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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】5881606
(24)【登録日】2016年2月12日
(45)【発行日】2016年3月9日
(54)【発明の名称】脊髄損傷治療用製剤
(51)【国際特許分類】
A61K 31/352 20060101AFI20160225BHJP
A61K 47/38 20060101ALI20160225BHJP
A61K 47/36 20060101ALI20160225BHJP
A61K 47/32 20060101ALI20160225BHJP
A61K 47/22 20060101ALI20160225BHJP
A61K 47/28 20060101ALI20160225BHJP
A61K 9/70 20060101ALI20160225BHJP
A61K 9/00 20060101ALI20160225BHJP
A61K 47/34 20060101ALI20160225BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20160225BHJP
A61K 47/10 20060101ALI20160225BHJP
A61K 47/42 20060101ALI20160225BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20160225BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20160225BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20160225BHJP
A61P 7/00 20060101ALI20160225BHJP
【ＦＩ】
A61K31/352
A61K47/38
A61K47/36
A61K47/32
A61K47/22
A61K47/28
A61K9/70
A61K9/00
A61K47/34
A61K47/02
A61K47/10
A61K47/42
A61K47/12
A61P43/00 111
A61P25/00
A61P43/00 105
A61P7/00
【請求項の数】18
【全頁数】28
(21)【出願番号】特願2012-527762(P2012-527762)
(86)(22)【出願日】2011年8月4日
(86)【国際出願番号】JP2011067838
(87)【国際公開番号】WO2012018069
(87)【国際公開日】20120209
【審査請求日】2014年8月1日
(31)【優先権主張番号】特願2010-177255(P2010-177255)
(32)【優先日】2010年8月6日
(33)【優先権主張国】JP
(73)【特許権者】
【識別番号】000002912
【氏名又は名称】大日本住友製薬株式会社
(73)【特許権者】
【識別番号】899000079
【氏名又は名称】学校法人慶應義塾
(74)【代理人】
【識別番号】100068526
【弁理士】
【氏名又は名称】田村 恭生
(74)【代理人】
【識別番号】100100158
【弁理士】
【氏名又は名称】鮫島 睦
(74)【代理人】
【識別番号】100126778
【弁理士】
【氏名又は名称】品川 永敏
(74)【代理人】
【識別番号】100150500
【弁理士】
【氏名又は名称】森本 靖
(74)【代理人】
【識別番号】100176485
【弁理士】
【氏名又は名称】菊地 拓弥
(72)【発明者】
【氏名】前田 美穂
(72)【発明者】
【氏名】岸野 晶祥
(72)【発明者】
【氏名】佐野 明彦
(72)【発明者】
【氏名】岡野 栄之
(72)【発明者】
【氏名】中村 雅也
(72)【発明者】
【氏名】張 亮
【審査官】
牧野 晃久
(56)【参考文献】
【文献】
国際公開第２００２／００９７５６（ＷＯ，Ａ１）
【文献】
国際公開第２００５／０５３６７８（ＷＯ，Ａ１）
【文献】
国際公開第２００８／１０５０８８（ＷＯ，Ａ１）
【文献】
特開２００９−１１４０８５（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）
Ａ６１Ｋ ３１／００− ３１／８０
Ａ６１Ｋ ４７／００− ４７／４８
Ａ６１Ｋ ９／００− ９／７２
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記式（１）で表される化合物またはその薬学上許容される塩、および難水溶性物質を含有する生体適合性の疎水性高分子を担体としたシート状またはロッド状の固形の徐放性製剤であって、難水溶性物質が低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、部分α化デンプン、クロスポビドン、クロスカルメロースナトリウム、カルメロースカルシウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、ミリスチン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、サッカリンおよび／またはコレステロールである徐放性製剤。
（式中、Ｒ１は水素原子またはカルボキシル基を表し、Ｒ２は水素原子または水酸基を表し、Ｒ３は水素原子またはカルボキシル基を表し、Ｒ４は水素原子または水酸基を表す。）
【化1】
【請求項2】
難水溶性物質が低置換度ヒドロキシプロピルセルロースおよび／またはコレステロールである請求項１に記載の徐放性製剤。
【請求項3】
固形の徐放性製剤の形状が脊髄の損傷部位近傍または脊髄腔内に留置可能な形状である請求項１または２に記載の徐放性製剤。
【請求項4】
生体適合性の疎水性高分子がシリコーンである請求項１〜３のいずれか一項に記載の徐放性製剤。
【請求項5】
固形の徐放性製剤の形状がシート状であって、シートの厚さが０．１〜１．５ｍｍである請求項１〜４のいずれか一項に記載の徐放性製剤。
【請求項6】
難水溶性物質の重量が製剤重量の３〜３５％である請求項１〜５のいずれか一項に記載の徐放性製剤。
【請求項7】
製剤重量の５５％以上がシリコーンである請求項１〜６のいずれか一項に記載の徐放性製剤。
【請求項8】
さらに水溶性添加剤を含有する請求項１〜７のいずれか一項に記載の徐放性製剤。
【請求項9】
水溶性添加剤が塩化ナトリウム、グルコース、マンニトール、ラクトース、グリシン、コール酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウムおよび／またはデスオキシコール酸ナトリウムである請求項８に記載の徐放性製剤。
【請求項10】
水溶性添加剤が塩化ナトリウムおよび／またはデスオキシコール酸ナトリウムである請求項８に記載の徐放性製剤。
【請求項11】
難水溶性物質が低置換度ヒドロキシプロピルセルロースであり、水溶性添加剤が塩化ナトリウムである請求項１０に記載の徐放性製剤。
【請求項12】
難水溶性物質がコレステロールであり、水溶性添加剤がデスオキシコール酸ナトリウムである請求項１０に記載の徐放性製剤。
【請求項13】
難水溶性物質がコレステロールであり、水溶性添加剤が塩化ナトリウムおよびデスオキシコール酸ナトリウムである請求項１０に記載の徐放性製剤。
【請求項14】
式（１）で表される化合物またはその薬学上許容される塩と低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、部分α化デンプン、クロスポビドン、クロスカルメロースナトリウム、カルメロースカルシウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、ミリスチン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、サッカリンまたはコレステロールの重量の総和、さらに水溶性添加剤を含有する場合は水溶性添加剤を加えた重量の総和が製剤重量の１０〜４０％であり、かつ式（１）で表される化合物またはその薬学上許容される塩と水溶性添加剤の重量の総和が製剤重量の３５％を超えない請求項１〜１３のいずれか一項に記載の徐放性製剤。
【請求項15】
実質的に、式（１）で表される化合物またはその薬学上許容される塩、難水溶性物質、適宜添加される水溶性添加剤、および担体としての生体適合性の疎水性高分子からなる請求項１〜１４のいずれか一項に記載の徐放性製剤。
【請求項16】
式（１）で表される化合物またはその薬学上許容される塩を製剤重量１ｍｇあたり３〜３５０μｇ含有する請求項１〜１５のいずれか一項に記載の徐放性製剤。
【請求項17】
固形の徐放性製剤がマトリックス型製剤である請求項１〜１６のいずれか一項に記載の徐放性製剤。
【請求項18】
式（１）で表される化合物のＲ１およびＲ３がカルボキシル基であり、Ｒ２およびＲ４が水酸基である請求項１〜１７のいずれか一項に記載の徐放性製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、セマフォリン３Ａ阻害活性を有する後記式（１）で表される化合物またはその薬学上許容される塩を有効成分とする脊髄損傷の局所治療剤を提供する。すなわち、本発明は、脊髄損傷部位近傍への投与に適した生体適合性高分子を担体とする固形の放出制御製剤であって、有効成分であるセマフォリン３Ａ阻害剤を脊髄損傷治療に必要とされる長時間にわたって損傷部位へ効率的に送達する。具体的には、損傷部位近傍の硬膜下へ投与することにより神経再生に必要な約１ヶ月にわたって損傷部位へ効率的に有効成分を送達し、効果を発揮する。【背景技術】
【0002】
神経細胞は生体において分裂能を持っていない特殊な組織である。そのため一旦傷害を受けると長期にわたって神経機能不全が続く。特に脳や脊髄といった中枢神経系では、傷害を受けた神経線維は、ほとんど再生しないとされている。その原因として、中枢神経系には神経の伸長を阻止する物質が存在していると考えられ、実際に神経再生阻害因子としてＮｏｇｏ、ＭＡＧなどが発見された。またコンドロイチン硫酸プロテオグリカンも同様の作用を持つことが見出された。また、セマフォリンもこのような神経伸長阻害因子の一つである。セマフォリンは、神経成長円錐を退縮させ軸索の伸長を抑制する因子として同定された内因性のタンパク質であり、これまでに約２０種の分子種が知られている。この中で最も良く研究されているのがセマフォリン３Ａ（非特許文献１および２を参照）であり、インビトロで強い神経突起伸長抑制活性、成長円錐退縮活性を有していることが知られている。この蛋白は１０ｐＭという低濃度で短時間のうちに培養神経細胞の成長円錐退縮を誘発する。このセマフォリン３Ａの働きを阻害する化合物（セマフォリン阻害剤）として、一連のキサントン化合物が、セマフォリン阻害活性を有し、神経再生促進作用を有することが知られている（特許文献１及び２を参照）。
【0003】
特許文献１および２には、後記式（１）の化合物に代表されるキサントン化合物類と、その製造方法やセマフォリン阻害作用等について開示されている。しかしながら、その化合物を用いた製剤に関しては、特許文献１では一般的な製剤に関する記載にとどまり、また特許文献２でも実施例４〜７にて点眼剤および眼軟膏剤についての記載があるのみで、後述の式（１）の化合物による脊髄損傷の治療に適した具体的製剤の検討は開示も示唆もなかった。【0004】
中枢神経変性疾患である脊髄損傷の場合でも、脊髄内に含まれる中枢神経線維が傷害され、多くの場合神経機能不全が大きく回復することはない。上記の神経伸長阻害因子の発見後、これら因子の働きを阻害することによって、脊髄損傷を治療しようとする研究が多くなされた。金子らは、セマフォリン３Ａが脊髄損傷後の神経組織に多く発現していることを見出し、セマフォリン３Ａが脊髄神経の再生を阻害していると考えた。そこで脊髄損傷ラットを作製し、髄腔内に上記セマフォリン阻害剤を持続的に投与し、運動機能の変化を調べた。その結果、セマフォリン阻害剤投与ラットでは、脊髄内の神経線維の再伸長が見られ、これに起因した運動機能回復も確かめられた。この実験結果により、セマフォリン阻害剤が脊髄損傷の有効な治療薬となることが示唆された（例えば、非特許文献３を参照）。【0005】
脊髄損傷における神経伸長阻害因子の発現は長期間にわたると考えられる。従って、薬剤によりこれら因子の働きを抑制し、神経線維の伸長を促すためには、長期間にわたる薬剤投与が必要とされる。また、脊髄は脳と同様に、血液からの物質移行に関しては、脳血液関門により高度に選択的であるため、効率よく脊髄に化合物を作用させるためには、髄腔内投与を行うのが一般的である。従来、脊髄腔内にセマフォリン阻害剤を持続的に投与するには、頻回の脊髄腔内への注射的投与か、あるいはカテーテルの先端を脊髄腔内に留置しセマフォリン阻害剤の水溶液を持続注入することによって行っているが、これらの投与法は感染や神経線維を損傷する恐れがあり、患者にとって心身ともに負担の大きいものである。
これらを解決する手段として、セマフォリン阻害剤を徐放製剤化し局所投与することにより、投与回数の削減、薬効発現に必要な局所濃度の持続、副作用の軽減が期待される。
【0006】
体内埋め込み型の徐放性製剤としては、高分子物質を薬物の担体として利用する技術が中心となっており、親水性高分子のコラーゲンを担体に用いたタンパク性薬物の徐放について報告されている（たとえば、非特許文献４を参照）。コラーゲンは生体適合性に優れタンパクのような水溶性高分子の徐放化に適した担体であるが、放出期間はタンパクの場合で１週間程度にとどまる。分子量が小さい水溶性低分子薬物ではさらに放出速度が速くなることから長期間の徐放化には適さない。【0007】
長期間の徐放化を可能にするには、コラーゲンや多糖類のような親水性高分子ではなく、疎水性高分子を担体にするのが有効であり、生体適合性に優れた疎水性高分子の代表的なものとしてシリコーンがあげられる。ノルプラント（登録商標）は、円柱状のシリコーン製容器の中に有効成分としてレボノルゲストレルの粉末が封入されたカプセル型の製剤であり、５年間にわたって生体内でレボノルゲストレルを放出するという特徴を有している。また、マトリックス型製剤の例としては、有効成分のエストラジオールがシリコーン中に分散した形態であるコンプドーズ（登録商標）が挙げられる（例えば、特許文献３を参照）。
これらノルプラントおよびコンプドーズの有効成分はいずれも脂溶性薬物であり、疎水性高分子のシリコーン中に溶解し拡散することが可能である。これより、製剤表面の薬物が周囲の組織への拡散によって放出されると、製剤表面の脂溶性薬物濃度が減少することから、製剤内部の高濃度領域から低濃度領域である製剤表面への拡散による薬物の移動が起こり、持続的放出が可能となる。
【0008】
一方、本発明の有効成分である式（１）で表される化合物のような水溶性の化合物では疎水性高分子担体にほとんど溶解せず、自律的に拡散放出され得ないことから、脂溶性薬物とは全く異なる放出機構が必要となってくる。一般に水溶性薬物を疎水性高分子担体から放出させる方法としては、リザーバー型製剤で細孔から放出させるものが挙げられる。他にも、担体中に薬物が分散したタイプもあり、ここではまず初めに表面に存在する薬物粒子が周囲の組織中の水分により溶け出し、次いでこれに接する薬物粒子が溶け出す、といった現象の繰り返しにより連続した水のチャンネルを形成し、チャンネル内を拡散させることにより薬物を放出させている。このとき、製剤内部で生じる浸透圧の差によりクラッキングが生じることによってもチャンネル形成が促進され、さらに膨潤による押出し効果によって放出が促進される。このため、放出を持続させるには担体中の粒子が近接していることや製剤内部で浸透圧の差を発生させることが必要であり、一定量以上の水溶性薬物または水溶性の添加剤を含有させる必要があることを特徴とする。このような例として、アルブミンの添加によりシリコーンからの薬物放出を制御する方法が報告されている（特許文献４を参照）。
【0009】
しかし、このような水溶性薬物の放出機構による放出制御は極めて難しく、一般的に初期放出速度が著しく大きいバースト的放出を生じ、その後は経時的に放出量が低下する一次放出のプロファイルとなることから、長期間の安定した持続放出は困難である。初期放出速度が大きいことは疾患と薬物との関係によっては有効な場合もあるが、初期の薬物濃度の急上昇による副作用の発現や、薬物放出量がその後経時的に低下するため使いにくい、といった問題点がある。特に製剤の表面積が大きいほど初期放出速度が高まることから、重量あたりの表面積が大きくなる小型の製剤や厚みの薄いシート状の製剤では初期バーストを起こして放出制御することができなくなる。これより、長期持続型製剤として目的に応じた小型化や厚みを薄くすることが困難である。
疎水性高分子担体から水溶性薬物を一定速度で持続的に放出する技術として、水溶性薬物を含有する層の周囲のみを、水を通さず内層の膨潤を制御し得る外層で被覆した柱状製剤が開示されているが、この技術は外層被覆によりサイズが大きくなり、製剤の小型化や薄いフィルム状に製剤化することができないことがデメリットであり（特許文献５を参照）、また、外層に被覆されていない製剤両端の断面のみから薬物が放出されることから、断面近傍に高濃度の薬物が分布することになり、患部に均一に薬物を送達させようとする場合には適さない。
薬剤持続的放出性包帯材も報告されており（特許文献６を参照）、シリコーンからの薬物放出の調整成分として親水性成分が用いられている。これは親水性成分によって製剤内部が高浸透圧状態になり、製剤の膨張と、それに続くシリコーンポリマーの収縮によって薬物を放出させるというメカニズムである。このため、周囲に水が存在する環境下では製剤が膨張し大幅な体積変化を生じることから、生体内への適用においては周囲組織を圧迫する等の障害が予想され、実用上不適である。しかも放出速度は速く、放出期間は数時間から数日程度に限られ長期間の徐放化には適さない。また同報告においては、親水性成分が液体であるのが好適とされ、最も好適な親水性成分としてグリセロールの記載があり、この他にも液状ポリエチレングリコール等液体成分の例示があるが、これらはシリコーンの成形および硬化を阻害し、後述する本発明の固形シリコーン製剤に含有させることは不適である。
さらには脂溶性薬物用の徐放性製剤も報告されており（特許文献７を参照）、同報告においては、シリコーンなどの水不透過性の生体適合性素材に水溶性物質が分散した製剤が開示されている。
【0010】
以上のように、セマフォリン３Ａ阻害による脊髄損傷治療剤として臨床応用を実用化するには適したデリバリー技術が必須であるが、これまで式（１）で表される化合物の局所投与に適した実用的な徐放性製剤は見出されていなかった。【先行技術文献】
【特許文献】
【0011】
【特許文献1】国際公開第０２/０９７５６号パンフレット
【特許文献2】国際公開第２００５/０５３６７８号パンフレット
【特許文献3】特開昭５５−４５６９４号公報
【特許文献4】特開昭６２-１７４００７号公報
【特許文献5】特開平７-１８７９９４号公報
【特許文献6】特開平３−１５１３２２号
【特許文献7】国際公開第００／１５１９９号パンフレット
【非特許文献】
【0012】
【非特許文献1】Ｃｅｌｌ，Ｖｏｌｕｍｅ７５，ｐ２１７，１９９３年
【非特許文献2】Ｃｅｌｌ，Ｖｏｌｕｍｅ７５，ｐ１３８９，１９９３年
【非特許文献3】Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌｕｍｅ１２，ｐ１３８０，２００６年
【非特許文献4】Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ，Ｖｏｌｕｍｅ３１，ｐ２４、１９９８年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0013】
本発明の課題は、セマフォリンの阻害剤を有効成分として含有する脊髄損傷の局所治療に適した有効で実用的な徐放性製剤を提供することである。【課題を解決するための手段】
【0014】
本発明者らは、セマフォリン阻害剤である式（１）で表される化合物またはその薬学上許容される塩が脊髄損傷治療に十分に効果を発揮するには、神経再生に要する長期間にわたって組織中のセマフォリン３Ａを阻害すべく有効濃度を維持することが必要であると考え、鋭意検討した結果、疎水性高分子を担体とし、添加剤として難水溶性物質である低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、コレステロールなどを用いた製剤とすることにより、式（１）の化合物が２週間以上の長期間の放出制御を達成することができ、神経再生において有効性を示すことが可能であることを見出した。また、局所製剤として物理的圧迫による神経への障害を及ぼさずに投与可能な形状を工夫することで脊髄損傷治療への臨床応用を可能とする実用的な治療剤を得ることに成功し、本発明を完成した。【0015】
すなわち、本発明は、以下のものに関する。項１．下記式（１）で表される化合物またはその薬学上許容される塩、および難水溶性物質を含有する生体適合性の疎水性高分子を担体としたシート状またはロッド状の固形の徐放性製剤であって、難水溶性物質が低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、部分α化デンプン、クロスポビドン、クロスカルメロースナトリウム、カルメロースカルシウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、ヒドロキシプロピルスターチ、ミリスチン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、サッカリンおよび／またはコレステロールである徐放性製剤。
【化1】
【0016】
項２．難水溶性物質が低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、部分α化デンプン、クロスポビドン、クロスカルメロースナトリウム、ミリスチン酸、サッカリンおよび／またはコレステロールである項１に記載の徐放性製剤。項３．難水溶性物質が低置換度ヒドロキシプロピルセルロースおよび／またはコレステロールである項１に記載の徐放性製剤。
【0017】
項４．固形の徐放性製剤の形状が脊髄の損傷部位近傍または脊髄腔内に留置可能な形状である項１〜３のいずれか一項に記載の徐放性製剤。項５．生体適合性の疎水性高分子がシリコーンである項１〜４のいずれか一項に記載の徐放性製剤。
【0018】
項６．固形の徐放性製剤の形状がシート状であって、シートの厚さが０．１〜１．５ｍｍである項１〜５のいずれか一項に記載の徐放性製剤。【0019】
項７．難水溶性物質の重量が製剤重量の３〜３５％である項１〜６のいずれか一項に記載の徐放性製剤。【0020】
項８．製剤重量の５５％以上がシリコーンである項１〜７のいずれか一項に記載の徐放性製剤。【0021】
項９．さらに水溶性添加剤を含有する項１〜８のいずれか一項に記載の徐放性製剤。【0022】
項１０．水溶性添加剤が塩化ナトリウム、グルコース、マンニトール、ラクトース、グリシン、コール酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウムおよび／またはデスオキシコール酸ナトリウムである項９に記載の徐放性製剤。項１１．水溶性添加剤が塩化ナトリウムおよび／またはデスオキシコール酸ナトリウムである項９に記載の徐放性製剤。
【0023】
項１２．難水溶性物質が低置換度ヒドロキシプロピルセルロースであり、水溶性添加剤が塩化ナトリウムである項１１に記載の徐放性製剤。【0024】
項１３．難水溶性物質がコレステロールであり、水溶性添加剤がデスオキシコール酸ナトリウムである項１１に記載の徐放性製剤。【0025】
項１４．難水溶性物質がコレステロールであり、水溶性添加剤が塩化ナトリウムおよびデスオキシコール酸ナトリウムである項１１に記載の徐放性製剤。【0026】
項１５．式（１）で表される化合物またはその薬学上許容される塩と低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、部分α化デンプン、クロスポビドン、クロスカルメロースナトリウム、カルメロースカルシウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、ヒドロキシプロピルスターチ、ミリスチン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、サッカリンまたはコレステロールの重量の総和、さらに水溶性添加剤を含有する場合は水溶性添加剤を加えた重量の総和が製剤重量の１０〜４０％であり、かつ式（１）で表される化合物またはその薬学上許容される塩と水溶性添加剤の重量の総和が製剤重量の３５％を超えない項１〜１４のいずれか一項に記載の徐放性製剤。【0027】
項１６．実質的に、式（１）で表される化合物またはその薬学上許容される塩、難水溶性物質、適宜添加される水溶性添加剤、および担体としての生体適合性の疎水性高分子からなる項１〜１５のいずれか一項に記載の徐放性製剤。【0028】
項１７．式（１）で表される化合物またはその薬学上許容される塩を製剤重量１ｍｇあたり３〜３５０μｇ含有する項１〜１６のいずれか一項に記載の徐放性製剤。【0029】
項１８．固形の徐放性製剤がマトリックス型製剤である項１〜１７のいずれか一項に記載の徐放性製剤。【0030】
項１９．式（１）で表される化合物のＲ１およびＲ３がカルボキシル基であり、Ｒ２およびＲ４が水酸基である項１〜１８のいずれか一項に記載の徐放性製剤。【0031】
項２０．項１〜１９のいずれか一項に記載の徐放性製剤を用いた、脊髄損傷の治療方法。【0032】
項２１．他の脊髄損傷の治療方法を併用した、項２０の治療方法。【0033】
項２２．更にリハビリテーションを併用した、項２０または２１の治療方法。【図面の簡単な説明】
【0034】
【図1】試験例１の結果を示す。
【図2】試験例２の結果を示す。
【図3】試験例３の結果を示す。
【図4】試験例４の結果を示す。
【図5】試験例５の結果を示す。
【図6】試験例６の結果を示す。
【図7】試験例７の結果を示す。
【図8】試験例８の結果を示す。
【図9】試験例９の結果を示す。
【図10】試験例１０の結果を示す。
【図11】試験例１１の結果を示す。
【図12】試験例１２の結果を示す。
【図13】試験例１３の結果を示す。
【図14】試験例１４の結果を示す。
【図15】試験例１５の結果を示す。
【図16】試験例１６の結果を示す。
【図17】試験例１７における切開したラット脊髄のＴ８部の硬膜を示す。
【図18】試験例１７におけるシートを挿入した脊髄を示す。
【図19】試験例１７における試験終了時の脊髄組織（プラセボ）を示す。
【図20】試験例１７における試験終了時の脊髄組織（製剤５投与）を示す。
【図21】試験例１７における試験終了時の脊髄断面の顕微鏡写真（製剤５投与）を示す。
【図22】試験例１８の結果を示す。
【図23】試験例１９における脊髄の免疫染色を写真で示す。
【図24】試験例１９の結果を示す。
【図25】試験例１９における免疫染色を定量化した結果を示す。
【図26】試験例１９における脊髄の電子顕微鏡写真を示す。
【図27】試験例２０における脊髄の免疫染色を写真で示す。
【図28】試験例２０における免疫染色を定量化した結果を示す。
【図29】試験例２１の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【0035】
本発明で用いる式（１）で表される化合物は水溶性薬物であり、セマフォリン３Ａ阻害活性を有していることが知られている。後記実施例で用いるビナキサントン（別名：ＳＰＦ−３０５９−５、下式参照）を含む式（１）で表される化合物は、特許文献１（第42頁〜第47頁、実施例１）および特開２００８−１３５３０号公報（第26頁〜第27頁、実施例３）を参考にして製造することができる。【化2】
【0036】
本発明で用いる難水溶性物質とは、常温で固体であり、生体内環境であるｐＨが中性、３７℃において、水に溶けにくいもので、医学的・薬学的に許容される物質である。難水溶性物質として具体的には、経口剤において崩壊剤として使用される膨潤性ポリマーである低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、部分α化デンプン、クロスポビドン、クロスカルメロースナトリウム、カルメロースカルシウム、カルボキシメチルスターチナトリウムもしくはヒドロキシプロピルスターチ、常温において固体の脂肪酸であるミリスチン酸、ラウリン酸もしくはパルミチン酸、サッカリンまたはコレステロールを意味し、これらの成分のいずれかまたはそれらの混合物も含まれる意図である。ここで低置換度ヒドロキシプロピルセルロースは、ヒドロキシプロポキシル基を５〜１６％含有する。難水溶性物質として、好ましくは、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、部分α化デンプン、クロスポビドン、クロスカルメロースナトリウム、ミリスチン酸、サッカリンおよび／またはコレステロールが挙げられ、低置換度ヒドロキシプロピルセルロースおよび／またはコレステロールが最も好ましい。コレステロールはその溶解を補助する物質（例えば胆汁酸塩）と併用することで、さらに好ましい効果が得られる。【0037】
本発明においては、さらに放出速度を最適化するため、あるいは薬物安定化等の目的で、水溶性添加剤を加えてもよい。水溶性添加剤は常温で固体であり医学的・薬学的に許容されるものであれば特に制限はないが、１級アミンを持たない糖類、塩類、胆汁酸塩が好ましい。具体的には、糖類として、グルコース、マンニトール、ラクトース、トレハロース、スクロース、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール等が挙げられ、好ましくはグルコース、マンニトール、ラクトースが挙げられる。塩類として、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム等が挙げられ、好ましくは塩化ナトリウムが挙げられる。胆汁酸塩として、一次胆汁酸塩であるコール酸ナトリウムおよびケノデオキシコール酸ナトリウム、二次胆汁酸塩であるデスオキシコール酸ナトリウムおよびリトコール酸ナトリウム、複合胆汁酸塩であるグリココール酸ナトリウムおよびタウロコール酸ナトリウム等が挙げられ、好ましくはコール酸ナトリウム、デスオキシコール酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウムが挙げられる。更に好ましくは、塩化ナトリウムおよび／またはデスオキシコール酸ナトリウムである。これらの水溶性添加剤は、本発明の固形製剤において、単独でまたは異なるものが複数種類含まれてもよい。更にはデスオキシコール酸ナトリウムを併用することが最も好ましい。
難水溶性物質として低置換度ヒドロキシプロピルセルロースを用いる場合は、水溶性添加剤として塩化ナトリウムとの組み合わせが放出制御に優れている。難水溶性物質としてコレステロールを用いる場合は、前述のようにその溶解を補助する物質を併用することが好ましく、具体的には前述の胆汁酸塩を併用することが好ましく、中でもコール酸ナトリウム、デスオキシコール酸ナトリウムまたはグリココール酸ナトリウムを併用することがより好ましく、更にはデスオキシコール酸ナトリウムあるいは、デスオキシコール酸ナトリウムと塩化ナトリウムとの組み合わせが放出制御に優れている。ここで、デスオキシコール酸ナトリウムと塩化ナトリウムを組み合わせた場合のデスオキシコール酸ナトリウムと塩化ナトリウムを合わせた含量は３５％未満、好ましくは２０％以下であって、両者の割合には特に制限なく、任意の割合で組み合わせることができる。
ただし、水溶性添加剤としての塩化ナトリウムは放出促進効果に優れているが、添加量が多すぎると製剤内部での浸透圧の差の発生が過剰になり製剤の著しい膨潤を生じる可能性があることから、添加量は１０％以下にすることが好ましい。
【0038】
担体に用いる疎水性高分子としては、生体適合性であれば特に限定されないが、１級アミンを含有しない担体を用いることが好ましい。これは式（１）で表される化合物、殊にビナキサントン（別名：ＳＰＦ−３０５９−５）が１級アミンと反応しやすく、１ヶ月以上の長期の持続放出を達成するには製剤内で十分な安定性を保つことが重要であることによる。フィルム状製剤にする場合は、適度な強度と柔軟性を有するものが好ましい。【0039】
疎水性高分子は生体内非分解性のものと生体内分解性のものに大別されるがいずれを用いてもよく、以下に例を示すが、これに限定されるものではない。生体内非分解性高分子の例としては、シリコーン、ポリウレタンが挙げられ、生体内分解性高分子の例としてはポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリカプロラクトンおよびこれらの共重合体が挙げられる。【0040】
このうち疎水性高分子として、より好ましい担体はシリコーンである。シリコーンは、生体適合性の優れた材料として古くから人工臓器や医療器具の材料として用いられてきた実績がある。シリコーンはシロキサン結合の重合度や置換基の違いにより、オイル状、ゲル状、ゴム状等、さまざまな形状のものがある。本発明のシリコーンは、固体のシリコーンであれば特に制限はなく、オイル状、ゲル状のシリコーンを硬化させ固体としたものであってもよい。例えばDow Corning社製のポリジメチルシロキサンのSILASTIC Q7-4750や、Nusil社製のMED-4750を用いることができる。【0041】
本発明におけるマトリックス型製剤とは、疎水性担体中に粉末医薬品や粉末添加剤を均一に分散させた固形の放出制御製剤である。本発明における固形製剤の形状は、脊髄損傷部位近傍または脊髄腔内への留置に適したものであれば特に限定されない。
【0042】
本発明で用いる「損傷部位近傍または脊髄腔内に留置可能な形状」とは、留置後に脊髄神経を圧迫しない形状のものであり、好ましい形状としてシート状のものや、円柱状（ロッド状）の形状が挙げられる。【0043】
脊髄損傷の局所治療における本発明製剤の投与法としては、手術時に損傷部位近傍の硬膜下にシート状の製剤を挿入する、あるいはシート状製剤を人工硬膜に接着または人工硬膜の代用として設置することで損傷部位局所の有効濃度を維持する方法、または、馬尾のような脊髄腔内の空間にロッド状の製剤を留置し髄液中の有効濃度を維持する方法がある。このうち、シート状製剤がより直接的に損傷部位に作用させるのに適しているが、神経への圧迫を生じないこと、あるいは人工硬膜的な使用を可能とするため、シート製剤の厚みは０．１〜１.５ｍｍが好ましく、より好ましくは０．１〜１ｍｍであり、さらに好ましくは０．２３〜０．５ｍｍであり、ヒトへの適用においては０．３〜０．３５ｍｍが最も好ましい。縦は３〜９０ｍｍであり、横は３〜１４０ｍｍであり、損傷部位の大きさに応じて用時に切断してもよい。
また、本発明で用いるロッド状の固形製剤は、脊髄腔内への留置に適した剤形であって、より具体的には留置針のような投与器具による馬尾への留置にも適した直径０．３〜５ｍｍ、より好ましくは０．３５〜３ｍｍの円柱状の製剤である。
【0044】
本発明で用いるシート状製剤の厚さあるいはロッド状製剤の直径の測定方法は、実験的な小規模製造においては、シリコーン硬化後にノギス等により測定することが可能であるが、シリコーンには弾力性があることから過度の加圧による収縮、変形が起こらないように注意して測定する必要がある。加圧の影響が少ない測定法としては顕微鏡による測定や超音波厚さ計が挙げられる。製造工程において、シリコーン硬化前の成形直後、または硬化後のいずれにおいても測定することも可能であるが、硬化前には加圧よる変形が起こりやすいので一層の注意を要する。また、成形に用いるノズル、スリット、ローラー等の金型のサイズと常圧下での膨張率を予め計算しておいて、完成品のサイズを予測して製造することもできる。【0045】
本発明で用いる「実質的に、式（１）で表される化合物またはその薬学上許容される塩、難水溶性物質、適宜添加される水溶性添加剤、および担体としての生体適合性の疎水性高分子からなる」とは、ここで挙げられた各成分が主たる成分であり、それ以外の成分については、本発明の製剤の効果に影響を与えない成分であれば僅かに含んでいてもよいことを意味している。ここで式（１）で表される化合物またはその薬学上許容される塩、難水溶性物質、適宜添加される水溶性添加剤、および担体としての生体適合性の疎水性高分子の総量としては、製剤重量の９５％以上であり、例えば、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、または１００％である。基本的に上記成分以外に本発明製剤の構成成分として必須なものないが、必要に応じて、例えば、製造時におけるシリコーンの硬化速度を調節するものや、製剤の強度や柔軟性を調節する物質、製剤の体内埋め込み位置がＸ線下で確認できるＸ線不透過性マーカー等を含んでもよい。Ｘ線不透過マーカーとしては、例えば、プラチナ、プラチナ／イリジウム、プラチナ／ニッケル等のプラチナ系合金またはパラジウム系の合金が挙げられる。【0046】
疎水性高分子からの水溶性薬物の放出制御に難水溶性物質が有効な理由としては、特定の理論にとらわれるものではないが以下のとおり考えられる。前述のように、水溶性薬物は疎水性高分子に溶解せず自律的に拡散放出され得ないことから、製剤表面からの溶解連鎖によるチャンネル形成により放出される。このチャンネル形成は、従来の水溶性添加剤を用いた場合では、添加剤の速やかな溶解により製剤内部に添加剤粒子の容積分の空隙が生じ、大きなチャンネル形成が急激に進行する。これにより放出が著しく促進され初期バースト的な短期間の放出となる。これに対し、難水溶性の添加剤の場合は、溶解速度が遅いことから大きな空隙を急速に生じることなく、添加剤の存在領域が適度な水分と水溶性薬物の通路として働き、長期間の放出制御が可能となる。
【0047】
式（１）で表される化合物またはその薬学上許容される塩の含量は、製剤重量の０．３〜３５％、好ましくは２〜２０％、より好ましくは８〜１５％である。疎水性高分子の含量は、製剤重量の５５％以上、好ましくは６０〜９０％、より好ましくは６５〜８５％、最も好ましくは７０％である。
固体の難水溶性物質の含量は、製剤重量の３〜３５％、好ましくは７〜３０％、より好ましくは７〜２５％である。また、より好ましい低置換度ヒドロキシプロピルセルロースの添加量は製剤重量の７〜３０％であり、最も好ましい添加量は製剤重量の１２〜２５％である。コレステロールのより好ましい添加量は製剤重量の７〜２０％であり、最も好ましい添加量は製剤重量の７．５〜１５％である。これより、初期バーストの少ない長期の良好な放出性が得られる。
適宜添加される水溶性添加剤の含量は、製剤重量の３５％未満、好ましくは２０％以下である。
【0048】
式（１）の薬物、難水溶性物質および適宜添加される水溶性添加剤は担体中で粉末として分散しているが、これらの粒子径が放出性に影響を与える可能性があることから、品質を一定させるために必要に応じて、粒子径を一定範囲にコントロールすることが望ましく、通常、上限として３００μｍ以下、より好ましくは２００μｍ以下になるようにコントロールされる。【0049】
本発明の製剤は、セマフォリン３Ａ阻害による脊髄損傷の局所治療剤として有用であるとともに、脊髄損傷治療における他の療法との併用にも優れている。たとえば、神経保護剤、神経成長促進剤としてＦＧＦ−２（Fibroblast growth factor-2）、ＮＧＦ（Nerve growth factor）、ＢＤＮＦ（Brain-derived neurotrophic factor）、ＨＧＦ（Hepatocyte growth factor）等の神経栄養因子やＮＢＱＸ（2,3-Dioxo-6-nitro-１,2,3,4-tetrahydrobenzo[f]quinoxaline-7-sulfonamide）等との併用療法や、細胞移植との組み合わせが可能である。セマフォリンの阻害剤と他の有効成分を併用する場合は、それぞれ治療に適したタイミングと持続期間で放出するように設計することができる。たとえば、ＦＧＦ−２やＮＢＱＸなどの神経保護に働く成分は初期の数日間、神経の再生に働く成分ではより長期の約１ヶ月の持続が望ましい。また、本発明の製剤による治療ではカテーテル挿入による感染の恐れがなくリハビリとの併用にも優れる。【0050】
本発明における徐放性製剤を用いた脊髄損傷治療には、脊髄損傷患者に通常行われるリハビリテーションを併用することで、神経機能回復がより向上する。【実施例】
【0051】
次に実施例および比較例とこれらの試験例を挙げて、本発明をさらに詳しく説明するが、本発明の範囲はこれらに限定されるものではない。【0052】
（入手先）ビナキサントン粉末（上記［００３５］に記載の文献の通り培養と精製することにより製造する。また文献（K.Tatsutaら、Chemistry Letters Vol.36, No.1 (2007)）に従い化学合成も可能である）
Ｌ−ＨＰＣ（信越化学工業株式会社）
ラクトース（島貿易株式会社）
ＰＢＳ（タカラバイオ株式会社）
塩化ナトリウム結晶（ナカライテスク株式会社）
コレステロール（関東化学株式会社）
デスオキシコール酸ナトリウム一水和物（ナカライテスク株式会社）
グルコース（ナカライテスク株式会社）
Ｄ−マンニトール（東和化成工業株式会社）
ＰＥＧ４０００（ナカライテスク株式会社）
ＣＭＣ−Ｎａ（ナカライテスク株式会社）
ＨＰＣ（日本曹達株式会社）
【0053】
実施例１Ｌ−ＨＰＣ（低置換度ヒドロキシプロピルセルロース）９０ｍｇにビナキサントン粉末６ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分１０２ｍｇと同シリコーンＢ成分１０２ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の製剤１を得た。
【0054】
試験例１実施例１にて製造した製剤１を５ｍｍ×７ｍｍの大きさに切断し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ） １ｍＬ中に投入し、３７℃にて静置し、製剤から放出されるビナキサントンを高速液体クロマトグラフィー（UFLC、株式会社 島津製作所）により定量し累積放出率を求めた。結果を図１に示す。
本製剤は、難水溶性物質としてＬ−ＨＰＣを３０％含有する製剤であるが、初期バーストが５％未満と小さく抑えられ、放出期間の４週間に亘ってほぼ一定量の持続放出が達成された。
【表1】
【0055】
実施例２ラクトース４５ｍｇとＬ−ＨＰＣ ４５ｍｇを混合した。さらにビナキサントン粉末６ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分１０２ｍｇと同シリコーンＢ成分１０２ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の製剤２を得た。
【0056】
実施例３あらかじめ乳鉢で結晶を直径１００μｍ以下（光学顕微鏡（位相差顕微鏡 BX-51-33-PHU-D, OLYMPAS）により粒子径を確認した）に粉砕した塩化ナトリウム１５ｍｇとＬ−ＨＰＣ ７５ｍｇを混合した。さらにビナキサントン粉末６ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分１０２ｍｇと同シリコーンＢ成分１０２ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の製剤３を得た。
【0057】
試験例２実施例２および実施例３にて製造した各々の製剤（表２に示す）を５ｍｍ×７ｍｍの大きさに切断し、ＰＢＳ １ｍＬ中３７℃にて静置し、製剤から放出されるビナキサントンを高速液体クロマトグラフィーにより定量し累積放出率を求めた。結果を図２に示す。
製剤２および製剤３は難水溶性物質としてＬ−ＨＰＣを含有し、それぞれさらに水溶性添加剤のラクトースまたはＮａＣｌを含有する製剤であるが、いずれも初期バーストが少なく放出期間の１ヶ月にわたって良好な持続放出が達成された。
【表2】
【0058】
実施例４あらかじめ乳鉢で結晶を直径１００μｍ以下に粉砕した塩化ナトリウム２０ｍｇとＬ−ＨＰＣ １００ｍｇを混合した。さらにビナキサントン粉末４０ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分１７０ｍｇと同シリコーンＢ成分１７０ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の製剤４を得た。
【0059】
実施例５あらかじめ乳鉢で結晶を直径１００μｍ以下に粉砕した塩化ナトリウム３０ｍｇとＬ−ＨＰＣ １７０ｍｇを混合した。さらにビナキサントン粉末１００ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分３５０ｍｇと同シリコーンＢ成分３５０ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の製剤５を得た。
【0060】
試験例３実施例４および実施例５にて製造した各々の製剤（表３に示す）を試験例１と同様の方法で試験し、累積放出率を求めた。図３に結果を示す。
製剤４および製剤５は、上記の製剤１から製剤３に比べてビナキサントン含量が高い製剤であるが、いずれの製剤も５６日間の長期にわたる良好な持続放出を達成した。
【表3】
【0061】
実施例６あらかじめ乳鉢で結晶を直径１００μｍ以下に粉砕した塩化ナトリウム１２ｍｇとＬ−ＨＰＣ ４８ｍｇを混合した。さらにビナキサントン粉末６０ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分１４０ｍｇと同シリコーンＢ成分１４０ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の製剤６を得た。
【0062】
実施例７あらかじめ乳鉢で結晶を直径１００μｍ以下に粉砕した塩化ナトリウム１２ｍｇとＬ−ＨＰＣ ２８ｍｇを混合した。さらにビナキサントン粉末８０ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分１４０ｍｇと同シリコーンＢ成分１４０ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の製剤７を得た。
【0063】
試験例４実施例６および実施例７にて製造した各々の製剤（表４に示す）を試験例１と同様の方法で試験し、累積放出率を求めた。図４に結果を示す。
製剤６および製剤７は、製剤５よりもさらにビナキサントン含量の異なる製剤であるが、いずれの製剤も４０日間以上の長期にわたる良好な持続放出を達成した。
【表4】
【0064】
実施例８あらかじめ乳鉢で結晶を直径１００μｍ以下に粉砕した塩化ナトリウム１８ｍｇとＬ−ＨＰＣ １０２ｍｇを混合した。さらにビナキサントン粉末６０ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分２１０ｍｇと同シリコーンＢ成分２１０ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．２３ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の製剤８を得た。
【0065】
試験例５実施例８で製造した製剤８を試験例１と同様の方法で試験し、累積放出率を求めた。図５に結果を示す。
製剤１から製剤７は製剤の厚みが０．３ｍｍであったが、製剤８は０．２３ｍｍとさらに厚みが薄いシート製剤であるが、４０日間以上の長期にわたる良好な持続放出を達成した。
【表5】
【0066】
実施例９あらかじめ乳鉢で結晶を直径１００μｍ以下に粉砕した塩化ナトリウム６ｍｇにデスオキシコール酸ナトリウム二水和物１７ｍｇとコレステロール１７ｍｇを混合した。さらにビナキサントン粉末２０ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分７０ｍｇと同シリコーンＢ成分７０ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の製剤９を得た。
【0067】
試験例６実施例９で製造した製剤９を試験例１と同様の方法で試験し、累積放出率を求めた。図６に結果を示す。
本製剤は難水溶性物質としてコレステロールを含有し、さらに水溶性添加剤のデスオキシコール酸Ｎａ（ＤＣ）とＮａＣｌを含有する製剤であるが、４０日間以上の長期にわたる良好な持続放出を達成した。
【表6】
【0068】
実施例１０あらかじめ乳鉢で結晶を直径１００μｍ以下に粉砕した塩化ナトリウム１０ｍｇにデスオキシコール酸ナトリウム二水和物１５ｍｇとコレステロール１５ｍｇを混合した。さらにビナキサントン粉末２０ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分７０ｍｇと同シリコーンＢ成分７０ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の製剤１０を得た。
【0069】
試験例７実施例１０で製造した製剤１０を試験例１と同様の方法で試験し、累積放出率を求めた。図７に結果を示す。
本製剤は難水溶性物質としてコレステロールを含有し、さらに水溶性添加剤のデスオキシコール酸Ｎａ（ＤＣ）とＮａＣｌを含有する製剤であるが、１ヶ月以上の長期にわたる良好な持続放出を達成した。
【表7】
【0070】
実施例１１あらかじめ乳鉢で結晶を直径１００μｍ以下に粉砕した塩化ナトリウム１６ｍｇにコレステロール２４ｍｇを混合した。さらにビナキサントン粉末２０ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分７０ｍｇと同シリコーンＢ成分７０ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の製剤１１を得た。
【0071】
実施例１２あらかじめ乳鉢で結晶を直径１００μｍ以下に粉砕した塩化ナトリウム１０ｍｇにコレステロール３０ｍｇを混合した。さらにビナキサントン粉末２０ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分７０ｍｇと同シリコーンＢ成分７０ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の製剤１２を得た。
【0072】
試験例８実施例１１および実施例１２にて製造した各々の製剤（表８に示す）を試験例１と同様の方法で試験し、累積放出率を求めた。図８に結果を示す。
製剤１１および製剤１２は、難水溶性物質としてコレステロールを含有し、さらに水溶性添加剤のＮａＣｌを含有する製剤であるが、いずれの製剤も２ヶ月の長期に亘る良好な持続放出を達成した。
【表8】
【0073】
実施例１３あらかじめ乳鉢で結晶を直径１００μｍ以下に粉砕した塩化ナトリウム１０ｍｇにＬ−ＨＰＣ ５０ｍｇを混合した。さらにビナキサントン粉末２０ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分８５ｍｇと同シリコーンＢ成分８５ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．５ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の製剤１３を得た。
【0074】
実施例１４あらかじめ乳鉢で結晶を直径１００μｍ以下に粉砕した塩化ナトリウム１５ｍｇにＬ−ＨＰＣ ４５ｍｇを混合した。さらにビナキサントン粉末２０ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分８５ｍｇと同シリコーンＢ成分８５ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．５ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の製剤１４を得た。
【0075】
試験例９実施例１３および実施例１４にて製造した各々の製剤（表９に示す）を試験例１と同様の方法で試験し、累積放出率を求めた。図９に結果を示す。
製剤１３および製剤１４は、製剤の厚みが０．５ｍｍで、難水溶性添加剤としてＬ−ＨＰＣを含有し、さらに水溶性添加剤のＮａＣｌを含有する製剤であるが、いずれの製剤も１ヶ月以上の長期にわたる良好な持続放出を達成した。
【表9】
【0076】
実施例１５あらかじめ乳鉢で結晶を直径１００μｍ以下に粉砕した塩化ナトリウム１５ｍｇにＬ−ＨＰＣ ８５ｍｇを混合した。さらにビナキサントン粉末５０ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分１７５ｍｇと同シリコーンＢ成分１７５ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合した。これを小型ラム式押し出し機にセットし、直径０．３ｍｍのダイスを通して押し出し４０℃で１日硬化させ、直径０．３５ｍｍのロッド製剤を得た。このロッド製剤を切断して本発明の製剤１５を得た。
【0077】
試験例１０実施例１５にて製造した製剤１５を７ｍｍの長さに切断し、ＰＢＳ １ｍＬ中３７℃にて静置し、製剤から放出されるビナキサントンを高速液体クロマトグラフィーにより定量し累積放出率を求めた。結果を図１０に示す。
本製剤は、直径が０．３５ｍｍのロッド状の製剤であり、難水溶性添加剤としてＬ−ＨＰＣを含有し、さらに水溶性添加剤のＮａＣｌを含有する製剤であるが、１ヶ月以上の長期にわたる良好な持続放出を達成した。
【表10】
【0078】
比較例１Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分１４７ｍｇと同Ｂ成分１４７ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかにビナキサントン粉末６ｍｇを加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の比較製剤１を得た。
【0079】
試験例１１比較例１にて製造した比較製剤１を試験例１と同様の方法で試験し、累積放出率を求めた。図１１に結果を示す。
本比較製剤はビナキサントンを２％含有し、添加剤を含有しない製剤であるが、４週間に亘ってほとんど放出されずに製剤内に大部分のビナキサントンが残存した。
【表11】
【0080】
比較例２ヒドロキシプロポキシル基を５３％以上含有する水溶性のＨＰＣ ７５ｍｇにビナキサントン粉末５ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分８５ｍｇと同シリコーンＢ成分８５ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の比較製剤２を得た。
【0081】
試験例１２比較例２にて製造した比較製剤２を試験例１と同様の方法で試験し、累積放出率を求めた。図１２に結果を示す。
本比較製剤はビナキサントンを２％含有し、添加剤としてヒドロキシプロポキシル基含量が５３％以上の水溶性のＨＰＣを含有する製剤であるが、１日目の初期バーストで６０％以上が放出され、その後の持続的放出は認められなかった。
一方、本発明の添加剤である低置換度ＨＰＣは、ヒドロキシプロポキシル基含量が５〜１６％の難水溶性の添加剤であり、これを用いた本発明の製剤１では、初期バーストが少なく１ヶ月にわたる持続的放出が達成された（試験例１、図１）。
【表12】
【0082】
比較例３あらかじめ乳鉢で結晶を直径１００μｍ以下に粉砕した塩化ナトリウム ９０ｍｇにビナキサントン粉末６ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分１０２ｍｇと同シリコーンＢ成分１０２ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の比較製剤３を得た。
【0083】
比較例４グルコース９０ｍｇにビナキサントン粉末６ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分１０２ｍｇと同シリコーンＢ成分１０２ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の比較製剤４を得た。
【0084】
比較例５Ｄ−マンニトール９０ｍｇにビナキサントン粉末６ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分１０２ｍｇと同シリコーンＢ成分１０２ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の比較製剤５を得た。
【0085】
比較例６ＰＥＧ４０００ ９０ｍｇにビナキサントン粉末６ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分１０２ｍｇと同シリコーンＢ成分１０２ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の比較製剤６を得た。
【0086】
試験例１３比較例３から比較例６にて製造した各々の比較製剤（表１３に示す）を試験例１と同様の方法で試験し、累積放出率を求めた。図１３に結果を示す。
これらの比較製剤は難水溶性添加剤を含有せず、それぞれ異なる水溶性物質を添加剤として含有するものであるが、ＰＥＧ４０００を含有する比較製剤６では初期バーストが大きく、他の比較製剤では比較的初期バーストは小さかったものの、いずれも短期間の放出のみで、脊髄損傷治療に必要とされる長期間の持続的放出を達成することはできなかった。
【表13】
【0087】
比較例７ＣＭＣ−Ｎａ（カルボキシメチルセルロース-ナトリウム）９０ｍｇにビナキサントン粉末６ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分１０２ｍｇと同シリコーンＢ成分１０２ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の比較製剤７を得た。
【0088】
比較例８あらかじめ乳鉢で結晶を直径１００μｍ以下に粉砕した塩化ナトリウム１５ｍｇにＣＭＣ−Ｎａ ７５ｍｇを加えて混合した。さらにビナキサントン粉末６ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分１０２ｍｇと同シリコーンＢ成分１０２ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の比較製剤８を得た。
【0089】
比較例９ラクトース４５ｍｇにＣＭＣ−Ｎａ ４５ｍｇを加えて混合した。さらにビナキサントン粉末６ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分１０２ｍｇと同シリコーンＢ成分１０２ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の比較製剤９を得た。
【0090】
試験例１４比較例７から比較例９にて製造した各々の比較製剤（表１４に示す）を試験例１と同様の方法で試験し、累積放出率を求めた。図１４に結果を示す。
これらの比較製剤はいずれも難水溶性物質を含有せず、水溶性添加剤であるＣＭＣ−Ｎａを含有する製剤であるが、図１４から明らかなように、初期バーストのみで持続的放出は認めらなかった。
【表14】
【0091】
比較例１０あらかじめ乳鉢で結晶を直径１００μｍ以下に粉砕した塩化ナトリウム６ｍｇにデスオキシコール酸Ｎａ ３４ｍｇを加えて混合した。さらにビナキサントン粉末２０ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得た。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分７０ｍｇと同シリコーンＢ成分７０ｍｇを二本ロールで練合した。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合した。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得た。このシート製剤を切断して本発明の比較製剤１０を得た。
【0092】
試験例１５比較例１０にて製造した各々の比較製剤１０を試験例１と同様の方法で試験し、累積放出率を求めた。図１５に結果を示す。
本比較製剤は難水溶性物質を含有せず、水溶性添加剤であるデスオキシコール酸Ｎａ（ＤＣ）とＮａＣｌを含有する製剤であるが、１週間程度の短期間の放出のみで、脊髄損傷治療に必要とされる長期間の持続的放出を達成することはできなかった。
【表15】
【0093】
以上、実施例ならびに比較例により本発明の効果を示した。脊髄損傷治療には少なくとも２週間以上、望ましくは１ヶ月以上のセマフォリン阻害剤の持続が必要とされることから、本発明の製剤がこれを可能とすることが示された。次に、本発明製剤の動物を用いた脊髄損傷の治療効果および局所治療剤として重要な神経組織への近接における毒性評価について評価を行った。
【0094】
試験例１６．ラット脊髄完全切断モデルにおける運動機能回復効果体重２００ｇ〜２５０ｇの雌性ＳＤ系ラットの脊髄を第１２胸髄部分で眼科バサミにて完全に切断し、切断部のくも膜下に製剤５（厚さ０．３ｍｍのシート状製剤）を３ｍｍ×３ｍｍにカットしたものを留置した。対照としてビナキサントンを含有しないプラセボのシート（ビナキサントンを含有せず、製剤５と同含量の添加物を含有する製剤：Ｌ−ＨＰＣ １７％、塩化ナトリウム３％、シリコーン８０％）を同サイズにカットしたもの留置した。手術後１、２、３ヶ月に下肢の運動学的検討（kinematic analysis）を行った。結果を図１６に示す。プラセボ投与群に比較して製剤５の投与群は、平均歩幅(average step length)、最大歩幅(max length)、歩行面積(step cycle area)で顕著な回復が見られた。この結果より本発明製剤によるビナキサントン投与は脊髄損傷の有効な治療法となることが強く示唆された。なお用いた動物数は、薬剤投与群４匹、プラセボ群５匹である。
【0095】
試験例１７．神経組織に対する毒性評価セマフォリン阻害剤の脊髄損傷適用にあたっては、薬剤含有シリコーンシートを損傷部に留置投与した場合、表面付近の薬剤が長時間高濃度に保たれること、および製剤の接着による留置部分の組織表面への直接的影響が懸念される。これを検証するため、脊髄損傷ラットで硬膜下留置後の脊髄表面の変化を調べた。
被験薬剤は製剤５および対照としてプラセボのシート（ビナキサントンを含有せず、製剤５と同含量の添加物を含有する製剤：Ｌ−ＨＰＣ １７％、塩化ナトリウム３％、シリコーン８０％）を直径２ｍｍにパンチしたものを用いた。ラット脊髄のＴ８部の硬膜を切開し（図１７）、放出を安定化させるために予めＰＢＳ中に２日間浸漬しておいたシートを硬膜内に挿入し（図１８）、Ｔ７付近まで硬膜内で移動させた。４日間飼育後に、灌流固定し脊髄を摘出、シート直下にある脊髄組織を顕微鏡観察した。その結果、プラセボ（図１９）、製剤５（図２０）とも脊髄表面には変化は認められなかった。また、製剤５投与例の病理検査を行ったが、脊髄背側部に変性所見は認められなかった（図２１）。以上の結果より、本発明製剤によるビナキサントン投与の直接的傷害反応は小さいものと示唆された。
【0096】
試験例１８．ラット脊髄損傷モデルにおけるリハビリテーションに対するセマフォリン阻害剤シリコーンシート製剤の作用製剤５（厚さ０．３ｍｍのシート状製剤）を３ｍｍ×３ｍｍにカットしたものを用い、セマフォリン阻害剤ビナキサントンの脊髄損傷モデルにおけるリハビリテーションへの影響を検討した。試験例１６と同様なラット脊髄完全モデルを作製し、同様に製剤５を、対照群にはプラセボシートを留置した。処置ラットに対し、手術後１週より３ヶ月にわたりトレッドミルによるリハビリテーションを行った。このトレッドミルによるリハビリテーションは、実際に脊髄損傷患者に対して行われるものと同様である。手術後１、２、３ヶ月に下肢の運動学的検討（kinematic analysis）を行った。結果を図２２に示す。平均歩高（Average step height）、最大歩高（Max step height）、歩行面積（Step cycle area）において、リハビリテーションのみを行った群では、手術後２〜３ヶ月で回復が見られたのに対し、製剤５を併用した群では、既に１ヶ月目で顕著な回復を示した。この結果より本発明製剤によるビナキサントン投与は、脊髄損傷治療におけるリハビリテーションの効果を時間的に促進する作用を持つことが示された。なお用いた動物数は、薬剤投与４匹、対照２匹である。
【0097】
試験例１９．セマフォリン阻害剤シリコーン製剤の脊髄神経に対する再伸長作用セマフォリン阻害剤シリコーン製剤が、傷害を受けた脊髄内の神経線維に対し、再伸長作用を示すかどうかを調べた。試験例１６および１８と同様にラット脊髄完全切断モデルを作製し、製剤５を留置、対照群にはプラセボシートを留置した。製剤５を投与したラットの一部は試験例１８と同様な３ヶ月間のリハビリテーションを行った。手術３ヶ月後にラットを灌流固定し脊髄を摘出した。脊髄の凍結切片を作製し、再生神経線維のマーカーであるＧＡＰ４３に対する抗体を用いて免疫染色を行なった。切断部位を顕微鏡観察したところ、図２３に示すように、薬剤のみを投与したラット（製剤５）および薬剤投与に加えてリハビリテーションを行なったラット（製剤５＋リハビリテーション）では、対照群に比較して、ＧＡＰ４３陽性線維が増加していた。これをコンピューターによる画像解析にて定量化したところ、傷害部位（図２４）、傷害部位から１ｍｍ頭側、１ｍｍ尾側のいずれにおいても（図２５）、薬剤投与群は有意な増加を示した。この結果により、セマフォリン阻害剤シリコーンシート製剤は切断された脊髄内の神経線維を再伸長させる作用があることがわかった。また、電子顕微鏡にて再伸長した神経線維を対照群と製剤５投与群で観察したところ、図２６に示すように、対照群では髄鞘をもつ神経線維が少なかったのに対し、製剤５を投与した群では髄鞘（矢印）を持つ神経線維が顕著に多かった。これによりセマフォリン阻害剤シリコーンシートにより再伸長した神経線維は成熟も促進されることがわかった。なお、用いた動物数は、対照群、薬剤投与群、リハビリテーション併用群とも１１匹である。
【0098】
試験例２０．セマフォリン阻害剤シリコーン製剤の血管新生促進作用脊髄損傷後の血管の再形成は組織の損傷の回復に重要である。セマフォリン阻害剤シリコーン製剤が、傷害後の脊髄内の血管新生を促進するかを調べた。試験例１９で作製した凍結切片に対し、血管内皮細胞のマーカーであるＲＥＣＡ−１に対する抗体を用いて免疫染色を行なった。切断部位から１ｍｍ尾側を顕微鏡観察したところ、図２７に示すように薬剤のみ投与したラット（製剤５）および薬剤投与に加えてリハビリテーションを行なったラット（製剤５＋リハビリテーション）では、対照群に比較してＲＥＣＡ−１陽性細胞が増加していた。新生血管は成熟血管に比べ大径であるのでコンピューターにより面積が２０μｍ２以上の血管の数を計測したところ、傷害部位から１ｍｍ頭側、３ｍｍ頭側、１ｍｍ尾側、３ｍｍ尾側のいずれにおいても薬剤投与群は有意な増加を示した（図２８）。この結果により、セマフォリン阻害剤シリコーンシート製剤は脊髄損傷後の血管新生を促進する作用があることがわかった。
【0099】
試験例２１．ラット脊髄損傷モデルにおけるセマフォリン阻害剤シリコーンシート製剤の作用とリハビリテーションによる増強製剤５（厚さ０．３ｍｍのシート状製剤）を３ｍｍ×３ｍｍにカットしたものを用い、試験例１８とは逆にリハビリテーションがセマフォリン阻害剤ビナキサントンの作用におよぼす影響を検討した。試験例１６と同様なラット脊髄完全モデルを作製し、同様に製剤５を、対照群にはプラセボシートを留置した。製剤５を投与した動物群をさらに2群に分け、１群に対しては手術後１週より３ヶ月にわたりトレッドミルによるリハビリテーションを行った。手術後１、２、３ヶ月に下肢の運動学的検討（kinematic analysis）を行った。結果を図２９に示す。平均歩幅（Average step length）、最大歩幅（Max step length）、歩行面積（Step cycle area）において製剤５による回復促進作用が示された。その中で歩行面積（Step cycle area）においては、リハビリと製剤５の併用群は、対照群だけでなく製剤５のみの群に比べても顕著な回復促進が示された。また、平均歩幅（Average step height）、最大歩高（Max step height）においては、製剤５のみによる回復促進は示されなかったが、リハビリの併用により顕著な回復作用を示した。以上の結果より、本発明製剤によるビナキサントン投与はリハビリテーションを併用することにより、その効果が促進されることが示された。なお、用いた動物数は、対照群１１匹、薬剤投与群１３匹、リハビリテーション併用群１１匹である。
【0100】
実施例１６あらかじめ乳鉢で塩化ナトリウム結晶を直径１００μｍ以下に粉砕する。上記塩化ナトリウム ５０ｍｇに部分α化デンプン １７０ｍｇを混合する。さらにビナキサントン粉末 １００ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得る。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分３４０ｍｇと同シリコーンＢ成分３４０ｍｇを二本ロールで練合する。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合する。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得る。このシート製剤を５ｍｍ×７ｍｍの大きさに切断して本発明の製剤１６を得る。
【0101】
実施例１７あらかじめ乳鉢で塩化ナトリウム結晶を直径１００μｍ以下に粉砕する。上記塩化ナトリウム ３０ｍｇにクロスカルメロースナトリウム ７０ｍｇを混合する。さらにビナキサントン粉末 １００ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得る。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分４００ｍｇと同シリコーンＢ成分４００ｍｇを二本ロールで練合する。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合する。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得る。このシート製剤を５ｍｍ×７ｍｍの大きさに切断して本発明の製剤１７を得る。
【0102】
実施例１８あらかじめ乳鉢で塩化ナトリウム結晶を直径１００μｍ以下に粉砕する。上記塩化ナトリウム ３０ｍｇにクロスポビドン １２０ｍｇを混合する。さらにビナキサントン粉末 １００ｍｇを加えて乳鉢で混合し、混合粉末を得る。一方Dow Corning製 SILASTIC Q7-4750 シリコーンＡ成分３７５ｍｇと同シリコーンＢ成分３７５ｍｇを二本ロールで練合する。上記シリコーン練合後、速やかに上記混合粉末を全量加え練合する。その後二本ロールで伸展し４０℃で１日硬化させ、厚さ０．３ｍｍのシート製剤を得る。このシート製剤を５ｍｍ×７ｍｍの大きさに切断して本発明の製剤１８を得る。
【0103】
試験例２２実施例１６から実施例１８にて製造した各々の製剤（表１６に示す）を試験例１と同様の方法で試験し、累積放出率を求める。
【表16】