特許 5864564 線維性疾患および癌における治療選択肢としてのＣＣＲ６を介するＣＣＬ１８シグナル伝達の遮断

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5864564

(24)【登録日】2016年1月8日

(45)【発行日】2016年2月17日

(54)【発明の名称】線維性疾患および癌における治療選択肢としてのＣＣＲ６を介するＣＣＬ１８シグナル伝達の遮断

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/09 20060101AFI20160204BHJP

   C07K 14/52 20060101ALI20160204BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20160204BHJP

   C12N 15/113 20100101ALI20160204BHJP

   A61K 38/00 20060101ALI20160204BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20160204BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20160204BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20160204BHJP

   A61K 31/713 20060101ALI20160204BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20160204BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20160204BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20160204BHJP

   C12P 21/08 20060101ALN20160204BHJP

【ＦＩ】

   C12N15/00 AZNA

   C07K14/52

   C07K16/28

   C12N15/00 G

   A61K37/02

   A61P11/00

   A61P35/00

   A61K39/395 E

   A61K39/395 D

   A61K39/395 N

   A61K39/395 T

   A61K31/713

   A61K31/7088

   A61K45/00

   A61K48/00

   !C12P21/08

【請求項の数】7

【全頁数】99

(21)【出願番号】特願2013-517215(P2013-517215)

(86)(22)【出願日】2011年6月24日

(65)【公表番号】特表2013-537405(P2013-537405A)

(43)【公表日】2013年10月3日

(86)【国際出願番号】EP2011060641

(87)【国際公開番号】WO2012000906

(87)【国際公開日】20120105

【審査請求日】2013年2月15日

(31)【優先権主張番号】11169326.3

(32)【優先日】2011年6月9日

(33)【優先権主張国】EP

(31)【優先権主張番号】10167496.8

(32)【優先日】2010年6月28日

(33)【優先権主張国】EP

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】507387837

【氏名又は名称】ユニベルシテーツクリニクム フライブルグ

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 浩

(74)【代理人】

【識別番号】100120134

【弁理士】

【氏名又は名称】大森 規雄

(74)【代理人】

【識別番号】100110663

【弁理士】

【氏名又は名称】杉山 共永

(74)【代理人】

【識別番号】100104282

【弁理士】

【氏名又は名称】鈴木 康仁

(72)【発明者】

【氏名】ジーゼル，ゲルノット

(72)【発明者】

【氏名】ミューラー−クワーンハイム，ジョアキム

(72)【発明者】

【氏名】ブラッセ，アンジェ

【審査官】 坂崎 恵美子

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００３−５３０３２５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２００５／０９５９５３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００２／０２６７６４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特開２００９−０９６７１６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 Journal of Leukocyte Biology，２００７年，Vol.82，p.946-955

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ１２Ｎ １５／０９

Ｃ０７Ｋ １４／５２

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ／ＤＤＢＪ／ＰＤＢ

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＤＷＰＩ（Ｔｈｏｍｓｏｎ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の活性および／または発現を阻害することができる化合物を含む医薬組成物であって、該化合物が、
配列番号１に記載の配列に対して少なくとも９０％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０に結合することができ、膜貫通ドメインを含まない、単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドである、前記医薬組成物。

【請求項2】

前記アミノ酸配列が、配列番号１に記載の配列の少なくとも８個の連続するアミノ酸を含む、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項3】

間質性肺疾患および／または癌の処置または予防のための、請求項１または２に記載の医薬組成物。

【請求項4】

間質性肺疾患が、特発性肺線維症、非特異的間質性肺炎、特発性器質化肺炎、呼吸細気管支炎関連間質性肺疾患、剥離性間質性肺炎、急性間質性肺炎およびリンパ球性間質性肺炎からなる群より選択される、請求項３に記載の医薬組成物。

【請求項5】

癌が、腺癌、胸膜中皮腫、結腸直腸癌、前立腺癌、乳癌、腎細胞癌、肝細胞癌、非ホジキンリンパ腫およびホジキンリンパ腫からなる群より選択される、請求項３に記載の医薬組成物。

【請求項6】

間質性肺疾患および／または癌の処置または予防にとって好適なさらなる活性化合物を含み、該間質性肺疾患の処置にとって好適なさらなる活性化合物が、抗炎症剤、酸化防止剤、抗線維症剤、ミノサイクリン、シルデナフィル、サリドマイド、抗ＴＮＦ抗体、エタネルセプト、インターフェロンγ、抗ＩＬ−１３抗体、エンドセリン阻害剤、ジレウトン、抗凝固剤、マクロライド、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）４阻害剤、アビプタジル、α−メラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、及びチロシンキナーゼ阻害剤からなる群より選択され、前記癌の処置にとって好適なさらなる活性化合物が、化学療法剤である、請求項３から５のいずれかに記載の医薬組成物。

【請求項7】

被験体からの試料中での間質性肺疾患または癌の検出における使用のための、請求項１に記載の単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに特異的な抗体。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０に結合することができる単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドならびに被験体からの液体試料中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドの濃度を定量するための方法に関する。本発明はまた、被験体からの試料中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルを決定することによって前記被験体における間質性肺疾患または癌を検出および／または予後判定するための方法に関し、さらに、前記疾患の処置のための、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の活性および／または発現を阻害することができる化合物を含む医薬組成物を提供する。本発明はさらに、ケモカイン受容体ＣＣＲ６に結合しその活性を阻害することができる単離されたポリペプチドおよびＣＣＲ６受容体活性のさらなる阻害剤を同定するための方法に関する。本発明はまた、被験体からの試料中のＣＣＲ６遺伝子発現のレベルを決定することによって前記被験体における間質性肺疾患または癌を検出するための方法に関し、さらに、前記疾患の処置のための、ＣＣＲ６受容体活性および／または発現の阻害剤を含む医薬組成物を提供する。

【背景技術】

【0002】

間質性肺疾患は、肺実質の損傷をもたらす様々な程度の炎症および線維症に付随して起こる不均質な群の障害である。最近では、特発性間質性肺炎のサブグループは７つの異なる症候群に分類されている。最も頻繁なこれらの症状は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、非特異的間質性肺炎（ＮＳＩＰ）および特発性器質化肺炎（ＣＯＰ）である。前記疾患の原因はわかりにくいままであり、その病因を駆動する分子機構はあまり理解されていない。しかしながら、線維芽細胞の増殖および細胞外マトリックス放出の最終的な経路は、線維症を誘導する肺症状を伴うコラーゲン−血管および全身性炎症疾患を含む既知および未知の原因の線維化性肺疾患の共通の経路である（例えば、慢性関節リウマチ、全身性硬化症、強皮症、過敏性肺炎、いくつかの形態の薬剤誘導性肺胞炎）。

【0003】

ＩＰＦは、独特の型の未知の原因の慢性線維化性間質性肺炎である。ＩＰＦに罹患している患者に由来する肺組織を検査した場合、それは通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）として知られる特徴的なセットの組織学的／病理学的特徴を示す。対照的に、ＮＳＩＰは、ＵＩＰとは異なるパターンのより均質な炎症および線維症が同定され得る間質性肺炎の事例を指す。

【0004】

ＩＰＦは、女性よりも男性においてわずかにより一般的であり、通常は５０歳以上の年齢の患者において起こる。

【0005】

気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）の細胞学的検査は、例えば、ＩＰＦなどの間質性肺疾患を診断およびモニターする際の一般的な方法である。ＩＰＦに罹患している患者からの気管支肺胞洗浄液は、健康な対照からの気管支肺胞洗浄液と比較して、有意により高い総細胞数およびマクロファージ数、リンパ球、好中球および好酸球の比率の増加を特徴とする。

【0006】

ＩＰＦのさらに一般的な症候は、特に身体的活動の間またはその後の息切れ、および空咳である。前記症候は、疾患が進行するまで現れないことが多く、不可逆的な肺損傷が既に生じている。ＩＰＦの予後はかなり不良であり、診断の時点からの平均生存期間は３年である。

【0007】

現在では、肺線維症のための有効な処置も治療もない。処置は、肺で起こる炎症応答を処置することに限られることが多い。標準的な療法は、ステロイドおよびシクロホスファミドまたはアザチオプリンなどの抗炎症剤および細胞傷害剤を含むが、これらの療法は、例えば、ＮＳＩＰ（ＩＰＦよりも良好な予後も有する）または剥離性間質性肺炎（ＤＩＰ）においていくらか有用であるに過ぎない。しかしながら、ＩＰＦはこれらの治療選択肢の多くに対して難治性である。ＩＦＮγ、Ｂｏｓｅｎｔａｎ（登録商標）（エンドセリンアンタゴニスト）、Ａｖｉｐｔａｄｉｌ（登録商標）（血管作動性腸管ペプチド、ＶＩＰ）またはチロシンキナーゼ阻害剤Ｉｍａｔｉｎｉｂ（登録商標）を用いる実験的療法試験も、これらの薬剤の広範囲の有益な効果を示さなかった。

【0008】

従って、様々な形態の肺線維症、特に、ＩＰＦの処置のための新規療法の開発は、依然として必須の仕事である。新しい細胞標的ならびにこれらの標的に効率的に作用することができる治療的分子が必要である。

【0009】

ケモカインは、化学誘引物質のファミリーであり、免疫系の恒常性および活性化にとって必須である炎症促進性サイトカインである。それらは炎症および感染の部位への免疫細胞の遊走を指令する。ケモカインは、７回膜貫通ドメインのファミリーに属する特異的細胞表面受容体、Ｇタンパク質共役受容体に結合する。ＣＣＬ１８は、肺および活性化調節ケモカイン（ＰＡＲＣ）、選択的マクロファージ活性化関連ＣＣケモカイン１（ＡＭＡＣ−１）、マクロファージ炎症タンパク質−４（ＭＩＰ−４）および樹状細胞由来ケモカイン１（ＤＣＣＫ１）としても知られ、広範囲の単球／マクロファージおよび樹状細胞によって主に発現されるケモカインである。それはヒトの肺において高レベルで構成的に発現される。ＣＣＬ１８はＴ細胞、未熟樹状細胞を誘引し、線維芽細胞によるコラーゲン合成を誘導する。さらに、ＣＣＬ１８がＢ細胞の走化性も誘導するヒントもある。

【0010】

例えば、皮膚、肺および関節の炎症障害などの様々な疾患状態において、ＣＣＬ１８レベルが増強される。ＣＣＬ１８は肺線維症に罹患している患者から肺胞マクロファージによって高レベルで放出され、このケモカインの血清レベルは線維性疾患における予後マーカーであることもわかってきた。

【0011】

さらに、ＣＣＬ１８が線維芽細胞の筋線維芽細胞への分化を誘導し、コラーゲンおよびα−平滑筋アクチンの発現を誘導することを証明することができる。その公知のコラーゲン誘導特性のため、高レベルのＣＣＬ１８は肺線維症におけるマトリックス蓄積の増加と直接関連し得る。

【0012】

しかしながら、ＣＣＬ１８シグナル伝達におけるシグナル伝達事象および可能な治療的介入の正確な分析は、その受容体が未知であるという事実によって妨げられている。

【0013】

最近、可溶性受容体が新規形態の療法として臨床医学に導入されてきた。多くの可溶性受容体はそのリガンドに関してその膜結合対応物と競合し、かくして、競合的アンタゴニストとして作用する。可溶性受容体は、それらが高度に特異的であり、高い親和性でその標的に結合し、その作用を弱め得る免疫応答を誘導する可能性が低いという利点を提供する。さらに、それらは距離を置いて作用する能力を有するため、それらを作用部位から遠い位置に投与することができる。これらの利点を考慮すると、可溶性受容体は治療的使用のための有意な潜在能力を保持する。

【0014】

癌は、一群の細胞が未制御の増殖、侵襲および時には転移を示す疾患のクラスである。癌のこれらの３つの悪性的特性により、癌は、自己制限的であり、侵襲も転移もしない良性腫瘍と区別される。

【0015】

癌は、世界のあらゆる死の約１３％の原因である主要な健康問題である。米国癌協会によれば、世界で７６０万人が２００７年中に癌で死亡した。癌による死亡は増え続けると予測され、２０３０年には１２００万人が死亡すると見積もられている。

【0016】

従って、癌と闘うための新規療法の開発は、依然として必須の仕事である。

【0017】

肺癌は癌関連死の主な原因であり、その高い有病率および高い発生率のため、最も重要な悪性新生物の一つである。全ての肺癌のほぼ８０％が、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）として組織学的に定義される。非常により早い診断およびより十分な処置に寄与する新しい技術における利点ならびに新規薬剤の開発にも拘らず、ＮＳＣＬＣは依然として命を脅かす疾患である。ＮＳＣＬＣ患者の全５年生存期間は依然として低く、疾患の初期段階でも、再発率は比較的高い。予後不良は、速い腫瘍増殖および早期転移により示されるように、腫瘍の高度に攻撃的な挙動に起因する。ＮＳＣＬＣにおける発癌および転移の正確な機構は依然として未知であるが、腫瘍の微小環境が悪性疾患の発達および腫瘍細胞の播種(dissemination)において重要な役割を果たすと考えられる。

【0018】

ＮＳＣＬＣは、いくつかの形態の腫瘍を記述する用語である。ＮＳＣＬＣの２５〜４０％は腺癌である。この型の腫瘍は、粘液産生細胞から生じ、主に肺の末梢部に位置する。第二のよくある組織型の腫瘍は、肺胞および細気管支の表面を覆う扁平細胞から生じる扁平上皮癌である。

【0019】

固形腫瘍の微小環境は、細胞因子と非細胞因子との複雑な混合物である。特に、腫瘍の周囲に位置する免疫細胞およびケモカインクロストークは、腫瘍細胞の増殖およびその拡散を促進する。腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）は、腫瘍微小環境における最も重要なサブグループの免疫細胞の一つであり、腫瘍量の最大５０％に相当する。いくつかの研究により、悪性疾患におけるＴＡＭの数と、予後不良との有意な相関が示されている。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0020】

本発明の目的の一つは、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０に結合することができる単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドを提供することである。

【0021】

本発明のさらなる目的は、被験体からの液体試料中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドの濃度を定量するための方法ならびに被験体における間質性肺疾患または癌を検出および／または予後判定するために用いることができるｉｎ ｖｉｔｒｏでの診断方法を提供することである。

【0022】

本発明の別の目的は、ＣＣＲ６受容体活性の阻害剤を提供することである。本発明のさらなる目的は、ＣＣＲ６受容体活性の阻害剤を同定する方法を提供することである。

【0023】

本発明の別の目的は、間質性肺疾患および／または癌の処置にとって好適な化合物を含む医薬組成物を提供することであり、前記間質性肺疾患は好ましくは特発性肺線維症（ＩＰＦ）であり、前記癌は好ましくは腺癌であり、最も好ましくは肺の腺癌である。

【課題を解決するための手段】

【0024】

これらの目的およびその他の目的は、後の説明および特許請求の範囲から明らかとなるように、独立クレームの主題によって達成される。いくつかの好ましい実施形態は、従属クレームによって定義される。

【0025】

第一の態様において、本発明は、
（ａ）配列番号１に記載の配列に対して少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列、および
（ｂ）（ａ）に記載のアミノ酸配列の断片
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０に結合することができる単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドを提供する。

【0026】

別の態様において、本発明は、被験体からの液体試料中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドの濃度を定量するための方法であって、
（ａ）固相支持体上に可溶性ＣＣＲ６受容体に特異的な捕捉分子を固定化するステップと、
（ｂ）前記被験体からの液体試料を添加するステップと、
（ｃ）任意選択で、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０または配列番号２１に記載の配列に対して少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドである、可溶性ＣＣＲ６受容体のリガンドを添加するステップと、
（ｄ）検出可能な標識を含む、（ｃ）に記載のリガンドに特異的な検出剤を添加するステップと、
（ｅ）（ｄ）に記載の検出剤からのシグナルを定量するステップと
を含む方法に関する。

【0027】

さらに別の態様において、本発明は、被験体における間質性肺疾患または癌を検出および／または予後判定するための方法であって、前記被験体からの試料中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルを決定するステップを含む方法に関する。

【0028】

さらなる態様において、本発明は、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の活性および／または発現を阻害することができる化合物を含む医薬組成物を提供する。

【0029】

別の態様において、本発明は、療法における使用のための、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに関する。

【0030】

さらなる態様において、本発明は、間質性肺疾患および／または癌の処置または予防における使用のための、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは本発明による医薬組成物に関する。

【0031】

さらに別の態様において、本発明は、被験体からの試料における間質性肺疾患または癌の検出における使用のための、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに特異的な検出剤に関する。

【0032】

さらなる態様において、本発明は、
（ａ）配列番号９、２２または２３に記載の配列に対して少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列、および
（ｂ）（ａ）に記載のアミノ酸配列の断片
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＣＣＲ６受容体に結合しその活性を阻害することができる単離されたポリペプチドを提供する。

【0033】

別の態様において、本発明は、本発明によるポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドに関する。

【0034】

さらに別の態様において、本発明は、ＣＣＲ６受容体の活性を阻害することができる化合物を同定するための方法であって、
（ａ）ＣＣＲ６受容体を試験化合物と接触させるステップと、
（ｂ）配列番号５または配列番号１８に記載の配列に対して少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドであるＣＣＲ６受容体アゴニストを添加するステップと、
（ｃ）前記ＣＣＲ６受容体の活性を決定するステップと、
（ｄ）（ｃ）で決定されたＣＣＲ６受容体活性が対照中で決定されたＣＣＲ６受容体活性よりも低い場合、前記試験化合物を、ＣＣＲ６受容体の活性を阻害することができる化合物として選択するステップと
を含む方法に関する。

【0035】

さらなる態様において、本発明は、被験体からの試料中のＣＣＲ６遺伝子発現のレベルを決定するステップを含む、前記被験体における間質性肺疾患または癌を検出するための方法に関する。

【0036】

別の態様において、本発明は、ＣＣＲ６受容体の活性および／または発現を阻害することができる化合物を含む医薬組成物を提供する。

【0037】

さらに別の態様において、本発明は、間質性肺疾患および／または癌の処置または予防における使用のための、本発明による医薬組成物に関する。

【0038】

さらなる態様において、本発明はまた、間質性肺疾患および／または癌の処置または予防のための薬剤の製造のための、ＣＣＲ６受容体の活性および／もしくは発現を阻害することができる化合物または本発明による医薬組成物の使用にも関する。

【図面の簡単な説明】

【0039】

【図1】扁平上皮癌（ｎ＝３）、ＮＳＩＰ（ｎ＝２）およびＵＩＰ（ｎ＝３）に罹患している患者に由来する様々な線維芽細胞系によるＣＣＲ６ ｍＲＮＡ発現を示す図である。ＣＣＲ６発現を、ハウスキーピング遺伝子グリセリンアルデヒド−３−リン酸(Glycerinaldehyd-3-phosphat)−デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰｄＨ）を用いて正規化した。

【図2】ＵＩＰ（上パネル、左および中央）、ＮＳＩＰ（上パネル、右）、および扁平上皮癌（ＳＱ ＣＡ；下パネル）に罹患している患者に由来する様々な線維芽細胞系によるＣＣＲ６発現の分析を示す図である。

【図3】ＣＣＲ６は対照の肺（Ａ）においては発現されないが、線維症の肺においては、ＣＣＲ６の発現は肺胞上皮細胞の先端面（ＢおよびＣ、矢印頭部）、ならびに線維芽細胞上（Ｃ、矢印）に見出され得ることを示す図である（倍率：Ａ：ｘ１００、Ｂ：ｘ２００、Ｃ：ｘ４００）。

【図4】刺激されていない（ｕｎｓｔ．）ＦＧＦ２放出が、非線維性肺に由来する線維芽細胞（明るい灰色、「対照」、ｎ＝６）と比較して、線維性肺に由来する線維芽細胞（灰色、ｎ＝６（ＵＩＰ ｎ＝３、サルコイドーシス ｎ＝１、ＮＳＩＰ ｎ＝１、未定義 ｎ＝１））において増加することを示す図である。ＣＣＬ１８は線維性肺に由来する線維芽細胞においてはＦＧＦ２放出の有意な上方調節を誘導するが、非線維性肺に由来する線維芽細胞においてはわずかに誘導するに過ぎない。遮断抗体を用いるＣＣＲ６の遮断は、ＣＣＬ１８により誘導されるＦＧＦ２放出の上方調節を阻害する。再度、この効果は、線維性肺に由来する線維芽細胞においてのみ認められる。

【図5】調査したヒト肺線維芽細胞系の３／４（上パネル）におけるＣＣＬ１８により誘導されるＩ型コラーゲンｍＲＮＡ発現および調査したヒト肺線維芽細胞系の全部（下パネル）におけるα−平滑筋アクチン（αＳＭＡ）ｍＲＮＡ発現を示す図である（縦座標は細胞系の名称を示す）。Ｉ型コラーゲンｍＲＮＡ発現およびα−平滑筋アクチン（αＳＭＡ）ｍＲＮＡ発現は、抗ＣＣＲ６により遮断される（ｒＥ＝相対的発現）。

【図6】形質転換されたラット肺胞上皮細胞系ＲＬＥ−６ＴＮが、ＴＧＦβまたはＣＣＬ１８による刺激後に上皮間葉移行（ＥＭＴ）を受けることを示す図である。矢印は線維芽細胞様細胞を示す。培養期間＝６日間。

【図7】刺激しないか、またはＴＧＦβ、ＴＧＦβ＋ＴＮＦα、ＣＣＬ１８、もしくはＣＣＬ１８＋ＴＮＦαの存在下で６日間培養されたビメンチンおよびαＳＭＡの発現のウェスタンブロット分析を示す図である。

【図8】６日目に免疫蛍光により評価されたαＳＭＡに対する免疫反応性を示す図である。ＲＬＥ−６ＴＮ細胞を、刺激しないまま放置するか（Ａ）または（Ｂ）ＴＧＦβ＋ＴＮＦα、（Ｃ）ＣＣＬ１８、もしくは（Ｄ）ＣＣＬ１８＋ＴＮＦαで刺激した。核はＤＡＰＩにより染色される。パネルＢにおいてはαＳＭＡのみが見え、線維芽細胞の典型的な形状を発見する（矢印頭部）。対照的に、パネルＣおよびＤにおいては、核のみが明白である。

【図9】６日目に免疫蛍光により評価されたＣＤ９０の免疫反応性を示す図である。ＲＬＥ−６ＴＮ細胞を、刺激しないまま放置するか（Ａ）またはＴＧＦβ＋ＴＮＦα（Ｂ）、ＣＣＬ１８（Ｃ）で刺激した。核はＴｏＰｒｏ３により染色される。刺激されない細胞はＣＤ９０を発現せず、核のみが見える。対照的に、ＴＧＦβ＋ＴＮＦαおよびＣＣＬ１８に刺激された細胞の両方が、細胞形状の発見により示されるようにＣＤ９０を発現する。

【図10】αＳＭＡのＣＣＬ１８により誘導される発現が、ＣＣＲ６によりトランスフェクトされたＲＬＥ−６ＴＮにおいては見出されるが、モックトランスフェクトされた細胞においては見出されないことを示す図である。対照的に、ＴＧＦβは両方の細胞系においてαＳＭＡ発現を誘導する。

【図11】ＴＮＦαの非存在下または存在下でＴＧＦβ＋ＴＮＦαまたはＣＣＬ１８で１２日間刺激されたヒト一次ＡＥＣＩＩを示す図である。全細胞溶解物を１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、ウェスタンブロットにより分析した。非刺激細胞はα平滑筋アクチン（αＳＭＡ）をわずかに発現するに過ぎず、ビメンチンを発現しない。ＴＧＦβ＋ＴＮＦαおよびＣＣＬ１８単独、またはＴＮＦαと組合せたＣＣＬ１８による刺激は、両方の分子を強く上方調節する。興味深いことに、サイトケラチンは、ＴＧＦβ＋ＴＮＦαによって下方調節されるが、ＣＣＬ１８単独で、またはＴＮＦαと組合せたＣＣＬ１８によって保存される。

【図12】フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ；５μｇ／ｍｌ）の存在下または非存在下での培養の７日後の末梢血単核細胞によるＣＣＲ６の発現を示す図である。細胞調製物を、その初期ＣＣＲ６発現に従って「高い」または「低い」ＣＣＲ６発現調製物に分類した。培養期間の後、非刺激調製物はＣＣＲ６発現パターンを変化させなかった。対照的に、ＰＨＡによる刺激は、高発現群のＣＣＲ６発現を低下させたが、低発現群における発現を増加させた。

【図13】ＣＣＬ１８（１０ｎｇ／ｍｌ）と共に２０分間インキュベートした後のＣＣＲ６受容体の下方調節を示す図である。ＣＣＬ１８とのインキュベーションは、ＣＣＲ６表面発現の顕著な下方調節を誘導する。この効果は、リガンド−受容体相互作用後の受容体内在化によって引き起こされる。

【図14】ヒトリンパ球上でのＣＣＲ６発現のＣＣＬ１８により誘導される下方調節および阻害剤ＰＳ−ＡＵ−１０１５（配列番号９に記載のポリペプチド）によるその阻害のＦＡＣＳ分析を示す図である。新鮮に単離されたヒトリンパ求のサブ集団は、主要なピークの下側ピーク右手側として見えるケモカイン受容体ＣＣＲ６を発現する（陽性対照）。２０分間のＣＣＬ１８（１０ｎｇ／ｍｌ）とのインキュベーションは、ピークを顕著に低下させる（ＣＣＬ１８のみ）。阻害剤ＰＳ−ＡＵ−１０１５（配列番号９；１００ｎｇ／ｍｌ）の存在下でのＣＣＬ１８（１０ｎｇ／ｍｌ）との細胞のインキュベーション時には、この下方調節は起こらない（ＣＣＬ１８＋阻害剤）。阻害剤のみの場合、効果を示さない。

【図15】対照肺（Ａ）および２つの腺癌肺（Ｂ、Ｃ）に由来する肺切片のＣＣＲ６染色を示す図である。対照肺においては染色は見えないが、腫瘍細胞はＣＣＲ６について陽性である（赤色、矢印）。

【図16】肺腺癌細胞（上パネル）および胸膜中皮腫細胞（下パネル）の表面上でのＣＣＲ６の発現を示す図である。左ピークはアイソタイプ対照を示し、右ピークはＣＣＲ６発現を示す。３つの腺癌細胞系のうちの２つおよび胸膜中皮腫細胞系の全部が顕著なＣＣＲ６発現を示す。

【図17】ＰＣＲに用いたプライマーの一覧を示す図である。

【図18】対照として使用する健康なボランティア（ｎ＝３；レーン１〜３）および線維症（ＵＩＰ）患者（ｎ＝３；レーン４〜６）からの血清のウェスタンブロット分析を示す図である（Ａ）。分子サイズは図の縁に記載される（Ｃ＝対照；Ｍ＝タンパク質マーカー）。ウェスタンブロットの密度分析も示す（Ｂ）。

【図19】健康なボランティア（ｎ＝９）からの対照血清および線維症患者（ＵＩＰ、ｎ＝１９）からの血清の分析を示す図である。

【図20】ＣＣＲ６リガンドであるＣＣＬ１８およびＣＣＬ２０（それぞれ１００ｎｇ／ｍｌ）を１ｈ用いるＥＬＩＳＡによる可溶性ＣＣＲ６（ｓＣＣＲ６）検出の遮断を示す図である。低濃度および中濃度は全体的に遮断されるが、高濃度は３分の１減少する。血清１、２および３は健康なボランティアからの血清である。

【図21】ｓＣＣＲ６陽性およびｓＣＣＲ６陰性対照ならびに（ＵＩＰ）患者からのＢＡＬにおけるリンパ球の割合を示す図である。リンパ球の割合は血清ｓＣＣＲ６陽性患者において有意に増加する。この効果は対照においてはあまり顕著ではない（有意ではない）。

【図22】ｓＣＣＲ陽性およびｓＣＣＲ６陰性（ＵＩＰ）患者からのＢＡＬ中のＣＤ３^＋およびＨＬＡ−ＤＲ^＋リンパ球、ＮＫ細胞ならびにＣＤ１ａ^＋樹状細胞の割合を示す図である。

【図23】全ての患者群がＣＣＬ１８血清レベルを対照と比較して有意に増加させることを開示する図である。

【図24】全てのＴ段階の平均ＣＣＬ１８レベルが対照と比較して有意に増加したことを示す図である（ｐ＜０．０００２）。さらに、最も低いＴ段階を有する患者群と２つの最も高いＴ段階を有する患者群との間には有意差があった。

【図25】受信者／操作者曲線（ＲＯＣ、左側）およびプロット対基準値（右側）を用いるカットオフ点の決定を示す図である。ＲＯＣ分析により、対照と腫瘍患者とを区別するためのカットオフ点が８３ｎｇ／ｍｌであることが示された。基準プロットにより、観察期間内の基準死に関する１６０ｎｇ／ｍｌのカットオフ点が示された。

【図26】ＣＣＬ血清レベルに関するＮＳＣＬＣを有する患者の生存期間のＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ分析を示す図である。

【図27】ＣＣＬ血清レベルに関する腺癌に罹患している患者の生存期間のＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ分析を示す図である。

【図28】腺癌患者のサブグループにおいて、最も高い血清ＣＣＬ１８レベルを有する群の平均Ｎ段階が、正常な血清ＣＣＬ１８レベルを有するサブグループと比較して有意に高いことを示す図である。

【図29】ＣＣＬ１８が腺癌細胞（Ａ５４９）中でＦＳＰ１発現の上方調節を誘導することを示す図である。２ｎｇ／ｍｌのＴＧＦβを用いた。培養の７２ｈ後にｑＰＣＲにより発現を決定した（Ｃ＝非刺激細胞）。

【図30】ＣＣＬ１８が腺癌細胞（Ａ５４９）中でｓｎａｉｌの発現を誘導することを示す図である。２ｎｇ／ｍｌのＴＧＦβを用いた。培養の７２ｈ後にウェスタンブロットより発現を決定した（Ｃ＝非刺激細胞）。

【図31】ＣＣＬ１８が腺癌細胞（Ａ５４９）中でＥ−カドヘリン発現の下方調節を誘導することを示す図である。２ｎｇ／ｍｌのＴＧＦβを用いた。培養の７２ｈ後にｑＰＣＲにより発現を決定した（Ｃ＝非刺激細胞）。

【図32】様々な腫瘍に罹患している患者の肺から誘導された線維芽細胞系内のＣＣＲ６陽性線維芽細胞の割合を示す図である。

【図33】配列番号１〜９および配列番号１８〜２７の配列表である。

【発明を実施するための形態】

【0040】

本発明を以下で詳細に説明する前に、本発明が本明細書に記載の特定の方法論、プロトコールおよび試薬に限定されず、これらのものが変化してもよいことが理解されるべきである。また、本明細書で用いられる用語は、特定の実施形態のみを説明する目的のためのものであり、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定することを意図するものではないことも理解されるべきである。別途定義しない限り、本明細書で用いられる全ての技術的および科学的用語は、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。

【0041】

本明細書の本文を通じて、全体が参照により本明細書に組み入れられるいくつかの文書が引用されるが、その中の全てが、本発明が、先の発明であるという理由でそのような開示に先行する資格を与えられないとの許諾と解釈されるべきではない。

【0042】

以下の定義が導入される。本明細書および意図される特許請求の範囲で用いられる単数形「ａ」および「ａｎ」は、文脈が別途明確に区別しない限り、対応する複数のものも含む。

【0043】

用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」ならびに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形が限定ではないことが理解されるべきである。本発明の目的のために、用語「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」は、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」の好ましい実施形態であると考えられる。

【0044】

以後、ある群が少なくとも特定数の実施形態を含むと定義される場合、これが好ましくはこれらの実施形態のみからなる群も包含することを意味する。

【0045】

本発明の文脈における用語「約」および「およそ」は、当業者であれば問題の特徴の技術的効果を依然として確保することを理解できる正確さの間隔を指す。この用語は典型的には、指示される数値の±１０％および好ましくは±５％の逸脱を包含する。

【0046】

２つの配列間の同一性％の決定は、好ましくはKarlinおよびAltschul(1993) Proc. Natl. Acad. Sci USA 90: 5873〜5877の数学的アルゴリズムを用いて達成される。そのようなアルゴリズムは、例えば、ＮＣＢＩ(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/Blast.cgi)で利用可能なAltschulら(1990)J.Mol.Biol.215: 403〜410のＢＬＡＳＴｎおよびＢＬＡＳＴｐプログラム中に組み入れられる。

【0047】

同一性％の決定は、好ましくは、ＢＬＡＳＴｎおよびＢＬＡＳＴｐプログラムの標準的なパラメータを用いて実施される。

【0048】

ＢＬＡＳＴポリヌクレオチド検索は、好ましくは、ＢＬＡＳＴｎプログラムを用いて実施される。

【0049】

一般的なパラメータについて、「最大標的配列」ボックスは１００に設定し、「短いクエリー」ボックスにレ点を付け、「期待閾値」ボックスは１０に設定し、「ワードサイズ」ボックスは２８に設定してよい。スコアリングパラメータについて、「一致／不一致スコア」は１、−２に設定し、「ギャップコスト」ボックスは線形に設定してよい。フィルターおよびマスキングパラメータについては、「低複雑性領域」ボックスにレ点を付けず、「種特異的反復」ボックスにはレ点を付けず、「検索表のみを隠す」ボックスにレ点を付け、「小文字を隠す」ボックスにはレ点を付けなくてよい。

【0050】

ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、好ましくはＢＬＡＳＴｐプログラムを用いて実施される。

【0051】

一般的なパラメータについて、「最大標的配列」ボックスは１００に設定し、「短いクエリー」ボックスにレ点を付け、「期待閾値」ボックスは１０に設定し、「ワードサイズ」ボックスは３に設定してよい。スコアリングパラメータについて、「マトリックス」ボックスは「ＢＬＯＳＵＭ６２」に設定し、「ギャップコスト」ボックスは「存在：１１ 伸長：１」に設定し、「組成調整」ボックスは「条件的組成スコアマトリックス調整」に設定してよい。フィルターおよびマスキングパラメータについては、「低複雑性領域」ボックスにレ点を付けず、「検索表のみを隠す」ボックスにレ点を付けず、「小文字を隠す」ボックスにはレ点を付けなくてよい。

【0052】

同一性％は、それぞれの参照配列の全長にわたって、すなわち、それぞれの文脈で記載される配列番号または複数の配列番号に記載の配列の全長にわたって決定される。例えば、配列番号１に記載の配列に対して少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列は、配列番号１の全長にわたって配列番号１に対して少なくとも８０％の同一性を示す。別の例では、配列番号８に記載の配列に対して少なくとも８０％の同一性を示す配列は、配列番号８の全長にわたって配列番号８に対して少なくとも８０％の同一性を示す。

【0053】

本明細書で用いられる用語「被験体」とは、ヒトまたは動物、好ましくは、例えば、非ヒト霊長類、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギなどの哺乳動物を指す。好ましくは、本発明の文脈における「被験体」はヒトである。

【0054】

本発明の文脈において記載される用語「ケモカイン受容体ＣＣＲ６」または「ＣＣＲ６受容体」、「ケモカインリガンド１８」または「ＣＣＬ１８」および「ケモカインリガンド２０」または「ＣＣＬ２０」は、当業界で周知である。従って、平均的な当業者であれば、ＣＣＲ６受容体、ＣＣＬ１８およびＣＣＬ２０ならびにそのオルトログおよびスプライスアイソフォームのポリヌクレオチドおよびアミノ酸配列を、例えば、ＮＣＢＩデータベース(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/)などの任意の好適な公共データベースから容易に検索することができる。用語「ＣＣＲ６受容体」および「ＣＣＲ６」は、本明細書では互換的に用いられる。

【0055】

本発明の文脈において記載される用語「ＣＣＲ６受容体」、「ＣＣＬ１８」および「ＣＣＬ２０」は、好ましくは哺乳動物のＣＣＲ６受容体、ＣＣＬ１８およびＣＣＬ２０であり、最も好ましくはヒトＣＣＲ６受容体およびヒトＣＣＬ１８またはヒトＣＣＬ２０である。ヒトＣＣＲ６受容体は、例えば、受託番号ＮＭ＿００４３６７．５（転写変異体１；配列番号３）またはＮＭ＿０３１４０９．３（転写変異体２；配列番号４）の下でＮＣＢＩデータベース中に見出すことができる。ヒトＣＣＬ１８は、例えば、受託番号ＮＭ＿００２９８８．２（配列番号５）の下でＮＣＢＩデータベース中に見出すことができる。ヒトＣＣＬ２０は、例えば、受託番号ＮＭ＿００４５９１．２（転写変異体１；配列番号６）またはＮＭ＿００１１３００４６．１（転写変異体２；配列番号７）の下でＮＣＢＩデータベース中に見出すことができる。

【0056】

ＣＣＲ６はＣＤ１９６と呼ばれることもある。ＣＣＬ１８は肺および活性化調節ケモカイン（ＰＡＲＣ）、選択的マクロファージ活性化関連ＣＣケモカイン１（ＡＭＡＣ−１）、マクロファージ炎症タンパク質−４（ＭＩＰ−４）または樹状細胞由来ケモカイン１（ＤＣＣＫ１）と呼ばれることもある。

【0057】

用語「ＩＰＦ」（特発性肺線維症）および「ＵＩＰ」（通常型間質性肺炎）は、本明細書では同義語として用いられる。

【0058】

本発明の発明者らは驚くべきことに、ＣＣＬ１８がＣＣＲ６受容体のリガンド／アゴニストであり、７回膜貫通Ｇタンパク質共役ケモカイン受容体ファミリーのメンバーであることを見出した。本発明者らはさらに驚くべきことに、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドが健康なヒトボランティアからの血清中に見出され得るが、ＩＰＦに罹患するヒト患者からの血清中では少量でのみ検出されるか、または全く検出されない可能性があることを見出した。本発明者らはまた、単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドを、療法、特に、間質性肺疾患または癌の療法のために用いることができることも見出した。本発明者らはさらに驚くべきことに、ＣＣＲ６受容体活性の阻害剤を、間質性肺疾患または癌の療法のために用いることができることを見出した。

【0059】

従って、一態様において、本発明は、
（ａ）配列番号１に記載の配列に対して少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列、および
（ｂ）（ａ）に記載のアミノ酸配列の断片
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０に結合することができる単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに関する。

【0060】

好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドはさらに、配列番号２に記載の配列またはその断片に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％または９８％の同一性を示すアミノ酸配列を含む。特に好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドはさらに、配列番号２に記載の配列またはその断片に対して少なくとも９５％の同一性を示すアミノ酸配列を含む。別の特に好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドはさらに、配列番号２に記載のアミノ酸配列またはその断片を含む。別の好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列またはその断片に対して少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列および配列番号２に記載の配列またはその断片に対して少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。さらに別の好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列またはその断片に対して少なくとも９０％の同一性を示すアミノ酸配列および配列番号２に記載の配列またはその断片に対して少なくとも９０％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。さらに別の好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列またはその断片に対して少なくとも９５％の同一性を示すアミノ酸配列および配列番号２に記載の配列またはその断片に対して少なくとも９５％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

【0061】

さらに別の好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列またはその断片および配列番号２に記載のアミノ酸配列またはその断片を含むか、またはそれからなる。

【0062】

好ましくは、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０は、ヒトＣＣＬ１８および／またはヒトＣＣＬ２０である。最も好ましくは、前記ＣＣＬ１８は配列番号１８に記載のポリペプチドであり、前記ＣＣＬ２０は配列番号１９に記載のポリペプチドである。

【0063】

本発明の文脈における用語「単離された」とは、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドがその天然の環境から除去された、および／またはそれが天然には見出されない形態で提供されることを示す。「単離された」ポリペプチドまたは「単離された」ポリヌクレオチドはまた、ｉｎ ｖｉｔｒｏで生成されたポリペプチドまたはポリヌクレオチドであってもよい。

【0064】

本明細書で用いられる用語「単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド」は、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドを、例えば、膜結合型ＣＣＲ６受容体などの膜に結合した受容体ポリペプチドから区別することを意味する。例えば、本発明の文脈においては、内因性条件下で被験体の体液（例えば、血清、血漿、気管支肺胞洗浄液、胸水、痰、唾液または尿）に溶解し、細胞膜に埋め込まれるか、または付着する任意の天然の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは「可溶性」であると考えられる。

【0065】

かくして、一例において、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、被験体からの試料から単離された天然の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドであってよい。

【0066】

別の例では、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドはまた、ｉｎ ｖｉｔｒｏで生成され、水性溶液、例えば、生理的水性溶液、好ましくは、血清、血漿、気管支肺胞洗浄液、胸水、痰、唾液または尿、最も好ましくは、血清中で実質的に可溶性である組換えポリペプチドであってもよい。

【0067】

好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、水性溶液、好ましくは、血清、血漿、気管支肺胞洗浄液、胸水、痰、唾液または尿中に、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％または最も好ましくは少なくとも９０％可溶性である。特に好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、水性溶液、好ましくは、血清、血漿、気管支肺胞洗浄液、胸水、痰、唾液または尿中に、少なくとも７５％可溶性である。本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６ポリペプチドの溶解度（％）を決定するために、当業者であれば、例えば、前記ポリペプチドを含有する試料を遠心分離した後、上清中の該ポリペプチドの量および試料中の該ポリペプチドの総量を測定することができる。次いで、溶解度（％）を、遠心分離前の試料中のポリペプチドの総量に対する上清中のポリペプチドの量の％として算出することができる。

【0068】

好ましい実施形態においては、上記水性溶液中での本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドの溶解は、洗剤の添加を要しない。別の好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、膜貫通ドメインを含まない。

【0069】

一つの好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号１に記載の配列に対して少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９１％、さらにより好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、さらにより好ましくは少なくとも９７％、さらにより好ましくは少なくとも９８％またはさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を示す。

【0070】

特に好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号１に記載の配列に対して９０％、９５％または１００％の同一性を示す。

【0071】

別の特に好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号１に記載の配列である。本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドが配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる場合、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、好ましくは４８アミノ酸の長さを有する。

【0072】

別の好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列中、配列番号１に記載の配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個以下のアミノ酸が変更される（すなわち、欠失、挿入、改変および／または他のアミノ酸により置換される）。

【0073】

本発明によるアミノ酸配列中の置換は、保存的または非保存的置換、好ましくは、保存的置換であってよい。いくつかの実施形態においては、置換は天然アミノ酸の非天然アミノ酸との交換をも含む。保存的置換は、あるアミノ酸の、置換されるアミノ酸と類似する化学的特性を有する別のアミノ酸との置換を含む。好ましくは、保存的置換は、
（ｉ）塩基性アミノ酸の、別の異なる塩基性アミノ酸との置換；
（ｉｉ）酸性アミノ酸の、別の異なる酸性アミノ酸との置換；
（ｉｉｉ）芳香族アミノ酸の、別の異なる芳香族アミノ酸との置換；
（ｉｖ）非極性脂肪族アミノ酸の、別の異なる非極性脂肪族アミノ酸との置換；および
（ｖ）極性非荷電アミノ酸の、別の異なる極性非荷電アミノ酸との置換
からなる群より選択される置換である。

【0074】

塩基性アミノ酸は、好ましくは、アルギニン、ヒスチジン、およびリジンからなる群より選択される。酸性アミノ酸は、好ましくはアスパラギン酸またはグルタミン酸である。

【0075】

芳香族アミノ酸は、好ましくは、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファンからなる群より選択される。非極性脂肪族アミノ酸は、好ましくは、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、メチオニンおよびイソロイシンからなる群より選択される。極性非荷電アミノ酸は、好ましくは、セリン、トレオニン、システイン、プロリン、アスパラギンおよびグルタミンからなる群より選択される。保存的アミノ酸置換とは対照的に、非保存的アミノ酸置換は、あるアミノ酸の、上記で概略された保存的置換（ｉ）から（ｖ）に該当しない任意のアミノ酸との交換である。

【0076】

本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６ポリペプチドのアミノ酸は、改変、例えば、化学的に改変されていてもよい。例えば、タンパク質のアミノ酸の側鎖または遊離アミノもしくはカルボキシ末端を、例えば、グリコシル化、アミド化、リン酸化、ユビキチン化などにより改変することができる。本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６ポリペプチドの細胞内安定性を増加させ、かつ／またはそれに対する被験体の免疫応答を低下させるために、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６ポリペプチドを、例えば、アセチル化、ＰＥＧ化、アミド化またはＤ−アミノ酸の組込みにより改変することができる。

【0077】

好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号１に記載の配列の少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０または少なくとも４５個の連続するアミノ酸を含む。特に好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号１に記載の配列の少なくとも８、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも３０または少なくとも４０個のアミノを含む。

【0078】

別の好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号１に記載の配列に対して少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、より好ましくは少なくとも９３％、より好ましくは少なくとも９４％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９６％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％または最も好ましくは１００％の同一性を示し、配列番号１に記載の配列の少なくとも８、より好ましくは少なくとも１２、より好ましくは少なくとも１５、より好ましくは少なくとも２０、より好ましくは少なくとも２５、より好ましくは少なくとも３０、より好ましくは少なくとも３５、より好ましくは少なくとも４０および最も好ましくは少なくとも４５個の連続するアミノ酸を含む。

【0079】

さらに別の好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号１に記載の配列に対して少なくとも９５％または少なくとも９８％の同一性を示し、配列番号１に記載の配列の少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０または少なくとも４０個の連続するアミノ酸を含む。最も好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号１に記載の配列に対して少なくとも９５％の同一性を示し、配列番号１に記載の配列の少なくとも２０個の連続するアミノ酸を含むか、または配列番号１に記載の配列に対して少なくとも９８％の同一性を示し、配列番号１に記載の配列の少なくとも２５個の連続するアミノ酸を含む。

【0080】

好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、３０００アミノ酸未満、好ましくは２０００アミノ酸未満、より好ましくは１０００アミノ酸未満、より好ましくは５００アミノ酸未満、より好ましくは３００アミノ酸未満、より好ましくは２００アミノ酸未満、より好ましくは１００アミノ酸未満または最も好ましくは８０アミノ酸未満の長さを有する。

【0081】

さらに好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、少なくとも８〜少なくとも３０００アミノ酸、好ましくは少なくとも８〜少なくとも２０００アミノ酸、より好ましくは少なくとも８〜少なくとも１０００アミノ酸、より好ましくは少なくとも８〜５００アミノ酸、より好ましくは少なくとも８〜３００アミノ酸、より好ましくは少なくとも８〜２００アミノ酸、およびさらにより好ましくは少なくとも８〜１００アミノ酸または少なくとも８〜８０アミノ酸の長さを有する。

【0082】

別の好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、少なくとも２０〜少なくとも３０００アミノ酸、好ましくは少なくとも２０〜少なくとも２０００アミノ酸、より好ましくは少なくとも２０〜少なくとも１０００アミノ酸、より好ましくは少なくとも２０〜５００アミノ酸、より好ましくは少なくとも２０〜３００アミノ酸、より好ましくは少なくとも２０〜２００アミノ酸、およびさらにより好ましくは少なくとも２０〜１００アミノ酸または少なくとも２０〜８０アミノ酸の長さを有する。別の好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、少なくとも３０〜少なくとも３０００アミノ酸、好ましくは少なくとも３０〜少なくとも２０００アミノ酸、より好ましくは少なくとも３０〜少なくとも１０００アミノ酸、より好ましくは少なくとも３０〜５００アミノ酸、より好ましくは少なくとも３０〜３００アミノ酸、より好ましくは少なくとも３０〜２００アミノ酸、およびさらにより好ましくは少なくとも３０〜１００アミノ酸または少なくとも３０〜８０アミノ酸の長さを有する。

【0083】

さらに好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、少なくとも４０〜少なくとも３０００アミノ酸、好ましくは少なくとも４０〜少なくとも２０００アミノ酸、より好ましくは少なくとも４０〜少なくとも１０００アミノ酸、より好ましくは少なくとも４０〜５００アミノ酸、より好ましくは少なくとも４０〜３００アミノ酸、より好ましくは少なくとも４０〜２００アミノ酸、およびさらにより好ましくは少なくとも４０〜１００アミノ酸または少なくとも４０〜８０アミノ酸の長さを有する。さらに別の好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、少なくとも５０〜少なくとも３０００アミノ酸、好ましくは少なくとも５０〜少なくとも２０００アミノ酸、より好ましくは少なくとも５０〜少なくとも１０００アミノ酸、より好ましくは少なくとも５０〜５００アミノ酸、より好ましくは少なくとも５０〜３００アミノ酸、より好ましくは少なくとも５０〜２００アミノ酸、およびさらにより好ましくは少なくとも５０〜１００アミノ酸または少なくとも５０〜８０アミノ酸の長さを有する。特に好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、少なくとも２０〜少なくとも５００アミノ酸の長さを有する。

【0084】

別の好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、少なくとも８、より好ましくは少なくとも１０、より好ましくは少なくとも２０、より好ましくは少なくとも３０、より好ましくは少なくとも４０、より好ましくは少なくとも４５およびさらにより好ましくは少なくとも４８アミノ酸の長さを有する。特に好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、少なくとも３０、少なくとも４０または少なくとも４８アミノ酸の長さを有する。特に好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、４８アミノ酸の長さを有する。

【0085】

断片は、典型的には、それが言及するアミノ酸配列の一部である。

【0086】

好ましい実施形態においては、（ｂ）に記載の断片は、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７または少なくとも２８アミノ酸の長さである。好ましい実施形態においては、（ｂ）に記載の断片は、少なくとも１０、少なくとも１５または少なくともまたは少なくとも２０アミノ酸の長さを有する。特に好ましい実施形態においては、（ｂ）に記載の断片は、少なくとも１５アミノ酸、より好ましくは少なくとも２０アミノ酸、より好ましくは少なくとも３０アミノ酸または最も好ましくは少なくとも４０アミノ酸の長さを有する。さらに特に好ましい実施形態においては、（ｂ）に記載の断片は、少なくとも４０アミノ酸の長さを有する。

【0087】

本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドがＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０に結合することができるかどうかを、当業者には公知の任意の好適な方法により決定することができる。例えば、当業者であれば、酵母２ハイブリッドアッセイまたは生化学的アッセイ、例えば、プルダウンアッセイ、共免疫沈降アッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、定量的放射性リガンド結合アッセイ、プラズモン共鳴アッセイもしくは当業者には公知の任意の他の方法を用いることにより、本発明による可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドがＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０に結合することができるかどうかを決定することができる。プルダウンアッセイまたはプラズモン共鳴アッセイを用いる場合、生化学の分野では周知のように、タンパク質の少なくとも一つを、ＨＩＳタグ、ＧＳＴタグその他などの親和性タグに融合させることが有用である。

【0088】

好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０の活性を阻害することができる。

【0089】

本明細書で用いられる用語「ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０の活性を阻害すること」とは、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは本明細書に記載のＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０の活性を阻害することができる任意の他の化合物（例えば、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０に特異的な抗体など）によって、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０の活性が下方調節されるか、または消失することを意味する。

【0090】

例えば、一実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは本明細書に記載のＣＣＬ１８および／もしくはＣＣＬ２０の活性を阻害することができる任意の他の化合物は、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０への結合時に、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０と膜結合型ＣＣＲ６受容体との相互作用を阻害し、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０が前記受容体を活性化できないようにする。かくして、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０活性の阻害は、例えば、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０と膜結合型ＣＣＲ６受容体との相互作用の阻害に起因するものであってよい。別の実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは本明細書に記載のＣＣＬ１８および／もしくはＣＣＬ２０の活性を阻害することができる任意の他の化合物は、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０への結合時に、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０の遊走能を阻害することができる。さらに好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは本明細書に記載のＣＣＬ１８および／もしくはＣＣＬ２０の活性を阻害することができる任意の他の化合物は、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０への結合時に、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０と膜結合型ＣＣＲ６受容体との相互作用ならびにＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０の遊走能を阻害することができる。本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは本明細書に記載のＣＣＬ１８および／もしくはＣＣＬ２０の活性を阻害することができる任意の他の化合物は、例えば、前記タンパク質を隔離し、かくして、そのバイオアベイラビリティを低下させることにより、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０の活性を阻害することができる。

【0091】

試験しようとする本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは任意の他の化合物がＣＣＲ６受容体リガンドであるＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０の活性を阻害することができるかどうかを、例えば、膜結合型ＣＣＲ６受容体の活性を測定することにより決定することができる。

【0092】

一例では、当業者であれば、例えば、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の存在下、および試験しようとする本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは任意の他の化合物の存在下または非存在下で膜結合型ＣＣＲ６受容体を発現する細胞をインキュベートした後、該細胞を溶解し、ウェスタンブロット分析により、ＣＣＲ６シグナル伝達の下流の分子であるＥＲＫのリン酸化を分析することによって、試験しようとする本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは任意の他の化合物がＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０活性を阻害する能力を決定することができる。この例では、試験しようとする本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは任意の他の化合物の非存在下でのＥＲＫのリン酸化のレベルに対して、試験しようとする本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは任意の他の化合物の存在下でのＥＲＫのリン酸化のレベルが低いことは、試験された本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは任意の他の化合物がＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０による膜結合型ＣＣＲ６受容体の活性化を阻害することができることを示す。ウェスタンブロット分析によりＥＲＫリン酸化を決定するための一つの方法は、例えば、Linら、J Proteome Res. 2010 Jan; 9(1): 283〜97に記載されている。同様の例では、例えば、Ａｋｔ、ＳＡＰＫ／ＪＮＫキナーゼ、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼまたはホスホリパーゼＣなどの他のＣＣＲ６受容体下流エフェクターのリン酸化を分析して、試験しようとする本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは任意の他の化合物がＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０活性を阻害することができるかどうかを決定することができる。

【0093】

試験しようとする本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは任意の他の化合物がＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０の活性を阻害することができるかどうかを、例えば、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０の遊走能を測定することによって決定することもできる。

【0094】

ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０の遊走能を、例えば、試験しようとする本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは任意の他の化合物の存在下または非存在下で走化性アッセイを実施することにより決定することができる。当業者であれば、例えば、ケモタキシスチャンバーアッセイを実施することができる。そのようなアッセイの例は、例えば、Christophersonら、J Pharmacol Exp Ther. 2002 Jul; 302(1): 290〜5に記載されている。試験しようとする本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは任意の他の化合物の存在下でのＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０の遊走能の低下は、試験された本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは任意の他の化合物がＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０の遊走能を阻害することができることを示す。

【0095】

さらに、試験しようとする本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６ポリペプチドまたは任意の他の化合物がＣＣＬ１８の活性を阻害することができるかどうかを、例えば、前記単離されたＣＣＲ６ポリペプチドまたは他の化合物の存在下で、ＣＣＬ１８により刺激されたＦＧＦ２放出またはコラーゲンおよび／もしくはα−ＳＭＡのＣＣＬ１８により媒介される誘導を測定することによって決定することもできる。この例では、単離された可溶性ＣＣＲ６ポリペプチド他の化合物が添加されなかった対照と比較した、試験しようとする単離された可溶性ＣＣＲ６ポリペプチドまたは他の化合物の存在下でのＣＣＬ１８により誘導されたＦＧＦ２上方調節の阻害ならびに／またはコラーゲンおよび／もしくはα−ＳＭＡ発現のＣＣＬ１８により媒介される誘導の阻害は、単離された可溶性ＣＣＲ６ポリペプチドまたは他の化合物がＣＣＬ１８の活性を阻害することができることを示す。さらに、試験しようとする本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６ポリペプチドまたは任意の他の化合物がＣＣＬ１８の活性を阻害する能力を決定するために、当業者であれば、ＣＣＬ１８による上皮間葉移行（ＥＭＴ）の誘導が下方調節されまたは消失するかどうかを決定することもできる。

【0096】

あるいは、またはさらに、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０の活性を決定するのに好適であり、当業界に含まれ、平均的な当業者にとって公知である任意のさらなる方法を用いることができる。

【0097】

本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたはＣＣＬ１８および／もしくはＣＣＬ２０の活性を阻害することができる任意の他の化合物は、対照と比較した場合、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０の活性を、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％阻害することができる。好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたはＣＣＬ１８および／もしくはＣＣＬ２０の活性を阻害することができる任意の他の化合物は、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０の活性を、少なくとも５０％、少なくとも６０％または少なくとも７０％阻害する。別の好ましい実施形態においては、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０の活性を阻害することができる、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは本明細書に開示される任意の他の化合物は、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０の活性を１００％阻害することができる。

【0098】

別の好ましい実施形態においては、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、膜貫通ドメインを含まない。

【0099】

用語「膜貫通ドメイン」は、当業界におけるその従来かつ周知の意味に従って本明細書で用いられる。膜貫通ドメインは、例えば、高い割合の非極性疎水性アミノ酸残基、例えば、バリン、ロイシン、イソロイシン、チロシン、フェニルアラニンまたはトリプトファンを含み、脂質二重膜中へのタンパク質の分配を提供するタンパク質の一部であってよい。用語「高い割合の非極性疎水性アミノ酸残基」とは、膜貫通ドメインのアミノ酸の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％以上が非極性疎水性アミノ酸残基であることを意味する。

【0100】

別の態様において、本発明は、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドに関する。

【0101】

好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、９０００ヌクレオチド未満、８０００ヌクレオチド未満、７０００ヌクレオチド未満、６０００ヌクレオチド未満、５０００ヌクレオチド未満、４０００ヌクレオチド未満、３０００ヌクレオチド未満、２０００ヌクレオチド未満、１０００ヌクレオチド未満、５００ヌクレオチド未満または３００ヌクレオチド未満の長さを有する。

【0102】

さらに好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、少なくとも２４〜９０００ヌクレオチド、好ましくは少なくとも２４〜８０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも２４〜７０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも２４〜６０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも２４〜５０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも２４〜４０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも２４〜３０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも２４〜２０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも２４〜１０００ヌクレオチドまたはさらにより好ましくは少なくとも２４〜５００ヌクレオチドまたはさらにより好ましくは少なくとも２４〜３００ヌクレオチドの長さを有する。別の好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、少なくとも６０〜９０００ヌクレオチド、好ましくは少なくとも６０〜８０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも６０〜７０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも６０〜６０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも６０〜５０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも６０〜４０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも６０〜３０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも６０〜２０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも６０〜１０００ヌクレオチドまたはさらにより好ましくは少なくとも６０〜５００ヌクレオチドまたはさらにより好ましくは少なくとも６０〜３００ヌクレオチドの長さを有する。さらに好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、少なくとも９０〜９０００ヌクレオチド、好ましくは少なくとも９０〜８０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも９０〜７０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも９０〜６０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも９０〜５０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも９０〜４０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも９０〜３０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも９０〜２０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも９０〜１０００ヌクレオチドまたはさらにより好ましくは少なくとも９０〜５００ヌクレオチドまたはさらにより好ましくは少なくとも９０〜３００ヌクレオチドの長さを有する。さらに別の好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、少なくとも１２０〜９０００ヌクレオチド、好ましくは少なくとも１２０〜８０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも１２０〜７０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも１２０〜６０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも１２０〜５０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも１２０〜４０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも１２０〜３０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも１２０〜２０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも１２０〜１０００ヌクレオチドまたはさらにより好ましくは少なくとも１２０〜５００ヌクレオチドまたはさらにより好ましくは少なくとも１２０〜３００ヌクレオチドの長さを有する。さらに別の好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、少なくとも１４０〜９０００ヌクレオチド、好ましくは少なくとも１４０〜８０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも１４０〜７０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも１４０〜６０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも１４０〜５０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも１４０〜４０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも１４０〜３０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも１４０〜２０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも１４０〜１０００ヌクレオチドまたはさらにより好ましくは少なくとも１４０〜５００ヌクレオチドまたはさらにより好ましくは少なくとも１４０〜３００ヌクレオチドの長さを有する。

【0103】

別の好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、少なくとも２４ヌクレオチド、少なくとも５０ヌクレオチド、少なくとも６０ヌクレオチド、少なくとも７０ヌクレオチド、少なくとも８０ヌクレオチド、少なくとも９０ヌクレオチド、少なくとも１００ヌクレオチド、少なくとも２００ヌクレオチド、少なくとも５００ヌクレオチド、少なくとも８００ヌクレオチド、少なくとも１０００ヌクレオチド、少なくとも１５００ヌクレオチド、少なくとも２０００ヌクレオチド、少なくとも２５００ヌクレオチド、少なくとも３０００ヌクレオチドまたは少なくとも３５００ヌクレオチドの長さを有する。特に好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、少なくとも２４ヌクレオチド、少なくとも５０ヌクレオチド、少なくとも６０ヌクレオチド、少なくとも７０ヌクレオチド、少なくとも８０ヌクレオチド、少なくとも９０ヌクレオチド、少なくとも１００ヌクレオチド、少なくとも２００ヌクレオチドの長さを有する。特に好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、少なくとも１４０ヌクレオチドの長さを有する。

【0104】

別の特に好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、１４４ヌクレオチドの長さを有する。

【0105】

遺伝子コードの縮重性のため、本発明による所与のポリペプチドが異なるヌクレオチド配列によってコードされ得ることが当業者には明らかである。

【0106】

好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、配列番号８に記載の配列に対して少なくとも８０％の同一性を示す配列を含むか、またはそれからなる。

【0107】

さらに好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、配列番号８に記載の配列に対して少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９１％、さらにより好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、さらにより好ましくは少なくとも９７％、さらにより好ましくは少なくとも９８％またはさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を示す配列を含むか、またはそれからなる。特に好ましい実施形態においては、本発明によるポリヌクレオチドは、配列番号８に記載の配列に対して少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％またはさらにより好ましくは少なくとも９８％の同一性を示す配列を含むか、またはそれからなる。

【0108】

特に好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、配列番号８に記載の配列に対して１００％の同一性を示す配列を含むか、またはそれからなる。別の特に好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、配列番号８に記載の配列を含むか、またはそれからなる。

【0109】

本発明による単離されたポリヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖のＲＮＡまたはＤＮＡ分子であってよい。

【0110】

いくつかの実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドを発現ベクター中に挿入することができる。発現ベクターは、例えば、プラスミド、ミニ染色体、コスミド、細菌ファージ、レトロウイルスベクターまたは当業者には公知の任意の他のベクターなどの原核または真核発現ベクターであってよい。当業者であれば、特定の必要性に応じて好適なベクターを選択する方法に精通している。

【0111】

かくして、本発明はまた、本発明によるポリヌクレオチドを含む発現ベクターにも関する。

【0112】

さらなる態様において、本発明は、被験体からの液体試料中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドの濃度を定量するための方法であって、
（ａ）固相支持体上に前記可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのための捕捉分子を固定化するステップと、
（ｂ）前記被験体からの液体試料を添加するステップと、
（ｃ）任意選択で、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０または配列番号２１に記載の配列に対して少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドである、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのリガンドを添加するステップと、
（ｄ）標識を含む、（ｃ）に記載のリガンドに特異的な検出剤を添加するステップと、
（ｅ）（ｄ）に記載の検出剤からのシグナルを定量するステップと
を含む方法に関する。

【0113】

上記方法の好ましい実施形態においては、ステップ（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）を、その順序で実行する。前記方法は、好ましくはｉｎ ｖｉｔｒｏで実施する。

【0114】

本明細書で用いられる用語「可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド」は、細胞膜中に埋め込まれていないか、またはそれに付着していないＣＣＲ６受容体ポリペプチドを指すことを意味する。かくして、「可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド」は、「膜結合型ＣＣＲ６受容体」と区別する必要がある。例えば、本発明の文脈においては、内因性条件下で、被験体の体液（例えば、血清、血漿、気管支肺胞洗浄液、胸水、痰、唾液または尿）中に溶解し、細胞膜中に埋め込まれていないか、またはそれに付着していない任意の天然の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは「可溶性」であると考えられる。

【0115】

かくして、一例では、本発明による上記方法の文脈における「可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド」は、天然の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドであってよい。一つの好ましい実施形態においては、前記天然の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、ＣＣＲ６のＮ末端細胞外ドメインに対する抗ＣＣＲ６抗体を用いて検出可能である。

【0116】

別の好ましい実施形態においては、天然の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、
（ａ）配列番号１に記載の配列に対して少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列、および
（ｂ）（ａ）に記載のアミノ酸配列の断片
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、前記単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドはＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０に結合することができる。

【0117】

一つの好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号１に記載の配列に対して少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％またはさらにより好ましくは少なくとも９８％の同一性を示す。特に好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号１に記載の配列に対して少なくとも９５％の同一性を示す。最も好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号１に記載の配列に対して１００％の同一性を示す。

【0118】

別の特に好ましい実施形態においては、天然の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

【0119】

別の例においては、本発明の上記方法の文脈における「可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド」はまた、ｉｎ ｖｉｔｒｏで生成された、例えば、生理学的水性溶液、好ましくは血清、血漿、気管支肺胞洗浄液、胸水、痰、唾液または尿などの水性溶液中に実質的に溶解する組換え「可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド」であってもよい。一つの好ましい実施形態においては、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドである。

【0120】

好ましくは、本発明による上記方法の文脈における「可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド」は、水性溶液、好ましくは、血清、血漿、気管支肺胞洗浄液、胸水、痰、唾液または尿中に少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％または最も好ましくは少なくとも９０％溶解する。特に好ましい実施形態においては、本発明による上記方法の文脈における「可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド」は、水性溶液、好ましくは、血清、血漿、気管支肺胞洗浄液、胸水、痰、唾液または尿中に少なくとも７５％溶解する。「可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド」の溶解度（％）を決定するために、当業者であれば、例えば、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドを含有する試料を遠心分離した後、上清中の前記ポリペプチドの量および該試料中の前記ポリペプチドの総量を測定することができる。次いで、溶解度（％）を、遠心分離前の試料中のＣＣＲ６受容体ポリペプチドの総量に対する上清中のＣＣＲ６受容体ポリペプチドの量の百分率として算出することができる。

【0121】

本発明による上記方法の一つの好ましい実施形態においては、被験体から得られる液体試料は、血清、血漿、気管支肺胞洗浄液、胸水、痰、唾液および尿からなる群より選択される。特に好ましい実施形態においては、被験体から得られる液体試料は、血清である。好ましくは、前記試料は、それが誘導される被験体の身体から分離される。

【0122】

好ましい実施形態においては、（ａ）における前記捕捉分子および／または（ｄ）における前記検出剤は、抗体またはアプタマーである。

【0123】

「アプタマー」は、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはペプチドアプタマーであってよい。ポリヌクレオチドアプタマーは、好ましくは約１０〜約３００ヌクレオチドの長さである。好ましくは、アプタマーは約３０〜約１００ヌクレオチドの長さである。最も好ましくは、アプタマーは約１０〜６０ヌクレオチドの長さである。アプタマーは、例えば、合成、組換え、および精製方法などの当業界で公知の任意の方法により調製することができる。

【0124】

好ましくは、抗体はモノクローナルまたはポリクローナル抗体である。いくつかの実施形態においては、抗体は、例えば、一本鎖抗体、ダイアボディ、ミニボディ、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃ（Ｆｖ））、ｓｃ（Ｆｖ）_２抗体、Ｆａｂ断片またはＦ（ａｂ’）_２断片などの抗体変異体または断片から選択することもできる。

【0125】

捕捉分子または検出剤が、例えば、試料中の任意の他の化合物（すなわち、非標的）よりも高い親和性で可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのリガンドなどの所与の化合物に結合する場合、捕捉分子または検出剤は前記化合物に対して特異的である。好ましくは、捕捉分子または検出剤は、それが所与の化合物のみに結合し、非標的に全く結合しない場合、前記化合物に対して特異的である。（ｄ）における検出剤は、標識を含む。検出剤に結合させることができる任意の好適な標識を用いることができる。好ましくは、標識は検出可能であるか、または検出可能である生成物の酵素反応を触媒する。

【0126】

一つの好ましい実施形態においては、標識を検出剤に共有または非共有結合させる。検出剤に結合させることができる標識の例としては、例えば、シアニン染料、例えば、シアニン３、シアニン５またはシアニン７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ染料、例えば、Ａｌｅｘａ ５９４、Ａｌｅｘａ ４８８またはＡｌｅｘａ ５３２、フルオレセインファミリーの染料、Ｒ−フィコエリトリン、テキサスレッド、ローダミンおよびフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）などの蛍光染料が挙げられる。検出剤は、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼもしくはβ−ラクタマーゼなどの酵素、例えば、^３Ｈ、^１４Ｃ、^３２Ｐ、^３３Ｐ、^３５Ｓもしくは^１２５Ｉなどの放射性アイソトープ、例えば、金などの金属またはビオチンで標識することもできる。特定の好ましい実施形態においては、標識は蛍光標識である。別の実施形態においては、標識は前記の標識を含む二次検出剤であってもよい。好ましくは、二次検出剤は、上記検出剤に特異的に結合することができる。特に好ましい実施形態においては、二次検出剤は、抗体である。

【0127】

一つの好ましい実施形態においては、（ｄ）における検出剤は、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０または配列番号２１に記載の配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドに対して特異的である。さらに好ましい実施形態においては、（ｄ）における検出剤は、配列番号１８に記載の配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドに対して特異的である。別の好ましい実施形態においては、（ｄ）における検出剤は、配列番号１９に記載の配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドに対して特異的である。さらに別の好ましい実施形態においては、（ｄ）における検出剤は、配列番号２０に記載の配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドに対して特異的である。さらに好ましい実施形態においては、（ｄ）における検出剤は、配列番号２１に記載の配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドに対して特異的である。

【0128】

最も好ましい実施形態においては、（ｄ）における検出剤は、配列番号１８に記載の配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドに対して特異的である。

【0129】

好ましくは、（ａ）における前記固相は、プラスチックまたはガラス表面である。固相支持体上への捕捉分子の固定化を可能にするために、いくつかの実施形態においては、固相を、カルボジイミン、イミド−またはスクシンイミジルエステル、エタンスルホン酸、グルタルアルデヒドおよびポリリジンからなる群より選択される試薬で予め被覆することができる。

【0130】

一つの好ましい実施形態においては、本発明による上記方法は、マイクロタイタープレート中で実施される。

【0131】

別の好ましい実施形態においては、（ｃ）に記載のリガンドは、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０または配列番号２１に記載の配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドである。さらに好ましい実施形態においては、（ｃ）に記載のリガンドは、配列番号１８に記載の配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドである。別の好ましい実施形態においては、（ｃ）に記載のリガンドは、配列番号１９に記載の配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドである。さらに別の好ましい実施形態においては、（ｃ）に記載のリガンドは、配列番号２０に記載の配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドである。さらに好ましい実施形態においては、（ｃ）に記載のリガンドは、配列番号２１に記載の配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドである。

【0132】

特に好ましい実施形態においては、（ｃ）に記載のリガンドは、配列番号１８、配列番号１９または配列番号２０または配列番号２１に記載の配列に対して９５％、少なくとも９８％または１００％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドである。さらに特に好ましくは、（ｃ）に記載のリガンドは、配列番号１８に記載の配列に対して９５％、少なくとも９８％または１００％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドである。別の特に好ましい実施形態においては、（ｃ）に記載のリガンドは、配列番号１９に記載の配列に対して９５％、少なくとも９８％または１００％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドである。さらに別の特に好ましい実施形態においては、（ｃ）に記載のリガンドは、配列番号２０に記載の配列に対して９５％、少なくとも９８％または１００％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドである。さらに別に特に好ましくは、（ｃ）に記載のリガンドは、配列番号２１に記載の配列に対して９５％、少なくとも９８％または１００％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドである。

【0133】

さらに特に好ましい実施形態においては、（ｃ）に記載のリガンドは、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０または配列番号２１に記載の配列に対して少なくとも９５％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドである。

【0134】

さらに別の特に好ましい実施形態においては、（ｃ）に記載のリガンドは、配列番号１８に記載の配列に対して少なくとも９５％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドである。最も好ましい実施形態においては、（ｃ）に記載のリガンドは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドである。

【0135】

本発明による上記方法を、被験体からの液体試料中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドの総量または被験体からの液体試料中のＣＣＬ１８、ＣＣＬ２０および／もしくはβ−ディフェンシンに結合した可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドの量を定量するために用いることができる。

【0136】

液体試料中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドの総量を定量しようとする場合、ステップ（ｃ）においてリガンドを添加して、試料中に存在するＣＣＲ６受容体ポリペプチドをリガンドで飽和させるのが好ましい。被験体からの液体試料中のＣＣＬ１８、ＣＣＬ２０および／またはβ−ディフェンシンに結合した可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドの量を定量しようとする場合、ステップ（ｃ）においてリガンドを添加しないのが好ましい。次いで、（ｄ）における検出剤は、液体試料中のリガンドに結合した可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのみを検出する。

【0137】

ステップ（ｅ）における検出剤からのシグナルを定量するための好適な方法の選択は、検出剤の標識の性質に依存する。標識された検出剤からのシグナルを定量するための好適な方法は、当業界で周知である。

【0138】

例えば、標識が酵素（例えば、アルカリホスファターゼなど）である場合、酵素によって着色した生成物に変換される無色の基質（例えば、ｐ−ニトロフェニルリン酸など）を添加することができる。前記基質の添加後、酵素によって生成された着色生成物の量を、例えば、分光光度測定することができる。

【0139】

別の例では、標識が蛍光染料である場合、蛍光シグナルは、例えば、レーザースキャナーを用いることにより定量することができる。

【0140】

さらなる態様において、本発明は、被験体における間質性肺疾患または癌を検出および／または予後判定するための方法であって、前記被験体からの試料中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルを決定するステップを含む方法にも関する。

【0141】

前記方法は、好ましくはｉｎ ｖｉｔｒｏで実施される。

【0142】

本発明による上記方法の文脈における「可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド」は、好ましくは天然の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドである。

【0143】

一つの好ましい実施形態においては、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、
（ａ）配列番号１に記載の配列に対して少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列、および
（ｂ）（ａ）に記載のアミノ酸配列の断片
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、前記単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０に結合することができる。

【0144】

一つの好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号１に記載の配列に対して少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％またはさらにより好ましくは少なくとも９８％の同一性を示す。特に好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号１に記載の配列に対して少なくとも９５％の同一性を示す。最も好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号１に記載の配列に対して１００％の同一性を示す。

【0145】

別の特に好ましい実施形態においては、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

【0146】

さらに好ましい実施形態においては、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、リガンドを含まない可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドである。この文脈における用語「リガンドを含まない」とは、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドが、例えば、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０などのリガンドに結合しないことを意味する。

【0147】

一実施形態においては、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルの決定は、被験体からの試料を、ＣＣＲ６に特異的な検出剤、好ましくは、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに特異的な検出剤と接触させることにより達成することができる。検出剤が試料中の任意の他の化合物（すなわち、非標的）よりも高い親和性でＣＣＲ６または可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに結合する場合、検出剤はＣＣＲ６または可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに対して特異的である。好ましくは、検出剤がＣＣＲ６または可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのみに結合し、非標的に全く結合しない場合、検出剤はＣＣＲ６または可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに対して特異的である。好ましい実施形態においては、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに対して特異的な検出剤は、ＣＣＲ６の細胞外ドメインに結合する。特に好ましい実施形態においては、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに対して特異的な検出剤は、配列番号１に記載の配列に結合する。

【0148】

可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドを検出するための好ましい検出剤は、抗体またはアプタマーである。好ましくは、抗体はモノクローナルまたはポリクローナル抗体である。いくつかの実施形態においては、検出剤は、例えば、一本鎖抗体、ダイアボディ、ミニボディ、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃ（Ｆｖ））、ｓｃ（Ｆｖ）_２抗体、Ｆａｂ断片またはＦ（ａｂ’）_２断片などの抗体変異体または断片から選択することもできる。一つの好ましい実施形態においては、ＣＣＲ６または可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに特異的な市販の抗体を用いることができる。

【0149】

本明細書に記載の抗体を、当業者には公知の任意の好適な方法に従って製造することができる。ポリクローナル抗体は、例えば、選択した抗原で動物を免疫することにより製造することができるが、規定の特異性を有するモノクローナル抗体は、例えば、KohlerおよびMilstein(KohlerおよびMilstein, 1976, Eur. J. Immunol., 6:511〜519)により開発されたハイブリドーマ技術を用いて製造することができる。

【0150】

好ましい実施形態においては、本明細書に記載の検出剤は、検出可能な標識を含んでもよい。検出剤に結合させることができる任意の好適な標識を用いることができる。一つの好ましい実施形態においては、検出可能な標識を、検出剤に共有または非共有結合させる。検出剤に結合させることができる標識の例としては、例えば、シアニン染料、例えば、シアニン３、シアニン５またはシアニン７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ染料、例えば、Ａｌｅｘａ ５９４、Ａｌｅｘａ ４８８またはＡｌｅｘａ ５３２、フルオレセインファミリーの染料、Ｒ−フィコエリトリン、テキサスレッド、ローダミンおよびフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）などの蛍光染料が挙げられる。また、検出剤を、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼもしくはβ−ラクタマーゼなどの酵素、例えば、^３Ｈ、^１４Ｃ、^３２Ｐ、^３３Ｐ、^３５Ｓもしくは^１２５Ｉなどの放射性アイソトープ、例えば、金などの金属またはビオチンで標識することもできる。別の好ましい実施形態においては、検出剤を、上記の標識を含む二次検出剤により検出することもできる。

【0151】

好ましくは、二次検出剤は上記の検出剤に特異的に結合することができる。特に好ましい実施形態においては、二次検出剤は抗体である。

【0152】

被験体からの試料中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルの決定を、当業界で公知の任意の方法により達成することができる。いくつかの実施形態においては、被験体からの試料中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルは、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、免疫沈降法またはラジオイムノアッセイなどの免疫アッセイを用いて検出することができる。また、被験体からの試料中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルを、被験体からの液体試料中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドの量を定量するための上記方法を用いて検出することもできる。

【0153】

本明細書で用いられる用語「間質性肺疾患を検出すること」または「癌を検出すること」は、間質性肺疾患または癌性疾患もしくは障害の存在を、被験体または被験体からの試料において同定することができることを意味する。前記被験体は、それぞれ間質性肺疾患または癌に罹患することが以前に知られていないのが好ましい。一つの好ましい実施形態においては、被験体は間質性肺疾患または癌に罹患することが疑われる。

【0154】

被験体における間質性肺疾患または癌を検出するために、いくつかの実施形態においては、それぞれ間質性肺疾患または癌を示唆する他の化合物または因子の量を測定または決定するのと同時に、被験体からの試料中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルの決定を実施することができる。例えば、血清マーカー界面活性タンパク質（ＳＰ）ＡおよびＤなどの間質性肺疾患のための公知のマーカー、または公知の癌マーカーを、同じ試料中で、または被験体からの異なる試料中で検出することができる。さらに好適なマーカーは、当業者には公知である。

【0155】

好ましい実施形態においては、上記方法はさらに、被験体からの試料中で決定された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルを、対照中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルと比較するステップを含み、対照と比較して被験体からの試料中で決定された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルがより低い場合、被験体における間質性肺疾患または癌の存在を示唆する。

【0156】

別の好ましい実施形態においては、上記方法はさらに、被験体からの試料中で決定されたリガンドを含まない可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルを、対照中のリガンドを含まない可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルと比較するステップを含み、対照と比較して被験体からの試料中で決定されたリガンドを含まない可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルがより低い場合、被験体における間質性肺疾患または癌の存在を示唆する。この文脈において、用語「リガンドを含まない」とは、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドが、例えば、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０などのリガンドに結合しないことを意味する。

【0157】

被験体からの試料中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドの総量またはリガンドに結合した／リガンドを含まない可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドの量を決定するために、当業者であれば、例えば、被験体からの液体試料中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドの量を定量するための上記方法を用いることができる。

【0158】

一つの好ましい実施形態においては、対照は、健康な被験体からの試料である。好ましい実施形態においては、対照と比較して被験体からの試料中で決定された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルがより低い場合、被験体における間質性肺疾患または癌の存在を示唆する。好ましくは、被験体からの試料中で決定された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルは、対照よりも少なくとも２倍、好ましくは少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも４０倍、少なくとも５０倍、少なくとも６０倍、少なくとも７０倍、少なくとも８０倍、少なくとも９０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５００倍、少なくとも１０００倍または少なくとも１００００倍低い。最も好ましくは、被験体からの試料中で決定された可溶性ＣＣＲ６受容体のレベルは、対照よりも少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍または少なくとも１０００倍低い。一つの好ましい実施形態においては、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、リガンドを含まない可溶性受容体ポリペプチドである。

【0159】

別の好ましい実施形態においては、対照は、間質性肺疾患または癌に罹患することが知られる被験体（対照被験体）、すなわち、間質性肺疾患または癌を有すると独立に診断された被験体から誘導された試料であってもよく、その場合、癌は好ましくは腺癌であり、最も好ましくは、肺の腺癌である。そのような事例において、対照と比較して被験体からの試料中で決定された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルがより低い場合、対照被験体と比較して試料が誘導された被験体において間質性肺疾患または癌がさらに進行していることを示唆する。一つの好ましい実施形態においては、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、リガンドを含まない可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドである。

【0160】

本発明の文脈においては、対照は好ましくはそれが誘導される被験体の身体から分離される。

【0161】

本明細書で用いられる用語「間質性肺疾患または癌を予後判定すること」とは、例えば、特定の期間、例えば、処置中または処置後の診断または検出された間質性肺疾患または癌の過程または結果の予測を指す。この用語はまた、間質性肺疾患または癌からの生存または回復の機会の決定、ならびに被験体の期待される生存期間の予測をも指し得る。

【0162】

例えば、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルを、所与の時点で被験体からの試料中で決定し、後の時点で同じ被験体からの試料中で決定された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドの対応するレベルと比較することができ、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルの増加または低下は、疾患症状の改善または悪化を示唆する。そのような手法は、例えば、間質性肺疾患または癌に罹患している患者の医学的処置の間に用いることができる。

【0163】

かくして、一つの好ましい実施形態においては、本発明による上記方法を用いて、間質性肺疾患または癌の処置の有効性をｉｎ ｖｉｔｒｏでモニターすることもできる。間質性肺疾患または癌の処置の有効性を、例えば、試料が誘導された被験体を間質性肺疾患または癌の処置にかけながら、所与の期間にわたって提供された被験体からの異なる試料中の可溶性ＣＣＲ６ポリペプチドのレベルを決定することによりモニターすることができる。次いで、所与の期間にわたって被験体から提供された試料中の可溶性ＣＣＲ６ポリペプチドのレベルの増加または低下は、処置の有効性を示唆し得る。一つの好ましい実施形態においては、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、リガンドを含まない可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドである。

【0164】

一つの好ましい実施形態においては、対照中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルを、被験体からの試料中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルと同時に決定することができる。

【0165】

別の好ましい実施形態においては、対照は所定の値であってもよい。そのような値は、例えば、健康な被験体または間質性肺疾患もしくは癌に罹患することが知られる被験体からの１または複数の試料中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルを決定する以前の実験の結果に基づくものであってよい。いくつかの実施形態においては、所定の値は、データベースから誘導可能であってもよい。

【0166】

一つの好ましい実施形態においては、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルを、２以上の対照、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００または１００を超える対照と比較することができる。

【0167】

好ましくは、本発明による方法で用いられる被験体からの試料は、被験体の身体から分離される。試料は、好ましくは液体試料である。好ましい実施形態においては、液体試料は、血液、血清、血漿、気管支肺胞洗浄液、胸水、痰、唾液または尿からなる群より選択される。特に好ましい実施形態においては、試料は血清である。好ましくは、試料は無細胞または膜を含まないものである。試料から細胞および細胞膜を除去するために、当業者であれば、例えば、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルを決定する前に試料を遠心分離することができる。

【0168】

さらなる態様において、本発明は、ＣＣＲ６または可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに特異的な検出剤を含む、間質性肺疾患または癌を検出するための診断キットにも関する。

【0169】

好ましい実施形態においては、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに特異的な検出剤は、ＣＣＲ６の細胞外ドメインに特異的に結合する。特に好ましい実施形態においては、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに特異的な検出剤は、配列番号１に記載の配列に特異的に結合する。

【0170】

好ましい実施形態においては、前記検出剤は、抗体またはアプタマーである。

【0171】

好ましくは、抗体はモノクローナルまたはポリクローナル抗体である。いくつかの実施形態においては、検出剤は、例えば、一本鎖抗体、ダイアボディ、ミニボディ、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃ（Ｆｖ））、ｓｃ（Ｆｖ）_２抗体、Ｆａｂ断片またはＦ（ａｂ’）_２断片などの抗体変異体または断片から選択することもできる。一つの好ましい実施形態においては、ＣＣＲ６または可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに特異的な市販の抗体を用いることができる。

【0172】

ＣＣＲ６または可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに特異的な「アプタマー」は、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはペプチドアプタマーであってよい。

【0173】

ポリヌクレオチドアプタマーは、好ましくは約１０〜約３００ヌクレオチドの長さである。好ましくは、アプタマーは、約３０〜約１００ヌクレオチドの長さである。最も好ましくは、アプタマーは約１０〜６０ヌクレオチドの長さである。

【0174】

アプタマーを、合成、組換え、および精製方法などの任意の公知の方法により調製し、単独で、またはＣＣＲ６もしくは可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに特異的な他のアプタマーと組合せて用いることができる。

【0175】

一つの好ましい実施形態においては、本発明の上記方法の文脈における可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドは、リガンドを含まない可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドである。

【0176】

上記方法の好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、既知の原因の広範性実質性肺疾患（好ましくは、膠原血管病または環境もしくは薬剤関連広範性実質性肺疾患）、肉芽腫性広範性実質性肺疾患（好ましくは、サルコイドーシス）および他の形態の広範性実質性肺疾患（好ましくは、リンパ脈管筋腫症（ＬＡＭ）、肺ランゲルハンス細胞組織球増加症／ヒスチオサイトーシスＸ（ＨＸ）または好酸性肺炎）からなる群より選択される。

【0177】

上記方法の別の好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、特発性間質性肺炎である。

【0178】

上記方法の特に好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、特発性肺線維症、非特異的間質性肺炎、特発性器質化肺炎、呼吸細気管支炎関連間質性肺疾患、剥離性間質性肺炎、急性間質性肺炎およびリンパ球性間質性肺炎からなる群より選択される。最も好ましくは、間質性肺疾患は、特発性肺線維症である。

【0179】

上記方法のさらに好ましい実施形態においては、癌は、肺癌、乳癌、膵臓癌、前立腺癌、神経芽腫、黒色腫、脳の癌、腎臓癌、膀胱癌、卵巣癌、血液の癌および結腸癌からなる群より選択される。

【0180】

上記方法の特に好ましい実施形態においては、癌は腺癌、好ましくは、肺の腺癌、胸膜中皮腫、結腸直腸癌、前立腺癌、乳癌、腎細胞癌、肝細胞癌、非ホジキンリンパ腫およびホジキンリンパ腫からなる群より選択される。最も好ましくは、癌は腺癌、好ましくは肺の腺癌である。

【0181】

さらなる態様において、本発明は、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の活性および／または発現を阻害することができる化合物を含む医薬組成物にも関する。本発明による医薬組成物を、例えば、ピル、錠剤、ラッカー錠、糖衣錠、顆粒、硬質および軟質ゼラチンカプセル、水性、アルコール性もしくは油性溶液、シロップ、乳濁液もしくは懸濁液の形態で経口的に、または例えば、坐剤の形態で直腸的に投与することができる。投与は、注射または輸液のための溶液の形態で非経口的、例えば、皮下的、筋肉内的または静脈内的に実行することもできる。他の好適な投与形態は、例えば、軟膏、チンキ剤、スプレー剤もしくは経皮治療剤系の形態の、例えば、経皮投与もしくは局所投与であるか、または鼻スプレーもしくはエアロゾル混合物の形態の吸入投与である。

【0182】

好ましい実施形態においては、本発明による医薬組成物を、例えば、注射もしくは輸液のための溶液の形態で非経口的に、例えば、錠剤、ピル、ロゼンジ剤もしくはカプセルの形態で経口的に、または吸入を介して投与する。

【0183】

ピル、錠剤、糖衣錠および硬質ゼラチンカプセルの製造のために、例えば、ラクトース、デンプン、例えば、トウモロコシデンプン、もしくはデンプン誘導体、タルク、ステアリン酸もしくはその塩などを用いることができる。軟質ゼラチンカプセルおよび坐剤のための担体は、例えば、脂肪、蝋、半固体および液体ポリオール、天然油または硬化油などである。溶液、例えば、注射用の溶液、または乳濁液もしくはシロップの調製のための好適な担体は、例えば、水、生理的塩化ナトリウム溶液、アルコール、例えば、エタノール、グリセロール、ポリオール、スクロース、転化糖、グルコース、マンニトール、植物油などである。

【0184】

いくつかの実施形態においては、医薬組成物は、例えば、充填剤、崩壊剤、結合剤、潤滑剤、湿潤剤、安定剤、乳化剤、分散剤、保存剤、甘味料、着色料、香料、芳香剤、増粘剤、希釈剤、緩衝物質、溶媒、可溶化剤、デポー効果を達成するための薬剤、浸透圧を変化させるための塩、コーティング剤または酸化防止剤などの添加物も含有する。

【0185】

様々な異なる形態の本明細書に記載の医薬組成物のための好適な賦形剤の例は、例えば、「Handbook of Pharmaceutical Excipients」、第2版(1994)、A WadeおよびPJ Weller(編)に見出すことができる。

【0186】

好ましい実施形態においては、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の活性および／または発現を阻害することができる化合物は、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０に結合することができる小分子、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０に特異的なアプタマー、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０に特異的な抗体、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の発現を低下させるか、または阻害するのに好適なアンチセンス分子およびＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の発現を低下させるか、または阻害するのに好適なｓｉＲＮＡ分子からなる群より選択される。

【0187】

本明細書で用いられる用語「小分子」とは、低分子量を有する小さい有機化合物を指す。

【0188】

小分子は、天然で生じることが知られていない合成化合物または例えば、細胞、植物、菌類、動物などの天然の起源から単離されるか、もしくはその中で生じることが知られる天然の化合物であってよい。本発明の文脈における小分子は、好ましくは、５０００ダルトン未満、より好ましくは４０００ダルトン未満、より好ましくは３０００ダルトン未満、より好ましくは２０００ダルトン未満またはさらにより好ましくは１０００ダルトン未満の分子量を有する。特に好ましい実施形態においては、本発明の文脈における小分子は、８００ダルトン未満の分子量を有する。

【0189】

別の好ましい実施形態においては、本発明の文脈における小分子は、５０〜３０００ダルトン、好ましくは１００〜２０００ダルトン、より好ましくは１００〜１５００ダルトンおよびさらにより好ましくは１００〜１０００ダルトンの分子量を有する。最も好ましくは、本発明の文脈における小分子は、１００〜８００ダルトンの分子量を有する。

【0190】

ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０に結合することができる小分子は、例えば、小分子化合物ライブラリーをスクリーニングすることにより同定することができる。

【0191】

「アプタマー」は、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０に特異的なＤＮＡ、ＲＮＡまたはペプチドアプタマーであってよい。

【0192】

ポリヌクレオチドアプタマーは、好ましくは約１０〜約３００ヌクレオチドの長さである。好ましくは、アプタマーは約３０〜約１００ヌクレオチドの長さである。最も好ましくは、アプタマーは約１０〜６０ヌクレオチドの長さである。

【0193】

アプタマーは、合成、組換え、および精製方法などの任意の公知の方法により調製し、単独で、またはＣＣＬ１８もしくはＣＣＬ２０に特異的な他のアプタマーと組合せて用いることができる。

【0194】

ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０に特異的な抗体は、モノクローナルまたはポリクローナル抗体であってよい。いくつかの実施形態においては、抗体は、その抗体変異体または断片がＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０に特異的であるという条件で、例えば、一本鎖抗体、ダイアボディ、ミニボディ、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃ（Ｆｖ））、ｓｃ（Ｆｖ）_２抗体、Ｆａｂ断片またはＦ（ａｂ’）_２断片などの抗体変異体または断片から選択することもできる。

【0195】

用語「ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の発現を低下させるか、または阻害するのに好適なアンチセンス分子」とは、それぞれ、ＣＣＬ１８ ｍＲＮＡまたはＣＣＬ２０ ｍＲＮＡに相補的であるポリヌクレオチドを指す。前記アンチセンス分子は、細胞中でＣＣＬ１８ ｍＲＮＡまたはＣＣＬ２０ ｍＲＮＡの翻訳を阻害するためのアンチセンス手法における使用にとって好適であることが好ましい。前記アンチセンス分子は、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子であってよく、一本鎖または二本鎖であってよい。好ましい実施形態においては、アンチセンス分子は、一本鎖ＤＮＡ分子または二本鎖もしくは一本鎖ＲＮＡ分子である。

【0196】

アンチセンス分子は、好ましくは約１０〜約５００ヌクレオチド、約１１〜約２００ヌクレオチド、約１２〜約１００ヌクレオチド、約１３〜約７５ヌクレオチドまたは約１４〜約５０ヌクレオチド、約１５〜約４０ヌクレオチド、約１６〜約３０ヌクレオチドまたは約１７〜約２５ヌクレオチドの長さを有する。

【0197】

ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の発現を低下させるか、または阻害するのに好適なｓｉＲＮＡ分子は、ＣＣＬ１８ ｍＲＮＡまたはＣＣＬ２０ ｍＲＮＡにハイブリダイズし、それによって、ＣＣＬ１８タンパク質またはＣＣＬ２０タンパク質の発現の低下または阻害をもたらすＲＮＡ干渉または任意の他の細胞内アンチセンス機構を誘導することができる一本鎖または二本鎖ｓｉＲＮＡ分子であってよい。

【0198】

前記ｓｉＲＮＡ分子は、ｓｉＲＮＡ分子がＣＣＬ１８タンパク質またはＣＣＬ２０タンパク質の発現の低下または阻害をもたらすＲＮＡ干渉を誘導することができる任意の配列のものであってよい。

【0199】

好ましくは、ｓｉＲＮＡ分子は、１０〜１００、１２〜８０、１４〜６０、１６〜５０、１７〜４０、より好ましくは１８〜３０ヌクレオチドおよび最も好ましくは１８〜２６ヌクレオチドの長さを有する。

【0200】

ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の発現を低下させるか、または阻害することができるか、またはそれにとって好適な化合物は、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の発現を、対照と比較して少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％低下させるか、または阻害することができる。いくつかの好ましい実施形態においては、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の発現を低下させるか、または阻害することができるか、またはそれにとって好適な化合物は、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の発現を１００％低下させるか、または阻害することができる。

【0201】

別の好ましい実施形態においては、本発明による医薬組成物は、間質性肺疾患および／または癌の処置または予防にとって好適なさらなる活性化合物を含む。

【0202】

間質性肺疾患の処置にとって好適なさらなる活性化合物の例は、例えば、抗炎症剤、例えば、プレドニゾンもしくは他のコルチコステロイド、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸もしくはシクロホスファミド、酸化防止剤、例えば、アセチルシステイン、抗線維症剤、例えば、ボセンタンもしくはピルフェニドン、ミノサイクリン、シルデナフィル、サリドマイド、抗ＴＮＦ抗体、例えば、インフリキシマブ；エタネルセプト、インターフェロンγ、抗ＩＬ−１３抗体、エンドセリン阻害剤、ジレウトン、抗凝固剤、マクロライド、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）４阻害剤、例えば、ロフルミラスト、アビプタジル、α−メラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、イマチニブ、ダサチニブおよびニロチニブである。

【0203】

癌の処置にとって好適なさらなる活性化合物は、好ましくは化学療法剤である。癌の処置にとって好適な化学療法剤は、当業者には周知である。化学療法剤の例は、例えば、テモゾロミド、アドリアマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）、シクロホスファミド、チオテパ、ブスルファン、サイトキシン、タキソイド、例えば、パクリタキセル、トキソテール、メトトレキサート、シスプラチン、メルファラン、ビンブラスチン、ブレオマイシン、エトポシド、イフォスファミド、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、カルボプラチン、テニポシド、ダウノマイシン、カルミノマイシン、アミノプテリン、ダクチノマイシン、マイトマイシン、メルファランおよび他の関連する窒素マスタードならびにタモキシフェンおよびオナプリストンなどの腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害するように作用するホルモン剤である。

【0204】

本発明による医薬組成物は、間質性肺疾患の処置もしくは予防にとって好適な１もしくは１より多いさらなる活性化合物および／または癌の処置もしくは予防にとって好適な１もしくは１より多いさらなる活性化合物を含んでもよい。好ましい実施形態においては、本発明による医薬組成物は、間質性肺疾患の予防の処置にとって好適な１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０もしくは１０より多いさらなる活性化合物および／または癌の処置にとって好適な１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０もしくは１０より多いさらなる活性化合物を含む。

【0205】

他の好ましい実施形態においては、間質性肺疾患の処置もしくは予防にとって好適な活性化合物および／または癌の処置もしくは予防にとって好適な活性化合物を含む１または複数の別々の組成物を、被験体、好ましくはヒト被験者に、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の活性および／または発現を阻害することができる化合物を含む本発明による医薬組成物と組合せて投与することができる。

【0206】

好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、既知の原因の広範性実質性肺疾患（好ましくは、膠原血管病または環境もしくは薬剤関連広範性実質性肺疾患）、肉芽腫性広範性実質性肺疾患（好ましくは、サルコイドーシス）および他の形態の広範性実質性肺疾患（好ましくは、リンパ脈管筋腫症（ＬＡＭ）、肺ランゲルハンス細胞組織球増加症／ヒスチオサイトーシスＸ（ＨＸ）または好酸性肺炎）からなる群より選択される。

【0207】

別の好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、特発性間質性肺炎である。

【0208】

特に好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、特発性肺線維症、非特異的間質性肺炎、特発性器質化肺炎、呼吸細気管支炎関連間質性肺疾患、剥離性間質性肺炎、急性間質性肺炎およびリンパ球性間質性肺炎からなる群より選択される。最も好ましくは、間質性肺疾患は、特発性肺線維症である。

【0209】

別の好ましい実施形態においては、癌は肺癌、乳癌、膵臓癌、前立腺癌、神経芽腫、黒色腫、脳の癌、腎臓癌、膀胱癌、卵巣癌、血液の癌および結腸癌からなる群より選択される。

【0210】

特に好ましい実施形態においては、癌は腺癌、好ましくは、肺の腺癌、胸膜中皮腫、結腸直腸癌、前立腺癌、乳癌、腎細胞癌、肝細胞癌、非ホジキンリンパ腫およびホジキンリンパ腫からなる群より選択される。最も好ましくは、癌は腺癌、好ましくは肺の腺癌である。

【0211】

本発明の発明者らは驚くべきことに、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドが治療的使用にとって好適であることを見出した。

【0212】

従って、さらなる態様において、本発明は、療法における使用のための、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに関する。

【0213】

いくつかの疾患は、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の血清レベルの上昇を特徴とすることがわかったが、これは、疾患に罹患している患者からの血清中のＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０のレベルが、健康な対照からの血清中のＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０のレベルと比較して上昇していることを意味する。

【0214】

かくして、本発明はまた、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０の血清レベルの上昇を特徴とする疾患の処置または予防における使用のための本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは本発明による医薬組成物に関する。用語「ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０の血清レベルの上昇」は、疾患に罹患している患者からの血清中のＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０のレベルが、健康な対照からの血清中のＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０のレベルと比較して上昇していることを意味する。

【0215】

別の態様において、本発明はまた、間質性肺疾患、癌、ゴーシェ病、サラセミア、好ましくは、β−サラセミア、慢性関節リウマチ、後腹膜線維化症（Ｏｒｍｏｎｄ病）および／もしくは慢性炎症皮膚疾患、好ましくは、アトピー性皮膚炎または水疱性類天疱瘡からなる群より選択される疾患の処置または予防における使用のための、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは本発明による医薬組成物に関する。

【0216】

好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、既知の原因の広範性実質性肺疾患（好ましくは、膠原血管病または環境もしくは薬剤関連広範性実質性肺疾患）、肉芽腫性広範性実質性肺疾患（好ましくは、サルコイドーシス）および他の形態の広範性実質性肺疾患（好ましくは、リンパ脈管筋腫症（ＬＡＭ）、肺ランゲルハンス細胞組織球増加症／ヒスチオサイトーシスＸ（ＨＸ）または好酸性肺炎）からなる群より選択される。

【0217】

別の好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、特発性間質性肺炎である。

【0218】

特に好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、特発性肺線維症、非特異的間質性肺炎、特発性器質化肺炎、呼吸細気管支炎関連間質性肺疾患、剥離性間質性肺炎、急性間質性肺炎およびリンパ球性間質性肺炎からなる群より選択される。最も好ましくは、間質性肺疾患は、特発性肺線維症である。

【0219】

さらに好ましい実施形態においては、癌は、肺癌、乳癌、膵臓癌、前立腺癌、神経芽腫、黒色腫、脳の癌、腎臓癌、膀胱癌、卵巣癌、血液の癌および結腸癌からなる群より選択される。

【0220】

特に好ましい実施形態においては、癌は腺癌、好ましくは、肺の腺癌、胸膜中皮腫、結腸直腸癌、前立腺癌、乳癌、腎細胞癌、肝細胞癌、非ホジキンリンパ腫およびホジキンリンパ腫からなる群より選択される。最も好ましくは、癌は腺癌、好ましくは肺の腺癌である。

【0221】

さらに別の態様において、本発明は、間質性肺疾患および／または癌の処置または予防における使用のための、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは本発明による医薬組成物に関する。

【0222】

本明細書で用いられる用語「予防」およびその文法的な等価物は、間質性肺疾患および／または癌を生じる被験体の素因または危険性の任意の低下を指す。

【0223】

別の態様において、本発明は、間質性肺疾患および／または癌の処置または予防のための薬剤の製造のための、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは本発明による医薬組成物の使用に関する。

【0224】

別の態様において、本発明はまた、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに特異的な検出剤に関する。

【0225】

好ましい実施形態においては、検出剤は抗体またはアプタマーである。

【0226】

「アプタマー」は、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはペプチドアプタマーであってよい。ポリヌクレオチドアプタマーは、好ましくは約１０〜約３００ヌクレオチドの長さである。好ましくは、アプタマーは約３０〜約１００ヌクレオチドの長さである。最も好ましくは、アプタマーは約１０〜６０ヌクレオチドの長さである。アプタマーは、例えば、合成、組換え、および精製方法などの当業界で公知の任意の方法により調製することができる。

【0227】

好ましくは、抗体はモノクローナルまたはポリクローナル抗体である。いくつかの実施形態においては、検出剤は、例えば、一本鎖抗体、ダイアボディ、ミニボディ、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃ（Ｆｖ））、ｓｃ（Ｆｖ）_２抗体、Ｆａｂ断片またはＦ（ａｂ’）_２断片などの抗体変異体または断片から選択することもできる。検出剤は、好ましくは検出可能な標識を含む。好適な標識は、本明細書に上記されている。

【0228】

検出剤が、試料中の任意の他の化合物（すなわち、非標的）よりも高い親和性で本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに結合する場合、検出剤は本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに対して特異的である。好ましくは、検出剤は、それが本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのみに結合し、非標的に全く結合しない場合、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに対して特異的である。

【0229】

好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、既知の原因の広範性実質性肺疾患（好ましくは、膠原血管病または環境もしくは薬剤関連広範性実質性肺疾患）、肉芽腫性広範性実質性肺疾患（好ましくは、サルコイドーシス）および他の形態の広範性実質性肺疾患（好ましくは、リンパ脈管筋腫症（ＬＡＭ）、肺ランゲルハンス細胞組織球増加症／ヒスチオサイトーシスＸ（ＨＸ）または好酸性肺炎）からなる群より選択される。

【0230】

別の好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、特発性間質性肺炎である。

【0231】

特に好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、特発性肺線維症、非特異的間質性肺炎、特発性器質化肺炎、呼吸細気管支炎関連間質性肺疾患、剥離性間質性肺炎、急性間質性肺炎およびリンパ球性間質性肺炎からなる群より選択される。最も好ましくは、間質性肺疾患は、特発性肺線維症である。

【0232】

さらに好ましい実施形態においては、癌は、肺癌、乳癌、膵臓癌、前立腺癌、神経芽腫、黒色腫、脳の癌、腎臓癌、膀胱癌、卵巣癌、血液の癌および結腸癌からなる群より選択される。

【0233】

特に好ましい実施形態においては、癌は腺癌、好ましくは、肺の腺癌、胸膜中皮腫、結腸直腸癌、前立腺癌、乳癌、腎細胞癌、肝細胞癌、非ホジキンリンパ腫およびホジキンリンパ腫からなる群より選択される。最も好ましくは、癌は腺癌、好ましくは肺の腺癌である。

【0234】

さらなる態様において、本発明は、被験体からの試料中の間質性肺疾患または癌の検出における使用のための、ＣＣＲ６受容体または本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに特異的な検出剤にも関する。

【0235】

好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、既知の原因の広範性実質性肺疾患（好ましくは、膠原血管病または環境もしくは薬剤関連広範性実質性肺疾患）、肉芽腫性広範性実質性肺疾患（好ましくは、サルコイドーシス）および他の形態の広範性実質性肺疾患（好ましくは、リンパ脈管筋腫症（ＬＡＭ）、肺ランゲルハンス細胞組織球増加症／ヒスチオサイトーシスＸ（ＨＸ）または好酸性肺炎）からなる群より選択される。

【0236】

別の好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、特発性間質性肺炎である。

【0237】

特に好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、特発性肺線維症、非特異的間質性肺炎、特発性器質化肺炎、呼吸細気管支炎関連間質性肺疾患、剥離性間質性肺炎、急性間質性肺炎およびリンパ球性間質性肺炎からなる群より選択される。最も好ましくは、間質性肺疾患は、特発性肺線維症である。

【0238】

さらに好ましい実施形態においては、癌は、肺癌、乳癌、膵臓癌、前立腺癌、神経芽腫、黒色腫、脳の癌、腎臓癌、膀胱癌、卵巣癌、血液の癌および結腸癌からなる群より選択される。

【0239】

特に好ましい実施形態においては、癌は腺癌、好ましくは、肺の腺癌、胸膜中皮腫、結腸直腸癌、前立腺癌、乳癌、腎細胞癌、肝細胞癌、非ホジキンリンパ腫およびホジキンリンパ腫からなる群より選択される。最も好ましくは、癌は腺癌、好ましくは肺の腺癌である。

【0240】

別の好ましい実施形態においては、検出剤は、抗体またはアプタマーである。

【0241】

「アプタマー」は、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはペプチドアプタマーであってよい。ポリヌクレオチドアプタマーは、好ましくは約１０〜約３００ヌクレオチドの長さである。好ましくは、アプタマーは約３０〜約１００ヌクレオチドの長さである。最も好ましくは、アプタマーは約１０〜６０ヌクレオチドの長さである。アプタマーは、例えば、合成、組換え、および精製方法などの当業界で公知の任意の方法により調製することができる。

【0242】

好ましくは、抗体はモノクローナルまたはポリクローナル抗体である。いくつかの実施形態においては、検出剤は、例えば、一本鎖抗体、ダイアボディ、ミニボディ、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃ（Ｆｖ））、ｓｃ（Ｆｖ）_２抗体、Ｆａｂ断片またはＦ（ａｂ’）_２断片などの抗体変異体または断片から選択することもできる。検出剤は、好ましくは検出可能な標識を含む。好適な標識は、本明細書に上記されている。

【0243】

検出剤が、試料中の任意の他の化合物（すなわち、非標的）よりも高い親和性でＣＣＲ６受容体または本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに結合する場合、検出剤はＣＣＲ６受容体または本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに対して特異的である。好ましくは、検出剤は、それがＣＣＲ６受容体または本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのみに結合し、非標的に全く結合しない場合、ＣＣＲ６受容体または本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに対して特異的である。

【0244】

この文脈において、被験体からの試料は、液体試料または固体試料であってよい。一つの好ましい実施形態においては、被験体からの試料は、血清、血漿、気管支肺胞洗浄液、胸水、痰、唾液および尿からなる群より選択される。特に好ましい実施形態においては、被験体からの液体試料は血清である。別の好ましい実施形態においては、被験体からの試料は組織試料、好ましくは肺組織試料である。組織試料は、例えば、新鮮な、もしくは凍結した組織試料または固定パラフィン包埋試料であってよい。一つの好ましい実施形態においては、試料は生検または切除試料であってよい。さらに好ましい実施形態においては、試料は気管支擦過試料である。

【0245】

本発明による方法、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド、本発明による診断キット、本発明による医薬組成物、本発明による使用および／または本発明による検出剤の好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、既知の原因の広範性実質性肺疾患（好ましくは、膠原血管病または環境もしくは薬剤関連広範性実質性肺疾患）、肉芽腫性広範性実質性肺疾患（好ましくは、サルコイドーシス）および他の形態の広範性実質性肺疾患（好ましくは、リンパ脈管筋腫症（ＬＡＭ）、肺ランゲルハンス細胞組織球増加症／ヒスチオサイトーシスＸ（ＨＸ）または好酸性肺炎）からなる群より選択される。

【0246】

本発明による方法、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド、本発明による診断キット、本発明による医薬組成物、本発明による使用および／または本発明による検出剤の特に好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、特発性間質性肺炎である。

【0247】

本発明による方法、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド、本発明による診断キット、本発明による医薬組成物、本発明による使用および／または本発明による検出剤のさらに好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、特発性肺線維症、非特異的間質性肺炎、特発性器質化肺炎、呼吸細気管支炎関連間質性肺疾患、剥離性間質性肺炎、急性間質性肺炎およびリンパ球性間質性肺炎からなる群より選択される。

【0248】

本発明による方法、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド、本発明による診断キット、本発明による医薬組成物、本発明による使用および／または本発明による検出剤の特に好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、特発性肺線維症である。間質性肺疾患の分類に関する概説については、当業者は、例えば、American Thoracic Society/European Respiratory Society International Multidisciplinary Consensus Classification of the Idiopathic Interstitial Pneumonias, American Thoracic Society; European Respiratory Society, Am J Respir Crit Care Med. 2002 Jan 15; 165(2): 277〜304を参照することができる。

【0249】

いくつかの実施形態においては、間質性肺疾患は、強皮性肺疾患、サルコイドーシス、過敏性肺炎、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデスおよび石綿症からなる群より選択される症状により引き起こされ得る。

【0250】

本発明による方法、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド、本発明による診断キット、本発明による医薬組成物、本発明による使用および／または本発明による検出剤の別の好ましい実施形態においては、癌は、肺癌、乳癌、膵臓癌、前立腺癌、神経芽腫、黒色腫、脳の癌、腎臓癌、膀胱癌、卵巣癌、血液の癌および結腸癌からなる群より選択される。

【0251】

本発明による方法、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド、本発明による診断キット、本発明による医薬組成物、本発明による使用および／または本発明による検出剤のさらに好ましい実施形態においては、癌は、腺癌、好ましくは、肺の腺癌、胸膜中皮腫、結腸直腸癌、前立腺癌、乳癌、腎細胞癌、肝細胞癌、非ホジキンリンパ腫およびホジキンリンパ腫からなる群より選択される。

【0252】

本発明による方法、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド、本発明による診断キット、本発明による医薬組成物、本発明による使用および／または本発明による検出剤の特に好ましい実施形態においては、癌は、肺癌、最も好ましくは、肺の腺癌、または胸膜中皮腫である。最も好ましい実施形態においては、癌は肺の腺癌である。

【0253】

本発明の発明者らはさらに驚くべきことに、ＣＣＲ６受容体活性の阻害剤を、間質性肺疾患または癌の療法に用いることができることを見出した。

【0254】

従って、さらなる態様において、本発明は、
（ａ）配列番号９、２２または２３に記載の配列に対して少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％および最も好ましくは１００％の同一性を示すアミノ酸配列、ならびに
（ｂ）（ａ）に記載のアミノ酸配列の断片
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＣＣＲ６受容体に結合しその活性を阻害することができる単離されたポリペプチドに関する。

【0255】

好ましくは、前記ＣＣＲ６受容体は、ヒトＣＣＲ６受容体である。一つの好ましい実施形態においては、前記ＣＣＲ６受容体は、配列番号３または配列番号４に記載の配列によりコードされるポリペプチドである。別の好ましい実施形態においては、前記ＣＣＲ６受容体は、配列番号２７に記載のポリペプチドである。

【0256】

好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号９、配列番号２２または配列番号２３に記載の配列に対して少なくとも９１％、さらにより好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、さらにより好ましくは少なくとも９７％、さらにより好ましくは少なくとも９８％またはさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を示す。最も好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号９、配列番号２２または配列番号２３に記載の配列に対して１００％の同一性を示す。

【0257】

別の好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号９に記載の配列に対して少なくとも９１％、さらにより好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、さらにより好ましくは少なくとも９７％、さらにより好ましくは少なくとも９８％またはさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を示す。さらに好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号９に記載のアミノ酸配列である。

【0258】

さらに好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号２２に記載の配列に対して少なくとも９１％、さらにより好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、さらにより好ましくは少なくとも９７％、さらにより好ましくは少なくとも９８％またはさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を示す。さらに好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号２２に記載のアミノ酸配列である。

【0259】

別の好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号２３に記載の配列に対して少なくとも９１％、さらにより好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、さらにより好ましくは少なくとも９７％、さらにより好ましくは少なくとも９８％またはさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を示す。さらに好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号２３に記載のアミノ酸配列である。

【0260】

いくつかの好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号９および配列番号２２に記載の配列に対して少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、より好ましくは少なくとも９３％、より好ましくは少なくとも９４％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９６％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％またはさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を示してもよい。

【0261】

別の好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列において、配列番号９、配列番号２２または配列番号２３に記載の配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個以下のアミノ酸が変更される（すなわち、欠失、挿入、改変および／または他のアミノ酸により置換される）。

【0262】

さらに好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列において、配列番号９に記載の配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個以下のアミノ酸が変更される（すなわち、欠失、挿入、改変および／または他のアミノ酸により置換される）。別の好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列において、配列番号２２に記載の配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個以下のアミノ酸が変更される（すなわち、欠失、挿入、改変および／または他のアミノ酸により置換される）。さらに別の好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列において、配列番号２３に記載の配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個以下のアミノ酸が変更される（すなわち、欠失、挿入、改変および／または置換される）。

【0263】

本発明に記載の上記の単離されたポリペプチドのアミノ酸を、改変する、例えば、化学的に改変することもできる。例えば、タンパク質のアミノ酸の側鎖または遊離アミノもしくはカルボキシ末端を、例えば、グリコシル化、アミド化、リン酸化、ユビキチン化などにより改変することができる。

【0264】

好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号９、２２または２３に記載の配列の少なくとも８個の連続するアミノ酸を含む。かくして、一つの好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号９、２２または２３に記載の配列に対して少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、より好ましくは少なくとも９３％、より好ましくは少なくとも９４％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９６％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％または最も好ましくは１００％の同一性を示し、配列番号９、２２または２３に記載の配列の少なくとも８個の連続するアミノ酸を含む。別の好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号９に記載の配列に対して少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、より好ましくは少なくとも９３％、より好ましくは少なくとも９４％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９６％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％または最も好ましくは１００％の同一性を示し、配列番号９に記載の配列の少なくとも８個または少なくとも１５個の連続するアミノ酸を含む。さらに好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号２２に記載の配列に対して少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、より好ましくは少なくとも９３％、より好ましくは少なくとも９４％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９６％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％または最も好ましくは１００％の同一性を示し、配列番号２２に記載の配列の少なくとも８個または少なくとも１５個の連続するアミノ酸を含む。別の好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号２３に記載の配列に対して少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９２％、より好ましくは少なくとも９３％、より好ましくは少なくとも９４％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９６％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％または最も好ましくは１００％の同一性を示し、配列番号２３に記載の配列の少なくとも８個または少なくとも１５個の連続するアミノ酸を含む。別の好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号９、２２または２３に記載の配列に対して少なくとも９５％、９８％または１００％の同一性を示し、配列番号９、２２または２３に記載の配列の少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または少なくとも２０個の連続するアミノ酸を含む。より好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号９、２２または２３に記載の配列に対して少なくとも９５％、９８％または１００％の同一性を示し、配列番号９、配列番号２２または配列番号２３に記載の配列の少なくとも８個または少なくとも１５個の連続するアミノ酸を含む。

【0265】

さらに好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号９に記載の配列に対して少なくとも９５％、９８％または１００％の同一性を示し、配列番号９に記載の配列の少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または少なくとも２０個の連続するアミノ酸を含む。

【0266】

別の好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号２２に記載の配列に対して少なくとも９５％、９８％または１００％の同一性を示し、配列番号２２に記載の配列の少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または少なくとも２０個の連続するアミノ酸を含む。

【0267】

さらに好ましい実施形態においては、（ａ）に記載のアミノ酸配列は、配列番号２３に記載の配列に対して少なくとも９５％、９８％または１００％の同一性を示し、配列番号２３に記載の配列の少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個または少なくとも２０個の連続するアミノ酸を含む。

【0268】

好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリペプチドは、３０００アミノ酸未満、好ましくは２０００アミノ酸未満、より好ましくは１０００アミノ酸未満、より好ましくは５００アミノ酸未満、より好ましくは３００アミノ酸未満、より好ましくは２００アミノ酸未満、より好ましくは１００アミノ酸未満または最も好ましくは５０アミノ酸未満の長さを有する。

【0269】

さらに好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリペプチドは、少なくとも８〜少なくとも３０００アミノ酸、好ましくは少なくとも８〜少なくとも２０００アミノ酸、より好ましくは少なくとも８〜少なくとも１０００アミノ酸、より好ましくは少なくとも８〜５００アミノ酸、より好ましくは少なくとも８〜３００アミノ酸、より好ましくは少なくとも８〜２００アミノ酸、およびさらにより好ましくは少なくとも８〜１００アミノ酸、またはより好ましくは少なくとも８〜５０アミノ酸の長さを有する。

【0270】

最も好ましくは、本発明による単離されたポリペプチドは、少なくとも８、少なくとも２９または少なくとも３１アミノ酸の長さを有する。

【0271】

別の好ましい実施形態においては、（ａ）に記載の単離されたポリペプチドは、少なくとも２９〜３０００アミノ酸、好ましくは少なくとも２９〜２０００アミノ酸、より好ましくは少なくとも２９〜１０００アミノ酸、少なくとも２９〜５００アミノ酸、少なくとも２９〜３００アミノ酸、少なくとも２９〜２００アミノ酸、少なくとも２９〜１００アミノ酸または少なくとも２９〜５０アミノ酸の長さを有する。

【0272】

さらに好ましい実施形態においては、（ａ）に記載の単離されたポリペプチドは、少なくとも３１〜３０００アミノ酸、好ましくは少なくとも３１〜２０００アミノ酸、より好ましくは少なくとも３１〜１０００アミノ酸、少なくとも３１〜５００アミノ酸、少なくとも３１〜３００アミノ酸、少なくとも３１〜２００アミノ酸、少なくとも３１〜１００アミノ酸または少なくとも３１〜５０アミノ酸の長さを有する。

【0273】

断片は、典型的には、それが言及するアミノ酸の一部である。

【0274】

好ましい実施形態においては、（ｂ）に記載の断片は、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７または少なくとも２８アミノ酸の長さである。好ましい実施形態においては、（ｂ）に記載の断片は、少なくとも１０、少なくとも１５または少なくともまたは少なくとも２０アミノ酸の長さを有する。最も好ましい実施形態においては、（ｂ）に記載の断片は、１５アミノ酸の長さを有する。

【0275】

別の特に好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリペプチドは、配列番号９、配列番号２２または配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、前記ポリペプチドはＣＣＲ６受容体に結合し、その活性を阻害することができる。最も好ましくは、本発明による上記単離されたポリペプチドは、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、前記ポリペプチドはＣＣＲ６受容体に結合し、その活性を阻害することができる。

【0276】

本発明によるポリペプチドがＣＣＲ６受容体に結合することができるかどうかを、当業者には公知の任意の好適な方法により決定することができる。例えば、当業者であれば、酵母２ハイブリッドアッセイまたは例えば、プルダウンアッセイ、免疫沈降アッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、定量的放射性リガンド結合アッセイ、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）に基づくアッセイ、プラズモン共鳴アッセイなどの生化学的アッセイまたは当業者には公知の任意の他の方法を用いることにより、ポリペプチドがＣＣＲ６受容体に結合することができるかどうかを決定することができる。プルダウンアッセイまたはプラズモン共鳴アッセイを用いる場合、生化学の分野では周知の通り、少なくとも一つのタンパク質を、ＨＩＳタグ、ＧＳＴタグその他などの親和性タグに融合させることが有用である。

【0277】

本明細書で用いられる用語「ＣＣＲ６受容体の活性を阻害すること」とは、ＣＣＲ６受容体活性が下方調節されもしくは消失し、かつ／またはＣＣＲ６受容体の活性化が阻害されることを意味する。

【0278】

例えば、一実施形態においては、本発明による単離されたポリペプチドまたは本明細書に記載のＣＣＲ６受容体の活性および／もしくは発現を阻害することができる任意の他の化合物は、ＣＣＲ６受容体アゴニスト（例えば、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０）が該受容体を活性化することができないように、ＣＣＲ６受容体を立体的に遮断することができる。かくして、ＣＣＲ６受容体活性の阻害は、例えば、ＣＣＲ６受容体に結合するが、それ自体ではシグナル伝達事象を媒介しないポリペプチドまたは任意の他の化合物による、ＣＣＲ６受容体と、そのリガンドの一つ、すなわち、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０との相互作用の阻害に起因するものであってよい。

【0279】

別の実施形態においては、ＣＣＲ６受容体の活性および／もしくは発現を阻害することができる本発明による単離されたポリペプチドまたは任意の他の化合物は、存在するＣＣＲ６受容体活性を下方調節または消失させることができる。

【0280】

試験しようとする本発明による単離されたポリペプチドまたは任意の他の化合物がＣＣＲ６受容体の活性を阻害することができるかどうかを、例えば、以下の実施例６ならびに図１３および１４で本明細書に記載されるようにＣＣＲ６の細胞表面発現を測定することによって決定することができ、対照（例えば、ＣＣＲ６受容体アゴニストのみの存在下）と比較した、ＣＣＲ６受容体アゴニスト（例えば、ＣＣＬ１８など）および試験しようとする単離されたポリペプチドもしくは他の化合物の存在下でのＣＣＲ６受容体内在化の阻害は、単離されたポリペプチドまたは他の化合物がＣＣＲ６受容体の活性を阻害することができることを示唆する。

【0281】

別の例では、当業者であれば、試験しようとする本発明による単離されたポリペプチドまたは任意の他の化合物がＣＣＲ６受容体活性を阻害する能力を、ＣＣＲ６受容体アゴニスト、例えば、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の存在下、および試験しようとする単離されたポリペプチドまたは他の化合物の存在下または非存在下でＣＣＲ６を発現する細胞をインキュベートした後、該細胞を溶解し、ウェスタンブロット分析により、ＣＣＲ６シグナル伝達の下流の分子であるＥＲＫのリン酸化を分析することによって決定することもできる。この例では、試験しようとする単離されたポリペプチドまたは他の化合物の非存在下でのＥＲＫのリン酸化のレベルに対する試験しようとする前記ポリペプチドまたは他の化合物の存在下でのＥＲＫのリン酸化のレベルがより低い場合、前記ポリペプチドまたは他の化合物はＣＣＲ６受容体の活性を阻害することができることを示唆する。ウェスタンブロット分析によりＥＲＫリン酸化を決定するための一つの方法は、例えば、Linら、J Proteome Res. 2010 Jan; 9(1): 283〜97に記載されている。同様の例では、例えば、Ａｋｔ、ＳＡＰＫ／ＪＮＫキナーゼ、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼまたはホスホリパーゼＣなどの他のＣＣＲ６の下流のエフェクターのリン酸化を分析して、試験しようとする本発明による単離されたポリペプチドまたは任意の他の化合物がＣＣＲ６受容体活性を阻害することができるかどうかを決定することができる。

【0282】

試験しようとする本発明による単離されたポリペプチドまたは任意の他の化合物がＣＣＲ６受容体の活性を阻害することができるかどうかを、例えば、以下の実施例４ならびに図４および５で本明細書に記載されるように前記ポリペプチドまたは他の化合物の存在下で、ＣＣＬ１８により刺激されるＦＧＦ２放出またはＣＣＬ１８により媒介されるコラーゲンおよび／もしくはα−ＳＭＡの誘導を測定することにより決定することもできる。この例では、前記ポリペプチドまたは他の化合物が添加されていない対照と比較した、試験しようとする前記ポリペプチドまたは他の化合物の存在下での、ＣＣＬ１８により誘導されるＦＧＦ２の上方調節の阻害ならびに／またはＣＣＬ１８により媒介されるコラーゲンおよび／もしくはα−ＳＭＡ発現の誘導の阻害は、単離されたポリペプチドまたは他の化合物がＣＣＲ６受容体の活性を阻害することができることを示唆する。さらに、試験しようとする本発明による単離されたポリペプチドまたは任意の他の化合物がＣＣＲ６受容体の活性を阻害する能力を決定するために、当業者であれば、ＣＣＬ１８による上皮間葉移行（ＥＭＴ）の誘導が下方調節されるか、または消失するかどうかを決定することもできる。

【0283】

あるいは、またはさらに、ＣＣＲ６受容体の活性を決定するのに好適であり、当業界に含まれ、平均的な当業者に公知である任意のさらなる方法を用いることができる。

【0284】

ＣＣＲ６受容体の活性を阻害することができる本発明による単離されたポリペプチドまたは任意の他の化合物は、ＣＣＲ６受容体の活性を、対照と比較した場合、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％阻害することができる。いくつかの好ましい実施形態においては、ＣＣＲ６受容体の活性を阻害することができる、本明細書に記載の本発明によるポリペプチドまたは任意の他の化合物は、ＣＣＲ６受容体の活性を１００％阻害することができる。

【0285】

別の態様において、本発明は、本発明による単離されたポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドに関する。

【0286】

好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、６０００ヌクレオチド未満、５０００ヌクレオチド未満、４０００ヌクレオチド未満、３０００ヌクレオチド未満、２０００ヌクレオチド未満、１０００ヌクレオチド未満または５００ヌクレオチド未満の長さを有する。

【0287】

さらに好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、少なくとも２４〜９０００ヌクレオチド、好ましくは少なくとも２４〜８０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも２４〜７０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも２４〜６０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも２４〜５０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも２４〜４０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも２４〜３０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも２４〜２０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも２４〜１０００ヌクレオチドまたはさらにより好ましくは少なくとも２４〜５００ヌクレオチドの長さを有する。別の好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、少なくとも２４、少なくとも８７または少なくとも９３ヌクレオチドの長さを有する。

【0288】

別の好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、少なくとも８７〜９０００ヌクレオチド、好ましくは少なくとも８７〜８０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも８７〜７０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも８７〜６０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも８７〜５０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも８７〜４０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも８７〜３０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも８７〜２０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも８７〜１０００ヌクレオチドまたはさらにより好ましくは少なくとも８７〜５００ヌクレオチドの長さを有する。

【0289】

別の好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、少なくとも８７ヌクレオチド、少なくとも１００ヌクレオチド、少なくとも２００ヌクレオチド、少なくとも５００ヌクレオチド、少なくとも８００ヌクレオチド、少なくとも１０００ヌクレオチド、少なくとも１５００ヌクレオチド、少なくとも２０００ヌクレオチド、少なくとも２５００ヌクレオチド、少なくとも３０００ヌクレオチドまたは少なくとも３５００ヌクレオチドの長さを有する。特に好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、少なくとも８７ヌクレオチドまたは少なくとも１００ヌクレオチドの長さを有する。

【0290】

別の好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、少なくとも９３〜９０００ヌクレオチド、好ましくは少なくとも９３〜８０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも９３〜７０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも９３〜６０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも９３〜５０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも９３〜４０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも９３〜３０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも９３〜２０００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも９３〜１０００ヌクレオチドまたはさらにより好ましくは少なくとも９３〜５００ヌクレオチドの長さを有する。

【0291】

別の好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、少なくとも２４ヌクレオチド、少なくとも５０ヌクレオチド、少なくとも８７ヌクレオチド、少なくとも９３ヌクレオチド、少なくとも１００ヌクレオチド、少なくとも２００ヌクレオチド、少なくとも５００ヌクレオチド、少なくとも８００ヌクレオチド、少なくとも１０００ヌクレオチド、少なくとも１５００ヌクレオチド、少なくとも２０００ヌクレオチド、少なくとも２５００ヌクレオチド、少なくとも３０００ヌクレオチドまたは少なくとも３５００ヌクレオチドの長さを有する。特に好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、少なくとも２４、少なくとも８７または少なくとも９３ヌクレオチドの長さを有する。

【0292】

遺伝子コードの縮重性のため、本発明による所与のポリペプチドが異なるヌクレオチド配列によってコードされ得ることが当業者には明らかである。

【0293】

好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、配列番号２４、配列番号２５または配列番号２６に記載の配列に対して少なくとも８０％の同一性を示す配列を含むか、またはそれからなる。

【0294】

さらに好ましい実施形態においては、本発明によるポリヌクレオチドは、配列番号２４、配列番号２５または配列番号２６に記載の配列に対して少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９１％、さらにより好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、さらにより好ましくは少なくとも９７％、さらにより好ましくは少なくとも９８％またはさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を示す配列を含むか、またはそれからなる。特に好ましい実施形態においては、本発明によるポリヌクレオチドは、配列番号２４、配列番号２５または配列番号２６に記載の配列に対して少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％またはさらにより好ましくは少なくとも９８％の同一性を示す配列を含むか、またはそれからなる。

【0295】

別の好ましい実施形態においては、本発明によるポリヌクレオチドは、配列番号２４に記載の配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９１％、さらにより好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、さらにより好ましくは少なくとも９７％、さらにより好ましくは少なくとも９８％またはさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を示す配列を含むか、またはそれからなる。別の好ましい実施形態においては、本発明によるポリヌクレオチドは、配列番号２５に記載の配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９１％、さらにより好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、さらにより好ましくは少なくとも９７％、さらにより好ましくは少なくとも９８％またはさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を示す配列を含むか、またはそれからなる。さらに好ましい実施形態においては、本発明によるポリヌクレオチドは、配列番号２６に記載の配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９１％、さらにより好ましくは少なくとも９２％、さらにより好ましくは少なくとも９３％、さらにより好ましくは少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、さらにより好ましくは少なくとも９７％、さらにより好ましくは少なくとも９８％またはさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を示す配列を含むか、またはそれからなる。

【0296】

特に好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、配列番号２４、配列番号２５または配列番号２６に記載の配列に対して１００％の同一性を示す配列を含むか、またはそれからなる。別の特に好ましい実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドは、配列番号２４、配列番号２５または配列番号２６に記載の配列を含むか、またはそれからなる。

【0297】

本発明による単離されたポリヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖ＲＮＡまたはＤＮＡ分子であってよい。

【0298】

いくつかの実施形態においては、本発明による単離されたポリヌクレオチドを、発現ベクター中に挿入することができる。発現ベクターは、例えば、プラスミド、ミニ染色体、コスミド、細菌ファージ、レトロウイルスベクターなどの原核もしくは真核発現ベクターまたは当業者には公知の任意の他のベクターであってよい。当業者であれば、特定の必要性に従って好適なベクターを選択する方法に精通している。

【0299】

かくして、本発明は、本発明によるポリヌクレオチドを含む発現ベクターにも関する。

【0300】

さらなる態様において、本発明は、ＣＣＲ６受容体の活性を阻害することができる化合物を同定するための方法であって、
（ａ）ＣＣＲ６受容体を試験化合物と接触させるステップと、
（ｂ）配列番号５または配列番号１８に記載の配列に対して少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドであるＣＣＲ６受容体アゴニストを添加するステップと、
（ｃ）前記ＣＣＲ６受容体の活性を決定するステップと、
（ｄ）（ｃ）で決定されたＣＣＲ６受容体活性が対照中で決定されたＣＣＲ６受容体活性よりも低い場合、前記試験化合物を、ＣＣＲ６受容体の活性を阻害することができる化合物として選択するステップと
を含む方法に関する。

【0301】

上記方法の好ましい実施形態においては、ステップ（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）を、その順序で実行する。

【0302】

好ましい実施形態においては、（ａ）におけるＣＣＲ６受容体は、細胞によって、好ましくは細胞の表面上で発現される。別の好ましい実施形態においては、（ａ）におけるＣＣＲ６受容体は、組換えＣＣＲ６受容体、好ましくは、精製された組換えＣＣＲ６受容体である。（ａ）におけるＣＣＲ６受容体が細胞によって、好ましくは細胞の表面上で発現される場合、前記細胞は、例えば、細胞に基づく反応系に含まれていてもよい。好ましい実施形態においては、前記細胞は、線維芽細胞、肺胞上皮細胞、リンパ球および肺細胞からなる群より選択される。さらに好ましい実施形態においては、前記細胞は、線維芽細胞、肺胞上皮細胞、リンパ球および肺細胞からなる群より選択され、該細胞は間質性肺疾患または癌に罹患している患者から誘導される。好ましい実施形態においては、前記間質性肺疾患は、特発性肺線維症であり、前記癌は腺癌、好ましくは、肺の腺癌である。

【0303】

（ａ）におけるＣＣＲ６受容体が組換えＣＣＲ６受容体、好ましくは精製された組換えＣＣＲ６受容体である場合、ＣＣＲ６受容体は、無細胞反応系に含まれていてもよい。次いで、（ｂ）におけるＣＣＲ６受容体アゴニストを細胞に基づく、または無細胞反応系に添加することができる。

【0304】

この文脈における用語「反応系」は、ＣＣＲ６受容体または組換えＣＣＲ６受容体を発現する細胞が細胞培養チューブ、組織培養チューブ、エッペンドルフチューブ、反応チャンバーまたは必要なバッファーおよび／もしくは上記方法を実施するのに好適な他の試薬を含有する他の格納装置中に入れられ、前記方法が前記細胞培養チューブ、組織培養チューブ、エッペンドルフチューブ、反応チャンバーまたは他の格納装置中で行われる実験設定を指すことを意味する。かくして、上記方法は、いくつかの実施形態においては、ＣＣＲ６受容体を含む細胞に基づく、または無細胞反応系を提供するステップをさらに含む。前記方法が前記ステップを含む場合、前記ステップはステップ（ａ）、すなわち、前記方法の最初のステップであるのが好ましい。

【0305】

好ましくは、ＣＣＲ６受容体は、ヒトＣＣＲ６受容体である。一つの好ましい実施形態においては、前記ＣＣＲ６受容体は、配列番号３または配列番号４に記載の配列によりコードされるポリペプチドである。別の好ましい実施形態においては、前記ＣＣＲ６受容体は、配列番号２７に記載のポリペプチドである。

【0306】

好ましい実施形態においては、前記試験化合物は、抗体、小分子またはペプチドである。好ましくは、抗体はモノクローナルまたはポリクローナル抗体である。いくつかの実施形態においては、抗体は、例えば、一本鎖抗体、ダイアボディ、ミニボディ、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃ（Ｆｖ））、ｓｃ（Ｆｖ）_２抗体、Ｆａｂ断片またはＦ（ａｂ’）_２断片などの抗体変異体または断片から選択することもできる。

【0307】

別の好ましい実施形態においては、（ｂ）に記載のポリペプチドは、配列番号５に記載の配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。特に好ましい実施形態においては、（ｂ）に記載のポリペプチドは、配列番号５に記載の配列に対して少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

【0308】

さらに好ましい実施形態においては、（ｂ）に記載のポリペプチドは、配列番号１８に記載の配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。特に好ましい実施形態においては、（ｂ）に記載のポリペプチドは、配列番号１８に記載の配列に対して少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

【0309】

さらに好ましい実施形態においては、（ｂ）に記載のポリペプチドは、配列番号５に記載の配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、２０、３０、５０または６０個の連続するアミノ酸を含むアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

【0310】

さらに好ましい実施形態においては、（ｂ）に記載のポリペプチドは、配列番号１８に記載の配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、２０、３０、５０または６０個の連続するアミノ酸を含むアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

【0311】

別の好ましい実施形態においては、（ｂ）に記載のポリペプチドは、配列番号５に記載の配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を示し、配列番号５に記載の配列の少なくとも３０個または少なくとも５０個の連続するアミノ酸を含むアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

【0312】

さらに別の好ましい実施形態においては、（ｂ）に記載のポリペプチドは、配列番号１８に記載の配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を示し、配列番号１８に記載の配列の少なくとも３０個または少なくとも５０個の連続するアミノ酸を含むアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。特に好ましい実施形態においては、（ｂ）に記載のポリペプチドは、配列番号１８に記載のポリペプチドである。

【0313】

ＣＣＲ６受容体の活性は、例えば、本明細書に上記されたＣＣＲ６受容体活性を決定するための方法のいずれかによって決定することができる。

【0314】

好適な対照の選択は、ＣＣＲ６受容体活性を決定するのに用いられる方法に依存する。当業者であれば、好適な対照を選択する方法を知っている。ＣＣＲ６受容体活性および好適な対照を決定するためのいくつかの好適な例は、以下の実施例の節に記載されている。

【0315】

対照は、例えば、ＣＣＲ６受容体の活性のみがＣＣＲ６受容体アゴニストの存在下および試験化合物の非存在下で決定された試料であってよい。

【0316】

好ましい実施形態においては、（ｃ）において決定されるＣＣＲ６受容体活性は、対照におけるＣＣＲ６受容体活性よりも少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％低い。

【0317】

特に好ましい実施形態においては、（ｃ）において決定されるＣＣＲ６受容体活性は、対照におけるＣＣＲ６受容体活性よりも少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％低い。

【0318】

別の好ましい実施形態においては、（ｃ）において決定されるＣＣＲ６受容体活性は、対照におけるＣＣＲ６受容体活性よりも１００％低い。

【0319】

さらに好ましい実施形態においては、（ｃ）において決定されるＣＣＲ６受容体活性は、対照におけるＣＣＲ６受容体活性よりも少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも４０倍、少なくとも５０倍、少なくとも６０倍、少なくとも７０倍、少なくとも８０倍、少なくとも９０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５００倍、少なくとも１０００倍または少なくとも１００００倍低い。

【0320】

本発明はまた、被験体からの試料中のＣＣＲ６遺伝子発現のレベルを決定するステップを含む、前記被験体における間質性肺疾患または癌を検出するための方法も提供する。

【0321】

前記方法は、好ましくはｉｎ ｖｉｔｒｏで実施される。

【0322】

好ましくは、ＣＣＲ６受容体はヒトＣＣＲ６受容体である。好ましい実施形態においては、前記ＣＣＲ６受容体は、配列番号３または配列番号４に記載の配列によりコードされるポリペプチドである。別の好ましい実施形態においては、前記ＣＣＲ６受容体は、配列番号２７に記載のポリペプチドである。

【0323】

一実施形態においては、ＣＣＲ６発現のレベルの決定は、被験体からの試料を、ＣＣＲ６に特異的な検出剤と接触させることにより達成することができる。検出剤は、それが試料中の任意の他の化合物（すなわち、非標的）よりも高い親和性でＣＣＲ６に結合する場合、ＣＣＲ６に対して特異的である。好ましくは、検出剤は、それがＣＣＲ６にのみ結合し、非標的には全く結合しない場合、ＣＣＲ６に対して特異的である。

【0324】

本発明はまた、被験体からの試料中のＣＣＬ１８遺伝子発現のレベルを決定するステップを含む、前記被験体における癌を検出するか、または等級付けるための方法も提供する。

【0325】

本明細書で用いられる用語「癌を等級付けること」とは、例えば、その攻撃性およびその予後などの癌の特定の特徴を決定することにより癌を分類することを指す。一つの好ましい実施形態においては、癌、好ましくは腺癌を「等級付けること」を、被験体からの試料中で決定されたＣＣＬ１８の量と、癌の等級、好ましくは、腺癌の等級、最も好ましくは、肺の腺癌の等級とを相関付けることにより実施することができる。

【0326】

一実施形態においては、ＣＣＬ１８発現のレベルの決定は、被験体からの試料を、ＣＣＬ１８に特異的な検出剤と接触させることにより達成することができる。検出剤は、それが試料中の任意の他の化合物（すなわち、非標的）よりも高い親和性でＣＣＬ１８に結合する場合、ＣＣＬ１８に対して特異的である。好ましくは、検出剤は、それがＣＣＬ１８にのみ結合し、非標的には全く結合しない場合、ＣＣＬ１８に対して特異的である。

【0327】

「ＣＣＲ６遺伝子発現のレベルの決定」とは、ＣＣＲ６ ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質のレベルまたは量を決定することができることを意味する。いくつかの実施形態においては、ＣＣＲ６受容体の細胞表面発現を決定することができる。「ＣＣＬ１８遺伝子発現のレベルの決定」とは、ＣＣＬ１８ ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質のレベルまたは量を決定することができることを意味する。好ましい実施形態においては、前記ＣＣＬ１８は配列番号１８に記載のポリペプチドである。

【0328】

ＣＣＲ６ ｍＲＮＡ発現またはＣＣＬ１８ ｍＲＮＡ発現は、例えば、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、ノーザンブロッティング、ＲＮＡｓｅ保護アッセイまたはＰＣＲに基づく方法、例えば、逆転写ＰＣＲもしくはリアルタイム定量的ＰＣＲにより決定することができる。当業者であれば、これらの方法を実施する方法を知っている。

【0329】

いくつかの実施形態においては、総ＲＮＡを被験体からの試料から単離した後、ｍＲＮＡの量を決定することができる。

【0330】

ＣＣＲ６ ｍＲＮＡ発現のレベルを決定するのに用いることができる好適な検出剤は、例えば、ＣＣＲ６ ｍＲＮＡに特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチドプローブである。ＣＣＬ１８ ｍＲＮＡ発現のレベルを決定するのに用いることができる好適な検出剤は、例えば、ＣＣＬ１８ ｍＲＮＡに特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチドプローブである。このアンチセンスオリゴヌクレオチドプローブは、ＲＮＡまたはＤＮＡオリゴヌクレオチドプローブであってよい。好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチドプローブは、一本鎖ＲＮＡ分子である。

【0331】

オリゴヌクレオチドプローブは、それが高ストリンジェントな条件下でＣＣＲ６ ｍＲＮＡにハイブリダイズすることができる場合、ＣＣＲ６ ｍＲＮＡに対して特異的である。オリゴヌクレオチドプローブは、それが高ストリンジェントな条件下でＣＣＬ１８ ｍＲＮＡにハイブリダイズすることができる場合、ＣＣＬ１８ ｍＲＮＡに対して特異的である。

【0332】

本明細書で用いられる用語「ハイブリダイズする」とは、第一のポリヌクレオチドの第二のポリヌクレオチドへのハイブリダイゼーションを指す。２つのポリヌクレオチドが互いにハイブリダイズするかどうかを決定するために、当業者であれば、好ましくは中程度の、またはストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下、ｉｎ ｖｉｔｒｏでハイブリダイゼーション実験を行う。ハイブリダイゼーションアッセイおよび条件は当業者には公知であり、例えば、Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y., 6.3.1〜6.3.6, 1991に見出すことができる。ストリンジェントな条件は、例えば、４５℃の６Ｘ塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中でハイブリダイゼーションを行った後、６５℃の０．２Ｘ ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で洗浄する条件であってよい。

【0333】

ＣＣＲ６タンパク質またはＣＣＬ１８タンパク質を検出するための好ましい検出剤は、抗体またはアプタマーである。好ましくは、抗体はモノクローナルまたはポリクローナル抗体である。いくつかの実施形態においては、検出剤は、例えば、一本鎖抗体、ダイアボディ、ミニボディ、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃ（Ｆｖ））、ｓｃ（Ｆｖ）_２抗体、Ｆａｂ断片またはＦ（ａｂ’）_２断片などの抗体変異体または断片から選択することもできる。一つの好ましい実施形態においては、ＣＣＲ６またはＣＣＬ１８に特異的な市販の抗体を用いることができる。市販の抗体の一例は、以下の実施例１に記載のような抗ヒトＣＣＲ６ ｍＡｂである。

【0334】

好ましい実施形態においては、本明細書で上記された検出剤は、検出可能な標識を含んでもよい。検出剤に結合させることができる任意の好適な標識を用いることができる。一つの好ましい実施形態においては、検出可能な標識は、検出剤に共有または非共有結合する。検出剤に結合させることができる標識の例としては、例えば、シアニン染料、例えば、シアニン３、シアニン５またはシアニン７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ染料、例えば、Ａｌｅｘａ ５９４、Ａｌｅｘａ ４８８またはＡｌｅｘａ ５３２、フルオレセインファミリーの染料、Ｒ−フィコエリトリン、テキサスレッド、ローダミンおよびフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）などの蛍光染料が挙げられる。検出剤は、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼもしくはβ−ラクタマーゼなどの酵素、例えば、^３Ｈ、^１４Ｃ、^３２Ｐ、^３３Ｐ、^３５Ｓもしくは^１２５Ｉなどの放射性アイソトープ、例えば、金などの金属またはビオチンで標識することもできる。別の好ましい実施形態においては、検出剤は上記のような標識を含む二次検出剤により検出することもできる。

【0335】

好ましくは、二次検出剤は、上記の検出剤に特異的に結合することができる。特に好ましい実施形態においては、二次検出剤は抗体である。

【0336】

いくつかの実施形態においては、ＣＣＲ６発現またはＣＣＬ１８発現のレベルは、例えば、組織学的または細胞生物学的手順を含む方法で検出することができる。いくつかの実施形態においては、光学顕微鏡、免疫蛍光顕微鏡もしくは電子顕微鏡、またはフローサイトメトリーもしくはルミノメトリーなどの視覚的技術を用いることができる。好ましい実施形態においては、ＣＣＲ６発現またはＣＣＬ１８発現のレベルを、免疫組織化学により検出する。

【0337】

本明細書で用いられる用語「間質性肺疾患を検出すること」または「癌を検出すること」は、間質性肺疾患または癌性疾患もしくは障害の存在を被験体または被験体からの試料において同定することができることを意味する。前記被験体は、それぞれ間質性肺疾患または癌に罹患することが以前に知られていないのが好ましい。一つの好ましい実施形態においては、被験体は間質性肺疾患または癌に罹患すると疑われる。

【0338】

被験体における間質性肺疾患または癌を検出するために、被験体からの試料中のＣＣＲ６遺伝子発現のレベルの決定を、いくつかの実施形態においては、それぞれ間質性肺疾患または癌を示唆する他の化合物または因子の量を測定または決定するのと同時に実施することができる。例えば、例えば血清マーカー界面活性タンパク質（ＳＰ）ＡおよびＤなどの間質性肺疾患のための公知のマーカー、または公知の癌マーカーを、その同じ試料または被験体からの異なる試料中で検出することができる。さらに好適なマーカーは、当業者には公知である。いくつかの実施形態においては、当業者であれば、被験体からの試料中のＣＣＲ６遺伝子発現のレベルの決定に加えて、試料の組織学的パターンを検査して、被験体が間質性肺疾患または癌に罹患するかどうかをさらに検査することもできる。

【0339】

被験体における癌を検出するために、被験体からの試料中のＣＣＬ１８遺伝子発現のレベルの決定を、いくつかの実施形態においては、癌を示唆する他の化合物または因子の量を測定または決定するのと同時に実施することができる。例えば、公知の癌マーカーを、同じ試料または被験体からの異なる試料中で検出することができる。さらに好適なマーカーは、当業者には公知である。いくつかの実施形態においては、当業者であれば、被験体からの試料中のＣＣＬ１８遺伝子発現のレベルの決定に加えて、試料の組織学的パターンを検査して、被験体が癌に罹患するかどうかをさらに検査することもできる。

【0340】

好ましい実施形態においては、上記方法はさらに、被験体からの試料中で決定されたＣＣＲ６遺伝子発現のレベルを、対照中のＣＣＲ６遺伝子発現のレベルと比較するステップを含み、対照と比較して被験体からの試料中で決定されたＣＣＲ６遺伝子発現のレベルがより高い場合、被験体における間質性肺疾患または癌の存在を示唆する。

【0341】

別の好ましい実施形態においては、上記方法はさらに、被験体からの試料中で決定されたＣＣＬ１８遺伝子発現のレベルを、対照中のＣＣＬ１８遺伝子発現のレベルと比較するステップを含み、対照と比較して被験体からの試料中で決定されたＣＣＬ１８遺伝子発現のレベルがより高い場合、被験体における癌の存在を示唆する。

【0342】

一つの好ましい実施形態においては、対照は健康な被験体からの試料である。好ましい実施形態においては、対照と比較して被験体からの試料中で決定されたＣＣＲ６発現のレベルがより高い場合、被験体における間質性肺疾患または癌の存在を示唆する。別の好ましい実施形態においては、対照と比較して被験体からの試料中で決定されたＣＣＬ１８発現のレベルがより高い場合、被験体における癌の存在を示唆する。用語「より高いレベル」は、被験体からの試料中で決定されたＣＣＲ６発現またはＣＣＬ１８発現のレベルが、対照におけるよりも少なくとも２倍、好ましくは少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも４０倍、少なくとも５０倍、少なくとも６０倍、少なくとも７０倍、少なくとも８０倍、少なくとも９０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５００倍、少なくとも１０００倍または少なくとも１００００倍高いことを意味する。最も好ましくは、被験体からの試料中で決定されたＣＣＲ６発現またはＣＣＬ１８発現のレベルは、対照におけるよりも少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍または少なくとも１０００倍高い。

【0343】

別の好ましい実施形態においては、対照は、間質性肺疾患または癌に罹患することが知られた被験体（対照被験体）、すなわち、間質性肺疾患または癌を有すると独立に診断され、その癌が好ましくは腺癌、最も好ましくは、肺の腺癌である被験体から誘導された試料であってもよい。そのような事例において、対照と比較して被験体からの試料中で決定されたＣＣＲ６遺伝子発現またはＣＣＬ１８遺伝子発現のレベルがより高い場合、対照被験体と比較して試料が誘導された被験体における間質性肺疾患または癌のさらなる進行を示唆する。

【0344】

さらに好ましい実施形態においては、対照は、間質性肺疾患または癌に罹患することが知られたか、または疑われる被験体の罹患した器官から誘導される健康な組織であってもよく、前記癌は好ましくは腺癌、最も好ましくは、肺の腺癌である。そのような事例において、試験しようとする試料（すなわち、被験体からの試料）は前記器官の罹患した（すなわち、疾患）部分または罹患していることが疑われる前記器官の一部から誘導され、対照は同じ器官の健康な部分から誘導されるのが好ましい。この文脈における用語「罹患した器官」は、疾患に罹患した器官、すなわち、間質性肺疾患または癌に罹患した器官を意味する。

【0345】

本発明の文脈において、対照は好ましくはそれが誘導される被験体の身体から分離される。

【0346】

いくつかの好ましい実施形態においては、本発明による上記方法を用いて、間質性肺疾患または癌の処置の有効性をｉｎ ｖｉｔｒｏでモニターすることもできる。間質性肺疾患または癌の処置の有効性は、例えば、試料が誘導された被験体を間質性肺疾患または癌の処置にかけながら、所与の期間にわたって提供された被験体からの異なる試料中のＣＣＲ６発現のレベルを検出することによりモニターすることができる。次いで、所与の期間にわたって被験体から提供された試料中のＣＣＲ６発現のレベルの増加または減少は、処置の有効性を示唆し得る。

【0347】

癌の処置の有効性は、例えば、試料が誘導された被験体を癌の処置にかけながら、所与の期間にわたって提供された被験体からの異なる試料中のＣＣＬ１８発現のレベルを検出することによりモニターすることもできる。次いで、所与の期間にわたって被験体から提供された試料中のＣＣＬ１８発現のレベルの増加または減少は、処置の有効性を示唆し得る。

【0348】

一つの好ましい実施形態においては、対照中のＣＣＲ６発現のレベルを、被験体からの試料中のＣＣＲ６発現のレベルと同時に決定することができる。さらに好ましい実施形態においては、対照中のＣＣＬ１８発現のレベルを、被験体からの試料中のＣＣＬ１８発現のレベルと同時に決定することができる。

【0349】

別の好ましい実施形態においては、対照は所定の値であってもよい。そのような値は、例えば、健康な被験体または間質性肺疾患もしくは癌に罹患することが知られた被験体からの１または複数の試料中のＣＣＲ６発現レベルまたはＣＣＬ１８発現レベルの量を決定する以前の実験の結果に基づくものであってよい。いくつかの実施形態においては、所定の値は、データベースから誘導可能であってもよい。

【0350】

一つの好ましい実施形態においては、ＣＣＲ６発現のレベルを、２つ以上の対照、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０，１００または１００を超える対照と比較することができる。別の好ましい実施形態においては、ＣＣＬ１８発現のレベルを、２つ以上の対照、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０，１００または１００を超える対照と比較することができる。

【0351】

好ましくは、本発明による方法において用いられる被験体からの試料は、被験体の身体から分離される。試料は、好ましくは固形試料である。好ましい実施形態においては、被験体からの試料は、組織試料、好ましくは肺組織試料である。組織試料は、例えば、新鮮な、もしくは凍結した組織試料または固定パラフィン包埋試料であってよい。一つの好ましい実施形態においては、試料は生検または切除試料であってよい。別の好ましい実施形態においては、試料は、例えば、以下の実施例１に記載のような、外科的材料または線維性肺から得られた材料から確立された線維芽細胞系である。さらに好ましい実施形態においては、試料は、気管支擦過試料である。

【0352】

いくつかの実施形態においては、被験体からの試料は、液体、好ましくは、体液である。

【0353】

好ましい実施形態においては、体液は、血液、血漿、気管支肺胞洗浄液、胸水、痰、唾液、血清または尿からなる群より選択される。

【0354】

いくつかの実施形態においては、液体試料は、目的の細胞、例えば、被験体が間質性肺疾患に罹患するかどうかを検査するために液体試料を用いる場合は、循環する線維芽細胞またはＴ細胞について、または被験体が癌に罹患するかどうかを検査するために液体試料を用いる場合は、癌細胞について濃縮されていてもよい。

【0355】

濃縮は、当業者には公知の任意の方法により実施することができる。

【0356】

濃縮は、例えば、Ｔ細胞を濃縮しようとする場合はＴ細胞に特異的な抗体または肺癌細胞を濃縮しようとする場合は肺癌抗原に特異的な抗体などの特異的抗体で被覆された固相支持体、例えば、カラムを用いることにより達成することができる。あるいは、濃縮は、例えば、メッシュガーゼを介する濾過などの濾過方法を用いることにより、またはマイクロ流体チャンネル上に特異的アプタマーを固定化し、該装置を通して液体試料をポンプすることにより達成することもできる。

【0357】

さらなる態様において、本発明はまた、ＣＣＲ６ポリヌクレオチドまたはＣＣＲ６ポリペプチドに特異的な検出剤を含む間質性肺疾患または癌を検出するための診断キットに関する。

【0358】

好ましくは、前記ＣＣＲ６ポリヌクレオチドは、ＣＣＲ６ ｍＲＮＡである。

【0359】

好ましい実施形態においては、前記検出剤は、抗体、アプタマーまたはオリゴヌクレオチドプローブである。

【0360】

ＣＣＲ６ポリヌクレオチド、特に、ＣＣＲ６ ｍＲＮＡ、およびＣＣＲ６ポリペプチドの検出にとって好適な抗体およびオリゴヌクレオチドプローブは、本明細書に上記されている。

【0361】

さらなる態様において、本発明はまた、ＣＣＬ１８ポリヌクレオチドまたはＣＣＬ１８ポリペプチドに特異的な検出剤を含む癌を検出するための診断キットに関する。

【0362】

好ましくは、前記ＣＣＬ１８ポリヌクレオチドは、ＣＣＬ１８ ｍＲＮＡである。

【0363】

好ましい実施形態においては、前記検出剤は、抗体、アプタマーまたはオリゴヌクレオチドプローブである。

【0364】

ＣＣＬ１８ポリヌクレオチド、特に、ＣＣＬ１８ ｍＲＮＡ、およびＣＣＬ１８ポリペプチドの検出にとって好適な抗体およびオリゴヌクレオチドプローブは、本明細書に上記されている。

【0365】

好ましい実施形態においては、診断キットはさらに、例えば、バッファーまたは対照などの本発明による方法を実施するのに好適なさらなる成分または試薬を含む。別の好ましい実施形態においては、診断キットに含まれる化合物は、１または複数の容器中に含まれる。本発明による診断キットはまた、診断キットおよびその成分の使用方法を指示する説明書を含んでもよい。

【0366】

さらなる態様において、本発明はまた、ＣＣＲ６受容体の活性および／または発現を阻害することができる化合物を含む医薬組成物に関する。

【0367】

本発明による医薬組成物を、例えば、ピル、錠剤、ラッカー錠、糖衣錠、顆粒、硬質および軟質ゼラチンカプセル、水性、アルコール性もしくは油性溶液、シロップ、乳濁液もしくは懸濁液の形態で経口的に、または例えば、坐剤の形態で直腸的に投与することができる。投与は、注射または輸液のための溶液の形態で非経口的、例えば、皮下的、筋肉内的または静脈内的に実行することもできる。他の好適な投与形態は、例えば、軟膏、チンキ剤、スプレー剤もしくは経皮治療剤系の形態の、例えば、経皮投与もしくは局所投与であるか、または鼻スプレーもしくはエアロゾル混合物の形態の吸入投与である。

【0368】

好ましい実施形態においては、本発明による医薬組成物を、例えば、注射もしくは輸液のための溶液の形態で非経口的に、例えば、錠剤、ピル、ロゼンジ剤もしくはカプセルの形態で経口的に、または吸入を介して投与する。

【0369】

ピル、錠剤、糖衣錠および硬質ゼラチンカプセルの製造のために、例えば、ラクトース、デンプン、例えば、トウモロコシデンプン、もしくはデンプン誘導体、タルク、ステアリン酸もしくはその塩などを用いることができる。軟質ゼラチンカプセルおよび坐剤のための担体は、例えば、脂肪、蝋、半固体および液体ポリオール、天然油または硬化油などである。溶液、例えば、注射用の溶液、または乳濁液もしくはシロップの調製のための好適な担体は、例えば、水、生理的塩化ナトリウム溶液、アルコール、例えば、エタノール、グリセロール、ポリオール、スクロース、転化糖、グルコース、マンニトール、植物油などである。

【0370】

いくつかの実施形態においては、医薬組成物は、例えば、充填剤、崩壊剤、結合剤、潤滑剤、湿潤剤、安定剤、乳化剤、分散剤、保存剤、甘味料、着色料、香料、芳香剤、増粘剤、希釈剤、緩衝物質、溶媒、可溶化剤、デポー効果を達成するための薬剤、浸透圧を変化させるための塩、コーティング剤または酸化防止剤などの添加物も含有する。

【0371】

様々な異なる形態の本明細書に記載の医薬組成物のための好適な賦形剤の例は、例えば、「Handbook of Pharmaceutical Excipients」、第2版(1994)、A WadeおよびPJ Weller(編)に見出すことができる。

【0372】

好ましい実施形態においては、ＣＣＲ６受容体の活性および／または発現を阻害することができる化合物は、本発明によるポリペプチド、ＣＣＲ６受容体に結合することができる小分子、本発明による単離されたポリヌクレオチド、ＣＣＲ６受容体に特異的なアプタマー、ＣＣＲ６に特異的な抗体、ＣＣＲ６受容体の発現を低下させるか、もしくは阻害するのに好適なアンチセンス分子およびＣＣＲ６受容体の発現を低下させるか、もしくは阻害するのに好適なｓｉＲＮＡ分子からなる群より選択される。

【0373】

ＣＣＲ６受容体に結合することができる小分子は、例えば、小分子化合物ライブラリーをスクリーニングすることにより同定することができる。

【0374】

小分子がＣＣＲ６受容体に結合することができるかどうかを、例えば、上記と同じ方法により決定することができる。例えば、類似する方法を用いて、小分子がＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０に結合することができるかどうかを決定することができる。

【0375】

本明細書で用いられる用語「アプタマー」とは、それぞれ、ＣＣＲ６受容体、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０に特異的なＤＮＡ、ＲＮＡまたはペプチドアプタマーを指す。

【0376】

ポリヌクレオチドアプタマーは、好ましくは約１０〜約３００ヌクレオチドの長さである。好ましくは、アプタマーは約３０〜約１００ヌクレオチドの長さである。最も好ましくは、アプタマーは約１０〜６０ヌクレオチドの長さである。

【0377】

アプタマーは、合成、組換え、および精製方法などの任意の公知の方法により調製することができ、単独で、またはＣＣＲ６、ＣＣＬ１８もしくはＣＣＬ２０に特異的な他のアプタマーと組合せて用いることができる。

【0378】

ＣＣＲ６受容体に特異的な抗体は、モノクローナルまたはポリクローナル抗体であってよい。いくつかの実施形態においては、抗体は、例えば、一本鎖抗体、ダイアボディ、ミニボディ、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃ（Ｆｖ））、ｓｃ（Ｆｖ）_２抗体、Ｆａｂ断片またはＦ（ａｂ’）_２断片などの抗体変異体または断片から選択することもできるが、但し、該抗体変異体または断片はＣＣＲ６受容体に特異的である。

【0379】

用語「ＣＣＲ６受容体の発現を低下させるか、または阻害するのに好適なアンチセンス分子」とは、ＣＣＲ６ ｍＲＮＡと相補的であるポリヌクレオチドを指す。前記アンチセンス分子は、細胞中でのＣＣＲ６ ｍＲＮＡの翻訳を阻害するためのアンチセンス手法における使用にとって好適であるのが好ましい。前記アンチセンス分子は、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子であってよく、一本鎖または二本鎖であってよい。好ましい実施形態においては、アンチセンス分子は、一本鎖ＤＮＡ分子または二本鎖もしくは一本鎖ＲＮＡ分子である。

【0380】

アンチセンス分子は、好ましくは、約１０〜約５００ヌクレオチド、約１１〜約２００ヌクレオチド、約１２〜約１００ヌクレオチド、約１３〜約７５ヌクレオチドまたは約１４〜約５０ヌクレオチド、約１５〜約４０ヌクレオチド、約１６〜約３０ヌクレオチドまたは約１７〜約２５ヌクレオチドの長さを有する。

【0381】

ＣＣＲ６受容体の発現を低下させるか、または阻害するのに好適なｓｉＲＮＡ分子は、ＣＣＲ６ ｍＲＮＡにハイブリダイズし、それによって、ＣＣＲ６タンパク質の発現の低下もしくは阻害をもたらすＲＮＡ干渉または任意の他の細胞内アンチセンス機構を誘導することができる一本鎖または二本鎖ｓｉＲＮＡ分子であってよい。

【0382】

ｓｉＲＮＡ分子は、該ｓｉＲＮＡ分子がＣＣＲ６タンパク質の発現の低下または阻害をもたらすＲＮＡ干渉を誘導することができる任意の配列のものであってよい。

【0383】

好ましくは、ｓｉＲＮＡ分子は、１０〜１００、１２〜８０、１４〜６０、１６〜５０、１７〜４０、より好ましくは１８〜３０ヌクレオチドおよび最も好ましくは１８〜２６ヌクレオチドの長さを有する。

【0384】

別の好ましい実施形態においては、本発明による医薬組成物は、間質性肺疾患および／または癌の処置または予防にとって好適なさらなる活性化合物を含む。

【0385】

間質性肺疾患の処置にとって好適なさらなる活性化合物の例は、例えば、抗炎症剤、例えば、プレドニゾンもしくは他のコルチコステロイド、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸もしくはシクロホスファミド、酸化防止剤、例えば、アセチルシステイン、抗線維症剤、例えば、ボセンタンもしくはピルフェニドン、ミノサイクリン、シルデナフィル、サリドマイド、抗ＴＮＦ抗体、例えば、インフリキシマブ；エタネルセプト、インターフェロンγ、抗ＩＬ−１３抗体、エンドセリン阻害剤、ジレウトン、抗凝固剤、マクロライド、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）４阻害剤、例えば、ロフルミラスト、アビプタジル、α−メラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、イマチニブ、ダサチニブおよびニロチニブである。

【0386】

癌の処置にとって好適なさらなる活性化合物は、好ましくは化学療法剤である。癌の処置にとって好適な化学療法剤は、当業者には周知である。化学療法剤の例は、例えば、テモゾロミド、アドリアマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）、シクロホスファミド、チオテパ、ブスルファン、サイトキシン、タキソイド、例えば、パクリタキセル、トキソテール、メトトレキサート、シスプラチン、メルファラン、ビンブラスチン、ブレオマイシン、エトポシド、イフォスファミド、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、カルボプラチン、テニポシド、ダウノマイシン、カルミノマイシン、アミノプテリン、ダクチノマイシン、マイトマイシン、メルファランおよび他の関連する窒素マスタードならびにタモキシフェンおよびオナプリストンなどの腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害するように作用するホルモン剤である。

【0387】

本発明による医薬組成物は、間質性肺疾患の処置もしくは予防にとって好適な１もしくは１より多いさらなる活性化合物および／または癌の処置もしくは予防にとって好適な１もしくは１より多いさらなる活性化合物を含んでもよい。好ましい実施形態においては、本発明による医薬組成物は、間質性肺疾患の処置もしくは予防にとって好適な１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０もしくは１０より多いさらなる活性化合物および／または癌の処置もしくは予防にとって好適な１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０もしくは１０より多いさらなる活性化合物を含む。

【0388】

他の好ましい実施形態においては、間質性肺疾患の処置もしくは予防にとって好適な活性化合物および／または癌の処置もしくは予防にとって好適な活性化合物を含む１または複数の別々の組成物を、被験体、好ましくはヒト被験者に、ＣＣＲ６受容体の活性および／または発現を阻害することができる化合物を含む本発明による医薬組成物と組合せて投与することができる。

【0389】

さらなる態様において、本発明は、間質性肺疾患および／または癌の処置または予防における使用のための、本発明による医薬組成物に関する。

【0390】

別の態様において、本発明は、間質性肺疾患および／または癌の処置または予防のための薬剤の製造のための、ＣＣＲ６受容体または本発明による医薬組成物の活性および／または発現を阻害することができる化合物の使用に関する。

【0391】

本発明による使用の好ましい実施形態においては、ＣＣＲ６受容体の活性および／または発現を阻害することができる化合物は、本発明による単離されたポリペプチド、ＣＣＲ６受容体に結合することができる小分子、本発明による単離されたポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド、ＣＣＲ６受容体に特異的なアプタマー、ＣＣＲ６受容体に特異的な抗体、ＣＣＲ６受容体の発現を低下させるか、または阻害するのに好適なアンチセンス分子およびＣＣＲ６受容体の発現を低下させるか、または阻害するのに好適なｓｉＲＮＡ分子からなる群より選択される。ＣＣＲ６受容体の活性および／または発現を阻害することができるそのような化合物は、本明細書に上記されている。本発明による使用の特に好ましい実施形態においては、ＣＣＲ６受容体の活性および／または発現を阻害することができる化合物は、本発明による単離されたポリペプチドおよび本発明による単離されたポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドからなる群より選択される。

【0392】

本発明はまた、間質性肺疾患および／または癌の処置または予防のための薬剤の製造のための、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の活性および／または発現を阻害することができる化合物の使用に関する。

【0393】

本発明による上記使用の好ましい実施形態においては、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の活性および／または発現を阻害することができる化合物は、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０に結合することができる小分子、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０に特異的なアプタマー、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０に特異的な抗体、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の発現を低下させるか、または阻害するのに好適なアンチセンス分子およびＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の発現を低下させるか、または阻害するのに好適なｓｉＲＮＡ分子からなる群より選択される。

【0394】

本発明はまた、被験体からの試料中で間質性肺疾患または癌を検出するための、
（ａ）ＣＣＲ６受容体をコードするポリヌクレオチドに特異的な検出剤；
（ｂ）ＣＣＲ６受容体に特異的な検出剤；
（ｃ）ＣＣＬ１８をコードするポリヌクレオチドに特異的な検出剤；
（ｄ）ＣＣＬ１８タンパク質に特異的な検出剤；
（ｅ）ＣＣＬ２０をコードするポリヌクレオチドに特異的な検出剤；および
（ｆ）ＣＣＬ２０に特異的な検出剤
からなる群より選択される検出剤の使用に関する。

【0395】

好ましくは、（ａ）、（ｃ）および／または（ｅ）における前記ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡである。ＣＣＲ６ ｍＲＮＡ、ＣＣＬ１８ ｍＲＮＡまたはＣＣＬ２０ ｍＲＮＡを検出するための好適な検出剤は、例えば、ＣＣＲ６ ｍＲＮＡ、ＣＣＬ１８ ｍＲＮＡまたはＣＣＬ２０ ｍＲＮＡに特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチドプローブである。ＣＣＲ６受容体、ＣＣＬ１８タンパク質またはＣＣＬ２０タンパク質を検出するための好ましい検出剤は、抗体またはアプタマーである。好ましくは、抗体はモノクローナルまたはポリクローナル抗体である。いくつかの実施形態においては、検出剤は、例えば、一本鎖抗体、ダイアボディ、ミニボディ、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃ（Ｆｖ））、ｓｃ（Ｆｖ）_２抗体、Ｆａｂ断片またはＦ（ａｂ’）_２断片などの抗体変異体または断片から選択することもできる。ＣＣＲ６に特異的な市販の抗体の一例は、以下の実施例１に記載の抗ヒトＣＣＲ６ ｍＡｂである。検出剤は、好ましくは、検出可能な標識を含む。

【0396】

本発明による方法、本発明による診断キット、本発明による医薬組成物および／または本発明による使用の一つの好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、既知の原因の広範性実質性肺疾患（好ましくは、膠原血管病または環境もしくは薬剤関連広範性実質性肺疾患）、肉芽腫性広範性実質性肺疾患（好ましくは、サルコイドーシス）および他の形態の広範性実質性肺疾患（好ましくは、リンパ脈管筋腫症（ＬＡＭ）、肺ランゲルハンス細胞組織球増加症／ヒスチオサイトーシスＸ（ＨＸ）または好酸性肺炎）からなる群より選択される。

【0397】

本発明による方法、本発明による診断キット、本発明による医薬組成物および／または本発明による使用の一つの好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、特発性間質性肺炎である。

【0398】

本発明による方法、本発明による診断キット、本発明による医薬組成物および／または本発明による使用の一つの好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、特発性肺線維症、非特異的間質性肺炎、特発性器質化肺炎、呼吸細気管支炎関連間質性肺疾患、剥離性間質性肺炎、急性間質性肺炎およびリンパ球性間質性肺炎からなる群より選択される。本発明による方法、本発明による診断キット、本発明による医薬組成物および／または本発明による使用の特に好ましい実施形態においては、間質性肺疾患は、特発性肺線維症である。間質性肺疾患の分類に関する概説については、当業者は、例えば、American Thoracic Society/European Respiratory Society International Multidisciplinary Consensus Classification of the Idiopathic Interstitial Pneumonias, American Thoracic Society; European Respiratory Society, Am J Respir Crit Care Med. 2002 Jan 15; 165(2): 277〜304を参照することができる。

【0399】

いくつかの実施形態においては、間質性肺疾患は、強皮性肺疾患、サルコイドーシス、過敏性肺炎、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデスおよび石綿症からなる群より選択される症状により引き起こされ得る。

【0400】

本発明による方法、本発明による診断キット、本発明による医薬組成物および／または本発明による使用の別の好ましい実施形態においては、癌は、肺癌、乳癌、膵臓癌、前立腺癌、神経芽腫、黒色腫、脳の癌、腎臓癌、膀胱癌、卵巣癌、血液の癌および結腸癌からなる群より選択される。本発明による方法、本発明による診断キット、本発明による医薬組成物および／または本発明による使用のさらに好ましい実施形態においては、癌は、腺癌、好ましくは、肺の腺癌、胸膜中皮腫、結腸直腸癌、前立腺癌、乳癌、腎細胞癌、肝細胞癌、非ホジキンリンパ腫およびホジキンリンパ腫からなる群より選択される。

【0401】

本発明による方法、本発明による診断キット、本発明による医薬組成物および／または本発明による使用の特に好ましい実施形態においては、癌は、肺癌、最も好ましくは、肺の腺癌、または胸膜中皮腫である。最も好ましい実施形態においては、癌は肺の腺癌である。

【0402】

本発明は、下記にも関する：
（１）ＣＣＲ６受容体の活性を阻害することができる化合物を同定するための方法であって、
（ａ）ＣＣＲ６受容体を試験化合物と接触させるステップと、
（ｂ）配列番号５または配列番号１８に記載の配列に対して少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドであるＣＣＲ６受容体アゴニストを添加するステップと、
（ｃ）前記ＣＣＲ６受容体の活性を決定するステップと、
（ｄ）（ｃ）で決定されたＣＣＲ６受容体活性が対照中で決定されたＣＣＲ６受容体活性よりも低い場合、前記試験化合物を、ＣＣＲ６受容体の活性を阻害することができる化合物として選択するステップと
を含む方法。

【0403】

（２）前記試験化合物が抗体、小分子またはペプチドである、（１）に記載の方法。

【0404】

（３）被験体からの試料中のＣＣＲ６遺伝子発現のレベルを決定するステップを含む、前記被験体における間質性肺疾患または癌を検出するための方法。

【0405】

（４）被験体からの試料中で決定されたＣＣＲ６遺伝子発現のレベルを、対照中のＣＣＲ６遺伝子発現のレベルと比較するステップをさらに含み、対照と比較して被験体からの試料中で決定されたＣＣＲ６遺伝子発現のレベルがより高い場合、被験体における間質性肺疾患または癌の存在を示唆する、（３）に記載の方法。

【0406】

（５）間質性肺疾患が、特発性肺線維症、非特異的間質性肺炎、特発性器質化肺炎、呼吸細気管支炎関連間質性肺疾患、剥離性間質性肺炎、急性間質性肺炎およびリンパ球性間質性肺炎からなる群より選択される、（３）または（４）に記載の方法。

【0407】

（６）癌が、腺癌、好ましくは、肺の腺癌、胸膜中皮腫、結腸直腸癌、前立腺癌、乳癌、腎細胞癌、肝細胞癌、非ホジキンリンパ腫およびホジキンリンパ腫からなる群より選択される、（３）または（４）に記載の方法。

【0408】

（７）被験体からの液体試料中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドの濃度を定量するための方法であって、
（ａ）固相支持体上に前記可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに特異的な捕捉分子を固定化するステップと、
（ｂ）被験体からの液体試料を添加するステップと、
（ｃ）任意選択で、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０または配列番号２１に記載の配列に対して少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドである、可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのリガンドを添加するステップと、
（ｄ）標識を含む、（ｃ）に記載のリガンドに特異的な検出剤を添加するステップと、
（ｅ）（ｄ）に記載の検出剤からのシグナルを定量するステップと
を含む方法。

【0409】

（８）前記可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドが、本発明による単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドである、（７）に記載の方法。

【0410】

（９）被験体からの試料中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルを決定するステップを含む、前記被験体における間質性肺疾患または癌を検出および／または予後判定するための方法。

【0411】

（１０）被験体からの試料中で決定された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルを、対照中の可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルと比較するステップをさらに含み、対照と比較して被験体からの試料中で決定された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドのレベルがより低い場合、被験体における間質性肺疾患または癌の存在を示唆する、（９）に記載の方法。

【0412】

（１１）間質性肺疾患が、特発性肺線維症、非特異的間質性肺炎、特発性器質化肺炎、呼吸細気管支炎関連間質性肺疾患、剥離性間質性肺炎、急性間質性肺炎およびリンパ球性間質性肺炎からなる群より選択される、（９）または（１０）に記載の方法。

【0413】

（１２）癌が、腺癌、好ましくは、肺の腺癌、胸膜中皮腫、結腸直腸癌、前立腺癌、乳癌、腎細胞癌、肝細胞癌、非ホジキンリンパ腫およびホジキンリンパ腫からなる群より選択される、（９）または（１０）に記載の方法。

【0414】

ここで、本発明を、いくつかのその特定の実施例に関して説明する。しかしながら、これらの実施例は限定的な方法で解釈されるべきではない。

【実施例1】

【0415】

材料および方法
ファージディスプレイライブラリー
ＣＣＬ１８結合モチーフの同定のために、確立されたファージディスプレイライブラリーを用いた（１）。

【0416】

細胞および細胞系
様々な腫瘍に罹患している患者からの肺切除もしくは肺葉切除からの外科的材料から、またはビデオ補助胸腔鏡下手術（ＶＡＴＳ）により線維性肺から得られた残存材料から、線維芽細胞系を確立した。患者は、肺の腺癌、非小細胞癌または扁平上皮癌のいずれかに罹患していた。線維症は、特発性肺線維症（ＵＩＰ）、非特異的間質性肺炎、サルコイドーシス、過敏性肺炎、塵肺または全身性強皮症の結果生じたものであった。組織を小片（およそ０．５ｃｍ辺長）に切断し、１％ペニシリン／ストレプトマイシンと共に１ｍｌのＱｕａｎｔｕｍ ３３３（ＰＡＡ、Ｐａｓｃｈｉｎｇ、Ａｕｓｔｒｉａ）を含有する６穴プレート中に入れた。線維芽細胞がおよそ８０％の集密度に達した時、増殖する線維芽細胞をトリプシン処理により収穫し、Ｑｕａｎｔｕｍ ３３３中、７５ｃｍ^２細胞培養フラスコ（ＮＵＮＣ Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ，Ｒｏｓｋｉｌｄｅ，Ｄｅｎｍａｒｋ）中で培養した後、分割した（１：３〜１：５）。確立された細胞系を、継代３から８まで試験に登録した。

【0417】

別途記載しない限り、細胞を、１０ｎｇ／ｍｌのヒト組換えＣＣＬ１８、２．５ｎｇ／ｍｌのＴＧＦβを用いて、さらに１ｎｇ／ｍｌのＴＮＦαを用いて、または用いずに刺激した。

【0418】

ＡＥＣＩＩを以前に記載されたように単離した（２）。簡単に述べると、肉眼で腫瘍を含まない肺組織をまずスライスし、スライスをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中、４℃で３回洗浄した後、滅菌ディスパーゼ溶液（２．５ｍｇのディスパーゼＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＧｍｂＨ，Ｋａｒｌｓｒｕｂｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）ｍｌおよび５０μｇ／ｍｌのＤＮａｓｅＩ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ））中、３７℃で６０分間消化した。ディスパーゼ消化の後、スライスを広い注水口を有する１０ｍｌのピペットを用いて数分間完全にピペッティングした。粗組織および細胞懸濁液を、５０および２０μｍのメッシュを有するナイロンガーゼを通して濾過した。次いで、細胞懸濁液を密度勾配溶液（ＰＡＮ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ，Ａｉｄｅｎｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）上で層状にし、８００ｘｇで２０ｍｉｎ遠心分離した。

【0419】

相間に由来する細胞を洗浄し、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）（ＰＡＡ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ＧｍｂＨ，Ｃｏｌｂｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）および１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ ＡＧ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を含むＲＰＭＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）中、３７℃で加湿インキュベータ（５％ＣＯ２、３７℃）中で１５、２０および可能なら３０分間、１００ｍｍのペトリ皿（最大６ｘ１０７細胞／皿）中でインキュベートして、非付着細胞から付着細胞（多くは肺胞マクロファージ、単球および線維芽細胞）を除去した。

【0420】

ヒト肺腺癌細胞および胸膜中皮腫細胞は、ＨＨ Ｆｉｅｂｉｇ教授、Ｏｎｃｏｔｅｓｔ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇからの寛大な贈り物であった。これらの細胞を、１０％ＦＣＳならびに１００Ｕ／ｍｌのストレプトマイシンおよびペニシリンを含有するＲＰＭＩ１６４０中で培養した。培養液が９０％の集密度に達した時、培養液を１：３に分割した。

【0421】

フローサイトメトリー
線維芽細胞および腫瘍細胞系ならびにＲＬＥ−６ＴＮのＣＣＲ６の表面発現を、ＦＩＴＣ標識抗ヒトＣＣＲ６抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いて評価し、ＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒ（ＢＤ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて計数した。トリプシン処理した細胞は、３７℃で培地中で３ｈインキュベートして、表面分子の再発現を可能にしなければならない。細胞の付着を阻害するために、このインキュベーションをポリプロピレンチューブ中で行った。

【0422】

また、ＲＬＥ−６ＴＮのＣＣＲ６発現を、ポリクローナルヤギ抗ＣＣＲ６抗体（ＣＫＲ６／Ｃ２０，Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，ＣＡ）およびＦＩＴＣ標識マウス抗ヤギ抗体（ＤＡＫＯ，Ｇｌｏｓｔｒｕｐ，Ｄｅｎｍａｒｋ）を用いて分析した。

【0423】

また、腫瘍細胞系のＣＣＲ６の表面発現をＰＥ標識抗ヒトＣＣＲ６抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いて評価し、ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ（Ｂｅｃｋｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，ＦＲＧ）を用いて測定した。

【0424】

ヒト肺癌におけるＣＣＲ６発現の分析
肺の腺癌から新鮮に単離された腫瘍組織を、１ｘ１ｘ０．５ｃｍ辺長以下の小片に切断した。ＨＯＰＥ安定化溶液（ＤＣＳ，Ｈａｍｂｕｒｇ，ＦＲＧ）を４℃で用いて組織を安定化し、パラフィン包埋した。組織スライスを脱パラフィン化し、市販の抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｗｉｅｓｂａｄｅｎ，ＦＲＧ）を用いるペルオキシダーゼ技術（５）によりＣＣＲ６発現のために染色した。

【0425】

免疫組織化学分析
抗ヒトＣＣＲ６ ｍＡｂ（クローン５３１０３、アイソタイプマウスＩｇＧ２ｂ；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｅｕｒｏｐｅ，ＵＫ）およびペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン−ビオチン技術（ＤＡＫＯ ＬＳＡＢ２ Ｓｙｓｔｅｍ；ＤａｋｏＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、免疫組織化学分析を記載のように（３、４）行った。Ｍａｙｅｒのヘマラムを用いて対抗染色を行った。全ての染色シリーズに含まれる陰性対照のために、一次抗体を用いずに切片を染色した。

【0426】

ＦＧＦ２ ＥＬＩＳＡ
ＣＣＬ１８により誘導されたＦＧＦ２放出を評価するために、線維芽細胞を収穫、計数し、Ｑｕａｎｔｕｍ ３３３中、６穴細胞培養プレートにウェルあたり３００，０００個の細胞を播種した。細胞を一晩付着させ、培地を１ｍｌのＤＭＥＭ＋１０％ＦＣＳと交換した。細胞を未刺激のまま放置するか、または１０ｎｇ／ｍｌのヒト組換えＣＣＬ１８で刺激した。ＣＣＲ６／ＣＣＬ１８相互作用を遮断するために、ＣＣＲ６に対する遮断抗体（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｗｉｅｓｂａｄｅｎ，ＦＲＧ）または無関係の抗体（マウス抗ヒトＩｇＧ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、平行培養中で２０μｇ／ｍｌの最終濃度で添加した。培養の２４ｈ後、上清を収穫し、ＦＧＦ２決定まで−８０℃で保存した。

【0427】

ＦＧＦ２濃度を、ＥＬＩＳＡ発色キット（Ｒ＆Ｄ）を用いて測定し、供給業者により提言されるように実施した。

【0428】

リアルタイムＰＣＲ
指示された培養期間の後、製造業者のプロトコール（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｋａｒｌｓｒｕｂｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に従ってＴＲＩｚｏｌ Ｒｅａｇｅｎｔを用いて、総ＲＮＡを抽出した。オリゴ（ｄＴ）１２〜１８プライマーを用いるＳｔｒａｔａＳｃｒｉｐｔ ＲＴ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）を用いて総ＲＮＡを逆転写して、製造業者のプロトコールに従ってｃＤＮＡを作製した。ＬｏｃｕｓＬｉｎｋおよびＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＬｏｃｕｓＬｉｎｋ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ）を用いるＰｒｉｍｅｒ３ソフトウェア（Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＳＡ；ｈｔｔｐ：／／ｆｒｏｄｏ．ｗｉ．ｍｉｔ．ｅｄｕ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｐｒｉｍｅｒ３／ｐｒｉｍｅｒ３＿ｗｗｗ．ｃｇｉ）、Ａｍｐｌｉｆｙ１．２ソフトウェア（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，ＵＳＡ；ｈｔｔｐ：／／ｅｎｇｅｌｓ．ｇｅｎｅｔｉｃｓ．ｗｉｓｅ．ｅｄｕ／ａｍｐｌｉｆｙ）を用いて、ヒトＣＣＲ６、Ｉ型コラーゲン、α−平滑筋アクチンおよびＧＡＰＤＨのための特異的プライマーを設計した。それぞれのプライマーを作製するのに用いられたヌクレオチド配列の受託番号およびプライマー配列を、図１７に示す。

【0429】

全てのプライマーを、ＭＷＧ−Ｂｉｏｔｅｃｈ（ＭＷＧ−Ｂｉｏｔｅｃｈ ＡＧ，Ｇｅｒｍａｎｙ）によりイントロンスパニングおよび合成した。製造業者のプロトコールに従って、ｉＱ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ＳｕｐｅｒＭｉｘ，ｉＣｙｃｌｅｒサーモサイクラーおよびｉＣｙｃｌｅｒ ｉＱ ３．０ソフトウェア（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ＧｍｂＨ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、リアルタイムＰＣＲを実施した。増幅産物の特異性を制御するために、融解曲線分析を行った。いずれの反応においても、非特異的産物の増幅は観察されなかった。閾値サイクル値（Ｃｔ）を算出し、それぞれのｃＤＮＡ試料について、以下の式：「相対的発現＝２^{（ＣｔＧＡＰＤＨ−ＣｔＣＣＬ１８）}ｘ１０，０００」により特異的ｍＲＮＡの相対レベルを計算するのに用いた。

【0430】

ウェスタンブロット
指示された培養期間の後、細胞をＰＢＳ中で１回洗浄し、氷冷溶解バッファー中で溶解した。等量のローディングバッファー（０．５ＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ ６．８、２％ＳＤＳ、０．０５％のブロムフェノールブルー、２０％の２−メルカプトエタノール、１０％のグリセロール）中、全細胞溶解物を９３℃で５分間沸騰させた。

【0431】

全試料を１２％ドデシル硫酸ナトリウム−ＰＡＧＥにかけ、電気泳動により分離し、ポリビニリデンジフルオリド膜（ＰＶＤＦ）に移した。５％無脂肪乾燥ミルクを含有するＴｒｉｓ緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）中で２ｈ遮断した後、膜を、ＴＢＳで１：７００に希釈された一次抗体（ウサギ抗Ｉ型コラーゲン（Ｒｏｃｋｌａｎｄ，Ｇｉｌｂｅｒｔｓｖｉｌｌｅ ＰＡ）；抗αＳＭＡ（ウサギ抗αＳＭＡ（Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）；抗ビメンチン（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）；抗ＣＣＲ６：ＣＫＲ６／Ｃ２０，Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）と共に４℃で一晩インキュベートした。１：１００００〜１：２００００に希釈されたＩＲＤｙｅ ８００ＣＷまたはＩＲＤｙｅ ７００ＣＷ（Ｌｉ−ＣＯＲ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｂａｄ Ｈｏｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で標識された好適な二次抗体を用いて２ｈ、可視化を実施し、製造業者の説明書に従ってＯｄｙｓｓｅｙシステム（Ｌｉ−ＣＯＲ Ｂｉｏｓｉｅｎｃｅ）を用いてスキャンした。

【0432】

ＰＨＡの存在下または非存在下でのＰＢＭＮＣによるＣＣＲ６発現の分析
ヒト末梢血単核細胞を、密度遠心分離により静脈穿刺血から単離し、洗浄し、計数した。完全培養培地（１０％ウシ胎仔血清および１００Ｕペニシリン／ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ１６４０）中、１ｍｌあたり１ｘ１０^６細胞に細胞を調整し、１０μｇ／ｍｌのフィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）の非存在下または存在下で２４ｈ培養した。ＣＣＲ６陽性細胞の割合を、ＦＩＴＣ標識抗ＣＣＲ６抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｗｉｅｓｂａｄｅｎ ＦＲＧ）を用いて測定し、ＦＡＣＳ ｃａｌｉｂｕｒ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，ＦＲＧ）中で計数した。

【0433】

ＣＣＲ６下方調節の阻害
新鮮に単離された単核細胞を、１０ｎｇ／ｍｌのＣＣＬ１８、１００ｎｇ／ｍｌの阻害剤ペプチドＰＳ−ＡＵ−１０５（配列番号９に記載のポリペプチド）、両方の組合せと共に２０分間インキュベートするか、または未処理のまま放置した。インキュベーションを、１０％ウシ胎仔血清および１００Ｕ／ｍｌのストレプトマイシン／ペニシリンを含むＲＰＭＩ１６４０中、３７℃で行った。インキュベーション後、細胞を遠心分離し、上清を廃棄した。細胞を氷上で５分間、４％パラホルムアルデヒドで固定し、１％ＦＣＳを含有するＰＢＳ中で２回洗浄した。固定後、細胞を、ＣＣＲ６に対するフルオレセインコンジュゲート抗体（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｗｉｅｓｂａｄｅｎ，ＦＲＧ）を用いて染色し、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒおよびＱｕａｎｔｉｑｕｅｓｔ；両方ともＢｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＵＳＡ）により分析した。

【0434】

統計分析（図１〜１６）
全ての統計分析を、非パラメータ統計分析を用いて行った。増加または阻害のペアワイズ分析を、Ｗｉｌｃｏｘｏｎの符号付き分析を用いて実行した；対になっていない群を、Ｍａｎｎ−ＷｈｉｔｎｅｙのＵ検定を用いて分析した。ｐ＜０．０５の値を有意と考えた。データをＢｏｘ−Ｐｌｏｔを用いて提示する。この場合、中央値は２５および７５パーセンタイルを示す長方形の線で与えられる。５および９５パーセンタイル値を、長方形の下または上の線で示し、５および９５パーセンタイルを超えるか、またはそれより上の値を点で例示する。

【0435】

患者
血清を、健康なボランティア（ｎ＝６）、ＮＳＩＰに罹患している患者（ｎ＝６）およびＵＩＰに罹患している患者（ｎ＝１３）から、静脈穿刺により採取した。凝固の１時間後、血液を１５分間遠心分離し、血清試料を分注し、ＥＬＩＳＡの前に−８０℃で保存した。

【0436】

血清のウェスタンブロット分析（実施例８）
血清をウェスタンブロットバッファーを用いて１：１０に希釈し、等量のローディングバッファー（０．５ＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ ６．８、２％のＳＤＳ、０．０５％のブロムフェノールブルー、２０％の２−メルカプトエタノール、１０％のグリセロール）中、９３℃で５分間沸騰させた。

【0437】

試料を１２％ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）にかけ、電気泳動により分離し、ポリビニリデンジフルオリド膜（ＰＶＤＦ）に移した。５％無脂肪乾燥ミルクを含有するＴｒｉｓ緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）中で２ｈ遮断した後、膜を、ＴＢＳで１：７００に希釈された一次抗ＣＣＲ６抗体（ＣＫＲ６／Ｃ２０，Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）と共に４℃で一晩インキュベートした。１：１００００〜１：２００００に希釈されたＩＲＤｙｅ ８００ＣＷ（Ｌｉ−ＣＯＲ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｂａｄ Ｈｏｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で標識された二次抗体を用いて２ｈ、可視化を行った。次いで、ブロットをスキャンし、製造業者の説明書に従ってＯｄｙｓｓｅｙシステムおよびソフトウェア（Ｌｉ−ＣＯＲ Ｂｉｏｓｉｅｎｃｅ）を用いて評価した。

【0438】

ＣＣＲ６ ＥＬＩＳＡ
供給業者（Ｕｓｃｎ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｎｃ．Ｗｕｈａｎ，Ｃｈｉｎａ）により提言されたようにＥｌｉｓａを行った。

【0439】

遊離可溶性ＣＣＲ６の遮断
血清を、添加物を含まない、またはＣＣＬ１８もしくはＣＣＬ２０（両方ともＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ；それぞれ１００ｎｇ／ｍｌ）を含有する等量のＰＢＳ／ＢＳＡ（１％ウシ血清アルブミン、Ｓｉｇｍａ，Ｄｅｉｓｅｎｈｏｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で希釈した。次いで、希釈された血清を、３７℃で１ｈインキュベートした後、ＥＬＩＳＡにより測定した。

【0440】

気管支肺胞洗浄
以前に記載されたような（８、９）標準的な技術を用いて、気管支鏡検査、気管支肺胞洗浄およびＢＡＬ−細胞培養を行った。培養期間の終わりに、上清を収穫し、ＣＣＬ１８濃度についてアッセイするまで−７０℃で保存した。細胞の生存能力を、Ｔｒｙｐａｎブルー色素排除により決定したところ、常に９５％を超えていた。

【0441】

ＢＡＬ細胞示差計数
Ｍａｙ−Ｇｒｕｎｗａｌｄ染色により染色された細胞スメアで少なくとも２００個の細胞を計数することにより、細胞示差を決定した。

【0442】

イムノペルオキシダーゼ染色のために、細胞をポリ−Ｌ−リジン被覆スライド（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｍｕｎｉｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）上に固定し、ＣＤ４、ＣＤ８、ＩＬ−２Ｒ（Ｏｒｔｈｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ；Ｎｅｃｋａｒｇｅｍｕｎｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ）およびヒト白血球抗原−ＤＲ（ＨＬＡ−ＤＲ）（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に対するモノクローナル抗体を用いる、ペルオキシダーゼ−抗ペルオキシダーゼ（ＰＡＰ）技術を用いて発色させた。少なくとも２００個の細胞が計数され、陽性細胞を全リンパ球の割合として表す。

【0443】

統計分析（図１８〜２２）
データは平均±ＳＤで示される。名目データの比較はカイ二乗検定を用いて実施される。連続データは非パラメータＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ検定を用いて分析される。全ての統計分析はＳｔａｔＶｉｅｗを用いて実施される。

【0444】

実施例１１〜１７および図２３〜３２に関する材料および方法
ＮＳＣＬＣ患者および健康な対照の特徴：
ＮＳＣＬＣ（ＵＩＣＣ Ｓｔａｇｅ ＩからＳｔａｇｅ ＩＶ、第６版）と診断された１７０人の患者および３１人の健康なボランティアの対照群がこの試験に含まれる。患者の平均年齢は６４±１０歳であり、男性は１２５人および女性は４５人であった。腺癌は７０人の患者において診断され、５４人の患者は扁平上皮癌を提示し、４６人の事例では検査する病理学者が混合組織学を記載した。ＵＩＣＣ段階分類（第６版）に従って、本発明者らは２２人の患者が段階ＩＡにあり、１９人が段階ＩＢにあり、５人が段階ＩＩＢにあり、２９人が段階ＩＩＩＡにあり、２５人が段階ＩＩＩＢにあり、および６９人が段階ＩＶにあることを見出した。一事例においては、ＵＩＣＣ段階は決定されなかったが、これは結節状態のみを記述する不十分なデータ記録であったためである。対照群は、３２±１１歳の平均年齢を有する１０人の女性被験者および２２人の男性被験者からなっていた。

【0445】

インフォームドコンセント、データ収集およびプライバシー保護に関する全ての手順は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ Ｆｒｅｉｂｕｒｇの倫理委員会によって認可されたものであった。臨床データを、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ Ｆｒｅｉｂｕｒｇの医療記録データバンクから抽出した。それぞれの個人からの血清試料は、任意の治療的処置を開始する前の臨床ワークアウトの間の診断時に得られたものであった。分析を実施するまで血清を−８０℃で保存した。ＮＳＣＬＣの診断を、組織学または細胞学によって確認した。世界保健機関の分類に従って、組織学的型を決定した。全ての腫瘍を、ＵＩＣＣ、第６版に従って分類した。

【0446】

血清ＣＣＬ１８の免疫検出
日常的な手順を用いて静脈血をサンプリングした。血液試料を、遠心分離の前に２０分間静置した。遠心分離後、血清試料を−８０℃で凍結し、保存した。ＤｕｏＳｅｔ ＥＬＩＳＡ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｓｙｓｔｅｍ Ｋｉｔ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｅｕｒｏｐｅ，Ｗｉｅｓｂａｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、ＣＣＬ１８を定量した。ＣＣＬ１８ ＥＬＩＳＡの検出限界は７ｐｇ／ｍｌであった。全ての試料を２回測定した。２回分の試料について、１０％の変動のアッセイ内係数および２０％の変動のアッセイ間係数が許容された。

【0447】

ＣＣＬ１８によるＥＭＴ誘導
腺癌細胞系Ａ５４９の細胞を６穴プレート中に播種し、一晩付着させた。付着後、細胞を指示された量のＣＣＬ１８で刺激した。陽性対照としてＴＧＦβを用いた。７２ｈ後、細胞を収穫し、ＰＣＲまたはウェスタンブロットにより分析した。

【0448】

線維芽細胞系の単離
様々な腫瘍に罹患している患者からの肺切除または肺葉切除からの外科的材料から、線維芽細胞系を確立した。組織を小片（およそ０．５ｃｍ辺長）に切断し、１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含む１ｍｌのＱｕａｎｔｕｍ ３３３（ＰＡＡ，Ｐａｓｃｈｉｎｇ，Ａｕｓｔｒｉａ）を含有する６穴プレート中に入れた。線維芽細胞がおよそ８０％の集密度に達した時、増殖する線維芽細胞をトリプシン処理により収穫し、Ｑｕａｎｔｕｍ ３３３中、７５ｃｍ^２の細胞培養フラスコ（ＮＵＮＣ Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ，Ｒｏｓｋｉｌｄｅ，Ｄｅｎｍａｒｋ）中で培養した後、分割した（１：３〜１：５）。

【0449】

フローサイトメトリー
線維芽細胞系のＣＣＲ６の表面発現を、ＦＩＴＣ標識抗ヒトＣＣＲ６抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いて評価し、サイトメトリー（ＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒ，Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＵＳＡ）により測定した。

【0450】

統計分析
濃度は中央値（範囲）として与える。統計分析をＳｔａｔＶｉｅｗ ５．０ソフトウェア（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＮＣ）を用いて行った。データは標準偏差と共に平均として提示し、ボックスプロットとして示す。患者群間の比較は、複数の比較のためにＡＮＯＶＡおよびＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ−Ｄｕｎｎ検定を用いて行った。様々な刺激後の同一の細胞培養物のサイトカイン産生などの関連する変数を、Ｗｉｌｃｏｘｏｎの符号付き検定により比較した。ＲＯＣ分析および「プロット対基準値」を、ＭｅｄＣａｌｃ（ＭｅｄＣａｌｃ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｂｖｂａ，Ｍａｒｉａｋｅｒｋｅ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を用いて実施した。

【0451】

単一の比較においては、確率値が０．０５未満である場合、それらは有意であると考えた。複数の比較においては、ｐのレベルを比較数のために調整した（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）。

【実施例2】

【0452】

ファージディスプレイを用いるＣＣＬ１８結合ペプチドの同定
ファージライブラリー（実施例１に記載）のファージの、プレートに結合したヒトＣＣＬ１８への結合の３サイクル後、ファージに感染した大腸菌(E. coli)を寒天上に塗布し、２０個のコロニーを拾い、増殖させ、配列決定のためにＤＮＡを単離した。いくつかの配列は情報を与えるものではなく、または非ヒト遺伝子標的をコードしていたが、ＣＣ−ケモカイン受容体６（ＣＣＲ６）との明確な関連を有する一つの配列が同定された。

【実施例3】

【0453】

一次ヒト線維芽細胞系上でのＣＣＲ６発現の分析
ＰＣＲ
ＣＣＲ６のプライマーを用いる発現試験により、ＣＣＲ６ ｍＲＮＡ発現の高い変動性が示された。最も高い発現は、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）に罹患している患者の肺から誘導された線維芽細胞系において認められた。非特異的間質性肺炎（ＮＳＩＰ）または扁平上皮癌に罹患している患者から誘導された細胞系は、ほんのわずかなレベルのＣＣＲ６ ｍＲＮＡを発現した（図１）。

【0454】

ＦＡＣＳ
確立された線維芽細胞系のフローサイトメトリー分析により、ＵＩＰに罹患している患者から誘導された線維芽細胞系上でのみ検出可能なＣＣＲ６発現が示された。扁平上皮癌またはＮＳＩＰに罹患している患者の肺から作製された細胞系は、その表面上に検出可能なＣＣＲ６を発現しない（図２）。線維性肺に由来する線維芽細胞のＣＣＲ６発現の増加は、全継代を通して増加したままであった（データは示さない）。

【0455】

免疫組織化学
ＩＰＦ／ＵＩＰを有する患者の肺から取った組織切片に対する免疫組織化学試験は、正常な肺組織中ではＣＣＲ６発現を示さなかった（図３Ａ）。線維性肺においては、肺胞上皮細胞の先端面（図３Ｂ）および線維芽細胞（図３Ｃ）上でＣＣＲ６発現が検出された。

【実施例4】

【0456】

ＣＣＲ６の機能的分析
ＦＧＦ２発現
非線維性肺から誘導された線維芽細胞は、ほんのわずかなレベルのＦＧＦ２を示した。ＣＣＬ１８は、これらの細胞におけるＦＧＦ２放出をほんのわずか刺激した。対照的に、線維性肺から誘導された非刺激線維芽細胞は、高レベルのＦＧＦ２（ｐ＜０．００５、対照と比較）を示し、これはＣＣＬ１８によってさらに上方調節される（ｐ＜０．０５、図４）。

【0457】

遮断抗体によるＣＣＲ６の遮断は、非線維性線維芽細胞系によるＣＣＬ１８刺激ＦＧＦ２放出に対して効果を示さない。線維性肺から誘導された線維芽細胞においては、ＣＣＲ６の遮断は、ＣＣＬ１８により誘導されるＦＧＦ２の上方調節を有意に減少させた（ｐ＜０．０５）。

【0458】

コラーゲン発現
ＣＣＬ１８は、コラーゲンおよびαＳＭＡの発現を誘導することが報告されている（７、１８）。かくして、これらの分子の誘導もＣＣＲ６に依存するかどうかを決定した。図５（上パネル）に示されるように、ＣＣＬ１８は、分析した４つの細胞系のうちの３つにおいてＩ型コラーゲンの発現を上方調節する。この誘導は、遮断抗体を用いるＣＣＲ６の遮断によって３つ全てのＣＣＬ１８反応性細胞系において阻害された。ＣＣＬ１８により誘導されるαＳＭＡの上方調節についても同じ結果が得られた。ＣＣＬ１８刺激によるＩ型コラーゲンの発現を増加させることができなかった同じ細胞系も、αＳＭＡの場合、反応しなかった（図５、下パネル）。

【実施例5】

【0459】

ＣＣＬ１８による筋線維芽細胞への上皮間葉移行（ＥＭＴ）の誘導はＣＣＲ６依存的である
ラット肺胞上皮細胞系ＲＬＥ−６ＴＮのＥＭＴ
ラット肺胞上皮細胞系ＲＬＥ−６ＴＮは、典型的な立方細胞形態の上皮細胞を開示する（図６上）。ＣＣＬ１８の存在下で６日間、これらの細胞を培養すれば、いくつかの領域において紡錘形状の線維芽細胞様細胞への分化が誘導される（図６中、矢印を参照）。この分化は、ＴＧＦβの存在下でより顕著であり（図６下、矢印を参照）、ほぼ全ての細胞が紡錘形状の線維芽細胞様表現型を開示する。これは、ＣＣＬ１８がＲＬＥ−６ＴＮ細胞中で少なくとも部分的にＥＭＴを誘導することを示唆している。

【0460】

ＣＣＬ１８もしくはＴＧＦβにより誘導されたＥＭＴ後のＲＬＥ−６ＴＮのウェスタンブロット分析により、ＴＮＦαにより増強されるＣＣＬ１８の存在下での培養後にビメンチンの発現が示された（図７）。両条件ではかすかなαＳＭＡ発現のみが見えた。ＴＧＦβはαＳＭＡの強い発現を誘導したが、ビメンチンの発現を誘導することはできなかった。

【0461】

蛍光顕微鏡観察により、ＴＧＦβによる刺激が実際にＲＬＥ−６ＴＮ細胞中でαＳＭＡの発現を誘導するが（図８Ｂ）、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ１８／ＴＮＦαは誘導しない（図８ＣおよびＤ）ことが示された。対照的に、全ての刺激がＣＤ９０の発現を誘導したが（図９ＢおよびＣ）、ＣＤ９０発現はＣＣＬ１８を用いた場合により強かった。ＲＬＥ−６ＴＮの定量的リアルタイムＰＣＲにより、ラットＣＣＲ６のかすかな発現が示された。しかしながら、ウェスタンブロットまたはフローサイトメトリーを用いるＣＣＲ６タンパク質分析は、ＲＬＥ−６ＴＮによるＣＣＲ６の発現を示せなかった（データは示さない）。従って、細胞を、ヒトＣＣＲ６をコードするＤＮＡ配列を含有する市販のプラスミドで一過的にトランスフェクトした。トランスフェクション後、ＣＣＬ１８による刺激はＣＣＲ６でトランスフェクトされた細胞中でαＳＭＡを誘導したが、モックトランスフェクトされた細胞中では誘導しなかった。対照的に、ＴＧＦβは、両方の細胞型においてαＳＭＡ発現を誘導した（図１０）。

【0462】

ヒト一次肺胞上皮細胞のＥＭＴ
ＴＧＦβ＋ＴＮＦαまたはＴＮＦαを含むか、もしくは含まないＣＣＬ１８で刺激された単離されたヒト一次肺胞上皮細胞型ＩＩの刺激はまた、ビメンチンおよびαＳＭＡ発現の誘導ならびにサイトケラチンの発現の低下により証明されるように、ＥＭＴを誘導する（図１１）。

【実施例6】

【0463】

ＰＢＭＮＣ上でのＣＣＲ６発現のＣＣＬ１８により誘導される下方調節の阻害
単離されたヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＮＣ）を、それらのＣＣＲ６^＋細胞の基本的割合に従ってグループ化した。活性化しないＰＢＭＮＣの培養は、ＣＣＲ６^＋細胞の割合を変化させない。対照的に、ＰＨＡによる活性化は、低い初期ＣＣＲ６^＋比率を有する調製物中ではＣＣＲ６^＋の割合を増加させるが（図１２、影付きのバー）、高いＣＣＲ６^＋比率を有する調製物中ではそれを減少させる（図１２、白色のバー）。

【0464】

単離されたＣＣＲ６^＋に富むＰＢＭＮＣとＣＣＬ１８との２０分間のインキュベーションは、おそらくＣＣＲ６受容体の内在化に起因して、ＣＣＲ６^＋細胞の割合の減少をもたらした（図１３）。ＣＣＲ６発現のこのＣＣＬ１８により誘導された低下は、阻害剤ペプチドＰＳ−ＡＵ−１０５（配列番号９に記載のポリペプチド）の存在下で減少する。図１４は、非刺激（陽性対照）培養物中のＣＣＲ６^＋細胞の明確なサブ集団を示す。ＣＣＬ１８による刺激は、低下した２番目のピーク（ＣＣＬ１８のみ）により示されるように、このサブ集団を減少させる。阻害剤ペプチドＰＳ−ＡＵ−１０５（配列番号９に記載のポリペプチド）の存在下でのＣＣＬ１８刺激は、ＣＣＲ６^＋サブ集団を下方調節することができない。この阻害剤単独では効果を示さない（阻害剤のみ）。

【実施例7】

【0465】

ヒト肺癌におけるＣＣＲ６発現の分析
免疫組織化学
対照の肺の分析により、ＣＣＲ６染色がないことが示された（図１５Ａ）。対照的に、腫瘍細胞は、明確なＣＣＲ６発現を開示した（図１５ＢおよびＣ、矢印）。さらに、いくつかの線維芽細胞はまた、かすかなＣＣＲ６発現も開示した（図１５Ｃ、矢印頭部）。

【0466】

ＦＡＣＳ
ＦＡＣＳ分析により、３つの腺癌細胞系のうちの２つ（図１６、上パネル）および全ての胸膜中皮腫細胞系（図１６、下パネル）において明確なＣＣＲ６発現が示された。肺腺癌細胞系ＬｘＦＡ ５２６Ｌは、わずかなＣＣＲ６発現を開示する。

【実施例8】

【0467】

肺線維症に罹患している患者からの血清および健康な対照からの血清中での可溶性ＣＣＲ６（ｓＣＣＲ６）の検出
ウェスタンブロット分析
ウェスタンブロット分析により、ｓＣＣＲ６が健康なボランティアおよびＵＩＰ患者からの血清中に存在することが示された（図１８Ａ）。ウェスタンブロットの定量分析により、対照と比較して、線維症患者についてわずかであるが、それにも拘らず有意に低下したピーク強度が示された（図１８Ｂ）。

【0468】

ＥＬＩＳＡ
ウェスタンブロット分析で観察された差異をより正確に評価するために、市販のＣＣＲ６ ＥＬＩＳＡを用いてｓＣＣＲ６の濃度を測定した。線維症患者（ＮＳＩＰ：ｎ＝６、ＵＩＰ：ｎ＝１３）からの１９の試料のうちの１５においては、ｓＣＣＲ６を検出できなかったが、健康なボランティアからの９の血清試料のうちの２のみが陰性であることがわかった（ｐ＜０．００５）。ウェスタンブロットにより陽性であることが示された２の試料においても（図１８Ａのレーン４および６）、ＥＬＩＳＡによってｓＣＣＲ６は検出不可能であった。肺線維症に罹患している患者からの血清においては、ｓＣＣＲ６の濃度は対照と比較して有意に低かった（１８±１１対２１６±９５ｐｇ／ｍｌ；ｐ＜０．００１；図１９）。基本的な線維性疾患のさらなる分析は、ＵＩＰまたはＮＳＩＰ患者からの血清中のｓＣＣＲ６濃度間で差異を示さなかった。

【実施例9】

【0469】

線維症患者からの血清中のｓＣＣＲ６分子はリガンドに結合している
実施例８に記載のｓＣＣＲ６ ＥＬＩＳＡは、プレートに結合した捕捉抗体としてモノクローナル抗ＣＣＲ６抗体および検出抗体としてビオチン結合ポリクローナル抗ＣＣＲ６抗体を用いる。多くのモノクローナル抗ＣＣＲ６抗体は、リガンド結合部位を担持する受容体のＮ末端部分に対するものである。線維症患者からの血清中のｓＣＣＲ６分子の抗体認識部位が、これらの血清中にＣＣＬ１８が豊富に存在するため［６、７］、リガンドで被覆され得るかどうかを試験するために、健康なボランティアからの血清をそれぞれ１００ｎｇ／ｍｌのＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０と共にインキュベートし、遮断された血清および遮断されていない血清中でｓＣＣＲ６をＥＬＩＳＡにより測定した。これらのＣＣＲ６リガンドの添加は、ｓＣＣＲ６シグナルの顕著な低下を誘導する（図２０）。１００ｎｇのＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の添加は、低いｓＣＣＲ６濃度および中程度のｓＣＣＲ６濃度で血清中のＣＣＲ６検出をほぼ消失させる。高いｓＣＣＲ６濃度を有する血清中では、ＣＣＬ１８の場合は３６％のみの低下およびＣＣＬ２０の場合は１４％の低下が認められた。

【0470】

かくして、リガンドＣＣＬ１８およびＣＣＬ２０に結合したｓＣＣＲ６は、ＥＬＩＳＡによって最早検出されない。

【0471】

これらの結果は、線維症患者からの血清中のｓＣＣＲ６分子がリガンドに結合しており、より低濃度のｓＣＣＲ６がＥＬＩＳＡによって前記患者からの血清中で検出されることを示唆している（実施例８）。このデータはまた、ＣＣＬ１８遮断能力が、血清中のリガンドを含まないｓＣＣＲ６について陰性の患者において使い果たされることも示唆している。

【実施例10】

【0472】

血清中のｓＣＣＲ６について陽性の線維症患者はｓＣＣＲ６陰性患者と比較して気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）中でより高い割合のリンパ球を開示する
ＣＣＲ６受容体のリガンドとして本発明の発明者らにより同定されたＣＣＬ１８は、Ｔ細胞走化性を誘導することが報告されている。従って、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）中の細胞集団に対するｓＣＣＲ６の可能性のある影響を試験した。実際に、血清中のリガンドを含まないｓＣＣＲ６について陽性である線維症患者（ＮＳＩＰ：ｎ＝６、ＵＩＰ：ｎ＝１３）は、血清中のリガンドを含まないｓＣＣＲ６について陰性である患者と比較して、ＢＡＬ中の有意により高い割合のリンパ球を開示する（３５．５％対１７．８％、ｐ＜０．０５）。この差異は、対照においては認められなかった（図２１）。

【0473】

これらのデータは、ｓＣＣＲ６は血清中のＣＣＬ１８のバイオアベイラビリティを減少させ、かくして、肺と末梢との間のＣＣＬ１８濃度勾配を増加させ、免疫細胞を肺の肺胞へ遊走させることを示唆している。この機能は、リガンドを含まないｓＣＣＲ６について陰性であることがわかったこれらの患者においては使い果たされ、ＣＣＬ１８の蓄積を誘導し、機能的ＣＣＬ１８濃度勾配を低下させる。

【0474】

一般に、リンパ球の割合が増加した患者における肺線維症は、ＢＡＬ中のリンパ球の割合が低い患者と比較して重症度が低い。リンパ球サブ集団の分析により、血清中のｓＣＣＲ６について陽性である患者においてＣＤ３^＋Ｔ細胞がわずかであるが、有意に増加することが示された（９１．０±１．４％対９５．７±１．２％；ｐ＜０．０５）。対照的に、ＨＬＡ−ＤＲ陽性リンパ球の割合は、ｓＣＣＲ６陰性患者と比較してｓＣＣＲ６陽性患者において低かった（３２．３±１４．４％対７．０±７．８％；ｐ＜０．０５）。ｓＣＣＲ６陽性患者はまた、ＮＫ細胞（ＣＤ５７^＋）およびＣＤ１ａ陽性細胞の割合の増加も開示した（それぞれ、３３．０±９．６％対１４．５±５．６％および１．０±１．０％対０．１±０．３％；両方の場合ともｐ＜０．０５）（図２２）。

【実施例11】

【0475】

ＮＳＣＬＣを有する患者におけるＣＣＬ１８の血清レベルおよびその臨床病理パラメータとの相関
対照と比較して全ての患者群に有意差があった（ｐ＜０．０００１；図２３）。扁平上皮癌を有する患者におけるＣＣＬ１８血清レベルは、腺癌を有する患者からの血清中よりも高かった（それぞれ、１７２±９５ｎｇ／ｍｌ、２０７±１３９ｎｇ／ｍｌ；ｐ＜０．０２）。ＣＣＬ１８血清レベルは、Ｔ段階の進行と共に徐々に、また有意に増加した（図２４）。対照と比較して、ＣＣＬ１８血清レベルは段階Ｉにおいて有意により高く（１３４±７４ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝３９、ｐ＝０．０００２）、段階ＩＩの患者（１７６±９９ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝６１、ｐ＜０．０００１）、段階ＩＩＩ（２１５±１０６ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝２６、ｐ＜０．０００１）および段階ＩＶ（２１９±１７７ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝２８、ｐ＜０．０００１）においてもそうであった。腫瘍患者間の比較により、段階Ｉにおけるレベルは、段階ＩＩＩ（２１５±１０６ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝２６、ｐ＜０．００５）および段階ＩＶ（２１９±１７７ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝２８、ｐ＝０．００２）と比較して有意に低いことが示された。段階ＩＩＩおよびＩＶにおけるＣＣＬ１８レベルも、対照と有意に異なっていた（ｐ＜０．０００１）。

【実施例12】

【0476】

ＣＣＬ１８血清レベルカットオフ点の決定
受信者操作特性（ＲＯＣ）分析により、健康な対照とＮＳＣＬＣ患者とを区別するためのカットオフ点が８３ｎｇ／ｍｌ（曲線下面積（ＡＵＣ）：０．９６８；ｐ＜０．０００１、図２５左側）であることが示された。癌関連死または非癌関連死の間を区別するためのＲＯＣ分析は、有効なＡＵＣをもたらさなかった。腫瘍患者を階層化するために、観察期間内の基準死を用いて、基準値プロットを行った。この分析により、等しい感度および特異性（５４％）の点が１６２ｎｇ／ｍｌであることが示された（図２５右側）。

【実施例13】

【0477】

ＮＳＣＬＣ患者におけるＣＣＬ１８血清レベルおよび生存率
ＮＳＣＬＣおよび１６０ｎｇ／ｍｌより高いＣＣＬ１８血清レベルを有する患者は、６２３日の平均生存期間を有していたが、ＮＳＣＬＣおよび１６０ｎｇ／ｍｌと８０ｎｇ／ｍｌの間の血清レベルを有する患者は、９８４日の平均生存期間を有していた。８０ｎｇ／ｍｌ未満のＣＣＬ１８レベルを有する患者においては、平均生存期間は８４１日であった（ｐ＜０．００４、図２６）。

【実施例14】

【0478】

組織学的サブグループによるＣＣＬ１８血清レベルおよび生存率
肺の腺癌を有する患者においては、最も高いＣＣＬ１８レベルを有する群において３８８日の平均生存期間が認められた。１６０と８０ｎｇ／ｍｌの間のＣＣＬ１８レベルを有する群においては、平均生存期間は７８８日であり、正常なＣＣＬ１８レベルを有する群においては、平均生存期間は１１５２日であった（ｐ＜０．００２）。

【実施例15】

【0479】

組織学的サブグループにおけるＣＣＬ１８血清レベルおよび腫瘍段階
腺癌患者のサブグループに関して、１６０ｎｇ／ｍｌを超える血清ＣＣＬ１８濃度を有する群における平均Ｎ段階は、正常な血清ＣＣＬ１８レベルを有するサブグループと比較して、有意に高かった（１．７±１．１）（０．５±１；ｐ＜０．００５、図２８）。腺癌を有する患者に関して、１６０ｎｇを超える血清ＣＣＬ１８を有するサブグループにおいてより高頻度に転移する傾向があり（５８％）、他の群においてはより低かった（＜１６０ｎｇ／ｍｌ；４２％；正常：２５％）。

【実施例16】

【0480】

ＣＣＬ１８は腺癌細胞においてＥＭＴを誘導する
腺癌細胞をＣＣＬ１８で７２ｈ刺激することにより、線維芽細胞マーカーＦＳＰ１のｍＲＮＡ発現の顕著かつ用量依存的な上方調節が誘導される。ＣＣＬ１８により誘導された上方調節は、ＴＧＦβにより誘導された上方調節よりも高かった（図２９）。さらに、ＣＣＬ１８はまた、線維芽細胞関連転写因子ｓｎａｉｌの発現を用量依存的に誘導する。また、ＣＣＬ１８による刺激は、ＴＧＦβよりも有効であった（図３０）。上記で名前を挙げられたマーカーとは対照的に、上皮マーカーＥ−カドヘリンは、ＣＣＬ１８による刺激の２４ｈ後に実質的に下方調節された（図３１）。

【実施例17】

【0481】

組織学的サブグループに由来する線維芽細胞系におけるＣＣＲ６発現
腺癌に罹患している患者からの肺から単離された線維芽細胞は、扁平上皮癌または混合組織を含む肺から誘導された線維芽細胞系（それぞれ、２±１％、ｎ＝８および２±２％、ｎ＝６）と比較して、より高い割合のＣＣＲ６陽性細胞（３０±２２％、ｎ＝４；図３２）を開示する。

【0482】

実施例１１〜１７に記載の結果は、肺癌を有する患者におけるＣＣＬ１８血清レベルを調査する最初の試験である。肺癌を有する患者におけるＣＣＬ１８の平均血清レベルは、健康な対照と比較して４倍より多く増加していることが観察された。得られたデータは、ＣＣＬ１８血清レベルが、Ｔ段階に対応して上昇することを示している。対照的に、ＮおよびＭ段階は、ＣＣＬ１８血清レベルと相関しなかった。さらに、ＣＣＬ１８血清レベルは、肺癌の異なる組織に従って異なっていた。

【0483】

腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）は、ＣＣＬ１８の放出を含む選択的に活性化されたマクロファージと類似する。

【0484】

健康な被験体と、ＮＳＣＬＣを有する患者とを区別するカットオフ点は８３ｎｇ／ｍｌであり、線維症と健康な対照とを区別するために用いられた本発明者らによって決定されたカットオフ点と同じ範囲にある。ＲＯＣ分析を用いた場合、ＣＣＬ１８血清レベルに従って癌関連死を予測することはできなかった。かくして、患者を階層化するためのカットオフ値を定義するために、生存率に関する基準値プロットを行った。このＣＣＬ１８基準値プロットにより、カットオフ点として１６０ｎｇ／ｍｌの濃度が示された。このカットオフ点１６０ｎｇ／ｍｌは、ＮＳＣＬＣを有する患者における平均生存期間を強く予測した。１６０ｎｇ／ｍｌ以上のＣＣＬ１８血清濃度を有する患者は、１６０ｎｇ／ｍｌ未満のＣＣＬ１８濃度を有する患者よりも１／３短い平均生存期間を有していた。この効果は、腺癌を有する患者のサブグループにおいて最も典型的である。ＣＣＬ１８は、選択的に活性化されるマクロファージの典型的な生成物であり、ＴＡＭの可能性のあるマーカーである。ＴＡＭは腫瘍内に位置するため、その数は腫瘍量と共に増加するはずである。かくして、ＣＣＬ１８血清レベルと、腫瘍サイズの代用マーカーとしてのＴ段階との相関を分析した。これは、特に、より低いＴ段階に適用され、実際、ＣＣＬ１８血清レベルはＴ１からＴ３へのＴ段階の増加と共に増加する。Ｔ３およびＴ４段階の主な差異は、重要な縦隔構造の浸潤であるが、必ずしもサイズの増加を反映するわけではない。Ｔ３およびＴ４段階の患者のＣＣＬ１８血清レベルに顕著な差異は認められなかった。

【0485】

ＮおよびＭ段階は造血性転移およびリンパ行性転移の代用マーカーである。また、Ｎ段階の増加および高レベルの血清ＣＣＬ１８を有する患者におけるより高頻度の転移に向かう傾向は、ＣＣＬ１８が腺癌における延長された疾患のマーカーであることを示唆する。

【0486】

上皮細胞に関して得られた結果と平行して、ＣＣＬ１８は腺癌細胞においても上皮間葉移行を誘導する。ＥＭＴは転移プロセスにおける重要な事象であると考えられる。癌細胞は限られた移住能力のみを有する。ＥＭＴの間に、癌細胞はその周囲の組織との接触を失い、細胞の移住を可能にする機能を獲得する。間葉マーカーＦＳＰ１およびｓｎａｉｌの上方調節ならびにＥ−カドヘリンの下方調節は、ＣＣＬ１８が腺癌細胞においてＥＭＴを誘導することを示す。接着分子Ｅ−カドヘリンの喪失によって、細胞は腫瘍組織から逃れることができる。ＦＳＰ１は転移および腫瘍侵襲に関与すると考えられている。転写因子ｓｎａｉｌは、コラーゲン、いくつかのマトリックスメタロプロテイナーゼおよびα−平滑筋アクチンの発現を調節し、細胞の移動性にとって重要である。

【0487】

かくして、ＣＣＬ１８は高リスクの腺癌患者を階層化するためのバイオマーカーである。データはまた、ＣＣＬ１８がＥＭＴの誘導によって腫瘍転移を促進することを示唆する。
（参考文献）

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2. Pechkovsky, D.V., Zissel, G., Ziegenhagen, M.W., Einhaus, M., Taube, C., Rabe, K.F., Magnussen, H., Papadopoulos, T., Schlaak, M., and Muller-Quernheim, J. 2000. Effect of proinflammatory cytokines on interleukin-8 mRNA expression and protein production by isolated human alveolar epithelial cells type II in primary culture. Eur Cytokine Netw 11:618-625.

3. Goldmann, T., Wiedorn, K.H., Kuhl, H., Olert, J., Branscheid, D., Pechkovsky, D., Zissel, G., Galle, J., Muller-Quernheim, J., and Vollmer, E. 2002. Assessment of transcriptional gene activity in situ by application of HOPE-fixed, paraffin-embedded tissues. Pathol Res Pract198:91-95.

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7. Prasse, A., C. Probst, E. Bargagli, G. Zissel, G.B. Toews, K.R. Flaherty, M. Olschewski, P. Rottoli, and J. Muller-Quernheim, Serum CC-Chemokine Ligand 18 Concentration Predicts Outcome in Idiopathic Pulmonary Fibrosis. Am J Respir Crit Care Med, 2009. 179(8): p. 717-723.

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Th1 cytokine pattern in sarcoidosis is expressed by bronchoalveolar CD4+ and CD8+ T cells. Clin Exp Immunol 2000;122:241-8.

なお、本発明は、以下の態様を含むものである。
＜１＞ （ａ）配列番号１に記載の配列に対して少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列、および
（ｂ）（ａ）に記載のアミノ酸配列の断片
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＣＣＬ１８および／またはＣＣＬ２０に結合することができる単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド。
＜２＞ （ａ）に記載のアミノ酸配列が、配列番号１に記載の配列の少なくとも８個の連続するアミノ酸を含む、＜１＞に記載の単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド。
＜３＞ 膜貫通ドメインを含まない、＜１＞または＜２＞に記載の単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド。
＜４＞ ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の活性および／または発現を阻害することができる化合物を含む医薬組成物。
＜５＞ ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の活性および／または発現を阻害することができる化合物が、＜１＞から＜３＞のいずれかに記載の単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０に結合することができる小分子、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０に特異的なアプタマー、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０に特異的な抗体、ＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の発現を低下させるか、または阻害するのに好適なアンチセンス分子およびＣＣＬ１８またはＣＣＬ２０の発現を低下させるか、または阻害するのに好適なｓｉＲＮＡ分子からなる群より選択される、＜４＞に記載の医薬組成物。
＜６＞ 間質性肺疾患および／または癌の処置または予防にとって好適なさらなる活性化合物を含む、＜４＞または＜５＞に記載の医薬組成物。
＜７＞ 療法における使用のための、＜１＞から＜３＞のいずれかに記載の単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド。
＜８＞ 間質性肺疾患および／または癌の処置または予防における使用のための、＜１＞から＜３＞のいずれかに記載の単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドまたは＜４＞から＜６＞のいずれかに記載の医薬組成物。
＜９＞ 被験体からの試料中での間質性肺疾患または癌の検出における使用のための、＜１＞から＜３＞のいずれかに記載の単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチドに特異的な検出剤。
＜１０＞ 間質性肺疾患が、特発性肺線維症、非特異的間質性肺炎、特発性器質化肺炎、呼吸細気管支炎関連間質性肺疾患、剥離性間質性肺炎、急性間質性肺炎およびリンパ球性間質性肺炎からなる群より選択される、＜８＞に記載の単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド、＜８＞に記載の医薬組成物および／または＜９＞に記載の検出剤。
＜１１＞ 癌が、腺癌、好ましくは、肺の腺癌、胸膜中皮腫、結腸直腸癌、前立腺癌、乳癌、腎細胞癌、肝細胞癌、非ホジキンリンパ腫およびホジキンリンパ腫からなる群より選択される、＜８＞に記載の単離された可溶性ＣＣＲ６受容体ポリペプチド、＜８＞に記載の医薬組成物および／または＜９＞に記載の検出剤。
＜１２＞ （ａ）配列番号９、２２または２３に記載の配列に対して少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列、および
（ｂ）（ａ）に記載のアミノ酸配列の断片
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＣＣＲ６受容体に結合しその活性を阻害することができる単離されたポリペプチド。
＜１３＞ （ａ）に記載のアミノ酸配列が、配列番号９、２２または２３に記載の配列の少なくとも８個の連続するアミノ酸を含む、＜１２＞に記載の単離されたポリペプチド。
＜１４＞ ＜１２＞または＜１３＞に記載のポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド。
＜１５＞ 配列番号２４、配列番号２５または配列番号２６に記載の配列に対して少なくとも８０％の同一性を示す配列を含むか、またはそれからなる、＜１４＞に記載の単離されたポリヌクレオチド。
＜１６＞ ＣＣＲ６受容体の活性および／または発現を阻害することができる化合物を含む医薬組成物。
＜１７＞ ＣＣＲ６受容体の活性および／または発現を阻害することができる化合物が、＜１２＞または＜１３＞に記載の単離されたポリペプチド、ＣＣＲ６受容体に結合することができる小分子、＜１４＞または＜１５。に記載の単離されたポリヌクレオチド、ＣＣＲ６受容体に特異的なアプタマー、ＣＣＲ６受容体に特異的な抗体、ＣＣＲ６受容体の発現を低下させるか、または阻害するのに好適なアンチセンス分子およびＣＣＲ６受容体の発現を低下させるか、または阻害するのに好適なｓｉＲＮＡ分子からなる群より選択される、＜１６＞に記載の医薬組成物。
＜１８＞ 間質性肺疾患および／または癌の処置または予防にとって好適なさらなる活性化合物を含む、＜１６＞または＜１７＞に記載の医薬組成物。
＜１９＞ 間質性肺疾患および／または癌の処置または予防における使用のための、＜１６＞から＜１８＞のいずれかに記載の医薬組成物。
＜２０＞ 間質性肺疾患および／または癌の処置または予防のための薬剤の製造のための、ＣＣＲ６受容体の活性および／もしくは発現を阻害することができる化合物または＜１６＞から＜１８＞のいずれかに記載の医薬組成物の使用。
＜２１＞ 間質性肺疾患が、特発性肺線維症、非特異的間質性肺炎、特発性器質化肺炎、呼吸細気管支炎関連間質性肺疾患、剥離性間質性肺炎、急性間質性肺炎およびリンパ球性間質性肺炎からなる群より選択される、＜１８＞もしくは＜１９＞に記載の医薬組成物および／または＜２０＞に記載の使用。
＜２２＞ 癌が、腺癌、好ましくは、肺の腺癌、胸膜中皮腫、結腸直腸癌、前立腺癌、乳癌、腎細胞癌、肝細胞癌、非ホジキンリンパ腫およびホジキンリンパ腫からなる群より選択される、＜１８＞もしくは＜１９＞に記載の医薬組成物および／または＜２０＞に記載の使用。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]