特許 5943909 血液分析装置、血液分析方法、及びコンピュータプログラム

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5943909

(24)【登録日】2016年6月3日

(45)【発行日】2016年7月5日

(54)【発明の名称】血液分析装置、血液分析方法、及びコンピュータプログラム

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/49 20060101AFI20160621BHJP

   G01N 33/483 20060101ALI20160621BHJP

   G01N 33/48 20060101ALI20160621BHJP

   G01N 21/64 20060101ALI20160621BHJP

   G01N 21/49 20060101ALI20160621BHJP

   G01N 15/14 20060101ALI20160621BHJP

【ＦＩ】

   G01N33/49 A

   G01N33/49 K

   G01N33/483 C

   G01N33/48 P

   G01N21/64 F

   G01N21/49 Z

   G01N15/14 K

   G01N15/14 C

【請求項の数】15

【全頁数】41

(21)【出願番号】特願2013-511980(P2013-511980)

(86)(22)【出願日】2012年3月30日

(86)【国際出願番号】JP2012058589

(87)【国際公開番号】WO2012147451

(87)【国際公開日】20121101

【審査請求日】2015年1月26日

(31)【優先権主張番号】特願2011-100810(P2011-100810)

(32)【優先日】2011年4月28日

(33)【優先権主張国】JP

(73)【特許権者】

【識別番号】390014960

【氏名又は名称】シスメックス株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100125645

【弁理士】

【氏名又は名称】是枝 洋介

(74)【代理人】

【識別番号】100166774

【弁理士】

【氏名又は名称】右田 敏之

(72)【発明者】

【氏名】吉田 歩

(72)【発明者】

【氏名】片岡 由起子

(72)【発明者】

【氏名】辻 智悠

【審査官】 三木 隆

(56)【参考文献】

【文献】 特公平０７−１１３６３２（ＪＰ，Ｂ２）

【文献】 特表２００９−５１１９１９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平１０−３１９０１０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００６−２７５９８５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許出願公開第２００７／０２７５４６９（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 特許第２６３５１４２（ＪＰ，Ｂ２）

【文献】 特開２００７−２６３８９４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許出願公開第２００９／００２３１２９（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 米国特許出願公開第２００５／０２６０７６６（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 特開平０６−２０７９４２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特許第４６５９１４６（ＪＰ，Ｂ２）

【文献】 特開２０１０−２３７１４７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００８−５００５５８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００６−０９１０２４（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｇ０１Ｎ ３３／４９

Ｇ０１Ｎ １５／１４

Ｇ０１Ｎ ２１／４９

Ｇ０１Ｎ ２１／６４

Ｇ０１Ｎ ３３／４８

Ｇ０１Ｎ ３３／４８３

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

カチオン性界面活性剤を実質的に含まずノニオン性界面活性剤を含む溶血剤、血液検体、及び核酸を染める蛍光色素を混合して測定試料を調製する試料調製部と、
前記試料調製部によって調製された測定試料に光を照射する光源と、
前記光源により光が前記測定試料に照射されたときに前記測定試料中の細胞から生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する蛍光信号及び受光された散乱光に関する散乱光信号を出力する受光部と、
前記受光部により出力された蛍光信号及び散乱光信号に基づき、所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を、芽球および異型リンパ球と区別して異常リンパ球として検出する細胞分析部と、
前記細胞分析部による検出結果に基づく出力を行う出力部と、
を備える、
血液分析装置。

【請求項2】

前記受光部は、前記測定試料に光が照射されたときに前記測定試料中の細胞から生じる前方散乱光及び側方散乱光を受光して、受光された前方散乱光に関する前方散乱光信号及び受光された側方散乱光に関する側方散乱光信号を含む前記散乱光信号を出力するように構成されており、
前記細胞分析部は、前記蛍光信号と、前記前方散乱光信号及び前記側方散乱光信号の少なくとも一方とに基づき、所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を、異常リンパ球として検出するように構成されている、
請求項１に記載の血液分析装置。

【請求項3】

前記受光部は、前記測定試料に光が照射されたときに前記測定試料中の細胞から生じる前方散乱光及び側方散乱光を受光して、受光された前方散乱光に関する前方散乱光信号及び受光された側方散乱光に関する側方散乱光信号を含む前記散乱光信号を出力するように構成されており、
前記細胞分析部は、前記前方散乱光信号、前記側方散乱光信号、及び前記蛍光信号から選択される少なくとも２つに基づいて、異常リンパ球及び異型リンパ球と区別して芽球を検出するように構成されている、
請求項１又は２に記載の血液分析装置。

【請求項4】

前記細胞分析部は、前記前方散乱光信号及び前記側方散乱光信号に基づき、所定範囲の前方散乱光強度及び側方散乱光強度を示す細胞を、異常リンパ球及び異型リンパ球と区別して芽球として検出するように構成されている、
請求項３に記載の血液分析装置。

【請求項5】

前記試料調製部は、カチオン性界面活性剤を実質的に含まずノニオン性界面活性剤及びアニオン性界面活性剤を含む前記溶血剤、血液検体、及び前記蛍光色素を混合して測定試料を調製するように構成されている、
請求項１乃至４の何れか１項に記載の血液分析装置。

【請求項6】

前記試料調製部は、有核赤血球測定用の第２溶血剤、血液検体、及び有核赤血球測定用の第２蛍光色素を混合して第２測定試料を調製するように構成されており、
前記受光部は、前記光源により光が前記第２測定試料に照射されたときに前記第２測定試料中の細胞から生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第２蛍光信号及び受光された散乱光に関する第２散乱光信号を出力するように構成されており、
前記細胞分析部は、前記受光部により出力された第２蛍光信号及び第２散乱光信号に基づき、前記第２測定試料中の有核赤血球を検出するための検出処理を行い、当該検出処理の結果が所定の条件を満たす場合に、前記所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を、異常リンパ球として検出するように構成されている、
請求項１乃至５の何れか１項に記載の血液分析装置。

【請求項7】

前記所定範囲の蛍光強度は、リンパ球および単球から得られる蛍光強度よりも大きい、
請求項１乃至６の何れか１項に記載の血液分析装置。

【請求項8】

前記所定範囲の前方散乱光強度は、リンパ球から得られる前方散乱光強度よりも大きい、
請求項４に記載の血液分析装置。

【請求項9】

前記細胞分析部は、前記検出処理として、前記第２蛍光信号および前記第２散乱光信号に基づき、第２所定範囲の蛍光強度および散乱光強度を示す細胞の数に基づく値を取得する取得処理を行い、取得した値が所定の閾値を超えない場合に、前記所定範囲の蛍光強度および散乱光強度を示す細胞を異常リンパ球として検出する、
請求項６に記載の血液分析装置。

【請求項10】

カチオン性界面活性剤を実質的に含まずノニオン性界面活性剤を含む溶血剤、血液検体、及び核酸を染める蛍光色素を混合して測定試料を調製するステップと、
調製された測定試料に光を照射するステップと、
光が前記測定試料に照射されたときに前記測定試料中の細胞から生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する蛍光信号及び受光された散乱光に関する散乱光信号を取得するステップと、
前記蛍光信号及び前記散乱光信号に基づき、所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を、芽球および異型リンパ球と区別して異常リンパ球として検出するステップと、
検出結果に基づく出力を行うステップと、
を有する、
血液分析方法。

【請求項11】

前記蛍光信号及び前記散乱光信号を取得するステップにおいて、光が前記測定試料に照射されたときに前記測定試料中の細胞から生じる蛍光、前方散乱光及び側方散乱光を受光して、受光された蛍光に関する前記蛍光信号と、受光された前方散乱光に関する前方散乱光信号及び受光された側方散乱光に関する側方散乱光信号を含む前記散乱光信号とを取得し、
前記異常リンパ球を検出するステップにおいて、前記蛍光信号と、前記前方散乱光信号及び前記側方散乱光信号の少なくとも一方とに基づき、所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を、異常リンパ球として検出する、
請求項１０に記載の血液分析方法。

【請求項12】

前記蛍光信号及び前記散乱光信号を取得するステップにおいて、光が前記測定試料に照射されたときに前記測定試料中の細胞から生じる蛍光、前方散乱光及び側方散乱光を受光して、受光された蛍光に関する前記蛍光信号と、受光された前方散乱光に関する前方散乱光信号及び受光された側方散乱光に関する側方散乱光信号を含む前記散乱光信号を取得し、
前記前方散乱光信号、前記側方散乱光信号、及び前記蛍光信号から選択される少なくとも２つに基づいて、異常リンパ球及び異型リンパ球と区別して芽球を検出するステップをさらに有する、
請求項１０又は１１に記載の血液分析方法。

【請求項13】

前記芽球を検出するステップにおいて、前記前方散乱光信号及び前記側方散乱光信号に基づき、所定範囲の前方散乱光強度及び側方散乱光強度を示す細胞を、異常リンパ球及び異型リンパ球と区別して芽球として検出する、
請求項１２に記載の血液分析方法。

【請求項14】

前記測定試料を調製するステップにおいて、カチオン性界面活性剤を実質的に含まずノニオン性界面活性剤及びアニオン性界面活性剤を含む前記溶血剤、血液検体、及び前記蛍光色素を混合して測定試料を調製する、
請求項１０乃至１３の何れか１項に記載の血液分析方法。

【請求項15】

通信部と、出力部とを備えるコンピュータに、血液検体の分析をさせるためのコンピュータプログラムであって、
前記通信部が、カチオン性界面活性剤を実質的に含まずノニオン性界面活性剤を含む溶血剤、血液検体、及び核酸を染める蛍光色素を混合して調製された測定試料に光を照射したときに前記測定試料中の細胞から生じる蛍光及び散乱光に関する蛍光信号及び散乱光信号を受信するステップと、
前記蛍光信号及び前記散乱光信号に基づき、所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を、芽球および異型リンパ球と区別して異常リンパ球として検出するステップと、
前記出力部に、検出結果に基づく情報を出力させるステップと、
を前記コンピュータに実行させる、
コンピュータプログラム。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、血液検体を光学的に測定し、血液検体に含まれる血球を分類する血液分析装置及び血液分析方法、並びにコンピュータに血液を分析させるためのコンピュータプログラムに関する。

【背景技術】

【0002】

正常な末梢血液中にはリンパ球、単球、好塩基球、好酸球、及び好中球の５種類の白血球が存在し、多くの血球計数装置は血液検体中の白血球をかかる５つの種類に分類する機能を有している。一方、ウイルス感染症、造血器腫瘍等の疾患においては、正常な末梢血液中には存在しない細胞が出現する。末梢血液中に出現する異常な白血球には異常な単核球が含まれ、異常単核球としては、例えば、慢性リンパ性白血病、悪性リンパ腫等の疾患では、腫瘍性の成熟リンパ球である「異常リンパ球（abnormal lymphocyte）」が末梢血液中に出現する。一方、急性の白血病では、異常単核球として、未成熟な白血球である「芽球（骨髄芽球：myeloblast、リンパ芽球：lymphoblast）」が末梢血液中に出現する。さらに、ウイルス感染症、薬物アレルギー等では、異常単核球として、抗原刺激により活性化したリンパ球である「異型リンパ球（atypical lymphocyte）」が末梢血液中に出現する。末梢血液中から異常リンパ球を、異型リンパ球、及び芽球と区別して検出することは、異常リンパ球が末梢血液中に出現する慢性リンパ性白血病といった疾患のスクリーニング又は診断を行う上で極めて有用である。

【0003】

特許文献１及び特許文献２には、白血球を５つ又は４つに分類する試薬を用いて異常リンパ球を含む異常な白血球を正常白血球と区別して検出することが開示されている。具体的には、白血球を分類するための試薬として、カチオン性界面活性剤及びノニオン性界面活性剤を含む溶血剤と、核酸を染める蛍光色素を含む染色液とを用いて、異常な白血球と正常白血球との間に蛍光強度及び散乱光強度の差異を生じさせ、それらの差異に基づいて異常な白血球を正常白血球と区別して検出することが開示されている。

【0004】

特許文献３には、所定の試薬を用いて、骨髄芽球を成熟白血球及び幼若顆粒球と区別して検出することが開示されている（図１、２、５参照）。具体的には、この文献には、上記の試薬として、ノニオン性界面活性剤及び可溶化剤を含む溶血剤と、核酸を染める蛍光色素を含む染色液とを用いることで、骨髄芽球、成熟白血球、及び幼若顆粒球の間に蛍光強度及び散乱光強度の差異を生じさせ、それらの差異に基づいて骨髄芽球を成熟白血球及び幼若顆粒球と区別して検出することが開示されている。

【0005】

また、特許文献４には、所定の試薬を用いて、リンパ芽球及び骨髄芽球を、成熟白血球及び幼若顆粒球と区別して検出することが開示されている（図１３Ａ、１３Ｂ参照）。具体的には、この文献には、上記の試薬として、ノニオン性界面活性剤及び可溶化剤を含む溶血剤と、核酸を染める蛍光色素を含む染色液とを用いることで、リンパ芽球及び骨髄芽球を、成熟白血球及び幼若顆粒球と区別して検出することが開示されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【特許文献1】米国特許出願公開第２００９／００２３１２９号明細書

【特許文献2】米国特許出願公開第２０１０／０１５１５０９号明細書

【特許文献3】特開２００７−２６３８９４号公報

【特許文献4】特開２０１０−２３７１４７号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

しかしながら、上記特許文献１に開示されている方法にあっては、側方蛍光強度及び側方散乱光強度のスキャッタグラムにおいて、異常リンパ球と芽球とが同一の領域に出現しており、両者を区別することはできない（図２参照）。また、特許文献１には、異型リンパ球の出現については何ら記載されていない。

【0008】

特許文献２には、側方蛍光強度及び側方散乱光強度のスキャッタグラムにおける異常リンパ球の出現領域は示されているが（図４及び図７参照）、芽球及び異型リンパ球の出現については何ら記載されていない。また、特許文献２に記載されている試薬は、特許文献１に記載されている試薬と特徴が類似しており、しかも特許文献２に示されているスキャッタグラムにおける異常リンパ球の出現領域は、特許文献１に示されているスキャッタグラムにおける異常リンパ球及び芽球の出現領域と同様の位置であることから、特許文献２においても、上記の異常リンパ球の出現領域に芽球も出現し、両者を区別することはできないと推定される。

【0009】

また、特許文献３及び特許文献４には、異常リンパ球を他の血球と区別して検出することは記載されていない。

【0010】

本発明は斯かる事情に鑑みてなされたものであり、その主たる目的は、異常リンパ球を芽球及び異型リンパ球と区別して検出することが可能な血液分析装置、血液分析方法、及びコンピュータプログラムを提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0011】

上述した課題を解決するために、本発明の一の態様の血液分析装置は、カチオン性界面活性剤を実質的に含まずノニオン性界面活性剤を含む溶血剤、血液検体、及び核酸を染める蛍光色素を混合して測定試料を調製する試料調製部と、前記試料調製部によって調製された測定試料に光を照射する光源と、前記光源により光が前記測定試料に照射されたときに前記測定試料中の細胞から生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する蛍光信号及び受光された散乱光に関する散乱光信号を出力する受光部と、前記受光部により出力された蛍光信号及び散乱光信号に基づき、所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を、芽球および異型リンパ球と区別して異常リンパ球として検出する細胞分析部と、前記細胞分析部による検出結果に基づく出力を行う出力部と、を備える。

【0013】

また、この態様において、前記受光部は、前記測定試料に光が照射されたときに前記測定試料中の細胞から生じる前方散乱光及び側方散乱光を受光して、受光された前方散乱光に関する前方散乱光信号及び受光された側方散乱光に関する側方散乱光信号を含む前記散乱光信号を出力するように構成されており、前記細胞分析部は、前記蛍光信号と、前記前方散乱光信号及び前記側方散乱光信号の少なくとも一方とに基づき、所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を、異常リンパ球として検出するように構成されていてもよい。

【0014】

また、上記態様において、前記受光部は、前記測定試料に光が照射されたときに前記測定試料中の細胞から生じる前方散乱光及び側方散乱光を受光して、受光された前方散乱光に関する前方散乱光信号及び受光された側方散乱光に関する側方散乱光信号を含む前記散乱光信号を出力するように構成されており、前記細胞分析部は、前記前方散乱光信号、前記側方散乱光信号、及び前記蛍光信号から選択される少なくとも２つに基づいて、異常リンパ球及び異型リンパ球と区別して芽球を検出するように構成されていてもよい。

【0015】

また、上記態様において、前記細胞分析部は、前記前方散乱光信号及び前記側方散乱光信号に基づき、所定範囲の前方散乱光強度及び側方散乱光強度を示す細胞を、異常リンパ球及び異型リンパ球と区別して芽球として検出するように構成されていてもよい。

【0016】

また、上記態様において、前記試料調製部は、カチオン性界面活性剤を実質的に含まずノニオン性界面活性剤及びアニオン性界面活性剤を含む前記溶血剤、血液検体、及び前記蛍光色素を混合して測定試料を調製するように構成されていてもよい。

【0017】

また、上記態様において、前記試料調製部は、有核赤血球測定用の第２溶血剤、血液検体、及び有核赤血球測定用の第２蛍光色素を混合して第２測定試料を調製するように構成されており、前記受光部は、前記光源により光が前記第２測定試料に照射されたときに前記第２測定試料中の細胞から生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第２蛍光信号及び受光された散乱光に関する第２散乱光信号を出力するように構成されており、前記細胞分析部は、前記受光部により出力された第２蛍光信号及び第２散乱光信号に基づき、前記第２測定試料中の有核赤血球を検出するための検出処理を行い、当該検出処理の結果が所定の条件を満たす場合に、前記所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を、異常リンパ球として検出するように構成されていてもよい。
また、上記態様において、前記所定範囲の蛍光強度は、リンパ球および単球から得られる蛍光強度よりも大きくてもよく、前記所定範囲の前方散乱光強度は、リンパ球から得られる前方散乱光強度よりも大きくてもよい。

【0019】

また、上記態様において、前記細胞分析部は、前記検出処理として、前記第２蛍光信号および前記第２散乱光信号に基づき、第２所定範囲の蛍光強度および散乱光強度を示す細胞の数に基づく値を取得する取得処理を行い、取得した値が所定の閾値を超えない場合に、前記所定範囲の蛍光強度および散乱光強度を示す細胞を異常リンパ球として検出するように構成されていてもよい。

【0020】

本発明の一の態様の血液分析方法は、カチオン性界面活性剤を実質的に含まずノニオン性界面活性剤を含む溶血剤、血液検体、及び核酸を染める蛍光色素を混合して測定試料を調製するステップと、調製された測定試料に光を照射するステップと、光が前記測定試料に照射されたときに前記測定試料中の細胞から生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する蛍光信号及び受光された散乱光に関する散乱光信号を取得するステップと、前記蛍光信号及び前記散乱光信号に基づき、所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を、芽球および異型リンパ球と区別して異常リンパ球として検出するステップと、検出結果に基づく出力を行うステップと、を有する。

【0022】

また、この態様において、前記蛍光信号及び前記散乱光信号を取得するステップにおいて、光が前記測定試料に照射されたときに前記測定試料中の細胞から生じる蛍光、前方散乱光及び側方散乱光を受光して、受光された蛍光に関する前記蛍光信号と、受光された前方散乱光に関する前方散乱光信号及び受光された側方散乱光に関する側方散乱光信号を含む前記散乱光信号を取得し、前記異常リンパ球を検出するステップにおいて、前記蛍光信号と、前記前方散乱光信号及び前記側方散乱光信号の少なくとも一方とに基づき、所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を、異常リンパ球として検出してもよい。

【0023】

また、上記態様において、前記蛍光信号及び前記散乱光信号を取得するステップにおいて、光が前記測定試料に照射されたときに前記測定試料中の細胞から生じる蛍光、前方散乱光及び側方散乱光を受光して、受光された蛍光に関する前記蛍光信号と、受光された前方散乱光に関する前方散乱光信号及び受光された側方散乱光に関する側方散乱光信号を含む前記散乱光信号を取得し、前記血液分析方法は、前記前方散乱光信号、前記側方散乱光信号、及び前記蛍光信号から選択される少なくとも２つに基づいて、異常リンパ球及び異型リンパ球と区別して芽球を検出するステップをさらに有してもよい。

【0024】

また、上記態様において、前記芽球を検出するステップにおいて、前記前方散乱光信号及び前記側方散乱光信号に基づき、所定範囲の前方散乱光強度及び側方散乱光強度を示す細胞を、異常リンパ球及び異型リンパ球と区別して芽球として検出してもよい。

【0025】

また、上記態様において、前記測定試料を調製するステップにおいて、カチオン性界面活性剤を実質的に含まずノニオン性界面活性剤及びアニオン性界面活性剤を含む前記溶血剤、血液検体、及び前記蛍光色素を混合して測定試料を調製してもよい。

【0027】

本発明の一の態様のコンピュータプログラムは、通信部と、出力部とを備えるコンピュータに、血液検体の分析をさせるためのコンピュータプログラムであって、前記通信部が、カチオン性界面活性剤を実質的に含まずノニオン性界面活性剤を含む溶血剤、血液検体、及び核酸を染める蛍光色素を混合して調製された測定試料に光を照射したときに前記測定試料中の細胞から生じる蛍光及び散乱光に関する蛍光信号及び散乱光信号を受信するステップと、前記蛍光信号及び前記散乱光信号に基づき、所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を、芽球および異型リンパ球と区別して異常リンパ球として検出するステップと、前記出力部に、検出結果に基づく情報を出力させるステップと、を前記コンピュータに実行させる。

【発明の効果】

【0030】

本発明に係る血液分析装置、血液分析方法、及びコンピュータプログラムによれば、異常リンパ球を芽球及び異型リンパ球と区別して検出することが可能となる。

【図面の簡単な説明】

【0031】

【図1】実施の形態１に係る血液分析装置の外観を示す斜視図。

【図2】実施の形態１に係る測定ユニットの構成を示すブロック図。

【図3】光学検出器の概要構成を示す模式図。

【図4】実施の形態１に係る情報処理ユニットの構成を示すブロック図。

【図5】実施の形態１に係る血液分析装置の測定工程での動作手順を示すフローチャート。

【図6】実施の形態１に係る血液分析装置のデータ処理工程での処理手順を示すフローチャート。

【図7】測定データにおける前方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムの模式図。

【図8】測定データにおける蛍光強度及び側方散乱光強度のスキャッタグラムの模式図。

【図9】測定データにおける前方散乱光強度及び側方散乱光強度のスキャッタグラムの模式図。

【図10A】骨髄芽球を含有する血液検体を測定したときのスキャッタグラムの例。

【図10B】リンパ芽球を含有する血液検体を測定したときのスキャッタグラムの例。

【図10C】異常リンパ球を含有する血液検体を測定したときのスキャッタグラムの例。

【図10D】異型リンパ球を含有する血液検体を測定したときのスキャッタグラムの例。

【図10E】正常な血液検体を測定したときのスキャッタグラムの例。

【図11】血液分析装置の分析結果画面の一例を示す図。

【図12】実施の形態２に係る測定ユニットの構成を示すブロック図。

【図13】実施の形態２に係る血液分析装置の第２測定工程での動作手順を示すフローチャート。

【図14】実施の形態２に係る血液分析装置のデータ処理工程での処理手順を示すフローチャート。

【図15】第２測定データにおける前方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムの模式図。

【図16A】異常リンパ球を含有する血液検体を測定したときのスキャッタグラムの例。

【図16B】有核赤血球を含有する血液検体を測定したときのスキャッタグラムの例。

【発明を実施するための形態】

【0032】

以下、本発明の好ましい実施の形態を、図面を参照しながら説明する。

【0033】

（実施の形態１）
［血液分析装置の構成］
図１は、本実施の形態に係る血液分析装置の外観を示す斜視図である。本実施の形態に係る血液分析装置１は、血液検体に含まれる血球である白血球、赤血球、血小板等を検出し、各血球を計数する多項目血球分析装置である。図１に示すように、血液分析装置１は、測定ユニット２と、測定ユニット２の前面側に配置された検体搬送ユニット４と、測定ユニット２及び検体搬送ユニット４を制御可能な情報処理ユニット５とを備えている。

【0034】

患者から採取された末梢血である血液検体は、検体容器（採血管）に収容される。複数の検体容器がサンプルラックに保持され、このサンプルラックが検体搬送ユニット４により搬送されて、血液検体が測定ユニット２へ供給される。

【0035】

＜測定ユニットの構成＞
測定ユニットの構成について説明する。図２は、測定ユニットの構成を示すブロック図である。図２に示すように、測定ユニット２は、検体である血液を検体容器（採血管）Ｔから吸引する検体吸引部２１と、検体吸引部２１により吸引した血液から測定に用いられる測定試料を調製する試料調製部２２と、試料調製部２２により調製された測定試料から血球を検出する検出部２３とを有している。また、測定ユニット２は、検体搬送ユニット４のラック搬送部４３によって搬送されたサンプルラックＬに収容された検体容器Ｔを測定ユニット２の内部に取り込むための取込口（図１参照）と、サンプルラックＬから検体容器Ｔを測定ユニット２の内部に取り込み、検体吸引部２１による吸引位置まで検体容器Ｔを搬送する検体容器搬送部２５とをさらに有している。

【0036】

図２に示すように、検体吸引部２１は、吸引管２１１を有している。また、検体吸引部２１はシリンジポンプを備えている。また、吸引管２１１は、鉛直方向に移動可能であり、下方に移動されることにより、吸引位置まで搬送された検体容器Ｔ内の血液を吸引するように構成されている。

【0037】

試料調製部２２は、混合チャンバＭＣを備えている。吸引管２１１は、シリンジポンプによって検体容器Ｔから所定量の全血検体を吸引し、吸引された検体は、混合チャンバＭＣへ移送され、前記シリンジポンプによって、混合チャンバＭＣへ所定量の全血検体を供給する。また、試料調製部２２は、混合チャンバＭＣを加温するためのヒータＨを備えている。

【0038】

試料調製部２２は、第１試薬を収容する試薬容器２２１ａ、第２試薬を収容する試薬容器２２１ｂ、及びシース液（希釈液）を収容する試薬容器２２３にチューブを介して接続されている。また、試料調製部２２はコンプレッサに接続されており、当該コンプレッサにより発生される圧力により試薬容器２２１ａ，２２１ｂ，２２３からそれぞれの試薬を分取することが可能となっている。

【0039】

第１試薬は、異常リンパ球、異型リンパ球、及び芽球を区別して検出するため溶血剤である。第１試薬としては、ノニオン性界面活性剤を含み、カチオン性界面活性剤を実質的に含まないものが使用できる。この溶血剤を使用することで、赤血球を溶血し、正常白血球及び異常単核球（異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球）の細胞膜に損傷を与えることができる。このため、正常白血球及び異常単核球は後述する蛍光色素により染色されやすくなる。

【0040】

なお、「異常リンパ球（abnormal lymphocyte）」とは腫瘍性の成熟リンパ球を指す。この異常リンパ球は、慢性リンパ性白血病、悪性リンパ腫等の疾患のある患者の末梢血中に出現する。また、「異型リンパ球（atypical lymphocyte）」とは、抗原刺激により活性化したリンパ球で、刺激に反応して形態変化したものを指す。この異型リンパ球は、ウイルス感染症、薬物アレルギー等の疾患のある患者の末梢血中に出現する。

【0041】

また、「芽球」とは、骨髄芽球（myeloblast）及びリンパ芽球（lymphblast）等の未成熟な白血球を指す。骨髄芽球は、急性骨髄性白血病の患者の末梢血中に出現し、リンパ芽球は、急性リンパ性白血病の患者の末梢血中に出現する。

【0042】

ここで、ノニオン性界面活性剤としては、ポリオキシエチレン系ノニオン界面活性剤が好ましい。具体的なポリオキシエチレン系ノニオン界面活性剤としては、以下の構造式（Ｉ）
Ｒ１−Ｒ２−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｈ（Ｉ）
（式中、Ｒ１は炭素数９〜２５のアルキル基、アルケニル基又はアルキニル基であり、Ｒ２は−Ｏ−、−ＣＯＯ−又は

【化1】

であり、ｎは１０〜４０の整数である）

【0043】

上記の構造式（Ｉ）で表される具体的な界面活性剤としては、ポリオキシエチレン（１５）オレイルエーテル、ポリオキシエチレン（１５）セチルエーテル、ポリオキシエチレン（１６）オレイルエーテル、ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテル、ポリオキシエチレン（２０）ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン（２０）ステアリルエーテル、ポリオキシエチレン（２０）セチルエーテルなど挙げられ、ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテルが好ましい。なお、第１試薬は、界面活性剤を１種類又は２種類以上含むことができる。

【0044】

第１試薬に含まれる界面活性剤の濃度は、界面活性剤の種類、溶血剤の浸透圧等に応じて適宜選択できる。例えば、界面活性剤がポリオキシエチレンオレイルエーテルである場合、第１試薬に含まれる界面活性剤の濃度は、０．５〜５０．０ｇ／Ｌであり、好ましくは１．０〜２０．０ｇ／Ｌである。

【0045】

なお、第１試薬は、溶血した赤血球を十分に収縮させて測定に影響をおよぼさないゴースト集団にするために、上述のノニオン性界面活性剤以外に可溶化剤を含むことができる。この可溶化剤は、ノニオン性界面活性剤による赤血球の溶血作用を補助するために用いられる。第１試薬に含まれる可溶化剤としてはアニオン性界面活性剤を用いることができ、サルコシン誘導体、コール酸誘導体、メチルグルカンアミド、ｎ−オクチルβ−グルコシド、シュークロースモノカプレート、Ｎ−ホルミルメチルロイシルアラニンなどが挙げられ、特にサルコシン誘導体が好ましい。なお、第１試薬は、可溶化剤を１種類又は２種類以上含むことができる。

【0046】

サルコシン誘導体としては、以下の構造式（ＩＩ）

【化2】

（式中、Ｒ１はＣ１０−２２のアルキル基であり、ｎは１〜５である。）
で示される化合物及びその塩が挙げられる。具体的なサルコシン誘導体としては、Ｎ−ラウロイルサルコシン酸ナトリウム、ラウロイルメチルβ−アラニンナトリウム、ラウロイルサルコシンなどが挙げられ、特にＮ−ラウロイルサルコシン酸ナトリウムが好ましい。

【0047】

コール酸誘導体としては、以下の構造式（ＩＩＩ）

【化3】

（式中、Ｒ１は水素原子又は水酸基である。）
で示される化合物及びその塩が挙げられる。具体的なコール酸誘導体としては、ＣＨＡＰＳ（３−［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−１−プロパンスルホネート）、ＣＨＡＰＳＯ（［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート）などが挙げられる。

【0048】

メチルグルカンアミドとしては、以下の構造式（ＩＶ）

【化4】

（式中、ｎは５〜７である。）
で示される化合物が挙げられる。具体的なメチルグルカンアミドとしては、ＭＥＧＡ８（オクタノイル−Ｎ−メチルグルカミド）、ＭＥＧＡ９（ノナノイル−Ｎ−メチルグルカミド）、ＭＥＧＡ１０（デカノイル−Ｎ−メチルグルカミド）などが挙げられる。

【0049】

第１試薬に含まれる可溶化剤の濃度は、用いる可溶化剤の種類に応じて適宜選択できる。例えば、可溶化剤としてサルコシン誘導体を用いる場合、第１試薬に含まれる可溶化剤の濃度は、０．０５〜３．０ｇ／Ｌであり、好ましくは０．１〜１．０ｇ／Ｌである。コール酸誘導体を用いる場合、第１試薬に含まれる可溶化剤の濃度は、０．１〜１０．０ｇ／Ｌであり、好ましくは０．２〜２．０ｇ／Ｌである。メチルグルカンアミドを用いる場合、第１試薬に含まれる可溶化剤の濃度は、１．０〜８．０ｇ／Ｌであり、好ましくは２．０〜６．０ｇ／Ｌである。ｎ−オクチルβ−グルコシド、シュークロースモノカプレート、Ｎ−ホルミルメチルロイシルアラニンを用いる場合、第１試薬に含まれる可溶化剤の濃度は、０．０１〜５０．０ｇ／Ｌであり、好ましくは０．０５〜３０．０ｇ／Ｌである。

【0050】

第１試薬のｐＨは、５．０〜９．０が好ましく、より好ましくは６．５〜７．５、さらに好ましくは６．８〜７．３である。第１試薬のｐＨは、緩衝剤又はｐＨ調整剤で調整できる。緩衝剤としては、例えばＨＥＰＥＳ、ＭＯＰＳ（3-morpholinopropanesulfonic acid）又はＭＯＰＳＯ（2-Hydroxy-3-morpholinopropanesulfonic
acid）などのグッド緩衝剤、リン酸緩衝剤などが挙げられる。ｐＨ調整剤としては、水酸化ナトリウム、塩酸などが挙げられる。

【0051】

第１試薬の浸透圧は、上述の界面活性剤の種類及び第１試薬中の濃度に応じて、適宜設定することができる。具体的な第１試薬の浸透圧としては、１０〜６００ｍＯｓｍ／ｋｇが挙げられる。また、第１試薬の浸透圧は、糖類、アミノ酸、塩化ナトリウムなどを第１試薬に添加することにより調整してもよい。具体的な糖類としては、単糖類、多糖類、糖アルコールなどが挙げられる。単糖類としては、グルコース、フルクトースが好ましい。多糖類としては、アラビノースが好ましい。糖アルコールとしては、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、リビトールが好ましい。ここで、第１試薬に添加する糖類としては、糖アルコールが好ましく、特にキシリトールが好ましい。キシリトールを第１試薬に添加する場合、キシリトールの第１試薬中の濃度は、１．０〜７５．０ｇ／Ｌ、特に２０．０〜５０．０ｇ／Ｌが好ましい。具体的なアミノ酸としては、バリン、プロリン、グリシン、アラニンなどが挙げられ、特にグリシン、アラニンが好ましい。グリシンを第１試薬に添加する場合、グリシンの第１試薬中の濃度は、１．０〜５０．０ｇ／Ｌ、特に１０．０〜３０．０ｇ／Ｌが好ましい。

【0052】

また、第１試薬の電気伝導度は、０．０１〜３ｍＳ／ｃｍが好ましく、特に０．１〜２ｍＳ／ｃｍが好ましい。さらに第１試薬には、キレート剤又は防腐剤などを添加することもできる。キレート剤としては、ＥＤＴＡ−２Ｋ、ＥＤＴＡ−３Ｎａなどが挙げられる。防腐剤としては、Ｐｒｏｘｅｌ ＧＸＬ（Avecia社製）、マテリアルＴＫＭ−Ａ（株式会社エーピーアイ コーポレーション）などが挙げられる。

【0053】

上述した第１試薬を使用することで、正常白血球及び異常単核球は、後述する蛍光色素により染色されやすくなり、さらに異常単核球は、異常リンパ球、異型リンパ球、芽球の間で染色の度合い及び細胞の大きさ等に差異が生じる。このため、血球由来の蛍光信号（蛍光強度）と散乱光信号（散乱光強度）に基づいて、異常単核球を異常リンパ球、異型リンパ球、芽球に区別して検出することができる。

【0054】

第２試薬は、血液試料中の有核細胞を蛍光染色するための染色液である。かかる第２試薬には、核酸を染色できる蛍光色素が含有されている。この蛍光色素としては、核酸を蛍光染色できるものであれば特に限定されない。このような色素を用いることにより、核酸を持たない赤血球はほとんど染色されず、核酸を有する異常リンパ球等の有核の血球は染色される。なお、核酸を染色できる蛍光色素は、光源から照射される光によって適宜選択することができる。核酸を染色できる蛍光色素としては、例えば、プロピジウムアイオダイド、エチジウムブロマイド、エチジウム−アクリジンヘテロダイマー、エチジウムジアジド、エチジウムホモダイマー−１、エチジウムホモダイマー−２、エチジウムモノアジド、トリメチレンビス［［３‐［［４‐［［（３‐メチルベンゾチアゾール‐３‐イウム）‐２‐イル］メチレン］‐１，４‐ジヒドロキノリン］‐１‐イル］プロピル］ジメチルアミニウム］・テトラヨージド（ＴＯＴＯ−１）、４‐［（３‐メチルベンゾチアゾール‐２（３Ｈ）‐イリデン）メチル］‐１‐［３‐（トリメチルアミニオ）プロピル］キノリニウム・ジヨージド（ＴＯ−ＰＲＯ−１）、Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'‐テトラメチル‐Ｎ，Ｎ'‐ビス［３‐［４‐［３‐［（３‐メチルベンゾチアゾール‐３‐イウム）‐２‐イル］‐２‐プロペニリデン］‐１，４‐ジヒドロキノリン‐１‐イル］プロピル］‐１，３‐プロパンジアミニウム・テトラヨージド（ＴＯＴＯ−３）、又は２‐［３‐［［１‐［３‐（トリメチルアミニオ）プロピル］‐１，４‐ジヒドロキノリン］‐４‐イリデン］‐１‐プロペニル］‐３‐メチルベンゾチアゾール‐３‐イウム・ジヨージド（ＴＯ−ＰＲＯ−３）、及び以下の構造式（Ｖ）〜（ＸＶＩＩＩ）で示される蛍光色素が挙げられる。

【0055】

＜構造式（Ｖ）＞

【化5】

（式中、Ｒ１及びＲ２は、低級アルキル基であり；ｎは１又は２であり；Ｘ−はアニオンであり；Ｚは硫黄原子、酸素原子、又は低級アルキル基で置換された炭素原子である）。

【0056】

構造式（Ｖ）中、低級アルキル基とは炭素数１〜６の直鎖又は分枝のアルキル基である。具体的な低級アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などが挙げられ、メチル基、エチル基が好ましい。また、Ｚとしては、硫黄原子が好ましい。Ｘ−におけるアニオンは、ハロゲンイオン（フッ素、塩素、臭素又はヨウ素イオン）、ハロゲン化ホウ素イオン（ＢＦ４−、ＢＣｌ４−、ＢＢｒ４−など）、リン化合物イオン、ハロゲン酸素酸イオン、フルオロ硫酸イオン、メチル硫酸イオン、芳香環ハロゲン或いはハロゲンをもつアルキル基を置換基として有するテトラフェニルホウ素化合物イオンなどが挙げられ、ヨウ素イオンが好ましい。

【0057】

構造式（Ｖ）で示されるもののうち、特に好ましい核酸を染色できる蛍光色素は、次の構造式（ＶＩ）で示されるＮＫ−３２１である。

【化6】

【0058】

＜構造式（ＶＩＩ）＞

【化7】

（式中、Ｒ１及びＲ２は、低級アルキル基であり；ｎは１又は２であり；Ｘ−はアニオンである）。

【0059】

構造式（ＶＩＩ）における低級アルキル基、並びにＸ−のアニオンは、構造式（Ｖ）と同様である。

【0060】

構造式（ＶＩＩ）で示されるもののうち、特に好ましい核酸を染色できる蛍光色素は、次の構造式（ＶＩＩＩ）により示される。

【化8】

【0061】

＜構造式（ＩＸ）＞

【化9】

（式中、Ｒ１は水素原子又は低級アルキル基であり；Ｒ２及びＲ３は水素原子、低級アルキル基又は低級アルコキシ基であり；Ｒ４は水素原子、アシル基又は低級アルキル基であり；Ｒ５は水素原子又は置換されていてもよい低級アルキル基であり；Ｚは硫黄原子、酸素原子、又は低級アルキル基で置換された炭素原子であり；ｎは１又は２であり；Ｘ−はアニオンである）。

【0062】

構造式（ＩＸ）における低級アルキル基、並びにＸ−のアニオンは、構造式（Ｖ）と同様である。低級アルコキシ基は、炭素数１〜６のアルコキシ基を示す。具体的な低級アルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基等が挙げられ、特にメトキシ基、エトキシ基が好ましい。アシル基としては、脂肪族カルボン酸から誘導されたアシル基が好ましい。具体的なアシル基としては、アセチル基、プロピオニル基等が挙げられ、特にアセチル基が好ましい。置換されていてもよい低級アルキル基の置換基としては、水酸基及びハロゲン原子（フッ素、塩素、臭素又はヨウ素）が挙げられる。置換されていてもよい低級アルキル基は、１〜３個の置換基で置換されることができる。置換されていてもよい低級アルキル基としては、特に１個の水酸基で置換された低級アルキル基が好ましい。なお、Ｚとしては硫黄原子が好ましく、Ｘ−は、臭素イオン又はＢＦ４−が好ましい。

【0063】

構造式（ＩＸ）で示されるもののうち、特に好ましい核酸を染色できる蛍光色素は、以下の３つの構造式（Ｘ）〜（ＸＩＩ）により示される。

【化10】

【0064】

【化11】

【0065】

【化12】

【0066】

＜構造式（ＸＩＩＩ）＞

【化13】

（式中、Ｘ１及びＸ２は、独立してＣｌ又はＩである）

【0067】

＜構造式（ＸＩＶ）＞

【化14】

【0068】

＜構造式（ＸＶ）＞（ＮＫ−１５７０）

【化15】

【0069】

＜構造式（ＸＶＩ）＞（ＮＫ−１０４９）

【化16】

【0070】

＜構造式（ＸＶＩＩ）＞（ＮＫ−９８）

【化17】

【0071】

＜構造式（ＸＶＩＩＩ）＞（ＮＫ−１４１）。

【化18】

【0072】

上記の核酸を染色できる蛍光色素のうち、第２試薬に含まれる特に好ましい蛍光色素は、次の構造式（ＸＩＸ）で示されるＮＫ−３２１である。

【化19】

【0073】

上記の核酸を染色できる蛍光色素の第２試薬中の濃度は、１０〜５００ｍｇ／Ｌが好ましく、特に３０〜１００ｍｇ／Ｌが好ましい。なお、第２試薬は、核酸を染色できる蛍光色素を１種類又は２種類以上含むことができる。

【0074】

検出部２３は、フローサイトメトリー法により検体の測定を行うことができる光学検出器Ｄを有している。光学検出器Ｄによる検体測定においては、血液検体、第１試薬、及び第２試薬が混合された測定試料が光学検出器Ｄに供給され、このときに光学検出器Ｄによって測定試料中の血球から光学情報（蛍光強度、前方散乱光強度及び側方散乱光強度）が検出される。検体測定によって得られた光学情報は情報処理ユニット３に供給され、これによって血液検体中に異常リンパ球が存在するか否か、及び芽球が存在するか否かが判定される。

【0075】

図３は、光学検出器Ｄの概要構成を示している。この光学検出器Ｄは、フローセル２３１に測定試料及びシース液を送り込み、フローセル２３１中に液流を発生させ、フローセル２３１内を通過する液流に含まれる血球に半導体レーザ光を照射して測定するものであり、シースフロー系２３２、ビームスポット形成系２３３、前方散乱光受光系２３４、側方散乱光受光系２３５、蛍光受光系２３６を有している。

【0076】

シースフロー系２３２は、測定試料をフローセル２３１内にシース液に包まれた状態で流すように構成されている。ビームスポット形成系２３３は、半導体レーザ２３７から照射された光が、コリメータレンズ２３８とコンデンサレンズ２３９とを通って、フローセル２３１に照射されるよう構成されている。また、ビームスポット形成系２３３は、ビームストッパ２４０も備えている。

【0077】

前方散乱光受光系２３４は、前方への散乱光を前方集光レンズ２４１によって集光し、ピンホール２４２を通った光をフォトダイオード（前方散乱光受光部）２４３で受光するように構成されている。

【0078】

側方散乱光受光系２３５は、側方への散乱光を側方集光レンズ２４４にて集光するとともに、一部の光をダイクロイックミラー２４５で反射させ、フォトダイオード（側方散乱光受光部）２４６で受光するよう構成されている。

【0079】

光散乱は、光の進行方向に血球のような粒子が障害物として存在すると、粒子により光がその進行方向を変えることによって生じる現象である。この散乱光を検出することによって、粒子の大きさや材質に関する情報を得ることができる。特に、前方散乱光からは、粒子（血球）の大きさに関する情報を得ることができる。また、側方散乱光からは、粒子内部の情報を得ることができる。血球粒子にレーザ光が照射された場合、側方散乱光強度は細胞内部の複雑さ（核の形状、大きさ、密度や顆粒の量）に依存する。したがって、これら散乱光強度は、白血球の分類、芽球の検出等に利用することができる。

【0080】

蛍光受光系２３６は、ダイクロイックミラー２４５を透過した光をさらに分光フィルタ２４７に通し、アバランシェフォトダイオード（蛍光受光部）２４８で受光するよう構成されている。

【0081】

蛍光物質により染色された血球に光を照射すると、照射した光の波長より長い波長の光を発する。蛍光の強度はよく染色されていれば強くなり、この蛍光強度を測定することによって血球の染色度合いに関する情報を得ることができる。したがって、蛍光強度の差は、白血球の検出、異常リンパ球の検出、芽球の検出等に利用することができる。

【0082】

次に、図２に戻って、検体容器搬送部２５の構成について説明する。検体容器搬送部２５は、検体容器Ｔを把持可能なハンド部２５ａを備えている。ハンド部２５ａは、互いに対向して配置された一対の把持部材を備えており、この把持部材を互いに近接及び離反させることが可能である。かかる把持部材を、検体容器Ｔを挟んだ状態で近接させることにより、検体容器Ｔを把持することができる。また、検体容器搬送部２５は、ハンド部２５ａを上下方向及び前後方向（Ｙ方向）に移動させることができ、さらに、ハンド部２５ａを揺動させることができる。これにより、サンプルラックＬに収容され、検体供給位置４３ａに位置した検体容器Ｔをハンド部２５ａにより把持し、その状態でハンド部２５ａを上方に移動させることによりサンプルラックＬから検体容器Ｔを抜き出し、ハンド部２５ａを揺動させることにより、検体容器Ｔ内の検体を撹拌することができる。

【0083】

また、検体容器搬送部２５は、検体容器Ｔを挿入可能な穴部を有する検体容器セット部２５ｂを備えている。上述したハンド部２５ａによって把持された検体容器Ｔは、撹拌完了後移動され、把持した検体容器Ｔを検体容器セット部２５ｂの穴部に挿入する。その後、把持部材を離反させることにより、ハンド部２５ａから検体容器Ｔが開放され、検体容器セット部２５ｂに検体容器Ｔがセットされる。かかる検体容器セット部２５ｂは、図示しないステッピングモータの動力によって、図中Ｙ１及びＹ２方向へ水平移動可能である。

【0084】

測定ユニット２の内部には、バーコード読取部２６が設けられている。検体容器セット部２５ｂは、バーコード読取部２６の近傍のバーコード読取位置２６ａ及び検体吸引部２１による吸引位置２１ａへ移動可能である。検体容器セット部２５ｂがバーコード読取位置２６ａへ移動したときには、バーコード読取部２６により検体バーコードが読み取られる。また、検体容器セット部２５ｂが吸引位置へ移動したときには、検体吸引部２１により、セットされた検体容器Ｔから検体が吸引される。

【0085】

＜情報処理ユニットの構成＞
次に、情報処理ユニット５の構成について説明する。情報処理ユニット５は、コンピュータにより構成されている。図４は、情報処理ユニット５の構成を示すブロック図である。情報処理ユニット５は、コンピュータ５ａによって実現される。図４に示すように、コンピュータ５ａは、本体５１と、画像表示部５２と、入力部５３とを備えている。本体５１は、ＣＰＵ５１ａ、ＲＯＭ５１ｂ、ＲＡＭ５１ｃ、ハードディスク５１ｄ、読出装置５１ｅ、入出力インタフェース５１ｆ、通信インタフェース５１ｇ、及び画像出力インタフェース５１ｈを備えており、ＣＰＵ５１ａ、ＲＯＭ５１ｂ、ＲＡＭ５１ｃ、ハードディスク５１ｄ、読出装置５１ｅ、入出力インタフェース５１ｆ、通信インタフェース５１ｇ、及び画像出力インタフェース５１ｈは、バス５１ｊによって接続されている。

【0086】

ＣＰＵ５１ａは、ＲＡＭ５１ｃにロードされたコンピュータプログラムを実行することが可能である。そして、後述するような血液分析用並びに測定ユニット２及び検体搬送ユニット４の制御用のコンピュータプログラム５４ａを当該ＣＰＵ５１ａが実行することにより、コンピュータ５ａが情報処理ユニット５として機能する。

【0087】

ハードディスク５１ｄは、オペレーティングシステム及びアプリケーションプログラム等、ＣＰＵ５１ａに実行させるための種々のコンピュータプログラム及び当該コンピュータプログラムの実行に用いられるデータがインストールされている。後述する処理をＣＰＵに実行させるためのコンピュータプログラム５４ａも、このハードディスク５１ｄにインストールされている。また、このコンピュータプログラム５４ａは、イベントドリブン型のコンピュータプログラムである。

【0088】

読出装置５１ｅは、フレキシブルディスクドライブ、ＣＤ−ＲＯＭドライブ、又はＤＶＤ−ＲＯＭドライブ等によって構成されており、可搬型記録媒体５４に記録されたコンピュータプログラム又はデータを読み出すことができる。また、可搬型記録媒体５４には、コンピュータを情報処理ユニット５として機能させるためのコンピュータプログラム５４ａが格納されており、コンピュータ５ａが当該可搬型記録媒体５４からコンピュータプログラム５４ａを読み出し、当該コンピュータプログラム５４ａをハードディスク５１ｄにインストールすることが可能である。

【0089】

また、ハードディスク５１ｄには、例えば米マイクロソフト社が製造販売するWindows（登録商標）等のマルチタスクオペレーティングシステムがインストールされている。以下の説明においては、本実施の形態に係るコンピュータプログラム５４ａは当該オペレーティングシステム上で動作するものとしている。

【0090】

入出力インタフェース５１ｆは、例えばUSB，IEEE1394，又はRS-232C等のシリアルインタフェース、SCSI，IDE，又はIEEE1284等のパラレルインタフェース、及びＤ／Ａ変換器、Ａ／Ｄ変換器等からなるアナログインタフェース等から構成されている。入出力インタフェース５１ｆには、キーボード及びマウスからなる入力部５３が接続されており、ユーザが当該入力部５３を使用することにより、コンピュータ５ａにデータを入力することが可能である。また、入出力インタフェース５１ｆは、測定ユニット２及び検体搬送ユニット４に接続されている。これにより、情報処理ユニット５は、測定ユニット２及び検体搬送ユニット４のそれぞれを制御可能となっている。

【0091】

通信インタフェース５１ｇは、Ethernet（登録商標）インタフェースである。通信インタフェース５１ｇはＬＡＮを介してホストコンピュータ６に接続されている（図２参照）。コンピュータ５ａは、通信インタフェース５１ｇにより、所定の通信プロトコルを使用して当該ＬＡＮに接続されたホストコンピュータ６との間でデータの送受信が可能である。

【0092】

［血液分析装置の検体測定動作］
以下、本実施の形態に係る血液分析装置１の動作について説明する。血液分析装置１は、光学検出器Ｄを用いた検体測定を実行可能である。かかる検体測定の工程は、測定試料を測定する測定工程と、測定工程によって得られた測定データを解析処理するデータ処理工程によって構成される。

【0093】

まず、検体容器Ｔを保持したサンプルラックＬがオペレータによって検体搬送ユニット４に載置される。検体搬送ユニット４によってサンプルラックＬが搬送され、測定対象の検体が収容されている検体容器Ｔが検体供給位置４３ａに位置する。次に、測定ユニット２のハンド部２５ａにより、当該検体容器Ｔが把持され、サンプルラックＬからこの検体容器Ｔが取り出される。ハンド部２５ａはその後揺動運動を行い、検体容器Ｔの内部の検体が撹拌される。次に、検体容器セット部２５ｂにこの検体容器Ｔが挿入され、Ｙ方向へと検体容器セット部２５ｂが移動し、バーコード読取部２６による検体バーコード読み取りを行った後、吸引位置に到達する。その後、以下の測定工程が実行される。

【0094】

測定工程
まず、測定工程について説明する。血液分析装置１は、測定工程では、全血検体（１７．０μＬ）と第１試薬（１０００μＬ）と第２試薬（２０μＬ）とを混合して測定試料を作成し、この測定試料を光学検出器Ｄにてフローサイトメトリー法によって測定する。

【0095】

ここで、本実施の形態においては、第１試薬として、以下に示される試薬が用いられる。
＜第１試薬＞
ＭＯＰＳ ２．０９ｇ／Ｌ
ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテル １．２５ｇ／Ｌ
Ｎ−ラウロイルサルコシン酸ナトリウム ０．２６８ｇ／Ｌ
ＥＤＴＡ−２Ｋ ０．５ｇ／Ｌ
上記各成分を混合しさらにＮａＯＨを添加してｐＨを７．３に調製した。第１試薬の浸透圧は３７ｍＯｓｍ／Ｋｇ、電気伝導度は０．７４５ｍＳ／ｃｍであった。
＜第２試薬＞
ＮＫ−３２１ ５０ｍｇ／Ｌ
エチレングリコールに溶解されたＮＫ−３２１（５０ｍｇ／Ｌ）を第２試薬とした。

【0096】

図５は、測定工程での血液分析装置１の動作手順を示すフローチャートである。まず、ＣＰＵ５１ａは、検体吸引部２１を制御して、吸引管２１１により検体容器Ｔの全血検体を定量吸引する（ステップＳ１０１）。ステップＳ１０１の処理は、具体的には、吸引管２１１が検体容器Ｔの中に挿入され、シリンジポンプの駆動によって、全血検体が定量（３９．０μＬ）吸引される。

【0097】

次に、ＣＰＵ５１ａは、測定ユニット２を制御することにより、試薬容器２２１ａから第１試薬（１０００μＬ）を、試薬容器２２１ｂから第２試薬（２０μＬ）を、吸引管２１１から全血検体（１７．０μＬ）を、混合チャンバＭＣにそれぞれ供給する（ステップＳ１０２）。このステップＳ１０２において混合チャンバＭＣに供給される検体は、上述したステップＳ１０１において吸引管２１１により吸引された全血検体の一部である。

【0098】

次に、ＣＰＵ５１ａは、混合チャンバＭＣへの第１試薬、第２試薬及び全血検体の供給から１８．５秒間経過したか否かを判定し（ステップＳ１０３）、１８．５秒間待機する。ここで、ヒータにより混合チャンバＭＣは３４．０℃に加温されており、これにより、第１試薬と第２試薬と血液検体との混合液が３４．０℃で１８．５秒加温され、測定試料が調製される。

【0099】

そして、測定試料を対象に光学検出器Ｄにて光学測定が行われる（ステップＳ１０４）。ステップＳ１０４の処理においては、具体的には、測定試料とシース液とが同時に光学検出器Ｄのフローセル２３１に供給され、そのときの前方散乱光がフォトダイオード２４３で受光され、側方散乱光がフォトダイオード２４６で受光され、蛍光がアバランシェフォトダイオード２４８で受光される。この光学測定では、光源として、励起波長６３３ｎｍの赤色半導体レーザを用い、蛍光シグナルは６５０ｎｍ以上の波長の蛍光（赤蛍光）を検出した。このような光学検出器Ｄの各受光素子により出力される出力信号（アナログ信号）は、図示しないＡ／Ｄ変換器によりデジタル信号に変換され、所定の信号処理が施されてデジタルデータである測定データに変換され、情報処理ユニット５にこの測定データが送信される。この信号処理においては、測定データに含まれる特徴パラメータとして、前方散乱光信号（前方散乱光強度）、側方散乱光信号（側方散乱光強度）、及び蛍光信号（蛍光強度）が得られる。これにより、測定工程が終了する。また、後述するように、情報処理ユニット５のＣＰＵ５１ａは、測定データに対して所定の解析処理を実行することにより、異常リンパ球又は芽球を検出し、この検出結果を含む分析結果データを生成し、ハードディスク５１ｄに分析結果データを記憶する。

【0100】

データ処理工程
次に、データ処理工程について説明する。図６は、本実施の形態に係る血液分析装置のデータ処理工程での処理手順を示すフローチャートである。血液分析装置１の情報処理ユニット５は、測定ユニット２から測定データを受信する（ステップＳ２０１）。ＣＰＵ５１ａによって実行されるコンピュータプログラム５４ａはイベントドリブン型のプログラムであり、測定データを受信するイベントが発生すると、ステップＳ２０２の処理が呼び出される。

【0101】

ステップＳ２０２において、ＣＰＵ５１ａは、測定データを用いて異常リンパ球の細胞群（以下、「異常リンパ球群」という。）を検出し、検出された異常リンパ球群に含まれる血球数ＣＮ１を計数する（ステップＳ２０２）。

【0102】

ステップＳ２０２の処理を模式図を用いて説明する。図７は、測定ユニット２から受信した前方散乱光強度及び蛍光強度の測定データを２次元平面上にプロットした場合に得られるスキャッタグラムの模式図であり、図８は、測定ユニット２から受信した蛍光強度及び側方散乱光強度の測定データを２次元平面上にプロットした場合に得られるスキャッタグラムの模式図である。これらのスキャッタグラムでは、図に示す原点Ｏからの距離に応じて強度が大きくなるように示されている。図７に示すスキャッタグラムでは、芽球のクラスター、顆粒球（好中球と好酸球と好塩基球とからなる血球群）のクラスター、リンパ球のクラスター、及び単球のクラスターが現れる。また、図８に示すスキャッタグラムでも、芽球のクラスター、顆粒球のクラスター、リンパ球のクラスター、及び単球のクラスターが現れる。

【0103】

本実施の形態においては、図７において破線で示す前方散乱光強度及び蛍光強度の範囲を、異常リンパ球群の検出領域Ａ１として定める。図７に示すように、検出領域Ａ１は、リンパ球及び単球の出現領域よりも蛍光強度が高い部分に設けられる。本願発明者らは、臨床検体を使用した実験を行い、実験結果の詳細な検討を実施した結果、この検出領域Ａ１及び図８に示す領域Ａ１１において異常リンパ球が出現し、図７に示す領域Ａ２１及び図８に示す領域Ａ２２において芽球が出現することを見出した。図８に示す領域Ａ１１も、リンパ球及び単球の出現領域よりも蛍光強度が高い領域である。図７に示す領域Ａ２１及び図８に示す領域Ａ２２は、リンパ球及び単球の出現領域よりも蛍光強度が低い領域である。また、発明者らは、詳細に実験結果を評価した結果、異型リンパ球は、上述した領域Ａ１、Ａ１１、Ａ２１、及びＡ２２の何れにも出現せず、正常白血球の出現領域に出現することを見出した。したがって、図７に示す領域Ａ１又は図８に示す領域Ａ１１を用いることで、異常リンパ球を異型リンパ球及び芽球と区別して検出できることが分かった。ステップＳ２０２においては、上述した検出領域Ａ１の内部に出現する細胞群が異常リンパ球群として検出され、血球数ＣＮ１が計数される。

【0104】

次にＣＰＵ５１ａは、ＣＮ１が所定の閾値Ｔ１より大きいか否かを判定する（ステップＳ２０３）。閾値Ｔ１は、血液検体中に異常リンパ球が存在するか否かを判定するための基準値である。ステップＳ２０３では、ＣＮ１が閾値Ｔ１よりも大きい場合には、血液検体中に異常リンパ球が存在すると判定され、ＣＮ１が閾値Ｔ１以下の場合には、血液検体中に異常リンパ球が存在しないと判定される。

【0105】

ステップＳ２０３において、ＣＮ１＞Ｔ１の場合には（ステップＳ２０３においてＹＥＳ）、ＣＰＵ５１ａは、ＲＡＭ５１ｃに設けられた異常リンパ球フラグに「１」をセットし、芽球フラグに「０」をセットする（ステップＳ２０４）。ここで、異常リンパ球フラグは血液検体における異常リンパ球の有無を示すフラグであり、「１」がセットされている場合には異常リンパ球が存在していることを示し、「０」がセットされている場合には異常リンパ球が存在していないことを示す。また、芽球フラグは血液検体における芽球の有無を示すフラグであり、「１」がセットされている場合には芽球が存在していることを示し、「０」がセットされている場合には芽球が存在していないことを示す。その後、ＣＰＵ５１ａは、ステップＳ２０９へ処理を移す。

【0106】

一方、ステップＳ２０３において、ＣＮ１≦Ｔ１の場合には（ステップＳ２０３においてＮＯ）、ＣＰＵ５１ａは、測定データを用いて芽球の細胞群（以下、「芽球群」という。）を検出し、検出された芽球群に含まれる血球数ＣＮ２を計数する（ステップＳ２０５）。

【0107】

ステップＳ２０５の処理について詳しく説明する。図９は、測定ユニット２から受信した前方散乱光強度及び側方散乱光強度の測定データを２次元平面状にプロットした場合に得られるスキャッタグラムの模式図である。図９に示すスキャッタグラムでは、顆粒球のクラスター、リンパ球のクラスター、及び単球のクラスターが現れる。また、本実施の形態においては、図９において破線で示す前方散乱光強度及び側方散乱光強度の範囲を、芽球群の検出領域Ａ２として定める。図９に示すように、検出領域Ａ２は、リンパ球の出現領域よりも前方散乱光強度が高い部分に設けられる。本願発明者らは、臨床検体を使用した実験を行い、実験結果の詳細な検討を実施した結果、この検出領域Ａ２において芽球が出現し、異常リンパ球及び異型リンパ球が出現しないことを見出した。したがって、検出領域Ａ２を用いることで、芽球を異常リンパ球及び異型リンパ球と区別して検出できることが分かった。ステップＳ２０５においては、上述した検出領域Ａ２の内部に出現する細胞群が芽球群として検出され、血球数ＣＮ２が計数される。なお、上述したように、図７に示す領域Ａ２１及び図８に示す領域Ａ２２において芽球が出現し、これらの領域には異常リンパ球及び異型リンパ球が出現しないことも本願発明者らは見出している。そのため、領域Ａ２１又は領域Ａ２２を用いて、芽球を異常リンパ球及び異型リンパ球と区別して検出してもよい。

【0108】

次にＣＰＵ５１ａは、ＣＮ２が所定の閾値Ｔ２より大きいか否かを判定する（ステップＳ２０６）。閾値Ｔ２は、血液検体中に芽球が存在するか否かを判定するための基準値である。ステップＳ２０６では、ＣＮ２が閾値Ｔ２よりも大きい場合には、血液検体中に芽球が存在すると判定され、ＣＮ２が閾値Ｔ２以下の場合には、血液検体中に芽球が存在しないと判定される。

【0109】

ＣＮ２＞Ｔ２の場合には（ステップＳ２０６においてＹＥＳ）、ＣＰＵ５１ａは、ＲＡＭ５１ｃに設けられた芽球フラグに「１」をセットし、異常リンパ球フラグに「０」をセットする（ステップＳ２０７）。その後、ＣＰＵ５１ａは、ステップＳ２０８へ処理を移す。

【0110】

一方、ＣＮ２≦Ｔ２の場合には（ステップＳ２０６においてＮＯ）、ＣＰＵ５１ａは、ＲＡＭ５１ｃに設けられた異常リンパ球フラグ及び芽球フラグのそれぞれに「０」をセットする（ステップＳ２０８）。その後、ＣＰＵ５１ａは、ステップＳ２０９へ処理を移す。

【0111】

ステップＳ２０９において、ＣＰＵ５１ａは、上述のようにして得た分析結果（異常リンパ球フラグ及び芽球フラグを含む）をハードディスク５１ｄに格納する。次にＣＰＵ５１ａは、ハードディスク５１ｄに記憶した分析結果を示す分析結果画面を画像表示部５２に表示させ（ステップＳ２１０）、処理を終了する。

【0112】

次に、具体的な血液検体を測定したときのスキャッタグラムの例を示し、本実施の形態に係る血液分析装置１による測定データの分析について説明する。図１０Ａ〜図１０Ｅは、血液分析装置１による測定条件と実質的に同じ測定条件で得られたスキャッタグラムの例を示す図である。図１０Ａは、骨髄芽球を含有する血液検体Ａを測定したときのスキャッタグラムの例を示している。図１０Ｂは、リンパ芽球を含有する血液検体Ｂを測定したときのスキャッタグラムの例を示している。図１０Ｃは、異常リンパ球を含有する血液検体Ｃを測定したときのスキャッタグラムの例を示している。図１０Ｄは、異型リンパ球を含有する血液検体Ｄを測定したときのスキャッタグラムの例を示している。また、図１０Ｅは、正常な血液検体Ｅを測定したときのスキャッタグラムの例を示している。

【0113】

図１０Ａに示すように、血液検体Ａの測定データにおける前方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラム（異常リンパ球検出用のスキャッタグラム）ＳＧ１１では、異常リンパ球の検出領域Ａ１に、検出された血球に対応する粒子が実質的に存在していない（ごく僅かだけ存在しているが、血球数が閾値Ｔ１を超えていない）。図１０Ａには、血液検体Ａの測定データにおける蛍光強度及び側方散乱光強度のスキャッタグラムＳＧ１２も参考として示している。このスキャッタグラムＳＧ１２においても、異常リンパ球の出現領域Ａ１１には、実質的に血球が存在していないことが分かる。さらに、血液検体Ａの測定データにおける前方散乱光強度及び側方散乱光強度のスキャッタグラム（芽球検出用のスキャッタグラム）ＳＧ１３では、芽球の検出領域Ａ２に、検出された血球に対応する粒子が存在している。つまり、このスキャッタグラムＳＧ１３から分かるように、血液検体Ａからは芽球群が検出される。よって、本実施の形態に係る血液分析装置１が血液検体Ａを分析したときには、ＣＮ１≦Ｔ１且つＣＮ２＞Ｔ２となり、芽球が存在すると判定される。

【0114】

血液検体Ａに対し、用手法による検査（顕微鏡を使用した目視検査）を実施したところ、全白血球数に対する骨髄芽球の割合が１５％であり、同じくリンパ芽球、異常リンパ球、及び異型リンパ球の割合がそれぞれ０％であった。したがって、血液分析装置１による血液検体Ａの芽球の検出は妥当であることが分かる。

【0115】

図１０Ｂに示すように、血液検体Ｂの測定データにおける異常リンパ球検出用のスキャッタグラムＳＧ２１では、異常リンパ球の検出領域Ａ１に、検出された血球に対応する粒子が実質的に存在していない。図１０Ｂには、血液検体Ｂの測定データにおける蛍光強度及び側方散乱光強度のスキャッタグラムＳＧ２２も参考として示している。このスキャッタグラムＳＧ２２においても、異常リンパ球の出現領域Ａ１１には、実質的に血球が存在していないことが分かる。さらに、血液検体Ｂの測定データにおける芽球検出用のスキャッタグラムＳＧ２３では、芽球の検出領域Ａ２に、検出された血球に対応する粒子が存在している。つまり、このスキャッタグラムＳＧ２３から分かるように、血液検体Ｂからは芽球群が検出される。よって、本実施の形態に係る血液分析装置１が血液検体Ｂを分析したときには、ＣＮ１≦Ｔ１且つＣＮ２＞Ｔ２となり、芽球が存在すると判定される。

【0116】

血液検体Ｂに対し、用手法による検査を実施したところ、全白血球数に対するリンパ芽球の割合が２３．５％であり、同じく骨髄芽球、異常リンパ球、及び異型リンパ球の割合がそれぞれ０％であった。したがって、血液分析装置１による血液検体Ｂの芽球の検出は妥当であることが分かる。

【0117】

図１０Ｃに示すように、血液検体Ｃの測定データにおける異常リンパ球検出用のスキャッタグラムＳＧ３１では、異常リンパ球の検出領域Ａ１に、検出された血球に対応する粒子が存在している。図１０Ｃには、血液検体Ｃの測定データにおける蛍光強度及び側方散乱光強度のスキャッタグラムＳＧ３２も参考として示している。このスキャッタグラムＳＧ３２においても、異常リンパ球の出現領域Ａ１１には、血球が存在していることが分かる。さらに、血液検体Ｃの測定データにおける芽球検出用のスキャッタグラムＳＧ３３では、芽球の検出領域Ａ２に、検出された血球に対応する粒子が実質的に存在していない。つまり、スキャッタグラムＳＧ３１及びＳＧ３２から分かるように、血液検体Ｃからは異常リンパ球群が検出される。よって、本実施の形態に係る血液分析装置１が血液検体Ｃを分析したときには、ＣＮ１＞Ｔ１となり、異常リンパ球が存在すると判定される。

【0118】

血液検体Ｃに対し、用手法による検査を実施したところ、全白血球数に対する異常リンパ球の割合が９％であり、同じく骨髄芽球、リンパ芽球、及び異型リンパ球の割合がそれぞれ０％であった。したがって、血液分析装置１による血液検体Ｃの異常リンパ球の検出は妥当であることが分かる。

【0119】

図１０Ｄに示すように、血液検体Ｄの測定データにおける異常リンパ球検出用のスキャッタグラムＳＧ４１では、異常リンパ球の検出領域Ａ１に、検出された血球に対応する粒子が実質的に存在していない。図１０Ｄには、血液検体Ｄの測定データにおける蛍光強度及び側方散乱光強度のスキャッタグラムＳＧ４２も参考として示している。このスキャッタグラムＳＧ４２においても、異常リンパ球の出現領域Ａ１１には、血球が実質的に存在していないことが分かる。さらに、血液検体Ｄの測定データにおける芽球検出用のスキャッタグラムＳＧ４３では、芽球の検出領域Ａ２に、検出された血球に対応する粒子が実質的に存在していない。つまり、スキャッタグラムＳＧ４１及びＳＧ４３から分かるように、血液検体Ｄからは異常リンパ球群及び芽球群の何れも検出されない。よって、本実施の形態に係る血液分析装置１が血液検体Ｄを分析したときには、ＣＮ１≦Ｔ１且つＣＮ２≦Ｔ２となり、異常リンパ球及び芽球が存在しないと判定される。

【0120】

血液検体Ｄに対し、用手法による検査を実施したところ、全白血球数に対する異型リンパ球の割合が７％であり、同じく骨髄芽球、リンパ芽球、及び異常リンパ球の割合がそれぞれ０％であった。したがって、血液分析装置１が血液検体Ｄから芽球及び異常リンパ球を検出しなかったことは妥当であることが分かる。

【0121】

以上のように、異常リンパ球が含まれ、芽球及び異型リンパ球が含まれない血液検体が血液分析装置１により測定されたときには、異常リンパ球が検出され、芽球は検出されない。同じく、芽球が含まれ、異常リンパ球及び異型リンパ球が含まれない血液検体が血液分析装置１により測定されたときには、芽球が検出され、異常リンパ球は検出されない。また、異型リンパ球が含まれ、異常リンパ球及び芽球が含まれない血液検体を測定したときには、異常リンパ球及び芽球は検出されない。つまり、実施の形態に係る血液分析装置１によれば、異常リンパ球及び芽球をそれぞれ単独に検出することが可能である。

【0122】

正常な末梢血には、異常リンパ球、芽球、異型リンパ球は出現しない。図１０Ｅに示すように、血液検体Ｅの測定データにおける異常リンパ球検出用のスキャッタグラムＳＧ５１では、異常リンパ球の検出領域Ａ１に、検出された血球に対応する粒子が実質的に存在していない。図１０Ｅには、血液検体Ｅの測定データにおける蛍光強度及び側方散乱光強度のスキャッタグラムＳＧ５２も参考として示している。このスキャッタグラムＳＧ５２においても、異常リンパ球の出現領域Ａ１１には、血球が実質的に存在していないことが分かる。さらに、血液検体Ｅの測定データにおける芽球検出用のスキャッタグラムＳＧ５３では、芽球の検出領域Ａ２に、検出された血球に対応する粒子が実質的に存在していない。スキャッタグラムＳＧ５１及びＳＧ５３から分かるように、血液検体Ｅからは異常リンパ球群及び芽球群の何れも検出されない。よって、本実施の形態に係る血液分析装置１が血液検体Ｅを分析したときには、ＣＮ１≦Ｔ１且つＣＮ２≦Ｔ２となり、異常リンパ球及び芽球が存在しないと判定される。

【0123】

血液検体Ｅに対し、用手法による検査を実施したところ、全白血球数に対する骨髄芽球、リンパ芽球、異常リンパ球、及び異型リンパ球の割合がそれぞれ０％であった。したがって、血液分析装置１が血液検体Ｅから芽球及び異常リンパ球を検出しなかったことは妥当であることが分かる。

【0124】

図１１は、血液分析装置１の分析結果画面を示す図である。図１１は、血液検体Ｃを血液分析装置１によって分析した場合に出力される分析結果画面を示している。上述したように、この血液検体Ｃには、異常リンパ球が含まれており、芽球及び異型リンパ球は含まれていない。図１１に示すように、分析結果画面Ｒ１においては、測定された測定項目（ＷＢＣ、ＲＢＣ、ＰＬＴ等）の数値データが表示される。この血液検体Ｃに係る分析結果データでは、異常リンパ球フラグが「１」に、芽球フラグが「０」にセットされている。したがって、当該血液検体Ｃの分析結果画面Ｒ１では、図１１に示すように、異常リンパ球が存在している可能性を示す情報である「Ａｂｎ Ｌｙｍｐｈｏ？」の表示が、Ｆｌａｇの欄ＦＬＧに付される。また、ここでは図示しないが、芽球フラグが「１」にセットされており、異常リンパ球フラグが「０」にセットされている場合には、フラグ表示欄ＦＬＧに「Ｂｌａｓｔｓ？」が表示される。さらに、異常リンパ球フラグ及び芽球フラグの両方に「０」がセットされている場合には、上記の「Ａｂｎ Ｌｙｍｐｈｏ？」及び「Ｂｌａｓｔｓ？」の何れも分析結果画面に表示されない。これによって、オペレータは分析結果画面を見るだけで、その血液検体において異常リンパ球が検出されたか否か、及び芽球が検出されたか否かを把握することができる。また、この分析結果画面Ｒ１には、測定データの蛍光強度及び側方散乱光強度のスキャッタグラムＳＧ３２が表示される。オペレータはかかるスキャッタグラムを参照することによって、血液分析装置１による異常リンパ球及び芽球の検出結果の根拠を把握することができ、また血液分析装置１による異常リンパ球及び芽球の検出結果の妥当性を判断することができる。

【0125】

以上のような構成とすることにより、血液分析装置１は、血液検体と、溶血剤が含有された第１試薬と、核酸を染色する蛍光色素が含有された第２試薬とを混合して調製した測定試料を光学検出器Ｄにより測定することにより、異常リンパ球及び芽球を個別に検出することができる。

【0126】

（実施の形態２）
以下、本実施の形態に係る血液分析装置について説明する。

【0127】

［血液分析装置の構成］
まず、本実施の形態に係る血液分析装置の構成について説明する。

【0128】

＜測定ユニットの構成＞
測定ユニットの構成について説明する。図１２は、本実施の形態に係る測定ユニットの構成を示すブロック図である。図１２に示すように、本実施の形態に係る血液分析装置２００は、測定ユニット２０２を備えている。測定ユニット２０２は、試料調製部２２０を具備しており、試料調製部２２０には、２つの混合チャンバＭＣ１，ＭＣ２が設けられている。吸引管２１１は、シリンジポンプ（図示せず）によって検体容器Ｔから所定量の全血検体を吸引し、第１混合チャンバＭＣ１と第２混合チャンバＭＣ２の位置へ移送され、前記シリンジポンプによって、それぞれのチャンバＭＣ１，ＭＣ２へ所定量の全血検体を分配供給する。

【0129】

試料調製部２２０は、第１試薬を収容する試薬容器２２１ａ、第２試薬を収容する試薬容器２２１ｂ、第３試薬を収容する試薬容器２２２ａ、第４試薬を収容する試薬容器２２２ｂ、及びシース液（希釈液）を収容する試薬容器２２３にチューブを介して接続されている。また、試料調製部２２０はコンプレッサに接続されており、当該コンプレッサにより発生される圧力により試薬容器２２１ａ，２２１ｂ，２２２ａ，２２２ｂ，２２３からそれぞれの試薬を分取することが可能となっている。

【0130】

第３試薬は、有核赤血球（ＮＲＢＣ）測定用の溶血剤である。このＮＲＢＣ測定用の溶血剤としては、例えばシスメックス（株）製ストマトライザーＮＲ溶血剤が挙げられる。また、第４試薬は、蛍光色素を含有したＮＲＢＣ測定用の染色液である。このＮＲＢＣ測定用の染色液としては、例えばシスメックス（株）製ストマトライザーＮＲ染色液が挙げられる。

【0131】

なお、第１試薬、第２試薬、及びシース液については、実施の形態１と同様であるので、その説明を省略する。

【0132】

また、本実施の形態に係る血液分析装置２００のその他の構成については、実施の形態１に係る血液分析装置１の構成と同様であるので、同一構成要素については同一符号を付し、その説明を省略する。

【0133】

［血液分析装置の動作］
次に、本実施の形態に係る血液分析装置２００の検体測定動作について説明する。

【0134】

本実施の形態に係る血液分析装置２００は、光学検出器Ｄを用いた異常リンパ球／芽球測定、及びＮＲＢＣ測定を実行可能である。かかる測定の工程は、異常リンパ球／芽球測定試料を測定する第１測定工程と、ＮＲＢＣ測定試料を測定する第２測定工程と、第１測定工程及び第２測定工程によって得られた測定データを解析処理するデータ処理工程によって構成される。

【0135】

まず、検体容器Ｔを保持したサンプルラックＬがオペレータによって検体搬送ユニット４に載置される。検体搬送ユニット４によってサンプルラックＬが搬送され、測定対象の検体が収容されている検体容器Ｔが検体供給位置４３ａに位置する。次に、測定ユニット２０２のハンド部２５ａにより、当該検体容器Ｔが把持され、サンプルラックＬからこの検体容器Ｔが取り出される。ハンド部２５ａはその後揺動運動を行い、検体容器Ｔの内部の検体が撹拌される。次に、検体容器セット部２５ｂにこの検体容器Ｔが挿入され、Ｙ２方向へと検体容器セット部２５ｂが移動し、バーコード読取部２６による検体バーコード読み取りを行った後、吸引位置に到達する。その後、第１測定工程及び第２測定工程が実行される。

【0136】

第１測定工程では、所定量の第１試薬と、所定量の第２試薬と、所定量の全血検体とが第１混合チャンバＭＣ１に供給されることで異常リンパ球／芽球測定試料が調製され、光学検出器Ｄにより異常リンパ球／芽球測定試料の光学測定が行われる。かかる第１測定工程は、実施の形態１に係る測定工程と同様であるので、その詳細な説明を省略する。第１測定工程では、前方散乱光信号（前方散乱光強度）、側方散乱光信号（側方散乱光強度）、及び蛍光信号（蛍光強度）の特徴パラメータが含まれたデジタルデータである第１測定データが生成され、かかる第１測定データが情報処理ユニット５に送信される。

【0137】

第２測定工程
次に、第２測定工程について説明する。この第２測定工程は、第１測定工程と時間的に一部重複して実行される。血液分析装置２００は、第２測定工程では、全血検体（１７．０μＬ）と第３試薬（１．０ｍＬ）と第４試薬（０．０３０ｍＬ）とを混合してＮＲＢＣ測定試料を作成し、このＮＲＢＣ測定試料を光学検出器Ｄにてフローサイトメトリー法によって測定する。

【0138】

図１３は、第２測定工程での血液分析装置２００の動作手順を示すフローチャートである。ＣＰＵ５１ａは測定ユニット２０２を制御することにより、試薬容器２２２ａから第３試薬（１．０ｍＬ）を、試薬容器２２２ｂから第４試薬（０．０３０ｍＬ）を、吸引管２１１から全血検体（１７．０μＬ）を第２混合チャンバＭＣ２にそれぞれ供給する（ステップＳ３０１）。このステップＳ３０１において第２混合チャンバＭＣ２に供給される検体は、上述した第１測定工程において吸引管２１１により吸引された全血検体の一部である。つまり、第１測定工程においては、第１混合チャンバＭＣ１に供給する検体と、第２混合チャンバＭＣ２に供給される検体とが一度に検体容器Ｔから吸引される。

【0139】

次に、ＣＰＵ５１ａは、第２混合チャンバＭＣ２への第３試薬、第４試薬及び全血検体の供給から７．０秒間経過したか否かを判定し（ステップＳ３０２）、７．０秒間待機する。ここで、ヒータにより第２混合チャンバＭＣ２は４１．０℃に加温されており、これにより、第３試薬と第４試薬と血液検体との混合液が４１．０℃で７．０秒加温され、ＮＲＢＣ測定試料が調製される。

【0140】

そして、ＮＲＢＣ測定試料を対象に光学検出器Ｄにて光学測定が行われる（ステップＳ３０３）。ステップＳ３０３の処理においては、具体的には、ＮＲＢＣ測定試料とシース液とが同時に光学検出器Ｄのフローセル２３１に供給され、そのときの前方散乱光がフォトダイオード２４３で受光され、側方散乱光がフォトダイオード２４６で受光され、蛍光がアバランシェフォトダイオード２４８で受光される。このような光学検出器Ｄの各受光素子により出力される出力信号（アナログ信号）は、上述した第１測定工程（実施の形態１に係る測定工程）と同様に、デジタル信号に変換され、所定の信号処理が施されてデジタルデータである第２測定データに変換され、情報処理ユニット５にこの第２測定データが送信される。この信号処理においては、第２測定データに含まれる特徴パラメータとして、前方散乱光信号（前方散乱光強度）、側方散乱光信号（側方散乱光強度）、及び蛍光信号の（蛍光強度）が得られる。これにより、第２測定工程が終了する。また、後述するように、情報処理ユニット５のＣＰＵ５１ａは、第２測定データに対して所定の解析処理を実行することにより、ＮＲＢＣの数値データを含む分析結果データを生成し、ハードディスク５１ｄに分析結果データを記憶する。

【0141】

データ処理工程
次に、データ処理工程について説明する。図１４は、本実施の形態に係る血液分析装置のデータ処理工程での処理手順を示すフローチャートである。血液分析装置２００の情報処理ユニット５は、測定ユニット２０２から測定データを受信する（ステップＳ４０１）。ＣＰＵ５１ａによって実行されるコンピュータプログラム５４ａはイベントドリブン型のプログラムであり、測定データを受信するイベントが発生すると、ステップＳ４０２の処理が呼び出される。

【0142】

ステップＳ４０２において、ＣＰＵ５１ａは、第１測定データを用いて異常リンパ球又はＮＲＢＣを含む細胞群（以下、「異常リンパ球／ＮＲＢＣ群」という。）を検出し、検出された異常リンパ球／ＮＲＢＣ群に含まれる血球数ＣＮ２１を計数する（ステップＳ４０２）。

【0143】

本実施の形態においては、図７における検出領域Ａ１を、異常リンパ球／ＮＲＢＣ群を検出するための前方散乱光強度及び蛍光強度の範囲とする。本願発明者らは、臨床検体を使用した実験を行い、実験結果の詳細な検討を実施した結果、この検出領域Ａ１及び図８に示す領域Ａ１１において、異常リンパ球だけでなく、ＮＲＢＣが出現することを見出した。即ち、図７に示す領域Ａ１又は図８に示す領域Ａ１１において血球群が検出された場合に、それが異常リンパ球群ではなく、ＮＲＢＣの細胞群（以下、「ＮＲＢＣ群」という。）である場合がある。なお、ステップＳ４０２において異常リンパ球／ＮＲＢＣ群を検出する処理は、実施の形態１のステップＳ２０２における異常リンパ球群を検出する処理と同様であるので、その詳細な説明を省略する。本実施の形態においては、検出領域Ａ１に血球群が検出された場合に、その血球群が異常リンパ球群であるか、ＮＲＢＣ群であるかを、第２測定データを用いて判別する。

【0144】

次にＣＰＵ５１ａは、ＣＮ２１が所定の閾値Ｔ２１より大きいか否かを判定する（ステップＳ４０３）。閾値Ｔ２１は、血液検体中に異常リンパ球又はＮＲＢＣが存在するか否かを判定するための基準値である。ステップＳ４０３では、ＣＮ２１が閾値Ｔ２１よりも大きい場合には、血液検体中に異常リンパ球又はＮＲＢＣが存在すると判定され、ＣＮ２１が閾値Ｔ２１以下の場合には、血液検体中に異常リンパ球及びＮＲＢＣが存在しないと判定される。

【0145】

ステップＳ４０３において、ＣＮ２１＞Ｔ２１の場合には（ステップＳ４０３においてＹＥＳ）、ＣＰＵ５１ａは、第２測定データを用いてＮＲＢＣ群と他の血球群とを分類し、有核赤血球の数ＣＮ２２を計数する（ステップＳ４０４）。かかる処理について詳しく説明する。図１５は、第２測定データにおける前方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムである。図１５に示すスキャッタグラムでは、有核赤血球のクラスター、白血球のクラスター、及び赤血球ゴーストのクラスターが現れる。本実施の形態においては、図１５において領域Ａ３によって示された前方散乱光強度及び蛍光強度の範囲を、ＮＲＢＣ群の検出領域として定める。このスキャッタグラムに示されるように、第２測定データの前方散乱光強度及び蛍光強度を利用して、領域Ａ３を用いることにより、有核赤血球のクラスターを、他のクラスターから弁別することができる。ステップＳ４０４の処理においては、ＣＰＵ５１ａは、第２測定データの前方散乱光強度及び蛍光強度を用いて、有核赤血球を他のクラスターから弁別し、これによってＮＲＢＣ群を検出する。さらに、ＣＰＵ５１ａは、検出された有核赤血球の数ＣＮ２２を計数する。なお、ＮＲＢＣ群の血球数ＣＮ２２としては、例えば、血液１μＬあたりのＮＲＢＣ数、白血球１００個あたりのＮＲＢＣ数等を用いることができる。

【0146】

次にＣＰＵ５１ａは、ＣＮ２２が所定の閾値Ｔ２２より大きいか否かを判定する（ステップＳ４０５）。閾値Ｔ２２は、血液検体中にＮＲＢＣが存在するか否かを判定するための基準値である。ステップＳ４０５では、ＣＮ２２が閾値Ｔ２２よりも大きい場合には、血液検体中にＮＲＢＣが存在すると判定され、ＣＮ２２が閾値Ｔ２２以下の場合には、血液検体中にＮＲＢＣが存在しないと判定される。

【0147】

ステップＳ４０５において、ＣＮ２２＞Ｔ２２の場合には（ステップＳ４０５においてＹＥＳ）、ＣＰＵ５１ａは、ＲＡＭ５１ｃに設けられたＮＲＢＣフラグに「１」をセットし、異常リンパ球フラグ及び芽球フラグにそれぞれ「０」をセットする（ステップＳ４０６）。ここで、ＮＲＢＣフラグは血液検体におけるＮＲＢＣの有無を示すフラグであり、「１」がセットされている場合にはＮＲＢＣが存在していることを示し、「０」がセットされている場合にはＮＲＢＣが存在していないことを示す。なお、異常リンパ球フラグ及び芽球フラグについては、実施の形態１と同様であるので、その説明を省略する。その後、ＣＰＵ５１ａは、ステップＳ４１２へ処理を移す。

【0148】

一方、ステップＳ４０５において、ＣＮ２２≦Ｔ２２の場合には（ステップＳ４０５においてＮＯ）、血液検体中にＮＲＢＣが存在しないと判定される。つまり、ステップＳ４０２において検出領域Ａ１から検出された血球群は、異常リンパ球群であると確定される。したがって、この場合には、ＣＰＵ５１ａは、ＲＡＭ５１ｃに設けられた異常リンパ球フラグに「１」をセットし、ＮＲＢＣフラグ及び芽球フラグにそれぞれ「０」をセットする（ステップＳ４０７）。その後、ＣＰＵ５１ａは、ステップＳ４１２へ処理を移す。

【0149】

また、ステップＳ４０３において、ＣＮ２１≦Ｔ２１の場合には（ステップＳ４０３においてＮＯ）、ＣＰＵ５１ａは、第１測定データを用いて芽球群を検出し、検出された芽球群に含まれる血球数ＣＮ２３を計数する（ステップＳ４０８）。なお、ステップＳ４０８の処理は、実施の形態１において説明したステップＳ２０５の処理と同様であるので、その説明を省略する。

【0150】

次にＣＰＵ５１ａは、ＣＮ２３が所定の閾値Ｔ２３より大きいか否かを判定する（ステップＳ４０９）。閾値Ｔ２３は、血液検体中に芽球が存在するか否かを判定するための基準値である。ステップＳ４０９では、ＣＮ２３が閾値Ｔ２３よりも大きい場合には、血液検体中に芽球が存在すると判定され、ＣＮ２３が閾値Ｔ２３以下の場合には、血液検体中に芽球が存在しないと判定される。

【0151】

ＣＮ２３＞Ｔ２３の場合には（ステップＳ４０９においてＹＥＳ）、ＣＰＵ５１ａは、ＲＡＭ５１ｃに設けられた芽球フラグに「１」をセットし、異常リンパ球フラグ及びＮＲＢＣフラグにそれぞれ「０」をセットする（ステップＳ４１０）。その後、ＣＰＵ５１ａは、ステップＳ４１２へ処理を移す。

【0152】

一方、ＣＮ２３≦Ｔ２３の場合には（ステップＳ４０９においてＮＯ）、ＣＰＵ５１ａは、ＲＡＭ５１ｃに設けられた異常リンパ球フラグ、芽球フラグ、及びＮＲＢＣフラグのそれぞれに「０」をセットする（ステップＳ４１１）。その後、ＣＰＵ５１ａは、ステップＳ４１２へ処理を移す。

【0153】

ステップＳ４１２において、ＣＰＵ５１ａは、上述のようにして得た分析結果（異常リンパ球フラグ、芽球フラグ、及びＮＲＢＣフラグを含む）をハードディスク５１ｄに格納する。次にＣＰＵ５１ａは、ハードディスク５１ｄに記憶した分析結果を示す分析結果画面を画像表示部５２に表示させ（ステップＳ４１３）、処理を終了する。

【0154】

次に、具体的な血液検体を測定したときのスキャッタグラムの例を示し、本実施の形態に係る血液分析装置２００による測定データの分析について説明する。図１６Ａ及び図１６Ｂは、血液分析装置２００による測定条件と実質的に同じ測定条件で得られたスキャッタグラムの例を示す図である。図１６Ａは、異常リンパ球を含有する血液検体Ｆを測定したときのスキャッタグラムの例を示している。また、図１６Ｂは、ＮＲＢＣを含有する血液検体Ｇを測定したときのスキャッタグラムの例を示している。

【0155】

図１６Ａに示すように、血液検体Ｆの第２測定データにおける前方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラム（ＮＲＢＣ検出用のスキャッタグラム）ＳＧ２１１では、ＮＲＢＣの検出領域Ａ３に血球が実質的に存在していない（ごく僅かだけ存在しているが、血球数が閾値Ｔ２２を超えていない）。図１６Ａには、血液検体Ｆの第１測定データにおける蛍光強度及び側方散乱光強度のスキャッタグラムＳＧ２１２も示している。このスキャッタグラムＳＧ２１２においては、異常リンパ球又はＮＲＢＣの出現領域Ａ１１に血球が存在している。つまり、スキャッタグラムＳＧ２１２から分かるように、血液検体Ｆからは異常リンパ球／ＮＲＢＣ群が検出されるが、スキャッタグラムＳＧ２１１から分かるように、血液検体ＦからはＮＲＢＣ群が検出されない。したがって、出現領域Ａ１１に出現している血球群は、異常リンパ球群であると確定される。よって、本実施の形態に係る血液分析装置２００が血液検体Ｆを分析したときには、ＣＮ２１＞Ｔ２１且つＣＮ２２≦Ｔ２２となり、異常リンパ球が存在すると判定される。

【0156】

図１６Ｂに示すように、血液検体Ｇの第２測定データにおける前方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラム（ＮＲＢＣ検出用のスキャッタグラム）ＳＧ２２１では、ＮＲＢＣの検出領域Ａ３に血球が存在している。図１６Ｂには、血液検体Ｇの第１測定データにおける蛍光強度及び側方散乱光強度のスキャッタグラムＳＧ２２２も示している。このスキャッタグラムＳＧ２２２においては、異常リンパ球又はＮＲＢＣの出現領域Ａ１１に血球が存在している。つまり、スキャッタグラムＳＧ２２２から分かるように、血液検体Ｇからは異常リンパ球／ＮＲＢＣ群が検出されており、スキャッタグラムＳＧ２２１から分かるように、血液検体ＧからはＮＲＢＣ群も検出されている。したがって、出現領域Ａ１１に出現している血球群は、ＮＲＢＣ群であると確定される。よって、本実施の形態に係る血液分析装置２００が血液検体Ｇを分析したときには、ＣＮ２１＞Ｔ２１且つＣＮ２２＞Ｔ２２となり、ＮＲＢＣが存在すると判定される。

【0157】

以上のように、異常リンパ球が含まれ、芽球、ＮＲＢＣ及び異型リンパ球が含まれない血液検体が血液分析装置２００により測定されたときには、異常リンパ球が検出され、芽球及びＮＲＢＣは検出されない。同じく、ＮＲＢＣが含まれ、異常リンパ球、芽球及び異型リンパ球が含まれない血液検体が血液分析装置２００により測定されたときには、ＮＲＢＣが検出され、異常リンパ球及び芽球は検出されない。同じく、芽球が含まれ、異常リンパ球、ＮＲＢＣ及び異型リンパ球が含まれない血液検体が血液分析装置２００により測定されたときには、芽球が検出され、異常リンパ球及びＮＲＢＣは検出されない。また、異型リンパ球が含まれ、異常リンパ球、芽球及びＮＲＢＣが含まれない血液検体を測定したときには、異常リンパ球、芽球及びＮＲＢＣは検出されない。つまり、実施の形態に係る血液分析装置２００によれば、異常リンパ球、芽球及びＮＲＢＣをそれぞれ単独に検出することが可能である。

【0158】

また、図示しないが、ＮＲＢＣフラグが「１」にセットされており、異常リンパ球フラグ及び芽球フラグのそれぞれが「０」にセットされている場合には、図１１に示す分析結果画面のフラグ表示欄ＦＬＧに「ＮＲＢＣ ｐｒｅｓｅｎｔ」が表示される。また、異常リンパ球フラグが「１」にセットされており、ＮＲＢＣフラグ及び芽球フラグのそれぞれが「０」にセットされている場合には、図１１に示すように、分析結果画面のフラグ表示欄ＦＬＧに「Ａｂｎ Ｌｙｍｐｈｏ？」が表示される。芽球フラグが「１」にセットされており、異常リンパ球フラグ及びＮＲＢＣフラグのそれぞれが「０」にセットされている場合には、フラグ表示欄ＦＬＧに「Ｂｌａｓｔｓ？」が表示される。さらに、異常リンパ球フラグ、芽球フラグ及びＮＲＢＣフラグのそれぞれに「０」がセットされている場合には、上記の「ＮＲＢＣ ｐｒｅｓｅｎｔ」、「Ａｂｎ Ｌｙｍｐｈｏ？」、「Ｂｌａｓｔｓ？」の何れも分析結果画面に表示されない。これによって、オペレータは分析結果画面を見るだけで、その血液検体において異常リンパ球が検出されたか否か、芽球が検出されたか否か、ＮＲＢＣが検出されたか否かを把握することができる。

【0159】

以上のような構成とすることにより、血液分析装置２００は、血液検体と、溶血剤が含有された第１試薬と、核酸を染色する蛍光色素が含有された第２試薬とを混合して調製した異常リンパ球／芽球測定試料を光学検出器Ｄにより測定し、また、血液検体と、第３試薬と、第４試薬とを混合して調製したＮＲＢＣ測定試料を光学検出器Ｄにより測定することにより、異常リンパ球、芽球、及びＮＲＢＣを個別に検出することができる。また、ＮＲＢＣが異常リンパ球として誤って検出されることを抑制することができる。

【0160】

（その他の実施の形態）
なお、試料調製部２２における、血液検体と第１試薬と第２試薬との混合の際の反応温度及び反応時間は、血液検体中の血球の損傷や染色の状態により適宜設定すればよく、特に制限されない。具体的には、反応温度が高いときは反応時間を短くし、反応温度が低いときは反応時間を長くするように調整することができる。より具体的には、血液検体と試薬の混合は、２０℃〜４５℃の温度において、３〜４０秒間行うことが好ましい。

【0161】

また、上述した実施の形態においては、溶血剤を含む第１試薬及び核酸を染色できる蛍光色素を含む第２試薬を用いて、測定工程を行う構成について述べたが、これに限定されるものではない。溶血剤及び核酸染色色素を含む１つの試薬を血液検体と混合して測定試料を調製し、異常リンパ球及び芽球の検出を行う構成としてもよい。この場合、界面活性剤及び蛍光色素の濃度は、上記試薬を混合した際に、上述の濃度になるように調整される。

【0162】

また、上述した実施の形態においては、測定データにおける前方散乱光強度及び蛍光強度において、異常リンパ球の検出領域Ａ１の内部に出現した血球数ＣＮ１が閾値Ｔ１より大きいか否かによって、血液検体中に異常リンパ球が存在するか否かが判定される構成について述べたが、これに限定されるものではない。異常リンパ球の検出領域Ａ１の内部に出現した血球数の全白血球数に対する割合を求め、この割合が所定の基準値よりも大きいか否かを判定することで、異常リンパ球が存在するか否かを判定する構成としてもよい。同様に、芽球の検出においても、芽球の検出領域Ａ２の内部に出現した血球数の全白血球数に対する割合を求め、この割合が所定の基準値よりも大きいか否かを判定することで、芽球が存在するか否かを判定する構成としてもよい。

【0163】

また、上述した実施の形態においては、測定試料をフローサイトメトリー法により光学測定し、蛍光強度、前方散乱光強度、及び側方散乱光強度を含む光学信号を取得し、かかる蛍光強度及び散乱光強度を用いて血液検体中において芽球及び異型リンパ球を含まず異常リンパ球を含む細胞群を検出する構成について述べたが、これに限定されるものではない。蛍光強度と共に、前方広角散乱光強度等の前方散乱光強度及び側方散乱光強度以外の散乱光情報を取得し、当該散乱光情報及び蛍光強度の所定の範囲において、芽球及び異型リンパ球を含まず異常リンパ球を含む細胞群を検出する構成としてもよい。

【0164】

また、上述した実施の形態においては、ＣＰＵ５１ａが上記のコンピュータプログラム５４ａを実行することにより、測定ユニット２の制御及び測定データの処理を行う構成について述べたがこれに限定されるものではない。上記コンピュータプログラム５４ａと同様の処理を実行することが可能なＦＰＧＡ又はＡＳＩＣ等の専用ハードウェアにより、測定ユニット２の制御及び測定データの処理を実行する構成としてもよい。

【0165】

また、上述した実施の形態においては、単一のコンピュータ５ａによりコンピュータプログラム５４ａの全ての処理を実行する構成について述べたが、これに限定されるものではなく、上述したコンピュータプログラム５４ａと同様の処理を、複数の装置（コンピュータ）により分散して実行する分散システムとすることも可能である。

【0166】

また、上述した実施の形態２においては、ＣＰＵ５１ａが、データ処理工程のＳ４０５においてＣＮ２２＞Ｔ２２となった場合には、検出領域Ａ１に出現する血球群をＮＲＢＣであると判定しているが、Ｓ４０５においてＣＮ２２＞Ｔ２２となった場合には、ＣＰＵ５１ａがさらに芽球の出現を判定する工程（Ｓ４０８およびＳ４０９）を実行してもよい。ＮＲＢＣも芽球も通常は骨髄中に存在する血液細胞である。そのため、骨髄系の疾患により末梢血中にＮＲＢＣと芽球の両方が出現してくる可能性がある。

【0167】

また、上述した実施の形態２においては、ＣＰＵ５１ａが、ＮＲＢＣが存在するか否かの判定および異常リンパ球が存在するか否かの判定をデータ処理工程の中で行っているが、ＮＲＢＣが存在するか否かを判定するための工程を、異常リンパ球が存在するか否かを判定するための工程とは独立して行ってもよい。

【0168】

また、ＮＲＢＣが存在するか否かの判定に使用する閾値Ｔ２２は、異常リンパ球が存在するか否かの判定に使用する閾値Ｔ２１と同じ値を用いてもよいし、Ｔ２１とは異なる値を用いてもよい。

【0169】

（性能評価実験）
本願発明者らは、上記血液分析装置１で行われる血液分析方法の性能評価実験を実施した。

【0170】

この実験では、複数の血液検体に対して用手法による顕微鏡検査を実施し、リンパ芽球、異常リンパ球、及び異型リンパ球の数を調べた。全白血球数に対してリンパ芽球の数が２％以上の場合に、リンパ芽球について「陽性」と判定した。全白血球数に対して異常リンパ球の数が１０％以上の場合に、異常リンパ球について「陽性」と判定した。また、全白血球数に対して異型リンパ球の数が２％以上の場合に、異型リンパ球について「陽性」と判定した。また、リンパ芽球、異常リンパ球及び異型リンパ球の出現が全く確認されなかった血液検体を「陰性検体」と判定した。

【0171】

また、この実験では、上記の顕微鏡検査によりリンパ芽球について陽性と判定され、且つ、異常リンパ球及び異型リンパ球については陽性と判定されなかった検体（以下、「リンパ芽球陽性検体」という。）に対し、下記の要領でフローサイトメトリー法による測定を実施した。同じくこの実験では、顕微鏡検査により異常リンパ球について陽性と判定され、且つ、リンパ芽球及び異型リンパ球については陽性と判定されなかった検体（以下、「異常リンパ球陽性検体」という。）に対し、フローサイトメトリー法による測定を実施した。顕微鏡検査により異型リンパ球について陽性と判定され、且つ、リンパ芽球及び異常リンパ球については陽性と判定されなかった検体（以下、「異型リンパ球陽性検体」という。）に対しても、下記の要領で測定を実施した。さらに、上記の「陰性検体」に対しても、フローサイトメトリー法による測定を実施した。

【0172】

フローサイトメトリー法による測定においては、以下の試薬を使用した。
＜溶血剤＞
ＭＯＰＳ：２．０９ｇ／Ｌ
ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテル：１．２５ｇ／Ｌ
Ｎ−ラウロイルサルコシン酸ナトリウム：０．２６８ｇ／Ｌ
ＥＤＴＡ−２Ｋ：０．５ｇ／Ｌ
上記各成分を混合しさらにＮａＯＨを添加してｐＨを７．３に調製した。第１試薬の浸透圧は３７ｍＯｓｍ／Ｋｇ、電気伝導度は０．７４５ｍＳ／ｃｍであった。
＜染色試薬＞
ＮＫ−３２１：５０ｍｇ／Ｌ
エチレングリコールに溶解されたＮＫ−３２１（５０ｍｇ／Ｌ）を第２試薬とした。

【0173】

＜測定＞
全血検体（１７．０μＬ）と溶血剤（１０００μＬ）と染色試薬（２０μＬ）とを混合して測定試料を調製し、この測定試料を光学検出器にてフローサイトメトリー法によって測定した。光源として、励起波長６３３ｎｍの赤色半導体レーザを用い、蛍光シグナルは６５０ｎｍ以上の波長の蛍光（赤蛍光）を検出した。

【0174】

各検体について測定を実施した結果得られた前方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムにおいて、図７に示す検出領域Ａ１に相当する領域（異常リンパ球を検出するための領域）に出現した血球数を計数し、当該血球数の全白血球数に対する割合ＨＬＦ％を求めた。割合ＨＬＦ％が基準値（１％）以上である場合には、異常リンパ球について陽性と判定し、割合ＨＬＦ％が基準値未満である場合には、異常リンパ球について陰性と判定した。

【0175】

また、測定の結果得られた前方散乱光強度及び側方散乱光強度のスキャッタグラムにおいて、図９に示す検出領域Ａ２に相当する領域（芽球を検出するための領域）に出現した血球数ＬＣ１＃を計数した。血球数ＬＣ１＃が基準値（２０）以上である場合には、芽球について陽性と判定し、血球数ＬＣ１＃が基準値未満である場合には、芽球について陰性と判定した。

【0176】

表１にリンパ芽球陽性検体についての実験結果を示す。なお、表中の数値は検体数を示している（表２〜４についても同様。）。

【表1】

【0177】

リンパ芽球陽性検体である１１検体の全てについて、フローサイトメトリー法による測定を実施した結果、異常リンパ球について陽性と判定された検体はなかった。つまり、リンパ芽球陽性検体のうち、フローサイトメトリー法による測定により異常リンパ球が検出された検体数は０であり、異常リンパ球が検出されなかった検体数は１１であった。また、リンパ芽球陽性検体である１１検体のうち、フローサイトメトリー法による測定による測定を実施した結果、芽球について陽性と判定された検体数は９であり、芽球について陰性と判定された検体数は２であった。つまり、リンパ芽球陽性検体のうちの８１．８％の検体について、フローサイトメトリー法による測定により芽球が検出された。これにより、リンパ芽球陽性検体に含まれるリンパ芽球は、異常リンパ球を検出するための検出領域Ａ１には実質的に出現せず、芽球を検出するための検出領域Ａ２には出現することが分かる。つまり、実施の形態に係る血液分析方法によれば、リンパ芽球を含み、異常リンパ球及び異型リンパ球を含まない血液検体からは、異常リンパ球を誤検出することなく、正確に芽球を検出可能であるといえる。

【0178】

表２に異常リンパ球陽性検体についての実験結果を示す。

【表2】

【0179】

異常リンパ球陽性検体である１２検体のうち、フローサイトメトリー法による測定を実施した結果、異常リンパ球について陽性と判定された検体数は８であり、異常リンパ球について陰性と判定された検体数は４であった。つまり、異常リンパ球陽性検体のうちの６６．７％の検体について、フローサイトメトリー法による測定により異常リンパ球が検出された。また、異常リンパ球陽性検体である１２検体の全てについて、フローサイトメトリー法による測定による測定を実施した結果、芽球について陽性と判定された検体はなかった。つまり、異常リンパ球陽性検体のうち、フローサイトメトリー法による測定により芽球が検出された検体数は０であり、芽球が検出されなかった検体数は１２であった。これにより、異常リンパ球陽性検体に含まれる異常リンパ球は、異常リンパ球を検出するための検出領域Ａ１に出現し、芽球を検出するための検出領域Ａ２には実質的に出現しないことが分かる。つまり、実施の形態に係る血液分析方法によれば、異常リンパ球を含み、リンパ芽球及び異型リンパ球を含まない血液検体からは、芽球を誤検出することなく、正確に異常リンパ球を検出可能であるといえる。

【0180】

表３に異型リンパ球陽性検体についての実験結果を示す。

【表3】

【0181】

異型リンパ球陽性検体である３４検体のうち、フローサイトメトリー法による測定を実施した結果、異常リンパ球について陽性と判定された検体数は２であり、異常リンパ球について陰性と判定された検体数は３２であった。つまり、異型リンパ球陽性検体の殆ど全てについて、フローサイトメトリー法による測定により異常リンパ球が検出されなかった。また、異型リンパ球陽性検体である３４検体の全てについて、フローサイトメトリー法による測定による測定を実施した結果、芽球について陽性と判定された検体はなかった。つまり、異型リンパ球陽性検体のうち、フローサイトメトリー法による測定により芽球が検出された検体数は０であり、芽球が検出されなかった検体数は３４であった。これにより、異型リンパ球陽性検体に含まれる異型リンパ球は、異常リンパ球を検出するための検出領域Ａ１及び芽球を検出するための検出領域Ａ２のそれぞれには実質的に出現しないことが分かる。つまり、実施の形態に係る血液分析方法によれば、異型リンパ球を含み、リンパ芽球及び異常リンパ球を含まない血液検体からは、ほぼ芽球及び異常リンパ球が誤検出されることがない。

【0182】

表４に陰性検体についての実験結果を示す。

【表4】

【0183】

陰性検体である１１７９検体のうち、フローサイトメトリー法による測定を実施した結果、異常リンパ球について陽性と判定された検体数は１１であり、異常リンパ球について陰性と判定された検体数は１１６８であった。つまり、陰性検体の殆ど全てについて、フローサイトメトリー法による測定により異常リンパ球が検出されなかった（異常リンパ球が検出されたのは陰性検体全体の０．９％であった。）。また、陰性検体である１１７９検体のうち、フローサイトメトリー法による測定を実施した結果、芽球について陽性と判定された検体数は４であり、芽球について陰性と判定された検体数は１１７５であった。つまり、陰性検体の殆ど全てについて、フローサイトメトリー法による測定により芽球が検出されなかった（芽球が検出されたのは陰性検体全体の０．３％であった。）。これにより、異型リンパ球陽性検体に含まれる異型リンパ球は、異常リンパ球を検出するための検出領域Ａ１及び芽球を検出するための検出領域Ａ２のそれぞれには実質的に出現しないことが分かる。つまり、実施の形態に係る血液分析方法によれば、異型リンパ球、リンパ芽球及び異常リンパ球を含まない血液検体からは、ほぼ芽球及び異常リンパ球が誤検出されることがない。

【産業上の利用可能性】

【0184】

本発明の血液分析装置、血液分析方法、及びコンピュータプログラムは、血液検体を光学的に測定し、血液検体に含まれる細胞群を検出する血液分析装置及び血液分析方法、並びにコンピュータに血液を分析させるためのコンピュータプログラムとして有用である。

【符号の説明】

【0185】

１ 血液分析装置
２ 測定ユニット
２２ 試料調製部
２２１ａ，２２１ｂ，２２３ 試薬容器
２３ 検出部
２３１ フローセル
２３７ 半導体レーザ
２４３ フォトダイオード
２４６ フォトダイオード
２４８ アバランシェフォトダイオード
５ 情報処理ユニット
５ａ コンピュータ
５１ 本体
５１ａ ＣＰＵ
５１ｂ ＲＯＭ
５１ｃ ＲＡＭ
５１ｄ ハードディスク
５１ｈ 画像出力インタフェース
５２ 画像表示部
５４ａ コンピュータプログラム
ＭＣ 混合チャンバ
Ｈ ヒータ
Ｄ 光学検出器
Ｒ１ 分析結果画面

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図10D】

【図10E】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16A】

【図16B】