特許 5931303 ラクターゼ溶液及びそれを用いた乳

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B1)

(11)【特許番号】5931303

(24)【登録日】2016年5月13日

(45)【発行日】2016年6月8日

(54)【発明の名称】ラクターゼ溶液及びそれを用いた乳

(51)【国際特許分類】

   C12N 9/38 20060101AFI20160526BHJP

   A23C 9/12 20060101ALI20160526BHJP

【ＦＩ】

   C12N9/38

   A23C9/12

【請求項の数】9

【全頁数】19

(21)【出願番号】特願2015-548096(P2015-548096)

(86)(22)【出願日】2015年8月26日

(86)【国際出願番号】JP2015074121

【審査請求日】2015年9月30日

(31)【優先権主張番号】特願2014-173068(P2014-173068)

(32)【優先日】2014年8月27日

(33)【優先権主張国】JP

【早期審査対象出願】

(73)【特許権者】

【識別番号】303036670

【氏名又は名称】合同酒精株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100105315

【弁理士】

【氏名又は名称】伊藤 温

(74)【代理人】

【識別番号】100198524

【弁理士】

【氏名又は名称】重田 英彦

(72)【発明者】

【氏名】小笠原 準季

(72)【発明者】

【氏名】堀口 博文

【審査官】 高山 敏充

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００４−５３４５２７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０２−３０３４８６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０１−１０４１９８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０２−１００６９３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０６−２１７７９７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 日本農芸化学会大会講演要旨集 第６４巻第３号，１９９０年，pp.359，3Np5

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ１２Ｎ ９／００−９／９９

Ａ０１Ｊ １／００−９９／００

Ａ２３Ｃ １／００−２３／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

５，０００NLU/ｇの活性となる濃度で１００rpm、１０℃で１６時間撹拌処理した後、１，０００NLU/ｇの活性となる濃度で孔径０．２２μｍのメンブレンフィルターに３６６kg/m²を透過させたときの透過速度が５kg/min×m²以上であり、
凝集阻害剤を含有し、
前記凝集阻害剤が、ＨＬＢが１２〜１５である界面活性剤、ポリエチレングリコール及びマグネシウムイオン又はその塩から選択される一種以上であり、
中性ラクターゼを含有することを特徴とするラクターゼ溶液。

【請求項2】

透過試験開始直後（２０ｇ透過時）の透過速度を１００％とした場合における透過試験終了時（１８０ｇ透過時）の透過速度が１０％以上である、請求項１記載のラクターゼ溶液。

【請求項3】

前記中性ラクターゼが、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ属由来の中性ラクターゼである、請求項１又は２記載のラクターゼ溶液。

【請求項4】

前記ＨＬＢが１２〜１５の界面活性剤の濃度が、０．００１質量％〜５質量％である、請求項１〜３のいずれか１項記載のラクターゼ溶液。

【請求項5】

前記ポリエチレングリコールの濃度が、０．０５質量％〜１５質量％である、請求項１〜４のいずれか１項記載のラクターゼ溶液。

【請求項6】

前記中性ラクターゼの活性が、１０〜１００，０００NLU/gである、請求項１〜５のいずれか１項記載のラクターゼ溶液。

【請求項7】

安定剤を含有する、請求項１〜６のいずれか１項記載のラクターゼ溶液。

【請求項8】

請求項１〜７のいずれか１項記載のラクターゼ溶液を含む乳。

【請求項9】

請求項１〜７のいずれか１項記載のラクターゼ溶液又は請求項８記載の乳を少なくとも一原料として得られた乳製品。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ラクターゼ溶液及びそれを用いた乳、乳製品などの製造方法に関する。

【背景技術】

【0002】

乳糖（ラクトース）不耐症は、先天的に乳糖をうまく分解することができないため、乳製品などの食品中の乳糖により腹痛や下痢などの諸症状を呈する状態をいう。乳糖は、ガラクトース及びグルコースから構成される二糖である。乳糖不耐症に対応するために、牛乳などに含まれる乳糖を、酵素ラクターゼによってガラクトースとグルコースとに予め分解することが食品製造業において行われている。

【0003】

牛乳などに含まれる乳糖を分解するために使用されるラクターゼ溶液は、従来、ラクターゼ産生微生物を培養し、細胞内からラクターゼを抽出、または細胞外に分泌したラクターゼを取得し、培養物由来の夾雑物を除去して精製した後、安定剤を添加し、ろ過滅菌することによって製造されている。

【0004】

製造されたラクターゼ溶液は、冷蔵（１０℃以下）で保存され、販売され、輸送される。その後、ラクターゼ溶液は、ユーザーにより牛乳などの乳又は乳製品に添加される。このラクターゼの添加方法には主に、乳等の殺菌前に添加する方法と、殺菌後に添加する方法の２つがある。前者の場合に、ろ過除菌工程を必ずしも必要としないのに対し、後者の場合、ラクターゼのろ過滅菌工程が必要になる。ラクターゼ添加後の乳は充填後、販売される。

【0005】

上記のような殺菌後の乳等にラクターゼを添加する製造プロセスにおいて、ろ過滅菌工程でラクターゼ溶液がフィルターの目詰まりを起こしやすく、このことは作業効率を著しく低下させる原因であることが知られている。その問題に対処するために、たとえば、特許文献１（特公平６−７３４５４号公報）には、目詰まりの原因となるタンパク質と多糖類との劣化生成物が形成される前に、たとえばラクターゼ溶液の回収及び精製の直後に、ラクターゼ液をろ過滅菌することが記載されている。この方法は、ラクターゼ溶液の製造時に行うことができる。しかし、いったん劣化生成物が形成された後においては実施できない。この方法で製造されたラクターゼ溶液を保存又は輸送した後にろ過すると、目詰まりが発生する場合があるからである。例えば、この方法で製造したラクターゼをユーザーに輸送した後、当該ユーザーが乳等に当該ラクターゼを添加すべく、当該ラクターゼのろ過滅菌工程を行うと、フィルターに目詰まりが発生する場合があった。目詰まりが発生すると、製造工程を止めてフィルターを交換しなければならず、作業効率を著しく低下させる問題があった。特に、乳を製造する個々の製造工程が連続している場合、ろ過滅菌工程のみを止めることはできないため、全ての乳の製造工程を止める必要が生じてしまう。その結果、乳の製造効率が著しく減少してしまい、改善が求められていた。
したがって、特許文献１に記載の方法は、製品化後のラクターゼ溶液のろ過における目詰まりに関しては問題の解決にならない。

【0006】

また、特許文献２（特表２００４−５３４５２７号公報）には、ラクターゼ溶液に含まれる多糖類とオリゴ糖の濃度を一定値以下にすること、特にクロマトグラフィによりこれらの物質を除去することが記載されている。しかし、多糖類とオリゴ糖の濃度を一定値以下にしても同様に上記のように製品化後のろ過における目詰まりの問題が生ずる場合があった。

【0007】

したがって、上記の問題は、未だ十分に解決されていない。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0008】

【特許文献1】特公平６−７３４５４号公報

【特許文献2】特表２００４−５３４５２７号公報

【発明の開示】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

本発明は、製剤化後のラクターゼ溶液を乳に添加使用する前のろ過工程におけるろ過装置（フィルター）の目詰まりを低減させる方法、及びろ過装置の目詰まりを起こしにくいラクターゼ溶液を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0010】

本発明者らは、目詰まり現象が撹拌や振とうのような物理的刺激及び／又は温度負荷によって生じ、加速されることを見出した。そして、ラクターゼ溶液に含まれる物質間の相互作用を低減させることによって目詰まり現象が防止されることを見出し、本発明を完成した。

【0011】

したがって、本発明によれば、
〔１〕 ５，０００NLU/ｇ又は１０，０００ALU/ｇの活性となる濃度で１００rpm、１０℃で１６時間撹拌処理した後、１，０００NLU/ｇ又は２，０００ALU/ｇの活性となる濃度で孔径０．２２μｍのメンブレンフィルターを３６６kg/m²を透過させたときの透過速度が５kg/min×m²以上であることを特徴とするラクターゼ溶液；
〔２〕 透過試験開始直後（２０ｇ透過時）の透過速度を１００％とした場合における透過試験終了時（１８０ｇ透過時）の透過速度が１０％以上であることを特徴とする前記［１］に記載のラクターゼ溶液；
［３］ 凝集阻害剤を含有する、前記［１］又は［２］記載のラクターゼ溶液；
［４］ 凝集阻害剤が、ＨＬＢ１２〜１５の界面活性剤、保護剤及び金属イオン又はその塩から選択される一種以上である、前記〔３〕記載のラクターゼ溶液；
〔５〕 前記ＨＬＢ１２〜１５の界面活性剤の濃度が、０．００１質量％〜５質量％である、前記〔３〕又は〔４〕記載のラクターゼ溶液；
［６］ 前記保護剤が、ポリエーテル及び増粘多糖類から選択される一種以上である、前記［４］又は［５］記載のラクターゼ溶液；
［７］ 前記ポリエーテルが、アルキレンの炭素数が２〜８であるポリアルキレングリコールである、前記［６］記載のラクターゼ溶液；
［８］ 前記ポリアルキレングリコールの濃度が、０．０５質量％〜１５質量％である、前記［７］記載のラクターゼ溶液；
〔９〕 ラクターゼの活性が、１０〜１００，０００NLU/g又は１０〜１００，０００ALU/ｇである、前記〔１〕〜〔８〕のいずれか１項記載のラクターゼ溶液；
〔１０〕 安定剤を含有する、前記〔１〕〜〔９〕のいずれか１項記載のラクターゼ溶液；
〔１１〕 前記〔１〕〜〔１０〕のいずれか１項記載のラクターゼ溶液を添加することにより得られた乳；
〔１２〕 前記〔１〕〜〔１０〕のいずれか１項記載のラクターゼ溶液又は前記〔１１〕記載の乳を少なくとも一原料として得られた乳製品；
〔１３〕 凝集阻害剤を含有するラクターゼ溶液
が提供される。

【発明の効果】

【0012】

本発明により、ラクターゼ溶液を乳に添加使用する前のろ過工程におけるフィルターの目詰まりの問題が改善される。それにより、目詰まりによるフィルター交換及びそれに伴う製造ラインの滅菌などの頻度を低減させ、作業効率を大幅に向上させることができる。また、本発明は、目詰まり物質の除去などによる従来の方法と比較して、簡便であり、ラクターゼ溶液の保存中に再び目詰まり物質が形成されることがない点においても優れている。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】図１は、目詰まり現象を起こす原因を検討した結果を示す図である。パネルＡ、パネルＢ、パネルＣは、それぞれ１０℃、２０℃、３０℃で振とう又は静置した後にフィルター透過性を測定した結果を表す。パネルＤは、各温度において振とう又は静置した場合におけるラクターゼ活性の測定結果を表す。

【図2】図２は、１０℃で１６時間撹拌することにより目詰まり現象を再現した結果を示す図である。

【図3】図３は、各種界面活性剤を添加して目詰まり現象の防止に対する有効性を検討した結果を示す。図３において、◆は無添加のサンプル、添加剤としてそれぞれ、●はＴｗｅｅｎ８０、×はＴｒｉｔｏｎＸ（Ｔｘ）−１００、−はリョート−ポリグリエステルを加えた場合を表す。

【図4】図４は、各種ポリエチレングリコール（ＰＥＧ２００、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ４０００、ＰＥＧ６０００、ＰＥＧ２００００）を添加して目詰まり現象の防止に対する有効性を検討した結果を示す。図４において、◆は無添加のサンプル、添加剤としてそれぞれ、●、○、▲及び△は、各種ポリエチレングリコールを加えた場合を表す。

【図5】図５は、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００（パネルＡ）及びＴｗｅｅｎ８０（パネルＢ）について添加濃度を変えて目詰まり現象の防止に対する有効性を検討した結果を表す。

【図6】図６は、ＰＥＧ６０００（パネルＡ）及びＰＥＧ２００００（パネルＢ）について添加濃度を変えて目詰まり現象の防止に対する有効性を検討した結果を表す。

【図7】図７は、Ｍｇ塩について添加濃度を変えて目詰まり現象の防止に対する有効性を検討した結果を表す。

【発明を実施するための形態】

【0014】

本発明に係るラクターゼ溶液は、ラクターゼ及び当該ラクターゼ溶液に含まれるラクターゼその他のタンパク質の凝集を防ぐ凝集阻害剤を必須的に含み、安定剤等の添加剤を任意で含有する。以下、（１）ラクターゼ溶液の構成成分、（２）ラクターゼ溶液の組成（特に凝集阻害剤の濃度）、（３）ラクターゼ溶液の性質、（４）ラクターゼ溶液の製造方法、（５）ラクターゼ溶液の使用方法・用途、の順で説明する。

【0015】

≪ラクターゼ溶液の構成成分≫
＜ラクターゼ＞
（原料生物の種類）
ラクターゼは、微生物を含む、非常に広範囲の生物から単離されている。ラクターゼは、多くの場合、ＫｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓやＢａｃｉｌｌｕｓのような微生物の細胞内または細胞外成分である。Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ、特にＫ．ｆｒａｇｉｌｉｓ及びＫ．ｌａｃｔｉｓ、並びに、Ｃａｎｄｉｄａ属、Ｔｏｒｕｌａ属及びＴｏｒｕｌｏｐｓｉｓ属の酵母などは、酵母酵素ラクターゼの一般的なソースであり、一方、Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ又はＢ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓは細菌ラクターゼのよく知られたソースである。それらの生物に由来するラクターゼ調製物がいくつか商業的に入手可能である。これらラクターゼは全て、最適ｐＨがｐＨ＝６〜ｐＨ＝８であるため、所謂、中性ラクターゼである。また、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒやＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍｕｌｔｉｃｏｌｏｒは、細胞外ラクターゼを産生し、米国特許第５，７３６，３７４号明細書には、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅにより産生された、そのようなラクターゼの例が記載されている。最適ｐＨや最適温度などのラクターゼの酵素特性は種によって変化する。一般に、細胞外ラクターゼは、最適ｐＨがｐＨ＝３．５〜ｐＨ＝５．０と低い、所謂、酸性ラクターゼである。
本発明においては、中性ラクターゼならびに酸性ラクターゼを使用することが好ましく、特にＫｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ属由来の中性ラクターゼならびにＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属由来の酸性ラクターゼを使用することが好ましい。

【0016】

（ラクターゼの製法）
本発明に使用されるラクターゼは、従来の一般的な方法で微生物から回収され、精製されたものであることができる。本発明に使用されるラクターゼは、細胞内ラクターゼ、又は細胞外ラクターゼのどちらであってもよい。前者の場合、ラクターゼは、通常、微生物の細胞質に由来する。細胞内ラクターゼ溶液の製造の具体的方法としては、例えば、まず微生物の培養を行った後、ラクターゼを分離する方法が挙げられる。これには、細胞質から酵素を放出させるために細胞壁の破壊を必要とする。細胞の溶解には、オクタノールなどの有機溶媒による細胞壁の透過化、超音波分解又はフレンチプレッシング等の技術が使用される。溶解した細胞から公知の方法でラクターゼを分離・回収することができる。後者の場合には、前記細胞壁の破壊を必要とせず、例えば培養後、遠心分離又はろ過によって、培養液中の細胞を取り出すことができる。発酵が停止した後又は細胞の取り出し後、培養液からラクターゼを回収する。いずれの場合も、さらに、従来の手段によってラクターゼを精製及び単離することができる。

【0017】

＜凝集阻害剤Ｉ＞
本発明のラクターゼ溶液は、当該ラクターゼ溶液に含まれるラクターゼその他のタンパク質の凝集を防ぐ凝集阻害剤を含む。本発明において使用される好適な凝集阻害剤は、（タイプ１）ＨＬＢ１２〜１５の界面活性剤、（タイプ２）脂肪親和性界面活性剤、（タイプ３）ノニオン性脂肪親和性界面活性剤、（タイプ４）ノニオン性界面活性剤、（タイプ５）天然物系界面活性剤、である。より好適には、ＨＬＢ１２〜１５のノニオン性界面活性剤である。このような凝集阻害剤が系に存在することで、タンパク質の疎水性相互作用が低下又は防止される結果、長時間の撹拌や振とう等でも凝集による目詰まり物質の形成が防止できると理解される。水系溶液中における乳化安定性ならびに疎水性物質の分散効果の高さの点でＨＬＢ１２〜１５の界面活性剤が望ましい。以下、これら界面活性剤について詳述する。なお、これらタイプは、物性や由来等で分けたものであり、あるタイプに属している成分が別のタイプに属する場合もある。また、同一種の界面活性剤を複数組み合わせて使用しても、或いは、異なる種の界面活性剤を複数組み合わせて使用してもよい。

【0018】

（タイプ１）
まず、ＨＬＢ１２〜１５の界面活性剤における「ＨＬＢ」は、グリフィン法により算出された値とする。また、より好適なＨＬＢは１３〜１５である。タイプ１の界面活性剤としては、アニオン性界面活性剤及び両性イオン界面活性剤の他、後述するノニオン性界面活性剤を使用することができる。

【0019】

（タイプ２）
次に、脂肪親和性界面活性剤としては、例えば、アルコール、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、脂肪酸、胆汁酸、グリセリン脂肪酸エステル、アセチル化グリセリン脂肪酸エステル、低級アルコール脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリエチレングリコールグリセリン脂肪酸エステル、ポリプロピレングリコール脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ポリエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリド、モノ／ジグリセリドの乳酸誘導体、プロピレングリコールジグリセリド、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン-ポリオキシプロピレンブロックコポリマー、トランスエステル化された植物油、ステロール、ステロール誘導体、糖エステル、糖エーテル、スクログリセリド（sucroglyceride）、ポリオキシエチレン植物油、ポリオキシエチレン硬化植物油、多価アルコールと、脂肪酸、グリセリド、植物油、硬化植物油、及びステロールからなる群の少なくとも一つの要素との反応混合物、ならびに、それらの混合物を挙げることができる。

【0020】

（タイプ３）
また、ノニオン性脂肪親和性界面活性剤としては、例えば、アルキルグルコシド、アルキルマルトシド、アルキルチオグルコシド、ラウリルマクロゴールグリセリド、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェノール、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリエチレングリコールグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン-ポリオキシプロピレンブロックコポリマー、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリド、ポリオキシエチレンステロール、それらの誘導体及び類似体、ポリオキシエチレン植物油、ポリオキシエチレン硬化植物油、多価アルコールと、脂肪酸、グリセリド、植物油、硬化植物油、及びステロールからなる群の少なくとも一つの要素との反応混合物、トコフェロールポリエチレングリコールサクシネート、糖エステル、糖エーテル、スクログリセリド、ならびにそれらの混合物を挙げることができる。

【0021】

（タイプ４）
更に、ノニオン性界面活性剤としては、Brij35、ポリオキシエチレン(20)セチルエーテルのようなn-アルキルPEOモノエーテル、Lubrol PX、Lubrol WX、nonidet P-40、オクチルフェノールポリ(エチレングリコールエーテル)n10及びオクチルフェノールポリ(エチレングリコールエーテル)n7のようなn-アルキルフェニルPEO、テトラメチルブチルフェニルPEO、n-オクチルグルコシド、オクチル-チオグルコピラノシド、tween-85、tween-80、tween-65、tween-60、tween-40、及びtween-20、ならびにアルキルアリールポリエーテルアルコール（TritonX-100）、ポリエチレングリコールtert-オクチルフェニルエーテル（TritonX-114）を挙げることができる。

【0022】

（タイプ５）
また、天然物由来界面活性剤としては、ショ糖脂肪酸エステル、ポリエチレン脂肪酸エステル、レシチン、リゾレシチン、キラヤサポニンを挙げることができる。

【0023】

これらのうち、最も好適な凝集阻害剤Ｉは、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えばポリソルベート８０）、アルキルアリールポリエーテルアルコール（例えばＴｒｉｔｏｎＸ−１００）及びグリセリン脂肪酸エステルからなる群より選択される少なくとも１種である。

【0024】

＜凝集阻害剤ＩＩ＞
本発明のラクターゼ溶液に含まれるラクターゼその他のタンパク質の凝集を防ぐ凝集阻害剤として、ラクターゼその他のタンパク質の表面を覆う作用を有する保護剤を使用することができる。保護剤としては、ポリエーテル及び増粘多糖類を使用することができる。

【0025】

ポリエーテルとしては、アルキレンの炭素数が２〜８であるポリアルキレングリコール（例えば、ポリオキシプロピレン誘導体、ポリエチレングリコール）等が挙げられる。水和性が高く、極めて柔軟な構造骨格を有することで、タンパク質を効率的に保護するという理由から、ポリアルキレングリコールの中でも、ポリエチレングリコールが好適である。ポリエチレングリコールの数平均分子量としては、２００〜４００００００が好適であり、より好適には、４００〜２００００である。

【0026】

ポリエーテルも親水性の部位と疎水性の部位を持つことから、ラクターゼ溶液に含まれるラクターゼその他のタンパク質の疎水性相互作用を防止できる結果、目詰まり物質の形成に対し低減効果を有するものと理解される。また、同一種のポリエーテルを複数組み合わせて使用しても、或いは、異なる種のポリエーテルを複数組み合わせて使用してもよい。

【0027】

増粘多糖類としては、ジェランガム、カラギナン、キサンタンガム、ローカストビーンガム、グアーガム、ペクチン、寒天、ゼラチン、アラビアガム、グルコマンナン、タラガム、プルラン、タマリンド種子多糖類、トラガントガム、カラヤガム、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、マクロホモプシスガム、コーンスターチ、タピオカ澱粉などの澱粉、デキストリン及びシクロデキストリンを使用することができる。

【0028】

＜凝集阻害剤ＩＩＩ＞
更に、ラクターゼ溶液に含まれるラクターゼその他のタンパク質の凝集を防ぐ凝集阻害剤として、塩溶効果を有する金属イオン又はその塩が挙げられる。ラクターゼ溶液において適切なイオン強度を得やすいという理由から、金属イオンの中でも、グアニジウムイオン、カルシウムイオンもしくはＭｇイオン又はそれらの塩が好適である。

【0029】

金属イオン又はその塩を添加することで、溶液のイオン強度が適切になり、ラクターゼ溶液に含まれるラクターゼその他のタンパク質のタンパク質間の疎水性相互作用が減少する。その結果、タンパク質が凝集しにくくなり目詰まり物質の形成に対し低減効果を有するものと理解される。また、同一種の金属イオン又はその塩を複数組み合わせて使用しても、或いは、異なる種の金属イオン又はその塩を複数組み合わせて使用してもよい。

【0030】

これら、凝集阻害剤Ｉ〜ＩＩＩは、単独で使用してもよく、異なる種の凝集阻害剤を組み合わせて使用してもよい。例えば、凝集阻害剤Ｉ及びＩＩ、凝集阻害剤ＩＩ及びＩＩＩ、凝集阻害剤Ｉ及びＩＩＩ、並びに、凝集阻害剤Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩを併用してもよい。また、凝集阻害剤ＩＩＩは単独では効果がわずかであることから凝集阻害剤Ｉ及びＩＩＩ、並びに、凝集阻害剤ＩＩ及びＩＩＩを併用することが好ましい。

【0031】

＜任意成分＞
本発明のラクターゼ溶液は、必要に応じ、各種成分を含有していてもよい。具体例としては、ラクターゼの安定化に寄与する金属塩類、各種糖類、アスコルビン酸、グリセリン等、使い勝手をよくするための賦形剤である澱粉、デキストリン、緩衝作用を有する無機塩類等を挙げることができる。

【0032】

≪ラクターゼ溶液の組成（特に凝集阻害剤の量）≫
＜凝集阻害剤Ｉ＞
凝集阻害剤Ｉは、ラクターゼ溶液に、ラクターゼ溶液の全質量を基準として、好適には０．００１質量％〜５質量％の範囲、より好適には０．０１質量％〜１質量％、更に好適には０．１質量％〜０．５質量％の範囲で添加することができる。

【0033】

＜凝集阻害剤ＩＩ＞
凝集阻害剤ＩＩは、ラクターゼ溶液に、ラクターゼ溶液の全質量を基準として、好適には０．０５質量％〜１５質量％の範囲、より好適には０．３質量％〜１０質量％の範囲、更に好適には０．５質量％〜５質量％の範囲で添加することができる。

【0034】

＜凝集阻害剤ＩＩＩ＞
凝集阻害剤ＩＩＩは、ラクターゼ溶液中において、金属成分として、０．１ｍＭ以上２０ｍＭ以下の濃度であることが好ましく、０．２５ｍＭ以上１５ｍＭ以下の濃度であることがより好ましく、０．５ｍＭ以上１０ｍＭ以下の濃度であることが更に好ましく、１ｍＭ以上５ｍＭ以下ののうどであることが最も好ましい。塩溶効果の高い順にグアニジウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオンとなる。マグネシウムイオンはより高い濃度が必要となるが、グアニジウムイオン及びカルシウムイオンはそれより低い濃度でよい。

【0035】

≪ラクターゼ溶液の性質≫
＜ラクターゼ活性＞
本発明のラクターゼ溶液は、１０〜１００，０００NLU/gの中性ラクターゼ活性を有することが望ましく、１００〜９０，０００NLU/gの活性を有することがより望ましく、１，０００〜８０，０００NLU/ｇの活性を有することがさらに望ましい。「ＮＬＵ」はNeutral Lactase Unitである。活性の測定方法は例えば、以下のとおりである。基質ｏ−ニトロフェニル−β−ガラクトピラノシド（ＯＮＰＧ）を、ｏ−ニトロフェニル及びガラクトースにする加水分解によって測定される。反応は、炭酸ナトリウムの添加によって終了する。形成されたｏ−ニトロフェニルは、アルカリ媒体中で黄色になり、吸光度の変化が酵素活性（ＮＬＵ／ｇで表される）を測定するのに使用される。この手順は、米国食品化学物質規格集（FCC； Food Chemicals Codex）第４版、１９９６年７月１日、第８０１〜８０２頁／ラクターゼ（中性）（β-ガラクトシダーゼ）活性で、公表されている。
本発明のラクターゼ溶液は、１０〜１００，０００ALU/gの酸性ラクターゼ活性を有することが望ましく、１００〜９０，０００ALU/gの活性を有することがより望ましく、１，０００〜８０，０００ALU/ｇの活性を有することがさらに望ましい。「ＡＬＵ」はAcid Lactase Unitである。活性の測定方法は例えば、以下のとおりである。基質ｏ−ニトロフェニル−β−ガラクトピラノシド（ＯＮＰＧ）を、ｏ−ニトロフェニル及びガラクトースにする加水分解によって測定される。反応は、炭酸ナトリウムの添加によって終了する。形成されたｏ−ニトロフェニルは、アルカリ媒体中で黄色になり、吸光度の変化が酵素活性（ＡＬＵ／ｇで表される）を測定するのに使用される。この手順は、米国食品化学物質規格集（FCC； Food Chemicals Codex）第４版、１９９６年７月１日、第８０２〜８０３頁／ラクターゼ（酸性）（β-ガラクトシダーゼ）活性で、公表されている。
本発明のラクターゼ溶液は、中性ラクターゼ溶液であってもよいし、酸性ラクターゼ溶液であってもよいし、両者が混合された中性〜酸性で作用するラクターゼ溶液であってもよい。

【0036】

＜撹拌後の透過速度（相対値）＞
本発明のラクターゼ溶液は、５，０００NLU/ｇ又は１０，０００ALU/ｇの活性となる濃度で１００ｒｐｍ、１０℃で１６時間撹拌処理した後、下記条件にて測定した透過試験開始直後（２０ｇ透過時）の透過速度（Ｆｌｕｘ）を１００％とし、試験終了時（１８０ｇ透過時）の透過速度がどの程度減少したかを算出することによって判断することができる。透過試験終了時の透過速度は高いほど好ましいが、１０％以上であることが好ましく、２０％以上であることがより好ましく、３０％以上であることがさらに好ましい。上限値は例えば、７５％である。
ラクターゼ溶液の活性はイオン交換水にて希釈するか又は限外ろ過濃縮することで調節することが可能である。
＜撹拌後の透過速度（絶対値）＞
本発明のラクターゼ溶液は、５，０００NLU/ｇ又は１０，０００ALU/ｇの活性となる濃度で１００rpm、１０℃で１６時間撹拌処理した後に、下記条件にて測定したフィルター透過速度が５kg/min×m²以上であることを特徴とする。このフィルター透過速度は、好ましくは８kg/min×m²以上、さらに好ましくは１０kg/min×m²以上であり、最も好ましくは２０kg/min×m²以上である。

【0037】

＜目詰まり現象の再現条件＞
ラクターゼのフィルター目詰まり現象は、ラクターゼ溶液に往復振とう又は撹拌操作を行うことで再現することができる。往復振とう又は撹拌操作を行う時間は、加温温度及びラクターゼ溶液に含まれる活性値にもよるが、３０分〜７日間の間で設定すればよく、１時間〜６日間であることが好ましく、２時間〜５日間であることがより好ましい。往復振とう又は撹拌操作を行っているときに、ラクターゼ溶液に加温をすることで目詰まり現象を促進させることができる。
ラクターゼ溶液の往復振とうは１０spm（往復/分）〜３００spm（往復/分）であることが好ましく２０spm（往復/分）〜２５０spm（往復/分）であることがより好ましく、３０spm（往復/分）〜２００spm（往復/分）であることがさらに好ましい。
ラクターゼ溶液の撹拌操作は１０rpm（回転/分）〜３００rpm（回転/分）であることが好ましく、２０rpm（回転/分）〜２５０rpm（回転/分）であることがより好ましく、３０rpm（回転/分）〜２００rpm（回転/分）であることがさらに好ましい。
ラクターゼ溶液の加温温度は、５℃〜７０℃程度であることが好ましく、６℃〜６５℃であることがより好ましく、７℃〜６０℃であることがさらに好ましい。温度が高くなるにつれて、目詰まり現象が生じやすくなる。
ラクターゼ溶液のラクターゼ活性は、１０〜１００，０００NLU/gまたは、１０〜１００，０００ALU/gの範囲であればよい。活性値が高くなるほど、目詰まり現象が生じやすくなる。

【0038】

＜フィルター透過性試験１＞
フィルター透過性は、低温環境下で、一定のラクターゼ活性になるようにラクターゼ含量を調整した検体を、所定の膜面積を有する所定のフィルターを加圧して透過させ、その速度を測定することで評価することができる。具体的には、例えば、以下のようにして実施することができる。
（フィルター透過性測定手順）
以下の操作は低温から室温（例えば、１〜３０℃、好ましくは４〜１５℃、より好ましくは８〜１２℃）環境下で実施する。
１．測定装置等の温度
測定装置、ラクターゼ溶液サンプル及びイオン交換水を低温から室温（例えば、１〜３０℃、好ましくは４〜１５℃、より好ましくは８〜１２℃）に冷却する。
２．ラクターゼ液の調製
ラクターゼ溶液サンプルを、イオン交換水にて希釈するか又は限外ろ過濃縮することで、ラクターゼ活性を一定に調整し、よく混ぜ合わせる。なお、ラクターゼ活性は、ラクターゼ溶液の粘度によっては１０〜２，０００NLU/ｇまたは１０〜４，０００ALU/ｇ程度のいずれに調整してもよい。
３．試験装置の構成
試験装置としては、加圧することのできるタンク付きのフィルターホルダーを測定サンプル導入部として、さらに、別のフィルターホルダーを連結して使用することができる。タンク付きのフィルターホルダーは、単独でも使用可能であるが、フィルターが目詰まりする条件を得るためには、前者が好適であり、その直径（φ）は、連結するフィルターホルダーよりそのφが大きいことが好ましい。
一般的には、フィルターホルダー内のサンプル透過部分は、測定サンプルの入り口側から０−リング、メンブレン、サポートスクリーンを備えた構成が一般的であるが、これに限定されるものではない。メンブレンとしては、特に限定されないが、その孔径が０．０５〜０．５０μｍのものが好ましく、０．１〜０．４５μｍのものがさらに好ましい。また、親水性のものであっても、疎水性のものであってもよい。より好ましくは、親水性のものである。φは有効膜面積を調整可能な大きさであれば特に限定されない。有効膜面積は、液不透過性のラベルシール等によって調節することができ、例えば、０．５〜１．８ｃｍ^２好ましくは、１．０〜１．５ｃｍ^２である。
４．２．において希釈したラクターゼ溶液サンプル（以後サンプルと略記する）を、測定サンプル導入部へ投入する。
５．窒素ガス（空気、酸素、アルゴン等でも可）を用いて、０．１〜１ＭＰａ、好ましくは０．２ＭＰａの圧力をタンク付フィルターホルダーに付加し、所定量（例えば１０〜３０ｇ）、好ましくは２０ｇのサンプル透過毎の経過時間を記録する。

【0039】

（目詰まり抑制効果の判定）
上記フィルター透過性測定手順に従って、ラクターゼ溶液として従来のラクターゼ溶液（凝集阻害剤不含有）を使用すると、透過試験終了時の透過速度が大きく減少する。この従来のラクターゼ溶液の透過速度より大きい場合に凝集阻害剤として添加した物質には目詰まり抑制効果ありと判断することができる。

【0040】

≪ラクターゼ溶液の製造方法≫
本発明のラクターゼの具体的製造方法は、詳細については上述した通りであり、ここでの記載は省略するが、例えば、（１）酵母の培養を行った後の、細胞壁の破壊を伴うラクターゼの抽出工程と、（２）当該抽出したラクターゼから、培養物由来の夾雑物等を除去するための精製工程と、を含む。本発明のラクターゼ溶液の製造方法は、（３）上記のラクターゼ（直前に調製したものでも市販品でもよい）に、凝集阻害剤（＋必要に応じて他の添加剤）を添加する工程と、（４）滅菌のためにろ過する工程と、を含む。

【0041】

≪ラクターゼ溶液の使用方法・用途≫
（ラクターゼ溶液の使用方法）
ラクターゼ溶液の具体的な利用形態としては、例えば、発酵乳の製造において用いられる。乳糖分解した発酵乳の製造方法は、１．殺菌前の乳にラクターゼを添加して乳糖の分解を行なった後、乳の加熱殺菌と同時にラクターゼを失活させてから乳を発酵させる方法（特開平５−５０１１９７号公報）、２．殺菌乳にラクターゼを添加して乳糖の分解を行なった後、加熱処理によってラクターゼを失活させてから乳を発酵させる方法、３．固定化したラクターゼで乳中の乳糖を分解した後、乳を発酵させる方法（特開昭４６−１０５５９３号公報、特開昭５９−１６２８３３号公報）、４．予め乳糖分解もしくは乳糖除去した原材料を殺菌乳に用いて発酵させる方法等がある。

【0042】

さらに、本発明のラクターゼ溶液の具体的な利用形態として、ロングライフミルクの製造において用いられる。ロングライフミルクは、長期保存牛乳のことで、製造工程は滅菌工程と連続式無菌包装工程からなっており、一般的には、135〜150℃数秒間の超高温短時間滅菌法で処理され、あらかじめ過酸化水素で滅菌した紙容器を無菌包装できる工程で充填される。
ロングライフミルクに添加されるラクターゼ溶液は、一般的に超高温短時間滅菌後の牛乳を充填する際、濾過滅菌の後に添加される。

【0043】

（ラクターゼ溶液の用途）
本発明に係るラクターゼ溶液は、乳製品製造用として特に適している。ここで、乳製品とは、アイス、ロングライフミルク等の牛乳類、ヨーグルト、生クリーム、サワークリーム、チーズ等をいう。特に、本発明に係るラクターゼ溶液は、ロングライフミルクの製造用に適している。

【0044】

（ラクターゼの用途とそのｐＨプロファイル）
また、ラクターゼの用途を考える場合には、中性ラクターゼであるか、又は酸性ラクターゼであるかにより大きく２つに大別される。これは、用途におけるｐＨプロファイルに依るものである。中性ｐＨの用途では、通常、中性ラクターゼが好ましく、酸性ラクターゼは、酸性範囲の用途により適しているといえる。

【0045】

ここで、前述のフィルター透過性試験１は、ラクターゼ溶液のみならず、タンパク質、ペプチドにも適用することが可能である。後述するように、分子中の疎水性部分同士が接して付着することにより、凝集物が形成されると考えられるからである。
以下、このようなフィルター透過性の試験について詳述する。

【0046】

本試験方法は、
第一の径を有する第一の円筒状流路と、
前記第一の径よりも小さい第二の径を有し、前記第一の円筒状流路と流体導通可能に連結され且つ前記第一の円筒状流路の下流に配された、第二の円筒状流路と、
前記第二の円筒状流路の、前記第一の円筒状流路とは反対側の開口部に配置されたメンブレンフィルターと、
を有するユニットを用いた、
液体の単位面積当たりの透過量（permeate（kg/m²））及び／又は透過速度（flux（kg/min×m²））の変化を測定することにより、目詰まりを評価する試験方法であって、
前記測定方法は、
測定対象の液体を加圧し、当該液体を、前記第一の円筒状流路及び前記第二の円筒状流路を介し、前記メンブレンフィルターから当該ユニットの外部に排出させる工程を有し、且つ
前記ユニットは、
前記メンブレンフィルターの下流側且つ前記メンブレンフィルターと近接した位置に設けられたサポートスクリーンと、
前記サポートスクリーン上の、前記メンブレンフィルター側に貼付された一又は複数のシール材であって、前記一又は複数のシール材の総面積が前記メンブレンフィルターの面積よりも小さい、液体不透性シール材とを有し、前記メンブレンフィルターと前記液体不透性シール材とは接触状態にあることを、
特徴とする目詰まりを評価する試験方法である。

【0047】

本試験方法によれば、メンブレンフィルターによる目詰まりの現象を再現することができ、簡易にその対策等の検証試験を実施することができる。

【実施例】

【0048】

１．目詰まり現象の再現条件の検討
ラクターゼ溶液としてＹＮＬ（合同酒精株式会社製商品名：ＧＯＤＯ−ＹＮＬ）を使用して、目詰まりが起こる条件を調べた。なお、使用したＧＯＤＯ−ＹＮＬは、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ由来の中性ラクターゼであり、活性は５，０００ＮＬＵ／ｇであった。

【0049】

（往復振とう処理）
２００gのＹＮＬを５００mlアイボーイ（広口（アズワン社製、品番7-2102-03））に入れ、１０、２０、又は３０℃において、振とう装置（大洋科学工業株式会社製、製品名ＴＡＩＹＯ ＩＮＣＵＢＡＴＯＲ ＰＥＲＳＯＮＡＬ、振幅３ｃｍ）を用いて、０、２、４又は７日間往復振とう（１００spm（往復/分）））又は静置した。各ＹＮＬをそれぞれ４０ｇ計り取り、イオン交換水で５倍希釈することにより活性を１，０００ＮＬＵ／ｇに調整したものをサンプルとして、フィルター透過性を測定した。

【0050】

（フィルター透過性試験）
上述したフィルター透過性試験１の本実施例における詳細な条件について以下に詳述する。
（フィルター透過性測定手順）
以下の操作は１０℃の環境下で実施した。
１．測定装置、ラクターゼ溶液サンプル及びイオン交換水を１０℃に冷却した。
２．ラクターゼ溶液サンプルを、イオン交換水にて希釈するか又は限外ろ過濃縮することで、ラクターゼ活性を１，０００NLU/ｇに調整し、よく混ぜ合わせた。
３．試験には、４７ｍｍタンク付ステンレスホルダー（アドバンテック東洋社製、製品名「ＫＳＴ−４７」）に２５ｍｍステンレススチール製フィルターホルダー（ＰＡＬＬ社製、製品番号１２０９（有効膜面積3.7ｃｍ^２））を連結させたものを装置として用いた。前記フィルターホルダー内のサンプル透過部分は、測定サンプルの入り口側からO-リング、メンブレン、サポートスクリーンを備えた構成となっている（本発明の試験においては、タンク付きステンレスホルダーのフィルター及びフィルター保持部分のパーツ（サポートスクリーンとその支持体）は非装着とした）。メンブレンとしてMerck Millipore社製、製品名DURAPORE (孔径０．２２mm,φ２５mm、親水性ＰＶＤＦ製)を使用し、サポートスクリーンとして上記フィルターホルダー付属のType 316 ステンレススチールを使用した。また、透過速度を調節するために、サポートスクリーンの上部（測定サンプルの入り口側）に、直径０．９ｃｍの円形のラベルシール（エーワン株式会社製、製品名 A-oneカラーラベル０７０１０）を４枚左右対称となるよう貼り付け（有効膜面積１．２６ｃｍ^２）、メンブレンフィルター（孔径０．２２μｍ）をセットした。メンブレンは、５０％グリセリン水溶液にてリンスし、ステンレス製フィルターホルダーに取り付けた。
４．２．において希釈したラクターゼ溶液サンプル（サンプル）を、タンク付ステンレスホルダーへ投入した。
５．窒素ガスを用いて０．２ＭＰａの圧力をタンク付ステンレスホルダーに付加し、２０ｇ透過毎の経過時間を記録した。この結果から、膜１ｍ^２換算あたりの透過量（permeate（kg/m²））と透過速度（flux（kg/min×m²））を以下の方法で求めた。

【0051】

計算式（概念式）
Permeate（kg/m²）= n点の透過量（g）/（膜半径（mm）×膜半径（mm）×円周率）（ｍ^２）×1000
Flux（kg/min×m²）= (n点のpermeate-(n-1)点のpermeate)/(n点の透過時間(min)-(n-1)点の透過時間(min))
※ｎは測定点を示す。２０ｇ透過毎の経過時間を記録するため、例えば、ｎ点が２０ｇ透過時の透過量又はpermeateである場合、（n-1）点は０ｇ透過時の透過量又はpermeateである。

【0052】

結果を図１に示す。パネルＡは１０℃、パネルＢは２０℃、及びパネルＣは３０℃で、それぞれ静置又は往復振とうした結果を表す。各温度において、静置したサンプルは、静置日数にかかわらずいずれも透過速度の低下が小さいのに対し、往復振とうしたサンプルの透過量は、振とう日数が長いほど急速に透過速度が低下しており、２０℃又は３０℃で７日間振とうしたサンプルは、目詰まりのため測定できなかった。したがって、目詰まりは主に往復振とう処理により凝集物が形成されることによって引き起こされたと考えられる。一方、２０℃往復振とうサンプル、３０℃往復振とうサンプルにおいて、２日目以降は若干の濁りが見られたが、静置サンプルには濁りは見られなかった。しかし、往復振とうサンプル及び静置サンプルの両方において、温度が高いほど透過量が低下する傾向が見られた。温度の上昇は、振とうにより生じる凝集物の形成を加速することが見出された。

【0053】

ラクターゼ活性は、パネルＤに示すように、各温度において振とう又は静置した場合において、ほとんど変化しなかった。したがって、目詰まりを生じさせる凝集物の形成は、ラクターゼ活性にはほとんど影響しないことがわかった。

【0054】

さらに、往復振とうではなく、撹拌によって同様の現象が観察されるかどうかを調べた。５０gのＹＮＬを１００mlビーカーに入れ、１０℃で１６時間、撹拌装置（アズワン社製、商品名HS-400）を用いて各速度（撹拌速度最小：100rpm、速度２：170rpm、速度３：240rpm、速度４：310rpm）で撹拌した。その後、上記と同様にしてサンプルを調製し、上記のフィルター透過性試験と同様にしてフィルター透過性を測定した。

【0055】

結果を図２に示す。処理を行なわないものに比較して、撹拌操作による有意な透過性悪化が認められた。

【0056】

以上の結果から、振とう又は撹拌のような物理的刺激が目詰まりを生じさせる凝集物の形成の主な原因であることが明らかになった。したがって、ラクターゼ溶液製造後の輸送中に生じる振動などによっても凝集物が形成されると考えられる。
なお、図示していないが、ラクターゼ溶液に含まれる多糖類及びオリゴ糖類の含有量を１０ｇ／ｋｇ未満にしたもの、及び１０ｇ／ｋｇ超にしたものを用いて、上記の撹拌処理を行ったところ、いずれのラクターゼ溶液においても凝集物が同程度形成されることを確認した。すなわち、凝集物の発生には、ラクターゼ溶液に含まれる多糖類及びオリゴ糖類の影響はほとんどないことが示唆された。

【0057】

以下の検討においては、目詰まり現象を生じさせる凝集物形成の再現条件を１００rpm、１０℃、１６時間の撹拌条件にて実験を行った。

【0058】

２．凝集物の形成を阻害する物質の探索
振とうや温度によって目詰まり物質（凝集物）が生じるメカニズムは、明らかではないが、一応、以下のように考えられる。振とうなどの物理的刺激によってタンパク質分子とタンパク質分子とが衝突する。その際に、分子中の疎水性部分同士が接して付着することにより、凝集物が形成される。したがって、本発明者らは、疎水性相互作用を低減させることができる成分を添加することにより、目詰まりを生じる凝集物の形成を防ぐことができる可能性があると考え、種々の成分の添加の効果を調べた。

【0059】

２−１．界面活性剤
界面活性剤としては、Ｔｗｅｅｎ８０（ＨＬＢ１５．０）、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００（Ｔｘ１００、ＨＬＢ１３．５）及びリョートーポリグリエステル（ＨＬＢ１２．０）を添加剤として、それぞれ０．１質量％の濃度でＹＮＬ（１００mlビーカー中、５０g）に添加し、撹拌処理により、目詰まり現象を生じさせる凝集物を形成させた。その後、上記と同様にしてサンプルを調製し、上記フィルター透過性試験により、フィルター透過性を測定した。添加剤を添加せずに撹拌処理したものをコントロールとして同様にフィルター透過性を測定した。結果を図３に示す。添加した物質のうち、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００及びＴｗｅｅｎ８０は凝集阻害剤として特に有効であった。

【0060】

ここで、具体的な目詰まりの判定は、試験開始直後（２０ｇ透過時）のＦｌｕｘから、試験終了時（１８０ｇ透過時）に何％まで低下したか（180g透過時の相対透過速度（％））を算出し判断する。添加剤の目詰まり抑制効果の判定は、上記計算結果がコントロール（5.8％）より大きい場合に効果ありといえる。撹拌を行わないサンプルの計算値は約75％であるので、この数値を最大値とし、35％以上のものを◎、10〜35＜のものを○、0〜10＜のものを×、200ｇ透過不能のものを××と評価する。結果を表１に示す。

【0061】

【表1】

【0062】

２−２．ポリアルキレングリコール
ポリアルキレングリコールとしては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ２００(和光純薬工業株式会社製)、ＰＥＧ４００（関東化学株式会社製）、ＰＥＧ４０００（関東化学株式会社製）、ＰＥＧ６０００（関東化学株式会社製）、ＰＥＧ２０００００(和光純薬工業株式会社製)）を添加剤として、０．５質量％とした以外は、界面活性剤と同様にフィルター透過性を測定した。結果を図４及び表２に示す。

【0063】

【表2】

【0064】

２−３．金属イオン又はその塩
金属イオン又はその塩としては、ＭｇＳＯ_４を金属成分として、所定の濃度となるように添加した以外は、界面活性剤と同様にフィルター透過性を測定した。結果は、後述する添加濃度の検討と共に、図７及び表６に示す。

【0065】

３‐１．添加濃度の検討（界面活性剤）
上記の実験で特に有効であったＴｒｉｔｏｎＸ−１００及びＴｗｅｅｎ８０について、添加濃度を変化させて上記と同様の実験を行い、有効な添加濃度を検討した。結果を図５及び表３に示す。

【0066】

【表3】

【0067】

この実験の条件下では、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００（パネルＡ）は０．０１〜０．５％の範囲、Ｔｗｅｅｎ８０（パネルＢ）は０．０５〜０．５％の範囲で効果が認められた。

【0068】

３−２．添加濃度の検討（ポリアルキレングリコール）
ポリアルキレングリコールとして、種々のポリエチレングリコールを用いて、添加濃度を変化させて界面活性剤と同様の実験を行い、有効な添加濃度を検討した。結果を図６及び表４〜表５に示す。

【0069】

【表4】

【0070】

【表5】

【0071】

３−３．添加濃度の検討（金属塩）
金属塩として、ＭｇＳＯ_４を用いて、添加濃度を変化させて（０．５ｍＭ、１ｍＭ、５ｍＭ）界面活性剤と同様の実験を行い、有効な添加濃度を検討した。結果を図７及び表６に示す。

【0072】

【表6】

【0073】

なお、図示していないが、ラクターゼ溶液に含まれる多糖類及びオリゴ糖類の含有量を１０ｇ／ｋｇ未満にしたもの、及び１０ｇ／ｋｇ超にしたものに、それぞれＴｒｉｔｉｏｎＸ−１００を０．０１％、０．０５％及び０．５％含有させたもの及びＴｗｅｅｎ８０を０．０５％、０．１％及び０．５％含有させたものに対して、上記の撹拌処理を行ったところ、表１及び表２に示すものと同様の傾向を示した。加えて、ポリエチレングリコール各種、Ｍｇ塩を加えた場合にも、フィルター透過性の向上に関して、同様の傾向を示した。すなわち、Ｆｌｕｘ及び相対透過速度には、ラクターゼ溶液に含まれる多糖類及びオリゴ糖類の影響がほとんどないことが示唆された。

【要約】

【課題】 製剤化後のラクターゼ溶液を乳に添加使用する前のろ過工程におけるろ過装置（フィルター）の目詰まりを低減させる方法、及びろ過装置の目詰まりを起こしにくいラクターゼ溶液の提供。
【解決手段】 ５，０００NLU/ｇ又は１０，０００ALU/ｇの活性となる濃度で１００rpm、１０℃で１６時間撹拌処理した後、１，０００NLU/ｇ又は２，０００ALU/ｇの活性となる濃度で孔径０．２２μｍのメンブレンフィルターに３６６kg/m²を透過させたときの透過速度が５kg/min×m²以上であることを特徴とするラクターゼ溶液。
【選択図】なし

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】