特許 5940788 選択的分離材及びその製造方法、並びに血液処理器

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5940788

(24)【登録日】2016年5月27日

(45)【発行日】2016年6月29日

(54)【発明の名称】選択的分離材及びその製造方法、並びに血液処理器

(51)【国際特許分類】

   B01J 20/26 20060101AFI20160616BHJP

   A61K 35/14 20150101ALI20160616BHJP

   B01J 20/30 20060101ALI20160616BHJP

   B01J 20/28 20060101ALI20160616BHJP

   A61M 1/00 20060101ALI20160616BHJP

   G01N 33/545 20060101ALN20160616BHJP

【ＦＩ】

   B01J20/26 H

   A61K35/14 Z

   B01J20/30

   B01J20/28 Z

   A61M1/00

   !G01N33/545 Z

【請求項の数】9

【全頁数】26

(21)【出願番号】特願2011-212918(P2011-212918)

(22)【出願日】2011年9月28日

(65)【公開番号】特開2013-71074(P2013-71074A)

(43)【公開日】2013年4月22日

【審査請求日】2014年8月26日

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】000000033

【氏名又は名称】旭化成株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100088155

【弁理士】

【氏名又は名称】長谷川 芳樹

(74)【代理人】

【識別番号】100128381

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 義憲

(74)【代理人】

【識別番号】100133307

【弁理士】

【氏名又は名称】西本 博之

(74)【代理人】

【識別番号】100176773

【弁理士】

【氏名又は名称】坂西 俊明

(74)【代理人】

【識別番号】100165526

【弁理士】

【氏名又は名称】阿部 寛

(74)【代理人】

【識別番号】100189452

【弁理士】

【氏名又は名称】吉住 和之

(72)【発明者】

【氏名】河野 香織

(72)【発明者】

【氏名】長澤 伸一郎

(72)【発明者】

【氏名】杉坂 裕美

【審査官】 岩下 直人

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１１／１２５６１８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特開２０１１−０１６０３６（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｂ０１Ｊ ２０／２６

Ａ６１Ｋ ３５／１４

Ａ６１Ｍ １／００

Ｂ０１Ｊ ２０／２８

Ｂ０１Ｊ ２０／３０

Ｇ０１Ｎ ３３／５４５

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

水不溶性担体と、該水不溶性担体の少なくとも表面に結合したポリマーと、該ポリマーに結合した抗体とを有し、
前記ポリマーが、親水性モノマー及び疎水性モノマーの共重合体であり、かつ前記親水性モノマーに由来する構造単位のモル組成比が、全構造単位に対して、０．３０〜０．６０であり、
前記抗体の単位表面積あたりの固定量が１．５０ｍｇ／ｍ^２以上であり、かつ抗体配向性を示す抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率の値が６以上であり、
前記ポリマーと前記抗体とが、前記疎水性モノマーに由来する構造単位中の求電子官能基と前記抗体との間の共有結合により結合している、特異的分離材。

【請求項2】

前記抗体の化学固定率が８０％以上である、請求項１に記載の特異的分離材。

【請求項3】

前記親水性モノマーが、Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン、スルホベタイン及びポリエチレングリコールモノメタクリレートからなる群より選択される１種以上である、請求項１又は２に記載の特異的分離材。

【請求項4】

前記疎水性モノマーが、下記一般式（１）で表される重合性モノマーである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の特異的分離材。

【化1】

［一般式（１）中、Ｒ^１はＨ又はＣＨ_３、Ｒ^２は求電子官能基を有する有機基を示す。］

【請求項5】

前記求電子官能基がエポキシ基である、請求項４に記載の特異的分離材。

【請求項6】

前記水不溶性担体が、多孔膜又は粒子である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の特異的分離材。

【請求項7】

血液の導入口及び導出口を有する容器と、
該容器の内部に充填された請求項１〜６のいずれか一項に記載の特異的分離材と、を備える、血液処理器。

【請求項8】

請求項１〜６のいずれか一項に記載の特異的分離材の製造における抗体固定化用基材の使用であって、
前記抗体固定化用基材が、水不溶性担体と、該水不溶性担体の少なくとも表面に結合したポリマーと、を有し、
前記ポリマーが、親水性モノマー及び疎水性モノマーの共重合体であり、かつ前記親水性モノマーに由来する構造単位のモル組成比が、全構造単位に対して、０．３０〜０．６０である、前記使用。

【請求項9】

水不溶性担体と、該水不溶性担体の少なくとも表面に結合したポリマーとを有する抗体固定化用基材に対し、濃度が０．６Ｍ以上のアンチカオトロピックイオンの存在下、酸性ｐＨの条件下で抗体を結合させる工程を備え、
前記ポリマーが、親水性モノマー及び疎水性モノマーの共重合体であり、かつ前記親水性モノマーに由来する構造単位のモル組成比が、全構造単位に対して、０．３０〜０．６０である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の特異的分離材を製造する製造方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、選択的分離材及びその製造方法、並びに血液処理器に関する。

【背景技術】

【0002】

血液から特定成分を除去する目的で、該特定成分に対して親和性のある物質、すなわち、リガンドを水不溶性担体に固定した分離材が臨床的に広く利用されている。これら分離材は、患者の血液を一旦体外に取り出し、血液そのもの、又は血漿分離器で分離した血漿を分離材に流して処理した後、患者に返血するという形で使用される。

【0003】

このため分離材からリガンドが溶離すると、リガンドが直接患者体内に入り、種々の生理作用を引き起こす危険性がある。よって、リガンドの溶離量が多い分離材は、安全性の点から臨床で利用できない。すなわち、これら分離材を実用化するにあたっては、水不溶性担体とリガンドとの結合を強固にし、溶離するリガンド量を減らせるかが最も重要な技術課題である。

【0004】

また、分離材には、血液又は血漿中のタンパク質、細胞（例えば、白血球及び血小板）、及びその他血中成分が表面に吸着しにくいという血液適合性（生体適合性）も求められる。特に、選択的分離材においては、特定成分を選択的に吸着させるために、分離材そのものに目的成分以外の成分が非特異的に吸着しない特性が望まれている。

【0005】

そこで、医療用材料表面の親水性及び疎水性を改善するため、放射線及び紫外線等を照射する方法、アーク、直流グロー、高周波、マイクロ波及びコロナ放電等によりプラズマ処理する方法、並びに、ＵＶ−オゾン処理する方法等により発生させたラジカルを開始点として、これにラジカル重合性モノマーを作用させて、医療用材料表面にグラフト重合層を形成させる方法が広く用いられている。

【0006】

一方、生体適合性を高めるポリマーとして、グリシン型の両性基を持つＮ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン（以下、「ＣＭＢ」ともいう。）が提案されている（例えば、特許文献１、２及び３）。ＣＭＢと重合性モノマーとの共重合ポリマーはタンパク質及び血球等の生体成分との相互作用が小さいなどの優れた生体適合性を有しているとの報告がある（特許文献４）。

【0007】

しかしながら、生体適合性を向上させるために、ＣＭＢのような親水性ポリマーが基材表面に高含有される場合、タンパク質及び血球等の生体成分が吸着しにくくなると同時に、リガンド自体も結合できなくなるといった問題がある。

【0008】

親水性ポリマーを含有した基材に抗体を固定する方法として、１Ｍ程度のリン酸水素二カリウムを含む緩衝液を使用する方法が開示されている（特許文献５）。また、非特許文献１には、エポキシ基と抗体との化学結合を促進するために、０．５Ｍ程度の硫酸アンモニウムを含む緩衝液を使用する方法が記載されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0009】

【特許文献1】特開平９−９５４７４号公報

【特許文献2】特開平９−９５５８６号公報

【特許文献3】特開平１１−２２２４７０号公報

【特許文献4】特開２００７−１３０１９４号公報

【特許文献5】特開２００８−１２８８５４号公報

【非特許文献】

【0010】

【非特許文献1】Ｗｈｅａｔｌｙ ＪＢ， ｅｔ． ａｌ．， Ｊ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ａ． ８４９（１）：１−１２（１９９９）．

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0011】

上述のように、細胞分離材に限らず、血液中から選択的に目的物質を除去又は回収する選択的分離材を製造する場合には、分離材からのリガンドの漏出が極めて少ないといった安全性が重要である。つまり、リガンドの固定化を化学結合でほぼ達成し、リガンドの物理的な結合を十分に低減させておく必要がある。また、選択的分離材においては、特定成分を選択的に吸着させるために、基材そのものに目的成分以外の成分の非特異的な吸着が起きない基材が望まれており、その解決策の一つとして、親水性ポリマーを高含有する基材の使用が挙げられる。

【0012】

特許文献５に記載の方法では、臨床使用するためには抗体固定量が不十分である。非特許文献１に記載の方法は、親水性ポリマーを高含有する基材への化学固定方法としては応用できない。また、基材にリガンドを固定した後、親水性ポリマーで基材表面をコートする方法も実施されているが、この場合、コートされたポリマーが溶出するという問題、及びリガンドの性能が低下するという問題がある。

【0013】

さらに、選択的分離材においては、リガンドが目的物質と効率よく結合できるように、リガンドの配向を制御することも重要である。例えば、リガンドとして抗体を使用した場合、抗体のＦｃ部が基材と結合し、抗原との結合部位であるＦａｂ部が基材表面から外に向かうように抗体が固定される必要がある。Ｆｃ部が基材表面から外に向かうように抗体が固定された場合、目的物質との結合効率が低下することに加え、Ｆｃ部への血小板の吸着及び補体の活性化が起こるといった問題が生じる。

【0014】

抗体の配向を制御する方法として、ＰｒｏｔｅｉｎＧ／Ａ又ビオチン・アビジンを利用して、抗体のＦｃ部と特異的に吸着させる方法が挙げられる。しかしながら、ＰｒｏｔｅｉｎＧ／Ａはヒト血中の抗体との親和性が高く、リガンドとして用いる抗体と血中の抗体とが置き換わるため臨床使用することはできない。また、ビオチン・アビジンを利用する場合においても、ビオチンとアビジンとの結合が化学結合ではないため、分離材からの抗体の漏れ出しの問題があり臨床使用はされていない。

【0015】

本発明者は、蛋白質や血球などの生体成分との非特異的相互作用が少ないなどの優れた生体適合性を有し、リガンドを強固に結合し、固定化したリガンドとの特異的相互作用に基づく高い吸着性能を発揮し得るリガンド固定化用基材として、水不溶性担体の少なくとも表面にＣＭＢと求電子官能基を有する重合性モノマーとの共重合体が結合してなるリガンド固定化用基材がこの課題を解決できることを見出しており、本出願人によって特許出願を行っている（特願２０１０−０８３４５５号）。しかしながら、先願明細書には、固定化するリガンドの配向制御に関してまでは記載されておらず、リガンドの使用効率が更に高いものが望まれていた。また、先願明細書に記載されているモノマーの重合条件と完全に同じではないが、本発明者らがモノマーの共重合を行ったところ、基材表面のＣＭＢモル組成比が高くなるにつれ、血小板吸着は抑制されるが、リガンドが固定化されにくくなり、目的の細胞を除去する能力が低下してしまうことが分かった。また、先願明細書に記載されたリガンド固定化方法では抗体の配向が制御できていないことも明らかとなっている（本願比較例４及び７等参照）。

【0016】

本発明は、上記実情に鑑みてなされたものであり、優れた生体適合性を有し、かつ、十分量の抗体が配向よく強固に化学結合した選択的分離材を提供することを目的とする。本発明はまた、優れた生体適合性を有し、かつ、十分量の抗体が配向よく強固に化学結合した選択的分離材の製造方法を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0017】

本発明は下記［１］〜［９］に関する。
［１］
水不溶性担体と、該水不溶性担体の少なくとも表面に結合したポリマーと、該ポリマーに結合した抗体とを有し、
前記ポリマーが、親水性モノマー及び疎水性モノマーの共重合体であり、かつ前記親水性モノマーに由来する構造単位のモル組成比が、全構造単位に対して、０．３０〜０．６０であり、
前記抗体の単位表面積あたりの固定量が１．５０ｍｇ／ｍ^２以上であり、かつ抗体配向性を示す抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率の値が６以上である、選択的分離材。
［２］
前記抗体の化学固定率が８０％以上である、［１］に記載の選択的分離材。
［３］
前記親水性モノマーが、Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン、スルホベタイン及びポリエチレングリコールモノメタクリレートからなる群より選択される１種以上である、［１］又は［２］に記載の選択的分離材。
［４］
前記疎水性モノマーが、下記一般式（１）で表される重合性モノマーである、［１］〜［３］のいずれかに記載の選択的分離材。

【化1】

［一般式（１）中、Ｒ^１はＨ又はＣＨ_３、Ｒ^２は求電子官能基を有する有機基を示す。］
［５］
前記求電子官能基がエポキシ基である、［４］に記載の選択的分離材。
［６］
前記水不溶性担体が、多孔膜又は粒子である、［１］〜［５］のいずれかに記載の選択的分離材。
［７］
血液の導入口及び導出口を有する容器と、
該容器の内部に充填された［１］〜［６］のいずれかに記載の選択的分離材と、を備える、血液処理器。
［８］
［１］〜［６］のいずれかに記載の選択的分離材の製造における抗体固定化用基材の使用であって、
前記抗体固定化用基材が、水不溶性担体と、該水不溶性担体の少なくとも表面に結合したポリマーと、を有し、
前記ポリマーが、親水性モノマー及び疎水性モノマーの共重合体であり、かつ前記親水性モノマーに由来する構造単位のモル組成比が、全構造単位に対して、０．３０〜０．６０である、前記使用。
［９］
水不溶性担体と、該水不溶性担体の少なくとも表面に結合したポリマーとを有する抗体固定化用基材に対し、濃度が０．６Ｍ以上のアンチカオトロピックイオンの存在下、酸性ｐＨの条件下で抗体を結合させる工程を備え、
前記ポリマーが、親水性モノマー及び疎水性モノマーの共重合体であり、かつ前記親水性モノマーに由来する構造単位のモル組成比が、全構造単位に対して、０．３０〜０．６０である、［１］〜［６］のいずれかに記載の選択的分離材を製造する製造方法。

【発明の効果】

【0018】

本発明によれば、優れた生体適合性を有し、かつ、十分量の抗体が配向よく強固に化学結合した選択的分離材を提供することができる。また、本発明によれば、優れた生体適合性を有し、かつ、十分量の抗体が配向よく強固に化学結合した選択的分離材の製造方法を提供することができる。

【図面の簡単な説明】

【0019】

【図1】一実施形態に係る選択的分離材の模式断面図である。

【図2】一実施形態に係る選択的分離材の模式断面図である。

【図3】一実施形態に係る血液処理器の模式断面図である。

【発明を実施するための形態】

【0020】

以下、本発明を実施形態に基づいて詳細に説明するが、本発明はこれらの実施形態に限定されるものではない。

【0021】

本実施形態に係る選択的分離材は、水不溶性担体と、該水不溶性担体の少なくとも表面に結合したポリマーと、該ポリマーに結合した抗体とを有する。

【0022】

〔水不溶性担体〕
本明細書において、水不溶性担体とは、水に溶けない担体を意味する。例えば、血液に接触した場合、血液中に溶け出さないものである。

【0023】

本実施形態に係る水不溶性担体を形成する素材としては、天然高分子、合成高分子、再生高分子等の有機高分子化合物、ガラス及び金属に代表される無機化合物、さらに有機／無機ハイブリッド化合物等が挙げられるが特に限定されない。

【0024】

加工性の面からは、有機高分子素材が特に好ましく、例えば、ポリアルキレンテレフタレート類、ポリカーボネート類、ポリウレタン類、ポリ（メタ）アクリル酸エステル類、ポリアクリロニトリル、ポリビニルアルコール、エチレン／ビニルアルコール共重合体（エバール）、エチレン／ビニルアセテート共重合体、ポリビニルアセタール、ポリスチレン、ポリスルホン類、セルロース及びセルロース誘導体類、ポリフェニレンエーテル類、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリフッ化ビニル、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニリデン等、及びこれらを構成するモノマーの共重合体、更には上記高分子の１種又は２種以上のアロイ及びブレンド等が挙げられる。

【0025】

水不溶性担体としては、医療用分離材（医療用吸着材）の担体として周知のもの全てを使用できるが、多孔膜又は粒子が好ましく、多孔質粒子、不織布又は中空糸膜が体外循環時の体液の流通性に優れるためより好ましい。また、目的吸着成分が細胞である場合は、不織布又は粒子が好ましい。なお、以下、目的吸着成分が細胞である場合の選択的分離材を、特に「細胞選択分離材」ともいう。

【0026】

多孔膜としては、これらの素材から得られる繊維状物（中実繊維及び中空繊維）を用いて製造される不織布、織布、編布及びメッシュ等が挙げられる。また、有機高分子素材又は無機高分子素材を、熱溶融した状態、溶媒によって溶解した溶液状態、可塑剤を用いて可塑化した状態等から、発泡法、相分離法（熱誘起相分離法や湿式相分離法）、延伸法及び焼結法等によって得ることができるシート状膜（平膜）及び空糸膜も使用できる。

【0027】

多孔膜においては、連通孔を有し、連通孔の少なくとも表面部分に存在するアフィニティーリガンドとの接触によって目的成分が吸着されるのであればどのような構造であっても構わない。連通孔とは、支持多孔膜の一方の膜面から反対側の膜面にかけて連通した孔のことであって、その連通孔を通して液体が通過するとこができるのであれば、その孔の膜表面の形状や膜内部の構造はどのようなものであってもよい。

【0028】

特に、細胞選択分離材の場合に好ましいものとしては、細胞浮遊液の透過性、及び細胞捕捉性の観点から、各種繊維状物から製造される不織布、織布、編布及びメッシュ等が挙げられ、特に不織布は好ましく用いられる多孔膜である。不織布形状の場合、その平均繊維径（平均繊維直径）は０．１μｍ〜５０μｍが好ましい。さらに平均繊維径は０．５μｍ〜４０μｍであることが好ましく、１μｍ〜３０μｍであることがより好ましく、１μｍ〜２０μｍであることが更に好ましく、２μｍ〜１０μｍであることが更により好ましい。平均繊維径が０．１μｍ未満であると、細胞選択分離材の機械的強度が低下しやすい。また５０μｍを超えると吸着表面積が小さくなり細胞捕捉性が低下しやすい。

【0029】

粒子は目的吸着成分によって、無孔質又は多孔質を選択すればよい。また、多孔質においては、目的吸着成分によって、その孔径を選択すればよい。平均粒径は、２５μｍ以上２５００μｍ以下のものを利用できるが、その比表面積（分離材としての吸着能力）と体液の流通性を考慮すると、５０μｍ以上１５００μｍ以下のものが好ましい。

【0030】

〔ポリマー〕
本実施形態に係るポリマーは、親水性モノマーと疎水性モノマーとの共重合体である。共重合体は、ランダム共重合体、ブロック共重合体、周期的共重合体及び交互共重合体のいずれであってもよい。

【0031】

＜親水性モノマー＞
本明細書において、「親水性モノマー」とは、重合性官能基（例えば、炭素−炭素二重結合等の不飽和結合を有する官能基）及び親水性官能基を有するモノマーを意味する。親水性官能基は、水分子との間で水素結合を形成可能な官能基であればよく、例えば、ヒドロキシル基、カルボキシル基、アミノ基、アルキレングリコール残基、ベタイン基が挙げられる。親水性官能基は、好ましくは、水中で電離し、正又は負に帯電する官能基である。

【0032】

親水性モノマーとしては、Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン（ＣＭＢ）、スルホベタイン及びポリエチレングリコールモノメタクリレートからなる群より選択される１種以上であることが好ましい。中でも、抗体の配向性により優れるため、親水性モノマーとしては、下記式（２）で表されるＣＭＢがより好ましい。

【化2】

【0033】

ＣＭＢは、例えば、特開平９−９５４７４号公報、特開平９−９５５８６号公報、特開平１１−２２２４７０号公報などに記載されている方法により、容易に高純度で調製することができる。

【0034】

＜疎水性モノマー＞
本明細書において、「疎水性モノマー」とは、重合性官能基（例えば、炭素−炭素二重結合等の不飽和結合を有する官能基）及び求電子官能基を有するモノマーを意味する。好ましくは、親水性官能基を有しないモノマーである。求電子官能基とは求電子的に反応する官能基を意味し、求電子官能基の具体例としては、例えば、エポキシ基、イソシアネート基又はアルデヒド基が挙げられる。

【0035】

疎水性モノマーとしては、下記一般式（１）で表される重合性モノマーが好ましい。

【化3】

一般式（１）中、Ｒ^１はＨ又はＣＨ_３、Ｒ^２は求電子官能基を有する有機基を示す。

【0036】

求電子官能基としてエポキシ基を分子内に有する重合性モノマーとしては、特に限定されないが、グリシジルアクリレート、グリシジルメタクリレート、グリシジルアクリルアミド、アリルグリシジルエーテル、メタクリルグリシジルエーテル、グリシジルソルベート、グリシジルメタイタコナート、エチルグリシジルマレアート、グリシジルビニルスルホナート等を例示でき、求電子官能基としてイソシアネート基を分子内に有する重合性モノマーとしては、アクリロイルオキシエチルイソシアネート、アクリロイルオキシメチルイソシアネート、アクリロイルイソシアネート、メタクリロイルイソシアネート、メタクリロイルエチルイソシアネート等を例示でき、さらに、求電子官能基としてアルデヒド基を分子内に有する重合性モノマーとしては、シンナムアルデヒド、クロトンアルデヒド、アクロレイン、メタクロレイン等を例示できるが、この中でも入手の容易さ、コスト、取り扱いの容易さから、求電子官能基としてエポキシ基を分子内に有する重合性モノマーが好ましく、その中でも特にグリシジルメタクリレートが好ましい。

【0037】

＜ポリマー＞
本実施形態に係るポリマーは、優れた生体適合性を発揮するという観点から、親水性モノマーに由来する構造単位のモル組成比が、親水性モノマーに由来する構造単位及び疎水性モノマーに由来する構造単位の合計（すなわち、全構造単位）に対して、０．３０〜０．６０であればよい。このモル組成比が０．３０未満であると、ポリマーの疎水性が高くなりすぎて、タンパク質及び血球等の生体成分の非特異的吸着が増加する傾向にある。一方、このモル組成比が０．６０を超えると、抗体の結合量が低下する傾向にある。上記モル組成比は、好ましくは０．３０〜０．５０であり、より好ましくは０．４０〜０．５０である。

【0038】

親水性モノマーに由来する構造単位とは、例えば、親水性ポリマーがＣＭＢである場合、以下の構造単位を意味する。

【化4】

「＊」は他の構造単位との結合を示す。
また、疎水性モノマーに由来する構造単位とは、例えば、疎水性ポリマーが上記一般式（１）で表される重合性モノマーである場合、以下の構造単位を意味する。

【化5】

「＊」は他の構造単位との結合を示す。

【0039】

親水性ポリマーがＣＭＢであり、疎水性ポリマーが上記一般式（１）で表される重合性モノマーである場合、ポリマーは下記一般式（２）で表すことができる。

【化6】

［一般式（２）中、ｎ及びｍは正の整数を示し、ｍ／（ｎ＋ｍ）の値は０．３０以上０．６０以下である。また、一般式（２）中、Ｒ^１はＨ又はＣＨ_３、Ｒ^２は求電子官能基を有する有機基、Ｒ^３は

【化7】

を示す。］

【0040】

上述した水不溶性担体の少なくとも表面にポリマー（共重合体）がどのような様式で結合しているかは特に限定されず、共有結合、配位結合、イオン結合及び水素結合等の化学結合であれば、いずれの結合様式であってもよい。中でも、ポリマーの溶出が十分に低減されることから、共有結合であることが好ましい。

【0041】

水不溶性担体へのポリマーの結合方法としては、グラフト法及び不溶化沈殿法等、あらゆる公知の方法を用いることができる。したがって、高分子化合物又はそのモノマーを放射線又はプラズマ等を用いてグラフト重合する、又は共有結合する等の公知の方法により表面改質を施す方法（特開平１−２４９０６３号公報、特開平３−５０２０９４号公報）を好適に用いることができる。

【0042】

放射線照射グラフト重合法を用いる場合、種々の公知の方法を利用することができる。例えば、担体上に活性点を導入するための電離性放射線は、α線、β線、γ線、加速電子線、Ｘ線及び紫外線等が挙げられるが、実用的には加速電子線又はγ線が好ましい。加速電子線又はγ線の照射量は担体の性質、重合性モノマー（親水性モノマー及び疎水性モノマー）の性質、及びポリマーの固定量等により任意に変えることができるが、１０ｋＧｙから２００ｋＧｙが好ましい。水不溶性担体と重合性モノマーをグラフト重合させる方法としては、水不溶性担体と重合性モノマーの共存下で放射線を照射する同時照射法と、水不溶性担体のみに予め放射線を照射した後、重合性モノマーと水不溶性担体とを接触させる前照射法のいずれも使用可能であるが、前照射法が、グラフト重合以外の副反応を生成しにくいため好ましい。重合性モノマー濃度は通常１質量％以上２０質量％以下、反応温度は５℃以上４０℃以下の範囲で、重合性モノマーと水不溶性担体との反応を行うことができるが、この範囲に限定されるものではなく、適宜設定してよい。重合性モノマーと水不溶性担体との反応の際の溶媒は、無溶媒又は水、メタノール、エタノール、その他アルコール若しくはアセトン等の溶媒若しくはそれらの混合溶媒で、重合性モノマーが溶解、分散するものであれば用いることができる。また、放射線照射グラフト重合法を用いる場合、水不溶性担体への共重合体のグラフト率（Ｇ）は５％以上３００％以下が好ましく、２０％以上２００％以下がさらに好ましく、５０％以上１５０％以下が特に好ましい。グラフト率が５％未満であると、水不溶性担体表面のグラフト鎖による被覆が不十分となりやすく、水不溶性担体表面の改質が不十分となるおそれや、リガンド（抗体）の固定化量が不十分となるおそれがある。またグラフト率が３００％を超えると、水不溶性担体自体の物理特性が失われるおそれがあり、分離材の設計上好ましくない。

【0043】

なお、ここにいうグラフト率（Ｇ）は、下記式（４）で表される値である。
Ｇ（％）＝［（グラフト後水不溶性担体重量−グラフト前水不溶性担体重量）／（グラフト前水不溶性担体重量）］×１００ （４）

【0044】

重合反応後は、過剰の重合性モノマーや連鎖移動反応によって生成したグラフトされていないポリマーを適当な溶剤にて十分洗浄除去すればよい。

【0045】

〔抗体固定化用基材〕
上述した水不溶性担体の少なくとも表面に上述したポリマーが結合した基材は、抗体（リガンド）固定化用基材として、好適に用いることができる。本実施形態に係る抗体固定化用基材は、疎水性ポリマーに由来する構造単位中の求電子官能基と抗体との間で共有結合させて抗体を固定することができる。

【0046】

求電子官能基としてエポキシ基を有する不織布型の抗体固定化用基材は、細胞選択分離材の製造には非常に有効である。グリシジルメタクリレートやその誘導体（エポキシ基とエステル基を結ぶメチレン基の数が２〜５のもの）を放射線照射グラフト重合法にて不織布（例えば、ポリエチレンやポリプロピレン不織布）へ固定化する方法でエポキシ基を導入したものは、これに抗体を固定化した場合は、抗体が有する本来の高いアフィニティーを問題なく発現して目的細胞を十分に捕捉する細胞選択分離材を得ることができる。

【0047】

〔抗体〕
本実施形態に係る選択的分離材に用いられる抗体は、求電子官能基と化学結合するものであれば特に制限されない。抗体としては、具体的には例えば、マウス抗体、ウサギ抗体、ヒツジ抗体、ヤギ抗体、ラット抗体、ハムスター抗体、ブタ抗体、ウシ抗体及びヒト抗体並びにこれらのキメラ抗体を挙げることができる。また、抗体が有する重鎖又は軽鎖の可変領域の相補性決定領域を形成しうるアミノ酸配列を有するＦ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びその他ペプチド又はその修飾ペプチド型のリガンドであってもよい。

【0048】

〔選択的分離材〕
図１は、一実施形態に係る選択的分離材の模式図である。図１に示す選択的分離材１００は、水不溶性担体１と、水不溶性担体１の少なくとも表面に結合した、親水性モノマー及び疎水性モノマーの共重合体（ポリマー）２と、を備える。共重合体２は、ポリマー主鎖１０の末端で水不溶性担体１と結合しており、選択的分離材１００の表面に、親水性モノマーに由来する親水性基２０及び疎水性モノマーに由来する求電子官能基３０を呈している。求電子官能基３０には、抗体４０が結合している。

【0049】

図２は、他の実施形態に係る選択的分離材の模式図である。図２に示す選択的分離材１１０は、共重合体２と水不溶性担体１とが、ポリマー主鎖１０に相当する部分を介して結合している。なお、共重合体２と水不溶性担体１との間の結合は、図１に示すようにポリマー主鎖１０の末端を介する結合、又は図２に示すようにポリマー主鎖１０の全体を介する結合のみならず、ポリマー主鎖１０の一部を介して結合していればよい。

【0050】

本実施形態に係る選択的分離材は、単位表面積あたりの抗体の固定量が１．５０ｍｇ／ｍ^２以上であり、１．７０ｍｇ／ｍ^２以上であることが好ましく、２．００ｍｇ／ｍ^２以上であることがより好ましい。固定量の上限には特に制限はないが、通常２．５０ｍｇ／ｍ^２以下である。本実施形態に係る選択的分離材は、抗体の化学固定率が８０％以上であることが好ましく、９０％以上であることがより好ましい。抗体の化学固定率は、選択的分離材を２％ドデシル硫酸ナトリウム（以下「ＳＤＳ」という。）で洗浄する前後における単位表面積あたりの抗体の固定量から求めることができる。

【0051】

本実施形態に係る選択的分離材は、抗体配向性を示す抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率の値が６以上であり、６．５以上であることが好ましく、７以上であることがより好ましい。抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率の値の上限には特に制限はないが、通常１０以下である。なお、抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率の値は、選択的分離材への抗Ｆａｂ抗体の結合量と、抗Ｆｃ抗体の結合量との比を意味しており、この値が大きいほど抗Ｆａｂ抗体の結合量の方が多いことを意味している。すなわち、選択的分離材に固定された抗体のうち、抗原と結合可能なＦａｂ部分が基材表面から外へ向かう配向で固定された抗体の割合が高いことを意味している。

【0052】

本実施形態に係る選択的分離材は、血液又は血漿中のタンパク質、細胞（例えば、白血球及び血小板）を特異的に吸着して分離することができる。そのため、本実施形態に係る選択的分離材は、血液浄化用として、又は血液浄化用吸着材としても好適に使用することができる。

【0053】

〔選択的分離材の製造方法〕
本実施形態に係る選択的分離材の製造方法は、上述した抗体固定化用基材に対し、濃度が０．６Ｍ以上と高濃度のアンチカオトロピックイオンの存在下、かつ酸性ｐＨの条件下で抗体を結合させる工程を少なくとも備える。抗体固定化用基材と抗体との結合は、疎水性ポリマーに由来する構造単位中の求電子官能基と抗体との間の共有結合により行われる。

【0054】

抗体を基材に固定化する方法として、抗体と基材（疎水性）との疎水性相互作用を高める目的でアンチカオトロピックイオン強度の高い塩が使用されることがある。例えば、非特許文献１では、エポキシ基への抗体固定の際に０．５Ｍ程度の比較的低濃度の硫酸アンモニウムが使用されている。また、特許文献５には、親水性ポリマーを含有した基材へ抗体を固定化させる方法として、１Ｍ程度のリン酸水素二カリウムを含有する溶液を使用することが記載されている。さらに、ｐＨを下げることで、抗体のＦｃ部の疎水度を高めることができるとの報告もある（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３６巻，４９２−４９６頁，１９９０年）。しかしながら、親水性ポリマーを高含有する基材への抗体の化学固定方法として、塩濃度を高める、又はｐＨを下げるだけでは十分量の抗体が化学固定できないという問題があった。

【0055】

一般的にタンパク質はｐＨ及び塩の影響を受けやすい。例えば、ｐＨ３以下の緩衝液では抗体が変性してしまい、リフォールディングできなくなるとの報告がある（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３６巻，４９２−４９６頁，１９９０年）。また、硫酸アンモニウム等のアンチカオトロピックイオンとしての強度の強い塩は濃度を高めすぎると、タンパク質が凝集・変性してしまうおそれがある。このような背景から、リガンドの固定化は、中性条件又はアルカリ条件下で行われるのが一般的である。例えば、リガンドをエポキシ基へと固定化する場合は、中性〜アルカリ性条件下で行われるのが一般的であり、リガンドをチオール基又はアミノ基へと固定化する場合は、中性条件下で行われるのが一般的である。すなわち、酸性条件下での固定化は推奨されていないのが現状であり、抗体の固定化は、抗体が失活する可能性のある、高塩濃度かつ低ｐＨの条件下では行われてこなかった。

【0056】

本実施形態に係る選択的分離材の製造方法によれば、親水性モノマーに由来する構造単位を高含有するポリマーへの化学固定量を増加させることができ、かつ抗体を配向よく固定化することが可能となる。この機構は必ずしも明らかではないが、本発明者らは、以下のように考えている。すなわち、高濃度のアンチカオトロピックイオンの存在下で酸性ｐＨの条件下で抗体固定化用基材と抗体との結合を行うことにより、抗体固定化用基材と抗体との疎水性相互作用が向上し、親水性モノマーに由来する構造単位を高含有するポリマーへの化学固定量を増加させることができる。さらに、高濃度のアンチカオトロピックイオン及び酸性ｐＨの影響により抗体の構造の中でもＦｃ部の疎水度を高めることができ、抗体を配向よく抗体固定化用基材へと固定化することができる。一方、特許文献５に記載の方法では、１Ｍ程度のリン酸水素二カリウムを含有する溶液がｐＨ８〜９と高ｐＨの溶液であり、基材と抗体の反応としては、ニトロフェニルエステル基と抗体のアミノ酸中のＮ末端、又はランダムに存在するリシン側鎖のアミノ基とが結合していると考えられる。したがって、特許文献５に記載の固定化方法では、抗体の配向は向上していない。

【0057】

＜アンチカオトロピックイオン＞
本実施形態に係る選択的分離材の製造方法では、高濃度のアンチカオトロピックイオンの存在下で抗体固定化用基材と抗体との結合を行う。

【0058】

アンチカオトロピックイオンは、一般に水分子との水素結合を強める作用を有しており、また疎水性相互作用を強化する作用がある。本実施形態に係る製造方法において、好適に使用することのできるアンチカオトロピックイオンとしては、例えば、ＰＯ_４^３−、ＳＯ_４^２−、ＣＨ_３ＣＯ_２⁻、ＮＨ_４^＋、Ｋ^＋、Ｎａ^＋が挙げられる。これらのアンチカオトロピックイオンは１種を単独で、又は２種以上を混合して用いてもよい。

【0059】

アンチカオトロピックイオンを生じるアンチカオトロピック塩としては、例えば、リン酸アンモニウム、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸水素カリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素アンモニウム、リン酸二アンモニウム、リン酸二カリウム、リン酸二水素アンモニウム、リン酸二水素カリウム、リン酸二水素ナトリウム、硫酸アンモニウム、硫酸カリウム、硫酸ナトリウム、硫酸水素カリウム、硫酸水素二カリウム、硫酸水素ナトリウム、硫酸水素二ナトリウム、硫酸水素アンモニウム、硫酸二水素アンモニウム、硫酸二水素カリウム、硫酸二水素ナトリウム、酢酸アンモニウム、酢酸カリウム、酢酸ナトリウム、酢酸水素カリウム、酢酸水素二カリウム、酢酸水素ナトリウム、酢酸水素二ナトリウム、酢酸水素アンモニウム、酢酸二水素アンモニウム、酢酸二水素カリウム、酢酸二水素ナトリウム等が挙げられる。これらのアンチカオトロピック塩は１種を単独で、又は２種以上を混合して用いてもよい。

【0060】

アンチカオトロピックイオンの濃度は、０．６Ｍ以上であることが好ましく、１Ｍ以上であることがより好ましい。また、アンチカオトロピックイオンの濃度の上限には特に制限はないが、通常２Ｍ以下である。

【0061】

＜ｐＨ＞
本実施形態に係る選択的分離材の製造方法では、酸性ｐＨ条件下で抗体固定化用基材と抗体との結合を行う。ｐＨとしては、２．６〜６．０であることが好ましい。また、３．０〜５．０であることがより好ましく、３．０〜４．０であることが更に好ましい。

【0062】

〔血液処理器〕
本実施形態に係る血液処理器は、内部に血液を導入するための入口（導入口）と、内部の血液を外部に排出するための出口（導出口）とを有する容器と、容器の内部に充填された上記選択的分離材とを備えるものである。上記選択的分離材が選択的にターゲット成分を吸着することができるため、例えば、血液から特定の成分を除去する目的に好ましく利用することができる。具体的には、直接血液灌流用の血液成分吸着器や特異的細胞吸着器等が挙げられる。

【0063】

図３は、一実施形態に係る血液処理器の模式断面図である。血液処理器２００は、容器５０と、容器５０の内部に充填された複数の選択的分離材１２０とを有する。容器５０の両端部には、ヘッダーキャップ６０ａ、６０ｂが設けられている。ヘッダーキャップ６０ａは内部に血液を導入するための入口（導入口）となり、ヘッダーキャップ６０ｂは血液を外部に排出するための出口（導出口）となる。ヘッダーキャップ６０ａの導入口より矢印Ｆの方向から血液処理器２００の内部に流入した血液が、選択的分離材１２０と接することにより、抗体４０の抗原となる血液中の成分が吸着する。これにより、ヘッダーキャップ６０ｂの導出口から流出した際には血液中から上記成分が除去されている。

【実施例】

【0064】

以下、実施例及び比較例に基づいて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

【0065】

［実施例１］
（Ａ）方法
（１）γ線照射
担体としてポリプロピレンからなる不織布（平均繊維径３．８μｍ、目付８０ｇ／ｍ^２）０．１０８ｍ^２を脱酸素剤とともに酸素低透過性袋に封入し十分に酸素を除いた後、−７８℃にて２５ｋＧｙのγ線を照射した。

【0066】

（２）グラフト反応
Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン（ＣＭＢ）６８．９ｇ、及びグリシジルメタクリレート（ＧＭＡ）２１．１ｍＬを４００ｍＬのメタノールに溶解し、４０℃にて６０分間窒素を通気した。
耐圧ガラス容器に上記の不織布をすばやく入れ、減圧後、上記の溶液を引き込み４０℃にて１時間反応させた。反応後、取り出した不織布をジメチルホルムアミド及びメタノールにより洗浄し、４０℃にて真空乾燥することでリガンド固定化用不織布（リガンド固定化用基材）を得た。

【0067】

（３）細胞吸着フィルター（選択的分離材）の作製
上記で得られたリガンド固定化用不織布を直径０．６８ｃｍの円形に切断した（以下、「円形不織布状基材Ａ」という。）。次に、抗ヒトＣＤ４モノクローナル抗体（１６μｇ）及び硫酸アンモニウム（１０５．７ｍｇ）を溶解したクエン酸リン酸緩衝液（ｐＨ４．０）４００μＬ（以下、「抗ＣＤ４溶液」という。）に、得られた円形不織布状基材Ａ４枚を３７℃にて１６時間浸し、該モノクローナル抗体を円形不織布状基材Ａに固定した。その後、このモノクローナル抗体を固定化した円形不織布状基材Ａ（以下、「抗体固定化円形不織布Ａ」という。）をカルシウム及びマグネシウムを含まないリン酸緩衝生理食塩液（以下、「ＰＢＳ（−）」という。）で洗浄した。次に、０．２％ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート／ＰＢＳ（−）溶液（以下、「Ｔｗｅｅｎ２０溶液」という。）に該抗体固定化円形不織布Ａを常温で２．５時間浸し、ブロッキングを行った。その後、該抗体固定化円形不織布ＡをＰＢＳ（−）２ｍｌで洗浄することで、細胞吸着フィルターを作製した。

【0068】

（４）細胞吸着フィルターの洗浄
２％ドデシル硫酸ナトリウム／ＰＢＳ（−）（以下、「ＳＤＳ溶液」という。）により細胞吸着フィルター４枚を９５℃で５分間浸した。これを２回繰り返した後、該細胞吸着フィルターをＰＢＳ（−）２ｍｌで洗浄した。

【0069】

（５）細胞吸着器の作製
入口と出口を有する容量１ｍｌの容器に、上記で得られた細胞吸着フィルター４枚と充填液としてＰＢＳ（−）溶液とを充填し、細胞吸着器を作成した。

【0070】

（６）細胞吸着器の細胞吸着性
上記で得られた細胞吸着器の入口から、ＡＣＤ−Ａ添加ヒト新鮮血液８ｍｌ（血液：ＡＣＤ−Ａ＝８：１）をシリンジポンプにて流速０．２ｍｌ／分で送液した。細胞吸着器の出口から回収される細胞吸着後溶液を８ｍＬずつ分取した。その後、細胞吸着器の出口から細胞吸着後の溶液を回収した。

【0071】

（７）配向評価用基材の作製
上記リガンド固定化用不織布を直径０．４８ｃｍの円形に切断した（以下、「円形不織布状基材Ｂ」という。）。次に、ヒトＩｇＧ（１６μｇ）及び硫酸アンモニウム（１０５．７ｍｇ）を溶解したクエン酸リン酸緩衝液（ｐＨ４．０）４００μＬ（以下、「ＩｇＧ溶液」という。）に、得られた円形不織布状基材Ｂ８枚を３７℃にて１６時間浸し、該ヒトＩｇＧを円形不織布状基材Ｂに固定した。その後、このヒトＩｇＧを固定化した円形不織布状基材Ｂ（以下、「抗体固定化円形不織布Ｂ」という。）をＰＢＳ（−）で洗浄した。次に、０．２％Ｔｗｅｅｎ２０溶液に該抗体固定化円形不織布Ｂを常温で２．５時間浸し、ブロッキングを行った。その後、該抗体固定化円形不織布ＢをＰＢＳ（−）２ｍｌで洗浄することで、配向評価用基材を作製した。

【0072】

（Ｂ）結果
（１）Ｘ線光電子分光法（ＸＰＳ）による表面解析
上記で得られたリガンド固定化用不織布の表面をＸ線光電子分光法（ＸＰＳ ＥＳＣＡ）により解析した。ＸＰＳより得られる炭素、酸素及び窒素の各相対元素濃度をそれぞれＣ_１、Ｃ_２、Ｃ_３とすると、基材表面に存在するＣＭＢ相対モル濃度（Ｘ）、ＧＭＡ相対モル濃度（Ｙ）、担体構成ポリマー相対モル濃度（Ｚ）はそれぞれ下記式（１）から（３）で表される。
Ｘ＝ｘ／（ｘ＋ｙ＋ｚ） （１）
Ｙ＝ｙ／（ｘ＋ｙ＋ｚ） （２）
Ｚ＝ｚ／（ｘ＋ｙ＋ｚ） （３）
ただし、ｘ＝Ｃ_３、ｙ＝（Ｃ_２−４ｘ）／３、ｚ＝｛Ｃ_１−（１０ｘ＋７ｙ）｝／Ａであって、Ａは担体構成ポリマーの単位炭素組成であり、例えば、ポリエチレンの場合Ａ＝２、ポリプロピレンの場合Ａ＝３である。
上記で得られる相対モル濃度より共重合ポリマー中のＣＭＢのモル組成比Ｒは次式（４）で表される。
Ｒ＝ｍ／（ｎ＋ｍ）＝Ｘ／（Ｘ＋Ｙ） （４）
これらの計算式に基づき、ＣＭＢモル組成比Ｒを算出した結果、ＣＭＢのモル組成比Ｒは０．４８であった。

【0073】

（２）比表面積測定
上記で得られたリガンド固定化用不織布の比表面積は自動比表面積／細孔分布測定装置（ＳＨＩＭＡＤＺＵ社製 ＭＩＣＲＩＭＥＲＩＴＩＣＳ ＴＲＩＳＴＡＲ ３０００）を用いてＢＥＴ法による多点法比表面積を測定した。その結果、比表面積は０．４０ｍ^２／ｇであった。

【0074】

（３）細胞吸着フィルターの抗体固定化量の定量
上記で得られた細胞吸着フィルターにおける抗ヒトＣＤ４モノクローナル抗体の固定化量はＢＣＡタンパク質定量試薬（ＰＩＥＲＣＥ社製 Ｍｉｃｒｏ ＢＣＡ（登録商標） Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ ２３２３５）を用い、マイクロプレート分光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ社製 ＳＰＥＣＴＲＡ ＭＡＸ３４０ＰＣ、解析ソフトＳＯＦＴ ｍａｘ ＰＲＯ）によって吸光度測定を行い、定量した。その結果、洗浄前の細胞吸着フィルターには１．８５ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の細胞吸着フィルターには１．６５ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率８９．１％であった。

【0075】

（４）ＣＤ４陽性細胞除去率
フローサイトメーター（ＢＥＣＴＯＮ ＤＩＣＫＩＮＳＯＮ社製 ＦＡＣＳＣＡＬＩＢＵＲ）を用いたフローサイトメトリー法によって、細胞吸着前のＡＣＤ−Ａ添加ヒト新鮮血液及び細胞吸着後の溶液中のＣＤ４陽性細胞数を測定し、細胞吸着器への細胞の吸着率を計算した。その結果、ＣＤ４陽性細胞の吸着率は９８．３％であった。また血小板の回収率は９４．７％であった。

【0076】

（５）配向評価用基材の抗体固定化量の定量
上記で得られた配向評価用基材におけるヒトＩｇＧの固定化量の定量を、（３）細胞吸着フィルターの抗体固定化量の定量と同様に行った。その結果、洗浄前の配向評価用基材には１．６３ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の配向評価用基材には１．５７ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率９６．５％であった。

【0077】

（６）配向評価
上記配向評価用基材１枚にｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｏ ＩｇＧ （Ｆａｂ）（ＰＥ）ｃｏｎｊｕｆｇａｔｅｄ（Ｓｉｇｍａ社製）（以下、「抗Ｆａｂ抗体」という。）０．１ｍｇ／ｍｌ溶液を、もう１枚にＭｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｏ Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ （Ｆｃ）−ＰＥ（ｓｉｇｍａ社製）（以下、「抗Ｆｃ抗体」という。）０．１ｍｇ／ｍｌ溶液を５０μｌずつ添加し、１時間遮光反応させた。その後、０．２％Ｔｗｅｅｎ２０溶液にて１回、ＰＢＳ（−）で３回洗浄した。二次抗体（抗ＰＥ抗体）を結合させ、二次抗体結合量を蛍光プレートリーダー（Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ社製 ＣｙｔｏＦｌｕｏｒ ＩＩ）を用いた蛍光測定により定量した。その結果、配向評価基材へ固定化されたヒトＩｇＧへの抗Ｆｃ抗体結合量に対する抗Ｆａｂ抗体結合量の比率（抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率）は７．３５であった。抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率が高い程、抗原と結合可能な配向で固定化されたヒトＩｇＧの比率が高いことを意味している。

【0078】

［実施例２］
抗ＣＤ４溶液を、抗ヒトＣＤ４モノクローナル抗体（１６μｇ）及び硫酸アンモニウム（５２．９ｍｇ）を溶解したクエン酸リン酸緩衝液（ｐＨ３．０）４００μｌに代えたこと、及び抗ＩｇＧ溶液を、ＩｇＧ（１６μｇ）及び硫酸アンモニウム（５２．９ｍｇ）を溶解したクエン酸リン酸緩衝液（ｐＨ３．０）４００μｌに代えたこと以外は実施例１と同様の方法で、細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価を行った。
細胞吸着フィルターの抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の細胞吸着フィルターには２．２１ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の細胞吸着フィルターには２．１７ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率９８．１％であった。
細胞吸着器への細胞の吸着率を測定した結果、ＣＤ４陽性細胞の吸着率は９６．９％であり、血小板の回収率は９６．３％であった。
配向評価用基材の抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の配向評価用基材には２．０１ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の配向評価用基材には１．８２ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率９０．４％であった。
配向評価用基材の配向評価の結果、抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率は７．２３であった。

【0079】

［実施例３］
抗ＣＤ４溶液を、抗ヒトＣＤ４モノクローナル抗体（１６μｇ）及び硫酸アンモニウム（１０５．７ｍｇ）を溶解したクエン酸リン酸緩衝液（ｐＨ３．０）４００μｌに代えたこと、及び抗ＩｇＧ溶液を、ＩｇＧ（１６μｇ）及び硫酸アンモニウム（１０５．７ｍｇ）を溶解したクエン酸リン酸緩衝液（ｐＨ３．０）４００μｌに代えたこと以外は実施例１と同様の方法で、細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価を行った。
細胞吸着フィルターの抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の細胞吸着フィルターには１．９９ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の細胞吸着フィルターには１．６４ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率８２．４％であった。
細胞吸着器への細胞の吸着率を測定した結果、ＣＤ４陽性細胞の吸着率は９３．１％であり、血小板の回収率は９３．９％であった。
配向評価用基材の抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の配向評価用基材には１．７５ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の配向評価用基材には１．５６ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率８９．２％であった。
配向評価用基材の配向評価の結果、抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率は７．１０であった。

【0080】

［実施例４］
抗ＣＤ４溶液を、抗ヒトＣＤ４モノクローナル抗体（１６μｇ）及びリン酸二水素カリウム（５４．４ｍｇ）を溶解したクエン酸緩衝液（ｐＨ３．５）４００μｌに代えたこと、及び抗ＩｇＧ溶液を、ＩｇＧ（１６μｇ）及びリン酸二水素カリウム（５４．４ｍｇ）を溶解したクエン酸緩衝液（ｐＨ３．５）４００μｌに代えたこと以外は実施例１と同様の方法で、細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価を行った。
細胞吸着フィルターの抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の細胞吸着フィルターには１．７５ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の細胞吸着フィルターには１．７４ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率９９．５％であった。
細胞吸着器への細胞の吸着率を測定した結果、ＣＤ４陽性細胞の吸着率は９８．５％であり、血小板の回収率は９３．７％であった。
配向評価用基材の抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の配向評価用基材には１．６２ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の配向評価用基材には１．６１ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率９９．２％であった。
配向評価用基材の配向評価の結果、抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率は８．２１であった。

【0081】

［実施例５］
抗ＣＤ４溶液を、抗ヒトＣＤ４モノクローナル抗体（１６μｇ）及びリン酸二水素カリウム（８１．７ｍｇ）を溶解したクエン酸緩衝液（ｐＨ３．５）４００μｌに代えたこと、及び抗ＩｇＧ溶液を、ＩｇＧ（１６μｇ）及びリン酸二水素カリウム（８１．７ｍｇ）を溶解したクエン酸緩衝液（ｐＨ３．５）４００μｌに代えたこと以外は実施例１と同様の方法で、細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価を行った。
細胞吸着フィルターの抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の細胞吸着フィルターには２．０１ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の細胞吸着フィルターには１．９０ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率９４．７％であった。
細胞吸着器への細胞の吸着率を測定した結果、ＣＤ４陽性細胞の吸着率は９６．３％であり、血小板の回収率は９５．３％であった。
配向評価用基材の抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の配向評価用基材には１．８９ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の配向評価用基材には１．８０ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率９５．１％であった。
配向評価用基材の配向評価の結果、抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率は７．２４であった。

【0082】

［実施例６］
グラフト反応を下記方法により行ったこと、ＸＰＳによる表面解析を下記方法により行ったこと以外は実施例３と同様の方法で、細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価を行った。
（グラフト反応）
スルホベタイン（ＳＢ）１４５．４ｇ、及びグリシジルメタクリレート（ＧＭＡ）２６．３ｍＬをメタノールに溶解し、５００ｍＬの反応液を得た。この反応液を用いて実施例１と同様の方法により、リガンド固定化用不織布（リガンド固定化用基材）を得た。
（ＸＰＳによる表面解析）
上記で得られたリガンド固定化用不織布の表面をＸＰＳ法により解析した。ＸＰＳより得られる炭素、酸素及び窒素の各相対元素濃度をそれぞれＣ_１、Ｃ_２、Ｃ_３とすると、基材表面に存在するＳＢ相対モル濃度（Ｘ）、ＧＭＡ相対モル濃度（Ｙ）、担体構成ポリマー相対モル濃度（Ｚ）はそれぞれ下記式（５）から（７）で表される。
Ｘ＝ｘ／（ｘ＋ｙ＋ｚ） （５）
Ｙ＝ｙ／（ｘ＋ｙ＋ｚ） （６）
Ｚ＝ｚ／（ｘ＋ｙ＋ｚ） （７）
ただし、ｘ＝Ｃ_３、ｙ＝（Ｃ_２−５ｘ）／３、ｚ＝｛Ｃ_１−（１１ｘ＋７ｙ）｝／Ａであって、Ａは担体構成ポリマーの単位炭素組成であり、例えば、ポリエチレンの場合Ａ＝２、ポリプロピレンの場合Ａ＝３である。
上記で得られる相対モル濃度より共重合ポリマー中のＳＢのモル組成比Ｒは次式（８）で表される。
Ｒ＝ｍ／（ｎ＋ｍ）＝Ｘ／（Ｘ＋Ｙ） （８）
これらの計算式に基づき、ＳＢモル組成比Ｒを算出した結果、ＳＢのモル組成比Ｒは０．４０であった。
（細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価）
細胞吸着フィルターの抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の細胞吸着フィルターには２．０５ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の細胞吸着フィルターには１．９５ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率９５．０％であった。
細胞吸着器への細胞の吸着率を測定した結果、ＣＤ４陽性細胞の吸着率は９０．２％であり、血小板の回収率は９６．８％であった。
配向評価用基材の抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の配向評価用基材には１．９９ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の配向評価用基材には１．９０ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率９５．３％であった。
配向評価用基材の配向評価の結果、抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率は６．１２であった。

【0083】

［実施例７］
グラフト反応を下記方法により行ったこと、ＸＰＳによる表面解析を下記方法により行ったこと以外は実施例３と同様の方法で、細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価を行った。
（グラフト反応）
ポリエチレングリコールモノメタクリレート（ＰＥＧＭＭ）１５２．８ｇ、及びグリシジルメタクリレート（ＧＭＡ）２６．３ｍＬを５００ｍＬのメタノールに溶解し、反応液を得た。この反応液を用いて実施例１と同様の方法により、リガンド固定化用不織布（リガンド固定化用基材）を得た。
（ＸＰＳによる表面解析）
上記で得られたリガンド固定化用不織布の表面をＸＰＳ法により解析した。ＸＰＳ解析では、まず、リガンド固定化用不織布表面のエポキシ基を開環させるため、リガンド固定化用不織布を２規定（２Ｎ）硫酸にて、５０℃で１０時間処理した後、エポキシ基開環前リガンド固定化用不織布とエポキシ基開環後リガンド固定化用不織布の表面を解析した。ＸＰＳより得られる炭素及び酸素の各相対元素濃度を測定し、エポキシ基開環前リガンド固定化用不織布の炭素及び酸素の各相対元素濃度をそれぞれＣ_４及びＣ_５、エポキシ基開環後リガンド固定化用不織布基材の炭素及び酸素の各相対元素濃度をそれぞれＣ_６及びＣ_７とすると、Ｃ_４＋Ｃ_５＝１、Ｃ_６＋Ｃ_７＝１である。また、基材表面に存在するＰＥＧＭＭ相対モル濃度（Ｘ）、ＧＭＡ相対モル濃度（Ｙ）はそれぞれ下記式（９）及び（１０）で表される。
Ｘ＝ｘ／１２ （９）
Ｙ＝Ｃ_７−Ｃ_５ （１０）
ただし、ｘ＝Ｃ_５−ｙ、ｙ＝３（Ｃ_７−Ｃ_５）で表される。上記で得られる相対モル濃度より共重合ポリマー中のＰＥＧＭＭのモル組成比Ｒは次式（１１）で表される。
Ｒ＝ｍ／（ｎ＋ｍ）＝Ｘ／（Ｘ＋Ｙ） （１１）
これらの計算式に基づき、ＰＥＧＭＭモル組成比Ｒを算出した結果、ＰＥＧＭＭのモル組成比Ｒは０．３５であった。
（細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価）
細胞吸着フィルターの抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の細胞吸着フィルターには２．２０ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の細胞吸着フィルターには２．０５ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率９３．３％であった。
細胞吸着器への細胞の吸着率を測定した結果、ＣＤ４陽性細胞の吸着率は９８．７％であり、血小板の回収率は９２．１％であった。
配向評価用基材の抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の配向評価用基材には１．８１ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の配向評価用基材には１．７９ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率９９．０％であった。
配向評価用基材の配向評価の結果、抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率は６．５３であった。

【0084】

［実施例８］
グラフト反応を下記方法により行ったこと以外は実施例３と同様の方法で、細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価を行った。
（グラフト反応）
Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン２８．３ｇ、及びグリシジルメタクリレート２６．３ｍＬを５００ｍＬのメタノールに溶解し、反応液を得た。この反応液を用いて実施例１と同様の方法により、リガンド固定化用不織布（リガンド固定化用基材）を得た。ＸＰＳによる表面解析の結果、ＣＭＢのモル組成比Ｒは０．３０であった。また比表面積を測定したところ０．４７ｍ^２／ｇであった。
（細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価）
細胞吸着フィルターの抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の細胞吸着フィルターには２．２０ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の細胞吸着フィルターには２．１６ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率９８．０％であった。
細胞吸着器への細胞の吸着率を測定した結果、ＣＤ４陽性細胞の吸着率は９８．１％であり、血小板の回収率は９３．２％であった。
配向評価用基材の抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の配向評価用基材には２．１３ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の配向評価用基材には１．８４ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率８６．３％であった。
配向評価用基材の配向評価の結果、抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率は６．５１であった。

【0085】

［実施例９］
グラフト反応を下記方法により行ったこと以外は実施例３と同様の方法で、細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価を行った。
（グラフト反応）
Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン４３．１ｇ、及びグリシジルメタクリレート２６．３ｍＬを５００ｍＬのメタノールに溶解し、反応液を得た。この反応液を用いて実施例１と同様の方法により、リガンド固定化用不織布（リガンド固定化用基材）を得た。ＸＰＳによる表面解析の結果、ＣＭＢのモル組成比Ｒは０．３３であった。また比表面積を測定したところ０．５３ｍ^２／ｇであった。
（細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価）
細胞吸着フィルターの抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の細胞吸着フィルターには２．２２ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の細胞吸着フィルターには２．１４ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率９６．２％であった。
細胞吸着器への細胞の吸着率を測定した結果、ＣＤ４陽性細胞の吸着率は９９．５％であり、血小板の回収率は９８．３％であった。
配向評価用基材の抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の配向評価用基材には２．０７ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の配向評価用基材には１．８４ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率８８．８％であった。
配向評価用基材の配向評価の結果、抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率は７．９２であった。

【0086】

［実施例１０］
グラフト反応を下記方法により行ったこと以外は実施例３と同様の方法で、細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価を行った。
（グラフト反応）
Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン１０３．３ｇ、及びグリシジルメタクリレート１５．８ｍＬを３５０ｍＬのメタノールに溶解し、反応液を得た。この反応液を用いて実施例１と同様の方法により、リガンド固定化用不織布（リガンド固定化用基材）を得た。ＸＰＳによる表面解析の結果、ＣＭＢのモル組成比Ｒは０．５６であった。また比表面積を測定したところ０．３６ｍ^２／ｇであった。
（細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価）
細胞吸着フィルターの抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の細胞吸着フィルターには１．５０ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の細胞吸着フィルターには１．２１ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率８０．４％であった。
細胞吸着器への細胞の吸着率を測定した結果、ＣＤ４陽性細胞の吸着率は９９．３％であり、血小板の回収率は９２．６％であった。
配向評価用基材の抗体固定化量を測定した結果、洗浄前の配向評価用基材には１．５２ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の配向評価用基材には１．２５ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率８２．３％であった。
配向評価用基材の配向評価の結果、抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率は８．３７であった。

【0087】

［比較例１］
グラフト反応を下記方法により行ったこと、抗ＣＤ４溶液を、抗ヒトＣＤ４モノクローナル抗体（１６μｇ）及び硫酸アンモニウム（２６．４ｍｇ）を溶解したＰＢＳ（−）（ｐＨ７．４）４００μｌに代えたこと、及び抗ＩｇＧ溶液を、ＩｇＧ（１６μｇ）及び硫酸アンモニウム（２６．４ｍｇ）を溶解したＰＢＳ（−）（ｐＨ７．４）４００μｌに代えたこと以外は実施例１と同様の方法で、細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価を行った。
（グラフト反応）
グリシジルメタクリレート２６．３ｍＬを５００ｍＬのメタノールに溶解し、反応液を得た。この反応液を用いて実施例１と同様の方法により、リガンド固定化用不織布（リガンド固定化用基材）を得た。ＸＰＳによる表面解析の結果、ＣＭＢのモル組成比Ｒは０であった。また比表面積を測定したところ０．５１ｍ^２／ｇであった。
（細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価）
細胞吸着フィルターの抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の細胞吸着フィルターには２．３２ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の細胞吸着フィルターには２．２４ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率９６．４％であった。
細胞吸着器への細胞の吸着率を測定した結果、ＣＤ４陽性細胞の吸着率は６９．７％であり、血小板の回収率は８．７％であった。
配向評価用基材の抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の配向評価用基材には２．０１ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の配向評価用基材には１．８５ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率９２．０％であった。
配向評価用基材の配向評価の結果、抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率は３．１７であった。

【0088】

［比較例２］
グラフト反応を下記方法により行ったこと以外は比較例１と同様の方法で、細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価を行った。
（グラフト反応）
Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン２１．５ｇ、及びグリシジルメタクリレート２６．３ｍＬを５００ｍＬのメタノールに溶解し、反応液を得た。この反応液を用いて実施例１と同様の方法により、リガンド固定化用不織布（リガンド固定化用基材）を得た。ＸＰＳによる表面解析の結果、ＣＭＢのモル組成比Ｒは０．２６であった。また比表面積を測定したところ０．５０ｍ^２／ｇであった。
（細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価）
細胞吸着フィルターの抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の細胞吸着フィルターには１．４３ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の細胞吸着フィルターには１．２６ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率８７．６％であった。
細胞吸着器への細胞の吸着率を測定した結果、ＣＤ４陽性細胞の吸着率は７８．２％であり、血小板の回収率は５０．５％であった。
配向評価用基材の抗体固定化量を測定した結果、洗浄前の配向評価用基材には２．０３ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の配向評価用基材には１．７２ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率８４．６％であった。
配向評価用基材の配向評価の結果、抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率は３．１５であった。

【0089】

［比較例３］
グラフト反応を下記方法により行ったこと以外は実施例３と同様の方法で、細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価を行った。
（グラフト反応）
Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン２０７．１４ｇ、及びグリシジルメタクリレート１５．８ｍＬを３００ｍＬのメタノールに溶解し、反応液を得た。この反応液を用いて実施例１と同様の方法により、リガンド固定化用不織布（リガンド固定化用基材）を得た。ＸＰＳによる表面解析の結果、ＣＭＢのモル組成比Ｒは０．６３であった。また比表面積を測定したところ０．３２ｍ^２／ｇであった。
（細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価）
細胞吸着フィルターの抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の細胞吸着フィルターには１．２５ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の細胞吸着フィルターには０．８５ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率６８．０％であった。
細胞吸着器への細胞の吸着率を測定した結果、ＣＤ４陽性細胞の吸着率は７５．８％であり、血小板の回収率は９９．８％であった。
配向評価用基材の抗体固定化量を測定した結果、洗浄前の配向評価用基材には１．３７ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の配向評価用基材には０．７９ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率５７．７％であった。
配向評価用基材の配向評価の結果、抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率は８．５２であった。

【0090】

［比較例４］
抗ＣＤ４溶液を、抗ヒトＣＤ４モノクローナル抗体（１６μｇ）及び硫酸アンモニウム（２６．４ｍｇ）を溶解したＰＢＳ（−）（ｐＨ７．４）４００μｌに代えたこと、及び抗ＩｇＧ溶液を、ＩｇＧ（１６μｇ）及び硫酸アンモニウム（２６．４ｍｇ）を溶解したＰＢＳ（−）（ｐＨ７．４）４００μｌに代えたこと以外は実施例１と同様の方法で、細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価を行った。
細胞吸着フィルターの抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の細胞吸着フィルターには０．９５ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の細胞吸着フィルターには０．６６ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率６９．５％であった。
細胞吸着器への細胞の吸着率を測定した結果、ＣＤ４陽性細胞の吸着率は４９．５％であり、血小板の回収率は９５．４％であった。
配向評価用基材の抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の配向評価用基材には０．８７ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の配向評価用基材には０．６３ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率７２．４％であった。
配向評価用基材の配向評価の結果、抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率は４．０１であった。

【0091】

［比較例５］
抗ＣＤ４溶液を、抗ヒトＣＤ４モノクローナル抗体（１６μｇ）及び硫酸アンモニウム（２６．４ｍｇ）を溶解したクエン酸リン酸緩衝液（ｐＨ３．０）４００μｌに代えたこと、及び抗ＩｇＧ溶液を、ＩｇＧ（１６μｇ）及び硫酸アンモニウム（２６．４ｍｇ）を溶解したクエン酸リン酸緩衝液（ｐＨ３．０）４００μｌに代えたこと以外は実施例１と同様の方法で、細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価を行った。
細胞吸着フィルターの抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の細胞吸着フィルターには１．３３ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の細胞吸着フィルターには０．５２ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率３８．８％であった。
細胞吸着器への細胞の吸着率を測定した結果、ＣＤ４陽性細胞の吸着率は５０．１％であり、血小板の回収率は１００．０％であった。
配向評価用基材の抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の配向評価用基材には１．１５ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の配向評価用基材には６．５８ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率５７．２％であった。
配向評価用基材の配向評価の結果、抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率は５．０３であった。

【0092】

［比較例６］
抗ＣＤ４溶液を、抗ヒトＣＤ４モノクローナル抗体（１６μｇ）及び硫酸アンモニウム（１０５．７ｍｇ）を溶解したＰＢＳ（−）（ｐＨ７．４）４００μｌに代えたこと、及び抗ＩｇＧ溶液を、ＩｇＧ（１６μｇ）及び硫酸アンモニウム（１０５．７ｍｇ）を溶解したＰＢＳ（−）（ｐＨ７．４）４００μｌに代えたこと以外は実施例１と同様の方法で、細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価を行った。
細胞吸着フィルターの抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の細胞吸着フィルターには１．０５ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の細胞吸着フィルターには０．８３ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率７９．０％であった。
細胞吸着器への細胞の吸着率を測定した結果、ＣＤ４陽性細胞の吸着率は６４．２％であり、血小板の回収率は１００．０％であった。
配向評価用基材の抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の配向評価用基材には０．９３ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の配向評価用基材には０．８５ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率９１．４％であった。
配向評価用基材の配向評価の結果、抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率は４．９２であった。

【0093】

［比較例７］
抗ＣＤ４溶液を、抗ヒトＣＤ４モノクローナル抗体（１６μｇ）及び硫酸アンモニウム（２６．４ｍｇ）を溶解したＰＢＳ（−）（ｐＨ７．４）４００μｌに代えたこと、及び抗ＩｇＧ溶液を、ＩｇＧ（１６μｇ）及び硫酸アンモニウム（２６．４ｍｇ）を溶解したＰＢＳ（−）（ｐＨ７．４）４００μｌに代えたこと以外は実施例９と同様の方法で、細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価を行った。
細胞吸着フィルターの抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の細胞吸着フィルターには１．１３ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の細胞吸着フィルターには０．８１ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率７１．７％であった。
細胞吸着器への細胞の吸着率を測定した結果、ＣＤ４陽性細胞の吸着率は７２．０％であり、血小板の回収率は７６．５％であった。
配向評価用基材の抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の配向評価用基材には１．０５ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の配向評価用基材には０．９４ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率８９．５％であった。
配向評価用基材の配向評価の結果、抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率は２．８１であった。

【0094】

［比較例８］
抗ＣＤ４溶液を、抗ヒトＣＤ４モノクローナル抗体（１６μｇ）及び硫酸アンモニウム（２６．４ｍｇ）を溶解したＰＢＳ（−）（ｐＨ７．４）４００μｌに代えたこと、及び抗ＩｇＧ溶液を、ＩｇＧ（１６μｇ）及び硫酸アンモニウム（２６．４ｍｇ）を溶解したＰＢＳ（−）（ｐＨ７．４）４００μｌに代えたこと以外は実施例８と同様の方法で、細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価を行った。
細胞吸着フィルターの抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の細胞吸着フィルターには１．２５ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の細胞吸着フィルターには０．９８ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率７８．４％であった。
細胞吸着器への細胞の吸着率を測定した結果、ＣＤ４陽性細胞の吸着率は７８．２％であり、血小板の回収率は６８．４％であった。
配向評価用基材の抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の配向評価用基材には１．１３ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の配向評価用基材には０．９２ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率８１．４％であった。
配向評価用基材の配向評価の結果、抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率は２．２０であった。

【0095】

［比較例９］
抗ＣＤ４溶液を、抗ヒトＣＤ４モノクローナル抗体（１６μｇ）及び硫酸アンモニウム（２６．４ｍｇ）を溶解したＰＢＳ（−）（ｐＨ７．４）４００μｌに代えたこと、及び抗ＩｇＧ溶液を、ＩｇＧ（１６μｇ）及び硫酸アンモニウム（２６．４ｍｇ）を溶解したＰＢＳ（−）（ｐＨ７．４）４００μｌに代えたこと以外は実施例６と同様の方法で、細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価を行った。
細胞吸着フィルターの抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の細胞吸着フィルターには０．７２ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の細胞吸着フィルターには０．６２ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率８６．０％であった。
細胞吸着器への細胞の吸着率を測定した結果、ＣＤ４陽性細胞の吸着率は１５．０％であり、血小板の回収率は８５．２％であった。
配向評価用基材の抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の配向評価用基材には０．３５ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の配向評価用基材には０．１４ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率３９．５％であった。
配向評価用基材の配向評価の結果、抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率は３．１５であった。

【0096】

［比較例１０］
抗ＣＤ４溶液を、抗ヒトＣＤ４モノクローナル抗体（１６μｇ）及び硫酸アンモニウム（２６．４ｍｇ）を溶解したＰＢＳ（−）（ｐＨ７．４）４００μｌに代えたこと、及び抗ＩｇＧ溶液を、ＩｇＧ（１６μｇ）及び硫酸アンモニウム（２６．４ｍｇ）を溶解したＰＢＳ（−）（ｐＨ７．４）４００μｌに代えたこと以外は実施例７と同様の方法で、細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価を行った。
細胞吸着フィルターの抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の細胞吸着フィルターには０．２８ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の細胞吸着フィルターには０．２８ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率９９．１％であった。
細胞吸着器への細胞の吸着率を測定した結果、ＣＤ４陽性細胞の吸着率は７５．５％であり、血小板の回収率は９８．４％であった。
配向評価用基材の抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の配向評価用基材には０．５０ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の配向評価用基材には０．３０ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率６０．４％であった。
配向評価用基材の配向評価の結果、抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率は３．６８であった。

【0097】

［比較例１１］
抗ＣＤ４溶液を、抗ヒトＣＤ４モノクローナル抗体（１６μｇ）及び塩化ナトリウム（２３．４ｍｇ）を溶解したクエン酸リン酸緩衝液（ｐＨ３．０）４００μｌに代えたこと、及び抗ＩｇＧ溶液を、ＩｇＧ（１６μｇ）及び塩化ナトリウム（２３．４ｍｇ）を溶解したクエン酸リン酸緩衝液（ｐＨ３．０）４００μｌに代えたこと以外は実施例１と同様の方法で、細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価を行った。
細胞吸着フィルターの抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の細胞吸着フィルターには２．１１ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の細胞吸着フィルターには１．５１ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率７１．３％であった。
細胞吸着器への細胞の吸着率を測定した結果、ＣＤ４陽性細胞の吸着率は９５．１％であり、血小板の回収率は９４．９％であった。
配向評価用基材の抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の配向評価用基材には２．０６ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の配向評価用基材には１．３５ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率６５．３％であった。
配向評価用基材の配向評価の結果、抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率は５．６１であった。

【0098】

［比較例１２］
抗ＣＤ４溶液を、抗ヒトＣＤ４モノクローナル抗体（１６μｇ）及び塩化ナトリウム（４６．７ｍｇ）を溶解したクエン酸リン酸緩衝液（ｐＨ３．０）４００μｌに代えたこと、及び抗ＩｇＧ溶液を、ＩｇＧ（１６μｇ）及び塩化ナトリウム（４６．７ｍｇ）を溶解したクエン酸リン酸緩衝液（ｐＨ３．０）４００μｌに代えたこと以外は実施例１と同様の方法で、細胞吸着フィルター及び配向評価用基材の作製及び評価を行った。
細胞吸着フィルターの抗体固定化量を定量した結果、洗浄前の細胞吸着フィルターには２．１５ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の細胞吸着フィルターには１．４２ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率６６．１％であった。
細胞吸着器への細胞の吸着率を測定した結果、ＣＤ４陽性細胞の吸着率は９８．４％であり、血小板の回収率は９５．９％であった。
配向評価用基材の抗体固定化量を測定した結果、洗浄前の配向評価用基材には１．９４ｍｇ／ｍ^２、ＳＤＳ洗浄後の配向評価用基材には１．１３ｍｇ／ｍ^２が固定化されており、化学固定率５８．２％であった。
配向評価用基材の配向評価の結果、抗Ｆａｂ／抗Ｆｃ比率は５．７９であった。

【0099】

実施例１〜１０及び比較例１〜１２の評価結果を下記表１にまとめた。

【表1】

【符号の説明】

【0100】

１…水不溶性担体、２…ポリマー（共重合体）、１０…ポリマー主鎖、２０…親水性基、３０…求電子官能基、４０…抗体、５０…容器、６０ａ、６０ｂ…ヘッダーキャップ、Ｆ…血液の流れ方向、１００，１１０…特異的分離材、２００…血液処理器。

【図1】

【図2】

【図3】