特許 5969491 顔の毛穴の外観を改善するための組成物及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5969491

(24)【登録日】2016年7月15日

(45)【発行日】2016年8月17日

(54)【発明の名称】顔の毛穴の外観を改善するための組成物及び方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 8/34 20060101AFI20160804BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20160804BHJP

【ＦＩ】

   A61K8/34

   A61Q19/00

【請求項の数】7

【全頁数】18

(21)【出願番号】特願2013-540006(P2013-540006)

(86)(22)【出願日】2011年11月17日

(65)【公表番号】特表2013-543001(P2013-543001A)

(43)【公表日】2013年11月28日

(86)【国際出願番号】US2011061159

(87)【国際公開番号】WO2012068356

(87)【国際公開日】20120524

【審査請求日】2013年5月20日

(31)【優先権主張番号】61/415,687

(32)【優先日】2010年11月19日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】590005058

【氏名又は名称】ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー

(74)【代理人】

【識別番号】110001243

【氏名又は名称】特許業務法人 谷・阿部特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】箱崎 智洋

(72)【発明者】

【氏名】レオ ティモシー ラフリン ザ セカンド

【審査官】 團野 克也

(56)【参考文献】

【文献】 米国特許出願公開第２００８／０２０６３７３（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 特開平０８−１８３７２５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００５−０４７９１０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００８−５０２７０４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２００８／１４３０８１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特開２００１−００２５５１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００３−０１２４８６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００２−１６７３２０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０７−１６５５６７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００６−５１５３２９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 西島 貴史，"毛穴に対するスキンケア対策"，FRAGRANCE JOURNAL，２００５年 ９月１５日，Vol.33, No.9，pp.27-32

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

ＩＰＣ Ａ６１Ｋ ８／００− ８／９９

Ａ６１Ｑ １／００−９９／００

ＤＢ等 ＤＷＰＩ（Ｔｈｏｍｓｏｎ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ）

Ｍｉｎｔｅｌ ＧＮＰＤ

ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＣＡｐｌｕｓ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

顔の毛穴の領域を縮小する方法であって、
ａ．顔の皮膚表面上の顔の毛穴の領域を識別する工程と、
ｂ．全組成物の３重量％〜６重量％のヘキシルデカノールを含む組成物を前記顔の皮膚表面上の前記顔の毛穴に塗布する工程と、を含み、
前記組成物は、ヒアルロン酸産生及び／又はＩＬ−１調節によって、皮膚の水分量を制御すること、及び／又は炎症を低減することによって、前記顔の毛穴の領域を縮小するのに十分な期間塗布される、方法。

【請求項2】

顔の毛穴の領域を縮小する方法であって、
ａ．顔の皮膚表面上の顔の毛穴の領域を識別する工程と、
ｂ．ＩＬ−１、及び／又はヒアルロン酸産生を調節するヘキシルデカノールを３重量％〜６％重量の濃度で含む組成物を前記顔の皮膚表面上の前記顔の毛穴の領域に塗布する工程と、を含み、
前記組成物は、ヒアルロン酸産生及び／又はＩＬ−１調節によって、皮膚の水分量を制御すること、及び／又は炎症を低減することによって、前記顔の毛穴の領域を縮小するのに十分な期間塗布される、方法。

【請求項3】

前記組成物が、額、口周囲、頤、眼窩周囲、鼻、頬の皮膚表面、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの顔の領域に塗布される、請求項１または２に記載の方法。

【請求項4】

前記組成物が、少なくとも４週間の間、少なくとも１日１回、前記顔の毛穴に塗布される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

前記組成物が、抗炎症剤を更に含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

前記組成物が、皮膚色調剤を更に含み、
前記皮膚色調剤が、糖アミン、ビタミンＢ３化合物、アルブチン、デオキシアルブチン、１，３−ジヒドロキシ−４−アルキルベンゼン、バクコイル、ピレノイン、キビ（panicum miliaceum）種子抽出物、アーラトン（arlatone）二酸、ケイ皮酸、フェルラ酸、アクロマキシル（achromaxyl）、メチルニコチンアミド、油可溶性甘草抽出物、葉酸、ウンデシレン酸、ウンデシレン酸亜鉛、チアミン（ビタミンＢ１）及びその塩酸塩、Ｌ−トリプトファン、ベンガルボダイジュ（ficus bengkalensis）、カラフトコンブ（コンブ属）［登録商標phlorogine（laminaria)］、ヒマワリ及びブドウ（vitis vinifera）（グレープ）葉抽出物、カルノシン、ゲンチシン酸メチル、１，２−ヘキサンジオール及び１，２−オクタンジオール、イノシトール、デシレノイルフェニルアラニン、コウジ酸、ヘキサアミジン化合物、サリチル酸、レチノイド、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

前記顔の毛穴の領域に塗布される前記ヘキシルデカノールが、前記組成物の１回の塗布当たり１〜５０μＬ／ｃｍ²の投与量で塗布される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、顔の毛穴の外観を改善するための組成物及び方法に関する。

【背景技術】

【0002】

皮膚の最外層である表皮は、角質層、顆粒層、有棘層、及び基底層の４層の細胞の連続体を含む。表皮中の細胞の各層は、表皮基底層のケラチノサイトが、増殖、分化、及びアポトーシスの連続的なサイクルを経て、基底層から上方に移動し最終的に角質細胞となるプロセスに沿った様々な工程を表す。これらの角質細胞は、角質層として知られる角化層を形成する。

【0003】

基底ケラチノサイトは表皮の下部に存在する。これらの有糸分裂的に活性である細胞は、物理的に上方に有棘層及び顆粒層に移行し、角質細胞に分化するプロセスを起こす娘細胞を産生する増殖サイクルを起こす。有棘層及び顆粒層を通過する際に、細胞は、細胞生存能を失い、交代性のケラチン発現プロフィールを経て、細胞残遺物に形質転換するとき、構造が平たくなる形態変化を起こす。平均で、若い年齢の表皮は約１カ月で代謝回転し、古い細胞を脱落させ新しい細胞と置換するが、年とった皮膚ではこのプロセスが４０日以上に増加し得る。

【0004】

角質層の角質細胞はタンパク質及び脂質によって相互に（to one other）結合を維持し、生命体と外部環境との間の保護バリアを作り出す。このしっかりと調節された表皮透過性バリアは、化学的侵襲及び生物学的侵襲に対して物理的かつ選択的なバリアとして機能する。このバリアの重要な機能としては、深層へのフリーラジカルの侵入を減衰させ紫外線を含む有害放射線の侵入を防止させることが挙げられる。角質層は、透過性バリアとしても作用し、身体の水分が外部環境に失われるのを防ぐ働きをする。このバリアの機能障害は、慢性的な皮膚状態、疾病を導き得、極端な場合には生命体の生存能までも脅かし得る。

【0005】

皮膚の老化現象は、内因性（経年的老化）因子、並びに、紫外線（ＵＶ）暴露、環境毒物、汚染物質、及び喫煙を含む外部（環境的）因子の両方により駆動される多元的なプロセスである。角質層が周期的に新しい層の皮膚を産生する能力が年齢とともに減少し、その結果、角質層の代謝回転速度が加齢した皮膚で実質的に低下し、同時に角化層が徐々に薄くなることは当該技術分野において周知である。これはバリアの機能能力の低減の原因となり、その結果、有害な刺激が角質層をより容易に浸透し、例えば、下にある皮膚層の紫外線ダメージ、コラーゲン及びエラスチンの分解を導き、ついにはしわ及び皮膚萎縮として外観に発現する。更に、バリアは、加齢に伴うフリーラジカル透過性の増加、及び細胞間マトリクス中の脂質量の減少を受けて、深層からの毒素を拡散するバリア能力が減少する。環境からの侵襲に対するバリアの回復能力も加齢と共に実質的に減少する。

【0006】

顔の皮膚の毛穴のサイズ、特に鼻及び頬の周りの毛穴のサイズは、経時的に増大する可能性がある。誰もが、度合いは異なるが、加齢と共にしわができるが、全ての人の顔の毛穴が拡大するわけではない。結果として恐らく、化粧品科学は、しわを理解することに大いに焦点を合わせており、小じわ及びしわの外観を防ぐ及び／又は低減するのに役立ち得るスキンケア製品の開発に活用されてきた大規模な知識を作り出している。

【0007】

それに比べて、加齢による顔の毛穴の拡大に焦点を当てた研究はあまりなされておらず、顔の毛穴の外観を防ぐ、低減する、又は改善することに有効であるように特にデザインされたスキンケア製品の開発を妨げる空洞を残している。顔の毛穴が拡大し始める可能性がある年齢は大きく個人差があり得るが、プロセスは２０代から始まり得、毛穴は拡大をし続け、４０代と５０代との間により明確になる可能性がある。本発明者らは、安全かつ有効な量のヘキシルデカノールを、顔の毛穴の外観を改善するために使用し得ることを意外にも発見した。本発明者らはまた、ヘキシルデカノール（hexlydecanol）は、ヒアルロン酸産生及び／又はＩＬ−１と関係するある生化学プロセスに影響する可能性があり、結果的に、顔の毛穴の外観に影響を及ぼす可能性があることを意外にも発見した。更に、本発明者らは、顔の毛穴の外観を改善する、局所的に塗布する化粧用組成物、及び関連する処置方法の要望を認識した。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0008】

顔の毛穴の外観を改善する方法は、有効量のヘキシルデカノールを含む組成物を顔の毛穴を有する顔の皮膚の領域に塗布する工程を含み、組成物は、ヘキシルデカノールが顔の毛穴の外観を改善するのに十分な期間塗布される。

【0009】

顔の毛穴の外観を改善する方法は、（ａ）顔の皮膚表面上の顔の毛穴の領域を識別する工程、及び（ｂ）有効量のヘキシルデカノールを含む組成物を顔の皮膚表面上の顔の毛穴の領域に塗布する工程を含み、組成物は、ヘキシルデカノールが顔の毛穴の外観を改善するのに十分な期間塗布される。

【0010】

顔の毛穴の外観を改善する方法は、ＩＬ−１、及び／又はＨＡ産生を調節する物質の有効量を含む組成物を顔の毛穴の領域に局所的に塗布する工程を含み、組成物は、該物質が顔の毛穴の外観を改善するのに十分な期間塗布される。

【0011】

顔の毛穴の外観を改善する方法は、（ａ）顔の皮膚表面上の顔の毛穴の領域を識別する工程、及び（ｂ）ＩＬ−１、及び／又はＨＡ産生を調節する物質の有効量を含む組成物を顔の皮膚表面上の顔の毛穴の領域に塗布する工程を含み、組成物は、該物質が顔の毛穴の外観を改善するのに十分な期間塗布される。

【0012】

本発明は、背景技術にて特定された技術的問題に応答して、他の形態をとり得る。本発明の更なる形態は、以下の詳細な説明にて認識されるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0013】

本発明は添付図面と共に示す以下の説明によってより良く理解できるであろうと考えられる。参照図面は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。

【図1】生体内試験からの毛穴領域分画のパーセント減少をグラフ表示する。

【発明を実施するための形態】

【0014】

特に指定がない限り、本明細書において使用する全ての百分率及び比率は、組成物全体の重量によるものであり、また、全ての測定は２５℃でなされるものとする。全ての数範囲はより狭い範囲を包含し、表現された上方及び下方範囲の限界値は互換可能であって、明示されていない範囲を更に作り出す。

【0015】

本発明の組成物は、本明細書に記載の必須構成成分並びに任意成分を含み、それらから本質的になり、又はそれらからなることができる。本明細書で使用するとき、「から本質的になる」とは、組成物又は構成成分は追加成分を包含してもよいが、それら追加成分が特許請求される組成物又は方法の基本的及び新規な特徴を実質的に変化させない場合に限ることを意味する。

【0016】

組成物に関連して使用するとき、用語「塗布する」又は「塗布」は、本発明の組成物を表皮等のヒトの体外皮膚表面上に局所的に塗布する又は広げることを意味する。

【0017】

本明細書で使用するとき、用語「皮膚科学的に許容可能な」は、記載される組成物又は構成成分が、過度の毒性、不適応性、不安定性、アレルギー反応等がなく、ヒトの皮膚組織と接触して使用するのに好適であることを意味する。

【0018】

本明細書で使用するとき、用語「有効量」は、ポジティブな利点を有意に誘導するのに十分な化合物及び組成物の量を意味する。

【0019】

ヒトの顔の皮膚に関連して使用するとき、用語「顔の毛穴」は、肉眼で見える顔の毛穴を一般に指すが、用語「顔の毛穴」は、肉眼で見えない毛穴も含み得る。顔の毛穴は、毛穴の開口部、及び毛穴の可視の外観に影響を及ぼす開口部に直接隣接する皮膚の両方を含む。場合によっては、顔の毛穴は、２．０ｍｍ²、若しくは１．０ｍｍ²、若しくは０．１ｍｍ²未満の毛穴領域、又は０．０９ｍｍ²未満、０．０８ｍｍ²未満、０．０７ｍｍ²未満、若しくは０．０５ｍｍ²未満の毛穴領域、及び／又は０．０２ｍｍ²又は０．０４ｍｍ²を超える毛穴領域を有してもよい。顔の毛穴は、一般に、しかし常時ではないが、皮膚表面で一般に円形又は楕円の形状を有する。

【0020】

本明細書で使用するとき、用語「顔の皮膚」は、額、眼窩周囲、頬、口周囲、頤及び鼻の皮膚表面のうちの１つ以上を指す。

【0021】

顔の毛穴に関連して使用するとき、用語「改善する」は、顔の毛穴の外観を予防する、遅れさせる、及び／又は縮小させることを含む。したがって「改善する」は、毛穴開口部の直径を減少させること、及び／又は毛穴開口部に直接隣接する皮膚の外観を改善することも含み、その結果、全体的な毛穴の外観が縮小される。これは、定量的（例えば、毛穴領域分画）及び／又は定性的（例えば、ヒトの目による目視検査）な手段によって評価し得る。

【0022】

Ｉ．組成物
本発明は様々な組成物に関し、より詳細には、顔の皮膚表面に局所塗布するための組成物に関する。組成物は、溶液、懸濁液、ローション、クリーム、ゲル、化粧水、スティック、ペンシル、スプレー、エアゾル、軟膏、クレンジング洗剤液及びクレンジング棒状固形物（cleansing liquid washes and solid bars）、シャンプー及びヘアコンディショナー、ペースト、フォーム、パウダー、ムース、髭剃りクリーム、ティッシュ、細片（strip）、パッチ、電気駆動パッチ、創傷被覆材及び粘着性包帯、ヒドロゲル、フィルム形成製品、顔及び皮膚マスク（不溶性シートを有する及び有さない）、ファンデーション、アイライナー及びアイシャドウ等の化粧品等が挙げられるがこれらに限定されない、非常に様々な製品形態を有することができる。組成物の形態は、組成物中に存在する場合、選択された皮膚科学的に許容可能な特定のキャリアに従い得る。

【0023】

Ａ．ヘキシルデカノール
本発明の組成物は、有効量のヘキシルデカノールを含み得る。特定実施形態では、組成物は、全組成物の１％重量〜１０重量％、あるいは２．５重量％１０重量％、あるいは２．５重量％〜６重量％、あるいは４重量％〜６重量％のヘキシルデカノールを含んでもよい。

【0024】

ヘキシルデカノールは、脂肪アルコールのＩＮＣＩ名称で、２−ヘキシルデカン−１−オール（ＩＵＰＡＣ名称）、２−ヘキシルデカノール、又は２−ヘキシル−１−デカノールとしても知られる。ヘキシルデカノールの化学式は、Ｃ₁₆Ｈ₃₄Ｏで、ＣＡＳ番号２４２５−７７−６である。ヘキシルデカノールは、広く入手可能な化粧用溶媒で、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，ＵＳＡ）から市販されている。

【0025】

Ｂ．任意成分
本発明の組成物は、本発明の利益を受け入れ難いほど変更しなければ、様々な他の成分を含有することができる。存在する場合、本発明の組成物は、組成物の約０．０００１重量％〜約５０重量％、約０．００１重量％〜約２０重量％、又は代替的に約０．０１重量％〜約１０重量％の任意構成成分を含有することができる。本明細書に列挙した量は規準としてのみ使用されるべきであり、組成物中に使用される任意構成成分の最適な量は、それらの効力がかなり多様であるため、選択される特定の活性物質に依存するであろう。したがって、本発明において有用ないくつかの任意構成成分の量は、本明細書に列挙した範囲外であり得る。

【0026】

組成物中に組み込まれる場合、任意成分は、過度の毒性、不適応性、不安定性、アレルギー反応等を示すことなく、ヒトの皮膚組織に接触させて用いるのに好適でなければならない。本発明の組成物は、抗挫創活性物質、落屑活性物質、抗セルライト剤、キレート剤、フラボノイド、日焼け活性物質、非ビタミン酸化防止剤及びラジカルスカベンジャー、育毛調整剤、しわ防止活性物質、抗皮膚萎縮防止活性物質、鉱物、フィトステロール及び／又は植物ホルモン、Ｎ−アシルアミノ酸化合物、抗菌活性物質又は抗真菌活性物質、並びに他の有用なスキンケア活性物質等の任意構成成分を含有してもよく、これらは、米国特許出願公開第２００６／０２７５２３７（Ａ１）号及び同第２００４／０１７５３４７（Ａ１）号に更に詳細に記載されている。

【0027】

Ｐｅｒｓｏｎａｌ Ｃａｒｅ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｃｏｕｎｃｉｌ’ｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｓｍｅｔｉｃ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ａｎｄ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｔｈｉｒｔｅｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎには、皮膚ケア産業において通常使用されている非常に様々な非限定的な美容及び医薬成分が記載され、それらは本発明の組成物中で使用するのに好適な任意構成成分である。これらの成分クラスの例としては、研磨材、吸収剤、芳香剤等の美容構成成分、色素、顔料／着色剤、精油、アンチケーキング剤、消泡剤、抗菌剤、結合剤、生物学的添加剤、緩衝剤、充填剤、キレート化剤、化学的添加剤、着色剤、美容収斂剤、美容殺生物剤、変性剤、薬物収斂剤、皮膚軟化剤、外用鎮痛剤、フィルム形成剤又は材料、乳白剤、ｐＨ調整剤、保存剤、噴霧剤、還元剤、捕捉剤、皮膚冷却剤、皮膚保護剤、増粘剤粘度調節剤、ビタミン及びそれらの組み合わせが挙げられる。

【0028】

任意成分のいくつかのクラスは以下でより詳細に議論される。

【0029】

１．皮膚色調剤
いくらかの実施形態では、ヘキシルデカノールと組み合わせて、組成物中に皮膚色調剤も含ませることが望ましい場合がある。本明細書で使用するとき、「皮膚色」は、色素沈着過度の広汎領域及び／又は局部領域（すなわち、斑点、年齢による染み）を指す。本明細書で使用するとき、「皮膚色の改善」は、色素沈着過度の領域の外観を予防する又は減少させることを意味する。

【0030】

皮膚色調剤は、全体的な皮膚色調を更に改善するよう含められてもよい。存在する場合、本発明の組成物は、組成物の約５０重量％、４０重量％、３０重量％、２０重量％、１０重量％、５重量％又は３重量％迄の皮膚色調剤を含有する。存在する場合、本発明の組成物は、組成物の少なくとも約０．００１重量％、０．０１重量％、０．１重量％、０．２重量％、０．５重量％又は１重量％の皮膚色調剤を含有する。好適な範囲は、組成物の約０．１重量％〜約５０重量％、約０．２重量％〜約２０重量％、又は約１重量％〜約１０重量％の皮膚色調剤の好適な範囲を含む、下限及び上限の任意の組み合わせを含む。皮膚色調剤の効力がかなり多様であるため、皮膚色調剤の最適な量は選択される特定の活性物質に依存することにより、本明細書に列挙した量は、規準としてのみ使用されるべきである。

【0031】

好適な皮膚色調剤には、糖アミン、ビタミンＢ３化合物、アルブチン、デオキシアルブチン、ヘキシルレゾルシノール等の１，３−ジヒドロキシ−４−アルキルベンゼン、バクコイル（４−［（１Ｅ，３Ｓ）−３−エテニル−３，７−ジメチル−１，６オクタジエニル］フェノール又はモンテルペンフェノール）、ピレノイン（Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｍａｒｉｎｅ，Ｆｒａｎｃｅから入手可能）、キビ（panicum miliaceum）種子抽出物、アーラトン（arlatone）二酸、ケイ皮酸、フェルラ酸、アクロマキシル（achromaxyl）、メチルニコチンアミド、油可溶性甘草抽出物、葉酸、ウンデシレン酸（即ち、ウンデセン酸）、ウンデシレン酸亜鉛、チアミン（ビタミンＢ１）及びその塩酸塩、Ｌ−トリプトファン、ベンガルボダイジュ（ficus bengkalensis）、カラフトコンブ（コンブ属）［登録商標phlorogine（laminaria)］、ヒマワリ（helianthus annuus）（サンフラワー）及びブドウ（vitis vinifera）（グレープ）葉抽出物、カルノシン（即ち、ドラゴシン）、ゲンチシン酸メチル、１，２−ヘキサンジオール及び１，２−オクタンジオール（即ち、Ｓｙｍｒｉｓｅ ＡＧ（Ｇｅｒｍａｎｙ）によりＳｙｍｄｉｏｌ ６８として販売されている組み合わせ）、イノシトール、デシレノイルフェニルアラニン（例えば、Ｓｅｐｐｉｃ（Ｆｒａｎｃｅ）により商標名Ｓｅｐｉｗｈｉｔｅで販売）、コウジ酸、ヘキサアミジン化合物、サリチル酸、並びにレチノール及びプロピオン酸レチニルを含むレチノイドが挙げられるがこれらに限定されない。

【0032】

所定の実施形態において、追加の皮膚色調剤はビタミンＢ３化合物、糖アミン、ヘキサミジン化合物、サリチル酸、ヘキシルレゾルシノール等の１，３−ジヒドロキシ−４−アルキルベンゼン、及びレチノイドからなる群から選択される。本明細書で使用するとき、「ビタミンＢ₃化合物」とは、次式を有する化合物を意味する：

【0033】

【化1】

式中、Ｒは、−ＣＯＮＨ₂（即ち、ナイアシンアミド）、−ＣＯＯＨ（即ち、ニコチン酸）、又は−ＣＨ₂ＯＨ（即ち、ニコチニルアルコール）；これらの誘導体；及び前述のいずれかの塩である。本明細書で使用するとき、「糖アミン」には、その異性体及び互変異性体、並びにその塩（例えば、ＨＣｌ塩）及びその誘導体が含まれる。糖アミンの例としては、グルコサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノサミン、Ｎ−アセチルマンノサミン、ガラクトサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、これらの異性体（例えば、立体異性体）、及びこれらの塩（例えば、ＨＣｌ塩）が挙げられる。本明細書で使用する場合、「ヘキサミジン化合物」とは、次式を有する化合物を意味する：

【0034】

【化2】

式中、Ｒ¹及びＲ²は任意であるか、又は有機酸（例えば、スルホン酸など）である。一実施形態において、ヘキサミジン化合物はジイセチオン酸ヘキサミジンである。

【0035】

２．抗炎症剤
組成物は抗炎症剤を更に含んでもよい。存在する場合、本発明の組成物は、組成物の約２０重量％、１０重量％、５重量％、３重量％又は１重量％迄の抗炎症剤を含有する。存在する場合、本発明の組成物は、組成物の少なくとも約０．００１重量％、０．０１重量％、０．１重量％、０．２重量％、０．３重量％、０．５重量％又は１重量％の抗炎症剤を含有する。好適な範囲は、下限と上限との任意の組み合わせを含む。好適な抗炎症剤には、非ステロイド系の抗炎症剤（イブプロフェン、ナプロキセン、フルフェナム酸、エトフェナマート、アスピリン、メフェナム酸、メクロフェナム酸、ピロキシカム及びフェルビナクが挙げられるが、これらに限定されないＮＳＡＩＤＳ）、グリシルリジン酸（グリシルリジン、グリシルリキシン酸（glycyrrhixinic acid）及びグリシルレチン酸グリコシドとしても知られている）及びグリシルリジン酸二カリウム等の塩、グリシルレテン酸（glycyrrhetenic acid）、甘草抽出物、ビサボロール（例えば、αビサボロール）、マンジスタ（キイチゴ属の植物、特にクルマバアカネ（Rubia cordifolia）から抽出される）、及びガッガル（guggal）（コミフォラ属の植物、特にコミフォラムクリ（Commiphora mukul）から抽出される）、コーラノキ抽出物、カミツレ、ムラサキツメクサ抽出物、及びムチサンゴ（sea whip）抽出物（ヤギ目の植物からの抽出物）、上記のいずれかの誘導体、及びこれらの混合物を含むがこれらに限定されない。

【0036】

３．日焼け止め活性物質
本発明の組成物は、１つ以上の日焼け止め活性物質（日焼け止め剤）及び／又は紫外線吸収剤を含んでよい。本明細書において「日焼け止め活性物質」には、集合的に日焼け止め活性物質、日焼け止め剤、及び／又は紫外線吸収剤が含まれる。日焼け止め活性物質には、日焼け止め剤と物理的日焼け防止剤の双方が含まれる。日焼け止め活性物質は、有機又は無機であってよい。好適な日焼け止め活性物質の例は、「日焼け止め剤」としてＰｅｒｓｏｎａｌ Ｃａｒｅ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｃｏｕｎｃｉｌ’ｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｓｍｅｔｉｃ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ａｎｄ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｔｈｉｒｔｅｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎに開示されている。特に好適な日焼け止め活性物質は、２−エチルヘキシル−ｐ−メトキシシンナメート（ＰＡＲＳＯＬ（商標）ＭＣＸとして市販）、４，４’−ｔ−ブチルメトキシジベンゾイル−メタン（ＰＡＲＳＯＬ（商標）１７８９として市販）、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、オクチルジメチル−ｐ−アミノ安息香酸、ジガロイルトリオレエート、２，２−ジヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、エチル−４−（ビス（ヒドロキシプロピル））アミノ安息香酸、２−エチルヘキシル−２−シアノ−３，３−ジフェニルアクリル酸、２−エチルヘキシル−サリチル酸、グリセリル−ｐ−アミノ安息香酸、３，３，５−トリ−メチルシクロヘキシルサリチル酸、メンチルアントラニル酸、ｐ−ジメチル−アミノ安息香酸又はアミノベンゾエート、２−エチルヘキシル−ｐ−ジメチル−アミノ−安息香酸、２−フェニルベンゾイミダゾール−５−スルホン酸、２−（ｐ−ジメチルアミノフェニル）−５−スルホニクベンゾオキサゾ酸、オクトクリレン、酸化亜鉛、ベンジリデンショウノウ及びその誘導体類、二酸化チタン、並びにこれらの混合物である。

【0037】

一実施形態において、組成物は、組成物の約１重量％〜約２０重量％、代替的に約２重量％〜約１０重量％の日焼け止め活性物質を含有してもよい。正確な量は、選択された日焼け止め活性物質と、当業者の知識の範囲内である所望の太陽光線保護指数（ＳＰＦ）に応じて変動するであろう。

【0038】

Ｃ．皮膚科学的に許容可能なキャリア
本発明の組成物は、組成物用の皮膚科学的に許容可能なキャリア（「キャリア」と称してもよい）も含有し得る。本明細書で使用するとき、「皮膚科学的に許容可能なキャリア」という語句は、キャリアが皮膚への局所塗布に好適であり、良好な審美特性を有し、組成物中の活性物質と適合性があり、安全性又は毒性についていかなる不当な問題も起こさないことを意味する。一実施形態において、キャリアは、組成物の約５０重量％〜約９９重量％、約６０重量％〜約９８重量％、約７０重量％〜約９８重量％、又は代替的に約８０重量％〜約９５重量％のレベルで存在する。

【0039】

担体は多様な形態をとりうる。非限定例には、単純な溶液（例えば、水性、有機溶媒又は油ベースの）、乳濁液、及び固体形態（例えば、ゲル、スティック、流動性固体、又は無定形材料）が挙げられる。特定の実施形態において、皮膚科学的に許容可能な担体は、エマルションの形状である。エマルションは、一般に、連続水相（例えば水中油型及び水中油中水型）、又は連続油相（例えば油中水型及び油中水中油型）を有するものとして分類され得る。本発明の油相には、シリコーンオイル、非シリコーンオイル（炭化水素油、エステル類、エーテル類など）、及びこれらの混合物が含まれうる。

【0040】

水相は典型的に、水を含む。しかしながら、別の実施形態では、水相は、水溶性保湿剤、コンディショニング剤、抗菌剤、湿潤剤、及び／又は他の水溶性スキンケア活性物質が挙げられるが、これらに限定されない水以外の構成成分を含み得る。一実施形態では、組成物の非水構成成分は、グリセリン及び／又は他のポリオール等の湿潤剤を含む。しかしながら、組成物は、実質的に（即ち、１％未満の水）又は完全に無水であってもよいことを理解するべきである。

【0041】

所望の製品形態を得るために、好適なキャリアが選択される。更に、構成成分（例えば、ヘキシルデカノール、日焼け止め活性物質、追加の構成成分）の可溶性又は分散性は、キャリアの形態及び特性に影響し得る。一実施形態では、水中油又は油中水型の乳濁液が好ましい。

【0042】

乳濁液は、更に乳化剤を含み得る。組成物は、キャリアを十分乳状にする任意の好適な百分率の乳化剤を含有してもよい。好適な重量範囲は、組成物の、約０．１重量％〜約１０重量％又は約０．２重量％〜約５重量％の乳化剤を含む。乳化剤は、非イオン性、アニオン性、又はカチオン性であり得る。好適な乳化剤は、例えば、米国特許第３，７５５，５６０号、同第４，４２１，７６９号、及びＭｃＣｕｔｃｈｅｏｎ’ｓ Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒｓ，Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐａｇｅｓ ３１７〜３２４（１９８６）に開示されている。好適なエマルションは、所望の製品形態に応じて、幅広い粘度を有し得る。

【0043】

キャリアは、当業者に周知であるように増粘剤を更に含有して、好適な粘度及び流動学的特性を有する組成物を提供してもよい。

【0044】

ＩＩ．例示的な組成物
表１は、本発明の組成物の非限定的な実施例を示す。これらの実施例は単に説明のために示すものであり、本発明を限定するものと解釈すべきでなく、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、多くの改変が可能であり、当業者にはこれらのことが理解されよう。実施例においては、特に指定のない限り、全ての濃度が重量％として列挙されており、希釈剤、充填剤などの微量物質は除外し得る。そのため、列挙した配合は、列挙した成分及びこのような成分に関連するいかなる微量物質をも含む。当業者にとって明白なように、このような微量物質の選択は、本明細書に記載したように本発明を作るために選択した特定成分の物理的及び化学的特質によって変わることになる。

【0045】

実施例はすべて、顔の毛穴の１つ以上の領域の外観を改善するために使用されてもよい。

【0046】

【表1】

^*１−Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（ＵＳＡ）から入手可能なヘキシルデカノール。
^*２−ＳＥＰＰＩＣ（Ｆｒａｎｃｅ）から入手可能なＳｅｐｉｗｈｉｔｅ。
^*３−Ｃｏｇｎｉｓ ＧｍｂＨから入手可能なＥｍｕｌｇａｄｅ ＰＬ ６８／５０。
^*４−ＳＥＰＰＩＣ（Ｆｒａｎｃｅ）から入手可能なＳｅｐｉｇｅｌ ３０５。
^*５−Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｉｎｃ．（Ｍｉｄｌａｎｄ，ＭＩ）から入手可能なＤｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇ ＤＣ１５０３。

【0047】

本発明の組成物は、一般に、局所塗布組成物を製造する技術分野において既知であるような従来の方法によって調製される。このような方法は、通常、加熱、冷却、真空の適用などを用いて又は用いずに、成分を１つ以上の工程で混合して比較的均一な状態にするものである。一般に、乳濁液は、最初に水相物質を脂肪相物質とは別個に混合し、その後２相を適宜組み合わせて、所望の連続層を得ることにより調製される。組成物は、好ましくは、安定性（物理的安定性、化学的安定性、光安定性）、及び／又は活性物質の送達を最適化するように調製される。この最適化には、適切なｐＨ（例えば７未満）、活性剤と錯体になり、ひいては安定性又は分配にマイナスの影響を与え得る物質の排除（例えば汚染鉄の排除）、錯体形成を防止する手法（例えば適切な分散剤又は二重区画包装）の使用、適切な光安定性の手法（例えば日焼け止め剤／日焼け防止剤の組み込み、不透明包装の使用）の使用などが含まれてもよい。

【0048】

ＩＩＩ．処置方法
処置、塗布、調節又は改善の様々な方法として、前述した組成物を使用することができる。一実施形態では、本方法は、組成物により改善する顔の毛穴を識別する工程を含む。顔の毛穴は、使用者、又は例えば皮膚科医、美容師、若しくは他の介護者等の第三者により識別されてもよい。識別は、顔の毛穴の外観に基づいて、処置を必要とする皮膚を目視検査することにより行われてもよい。識別はまた、ＶＩＳＩＡ（登録商標）Ｃｏｍｐｌｅｘｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓシステム（Ｃａｎｆｉｅｌｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．（Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，ＮＪ）から入手可能）等の市販の撮像装置により行われてもよい。装置は、皮膚の画像を収集し、顔の毛穴を識別することが可能である。場合によっては、本方法は、組成物により処置するために複数の顔の毛穴を識別する工程を含む。顔の毛穴の識別は、額、口周囲、頤、眼窩周囲、鼻、及び／又は頬の皮膚表面を含む顔の任意の皮膚表面上で行われてもよい。いくらかの実施形態では、鼻及び頬の皮膚表面の顔の毛穴を標的としてもよい。

【0049】

本方法は、既に識別された可能性がある顔の毛穴に組成物を塗布する工程を含んでもよい。組成物を顔の毛穴に塗布する多数の処置計画が存在する。組成物は、処置期間中、少なくとも１日１回、１日２回、又は１日により頻繁に塗布されてもよい。１日２回塗布される場合、第１及び第２の塗布は、少なくとも１〜１２時間の間隔を空ける。一般に、組成物は、朝及び／又は就寝前の夜に塗布され得る。

【0050】

処置期間は、顔の毛穴の外観の改善をもたらすのに十分な時間が理想的である。処置期間は、少なくとも約１週間であり得る。処置期間は、少なくとも約４週間又は約８週間の間継続する場合がある。所定の実施形態では、処置期間は、数ヶ月（即ち３〜１２ヶ月）又は数年間にわたり延長するであろう。一実施形態において、組成物は少なくとも約４週間又は少なくとも約８週間の間の処置期間中、少なくとも１日１回顔の毛穴に塗布される。一実施形態において、組成物は少なくとも約４週間又は少なくとも約８週間の間の処置期間中、１日２回顔の毛穴に塗布される。

【0051】

組成物を顔の毛穴に塗布する工程は、局所的塗布により行われてもよい。組成物の塗布に関連して、用語「局所的な」、「局所」又は「局所的に」は、処置を必要としない皮膚表面への送達を最小限にしながら、組成物が標的範囲（顔の毛穴の領域等）に送達されることを意味する。組成物は顔の毛穴に塗布され、軽くマッサージされてもよい。局所的塗布によって適度の量の組成物が顔の毛穴に隣接した範囲に塗布される（即ち、組成物が、幾分拡がることなく顔の毛穴の境界線内に塗布される、又は境界線内に留まるとは考えにくい）ことが理解される。組成物又は皮膚科学的に許容可能なキャリアの形態は、局部的塗布を容易にするように選択されるべきである。本発明の特定の実施形態は、組成物を顔の毛穴に局所的に塗布することを意図するが、本発明の組成物は、１つ以上の顔の皮膚領域内の顔の毛穴の外観を低減するためにそれらの顔の皮膚表面により全般的に、つまり広く塗布され得ることが認識されるであろう。

【0052】

いくつかの実施形態では、組成物は局部的及び全般的な塗布に適した様々なアプリケーターにより送達されてもよい。別の実施形態では、組成物は、１つ以上の顔の毛穴の領域に、及びより一般的には、１つ以上の顔の皮膚表面に同時に（即ち、３０分未満の時間にわたって、又はより典型的には５分未満の時間にわたって）塗布される。本明細書に記載するいくつかの方法は、本発明の組成物をアプリケーターで塗布することを想定しているが、アプリケーターは必要なく、本発明の組成物は人の指で直接、又は他の従来の様式で塗布できることが認識されるであろう。

【0053】

皮膚表面、特に顔の皮膚表面に全般的に塗布するにおいて、組成物の投与量は、塗布当たり（即ち、皮膚表面に対する１回の塗布当たり）約１〜約５０μＬ／ｃｍ²であってもよい。

【0054】

顔の毛穴の外観を改善する１つの好適な方法は、有効量のヘキシルデカノールを含む組成物を皮膚表面上の顔の毛穴に局所的に塗布する工程を含み、組成物は、ヘキシルデカノールが顔の毛穴の外観を改善するのに十分な期間塗布される。顔の毛穴の外観を改善する別の好適な方法は、皮膚表面上の顔の毛穴を識別する工程と、有効量のヘキシルデカノールを含む組成物を皮膚表面上の顔の毛穴に塗布する工程と、を含み、組成物は、ヘキシルデカノールが顔の毛穴の外観を改善するのに十分な期間塗布される。

【0055】

ＶＩ．作用機序
理論に束縛されるものではないが、ヒアルロン酸（「ＨＡ」）産生を刺激する、及び／又はＩＬ−１を調節することは、顔の毛穴の外観を改善する可能性があると考えられる。ＨＡは、水中で自体の重量の約１０００倍まで結合し、水分を吸い取るものとして作用することで皮膚の水分量に影響するとして知られているが、細胞外及び細胞内のＨＡサイクルを構成する酵素の工程はまだ完全に理解されていない。ＩＬ−１は炎症に関連し、炎症に寄与し、顔の毛穴をよりはっきりと見えさせる。したがって、ＨＡ産生及び／又はＩＬ−１を調節する物質の有効量を塗布することは顔の毛穴の外観も改善する可能性がある。いくらかの実施形態では、ヘキシルデカノールはＨＡ産生及び／又はＩＬ−１を調節する物質として使用される。

【0056】

いくつかの実施形態によって、顔の毛穴の外観を改善する方法は、ＩＬ−１、及び／又はＨＡ産生を調節する物質の有効量を含む組成物を顔の毛穴の領域に局所的に塗布する工程を含み、組成物は、該物質が顔の毛穴の外観を改善するのに十分な期間塗布される。

【0057】

他の実施形態では、顔の毛穴の外観を改善する方法は、（ａ）顔の皮膚表面上の顔の毛穴の領域を識別する工程と、（ｂ）ＩＬ−１、及び／又はＨＡ産生を調節する物質の有効量を含む組成物を顔の皮膚表面上の顔の毛穴の領域に塗布する工程と、を含み、組成物は、該物質が顔の毛穴の外観を改善するのに十分な期間塗布される。

【0058】

Ｖ．生体内試験
３３０の被験者を使用して、ラウンドロビン、ビヒクル調整、スプリットフェース（split face）設計を用いて、１週間の標準化期間を含む９週間のインビボでの試験を行った。

【0059】

処置計画−計画は、１週間のウォッシュアウト期間により開始した。毎朝、被験者は顔面を好適な洗浄剤（例えば、Ｏｌａｙ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｅｅｐ Ｐｕｒｉｆｙ Ｃｌｅａｎｓｅｒ、Ｔｈｅ Ｐｒｏｃｔｅｒ ＆ Ｇａｍｂｌｅ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ，ＯＨ）から入手可能）で洗浄し、タオルで穏やかに乾燥し、適切な顔面側に保湿剤原料（stock moisturizer）（例えば、３％グリセリン、パンテノールなし、０．３％ ＥＤＴＡ二ナトリウムを含有する表２に記載したビヒクル）を塗布し、５分間待機した後、紫外線遮断ローション（例えば、Ｏｌａｙ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ａｌｌ Ｄａｙ Ｍｏｉｓｔｕｒｉｚｉｎｇ Ｌｏｔｉｏｎ ＳＰＦ １５、Ｔｈｅ Ｐｒｏｃｔｅｒ ＆ Ｇａｍｂｌｅ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ，ＯＨ）から入手可能）を塗布する。毎晩、被験者は顔面を好適な洗浄剤（例えば、Ｏｌａｙ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｅｅｐ Ｐｕｒｉｆｙ Ｃｌｅａｎｓｅｒ、Ｔｈｅ Ｐｒｏｃｔｅｒ ＆ Ｇａｍｂｌｅ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ，ＯＨ）から入手可能）で洗浄し、タオルで穏やかに乾燥し、保湿剤原料を塗布する。

【0060】

各被験者は、顔の左又は右側のいずれかに、２つのコード化試験製剤の１日２回の塗布を受ける。毎朝、被験者は顔を好適な洗浄剤（例えば、Ｏｌａｙ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｅｅｐ Ｐｕｒｉｆｙ Ｃｌｅａｎｓｅｒ、Ｔｈｅ Ｐｒｏｃｔｅｒ ＆ Ｇａｍｂｌｅ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ，ＯＨ）から入手可能）で洗浄し、タオルで穏やかに乾燥し、適切な顔面側に試験製剤を塗布し、５分間待機した後、紫外線遮断ローション（例えば、Ｏｌａｙ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ａｌｌ Ｄａｙ Ｍｏｉｓｔｕｒｉｚｉｎｇ Ｌｏｔｉｏｎ ＳＰＦ １５、Ｔｈｅ Ｐｒｏｃｔｅｒ ＆ Ｇａｍｂｌｅ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ，ＯＨ）から入手可能）を塗布する。毎晩、被験者は顔面を好適な洗浄剤（例えば、Ｏｌａｙ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｅｅｐ Ｐｕｒｉｆｙ Ｃｌｅａｎｓｅｒ、Ｔｈｅ Ｐｒｏｃｔｅｒ ＆ Ｇａｍｂｌｅ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ，ＯＨ）から入手可能）で洗浄し、タオルで穏やかに乾燥し、適切な顔面側に試験製剤を塗布する。参加者は、顔の各側に、０．５ｇの適切な試験製剤を塗布しなければならない。試験製剤は、指により穏やかな圧力を用いて円形動作で塗布される必要がある。試験製剤は、ビヒクルコントロール、及びビヒクル＋ヘキシルデカノール５％を含む。これらの試験製剤を表２に示す。

【0061】

【表2】

^*Ａ−Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（ＵＳＡ）又はＣｏｇｎｉｓ（Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手可能なヘキシルデカノール。
^*Ｂ−ＳＥＰＰＩＣ（Ｆｒａｎｃｅ）から入手可能なＳｅｐｉｇｅｌ ３０５。
^*Ｃ−Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇ（Ｍｉｄｌａｎｄ，ＭＩ）から入手可能なＤｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇ １５０３ Ｆｌｕｉｄ。
^*Ｄ−Ｃｏｇｎｉｓ ＧｍｂＨ（Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手可能なＥｍｕｌｇｌａｄｅ ＰＬ ６８／５０。
^*Ｅ−Ｍｏｍｅｎｔｉｖｅ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ａｌｂａｎｙ，ＮＹ）から入手可能なＴｏｓｐｅａｒｌ ２０００。

【0062】

顔面処置部位の画像は、ベースライン（第０週）、及び処置から４週後並びに８週後に取り込み、顔の毛穴の変化に関して分析する。画像収集前に、参加者の顔を、上記に引用した洗浄剤で洗浄し、乾燥させる（およそ２０分間）。参加者の顔の右側及び左側の画像を収集する。ヘッドポジショニングを装着した標準照明ボックスに取り付けられた、顔の画像化に好適なレンズ（例えば、６０ｍｍ Ｎｉｋｏｒレンズ）装備のディジタルカメラ（例えば、Ｆｕｊｉ Ｆ２ Ｐｒｏ ｄｉｇｉｔａｌ ＳＬＲ）を使用して、画像を収集する。カメラの前のＧｒｅｔａｇＭａｃｂｅｔｈニュートラル８．０のグレー色板紙を使って、カメラを毎日校正した。顔の左右のビューは標準化された。即ち、カメラのレンズから顔までの焦点距離が同じ、同じ倍率、カメラアングルが顔の表面に対して同じであるように同じヘッドポジション、照明がまったく同じである。画像を好適なカメラ分解能にて、ＲＡＷフォーマット等の好適なファイルフォーマットで保存する。照明は、フラッシュ源（例えば、約５３２７℃（５６００Ｋ）の色温度を備える１０００Ｗのストロボ）で提供される。カメラ及び照明に偏光フィルターが装備されて、鏡面反射を低減する。

【0063】

関心領域（ＲＯＩ）、この場合は上頬部領域、を頬の周りの事前定義の１２の顔の目印、例えば、目の隅、鼻橋部、口の隅に基づいて手で印をつけた。Ｏｐｔｉｍｕｓソフトウェアプラットフォームに基づいた画像解析アルゴリズムを使用して、ＲＯＩの顔の毛穴の度合いを客観的に定量化した。

【0064】

ＲＯＩは形状及びサイズが異なるので、全体的な毛穴の領域は、合計ＲＯＩサイズに基準化され、毛穴領域分画（ＰＡＦ）即ち、顔の毛穴が占める分画したＲＯＩ領域、が得られる。群統計的解析は、各被験者の顔の左右両側のＰＡＦ平均値を使用した。Ｓｔａｔａ ８．１（Ｓｔａｔａ Ｃｏｒｐ（Ｌａｋｅｗａｙ Ｄｒｉｖｅ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｓｔａｔｉｏｎ，Ｔｅｘａｓ，ＵＳＡ））を統計的解析に使用した。多変量ロジスティック回帰分析で論理和の最尤推定量及び対応する９５％信頼区間が得られた。画像から収集したデータを使用して、毛穴領域が存在することを表す毛穴領域分画を計算する。毛穴領域分画が小さいほど、顔の毛穴の外観のレベルが低下したことを表す。

【0065】

ヘキシルデカノールは８週間の間で最良に働き、対照よりも優れて毛穴領域分画を有意に（ｐ＜＝０．１０）下げた。図１はこれらの結果を要約する。

【0066】

ＶＩ．試験方法
以下の方法は、本発明の様々な実施形態の所定の特徴及び利点を説明するために提供され、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。

【0067】

Ａ．ＩＬ−１抑制アッセイプロトコル
１．出発細胞
ヒトＩＣＡＭ−１プロモーター／ルシフェラーゼ・レポーターコンストラクト（ｐＧＬ３基本プラスミド）、及びＣＭＶ−βｇａｌ／ＲＳＶ−ネオ（neo）プラスミドＤＮＡ（クローンＥ１．３−２２）で安定的に遺伝子導入した１バイアルのヒトＥＣＶ３０４細胞を、Ｍ１９９（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１１１５０−０５９、１倍液、Ｅａｒｌｅ塩、Ｎａ重炭酸ソーダ、及びＬ−グルタミン含有５００ｍｌ）、１０％ＦＢＳ（認定済み、加熱不活性化、Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１００８２−１４７）、１０μｇ／ｍｌゲンタマイシン（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１５７１０−０１５、１０ｍｇ／ｍｌ溶液（soln）（１０００倍））、及び２５０μｇ／ｍｌジェネテシン抗生物質（活性Ｇ４１８、Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１０１３１−０３５、５０ｍｇ／ｍｌ溶液）で定義される、完全維持培地１５ｍｌと共に７５ｃｍフラスコに入れる。

【0068】

２．継代培養
細胞が８５〜９０％コンフルエント状態になると、培地を除去する。（１０倍）トリプシンＥＤＴＡ（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５４００−０３９）をＨＢＳＳで（１倍）に希釈し、３ｍｌの（１倍）トリプシンＥＤＴＡをフラスコに添加してすすぐ。トリプシンを除去し、新たに３ｍｌ／フラスコを加えて３〜４分間インキュベートする。フラスコの底を叩いて細胞を剥離させ、次に６ｍｌの完全維持培地を添加してフラスコをよく洗浄し、液体をコニカルチューブに入れる。次に、追加の３ｍｌの維持培地で各フラスコをすすぐ。２００×ｇ（３Ｎ０６６Ｂでおよそ９００ｒｐｍ遠心分離）で７分間チューブを回転させる。上澄みを吸引し１０ｍｌの維持培地で細胞を再懸濁する。１０μｌの細胞懸濁液を血球計数器に入れて、５個の正方形中の細胞を計数する。数式−数えた細胞の合計数×希釈率×１０⁴／数えた正方形の数＝細胞／ｍｌを使用する。例：細胞数１１４細胞×１０×１００００／５個の正方形＝２．３×１０⁶細胞／ｍｌ。これらの細胞を使用して、７５ｃｍフラスコ（５００，０００細胞／フラスコ）又は９６ウェルプレート（以下を参照）のどちらかに播種する。

【0069】

３．化合物の試験
工程１−細胞を、白色組織培養処理済み９６ウェルプレートに、１０，０００細胞／ウェルの密度で、組織培養処理済みプレートに１０％加熱不活性化ＦＢＳ、１０μｇ／ｍｌゲンタマイシン、及び２５０μｇ／ｍｌ Ｇ４１８を補充したＭｅｄｉｕｍ １９９に６０〜６５時間播種する。（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｖｉｅｗｐｌａｔｅｓ−９６、白色、ＴＣ カタログ番号＃６００５１８１を使用した）。

【0070】

工程２−培地を除去し、１０％加熱不活性化ＦＢＳ、１０μｇ／ｍｌゲンタマイシン、及び２５０μｇ／ｍｌ Ｇ４１８を補充した１００μｌフェノールレッドフリーＭｅｄｉｕｍ １９９＋／−１０Ｕ／ｍｌのＩＬ−１β、＋／−被化合物と交換する。

【0071】

実施例：ＩＬ−１の最終濃度が１０Ｕ／ｍｌになるように、各ウェルに１１．１Ｕ／ｍｌのＩＬ−１と共に９０μｌの培地、及び１０μｌの化合物（化合物の最終濃度１００μＭ）を加える。１００，０００Ｕ／ｍｌのＩＬ−１ストックを使用する場合：１１．１Ｕ／ｍｌ＝５０ｍｌ培地に５．５５μｌのＩＬ−１βストック（これは、およそ５個のプレートの十分な処理用培地である。）

【0072】

工程３−細胞を４時間インキュベートする。化合物処理を行った後、プレートをインキュベーターから取り出して、その後の試験用に−８０℃で凍結させるか、工程４で試薬を添加する前に室温で放置し約３０分間順応させるかのどちらかを行わなければならない。（プレートを凍結させる場合、工程４で試薬を追加する前に、室温になるまで放置する必要がある。）

【0073】

工程４−以前に再構成されたｓｔｅａｄｙｌｉｔｅ基質（−８０℃で貯蔵）を室温に解凍させ反転させてよく混合させる、又は凍結乾燥されたｓｔｅａｄｙｌｉｔｅ基質をｓｔｅａｄｙｌｉｔｅ ＨＴＳ基質緩衝液で再構成する（キットの説明に従う）ことで新鮮な基質を作り基質が完全に溶解するまで反転させてよく混合させる。全てのアッセイ用に新鮮な試薬を作る。（あるいは、新鮮に調整された基質／溶解緩衝液は１カ月間−８０Ｃで貯蔵され得る）。ｓｔｅａｄｙｌｉｔｅアッセイを開始する前に：凍結したｓｔｅａｄｙｌｉｔｅ基質の一定分量、及び／又は凍結した試験培地のサンプルを使用する場合、アッセイに必要となる時までに解凍し室温になるように、朝取り出しておく必要がある。冷たい基質及び／又はサンプルはアッセイ結果に有害な影響を及ぼす。

【0074】

工程５−１００μｌの基質を培地／細胞に添加する。この工程は、工程が安全かつ正確に行われているのが研究者に見えるために必要な最低限の照明のみを備えた部屋で行なわれるべきである。

【0075】

工程６−プレートをＴｏｐＳｅａｌ−Ａで密閉してホイルで包み、細胞が溶解し反応が進み完全な信号が生成されるように穏やかに振って、５分間より長く（かつ５時間以下）待つ。Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＵＳＡ）から入手可能なＥｎｖｉｓｉｏｎ等の照度計を使用して発光を測定する。

【0076】

４．結果
上述した方法を一般に使用して、４つの複製のＩＬ−１アッセイを、５％濃度のヘキシルデカノールを０．０５％濃度まで希釈したものを使用して行った。ヘキシルデカノールはＩＬ−１の刺激による活性化を４つの複製に対して、２４％、１８％、１８％、及び２１％ほど低減したことが分かった。

【0077】

Ｂ．ヒアルロン酸（ＨＡ）シンターゼ発現
１．ケラチノサイト培養：
個々の実験（バッチと呼ばれる）は、６つのビヒクル対照試料、２つの陽性対照試料、及び５２つの個々の検査物質試料を含む６０のＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＧｅｎｅＣｈｉｐｓ（登録商標）（「実例」と呼ばれる）から一般になる。検査物質の複製をバッチ全体で行う。ＧｅｎｅＣｈｉｐ（登録商標）分析に十分なＲＮＡ（２〜４μｇの合計ＲＮＡ収量／ウェル）を提供するために、生体外試験を６ウェルプレートで行う。テロメル化したヒトケラチノサイトを、コラーゲンＩコート済み細胞培養フラスコ及びプレート（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）上に１Ｘヒトケラチノサイト増殖サプリメント（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を加えたＥｐｉＬｉｆｅ（登録商標）培地で増殖させる。化学暴露前の２４時間、細胞を２０，０００細胞／ｃｍ²で６ウェルプレートに播種する。ｔ＝−２４時間でＴ−７５フラスコから細胞をトリプシン処理し、基本増殖培地で６ウェルプレートに蒔いた。ｔ＝０で培地を取り除き、実験計画法に従って適切な投与溶液と置換した。投与溶液を、前日殺菌済み４ｍｌのＦａｌｃｏｎスナップキャップチューブに調製した。６時間の化学暴露後に、細胞を調べ画像化した。次に、細胞をβ−メルカプトエタノール（Ｑｉａｇｅｎ）入りの３５０μｌ／ウェルのＲＬＴ緩衝液で溶解し、９６ウェルプレートに移し、−２０℃で保存した。

【0078】

２．転写スクリーニング−遺伝子チップで分析されたＲＮＡ
トータルＲＮＡ分離：細胞を〜３５０μｌのＲＮＥａｓｙ ＲＬＴ緩衝液（ＱＩＡｇｅｎ（Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ））とβ−メルカプトエタノール、並びに４００μｌのＡｇｅｎｃｏｕｒｔ ＲＮＡＣｌｅａｎ常磁性ビーズ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ（Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ））に懸濁した。Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ（Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）ＧＣＡＳ装置の自動化に最適化されたＲＮＥａｓｙの手順の修正を使用してＲＮＡを精製した。

【0079】

ＧｅｎｅＣｈｉｐ標的合成及びＧｅｎｅＣｈｉｐ処理：１μｇの精製トータルＲＮＡを、Ａｍｂｉｏｎ（Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）製ＭｅｓｓａｇｅＡｍｐ ＩＩキット及び提供されたプロトコルを使用して、ｃＲＮＡ ＧｅｎｅＣｈｉｐ標的に変換した。２０μｇのｃＲＮＡ標的を断片化して、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｕ１３３ｐｌｕｓ２．０アレイとハイブリッド形成させた。Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓプロトコルに従って、ハイブリッド形成、洗浄、及び走査を行った。標的合成及びＧｅｎｅＣｈｉｐ処理のための完全なプロトコルは、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘのウェブサイトに見出だすことができる（２０１０年１１月１５日現在ｗｗｗ．ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ．ｃｏｍ）。参照マニュアルは、Ｐ／Ｎ ７０２２３２ Ｒｅｖｉｓｉｏｎ ３著作権２００５〜２００５である。

【0080】

ＧｅｎｅＣｈｉｐ解析：ＧｅｎｅＣｈｉｐ走査をＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＭＡＳ５アルゴリズムを使用して表形式データに変換するが、これもＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘのウェブサイト（ｗｗｗ．ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ．ｃｏｍ）に記載されている。

【0081】

データの出所及び特徴に応じて、ｔ−検定、双散布図（scatter biplots）、及び主成分分析を含む様々な統計尺度を使用してデータの品質を判定した。

【0082】

データ分析：Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘプローブセットをｐ−値によって順位序列をつけ、ｐ−値＞０．１で変化を示すプローブは有意でないとみなされるので分析から除外する。

【0083】

結果：上述の方法を一般に使用して、１０マイクロモル濃度のヘキシルデカノールを投与したケラチノサイト細胞培養を６つのＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＧｅｎｅＣｈｉｐｓのマイクロアレイ解析によって処理した。ＨＡＳ−２遺伝子（ヒアルロン酸シンターゼ−２遺伝子）に関連するプローブセットＩＤの転写発現レベルは、平均倍率変化１．３３６（ｐ−値＝０．０３６６）であった。

【0084】

本明細書に開示した寸法及び値は、記載された正確な数値に厳密に限定されるものとして理解されるべきでない。むしろ、特に断らない限り、そのような寸法はそれぞれ、記載された値及びその値周辺の機能的に同等の範囲の両方を意味するものとする。例えば、「４０ｍｍ」として開示された寸法は、「約４０ｍｍ」を意味するものとする。

【0085】

相互参照されるか又は関連する全ての特許又は特許出願を含む、本願に引用される全ての文書を、特に除外又は限定することを明言しない限りにおいて、その全容にわたって本願に援用するものである。いずれの文献の引用も、こうした文献が本願で開示又は特許請求される全ての発明に対する先行技術であることを容認するものではなく、あるいは、こうした文献が、単独で、又は他の全ての参照文献とのあらゆる組み合わせにおいて、こうした発明のいずれかを参照、教示、示唆又は開示していることを容認するものでもない。更に、本文書において、ある用語の任意の意味又は定義の範囲が、援用文献中の同じ用語の任意の意味又は定義と矛盾する場合には、本文書中でその用語に与えられる意味又は定義が優先するものとする。

【0086】

以上、本発明の特定の実施形態を例示、記載したが、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく他の様々な変更及び改変を行いうる点は、当業者には明らかであろう。したがって、本発明の範囲に含まれるそのような全ての変更及び改変を添付の特許請求の範囲において網羅するものとする。

【図1】