5933562 Ｎ−カルボキシアルキル−アウリスタチンおよびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5933562

(24)【登録日】2016年5月13日

(45)【発行日】2016年6月15日

(54)【発明の名称】Ｎ−カルボキシアルキル−アウリスタチンおよびその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 5/027 20060101AFI20160602BHJP

   C07K 1/10 20060101ALI20160602BHJP

   A61K 38/00 20060101ALI20160602BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20160602BHJP

【ＦＩ】

   C07K5/027

   C07K1/10

   A61K37/02

   A61P35/00

【請求項の数】17

【全頁数】112

(21)【出願番号】特願2013-530690(P2013-530690)

(86)(22)【出願日】2011年9月26日

(65)【公表番号】特表2013-540114(P2013-540114A)

(43)【公表日】2013年10月31日

(86)【国際出願番号】EP2011066658

(87)【国際公開番号】WO2012041805

(87)【国際公開日】20120405

【審査請求日】2014年8月1日

(31)【優先権主張番号】11158466.0

(32)【優先日】2011年3月16日

(33)【優先権主張国】EP

(31)【優先権主張番号】10181966.2

(32)【優先日】2010年9月29日

(33)【優先権主張国】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】505314468

【氏名又は名称】シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】レルヒェン， ハンス−ゲオルク

(72)【発明者】

【氏名】エル シエイク， シェリフ

(72)【発明者】

【氏名】シュトルテ−ルートヴィヒ， ベアトリクス

(72)【発明者】

【氏名】ゴルフィア， スフェン

(72)【発明者】

【氏名】シューマッハー， ヨハヒム

(72)【発明者】

【氏名】グノート， マルク ジャン

(72)【発明者】

【氏名】クレンツ， ウルスラ

【審査官】 坂崎 恵美子

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１０−５２３４６９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２００７／００８８４８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 Bioconjugate Chemistry，２００６年，Vol.17，p.114-124

【文献】 ChemMedChem，２０１１年，Vol.6，p.54-59

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｋ ５／０２７

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＷＰＤＩＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）

【化201】

の化合物（式中、
Ｌは、直鎖（Ｃ_１〜Ｃ_１２）−アルカンジイルを表し、
Ｒ^１は、水素またはメチルを表し、
Ｒ^２は、１−ヒドロキシエチル、ベンジル、１−フェニルエチル、または１Ｈ−インドール−３−イルメチルを表すか、
あるいは
Ｒ^１とＲ^２は、これらがともに結合している炭素原子と一緒に、式

【化202】

の２−フェニルシクロプロパン−１，１−ジイル基（式中、＃は、該分子の他の部分との結合点に印をつけたものである）
を形成しており、
Ｔは、式−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＲ^３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ^４Ｒ^５、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ−Ｒ^６または−ＣＨ_２−Ｏ−Ｒ^７を有する基を表し、ここで、
Ｒ^３は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルまたは（Ｃ_３〜Ｃ_１０）−シクロアルキルを表し、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルはフェニル、ナフチルまたは（Ｃ_３〜Ｃ_１０）−シクロアルキルで、必要に応じて置換されており、
Ｒ^４は、水素または（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルを表し、
Ｒ^５は、水素、または（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルを表し、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルはフェニルで、必要に応じて置換されているか、
あるいは
Ｒ^４とＲ^５は、互いに結合され、これらが結合している窒素原子と一緒に５〜７員の飽和アザ−複素環式化合物を形成しており、該複素環式化合物は、該窒素原子に対して１，３−または１，４−のいずれかの位置に、さらなる環へテロ原子＞Ｎ−Ｈ、＞Ｎ−ＣＨ_３または−Ｏ−を含んでおり、
Ｒ^６は、ベンゾイルを表し、
Ｒ^７は、フェニルで置換されている（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルを表し、フェニルは、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルコキシカルボニルまたはカルボキシルで、必要に応じて置換されている）
またはその塩、溶媒和物もしくは該塩の溶媒和物。

【請求項2】

請求項１に記載のとおりの式（Ｉ）の化合物であって、
Ｌが、直鎖（Ｃ_１〜Ｃ_８）−アルカンジイルを表し、
Ｒ^１が、水素を表し、
Ｒ^２が、ベンジル、１−フェニルエチルまたは１Ｈ−インドール−３−イルメチルを表すか、
あるいは
Ｒ^１とＲ^２は、これらがともに結合している炭素原子と一緒に、式

【化203】

の２−フェニルシクロプロパン−１，１−ジイル基（式中、＃は、該分子の他の部分との結合点に印をつけたものである）
を形成しており、
Ｔが、式−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＲ^３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ^４Ｒ^５、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ−Ｒ^６または−ＣＨ_２−Ｏ−Ｒ^７を有する基を表し、ここで、
Ｒ^３は、水素または（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルを表し、これはフェニル、ナフチルまたは（Ｃ_３〜Ｃ_１０）−シクロアルキルで、必要に応じて置換されており、
Ｒ^４は、水素またはメチルを表し、
Ｒ^５は、水素または（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルを表し、これはフェニルで、必要に応じて置換されているか、
あるいは
Ｒ^４とＲ^５は互いに結合され、これらが結合している窒素原子と一緒にモルホリン環を形成しており、
Ｒ^６は、ベンゾイルを表し、
Ｒ^７は、ベンジルを表し、これは該フェニル基において（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルコキシカルボニルまたはカルボキシルで、必要に応じて置換されている、
化合物、またはその塩、溶媒和物もしくは該塩の溶媒和物。

【請求項3】

請求項１または請求項２に記載のとおりの式（Ｉ）の化合物であって、
Ｌが、直鎖（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルカンジイルを表し、
Ｒ^１が、水素を表し、
Ｒ^２が、ベンジル、１−フェニルエチルまたは１Ｈ−インドール−３−イルメチルを表すか、
あるいは
Ｒ^１とＲ^２は、これらがともに結合している炭素原子と一緒に、式

【化204】

の（１Ｓ，２Ｒ）−２−フェニルシクロプロパン−１，１−ジイル基（式中、
＃１は、隣接している窒素原子との結合点に印をつけたものであり、
＃２は、Ｔ基の結合点に印をつけたものである）
を形成しており、
Ｔが、式−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＲ^３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ^４Ｒ^５、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ−Ｒ^６または−ＣＨ_２−Ｏ−Ｒ^７を有する基を表し、ここで、
Ｒ^３は、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ベンジルまたはアダマンチルメチルを表し、
Ｒ^４は、水素またはメチルを表し、
Ｒ^５は、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピルまたはベンジルを表し、
Ｒ^６は、ベンゾイルを表し、
Ｒ^７は、ベンジルを表し、これは、該フェニル基においてメトキシカルボニルまたはカルボキシルで、必要に応じて置換されている、
化合物、またはその塩、溶媒和物もしくは該塩の溶媒和物。

【請求項4】

式（Ｉ−Ａ）

【化205】

を有する、請求項１、２または３のうちの１項に記載のとおりの化合物（式中、Ｌ、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは、請求項１、２または３に定義したとおりであり、ラジカルＲ^１およびＲ^２を担持しているＣ^Ｘ−炭素原子は、該図示した立体配置を有する）
またはその塩、溶媒和物もしくは該塩の溶媒和物。

【請求項5】

式（ＩＩ）

【化206】

の化合物（式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは、請求項１〜４のうちの１項に記載の意味に従う）
を、不活性溶媒中で、
［Ａ］塩基誘導性アルキル化によって、
式（ＩＩＩ）

【化207】

の化合物（式中、Ｌは、請求項１〜４のうちの１項に示した意味を有し、
Ｅ^１は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたはベンジルを表し、
Ｘは、脱離基を表す）
とカップリングさせて式（ＩＶ）

【化208】

の化合物（式中、Ｅ^１、Ｌ、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは上記に定義のとおりである）
にし、このとき、Ｅ^１が（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたはベンジルを表す場合は、このエステルラジカルを一般的な方法を用いて切り離し、
（ＩＩＩ）のＥ^１が水素を表す場合と同様に、式（Ｉ）

【化209】

の本発明によるカルボン酸（式中、Ｌ、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは上記に定義のとおりである）
が保存されるようにするか、
あるいは
［Ｂ］式（Ｖ）

【化210】

の化合物（式中、
Ｅ^１は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたはベンジルを表し、
Ｌ^Ａは、請求項１〜４のうちの１項に記載のＬの意味に従うが、該アルキル鎖長はＣＨ_２単位１つ分短い）
で、適切な還元剤の存在下で処理することによって式（ＶＩ）

【化211】

の化合物（式中、Ｅ^１、Ｌ^Ａ、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは上記に定義のとおりである）
にし、このとき、Ｅ^１が（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたはベンジルを表す場合は、このエステルラジカルを一般的な方法を用いて切り離し、（Ｖ）のＥ^１が水素を表す場合と同様に、式（Ｉ−Ｂ）

【化212】

の本発明に適合するカルボン酸（式中、Ｌ^Ａ、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは上記に定義のとおりである）
が保存されるようにするか、
のいずれかを行ない、
得られた該式（Ｉ）および（Ｉ−Ｂ）の化合物は、必要に応じて、そのエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーに分離され得る、および／または適切な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）塩基もしくは酸を用いてその溶媒和物、塩および／または該塩の溶媒和物に変換され得ること
を特徴とする、請求項１〜４のうちの１項に記載の式（Ｉ）の化合物を製造するための方法。

【請求項6】

疾患の処置および／または予防のための組成物であって、請求項１〜４のうちの１項に記載の化合物またはその塩、溶媒和物もしくは該塩の溶媒和物を含む、組成物。

【請求項7】

がんおよび腫瘍疾患を処置および／または予防するための手順における使用のための組成物であって、請求項１〜４のうちの１項に記載の化合物またはその塩、溶媒和物もしくは該塩の溶媒和物を含む、組成物。

【請求項8】

がんおよび腫瘍疾患を処置および／または予防するための薬物の作製のための、請求項１〜４のうちの１項に記載の化合物またはその塩、溶媒和物もしくは該塩の溶媒和物の使用。

【請求項9】

請求項１〜４のうちの１項に記載の化合物またはその塩、溶媒和物もしくは該塩の溶媒和物を、１種類以上の不活性な無毒性の薬学的に適し得る賦形剤との組合せで含む薬物。

【請求項10】

請求項１〜４のうちの１項に記載の化合物またはその塩、溶媒和物もしくは該塩の溶媒和物を１種類以上の物質との組合せで含む薬物。

【請求項11】

がんおよび腫瘍疾患の処置および／または予防のための請求項９または１０に記載のとおりの薬物。

【請求項12】

ヒトまたは動物のがんおよび腫瘍疾患の処置および／または予防のための組成物であって、有効量の少なくとも１種類の、請求項１〜４のうちの１項に記載の化合物またはその塩、溶媒和物もしくは該塩の溶媒和物、または有効量の請求項９〜１１のうちの１項に記載の薬物を含む、組成物。

【請求項13】

前記化合物が、

【化213】

【化214】

【化215】

【化216】

【化217】

【化218】

【化219】

【化220】

からなる群より選択される、請求項１に記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物。

【請求項14】

請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物またはその塩、溶媒和物もしくは該塩の溶媒和物、あるいは請求項１３に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物がタンパク質と連結されている、抗増殖結合体。

【請求項15】

前記タンパク質が抗体である、請求項１４に記載の抗増殖結合体。

【請求項16】

請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物またはその塩、溶媒和物もしくは該塩の溶媒和物、あるいは請求項１３に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物が、Ｎ末端カルボキシアルキル基によって前記抗体と連結されている、請求項１５に記載の抗増殖結合体。

【請求項17】

前記脱離基が、クロリド、ブロミド、イオダイド、メシラート、トリフラートもしくはトシラートである、請求項５に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、Ｎ末端がカルボキシアルキル基によって置換されているモノメチルアウリスタチンＦの新しい誘導体、該誘導体の調製のためのプロセス、疾患の処置および／または予防のための該誘導体の使用、ならびに疾患、特に、過剰増殖性障害および／または抗原性の障害（例えば、がん障害など）の処置および／または予防のための医薬を作製するための該誘導体の使用に関する。かかる処置は単独療法として、あるいは他の医薬またはさらなる治療手段と併用して行なわれ得る。

【背景技術】

【0002】

がん障害は、多種多様な組織における制御不能な細胞成長の帰結である。多くの場合、新しい細胞が、既に存在している組織内に貫入するか（浸潤性成長）、または遠隔器官に転移する。がんは多種多様な器官において発生し、多くの場合、組織特異的様式で進行する。このため、用語「がん性障害」は、種々の器官、組織および細胞型の定義された１つの大きな疾患群を示す。

【0003】

初期段階の腫瘍は、外科的治療手段および放射線療法的手段によって除去され得る。転移した腫瘍は、通常、待機的医療として化学療法剤の使用でのみ処置される。この場合の主な目的は、生活の質の改善と延命の最適な並存を見出すことである。

【0004】

現在使用されている非経口で投与される化学療法剤のほとんどは、多くの場合、腫瘍組織または腫瘍細胞を特異的に狙うものではなく、全身性投与のため体内に非特異的に、したがって、その薬物への曝露が望ましくない箇所（例えば、健常な細胞、組織および器官）にも分布する。これにより、一般毒性作用までのおよび一般毒性作用を含む望ましくない副作用がもたらされることがあり、多くの場合、その薬物の治療上使用可能な投薬量が制限され、さらには投薬の中止に至ることもあり得る。

【0005】

腫瘍細胞または周囲組織におけるこのような化学療法剤の改善された選択的利用可能性は、その薬物の効果を最大にするためだけでなく毒性副作用を最小限にするためにも、長年、新しい化学療法剤の開発の焦点であった。上記薬物を標的細胞に直接投与するための効率的な方法が何度も試みられている。薬物と細胞内標的との結合の最適化、および細胞内薬物分布（例えば、近接細胞内）の最小限化は、依然として困難な課題であることが示されている。

【0006】

例えば、モノクローナル抗体は、腫瘍組織および腫瘍細胞の特異的標的化に適している。がん性障害の臨床処置のためのかかる抗体の重要性は、トラスツズマブ（ハーセプチン）、リツキシマブ（リツキサン）、セツキシマブ（エルビタックス）およびベバシズマブ（アバスチン）（これらはすべて、個々の特定の腫瘍障害の治療について認可を受けている）などの薬剤の有効性に基づいて、ここ数年で顕著に増大している。［例えば、非特許文献１参照］。このため、いわゆるイムノコンジュゲートにおける関心が著しく増大してきている。腫瘍関連抗原に向けられた内部移行抗体を、連結単位（「リンカー」）によって細胞傷害剤に共有結合で連接させたものである。腫瘍細胞内に導入され、該コンジュゲートから分離すると、それは直接的かつ選択的に奏功し得る。これにより、潜在的に、がん性障害の従来の化学療法と比べて正常組織の損傷が有意に低減され得る［例えば、非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５参照］。

【0007】

また、抗体の代わりに、特定の標的（受容体など）に選択的に結合する低分子薬物の範囲由来のリガンドを使用することも可能である［例えば、非特許文献６；非特許文献７参照］。また、細胞傷害薬とアドレス（ａｄｒｅｓｓｉｅｒｅｎｄｅｍ）リガンドから作製されたコンジュゲートも知られており、これは、活性薬物を遊離させるための、リガンドと薬物間の明白な切断部位を示す。かかる「所定の分断点」はペプチド鎖内に存在し得、必要とされる位置で特異的酵素によって特定の位置で選択的に切断され得る［例えば、Ｒ．Ａ．ＦｉｒｅｓｔｏｎｅおよびＬ．Ａ．Ｔｅｌａｎ，米国特許出願第ＵＳ２００２／０１４７１３８号参照］。

【0008】

アウリスタチンＥ（ＡＥ）およびモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）は、最初に海洋供給源から単離され、一部において腫瘍細胞に対して非常に強力な細胞傷害活性が示された線状のプソイドペプチドの特定の一群であるドラスタチンの合成類似体である［概説については、例えば、非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０を参照のこと］。

【0009】

【化1】

【0010】

しかしながら、ＭＭＡＥは、残念なことに比較的高い全身毒性を有する。さらに、抗体／活性薬剤−コンジュゲート（イムノコンジュゲート）の使用は、酵素的による所定の分断点を持つ、抗体と活性化合物間のリンカーと不適合である［非特許文献１１］。

【0011】

モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）は、Ｃ末端フェニルアラニン単位を有するアウリスタチン誘導体であるが、ＭＭＡＥと比較すると、示される抗増殖活性は中程度にすぎない。これは遊離カルボキシル基に起因し得る可能性が非常に高く、その極性および電荷が該誘導体の細胞到達能力に有害に影響している。これとの関連において、ＭＭＡＦのメチルエステル（ＭＭＡＦ−ＯＭｅ）が、細胞到達能を有する中性に荷電したプロドラッグ誘導体として報告されており、さまざまな癌細胞系に対して、ＭＭＡＦと比べて数桁高いインビトロ毒性が示されている［非特許文献１１］。この効果は、そのプロドラッグが細胞内に導入された後、細胞内エステル加水分解によって速やかに遊離するＭＭＡＦ自体によってもたらされることが推測され得る。

【0012】

【化2】

【0013】

しかしながら、単純なエステル誘導体の基づく薬物化合物は、一般的に、意図される作用部位に無関係である非特異的エステル加水分解のため（例えば、血漿中に存在しているエステラーゼにより）、化学的不安定性のリスクに晒される；これにより、治療目的のためのこれらの化合物の有用性が著しく制限され得る。さらに、ＭＭＡＥおよびＭＭＡＦなどのアウリスタチン誘導体は、多くの腫瘍細胞で発現される輸送体タンパク質の基質でもあり、このような薬物に対する耐性の発生がもたらされ得る。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0014】

【非特許文献1】Ｇ．Ｐ．ＡｄａｍｓおよびＬ．Ｍ．Ｗｅｉｎｅｒ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３，１１４７−１１５７（２００５）

【非特許文献2】Ｊ．Ｍ．Ｌａｍｂｅｒｔ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５，５４３−５４９（２００５）

【非特許文献3】Ａ．Ｍ．ＷｕおよびＰ．Ｄ．Ｓｅｎｔｅｒ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３，１１３７−１１４６（２００５）

【非特許文献4】Ｐ．Ｄ．Ｓｅｎｔｅｒ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１３，２３５−２４４（２００９）

【非特許文献5】Ｌ．ＤｕｃｒｙおよびＢ．Ｓｔｕｍｐ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２１，５−１３（２０１０）

【非特許文献6】Ｅ．Ｒｕｏｓｌａｈｔｉら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７９，３７７−３８０（１９９８）

【非特許文献7】Ｄ．Ｋａｒｋａｎら，ＰＬｏＳ ＯＮＥ ３（６），ｅ２４６９（２００８年６月２５日）

【非特許文献8】Ｇ．Ｒ．Ｐｅｔｔｉｔ，Ｐｒｏｇ．Ｃｈｅｍ．Ｏｒｇ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．７０，１−７９（１９９７）

【非特許文献9】Ｇ．Ｒ．Ｐｅｔｔｉｔら，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ １０，５２９−５４４（１９９５）

【非特許文献10】Ｇ．Ｒ．Ｐｅｔｔｉｔら，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ １３，２４３−２７７（１９９８）

【非特許文献11】Ｓ．Ｏ．Ｄｏｒｏｎｉｎａら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１７，１１４−１２４（２００６）

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0015】

したがって、本発明の意図は、有効性が中程度にすぎないモノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）を出発物質として、一方において全細胞アッセイで有意に高い細胞傷害活性を示し、他方において輸送体タンパク質に対して低い基質特性を示す新しい結合体を同定すること、およびこのような結合体を、特にがん性疾患の治療に利用可能にすることであった。かかる物質は、抗増殖性（イムノ）コンジュゲートを形成するためのタンパク質（抗体など）との結合または場合によっては低分子量のリガンドとの結合のための坦毒体として特に好適であり得る。

【0016】

モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）およびそのいくつかのエステルおよびアミド誘導体は、既に、ＷＯ２００５／０８１７１１−Ａ２に開示されている。Ｃ末端アミド置換フェニルアラニン単位を有するいくつかの他のアウリスタチン類似体が、ＷＯ０１／１８０３２−Ａ２に記載されている。ＷＯ０２／０８８１７２−Ａ２およびＷＯ２００７／００８６０３−Ａ１には、フェニルアラニンの側鎖が改変されているＭＭＡＦ類似体が記載されており、ＷＯ２００７／００８８４８−Ａ２には、該フェニルアラニンのカルボキシル基が改変された類似体が記載されている。とりわけ、ＷＯ２００４／０１０９５７−Ａ２およびＷＯ２００９／１１７５３１−Ａ１には、Ｎ末端またはＣ末端で結合したさらなるアウリスタチンコンジュゲートが記載されている［Ｓ．Ｏ．Ｄｏｒｏｎｉｎａら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１９，１９６０−１９６３（２００８）も参照のこと］。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
式（Ｉ）

【化201】

の化合物（式中、
Ｌは、直鎖（Ｃ_１〜Ｃ_１２）−アルカンジイルを表し、これはメチルで４回まで置換されていてもよく、ここで、（ａ）２個の炭素原子が、互いに１，２−、１，３−または１，４−の関係で結合されていてもよく、必要であれば、両原子間に存在する炭素原子を含めて（Ｃ_３〜Ｃ_６）−シクロアルキル環またはフェニル環を形成していてもよく、あるいは（ｂ）互いに隣接していない３つまでのＣＨ_２基が−Ｏ−に代えて置換されていてもよく、
Ｒ^１は、水素またはメチルを表し、
Ｒ^２は、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、１−ヒドロキシエチル、フェニル、ベンジル、４−ヒドロキシベンジル、１−フェニルエチル、ジフェニルメチル、１Ｈ−イミダゾール−４−イルメチルまたは１Ｈ−インドール−３−イルメチルを表すか、
あるいは
Ｒ^１とＲ^２は、これらがともに結合している炭素原子と一緒に、式

【化202】

の２−フェニルシクロプロパン−１，１−ジイル基（式中、＃は、該分子の他の部分との結合点に印をつけたものである）
を形成しており、
Ｔは、式−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＲ^３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ^４Ｒ^５、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ−Ｒ^６または−ＣＨ_２−Ｏ−Ｒ^７を有する基を表し、ここで、
Ｒ^３は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルまたは（Ｃ_３〜Ｃ_１０）−シクロアルキルを表し、該（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルはフェニル、ナフチルまたは（Ｃ_３〜Ｃ_１０）−シクロアルキルで置換されていてもよく、
Ｒ^４は、水素または（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルを表し、
Ｒ^５は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルまたは（Ｃ_３〜Ｃ_１０）−シクロアルキルを表し、該（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルはフェニルで置換されていてもよいか、
あるいは
Ｒ^４とＲ^５は、互いに結合され、これらが結合している窒素原子と一緒に５〜７員の飽和アザ−複素環式化合物を形成しており（該複素環式化合物は、＞Ｎ−Ｈ、＞Ｎ−ＣＨ
_３または−Ｏ−などのさらなる環へテロ原子を含んでいてもよい）；該窒素原子に対して１，３−または１，４−のいずれかの位置に存在し、
Ｒ^６は、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルカルボニル、フェニルまたはベンゾイルを表し、
Ｒ^７は、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルを表し、これはフェニルで置換されていてもよく、また、該フェニルも（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルコキシカルボニルまたはカルボキシルで置換されていてもよい）
およびその塩、溶媒和物ならびに該塩の溶媒和物。
（項目２）
項目１に記載のとおりの式（Ｉ）の化合物であって、
Ｌが、直鎖（Ｃ_１〜Ｃ_８）−アルカンジイルを表し、ここで、（ａ）２個の炭素原子が互いに１，３−または１，４−の関係で連結され、両原子間に存在する１個または２個の炭素原子を含めてフェニル環を形成しているか、あるいは（ｂ）互いに隣接していない２つまでのＣＨ_２基が−Ｏ−に代えて置換されていてもよく、
Ｒ^１が、水素を表し、
Ｒ^２が、ベンジル、４−ヒドロキシベンジル、１−フェニルエチルまたは１Ｈ−インドール−３−イルメチルを表すか、
あるいは
Ｒ^１とＲ^２は、これらがともに結合している炭素原子と一緒に、式

【化203】

の２−フェニルシクロプロパン−１，１−ジイル基（式中、＃は、該分子の他の部分との結合点に印をつけたものである）
を形成しており、
Ｔが、式−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＲ^３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ^４Ｒ^５、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ−Ｒ^６または−ＣＨ_２−Ｏ−Ｒ^７を有する基を表し、ここで、
Ｒ^３は、水素または（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルを表し、これはフェニル、ナフチルまたは（Ｃ_３〜Ｃ_１０）−シクロアルキルで置換されていてもよく、
Ｒ^４は、水素またはメチルを表し、
Ｒ^５は、水素または（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルを表し、これはフェニルで置換されていてもよいか、
あるいは
Ｒ^４とＲ^５は互いに結合され、これらが結合している窒素原子と一緒にピペリジン環またはモルホリン環を形成しており、
Ｒ^６は、（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルカルボニルまたはベンゾイルを表し、
Ｒ^７は、（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたはベンジルを表し、これは該フェニル基において（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルコキシカルボニルまたはカルボキシルで置換されていてもよい、
化合物、およびその塩、溶媒和物ならびに該塩の溶媒和物。
（項目３）
項目１または項目２に記載のとおりの式（Ｉ）の化合物であって、
Ｌが、直鎖（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルカンジイルを表し、
Ｒ^１が、水素を表し、
Ｒ^２が、ベンジル、１−フェニルエチルまたは１Ｈ−インドール−３−イルメチルを表すか、
あるいは
Ｒ^１とＲ^２は、これらがともに結合している炭素原子と一緒に、式

【化204】

の（１Ｓ，２Ｒ）−２−フェニルシクロプロパン−１，１−ジイル基（式中、
＃１は、隣接している窒素原子との結合点に印をつけたものであり、
＃２は、Ｔ基の結合点に印をつけたものである）
を形成しており、
Ｔが、式−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＲ^３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ^４Ｒ^５、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ−Ｒ^６または−ＣＨ_２−Ｏ−Ｒ^７を有する基を表し、ここで、
Ｒ^３は、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ベンジルまたはアダマンチルメチルを表し、
Ｒ^４は、水素またはメチルを表し、
Ｒ^５は、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピルまたはベンジルを表し、
Ｒ^６は、ベンゾイルを表し、
Ｒ^７は、ベンジルを表し、これは、該フェニル基においてメトキシカルボニルまたはカルボキシルで置換されていてもよい、
化合物、およびその塩、溶媒和物ならびに該塩の溶媒和物。
（項目４）
式（Ｉ−Ａ）

【化205】

を有する、項目１、２および３に記載のとおりの化合物（式中、Ｌ、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは、項目１、２または３に定義したとおりであり、ラジカルＲ^１およびＲ^２を担持しているＣ^Ｘ−炭素原子は、該図示した立体配置を有する）
およびその塩、溶媒和物ならびに該塩の溶媒和物。
（項目５）
式（ＩＩ）

【化206】

の化合物（式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは、項目１〜４に記載の意味に従う）
を、不活性溶媒中で、
［Ａ］塩基誘導性アルキル化によって、
式（ＩＩＩ）

【化207】

の化合物（式中、Ｌは、項目１および４に示した意味を有し、
Ｅ^１は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたはベンジルを表し、
Ｘは、クロリド、ブロミド、イオダイド、メシラート、トリフラートもしくはトシラートなどの脱離基を表す）
とカップリングさせて式（ＩＶ）

【化208】

の化合物（式中、Ｅ^１、Ｌ、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは上記に定義のとおりである）
にし、このとき、Ｅ^１が（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたはベンジルを表す場合は、このエステルラジカルを一般的な方法を用いて切り離し、
（ＩＩＩ）のＥ^１が水素を表す場合と同様に、式（Ｉ）

【化209】

の本発明によるカルボン酸（式中、Ｌ、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは上記に定義のとおりである）
が保存されるようにするか、
あるいは
［Ｂ］式（Ｖ）

【化210】

の化合物（式中、
Ｅ^１は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたはベンジルを表し、
Ｌ^Ａは、項目１〜４に記載のＬの意味に従うが、該アルキル鎖長はＣＨ_２単位１つ分短い）
で、適切な還元剤の存在下で処理することによって式（ＶＩ）

【化211】

の化合物（式中、Ｅ^１、Ｌ^Ａ、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは上記に定義のとおりである）
にし、このとき、Ｅ^１が（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたはベンジルを表す場合は、このエステルラジカルを一般的な方法を用いて切り離し、（Ｖ）のＥ^１が水素を表す場合と同様に、式（Ｉ−Ｂ）

【化212】

の本発明に適合するカルボン酸（式中、Ｌ^Ａ、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは上記に定義のとおりである）
が保存されるようにするか、
のいずれかを行ない、
得られた該式（Ｉ）および（Ｉ−Ｂ）の化合物は、必要に応じて、そのエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーに分離され得る、および／または適切な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）塩基もしくは酸を用いてその溶媒和物、塩および／または該塩の溶媒和物に変換され得ること
を特徴とする、項目１〜４に記載の式（Ｉ）の化合物を製造するための方法。
（項目６）
疾患の処置および／または予防のための項目１〜４に記載の化合物。
（項目７）
がんおよび腫瘍疾患を処置および／または予防するための手順における使用のための項目１〜４のうちの１項に記載の化合物。
（項目８）
がんおよび腫瘍疾患を処置および／または予防するための薬物の作製のための項目１〜４のうちの１項に記載の化合物の使用。
（項目９）
項目１〜４のうちの１項に記載の化合物を、１種類以上の不活性な無毒性の薬学的に適し得る賦形剤との組合せで含む薬物。
（項目１０）
項目１〜４のうちの１項に記載の化合物を１種類以上の物質との組合せで含む薬物。
（項目１１）
がんおよび腫瘍疾患の処置および／または予防のための項目９または１０に記載のとおりの薬物。
（項目１２）
有効量の少なくとも１種類の、項目１〜４のうちの１項に記載の化合物または項目９〜１１のうちの１項に記載の薬物を使用する、ヒトまたは動物のがんおよび腫瘍疾患の処置および／または予防のための方法。

【発明を実施するための形態】

【0017】

本発明の目的は、一般式（I）

【0018】

【化3】

【0019】

の化合物、（式中、
Ｌは、直鎖（Ｃ_１〜Ｃ_１２）−アルカンジイルを表し、これはメチルで４回まで置換されていてもよく、（ａ）２個の炭素原子が、互いに１，２−、１，３−または１，４−の関係で結合されていてもよく、必要であれば、それらの間に存在する炭素原子を含めて、（Ｃ_３〜Ｃ_６）−シクロアルキル環またはフェニル環を形成しているものでもよく、あるいは（ｂ）互いに隣接していない３つまでのＣＨ_２基がＯに代えて置換されていてもよく、
Ｒ^１は、水素またはメチルを表し、
Ｒ^２は、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、１−ヒドロキシエチル、フェニル、ベンジル、４−ヒドロキシベンジル、１−フェニルエチル、ジフェニルメチル、１Ｈ−イミダゾール−４−イルメチルまたは１Ｈ−インドール−３−イルメチルを表すか、
あるいは
Ｒ^１とＲ^２は、これらがともに結合している炭素原子と一緒に、式

【0020】

【化4】

【0021】

の２−フェニルシクロプロパン−１，１−ジイル基（式中、＃は、その分子の他の部分との結合点に印をつけたものである）
を形成しており、
Ｔは、式−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＲ^３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ^４Ｒ^５、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ−Ｒ^６または−ＣＨ_２−Ｏ−Ｒ^７を有する基を表し、ここで、
Ｒ^３は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルまたは（Ｃ_３〜Ｃ_１０）−シクロアルキルを表し、該（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルはフェニル、ナフチルまたは（Ｃ_３〜Ｃ_１０）−シクロアルキルで置換されていてもよく、
Ｒ^４は、水素または（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルを表し、
Ｒ^５は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルまたは（Ｃ_３〜Ｃ_１０）−シクロアルキルを表し、該（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルはフェニルで置換されていてもよいか、
あるいは
Ｒ^４とＲ^５は、互いに結合し、これらが結合している窒素原子と一緒に５〜７員の飽和アザ複素環式化合物を形成しており（該複素環式化合物は、＞Ｎ−Ｈ、＞Ｎ−ＣＨ_３または−Ｏ−などのさらなる環へテロ原子を含んでいてもよい）；上記窒素原子に対して１，３−または１，４−のいずれかの位置に存在し、
Ｒ^６は、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルカルボニル、フェニルまたはベンゾイルを表し、
Ｒ^７は、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルを表し、これはフェニルで置換されていてもよく、該フェニルも（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルコキシカルボニルまたはカルボキシルで置換されていてもよい）
およびその塩、溶媒和物ならびに該塩の溶媒和物である。

【0022】

本発明の化合物は、式（Ｉ）の化合物およびその塩、溶媒和物ならびに該塩の溶媒和物式（Ｉ）を包含する、以下に挙げる式の化合物、およびその塩、溶媒和物ならびに該塩の溶媒和物、また、以下において作業実施例として紹介する、式（Ｉ）を包含する化合物およびその塩、溶媒和物ならびに該塩の溶媒和物である（以下に挙げる化合物は、既に塩、溶媒和物および該塩の溶媒和物でないものと想定している）。

【0023】

その構造によっては、本発明の化合物は、異なる立体異性体形態で、すなわち、立体配置異性体の形態で、あるいは適切な場合は、立体配座異性体（エナンチオマーおよび／またはジアステレオマー（アトロプ異性体を含む））の形態で存在し得る。したがって、本発明は、エナンチオマーおよびジアステレオマーならびにそのそれぞれの複合物を包含する。立体異性体的に均一な成分は、通常の様式で、かかるエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーの複合物から抽出され得る；好ましくは、これは、クロマトグラフィー法、特に、アキラル相またはキラル相でのＨＰＬＣクロマトグラフィーを用いて行なわれる。

【0024】

本発明の化合物が互変異性体形態で存在する場合、本発明は、あらゆる互変異性体形態を包含する。

【0025】

本発明との関連において好ましい塩は、本発明の化合物の生理学的に無害の塩である。また、薬学的用途に適していない塩も、これらが、本発明の化合物の単離または精製するために使用できるため、包含される。

【0026】

本発明の化合物の生理学的に無害の塩としては、鉱酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩が挙げられる。

【0027】

また、本発明の化合物の生理学的に無害の塩としては、慣用的な塩基の塩、例えば好ましくは、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウムおよびカリウムの塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウムおよびマグネシウムの塩）、ならびにアンモニアまたは１〜１６個のＣ原子を有する有機アミン、例えば好ましくは、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリスエタノールアミン、ジメチルアミノエタノール、ジエチルアミノエタノール、プロカイン、ジシクロヘキシルアミン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン、アルギニン、リシンおよび１，２−エチレンジアミンから誘導されるアンモニウム塩も挙げられる。

【0028】

本発明との関連において、溶媒分子との配位によって固体状態または液体状態のいずれかの複合体を形成する、本発明の化合物のそのような形態を溶媒和物と称する。水和物は、上記配位が水と行なわれる溶媒和物の特別な一形態である。本発明との関連において、水和物が溶媒和物として好ましい。

【0029】

また、さらに、本発明は、本発明の化合物のプロドラッグも包含する。用語「プロドラッグ」は、本明細書において、生物学的に活性であっても不活性であってもよいが、体内に存在している期間中に本発明の化合物に変換される（例えば、代謝により、または加水分解によって）化合物をいう。

【0030】

本発明との関連において、置換基は、特に指定していない限り、以下に定義するとおりである。

【0031】

（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルおよび（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルは、本明細書において、それぞれ、１〜６および１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝状アルキルラジカルを表す。１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝状アルキルラジカルが本明細書において好ましい。一例としておよび優先的には、以下のものが挙げられる：メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、２−ペンチル、３−ペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、２−ヘキシルおよび３−ヘキシル。

【0032】

（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルカルボニルおよび（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルカルボニルは、本発明との関連において、カルボニル基［−Ｃ（＝Ｏ）−］を介して結合される、それぞれ、１〜６および１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝状アルキルラジカルを表す。上記アルキルラジカルに１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝状アルキルカルボニル基が本明細書において好ましい。一例としておよび優先的には、以下のものが挙げられる：アセチル、プロピオニル、ｎ−ブチリル、イソ−ブチリル、ｎ−ペンタノイル、ピバロイル、ｎ−ヘキサノイルおよびｎ−ヘプタノイル。

【0033】

（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルコキシおよび（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルコキシは、本発明との関連において、それぞれ、１〜６および１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝状アルコキシラジカルを表す。１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝状アルコキシラジカルが本明細書において好ましい。一例としておよび優先的には、以下のものが挙げられる：メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペントキシおよびｎ−ヘキソキシ。

【0034】

（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルコキシカルボニルおよび（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルコキシカルボニルは、本発明との関連において、酸素原子を介してカルボニル基［−Ｃ（＝Ｏ）−］によって結合される、それぞれ、１〜６および１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝状アルコキシラジカルを表す。上記アルコキシラジカルに１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝状アルコキシカルボニル基が本明細書において好ましい。一例としておよび優先的には、以下のものが挙げられる：メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｎ−プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ｎ−ブトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、ｎ−ペントキシカルボニルおよびｎ−ヘキソキシカルボニル。

【0035】

（Ｃ_１〜Ｃ_１２）−アルカンジイル、（Ｃ_１〜Ｃ_８）−アルカンジイルおよび（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルカンジイルは、本明細書において、それぞれ、１〜１２、１〜８および１〜６個の炭素原子を有する直鎖α，ω−二価アルキルラジカルを表す。１〜８、特に１〜６個の炭素原子を有する直鎖アルカンジイル基が本明細書において好ましい。一例としておよび優先的には、以下のものが挙げられる：メチレン、エタン−１，２−ジイル（１，２−エチレン）、プロパン−１，３−ジイル（１，３−プロピレン）、ブタン−１，４−ジイル（１，４−ブチレン）、ペンタン−１，５−ジイル（１，５−ペンチレン）、ヘキサン−１，６−ジイル（１，６−ヘキシレン）、ヘプタン−１，７−ジイル（１，７−ヘキシレン）、オクタン−１，８−ジイル（１，８−オクチレン）、ノナン−１，９−ジイル（１，９−ノニレン）、デカン−１，１０−ジイル（１，１０−デシレン）、ウンデカン−１，１１−ジイル（１，１１−ウンデシレン）およびドデカン−１，１２−ジイル（１，１２−ドデシレン）。

【0036】

（Ｃ_３〜Ｃ_６）−シクロアルキルは、本発明との関連において、３〜６個の炭素原子を有する単環式の飽和シクロアルキル基を表す。一例としておよび優先的には、以下のものが挙げられる：シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシル。

【0037】

（Ｃ_３〜Ｃ_１０）−シクロアルキルは、本発明との関連において、３〜１０個の炭素原子を有する単環式または必要な場合は二環式もしくは三環式の飽和シクロアルキル基を表す。一例としておよび優先的には、以下のものが挙げられる：シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシル、ヘキサヒドロインダニル、デカリニル、ビシクロ［２．１．１］ヘキシル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、ビシクロ［３．２．１］オクチル、ビシクロ［２．２．２］オクチル、ビシクロ［３．２．２］ノニル、ビシクロ［３．３．１］ノニル、ビシクロ［３．３．２］デシル、ビシクロ［４．３．１］デシルおよびアダマンチル。

【0038】

本発明との関連において、５〜７員のアザ複素環は全部で５〜７個の環原子を有する単環式の飽和複素環を表し、該複素環は、１個の窒素環原子を含み、該窒素環原子で結合されており、さらに、上記窒素環原子に対して１，３−位または必要な場合は１，４−位に存在する以下の＞Ｎ−Ｈ、＞Ｎ−ＣＨ_３または−Ｏ−からの別の環へテロ原子を含有していてもよい。一例としておよび優先的には、以下のものが挙げられる：ピロリジニル、１，３−オキサゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、Ｎ’−メチルピペラジニルおよびモルホリニル。

【0039】

本発明との関連において、複数回存在しているラジカルはすべて、互いに独立した意味を有する。本発明の化合物のラジカルが置換型である場合、該ラジカルは、特に指定していない限り、１回置換されていても複数回置換されていてもよい。１つもしくは２つの同一の置換基または異なる置換基での置換が好ましい。１つの置換基での置換が特に好ましい。

【0040】

本発明との関連において、式（Ｉ）の化合物であって、
Ｌが、直鎖（Ｃ_１〜Ｃ_８）−アルカンジイルを表し、そこでは、（ａ）２個の炭素原子が互いに１，３−または１，４−の関係で連結され、両原子間に存在する１個または２個の炭素原子を含めてフェニル環を形成しているか、あるいは（ｂ）互いに隣接していない２つまでのＣＨ_２基が−Ｏ−に代えて置換されていてもよく、
Ｒ^１が、水素を表し、
Ｒ^２が、ベンジル、４−ヒドロキシベンジル、１−フェニルエチルまたは１Ｈ−インドール−３−イルメチルを表すか、
あるいは
Ｒ^１とＲ^２は、これらがともに結合している炭素原子と一緒に、式

【0041】

【化5】

【0042】

の２−フェニルシクロプロパン−１，１−ジイル基（式中、＃は、その分子の他の部分との結合点の印をつけたものである）
を形成しており、
Ｔが、式−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＲ^３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ^４Ｒ^５、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ−Ｒ^６または−ＣＨ_２−Ｏ−Ｒ^７を有する基を表し、ここで、
Ｒ^３は、水素または（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルを表し、これはフェニル、ナフチルまたは（Ｃ_３〜Ｃ_１０）−シクロアルキルで置換されていてもよく、
Ｒ^４は、水素またはメチルを表し、
Ｒ^５は、水素または（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルを表し、これはフェニルで置換されていてもよいか、
あるいは
Ｒ^４とＲ^５は互いに結合され、これらが結合している窒素原子と一緒にピペリジン環またはモルホリン環を形成しており、
Ｒ^６は、（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルカルボニルまたはベンゾイルを表し、
Ｒ^７は、（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたはベンジルを表し、これはそのフェニル基において（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルコキシカルボニルまたはカルボキシルで置換されていてもよい、
化合物、およびその塩、溶媒和物ならびに該塩の溶媒和物に対して優先的に選択される。

【0043】

本発明との関連において、式（Ｉ）の化合物であって、
Ｌが、直鎖（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルカンジイルを表し、
Ｒ^１が、水素を表し、
Ｒ^２が、ベンジル、１−フェニルエチルまたは１Ｈ−インドール−３−イルメチルを表すか、
あるいは
Ｒ^１とＲ^２は、これらがともに結合している炭素原子と一緒に、式

【0044】

【化6】

【0045】

の（１Ｓ，２Ｒ）−２−フェニルシクロプロパン−１，１−ジイル基（式中、
＃１は、隣接している窒素原子との結合点に印をつけたものであり、
＃２は、Ｔ基の結合点に印をつけたものである）
を形成しており、
Ｔが、式−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＲ^３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ^４Ｒ^５、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ−Ｒ^６または−ＣＨ_２−Ｏ−Ｒ^７を有する基を表し、ここで、
Ｒ^３は、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ベンジルまたはアダマンチルメチルを表し、
Ｒ^４は、水素またはメチルを表し、
Ｒ^５は、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピルまたはベンジルを表し、
Ｒ^６は、ベンゾイルを表し、
Ｒ^７は、ベンジルを表し、これは、そのフェニル基においてメトキシカルボニルまたはカルボキシルで置換されていてもよい、
化合物、およびその塩、溶媒和物ならびに該塩の溶媒和物も特に好ましい。

【0046】

本発明との関連において、式（Ｉ−Ａ）

【0047】

【化7】

【0048】

の化合物（式中、Ｌ、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは、上記に定義のとおりであり、該ラジカルＲ^１およびＲ^２を担持しているＣ^Ｘ−炭素原子は、図示した立体配置を有する）
およびその塩、溶媒和物ならびに該塩の溶媒和物も特に重要である。

【0049】

また、本発明との関連において、
Ｌが、プロパン−１，３−ジイルを表す、
式（Ｉ）および（Ｉ−Ａ）の化合物、およびその塩、溶媒和物ならびに該塩の溶媒和物も特に重要である。

【0050】

示したそれぞれのラジカルの組合せとは独立して、それぞれのラジカルまたは好ましいラジカルの組合せで示した具体的なラジカルの定義はまた、他のラジカルの組合せの定義でも置き換えられる。特に、上記に示した好ましい範囲のうちの２つ以上が優先される。

【0051】

また、本発明は、
式（ＩＩ）

【0052】

【化8】

【0053】

の化合物（式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは上記に定義のとおりである）
を、不活性溶媒中で、
［Ａ］塩基誘導性アルキル化によって、
式（ＩＩＩ）

【0054】

【化9】

【0055】

の化合物（式中、Ｌは、上記に定義のとおりであり、
Ｅ^１は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたはベンジルを表し、
Ｘは、クロリド、ブロミド、イオダイド、メシラート、トリフラートもしくはトシラートなどの脱離基を表す）
とカップリングさせて式（ＩＶ）

【0056】

【化10】

【0057】

の化合物（式中、Ｅ^１、Ｌ、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは上記に定義のとおりである）
にし、このとき、Ｅ^１が（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたはベンジルを表す場合は、このエステルラジカルを一般的な方法を用いて切り離し、
（ＩＩＩ）のＥ^１が水素を表す場合と同様に、本発明による式（Ｉ）

【0058】

【化11】

【0059】

のカルボン酸（式中、Ｌ、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは上記に定義のとおりである）
が保存されるようにするか、
あるいは
［Ｂ］適切な還元剤の存在下、式（Ｖ）

【0060】

【化12】

【0061】

の化合物（式中、
Ｅ^１は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたはベンジルを表し、
Ｌ^Ａは、上記でＬについて定義のとおりであるが、そのアルキル鎖長はＣＨ_２単位１つ分短い）
での処理により式（ＶＩ）

【0062】

【化13】

【0063】

の化合物（式中、Ｅ^１、Ｌ^Ａ、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは上記に定義のとおりである）
にし、このとき、Ｅ^１が（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたはベンジルを表す場合は、このエステルラジカルを一般的な方法を用いて切り離し、（Ｖ）のＥ^１が水素を表す場合と同様に、式（Ｉ−Ｂ）

【0064】

【化14】

【0065】

の本発明に適合するカルボン酸（式中、Ｌ^Ａ、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは上記に定義のとおりである）
が保存されるようにするか、
のいずれかを行ない、
得られた式（Ｉ）および（Ｉ−Ｂ）の化合物は、必要に応じて、そのエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーに分離され得る、および／または適切な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）塩基もしくは酸を用いてその溶媒和物、塩および／または該塩の溶媒和物に変換され得ること
を特徴とする、本発明の式（I）の化合物を調製するプロセスを提供する。

【0066】

カップリング反応（ＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）に好適な不活性溶媒は、例えば、エーテル（ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタンもしくはビス−（２−メトキシエチル）−エーテルなど）、炭化水素（ベンゼン、トルエン、キシレン、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサンもしくは鉱油留分など）、または双極性非プロトン性溶媒（アセトン、メチルエチルケトン、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルプロピレン尿素（ＤＭＰＵ）、Ｎ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）もしくはピリジンなど）である。また、これらの溶媒の混合物を使用することも可能である。アセトンまたはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドが好ましい。

【0067】

アルキル化反応に好適な塩基は、特に、アルカリ水酸化物（リチウム、ナトリウムもしくはカリウムの水酸化物など）、アルカリ金属もしくはアルカリ土類金属の炭酸塩（リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウムもしくはセシウムの炭酸塩など）または通常の有機アミン（トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ピリジンもしくは４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンなど）である。カリウムまたはセシウムの炭酸塩が好ましい。必要であれば、アルキル化触媒（リチウムブロミドもしくはリチウムイオダイド、ナトリウムイオダイドもしくはカリウムイオダイド、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムブロミドもしくはテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムイオダイドまたはベンジルトリエチルアンモニウムブロミドなど）を添加することが好都合である。

【0068】

上記反応（ＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）は、通常、−２０℃〜＋１００℃、好ましくは０℃〜＋５０℃の温度範囲で行なわれる。上記反応は、大気圧で行なっても、高圧でも減圧でも（例えば、０．５〜５バール）行なってもよい；通常、上記反応は大気圧で行なわれる。

【0069】

反応（ＩＩ）＋（Ｖ）→（ＶＩ）は、通常、還元アミノ化に標準的であり、かつその反応条件下で不活性な溶媒中で、必要であれば、触媒としての酸および／または脱水剤の添加により行なわれる。かかる溶媒は、例えば、アルコール（メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノールもしくはｔｅｒｔ−ブタノールなど）、エーテル（テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタンもしくはビス−（２−メトキシエチル）−エーテルなど）、または他の溶媒（ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドもしくは水など）である。また、これらの溶媒の混合物を使用することも可能である。触媒としての酢酸または希塩酸の添加の下では、１，４−ジオキサン／水混合物が優先的に使用される。

【0070】

この反応に好適な還元剤は、特に、水素化ホウ素複合体（水素化ホウ素ナトリウム、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムまたはテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムボロヒドリドなど）である。シアノ水素化ホウ素ナトリウムが好ましい。

【0071】

上記反応（ＩＩ）＋（Ｖ）→（ＶＩ）は、通常、０℃〜＋１２０℃の温度範囲、好ましくは＋５０℃〜＋１００℃の範囲で行なわれる。上記反応は、大気圧で行なっても、高圧でも減圧でも（例えば、０．５〜５バール）行なってもよい；通常、上記反応は大気圧で行なわれる。

【0072】

ステップ（ＩＶ）→（Ｉ）および（ＶＩ）→（Ｉ−Ｂ）におけるエステルラジカルＥ^１［Ｅ^１＝（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたはベンジル］の切断は、標準的な手順を用いて、エステルを酸または塩基で、不活性溶媒中で処理することにより、および生成するカルボン酸塩を酸で処理して遊離カルボン酸を生成させることにより（後者の場合）行なわれる。ｔｅｒｔ−ブチルエステルの場合、上記切断は酸によって行なわれる。ベンジルエステルの場合、上記切断は、適切なパラジウム触媒（パラジウム活性炭など）の存在下での水素化分解を用いてなされ得る。

【0073】

反応（ＩＩＩ）および（Ｖ）で生成させるエステルラジカルＥ^１は、その切断条件が、反応（ＩＶ）および（ＶＩ）での対応するＴ基のものと適合するように選択される。

【0074】

エステル加水分解に好適な塩基は標準的な無機塩基である。このようなものとしては、特に、アルカリ金属もしくはアルカリ土類金属の水酸化物（水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムもしくは水酸化バリウムなど）、またはアルカリ金属およびアルカリ土類金属の炭酸塩（炭酸ナトリウム、炭酸カリウムもしくは炭酸カルシウムなど）が挙げられる。水酸化リチウム、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムが好ましい。

【0075】

エステルの切断に好適な酸は、一般に、硫酸、塩化水素／塩酸、臭化水素／臭化水素酸、リン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸もしくはトリフルオロメタンスルホン酸またはその混合物であり、必要な場合は、水の添加を伴う。ｔｅｒｔ−ブチルエステルの場合は塩化水素またはトリフルオロ酢酸が、メチルエステルの場合は塩酸が好ましい。

【0076】

このような反応に好適な不活性溶媒は、水またはエステル切断に使用される標準的な有機溶媒である。好ましくは、このようなものとしては、低級アルコール（メタノール、エタノール、ｎ−プロパノールもしくはイソプロパノールなど）、エーテル（ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサンもしくは１，２−ジメトキシエタンなど）、または他の溶媒（ジクロロメタン、アセトン、メチルエチルケトン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドもしくはジメチルスルホキシドなど）が挙げられる。また、これらの溶媒の混合物を使用することも可能である。塩基性エステル加水分解の場合、水と１，４−ジオキサン、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノールおよび／またはジメチルホルムアミドとの混合物が好ましい。トリフルオロ酢酸を用いた反応の場合は、ジクロロメタンが好ましく、塩化水素を用いた反応の場合は、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、１，４−ジオキサンまたは水が好ましい。

【0077】

エステルの切断は、一般的に、−２０℃〜＋１００℃、好ましくは０℃〜＋５０℃の温度範囲で行なわれる。

【0078】

式（ＩＩ）の化合物は、例えば、標準的なペプチド化学手順を使用し、式（ＶＩＩ）

【0079】

【化15】

【0080】

の化合物（式中、
ＰＧは、アミノ保護基（（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルまたはベンジルオキシカルボニルなど）を表す）
を、不活性溶媒中で、（ＶＩＩ）のカルボキシル官能部の活性化の下、
［Ｃ］まず、式（ＶＩＩＩ）

【0081】

【化16】

【0082】

の化合物（式中、
Ｅ^２は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたはベンジルを表す）
またはこの化合物の塩とカップリングさせて式（ＩＸ）

【0083】

【化17】

【0084】

の化合物（式中、Ｅ^２およびＰＧは上記に定義のとおりである）
とし、
このとき、Ｅ^２が（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたはベンジルを表す場合は、該エステルラジカルを標準的な手順を用いて切除し、次いで、得られた式（Ｘ）

【0085】

【化18】

【0086】

のカルボン酸（式中、ＰＧは上記に定義のとおり）
を、不活性溶媒中で、該カルボキシル官能部を活性化させることによって、式（ＸＩ）

【0087】

【化19】

【0088】

の化合物（式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは上記に定義のとおり）
またはこの化合物の塩とカップリングさせて式（ＸＩＩ）

【0089】

【化20】

【0090】

の化合物（式中、ＰＧ、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは定義のとおり）
とするか、
あるいは
［Ｄ］式（ＸＩＩＩ）

【0091】

【化21】

【0092】

の化合物（式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは上記に定義のとおり）
またはこの化合物の塩とカップリングさせて式（ＸＩＩ）

【0093】

【化22】

【0094】

の化合物（式中、ＰＧ、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは上記に定義のとおり）
とし、次いで、式（ＸＩＩ）の化合物を通常の様式で脱保護して式（ＩＩ）

【0095】

【化23】

【0096】

の化合物（式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは上記に定義のとおりである）
とするか
のいずれかにより作製され得る。

【0097】

上記のカップリング反応（すなわち、それぞれ、アミン成分およびカルボン酸成分からのアミドの形成）は、標準的なペプチド化学手順を用いて行なわれる［例えば、Ｍ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ，１９９３；Ｍ．ＢｏｄａｎｓｚｋｙおよびＡ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，Ｔｈｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ，１９８４；Ｈ．Ｄ．ＪａｋｕｂｋｅおよびＨ．Ｊｅｓｃｈｋｅｉｔ，Ａｍｉｎｏｓａｅｕｒｅｎ，Ｐｅｐｔｉｄｅ，Ｐｒｏｔｅｉｎｅ，Ｖｅｒｌａｇ Ｃｈｅｍｉｅ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，１９８２を参照のこと］。

【0098】

カップリング反応（ＶＩＩ）＋（ＶＩＩＩ）→（ＩＸ）、（Ｘ）＋（ＸＩ）→（ＸＩＩ）および（ＶＩＩ）＋（ＸＩＩＩ）→（ＸＩＩ）のための不活性溶媒は、例えば、エーテル（ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタンもしくはビス−（２−メトキシエチル）−エーテルなど）、炭化水素（ベンゼン、トルエン、キシレン、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサンもしくは鉱油留分など）、ハロゲン化炭化水素（ジクロロメタン、トリクロロメタン、テトラクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、トリクロロエチレンもしくはクロロベンゼンなど）、または双極性非プロトン性溶媒（アセトン、メチルエチルケトン、アセトニトリル、酢酸エチル、ピリジン、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルプロピレン尿素（ＤＭＰＵ）もしくはＮ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）など）である。また、これらの溶媒の混合物を使用することも可能である。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドが好ましい。

【0099】

このようなカップリングに好適な活性化剤／縮合剤は、例えば、カルボジイミド（Ｎ，Ｎ’−ジエチル−、Ｎ，Ｎ’−ジプロピル−、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）もしくはＮ−（３−ジメチルアミノイソプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）など）、ホスゲン誘導体（Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）もしくはクロロギ酸イソブチルなど）、１，２−オキサゾリウム化合物（２−エチル−５−フェニル−１，２−オキサゾリウム−３−スルフェートもしくは２−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルイソオキサゾリウム−ペルクロレートなど）、アシルアミノ−化合物（２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン、α−クロレナミン（α−ｃｈｌｏｒｅｎａｍｉｎｅ）（１−クロロ−２−メチル−１−ジメチルアミノ−１−プロペンなど）、ホスホル−化合物（プロパンホスホン酸無水物、シアノホスホン酸ジエチルエステル、ビス−（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）−ホスホリルクロリド、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム−ヘキサフルオロホスフェートもしくはベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス（ピロリジノ）ホスホニウム−ヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）など）またはウロニウム−化合物（Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、２−（２−オキソ−１−（２Ｈ）−ピリジル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム−テトラフルオロボレート（ＴＰＴＵ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）もしくはＯ−（１Ｈ−６−クロロベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム−テトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ）など）であり、必要であれば、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）もしくはＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）、あるいは塩基として、アルカリカーボネート（例えば、炭酸ナトリウムもしくは炭酸カリウム）または第三アミン（トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ピリジンもしくは４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンなど）の補助と併用する。

【0100】

本発明との関連において、Ｎ−（３−ジメチルアミノイソプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド−塩酸塩（ＥＤＣ）と１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンとの併用、またはＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）とＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンとの併用が、このようなカップリング反応に好ましい活性化剤／縮合剤である。

【0101】

カップリング反応（ＶＩＩ）＋（ＶＩＩＩ）→（ＩＸ）、（Ｘ）＋（ＸＩ）→（ＸＩＩ）および（ＶＩＩ）＋（ＸＩＩＩ）→（ＸＩＩ）は、一般的に、−２０℃〜＋６０℃、好ましくは０℃〜＋４０℃の温度範囲で行なわれる。上記反応は、大気圧で行なっても、高圧でも減圧でも（例えば、０．５〜５バール）行なってもよい；通常、反応は大気圧で行なわれる。

【0102】

必要であれば、既に存在している官能基（特にアミノ基、ヒドロキシル基およびカルボキシル基）を、本明細書に記載のステップにおいて、機能し、または必要であれば、一時的に保護された形態で存在させてもよい。かかる保護基の導入および除去は、ペプチド化学の標準的な方法を用いて行なわれる［例えば、Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９９；Ｍ．ＢｏｄａｎｓｚｋｙおよびＡ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，Ｔｈｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ，１９８４を参照のこと］。保護された基がいくつか存在する場合、これらは、ワンポット反応で同時に遊離させてもよく、別々の反応ステップで遊離させてもよい。

【0103】

好ましいアミノ保護基は、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）または（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル（Ｆｍｏｃ）であり；ヒドロキシルまたはカルボキシル官能部には、ｔｅｒｔ−ブチルまたはベンジルが好ましい保護基である。ｔｅｒｔ−ブチル−またはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基の除去は、典型的には、不活性溶媒（例えば、ジエチルエーテル、１，４−ジオキサン、ジクロロメタンまたは酢酸）中での強酸（塩化水素、臭化水素またはトリフルオロ酢酸など）での処理によって行なわれ：必要な場合は、この反応は、不活性溶媒の添加なしで行なわれ得る。上記保護基がベンジルまたはベンジルオキシカルボニルである場合、これらは、好ましくは、適切なパラジウム触媒（パラジウム活性炭など）の存在下での水素化分解によって除去される。（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル基は、通常、第二級アミン塩基（ジエチルアミンまたはピペリジンなど）を用いて除去される。

【0104】

化合物（ＶＩＩＩ）のエステルラジカルＥ^２［Ｅ^２＝（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたはベンジル］は、その切断条件が、化合物（ＶＩＩ）の具体的な保護基と適合するように選択される。

【0105】

式（ＶＩＩ）の化合物も同様の様式で、まず、式（ＸＩＶ）

【0106】

【化24】

【0107】

のＮ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−バリン（式中、Ｚは、ベンジルオキシカルボニル保護基を表す）
を、縮合剤の補助により、式（ＸＶ）

【0108】

【化25】

【0109】

の化合物（式中、Ｅ^３は（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルを表す）
またはこの化合物の塩にカップリングさせて式（ＸＶＩ）

【0110】

【化26】

【0111】

の化合物（式中、Ｅ^３およびＺは上記に定義のとおりである）
にし、上記Ｚ−保護基を水素化分解で除去した後、これを、縮合剤の存在下で、式（ＸＶＩＩ）

【0112】

【化27】

【0113】

のＮ−保護Ｎ−メチル−Ｌ−バリン（式中、
ＰＧは、アミノ保護基（（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルまたはベンジルオキシカルボニルなど）を表す）
とカップリングさせて式（ＸＶＩＩＩ）

【0114】

【化28】

【0115】

の化合物（式中、Ｅ^３およびＰＧは上記に定義のとおりである）
にし、最後に、標準的な手順を用いて、（ＸＶＩＩＩ）のエステル基−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｅ^３を交換反応によって遊離カルボン酸（ＶＩＩ）に変換させることにより、作製され得る。

【0116】

カップリング反応（ＸＩＶ）＋（ＸＶ）→（ＸＶＩ）およびＺ−脱保護（ＸＶＩ）＋（ＸＶＩＩ）→（ＸＶＩＩＩ）は、ステップ［Ｃ］および［Ｄ］に記載のものと同様の反応条件下で行なわれる。

【0117】

ステップ（ＸＶＩＩＩ）→（ＶＩＩ）におけるエステル基−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｅ^３の加水分解は、エステルラジカルＥ^１についてステップ［Ａ］および［Ｂ］に記載したものと同様の様式で行なわれる。化合物（ＸＶ）のアルキル基Ｅ^３は、本明細書において、その切断条件が、化合物（ＸＶＩＩ）の選択された保護基ＰＧと適合するように選択される。

【0118】

式（ＸＩＩＩ）の化合物自体は、上記の化合物（ＸＩ）と化合物（ＸＩＸ）

【0119】

【化29】

【0120】

（式中、Ｂｏｃは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基を表す）
とのカップリングによって式（ＸＸ）

【0121】

【化30】

【0122】

の化合物（式中、Ｂｏｃ、Ｒ^１、Ｒ^２およびＴは上記に定義のとおりである）
にし、その後、Ｂｏｃ保護基の切断を利用可能にすることによって、入手可能である。

【0123】

カップリング反応（ＸＩ）＋（ＸＩＸ）→（ＸＸ）は、手順［Ｃ］および［Ｄ］の上記カップリングステップに関して記載したものと類似の条件下で行なわれる。

【0124】

式（ＩＩＩ）、（Ｖ）、（ＶＩＩＩ）、（ＸＩ）、（ＸＩＶ）、（ＸＶ）、（ＸＶＩＩ）および（ＸＩＸ）の化合物は、それぞれ、適切な場合は、市販のキラル形態もしくはジアステレオマー形態であるか、または文献にそのようなものとして記載されたものであるか、または当業者には標準的な様式で、文献に公開された方法と類似して作製され得るものである。数多くの包括的教示（例えば、出発化合物の作製のための文献情報源）が、出発化合物および中間体の作製に関するセクションの実験の部において見出すことができる。

【0125】

該当する異性体的に純粋な出発化合物が入手可能でない場合は、本発明による化合物を対応するエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーに切断することを、（ＩＩ）、（ＩＶ）、（ＶＩ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、（ＸＩＩＩ）および（ＸＸ）の化合物段階において行なうことができ、次いで、該化合物を、さらに、記載するような分離された形態で後続の反応工程において使用することができる。立体異性体の切断は、当業者によって標準的な方法を用いて行なわれ得る。アキラルならびにキラル分離相でのクロマトグラフィー法の使用が好ましく；中間体として遊離カルボキシル基の場合は、切断は、キラル塩基の補助によりジアステレオマー塩を介して行なわれ得る。

【0126】

本発明の化合物の作製は、以下のスキームを用いて視覚化することができる：
スキーム１

【0127】

【化31】

【0128】

スキーム２

【0129】

【化32】

【0130】

スキーム３

【0131】

【化33】

【0132】

スキーム４

【0133】

【化34】

【0134】

本発明の化合物は有益な薬理学的特性を有するものであり、ヒトおよび動物の疾患の処置および予防のために使用され得る。

【0135】

よく知られた他のアウリスタチン誘導体と比較すると、本発明の化合物に含まれているＮ末端カルボキシアルキル基［式（Ｉ）のＨＯＯＣ-Ｌ-］は、抗体タンパク質または他のリガンドとの潜在的結合のためのリンカーとしての機能を果たすだけでなく、驚くべきことにこの化合物に好都合な特性を有する構成的構造要素であることも示されている。

【0136】

例えば、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）と比較すると、本発明の化合物は、明らかにより強力な細胞傷害活性を示すが、同時に細胞内輸送体タンパク質の基質として作用する可能性が低いことが示されるものでもある。

【0137】

したがって、本発明の化合物は、特に、ヒトおよび哺乳動物の過剰増殖性疾患全般の処置に適している。該化合物は、一方において細胞増殖および細胞分裂を阻害、阻止、減少または低減できるが、アポトーシスも増大させるものである。

【0138】

本発明の化合物で処置され得る過剰増殖性疾患は、特に、がん性障害および腫瘍障害である。本発明との関連において、このようなものとしては、とりわけ：乳癌および乳腺腫瘍（腺管型および小葉型、また上皮内）、呼吸道の腫瘍（小細胞癌および非小細胞癌、気管支癌）、脳腫瘍（例えば、脳幹のもの、および視床下部のもの、星状細胞腫、脳室上衣腫、グリア芽腫、グリオーム、髄芽腫、髄膜腫、また、神経外胚葉性腫瘍および松果体部の腫瘍）、消化器官（食道、胃、胆嚢、小腸および大腸、直腸および肛門）の腫瘍、肝臓の腫瘍（肝細胞癌、胆管癌および肝細胞癌胆管癌混合型など）、頭頚部領域の腫瘍（喉頭、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭、唇および口腔、口腔黒色腫）、皮膚の腫瘍（基底細胞腫、棘細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫、悪性黒色腫、非悪性皮膚がん、メルケル細胞癌、肥満細胞腫瘍）、軟部組織の腫瘍（軟部組織肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、線維肉腫、血管肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫および横紋筋肉腫など）、目の腫瘍（眼内黒色腫および網膜芽腫など）、内分泌腺および外分泌腺の腫瘍（例えば、甲状腺および副甲状腺、膵臓ならびに唾液腺、腺癌）、尿路の腫瘍（膀胱、陰茎、腎臓、腎盂および尿管）ならびに生殖器官の腫瘍（女性の子宮内膜、子宮頸部、卵巣、膣、外陰部および子宮の癌ならびに男性の前立腺および精巣の癌）が挙げられる。また、このようなものとしては、充実性形態の、および循環細胞としての血液、リンパ系および脊髄の増殖性疾患（白血病、リンパ腫および骨髄増殖性疾患、例えば、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病およびヘアリーセル白血病、また、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫および中枢神経系のリンパ腫など）も挙げられる。

【0139】

これらの充分に報告されたヒトの疾患は、他の哺乳動物においても、同等の病因で存在し得、その場合も本発明の化合物で処置することができる。

【0140】

本発明の化合物での上記のがんの処置は、充実性腫瘍だけでなく、転移型および循環型の処置も包含する。

【0141】

用語「処置」または「処置する」は、本明細書において慣用的な意味で用いており、疾患または健康異常に対処する、減少、低減させる、または緩和すること、およびがんの場合のように上記疾患によって冒された生活の質を改善することを目的とした患者の援助、ケアおよび管理を示す。

【0142】

したがって、本発明のさらなる要点は、疾患、特に、上記の疾患の処置および／または予防のための、本発明の化合物の適用である。

【0143】

本発明のさらなる要点は、疾患、特に、上記の疾患の処置および／または予防のための、医薬の開発のための、本発明の化合物の適用である。

【0144】

したがって、本発明のさらなる要点は、疾患、特に、上記の疾患の処置および／または予防のためのプロセスのための、該化合物の適用である。

【0145】

本発明のさらなる要点は、少なくとも１種類の本発明の化合物を有用な量で使用しながら、疾患、特に、上記の疾患の処置および／または予防のための工程における本発明の化合物の適用である。

【0146】

本発明の化合物は、単独で使用してもよく、必要な場合は、１種類以上の他の薬理学的に有用な物質とともに使用してもよい（この併用により、望ましくないそして許容され得ない副作用がもたらされない限り）。したがって、本発明のさらなる要点は、特に、上記の疾患の処置および／または予防のための、少なくとも１種類の本発明の化合物および１種類以上の活性物質を含む医薬である。

【0147】

例えば、本発明の化合物は、がんの処置のための既知の抗過剰増殖性物質、細胞増殖抑制性物質または細胞傷害性物質と併用することができる。好適な併用薬剤は、例えば：アルデスロイキン、アレンドロン酸、アルファフェロン、アリトレチノイン、アロプリノール、アロプリム、アロキシ、アルトレタミン、アミノグルテチミド、アミホスチン、アムルビシン、アムサクリン、アナストロゾール、アンズメト（ａｎｚｍｅｔ）、アラネスプ、アルグラビン、三酸化ヒ素、アロマシン、５−アザシチジン、アザチオプリン、ＢＣＧまたはタイスＢＣＧ、ベスタチン、酢酸ベタメタゾン ベタメタゾンリン酸ナトリウム、ベキサロテン、硫酸ブレオマイシン、ブロクスウリジン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カルシトニン、キャンパス、カペシタビン、カルボプラチン、カソデックス、セフェゾン、セルモロイキン、セルビジン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロン酸、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノキソーム（ｄａｕｎｏｘｏｍｅ）、デカドロン、リン酸デカドロン、デレストロゲン、デニロイキンジフチトックス、デポメドロール、デスロレリン、デクスラゾキサン、ジエチルスチルベストロール、ジフルカン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、ドロナビノール、ＤＷ−１６６ＨＣ、エリガード、エリテック、エレンス、エメンド、エピルビシン、エポエチンα、エポジェン、エプタプラチン、エルガミゾール、エストレース、エストラジオール、リン酸エストラムスチンナトリウム、エチニルエストラジオール、エチヨル（ｅｔｈｙｏｌ）、エチドロン酸、エトポホス、エトポシド、ファドロゾール、ファルストン、フィルグラスチム、フィナステリド、フリグラスチム、フロクスウリジン、フルコナゾール、フルダラビン、５−フルオロデオキシウリジンモノホスフェート、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フルオキシメステロン、フルタミド、フォルメスタン、フォステアビン、フォテムスチン、フルベストラント、ガンマガード、ゲムシタビン、ゲムツズマブ、グリベック、グリアデル、ゴセレリン、塩酸グラニセトロン、ヒストレリン、ハイカムチン、ヒドロコルトン、エリトロ−ヒドロキシノニルアデニン、ヒドロキシ尿素、イブリツモマブチウキセタン、イダルビシン、イホスファミド、インターフェロン−α、インターフェロン−α−２、インターフェロン−α−２α、インターフェロン−α−２β、インターフェロン−α−ｎ１、インターフェロン−α−ｎ３、インターフェロン−β、インターフェロン−γ−１α、インターロイキン−２、イントロンＡ、イレッサ、イリノテカン、カイトリル、硫酸レンチナン、レトロゾール、ロイコボリン、ロイプロリド、酢酸ロイプロリド、レバミゾール、レボホリン酸カルシウム塩、レボスロイド、レボキシル、ロムスチン、ロニダミン、マリノール、メクロレタミン、メコバラミン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、メルファラン、メネスト、６−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、メトビックス（ｍｅｔｖｉｘ）、ミルテホシン、ミノサイクリン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、モドレナル、ミオセット、ネダプラチン、ニューラスタ、ニューメガ、ニューポジェン、ニルタミド、ノルバデックス、ＮＳＣ−６３１５７０、ＯＣＴ−４３、オクトレオチド、塩酸オンダンセトロン、オラプレド、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペジアプレド、ペグアスパラガーゼ、ペガシス、ペントスタチン、ピシバニール、塩酸ピロカルピン、ピラルビシン、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、プレドニムスチン、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレマリン、プロカルバジン、プロクリット、ラルチトレキセド、レビフ、レニウム−１８６エチドロネート、リツキシマブ、ロフェロン−Ａ、ロムルチド、サラジェン、サンドスタチン、サルグラモスチム、セムスチン、シゾフィラン、ソブゾキサン、ソル・メドロール、ストレプトゾシン、塩化ストロンチウム−８９、シンスロイド、タモキシフェン、タムスロシン、タソネルミン、タストラクトン、タキソテール、テセロイキン、テモゾロミド、テニポシド、プロピオン酸テストステロン、テストレド、チオグアニン、チオテパ、チロトロピン、チルドロン酸、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレオスルファン（ｔｅｏｓｕｌｆａｎ）、トレチノイン、トレキサル、トリメチルメラミン、トリメトレキサート、酢酸トリプトレリン、パモ酸トリプトレリン、ＵＦＴ、ウリジン、バルルビシン、ベスナリノン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ビルリジン、ジネカルド（ｚｉｎｅｃａｒｄ）、ジノスタチンスチマラマー、ゾフラン；ＡＢＩ−００７、アコルビフェン、アクティミューン、アフィニタク、アミノプテリン、アルゾキシフェン、アソプリスニル、アタメスタン、アトラセンタン、アバスチン、ＢＡＹ ４３−９００６（ソラフェニブ）、ＣＣＩ−７７９、ＣＤＣ−５０１、セレブレックス、セツキシマブ、クリスナトール、酢酸シプロテロン、デシタビン、ＤＮ−１０１、ドキソルビシン−ＭＴＣ、ｄＳＬＩＭ、デュタステリド、エドテカリン、エフロルニチン、エキサテカン、フェンレチニド、ヒスタミン二塩酸塩、ヒストレリンハイドロゲル埋没物、ホルミウム−１６６−ＤＯＴＭＰ、イバンドロン酸、インターフェロンγ、イントロン−ＰＥＧ、イクサベピロン、キーホールリンペットヘモシアニン、Ｌ−６５１５８２、ランレオチド、ラソフォキシフェン、リブラ、ロナファルニブ、ミプロキシフェン、ミノドロネート、ＭＳ−２０９、リポソームＭＴＰ−ＰＥ、ＭＸ−６、ナファレリン、ネモルビシン、ネオバスタット、ノラトレキセド、オブリメルセン、オンコ−ＴＣＳ、オシデム、ポリグルタメート化パクリタキセル、パミドロン酸二ナトリウム、ＰＮ−４０１、ＱＳ−２１、クアゼパム、Ｒ−１５４９、ラロキシフェン、ランピルナーゼ、１３−シス−レチノイン酸、サトラプラチン、セオカルシトール、Ｔ−１３８０６７、タルセバ、タキソプレキシン、チモシン−α−１、チアゾフリン、チピファルニブ、チラパザミン、ＴＬＫ−２８６、トレミフェン、トランスＭＩＤ−１０７Ｒ、バルスポダール、バプレオチド、バタラニブ、ベルテポルフィン、ビンフルニン、Ｚ−１００、ゾレドロン酸およびこれらの組合せである。

【0148】

好ましい形態では、本発明の化合物は、以下のもののうちの１つであり得る抗過剰増殖剤と併用され得る。しかしながら、この列挙は排他的でない：
アミノグルテチミド、Ｌ−アスパラギナーゼ、アザチオプリン、５−アザシチジン、ブレオマイシン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、コラスパーゼ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ジエチルスチルベストロール、２’，２’−ジフルオロデオキシシチジン、ドセタキセル、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、エピルビシン、エポチロンおよびその誘導体、エリトロ−ヒドロキシノニルアデニン、エチニルエストラジオール、エトポシド、リン酸フルダラビン、５−フルオルデオキシウリジン、５−フルオルデオキシウリジンモノホスフェート、５−フルオロウラシル、フルオキシメステロン、フルタミド、ヘキサメチルメラミン、ヒドロキシ尿素、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、イダルビシン、イホスファミド、インターフェロン、イリノテカン、ロイコボリン、ロムスチン、メクロレタミン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、メルファラン、６−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、パクリタキセル、ペントスタチン、Ｎ−ホスホノアセチルＬ−アルパルテート（ＰＡＬＡ）、プリカマイシン、プレドニゾロン、プレドニゾン、プロカルバジン、ラロキシフェン、セムスチン、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テニポシド、プロピオン酸テストステロン、チオグアニン、チオテパ、トポテカン、トリメチルメラミン、ウリジン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビン。

【0149】

本発明の化合物は、抗体（例えば、アバスチン、リツキサン、エルビタックス、ハーセプチン）などの生物学的治療薬と有望な様式で併用され得る。また、本発明の化合物により、血管新生に対して指向される治療、例えば、アバスチン、アキシチニブ、レセンチン、レゴラフェニブ、ソラフェニブまたはスニチニブなどとの併用でプラスの効果が得られる。プロテアソームの阻害薬およびｍＴＯＲの阻害薬との併用、ならびに抗ホルモンおよびステロイド系代謝酵素阻害薬との併用もまた、その好都合な副作用プロフィールのため特に好適である。

【0150】

一般的に、本発明の化合物を他の細胞増殖抑制剤または細胞傷害剤と併用して使用する場合、以下の目的が追求され得る：
・単独薬物での処置と比べたときの腫瘍の成長の遅滞、腫瘍の大きさの縮小、さらには、腫瘍の完全な消失における有効性の増大；
・単独療法と比べてより少ない投薬量で化学療法剤を施与できる可能性；
・単独薬物投与と比べてより少ない副作用でより快適な治療ができる可能性
・より広範な腫瘍障害を処置できる可能性；
・より高い治療応答速度の達成；
・現在の標準的な治療と比べて患者の生存率の長期化。

【0151】

また、さらに、本発明の化合物は、放射線療法および／または外科的介入とともに使用してもよい。

【0152】

本発明のさらなる要点は、少なくとも１種類の本発明の化合物を、通常、１種類以上の不活性な無毒性の薬学的に適し得る賦形剤とともに含む医薬、および上記に挙げた目的のためのその使用である。

【0153】

本発明の化合物は、全身および／または局所で働き得るものである。これを達成するため、該化合物は、好適な様式で、例えば、経口で、非経口で、肺に、鼻腔に、舌下に、舌に、口腔内も、直腸に、皮膚に、経皮で、経結膜で、または埋没物もしくはステントを介して適用され得る。

【0154】

このような適用方法のために、本発明の化合物は、適用方法に適した形態で施与され得る。

【0155】

経口適用のためには、本発明の化合物は、即時型および／または調節型施薬方法を用いて投与され得、該施薬方法は該化合物を、結晶性形態および／または非晶質化形態および／または可溶性形態、例えば、錠剤（非コート型もしくはコート型、例えば、胃酸に抵抗性であるか、もしくは遅延様式で溶解するか、もしくは溶解せず、したがって、本発明の化合物の放出を制御するコーティングを有するもの）、口内で速やかに溶解する錠剤もしくはフィルム／オブラート、フィルム／凍結乾燥製剤、カプセル剤（例えば、硬質もしくは軟質ゼラチンカプセル剤）、丸剤、顆粒剤、ペレット剤、散剤、乳剤、懸濁剤、エアロゾル剤または液剤で含んでもよい。

【0156】

非経口適用は、吸収工程を回避することにより（例えば、静脈内、動脈内、心臓内もしくは腰椎内）、または吸収を利用することにより（例えば、筋肉内、皮下、皮内、経皮もしくは腹腔内）により行なわれ得る。非経口適用に適した適用形態は、とりわけ、液剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤または滅菌粉末剤の形態の注射調製物および注入調製物である。

【0157】

他の適用方法として、例えば、吸入投薬（粉末剤吸入器、ネブライザ）、点鼻薬、液剤もしくはスプレー剤、舌に、舌下にもしくは口腔内に適用される錠剤、フィルム／オブラートもしくはカプセル剤、坐剤、耳用もしくは目用の調製物、膣カプセル剤、水性懸濁剤（ローション剤、振る必要がある混合物）、親油性懸濁剤、軟膏、クリーム剤、経皮治療系（例えば、硬膏剤）、乳液剤、ペースト剤、フォーム剤、散布粉末剤、埋没物またはステントが使用され得る。

【0158】

経口および非経口適用、特に、経口および静脈内適用が好ましい。

【0159】

本発明の化合物は、上記の適用方法に変換させることができる。これは、不活性で無毒性の薬学的に適し得る賦形剤と混合することにより標準的な様式で行なわれ得る。このような賦形剤は、例えば、キャリア物質（微晶質セルロース、ラクトース、マンニトールなど）、溶媒（液状ポリエチレングリコールなど）、乳化剤および分散剤もしくは湿潤剤（ドデシル硫酸ナトリウム、ポリオキシソルビタンオレエートなど）、結合剤（ポリビニルピロリドンなど）、合成および天然ポリマー（アルブミンなど）、安定剤（例えば、アスコルビン酸などの酸化防止剤）、着色剤（例えば、酸化鉄などの無機顔料）ならびに矯味剤および／または矯臭剤であり得る。

【0160】

一般的に、非経口適用を使用する場合、有効な成績を得るためには、およそ０．００１から１ｍｇ／ｋｇまで、好ましくは、およそ０．０１から０．５ｍｇ／ｋｇ体重までの用量を投与することが好都合であることがわかった。経口適用では、上記用量は約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは、およそ０．０１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、理想的には０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重である。

【0161】

しかしながら、体重、適用方法、活性薬剤に対する個体の挙動、調製物の型および適用が行なわれる期間または間隔に応じて、上記の用量からの逸脱が必要な場合があり得る。一部の場合では、記載の最小用量より少量でも充分であるが、一部の場合では、
記載の最大用量より多くの量が必要とされ得る可能性がある。多くの量の適用が必要とされる場合、この量を、１日を通して数回のより少ない用量に分配することが推奨され得る。

【0162】

以下の実施例に本発明の実例を示す。本発明は、これらの実施例に限定されない。

【0163】

以下の試験および実施例におけるパーセンテージの数字は、特に記載のない限り、体重パーセンテージを指し；部は重量部である。液体／液体溶液の溶媒の比率、希釈率および濃度のデータは容量を指す。

【実施例】

【0164】

Ａ．実施例
略号および頭文字：
ａｂｓ． 無水
Ａｃ アセチル
ａｑ． 水性，水溶液
Ｂｏｃ ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ｂｒ． ブロード（ＮＭＲにおいて）
Ｅｘ． 実施例
ｃａ． およそ（ｃｉｒｃａ）：およそ
ＣＩ 化学イオン化（ＭＳにおいて）
ｄ 二重線（ＮＭＲにおいて）
ｄ 日間
ＴＬＣ 薄層クロマトグラフィー
ＤＣＩ 直接化学イオン化（ＭＳにおいて）
ｄｄ 二重線の二重線（ＮＭＲにおいて）
ＤＭＡＰ ４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＥ １，２−ジメトキシエタン
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＤＰＢＳ ダルベッコリン酸緩衝塩溶液
ｄｔ 三重線の二重線（ＮＭＲにおいて）
ｏ．ｔｈ． 理論値（化学収率について）
ＥＤＣ Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＥＩ 電子衝撃イオン化（ＭＳにおいて）
ｅｑ． 当量
ＥＳＩ エレクトロスプレーイオン化（ＭＳにおいて）
ＦＣＳ ウシ胎仔血清
Ｆｍｏｃ （９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル
ｓａｔ． 飽和
ＧＴＰ グアノシン−５’−三リン酸
ｈ 時間
ＨＡＴＵ Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＥＰＥＳ ４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸
ＨＯＡｃ 酢酸
ＨＯＢｔ １−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物
ＨＯＳｕ Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
ＨＰＬＣ 高圧，高速液体クロマトグラフィー
ｃｏｎｃ． 濃縮
ＬＣ−ＭＳ 液体クロマトグラフィー一体型質量分析
ｍ 多重線（ＮＭＲにおいて）
ｍｉｎ 分
ＭＳ 質量分析
ＭＴＴ ３−（４，５−ジメチルチアゾル−２−イル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロミド
ＮＭＭ Ｎ−メチルモルホリン
ＮＭＰ Ｎ−メチル−２−ピロリジノン
ＮＭＲ 核磁気共鳴分光分析
ＰＢＳ リン酸緩衝塩溶液
Ｐｄ／Ｃ パラジウム活性炭
ｑｕａｎｔ． 定量的（収率に関して）
ｑｕａｒｔ 四重線（ＮＭＲにおいて）
ｑｕｉｎｔ 五重線（ＮＭＲにおいて）
Ｒｆ 保持指数（ＤＣにおいて）
ＲＴ 室温
Ｒｔ 保持時間（ＨＰＬＣにおいて）
ｓ 一重線（ＮＭＲにおいて）
ｔ 三重線（ＮＭＲにおいて
ｔｅｒｔ． 第三
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＵＶ 紫外分光分析
ｖ／ｖ 容量対容量比（溶液の）
Ｚ ベンジルオキシカルボニル
ｔｏｇ． 一緒に
ＨＰＬＣおよびＬＣ−ＭＳ法：
方法１（ＬＣ−ＭＳ）：
機器：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＳＱＤ ＵＰＬＣ Ｓｙｓｔｅｍ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３ １．８μ ５０ｍｍ×１ｍｍ；溶離液Ａ：１ｌの水＋０．２５ｍｌの９９％のギ酸，溶離液Ｂ：１ｌのアセトニトリル＋０．２５ｍｌの９９％のギ酸；勾配：０．０分で９０％のＡ→１．２分で５％のＡ→２．０分で５％のＡ；流速：０．４０ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０−４００ｎｍ。

【0165】

方法２（ＬＣ−ＭＳ）：
機器：Ｗａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ Ａｃｑｕｉｔｙを備えたＭｉｃｒｏｍａｓｓ Ｑｕａｔｔｒｏ Ｐｒｅｍｉｅｒ；カラム：Ｔｈｅｒｍｏ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＧＯＬＤ １．９μ ５０ｍｍ×１ｍｍ；溶離液Ａ：１ｌの水＋０．５ｍｌの５０％のギ酸，溶離液Ｂ：１ｌのアセトニトリル＋０．５ｍｌの５０％のギ酸；勾配：０．０分で９０％のＡ→０．１分で９０％のＡ→１．５分で１０％のＡ→２．２分で１０％のＡ；流速：０．３３ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。

【0166】

方法３（ＬＣ−ＭＳ）：
機器：ＨＰＬＣ Ａｇｉｌｅｎｔ Ｓｅｒｉｅｓ １１００を備えたＭｉｃｒｏｍａｓｓ Ｑｕａｔｔｒｏ Ｍｉｃｒｏ ＭＳ；カラム：Ｔｈｅｒｍｏ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＧＯＬＤ ３μ ２０ｍｍ×４ｍｍ；溶離液Ａ：１ｌの水＋０．５ｍｌの５０％のギ酸，溶離液Ｂ：１ｌのアセトニトリル＋０．５ｍｌの５０％のギ酸；勾配：０．０分で１００％のＡ→３．０分で１０％のＡ→４．０分で１０％のＡ→４．０１分で１００％のＡ（流速２．５ｍｌ／分）→５．００分で１００％のＡ；オーブン：５０℃；流速：２ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。

【0167】

方法４（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ機器の型：Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱ；ＨＰＬＣ機器の型：ＨＰ １１００ Ｓｅｒｉｅｓ；ＵＶ ＤＡＤ；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ ３μ ３０ｍｍ×３．００ｍｍ；溶離液Ａ：１ｌの水＋０．５ｍｌの５０％のギ酸，溶離液Ｂ：１ｌのアセトニトリル＋０．５ｍｌの５０％のギ酸；勾配：０．０分で９０％のＡ→２．５分で３０％のＡ→３．０分で５％のＡ→４．５分で５％のＡ；流速：０．０分で１ｍｌ／分→２．５分／３．０分／４．５分で２ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。

【0168】

方法５（ＨＰＬＣ）：
機器：ＨＰ １０９０ Ｓｅｒｉｅｓ ＩＩ；カラム：Ｍｅｒｃｋ Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ ＳｐｅｅｄＲＯＤ ＲＰ−１８ｅ，５０ｍｍ×４．６ｍｍ；プレカラム：Ｍｅｒｃｋ Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ Ｇｕａｒｄ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ Ｋｉｔ ＲＰ−１８ｅ，５ｍｍ×４．６ｍｍ；インジェクション容量：５μｌ；溶離液Ａ：７０％ＨＣｌＯ_４含有水（４ｍｌ／リットル），溶離液Ｂ：アセトニトリル；勾配：０．００分で２０％のＢ→０．５０分で２０％のＢ→３．００分で９０％のＢ→３．５０分で９０％のＢ→３．５１分で２０％のＢ→４．００分で２０％のＢ；流速：５ｍｌ／分；カラム温度：４０℃。

【0169】

方法６（ＨＰＬＣ）：
機器：ＤＡＤ ９９６を備えたＷａｔｅｒｓ ２６９５；カラム：Ｍｅｒｃｋ Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ ＳｐｅｅｄＲＯＤ ＲＰ−１８ｅ，５０ｍｍ×４．６ｍｍ；プレカラム：Ｍｅｒｃｋ Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ Ｇｕａｒｄ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ Ｋｉｔ ＲＰ−１８ｅ，５ｍｍ×４．６ｍｍ；溶離液Ａ：７０％ＨＣｌＯ_４含有水（４ｍｌ／リットル），溶離液Ｂ：アセトニトリル；勾配：０．００分で５％のＢ→０．５０分で５％のＢ→３．００分で９５％のＢ→４．００分で９５％のＢ；流速：５ｍｌ／分。

【0170】

方法７（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ機器の型：Ｗａｔｅｒｓ ＺＱ；ＨＰＬＣ機器の型：Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ Ｓｅｒｉｅｓ；ＵＶ ＤＡＤ；カラム：Ｔｈｅｒｍｏ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＧＯＬＤ ３μ ２０ｍｍ×４ｍｍ；溶離液Ａ：１ｌの水＋０．５ｍｌの５０％のギ酸，溶離液Ｂ：１ｌのアセトニトリル＋０．５ｍｌの５０％のギ酸；勾配：０．０分で１００％のＡ→３．０分で１０％のＡ→４．０分で１０％のＡ→４．１分で１００％のＡ（流速２．５ｍｌ／分）；オーブン：５５℃；流速：２ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。

【0171】

方法８（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ機器の型：Ｗａｔｅｒｓ ＺＱ；ＨＰＬＣ機器の型：Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ Ｓｅｒｉｅｓ；ＵＶ ＤＡＤ；カラム：Ｔｈｅｒｍｏ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＧＯＬＤ ３μ ２０ｍｍ×４ｍｍ；溶離液Ａ：１ｌの水＋０．５ｍｌの５０％のギ酸，溶離液Ｂ：１ｌのアセトニトリル＋０．５ｍｌの５０％のギ酸；勾配：０．０分で１００％のＡ→２．０分で６０％のＡ→２．３分で４０％のＡ→３．０分で２０％のＡ→４．０分で１０％のＡ→４．２分で１００％のＡ（流速２．５ｍｌ／分）；オーブン：５５℃；流速：２ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。

【0172】

方法９（ＬＣ−ＭＳ）：
機器：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＳＱＤ ＵＰＬＣ Ｓｙｓｔｅｍ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３ １．８μ ５０ｍｍ×１ｍｍ；溶離液Ａ：１ｌの水＋０．２５ｍｌの９９％のギ酸，溶離液Ｂ：１ｌのアセトニトリル＋０．２５ｍｌの９９％のギ酸；勾配：０．０分で９５％のＡ→６．０分で５％のＡ→７．５分で５％のＡ；オーブン：５０℃；流速：０．３５ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０−４００ｎｍ。

【0173】

方法１０（ＨＰＬＣ）：
機器：Ａｇｉｌｅｎｔ １２００ Ｓｅｒｉｅｓ；カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ−Ｃ１８ ５μ ４．６ｍｍ×１５０ｍｍ；プレカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ＫｒｕｄＫａｔｃｈｅｒ Ｄｉｓｐｏｓａｂｌｅ Ｐｒｅ−Ｃｏｌｕｍｎ；インジェクション容量：５μｌ；溶離液Ａ：１ｌの水＋０．０１％のトリフルオロ酢酸；溶離液Ｂ：１ｌのアセトニトリル＋０．０１％のトリフルオロ酢酸；勾配：０．００分で１０％のＢ→１．００分で１０％のＢ→１．５０分で９０％のＢ→５．５分で１０％のＢ；流速：２ｍｌ／分；カラム温度：３０℃。

【0174】

方法１１（ＬＣ−ＭＳ）：
機器：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＳＱＤ ＵＰＬＣ Ｓｙｓｔｅｍ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３ １．８μ ３０ｍｍ×２ｍｍ；溶離液Ａ：１ｌの水＋０．２５ｍｌの９９％のギ酸，溶離液Ｂ：１ｌのアセトニトリル＋０．２５ｍｌの９９％のギ酸；勾配：０．０分で９０％のＡ→１．２分で５％のＡ→２．０分で５％のＡ；流速：０．６０ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２０８−４００ｎｍ。

【0175】

合成を明白に記載しなかった反応体または試薬については、すべて、容易に入手可能な供給元から商業的に得たものであると想定してよい。合成を明白に記載しなかったが商業的に、または容易に入手可能でなかった反応体または試薬については、すべて、その調製が記載された文献を示している。

【0176】

出発化合物および中間体：
出発化合物１
（２Ｒ，３Ｒ）−３−［（２Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−２−イル］−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸（Ｂｏｃ−ドラプロイン）ジシクロヘキシルアミン塩

【0177】

【化35】

【0178】

この化合物は、文献の参考資料、例えば、Ｐｅｔｔｉｔら，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ １９９６，７１９；Ｓｈｉｏｉｒｉら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．１９９１，３２，９３１；Ｓｈｉｏｉｒｉら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９３，４９，１９１３；Ｋｏｇａら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．１９９１，３２，２３９５；Ｖｉｄａｌら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ２００４，６０，９７１５；Ｐｏｎｃｅｔら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９４，５０，５３４５に従ってさまざまな様式で作製され得る。ここでは、該化合物を、Ｓｈｉｏｉｒｉら（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． １９９１，３２，９３１）による指示を用いて合成した。

【0179】

出発化合物２
ｔｅｒｔ−ブチル−（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−５−メチル−４−（メチルアミノ）ヘプタノエート−塩酸塩（ドライソロイシン−ＯｔＢｕｘＨＣｌ）

【0180】

【化36】

【0181】

この化合物は、文献の参考資料、例えば、Ｐｅｔｔｉｔら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９４，５９，１７９６；Ｋｏｇａら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．１９９１，３２，２３９５；Ｓｈｉｏｉｒｉら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．１９９１，３２，９３１；Ｓｈｉｏｉｒｉら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９３，４９，１９１３に従ってさまざまな様式で作製され得る。ここでは、該化合物を、Ｋｏｇａら（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．１９９１，３２，２３９５）による指示を用いて合成した。

【0182】

中間体１
ｔｅｒｔ−ブチル−（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−［｛Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝（メチル）アミノ］−３−メトキシ−５−メチルヘプタノエート

【0183】

【化37】

【0184】

４２５ｍｇ（１．７ｍｍｏｌ）のＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリンを５０ｍｌのＤＭＦに溶解させ、引き続き、５００ｍｇ（１．７ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブチル−（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−５−メチル−４−（メチルアミノ）−ヘプタノエート塩酸塩（出発化合物２）、３５６ｍｇ（１．９ｍｍｏｌ）の１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩、２８５ｍｇ（１．９ｍｍｏｌ）の１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物および６５５ｍｇ（５．１ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンと混合した。その混合物を室温で２０時間撹拌した。さらに１４２ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）のＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリン、１１９ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）の１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩、９５ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）の１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物および２１８ｍｇ（１．７ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加し、その混合物を超音波で９０分間処理した。次いで、その混合物を、半飽和水性塩化アンモニウムと酢酸エチルの溶液に注入した。有機相を分取し、引き続き、飽和炭酸水素ナトリウム溶液と飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。その残留物を、分取用ＨＰＬＣを用いて精製した。３２９ｍｇ（４０％ 理論値）の標題化合物を無色の油状物として得た。

【0185】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４９３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0186】

中間体２
ｔｅｒｔ−ブチル−（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−５−メチル−４−［メチル（Ｌ−バリル）アミノ］ヘプタノエート

【0187】

【化38】

【0188】

５００ｍｇ（１ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブチル−（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−［｛Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝（メチル）アミノ］−３−メトキシ−５−メチルヘプタノエート（中間体１）を５０ｍｌのメタノールに溶解させ、１００ｍｇの１０％パラジウム活性炭を添加後、大気圧下で室温にて１時間含水させた。次いでその触媒を濾別し、溶解剤を真空除去した。３７０ｍｇ（定量的）の標題化合物をほぼ無色の油状物で得た。

【0189】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝１．５９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３５９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0190】

中間体３
Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブトキシ−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0191】

【化39】

【0192】

３９６ｍｇ（１．１ｍｍｏｌ）のＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンを２０ｍｌのＤＭＦに溶解させ、３６５ｍｇ（１ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブチル−（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−５−メチル−４−［メチル（Ｌ−バリル）アミノ］ヘプタノエート（中間体２）、２３４ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）の１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩および１８７ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）の１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物を引き続き添加した。その混合物を室温で一晩撹拌した。次いで、その混合物を、半飽和水性塩化アンモニウムと酢酸エチルの溶液に注入した。有機相を分取し、引き続き、飽和炭酸水素ナトリウム溶液と飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。残渣を、精製せずに次の工程に直接使用した。

【0193】

収量：６６０ｍｇ（６８％ 理論値）
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝３．０分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．６１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６９４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0194】

中間体４
Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチルヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0195】

【化40】

【0196】

６５０ｍｇ（０．９４ｍｍｏｌ）のＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブトキシ−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体３）を５ｍｌのジクロロメタン中で吸収させ、５ｍｌのトリフルオロ酢酸を添加し、次いで室温で一晩撹拌した。次いで、その混合物を真空でエバポレートし、残留した残渣を、ＨＰＬＣを用いて精製した。４３０ｍｇ（７２％ 理論値）の標題化合物を無色の泡状物として得た。

【0197】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝２．４分。

【0198】

ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒ_ｔ＝１．５１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６３８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0199】

中間体５
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチルヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0200】

【化41】

【0201】

５１ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）のＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチルヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体４）を１０ｍｌのＤＭＦに溶解させ、０．５ｍｌのピペリジンを添加した。室温で１０分間撹拌した後、その混合物を真空でエバポレートし、残渣をジエチルエーテルに溶解させた。不溶性成分を濾別し、ジエチルエーテルで数回洗浄した。濾過残渣を５ｍｌのジオキサン／水（１：１）に添加し、１Ｎ水酸化ナトリウムを用いてその溶液をｐＨ値１１に調整した。超音波処理下で、３４９ｍｇ（１．６ｍｍｏｌ）のジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネートを数段階で添加した。溶液のｐＨ値１１を維持した。反応終了後、上記ジオキサンをエバポレートし、水性液を、クエン酸を用いてｐＨ値２〜３に調整した。その後、各々５０ｍｌの酢酸エチルでの抽出を２回行なった。有機相を精製し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空でエバポレートした。その残渣をジエチルエーテル中で吸収させ、ペンタンを用いて生成物を析出させた。デカンテーションを用いて溶解剤を分離した。その残渣をペンタンで数回温浸させ、次いで、高真空にて乾燥させた。かくして、３１ｍｇ（９３％ 理論値）の標題化合物を得た。

【0202】

ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝２．２分。

【0203】

ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒ_ｔ＝１．３２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0204】

中間体６
Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−カルボキシ−１−メトキシプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0205】

【化42】

【0206】

３１５ｍｇ（０．４９４ｍｍｏｌ）のＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチルヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体４）を１２ｍｌのＤＭＦに溶解させ、１０４ｍｇ（０．５４３ｍｍｏｌ）の１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩と８３ｍｇ（０．５４３ｍｍｏｌ）の１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物を添加し、室温で９０分間撹拌した。次いで、１１２μｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンと１４９ｍｇ（０．４９４ｍｍｏｌ）（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパン酸トリフルオロ酢酸塩（これは、最初に出発化合物１から、トリフルオロ酢酸を用いたＢｏｃ保護基の切断によって合成しておいた）を添加した。この組成物を室温で２時間撹拌し、次いで高真空でエバポレートした。次いで、残留した残渣を、分取用ＨＰＬＣを用いて２回精製した。１４０ｍｇ（３５％ 理論値）の標題化合物を無色の泡状物として得た。

【0207】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒｔ＝２．４分。

【0208】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８０７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0209】

中間体７
ベンジル−（βＳ）−Ｎ−｛（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパノイル｝−β−メチル−Ｌ−フェニルアラニナートトリフルオロ酢酸塩

【0210】

【化43】

【0211】

まず、（２Ｒ，３Ｒ）−３−［（２Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−２−イル］−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸を、３５１ｍｇ（０．７５ｍｍｏｌ）のジシクロヘキシルアミン塩（出発化合物１）を酢酸エチル中で吸収させ、硫酸水素カリウム水溶液によって析出させることにより放出させた。その有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。次いで、その残渣を１０ｍｌのＤＭＦ中で吸収させ、３７３ｍｇ（０．７５ｍｍｏｌ）のベンジル−（βＳ）−β−メチル−Ｌ−フェニルアラニナートトリフルオロ酢酸塩［市販の（βＳ）−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−メチル−Ｌ−フェニルアラニンを使用し、ベンジルアルコールでのＥＤＣ／ＤＭＡＰ補助エステル化およびその後のトリフルオロ酢酸の補助によるＢｏｃ保護基の切断によって合成］、４２８ｍｇ（１．１２５ｍｍｏｌ）のＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）および３９２μｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを引き続き添加した。その混合物を室温で２０時間撹拌した。次いで、その混合物を、半飽和水性塩化アンモニウムと酢酸エチルの溶液に注入した。その有機相を分取し、炭酸水素ナトリウム溶液、次いで塩化ナトリウム溶液を用いて精製し、最後にエバポレートした。その残渣を、分取用ＨＰＬＣを用いて精製した。かくして、２３０ｍｇ（５７％ ｄ．Ｔｈ．）のＢｏｃ保護中間体ベンジル−（βＳ）−Ｎ−｛（２Ｒ，３Ｒ）−３−［（２Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−２−イル］−３−メトキシ−２−メチルプロパノイル｝−β−メチル−Ｌ−フェニルアラニナートを得た。

【0212】

ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒ_ｔ＝２．３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５３９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0213】

２３０ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）のこの中間体を５ｍｌのジクロロメタン中で吸収させ、次いで５ｍｌのトリフルオロ酢酸を添加し、室温で３０分間撹拌した。次いで、これを真空でエバポレートした。残留した残渣をさらに真空にて乾燥させ、次いで、アセトニトリル／水から凍結乾燥させた。かくして、２３０ｍｇ（定量的）の標題化合物を得た。

【0214】

ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒ_ｔ＝１．６分。

【0215】

中間体８
ベンジル−Ｎ−｛（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパノイル｝−Ｌ−フェニルアラニナートトリフルオロ酢酸塩

【0216】

【化44】

【0217】

中間体７の合成と同様にして、標題化合物を出発化合物１とベンジル−Ｌ−フェニルアラニナートから合成した。

【0218】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝１．６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４２５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0219】

中間体９
Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチル−Ｌ−フェニルアラニンアミドトリフルオロ酢酸塩

【0220】

【化45】

【0221】

１０００ｍｇ（３．７７ｍｍｏｌ）のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−フェニルアラニンを１０ｍｌのＤＭＦに溶解させ、４５７ｍｇ（３．７７ｍｍｏｌ）のＮ−メチルベンジルアミン、２１５０ｍｇ（５．６５ｍｍｏｌ）のＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートおよび６５７μｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加した。このバッチを室温で３０分間撹拌し、次いで真空でエバポレートした。その残渣をジクロロメタン中で吸収させ、水で３回抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、エバポレートした。その残渣を、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（溶媒として３：１の石油エーテル／酢酸エチルを使用）を用いて精製した。その生成物画分をエバポレートし、その残渣を高真空にて乾燥させた。かくして、１１１０ｍｇ（７５％ 理論値）のＢｏｃ保護中間体Ｎ−ベンジル−Ｎ^α−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−フェニルアラニンアミドを得た。

【0222】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．１４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３６９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0223】

１１０８ｍｇ（３，００７ｍｍｏｌ）のこの中間体を３０ｍｌのジクロロメタン中で吸収させ、次いで１０ｍｌのトリフルオロ酢酸を添加し、室温で３０分間撹拌した。続いて、これを真空でエバポレートし、残留した残渣をジクロロメタンに溶解させ、溶解剤を蒸留した。残渣をペンタンに２回溶解させ、そのたびに溶解剤をデカンテーションして除去し、最後に生成物を高真空にて乾燥させた。かくして、１０７５ｍｇ（９３％ 理論値）の樹脂形態の標題化合物を得た。

【0224】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝１．６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２６９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0225】

中間体１０
Ｎ−ベンジル−Ｎ^α−｛（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパノイル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−フェニルアラニンアミドトリフルオロ酢酸塩

【0226】

【化46】

【0227】

まず、（２Ｒ，３Ｒ）−３−［（２Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−２−イル］−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸を、１４１ｍｇ（０．４９１ｍｍｏｌ）のジシクロヘキシルアミン塩（出発物質１）を酢酸エチルに溶解させ、次いで、５％水性硫酸を用いて析出させることにより放出させた。その有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。その残渣を１０ｍｌのＤＭＦ中で吸収させ、１８７．６ｍｇ（０．４９ｍｍｏｌ）のＮ−ベンジル−Ｎ−メチル−Ｌ−フェニルアラニンアミドトリフルオロ酢酸塩（中間体９）、１９０．３ｍｇ（１．４７ｍｍｏｌ）のＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）および２５６μｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加した。この組成物を室温で１時間撹拌した。次いで、このバッチをエバポレートし、残渣を酢酸エチル中で吸収させ、次いで、この溶液を、引き続き、飽和塩化アンモニウム溶液、炭酸水素ナトリウム溶液および水を用いて手作業溶媒抽出に供した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、エバポレートした。その残渣をシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（溶離液として３０：１のアセトニトリル／水を使用）を用いて精製した。生成物画分をエバポレートし、次いで残渣を高真空にて乾燥させた。かくして、１６８ｍｇ（６４％ 理論値）のＢｏｃ保護中間体ｔｅｒｔ−ブチル−（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−（｛（２Ｓ）−１−［ベンジル（メチル）アミノ］−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル｝アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−カルボキシレートを得た。

【0228】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒ_ｔ＝１．２２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５３８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0229】

１６８ｍｇ（０．３１２ｍｍｏｌ）のこの中間体を１５ｍｌのジクロロメタン中で吸収させ、次いで、３ｍｌのトリフルオロ酢酸を添加し、室温で３０分間撹拌した。次いで、これを真空でエバポレートした。残留した残渣を、まずジクロロメタンに、次いでジエチルエーテルに溶解させ、そのたびに溶解剤を蒸留して除去した。高真空にて乾燥後、１７０ｍｇ（９９％ 理論値）の標題化合物を樹脂状物として得た。

【0230】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝１．７分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４３８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0231】

中間体１１
メチル−Ｎ−｛（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパノイル｝−Ｌ−フェニルアラニナートトリフルオロ酢酸塩

【0232】

【化47】

【0233】

中間体１０の合成と同様にして、標題化合物を、（２Ｒ，３Ｒ）−３−［（２Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−２−イル］−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸ジシクロヘキシルアミン塩（出発物質１）とメチル−Ｌ−フェニルアラニナート塩酸塩を用いて合成した。

【0234】

ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒ_ｔ＝０．６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒ_ｔ＝１．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0235】

中間体１２
ベンジル−Ｎ−｛（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパノイル｝−Ｌ−トリプトファナートトリフルオロ酢酸塩

【0236】

【化48】

【0237】

中間体１０の合成と同様にして、標題化合物を、（２Ｒ，３Ｒ）−３−［（２Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−２−イル］−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸ジシクロヘキシルアミン塩（出発物質１）とベンジル−Ｌ−トリプトファナートを用いて合成した。

【0238】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．０分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４６４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0239】

中間体１３
ベンジル−（１Ｓ，２Ｒ）−１−（｛（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパノイル｝アミノ）−２−フェニルシクロプロパンカルボキシラートトリフルオロ酢酸塩

【0240】

【化49】

【0241】

中間体１０の合成と同様にして、標題化合物を、（２Ｒ，３Ｒ）−３−［（２Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−２−イル］−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸ジシクロヘキシルアミン塩（出発物質１）とベンジル−（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−フェニルシクロプロパンカルボキシレートを用いて合成した。後者は、標準的な手順を使用し、市販の（１Ｓ，２Ｒ）−１−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−フェニルシクロプロパンカルボン酸のベンジルアルコールでのエステル化、続いてトリフルオロ酢酸を用いたＢｏｃ切断によって合成した。

【0242】

ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒ_ｔ＝１．５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒ_ｔ＝０．９３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４３７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0243】

中間体１４
ベンジル−（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパン酸トリフルオロ酢酸塩

【0244】

【化50】

【0245】

まず、（２Ｒ，３Ｒ）−３−［（２Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−２−イル］−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸を１．８２ｇ（３．８８ｍｍｏｌ）のジシクロヘキシルアミン塩（出発物質１）から、１５０ｍｌの酢酸エチル中への吸収および１００ｍｌの０．５％水性硫酸での抽出によって放出させた。その有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートした。その残渣を１０ｍｌのジオキサンと１０ｍｌの水中で吸収させ、１５１７ｍｇ（４．６６ｍｍｏｌ）の炭酸セシウムを添加し、次いで、その混合物を超音波浴中で５分間処理した。次いで、これを真空でエバポレートし、その残渣をＤＭＦと１回共蒸留した。次いで、その残渣を１５ｍｌのＤＭＦ中で吸収させ、１９９０ｍｇ（１１．６４ｍｍｏｌ）の臭化ベンジルに添加した。その混合物を超音波浴中で１５分間処理し、次いで真空でエバポレートした。その残渣を酢酸エチルと水間に分配した。有機相を分取し、塩化ナトリウム溶液を用いて精製し、次いでエバポレートした。次いで、その残渣を、分取用ＨＰＬＣを用いて精製した。かくして、１１７０ｍｇ（８０％ 理論値）のＢｏｃ保護中間体ｔｅｒｔ−ブチル−（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−（ベンジルオキシ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−カルボキシレートを得た。

【0246】

この１１７０ｍｇの中間体を、すぐに１５ｍｌのジクロロメタンに添加し、次いで、これを５ｍｌのトリフルオロ酢酸に添加した。室温で１５分間撹拌した後、その混合物を真空でエバポレートした後、ジオキサンを用いてその残渣を凍結乾燥させた。高真空にて乾燥後、１３３３ｍｇ（８４％ 理論値）の標題化合物を黄色油状物として得た。

【0247】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝１．５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．５９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２７８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0248】

中間体１５
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−カルボキシ−１−メトキシプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0249】

【化51】

【0250】

１２００ｍｇ（２．３３ｍｍｏｌ）のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチルヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体５）を、９１０．８ｍｇ（２．３３ｍｍｏｌ）のベンジル−（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパノエートトリフルオロ酢酸塩（中間体１４）、１３２７ｍｇ（３．４９ｍｍｏｌ）のＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェートと２０２７μｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを含む５０ｍｌのＤＭＦとを混合し、室温で５分間撹拌した。その後、その溶媒を真空下でエバポレートした。残留した残渣を酢酸エチル中で吸収させ、引き続き、５％のレモン酸溶液中および飽和炭酸水素ナトリウム溶液中で抽出した。有機相を分離し、エバポレートした。残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。その生成物画分を合わせ、エバポレートし、残渣を高真空にて乾燥させた。このようにして、１０００ｍｇ（５５％ 理論値）のベンジルエステル−中間体Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−（ベンジルオキシ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドを樹脂状物として得た。

【0251】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．５６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７７５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0252】

全量のこの中間体をメタノールとジクロロメタン（２０：１）の２５ｍｌの組成物中で吸収させ、ベンジルエステル基を、常圧で１０％パラジウム活性炭（触媒として）下での水和によって除去した。室温で３０分間撹拌した後、その触媒を濾別し、濾液を真空エバポレートした。その収量は８０３ｍｇ（９１％ 理論値）の標題化合物（白色固形物質として）であった。

【0253】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．２４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0254】

中間体１６
（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−フェニル−Ｎ−プロピルシクロプロパンカルボキサミドトリフルオロ酢酸塩

【0255】

【化52】

【0256】

標題化合物を、市販の（１Ｓ，２Ｒ）−１−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−フェニルシクロプロパンカルボン酸とｎ−プロピルアミンとのカップリング（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）の存在下）、続いて、トリフルオロ酢酸を用いたＢｏｃの切断によって作製した（両段階での収率８５％ 理論値）．
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝１．２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．５２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２１９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0257】

中間体１７
エチル−（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−フェニルシクロプロパンカルボキシラートトリフルオロ酢酸塩

【0258】

【化53】

【0259】

標題化合物を、標準的な手順を使用し、市販の（１Ｓ，２Ｒ）−１−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−フェニルシクロプロパンカルボン酸のエタノールでのエステル化、続いてトリフルオロ酢酸を用いたＢｏｃ切断によって合成した。

【0260】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．５０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２０６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0261】

中間体１８
１−ナフチルメチル−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−フェニルアラニナート

【0262】

【化54】

【0263】

１１９２ｍｇ（６．２ｍｍｏｌ）のＥＤＣ、５７８μｌ（４．１ｍｍｏｌ）のトリエチルアミン、３４５ｍｇ（２．８ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰ、および３２８ｍｇ（２．１ｍｍｏｌ）の１−ナフチルメタノールを室温で、５００ｍｇ（１．８９ｍｍｏｌ）のＮ−Ｂｏｃ−Ｌ−フェニルアラニンを含む２５ｍｌのジクロロメタンの溶液に添加した。その反応組成物を一晩撹拌し、次いで５０ｍｌのジクロロメタンで希釈し、引き続き、１０％クエン酸水溶液、水および飽和生理食塩水中で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、次いでエバポレートし、その残渣を、分取用ＨＰＬＣを用いて精製した。その収量は５０１ｍｇ（６６％ 理論値）の標題化合物であった。

【0264】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３３分；ｍ／ｚ＝４０６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0265】

中間体１９
１−ナフチルメチル−Ｌ−フェニルアラニナート−塩酸塩

【0266】

【化55】

【0267】

５００ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）の１−ナフチルメチル−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−フェニルアラニナート（中間体１８）を、２０ｍｌの４Ｎ塩酸溶液（ジオキサン中で希釈）中で撹拌し、室温で１時間撹拌した。次いで、その反応組成物をエバポレートし、残渣を真空乾燥させた。その収量は４２１．５ｍｇ（定量的）の標題化合物であった。

【0268】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８０分；ｍ／ｚ＝３０６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0269】

中間体２０
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１−ナフチルメトキシ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0270】

【化56】

【0271】

１５．３μｌ（８８μｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、６．７ｍｇ（４４μｍｏｌ）のＨＯＢｔと６．７ｍｇ（３５μｍｏｌ）のＥＤＣを、２０ｍｇ（２９μｍｏｌ）のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−カルボキシ−１−メトキシプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体１５）を含む１ｍｌのＤＭＦの溶液に添加し、次いで、この組成物を３０分間撹拌した。次いで、１１ｍｇ（３２μｍｏｌ）の１−ナフチルメチル−Ｌ−フェニルアラニナート−塩酸塩（中間体１９）を添加した。その反応組成物を一晩撹拌した後、その成分を直接、分取用ＨＰＬＣによって分離した。その収量は２６．１ｍｇ（９２％ 理論値）の標題化合物であった。

【0272】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．６１分；ｍ／ｚ＝９７３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0273】

中間体２１
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１−ナフチルメトキシ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドトリフルオロ酢酸塩

【0274】

【化57】

【0275】

２６ｍｇ（２７μｍｏｌ）のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１−ナフチルメトキシ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体２０）を１ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、０．２ｍｌのＴＦＡと混合した。その反応組成物を室温で３０分間撹拌し、次いでエバポレートした。その収量は２６．３ｍｇ（９９．７％ 理論値）の標題化合物であった。

【0276】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０２分；ｍ／ｚ＝８７３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0277】

中間体２２
アダマンタン−１−イル−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−フェニルアラニナート

【0278】

【化58】

【0279】

１１９２ｍｇ（６．２ｍｍｏｌ）のＥＤＣ、５７８μｌ（４．１ｍｍｏｌ）のトリエチルアミン、３４５ｍｇ（２．８ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰ、および３１６ｍｇ（２．１ｍｍｏｌ）の１−アダマンタノールを室温で、５００ｍｇ（１．８９ｍｍｏｌ）のＮ−Ｂｏｃ−Ｌ−フェニルアラニンを含む２５ｍｌのジクロロメタンの溶液に添加した。その反応組成物を一晩撹拌し、次いで５０ｍｌのジクロロメタンで希釈し、引き続き、１０％クエン酸水溶液、水および飽和生理食塩水中で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、次いでエバポレートし、その残渣を、分取用ＨＰＬＣを用いて精製した。その収量は３３６ｍｇ（４３％ 理論値）の標題化合物であった。

【0280】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４９分；ｍ／ｚ＝４００（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0281】

中間体２３
アダマンタン−１−イル−Ｌ−フェニルアラニナート−塩酸塩

【0282】

【化59】

【0283】

３３６ｍｇ（８４０μｍｏｌ）のアダマンタン−１−イル−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−フェニルアラニナート（中間体２２）を１２ｍｌの４Ｎ塩酸溶液（ジオキサン中で希釈）に溶解させ、室温で１時間撹拌した。次いで、その反応組成物をエバポレートし、残渣を分取用ＨＰＬＣで精製した（メタノール／水＋０．０１％ＴＦＡの勾配溶出）。その収量は２２８ｍｇ（８１％ 理論値）の標題化合物であった。

【0284】

ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒ_ｔ＝１．０３分；ｍ／ｚ＝３００（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0285】

中間体２４
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（アダマンタン−１−イルオキシ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0286】

【化60】

【0287】

１５．３μｌ（８８μｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、６．７ｍｇ（４４μｍｏｌ）のＨＯＢｔ、および６．７ｍｇ（３５μｍｏｌ）のＥＤＣを、２０ｍｇ（２９μｍｏｌ）のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−カルボキシ−１−メトキシプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体１５）を含む１ｍｌのＤＭＦの溶液に添加し、次いでこの組成物を３０分間撹拌した。次いで、９．６ｍｇ（３２μｍｏｌ）のアダマンタン−１−イル−Ｌ−フェニルアラニナート−塩酸塩（中間体２３）を添加した。その反応組成物を一晩撹拌した後、その成分を直接、分取用ＨＰＬＣによって分離した。その収量は１５ｍｇ（９０％純度，４８％ 理論値）の標題化合物であった。

【0288】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．６７分；ｍ／ｚ＝９６７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0289】

中間体２５
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（アダマンタン−１−イルオキシ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドトリフルオロ酢酸塩

【0290】

【化61】

【0291】

１５ｍｇ（１６μｍｏｌ）のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（アダマンタン−１−イルオキシ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−プロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体２４）を１ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、０．２ｍｌのＴＦＡと混合した。その反応組成物を室温で３０分間撹拌し、次いでエバポレートした。そのままの生成物を分取用ＨＰＬＣで精製した。その収量は４．８ｍｇ（３２％ 理論値）の標題化合物であった。

【0292】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．１０分；ｍ／ｚ＝８６７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0293】

中間体２６
アダマンタン−１−イルメチル−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−フェニルアラニナート

【0294】

【化62】

【0295】

１１９２ｍｇ（６．２ｍｍｏｌ）のＥＤＣ、５７８μｌ（４．１ｍｍｏｌ）のトリエチルアミン、３４５ｍｇ（２．８ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰ、および３４５ｍｇ（２．１ｍｍｏｌ）の１−アダマンチルメタノールを室温で、５００ｍｇ（１．８９ｍｍｏｌ）のＮ−Ｂｏｃ−Ｌ−フェニルアラニンを含む２５ｍｌのジクロロメタンの溶液に添加した。その反応組成物を一晩撹拌し、次いで５０ｍｌのジクロロメタンで希釈し、引き続き、１０％クエン酸水溶液、水および飽和生理食塩水中で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、次いでエバポレートし、その残渣を、分取用ＨＰＬＣを用いて精製した。その収量は７６９ｍｇ（９０％ 理論値）の標題化合物であった。

【0296】

ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒ_ｔ＝１．８４分；ｍ／ｚ＝４１４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0297】

中間体２７
アダマンタン−１−イルメチル−Ｌ−フェニルアラニナート−塩酸塩

【0298】

【化63】

【0299】

７６９ｍｇ（１．８６ｍｍｏｌ）のアダマンタン−１−イルメチル−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−フェニルアラニナート（中間体２６）を２５ｍｌの４Ｎ塩酸溶液（ジオキサン中で希釈）に溶解させ、室温で１時間撹拌した。次いで、その反応組成物をエバポレートし、その残渣を真空乾燥させた。その収量は６１９ｍｇ（９５％ 理論値）の標題化合物であった。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８２分；ｍ／ｚ＝３１４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0300】

中間体２８
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（アダマンタン−１−イルメトキシ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0301】

【化64】

【0302】

１５．３μｌ（８８μｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、６．７ｍｇ（４４μｍｏｌ）のＨＯＢｔおよび６．７ｍｇ（３５μｍｏｌ）のＥＤＣを、２０ｍｇ（２９μｍｏｌ）のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−カルボキシ−１−メトキシプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体１５）を含む１ｍｌのＤＭＦの溶液に添加し、次いでこの組成物を３０分間撹拌した。次いで、１０．１ｍｇ（３２μｍｏｌ）のアダマンタン−１−イル−Ｌ−フェニルアラニナート−塩酸塩（中間体２７）を添加した。その反応組成物を一晩撹拌した後、その成分を直接、分取用ＨＰＬＣによって分離した。その収量は２７．５ｍｇ（９３％ 理論値）の標題化合物であった。

【0303】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．７０分；ｍ／ｚ＝９８０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0304】

中間体２９
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（アダマンタン−１−イルメトキシ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドトリフルオロ酢酸塩

【0305】

【化65】

【0306】

２７．５ｍｇ（２８μｍｏｌ）のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（アダマンタン−１−イルメトキシ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体２８）を１．８ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、３６１μｌｍｌのＴＦＡと混合した。その反応組成物を室温で３０分間撹拌し、次いでエバポレートした。その残渣を水中で吸収させ、凍結乾燥させた。その収量は２２．７ｍｇ（８１％ 理論値）の標題化合物であった。

【0307】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．１４分；ｍ／ｚ＝８８０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0308】

中間体３０
ｔｅｒｔ−ブチル−［（２Ｓ）−１−（ベンジルオキシ）−３−フェニルプロパン−２−イル］カルバメート

【0309】

【化66】

【0310】

５００ｍｇ（１．９９ｍｍｏｌ）のＮ−Ｂｏｃ−Ｌ−フェニルアラニノールを５ｍｌのＤＭＦに溶解させ、アルゴン雰囲気下で０℃まで冷却した。次いで、１５９ｍｇ（３．９８ｍｍｏｌ）の６０％水素化ナトリウム懸濁液を流動パラフィンに添加した。次いで、その反応組成物をガス形成の終了まで撹拌し、次いで、２６０μｌ（２．１９ｍｍｏｌ）の臭化ベンジルと混合した。冷却浴を外し、その反応組成物を室温で２時間撹拌した。その後、このバッチをエバポレートし、残渣を氷水中で吸収させ、その組成物をジクロロメタンで抽出した。有機相を飽和生理食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、エバポレートした。その残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。その収量は２２６ｍｇ（３３％ 理論値）の標題化合物であった。

【0311】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．２８分；ｍ／ｚ＝３４２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0312】

中間体３１
（２Ｓ）−１−（ベンジルオキシ）−３−フェニルプロパン−２−アミン−塩酸塩

【0313】

【化67】

【0314】

２２０ｍｇ（６４４μｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブチル−［（２Ｓ）−１−（ベンジルオキシ）−３−フェニルプロパン−２−イル］カルバメート（中間体３０）を１１ｍｌの４Ｎ塩酸溶液（ジオキサン中で希釈）に溶解させ、室温で１時間撹拌した。次いで、このバッチをエバポレートし、その残渣を真空乾燥させた。その収量は１３８ｍｇ（７７％ 理論値）の標題化合物であった。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．６５分；ｍ／ｚ＝２４２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0315】

中間体３２
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（ベンジルオキシ）−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0316】

【化68】

【0317】

１５．３μｌ（８８μｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、６．７ｍｇ（４４μｍｏｌ）のＨＯＢｔ、および６．７ｍｇ（３５μｍｏｌ）のＥＤＣを、２０ｍｇ（２９μｍｏｌ）のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−カルボキシ−１−メトキシプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体１５）を含む１ｍｌのＤＭＦの溶液に添加し、次いでこの組成物を３０分間撹拌した。次いで、７．８ｍｇ（３２μｍｏｌ）の（２Ｓ）−１−（ベンジルオキシ）−３−フェニルプロパン−２−アミン−塩酸塩（中間体３１）を添加した。その反応組成物を一晩撹拌した後、その成分を直接、分取用ＨＰＬＣによって分離した。その収量は２６ｍｇ（９８％ 理論値）の標題化合物であった。

【0318】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．５１分；ｍ／ｚ＝９０９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0319】

中間体３３
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（ベンジルオキシ）−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドトリフルオロ酢酸塩

【0320】

【化69】

【0321】

２６ｍｇ（２９μｍｏｌ）のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（ベンジルオキシ）−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体３２）を１．８ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、３７０μｌのＴＦＡと混合した。その反応組成物を室温で３０分間撹拌し、次いでエバポレートした。その残渣を水中で吸収させ、凍結乾燥させた。その収量は２６．４ｍｇ（定量的）の標題化合物であった。

【0322】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９７分；ｍ／ｚ＝８０９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0323】

中間体３４
ｔｅｒｔ−ブチル−［（２Ｓ）−１−（２−ベンゾイルヒドラジノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］カルバメート

【0324】

【化70】

【0325】

２００ｍｇ（７５４μｍｏｌ）のＮ−Ｂｏｃ−Ｌ−フェニルアラニンを８ｍｌのＤＭＦに溶解させ、１３１μｌ（７５４μｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、３４６ｍｇ（２２６１μｍｏｌ）のＨＯＢｔ、４３４ｍｇ（２２６１μｍｏｌ）のＥＤＣ、および４１１ｍｇ（３０１５μｍｏｌ）のベンゾイルヒドラジンと混合した。その反応組成物を室温で一晩撹拌し、次いでエバポレートし、その残渣を分取用ＨＰＬＣで精製した。その収量は３１３ｍｇ（９５％純度，１００％ 理論値）の標題化合物であった。

【0326】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９４分；ｍ／ｚ＝３８４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0327】

中間体３５
Ｎ’−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−フェニルプロパノイル］ベンゾイルヒドラジノ−塩酸塩

【0328】

【化71】

【0329】

３１３ｍｇ（８１８μｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブチル−［（２Ｓ）−１−（２−ベンゾイルヒドラジノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］カルバメート（中間体３４）を１３ｍｌの４Ｎ塩酸溶液（ジオキサン中で希釈）中で撹拌し、室温で１時間撹拌した。次いで、その反応組成物をエバポレートし、その残渣を真空乾燥させた。その収量は２５５ｍｇ（９２％ 理論値）の標題化合物であった。

【0330】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．４４分；ｍ／ｚ＝２８４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0331】

中間体３６
ｔｅｒｔ−ブチル−［（２Ｓ）−１−｛［（２Ｓ）−１−｛［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（２−ベンゾイルヒドラジノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］（メチル）アミノ｝−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル］アミノ｝−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル］メチルカルバメート

【0332】

【化72】

【0333】

１５．３μｌ（８８μｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、６．７ｍｇ（４４μｍｏｌ）のＨＯＢｔと６．７ｍｇ（３５μｍｏｌ）のＥＤＣを、２０ｍｇ（２９μｍｏｌ）のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−カルボキシ−１−メトキシプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体１５）を含む１ｍｌのＤＭＦの溶液に添加し、次いでこの組成物を３０分間撹拌した。次いで、９．１ｍｇ（３２μｍｏｌ）のＮ’−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−フェニルプロパノイル］ベンゾイルヒドラジノ−塩酸塩（中間体３５）を添加した。その反応組成物を一晩撹拌した後、その成分を直接、分取用ＨＰＬＣによって分離した。その収量は６．７ｍｇ（２４％ 理論値）の標題化合物であった。

【0334】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．３２分；ｍ／ｚ＝９５１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0335】

中間体３７
（２Ｓ）−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（２−ベンゾイルヒドラジノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ，３−ジメチル−２−｛［（２Ｓ）−３−メチル−２−（メチルアミノ）ブタノイル］アミノ｝ブタンアミドトリフルオロ酢酸塩

【0336】

【化73】

【0337】

６．７ｍｇ（７μｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブチル−［（２Ｓ）−１−｛［（２Ｓ）−１−｛［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（２−ベンゾイルヒドラジノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］（メチル）アミノ｝−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル］アミノ｝−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル］メチルカルバメート（中間体３６）を４５４μｌのジクロロメタンに溶解させ、９１μｌのＴＦＡと混合した。その反応組成物を室温で３０分間撹拌し、次いでエバポレートした。その残渣を水中で吸収させ、凍結乾燥させた。その収量は６．８ｍｇ（定量的）の標題化合物であった。

【0338】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８０分；ｍ／ｚ＝８５１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0339】

中間体３８
ベンジル−（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−フェニルシクロプロパンカルボキシレートトリフルオロ酢酸塩

【0340】

【化74】

【0341】

後者は、標準的な手順を使用し、市販の（１Ｓ，２Ｒ）−１−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−フェニルシクロプロパンカルボン酸のベンジルアルコールでのエステル化、続いてトリフルオロ酢酸を用いたＢｏｃ切断によって合成した。

【0342】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２６８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0343】

中間体３９
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（１Ｓ）−１−カルボキシ−２−フェニルエチル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0344】

【化75】

【0345】

３８３ｍｇ（０．７４３ｍｍｏｌ）のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチルヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体５）を、４８５ｍｇ（０．７４３ｍｍｏｌ）のベンジル−Ｎ−{（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパノイル｝−Ｌ−フェニルアラニナートトリフルオロ酢酸塩（中間体８）、４２４ｍｇ（１．１１４ｍｍｏｌ）のＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート、および３８８μｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを含む１５ｍｌのＤＭＦと混合し、室温で１０分間撹拌した。その後、その溶媒を真空下でエバポレートした。残留した残渣を酢酸エチル中で吸収させ、引き続き、５％のレモン酸溶液中および飽和炭酸水素ナトリウム溶液中で抽出した。有機相を単離し、残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製し：その生成物画分を合わせ、エバポレートし、その残渣を高真空にて乾燥させた。その収量は３３５ｍｇ（４８％ 理論値）のベンジルエステル中間体（泡状物の形態）であった。

【0346】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0347】

１００ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）のこの中間体を１５ｍｌのメタノール中で吸収させ、ベンジルエステル基を、常圧下で１０％Ｐｄ／Ｃ（触媒として）を用いる水和によって除去した。室温で１時間撹拌した後、その触媒を濾別し、濾液を真空エバポレートした。ジオキサンからの凍結乾燥後、その収量は８５ｍｇ（９４％ 理論値）の標題化合物（白色固形物質の形態）であった。

【0348】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．２４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0349】

中間体４０
Ｎ−ベンジル−Ｌ−トリプトファンアミドトリフルオロ酢酸塩

【0350】

【化76】

【0351】

２０２ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）の２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−トリプトファナートと４５ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）のベンジルアミンを１０ｍｌのＤＭＦに溶解させ、１１０μｌ（６３０μｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンと混合した。このバッチを室温で３時間撹拌した。次いで、これを真空下でエバポレートし、その残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製した（シリカゲルを吸着剤として使用（溶離液：２０：０．５：０．０５のジクロロメタン／メタノール／１７％アンモニア水））。その適切な画分を混合し、エバポレートした。これにより得られた残渣をジエチルエーテルで温浸させ、次いで高真空にて乾燥させた。これにより得られた残渣を、次いで、１０ｍｌのジクロロメタン中で吸収させ、３ｍｌの無水トリフルオロ酢酸と混合した。室温で４５分間撹拌した後、これをエバポレートし、その残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。高真空にて乾燥させた後、１１７ｍｇ（両段階で５７％ 理論値）の標題化合物を得た。

【0352】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝１．６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．６６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２９４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0353】

中間体４１
（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−フェニルシクロプロパンカルボキサミドトリフルオロ酢酸塩

【0354】

【化77】

【0355】

５０ｍｇ（１８０μｍｏｌ）の市販の（１Ｓ，２Ｒ）−１−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−フェニルシクロプロパンカルボン酸を５ｍｌのＤＭＦに溶解させ、９４μｌ（５４１μｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、３１ｍｇ（２７０μｍｏｌ）のＮ−ヒドロキシスクシンイミド、および４１．５ｍｇ（２１６μｍｏｌ）のＥＤＣと混合し、次いで室温で一晩撹拌した。次いで、その反応組成物をエバポレートし、その残渣をジオキサン中で吸収させ、７１ｍｇ（９０１μｍｏｌ）の炭酸水素アンモニウムと混合し、そのバッチを室温で３日間放置した。次いでその反応組成物を、酢酸エチルと水の１：１の混合物中で希釈した。次いで、飽和生理食塩水を用いて有機相を分離し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、エバポレートした。これにより得られた残渣を、次いで、３ｍｌのジクロロメタン中で吸収させ、３ｍｌの無水トリフルオロ酢酸と混合した。１時間の撹拌後、これをエバポレートした。その残渣をペンタンと混合し、吸引し、ジオキサンから凍結乾燥させた。このようにして、３２ｍｇ（両段階で６２％ 理論値）の標題化合物を得た。

【0356】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝０．３８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．２０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１７７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0357】

中間体４２
Ｎ^α−｛（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパノイル｝−Ｌ−トリプトファンアミドトリフルオロ酢酸塩

【0358】

【化78】

【0359】

中間体７の合成と同様にして、標題化合物を出発化合物１とＬ−トリプトファンアミド−塩酸塩から合成した。

【0360】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝１．４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0361】

中間体４３
ｔｅｒｔ−ブチル−４−（ブロモメチル）ベンゾエート

【0362】

【化79】

【0363】

１０００ｍｇ（４．６５ｍｍｏｌ）の４−（ブロモメチル）安息香酸を６ｍｌのジクロロメタンに添加し、次いで、まず１８μｌ（０．２３ｍｍｏｌ）のＤＭＦを添加し、その後、８１１μｌ（９．３ｍｍｏｌ）のシュウ酸ジクロリドを滴下して加えた。このバッチを、ガス形成が終了するまで１５分間撹拌し、エバポレートした。その残渣を１０ｍｌのトルエン中で吸収させ、もう一度エバポレートした。次いで、かくして得られた安息香酸塩化物を３０ｍｌのジエチルエーテル中に懸濁させ、５２２ｍｇ（４．６５ｍｍｏｌ）のカリウム−ｔｅｒｔ−ブチレートを含む４０ｍｌのジエチルエーテルの懸濁液と複数回に分けて混合した。その反応組成物を室温で１時間撹拌し、次いでエバポレートした。濾液を水、飽和塩化アンモニウムおよび飽和塩化ナトリウム溶液で、各々３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過後、真空下でエバポレートした。得られたそのままの生成物を（溶離液は１０：１のシクロヘキサン／酢酸エチル）シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。その収量は７７０ｍｇ（５１％ 理論値）の標題化合物であった。

【0364】

ＭＳ（ＤＣＩ）：ｍ／ｚ＝２１７（Ｍ−５４）^＋。

【0365】

中間体４４
４−（｛［（２Ｓ）−２−アミノ−３−フェニルプロピル］オキシ｝メチル）安息香酸トリフルオロ酢酸塩

【0366】

【化80】

【0367】

１６８．５ｍｇ（０．６７ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブチル−［（２Ｓ）−１−ヒドロキシ−３−フェニルプロパン−２−イル］カルバメートをアルゴン下で４．９ｍｌのＤＭＦに添加し、５３．６ｍｇ（１．３ｍｍｏｌ）の水素化ナトリウム（流動パラフィン中６０％分散体として）と０℃の温度で混合した。３０分後、２００ｍｇ（０．７４ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブチル−４−（ブロモメチル）ベンゾエートを０℃の温度で添加した。測定終了後、このバッチを室温で２時間撹拌した。その後、このバッチをロータリーエバポレーターでエバポレートし、残渣を氷水中で吸収させ、上記化合物を各々５０ｍｌのジクロロメタンで抽出した。有機相を飽和水素化ナトリウム溶液中で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空でエバポレートした。かくして得られたそのままの生成物を分取用ＨＰＬＣによって精製する。５０．２ｍｇ（１７％ 理論値）の中間体ｔｅｒｔ−ブチル−４−［（｛（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−フェニルプロピル｝オキシ）メチル］ベンゾエートを得た。

【0368】

ＨＰＬＣ（方法１０）：Ｒ_ｔ＝４．０６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４４２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0369】

５０ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）のこの中間体を室温で１．３ｍｌのトリフルオロ酢酸と６．４ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、１５分間撹拌した。次いで、このバッチをロータリーエバポレーターでエバポレートし、残渣を真空乾燥させた。その収量は５１．２ｍｇ（９９％ 理論値）の標題化合物であった。

【0370】

ＨＰＬＣ（方法１０）：Ｒ_ｔ＝２．４０分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．５３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２８６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0371】

中間体４５
メチル−４−（｛［（２Ｓ）−２−アミノ−３−フェニルプロピル］オキシ｝メチル）ベンゾエート塩酸塩

【0372】

【化81】

【0373】

５１．２ｍｇ（１２８μｍｏｌ）の４−（｛［（２Ｓ）−２−アミノ−３−フェニルプロピル］オキシ｝メチル）安息香酸トリフルオロ酢酸塩を５ｍｌのメタノールに添加し、２．４ｍｇ（１３μｍｏｌ）の４−トルエンスルホン酸一水和物と混合した。このバッチを還流下で一晩撹拌した。次いで、１８．７μｌ（２５６μｍｏｌ）の塩化チオニルを添加し、その組成物を還流下で６時間再度加熱した。次いで、その反応組成物をロータリーエバポレーターでエバポレートし、残渣を真空乾燥させた。かくして、４２．３ｍｇ（８０％純度，８８％ 理論値）の標題化合物を得、これを、さらに精製せずに逐次反応に使用した。

【0374】

ＨＰＬＣ（方法１０）：Ｒ_ｔ＝２．４８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．６８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３００（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0375】

中間体４６
Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−３−｛［（２Ｓ）−１−｛［４−（メトキシカルボニル）ベンジル］オキシ｝−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドトリフルオロ酢酸塩

【0376】

【化82】

【0377】

２０ｍｇ（２９μｍｏｌ）のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−カルボキシ−１−メトキシプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体１５）を０．５９ｍｌのＤＭＦに添加し、１３．３ｍｇ（３５μｍｏｌ）のＨＡＴＵおよび２０μｌ（１１７μｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンと混合した。３０分後、９．６ｍｇ（３２μｍｏｌ）のメチル−４−（｛［（２Ｓ）−２−アミノ−３−フェニルプロピル］オキシ｝メチル）ベンゾエート塩酸塩（中間体４５）を添加した。その反応組成物を一晩撹拌し、次いで、さらに処理せずに直接、分取用ＨＰＬＣによってその成分に分離した。収量１５．２ｍｇ（５４％ 理論値）のＢｏｃ保護中間体Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−３−｛［（２Ｓ）−１−｛［４−（メトキシカルボニル）ベンジル］オキシ｝−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドを得た。

【0378】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９６７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0379】

トリフルオロ酢酸を用いたＢｏｃ保護基の切断後、１５．８ｍｇ（９９％ 理論値）の標題化合物を得た。

【0380】

ＬＣ−ＭＳ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝０．９０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0381】

実施形態：
実施例１
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１−ナフチルメトキシ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0382】

【化83】

【0383】

２４ｍｇ（２４μｍｏｌ）のＮ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（１−ナフチルメトキシ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドトリフルオロ酢酸塩（中間体２１）と３１．５μｌの１５％水性コハク酸アルデヒド溶液（４９μｍｏｌ）を９００μｌの１：１−ジオキサン／水組成物に溶解させ、１００℃の温度で１時間加熱した。短時間の冷却期間後、１．７ｍｇ（２７μｍｏｌ）のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加した。その反応組成物を、０．１Ｎ塩酸を加えてｐＨ３にし、１００℃の温度で２時間加熱した。これに、同量のコハク酸アルデヒド溶液、シアノ水素化ホウ素ナトリウムおよび塩酸をもう一度添加した後、再度１００℃で２時間再加熱した。その後、その反応組成物を直接、分取用ＨＰＬＣによって分離した。その収量は２０．１ｍｇ（８６％ 理論値）の標題化合物であった。

【0384】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０６分；ｍ／ｚ＝９５９（Ｍ＋Ｈ）^＋。
^１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ［ｐｐｍ］＝０．７３−０．８１（ｍ，３Ｈ），０．８２−１．０５（ｍ，１５Ｈ），１．１９−１．４８（ｍ，３Ｈ），１．５３−２．１０（ｍ，４Ｈ），２．１２−２．４１（ｍ，５Ｈ），２．７９（ｄ，２Ｈ），２．８５−３．０６（ｍ，３Ｈ），３．０６−３．１３（ｍ，３Ｈ），３．１３−３．２８（ｍ，６Ｈ），３．３５−３．４３（ｍ，１Ｈ），３．８９−４．１４（ｍ，１Ｈ），４．４５−４．８１（ｍ，３Ｈ），５．４８−５．７３（ｍ，２Ｈ），７．１３−７．３３（ｍ，５Ｈ），７．４５−７．５３（ｍ，１Ｈ），７．５３−７．６４（ｍ，３Ｈ），７．９１−８．０５（ｍ，３Ｈ），８．２１−８．６０（ｍ，１Ｈ），８．６９−９．０１（ｍ，１Ｈ），９．２７−９．６０（ｍ，１Ｈ）［溶媒のピークに隠れたさらなるシグナル］。

【0385】

実施例２
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（アダマンタン−１−イルオキシ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0386】

【化84】

【0387】

４．８ｍｇ（５μｍｏｌ）のＮ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（アダマンタン−１−イルオキシ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドトリフルオロ酢酸塩（中間体２５）と６．３μｌの１５％水性コハク酸アルデヒド溶液（１０μｍｏｌ）を１８０μｌの１：１−ジオキサン／水組成物に溶解させ、１００℃の温度で１時間加熱した。短時間の冷却期間後、０．３４ｍｇ（５μｍｏｌ）のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加した。その反応組成物を、０．１Ｎ塩酸を加えてｐＨ３にし、１００℃の温度で２時間加熱した。これに、同量のコハク酸アルデヒド溶液、シアノ水素化ホウ素ナトリウムおよび塩酸をもう一度添加した後、再度１００℃で２時間再加熱した。その後、反応組成物を直接、分取用ＨＰＬＣによって分離した。その収量は３．２ｍｇ（６９％ 理論値）の標題化合物であった。

【0388】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．１４分；ｍ／ｚ＝９５２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0389】

実施例３
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（アダマンタン−１−イルメトキシ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0390】

【化85】

【0391】

２６ｍｇ（２６μｍｏｌ）のＮ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（アダマンタン−１−イルメトキシ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドトリフルオロ酢酸塩（中間体２９）と３３．９μｌの１５％水性コハク酸アルデヒド溶液（５３μｍｏｌ）を９５７μｌの１：１−ジオキサン／水組成物に溶解させ、１００℃の温度で１時間加熱した。短時間の冷却期間後、１．８１ｍｇ（２９μｍｏｌ）のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加した。その反応組成物を０．１Ｎ塩酸を加えてｐＨ３にし、１００℃の温度で２時間加熱した。これに、同量のコハク酸アルデヒド溶液、シアノ水素化ホウ素ナトリウムおよび塩酸をもう一度添加した後、再度１００℃で２時間再加熱した。その後、その反応組成物を直接、分取用ＨＰＬＣによって分離した。その収量は１８．５ｍｇ（７３％ 理論値）の標題化合物であった。

【0392】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．１７分；ｍ／ｚ＝９６７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0393】

実施例４
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（ベンジルオキシ）−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0394】

【化86】

【0395】

２４ｍｇ（２６μｍｏｌ）のＮ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（ベンジルオキシ）−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドトリフルオロ酢酸塩（中間体３３）と３３．７μｌの１５％水性コハク酸アルデヒド溶液（５２μｍｏｌ）を９５３μｌの１：１−ジオキサン／水組成物に溶解させ、１００℃の温度で１時間加熱した。短時間の冷却期間後、１．８０ｍｇ（２９μｍｏｌ）のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加した。反応組成物を、０．１Ｎ塩酸を加えてｐＨ３にし、１００℃の温度で２時間加熱した。これに、同量のコハク酸アルデヒド溶液、シアノ水素化ホウ素ナトリウムおよび塩酸をもう一度添加した後、再度１００℃で２時間再加熱した。その後、その反応組成物を直接、分取用ＨＰＬＣによって分離した。その収量は１５．２ｍｇ（６５％ 理論値）の標題化合物であった。

【0396】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０１分；ｍ／ｚ＝８９５（Ｍ＋Ｈ）^＋。
^１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ［ｐｐｍ］＝０．７２−０．８１（ｍ，３Ｈ），０．８１−１．００（ｍ，１５Ｈ），１．０３（ｄｄ，３Ｈ），１．１２−１．５６（ｍ，３Ｈ），１．６２−２．４５（ｍ，１０Ｈ），２．６１−２．７３（ｍ，１Ｈ），２．７８（ｂｒ．ｓ，２Ｈ），２．８４−３．０７（ｍ，３Ｈ），３．１１（ｂｒ．ｓ，２Ｈ），３．１７（ｓ，１Ｈ），３．２１（ｄ，３Ｈ），３．２６（ｓ，３Ｈ），３．３０−３．３５（ｍ，２Ｈ），３．５１−３．９４（ｍ，４Ｈ），４．００（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），４．０８−４．３５（ｍ，１Ｈ），４．５０（ｓ，１Ｈ），４．５３（ｓ，１Ｈ），４．５５−４．７８（ｍ，２Ｈ），７．１２−７．１６（ｍ，１Ｈ），７．１６−７．２５（ｍ，４Ｈ），７．３０（ｄ，１Ｈ），７．３３−７．４２（ｍ，４Ｈ），７．７６および８．０１（２ｄ，１Ｈ），８．７３−８．９８（ｍ，１Ｈ）［溶媒のピークに隠れたさらなるシグナル］。

【0397】

実施例５
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（ベンジルオキシ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0398】

【化87】

【0399】

５３ｍｇ（８４μｍｏｌ）のＮ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチルヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体４）と４５ｍｇ（８４μｍｏｌ）のベンジル−Ｎ−｛（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパノイル｝−Ｌ−フェニルアラニナートトリフルオロ酢酸塩（中間体８）を２ｍｌのＤＭＦ中で吸収させ、１９μｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、１４ｍｇ（９２μｍｏｌ）のＨＯＢｔ、および１７．６ｍｇ（９２μｍｏｌ）のＥＤＣと混合し、次いで室温で一晩撹拌した。次いで、その反応組成物をエバポレートし、その残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。このようにして、５９ｍｇ（６８％ 理論値）のＦｍｏｃ保護中間体Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（ベンジルオキシ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドを得た。

【0400】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．５５分；ｍ／ｚ＝１０４４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0401】

５７ｍｇ（０．０５５ｍｍｏｌ）のこの中間体を、Ｆｍｏｃ保護基の脱離のために１．２ｍｌのピペリジンを含む５ｍｌのジクロロメタンで処理した。エバポレーションおよび精製（ＨＰＬＣの補助による）後、３９ｍｇ（７６％ 理論値）の遊離アミン中間体Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（ベンジルオキシ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドをトリフルオロ酢酸塩として得た。

【0402】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝１．９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０１分；ｍ／ｚ＝８２２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0403】

３７ｍｇ（０．０４５ｍｍｏｌ）のこの中間体を５ｍｌのジオキサン／水（１：１）に溶解させ、実施例６の作製と同様にしてシアノ水素化ホウ素ナトリウムの存在下にて１５％４−オキソ−酪酸水溶液で処理した。１６ｍｇ（３９％ 理論値）の標題化合物を無色の泡状物として得た。

【0404】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．０１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９０８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0405】

実施例６
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ，３Ｓ）−１−（ベンジルオキシ）−１−オキソ−３−フェニルブタン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0406】

【化88】

【0407】

初めに、アミン化合物Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ，３Ｓ）−１−（ベンジルオキシ）−１−オキソ−３−フェニルブタン２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドを、実施例５に記載の合成と同様にして中間体４と７を基にして作製した。

【0408】

３０ｍｇ（０．０３２ｍｍｏｌ）のこの化合物を６ｍｌのジオキサン／水（１：１）に溶解させ、４１μｌ（０．０６３ｍｍｏｌ）の１５％水性４−オキソ酪酸溶液と混合した。次いで、このバッチを１００℃で１時間撹拌した。その混合物を室温に冷却後、２．２ｍｇ（０．０３５ｍｍｏｌ）のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加し、およそ３００μｌの０．１Ｎ塩酸を添加することによりその組成物をｐＨ値３に調整した。次いで、このバッチを１００℃で２時間撹拌した。冷却後、４１μｌ（０．０６３ｍｍｏｌ）の１５％水性４−オキソ酪酸溶液を再度添加し、そのバッチを１００℃で１時間、再度撹拌した。次いで、さらに２．２ｍｇ（０．０３５ｍｍｏｌ）のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加し、次いで、３００μｌの０．１Ｎ塩酸でｐＨ値３に再度調整した。この場合も、バッチを１００℃で２時間撹拌した。その処理が不完全である場合、３回目のこの手順を繰り返した。最後にそのバッチをエバポレートし、そのままの生成物を分取用ＨＰＬＣによって精製した。２４ｍｇ（８２％ 理論値）の標題化合物を無色の泡状物として得た。

【0409】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝１．９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法９）：Ｒ_ｔ＝５．１５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0410】

実施例７
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−３−｛［（２Ｓ）−１−メトキシ−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0411】

【化89】

【0412】

初めに、アミン化合物Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−３−｛［（２Ｓ）−１−メトキシ−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドを、実施例５に記載の合成と同様にして中間体４と１１を基にして作製した。７ｍｇ（０．００９ｍｍｏｌ）のこの化合物から２ｍｇ（２２％ 理論値）の標題化合物を得た（実施例６の作製と同様にしてシアノ水素化ホウ素ナトリウムの存在下にて４−オキソ酪酸で処理して）。

【0413】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝１．９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒ_ｔ＝１．０６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0414】

実施例８
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（ベンジルオキシ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１−オキソプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0415】

【化90】

【0416】

２１２ｍｇ（４１１μｍｏｌ）のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチルヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体５）と２３７ｍｇ（４１１μｍｏｌ）のベンジル−Ｎ−｛（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパノイル｝−Ｌ−トリプトファナートトリフルオロ酢酸塩（中間体１２）を３０ｍｌのＤＭＦ中で吸収させ、１８８ｍｇ（４９３μｍｏｌ）のＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェートおよび２１５μｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンと混合した。このバッチを室温で２０時間撹拌し、次いで真空下でエバポレートし、その残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。その生成物画分を合わせ、エバポレートし、その残渣を高真空にて乾燥させた。収量３１５ｍｇ（８０％ 理論値）のＢｏｃ保護中間体Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（ベンジルオキシ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１−オキソプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドを無色の泡状物として得た。

【0417】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４５分；ｍ／ｚ＝９６１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0418】

５０ｍｇ（５２μｍｏｌ）のこの中間体を、Ｂｏｃ保護基の切断のために１ｍｌのピペリジンを含む９ｍｌのジクロロメタンで処理した。エバポレーションおよび精製（ＨＰＬＣの補助による）後、２９ｍｇ（５７％ 理論値）の遊離アミン中間体Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（ベンジルオキシ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１−オキソプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドをトリフルオロ酢酸塩として得た。

【0419】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９９分；ｍ／ｚ＝８６１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0420】

２９ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）のこの中間体を６ｍｌのジオキサン／水（１：１）に溶解させ、３９μｌ（０．０５９ｍｍｏｌ）の１５％水性４−オキソ酪酸溶液と混合した。次いで、このバッチを１００℃で１時間撹拌した。混合物を室温に冷却後、２ｍｇ（０．０３３ｍｍｏｌ）のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加し、およそ３００μｌの０．１Ｎ塩酸を添加することによりその混合物をｐＨ値３に調整した。次いで、このバッチを１００℃で２時間撹拌した。冷却後、３９μｌ（０．０５９ｍｍｏｌ）の１５％水性４−オキソ酪酸溶液を再度添加し、そのバッチを１００℃で１時間、再度撹拌した。次いで、さらに２ｍｇ（０．０３３ｍｍｏｌ）のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加し、次いで、３００μｌの０．１Ｎ塩酸でｐＨ値３に再度調整した。次いで、この組成物を１００℃で２時間撹拌した。次いで、このバッチを、半飽和水性塩化アンモニウム溶液と酢酸エチルの１：１の混合物に注入した。有機相を分離し、飽和水素化ナトリウム溶液でスクラビングし、水素化ナトリウムで乾燥させ、エバポレートした。その残渣を水／アセトニトリルから凍結乾燥させた。２７ｍｇ（９４％ 理論値）の標題化合物を無色の泡状物として得た。

【0421】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法９）：Ｒ_ｔ＝５．０４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９４７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0422】

実施例９
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−（｛（２Ｓ）−１−［ベンジル（メチル）アミノ］−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル｝アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0423】

【化91】

【0424】

初めに、アミン化合物Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−（｛（２Ｓ）−１−［ベンジル（メチル）アミノ］−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル｝アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドを、実施例５に記載の合成と同様にして中間体４と１０を基にして作製した。次いで、２５ｍｇ（０．０２６ｍｍｏｌ）のこの化合物から、１３ｍｇ（５４％ 理論値）の標題化合物を得た（実施例６の作製と同様にしてシアノ水素化ホウ素ナトリウムの存在下での４−オキソ酪酸での処理によって）。

【0425】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法９）：Ｒ_ｔ＝５．０１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0426】

実施例１０
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−（｛（１Ｓ，２Ｒ）−１−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−２−フェニルシクロプロピル｝アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0427】

【化92】

【0428】

５０ｍｇ（７３μｍｏｌ）のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−カルボキシ−１−メトキシプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体１５）および２８ｍｇ（７３μｍｏｌ）のベンジル−（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−フェニルシクロプロパンカルボキシレートトリフルオロ酢酸塩（中間体３８）を５ｍｌのＤＭＦ中で吸収させ、４２ｍｇ（１１０μｍｏｌ）のＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェートおよび３８μｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンと混合した。このバッチを室温で５時間撹拌し、次いで真空下でエバポレートし、その残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。その生成物画分を混合し、エバポレートした。ジオキサン／水で凍結乾燥後、３５ｍｇ（５１％ 理論値）のＢｏｃ保護中間体Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−（｛（１Ｓ，２Ｒ）−１−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−２−フェニルシクロプロピル｝アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドを無色の泡状物の形態で得た。

【0429】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．５２分；ｍ／ｚ＝９３４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0430】

３５ｍｇのこの中間体を、Ｂｏｃ保護基の切断のために１ｍｌのトリフルオロ酢酸を含む５ｍｌのジクロロメタンで処理した。エバポレーションおよびジオキサン／水での凍結乾燥後、３４ｍｇ（９７％ 理論値）の遊離アミン中間体Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−（｛（１Ｓ，２Ｒ）−１−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−２−フェニルシクロプロピル｝アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドをトリフルオロ酢酸塩として得た。

【0431】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９１分；ｍ／ｚ＝８３４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0432】

１１ｍｇ（０．０１１ｍｍｏｌ）のこの中間体から２．５ｍｇ（２４％ 理論値）の標題化合物を無色の泡状物の形態で得た（実施例６の作製と同様にして、シアノ水素化ホウ素ナトリウムの存在下で４−オキソ酪酸での処理によって）。

【0433】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法９）：Ｒ_ｔ＝５．１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0434】

実施例１１
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−２−フェニル−１−（プロピルカルバモイル）シクロプロピル］アミノ｝プロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0435】

【化93】

【0436】

まず、アミン化合物Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−２−フェニル−１−（プロピルカルバモイル）シクロプロピル］アミノ｝プロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドをトリフルオロ酢酸塩として、実施例１０に記載の合成と同様にして、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−カルボキシ−１−メトキシプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体１５）と（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−フェニル−Ｎ−プロピルシクロプロパンカルボキサミドトリフルオロ酢酸塩（中間体１６）とのカップリング（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェートの存在下）、続いて、トリフルオロ酢酸の補助によるＢｏｃ保護基の切断により作製した。１４ｍｇ（０．０１６ｍｍｏｌ）のこの化合物から１１．３ｍｇ（８３％ 理論値）の標題化合物を得た（実施例６の作製と同様にしてシアノ水素化ホウ素ナトリウムの存在下で４−オキソ酪酸で処理して）。

【0437】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝１．９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒ_ｔ＝１．２７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８７１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0438】

実施例１２
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−１−（エトキシ−カルボニル）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0439】

【化94】

【0440】

まず、アミン化合物Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−１−（エトキシカルボニル）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドをトリフルオロ酢酸塩として、実施例１０に記載の合成と同様にして、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−カルボキシ−１−メトキシプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体１５）とエチル−（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−フェニルシクロプロパンカルボキシレートトリフルオロ酢酸塩（中間体１７）とのカップリング（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェートの存在下）、続いて、トリフルオロ酢酸の補助によるＢｏｃ保護基の切断により作製した。７０ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）のこの化合物から４６ｍｇ（６８％ 理論値）の標題化合物を得た（実施例６の作製と同様にして、シアノ水素化ホウ素ナトリウムの存在下で４−オキソ酪酸での処理によって）。

【0441】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝１．９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒ_ｔ＝１．２８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５８（Ｍ＋Ｈ）^＋。
^１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ＝８．９５および８．８（２ｍ，１Ｈ），８．８５および８．７（２ｓ，１Ｈ），７．４−７．１（ｍ，５Ｈ），４．８および４．６５（２ｍ，１Ｈ），４．５５（ｍ，１Ｈ），４．１２−３．９５（ｍ，２Ｈ），３．９−３．８（ｍ，１Ｈ），３．８−３．４（ｍ，５Ｈ），３．３５，３．３０，３．２０，３．１５，３．１０，３．００，２．８１ａｎｄ２．７９（８ｓ，１２Ｈ），２．８５−２．７（ｍ，２Ｈ），２．７−２．６（ｍ，１Ｈ），２．４−２．２（ｍ，３Ｈ），２．１−１．６（ｍ，９Ｈ），１．５−１．２（ｍ，３Ｈ），１．２−０．７（ｍ，２４Ｈ）［溶媒のピークに隠れたさらなるシグナル］。

【0442】

実施例１３
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−アミノ−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0443】

【化95】

【0444】

まず、アミン化合物Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−アミノ−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドをトリフルオロ酢酸塩として、実施例１０に記載の合成と同様にして、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−カルボキシ−１−メトキシプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体１５）とＬ−フェニルアラニンアミド−塩酸塩とのカップリング（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェートの存在下）、続いて、トリフルオロ酢酸の補助によるＢｏｃ保護基の切断により作製した。４７ｍｇ（０．０４９ｍｍｏｌ）のこの化合物から３９ｍｇ（９６％ 理論値）の標題化合物を得た（実施例６の作製と同様にしてシアノ水素化ホウ素ナトリウムの存在下で４−オキソ酪酸で処理して）。

【0445】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝１．７分；
ＬＣ−ＭＳ（方法９）：Ｒ_ｔ＝４．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１７（Ｍ＋Ｈ）^＋。
^１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ＝８．９５および８．８（２ｍ，１Ｈ），８．２５および８．０（２ｄ，１Ｈ），７．４５，７．３５および７．０（３ｓ，幅広，２Ｈ），７．３−７．１（ｍ，５Ｈ），４．８−４．４（２ｍ，３Ｈ），３．９５（ｍ，１Ｈ），３．８２（ｍ，１Ｈ），３．７２（ｄ，１Ｈ），３．２２，３．１８，３．１５，３．０５および３．００（５ｓ，９Ｈ），２．８５−２．７（ｍ，４Ｈ），２．４５−１．６（ｍ，１２Ｈ），１．５−１．２（ｍ，３Ｈ），１．１−０．７（ｍ，２１Ｈ）［溶媒のピークに隠れたさらなるシグナル］。

【0446】

実施例１４
（３Ｒ，４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ）−３−（２−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（２−ベンゾイルヒドラジノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−２−オキソエチル）−４−［（２Ｓ）−ブタン−２−イル］−７，１０−ジイソプロピル−５，１１−ジメチル−６，９−ジオキソ−２−オキサ−５，８，１１−トリアザペンタデカン−１５−酸

【0447】

【化96】

【0448】

６．２ｍｇ（６μｍｏｌ）の（２Ｓ）−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（２−ベンゾイルヒドラジノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ，３−ジメチル−２−｛［（２Ｓ）−３−メチル−２−（メチルアミノ）ブタノイル］アミノ｝ブタンアミドトリフルオロ酢酸塩（中間体３７）と８．３μｌの１５％水性コハク酸アルデヒド溶液（１３μｍｏｌ）を２３５μｌの１：１−ジオキサン／水組成物に溶解させ、１００℃の温度で１時間加熱した。短い冷却期間後、０．５ｍｇ（７μｍｏｌ）のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加した。その反応組成物を、０．１Ｎ塩酸を加えてｐＨ３にし、１００℃の温度で２時間加熱した。これに、同量のコハク酸アルデヒド溶液、シアノ水素化ホウ素ナトリウムおよび塩酸をもう一度添加した後、再度１００℃で２時間再加熱した。その後、その反応組成物を直接、分取用ＨＰＬＣによって分離した。その収量は４．１ｍｇ（６８％ 理論値）の標題化合物であった。

【0449】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８６分；ｍ／ｚ＝９３６（Ｍ＋Ｈ）^＋。
^１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ［ｐｐｍ］＝０．７１−０．８１（ｍ，３Ｈ），０．８２−１．０２（ｍ，１５Ｈ），１．０５（ｄ，２Ｈ），１．１９−１．５１（ｍ，３Ｈ），１．５６−１．８９（ｍ，３Ｈ），１．８９−２．１２（ｍ，２Ｈ），２．１８−２．４４（ｍ，５Ｈ），２．７１−２．９０（ｍ，３Ｈ），２．９４−３．２８（ｍ，１０Ｈ），３．３６−３．６７（ｍ，３Ｈ），３．７１−４．０２（ｍ，１Ｈ），４．５３−４．９１（ｍ，３Ｈ），７．１４−７．２０（ｍ，１Ｈ），７．２４（ｄｄ，２Ｈ），７．３１（ｄ，１Ｈ），７．３５（ｄ，１Ｈ），７．５２（ｄｄ，２Ｈ），７．６０（ｄｄ，１Ｈ），７．９２（ｄ，２Ｈ），８．２４および８．４６（２ｄ，１Ｈ），１０．２−１０．３（ｍ，１Ｈ），１０．４４−１０．５２（ｍ，１Ｈ）［溶媒のピークに隠れたさらなるシグナル]。

【0450】

実施例１５
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（ベンジルアミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0451】

【化97】

【0452】

３６ｍｇ（４３μｍｏｌ）のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（１Ｓ）−１−カルボキシ−２−フェニルエチル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体３９）と４．６ｍｇ（４３μｍｏｌ）のベンジルアミンを５ｍｌのＤＭＦ中で吸収させ、７．５μｌ（８８μｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、１０ｍｇ（６５μｍｏｌ）のＨＯＢｔならびに１０ｍｇ（５２μｍｏｌ）のＥＤＣと混合し、次いで、室温で一晩撹拌した。次いで、その反応組成物をエバポレートし、その残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製した。このようにして、２９ｍｇ（７３％ 理論値）のＢｏｃ保護中間体Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（ベンジルアミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドを得た。

【0453】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝１．４３分；ｍ／ｚ＝９２１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0454】

２９ｍｇのこの中間体を、Ｂｏｃ保護基の切断のために１ｍｌのトリフルオロ酢酸を含む６ｍｌのジクロロメタンで処理した。エバポレーションおよびジオキサン／水での凍結乾燥後、３０ｍｇ（定量的）の遊離アミン中間体Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（ベンジルアミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドをトリフルオロ酢酸塩として得た。

【0455】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９５分；ｍ／ｚ＝８２１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0456】

１７ｍｇ（０．０１８ｍｍｏｌ）のこの中間体から１３ｍｇ（８０％ 理論値）の標題化合物を無色の泡状物の形態で得た（実施例６の作製と同様にしてシアノ水素化ホウ素ナトリウムの存在下にて４−オキソ酪酸で処理して）。

【0457】

ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒ_ｔ＝１．７分；
ＬＣ−ＭＳ（方法９）：Ｒ_ｔ＝４．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９０７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0458】

実施例１６
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（ベンジル−アミノ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１−オキソプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0459】

【化98】

【0460】

まず、アミン化合物Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（ベンジルアミノ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１−オキソプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−プロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドをトリフルオロ酢酸塩として、実施例１０に記載の合成と同様にして、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−カルボキシ−１−メトキシプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体１５）とＮ−ベンジル−Ｌ−トリプトファンアミドトリフルオロ酢酸塩（中間体４０）とのカップリング（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェートの存在下）、続いて、トリフルオロ酢酸の補助によるＢｏｃ保護基の切断により作製した。１０ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）のこの化合物から２．５ｍｇ（２６％ 理論値）の標題化合物を得た（実施例６の作製と同様にしてシアノ水素化ホウ素ナトリウムの存在下にて４−オキソ酪酸で処理によって）。

【0461】

ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒ_ｔ＝１．７分；
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒ_ｔ＝１．１３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９４６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0462】

実施例１７
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−１−カルバモイル−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0463】

【化99】

【0464】

まず、アミン化合物Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（１Ｓ，２Ｒ）−１−カルバモイル−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドをトリフルオロ酢酸塩として、実施例１０に記載の合成と同様にして、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−カルボキシ−１−メトキシプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体１５）と（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−フェニルシクロプロパンカルボキサミドトリフルオロ酢酸塩（中間体４１）とのカップリング（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェートの存在下）、続いて、トリフルオロ酢酸の補助によるＢｏｃ保護基の切断により作製した。１５ｍｇ（０．０１７５ｍｍｏｌ）のこの化合物から１１ｍｇ（７６％ 理論値）の標題化合物を得た（実施例６の作製と同様にしてシアノ水素化ホウ素ナトリウムの存在下にて４−オキソ酪酸で処理によって）。

【0465】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝１．７分；
ＬＣ−ＭＳ（方法９）：Ｒ_ｔ＝４．６６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0466】

実施例１８
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１−オキソプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0467】

【化100】

【0468】

まず、アミン化合物Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１−オキソプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドを、トリフルオロ酢酸塩として、実施例５および１０に記載の合成と同様にして、Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−１−カルボキシ−２−メトキシ−４−メチルヘキサン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体４）とＮ^α−｛（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］プロパノイル｝−Ｌ−トリプトファンアミドトリフルオロ酢酸塩（中間体４２）とのカップリング（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェートの存在下）、続いて、ピペリジンの補助によるＦｍｏｃ保護基の切断により作製した。７８ｍｇ（０．０８８ｍｍｏｌ）のこの化合物から６８ｍｇ（９０％ 理論値）の標題化合物を得た（実施例６の作製と同様にしてシアノ水素化ホウ素ナトリウムの存在下にて４−オキソ酪酸で処理によって）。

【0469】

ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒ_ｔ＝１．８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法９）：Ｒ_ｔ＝４．４９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0470】

実施例１９
Ｎ−（５−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１−オキソプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0471】

【化101】

【0472】

標題化合物を、実施例１８の合成と同様にして、２０ｍｇ（２６μｍｏｌ）のＮ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３イル）−１−オキソプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドトリフルオロ酢酸塩と６−オキソヘキサン酸でシアノ水素化ホウ素ナトリウムの存在下にて作製した。

【0473】

収量：５ｍｇ（２５％ 理論値）
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒ_ｔ＝１．６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１１）：Ｒ_ｔ＝０．７２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８８４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0474】

実施例２０
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0475】

【化102】

【0476】

まず、アミン化合物Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドをトリフルオロ酢酸塩として、実施例１６に記載の合成と同様にして、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−カルボキシ−１−メトキシプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体１５）とｔｅｒｔ−ブチル−Ｌ−フェニルアラニナート−塩酸塩とのカップリング（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェートの存在下）、続いて、トリフルオロ酢酸の補助によりＢｏｃ保護基を注意深く切断し、ｔｅｒｔ−ブチルエステル基を維持すること（これを１０％のトリフルオロ酢酸を含むジクロロメタンとともに室温で４０分間撹拌）により作製した。２２ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ，８０％純度）のこの化合物から１６ｍｇ（９４％ 理論値）の標題化合物を得た（実施例１の作製と同様にしてシアノ水素化ホウ素ナトリウムの存在下にて４−オキソ酪酸で処理して）。

【0477】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．０分；
ＬＣ−ＭＳ（方法９）：Ｒ_ｔ＝５．０５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８７４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0478】

実施例２１
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブトキシ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１−オキソプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0479】

【化103】

【0480】

標題化合物を３段階で、実施例２０に記載の合成と同様にして、２３０ｍｇ（３３６μｍｏｌ）のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−カルボキシ−１−メトキシプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体１５）とｔｅｒｔ−ブチル−Ｌ−トリプトファナート−塩酸塩を基にして作製した。

【0481】

収量：９５ｍｇ（３段階で３１％ 理論値）
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝２．０分；
ＬＣ−ＭＳ（方法９）：Ｒ_ｔ＝５．０５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９１３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0482】

実施例２２
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（１Ｓ）−１−カルボキシ−２−（１Ｈ−インドール−３−イル）エチル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0483】

【化104】

【0484】

８ｍｇ（９μｍｏｌ）の実施例２１の化合物を、１ｍｌのトリフルオロ酢酸を含む３ｍｌのジクロロメタンとともに室温で４時間撹拌した。バッチを真空下でエバポレートした後、そのままの生成物を分取用ＨＰＬＣによって精製した。

【0485】

収量：３ｍｇ（３７％ 理論値）
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．７７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0486】

実施例２３
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（モルホリン−４−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0487】

【化105】

【0488】

まず、アミン化合物Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−｛［（２Ｓ）−１−（モルホリン−４−イル）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドをトリフルオロ酢酸塩として、実施例１５に記載の合成と同様にして、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（１Ｓ）−１−カルボキシ−２−フェニルエチル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体３９）とモルホリンとのカップリング（ＥＤＣとＨＯＢｔの存在下）、続いて、トリフルオロ酢酸の補助によるＢｏｃ保護基の切断により作製した。３０ｍｇ（０．０３３ｍｍｏｌ）のこの化合物から、次いで、２２ｍｇ（７６％ 理論値）の標題化合物を得た（実施例１の作製と同様にして、シアノ水素化ホウ素ナトリウムの存在下で４−オキソ酪酸での処理によって）。

【0489】

ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒ_ｔ＝１．６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法９）：Ｒ_ｔ＝４．５８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８８７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0490】

実施例２４
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（１Ｓ）−１−カルボキシ−２−フェニルエチル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0491】

【化106】

【0492】

０．４ｍｇ（０．５μｍｏｌ）の実施例２０の化合物を１ｍｌのジクロロメタン中で吸収させ、１ｍｌのトリフルオロ酢酸と混合した。室温で１時間の撹拌後、この混合物をエバポレートし、その残渣をジオキサン／水で凍結乾燥させた。０．３７ｍｇ（９９％ 理論値）の標題化合物を無色の泡状物として得た。

【0493】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝１．６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0494】

実施例２５
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ，３Ｒ）−１−（ベンジルアミノ）−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0495】

【化107】

【0496】

まず、アミン化合物Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ，３Ｒ）−１−（ベンジルアミノ）−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドをトリフルオロ酢酸塩として、実施例１６に記載の合成と同様にして、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−カルボキシ−１−メトキシプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（中間体１５）とＮ−ベンジル−Ｌ−トレオニンアミドトリフルオロ酢酸塩とのカップリング（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェートの存在下）、続いて、トリフルオロ酢酸の補助によるＢｏｃ保護基の切断により作製した。２１ｍｇ（０．０２４ｍｍｏｌ）のこの化合物から２０ｍｇ（９７％ 理論値）の標題化合物を得た（実施例１の作製と同様にして、シアノ水素化ホウ素ナトリウムの存在下で４−オキソ酪酸での処理によって）。

【0497】

ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝１．５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法９）：Ｒ_ｔ＝４．４９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0498】

実施例２６
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−３−｛［（２Ｓ）−１−｛［４−（メトキシカルボニル）ベンジル］オキシ｝−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0499】

【化108】

【0500】

１１．５ｍｇ（１２μｍｏｌ）のＮ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−３−｛［（２Ｓ）−１−｛［４−（メトキシカルボニル）ベンジル］オキシ｝−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドトリフルオロ酢酸塩（中間体４６）を０．７ｍｌのジオキサン／水（１：１）に溶解させ、実施例１と同様にして、シアノ水素化ホウ素ナトリウムの存在下で４−オキソ酪酸の１５％水溶液で処理した。ジオキサンからの凍結乾燥後、その収量は８．３ｍｇ（７４％ 理論値）の標題化合物（白色固形物質の形態）であった。

【0501】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９５３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0502】

実施例２７
Ｎ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−（｛（２Ｓ）−１−［（４−カルボキシベンジル）オキシ］−３−フェニルプロパン−２−イル｝アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0503】

【化109】

【0504】

７．５ｍｇ（８μｍｏｌ）のＮ−（３−カルボキシプロピル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−３−｛［（２Ｓ）−１−｛［４−（メトキシカルボニル）ベンジル］オキシ｝−３−フェニルプロパン−２−イル］アミノ｝−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（実施例２６）を０．２５ｍｌのＴＨＦ／水（１：１）に溶解させた。０．８ｍｇ（３２μｍｏｌ）の水酸化リチウムを添加し、そのバッチを室温で３時間撹拌した。次いで、その反応組成物を１Ｎ塩酸で酸性化し、各々５ｍｌの酢酸エチルで３回抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空でエバポレートした。ジオキサンからの凍結乾燥後、収量は２．３ｍｇ（７１％純度，２２％ 理論値）の標題化合物（白色固形物質の形態）であった。

【0505】

ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９３９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0506】

実施例２８
Ｎ−（５−カルボキシペンチル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（ベンジルアミノ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１−オキソプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド

【0507】

【化110】

【0508】

標題化合物を、実施例１６の合成と同様にして、１００ｍｇ（１０３μｍｏｌ）のＮ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（２Ｓ）−１−（ベンジルアミノ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１−オキソプロパン−２−イル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドトリフルオロ酢酸塩を６−オキソヘキサン酸で、シアノ水素化ホウ素ナトリウムの存在下にて処理することによって作製した。

【0509】

収量：４０ｍｇ（４０％ 理論値）
ＨＰＬＣ（方法５）：Ｒ_ｔ＝１．９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒ_ｔ＝０．９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９７４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0510】

Ｂ．生物学的有効性の評価
本革新的化合物の生物学的活性は、平均的な専門技術者に知られたインビトロおよびインビボ試験によって実証することができる。例えば、本発明の化合物の薬理学的特性および薬物動態特性は、下記のアッセイによって測定することができる。

【0511】

Ｂ−１．腎細胞癌７８６−Ｏ細胞系の抗増殖効果の測定：
定義の細胞数のヒト腎癌細胞系７８６−Ｏを、富栄養培地中の９６ウェルマイクロタイタープレート内で培養し（２５００または７０００細胞／ウェル）、次いで、３７℃／５％ＣＯ_２で一晩インキュベートした。１８時間後、シード培地を無血清培地または２％ＦＣＳを含む培地と交換した。種々の濃度（１０^−５Ｍ〜１０^−１４Ｍ）のそれぞれの試験物質を測って分配することにより処理を開始した。４８時間〜９６時間のインキュベーション時間を選択した。ＭＴＴアッセイ（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ，ＵＳＡ，カタログ番号３０−１０１０Ｋ）によって増殖を測定した。インキュベーション期間の終了後、ＭＴＴ試薬を細胞とともに４時間インキュベートした後、デタージェントを測って分配することにより溶解を一晩行なった。生じた染色を５７０ｎｍで検出した。その他の細胞と同一に処理したが試験物質なしの細胞の増殖を１００％の値と定義した。この試験で得られたデータは三連の測定のものを表し、少なくとも２つの実験は互いに独立して行なった。

【0512】

このアッセイの代表的な実施形態のＩＣ_５０値を以下の表１に示す。

【0513】

【表1】

【0514】

比較として、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）は、この試験で２６０ｎＭのＩＣ_５０値を示す。

【0515】

Ｂ−２．ＨＴ２９ ｗｔ細胞系の抗増殖効果の測定：
定義の細胞数のヒト結腸癌細胞系ＨＴ２９ｗｔ（野生型）を、富栄養培地（１０％ ＦＣＳ−ＲＰＭＩ）中の９６ウェルマイクロタイタープレート内で培養し（２５００細胞／ウェル）、次いで、３７℃／５％ＣＯ_２で一晩インキュベートした。１８時間後、シード培地を、１０％のＦＣＳを含む新鮮培地と交換した。それぞれの試験物質を測って分配することにより処理を開始した。１０^−５Ｍ〜１０^−１４Ｍ（１：１０の希釈度）の濃度の試験対象物質の用量応答曲線を決定した。４８時間〜９６時間のインキュベーション時間を選択した。ＭＴＴアッセイ（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ，ＵＳＡ，カタログ番号３０−１０１０Ｋ）によって増殖を検出した。選択したインキュベーション期間の終了後、ＭＴＴ試薬を細胞とともに４時間インキュベートした後、デタージェントを測って分配することにより溶解を一晩行なった。生じた染色を５７０ｎｍで検出した。その他の細胞と同一に処理したが試験物質なしの細胞の増殖を１００％の値と定義した。この試験で得られたデータは三連の測定のものを表し、少なくとも２つの実験は互いに独立して行なった。

【0516】

このアッセイの代表的な実施形態のＩＣ_５０値を以下の表２に示す。

【0517】

【表2】

【0518】

比較として、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）は、この試験で１０ｎＭのＩＣ_５０値を示す。

【0519】

Ｂ−３．チューブリンの重合に対する影響の測定：
がん細胞は、非常に多くの場合、細胞分裂の増大によって腫瘍形成ももたらす変性細胞である。微小管は、紡錐体器官の紡錘糸を形成しており、細胞周期の必須成分である。微小管の構成と分解の調和により、娘核への染色体の正確な分布を可能とし連続的な動的プロセスを形成する。この動的周期の破壊により欠陥性の細胞分裂がもたらされ、最終的に細胞死に至る。また、がん細胞は、細胞分裂が増大すると、化学療法の不可欠部分である紡錘糸毒に対して特に感受性になる。パクリタキセルまたはエポチロンなどの紡錘糸毒は、微小管の重合速度を大きく増大させるが、ビンカアルカロイド（またはモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）も）は、微小管の重合速度を有意に低減させる。どちらの場合も、必要な細胞周期のダイナミクスがかなり破壊される。本発明において試験した化合物は、微小管の重合速度の低減をもたらすものである。

【0520】

チューブリンの重合の試験には、Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ社の「蛍光系Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ」（Ｄｅｎｖｅｒ，Ｃｏｌｏｒａｄｏ，ＵＳＡ；注文番号：ＢＫ０１１）を使用した。このアッセイでは、非重合チューブリンＧＴＰを添加して自発重合を誘発させた。このアッセイは、フルオロフォアの４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）のチューブリンに対する結合に基づいたものである。遊離型と結合型のＤＡＰＩは、発光スペクトルが異なるため識別することができる。ＤＡＰＩは、非重合チューブリンとは対照的に重合チューブリンに対して有意により高い親和性を有するため、チューブリンの重合は、蛍光結合型ＤＡＰＩフルオロフォアが増大するにつれて観察することができる。

【0521】

このアッセイを行なうため、ＤＭＳＯに溶解させた試験物質を、初期濃度１０ｍＭから１μＭまで水で希釈した。バッファー対照に加え、重合促進パクリタキセルを用いたアッセイ対照を実施し、他方では、重合抑制ビンブラスチンを用いた対照を行なった。測定には、９６ウェル有孔プレートの床スペースの半分を使用した。３７℃の１時間の期間のチューブリン重合のキネティクスを、蛍光光度計を用いてモニタリングした。励起波長は３５５ｎｍとし、発光は４６０ｎｍで観察した。最初の１０分以内の線形増大領域で、１分あたりの蛍光の変化（ΔＦ／分）（これは、微小管の重合速度である）を計算した。試験物質の効力を、それぞれの重合速度の低減によって定量化した。

【0522】

Ｂ−４．インビトロでの血漿安定性の測定：
方法Ａ：
１ｍｇのそれぞれの試験物質を０．５ｍｌのアセトニトリル／ＤＭＳＯ（９：１）に溶解させ、この溶液から２０μｌを抽出し、１ｍｌのラット血漿およびヒト血漿にそれぞれ添加し、３７℃まで加熱した（それぞれ、Ｆａ．Ｈａｒｌａｎ ＆ ＷｉｎｋｅｌｍａｎｎのＬｉ−ヘパリン加雄Ｗｉｓｔａｒラットの血漿のおよび採血された全血由来の新鮮ヒト白血球枯渇血漿）。充分に振っておいたこの血漿溶液から、試料の添加の直後に１００μｌのアリコートを（参照としての基底値）、次いで、各々、５、１０、３０、６０、１２０、１８０および２４０分後、ならびに必要であれば２４時間後に１００μｌのアリコートを抽出し、３００μｌのアセトニトリルに添加した。沈殿した血漿タンパク質を５０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、３０μｌの上清を、未変化の試験物質の濃度に関してＨＰＬＣによって解析した。定量化は、個々のピークの面積割合によって行なった。

【0523】

ラット血漿についてのＨＰＬＣ法：
機器：ＤＡＤ、バイナリーポンプ、オートサンプラー、カラムオーブンおよびサーモスタットを備えたＡｇｉｌｅｎｔ １２００、カラム：Ｋｒｏｍａｓｉｌ １００ Ｃ１８，２５０ｍｍ×４ｍｍ，５μｍ；カラム温度：４５℃；溶離液Ａ：５ｍｌの過塩素酸／１Ｌの水，溶離液Ｂ：アセトニトリル；勾配：０〜８分 ９８％のＡ，２％のＢ；８〜１５分 ５６％のＡ，４４％のＢ；１５〜２０分 １０％のＡ，９０％のＢ；２０〜２１分 １０％のＡ，９０％のＢ；２１〜２３分 ９８％のＡ，２％のＢ；２３〜２５分 ９８％のＡ，２％のＢ；流速：２ｍｌ／分；ＵＶ検出：２２０ｎｍ。

【0524】

ヒト血漿についてのＨＰＬＣ法：
機器：ＤＡＤ、バイナリーポンプ、オートサンプラー、カラムオーブンおよびサーモスタットを備えたＡｇｉｌｅｎｔ １１００，カラム：Ｋｒｏｍａｓｉｌ １００ Ｃ１８，２５０ｍｍ×４ｍｍ，５μｍ；カラム温度：４５℃；溶離液Ａ：５ｍｌの過塩素酸／１Ｌの水，溶離液Ｂ：アセトニトリル；勾配：０〜３分 ９８％のＡ，２％のＢ；３〜１０分 ６５％のＡ，３５％のＢ；１０〜１５分 ４０％のＡ，６０％のＢ；１５〜２１分 １０％のＡ，９０％のＢ；２１〜２２分 １０％のＡ，９０％のＢ；２２〜２４分 ９８％のＡ，２％のＢ；２４〜２６分 ９８％のＡ，２％のＢ；流速：２ｍｌ／分；ＵＶ検出：２２０ｎｍ。

【0525】

方法Ｂ：
対応する試験物質を、それぞれラット血漿およびヒト血漿中で、軽く撹拌しながら３７℃で５時間インキュベートした。種々の時間点（０、２、５、１０、２０、３０、６０、１２０、１８０、および３００分）で、１００μｌのアリコートを抽出した。内部標準（１０μｌ）の添加後、２００μｌのアセトニトリルを添加することによりタンパク質を沈殿させ、上記化合物を実験室用遠心分離機にて５分間遠心分離した。１５０μｌの酢酸アンモニウムバッファー溶液（ｐＨ３）を１５０μｌの上清に添加した後、未変化の試験物質の濃度をＬＣ／ＭＳＭＳによって解析した。

【0526】

Ｂ−５．細胞浸透性の測定：
物質の細胞浸透性は、Ｃａｃｏ−２細胞を用いたフラックスアッセイでのインビトロ試験によって解析することができる［Ｍ．Ｄ．ＴｒｏｕｔｍａｎおよびＤ．Ｒ．Ｔｈａｋｋｅｒ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．２０（８），１２１０−１２２４（２００３）］。この解析のため、上記細胞を２４メンブレンフィルタープレートで１５〜１６日間培養した。浸透を調べるため、対象試験物質を上記細胞に対して頂端部（Ａ）のＨＥＰＥＳバッファーまたは基底部（Ｂ）のＨＥＰＥＳバッファーのいずれかに施与し、２時間インキュベートした。試料を０時間後と２時間後に、シス区画およびトランス区画から採取した。上記試料をＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ １２００，Ｂｏｅｂｌｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）によって逆相カラムを用いて分離した。このＨＰＬＣシステムは、トリプル四重極質量分析計ＡＰＩ ４０００（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ａｐｐｌｅｒａ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）にターボイオンスプレーによって連結させた。上記浸透性をＰ_ａｐｐ値によって評価し、該値は、Ｓｃｈｗａｂらによって公開された式の補助により計算した［Ｄ．Ｓｃｈｗａｂら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４６、１７１６−１７２５（２００３）］。物質は、Ｐ_ａｐｐ（Ａ−Ｂ）に対するＰ_ａｐｐ（Ｂ−Ａ）の比が＞２または＜０．５である場合、活性であると分類した。

【0527】

ＢからＡへの浸透性［Ｐ_ａｐｐ（Ｂ−Ａ）］は、細胞内で放出される坦毒体について特に重要である：浸透性が低いほど、細胞内放出後の細胞内でのその物質の滞留時間が長く、そのため、生化学的標的（ここでは：チューブリン）との相互作用に利用可能な時間が長くなる。

【0528】

このアッセイの代表的な実施形態の浸透性データを以下の表３に示す。

【0529】

【表3】

【0530】

比較として、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）およびモノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）は、この試験でそれぞれ８９ｎｍ／ｓおよび７３ｎｍ／ｓのＰ_ａｐｐ（Ｂ−Ａ）値を示す。

【0531】

Ｂ−６．Ｐ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）に対する基質特性の測定：
多くの腫瘍細胞は薬物に対する輸送タンパク質を発現し、多くの場合、細胞増殖抑制薬に対する耐性の発達に関与する。したがって、例えばＰ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）またはＢＣＲＰなどの輸送タンパク質の基質でない物質では、有効性の改善を示すことができる。

【0532】

Ｐ−ｇｐ（ＡＢＣＢ１）に対する物質の基質特性を、Ｐ−ｇｐを過剰発現するＬＬＣ−ＰＫ１細胞（Ｌ−ＭＤＲ１細胞）を用いたフラックスアッセイによって決定した［Ａ．Ｈ．Ｓｃｈｉｎｋｅｌら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９６，１６９８−１７０５（１９９５）］。この解析のため、ＬＬＣ−ＰＫ１細胞またはＬＭＤＲ１細胞を９６メンブレンフィルタープレートで３〜４日間培養した。浸透を調べるため、適切な試験物質を単独またはインヒビター（例えば、イベルメクチンもしくはベラパミルなど）の存在下で、細胞に対して頂端部（Ａ）または基底部（Ｂ）のいずれかのＨＥＰＥＳバッファー溶液に添加し、２時間インキュベートした。試料を０時間後と２時間後に、シス区画およびトランス区画から採取した。その試料をＨＰＬＣによって逆相カラムを用いて分離した。このＨＰＬＣシステムは、トリプル四重極質量分析計ＡＰＩ ３０００（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ａｐｐｌｅｒａ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）にターボイオンスプレーによって連結させた。上記浸透性をＰ_ａｐｐ値によって評価し、該値は、Ｓｃｈｗａｂらによって公開された式の補助により計算した［Ｄ．Ｓｃｈｗａｂら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４６，１７１６−１７２５（２００３）］。物質は、流出比であるＰ_ａｐｐ（Ｂ−Ａ）とＰ_ａｐｐ（Ａ−Ｂ）の比が＞２である場合、Ｐ−ｇｐ基質であると分類した。

【0533】

Ｐ−ｇｐ基質特性のさらなる評価基準は、Ｌ−ＭＤＲ１細胞とＬＬＣ−ＰＫ１細胞の流出比の比較、またはインヒビターの存在下もしくは非存在下での流出比の比較であり得る。これらの値が２倍より大きく異なる場合、その対象物質はＰ−ｇｐ基質である。

【0534】

Ｃ．薬学的化合物の実施形態
本発明の化合物は以下のように変換され得る：
錠剤：
組成：
１００ｍｇの本発明による化合物、５０ｍｇのラクトース（一水和物）、５０ｍｇのコーンスターチ（天然）、１０ｍｇのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ ２５）（Ｆａ．ＢＡＳＦ，Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）および２ｍｇのステアリン酸マグネシウム。

【0535】

錠剤の重量２１２ｍｇ．直径８ｍｍ，曲率半径１２ｍｍ。

【0536】

作製：
本発明による化合物、ラクトースおよびデンプンからなる組成物を、ＰＶＰの５％水溶液（ｍ／ｍ）を用いて造粒する。乾燥後、この顆粒材料をステアリン酸マグネシウムと５分間混合する。この混合物を、慣用的な錠剤用プレス機で打錠する（上記のような錠剤の形態に）。１５ｋＮのプレス力が打錠の指標値として使用される。

【0537】

経口懸濁剤：
組成：
１０００ｍｇの本発明による化合物、１０００ｍｇのエタノール（９６％）、４００ｍｇのＲｈｏｄｉｇｅｌ（登録商標）（ＦＭＣ社（Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，ＵＳＡ）のキサンタンガム）および９９ｇの水。

【0538】

単回用量１００ｍｇの本発明による化合物が１０ｍｌの経口懸濁剤に相当する。

【0539】

作製：
上記Ｒｈｏｄｉｇｅｌをエタノール中に懸濁させ、この懸濁液に本発明による化合物を添加する。撹拌しながら水を添加する。上記Ｒｈｏｄｉｇｅｌの浸軟が終了するまで撹拌をおよそ６時間継続する。

【0540】

経口液剤：
組成：
５００ｍｇの本発明による化合物、２．５ｇのポリソルベートおよび９７ｇのポリエチレングリコール４００。単回用量１００ｍｇの本発明による化合物が２０ｇの経口懸濁剤に相当する。

【0541】

作製：
本発明による化合物をポリエチレングリコールとポリソルベートの組成物中で撹拌する。本発明による化合物が完全に溶解するまで撹拌を継続する。

【0542】

ＩＶ液剤：
本発明による化合物を飽和溶解度より下の濃度で、生理学的に許容され得る溶媒（例えば、等張性生理食塩水溶液、５％グルコース溶液および／または３０％ＰＥＧ４００溶液）に溶解させる。この溶液を濾過し、次いで、無菌でパイロジェンフリーの注射容器内に充填する。