特許 5953108 スクリーニング方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5953108

(24)【登録日】2016年6月17日

(45)【発行日】2016年7月20日

(54)【発明の名称】スクリーニング方法

(51)【国際特許分類】

   C12Q 1/02 20060101AFI20160707BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20160707BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20160707BHJP

   A61K 8/96 20060101ALI20160707BHJP

   A61Q 19/02 20060101ALI20160707BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20160707BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20160707BHJP

   A61P 9/12 20060101ALI20160707BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20160707BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20160707BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20160707BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20160707BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20160707BHJP

   G01N 33/15 20060101ALI20160707BHJP

   G01N 33/50 20060101ALI20160707BHJP

【ＦＩ】

   C12Q1/02

   A61K45/00

   A61P43/00 111

   A61K8/96

   A61Q19/02

   A61P17/00

   A61P9/10

   A61P9/10 103

   A61P9/12

   A61P35/00

   A61P27/02

   A61P19/02

   A61P29/00

   A61P17/06

   G01N33/15 Z

   G01N33/50 Z

【請求項の数】8

【全頁数】16

(21)【出願番号】特願2012-110959(P2012-110959)

(22)【出願日】2012年5月14日

(65)【公開番号】特開2013-236579(P2013-236579A)

(43)【公開日】2013年11月28日

【審査請求日】2015年2月19日

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用 平成２４年１月１９日 販促媒体「ホワイトショットＣＸ 新製品ガイド」の当該新製品発売予定の支店責任者への送付により発表

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用 平成２３年１１月２２日 ポーラ化成工業株式会社ホームページへの掲載により発表（掲載アドレス ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｏｌａ−ｒｍ．ｃｏ．ｊｐ／ｒｄ／ｒｅｌｅａｓｅ．ｈｔｍｌ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｏｌａ−ｒｍ．ｃｏ．ｊｐ／ｐｄｆ／ｒｅｌｅａｓｅ＿２０１１１１２２．ｐｄｆ）

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用 平成２３年１１月２９日 グランドハイアット東京２階会議室コリアンダーでの記者会見において発表

(73)【特許権者】

【識別番号】000113470

【氏名又は名称】ポーラ化成工業株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100100549

【弁理士】

【氏名又は名称】川口 嘉之

(74)【代理人】

【識別番号】100126505

【弁理士】

【氏名又は名称】佐貫 伸一

(74)【代理人】

【識別番号】100131392

【弁理士】

【氏名又は名称】丹羽 武司

(74)【代理人】

【識別番号】100151596

【弁理士】

【氏名又は名称】下田 俊明

(72)【発明者】

【氏名】本川 智紀

【審査官】 荒木 英則

(56)【参考文献】

【文献】 特開２００５−２００４０８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００３−１１３０２７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００５−１３２７８４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００５−０７５７７１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００７−１４５８５０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 多田明弘ら，BIO INDUSRTY，２００５年 ９月１２日，22(9)，pp.12-17

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ１２Ｑ １／００− １／０２

Ａ６１Ｋ ８／００− ８／９６

Ａ６１Ｋ ４５／００−４５／０８

Ａ６１Ｐ １／００−４３／００

Ａ６１Ｑ １／００−１９／０２

Ｇ０１Ｎ ３３／００−３３／５０

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＷＰＩＤＳ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

Ｇｏｏｇｌｅ

Ｇｏｏｇｌｅ Ｓｃｈｏｌａｒ

ＰｕｂＭｅｄ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

アドレノメジュリン（ＡＤＭ：Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ）情報伝達系の活性化を阻害する成分のスクリーニング方法であって、
被験物質を添加し、さらにＡＤＭ情報伝達系の活性化因子を付与した細胞の形態を、被験物質を添加せずにＡＤＭ情報伝達系の活性化因子を付与した細胞の形態と比較して、ＡＤＭ情報伝達系の活性化因子を付与したことによって生じる細胞の形態変化が、前記被験物質によって抑制されていた場合に、前記被験物質にはＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する作用があると判別することを特徴とする、スクリーニング方法。

【請求項2】

前記形態変化が、色素細胞（メラノサイト）の形態変化である、請求項１に記載のスクリーニング方法。

【請求項3】

前記形態変化が、デンドライトの総数及び／又はデンドライトの分岐総数の増加である、請求項１又は２に記載のスクリーニング方法。

【請求項4】

前記ＡＤＭ情報伝達系の活性化因子の付与がＡＤＭの添加である、請求項１〜３の何れか１項に記載のスクリーニング方法。

【請求項5】

前記形態変化の抑制効果が大きい被験物質ほど、ＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する作用が強いと判別する、請求項１〜４の何れか１項に記載のスクリーニング方法。

【請求項6】

前記被験物質にＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する作用があると判別された場合に、前記被験物質は美白剤であると判別する、請求項１〜５の何れか１項に記載のスクリーニング方法。

【請求項7】

アドレノメジュリン（ＡＤＭ：Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ）情報伝達系を活性化する成分の候補物質のスクリーニング方法であって、
被験物質を添加した色素細胞（メラノサイト）において、被験物質を添加しなかった色素細胞と比較して、デンドライトの総数及び／又はデンドライトの分岐総数が増加した場合に、前記被験物質にはＡＤＭ情報伝達系を活性化する作用があると推定することを特徴とする、スクリーニング方法。

【請求項8】

請求項１〜７の何れか１項に記載のスクリーニング方法を行う工程、及び前記工程により判別されたＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する成分又はＡＤＭ情報伝達系を活性化する成分の候補物質を組成物に配合する工程を含むことを特徴とする組成物の製造方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、アドレノメジュリン（ＡＤＭ：Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ）情報伝達系の活性化を阻害する成分のスクリーニング方法、ＡＤＭ情報伝達系を活性化する成分のスクリーニング方法、当該成分を含有する組成物、並びに該組成物の製造方法に関するものである。

【背景技術】

【0002】

皮膚における日焼け後の色素沈着、シミ、肝斑、老人性色素斑等は、皮膚に存在する色素細胞（メラノサイト）の活性化によりメラニン生成が著しく亢進した状態である。これらの皮膚色素沈着に関連するトラブルの発生・悪化を防止又は改善する作用を有する成分（美白剤）に関する研究は、今尚、盛んに行われている。また、現在に至るまで様々な作用機序に基づいた美白剤が創出されており、例えばアスコルビン酸類、過酸化水素、コロイド硫黄、グルタチオン、ハイドロキノン、カテコール等（非特許文献１参照）がよく知られている。さらに近年、新たな作用機序に基づいた美白剤として、チロシナーゼ関連蛋白阻害剤（特許文献１参照）、エンドセリン作用抑制剤（特許文献２参照）、メラノサイトのデンドライト伸張抑制剤（特許文献３参照）、メラニン移送又は放出抑制剤（特許文献４参照）、プロトンポンプ阻害剤（特許文献５参照）、インテグリン産生促進剤（特許文献６参照）、ステムファクターセル結合阻害剤（特許文献７参照）等が報告されている。加えて、美白剤を単独で配合する化粧料のほか、複数の美白剤を組合せて配合する化粧料も開発されている。しかしながら、既知の作用機序に基づいた美白剤では、ある程度の美白効果は認められるものの、十分に満足のいく効果が得られているとは言い難い。このため、今尚、新たな作用機序に基づいた美白剤の開発が望まれている。

【0003】

１９９３年、寒川、北村等によりヒト褐色細胞腫より同定されたアドレノメジュリン（ＡＤＭ：Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ）は、アミノ酸プレプロホルモンから連続的な酵素分解及びアミド化反応を経由し精製される５２個のアミノ酸よりなる生理活性ペプチドである（非特許文献２参照）。ＡＤＭは、カルシトニン受容体様受容体（ＣＲＬＲ：ｃａｌｓｉｔｏｎｉｎ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）及び受容体活性化調節蛋白質（ＲＡＭＰ１〜３：ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ−ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ１〜３）により形成される複合体（受容体）を介して、様々な生物活性を発現する。また、かかる結合受容体は、その生体分布、ＡＤＭに対する結合親和性等がそれぞれ違うため、生体における役割、病態への関与等も異なる。ＡＤＭに対し高い結合親和性を有するＣＲＬＲ及びＲＡＭＰ２、ＲＡＭＰ３により形成される２種類の結合受容体は、酸化ストレス、動脈硬化、血管・リンパ管新生への関与が報告されている。一方、かかる２種類の受容体に対しＡＤＭ結合親和性が相対的に低いとされるＣＲＬＲ及びＲＡＭＰ１により形成される受容体は、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ：ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ ｇｅｎｅ−ｒｅｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ）に対し高い結合親和性を示し、血圧調節、偏頭痛等の症状と深く関与する。この様にＡＤＭは、ＣＲＬＲ及びＲＡＭＰ１〜３により形成される受容体に対し親和性を有し、かかる受容体を介する情報伝達系を活性化することにより多様な生体反応及び症状と深く関連する。
また、ＡＤＭと関連性の高い生理活性ペプチドとしては、ＡＤＭと共通の前駆体であるアミノ酸プレプロホルモンより生成するプロアドレノメジュリンＮ−末端２０ペプチド（ＰＡＭＰ：Ｐｒｏａｄｅｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ ２０ ｐｅｐｔｉｄｅ）、更にはＡＤＭと同様のカルシトニン遺伝子関連ペプチドファミリーに属し、類似性の高い構造を有するアドレノメジュリン２／インテルメジン（ＡＤＭ２／ＩＭＤ：Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ２／Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｎ）等が報告されている。ＰＡＭＰは、ＡＤＭと同様に降圧作用を有するため、その生物活性に注目が集まり研究が盛ん
に行われている。

【0004】

ＡＤＭは、当初、血管拡張作用を有する物質として注目を集め、その後、血管以外の組織、副腎髄質、心臓、肺、脳、腎臓等の組織に存在することが確認されている（非特許文献３参照）。さらにＡＤＭは、細胞遊走、分化制御、内皮細胞再生、抗炎症作用、気管支拡張作用、中枢神経脳活動の調整作用、アルドステロン及びアドレノコルチコトロピン放出抑制作用、体液量調節、強心作用、抗菌又は抗真菌作用による擦り傷、皮疹又は皮膚損傷を治癒する作用等に関連があることが報告されている。このような生物活性との関連性の解明により、ＡＤＭ結合受容体を介する情報伝達系に作用する成分の応用展開が図られ、脳梗塞、心筋梗塞、狭心症、高血圧等の血管系疾患、腫瘍（特許文献８参照）、網膜症、関節炎、乾癬の治療薬、診断薬としての開発が進められている。
しかしながら、このようなＡＤＭ情報伝達系に作用する成分に関する研究は、ＣＲＬＲ及びＲＡＭＰ１より形成される受容体を中心に行われている。さらに、ＡＤＭ情報伝達系に作用する成分のほとんどが、ＡＤＭ及び関連蛋白質のフラグメント構造を有するペプチド誘導体、抗体等の分子量が大きい物質である。これは、ＡＤＭ及び関連蛋白質の三次元構造解析等が十分に進んでおらず、構造活性相関及び化合物設計等の技術導入がなされていないためである。また、ＡＤＭ及び関連蛋白質の活性及び機能を評価する方法としては、市販のＡＤＭ抗体等を用いＡＤＭ産生量を測定することにより被験物質のＡＤＭ情報伝達系への作用を評価する方法、被験物質のＡＤＭ産生に関与する遺伝子又は酵素活性に対する影響を評価する方法、アドレノメジュリン受容体を宿主細胞に発現させアゴニスト及びアンタゴニスト活性を評価する方法（特許文献９参照）等が報告されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【特許文献1】特開２０１０−１９５７３２号公報

【特許文献2】特開２０１２−０２０９５０号公報

【特許文献3】特開２００３−１１３０２７号公報

【特許文献4】特開２００８−１４３７９６号公報

【特許文献5】特開２０１１−１７８７６０号公報

【特許文献6】特開２００６−０４５０８７号公報

【特許文献7】特開２００８−０３１０９４号公報

【特許文献8】特開２００７−１４５８５０号公報

【特許文献9】特開平１１−１６９１８７号公報

【非特許文献】

【0006】

【非特許文献1】メラニン色素の制御と美白剤の開発（フレグランスジャーナル社、臨時増刊）、Ｎｏ．１４、Ｐ．１１８−１２６（１９９５）

【非特許文献2】Ｋｉｔａｍｕｒａ Ｋ．ｅｔ． ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ，１９２，５５３−５６０（１９９３）

【非特許文献3】Ｓｈｉｍｏｓａｗａ Ｔ．ｅｔ．ａｌ．， Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９６，１６７２（１９９５）

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

前述のようにＡＤＭ情報伝達系に作用する成分は、脳梗塞、心筋梗塞、狭心症、高血圧等の疾病の治療薬として応用展開が図られているが、これらの治療薬の開発を促進するためには、ＡＤＭ情報伝達系に対する作用を正確かつ効率的に判別することができる技術が必要である。ＡＤＭ情報伝達系への作用については、ＡＤＭ情報伝達系に関与する受容体に対する結合親和性、並びにその機能を評価することによって把握することもできるが、このような評価方法は生化学的な専門知識を必要とするとともに、測定操作が簡便である
とは言い難いものであった。
即ち、本発明は、ＡＤＭ情報伝達系に作用する成分を正確かつ効率的に判別することができるスクリーニング方法を提供することを課題とする。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明者は、上記の課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、ＡＤＭ情報伝達系を活性化することによって、細胞の形態が特異的に変化すること、例えば色素細胞（メラノサイト）にＡＤＭを添加することによって、デンドライト（メラノサイトの触手）が増加することを見出した。そして、かかる現象を利用して、ＡＤＭ情報伝達系が活性化される条件に置く細胞に被験物質を添加し、その形態変化を観察することによって、被験物質にＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する作用があるか否かを正確かつ効率的に判別することができることを見出した。また、ＡＤＭ情報伝達系が活性化されていない条件下に置く細胞に被験物質を添加し、その形態変化を観察することによって、被験物質にＡＤＭ情報伝達系を活性化する作用があるか否かを正確かつ効率的に判別することができることも見出した。
即ち本発明は、以下に示す通りである。
＜１＞ アドレノメジュリン（ＡＤＭ：Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ）情報伝達系の活
性化を阻害する成分のスクリーニング方法であって、被験物質を添加し、さらにＡＤＭ情報伝達系の活性化因子を付与した細胞の形態を、被験物質を添加せずにＡＤＭ情報伝達系の活性化因子を付与した細胞の形態と比較して、ＡＤＭ情報伝達系の活性化因子を付与したことによって生じる細胞の形態変化が、前記被験物質によって抑制されていた場合に、前記被験物質にはＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する作用があると判別することを特徴とする、スクリーニング方法。
＜２＞ 前記形態変化が、色素細胞（メラノサイト）の形態変化である、＜１＞に記載の
スクリーニング方法。
＜３＞ 前記形態変化が、デンドライトの総数及び／又はデンドライトの分岐総数の増加
である、＜１＞又は＜２＞に記載のスクリーニング方法。
＜４＞ 前記ＡＤＭ情報伝達系の活性化因子の付与がＡＤＭの添加である、＜１＞〜＜３
＞の何れかに記載のスクリーニング方法。
＜５＞ 前記形態変化の抑制効果が大きい被験物質ほど、ＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻
害する作用が強いと判別する、＜１＞〜＜４＞の何れかに記載のスクリーニング方法。
＜６＞ 美白剤を判別するものである、＜１＞〜＜５＞の何れかに記載のスクリーニング
方法。
＜７＞ アドレノメジュリン（ＡＤＭ：Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ）情報伝達系を活
性化する成分のスクリーニング方法であって、被験物質を色素細胞（メラノサイト）に添加することによって、前記色素細胞（メラノサイト）のデンドライトの総数及び／又はデンドライトの分岐総数が増加した場合に、前記被験物質にはＡＤＭ情報伝達系を活性化する作用があると判別することを特徴とする、スクリーニング方法。
＜８＞ ＜１＞〜＜７＞の何れかに記載のスクリーニング方法により判別されたＡＤＭ情
報伝達系の活性化を阻害する成分又はＡＤＭ情報伝達系を活性化する成分を含有することを特徴とする組成物。
＜９＞ 皮膚外用剤である、＜８＞に記載の組成物。
＜１０＞ 化粧料（但し、医薬部外品を含む）である、＜８＞又は＜９＞に記載の組成物
。
＜１１＞ ＜１＞〜＜７＞の何れかに記載のスクリーニング方法により判別されたＡＤＭ
情報伝達系の活性化を阻害する成分又はＡＤＭ情報伝達系を活性化する成分を組成物に配合する工程を含むことを特徴とする組成物の製造方法。

【発明の効果】

【0009】

本発明によれば、ＡＤＭ情報伝達系に作用する成分を正確かつ効率的に判別することが
できる。

【図面の簡単な説明】

【0010】

【図1】ＡＤＭの添加又は非添加、ＡＤＭ及び被験物質添加の色素細胞の顕微鏡写真である（図面代用写真）。１ａはＡＤＭ非添加の色素細胞、１ｂはＡＤＭ添加の色素細胞、１ｃはＡＤＭとシソ科ハナハッカ属マジョラムより得られる植物抽出物を添加した色素細胞である。

【図2】各種因子を添加した正常ヒトメラノサイトにおけるデンドライトの総数の増加量及びデンドライトの分岐数の増加量を表すグラフである。

【図3】ＡＤＭを添加した場合の正常ヒトメラノサイトにおけるメラニン産生量及び細胞数を表すグラフである。

【発明を実施するための最良の形態】

【0011】

以下、本発明の実施の形態について詳細に説明するが、本発明はこれらの内容に限定されるものではない。

【0012】

＜ＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する成分のスクリーニング方法＞
本発明は、アドレノメジュリン（ＡＤＭ：Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ）情報伝達系の活性化を阻害する成分を判別するためのスクリーニング方法（以下、「本発明のスクリーニング方法」と略す場合がある。）である。より具体的には、被験物質を添加し、さらにＡＤＭ情報伝達系の活性化因子を付与した細胞の形態を、被験物質を添加せずにＡＤＭ情報伝達系の活性化因子を付与した細胞の形態と比較して、ＡＤＭ情報伝達系の活性化因子を付与したことによって生じる細胞の形態変化が、被験物質によって抑制されていた場合に、かかる被験物質にはＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する作用があると判別することを特徴とするスクリーニング方法である。
本発明者は、ＡＤＭ情報伝達系を活性化することによって、細胞の形態が特異的に変化すること、例えば色素細胞（メラノサイト）にＡＤＭを添加することによって、図１（図１の１ａはＡＤＭ非添加の色素細胞、１ｂはＡＤＭ添加の色素細胞、１ｃはＡＤＭとシソ科ハナハッカ属マジョラムより得られる植物抽出物を添加した色素細胞である。）に示されるようにデンドライト（メラノサイトの触手）が増加することを見出している。ＡＤＭ情報伝達系が活性化しているか否かについては、ＡＤＭ情報伝達系に関与する受容体に対する結合親和性、並びにその機能を評価することによって把握することもできるが、このような評価方法は生化学的な専門知識を必要とするとともに、測定操作が簡便であるとは言い難いものであった。即ち、細胞の形態変化を観察することによって、ＡＤＭ情報伝達系の活性化をより簡易的に判断することが可能となったと言える。そして、かかる現象を利用して、ＡＤＭ情報伝達系が活性化される条件下に設定する細胞に被験物質を添加し、その形態変化を観察することによって、被験物質にＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する作用があるか否かを正確かつ効率的に判別することができることを見出したのである。
また、色素細胞（メラノサイト）のデンドライトは、色素細胞において産生されたメラニンを角化細胞等に移送するための重要な役割を果たしているため、デンドライトの総数やデンドライトの分岐総数が増加する形態変化を起こした場合、皮膚における色素沈着は促進されるものと考えられる。さらに、本発明者は、色素細胞に前述のＣＲＬＲ及びＲＡＭＰ１〜３により形成される３種類の結合受容体が存在することも確認している。実際、後述する試験例２に記載の通り、色素細胞のＡＤＭ情報伝達系の活性化（ＡＤＭ添加）によりメラニン産生量が増加することが確認されている。従って、同様にＡＤＭ情報伝達系が活性化される条件に置く色素細胞に被験物質を添加し、デンドライトの総数やデンドライトの分岐総数の増加が抑制されているか否かを観測することによって、かかる被験物質に色素沈着予防効果、即ち美白効果があるか否かを判別することができるのである。なお、従来の美白剤の中にも、デンドライトの伸張を抑制する作用のあるものは報告されているが、本発明者の知る限り、デンドライトの総数やデンドライトの分岐総数の増加を抑制
することによって美白効果を発揮する成分は具体的に報告されておらず、色素細胞のＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する作用に基づいた美白剤は知られていないものと言える。
ここで、ＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する成分とは、例えばＡＤＭ産生量を減少させる成分、ＡＤＭ結合受容体を介する情報伝達系を不活性化させる成分（直接又は間接的なＡＤＭ結合受容体不活性化作用を有する成分）、ＡＤＭ結合受容体蛋白発現量を減少させる成分、ＡＤＭ情報伝達系を介するｃ−ＡＭＰ等の二次的情報伝達物質を減少させる成分等が挙げられるが、結果的にＡＤＭ情報伝達系の活性化の阻害に結びつくものであれば、本発明においてその原理は特に限定されないものとする。
また、ＡＤＭ情報伝達系とは、ＡＤＭが結合することができる受容体、具体的にはＣＲＬＲとＲＡＭＰ２若しくはＲＡＭＰ３により形成される受容体、又はＣＲＬＲとＲＡＭＰ１により形成される受容体等を介して情報を伝達する細胞内情報伝達機構を意味するものとする。

【0013】

本発明のスクリーニング方法は、スクリーニングに使用する細胞に「被験物質を添加し、さらにＡＤＭ情報伝達系の活性化因子を付与」することを特徴としているが、スクリーニングに使用する細胞の種類は、ＡＤＭ情報伝達系を有する細胞であれば特に限定されない。具体的な細胞としては、色素細胞（メラノサイト）、神経細胞（プルキンエ細胞）等が挙げられるが、色素細胞（メラノサイト）が好適なものとして例示できる。また、細胞の培養系としては、単独培養であっても共培養であってもよく、例えばメラノサイトの単独培養系、メラノサイト及びケラチノサイトの共培養系が好適なものとして例示できる。また、細胞の培養条件としては、通常の色素細胞培養条件、例えば市販のメラニン細胞基礎培地（Ｍｅｄｉｕｍ２５４、倉敷紡績株式会社）等による培養のほか、ＡＤＭ情報伝達系の活性化による細胞の特異的な形態変化の発生又は確認を妨げない培養条件であれば特段の限定なく適用することができる。

【0014】

本発明のスクリーニング方法は、スクリーニングに使用する細胞に「ＡＤＭ情報伝達系の活性化因子を付与」することを特徴としているが、「ＡＤＭ情報伝達系の活性化因子を付与」とは、ＡＤＭ情報伝達系を活性化することができるものであれば具体的な操作は特に限定されないものとする。例えば、アドレノメジュリン（ＡＤＭ：Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ）、プロアドレノメジュリンＮ−末端２０ペプチド（ＰＡＭＰ：Ｐｒｏａｄｅｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ ２０ ｐｅｐｔｉｄｅ）、アドレノメジュリン２／インテルメジン（ＡＤＭ２／ＩＭＤ：Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ２／Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｎ）等を添加する操作、紫外線の照射等が挙げられる。これらの中でも、ＡＤＭを添加する操作が好適なものとして例示できる。また、ＡＤＭ等の添加量や紫外線の照射条件は、スクリーニングに使用する細胞の種類等に応じて適宜設定されるべきものであるが、例えばＡＤＭの添加量（複数回添加する場合には総量）として、通常０．０００１μＭ以上、好ましくは０．００１μＭ以上、より好ましくは０．０１μＭ以上であり、通常１０００μＭ以下、好ましくは１００μＭ以下、より好ましくは１０μＭ以下である。上記範囲であれば、ＡＤＭ情報伝達系を適度に活性化することができる。

【0015】

本発明のスクリーニング方法は、スクリーニングに使用する細胞に「被験物質を添加し、さらにＡＤＭ情報伝達系の活性化因子を付与」することを特徴としているが、被験物質の添加とＡＤＭ情報伝達系の活性化因子の付与についての順番やその回数は特に限定されず、被験物質を添加した後にＡＤＭ情報伝達系の活性化因子を付与するものであっても、ＡＤＭ情報伝達系の活性化因子を付与した後に被験物質を添加するものであっても、或いは被験物質の添加とＡＤＭ情報伝達系の活性化因子の付与を同時に行うものであってもよい。また、被験物質の添加量（複数回添加する場合には総量）は、スクリーニングに使用する細胞の種類等に応じて適宜設定されるべきものであるが、例えば培地中の濃度として通常０．０００１質量％以上、好ましくは０．００５質量％以上、より好ましくは０．０１質量％以上になるように添加するものであり、通常５０質量％以下、好ましくは３０質
量％以下、より好ましくは２０質量％以下になるように添加するものである。
本発明のスクリーニング方法が対象とする被験物質は、純物質又は動植物由来の抽出物等の混合物等の何れであってもよい。動植物由来の抽出物は、動物又は植物由来の抽出物自体のみならず、抽出物の画分、精製した画分、抽出物乃至は画分、精製物の溶媒除去物の総称を意味するものとし、植物由来の抽出物は、自生若しくは生育された植物、漢方生薬原料等として販売されるものを用いた抽出物、市販されている抽出物等が挙げられる。
抽出操作は、植物部位の全草を用いるほか、植物体、地上部、根茎部、木幹部、葉部、茎部、花穂、花蕾等の部位を使用することできるが、予めこれらを粉砕或いは細切して抽出効率を向上させることが好ましい。抽出溶媒としては、水、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノールなどのアルコール類、１，３−ブタンジオール、ポリプロピレングリコールなどの多価アルコール類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル類等の極性溶媒から選択される１種乃至は２種以上が好適なものとして例示することができる。具体的な抽出方法としては、例えば、植物体等の抽出に用いる部位乃至はその乾燥物１質量に対して、溶媒を１〜３０質量部加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬し、室温まで冷却し後、所望により不溶物及び／又は溶媒除去し、カラムクロマトグラフィー等で分画精製する方法が挙げられる。

【0016】

本発明のスクリーニング方法は、「被験物質を添加し、さらにＡＤＭ情報伝達系の活性化因子を付与した細胞の形態を、被験物質を添加せずにＡＤＭ情報伝達系の活性化因子を付与した細胞の形態と比較」することを特徴としているが、「細胞の形態」の具体的な比較方法は特に限定されない。「細胞の形態」を比較する方法としては、例えば、光学顕微鏡（明視野顕微鏡、蛍光顕微鏡、位相差顕微法、微分干渉顕微法、レーザー顕微鏡等、共焦点レーザー顕微鏡、ｉｎｖｉｖｏ共焦点顕微鏡、ラマン顕微鏡）、電子顕微鏡、原子間力顕微鏡の公知の顕微鏡を用いて細胞を観察、もしくは画像を取得し、細胞全体又は細胞の一部分の形状、寸法を測定して、その値を比較する方法が挙げられる。操作が簡易的であることから、光学顕微鏡による観察もしくは画像結果を比較することが好ましい。また、細胞の形態をより観察しやすくするために、抗体染色（例えば抗メラノサイト抗体等）や、細胞染色（例えば細胞に取り込まれ蛍光を発するＣＦＤＡ染色等）を用いてもよい。

【0017】

本発明のスクリーニング方法は、「ＡＤＭ情報伝達系の活性化因子を付与したことによって生じる細胞の形態変化が、前記被験物質によって抑制されていた場合に、前記被験物質にはＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する作用があると判別すること」ことを特徴としているが、「細胞の形態変化」は、細胞全体の形状、寸法等の変化であっても、或いは細胞の一部分の形状、寸法等の変化であってもよく、スクリーニングに使用する細胞の特徴等に応じて適宜選択することができる。但し、「細胞の形態変化が抑制」されているか否かを判断し易くする観点から、変化が比較的大きい形状、寸法等に着目し、さらにその変化を定量的な数値として捉えることが好ましい。例えば、スクリーニングに使用する細胞が色素細胞（メラノサイト）である場合、ＡＤＭ情報伝達系を活性化するとデンドライトの総数やデンドライトの分岐総数は顕著に増加する。従って、「細胞の形態変化」としてデンドライトの総数及び／又はデンドライトの分岐総数を測定すると、客観的な数値として「細胞の形態変化」を捉えることができ、さらに正確にＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する作用を判別することができる。なお、「デンドライトの総数」とは、細胞本体より派生するデンドライトの本数の合計を意味し、「デンドライトの分岐総数」とは、細胞本体より派生したデンドライトが伸張するに伴って増加する分岐総数を意味するものとする。また、デンドライトの総数及び／又はデンドライトの分岐総数を測定する場合は、複数の色素細胞のデンドライトの総数及び／又はデンドライトの分岐総数を測定しても、或いは１細胞当たりのデンドライトの総数及び／又はデンドライトの分岐総数を測定してもよい。
より正確にＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する作用を判別するために、より高い基準
を設けて判別してもよい。例えば、デンドライトの総数やデンドライトの分岐総数によって判別する場合、デンドライトの総数及びデンドライトの分岐総数の両方の増加が抑制されているとき、その被験物質にはＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する作用があると判別してもよい。また、デンドライトの総数（又はデンドライトの分岐総数）の増加量の何％が抑制されている場合、その被験物質にはＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する作用があると判別する等、定量的な基準を設けて判別してもよい。デンドライトの総数を基準とする場合、ＡＤＭ添加のみを行った時のデンドライトの総数の増加量に対し、好ましくは５％以上、より好ましくは１０％以上、さらに好ましくは１５％以上抑制される場合、その被験物質にはＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する作用があると判別することが挙げられる。また、デンドライトの分岐総数を基準とする場合、ＡＤＭ添加のみを行った時のデンドライトの分岐総数の増加量に対し、好ましくは５％以上、より好ましくは１０％以上、さらに好ましくは１５％以上抑制される場合、その被験物質にはＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する作用があると判別することができる。上記基準であると、より正確にＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する作用を判別することができる。

【0018】

本発明のスクリーニング方法は、「ＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する成分」を判別するスクリーニング方法であるが、被験物質に「ＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する作用がある」か否かを判別するのみならず、被験物質のＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する作用の強さを相対的に判別するために活用することができる。例えば、本発明において「細胞の形態変化」を定量的な数値として捉えることが好ましいことを前述したが、これによって「細胞の形態変化」の抑制効果についても定量的な数値として捉えることができる。即ち、「細胞の形態変化」の抑制効果を被験物質同士相対的に比較することができ、「ＡＤＭ情報伝達系の活性化」と「細胞の形態変化」の相関性から、形態変化の抑制効果が大きい被験物質ほど、ＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する作用が強いと判別することができる。

【0019】

本発明のスクリーニング方法は、「ＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する成分」を判別するスクリーニング方法であるが、美白剤を判別するために活用することができる。前述のように、色素細胞（メラノサイト）のデンドライトは、色素細胞において産生されたメラニンを角化細胞等に移送するための重要な役割を果たしているため、デンドライトの総数やデンドライトの分岐総数が増加する形態変化を起こした場合、皮膚における色素沈着は促進されるものと考えられる。従って、ＡＤＭ情報伝達系が活性化される条件に置く色素細胞に被験物質を添加し、デンドライトの総数やデンドライトの分岐総数の増加が抑制されていた場合、かかる被験物質に色素沈着予防効果、即ち美白効果があるか否かを判別することができる。

【0020】

本発明のスクリーニング方法における手順（工程）の具体例を以下に挙げるが、本発明の趣旨を逸脱しない限り以下の内容に限定されるものではなく、適宜変更して実施することができる。
（１）スクリーニングに使用する細胞の初期の形態を把握するため、顕微鏡等によってその形態を観察する（細胞全体及び／又は一部分の寸法、デンドライトの総数及び／又はデンドライトの分岐総数等の定量的な数値を測定する。）。
（２）細胞に被験物質を添加する。
（３）ＡＤＭ情報伝達系の活性化因子を細胞に付与する（例えばＡＤＭを細胞に添加する）。なお、コントロールとして被験物質を添加せずＡＤＭ情報伝達系の活性化因子を付与した同種の細胞も用意する。
（４）被験物質を添加した細胞及び被験物質を添加していない細胞の形態をそれぞれ顕微鏡等によって観察する（細胞全体及び／又は一部分の寸法、デンドライトの総数及び／又はデンドライトの分岐総数等の定量的な数値を測定する）。
（５）細胞の初期の形態をもとに、被験物質を添加した細胞及び被験物質を添加していな
い細胞の形態変化をそれぞれ定量的な数値として捉える（細胞全体及び／又は一部分の寸法変化量、デンドライトの総数及び／又はデンドライトの分岐総数の増加量等）。
（６）被験物質を添加した細胞及び被験物質を添加していない細胞の形態変化を比較し、被験物質を添加したことによって細胞の形態変化が抑制されていた場合、その被験物質にはＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する作用があると判別する。

【0021】

＜試験例１： 各種因子の添加による色素細胞の形態変化の検討＞
以下に記載の手順に従い試験を実施した。１２穴プレートに正常ヒトメラノサイト（ＮＨＥＭ）（倉敷紡績株式会社）１．０×１０^８（ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）の密度で播種し、播種２４時間後、合成ＡＤＭ（ペプチド゛研究所４２７８−ｓ）、α−メラニン細胞刺激ホルモン（α−ＭＳＨ、シグマアルドリッチジャパン）、エンドセリン（ＥＮＤ、和光純薬工業株式会社）を１μＭ添加、プロスタグランジン（ＰＧＥ２）（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ １４０１０）を０．１μＭ添加（ＰＧＥ２は１μＭ添加では細胞が死滅したため）し、添加１２時間後の細胞の形態を光学顕微鏡で観察し、ランダムに撮影部位を設定、１０枚の写真を撮影し画像に取り込んだ。そして１０枚の画像中の＜１＞細胞全体が写っている細胞、＜２＞鮮明に形態が観察されている細胞をすべて選択し、デンドライトの総数及びデンドライトの分岐総数を計測、細胞数あたりの値に換算した。結果を図２に示す。

【0022】

図２の結果より、ＡＤＭ情報伝達系の活性化因子の付与（ＡＤＭ添加）によりデンドライトの総数及びデンドライトの分岐総数の増加が観察された。また、ＡＤＭ情報伝達系の活性化による形態変化は、色素細胞のＧ蛋白型受容体を介するその他の情報伝達系を活性化した場合と比較し、その形態変化の程度は顕著であった。

【0023】

＜試験例２： 正常ヒトメラノサイトにおけるＡＤＭ添加によるメラニン産生量及び細胞数に関する検討＞
以下の手順に従い、正常ヒトメラノサイトにおけるＡＤＭ添加によるメラニン産生量及び細胞数への影響を検討した。４８穴プレートに正常ヒトメラノサイト（ＮＨＥＭ）（倉敷紡績株式会社）１．５×１０^４（ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）の密度で播種し、播種２４時間後、合成ＡＤＭ（ペプチド研究所４２７８−ｓ）を２（μＭ）になる様に添加し、さらに０．２５（μＣｉ／ｗｅｌｌ）の［^１４Ｃ］−２−Ｔｈｉｏｕｒａｃｉｌを添加した。ＣＯ_２インキュベーターにて７２時間培養後、Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ−８（株式会社 同仁研究所）を用い、細胞数を測定後、液体シンチレーションカウンター（アロカ株式会社）により［^１４Ｃ］−２−Ｔｈｉｏｕｒａｃｉｌの取り込みを測定した。結果を図３に示す。図３において、縦軸はメラニン産生量又は細胞数を表す。また、メラニン産生量又は細胞数は、ＡＤＭ非添加群におけるメラニン産生量又は細胞数を１００％とした場合の百分率で表示した。

【0024】

図３の結果より、ＡＤＭ添加により正常ヒトメラノサイトにおけるメラニン産生量が増加することが確認された。この際、メラノサイト細胞数の増加は認められなかった。即ち、ＡＤＭ結合受容体を介する情報伝達系が活性化されることにより、メラニン産生量が増加することが明らかである。

【0025】

色素細胞には、ＡＤＭ情報伝達系と同様に、Ｇ蛋白結合型受容体を介しｃ−ＡＭＰ等の二次情報伝達物質を制御することにより細胞内情報を伝達する情報伝達系が存在する。かかる情報伝達物質としては、メラニン細胞刺激ホルモン（α−ＭＳＨ：α−Ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ）、エンドセリン（ＥＮＤ：ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎｅ）、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２：Ｐｒｏｓｔａｇｒａｎｄｉｎ
Ｅ２）等が知られており、何れの因子もメラニン産生及び色素沈着と深く関連する。前記の試験結果によれば、ＡＤＭ以外の前記細胞情報伝達系を活性化した場合、デンドライ
トの総数やデンドライトの分岐総数の増加が認められるものの、その増加効果は、ＡＤＭ情報伝達系の活性化に比較し非常に弱いものであった。このことは、色素細胞のデンドライトの総数やデンドライトの分岐総数の増加（細胞の形態変化）は、ＡＤＭ情報伝達系の活性化のよる寄与度が非常に大きいと言える。即ち、色素細胞におけるデンドライトの総数、デンドライトの分岐総数の変化を調べることにより容易にＡＤＭ情報伝達系への作用を評価することができる。また、色素沈着との関連性が高い色素細胞におけるデンドライトの総数、デンドライトの分岐総数の変化は、ＡＤＭ情報伝達系による寄与度が極めて大きいため、ＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害することにより、高い色素沈着抑制作用を有する新たな美白剤を判別することができる。

【0026】

＜ＡＤＭ情報伝達系を活性化する成分のスクリーニング方法＞
前述のように、本発明者はＡＤＭ情報伝達系を活性化することによって、色素細胞（メラノサイト）のデンドライトの総数やデンドライトの分岐総数が増加することを見出している。一方、色素細胞には、ＡＤＭ情報伝達系と同様に、結合受容体を介しｃ−ＡＭＰ等の細胞内の二次情報伝達物質を経由して情報を伝達するＧ蛋白結合型の細胞情報伝達系が存在するが、本発明者によると、色素細胞におけるメラニン細胞刺激ホルモン（α−ＭＳＨ：α−Ｍｅｌａｎｏｃｕｔｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ）、エンドセリン（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎｅ）等のＧ蛋白結合型受容体を介する情報伝達系を活性化しても、色素細胞（メラノサイト）のデンドライトの総数やデンドライトの分岐総数の増加は非常に小さいことを明らかとしている。従って、色素細胞（メラノサイト）のデンドライトの総数やデンドライトの分岐総数が増加する現象は、ＡＤＭ情報伝達系が活性化したことによる影響が極めて強く、色素細胞（メラノサイト）のデンドライトの総数やデンドライトの分岐総数を増加させる成分について、ＡＤＭ情報伝達系を活性化する作用があると推定することができることを見出したのである。
即ち、被験物質を色素細胞（メラノサイト）に添加することによって、デンドライトの総数及び／又はデンドライトの分岐総数が増加した場合に、かかる被験物質にはＡＤＭ情報伝達系を活性化する作用があると判別することができる。そして、かかる判別を行うスクリーニング方法も本発明の一態様である。
なお、ＡＤＭ情報伝達系を活性化する作用のある成分とは、例えばＡＤＭ産生量を増加させる成分、ＡＤＭ結合受容体を介する情報伝達系を活性化させる成分（直接又は間接的なＡＤＭ結合受容体活性化作用を有する成分）、ＡＤＭ結合受容体蛋白発現量を増加させる成分、ＡＤＭ情報伝達系を介するｃ−ＡＭＰ等の二次的情報伝達物質を増加させる成分等が挙げられるが、結果的にＡＤＭ情報伝達系の活性化に結びつくものであれば、本発明においてその原理は特に限定されないものとする。

【0027】

本発明のＡＤＭ情報伝達系の活性化する成分のスクリーニング方法は、「被験物質を色素細胞（メラノサイト）に添加する」ことを特徴としているが、スクリーニングに使用する色素細胞（メラノサイト）は、単独培養であっても共培養であってもよく、例えばメラノサイトの単独培養系、メラノサイト及びケラチノサイトの共培養系が好適なものとして例示できる。また、細胞の培養条件としては、通常の色素細胞培養条件、例えば市販のメラニン細胞基礎培地（Ｍｅｄｉｕｍ２５４、倉敷紡績株式会社）等による培養のほか、ＡＤＭ情報伝達系の活性化による色素細胞（メラノサイト）の特異的な形態変化の発生又は確認を妨げない培養条件であれば特段の限定なく適用することができる。

【0028】

本発明のＡＤＭ情報伝達系の活性化する成分のスクリーニング方法は、「被験物質を色素細胞（メラノサイト）に添加する」ことを特徴としているが、被験物質の添加量は特に限定されず、その濃度として通常０．０００１質量％以上、好ましくは０．００５質量％以上、より好ましくは０．０１質量％以上になるように添加するものであり、通常５０質量％以下、好ましくは３０質量％以下、より好ましくは２０質量％以下になるように添加するものである。
本発明のＡＤＭ情報伝達系の活性化する成分のスクリーニング方法が対象とする被験物質は、純物質又は動植物由来の抽出物等の混合組成物等の何れであってもよい。動植物由来の抽出物は、動物又は植物由来の抽出物自体のみならず、抽出物の画分、精製した画分、抽出物乃至は画分、精製物の溶媒除去物の総称を意味する。植物由来の抽出物は、自生若しくは生育された植物、漢方生薬原料等として販売されるものを用いた抽出物、市販（丸善製薬株式会社等）されている抽出物等が挙げられる。
抽出操作は、植物部位の全草を用いるほか、植物体、地上部、根茎部、木幹部、葉部、茎部、花穂、花蕾等の部位を使用することできるが、予めこれらを粉砕或いは細切して抽出効率を向上させることが好ましい。抽出溶媒としては、水、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノールなどのアルコール類、１，３−ブタンジオール、ポリプロピレングリコールなどの多価アルコール類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル類等の極性溶媒から選択される１種乃至は２種以上が好適なものとして例示出来る。具体的な抽出方法としては、例えば、植物体等の抽出に用いる部位乃至はその乾燥物１質量に対して、溶媒を１〜３０質量部加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬し、室温まで冷却し後、所望により不溶物及び／又は溶媒除去し、カラムクロマトグラフィー等で分画精製する方法が挙げられる。

【0029】

本発明のスクリーニング方法は、「色素細胞（メラノサイト）のデンドライトの総数及び／又はデンドライトの分岐総数が増加した場合に、前記被験物質にはＡＤＭ情報伝達系を活性化する作用があると判別する」ことを特徴としているが、正確にＡＤＭ情報伝達系を活性化する作用を判別する観点から、デンドライトの総数及びデンドライトの分岐総数の両方が増加する場合に、被験物質にはＡＤＭ情報伝達系を活性化する作用があると判別することが好ましい。また、デンドライトの総数又はデンドライトの分岐総数の具体的増加量は特に限定されないが、１細胞当たりのデンドライトの総数の平均増加量としては、通常０．３以上、好ましくは０．５以上、より好ましくは０．７以上であり、通常７以下である。１細胞当たりのデンドライトの分岐総数の平均増加量としては、通常０．５以上、好ましくは０．８以上、より好ましくは１以上であり、通常１０以下である。上記基準であると、より正確にＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する作用を判別することができる。

【0030】

前述のように、ＡＤＭは様々な細胞及び組織に存在することが確認されている。このため、本発明のＡＤＭ情報伝達系を活性化する成分のスクリーニング方法により選択されたＡＤＭ情報伝達系を活性化する成分は、ＡＤＭ情報伝達系の不活性化により生じる様々な症状及び疾患の予防又は改善、診断等に用いることができる。本発明に係るＡＤＭ情報伝達系を活性化する成分は、ADM情報伝達系の不活性化により生じる疾患、症状等の予防又
は改善、診断等であれば特段の限定なく適用することができるが、特に、脳梗塞、心筋梗塞、狭心症、高血圧等の血管系疾患、腫瘍、網膜症、関節炎、乾癬の治療薬、診断薬、色素沈着の予防又は改善用に用いることが好ましい。

【0031】

本発明のＡＤＭ情報伝達系の活性化する成分のスクリーニング方法における手順（工程）の具体例を以下に挙げるが、本発明の趣旨を逸脱しない限り以下の内容に限定されるものではなく、適宜変更して実施することができる。
（１）スクリーニングに使用する細胞に被験物質を添加する。なお、コントロールとして被験物質を添加していない同種の細胞も用意する。（また、コントロールとして、スクリーニングに使用する細胞の初期のデンドライトの総数及び／又はデンドライトの分岐総数を測定しておいてもよい。）
（２）被験物質を添加した細胞及び被験物質を添加していない細胞の形態をそれぞれ顕微鏡等によって観察する（デンドライトの総数及び／又はデンドライトの分岐総数を測定する）。
（３）被験物質を添加したことによって、デンドライトの総数及び／又はデンドライトの分岐総数が増加した場合に、前記被験物質にはＡＤＭ情報伝達系を活性化する作用があると判別する。

【0032】

＜組成物及び組成物の製造方法＞
前述したように本発明のスクリーニング方法によって、ＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する成分又はＡＤＭ情報伝達系を活性化する成分を正確かつ効率的に判別することができる。特にＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する成分は、色素沈着予防効果を発揮するため、優れた美白剤を判別するために活用することができる。本発明のスクリーニング方法によって判別されたＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する成分又はＡＤＭ情報伝達系を活性化する成分を含有する組成物（以下、「本発明の組成物」と略す場合がある。）、及び本発明のスクリーニング方法により判別されたＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する成分又はＡＤＭ情報伝達系を活性化する成分を組成物に配合する工程を含む組成物の製造方法（以下、「本発明の組成物の製造方法」と略す場合がある。）も、本発明の一態様である。以下、本発明の組成物及び本発明の組成物の製造方法について詳細に説明する。

【0033】

本発明の組成物及び本発明の組成物の製造方法は、前述した本発明のスクリーニング方法によって判別されたＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する成分又はＡＤＭ情報伝達系を活性化する成分を含有する（配合する）ものであれば、ＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する成分又はＡＤＭ情報伝達系を活性化する成分の含有量（配合量）やその他の構成については特に限定されず、調製方法も特に限定されない。但し、組成物におけるＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する成分又はＡＤＭ情報伝達系を活性化する成分の含有量（配合量）は、通常０．００００１質量％以上、好ましくは０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量以上であり、通常１５質量％以下、好ましくは１０質量％以下、より好ましくは５量％である。ＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する成分又はＡＤＭ情報伝達系を活性化する成分の含有量（配合量）が少なすぎると、目的とする効果が低下する傾向にあり、多すぎても効果が頭打ちになる傾向があり、この系の自由度を損なう場合がある。
また、組成物に含有させるＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する成分又はＡＤＭ情報伝達系を活性化する成分の種類は、１種類に限定されず、２種類以上を含有させてもよい。

【0034】

本発明の組成物の製剤化にあたっては、通常の食品、医薬品、化粧料などの製剤化で使用される任意成分を含有することが出来る。この様な任意成分としては、経口投与組成物であれば、例えば、乳糖や白糖などの賦形剤、デンプン、セルロ−ス、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセルロ−スなどの結合剤、カルボキシメチルセルロ−スナトリウム、カルボキシメチルセルロ−スカルシウムなどの崩壊剤、大豆レシチン、ショ糖脂肪酸エステルなどの界面活性剤、マルチト−ルやソルビト−ルなどの甘味剤、クエン酸などの酸味剤、リン酸塩などの緩衝剤、シェラックやツェインなどの皮膜形成剤、タルク、ロウ類などの滑沢剤、軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウムゲルなどの流動促進剤、生理食塩水、ブドウ糖水溶液などの希釈剤、矯味矯臭剤、着色剤、殺菌剤、防腐剤、香料など好適に例示出来る。経皮投与組成物であれば、スクワラン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックスなどの炭化水素類、ホホバ油、カルナウバワックス、オレイン酸オクチルドデシルなどのエステル類、オリ−ブ油、牛脂、椰子油などのトリグリセライド類、ステアリン酸、オレイン酸、レチノイン酸などの脂肪酸、オレイルアルコ−ル、ステアリルアルコ−ル、オクチルドデカノ−ル等の高級アルコ−ル、スルホコハク酸エステルやポリオキシエチレンアルキル硫酸ナトリウム等のアニオン界面活性剤類、アルキルベタイン塩等の両性界面活性剤類、ジアルキルアンモニウム塩等のカチオン界面活性剤類、ソルビタン脂肪酸エステル、脂肪酸モノグリセライド、これらのポリオキシエチレン付加物、ポリオキシエチレンアルキルエ−テル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル等の非イオン界面活性剤類、ポリエチレングリコ−ル、グリセリン、１，３−ブタンジオ−ル等の多価アルコ−ル類、
増粘・ゲル化剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、色剤、防腐剤、粉体等を含有することができる。製造は、常法に従い、これらの成分を処理することにより、困難なく、為しうる。

【0035】

本発明の組成物としては、医薬品、化粧品、食品、飲料などが好適に例示でき、日常的に摂取できることから、食品、化粧品等に適応することが好ましい。その投与経路も、経口投与、経皮投与の何れもが可能であるが、皮膚における色素沈着予防又は改善作用を発揮するためには、皮膚への貯留性、標的部位への到達効率等を考慮し、経皮投与を採用することが好ましい。

【0036】

前述のように本発明のスクリーニング方法によって判別されたＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する成分は、美白剤として活用することができ、ＡＤＭ情報伝達系を活性化する成分は、脳梗塞、心筋梗塞、狭心症、高血圧等の血管系疾患、腫瘍、網膜症、関節炎、乾癬の治療薬、診断薬、色素沈着の予防又は改善剤として活用することができる。即ち、本発明の組成物もこれらの用途のとして好適に利用することができる。

【0037】

また、後述する実施例に記載されているシソ科ハナハッカ属マジョラムより得られる植物抽出物は、丸善製薬株式会社より購入した植物抽出物を使用した。シソ科ハナハッカ属マジョラムは、地中海、エジプト、北アフリカを原産地とする多年草であり、料理等に使用されている。また、前記の精油や植物抽出物には、消火促進作用、抗菌作用、抗炎症作用等の作用が存することが知られている。

【0038】

以下に、本発明に付いて、実施例を挙げて更に詳しく説明を加えるが、本発明がかかる実施例のみに限定されないことは言うまでもない。

【実施例】

【0039】

＜試験例３：ＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する成分のスクリーニング方法＞
以下に記載の手順に従い、ＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する成分のスクリーニングを実施した。
１２穴プレートに正常ヒトメラノサイト（ＮＨＥＭ）（倉敷紡績株式会社）１．０×１０^３（ｃｅｌｌｓｓ／ｗｅｌｌ）の密度で播種し、播種２４時間後、合成ＡＤＭ（ペプチド研究所４２７８−ｓ）１μＭとなるよう添加、同時に被験物質（植物抽出液）を培地中に１質量％となるように添加した。添加１２時間後の細胞の形態を光学顕微鏡で観察し、ランダムに撮影部位を設定、１０枚の写真を撮影し画像に取り込んだ。そして１０枚の画像中の＜１＞細胞全体が写っている細胞、＜２＞鮮明に形態が観察されている細胞をすべて選択し、デンドライトの総数及びデンドライトの分岐総数を計測、細胞数あたりの値に換算した。評価のため、ＡＤＭ無添加群を準備し、ＡＤＭ添加による増加量」と、ＡＤＭと被験物質添加時の増加量の値を算出し、被験物質による抑制率を算出した。結果を表１に示す。

【0040】

【表1】

【0041】

表１の結果より、シソ科ハナハッカ属マジョラムより得られる植物抽出物は、ＡＤＭ添加による各本数に対しデンドライトの総数では３２．４％、デンドライトの分岐総数では４０．４％の増加を抑制する効果があることが判明した。

【0042】

＜製造例１：ＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する成分を含有する組成物＞
以下の手順に従い、本発明のスクリーニング方法により選択されたＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する成分を含有する組成物（皮膚外用剤）を作製した。即ち、表２の処方成分（Ａ）に記載の各成分を合わせ、室温下に溶解した。一方、処方成分（Ｂ）に記載された各成分を室温下に溶解し、これを（Ａ）に記載された処方の混合物に加え可溶化し、ＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する成分を含有する組成物（皮膚外用剤１）を得た。

【0043】

【表2】

【0044】

＜製造例２：ＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する成分を含有する組成物＞
以下の手順に従い、本発明のスクリーニング方法により選択されたＡＤＭ情報伝達系の活性化を阻害する成分を含有する組成物（食品）を作製した。即ち、表３に記載の処方成分を１０質量部の水と共に転動相造粒（不二パウダニル株式会社製「ニューマルメライザー」）し、打錠して錠剤状の健康食品を得た。尚、表中の数値の単位は質量部を表す。

【0045】

【表3】

【産業上の利用可能性】

【0046】

本発明は、食品、医薬品、化粧品（但し、医薬部外品を含む）等に応用することができる。

【図1】

【図2】

【図3】