７１．６ｇ、６４５ミリモル）をピリジン（５２０ｍＬ）に溶解させた。その反応混合物を１００℃で２時間撹拌した。溶媒を蒸発させた後、１ＮのＨＣｌ水溶液を加えた。その水層にＥｔＯＡｃを用いた抽出を受けさせた。その有機層を一緒にして乾燥（Ｍｇ_２ＳＯ_４）させ、濾過した後、真空下で濃縮することで中間体６４（６２ｇ、７８％の収率）を得て、これをそのまま次の反応で用いた。

【0274】

実施例Ａ６５
中間体６５：（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）（オキソ）酢酸ｔ−ブチルの製造

【0275】

【化79】

【0276】

中間体６４（５０ｇ、２０２ミリモル）をトルエン（５００ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を０℃で撹拌しながらこれに塩化チオニル（７２ｇ、６０７ミリモル）を滴下した。その混合物を６０℃で１．５時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。ＤＣＭを加えた後の混合物を再び真空下で濃縮した。粗生成物をＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解させた。ｔ−ブタノール（３０ｇ、４０４ミリモル）、ピリジン（１６ｍＬ、２０２ミリモル）および無水ＤＣＭ（１００ｍＬ）を注意深く加えた。その混合物を室温で１．５時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体６５（４５．５ｇ、７４％の収率）を得た。

【0277】

実施例Ａ６６
中間体６６：（Ｓ）−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）［（ｔ−ブチルスルフィニル）イミノ］酢酸１−メチルエチルの製造

【0278】

【化80】

【0279】

中間体６５（４３ｇ、１４２ミリモル）と（Ｓ）−２−メチル−２−プロパンスルフィンアミド（２５．８ｇ、２１２ミリモル）をｎ−ヘプタン（１０００ｍＬ）に入れることで生じさせた混合物を撹拌しながらこれにチタン（ＩＶ）イソプロポキサイド（８５ｍＬ、２８３ミリモル）を加えた。その混合物を８０℃で１８時間撹拌した。その混合物に濃縮を真空下である程度受けさせた後、ＥｔＯＡｃによる希釈を受けさせた。その混合物を室温に冷却した後、水を加えた。その結果として得た混合物の濾過をケイソウ土の詰め物を用いて行った後、ＥｔＯＡｃそして水で濯いだ。有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、真空下で濃縮した。その残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；溶離剤：ｎ−ヘプタン／ＥｔＯＡｃを９０／１０から８０／２０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体６６（４４ｇ、７９％の収率）を得た。

【0280】

実施例Ａ６７
中間体６７：（２Ｒ）−２−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−［［（Ｓ）−ｔ−ブチルスルフィニル］アミノ］−２−シクロプロピル酢酸イソプロピルの製造

【0281】

【化81】

【0282】

中間体６６をＤＣＭ（３８８ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を−７８℃で撹拌しながらこれにシクロプロピルマグネシウムブロマイド（０．５Ｍ、１７４ｍＬ、８７ミリ
モル）を滴下した。その混合物を前記温度で３０分間撹拌した後、飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液に続いて水を添加することで反応を消滅させた。その混合物にＤＣＭを用いた抽出を受けさせた。有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させることで中間体６７（２６．４ｇ、９８％の収率）を黄色がかった油として得て、それをそのまま次の段階で用いた。

【0283】

実施例Ａ６８
中間体６８：（２Ｒ）−２−アミノ−２−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−シクロプロピル酢酸イソプロピルの製造

【0284】

【化82】

【0285】

中間体６７（２３．９ｇ、５５ミリモル）をジオキサン中４ＭのＨＣｌ溶液（２７ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を室温で１５分間撹拌した。溶媒を真空下で濃縮した。粗生成物をＥｔＯＡｃに溶解させた後、飽和ＮａＨＣＯ_３を加えた。その混合物を１時間撹拌した。有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、真空下で濃縮することで中間体６８（１６．６ｇ、９１％の収率）を黄色がかった油として得て、それをそのまま次の段階で用いた。

【0286】

実施例Ａ６９
中間体６９：（２Ｒ）−２−アミノ−２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−シクロプロピル−エタノールの製造

【0287】

【化83】

【0288】

中間体６８（１６．６ｇ、５０．２ミリモル）をＴＨＦ（３４６ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を−１５℃で撹拌しながらこれに水素化リチウムアルミニウム（ＴＨＦ中１Ｍ、３８ｍＬ、３８ミリモル）を滴下した。その混合物を１時間撹拌しながらゆっくりと０℃に温めた。この混合物に固体状のＮａ_２ＳＯ_４十水化物を気体の発生がそれ以上観察されなくなるまで加えた。その混合物を室温で３０分間撹拌した。その混合物の濾過をケイソウ土の詰め物を用いて行った後、ＴＨＦで濯いだ。有機層を集めて真空下で蒸発乾固させた後、その結果として得た粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ中７ＭのＮＨ_３／ＤＣＭを０／１００から３／９７）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体６９（１３．７ｇ、定量的収率）を黄色の油として得た。

【0289】

実施例Ａ７０
中間体７０：［（１Ｒ）−１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−シクロプロピル−２−ヒドロキシエチル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造

【0290】

【化84】

【0291】

中間体７０の合成を実施例Ａ５に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体６９（４．３５ｇ、６．０３ミリモル）を用いて出発することで中間体７０を黄色の油（３．２９ｇ）として得たが、これは放置すると固化した。

【0292】

実施例Ａ７１
中間体７１：［（１Ｒ）−１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−シクロプロピル−２−オキソエチル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造

【0293】

【化85】

【0294】

中間体７１の合成を実施例Ａ６に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体７０（４．５２ｇ、１２．０８ミリモル）を用いて出発することで中間体７１を淡黄色の油（４ｇ、８９％の収率）として得た。

【0295】

実施例Ａ７２
中間体７２：［（１Ｒ）−１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−シクロプロピル−２−ヒドロキシブト−３−イン−１−イル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造

【0296】

【化86】

【0297】

中間体７２の合成を実施例Ａ７に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体７１（４ｇ、１０．７５ミリモル）を用いて出発することで中間体７２をジアステレオ異性体混合物（３．９ｇ、９１％の収率）として油の状態で得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。

【0298】

実施例Ａ７３
中間体７３：［（１Ｒ）−１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−シクロプロピル−２−オキソブト−３−イン−１−イル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造

【0299】

【化87】

【0300】

中間体７３の合成を実施例Ａ８に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体７２（３．９ｇ、９．８ミリモル）を用いて出発することで中間体７３を黄色の油（３．４ｇ、８８％の収率）として得た。

【0301】

実施例Ａ７４
中間体７４：Ｎ−［（Ｒ）−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−シクロプロピル−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）メチル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造

【0302】

【化88】

【0303】

中間体７４の合成を実施例Ａ９に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体７３（３．４ｇ、８．５８ミリモル）を用いて出発することで中間体７４を発泡体（３．４５ｇ、９８％の収率）として得た。

【0304】

実施例Ａ７５
中間体７５：（Ｒ）−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−シクロプロピル−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）メタンアミンの製造

【0305】

【化89】

【0306】

中間体７５の合成を実施例Ａ１０に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体７４（３．４５ｇ、８．４１ミリモル）を用いて出発することで中間体７５を黄色の発泡体（２．８５ｇ）として得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。

【0307】

実施例Ａ７６
中間体７６：Ｎ−［（Ｒ）−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−シクロプロピル−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）メチル］−２−クロロ−アセトアミドの製造

【0308】

【化90】

【0309】

中間体７６の合成を実施例Ａ１１に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体７５（２．８ｇ、９．０３ミリモル）を用いて出発することで中間体７６を固体（１．０３ｇ、３０％の収率）として得た。

【0310】

実施例Ａ７７
中間体７７：（Ｒ）−４−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−４−シクロプロピル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オンの製造

【0311】

【化91】

【0312】

中間体７７の合成を実施例Ａ１２に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体７６（０．７６５ｇ、１．９８ミリモル）を用いて出発することで中間体７７を白色の固体（０．５２ｇ、７５％の収率）として得た。

【0313】

実施例Ａ７８
中間体７８：（Ｒ）−４−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−４−シクロプロピル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオンの製造

【0314】

【化92】

【0315】

中間体７８の合成を実施例Ａ１３に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体７７（０．６２ｇ、１．７７ミリモル）を用いて出発することで中間体７８を淡赤色の固体（０．４６ｇ、７０％の収率）として得た。

【0316】

実施例Ａ７９
中間体７９：（Ｒ）−４−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−４−シクロプロピル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造

【0317】

【化93】

【0318】

中間体７８（０．４６ｇ、１．２６ミリモル）をメタノール中７Ｎのアンモニア溶液（７ｍＬ、４９ミリモル）に入れることで生じさせた混合物を密封型管内で撹拌しながらこれに３２％のアンモニア水溶液（３ｍＬ、５０．７ミリモル）を加えた。その混合物を７０℃で８時間撹拌した。室温に冷却した後の混合物を水およびＮａ_２ＣＯ_３（飽和水溶液）で希釈した後、ＤＣＭを用いた抽出を実施した。その有機層を分離し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＤＣＭに０／１００から２／９８から３／９７から１０／９０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体７９（０．３４ｇ、７８％の収率）を黄色の発泡体として得た。

【0319】

実施例Ａ８０
中間体８０：（Ｒ）−４−［５−（ベンズヒドリリデンアミノ）−２−フルオロフェニル］−４−シクロプロピル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造

【0320】

【化94】

【0321】

中間体８０の合成を実施例Ａ１５に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体７９（０．３４ｇ、０．９７４ミリモル）を用いて出発することで中間体８０を黄色の固体（０．３８ｇ、６１％の収率）として得た。

【0322】

実施例Ａ８１
中間体８１：（Ｒ）−４−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−４−シクロプロピル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造

【0323】

【化95】

【0324】

中間体８１の合成を実施例Ａ１６に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体８０（０．３８ｇ、０．８４５ミリモル）を用いて出発することで中間体８１を淡黄色の固体（０．１６ｇ、６６％の収率）として得た。

【0325】

最終的化合物の製造
実施例Ｂ１
化合物１：ラセミ−４−メチル−４−（３−ピリミジン−５−イルフェニル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造

【0326】

【化96】

【0327】

中間体２８（０．０２６ｇ、０．０８１ミリモル）をＥｔＯＨ（３ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を撹拌しながらこれにＮＨ_４Ｃｌ（０．００７ｇ、０．１２１ミリモル）を加えた後、その混合物を７５℃に１８時間加熱した。溶媒を真空下で除去した後、その残留物をＤＣＭに溶解させて、水で洗浄した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＡｃＯＥｔに０／１００から２０／８０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで化合物１（０．０２ｇ、８１％の収率）を淡黄色の固体として得た。

【0328】

実施例Ｂ２
化合物２：ラセミ−４−［３−（５−メトキシピリジン−３−イル）−フェニル］−４−メチル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造

【0329】

【化97】

【0330】

化合物２の合成を実施例Ｂ１に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体３０（０．１ｇ、０．２８５ミリモル）を用いて出発することで化合物２を白色の固体（０．０６ｇ、６３％の収率）として得た。

【0331】

実施例Ｂ３
化合物３：ラセミ−Ｎ−［３−（６−アミノ−４−メチル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イル）フェニル］−５−クロロピリジン−２−カルボキサミドの製造

【0332】

【化98】

【0333】

５−クロロ−２−ピリジンカルボン酸（０．１５ｇ、０．９６ミリモル）とＨＡＴＵ（０．４０ｇ、１．０４ミリモル）をＤＣＭ（１５ｍＬ）に入れることで生じさせた懸濁液にＮ，Ｎ−ジメチルアニリン（０．２４ｍＬ、１．９２ミリモル）を加えた。その混合物を室温で１０分間撹拌した。次に、中間体１６（０．２１ｇ、０．８７ミリモル）を加えた後の混合物を室温で１８時間撹拌した。その混合物をＮＨ_４Ｃｌ（飽和水溶液）で希釈した後、ＤＣＭを用いた抽出を実施した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＤＣＭに０／１００から５／９５）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで化合物３（０．０７０ｇ、２１％の収率）を白色の固体として得た。

【0334】

実施例Ｂ４
化合物４：ラセミ−４−（２，４−ジフルオロ−５−ピリミジン−５−イル−フェニル）−４−メチル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造

【0335】

【化99】

【0336】

中間体３２（０．１５ｇ、０．４４ミリモル）とピリミジン−５−ボロン酸（０．１６ｇ、１．３２ミリモル）と炭酸カリウム（０．１８ｇ、１．３２ミリモル）を１，４−ジオキサン（４ｍＬ）とエタノール（０．４ｍＬ）に入れることで生じさせた懸濁液を室温で撹拌しながらこれに窒素下でテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．０２５ｇ、０．０２ミリモル）を加えた。その混合物をマイクロ波照射下において１５０℃で３０分間撹拌した。次に、その混合物を水で希釈した後、ＤＣＭを用いた抽出を実施した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＤＣＭに０／１００から３／９７）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで化合物４（０．０８１ｇ、５４％の収率）を白色の固体として得た。

【0337】

実施例Ｂ５
化合物７：（Ｒ）−４−（３’−メトキシビフェニル−３−イル）−４−メチル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造

【0338】

【化100】

【0339】

中間体４２（０．１５ｇ、０．４９ミリモル）と５−メトキシピリジン−３−ボロン酸（０．２３ｇ、１．４８ミリモル）と炭酸カリウム（０．２０ｇ、１．４８ミリモル）を１，４−ジオキサン（４ｍＬ）とエタノール（０．４ｍＬ）に入れることで生じさせた懸濁液を室温で撹拌しながらこれに窒素下でテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．０２８ｇ、０．０２５ミリモル）を加えた。その混合物をマイクロ波照射下において１５０℃で３０分間撹拌した。次に、その混合物を水で希釈した後、ＤＣＭを用いた抽出を実施した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＤＣＭに０／１００から３／９７）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで化合物７（０．１２ｇ、７３％の収率）を白色の固体として得た。

【0340】

実施例Ｂ６
化合物１０：（Ｓ^＊）−Ｎ−［３−（６−アミノ−４−メチル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イル）−４−フルオロフェニル］−５−クロロピリジン−２−カルボキサミドと化合物１１：（Ｒ^＊）−Ｎ−［３−（６−アミノ−４−メチル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イル）−４−フルオロフェニル］−５−クロロピリジン−２−カルボキサミドアミンの製造

【0341】

【化101】

【0342】

ラセミ−５−クロロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（６−アミノ−４−メチル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドのサンプル（０．１８２ｇ）にＣｈｉｒａｌｐａｋ（商標）ＡＤ Ｄａｉｃｅｌカラム（１０μｍ、４．６ｘ２５０ｍｍ）使用調製用ＳＦＣによる分離を３５℃で流量を３．０ｍｌ／分にして受けさせることで相当する鏡像異性体を得た。可動相をＣＯ_２、５０％のエタノール、５０％のＥｔＯＨ（ｉＰｒＮＨ_２を０．３％含有）にして７分間保持することで化合物１１（０．０７ｇ、３８％の収率）と化合物１０（０．０６ｇ、３３％の収率）を得た。

【0343】

実施例Ｂ７
化合物２１：ラセミ−４−［３−（５−メトキシピリジン−３−イル）−フェニル］−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンと化合物２２：（Ｒ^＊）−４−［３−（５−メトキシピリジン−３−イ
ル）−フェニル］−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンと化合物２３：（Ｓ^＊）−４−［３−（５−メトキシピリジン−３−イル）−フェニル］−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造

【0344】

【化102】

【0345】

中間体５２（０．２ｇ、０．５４ミリモル）と５−メトキシピリジン−３−ボロン酸（０．１６３ｇ、１．０７ミリモル）と炭酸カリウム（０．２２２ｇ、１．６１ミリモル）を１，４−ジオキサン（６ｍＬ）とエタノール（０．６ｍＬ）に入れることで生じさせた懸濁液を室温で撹拌しながらこれに窒素下でテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．０３１ｇ、０．０２７ミリモル）を加えた。その混合物を８０℃で２４時間撹拌した。次に、その混合物を水で希釈した後、ＤＣＭを用いた抽出を実施した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＤＣＭに０／１００から３／９７）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮した。その残留物をジエチルエーテルと一緒にしてすり潰し、音波処理し、濾過した後、真空下５０℃で乾燥させることで化合物２１（０．１３ｇ、６０％の収率）を白色の固体として得た。次に、このラセミ化合物に精製をＣｈｉｒａｌｐａｋ（商標）ＡＤ−Ｈカラム（２０ｘ２５０ｍｍ）使用調製用ＳＦＣで可動相（ＣＯ_２、ｉＰｒＮＨ_２が０．３％のｉＰｒＯＨ）を用いて受けさせることで化合物２２（０．０４７ｇ、２２％の収率）と化合物２３（０．０５１ｇ、２４％の収率）を高純度の鏡像異性体（両方とも固体状化合物）として得た。

【0346】

実施例Ｂ８
化合物２４：ラセミ−４−［５−（５−クロロピリジン−３−イル）−フルオロフェニル］−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンと化合物２５：（Ｒ^＊）−４−［５−（５−クロロピリジン−３−イル）−フルオロフェニル］−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンと化合物２６：（Ｓ^＊）−４−［５−（５−クロロピリジン−３−イル）−フルオロフェニル］−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造

【0347】

【化103】

【0348】

化合物２４の合成を実施例Ｂ７に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体６１（０．３ｇ、０．７７ミリモル）を用いて出発することで化合物２４を白色の固体（０．２１ｇ、６４％の収率）として得た。次に、このラセミ化合物に精製をＣｈｉｒａｌｐａｋ（商標）ＡＤ−Ｈカラム（２０ｘ２５０ｍｍ）使用調製用ＳＦＣで可動相（ＣＯ_２、ｉＰｒＮＨ_２が０．３％のｉＰｒＯＨ）を用いて受けさせることで化合物２５（０．０８９ｇ、２７％の収率）と化合物２６（０．０９２ｇ、２８％の収率）を高純度の鏡像異性体（両方とも固体状化合物）として得た。

【0349】

実施例Ｂ９
化合物２７：ラセミ−Ｎ−｛３−［６−アミノ−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イル］−４−フルオロフェニル｝−３，５−ジクロロピリジン−２−カルボキサミドと化合物２８：（Ｒ^＊）−Ｎ−｛３−［６−アミノ−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イル］−４−フルオロフェニル｝−３，５−ジクロロピリジン−２−カルボキサミドと化合物２９：（Ｓ^＊）−Ｎ−｛３−［６−アミノ−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イル］−４−フルオロフェニル｝−３，５−ジクロロピリジン−２−カルボキサミドの製造

【0350】

【化104】

【0351】

３，５−ジクロロ−２−ピリジンカルボン酸（０．５４ｇ、０．８１ミリモル）をＭｅＯＨ（４ｍＬ）に溶解させた後、ＤＭＴＭＭ（０．２２３ｇ、０．８１ミリモル）を加えた。その混合物を５分間撹拌した後、中間体６３（０．２２ｇ、０．６７ミリモル）をＭｅＯＨ（４ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を０℃で加えて、その混合物を更に４時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液／ＤＣＭを０／１００から５／９５）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮した。その残留物をＤＩＰＥから結晶化させることで化合物２７（０．１２４ｇ、３７％の収率）を白色の固体として得た。次に、このラセミ化合物に精製をＣｈｉｒａｌｐａｋ（商標）ＡＤ−Ｈカラム（２０ｘ２５０ｍｍ）使用調製用ＳＦＣで可動相（ＣＯ_２、ｉＰｒＮＨ_２が０．３％のｉＰｒＯＨ）を用いて受けさせることで化合物２８（０．０３８ｇ、１１％の収率）と化合物２９（０．０３６ｇ、１１％の収率）を高純度の鏡像異性体（両方とも固体状化合物）として得た。

【0352】

実施例Ｂ１０
化合物３３：（Ｒ）−Ｎ−｛３−［６−アミノ−４−シクロプロピル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イル］−４−フルオロフェニル｝−５−クロロ−３−フルオロピリジン−２−カルボキサミドの製造

【0353】

【化105】

【0354】

５−クロロ−３−フルオロピリジン−２−カルボン酸（０．０５２ｇ、０．２６ミリモル）をＭｅＯＨ（１．５ｍＬ）に溶解させた後、ＤＭＴＭＭ（０．０８６ｇ、０．３１ミリモル）を加えた。その混合物を５分間撹拌した後、中間体８１（０．０７４ｇ、０．２６ミリモル）をＭｅＯＨ（１．５ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を０℃で加えて、その混合物を更に２４時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液／ＤＣＭを０／１００から５／９５）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮した。その残留物を真空下で乾燥させることで化合物３３（０．０８４ｇ、７３％の収率）を白色の固体として得た。

【0355】

【表1】

【0356】

【表2】

【0357】

【表3】

【0358】

【表4】

【0359】

Ｃ．分析部分
ＬＣＭＳ
本発明の化合物が示す（ＬＣ）ＭＳ特徴付けに関しては下記の方法を用いた。

【0360】

一般的手順Ａ
脱気装置付きポンプ（４式または２式）、オートサンプラー、カラムオーブン、ダイオードアレイ検出器（ＤＡＤ）および個々の方法に指定する如きカラムを含有して成るＨＰ
１１００（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）装置を用いてＨＰＬＣ測定を実施した。ＭＳ検出器にはエレクトロスプレーイオン化源が備わっていた。源の温度を１４０℃または１００℃のいずれかに維持した。窒素をネブライザーガスとして用いた。データの取得をＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘソフトウエア（Ｗａｔｅｒｓ）を用いて実施した。

【0361】

一般的手順Ｂ
サンプラーオーガナイザー、脱気装置付き２式ポンプ、４個のカラム用のオーブン、ダイオードアレイ検出器（ＤＡＤ）および個々の方法に指定する如きカラムを含有して成るＡｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ）装置を用いてＵＰＬＣ（超性能液クロ）測定を実施した。ＭＳ検出器にはＥＳＣＩ二重イオン化源（大気圧化学イオン化と組み合わされたエレクトロスプレー）が備わっていた。窒素をネブライザーガスとして用いた。源の温度を１４０℃に維持した。データの取得をＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘソフトウエア（Ｗａｔｅｒｓ）を用いて実施した。

【0362】

一般的手順Ｃ
脱気装置付き２式ポンプ、オートサンプラー、ダイオードアレイ検出器（ＤＡＤ）および以下の個々の方法に指定する如きカラム（カラムを４０℃の温度に保持）を含有して成るＵＰＬＣ（超性能液クロ）Ａｃｑｕｉｔｙ （Ｗａｔｅｒｓ）装置を用いてＬＣ測定を実施した。カラムから出てきた流れをＭＳ検出器に送った。ＭＳ検出器にはエレクトロスプレーイオン化源が備わっていた。毛細管針の電圧を３ｋＶにしそしてＱｕａｔｔｒｏ（Ｗａｔｅｒｓの三連四重極質量分析計）の源の温度を１３０℃に維持した。窒素をネブライザーガスとして用いた。データの取得をＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘソフトウエア（Ｗａｔｅｒｓ）を用いて実施した。

【0363】

方法１：
一般的手順Ａに加えて、逆相ＨＰＬＣをＡｇｉｌｅｎｔのＥｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ−
Ｃ１８カラム（３．５μｍ、２．１ｘ３０ｍｍ）を用いて流量を１．０ｍｌ／分にして６０℃で実施した。用いた勾配条件は下記である：Ａ（０．５ｇ／ｌの酢酸アンモニウム溶液＋５％のアセトニトリル）が９５％でＢ（アセトニトリル）が５％から５．０分かけてＢが１００％にして５．１５分間維持しそして５．３分の時に初期条件に平衡状態にして７．０分間置く。注入体積２μｌ。０．３秒の滞留時間を用いて１００から７５０まで０．５秒で走査することによって高解像度質量スペクトル（飛行時間、ＴＯＦ検出器）を取得した。毛細管針の電圧を正イオン化モードの場合には２．５ｋＶにしそして負イオン化モードの場合には２．９ｋＶにした。コーン電圧を正および負両方のイオン化モードで２０Ｖにした。ロイシン−エンケファリンがロック質量校正で用いた標準物質であった。

【0364】

方法２：方法１と同じＨＰＬＣ勾配
０．１秒の滞留時間を用いて１００から７５０まで０．５秒で走査することによって高解像度質量スペクトル（飛行時間、ＴＯＦ検出器）を正イオン化モードでのみ取得した。毛細管針の電圧を正イオン化モードの場合には２．５ｋＶにしそしてコーン電圧を２０Ｖにした。ロイシン−エンケファリンがロック質量校正で用いた標準物質であった。

【0365】

方法３：
一般的手順Ａに加えて、逆相ＨＰＬＣをＡｇｉｌｅｎｔのＥｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ−Ｃ１８カラム（３．５μｍ、２．１ｘ３０ｍｍ）を用いて流量を１．０ｍｌ／分にして６０℃で実施したが、ＭＳ検出器への分割を行わなかった。用いた勾配条件は下記である：Ａ（０．５ｇ／ｌの酢酸アンモニウム溶液＋５％のアセトニトリル）が９５％でＢ（アセトニトリル／メタノールが１／１の混合物）が５％を２分間維持し、３．０分かけてＢが１００％にして３．１５分間維持しそして３．３０分の時に初期条件に平衡状態にして５．０分間置く。注入体積２μｌ。０．０８秒のチャンネル間遅延を用いて１００から１０００まで０．１秒で走査することによって低解像度質量スペクトル（単一四重極、ＳＱＤ検出器）を取得した。毛細管針の電圧を３ｋＶにした。コーン電圧を正イオン化モードの場合には２０Ｖと５０Ｖにしそして負イオン化モードの場合には３０Ｖにした。

【0366】

方法４：
一般的手順Ｂに加えて、逆相ＵＰＬＣをＡｇｉｌｅｎｔのＲＲＨＤ Ｅｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ−Ｃ１８カラム（１．８μｍ、２．１ｘ５０ｍｍ）を用いて流量を１．０ｍｌ／分にして５０℃で実施したが、ＭＳ検出器への分割を行わなかった。用いた勾配条件は下記である：Ａ（０．５ｇ／ｌの酢酸アンモニウム溶液＋５％のアセトニトリル）が９５％でＢ（アセトニトリル）が５％を３．８分かけてＡが４０％でＢが６０％にし、４．６分かけてＡが５％でＢが９５％にして５分間維持した。注入体積２μｌ。０．０８秒のチャンネル間遅延を用いて１００から１０００まで０．１秒で走査することによって低解像度質量スペクトル（単一四重極、ＳＱＤ検出器）を取得した。毛細管針の電圧を３ｋＶにした。コーン電圧を正イオン化モードの場合には２５Ｖにしそして負イオン化モードの場合には３０Ｖにした。

【0367】

方法５：方法４と同じ勾配、使用カラム：ＡｇｉｌｅｎｔのＲＲＨＤ Ｅｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ−Ｃ１８（１．８μｍ、２．１ｘ５０ｍｍ）。

【0368】

方法６：
一般的手順Ｃに加えて、逆相ＵＰＬＣをＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＢＥＨ（橋状エチルシロキサン／シリカハイブリッド）Ｐｈｅｎｙｌ−Ｈｅｘｙｌカラム（１．７μｍ、２．１ｘ１００ｍｍ）を用いて流量を０．３４３ｍｌ／分にして実施した。２種類の可動相（可動相Ａ：７ｍＭの酢酸アンモニウムが９５％／アセトニトリルが５％；可動相Ｂ：アセトニトリルが１００％）を用いてＡが８４．２％でＢが１５．８％（０．４９分間維持）から２．１８分かけてＡが１０．５％でＢが８９．５％にして１．９４分間維持し
そして０．７３分かけて初期条件に戻して０．７３分間維持する勾配条件で流した。２ｍｌの注入体積を用いた。コーン電圧を正および負イオン化モードで２０Ｖにした。０．１秒の走査間遅延を用いて１００から１０００まで０．２秒で走査することで質量スペクトルを取得した。

【0369】

方法７：
一般的手順Ａに加えて、逆相ＨＰＬＣをＡｇｉｌｅｎｔのＥｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ−Ｃ１８カラム（３．５μｍ、２．１ｘ３０ｍｍ）を用いて流量を１．０ｍｌ／分にして６０℃で実施したが、ＭＳ検出器への分割を行わなかった。用いた勾配条件は下記である：Ａ（０．５ｇ／ｌの酢酸アンモニウム溶液＋５％のアセトニトリル）が９５％でＢ（アセトニトリル／メタノールが１／１の混合物）が５％から５．０分かけてＢが１００％にして５．１５分間維持しそして５．３０分の時に初期条件に平衡状態にして７．０分間置く。注入体積２μｌ。０．０８秒のチャンネル間遅延を用いて１００から１０００まで０．１秒で走査することによって低解像度質量スペクトル（単一四重極、ＳＱＤ検出器）を取得した。毛細管針の電圧を３ｋＶにした。コーン電圧を正イオン化モードの場合には２０Ｖにしそして負イオン化モードの場合には３０Ｖにした。

【0370】

融点
値はピーク値または溶融範囲のいずれかであり、そして得る値はこの分析方法に通常関連した実験不確かさを伴う。

【0371】

Ｍｅｔｔｌｅｒ ＦＰ ８１ＨＴ／ＦＰ９０装置（表３中にＦＰ９０で示す）
いろいろな化合物が示す融点の測定をＭｅｔｔｌｅｒ ＦＰ８１ＨＴ／ＦＰ９０装置に備わっている開放毛細管内で実施した。融点の測定を１、３、５または１０℃／分の温度勾配で実施した。最大温度を３００℃にした。融点をデジタルディスプレーで読み取った。

【0372】

【表5】

【0373】

【表6】

【0374】

旋光
旋光の測定をナトリウムランプが備わっているＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ ３４１偏光計を用いて実施した。

【0375】

【表7】

【0376】

ＳＦＣＭＳ−方法：
ＳＦＣ−ＭＳ方法の一般的手順
ＳＦＣ測定をＢｅｒｇｅｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｎｅｗａｒｋ、ＤＥ、ＵＳＡ）のＡｎａｌｙｔｉｃａｌ ＳＦＣ装置を用いて実施したが、それには、二酸化炭素（ＣＯ_２）および修飾剤を送るためのＦＣＭ−１２００２式ポンプ流体制御モジュール、ＣＴＣ
Ａｎａｌｙｔｉｃｓ自動液体サンプラー、カラムを室温から８０℃にまで加熱するためのＴＣＭ−２００００熱制御モジュールが備わっていた。４００バールまで耐える高圧フローセルが備わっているＡｇｉｌｅｎｔ １１００ ＵＶ光ダイオードアレー検出器を用いた。カラムから出る流れを分割してＭＳ分光計に送った。ＭＳ検出器には大気圧イオン化源が備わっていた。Ｗａｔｅｒｓ ＺＱ質量分光光度計では下記のイオン化パラメーターを用いる：コロナ：９μａ、源の温度：１４０℃、コーン：３０Ｖ、プローブの温度：４５０℃、抽出器：３Ｖ、脱溶媒和ガス：４００Ｌ／時、コーンガス：７０Ｌ／時。窒素をネブライザーガスとして用いた。データの取得をＷａｔｅｒｓ−Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘデータシステムを用いて実施した。

【0377】

方法１：
一般的手順に加えて、ＳＦＣにおけるキラル分離をＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ ＤＡＩＣＥＬカラム（１０μｍ、４．６ｘ２５０ｍｍ）を用いて流量を３．０ｍｌ／分にして３５℃で実施した。可動相はＣＯ_２であり、エタノールが５０％でＥｔＯＨ（ｉＰｒＮＨ_２を０．３％含有）が５０％を７分間保持。

【0378】

方法２：
一般的手順Ａに加えて、ＳＦＣにおけるキラル分離をＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ ＤＡＩＣＥＬカラム（１０μｍ、４．６ｘ２５０ｍｍ）を用いて流量を３．０ｍｌ／分にして３５℃で実施した。可動相はＣＯ_２であり、メタノール（ｉＰｒＮＨ_２を０．３％含有）が２０％を７分間保持。

【0379】

方法３：
一般的手順Ａに加えて、ＳＦＣにおけるキラル分離をＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ ＤＡＩＣＥＬカラム（１０μｍ、４．６ｘ２５０ｍｍ）を用いて流量を３．０ｍｌ／分にして３５℃で実施した。可動相はＣＯ_２であり、イソプロパノール（ｉＰｒＮＨ_２を０．３％含有）が２５％を７分間保持。

【0380】

方法４：
一般的手順Ａに加えて、ＳＦＣにおけるキラル分離をＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ ＤＡＩＣＥＬカラム（１０μｍ、４．６ｘ２５０ｍｍ）を用いて流量を３．０ｍｌ／分にして３５℃で実施した。可動相はＣＯ_２であり、エタノール（ｉＰｒＮＨ_２を０．３％含有）が３０％を７分間保持。

【0381】

【表8】

【0382】

薬理学的実施例
本発明に示す化合物はβ−サイトＡＰＰ開裂酵素１（ＢＡＣＥ１）の阻害剤である。ＢＡＣＥ１、即ちアスパラギン酸プロテアーゼの阻害はアルツハイマー病（ＡＤ）の治療に関係していると考えている。β−アミロイド前駆体蛋白質（ＡＰＰ）からβ−アミロイドペプチド（Ａβ）が生成して蓄積すると、それはＡＤの発症および進行で鍵となる役割を果たすと考えている。アミロイド前駆体蛋白質（ＡＰＰ）のＡβドメインのＮ末端およびＣ末端のそれぞれがβ−セクレターゼおよびγ−セクレターゼによって逐次的に開裂するとＡβが生じる。式（Ｉ）で表される化合物はその酵素の活性を阻害する能力を有するお陰で実質的にＢＡＣＥ１に影響を与えると予測している。生化学的蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）が基になった検定およびＳＫＮＢＥ２細胞を用いた細胞αｌｉｓａ検定［以下に記述しかつそのような化合物、より特別には式（Ｉ）に従う化合物の同定で用いるに適切である］を用いてそのような阻害剤を試験した時の挙動を表１に示す。

【0383】

生化学的ＦＲＥＴが基になった検定
この検定は蛍光共鳴エネルギー移動検定（ＦＲＥＴ）が基になった検定である。この検定用の基質はＡＰＰから誘導された１３個のアミノ酸から成るペプチドであり、これはアミロイド前駆体蛋白質（ＡＰＰ）β−セクレターゼ開裂部位の「Ｓｗｅｄｉｓｈ」Ｌｙｓ−Ｍｅｔ／Ａｓｎ−Ｌｅｕ変異を含有する。この基質はまた２個の蛍光団：（７−メトキシクマリン−４−イル）酢酸（Ｍｃａ）［これは励起波長が３２０ｎｍで発光波長が４０５ｎｍの蛍光ドナーである］および２，４−ジニトロフェニル（Ｄｎｐ）［これは特許で守られたクエンチャーアクセプターである］を含有する。これらの２つの基の間の距離を光で励起させた時にドナーの蛍光エネルギーが共鳴エネルギー移動でアクセプターによって有意に消光されるように選択した。蛍光団ＭｃａはＢＡＣＥ１で開裂を受けると消光基Ｄｎｐから分離することで、そのドナーの完全な蛍光収率が回復する。蛍光の増大は蛋白分解速度と直線関係にある（Ｋｏｉｋｅ Ｈ他、Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９９、１２６、２３５−４２）。

【0384】

簡単に述べると、３８４穴フォーマットに組換え型ＢＡＣＥ１蛋白質を１μｇ／ｍｌの最終濃度になるように入れて、それを１０μｍの基質と一緒にして、インキュベーション
用緩衝液（４０ｍＭのクエン酸塩緩衝剤、ｐＨ５．０、０．０４％のＰＥＧ、４％のＤＭＳＯ）中で化合物の存在有り無しで室温で１２０分間インキュベートする。次に、Ｔ＝０およびＴ＝１２０の時の蛋白分解の量を蛍光測定（３２０ｎｍで励起させて４０５ｎｍで発光）で直接測定する。結果をＴ１２０とＴ０の間の差としてＲＦＵで表す。最小二乗和方法を用いて最良適合曲線を化合物の濃度と対比させたＣｏｎｔｒｏｌｍｉｎ（％）のプロットに適合させる。これを用いてＩＣ５０値（活性の５０％阻害を引き起こす阻害濃度）を得ることができる。

【0385】

ＬＣ＝低対照値の中央値
＝低対照：酵素なし反応
ＨＣ＝高対照値の中央値
＝高対照：酵素あり反応
効果％＝１００−［（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）^＊１００］
対照％＝（サンプル／ＨＣ）^＊１００
Ｃｏｎｔｒｏｌｍｉｎ％＝（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）^＊１００

【0386】

以下の例示化合物に試験を本質的に上述したようにして受けさせた結果、それらは下記の活性を示した。

【0387】

【表9】

【0388】

ＳＫＮＢＥ２細胞を用いた細胞αｌｉｓａ検定
２つのαｌｉｓａ検定で、生じてヒト神経芽細胞腫ＳＫＮＢＥ２細胞の培地の中に分泌されるＡβｔｏｔａｌおよびＡβ４２の濃度を量化する。この検定は、野生型アミロイド前駆体蛋白質（ｈＡＰＰ６９５）を発現するヒト神経芽細胞腫ＳＫＮＢＥ２が基になって
いる。当該化合物を希釈し、前記細胞に加え、１８時間インキュベートした後、Ａβ４２およびＡβｔｏｔａｌの測定値を得る。ＡβｔｏｔａｌおよびＡβ４２の測定をサンドイッチαｌｉｓａで実施する。αｌｉｓａはストレプトアビジン被覆ビードに結合させておいたビオチニル化抗体ＡｂＮ／２５およびそれぞれＡβｔｏｔａｌおよびＡβ４２を検出するための抗体Ａｂ４Ｇ８またはＡｂ４２／２６と接合させておいた受容体ビードを用いたサンドイッチ検定である。ＡβｔｏｔａｌまたはＡβ４２を存在させると前記ビードが近くに寄ってくる。ドナービードを励起させると一重項酸素分子の放出が誘発され、それが受容体ビード内で起こるエネルギー移動のカスケードの引き金になり、その結果として発光が起こる。インキュベーションを１時間行った後に発光を測定する（６５０ｎｍで励起させて６１５ｎｍで発光）。

【0389】

最小二乗和方法を用いて最良適合曲線を化合物の濃度と対比させたＣｏｎｔｒｏｌｍｉｎ（％）のプロットに適合させる。これを用いてＩＣ５０値（活性の５０％阻害を引き起こす阻害濃度）を得ることができる。

【0390】

ＬＣ＝低対照値の中央値
＝低対照：αｌｉｓａで化合物もビオチニル化Ａｂも用いないで予備インキュベートした細胞
ＨＣ＝高対照値の中央値
＝高対照：化合物なしに予備インキュベートした細胞
効果％＝１００−［（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）^＊１００］
対照％＝（サンプル／ＨＣ）^＊１００
Ｃｏｎｔｒｏｌｍｉｎ％＝（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）^＊１００

【0391】

以下の例示化合物に試験を本質的に上述したようにして受けさせた結果、それらは下記の活性を示した。

【0392】

【表10】

【0393】

インビボ効力の立証
本発明のＡβペプチド減少剤を用いて哺乳動物、例えばヒトにおけるＡＤを治療するこ
とができるか或はヒトモデル、例えばこれらに限定するものでないが、マウス、ラットまたはモルモットなどにおける効力を立証することができる。その哺乳動物がＡＤにかかっていると診断することは不可能であり、またその哺乳動物にＡＤの遺伝的素因を持たせることも不可能であるが、ＡＤに感染したヒトに見られる様式と同様な様式でＡβが過剰に生成して最終的に沈着するように遺伝子導入することは可能である。

【0394】

Ａβペプチド減少剤を標準的方法のいずれかを用いて標準的形態のいずれかで投与することができる。例えば、これらに限定するものでないが、Ａβペプチド減少剤の形態を経口または注射で投与する液体、錠剤またはカプセルの形態にしてもよい。Ａβペプチド減少剤を血液、血漿、血清、脳髄液（ＣＳＦ）または脳内のＡβペプチドの濃度が有意に減少するに充分ないずれかの量で投与してもよい。

【0395】

Ａβ４２ペプチド減少剤を急性投与した時にインビボでＡβペプチド濃度が減少するか否かを測定する目的で、遺伝子導入をしていない齧歯類、例えばマウスまたはラットなどを用いた。Ａβペプチド減少剤で処置した動物を検査して、未処置または媒体で処置した動物と比較して、可溶Ａβ４２および総Ａβの脳内濃度を標準的技術、例えばＥＬＩＳＡなどを用いて量化した。処置時間は数時間（時）から数日間に及んで多様であり、効果開始時間経過が確立できた時点でＡβ４２減少の結果を基にして処置時間を調整した。

【0396】

Ａβ４２の減少をインビボで測定する典型的なプロトコルを示すが、それは、検出可能Ａβの濃度を最適にする目的で使用可能な数多くの変法のほんの１つである。例えばＡβペプチド減少用化合物を２０％のヒドロキシプロピルβシクロデキストリンに配合してもよい。一晩絶食させておいた動物にＡβペプチド減少剤を１回分の経口投与（ｐ．ｏ．）または１回分の皮下投与（ｓ．ｃ．）として投与した。一定の時間が経過、通常は２または４時間（表１９に示すように）経過した後、その動物を屠殺してＡβ４２濃度を分析した。

【0397】

断頭術およびＥＤＴＡで処理しておいた採取用管を用いた放血によって血液を採取した。血液を１９００ｇの遠心分離に４℃で１０分間かけることで血漿を回収した後、後で分析する目的で瞬間凍結した。頭蓋および後脳から脳を取り出した。小脳を取り出した後、左脳半球と右脳半球を分離した。左脳半球を試験化合物濃度の定量的分析の目的で−１８℃で保存した。右脳半球を燐酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）緩衝液で濯いだ後、直ちにドライアイスで凍結して、生化学的検定の目的で均一化を行うまで−８０℃で保存した。

【0398】

遺伝子導入をしていない動物から取り出したマウス脳を８倍体積の０．４％ＤＥＡ（ジエチルアミン）／５０ｍＭのＮａＣｌ［プロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ−１１８７３５８０００１または０４６９３１５９００１）を入れておいた］に入れて懸濁させた［例えば０．１５８ｇの脳の場合には組織１グラム当たりに０．４％ＤＥＡを１．２６４ｍｌ加えた］。あらゆるサンプルに均一化をＦａｓｔＰｒｅｐ−２４装置（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）内で溶解用マトリクスＤ（ＭＰＢｉｏ＃６９１３−１００）を用いて６ｍ／秒で２０秒間受けさせた。ホモジネートを２２１．３００ｘｇの遠心分離に５０分間かけた。次に、その結果として得た高速上澄み液を新鮮なエッペンドルフ管に移した。９部の上澄み液を１部の０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８）で中和した後、それを用いてＡβｔｏｔａｌおよびＡβ４２の量化を実施した。

【0399】

脳ホモジネートの可溶画分に入っているＡβｔｏｔａｌおよびＡβ４２の量を量化する目的で酵素免疫測定法を用いた。簡単に述べると、標準［合成Ａβ１−４０およびＡβ１−４２（Ｂａｃｈｅｍ）の希釈液］の調製を１．５ｍｌのエッペンドルフ管内でＵｌｔｒａｃｕｌｔｕｒｅを用いて最終濃度が１００００から０．３ｐｇ／ｍｌの範囲になるように実施した。サンプルおよび標準をＡβ４２検出の場合にはＨＲＰＯ標識Ｎ末端抗体と一
緒にインキュベートしそしてＡβｔｏｔａｌ検出の場合にはビオチニル化中間ドメイン抗体４Ｇ８と一緒にインキュベートした。次に、抗体被覆プレートに接合体／サンプルまたは接合体／標準混合物を５０μｌ加えた［捕捉用抗体は選択的にＡβ４２のＣ末端（Ａβ４２検出の場合には抗体ＪＲＦ／ｃＡβ４２／２６）およびＡβのＮ末端（Ａβｔｏｔａｌ検出の場合には抗体ＪＲＦ／ｒＡβ／２）を認識する］。抗体−アミロイド複合体が生じるように前記プレートを４℃で一晩インキュベートした。このインキュベーションに続く洗浄段階の後にＱｕａｎｔａ Ｂｌｕ蛍光性ペルオキシダーゼ基質を製造業者（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｏｒｐ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌ）の指示に従って添加することでＡβ４２量化のためのＥＬＩＳＡを終了した。１０から１５分後に読み取りを実施した（励起３２０ｎｍ／発光４２０ｎｍ）。

【0400】

Ａβｔｏｔａｌの検出では、ストレプトアビジン−ペルオキシダーゼ接合体を添加し、６０分後に追加的洗浄段階そしてＱｕａｎｔａ Ｂｌｕ蛍光性ペルオキシダーゼ基質の添加を製造業者（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｏｒｐ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌ）の指示に従って実施した。１０から１５分後に読み取りを実施した（励起３２０ｎｍ／発光４２０ｎｍ）。

【0401】

このモデルでＡβ４２が未処置動物に比べて少なくとも２０％減少するならば、それは有利なことである。

【0402】

以下の例示化合物に試験を本質的に上述したようにして受けさせた結果、それらは下記の活性を示した。

【0403】

【表11】