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特許5967436新規フラバノン化合物、新規スチルベン化合物、抗菌剤、抗酸化剤及び高抗菌抗酸化養蜂組成物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】5967436
(24)【登録日】2016年7月15日
(45)【発行日】2016年8月10日
(54)【発明の名称】新規フラバノン化合物、新規スチルベン化合物、抗菌剤、抗酸化剤及び高抗菌抗酸化養蜂組成物
(51)【国際特許分類】
C07D 311/32 20060101AFI20160728BHJP
C07D 311/30 20060101ALI20160728BHJP
A61K 31/353 20060101ALI20160728BHJP
A61K 35/64 20150101ALI20160728BHJP
A61K 31/352 20060101ALI20160728BHJP
A61K 31/05 20060101ALI20160728BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20160728BHJP
A61P 39/06 20060101ALI20160728BHJP
C07C 39/21 20060101ALI20160728BHJP
【ＦＩ】
C07D311/32CSP
C07D311/30
A61K31/353
A61K35/64
A61K31/352
A61K31/05
A61P31/04
A61P39/06
C07C39/21
【請求項の数】7
【全頁数】27
(21)【出願番号】特願2012-222515(P2012-222515)
(22)【出願日】2012年9月19日
(65)【公開番号】特開2013-189421(P2013-189421A)
(43)【公開日】2013年9月26日
【審査請求日】2015年8月21日
(31)【優先権主張番号】特願2012-45936(P2012-45936)
(32)【優先日】2012年2月15日
(33)【優先権主張国】JP
(73)【特許権者】
【識別番号】512053130
【氏名又は名称】特定非営利活動法人エーピーエスディ
(72)【発明者】
【氏名】乾 沙王里
(72)【発明者】
【氏名】島村 裕子
(72)【発明者】
【氏名】増田 修一
(72)【発明者】
【氏名】熊澤 茂則
(72)【発明者】
【氏名】細谷 孝博
(72)【発明者】
【氏名】ルーベン ティ モーリー
(72)【発明者】
【氏名】伊藤 健治
(72)【発明者】
【氏名】西屋 浩隆
(72)【発明者】
【氏名】白藤 謙一
【審査官】
水島 英一郎
(56)【参考文献】
【文献】
特開２００７−２６９６５０（ＪＰ，Ａ）
【文献】
国際公開第０３／０１３５５４（ＷＯ，Ａ１）
【文献】
欧州特許出願公開第０２２７７３８７（ＥＰ，Ａ１）
【文献】
特開２００５−０２９７７８（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）
Ｃ０７Ｄ
ＣＡｐｌｕｓ（ＳＴＮ）
ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記化１に示される構造を有するフラバノン化合物 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌＡ。
【化1】
【請求項2】
下記化１６に示される構造を有するフラバノン化合物 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌＢ。
【化16】
【請求項3】
下記化１７に示される構造を有するフラバノン化合物 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌＣ。
【化17】
【請求項4】
下記化１８に示される構造を有するフラバノン化合物 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌＤ。
【化18】
【請求項5】
下記化１に示される構造を有するスチルベン化合物 ｓｏｌｏｍｏｎｉｎ。
【化21】
【請求項6】
特許請求の範囲第１項から第５項に記載された新規化合物の少なくとも１種を含有することを特徴とする高抗菌性組成物。
【請求項7】
特許請求の範囲第１項から第５項に記載された新規化合物を含有することを特徴とする高抗酸化組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は高抗菌性、高抗酸化性組成物に関し、さらに詳しくはソロモン産養蜂産物中のプロポリス画分、さらに詳しくは、新規な４種のフラバノン化合物ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ａ、ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｂ、ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｃ、ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｄ、および新規な１種のスチルベン化合物ｓｏｌｏｍｏｎｉｎ、並びにこれら化合物の一種以上を含むことを特徴とする新規な高抗菌性、高抗酸化性組成物に関する。【背景技術】
【0002】
沖縄産のプロポリスが抗菌性、抗酸化性が高いことが知られている（特許文献１参照）また、沖縄産のプロポリスからテトラヒドロキシゲラニルフラバノンが見出されている。（特許文献２参照）【先行技術文献】
【特許文献】
【0003】
【特許文献1】 抗酸化剤、抗菌剤、抗腫瘍剤および飲食品 特開２００５−２９７７８
【特許文献2】 フラバノン化合物、抗酸化剤、抗菌剤、抗腫瘍剤および飲食品 特開２００５−２９５６０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
経済の発展に伴い健康に対する需要、とりわけ抗菌性、抗酸化性物質が注目されている。とりわけ天然物に対するニーズが大きく、多くの天然素材の抗菌性、抗酸化性が研究されており、一部には化粧品や健康食品として実用化され人気を呼んでいるものもある。養蜂産物もこれらの成功例の一つで、たとえばプロポリスやロイヤルゼリーなどは蜂が巣箱や幼虫をカビや菌、酸化ストレスから防御する物質だという神話にも似たストーリーと消費者の天然物指向からきわめて高価で取り扱われている。しかしながら、実はこれらの養蜂組成物の抗菌、抗酸化活性は産地や季節、ロットにより大きく変動し、その効果も他の化学合成された抗菌剤、抗酸化剤に遙かに及ばないのが現実である。このような中、より強く安定した抗菌性、抗酸化性を有する養蜂組成物を求める研究も盛んであり、たとえばポッカコーポレーションによる沖縄産プロポリスの研究（先行技術文献）などが知られているがその活性は十分とは言い難く、真に有効で安定な天然の高抗菌性、高抗酸化性組成物が求められてきた。
【課題を解決するための手段】
【0005】
発明者らは一般に抗菌性、抗酸化性が高いことで知られている養蜂組成物に注目し、さらに抗菌性が高い養蜂組成物はより蜂が生活する上で高い抗菌性が要求される多湿な地帯で見つかるであろうという仮説を立てた。また、同様に抗酸化性が高い養蜂組成物は高温地帯で見つかるであろうと考えた。さらには、高い抗菌性、抗酸化を安定的に得るには季節変動が少ない地帯で植生が豊な土地が有利であり、これまでにあまり養蜂業が知られていない地帯では新たな抗菌性、抗酸化性を有する化合物や組成物が見いだせる可能性が高いと考えた。発明者らは自らが発展途上国の支援活動を行っている南太平洋ソロモン諸島こそが適地であり、有用な化合物や組成物の発見、発明、その産業化が現地の発展につながるとの信念を持ち、現地スタッフと協力して全く養蜂業の無かったソロモン諸島での養蜂を開始、幾多の苦労の末に得た養蜂組成物からこれまでに知られていない高抗菌、高抗酸化組成物を抽出分離することに成功し、さらにはこの組成物から新規な４種のフラバノン化合物および１種のスチルベン化合物の抽出と同定に成功し本発明を完成させた。【発明の効果】
【0006】
本発明によれば消費者の嗜好が高い天然物の食品から、高い抗菌性、高い抗酸化性の組成物を得ることが出来、抗菌製品、化粧品、健康食品、食品加工、食品、飲料、医薬品原料などで健康で快適な生活に資することが出来る。【図面の簡単な説明】
【0007】
【図1】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ａの物理化学的特徴をまとめた。
【図2】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ ＡのＮＭＲデータを示す。
【図3】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ａの１Ｈ−ＮＭＲのチャートを示す。
【図4】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ａの１３Ｃ−ＮＭＲのチャートを示す。
【図5】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ａの１Ｈ−１Ｈ ＣＯＳＹスペクトルのチャートを示す。
【図6】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ ＡのＨＳＱＣスペクトルのチャートを示す。
【図7】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ ＡのＨＭＢＣスペクトルのチャートを示す。
【図8】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ ＡのＣＤスペクトルのチャートを示す。
【図9】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ａのマススペクトルのチャートを示す。
【図10】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ ＡのＵＶスペクトルのチャートを示す。
【図11】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ａの赤外スペクトルのチャートを示す。
【図12】 プロポリス画分の抗菌性試験結果を示す。
【図13】 プロポリスの分離チャートを示す。
【図14】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｂの物理化学的特徴をまとめた。
【図15】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ ＢのＵＰＬＣ−ＴＯＦ−ＭＳスペクトルのチャートを示す。
【図16】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ ＢのＩＲスペクトルのチャートを示す。
【図17】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｂの１Ｈ−ＮＭＲスペクトルのチャートを示す
【図18】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｂの１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルのチャートを示す。
【図19】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ ＢのＨＳＱＣスペクトルのチャートを示す。
【図20】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ ＢのＨＭＢＣスペクトルのチャートを示す。
【図21】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ ＢのＨＭＢＣ相関を示す
【図22】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｂの構造を示す。
【図23】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｃの物理化学的特徴をまとめた。
【図24】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ ＣのＵＰＬＣ−ＴＯＦ−ＭＳスペクトルのチャートを示す。
【図25】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ ＣのＩＲスペクトルのチャートを示す。
【図26】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｃの１Ｈ−ＮＭＲスペクトルのチャートを示す
【図27】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｃの１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルのチャートを示す。
【図28】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ ＣのＨＳＱＣスペクトルのチャートを示す。
【図29】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ ＣのＨＭＢＣスペクトルのチャートを示す。
【図30】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ ＣのＨＭＢＣ相関を示す
【図31】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｃの構造を示す。
【図32】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｄの物理化学的特徴をまとめた。
【図33】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ ＤのＵＰＬＣ−ＴＯＦ−ＭＳスペクトルのチャートを示す。
【図34】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ ＤのＩＲスペクトルのチャートを示す。
【図35】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｄの１Ｈ−ＮＭＲスペクトルのチャートを示す
【図36】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｄの１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルのチャートを示す。
【図37】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ ＤのＨＳＱＣスペクトルのチャートを示す。
【図38】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ ＤのＨＭＢＣスペクトルのチャートを示す。
【図39】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ ＤのＨＭＢＣ相関を示す
【図40】 ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｄの構造を示す。
【図41】 ｓｏｌｏｍｏｎｉｎの物理化学的特徴をまとめた。
【図42】 ｓｏｌｏｍｏｎｉｎのＵＰＬＣ−ＴＯＦ−ＭＳスペクトルのチャートを示す。
【図43】 ｓｏｌｏｍｏｎｉｎのＩＲスペクトルのチャートを示す。
【図44】 ｓｏｌｏｍｏｎｉｎの１Ｈ−ＮＭＲスペクトルのチャートを示す
【図45】 ｓｏｌｏｍｏｎｉｎの１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルのチャートを示す。
【図46】 ｓｏｌｏｍｏｎｉｎの１Ｈ−１Ｈ−ＣＯＳＹスペクトルのチャートを示す。
【図47】 ｓｏｌｏｍｏｎｉｎのＨＳＱＣスペクトルのチャートを示す。
【図48】 ｓｏｌｏｍｏｎｉｎのＨＭＢＣスペクトルのチャートを示す。
【図49】 ｓｏｌｏｍｏｎｉｎのＨＭＢＣ相関を示す
【図50】 ｓｏｌｏｍｏｎｉｎの構造を示す。
【発明を実施するための形態】
【0008】
以下に本発明を詳細に説明する。本発明のｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ａはソロモン産の養蜂産物から見出された下記の化学構造式を示すものである。
【0009】
化合物【化1】
【0010】
本発明のｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｂはソロモン産の養蜂産物から見出された下記の化学構造式を示すものである。【0011】
化合物【化16】
【0012】
本発明のｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｃはソロモン産の養蜂産物から見出された下記の化学構造式を示すものである。【0013】
化合物【化17】
【0014】
本発明のｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｄはソロモン産の養蜂産物から見出された下記の化学構造式を示すものである。【0015】
化合物【化18】
【0016】
本発明のｓｏｌｏｍｏｎｉｎはソロモン産の養蜂産物から見出された下記の化学構造式を示すものである。【0017】
化合物【化21】
【0018】
本発明の抗菌剤、抗酸化剤は養蜂産物から抽出されることを特徴とし、食品や飲料などに利用する場合は養蜂産物をそのまま添加しても良いし、必要に応じて抽出、分離、さらには加工して用いることが出来る。【0019】
本発明の組成物は十分な抗菌活性、抗酸化活性を有するが必要に応じて既存の抗菌剤や抗菌成分、抗酸化剤を添加して使用することも出来る。これらの既存の抗菌剤としては、各種抗生物質、合成殺菌剤、銀などの金属、酸、塩などを、抗酸化剤としては合成還元剤や各種ビタミン、コエンザイムＱ、アスタキサンチンなどが挙げられる。【0020】
本発明の抗菌剤、抗酸化剤及び養蜂組成物を得るための養蜂は通常の養蜂が用いることが出来、特別な工夫は不要である。使用できる蜂は西洋ミツバチ、日本ミツバチのいずれでも構わないし、現地では土着の小型ミツバチあるいは、西洋ミツバチとアフリカミツバチが交配したアフリカ蜂化ミツバチも使用することが出来る。【0021】
本発明の抗菌剤、抗酸化剤及び養蜂組成物を得るための養蜂産物は、ハチミツ、蜂の巣、プロポリス、ロイヤルゼリー、蜂の子、蜂のいずれでも構わないが得率の高いのはプロポリスである。より多くのプロポリスを得るには養蜂箱の中にプロポリスネットを設置するのがよい。【0022】
本発明の抗菌剤、抗酸化剤及び養蜂組成物を得るための養蜂は目的物が得られればどこで養蜂をしても差し支えないが、高温多湿地帯が望ましく、より望ましくは熱帯雨林を持つ南太平洋地域が望ましい。同地で高抗菌、高抗酸化の養蜂組成物が得られるのは蜂が悪環境で生き抜くために身につけた生きるための術であると思われ、４０００種類とも言われる熱帯植物のどこから有効成分を運んでくるのかは不明であるが、季節変動が少ない熱帯地域に属する同地では安定した品質の産物が得られる。【0023】
養蜂産物からの組成物や抗菌剤、抗酸化剤の分離は公知の手法を用いることが出来、特に制限はされないが、粉砕、抽出、分離、濃縮などの手法が使われる。粉砕には手での破壊、ミキサーなどの粉砕器の使用、すり鉢の使用などが、抽出には水、エタノール、有機溶剤による抽出が、分離には相分離やクロマトグラフィー、遠心分離などが、濃縮には加熱濃縮、減圧濃縮、凍結乾燥などが挙げられる。【0024】
本発明のｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ａ、ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｂ、ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｃ、ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｄ、ｓｏｌｏｍｏｎｉｎは抗菌剤、抗酸化剤として使用できるばかりか医薬品や化学品の有効成分や有効成分合成の原料として使用できる。【実施例】
【0025】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。【実施例1】
【0026】
＜化合物の単離同定＞ソロモン国マライタ州フィユ村の農業専門学校ＡＰＳＤソロモンファーマカルチャーセンターで西洋ミツバチを用いた養蜂を実施し養蜂箱よりプロポリス画分を得た。このプロポリスの原塊４９．５ｇを乳鉢で粉砕後５００ｍｌのエタノールで室温下２４時間抽出し、濾過濃縮後３４．８ｇの抽出物を得た。その抽出物を通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メルク製シリカゲル６０ ３６０ｍｍ×５０ｍｍ）で粗分画し、２４個の分画物を得た。
溶出はヘキサン、酢酸エチル、メタノールのグラジエント方式を用いた。その分画の１つより、分取ＨＰＬＣ（資生堂ＯＤＳカラム２５０ｍｍ×２０ｍｍ）を用いて５個の成分を単離した。
展開溶剤は水：アセトニトリル＝７０：３０（０．１％ ＴＦＡ）、流量１０ｍｌ／ｍｉｎの条件を用いた。
１８分の留分に新規な単一成分６．１ｍｇを得たため、ＥＳＩ−ＭＳ，ＮＭＲ，ＣＤ等の各種分析機器を用いて構造解析を行ったところ新規なフラバノン化合物（化１）を見出しｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ａと命名した。
ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ａの構造解析の過程を以下に記載する。
【0027】
＜新規化合物の同定＞ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ａ物理化学的性質を（図１）に要約した。ＥＳＩ−ＭＳでは、Ｐｏｓｉｔｉｖｅモードでｍ／ｚ４９３．０７に（Ｍ＋Ｈ）＋、ｍ／ｚ５１５．３３に（Ｍ＋Ｎａ）＋、ｍ／ｚ５３７．２７に（Ｍ＋Ｋ）＋、Ｎｅｇａｔｉｖｅモードでｍ／ｚ４９１．２７に（Ｍ−Ｈ）−の分子イオンピークが観測されたことより、分子量が４９２であることが明らかになった（図９）。
１Ｈ−ＮＭＲスペクトルにおいて、積分値より３６個のプロトンが観測され、δ６．８４，δ７．０１は芳香族性のプロトン、δ１２．１８は水酸基のプロトンと推定された（図３）。
１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルにおいて、３０本のシグナルが観測され、δ１９７．９９にカルボニル炭素と思われるシグナルが観測された（図４）。また１Ｈ−１Ｈ ＣＯＳＹスペクトルを測定し結果を（図５）に示す。
以上の情報及び高分解能ＦＡＢ−ＭＳの結果から、分子式をＣ３０Ｈ３６Ｏ６と推定した。
ＨＳＱＣスペクトル（図６）、ＨＭＢＣスペクトル（図７）より平面構造を導いた。
さらに、ＣＤスペクトルを測定したところ、３１０ｎｍで正のコットン効果を、２９３ｎｍで負のコットン効果を示した（図８）。フラバノンに関して報告されているＣＤスペクトルの文献値と比較し、２位の立体配置をＳと決定した。以上の結果から、本化合物を（２Ｓ）−５，７，３′，４′−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｘｙ−８−（３′′′，３′′′−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｌｌｙｌ）−２′−ｇｅｒａｎｙｌ ｆｌａｖａｎｏｎｅであると同定した（化１）。本化合物は、文献未記載の新規化合物であり、ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ａと命名した。
【実施例2】
【0028】
＜分画成分の同定＞実施例１に示した分収ＨＰＬＣで引き続き２２分に４．０ｍｇ、展開溶剤を水：アセトニトリル＝６３：３７（０．１％ ＴＦＡ）に変更して、２３分に８．６ｍｇ、２４分に３．５ｍｇの画分を分取した。
実施例１同様に構造解析を行い化合物２ ｂｏｎａｎｎｉｏｎｅ Ａ、化合物３ ｓｏｐｈｏｒａｆｌａｖａｎｏｎｅ Ａ、化合物４ （２Ｓ）−５，７−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−４′−ｍｅｔｈｏｘｙ−８−ｐｒｅｎｙｌｆｌａｖａｎｏｎｅであると同定した。
化合物２（ｂｏｎａｎｎｉｏｎｅ Ａ）
【化2】
【化3】
【化4】
【実施例3】
【0029】
＜抗菌活性試験（ペーパーディスク法）＞グラム陽性菌の代表として、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ 黄色ブドウ球菌 ＦＤＡ２０９Ｐ及び Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ 枯草菌 ＮＢＲＣ３１３４を、グラム陰性菌の代表としてＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ 緑膿菌 ＮＢＲＣ１３２７５を各菌液５００μＬ、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ ａｇａｒ培地１９．５ｍＬをシャーレに播き凝固させた。実施例１同様に抽出したソロモン諸島産プロポリスのＥｔＯＨ抽出物をＭｅＯＨで濃度２０ｍｇ／ｍＬに調製した。その試料をクリーンベンチ内でフィルター（０．２μｍ）に通し、ペーパーディスク（φ８ｍｍ）に５０μＬずつ浸み込ませ、乾燥させた後、培地上に置き、それをインキュベーター内で、３７℃で２４時間、静置培養した。その後、形成された阻止円の直径を二方向から測定し、平均値を求め、抗菌活性を比較した。
また、上記と同様にして調製した沖縄産プロポリス（オオバギタイプ）及びブラジル産プロポリス（バッカリスタイプ）のＥｔＯＨ抽出物と比較例として示した。
結果を表１に示す。また、参考に図１２に試験の様子を示す。
【表1】
【実施例4】
【0030】
実施例２、実施例３同様に実施し、ソロモン産プロポリスより抗菌性の高い成分として上述の化合物に加えｐｒｏｐｏｌｉｎ Ｉを得た。ｐｒｏｐｏｌｉｎ Ｉを加えた５化合物についてＭＩＣ（Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）を求めた。ＭＩＣを求める方法としては、国際的な標準法であるＣｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＣＬＳＩ）に準拠した微量液体希釈法を用いた。ＣＡＭＨＢ（Ｃａｔｉｏｎ Ａｄｊｕｓｔｅｄ Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ Ｂｒｏｔｈ）液体培地表２を作製した。次に、７ｍＬずつ分注した１８ｍｍ試験管をオートクレーブで、１２０℃で２０分間、滅菌し、そこに、各試験菌を植菌して３７℃で２４時間、振とう培養した。それを、クリーンベンチ内で、１×１０７ｃｆｕ／ｍＬにＣＡＭＨＢで調製し、９６穴プレートに５／μＬ／ｗｅｌｌずつ添加した。各化合物は、濃度を１，２，４，８，１６，３２，６４，１２８，２５６，５１２ｍｇ／Ｌになるように、ＣＡＭＨＢで調製し、１００μＬずつ添加した。十分撹拌させた後、３７℃で１８時間、振とう培養した。
なお、これらの化合物は水に溶けにくいものであるため、試料をＥｔＯＨに溶かし、１％ＥｔＯＨ溶液とした。
培養後、肉眼で観察し、試験管内の菌の増殖が完全に阻止された試料の最小濃度をＭＩＣと判定した。結果を表３に示す。
【表2】
【表3】
【実施例5】
【0031】
抗酸化性を評価するためにＤＰＰＨアッセイを実施した。このアッセイは比較的安定なラジカルＤＰＰＨ（ジフェニルピクリルヒドラジル）が水素を得ることで無色のヒドラジンになる呈色反応を利用してラジカル捕捉能を測定する手法で、ＤＰＰＨアッセイの手法はＪ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．，５０，３７３−３７７（２００２）に準じた。結果を表４に示す。
【表4】
【実施例6】
【0032】
実施例１記載の化合物の単離同定をさらに進め、新たに新規な３種のフラバノン化合物ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｂ、ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｃ、ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｄ、および新規な１種のスチルベン化合物ｓｏｌｏｍｏｎｉｎの抽出と同定に成功した。単離の過程を（図１３）に示す。【実施例6】
【0033】
＜分画成分の同定＞図１３に示す分取ＨＰＬＣ画各分から化合物１５，１９，２０は既知化合物であり、それぞれ、没食子酸、ｐｕｙａｎｉｎ、６′−ｇｅｒａｎｙｌｐｉｎｏｃｅｍｂｒｉｎであった。残りの７個の成分を単離し、化合物１６，１７，１８，２１の構造を実施例１及び２同様に各種機器分析により同定したところ、これらは新規の化合物であり以下のように構造を決定した。
【0034】
＜新規化合物 化合物１６の構造決定＞ＵＰＬＣ−ＴＯＦ−ＭＳでは、Ｎｅｇａｔｉｖｅモードでｍ／ｚ４５５．１７４７に（Ｍ−Ｈ）−の分子イオンピークが観測されたことより、分子量が４５６であることが明らかになった（図１５）。
ＩＲスペクトルを測定したところ、１６５５，１７０２ｃｍ−１にカルボニル基、２９５４ｃｍ−１にアルキル基、３１１１ｃｍ−１に水酸基の存在を確認した（図１６）。
１Ｈ−ＮＭＲスペクトルにおいて、δ６．２６，δ６．４５，δ６．８７，δ６．９６は芳香族性のプロトン、δ１２．２７は分子内水素結合している水酸基のプロトンと推定された（図１７）。
１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルにおいて、２４本分のシグナルが観測され、δ１７６．９９にカルボニル炭素と思われるシグナルが観測された（図１８）。
以上の情報とＨＲＥＳＩＭＳから、分子式をＣ２５Ｈ２８Ｏ８と推定した。
ＨＳＱＣスペクトル（図１９）、ＨＭＢＣスペクトル（図２０）より、（図２１）に示すようなプロトンとカーボンのＨＭＢＣ相関が見られた。
以上のことより、本化合物の構造を（図２２）のように導き出すことができた。
以上の結果から、本化合物を
２′−（８″−ｈｙｄｒｏｘｙ−３″，８″−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−ｏｃｔ−２″−ｅｎｙｌ）−ｑｕｅｒｃｅｔｉｎであると同定した（図２２）。
本化合物は、文献未記載の新規化合物でありｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｂと命名した。ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｂの理化学的性質を（図１４）に要約した。
【0035】
＜新規化合物 化合物１７の構造決定＞ＵＰＬＣ−ＴＯＦ−ＭＳでは、Ｎｅｇａｔｉｖｅモードでｍ／ｚ４５５．１６８７に（Ｍ−Ｈ）−の分子イオンピークが観測されたことより、分子量が４５６であることが明らかになった（図２４）。
ＩＲスペクトルを測定したところ、１６５４，１７０２ｃｍ−１にカルボニル基、２９６５ｃｍ−１にアルキル基、３１１０ｃｍ−１に水酸基の存在を確認した（図２５）。
１Ｈ−ＮＭＲスペクトルにおいて、δ６．６１，δ７．００，δ７．７０，δ７．８２は芳香族性のプロトン、δ１２．４３は分子内水素結合した水酸基のプロトンと推定された（図２６）。
１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルにおいて、２４本分のシグナルが観測され、δ１７６．３８にカルボニル炭素と思われるシグナルが観測された（図２７）。
以上の情報とＨＲＥＳＩＭＳから、分子式をＣ２５Ｈ２８Ｏ８と推定した。
ＨＳＱＣスペクトル（図２８）、ＨＭＢＣスペクトル（図２９）より、（図３０）に示すようなプロトンとカーボンのＨＭＢＣ相関が見られた。
以上のことより、本化合物の構造を（図３１）ように導き出すことができた。
以上の結果から、本化合物を
６−（８″−ｈｙｄｒｏｘｙ−３″，８″−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−ｏｃｔ−２″−ｅｎｙｌ）−ｑｕｅｒｃｅｔｉｎであると同定した（図３１）。
本化合物は、文献未記載の新規化合物でありｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｃと命名した。ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｃの理化学的性質を（図２３）に要約した。
【0036】
＜新規化合物 化合物１８の構造決定＞ＵＰＬＣ−ＴＯＦ−ＭＳでは、Ｎｅｇａｔｉｖｅモードでｍ／４３７．１５７６に（Ｍ−Ｈ）−の分子イオンピークが観測されたことより、分子量が４３８であることが明らかになった（図３３）。
ＩＲスペクトルを測定したところ、１６５４，１７０２ｃｍ−１にカルボニル基、２９５６ｃｍ−１にアルキル基、３１１１ｃｍ−１に水酸基の存在を確認した（図３４）。
１Ｈ−ＮＭＲスペクトルにおいて、δ６．２８，δ６．４０，δ６．８２，δ６．９５は芳香族性のプロトン、δ１２．３０は分子内水素結合した水酸基のプロトンと推定された（図３５）。
１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルにおいて、２５本のシグナルが観測され、δ１７６．０５にカルボニル炭素と思われるシグナルが観測された（図３６）。以上の情報とＨＲＥＳＩＭＳから、分子式をＣ２５Ｈ２６Ｏ７と推定した。
ＨＳＱＣスペクトル（図３７）、ＨＭＢＣスペクトル（図３８）より、（図３９）に示すようなプロトンとカーボンのＨＭＢＣ相関が見られた。
以上のことより、本化合物の平面構造を（図４０）のように導き出すことができた。
以上の結果から、本化合物を２′−ｇｅｒａｎｙｌｑｕｅｒｃｅｔｉｎであると同定した（図４０）。
本化合物は、文献未記載の新規化合物でありｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｄと命名した。ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｄの理化学的性質を（図３２）に要約した。
【0037】
＜新規化合物 化合物２１の同定＞ＵＰＬＣ−ＴＯＦ−ＭＳでは、Ｐｏｓｉｔｉｖｅモードでｍ／ｚ４４９．２６７４に（Ｍ＋Ｈ）＋、Ｎｅｇａｔｉｖｅモードでｍ／ｚ４４７．２５２４に（Ｍ−Ｈ）−の分子イオンピークが観測されたことより、分子量が４４８であることが明らかになった（図４２）。
ＩＲスペクトルを測定したところ、２９２２ｃｍ−１にアルキル基、３３９２ｃｍ−１に水酸基の存在を確認した（図４３）。
１Ｈ−ＮＭＲスペクトルにおいて、δ６．２９，δ６．５５，δ６．８７，δ６．９９は芳香族性のプロトン、δ６．８１とδ６．９６はカップリング定数（Ｊ＝１６．２Ｈｚ）より、二重結合のトランス位のプロトンと推定された（図４４）。
１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルにおいて、２６本のシグナルが観測された（図４５）。
以上の情報とＨＲＥＳＩＭＳから、分子式をＣ２９Ｈ３６Ｏ４と推定した。
１Ｈ−１Ｈ−ＣＯＳＹスペクトル（図４６）、ＨＳＱＣスペクトル（図４７）、ＨＭＢＣスペクトル（図４８）より、（図４９）示すようなプロトンとカーボンのＨＭＢＣ相関が見られた。
以上のことより、本化合物の構造を（図５０）のように導き出すことができた。
以上の結果から、本化合物を５′−ｆａｒｎｅｓｙｌｐｉｃｅａｔａｎｎｏｌであると同定した（図５０）。
本化合物は、文献未記載の新規化合物でありｓｏｌｏｍｏｎｉｎと命名した。ｓｏｌｏｍｏｎｉｎの理化学的性質を（図４１）に要約した。
【実施例7】
【0038】
＜抗菌活性試験（微量液体希釈法）＞新たに分離同定された５化合物について実施例４同様ＭＩＣ（Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）を求めた。結果を表５に示す。
【表5】
【産業上の利用可能性】
【0039】
本発明のｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ａ，ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｂ，ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｃ，ｓｏｌｏｐｈｅｎｏｌ Ｄ、ｓｏｌｏｍｏｎｉｎは抗菌剤、抗酸化剤として使用できるばかりか医薬品や化学品の有効成分や有効成分合成の原料として使用できる。本発明の抗菌剤、抗酸化剤は食品、飲料、食品添加物、健康食品、化粧品、化粧品添加物、抗菌衛生素材として幅広く衛生、健康分野に利用できる。