特許 5970959 マイクロプレートへの試薬供給方法及びマイクロプレートへの試薬供給装置

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5970959

(24)【登録日】2016年7月22日

(45)【発行日】2016年8月17日

(54)【発明の名称】マイクロプレートへの試薬供給方法及びマイクロプレートへの試薬供給装置

(51)【国際特許分類】

   G01N 35/04 20060101AFI20160804BHJP

   G01N 35/10 20060101ALI20160804BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20160804BHJP

   G01N 37/00 20060101ALI20160804BHJP

【ＦＩ】

   G01N35/04 E

   G01N35/10 A

   G01N33/53 D

   G01N37/00 102

【請求項の数】4

【全頁数】28

(21)【出願番号】特願2012-116370(P2012-116370)

(22)【出願日】2012年5月22日

(65)【公開番号】特開2013-242248(P2013-242248A)

(43)【公開日】2013年12月5日

【審査請求日】2015年4月30日

(73)【特許権者】

【識別番号】000102212

【氏名又は名称】ウシオ電機株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100100930

【弁理士】

【氏名又は名称】長澤 俊一郎

(72)【発明者】

【氏名】森田 金市

(72)【発明者】

【氏名】川口 俊一

(72)【発明者】

【氏名】嶋津 克明

【審査官】 長谷 潮

(56)【参考文献】

【文献】 米国特許第０５７２１１３６（ＵＳ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１１／１５８７５９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 米国特許出願公開第２００８／０２３３０１５（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 米国特許第０４７５５１７３（ＵＳ，Ａ）

【文献】 特開２００４−２６９０３８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２０１１−２２０９９６（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｇ０１Ｎ ３５／００−３７／００

Ｇ０１Ｎ ３３／５３

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

内部に試薬配置領域を有する空間として複数のウエルが形成され、該ウエルの開口部が自己修復性機能を有するシリコーンゲルにより気密に閉塞されたマイクロプレートへの試薬供給方法であって、
先端部が針状に形成され流体放出口となる開口を有する流体放出手段と、先端部が針状に形成され流体回収口となる開口を有する流体回収手段を、同一ウエルの開口部を閉塞する自己修復機能性を有するシリコーンゲルを貫通させて上記試薬配置領域を有する空間に進入させ、上記流体放出手段と流体回収手段の上記開口を上記試薬配置領域を有する空間に連通させる第１の工程と、
上記流体放出手段から試薬を注入するとともに、上記流体回収手段から試薬を排出させることにより、試薬を上記試薬配置領域の空間に供給する第２の工程と、
試薬の供給後、上記流体放出手段と流体回収手段を上記シリコーンゲルから離脱して退避させる第３の工程からなり、
上記第２の工程において、上記流体放出手段から、マイクロプレートの試薬配置領域を有するウエルに対して複数種類の試薬が順次注入され、
上記流体回収手段は、上記ウエル中に順次注入された試薬を順次排出し、
上記複数種類の試薬には上記試薬配置領域に固定される嫌気性抗体含有溶液が含まれ、
上記試薬は、該試薬の液面レベルが、上記試薬配置領域に固定される嫌気性抗体を完全に浸漬する高さとなるように注入される
ことを特徴とするマイクロプレートへの試薬供給方法。

【請求項2】

内部に試薬配置領域を有する空間として複数のウエルが形成され、該ウエルの開口部が自己修復性機能を有するシリコーンゲルにより気密に閉塞されたマイクロプレートの上記ウエルに対して試薬を供給する試薬供給装置であって、
上記空間に対して試薬を放出する流体放出手段と、上記空間中の試薬を排出する流体回収手段とを備え、
上記流体放出手段および上記流体回収手段はいずれも中空筒状部材からなり、当該中空状部材の先端部は閉鎖され、該先端部は針状に形成され、上記中空筒状部材の内部空洞と連通する開口部が上記中空筒状部材の円筒部側面に設けられており、
上記流体放出手段および上記流体回収手段は、上記マイクプレートの同一ウエルの開口部を閉塞する自己修復性機能を有するシリコーンゲルを貫通し、上記流体回収手段の開口部の下端の位置が流体放出手段の開口部上端の位置より上側になり、かつ、上記流体放出手段および上記流体回収手段のそれぞれの開口が上記ウエル内の上記空間に連通するように該空間へ進入し、かつ、該空間から離脱されるように構成されている
ことを特徴とするマイクロプレートへの試薬供給装置。

【請求項3】

上記流体放出手段は、マイクロプレートの試薬配置領域を有するウエルに対して複数種類の試薬を順次注入し、
上記流体回収手段は、上記ウエルに順次注入された試薬を順次排出し、
上記複数種類の試薬には上記試薬配置領域に固定される嫌気性抗体含有溶液が含まれ、
上記流体放出手段の開口部および流体回収手段の開口部はそれぞれ上記ウエルの側面側壁部に面するように配置され、上記流体回収手段の開口部の下端の位置は、上記ウエルに供給される試薬の液面レベルが上記試薬配置領域に固定される嫌気性抗体を完全に浸漬する高さとなるように設定されている
ことを特徴とする請求項２に記載のマイクロプレートへの試薬供給装置。

【請求項4】

上記同一のウエルの開口部を閉塞する自己修復性機能を有するシリコーンゲルを貫通して上記ウエルへの進入・離脱する一対の流体放出手段および流体回収手段は、マイクロプレートに構成されている複数のウエルに対応して複数組設けられている
ことを特徴とする請求項２または請求項３に記載のマイクロプレートへの試薬供給装置。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、多数のウエルが試験管あるいはシャーレーとして利用され、ＤＮＡ分析、免疫分析などの生化学的分析や臨床検査、薬物スクーリングや細胞培養などに用いられるマイクロプレートへの試薬供給方法及び、マイクロプレートへ試薬を供給するための試薬供給装置に関する。

【背景技術】

【0002】

例えばアクリル、ポリエチレン、ポリスチレン、ガラス等からなり、多数の窪み（ウエル）が設けられた平板であるマイクロプレートを用いて、試薬の分離、合成、抽出、分析などが行われている（マイクロプレートについては例えば特許文献１等参照）。
上記マイクロプレートは、多数のウエルが試験管あるいはシャーレーとして利用され、ＤＮＡ分析、免疫分析などの生化学的分析や臨床検査、薬物スクーリングや細胞培養などに用いられる。
マイクロプレートの各ウエルに設置された試料は、例えば、当該試料の光学的性質が測定される。測定には、例えば、吸光、蛍光、化学発光、蛍光偏光等を測定可能なマイクロプレートリーダーにより行われる。
例えば、各ウエルには試料として抗体が固定され、各ウエルに抗原を含む試薬を注入することにより発生する抗体抗原反応に関する測定が、当該マイクロプレートを用いて行われる。

【0003】

マイクロプレートのウエル内への抗体の固定は、例えば、以下のように行われる。
図１１にマイクロプレート１０の構成例を示す。図１１（ａ）に示すように、マイクロプレート１０は例えば長方形形状であり、表面には多数の窪み（ウエル１３）が設けられている。ウエル１３の数は６，２４，９６，３８４等であり、容量は数μリットル〜数ｍリットルである。マイクロプレート１０は、例えば、貫通孔が複数設けられた第１のマイクロプレート基板１１と平板状の第２のマイクロプレート基板１２とが積層・接合された構造であり、図１１（ｂ）に示すように、第１のマイクロプレート基板１１に設けられた各貫通孔と第２のマイクロプレート基板１２の接合側表面とにより各ウエル１３が構成される。

【0004】

図１２（ａ）に示すように、各ウエル１３の開口１３ａに向かって、図示を省略した抗体含有溶液貯蔵部からマイクロピペット１０１により採取された抗体含有溶液を前記マイクロピペット１０１から滴下する。
マイクロプレート１０は、例えばポリスチレンからなる表面が疎水性である材料から構成されるので、図１２（ｂ）に示すように、疎水結合により抗体含有溶液中の抗体がウエル１３底面（第２のマイクロプレート基板１２表面）に吸着される。この後、ウエル１３に抗原を導入することにより、抗体抗原反応が発生する。
なお、マイクロプレート１０に抗体を吸着させたあと一時的に保管する場合は、ウエル１３内にりん酸緩衝生理食塩水（Phosphate buffered saline, 以下、ＰＢＳと呼称する）を充填しておく。
すなわち、図１２（ｃ）に示すように、各ウエル１３の開口１３ａにマイクロピペット１０１を挿入して当該マイクロピペット１０１により抗体含有溶液を吸い取る。これにより、抗体含有溶液に含まれるウエル１３底面に固定されていない抗体を外部に排出する。

【0005】

次に、図１２（ｄ）に示すように、各ウエル１３の開口１３ａに向かって、図示を省略したＰＢＳ貯蔵部４１ａからマイクロピペットにより採取されたＰＢＳを前記マイクロピペットから滴下する。その結果、図１２（ｅ）に示すように、ウエル１３内はＰＢＳが充填される。

【0006】

抗体として嫌気性のものを使用する場合、ウエル１３表面に吸着された抗体はウエル１３内の空気と接触して失活する。ウエル１３内にＰＢＳを充填するのは、抗体と空気との接触を防ぎ抗体の失活を防止するためである。
なお、抗体固定後、マイクロピペットによりウエル１３から抗体含有溶液を吸い取った時点から、ＰＢＳをウエル１３に充填するまでの間、抗体は空気に接触することになる。よって、できるだけ抗体が失活しないように、マイクロピペットによる抗体含有溶液の排出とＰＢＳの充填はできるだけ手早く行う必要がある。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0007】

【特許文献1】特開平１０−２２１２４３号公報

【特許文献2】特許第３７１４３３８号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

マイクロプレート１０に抗体を固定する場合、作業者によるマイクロピペットの操作の際にバブルが混入することがある。すなわち、図１２に示すウエル１３への抗体含有溶液やＰＢＳのマイクロピペット１０１による注入の際、図１３（ａ）（ｂ）に示すように、作業者の技能に依存してバブルが混入する。
また、抗体含有溶液やＰＢＳといった試薬のウエル１３への注入の際、試薬の注入スピードも作業者の技能に依存するので、場合によっては、ウエル１３内で試薬の流れの乱れが大きくなり、図１３（ａ）（ｂ）に示すように、抗体Ｉｇの一部が傾いてウエル１３の底面に吸着されたり、同図では省略しているが倒れた状態で吸着される。

【0009】

すなわち、マイクロプレート１０に抗体Ｉｇを固定する場合、抗体Ｉｇの失活の度合いやウエル１３底面に吸着される抗体Ｉｇの配向性は、マイクロピペットの操作技能に依存する。よって、抗体Ｉｇ固定後に行う抗体抗原反応の結果にばらつきが生じるという問題が発生する。

【0010】

本発明は上記事情に鑑みなされたものであって、本発明の第１の目的は、試薬配置領域に嫌気性の抗体を固定するマイクロプレートにおいて、当該試薬配置領域に殆ど空気と接触させることなく嫌気性抗体等の嫌気性試薬を配置することが可能なマイクロプレートへの試薬供給方法を提供することである。
また、上記マイクロプレートの試薬配置領域に対して、殆ど空気と接触させることなく、また、ばらつき無く安定に嫌気性抗体等の嫌気性試薬を供給可能な試薬供給装置を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0011】

上記課題を解決するため、本発明においては、内部に試薬配置領域を有する空間として複数のウエルが形成されたマイクロプレートにおいて、該ウエルの開口部を自己修復性機能を有するシリコーンゲルにより気密に閉塞した。
そして、先端部が針状に形成され流体放出口となる開口を有する流体放出手段と、この流体放出手段と同様な形状を有する流体回収手段を、上記開口部に設けられたシリコーンゲルをそれぞれ貫通させて、上記試薬配置領域を有する空間に進入させ、上記試薬配置領域であるウエルに、嫌気性抗体等の試薬を上記流体放出手段の開口から供給し、また、該流路に供給された試薬を上記流体改出手段の開口から回収するようした。
これにより、殆ど空気と接触させることなく、嫌気性抗体等の試薬を試薬配置領域に供給したり該領域から試薬を回収することができる。
なお、シリコーンゲルは金型で成型しにくいので、後述するように、上記ウエルの開口部に対応した位置に窪みを形成し、この窪み部分が薄板状になっているシリコーン樹脂等からなる板状部材を用意し、この板状部材の凹部にシリコーンゲルを流しこんで、上記ウエルを閉塞する板状体を形成し、この板状体によりウエルを閉塞するようにしてもよい。
この場合、上記流体放出手段、流体回収手段を上記試薬配置領域を有する空間に進入させる際、上記流体放出手段、流体回収手段は上記シリコーンゲルと上記薄板状の部材を貫通する必要がある。したがって、上記薄板状の部材は、上記流体放出手段と流体回収手段が容易に貫通可能な厚さにしておくことが望ましい。
また、上記マイクロプレートに試薬を供給する試薬供給装置を、上記流体放出手段と流体回収手段と、この流体放出手段と流体回収手段を、上記自己修復性機能を有するシリコーンゲルを貫通して試薬配置領域を有する空間に進入させ、また、該空間から離脱させる手段とから構成する。
試薬供給装置を上記構成とすることにより、殆ど空気と接触させることなく、また、ばらつき無く安定に嫌気性抗体等の試薬を上記マイクロプレートのウエル内の試薬配置領域に供給したり、該領域から回収することができる。
すなわち、本発明に前記課題を次のように解決する。
（１）内部に試薬配置領域を有する空間として複数のウエルが形成され、該ウエルの開口部が自己修復性機能を有するシリコーンゲルにより気密に閉塞されたマイクロプレートへの試薬供給を以下のように行う。
第１の工程：先端部が針状に形成され流体放出口となる開口を有する流体放出手段と、先端部が針状に形成され流体回収口となる開口を有する流体回収手段を、同一ウエルの開口部を閉塞する自己修復機能性を有するシリコーンゲルを貫通させて上記試薬配置領域を有する空間に進入させ、上記流体放出手段と流体回収手段の上記開口を上記試薬配置領域を有する空間に連通させる。
第２の工程：上記流体放出手段から試薬を注入するとともに、上記流体回収手段から試薬を排出させることにより、試薬を上記試薬配置領域の空間に供給する。
第３の工程：試薬の供給後、上記流体放出手段と流体回収手段を上記シリコーンゲルから離脱して退避させる。
そして、上記第２の工程において、上記流体放出手段から、マイクロプレートの試薬配置領域を有するウエルに対して複数種類の試薬が順次注入され、上記流体回収手段は、上記ウエル中に順次注入された試薬を順次排出し、上記複数種類の試薬には上記試薬配置領域に固定される嫌気性抗体含有溶液が含まれ、上記試薬は、該試薬の液面レベルが、上記試薬配置領域に固定される嫌気性抗体を完全に浸漬する高さとなるように注入される。
（２）内部に試薬配置領域を有する空間としてウエルが形成され、ウエルの開口部が自己修復性機能を有するシリコーンゲルにより気密に閉塞されたマイクロプレートの上記試薬配置領域を有する空間に対して試薬を供給する試薬供給装置を以下のように構成する。
上記空間に対して試薬を放出する流体放出手段と、上記空間中の試薬を排出する流体回収手段とを備え、上記流体放出手段および上記流体回収手段はいずれも中空筒状部材からなり、当該中空状部材の先端部は閉鎖され、該先端部は針状に形成され、上記中空筒状部材の内部空洞と連通する開口部が上記中空筒状部材の円筒部側面に設けられている。
上記流体放出手段および上記流体回収手段は、上記マイクプレートの同一ウエルの開口部を閉塞する自己修復性機能を有するシリコーンゲルを貫通し、上記流体回収手段の開口部の下端の位置が流体放出手段の開口部上端の位置より上側になり、かつ、上記流体放出手段および上記流体回収手段のそれぞれの開口が上記ウエル内の上記空間に連通するように該空間へ進入し、かつ、該空間から離脱されるように構成される。
（３）上記（２）において、上記流体放出手段は、マイクロプレートの試薬配置領域を有するウエルに対して複数種類の試薬を順次注入し、上記流体回収手段は、上記ウエルに順次注入された試薬を順次排出し、上記複数種類の試薬には上記試薬配置領域に固定される嫌気性抗体含有溶液が含まれ、上記流体放出手段の開口部および流体回収手段の開口部はそれぞれ上記ウエルの側面側壁部に面するように配置され、上記流体回収手段の開口部の下端の位置は、上記ウエルに供給される試薬の液面レベルが上記試薬配置領域に固定される嫌気性抗体を完全に浸漬する高さとなるように設定されている。
（４）上記（２）（３）において、上記一対の流体放出手段および流体回収手段は、マイクロプレートに構成されている複数のウエルに対応して複数組設けられている。

【発明の効果】

【0012】

本発明においては、以下の効果を得ることができる。
（１）内部に試薬配置領域を有する空間として複数のウエルが形成されたマイクロプレートにおいて、上記ウエルの開口部を自己修復性機能を有するシリコーンゲルにより気密に閉塞したので、先端部が針状に形成され流体放出口となる開口を有する流体放出手段と流体回収手段を、上記流入口、排出口に設けられたシリコーンゲルをそれぞれ貫通させて上記試薬配置領域を有する空間に進入させることにより、殆ど空気と接触させることなく、嫌気性抗体等の嫌気性試薬を試薬配置領域に供給したり、該領域から試薬を回収することができる。
また、従来例のようにマイクロピペットを操作する必要がないので、上記空間内にバブルが混入するのを防ぐことができる。
（２）上記流入口、排出口を閉塞するシリコーンゲルは自己修復性機能を有し、力が印加されると変形し、力の印加を解除すると力の印加前の形状に戻る性質があるので、流体放出手段、流体回収手段がシリコーンゲルを貫通して試薬配置領域に進入した場合においても、シリコーンゲルと流体放出手段、流体回収手段との接触部における密着性が良好であり、この接触部から外部の空気が閉塞空間である試薬配置領域に進入するのを防ぐことができる。
（３）上記試薬配置領域の空間に順次注入する試薬に嫌気性抗体含有溶液が含まれる場合において、試薬の液面レベルが、試薬配置領域に固定される嫌気性抗体を完全に浸漬する高さとなるように注入することにより、上記嫌気性抗体が空気に接触するのを防ぐことができる。
（４）ウエルの開口部を自己修復性機能を有するシリコーンゲルで閉塞されたマイクロプレートへの試薬供給装置として、中空筒状部材からなり先端部が閉鎖され、先端部は針状に形成され上記中空筒状部材の内部空洞と連通する開口部が上記中空筒状部材の円筒部側面に設けられた流体放出手段と、該流体放出手段と同様の形状の流体回収手段を有し、該流体放出手段と流体回収手段が、上記シリコーンゲルを貫通して、マイクロプレートの上記試薬配置領域を有する空間へ進入し、かつ、該空間から離脱されるように構成された試薬供給装置を用いることにより、殆ど空気と接触させることなく、また、ばらつき無く安定に嫌気性抗体等の嫌気性試薬を上記マイクロプレートの試薬配置領域に供給したり、該領域から試薬を回収することができる。
（５）上記（４）において、上記流体放出手段の開口部および流体回収手段の開口部がそれぞれウエルの側面側壁部に面するように配置することにより、マイクロプレートの各ウエル内において、試薬を十分に拡散することができる。
また、上記流体回収手段の開口部の下端の位置を、上記ウエルに供給される試薬の液面レベルが上記試薬配置領域に固定される嫌気性抗体を完全に浸漬する高さとなるように設定することより、上記嫌気性抗体が空気に接触するのを防ぐことができる。
（６）一対の流体放出手段および流体回収手段を、マイクロプレートに構成されている複数のウエルに対応して複数組設けることにより、効率的にマイクロプレートの各ウエルに効率的に試薬を供給し、また、回収することができる。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】本発明のマイクロプレートの構成例（断面図、上面図）を示す図である。

【図2】本発明のマイクロプレートの製造方法を説明する図（１）である。

【図3】本発明のマイクロプレートの製造方法を説明する図（２）である。

【図4】本発明のマイクロプレートの変形例を示す図である。

【図5】本発明の実施例のマイクロプレートのウエル内に嫌気性試薬を供給する試薬供給装置の構成例を示す図である。

【図6】図５に示す流体放出手段、流体回収手段の拡大図である。

【図7】図５に示す分注排出機構における分注排出部の詳細構成を示す図である。

【図8】本発明のマイクロプレートにおいて各ウエル内への１次抗体の固定手順を説明する図である

【図9】本発明のマイクロプレートにおいて各ウエル内における１次、２次抗体抗原反応処理を説明する図である。

【図10】本発明のマイクロプレートにおいて各ウエル内における酵素反応および反応停止処理を説明する図である。

【図11】マイクロプレートの構成例を示す図である。

【図12】従来のマイクロプレートにおいてマイクロプレートへの抗体を固定を説明する図である。

【図13】マイクロプレートに抗体を固定する際にバブルが混入したり、抗体の一部が傾いて吸着される場合を説明する図である。

【発明を実施するための形態】

【0014】

次に、本発明のマイクロプレートの構成例を示す。図１に本発明に係るマイクロプレート１０の模式図を示す。ここで、図１（ａ）は外観図、図１（ｂ）は図１（ａ）のＡ−Ａ断面図である。
同図に示すように、本発明のマイクロプレート１０は例えば、貫通孔が複数設けられた第１のマイクロプレート基板１１と平板状の第２のマイクロプレート基板１２とが積層・接合された構造であり、第１のマイクロプレート基板１１に設けられた各貫通孔と第２のマイクロプレート基板１２の接合側表面とにより各ウエル１３が構成される。ウエル１３の数は、例えば９６個であり、容量は数μリットル〜数ｍリットルである。

【0015】

第１のマイクロプレート基板１１は、例えば、ＰＤＭＳ（ポリジメチルシロキサン：Ｐｏｌｙｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｏｘａｎｅ）などからなるシリコーン樹脂基板であり、第２のマイクロプレート基板１２はガラス基板である。
第１のマイクロプレート基板１１と第２のマイクロプレート基板１２との接合は、例えば、特許文献２に示されているように、両マイクロプレート基板の接合面に波長２２０ｎｍ以下の紫外線（例えば、キセノンエキシマランプから放出される中心波長１７２ｎｍの紫外線）を照射して、紫外線が照射された接合面同士を密着させることにより行われる。

【0016】

本発明のマイクロプレート１０は、各ウエル１３の開口１３ａが、板状の自己修復性封止材１４により封止された構造を有する。具体的には、シリコーン樹脂からなる板状部材１５上に自己修復性封止材１４が設けられている板状体１６を用いて、第１のマイクロプレート基板１１上面を、上記した板状体１６により封止した構造を有する。
なお、以下では、上記第１の基板１１と第２の基板１２と板状体１６から構成される部材をマイクロプレート１０ということとする。

【0017】

自己修復性封止材１４としては、力が印加されると変形し、力の印加を解除すると力の印加前の形状に戻るものを用いる。例えば、粘着性ゲルであるシリコーンゲルが採用される。

【0018】

以下、図２、図３を用いて、本発明のマイクロプレートの製造例について説明する。
図２（ａ）に示すように、まずシリコーン樹脂（例えば、Ｘ−３２）からなる板状部材１５が第１の金型７１および第２の金型７２により成形される。板状部材１５は円柱状の窪み１５ｂが複数設けられた構成であり、この複数の窪み１５ｂの数、位置はマイクロプレート１０の複数のウエル１３の数、位置に対応している。なお、窪み１５ｂの底板部分が図１（ｂ）に示すマイクロプレートの薄板部１５ａとなる。

【0019】

次に、図２（ｂ）に示すように、シリコーン樹脂１５が固化後、第２の金型７２が取り外される。次いで図２（ｃ）に示すように、シリコーン樹脂１５表面の上部に設けられた凹部（窪み１５ｂ）に粘着性ゲル１４（シリコーンゲルＸ−４０−３３３１−２）が流し込まれる。その後、熱成形により、粘着性ゲル１４とシリコーン樹脂１５（Ｘ−３２）とが一体化される。

【0020】

上記したように、シリコーン樹脂からなる板状部材１５は円柱状の窪み１５ｂが複数設けられた構成であるので、上記板状部材１５の上部に設けられた粘着性ゲルからなる自己修復性封止材１４は、複数の円柱状の凸部を有する構造となる。この円柱状の凸部は上記した板状部材１５の窪み１５ｂに対応しているので、当該円柱状の凸部の数、位置はマイクロプレート１０の複数のウエル１３の数、位置に対応している。

【0021】

粘着性ゲル１４は接着性が強く、金型を用いた場合、金型と粘着性ゲルとが接着されて当該金型を取り外すことができない。すなわち、金型を用いた射出成形を行うことが難しい。
よって、今回は金型の代わりに、シリコーン樹脂１５を用いて粘着性ゲル１４を成形した。なお、シリコーン樹脂からなる板状部材１５と粘着性ゲルからなる自己修復性封止材１４とは、分離させず一体化させる。

【0022】

次に、図２（ｄ）に示すように、熱成形により粘着性ゲル（シリコーンゲル）からなる自己修復性封止材１４とシリコーン樹脂（Ｘ−３２）１５とが一体化後、第１の金型７１が取り外され、シリコーン樹脂からなる板状部材１５上部に自己修復性封止材１４が設けられてなる板状体１６が得られる。
そして、図２（ｅ）に示すように、一旦、板状体１６の自己修復性封止材１４の上部（平面部分）に、保護用シート７３（例えば、ＰＴＦＥ：ポリテトラフルオロエチレン等のフッ素樹脂シート）が貼られる。

【0023】

次に、自己修復性封止材１４が設けられたシリコーン樹脂からなる板状体１６と、第１の基板１１と第２の基板１２との接合を行う。
まず、図３（ｆ）に示すように、自己修復性封止材１４の上部（平面部分）に貼られた保護用シート７３を剥離する。自己修復性封止材１４を構成する粘着性ゲルは保護用シート７３を形成するフッ素樹脂に対しては比較的接着力が弱いので、自己修復性封止材１４から保護用シート７３は比較的容易に剥離することが可能である。

【0024】

次いで、図３（ｇ）に示すように、第１のマイクロプレート基板１１に自己修復性封止材１４の上部（平面部分）を密着させ、加圧して両者を接着することにより、図３（ｈ）（図１（ｂ））に示すように、本発明のマイクロプレートを得る。
以下では、上記第１の基板１１と第２の基板１２と板状体１６から構成される部材をマイクロプレート１０ということとする。
なお、図１（ｂ）に示す本発明のマイクロプレートにおいて、自己修復性封止材１４とシリコーン樹脂性の板状部材１５とにより板状体１６を構成した理由は、自己修復性封止材１４を構成する粘着性ゲルは接着性が強く、上記したように金型を用いた射出成形を行うことが難しいためである。すなわち、金型の代替部材としてシリコーン樹脂性の板状部材１５を用いて粘着性ゲルからなる自己修復性封止材１４を成形する。金型同様、自己修復性封止材１４とシリコーン樹脂性の板状部材１５とを分離することは難しいので、両者を分離せず、そのまま板状体１６として使用する。

【0025】

後で示すように、試薬供給装置の注射針状流体放出手段、注射針状流体回収手段を自己修復性封止材を貫通させて試薬配置領域に進入させる場合、薄板部１５ａは厚みが１００μｍ以下と薄いので、注射針状流体放出手段、注射針状流体回収手段は、容易に上記薄板部１５ａを貫通することができる。

【0026】

なお、板状体１６の構造は、図１（ｂ）に示すものに限定されるわけではない。例えば、図４（ａ）に示すように、板状部材１５の窪みを円柱状ではなく、マイクロプレートの複数のウエル１３の開口１３ａを全て覆うような大きさに構成してもよい。この場合、この窪みに対応する自己修復性封止材１４の凸部は、マイクロプレートの複数のウエル１３の開口１３ａを全て覆うことが可能となる。しかしながら、図４（ａ）に示す構造の場合、板状部材１５の薄板部１５ａの面積が大きくなるので、図１（ｂ）に示す構造の板状体１６と比較すると破損しやすいという特徴もある。

【0027】

また、図１に示すマイクロプレートは、貫通孔が複数設けられた第１のマイクロプレート基板１１と平板状の第２のマイクロプレート基板１２とが積層・接合された構造であるが、これに限定されるわけではない。例えば、図４（ｂ）に示すように、底板部１３ｃに複数の円筒部１３ｂが固定され、さらに全体が支持部１７により支持されるような一体構造のものであってもよい。

【0028】

図１に示す本発明の実施例のマイクロプレート１０において、嫌気性抗体等の嫌気性試薬を配置することが可能な試薬配置領域は各ウエル１３と自己修復性封止材１４により包囲された空間であり、より具体的には各ウエル１３の底面領域である。

【0029】

上記したように、本実施例のマイクロプレート１０は、各ウエル１３の開口１３ａが自己修復性封止材１４により封止されている構造である。
すなわち、本発明のマイクロプレートは、自己修復性封止材１４により、試薬配置領域（ウエル１３）が閉塞された構造である。よって、閉塞空間内への外部からの空気の流入を防止することが可能である。

【0030】

また、後に示す試薬供給装置の注射針状流体放出手段、注射針状流体回収手段が上記薄板部１５ａと自己修復性封止材１４を貫通して試薬配置領域に進入した場合においても、自己修復性封止材１４は力が印加されると変形し、力の印加を解除すると力の印加前の形状に戻る性質があるので、当該自己修復性封止材１４と注射針状流体放出手段、注射針状流体回収手段との接触部における密着性が良好であり、この接触部から外部の空気は閉塞空間である試薬配置領域に殆ど進入しない。

【0031】

また、後に示す試薬供給装置の注射針状流体放出手段、注射針状流体回収手段が上記薄板部１５ａと自己修復性封止材１４を貫通後、再び離脱しても、自己修復性封止材１４は力が印加されると変形し、力の印加を解除すると力の印加前の形状に戻る性質があるので、前記自己修復性封止材１４を貫通、離脱する注射針状流体放出手段、注射針状流体回収手段により前記自己修復性封止材１４に生じる孔も速やかに閉塞される。よって、注射針状流体放出手段、注射針状流体回収手段が自己修復性封止材１４を離脱後も閉塞空間である試薬配置領域への外部からの空気の流入を防止することが可能である。

【0032】

よって、後に示す試薬供給装置の注射針状流体放出手段、注射針状流体回収手段を用いて、嫌気性抗体等の嫌気性試薬を試薬配置領域に固定する際、上記注射針状流体放出手段、注射針状流体回収手段を用いて閉塞空間である試薬配置領域内部に残留する空気を試薬溶液等でパージすることにより、殆ど空気と接触させることなく嫌気性抗体等の嫌気性試薬を試薬配置領域に配置することが可能となる。

【0033】

次に、本発明のマイクロプレートの試薬配置領域（ウエル１３）に対して、殆ど空気と接触させることなく嫌気性抗体等の嫌気性試薬を供給するための試薬供給装置について説明する。
図５、図６、図７に、図１のマイクロプレート１０のウエル１３内に嫌気性試薬（ここでは、嫌気性抗体を例に取る）を供給する試薬供給装置の構成ブロック図の例を示す。
図５に示す試薬供給装置は、試薬供給機構４０、分注排出機構２５、試験体保持機構２０、試薬回収機構５０、制御部６０からなる。図６は流体放出手段２１、流体回収手段２２の拡大図、図７は、分注排出機構２５に含まれる分注排出部２４の詳細図である。

【0034】

Ｉ．試薬供給機構
図５に示すように、試薬供給機構４０には、試薬貯蔵部４１、制御バルブ４２、温度制御部３１、ジョイント２８ａが含まれる。
試薬貯蔵部４１は、マイクロプレート１０のウエル１３に供給するための試薬を貯蔵する。図５に示す例では、試薬貯蔵部４１は、ＰＢＳ貯蔵部４１ａ、１次抗体含有溶液貯蔵部４１ｂ、抗原含有溶液貯蔵部４１ｃ、２次抗体含有溶液貯蔵部４１ｄ、酵素反応溶液貯蔵部４１ｅ、反応停止液貯蔵部４１ｆ、温度制御部３３、温度制御部３４からなる。
ここで、１次抗体、２次抗体は一般に低温状態にて貯蔵しておくと安定であるので、１次抗体含有溶液貯蔵部４１ｂは温度制御部３３により温度制御される。また、２次抗体含有溶液貯蔵部４１ｄは温度制御部３４により温度制御される。１次抗体、２次抗体の保存温度は、例えば４°Ｃである。

【0035】

試薬貯蔵部４１の各貯蔵部は、三方弁からなる制御バルブ４２と接続される。図５に示す例では、試薬貯蔵部４１は６つの貯蔵部から構成されるので、試薬貯蔵部４１と制御バルブ４２からなる配管系統は６系統となる。制御バルブ４２としては三方電磁弁等が採用される。
図５において、制御バルブ４２である三方弁は、ａ，ｂ，ｃの三つのポートを持ち、ここでは、ａ−ｃ流路とｂ−ｃ流路とを切り替えるものとする。各制御バルブ４２は、それぞれのｂ−ｃ流路が一本の流路となるようにマニホールド状に接続されている。一方、各制御バルブ４２のａポートは、試薬貯蔵部４１にそれぞれ接続されている。また、ＰＢＳ貯蔵部４１ａと接続されている制御バルブ４２のｂポートには封止用の栓が接続されていて、抗原含有溶液貯蔵部４１ｃと接続されている制御バルブ４２のｃポートには、温度制御部３１によって温度制御される配管に接続されている。

【0036】

すなわち、図５に示すように、試薬貯蔵部４１の６つの配管系統は最終的には１つの配管系統に統合され、温度制御部３１によって温度制御される配管に接続される。各制御バルブ４２の流路の切替を制御することにより、温度制御部を経由して流体放出手段からマイクロプレート１０のウエル１３に放出する試薬を切り替えることが可能となる。
温度制御部３１は、抗体等の試薬の温度を制御するためのものであり、具体的には上記した１つの配管系統に統合された試薬貯蔵部４１からの配管と接続される配管の温度を制御する。温度制御部３１により温度制御される配管の一方は、上記したように試薬貯蔵部４１と接続され、他方はジョイント２８ａにより試薬溶液注入管２６と接続される。

【0037】

ＩＩ．分注排出機構
図５に示すように、分注排出機構２５には、分注排出部２４、流体放出手段２１（注射針状流体放出手段）、流体回収手段２２（注射針状流体回収手段）、分注排出部駆動機構２３、試薬溶液注入管２６、試薬溶液排出管２７が含まれる。

【0038】

流体放出手段２１および流体回収手段２２は、マイクロプレート１０のウエル１３の開口１３ａに設けられた板状体１６における板状部材１５の薄板部１５ａと自己修復性封止材１４を貫通し、試薬をマイクロプレート１０のウエル１３内に放出および回収するものである。
図６に示すように、注射針状流体放出手段２１は、ステンレス製の中空筒状部材からなる。注射針状流体放出手段２１の先端部２１ｂは閉鎖されており、先端部形状は、針状（例えば注射針のようにベベル形状（斜め形状））になっている。中空筒状部材の内部空洞と連通し内部空洞より供給される試薬を流路内に放出する開口部２１ａは、中空筒状部材の円筒部２１ｃの側面における先端部２１ｂにできるだけ近い部位に設けられている。以降、注射針状流体放出手段２１を単に流体放出手段２１と称する。

【0039】

また、図６に示すように注射針状流体回収手段２２は、流体放出手段２１と同様ステンレス製の中空筒状部材からなる。流体回収手段２２の先端部２２ｂは閉鎖されており、先端部形状は、針状（例えば注射針のようにベベル形状（斜め形状））になっている。中空筒状部材の内部空洞と連通し内部空洞より供給される試薬を流体内に放出する開口部２２ａは、中空筒状部材の円筒部２２ｃの側面の先端部２２ｂにできるだけ近い部位に設けられている。以降、注射針状流体回収手段２２を単に流体回収手段２２と称する。

【0040】

流体放出手段２１および流体回収手段２２は、先端部がベベル形状となっているので、容易に板状体１６における板状部材１５の薄板部１５ａと自己修復性封止材１４を貫通可能となる。さらに、先端部が閉鎖されていて、開口部が中空筒状部材の円筒部側面に設けられているので、流体放出手段２１および流体回収手段２２が自己修復性封止材１４を貫通する際に自己修復性封止材１４の切屑はほとんど発生せず、また、開口部が自己修復性封止材１４の切屑により詰まることもない。

【0041】

流体放出手段２１および流体回収手段２２は、マイクロプレート１０の１つのウエル１３に試薬を放出および回収するものである。すなわち、１つのウエル１３に一組の流体放出手段２１および流体回収手段２２が対応する。そのため、複数のウエル１３を有するマイクロプレート１０に対して、ウエル１３の数に対応した複数組の流体放出手段２１および流体回収手段２２が準備される。
なお、マイクロプレート１０の各ウエル１３においては、試薬が十分に拡散されることが好ましいので、流体放出手段２１の開口部２１ａと流体回収手段２２の開口部２２ａとは、互いに対向しないように設定される。例えば、図５、図６に示すように、流体放出手段２１の開口部２１ａと流体回収手段２２の開口部２２ａは、それぞれがウエル１３の側面側壁部に面するように設定される。

【0042】

分注排出部２４は、複数の流体放出手段２１に一度に試薬を供給し、複数の流体回収手段２２からの廃液を一度に回収するためのものである。
図７に分注排出部２４の構成例を示す。同図に示すように、分注排出部２４は、流体放出用マニホールド２４ａ、流体回収用マニホールド２４ｂ、ジョイント２８ｃから構成される。

【0043】

図７に示すように、各ウエル１３に対応する複数組の流体放出手段２１および流体回収手段２２は、ジョイント２８ｃによりそれぞれ流体放出用配管２４ｃおよび流体回収用配管２４ｄと連結される。流体放出手段２１および流体回収手段２２からなる各組のジョイント２８ｃとの連結位置はマイクロプレート１０の各ウエル１３の位置に対応しており、ジョイント２８ｃは複数組の流体放出手段２１および流体回収手段２２を一体に保持する。

【0044】

ジョイント２８ｃに連結された複数組の流体放出手段２１および流体回収手段２２のうち、流体放出手段２１は流体放出用配管２４ｃを介して流体放出用マニホールド２４ａに連結され、流体回収手段２２は流体回収用配管２４ｄを介して流体回収用マニホールド２４ｂに連結される。

【0045】

流体放出用マニホールド２４ａは内部が空洞になっており、上記したようにジョイント２８ｃからの流体放出用配管２４ｃと連結されるとともに試薬溶液注入管２６と連結される。一方、流体回収用マニホールド２４ｂは内部が空洞になっており、上記したようにジョイント２８ｃと連結され流体放出用マニホールド２４ａを貫通した流体回収用配管２４ｄと連結されるとともに試薬溶液排出管２７と連結される。

【0046】

試薬溶液注入管２６は、上記したように一方は流体放出用マニホールド２４ａに連結され、他方はジョイント２８ａを介して温度制御部３１の配管と連結される。試薬溶液注入管２６内を通過する試薬は、流体放出用マニホールド２４ａの空洞内に供給される。流体放出用マニホールド２４ａの空洞内に供給される試薬の流れは、当該流体放出用マニホールド２４ａの空洞に連結されている複数の流体放出用配管２４ｃに分流され、ジョイント２８ｃを介して各流体放出手段２１を通過し、マイクロプレート１０の各ウエル１３に供給される。
なお、流体放出用マニホールド２４ａにおける流体放出用配管２４ｃの貫通部分は溶接等で密閉されており、空洞内に供給される試薬が上記貫通部分から漏洩することはない。

【0047】

一方、試薬溶液排出管２７は、上記したように一方は流体回収用マニホールド２４ｂに連結され、他方はジョイント２８ｂを介してポンプ５１と連結される。試薬溶液注入管２６内を通過する試薬は、流体放出用マニホールド２４ａの空洞内に供給される。各ウエル１３から流体回収手段２２により回収される試薬廃液は、ジョイント２８ｃを介して流体回収用配管２４ｄを流れ、流体回収用マニホールド２４ｂの空洞内に供給される。各流体回収用配管から供給される試薬廃液は上記空洞内で合流し、試薬溶液排出管２７からジョイント２８ｂを介してポンプ５１に吸引される。

【0048】

上記したように、ジョイント２８ｃは複数組の流体放出手段２１および流体回収手段２２を一体に保持するが、上記ジョイント２８ｃは流体放出用配管２４ｃを介して流体放出用マニホールド２４ａと連結されるとともに流体回収用配管２４ｄを介して流体回収用マニホールド２４ｂと連結されているので、ジョイント２８ｃ、流体放出用マニホールド２４ａ、流体回収用マニホールド２４ｂは一体に構成される。
上記した構造から明らかなように、流体放出用マニホールド２４ａ、流体回収用マニホールド２４ｂ、ジョイント２８ｃからなる分注排出部２４は、マイクロプレート１０の複数の各ウエル１３に対して一括して試薬を供給・回収可能な構造を有する。

【0049】

ここで、分注排出部２４は分注排出部駆動機構２３により、上下方向に駆動される。上記したように、流体放出用マニホールド２４ａ、流体回収用マニホールド２４ｂとともに一体に構成されるジョイント２８ｃは、複数組の流体放出手段２１および流体回収手段２２を一体に保持しているので、分注排出部２４を駆動することにより、複数組の流体放出手段２１および流体回収手段２２も一括して駆動される。
すなわち、分注排出部駆動機構２３は、複数組の流体放出手段２１および流体回収手段２２がマイクロプレート１０の各ウエル１３の開口１３ａに設けられた板状体１６における板状部材１５の薄板部１５ａと自己修復性封止材１４を一括して貫通して当該マイクロプレート１０のウエル１３内に進入するように分注排出部２４を駆動したり、複数組の流体放出手段２１および流体回収手段２２が上記板状体１６における板状部材１５の薄板部１５ａと自己修復性封止材１４を経由して完全にマイクロプレート１０から離脱するように分注排出部２４を駆動する。

【0050】

分注排出部駆動機構２３は、例えば、複数組の流体放出手段２１および流体回収手段２２とそれぞれ流体放出用配管および流体回収用配管とを接続するジョイント２８ｃに連結される。
このように、分注排出部２４は分注排出部駆動機構２３により上下方向に駆動されるので、分注排出部２４の液体放出用マニホールド２４ａに接続される試薬溶液注入管２６や分注排出部２４の液体回収用マニホールド２４ｂに接続される試薬溶液排出管２７も、これらの動作に対応可能なようにそれぞれ可撓管から構成される。

【0051】

ＩＩＩ．試験体保持機構
図５に示すように、試験体保持機構２０は、温度制御部３２を備える温調ステージ３５からなる。温調ステージ３５は試験体であるマイクロプレート１０が載置されるとともに、マイクロプレート１０の温度を調整する機能を有する。具体的には、温度制御部３２により温調ステージ３５の温度を制御して、温調ステージ３５に載置されるマイクロプレート１０の温度を調整する。

【0052】

ＩＶ．試薬回収機構
図５に示すように、試薬回収機構５０には、ジョイント２８ｂ、ポンプ５１、廃液槽５２が含まれる。
上記したように、ジョイント２８ｂを介して試薬溶液排出管２７と連結されるポンプ５１は、試薬貯蔵部４１に貯蔵されている試薬を流体放出手段２１を介してマイクロプレート１０の各ウエル１３内に供給させ、当該ウエル１３内の試薬の少なくとも一部を廃液槽５２に送出するためのものであり、ポンプ５１から送出される試薬（廃液）は廃液槽５２に貯蔵される。

【0053】

Ｖ．制御部
制御部６０は、試薬供給機構４０に属する制御バルブ４２、温度制御部３３、温度制御部３４、温度制御部３１と、分注排出機構２５に属する分注排出部駆動機構２３と、試験体保持機構２０の温度制御部３２と、試薬回収機構５０に属するポンプ５１の動作を制御する。

【0054】

ＶＩ．マイクロプレートのウエル１３内への１次抗体Ｉｇ１の固定手順
図１（ａ）に示すマイクロプレート１０の各ウエル１３内への１次抗体Ｉｇ１の固定は、例えば、以下のように行われる。この固定手順については、図５、図６、図７、図８を参照しながら説明する。

【0055】

（１）注射針状流体放出手段２１、注射針状流体回収手段２２のマイクロプレート１０へのセッティング
試験体であるマイクロプレート１０が温調ステージ３５に載置される。なお、温調ステージ３５へのマイクロプレート１０の載置は作業者が行っても良いし、図示を省略した公知の搬送機構を用いてもよい。なお、搬送機構を用いる場合、搬送機構の制御は上記した制御部６０が行ってもよい。

【0056】

なお、マイクロプレート１０が温調ステージ３５に載置されるのに先立って、温調ステージ３５の温度制御部３２は、制御部６０の指令に基づき、温調ステージ３５の温度が所定の温度となるように制御する。この所定の温度とは、温調ステージ３５に載置されるマイクロプレート１０の温度が予め定められた温度に到達させるための温度である。予め定められた温度とは、例えば、２５〜３７°Ｃである。
同様に、制御部６０の指令に基づき、図５に示す温度制御部３１は、予め温度制御部３１の配管の温度が所定の温度となるように制御する。この所定の温度とは、温度制御部３１の配管を通過したときの試薬の温度が予め定められた温度に到達させるための温度である。予め定められた温度とは、例えば、２５〜３７°Ｃである。

【0057】

制御部６０の指令に基づき、分注排出部駆動機構２３は、分注排出部２４を所定の位置まで下側に駆動する。図８（ａ）に示すように、この駆動により、複数組の流体放出手段２１（注射針状流体放出手段）の開口部２１ａおよび流体回収手段２２（注射針状流体回収手段２２）の開口部２２ａはマイクロプレート１０の各ウエル１３の開口１３ａに設けられた板状体１６における板状部材１５の薄板部１５ａと自己修復性封止材１４を一括して貫通して当該マイクロプレート１０の各ウエル１３内に進入する。なお、上記した所定の位置とは、複数組の流体放出手段２１および流体回収手段２２の先端部がマイクロプレート１０の第２のマイクロプレート基板１２に接触しない位置である。
なお、図６、図７に示すように、ジョイント２８ｃは、複数組の流体放出手段２１および流体回収手段２２において、流体回収手段２２の開口部２２ａの下端の位置が流体放出手段２１の開口部２１ａ上端の位置より上側になるように保持している。

【0058】

（２）ＰＢＳによるウエル１３内洗浄
図５において、各制御バルブ４２の流路は、ｂ−ｃ流路に設定されているものとする。
制御部６０は、複数の制御バルブ４２のうち、ＰＢＳ貯蔵部４１ａに繋がる配管系統（以下、ＰＢＳ配管系統と称する）に属する制御バルブ４２の流路をａ−ｃ流路に切り替える。

【0059】

次いで、制御部６０はポンプ５１の駆動を開始する。これにより、まず流体回収手段２２の開口部２２ａからマイクロプレート１０の各ウエル１３内の空気が吸引され、その後、ＰＢＳ貯蔵部４１ａに貯蔵されているＰＢＳがＰＢＳ配管系統に属する制御バルブ４２のａ−ｃ流路、その他の制御バルブ４２のｂ−ｃ流路、温度制御部３１、試薬溶液注入管２６、液体放出用マニホールド２４ａ、流体放出用配管２４ｃを経由して流体放出手段２１の開口部２１ａからマイクロプレート１０の各ウエル１３内にＰＢＳが流入する。
各ウエル１３内に流入したＰＢＳの液面が流体回収手段２２の開口部２２ａに到達すると、ＰＢＳは流体回収手段２２の開口部２２ａから吸引され、流体回収用配管２４ｄ、液体回収用マニホールド２４ｂ、試薬溶液排出管２７を経由して廃液槽５２に送出される。
以上の手順により、図８（ｂ）に示すように、各ウエル１３内にて各ウエル１３を洗浄するためのＰＢＳの流れが発生する。

【0060】

（３）１次抗体Ｉｇ１固定
洗浄が一定時間行われたあと、制御部６０は、複数の制御バルブ４２のうち、ＰＢＳ配管系統に属する制御バルブ４２の流路をｂ−ｃ流路に切り替えるとともに、１次抗体含有溶液を貯蔵する１次抗体含有溶液貯蔵部４１ｂに繋がる配管系統（以下、ＰＡＢ配管系統と称する）に属する制御バルブ４２の流路をａ−ｃ流路に切り替える。
なお、ＰＢＳでの洗浄時間（上記した一定時間）、ＰＢＳ配管系統およびＰＡＢ配管系統に属する制御バルブ４２の流路切替のタイミングは、予め制御部６０に記憶されているものとする。

【0061】

このような流路切替により、分注排出部２４の各流体回収手段２２の開口部２２ａからマイクロプレート１０の各ウエル１３内に残留しているＰＢＳが吸引されるとともに、１次抗体含有溶液がＰＡＢ配管系統に属する制御バルブ４２のａ−ｃ流路、抗原含有貯蔵部に繋がる配管系統（以下、ＡＣ配管系統と称する）に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路、２次抗体含有溶液貯蔵部４１ｄに繋がる配管系統（以下、ＳＡＢ配管系統と称する）に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路、酵素反応溶液貯蔵部４１ｅに繋がる配管系統（以下、ＥＲＳ配管系統と称する）に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路、反応停止駅貯蔵部に繋がる配管系統（以下、ＲＳ配管系統と称する）に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路、温度制御部３１、試薬溶液注入管２６を経由して分注排出部２４の各流体放出手段２１の開口部２１ａからマイクロプレート１０の各ウエル１３内に流入する。なお、ＰＢＳ貯蔵部４１ａと接続されている制御バルブ４２のｂポートには封止用の栓が接続されているので、１次抗体含有溶液は、ＰＢＳ配管系統に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路側には流れない。

【0062】

なお、１次抗体含有溶液貯蔵部４１ｂにおいて、例えば４°Ｃである低温状態にて貯蔵されていた１次抗体含有溶液は、図５に示す温度制御部３１によって温度制御されている、温度制御部３１の配管を通過することにより、例えば２５〜３７°Ｃに加熱される。
上記したように、温調ステージ３５に載置されるマイクロプレート１０の温度は、温度制御部３２に温度制御される温調ステージ３５により例えば２５〜３７°Ｃに維持されているので、マイクロプレート１０の各ウエル１３内に流入した抗体含有溶液の温度が下がることはない。

【0063】

以上の手順により、図８（ｃ）に示すように、分注排出部２４の流体放出手段２１の開口部２１ａからマイクロプレート１０の各ウエル１３内に注入された１次抗体含有溶液は、当初は１次抗体含有溶液流入前に各ウエル１３内に残存するＰＢＳと混合されながら各ウエル１３内を通過し、分注排出部２４の流体回収手段２２の開口部２２ａから各ウエル１３外部へと排出され廃液槽５２に送られる。やがて、徐々にＰＢＳの濃度は減少し、最終的にはほぼ１次抗体含有溶液からなる流れが各ウエル１３内にて発生する。上記したように、マイクロプレート１０は、例えばポリスチレンからなる表面が疎水性である材料から構成されるので、１次抗体含有溶液中の１次抗体Ｉｇ１は、疎水結合によりウエル１３底面（第２のマイクロプレート基板１２表面）に吸着される。

【0064】

上記したように、ジョイント２８ｃは、複数組の流体放出手段２１および流体回収手段２２において、流体回収手段２２の開口部２２ａの下端の位置が流体放出手段２１の開口部２１ａ上端の位置より上側になるように保持しているので、各ウエル１３内を流れる１次抗体含有溶液の液面レベルは、流体回収手段２２の開口部２２ａ下端の位置となる。
ここで上記液面レベルが少なくとも各ウエル１３底面に固定される１次抗体Ｉｇ１が１次抗体含有溶液により完全に浸漬される高さとなるように流体回収手段２２の開口部２２ａの下端の位置を設定しておくことにより、各ウエル１３底面に固定される抗体Ｉｇ１は空気には接触しない。

【0065】

すなわち、手順（１）における流体放出手段２１、流体回収手段２２のセッティングは、流体回収手段２２の開口部２２ａの下端の位置、流体放出手段２１の開口部２１ａの位置が上記したような位置に設定されるように行われる。

【0066】

（４）ＰＢＳによるウエル１３内洗浄
ある一定時間経過し、各ウエル１３底面に１次抗体Ｉｇ１が固定されたあと、制御部６０は、複数の制御バルブ４２のうち、ＰＡＢ配管系統に属する制御バルブ４２の流路をｂ−ｃ流路に切り替えるとともに、ＰＢＳ配管系統に属する制御バルブ４２の流路をａ−ｃ流路に切り替える。
なお、各ウエル１３底面に１次抗体Ｉｇ１が固定されるまでの１次抗体含有溶液が各ウエル１３内を流れる時間（上記したある一定時間）、ＡＢ配管系統およびＰＢＳ配管系統に属する制御バルブ４２の流路切替のタイミングは、予め制御部６０に記憶されているものとする。

【0067】

このような流路切替により、分注排出部２４の流体回収手段２２の開口部２２ａから各ウエル１３内の残留している１次抗体含有溶液が吸引されるとともに、ＰＢＳがＰＢＳ配管系統に属する制御バルブ４２のａ−ｃ流路、その他の制御バルブ４２のｂ−ｃ流路、温度制御部３１、試薬溶液注入管２６を経由して分注排出部２４の流体放出手段２１の開口部２１ａからマイクロプレート１０の各ウエル１３内に流入する。

【0068】

以上の手順により、図８（ｄ）に示すように、各ウエル１３底面に固定された１次抗体Ｉｇ１表面に残留していた固定されていない１次抗体Ｉｇ１や、各ウエル１３底面以外の領域に残留していた１次抗体Ｉｇ１は、ＰＢＳとともに試薬溶液排出管２７により外部へ排出される。

【0069】

ジョイント２８ｃは、複数組の流体放出手段２１および流体回収手段２２において、流体回収手段２２の開口部２２ａの下端の位置が流体放出手段２１の開口部２１ａ上端の位置より上側になるように保持しているので、各ウエル１３内を流れるＰＢＳの液面レベルは、流体回収手段２２の開口部２２ａ下端の位置となる。この液面レベルは、各ウエル１３底面に固定される１次抗体Ｉｇ１がＰＢＳにより完全に浸漬される高さに設定してあるので、各ウエル１３底面に固定される抗体は空気には接触しない。

【0070】

上記した（１）〜（４）の手順により、マイクロプレート１０の各ウエル１３底面に１次抗体Ｉｇ１が固定される。
上記した手順から明らかなように、手順（２）において、各ウエル１３内がＰＢＳに洗浄されて以降、各ウエル１３底面は常にＰＢＳ、１次抗体含有溶液中に浸漬される。手順（３）における各ウエル１３底面への１次抗体Ｉｇ１固定は、ウエル１３底面およびその近傍に空気が残留していない条件下で１次抗体Ｉｇ１に空気が接触することなく行われる。また手順（４）における各ウエル１３底面に固定されていない１次抗体Ｉｇ１の排出も、各ウエル１３底面に固定されている抗体Ｉｇ１に空気が接触することなく行われる。
これは、上記したように、各ウエル１３内を流れる試薬の液面レベルが、各ウエル１３底面に固定される１次抗体Ｉｇ１が当該試薬により完全に浸漬される高さとなるように流体回収手段２２の開口部２２ａの下端の位置を設定したためである。

【0071】

すなわち、本発明のマイクロプレート１０を用いた試薬供給装置は、マイクロプレート１０の試薬配置領域に、空気を接触させることなく嫌気性抗体等の嫌気性試薬を供給することが可能となる。すなわち、マイクロプレート１０の試薬配置領域に嫌気性抗体を失活させることなく固定することが可能となる。

【0072】

また、マイクロプレート１０の各ウエル１３への試薬の供給は、制御部６０、試薬供給機構４０、試薬回収機構５０により機械的に実施しているので、ばらつき無く安定にマイクロプレート１０の各ウエル１３への試薬の供給を行うことができる。すなわち、試薬の注入スピードも一定となり、当該注入スピードを適宜調整することにより、各ウエル１３内での試薬の乱れを小さくして抗体Ｉｇ１の一部が傾いたり、倒れた状態でウエル１３の底面に１次抗体Ｉｇ１が吸着されることを抑制することができる。よって、ウエル１３底面に吸着される１次抗体Ｉｇ１の配向性も良好にすることができ、１次抗体Ｉｇ１固定後に行う抗体抗原反応の結果のばらつきを小さくすることが可能となる。

【0073】

なお、マイクロプレート１０としては、本発明の各ウエル１３の開口１３ａが、板状部材１５とともに板状体１６を構成する例えばシリコーンゲルからなる自己修復性封止材１４により封止されている構造を有するものを用いたので、本発明の試薬供給装置の流体放出手段２１、流体回収手段２２が板状体１６における板状部材１５の薄板部１５ａと自己修復性封止材１４を貫通して試薬配置領域に進入した場合においても、自己修復性封止材１４は力が印加されると変形し、力の印加を解除すると力の印加前の形状に戻る性質があるので、当該自己修復性封止材１４と流体放出手段２１、流体回収手段２２との接触部における密着性が良好であり、この接触部から外部の空気は閉塞空間である試薬配置領域に殆ど進入しない。

【0074】

ＶＩＩ．マイクロプレート１０の各ウエル１３内の抗原測定手順
上記したマイクロチップへの抗体固定に引き続き、固定された抗体に対して抗原を供給して抗体抗原反応を発生させ、抗原を測定する場合は、例えば、以下の手順を実施する。ここでは、ＥＬＩＳＡ（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay）法のサンドイッチ法に準拠した測定について述べる。

【0075】

（５）１次抗体抗原反応
上記した手順（４）において、洗浄が一定時間行われたあと、制御部６０は、複数の制御バルブ４２のうち、ＰＢＳ配管系統に属する制御バルブ４２の流路をｂ−ｃ流路に切り替えるとともに、抗原含有溶液を貯蔵する抗原含有溶液貯蔵部４１ｃに繋がる配管系統（ＡＣ配管系統）に属する制御バルブ４２の流路をａ−ｃ流路に切り替える。
なお、ＰＢＳでの洗浄時間（上記した一定時間）、ＰＢＳ配管系統およびＡＣ配管系統に属する制御バルブ４２の流路切替のタイミングは、予め制御部６０に記憶されているものとする。

【0076】

このような流路切替により、分注排出部２４の流体回収手段２２の開口部２２ａからマイクロプレート１０の各ウエル１３内の残留しているＰＢＳが吸引されるとともに、抗原含有溶液がＡＣ配管系統に属する制御バルブ４２のａ−ｃ流路、ＳＡＢ配管系統に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路、ＥＲＳ配管系統に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路、ＲＳ配管系統に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路、温度制御部３１、試薬溶液注入管２６を経由して分注排出部２４の流体放出手段２１の開口部２１ａからマイクロプレート１０の各ウエル１３内に流入する。なお、ＰＢＳ貯蔵部４１ａと接続されている制御バルブ４２のｂポートには封止用の栓が接続されているので、抗原含有溶液は、ＰＡＢ配管系統に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路側、およびＰＢＳ配管系統に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路側には流れない。
なお、抗原含有溶液は、図５に示す温度制御部３１によって温度制御されている温度制御部３１の配管を通過することにより、例えば２５〜３７°Ｃに加熱される。

【0077】

以上の手順により、図９（ｅ）に示すように、分注排出部２４の流体放出手段２１の開口部２１ａからマイクロプレート１０の各ウエル１３内に注入された抗原含有溶液は、当初は抗原含有溶液流入前に各ウエル１３内に残存するＰＢＳと混合されながら各ウエル１３を通過し、分注排出部２４の流体回収手段２２の開口部２２ａから各ウエル１３外部へと排出され廃液槽５２に送られる。やがて、徐々にＰＢＳの濃度は減少し、最終的にはほぼ抗原含有溶液からなる流れが各ウエル１３内にて発生する。抗原含有溶液中の抗原Ａｇは、各ウエル１３の底面に固定されている１次抗体Ｉｇ１と抗体抗原反応を行い化学的に結合する。
なお、上記したように、手順（１）における分注排出部２４の流体放出手段２１、流体回収手段２２のセッティングにより、１次抗体抗原反応は、空気が存在しない抗原含有溶液中で行われる。
上記したように、温調ステージ３５に載置されるマイクロプレート１０の温度は、温度制御部３２に温度制御される温調ステージ３５により例えば２５〜３７°Ｃに維持されているので、マイクロプレート１０の各ウエル１３内にて行われる抗体抗原反応は、２５〜３７°Ｃの温度条件にて行われる。この温度条件は、ヒトの体温に準じたものである。

【0078】

（６）ＰＢＳによる各ウエル１３内洗浄
ある一定時間経過し、抗体抗原反応が完了したあと、制御部６０は、複数の制御バルブ４２のうち、ＡＣ配管系統に属する制御バルブ４２の流路をｂ−ｃ流路に切り替えるとともに、ＰＢＳ配管系統に属する制御バルブ４２の流路をａ−ｃ流路に切り替える。
なお、抗体抗原反応が完了するまでの抗原含有溶液が各ウエル１３内を流れる時間（上記したある一定時間）、ＡＣ配管系統およびＰＢＳ配管系統に属する制御バルブ４２の流路切替のタイミングは、予め制御部６０に記憶されているものとする。

【0079】

このような流路切替により、分注排出部２４の流体回収手段２２の開口部２２ａからマイクロプレート１０の各ウエル１３内の残留している抗原含有溶液が吸引されるとともに、ＰＢＳがＰＢＳ配管系統に属する制御バルブ４２のａ−ｃ流路、その他の制御バルブ４２のｂ−ｃ流路、温度制御部３１、試薬溶液注入管２６を経由して分注排出部２４の流体放出手段２１の開口部２１ａからマイクロプレート１０の各ウエル１３内に流入する。
以上の手順により、図９（ｆ）に示すように、各ウエル１３内に残留していた抗体抗原反応に寄与しなかった抗原Ａｇは、ＰＢＳとともに試薬溶液排出管２７により外部へ排出される。

【0080】

（７）２次抗体抗原反応
洗浄が一定時間行われたあと、制御部６０は、複数の制御バルブ４２のうち、ＡＣ配管系統に属する制御バルブ４２の流路をｂ−ｃ流路に切り替えるとともに、２次抗体含有溶液を貯蔵する２次抗体含有溶液貯蔵部４１ｄに繋がる配管系統（ＳＡＢ配管系統）に属する制御バルブ４２の流路をａ−ｃ流路に切り替える。
なお、ＰＢＳでの洗浄時間（上記した一定時間）、ＰＢＳ配管系統およびＳＡＢ配管系統に属する制御バルブ４２の流路切替のタイミングは、予め制御部６０に記憶されているものとする。

【0081】

このような流路切替により、分注排出部２４の各流体回収手段２２の開口部２２ａからマイクロプレート１０の各ウエル１３内に残留しているＰＢＳが吸引されるとともに、２次抗体含有溶液がＳＡＢ配管系統に属する制御バルブ４２のａ−ｃ流路、酵素反応溶液貯蔵部４１ｅに繋がる配管系統（ＥＲＳ配管系統）に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路、反応停止液貯蔵部４１ｆに繋がる配管系統（ＲＳ配管系統）に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路、温度制御部３１、試薬溶液注入管２６を経由して分注排出部２４の各流体放出手段２１の開口部２１ａからマイクロプレート１０の各ウエル１３内に流入する。
なお、ＰＢＳ貯蔵部４１ａと接続されている制御バルブ４２のｂポートには封止用の栓が接続されているので、２次抗体含有溶液は、ＡＣ配管系統に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路側、ＰＡＢ配管系統に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路側、およびＰＢＳ配管系統に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路側には流れない。

【0082】

なお、２次抗体含有溶液貯蔵部４１ｄにおいて、例えば４°Ｃである低温状態にて貯蔵されていた抗体含有溶液は、図５に示す温度制御部３１によって温度制御されている温度制御部３１の配管を通過することにより、例えば２５〜３７°Ｃに加熱される。
上記したように、温調ステージ３５に載置されるマイクロプレート１０の温度は、温度制御部３２に温度制御される温調ステージ３５により例えば２５〜３７°Ｃに維持されているので、マイクロプレート１０の各ウエル１３内に流入した抗体含有溶液の温度が下がることはない。

【0083】

以上の手順により、図９（ｇ）に示すように、分注排出部２４の流体放出手段２１の開口部２１ａからマイクロプレート１０の各ウエル１３内に注入された２次抗体含有溶液は、当初は２次抗体含有溶液流入前に各ウエル１３内に残存するＰＢＳと混合されながら各ウエル１３内を通過し、分注排出部２４の流体回収手段２２の開口部２２ａから各ウエル１３外部へと排出され廃液槽５２に送られる。やがて、徐々にＰＢＳの濃度は減少し、最終的にはほぼ２次抗体含有溶液からなる流れが各ウエル１３内にて発生する。

【0084】

２次抗体含有溶液中の２次抗体Ｉｇ２は、１次抗体Ｉｇ１と結合している抗原Ａｇと抗体抗原反応を行い化学的に結合する。すなわち、抗原Ａｇは、１次抗体Ｉｇ１と２次抗体Ｉｇ２とによりサンドイッチ状に挟まれた状態で当該１次抗体Ｉｇ１および２次抗体Ｉｇ２と結合する。なお、２次抗体Ｉｇ２としては予め酵素標識されているものが使用され、２次抗体Ｉｇ２と抗原Ａｇとが抗体抗原反応により結合した結果、上記酵素は１次抗体抗原Ａｇ、２次抗体Ｉｇ２からなる複合体の上側（表面側）に位置する。

【0085】

なお、上記したように、マイクロプレート１０は、例えばポリスチレンからなる表面が疎水性である材料から構成されるので、２次抗体含有溶液中の２次抗体Ｉｇ２の一部は抗原Ａｇとは結合せず、疎水結合によりウエル１３底面（第２のマイクロプレート基板１２表面）に吸着されることになる。よって、実際にはマイクロプレート１０の各ウエル１３内に２次抗体含有溶液を注入する前に２次抗体Ｉｇ２がウエル１３底面と結合しないようにブロッキング処理を施す必要がある。本実施例では、理解を容易にするためにブロッキング処理工程を省略している。すなわち、本実施例においては、仮想的に２次抗体Ｉｇ２は抗原Ａｇ以外とは結合しないものとする。

【0086】

上記したように、ジョイント２８ｃは、複数組の流体放出手段２１および流体回収手段２２において、流体回収手段２２の開口部２２ａの下端の位置が流体放出手段２１の開口部２１ａ上端の位置より上側になるように保持しているので、各ウエル１３内を流れる抗体含有溶液の液面レベルは、流体回収手段２２の開口部２２ａ下端の位置となる。
ここで上記液面レベルが各ウエル１３底面に固定されている１次抗体Ｉｇ１と結合した抗原Ａｇと結合した２次抗体Ｉｇ２が２次抗体含有溶液により完全に浸漬される高さとなるように流体回収手段２２の開口部２２ａの下端の位置を設定しておくことにより、１次抗体Ｉｇ１と結合した抗原Ａｇと抗体抗原反応をする２次抗体Ｉｇ２は、結合反応中空気には接触しない。

【0087】

すなわち、１次抗体Ｉｇ１と結合した抗原Ａｇと２次抗体Ｉｇ２とを抗体抗原反応により結合させる場合、手順（１）における流体放出手段２１、流体回収手段２２のセッティングは、流体回収手段２２の開口部２２ａの下端の位置、流体放出手段２１の開口部２１ａの位置が上記したような位置に設定されるように行われる。

【0088】

（８）ＰＢＳによるウエル１３内洗浄
ある一定時間経過し、１次抗体Ｉｇ１と結合した抗原Ａｇと酵素標識された２次抗体Ｉｇ２との抗体抗原反応が完了したあと、制御部６０は、複数の制御バルブ４２のうち、ＳＡＢ配管系統に属する制御バルブ４２の流路をｂ−ｃ流路に切り替えるとともに、ＰＢＳ配管系統に属する制御バルブ４２の流路をａ−ｃ流路に切り替える。
なお、上記した抗体抗原反応が完了するまでの抗原含有溶液が各ウエル１３内を流れる時間（上記したある一定時間）、ＳＡＢ配管系統およびＰＢＳ配管系統に属する制御バルブ４２の流路切替のタイミングは、予め制御部６０に記憶されているものとする。

【0089】

このような流路切替により、分注排出部２４の流体回収手段２２の開口部２２ａからマイクロプレート１０の各ウエル１３内に残留している２次抗体含有溶液が吸引されるとともに、ＰＢＳがＰＢＳ配管系統に属する制御バルブ４２のａ−ｃ流路、その他の制御バルブ４２のｂ−ｃ流路、温度制御部３１、試薬溶液注入管２６を経由して分注排出部２４の流体放出手段２１の開口部２１ａからマイクロプレート１０の各ウエル１３内に流入する。

【0090】

以上の手順により、図９（ｈ）に示すように、各ウエル１３内に残留していた抗体抗原反応に寄与しなかった２次抗体Ｉｇ２は、ＰＢＳとともに試薬溶液排出管２７により外部へ排出される。

【0091】

ジョイント２８ｃは、複数組の流体放出手段２１および流体回収手段において、流体回収手段２２の開口部２２ａの下端の位置が流体放出手段２１の開口部２１ａ上端の位置より上側になるように保持しているので、流路内を流れるＰＢＳの液面レベルは、流体回収手段２２の開口部２２ａ下端の位置となる。この液面レベルは、１次抗体Ｉｇ１と結合した抗原と結合した２次抗体がＰＢＳにより完全に浸漬される高さに設定してあるので、各ウエル１３底面に固定される抗体は空気には接触しない。

【0092】

（９）酵素反応溶液の注入
洗浄が一定時間行われたあと、制御部６０は、複数の制御バルブ４２のうち、ＰＢＳ配管系統に属する制御バルブ４２の流路をｂ−ｃ流路に切り替えるとともに、酵素反応溶液を貯蔵する酵素反応溶液貯蔵部４１ｅに繋がる配管系統（ＥＲＳ配管系統）に属する制御バルブ４２の流路をａ−ｃ流路に切り替える。
なお、ＰＢＳでの洗浄時間（上記した一定時間）、ＰＢＳ配管系統およびＥＲＳ配管系統に属する制御バルブ４２の流路切替のタイミングは、予め制御部６０に記憶されているものとする。

【0093】

このような流路切替により、分注排出部２４の流体回収手段２２の開口部２２ａからマイクロプレート１０の各ウエル１３内の残留しているＰＢＳが吸引されるとともに、酵素反応溶液がＥＲＳ配管系統に属する制御バルブ４２のａ−ｃ流路、ＲＳ配管系統に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路、温度制御部３１、試薬溶液注入管２６を経由して分注排出部２４の流体放出手段２１の開口部２１ａからマイクロプレート１０の各ウエル１３内に流入する。
なお、ＰＢＳ貯蔵部４１ａと接続されている制御バルブ４２のｂポートには封止用の栓が接続されているので、抗原含有溶液は、ＳＡＢ配管系統に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路側、ＡＣ配管系統に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路側、ＰＡＢ配管系統に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路側、およびＰＢＳ配管系統に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路側には流れない。

【0094】

以上の手順により、図１０（ｉ）に示すように、分注排出部２４の流体放出手段２１の開口部２１ａからマイクロプレート１０の各ウエル１３内に注入された酵素反応溶液は、当初は酵素反応溶液流入前に各ウエル１３内に残存するＰＢＳと混合されながら各ウエル１３を通過し、分注排出部２４の流体回収手段２２の開口部２２ａから各ウエル１３外部へと排出され廃液槽５２に送られる。やがて、徐々にＰＢＳの濃度は減少し、最終的にはほぼ酵素反応溶液からなる流れが各ウエル１３内にて発生する。

【0095】

酵素反応溶液は、酵素と酵素反応を発生して反応生成物となる。ここでは、酵素反応により蛍光を発生する酵素反応溶液を用いることにする。
すなわち、酵素と酵素反応を起こした酵素反応溶液は、蛍光を発生する反応生成物となり酵素近傍で蛍光を発生する。
なお、酵素反応溶液の液面レベルは、１次抗体Ｉｇ１と結合した抗原Ａｇと結合した２次抗体Ｉｇ２がＰＢＳにより完全に浸漬される高さとなるので、酵素反応溶液と酵素反応を起こす酵素は空気には接触しない。

【0096】

（１０）反応停止液の注入
酵素と酵素反応液との酵素反応が一定時間行われたあと、制御部６０は、複数の制御バルブ４２のうち、ＥＲＳ配管系統に属する制御バルブ４２の流路をｂ−ｃ流路に切り替えるとともに、反応停止液を貯蔵する反応停止液貯蔵部４１ｆに繋がる配管系統（ＲＳ配管系統）に属する制御バルブ４２の流路をａ−ｃ流路に切り替える。
なお、酵素反応時間（上記した一定時間）、ＥＲＳ配管系統およびＲＳ配管系統に属する制御バルブ４２の流路切替のタイミングは、予め制御部６０に記憶されているものとする。上記した酵素反応時間は、例えば、３０分〜数時間の値に設定される。

【0097】

このような流路切替により、分注排出部２４の流体回収手段２２の開口部２２ａからマイクロプレート１０の各ウエル１３内の残留している酵素反応溶液が吸引されるとともに、反応停止液がＲＳ配管系統に属する制御バルブ４２のａ−ｃ流路、温度制御部３１、試薬溶液注入管２６を経由して分注排出部２４の流体放出手段２１の開口部２１ａからマイクロプレート１０の各ウエル１３内に流入する。なお、ＰＢＳ貯蔵部４１ａと接続されている制御バルブ４２のｂポートには封止用の栓が接続されているので、抗原含有溶液は、ＥＲＳ配管系統に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路側、ＳＡＢ配管系統に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路側、ＡＣ配管系統に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路側、ＰＡＢ配管系統に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路側、およびＰＢＳ配管系統に属する制御バルブ４２のｂ−ｃ流路側には流れない。

【0098】

以上の手順により、図１０（ｊ）に示すように、分注排出部２４の流体放出手段２１の開口部２１ａからマイクロプレート１０の各ウエル１３内に注入された酵素反応溶液は、当初は反応停止液流入前に各ウエル１３内に残存する酵素反応溶液と混合されながら各ウエル１３を通過し、分注排出部２４の流体回収手段２２の開口部２２ａから各ウエル外部へと排出され廃液槽５２に送られる。やがて、徐々に酵素反応溶液の濃度は減少し、最終的にはほぼ反応停止液からなる流れが各ウエル１３内にて発生する。

【0099】

反応停止液は、酵素反応を停止させるものである。反応停止液を加えることにより、蛍光が安定する。
なお、反応停止液の液面レベルは、１次抗体Ｉｇ１と結合した抗原Ａｇと結合した２次抗体Ｉｇ２がＰＢＳにより完全に浸漬される高さとなるので、酵素反応の停止は、空気には接触せず行われる。

【0100】

上記した（５）〜（１０）の手順により、マイクロプレート１０の各ウエル１３の底面に固定された抗原が供給され、抗体抗原反応を発生し、ＥＬＩＳＡ法のサンドイッチ法に基づき酵素反応による蛍光を発生させることができる。すなわち、抗原測定が可能な状態となる。
上記した手順から明らかなように、手順（５）における１次抗体抗原反応は、各ウエル１３底面に固定されている１次抗体Ｉｇ１に空気が接触することなく行われる。また、手順（６）における流路内に残留していた抗体抗原反応に寄与しなかった抗原の排出も１次抗体Ｉｇ１に空気が接触することなく行われる。
同様に、手順（７）における次抗体抗原反応は、各ウエル１３内の１次抗体抗原、２次抗体が空気に接触することなく行われる。また、手順（８）における各ウエル１３内に残留していた２次抗体抗原反応に寄与しなかった２次抗体Ｉｇ２の排出、手順（９）における酵素反応、手順（１０）における酵素反応停止も各ウエル１３内の１次抗体Ｉｇ２、抗原Ａｇ、２次抗体Ｉｇ２が空気に接触することなく行われる。
これは、上記したように、各ウエル１３内を流れる試薬の液面レベルが、１次抗体Ｉｇ１と結合した抗原Ａｇと結合した２次抗体Ｉｇ２が当該試薬により完全に浸漬される高さとなるように流体回収手段２２の開口部２２ａの下端の位置を設定したためである。

【0101】

すなわち、本発明のマイクロプレート１０を用いた試薬供給装置は、マイクプレートの試薬配置領域に、空気を接触させることなく抗原や２次抗体を供給することが可能となる。すなわち、マイクロプレート１０の各ウエル１３の底面に固定されている１次抗体を失活させることなく１次抗原抗体反応を発生させることや、２次抗体を失活させることなく２次抗原抗体反応を発生させることが可能となる。

【0102】

また、マイクロプレート１０の各ウエル１３への試薬の供給は、制御部６０、試薬注入機構、試薬回収機構５０により機械的に実施しているので、ばらつき無く安定にマイクロプレート１０の各ウエル１３への試薬の供給を行うことができる。

【0103】

（１１）注射針状流体放出手段２１、注射針状流体回収手段２２のマイクロプレート１０からの離脱
反応停止液注入が一定時間行われたあと、制御部６０は、ＲＳ配管系統に属する制御バルブ４２の流路をｂ−ｃ流路に切り替える。なお、反応停止液の注入時間（上記した一定時間）、ＲＳ配管系統に属する制御バルブ４２の流路切替のタイミングは、予め制御部６０に記憶されているものとする。

【0104】

次いで制御部６０はポンプ５１の駆動を停止する。これにより、マイクロプレート１０の流路内におけるほぼ反応停止液からなる流れが停止する。上記したように、分注排出部２４の流体回収手段２２（注射針状流体回収手段）の開口部の下端の位置は、分注排出部２４の流体放出手段２１（注射針状流体放出手段）の開口部上端の位置より上側になるようにセットされているので、各ウエル１３内の反応停止液の液面レベルは、流体回収手段２２の開口部２２ａ下端の位置となる。
ここで上記液面レベルが１次抗体と結合した抗原と結合した２次抗体が反応停止液により完全に浸漬される高さとなるように流体回収手段２２の開口部２２ａの下端の位置が設定されているので、１次抗体抗原、２次抗体は空気には接触しない。

【0105】

制御部６０の指令に基づき、分注排出部駆動機構２３は、分注排出部２４の複数組の流体放出手段２１および流体回収手段２２を所定の位置まで上側に駆動する。図１０（ｋ）に示すように、この駆動により、複数組の流体放出手段２１の開口部２１ａおよび流体回収手段２２の開口部２２ａは、マイクロプレート１０の各ウエル１３を離脱する。なお、上記した所定の位置とは、分注排出部２４の複数組の流体放出手段２１および流体回収手段２２がマイクロプレート１０の各ウエル１３の開口１３ａに設けられた板状体１６における板状部材１５の薄板部１５ａと自己修復性封止材１４を経由して完全にマイクロプレート１０から離脱するような位置である。

【0106】

なお、マイクロプレート１０の板状体１６における板状部材１５の薄板部１５ａと自己修復性封止材１４を貫通していた流体放出手段２１、流体回収手段２２が自己修復性封止材１４を経由して離脱しても、自己修復性封止材１４は力が印加されると変形し、力の印加を解除すると力の印加前の形状に戻る性質があるので、前記板状体１６における板状部材１５の薄板部１５ａと自己修復性封止材１４を貫通、離脱する流体放出手段２１、流体回収手段２２により薄板部１５ａに生じる孔は維持されるものの、前記自己修復性封止材１４に生じる孔は速やかに閉塞される。よって、流体放出手段２１、流体回収手段２２が自己修復性封止材１４を離脱後も各ウエル１３内への外部からの空気の流入は防止される。

【0107】

温調ステージ３５に載置されていたマイクロプレート１０が、抗原状態を測定するために各ウエル１３内での蛍光の測定するためのマイクロプレートリーダーへ搬出される。なお、マイクロプレートリーダーへのマイクロプレート１０の搬出は作業者が行っても良いし、図示を省略した公知の搬送機構を用いてもよい。なお、搬送機構を用いる場合、搬送機構の制御は上記した制御部６０が行ってもよい。搬出されたマイクロプレート１０は、自己修復性封止シート１５が剥がされてマイクロプレートリーダーの測定領域に設置される。

【0108】

引き続き、次なるマイクロプレート１０への抗体固定等を行わない場合、温調ステージ３５の温度制御部３２は、制御部６０の指令に基づき、温調ステージ３５の温度制御を停止する。同様に、制御部６０の指令に基づき、図５に示す温度制御部３１は、温度制御部３１の配管の温度制御を停止する。

【0109】

なお、上記説明では、マイクロプレート１０への試薬の供給を制御部６０の制御により、自動的に行う場合について説明したが、上記手順の操作の一部あるいは全部を人がマニュアルで行うようにしてもよい。

【符号の説明】

【0110】

１０ マイクロプレート
１１ 第１のマイクロプレート基板
１２ 第２のマイクロプレート基板
１３ ウエル
１３ａ 開口
１４ 自己修復性封止材（粘着性ゲル）
１５ シリコーン樹脂（板状部材）
１５ａ 薄板部
１５ｂ 窪み
１６ 板状体
２０ 試験体保持機構
２１ 流体放出手段（注射針状流体放出手段）
２１ｂ，２２ｂ 先端部
２１ｃ，２２ｃ 円筒部
２２ 流体回収手段（注射針状流体回収手段）
２３ 分注排出部駆動機構
２４ 分注排出部
２４ａ 流体放出用マニホールド
２４ｂ 流体回収用マニホールド
２４ｃ 流体放出用配管
２４ｄ 流体回収用配管
２５ 分注排出機構
２６ 試薬溶液注入管
２７ 試薬溶液排出管
２８ａ ジョイント
２８ｂ ジョイント
２８ｃ ジョイント
３１ 温度制御部
３２ 温度制御部
３３ 温度制御部
３４ 温度制御部
３５ 温調ステージ
４０ 試薬供給機構
４１ 試薬貯蔵部
４１ａ ＰＢＳ貯蔵部
４１ｂ １次抗体含有溶液貯蔵部
４１ｃ 抗原含有溶液貯蔵部
４１ｄ ２次抗体含有溶液貯蔵部
４１ｅ 酵素反応溶液貯蔵部
４１ｆ 反応停止液貯蔵部
４２ 制御バルブ
５０ 試薬回収機構
５１ ポンプ
５２ 廃液槽
６０ 制御部
７１ 第１の金型
７２ 第２の金型
７３ 保護用シート

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】