特許 5856963 ２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶及び２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶含有粉末とそれらの製造方法並びに用途

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5856963

(24)【登録日】2015年12月18日

(45)【発行日】2016年2月10日

(54)【発明の名称】２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶及び２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶含有粉末とそれらの製造方法並びに用途

(51)【国際特許分類】

   C07H 17/04 20060101AFI20160128BHJP

   A61K 31/7048 20060101ALI20160128BHJP

   A61P 17/16 20060101ALI20160128BHJP

   A61K 8/67 20060101ALI20160128BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20160128BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20160128BHJP

【ＦＩ】

   C07H17/04CSP

   A61K31/7048

   A61P17/16

   A61K8/67

   A61Q19/00

   A61K47/22

【請求項の数】10

【全頁数】17

(21)【出願番号】特願2012-533051(P2012-533051)

(86)(22)【出願日】2011年9月6日

(86)【国際出願番号】JP2011070681

(87)【国際公開番号】WO2012033218

(87)【国際公開日】20120315

【審査請求日】2014年7月29日

(31)【優先権主張番号】特願2010-199898(P2010-199898)

(32)【優先日】2010年9月7日

(33)【優先権主張国】JP

(73)【特許権者】

【識別番号】397077760

【氏名又は名称】株式会社林原

(74)【代理人】

【識別番号】100108486

【弁理士】

【氏名又は名称】須磨 光夫

(72)【発明者】

【氏名】渋谷 孝

(72)【発明者】

【氏名】伊澤 精祐

(72)【発明者】

【氏名】福田 恵温

【審査官】 三木 寛

(56)【参考文献】

【文献】 特開平０３−１３５９９２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２００７／０８６３２７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００６／０３３４１２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００５／０３４９３８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特開２００４−２１７５９７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０８−３３３２６０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０４−１８２４１５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０４−１８２４１３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００２−０８８０９５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０５−２０８９９１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０５−１１７２９０（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｈ １７／０４

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

Ｘ線源としてＣｕＫα線を用いて得られる粉末Ｘ線回折図において、少なくとも、回折角（２θ）６．１°、９．２°、１０．６°、１１．４°及び１２．１°に回折ピークを示し結晶水を含有する、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶。

【請求項2】

２．７質量％の結晶水を含む請求項１記載の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶。

【請求項3】

示差走査熱量分析において、１５６℃付近に吸熱ピークを示す請求項１又は２に記載の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶。

【請求項4】

請求項１乃至３のいずれかに記載の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶を含んでなり、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸純度が無水物換算で８５質量％以上である２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶含有粉末。

【請求項5】

２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸無水結晶が共存する過飽和の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含有水溶液から水を蒸発させることにより請求項１乃至３のいずれかに記載の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶を晶出させ、これを採取することを特徴とする請求項１乃至３のいずれかに記載の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶の製造方法。

【請求項6】

２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含有水溶液に、請求項１乃至３のいずれかに記載の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶を種晶として添加することにより、請求項１乃至３のいずれかに記載の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶を晶出させ、これを採取することを特徴とする請求項１乃至３のいずれかに記載の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶の製造方法。

【請求項7】

非晶質の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸粉末に対し、種晶として請求項１乃至３のいずれかに記載の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶を共存させ、温度２５℃、相対湿度９０％に保持することにより請求項１乃至３のいずれかに記載の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶を晶出させ、これを採取することを特徴とする請求項１乃至３のいずれかに記載の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶の製造方法。

【請求項8】

請求項１乃至３のいずれかに記載の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶又は請求項４記載の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶含有粉末からなる賦形剤。

【請求項9】

請求項１乃至３のいずれかに記載の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶又は請求項４記載の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶含有粉末からなる油性物質の粉末化基材。

【請求項10】

請求項１乃至３のいずれかに記載の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶又は請求項４記載の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶含有粉末を配合することを特徴とする食品、化粧品、医薬部外品又は医薬品の製造方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶及び２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸含水結晶含有粉末とそれらの製造方法並びに用途に関する。

【背景技術】

【0002】

２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸（別名：アスコルビン酸２−グルコシド、以下、本明細書では「ＡＡ−２Ｇ」と略称する。）は、Ｌ−アスコルビン酸（ビタミンＣ）分子の２位水酸基に１分子のＤ−グルコースがα−グルコシド結合を介して結合した化合物である。ＡＡ−２Ｇは、Ｌ−アスコルビン酸とは異なり、非還元性であり、安定性に優れることから「安定型ビタミンＣ」とも呼ばれている。また、ＡＡ−２Ｇは、生体内では酵素により容易にＬ−アスコルビン酸とＤ−グルコースとに加水分解され、Ｌ−アスコルビン酸が本来的に有する生理活性を発揮する。

【0003】

ＡＡ−２Ｇは、澱粉質とＬ−アスコルビン酸とを含む溶液にシクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼ（以下、本明細書では「ＣＧＴａｓｅ」と略称する。）を作用させ、さらにグルコアミラーゼを作用させることにより工業的規模で製造されており（例えば、特開平３−１３９２８８号公報、特開平３−１３５９９２号公報、特開平３−１８３４９２号公報、特開平５−１１７２９０号公報、特開平５−２０８９９１号公報、国際公開ＷＯ０１０９０３３８号パンフレット、特開２００２−０８８０９５号公報、国際公開ＷＯ０２０１０３６１号パンフレット、特開２００４−０６５０９８号公報参照）、ＡＡ−２Ｇ純度９８質量％以上の無水結晶含有粉末が、株式会社林原生物化学研究所より登録商標『ＡＡ２Ｇ』として化粧品・医薬部外品素材向けに、また、株式会社林原商事より商品名『アスコフレッシュ』として食品素材向けに、それぞれ市販されている。ＡＡ−２Ｇは主に美白成分などとして化粧品、医薬部外品などの分野において汎用されている（例えば、国際公開ＷＯ０５０８７１８２号パンフレット、特開平４−０４６１１２号公報、特開平４−１８２４１２号公報、特開平４−１８２４１３号公報、特開平４−１８２４１９号公報、特開平４−１８２４１５号公報、特開平４−１８２４１４号公報、特開平８−３３３２６０号公報、特開２００５−２３９６５３号公報、国際公開ＷＯ０６０３３４１２号パンフレット、特開２００２−３２６９２４号公報、特開２００３−１７１２９０号公報、特開２００４−２１７５９７号公報、国際公開ＷＯ０５０３４９３８号パンフレット、特開２００６−２２５３２７号公報、国際公開ＷＯ０６１３７１２９号パンフレット、国際公開ＷＯ０６０２２１７４号パンフレット、特開２００７−０６３１７７号公報、国際公開ＷＯ０６１３２３１０号パンフレット、国際公開ＷＯ０７０８６３２７号パンフレット参照）。

【0004】

ところで、ＡＡ−２Ｇ無水結晶については単結晶のＸ線構造解析によってその絶対構造が解明されている（マンダイ・タカヒコら、『カーボハイドレート・リサーチ』（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、第２３２巻、１９７〜２０５頁（１９９２年）を参照）ものの、ＡＡ−２Ｇの結晶形態としては無水結晶のみが知られており、それ以外の結晶は知られていない。

【発明の開示】

【0005】

本発明は、新規なＡＡ−２Ｇ結晶とその製造方法並びに用途を提供することを課題とする。

【0006】

本発明者らは、ＡＡ−２Ｇの結晶化条件を種々検討する過程において、意外にも、特定の条件下においてＡＡ−２Ｇ無水結晶の析出とともに無水結晶とは外観の異なる結晶が析出することを見出した。当該結晶を採取し、粉末Ｘ線回折法に供したところ、従来のＡＡ−２Ｇ無水結晶とは異なる粉末Ｘ線回折図を示したことから、当該結晶は従来知られていないＡＡ−２Ｇの新規な結晶であることが判明した。さらに、当該結晶は、一定量の結晶水を含むことから含水結晶であることも判明した。そして、本発明者らは、この新規なＡＡ−２Ｇ含水結晶の物性を明らかにするとともに、ＡＡ−２Ｇ含水結晶及びＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末とそれらの製造方法、並びに賦形剤及び油性物質の粉末化基材としての用途を確立して本発明を完成した。

【0007】

すなわち、本発明は、ＡＡ−２Ｇ含水結晶及びＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末とそれらの製造方法並びに用途を提供することすることにより上記課題を解決するものである。

【0008】

本発明によれば、新規なＡＡ−２Ｇ含水結晶及びＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末をＡＡ−２Ｇ含有水溶液から大量に製造することができる。また、当該ＡＡ−２Ｇ含水結晶及びＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末は、賦形性に優れ、顆粒、錠剤などの成形物の製造に有利に用いることができ、さらに親油性が高いことから油性物質の粉末化基材として有用である。

【図面の簡単な説明】

【0009】

【図1】新規なＡＡ−２Ｇ結晶の顕微鏡写真（倍率：１，２５０倍）である。

【図2】新規なＡＡ−２Ｇ結晶の粉末Ｘ線回折図である。

【図3】試薬級ＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末の粉末Ｘ線回折図である。

【図4】本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶の示差走査熱量分析（ＤＳＣ分析）における吸熱パターンをＡＡ−２Ｇ無水結晶のそれと比較した図である。

【符号の説明】

【0010】

図２において、
↓：新規なＡＡ−２Ｇ結晶に特徴的な回折ピーク
ａ：回折角６．１°の回折ピーク
ｂ：回折角９．２°の回折ピーク
ｃ：回折角１０．６°の回折ピーク
ｄ：回折角１１．４°の回折ピーク
ｅ：回折角１２．１°の回折ピーク
図４において、
Ａ：本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶のＤＳＣ分析における吸熱パターン
Ｂ：ＡＡ−２Ｇ無水結晶のＤＳＣ分析における吸熱パターン

【発明を実施するための最良の形態】

【0011】

本発明は、新規なＡＡ−２Ｇ含水結晶に関するものである。本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶は、後述する実験において示すとおり、Ｘ線源としてＣｕＫα線を用いた粉末Ｘ線回折法に供して得られる粉末Ｘ線回折図において、少なくとも、回折角（２θ）６．１°、９．２°、１０．６°、１１．４°及び１２．１°に、従来公知のＡＡ−２Ｇ無水結晶の粉末Ｘ線回折図に認められない特徴的な回折ピークを示すことを特徴とする。

【0012】

また、本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶は、後述する実験において示すとおり、熱重量分析（ＴＧ分析）したとき、約２．７質量％の結晶水含量を示すことを特徴とする。因みに、この結晶水含量の値は、本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶が１分子のＡＡ−２Ｇに対して１／２分子の結晶水を有する１／２含水結晶、すなわち、Ｃ_１２Ｈ_１８Ｏ_１１・１／２Ｈ_２Ｏであると仮定した場合の結晶水含量の理論値である２．６６質量％と極めてよく一致している。

【0013】

また、本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶は、同じく後述する実験において示すとおり、示差走査熱量分析（ＤＳＣ分析）において、１５６℃付近に吸熱ピークを示すことを特徴とし、同分析において１７６℃付近に単一の吸熱ピークを示す従来公知のＡＡ−２Ｇ無水結晶とは明瞭に区別することができる。

【0014】

ＡＡ−２Ｇ含水結晶は、上記の特徴を有する限り本発明に包含され、特定の製造方法によって製造されたものに限定されるものではない。

【0015】

また、本発明は、新規なＡＡ−２Ｇ含水結晶の製造方法を提供する発明でもある。ＡＡ−２Ｇ含水結晶の原料となるＡＡ−２Ｇの由来は問わず、有機合成によって得られるものであってもよいが、一般的には従来公知の食品素材、化粧品素材向けＡＡ−２Ｇの製造方法、すなわち、澱粉質とＬ−アスコルビン酸にＣＧＴａｓｅを作用させ、さらにグルコアミラーゼを作用させる方法によって得られるＡＡ−２Ｇ高含有溶液又はこれから調製されたＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末を用いるのが好適である。なお、本発明はＡＡ−２Ｇ自体の製造方法に係るものではないことから、以下に概略を記載するにとどめる（詳細は特開平３−１３９２８８号公報、特開平３−１３５９９２号公報、特開平３−１８３４９２号公報を参照）。

【0016】

例えば、従来のＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末の製造方法は、基本的に、以下の（１）乃至（５）の工程を含んでいる：
（１）澱粉質とＬ−アスコルビン酸とを含む溶液にＣＧＴａｓｅを作用させてＡＡ−２Ｇとともに２−Ｏ−α−マルトシル−Ｌ−アスコルビン酸、２−Ｏ−α−マルトトリオシル−Ｌ−アスコルビン酸、２−Ｏ−α−マルトテトラオシル−Ｌ−アスコルビン酸などの２−Ｏ−α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸を生成させる糖転移反応工程；
（２）得られる２−Ｏ−α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸含有溶液にグルコアミラーゼを作用させて２−Ｏ−α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸をＡＡ−２Ｇとグルコースにまで、また、夾雑するマルトオリゴ糖をグルコースにまで分解し、ＡＡ−２Ｇ含量を高めるグルコアミラーゼ処理工程；
（３）陰イオン交換樹脂にＡＡ−２Ｇと未反応のＬ−アスコルビン酸を吸着させ、樹脂に吸着しないグルコースなどの糖質を流去した後、希塩酸でＡＡ−２ＧとＬ−アスコルビン酸を溶出し、さらに強酸性カチオン交換樹脂を用いたゲル濾過クロマトグラフィーによりＡＡ−２Ｇ高含有画分を採取し、脱色、濾過、脱塩、濃縮する精製工程；
（４）得られるＡＡ−２Ｇ高含有溶液にＡＡ−２Ｇ無水結晶の種晶を添加し、晶析してＡＡ−２Ｇ無水結晶を得る晶析工程；
（５）得られるＡＡ−２Ｇ無水結晶を採取し、工程；熟成、乾燥し、必要に応じて粉砕する工程。

【0017】

本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶は、上記の方法で製造されたＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末（例えば、登録商標『ＡＡ２Ｇ』、ＡＡ−２Ｇ純度９８質量％以上、株式会社林原生物化学研究所販売）を原料として、比較的容易に調製することができる。上記ＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末を容器に入れた後、比較的少量の精製水に懸濁、加熱攪拌し、未溶解のＡＡ−２Ｇ無水結晶が残存する過飽和ＡＡ−２Ｇ水溶液を調製し、静置した状態で、恒温器又は乾燥機に入れるなどして時間をかけて水を蒸発させれば、再度析出するＡＡ−２Ｇ無水結晶の層の表層又は容器の壁面に無水結晶とは外観の異なる本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶が塊状に晶出する。この塊状のＡＡ−２Ｇ含水結晶を採取し、粉砕、乾燥することにより、無水物換算でＡＡ−２Ｇ純度９８質量％以上のＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末を得ることができる。しかしながら、この方法では、原料として用いたＡＡ−２Ｇの一部しかＡＡ−２Ｇ含水結晶として回収できず、ＡＡ−２Ｇ含水結晶を効率よく製造することは難しい。

【0018】

一方、本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶は、一旦得られたＡＡ−２Ｇ含水結晶を種晶として用いることにより、無水物換算でＡＡ−２Ｇを９８質量％以上含有する水溶液から効率よく得ることができる。例えば、市販のＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末（登録商標『ＡＡ２Ｇ』、ＡＡ−２Ｇ純度９８質量％以上、株式会社林原生物化学研究所販売）を水に完全に溶解させた後、必要に応じて濃縮することにより固形物濃度を５０％（ｗ／ｖ）以上に調整し、容器に入れ、ＡＡ−２Ｇ含水結晶を種晶として固形物当たり１乃至５質量％加え、温度６０℃以下、望ましくは、２０乃至５０℃の範囲で容器に蓋をしない開放系で０．５乃至７日間放置すれば、ＡＡ−２Ｇ含水結晶のみが晶出したブロックが得られる。このブロックを常法に従い、切削、粉砕、乾燥することにより、無水物換算でＡＡ−２Ｇを９８質量％以上含有するＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末を得ることができる。

【0019】

さらに、本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶は、後述する実験で示すように、ＡＡ−２Ｇ含水結晶を種晶として用いることにより、ＡＡ−２Ｇ純度が高い非晶質ＡＡ−２Ｇ粉末から直接製造することもできる。非晶質ＡＡ−２Ｇ粉末は、例えば、純度９８質量％以上のＡＡ−２Ｇ含有水溶液を凍結真空乾燥した後、粉砕、乾燥して得ることができる。非晶質ＡＡ−２Ｇ粉末に対し、ＡＡ−２Ｇ含水結晶を種晶として３０質量％以上になるように添加し、均一に磨砕、混合した後、温度を、通常、１０乃至４０℃、望ましくは、２０乃至３０℃に、相対湿度を、通常、７０乃至９５％、望ましくは８０乃至９０％にコントロールした環境下で約０．５乃至７日間、静置することにより非晶質ＡＡ−２Ｇをほぼ完全に本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶に変換することができる。なお、非晶質ＡＡ−２Ｇ粉末からＡＡ−２Ｇ含水結晶への変換の進展は、その粉末を一部採取し、粉末Ｘ線回折法に供して得られる粉末Ｘ線回折図によって確認することができる。非晶質ＡＡ−２Ｇ粉末からの変換によって得たＡＡ−２Ｇ含水結晶を、そのまま、又は、切削又は粉砕などして乾燥することにより、ＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末を製造することができる。

【0020】

さらに、本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶は、上記の方法で得られたＡＡ−２Ｇ含水結晶を種晶として用いることにより、比較的ＡＡ−２Ｇ純度の低いＡＡ−２Ｇ含有溶液からも得ることができる。例えば、前記したＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末の製造方法における工程（１）乃至（３）により得られる、固形物当りのＡＡ−２Ｇ純度８５質量％以上、濃度６５乃至９０％（ｗ／ｖ）のＡＡ−２Ｇ含有溶液を助晶缶にとり、１乃至２０質量％のＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末を種晶として加え、温度６０℃以下、望ましくは、２０乃至５０℃の範囲で、攪拌しつつ晶析し、ＡＡ−２Ｇ含水結晶を含有するマスキットとする。マスキットから高純度のＡＡ−２Ｇ含水結晶を採取する方法としては、通常、分蜜法が好適に用いられる。分蜜法の場合には、通常、マスキットをバスケット型遠心分離機にかけ、ＡＡ−２Ｇ含水結晶と蜜（結晶化母液）とを分離し、必要に応じて、当該結晶に、例えば、少量の冷水又は冷エタノールをスプレーすることにより結晶を洗浄して、高純度のＡＡ−２Ｇ含水結晶を製造することができる。斯して得られるＡＡ−２Ｇ含水結晶におけるＡＡ−２Ｇ純度は、通常、９８質量％以上である。

【0021】

とりわけ高純度のＡＡ−２Ｇ含水結晶を要さない場合には、上記マスキットを噴霧乾燥し、得られた粉末を熟成、乾燥させる噴霧乾燥法により、ＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末を製造することも有利に実施できる。この噴霧乾燥法の場合には、前記したＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末の製造方法における工程（１）乃至（４）により得られる、固形物当りのＡＡ−２Ｇ純度８５質量％以上、濃度６５乃至７５％（ｗ／ｖ）、晶出率（固形物に対する結晶の割合）１０乃至６０質量％程度のマスキットを、例えば、高圧ポンプでノズルから噴霧するか、又は回転円盤を用いて噴霧し、結晶粉末が溶解しない温度、例えば、６０乃至１００℃の熱風で乾燥し、次いで、２０乃至６０℃の温風で、相対湿度を５３乃至９０％に保ちつつ約１乃至４８時間熟成することにより、ＡＡ−２Ｇ純度８５質量％以上のＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末を容易に製造することができる。

【0022】

また、上記マスキットをブロック化し、ブロック粉砕法によりＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末を製造することも有利に実施できる。ブロック粉砕法の場合には、通常、水分５乃至２０％（ｗ／ｖ）、晶出率１０乃至６０質量％程度のマスキットを、約０．１乃至約７日間静置して全体をブロック状に晶出固化させ、これを切削又は粉砕などの方法によって粉末化し乾燥することにより、ＡＡ−２Ｇ純度８５質量％以上のＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末を容易に製造することができる。

【0023】

さらに、本発明は、ＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末又はＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末の用途を提供する発明でもある。本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末は、その粒度分布にもよるものの、従来公知のＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末に比べ、賦形性に優れるという特徴を有する。後述する実験の項に示すとおり、従来のＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末を、打錠機を用いて錠剤に成形しようとすると、粉末への荷重を開放した段階で錠剤には割れ、欠けなどが生じ、錠剤への成形が困難であるのに対し、本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末の場合には、割れ、欠けなどを生じることなく、硬度の高い錠剤を調製することができる。

【0024】

また、本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末は、従来公知のＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末に比べ、油性物質との親和性が強く、油性物質の粉末化基材として有利に利用できるという特性を有している。この特性は、各種粉末油脂などを製造する上で有利に利用できる。

【0025】

本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶及びＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末は、ＡＡ−２Ｇの粉末であるという点では従来のＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末と何ら変わるところがない。したがって、本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶及びＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末は上記の用途のみならず、従来のＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末と同様に、広く飲食物、嗜好物、飼料、餌料、化粧品、医薬品、成形物などに配合することができ、更には、生活用品、農林水産用品、試薬、化学工業用品などの各種組成物に利用することができることは言うまでもない。

【0026】

次に実験により本発明を具体的に説明する。

【0027】

＜実験１：新規なＡＡ−２Ｇ結晶の取得＞
５００ｍｌ容ガラスビーカーに、ＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末（登録商標『ＡＡ２Ｇ』、株式会社林原生物化学研究所販売、ＡＡ−２Ｇ純度９８．０質量％以上）２０ｇと脱イオン水７．５ｇを入れ、５０乃至６０℃に加熱しつつ攪拌することによりＡＡ−２Ｇの過飽和水溶液に一部未溶解のＡＡ−２Ｇ無水結晶が残存する懸濁液を調製した。次いで、この懸濁液を入れたビーカーを４０℃の恒温器内に入れ、３日間保持することにより時間をかけて水分を蒸発させたところ、ビーカー底面に形成されたＡＡ−２Ｇ無水結晶の層の表層及びガラスビーカーの壁面に、ＡＡ−２Ｇ焦水結晶とは外観の異なる塊状の結晶の析出が認められた。この塊状の結晶を薬匙にて採取し、粉砕、乾燥することにより結晶粉末３．８ｇを得た。

【0028】

＜実験２：新規ＡＡ−２Ｇ結晶の物性＞
実験１で得た結晶粉末を用いて、以下の物性を調査した。

【0029】

＜実験２−１：新規ＡＡ−２Ｇ結晶の顕微鏡写真＞
実験１で得た結晶粉末の適量を、グリセロールゼラチン（シグマ社製）に懸濁し、スライドガラスに載せ顕微鏡（オリンパス株式会社製、「ＢＸ５０」）にて観察するとともに、顕微鏡用デジタルカメラ（オリンパス株式会社製、「ＤＰ２１」）にて顕微鏡写真を撮影した。結晶の顕微鏡写真の一例（倍率：１，２５０倍）を図１に示す。図１に見られるとおり、柱状結晶が観察された。

【0030】

＜実験２−２：新規ＡＡ−２Ｇ結晶のＡＡ−２Ｇ純度＞
実験１で得た結晶粉末を、脱イオン水に終濃度０．１又は１％（ｗ／ｖ）になるよう溶解し、メンブランフィルターにて濾過した後、下記の条件によるＨＰＬＣ分析に供した。なお、ＡＡ−２Ｇの標準品として、試薬級のＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末（商品名『アスコルビン酸２−グルコシド ９９９』、コード番号：ＡＧ１２４、純度９９．９質量％以上、株式会社林原生物化学研究所販売）を用い、同様にＨＰＬＣ分析に供した。

【0031】

（ＨＰＬＣ分析条件）
ＨＰＬＣ装置：『ＬＣ−１０ＡＤ』（株式会社島津製作所製）
デガッサー：『ＤＧＵ−１２ＡＭ』（株式会社島津製作所製）
カラム：『Ｗａｋｏｐａｋ Ｗａｋｏｂｅａｄｓ Ｔ−３３０』
（和光純薬工業株式会社販売、Ｈ^＋型）
サンプル注入量：０．１％溶液５μｌ（ＵＶ検出器）又は
１％溶液２０μｌ（示差屈折計）
溶離液：０．０１％（ｖ／ｖ）硝酸水溶液
流 速：０．５ｍｌ／分
温 度：２５℃
検出器：多波長ＵＶ検出器『ＵＶ２００−４００』（株式会社島津製作所製）
示差屈折計『ＲＩＤ−１０Ａ』（株式会社島津製作所製）
データ処理装置：『クロマトパックＣ−Ｒ７Ａ』（株式会社島津製作所製）

【0032】

実験１で得た結晶粉末は、上記ＨＰＬＣ分析において、ＵＶ検出器及び示差屈折計のいずれの検出方法においてもＡＡ−２Ｇ標準品と同一の保持時間（Ｒｔ）に溶出ピークを示し、また、多波長ＵＶ検出器により調べた最大吸収波長（λｍａｘ）は２４８ｎｍと、ＡＡ−２Ｇ標準品のそれと完全に一致した。実験１で得た結晶粉末のＡＡ−２Ｇ純度を、示差屈折計を用いて得られたＨＰＬＣクロマトグラムのピーク面積に基づき算出したところ９９．５質量％であった。

【0033】

＜実験２−３：新規ＡＡ−２Ｇ結晶粉末の粉末Ｘ線回折＞
実験１で得たＡＡ−２Ｇ結晶粉末約５０ｍｇをシリコン製無反射板に乗せ、市販の反射光方式による粉末Ｘ線回折装置（商品名『Ｘ´ Ｐｅｒｔ Ｐｒｏ ＭＰＤ』、スペクトリス株式会社製）を用い、Ｃｕ対陰極から放射される特性Ｘ線であるＣｕＫα線（Ｘ線管電流：４０ｍＡ、Ｘ線管電圧：４５ｋＶ、波長：１．５４０５オングストローム）を照射して得られる回折プロファイルに基づく粉末Ｘ線回折図を得た。新規ＡＡ−２Ｇ結晶粉末の粉末Ｘ線回折図を図２に、また、対照として用いた試薬級ＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末（商品名『アスコルビン酸２−グルコシド ９９９』、コード番号：ＡＧ１２４、純度９９．９質量％以上、株式会社林原生物化学研究所販売）のそれを図３にそれぞれ示す。

【0034】

図２と図３との対比から明らかなように、実験１で得た新規ＡＡ−２Ｇ結晶粉末の粉末Ｘ線回折図は、従来のＡＡ−２Ｇ無水結晶粉末のそれとは全く異なっていた。すなわち、新規ＡＡ−２Ｇ結晶粉末の粉末Ｘ線回折図は、少なくとも、回折角（２θ）６．１°（図２における符号「ａ」）、９．２°（図２における符号「ｂ」）、１０．６°（図２における符号「ｃ」）、１１．４°（図２における符号「ｄ」）及び１２．１°（図２における符号「ｅ」）において、従来のＡＡ−２Ｇ無水結晶粉末のそれに認められない特徴的な回折ピークを示した。

【0035】

＜実験２−４：新規ＡＡ−２Ｇ結晶粉末の結晶水含量＞
実験１で得たＡＡ−２Ｇ結晶粉末３．５ｍｇをアルミ製容器に入れ、示差熱・熱重量同時測定装置（商品名『ＴＧ／ＤＴＡ６２００』、エスアイアイ・ナノテクノロジー株式会社製）を用いて窒素ガスを３００ｍｌ／分の流量で流しながら２５℃で３分間保持した後、１０℃／分の昇温速度で２５０℃まで昇温させることにより熱重量分析（ＴＧ分析）したところ、加熱に伴い１１０乃至１４５℃にかけて２．７０質量％の重量減少が認められ、当該結晶粉末が２．７０質量％の結晶水を含有していることが判明した。この結果から、実験１で得た新規ＡＡ−２Ｇ結晶粉末は従来未知の含水結晶であることが判明した。因みに、この結晶水含量の値は、当該結晶がＡＡ−２Ｇ１／２含水結晶、すなわち、Ｃ_１２Ｈ_１８Ｏ_１１・１／２Ｈ_２Ｏであると仮定した場合の水分含量の理論値である２．６６質量％と極めてよく一致した。

【0036】

＜実験２−５：新規ＡＡ−２Ｇ結晶粉末の元素分析＞
実験１で得たＡＡ−２Ｇ結晶粉末５乃至１０ｍｇを秤取し、酸素循環燃焼・ＴＣＤ検出方式 ＮＣＨ定量装置（「スミグラフ ＮＣＨ−２２Ｆ型」、住化分析センター製）を用いて、反応温度８５０℃、還元温度６００℃の条件下で炭素（Ｃ）及び水素（Ｈ）について定量したところ、Ｃ：４１．５３質量％、Ｈ：５．５８質量％の値が得られた。この元素分析の結果は、当該結晶がＡＡ−２Ｇ１／２含水結晶、すなわち、Ｃ_１２Ｈ_１８Ｏ_１１・１／２Ｈ_２Ｏであると仮定した場合の元素分析における理論値であるＣ：４１．５０質量％、Ｈ：５．５１質量％と極めてよく一致した。実験２−４及び２−５の結果から、実験１で得たＡＡ−２Ｇ結晶粉末は、１／２含水結晶であると推定された。以下、実験１で得たＡＡ−２Ｇ結晶を「ＡＡ−２Ｇ含水結晶」と呼称する。

【0037】

＜実験２−６：ＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末の示差走査熱量分析（ＤＳＣ分析）＞
実験１で得たＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末３．５ｍｇをアルミ製容器に入れ、示差走査熱量計（商品名『ＤＳＣ Ｑ２０』、ＴＡインスツルメンツ社製）を用いて窒素ガスを５０ｍｌ／分の流量で流しながら２５℃で５分間保持した後、１０℃／分の昇温速度で２５０℃まで昇温させることにより、ＤＳＣ分析における吸熱パターンを分析した。ＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末の吸熱パターンを図４の符号Ａに、試薬級のＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末（商品名『アスコルビン酸２−グルコシド ９９９』、コード番号：ＡＧ１２４、純度９９．９質量％以上、株式会社林原生物化学研究所販売）のそれを図４の符号Ｂに示す。

【0038】

図４から明らかなように、ＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末は１７６℃付近で融解にともなう単一の吸熱ピークを示したのに対し、実験１で得たＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末は、１１０乃至１４５℃の範囲に僅かな吸熱を示すとともに、１５７℃付近で融解にともなう吸熱ピークを示し、両者のＤＳＣ分析における吸熱パターンは全く相違していた。

【0039】

＜実験３：高純度ＡＡ−２Ｇ含有水溶液からのＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末の調製＞
実験１では未溶解のＡＡ−２Ｇ無水結晶が共存する高純度ＡＡ−２Ｇの過飽和水溶液系から新規なＡＡ−２Ｇ含水結晶が得られた。本実験では新規なＡＡ−２Ｇ含水結晶の製造条件について、高純度のＡＡ−２Ｇ含有水溶液を用いてさらに詳細な検討を行った。

【0040】

ＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末（商品名『ＡＡ２Ｇ』、純度９８質量％以上、株式会社林原生物化学研究所販売）２００ｇを２００ｍｌの精製水に加え、加熱攪拌することにより完全に溶解した。この水溶液を２０ｃｍ角、深さ５ｃｍのトレーに移し、実験１の方法で得たＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末を２．０ｇ添加し、攪拌・混合した後、蓋をしない開放系にて室温で３日間放置したところ、結晶が晶出しブロック状の塊となった。ブロックを乳鉢で粉砕した後、室温で真空乾燥したところ約２００ｇの結晶粉末が得られた。本結晶粉末におけるＡＡ−２Ｇ純度を実験２−２記載のＨＰＬＣ法にて測定したところ９９．２質量％であり、また、カールフィッシャー法により水分含量を測定したところ、２．８質量％であった。本結晶粉末を実験２−３記載の粉末Ｘ線回折法に供したところ、図２と同様のＡＡ−２Ｇ含水結晶の粉末Ｘ線回折図が得られ、ＡＡ−２Ｇ無水結晶に由来する回折ピークは全く認められなかった。この結果は、ＡＡ−２Ｇ含水結晶を種晶として用いれば、高純度のＡＡ−２Ｇ含有水溶液からＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末が収率よく得られることを物語っている。

【0041】

＜実験４：非晶質ＡＡ−２Ｇ粉末からのＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末の調製＞
実験３で得たＡＡ−２Ｇ含水結晶を種晶として用い、非晶質ＡＡ−２Ｇ粉末のＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末への変換を試みた。

【0042】

＜実験４−１：非晶質ＡＡ−２Ｇ粉末の調製＞
市販のＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末（商品名『ＡＡ２Ｇ』、純度９８質量％以上、株式会社林原生物化学研究所販売）２００ｇを２，０００ｍｌの精製水に完全に溶解した後、３日間かけて凍結真空乾燥し、次いで、４０℃以下で１晩真空乾燥することにより、約２００ｇのＡＡ−２Ｇ粉末を調製した。本粉末におけるＡＡ−２Ｇ純度を実験２−２記載のＨＰＬＣ法にて測定したところ９８．７質量％であり、また、カールフィッシャー法により水分含量を測定したところ、１．５質量％であった。本粉末を実験２−３記載の粉末Ｘ線回折法に供したところ、粉末Ｘ線回折図において非晶質粉末に特有なハローがベースラインの膨らみとして認められたものの、ＡＡ−２Ｇ無水結晶及びＡＡ−２Ｇ含水結晶に特有な回折ピークは一切認められなかった。この結果から、本粉末が非晶質ＡＡ−２Ｇ粉末であることが確認された。

【0043】

＜実験４−２：非晶質ＡＡ−２Ｇ粉末からのＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末の調製＞
実験４−１で得た非晶質ＡＡ−２Ｇ粉末と、実験３で得たＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末をそれぞれ、９：１、８：２、７：３、６：４又は５：５の質量比で混合し、乳鉢で均一に磨砕、混合し、各粉末を恒温恒湿機（「ＴＥＭＰ．＆ＨＵＭＩＤ． ＣＨＡＭＢＥＲ ＰＲ−４Ｋ」、エスペック社製）に入れ、２５℃、相対湿度９０％の条件下で２４時間放置した。その後、各粉末を恒温恒湿機から取り出し、実験２−３記載の粉末Ｘ線回折法に供し、それぞれの粉末Ｘ線回折図を得た。得られた粉末Ｘ線回折図をＡＡ−２Ｇ含水結晶及びＡＡ−２Ｇ無水結晶の粉末Ｘ線回折図（図２及び図３）とそれぞれ照合することにより、各粉末の結晶形態を判断した。結果を表１に示す。

【0044】

【表1】

【0045】

表１に示すとおり、非晶質ＡＡ−２Ｇ粉末とＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末をそれぞれ、７：３、６：４及び５：５の質量比で混合した粉末は、２５℃、相対湿度９０％の条件下で２４時間保持したところ、完全にＡＡ−２Ｇ含水結晶の粉末Ｘ線回折図を示す粉末に変換されていた。一方、非晶質ＡＡ−２Ｇ粉末とＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末をそれぞれ、９：１及び８：２の質量比で混合し共存させた粉末は、ＡＡ−２Ｇ無水結晶とＡＡ−２Ｇ含水結晶とが混在する粉末Ｘ線回折図を示し、ＡＡ−２Ｇ無水結晶とＡＡ−２Ｇ含水結晶が共存する粉末に変換されていた。この結果は、非晶質ＡＡ−２Ｇ粉末にＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末を３０質量％以上混合し、２５℃、相対湿度９０％で２４時間以上保持することにより、非晶質ＡＡ−２Ｇ粉末からＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末を製造できることを示している。

【0046】

＜実験５：ＡＡ−２Ｇ含有溶液からの晶析＞
従来のＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末の製造方法に準じてＡＡ−２Ｇ含有溶液を調製し、ＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末の製造方法を検討した。

【0047】

＜実験５−１：ＡＡ−２Ｇ含有溶液の調製＞
馬鈴薯澱粉液化液の固形物７質量部に対しＬ−アスコルビン酸３質量部を加え、ｐＨを５．５に、固形物濃度を３０％（ｗ／ｖ）に調整し基質溶液とした。これに、ジオバチルス・ステアロサーモフィラス（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）由来ＣＧＴａｓｅ粗酵素液（株式会社林原製）を澱粉固形物１ｇ当り１００単位加え、５５℃で４０時間反応させＬ−アスコルビン酸への糖転移を行い、ＡＡ−２Ｇ及び２−Ｏ−α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸を生成させた。

【0048】

得られた反応液を加熱しＣＧＴａｓｅを失活させた後、ｐＨ４．５に調整し、これにグルコアミラーゼ剤（天野エンザイム株式会社販売、商品名『グルクザイムＡＦ６』、６，０００単位／ｇ）を澱粉固形物１ｇ当り５０単位加え５５℃で２４時間処理し、２−Ｏ−α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸をＡＡ−２Ｇにまで、また、混在する糖質をグルコースにまで分解した。本反応液のＡＡ−２Ｇ含量は固形物当たり３０．４質量％であった。

【0049】

本反応液を加熱しグルコアミラーゼを失活させた後、活性炭で脱色濾過し、濾液をカチオン交換樹脂（Ｈ^＋型）にて脱塩し、次いで、アニオン交換樹脂（ＯＨ⁻型）にＬ−アスコルビン酸及びＡＡ−２Ｇを吸着させ、水洗してグルコースの大部分を除いた。樹脂に吸着したＡＡ−２Ｇ及びＬ−アスコルビン酸を０．５Ｎ塩酸溶液で溶出し、さらに、強酸性カチオン交換樹脂（商品名「ダウェックス５０ＷＸ４」、Ｃａ^２＋型、ダウケミカル社製造）を用いるゲル濾過カラムクロマトグラフィーに供することにより、ＡＡ−２Ｇ高含有画分を回収した。回収したＡＡ−２Ｇ含有溶液の組成は、固形物当たりＡＡ−２Ｇ９２．０質量％、Ｌ−アスコルビン酸０．８質量％、グルコース６．５質量％、その他０．７質量％であった。

【0050】

＜実験５−２：分蜜法によるＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末の調製＞
実験５−１の方法で得たＡＡ−２Ｇ含有溶液を減圧濃縮し、濃度約５０％（ｗ／ｖ）の濃縮液とし、これを助晶缶にとり、実験３で得たＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末を種晶として濃縮液固形物当たり１質量％加えて４０℃とし、穏やかに撹拌しつつ５日間かけて晶析し、ＡＡ−２Ｇ含水結晶を含むマスキットを得た。

【0051】

得られたマスキットを常法によりバスケット型遠心分離機にかけ、析出したＡＡ−２Ｇ含水結晶を回収し、少量のエタノール水をスプレーして洗浄した後、熟成、粉砕、乾燥してＡＡ−２Ｇ純度９９．３質量％のＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末を得た。

【0052】

＜実験５−３：ブロック粉砕法によるＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末の調製＞
実験５−１の方法で得たＡＡ−２Ｇ含有溶液を減圧濃縮し、濃度約６０％（ｗ／ｖ）の濃縮液とし、プラスチックトレー（縦８０ｃｍ、横３０ｃｍ、高さ３０ｃｍ）に移し、実験１で得たＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末を濃縮液固形物当たり２質量％添加し、攪拌・混合した後、蓋をしない状態で４５℃にて４日間放置することにより結晶化させ、ＡＡ−２Ｇ含水結晶のブロックを調製した。ブロックをハンマーで粗砕きした後、ブレンダー（商品名「オスターブレンダー ＳＴ−２」、大阪ケミカル株式会社製）にて粉砕した後、室温で真空乾燥し、ＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末を得た。なお、得られたＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末におけるＡＡ−２Ｇ純度は９１．８質量％であった。

【0053】

＜実験６：ＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末の打錠性＞
本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末の打錠性を以下の方法で調べ、従来のＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末と比較した。

【0054】

実験３の方法で得たＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末（ＡＡ−２Ｇ純度９９．２質量％）を篩にかけ、粒度５３乃至１０６μｍの粉末を回収した。得られた粉末を打錠用金型（直径１１ｍｍ、厚み３０ｍｍ）に０．４ｇ入れ、卓上型プレス機（島津製作所製、ＳＳＰ−１０Ａ型）にて１トンの荷重を３０秒間かけることにより打錠した後、荷重を開放し錠剤を取り出した。この操作を１０回繰り返し計１０個の錠剤を作製した。対照として、市販のＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末（登録商標『ＡＡ２Ｇ』、純度９８％以上、株式会社林原生物化学研究所販売）を用い、上記と同様に粒度５３乃至１０６μｍの粉末を調製し、上記と同じ方法により１０個の錠剤を作製した。各１０個の錠剤についてその形状（割れ、又は、欠けの有無）を観察し、錠剤１０個中１個以上に割れや欠けが認められた場合を「打錠性 不合格」（×）、錠剤１０個中割れや欠けが全く認められない場合を「打錠性 合格」（○）と判定した。結果を表２に示した。

【0055】

【表2】

【0056】

表２に示すように、対照のＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末では錠剤１０個のうち９個に割れや欠けが認められ、打錠性が劣っていた。錠剤調製時に荷重を開放した段階でプレス機のシリンダー（杵）への粉末の付着が屡々認められ欠けの原因となり、また、錠剤をプレス機の金型から取り出した段階で割れが生じた。一方、本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末では、錠剤１０個全てにおいて割れや欠けは認められず、打錠性に優れることが判明した。ＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末で調製した錠剤についてレオメーター（商品名『レオメーター ＣＲ−５００ＤＸ』、サン科学社製）を用いて硬度を測定したところ約９０Ｎであった。この結果は、本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末がＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末よりも打錠性、すなわち賦形性に優れ、硬度の高い錠剤を調製するための基材として有用であることを示している。

【0057】

＜実験７：ＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末の保油力＞
実験３−２の方法で得たＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末を用いて結晶粉末の保油力を測定した。対照として、市販のＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末（商品名『ＡＡ２Ｇ』、純度９８質量％以上、株式会社林原生物化学研究所販売）を用いた。

【0058】

結晶粉末の保油力の測定は、特開昭５９−３１６５０号公報に開示されている方法に準じて以下のように行った。すなわち、コーン油（試薬、ロット番号 ＷＫＬ１２１５、和光純薬工業株式会社販売）５ｇを５０ｍｌ容のプラスチック容器に採取し、攪拌しながら実験６と同様に粒度５３乃至１０６μｍに調整したＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末又はＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末を添加してゆく。この混合物は結晶粉末の添加量の少ない内は流動性を保持しているものの、その量が増すにつれて粘稠度が増し、やがて一つの塊となる。さらにその添加量を増すと、固さが増し、やがて一つにまとまらなくなりほぐれはじめる。この点を終点として、終点までに添加した結晶粉末の量に基づき次式により保油力を求めた。結果を表３に示した。

【0059】

【数1】

【0060】

【表3】

【0061】

表３の結果から明らかなように、対照のＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末の保油力が２５．２であったのに対し、ＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末の保油力は３８．３であり、約１．５倍高かった。この結果は、ＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末はＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末よりも親油性が高く、本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末の方が油性物質の粉末化基材として、より有用であることを示している。

【0062】

以下、実施例により本発明をより詳細に説明する。しかしながら、本発明はこれら実施例によって何ら限定されるものではない。

【実施例1】

【0063】

＜ＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末＞
市販のＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末（商品名『ＡＡ２Ｇ』、純度９８質量％以上、株式会社林原生物化学研究所販売）１０ｋｇを１０リットルの精製水に加え、攪拌することにより完全に溶解した。この水溶液に実験３の方法で得たＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末を１００ｇ添加し、攪拌・混合した後、縦３０ｃｍ、横６０ｃｍ、高さ４０ｃｍのプラスチック容器３個に分注し、蓋をしない開放系にて５０℃で３日間放置することにより晶析し、さらに室温で１日間熟成させた。得られたブロック状の結晶塊を、常法により粉砕した後、３０℃で乾燥し、約９．７ｋｇのＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末を製造した。本粉末におけるＡＡ−２Ｇ純度を実験２−２記載のＨＰＬＣ法にて測定したところ９８．４質量％であり、また、カールフィッシャー法により水分含量を測定したところ、３．０質量％であった。

【0064】

本品は、流動性が良好であり、酸味剤、呈味改良剤、賦形剤、油性物質の粉末化基材などとして、広く飲食物、化粧品、医薬部外品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。

【実施例2】

【0065】

＜ＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末＞
タピオカ澱粉７質量部を水２５質量部に加え、市販の液化酵素を加え加熱溶解した後、Ｌ−アスコルビン酸３質量部を加え、ｐＨを５．５に調整し基質溶液とした。これに、ジオバチルス・ステアロサーモフィルス由来ＣＧＴａｓｅの粗酵素液（株式会社林原製）を、タピオカ澱粉固形物１ｇ当り１００単位加えて５５℃で５０時間反応させ、ＡＡ−２Ｇ及び２−Ｏ−α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸を生成させた。

【0066】

この反応液を加熱し酵素を失活させた後、ｐＨを４．５に調整し、これにグルコアミラーゼ剤（ナガセケムテックス株式会社販売、商品名『グルコチーム＃２００００』、２０，０００単位／ｇ）を澱粉固形物１ｇ当り５０単位加え、５５℃で２４時間反応させ、２−Ｏ−α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸をＡＡ−２Ｇにまで、また、混在する糖質をグルコースにまで分解した。本反応液におけるＡＡ−２Ｇ含量は無水物換算で約３０．５質量％であった。

【0067】

本反応液を加熱し酵素を失活させた後、活性炭で脱色濾過し、濾液をカチオン交換樹脂（Ｈ^＋型）にて脱塩し、次いで、アニオン交換樹脂（ＯＨ⁻型）にＬ−アスコルビン酸及びＡＡ−２Ｇを吸着させ、水洗して大部分のグルコースを除いた後、０．５Ｎ塩酸溶液で溶出し、さらに、強酸性カチオン交換樹脂（商品名「ダウェックス５０ＷＸ４」、Ｃａ^２＋型、ダウケミカル社製造）を用いるゲル濾過カラムクロマトグラフィーに供し、ＡＡ−２Ｇ高含有画分を回収した。回収したＡＡ−２Ｇ含有溶液の組成は、無水物換算でＡＡ−２Ｇ８９．３質量％、Ｌ−アスコルビン酸１．２質量％、グルコース７．８質量％、その他１．７質量％であった。

【0068】

このＡＡ−２Ｇ含有溶液を減圧濃縮することにより固形物濃度約６０％とし、これを助晶缶にとり、固形物質量に対して実験３の方法で得たＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末を種晶として２％加えて４０℃とし、穏やかに撹拌して５日間晶析し、ＡＡ−２Ｇ含水結晶が析出したマスキットを得た。このマスキットを常法によりバスケット型遠心分離機にかけて結晶を回収し、少量の精製水をスプレーすることにより結晶を洗浄した後、粉砕、乾燥し、ＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末を得た。本品のＡＡ−２Ｇ純度は無水物換算で９８．５質量％であった。

【0069】

本品は、流動性が良好であり、酸味剤、呈味改良剤、賦形剤、油性物質の粉末化基材などとして、広く飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。

【実施例3】

【0070】

＜ＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末＞
タピオカ澱粉をトウモロコシ澱粉に換えた以外は実施例２と同じ方法で反応、精製を行い、ＡＡ−２Ｇ高含有画分を回収した。回収したＡＡ−２Ｇ含有溶液の組成は、固形物当たりＡＡ−２Ｇ８５．４質量％、Ｌ−アスコルビン酸３．８質量％、グルコース８．７質量％、その他２．１質量％であった。

【0071】

このＡＡ−２Ｇ含有溶液を減圧濃縮することにより固形物濃度約７６％とし、これを助晶缶にとり、固形物質量に対して実施例１の方法で得たＡＡ−２Ｇ含水結晶粉末を種晶として２％加えて４０℃とし、攪拌・混合した後、縦３０ｃｍ、横４０ｃｍ、高さ３０ｃｍのプラスチック容器に分注し、蓋をしない開放系にて５０℃で３日間放置することにより晶析し、さらに室温で１日間熟成させた。得られたブロック状の結晶塊を、ハンマーで粗砕きした後、常法により粉砕した後、３０℃で乾燥し、ＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末を製造した。本品は、無水物換算でＡＡ−２Ｇを８５．２質量％、Ｌ−アスコルビン酸を３．９質量％、グルコースを８．８質量％含有していた。

【0072】

本品は、流動性が良好であり、酸味剤、呈味改良剤、賦形剤、油性物質の粉末化基材などとして、広く飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。

【実施例4】

【0073】

＜錠剤＞
実施例１の方法で得たＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末１００質量部、パントテン酸カルシウム１．３質量部、及び、リボフラビン０．２質量部を均一に混合した粉末を常法により打錠機にかけて１錠０．５ｇの錠剤を製造した。本品は、市販のビタミンＣ錠と同様に、肉体疲労時、体力低下時などのビタミンＣ補給用錠剤として有利に利用できる。

【実施例5】

【0074】

＜ビタミンＥ含有粉末＞
油状の天然由来トコフェロール（商品名『γ７０』、株式会社Ｊ−オイルミルズ販売）１質量部に対し、実施例１の方法で得たＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末５質量部を加え、万能混合機で混合した後、一晩放置し、粉砕してビタミンＥ（トコフェロール）含有粉末を調製した。本品は、ビタミンＥと安定型ビタミンＣからなるサプリメントとして好適に利用できる。

【実施例6】

【0075】

＜乳液＞
アボガド油１質量部、テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトール１質量部、親油性モノステアリン酸グリセリン１質量部、実施例１の方法で得たＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末１質量部、ポリオキシエチレンベヘニルエーテル０．５質量部、ピルビン酸０．５質量部、ベヘニルアルコール０．５質量部、ビタミンＥ及び防腐剤の適量を、常法に従って加熱溶解し、これに１，３−ブチレングリコール５質量部、Ｌ−乳酸ナトリウム１質量部、カルボキシビニルポリマー０．１質量部、及び、精製水８５．３質量部を加えホモジナイザーにて均一に攪拌、乳化した。さらに香料を適量加えて再度攪拌混合し乳液を製造した。本品は、美肌剤、美白剤、日焼け止めなどとして有利に利用できる。

【産業上の利用可能性】

【0076】

本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶は、これまで知られていなかったＡＡ−２Ｇの新たな結晶形態である。本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末は、流動性に優れ、賦形剤として使用すれば、従来のＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末では製造できなかった硬度の高い錠剤が得られるという利点を有している。また、本発明のＡＡ−２Ｇ含水結晶含有粉末は、従来のＡＡ−２Ｇ無水結晶含有粉末と比べて親油性が高く、油状物質の粉末化基材として有用である。本発明は、従来未知のＡＡ−２Ｇ含水結晶の発見という学術的意義のみならず、食品、化粧品、医薬部外品、医薬品の各分野に貢献すること誠に多大な意義ある発明である。

【図3】

【図4】

【図1】

【図2】