特許 5870400 標的化ピロロベンゾジアゼピンコンジュゲート

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5870400

(24)【登録日】2016年1月22日

(45)【発行日】2016年3月1日

(54)【発明の名称】標的化ピロロベンゾジアゼピンコンジュゲート

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/00 20060101AFI20160216BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20160216BHJP

   A61K 31/5517 20060101ALI20160216BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20160216BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20160216BHJP

   C07D 519/00 20060101ALN20160216BHJP

【ＦＩ】

   C07K16/00

   A61K39/395 C

   A61K39/395 L

   A61K31/5517

   A61P35/00

   A61P37/06

   !C07D519/00 311

【請求項の数】32

【全頁数】125

(21)【出願番号】特願2013-505171(P2013-505171)

(86)(22)【出願日】2011年4月15日

(65)【公表番号】特表2013-523896(P2013-523896A)

(43)【公表日】2013年6月17日

(86)【国際出願番号】US2011032664

(87)【国際公開番号】WO2011130613

(87)【国際公開日】20111020

【審査請求日】2014年4月11日

(31)【優先権主張番号】61/324,623

(32)【優先日】2010年4月15日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】503188759

【氏名又は名称】シアトル ジェネティクス，インコーポレーテッド

(73)【特許権者】

【識別番号】506042265

【氏名又は名称】メディミューン リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100091096

【弁理士】

【氏名又は名称】平木 祐輔

(74)【代理人】

【識別番号】100118773

【弁理士】

【氏名又は名称】藤田 節

(74)【代理人】

【識別番号】100122389

【弁理士】

【氏名又は名称】新井 栄一

(74)【代理人】

【識別番号】100111741

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 夏夫

(72)【発明者】

【氏名】ハワード，フィリップ，ウィルソン

(72)【発明者】

【氏名】ジェフリー，スコット

(72)【発明者】

【氏名】バーク，パトリック

(72)【発明者】

【氏名】センター，ピーター

【審査官】 伊藤 基章

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００８−５３６９０５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００７−５２５５３５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 JEFFREY S C，DESIGN, SYNTHESIS, AND IN VITRO EVALUATION OF DIPEPTIDE-BASED ANTIBODY MINOR 以下備考，JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY，米国，AMERICAN CHEMICAL SOCIETY，２００５年 ５月 ２日，VOL. 48, NO. 5，PAGES 1344-1358，GROOVE BINDER CONJUGATES

【文献】 BURKE P J，NOVEL IMMUNOCONJUGATES COMPRISED OF STREPTONIGRIN AND 17-AMINO-GELDANAMYCIN 以下備考，BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS，英国，ELSEVIER SCIENCE，２００９年 ４月 ５日，VOL. 19. NO. 10，PAGES 2650-2653，ATTACHED VIA A DIPEPTIDE-P-AMINOBENZYL-AMINE LINKER SYSTEM

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３１／００

Ａ６１Ｋ ３９／３９５

Ｃ０７Ｄ ５１９／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式I:
L-(LU-D)_p (I)
を有するコンジュゲート、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物
{式中、
Lは、完全長抗体、完全長抗体の抗原結合性フラグメント、標的分子に特異的に結合する抗体重鎖及び/又は軽鎖可変領域を含む薬剤から選択されるリガンド単位であり、
LUは、式1a:
-A¹-L¹- (1a)
又は
式X:

【化1】

[式中、
Eはグルクロン酸残基であり、星印は薬物単位への結合箇所を示し、波線はリガンド単位への結合箇所を示す］
のリンカー単位であり
[式中、
-A¹-は

【化2】

(式中、nは0〜6である)、

【化3】

(式中、nは0又は1であり、mは0〜30である)、

【化4】

(式中、nは0又は1であり、mは0〜30である)、及び

【化5】

(式中、星印はL¹への結合箇所を示し、波線はリガンド単位への結合箇所を示す）
から選択され、
L¹は標的細胞での酵素の作用によって開裂可能なアミノ酸配列である]、
pは、1〜20であり、
Dは、次式II:

【化6】

[式中、
R²は、式III:

【化7】

(ここで、AはC_5〜7アリール基であり、Xはリンカー単位への結合のための活性化可能な基であって、-O-、-S-、-C(O)O-、-C(O)-、-NH(C=O)-、-N(R^N)-を含む群から選択され、ここで、R^NはH、C_1〜4アルキル及び(C₂H₄O)_mCH₃(ここで、mは1〜3である)を含む群から選択され、且つ
(i)Q¹は単結合であり、Q²は単結合及び-Z-(CH₂)_n-(ここで、Zは、単結合、O、S、及びNHから選択され、nは1〜3である)から選択されるか、又は
(ii)Q¹は-CH=CH-であり、Q²は単結合であるか、
のいずれかである）
であり、
R¹²は、ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、C_1〜7アルキル、C_3〜7ヘテロシクリル、ジメチルアミノプロピルオキシ、ピペラジニル、及びビス-オキシ-C_1〜3アルキレンを含む群から選択される一つ又は複数の置換基で置換されていてもよいC_5〜10アリール基であり、
R⁶及びR⁹は、H、R、OH、OR、SH、SR、NH₂、NHR、NRR'、ニトロ、Me₃Sn、及びハロから独立に選択され、
R⁷は、H、R、OH、OR、SH、SR、NH₂、NHR、NHRR'、ニトロ、Me₃Sn、及びハロから選択され、
ここで、R及びR'は、置換されていてもよいC_1〜12アルキル、C_3〜20ヘテロシクリル、及びC_5〜20アリール基から独立に選択され、
(a)R¹⁰はHであり、R¹¹はOH又はOR^A(ここで、R^AはC_1〜4アルキルである)であるか、
(b)R¹⁰及びR¹¹は、それらが結合している窒素及び炭素原子の間で窒素-炭素二重結合を形成しているか、又は
(c)R¹⁰はHであり、R¹¹はSO_zM(ここで、zは2又は3であり、Mは薬学的に許容される一価カチオンである)であるか、
のいずれかであり、
R''は、C_3〜12アルキレン基(その鎖は、O、S、及びNHからなる群から選択される一つ又は複数のヘテロ原子、及び／又は芳香族環によって中断されていてもよい)であり、
Y及びY’は、O、S、又はNHから選択され、
R^6'、R^7'、R^9'は、それぞれR⁶、R⁷、及びR⁹と同じ群から選択され、R^10'及びR^11'は、R¹⁰及びR¹¹と同一であり、ここで、R¹¹及びR^11'がSO_zMである場合は、各Mは薬学的に許容される一価カチオン、又は一緒になって薬学的に許容される二価カチオンを表してもよい]
を有するPBD二量体である薬物単位である}。

【請求項2】

R⁷が、H、OH、及びORから選択される、請求項1に記載のコンジュゲート。

【請求項3】

R⁷が、C_1〜4アルキルオキシ基である、請求項2に記載のコンジュゲート。

【請求項4】

YがOである、請求項1から3のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項5】

R''が、C_3〜7アルキレンである、請求項1から4のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項6】

R⁹がHである、請求項1から5のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項7】

R⁶が、H及びハロから選択される、請求項1から6のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項8】

Aがフェニルである、請求項1から7のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項9】

Xが、-O-、-S-、及び-NH-から選択される、請求項1から8のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項10】

Q¹が単結合である、請求項1から9のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項11】

Q²が単結合である、請求項10に記載のコンジュゲート。

【請求項12】

Q²が-Z-(CH₂)_n-であり、ZがO又はSであり、nが1又は2である、請求項10に記載のコンジュゲート。

【請求項13】

Q¹が-CH=CH-である、請求項1から9のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項14】

R¹²がC_5〜7アリール基である、請求項1から13のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項15】

R¹²がフェニルである、請求項14に記載のコンジュゲート。

【請求項16】

R¹²がC_8〜10アリール基である、請求項1から13のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項17】

R¹²が、1〜3個の置換基を有する、請求項1から16のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項18】

R¹⁰及びR¹¹が、窒素-炭素二重結合を形成している、請求項1から17のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項19】

R^6'、R^7'、R^9'、R^10'、R^11'及びY'が、それぞれ、R⁶、R⁷、R⁹、R¹⁰、R¹¹、及びYと同一である、請求項1から18のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項20】

A¹が、

【化8】

(ここで、星印は、L¹への結合箇所を示し、波線は、リガンド単位への結合箇所を示し、nは0〜6である)
である、請求項1から19のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項21】

nが5である、請求項20に記載のコンジュゲート。

【請求項22】

L¹が、ジペプチドである、請求項1から21のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項23】

L¹が、バリン-アラニン、バリン-シトルリン、及びフェニルアラニン-リシンからなる群から選択される、請求項22に記載のコンジュゲート。

【請求項24】

Dが、

【化9】

【化10】

【化11】

、及び

【化12】

[式中、波線はリンカー単位への共有結合を示す]
から選択される、請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項25】

LU-Dが、

【化13】

[式中、波線はリガンド単位への共有結合を示す]
である、請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項26】

LU-Dが、

【化14】

【化15】

、又は

【化16】

[式中、波線はリガンド単位への共有結合を示す]
である、請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項27】

ｐが2である、請求項1から26のいずれか一項に記載のコンジュゲート。

【請求項28】

請求項1から27のいずれか一項に記載のコンジュゲートおよび薬学的に許容される賦形剤、担体、緩衝剤、又は安定剤を含む医薬組成物。

【請求項29】

組成物中のコンジュゲートの平均薬物負荷量が2である、請求項28に記載の医薬組成物。

【請求項30】

増殖性疾患又は自己免疫疾患を治療するための医薬の製造における、請求項1から29のいずれか一項に記載のコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物の使用。

【請求項31】

式：
G¹-L¹-D
を有する薬物リンカー又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物
｛式中、G¹は、

【化17】

［式中、nは0〜6である]、

【化18】

［式中、nは0又は1であり、mは0〜30である]、

【化19】

［式中、nは0又は1であり、mは0〜30である]、

【化20】

［式中、星印はL¹への結合箇所を示す]
から選択され；
L¹およびDは、請求項1〜30のいずれか一項に定義される｝。

【請求項32】

式：

【化21】

【化22】

；又は

【化23】

を有する請求項31に記載の薬物リンカー又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、標的化ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）コンジュゲートに関し、特には一方の単量体のＣ２位を介してターゲティング剤に結合しているピロロベンゾジアゼピン二量体に関する。

【背景技術】

【0002】

ある種のピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）は、ＤＮＡの特定の配列を認識してそれに結合するという能力を有している。その好ましい配列はＰｕＧＰｕである。最初のＰＢＤ抗腫瘍抗生物質であるアントラマイシン（anthramycin）は、１９６５年に発見された（非特許文献１；非特許文献２）。それ以来、多くの天然に存在するＰＢＤが報告されており、１０を超える合成経路がさまざまな類似体に対して開発されている（非特許文献３）。ファミリー構成員としては、アッベイマイシン（abbeymycin）（非特許文献４）、キカマイシン（chicamycin）（非特許文献５）、ＤＣ−８１（特許文献１；非特許文献６；非特許文献７）、マゼトラマイシン（mazethramycin）（非特許文献８）、ネオトラマイシン（neothramycin）Ａ及びＢ（非特許文献９）、ポロトラマイシン（porothramycin）（非特許文献１０）、プロトラカルシン（prothracarcin）（非特許文献１１；非特許文献１２）、シバノミシン（sibanomicin）（ＤＣ−１０２）（非特許文献１３；非特許文献１４）、シビロマイシン（sibiromycin）（非特許文献１５）及びトママイシン（tomamycin）（非特許文献１６）が挙げられる。ＰＢＤは、一般構造：

【化1】

【0003】

で表される化合物群である。

【0004】

これらは、芳香族Ａ環及びピロロＣ環の双方において、置換基の数、種類及び位置、並びに、Ｃ環の飽和度が異なっている。Ｂ環には、Ｎ１０−Ｃ１１位のところに、ＤＮＡのアルキル化に関与する求電子中心であるイミン（Ｎ＝Ｃ）か、カルビノールアミン（ＮＨ−ＣＨ（ＯＨ））か、又はカルビノールアミンメチルエーテル（ＮＨ−ＣＨ（ＯＭｅ））がある。知られている天然の生成物はすべて、キラルなＣ１１ａ位のところで（Ｓ）配置を有しており、この配置はＣ環からＡ環の方を見たときに右手回りのねじれをもたらす。これは、Ｂ型ＤＮＡの副溝との等螺旋性を得るのに適切な三次元形状を与えるものであり、その結合部位のところにぴったりと嵌合することになる（非特許文献１７；非特許文献１８）。この副溝中で付加物を生成するというＰＢＤの能力は、ＤＮＡプロセシングと干渉することを可能にするものであり、したがって、抗腫瘍剤としてそれらを用いることが可能になる。

【0005】

２つのＰＢＤ単位を、その各Ｃ８／Ｃ’−ヒドロキシル官能から柔軟アルキレンリンカーを介して一緒に合わせることによって、これらの分子の生物学的活性が高められ得る（非特許文献１９；非特許文献２０）。このＰＢＤ二量体は、配列選択的ＤＮＡ損傷、例えば、パリンドローム性５’−Ｐｕ−ＧＡＴＣ−Ｐｙ−３’鎖間架橋を形成すると考えられており（非特許文献２１；非特許文献２２）、これが生物学的活性に主に関与していると考えられている。ＰＢＤ二量体の一つの例は、ＳＧ２０００（ＳＪＧ−１３６）：

【化2】

【0006】

である（非特許文献２３；非特許文献２４；非特許文献２５）。

【0007】

これらの極めて強力な化合物はDNAの架橋において作用するため、PBD二量体は、対称的に作られ、換言すれば、二量体の双方のモノマーは同一である。この合成経路は、二量体結合が既に形成されたPBD二量体部分を同時に構築することによる、又は既に構築されているPBDモノマー部分を二量体結合形成基と反応させることによる、単純な合成を提供する。これらの合成法は、PBDを含む標的化コンジュゲートを調製するための選択肢を制約していた。しかし、PBD二量体の有効性が観察されるので、標的化療法で使用するための、ターゲティング剤に結合できるPBD二量体が求められている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0008】

【特許文献1】特開昭５８−１８０４８７号公報

【非特許文献】

【0009】

【非特許文献1】Leimgruber, et al., J. Am. Chem. Soc., 87, 5793-5795 (1965)

【非特許文献2】Leimgruber, et al., J. Am. Chem. Soc., 87, 5791-5793 (1965)

【非特許文献3】Thurston, et al., Chem. Rev. 1994, 433-465 (1994)

【非特許文献4】Hochlowski, et al., J. Antibiotics, 40, 145-148 (1987)

【非特許文献5】Konishi, et al., J. Antibiotics, 37, 200-206 (1984)

【非特許文献6】Thurston, et al., Chem. Brit., 26, 767-772 (1990)

【非特許文献7】Bose, et al., Tetrahedron, 48, 751-758 (1992)

【非特許文献8】Kuminoto, et al., J. Antibiotics, 33, 665-667 (1980)

【非特許文献9】Takeuchi, et al., J. Antibiotics, 29, 93-96（1976)

【非特許文献10】Tsunakawa, et al., J. Antibiotics, 41, 1366-1373 (1988)

【非特許文献11】Shimizu, et al, J. Antibiotics, 29, 2492-2503 (1982)

【非特許文献12】Langley and Thurston, J. Org. Chem., 52, 91-97 (1987)

【非特許文献13】Hara, et al., J. Antibiotics, 41, 702-704 (1988)

【非特許文献14】Itoh, et al., J. Antibiotics, 41, 1281-1284 (1988)

【非特許文献15】Leber, et al., J. Am. Chem. Soc., 110, 2992-2993 (1988)

【非特許文献16】Arima, et al., J. Antibiotics, 25, 437-444 (1972)

【非特許文献17】Kohn, in Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, pp. 3-11 (1975)

【非特許文献18】Hurley and Needham-VanDevanter, Acc. Chem. Res., 19, 230-237 (1986)

【非特許文献19】Bose, D.S., et al., J. Am. Chem. Soc., 114, 4939-4941 (1992)

【非特許文献20】Thurston, D.E., et al., J. Org. Chem., 61, 8141-8147 (1996)

【非特許文献21】Smellie, M., et al., Biochemistry, 42, 8232-8239（2003)

【非特許文献22】Martin, C., et al., Biochemistry, 44, 4135-4147

【非特許文献23】Gregson, S., et al., J. Med. Chem., 44, 737-748 (2001)

【非特許文献24】Alley, M.C., et al., Cancer Research, 64, 6700-6706 (2004)

【非特許文献25】Hartley, J.A., et al., Cancer Research, 64, 6693-6699 (2004)

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0010】

本発明は、ターゲティング剤に連結されたPBD二量体を含むコンジュゲートに関するものであり、ここで、PBD単量体は、C2位に、化合物をターゲティング剤に連結するためのアンカーを提供する置換基を有する。本発明は、また、ターゲティング剤に結合されたPBD二量体を含むコンジュゲートに関するものであり、ここで、二量体中のPBD単量体は同一でない。一方のPBD単量体は、C2位に、化合物をターゲティング剤に連結するためのアンカーを提供する置換基を有する。本明細書に記載のコンジュゲートは、がん細胞又は免疫細胞などの、標的分子を発現している細胞に対して強力な細胞障害活性及び/又は細胞増殖抑制活性を有する。これらのコンジュゲートは、対応する遊離のPBD二量体薬物化合物と比較して、毒性の低下した優れた有効性を提示する。

【課題を解決するための手段】

【0011】

一部の実施形態において、該コンジュゲートは、次式I:
L-(LU-D)_p (I)
を有し、式中、Lはリガンド単位(すなわち、ターゲティング剤)であり、LUはリンカー単位であり、DはPBD二量体を含む薬物単位である。下付文字pは1〜20の整数である。したがって、該コンジュゲートは、リンカー単位によって少なくとも一つの薬物単位に共有結合で連結されたリガンド単位を含む。リガンド単位は、後でより完全に説明するが、標的部分に結合するターゲティング剤である。リガンド単位は、例えば、細胞成分(細胞結合剤)に、又は他の注目の標的分子に特異的に結合することができる。したがって、本発明は、また、例えば、種々のがん及び自己免疫疾患の治療方法を提供する。これらの方法は、リガンド単位が標的分子に特異的に結合するターゲティング剤であるコンジュゲートの使用を包含する。該リガンド単位は、例えば、抗体、抗体の抗原結合性フラグメントなどのタンパク質、ポリペプチド若しくはペプチド、又はFc融合タンパク質などの他の結合剤でよい。

【0012】

第1の態様において、コンジュゲートは、式I(前記)のコンジュゲートを含み、ここで、薬物単位は次式IIのPBD二量体を含む:

【化3】

【0013】

［式中、
Ｒ^２は、式ＩＩＩ：

【化4】

【0014】

（ここで、Ａは、Ｃ_５〜７アリール基であり、Ｘはリンカー単位への結合のための活性化可能な基であって、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）−及び−Ｎ（Ｒ^Ｎ）−（ここで、Ｒ^Ｎは、Ｈ、Ｃ_１〜４アルキル、及び（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｍＣＨ_３（ここで、ｍは、１〜３である）からなる群から選択され、且つ：
（ｉ）Ｑ^１は、一重結合であり、Ｑ^２は、一重結合及び−Ｚ−（ＣＨ_２）_ｎ−（ここで、Ｚは、一重結合、Ｏ、Ｓ及びＮＨから選択され、ｎは、１〜３である）から選択されるか；又は
（ｉｉ）Ｑ^１は、−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ｑ^２は、一重結合である；
のいずれかである）
で表されるものであり；
Ｒ^１２は、Ｃ_５〜１０アリール基であって、ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、Ｃ_１〜７アルキル、Ｃ_３〜７ヘテロシクリル及びビス−オキシ−Ｃ_１〜３アルキレンからなる群から選択される１個又はそれ以上の置換基によって場合により置換されており；
Ｒ^６及びＲ^９は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ_２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ_３Ｓｎ及びハロから独立に選択され；
（ここで、Ｒ及びＲ’は、置換されていてもよいＣ_１〜１２アルキル、置換されていてもよいＣ_３〜２０ヘテロシクリル及び置換されていてもよいＣ_５〜２０アリール基から独立に選択される）；
Ｒ^７は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ_２、ＮＨＲ、ＮＨＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ_３Ｓｎ及びハロから選択され；
且つ：
（ａ）Ｒ^１０はＨであり、Ｒ^１１はＯＨ又はＯＲ^Ａ（ここで、Ｒ^Ａは、Ｃ_１〜４アルキルである）であるか；
（ｂ）Ｒ^１０及びＲ^１１は、それらが結合されている窒素原子及び炭素原子との間に窒素−炭素二重結合を形成しているか；又は
（ｃ）Ｒ^１０はＨであり、Ｒ^１１はＳＯ_ｚＭ（ここで、ｚは２又は３であり、Ｍは薬学的に許容される一価カチオンである）であるか；
のいずれかであり、
Ｒ’’は、Ｃ_３〜１２アルキレン基であって、この鎖は、１個又はそれ以上のへテロ原子（例えばＯ、Ｓ、ＮＲ^Ｎ２（ここで、Ｒ^Ｎ２は、Ｈ又はＣ_１〜４アルキルである）及び／又は芳香族環（例えばベンゼン又はピリジン）によって中断されていてよく；
Ｙ及びＹ’は、Ｏ、Ｓ、又はＮＨから選択され；
Ｒ^６’、Ｒ^７’、Ｒ^９’は、それぞれ、Ｒ^６、Ｒ^７及びＲ^９のと同じ群から選択され、Ｒ^１０’及びＲ^１１’は、Ｒ^１０及びＲ^１１と同一であり、Ｒ^１１及びＲ^１１’がＳＯ_ｚＭである場合は、Ｍは薬学的に許容される二価カチオンを表し得る］
を有する化合物が含まれている。

【0015】

第２の態様において、増殖性疾患又は自己免疫疾患を治療するための医薬を製造するための、式Ｉのコンジュゲートの使用が提供される。関連する第３の態様において、増殖性疾患又は自己免疫疾患の治療のための、式Ｉのコンジュゲートの使用が提供される。

【0016】

別の態様において、標的箇所でＰＢＤ二量体又はその塩若しくは溶媒和物を提供するための、式Ｉのコンジュゲートの使用を提供する。

【0017】

当業者であれば、特定の細胞種の増殖性病態が、ある候補の共役体によって治療されるか否かを容易に測定することができる。例えば、ある特定の化合物によってもたらされる活性を評価するのに簡便に用いられ得るアッセイが、後にある実施例に説明されている。

【0018】

用語「増殖性疾患」は、インビトロであれ、インビボであれ、腫瘍性増殖又は増殖性増殖のような、望まれていない過剰細胞又は異常細胞の望まれていない、つまり制御されていない細胞増殖に対して使われている。

【0019】

増殖性病態の例としては、限定するものではないが、新生物及び腫瘍（例えば組織球増殖、神経膠腫、星状細胞増殖、骨腫）、ガン（例えば肺ガン、小細胞肺ガン、胃腸ガン、大腸ガン、結腸ガン、乳癌、卵巣癌、前立腺ガン、精巣ガン、腎臓ガン、膀胱ガン、膵臓ガン、脳腫瘍、肉腫、骨肉腫、カポージ肉腫、黒色腫）、白血病、乾癬、骨疾患、線維増殖障害（例えば結合組織の）、及びアテローム性動脈硬化症を含めた、限定するものではないが良性、前悪性、及び悪性の、細胞増殖が挙げられる。対象となる他のガンとしては、限定するものではないが、血液学的なもの：悪性腫瘍、例えば白血病、及びリンパ腫、例えば非ホジキンリンパ腫、及びサブタイプ、例えばＤＬＢＣＬ、辺縁帯、外套帯、及び濾胞、ホジキンリンパ腫、ＡＭＬ、及びＢ又はＴ細胞由来の他のガンが挙げられる。

【0020】

自己免疫疾患の例には、次のものが含まれる:リウマチ様関節炎、自己免疫性脱髄疾患(例えば、多発性硬化症、アレルギー性脳脊髄炎)、乾癬性関節炎、内分泌性眼疾患、網膜ぶどう膜炎、全身性エリテマトーデス、重症筋無力症、グレーブス病、糸球体腎炎、自己免疫性肝臓病学的障害、炎症性腸疾患(例えばクローン病)、アナフィラキシー、アレルギー反応、シェーグレン症候群、I型糖尿病、原発性胆汁性肝硬変、ウェゲナー肉芽腫症、線維筋痛症、多発性筋炎、皮膚筋炎、多発性内分泌不全、シュミット症候群、自己免疫性ぶどう膜炎、アジソン病、副腎炎、甲状腺炎、橋本甲状腺炎、自己免疫性甲状腺疾患、悪性貧血、胃萎縮症、慢性肝炎、ルポイド肝炎、アテローム性動脈硬化症、亜急性皮膚エリテマトーデス、副甲状腺機能低下症、ドレスラー症候群、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少性紫斑病、溶血性貧血、尋常性天疱瘡、天疱瘡、ヘルペス状皮膚炎、円形脱毛症、類天疱瘡、強皮症、進行性全身性硬化症、CREST症候群(石灰沈着症、レイノー現象、食道蠕動低下、強指症、及び毛細血管拡張症)、男性及び女性の自己免疫性不妊症、強直性脊椎炎、潰瘍性大腸炎、混合性結合組織病、結節性多発性動脈炎、全身性壊死性血管炎、アトピー性皮膚炎、アトピー性鼻炎、グッドパスチャー症候群、シャーガス病、サルコイドーシス、リウマチ熱、喘息、反復流産、抗リン脂質症候群、農夫肺、多形性紅疹、心臓切開後症候群、クッシング症候群、自己免疫性慢性活動性肝炎、トリ愛好者肺、中毒性表皮壊死剥離症、アルポート症候群、肺胞炎、アレルギー性肺胞炎、線維性肺胞炎、間質性肺疾患、結節性紅斑、化膿性皮膚炎、輸血反応、高安動脈炎、リウマチ性多発筋痛、側頭動脈炎、住血吸虫症、巨細胞性動脈炎、回虫症、アスペルギルス症、サンプター症候群、湿疹、肉芽腫性リンパ腫症、ベーチェット病、カプラン症候群、川崎病、デング熱、脳脊髄炎、心内膜炎、心内膜心筋線維症、眼内炎、持久性隆起性紅斑、乾癬、胎児赤芽球症、好酸球性筋膜炎、シュルマン症候群、フェルティ症候群、フィラリア症、毛様体炎、慢性毛様体炎、異色性毛様体炎、フックス毛様体炎、IgA腎症、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、移植片対宿主病、移植拒絶、心筋症、イートン・ランバート症候群、再発性多発性軟骨炎、寒冷グロブリン血症、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、エバンス症候群、及び自己免疫性性腺不全。

【0021】

一部の実施形態において、自己免疫疾患は、Bリンパ球の障害(例えば、全身性エリテマトーデス、グッドパスチャー症候群、リウマチ様関節炎、及びI型糖尿病)、Th1-リンパ球の障害(例えば、リウマチ様関節炎、多発性硬化症、乾癬、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、グレーブス病、原発性胆汁性肝硬変、ウェゲナー肉芽腫症、結核症、又は移植片対宿主病)、又はTh2-リンパ球の障害(例えば、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス、アトピー性喘息、鼻結膜炎、アレルギー性鼻炎、オーメン症候群、全身性硬化症、又は慢性移植片対宿主病)である。一般に、樹状細胞に関連する障害は、Th1-リンパ球又はTh2-リンパ球の障害を含む。一部の実施形態において、自己免疫障害は、T細胞の介在する免疫学的障害である。

【0022】

本発明の第4の態様は、式Iのコンジュゲートの調製方法を含む。

【0023】

本発明で使用するための二量体PBD化合物は、以前に対称的な二量体PBD化合物を製造するのに採用されたものと異なる戦略で製造される。詳細には、本発明者らは、別個の方法ステップにおいて対称的なPBD二量体のコアにそれぞれC2アリール置換基を付加することを含む方法を開発した。したがって、本発明の第6の態様は、本明細書に記載の方法ステップの少なくとも一つを含む、式Iのコンジュゲートの製造方法を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0024】

【図1】本発明のコンジュゲートの腫瘍での効果を示す図である。

【図2】本発明のコンジュゲートの腫瘍での効果を示す図である。

【図3】本発明のコンジュゲートの腫瘍での効果を示す図である。

【図4】本発明のコンジュゲートの腫瘍での効果を示す図である。

【図5】本発明のコンジュゲートの腫瘍での効果を示す図である。

【図6】本発明のコンジュゲートの腫瘍での効果を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0025】

定義
本明細書中で商品名が使用される場合、商品名への言及は、文脈がそうでないことを指摘しない限り、該商品名の製品の製品製剤、ジェネリック薬、及び活性医薬成分をも指す。

【0026】

結合剤及びターゲティング剤
用語「結合剤」及び「ターゲティング剤」は、本明細書中で使用される場合、標的分子に特異的に結合する分子、例えば、タンパク質、ポリペプチド又はペプチドを指す。例としては、完全長抗体、完全長抗体の抗原結合性フラグメント、標的分子に特異的に結合する抗体重鎖及び/又は軽鎖可変領域を含む他の薬剤(タンパク質、ポリペプチド又はペプチド)、又は標的分子に結合し、且つ抗体のFc領域、そのドメイン若しくは部分につながれているタンパク質、ペプチド、ポリペプチドの細胞外ドメインを含むFc融合タンパク質を挙げることができる。

【0027】

特異的結合
用語「特異的に結合する」及び「特異的結合」は、抗体又は他のタンパク質、ポリペプチド又はペプチドの所定分子(例えば、抗原)への結合を指す。典型的には、抗体又は他の分子は、少なくとも約1×10⁷M^-1の親和性で結合し、所定分子又は密接に関連した分子以外の非特異的分子(例えば、BSA、カゼイン)に結合する場合のその親和性に比べて少なくとも2倍を超える親和性で所定分子に結合する。

【0028】

薬学的に許容されるカチオン
薬学的に許容される一価並びに二価カチオンの各例は、Berge, et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977)に議論されている（この文献は参照により本明細書に組み込む）。

【0029】

この薬学的に許容されるカチオンは無機又は有機であり得る。

【0030】

薬学的に許容される一価無機カチオンの例としては、限定するものではないが、アルカリ金属イオン、例えばＮａ^＋及びＫ^＋が挙げられる。薬学的に許容される二価無機カチオンの例としては、限定するものではないが、アルカリ土類のカチオン、例えばＣａ^２＋及びＭｇ^２＋が挙げられる。薬学的に許容される有機カチオンの例としては、限定するものではないが、アンモニウムイオン（すなわちＮＨ_４^＋）及び置換されたアンモニウムイオン（例えばＮＨ_３Ｒ^＋、ＮＨ_２Ｒ_２^＋、ＮＨＲ_３^＋、ＮＲ_４^＋）が挙げられる。いくつかの適する置換されたアンモニウムイオンの例は、エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン、及びトロメタミン、並びにアミノ酸、例えばリシン及びアルギニンから誘導されるイオンである。一般的な四級アンモニウムイオンの例はＮ（ＣＨ_３）_４^＋である。

【0031】

置換基
本明細書で使われている用語「場合により置換された」は、置換されていなくてよいしまた置換されていてもよい親基に対して使われている。

【0032】

特に断らない限り、本明細書で使われている用語「置換された」は、１個又はそれ以上の置換基を有している親基に対して使われている。この用語「置換基」とは、本明細書では、通常の意味で使われており、親基に共有結合されている、又は適切であれば、親基に縮合されている化学部分構造のことを言う。さまざまな置換基が周知であって、その生成方法及びさまざまな親基への導入方法も周知である。

【0033】

以下に各置換基の例をより詳細に述べる。

【0034】

Ｃ_１〜１２アルキル：本明細書で使われているこの用語「Ｃ_１〜１２アルキル」は、１〜１２炭素原子を有している炭化水素化合物の１つの炭素原子から１個の水素原子を除去することによって得られる一価部分構造に対して使われており、これは脂肪族又は脂環式であり得、また飽和又は不飽和（例えば、部分不飽和、完全不飽和）でもあり得る。つまり、この用語「アルキル」には、以下で議論される、下位群であるアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、他が含まれる。

【0035】

飽和アルキル基の例としては、限定するものではないが、メチル（Ｃ_１）、エチル（Ｃ_２）、プロピル（Ｃ_３）、ブチル（Ｃ_４）、ペンチル（Ｃ_５）、へキシル（Ｃ_６）及びヘプチル（Ｃ_７）が挙げられる。

【0036】

飽和線状アルキル基の例としては、限定するものではないが、メチル（Ｃ_１）、エチル（Ｃ_２）、ｎ−プロピル（Ｃ_３）、ｎ−ブチル（Ｃ_４）、ｎ−ペンチル（アミル）（Ｃ_５）、ｎ−へキシル（Ｃ_６）及びｎ−ヘプチル（Ｃ_７）が挙げられる。

【0037】

飽和分岐アルキル基の例としては、イソ−プロピル（Ｃ_３）、イソ−ブチル（Ｃ_４）、ｓｅｃ−ブチル（Ｃ_４）、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｃ_４）、イソ−ペンチル（Ｃ_５）、及びネオ−ペンチル（Ｃ_５）が挙げられる。

【0038】

Ｃ_２〜１２アルケニル：本明細書で使われているこの用語「Ｃ_２〜１２アルケニル」は、１つ又はそれ以上の炭素−炭素二重結合を有しているアルキル基に対して使われている。

【0039】

不飽和アルケニル基の例としては、限定するものではないが、エテニル（ビニル、−ＣＨ＝ＣＨ_２）、１−プロペニル（−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ_３）、２−プロペニル（アリル、−ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ_２）、イソプロペニル（１−メチルビニル、−Ｃ（ＣＨ_３）＝ＣＨ_２）、ブテニル（Ｃ_４）、ペンテニル（Ｃ_５）、及びヘキセニル（Ｃ_６）が挙げられる。

【0040】

Ｃ_２〜１２アルキニル：本明細書で使われているこの用語「Ｃ_２〜１２アルキニル」は、１つ又はそれ以上の炭素−炭素三重結合を有しているアルキル基に対して使われている。

【0041】

不飽和アルキニル基の例としては、限定するものではないが、エチニル（−Ｃ≡ＣＨ）及び２−プロピニル（プロパルギル、−ＣＨ_２−Ｃ≡ＣＨ）が挙げられる。

【0042】

Ｃ_３〜１２シクロアルキル：本明細書で使われているこの用語「Ｃ_３〜１２シクロアルキル」は、シクリル基でもあるアルキル基に対して使われている；すなわち、３〜７環原子を含んでいる環状炭化水素（炭環式）化合物（この部分構造は３〜７炭素原子を有する）の１つの脂環式環原子から１個の水素原子を除去することによって得られる一価部分構造に対して使われている。

【0043】

シクロアルキル基の例としては、限定するものではないが、
飽和単環式炭化水素化合物：
シクロプロパン（Ｃ_３）、シクロブタン（Ｃ_４）、シクロペンタン（Ｃ_５）、シクロヘキサン（Ｃ_６）、シクロヘプタン（Ｃ_７）、メチルシクロプロパン（Ｃ_４）、ジメチルシクロプロパン（Ｃ_５）、メチルシクロブタン（Ｃ_５）、ジメチルシクロブタン（Ｃ_６）、メチルシクロペンタン（Ｃ_６）、ジメチルシクロペンタン（Ｃ_７）及びメチルシクロヘキサン（Ｃ_７）；
不飽和単環式炭化水素化合物：
シクロプロペン（Ｃ_３）、シクロブテン（Ｃ_４）、シクロペンテン（Ｃ_５）、シクロヘキセン（Ｃ_６）、メチルシクロプロペン（Ｃ_４）、ジメチルシクロプロペン（Ｃ_５）、メチルシクロブテン（Ｃ_５）、ジメチルシクロブテン（Ｃ_６）、メチルシクロペンテン（Ｃ_６）、ジメチルシクロペンテン（Ｃ_７）及びメチルシクロヘキセン（Ｃ_７）；及び
飽和多環式炭化水素化合物：
ノルカラン（Ｃ_７）、ノルピナン（Ｃ_７）、ノルボルナン（Ｃ_７）；
から誘導されるものが挙げられる。

【0044】

Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル：本明細書で使われているこの用語「Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル」は、ヘテロ環式化合物の１つの環原子から１個の水素原子を除去することによって得られる一価部分構造に対して使われており、この部分構造は３〜２０環原子を有しており、そのうちの１〜１０が環へテロ原子である。好ましくは、それぞれの環は、３〜７環原子を有しており、そのうちの１〜４が環へテロ原子である。

【0045】

本発明の文脈では、添え字（例えばＣ_３〜２０、Ｃ_３〜７、Ｃ_５〜６、他）は、炭素原子であれへテロ原子であれ、その環原子の数、又は環原子の数の範囲を表している。例えば、本明細書で使われている、用語「Ｃ_５〜６ヘテロシクリル」は、５又は６環原子を有しているヘテロシクリル基に対して使われている。

【0046】

単環式ヘテロシクリル基の例としては、限定するものではないが、
Ｎ_１：アジリジン（Ｃ_３）、アゼチジン（Ｃ_４）、ピロリジン（テトラヒドロピロール）（Ｃ_５）、ピロリン（例えば、３−ピロリン、２，５−ジヒドロピロール）（Ｃ_５）、２Ｈ−ピロール又は３Ｈ−ピロール（イソピロール、イソアゾール）（Ｃ_５）、ピペリジン（Ｃ_６）、ジヒドロピリジン（Ｃ_６）、テトラヒドロピリジン（Ｃ_６）、アゼピン（Ｃ_７）；
Ｏ_１：オキシラン（Ｃ_３）、オキセタン（Ｃ_４）、オキソラン（テトラヒドロフラン）（Ｃ_５）、オキソール（ジヒドロフラン）（Ｃ_５）、オキサン（テトラヒドロピラン）（Ｃ_６）、ジヒドロピラン（Ｃ_６）、ピラン（Ｃ_６）、オキセピン（Ｃ_７）；
Ｓ_１：チイラン（Ｃ_３）、チエタン（Ｃ_４）、チオラン（テトラヒドロチオフェン）（Ｃ_５）、チアン（テトラヒドロチオピラン）（Ｃ_６）、チエパン（Ｃ_７）；
Ｏ_２：ジオキソラン（Ｃ_５）、ジオキサン（Ｃ_６）、及びジオキセパン（Ｃ_７）；
Ｏ_３：トリオキサン（Ｃ_６）；
Ｎ_２：イミダゾリジン（Ｃ_５）、ピラゾリジン（ジアゾリジン）（Ｃ_５）、イミダゾリン（Ｃ_５）、ピラゾリン（ジヒドロピラゾール）（Ｃ_５）、ピペラジン（Ｃ_６）；
Ｎ_１Ｏ_１：テトラヒドロオキサゾール（Ｃ_５）、ジヒドロオキサゾール（Ｃ_５）、テトラヒドロイソオキサゾール（Ｃ_５）、ジヒドロイソオキサゾール（Ｃ_５）、モルホリン（Ｃ_６）、テトラヒドロオキサジン（Ｃ_６）、ジヒドロオキサジン（Ｃ_６）、オキサジン（Ｃ_６）；
Ｎ_１Ｓ_１：チアゾリン（Ｃ_５）、チアゾリジン（Ｃ_５）、チオモルホリン（Ｃ_６）；
Ｎ_２Ｏ_１：オキサジアジン（Ｃ_６）；
Ｏ_１Ｓ_１：オキサチオール（Ｃ_５）及びオキサチアン（チオキサン）（Ｃ_６）；及び、
Ｎ_１Ｏ_１Ｓ_１：オキサチアジン（Ｃ_６）；
から誘導されるものが挙げられる。

【0047】

置換された単環式ヘテロシクリル基の例としては、サッカリド（環状形態にある）、例えば、フラノース（Ｃ_５）（例えばアラビノフラノース、リキソフラノース、リボフラノース、及びキシロフランス）及びピラノース（Ｃ_６）（例えばアロピラノース、アルトロピラノース、グルコピラノース、マンノピラノース、グロピラノース、イドピラノース、ガラクトピラノース、及びタロピラノース）から誘導されるものが挙げられる。

【0048】

Ｃ_５〜２０アリール：本明細書で使われている、この用語「Ｃ_５〜２０アリール」は、芳香族化合物の１つの芳香族環原子から１個の水素原子を除去することによって得られる一価部分構造に対して使われており、この部分構造は３〜２０環原子を有している。好ましくは、それぞれの環は、５〜７環原子を有している。

【0049】

本発明の文脈では、添え字（例えばＣ_３〜２０、Ｃ_５〜７、Ｃ_５〜６、他）は、炭素原子であれへテロ原子であれ、その環原子の数、又は環原子の数の範囲を表している。例えば、用語「Ｃ_５〜６アリール」は、５又は６環原子を有しているアリール基に対して使われている。

【0050】

この環原子は、「カルボアリール基」におけるように、すべて、炭素原子であり得る。

【0051】

カルボアリール基の例としては、限定するものではないが、ベンゼン（すなわちフェニル）（Ｃ_６）、ナフタレン（Ｃ_１０）、アズレン（Ｃ_１０）、アントラセン（Ｃ_１４）、フェナントレン（Ｃ_１４）、ナフタセン（Ｃ_１８）、及びピレン（Ｃ_１６）から誘導されるものが挙げられる。

【0052】

縮合環を含み、その縮合環の少なくとも１つが芳香族環であるアリール基の例としては、限定するものではないが、インダン（例えば２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン）（Ｃ_９）、インデン（Ｃ_９）、イソインデン（Ｃ_９）、テトラリン（１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン）（Ｃ_１０）、アセナフテン（Ｃ_１２）、フルオレン（Ｃ_１３）、フェナレン（Ｃ_１３）、アセフェナントレン（Ｃ_１５）、及びアセアントレン（Ｃ_１６）から誘導される基が挙げられる。

【0053】

別形態として、この環原子は、「ヘテロアリール基」におけるように、１個又はそれ以上のへテロ原子を含み得る。単環式へテロアリール基の例としては、限定するものではないが、
Ｎ_１：ピロール（アゾール）（Ｃ_５）、ピリジン（アジン）（Ｃ_６）；
Ｏ_１：フラン（オキソール）（Ｃ_５）；
Ｓ_１：チオフェン（チオール）（Ｃ_５）；
Ｎ_１Ｏ_１：オキサゾール（Ｃ_５）、イソオキサゾール（Ｃ_５）、イソキサジン（Ｃ_６）；
Ｎ_２Ｏ_１：オキサジアゾール（フラザン）（Ｃ_５）；
Ｎ_３Ｏ_１：オキサトリアゾール（Ｃ_５）；
Ｎ_１Ｓ_１：チアゾール（Ｃ_５）、イソチアゾール（Ｃ_５）；
Ｎ_２：イミダゾール（１，３−ジアゾール）（Ｃ_５）、ピラゾール（１，２−ジアゾール）（Ｃ_５）、ピリダジン（１，２−ジアジン）（Ｃ_６）、ピリミジン（１，３−ジアジン）（Ｃ_６）（例えば、シトシン、チミン、ウラシル）、ピラジン（１，４−ジアジン）（Ｃ_６）；
Ｎ_３：トリアゾール（Ｃ_５）、トリアジン（Ｃ_６）；及び、
Ｎ_４：テトラゾール（Ｃ_５）；
から誘導されるものが挙げられる。

【0054】

縮合環を含むヘテロアリールの例としては、限定するものではないが、
ベンゾフラン（Ｏ_１）、イソベンゾフラン（Ｏ_１）、インドール（Ｎ_１）、イソインドール（Ｎ_１）、インドリジン（Ｎ_１）、インドリン（Ｎ_１）、イソインドリン（Ｎ_１）、プリン（Ｎ_４）（例えば、アデニン、グアニン）、ベンゾイミダゾール（Ｎ_２）、インダゾール（Ｎ_２）、ベンゾオキサゾール（Ｎ_１Ｏ_１）、ベンゾイソオキサゾール（Ｎ_１Ｏ_１）、ベンゾジオキソール（Ｏ_２）、ベンゾフラザン（Ｎ_２Ｏ_１）、ベンゾトリアゾール（Ｎ_３）、ベンゾチオフラン（Ｓ_１）、ベンゾチアゾール（Ｎ_１Ｓ_１）、ベンゾチアジアゾール（Ｎ_２Ｓ）から誘導されるＣ_９（２縮合環を有する）；
クロメン（Ｏ_１）、イソクロメン（Ｏ_１）、クロマン（Ｏ_１）、イソクロマン（Ｏ_１）、ベンゾジオキサン（Ｏ_２）、キノリン（Ｎ_１）、イソキノリン（Ｎ_１）、キノリジン（Ｎ_１）、ベンゾオキサジン（Ｎ_１Ｏ_１）、ベンゾジアジン（Ｎ_２）、ピリドピリジン（Ｎ_２）、キノキサリン（Ｎ_２）、キナゾリン（Ｎ_２）、シンノリン（Ｎ_２）、フタラジン（Ｎ_２）、ナフチリジン（Ｎ_２）、プテリジン（Ｎ_４）から誘導されるＣ_１０（２縮合環を有する）；
ベンゾジアゼピン（Ｎ_２）から誘導されるＣ_１１（２縮合環を有する）；
カルバゾール（Ｎ_１）、ジベンゾフラン（Ｏ_１）、ジベンゾチオフェン（Ｓ_１）、カルボリン（Ｎ_２）、ペリミジン（Ｎ_２）、ピリドインドール（Ｎ_２）から誘導されるＣ_１３（３縮合環を有する）；及び、
アクリジン（Ｎ_１）、キサンテン（Ｏ_１）、チオキサンテン（Ｓ_１）、オキサントレン（Ｏ_２）、フェノキサチイン（Ｏ_１Ｓ_１）、フェナジン（Ｎ_２）、フェノキサジン（Ｎ_１Ｏ_１）、フェノチアジン（Ｎ_１Ｓ_１）、チアントレン（Ｓ_２）、フェナントリジン（Ｎ_１）、フェナントロリン（Ｎ_２）、フェナジン（Ｎ_２）から誘導されるＣ_１４（３縮合環を有する）；
が挙げられる。

【0055】

上記各群のものは、それら自体及び以下に掲載するさらなる置換基から選択される１個又はそれ以上の基でそれら自体が場合により置換されていてもよい。

【0056】

ハロ：−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、及び−Ｉ。

【0057】

ヒドロキシ：−ＯＨ。

【0058】

エーテル：−ＯＲ［式中、Ｒは、エーテル置換基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基（Ｃ_１〜７アルコキシ基とも呼ばれる、以下で議論される）、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基（Ｃ_３〜２０ヘテロシクリルオキシ基とも呼ばれる）、又はＣ_５〜２０アリール基（Ｃ_５〜２０アリールオキシ基とも呼ばれる）、好ましくはＣ_１〜７アルキル基である］。

【0059】

アルコキシ：−ＯＲ［式中、Ｒは、アルキル基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基である。Ｃ_１〜７アルコキシ基の例としては、限定するものではないが、−ＯＭｅ（メトキシ）、−ＯＥｔ（エトキシ）、−Ｏ（ｎＰｒ）（ｎ−プロポキシ）、−Ｏ（ｉＰｒ）（イソプロポキシ）、−Ｏ（ｎＢｕ）（ｎ−ブトキシ）、−Ｏ（ｓＢｕ）（ｓｅｃ−ブトキシ）、−Ｏ（ｉＢｕ）（イソブトキシ）、及び−Ｏ（ｔＢｕ）（ｔｅｒｔ−ブトキシ）が挙げられる］。

【0060】

アセタール：−ＣＨ（ＯＲ^１）（ＯＲ^２）［式中、Ｒ^１及びＲ^２は、独立して、アセタール置換基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくはＣ_１〜７アルキル基である、又は、「環状」アセタール基のケースでは、Ｒ^１及びＲ^２は、それらが結合されている２つの酸素原子、及び、それらが結合されている炭素原子と一緒になって、４〜８環原子を有しているヘテロ環式環を形成している。アセタール基の例としては、限定するものではないが、−ＣＨ（ＯＭｅ）_２、−ＣＨ（ＯＥｔ）_２、及び−ＣＨ（ＯＭｅ）（ＯＥｔ）が挙げられる］。

【0061】

ヘミアセタール：−ＣＨ（ＯＨ）（ＯＲ^１）［式中、Ｒ^１は、ヘミアセタール置換基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくはＣ_１〜７アルキル基である。ヘミアセタール基の例としては、限定するものではないが、−ＣＨ（ＯＨ）（ＯＭｅ）及び−ＣＨ（ＯＨ）（ＯＥｔ）が挙げられる］。

【0062】

ケタール：−ＣＲ（ＯＲ^１）（ＯＲ^２）［ここで、Ｒ^１及びＲ^２はアセタールに対して定義されている通りであって、Ｒは水素以外のケタール置換基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくはＣ_１〜７アルキル基である。ケタール基の例としては、限定するものではないが、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＭｅ）_２、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＥｔ）_２、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＭｅ）（ＯＥｔ）、−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＭｅ）_２、−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＥｔ）_２、及び−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＭｅ）（ＯＥｔ）が挙げられる］。

【0063】

ヘミケタール：−ＣＲ（ＯＨ）（ＯＲ^１）［ここで、Ｒ^１はヘミアセタールに対して定義されている通りであって、Ｒは水素以外のヘミケタール置換基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくはＣ_１〜７アルキル基である。ヘミアセタール基の例としては、限定するものではないが、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＨ）（ＯＭｅ）、−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＨ）（ＯＭｅ）、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＨ）（ＯＥｔ）、及び−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＨ）（ＯＥｔ）が挙げられる］。

【0064】

オキソ（ケト、−オン）：＝Ｏ。

【0065】

チオン（チオケトン）：＝Ｓ。

【0066】

イミノ（イミン）：＝ＮＲ［式中、Ｒは、イミノ置換基、例えば、水素、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくは水素又はＣ_１〜７アルキル基である。エステル基の例としては、限定するものではないが、＝ＮＨ、＝ＮＭｅ、＝ＮＥｔ、及び＝ＮＰｈが挙げられる］。

【0067】

ホルミル（カルバルデヒド、カルボキサルデヒド）：−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ。

【0068】

アシル（ケト）：−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ［式中、Ｒは、アシル置換基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基（Ｃ_１〜７アルキルアシル又はＣ_１〜７アルカノイルとも呼ばれる）、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基（Ｃ_３〜２０ヘテロシクリルアシルとも呼ばれる）、又はＣ_５〜２０アリール基（Ｃ_５〜２０アリールアシルとも呼ばれる）、好ましくはＣ_１〜７アルキル基である。アシル基の例としては、限定するものではないが、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_３（アセチル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２ＣＨ_３（プロピオニル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ_３）_３（ｔ−ブチリル）、及び−Ｃ（＝Ｏ）Ｐｈ（ベンゾイル、フェノン）が挙げられる］。

【0069】

カルボキシ（カルボン酸）：−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ。

【0070】

チオカルボキシ（チオカルボン酸）：−Ｃ（＝Ｓ）ＳＨ。

【0071】

チオロカルボキシ（チオロカルボン酸）：−Ｃ（＝Ｏ）ＳＨ。

【0072】

チオノカルボキシ（チオノカルボン酸）：−Ｃ（＝Ｓ）ＯＨ。

【0073】

イミド酸：−Ｃ（＝ＮＨ）ＯＨ。

【0074】

ヒドロキサム酸：−Ｃ（＝ＮＯＨ）ＯＨ。

【0075】

エステル（カルボキシラート、カルボン酸エステル、オキシカルボニル）：−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ［式中、Ｒは、エステル置換基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくはＣ_１〜７アルキル基である。エステル基の例としては、限定するものではないが、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ_３、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ_２ＣＨ_３、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣ（ＣＨ_３）_３、及び−Ｃ（＝Ｏ）ＯＰｈが挙げられる］。

【0076】

アシルオキシ（逆エステル）：−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ［式中、Ｒは、アシルオキシ置換基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくはＣ_１〜７アルキル基である。アシルオキシ基の例としては、限定するものではないが、−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ_３（アセトキシ）、−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２ＣＨ_３、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ_３）_３、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｐｈ、及び−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｐｈが挙げられる］。

【0077】

オキシカルボイルオキシ：−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲ［式中、Ｒは、エステル置換基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくはＣ_１〜７アルキル基である。エステル基の例としては、限定するものではないが、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ_３、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ_２ＣＨ_３、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣ（ＣＨ_３）_３、及び−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＰｈが挙げられる］。

【0078】

アミノ：−ＮＲ^１Ｒ^２［式中、Ｒ^１及びＲ^２は、独立して、アミノ置換基、例えば、水素、Ｃ_１〜７アルキル基（Ｃ_１〜７アルキルアミノ又はジ−Ｃ_１〜７アルキルアミノとも呼ばれる）、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくはＨ又はＣ_１〜７アルキル基である、又は、「環状」アミノ基のケースでは、Ｒ^１及びＲ^２は、それらが結合されている窒素原子と一緒になって、４〜８環原子を有しているヘテロ環式環を形成している。アミノ基は、一級（−ＮＨ_２）、二級（−ＮＨＲ^１）、又は三級（−ＮＨＲ^１Ｒ^２）であり得るものであって、カチオン形態では、四級（−^＋ＮＲ^１Ｒ^２Ｒ^３）であり得る。アミノ基の例としては、限定するものではないが、−ＮＨ_２、−ＮＨＣＨ_３、−ＮＨＣ（ＣＨ_３）_２、−Ｎ（ＣＨ_３）_２、−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_２、及び−ＮＨＰｈが挙げられる。環状アミノ基の例としては、限定するものではないが、アジリジノ、アゼチジノ、ピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノ、モルホリノ、及びチオモルホリノが挙げられる］。

【0079】

アミド（カルバモイル、カルバミル、アミノカルボニル、カルボキサミド）：−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１Ｒ^２［式中、Ｒ^１及びＲ^２は、独立して、アミノ基に対して定義されている、アミノ置換基である。アミド基の例としては、限定するものではないが、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ_３、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ_３）_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ_２ＣＨ_３、及び−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_２、並びにＲ^１及びＲ^２が、それらが結合されている窒素原子と一緒になって、例えば、ピペリジノカルボニル、モルホリノカルボニル、チオモルホリノカルボニル、及びピペラジノカルボニルにおけるようなヘテロ環式構造を形成しているアミド基が挙げられる］。

【0080】

チオアミド（チオカルバミル）：−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ^１Ｒ^２［式中、Ｒ^１及びＲ^２は、独立して、アミノ基に対して定義されている、アミノ置換基である。アミド基の例としては、限定するものではないが、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ_２、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨＣＨ_３、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（ＣＨ_３）_２、及び−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨＣＨ_２ＣＨ_３が挙げられる］。

【0081】

アシルアミド（アシルアミノ）：−ＮＲ^１Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^２［式中、Ｒ^１は、アミド置換基、例えば、水素、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくは水素又はＣ_１〜７アルキル基であって、Ｒ^２は、アシル置換基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくは水素又はＣ_１〜７アルキル基である。アシルアミド基の例としては、限定するものではないが、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_３、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２ＣＨ_３、及び−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｐｈが挙げられる。Ｒ^１及びＲ^２は、例えば、スクシンイミジル、マレイミジル、及びフタルイミジル：

【化5】

【0082】

のように、一緒に環状構造を形成し得る］。

【0083】

アミノカルボニルオキシ：−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１Ｒ^２［式中、Ｒ^１及びＲ^２は、独立して、アミノ基に対して定義されている、アミノ置換基である。アミノカルボニルオキシ基の例としては、限定するものではないが、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨＭｅ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＭｅ_２、及び−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＥｔ_２が挙げられる］。

【0084】

ウレイド：−Ｎ（Ｒ^１）ＣＯＮＲ^２Ｒ^３［式中、Ｒ^２及びＲ^３は、独立して、アミノ基に対して定義されている、アミノ置換基であって、Ｒ^１は、ウレイド置換基、例えば、水素、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくは水素又はＣ_１〜７アルキル基である。ウレイド基の例としては、限定するものではないが、−ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＮＨＣＯＮＨＭｅ、−ＮＨＣＯＮＨＥｔ、−ＮＨＣＯＮＭｅ_２、−ＮＨＣＯＮＥｔ_２、−ＮＭｅＣＯＮＨ_２、−ＮＭｅＣＯＮＨＭｅ、−ＮＭｅＣＯＮＨＥｔ、−ＮＭｅＣＯＮＭｅ_２、及び−ＮＭｅＣＯＮＥｔ_２が挙げられる］。

【0085】

グアニジノ：−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２。

【0086】

テトラゾリル：４窒素原子及び１炭素原子を有している５員芳香族環、

【化6】

【0087】

イミノ：＝ＮＲ［式中、Ｒは、イミノ置換基、例えば、水素、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくはＨ又はＣ_１〜７アルキル基である。イミノ基の例としては、限定するものではないが、＝ＮＨ、＝ＮＭｅ、及び＝ＮＥｔが挙げられる］。

【0088】

アミジン（アミジノ）：−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ_２［式中、それぞれのＲは、アミジン置換基、例えば、水素、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくはＨ又はＣ_１〜７アルキル基である。アミジン基の例としては、限定するものではないが、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＭｅ_２、及び−Ｃ（＝ＮＭｅ）ＮＭｅ_２が挙げられる］。

【0089】

ニトロ：−ＮＯ_２。

【0090】

ニトロソ：−ＮＯ。

【0091】

アジド：−Ｎ_３。

【0092】

シアノ（ニトリル、カルボニトリル）：−ＣＮ。

【0093】

イソシアノ：−ＮＣ。

【0094】

シアナト：−ＯＣＮ。

【0095】

イソシアナト：−ＮＣＯ。

【0096】

チオシアノ（チオシアナト）：−ＳＣＮ。

【0097】

イソチオシアノ（イソチオシアナト）：−ＮＣＳ。

【0098】

スルフヒドリル（チオール、メルカプト）：−ＳＨ。

【0099】

チオエーテル（スルフィド）：−ＳＲ［式中、Ｒは、チオエーテル置換基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基（Ｃ_１〜７アルキルチオ基とも呼ばれる）、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくはＣ_１〜７アルキル基である。Ｃ_１〜７アルキルチオ基の例としては、限定するものではないが、−ＳＣＨ_３及び−ＳＣＨ_２ＣＨ_３が挙げられる］。

【0100】

ジスルフィド：−ＳＳ−Ｒ［式中、Ｒは、ジスルフィド置換基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくはＣ_１〜７アルキル基（本明細書ではＣ_１〜７アルキルジスルフィドとも呼ばれる）である。Ｃ_１〜７アルキルジスルフィド基の例としては、限定するものではないが、−ＳＳＣＨ_３及び−ＳＳＣＨ_２ＣＨ_３が挙げられる］。

【0101】

スルフィン（スルフィニル、スルホキシド）：−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ［式中、Ｒは、スルフィン置換基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくはＣ_１〜７アルキル基である。スルフィン基の例としては、限定するものではないが、−Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ_３及び−Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ_２ＣＨ_３が挙げられる］。

【0102】

スルホン（スルホニル）：−Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ［式中、Ｒは、スルホン置換基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくはＣ_１〜７アルキル基であり、例えば、フッ素化又は過フッ素化Ｃ_１〜７アルキル基も含まれる。スルホン基の例としては、限定するものではないが、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_３（メタンスルホニル、メシル）、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＦ_３（トリフリル）、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_３（エシル）、−Ｓ（＝Ｏ）_２Ｃ_４Ｆ_９（ノナフリル）、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＦ_３（トレシル）、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２（タウリル）、−Ｓ（＝Ｏ）_２Ｐｈ（フェニルスルホニル、ベシル）、４−メチルフェニルスルホニル（トシル）、４−クロロフェニルスルホニル（クロシル）、４−ブロモフェニルスルホニル（ブロシル）、４−ニトロフェニル（ノシル）、２−ナフタレンスルホナート（ナプシル）、及び５−ジメチルアミノ−ナフタレン−１−イルスルホナート（ダンシル）が挙げられる］。

【0103】

スルフィン酸（スルフィノ）：−Ｓ（＝Ｏ）ＯＨ、−ＳＯ_２Ｈ。

【0104】

スルホン酸（スルホ）：−Ｓ（＝Ｏ）_２ＯＨ、−ＳＯ_３Ｈ。

【0105】

スルフィナート（スルフィン酸エステル）：−Ｓ（＝Ｏ）ＯＲ［式中、Ｒは、スルフィナート置換基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくはＣ_１〜７アルキル基である。スルフィナート基の例としては、限定するものではないが、−Ｓ（＝Ｏ）ＯＣＨ_３（メトキシスルフィニル；メチルスルフィナート）及び−Ｓ（＝Ｏ）ＯＣＨ_２ＣＨ_３（エトキシスルフィニル；エチルスルフィナート）が挙げられる］。

【0106】

スルホナート（スルホン酸エステル）：−Ｓ（＝Ｏ）_２ＯＲ［式中、Ｒは、スルホナート置換基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくはＣ_１〜７アルキル基である。スルホナート基の例としては、限定するものではないが、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＯＣＨ_３（メトキシスルホニル；メチルスルホナート）及び−Ｓ（＝Ｏ）_２ＯＣＨ_２ＣＨ_３（エトキシスルホニル；エチルスルホナート）が挙げられる］。

【0107】

スルフィニルオキシ：−ＯＳ（＝Ｏ）Ｒ［式中、Ｒは、スルフィニルオキシ置換基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくはＣ_１〜７アルキル基である。スルフィニルオキシ基の例としては、限定するものではないが、−ＯＳ（＝Ｏ）ＣＨ_３及び−ＯＳ（＝Ｏ）ＣＨ_２ＣＨ_３が挙げられる］。

【0108】

スルホニルオキシ：−ＯＳ（＝Ｏ）_２Ｒ［式中、Ｒは、スルホニルオキシ置換基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくはＣ_１〜７アルキル基である。スルホニルオキシ基の例としては、限定するものではないが、−ＯＳ（＝Ｏ）_２ＣＨ_３（メシラート）及び−ＯＳ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_３（エシラート）が挙げられる］。

【0109】

スルファート：−ＯＳ（＝Ｏ）_２ＯＲ［式中、Ｒは、スルファート置換基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくはＣ_１〜７アルキル基である。スルファート基の例としては、限定するものではないが、−ＯＳ（＝Ｏ）_２ＯＣＨ_３及び−ＳＯ（＝Ｏ）_２ＯＣＨ_２ＣＨ_３が挙げられる］。

【0110】

スルファミル（スルファモイル；スルフィン酸アミド；スルフィンアミド）：−Ｓ（＝Ｏ）ＮＲ^１Ｒ^２［式中、Ｒ^１及びＲ^２は、独立して、アミノ基に対して定義されている、アミノ置換基である。スルファミル基の例としては、限定するものではないが、−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ_２、−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_３）、−Ｓ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ_３）_２、−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）、−Ｓ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_２、及び−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨＰｈが挙げられる］。

【0111】

スルホンアミド（スルフィナモイル；スルホン酸アミド；スルホンアミド）：−Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＲ^１Ｒ^２［式中、Ｒ^１及びＲ^２は、独立して、アミノ基に対して定義されている、アミノ置換基である。スルホンアミド基の例としては、限定するものではないが、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨ_２、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨ（ＣＨ_３）、−Ｓ（＝Ｏ）_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）、−Ｓ（＝Ｏ）_２Ｎ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_２、及び−Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨＰｈが挙げられる］。

【0112】

スルファミノ：−ＮＲ^１Ｓ（＝Ｏ）_２ＯＨ［式中、Ｒ^１は、アミノ基に対して定義されている、アミノ置換基である。スルファミノ基の例としては、限定するものではないが、−ＮＨＳ（＝Ｏ）_２ＯＨ及び−Ｎ（ＣＨ_３）Ｓ（＝Ｏ）_２ＯＨが挙げられる］。

【0113】

スルホンアミノ：−ＮＲ^１Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ［式中、Ｒ^１は，アミノ基に対して定義されている、アミノ置換基であって、Ｒは、スルホンアミノ置換基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくはＣ_１〜７アルキル基である。スルホンアミノ基の例としては、限定するものではないが、−ＮＨＳ（＝Ｏ）_２ＣＨ_３及び−Ｎ（ＣＨ_３）Ｓ（＝Ｏ）_２Ｃ_６Ｈ_５が挙げられる］。

【0114】

スルフィンアミノ：−ＮＲ^１Ｓ（＝Ｏ）Ｒ［式中、Ｒ^１は，アミノ基に対して定義されている、アミノ置換基であって、Ｒは、スルフィンアミノ置換基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくはＣ_１〜７アルキル基である。スルフィンアミノ基の例としては、限定するものではないが、−ＮＨＳ（＝Ｏ）ＣＨ_３及び−Ｎ（ＣＨ_３）Ｓ（＝Ｏ）Ｃ_６Ｈ_５が挙げられる］。

【0115】

ホスフィノ（ホスフィン）：−ＰＲ_２［式中、Ｒは、ホスフィノ置換基、例えば、−Ｈ、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ_１〜７アルキル基、又はＣ_５〜２０アリール基である。ホスフィノ基の例としては、限定するものではないが、−ＰＨ_２、−Ｐ（ＣＨ_３）_２、−Ｐ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_２、−Ｐ（ｔ−Ｂｕ）_２、及び−Ｐ（Ｐｈ）_２が挙げられる］。

【0116】

ホスホ：−Ｐ（＝Ｏ）_２。

【0117】

ホスフィニル（ホスフィンオキシド）：−Ｐ（＝Ｏ）Ｒ^２［式中、Ｒは、ホスフィニル置換基、例えば、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくはＣ_１〜７アルキル基又はＣ_５〜２０アリール基である。ホスフィニル基の例としては、限定するものではないが、−Ｐ（＝Ｏ）（ＣＨ_３）_２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＣＨ_２ＣＨ_３）_２、−Ｐ（＝Ｏ）（ｔ−Ｂｕ）_２、及び−Ｐ（＝Ｏ）（Ｐｈ）_２が挙げられる］。

【0118】

ホスホン酸（ホスホノ）：−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）_２。

【0119】

ホスホナート（ホスホノエステル）：−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）_２［ここで、Ｒは、ホスホナート置換基、例えば、−Ｈ、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ_１〜７アルキル基、又はＣ_５〜２０アリール基である。ホスホナート基の例としては、限定するものではないが、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＣＨ_３）_２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＣＨ_２ＣＨ_３）_２、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）_２、及び−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＰｈ）_２が挙げられる］。

【0120】

リン酸（ホスホノオキシ）：−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）_２。

【0121】

ホスファート（ホスホノオキシエステル）：−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）_２［ここで、Ｒは、ホスファート置換基、例えば、−Ｈ、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ_１〜７アルキル基、又はＣ_５〜２０アリール基である。ホスファート基の例としては、限定するものではないが、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ_３）_２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ_２ＣＨ_３）_２、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）_２、及び−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＰｈ）_２が挙げられる］。

【0122】

亜リン酸：−ＯＰ（ＯＨ）_２。

【0123】

ホスファイト：−ＯＰ（ＯＲ）_２［ここで、Ｒは、ホスファイト置換基、例えば、−Ｈ、Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ_１〜７アルキル基、又はＣ_５〜２０アリール基である。ホスファイト基の例としては、限定するものではないが、−ＯＰ（ＯＣＨ_３）_２、−ＯＰ（ＯＣＨ_２ＣＨ_３）_２、−ＯＰ（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）_２、及び−ＯＰ（ＯＰｈ）_２が挙げられる］。

【0124】

ホスホロアミダイト：−ＯＰ（ＯＲ^１）−ＮＲ^２_２［ここで、Ｒ^１及びＲ^２は、ホスホロアミダイト置換基、例えば、−Ｈ、（置換されていてもよい）Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ_１〜７アルキル基、又はＣ_５〜２０アリール基である。ホスホロアミダイト基の例としては、限定するものではないが、−ＯＰ（ＯＣＨ_２ＣＨ_３）−Ｎ（ＣＨ_３）_２、−ＯＰ（ＯＣＨ_２ＣＨ_３）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）_２、及び−ＯＰ（ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＮ）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）_２が挙げられる］。

【0125】

ホスホロアミダイト：−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ^１）−ＮＲ^２_２［ここで、Ｒ^１及びＲ^２は、ホスホロアミダイト置換基、例えば、−Ｈ、（置換されていてもよい）Ｃ_１〜７アルキル基、Ｃ_３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ_５〜２０アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ_１〜７アルキル基、又はＣ_５〜２０アリール基である。ホスホロアミダイト基の例としては、限定するものではないが、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ_２ＣＨ_３）−Ｎ（ＣＨ_３）_２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ_２ＣＨ_３）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）_２、及び−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＮ）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）_２が挙げられる］。

【0126】

アルキレン
Ｃ_３〜１２アルキレン：本明細書で使われている、この用語「Ｃ_３〜１２アルキレン」は、（特に断らない限り）３〜１２炭素原子を有している炭化水素化合物の２個の水素原子を除去する（同じ炭素原子から２つ、又は２つの別の炭素原子のそれぞれから１つずつ）ことによって得られる二座部分構造に対して使われていて、脂肪族又は脂環式であり得、また飽和、部分不飽和、又は完全不飽和でもあり得る。つまり、この用語「アルキレン」には、以下で議論される、下位群であるアルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレン、他も含まれる。

【0127】

線状飽和Ｃ_３〜１２アルキレン基の例としては、限定するものではないが、−（ＣＨ_２）_ｎ−（ここで、ｎは、３〜１２の整数である）、例えば、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−（プロピレン）、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−（ブチレン）、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−（ペンチレン）及び−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−（ヘプチレン）が挙げられる。

【0128】

分岐飽和Ｃ_３〜１２アルキレン基の例としては、限定するものではないが、−ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２−、−ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２−、−ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−、−ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２−、−ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２−、−ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）−、−ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）ＣＨ_２−、及び−ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）ＣＨ_２−が挙げられる。

【0129】

線状部分不飽和Ｃ_３〜１２アルキレン基（Ｃ_３〜１２アルケニレン、及びアルキニレン基）の例としては、限定するものではないが、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ_２−、−ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ_２−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ_２−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ−、及び−ＣＨ_２−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ_２−が挙げられる。

【0130】

分岐部分不飽和Ｃ_３〜１２アルキレン基（Ｃ_３〜１２アルケニレン及びアルキニレン基）の例としては、限定するものではないが、−Ｃ（ＣＨ_３）＝ＣＨ−、−Ｃ（ＣＨ_３）＝ＣＨ−ＣＨ_２−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ（ＣＨ_３）−及び−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ（ＣＨ_３）−が挙げられる。

【0131】

脂環式飽和Ｃ_３〜１２アルキレン基（Ｃ_３〜１２シクロアルキレン）の例としては、限定するものではないが、シクロペンチレン（例えばシクロペンタ−１，３−イレン）、及びシクロへキシレン（例えばシクロヘキサ−１，４−イレン）が挙げられる。

【0132】

脂環式部分不飽和Ｃ_３〜１２アルキレン基（Ｃ_３〜１２シクロアルキレン）の例としては、限定するものではないが、シクロペンテニレン（例えば４−シクロペンテン−１，３−イレン）、シクロヘキセニレン（例えば２−シクロヘキセン−１，４−イレン；３−シクロヘキセン−１，２−イレン；２，５−シクロヘキサジエン−１，４−イレン）が挙げられる。

【0133】

酸素保護基：用語「酸素保護基」とは、ヒドロキシ基をマスクする部分構造のことを言い、当技術分野では周知のものである。多数の適する基がGreene, T.W. and Wuts, G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc., 1999の２３〜２００頁に記載されている（これは参照により本明細書に組み込まれる）。特に対象となる群としては、シリルエーテル（例えばＴＭＳ、ＴＢＤＭＳ）、置換されたメチルエーテル（例えばＴＨＰ）及びエステル（例えばアセタート）が挙げられる。

【0134】

カルバマート窒素保護基：用語「カルバマート窒素保護基」は、イミン結合中の窒素をマスクする部分構造に対して使われていて、当技術分野では周知のものである。これらの基は、以下の構造：

【化7】

【0135】

［式中、Ｒ^’１０は、先に定義されているＲである］を有している。多数の適する基がGreene, T.W. and Wuts, G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc., 1999の５０３〜５４９頁に記載されている（これは参照により本明細書に組み込まれる）。

【0136】

ヘミ−アミナール窒素保護基：用語「ヘミ−アミナール窒素保護基」は、以下の構造：

【化8】

【0137】

［式中、Ｒ^’１０は、先に定義されているＲである］を有している基に対して使われている。多数の適する基がGreene, T.W. and Wuts, G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc., 1999の６３３〜６４７頁にアミド保護基として記載されている（これは参照により本明細書に組み込まれる）。

【0138】

発明の詳細な説明
本発明は、リンカー単位を介してリガンド単位に連結されたPBD二量体を含むコンジュゲートを提供する。一実施形態において、リンカー単位は、ストレッチ単位(Stretcher unit)(A)、特異性単位(Specificity unit)(L₁)、及びスペーサー単位(L₂)を含む。リンカー単位は、一端でリガンド単位に、他端でPBD二量体化合物に連結される。

【0139】

一態様において、このようなコンジュゲートは以下に式Ia:
L-(A¹_a-L¹_s-L²_y-D)_p (Ia)
で示され、式中、
Lはリガンド単位であり、
-A¹_a-L¹_s-L²_y-はリンカー単位(LU)(ここで、
-A¹-はストレッチ単位であり、
aは1又は2であり、
-L¹-は特異性単位であり、
sは1〜12の範囲の整数であり、
-L²-はスペーサー単位であり、
yは0、1又は2である)であり、
-DはPBD二量体であり、
pは1〜20である。

【0140】

薬物負荷量は、リガンド単位(例えば、抗体)当たりの薬物分子の数であるpで表される。薬物負荷量は、リガンド単位(例えば、Ab又はmAb)当たり1〜20個の範囲の薬物単位(D)でよい。組成物の場合、pは、組成物中のコンジュゲートの平均薬物負荷量を表し、pは1〜20の範囲にある。

【0141】

一部の実施形態において、pは、リガンド単位当たり約1〜約8の薬物単位である。一部の実施形態において、pは1である。一部の実施形態において、pは2である。一部の実施形態において、pはリガンド単位当たり約2〜約8個の薬物単位である。一部の実施形態において、pは、リガンド単位当たり約2〜約6、2〜約5、又は2〜約4個の薬物単位である。一部の実施形態において、pは、リガンド単位当たり約2、約4、約6又は約8個の薬物単位である。

【0142】

コンジュゲーション反応による調製において、リガンド単位当たりの平均薬物単位数は、質量分光法、ELISAアッセイ、及びHPLCなどの通常の手段によって特徴付けることができる。コンジュゲート中のpに関する定量的分布も測定することができる。一部の例で、pがある特定の値である均一コンジュゲートの、異なる薬物負荷量を有するコンジュゲートからの分離、精製、及び特徴付けは、逆相HPLC又は電気泳動などの手段を用いて達成することができる。

【0143】

別の態様において、このようなコンジュゲートは、以下に式Ibで示される:

【化9】

【0144】

また、
L-(A¹_a-L²_y(-L¹_s)-D)_p (Ib)
とも表され、
式中、
Lはリガンド単位であり、
-A¹_a-L¹_s(L²_y)-はリンカー単位(LU)(ここで、
-A¹-はストレッチ単位(L²)に連結されたストレッチ単位であり、
aは1又は2であり、
-L¹-はストレッチ単位(L²)に連結された特異性単位であり、
sは0〜12の範囲の整数であり、
-L²-はスペーサー単位であり、
yは0、1又は2である)であり、
-DはPBD二量体であり、
pは1〜20である。

【0145】

好ましい形態
次の好ましい形態は、前記のような本発明のすべての態様に適用されてよく、又は単一の態様に関してもよい。好ましい形態は、任意の組合せにおいて一緒に組み合わせることができる。

【0146】

一実施形態において、コンジュゲートは、次式:
L-(A¹_a-L¹_s-L²_y-D)_p
を有し、式中、L、A¹、a、L¹、s、L²、D及びpは前に説明した通りである。

【0147】

一実施形態において、リガンド単位(L)は、標的細胞の表面上の標的分子に特異的に結合する細胞結合剤(CBA)である。典型的な式を下に例示する:

【化10】

【0148】

ここで、星印は薬物単位(D)への結合箇所を示し、CBAは細胞結合剤であり、L¹は特異性単位であり、A¹は、L¹を細胞結合剤へ連結するストレッチ単位であり、L²はスペーサー単位であり、これは、共有結合、自壊性基であるか、又は-OC(=O)と一緒になって自壊性基を形成し、L²は任意である。

【0149】

別の実施形態において、リガンド単位(L)は、標的細胞の表面上の標的分子に特異的に結合する細胞結合剤(CBA)である。典型的な式を下に例示する:
CBA-A¹_a-L¹_s-L²_y-^*
ここで、星印は薬物単位(D)への結合箇所を示し、CBAは細胞結合剤であり、L¹は特異性単位であり、A¹は、L¹を細胞結合剤へ連結するストレッチ単位であり、L²はスペーサー単位であり、これは、共有結合又は自壊性基であり、aは1又は2であり、sは0、1又は2であり、yは0、1又は2である。

【0150】

上に例示した実施形態において、L¹は、開裂可能な特異性単位でよく、自壊性基(複数可)が存在する場合、開裂すると自壊性基(又は複数の自壊性基)L²を活性化する「トリガー」と呼ばれることもある。特異性単位L¹が開裂するか、又はL¹とL²との間の連結(すなわち、共有結合)が開裂すると、自壊性基は薬物単位(D)を放出する。

【0151】

別の実施形態において、リガンド単位(L)は、標的細胞の表面上の標的分子に特異的に結合する細胞結合剤(CBA)である。典型的な式を下に例示する:

【化11】

【0152】

ここで、星印は薬物(D)への結合箇所を示し、CBAは細胞結合剤であり、L¹はL²に連結された特異性単位であり、A¹は、L²を細胞結合剤へ連結するストレッチ単位であり、L²は自壊性基であり、aは1又は2であり、sは1又は2であり、yは1又は2である。

【0153】

本明細書中で考察される種々の実施形態において、L¹及びL²の性質は広範に異なることができる。これらの基は、コンジュゲートが送達される部位の状態によって部分的には規定され得るそれらの特性に基づいて選択される。特異性単位L¹が開裂可能なら、L¹の構造及び/又は配列は、それが標的部位(例えば、標的細胞)に存在する酵素の作用によって開裂するように選択される。pH(例えば、酸又は塩基に不安定)、温度の変化、又は照射(例えば、光に不安定)によって開裂可能であるL¹単位を使用することもできる。還元又は酸化条件下で開裂可能であるL¹単位も、コンジュゲート中で使用できる可能性がある。

【0154】

一部の実施形態において、L¹は、一つのアミノ酸又はアミノ酸の連続的配列を含むことができる。アミノ酸配列は、酵素にとっての標的基質であり得る。

【0155】

一実施形態において、L¹は、酵素の作用によって開裂可能である。一実施形態において、酵素はエステラーゼ又はペプチダーゼである。例えば、L¹は、カテプシンなど、リソソームのプロテアーゼによって開裂され得る。

【0156】

一実施形態において、L²は、存在し、-C(=O)O-と一緒になって一つ又は複数の自壊性基を形成する。一部の実施形態において、-C(=O)O-も自壊性基である。

【0157】

一実施形態において、L¹が酵素の作用によって開裂可能であり、且つL²が存在する場合、酵素は、L¹とL²との間の結合を開裂し、それによって、自壊性基(複数可)は薬物単位を放出する。

【0158】

L¹及びL²は、存在する場合、
-C(=O)NH-、
-C(=O)O-、
-NHC(=O)-、
-OC(=O)-、
-OC(=O)O-、
-NHC(=O)O-、
-OC(=O)NH-、
-NHC(=O)NH、及び
-O-(グリコシド結合)
から選択される結合によって連結され得る。

【0159】

L²に連結しているL¹のアミノ基は、アミノ酸のN-末端でよく、又はアミノ酸側鎖、例えば、リシンアミノ酸側鎖のアミノ基から誘導することができる。

【0160】

L²に連結しているL¹のカルボキシル基は、アミノ酸のC-末端でよく、又はアミノ酸側鎖、例えば、グルタミン酸アミノ酸側鎖のカルボキシル基から誘導することができる。

【0161】

L²に連結しているL¹のヒドロキシ基は、アミノ酸側鎖、例えば、セリンアミノ酸側鎖のヒドロキシ基から誘導することができる。

【0162】

一実施形態において、-C(=O)O-及びL²は、一緒になって、基:

【化12】

【0163】

を形成し、ここで、星印は薬物単位への結合箇所を示し、波線はL¹への結合箇所を示し、Yは、-N(H)-、-O-、-C(=O)N(H)-、又は-C(=O)O-であり、nは0〜3である。フェニレン環は、本明細書に記載のような一つ、二つ又は三つの置換基で置換されていてもよい。

【0164】

一実施形態において、YはNHである。

【0165】

一実施形態において、nは0又は1である。好ましくは、nは0である。

【0166】

YがNHであり、且つnが0である場合には、自壊性基を、p-アミノベンジルカルボニル(PABC)リンカーと呼ぶこともある。

【0167】

自壊性基は、リンカー中の遠隔部位が活性化されると、(n=0の場合には)下記に示す道筋に沿って進行して、薬物単位(すなわち、非対称PBD)の放出を可能にする:

【化13】

【0168】

ここで、星印は、薬物への結合を表し、L^*は、リンカーの残存部分の活性化された形態であり、放出された薬物単位は示されていない。これらの基は、活性化部位を薬物から分離する利点を有する。

【0169】

別の実施形態において、-C(=O)O-及びL²は、一緒になって、次式から選択される基を形成する:

【化14】

【0170】

ここで、星印、波線、Y、及びnは前に定義した通りである。各フェニレン環は、本明細書に記載のような一つ、二つ又は三つの置換基で置換されていてもよい。一実施形態において、Y置換基を有するフェニレン環は、置換されていてもよく、Y置換基を有さないフェニレン環は非置換である。

【0171】

別の実施形態において、-C(=O)O-及びL²は、一緒になって、次式から選択される基を形成する:

【化15】

【0172】

ここで、星印、波線、Y、及びnは前に定義した通りであり、Eは、O、S又はNRであり、Dは、N、CH又はCRであり、Fは、N、CH又はCRである。

【0173】

一実施形態において、DはNである。

【0174】

一実施形態において、DはCHである。

【0175】

一実施形態において、EはO又はSである。

【0176】

一実施形態において、FはCHである。

【0177】

好ましい実施形態において、L¹とL²との間の共有結合は、カテプシンに不安定(例えば、開裂可能)な結合である。

【0178】

一実施形態において、L¹はジペプチドを含む。ジペプチド中のアミノ酸は、天然アミノ酸と非天然アミノ酸との任意の組合せでよい。一部の実施形態において、ジペプチドは、天然アミノ酸を含む。リンカーがカテプシンに不安定なリンカーである場合、ジペプチドは、カテプシン介在性開裂の作用部位である。それゆえ、ジペプチドは、カテプシンにとっての認識部位である。

【0179】

一実施形態において、ジペプチド-NH-X₁-X₂-CO-中の基-X₁-X₂-は、
-Phe-Lys-、
-Val-Ala-、
-Val-Lys-、
-Ala-Lys-、
-Val-Cit-、
-Phe-Cit-、
-Leu-Cit-、
-Ile-Cit-、
-Phe-Arg-、及び
-Trp-Cit-
から選択され、ここで、Citはシトルリンである。このようなジペプチドにおいて、-NH-はX₁のアミノ基であり、COはX₂のカルボニル基である。

【0180】

好ましくは、ジペプチド-NH-X₁-X₂-CO-中の基-X₁-X₂-は、
-Phe-Lys-、
-Val-Ala-、
-Val-Lys-、
-Ala-Lys-、及び
-Val-Cit-
から選択される。

【0181】

最も好ましくは、ジペプチド-NH-X₁-X₂-CO-中の基-X₁-X₂-は、-Phe-Lys-、-Val-Cit-、又は-Val-Ala-である。

【0182】

注目される他のジペプチドの組合せとしては、
-Gly-Gly-、
-Pro-Pro-、及び
-Val-Glu-
が挙げられる。

【0183】

参照により本明細書に組み込まれる、Dubowchikらによって発表されているものを含め、他のジペプチドの組合せを使用することもできる。

【0184】

一実施形態において、アミノ酸側鎖は、適切なら、化学的に保護される。側鎖保護基は、後で考察されるような基でよい。保護されたアミノ酸配列は、酵素によって開裂可能である。例えば、Boc側鎖で保護されたLys残基を含むジペプチド配列はカテプシンによって開裂できる。

【0185】

アミノ酸の側鎖のための保護基は、当技術分野で周知であり、Novabiochemカタログ中に記載されている。さらなる保護基戦略は、Greene及びWutsの著作、「Protective groups in Organic Synthesis」中で詳説されている。

【0186】

反応性側鎖官能基を有するそれらのアミノ酸に対して考え得る側鎖保護基を、下記に示す:
Arg: Z、Mtr、Tos;
Asn: Trt、Xan;
Asp: Bzl、t-Bu;
Cys: Acm、Bzl、Bzl-OMe、Bzl-Me、Trt;
Glu: Bzl、t-Bu;
Gln: Trt、Xan;
His: Boc、Dnp、Tos、Trt;
Lys: Boc、Z-Cl、Fmoc、Z;
Ser: Bzl、TBDMS、TBDPS;
Thr: Bz;
Trp: Boc;
Tyr: Bzl、Z、Z-Br。

【0187】

一実施形態において、-X₂-は、薬物単位に間接的に連結される。このような実施形態では、スペーサー単位L²が存在する。

【0188】

一実施形態において、ジペプチドは、自壊性基(複数可)(スペーサー単位)と組み合わせて使用される。自壊性基(複数可)は、-X₂-に連結されていてもよい。

【0189】

自壊性基が存在する場合、-X₂-は、該自壊性基に直接的に連結される。一実施形態において、-X₂-は、自壊性基の基Yに連結される。好ましくは、基-X₂-CO-は、Y(ここで、YはNHである)に連結される。

【0190】

-X₁-は、A¹に直接的に連結される。一実施形態において、-X₁-はA¹に直接的に連結される。好ましくは、基NH-X₁-(X₁のアミノ末端)は、A¹に連結される。A¹は、官能基-CO-を含むことができ、それによって-X₁-とアミド結合を形成することができる。

【0191】

一実施形態において、L¹及びL²は、-OC(=O)-と一緒になって、基-X₁-X₂-PABC-を構成する。PABC基は、薬物単位に直接的に連結される、一実施形態において、自壊性基及びジペプチドは、一緒になって、下記に示す基-Phe-Lys-PABC-を形成する:

【化16】

【0192】

ここで、星印は薬物単位への結合箇所を示し、波線は、L¹の残存部分への結合箇所、又はA¹への結合箇所を示す。好ましくは、波線はA¹への結合箇所を示す。

【0193】

別法として、自壊性基及びジペプチドは、一緒になって、下に示す基-Val-Ala-PABC-を形成する:

【化17】

【0194】

ここで、星印及び波線は前に定義した通りである。

【0195】

別の実施形態において、L¹及びL²は、-OC(=O)-と一緒になって、

【化18】

【0196】

を表し、ここで、星印は薬物単位への結合箇所を示し、波線はA¹への結合箇所を示し、Yは共有結合又は官能基であり、Eは、開裂されやすく、それによって自壊性基を活性化する基である。

【0197】

Eは、基が、例えば、光によって、又は酵素の作用によって開裂されやすいように選択される。Eは、-NO₂又はグルクロン酸(例えば、β-グルクロン酸)でよい。前者は、ニトロレダクターゼの作用に、後者はβ-グルクロニダーゼの作用に敏感である可能性がある。

【0198】

基Yは共有結合でよい。

【0199】

基Yは、
-C(=O)-
-NH-
-O-
-C(=O)NH-、
-C(=O)O-、
-NHC(=O)-、
-OC(=O)-、
-OC(=O)O-、
-NHC(=O)O-、
-OC(=O)NH-、
-NHC(=O)NH-、
-NHC(=O)NH、
C(=O)NHC(=O)-、
SO₂、及び
-S-
から選択される官能基でよい。

【0200】

基Yは、好ましくは、-NH-、-CH₂-、-O-、及び-S-である。

【0201】

一部の実施形態において、L¹及びL²は、-OC(=O)-と一緒になって、

【化19】

【0202】

を表し:ここで、星印は薬物単位への結合箇所を示し、波線はAへの結合箇所を示し、Yは共有結合又は官能基であり、Eはグルクロン酸(例えば、β-グルクロン酸)である。Yは、好ましくは-NH-から選択される官能基である。

【0203】

一部の実施形態において、L¹及びL²は、一緒になって、

【化20】

【0204】

を表し、ここで、星印は、L²の残部又は薬物単位への結合箇所を示し、波線はA¹への結合箇所を示し、Yは共有結合又は官能基であり、Eはグルクロン酸(例えば、β-グルクロン酸)である。Yは、好ましくは-NH-、-CH₂-、-O-及び-S-から選択される官能基である。

【0205】

一部のさらなる実施形態において、Yは前に示したような官能基であり、該官能基はアミノ酸に連結されており、該アミノ酸はストレッチ単位A¹に連結されている。一部の実施形態において、アミノ酸はβ-アラニンである。このような実施形態において、アミノ酸はストレッチ単位の一部と等価と考えられる。

【0206】

特異性単位L¹とリガンド単位とは、ストレッチ単位を介して間接的に連結されている。

【0207】

L¹及びL²は、
-C(=O)NH-、
-C(=O)O-、
-NHC(=O)-、
-OC(=O)-、
-OC(=O)O-、
-NHC(=O)O-、
-OC(=O)NH-、及び
-NHC(=O)NH-
から選択される結合によって連結されていてもよい。

【0208】

一実施形態において、基A¹は、

【化21】

【0209】

であり、ここで、星印はL¹への結合箇所を示し、波線はリガンド単位への結合箇所を示し、nは0〜6である。一実施形態において、nは5である。

【0210】

一実施形態において、基A¹は、

【化22】

【0211】

であり、ここで、星印はL¹への結合箇所を示し、波線はリガンド単位への結合箇所を示し、nは0〜6である。一実施形態において、nは5である。

【0212】

一実施形態において、基A¹は、

【化23】

【0213】

であり、ここで、星印はL¹への結合箇所を示し、波線はリガンド単位への結合箇所を示し、nは0又は1であり、mは0〜30である。好ましい実施形態において、nは1であり、mは0〜10、1〜8、好ましくは4〜8、最も好ましくは4又は8である。

【0214】

一実施形態において、基A¹は、

【化24】

【0215】

であり、ここで、星印はL¹への結合箇所を示し、波線はリガンド単位への結合箇所を示し、nは0又は1であり、mは0〜30である。好ましい実施形態において、nは1であり、mは0〜10、1〜8、好ましくは4〜8、最も好ましくは4又は8である。

【0216】

一実施形態において、基A¹は、

【化25】

【0217】

であり、ここで、星印はL¹への結合箇所を示し、波線はリガンド単位への結合箇所を示し、nは0〜6である。一実施形態において、nは5である。

【0218】

一実施形態において、基A¹は、

【化26】

【0219】

であり、ここで、星印はL¹への結合箇所を示し、波線はリガンド単位への結合箇所を示し、nは0〜6である。一実施形態において、nは5である。

【0220】

一実施形態において、基A¹は、

【化27】

【0221】

であり、ここで、星印はL¹への結合箇所を示し、波線はリガンド単位への結合箇所を示し、nは0又は1であり、mは0〜30である。好ましい実施形態において、nは1であり、mは0〜10、1〜8、好ましくは4〜8、最も好ましくは4又は8である。

【0222】

一実施形態において、基A¹は、

【化28】

【0223】

であり、ここで、星印はL¹への結合箇所を示し、波線はリガンド単位への結合箇所を示し、nは0又は1であり、mは0〜30である。好ましい実施形態において、nは1であり、mは0〜10、1〜8、好ましくは4〜8、最も好ましくは4又は8である。

【0224】

一実施形態において、リガンド単位とA¹との間の連結は、リガンド単位のチオール残基及びA¹のマレイミド基を介して存在する。

【0225】

一実施形態において、リガンド単位とA¹との間の連結は、

【化29】

【0226】

であり、ここで、星印は、A¹の残存部分、L¹、L²又はDへの結合箇所を示し、波線はリガンド単位の残存部分への結合箇所を示す。この実施形態において、S原子は、典型的には、リガンド単位に由来する。

【0227】

上記実施形態のそれぞれにおいて、下記で示されるマレイミドに由来する基:

【化30】

【0228】

(ここで、波線は、前記のようにリガンド単位への結合箇所を示し、星印は、A¹基の残存部分への、又はL¹、L²若しくはDへの結合を示す)の代わりに、別の官能基を使用することができる。

【0229】

一実施形態において、マレイミドに由来する基は、基

【化31】

【0230】

(ここで、波線はリガンド単位への結合箇所を示し、星印は、A¹基の残存部分への、又はL¹、L²若しくはDへの結合を示す)で置き換えられる。

【0231】

一実施形態において、マレイミドに由来する基は、リガンド単位(例えば、細胞結合剤)と場合によっては一緒になって、
-C(=O)NH-、
-C(=O)O-、
-NHC(=O)-、
-OC(=O)-、
-OC(=O)O-、
-NHC(=O)O-、
-OC(=O)NH-、
-NHC(=O)NH-、
-NHC(=O)NH、
-C(=O)NHC(=O)-、
-S-、
-S-S-、
-CH₂C(=O)-、
-C(=O)CH₂-、
=N-NH-、及び
-NH-N=
から選択される基で置き換えられる。

【0232】

一実施形態において、マレイミドに由来する基は、リガンド単位と場合によっては一緒になって、

【化32】

【0233】

(ここで、波線は、リガンド単位への結合箇所、又はA¹基の残存部分への結合を示し、星印は、リガンド単位への他方の結合箇所、又はA¹基の残存部分への結合を示す)から選択される基で置き換えられる。

【0234】

L¹を細胞結合剤に連結するのに適した他の基は、国際公開第2005/082023号に記載されている。

【0235】

一実施形態では、ストレッチ単位A¹が存在し、特異性単位L¹が存在し、且つスペーサー単位L²が存在しない。したがって、L¹及び薬物単位は、結合を介して直接的に連結されている。すなわち、この実施形態で、L²は結合である。

【0236】

L¹及びDは、
-C(=O)NH-、
-C(=O)O-、
-NHC(=O)-、
-OC(=O)-、
-OC(=O)O-、
-NHC(=O)O-、
-OC(=O)NH-、及び
-NHC(=O)NH-
から選択される結合によって連結されていてもよい。

【0237】

一実施形態において、L¹及びDは、
-C(=O)NH-、及び
-NHC(=O)-
から選択される結合によって好ましくは連結されている。

【0238】

一実施形態において、L¹はジペプチドを含み、該ジペプチドの一端はDに連結されている。前に説明したように、ジペプチド中のアミノ酸は、天然アミノ酸と非天然アミノ酸との任意の組合せでよい。一部の実施形態において、ジペプチドは、天然アミノ酸を含む。リンカーがカテプシンに不安定なリンカーである場合、ジペプチドは、カテプシン介在性開裂の作用部位である。それゆえ、ジペプチドは、カテプシンにとっての認識部位である。

【0239】

一実施形態において、ジペプチド-NH-X₁-X₂-CO-中の基-X₁-X₂-は、
-Phe-Lys-、
-Val-Ala-、
-Val-Lys-、
-Ala-Lys-、
-Val-Cit-、
-Phe-Cit-、
-Leu-Cit-、
-Ile-Cit-、
-Phe-Arg-、及び
-Trp-Cit-
から選択され、ここで、Citはシトルリンである。このようなジペプチドにおいて、-NH-はX₁のアミノ基であり、COはX₂のカルボニル基である。

【0240】

好ましくは、ジペプチド-NH-X₁-X₂-CO-中の基-X₁-X₂-は、
-Phe-Lys-、
-Val-Ala-、
-Val-Lys-、
-Ala-Lys-、及び
-Val-Cit-
から選択される。

【0241】

最も好ましくは、ジペプチド-NH-X₁-X₂-CO-中の基-X₁-X₂-は、-Phe-Lys-又は-Val-Ala-である。

【0242】

ジペプチドの他の注目の組合せとしては、
-Gly-Gly-、
-Pro-Pro-、及び
-Val-Glu-
が挙げられる。

【0243】

上記の組合せを含め、他のジペプチドの組合せを使用することができる。

【0244】

一実施形態において、L¹-Dは、

【化33】

【0245】

であり、ここで、-NH-X₁-X₂-COはジペプチドであり、-NH-は薬物単位の一部であり、星印は、薬物単位の残部への結合箇所を示し、波線は、L¹の残部への結合箇所、又はA¹への結合箇所を示す。好ましくは、波線はA¹への結合箇所を示す。

【0246】

一実施形態において、ジペプチドはバリン-アラニンであり、L¹-Dは、

【化34】

【0247】

であり、ここで、星印、-NH-及び波線は、前に定義した通りである。

【0248】

一実施形態において、ジペプチドはフェニルアラニン-リシンであり、L¹-Dは、

【化35】

【0249】

であり、ここで、星印、-NH-及び波線は、前に定義した通りである。

【0250】

一実施形態において、ジペプチドはバリン-シトルリンである。

【0251】

一実施形態において、基A¹-L¹は、

【化36】

【0252】

であり、ここで、星印はL²又はDへの結合箇所を示し、波線はリガンド単位への結合箇所を示し、nは0〜6である。一実施形態において、nは5である。

【0253】

一実施形態において、基A¹-L¹は、

【化37】

【0254】

であり、ここで、星印はDへの結合箇所を示し、波線はリガンド単位への結合箇所を示し、nは0〜6である。一実施形態において、nは5である。

【0255】

一実施形態において、基A¹-L¹は、

【化38】

【0256】

であり、ここで、星印はDへの結合箇所を示し、波線はリガンド単位への結合箇所を示し、nは0又は1であり、mは0〜30である。好ましい実施形態において、nは1であり、mは0〜10、1〜8、好ましくは4〜8、最も好ましくは4又は8である。

【0257】

一実施形態において、基A¹-L¹は、

【化39】

【0258】

であり、ここで、星印はDへの結合箇所を示し、波線はリガンド単位への結合箇所を示し、nは0又は1であり、mは0〜30である。好ましい実施形態において、nは1であり、mは0〜10、1〜7、好ましくは3〜7、最も好ましくは3又は7である。

【0259】

一実施形態において、基A¹-L¹は、

【化40】

【0260】

であり、ここで、星印はL²又はDへの結合箇所を示し、波線はリガンド単位への結合箇所を示し、nは0〜6である。一実施形態において、nは5である。

【0261】

一実施形態において、基A¹-L¹は、

【化41】

【0262】

であり、ここで、星印はL²又はDへの結合箇所を示し、波線はリガンド単位への結合箇所を示し、nは0〜6である。一実施形態において、nは5である。

【0263】

一実施形態において、基A¹-L¹は、

【化42】

【0264】

であり、ここで、星印はL²又はDへの結合箇所を示し、波線はリガンド単位への結合箇所を示し、nは0又は1であり、mは0〜30である。好ましい実施形態において、nは1であり、mは0〜10、1〜8、好ましくは4〜8、最も好ましくは4又は8である。

【0265】

一実施形態において、基A¹-L¹は、

【化43】

【0266】

であり、ここで、星印はL²又はDへの結合箇所を示し、波線はリガンド単位への結合箇所を示し、nは0又は1であり、mは0〜30である。好ましい実施形態において、nは1であり、mは0〜10、1〜8、好ましくは4〜8、最も好ましくは4又は8である。

【0267】

一実施形態において、基L-A¹-L¹-は、

【化44】

【0268】

であり、ここで、星印はDへの結合箇所を示し、Sはリガンド単位の硫黄基であり、波線は、リガンド単位の残部への結合箇所を示し、nは0〜6である。一実施形態においてnは5である。

【0269】

一実施形態において、基L-A¹-L¹は、

【化45】

【0270】

であり、ここで、星印はDへの結合箇所を示し、Sはリガンド単位の硫黄基であり、波線は、リガンド単位の残部への結合箇所を示し、nは0〜6である。一実施形態においてnは5である。

【0271】

一実施形態において、基L-A¹-L¹は、

【化46】

【0272】

であり、ここで、星印はDへの結合箇所を示し、Sはリガンド単位の硫黄基であり、波線は、リガンド単位の残部への結合箇所を示し、nは0又は1であり、mは0〜30である。好ましい実施形態において、nは1であり、mは0〜10、1〜8、好ましくは4〜8、最も好ましくは4又は8である。

【0273】

一実施形態において、基L-A¹-L¹は、

【化47】

【0274】

であり、ここで、星印はDへの結合箇所を示し、波線は、リガンド単位の結合箇所を示し、nは0又は1であり、mは0〜30である。好ましい実施形態において、nは1であり、mは0〜10、1〜7、好ましくは4〜8、最も好ましくは4又は8である。

【0275】

一実施形態において、基L-A¹-L¹は、

【化48】

【0276】

であり、ここで、星印はL²又はDへの結合箇所を示し、波線は、リガンド単位の残部への結合箇所を示し、nは0〜6である。一実施形態においてnは5である。

【0277】

一実施形態において、基L-A¹-L¹は、

【化49】

【0278】

であり、ここで、星印はL²又はDへの結合箇所を示し、波線は、リガンド単位の残部への結合箇所を示し、nは0〜6である。一実施形態においてnは5である。

【0279】

一実施形態において、基L-A¹-L¹は、

【化50】

【0280】

であり、ここで、星印はL²又はDへの結合箇所を示し、波線は、リガンド単位の残部への結合箇所を示し、nは0又は1であり、mは0〜30である。好ましい実施形態において、nは1であり、mは0〜10、1〜8、好ましくは4〜8、最も好ましくは4又は8である。

【0281】

一実施形態において、基L-A¹-L¹は、

【化51】

【0282】

であり、ここで、星印はL²又はDへの結合箇所を示し、波線は、リガンド単位の残部への結合箇所を示し、nは0又は1であり、mは0〜30である。好ましい実施形態において、nは1であり、mは0〜10、1〜8、好ましくは4〜8、最も好ましくは4又は8である。

【0283】

一実施形態において、ストレッチ単位は、次式:

【化52】

【0284】

を有するアセトアミド単位であり、ここで、星印は、ストレッチ単位の残部、L¹又はDへの結合箇所を示し、波線はリガンド単位への結合箇所を示す。

【0285】

他の実施形態において、リンカー-薬物化合物は、リガンド単位へのコンジュゲートのために提供される。一実施形態において、リンカー-薬物化合物は、細胞結合剤への連結のために設計される。

【0286】

一実施形態において、薬物-リンカー化合物は、次式:

【化53】

【0287】

を有し、ここで、星印は薬物単位への結合箇所を示し、G¹は、リガンド単位への連結を形成するためのストレッチ基(A¹)であり、L¹は特異性単位であり、L²(スペーサー単位)は、共有結合であるか、又は-OC(=O)-と一緒になって、自壊性基(複数可)を形成している。

【0288】

別の実施形態において、薬物-リンカー化合物は、次式:
G¹-L¹-L²-*
を有し、ここで、星印は薬物単位への結合箇所を示し、G¹は、リガンド単位への連結を形成するためのストレッチ基(A¹)であり、L¹は特異性単位であり、L²(スペーサー単位)は、共有結合又は自壊性基(複数可)である。

【0289】

L¹及びL²は前に定義した通りである。A¹への連結に対する言及は、G¹への連結を指すとここでは解釈することができる。

【0290】

一実施形態において、L¹がアミノ酸を含む場合、そのアミノ酸の側鎖を保護することができる。任意の適切な保護基を使用することができる。一実施形態において、側鎖保護基は、化合物中の(存在する場合)他の保護基と共に除去可能である。他の実施形態において、保護基は、分子中の(存在する場合)他の保護基に対して直交している可能性がある。

【0291】

アミノ酸側鎖に適した保護基としては、Novabiochemカタログ2006/2007中に記載の基が挙げられる。カテプシンに不安定なリンカー中で使用するための保護基は、Dubowchikらの著作中でも考察されている。

【0292】

本発明の特定の実施形態において、基L¹は、Lysアミノ酸残基を含む。このアミノ酸の側鎖は、Boc又はAlloc保護基で保護することができる。Boc保護基が最も好ましい。

【0293】

官能基G¹は、リガンド単位(例えば、細胞結合剤)との反応で連結形成基を形成する。

【0294】

一実施形態において、官能基G¹は、リガンド単位上の適切な基との反応のための、アミノ、カルボン酸、ヒドロキシ、チオール、又はマレイミド基であるか、又はそれらを含む。好ましい実施形態において、G¹はマレイミド基を含む。

【0295】

一実施形態において、基G¹はアルキルマレイミド基である。この基は、細胞結合剤中に存在する、例えば、抗体中に存在する、チオール基、特にシステインのチオール基との反応に適している。

【0296】

一実施形態において、基G¹は、

【化54】

【0297】

であり、ここで、星印はL¹、L²又はDへの結合箇所を示し、nは0〜6である。一実施形態において、nは5である。

【0298】

一実施形態において、基G¹は、

【化55】

【0299】

であり、ここで、星印はL¹、L²又はDへの結合箇所を示し、nは0〜6である。一実施形態において、nは5である。

【0300】

一実施形態において、基G¹は、

【化56】

【0301】

であり、ここで、星印はL¹への結合箇所を示し、nは0又は1であり、mは0〜30である。好ましい実施形態において、nは1であり、mは0〜10、1〜2、好ましくは4〜8、及び最も好ましくは4又は8である。

【0302】

一実施形態において、基G¹は、

【化57】

【0303】

であり、ここで、星印はL¹への結合箇所を示し、nは0又は1であり、mは0〜30である。好ましい実施形態において、nは1であり、mは0〜10、1〜8、好ましくは4〜8、及び最も好ましくは4又は8である。

【0304】

一実施形態において、基G¹は、

【化58】

【0305】

であり、ここで、星印はL¹、L²又はDへの結合箇所を示し、nは0〜6である。一実施形態において、nは5である。

【0306】

一実施形態において、基G¹は、

【化59】

【0307】

であり、ここで、星印はL¹、L²又はDへの結合箇所を示し、nは0〜6である。一実施形態において、nは5である。

【0308】

一実施形態において、基G¹は、

【化60】

【0309】

であり、ここで、星印はL¹への結合箇所を示し、nは0又は1であり、mは0〜30である。好ましい実施形態において、nは1であり、mは0〜10、1〜2、好ましくは4〜8、及び最も好ましくは4又は8である。

【0310】

一実施形態において、基G¹は、

【化61】

【0311】

であり、ここで、星印はL¹への結合箇所を示し、nは0又は1であり、mは0〜30である。好ましい実施形態において、nは1であり、mは0〜10、1〜8、好ましくは4〜8、及び最も好ましくは4又は8である。

【0312】

前記実施形態のそれぞれにおいて、下記に示すマレイミド基:

【化62】

【0313】

(ここで、星印はG基の残部への結合を示す)に代わって、別の官能基を使用することができる。

【0314】

一実施形態において、マレイミドに由来する基は、基:

【化63】

【0315】

(ここで、星印はG基の残部への結合を示す)で置き換えられる。

【0316】

一実施形態において、マレイミド基は、
-C(=O)OH、
-OH、
-NH₂、
-SH、
-C(=O)CH₂X(ここで、XはCl、Br又はIである)、
-CHO、
-NHNH₂、
-C≡CH、及び
-N₃(アジド)
から選択される基で置き換えられる。

【0317】

一実施形態では、L¹が存在し、G¹は、-NH₂、-NHMe、-COOH、-OH又は-SHである。

【0318】

一実施形態で、L¹が存在する場合、G¹は、-NH₂又は-NHMeである。どちらかの基は、L¹アミノ酸配列のN-末端でよい。

【0319】

一実施形態では、L¹が存在し、G¹は-NH₂であり、L¹は前に定義したようなアミノ酸配列-X₁-X₂-である。

【0320】

一実施形態では、L¹が存在し、G₁はCOOHである。この基は、L¹アミノ酸配列のC-末端でよい。

【0321】

一実施形態では、L¹が存在し、G¹はOHである。

【0322】

一実施形態では、L¹が存在し、G¹はSHである。

【0323】

基G¹は、一つの官能基から別のものに変換することができる。一実施形態では、L¹が存在し、G¹は-NH₂である。この基は、マレイミド基を含む別の基G¹へ変換することができる。例えば、基-NH₂を、前の示したマレイミドを含むG¹基の酸又は活性化された酸(例えば、N-スクシンイミド形態)と反応させることができる。

【0324】

したがって、基G¹を、リガンド単位との反応により適している官能基に変換することができる。

【0325】

前に示したように、一実施形態では、L¹が存在し、G¹は、-NH₂、-NHMe、-COOH、-OH又は-SHである。さらなる実施形態において、これらの基は、化学的に保護された形態で提供される。したがって、化学的に保護された形態は、官能基を伴って提供されるリンカーに対する前駆体である。

【0326】

一実施形態において、G¹は、化学的に保護された形態の-NH₂である。該基はカーバメート保護基で保護することができる。カーバメート保護基は、
Alloc、Fmoc、Boc、Troc、Teoc、Cbz及びPNZ
からなる群から選択することができる。

【0327】

好ましくは、G¹が-NH₂である場合は、それは、Alloc又はFmoc基で保護される。

【0328】

一実施形態において、G¹が-NH₂である場合は、それはFmoc基で保護される。

【0329】

一実施形態において、保護基は、キャッピング基のカーバメート保護基と同一である。

【0330】

一実施形態において、保護基は、キャッピング基のカーバメート保護基と同一でない。この実施形態では、キャッピング基のカーバメート保護基を除去しない条件下で、保護基を除去できることが好ましい。

【0331】

化学保護基を除去して、リガンド単位への連結を形成するための官能基を提供することができる。任意で、次いで、この官能基を前記のように別の官能基に変換することができる。

【0332】

一実施形態において、活性基はアミンである。このアミンは、好ましくは、ペプチドのN-末端アミンであり、本発明の好ましいジペプチドのN-末端アミンでよい。

【0333】

活性基を反応させて、リガンド単位への連結を形成することを意図した官能基をもたらすことができる。

【0334】

他の実施形態において、リンカー単位は、活性基を有するリンカー単位の前駆体である。この実施形態において、該リンカー単位は、保護基を用いて保護される活性基を含む。該保護基を除去して、活性基を有するリンカー単位を提供することができる。

【0335】

活性基がアミンである場合は、保護基は、Green及びWutsの著作中に記載のようなアミン保護基でよい。

【0336】

保護基は、好ましくは、リンカー単位中の(存在する場合)他の保護基に対して直交している。

【0337】

一実施形態において、保護基は、キャッピング基に対して直交している。したがって、キャッピング基を維持しながら、活性基の保護基を除去することができる。他の実施形態では、保護基及びキャッピング基を、キャッピング基を除去するのに使用されるものと同一条件下で、除去することができる。

【0338】

一実施形態において、リンカー単位は、

【化64】

【0339】

であり、ここで、星印は薬物単位への結合箇所を示し、波線は、適用可能な場合のリンカー単位の残部への結合箇所、又はG¹への結合箇所を示す。好ましくは、波線はG¹への結合箇所を示す。

【0340】

一実施形態において、リンカー単位は、

【化65】

【0341】

であり、ここで、星印及び波線は前に定義した通りである。

【0342】

L¹と細胞結合剤との間の連結を形成するのに使用するのに適した他の官能基は、国際公開第2005/082023号中に記載されている。

【0343】

リガンド単位
リガンド単位は、任意の種類でよく、標的分子に特異的に結合するタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、及び非ペプチド系薬剤が挙げられる。一部の実施形態において、リガンド単位は、タンパク質、ポリペプチド又はペプチドでよい、一部の実施形態において、リガンド単位は環状ポリペプチドでよい。これらのリガンド単位は、抗体、又は少なくとも一つの標的分子結合性部位を含む抗体のフラグメント、リンフォカイン、ホルモン、増殖因子、又は標的に特異的に結合できる任意の他の細胞結合性分子若しくは物質を含むことができる。

【0344】

リガンド単位の例には、本明細書に組み込まれる、国際公開第2007/085930号中で使用に関して記載されている薬剤が含まれる。

【0345】

一部の実施形態において、リガンド単位は、細胞上の細胞外標的に結合する細胞結合剤である。このような細胞結合剤は、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド及び非ペプチド系薬剤でよい。一部の実施形態において、細胞結合剤は、タンパク質、ポリペプチド又はペプチドでよい。一部の実施形態において、細胞結合剤は、環状ポリペプチドでよい。細胞結合剤は、また、抗体又は抗体の抗原結合性フラグメントでよい。したがって、一実施形態において、本発明は、抗体-薬物コンジュゲート(ADC)を提供する。

【0346】

一実施形態において、抗体は、モノクロナール抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、又は単鎖抗体である。一実施形態において、抗体は、生物学的活性を有するこれらの抗体の一つのフラグメントである。このようなフラグメントの例には、Fab、Fab'、F(ab')₂、及びFvフラグメントが含まれる。

【0347】

抗体は、二重特異性抗体、ドメイン抗体(DAB)、又は単鎖抗体でよい。

【0348】

一実施形態において、抗体は、モノクロナール抗体である。

【0349】

本発明で使用するための抗体としては、本明細書に組み込まれる国際公開第2005/082023号中に記載の抗体が挙げられる。とりわけ好ましいのは、腫瘍関連抗原に対する抗体である。当技術分野で公知のそれらの抗原の例には、限定はされないが、国際公開第2005/082023号中に示されたそれらの腫瘍関連抗原が含まれる。例えば、41〜55頁を参照されたい。

【0350】

一部の実施形態において、コンジュゲートは、それらの細胞表面抗原を介して腫瘍細胞を標的にするように設計される。該抗原は、過剰に発現している、又は異常な時期又は細胞型に発現している細胞表面抗原でよい。好ましくは、標的抗原は、増殖性細胞(好ましくは腫瘍細胞)上のみに発現されるが、実際に観察されるのはまれである。結果として、標的抗原は、通常、増殖性組織と健常組織との間での示差的発現に基づいて選択される。

【0351】

抗体は、
Cripto、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、糖タンパク質NMB、CanAg、Her2(ErbB2/Neu)、CD56(NCAM)、CD70、CD79、CD138、PSCA、PSMA(前立腺特異的膜抗原)、BCMA、E-セレクチン、EphB2、メラノトランスフェリン、Muc16、及びTMEFF2
を含む特定の腫瘍関連抗原を標的にするよう育成された。

【0352】

リガンド単位はリンカー単位に連結される。一実施形態において、リガンド単位は、リンカー単位の(存在する場合)Aに連結される。

【0353】

一実施形態において、リガンド単位とリンカー単位との間の連結は、チオエーテル結合を介する。

【0354】

一実施形態において、リガンド単位とリンカー単位との間の連結は、ジスルフィド結合を介する。

【0355】

一実施形態において、リガンド単位とリンカー単位との間の連結は、アミド結合を介する。

【0356】

一実施形態において、リガンド単位とリンカー単位との間の連結は、エステル結合を介する。

【0357】

一実施形態において、リガンド単位とリンカーとの間の連結は、リガンド単位のシステイン残基のチオール基とリンカー単位のマレイミド基との間で形成される。

【0358】

リガンド単位のシステイン残基は、連結を形成するための、リンカー単位の官能基との反応に利用できる。他の実施形態において、例えば、リガンド単位が抗体である場合は、抗体のチオール基は、鎖間ジスルフィド結合に参加することができる。これらの鎖間結合は、例えば、抗体を、リンカー単位の官能基との反応に先立ってDTTで処理することによって、遊離チオール基に変換することができる。

【0359】

一部の実施形態において、システイン残基は、抗体の重鎖又は軽鎖中に導入されている。抗体の重鎖又は軽鎖中での置換によるシステイン挿入の位置には、本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第2007/0092940号及び国際公開第2008/070593号に記載のものが含まれる。

【0360】

治療の方法
本発明のコンジュゲートは、治療の方法で、用いられ得る。治療を必要としている対象に式Ｉで表されるコンジュゲートの治療有効量を投与することを含む、治療の方法も提供される。用語「治療有効量」とは、患者に恩恵が見られるのに十分な量である。そのような恩恵は、少なくとも１つの症状が少なくとも改善することであり得る。投与されるコンジュゲートの実際の量、及び投与の頻度と時間過程は、何が治療されているかの実体と深刻度によって決まるものである。治療の処方箋（例えば投薬量に関する決定）は、医師及び他の医療専門家の責任の範囲内にある。

【0361】

一部の実施形態において、コンジュゲートの投与量は、1回の投与当たり約0.01〜約10mg/kgの範囲にある。一部の実施形態において、コンジュゲートの投与量は、1回の投与当たり約0.01〜約5mg/kgの範囲にある。一部の実施形態において、コンジュゲートの投与量は、1回の投与当たり約0.05〜約5mg/kgの範囲にある。一部の実施形態において、コンジュゲートの投与量は、1回の投与当たり約0.1〜約5mg/kgの範囲にある。一部の実施形態において、コンジュゲートの投与量は、1回の投与当たり約0.1〜約4mg/kgの範囲にある。一部の実施形態において、コンジュゲートの投与量は、1回の投与当たり約0.05〜約3mg/kgの範囲にある。一部の実施形態において、コンジュゲートの投与量は、1回の投与当たり約0.1〜約3mg/kgの範囲にある。一部の実施形態において、コンジュゲートの投与量は、1回の投与当たり約0.1〜約2mg/kgの範囲にある。一部の実施形態において、コンジュゲートの投与量は、1回の投与当たり約0.01〜約1mg/kgの範囲にある。

【0362】

治療されるべき病態に応じて、コンジュゲートは単独で投与され得るし、また、他の処置との組み合わせで、同時か順次に投与され得る。処置及び療法の例としては、限定するものではないが、化学療法（例えば薬物を含めた、活性剤を投与すること）；手術；及び放射線療法；が挙げられる。

【0363】

本発明による（及び本発明に従って使用されるための）医薬組成物は、活性成分（すなわち式Ｉで表されるコンジュゲート）に加えて、薬学的に許容される賦形剤、担体、緩衝剤、安定剤他、当業者にはよく知られている他の物質を含み得る。そのような物質は、非毒性であるべきであって、この活性成分の有効性を妨害するものであってはならない。この担体又は他の物質の正確な中身は、投与の経路によって決まるものであり、この投与経路は、経口、あるいは注射によるもの、例えば皮膚、皮下、又は静脈内であり得る。

【0364】

経口投与用の医薬組成物は、タブレット、カプセル、粉末又は液体形態であり得る。タブレットは、固体担体又はアジュバントを含み得る。液体医薬組成物は、一般的には、液体担体、例えば、水、鉱油、動物油、植物油、ミネラルオイル又は合成油を含んでいる。生理食塩水溶液、デキストロース又は他のサッカリド溶液あるいはグリコール例えばエチレングリコール、プロピレングリコール又はポリエチレングリコールも含まれ得る。カプセル剤は、ゼラチンのような固体担体を含み得る。

【0365】

静脈内、皮膚又は皮下注射（又は患っている部位における注射）には、この活性成分は、パイロジェンを含まない、適するｐＨ、等張性及び安定性を有している、非経口として許容される水溶液の形態にあるものである。当業者なら、例えば、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、乳酸加リンゲル注射液のような等張性ビヒクルを用いて、適する溶液を調製することが十分できるものである。必要に応じて、防腐剤、安定剤、緩衝剤、酸化防止剤及び／又は他の添加剤が含まれ得る。

【0366】

他の形態も含まれる
特に断らない限り、上記には、そのような各置換基のよく知られているイオン、塩、溶媒和、及びプロトン化形態も含まれる。例えば、カルボン酸（−ＣＯＯＨ）への言及には、そのアニオン（カルボキシラート）形態（−ＣＯＯ⁻）、これの塩又は溶媒和物、並びに通常の保護形態も含まれる。同様に、アミノ基への言及には、その保護形態（−Ｎ^＋ＨＲ^１Ｒ^２）、そのアミノ基の塩又は溶媒和物（例えば、塩酸塩）並びにアミノ基の通常の保護形態が含まれる。同様に、ヒドロキシル基への言及には、そのアニオン形態（−Ｏ⁻）、この塩又は溶媒和物、並びに通常の保護形態も含まれる。

【0367】

塩
この活性化合物（コンジュゲート）の対応する塩、例えば、薬学的に許容される塩を調製、精製、及び／又は取り扱うのが都合よい又は望ましいことであり得る。薬学的に許容される塩の例は、Berge, et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977)に論じられている。

【0368】

例えば、この化合物がアニオンである場合、又はアニオンになり得る官能基を有している（例えば−ＣＯＯＨは−ＣＯＯ⁻になり得る）場合は、適するカチオンと塩が形成され得る。適する無機カチオンの例としては、限定するものではないが、アルカリ金属イオン例えばＮａ^＋及びＫ^＋、アルカリ土類カチオン、例えばＣａ^２＋及びＭｇ^２＋、及び他のカチオン、例えばＡｌ^＋３が挙げられる。適する有機カチオンの例としては、限定するものではないが、アンモニウムイオン（すなわちＮＨ_４^＋）及び置換されたアンモニウムイオン（例えばＮＨ_３Ｒ^＋、ＮＨ_２Ｒ_２^＋、ＮＨＲ_３^＋、ＮＲ_４^＋）が挙げられる。いくつかの適する置換されたアンモニウムイオンの例は、エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロへキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン、及びトロメタミン、並びにアミノ酸（例えばリシン及びアルギニン）から誘導されるアンモニウムイオンである。一般的な四級アンモニウムイオンの例は、Ｎ（ＣＨ_３）_４^＋である。

【0369】

このコンジュゲートがカチオンである場合、又はカチオンになり得る官能基を有している（例えば−ＮＨ_２は、−ＮＨ_３^＋になり得る）場合は、適するアニオンと塩が形成され得る。適する無機アニオンの例としては、限定するものではないが、以下の無機酸：塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、亜硫酸、硝酸、亜硝酸、リン酸、及び亜リン酸から誘導されるアニオンが挙げられる。

【0370】

適する有機アニオンの例としては、限定するものではないが、以下の有機酸：２−アセチオキシ安息香酸、酢酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、安息香酸、ショウノウスルホン酸、ケイ皮酸、クエン酸、エデト酸、エタンジスルホン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルケプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシマレイン酸、ヒドロキシナフタレンカルボン酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、粘液酸、オレイン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、フェニルスルホン酸、プロピオン酸、ピルビン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、スルファニル酸、酒石酸、トルエンスルホン酸、及び吉草酸から誘導されるアニオンが挙げられる。適する高分子有機アニオンの例としては、限定するものではないが、以下の高分子酸：タンニン酸、カルボキシメチルセルロース、から誘導されるアニオンが挙げられる。

【0371】

溶媒和物
このコンジュゲートの対応する溶媒和物を調製、精製、及び／又は取り扱うのが都合よい又は望ましいことであり得る。用語「溶媒和物」は、本明細書では、溶質（例えば活性コンジュゲート、活性コンジュゲートの塩）と溶媒の複合体を言うのに通常の意味で使われている。溶媒が水である場合は、溶媒和物は、簡便に、水和物、例えば、一水和物、二水和物、三水和物、他、と呼ばれる。

【0372】

カルビノールアミン
本発明には、このＰＢＤ部分構造のイミン結合に沿って溶媒が付加しているコンジュゲートが含まれ、これはＰＢＤ単量体について以下に図説されており、この場合、溶媒は水又はアルコール（Ｒ^ＡＯＨ、ここでＲ^Ａは、Ｃ_１〜４アルキルである）である：

【化66】

【0373】

これらの形態は、このＰＢＤのカルビノールアミン形態及びカルビノールアミンエーテル形態と呼ばれ得る。これらの平衡の均衡は、化合物が存在している条件、並びにその部分構造それ自体の特質によって左右される。

【0374】

このような特定の化合物は、例えば、凍結乾燥により、固体形態で単離され得る。

【0375】

異性体
一部の化合物は、限定するものではないが、シス形及びトランス形；Ｅ形及びＺ形；ｃ形、ｔ形、及びｒ形；エンド形及びエキソ形；Ｒ形、Ｓ形、及びメソ形；Ｄ形及びＬ形；ｄ形及びｌ形；（＋）形及び（−）形；ケト形、エノール形、及びエノラート形；シン形及びアンチ形；シンクリナル形及びアンチクリナル形；α形及びβ形；アキシアル形及びエクアトリアル形；船形、椅子形、ねじれ形、封筒形、及び半椅子形；並びにこれらのものの組み合わせ；を含めた、１つ又はそれ以上の特定の幾何異性形、光学異性形、鏡像異性形、ジアステレオ異性形、エピ異性形、アトロプ異性形、立体異性形、互変異性形、配座異性形、又はアノマー異性形の形態で存在し得る（本明細書以下では、集合的に、「異性体」（又は「異性形」）と呼ぶ）。

【0376】

注記すべきこととして、互変異性形に対して以下に論述されるのを除いて、本明細書中で使われている、この用語「異性体」から特別に除外されるのが、構造（又は構成）異性体（すなわち、空間における各原子の位置が単に異なっているのではなく、原子と原子との間の連結が異なっている異性体）である。例えば、メトキシ基（−ＯＣＨ_３）への言及は、その構造異性体であるヒドロキシメチル基（−ＣＨ_２ＯＨ）への言及ととるべきでない。同様に、オルト−クロロフェニルへの言及は、その構造異性体であるメタ−クロロフェニルへの言及ととるべきでない。しかしながら、構造体の族への言及には、その族の範疇に入る構造異性形が十分含まれ得る（例えば、Ｃ_１〜７アルキルには、ｎ−プロピル及びイソ−プロピルが含まれ；ブチルには、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、及びｔｅｒｔ−ブチルが含まれ；メトキシフェニルには、オルト−メトキシフェニル、メタ−メトキシフェニル、及びパラ−メトキシフェニルが含まれる）。

【0377】

上記除外は、例えば、次のような互変体：ケト／エノール（以下に図説されている）、イミン／エナミン、アミド／イミノアルコール、アミジン／アミジン、ニトロソ／オキシム、チオケトン／エンチオール、Ｎ−ニトロソ／ヒドロキシアゾ、及びニトロ／アシニトロにおけるような、互変異性形（例えば、ケト形、エノール形、及びエノラート形）には関係しない。

【化67】

【0378】

注記すべきこととして、用語「異性体」に特別に含まれるのが、１つ又はそれ以上の同位体置換を有する化合物である。例えば、Ｈは、^１Ｈ、^２Ｈ（Ｄ）、及び^３Ｈ（Ｔ）を含めた、任意の同位体形態であり得；Ｃは、^１２Ｃ、^１３Ｃ、及び^１４Ｃを含めた、任意の同位体形態であり得；Ｏは、^１６Ｏ及び^１８Ｏを含めた、任意の同位体形態であり得る；等である。

【0379】

特に断らない限り、特定の化合物又はコンジュゲートへの言及には、このような各異性体の、その（完全又は部分）ラセミ混合物及び他の混合物も含めた、すべてが含まれる。このような異性体の調製方法（例えば不斉合成）及び分離方法（例えば分別結晶化及びクロマトグラフィー法）は、当技術分野では、知られているものであり、又は、本明細書に教示されている方法（つまり公知の方法）を、公知のやり方で、適応させることによって、容易に得られるものである。

【0380】

一般的合成経路
このＰＢＤ二量体化合物の合成は、以下の参考文献に、詳細に論述されている（その論旨は参照により本明細書に組み込む）：
ａ）国際公開第００／１２５０８（１４〜３０頁）；
ｂ）国際公開第２００５／０２３８１４号パンフレット（３〜１０頁）；
ｃ）国際公開第２００４／０４３９６３号パンフレット（２８〜２９頁）；及び
ｄ）国際公開第２００５／０８５２５１号パンフレット（３０〜３９頁）。

【0381】

合成経路
Ｒ^１０及びＲ^１１が、それらが結合されている窒素原子及び炭素原子との間に窒素−炭素二重結合を形成している、本発明のコンジュゲートは、化合物式２：

【化68】

【0382】

［ここで、Ｒ^２、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^９、Ｒ^６’、Ｒ^７’、Ｒ^９’、Ｒ^１２、Ｘ、Ｘ’及びＲ’’は、式ＩＩの化合物に対して定義されている通りであり、Ｐｒｏｔ^Ｎは、合成のための窒素保護基であり、Ｐｒｏｔ^Ｏは、合成のための保護された酸素基又はオキソ基である］で表される化合物から、イミン結合を標準的な方法により脱保護することによって合成され得る。

【0383】

この生成された化合物は、用いた溶媒に応じて、カルビノールアミン又はカルビノールアミンエーテル形態であり得る。例えば、Ｐｒｏｔ^ＮがＡｌｌｏｃであり、Ｐｒｏｔ^Ｏが合成のための酸素保護基である場合は、脱保護は、このＮ１０保護基を除去するためのパラジウムを用い、そのあと合成のためのこの酸素保護基を脱離させて行われる。Ｐｒｏｔ^ＮがＴｒｏｃであり、Ｐｒｏｔ^Ｏが合成のための酸素保護基である場合は、脱保護は、この式（Ｉ）で表される化合物を得るためのＣｄ／Ｐｂ組を用いて行われる。Ｐｒｏｔ^ＮがＳＥＭ（又は同じような基）であり、Ｐｒｏｔ^Ｏがオキソ基である場合は、このオキソ基は還元によって除去され得、これによって保護されたカルビノールアミン中間体がもたらされ、これはこのあとＳＥＭ保護基を除去するために処理され、そのあと水が脱離され得る。この化合物式２の化合物の還元は、例えば、リチウムテトラボロヒドリドで達成され得るものであり、ＳＥＭ保護基を除去するための適する手段は、シリカゲルによる処理である。

【0384】

化合物式２の化合物は、化合物式３ａ：

【化69】

【0385】

［ここで、Ｒ^２、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^９、Ｒ^６’、Ｒ^７’、Ｒ^９’、Ｘ、Ｘ’及びＲ’’は、化合物式２の化合物に対して定義されている通りである］で表される化合物から、Ｒ^１２を含んでいる有機金属誘導体（例えば有機ホウ素誘導体）をカップリングさせることによって合成され得る。この有機ホウ素誘導体は、ボロナート又はボロン酸であり得る。

【0386】

化合物式２の化合物は、化合物式３ｂ：

【化70】

【0387】

［式中、Ｒ^１２、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^９、Ｒ^６’、Ｒ^７’、Ｒ^９’、Ｘ、Ｘ’及びＲ’’は、化合物式２の化合物に対して定義されている通りである］で表される化合物から、Ｒ^２を含んでいる有機金属誘導体（例えば有機ホウ素誘導体）をカップリングさせることによって合成され得る。この有機ホウ素誘導体は、ボロナート又はボロン酸であり得る。

【0388】

化合物式３ａ及び３ｂの化合物は、式４：

【化71】

【0389】

［ここで、Ｒ^２、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^９、Ｒ^６’、Ｒ^７’、Ｒ^９’、Ｘ、Ｘ’及びＲ’’は、化合物式２の化合物に対して定義されている通りである］で表される化合物から、Ｒ^２又はＲ^１２を含んでいる有機金属誘導体（例えば有機ホウ素誘導体）の約１当量（例えば０．９又は１〜１．１又は１．２）をカップリングさせることによって合成され得る。

【0390】

上記で述べたこのカップリングは、通常、パラジウム触媒、例えばＰｄ（ＰＰｈ_３）_４、Ｐｄ（ＯＣＯＣＨ_３）_２、ＰｄＣｌ_２、又はＰｄ_２（ｄｂａ）_３の存在下に行われる。このカップリングは、標準的な条件下で行われ得るし、あるいはマイクロ波条件下でも行われ得る。

【0391】

この２つのカップリングステップは、通常、順次的に行われる。これらは、２つのステップ間に精製を行うことなく行われ得る。精製が行われない場合は、この２つのステップは、同じ反応容器中で行われ得る。この２つ目のカップリングステップの後は精製が通常必要とされる。望まれていない副生成物からのこの化合物の精製は、カラムクロマトグラフィー分離又はイオン交換分離によって行われ得る。

【0392】

Ｐｒｏｔ^Ｏがオキソ基であり、Ｐｒｏｔ^ＮがＳＥＭである化合物式４で表される化合物の合成は、国際公開第００／１２５０８号パンフレットに詳細に述べられている（この文献は参照により本明細書に組み込む）。特には、２４頁のスキーム７が参照され、そこでは上記化合物は中間体Ｐと表されている。この合成の方法は、国際公開第２００４／０４３９６３号パンフレットにも記載されている。

【0393】

Ｐｒｏｔ^Ｏが合成のために保護された酸素基である化合物式４で表される化合物の合成は、国際公開第２００５／０８５２５１号パンフレットに記載されている（この合成は参照により本明細書に組み込む）。

【0394】

Ｒ^１０及びＲ^１０’がＨであり、Ｒ^１１及びＲ^１１’がＳＯ_ｚＭである式Ｉで表される化合物は、Ｒ^１０及びＲ^１１が、それらが結合されている窒素原子及び炭素原子との間に窒素−炭素二重結合を形成している式Ｉで表される化合物から、適切な重亜硫酸水素塩又はスルフィン酸塩を加え、そのあと適切な精製工程によって、合成され得る。さらなる方法がＧＢ２０５３８９４に記載されている（これは本明細書に参照により組み込む）。

【0395】

合成のための窒素保護基
合成のための窒素保護基は当技術分野ではよく知られている。本発明では、この特定の対象の保護基はカルバマート窒素保護基及びヘミ−アミナール窒素保護基である。

【0396】

カルバマート窒素保護基は、以下の構造：

【化72】

【0397】

［式中、Ｒ^’１０は、先に定義されているＲと同じである］を有している。多数の適する基がGreene, T.W. and Wuts, G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc., 1999の５０３〜５４９頁に記載されている（これは参照により本明細書に組み込む）。

【0398】

特に好ましい保護基としては、Ｔｒｏｃ、Ｔｅｏｃ、Ｆｍｏｃ、ＢＯＣ、Ｄｏｃ、Ｈｏｃ、ＴｃＢＯＣ、１−Ａｄｏｃ及び２−Ａｄｏｃが挙げられる。

【0399】

他の可能性のある基は、ニトロベンジルオキシカルボニル（例えば４−ニトロベンジルオキシカルボニル）及び２−（フェニルスルホニル）エトキシカルボニルである。

【0400】

パラジウム触媒で除去され得るような保護基は好ましくない（例えばＡｌｌｏｃ）。

【0401】

ヘミ−アミナール窒素保護基は、以下の構造：

【化73】

【0402】

［式中、Ｒ^’１０は、先に定義されているＲと同じである］を有している。多数の適する基がGreene, T.W. and Wuts, G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc., 1999の６３３〜６４７頁に記載されている（これは参照により本明細書に組み込む）。本明細書に開示されている各基は本発明に使用するための化合物に適用され得る。そのような基の例としては、限定するものではないが、ＳＥＭ、ＭＯＭ、ＭＴＭ、ＭＥＭ、ＢＯＭ、ニトロ又はメトキシ置換ＢＯＭ、及びＣｌ_３ＣＣＨ_２ＯＣＨ_２−が挙げられる。

【0403】

合成のために保護された酸素基
合成のために保護された酸素基は当技術分野ではよく知られている。多数の適する酸素保護基がGreene, T.W. and Wuts, G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc., 1999の２３〜２００頁に記載されている（これは参照により本明細書に組み込む）。

【0404】

特に対象となる群には、シリルエーテル、メチルエーテル、アルキルエーテル、ベンジルエーテル、エステル、アセタート、ベンゾアート、カルボナート、及びスルホナートが含まれる。

【0405】

好ましい酸素保護基としては、アセタート、ＴＢＳ及びＴＨＰが挙げられる。

【0406】

さらに好ましい形態
以下の好ましい形態は、先に記載されている本発明のすべての態様に当てはまり得る、又は、１つの態様に関し得る。この各態様は、任意の組み合わせで一緒に組み合わせられ得る。

【0407】

いくつかの実施形態では、Ｒ^６’、Ｒ^７’、Ｒ^９’、Ｒ^１０’、Ｒ^１１’及びＹ’は、好ましくは、それぞれ、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１１及びＹと同じである。

【0408】

二量体連結
Ｙ及びＹ’は、好ましくは、Ｏである。

【0409】

Ｒ’’は、好ましくは、置換基をまったく有さないＣ_３〜７アルキレン基である。より好ましくは、Ｒ’’は、Ｃ_３、Ｃ_５又はＣ_７アルキレンである。

【0410】

Ｒ^６〜Ｒ^９
Ｒ^９は、好ましくは、Ｈである。

【0411】

Ｒ^６は、好ましくは、Ｈ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＮＨ_２、ニトロ及びハロから選択されるものであって、より好ましくはＨ又はハロであって、最も好ましくはＨである。

【0412】

Ｒ^７は、好ましくは、Ｈ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ_２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、及びハロから選択され、より好ましくはＨ、ＯＨ及びＯＲ（ここで、Ｒは、好ましくは置換されていてもよいＣ_１〜７アルキル、Ｃ_３〜１０ヘテロシクリル及びＣ_５〜１０アリール基から選択される）から独立に選択される。Ｒは、より好ましくは、Ｃ_１〜４アルキル基であり得、これは置換されていてもよいしあるいは置換されていなくてもよい。対象となる置換基は、Ｃ_５〜６アリール基（例えばフェニル）である。７位における特に好ましい置換基は、ＯＭｅ及びＯＣＨ_２Ｐｈである。

【0413】

これらの好ましい形態は、それぞれ、Ｒ^９’、Ｒ^６’及びＲ^７’にも当てはまる。

【0414】

Ｒ^２
Ｒ^２中のＡは、フェニル基又はＣ_５〜７ヘテロアリール基（例えばフラニル、チオフェニル及びピリジル）であり得る。いくつかの実施形態では、Ａは、好ましくは、フェニルである。他の実施形態では、Ａは、好ましくは、チオフェニル（例えば、チオフェン−２−イル及びチオフェン−３−イル）である。

【0415】

Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−及び−Ｎ（Ｒ^Ｎ）−［式中、Ｒ^Ｎは、Ｈ及びＣ_１〜４アルキルを含む群から選択される］を含んでいるリストから選択される基である。Ｘは、好ましくは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−又は−ＮＨ−であり得、より好ましくは−Ｏ−、−Ｓ−、又は−ＮＨ−であり得、最も好ましくは−ＮＨ−である。

【0416】

Ｑ^２−Ｘは、このＣ_５〜７アリール基の利用可能な各環原子上のいずれにあってもよいが、好ましくは化合物の残りの部分への結合に隣接していない環原子上にある（すなわち、それは、好ましくは、化合物の残りの部分への結合に対してβ又はγである）。したがって、このＣ_５〜７アリール基（Ａ）がフェニルである場合、置換基（Ｑ^２−Ｘ）は、好ましくは、メタ又はパラ位にあって、より好ましくはパラ位にある。

【0417】

いくつかの実施形態では、Ｑ^１は、一重結合である。そのような実施形態では、Ｑ^２は、一重結合及び−Ｚ−（ＣＨ_２）_ｎ−［ここで、Ｚは、一重結合、Ｏ、Ｓ及びＮＨから選択され、ｎは、１〜３である］から選択される。このような実施形態のいくつかでは、Ｑ^２は、一重結合である。他の実施形態では、Ｑ^２は、−Ｚ−（ＣＨ_２）_ｎ−である。そのような実施形態では、Ｚは、Ｏ又はＳであり得、ｎは、１であり得る、又は、２であり得る。そのような実施形態の他では、Ｚは、一重結合であり得、ｎは、１であり得る。

【0418】

別の実施形態では、Ｑ^１は、−ＣＨ＝ＣＨ−である。

【0419】

いくつかの実施形態では、Ｒ^２は、−Ａ−ＣＨ_２−Ｘ及び−Ａ−Ｘであり得る。そのような実施形態では、Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−及び−ＮＨ−であり得る。特に好ましい実施形態では、Ｘは、−ＮＨ−であり得る。

【0420】

Ｒ^１２
Ｒ^１２は、Ｃ_５〜７アリール基であり得る。Ｃ_５〜７アリール基は、フェニル基又はＣ_５〜７ヘテロアリール基（例えばフラニル、チオフェニル及びピリジル）であり得る。いくつかの実施形態では、Ｒ^１２は、好ましくは、フェニルである。他の実施形態では、Ｒ^１２は、好ましくは、チオフェニル（例えば、チオフェン−２−イル及びチオフェン−３−イル）である。

【0421】

Ｒ^１２は、Ｃ_８〜１０アリール、例えばキノリニル又はイソキノリニル基であり得る。このキノリニル又はイソキノリニル基は、ＰＢＤコアに、任意の利用可能な環位から結合され得る。例えば、このキノリニルは、キノリン−２−イル、キノリン−３−イル、キノリン−４イル、キノリン−５−イル、キノリン−６−イル、キノリン−７−イル及びキノリン−８−イルであり得る。これらのうちではキノリン−３−イル及びキノリン−６−イルが好ましいものであり得る。このイソキノリニルは、イソキノリン−１−イル、イソキノリン−３−イル、イソキノリン−４イル、イソキノリン−５−イル、イソキノリン−６−イル、イソキノリン−７−イル及びイソキノリン−８−イルであり得る。これらのうちではイソキノリン−３−イル及びイソキノリン−６−イルが好ましいものであり得る。

【0422】

Ｒ^１２は、任意の数の置換基を有し得る。好ましくはそれは１〜３置換基を有し、１及び２がより好ましくて、１つだけの置換された基が最も好ましい。この各置換基は、任意の位置にあり得る。

【0423】

Ｒ^１２がＣ_５〜７アリール基である場合、１個の置換基が、好ましくは、化合物の残りの部分への結合に隣接していない環原子上にある（すなわち、それは、好ましくは、化合物の残りの部分への結合に対してβ又はγである）。したがって、このＣ_５〜７アリール基がフェニルである場合は、この置換基は、好ましくは、メタ位又はパラ位にあって、より好ましくはパラ位にある。

【0424】

Ｒ^１２がＣ_８〜１０アリール基（例えばキノリニル又はイソキノリニル）である場合、それは、キノリン又はイソキノリン環の任意の位置に任意の数の置換基を有し得る。いくつかの実施形態では、それは、１個、２個又は３個の置換基を有していて、それらは、近位か遠位の環上又はそのどちらにも（１個の置換基より多い場合）あり得る。

【0425】

Ｒ^１２置換基
Ｒ^１２上の置換基がハロである場合、それは、好ましくは、Ｆ又はＣｌであり、より好ましくはＣｌである。

【0426】

Ｒ^１２上の置換基がエーテルである場合、それは、いくつかの実施形態では、アルコキシ基、例えば、Ｃ_１〜７アルコキシ基（例えばメトキシ、エトキシ）であり得る、又は、いくつかの実施形態では、Ｃ_５〜７アリールオキシ基（例えばフェノキシ、ピリジルオキシ、フラニルオキシ）であり得る。このアルコキシ基は、それ自体が、例えばアミノ基（例えばジメチルアミノ）によって、さらに置換されていてよい。

【0427】

Ｒ^１２上の置換基がＣ_１〜７アルキルである場合、それは、好ましくは、Ｃ_１〜４アルキル基（例えばメチル、エチル、プロプリル、ブチル）であり得る。

【0428】

Ｒ^１２上の置換基がＣ_３〜７ヘテロシクリルである場合、それは、いくつかの実施形態では、Ｃ_６窒素含有ヘテロシクリル基（例えばモルホリノ、チオモルホリノ、ピペリジニル、ピペラジニル）であり得る。ＰＢＤ部分構造の残りの部分には、これらの基は、窒素原子を介して結合されていてよい。これらの基は、例えば、Ｃ_１〜４アルキル基によって、さらに置換されていてよい。このＣ_６窒素含有ヘテロシクリル基がピペラジニルである場合、そのようなさらなる置換基は、第２の窒素環原子上にあり得る。

【0429】

Ｒ^１２上の置換基がビス−オキシ−Ｃ_１〜３アルキレンである場合、これは、好ましくは、ビス−オキシ−メチレン又はビス−オキシ−エチレンである。

【0430】

Ｒ^１２のための特に好ましい置換基としては、メトキシ、エトキシ、フルオロ、クロロ、シアノ、ビス−オキシ−メチレン、メチル−ピペラジニル、モルホリノ及びメチル−チオフェニルが挙げられる。Ｒ^１２のためのもう１つの特に好ましい置換基は、ジメチルアミノプロピルオキシである。

【0431】

Ｒ^１２基
特に好ましい置換されたＲ^１２基としては、限定するものではないが、４−メトキシ−フェニル、３−メトキシフェニル、４−エトキシ−フェニル、３−エトキシ−フェニル、４−フルオロ−フェニル、４−クロロ−フェニル、３，４−ビスオキシメチレン−フェニル、４−メチルチオフェニル、４−シアノフェニル、４−フェノキシフェニル、キノリン−３−イル及びキノリン−６−イル、イソキノリン−３−イル及びイソキノリン−６−イル、２−チエニル、２−フラニル、メトキシナフチル、及びナフチルが挙げられる。もう１つの考えられる置換されたＲ^１２基は、４−ニトロフェニルである。

【0432】

Ｍ及びｚ
Ｍ及びＭ’は薬学的に許容される一価カチオンであることが好ましく、より好ましくはＮａ^＋である。

【0433】

ｚは、好ましくは、３である。

【実施例】

【0434】

（一般実験法）
光学旋光度は、ＡＤＰ ２２０偏光計（Ｂｅｌｌｉｎｇｈａｍ Ｓｔａｎｌｅｙ Ｌｔｄ．）で測定した（濃度（ｃ）はｇ／１００ｍＬで書かれている）。融点は、ディジタル融点装置（Ｅｌｅｃｔｒｏｔｈｅｒｍａｌ）を用いて測定した。ＩＲスペクトルは、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ １０００ ＦＴ ＩＲ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒで記録した。^１Ｈ及び^１３Ｃ ＮＭＲスペクトルは、それぞれ、４００及び１００ＭＨｚのＢｒｕｋｅｒ ＡｖａｎｃｅＮＭＲ分光計を用いて３００Ｋで獲得した。ケミカルシフトはＴＭＳ（δ＝０．０ｐｐｍ）に対比して報告されていて、シグナルは、ｓ（シングレット）、ｄ（ダブレット）、ｔ（トリプレット）、ｄｔ（ダブルトリプレット）、ｄｄ（ダブレットのダブル）、ｄｄｄ（ダブレットのダブルダブレット）又はｍ（マルチプレット）として表されており、カップリング定数はヘルツ（Ｈｚ）で与えられている。質量分光分析（ＭＳ）データは、Ｗａｔｅｒｓ ２９９６ ＰＤＡを有するＷａｔｅｒｓ ２６９５ ＨＰＬＣに連結されたＷａｔｅｒｓ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱ装置を用いて採集された。用いたＷａｔｅｒｓ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱの各パラメーターは：Ｃａｐｉｌｌａｒｙ（ｋＶ）、３．３８；Ｃｏｎｅ（Ｖ）、３５；Ｅｘｔｒａｃｔｏｒ（Ｖ）、３．０；Ｓｏｕｒｃｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（℃）、１００；Ｄｅｓｏｌｖａｔｉｏｎ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（℃）、２００；Ｃｏｎｅ流量（Ｌ／ｈ）、５０；Ｄｅ−ｓｏｌｖａｔｉｏｎ流量（Ｌ／ｈ）、２５０；であった。高分解能質量分光（ＨＲＭＳ）データは、各サンプルを機器に導入するための金属コート・ボロシリケート・ガラスチップを用いるポジティブＷモードのＷａｔｅｒｓ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＱＴＯＦ Ｇｌｏｂａｌで記録した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）はシリカゲルアルミニウムプレート（Ｍｅｒｃｋ ６０、Ｆ２５４）で行い、フラッシュクロマトグラフィーにはシリカゲル（Ｍｅｒｃｋ ６０、２３０−４００メッシュＡＳＴＭ）を用いた。ＨＯＢｔ（ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ）及び固体担持試薬（Ａｒｇｏｎａｕｔ）を除いて、他の化学薬品及び溶媒は、すべて、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入し、さらに精製することなく供給された通りで用いた。無水溶媒は、適切な乾燥剤の存在下での乾燥窒素雰囲気下の蒸留によって調製し、４Åモレキュラーシーブ又はナトリウムワイヤーを入れて保存した。石油エーテルとは、蒸留沸点が４０〜６０℃にあるものを言う。

【0435】

化合物１ｂは、国際公開第００／０１２５０８号パンフレット（化合物２１０）に記載されているようにして合成した（この文献は本明細書に参照により組み込む）。

【0436】

ＬＣ／ＭＳ一般条件：ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ２６９５）は、水（Ａ）（ギ酸０．１％）及びアセトニトリル（Ｂ）（ギ酸０．１％）の移動相を用いて流した。勾配：初期組成５％Ｂ（１．０ｍｉｎ）そのあと５％Ｂ→９５％Ｂ（３分以内）。その組成は９５％Ｂに０．５分間保持され、そのあと５％Ｂに０．３分で戻された。全体勾配ランタイムは５分に等しい。流量３．０ｍＬ／ｍｉｎ、４００μＬをゼロ・デッドボリューム・ティー・ピース（zero dead volume tee piece）を介させて分けた（これは質量分光計に入っていった）。波長検出範囲：２２０〜４００ｎｍ。ファンクションタイプ：ダイオードアレイ（５３５スキャン）。カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）Ｏｎｙｘ Ｍｏｎｏｌｉｔｈｉｃ Ｃ１８ ５０×４．６０ｍｍ。

【0437】

Ｔｒｏｃ及びＴＢＤＭＳ基の双方によって保護された化合物に特異的なＬＣ／ＭＳ条件：Ｔｒｏｃ及びＴＢＤＭＳ保護化合物のクロマトグラフィー分離は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｃｏｒｐ製Ｏｎｙｘ Ｍｏｎｏｌｉｔｉｃ逆相カラム（３μｍ粒子、５０×４．６ｍｍ）を用いるＷａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ２６９５ ＨＰＬＣ装置で行った。移動相Ａは５％アセトニトリル−９５％水（０．１％ギ酸含有）から構成されており、移動相Ｂは９５％アセトニトリル−５％水（０．１％ギ酸含有）から構成されていた。５％Ｂで１分後、Ｂの割合を次の２．５分で９５％Ｂに上げ、９５％Ｂにさらに１分間保持し、そのあと９５％Ａに１０秒で戻し、さらに５０秒間再平衡化させた（全体ランタイムは５．０分となる）。流量は３．０ｍＬ／ｍｉｎに維持した。

【0438】

化合物３３に特異的なＬＣ／ＭＳ条件：ＬＣは、Ｗａｔｅｒｓ ２９９６フォトダイオードアレイ検出器及びＷａｔｅｒｓ ＺＱシングル四重極質量分光計が連結されたＷａｔｅｒｓ ２７６ Ｓａｍｐｌｅ Ｍａｎａｇｅｒで流した。用いたカラムは、Ｌｕｎａ Ｐｈｅｎｙｌ−Ｈｅｘｙｌ ５０×４．６０ｍｍ、５μｍ、Ｐａｒｔ ｎｏ．００Ｆ−４２５７−Ｅ０（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）であった。用いた移動相は：
移動相Ａ：１００％のＨＰＬＣ等級水（０．０５％トリエチルアミン）、ｐＨ＝７；
移動相Ｂ：２０％のＨＰＬＣ等級水及び８０％のＨＰＬＣ等級アセトニトリル（０．０５％トリエチルアミン）、ｐＨ＝７；
であった。

【0439】

用いた勾配は：
時間 流量 ％Ａ ％Ｂ
（ｍｉｎ） （ｍｌ／ｍｉｎ）

最初 １．５０ ９０ １０
１．０ １．５０ ９０ １０
１６．０ １．５０ ６４ ３６
３０．０ １．５０ ５ ９５
３１．０ １．５０ ９０ １０
３２．０ １．５０ ９０ １０
であった。

【0440】

質量分光法はポジティブ・イオンモード及びＳＩＲ（選択イオン検出）で行われ、検出されたイオンはｍ／ｚ＝７２７．２であった。

【0441】

（主な中間体の合成）

【化74】

【0442】

（ａ）１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス［（５−メトキシ−２−ニトロ−１，４−フェニレン）カルボニル］］ビス［（２Ｓ，４Ｒ）−メチル−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボキシラート］（２ａ）
方法Ａ：触媒量のＤＭＦ（２滴）を撹拌溶液ニトロ−酸１ａ（１．０ｇ、２．１５ｍｍｏｌ）＋塩化オキサリル（０．９５ｍＬ、１．３６ｇ、１０．７ｍｍｏｌ）／乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）に加えた。この反応混合物を１６時間室温で撹拌し、溶媒を真空で蒸発させることにより除去した。この得られた残留物を乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）に再溶解させ、この酸塩化物溶液を窒素雰囲気下の−３０℃（ドライアイス／エチレングリコール）にある撹拌混合物（２Ｓ，４Ｒ）−メチル−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボキシラートヒドロクロリド（８５９ｍｇ、４．７３ｍｍｏｌ）＋ＴＥＡ（６．６ｍＬ、４．７９ｇ、４７．３ｍｍｏｌ）／ＴＨＦ（１０ｍＬ）に滴下で加えた。この反応混合物を室温まで昇温させてさらに３時間撹拌したが、この時点でＴＬＣ（９５：５ｖ／ｖＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ）及びＬＣ／ＭＳ（２．４５ｍｉｎ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ（相対強度）７２１（［Ｍ＋Ｈ］^＋、２０））により生成物の生成が明らかにされた。ロータリーエバポレーターにより過剰ＴＨＦを除去し、得られた残留物をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解させた。有機層を１Ｎ ＨＣｌ（２×１５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３（２×１５ｍＬ）、Ｈ_２Ｏ（２０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ_４）。溶媒を濾過・蒸発させて、この粗製生成物を黒い色をした油状物として得た。フラッシュクロマトグラフィー（勾配溶離：１００％ＣＨＣｌ_３→９６：４ｖ／ｖＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ）による精製により等質なアミド２ａがオレンジ色をしたガラス状物（８４０ｍｇ、５４％）として単離された。

【0443】

方法Ｂ：塩化オキサリル（９．７５ｍＬ、１４．２ｇ、１１１ｍｍｏｌ）を撹拌懸濁液ニトロ−酸１ａ（１７．３ｇ、３７．１ｍｍｏｌ）＋ＤＭＦ（２ｍＬ）／無水ＤＣＭ（２００ｍＬ）に加えた。最初泡立った後この反応懸濁液は溶液となり、この混合物を室温で１６時間撹拌した。この反応混合物のサンプルをＭｅＯＨで処理し得られたビス−メチルエステルがＬＣ／ＭＳにより観測されたことによりこの酸塩化物への変換が確認された。溶媒の大半を真空で蒸発させることにより除去し、得られた濃縮溶液を最少量の乾燥ＤＣＭに再溶解させ、ジエチルエーテルで粉砕した。この得られた黄色の沈殿物を濾過により回収し、冷ジエチルエーテルで洗浄し、４０℃の真空オーブン中で１時間乾燥させた。この固体酸塩化物を２５分の時間をかけて−４０℃（ドライアイス／ＣＨ_３ＣＮ）の撹拌懸濁液（２Ｓ，４Ｒ）−メチル−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボキシラートヒドロクロリド（１５．２ｇ、８４．０ｍｍｏｌ）＋ＴＥＡ（２５．７ｍＬ、１８．７ｇ、１８５ｍｍｏｌ）／ＤＣＭ（１５０ｍＬ）に滴下で加えた。ＬＣ／ＭＳ（２．４７ｍｉｎ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ（相対強度）７２１（［Ｍ＋Ｈ］^＋、１００））により判定したところ、この反応は、直ぐ、完了していた。この混合物をＤＣＭ（１５０ｍＬ）で希釈し、１Ｎ ＨＣｌ（３００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３（３００ｍＬ）、ブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、濾過し（相分離器に通して）、溶媒を真空で蒸発させて、等質な生成物２ａをオレンジ色の固形物（２１．８ｇ、８２％）として得た。

【0444】

分析データ：［α］^２２_Ｄ＝−４６．１°（ｃ＝０．４７，ＣＨＣｌ_３）；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）（回転異性体）δ ７．６３（ｓ，２Ｈ），６．８２（ｓ，２Ｈ），４．７９−４．７２（ｍ，２Ｈ），４．４９−４．２８（ｍ，６Ｈ），３．９６（ｓ，６Ｈ），３．７９（ｓ，６Ｈ），３．４６−３．３８（ｍ，２Ｈ），３．０２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ），２．４８−２．３０（ｍ，４Ｈ），２．２９−２．０４（ｍ，４Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）（回転異性体）δ １７２．４，１６６．７，１５４．６，１４８．４，１３７．２，１２７．０，１０９．７，１０８．２，６９．７，６５．１，５７．４，５７．０，５６．７，５２．４，３７．８，２９．０；ＩＲ（ＡＴＲ，ＣＨＣｌ_３）３４１０（ｂｒ），３０１０，２９５３，１７４１，１６２２，１５７７，１５１９，１４５５，１４２９，１３３４，１２７４，１２１１，１１７７，１０７２，１０５０，１００８，８７１ｃｍ^−１；ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ（相対強度）７２１（［Ｍ＋Ｈ］^＋，４７），３８８（８０）；ＨＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］^＋理論Ｃ_３１Ｈ_３６Ｎ_４Ｏ_１６ ｍ／ｚ ７２１．２１９９，実測（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ ７２１．２２２７。

【0445】

（ａ）１，１’−［［（ペンタン−１，５−ジイル）ジオキシ］ビス［（５−メトキシ−２−ニトロ−１，４−フェニレン）カルボニル］］ビス［（２Ｓ，４Ｒ）−メチル−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボキシラート］（２ｂ）
方法Ｂに従って１ｂから調製することにより等質な生成物をオレンジ色の泡状物（７５．５ｇ、８２％）として得た。

【0446】

分析データ：（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ（相対強度）７４９（［Ｍ＋Ｈ］^＋、１００）。

【0447】

（ｂ）１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス（１１ａＳ，２Ｒ）−２−（ヒドロキシ）−７−メトキシ−１，２，３，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５，１１−ジオン］（３ａ）
方法Ａ：懸濁液１０％Ｐｄ／Ｃ（７．５ｇ、１０％ｗ／ｗ）／ＤＭＦ（４０ｍＬ）を溶液ニトロ−エステル２ａ（７５ｇ、１０４ｍｍｏｌ）／ＤＭＦ（３６０ｍＬ）に加えた。この懸濁液をＰａｒｒ水素化装置で８時間かけて水素化した。この反応の進行をＬＣ／ＭＳ（２．１２ｍｉｎ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ（相対強度）５９７（［Ｍ＋Ｈ］^＋、１００）、（ＥＳ⁻）ｍ／ｚ（相対強度）５９５（［Ｍ＋Ｈ］^＋、１００）により追跡したところ水素取り込みは既に停止していた。固形物Ｐｄ／Ｃを濾過により除去し、濾液を４０℃の真空（１０ｍｂａｒ以下）下にあるロータリーエバポレーターにより濃縮して、微量のＤＭＦ及び残留炭を含有している黒色の油状物を得た。この残留物をウォーターバス（ロータリーエバポレーターバス）上の４０℃のＥｔＯＨ（５００ｍＬ）で温浸し、得られた懸濁液をセライトに通して濾過し、エタノール（５００ｍＬ）で洗浄して、透明な濾液を得た。この溶液にヒドラジン水和物（１０ｍＬ、３２１ｍｍｏｌ）を加え、この反応混合物を還流で加熱した。２０分後には白色の沈殿物の生成が観測され、還流はさらに３０分間続けさせた。この混合物を室温まで冷却させ、沈殿物を濾過により回収し、ジエチルエーテル（沈殿物の２^＊１体積）で洗浄し、真空デシケーター中で乾燥させて３ａ（５０ｇ、８１％）を得た。

【0448】

方法Ｂ：溶液ニトロ−エステル２ａ（６．８０ｇ、９．４４ｍｍｏｌ）／ＭｅＯＨ（３００ｍＬ）を三頸丸底フラスコ中のＲａｎｅｙ（商標）ニッケル（大ヘラ４サジ分の約５０％スラリー／Ｈ_２Ｏ）＋突沸防止顆粒に加えた。この混合物を還流で加熱し、そのあと溶液ヒドラジン水和物（５．８８ｍＬ、６．０５ｇ、１８８ｍｍｏｌ）／ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）で滴下処理した（このとき激しい泡立ちが観測された）。この添加が完了したとき（約３０分）さらなるＲａｎｅｙ（商標）ニッケルを泡立ちが止むまで注意して加え、最初の黄色の色の反応混合物を排出した。この混合物をさらに３０分間還流で加熱した。ＴＬＣ（９０：１０ｖ／ｖＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ）及びＬＣ／ＭＳ（２．１２ｍｉｎ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ（相対強度）５９７（［Ｍ＋Ｈ］^＋、１００））によりこの時点でこの反応は完了しているとみなされた。この反応混合物をおよそ４０℃まで冷却させ、そのあと過剰ニッケルを真空吸引なしの焼結漏斗に通す濾過により除去した。この濾液を真空で蒸発させることにより量を減らすと無色の沈殿物が生成し、これを濾過により捕集し、真空デシケーター中で乾燥させて３ａ（５．４０ｇ、９６％）を得た。

【0449】

分析データ：［α］^２７_Ｄ＝＋４０４°（ｃ＝０．１０，ＤＭＦ）；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ １０．２（ｓ，２Ｈ，ＮＨ），７．２６（ｓ，２Ｈ），６．７３（ｓ，２Ｈ），５．１１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝３．９８Ｈｚ，ＯＨ），４．３２ ４．２７（ｍ，２Ｈ），４．１９−４．０７（ｍ，６Ｈ），３．７８（ｓ，６Ｈ），３．６２（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１２．１，３．６０Ｈｚ），３．４３（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１２．０，４．７２Ｈｚ），２．６７−２．５７（ｍ，２Ｈ），２．２６（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝５．９０Ｈｚ），１．９９ １．８９（ｍ，２Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ １６９．１，１６４．０，１４９．９，１４４．５，１２９．８，１１７．１，１１１．３，１０４．５，５４．８，５４．４，５３．１，３３．５，２７．５；ＩＲ（ＡＴＲ，ニート）３４３８，１６８０，１６５４，１６１０，１６０５，１５１６，１４９０，１４３４，１３７９，１２６３，１２３４，１２１６，１１７７，１１５６，１１１５，１０８９，１０３８，１０１８，９５２，８７０ｃｍ^−１；ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ（相対強度）６１９（［Ｍ＋Ｎａ］^＋，１０），５９７（［Ｍ＋Ｈ］^＋，５２），４４５（１２），３２６（１１）；ＨＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］^＋理論Ｃ_２９Ｈ_３２Ｎ_４Ｏ_１０ ｍ／ｚ ５９７．２１９１，実測（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ ５９７．２２０５。

【0450】

（ｂ）１，１’−［［（ペンタン−１，５−ジイル）ジオキシ］ビス（１１ａＳ，２Ｒ）−２−（ヒドロキシ）−７−メトキシ−１，２，３，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５，１１−ジオン］（３ｂ）
方法Ａに従って２ｂから調製することによりこの生成物を白色の固形物（２２．１ｇ、８６％）として得た。

【0451】

分析データ：ＭＳ（ＥＳ⁻）ｍ／ｚ（相対強度）６２３．３（［Ｍ−Ｈ］⁻、１００）。

【0452】

（ｃ）１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス（１１ａＳ，２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−７−メトキシ−１，２，３，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５，１１−ジオン］（４ａ）
ＴＢＳＣｌ（３１７ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）及びイミダゾール（３４２ｍｇ、５．０３ｍｍｏｌ）を濁った溶液テトララクタム３ａ（２５０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）／無水ＤＭＦ（６ｍＬ）に加えた。この混合物を窒素雰囲気下で３時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳ（３．９０ｍｉｎ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ（相対強度）８２５（［Ｍ＋Ｈ］^＋、１００））により判定したところこの時既にこの反応は完了していたとみなされた。この反応混合物を氷（約２５ｍＬ）に注ぎ、撹拌しながら室温まで昇温させた。この得られた白色の沈殿物を真空濾過により捕集し、Ｈ_２Ｏ、ジエチルエーテルで洗浄し、真空デシケーター中で乾燥させて等質な４ａ（２５２ｍｇ、７３％）を得た。

【0453】

分析データ：［α］^２３_Ｄ＝＋２３４°（ｃ＝０．４１，ＣＨＣｌ_３）；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ８．６５（ｓ，２Ｈ，ＮＨ），７．４４（ｓ，２Ｈ），６．５４（ｓ，２Ｈ），４．５０（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝５．３８Ｈｚ），４．２１−４．１０（ｍ，６Ｈ），３．８７（ｓ，６Ｈ），３．７３−３．６３（ｍ，４Ｈ），２．８５−２．７９（ｍ，２Ｈ），２．３６−２．２９（ｍ，２Ｈ），２．０７−１．９９（ｍ，２Ｈ），０．８６（ｓ，１８Ｈ），０．０８（ｓ，１２Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １７０．４，１６５．７，１５１．４，１４６．６，１２９．７，１１８．９，１１２．８，１０５．３，６９．２，６５．４，５６．３，５５．７，５４．２，３５．２，２８．７，２５．７，１８．０，−４．８２及び−４．８６；ＩＲ（ＡＴＲ，ＣＨＣｌ_３）３２３５，２９５５，２９２６，２８５５，１６９８，１６９５，１６０３，１５１８，１４９１，１４４６，１３８０，１３５６，１２５１，１２２０，１１２０，１０９９，１０３３ｃｍ^−１；ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ（相対強度）８２５（［Ｍ＋Ｈ］^＋，６２），７２１（１４），４４０（３８）；ＨＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］^＋理論Ｃ_４１Ｈ_６０Ｎ_４Ｏ_１０Ｓｉ_２ ｍ／ｚ ８２５．３９２１，実測（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ ８２５．３９４８。

【0454】

（ｃ）１，１’−［［（ペンタン−１，５−ジイル）ジオキシ］ビス（１１ａＳ，２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−７−メトキシ−１，２，３，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５，１１−ジオン］（４ｂ）
上記方法に従って３ｂから調製することによりこの生成物を白色の固形物（２７．３ｇ、９３％）として得た。

【0455】

分析データ：ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ（相対強度）８５３．８（［Ｍ＋Ｈ］^＋、１００）、（ＥＳ⁻）ｍ／ｚ（相対強度）８５１．６（［Ｍ−Ｈ］⁻、１００。

【0456】

（ｄ）１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス（１１ａＳ，２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−７−メトキシ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１，２，３，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５，１１−ジオン］（５ａ）
溶液ｎ−ＢｕＬｉ（４．１７ｍＬの１．６Ｍ溶液／ヘキサン、６．６７ｍｍｏｌ）／無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）を窒素雰囲気下の−３０℃（ドライアイス／エチレングリコール）にある撹拌懸濁液テトララクタム４ａ（２．２０ｇ、２．６７ｍｍｏｌ）／無水ＴＨＦ（３０ｍＬ）に滴下で加えた。この反応混合物をこの温度で１時間撹拌し（今度は赤色を帯びたオレンジ色）、この時点で溶液ＳＥＭＣｌ（１．１８ｍＬ、１．１１ｇ、６．６７ｍｍｏｌ）／無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）を滴下で加えた。この反応混合物を室温までゆっくり昇温させ、窒素雰囲気下で１６時間撹拌した。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）及びＬＣ／ＭＳ（４．７７ｍｉｎ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ（相対強度）１０８５（［Ｍ＋Ｈ］^＋、１００））により判定したところこの反応は完了しているとみなされた。ＴＨＦを真空で蒸発させることにより除去し、得られた残留物をＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）に溶解させ、Ｈ_２Ｏ（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）濾過し、真空で蒸発させて粗製生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（８０：２０ｖ／ｖヘキサン／ＥｔＯＡｃ）により精製して、等質なＮ１０−ＳＥＭ−保護テトララクタム５ａを油状物（２．３７ｇ、８２％）として得た。

【0457】

分析データ：［α］^２３_Ｄ＝＋１６３°（ｃ＝０．４１，ＣＨＣｌ_３）；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ７．３３（ｓ，２Ｈ），７．２２（ｓ，２Ｈ），５．４７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．９８Ｈｚ），４．６８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．９９Ｈｚ），４．５７（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝５．７７Ｈｚ），４．２９−４．１９（ｍ，６Ｈ），３．８９（ｓ，６Ｈ），３．７９−３．５１（ｍ，８Ｈ），２．８７−２．８１（ｍ，２Ｈ），２．４１（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝５．８１Ｈｚ），２．０３−１．９０（ｍ，２Ｈ），１．０２−０．８１（ｍ，２２Ｈ），０．０９（ｓ，１２Ｈ），０．０１（ｓ，１８Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １７０．０，１６５．７，１５１．２，１４７．５，１３３．８，１２１．８，１１１．６，１０６．９，７８．１，６９．６，６７．１，６５．５，５６．６，５６．３，５３．７，３５．６，３０．０，２５．８，１８．４，１８．１， １．２４，−４．７３；ＩＲ（ＡＴＲ，ＣＨＣｌ_３）２９５１，１６８５，１６４０，１６０６，１５１７，１４６２，１４３３，１３６０，１２４７，１１２７，１０６５ｃｍ^−１；ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ（相対強度）１１１３（［Ｍ＋Ｎａ］^＋，４８），１０８５（［Ｍ＋Ｈ］^＋，１００），１００９（５），８１３（６）；ＨＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］^＋理論Ｃ_５３Ｈ_８８Ｎ_４Ｏ_１２Ｓｉ_４ ｍ／ｚ １０８５．５５４８，実測（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ １０８５．５５４２。

【0458】

（ｄ）１，１’−［［（ペンタン１，５−ジイル）ジオキシ］ビス（１１ａＳ，２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−７−メトキシ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１，２，３，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５，１１−ジオン］（５ｂ）
上記方法に従って４ｂから調製することによりこの生成物を淡いオレンジ色の泡状物（４６．９ｇ、１００％）として得た（さらに精製することなく用いた）。

【0459】

分析データ：ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ（相対強度）１１１４（［Ｍ＋Ｈ］^＋、９０）、（ＥＳ⁻）ｍ／ｚ（相対強度）１１５８（［Ｍ＋２Ｎａ］⁻、１００）。

【0460】

（ｅ）１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス（１１ａＳ，２Ｒ）−２−ヒドロキシ−７−メトキシ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１，２，３，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５，１１−ジオン］（６ａ）
溶液ＴＢＡＦ（５．２４ｍＬの１．０Ｍ溶液／ＴＨＦ、５．２４ｍｍｏｌ）を室温にある撹拌溶液ビス−シリルエーテル５（２．５８ｇ、２．３８ｍｍｏｌ）／ＴＨＦ（４０ｍＬ）に加えた。３．５時間撹拌した後、ＴＬＣ（９５：５ｖ／ｖＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ）によりこの反応混合物を分析したところ反応の完了が明らかにされた。この反応混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液（１００ｍＬ）に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃ（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（６０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）、濾過、真空蒸発させて、粗製生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（勾配溶離：１００％ＣＨＣｌ_３→９６：４ｖ／ｖＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ）による精製により等質なテトララクタム６ａを白色の泡状物（１．７８ｇ、８７％）として得た。

【0461】

分析データ：［α］^２３_Ｄ＝＋２０２°（ｃ＝０．３４，ＣＨＣｌ_３）；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ７．２８（ｓ，２Ｈ），７．２０（ｓ，２Ｈ），５．４４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），４．７２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），４．６１ ４．５８（ｍ，２Ｈ），４．２５（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝５．８３Ｈｚ），４．２０−４．１６（ｍ，２Ｈ），３．９１−３．８５（ｍ，８Ｈ），３．７７−３．５４（ｍ，６Ｈ），３．０１（ｂｒ ｓ，２Ｈ，ＯＨ），２．９６−２．９０（ｍ，２Ｈ），２．３８（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝５．７７Ｈｚ），２．１１−２．０５（ｍ，２Ｈ），１．００−０．９１（ｍ，４Ｈ），０．００（ｓ，１８Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １６９．５，１６５．９，１５１．３，１４７．４，１３３．７，１２１．５，１１１．６，１０６．９，７９．４，６９．３，６７．２，６５．２，５６．５，５６．２，５４．１，３５．２，２９．１，１８．４，−１．２３；ＩＲ（ＡＴＲ，ＣＨＣｌ_３）２９５６，１６８４，１６２５，１６０４，１５１８，１４６４，１４３４，１３６１，１２３８，１０５８，１０２１ｃｍ^−１；ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ（相対強度）８８５（［Ｍ＋２９］^＋，７０），８５７（［Ｍ＋Ｈ］^＋，１００），７１１（８），４４８（１７）；ＨＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］^＋理論Ｃ_４１Ｈ_６０Ｎ_４Ｏ_１２Ｓｉ_２ ｍ／ｚ ８５７．３８１９，実測（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ ８５７．３８２６。

【0462】

（ｅ）１，１’−［［（ペンタン−１，５−ジイル）ジオキシ］ビス（１１ａＳ，２Ｒ）−２−ヒドロキシ−７−メトキシ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１，２，３，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５，１１−ジオン］（６ｂ）
上記方法に従って５ｂから調製することによりこの生成物を白色の泡状物（１５．０２ｇ）として得た。

【0463】

分析データ：ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ（相対強度）８８６（［Ｍ＋Ｈ］^＋，１０），７３９．６（１００），（ＥＳ⁻）ｍ／ｚ（相対強度）８８４（［Ｍ−Ｈ］⁻，４０）。

【0464】

（ｆ）１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス［（１１ａＳ）−１１−スルホ−７−メトキシ−２−オキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）１，２，３，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５，１１−ジオン］］（７ａ）
方法Ａ：０．３７Ｍ次亜塩素酸ナトリウム溶液（１４２．５ｍＬ、５２．７１ｍｍｏｌ、２．４ｅｑ）を０℃にある強撹拌混合物ジオール６（１８．８ｇ、２１．９６ｍｍｏｌ、１ｅｑ）＋ＴＥＭＰＯ（０．０６９ｇ、０．４４ｍｍｏｌ、０．０２ｅｑ）＋０．５Ｍ臭化カリウム溶液（８．９ｍＬ、４．４ｍｍｏｌ、０．２ｅｑ）／ＤＣＭ（１１５ｍＬ）に滴下で加えた。添加の速度を調節することにより温度を０℃〜５℃の間に維持した。この得られた黄色のエマルジョンを０℃〜５℃で１時間撹拌した。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）及びＬＣ／ＭＳ［３．５３ｍｉｎ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ（相対強度）８７５（［Ｍ＋Ｎａ］^＋、５０）、（ＥＳ⁻）ｍ／ｚ（相対強度）８５２（［Ｍ−Ｈ］⁻、１００）］により反応は完了していることが示された。

【0465】

この反応混合物を濾過し、有機層を分離させ、水層をＤＣＭ（×２）で逆洗浄した。合わせた有機部分をブライン（×１）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）、蒸発させて、黄色の泡状物を得た。フラッシュカラムクロマトグラフィー（勾配溶離３５／６５ｖ／ｖｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡＣ、３０／７０→２５／７５ｖ／ｖｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡＣ）による精製によりこのビス−ケトン７ａを白色の泡状物（１４．１ｇ、７５％）として得た。

【0466】

塩素１０〜１３％で売られている、試薬等級の、次亜塩素酸ナトリウム溶液を用いた。これは１０％（１０ｇ ＮａＣｌＯ／１００ｇ）であると仮定し、ＮａＣｌＯが１．３４Ｍであると計算された。これからそれを水で０．３７Ｍに希釈することによってストック溶液を調製した。これによりｐＨおよそ１４の溶液が得られた。固体ＮａＨＣＯ_３を加えることにより、このｐＨは、９．３〜９．４に調整された。その反応には、２．４モル当量が得られるように、このストックのアリコートがこのあと用いられた。

【0467】

このブリーチ溶液を加えると、最初温度が上がるのが観測された。温度を０℃〜５℃に維持するために、添加の速度が調節された。この反応混合物は、濃厚な、レモンイエロー色をした、エマルジョンを形成した。

【0468】

この酸化はThomas Fey et al，J. Org. Chem.，2001，66，8154-8159に記載されている手順を適応したものである。

【0469】

方法Ｂ：固体ＴＣＣＡ（１０．６ｇ、４５．６ｍｍｏｌ）を０℃（氷／アセトン）にある撹拌溶液アルコール６（１８．０５ｇ、２１．１ｍｍｏｌ）＋ＴＥＭＰＯ（１２３ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）／無水ＤＣＭ（７００ｍＬ）に滴下で加えた。この反応混合物を窒素雰囲気下の０℃で１５分間撹拌した。この時点でＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）及びＬＣ／ＭＳ［３．５７ｍｉｎ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ（相対強度）８７５（［Ｍ＋Ｎａ］^＋、５０）］により反応は完了していることが明らかにされた。この反応混合物をセライトに通して濾過し、濾液を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（４００ｍＬ）、ブライン（４００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）、濾過、真空蒸発させて、粗製生成物を得た。フラッシュカラムクロマトグラフィー（８０：２０ｖ／ｖＥｔＯＡｃ／ヘキサン）による精製によりこのビス−ケトン７ａを泡状物（１１．７ｇ、６５％）として得た。

【0470】

方法Ｃ：溶液無水ＤＭＳＯ（０．７２ｍＬ、０．８４ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）／乾燥ＤＣＭ（１８ｍＬ）を−６０℃（液体Ｎ_２／ＣＨＣｌ_３）の窒素雰囲気下の塩化オキサリル撹拌溶液（２．６３ｍＬの２．０Ｍ溶液／ＤＣＭ、５．２６ｍｍｏｌ）に２５ｍｉｎの時間をかけて滴下で加えた。−５５℃で２０分間撹拌した後、スラリー基質６ａ（１．５ｇ、１．７５ｍｍｏｌ）／乾燥ＤＣＭ（３６ｍＬ）をこの反応混合物に３０ｍｉｎの時間をかけて滴下で加えた。−５５℃でさらに５０分間撹拌した後、溶液ＴＥＡ（３．４２ｍＬ、２．４９ｇ；２４．６ｍｍｏｌ）／乾燥ＤＣＭ（１８ｍＬ）をこの反応混合物に２０ｍｉｎの時間をかけて滴下で加えた。この撹拌反応混合物を室温まで昇温させ（約１．５ｈ）、そのあとＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈した。この有機溶液を１Ｎ ＨＣｌ（２×２５ｍＬ）、Ｈ_２Ｏ（３０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ_４）。溶媒を真空で濾過・蒸発させることにより粗製生成物を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（８０：２０ｖ／ｖＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、ビス−ケトン７ａを泡状物（８３５ｍｇ、５６％）として得た。

【0471】

分析データ：［α］^２０_Ｄ＝＋２９１°（ｃ＝０．２６，ＣＨＣｌ_３）；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ７．３２（ｓ，２Ｈ），７．２５（ｓ，２Ｈ），５．５０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ），４．７５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ），４．６０（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．８５，３．０７Ｈｚ），４．３１−４．１８（ｍ，６Ｈ），３．８９−３．８４（ｍ，８Ｈ），３．７８−３．６２（ｍ，４Ｈ），３．５５（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１９．２，２．８５Ｈｚ），２．７６（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１９．２，９．９０Ｈｚ），２．４２（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝５．７７Ｈｚ），０．９８−０．９１（ｍ，４Ｈ），０．００（ｓ，１８Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ２０６．８，１６８．８，１６５．９，１５１．８，１４８．０，１３３．９，１２０．９，１１１．６，１０７．２，７８．２，６７．３，６５．６，５６．３，５４．９，５２．４，３７．４，２９．０，１８．４，−１．２４；ＩＲ（ＡＴＲ，ＣＨＣｌ_３）２９５７，１７６３，１６８５，１６４４，１６０６，１５１６，１４５７，１４３４，１３６０，１２４７，１２０９，１０９８，１０６６，１０２３ｃｍ^−１；ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ（相対強度）８８１（［Ｍ＋２９］^＋，３８），８５３（［Ｍ＋Ｈ］^＋，１００），７０７（８），５４２（１２）；ＨＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］^＋理論Ｃ_４１Ｈ_５６Ｎ_４Ｏ_１２Ｓｉ_２ ｍ／ｚ ８５３．３５０６，実測（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ ８５３．３５０２。

【0472】

（ｆ）１，１’−［［（ペンタン−１，５−ジイル）ジオキシ］ビス［（１１ａＳ）−１１−スルホ−７−メトキシ−２−オキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）１，２，３，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５，１１−ジオン］］（７ｂ）
方法Ｃに従って６ｂから調製することによりこの生成物を白色の泡状物（１０．５ｇ、７６％）として得た。

【0473】

分析データ：ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ（相対強度）８８２（［Ｍ＋Ｈ］^＋，３０），７３５（１００），（ＥＳ⁻）ｍ／ｚ（相対強度）９２５（［Ｍ＋４５］⁻，１００），８８０（［Ｍ−Ｈ］⁻，７０）。

【0474】

（ｇ）１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス（１１ａＳ）−７−メトキシ−２−［［（トリフルオロメチル）スルホニル］オキシ］−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５，１１−ジオン］（８ａ）
無水２，６−ルチジン（５．１５ｍＬ、４．７４ｇ、４４．２ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下の−４５℃（ドライアイス／アセトニトリル冷却バス）にある強撹拌溶液ビス−ケトン７（６．０８ｇ、７．１ｍｍｏｌ）／乾燥ＤＣＭ（１８０ｍＬ）に１回で注入した。新しく開けられたアンプル（７．２ｍＬ、１２．０８ｇ、４２．８ｍｍｏｌ）からとった、無水トリフル酸無水物を、温度を−４０℃又はそれ以下に維持しながら、素早く、滴下で注入した。この反応混合物を−４５℃で１時間撹拌した。この時点で、ＴＬＣ（５０／５０ｖ／ｖｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）により、出発物質が完全に消費されていることが明らかにされた。この冷反応混合物を、直ちに、激しく震盪しながら、ＤＣＭ（２００ｍＬ）で希釈し、水（１×１００ｍＬ）、５％クエン酸溶液（１×２００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（２００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ_４）。溶媒を真空で濾過・蒸発させることにより粗製生成物を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（勾配溶離：９０：１０ｖ／ｖｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ→７０：３０ｖ／ｖｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）により精製して、ビス−エノールトリフラート８ａを黄色の泡状物（５．５ｇ、７０％）として得た。

【0475】

分析データ：［α］^２４_Ｄ＝＋２７１°（ｃ＝０．１８，ＣＨＣｌ_３）；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ７．３３（ｓ，２Ｈ），７．２６（ｓ，２Ｈ），７．１４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝１．９７Ｈｚ），５．５１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ），４．７６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ），４．６２（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１１．０，３．６９Ｈｚ），４．３２−４．２３（ｍ，４Ｈ），３．９４−３．９０（ｍ，８Ｈ），３．８１−３．６４（ｍ，４Ｈ），３．１６（ｄｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１６．３，１１．０，２．３６Ｈｚ），２．４３（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝５．８５Ｈｚ），１．２３−０．９２（ｍ，４Ｈ），０．０２（ｓ，１８Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １６７．１，１６２．７，１５１．９，１４８．０，１３８．４，１３３．６，１２０．２，１１８．８，１１１．９，１０７．４，７８．６，６７．５，６５．６，５６．７，５６．３，３０．８，２９．０，１８．４， １．２５；ＩＲ（ＡＴＲ，ＣＨＣｌ_３）２９５８，１６９０，１６４６，１６０５，１５１７，１４５６，１４２８，１３６０，１３２７，１２０７，１１３６，１０９６，１０６０，１０２２，９３８，９１３ｃｍ^−１；ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ（相対強度）１１４４（［Ｍ＋２８］^＋，１００），１１１７（［Ｍ＋Ｈ］^＋，４８），１０４１（４０），５７８（８）；ＨＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］^＋理論Ｃ_４３Ｈ_５４Ｎ_４Ｏ_１６Ｓｉ_２Ｓ_２Ｆ_６ ｍ／ｚ １１１７．２４９１，実測（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ １１１７．２４６５。

【0476】

（ｇ）１，１’−［［（ペンタン−１，５−ジイル）ジオキシ］ビス（１１ａＳ）−７−メトキシ−２−［［（トリフルオロメチル）スルホニル］オキシ］−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５，１１−ジオン］（８ｂ）
上記方法に従って７ｂから調製することによりこのビス−エノールトリフラートを淡黄色の泡状物（６．１４ｇ、８２％）として得た。

【0477】

分析データ：（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ（相対強度）１１４６（［Ｍ＋Ｈ］^＋、８５）。

【0478】

（実施例１）

【化75】

【0479】

（ａ）（Ｓ）−２−（４−アミノフェニル）−７−メトキシ−８−（３−（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（トリフルオロメチルスルホニル）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）プロポキシ）−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５，１１（１０Ｈ，１１ａＨ）−ジオン（９）
固体Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（２０．１８ｍｇ、１７．４６ｍｍｏｌ）を撹拌溶液トリフラート８（９７５ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）＋４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボララン−２−イル）アニリン（１７２ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）＋Ｎａ_２ＣＯ_３（１３８ｍｇ、３．９８ｍｏｌ）／トルエン（１３ｍＬ）＋ＥｔＯＨ（６．５ｍＬ）＋Ｈ_２Ｏ（６．５ｍＬ）に加えた。この暗色の溶液を窒素雰囲気下で２４時間撹拌した。この時点で、ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）及びＬＣ／ＭＳによる分析により、所望の一連結生成物が生成していること並びに未反応出発物質が存在していることが明らかにされた。溶媒を減圧下のロータリーエバポレーターにより除去し、得られた残留物をＨ_２Ｏ（１００ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）とに分配させ、各層がそのうち分離した後水相をもう一度ＥｔＯＡｃ（２×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）、ブライン（６０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）、濾過、真空蒸発させて、粗製Ｓｕｚｕｋｉ生成物を得た。この粗製Ｓｕｚｕｋｉ生成物をフラッシュクロマトグラフィー（４０％ＥｔＯＡｃ／６０％ヘキサン→７０％ＥｔＯＡｃ、３０％ヘキサン）に付した。過剰溶離液を減圧下のロータリーエバポレーターにより除去して、所望生成物９（３９９ｍｇ）を４３％収率で得た。

【0480】

１Ｈ−ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ ７．４０（ｓ，１Ｈ），７．３３（ｓ，１Ｈ），７．２７（ｂｓ，３Ｈ），７．２４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．１５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），６．６６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），５．５２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），４．７７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），４．７６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），４．６２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．７，１１．０Ｈｚ），４．５８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．４，１０．６Ｈｚ），４．２９（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），４．００−３．８５（ｍ，８Ｈ），３．８０−３．６０（ｍ，４Ｈ），３．１６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．４，１１．０，１６．３Ｈｚ），３．１１（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２，１０．５，１６．１Ｈｚ），２．４３（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ），１．１−０．９（ｍ，４Ｈ），０．２（ｓ，１８Ｈ）。^１３Ｃ−ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ_３，１００ＭＨｚ）δ １６９．８，１６８．３，１６４．０，１６２．７，１５３．３，１５２．６，１４９．２８，１４９．０，１４７．６，１３９．６，１３４．８，１３４．５，１２７．９（メチン），１２７．５，１２５．１，１２３．２１，１２１．５，１２０．５（メチン），１２０．１（メチン），１１６．４（メチン），１１３．２（メチン），１０８．７（メチン），７９．８（メチレン），７９．６（メチレン），６８．７（メチレン），６８．５（メチレン），６７．０（メチレン），６６．８（メチレン），５８．８（メチン），５８．０（メチン），５７．６（メトキシ），３２．８（メチレン），３２．０（メチレン），３０．３（メチレン），１９．７（メチレン），０．２５（メチル）。

【0481】

（ｂ）（Ｓ）−２−（４−アミノフェニル）−７−メトキシ−８−（３−（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）プロポキシ）−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５，１１（１０Ｈ，１１ａＨ）−ジオン（１０）
固体Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（１０ｍｇ、８．６９μｍｏｌ）を、室温にあるＨ_２Ｏ（１．５ｍＬ）中、４−メトキシフェニルボロン酸（４３ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）、Ｎａ_２ＣＯ_３（３７ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）と共に、撹拌溶液モノ−トリフラート９（２３０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）／トルエン（３ｍＬ）＋ＥｔＯＨ（１０ｍＬ）に加えた。この反応混合物を窒素雰囲気下で２０時間撹拌した（ＬＣ／ＭＳ及びＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）により判定したところこの時点で反応は完了とみなされた）。溶媒を真空の減圧下にあるロータリーエバポレーターにより除去し、得られた残留物をＥｔＯＡｃ（７５ｍＬ）とＨ_２Ｏ（７５ｍＬ）とに分配させた。水相をＥｔＯＡｃ（３×３０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をＨ_２Ｏ（３０ｍＬ）、ブライン（４０ｍＬ）で洗浄、乾燥（ＭｇＳＯ_４）、濾過、蒸発させて、粗製生成物を得た。この粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィー（６０％ヘキサン：４０％ＥｔＯＡｃ→８０％ＥｔＯＡｃ：２０％ヘキサン）により精製して、等質な二量体をオレンジ色の泡状物として得た。減圧下で過剰溶離液を除去して所望生成物１０（４３４ｍｇ）を７４％収率で得た。

【0482】

１Ｈ−ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ ７．３８（ｓ，２Ｈ），７．３４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．３０（ｂｓ，１Ｈ），７．２６−７．２４（ｍ，３Ｈ），７．２２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），６．８６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），６．６３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），５．５０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），４．７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），４．７４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），４．５６（ｔｄ，２Ｈ，Ｊ＝３．３，１０．１Ｈｚ），４．２７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ），４．００−３．８５（ｍ，８Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），３．７７−３．６０（ｍ，４Ｈ），３．２０−３．００（ｍ，２Ｈ），２．４２（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ），０．９６（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），０．００（ｓ，１８Ｈ）。^１３Ｃ−ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ_３，１００ＭＨｚ）δ １６９．８，１６９．７，１６２．９，１６２．７，１６０．６，１５２．７，１５２．６，１４９．０，１４７．５，１３４．８，１２７．８（メチン），１２７．４，１２６．８，１２５．１，１２３．１，１２３．０，１２１．５（メチン），１２０．４（メチン），１１６．４（メチン），１１５．５（メチン），１１３．１（メチン），１０８．６（メチン），７９．６（メチレン），６８．５（メチレン），６６．９（メチレン），５８．８（メチン），５７．６（メトキシ），５６．７（メトキシ），３２．８（メチレン），３０．３（メチレン），１９．７（メチレン），０．０（メチル）。

【0483】

（ｃ）（Ｓ）−２−（４−アミノフェニル）−７−メトキシ−８−（３−（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）プロポキシ）−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン（１１）
新鮮ＬｉＢＨ_４（１８３ｍｇ、８．４２ｍｍｏｌ）を撹拌溶液ＳＥＭ−ジラクタム１０（４２８ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）／ＴＨＦ（５ｍＬ）＋ＥｔＯＨ（５ｍＬ）（室温）に加えた。１０分後、遅れた激しい泡立ちが観測され、反応容器をアイスバスに入れなければならなかった。このアイスバスを取り除いた後この混合物を室温で１時間撹拌した。この時点でのＬＣ／ＭＳ分析により出発物質は完全に消費されてごく僅かのモノ還元生成物があることが明らかにされた。この反応混合物を氷（１００ｍＬ）に注ぎ、撹拌しながら室温まで昇温させた。この水性混合物をＤＣＭ（３×３０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をＨ_２Ｏ（２０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、真空で濃縮した。この得られた残留物をＤＣＭ（５ｍＬ）、ＥｔＯＨ（１４ｍＬ）、Ｈ_２Ｏ（７ｍＬ）及びシリカゲル（１０ｇ）で処理した。この粘稠な混合物を室温で３日間撹拌した。この混合物を焼結漏斗にゆっくり通して濾過し、シリカ残留物を９０％ＣＨＣｌ_３：１０％ＭｅＯＨ（約２５０ｍＬ）で溶離液からＵＶ活性が完全に消えるまで洗浄した。この有機相をＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）、ブライン（６０ｍＬ）で洗浄、乾燥（ＭｇＳＯ_４）濾過し、真空で蒸発させて、粗製の物質を得た。この粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィー（９７％ＣＨＣｌ_３：３％ＭｅＯＨ）により精製して、等質なＣ２／Ｃ２’アリールＰＢＤ二量体１１（１８５ｍｇ）を６１％収率で得た。

【0484】

１Ｈ−ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ ７．８８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），７．８７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），７．５２（ｓ，２Ｈ），７．３９（ｂｓ，１Ｈ），７．３７−７．２８（ｍ，３Ｈ），７．２０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），６．８９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），６．８７（ｓ，１Ｈ），６．８６（ｓ，１Ｈ），６．６７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），４．４０−４．２０（ｍ，６Ｈ），３．９４（ｓ，６Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），３．６１−３．５０（ｍ，２Ｈ），３．４０−３．３０（ｍ，２Ｈ），２．４７−２．４０（ｍ，２Ｈ）。^１３Ｃ−ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ_３，１００ＭＨｚ）δ １６２．５（イミンメチン），１６１．３，１６１．１，１５９．３，１５６．０，１５１．１，１４８．１，１４６．２，１４０．３，１２６．２（メチン），１２３．２，１２２．０，１２０．５（メチン），１１９．４，１１５．２（メチン），１１４．３（メチン），１１１．９（メチン），１１１．２（メチン），６５．５（メチレン），５６．２（メトキシ），５５．４（メトキシ），５３．９（メチン），３５．６（メチレン），２８．９（メチレン）。

【0485】

（実施例２）

【化76】

【0486】

（ａ）（Ｓ）−２−（４−アミノフェニル）−７−メトキシ−８−（５−（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）ペンチルオキシ）−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５，１１（１０Ｈ，１１ａＨ）−ジオン（１２）
固体Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（３２ｍｇ、２７．７μｍｏｌ）を、３０℃にあるＨ_２Ｏ（５ｍＬ）中、４−メトキシフェニルボロン酸（０．２０２ｇ、１．３２ｍｍｏｌ）、Ｎａ_２ＣＯ_３（０．１６９ｇ、１．６ｍｍｏｌ）と共に、撹拌溶液ビス−トリフラート８ｂ（１．０４ｇ、０．９１ｍｍｏｌ）／トルエン（１０ｍＬ）＋ＥｔＯＨ（５ｍＬ）に加えた。この反応混合物を窒素雰囲気下で２０時間撹拌した。さらなる固体４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボララン−２−イル）アニリン（０．２０３ｇ、０．９３ｍｍｏｌ）及びＮａ_２ＣＯ_３（０．０５６ｇ、０．５３ｍｍｏｌ）を加え、そのあと固体Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（１０ｍｇ、８．６μｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を窒素雰囲気下でさらに２０時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳにより所望生成物が生成したことが示された。ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（１００ｍＬ）を加え、水相を分離させ、ＥｔＯＡｃ（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ_２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄、乾燥（ＭｇＳＯ_４）、濾過、蒸発させて黒茶色の油状物を得た。この油状物をＤＣＭに溶解させ、ＤＣＭ（１ｖｏｌ）で予め平衡化させてある１０ｇ ＳＣＸ−２カートリッジに負荷した。このカートリッジをＤＣＭ（３ｖｏｌ）、ＭｅＯＨ（３ｖｏｌ）で洗浄し、この粗製生成物を２ＭＮＨ_３／ＭｅＯＨ（２ｖｏｌ）で溶離させた。フラッシュクロマトグラフィー（５０％ｎ−ヘキサン：５０％ＥｔＯＡｃ→２０％ｎ−ヘキサン：８０％ＥｔＯＡｃ）により等質な二量体１２を黄色の泡状物（０．１６ｇ、３４％）として得た。

【0487】

分析データ：［α］^２３_Ｄ＝＋３８８°（ｃ＝０．２２，ＣＨＣｌ_３）；１Ｈ−ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ ７．３９（ｓ，２Ｈ），７．３５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ），７．３２（ｂｓ，１Ｈ），７．２６−７．２３（ｍ，５Ｈ），６．８９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），６．６６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），５．５５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），４．７３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），４．７２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），４．６２（ｔｄ，２Ｈ，Ｊ＝３．２，１０．４Ｈｚ），４．１５−４．０５（ｍ，４Ｈ），４．００−３．８５（ｍ，８Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），３．７７−３．６３（ｍ，４Ｈ），３．２０−３．０５（ｍ，２Ｈ），２．０５−１．９５（ｍ，４Ｈ），１．７５−１．６７（ｍ，２Ｈ）１．０１−０．９５（ｍ，４Ｈ），０．０３（ｓ，１８Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ（相対強度）１０４７（［Ｍ＋Ｈ］^＋，４５）。

【0488】

（ｂ）（Ｓ）−２−（４−アミノフェニル）−７−メトキシ−８−（５−（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）ペンチルオキシ）−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン（１３）
新鮮ＬｉＢＨ_４（６６ｍｇ、３．０４ｍｍｏｌ）を撹拌溶液ＳＥＭ−ジラクタム１２（４２８ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）／ＴＨＦ（３ｍＬ）＋ＥｔＯＨ（３ｍＬ）（０℃（アイスバス））に加えた。アイスバスを取り除き、この反応混合物を室温まで到達せしめた（激しい泡立ち）。２時間後、ＬＣ／ＭＳ分析により、出発物質は完全に消費されていることが示された。この反応混合物を氷（５０ｍＬ）に注ぎ、撹拌しながら室温まで昇温させた。この水性混合物をＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄、乾燥（ＭｇＳＯ_４）真空濃縮した。この得られた残留物をＤＣＭ（２ｍＬ）、ＥｔＯＨ（５ｍＬ）、Ｈ_２Ｏ（２．５ｍＬ）及びシリカゲル（３．７ｇ）で処理した。この粘稠混合物を室温で３日間撹拌した。この混合物を焼結漏斗に通して濾過し、シリカ残留物を９０％ＣＨＣｌ_３：１０％ＭｅＯＨ（約２５０ｍＬ）で溶離液からＵＶ活性が完全に消えるまで洗浄した。この有機相を乾燥（ＭｇＳＯ_４）濾過、真空蒸発させて、粗製の物質を得た。この粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィー（９９．５％ＣＨＣｌ_３：０．５％ＭｅＯＨ→９７．５％ＣＨＣｌ_３：２．５％ＭｅＯＨ／０．５％インクレメント）により精製して、等質なＣ２／Ｃ２’アリールＰＢＤ二量体１３（５９ｍｇ、５２％）を得た。

【0489】

分析データ：［α］^２８_Ｄ＝＋７６０°（ｃ＝０．１４，ＣＨＣｌ_３）；^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ７．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），７．８７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），７．５２（ｓ，２Ｈ），７．３９（ｂｓ，１Ｈ），７．３７−７．２８（ｍ，３Ｈ），７．２２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），６．９１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），６．８１５（ｓ，１Ｈ），６．８１（ｓ，１Ｈ），６．６８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），４．４５−４．３５（ｍ，２Ｈ），４．２−４．０（ｍ，４Ｈ），３．９４（ｓ，６Ｈ），３．８５−３．７（ｓ，３Ｈ），３．６５−３．５０（ｍ，２Ｈ），３．４５−３．３（ｍ，２Ｈ），２．０５−１．９（ｍ，４Ｈ），１．７５−１．６５（ｍ，２Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ^＋）（相対強度）７５４．６（［Ｍ＋Ｈ］^＋，１００），（ＥＳ⁻）（相対強度）７５２．５（［Ｍ−Ｈ］⁻，１００）。

【0490】

（実施例３）

【化77】

【0491】

（ａ）（Ｓ）−２−（チエン−２−イル）−７−メトキシ−８−（３−（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（トリフルオロメタンスルホニルオキシ）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）プロピルオキシ）−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５，１１（１０Ｈ，１１ａＨ）−ジオン（１４）
固体Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（４１ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ）を、Ｈ_２Ｏ（５ｍＬ）中、チエン−２−イルボロン酸（１４９ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）、Ｎａ_２ＣＯ_３（１５２ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）と共に、撹拌溶液ビス−トリフラート８（１ｇ、０．９ｍｍｏｌ）／トルエン（１０ｍＬ）＋ＥｔＯＨ（５ｍＬ）に加えた。この反応混合物を窒素雰囲気下で一晩室温にて撹拌した。溶媒を真空で蒸発させることにより除去し、得られた残留物をＨ_２Ｏ（１００ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）とに分配させた。水層をＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄、乾燥（ＭｇＳＯ_４）、濾過、真空蒸発させて、粗製生成物を得、これをフラッシュクロマトグラフィー（８０ヘキサン：２０ＥｔＯＡｃ→５０ヘキサン：５０ＥｔＯＡｃ）により精製して、二量体１４（１８８ｍｇ、２０％収率）を得た。

【0492】

分析データ：ＬＣ−ＭＳ ＲＴ ４．２７ｍｉｎ、１０５１（Ｍ＋Ｈ）；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨＺ，ＣＤＣｌ_３）δ ７．３６（ｓ，１Ｈ），７．３１（ｂｓ，１Ｈ），７．２７（ｂｓ，１Ｈ），７．２６−７．２３（ｍ，２Ｈ），７．２２−７．１７（ｍ，１Ｈ），７．１２（ｂｓ，１Ｈ），７．０２−６．９６（ｍ，２Ｈ），５．５０（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，２Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，２Ｈ），４．６５−４．５５（ｍ，２Ｈ），４．３７−４．１３（ｍ，４Ｈ），４．００−３．８５（ｍ，８Ｈ），３．８−３．６（ｍ，４Ｈ），３．２０−３．１０（ｍ，２Ｈ），２．５０−２．３５（ｍ，２Ｈ），１．０−０．９（ｍ，４Ｈ），０（ｓ，１８Ｈ）。

【0493】

（ｂ）（Ｓ）−２−（チエン−２−イル）−７−メトキシ−８−（３−（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（トリフルオロメタンスルホニルオキシ）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）ペンチルオキシ）−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５，１１（１０Ｈ，１１ａＨ）−ジオン（１５）
固体Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（７．６６ｍｇ、６．６３μｍｏｌ）を、白濁、撹拌溶液１４（１７４ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）＋Ｎａ_２ＣＯ_３（２８ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）＋４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボララン−２−イル）アニリン（４７ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）／トルエン（２−５ｍＬ）＋ＥｔＯＨ（１．２５ｍＬ）＋Ｈ_２Ｏ（１２５ｍＬ）（室温）に加えた。この反応混合物をＮ_２雰囲気下で２４時間撹拌した。この時点で、ＬＣ／ＭＳ主ピーク（＠３．９７ｍｉｎ、ＦＷ＝１０１６、Ｍ＋Ｎａ）及びＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）により、この反応は完了とみなされた。溶媒を真空で蒸発させることにより除去し、得られた残留物をＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）とＨ_２Ｏ（３０ｍＬ）とに分配させた。各層を分離させ、有機相をＨ_２Ｏ（２０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄、乾燥（ＭｇＳＯ_４）濾過し、真空で蒸発させて、粗製の生成物（１２３ｍｇ、７５％収率）を得た。

【0494】

分析データ：ＬＣ−ＭＳ ＲＴ ３．９８ｍｉｎ、１００％面積，９９４（Ｍ＋Ｈ）；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨＺ，ＣＤＣｌ_３）δ ７．４０（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），７．３０（ｔ，Ｊ ＝１．７０Ｈｚ，１Ｈ），７．２９−７．２７（ｍ，３Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．２１（ｄｄ，Ｊ＝１．４，４．７３Ｈｚ，１Ｈ），７．０３−６．９７（ｍ，２Ｈ），６．６６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），５．５２（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，２Ｈ），４．７８（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ），４．７７（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６２（ｄｄ，Ｊ＝３．４，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），４．５９（ｄｄ，Ｊ＝３．４０，１０．６Ｈｚ，１Ｈ），４．３０（ｔ，Ｊ＝５．８５Ｈｚ，４Ｈ），３．８５−４．０３（ｍ，８Ｈ），３．８４−３．６４（ｍ，６Ｈ），３．１８（ｄｄｄ，Ｊ＝２．２，１０．５，１６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．１１（ｄｄｄ，Ｊ＝２．２，１０．５，１６．０Ｈｚ，１Ｈ），２．４４（ｐ，Ｊ＝５．８５Ｈｚ，２Ｈ），０．９８（ｔ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，４Ｈ），０（ｓ，１８Ｈ）。

【0495】

（ｃ）（Ｓ）−２−（チエン−２−イル）−７−メトキシ−８−（３−（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−アミノフェニル）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）プロピルオキシ）−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン（１６）
新鮮ＬｉＢＨ_４（４７ｍｇ、２，２２ｍｍｏｌ）を撹拌溶液ＳＥＭ−ジラクタム１５（１１０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）／乾燥ＴＨＦ（３ｍＬ）＋ＥｔＯＨ（３ｍＬ）（０℃（アイスバス）に加えた。アイスバスを取り除き、この反応混合物をＮ_２雰囲気下で１時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳ分析によるこの反応の分析により、所望生成物（Ｐｋ＠２．５７ｍｉｎ（Ｉ＝６９．３２）、ＦＷ＝７０２、Ｍ＋Ｈ）及び半イミンが相当量生成していることが明らかにされた。この反応混合物をさらに１時間撹拌した。さらなる反応の進行はないことがＬＣ／ＭＳによりこの時点で観測された。この反応混合物を氷に注ぎ、撹拌し、室温まで昇温させた。ＤＣＭ（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）とに分配させた後、水相をＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、溶媒を減圧下の真空で蒸発させることにより除去した。

【0496】

この得られた残留物をＤＣＭ（５ｍＬ）、ＥｔＯＨ（１５ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（７ｍＬ）に溶解させ、そのあとシリカゲル（５ｇ）で処理した。この反応物を室温で４８時間撹拌した。シリカを焼結漏斗に通して濾過することにより除去し、残留物を９０：１０ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）で濯ぎ洗いした。この濾液にＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）を加え、各層を分離させた（震盪の後）。水層をＣＨＣｌ_３（２×３０ｍＬ）で抽出し、Ｈ_２Ｏ（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）、乾燥（ＭｇＳＯ_４）濾過、真空で蒸発させて、粗製の生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ_３→９８％ＣＨＣｌ_３：２％ＭｅＯＨ）により生成物（４１ｍｇ、５３％）を得た。

【0497】

分析データ：ＬＣ−ＭＳ ＲＴ ２．５５ｍｉｎ、７０２（Ｍ＋Ｈ）。

【0498】

（実施例４）

【化78】

【0499】

（ａ）（Ｓ）−２−（４−メトキシフェニル）−７−メトキシ−８−（３−（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（トリフルオロメチルスルホニル）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）プロピルオキシ）−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５，１１（１０Ｈ，１１ａＨ）−ジオン（１７）
固体４−メトキシベンゼンボロン酸（０．３８８ｇ、２．５５ｍｍｏｌ）を溶液ＳＥＭ保護ビストリフラート（８ａ）（３．０ｇ、２．６９ｍｍｏｌ）＋炭酸ナトリウム（４２６ｍｇ、４．０２ｍｍｏｌ）＋パラジウムテトラキストリフェニルホスフィン（０．０８ｍｍｏｌ）／トルエン（５４．８ｍＬ）＋エタノール（２７ｍＬ）＋水（２７ｍＬ）に加えた。この反応混合物を室温で３時間撹拌した。この反応混合物を酢酸エチルと水とに分配させた。有機層を水及びブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム入れて乾燥させた。減圧下のロータリーエバポレーターにより過剰溶媒を除去し、得られた残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；勾配溶離ＥｔＯＡｃ／ヘキサン３０／７０→３５／６５→４０／６０→４５／５５）に付して、未反応ビス−トリフラート（０．６ｇ）を除去した。選択されたフラクションから過剰溶離液を除去して、この４−メトキシフェニル連結生成物（１．２７ｇ、１．１８ｍｍｏｌ、４１％）を得た。

【0500】

ＬＣ−ＭＳ ＲＴ ４．３０ｍｉｎ、１０７６（Ｍ＋Ｈ）；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨＺ，ＣＤＣｌ_３）δ ７．４１（ｓ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．３５（ｓ，１Ｈ），７．３４（ｂｓ，１Ｈ），７．２９（ｓ，１Ｈ），７．１６（ｔ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），５．５３（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，２Ｈ），４．７９（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ），４．７８（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６６−４．６０（ｍ，２Ｈ），４．３０（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，４Ｈ），４．０−３．９４（ｍ，２Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．８３−３．６０（ｍ，４Ｈ），３．２２−３．１０（ｍ，２Ｈ），２．４５（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），１．０５−０．９４（ｍ，４Ｈ），０（ｓ，１８Ｈ）。

【0501】

（ｂ）（Ｓ）−２−（３−アミノフェニル）−７−メトキシ−８−（３−（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）プロピルオキシ）−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５，１１（１０Ｈ，１１ａＨ）−ジオン（１８）
固体３−アミノベンゼンボロン酸（０．１４３ｇ、０．９２ｍｍｏｌ）を溶液モノトリフラート（１７）（０．６１９ｇ、０．５８ｍｍｏｌ）＋炭酸ナトリウム（１９５ｍｇ、１．８４ｍｍｏｌ）＋パラジウムテトラキストリフェニルホスフィン（２６．６ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）／トルエン（１０ｍＬ）＋エタノール（５ｍＬ）＋水（５ｍＬ）に加えた。この反応混合物を３０℃の室温で一晩撹拌した。この反応混合物をこのあと酢酸エチルと水とに分配させた。有機層を水及びブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムを入れて乾燥させた。減圧下のロータリーエバポレーターにより過剰溶媒を除去し、得られた残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；勾配溶離ＥｔＯＡｃ／ヘキサン７０／３０→８５／１５）に付した。選択されたフラクションから過剰溶離液を除去して、所望生成物（０．５０２ｇ、０．４９ｍｍｏｌ、８５％）を得た。

【0502】

ＬＣ−ＭＳ ＲＴ ４．０２ｍｉｎ、１０１９（Ｍ＋Ｈ）；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨＺ，ＣＤＣｌ_３）δ ７．３８−７．３５（ｍ，４Ｈ），７．３３（ｂｓ，１Ｈ），７．３０（ｂｓ，１Ｈ），７．２５（ｓ，２Ｈ），７．１０（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８８−６．８０（ｍ，３Ｈ），６．７２（ｂｓ，１Ｈ），６．５７（ｄｄ，Ｊ＝７．９，１．８Ｈｚ，１Ｈ），５．５０（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，２Ｈ），４．７５（ｄ，１０．０Ｈｚ，２Ｈ），４．５８（ｄｄ，Ｊ＝１０．６，３．３Ｈｚ，２Ｈ），４．２７（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，４Ｈ），３．９５−３．９１（ｍ，２Ｈ），３．９０（ｓ，６Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），３．７７−３．６０（ｍ，６Ｈ），３．１５−３．０５（ｍ，２Ｈ），２．４１（ｐ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），０．９５（ｔ，＝８．２５Ｈｚ，４Ｈ），０（ｓ，１８Ｈ）。

【0503】

（ｃ）（Ｓ）−２−（３−アミノフェニル）−７−メトキシ−８−（３−（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）プロピルオキシ）−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン（１９）
スーパーヒドリド（superhydride）の溶液（０．５６ｍＬ、０．５６ｍｍｏｌ、１．０Ｍ／ＴＨＦ）を溶液ＳＥＭジラクタム（１８）（０．２７１ｇ、０．２７ｍｍｏｌ）／乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）（窒素雰囲気下−７８℃）に滴下で加えた。１時間後さらなるアリコートのスーパーヒドリド溶液（０．１３ｍｌ、０．１３ｍｍｏｌ）を加え、この反応混合物をもう０．５時間撹拌した。このとき、ＬＣ−ＭＳにより、還元は完了していることが示された。この反応混合物を水で希釈し、室温まで昇温させた。この反応混合物をクロロホルムと水とに分配させ、各層を分離させ、水層をさらなるクロロホルムで抽出した（エマルジョン）。最後に、この合わせた有機相をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムを入れて乾燥させた。この還元生成物をメタノール、クロロホルム及び水に溶解させ、シリカゲルの存在下に７２時間撹拌した。この粗製生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム勾配）に付し、選択されたフラクションから過剰溶離液を除去した後、所望イミン生成物（１５０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ、７７％）を得た。

【0504】

ＬＣ−ＭＳ ＲＴ ２．６３ｍｉｎ、９７％面積，７２６（Ｍ＋Ｈ）；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨＺ，ＣＤＣｌ_３）δ ７．８５（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｓ，１Ｈ），７．４９（ｓ，１Ｈ），７．４２（ｓ，１Ｈ），７．３６（ｓ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），７．１１（ｔ，（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９０−６．８０（ｍ，４Ｈ），６．７７（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），４．４０−４．２０（ｍ，６Ｈ），３．９２（ｓ，６Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），３．６０−３．２７（ｍ，６Ｈ），２．４８−２．２９（ｍ，２Ｈ）。

【0505】

（実施例５）

【化79】

【0506】

（ａ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−２，２，２−トリクロロエチル１１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−８−（５−（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−５−オキソ−１０−（（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ？１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）ペンチルオキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−２−（トリフルオロメチルスルホニルオキシ）−１１，１１ａ−ジヒドロ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシラート（２１）
固体４−メトキシベンゼンボロン酸（５９ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を溶液Ｔｒｏｃ保護ビストリフラート（化合物４４、国際公開第２００６／１１１７５９号パンフレット）（６００ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）＋炭酸ナトリウム（６５ｍｇ、０．６１ｍｍｏｍｌ）＋パラジウムテトラキストリフェニルホスフィン（０．０１２ｍｍｏｌ）／トルエン（１０．８ｍＬ）＋エタノール（５．４ｍＬ）＋水（５．４ｍＬ）に加えた。この反応混合物を室温で一晩撹拌した。この反応混合物をこのあと酢酸エチルと水とに分配させた。有機層を水及びブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムを入れて乾燥させた。減圧下のロータリーエバポレーターにより過剰溶媒を除去し、得られた残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；勾配溶離ＥｔＯＡｃ／ヘキサン２０／８０→３０／７０→４０／６０→６０／４０）に付して、未反応ビス−トリフラートを除去した。選択されたフラクションから過剰溶離液を除去することによりこの４−メトキシフェニル連結生成物（２６１ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ、４６％）を得た。

【0507】

ＬＣ−ＭＳ ＲＴ ４．１７ｍｉｎ、１４２７（Ｍ＋Ｈ）；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨＺ，ＣＤＣｌ_３）δ ７．３８（ｓ，１Ｈ），７．３３（ｓ，１Ｈ），７．３１（ｓ，１Ｈ），７．３０（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｓ，１Ｈ），７．２０（ｂｓ，１Ｈ），６．９２（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），６．７７（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．０−５．９０（ｍ，２Ｈ），５．２５（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．２４（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２４（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２２（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．１８−４．０８（ｍ，２Ｈ），４．０７−３．８９（ｍ，１０Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），３．４４−３．２５（ｍ，２Ｈ），２．８５（ｄ，Ｊ＝１６．６Ｈｚ，２Ｈ），２．０５−１．９０（ｍ，４Ｈ），１．７６−１．６４（ｍ，２Ｈ），０．９３（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｓ，９Ｈ），０．３０（ｓ，６Ｈ），０．２６（ｓ，６Ｈ）。

【0508】

（ｂ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−２，２，２−トリクロロエチル１１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−８−（５−（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−７−メトキシ−５−オキソ−１０−（（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）ペンチルオキシ）−７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシラート（２２）
化合物２１の合成にはステップ（ａ）で述べたＳｕｚｕｋｉカップリング手順を適用した。化合物２０（６２．５ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）を１当量の４−ヒドロキシベンゼンボロン酸（１０ｍｇ）で３０℃にて一晩処理し、シリカゲルのパッドに通して濾過した後、この所望生成物を得た（４０ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ、６６％収率）。この化合物は、そのまま、次のステップで用いた。

【0509】

ＬＣ−ＭＳ ＲＴ ４．２７ｍｉｎ、１３７１（Ｍ＋Ｈ）。

【0510】

（ｃ）（Ｓ）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−７−メトキシ−８−（５−（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）ペンチルオキシ）−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン（２３）
カドミウム／鉛カップル（１００ｍｇ、Q Dong et al. Tetrahedron Letters vol 36，issue 32，5681-5682，1995）を溶液２１（４０ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ）／ＴＨＦ（１ｍＬ）＋酢酸アンモニウム（１Ｎ、１ｍＬ）に加え、この反応混合物を１時間撹拌した。この反応混合物をクロロホルムと水とに分配させ、各相を分離させ、水相をクロロホルムで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムを入れて乾燥させた。減圧下のロータリーエバポレーターにより蒸発させて、粗製生成物を得、これをカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０→４％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３）に付した。減圧下のロータリーエバポレーターにより過剰溶離液を除去して、この所望イミン生成物（１７ｍｇ ０．０２３ｍｍｏｌ ７９％）を得た。

【0511】

ＬＣ−ＭＳ ＲＴ ２．２０ｍｉｎ、７５５（Ｍ＋Ｈ）；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨＺ，ＣＤＣｌ_３）δ ７．８９（ｄ，Ｊ＝３．９４Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝４．００Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｓ，１Ｈ），７．５２（ｓ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．２８（ｓ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），６．８１（ｓ，１Ｈ），５．６８（ｂｓ，１Ｈ），４．５０−４．３０（ｍ，２Ｈ），４．２２−４．００（ｍ，４Ｈ），３．９３（ｓ，６Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），３．６９−３．４５（ｍ，２Ｈ），３．４４−３．２８（ｍ，２Ｈ），２．６４−１．８８（ｍ，４Ｈ），１．７７−１．６２（ｍ，２Ｈ）。

【0512】

（実施例６）

【化80】

【0513】

（ａ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−２，２，２−トリクロロエチル１１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−８−（５−（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２−（４−ホルミルフェニル）−７−メトキシ−５−オキソ−１０−（（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）ペンチルオキシ）−７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシラート（２４）
化合物２４の合成には実施例５のステップ（ａ）で述べたＳｕｚｕｋｉカップリング手順を適用した。化合物２１（６２．５ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）を１当量の４−ホルミルベンゼンボロン酸（１０．５ｍｇ）で室温にて一晩処理し、シリカゲルのパッドに通して濾過した後、所望生成物を得た（４５ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ、７５％収率）。この化合物を、そのまま、次のステップで用いた。

【0514】

ＬＣ−ＭＳ ＲＴ ４．４２ｍｉｎ、１３８３（Ｍ＋Ｈ）。

【0515】

（ｂ）４−（（Ｓ）−７−メトキシ−８−（５−（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）ペンチルオキシ）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−２−イル）ベンズアルデヒド（２５）
化合物２４を実施例５のステップ（ｃ）で述べた方法で脱保護して、この所望化合物（１８ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ、７９％）を得た。

【0516】

ＬＣ−ＭＳ ＲＴ ３．１８ｍｉｎ、７６８（Ｍ＋Ｈ）；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨＺ，ＣＤＣｌ_３）δ ９．９８（ｓ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝３．９０Ｈｚ，１Ｈ），７．９０−７．８０（ｍ，３Ｈ），７．６８（ｓ，１Ｈ），７．６０−７．４５（ｍ，４Ｈ），７．３９（ｓ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．８３（ｓ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），４．５５−４．４４（ｍ，１Ｈ），４．４３−４．３６（ｍ，１Ｈ），４．２３−４．００（ｍ，４Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），３．６６−３．５１（ｍ，２Ｈ），３．５０−３．３４（ｍ，２Ｈ），２．０５−１．８７（ｍ，４Ｈ），１．７６−１６４（ｍ，２Ｈ）。

【0517】

（実施例７）

【化81】

【0518】

（ａ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−２，２，２−トリクロロエチル２−（３−アミノフェニル）−１１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−８−（５−（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−１０−（（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニル）−２−（トリフルオロメチルスルホニルオキシ）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）ペンチルオキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシラート（２６）
化合物２６の合成には、３−アミノベンゼンボロン酸を用いて、実施例５のステップ（ａ）で述べたＳｕｚｕｋｉカップリング手順を適用して、この所望化合物を４１％収率（２３０ｍｇ、０．１６３ｍｍｏｌ）で得た。

【0519】

ＬＣ−ＭＳ ＲＴ ４．２８ｍｉｎ、１４１１（Ｍ＋Ｈ）；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨＺ，ＣＤＣｌ_３）δ ７．４４（ｂｓ，１Ｈ），７．２９（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｓ，１Ｈ），７．２０（ｓ，１Ｈ），７．１６（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．８４−６．７３（ｍ，３Ｈ），６．７０（ｂｓ，１Ｈ），６．６２（ｄｄ，Ｊ＝７．９，１．７Ｈｚ，１Ｈ），６．６６−６．５８（ｍ，２Ｈ），５．２５（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．２４（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２４（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２２（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．１７−４．０７（ｍ，２Ｈ），４．０８−３．８９（ｍ，１０Ｈ），３．４３−３．２８（ｍ，２Ｈ），２．８５（ｄ，Ｊ＝１．６５Ｈｚ，２Ｈ），２．０７−１．９０（ｍ，４Ｈ），１．７８−１．６３（ｍ，２Ｈ），０．９４（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｓ，９Ｈ），０．３０（ｓ，６Ｈ），０．２７（ｓ，６Ｈ）。

【0520】

（ｂ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−２，２，２−トリクロロエチル２−（３−アミノフェニル）−１１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−８−（５−（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２−（４−（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）フェニル）−７−メトキシ−５−オキソ−１０−（（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）ペンチルオキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシラート（２７）
固体４−［３−（ジメチルアミノ）プロポキシベンゼンボロン酸ピナコールエステル（２５ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）を溶液２６（７３ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌｍｍｏｌ）＋炭酸ナトリウム（１８ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）＋パラジウムテトラキストリフェニルホスフィン（３ｍｇ）／トルエン（１ｍＬ）＋エタノール（０．５ｍＬ）＋水（０．５ｍＬ）に加えた。この反応混合物を室温で一晩撹拌した。この反応混合物をこのあと酢酸エチルと水とに分配させた。有機層を水及びブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムを入れて乾燥させた。減圧下のロータリーエバポレーターにより過剰溶媒を除去し、得られた残留物をクロロホルム／メタノールでのシリカゲルプラグに通して溶離させた。選択されたフラクションから過剰溶離液を除去して、この４−メトキシフェニル連結生成物（５０ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ、６７％）を得た。

【0521】

ＬＣ−ＭＳ ＲＴ ４．１２ｍｉｎ、１４４０（Ｍ＋Ｈ）。

【0522】

（ｃ）（Ｓ）−２−（３−アミノフェニル）−８−（５−（（Ｓ）−２−（４−（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）フェニル）−７−メトキシ−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）ペンチルオキシ）−７−メトキシ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン（２８）
化合物２７を実施例５のステップ（ｃ）で述べた方法で脱保護して、この所望化合物を得た。この反応混合物をＤＣＭと炭酸水素ナトリウム水溶液（エマルジョン）とに分配させ、粗製生成物をシリカゲルでの勾配カラムクロマトグラフィー（５％メタノールクロロホルム→３５％メタノール／クロロホルム）により精製して、この所望不斉ＰＢＤイミン（５０ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ、５８％）を得た。

【0523】

ＬＣ−ＭＳ ＲＴ ２．５５ｍｉｎ、８２６（Ｍ＋Ｈ）；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨＺ，ＣＤＣｌ_３）δ ７．９２−７．８２（ｍ，２Ｈ），７．５２（ｂｓ，２Ｈ），７．４５（ｂｓ，１Ｈ），７．３９（ｂｓ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．１４（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），６．８５−６．７５（ｍ，３Ｈ），６．７２（ｂｓ，１Ｈ），６．６０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４６−４．３３（ｍ，２Ｈ），４．２１−３．９８（ｍ，６Ｈ），３．９４（ｓ，６Ｈ），３．６３−３．５０（ｍ，２Ｈ），３．４３−３．２９（ｍ，２Ｈ），２．６４−２．４８（ｍ，２Ｈ），２．３４（ｓ，６Ｈ），２．１０−１．８９（ｍ，６Ｈ），１．５７（ｍ，２Ｈ）。

【0524】

（実施例８）

【化82】

【0525】

（ａ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−２，２，２−トリクロロエチル２−（３−アミノフェニル）−１１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−８−（５−（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−７−メトキシ−２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−５−オキソ−１０−（（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）ペンチルオキシ）−７−メトキシ−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシラート（２９）
実施例７のステップ（ｂ）の方法を実行し、シリカゲルのプラグに通して（１／３メタノール／クロロホルムで）濾過し、減圧下のロータリーエバポレーターにより過剰溶媒を除去することによりこの所望生成物（５８ｍｇ、０．０４０ｍｍｏｌ、７８％）を得た。

【0526】

ＬＣ−ＭＳ ＲＴ ４．０８ｍｉｎ、１４３９（Ｍ＋Ｈ）。

【0527】

（ｂ）（Ｓ）−２−（３−アミノフェニル）−７−メトキシ−８−（５−（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）ペンチルオキシ）−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン（３０）
実施例７のステップ（ｃ）の方法を用いて化合物２９を脱保護した。この粗製生成物をシリカゲル勾配クロマトグラフィー（２％メタノールクロロホルム→３５％メタノール／クロロホルム）により精製して、この所望不斉ＰＢＤイミン（１８ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、５９％）を得た。

【0528】

ＬＣ−ＭＳ ＲＴ ２．５２ｍｉｎ、８２３（Ｍ＋Ｈ）；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨＺ，ＣＤＣｌ_３）δ ７．８０（ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４５（ｓ，２Ｈ），７．３８（ｓ，１Ｈ），７．３０（ｓ，１Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．０７（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），６．７９−６．８９（ｍ，３Ｈ），６．６５（ｓ，１Ｈ），６．５４（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），４．４０−４．２４（ｍ，２Ｈ），４．１５−３．９３（ｍ，４Ｈ），３．８７（ｓ，６Ｈ），３．５６−３．４２（ｍ，２Ｈ），３．３７−３．２３（ｍ，２Ｈ），３．２２−３．０８（ｍ，４Ｈ），２．６１−２．４１（ｍ，４Ｈ），２．２９（ｓ，３Ｈ），１．９８−１．８０（ｍ，４Ｈ），１．６７−１．５４（ｍ，２Ｈ）。

【0529】

（実施例９）

【化83】

【0530】

（ａ）（Ｓ）−２−（４−（アミノメチル）フェニル）−７−メトキシ−８−（３−（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）プロピルオキシ）−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５，１１（１０Ｈ，１１ａＨ）−ジオン（３１）
固体４−アミノメチルベンゼンボロン酸ヒドロクロリド（０．１１１ｇ、０．５９ｍｍｏｌ）を溶液１７（０．３９４ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）＋炭酸ナトリウム（１７５ｍｇ、１．６５４ｍｍｏｌ）＋パラジウムテトラキストリフェニルホスフィン（２８．０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）／トルエン（１０ｍＬ）＋エタノール（５ｍＬ）＋水（５ｍＬ）に加えた。この反応混合物を一晩３０℃で撹拌した。次の日、この反応混合物をさらに３時間７０℃で加熱した。この反応混合物をこのあと酢酸エチルと水とに分配させた。有機層を水及びブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムを入れて乾燥させた。減圧下のロータリーエバポレーターにより過剰溶媒を除去し、得られた残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；勾配溶離ＥｔＯＡｃ／ヘキサン２／９８→１５／８５）に付した。選択されたフラクションから過剰溶離液を除去して、この所望生成物（０．２３０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ、６１％）を得た。

【0531】

ＬＣ−ＭＳ ＲＴ ３．６３ｍｉｎ、１０３４（Ｍ＋２Ｈ）；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ ｄ_６）δ １１．７（ (ｓ，２Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．４０（ｓ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ），７．３８−７．１９（ｍ，５Ｈ）６．９３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），５．４０（ｄ，Ｊ＝２．１３Ｈｚ，１Ｈ），５．３８（ｄ，Ｊ＝２．１２Ｈｚ，１Ｈ），５．３２（ｄ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ，２Ｈ），５．２５（ｄ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ，２Ｈ），４．８７−４．７２（ｍ，２Ｈ），４．３５−４．１５（ｍ，４Ｈ），３．８５（ｓ，６Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），３．７３−３．５６（ｍ，２Ｈ），３．５５−３．３９（ｍ，４Ｈ），３．２２−３．０２（ｍ，２Ｈ），２．３９−２．２３（ｍ，２Ｈ），０．９４−０．６７（ｍ，４Ｈ），−０．０６（ｓ，１８Ｈ）。

【0532】

（ｂ）（Ｓ）−２−（４−（アミノメチル）フェニル）−７−メトキシ−８−（３−（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）プロピルオキシ）−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン（３２）
実施例１のステップ（ｃ）に従って化合物３１を脱保護した。この粗製生成物を勾配カラムクロマトグラフィー（５／９５→３０／７０ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３）により精製して、この生成物をイミンとカルビノールアミンメチルエーテルの混合物として得た。

【0533】

ＬＣ−ＭＳ ＲＴ ２．５８ｍｉｎ、７４０（Ｍ＋Ｈ）。

【0534】

（実施例１０）

【化84】

【0535】

（Ｓ）−２−（４−アミノフェニル）−７−メトキシ−１１（Ｓ）−スルホ−８−（３−（（Ｓ）−７−メトキシ−１１（Ｓ）−スルホ−２−（４−メトキシフェニル）−５−オキソ−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イルオキシ）プロピルオキシ）−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン二ナトリウム塩（３３）
亜硫酸水素ナトリウム（８．５ｍｇ、３．１ｅｑ）を撹拌懸濁液ビス−イミン１１（２０ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ）／イソプロパノール（４ｍＬ）＋水（２ｍＬ）に加えた。この反応混合物を激しく撹拌すると、そのうち、透明になった（約１時間）。この反応混合物を漏斗に移し、コットンウォールに通して濾過した（及びそのあと２ｍＬの水で洗浄した）。この濾液を急速冷凍し（液体及びバスに）、凍結乾燥させて、この所望生成物３３を一定量の収率で得た。

【0536】

ＬＣ−ＭＳ ＲＴ １１．７７ｍｉｎ、７２７．２（Ｍ＋Ｈ）（親化合物の質量、重亜硫酸塩付加物質量分光計では不安定）；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ７．６６−７．５５（ｍ，５Ｈ），７．４３（ｓ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝８．６６Ｈｚ，２Ｈ），７．０６（ｍ，２Ｈ），６．９３（ｄ，Ｊ＝８．８４Ｈｚ，２Ｈ），６．５４（ｍ，２Ｈ），５．２９−５．２１（ｍ，２Ｈ），４．３２−４．２８（ｍ，２Ｈ），４．１４−４．２０（ｍ，４Ｈ），３．９６−３．８３（ｍ，２Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．７３（ｍ，６Ｈ），３．５２−３．４３（ｍ，２Ｈ），３．３０−３．０８（ｍ，２Ｈ），２．２４−２．２１（ｍ，２Ｈ）。

【0537】

（実施例１１）

【化85】

【0538】

(a)(S)-2-(2-アミノフェニル)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5,11-ジオキソ-10-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-5,10,11,11a-テトラヒドロ-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-10-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5,11(10H,11aH)-ジオン(103):
エタノール(5mL)、トルエン(5mL)及び水(5mL)中のモノトリフレート(17)(380mg)、2-アミノフェニルボロン酸のピナコールエステル(124mg)及び炭酸ナトリウム(120mg)の混合物に、触媒量のテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム(0)(11.2mg)を添加した。反応混合物を室温で一夜、そして40℃で反応が完結するまで(約2時間)撹拌したままにした。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機層を水及びブラインで洗浄した。酢酸エチル溶液を硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空下で濾過した。減圧下にロータリー蒸発によって酢酸エチルを除去して粗生成物を得て、それをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、酢酸エチル/ヘキサン)にかけた。純粋な画分を集め、一緒にした。過剰な溶離液を減圧下でのロータリー蒸発により除去して、純粋な生成物(103)を得た(330mg、収率86%)。LC/MS RT:4.17分、ES⁺1018.48。

【0539】

(b)(S)-2-(2-アミノフェニル)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5(11aH)-オン(104):
2-アナリノ化合物(103)(300mg)の無水テトラヒドロフラン(5mL)溶液に、スーパーヒドリド(Superhydride)の無水テトラヒドロフラン溶液(1.0M、4.4当量)を、不活性雰囲気下に-78℃で添加した。還元が徐々に進行するにつれて、水素化ホウ素リチウム(20当量)のアリコートを添加し、反応混合物を室温に戻した。反応混合物に水/氷を添加して未反応のヒドリドを失活させ、反応物をジクロロメタンで希釈した。有機層を水(2回)、クエン酸及びブラインで逐次的に洗浄した。過剰のジクロロメタンを、減圧下でのロータリー蒸発によって除去し、残留物をエタノール及び水に再溶解し、シリカゲルで96時間処理した。反応混合物を真空で濾過し、濾液を蒸発乾固した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、クロロホルム/メタノールでのグラジエント)にかけた。純粋な画分を集め、一緒にし、過剰な溶離液を減圧下でのロータリー蒸発により除去して、純粋な生成物(104)を得た(30mg、収率14%)。LC/MS RT:2.90分、ES⁺726.09。

【0540】

（実施例１２：代表ＰＢＤ化合物のインビトロ細胞傷害の測定）
Ｋ５６２アッセイ
Ｋ５６２ヒト慢性骨髄白血病細胞を、５％ＣＯ_２含有加湿雰囲気中の３７℃にある、１０％ウシ胎仔血清及び２ｍＭグルタミンが補充されたＲＰＭ１ １６４０培地に保持し、指定された用量の薬物と共に１時間又は９６時間３７℃の暗闇でインキュベートした。このインキュベーションを遠心分離（５ｍｉｎ、３００ｇ）により停止させ、細胞を、１回、薬物不含有培地で洗浄した。適切に薬物処理した後、その細胞を９６ウェルマイクロタイタープレート（１ウェル当たり１０^４細胞、１サンプル当たり８ウェル）に移した。プレートをこのあと５％ＣＯ_２含有加湿雰囲気中３７℃の暗闇で保管した。このアッセイは、黄色可溶性テトラゾリウム塩である３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ、Ａｌｄｒｉｃｈ−Ｓｉｇｍａ）を不溶性紫色ホルマザン沈殿物［formazan precipitate］に還元する生存細胞の能力に基づくものである。各プレートを４日間インキュベートした後（対照細胞の数をおよそ１０倍に増やすために）、２０μＬのＭＴＴ溶液（リン酸緩衝生理食塩水中５ｍｇ／ｍＬ）を各ウェルに加え、このプレートをさらに５時間インキュベートした。このプレートをこのあと５ｍｉｎ間３００ｇで遠心分離し、細胞プレートから培地の大部分をピペット取り出しして１ウェル当たり１０〜２０μＬを残した。ＤＭＳＯ（２００μＬ）を各ウェルに加え、完全混合を確実なものにするためサンプルを撹拌した。このあとＴｉｔｅｒｔｅｋ ＭｕｌｔｉｓｃＥＬＩＳＡプレート読み取り機で光学密度を５５０ｎｍの波長で読み取って、用量−応答曲線を作成した。それぞれの曲線に対して、ＩＣ_５０値を、最終光学密度を対照値の５０％まで低減させるのに必要とされる用量として読み取った。

【0541】

このアッセイでは化合物１３は３０ｐＭのＩＣ_５０を有している。

【0542】

Ａ２７８０アッセイ
Ａ２７８０親細胞を、Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｅｌｌｂｉｎｄ ７５ｃｍ^２フラスコ中の約１０％Ｆｏｅｔａｌ Ｃａｌｆ Ｓｅｒｕｍ（ＦＣＳ）及び約１％２００ｍＭ Ｌ−Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ溶液含有Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅｓ’Ｍｅｄｉ（ＤＭＥＭ）で増殖させた。

【0543】

１９０μｌ細胞懸濁液を９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ ９６Ｆ平坦底ＴＣプレート）のカラム２〜１１の各ウェルに加えた（１×１０^４で）。１９０μｌの培地をカラム１及び１２の各ウェルに加えた。この培地はＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅｓ’Ｍｅｄｉ（ＤＭＥＭ）（これには約１０％Ｆｏｅｔａｌ Ｃａｌｆ Ｓｅｒｕｍ（ＦＣＳ）及び約１％２００ｍＭ Ｌ−Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ溶液が含まれている）であった。

【0544】

プレートを一晩３７℃でインキュベートし、そのあと細胞が付着している場合は薬物を加えた。２００μＭの試験化合物溶液（１００％ＤＭＳＯ中）を９６ウェルプレートに沿って連続希釈した。各得られたポイントをこのあとさらに滅菌蒸留水（ＳＤＷ）に１／１０希釈した。

【0545】

細胞ネガティブブランクウェル及び化合物ネガティブコントロールウェルには、１０％ＤＭＳＯを５％ｖ／ｖで加えた。アッセイプレートを加湿インキュベーター中で次の期間（７２時間）５％ＣＯ_２中の３７℃でインキュベートした。インキュベーションの後、各ウェルにＭＴＴ溶液を１．５μＭの最終濃度まで加えた。プレートをこのあと加湿インキュベーター中で５％ＣＯ_２の３７℃でさらに４時間インキュベートした。培地をこのあと取り出して、染料を２００μｌ ＤＭＳＯ（９９．９９％）に溶かした。

【0546】

Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレート読み取り機を用いて５４０ｎｍの吸光度でプレートを読み取った。Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ及びＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを用いてデータを解析し、ＩＣ_５０値を得た。

【0547】

このアッセイでは化合物１１は１１．７ｐＭのＩＣ_５０を有している。

【0548】

腎細胞及びAML細胞株のアッセイ
種々の遊離薬物化合物の細胞障害性を、腎細胞がん細胞株786-O、ホジキンリンパ腫細胞株L428、並びに2種のAML細胞株HL60及びHELについて試験した。96時間のアッセイで、対数増殖期の培養細胞を、20%FBSで補足された150μLのRPMI1640を含む96ウェルプレート中に24時間播種した。試験物(すなわち、遊離薬物)の細胞培養培地での逐次希釈液を、4種の試験濃度で調製し、50μLの各希釈液を96ウェルプレートに添加した。試験物の添加に続いて、細胞を、試験物と共に37℃で4日間インキュベートした。次いで、各ウェルにリサズリンを50μMの最終濃度になるように添加し、プレートを37℃でさらに4時間インキュベートした。次いで、Fusion HTプレートリーダー(Packard Instruments、Meridien、コネティカット州、米国)を用い、それぞれ530及び590nmの励起及び発光波長で、プレートを染料還元の度合いについて読み取った。三つ組みで測定されたIC₅₀値を、本明細書では、未処理対照に比較して50%の細胞増殖低下をもたらす濃度と定義する。

【0549】

次表1を参照すると、このアッセイで、パラ-アニリン化合物11は、メタ-アニリン化合物19に比較して、これらの細胞株に対して著しい活性増加を示した。

【表1】

【0550】

次表2には、化合物28、30及び32のL428、786-O、HEL、HL-60及びMCF-7細胞に対する活性、並びに化合物19のMCF-7細胞に対する活性が示されている。

【表2】

【0551】

次表3では、化合物23、25の786-O、Caki-1、MCF-7、HL-60、THP-1、HEL、及びTF1細胞に対する活性が、化合物11のそれと比較されている。細胞を、側面が黒で底が透明の96ウェルプレート(Costar、Corning)中のウェル当たり150μLの増殖培地に播種し、バイオキャビネット中に1時間静置した後、37℃、5%CO₂のインキュベーター中に配置した。翌日、4種の濃度の薬物原液を調製し、次いで、8点の用量曲線を作出する10倍逐次希釈液として用量設定し、ウェル当たり50μLの二つ組みで添加した。次いで、細胞を、37℃、5%CO₂で48時間インキュベートした。細胞障害性は、100μLのCell Titer Glo(Promega)溶液と共に1時間インキュベートすることによる測定であり、次いで、発光をFusion HTプレートリーダー(Perkin Elmer)で測定した。データを、Excel(Microsoft)及びGraphPad(Prism)で処理して、用量-応答曲線を作出し、IC₅₀値を求め、データを集めた。

【表3】

【0552】

実施例13〜16では、次の化合物は、下記に示す通りの化合物番号によって呼ばれる。

【表4】

【0553】

(実施例13):PBD薬物-リンカー化合物の合成
一般情報
以下の実施例では、すべての市販無水溶媒をさらなる精製なしで使用した。分析薄層クロマトグラフィーは、シリカゲル60 F254アルミニウムシート(EMD Chemicals、Gibbstown、ニュージャージー州)を用いて実施した。ラジアルクロマトグラフィーは、Chromatotron装置(Harris Research、Palo Alto、カリフォルニア州)を用いて実施した。分析HPLCは、Varian ProStar 330 PDA検出器を備えた構成されたVarian ProStar210溶媒送液システムを用いて実施した。サンプルは、C12 Phenomenex Synergi 2.0×150mm、4μm、80Å、逆相カラムで溶離した。酸性移動相は、双方とも0.05%トリフルオロ酢酸又は0.1%ギ酸のどちらか(各化合物に対して示される)を含むアセトトリル及び水から構成した。化合物は、注入1分後の5%から11分の時点の95%までの酸性アセトニトリルでの線形グラジエント、それに続く15分までの95%アセトニトリルでのアイソクラティックで溶離した(流速=1.0mL/分)。LC/MSは、C12 Phenomenex Synergi 2.0×150mm、4μm、80Åの逆相カラムを備えたHP Agilent 1100 HPLC装置に連結されたZMD Micromass質量分光計を用いて実施した。酸性溶離液は、(5%〜95%)アセトニトリル/0.1%ギ酸水での10分間にわたる線形グラジエント、それに続く95%アセトニトリルでの5分間のアイソクラティックから構成した(流速=0.4mL/分)。分取HPLCは、Varian ProStar 330 PDA検出器を備えて構成されたVarian ProStar210溶媒送液システムを用いて実施した。生成物は、C12 Phenomenex Synergi 10.0×250mm、4μm、80Åの逆相カラムを用い、0.1%ギ酸/水(溶媒A)及び0.1%ギ酸/アセトニトリル(溶媒B)で溶離して精製した。精製方法は、溶媒A/溶媒Bが、0〜5分では90/10、5〜80分では90/10〜10/90のグラジエント、それに続く5分間の10/90でのアイソクラティックから構成した。流速は、4.6mL/分とし、254nmで監視した。NMRスペクトルデータは、Varian Mercury 400 MHz分光計で集めた。カップリング定数(J)はヘルツで報告する。

【化86】

【0554】

(S)-2-((S)-2-(6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ヘキサンアミド)-3-メチルブタンアミド)プロパン酸(36):
10.6mLの無水DMFに溶解したVal-Alaジペプチド(34)(200mg、1.06mmol)の溶液に、マレイミドカプロイルNHSエステル(35)(327mg、1.06mmol)を添加した。次いで、ジイソプロピルエチルアミン(0.92mL、5.3mmol)を添加し、反応物を窒素下に外界温度で18時間撹拌した。この時点で、TLC及び分析HPLCは、出発原料の消失を明らかにした。反応物を0.1M HCl(100mL)で希釈し、水層を酢酸エチル(100mL、3×)で抽出した。合わせた有機層を水及びブラインで洗浄し、次いで硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、濃縮した。粗生成物を最小量の塩化メチレンに溶解し、CH₂Cl₂/MeOH混合物(95/5〜90/10のCH₂Cl₂/MeOH)で溶離する2mm Chromatotronプレートでのラジアルクロマトグラフィーによって精製し、油状残渣として(36)を得た(158mg、39%)。TLC:R_f=0.26、10%MeOH/CH₂Cl₂。¹H NMR(CDCl₃) δ (ppm) 0.95(d, J=17Hz, 3H), 0.98(d, J=17Hz, 3H), 1.30(m, 2H), 1.40(d, J=17Hz, 3H), 1.61(m, 4H), 2.06(m, 1H), 2.25(dt, J=4, 19Hz, 2H), 3.35(s, 1H), 3.49(t, J=17Hz, 2H), 4.20(d, J=18Hz, 1H), 4.38(m, 1H), 6.80(s, 2H)。分析HPLC (0.1%ギ酸): t_R 9.05分。LC-MS: t_R 11.17分、m/z (ES⁺) 実測値381.9(M+H)⁺、m/z (ES^-) 実測値379.9(M-H)^-。

【0555】

6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)-N-((S)-1-(((S)-1-((4-((S)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5-,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)アミノ)-1-オキソプロパン-2-イル)アミノ)-3-メチル-1-オキソブタン-2-イル)ヘキサンアミド(38):
火炎で乾燥した10mLフラスコに、(36)(3.6mg、9.5μmol)、EEDQ(2.8mg、11.4μmol)、及び0.33mLの無水CH₂Cl₂を仕込んだ。溶解を促進するため、メタノール(4滴、約80μL)を添加し、混合物を窒素下で1時間撹拌した。次いで、PBD二量体(37)(5.7mg、7.9μmol)を添加し、反応物を室温で6時間撹拌した、この時点で、LC-MSは生成物への転化を明らかにした。反応物を濃縮し、最小量のCH₂Cl₂に溶解し、CH₂Cl₂/MeOH混合物(100/0〜90/10のCH₂Cl₂/MeOH)で溶離する1mm Chromatotronプレートでのラジアルクロマトグラフィーによって精製して、薬物-リンカー(38)を得た(3.9mg、45%)。TLC:R_f=0.06、5%MeOH/CH₂Cl₂。分析HPLC(0.1%ギ酸):t_R 11.51分。LC-MS:t_R12.73分、m/z(ES⁺) 実測値1089.6(M+H)⁺、m/z(ES^-) 実測値1087.3(M-H)^-。

【化87】

【0556】

6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)-N-(4-((S)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)ヘキサンアミド(40):
火炎で乾燥した10mLフラスコに、1.4mLの10%MeOH/CHCl₃溶媒混合物に溶解したPBD二量体(37)(25mg、34.4μmol)を添加した。マレイミドカプロン酸(39)(7.3mg、34.4μmol)、続いてEEDQ(10.2mg、41.3μmol)及びピリジン(6μL、68.8μmol)を添加した。反応物を窒素雰囲気下に室温で14時間撹拌した。この時点で、LC-MSは生成物への転化を明らかにした。反応物を濃縮し、最小量のCH₂Cl₂に溶解し、CH₂Cl₂/MeOH混合物(100/0〜90/10のCH₂Cl₂/MeOH)で溶離する1mm Chromatotronプレートでのラジアルクロマトグラフィーによって精製して、薬物-リンカー(40)を得た(14.1mg、45%)。LC-MS:t_R12.81分、m/z(ES⁺) 実測値918.9(M+H)⁺、m/z(ES^-) 実測値917.0(M-H)^-。

【化88】

【0557】

2-ブロモ-N-(4-((S)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)アセトアミド(41):
火炎で乾燥した10mLフラスコに、0.9mLの10%MeOH/CHCl₃溶媒混合物に溶解したPBD二量体(37)(16.5mg、22.7μmol)を添加した。ブロモ酢酸(3.2mg、22.7μmol)を、続いてEEDQ(6.8mg、27.2μmol)を添加した。反応物を窒素雰囲気下に室温で4時間撹拌した。この時点で、LC-MSは生成物への転化を明らかにした。反応物を濃縮し、最小量のCH₂Cl₂に溶解し、CH₂Cl₂/MeOH混合物(100/0〜95/5のCH₂Cl₂/MeOH)で溶離する1mm Chromatotronプレートでのラジアルクロマトグラフィーによって精製して、薬物リンカー(41)を得た(9.9mg、52%)。TLC:R_f=0.09、5%MeOH/CH₂Cl₂。LC-MS:t_R12.44分、m/z(ES⁺) 実測値848.1(M+H)⁺、m/z(ES^-) 実測値845.7(M-H)^-。

【化89】

【0558】

6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)-N-((S)-1-(((S)-1-((3-((S)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)アミノ)-1-オキソプロパン-2-イル)アミノ)-3-メチル-1-オキソブタン-2-イル)ヘキサンアミド(43):
火炎で乾燥した10mLフラスコに、酸(36)(3.6mg、9.4μmol)、EEDQ(2.8mg、11.3μmol)、及び0.38mLの無水CH₂Cl₂(1%のメタノールを含む)を仕込んだ。反応物を窒素下で1時間撹拌した。次いで、PBD二量体(42)(6.8mg、9.4μmol)を添加し、反応物を室温で2時間撹拌し、この時点で、LC-MSは生成物への転化を明らかにした。反応物を濃縮し、最小量のCH₂Cl₂に溶解し、CH₂Cl₂/MeOH混合物(100/0〜90/10のCH₂Cl₂/MeOH)で溶離する1mm Chromatotronプレートでのラジアルクロマトグラフィーによって精製して、薬物リンカー(43)を得た(3.1mg、30%)。TLC:R_f=0.31、10%MeOH/CH₂Cl₂。分析HPLC(0.1%ギ酸):t_R 11.49分。LC-MS:t_R12.28分、m/z(ES⁺) 実測値1089.5(M+H)⁺、m/z(ES^-) 実測値1087.3(M-H)^-。

【化90】

【0559】

6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)-N-(3-((S)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)ヘキサンアミド(44):
火炎で乾燥した10mLフラスコに、0.44mLの10%MeOH/CH₂Cl₂溶媒混合物に溶解したPBD二量体(42)(8.0mg、11μmol)を添加した。マレイミドカプロン酸(39)(2.3mg、11μmol)、続いてEEDQ(3.3mg、13.2μmol)及びピリジン(1.8μL、22μmol)を添加した。反応物を窒素雰囲気下に室温で3時間撹拌した。この時点で、LC-MSは生成物への転化を明らかにした。反応物をCH₂Cl₂/MeOH混合物(100/0〜90/10のCH₂Cl₂/MeOH)で溶離する1mm Chromatotronプレートでのラジアルクロマトグラフィーによって精製して、薬物リンカー化合物(44)を得た(1.2mg、12%)。TLC:R_f=0.45、10%MeOH/CH₂Cl₂。分析HPLC(0.05%トリフルオロ酢酸):t_R 11.71分。LC-MS:t_R12.63分、m/z(ES⁺) 実測値919.1(M+H)⁺、m/z(ES^-) 実測値917.1(M-H)^-。

【化91】

【0560】

(2S,3R,4S,5R,6R)-2-(2-(3-((((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)プロパンアミド)-4-((((3-((S)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)カルバモイル)オキシ)メチル)フェノキシ)-6-メチルテトラヒドロ-2H-ピラン-3,4,5-トリルトリアセテート(46):
火炎で乾燥したフラスコに、グルクロニドリンカー中間体(45)(参考文献:Jeffreyら、Bioconjugate Chemistry、2006、17、831〜840)(15mg、20μmol)、1.4mLの無水CH₂Cl₂、ピリジン(20μL、240μmol)を仕込み、次いで、窒素下で-78℃まで冷却した。次いで、ジホスゲン(3.0μL、24μmol)を添加し、反応物を-78℃で2時間撹拌した。その後の時点で、少量のアリコートをメタノールで失活させ、クロロギ酸グルクロニドの形成を確証する炭酸メチルの形成をLC-MSで分析した。次いで、PBD二量体(42)(15mg、20μmol)を0.7mLの無水CH₂Cl₂に溶解し、反応容器に滴加した。反応物を2時間かけて0℃まで暖め、次いで、50mLのCH₂Cl₂で希釈した。

【0561】

有機層を、水(50mL)、ブライン(50mL)で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、濃縮した。粗反応生成物を、10%MeOH/CH₂Cl₂で溶離する1mm Chromatotronプレートでのラジアルクロマトグラフィーによって精製して(46)を得た(5.7mg、19%)。TLC:R_f=0.47、10%MeOH/CH₂Cl₂。分析HPLC(0.1%ギ酸):t_R 12.09分、LC-MS:t_R 14.05分、m/z(ES⁺) 実測値1500.3(M+H)⁺。

【0562】

(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-(3-アミノプロパンアミド)-4-((((3-((S)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)カルバモイル)オキシ)メチル)フェノキシ)-3,4,5-トリヒドロキシテトラヒドロ-2H-ピラン-2-カルボン酸(47):
それぞれ0.2mLのMeOH、テトラヒドロフラン及び水からなる溶媒混合物に溶解した(46)(5.7mg、3.8μmol)を含むフラスコを0℃まで冷却した。撹拌された溶液に、水酸化リチウム一水和物(0.8mg、19μmol)を添加し、反応物を室温で4時間撹拌した。この時点で、LC-MSは生成物への転化を示した。氷酢酸(1.1μL、19μmol)を添加し、反応物を濃縮して(47)を得た。これを、さらなる精製なしで次に進めた。LC-MS:t_R 11.59分、m/z(ES⁺) 実測値1138.4(M+H)⁺。

【0563】

(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-(3-(6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ヘキサンアミド)プロパンアミド)-4-((((3-((S)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)カルバモイル)オキシ)メチル)フェノキシ)-3,4,5-トリヒドロキシテトラヒドロ-2H-ピラン-2-カルボン酸(48):
0.38mLの無水DMFに溶解した(47)(4.3mg、3.8μmol)の溶液に、マレイミドカプロイルNHSエステル(35)(1.2mg、3.8μmol)、続いてジイソプロピルエチルアミン(4.0μL、22.8μmol)を添加した。反応物を窒素下に室温で2時間撹拌した。この時点で、LC-MSは生成物への転化を明らかにした。反応物を、アセトニトリル(0.5mL)、DMSO(1mL)、水(0.5mL)の混合物で希釈し、次いで、分取HPLCで精製した。移動相は、双方とも0.1%のギ酸を含むA=水及びB=アセトニトリルから構成した。A/Bが75分間で90/10〜10/90となる線形溶離グラジエントを採用し、所望の生成物を含む画分を凍結乾燥して薬物-リンカー化合物(48)を得た(1.2mg、2ステップで24%)。分析HPLC(0.1%ギ酸):t_R 10.85分。LC-MS:t_R 12.12分、m/z(ES⁺) 実測値1331.4(M+H)⁺、m/z(ES^-) 実測値1329.5(M-H)^-。

【化92】

【0564】

6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)-N-((S)-1-(((S)-1-((3-((S)-7-メトキシ-8-((5-(((S)-7-メトキシ-2-(4-(4-メチルピペラジン-1-イル)フェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)ペンチル)オキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)アミノ)-1-オキソプロパン-2-イル)アミノ)-3-メチル-1-オキソブタン-2-イル)ヘキサンアミド(51):
火炎で乾燥した10mLフラスコに、酸(36)(2.7mg、7.1μmol)、EEDQ(2.1mg、8.5μmol)、及び0.28mLの無水CH₂Cl₂(1%のメタノールを含む)を仕込んだ。反応物を窒素下で1時間撹拌し、次いで、PBD二量体(49)(5.8mg、7.1μmol)を添加し、反応物を室温で20時間撹拌した。この時点で、LC-MSは生成物への転化を明らかにした。反応物を濃縮し、次いで、分取HPLCで精製し、所望の生成物を含む画分を凍結乾燥して薬物リンカー化合物(51)を得た(2.7mg、32%)。分析HPLC(0.1%ギ酸):t_R 9.17分。LC-MS:t_R11.25分、m/z(ES⁺) 実測値1185.3(M+H)⁺、m/z(ES^-) 実測値1182.9(M-H)^-。

【0565】

N-((S)-1-(((S)-1-((3-((S)-8-((5-(((S)-2-(4-(3-(ジメチルアミノ)プロポキシ)フェニル)-7-メトキシ-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)ペンチル)オキシ)-7-メトキシ-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)アミノ)-1-オキソプロパン-2-イル)アミノ)-3-メチル-1-オキソブタン-2-イル)-6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ヘキサンアミド(52):
火炎で乾燥した10mLフラスコに、酸(36)(3.7mg、9.7μmol)、EEDQ(2.9mg、11.6μmol)、及び0.4mLの無水CH₂Cl₂(1%のメタノールを含む)を仕込んだ。反応物を窒素下で1時間撹拌し、次いで、PBD二量体(50)(8.0mg、9.7μmol)を添加し、反応物を室温で6時間撹拌した。この時点で、LC-MSは生成物の存在を明らかにした。反応物を濃縮し、次いで、分取HPLCで精製し、所望の生成物を含む画分を凍結乾燥して薬物-リンカー化合物(52)を得た(3.1mg、25%)。分析HPLC(0.1%ギ酸):t_R 9.45分。LC-MS:t_R11.75分、m/z(ES⁺) 実測値1188.4(M+H)⁺、m/z(ES^-) 実測値1186.0(M-H)^-。

【化93】

【0566】

4-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)-N-((S)-1-(((S)-1-((4-((S)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)アミノ)-1-オキソプロパン-2-イル)アミノ)-3-メチル-1-オキソブタン-2-イル)ベンズアミド(54):
火炎で乾燥した10mLフラスコに、0.33mLの5%MeOH/CH₂Cl₂溶媒混合物に溶解したリンカーフラグメント(53)(7.7mg、20μmol)を添加した。EEDQ(6.1mg、25μmol)を添加し、反応物を窒素下に室温で15分間撹拌した。この時点で、PBD二量体(37)(12mg、16.5μmol)を添加した。反応物を窒素雰囲気下に室温でさらに3時間撹拌した。この時点で、LC-MSは生成物への転化を明らかにした。反応物を、CH₂Cl₂/MeOH混合物(100/0〜90/10のCH₂Cl₂/MeOH)で溶離する1mm Chromatotronプレートでのラジアルクロマトグラフィーによって精製して(54)を得た(2.4mg、13%)。TLC:R_f=0.44、10%MeOH/CH₂Cl₂。分析HPLC(0.05%トリフルオロ酢酸):t_R 11.53分。LC-MS:t_R 12.61分、m/z(ES⁺) 実測値1095.4(M+H)⁺、m/z(ES^-) 実測値1093.9(M-H)^-。

【0567】

(S)-2-(2-ヨードアセトアミド)-N-((S)-1-((4-((S)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)アミノ)-1-オキソプロパン-2-イル)-3-メチルブタンアミド(56):
火炎で乾燥したフラスコに、0.37mLの5%MeOH/CH₂Cl₂溶媒混合物に溶解したリンカー(55)(7.8mg、22μmol)を仕込んだ。EEDQ(6.8mg、27.5μmol)を添加し、反応物を窒素下に室温で15分間撹拌した。この時点で、PBD二量体(37)(13mg、18μmol)を添加した。反応物を窒素雰囲気下に室温でさらに4時間撹拌した。この時点で、LC-MSは生成物への転化を明らかにした。反応物を、CH₂Cl₂/MeOH混合物(100/0〜80/20のCH₂Cl₂/MeOH)で溶離する1mm Chromatotronプレートでのラジアルクロマトグラフィーによって精製して(56)を得た(3.5mg、18%)。分析HPLC(0.1%ギ酸):t_R 11.43分。LC-MS:t_R 12.49分、m/z(ES⁺) 実測値1064.6(M+H)⁺、m/z(ES^-) 実測値1098.9(M+2H₂O-H)^-。

【化94】

【0568】

6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)-N-((S)-1-(((S)-1-((4-((S)-7-メトキシ-8-((5-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)ペンチル)オキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)アミノ)-1-オキソプロパン-2-イル)アミノ)-3-メチル-1-オキソブタン-2-イル)ヘキサンアミド(58):
火炎で乾燥した10mLフラスコに、0.33mLの5%MeOH/CH₂Cl₂溶媒混合物に溶解したリンカーフラグメント(36)(19mg、50μmol)を添加した。EEDQ(12.4mg、50μmol)を添加し、反応物を窒素下に室温で15分間撹拌した。この時点で、PBD二量体(57)(12.5mg、16.6μmol)を添加した。反応物を窒素雰囲気下に室温でさらに5時間撹拌した。この時点で、LC-MSは生成物への転化を明らかにした。反応物を、CH₂Cl₂/MeOH混合物(100/0〜80/20のCH₂Cl₂/MeOH)で溶離する1mm Chromatotronプレートでのラジアルクロマトグラフィーによって精製して(58)を得た(2.1mg、11%)。分析HPLC(0.1%ギ酸):t_R 12.19分。LC-MS:t_R 12.58分、m/z(ES⁺) 実測値1117.8(M+H)⁺、m/z(ES^-) 実測値1133.7(M+H₂O-H)^-。

【化95】

【0569】

(R)-2-((R)-2-((((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)-3-メチルブタンアミド)プロパン酸(60):
火炎で乾燥したフラスコに、Fmoc-D-バリン(200mg、0.59mmol)及び5.9mLの無水THFを仕込んだ。N-ヒドロキシスクシンイミド(75mg、0.65mmol)、続いてジイソプロピルカルボジイミド(0.1mL、0.65mmol)を添加し、反応物を外界温度で一夜撹拌し、この時点で、LC-MSは生成物への転化を明らかにした。反応混合物を、CH₂Cl₂で希釈し、水(50mL)、ブライン(50mL)で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮乾固した。この材料はさらなる精製なしに次に進めた。LC-MS:t_R 13.89分、m/z(ES⁺) 実測値437.0(M+H)⁺。粗Fmoc-D-Val-OSu(0.59mmol)をジメトキシエタン(1.5mL)及びTHF(0.8mL)に溶解した。反応混合物に、2.3mLの水に溶解したD-アラニン(73mg、0.89mmol)、続いて重炭酸ナトリウム(99mg、1.2mmol)を添加した。生じたスラリーを室温で一夜撹拌した。この時点で反応物は澄明になり、LC-MSは反応完結を明らかにした。反応物を50mLのCH₂Cl₂中に注ぎ、有機層を、50mLの0.1M HCl、次いでブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、次いで濃縮乾固した。粗生成物を、CH₂Cl₂で溶離する1mm Chromatotronプレートでのラジアルクロマトグラフィーによって精製して(60)を得た(128mg、54%)。TLC:R_f=0.18、10%MeOH/CH₂Cl₂。分析HPLC(0.1%ギ酸):t_R 9.47分。LC-MS:t_R 13.09分、m/z(ES⁺) 実測値411.1(M+H)⁺、m/z(ES^-) 実測値409.2(M-H)^-。

【0570】

(R)-2-((R)-2-(6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ヘキサンアミド)-3-メチルブタンアミド)プロパン酸(61):
保護されたジペプチド(60)(70mg、0.37mmol)を、6mLの無水CH₂Cl₂に懸濁し、窒素下に氷上で冷却し、2mLのジエチルアミンを滴加した。反応物を室温まで暖め、窒素下で2時間撹拌した。この時点で、HPLCは出発原料の消失を明らかにした。反応物を6mLのクロロホルムで希釈し、濃縮した。粗反応物残渣を、6mLのクロロホルムに再溶解し、2回濃縮し、続いて真空系で2時間乾燥した。次いで、脱保護されたジペプチドを3.7mLの無水DMFに溶解した。次いで、MC-OSu(138mg、0.44.mmol)、続いてジイソプロピルエチルアミン(0.32mL、1.9mmol)を添加した。反応物を窒素雰囲気下に室温で一夜撹拌した。反応物を50mLの0.1M HClに注ぐこと、及び酢酸エチル(50mL、3×)で抽出することによって後処理を行った。合わせた有機層を、水(50mL)及びブライン(50mL)で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮した。粗生成物を、CH₂Cl₂/MeOH混合物(99/1〜95/5のCH₂Cl₂/MeOH)で溶離する1mm Chromatotronプレートでのラジアルクロマトグラフィーによって精製して(61)を得た(14mg、22%)。¹H NMR(CD₃OD) δ (ppm) 0.94(d, J=14Hz, 3H), 0.98(d, J=14Hz, 3H), 1.29(m, 2H), 1.39(d, J=7.4Hz, 3H), 1.61(m, 4H), 2.05(m, 1H), 2.25(dt, J=1.2, 7.4Hz, 2H), 3.48(t, J=7Hz, 2H), 4.19(m, 1H), 4.37(m, 1H), 6.78(s, 2H)。分析HPLC (0.1%ギ酸): t_R 10.04分。LC-MS: t_R 11.22分、m/z (ES⁺) 実測値382.1(M+H)⁺、m/z (ES^-) 実測値380.0(M-H)^-。

【0571】

6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)-N-((R)-1-(((R)-1-((4-((S)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)アミノ)-1-オキソプロパン-2-イル)アミノ)-3-メチル-1-オキソブタン-2-イル)ヘキサンアミド(62):
火炎で乾燥した10mLフラスコに、0.33mLの5%MeOH/CH₂Cl₂溶媒混合物に溶解したリンカー(61)(9.5mg、25μmol)を添加した。EEDQ(7.3mg、30μmol)を添加し、反応物を窒素下に室温で15分間撹拌した。この時点で、PBD二量体(37)(12mg、16.5μmol)を添加した。反応物を窒素雰囲気下に室温でさらに3時間撹拌した。この時点で、LC-MSは生成物への転化を明らかにした。反応物を、CH₂Cl₂/MeOH混合物(100/0〜80/20のCH₂Cl₂/MeOH)で溶離する1mm Chromatotronプレートでのラジアルクロマトグラフィーによって精製して(62)を得た(2.8mg、16%)。TLC:R_f=0.39、10%MeOH/CH₂Cl₂。分析HPLC(0.1%ギ酸):t_R 11.50分。LC-MS:t_R 12.50分、m/z(ES⁺) 実測値1089.7(M+H)⁺、m/z(ES^-) 実測値1088.0(M-H)^-。

【化96】

【0572】

(S)-2-(6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ヘキサンアミド)プロパン酸(64):
L-アラニン(58mg、0.65mmol)を6.5mLの無水DMFに懸濁し、次いでMC-OSu(35)(100mg、0.324mmol)を添加した。ジイソプロピルエチルアミン(0.28mL、1.6mmol)を添加し、反応物を窒素下に室温で一夜撹拌した。次いで、反応物を50mLの0.1M HClで希釈し、次いで水層を酢酸エチル(50mL、3×)で抽出した。次いで、合わせた有機層を、水(50mL)及びブライン(50mL)で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、次いで濃縮乾固した。反応物を、CH₂Cl₂/MeOH混合物(97.5/2.5〜90/10のCH₂Cl₂/MeOH)で溶離する1mm Chromatotronプレートでのラジアルクロマトグラフィーによって精製して(64)を得た(25mg、27%)。¹H NMR(CD₃OD) δ (ppm) 1.30(m, 2H), 1.37(d, J=7.4Hz, 3H), 1.60(m, 4H), 2.21(t, J=7.4Hz, 2H), 3.48(t, J=7Hz, 2H), 4.35(q, J=7.4Hz, 1H), 6.78(s, 2H)。分析HPLC (0.1%ギ酸): t_R 9.06分。

【0573】

6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)-N-((S)-1-((4-((S)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)アミノ)-1-オキソプロパン-2-イル)ヘキサンアミド(65):
火炎で乾燥した10mLフラスコに、0.66mLの5%MeOH/CH₂Cl₂溶媒混合物に溶解したリンカー(64)(14mg、50μmol)を添加した。EEDQ(15mg、60μmol)を添加し、反応物を窒素下に室温で15分間撹拌した。この時点で、PBD二量体(37)(24mg、33μmol)を添加した。反応物を窒素雰囲気下に室温でさらに4時間撹拌した。反応物を、CH₂Cl₂/MeOH混合物(100/0〜90/10のCH₂Cl₂/MeOH)で溶離する1mm Chromatotronプレートでのラジアルクロマトグラフィーによって精製して(65)を得た(3.5mg、11%)。分析HPLC(0.1%ギ酸):t_R 11.40分。LC-MS:t_R 12.39分、m/z(ES⁺) 実測値990.6(M+H)⁺、m/z(ES^-) 実測値989.0(M-H)^-。

【化97】

【0574】

マレイミドカプロイルスペーサーを介して直接的に連結されたPBD二量体(スキーム14)(57):
PBD二量体(57)を、スキーム2に記載の化学を採用してマレイミドカプロン酸(39)にカップリングさせた。

【化98】

【0575】

6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)-N-(2-((S)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)ヘキサンアミド(68):
CH₂Cl₂(300μL)中の(66)(10mg、0.013mmol)の混合物に、DIPEA及びMC-Cl(67)(3mg、0.013mmol)を添加した。1時間後、さらに3当量のDIPEA(7μL)及び2当量の酸クロリド(6mg、0.026mmol)を添加した。1時間後、さらなる量のDIPEA(7μL)及び酸クロリド(6mg、0.026mmol)を添加した。さらに3時間後、反応混合物を、1mmラジアルChromatotronプレート上に直接的に吸引し、ジクロロメタン、続いて(1%〜5%)メタノール/ジクロロメタンのグラジエントで溶離した。生成物を含む画分を、出発アニリンとの混合物として濃縮し、残渣を0.5mLのDMSO、0.5mLのアセトニトリル、及び0.5mLの脱イオン水からなる混合物に溶解し、分取HPLCでさらに精製した。主要ピークを集め、画分を合わせ、凍結乾燥して、2.1mgを得た(18%)。MS(ES⁺) m/z 919.2 [M+H]⁺。

【0576】

(注)酸クロリド(67)は、100mgの(39)をシュウ酸クロリド(5mL)に溶解して調製した。1滴のDMFを添加し、混合物を外界温度で数時間撹拌した後、減圧下で濃縮した。ジクロロメタンを添加し、混合物を2回濃縮して類白色固体を得て、これを直接使用した。¹H-NMR(400MHz, CDCl₃) δ 6.70(s, 2H), 3.46(t, J=7Hz, 2H), 2.82(t, J=7.2Hz, 2H), 1.72(五重線, J=7.6Hz, 2H), 1.61(五重線, J=7.4Hz, 2H), 1.35(五重線, J=7.6Hz, 2H).

【化99】

【0577】

2-(2-アミノアセトアミド)酢酸tert-ブチル(69):
ジクロロメタン(25mL)中のグリシンtert-ブチルエステル塩酸塩(70)(484mg、2.9mmol)の混合物に、Fmoc-Gly-OH(71)(0.861mg、2.99mmol)、DIPEA(756mg、4.35mmol)、及びHATU(1.3g、3.5mmol)を添加した。反応混合物を外界温度で16時間撹拌し、次いで、酢酸エチル中に注ぎ、水(3×)及びブライン(1×)で洗浄した。有機相をMgSO₄上で乾燥し、減圧下で濃縮した。生じた残渣を、5%メタノール/ジクロロメタンで溶離する2mmのプレートでのラジアルクロマトグラフィーで精製した。生成物を含む画分を、減圧下で濃縮し、20%ピペリジン/ジクロロメタン(10mL)で1時間処理した後、減圧下で濃縮し、次いで、(5〜10%)メタノール/ジクロロメタンのグラジエントで溶離する2mmのプレートでのラジアルクロマトグラフィーで2回精製して(200mg、37%)を得た。¹H-NMR(400MHz, CDCl₃) δ 7.62(s, 1H), 4.00(s, 2H), 3.39(s, 2H), 1.47(s, 9H)。

【0578】

2(2-(6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ヘキサンアミド)アセトアミド)酢酸(72):
アミン(69)(200mg、0.11mmol)のDMF(1mL)溶液に(35)(350mg、0.11mmol)を添加し、反応混合物を外界温度で2時間撹拌した。混合物を、減圧下で濃縮し、ジクロロメタンで、及び(1〜5%)メタノール/ジクロロメタンのグラジエントで溶離する1mmのプレートでのラジアルクロマトグラフィーで精製した。生成物を含む画分を、減圧下で濃縮し、ジクロロメタン(4mL)に溶解し、トリフルオロ酢酸(4mL)で処理した。40分後に、混合物を減圧下で濃縮し、生じた残渣をジクロロメタンに溶解し、濃縮して白色固体として22.5mgの(72)を得た(19%)。¹H-NMR(400MHz, CD₃OD) δ 6.79(s, 2H), 3.93(s, 2H), 3.89(s, 2H), 3.49(t, J=6.8Hz, 2H), 2.26(t, J=6.8Hz, 2H), 1.61(m, 4H), 1.34(m, 2H); MS(ES⁺) m/z 326.21 [M+H]⁺。

【0579】

6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)-N-(2-((2-((4-((S)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)アミノ)-2-オキソエチル)アミノ)-2-オキソエチル)ヘキサンアミド(73):
5%メタノール/ジクロロメタン(0.5mL)中の(72)(15mg、0.046mmol)の混合物に、EEDQ(11mg、0.046mmol)を添加し、混合物を外界温度で30分間撹拌した、この時点で、(37)(16mg、0.023mmol)を添加した。反応混合物を3時間撹拌し、(1%〜4%)メタノール/ジクロロメタンのグラジエントで溶離する1mmのラジアルChromatoronプレートで直接的に精製し、黄色固体として6.8mgの(73)を得た(29%)。MS(ES⁺) m/z 1033.57[M+H]⁺。

【化100】

【0580】

1-((S)-ピロリジン-2-カルボニル)ピロリジン-2-カルボン酸(S)-tert-ブチル(74):
ジクロロメタン(50mL)中のL-プロリン-tert-ブチルエステル塩酸塩(75)(0.5g、2.9mmol)の混合物に、(76)(0.98g、2.99mmol)、DIPEA(756mg、4.35mmol)、及びHATU(1.3g、3.5mmol)を添加した。反応混合物を外界温度で16時間撹拌した。混合物を酢酸エチル(100mL)中に注ぎ、0.2N HCl(50mL)、水(50mL)、ブライン(50mL)で洗浄し、MgSO₄上で乾燥した。10%酢酸エチル/ヘキサンで溶離する2mmのラジアルクロマトグラフィープレートでのクロマトグラフィーを実施した。生成物を含む画分を減圧下で濃縮し、ジクロロメタン(8mL)に溶解し、ピペリジン(2mL)で処理した。混合物を1時間撹拌し、減圧下で濃縮し、5%メタノール/ジクロロメタンで溶離する2mmのラジアルChromatotronプレートで精製した。これにより、200mgのジペプチド(74)を得た(26%)。¹H-NMR(400MHz, CDCl₃) δ 4.41(m, 1H), 4.17(m, 1H), 3.82(m, 1H), 3.57(m, 4H), 3.2(m, 1H), 2.82(m, 1H), 2.83-1.65(m, 5H), 1.44(m, 9H)。

【0581】

1-((S)-1-(6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ヘキサノイル)ピロリジン-2-カルボニル)ピロリジン-2-カルボン酸(S)-tert-ブチル(77):
アミン(74)(200mg、0.75mmol)、(39)(190mg、0.9mmol)及びDIPEA(0.32mL、1.8mmol)の混合物に、HATU(342mg、0.9mmol)を添加し、混合物を外界温度で5時間撹拌した。混合物を酢酸エチル(100mL)中に注ぎ、水(3×100mL)及びブライン(1×100mL)で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、濃縮した。生じた残渣を、ジクロロメタン、続いて(1%〜5%)メタノール/ジクロロメタンでの漸増するグラジエントで溶離する2mmラジアルChromatronプレートでのラジアルクロマトグラフィーにかけた。最初は2mmプレートで、次いで1mmプレートで、双方とも(1%〜5%)メタノール/ジクロロメタンのグラジエントで溶離する2回のさらなる精製により、白色固体として113mgの(77)を得た(33%)。¹H-NMR(400MHz, CDCl₃) δ 4.63(m, 1H), 4.41(m, 1H), 3.82(m, 1H), 3.63(m, 1H), 3.55(m, 1H), 3.45(m, 3H), 2.38-1.83(m, 10H), 1.70-1.50(m, 5H), 1.45(m, 9H), 1.35(m, 2H); MS(ES⁺) m/z 462.33 [M+H]⁺。

【0582】

(S)-1-((S)-1-(6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ヘキサノイル)ピロリジン-2-カルボニル)ピロリジン-2-カルボン酸(78):
ジクロロメタン(4mL)中のtert-ブチルエステル(77)の混合物にトリフルオロ酢酸(4mL)を添加した。40分後に、HPLC分析により反応は完結していると判定された。混合物を減圧下で濃縮し、生じた残渣をジクロロメタンに溶解し、2回濃縮して、白色固体として37mgの(78)を得た(100%)。¹H-NMR(400MHz, CDCl₃) δ 6.68(s, 2H), 4.62(m, 2H), 3.81(m, 1H), 3.70(m, 1H), 3.57(m, 2H), 3.45(m, 2H), 2.40-1.91(m, 10H), 1.70-1.45(m, 4H), 1.33(m, 2H); MS(ES⁺) m/z 406.2 [M+H]⁺。

【0583】

1-(1-(6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ヘキサノイル)ピロリジン-2-カルボニル)-N-(4-((S)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)ピロリジン-2-カルボキサミド(79):
5%メタノール/ジクロロメタン(0.4mL)中の(78)(9.3mg、0.023mmol)の混合物にEEDQ(7mg、0.027mmol)を添加した。混合物を外界温度で15分間撹拌し、次いで、(37)(15mg、0.021mmol)を添加した。混合物を4時間撹拌し、反応混合物をジクロロメタン(2mL)で希釈し、1mmのラジアルChromatoronプレート上に直接的に吸引した。生成物を、(1%〜5%)メタノール/ジクロロメタンのグラジエントで溶離し、黄色固体として6.8mgの(79)を得た(29%)。MS(ES⁺) m/z 1113.51[M+H]⁺。

【化101】

【0584】

(S)-5-(アリルオキシ)-2-((S)-2-(((アリルオキシ)カルボニル)アミノ)-3-メチルブタンアミド)-5-オキソペンタン酸(80):
ジクロロメタン(10mL)中に懸濁した2-クロロトリチル樹脂(1.0g、1.01mmol)の混合物に、Fmoc-Glu-(Oアリル)-OH(81)(409mg、1.0mmol)及びDIPEA(173μL、1.0mmol)を添加した。反応混合物を5分間振盪し、さらなるDIPEA(260μL、1.5mmol)を添加し、混合物を1時間振盪した。メタノール(0.8mL)を添加し、混合物を5分間振盪した後、濾過し、DMF(6×)、ジクロロメタン(6×)、ジエチルエーテル(6×)で洗浄し、減圧下で乾燥した。生じた樹脂を、20%ピペリジン/ジクロロメタン(10mL)に1時間さらした後、濾過し、DMF(6×)、ジクロロメタン(6×)、ジエチルエーテル(6×)で洗浄し、減圧下で乾燥した。

【0585】

DMF(7mL)中のFmoc-Val-OH(82)(1.03g、3.30mmol)の混合物に、DIPEA(1.0mL)及びHATU(1.1g、3.03mmol)を添加した。徹底的に混合した後、溶液を、上記で調製した樹脂を含む10mLシリンジ中に吸引した。混合物に蓋をし、16時間振盪した。樹脂をDMF(6×)、ジクロロメタン(6×)及びエーテル(6×)で洗浄した。少量(10mg)を単離し、20%TFA/ジクロロメタンで処理し、生じた溶液をLC-MSで分析すると、修正質量(MS(ES⁺) m/z 509.28[M+H]⁺)を示す一つの高純度のピークが現れた。次いで、残りの樹脂を20%ピペリジン/DMF(8mL)で2時間処理した後、DMF(6×)、ジクロロメタン(6×)、ジエチルエーテル(6×)で洗浄し、減圧下で乾燥した。

【0586】

ジクロロメタン(10mL)中でクロロギ酸アリル(529μL、5.05mmol)とDIPEA(1.7mL、10mmol)との混合物を調製し、上記の樹脂を含むシリンジ中に吸引した。混合物に蓋をし、振盪した。ほぼ2時間後に、反応混合物を排出し、ジクロロメタン(6×)で洗浄した。少量の樹脂(約10mg)を、20%TFA/ジクロロメタンで開裂させ、LC-MSで出発原料及び生成物の質量に関して分析した。主要成分は、なお未反応アミンであったので、樹脂を、再び上記条件にさらした。4時間後に、樹脂をジクロロメタン(6×)で洗浄し、次いで5%TFA/ジクロロメタン(4×7mL)で繰り返し処理した。生じた溶液を減圧下で濃縮した。混合物を、5%メタノール/ジクロロメタンで溶離する2mmラジアルChromatronプレートで精製して、107mgの(80)を得た。¹H-NMR(400MHz, CDCl₃) δ 7.05(s, 1H), 5.90(m, 2H), 5.57(d, 1H), 5.29(d, J=14.7Hz, 2H), 5.22(t, J=10.9Hz, 2H), 4.59(m, 5H), 4.02(m, 1H), 2.60-2.40(m, 2H), 2.37-2.18(m, 1H), 2.17-2.02(m, 2H), 0.96(d, J=6.4Hz, 3H), 0.93(d, J=6.6Hz, 3H); MS(ES⁺) m/z 371.12 [M+H]⁺。

【0587】

4-((S)-2-(((アリルオキシ)カルボニル)アミノ)-3-メチルブタンアミド)-5-((4-((S)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)アミノ)-5-オキソペンタン酸(S)-アリル(83):
5%メタノール/ジクロロメタン(1mL)中の酸(80)(30、0.04mmol)の混合物に、EEDQ(20mg、0.082mmol)を添加した。混合物を外界温度で30分間撹拌し、次いで(37)(30mg、0.04mmol)を添加し、混合物をほぼ5時間撹拌した。1mmラジアルChromatotronプレート上に直接的に吸引し、(1%〜5%)メタノール/ジクロロメタンのグラジエントで溶離する部分的精製により、所望の生成物と(37)との混合物が得られた(それぞれ、26mg、約3:1)。これをさらなる精製なしに次に進めた。

【0588】

(S)-4-((S)-2-アミノ-3-メチルブタンアミド)-5-((4-((S)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)アミノ)-5-オキソペンタン酸(84):
無水ジクロロメタン(3mL)中の(83)と(37)(26mg)との混合物に、Ph₃P(0.3mg、0.0012mmol)、ピロリジン(4μL、0.048mmol)及びテトラキスパラジウム(0.7mg、0.6μmol)を添加した。2時間後に、さらなる量のテトラキスパラジウム(0.7mg、0.6μmol)を添加し、反応物をさらに1時間撹拌した後、減圧下で濃縮した。残留物をDMSO(1mL)、アセトニトリル(0.05%ギ酸を含む)(1mL)、及び水(0.05%ギ酸を含む)(1mL)に溶解し、逆相分取HPLCで精製した。生成物の単一画分を集め、凍結乾燥して6mgの(84)を得た(2ステップで14%)。MS(ES⁺) m/z 1078.6[M+H]⁺。

【0589】

(S)-4-((S)-2-(6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ヘキサンアミド)-3-メチルブタンアミド)-5-((4-((S)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)アミノ)-5-オキソペンタン酸(85):
DMF(200μL)中の(84)(6mg、6μmol)と(35)(2mg、6μmol)との混合物にDIPEA(3μL、18μmol)を添加し、反応混合物を外界温度で撹拌した。1時間後に、さらなる当量の(35)(2mg、6μmol)を添加し、反応混合物を外界温度で3時間撹拌し続けた。3度目の当量の(35)(2mg、6μmol)を添加し、混合物をほぼ1時間撹拌し、減圧下で濃縮し、ジクロロメタンに溶解し、1mmのラジアルChromatotronプレート上に直接的に吸引し、5%メタノール/ジクロロメタンで溶離した。これによって、2.5mgの高純度の(85)を得た(36%)。MS(ES⁺) m/z 1147.49[M+H]⁺。

【0590】

(21S,24S)-1-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)-21-イソプロピル-24-((4-((S)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)カルバモイル)-3,19,22-トリオキソ-7,10,13,16-テトラオキサ-4,20,23-トリアザヘプタコサン-27-オイック酸(86):
DMF(200μL)中の(84)(8mg、8.4μmol)とMal-PEG4-NHS(87)(6.5mg、12.6μmol)との混合物にDIPEA(4.3μL、25μmol)を添加した。反応混合物を外界温度で2時間撹拌し、減圧下で濃縮した。生じた残渣をジクロロメタンに溶解し、1mmのラジアルChromatotronプレート上に吸引した。材料は、極性であり、シリカゲルをベースにしたChromatotronプレート上でクロマト化されなかった。プレートをメタノールで溶離して混合物を回収し、減圧下に単離した。残留材料を、逆相分取HPLCで精製した。単一の主要ピークが溶離し、画分を合わせ、凍結乾燥して、残留物として0.9mgの(86)を得た(8%)。MS(ES⁺) m/z 1353.04[M+H]⁺。

【化102】

【0591】

(S)-6-(ジメチルアミノ)-2-(6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ヘキサンアミド)ヘキサン酸(88):
CH₂Cl₂(10mL)中の2-クロロトリチル樹脂(1g、1.01mmol)の混合物に、Fmoc-Lys(Me)₂-OH(89)(432mg、1.0mmol)及びDIPEA(433μL、2.5mmol)を添加した。反応混合物を1時間振盪した。メタノール(0.8mL)を添加し、混合物をさらに5分間振盪した後、濾過し、DMF(6×)、ジクロロメタン(6×)、ジエチルエーテル(6×)で洗浄し、減圧下で乾燥した。乾燥した樹脂を20%ピペリジン/DMF(10mL)に1時間さらした後、濾過し、DMF(6×)、ジクロロメタン(6×)、ジエチルエーテル(6×)で洗浄した。

【0592】

DMF(7mL)中の(39)(3.0mmol、633mg)の混合物にDIPEA(1.0mL)及びHATU(1.1g、3.03mmol)を添加した。徹底的に混合した後、上記樹脂を含む10mLシリンジ中に溶液を吸引した。混合物に蓋をし、16時間振盪し、濾過し、樹脂をDMF(6×)、ジクロロメタン(6×)、及びエチルエーテル(6×)で洗浄した。樹脂を、5%TFA/ジクロロメタン(6mL×5)で1分間振盪して繰り返し処理し、次いで濾過した。生じた溶液を減圧下、及び高度真空下で濃縮した。材料を逆相分取HPLCで精製して、208mgの(88)を得た。¹H-NMR(400MHz, CD₃OH/CDCl₃ 1:1混合物) δ 6.73(s, 2H), 4.41(m, 1H), 3.48(t, 2H), 3.31(s, 1H), 3.03(m, 2H), 2.84(s, 6H), 2.22(m, 2H), 1.87(m, 2H), 1.78-1.52(m, 6H), 1.43(m, 2H), 1.31(五重線, 2H); MS(ES⁺) m/z 386.28 [M+H]⁺。

【0593】

(S)-6-(ジメチルアミノ)-2-(6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ヘキサンアミド)-N-(4-((S)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)ヘキサンアミド(90):
5%メタノール/ジクロロメタン(400μL)中の(88)(9.3mg、0.023mmol)の混合物にEEDQ(7mg、0.027mmol)を添加した。混合物を外界温度で30分間撹拌し、次いで(37)(15mg、0.021mmol)を添加した。4時間後に、混合物を減圧下で濃縮し、DMSO(1mL)、アセトニトリル(2mL、0.05%ギ酸を含む)及び水(1mL、0.05%ギ酸を含む)の混合物中に溶解し、逆相HPLC(方法A)で精製した。生成物を含む画分には(37)が混入していたので、該画分を凍結乾燥し、残留物を前記のように再精製して0.5mgの純粋な(90)を得た(2%)。MS(ES⁺) m/z 537.46[M+H]/2⁺。

【化103】

【0594】

((S)-1-(((S)-1-((4-((S)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)アミノ)-1-オキソプロパン-2-イル)アミノ)-3-メチル-1-オキソブタン-2-イル)カルバミン酸アリル(91):
5%メタノール/ジクロロメタン(1mL)中の(92)(45mg、0.123mmol)の混合物にEEDQ(30.4mg、0.123mmol)を添加した。混合物を外界温度で30分間撹拌し、次いで(37)(30mg、0.041mmol)を添加した。反応混合物をほぼ5時間撹拌し、次いで5%メタノール/ジクロロメタンで溶離する1mmのラジアルChromatotoronプレートで精製して、22mgの(91)(55%)を得、これを同定しないで直接次に進めた。

【0595】

1-(3-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)プロパンアミド)-N-((S)-1-(((S)-1-((4-((S)-7-メトキシ-8-(3-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)プロポキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)フェニル)アミノ)-1-オキソプロパン-2-イル)アミノ)-3-メチル-1-オキソブタン-2-イル)-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-アミド(93):
(91)(22mg、0.022mmol)の無水ジクロロメタン(3mL)溶液に、Ph₃P(0.3mg、0.0012mmol)、ピロリジン(4μL、0.048mmol)及びテトラキスパラジウム(0.7mg、6μmol)を添加した。ほぼ2時間後に、反応混合物を、(5%〜10%)メタノール/ジクロロメタンで溶離する1mmのラジアルChromatotronプレートで精製した。主要バンドを集め、濃縮し、残留物をDMF(0.2mL)に溶解し、NHSエステル(87)(10mg、0.19mmol)と反応させた。反応物を30分間撹拌し、濃縮し、5%メタノール/ジクロロメタンで溶離する1mmのプレートでのラジアルクロマトグラフィーで精製して、3.2mgの(93)を得た(11%)。MS(ES⁺) m/z 1294.7[M+H]⁺。

【化104】

【0596】

(E)-6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)-N'-(4-((S)-7-メトキシ-8-((5-(((S)-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-8-イル)オキシ)ペンチル)オキシ)-5-オキソ-5,11a-ジヒドロ-1H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-2-イル)ベンジリデン)ヘキサンヒドラジド(94):
5%メタノール/ジクロロメタン中のアルデヒド(95)(5.4mg、7μmol)の混合物に0℃でヒドラジド-TFA塩(96)(4.5mg、14μmol)を添加した。反応混合物を外界温度まで暖め、5時間撹拌した後、減圧下で濃縮し、3%メタノール/ジクロロメタンで溶離するシリカゲルカラムで精製して、2.2mgの(94)を得た(32%)。MS(ES⁺) m/z 974.49[M+H]⁺。

【化105】

【0597】

2-((S)-2-アミノ-3-メチルブタンアミド)プロパン酸(S)-tert-ブチル(97):
ジクロロメタン(5mL)中のアラニン-O-tert-ブチルエステル塩酸塩(98)の混合物(500mg、2.76mmol)にFmoc-Val-OSu(99)(1.09g、2.51mmol)を添加した。DIPEA(0.96mL、5.5mmol)を添加し、反応混合物を外界温度で16時間撹拌した。混合物をジクロロメタン(100mL)中に注ぎ、1N HCl(50mL)及び水(50mL)で洗浄した後、硫酸マグネシウム上で乾燥した。材料を、(1%〜5%)メタノール/ジクロロメタンのグラジエントで溶離する2mmのラジアルChromatotronプレートでクロマトグラフィーを行い、生成物を含む画分を合わせ、濃縮した。生じた残渣をジクロロメタン(16mL)に溶解し、ピペリジン(4mL)を添加した。混合物を10分間撹拌した後、減圧下で濃縮した。生じた残渣を、最初にアンモニアで飽和したジクロロメタンで、続いて5%メタノール/アンモニア飽和ジクロロメタンで溶離する2mmプレートでのクロマトグラフィーを行い、494mg(2.02mmol)の(97)を得た(2ステップで81%)。¹H-NMR(400MHz, CDCl₃) δ 7.78(bs, 1H), 4.47(m, 1H), 3.30(d, 1H), 2.30(m, 1H), 1.38(d, 3H), 1.47(s, 9H), 1.00(d, J=7.0Hz, 3H), 0.84(d, J=6.9Hz, 3H)。

【0598】

2-((S)-2-(4-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ベンズアミド)-3-メチルブタンアミド)プロパン酸(S)-tert-ブチル(100):
(97)(100mg、0.41mmol)と4-マレイミド安息香酸(101)(98mg、0.45mmol)との混合物に、ジクロロメタン(5mL)、続いてTBTU(157mg、0.49mmol)及びDIPEA(212μL、1.23mmol)を添加した。混合物を外界温度で16時間撹拌し、次いで、50%酢酸エチル/ヘキサンで溶離する2mmラジアルChromatotronプレートで精製して95mgの(100)を得た(51%)。¹H-NMR(400MHz, CDCl₃) δ 7.85(d, J=6.6Hz, 2H), 7.42(d, J=6.6Hz, 2H), 6.81(s, 2H), 6.38(bs, 1H), 4.43(m, 2H), 2.14(七重線, J=6.6Hz, 1H), 1.41(s, 9H), 1.31(d, J=7.0Hz, 3H), 0.98(m, 6H); MS(ES^-) m/z 441.90 [M-H]^-。

【0599】

(R)-2-((S)-2-(4-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ベンズアミド)-3-メチルブタンアミド)プロパン酸(53):
ジクロロメタン(5mL)中の(100)(47mg、0.11mmol)の混合物にトリフルオロ酢酸(5mL)を添加し、反応混合物をTLC(50%酢酸エチル/ヘキサン、TLCプレートを高真空下で5分間吸引した後)で監視した。75分後に、TLCで出発原料を検出できなかった。反応は、同一条件を使用して2回実施し、双方の反応からの材料を合わせ、(5%〜10%)メタノール/ジクロロメタンのグラジエントで溶離する2mmラジアルChromatotronプレートで精製した。42mgの(53)を得た(49%)。¹H-NMR(400MHz, CDCl₃) δ 7.92(d, J=6.6Hz, 2H), 7.51(d, J=6.6Hz, 2H), 7.0(m, 1H), 6.89(s, 2H), 6.70(s, 1H), 4.60 M, 1H), 2.22(m, 1H), 1.18(d, J=6.6Hz, 3H), 1.04(m, 6H); MS(ES⁺) m/z 388.02 [M+H]⁺。

【0600】

(S)-2-((S)-2-(2-ヨードアセトアミド)-3-メチルブタンアミド)プロパン酸(102):
ジクロロメタン中の(97)(100mg、0.41mmol)の混合物にヨードアセトアミド-NHSエステル(103)(115mg、0.41mmol)を添加し、混合物を外界温度で撹拌した。30分後に、混合物を1mmのChromatotronプレート上に吸引し、酢酸エチル/ヘキサン(1/1)で溶離した。単一バンドを集め、構造を確認した。¹H-NMR(400MHz, CDCl₃) δ 6.70(d, J=7.8Hz, 1H), 6.27(d, J=7.0Hz, 1H), 4.45(m, 1H), 4.26(dd, J=8.6, 6.3Hz, 1H), 3.72(四重線, J=11.3Hz, 2H), 2.13(七重線, J=6.5Hz, 1H), 1.47(s, 9H), 1.38(d, J=7.1Hz, 3H), 0.99(m, 6H); MS(ES⁺) m/z 412.87 [M+H]⁺。

【0601】

(S)-2-((S)-2-(2-ヨードアセトアミド)-3-メチルブタンアミド)プロパン酸(55):
(R)-2-((S)-2-(4-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ベンズアミド)-3-メチルブタンアミド)プロパン酸(53)の合成のための手順を参照されたい。これによって22mgを得た(2ステップで15%)。¹H-NMR(400MHz, D₆-DMSO) δ 8.27(d, J=9.4Hz, 1H), 4.24(m, 2H), 3.97(bs, 2H), 3.83(d, J=9.4Hz, 1H), 3.71(d, J=9.6Hz, 1H), 2.07(m, 1H), 1.33(d, J=7.3Hz, 3H), 0.93(d, J=6.7Hz, 3H), 0.89(d, J=6.9Hz, 3H); MS(ES^-) m/z 354.84 [M-H]^-。

【化106】

【0602】

脂肪族アミンを介して連結されたPBD二量体(スキーム21):
ベンジルアミンなどの脂肪族アミンを含むPBD二量体(実施例9)を、ペプチド系リンカー、グルクロニドリンカー、及び/又は放出のためのmAb分解に依存するリンカー(すなわち、非開裂性リンカー)を含めて合成する。ベンジルアミンを介してコンジュゲートされる薬物リンカーとしては、(1)スキーム1に類似の化学を採用する開裂性ペプチド、(2)マレイミドカプロイル基との直接結合(非開裂性リンカー)(スキーム2)、(3)スキーム6に記載のように調製されるグルクロニドリンカー、が挙げられる。

【化107】

【0603】

2-、3-及び4-アニリンPBD二量体に連結された一般的ペプチド(スキーム22):
2-、3-及び4-位のアニリンを備えたPBD二量体を、スキーム1に記載の化学を採用して、又はスキーム2に例示したようにマレイミドカプロン酸と直接的に結合して、ペプチドをベースにしたリンカーにコンジュゲートさせる。

【0604】

(実施例14):PDB二量体コンジュゲートの調製
抗体-薬物コンジュゲートは、前に記載のように(Doroninaら、Nature Biotechnology,21,778〜784(2003)を参照されたい)、又は後記のように調製した。簡潔には、マレイミド薬物-リンカーの場合、50mMホウ酸ナトリウムを含むpH7.4のPBS中のmAb(4〜5mg/mL)を、トリス(カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩(TCEP)を用い37℃で還元した。鎖間ジスルフィドを還元する反応の進行を、5,5'-ジチオビス(2-ニトロ安息香酸)との反応によって監視し、所望レベルのチオール/mAbが達成されるまで進行させた。還元された抗体を、次いで、0℃まで冷却し、抗体のチオール当たり1.5当量のマレイミド薬物-リンカーを用いてアルキル化した。1時間後に、5当量のN-アセチルシステインを添加して反応を止めた。反応を止めた薬物-リンカーをPD-10カラムでのゲル濾過によって除去した。次いで、ADCを、0.22μmのシリンジフィルターを通して無菌濾過した。タンパク質濃度は、それぞれ280nm及び329nmでスペクトルを分析し、280nmで薬物の吸光度の寄与に関して補正することによって測定した。サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、抗体の凝集度を測定し、RP(逆相)-HPLCによって、NAC(N-アセチルシステイン)で失活されて残存する薬物-リンカーの不在を確認した。

【0605】

ハロアセトアミドをベースにした薬物-リンカーの場合、コンジュゲーションは、一般に、次のように行った:10mM Tris(pH7.4)、50mMNaCl、及び2mM DTPA中の、還元され再酸化された抗体(重鎖中にS239Cの置換によって導入されたシステインを有する(下記参照))の10mg/mL溶液に、0.5容のプロピレングリコールを添加した。コンジュゲーションの直前に、ジメチルアセトアミド中のアセトアミドをベースにした薬物-リンカーの10mM溶液を調製した。抗体溶液に添加されると同量のプロピレングリコールを、6倍モル過剰の薬物-リンカーに添加した。抗体溶液に希薄な薬物-リンカー溶液を添加し、1M Tris(pH9)を使用してpHを8.0〜8.5に調整した。コンジュゲーション反応を37℃で45分間進行させた。コンジュゲーションは、還元及び変性PLRP-S逆相クロマトグラフィーによって検証した。過剰の薬物-リンカーをQuadrasil MP樹脂(Sigma Aldrich;製品番号679526)を用いて除去し、緩衝液を、PD-10脱塩カラム(GE Healthcare;製品番号17-0851-01)を使用して、10mM Tris(pH7.4)、50mM NaCl、及び5%プロピレングリコールに交換した。

【0606】

導入されたシステインを有する操作されたhlgG抗体:
重鎖の239位にシステイン残基を含むCD70抗体を、10当量のTCEP及び1mM EDTAを添加すること、及び1M Tris緩衝液(pH9.0)を用いてpHを7.4に調整することによって、完全に還元した。37℃で1時間のインキュベーションに続いて、反応物を22℃まで冷却し、30当量のデヒドロアスコルビン酸を添加し、システイン239を還元状態にしたまま、本来のジスルフィドを選択的に再酸化した。1M Tris緩衝液(pH3.7)を用いてpHを6.5に調整し、反応を22℃で1時間進行させた。次いで、1M Tris緩衝液(pH9.0)を添加することによって、溶液のpHを再び7.4まで上昇させた。反応物への添加に先立って、プロピレングリコールでの希釈のために、DMSO中の3.5当量のPBD薬物-リンカーを適切な容器中に入れた。PBD薬物-リンカーの溶解性を維持するために、抗体自体を、まず、プロピレングリコールで33%の最終濃度に希釈した(例えば、抗体溶液が60mLの反応体積で存在する場合、30mLのプロピレングリコールを添加した)。この同体積のプロピレングリコール(この例では30mL)を、次いで、希釈剤としてPBD薬物-リンカーに添加した。混合した後、PBD薬物-リンカーのプロピレングリコール溶液を抗体溶液に添加してコンジュゲーションを実施した(プロピレングリコールの最終濃度は50%である)。反応を30分間進行させ、次いで、5当量のN-アセチルシステインを添加して反応を止めた。次いで、30kDの膜を通す限外濾過によってADCを精製した(反応物中で使用されるプロピレングリコールの濃度は、その唯一の目的が水性媒体中での薬物-リンカーの溶解性を維持することにあるので、任意の個々のPBDに対して低下させることができることに留意されたい)。

【0607】

(実施例15):選択したコンジュゲートのインビトロ活性の測定
選択した抗体-薬物コンジュゲートのインビトロでの細胞障害活性を、レサズリン(Sigma、St.Louis、ミズーリ州、米国)還元アッセイを使用して評価した(参考文献:Doroninaら、Nature Biotechnology,2003,21,778〜784)。抗体-薬物コンジュゲートは、前に実施例13中に記載の通り調製した。

【0608】

96時間のアッセイの場合、対数増殖期の状態に培養された細胞を、20%FBSで補足された150μLのRPMI1640を含む96ウェルプレート中に24時間接種した。細胞培養培地でのADCの逐次希釈液を、4種の実施濃度で調製し、50μLの各希釈液を96ウェルプレートに添加した。ADCの添加に続いて、細胞を試験物とともに37℃で4日間インキュベートした。次いで、各ウェルにリサズリンを50μMの最終濃度になるように添加し、プレートを37℃でさらに4時間インキュベートした。次いで、プレートを染料の還元度について、Fusion HTプレートリーダー(Packard Instruments、Meridien、コネティカット州、米国)を用い、それぞれ530nm及び590nmの励起及び発光波長で読み取った。IC₅₀値は、三つ組みで測定され、本明細書では、未処理対照に比較して50%の細胞増殖低下をもたらす濃度と定義される。

【0609】

表4(下記)は、パラ-アニリンPBD二量体を有するADCの96時間アッセイを使用するインビトロでの細胞障害性を示す。ADCを、CD70⁺CD30^-細胞株、及び対照のCD70^-CD30^-細胞株に対して試験した。使用する抗体は、CD70抗体、ヒト化1F6(米国特許出願公開第2009/148942号を参照されたい)、CD30抗体、キメラAC10(米国特許出願公開第2008/0213289号を参照されたい)、及び重鎖の239位(EU番号化システムによる)のアミノ酸位置に導入されたシステイン残基を有するCD70抗体(ヒト化1F6dとして示す)とした。マレイミジル-ペプチドリンカーを有するコンジュゲート(薬物-リンカー化合物38)は、マレイミジル又はアセトアミドをベースにしたリンカー(それぞれ、化合物40及び41)とのコンジュゲートに比べてより低いIC₅₀を有した。

【0610】

パラ-アニリンPBD二量体(37)から誘導される薬物-リンカーを所持するADCのインビトロでの細胞障害活性:

【表5】

【0611】

表5は、PBD二量体にコンジュゲートされたADCのCD30⁺細胞株に対する96時間アッセイを使用するインビトロでの細胞障害性を示す。ADCを、CD30⁺CD70⁺細胞株及びCD70^-CD30^-細胞株に対して試験した。使用する抗体は、CD70抗体、ヒト化1F6(米国特許出願公開第2009/148942号を参照されたい)、CD30抗体、キメラAC10(米国特許出願公開第2008/0213289号を参照されたい)とした。マレイミジル-ペプチドリンカー(薬物-リンカー化合物38)を有するコンジュゲートは、一般に、マレイミジル又はアセトアミドをベースにしたリンカー(それぞれ化合物40及び41)に比べてより低いIC₅₀を有した。

【表6】

【0612】

メタ-アニリンPBD二量体(42)から誘導される薬物-リンカーを所持するADCのインビトロでの細胞障害活性:
表6は、PBD二量体ADCを含むADCのCD30⁺細胞株に対する96時間アッセイを使用するインビトロでの細胞障害性を示す。CD30⁺CD70⁺細胞株及びCD70^-CD30^-細胞株に対する活性を試験した。使用する抗体は、CD70抗体、ヒト化1F6(米国特許出願公開第2009/148942号を参照されたい)、及び重鎖の239位(EU番号化システムによる)のアミノ酸位置に導入されたシステイン残基を有するCD70抗体(ヒト化1F6)(h1F6dとして示される)とした。マレイミジル-ペプチドリンカー(薬物-リンカー化合物43)及びグルクロニドリンカー(48)を有するコンジュゲートは、マレイミジルをベースにしたリンカー(化合物44)とのコンジュゲートに比べて一般により低いIC₅₀を有した。

【表7】

【0613】

パラ-及びメタ-アニリンPBD二量体(それぞれ、38及び42)から誘導される薬物-リンカーを所持するADCのインビトロでの細胞障害活性:
表7は、PBD二量体を含むADCのCD70⁺細胞株に対する96時間アッセイを使用するインビトロでの細胞障害性を示す。CD70⁺細胞株L428及び786O、並びにCD70^-AML細胞株に対する活性を試験した。使用する抗体は、CD70抗体、ヒト化1F6(米国特許出願公開第2009/148942号を参照されたい)、及び重鎖の239位(EU番号化システムによる)のアミノ酸位置に導入されたシステイン残基を有するCD70抗体(ヒト化1F6)(h1F6dとして示される)とした。メタ-アニリンとのマレイミジル-ペプチドリンカー(薬物-リンカー化合物43)を有するコンジュゲートは、パラ-アニリンとのマレイミジル-ペプチドリンカーを有するもの(薬物-リンカー化合物38)を有するものに比べて、活性が若干低かった。メタ-アニリン化合物の薬物負荷量を抗体当たり2個まで減らすと、活性が低下した。パラ-アニリン化合物のグルクロニドリンカー(48)を有するコンジュゲートは、一般に、マレイミジルをベースにしたリンカー(化合物39)を有するコンジュゲートに比べて、より低いIC₅₀を有した。さらに、パラ-アニリン化合物のアリールマレイミド(54)は、これらの細胞株に対して活性を有さなかった。さらに、化合物(42)に直接的にコンジュゲートされたマレイミジルリンカーを有するコンジュゲートは、コンジュゲートh1F6-43と比べて低減された活性を有した(データは示さない)。

【表8】

【0614】

アニリンで連結されたPBD二量体から誘導される薬物-リンカーを所持するADCのインビトロでの細胞障害活性
表8は、PBD二量体を含むADCのCD70⁺細胞株に対する96時間アッセイを使用するインビトロでの細胞障害性を示す。CD70⁺細胞株Caki-1及びL428並びにCD70^-細胞株に対する活性を試験した。使用する抗体は、重鎖の239位(EU番号化システムによる)のアミノ酸位置に導入されたシステイン残基を有するCD70抗体(ヒト化1F6)(h1F6dとして示される)とした。PBDをオルト位のアミンを経由して非開裂性リンカーへ結合すると(化合物68)、パラ-アニリンで連結された開裂性リンカー(化合物54)を介して連結されたADCと比較して、活性が著しく低下した。開裂性リンカーを有する化合物73及び85(これらの化合物は、双方ともパラ-アニリンを介して連結されている)は、化合物54と類似の活性を示した。より厳しい開裂を必要とする開裂性リンカーを備えた化合物である化合物79及び90は、化合物54に比較して、若干低減された活性を示した。

【表9】

【0615】

アニリンで連結されたPBD二量体から誘導される薬物-リンカーを所持するADCのインビトロでの細胞障害活性
表9は、PBD二量体を含むADCのCD70⁺細胞株に対する96時間アッセイを使用するインビトロでの細胞障害性を示す。CD70⁺細胞株Caki-1及びL428並びに2種のCD70^-白血病細胞株に対する活性を試験した。使用する抗体は、CD70抗体、ヒト化1F6(米国特許出願公開第2009/148942号を参照されたい)、及び重鎖の239位(EU番号化システムによる)のアミノ酸位置に導入されたシステイン残基を有するCD70抗体(ヒト化1F6)(h1F6dとして示される)とした。アセトアミドを介して抗体に連結された開裂性リンカーを有する化合物56は、化合物38と類似の活性を示した。メタ-アニリンで連結されたPBD二量体のグルクロニド連結バージョンである化合物48は、このアッセイでほとんど活性を示さなかった。PBDブリッジ中に5個のメチレン基を有する化合物58は、PBDブリッジ中に3個のメチレン基を有する化合物38と類似の活性を示した。

【表10】

【0616】

(実施例16):選択したコンジュゲートのインビボでの細胞障害性の測定
すべての研究は、実験動物管理評価認定協会(the Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal care)によって完全に認可された施設内の動物管理使用委員会(the Animal Care and Use Committee)の同意のもとで実施した。まず、コンジュゲートが臨床的に意味のある用量で忍容されることを保障するために、インビボでの忍容性を評価した。BALB/cマウスを、0.01%Tween20を含むPBS中で製剤されたADCの段階的に増大する用量で治療した。マウスを薬物治療後の体重減少について監視し、20%の体重減少又は他の病的状態の兆候を示したマウスは安楽死させた。使用する抗体は、CD70抗体、ヒト化1F6(米国特許出願公開第2009/148942号を参照されたい)及びCD30抗体、キメラAC10(米国特許出願公開第2008/0213289号を参照されたい)とした。

【0617】

図1は、cAC10-val-ala-SG3132(2)(cAC10-化合物38)を使用した体重減少研究の結果を示す。IP又はIVのどちらかにより5mgで投与されるコンジュゲートの単回投与は、体重減少をほとんどもたらさなかった。より多い用量(15mg/kg)のコンジュゲートは、マウスに体重減少をもたらした。

【0618】

図2は、h1F6-val-ala-SG3132(2)(h1F6-化合物38)を使用した体重減少研究の結果を示す。IPにより5mgで投与されるコンジュゲートの単回投与は、若干の体重減少をもたらした。より多い用量(10mg/kg)のコンジュゲートは、マウスにかなりの体重減少をもたらした。

【0619】

治療研究は、2種のCD70⁺腎細胞癌異種移植片モデルにおいて実施した。腫瘍(786-O及びCaki-1)断片をヌードマウスの右側腹部に移植した。マウスは、8日目(786-O)又は9日目(Caki-1)に各群でおよそ100mm³に平均化して、研究群(n=5)に対して無作為化した。ADC又は対照を、q4d×4の予定に従ってip投与した。時間の関数としての腫瘍体積を、式(L×W²)/2を使用して測定した。腫瘍体積が1000mm³に達したら、動物を安楽死させた。永続的な退縮を示すマウスは、移植のおよそ100日後に屠殺した。

【0620】

図3は、h1F6-val-ala-SG3132(2)(h1F6-化合物38)コンジュゲートを使用する治療研究の結果を示す。対照コンジュゲート、cAC10-val-ala-SG3132(2)(cAC10-化合物38)も使用した。0.1mg/kgの用量でh1F6コンジュゲートを投与されたマウスは、若干の腫瘍縮小を示したが、より多い0.3mg/kg及び1mg/kgの用量は、完全な腫瘍縮小を提示するようであった。対照コンジュゲート(非結合性)は、h1F6コンジュゲートに比べて活性が低かった。

【0621】

図4は、h1F6-mc-val-ala-SG3132(2)(h1F6-化合物38)コンジュゲートを使用する治療研究の結果を示す。対照コンジュゲート、cAC10-mc-val-ala-SG3132(2)(cAC10-化合物38)も使用した。1mg/kgの用量でh1F6コンジュゲートを投与されたマウスは、完全な腫瘍縮小を示すようであった。より少ない0.3mg/kg及び0.1mg/kgの用量を投与されたマウスは、それぞれ、より少ない腫瘍縮小を示した。対照コンジュゲート(非結合性)は、同様の用量で投与されたh1F6コンジュゲートに比べて活性が低かったが、より少ない用量で投与されたh1F6コンジュゲートに比べてより高い活性を提示した。h1F6コンジュゲートは、また、より多い用量で投与されたh1F6-vc-MMAEコンジュゲート(米国特許出願公開第2009/0148942号)に比べてより活性であった。

【0622】

図5では、化合物38に連結された2個の負荷量の抗体h1F6d(h1F6d-38)を使用した治療研究の結果を、2個の負荷量の非結合性対照、同一化合物にコンジュゲートされたH00d(h00d-38)と比較した。モデルは、ヌードマウスのCaki皮下モデルとした。用量は0.1、0.3及び1mg/kgでのq7d×2とした。h1F6コンジュゲートの最も高い2種の用量は、1mg/kgで完全な退縮を、及び0.3mg/kgでかなりの腫瘍遅延を示した。非結合性対照は、1mg/kgの用量で腫瘍遅延を示した。

【0623】

図6では、化合物38に連結された2個の負荷量の抗体h1F6d(h1F6d-38)を使用した治療研究の結果を、2個の負荷量の非結合性対照、同一化合物にコンジュゲートされたH00d(h00d-38)と比較した。モデルは、ヌードマウスの786-O皮下モデルとした。用量は0.1、0.3及び1mg/kgでのq7d×2とした。h1F6コンジュゲートの3種の用量は、すべて、完全な退縮又は腫瘍遅延を示し、一方、非結合性対照は、腫瘍遅延を示した。
本発明の実施形態として例えば以下を挙げることができる。
［実施形態１］
式I:
L-(LU-D)_p (I)
を有するコンジュゲート、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物
{式中、
Lは、リガンド単位であり、
LUは、リンカー単位であり、
pは、1〜20であり、
Dは、次式II:

【化108】

[式中、
R²は、式III:

【化109】

(ここで、AはC_5〜7アリール基であり、Xは、-O-、-S-、-C(O)O-、-C(O)-、-NH(C=O)-、-N(R^N)-を含む群から選択され、ここで、R^NはH、C_1〜4アルキル及び(C₂H₄O)_mCH₃(ここで、mは1〜3である)を含む群から選択され、且つ
(i)Q¹は単結合であり、Q²は単結合及び-Z-(CH₂)_n-(ここで、Zは、単結合、O、S、及びNHから選択され、1〜3である)から選択されるか、又は
(ii)Q¹は-CH=CH-であり、Q²は単結合であるか、
のいずれかである）
であり、
R¹²は、ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、C_1〜7アルキル、C_3〜7ヘテロシクリル、ジメチルアミノプロピルオキシ、ピペラジニル、及びビス-オキシ-C_1〜3アルキレンを含む群から選択される一つ又は複数の置換基で置換されていてもよいC_5〜10アリール基であり、
R⁶及びR⁹は、H、R、OH、OR、SH、SR、NH₂、NHR、NRR'、ニトロ、Me₃Sn、及びハロから独立に選択され、
ここで、R及びR'は、置換されていてもよいC_1〜12アルキル、C_3〜20ヘテロシクリル、及びC_5〜20アリール基から独立に選択され、
R⁷は、H、R、OH、OR、SH、SR、NH₂、NHR、NHRR'、ニトロ、Me₃Sn、及びハロから選択され、
(a)R¹⁰はHであり、R¹¹はOH又はOR^A(ここで、R^AはC_1〜4アルキルである)であるか、
(b)R¹⁰及びR¹¹は、それらが結合している窒素及び炭素原子の間で窒素-炭素二重結合を形成しているか、又は
(c)R¹⁰はHであり、R¹¹はSO_zM(ここで、zは2又は3であり、Mは薬学的に許容される一価カチオンである)であるか、
のいずれかであり、
R''は、C_3〜12アルキレン基(その鎖は、O、S、NHからなる群から選択される一つ又は複数のヘテロ原子、及び芳香族環によって中断されていてもよい)であり、
Yは、O、S、又はNHから選択され、
R^6'、R^7'、R^9'は、それぞれR⁶、R⁷、及びR⁹と同じ群から選択され、R^10'及びR^11'は、R¹⁰及びR¹¹と同一であり、ここで、R¹¹及びR^11'がSO_zMである場合は、Mは薬学的に許容される二価カチオンを表してもよい]
を有するPBD二量体を含む薬物単位である}。
［実施形態２］
R⁷が、H、OH、及びORから選択される、実施形態1に記載のコンジュゲート。
［実施形態３］
R⁷が、C_1〜4アルキルオキシ基である、実施形態2に記載のコンジュゲート。
［実施形態４］
YがOである、実施形態1から3のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
［実施形態５］
R''が、C_3〜7アルキレンである、実施形態1から4のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
［実施形態６］
R⁹がHである、実施形態1から5のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
［実施形態７］
R⁶が、H及びハロから選択される、実施形態1から6のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
［実施形態８］
Aがフェニルである、実施形態1から7のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
［実施形態９］
Xが、-O-、-S-、又は-NH-から選択される、実施形態1から8のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
［実施形態１０］
Q¹が単結合である、実施形態1から9のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
［実施形態１１］
Q²が単結合である、実施形態10に記載のコンジュゲート。
［実施形態１２］
Q²が-Z-(CH₂)_n-であり、ZがO又はSであり、nが1又は2である、実施形態10に記載のコンジュゲート。
［実施形態１３］
Q¹が-CH=CH-である、実施形態1から9のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
［実施形態１４］
R¹²がC_5〜7アリール基である、実施形態1から13のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
［実施形態１５］
R¹²がフェニルである、実施形態14に記載のコンジュゲート。
［実施形態１６］
R¹²がC_8〜10アリール基である、実施形態1から13のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
［実施形態１７］
R¹²が、1〜3個の置換基を有する、実施形態1から16のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
［実施形態１８］
R¹⁰及びR¹¹が、窒素-炭素二重結合を形成している、実施形態1から17のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
［実施形態１９］
R^6'、R^7'、R^9'、R^10'、R^11'、及びY'が、それぞれ、R⁶、R⁷、R⁹、R¹⁰、R¹¹、及びYと同一である、実施形態1から18のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
［実施形態２０］
リンカー単位(LU)が、式1a又は1b:
-A¹_a-L¹_s-L²_y-, (Ia)
(式中、
-A¹-は、ストレッチ単位であり、
aは、1又は2であり、
L¹-は、特異性単位であり、
sは、0〜12の範囲の整数であり、
-L²-は、スペーサー単位であり、
yは、0、1又は2であり、
pは、1〜20である)、又は

【化110】

(式中、
-A¹-は、ストレッチ単位(L²)に連結されたストレッチ単位であり、
aは、1又は2であり、
L¹-は、特異性単位(L²)に連結された特異性単位であり、
sは、1〜12の範囲の整数であり、
-L²-は、スペーサー単位であり、
yは、1又は2であり、
pは、1〜20である)
を有する、実施形態1から19のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
［実施形態２１］
リンカー単位(LU)が、式1aを有する、実施形態20に記載のコンジュゲート。
［実施形態２２］
A¹が、

【化111】

(ここで、星印は、L¹への結合箇所を示し、波線は、リガンド単位への結合箇所を示し、nは0〜6である)、

【化112】

(ここで、星印は、L¹への結合箇所を示し、波線は、リガンド単位への結合箇所を示し、nは0〜6である)、

【化113】

(ここで、星印は、L¹への結合箇所を示し、波線は、リガンド単位への結合箇所を示し、nは0又は1であり、mは0〜30である)、又は

【化114】

(ここで、星印は、L¹への結合箇所を示し、波線は、リガンド単位への結合箇所を示し、nは0又は1であり、mは0〜30である)
から選択される、実施形態21に記載のコンジュゲート。
［実施形態２３］
A¹が、

【化115】

(ここで、星印は、L¹への結合箇所を示し、波線は、リガンド単位への結合箇所を示し、nは0〜6である)
である、実施形態21に記載のコンジュゲート。
［実施形態２４］
nが5である、実施形態23に記載のコンジュゲート。
［実施形態２５］
L¹が、アミノ酸配列を含む、実施形態20から24のいずれかに記載のコンジュゲート。
［実施形態２６］
L¹が、ジペプチドである、実施形態25に記載のコンジュゲート。
［実施形態２７］
L¹が、バリン-アラニン、バリン-シトルリン、及びフェニルアラニン-リシンからなる群から選択される、実施形態26に記載のコンジュゲート。
［実施形態２８］
yが0である、実施形態20から27のいずれかに記載のコンジュゲート。
［実施形態２９］
yが1又は2である、実施形態20から27のいずれかに記載のコンジュゲート。
［実施形態３０］
L²が、

【化116】

(ここで、星印は、薬物単位への結合箇所を示し、波線は、L¹への結合箇所を示し、Yは、-N(H)-、-O-、-C(=O)N(H)-、又は-C(=O)O-であり、nは0〜3である)
である、実施形態29に記載のコンジュゲート。
［実施形態３１］
L²が、

【化117】

である、実施形態30に記載のコンジュゲート。
［実施形態３２］
増殖性疾患又は自己免疫疾患を治療するための医薬の製造における、実施形態1から31のいずれか一項に記載のコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物の使用。
［実施形態３３］
増殖性疾患又は自己免疫疾患を治療するための、実施形態1から32のいずれか一項に記載のコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物の使用。
［実施形態３４］
有効量の実施形態1から32のいずれか一項に記載のコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を投与するステップを含む、増殖性疾患又は自己免疫疾患を有する哺乳動物を治療する方法。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】