特許 5905196 ヒアルロン酸又はその薬学的に許容される塩を含む保存組成物及び関連する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5905196

(24)【登録日】2016年3月25日

(45)【発行日】2016年4月20日

(54)【発明の名称】ヒアルロン酸又はその薬学的に許容される塩を含む保存組成物及び関連する方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/728 20060101AFI20160407BHJP

   A61K 47/18 20060101ALI20160407BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/728

   A61K47/18

【請求項の数】9

【全頁数】8

(21)【出願番号】特願2010-508487(P2010-508487)

(86)(22)【出願日】2008年5月1日

(65)【公表番号】特表2010-527363(P2010-527363A)

(43)【公表日】2010年8月12日

(86)【国際出願番号】US2008062140

(87)【国際公開番号】WO2008144185

(87)【国際公開日】20081127

【審査請求日】2011年4月11日

【審判番号】不服2014-4580(P2014-4580/J1)

【審判請求日】2014年3月10日

(31)【優先権主張番号】11/803,873

(32)【優先日】2007年5月16日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】506105814

【氏名又は名称】ジヨンソン・アンド・ジヨンソン・コンシユーマー・インコーポレーテツド

【氏名又は名称原語表記】Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｃｏｎｓｕｍｅｒ Ｉｎｃ．

(74)【代理人】

【識別番号】100088605

【弁理士】

【氏名又は名称】加藤 公延

(74)【代理人】

【識別番号】100130384

【弁理士】

【氏名又は名称】大島 孝文

(72)【発明者】

【氏名】ドーシ・ウダイ

(72)【発明者】

【氏名】ホリヴァ・ケネス・ティー

【合議体】

【審判長】 内田 淳子

【審判官】 松澤 優子

【審判官】 渕野 留香

(56)【参考文献】

【文献】 欧州特許出願公開第１７５９７０２（ＥＰ，Ａ１）

【文献】 特開２００４−３１５４７２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００２−３５６４２０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平４−６９３４２（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

A61K 31/00-33/44

ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＣＡＰＬＵＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒアルロン酸の保存組成物の調製法であって、
塩化ベンザルコニウム（ＢＡＫ）を第一量の溶媒に溶解すること、
ある量のヒアルロン酸（ＨＡ）又はその生理学的に許容可能な塩を第二量の前記溶媒に溶解すること、及び、
前記溶解したＢＡＫに前記溶解したＨＡ又はその生理学的に許容可能な塩を加えること、を含み、
前記ＢＡＫと前記ＨＡ又はその生理学的に許容可能な塩の沈殿が、別個のＨＡ又はその生理学的に許容可能な塩の溶液と別個のＢＡＫの溶液を調整し、その後、混合することにより実質的に防止され、
前記第一量の溶媒と前記第二量の溶媒の比が１．８：１〜２．２：１の間であり、
前記組成物は、０．００１重量／体積％〜０．０２重量／体積％の間のＢＡＫを含む、ヒアルロン酸の保存組成物の調製法。

【請求項2】

前記ＢＡＫが、［Ｃ_６Ｈ_５ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）Ｒ］Ｃｌ（ここでＲは炭素原子数８〜１８の間のアルキル基）の化学式を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記ＢＡＫが、溶液の形態である、請求項１又は２に記載の方法。

【請求項4】

前記ＨＡは５００，０００ダルトン〜４，０００，０００ダルトン（８．３０３×１０^−１９〜６．６４２×１０^−１８ｇ）の間の分子量又は１，０００，０００ダルトン〜２，０００，０００ダルトン（１．６６１×１０^−１８〜３．３２１×１０^−１８ｇ）の間の分子量を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

前記第一量の前記溶媒と前記第二量の前記溶媒の比が２：１である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

混合された前記ＨＡ又はその生理学的に許容可能な塩とＢＡＫの溶液を濾過することを更に含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

濾過前の前記ＨＡ又はその生理学的に許容可能な塩とＢＡＫの溶液の４４０ｎｍにおける透過率が９３％〜９８％の間である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

濾過後の混合された前記ＨＡ又はその生理学的に許容可能な塩とＢＡＫの溶液の４４０ｎｍにおける透過率が９５％〜１００％の間である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記組成物が、０．１重量／体積％〜０．５重量／体積％の濃度の沈殿していないＨＡを有する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【開示の内容】

【0001】

〔技術分野〕
本発明は一般的にヒアルロン酸（ＨＡ）又はその生理学的に許容される塩を含む保存組成物に関し、より具体的には塩化ベンザルコニウム（ＢＡＫ）などのカチオン性保存剤とともに保存されたＨＡ組成物に関する。

【0002】

〔背景技術〕
ヒアルロン酸（ＨＡ）は、硝子体液を含む種々の生理的流体に見出されるムコ多糖類である。その保水能力のため、ＨＡは眼科用、耳用、鼻用の組成物などのヘルスケア用及び医薬用組成物に潤滑剤又は湿潤剤として好んで用いられる。

【0003】

個人に投薬される組成物内の微生物増殖に起因する感染の可能性を軽減するために、そのような組成物は典型的に抗菌性保存剤を含む。ひとつの特に有効な抗菌性保存剤は塩化ベンザルコニウム（ＢＡＫ）である。しかしながら、ＨＡとＢＡＫのようなカチオン性保存剤は相溶性がなく、接合や沈殿を生じることが観察されており、それにより組成物の潤滑特性と保存特性の両方が低減される。一方、時々はそのような特性の喪失は一方又は両方の化合物の濃度を増大させることにより克服されるが、高濃度のＢＡＫは角膜疾患を引き起こすと考えられている。

【0004】

同様な沈殿はＢＡＫとラタノプロストの間でも指摘されている。アサダ（Asada）らの米国特許出願公開第２００６００６９１６２号は、そのような沈殿を防止するいくつかの方法を開示している。これらは、界面活性剤の添加、特定の種類のＢＡＫ（すなわち［Ｃ_６Ｈ_５ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）Ｒ］Ｃｌ、ここでＲは炭素１２個を有するアルキル基（ＢＡＫ−Ｃ_１２））の使用、及び／又は非イオン性等張剤の添加を含む。しかしながら、そのような方法は、組成物に対して付加的な構成要素の包含を要し、複雑性、費用、及び有害な相互作用の可能性を増大させ、かつ／又は、ひとつの構成要素を精製されたより高価な種類に限定するために許容できない。

【0005】

〔発明の概要〕
〔発明が解決しようとする課題〕
この点で、従来技術で知られている欠点を蒙らない、ＨＡを含む保存組成物に対する必要性が存在する。

【0006】

〔課題を解決するための手段〕
本発明はカチオン性保存剤によって保存されたヒアルロン酸（ＨＡ）又はその薬学的に許容可能な塩を含む組成物を提供する。一実施形態では、前記薬学的に許容可能な塩はヒアルロン酸ナトリウムである。別の実施形態では、カチオン性保存剤は塩化ベンザルコニウム（ＢＡＫ）を含む。

【0007】

本発明の第一の態様は、保存ヒアルロン酸組成物を調製する方法を提供し、前記方法は：第一量の溶媒にカチオン性保存剤を溶解すること、ある量のヒアルロン酸（ＨＡ）又はその生理学的に許容される塩を第二量の溶媒に溶解すること、及び溶解されたヒアルロン酸（ＨＡ）又はその生理学的に許容される塩を、溶解されたカチオン性保存剤に加えることにより成り、この場合には、混合前に各成分が前記第一及び第二量の溶媒に溶解されるために、カチオン性保存剤とヒアルロン酸（ＨＡ）又はその生理学的に許容される塩の沈殿は実質的に防止される。

【0008】

本発明の第二の態様は、保存ヒアルロン酸組成物を調製する方法を提供し、前記方法は、第一量の溶媒にカチオン性保存剤を溶解すること、ある量のヒアルロン酸（ＨＡ）又はその生理学的に許容される塩を第二量の前記溶媒に溶解すること、ある量のアニオン性セルロース誘導体を第三量の前記溶媒に溶解すること、溶解されたヒアルロン酸（ＨＡ）又はその生理学的に許容される塩を、溶解されたカチオン性保存剤に加えること、並びに、溶解されたアニオン性セルロース誘導体を、溶解されたヒアルロン酸（ＨＡ）又はその生理学的に許容される塩、溶解されたカチオン性保存剤、及び溶解されたヒアルロン酸（ＨＡ）又はその生理学的に許容される塩と溶解されたカチオン性保存剤の混合物のうちの少なくとも一つに加えることを含み、この場合には、各成分が混合前に前記第一及び第二量の溶媒に溶解されるために、カチオン性保存剤とヒアルロン酸（ＨＡ）又はその生理学的に許容される塩の沈殿は実質的に防止される。

【0009】

本発明の第三の態様は、溶媒、ヒアルロン酸（ＨＡ）又はその生理学的に許容される塩、及び［Ｃ_６Ｈ_５ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）Ｒ］Ｃｌ（ここでＲは８個〜１０個の間の炭素原子、又は１４個〜１８個の間の炭素原子のうちの少なくとも一方を有するアルキル基である）の式を有する塩化ベンザルコニウム（ＢＡＫ）を含むカチオン性保存剤の有効量より成る水性保存組成物を提供し、この場合には前記組成物はカチオン性保存剤及びヒアルロン酸（ＨＡ）又はその生理学的に許容される塩の沈殿物を実質的に含まない。

【0010】

本発明の前記例示的な態様は、ここに記載された問題点と、当業者により発見され得る、議論されていない他の問題点を解決するために設計されている。

【発明を実施するための形態】

【0011】

上述したように、本発明は、塩化ベンザルコニウム（ＢＡＫ）のようなカチオン性保存剤によって保存されるヒアルロン酸（ＨＡ）組成物とその調製法を提供する。

【0012】

本明細書において使われる「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」（及びその文法的変化物）は、「ｈａｖｉｎｇ」又は「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」を包括する意味で用いられ、「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｎｌｙ ｏｆ」の排他的な意味では使われない。本明細書で使用される「ａ」及び「ｔｈｅ」は単数のほかに複数も包含すると理解される。

【0013】

参照により特許又は特許出願が本明細書に包含されるが、包含された文書と本開示の不一致が存在する場合には、本開示が優先される。

【0014】

驚くべきことに、ＨＡ及びＢＡＫの別個の溶液を調製後にそれらを混合することにより、ＨＡとＢＡＫのようなカチオン性保存剤の接合及び／又は沈殿が防止又は最小化されることが見出された。

【0015】

より具体的には、ＨＡ及びＢＡＫそれ自体の前希釈が、ＨＡ−ＢＡＫの接合及び沈殿が軽減された混合組成物を生じる一方、特定の比率の溶媒へのＨＡ及びＢＡＫの前希釈が、ＨＡ−ＢＡＫの接合及び沈殿のほとんど無い、又は全く無い混合組成物を生じる。一実施形態では、ＨＡ又はその薬学的に許容される塩を最終組成物に所望される総量の約１／３に等しい量の溶媒に溶解し、ＢＡＫのようなカチオン性保存剤を最終組成物に所望される量の約２／３に等しい量の溶媒に溶解する。つまり、ＢＡＫの溶解に使用される溶媒量はＨＡの溶解に使用される量の約２倍となる。

【0016】

例えば、３００ｍＬの本発明に準じたＨＡ保存組成物を調製したい場合には、ＨＡ又はその薬学的に許容される塩（ヒアルロン酸ナトリウムのような）を約１００ｍＬの溶媒に溶解し、ＢＡＫ及び／又は別のカチオン性保存剤を約２００ｍＬの溶媒に溶解できる。ＨＡ及びＢＡＫがそれらの各々の量の溶媒に溶解された時点で、前記溶液が混合され、ＨＡ−ＢＡＫの接合又は沈殿のほとんど無い、又は全く無いＢＡＫ保存組成物を生成する。

【0017】

ＨＡ及びＢＡＫを溶解するのに用いられる溶媒量の比率を約２：１と上述したが、この比率は単に好適な比率である。効果的な組成物は約１．８：１〜２．２：１の間の比率により調製できる。

【0018】

本発明に準じた組成物は、その投与に対する適合性を前提として何種類の溶媒を用いても調製できる。眼科用、鼻用、耳用の組成物のための溶媒は一般的には水性であり、水単独又は水と一つ以上の他の溶媒との混合物である。眼科用、鼻用、耳用の組成物のための好適な溶媒は、例えば、グリセリン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びプロピレングリコールを含む。

【0019】

本発明の実施のためには、いずれの種類のＢＡＫ又はその組み合わせも用いることができる。通常ＢＡＫは［Ｃ_６Ｈ_５ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）Ｒ］Ｃｌ（ここでＲは炭素原子数８〜１８の間のアルキル基）の化学式で定義される。

【0020】

カチオン性保存剤としてＢＡＫが使用される場合には、本発明に準じた組成物は所望により約０．００１％〜約０．０２％の間のＢＡＫを含むか、又は所望により約０．００２％から約０．０１％の間のＢＡＫを含むか、又は所望により約０．００３％〜約０．００５％の間のＢＡＫを含むか、又は所望により約０．００５％のＢＡＫを含む。そのような濃度のＢＡＫは、市販品として入手可能なＢＡＫ溶液を希釈することにより得ることができ、いかなる濃度のＢＡＫ溶液も入手可能である。ほとんどの市販品として入手可能なＢＡＫ溶液は、約５％〜約５０％のＢＡＫを含む。特定の実施形態では前記ＢＡＫ溶液は約１０％〜約３０％の間のＢＡＫを含むか、又は所望により約１５％〜約１９％の間のＢＡＫを含むか、又は所望により約１７％のＢＡＫを含む。より詳細なＢＡＫに関する議論は、米国特許出願公開第２００６００６９１６２号に見出すことができ、参照によりその全体が本願に包含される。

【0021】

同様に、本発明の実施にあたっては、どのような種類のＨＡ又はその組み合わせを用いることができる。特定の実施形態では、前記ＨＡは約５００，０００ダルトン〜約４，０００，０００ダルトン（８．３０３×１０^−１９〜６．６４２×１０^−１８ｇ）の間の分子量を有するか、又は所望により約１，０００，０００ダルトン〜約２，０００，０００ダルトン（１．６６１×１０^−１８〜３．３２１×１０^−１８ｇ）の間の分子量を有するか、又は所望により約１，２００，０００ダルトン〜約１，８００，０００ダルトン（１．９９３×１０^−１８〜２．９８９×１０^−１８ｇ）の間の分子量を有する。本発明の特定の実施形態は、約０．１％〜約０．５％の間のＨＡを含むか、又は所望により約０．２％〜約０．４％の間のＨＡを含むか、又は所望により約０．２％のＨＡを含む。より詳細なＨＡに関する議論は、米国特許出願公開第２００６００９４６４３号；米国特許第３，３９６，０８１号；同第３，８６２，００３号；同第４，１４１，９７３号；同第４，５１７，２９６号；同第４，８５１，５２１号；同第４，９６５，３５３号；同第５，２０２，４３１号；同第５，３１６，９２６号；同第６，０９０，５９６号；及び同第６，３３９，０７４号，に見出すことができ、参照によりその各々の全体が本願に包含される。

【0022】

ＨＡ及びＢＡＫの溶液が混ぜ合わされた時点で、少量のＨＡ−ＢＡＫの沈殿物又は組成物の清澄性に影響する他の薬剤物質を除去するため、組成物を所望により濾過することができる。特定の実施形態では、前記本発明の組成物は、濾過前に４４０ｎｍにおいて約９３％〜約９８％の透過率を有し、濾過後に４４０ｎｍにおいて約９５％〜約１００％の透過率を有する。本発明の実施には、薬学的組成物に使用するのに適する任意の濾過方法を使用することができる。

【0023】

単独又はＢＡＫと組み合わせて使用できる代替的なカチオン性保存剤は、ポリ［ジメチルアミノ−ｗ−ブテン−１，４−ジイル］クロライド、アルファ−［４−トリス（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム］−ジクロライド（ポリクオタニウム（Polyquaternium）１（登録商標））、ポリ（オキシエチル（ジメチルイミニオ）エチレンジメチルイミニオ）エチレンジクロライド（WSCP（登録商標））、ＢＡＫ以外のハロゲン化ベンザルコニウム、アレキシジン塩、アレキシジン−遊離塩基、クロルヘキシジン塩、ヘキセジチン、アルキルアミン類、アルキルイミン類、アルキルジアミン、アルキルトリアミン、オクテニジン（Ｎ，Ｎ’−（１，１０−デカンジイルジ−１−（４Ｈ）−ピリジニル−４−イリデンビス−［１−オクタンアミン］二塩酸塩、塩化セチルピリジニウム、セチルピリジニウム塩、抗菌性ポリペプチド又は前記物質の混合物を含むが、これに限定されるものではない。

【0024】

本発明に準じた組成物は、眼科用、鼻用、及び耳用の組成物によく使用される付加的な構成要素を含むことができる。そのような付加的な構成要素は、例えば、セルロース誘導体、薬剤（例えば抗菌剤、抗真菌剤など）、及び緩衝液剤（例えば、リン酸緩衝剤、ホウ酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤など）を含む。本発明に準じた組成物は、その組成物の投与法及び投与部位に応じて、他の構成要素を含むことができる。そのような構成要素のより詳細な議論は、米国特許出願公開第２００７０３６８２９号に見出され、参照によりその全体が本願に包含される。

【0025】

眼科用、鼻用、及び耳用の組成物に有用な共通した種類の付加的構成要素は、アニオン性セルロース誘導体である。これらは、アルキル基が１〜３個の炭素原子を含むカルボキシアルキルセルロース及びヒドロキシアルキルセルロースと定義できる。特定の実施形態では、前記アニオン性セルロース誘導体は、カルボキシメチルエチルセルロース、エチルカルボキシエチルセルロース、カルボキシメチルヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース金属塩（カルボキシメチルセルロースのナトリウム塩のような）及び前記物質の混合物よりなるグループから選択される。特定の実施形態では、前記アニオン性セルロース誘導体は、カルボキシメチルセルロース金属塩である。一つ以上のアニオン性セルロース誘導体が用いられる場合には、それらは、カチオン性保存剤を含む画分に溶解することができ、その後にＨＡ又はその薬学的に許容される塩を含む画分と混合される。特定の実施形態では、用いられる前記アニオン性セルロース誘導体は、約７０，０００ダルトン〜約７００，０００ダルトン（１．１６２×１０^−１９〜１．１６２×１０^−１８ｇ）の分子量範囲を有する。

【0026】

代替法として、溶媒の第三の画分をＣＭＣ溶解のために単独で用いることができ、次いでそれを溶解したＨＡ、溶解したカチオン性保存剤、又はＨＡ（又はその薬学的に許容される塩）及びカチオン性保存剤の混合画分と混合する。そのような実施形態では、前記溶媒画分は所望により約１：１：１の比率であることができる。例えば、もし３００ｍＬの本発明に準じた組成物を調製する場合、それぞれ約１００ｍＬの溶媒を前記ＨＡ（又はその薬学的に許容される塩）、前記カチオン性保存剤、及び前記ＣＭＣの溶解に使用するであろう。

【0027】

本発明に準じた組成物の調製を以下の実施例を参照して記載する。

【実施例】

【0028】

実施例１−二つの部分により調製されるヒアルロン酸ナトリウム、ＢＡＫ、ＣＭＣ組成物
１．１００ｍＬの水に対して０．４％の濃度になる量のヒアルロン酸ナトリウムを溶解させる。
２．２００ｍＬの水に対して０．００５％の濃度になる量のＢＡＫを溶解させる。
３．溶解したＢＡＫに、０．５％の濃度になる量のＣＭＣを加えて溶解させる。
４．溶解したヒアルロン酸ナトリウム溶液を溶解したＢＡＫ−ＣＭＣ溶液に加える。

【0029】

実施例１の方法により、０．１３３％のヒアルロン酸ナトリウム、０．００３３％のＢＡＫ、及び０．３３％のＣＭＣを含む水性組成物３００ｍＬが生成された。

【0030】

実施例２−三つの部分により調製されるヒアルロン酸ナトリウム、ＢＡＫ、ＣＭＣ組成物
１．１００ｍＬの水に対して０．６％の濃度になる量のヒアルロン酸ナトリウムを溶解させる。
２．１００ｍＬの水に対して１．５％の濃度になる量のＣＭＣを溶解させる。
３．１００ｍＬの水に対して０．０１５％の濃度になる量のＢＡＫを溶解させる。
４．溶解したヒアルロン酸ナトリウム溶液を、溶解したＢＡＫ溶液に加える。
５．溶解したＣＭＣ溶液をヒアルロン酸ナトリウム−ＢＡＫ混合溶液に加える。
６．ヒアルロン酸ナトリウム−ＢＡＫ−ＣＭＣ混合溶液を濾過する。

【0031】

実施例２の方法により、０．２％のヒアルロン酸ナトリウム、０．００５％のＢＡＫ、及び０．５％のＣＭＣを含む水性組成物３００ｍＬが生成された。濾過された溶液は約１００％の透過率を有していた。

【0032】

本発明の種々の態様に関する前述の記述は、例示と記載のために提示されている。これは網羅的であること、又は本発明を開示された形状に綿密に限定することを意図して行われたものではなく、明らかに多くの改良と変更が可能である。当業者にとって明白である場合もあるそのような改良と変更は、添付された請求項に画定された発明の範囲内に包含されることが意図されている。

【0033】

〔実施態様〕
（１） ヒアルロン酸の保存組成物の調製法であって、
好適には塩化ベンザルコニウム（ＢＡＫ）であるカチオン性保存剤を第一量の溶媒に溶解すること、
ある量のヒアルロン酸（ＨＡ）又はその生理学的に許容可能な塩を第二量の前記溶媒に溶解すること、及び、
前記溶解したカチオン性保存剤に前記溶解したＨＡ又はその生理学的に許容可能な塩を加えること、を含み、
前記カチオン性保存剤と前記ＨＡ又はその生理学的に許容可能な塩の沈殿が、各成分を混合する前に前記第一及び第二量の溶媒にそれぞれを溶解することにより実質的に防止される、ヒアルロン酸の保存組成物の調製法。
（２） 前記ＢＡＫが、［Ｃ_６Ｈ_５ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）Ｒ］Ｃｌ（ここでＲは炭素原子数８〜１８の間のアルキル基）の化学式を有する、実施態様１に記載の方法。
（３） 前記ＢＡＫが、溶液の形態である、実施態様１又は２に記載の方法。
（４） 前記溶液が５％〜５０％、好適には１０％〜３０％の濃度のＢＡＫを含む、実施態様１〜３のいずれか一項に記載の方法。
（５） 前記ＨＡは５００，０００ダルトン〜４，０００，０００ダルトン（８．３０３×１０^−１９〜６．６４２×１０^−１８ｇ）の間の分子量を、好適には１，０００，０００ダルトン〜２，０００，０００ダルトン（１．６６１×１０^−１８〜３．３２１×１０^−１８ｇ）の間の分子量を有する、実施態様１〜４のいずれか一項に記載の方法。
（６） 前記溶媒が、更にグリセリン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びプロピレングリコールのうちの少なくとも一つを含む、実施態様１〜５のいずれか一項に記載の方法。
（７） 前記第一量の前記溶媒と前記第二量の前記溶媒の比が１．８：１〜２．２：１の間、好適には２：１である、実施態様１〜６のいずれか一項に記載の方法。
（８） 混合された前記ＨＡ又はその生理学的に許容可能な塩とカチオン性保存剤の溶液を濾過することを更に含む、実施態様１〜７のいずれか一項に記載の方法。
（９） 濾過前の前記ＨＡ又はその生理学的に許容可能な塩とカチオン性保存剤の溶液の４４０ｎｍにおける透過率が９３％〜９８％の間である、実施態様１〜８のいずれか一項に記載の方法。
（１０） 濾過後の混合された前記ＨＡ又はその生理学的に許容可能な塩とカチオン性保存剤の溶液の４４０ｎｍにおける透過率が９５％〜１００％の間である、実施態様１〜９のいずれか一項に記載の方法。
（１１） 前記組成物が、０．１％〜０．５％の濃度の沈殿していないＨＡを有する、実施態様１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
（１２） 実施態様１〜１１のいずれか一項に記載の方法に従って調製される組成物。
（１３） 溶媒、
ヒアルロン酸（ＨＡ）又はその生理学的に許容可能な塩、及び、
［Ｃ_６Ｈ_５ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）Ｒ］Ｃｌ（ここでＲは８〜１０及び１４〜１８の間の炭素原子のうち少なくとも一方を有するアルキル基）の式を有する塩化ベンザルコニウム（ＢＡＫ）を含む、有効量のカチオン性保存剤、を含み、
前記カチオン性保存剤及び前記ヒアルロン酸（ＨＡ）又はその生理学的に許容可能な塩の沈殿を実質的に含まない、水性保存組成物。