特許 5952899 う蝕象牙質組織の検出と除去

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5952899

(24)【登録日】2016年6月17日

(45)【発行日】2016年7月13日

(54)【発明の名称】う蝕象牙質組織の検出と除去

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/473 20060101AFI20160630BHJP

   A61K 31/4745 20060101ALI20160630BHJP

   A61K 31/352 20060101ALI20160630BHJP

   A61K 33/20 20060101ALI20160630BHJP

   A61K 47/18 20060101ALI20160630BHJP

   A61K 47/38 20060101ALI20160630BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20160630BHJP

   G01N 33/50 20060101ALI20160630BHJP

   A61P 1/02 20060101ALI20160630BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20160630BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/473

   A61K31/4745

   A61K31/352

   A61K33/20

   A61K47/18

   A61K47/38

   A61K9/08

   G01N33/50 X

   A61P1/02

   A61P43/00 121

【請求項の数】11

【全頁数】25

(21)【出願番号】特願2014-515215(P2014-515215)

(86)(22)【出願日】2012年6月15日

(65)【公表番号】特表2014-523872(P2014-523872A)

(43)【公表日】2014年9月18日

(86)【国際出願番号】EP2012061494

(87)【国際公開番号】WO2012172071

(87)【国際公開日】20121220

【審査請求日】2015年4月28日

(31)【優先権主張番号】1150542-7

(32)【優先日】2011年6月15日

(33)【優先権主張国】SE

(31)【優先権主張番号】61/497,116

(32)【優先日】2011年6月15日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】513315525

【氏名又は名称】アルエルエス グローバル アーベー

(74)【代理人】

【識別番号】100127926

【弁理士】

【氏名又は名称】結田 純次

(74)【代理人】

【識別番号】100140132

【弁理士】

【氏名又は名称】竹林 則幸

(72)【発明者】

【氏名】ウルリカ・アルムホエイェデ

(72)【発明者】

【氏名】オーケ・ニルソン

【審査官】 深谷 良範

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００９−５３４０９７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００１−５０４８１８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許出願公開第２００７／０２８７１２２（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 特開２０１０−１２０８６４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００６−１４３６４３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００５−２６３６６７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２０００−０６３２９０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平１０−２３６９１５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平１０−２３６９１４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開昭５５−０７６８２１（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ

Ｇ０１Ｎ ３３／

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ｉ）式（Ｉ）、
ＲＮＨＮＨ₂ （Ｉ）
のヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物（Ｒは、発色団を含有する化学基であることを特徴とする）；及び
（ｉｉ）う蝕象牙質組織を軟化する、及び／又は、溶解することができるう蝕象牙質組織の化学的処置のための手段であって、
（ａ）う蝕溶解性の第一の成分、及び第一の成分の粘膜に対する攻撃性を低下させる第二の成分を含有する、う蝕溶解性の二成分の液体、並びに
（ｂ）粘度増強物質
を含有する製剤を含む手段；
を含む、う蝕象牙質組織の検出と除去のための部品のキット。

【請求項2】

請求項１に記載の部品キットであって、ここで、ヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物は：

【化1】

【化2】

【化3】

（ここで、Ｍ又はＭ⁺は、Ｌｉ⁺、Ｋ⁺、及びＮａ⁺から選択される一価の金属イオンを表す）；及び

【化4】

から成るグループから選択される、上記キット。

【請求項3】

更に、う蝕象牙質組織の化学的処置のための前記手段により、軟化し、及び／又は、溶解したう蝕象牙質組織の機械的除去のための手段を含んでなる、請求項１又は２に記載の部品キット。

【請求項4】

第一の成分が、Ｃｌ¹⁺、次亜塩素酸カリウム、又は次亜塩素酸ナトリウムである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の部品キット。

【請求項5】

第一の成分の粘膜に対する攻撃性を低下させる第二の成分が、アミノ酸、又はアミノエタンジオール、１−アミノ−３，３−ジメチルプロパノール及び１，５−ジアミノペンタノールの混合物を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の部品キット。

【請求項6】

アミノ酸が、異なった電荷状態；一つが中性、一つが実効負電荷、及び一つが実効正電
荷を備えた三つのアミノ酸である、請求項５記載の部品キット。

【請求項7】

粘度増強物質が、ゲルである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の部品キット。

【請求項8】

ゲルが、カルボキシメチルセルロース又は多糖物質である、請求項７記載の部品キット。

【請求項9】

製剤が、１〜２％（ｗ／ｗ）濃度の第一の活性成分ＮａＯＣｌ、９．５〜１０．５のｐＨを有し、グルタミン酸、ロイシン及びリシンの混合物０．５〜１．５％（ｗ／ｗ）、ＮａＣｌ０．５％（ｗ／ｗ）を含む第二の成分、並びに高粘度のカルボキシメチルセルロースゲル２．５〜５％（ｗ／ｗ）を含む水性組成物である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の部品キット。

【請求項10】

製剤が、１〜２％（ｗ／ｗ）濃度の第一の活性成分ＮａＯＣｌ、９．５〜１０．５のｐＨを有し、グルタミン酸、ロイシン及びリシンの混合物０．５〜１．５％（ｗ／ｗ）、ＮａＣｌ０．５％（ｗ／ｗ）、ＴｉＯ₂：０．０３％（ｗ／ｗ）を含む第二の成分；及び中粘度のカルボキシメチルセルロースゲル２．５〜５％（ｗ／ｗ）を含む水性組成物である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の部品キット。

【請求項11】

更に、請求項１又は２で定義されたヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物を含んでなる、請求項１〜１０のいずれか１項に定義された製剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明はう蝕に関する。特に、本発明は、う蝕病変が象牙質組織内に進行したとき、化学的処置によるう蝕の検出、及び選択的除去に関する。

【背景技術】

【0002】

う蝕病変の処置において、う蝕組織の主要部分は、触覚器具（いわゆる、探針（probing））を用いて、患部表面の硬さを判断することにより、及び／又は、メイラード生成物として知られている公知の変色を視覚的に観察することにより、検査できる。しかしながら、透明ゾーンと呼ばれる、健常な象牙質近辺のう蝕の患部面は、変色しない。

【0003】

う蝕が歯のエナメル質のみを冒す（affect）初期段階のう蝕に対しては、異なった治療が使用される。一つの治療においては、歯科用ドリルツールなどの機械的手段を用いてう蝕の患部組織を除去する。別の治療は、フッ素添加などの予防方法を用いる。

【0004】

初期のう蝕、即ち、歯のエナメル質のみを冒すう蝕は、普通は、う蝕領域において半透明性低下として、歯科医師は検出可能であり、そして、多孔質のエナメル質に起因した不透明領域として観察できる。しかしながら、歯の間の歯間領域におけるう蝕の検出は、Ｘ線撮影分析を必要とする。

【0005】

全ての状況において、全てのう蝕性組織を除去することは可能ではないかもしれない。例えば、これは、う蝕病変が歯の象牙質内へ進行する場合であるかも知れない。あるう蝕性象牙質の組織は、その後、尚、残留するかもしれず、そしてこのう蝕性組織は、歯を修復するために使用される充填物の下にロックされるようになるかもしれない。これは、確かに、う蝕象牙質組織の更なる発達（development）を引き起こし、それは、充填物の下に隠されるという事実に起因して見えないで発達できる。冒された個人がう蝕象牙質組織に気付くようになるとき、歯を救うことは困難であるかも知れず、そして 抜歯又は根管充填が必要となるかもしれない。

【0006】

この問題は、もちろん、歯からより健常な象牙質組織を掘り出すことにより処理でき、即ち、健常な象牙質組織が、う蝕性象牙質組織と一緒に除去される。しかしながら、これは、歯の強度の低下（即ち、結晶質の低下、ヒドロキシアパタイトの低下、及びタンパク質の低下など）をもたらし、そして、歯冠壁が薄くなりすぎるようになるかもしれない。更に、組織は複合材料などの合成材料で代替されるので、これは歯の再石灰化過程の低下をもたらすことになるであろう。組織を取り除くことは、歯全体に、無機質及び有機質の両方に影響を与える。

【0007】

特許文献１は、ａ）う蝕性組織を、選択されたレーザ源から容易にエネルギを吸収するために、選択された染色液でう蝕性組織を洗い流すこと、ｂ）幾分かの染色液をう蝕組織により吸収されることを可能にすること、ｃ）領域を濯ぎ、う蝕組織中の吸収された染色液を放置すること、及びｄ）う蝕組織を補色主波長のレーザ光による切除でう蝕性組織を取り除き、及びそれに続いて、酸を用いて残留した無機組織のエッチングを行うこと、の工程を含む残留したう蝕を処置する方法を記載している。

【0008】

特許文献２は、赤外分光法を用いてう蝕象牙質組織の存在を決定するための方法を開示し、それは、エステル基を欠く健常な象牙質組織と対比して、エステル基はう蝕性組織に存在するという発見を基礎にしている。

【0009】

特許文献３は、エリスロシンなどの着色剤を含む二成分のう蝕溶解性液体の形体におけるう蝕性組織の化学的−機械的処置のための製剤を記載している。

【0010】

特許文献４は、初期段階のう蝕検出のための方法とキットを開示し、ここで初期のう蝕は、Hylight Fluorなどの光学的に検出可能なプローブを検出用の光学的デバイスを用いてエナメル質う蝕に結合することにより検出され得る。歯科組織、即ち、う蝕象牙質組織内へ進行したう蝕の検出に関しては何も記載されていない。

【0011】

健常な象牙質組織はアミド基を含むことは当該分野で公知である。これは、例えば、非特許文献１及び非特許文献２に記載されている。

【0012】

従って、健常な象牙質組織に影響を与えないか、又はほとんど影響を与えないう蝕象牙質組織を最大限検出し、除去することを可能にするデバイス及び方法に対する必要性が存在する。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0013】

【特許文献1】ＵＳ第２００７／０２８７１２２号

【特許文献2】ＷＯ第２００８／０４８１７０号

【特許文献3】ＷＯ第９８／０２０８３８号

【特許文献4】ＷＯ第２００７／１２３８８０号

【非特許文献】

【0014】

【非特許文献1】Digestion and Nutrition:In Zoology(動物学における消化及び栄養)by Dorit, lLR. and Walker, W.F, Saunders College, page 247

【非特許文献2】Primary Structure Determination In Biochemistry(生化学における一次構造の決定) by Voet, D. and Voet, G.E., 2nd edition, John Wiley & Sons, Inc. NY, at page 156

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0015】

本発明の目的は、従来技術分野に関連する幾つかの不利益に打勝ち、又は少なくとも緩和することである。特に、発明の目的は、う蝕象牙質組織の効率的、選択的検出と除去に対する手段を提供することである。

【0016】

本発明は、健常な象牙質の存在下、ヒドラジンから誘導した化合物、即ち、ヒドラジン誘導体で、非可逆的、及び選択的に、う蝕象牙質組織を視覚的に標識化させた後、化学的手段でう蝕象牙質組織を選択的に除去することが可能であるという予期しない発見を元にしている。

【課題を解決するための手段】

【0017】

驚くべきことに、発明者らは、ヒドラジン誘導体で標識化されたう蝕象牙質組織は、う蝕性組織の処置のために化学的手段で選択的に除去し得ることを見つけた。従って、う蝕象牙質組織がヒドラジンで標識化され、そしてう蝕象牙質組織の処置のために化学的手段を受けるとき、全てのう蝕象牙質組織は、周囲の健常な象牙質組織に影響を与えることなく除去された。その一方、ヒドラジン誘導体を、歯科医師用のドリルなどの機械的手段と組み合わせて用い、う蝕象牙質組織を選択的に検出し、除去することは不可能であった。

【0018】

第一の態様において、発明は：（ｉ）ヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物、及び（ｉｉ）う蝕象牙質組織の化学的処置のための手段を含む、う蝕象牙質組織の検出と除去のための部品キットに関する。

【0019】

更なる態様において、発明は、第一の活性でう蝕溶解成分、及び粘膜に対する活性成分の攻撃性を低下させる第二の成分の形態の活性で、う蝕溶解性の二成分の液体及び粘度増強物質を含み、更にヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物を含む製剤に関する。製剤は液体、例えば、水性組成物であってもよい。

【0020】

発明の更なる態様において、（ｉ）ヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物、（ｉｉ）う蝕象牙質組織の化学的処置のための手段を含む、う蝕象牙質組織の検出と除去用の部品キットを用いたう蝕性象牙質組織の標識化と除去のための方法が提供される。

【0021】

発明の更なる態様において、第一の活性でう蝕溶解成分、及び粘膜に対する活性成分の攻撃性を低下させる第二の成分の形態の活性でう蝕溶解性の二成分液体、ゲル物質、及びヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物含む製剤を用いたう蝕象牙質組織の標識化と除去のための方法が提供される。

【0022】

発明の更なる態様において：
（ｉ）う蝕象牙質組織を含む一つ又はそれ以上の歯の上にヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物を適用することにより、う蝕象牙質組織を標識化すること、
（ｉｉ）う蝕象牙質組織の化学的処置のための手段を標識化したう蝕性組織に適用すること、及び
（ｉｉｉ）機械的手段で標識化したう蝕象牙質組織を取り除くこと、
の工程を含むう蝕象牙質組織の標識化と除去のための方法が提供される。

【0023】

発明の更なる態様において：
（ｉ）第一の活性でう蝕溶解成分、及び粘膜に対する活性成分の攻撃性を低下させる第二の成分の形態の活性でう蝕溶解性の二成分液体、ゲル物質、及び一つ又はそれ以上のヒドラジン誘導体である化合物を含む製剤をう蝕象牙質組織を含む一つ又はそれ以上の歯に適用することによるう蝕象牙質組織の標識化、
（ｉｉ）機械的手段による標識化されたう蝕象牙質組織の除去；
の工程を含むう蝕象牙質組織の標識化と除去のための方法が提供される。

【図面の簡単な説明】

【0024】

【図1a】二つの歯から収集した健常な象牙質組織（曲線Ａ及び曲線Ｂ）、及び同じ二つの歯から収集したう蝕象牙質組織（曲線Ｃ及び曲線Ｄ）のデコンボリュートした（deconvoluted）ＦＴＩＲスペクトルを示す。

【図1b】曲線Ｂ（健常な象牙質組織）が、図１ａにおける曲線Ｃ及び曲線Ｄから差し引かれ、曲線Ｃ′及び曲線Ｄ′をもたらすＦＴＩＲスペクトルを示す。

【図2a】ＮａＣｌ及びＮａＯＨでインキュベーションした後、５−（２−２−ヒドラジニル−２−オキソエチルチオ）アセトアミド）−２−（３−ヒドロキシ−６−オキソ−６Ｈ−キサンテン−９−イル）安息香酸で処置した歯のスライスの染色を示す。

【図2b】ＮａＣｌ及びＮａＯＨでインキュベーションした後、ルシファーイエロー（Lucifer Yellow）ナトリウム塩で処置した歯のスライスの染色を示す。染色領域は、円と（１）で表示される。

【図2c】ＮａＣｌ及びＮａＯＨで処置した後、Alexa Fluor 594（登録商標）で処置した歯のスライスの染色を示す。

【図3a】健常な象牙質組織サンプルＳ１（参照サンプル）に対する３７００と２６００ｃｍ^-1の間で得られたＦＴＩＲスペクトルを示す。Ｓ２及びＳ３は、ルシファーイエローで処置した。

【図3b】う蝕象牙質組織サンプルＳ４（参照サンプル）に対する３７００と２６００ｃｍ^-1の間で得られたＦＴＩＲスペクトルを示す。Ｓ５及びＳ６は、ルシファーイエローで処置した。

【図3c】健常な象牙質組織サンプルＳ１（参照サンプル）に対する１８００と４００ｃｍ^-1の間で得られたＦＴＩＲスペクトルを示す。Ｓ２及びＳ３は、ルシファーイエローで処置した。

【図3d】う蝕象牙質組織サンプルＳ４（参照サンプル）に対する１８００と４００ｃｍ^-1の間で得られたＦＴＩＲスペクトルを示す。Ｓ５及びＳ６は、ルシファーイエローで処置した。

【図3e】う蝕象牙質組織サンプルＳ４（参照サンプル）に対する１８００と１６８０ｃｍ^-1の間で得られたＦＴＩＲスペクトルを示す。Ｓ５及びＳ６は、ルシファーイエローで処置し、そして健常な象牙質組織Ｓ１（参照サンプル）と比較した

【図4a】う蝕象牙質組織用の正のＴＯＦ−ＳＩＭＳスペクトルを示す。上段のスペクトルは、う蝕象牙質組織を示す。下段のスペクトルは、ヒドラジン誘導体のルシファーイエローで処置したう蝕象牙質組織を示す。

【図4b】健常な象牙質組織用の正のＴＯＦ−ＳＩＭＳスペクトルを示す。上段のスペクトルは、健常な象牙質組織を示す。下段のスペクトルは、ヒドラジン誘導体のルシファーイエローで処置した健常な象牙質組織を示す。

【発明を実施するための形態】

【0025】

う蝕象牙質組織を取り除くことによって、う蝕象牙質組織のみが除去され、即ち、何も、又は実質的に、他に何も除去されていないことを意味する。従って、健常な象牙質組織は全く除去されず、又はほとんど除去されない。

【0026】

選択的に標識化されることによって、健常な象牙質組織の標識化を行わず、う蝕象牙質組織とヒドラジン誘導体の間でのみ標識化が行われることを意味する。

【0027】

非可逆的に標識化することによって、う蝕象牙質組織と反応するヒドラジン誘導体が、例えば、水、ＮａＣｌの水溶液、又はＮａＯＨの水溶液で濯ぐ間、除去されないということを意味する。

【0028】

いかなる特定の理論に拘束されることを望まないが、う蝕象牙質組織のヒドラジン誘導体との非可逆的標識化は、う蝕象牙質組織とヒドラジン誘導体の間で一つ又はそれ以上の共有結合の形成に起因すると信じられる。

【0029】

う蝕象牙質組織はエステル基を含み、そして健常な象牙質組織はアミド基を含むので、ヒドラジン誘導体は、これら両方において、アミドとは遅いにもかかわらず、カルボニル基とは反応すると期待される。しかしながら、本発明の発明者らは、ヒドラジン誘導体が健常な象牙質組織と混合したとき、何も他に反応を観察しなかった。

【0030】

う蝕象牙質組織のヒドラジン誘導体との、恐らくう蝕象牙質組織とヒドラジン誘導体の間の共有結合の形成を通した非可逆的標識化は、過剰なヒドラジン誘導体がう蝕象牙質組織を標識化する程度に影響を与えることなく濯ぐことにより、容易に除去され得る利点を有する。これは、より正確なう蝕の除去、即ち、健常な象牙質組織に影響を与えることなく、できるだけ多くのう蝕象牙質組織の除去を可能にする、何故ならば、実質的に全てのう蝕象牙質組織が、濯ぎの後、標識化されたまま留まるからである。

【0031】

対照的に、う蝕象牙質組織に非共有結合を形成する染料を用いる従来法における濯ぎ工程は、う蝕象牙質組織の一部のみを標識化することになる過剰の染料の除去に加えて、染料の相当量の除去に容易にもたらすことになるかもしれない。う蝕象牙質組織に静電結合のみを形成するアシッドレッド（Acid Red）などの染料で標識化されるう蝕象牙質組織を濯ぐことは、過剰染料の除去のみならず、即ち、う蝕象牙質組織の一部が染料で標識化された後で、う蝕象牙質組織に結合した染料の解放をもたらすことを本発明の発明者らが見つけた。もちろん、そのような部分的標識化は、全てのう蝕組織を除去することが望ましい場合役には立たない。

【0032】

本発明において、化学的手段は、ヒドラジン誘導体で標識化されたう蝕象牙質組織を除去するために使用される。この文書において、う蝕象牙質組織の化学的処置のための手段は、う蝕象牙質組織を除くため、それを軟化させ、及び／又は、溶解させるために使用し得る製剤又は組成物と定義される。そのような手段は、当該分野で公知であり、そしてマイナスの形で健常な象牙質組織に影響を与えない。その結果、う蝕象牙質組織を取り囲む健常な象牙質組織は、う蝕性組織の除去の間、例えば、レーザを基礎とする方法において、保護する必要がない。

【0033】

発明の第一の態様において、（ｉ）ヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物、及び（ｉｉ）う蝕象牙質組織の化学的処置のための手段；を含む、う蝕象牙質組織の検出と除去のための部品キットが提供される。

【0034】

発明の実施態様において、上記又は下記の通りに定義された部品キットが提供され、ここで、ヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物は、Ｒが発色団を含む、又はＮＨＮＨ₂と一緒に発色団を形成する化学基であることを特徴とする式（Ｉ）の化合物、
ＲＮＨＮＨ₂ （Ｉ）
である。発色団は、式（Ｉ）の化合物とう蝕象牙質組織の反応の前、その時、その後、形成されてもよい。

【0035】

この文書において、用語「発色団」は、その色をもたらす分子の部分を意味する。色は、分子のその部分が可視光のある波長を吸収し、そして伝達し、他のものを反射するとき発生する。

【0036】

式（Ｉ）のヒドラジン誘導体は、それ自身により、又はう蝕象牙質組織との反応の後、日光でヒトの肉眼に対して見えるようになり、即ち、ヒドラジン誘導体は可視光を反射する。この文書において、可視光は、約３８０ｎｍ〜約７５０ｎｍの範囲の波長を有する電磁放射として定義される。従って、検出のためにいかなる光学的器具も必要ではない。

【0037】

式（Ｉ）のヒドラジン誘導体は、例えば、カルバジド又はヒドラジドであってもよいことは、理解されるべきであろう。

【0038】

発明の更なる実施態様において、上記又は下記で定義する部品キットを提供し、ここで、ヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物は：

【化1】

【化2】

【化3】

（ここで、Ｍ又はＭ⁺は、Ｌｉ⁺、Ｋ⁺、及びＮａ⁺から選択される一価の金属イオン表わす）、及び

【化4】

から成るグループから選択される。

【0039】

発明の更なる実施態様において、以前の態様、実施態様又は特許請求範囲のいずれかに記載の部品キットが提供され、ここで、ヒドラジン誘導体は、式（Ｉａ）の化合物：

【化5】

であり、ここで、ＭはＬｉ⁺、Ｋ⁺及びＮａ⁺から選択される。ＭがＫ⁺であるとき、式（Ｉａ）の化合物は、ルシファーイエロー（Lucifer Yellow）と命名される。

【0040】

発明の更なる実施態様において、以前の態様、実施態様又は特許請求範囲のいずれかに記載の部品キットが提供され、ここで、ヒドラジン誘導体は、式（Ｉｂ）の化合物：

【化6】

であり、ここで、Ｍ⁺は、Ｌｉ⁺、Ｋ⁺及びＮａ⁺から選択される一価の金属イオンを表す。

【0041】

Ｍ⁺が、Ｎａ⁺であるとき、式（Ｉｂ）の化合物の商標名は、Alexa Fluor（登録商標）５９４のヒドラジドナトリウム塩である。

【0042】

式（Ｉｂ）の化合物の化学名は、６−（２−カルボキシ−５−（ヒドラジンカルボニル）フェニル）−１，２，２，１０，１０，１１−ヘキサメチル−２，１０−ジヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３，２−ｇ］ジキノリン−１１-イウム−４，８−ジイル）メタンスルホナートである。

【0043】

発明の更なる実施態様において、以前の態様、実施態様又は特許請求範囲のいずれかに記載の部品キットが提供され、ここで、ヒドラジン誘導体は、式（Ｉｃ）の化合物：

【化7】

であり、ここで、Ｍ⁺は、Ｌｉ⁺、Ｋ⁺及びＮａ⁺から選択される一価の金属イオンを表す。

【0044】

Ｍ⁺がＮａ⁺であるとき、式（Ｉｃ）の化合物の商標名は、Alexa 350である。

【0045】

発明の更なる実施態様において, 以前の態様、実施態様又は特許請求範囲のいずれかに記載の部品キットが提供され、ここで、ヒドラジン誘導体は、式（Ｉｄ）の化合物：

【化8】

である。

【0046】

式（Ｉｄ）の化合物の商標名は、５−（（（２−（カルボヒドラジノ）メチル）チオ）アセチル）アミノフルオレセインであり、一方、式（Ｉｄ）に対してChemdraw (CS Chemdraw Ultra, Cambridge Soft, USA)で提案される化学名は、５−（２−２−ヒドラジニル−２−オキソエチルチオ）アセトアミド）−２−（３−ヒドロキシ−６−オキソ−６Ｈ−キサンテン−９−イル）安息香酸である。

【0047】

上記又は下記に記載のヒドラジン誘導体は、一つ又はそれ以上のヒドラジン誘導体と混合してもいいことは理解されるべきである。

【0048】

ヒドラジン誘導体の例としては、HiLyte Fluor（登録商標）488 ヒドラジド、HiLyte Fluor（登録商標）555ヒドラジド、HiLyte Fluor（登録商標）594 ヒドラジド、HiLyte Fluor（登録商標）647ヒドラジド、HiLyte Fluor（登録商標）680ヒドラジドがある。

【0049】

発明の更なる実施態様において、上記又は下記で記載のヒドラジン誘導体は、水、グリセリン、プロピレングリコール、ミネラルオイル、エタノール、アセトン、ポリソルベート８０などの溶媒に溶解し、又は分散させてもよい。

【0050】

発明の更なる実施態様において、上記又は下記で記載した部品キットは、また、ヒドラジン誘導体をう蝕象牙質組織に適用するためのツールを含んでもよい。そのようなツールの例としては、ブラシ、シリンジ、ペン、繊維状のペレット、又はその他いかなる繊維状のウェブ（web）材料も含むが、それに限定されない。

【0051】

発明の更なる実施態様において、上記又は下記で記載した部品キットは、濯ぎ溶液を含むか、又はそれと一緒に使用される。例えば、濯ぎ溶液は、水、ブライン又はその他いかなる生理学的に許容可能な水溶液であってもよい。

【0052】

発明の更なる実施態様において、部品キットは、リドカイン又はベンゾカインなどの麻酔薬を含む。麻酔薬は、ヒドラジン誘導体と混合してもよく、又は部品キットの化学的手段に加えてもよい。

【0053】

発明の更なる実施態様において、上記又は下記で定義される部品キットが提供され、ここで、う蝕象牙質組織の化学的処置のための前記手段は、う蝕象牙質組織を軟化させ、及び／又は、溶解させることができる製剤である。

【0054】

発明の更なる実施態様において、更にう蝕象牙質組織の化学的処置のための前記手段により、軟化し、及び／又は、溶解したう蝕象牙質組織の機械的除去のための手段を含む上記又は下記で定義される部品キットが提供される。

【0055】

発明の更なる実施態様において、上記又は下記で定義される部品キットが提供され、ここで、う蝕象牙質組織の化学的処置のための手段は、第一の活性でう蝕溶解成分、及び粘膜に対する活性成分の攻撃性を低下させる第二の成分の形態の活性でう蝕溶解性の二成分液体、及び粘度増強物質を含む製剤である。製剤は液体製剤、例えば、水性組成物であってもよい。第一の活性でう蝕溶解成分は、例えば、凍結乾燥により、粉末として製造され、そして保持されてもよく、そして、その後、第二の成分と混合してもよい。粉末は、第二の成分と混合する前に、水などの液体に溶解してもよい。

【0056】

発明の更なる実施態様において、上記又は下記で定義される部品キットが提供され、ここで、活性でう蝕溶解成分は、Ｃｌ¹⁺ 、次亜塩素酸カリウム又は次亜塩素酸ナトリウムである。

【0057】

発明の更なる実施態様において、上記又は下記で定義される部品キットが提供され、ここで、粘膜に対する攻撃性を低下させる成分は、アミノ酸の混合物又はアミノエタンジオール、３−アミノ−２，３−ジメチルプロパノール及び１，５−ジアミノペンタノールの混合物を含む。アミノ酸は、脱プロトン化されてもよく、又は双性イオン形体で存在してもよい。

【0058】

発明の更なる実施態様において、上記又は下記で定義される部品キットが提供され、ここでアミノ酸は、異なった電荷状態；一つが中性、一つが実効負電荷、及び一つが実効正電荷を備えた三つのアミノ酸である。

【0059】

発明の更なる実施態様において、上記又は下記で定義される部品キットが提供され、ここで粘度増強剤は、ゲルである。

【0060】

発明の更なる実施態様において、上記又は下記で定義される部品キットが提供され、ここで、ゲルは、カルボキシメチルセルロース又は多糖物質である。

【0061】

上記又は下記で記載されるゲル物質は、二成分液体に粘性を与え、活性なう蝕溶解成分の粘膜に対する攻撃的影響を低下させる特性を有するべきである。

【0062】

発明の更なる実施態様において、上記又は下記で定義されるヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物を、更に含む製剤が提供される。製剤は水性組成物のような液体製剤であってもよい。ヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物は、以上又は以下で定義した通りである。

【0063】

発明の更なる実施態様において、上記又は下記で定義される製剤が提供され、ここでう蝕溶解成分は、＜１％（ｗ／ｗ）濃度の水性ＮａＯＣｌであり、及び粘膜に対する活性成分の攻撃性を低下させる成分は、グルタミン酸、ロイシン、リシン、ＮａＣｌ、高粘度のカルボキシメチルセルロースであるゲル物質及びヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物を含む。製剤は水性組成物のような液体製剤であってもよい。ヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物は、上記又は下記で定義された通りである。更に、製剤は、ＴｉＯ₂を含んでもよい。

【0064】

発明の更なる実施態様において、更に、染料を含む上記又は下記で記載される部品キット又は製剤が提供される。染料の例としては、エリスロシン（Ｅ−１２７Ｂ）及びヒドラジン誘導体を挙げられるが、それに限定されない。

【0065】

発明の更なる実施態様において、上記又は下記で記載される部品キットが提供され、ここで、う蝕性組織の化学的処置のための手段としては、製剤Carisolv（登録商標）がある。製剤Carisolv（登録商標）は、ＮａＯＣｌを１〜２％（ｗ／ｗ）濃度有する第一の活性成分；ｐＨが９．５〜１０．５の間であり、グルタミン酸、ロイシン及びリシンを０．５〜１．５％（ｗ／ｗ）の混合物、及びＮａＣｌを０．５％（ｗ／ｗ）含む第二の成分；及び高粘度のカルボキシメチルセルロースゲルを２．５〜５％（ｗ／ｗ）を含む水性組成物である。組成物は、更に、Ｎａ₂−エリスロシン（着色剤）を含んでもよい。

【0066】

発明の更なる態様において、上記又は下記で記載される部品キットが提供され、ここで、う蝕性組織の化学的処置のための手段としては、製剤PerioPlus（登録商標）がある。製剤PerioPlus（登録商標）は、ＮａＯＣｌを１〜２％（ｗ／ｗ）濃度有する第一の活性成分；ｐＨが９．５〜１０．５の間であり、グルタミン酸、ロイシン及びリシンの混合物０．５〜１．５％（ｗ／ｗ）、及びＮａＣｌを０．５％（ｗ／ｗ）、ＴｉＯ₂を０．０３％（ｗ／ｗ）含む第二の成分；及び中粘度のカルボキシメチルセルロースゲルを２．５〜５％（ｗ／ｗ）を含む水性組成物である。

【0067】

発明の更なる実施態様において、上記又は下記で記載される部品キットが提供され、ここで、う蝕性組織の化学的処置のための手段としては、ルシファーイエローなどの式（Ｉ）のヒドラジン誘導体で代替した製剤Carisolv（登録商標）がある。それ故、う蝕性組織の化学的処置のための手段としては、ＮａＯＣｌ１〜２％（ｗ／ｗ）濃度有する第一の活性成分；ｐＨが１０と同等又はそれ以下であり、グルタミン酸、ロイシン及びリシンの混合物０．２〜０．４％（ｗ／ｗ）、及びＮａＣｌを０．３％（ｗ／ｗ）含む第二の成分；及び高粘度のカルボキシメチルセルロースゲルを３％（ｗ／ｗ）含む水性組成物である製剤であってもよい。組成物は、更に、Ｎａ₂−エリスロシン（着色剤）を含んでもよい。高粘度のカルボキシメチルセルロースは、１％Ｈ₂Ｏ（２５℃）中で、１５００〜３０００センチポアズ（ｃＰ）として定義される。

【0068】

発明の更なる実施態様において、上記又は下記で記載される歯根う蝕の選択的検出及び処置のための部品キットの使用が提供される。

【0069】

発明の更なる実施態様において、上記又は下記で記載される歯の根管におけるう蝕の選択的検出及び処置のための部品キットの使用が提供される。

【0070】

発明の更なる実施態様において、上記又は下記で記載される歯根う蝕の選択的検出及び処置のための部品キットの使用が提供される。

【0071】

発明の更なる実施態様において、上記又は下記で記載される歯根う蝕の選択的検出及び処置のための部品キットの使用が提供される。

【0072】

発明の更なる実施態様において、第一の活性う蝕溶解性成分、及び粘膜に対する活性成分の攻撃性を低下させる第二の成分の形態の活性う蝕溶解性の二成分液体、ゲル物質及び一つ又はそれ以上のヒドラジン誘導体である化合物を含むう蝕の化学的処置のための製剤が提供される。ヒドラジン誘導体は、上記又は下記で定義される式（Ｉ）のヒドラジン誘導体であってもよい。一つの実施態様において、ヒドラジン誘導体は、ルシファーイエローである。う蝕溶解性成分は、Ｃｌ¹⁺、次亜塩素酸カリウム、次亜塩素酸ナトリウムであってもよい。粘膜に対する活性成分の攻撃性を低下させる成分は、アミノ酸混合物、又はアミノエタンジオール、１−アミノ−３，３−ジメチルプロパノール及び１，５−ジアミノペンタノールの混合物であってもよい。粘膜に対する活性成分の攻撃性を低下させる成分は、異なった電荷状態：一つが中性、一つが実効負電荷、及び一つが実効正電荷を備えた三つのアミノ酸を含んでもよい。ゲル物質はカルボキシメチルセルロース又は多糖物質であってもよい。カルボキシメチルセルロースは、高粘度のカルボキシメチルセルロースであってもよい。

【0073】

発明の更なる実施態様において、ＮａＯＣｌを１〜２％（ｗ／ｗ）濃度有する第一の活性成分；１０と同等又はそれ以下のｐＨ、そしてグルタミン酸、ロイシン及びリシンを０．２〜０．４％（ｗ／ｗ）、及びＮａＣｌを０．５％（ｗ／ｗ）含む混合物を含む第二の成分；及び高粘度カルボキシメチルセルロースゲル３％（ｗ／ｗ）中のＮａ₂−エリスロシン（着色剤）及びルシファーイエローを含む水性組成物である製剤が提供される。製剤は、更に、ＴｉＯ₂を、例えば、０．０３％（ｗ／ｗ）の濃度で含んでもよい。ルシファーイエローの濃度は、１５〜５０ｍＭの間であってもよい。

【0074】

発明の更なる態様において、（ｉ）ヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物；及び（ｉｉ）う蝕象牙質組織の化学的処置用の手段を含む、う蝕象牙質組織の検出と除去用の部品キットを用いるう蝕象牙質組織の標識化と除去ための方法が提供される。一つ又はそれ以上のヒドラジン誘導体は、上記又は下記で定義した通りの式（Ｉ）の化合物であってもよい。

【0075】

発明の更なる態様において、第一の活性でう蝕溶解性の成分、及び粘膜に対する活性成分の攻撃性を低下させる第二の成分の形態の活性でう蝕溶解性の二成分の液体、ゲル物質、及びヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物を含む製剤を用いるう蝕象牙質組織の標識化と除去のための方法が提供される。ヒドラジン誘導体は、上記又は下記で定義される通りの式（Ｉ）のヒドラジン誘導体であってもよい。一つの実施態様において、ヒドラジン誘導体は、ルシファーイエローである。う蝕溶解性の成分は、Ｃｌ¹⁺、次亜塩素酸カリウム、次亜塩素酸ナトリウムであってもよい。粘膜に対する活性成分の攻撃性を低下させる成分は、アミノ酸混合物、又はアミノエタンジオール、１−アミノ−３，３−ジメチルプロパノール及び１，５−ジアミノペンタノールの混合物であってもよい。粘膜に対する活性成分の攻撃性を低下させる成分は、異なった電荷状態；一つが中性、一つが実効負電荷、及び一つが実効正電荷を備えた三つのアミノ酸を含んでもよい。ゲル物質はカルボキシメチルセルロース又は多糖物質であってもよい。カルボキシメチルセルロースは、高粘度のカルボキシメチルセルロースであってもよい。

【0076】

発明の更なる態様において：
（ｉ）う蝕象牙質組織を含む一つ又はそれ以上の歯の上にヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物を適用することによりう蝕象牙質組織を標識化すること、
（ｉｉ）う蝕象牙質組織の化学的処置用の手段を標識化う蝕組織に対して適用すること、及び
（ｉｉｉ）機械的手段により標識化したう蝕象牙質組織を除去すること、
の工程を含む、う蝕象牙質組織の標識化及び除去のための方法が提供される。

【0077】

発明の更なる態様において：
（ｉ）第一の活性でう蝕溶解性の成分、及び粘膜に対する活性成分の攻撃性を低下させる第二の成分の形態の活性でう蝕溶解性の二成分の液体、ゲル物質、及びヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物、う蝕象牙質組織を含む一つ又はそれ以上の歯を含む製剤の適用によるう蝕象牙質組織の標識化、及び
（ｉｉ）機械的手段による標識化う蝕象牙質組織の除去、
の工程を含むう蝕象牙質組織の標識化と除去のための方法が提供される。

【0078】

発明の更なる態様において：
（ｉ）う蝕により患部面上にヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物を適用することによりう蝕組織を標識化すること、
（ｉｉ）標識化したう蝕組織へ化学的処置のための手段を適用すること、及び
（ｉｉｉ）標識化したう蝕組織を機械的手段により取り除くこと、
の工程を含む歯根う蝕の標識化と処置のための方法が提供される。

【0079】

発明の更なる態様において：
（ｉ）第一の活性でう蝕溶解性の成分、及び粘膜に対する活性成分の攻撃性を低下させる第二の成分の形態の活性でう蝕溶解性の二成分の液体、ゲル物質、及びヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物、う蝕象牙質組織を含む一つ又はそれ以上の歯を含む製剤の適用によるう蝕象牙質組織の標識化、及び
（ｉｉ）機械的手段により標識化されたう蝕象牙質組織の除去、
の工程を含む歯根う蝕の標識化と処置のための方法が提供される。

【0080】

発明の更なる態様において：
（ｉ）歯の根管に、ヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物を適用することによりう蝕性組織を標識化すること、
（ｉｉ）う蝕性組織の化学的処置のための手段を標識化されたう蝕性組織に適用すること、及び
（ｉｉｉ）標識化されたう蝕性組織を機械的手段により取り除くこと、
の工程を含む歯の根管の標識化と処置のための方法が提供される。

【0081】

発明の更なる態様において：
（ｉ）第一の活性でう蝕溶解性の成分、及び粘膜に対する活性成分の攻撃性を低下させる第二の成分の形態の活性でう蝕溶解性の二成分の液体、ゲル物質、及びヒドラジン誘導体である一つ又はそれ以上の化合物、う蝕象牙質組織を含む一つ又はそれ以上の歯を含む製剤の適用によるう蝕象牙質組織の標識化、及び
（ｉｉｉ）機械的手段により標識化されたう蝕象牙質組織の除去；
の工程を含む歯の根管の標識化と処置のための方法が提供される。

【0082】

発明の更なる実施態様において、更に、工程（ｉ）、工程（ｉｉ）、及び／又は、工程（ｉｉｉ）の後で、例えば、濯ぎ工程を含む上記又は下記に記載の方法が提供される。

【0083】

発明の更なる実施態様において、上記又は下記に記載の方法が提供され、ここで、標識化う蝕象牙質組織の機械的除去のための手段は掻爬用器具である。

【0084】

発明の更なる実施態様において、上記又は下記で記載された方法が提供され、ここで、一つ又はそれ以上のヒドラジン誘導体は、上記又は下記で記載された通りである。

【0085】

更なる実施態様において、上記又は下記で定義する通りのヒドラジン誘導体と一緒に、恐らく、健常な象牙質の存在下で、標識化したう蝕性組織を含むう蝕象牙質組織の標識化及び除去のための方法が提供される。例えば、ヒドラジン誘導体は、上記又は下記で定義する通り、式（Ｉ）の化合物であってもよい。方法は、更に、濯ぎ工程を含んでもよい。更に、方法は、上記又は下記で定義した通りう蝕象牙質組織の処置のための化学的手段で標識化されたう蝕性組織の処置を含んでもよい。例えば、化学的手段は、製剤Carisolv（登録商標）であってもよい。

【0086】

発明の更なる実施態様において、上記又は下記で記載された部品キット又は製剤を用いてう蝕象牙質組織の標識化と除去のための方法が提供される。

【0087】

上記又は下記で記載された方法は、繰り返し使用してもよいことは理解されるべきである。

【0088】

発明は以下の実施例で説明されるが、それに限定されない。

【実施例】

【0089】

以下の実施例で使用される化学物質は、Ultradent、Sigma、Aldrich及びInvitrogen社からそれぞれ購入した。SEEKは、Ultradent Products社（ＵＳＡ）から購入し、ルシファーイエロー、即ち、ＭがＫ⁺である上記化合物Ｉａは、Sigma社から購入した。アシッドレッド１（Acid red 1）は、Aldrich社から購入した。Alexa fluor (登録商標)594ナトリウム塩、Alexa-350、及び５−（（（２−（カルボヒドラジノ）メチル）チオ）アセチル）アミノフルオレセインは、Invitrogen社から購入した。

【0090】

アシッドレッド１の化学構造は、以下の通りに表示される。

【化9】

【0091】

略号
ＦＴＩＲ：フーリエ変換赤外分光法；
ＴＯＦ ＳＩＭＳ：飛行時間型二次イオン化質量分析法；
ＦＴ：フーリエ変換；
ＩＲ：赤外分光法；
ｕ：質量／電荷比；
ｓ：秒；
ｎｍ：ナノメートル；
ＫｅＶ：キロ電子ボルト；
ｐＡ：ピコアンペア；
ａｍｕ：原子質量単位；
ＭＱ：超純水：ミリ−Ｑ−システム、ミリポア（ＵＳＡ）からの；
ｃＰ：センチポアズ；
ｗ／ｗ：溶質の質量と溶液のｗ／ｗ；
Ｍ：モル／リットル；
ｍＭ：ミリモル／リットル；

【0092】

〔実施例１〕
以前に歯科修復を全く行っていない二つの抜歯したヒト永久歯は、厳しいう蝕組織状態の故に選択され、そして抜歯後一週間以内にＦＴＩＲで分析した。う蝕歯の病変の最外側部分が除去された。残留したう蝕性組織は、変色した、軟質の、感染したう蝕性組織を有する一つの外層、及び未着色として見られる一つの内層の二層に分けられ、触覚的手法で残留した健常な象牙質の予測硬さまで掘り出される。各々の歯に対して、一つのサンプルは、健常な象牙質から採取され、そして別のサンプルは、う蝕組織の内層から採取された。純水でインキュベーションした後、それらは、雰囲気温度で乾燥のために放置した。各々の歯サンプルの乾燥質量は、約１ｍｇであった。その後、各々のサンプルは、合計ペレット質量１００ｍｇでその後のＦＴＩＲ試験を行う前に、臭化カリウム（ＫＢｒ）と混合した。ＩＲ分析は、Mattson Cygnus 100のＦＴＩＲ分光光度計を用いて、解像度４ｃｍ^-1で行った。器具は、大気中のＣＯ₂及びＨ₂Ｏを除去するために、分析器具用の品質の空気でパージし、乾燥し、そしてBalstron type 75-60のコンディショナで精製した。スペクトルは、ＦＴＩＲソフトウエアを用いてベースラインを補正した。全てのスペクトルに対して、同一の波数位置が選択された。各々のスペクトルは、１００スキャンして得られた。ピーク又は特定のショルダを強化し、更に、調査するために、フーリエのセルフデコンボリューション(Self-Deconvolution)技術を用い、次に参照として設定した無病息災の（sound healthy）象牙質とのスペクトル減算処置を行った。

【0093】

図１ａは、得られたデコンボリュートしたＦＴＩＲスペクトルを示す。曲線Ａ及びＢは、二つの抜歯された歯の健常な象牙質組織から採取されたサンプルから得られた。曲線Ｃ及びＤは、二つの抜歯された歯のう蝕性組織の内層から採取されたサンプルから得られた。精密検査より、曲線Ｃ及びＤは、１７４０ｃｍ^-1において、小さいピーク（「ショルダ」）を示した。このピークは、曲線Ａ及びＢでは存在しない。う蝕組織において１７４０ｃｍ^-1におけるピークの存在は、既に、ＷＯ第２００８／０４８１７０号で報告され、そして、それはう蝕組織におけるエステル基の存在に起因する。

【0094】

図１ｂは、曲線Ｂが図１ａにおける曲線Ｃ及び曲線Ｄから減算処置され、曲線Ｃ′及び曲線Ｄ′が得られたＦＴＩＲスペクトルを示す。１７４０ｃｍ^-1におけるピークは、曲線Ｃ′及びＤ′において非常に明確に表れる。これは、エステル基がう蝕性象牙質組織にのみ表れ、そして健常な象牙質組織には表れない明確な証拠である。

【0095】

〔実施例２〕
この実験は、追加色のＳＥＥＫ、アシッドレッド１、ルシファーイエロー、ルシファーイエローとアシッドレッド１の組合せ、又は、５−（２−２−ヒドラジニル−２−オキソエチルチオ）アセトアミド）−２−（３−ヒドロキシ−６−オキソ−６Ｈ−キサンテン−９−イル）安息香酸、Alexa Fluor（登録商標）594及びAlexa 350が、臨床的にう蝕フリーと表示される表面に掘り出した後、う蝕面に結合するか否かを判断することを目的とする。実験は４日間行った。

【0096】

全てのう蝕の感染歯は、硬化後、のこ引きの前にホルダとして使用される（のこぎりのブランド名：Zaw Micro Tone, German）オルトアクリルゲルに加えられた。厚さ１５０μｍであるスライス板は、試験すべき各々の色で終夜放置した（１日目）。２日目に、着色剤を、ＭＱ水でスライス板を濯ぐことにより洗浄し、そして歯の部分は、顕微鏡で（６．７倍：可視光）、ＵＶで（顕微鏡なし）、又は蛍光顕微鏡（１００倍）で写真を撮った。その後で、水性の塩溶液（ＮａＣｌ：１Ｍ）をスライス板に加え、終夜インキュベーションした。３日目に、スライス板をＭＱ水で洗浄し、そしてその後、同一の検出法を上記で記載の通りに使用した。最終的に、歯のスライス板は、ＮａＯＨの水溶液（０．５Ｍ）に終夜曝した。洗浄と検出の経路は、その後、以前に記載した通りに繰り返した（４日目）。

【0097】

１ＭのＮａＣｌでインキュベーションした後（２日目）、スライス板を検査して、アシッドレッド１で処置したスライス板は変色し、残留した染色部は、ほとんどなかったことが示された。ＮａＯＨで洗浄した後（４日目）、アシッドレッド１で処置したスライス板の着色は、可視光を用いては全く検出されず、そして顕微鏡ではわずかに検出されるのみであった。一方、ルシファーイエロー、ルシファーイエローとアシッドレッド１の組合せ、１，５−（２−２−ヒドラジニル−２−オキソエチルチオ）アセトアミド）−２−（３−ヒドロキシ−６−オキソ−６Ｈ−キサンテン−９−イル）安息香酸、Alexa Fluor（登録商標）594及び Alexa350で処置したスライス板は、蛍光顕微鏡で検出された通り、４日後で未だ、着色剤が含まれていた。また、ＳＥＥＫで処置されたスライス板は、色がエナメル質、健常な象牙質及び根管に広がっているように見えるが、染色されたまま残留していた。

【0098】

図２ａは、ＮａＣｌ及びＮａＯＨでインキュベーションした後、５−（２−２−ヒドラジニル−２−オキソエチルチオ）アセトアミド）−２−（３−ヒドロキシ−６−オキソ−６Ｈ−キサンテン−９−イル）安息香酸で処置した歯のスライス板の染色を示す。

【0099】

図２ｂは、ＮａＣＬ及びＮａＯＨで処置した後、ルシファーイエローナトリウム塩で処置した歯のスライス板の染色を示す。染色領域は、円と（１）で表示した。

【0100】

図２ｃは、ＮａＣＬ及びＮａＯＨで処置した後、Alexa Fluor（登録商標）594で処置した歯のスライス板の染色を示す。

【0101】

アシッドレッド１は、可逆的方法で、感染した歯のう蝕組織に結合するが、一方、５−（２−２−ヒドラジニル−２−オキソエチルチオ）アセトアミド）−２−（３−ヒドロキシ−６−オキソ−６Ｈ−キサンテン−９−イル）安息香酸、ルシファーイエロー、Alexa Fluor（登録商標）及びAlexa 350は、非可逆的に、感染した歯のう蝕象牙質組織に結合する。アシッドレッド１が可逆的結合する理由は、それは、う蝕性組織に静電結合のみ形成することが可能であり得ることを結論付けられる。ＳＥＥＫは、非特異方法で、う蝕性組織、健常な象牙質及び根管に結合する。

【0102】

〔実施例３〕
以前に歯科修復されたことのない抜歯されたヒト永久歯が、厳しいう蝕組織状態に基づき選択され、そして抜歯後、一週間以内にＦＴＩＲで分析した。う蝕歯の病変の最外側部分は除去された。残留したう蝕性組織は、二つの層：一つは変色した、軟質の、感染したう蝕性組織；及びもう一つは、触覚的手法で制御した、残留した健常な象牙質の観察された未着色の硬質面へ掘り出す内面に分割される。

【0103】

健常な象牙質組織と最内層からのう蝕性象牙質組織を採取した。この健常な象牙質組織サンプルとう蝕象牙質組織サンプルは、各々三つのサンプルに分けた。

【0104】

健常な象牙質組織サンプル（２６ｍｇ）は、以下通りに分けられ、処置される。サンプル１、以後Ｓ１と命名する（１１ｍｇ）は、純水で繰り返し洗浄し、そして真空下に置かれた未処置サンプル、即ち、参照サンプル、として定義される。第二のサンプル、以後サンプルＳ２（８ｍｇ）と命名するは、純水で激しく洗浄した。その後、サンプルＳ２は、終夜の反応後、水と塩（ＮａＣｌ、１Ｍ）で洗浄したヒドラジン誘導体ルシファーイエロー（１３ｍＭ）の水溶液と混合した。結合したヒドラジン誘導体ルシファーイエローの蛍光は、ＵＶランプで検査した。次に、サンプルＳ２を脱プロトン化するために、ＮａＯＨ（０．５Ｍ）水溶液を二回添加し、そして最後に、再び、ＭＱ水で濯ぎ、そして真空乾燥した。最終工程は、結合が静電特性を有するか否かを決めるために使用された。第三のサンプルは、以後サンプルＳ３（７ｍｇ）と命名し、そして最終的手法は、ＮａＢＨ₄（０．５Ｍ／エタノール）で処置し、そして、ヒドラジン誘導体ルシファーイエロー（１３ｍＭ）の水溶液を加える前に、アルデヒドとケトンを還元するために高濃度のエタノールで洗浄し、乾燥して、分析する前に純水で濯ぐことを繰り返した。

【0105】

う蝕象牙質組織サンプルは、上記の健常な象牙質サンプルと同じ方法で処置した。サンプルはＳ４、Ｓ５及びＳ６と命名した。サンプルＳ４は上記のサンプルＳ１と同じ処置を行った。サンプルＳ５は上記のサンプルＳ２と同じ処置を行った。サンプルＳ６は上記のサンプルＳ３と同じ処置を行った。

【0106】

その結果、合計６サンプル（健常な象牙質組織３サンプル、及びう蝕象牙質組織から３サンプル）は、抜歯後１週間以内でＦＴＩＲ分析を行った。ＩＲ分析は、Nicolet 6700 FTIR分光光度計を用いて行った。Smart Orbit diamond micro-ATR（減衰全反射）器具は、サンプルから直接スペクトルを得るために使用した。

【0107】

器具は、大気中のＣＯ₂及びＨ₂Ｏを除去するために、分析器具用の品質の空気でパージし、乾燥し、Balstron type 75-60コンディショナで精製した。スペクトルは、ＦＴＩＲソフトウエアを用いてベースラインを補正した。全てのスペクトルに対して、同じ波数位置が選択された。各々のスペクトルは、１００スキャンから得られ、そして解像度は４ｃｍ^-1であった。

【0108】

図３ａは、サンプルＳ１、Ｓ２及びＳ３に対して、３７００〜２６００ｃｍ^-1の間で得られたＦＴＩＲスペクトルを示す。同じピークがＳ１、Ｓ２及びＳ３に対して現れた。

【0109】

図３ｂは、サンプルＳ４，Ｓ５及びＳ６に対して、３７００〜２６００ｃｍ^-1の間で得られたＦＴＩＲスペクトルを示す。同じピークが、Ｓ４、Ｓ５及びＳ６に対して現れたが、２８５０ｃｍ^-1の領域では、健常な象牙質組織サンプルと異なっていた。

【0110】

図３ｃは、サンプルＳ１，Ｓ２及びＳ３に対して、１８００〜４００ｃｍ^-1の間で得られたＦＴＩＲスペクトルを示す。Ｓ１、Ｓ２及びＳ３から得られた曲線は、１７４０ｃｍ^-1においてピークを示さなかった。

【0111】

図３ｄは、サンプルＳ４，Ｓ５及びＳ６に対して、１８００〜４００ｃｍ^-1の間で得られたＦＴＩＲスペクトルを示す。Ｓ４から得られた曲線は、１７４０ｃｍ^-1においてピークを示した。Ｓ５及びＳ６に対して得られた曲線は、１７４０ｃｍ^-1において、ピークを示さなかった。

【0112】

図３ｅは、波数１８００〜１６８０ｃｍ^-1において、サンプルＳ４，Ｓ５、Ｓ６及びＳ１（象牙質参照サンプル）に対するＦＴＩＲスペクトルの強化領域を示す。

【0113】

図３ａ及び３ｃから、健常な象牙質とヒドラジン誘導体のルシファーイエローの間では、反応が起こらないことを結論付けることができる。図３ｄから、う蝕象牙質組織とヒドラジン誘導体のルシファーイエローの間で反応が起こることを結論付けることができるが、何故ならば、１７４０ｃｍ^-1におけるピークは、サンプルＳ５及びＳ６に対して、最早、存在しないからである。従って、ヒドラジン誘導体のルシファーイエローは、選択的にう蝕象牙質組織と反応する。

【0114】

〔実施例４〕
ＦＴＩＲ及びＴＯＦ−ＳＩＭＳ分析が、作業中の歯科医師の正確さで選択され、推定されるう蝕性組織の最内層から成るサンプルグループで行われた。サンプルは、う蝕性組織の内層の歯４〜６個（３７ｍｇ）からプールされた。プールされたサンプルは、一つはヒドラジン誘導体のルシファーイエローに曝され、そして、更に、ＴＯＦ−ＳＩＭＳで分析し、他方は、ＦＴＩＲ−ＡＴＲでのみ分析する二つのサブグループに分けられた。ヒドラジン誘導体であるルシファーイエローの水溶液（１．８ｍＭ）を内層のう蝕性組織（１９ｍｇ）に加え、そして１時間曝した後、ＮａＯＨの水溶液（０．５Ｍ）で洗浄し、そして真空乾燥の前に純水で洗浄した。抜歯から掘り出しまでの出来事は、乾燥と物質の粉砕のために数時間延長された。その後、ＦＴＩＲ−ＡＴＲ及びＴＯＦ−ＳＩＭＳの両方を行った。ＦＴＩＲ−ＡＴＲは、上記の実施例３で記載した通りに行われた。飛行時間型二次質量分析は、材料の表面から下へ、〜１ｎｍまでの分子組成の情報を与える感度の高い表面分析である。方法は、主イオンのパルスビームがサンプルホルダに投影された後、サンプル表面から放出される電荷を帯びた二次質量イオンの分離を基礎としている。使用された主イオンは、０．１２ｐＡにおけるビーム（電流）を備えた２５ＫｅＶのＢｉ³⁺であった。各々のサンプルは、両面テープに取り付け、ＴＯＦ−ＳＩＭＳ器具(TOF-SIMS IV, CAMECA/IONTOF, GmbH, Germany)で分析した。正の二次イオンの質量スペクトルは、２００×２００μｍ²のサイスでサンプルの異なった領域から記録し、そして質量分析器で分離し、次に、ＴＯＦ−ＳＩＭＳとリンクしたイオン種の応用(IonTof, GmbH, Germany, ver. 4.1)からの公知の質量スペクトルと比較した。負の二次イオンの質量スペクトルは記録したが、いかなる情報も与えなかった。各々の二次イオンの単数のスペクトル、複数のスペクトルのデータ入手時間は１００ｓであった。

【0115】

図４ａは、う蝕象牙質組織に対する正のＴＯＦ−ＳＩＭＳスペクトルを示す。上段のスペクトルは、粉砕したが、ヒドラジンで処置していないう蝕象牙質組織のサンプル（即ち、う蝕象牙質組織の参照サンプル）に対して記録したものである。下段のスペクトルは、ヒドラジン誘導体のルシファーイエローで処置したう蝕象牙質組織のサンプルに対して記録したものである。

【0116】

図４ｂは、健常な象牙質組織に対する正のＴＯＦ−ＳＩＭＳスペクトルを示す。上段のスペクトルは、粉砕したが、ヒドラジンで処置していない健常な象牙質組織のサンプル（即ち、健常な象牙質組織の参照サンプル）に対して記録したものである。下段のスペクトルは、ヒドラジン誘導体のルシファーイエローで処置した健常な象牙質組織のサンプルに対して記録したものである。

【0117】

これらのスペクトルは、う蝕象牙質組織の参照サンプルが、６５２．５６ｕにおいて最大の質量を保持するが、一方ヒドラジン誘導体のルシファーイエローで処置したう蝕象牙質組織は、高々１５０５．５６ｕで質量を有することを示す。ルシファーイエローは、６００ｕより高い質量を保持しない（示されていない）。従って、６５２．５６ｕ（図４ａ、上段スペクトル）においてう蝕象牙質組織の参照サンプルに対して見られたものより高い質量は、ヒドラジン誘導体のルシファーイエローに共有結合したう蝕象牙質組織の構造に起源にする（図４ａ、下段スペクトル）と結論付けることができる。Ｃ５ＮＯ２に対応する１０６の質量ユニットで繰り返し異なって観察された質量ユニットのパターンは、う蝕性組織に共有結合したルシファーイエローに帰属するかもしれない。このパターンは、健常な象牙質組織に対しては検出されなかった。ルシファーイエローで処置した健常な象牙質サンプルの正の質量スペクトル（図４ｂ、下段スペクトル）は、未処置の健常な象牙質サンプルの正の質量スペクトルと類似していた。両方は、鉱物のＣａＯと関連する５６の質量ユニットで異なった繰り返し質量を保持している。従って、ルシファーイエローは、健常な象牙質とは反応しなかったことが結論付けられる。従って、ヒドラジン誘導体であるルシファーイエローは、選択的にう蝕象牙質組織と反応することになる。

【0118】

〔実施例５〕
小臼歯のう蝕象牙質組織は、キャビティを得るために、Carisolv（登録商標）で処置し、そしてその後、ヒドラジン誘導体Alexa 594の水溶液で染色した。ヒドラジン誘導体Alexa 594の水溶液の濃度は、１５〜５０ｍＭであった。結果として、キャビティは、濃い暗青色を示した。Carisolv（登録商標）は、キャビティに加え、そして、う蝕なしのレベルまで到達するために、掘り出しは、Mediteam Dental ABからの手動器具で行った。ＭＱ水で濯ぎを行い、そしてう蝕なしが現れた面を示す写真を撮った。歯科医師は、この面の触覚制御を行い、面はう蝕なしであることを確認した。う蝕が全く残留していないことを確実に確認するために、Alexa 594で更に染色することを試み、キャビティ中心部に非常にわずかの染色が、生成したのみであった。若干染色した表面は、Carisolv（登録商標）での処置にかけて、次いで、手動器具で掘り出した。その結果、得られた表面を染色する最終の試みが、Alexa 594でなされたが、いかなる染色も起こらなかった。従って、歯の全てのう蝕象牙質組織が除去されたと結論付けた。Alexa 594などのヒドラジン誘導体は、う蝕象牙質組織の選択的検出と除去のために、Carisolv（登録商標）などのう蝕象牙質組織用の化学的手段との組合せで使用できることも結論付けた。更に、Alexa 594での染色は、歯科医師により行われる触覚制御により、う蝕象牙質組織を検出するために、良好で、そして感度の高い方法であることを結論付けた。

【0119】

〔実施例６〕
１５〜５０ｍＭ濃度でのヒドラジン誘導体Alexa 594の水溶液で染色した小臼歯のう蝕象牙質組織は、染色が視覚的に検出されなくなるまで、歯科医師のドリルによる機械的処置にかけた。１５〜５０ｍＭ濃度でのヒドラジン誘導体Alexa 594の水溶液を加え、そして染色を発生させた。染色面は、染色を視覚的に検出されなくなるまで掘り出しを行った。歯科医師は表面を視覚的、そして触覚的器具で検査し、そして、表面にはう蝕が存在しないことを結論付けた。驚くべきことに、１５〜５０ｍＭ濃度でのヒドラジン誘導体Alexa 594の水溶液の、う蝕が存在しない表面への添加は、染色をもたらした。再び、染色面の掘り出しを、染色が見えなくなるまで行った。１５〜５０ｍＭ濃度でのヒドラジン誘導体Alexa 594の水溶液の添加を行い、そして染色がもたらされた。この実施例における上記の掘り出しと染色は、数回繰り返した。掘り出しが実施された後、染色が常に発生する結果であった。歯科医師のドリルと組み合わせて、ヒドラジン誘導体を用いたう蝕象牙質組織の選択的検出と除去は不可能であることを結論付けた。う蝕象牙質組織の選択的検出と除去のためのうまくいかない試みは、スメア層の形成に起因するかもしれないことが示唆される。これは、実施例５で記載したう蝕性象牙質組織の処置のために、化学的手段との組合せにおけるヒドラジン誘導体を用いた成功したう蝕象牙質組織の選択的検出及び除去と対比をなす。

【図1a】

【図1b】

【図2a】

【図2b】

【図2c】

【図3a】

【図3b】

【図3c】

【図3d】

【図3e】

【図4a】

【図4b】