特許 5856069 新規なシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5856069

(24)【登録日】2015年12月18日

(45)【発行日】2016年2月9日

(54)【発明の名称】新規なシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/7068 20060101AFI20160120BHJP

   A61K 47/48 20060101ALI20160120BHJP

   A61K 9/107 20060101ALI20160120BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20160120BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20160120BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/7068

   A61K47/48

   A61K9/107

   A61P35/00

   A61P31/12

【請求項の数】8

【全頁数】23

(21)【出願番号】特願2012-544274(P2012-544274)

(86)(22)【出願日】2011年11月16日

(86)【国際出願番号】JP2011076373

(87)【国際公開番号】WO2012067138

(87)【国際公開日】20120524

【審査請求日】2014年10月16日

(31)【優先権主張番号】特願2010-257013(P2010-257013)

(32)【優先日】2010年11月17日

(33)【優先権主張国】JP

(73)【特許権者】

【識別番号】000004086

【氏名又は名称】日本化薬株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】110001173

【氏名又は名称】特許業務法人川口國際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】山本 啓一朗

(72)【発明者】

【氏名】岡崎 麻奈実

(72)【発明者】

【氏名】川村 大

【審査官】 伊藤 清子

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１０／１３１６７５（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００８／０５６６５４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００６／１２０９１４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００９／１１６５０９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００６／０３３２９６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００８／０５６５９６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００９／０４１５７０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 米国特許出願公開第２００２／０００９４２６（ＵＳ，Ａ１）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３１／７０６８

Ａ６１Ｋ ９／１０７

Ａ６１Ｋ ４７／４８

Ａ６１Ｐ ３１／１２

Ａ６１Ｐ ３５／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ポリエチレングリコール構造部分と１０以上のカルボキシ基を有するポリマーであるポリグルタミン酸とのブロック共重合体の側鎖カルボキシ基に，一般式（Ｉ）あるいは一般式（ＩＩ）

【化1】

［式中，Ｒ^７，Ｒ^８はそれぞれ独立して水素原子又は置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を示し，Ｒ^６は水素原子，置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４０）アルキル基，置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４０）アラルキル基，置換基を有していてもよい芳香族基，カルボキシ基が保護されたアミノ酸残基又は置換基を有していてもよい糖残基を示し，ＣＸ−ＣＹはＣＨ−ＣＨ又はＣ＝Ｃ（二重結合）を示し，Ａはシチジン系代謝拮抗剤の４位アミノ基を除いた残基を示す］で表わされる置換基が結合しているシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体。

【請求項2】

シチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体が一般式（ＩＩＩ）

【化2】

［式中，Ｒ^１は水素原子又は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を示し，Ｒ^３は結合基を示し，Ｒ^４は水素原子又は（Ｃ１〜Ｃ６）アシル基を示し，Ｒ^５は一般式（Ｉ）あるいは一般式（ＩＩ）

【化3】

［式中，Ｒ^６，Ｒ^７，Ｒ^８，ＣＸ−ＣＹ及びＡは前記と同じ意味を示す］
で表わされる置換基を示し，ｂは５〜１１５００の整数を示し，ｐ及びｑはそれぞれ独立に１〜３の整数を示し，ｉは５〜２００の整数を示し，ｎは０〜２００の整数を示し，且つｉ＋ｎは１０〜３００の整数を示す］
で表される化合物である請求項１に記載のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体。

【請求項3】

Ｒ^１が（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル基，Ｒ^３が式（ＩＶ)，（Ｖ）又は（ＶＩ)

【化4】

［式中，ｒは１〜６の整数を示す］
で表される結合基，Ｒ^４が（Ｃ１〜Ｃ３）アシル基であり，ｂが１００〜３００の整数であり，Ｒ^３によりｐ及びｑはそれぞれ１又は２であり，ｉが５〜９０の整数，ｎが０〜９０の整数で，且つｉ＋ｎが１０〜１００の整数である請求項２に記載のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体。

【請求項4】

Ｒ^１がメチル基，Ｒ^３がトリメチレン基，Ｒ^４がアセチル基，Ｒ^５におけるＲ^７，Ｒ^８が共に水素原子であり，ＣＸ−ＣＹがＣＨ−ＣＨである請求項３に記載のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体。

【請求項5】

シチジン系代謝拮抗剤がゲムシタビン，５’−デオキシ−５−フルオロシチジン，シタラビン又は３’−エチニルシチジンである請求項１〜４のいずれか一項に記載のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体。

【請求項6】

請求項１〜５のいずれか一項に記載のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体を薬効成分とする抗がん剤。

【請求項7】

請求項１〜５のいずれか一項に記載のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体を薬効成分とする抗ウイルス剤。

【請求項8】

水中でミセルを形成することを特徴とする請求項１〜７のいずれか一項に記載のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は，新規なシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体，特にポリエチレングリコール構造部分と１０以上のカルボキシ基を有するポリマーとのブロック共重合体における側鎖カルボキシ基に，特定のリンカーを介してシチジン系代謝拮抗剤の４位アミノ基が結合しているシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体，及びその用途に関する。

【背景技術】

【0002】

悪性腫瘍あるいはウイルス性疾患の治療を目的として，種々のシチジン系代謝拮抗剤の開発が行なわれ，抗がん剤としてはシタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ），ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）等が，抗ウイルス剤としてはザルシタビン（ｚａｌｃｉｔａｂｉｎｅ），ラミブジン（ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）等が臨床で使用されている。

【0003】

しかし，これらシチジン系代謝拮抗剤は，強いｉｎ ｖｉｔｒｏ活性を有するにも拘わらず生体内では代謝・排泄を受けやすいために十分な薬効を発揮出来なかったり，あるいは高投与量を必要とするものが多い。例えば，ゲムシタビンは，ｉｎ ｖｉｔｒｏでは同じく抗がん剤であるパクリタキセルやドキソルビシン等の薬剤に匹敵する細胞増殖抑制活性を有する一方で，臨床では体表面積あたり１回１０００ｍｇ／ｍ^２の投与量が必要である。これは，２’−デオキシシチジンの代謝酵素であるシチジン脱アミノ化酵素によってシトシン塩基の４位アミノ基が代謝されてしまい，ゲムシタビンとしてのｉｎ ｖｉｖｏ利用率が低くなるためと考えられている（非特許文献１参照）。

【0004】

非特許文献２には，平均分子量約３００００のポリグルタミン酸類とシタラビンとを結合させた高分子誘導体が記載されている。しかしながら，薬剤の高分子誘導体には免疫反応により過敏反応を示す場合があり，その様な場合には薬剤として繰返し投与が出来ない。

【0005】

特許文献１にはポリエチレングリコール類にシチジン系誘導体を結合させた高分子誘導体が，非特許文献３にはポリエチレングリコール類の両末端にアスパラギン酸を分枝状に置換させ，それにシタラビンを結合させた高分子誘導体が開示されている。しかし，これらはポリエチレングリコール類１分子あたり薬剤を１〜８分子程度しか結合出来ず，有効量を投与するためにはポリマー総量が大量になってしまう。更に，これらの高分子誘導体からの薬剤放出は生体内の酵素による加水分解反応に依存している部分があり，臨床上における治療効果が患者の個体差に大きく影響される恐れがある。

【0006】

特許文献２にはポリエチレングリコール類とポリアスパラギン酸が縮合したブロック共重合体に薬剤を結合した分子がミセルを形成し医薬となることが記載されている。又，特許文献３にはポリエチレングリコール類とポリ酸性アミノ酸とのブロック共重合体の側鎖カルボキシ基に疎水性物質を結合した高分子運搬体となる高分子担体が記載されている。更に，特許文献４にはポリエチレングリコール類とポリグルタミン酸が縮合したブロック共重合体のグルタミン酸側鎖カルボキシ基に抗がん性物質を結合させた高分子誘導体が記載されている。しかしながら，これらの特許文献２〜４には，結合する薬剤としてシチジン系代謝拮抗剤に関する記載はない。

【0007】

特許文献５には，ポリエチレングリコール類とポリグルタミン酸とのブロック共重合体の側鎖カルボキシ基とシチジン系代謝拮抗剤のアミノ基とがアミド結合した高分子誘導体が記載されている。又，特許文献６には，ポリエチレングリコール類とポリグルタミン酸とのブロック共重合体の側鎖カルボキシ基と核酸系代謝拮抗剤であるヌクレオシド誘導体の水酸基がエステル結合した高分子誘導体が記載されている。しかしながら，これらの文献はポリエチレングリコールとポリカルボン酸との共重合体のカルボキシ基に直接シチジン系代謝拮抗剤を結合させており，何らかのリンカーを介してシチジン系代謝拮抗剤を結合させてはいない。

【0008】

特許文献７にはポリエチレングリコール類とポリグルタミン酸とのブロック共重合体の側鎖カルボキシ基に疎水性の高いリンカーを介して核酸系代謝拮抗剤であるヌクレオシド誘導体が結合している高分子誘導体が記載されている。しかしながら，このリンカーにはコハク酸モノアミド構造部分がなく，イミドを形成するとともに薬剤が放出されるシステムではない。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0009】

【特許文献1】特表２００３−５２４０２８号公報

【特許文献2】特許第２６９４９２３号公報

【特許文献3】特許第３２６８９１３号公報

【特許文献4】特開平５−９５５号公報

【特許文献5】国際公開第２００６／１２０９１４号パンフレット

【特許文献6】国際公開第２００８／０５６５９６号パンフレット

【特許文献7】国際公開第２００８／０５６６５４号パンフレット

【非特許文献】

【0010】

【非特許文献1】「キャンサー・サイエンス」，日本癌学会発行，２００４年，第９５巻，１０５−１１１頁

【非特許文献2】「キャンサー・リサーチ」（米国），米国癌学会発行，１９８４年，第４４巻，２５−３０頁

【非特許文献3】「ジャーナル オブ コントロールド リリース」（英国），エルゼヴィア発行，２００２年，第７９巻，５５−７０頁

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0011】

本発明の目的は，シチジン系代謝拮抗剤を高分子誘導体化することにより従来以上の高い薬効を有する新規な抗がん剤又は抗ウイルス剤を提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0012】

本発明者等は前記課題を解決するために鋭意研究を行なった結果，ポリエチレングリコール構造部分と１０以上のカルボキシ基を有するポリマーとのブロック共重合体，特に，ポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体の側鎖カルボキシ基に，コハク酸モノアミド構造を有する特定のリンカーを介してシチジン系代謝拮抗剤の４位アミノ基を結合させたシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体を見出した。本発明の高分子誘導体は，リンカーの構成要素であるアミン成分を適宜選択することによって，結合しているシチジン系代謝拮抗剤の放出速度を自在に調節することが出来，高い薬効を有することを可能することを特徴としている。

【0013】

即ち，本発明は以下の（１）〜（１０）に関する。
（１）ポリエチレングリコール構造部分と１０以上のカルボキシ基を有するポリマーとのブロック共重合体の側鎖カルボキシ基に，一般式（Ｉ）あるいは一般式（ＩＩ）

【化1】

［式中，Ｒ^７，Ｒ^８はそれぞれ独立して水素原子又は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を示し，Ｒ^６は水素原子，置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４０）アルキル基，置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４０）アラルキル基，置換基を有していてもよい芳香族基，カルボキシ基が保護されたアミノ酸残基又は置換基を有していてもよい糖残基を示し，ＣＸ−ＣＹはＣＨ−ＣＨ又はＣ＝Ｃ（二重結合）を示し，Ａはシチジン系代謝拮抗剤の４位アミノ基を除いた残基を示す］で表わされる置換基が結合しているシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体。

【0014】

（２）１０以上のカルボキシ基を有するポリマーがポリアミノ酸又はその誘導体である前記（１）に記載のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
（３）ポリアミノ酸がポリグルタミン酸である前記（２）に記載のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体。

【0015】

（４）シチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体が一般式（ＩＩＩ）

【化2】

［式中，Ｒ^１は水素原子又は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を示し，Ｒ^３は結合基を示し，Ｒ^４は水素原子又は（Ｃ１〜Ｃ６）アシル基を示し，Ｒ^５は一般式（Ｉ）あるいは一般式（ＩＩ）

【化3】

［式中，Ｒ^６，Ｒ^７，Ｒ^８，ＣＸ−ＣＹ及びＡは前記と同じ意味を示す］
で表わされる置換基を示し，ｂは５〜１１５００の整数を示し，ｐ及びｑはそれぞれ独立に１〜３の整数を示し，ｉは５〜２００の整数を示し，ｎは０〜２００の整数を示し，且つｉ＋ｎは１０〜３００の整数を示す］
で表される化合物である前記（１）〜（３）のいずれか１つに記載のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体。

【0016】

（５）Ｒ^１が（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル基，Ｒ^３が式（ＩＶ)，（Ｖ）又は（ＶＩ)

【化4】

［式中，ｒは１〜６の整数を示す］
で表される結合基，Ｒ^４が（Ｃ１〜Ｃ３）アシル基であり，ｂが１００〜３００の整数であり，Ｒ^３によりｐ及びｑはそれぞれ１又は２であり，ｉが５〜９０の整数，ｎが０〜９０の整数で，且つｉ＋ｎが１０〜１００の整数である前記（４）に記載のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体。

【0017】

（６）Ｒ^１がメチル基，Ｒ^３がトリメチレン基，Ｒ^４がアセチル基，Ｒ^５におけるＲ^７，Ｒ^８が共に水素原子であり，ＣＸ−ＣＹがＣＨ−ＣＨである前記（５）に記載のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
（７）シチジン系代謝拮抗剤がゲムシタビン，５’−デオキシ−５−フルオロシチジン，シタラビン又は３’−エチニルシチジンである前記（１）〜（６）のいずれか１つに記載のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体。

【0018】

（８）前記（１）〜（７）のいずれか１つに記載のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体を薬効成分とする抗がん剤。
（９）前記（１）〜（７）のいずれか１つに記載のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体を薬効成分とする抗ウイルス剤。
（１０）水中でミセルを形成することを特徴とする前記（１）〜（９）のいずれか１つに記載のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体。

【発明の効果】

【0019】

本発明のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体，特に，ポリエチレングリコールとポリグルタミン酸とのブロック共重合体における側鎖カルボキシ基に，特定のリンカーを介してシチジン系代謝拮抗剤の４位アミノ基が結合した高分子誘導体は，シチジン系代謝拮抗剤の結合様式が１種類であることから均質で製造制御が容易な高分子化合物であり，高い薬効を発揮することが期待される。又，本発明の高分子誘導体は生理的条件下，生体の加水分解酵素に依存することなくシチジン系代謝拮抗剤を放出することが可能であるため，個体差に影響されることなく有効な薬効を示すものである。更に，該リンカーの構成要素であるアミン成分を適宜選択することによって，結合しているシチジン系代謝拮抗剤の放出速度をその薬剤の使用目的に合わせて調節することが出来る。

【図面の簡単な説明】

【0020】

【図1】実施例の化合物５，化合物１０及び比較化合物（ＰＥＧ−Ｇｌｕ−ＥＣｙｄ，ＰＥＧ−Ｇｌｕ−（ＥＣｙｄ，ＰｈｅＯＢｚｌ））について，ＰＢＳ溶液（リン酸緩衝生理食塩水，ｐＨ７．４）中，３７℃での３’−エチニルシチジン（ＥＣｙｄ）の放出量の全結合量に対する割合を示す。

【図2】実施例の化合物１５及び化合物２１について，ＰＢＳ溶液（リン酸緩衝生理食塩水，ｐＨ７．４）中，３７℃での３’−エチニルシチジン（ＥＣｙｄ）の放出量の全結合量に対する割合を示す。

【図3】実施例の化合物１５，化合物２２及び比較化合物（ＰＥＧ−Ｇｌｕ−ＥＣｙｄ）について，ＰＢＳ溶液（リン酸緩衝生理食塩水，ｐＨ７．４）中，３７℃での３’−エチニルシチジン（ＥＣｙｄ）の放出量の全結合量に対する割合を示す。

【発明を実施するための形態】

【0021】

本発明のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体は，ポリエチレングリコール構造部分と１０以上のカルボキシ基を有するポリマーとのブロック共重合体の側鎖カルボキシ基に，一般式（Ｉ）あるいは一般式（ＩＩ）［式中，Ｒ^７，Ｒ^８はそれぞれ独立して水素原子又は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を示し，Ｒ^６は水素原子，置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４０）アルキル基，置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４０）アラルキル基，置換基を有していてもよい芳香族基，カルボキシ基が保護されたアミノ酸残基又は置換基を有していてもよい糖残基を示し，ＣＸ−ＣＹはＣＨ−ＣＨ又はＣ＝Ｃ（二重結合）を示し，Ａはシチジン系代謝拮抗剤の４位アミノ基を除いた残基を示す］で表わされる置換基が結合している。

【0022】

本発明のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体におけるポリエチレングリコール構造部分と１０以上のカルボキシ基を有するポリマーとのブロック共重合体における１０以上のカルボキシ基を有するポリマーとしては，側鎖にカルボキシ基を有する低分子モノマーが重合して構成されたポリマーあるいは水酸基等カルボキシ基以外の官能基を有する低分子モノマーの重合体に，例えば，ハロゲノ酢酸等を用いてカルボキシ基を導入したポリマーが挙げられる。

【0023】

該カルボキシ基を有するポリマーあるいは該カルボキシ基を有するポリマーの製造に使用し得る重合体としては，例えば，ポリグルタミン酸，ポリアスパラギン酸，ポリセリン，ポリシステイン，ポリチロシン，ポリリジン，ポリリンゴ酸，デキストラン又はその部分酸化体，ポリウロン酸等が挙げられる。
該カルボキシ基を有するポリマーとして好ましくは，ポリアミノ酸又はその誘導体が挙げられ，ポリ酸性アミノ酸であるポリグルタミン酸が特に好ましい。

【0024】

本発明のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体におけるポリエチレングリコール構造部分と１０以上のカルボキシ基を有するポリマーとのブロック共重合体におけるポリエチレングリコール構造部分としては，エチレングリコール構造部分を１〜１５０００程度有していれば特に限定されない。好ましくは直鎖状のポリエチレングリコールと，１０以上のカルボキシ基を有するポリマーとの結合基を含めた構造部分である。

【0025】

本発明のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体におけるポリエチレングリコール構造部分と１０以上のカルボキシ基を有するポリマーとのブロック共重合体としては，ポリエチレングリコール構造部分とポリグルタミン酸のブロック共重合体が好ましい。

【0026】

本発明のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体の１０以上のカルボキシ基を有するポリマーに結合している一般式（Ｉ）あるいは一般式（ＩＩ）の置換基において，Ｒ^７，Ｒ^８はそれぞれ独立に水素原子又は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基である。（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基とは，例えば，メチル基，エチル基，ｎ−プロピル基，イソプロピル基，ｎ−ブチル基，ｓ−ブチル基，ｔ−ブチル基，ｎ−ペンチル基，ｎ−ヘキシル基，シクロプロピル基，シクロペンチル基，シクロヘキシル基等が挙げられる。
該置換基におけるＲ^７，Ｒ^８としては両者共に水素原子が特に好ましい。

【0027】

該置換基において，Ｒ^６は水素原子，置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４０）アルキル基，置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４０）アラルキル基，置換基を有していてもよい芳香族基，カルボキシ基が保護されたアミノ酸残基又は置換基を有していてもよい糖残基である。
置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４０）アルキル基における（Ｃ１〜Ｃ４０）アルキル基としては直鎖状でも分岐していてもよく，例えば，メチル基，エチル基，ｎ−プロピル基，イソプロピル基，ｎ−ブチル基，ｓ−ブチル基，イソブチル基，ｎ−ペンチル基，ｎ−ヘキシル基，ｎ−ステアリル基等が挙げられ，該置換基としては，例えば，フェニル基，ナフチル基，メトキシ基，エトキシ基，ジメチルアミノ基，アダマンチル基等が挙げられる。置換位置は置換可能であれば特に限定されない。

【0028】

置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４０）アラルキル基における（Ｃ１〜Ｃ４０）アラルキル基としては，芳香族炭化水素基が結合したアルキル基であれば特に限定されず，例えば，ベンジル基，ナフチルメチル基，フェネチル基，４−フェニルブチル基等が挙げられ，芳香族炭化水素基部分の置換基としては，例えば，メチル基，エチル基，ニトロ基，塩素原子，臭素原子，ジメチルアミノ基等が挙げられる。置換位置，置換基数は置換可能であれば特に限定されない。

【0029】

置換基を有していてもよい芳香族基としては，例えば，ベンゼン，ナフタレン，フルオレン，アニリン，ニトロアニリン，クロロアニリン，アミノフルオロベンゾニトリル，アミノナフタレン，アミノフラボン，アミノフルオレン等から導かれる置換基が挙げられる。該芳香族化合物から導かれる置換基と，一般式（Ｉ）あるいは一般式（ＩＩ）の置換基との結合位置は置換可能であれば特に限定されない。

【0030】

カルボキシ基が保護されたアミノ酸残基のアミノ酸としては，通常のペプチド合成で用いられるカルボキシ基が保護されたアミノ酸が挙げられ，該アミノ酸のカルボキシ基がエステルあるいはアミドにより保護されている化合物が好ましく，例えば，アラニンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル，アスパラギン酸のα若しくはβ（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル，グルタミン酸のα若しくはγ（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル，フェニルアラニンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル，システインの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル，グリシンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル，ロイシンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル，イソロイシンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル，ヒスチジンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル，プロリンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル，セリンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル，スレオニンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル，バリンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル，トリプトファンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル，チロシンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル等又はそれらのフェニル基等の置換体が挙げられ，特に，フェニルアラニンメチルエステル，グリシンメチルエステル，グリシン（４−フェニル−１−ブタノール）エステル，ロイシンメチルエステル，フェニルアラニンベンジルエステル，フェニルアラニン（４−フェニル−１−ブタノール）エステル等が好ましい。該アミノ酸はＤ体でもＬ体でもそれらの混合物であってもよい。

【0031】

置換基を有していてもよい糖残基の糖としてはアミノ糖であれば特に限定されず，例えば，グルコサミン，ガラクトサミン，マンノサミン等が挙げられ，該置換基としてはアセチル基，ピバロイル基，ベンジル基，メチル基等が挙げられる。該糖としてはＤ体でもＬ体でもそれらの混合物であってもよい。又，置換基の置換位置及び置換基数は可能であれば位置や数は限定されない。

【0032】

本発明のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体においてリンカーとなる一般式（Ｉ）あるいは一般式（ＩＩ）の置換基においてＣＸ−ＣＹは，リンカー部分が環状イミド中間体を形成出来ればよく，ＣＨ−ＣＨ若しくはＣ＝Ｃ（二重結合）であり，例えば，コハク酸モノアミド誘導体やマレイン酸モノアミド誘導体等が挙げられる。ＣＸ−ＣＹはＣＨ−ＣＨが特に好ましい。

【0033】

本発明のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体においてリンカーにシトシン塩基の４位アミノ基でアミド結合しているシチジン系代謝拮抗剤（Ａ−ＮＨ_２）としては，例えば，ゲムシタビン，５’−デオキシ−５−フルオロシチジン，シタラビン又は３’−エチニルシチジン等が挙げられる。
以下に，ゲムシタビン，５’−デオキシ−５−フルオロシチジン，シタラビン，３’−エチニルシチジンについて構造式を示す。

【0034】

ゲムシタビン

【化5】

【0035】

５’−デオキシ−５−フルオロシチジン

【化6】

【0036】

シタラビン

【化7】

【0037】

３’−エチニルシチジン

【化8】

【0038】

本発明のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体としては，前記一般式（ＩＩＩ）［式中，Ｒ^１は水素原子又は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を示し，Ｒ^３は結合基を示し，Ｒ^４は水素原子又は（Ｃ１〜Ｃ６）アシル基を示し，Ｒ^５は一般式（Ｉ）あるいは一般式（ＩＩ）［式中，Ｒ^６，Ｒ^７，Ｒ^８，ＣＸ−ＣＹ及びＡは前記と同じ意味を示す］で表わされる置換基を示し，ｂは５〜１１５００の整数を示し，ｐ及びｑはそれぞれ独立に１〜３の整数を示し，ｉは５〜２００の整数を示し，ｎは０〜２００の整数を示し，且つｉ＋ｎは１０〜３００の整数を示す］で表される化合物が好ましい。

【0039】

Ｒ^１における（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基としては，（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が挙げられ，好ましくは（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基が挙げられ，例えば，メチル基，エチル基，ｎ−プロピル基，ｎ−ブチル基等が挙げられる。
式（ＩＩＩ）におけるＲ^１としてはメチル基が特に好ましい。

【0040】

Ｒ^４における（Ｃ１〜Ｃ６）アシル基としては特に限定されず，好ましくは（Ｃ１〜Ｃ３）アシル基が挙げられ，例えば，ホルミル基，アセチル基，プロピオニル基等が挙げられる。
式（ＩＩＩ）におけるＲ^４としてはアセチル基が特に好ましい。

【0041】

Ｒ^５は一般式（Ｉ）あるいは一般式（ＩＩ）で表わされる置換基であり，該置換基は前記した通りであり，好ましい基も同様である。

【0042】

Ｒ^３の結合基は，ポリエチレングリコール構造部分と１０以上のカルボキシ基を有するポリマーとのブロック共重合体においてポリエチレングリコール構造部分の１０以上のカルボキシ基を有するポリマーとの結合側の末端部を構成する構造部分であり，ヘテロ原子を介していてもよい直鎖又は分岐鎖の（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン基である。該ヘテロ原子としては酸素原子，窒素原子，硫黄原子等が挙げられる。
該結合基としては，例えば，前記の式（ＩＶ），式（Ｖ），式（ＶＩ）で表される基が挙げられる。ここでメチレン数ｒは１〜６の整数であり，２〜４が好ましく，３が特に好ましい。
Ｒ^３の結合基としては式（ＩＶ）［ｒ＝３］で表されるトリメチレン基が殊更好ましい。

【0043】

一般式（ＩＩＩ）におけるｐ及びｑはそれぞれ独立に１〜３の整数であるが，Ｒ^３の結合基によって規定される。例えば，結合基が式（ＩＶ）で表される基の場合，ｐ＝ｑ＝１であり，結合基が式（Ｖ）で表される基の場合，ｐ＝２，ｑ＝１であり，結合基が式（ＶＩ）で表される基の場合，ｐ＝２，ｑ＝２である。

【0044】

一般式（ＩＩＩ）におけるｂは５〜１１５００程度の整数であり，好ましくは８〜２３００程度の整数であり，更に好ましくは１００〜３００程度の整数である。ポリエチレングリコール構造部分の分子量としては３００〜５０００００程度であり，好ましくは５００〜１０００００程度であり，更に好ましくは１０００〜５００００程度である。なお，本発明における分子量とはＧＰＣ法で測定した重量平均分子量である。

【0045】

一般式（ＩＩＩ）におけるｉは５〜２００の整数，好ましくは５〜９０であり，ｎは０〜２００の整数，好ましくは０〜９０であり，且つ全グルタミン酸数（ｉ＋ｎ）は１０〜３００の整数、好ましくは１０〜１００程度，特に好ましくは１０〜６０程度である。全グルタミン酸数（ｉ＋ｎ）に対するシチジン系代謝拮抗剤の結合したグルタミン酸数（ｉ）の割合は１０〜１００％であり，好ましくは２０〜１００％であり，更に好ましくは４０〜１００％である。
一般式（ＩＩＩ）におけるポリグルタミン酸の各構成部分は，その結合順は限定されず，ブロック型でもランダム型でもよい。

【0046】

本発明のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体の分子量は１０００〜６０００００程度，好ましくは１１００〜１１００００程度，更に好ましくは１５００〜８００００程度である。
本発明のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体中の一般式（Ｉ）あるいは一般式（ＩＩ）の置換基は，１分子中にそれぞれが混在していても一方のみであってもよく，Ｒ^６，Ｒ^７，Ｒ^８の基も１分子中で同一であっても異なっていてもよい。

【0047】

本発明のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体は，水中でポリエチレングリコール構造部分を外殻とし，シチジン系代謝拮抗剤がリンカーを介して結合している疎水性であるポリマーを内殻とするミセルを形成してもよい。

【0048】

本発明のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体の製造について以下に例示するが，製造法がこれらに限定されるわけではない。
まず，前記一般式（Ｉ）あるいは一般式（ＩＩ）で表されるリンカー部分の付いたシチジン系代謝拮抗剤誘導体を製造する。即ち，保護したアミノ基とカルボキシ基を有するコハク酸モノアミド誘導体又は保護したアミノ基とカルボキシ基を有するマレイン酸モノアミド誘導体と，シチジン系代謝拮抗剤とを有機溶媒中，脱水縮合剤を用いてシチジン系代謝拮抗剤の４位アミノ基とアミド結合させ，保護基を脱保護して，アミノ基を有しシチジン系代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミド誘導体又はアミノ基を有しシチジン系代謝拮抗剤が結合したマレイン酸モノアミド誘導体を得る。
次いで，文献に記載又はそれを応用して得られるポリエチレングリコール構造部分とポリグルタミン酸とのブロック共重合体の側鎖カルボキシ基と該誘導体を有機溶媒中，脱水縮合剤を用いてアミド結合させる方法である。

【0049】

より詳細に説明する。例えば，ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）でアミノ基を保護したコハク酸モノアミド誘導体と３’−エチニルシチジンを両者が溶解する有機溶媒，好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ），１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン（ＤＭＩ），Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）等の非プロトン性極性溶媒に溶解し，０〜１８０℃，好ましくは５〜５０℃でジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ），ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ），１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＷＳＣ）塩酸塩，１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキシキノリノン（ＥＥＤＱ），４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴ−ＭＭ），Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロリン酸塩（ＨＢＴＵ），Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロリン酸塩（ＨＡＴＵ），（１−シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ−２−モルホリノ−カルベニウム ヘキサフルオロリン酸塩（ＣＯＭＵ）等の脱水縮合剤を用いた反応に付して，縮合体を得る。反応物から必要により分離精製工程を経てシトシン塩基の４位アミノ基とのアミド結合体を得てもよい。又，脱水縮合剤としてジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）若しくは１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＷＳＣ）塩酸塩，反応補助剤として１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）若しくは１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）の使用，あるいは，１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキシキノリノン（ＥＥＤＱ），４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴ−ＭＭ），（１−シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ−２−モルホリノ−カルベニウム ヘキサフルオロリン酸塩（ＣＯＭＵ）の脱水縮合剤のみの使用により目的とするシトシン塩基の４位アミノ基とのアミド結合体を優先的に製造することが出来，その製造方法が実用上好ましい。更に，シチジン系代謝拮抗剤がカルボキシ基と反応する他の官能基を保護して縮合反応に付し，反応後に適当な段階で脱保護してもよい。
次いで，Ｂｏｃを脱保護し国際公開２００６／１２０９１４号パンフレットに記載の方法によって調製されるメトキシポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体と，前記と同様な溶媒中，前記と同様な脱水縮合剤を用い，必要に応じて反応補助剤を使用してアミド結合させ，本発明のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体とする。

【0050】

本発明のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体は，結合しているシチジン系代謝拮抗剤の薬効に相当する疾患を適応症とする医薬として使用出来る。例えば，抗がん剤，抗ウイルス剤等である。このような用途も本発明に含まれる。該高分子誘導体は，注射剤，錠剤，散剤等の通常使用されている剤型にて使用され得る。製剤化に当たり通常使用されている薬学的に許容される担体，例えば，結合剤，滑沢剤，崩壊剤，溶剤，賦形剤，可溶化剤，分散剤，安定化剤，懸濁化剤，保存剤，無痛化剤，色素，香料等を使用してもよい。

【0051】

本発明のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体は注射剤としての使用が好ましく，通常，例えば，水，生理食塩水，５％ブドウ糖又はマンニトール液，水溶性有機溶媒（例えば，グリセロール，エタノール，ジメチルスルホキシド，Ｎ−メチルピロリドン，ポリエチレングリコール，クレモホール等及びそれらの混合液）並びに水と該水溶性有機溶媒の混合液等に溶解して使用される。

【0052】

本発明のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体の投与量は，そのシチジン系代謝拮抗剤の特性，患者の性別，年齢，生理的状態，適応症，病態等により当然変更され得るが，非経口的に，通常，成人１日当たり，活性成分として０．０１〜５００ｍｇ／ｍ^２，好ましくは０．１〜２５０ｍｇ／ｍ^２を投与する。注射による投与は，静脈，動脈，患部（腫瘍部）等に行われる。
本発明のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体の使用に際し，本発明のシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体に含まれる２以上の化合物を混ぜて使用してもよい。

【実施例】

【0053】

以下，本発明を実施例により更に説明する。ただし，本発明がこれらの実施例に限定されるものではない。なお，実施例中で本発明の化合物が水溶液中でミセル等の粒子を形成する場合，該粒子の大きさ（粒径）は動的光散乱法によるガウス分布分析又は静的光散乱法によるＲＭＳ半径で示し，前者はＺｅｔａＰｏｔｅｎｔｉａｌ／Ｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅｒ ＮＩＣＯＭＰ^ＴＭ ３８０ＺＬＳ（Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ｓｉｚｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製）により，後者はＤＡＷＮ ＥＯＳ^ＴＭ（Ｗｙａｔｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）により測定し算出した。

【0054】

合成例１ Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アスパラギン酸−１−フェニルブチルアミド−４−ベンジルエステル（化合物１）の合成
４．２７ｇのＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アスパラギン酸−４−ベンジルエステル（（株）ペプチド研究所製）と２．１ｍＬの１−フェニルブチルアミンを４０ｍＬのＤＭＦに溶解後，２．７０ｇのＷＳＣ塩酸塩と１．９３ｇのＨＯＢｔを加え，室温にて６時間攪拌した。反応液に水を加え，酢酸エチルにて抽出し，有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し，硫酸マグネシウムで乾燥後，減圧下で酢酸エチルを留去し，次いで真空乾燥して化合物１を３．９４ｇ得た。
ＭＳ：ｍ／ｚ ４７７（Ｍ＋Ｎａ）^＋：Ｃ_２６Ｈ_３４Ｎ_２Ｏ_５（Ｍ＋Ｎａ）^＋としての計算値 ４７７

【0055】

合成例２ Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アスパラギン酸−１−フェニルブチルアミド（化合物２）の合成
合成例１で得られた３．５０ｇの化合物１を酢酸エチル１５ｍＬに溶解し，５％パラジウム炭素（水分含量５０％）０．６５６ｇを加えた後，系内を水素置換し，室温にて一夜攪拌し水素化分解した。５％パラジウム炭素を濾過し，酢酸エチル８０ｍＬで洗浄後，有機層を併せ，減圧下で酢酸エチルを留去し，次いで真空乾燥して化合物２を２．５８ｇ得た。
ＭＳ：ｍ／ｚ ３８７（Ｍ＋Ｎａ）^＋：Ｃ_１９Ｈ_２８Ｎ_２Ｏ_５（Ｍ＋Ｎａ）^＋としての計算値 ３８７

【0056】

合成例３ Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アスパラギン酸−１−フェニルブチルアミド−４−（３’−エチニルシチジン）アミド（化合物３）の合成
合成例２で得られた７５４ｍｇの化合物２，５００ｍｇの３’−エチニルシチジン及び２７５ｍｇのＨＯＢｔを４ｍＬのＤＭＦに溶解後，系内をアルゴン置換し，３５３ｍｇのＷＳＣ塩酸塩を加えて２０℃にて１０時間攪拌した。次いで，３７７ｍｇの化合物２と１７７ｍｇのＷＳＣ塩酸塩を加えて２０℃にて３時間，続いて１７７ｍｇのＷＳＣ塩酸塩を加えて２０℃にて２時間，更に，１８９ｍｇの化合物２と１７７ｍｇのＷＳＣ塩酸塩を加えて２０℃にて２時間攪拌した。反応液に水を加え酢酸エチルにて抽出し，有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液，飽和炭酸水素ナトリウム水溶液，飽和塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後，減圧下で酢酸エチルを留去し，得られた油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ）にて精製し，化合物３を７１６ｍｇ得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６，ｐｐｍ）：１．３５（ｓ，９Ｈ），１．３−１．６（ｍ，４Ｈ），２．５５（ｍ，２Ｈ），２．６−２．７（ｍ，２Ｈ），３．０６（ｍ，２Ｈ），３．１６（ｓ，１Ｈ），３．５４（ｓ，１Ｈ），３．６−３．７（ｍ，２Ｈ），３．９６（ｍ，１Ｈ），４．１４（ｄ，１Ｈ），４．３（ｂｒ，１Ｈ），５．０（ｂｒ，１Ｈ），５．８７（ｄ，１Ｈ），５．９３（ｂｒ，１Ｈ），７．０１（ｄ，１Ｈ），７．１−７．２（ｍ，５Ｈ），７．８０（ｂｒ，１Ｈ），８．３１（ｄ，１Ｈ），１０．８７（ｓ，１Ｈ）
ＭＳ：ｍ／ｚ ６１４（Ｍ＋Ｈ）^＋：Ｃ_２９Ｈ_３７Ｎ_５Ｏ_９（Ｍ＋Ｈ）^＋としての計算値 ６１４

【0057】

合成例４ アスパラギン酸−１−フェニルブチルアミド−４−（３’−エチニルシチジン）アミド（化合物４）の合成
合成例３で得られた８６０ｍｇの化合物３を酢酸エチル３．５ｍＬに溶解後，３．５ｍＬの４Ｎ−ＨＣｌ／ＡｃＯＥｔを加えて室温にて１時間攪拌した。反応終了後，減圧下で酢酸エチルを留去して化合物４を７１０ｍｇ得た。
ＭＳ：ｍ／ｚ ５１４（Ｍ＋Ｈ）^＋：Ｃ_２５Ｈ_３１Ｎ_５Ｏ_７（Ｍ＋Ｈ）^＋としての計算値 ５１４

【0058】

実施例１ 分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール構造部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体と，アスパラギン酸−１−フェニルブチルアミド−４−（３’−エチニルシチジン）アミドとのアミド結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ^１＝メチル基，Ｒ^３＝トリメチレン基，Ｒ^４＝アセチル基，Ｒ^７及びＲ^８＝水素原子，Ｒ^６＝１−フェニルブチル基，ｐ＝ｑ＝１，ｉ＋ｎ＝２１，ｂ＝２７３（化合物５）の合成
国際公開２００６／１２０９１４号パンフレットに記載された方法によって調製した５０３ｍｇのメトキシポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体を９ｍＬのＤＭＦに溶解した。合成例４で得られた６００ｍｇの化合物４，１９７μＬのトリエチルアミン，２２７μＬのＤＩＰＣＩ及び９６ｍｇのＨＯＢｔを加えて，２０℃にて２４時間攪拌した。更に，５５μＬのトリエチルアミンと１１４μＬのＤＩＰＣＩを加えて３時間攪拌後，反応液をエタノール９ｍＬ及びジイソプロピルエーテル７２ｍＬの混合溶液にゆっくり滴下した。室温にて１時間攪拌し，沈析物を濾取してエタノール／ジイソプロピルエーテル（１／８（ｖ／ｖ），２０ｍＬ）で洗浄した。沈析物をアセトニトリル１２ｍＬに溶かし，エタノール１５ｍＬ及びジイソプロピルエーテル９０ｍＬの混合溶液にゆっくり滴下し室温にて１時間攪拌し，沈析物を濾取してエタノール／ジイソプロピルエーテル（１／８（ｖ／ｖ），２０ｍＬ）で洗浄した。沈析物をアセトニトリル１０ｍＬ及び水１０ｍＬに溶解し，イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ^＋），２ｍＬ）を加え攪拌し，樹脂を濾取してアセトニトリル／水（１／１（ｖ／ｖ），３０ｍＬ）にて洗浄した。得られた溶液からアセトニトリルを減圧下留去し，次いで凍結乾燥して化合物５を５８０ｍｇ得た。

【0059】

化合物５に結合した３’−エチニルシチジンの含量は，化合物５に１Ｎ−水酸化ナトリウム水溶液を加えて３７℃で１時間攪拌後，遊離した３’−エチニルシチジンをＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）で分析し，予め３’−エチニルシチジンにより得られた検量線を用いて計算し求めた。その結果，結合した３’−エチニルシチジンの含量は１９．４％（ｗ／ｗ）だった。

【0060】

化合物５の水溶液（１ｍｇ／ｍＬ）を用いてガウス分布分析及び静的光散乱法によるＲＭＳ半径の算出を行ったところ，それぞれ１８ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ），１１ｎｍだった。このことから化合物５は水中でミセルを形成していると考えられる。

【0061】

合成例５ Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アスパラギン酸−１−ブチルアミド−４−ベンジルエステル（化合物６）の合成
４．２７ｇのＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アスパラギン酸−４−ベンジルエステルと１．３１ｍＬのｎ−ブチルアミンを２５ｍＬのＤＭＦに溶解後，２．９３ｇのＷＳＣ塩酸塩と１．９３ｇのＨＯＢｔを加え，室温にて一夜攪拌した。反応液に水を加え，酢酸エチルにて抽出し，有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液，飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し，硫酸マグネシウムで乾燥後，減圧下で酢酸エチルを留去し，次いで真空乾燥して化合物６を５．１２ｇ得た。

【0062】

合成例６ Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アスパラギン酸−１−ブチルアミド（化合物７）の合成
合成例５で得られた５．０９ｇの化合物６を酢酸エチル１５ｍＬに溶解し，５％パラジウム炭素（水分含量５０％）０．６５６ｇを加えた後，系内を水素置換し，室温にて一夜攪拌し水素化分解した。５％パラジウム炭素を濾過し，酢酸エチルで洗浄後，有機層を併せ，減圧下で酢酸エチルを留去し，次いで真空乾燥して化合物７を４．０５ｇ得た。

【0063】

合成例７ Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アスパラギン酸−１−ブチルアミド−４−（３’−エチニルシチジン）アミド（化合物８）の合成
合成例６で得られた５９６ｍｇの化合物７，５００ｍｇの３’−エチニルシチジン及び２７５ｍｇのＨＯＢｔを４ｍＬのＤＭＦに溶解後，系内をアルゴン置換し，３５３ｍｇのＷＳＣ塩酸塩を加えて２０℃にて９時間攪拌した。次いで，２９８ｍｇの化合物７と１７７ｍｇのＷＳＣ塩酸塩を加えて２０℃にて３時間，更に，２９８ｍｇの化合物７と１７７ｍｇのＷＳＣ塩酸塩を加えて２０℃にて３時間攪拌した。反応液に水を加え酢酸エチルにて抽出し，有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液，飽和炭酸水素ナトリウム水溶液，飽和塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄し，硫酸マグネシウムで乾燥後，減圧下で酢酸エチルを留去し，得られた油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ）にて精製し，化合物８を５９０ｍｇ得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６，ｐｐｍ）：０．８５（ｔ，３Ｈ），１．２−１．３（ｍ，４Ｈ），１．３６（ｓ，９Ｈ），２．５−２．７（ｍ，２Ｈ），３．０３（ｍ，２Ｈ），３．５３（ｓ，１Ｈ），３．６−３．７（ｍ，２Ｈ），３．９６（ｍ，１Ｈ），４．１４（ｍ，１Ｈ），４．２８（ｍ，１Ｈ），５．０８（ｍ，１Ｈ），５．８７（ｄ，１Ｈ），５．９２（ｍ，２Ｈ），７．００（ｄ，１Ｈ），７．２０（ｄ，１Ｈ），７．７５（ｍ，１Ｈ），８．３２（ｄ，１Ｈ），１０．８６（ｓ，１Ｈ）
ＭＳ：ｍ／ｚ ５３８（Ｍ＋Ｈ）^＋：Ｃ_２３Ｈ_３３Ｎ_５Ｏ_９（Ｍ＋Ｈ）^＋としての計算値 ５３８

【0064】

合成例８ アスパラギン酸−１−ブチルアミド−４−（３’−エチニルシチジン）アミド（化合物９）の合成
合成例７で得られた５９０ｍｇの化合物８を酢酸エチル３ｍＬに溶解後，２．７ｍＬの４Ｎ−ＨＣｌ／ＡｃＯＥｔを加え室温にて１時間攪拌した。反応終了後，減圧下で酢酸エチルを留去して化合物９を５００ｍｇ得た。
ＭＳ：ｍ／ｚ ４３８（Ｍ＋Ｈ）^＋：Ｃ_１９Ｈ_２７Ｎ_５Ｏ_７（Ｍ＋Ｈ）^＋としての計算値 ４３８

【0065】

実施例２ 分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール構造部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体と，アスパラギン酸−１−ブチルアミド−４−（３’−エチニルシチジン）アミドとのアミド結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ^１＝メチル基，Ｒ^３＝トリメチレン基，Ｒ^４＝アセチル基，Ｒ^７及びＲ^８＝水素原子，Ｒ^６＝１−ブチル基，ｐ＝ｑ＝１，ｉ＋ｎ＝２１，ｂ＝２７３（化合物１０）の合成
国際公開２００６／１２０９１４号パンフレットに記載された方法によって調製した４３８ｍｇのメトキシポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体を８ｍＬのＤＭＦに溶解し，３５℃にて１５分攪拌後，２０℃にて１時間攪拌した。合成例８で得られた４５０ｍｇの化合物９，１７２μＬのトリエチルアミン，１９８μＬのＤＩＰＣＩ及び８４ｍｇのＨＯＢｔを加えて，２０℃にて２４時間攪拌した。更に，４８μＬのトリエチルアミンと９９μＬのＤＩＰＣＩを加えて３時間攪拌後，反応液をエタノール８ｍＬ及びジイソプロピルエーテル６４ｍＬの混合溶液にゆっくり滴下した。室温にて１時間攪拌し，沈析物を濾取してエタノール／ジイソプロピルエーテル（１／８（ｖ／ｖ），１８ｍＬ）で洗浄した。沈析物を１ｍｌのＤＭＦ及び７ｍＬのアセトニトリルの混合溶媒に溶解し，エタノール８ｍＬ及びジイソプロピルエーテル６４ｍＬの混合溶液にゆっくり滴下し，室温にて１時間攪拌し，沈析物を濾取してエタノール／ジイソプロピルエーテル（１／８（ｖ／ｖ），１８ｍＬ）で洗浄した。沈析物をアセトニトリル１３．５ｍＬ及び水４．５ｍＬに溶解後，イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ^＋），５ｍＬ）を加え攪拌し，樹脂を濾取してアセトニトリル／水（１／１（ｖ／ｖ），２５ｍＬ）にて洗浄した。得られた溶液からアセトニトリルを減圧下留去し，次いで凍結乾燥して化合物１０を５６０ｍｇ得た。

【0066】

化合物１０に結合した３’−エチニルシチジンの含量は，実施例１と同様に加水分解後にＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）を用いて分析した。結合した３’−エチニルシチジンの含量は２０．９％（ｗ／ｗ）だった。

【0067】

化合物１０の水溶液（１ｍｇ／ｍＬ）を用いてガウス分布分析を行ったところ，散乱強度が弱く，この濃度で化合物１０は水中でミセルを形成していないと考えられた。

【0068】

合成例９ Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アスパラギン酸−１−アダマンタンメチルアミド−４−ベンジルエステル（化合物１１）の合成
１０．３ｇのＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アスパラギン酸−４−ベンジルエステルと５．１７ｇの１−アダマンタンメチルアミンを１００ｍＬのＤＭＦに溶解後，７．１５ｇｍのＷＳＣ塩酸塩と４．７２ｇのＨＯＢｔを加え，室温にて一夜攪拌した。反応液に水を加え，酢酸エチルにて抽出し，有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し，硫酸マグネシウムで乾燥後，減圧下で酢酸エチルを留去し，次いで真空乾燥して化合物１１を１５．０ｇ得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，ｐｐｍ）：１．４２（ｓ，６Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），１．６１（ｄ，３Ｈ），１．７０（ｄ，３Ｈ），１．９７（ｓ，３Ｈ），２．７１−２．７６（ｍ，１Ｈ），２．９１−２．９６（ｍ，２Ｈ），３．０３（ｄｄ，１Ｈ），４．５０（ｂｒ，１Ｈ），５．１１（ｄ，１Ｈ），５．１６（ｄ，１Ｈ），５．７４（ｂｒ，１Ｈ），６．５６（ｂｒ，１Ｈ），７．３８−７．３１（ｍ，５Ｈ）
ＭＳ：ｍ／ｚ ４９３（Ｍ＋Ｎａ）^＋：Ｃ_２７Ｈ_３８Ｎ_２Ｏ_５（Ｍ＋Ｎａ）^＋としての計算値 ４９３

【0069】

合成例１０ Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アスパラギン酸−１−アダマンタンメチルアミド（化合物１２）の合成
合成例９で得られた１５．０ｇの化合物１１を酢酸エチル７５ｍＬに溶解し，１０％パラジウム炭素（水分含量５０％）１．５ｇを加えた後，系内を水素置換し，室温にて２日間攪拌し水素化分解した。１０％パラジウム炭素を濾過し，酢酸エチル２０ｍＬで洗浄後，有機層を併せ，減圧下で酢酸エチルを留去し，次いで真空乾燥して化合物１２を９．２２ｇ得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，ｐｐｍ）：１．４６（ｓ，１５Ｈ），１．６１（ｄ，３Ｈ），１．７０（ｄ，３Ｈ），１．９６（ｓ，３Ｈ），２．７１−２．７７（ｍ，１Ｈ），２．８９−３．０６（ｍ，３Ｈ）４．４９（ｂｒ，１Ｈ），５．７６（ｂｒ，１Ｈ），６．７７（ｂｒ，１Ｈ）
ＭＳ：ｍ／ｚ ４０３（Ｍ＋Ｎａ）^＋：Ｃ_２０Ｈ_３２Ｎ_２Ｏ_５（Ｍ＋Ｎａ）^＋としての計算値 ４０３

【0070】

合成例１１ Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アスパラギン酸−１−アダマンタンメチルアミド−４−（３’−エチニルシチジン）アミド（化合物１３）の合成
合成例１０で得られた１．８８ｇの化合物１２，１．１０ｇの３’−エチニルシチジン及び６５８ｍｇのＨＯＢｔを２０ｍＬのＤＭＦに溶解後，凍結脱気を行った。９１４ｍｇのＷＳＣ塩酸塩を加えて２０℃にて９時間攪拌した。次いで，３１３ｍｇの化合物１２と１４１ｍｇのＷＳＣ塩酸塩を加えて２０℃にて２時間攪拌した。反応液に水を加え，酢酸エチルにて抽出し，有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液，飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し，硫酸マグネシウムで乾燥後，減圧下で酢酸エチルを留去し，得られた油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ_３／ｎ−Ｈｅｘａｎｅ）にて精製し，化合物１３を１．４７ｇ得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，ｐｐｍ）：１．４１（ｓ，９Ｈ），１．４５（ｓ，６Ｈ），１．５８（ｄ，３Ｈ），１．６７（ｄ，３Ｈ），１．９３（ｓ，３Ｈ），２．６４（ｂｒ，２Ｈ），２．９２−３．２２（ｍ，５Ｈ），４．００（ｂｒ，１Ｈ），４．３０（ｂｒ，１Ｈ），４．４９（ｂｒ，１Ｈ），４．６８（ｂｒ，１Ｈ），５．１８（ｂｒ，１Ｈ），５．８５（ｂｒ，１Ｈ），５．２６（ｂｒ，１Ｈ），７．０１（ｂｒ，１Ｈ），７．４５（ｂｒ，１Ｈ），７．７１（ｂｒ，１Ｈ），８．２２（ｂｒ，１Ｈ），１０．５（ｂｒ，１Ｈ）
ＭＳ：ｍ／ｚ ６３０（Ｍ＋Ｈ）^＋：Ｃ_３１Ｈ_４３Ｎ_５Ｏ_９（Ｍ＋Ｈ）^＋としての計算値 ６３０

【0071】

合成例１２ アスパラギン酸−１−アダマンタンメチルアミド−４−（３’−エチニルシチジン）アミド（化合物１４）の合成
合成例１１で得られた１．４７ｇの化合物１３を酢酸エチル６ｍＬに溶解後，６ｍＬの４Ｎ−ＨＣｌ／ＡｃＯＥｔを加えて室温にて１時間攪拌した。反応終了後，減圧下で酢酸エチルを留去し，次いで真空乾燥して化合物１４を１．２０ｇ得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ，ｐｐｍ）：１．５７（ｓ，６Ｈ），１．７０（ｂｒ，３Ｈ），１．７９（ｂｒ，３Ｈ），２．００（ｓ，３Ｈ），２．８２（ｂｒ，２Ｈ），３．１５−３．２０（ｍ，５Ｈ），４．０５（ｂｒ，１Ｈ），４．２２（ｂｒ，１Ｈ），４．３６（ｂｒ，１Ｈ），６．０４（ｂｒ，１Ｈ），７．３７（ｂｒ，１Ｈ），８．６０（ｂｒ，１Ｈ）
ＭＳ：ｍ／ｚ ５３０（Ｍ＋Ｈ）^＋：Ｃ_２６Ｈ_３５Ｎ_５Ｏ_７（Ｍ＋Ｈ）^＋としての計算値 ５３０

【0072】

実施例３ 分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール構造部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体と，アスパラギン酸−１−アダマンタンメチルアミド−４−（３’−エチニルシチジン）アミドとのアミド結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ^１＝メチル基，Ｒ^３＝トリメチレン基，Ｒ^４＝アセチル基，Ｒ^７及びＲ^８＝水素原子，Ｒ^６＝１−アダマンチルメチル基，ｐ＝ｑ＝１，ｉ＋ｎ＝２１，ｂ＝２７３（化合物１５）の合成
国際公開２００６／１２０９１４号パンフレットに記載された方法によって調製した４８９ｍｇのメトキシポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体を１０ｍＬのＤＭＦに溶解した。合成例１２で得られた６００ｍｇの化合物１４，１９２μＬのトリエチルアミン，２２１μＬのＤＩＰＣＩ及び９４．０ｍｇのＨＯＢｔを加えて，２０℃にて１９時間攪拌した。更に，５３μＬのトリエチルアミンと５５μＬのＤＩＰＣＩを加えて４時間攪拌後，反応液をエタノール１０ｍＬ及びジイソプロピルエーテル９０ｍＬの混合溶液にゆっくり滴下した。室温にて１時間攪拌し，沈析物を濾取してエタノール／ジイソプロピルエーテル（１／９（ｖ／ｖ），１０ｍＬ）で洗浄した。沈析物を８ｍＬのＤＭＦに溶かし，エタノール１０ｍＬ及びジイソプロピルエーテル９０ｍＬの混合溶液にゆっくり滴下し，室温にて１時間攪拌し，沈析物を濾取してエタノール／ジイソプロピルエーテル（１／９（ｖ／ｖ），４ｍＬ）で洗浄した。沈析物をアセトニトリル１０ｍＬ及び水１０ｍＬに溶解後，イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ^＋），１ｍＬ）を加え攪拌し，樹脂を濾取してアセトニトリル／水（１／１（ｖ／ｖ），１０ｍＬ）にて洗浄した。得られた溶液からアセトニトリルを減圧下留去し，次いで凍結乾燥することにより化合物１５を７７５ｍｇ得た。

【0073】

化合物１５に結合した３’−エチニルシチジンの含量は，実施例１と同様に加水分解後にＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）を用いて分析し計算した。結合した３’−エチニルシチジンの含量は１９．５％（ｗ／ｗ）だった。

【0074】

化合物１５の水溶液（１ｍｇ／ｍＬ）を用いてガウス分布分析及び静的光散乱法によるＲＭＳ半径の算出を行ったところ，それぞれ２０ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ），１３ｎｍだった。よって，化合物１５は水中でミセルを形成しているものと考えられた。

【0075】

合成例１３ フェニルアラニンフェニルブチルエステル（化合物１６）の合成
５．０３ｇのフェニルアラニンと２２．８ｇの４−フェニル−１−ブタノールを１，４−ジオキサン１７ｍＬ中に加え，１７ｍＬの４Ｎ−ＨＣｌ／１，４−ｄｉｏｘａｎｅを加えて室温にて４日間攪拌した。濾過をして濾液にジエチルエーテル４５０ｍＬを加えて室温にて１．５時間攪拌した。沈析物を濾取し，ジエチルエーテル５０ｍＬで洗浄後，真空乾燥して化合物１６を５．９０ｇ得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，ｐｐｍ）：１．４４−１．５５（ｍ，４Ｈ），２．５３（ｔ，２Ｈ），３．３１（ｄｄ，２Ｈ），３．４４（ｄｄ，２Ｈ），４．０５（ｔ，２Ｈ），４．４４（ｄｄ，１Ｈ），７．１１−７．２９（ｍ，１０Ｈ），８．７４（ｂｒ，２Ｈ）
ＭＳ：ｍ／ｚ ２９８（Ｍ＋Ｈ）^＋：Ｃ_１９Ｈ_２３ＮＯ_２（Ｍ＋Ｈ）^＋としての計算値 ２９８

【0076】

合成例１４ Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アスパラギン酸−１−フェニルアラニン−（４−フェニルブチルエステル）アミド−４−ベンジルエステル（化合物１７）の合成
２．０８ｇのＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アスパラギン酸−４−ベンジルエステルと合成例１３で得られた２．１８ｇの化合物１６を２０ｍＬのＤＭＦに溶解後，１．４３ｇのＷＳＣ塩酸塩と０．９４３ｇのＨＯＢｔを加えて，室温にて一夜攪拌した。反応液に水を加え，酢酸エチルにて抽出し，有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し，硫酸マグネシウムで乾燥後，減圧下で酢酸エチルを留去し、次いで真空乾燥して化合物１７を１．１８ｇ得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，ｐｐｍ）：１．４２（ｓ，６Ｈ），１．５７−１．６１（ｍ，４Ｈ），２．６０（ｔ，２Ｈ），２．６９（ｄｄ，１Ｈ），３．０２−３．０８（ｍ，３Ｈ），４．０４−４．１３（ｍ，２Ｈ），４．５２（ｂｒ，１Ｈ），４．７８（ｄｄ，１Ｈ），５．１１（ｄ，１Ｈ），５．１４（ｄ，１Ｈ），５．６２（ｂｒ，１Ｈ），６．９５（ｂｒ，１Ｈ），７．１２−７．３８（ｍ，１５Ｈ）
ＭＳ：ｍ／ｚ ６２５（Ｍ＋Ｎａ）^＋：Ｃ_３５Ｈ_４２Ｎ_２Ｏ_７（Ｍ＋Ｎａ）^＋としての計算値 ６２５

【0077】

合成例１５ Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アスパラギン酸−１−フェニルアラニン−（４−フェニルブチルエステル）アミド（化合物１８）の合成
合成例１４で得られた１．１８ｇの化合物１７を酢酸エチル５ｍＬに溶解し，１０％パラジウム炭素（水分含量５０％）０．１１８ｇを加えた後，系内を水素置換し，室温にて一夜攪拌した。１０％パラジウム炭素を濾過し，酢酸エチル２０ｍＬで洗浄後，有機層を併せ，減圧下で酢酸エチルを留去し，次いで真空乾燥して化合物１８を１．１８ｇ得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，ｐｐｍ）：１．４２（ｓ，１９Ｈ），１．５８（ｍ，４Ｈ），２．６０（ｔ，２Ｈ），２．７０（ｄｄ，１Ｈ），２．９８−３．０９（ｍ，３Ｈ），４．０３−４．１２（ｍ，２Ｈ），４．５２（ｂｒ，１Ｈ），４．７９（ｄｄ，１Ｈ），５．６１（ｄ，１Ｈ），７．０６−７．３８（ｍ，１１Ｈ）
ＭＳ：ｍ／ｚ ５３５（Ｍ＋Ｎａ）^＋：Ｃ_２８Ｈ_３６Ｎ_２Ｏ_７（Ｍ＋Ｎａ）^＋としての計算値 ５３５

【0078】

合成例１６ Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アスパラギン酸−１−フェニルアラニン−（４−フェニルブチルエステル）−４−（３’−エチニルシチジン）アミド（化合物１９）の合成
合成例１５で得られた２００ｍｇの化合物１８，８７．０ｍｇの３’−エチニルシチジン及び５５．０ｍｇのＨＯＢｔを２ｍＬのＤＭＦに溶解後，凍結脱気を行った。次いで，７０．６ｍｇのＷＳＣ塩酸塩を加えて２０℃にて６時間攪拌した。続いて，３５．３ｍｇのＷＳＣ塩酸塩を加え，２０℃にて２時間攪拌した。反応液に水を加え，酢酸エチルにて抽出し，有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液，飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し，硫酸マグネシウムで乾燥後，減圧下で酢酸エチルを留去し，得られた油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ_３／ｎ−Ｈｅｘａｎｅ）にて精製し，化合物１９を１５５ｍｇ得た。
ＭＳ：ｍ／ｚ ７８４（Ｍ＋Ｎａ）^＋：Ｃ_３９Ｈ_４７Ｎ_５Ｏ_１１（Ｍ＋Ｎａ）^＋としての計算値 ７８４

【0079】

合成例１７ アスパラギン酸−１−フェニルアラニン−（４−フェニルブチルエステル）−４−（３’−エチニルシチジン）アミド（化合物２０）の合成
合成例１６で得られた１５５ｍｇの化合物１９を酢酸エチル１ｍＬに溶解後，５１０μＬの４Ｎ−ＨＣｌ／ＡｃＯＥｔを加えて室温にて１時間攪拌した。反応終了後，減圧下で酢酸エチルを留去し，次いで真空乾燥して化合物２０を１０５ｍｇ得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６，ｐｐｍ）：１．５１（ｓ，４Ｈ），２．２２−２．２４（ｍ，３Ｈ），２．７８−３．０７（ｍ，４Ｈ），３．３１−４．１８（ｍ，６Ｈ），４．５０（ｓ，１Ｈ），５．８３（ｄ，１Ｈ），５．８９（ｄ，１Ｈ），６．２８（ｂｒ，１Ｈ），７．１９−７．２６（ｍ，１１Ｈ），８．３４（ｂｒ，２Ｈ），８．９４（ｓ，１Ｈ），９．０９（ｂｒ，２Ｈ），１０．１（ｂｒ，１Ｈ），１１．３（ｂｒ，１Ｈ）
ＭＳ：ｍ／ｚ ６８４（Ｍ＋Ｎａ）^＋：Ｃ_３４Ｈ_３９Ｎ_５Ｏ_９（Ｍ＋Ｎａ）^＋としての計算値 ６８４

【0080】

実施例４ 分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール構造部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体と，アスパラギン酸−１−フェニルアラニン−（４−フェニルブチルエステル）−４−（３’−エチニルシチジン）アミドとのアミド結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ^１＝メチル基，Ｒ^３＝トリメチレン基，Ｒ^４＝アセチル基，Ｒ^７及びＲ^８＝水素原子，Ｒ^６＝１−フェニルアラニン−４−フェニルブチルエステル基，ｐ＝ｑ＝１，ｉ＋ｎ＝２１，ｂ＝２７３（化合物２１）の合成
国際公開２００６／１２０９１４号パンフレットに記載された方法によって調製した６６ｍｇのメトキシポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体を２ｍＬのＤＭＦに溶解した。合成例１７で得られた１００ｍｇの化合物２０，２３μＬのトリエチルアミン，３９μＬのＤＩＰＣＩ及び１３ｍｇのＨＯＢｔを加えて２０℃にて４時間攪拌した。更に，１９μＬのトリエチルアミンと２０μＬのＤＩＰＣＩを加えて１６時間攪拌後，反応液をエタノール４ｍＬ及びジイソプロピルエーテル３６ｍＬの混合溶液にゆっくり滴下した。室温にて０．５時間攪拌し，沈析物を濾取してエタノール／ジイソプロピルエーテル（１／９（ｖ／ｖ），４ｍＬ）で洗浄した。沈析物を少量のＤＭＦに溶かし，酢酸エチル４ｍＬ及びジイソプロピルエーテル２４ｍＬの混合溶液にゆっくり滴下し室温にて３時間攪拌し，沈析物を濾取して酢酸エチル／ジイソプロピルエーテル（１／６（ｖ／ｖ），４ｍＬ）で洗浄した。沈析物をアセトニトリル２．５ｍＬ及び水２．５ｍＬに溶解後，イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ^＋），０．５ｍＬ）を加え攪拌し，樹脂を濾取してアセトニトリル／水（１／１（ｖ／ｖ），３ｍＬ）にて洗浄した。得られた溶液からアセトニトリルを減圧下留去し，次いで凍結乾燥して化合物２１を３６．５ｍｇ得た。

【0081】

化合物２１に結合した３’−エチニルシチジンの含量は，実施例１と同様に加水分解後にＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）を用いて分析し計算した。結合した３’−エチニルシチジンの含量は２２．５％（ｗ／ｗ）だった。

【0082】

化合物２１の水溶液（１ｍｇ／ｍＬ）を用いてガウス分布分析及び静的光散乱法によるＲＭＳ半径の算出を行ったところ，それぞれ４１ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ），４０ｎｍだった。よって，化合物２１は水中でミセルを形成しているものと考えられた。

【0083】

実施例５ 分子量５０００の二本のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体と，アスパラギン酸−１−アダマンタンメチルアミド−４−（３’−エチニルシチジン）アミドとのアミド結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ^１＝メチル基，Ｒ^３＝式（Ｖ）の結合基，ｒ＝３，Ｒ^４＝アセチル基，Ｒ^７及びＲ^８＝水素原子，Ｒ^６＝１−アダマンチルメチル基，ｉ＋ｎ＝２１，ｂ＝１１４（化合物２２）の合成
国際公開２００６／１２０９１４号パンフレットに記載された方法を応用して（メトキシポリエチレングリコール）_２アミン（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ ＧＬ２−１００ＰＡ；日油（株）製）から調製した４１３ｍｇの（メトキシポリエチレングリコール）_２−ポリグルタミン酸ブロック共重合体を８．３ｍＬのＤＭＦに溶解した。次いで，合成例１２で得られた５７０ｍｇの化合物１４，１８３μＬのトリエチルアミン，２１０μＬのＤＩＰＣＩ及び８９ｍｇのＨＯＢｔを加えて，２０℃にて１７時間攪拌した。更に，５１μＬのトリエチルアミンと１０５μＬのＤＩＰＣＩを加えて３時間攪拌後，反応液をエタノール１０ｍＬ及びジイソプロピルエーテル９０ｍＬの混合溶液にゆっくり滴下した。室温にて０．５時間攪拌し，沈析物を濾取してエタノール／ジイソプロピルエーテル（１／９（ｖ／ｖ），１０ｍＬ）で洗浄した。沈析物を８ｍＬのＤＭＦに溶かし，エタノール１０ｍＬ及びジイソプロピルエーテル９０ｍＬの混合溶液にゆっくり滴下し，室温にて０．５時間攪拌し，沈析物を濾取してエタノール／ジイソプロピルエーテル（１／９（ｖ／ｖ），４ｍＬ）で洗浄した。沈析物をアセトニトリル３５ｍＬ及び水１７．５ｍＬに溶解し，イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ^＋），５ｍＬ）を加え攪拌し，樹脂を濾取してアセトニトリル／水（１／１（ｖ／ｖ），１０ｍＬ×２）にて洗浄した。得られた溶液からアセトニトリルを減圧下留去し，次いで凍結乾燥することにより化合物２２を６８５ｍｇ得た。

【0084】

化合物２２に結合した３’−エチニルシチジンの含量は，実施例１と同様に加水分解後，ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）を用いて分析し計算した。結合した３’−エチニルシチジンの含量は２０．２％（ｗ／ｗ）だった。

【0085】

化合物２２の水溶液（１ｍｇ／ｍＬ）を用いてガウス分布分析及び静的光散乱法によるＲＭＳ半径の算出を行ったところ，それぞれ１４ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ），８ｎｍだった。よって，化合物２２は水中でミセルを形成しているものと考えられた。

【0086】

試験例１ ３’−エチニルシチジン高分子誘導体の酵素非存在下での薬剤放出
化合物５，化合物１０，化合物１５，化合物２１及び化合物２２と，比較化合物として国際公開第２００６／１２０９１４号パンフレット記載の方法で作成したポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体に３’−エチニルシチジン誘導体が結合しているＰＥＧ−Ｇｌｕ−ＥＣｙｄ，ポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体に３’−エチニルシチジンとフェニルアラニンベンジルエステルが結合しているＰＥＧ−Ｇｌｕ−（ＥＣｙｄ，ＰｈｅＯＢｚｌ）をそれぞれＰＢＳ溶液（リン酸緩衝生理食塩水；ｐＨ７．４）に１ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解し，３７℃にてインキュベートした。各高分子誘導体から放出された３’−エチニルシチジンを，ＨＰＬＣを用いて定量した。定量値と高分子誘導体の薬剤含有量から求めた高分子誘導体中の全薬剤量との比を図１〜図３に示した。

【0087】

図１，図２及び図３から明らかなように，本発明の高分子誘導体（化合物５，化合物１０，化合物１５，化合物２１及び化合物２２）は加水分解酵素が存在しなくても３’−エチニルシチジンを放出し，アスパラギン酸に結合しているＲ^６の置換基によって放出速度を大きく変化させることが出来，比較化合物に比べて放出速度は同等以上であった。特に化合物５及び化合物１０は，ＰＥＧ−Ｇｌｕ−ＥＣｙｄよりも十分速く３’−エチニルシチジンを放出することが出来た。一方，比較化合物は，ブロック共重合体にコハク酸モノアミド構造部分を持たないことから放出速度を速くすることが出来ない。これらの結果は，本発明の高分子結合体が薬剤放出速度の調整能に優れていることを示している。

【0088】

試験例２ ３’−エチニルシチジン誘導体の抗腫瘍活性試験
ラット皮下で継代しているヒト肺癌ＬＣ−１１−ＪＣＫを約２ｍｍ角のブロックにし，套管針を用いてＦ３４４ヌードラットの背側部皮下に移植した。腫瘍移植後１３日目から本発明の高分子誘導体（化合物５，化合物１０）を表１に示す投与量で静脈内に単回投与した。又，対照薬（３’−エチニルシチジン；ＥＣｙｄ）は，Ａｌｚｅｔ ｐｕｍｐを用い２４時間かけて皮下にｉｎｆｕｓｉｏｎ投与した。なお，各化合物は５％ブドウ糖溶液で溶解して使用した。投与量は，体重変動が最大減少率１０％程度までを最大投与量として，その投与量より投与を行った。

【0089】

投与開始日及び投与開始後２３日目の腫瘍体積を，腫瘍の長径（Ｌｍｍ）及び短径（Ｗｍｍ）をノギスで計測し，腫瘍体積を（ＬｘＷ^２）／２により計算して無処置群（コントロール）の腫瘍体積に対する相対腫瘍体積比として表１に示した。

【0090】

【表1】

【0091】

この結果，本発明の高分子誘導体である化合物５，化合物１０は，対照薬である３’−エチニルシチジンと比較して，体重変動が最大減少率１０％程度以下の最大投与量において強い抗腫瘍効果を示し，且つその半量で対照薬の最大投与量と同等の効果を有することを示した。

【図1】

【図2】

【図3】