特許 5963005 膵臓癌の治療のためのベバシズマブ組合せ療法のための血漿バイオマーカー

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5963005

(24)【登録日】2016年7月8日

(45)【発行日】2016年8月3日

(54)【発明の名称】膵臓癌の治療のためのベバシズマブ組合せ療法のための血漿バイオマーカー

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/574 20060101AFI20160721BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20160721BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20160721BHJP

   A61K 39/39 20060101ALI20160721BHJP

   A61P 1/18 20060101ALI20160721BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20160721BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20160721BHJP

   A61K 31/7068 20060101ALI20160721BHJP

   A61K 31/517 20060101ALI20160721BHJP

   C07K 16/24 20060101ALN20160721BHJP

【ＦＩ】

   G01N33/574 AZNA

   G01N33/53 D

   A61K39/395 T

   A61K39/39

   A61P1/18

   A61P35/04

   A61P35/00

   A61K31/7068

   A61K31/517

   !C07K16/24

【請求項の数】19

【全頁数】55

(21)【出願番号】特願2013-520100(P2013-520100)

(86)(22)【出願日】2011年7月18日

(65)【公表番号】特表2013-538337(P2013-538337A)

(43)【公表日】2013年10月10日

(86)【国際出願番号】EP2011062226

(87)【国際公開番号】WO2012010546

(87)【国際公開日】20120126

【審査請求日】2014年7月10日

(31)【優先権主張番号】10170004.5

(32)【優先日】2010年7月19日

(33)【優先権主張国】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】306021192

【氏名又は名称】エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト

(74)【代理人】

【識別番号】100109726

【弁理士】

【氏名又は名称】園田 吉隆

(74)【代理人】

【識別番号】100101199

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 義教

(72)【発明者】

【氏名】デルマー， ポール

(72)【発明者】

【氏名】フォエルンツラー， ドロテー

(72)【発明者】

【氏名】クロイゼ， フリーデマン

(72)【発明者】

【氏名】シェラー， シュテファン

【審査官】 草川 貴史

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００８−５３２５５７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１０／０７５４２０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２００７−５２２４５７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００８−５０２７３８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 ANDREW H KO，A phase II study evaluating bevacizumab in combination with fixed-dose rate gemcitabine and low-dose cisplatin for metastatic pancreatic cancer: is an anti-VEGF strategy still applicable?，Invest New Drugs. ，KLUWER ACADEMIC PUBLISHERS，２００８年 ４月 １日，V26 N5，P463-471

【文献】 SHERRY X. YANG，GENE EXPRESSION PROFILE AND ANGIOGENIC MARKERS CORRELATE WITH RESPONSE TO NEOADJUVANT BEVACIZUMAB FOLLOWED BY BEVACIZUMAB PLUS CHEMOTHERAPY IN BREAST CANCER ，CLINICAL CANCER RESEARCH，２００８年 ９月１５日，V14 N18，P5893-5899

【文献】 DAN G. DUDA，PLASMA SOLUBLE VEGFR-1 IS A POTENTIAL DUAL BIOMARKER OF RESPONSE AND TOXICITY FOR BEVACIZUMAB WITH CHEMORADIATION IN LOCALLY ADVANCED RECTAL CANCER，THE ONCOLOGIST，２０１０年 ６月 １日，V15 N6，P577-583

【文献】 HEDY L KINDLER，PHASE II TRIAL OF BEVACIZUMAB PLUS GEMCITABINE IN PATIENTS WITH ADVANCED PANCREATIC CANCER，JOURNAL OF CLINICAL ONCOLOGY，米国，AMERICAN SOCIETY OF CLINICAL ONCOLOGY，２００５年 １月 １日，V23 N31，P8033-8040

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｇ０１Ｎ ３３／４８−９８

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

化学療法レジメンへのベバシズマブ治療の追加に応答性又は感受性である患者の同定のためのインビトロ方法であって、前記方法が、膵臓癌を患っていると疑われるか又は患う傾向がある患者からのサンプルにおける一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程を含んでなり、それによって、膵臓癌を患っている患者において決定されるコントロール発現レベルと比較した一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した発現レベルが、前記化学療法レジメンへのベバシズマブの追加に対する患者の感受性の指標である、方法。

【請求項2】

膵臓癌を患っていると疑われるか、患っているか又は患う傾向がある患者の化学療法レジメンへのベバシズマブの追加に対する応答性又は感受性を予測するインビトロ方法であって、患者サンプルにおける一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定することを含んでなる、方法。

【請求項3】

治療効果が無進行生存である請求項１に記載の方法。

【請求項4】

治療効果が全生存である請求項１に記載の方法。

【請求項5】

決定されるタンパク質発現レベルがＶＥＧＦＡ又はＰＬＧＦのものである請求項１〜４の何れか一項に記載の方法。

【請求項6】

決定されるタンパク質発現レベルがＶＥＧＦＡ又はＶＥＧＦＲ２のものである請求項１〜４の何れか一項に記載の方法。

【請求項7】

決定されるタンパク質発現レベルがＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の組合せ発現レベルである請求項１〜４の何れか一項に記載の方法。

【請求項8】

決定されるタンパク質発現レベルがＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの組合せ発現レベルである請求項１〜４の何れか一項に記載の方法。

【請求項9】

決定されるタンパク質発現レベルがＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの組合せ発現レベルである請求項１〜４の何れか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記発現レベルが、イムノアッセイ方法によって決定される請求項１〜９の何れか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記イムノアッセイ方法がＥＬＩＳＡである請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記患者サンプルが血液サンプルである請求項１〜１１の何れか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記患者サンプルが血漿サンプルである請求項１〜１２の何れか一項に記載の方法。

【請求項14】

膵臓癌が転移性膵臓癌である請求項１〜１３の何れか一項に記載の方法。

【請求項15】

前記化学療法レジメンが、ゲムシタビン及びエルロチニブを含む請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

前記患者が、一又は複数の抗癌療法で共治療されている請求項１〜１５の何れか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記抗癌療法が放射線である請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

前記サンプルが、ネオアジュバント又はアジュバント療法の前に得られる請求項１〜１７の何れか一項に記載の方法。

【請求項19】

前記サンプルが、ネオアジュバント又はアジュバント療法の後に得られる請求項１〜１７の何れか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、膵臓癌、特に転移性膵臓癌と診断された患者のコントロールレベルと比較した、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベル、特に血漿発現レベルを決定することによって、膵臓癌、特に転移性膵臓癌を患っている患者の化学療法レジメンの治療効果を、化学療法レジメンにベバシズマブ(Ａｖａｓｔｉｎ(登録商標))を加えることによって改善するための方法を提供する。特に、本発明は、治療効果が患者の全生存及び／又は無進行生存である、治療効果を改善する方法を提供する。本発明は更に、膵臓癌、特に転移性膵臓癌と診断された患者におけるコントロールレベルと比較した、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベル、特に血漿発現レベルを決定することによって、化学療法レジメンとの組合せにおけるベバシズマブ(Ａｖａｓｔｉｎ(登録商標))に対する患者の感受性又は応答性を評価するための方法を提供する。

【0002】

従って、本発明は、化学療法レジメン、例えばゲムシタビン-エルロチニブ(ＧＥ)療法との組合せにおける血管新生阻害剤、例えばベバシズマブ(Ａｖａｓｔｉｎ(登録商標))に対する感受性又は応答性と相関する、膵臓癌、特に転移性膵臓癌のバイオマーカーの同定及び選択に関する。この点において、発明は、標準的化学療法への、血管新生阻害剤、例えばベバシズマブ(アバスチン(登録商標))の追加に対し感受性又は応答性の患者を同定するための、膵臓癌、特に転移性膵臓癌と診断された患者において得られるコントロールと比較した、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの血漿特異的発現プロファイルの使用に関する。発明は更に、膵臓癌、特に転移性膵臓癌と診断された患者におけるコントロールと比較した、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの血漿特異的発現レベルを決定することによって、標準的化学療法、例えばゲムシタビン-エルロチニブ(ＧＥ)療法への血管新生阻害剤、例えばベバシズマブ(アバスチン(登録商標))の追加によって、膵臓癌、特に転移性膵臓癌を患っている患者の治療効果、特に全生存及び／又は無進行生存を改善するための方法に関する。発明は更に、本発明の方法に従って決定され定義される、血管新生阻害剤、特にベバシズマブ(アバスチン(登録商標))に感受性又は応答性の患者の同定のためのキット及び組成物を提供する。

【0003】

血管新生は癌形成に必要であり、原発腫瘍サイズ及び増殖を制御するだけでなく、浸潤及び転移能にも影響する。従って、血管新生プロセスを媒介するメカニズムが、指向化抗癌療法の潜在標的として調査されてきた。血管新生調節因子の研究初期では、血管内皮増殖因子(ＶＥＧＦ)シグナル伝達経路が、複数の癌タイプにおいて血管新生活性を選択的に制御することが発見された。この因子は、血管新生を媒介する主要なＶＥＧＦシグナル伝達受容体である、ＶＥＧＦ受容体２(ＶＥＧＦＲ-２)を通してシグナルを伝達する。複数の治療法が、様々なポイントでこの経路を調節するために開発された。これらの療法は、とりわけ、ベバシズマブ、スニチニブ、ソラフェニブ及びバタラニブを含む。臨床における血管新生阻害剤の使用は成功を示したが、全ての患者が、血管新生阻害剤療法に応答又は十分に応答しなかったわけではない。このような不完全な応答の根底にあるメカニズムは不明である。従って、抗血管新生癌療法に感受性又は応答性の患者サブグループの同定に対するニーズが増加している。

【0004】

血管新生阻害剤の数は不明であるが、最も著名な血管新生阻害剤はベバシズマブ(アバスチン(登録商標))である。ベバシズマブは、ＶＥＧＦ(血管内皮増殖因子)に特異的に結合し、その生物学的効果を遮断する組換えヒト化モノクローナルＩｇＧ１抗体である。ＶＥＧＦは、腫瘍増殖及び転移、すなわち身体の他の部分への腫瘍の播種に必要な必須プロセスである腫瘍血管新生の鍵となる推進因子である。アバスチン(登録商標)は、毎年、合わせて２．５百万を超える死をもたらす４つの一般的なタイプの癌：結腸直腸癌、乳癌、非小細胞肺癌(ＮＳＣＬＣ)及び腎臓癌の進行ステージの治療のために、欧州において承認されている。米国では、アバスチン(登録商標)は、ＦＤＡによって承認された最初の抗血管新生療法であり、５つの腫瘍タイプ：結腸直腸癌、非小細胞肺癌、乳癌、脳(グリオブラストーマ)及び腎臓(腎細胞癌)の治療のために現在承認されている。５０万を超す患者がこれまでにアバスチンで治療されており、４５０を越す臨床治験による総合的な臨床プログラムが、異なる設定(例えば、進行又は早期ステージの疾患)における、複数の癌タイプ(結腸直腸、乳房、非小細胞肺、脳、胃、卵巣及び前立腺を含む)の治療におけるアバスチンの更なる使用を調査している。重要なことには、アバスチン(登録商標)は、共治療法として見込みを示しており、広範な化学療法及び他の抗癌治療と組み合わせられた時に、効果を示している。フェーズＩＩＩ試験が公開され、ベバシズマブを標準的な化学療法レジメンと組み合わせることの有益な効果を実証している(例えば、Saltz et al., 2008, J. Clin. Oncol., 26:2013-2019; Yang et al., 2008, Clin. Cancer Res., 14:5893-5899; Hurwitz et al., 2004, N. Engl. J. Med., 350:2335-2342を参照)。しかしながら、血管新生阻害剤の過去の研究でのように、幾つかのこれらのフェーズＩＩＩ試験は、一部の患者が、彼らの化学療法レジメンへのベバシズマブ(アバスチン(登録商標))の追加に対し不完全な応答を経験することを示している。

【0005】

従って、血管新生阻害剤、特にベバシズマブ(アバスチン(登録商標))を含んでなる併用療法に応答するか又は応答しそうである、それらの患者を決定する方法に対するニーズがある。このように、本発明の根底にある技術的問題は、化学療法治療、例えばゲムシタビン-エルロチニブ(ＧＥ)療法への、血管新生阻害剤、特にベバシズマブ(アバスチン(登録商標))の追加から利益を得うる、膵臓癌、特に転移性膵臓癌を患っているか又は患う傾向がある患者の同定のための、方法及び手段の提供である。

【0006】

技術的問題は、請求の範囲に特徴付けられている実施態様の提供によって解消される。

【0007】

本発明は、従って、膵臓癌を患っている患者の化学療法レジメンの治療効果を、前記化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法を提供する：
(ａ)患者サンプルにおける一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベル決定する工程；及び
(ｂ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール発現レベルと比較して、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0008】

本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、膵臓癌を患っている患者の化学療法レジメンの治療効果を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール発現レベルと比較して、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0009】

本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)患者サンプルにおける一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベル決定する工程；及び
(ｂ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール発現レベルと比較して、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0010】

本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール発現レベルと比較して、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0011】

本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)患者サンプルにおける一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベル決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール発現レベルと比較して、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含む。

【0012】

本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール発現レベルと比較して、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含む。

【0013】

本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)患者サンプルにおける一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベル決定する工程；及び
(ｂ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール発現レベルと比較して、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0014】

本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール発現レベルと比較して、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0015】

本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)患者サンプルにおける一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベル決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール発現レベルと比較して、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含む。

【0016】

本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール発現レベルと比較して、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含む。

【0017】

本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ又はＶＥＧＦＲ２のタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ又はＶＥＧＦＲ２の増加した発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0018】

本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ又はＶＥＧＦＲ２のタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ又はＶＥＧＦＲ２の増加した発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0019】

本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ又はＶＥＧＦＲ２のタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ又はＶＥＧＦＲ２の増加した発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含む。

【0020】

本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ又はＶＥＧＦＲ２のタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ又はＶＥＧＦＲ２の増加した発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンが、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含む。

【0021】

本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ又はＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ又はＰＬＧＦの増加した発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0022】

本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ又はＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ又はＰＬＧＦの増加した発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0023】

本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ又はＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ又はＰＬＧＦの増加した発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含む。

【0024】

本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ又はＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ又はＰＬＧＦの増加した発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含む。

【0025】

発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法を提供する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0026】

膵臓癌は、転移性膵臓癌でありうる。

【0027】

従って、発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0028】

膵臓癌は、転移性膵臓癌でありうる。

【0029】

発明は、従って、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含む。

【0030】

発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含む。

【0031】

発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法を提供する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0032】

膵臓癌は、転移性膵臓癌でありうる。

【0033】

従って、発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0034】

膵臓癌は、転移性膵臓癌でありうる。

【0035】

発明は、従って、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含む。

【0036】

発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含む。

【0037】

発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法を提供する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２のタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0038】

従って、発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２のタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0039】

発明は、従って、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２のタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含む。

【0040】

発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２のタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含む。

【0041】

発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法を提供する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２のタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0042】

従って、発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２のタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0043】

発明は、従って、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２のタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含む。

【0044】

発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２のタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含む。

【0045】

本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法を提供する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定される組合せコントロール発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0046】

従って、本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0047】

発明は、従って、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定される組合せコントロール発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含む。

【0048】

従って、本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含む。

【0049】

本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法を提供する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定される組合せコントロール発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0050】

従って、本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0051】

発明は、従って、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定される組合せコントロール発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含む。

【0052】

従って、本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するための方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含む。

【0053】

本発明は、化学療法レジメンへのベバシズマブ治療の追加に応答性又は感受性である患者の同定のためのインビトロ方法であって、前記方法が、膵臓癌、特に、転移性膵臓癌を患っているか、患っていると疑われるか又は患う傾向がある患者からのサンプルにおける一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程を含んでなり、それによって、膵臓癌、特に転移性膵臓癌を患っている患者において決定されるコントロール発現レベルと比較した、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した発現レベルが、前記化学療法レジメンへのベバシズマブの追加に対する患者の感受性の指標である方法を提供する。化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含みうる。

【0054】

従って、本発明は、化学療法レジメンへのベバシズマブ治療の追加に応答性又は感受性である患者の同定のためのインビトロ方法であって、前記方法が次を含んでなる方法に関する：
(ａ)膵臓癌、特に転移性膵臓癌を患っているか、患っていると疑われるか又は患う傾向がある患者からサンプルを得る工程；及び
(ｂ)一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程；
それによって、膵臓癌、特に転移性膵臓癌を患っている患者において決定されるコントロール発現レベルと比較した、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した発現レベルが、前記化学療法レジメンへのベバシズマブの追加に対する患者の感受性の指標である。化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含みうる。

【0055】

本発明は、化学療法レジメンへのベバシズマブ治療の追加に応答性又は感受性である患者の同定のためのインビトロ方法であって、前記方法が、転移性膵臓癌を患っているか、患っていると疑われるか又は患う傾向がある患者からのサンプルにおける一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのタンパク質発現レベルを決定する工程を含んでなり、それによって、転移性膵臓癌を患っている患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較した、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２又はＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦ又はＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現増加レベルが、前記化学療法レジメンへのベバシズマブの追加に対する患者の感受性の指標である方法を提供する。化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法を含みうる。

【0056】

従って、本発明は、同定された技術的問題を解消し、そこでは、膵臓癌、特に転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロールレベルと比較した、任意の患者における一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの血漿特異的発現レベルが、化学療法レジメンとの組合せにおいて血管新生阻害剤を投与されたそれらの患者における治療効果と相関することが、驚くべきことに示された。具体的には、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及び／又はＰＬＧＦのタンパク質発現レベルにおけるバリエーションが、ゲムシタビン-エルロチニブの化学療法レジメンへのベバシズマブ(アバスチン(登録商標))の追加への応答による転移性膵臓癌患者の改善された全生存及び／又は無進行生存のためのマーカー／予測因子として、驚くべきことに同定された。化学療法レジメンへのベバシズマブ(アバスチン(登録商標))の追加に対し応答性又は感受性を呈する患者が、膵臓癌、特に転移性膵臓癌と診断された患者から得られたサンプルにおいて得られるコントロール発現レベルと比較して、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加したタンパク質発現レベルを有することが明らかにされた。「マーカー」及び「予測因子」なる用語は互換的に使用でき、ここに記載の一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルを指す。発明はまた、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの血漿発現レベルの何れか２つ以上の組合せを指すための、「マーカー」及び「予測因子」なる用語の使用を包含する。

【0057】

本発明の関連において、「ＶＥＧＦＡ」は血管内皮増殖因子プロテインＡを指し、配列番号：１によって例示され、図８に示されている(Swiss Prot Accession Number P15692, Gene ID (NCBI): 7422)。「ＶＥＧＦＡ」なる用語は、配列番号：１のアミノ酸配列を有するタンパク質並びにその相同体及びアイソフォームを包含する。「ＶＥＧＦＡ」なる用語はまた、ＶＥＧＦＡの既知のアイソフォーム、例えばスプライスアイソフォーム、例えばＶＥＧＦ_１１１、ＶＥＧＦ_１２１、ＶＥＧＦ_１４５、ＶＥＧＦ_１６５、ＶＥＧＦ_１８９及びＶＥＧＦ_２０６、並びにその変異体、相同体及びアイソフォームを包含し、Ferrara Mol. Biol. Cell 21:687 (2010) and Leung et al. Science 246:1306 (1989), and Houck et al. Mol. Endocrin. 5:1806 (1991)に記載されるような、ＶＥＧＦ_１６５のプラスミン切断によって生成される１１０アミノ酸ヒト血管内皮細胞増殖因子を含む。本発明の特定の実施態様では、「ＶＥＧＦＡ」は、ＶＥＧＦ_１２１及び／又はＶＥＧＦ_１１０を指す。本発明の特定の実施態様では、「ＶＥＧＦＡ」は、ＶＥＧＦ_１１１を指す。発明の関連において、「ＶＥＧＦＡ」なる用語はまた、配列番号：１のアミノ酸配列に、又はその変異体及び／又は相同体のアミノ酸配列、並びに該配列の断片に、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％の相同性を有するタンパク質を包含するが、ただし、変異体タンパク質(アイソフォームを含む)、相同タンパク質及び／又は断片は、一又は複数のＶＥＧＦＡ特異的抗体、例えば抗体クローン３Ｃ５及び２６５０３(それぞれ、Bender RELIATech及びR&D Systemsから入手可能)及びＡ４．６．１(Kim et al., Growth Factors 7(1): 53-64 (1992)に記載)によって認識されることとする。発明の関連において、ＶＥＧＦ又はＶＥＧＦ-Ａの「アイソフォーム」なる用語は、スプライスアイソフォーム及び酵素的切断(例えば、プラスミン)によって生成される形態の双方を指す。

【0058】

一実施態様では、「ＶＥＧＦＡ」は、非修飾ＶＥＧＦを指す。本発明の関連において、「非修飾」ＶＥＧＦは、ＶＥＧＦの非修飾アミノ酸配列、そのアイソフォーム及びその切断産物に関連する。非修飾ＶＥＧＦは、原核生物発現システム、例えば大腸菌において合成的に、又は好ましくは組換え的に生産できる。非修飾ＶＥＧＦは、例えばグリコシル化のような、翻訳後修飾を持たない。発明の関連において、「非修飾ＶＥＧＦ-Ａ」なる用語はまた、その変異体及び／又は相同体、並びにＶＥＧＦ-Ａの断片を包含するが、ただし、変異体タンパク質(アイソフォームを含む)、相同タンパク質及び／又は断片は、非修飾ＶＥＧＦ-Ａ特異的抗体、例えばRELIATech GmbH, Wolfenbuttel, Germanyから入手可能である抗体クローン３Ｃ５によって認識されることとする。

【0059】

本発明の関連において、「ＶＥＧＦＲ２」は血管内皮増殖因子受容体２を指し、配列番号：２によって例示され、図９に示されている(Swiss Prot Accession Number P35968, Gene ID (NCBI): 3791)。「ＶＥＧＦＲ２」なる用語は、配列番号：２のアミノ酸配列を有するタンパク質並びにその相同体及びアイソフォームを包含する。発明の関連において、「ＶＥＧＦＲ２」なる用語はまた、配列番号：２のアミノ酸配列に、又はその変異体及び／又は相同体のアミノ酸配列、並びに該配列の断片に、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％の相同性を有するタンパク質を包含するが、ただし、変異体タンパク質(アイソフォームを含む)、相同タンパク質及び／又は断片は、一又は複数のＶＥＧＦＲ２特異的抗体、例えばR&D Systemsから入手可能である抗体クローン８９１１５及び８９１０９によって認識されることとする。

【0060】

本発明の関連において、「ＰＬＧＦ」は胎盤増殖因子を指し、配列番号：３によって例示され、図１０に示されている(Swiss Prot Accession Number P49763, Gene ID (NCBI): 5228)。「ＰＬＧＦ」なる用語は、配列番号：３のアミノ酸配列を有するタンパク質並びにその相同体及びアイソフォームを包含する。発明の関連において、「ＰＬＧＦ」なる用語はまた、配列番号：３のアミノ酸配列に、又はその変異体及び／又は相同体のアミノ酸配列、並びに該配列の断片に、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％の相同性を有するタンパク質を包含するが、ただし、変異体タンパク質(アイソフォームを含む)、相同タンパク質及び／又は断片は、一又は複数のＰＬＧＦ特異的抗体、例えばRoche Diagnostics GmbHから入手可能である抗体クローン２Ｄ６Ｄ５及び６Ａ１１Ｄ２によって認識されることとする。

【0061】

従って、本発明は、限定するものではないが、ここに記載のアミノ酸配列を含むタンパク質の発現レベルの決定を包含する。この関連において、発明は、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの相同体、変異体及びアイソフォームの検出を包含する；前記アイソフォーム又は変異体は、とりわけ、対立遺伝子バリアント又はスプライスバリアントを含みうる。また考えられるのは、ここに記載の一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦ、又はその断片に相同である、例えば配列番号：１、配列番号：２又は配列番号：３のアミノ酸配列、又はその断片に、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するタンパク質の検出である。あるいは又は加えて、本発明は、配列番号：１、配列番号：２又は配列番号：３をコードする核酸配列、又はその断片、変異体又はアイソフォームに、少なくとも少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である核酸配列、又はその断片によってコードされるタンパク質の発現レベルの検出を包含する。この関連では、「変異体」なる用語は、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及び／又はＰＬＧＦアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列をコードする核酸配列が、配列番号：１、配列番号：２又は配列番号：３によって同定される、及び／又は上記Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ受入番号下で入手可能な別個の配列と、変異、例えば欠失、付加、置換、逆位等によって異なることを意味する。更に、「相同体」なる用語は、配列番号：１、配列番号：２又は配列番号：３に示す一又は複数のポリペプチド、又はその断片に、少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％の配列同一性を有する分子を指す。

【0062】

アミノ酸又は核酸配列が、ここに記載のアミノ酸又は核酸配列に所定の度合いの同一性を有するか否か決定するために、当業者は、当分野でよく知られている手段及び方法を使用でき、例えば、手動、又は当分野でしられているか又はここに記載のコンピュータープログラムの使用によるアラインメントを使用できる。

【0063】

本発明によると、２つ以上のアミノ酸又は核酸配列の関連において「同一」又は「パーセント同一性」なる用語は、当分野で知られる配列比較アルゴリズムの使用、又は手動アライメント及び目視検査による測定により、比較のウィンドウにわたって又は指定領域にわたって最大一致について比較及び整列した時に、同じであるか、又は特定パーセンテージの同じアミノ酸残基又はヌクレオチド(例えば、例えば配列番号：１、配列番号：２又は配列番号：３のアミノ酸配列と、６０％又は６５％の同一性、好ましくは７０−９５％の同一性、より好ましくは少なくとも９５％の同一性)を有する２つ以上の配列又はサブ配列を指す。例えば、６０％〜９５％以上の配列同一性を有する配列は、実質的に同一であると考えられる。このような定義は、試験配列の相補体にも適用される。好ましくは、記載の同一性は、少なくとも約１５〜２５のアミノ酸又はヌクレオチド長である領域にわたって、より好ましくは、約５０〜１００のアミノ酸又はヌクレオチド長である領域にわたって存在する。当業者は、例えば、当分野で知られているＣＬＵＳＴＡＬＷコンピュータープログラム(Thompson Nucl. Acids Res. 2 (1994), 4673-4680)又はＦＡＳＴＤＢ(Brutlag Comp. App. Biosci. 6 (1990), 237-245)に基づくものなどのアルゴリズムを使用し、どのように配列同士/間のパーセント同一性を決定するか知るだろう。

【0064】

ＦＡＳＴＤＢアルゴリズムは典型的には、配列における内部の非一致欠失又は付加、すなわちギャップを考慮しないが、これは、％同一性の過剰評価を避けるために手動で訂正できる。しかしながら、ＣＬＵＳＴＡＬＷは、その同一性計算に配列ギャップを考慮する。また、当業者に利用可能なものは、ＢＬＡＳＴ(Basic Local Alignment Search Tool)及びＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズム(Altschul, 1997, Nucl. Acids Res. 25:3389-3402; Altschul, 1993 J. Mol. Evol. 36:290-300; Altschul, 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410)である。核酸配列のＢＬＡＳＴＮプログラムは、デフォルトとして、１１のワード長(Ｗ)、１０の期待(Ｅ)、Ｍ＝５、Ｎ＝４、及び両鎖の比較を使用する。アミノ酸配列については、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして、３のワード長(Ｗ)、１０の期待(Ｅ)を使用する。ＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス(Henikoff (1989) PNAS 89:10915)は、５０のアラインメント(Ｂ)、１０の期待(Ｅ)、Ｍ＝５、Ｎ＝４、及び両鎖の比較を使用する。

【0065】

上述のように、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、配列類似性を決定するために、アミノ及びヌクレオチド配列双方のアラインメントを生成する。アラインメントのローカル特性により、ＢＬＡＳＴは、正確な一致の決定、又は類似な配列の同定に特に有用である。ＢＬＡＳＴアルゴリズム出力の基本ユニットは、高スコアセグメント対(High-scoring Segment Pair(HSP))である。ＨＳＰは、アラインメントが局所的に最大であり、アラインメントスコアがユーザーによって設定される閾値又はカットオフを満たすか超す、任意であるが等しい長さの２つの配列断片から成る。ＢＬＡＳＴアプローチは、問い合わせ配列及びデータベース配列間のＨＳＰを探し、見つけた何れかの一致の統計的有意性を評価し、有意性のユーザー選択閾値を満たすその一致のみを報告する。パラメーターＥは、データベース配列一致を報告するための統計的に有意な閾値を定める。Ｅは、全データベース検索の設定において、ＨＳＰの(又はＨＳＰのセット)の発生の機会の期待頻度の上限として解釈される。その一致がＥを満たす何れかのデータベース配列が、プログラムの出力において報告される。

【0066】

ＢＬＡＳＴを使用する類似なコンピューター技術が、タンパク質又はヌクレオチドデータベース、例えばＧｅｎＢａｎｋ又はＥＭＢＬにおける同一又は関連分子の検索に使用されうる。この分析は、多重膜ベースハイブリダイゼーション(multiple membrane-based hybridizations)よりはるかに早い。更に、コンピューター検索の感度は、任意の特定の一致が、正確又は類似として分類されるか決定するように変更できる。検索の基本は、次のように定義されるプロダクトスコアであり：
％配列同一性 ｘ ％最大ＢＬＡＳＴスコア
１００
２つの配列間の類似性の度合い、及び配列一致の長さの双方を考慮する。例えば、４０のプロダクトスコアでは、一致は１−２％エラー内で正確であろう；７０では、一致は正確であろう。類似分子は通常、１５及び４０の間のプロダクトスコアを示すものを選択することによって同定されるが、低いスコアは関連した分子を同定しうる。配列アラインメントを生成できるプログラムの他の例は、当分野で知られているＣＬＵＳＴＡＬＷコンピュータープログラム(Thompson, 1994, Nucl. Acids Res. 2:4673-4680)又はＦＡＳＴＤＢ(Brutlag, 1990, Comp. App. Biosci. 6:237-245)である。

【0067】

ここに記載の発明の関連において、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及び／又はＰＬＧＦの発現レベル、特にタンパク質発現レベルは、個々のマーカーとして別個に、又は発現プロファイル又はマーカーパネルとして２つ以上のグループにおいて検討されうる。ここに記載の発明の関連において、発現プロファイル又はマーカーパネル(ここでは、２つ以上のマーカーの発現プロファイルが一緒に考慮されうる)は、組合せ発現レベルとしても言及されうる。例えば、２つ以上のマーカーの発現レベルが加えられ、類似に決定されたコントロール組合せ発現レベルと比較されうる。従って、発明の方法は、一又は複数のマーカーの発現レベルに基づく、組合せ発現レベルを含む、発現プロファイルの決定を包含する。

【0068】

ここに記載の発明の関連であって、添付の説明的実施例に従うと、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２又はＰＬＧＦの別個の検討では、次の値を、マーカーの対応する高又は低発現値として使用した：高ＶＥＧＦＡ(≧１５２．９ｐｇ／ｍｌ)、低ＶＥＧＦＡ(＜１５２．９ｐｇ／ｍｌ)、高ＶＥＧＦＲ２(≧９．９ｎｇ／ｍｌ)、低ＶＥＧＦＲ２(＜９．９ｎｇ／ｍｌ)。これらのレベルは、予め決定された統計的分析計画により、利用可能なサンプルの中央値によって決定した。更に、特定マーカーの高及び低発現間のカットオフ値を構成する最適化レベルは、カットオフの上及び下の患者のサブセットが、関連する統計的最適性基準を満たすまで、カットオフを変更することによって決定されうる。例えば、最適カットポイントは、サブセットの上及び下間の治療ハザード比における差異を最大にするように、又は一サブグループにおける治療効果、又は何れかの他の関連統計的基準を最大にするように選択されうる。ここに記載の発明の関連であって、添付の説明的実施例に従うと、別個に検討されるＰＬＧＦの最適化発現値は、高ＰＬＧＦ(≧３６．５ｐｇ／ｍｌ)、及び低ＰＬＧＦ(＜３６．５ｐｇ／ｍｌ)であった。このレベルは、利用可能なデータの４２パーセンタイルとして決定された。このレベルは、高及び低レベル間の治療効果における統計的差異を増加させるために決定された。しかしながら、当業者は、特定マーカーの発現レベル、従って、高又は低発現レベルを構成しているものが、患者ごとの集団によって異なりうることを理解するだろう。従って、当業者は、添付の説明的実施例に記載するもの以外の検出方法を使用し、添付の説明的実施例に記載するもの以外の患者及び患者集団を研究する場合、当業者が特定のバイオマーカーについて高及び／又は低発現レベルと考えるものは、ここに記載の値と異なりうることを理解するだろう。ここに記載の方法により、当業者は、特定のバイオマーカーの高及び／又は低レベルの発現を構成するものを決定できる。

【0069】

当業者が理解するように、調査中の診断的質問を改善するために、２つ以上のマーカーの測定を使用する多くの方法があることを理解するだろう。非常に単純だが、しばしば効果的なアプローチでは、サンプルが、調査されるマーカーの少なくとも一つについて陽性である場合、陽性結果が仮定される。

【0070】

しかしながら、マーカーの組合せも評価されうる。例えばＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２又はＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦ又はＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの、マーカーパネルのマーカーについて測定された値(又は組合せ発現レベル)は数学的に組合せられ得、組合せられた値は、根底にある診断的質問と相関されうる。マーカー値は、任意の適切な技術水準の数学的方法によって組み合せられうる。マーカーの組合せを疾患又は治療効果に相関させるためのよく知られた数学的方法は、判別分析(ＤＡ)(すなわち、線形-、二次-、正規化-ＤＡ)、カーネル法(すなわち、ＳＶＭ)、ノンパラメトリック手法(すなわち、ｋ近傍分類)、ＰＬＳ(部分最小二乗法)、樹木ベース法(すなわち、ロジック回帰、ＣＡＲＴ、ランダムフォレスト方法、ブースティング／バギング方法)、一般化線形モデル(すなわち、ロジスティック回帰)、主成分ベース方法(すなわち、ＳＩＭＣＡ)、一般加法モデル、ファジー論理ベース方法、ニューラルネットワーク及び遺伝的アルゴリズムベース方法等の方法を使用する。当業者は、本発明のマーカーの組合せを評価するための適切な方法の選択に問題はないだろう。ここに開示の発明によるマーカーの組合せの、例えば、化学療法剤／化学療法レジメンへのベバシズマブの追加に対する改善された全生存、無進行生存、応答性又は感受性、及び／又はベバシズマブ(一又は複数の化学療法剤／化学療法レジメンに追加して)への応答性又は感受性の予測との相関において使用される方法は、ＤＡ(すなわち、線形-、二次-、正規化判別分析)、カーネル法(すなわち、ＳＶＭ)、ノンパラメトリック手法(すなわち、ｋ近傍分類)、ＰＬＳ(部分最小二乗法)、樹木ベース法(すなわち、ロジック回帰、ＣＡＲＴ、ランダムフォレスト方法、ブースティング方法)、又は一般化線形モデル(すなわち、ロジスティック回帰)から選択される。これらの統計的方法に関する詳細は、次の参照文献に見られる：Ruczinski, I., et al, J. of Computational and Graphical Statistics, 12 (2003) 475-511; Friedman, J. H., J. of the American Statistical Association 84 (1989) 165-175; Hastie, Trevor, Tibshirani, Robert, Friedman, Jerome, The Elements of Statistical Learning, Springer Series in Statistics, 2001; Breiman, L., Friedman, J. H., Olshen, R. A., Stone, C. J. (1984) Classification and regression trees, California: Wadsworth; Breiman, L., Random Forests, Machine Learning, 45 (2001) 5-32; Pepe, M. S., The Statistical Evaluation of Medical Tests for Classification and Prediction, Oxford Statistical Science Series, 28 (2003); and Duda, R. O., Hart, P. E., Stork, D. G., Pattern Classification, Wiley Interscience, 2nd Edition (2001)。

【0071】

従って、ここに開示の発明は、根本にある組合せのバイオマーカーのための、及び状態Ａと状態Ｂとを区別するための、例えば化学療法レジメンへのベバシズマブの追加に応答性又は感受性の患者と、化学療法レジメンへのベバシズマブ療法の追加に乏しい応答の患者とを区別するための最適化多変量カットオフの使用に関する。このタイプの分析では、マーカーはもはや独立的ではなく、マーカーパネル又は組合せ発現レベルを形成する。

【0072】

本発明は、従って、ＶＥＧＦＡ、ＰＬＧＦ及びＶＥＧＦＲ２の２つ以上の発現レベルを決定し、各発現レベルを重み関数(又は重み付け係数)で乗じるように、これらの発現レベルを加えることによって、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、膵臓癌，特に転移性膵臓癌を患っている患者の化学療法レジメンの治療効果を改善するための方法に関する。驚くべきことに、結果(「値」、数学的操作の結果、又は組合せ発現レベル)は、併用化学療法レジメンにおいてベバシズマブを投与される患者における治療効果と相関し、事前に定めた(多変量)カットオフより上の値は、患者の良好な治療効果の指標となり、このカットオフより下の値は、乏しい治療効果の指標となる。

【0073】

本発明は、従って、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の発現レベルを決定し、各発現レベルを重み関数(又は重み付け係数)で乗じるように、これらの発現レベルを加えることによって、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、癌、特に転移性膵臓癌を患っている患者の化学療法レジメンの治療効果を改善するための方法に関する。驚くべきことに、結果(「値」、数学的操作の結果、又は組合せ発現レベル)は、併用化学療法レジメンにおいてベバシズマブを投与される患者における治療効果と相関し、事前に定めた(多変量)カットオフより上の値は、患者の良好な治療効果の指標となり、このカットオフより下の値は、乏しい治療効果の指標となる。

【0074】

本発明は、また、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの発現レベルを決定し、各発現レベルを重み関数(又は重み付け係数)で乗じるように、これらの発現レベルを加えることによって、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、癌、特に転移性膵臓癌を患っている患者の化学療法レジメンの治療効果を改善するための方法に関する。驚くべきことに、結果(「値」、数学的操作の結果、又は組合せ発現レベル)は、併用化学療法レジメンにおいてベバシズマブを投与される患者における治療効果と相関し、事前に定めた(多変量)カットオフより上の値は、患者の良好な治療効果の指標となり、このカットオフより下の値は、乏しい治療効果の指標となる。

【0075】

本発明は、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルを決定し、各発現レベルを重み関数(又は重み付け係数)で乗じるように、これらの発現レベルを加えることによって、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることによって、癌、特に転移性膵臓癌を患っている患者の化学療法レジメンの治療効果を改善するための方法に関する。驚くべきことに、結果(「値」、数学的操作の結果、又は組合せ発現レベル)は、併用化学療法レジメンにおいてベバシズマブを投与される患者における治療効果と相関し、事前に定めた(多変量)カットオフより上の値は、患者の良好な治療効果の指標となり、このカットオフより下の値は、乏しい治療効果の指標となる。

【0076】

例えば、添付の説明的実施例に示すように、治療効果が転移性膵臓癌を患っている患者における全生存である場合、次の式が、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２又はＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの組合せ発現レベルを評価するために使用できる。
式１：ノルム(ＶＥＧＦＡ)＋１．３＊ノルム(ＶＥＧＦＲ２)。カットポイント＝中央値又は０
等価式：ＶＥＧＦＡ＋３．３＊ＶＥＧＦＲ２。カットポイント＝中央値又は０
及び
式２：０．２５＊ノルム(ＶＥＧＦＡ)＋０．２１＊ノルム(ＰＬＧＦ)、カットポイント＝中央値又は０
等価式：０．１９＊ＶＥＧＦＡ＋０．６７＊ＰＬＧＦ、カットポイント＝中央値又は４．８
ここで我々はｌｏｇ２変換及び

を使用する。

【0077】

従って、ここに記載の発明の関連であって、添付の説明的実施例に従うと、全生存に関し、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の高組合せ発現レベルは(式１≧−０．１)であり、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の低組合せ発現は(式１＜−０．１)である。ここに記載の発明の関連であって、添付の説明的実施例に従うと、全生存に関し、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの高組合せ発現レベルは(式２≧−０．０４２)であり、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの低組合せ発現は(式２＜−０．０４２)である。しかしながら、当業者は、例えばＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２又はＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの、マーカーパネルのマーカーについて測定された発現レベル(又は組合せ発現レベル)が数学的に組合せられ得、組合せられた発現レベルが、一以上の方法において、根底にある診断的質問と相関されうることを理解するだろう。従って、マーカーレベルは、任意の適切な技術水準の数学的方法によって組み合せられうる。

【0078】

添付の説明的実施例にも示すように、治療効果が転移性膵臓癌を患っている患者における無進行生存である場合、次の式が、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２又はＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの組合せ発現レベルを評価するために使用できる。
式１：ノルム(ＶＥＧＦＡ)＋１．３＊ノルム(ＶＥＧＦＲ２)。カットポイント＝中央値又は０
等価式：ＶＥＧＦＡ＋３．３＊ＶＥＧＦＲ２。カットポイント＝中央値又は０
及び
式２：０．２５＊ノルム(ＶＥＧＦＡ)＋０．２１＊ノルム(ＰＬＧＦ)、カットポイント＝中央値又は０
等価式：０．１９＊ＶＥＧＦＡ＋０．６７＊ＰＬＧＦ、カットポイント＝中央値又は４．８
ここで我々はｌｏｇ２変換及び

を使用する。

【0079】

従って、ここに記載の発明の関連であって、添付の説明的実施例に従うと、無進行生存に関し、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の高組合せ発現レベルは(式１≧−０．１)であり、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の低組合せ発現は(式１＜−０．１)である。ここに記載の発明の関連であって、添付の説明的実施例に従うと、無進行生存に関し、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの高組合せ発現レベルは(式２≧−０．０４２)であり、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの低組合せ発現は(式２＜−０．０４２)である。しかしながら、当業者は、例えばＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２又はＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの、マーカーパネルのマーカーについて測定された発現レベル(又は組合せ発現レベル)が数学的に組合せられ得、組合せられた発現レベルが、一以上の方法において、根底にある診断的質問と相関されうることを理解するだろう。従って、マーカーレベルは、任意の適切な技術水準の数学的方法によって組み合せられうる。

【0080】

例えば、添付の説明的実施例に示すように、治療効果が転移性膵臓癌を患っている患者における全生存又は無進行生存である場合、次の式が、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの組合せ発現レベルを評価するために使用できる。
式３：０．０１２７＊ｌｎ(ＰＬＧＦ＋１)＋０．１４４＊ｌｎ(ＶＥＧＦＲ２＋１)＋０．０９４９＊ｌｎ(ＶＥＧＦＡ＋１)
ここで、ｌｎ＝ｌｏｇ底ｅ

【0081】

従って、ここに記載の発明の関連であって、添付の説明的実施例に従うと、全生存に関し、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの高組合せ発現レベルは(式３≧０．８３７)であり、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの低組合せ発現は(式３＜０．８３７)である。ここに記載の発明の関連であって、添付の説明的実施例に従うと、無進行生存に関し、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの高組合せ発現レベルは(式３≧０．８３７)であり、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの低組合せ発現は(式３＜０．８３７)である。しかしながら、当業者は、例えばＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの、マーカーパネルのマーカーについて測定された発現レベル(又は組合せ発現レベル)が数学的に組合せられ得、組合せられた発現レベルが、一以上の方法において、根底にある診断的質問と相関されうることを理解するだろう。従って、マーカーレベルは、任意の適切な技術水準の数学的方法によって組み合せられうる。

【0082】

一又は複数のマーカーＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルは、患者サンプルにおける特定のタンパク質レベルの決定に適切な当分野で知られている任意の方法によって評価され得、好ましくは、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦに特異的な抗体を用い、ＥＬＩＳＡなどのイムノアッセイ方法によって決定される。このような方法はよく知られており、当分野でルーチン的に実施され、対応する市販の抗体及び／又はキットは容易に入手可能である。例えば、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのための市販の抗体／試験キットは、クローン３Ｃ５及び２６５０３はBender RELIATech及びR&D Systemsから、クローン８９１１５及び８９１０９はR&D systemsから、クローン２Ｄ６Ｄ５及び６Ａ１１Ｄ２はRoche Diagnostics GmbHからそれぞれ得ることができる。好ましくは、発明のマーカー／指標タンパク質の発現レベルは、抗体又はキット製造者の推奨試薬及び／又はプロトコルを使用して評価される。当業者はまた、イムノアッセイ方法により一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルを決定するための更なる手段に気付くだろう。従って、発明のマーカー／指標の一又は複数の発現レベルは、不当な負担無く、当業者によってルーチン的に、また再現性よく決定できる。しかしながら、正確で再現性のある結果を確実にするために、発明はまた、試験手順の検証を確実にする専門の実験質において、患者サンプルを試験することを包含する。

【0083】

ＶＥＧＦ_１２１及びＶＥＧＦ_１１０タンパク質は、当業者に知られている任意の方法を使用して検出できる。例えば、哺乳類からの組織又は細胞サンプルは、ウェスタン、ＥＬＩＳＡ等を使用して、例えばタンパク質について簡便にアッセイできる。上記技術の適用におけるガイダンスの提供のために、多くの参照文献が入手可能である(Kohler et al., Hybridoma Techniques (Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 1980); Tijssen, Practice and Theory of Enzyme Immunoassays (Elsevier, Amsterdam, 1985); Campbell, Monoclonal Antibody Technology (Elsevier, Amsterdam, 1984); Hurrell, Monoclonal Hybridoma Antibodies:Techniques and Applications (CRC Press, Boca Raton, FL, 1982); and Zola, Monoclonal Antibodies:A Manual of Techniques, pp. 147-1 58 (CRC Press, Inc., 1987))。

【0084】

ＶＥＧＦ_１２１及びＶＥＧＦ_１１０の検出又はレベルに言及する場合、これは、例えば、ＶＥＧＦ_１２１及びＶＥＧＦ_１１０双方を検出するアッセイを使用して、双方の分子の合計が測定されることを意味する。双方の分子ＶＥＧＦ_１２１及びＶＥＧＦ_１１０を検出するアッセイは、例えば、対応する他の形態について(すなわち、ＶＥＧＦ_１１０が良好に認識される場合はＶＥＧＦ_１２１について、又はＶＥＧＦ_１２１が良好に認識される場合はＶＥＧＦ_１１０ついてそれぞれ)少なくとも２５％の感受性を有するアッセイを含む。ある実施態様では、アッセイでは、少なくとも５０％、７５％、８０％、８５％、９０％以上の、対応する他の形態に対する感受性を有する。一実施態様では、ＶＥＧＦ_１２１及びＶＥＧＦ_１１０は、基本的に同じ感受性で測定される。

【0085】

ＶＥＧＦ_１２１及びＶＥＧＦ_１１０タンパク質の検出については、様々なアッセイが利用可能である。例えば、サンプルは、長い、天然に生じるＶＥＧＦ-ＡアイソフォームＶＥＧＦ_１６５及びＶＥＧＦ_１８９それぞれと比較して、短いＶＥＧＦ-Ａアイソフォーム、ＶＥＧＦ_１２１及びＶＥＧＦ_１１０それぞれと優先的に又は特異的に結合する抗体又は抗体の組合せ(例えば、サンドイッチアッセイにおいて)と接触され得る。好ましくは、短アイソフォームは、長アイソフォームと比較して少なくとも３倍高い感受性で検出される。標準曲線が、短アイソフォーム(ＳＤＳ-ＰＡＧＥにより少なくとも９０％の純度及びＯＤ２８０ｎｍによって決定される濃度)を使用して得られ、同じ試薬及び同じ標準曲線を使用する所定の濃度での長アイソフォーム(ＳＤＳ-ＰＡＧＥにより少なくとも９０％の純度及びＯＤ２８０ｎｍによって決定される濃度)について、標準曲線の読取り値が、期待した濃度の３分の１以下のみである場合、少なくとも３倍高い感受性が確認される。また好ましくは、短アイソフォームの感受性は、長アイソフォームと比較して、特にＶＥＧＦ_１６５と比較して少なくとも４倍、５倍、６倍、７倍、８倍又は９倍高い。

【0086】

一実施態様では、短アイソフォームＶＥＧＦ_１２１及びＶＥＧＦ_１１０双方が特異的に検出される。このような特異的検出は、例えば、ＶＥＧＦ_１２１におけるエクソン４及び８を連結することによって生成される配列又はＶＥＧＦ_１１０のフリーＣ末端それぞれに結合する抗体、特にモノクローナル抗体が使用及び適用される場合に可能である。このようなＶＥＧＦ_１１０抗Ｃ末端抗体は、長ポリペプチド鎖の一部としてアミノ酸１１０を含んでなる何れかのＶＥＧＦ-Ａアイソフォームに、又は例えばアミノ酸１０９の短ＶＥＧＦ-Ａ断片末端に結合しない。ＶＥＧＦ_１２１においてそれぞれエクソン４及び８を連結することによって生成される配列に結合するモノクローナル抗体は、長ＶＥＧＦアイソフォーム１６５及び１８９それぞれに含まれるアミノ酸配列に結合しないだろう。なぜなら、そこでは、エクソン４及びエクソン７の、及びエクソン４及びエクソン５それぞれの連結により、他のアミノ酸配列が存在するからである(Ferrara, N., Mol.Biol. of the Cell 21 (2010) 687-690を参照)。使用する抗体が、短断片と１０％未満の交差反応、及び抗ＶＥＧＦ_１１０抗体の場合フリーＣ末端アミノ１１０を持たないそれらのＶＥＧＦ-Ａアイソフォームと、又は抗ＶＥＧＦ_１２１抗体の場合、エクソン４及び８の連結によって生成される配列を含んでなるそれらのアイソフォームとそれぞれ１０％未満の交差反応を呈する場合に、上記配列の特異的結合が確認される。また好ましくは、交差反応は、短断片及び、フリーＣ末端アミノ酸１１０をもたないか又はエクソン４及び８の連結によって生成される配列を持たないＶＥＧＦアイソフォーム双方それぞれに、それぞれ５％、４％、３％、２％及び１％未満であろう。

【0087】

短ＶＥＧＦアイソフォームＶＥＧＦ_１２１又はＶＥＧＦ_１１０にのみそれぞれ結合する適切な特異的抗体は、標準的な手順に従って得ることができる。通常、ＶＥＧＦ_１１０の最も少なくとも４、５、６、７、８、９、１０以上のアミノ酸Ｃ末端を呈するか含んでなるペプチド、又はのＶＥＧＦ_１２１のアミノ酸１１５にアミノ酸Ｃ末端及びＮ末端を含んでなる少なくとも５、６、７、８、９、１０以上のアミノ酸を呈するか又は含んでなるペプチドがそれぞれ合成され、場合によっては担体にカップリングされ、免疫化に使用されるだろう。特異的ポリクローナル抗体は、適切な免疫吸着工程によって得ることができる。モノクローナル抗体は、ＶＥＧＦ_１２１又はＶＥＧＦ_１１０それぞれとの反応性、及び適切な低交差反応について容易にスクリーニングできる。ＶＥＧＦ１１０特異的抗体に関して、低交差反応は、ＶＥＧＦ_１１０の短断片(例えば、ＶＥＧＦ_１１０のＣ末端アミノ酸を欠如)及びＶＥＧＦ_１１０のフリーＣ末端を持たないＶＥＧＦ-Ａアイソフォーム双方について評価できる。ＶＥＧＦ_１２１特異的抗体に関する低交差反応性は、エクソン４及びエクソン７の、及びエクソン４及びエクソン５の連結によって形成されるアミノ酸配列を含むＶＥＧＦアイソフォームを使用して評価できる。

【0088】

ＶＥＧＦ_１１１タンパク質又は核酸は、当分野で知られている任意の方法を使用して検出できる。例えば、哺乳類からの組織又は細胞サンプルは、例えば、ウエスタン、ＥＬＩＳＡを使用してタンパク質について、ノーザン、ドットブロット、又はポリメラーゼ連鎖反応(ＰＣＲ)分析、アレイハイブリダイゼーション、ＲＮａｓｅプロテクションアッセイを使用して、又はＤＮＡ ＳＮＰチップマイクロアレイを使用して、興味の遺伝的バイオマーカーからのｍＲＮＡ又はＤＮＡについて、簡便にアッセイでき、これらは市販されており、ＤＮＡマイクロアレイスナップショットを含む。例えば、リアルタイムＰＣＲ(ＲＴ-ＰＣＲ)アッセイ、例えば定量ＰＣＲアッセイは、当分野でよく知られている。発明の説明的実施態様では、生物学的サンプルにおける興味の遺伝的バイオマーカーからのｍＲＮＡの検出のための方法は、少なくとも一つのプライマーを使用して逆転写によってサンプルからｃＤＮＡを生成すること；そのように生成されたｃＤＮＡを増幅すること；及び増幅されたｃＤＮＡの存在を検出することを含む。更に、このような方法は、生物学的サンプルにおけるｍＲＮＡのレベルの決定を可能にする一又は複数の工程を含むことができる(例えば、「ハウスキーピング」遺伝子、例えばアクチンファミリーメンバーの比較コントロールｍＲＮＡ配列のレベルを同時に調べることによって)。場合によっては、増幅ｃＤＮＡの配列が決定されうる。

【0089】

上記技術の適用におけるガイダンスの提供のために、多くの参照文献が入手可能である(Kohler et al., Hybridoma Techniques (Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 1980); Tijssen, Practice and Theory of Enzyme Immunoassays (Elsevier, Amsterdam, 1985); Campbell, Monoclonal Antibody Technology (Elsevier, Amsterdam, 1984); Hurrell, Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications (CRC Press, Boca Raton, FL, 1982); and Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-1 58 (CRC Press, Inc., 1987)。

【0090】

ＶＥＧＦ_１１１タンパク質の検出について、様々なアッセイが利用可能である。例えば、サンプルは、長い天然に生じるＶＥＧＦ-ＡアイソフォームＶＥＧＦ_１６５及びＶＥＧＦ_１８９それぞれと比較して、ＶＥＧＦ_１１１に選択的又は特異的に結合する抗体又は抗体の組合せ(例えば、サンドイッチアッセイにおいて)と接触されうる。好ましくは、短アイソフォームＶＥＧＦ_１１１は、長アイソフォームと比較して少なくとも３倍高い感受性で検出される。標準曲線が、短アイソフォーム(ＳＤＳ-ＰＡＧＥにより少なくとも９０％の純度及びＯＤ２８０ｎｍによって決定される濃度)を使用して得られ、同じ試薬及び同じ標準曲線を使用する所定の濃度での長アイソフォーム(ＳＤＳ-ＰＡＧＥにより少なくとも９０％の純度及びＯＤ２８０ｎｍによって決定される濃度)について、標準曲線の読取り値が、期待した濃度の３分の１以下のみである場合、少なくとも３倍高い感受性が確認される。また好ましくは、短アイソフォームの感受性は、長アイソフォームと比較して少なくとも４倍、５倍、６倍、７倍、８倍又は９倍高い。

【0091】

一実施態様では、アイソフォームＶＥＧＦ_１１１が特異的に検出される。このような特異的検出は、例えば、ＶＥＧＦ_１１１に独自のエクソン接合部に結合する抗体、特にモノクローナル抗体が使用及び適用される場合に、可能である。このような抗体は、他のＶＥＧＦ-Ａアイソフォーム、又はこの特異的エクソン接合部を含まないその切断産物に結合しない。上記の意味での特異的結合は、もし、使用する抗体が、この独自のエクソン接合部を持たない、ＶＥＧＦ_１２１又はＶＥＧＦ_１６５のような他のＶＥＧＦ-Ａアイソフォームとそれぞれ、１０％未満の交差反応を呈する場合に、確認される。また好ましくは、例えばＶＥＧＦ_１２１への交差反応は、それぞれ５％、４％、３％、２％及び１％未満であろう。

【0092】

ＶＥＧＦ_１１１の特異性は、一実施態様では、同じ試薬を使用して、ＶＥＧＦ１１１(ＳＤＳ-ＰＡＧＥにより少なくとも９０％の純度及びＯＤ２８０ｎｍにより決定される濃度)及びＶＥＧＦ１２１(ＳＤＳ-ＰＡＧＥにより少なくとも９０％の純度及びＯＤ２８０ｎｍにより決定される濃度)を比較することによって評価される。この比較において、ＶＥＧＦ_１２１材料について得られるシグナルが、ＶＥＧＦ_１１１材料で得られるシグナルの１０分の１以下のみである場合、ＶＥＧＦ_１２１についての交差反応は１０％未満である。当業者が理解するように、ＶＥＧＦ_１２１シグナルは好ましくは、ＶＥＧＦ_１１１の最大シグナルの約５０％をもたらす濃度で読み取られる。

【0093】

短ＶＥＧＦアイソフォームＶＥＧＦ_１１１にのみ結合する適切な特異的抗体は、標準的な手順に従って得ることができる。通常、ＶＥＧＦ_１１１のアミノ酸１０５に、アミノ酸Ｃ末端及びＮ末端を示すか又は含んでなるペプチドが合成され得、場合によっては担体にカップリングされ、免疫化に使用される。好ましくは、このようなペプチドは、少なくとも６アミノ酸長であり、少なくとも、ＶＥＧＦ_１１１のアミノ酸１０５及び１０６を含むだろう。また好ましいのは、少なくとも、ＶＥＧＦ_１１１のアミノ酸１０４、１０５、１０６及び１０７を含むだろう。当業者が理解できるように、ＶＥＧＦ_１１１のアミノ酸１０５及び１０６間のエクソン接合部に、例えば３以上のアミノ酸Ｎ及びＣ末端を含んでなる、より長いペプチドも、ＶＥＧＦ_１１１に特異的に結合する抗体を得るために使用できる。

【0094】

非修飾ＶＥＧＦタンパク質は、当分野で知られている任意の適切な方法を使用して検出できる。好ましくは、抗体は、RELIATech GmbH, Wolfenbutel, Germanyから市販されているＭＡＢ３Ｃ５のような、修飾ＶＥＧＦと比較して、非修飾ＶＥＧＦへの優先的な結合特性を少なくとも有する抗体が使用されるだろう。例えば、哺乳類からの組織又は細胞サンプルは、ウエスタン、ＥＬＩＳＡ等を使用して、非修飾ＶＥＧＦタンパク質について簡便にアッセイできる。上記技術の適用におけるガイダンスの提供のために、多くの参照文献が入手可能である(Kohler et al., Hybridoma Techniques (Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 1980); Tijssen, Practice and Theory of Enzyme Immunoassays (Elsevier, Amsterdam, 1985); Campbell, Monoclonal Antibody Technology (Elsevier, Amsterdam, 1984); Hurrell, Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications (CRC Press, Boca Raton, FL, 1982); and Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-1 58 (CRC Press, Inc., 1987))。

【0095】

非修飾ＶＥＧＦの検出又はレベルに言及する場合、これは、例えばＭＡＢ３Ｃ５に結合されるような非修飾ＶＥＧＦ分子(アイソフォーム又は切断産物)が測定される。

【0096】

非修飾ＶＥＧＦタンパク質の検出については、様々なアッセイが利用可能である。例えば、サンプルは、例えば、患者のサンプルにおいて天然に生じるような修飾ＶＥＧＦと比較して、非修飾ＶＥＧＦに優先的又は特異的に結合する抗体又は抗体の組合せ(例えば、サンドイッチアッセイにおいて)と接触されうる。好ましくは、非修飾ＶＥＧＦは、非修飾ＶＥＧＦに特異的に結合する抗体を使用して、すなわち、修飾ＶＥＧＦ１６５と比較して、非修飾ＶＥＧＦ１６５に少なくとも３倍高い感受性を有する抗体で、検出される。非修飾ＶＥＧＦについての、このような少なくとも３倍高い感受性は、大腸菌において組換え的に生産されるＶＥＧＦ１６５(ＳＤＳ-ＰＡＧＥにより少なくとも９０％の純度、及びＯＤ２８０ｎｍにより決定される濃度)と、ＨＥＫ細胞において組換え的に生産されるＶＥＧＦ１６５(ＳＤＳ-ＰＡＧＥにより少なくとも９０％の純度、及びＯＤ２８０ｎｍにより決定される濃度)とを、同じ試薬を使用して比較することによって評価される。この比較において、ＨＥＫ生産による材料について得られるシグナルが、大腸菌由来の材料で得られるシグナルの３分の１以下のみである場合、非修飾ＶＥＧＦは、少なくとも３倍高い感受性で検出される。当業者が理解するように、シグナルが好ましくは最大シグナルの約５０％で読み取られる。好ましくは、この評価では、実施例５のアッセイが使用される。また好ましくは、非修飾ＶＥＧＦ(ＶＥＧＦ１６５ ｅｘ Ｅ．ｃｏｌｉ)に特異的に結合する抗体は、修飾ＶＥＧＦ材料(ＶＥＧＦ１６５ ｅｘ ＨＥＫ細胞)と比較して、少なくとも４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍又は１０倍高い感受性で非修飾ＶＥＧＦを検出する抗体である。

【0097】

一実施態様では、非修飾ＶＥＧＦは、市販のＭＡＢ３Ｃ５のように、修飾ＶＥＧＦと比較して非修飾ＶＥＧＦに少なくとも同じ結合優先性を有する抗体を使用して特異的に検出される。一実施態様では、非修飾ＶＥＧＦへの抗体の相対感受性又は優先的結合は、サンドイッチイムノアッセイにおいて評価され、ここで、非修飾ＶＥＧＦに対する抗体は捕獲抗体として使用され、全ての主要ＶＥＧＦアイソフォーム又は切断産物上に存在するエピトープに結合する検出抗体が使用される。一実施態様では、検出抗体は、ＭＡＢ３Ｃ５のエピトープ外のエピトープに結合するだろう。すなわちそれは、ＶＥＧＦのアミノ酸３３〜４３におよぶ合成ペプチドから成るエピトープに結合しないだろう。好ましくは、検出抗体は、１〜３２、４４〜１０５の範囲のアミノ酸から成るエピトープに、成熟ＶＥＧＦ１６５の最後の６のアミノ酸に、又はＭＡＢ３Ｃ５に結合されるエピトープと重複しない立体構造エピトープに結合するだろう。一実施態様では、修飾ＶＥＧＦと比較して非修飾ＶＥＧＦに特異的に結合する抗体は、ＶＥＧＦのアミノ酸３３〜４３におよぶ合成ペプチドから成るエピトープに結合する特性を有する。

【0098】

非修飾ＶＥＧＦに特異的に結合する適切な特異的抗体は、標準的な手順に従って得ることができる。通常、大腸菌において組換え的に生産されるか、又は合成的に、例えば固相ポリペプチド合成によって得られるＶＥＧＦのアイソフォーム、又は大腸菌において組換え的に生産されるか、又は合成的に、例えば固相ポリペプチド合成によって得られるＶＥＧＦのエピトープを表すか又は含んでなるペプチドが、免疫原として使用されるだろう。モノクローナル抗体は容易に、標準的なプロトコルに従って生産でき、非修飾ＶＥＧＦを用いて反応性について、また修飾ＶＥＧＦを用いて適切な低交差反応についてスクリーニングできる。一つの簡便で好ましいスクリーニング方法は、大腸菌において組換え的に生産されるＶＥＧＦ１６５(ＳＤＳ-ＰＡＧＥにより少なくとも９０％の純度、及びＯＤ２８０ｎｍにより決定される濃度)の、及びＨＥＫ細胞において組換え的に生産されるＶＥＧＦ１６５(ＳＤＳ-ＰＡＧＥにより少なくとも９０％の純度、及びＯＤ２８０ｎｍにより決定される濃度)の使用に基づく。

【0099】

一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルは、生物学的サンプルである患者サンプルにおいて評価されうる。患者サンプルは、血液サンプル、血清サンプル又は血漿サンプルでありうる。一実施態様では、サンプルはＥＤＴＡ-血漿である。一実施態様では、サンプルはクエン酸-血漿である。血液サンプル、血清サンプル及び血漿サンプルを得る方法は当分野でよく知られている。患者サンプルは、ネオアジュバント療法より前又は後に、又はアジュバント療法より前又は後に患者から得られうる。

【0100】

本発明の関連において、ベバシズマブは、当分野で知られる標準的な化学療法レジメンの一部として投与される一又は複数の化学療法剤に追加して、又は共療法又は共治療として投与される。このような標準的な化学療法レジメンに含まれる薬剤の例は、５-フルオロウラシル、ロイコボリン、イリノテカン、ゲムシタビン、エルロチニブ、カペシタビン、タキサン、例えばドセタキセル及びパクリタキセル、インターフェロンアルファ、ビノレルビン、及び白金ベース化学療法剤、例えばカルボプラチン、シスプラチン及びオキサリプラチンを含む。添付の説明的な実施例に示されるように、ゲムシタビン-エルロチニブ療法へのベバシズマブの追加は、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルによって定義及び選択される患者及び／又は患者集団における全生存及び／又は無進行生存における増加に影響した。このように、ベバシズマブは、添付の説明的実施例で示されるように、化学療法レジメン、例えばゲムシタビン-エルロチニブ療法と組み合わせられうる。

【0101】

投与の一般的な方法は、ボーラス投与としての、又は一定時間にわたる注入、例えば１０分、２０分、３０分、４０分、５０分、６０分、７５分、９０分、１０５分、１２０分、３時間、４時間、５時間又は６時間にわたる一日総投与量の投与としての非経口投与を含む。例えば、体重の２．５ｍｇ／ｋｇ〜体重の１５ｍｇ／ｋｇのベバシズマブ(アバスチン(登録商標))が、毎週、毎２週又は毎３週、治療されている癌のタイプに依存して投与されうる。投与量の例は、毎週、毎２週又は毎３週与えられる、体重の２．５ｍｇ／ｋｇ、体重の５ｍｇ／ｋｇ、体重の７．５ｍｇ／ｋｇ、体重の１０ｍｇ／ｋｇ及び体重の１５ｍｇ／ｋｇを含む。投与量の更なる例は、体重の５ｍｇ／ｋｇを毎２週、体重の１０ｍｇ／ｋｇを毎２週、体重の７．５ｍｇ／ｋｇを毎３週及び体重の１５ｍｇ／ｋｇを毎３週である。膵臓癌、特に転移性膵臓癌の治療では、投与量は、体重の５ｍｇ／ｋｇを毎２週、１０ｍｇ／ｋｇを毎２週、体重の７．５ｍｇ／ｋｇを毎３週及び体重の１５ｍｇ／ｋｇを毎３週を含む。当業者は、ベバシズマブの投与の更なる方法が、特定の患者及び化学療法レジメンによって決定され、発明によって包含され、投与の特定の方法及び治療用量が、当分野で知られている方法に従って、主治医によって最適に決定されることを理解するだろう。

【0102】

本発明の方法によって選択される患者は、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブで治療され、一又は複数の更なる抗癌療法で更に治療されうる。ある態様では、一又は複数の更なる抗癌療法は、放射線である。

【0103】

本発明はまた、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルの決定に適したオリゴヌクレオチド又はポリペプチドを含んでなる診断用組成物又はキットに関する。ここに詳細に記載するように、オリゴヌクレオチド、例えばＤＮＡ、ＲＮＡ又はＤＮＡ及びＲＮＡの混合のプローブが、マーカー／指標タンパク質のｍＲＮＡレベルの検出に有用であり得、ポリペプチドは、特異的タンパク質-タンパク質相互作用によるマーカー／指標タンパク質のタンパク質レベルの直接の検出に有用でありうる。発明の好ましい態様では、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルのためのプローブとして包含され、ここに記載のキット又は診断用組成物に含まれるポリペプチドは、これらのタンパク質に特異的な、又はその相同体及び／又はトランケーションに特異的な抗体である。

【0104】

従って、本発明の更なる実施態様は、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルを決定できるオリゴヌクレオチド又はポリペプチドを含んでなる、ここに記載の方法を実施するのに有用なキットを提供する。オリゴヌクレオチドは、ここに記載のマーカー／指標の一又は複数をコードするｍＲＮＡに特異的なプライマー及び／又はプローブを含み得、ポリペプチドは、マーカー／指標タンパク質との特異的な相互作用が可能なタンパク質、例えばマーカー／指標特異的抗体又は抗体断片を含む。

【0105】

従って、本発明は、膵臓癌を患っている患者のための改善された化学療法レジメンにおける使用のためのベバシズマブに関し、ここで、患者サンプルにおける一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルが決定され、それによって、膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロールレベルと比較して、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加したレベルを有する患者は、化学療法レジメンに加えて、ベバシズマブが投与される。

【0106】

以下の類似な使用が、変更すべきところは変更して適用されうる。

【0107】

本発明は、膵臓癌を患っている患者の化学療法レジメンの治療効果を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)患者サンプルにおける一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロールレベルと比較して、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加したレベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0108】

膵臓癌は、転移性膵臓癌でありうる。化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法でありうる。

【0109】

従って、本発明は、膵臓癌を患っている患者の化学療法レジメンの治療効果を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロールレベルと比較して、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加したレベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0110】

膵臓癌は、転移性膵臓癌でありうる。化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法でありうる。

【0111】

本発明は、膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)患者サンプルにおける一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロールレベルと比較して、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加したレベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0112】

膵臓癌は、転移性膵臓癌でありうる。化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法でありうる。

【0113】

従って、本発明は、膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロールレベルと比較して、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加したレベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0114】

膵臓癌は、転移性膵臓癌でありうる。化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法でありうる。

【0115】

本発明は、膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)患者サンプルにおける一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロールレベルと比較して、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加したレベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0116】

膵臓癌は、転移性膵臓癌でありうる。化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法でありうる。

【0117】

従って、本発明は、膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロールレベルと比較して、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加したレベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0118】

膵臓癌は、転移性膵臓癌でありうる。化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法でありうる。

【0119】

本発明は、膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ又はＶＥＧＦＲ２の発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロールレベルと比較して、ＶＥＧＦＡ又はＶＥＧＦＲ２の増加したレベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0120】

膵臓癌は、転移性膵臓癌でありうる。化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法でありうる。

【0121】

従って、本発明は、膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ又はＶＥＧＦＲ２の発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロールレベルと比較して、ＶＥＧＦＡ又はＶＥＧＦＲ２の増加したレベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0122】

膵臓癌は、転移性膵臓癌でありうる。化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法でありうる。

【0123】

本発明は、膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ又はＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロールレベルと比較して、ＶＥＧＦＡ又はＰＬＧＦの増加したレベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0124】

膵臓癌は、転移性膵臓癌でありうる。化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法でありうる。

【0125】

従って、本発明は、膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ又はＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロールレベルと比較して、ＶＥＧＦＡ又はＰＬＧＦの増加したレベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0126】

膵臓癌は、転移性膵臓癌でありうる。化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法でありうる。

【0127】

本発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用を提供する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0128】

本発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0129】

発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法である。

【0130】

従って、本発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存のためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法である。

【0131】

本発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用を提供する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0132】

本発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0133】

発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法である。

【0134】

従って、本発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存のためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法である。

【0135】

本発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用を提供する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0136】

従って、本発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存のためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0137】

本発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用を提供する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法である。

【0138】

従って、本発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存のためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法である。
本発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用を提供する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0139】

従って、本発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存のためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0140】

本発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用を提供する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法である。

【0141】

従って、本発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存のためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法である。

【0142】

本発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用を提供する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0143】

本発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0144】

発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法である。

【0145】

従って、本発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の全生存のためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法である。

【0146】

本発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用を提供する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0147】

本発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程。

【0148】

発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存を改善するためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｂ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法である。

【0149】

従って、本発明は、転移性膵臓癌を患っている患者の無進行生存のためのベバシズマブの使用であって、次の工程を含んでなる使用に関する：
(ａ)前記患者からサンプルを得る工程；
(ｂ)ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルを決定する工程；及び
(ｃ)転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロール組合せ発現レベルと比較して、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルを有する患者に、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与する工程、
ここで、化学療法レジメンは、ゲムシタビン-エルロチニブ療法である。

【0150】

添付の説明的実施例に記載のように、本発明は、同定された技術的問題を解消し、そこでは、膵臓癌、特に転移性膵臓癌と診断された患者において決定されるコントロールレベルと比較した、任意の患者における一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルレベルが、ゲムシタビン-エルロチニブ化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを投与された患者における治療効果と相関することが、驚くべきことに示された。添付の説明的実施例に示すように、ＶＥＧＦＡ又はＶＥＧＦＲ２の増加したタンパク質発現レベルが、プラセボ及びゲムシタビン-エルロチニブ化学療法レジメンで治療された患者と比較して、ベバシズマブ及びゲムシタビン-エルロチニブ化学療法レジメンで治療された転移性膵臓癌を患っている患者の改善された全生存と相関することが、驚くべきことに発見された(図２及び３)。ＶＥＧＦＡ又はＰＬＧＦの増加したタンパク質発現レベルが、プラセボ及びゲムシタビン-エルロチニブ化学療法で治療された患者と比較して、ベバシズマブ及びゲムシタビン-エルロチニブ化学療法レジメンで治療された転移性膵臓癌を患っている患者の改善された無進行生存と相関することが、驚くべきことに発見された(図２及び４)。更に、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の増加した組合せ発現レベルが、プラセボ及びゲムシタビン-エルロチニブ化学療法レジメンで治療された患者と比較して、ベバシズマブ及びゲムシタビン-エルロチニブ化学療法レジメンで治療された転移性膵臓癌を患っている患者の改善された全生存及び無進行生存と相関することが、驚くべきことに発見された(図５及び６)。また、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルが、プラセボ及びゲムシタビン-エルロチニブ化学療法レジメンで治療された患者と比較して、ベバシズマブ及びゲムシタビン-エルロチニブ化学療法レジメンで治療された転移性膵臓癌を患っている患者における改善された全生存及び無進行生存と相関することが、驚くべきことに発見された(図５及び６)。更に、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した組合せ発現レベルが、プラセボ及びゲムシタビン-エルロチニブ化学療法レジメンで治療された患者と比較して、ベバシズマブ及びゲムシタビン-エルロチニブ化学療法レジメンで治療された転移性膵臓癌を患っている患者における改善された全生存及び無進行生存と相関することが、驚くべきことに発見された(図７)。これらの結果は、これらの個々のマーカー及びこれらのマーカーの上記の組合せが、局所進行性、再発性又は転移性ＨＥＲ-２陰性乳癌を患っている患者におけるドセタキセル療法＋ベバシズマブ又はプラセボを比較する研究からの患者血漿サンプルにおいて分析された時、全生存と全く相関を示さなかったことが特に驚きである。

【0151】

発明は、従って、膵臓癌、特に転移性膵臓癌を患っているか、患っていると疑われるか又は患う傾向がある患者の、化学療法レジメンへのベバシズマブの追加に対する応答性又は感受性を予測するインビトロ方法であって、患者サンプルにおける一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの、組合せ発現レベルを含む発現レベルを決定することを含んでなる方法に関する。従って、ここに記載されている方法との関連で、発明は、患者サンプルにおける一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの、組合せ発現レベルを含む発現レベルを決定することを含んでなる、膵臓癌、特に転移性膵臓癌を患っているか、患っていると疑われるか又は患う傾向がある患者の、化学療法レジメンへのベバシズマブの追加に対する応答性又は感受性の予測のための診断用組成物の調製のための、例えば抗体及びアプタマーのような結合分子を含む、特異的プローブの使用を提供する。

【0152】

発明は、従って、転移性膵臓癌を患っているか、患っていると疑われるか又は患う傾向がある患者の、化学療法レジメンへのベバシズマブの追加に対する応答性又は感受性を予測するインビトロ方法であって、患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の組合せ発現レベルを決定することを含んでなる方法を提供する。従って、ここに記載されている方法との関連で、発明は、患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の組合せ発現レベルを決定することを含んでなる、転移性膵臓癌を患っているか、患っていると疑われるか又は患う傾向がある患者の、化学療法レジメンへのベバシズマブの追加に対する応答性又は感受性の予測のための診断用組成物の調製のための、例えば抗体及びアプタマーのような結合分子を含む、特異的プローブの使用を提供する。

【0153】

発明は、従って、転移性膵臓癌を患っているか、患っていると疑われるか又は患う傾向がある患者の、化学療法レジメンへのベバシズマブの追加に対する応答性又は感受性を予測するインビトロ方法であって、患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の組合せ発現レベルを決定することを含んでなる方法を提供する。従って、ここに記載されている方法との関連で、発明は、患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの組合せ発現レベルを決定することを含んでなる、転移性膵臓癌を患っているか、患っていると疑われるか又は患う傾向がある患者の、化学療法レジメンへのベバシズマブの追加に対する応答性又は感受性の予測のための診断用組成物の調製のための、例えば抗体及びアプタマーのような結合分子を含む、特異的プローブの使用を提供する。

【0154】

発明は、転移性膵臓癌を患っているか、患っていると疑われるか又は患う傾向がある患者の、化学療法レジメンへのベバシズマブの追加に対する応答性又は感受性を予測するインビトロ方法であって、患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの組合せ発現レベルを決定することを含んでなる方法を提供する。従って、ここに記載されている方法との関連で、発明は、患者サンプルにおけるＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの組合せ発現レベルを決定することを含んでなる、転移性膵臓癌を患っているか、患っていると疑われるか又は患う傾向がある患者の、化学療法レジメンへのベバシズマブの追加に対する応答性又は感受性の予測のための診断用組成物の調製のための、例えば抗体及びアプタマーのような結合分子を含む、特異的プローブの使用を提供する。

【0155】

本発明の関連で、「に応答性」なる言いまわしは、膵臓癌、特に転移性膵臓癌を患っているか、患っていると疑われるか又は患う傾向がある被験体／患者が、ベバシズマブの追加を含んでなる化学療法レジメンに対し応答を示すことを意味する。当業者は、発明の方法によりベバシズマブで治療された人が応答を示すかどうか容易に決定できる立場にある。例えば、応答は、転移性膵臓癌からの低下した苦痛、例えば減少した及び／又は停止した腫瘍増殖、腫瘍のサイズの低減、及び／又は癌の一又は複数の症状の寛解に反映されうる。好ましくは、応答は、膵臓癌の転移性変換の低下又は減少インデックス、例えば、転移の形成の防止、又は転移の数又はサイズの低減に反映されうる(例えば、Eisenhauser et al., New response evaluation criteria in solid tumours: Revised RECIST guideline (version 1.1) Eur. J. Cancer 2009 45: 228-247を参照)。

【0156】

本発明の関連で、「に感受性」なる言いまわしは、膵臓癌、特に転移性膵臓癌を患っているか、患っていると疑われるか又は患う傾向がある被験体／患者が、何らかの形で、化学療法レジメンとの組合せにおけるベバシズマブでの治療に陽性反応を示すことを意味する。上記のような、「に応答性」の患者と比較して、患者の反応はあまりはっきりしないだろう。例えば、腫瘍増殖又は転移指標における低下はないが、患者は疾患に関して苦痛をあまり経験せず、及び／又は化学療法レジメンとの組合せにおけるベバシズマブの反応は一過性のみであり得、すなわち、腫瘍及び／又は転位の増殖は一過性にのみ低減又は停止されうる。

【0157】

発明によると、「を患っている患者」なる言いまわしは、膵臓癌、特に転移性膵臓癌の臨床徴候を示している患者を指す。転移性膵臓癌の関連では、「患っていると疑われる」、「感受性である」、「患う傾向がある」又は「傾向がある」なる言いまわしは、例えばありうる遺伝的素因、有害及び／又は発癌性化合物への前又は最終的曝露、又は発癌性物理的ハザード、例えば放射線への曝露に基づく、患者における徴候疾患を指す。

【0158】

本発明の関連で、「化学療法レジメンの治療効果」なる言いまわしは、「全生存」及び「無進行生存」なる用語を包含する。

【0159】

本発明の関連で、「全生存」なる言いまわしは、患者が生存する治療中及び後の時間の長さを指す。当業者が理解するように、患者が、他の患者のサブグループと比較して、統計的に有意に長い平均生存時間を有する患者のサブグループに属する場合に、患者の全生存は改善又は増強される。

【0160】

本発明の関連で、「無進行生存」なる言いまわしは、治療中及び後の時間の長さであって、その間、臨床医又は調査員の評価により、患者の疾患が悪化していない、すなわち進行していない時間の長さを指す。当業者が理解するように、類似な状況の患者のコントロールグループの平均(average又はmean)の無進行生存時間と比較して、患者が、疾患が進行しない、より長い時間を経験する場合、患者の無進行生存は改善又は増強される。

【0161】

「投与」又は「投与する」なる用語は、ここで使用される場合、治療用抗体の投与について当分野で知られている任意の適切な手段による、このような治療又は医療介入を必要としている患者への、血管新生阻害剤、例えばベバシズマブ(アバスチン(登録商標))、及び／又は血管新生阻害剤、例えばベバシズマブ(アバスチン(登録商標))を含んでなる薬学的組成物／治療レジメンの投与を意味する。投与の非限定的経路は、経口、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、局所、皮内、鼻腔内又は気管支内投与(例えば、吸入によって達成される)を含む。この発明の関連で、特に好ましいのは、非経口投与、例えば静脈内投与である。

【0162】

「抗体」なる用語は、ここでは、最も広い意味で使用され、限定するものではないが、所望の生物学的活性、特に一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦへの、又はその相同体、変異体、断片及び／又はアイソフォームへの特異的結合を示す、モノクローナル及びポリクローナル抗体、多重特異性抗体(例えば、二重特異性抗体)、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体、単鎖抗体及び抗体断片及び断片コンストラクト、例えば、Ｆ(ａｂ′)_２断片、Ｆａｂ断片、Ｆｖ断片、単鎖Ｆｖ断片(ｓｃＦｖｓ)、二重特異性ｓｃＦｖｓ、ダイアボディ、単ドメイン抗体(ｄＡｂｓ)及びミニボディを含む。

【0163】

「アプタマー」なる用語は、ここで使用される場合、最も広い意味で使用され、限定するものではないが、所望の生物学的活性、特に一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦへの、又はその相同体、変異体、断片及び／又はアイソフォームへの特異的結合を示す、ＲＮＡ、ＤＮＡ及びＲＮＡ／ＤＮＡ分子を含むオリゴヌクレオチド、又はペプチド分子を含む。

【0164】

ここで使用される場合、「化学療法レジメン」又は「化学療法剤」は、抗癌治療効果を提供できる任意の活性剤を含み、化学的薬剤又は生物学的薬剤、特に癌又は腫瘍細胞を干渉できるでものありうる。好ましい活性剤は、悪性細胞の形成、成熟又は増殖を阻害又は防止する抗新生物(化学傷害性又は静化学性(chemostatic))剤として作用するものである。化学療法レジメン又は化学療法剤の非限定例は、アルキル化剤、例えばナイトロジェンマスタード(例えば、メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン及びクロラムブシル)、ニトロソウレア(例えば、アルムスチン(armustine)(ＢＣＮＵ)、ロムスチン(ＣＣＮＵ)、及びセムスチン(メチル-ＣＣＮＵ))、エチレンイミン／メチルメラミン(例えば、トリエチレンメラミン(ＴＥＭ)、トリエチレン、チオホスホルアミド(チオテパ)、ヘキサメチルメラミン(ＨＭＭ、アルトレタミン))、スルホン酸アルキル(例えば、ブスルファン)、及びトリアジン(例えば、ダカルバジン(ＤＴＩＣ))；代謝拮抗剤、例えば葉酸類似体(例えば、メトトレキサート、トリメトレキサート)、ピリミジン類似体(例えば、５-フルオロウラシル、カペシタビン、フルオロデオキシウリジン、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド(ＡｒａＣ、シタラビン)、５-アザシチジン、２、２′-ジフルオロデオキシシチジン)、及びプリン類似体(例えば、６-メルカプトプリン、６-チオグアニン、アザチオプリン、２′-デオキシコホルマイシン(ペントスタチン)、エリスロヒドロキシノニルアデニン(ＥＨＮＡ)、リン酸フルダラビン、及び２-クロロデオキシアデノシン(クラドリビン、２-ＣｄＡ))；天然産物から得られる有糸分裂阻害剤(例えば、パクリタキセル、ビンカアルカロイド(例えば、ビンブラスチン(ＶＬＢ)、ビンクリスチン、及びビノレルビン)、ドセタキセル、エストラムスチン、及びリン酸エストラムスチン)、エピポドフィロトキシン(例えば、エトポシド、テニポシド)、抗生物質(例えば、アクチモマイシン(actimomycin)Ｄ、ダウノマイシン(ルビドマイシン)、ダウノルビコン(daunorubicon)、ドキソルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、イダルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン(ミトラマイシン)、マイトマイシンＣ、アクチノマイシン)、酵素(例えば、Ｌ-アスパラギナーゼ)、及び生物学的反応修飾物質(例えば、インターフェロン-アルファ、ＩＬ-２、Ｇ-ＣＳＦ、ＧＭ-ＣＳＦ)；混合型薬剤、例えば、白金配位化合物(例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン)、アントラセンジオン(例えば、ミトキサントロン)、置換尿素(すなわちヒドロキシウレア)、メチルヒドラジン誘導体(例えば、Ｎ-メチルヒドラジン(ＭＩＨ)、プロカルバジン)、副腎皮質抑制剤(例えば、ミトタン(ｏ、ｐ′-ＤＤＤ)、アミノグルテチミド)；ホルモン及びアンタゴニスト、例えば副腎皮質ステロイドアンタゴニスト(例えば、プレドニゾン及び均等なもの、デキサメタゾン、アミノグルテチミド)、プロゲスチン(例えば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール)、エストロゲン(例えば、ジエチルスチルベストロール、エチニルエストラジオール及びその均等なもの)；抗エストロゲン(例えば、タモキシフェン)、アンドロゲン(例えば、プロピオン酸テストステロン、フルオキシメステロン及びその均等なもの)、抗アンドロゲン(例えば、フルタミド、ゴナドトロピン放出ホルモン類似体、ロイプロリド)、非ステロイド抗アンドロゲン(例えば、フルタミド)、上皮増殖因子阻害剤(例えば、エルロチニブ、ラパチニブ、ゲフィチニブ)抗体(例えば、トラスツズマブ)、イリノテカン及び他の薬剤、例えばロイコボリンを含む。膵臓癌、特に転移性膵臓癌の治療では、ベバシズマブとの投与のための化学療法剤又は化学療法レジメンは、ゲムシタビン及びエルロチニブ及びその組合せを含む(ここに提供されている添付の説明的実施例も参照のこと)。

【0165】

本発明の関連で、アミノ酸配列に関連して「相同性」とは、ここに提供している配列番号によって定義される配列の完全長に対し、少なくとも８０％の配列同一性、特に少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％の同一性を指すと理解される。この発明の関連で、当業者は、相同性が、異なる集団及び民族におけるマーカー／指標タンパク質の更なる対立遺伝子バリエーションを包含することを理解するだろう。

【0166】

ここで使用される場合、「ポリペプチド」なる用語は、任意の長さのアミノ酸鎖を包含するペプチド、タンパク質、オリゴペプチド又はポリペプチドに関し、アミノ酸残基は共有結合ペプチド結合によって連結されている。しかしながら、このようなタンパク質／ポリペプチドのペプチド模倣物も発明によって包含され、ここで、アミノ酸及び／又はペプチド結合は、機能的類似体、例えば２０の遺伝子コードアミノ酸の内の一以外のアミノ酸残基、例えばセレノシステインによって置換されている。ペプチド、オリゴペプチド及びタンパク質は、ポリペプチドと呼ばれうる。ポリペプチド及びタンパク質なる用語は、ここでは互換的に使用される。ポリペプチドなる用語は、ポリペプチドの修飾、例えばグリコシル化、アセチル化、リン酸化及び同様なものも指し、除外しない。このような修飾は基本的な教科書に、より詳細なモノグラフに、並びに多量の研究文献に記載されている。ポリペプチドなる用語は、ここで使用される「抗体」なる用語も指し、包含する。

【0167】

「治療する」及び「治療」なる用語は、ここで使用される場合、疾患又はその何れかのパラメーター又は症状の治療、改善、重症度の軽減、時間経過における低減を指す。好ましくは、前記患者はヒト患者であり、治療される疾患は膵臓癌、特に転移性膵臓癌である

【0168】

このような患者について「評価する」又は「評価」なる用語は、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦを含むここに記載の一又は複数のマーカー／指標タンパク質の発現レベルを決定する方法、及び／又は膵臓癌、特に転移性膵臓癌と診断された患者において得られるコントロールレベルと比較した、このようなマーカー／指標の発現レベルに基づいて、このような患者を選択するための方法に関する。

【0169】

「発現レベル」なる用語はまた、ここで使用される場合、サンプル中における本発明のマーカー／指標タンパク質の濃度又は量を指しうる。

【0170】

上記の方法に加え、発明はまた、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルを評価又は決定するための更なるイムノアッセイ方法、例えばウェスタンブロッティング及びＥＬＩＳＡベース検出を包含する。当分野で理解されるように、発明のマーカー／指標タンパク質の発現レベルはまた、当分野で知られている任意の適切な方法、例えばノーザンブロッティング、リアルタイムＰＣＲ、及びＲＴ ＰＣＲによって、ｍＲＮＡレベルで評価されうる。イムノアッセイ-及びｍＲＮＡ-ベースの検出方法及びシステムは当分野でよく知られており、標準的な教科書、例えばLottspeich(Bioanalytik, Spektrum Akademisher Verlag, 1998)又はSambrook及びRussell(Molecular Cloning: A Laboratory Manual, CSH Press, Cold Spring Harbor, NY, U.S.A., 2001)から導き出すことができる。記載の方法は、膵臓癌、特に転移性膵臓癌と診断された集団において得られるコントロールレベルと比較した、患者又は患者のグループにおけるＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルを決定するために特に有用である。

【0171】

一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルはまた、免疫凝集、免疫沈降(例えば、免疫拡散、免疫電気泳動、免疫固定)、ウェスタンブロッティング技術(例えば、(ｉｎ ｓｉｔｕ)免疫細胞化学、アフィニティークロマトグラフィー、酵素イムノアッセイ)、及び同様なものを利用して、タンパク質レベルにおいても決定できる。溶液中における精製ポリペプチドの量も、物理的方法、例えば測光法によって決定されうる。混合物中における特定のポリペプチドを定量化する方法は通常、例えば抗体の、特異的結合に頼る。抗体の特異性を利用する特異的検出及び定量化方法は、例えばイムノアッセイ方法を含む。例えば、患者サンプル中における本発明のマーカー／指標タンパク質の濃度／量は、酵素結合免疫吸着測定法(ＥＬＩＳＡ)によって決定されうる。あるいは、ウエスタンブロット分析又は免疫染色が実施されてもよい。ウェスタンブロッティングは、電気泳動によるタンパク質の混合物の分離と、抗体での特異的検出を組み合わせる。電気泳動は、多次元的、例えば二次元電気泳動でありうる。通常、ポリペプチドは、それらの見かけの分子量によって一次元に沿って、それらの等電点によって他方向に沿って、二次元電気泳動において分離される。

【0172】

上記のように、本発明によるマーカー／指標タンパク質の発現レベルはまた、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及び／又はＰＬＧＦをコードする対応遺伝子の増加した発現に反映されうる。従って、翻訳より前の遺伝子産物(スプライシング、非スプライシング又は部分的スプライシングｍＲＮＡ)の定量的評価が、対応遺伝子の発現を評価するために実施されうる。当業者は、この関連で使用される標準的な方法を知っているか、又は標準的な教科書からこれらの方法を導き出しうる(例えばSambrook, 2001, loc. cit.)。例えば、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及び／又はＰＬＧＦをコードするｍＲＮＡのそれぞれの濃度／量に関する定量的データは、ノーザンブロット、リアルタイムＰＣＲ及び同様なものによって得ることができる。

【0173】

発明の更なる態様では、発明のキットが有利に、発明の方法を実施するために使用され得、とりわけ、診断分野において又は研究道具として、様々な応用において用いられうる。発明のキットの部品は、バイアルに個々に、又は容器又はマルチコンテイナユニットに組合せでパッケージ化されうる。キットの製造は好ましくは、当業者に知られている標準な手順に従う。キット又は診断用組成物は、例えばここに記載の免疫組織化学技術を使用して、ここに記載の発明の方法に従って、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの発現レベルの検出のために使用されうる。

【0174】

ベバシズマブの使用によって例示したが、発明は、標準的な化学療法レジメンとの組合せにおける使用のための、当分野で知られている他の血管新生阻害剤の使用を包含する。「血管新生阻害剤」なる用語は、ここで使用される場合、血管新生(例えば、血管を形成するプロセス)を変更する全ての薬剤を指し、血管の形成を阻止し及び／又は血管の成長を停止又は遅くする薬剤を含む。血管新生阻害剤の非限定例は、ベバシズマブに加えて、ペガプタニブ、スニチニブ、ソラフェニブ及びバタラニブを含む。好ましくは、本発明の方法に従った使用のための血管新生阻害剤はベバシズマブである。ここで使用される場合、「ベバシズマブ」なる用語は、米国、欧州及び日本から成る国の群から選択される国又は領域において、同一又はバイオシミラー産物として販売承認を得るために必要な要件を満たしている、全ての対応する抗ＶＥＧＦ抗体又は抗ＶＥＧＦ抗体断片を包含する。

【0175】

ここに記載の検出方法における使用について、当業者は、本発明によって包含されるポリペプチド、例えば抗体、又はオリゴヌクレオチドを標識する能力を有する。当分野でルーチン的に実施されるように、ｍＲＮＡレベルの検出における使用のためのハイブリダイゼーションプローブ及び／又はイムノアッセイ方法における使用のための抗体又は抗体断片は、当分野で知られている標準的な方法に従って標識化及び可視化でき、一般的に使用されるシステムの非限定的な例は、放射性標識、酵素標識、蛍光タグ、ビオチン-アビジン複合体、化学発光、及び同様なもの使用を含む。

【0176】

当業者、例えば主治医は、ここで選択及び定義されるような患者／患者グループに、化学療法レジメンとの組合せにおいてベバシズマブを容易に投与できる立場にある。特定の状況では、主治医は、彼／彼女の専門的経験に従って、ベバシズマブ及び化学療法レジメンの投与スキームを修正、変更又は補正しうる。従って、本発明のある態様では、方法は、膵臓癌、特に転移性膵臓癌を患っているか又は患っていると疑われる患者の、治療又は全生存及び／又は無進行生存の改善のために提供され、それにより、前記患者／患者グループは、患者からの生物学的サンプル(特に血漿サンプル)の評価を特徴とし、前記サンプルは、膵臓癌、特に転移性膵臓癌と診断された患者において得られるコントロールレベルと比較して、一又は複数のＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの増加した発現レベルを呈する。本発明はまた、膵臓癌、特に転移性膵臓癌を患っているか又は患っていると疑われる患者の治療のための薬学的組成物の調製におけるベバシズマブの使用を提供し、ここで、患者は、ここに開示のタンパク質マーカー／指標ステータスによって、選択又は特徴付けされる(すなわち、膵臓癌、特に転移性膵臓癌と診断された患者において得られるコントロールレベルと比較した、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの一又は複数の増加した発現レベル)。

【0177】

図は以下を示す：

【図面の簡単な説明】

【0178】

【図1】転移性膵臓癌について治療されている患者の、ベバシズマブ＋ゲムシタビン-エルロチニブ療法対コントロールプラセボ＋ゲムシタビン-エルロチニブ療法についての、全生存(図１Ａ)及び無進行生存(図１Ｂ)のためのカプランマイヤー曲線。図では、実線がベバシズマブ／ゲムシタビン-エルロチニブ治療を表し、破線がプラセボ／ゲムシタビン-エルロチニブ治療を表す。

【図2】転移性膵臓癌について治療されている患者の、ベバシズマブ＋ゲムシタビン-エルロチニブ療法対コントロールプラセボ＋ゲムシタビン-エルロチニブ療法についての、高(≧１５２．９ｐｇ／ｍｌ)及び低(＜１５２．９ｐｇ／ｍｌ)発現レベル双方についての、マーカーＶＥＧＦＡの、全生存に関する治療効果との関連(図２Ａ)、及びマーカーＶＥＧＦＡの無進行生存に関する治療効果との関連(図２Ｂ)のためのカプランマイヤー曲線。図では、実線がベバシズマブ／ゲムシタビン-エルロチニブ治療を表し、破線がプラセボ／ゲムシタビン-エルロチニブ治療を表す。

【図3】転移性膵臓癌について治療されている患者の、ベバシズマブ＋ゲムシタビン-エルロチニブ療法対コントロールプラセボ＋ゲムシタビン-エルロチニブ療法についての、高(≧９．９ｎｇ／ｍｌ)及び低(＜９．９ｎｇ／ｍｌ)発現レベル双方についての、マーカーＶＥＧＦＲ２の、全生存に関する治療効果との関連のためのカプランマイヤー曲線。図では、実線がベバシズマブ／ゲムシタビン-エルロチニブ治療を表し、破線がプラセボ／ゲムシタビン-エルロチニブ治療を表す。

【図4】転移性膵臓癌について治療されている患者の、ベバシズマブ＋ゲムシタビン-エルロチニブ療法対コントロールプラセボ＋ゲムシタビン-エルロチニブ療法についての、最適化高(≧３６．５ｐｇ／ｍｌ)及び低(＜３６．５ｐｇ／ｍｌ)発現レベル双方についての、マーカーＰＬＧＦの、無進行生存に関する治療効果との関連のためのカプランマイヤー曲線。図では、実線がベバシズマブ／ゲムシタビン-エルロチニブ治療を表し、破線がプラセボ／ゲムシタビン-エルロチニブ治療を表す。

【図5】転移性膵臓癌について治療されている患者の、ベバシズマブ＋ゲムシタビン-エルロチニブ療法対コントロールプラセボ＋ゲムシタビン-エルロチニブ療法についての、高(式１≧−０．１)及び低(式１＜−０．１)発現レベル双方についての、組合せ発現レベルとしてマーカーＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２(図５Ａ)の、及び高(式２≧−０．０４２)及び低(式２＜−０．０４２)発現レベル双方についての、組合せ発現レベルとしてＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦ(図５Ｂ)の、全生存に関する治療効果との関連のためのカプランマイヤー曲線。図では、実線がベバシズマブ／ゲムシタビン-エルロチニブ治療を表し、破線がプラセボ／ゲムシタビン-エルロチニブ治療を表す。

【図6】転移性膵臓癌について治療されている患者の、ベバシズマブ＋ゲムシタビン-エルロチニブ療法対コントロールプラセボ＋ゲムシタビン-エルロチニブ療法についての、高(式１≧−０．１)及び低(式１＜−０．１)発現レベル双方についての、組合せ発現レベルとしてマーカーＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２(図６Ａ)の、及び高(式２≧−０．０４２)及び低(式２＜−０．０４２)発現レベル双方についての、組合せ発現レベルとしてＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦ(図６Ｂ)の、無進行生存に関する治療効果との関連のためのカプランマイヤー曲線。図では、実線がベバシズマブ／ゲムシタビン-エルロチニブ治療を表し、破線がプラセボ／ゲムシタビン-エルロチニブ治療を表す。

【図7】転移性膵臓癌について治療されている患者の、ベバシズマブ＋ゲムシタビン-エルロチニブ療法対コントロールプラセボ＋ゲムシタビン-エルロチニブ療法についての、高(式３≧０．８３７)及び低(式３＜０．８３７)発現レベル双方についての、組合せ発現レベルとしてマーカーＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの、全生存に関する治療効果との関連(図７Ａ)、及び高(式３≧０．８３７)及び低(式３＜０．８３７)発現レベル双方についての、組合せ発現レベルとしてマーカーＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの、無進行生存に関する治療効果との関連(図７Ｂ)のためのカプランマイヤー曲線。図では、実線がベバシズマブ／ゲムシタビン-エルロチニブ治療を表し、破線がプラセボ／ゲムシタビン-エルロチニブ治療を表す。

【図8】配列番号：１、ＶＥＧＦＡの例示的アミノ酸配列。

【図9】配列番号：２、ＶＥＧＦＲ２の例示的アミノ酸配列。

【図10】配列番号：３、ＰＬＧＦの例示的アミノ酸配列。

【図11】ＩＭＰＡＣＴチップにおいて測定される、ＶＥＧＦ_１１１、ＶＥＧＦ_１２１、ＶＥＧＦ_１６５及びＶＥＧＦ_１８９の増加濃度の測定。

【図12】自動化Ｅｌｅｃｓｙｓ(登録商標)分析器において、Ｅｌｅｃｓｙｓ(登録商標)アッセイを使用して測定される、ＶＥＧＦ_１１０、ＶＥＧＦ_１２１、及びＶＥＧＦ_１６５の増加濃度の測定。

【図13】ＩＭＰＡＣＴアッセイを用いて２回測定される、同じ患者からのＥＤＴＡ-及びクエン酸サンプルからのデータ。ＶＥＧＦＡ濃度は、クエン酸よりＥＤＴＡ-血漿が約４０％高く、ＥＤＴＡ-クエン酸方法の比較のスピアマン相関は約０．８である。

【図14】示されているのは、大腸菌又はＨＥＫ-細胞においてそれぞれ組換え的に生産されたＶＥＧＦ_１６５の増加濃度を、自動化Ｅｌｅｃｓｙｓ(登録商標)分析器において測定した場合に測定される計数(ＥＣＬ-シグナル)である。

【0179】

本発明は、以下の非限定的の説明的実施例によって更に説明される。

【0180】

実施例1
転移性膵臓腺癌を有する患者を、ゲムシタビン(gemicitamibe)-エルロチニブ＋ベバシズマブ(ｎ＝３０６)又はプラセボ(ｎ＝３０１)にランダム化した。

【0181】

血漿サンプルを、ランダム化フェーズＩＩＩ試験に参加する患者から集め、転移性膵臓癌の治療について、ゲムシタビン-エルロチニブ療法へのベバシズマブの追加の結果を比較する(ＢＯ１７７０６試験、図１を参照、またVan Cutsem, J. Clin. Oncol. 2009 27:2231-2237を参照)。転移性膵臓腺癌を有する患者を、ゲムシタビン(gemicitamibe)-エルロチニブ＋ベバシズマブ(ｎ＝３０６)又はプラセボ(ｎ＝３０１)にランダム化した。転移性膵臓腺癌を有する患者を、ゲムシタビン(１，０００ｍｇ／ｍ^２／週)、エルロチニブ(１００ｍｇ／日)、及びベバシズマブ(５ｍｇ／ｋｇ、２週毎)又はゲムシタビン、エルロチニブ、及びプラセボを受けるようにランダムに分けた。

【0182】

血管新生及び腫瘍形成に関連するバイオマーカーのステータスの調査は、バイオマーカー患者集団全体において決定されるコントロールレベルと比較した３つのバイオマーカーの発現レベルが、改善された治療パラメーターと相関することを示した。特に、バイオマーカー患者集団全体において決定されるコントロールレベルと比較して、より高い発現レベルのＶＥＧＦＡを呈する患者は、ゲムシタビン-エルロチニブ療法へのベバシズマブの追加に応答して、延長した全生存及び延長した無進行生存を示した。バイオマーカー患者集団全体において決定されるコントロールレベルと比較して、より高い発現レベルのＶＥＧＦＲ２を呈する患者は、ゲムシタビン-エルロチニブ療法へのベバシズマブの追加に応答して、延長した全生存を示した。バイオマーカー患者集団全体において決定されるコントロールレベルと比較して、より高い発現レベルのＰＬＧＦを呈する患者は、ゲムシタビン-エルロチニブ療法へのベバシズマブの追加に応答して、延長した無進行生存を示した。また、バイオマーカー患者集団全体において決定されるコントロールレベルと比較して、より高い組合せ発現レベルのＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２を呈する患者は、ゲムシタビン-エルロチニブ療法へのベバシズマブの追加に応答して、延長した全生存及び延長した無進行生存を示した。更に、患者集団全体において決定されるコントロールレベルと比較して、より高い組合せ発現レベルのＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦを呈する患者は、ゲムシタビン-エルロチニブ療法へのベバシズマブの追加に応答して、延長した全生存及び延長した無進行生存を示した。患者集団全体において決定されるコントロールレベルと比較して、より高い組合せ発現レベルのＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦを呈する患者は、ゲムシタビン-エルロチニブ療法へのベバシズマブの追加に応答して、延長した全生存及び延長した無進行生存を示した。

【0183】

患者及び免疫化学法
合計で６０７の患者がＢＯ１７７０６試験に参加し、２２４の参加者からの血漿サンプルがバイオマーカー分析に入手可能であった。バイオマーカー分析における２２４の患者のベースライン特性を、表１に提供する。

【0184】

血漿分析
血漿サンプルを、ランダム化後、及び何れかの試験治療を患者与える前に採取し、ＶＥＧＦＡ、血管内皮増殖因子受容体１(ＶＥＧＦＲ１)、ＶＥＧＦＲ２、ＰＬＧＦ及びＥ-ＳＥＬＥＣＴＩＮを、Roche Diagnostics GmbHからのマルチプレックスＥＬＩＳＡアッセイ(Impact)を使用して測定した。

【0185】

ＩＭＰＡＣＴマルチプレックスアッセイ技術
Roche Professional Diagnostics(Roche Diagnostics GmbH)は、実用名称ＩＭＰＡＣＴ(Immunological MultiParameter Chip Technology)下で、マルチマーカープラットホームを開発した。技術は、ＥＰ０９３９３１９及びＥＰ１６１０１２９に開示されている手順によって製造される小ポリスチレンチップに基づく。チップ表面をストレプトアビジン層で被覆し、次いでその上に、全てのアッセイについて、ビオチン化抗体をスポットした。各マーカーについて、抗体のスポットをチップ上に垂直線上にロードした。アッセイ中、アレイを、特異的分析物を含有する試料サンプルで探索した。

【0186】

チップ上の全マーカーを測定するために、試料につき必要な血漿量は８μＬであり、これを、３２μＬのインキュベーションバッファー(５０ｍＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．２、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１％Ｔｈｅｓｉｔ、０．５％ウシ血清アルブミン及び保護剤として０．１％Ｏｘｙｐｙｒｉｏｎ)と共に適用した。１２分間のインキュベーション、及び洗浄バッファー(５ｍＭのＴｒｉｓ ｐＨ７．９、０．０１％Ｔｈｅｓｉｔ及び０．００１％Ｏｘｙｐｙｒｉｏｎ)を使用したチップの洗浄後、ジゴキシゲニン化モノクローナル抗体混合物を加え(ジゴキシゲニンで標識された分析物特異的抗体の混合物を含む４０μＬのインキュベーションバッファー)、捕獲された分析物上に結合させるために更に６分間インキュベートした。最後に、第二抗体を、蛍光ラテックスでカップリングされた抗ジゴキシゲニン抗体コンジュゲートを含む４０μＬの試薬バッファー(６２．５ｍＭのＴＡＰＳ ｐＨ８．７、１．２５ＭのＮａＣｌ、０．５％ウシ血清アルブミン、０．０６３％Ｔｗｅｅｎ２０及び０．１％Ｏｘｙｐｙｒｉｏｎ)で検出した。この標識の使用により、単一スポットにおける１０の個々の結合イベントが検出され、ｆｍｏｌ／Ｌ濃度に至る非常に高い感度をもたらした。チップを検出ユニットに移し、電荷結合素子ＣＣＤ)カメラによって画像を生成し、これを専用のソフトウェアを使用してシグナル強度に変換した。個々のスポットは所定の位置で自動的に位置決定され、画像分析によって定量化される。各マーカーについて、１０−１２スポットのラインがチップ上にロードされ、最小で５のスポットが、サンプルの平均濃度を決定するために必要とされた。技術の利点は、サンドイッチ又は競合フォーマットにおいて、最高で１０パラメーターまで多重化(multiplexing)する能力である。カリブレーター及び患者サンプルを、二重に測定した。一ランは、合計で１００の決定を有するように設計され、ランコントロールとして２つのマルチコントロールを含んだ。幾つかの選択分析物は互いに反応するため（すなわち、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦとＶＥＧＦＲ１又はＶＥＧＲＦ２又はＶＥＧＦＡはＰＬＧＦとヘテロ二量体を形成する）、５つの分析物を次のように３つの異なるチップに分けた：
チップ１：ＶＥＧＦＡ
チップ２：ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、Ｅ-セレクチン
チップ３：ＰＬＧＦ

【0187】

次の抗体を、異なるアッセイについて使用した：

【0188】

統計的分析
サンプル中央値を、バイオマーカー値を低(中央値未満)又は高(中央値より大)として二分するために使用した。

【0189】

高又は低バイオマーカーレベルを有する患者のサブグループにおける治療効果のハザード比を、比例ハザードコックス回帰分析により推定した。

【0190】

更に、比例ハザードコックス回帰を使用して、バイオマーカーレベル及び治療効果間の関連を評価した。モデルは次の共変量を含んだ：治験治療、バイオマーカーレベル、バイオマーカーレベルによる治療の交互作用項。交互作用項のＷａｌｄ検定を使用して、バイオマーカーレベル及び治療効果間の関連を決定した。０．０５未満のｐ値を有意とみなした。

【0191】

結果
血漿マーカー
バイオマーカーのベースライン記述統計を表２に表す。

表３は、全生存に関する治療効果との選択バイオマーカーの関連性の単変量分析を表す。

【0192】

この分析では、ＶＥＧＦＡについては低ＶＥＧＦＡ＜１５２．９ｐｇ／ｍｌ及び高ＶＥＧＦＡ≧１５２．９ｐｇ／ｍｌ、ＶＥＧＦＲ２については低ＶＥＧＦＲ２＜９．９ｎｇ／ｍｌ及び高ＶＥＧＦＲＡ≧９．９ｎｇ／ｍｌ、及びＰＬＧＦについては低ＰＬＧＦ＜３６．５ｐｇ／ｍｌ及び高ＰＬＧＦ≧３６．５ｐｇ／ｍｌを使用した。

【0193】

ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２については、カットオフレベルを、サンプルデータの中央値として決定し、事前に決定された分析計画により、患者の５０％が高発現を有し、５０％の患者が低発現を有した。ＰＬＧＦカットオフレベルは、データの４２パーセンタイルとして決定された。従って、５８％の患者が高発現のＰＬＧＦを有し、４２％が低発現を有する。カットオフを、高及び低レベルサブグループにおける治療効果間の統計的差異を増加させるために決定した。

【0194】

この結果表は、治療効果のハザード比は、低ＶＥＧＦＡを有する患者と比較して、高ＶＥＧＦＡを有する患者のサブセットにおいて有意に良好であることを示す。この結果表はまた、治療効果のハザード比は、低ＶＥＧＦＲ２を有する患者と比較して、高ＶＥＧＦＲ２を有する患者のサブセットにおいて有意に良好であることを示す。従って、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２は各々、全生存に関するベバシズマブ治療効果の独立した予測バイオマーカーである。

【0195】

表４は、無進行生存に関する治療効果との、選択バイオマーカーの関連性の単変量分析を表す。

この分析では、ＶＥＧＦＡについては低ＶＥＧＦＡ＜１５２．９ｐｇ／ｍｌ及び高ＶＥＧＦＡ≧１５２．９ｐｇ／ｍｌ、ＶＥＧＦＲ２については低ＶＥＧＦＲ２＜９．９ｎｇ／ｍｌ及び高ＶＥＧＦＲＡ≧９．９ｎｇ／ｍｌ、及びＰＬＧＦについては低ＰＬＧＦ＜３６．５ｐｇ／ｍｌ及び高ＰＬＧＦ≧３６．５ｐｇ／ｍｌを使用した。ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２については、カットオフレベルを、サンプルデータの中央値として決定し、事前に決定された分析計画により、患者の５０％が高発現を有し、５０％の患者が低発現を有した。ＰＬＧＦカットオフレベルは、データの４２パーセンタイルとして決定された。従って、５８％の患者が高発現のＰＬＧＦを有し、４２％が低発現を有する。カットオフを、高及び低レベルサブグループにおける治療効果間の統計的差異を増加させるために決定した。

【0196】

この結果表は、治療効果のハザード比は、低ＶＥＧＦＡを有する患者と比較して、高ＶＥＧＦＡを有する患者のサブセットにおいて有意に良好であることを示す。この結果表はまた、治療効果のハザード比は、低ＰＬＧＦを有する患者と比較して、高ＰＬＧＦを有する患者のサブセットにおいて有意に良好であることを示す。従って、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦは各々、無進行生存に関するベバシズマブ治療効果の独立した予測バイオマーカーである。

【0197】

表５は、全生存に関する治療効果とのバイオマーカーの組合せの関連性の分析を表す。
この分析では、次の式を使用した：
式１：ノルム(ＶＥＧＦＡ)＋１．３＊ノルム(ＶＥＧＦＲ２)。カットポイント＝中央値又は０
等価式：ＶＥＧＦＡ＋３．３＊ＶＥＧＦＲ２。カットポイント＝中央値又は０
及び
式２：０．２５＊ノルム(ＶＥＧＦＡ)＋０．２１＊ノルム(ＰＬＧＦ)、カットポイント＝中央値又は０
等価式：０．１９＊ＶＥＧＦＡ＋０．６７＊ＰＬＧＦ、カットポイント＝中央値又は４．８
ここで我々はｌｏｇ２変換及び

を使用する。

【0198】

この分析では、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の高組合せ発現レベルは(式１≧−０．１０)、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の低組合せ発現は(式１＜−０．１０)であり、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの高組合せ発現レベルは(式２≧−０．０４２)、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの低組合せ発現は(式２＜−０．０４２)である。

【0199】

この結果表は、治療効果のハザード比は、低ＶＥＧＦＡ＆ＶＥＧＦＲ２組合せを有する患者と比較して、高ＶＥＧＦＡ＆ＶＥＧＦＲ２組合せを有する患者のサブセットにおいて有意に良好であることを示す。この結果表は、治療効果のハザード比は、低ＶＥＧＦＡ＆ＰＬＧＦ組合せを有する患者と比較して、高ＶＥＧＡ＆ＰＬＧＦ組合せを有する患者のサブセットにおいて有意に良好であることを示す。従って、ＶＥＧＦＡ＆ＶＥＧＦＲ２組合せ及びＶＥＧＦＡ＆ＰＬＧＦ組合せは各々、全生存に関するベバシズマブ治療効果の独立した予測バイオマーカーである。

【0200】

表６は、無進行生存に関する治療効果とのバイオマーカーの組合せの関連性の分析を表す。
この分析では、次の式を使用した：
式１：ノルム(ＶＥＧＦＡ)＋１．３＊ノルム(ＶＥＧＦＲ２)。カットポイント＝中央値又は０
等価式：ＶＥＧＦＡ＋３．３＊ＶＥＧＦＲ２。カットポイント＝中央値又は０
及び
式２：０．２５＊ノルム(ＶＥＧＦＡ)＋０．２１＊ノルム(ＰＬＧＦ)、カットポイント＝中央値又は０
等価式：０．１９＊ＶＥＧＦＡ＋０．６７＊ＰＬＧＦ、カットポイント＝中央値又は４．８
ここで我々はｌｏｇ２変換及び

を使用する。

この分析では、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の高組合せ発現レベルは(式１≧−０．１０)、ＶＥＧＦＡ及びＶＥＧＦＲ２の低組合せ発現は(式１＜−０．１０)であり、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの高組合せ発現レベルは(式２≧−０．０４２)、ＶＥＧＦＡ及びＰＬＧＦの低組合せ発現は(式２＜−０．０４２)である。

【0201】

この結果表は、治療効果のハザード比は、低ＶＥＧＦＡ＆ＶＥＧＦＲ２組合せを有する患者と比較して、高ＶＥＧＦＡ＆ＶＥＧＦＲ２組合せを有する患者のサブセットにおいて有意に良好であることを示す。この結果表は、治療効果のハザード比は、低ＶＥＧＦＡ＆ＰＬＧＦ組合せを有する患者と比較して、高ＶＥＧＡ＆ＰＬＧＦ組合せを有する患者のサブセットにおいて有意に良好であることを示す。従って、ＶＥＧＦＡ＆ＶＥＧＦＲ２組合せ及びＶＥＧＦＡ＆ＰＬＧＦ組合せは各々、無進行生存に関するベバシズマブ治療効果の独立した予測バイオマーカーである。

【0202】

表７及び表８は、全生存及び無進行生存それぞれに関する治療効果との、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦのバイオマーカー組合せ関連性の分析を表す。
この分析では、次の式を使用した：
式３：０．０１２７＊ｌｎ(ＰＬＧＦ＋１)＋０．１４４＊ｌｎ(ＶＥＧＦＲ２＋１)＋０．０９４９＊ｌｎ(ＶＥＧＦＡ＋１)
ここで、ｌｎ＝ｌｏｇ底ｅ

【0203】

この分析では、全生存については、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの高組合せ発現レベルは(式３≧０．８３７)、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの低組合せ発現は(式３＜０．８３７)であり、無進行生存については、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの高組合せ発現レベルは(式３≧０．８３７)、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２及びＰＬＧＦの低組合せ発現は(式３＜０．８３７)である。

【0204】

この結果表は、治療効果のハザード比は、低ＶＥＧＦＡ＆ＶＥＧＦＲ２＆ＰＬＧＦ組合せを有する患者と比較して、高ＶＥＧＦＡ＆ＶＥＧＦＲ２＆ＰＬＧＦ組合せを有する患者のサブセットにおいて有意に良好であることを示す。従って、ＶＥＧＦＡ＆ＶＥＧＦＲ２＆ＰＬＧＦ組合せは、無進行生存に関するベバシズマブ治療効果の予測バイオマーカーである。

【0205】

この結果表はまた、全生存に関し、治療効果のハザード比は、低ＶＥＧＦＡ＆ＶＥＧＦＲ２＆ＰＬＧＦ組合せを有する患者と比較して、高ＶＥＧＦＡ＆ＶＥＧＦＲ２＆ＰＬＧＦ組合せを有する患者のサブセットにおいて有意に良好であることを示す。従って、ＶＥＧＦＡ＆ＶＥＧＦＲ２＆ＰＬＧＦ組合せは、全生存に関するベバシズマブ治療効果の予測バイオマーカーである。

【0206】

実施例２：ＩＭＰＡＣＴアッセイを使用した、ＶＥＧＦ-Ａの短アイソフォームの検出
この実施例は、ＩＭＰＡＣＴプラットフォームにおけるＶＥＧＦ-Ａの検出に使用される抗体に基づくと、ＶＥＧＦ-Ａの短アイソフォームが、ＶＥＧＦ-Ａの長アイソフォームと比較して優先的測定されることを実証する。

【0207】

アッセイを、「統計的分析」セクションの前の表に挙げる抗体を使用し、ＩＭＰＡＣＴ技術と関連したセクション下に上述するように実施した。

【0208】

４つの異なるＶＥＧＦ-Ａ形態、すなわち、ＶＥＧＦ_１１１、ＶＥＧＦ_１２１、ＶＥＧＦ_１６５及びＶＥＧＦ_１８９が利用可能であり、分析において使用した。ＶＥＧＦ_１１１、ＶＥＧＦ_１２１(双方とも大腸菌における発現から得られた)、及びＶＥＧＦ_１６５(昆虫細胞株において組換え的に得られた)を、R&D Systems, Minneapolis, USAから購入し、ＶＥＧＦ_１８９を、RELIATech, Wolfenbuttel, Germanyから得た。ＶＥＧＦ１８９はかなり不安定であり、この材料から得られるデータは信用できないことが後に分かった。図１１に示すように、大腸菌において生産され、二次的修飾されない、例えばグリコシル化されない１１１又は１２１アミノ酸をそれぞれ有する短アイソフォームは、１６５アミノ酸を有する長アイソフォームと比較して、良好に検出される。ＶＥＧＦ１６５は、昆虫細胞株において得られ、少なくとも部分的にグリコシル化されている。生物学的に興味深いプラスミン切断産物ＶＥＧＦ_１１０は、この時点で試験のために入手不可であったが、このアイソフォームの検出は、１１１アミノ酸を有するＶＥＧＦ分子に見られるものに相当するだろうことが期待されなければならない。

【0209】

実施例３：Ｅｌｅｃｓｙｓ(登録商標)分析器を使用したＶＥＧＦアイソフォームの検出
この実施例は、Ｅｌｅｃｓｙｓ(登録商標)分析器を使用するアッセイ及び対応するアッセイが、ヒト血漿において、短ＶＥＧＦアイソフォームを検出するために使用できることを示す実験を記載する。

【0210】

ＶＥＧＦ-Ａアッセイを、ＩＭＰＡＣＴから、自動化インビトロ診断用システムＥｌｅｃｓｙｓ(登録商標)(Roche Diagnostics GmbH, Mannheim)に移した。ＩＭＰＡＣＴアッセイと同じ捕獲抗体、＜ｈＶＥＧＦ-Ａ＞-ｍ３Ｃ５(RELIATech, Wolfenbuttel)を使用し、ＩＭＰＡＣＴシステムにおいて使用された捕獲抗体＜ｈＶＥＧＦ-Ａ＞-ｍ２５６０３(R&D Systems, Minneapolis)を、＜ｈＶＥＧＦ-Ａ＞-ｍＡ４．６．１(Genentech, South San Francisco)と交換した。

【0211】

自動化Ｅｌｅｃｓｙｓ(登録商標)において実行されるイムノアッセイは、シグナル生成技術として電気化学ルミネセンス(ＥＣＬＩＡ)を使用するイムノアッセイである。本サンドイッチアッセイでは、ビオチン化捕獲抗体が、ストレプトアビジン被覆の磁性微小粒子に結合し、ルテニル化(ruthenylated)検出抗体がシグナル生成を可能にする。反応バッファー(５０ｍＭ Ｔｒｉｓ(ｐＨ７．４)、２ｍＭのＥＤＴＡ、０．１％ｔｈｅｓｉｔ、０．２％ウシＩｇＧ、１．０％ウシ血清アルブミン)における、１．５μｇ／ｍｌの７５μｌのビオチン化＜ＶＥＧＦ-Ａ＞-ｍ３Ｃ５、及び２μｇ／ｍｌの７５μｌのルテニル化＜ＶＥＧＦ-Ａ＞Ｍ-Ａ．４．６．１を、２０μｌのサンプルと共に、９分間インキュベートした。３０μｌの微小粒子懸濁液を、インキュベーションの最初の９分の後に加え、次いで、全混合物を更に９分間インキュベートした。これらのインキュベーション工程中、抗体分析物抗体サンドイッチが形成され、これが微小粒子に結合する。最後に、シグナル生成及び読取のために、微小粒子をＥｌｅｃｓｙｓシステムの検出チャンバーに移した。

【0212】

Ｅｌｅｃｓｙｓ(登録商標)ＶＥＧＦ-Ａアッセイの切断産物／アイソフォーム優先傾向を、精製された組換えタンパク質で評価した：ＶＥＧＦ１１０(Genentech, South San Franciscoで、プラスミン切断によって生産される)、ＶＥＧＦ１２１及びＶＥＧＦ１６５(双方とも昆虫細胞株において生産され、R&D Systems, Minneapolisに供給される)。ＩＭＰＡＣＴ(登録商標)アッセイで見られた短ＶＥＧＦアイソフォームの優先的結合を、Ｅｌｅｃｓｙｓアッセイにおいて確認した。図１２に示すように、Ｅｌｅｃｓｙｓ(登録商標)アッセイでは、アイソフォームＶＥＧＦ１２１及びプラスミン切断産物ＶＥＧＦ１１０がそれぞれ双方、ＶＥＧＦ１６５よりおよそ５倍高い感受性で検出された。

【0213】

実施例４：クエン酸ナトリウム及びＥＤＴＡに収集される血漿における短ＶＥＧＦアイソフォームの検出
対の血漿サンプルを、ＨＥＲ２＋局所再発性又は転移性乳癌を有する患者から、EDTA monovette（５ｍＬ）−及びCitrate Monovette採取管（５ｍＬ）双方に採取した。血液採取の３０分以内に、血液管を遠心分離機に置き、室温で１０分間、細胞及び血漿が分離するまで１５００ｇで回転させた。遠心分離の後すぐに、血漿をプロピレンｔｒａｎｓｆｅｒ ｔｕｂｅに注意深く移し、次いで、ピペットを使用して２つのストレージ管に等しく等分した(半分の体積は各々およそ１．２５ｍＬ)。サンプルにおけるＶＥＧＦ-Ａのレベルを、上記のＩＭＰＡＣＴアッセイを使用して測定した。図１３に示すように、ＶＥＧＦＡ濃度は、クエン酸に採取され保管された血漿サンプル(登録商標)比較して、ＥＤＴＡに採取され保管された血漿サンプルで約４０％高く、治療より前に採取されたベースラインサンプルについて、ＥＤＴＡ-クエン酸ＭＣのスピアマン相関は約０．８であった。

【0214】

実施例５：Ｅｌｅｃｓｙｓ分析器における非修飾及び修飾ＶＥＧＦ１６５の比較測定
この実施例は、Ｅｌｅｃｓｙｓ(登録商標)分析器及び対応するアッセイが、ヒト血漿において、非修飾ＶＥＧＦを検出するため使用できることを示す実験を記載する。

【0215】

ＶＥＧＦ-Ａアッセイを、ＩＭＰＡＣＴから、自動化インビトロ診断用システムＥｌｅｃｓｙｓ(登録商標)(Roche Diagnostics GmbH, Mannheim)に移した。ＩＭＰＡＣＴアッセイと同じ捕獲抗体、＜ｈＶＥＧＦ-Ａ＞-ｍ３Ｃ５(RELIATech GmbH, Wolfenbuttel)を使用し、ＩＭＰＡＣＴシステムにおいて使用された検出抗体＜ｈＶＥＧＦ-Ａ＞-ｍ２５６０３(R&D Systems, Minneapolis)を、＜ｈＶＥＧＦ-Ａ＞-ｍＡ４．６．１(Genentech, South San Francisco)と交換した。

【0216】

自動化Ｅｌｅｃｓｙｓにおいて実行されるイムノアッセイは、シグナル生成技術として電気化学ルミネセンス(ＥＣＬＩＡ)を使用するイムノアッセイである。本サンドイッチアッセイでは、ビオチン化捕獲抗体が、ストレプトアビジン被覆の磁性微小粒子に結合し、ルテニル化(ruthenylated)検出抗体がシグナル生成を可能にする。反応バッファー(５０ｍＭ Ｔｒｉｓ(ｐＨ７．４)、２ｍＭのＥＤＴＡ、０．１％ｔｈｅｓｉｔ、０．２％ウシＩｇＧ、１．０％ウシ血清アルブミン)における、１．５μｇ／ｍｌの７５μｌのビオチン化＜ＶＥＧＦ-Ａ＞-ｍ３Ｃ５、及び２μｇ／ｍｌの７５μｌのルテニル化＜ＶＥＧＦ-Ａ＞Ｍ-Ａ．４．６．１を、２０μｌのサンプルと共に、９分間インキュベートした。３０μｌの微小粒子懸濁液を、インキュベーションの最初の９分の後に加え、次いで、全混合物を更に９分間インキュベートした。これらのインキュベーション工程中、抗体-分析物-抗体サンドイッチが形成され、これが微小粒子に結合する。最後に、シグナル生成及び読取のために、微小粒子をＥｌｅｃｓｙｓシステムの検出チャンバーに移した。

【0217】

ＥｌｅｃｓｙｓＶＥＧＦ-Ａアッセイの選択性を、精製された組換えタンパク質で評価した：ＶＥＧＦ１６５(Peprotechにより大腸菌において組換え的に生産)及びＶＥＧＦ１６５(Roche Diagnostics, GermanyでＨＥＫ細胞において組換え的に生産)。ＩＭＰＡＣＴアッセイで見られた非修飾ＶＥＧＦ１６５の選択的結合を、Ｅｌｅｃｓｙｓアッセイにおいて確認した。図１４に示すように、Ｅｌｅｃｓｙｓアッセイでは、非修飾ＶＥＧＦ１６５は、修飾ＶＥＧＦ１６５よりおよそ５倍高い感受性で検出された。

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【図7A】

【図7B】

【図8】

【図9-1】

【図9-2】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]