特許 5985474 抗増殖特性を有する新規４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の調製プロセス

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5985474

(24)【登録日】2016年8月12日

(45)【発行日】2016年9月6日

(54)【発明の名称】抗増殖特性を有する新規４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の調製プロセス

(51)【国際特許分類】

   C07D 498/18 20060101AFI20160823BHJP

   A61K 31/436 20060101ALI20160823BHJP

   A61K 47/10 20060101ALI20160823BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20160823BHJP

   A61K 47/14 20060101ALI20160823BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20160823BHJP

   A61L 31/00 20060101ALI20160823BHJP

   A61P 7/02 20060101ALI20160823BHJP

【ＦＩ】

   C07D498/18CSP

   A61K31/436

   A61K47/10

   A61K47/22

   A61K47/14

   A61K47/12

   A61L31/00

   A61P7/02

【請求項の数】20

【全頁数】48

(21)【出願番号】特願2013-522344(P2013-522344)

(86)(22)【出願日】2011年8月2日

(65)【公表番号】特表2013-536182(P2013-536182A)

(43)【公表日】2013年9月19日

(86)【国際出願番号】IN2011000508

(87)【国際公開番号】WO2012017449

(87)【国際公開日】20120209

【審査請求日】2014年7月16日

(31)【優先権主張番号】299/MUM/2010

(32)【優先日】2010年8月4日

(33)【優先権主張国】IN

(73)【特許権者】

【識別番号】513026388

【氏名又は名称】メリル ライフ サイエンシズ ピーブィティ．エルティディ

(74)【代理人】

【識別番号】110000659

【氏名又は名称】特許業務法人広江アソシエイツ特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ラン，ダナンジャイ，シャラド

(72)【発明者】

【氏名】ヴィヤース，ラジニカーント，ガンダラール

(72)【発明者】

【氏名】ミノチャ，プラモド，クマー

【審査官】 東 裕子

(56)【参考文献】

【文献】 特開２００７−２６２０５７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表平０９−５０５２９９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表平０９−５１２０１８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００２−５３１５２７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００３−５３３４９３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第９８／００９９７２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 米国特許出願公開第２００５／０１０１６２４（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 米国特許第０５１５１４１３（ＵＳ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（１）の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物：

【化1】

（式（１）中のＲは、テトラヒドロフラン−３−イル、オキセタン−３−イル、テトラヒドロピラン−３−イル、テトラヒドロ−４−メチルフラン−３−イル、テトラヒドロ−２，５，５−トリメチルフラン−３−イル、テトラヒドロ−２，５−ジエチル−２−メチルフラン−３−イル、テトラヒドロ−６−メトキシ−２−メチル２Ｈ−ピラン−３−イルおよびテトラヒドロ−２，２−ジメチル−６−フェニル２Ｈ−ピラン−３−イルから選択される４、５または６員３−ヒドロキシヘテロアルコキシアルキル化合物由来の１価の基を示す。）

【請求項2】

４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−１）；
４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−２）；
４２−Ｏ−（テトラヒドロピラン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−３）；
４２−Ｏ−（４−メチル，テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン；
４２−Ｏ−（２，５，５−トリメチル，テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン；
４２−Ｏ−（２，５−ジエチル−２−メチル，テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン；
４２−Ｏ−（２Ｈ−ピラン−３−イル，テトラヒドロ−６−メトキシ−２−メチル）ラパマイシンおよび
４２−Ｏ−（２Ｈ−ピラン−３−イル，テトラヒドロ−２，２−ジメチル−６−フェニル）ラパマイシン
から成る群より選択される、請求項１に記載の式（１）の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物。

【請求項3】

４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−１）である、請求項２に記載の式（１）の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物。

【請求項4】

４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−２）である、請求項２に記載の式（１）の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物。

【請求項5】

４２−Ｏ−（テトラヒドロピラン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−３）である、請求項２に記載の式（１）の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物。

【請求項6】

ａ）ラパマイシンとトリフルオロメタンスルホン酸無水物とを有機塩基およびハロゲン化有機溶媒の存在下で反応させてトリフラート中間体を得ること；および
ｂ）前記トリフラート中間体とテトラヒドロフラン−３−オール、オキセタン−３−オール、テトラヒドロピラン−３−オール、テトラヒドロ−４−メチルフラン−３−オール、テトラヒドロ−２，５，５−トリメチルフラン−３−オール、テトラヒドロ−２，５−ジエチル−２−メチルフラン−３−オール、テトラヒドロ−６−メトキシ−２−メチル２Ｈ−ピラン−３−オールおよびテトラヒドロ−２，２−ジメチル−６−フェニル２Ｈ−ピラン−３−オールから選択される４、５または６員３−ヒドロキシヘテロアルコキシアルキル化合物とをトリアルキルアミンおよびハロゲン化有機溶媒の存在下で反応させて、４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を得ること；および
ｃ）前記４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を精製すること
を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の式（１）の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の製造方法。

【請求項7】

有機塩基が、ピリジンまたはその誘導体から選択され、１ｍｏｌのラパマイシンにつき３〜１５ｍｏｌの量で使用される、請求項６に記載の製造方法。

【請求項8】

１ｍｏｌの４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物につき、前記トリフルオロメタンスルホン酸無水物を１〜１０ｍｏｌの量で使用して、４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物のトリフラート中間体を得る、請求項６に記載の製造方法。

【請求項9】

不活性有機溶媒が、ハロゲン化有機溶媒から選択され、１重量部のラパマイシンに対して１０〜３０重量部の量で使用される、請求項６に記載の製造方法。

【請求項10】

トリアルキルアミンが、Ｎ，Ｎ−ジ−イソプロピルエチルアミンまたはＮ，Ｎ−ジ−ｎ−ブチルエチルアミンから選択され、１ｍｏｌのラパマイシンにつき５〜２０ｍｏｌの量で反応に使用される、請求項６に記載の製造方法。

【請求項11】

３−ヒドロキシヘテロアルコキシアルキル化合物が、オキセタン−３−オール、テトラヒドロフラン−３−オール、テトラヒドロ−４−メチルフラン−３−オール、テトラヒドロ−２，５，５−トリメチルフラン−３−オール、テトラヒドロ−２，５−ジエチル−２−メチルフラン−３−オール、テトラヒロドピラン−３−オール、テトラヒドロ−６−メトキシ−２−メチル２Ｈ−ピラン−３−オールおよびテトラヒドロ−２，２−ジメチル−６−フェニル２Ｈ−ピラン−３−オールから選択され、１ｍｏｌのラパマイシンにつき１〜７ｍｏｌの量で反応に使用される、請求項６に記載の製造方法。

【請求項12】

保存安定性を向上させるための酸化防止剤の添加により、精製された前記４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物が安定化される、請求項６に記載の製造方法。

【請求項13】

酸化防止剤が、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ＤＬ−α−トコフェロール、没食子酸プロピル、アスコルビン酸パルミテート、３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシアニソール、２−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシアニソールおよびフマル酸から選択され、１００％（ｗ／ｗ）の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物に基づき、０．１％〜１．０％（ｗ／ｗ）の間で使用される、請求項１２に記載の製造方法。

【請求項14】

請求項１〜５のいずれか１項に記載の式（１）の化合物とともに１つ以上の製薬用担体を含む、経口的に、非経口的に、静脈内的にまたは植込み型医療装置により投与可能な医薬組成物。

【請求項15】

経口形態、注射剤形態および植込み型医療装置形態といった形態で製剤化される、請求項１４に記載の医薬組成物。

【請求項16】

前記植込み型医療装置が、ステントおよびバルーンカテーテルである、請求項１５に記載の医薬組成物。

【請求項17】

１つ以上の製薬用担体と会合している請求項１〜５のいずれか１項に記載の式（１）の化合物を含み、経口的に、非経口的に、静脈内的に、または１つ以上の製薬用担体と会合している式１の化合物を含浸させた植込み型医療装置によって投与される、哺乳動物における再狭窄および血管閉塞から成る群より選択される高増殖性血管疾患を治療するための医薬組成物。

【請求項18】

前記高増殖性血管疾患が再狭窄である、請求項１７に記載の医薬組成物。

【請求項19】

１つ以上の製薬用担体と会合している請求項１〜５のいずれか１項に記載の式（１）の化合物を含み、経口的に、非経口的に、静脈内的に、または１つ以上の製薬用担体と会合している式１の化合物を含浸させた植込み型医療装置によって投与される、血管損傷／炎症を修復するための医薬組成物。

【請求項20】

高増殖性血管疾患の処置のための医薬品を調製するための、請求項１〜５のいずれか１項に記載の式（１）の化合物の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、新規４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシンならびにそれらの製造方法、それらの生体適合性および抗増殖特性に関する。

【背景技術】

【0002】

ラパマイシンおよびその誘導体の一部に関する文献、具体的には再狭窄を制御する処置に使用されるそれらに関する文献を再調査することで、本発明者らは、経皮経管冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）後に再狭窄の制御が、最も重要な制限事項の１つとして依然として存続することを見出した。早期成功にもかかわらず初回ＰＴＣＡ後の再狭窄の発生率は３０％と５０％の間であるが、数年後にはそれが２０〜３０％に低下される（Ｈａｍｏｎ，Ｍ．ら、「Ｄｒｕｇ Ｔｈｅｒａｐｙ」、第４巻、１９９８年、ｐ．２９１−３０１；Ｂａｕｔｅｒｓ Ｃ．ら、「Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｈｅａｒｔ Ｊｏｕｒｎａｌ」、１６巻、１９９５年、ｐ．３３４８）。新内膜過形成および血管リモデリングがＰＴＣＡ後の再狭窄について考えられる２つの主要構成プロセスであり、このプロセスの中で新内膜過形成が最初に起こり、その後、血管リモデリングが発生する（Ｈｏｆｆｍａｎ，Ｒ．ら、「Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ」、第９４巻、１９９６年、ｐ．１２４７−１２５４；Ｏｅｓｔｅｒｌｅ，Ｓ．ら、「Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｈｅａｒｔ Ｊｏｕｒｎａｌ」、第１３６巻、１９９８年、ｐ．５７８−５９９、Ｋｅｎｎｅｔｈ Ｇ．ら、「Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ ｃｏｌｌａｇｅ ｏｆ ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ」、第３５巻、２０００年、ｐ．５８３−５９１）。

【0003】

血管リモデリングプロセス制御アプローチを用いることで、再狭窄を無くすまたは低減するべきである。これは、ＰＴＣＡ手技後の動脈血管の狭窄した管腔に金属ステントを植え込むことによって巧みに行うことができる。冠動脈ステントは、小さな管状の足場であり、血管形成術後の弱った血管の急性再閉塞または崩壊を防ぐために広く用いられている。ステントは、今や全介入症例の７０から８０％において定常的に植え込まれている（Ｅｍａｎｕｅｌｅ Ｂ．ら、「Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｈｅａｒｔ Ｊｏｕｒｎａｌ」、第２４巻、２００３年、ｐ．３９４−４０３、Ｓｃｈｌｕｔｅｒ Ｌ．ら著、「Ｋａｒｄｉｏｖａｓｋ Ｍｅｄ．」、第７巻、２００５年、ｐ．６１−７０）。

【0004】

この成功にもかかわらず、再狭窄の問題は、まだ完全には理解または克服されていない（Ｈａｍｏｎ，Ｍ．ら、「Ｄｒｕｇ Ｔｈｅｒａｐｙ」、第４巻、１９９８年、ｐ．２９１−３０１；Ｏｅｓｔｅｒｌｅ，Ｓ．ら、「Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｈｅａｒｔ Ｊｏｕｒｎａｌ」、第１３６巻、１９９８年、ｐ．５７８−５９９）。バルーン血管形成術およびステント植込み手技中の標的血管の損傷は、多くの場合、血栓形成および細胞増殖をはじめとする過剰な治癒応答を誘導し、最終的にステント内再狭窄につながる。多くの患者が経験する血管形成術およびステント留置後のステント内部管腔の最終的再狭小化（すなわち、再狭窄）の解決が依然として必要とされている（（Ｌａｌｌｙ Ｃ．ら、「Ｗｉｌｅｙ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ」、２００６年）；（Ｐｅｔｅｒ Ｊ．ら、「Ｒｅｖ．Ｅｓｐ．Ｃａｒｄｉｏｌ．」、第６１巻、２００８年、ｐ．１００１−１００６））。

【0005】

この問題は、様々な出版物において言及されているように、抗増殖薬、例えばパクリタキセル、ラパマイシンおよびその類似体、の使用によって対処されている。一般に、パクリタキセル薬のファミリーは細胞傷害特性を有するので、薬剤溶出ステントの使用への適用が制限される。一方、薬物ラパマイシンおよびその類似体は、この用途に広く用いられており、事実上、非細胞傷害性（細胞増殖抑制性）である。

【0006】

今日まで薬理作用の作用強度および特異性を増やそうと、ラパマイシンの様々な構造特徴が修飾されてきた。本発明者らは、多数の米国特許を見つけた、例えば、米国特許第７，２２０，７７５号明細書には、４２−Ｏ−アルコキシアルキルラパマイシン誘導体およびそれらを含む組成物が開示されており、米国特許第７，２２０，７７５号明細書には、ラパマイシンの３６−ＤＥＳ（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）誘導体が開示されており、米国特許第７，８１２，１１５号Ｂ２明細書には、４２位にノルマル立体化学を有するＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体の調製プロセスが開示されている。ＰＣＩ公開出願（米国特許出願公開）第２０１０／０２４９４１５号Ａ１明細書には、テムシロシムスの調製プロセスが開示されている。

【0007】

ラパマイシンのいくつかの化学修飾が、近年試みられている。これらとしては、２００７年３月の米国特許第７，１９３，０７８号Ｂ２明細書におけるＭａｓａｓｈｉ ＩｓｏｚａｋｉによるＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体の調製；２００７年１０月の米国特許第７，２７９，５７１号Ｂ２明細書におけるＶｉｋｔｏｒ Ｇｙｏｌｌａｉによるピメクロリムス、ラパマイシン誘導体；２０１０年８月の米国特許出願公開第２０１０／０２０４４６６号Ａ１明細書におけるＭａｄｈｕｐ Ｄｈａｏｎによるラパマイシンのテトラゾール誘導体；および２０１１年１月の米国特許第７，８７２，１２２号Ｂ２明細書におけるＫｗａｎｇ−Ｃｈｕｎｇ Ｌｅｅによるアルキルベンゼンスルホネートラパマイシン誘導体が挙げられる。しかし、これらの試みは製造プロセスに限定されたものであり、これらの誘導体のさらなる作用強度研究は完了していない。そのため、改善された抗増殖特性を有するラパマイシン誘導体についてのアンメットニーズが依然存在する。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0008】

【特許文献1】米国特許第７，２２０，７７５号明細書

【特許文献2】米国特許出願公開第２００９／０２０９５７２号明細書

【特許文献3】米国特許第７，８１２，１１５号Ｂ２明細書

【特許文献4】ＰＣＩ公開出願（米国特許出願公開）第２０１０／０２４９４１５号Ａ１明細書

【特許文献5】米国特許第７，１９３，０７８号Ｂ２明細書

【特許文献6】米国特許第７，２７９，５７１号Ｂ２明細書

【特許文献7】米国特許出願公開第２０１０／０２０４４６６号Ａ１明細書

【特許文献8】米国特許第７，８７２，１２２号Ｂ２明細書

【非特許文献】

【0009】

【非特許文献1】Ｈａｍｏｎ，Ｍ．ら、「Ｄｒｕｇ Ｔｈｅｒａｐｙ」、第４巻、１９９８年、ｐ．２９１−３０１

【非特許文献2】Ｂａｕｔｅｒｓ Ｃ．ら、「Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｈｅａｒｔ Ｊｏｕｒｎａｌ」、１６巻、１９９５年、ｐ．３３４８

【非特許文献3】Ｈｏｆｆｍａｎ，Ｒ．ら、「Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ」、第９４巻、１９９６年、ｐ．１２４７−１２５４

【非特許文献4】Ｏｅｓｔｅｒｌｅ，Ｓ．ら、「Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｈｅａｒｔ Ｊｏｕｒｎａｌ」、第１３６巻、１９９８年、ｐ．５７８−５９９

【非特許文献5】Ｋｅｎｎｅｔｈ Ｇ．ら、「Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ ｃｏｌｌａｇｅ ｏｆ ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ」、第３５巻、２０００年、ｐ．５８３−５９１

【非特許文献6】Ｅｍａｎｕｅｌｅ Ｂ．ら、「Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｈｅａｒｔ Ｊｏｕｒｎａｌ」、第２４巻、２００３年、ｐ．３９４−４０３

【非特許文献7】Ｓｃｈｌｕｔｅｒ Ｌ．ら著、「Ｋａｒｄｉｏｖａｓｋ Ｍｅｄ．」、第７巻、２００５年、ｐ．６１−７０

【非特許文献8】Ｌａｌｌｙ Ｃ．ら、「Ｗｉｌｅｙ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ」、２００６年

【非特許文献9】Ｐｅｔｅｒ Ｊ．ら、「Ｒｅｖ．Ｅｓｐ．Ｃａｒｄｉｏｌ．」、第６１巻、２００８年、ｐ．１００１−１００６

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0010】

したがって、本発明の目的は、抗増殖剤として有用であり、対応する４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物になるように４２位のヒドロキシル基が修飾されたラパマイシンの一般構造を有する、ラパマイシンの新規化合物、およびそれらの調製方法を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0011】

上の目的に従って、本発明は、対応する４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物になるように４２位のヒドロキシル基が修飾されたラパマイシンの新規化合物、およびそれらの調製方法を提供する。

【0012】

１つの態様に従って、本発明は、式１の新規４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を提供する。

【0013】

【化1】

【0014】

この式中のＲは、３、４および５員３−ヒドロキシヘテロアルコキシアルキル化合物：テトラヒドロフラン−３−オール、オキセタン−３−オール、テトラヒドロピラン−３−オール、テトラヒドロ−４−メチルフラン−３−オール、テトラヒドロ−２，５，５−トリメチルフラン−３−オール、テトラヒドロ−２，５−ジエチル−２−メチルフラン−３−オール、テトラヒドロピラン−３−オール、テトラヒドロ−６−メトキシ−２−メチル２Ｈ−ピラン−３−オールおよびテトラヒドロ−２，２−ジメチル−６−フェニル２Ｈ−ピラン−３−オールを示す。

【0015】

したがって、１つの好ましい実施形態において、Ｒは、本明細書ではＭｅｒｉｌｉｍｕｓ−１と呼ぶ４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン化合物に到達するために、テトラヒドロフラン−３−オールである。

【0016】

もう１つの好ましい実施形態において、Ｒは、本明細書ではＭｅｒｉｌｉｍｕｓ−２と呼ぶ４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン化合物に到達するために、オキセタン−３−オールである。

【0017】

さらにもう１つの好ましい実施形態において、Ｒは、本明細書ではＭｅｒｉｌｉｍｕｓ−３と呼ぶ４２−Ｏ−（テトラヒドロピラン−３−イル）ラパマイシン化合物に到達するために、テトラヒドロピラン−３−オールである。

【0018】

もう１つの実施形態において、Ｒは、４２−Ｏ−（４−メチル，テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン化合物に到達するために、３−フラノール，テトラヒドロ−４−メチル−である。

【0019】

さらにもう１つの実施形態において、Ｒは、４２−Ｏ−（２，５，５−トリメチル，テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン化合物に到達するために、３−フラノール，テトラヒドロ−２，５，５−トリメチル−である。

【0020】

もう１つの実施形態において、Ｒは、４２−Ｏ−（２，５−ジエチル−２−メチル，テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン化合物に到達するために、３−フラノール，テトラヒドロ−２，５−ジエチル−２−メチル−である。

【0021】

さらのもう１つの実施形態において、Ｒは、４２−Ｏ−（２Ｈ−ピラン−３−イル，テトラヒドロ−６−メトキシ−２−メチル）ラパマイシン化合物に到達するために、２Ｈ−ピラン−３−オール，テトラヒドロ−６−メトキシ−２−メチル−である。

【0022】

さらにもう１つの実施形態において、Ｒは、４２−Ｏ−（２Ｈ−ピラン−３−イル，テトラヒドロ−２，２−ジメチル−６−フェニル）ラパマイシン化合物に到達するために、２Ｈ−ピラン−３−オール，テトラヒドロ−２，２−ジメチル−６−フェニル−である。

【0023】

もう１つの態様に従って、本発明は、ラパマイシンをトリフル酸（トリフルオロメタンスルホン酸）無水物と反応させてトリフラート中間体を調製すること、さらに、それを３−ヒドロキシヘテロアルコキシアルキル化合物と反応させることにより所望の化合物を生じさせることによる、４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の製造方法を提供する。

【0024】

したがって、一般式（１）によって表される４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の製造方法は、ラパマイシンとトリフル酸無水物とを有機塩基およびハロゲン化有機溶媒の存在下で反応させてトリフラート中間体を調製すること、さらに、それを４、５または６員３−ヒドロキシヘテロアルコキシアルキル化合物とトリアルキルアミンおよび不活性有機溶媒の存在下で反応させることにより４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を生じさせることを含む。

【0025】

本発明による有機塩基をピリジンまたはその誘導体から選択することができる。ピリジン誘導体は、好ましくは２，６−ジメチルピリジンであり、それを１ｍｏｌのラパマイシンにつき３から１５ｍｏｌの量で使用する。

【0026】

トリフル酸無水物は、１ｍｏｌの４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物につき１から１０ｍｏｌの量で使用する。

【0027】

不活性有機溶媒は、ハロゲン化有機溶媒から選択され、それを１重量部のラパマイシンに対して１０から３０重量部の量で使用する。

【0028】

ハロゲン化有機溶媒は、塩化メチレン、二塩化エチレン、クロロベンゼンまたはクロロホルムから成る群より選択される。

【0029】

トリアルキルアミンは、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジ−イソプロピルエチルアミンまたはＮ，Ｎ−ジ−ｎ−ブチルエチルアミンから選択され、それを１ｍｏｌのラパマイシンにつき５から２０ｍｏｌの量で反応に使用する。

【0030】

本発明のための３−ヒドロキシヘテロアルコキシアルキル化合物は、オキセタン−３−オール、テトラヒドロピラン−３−オール、テトラヒドロ−４−メチルフラン−３−オール、テトラヒドロ−２，５，５−トリメチルフラン−３−オール、テトラヒドロ−２，５−ジエチル−２−メチルフラン−３−オール、テトラヒドロピラン−３−オール、テトラヒドロ−６−メトキシ−２−メチル２Ｈピラン−３−オールおよびテトラヒドロ−２，２−ジメチル−６−フェニル２Ｈ−ピラン−３−オールから選択される。

【0031】

３−ヒドロキシヘテロアルコキシアルキル化合物を１ｍｏｌのラパマイシンにつき１から７ｍｏｌの量で反応に使用する。

【0032】

本発明の方法に従って得た粗製４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を、２本の異なるカラムを使用する分取ＨＰＬＣによる二段階精製によって精製する。

【0033】

１重量部の粗製４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物に対して５から２５重量部の量で分取ＨＰＬＣにより第一の精製段階を行い、その後、第二のカラム精製段階を経て、ＨＰＬＣにより少なくとも約９５面積％、さらに好ましくはＨＰＬＣにより少なくとも約９８面積％、の純度を有する４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を得る。

【0034】

本発明のプロセスに従って得た４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を、４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の保存安定性を向上させるための酸化防止剤の添加により、さらに安定させる。

【0035】

好ましい酸化防止剤は、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ＤＬ−α−トコフェロール、没食子酸プロピル、アスコルビン酸パルミテート、３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシアニソール、２−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシアニソールおよびフマル酸から選択される。

【0036】

使用される酸化防止剤は、１００％（ｗ／ｗ）の前記４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物に基づき０．１％から１．０％（ｗ／ｗ）である。

【0037】

さらなる態様では、本発明に従って調製された４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を、それらの生物活性、例えば血液適合性、溶血および細胞傷害性、について試験する。ラパマイシンとの比較で抗増殖効果についての４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の作用強度も評価する。

【0038】

さらにもう１つの態様において、本発明は、１つ以上の製薬用担体／賦形剤と会合している式１の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を含む医薬組成物を提供する。４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を含む医薬組成物は、所望の治療／臨床効果を達成するために様々な製剤に調製することができる。そのような製剤の製造方法は、当分野において周知であり、これらの方法において、活性成分を適する製薬用賦形剤／担体と混合して経口投与、注射剤投与、非経口投与、局所投与に適するまたは植込み型医療装置へのコーティングに適する所望の製剤を生じさせる。

【0039】

さらにもう１つの態様において、本発明は、哺乳動物における再狭窄および血管閉塞から成る群より選択される高増殖性血管疾患を予防または処置する方法を提供し、この方法は、１つ以上の製薬用担体と会合している式１の化合物を前記被験者に経口的に、非経口的に、静脈内的に、または１つ以上の製薬用担体と会合している式１の化合物を含浸させた植込み型医療装置によって投与することによる。

【0040】

さらにもう１つの態様において、本発明は、哺乳動物における動脈再狭窄を予防または処置する方法を提供し、この方法は、１つ以上の製薬用担体と会合している有効量の式１の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物でコーティングされた医療装置を植え込むことによる。

【0041】

さらなる態様において、本発明は、高増殖性血管疾患の処置のための医薬品を調製するための、式１の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の使用を提供する。

【0042】

さらなる態様において、本発明は、動脈再狭窄の処置のための植込み型医療装置へのコーティングのための、式１の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の使用を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0043】

【図1A】ＢＨＴなしで４０℃の温度で１２週間までの様々な４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の安定性に対する熱影響を示す図である。

【図1B】４０℃の温度で８週間までの様々な４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の安定性に対する酸化防止剤（１％ＢＨＴ）の効果を示す図である。

【図2A】４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシンおよび４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物のモル薬物濃度の関数として、対照細胞に対する成長の百分率として表した、ｉｎ−ｖｉｔｒｏヒト平滑筋細胞のｉｎ−ｖｉｔｒｏ細胞増殖を示すプロットを示す図である。

【図2B】４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシンおよび４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン化合物のモル薬物濃度の関数として、対照細胞に対する成長の百分率として表した、ｉｎ−ｖｉｔｒｏウサギ腸骨（Ｉｌｌｉａｃ）平滑筋細胞のｉｎ−ｖｉｔｒｏ細胞増殖を示すプロットを示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0044】

以下、本発明の様々な態様をより十分に理解でき、的確に認識できるように、一定の好ましいおよび自由選択の実施形態に関連して本発明を詳細に説明する。

【0045】

したがって、本発明は、一般構造式（１）の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物、および精製４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を製造するための化学的方法を開示する。

【0046】

【化2】

【0047】

この式中のＲは、テトラヒドロフラン−３−オール、オキセタン−３−オール、テトラヒドロピラン−３−オール、テトラヒドロ−４−メチルフラン−３−オール、テトラヒドロ−２，５，５−トリメチルフラン−３−オール、テトラヒドロ−２，５−ジエチル−２−メチルフラン−３−オール、テトラヒドロ−６−メトキシ−２−メチル２Ｈ−ピラン−３−オールおよびテトラヒドロ−２，２−ジメチル−６−フェニル２Ｈ−ピラン−３−オールから選択される３、４および５員３−ヒドロキシヘテロアルコキシアルキル化合物を示す。

【0048】

したがって、本発明は、式（８）から（１５）の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシンの下記化合物を包含する。

【0049】

１．テトラヒドロフラン−３−オール化合物
式（８）

【化3】

４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−１）

【0050】

２．４−メチル，テトラヒドロフラン−３−オール化合物
式（９）

【化4】

４２−Ｏ−（４−メチル，テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン

【0051】

３．２，５，５−トリメチル，テトラヒドロフラン−３−オール化合物
式（１０）

【化5】

４２−Ｏ−（２，５，５−トリメチル，テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン

【0052】

４．２，５−ジエチル−２−メチル，テトラヒドロフラン−３−オール化合物
式（１１）

【化6】

４２−Ｏ−（２，５−ジエチル−２−メチル，テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン

【0053】

５．オキセタン−３−オール化合物
式（１２）

【化7】

４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−２）

【0054】

６．テトラヒドロピラン−３−オール化合物
式（１３）

【化8】

４２−Ｏ−（テトラヒドロピラン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−３）

【0055】

７．４２−Ｏ−（２Ｈ−ピラン−３−オール，テトラヒドロ−６−メトキシ−２−メチル）化合物
式（１４）

【化9】

４２−Ｏ−（２Ｈ−ピラン−３−イル，テトラヒドロ−６−メトキシ−２−メチル）ラパマイシン

【0056】

８．２Ｈ−ピラン−３−オール，テトラヒドロ−２，２−ジメチル−６−フェニル−化合物
式（１５）

【化10】

４２−Ｏ−（２Ｈ−ピラン−３−イル，テトラヒドロ−２，２−ジメチル−６−フェニル）ラパマイシン

【0057】

もう１つの実施形態において、本発明は、４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン化合物についてのプロセスを記載する。

【0058】

本発明のプロセスに従って、式（４）のピリジン誘導体の有機塩基を触媒として使用し、ハロゲン化有機溶媒の存在下で式（２）の出発反応物ラパマイシンを式（３）のトリフルオロメタンスルホン酸無水物と反応させて、式（５）のトリフラート中間体を得る。この中間体を、式（７）のアルキルアミンおよびハロゲン化有機溶媒の存在下、式（６ａ）、（６ｂ）または（６ｃ）の４、５または６員３−ヒドロキシヘテロアルコキシアルキル化合物での置換反応にさらに付して、一般式（１）の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を得、それらを分離し、２段階のカラム精製プロセスに通して精製化合物（８〜１５）を得る。このようにして得た精製４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物（８〜１５）は、室温で多少不安定であることが認められるので、アセトン中のフェノール系酸化防止剤、例えばＢＨＴ（２，６−ジ−ｔ−ブチル−４−メチルフェノール、ブチルヒドロキシトルエン）、の添加によってそれらを安定させる。その後、この均質混合物を単離し、凍結乾燥によって乾燥させて、最終固体誘導体を得る。

【0059】

関連反応物、塩基、溶媒および生成物についての式、定義および詳細な説明を、次のようにさらに説明する。

【0060】

ラパマイシン
本明細書において用いる場合のラパマイシンは、次の式によって表される構造を有する出発反応物である。

【0061】

式（２）

【化11】

【0062】

アルキルトリフラート
前記アルキルトリフラートは、トリフルオロメタンスルホン酸無水物である、本発明による１つの方法。

【0063】

式（３）

【化12】

これは、本発明の反応にとって有益である高い安定性、高い活性および妥当な取り扱いやすさをもたらす。それを室温で保存することができる。

【0064】

有機塩基
有機塩基を触媒として使用し、式（４）のピリジン誘導体から選択することができる。

【0065】

式（４）

【化13】

式中のＲ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７およびＲ_８は、それぞれ独立して、水素およびＣ_１〜Ｃ_１０アルキル置換基から選択される。

【0066】

本発明の方法において、前記ピリジン誘導体は、２，６−ジメチルピリジンが挙げられる。

【0067】

【化14】

【0068】

有機溶媒
有機溶媒は、ハロゲン化アルキル、および塩化エチレン、塩化メチレン、クロロベンゼンまたはクロロホルムから選択される他の適する不活性ハロゲン化有機溶媒から選択することができる。

【0069】

トリフラート中間体
式（５）

【化15】

４２−Ｏ−（トリフルオロメチルスルホニル）ラパマイシン

【0070】

トリフルオロメタンスルホン酸無水物をトリフラート基の調製に選択する場合には、それを式（６ａ）、（６ｂ）または（６ｃ）の３−ヒドロキシヘテロアルコキシアルキル化合物の分子と反応させて、式中のＲが下に示すような式（６ａ）、（６ｂ）または（６ｃ）の４、５および６員３−ヒドロキシヘテロアルコキシアルキル化合物から選択される式（１）の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を得る。

【0071】

４員環
式（６ａ）

【化16】

オキセタン−３−オール

【0072】

５員環
式（６ｂ）

【化17】

【0073】

６員環
式（６ｃ）

【化18】

【0074】

トリアルキルアミン
式（７）

【化19】

式中のＲ_１、Ｒ_２およびＲ_３はそれぞれ、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル置換基からそれぞれ選択され、本発明の方法において、前記トリアルキルアミンは、Ｎ，Ｎ−ジ−イソプロピルエチルアミンまたはＮ，Ｎ−ジ−ｎ−ブチルエチルアミンが挙げられる。

【化20】

【0075】

４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシンの化合物は、式（８）から（１５）を包含する。

【0076】

テトラヒドロ−３−オール化合物
式（８）

【化21】

４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−１）

【0077】

上の化合物（８）について言えば、この場合、ラパマイシンの炭素番号４２におけるヒドロキシル基がテトラヒドロフラン−３−オール化合物部分で修飾されている。

【0078】

４−メチル，テトラヒドロフラン−３−オール化合物
式（９）

【化22】

４２−Ｏ−（４−メチル，テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン

【0079】

上の化合物（９）について言えば、この場合、ラパマイシンの炭素番号４２におけるヒドロキシル基が４−メチル，テトラヒドロフラン−３−オール化合物部分で修飾されている。

【0080】

２，５，５−トリメチル，テトラヒドロフラン−３−オール化合物
式（１０）

【化23】

４２−Ｏ−（２，５，５−トリメチル，テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン

【0081】

上の化合物（１０）について言えば、この場合、ラパマイシンの炭素番号４２におけるヒドロキシル基が２，５，５−トリメチル，テトラヒドロフラン−３−オール化合物部分で修飾されている。

【0082】

２，５−ジエチル−２−メチル，テトラヒドロフラン−３−オール化合物
式（１１）

【化24】

４２−Ｏ−（２，５−ジエチル−２−メチル，テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン

【0083】

上の化合物（１１）について言えば、この場合、ラパマイシン化合物の炭素番号４２におけるヒドロキシル基が２，５−ジエチル−２−メチル，テトラヒドロフラン−３−オール化合物部分で修飾されている。

【0084】

オキセタン−３−オール化合物
式（１２）

【化25】

４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−２）

【0085】

上の化合物（１２）について言えば、この場合、ラパマイシン化合物の炭素番号４２におけるヒドロキシル基がオキセタン−３−オール化合物部分で修飾されている。

【0086】

テトラヒドロピラン−３−オール化合物
式（１３）

【化26】

４２−Ｏ−（テトラヒドロピラン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−３）

【0087】

上の化合物（１３）について言えば、この場合、ラパマイシン化合物の炭素番号４２におけるヒドロキシル基がテトラヒドロピラン−３−オール化合物部分で修飾されている。

【0088】

４２−Ｏ−（２Ｈ−ピラン−３−オール，テトラヒドロ−６−メトキシ−２−メチル）化合物
式（１４）

【化27】

４２−Ｏ−（２Ｈ−ピラン−３−イル，テトラヒドロ−６−メトキシ−２−メチル）ラパマイシン

【0089】

上の化合物（１４）について言えば、この場合、ラパマイシン化合物の炭素番号４２におけるヒドロキシル基が２Ｈ−ピラン−３−オール，テトラヒドロ−６−メトキシ−２−メチル化合物部分で修飾されている。

【0090】

２Ｈ−ピラン−３−オール，テトラヒドロ−２，２−ジメチル−６−フェニル−化合物
式（１５）

【化28】

４２−Ｏ−（２Ｈ−ピラン−３−イル，テトラヒドロ−２，２−ジメチル−６−フェニル）ラパマイシン

【0091】

上の化合物（１５）について言えば、この場合、ラパマイシン化合物の炭素番号４２におけるヒドロキシル基が２Ｈ−ピラン−３−オール，テトラヒドロ−２，２−ジメチル−６−フェニル化合物部分で修飾されている。

【0092】

本発明のラパマイシン，４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）化合物は、二反応工程で調製される。工程−１では、有機塩基および不活性有機溶媒の存在下でラパマイシンの４２−ヒドロキシル基をアルキルトリフラートで活性化して、トリフラート中間体を形成する。４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物についてのトリフラート中間体の合成における有機溶媒は、出発原料および反応生成物を溶解するならば、ハロゲン化溶媒に特に限定されない。

【0093】

４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物についてのトリフラート中間体の合成では、有機溶媒を１重量部のラパマイシンに対して１５重量部以上、好ましくは１５から２０重量部の量で使用すべきである。

【0094】

したがって、脱離基を有するラパマイシン，４２−Ｏ−（トリフルオロメチルスルホニル）（トリフラート中間体）は、不活性塩化メチレンおよび触媒としての２，６−ルチジンの存在下、冷却温度条件および不活性窒素ガス環境下での乾燥ラパマイシンと対応するトリフルオロメタンスルホン酸無水物との反応によって、容易に調製される。本発明のプロセスによる４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物についてのトリフラート中間体の合成では、トリフルオロメタンスルホン酸（トリフル酸）無水物を１ｍｏｌのラパマイシンにつき３ｍｏｌ以上、好ましくは３から７ｍｏｌの量で使用すべきである。

【0095】

本発明のプロセスによる４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物についてのトリフラート中間体の合成では、２，６−ルチジンを１ｍｏｌのラパマイシンにつき６ｍｏｌ以上、好ましくは６から１０ｍｏｌの量で使用すべきである。反応中に活性化剤トリフルオロメチルスルホン酸無水物がトリフルオロメタンスルホン酸を形成するので、反応混合物の酸性度の上昇を防止するために２，６−ルチジンを反応に添加する。したがって、２，６−ルチジンは、酸掃去剤として作用して、反応を前方に進ませる。トリフラート中間体の合成の際の反応温度は、−１０から−６０℃であり、好ましくは−２０から−４０℃の温度である。

【0096】

４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物についてのトリフラート中間体の合成では、トリフルオロメタンスルホン酸（トリフル酸）無水物の添加後、反応混合物を放置して−２０から１０℃の温度（好ましくは、−２０から０℃の温度である）に温める。

【0097】

４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物についてのトリフラート中間体の合成では、反応混合物を１０から８０分間（好ましくは、２０から４０分である）撹拌して、淡黄色粘性塊を得る。

【0098】

工程−２では、Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−ブチルエチルアミンまたはＮ，Ｎ−ジ−イソプロピルエチルアミンから選択される、適切なトリアルキルアミン触媒の存在下、３−ヒドロキシヘテロアルコキシアルキル化合物での脱離基の置換によって、４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を調製する。

【0099】

トリフラート中間体からの４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の合成では、Ｎ，Ｎ−ジ−イソプロピルエチルアミンまたはＮ，Ｎ−ジ−ｎ−ブチルエチルアミンを１ｍｏｌのラパマイシンにつき１０ｍｏｌ以上、好ましくは１０から１５ｍｏｌの量で使用すべきである。

【0100】

トリフラート中間体からの４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の合成では、３−ヒドロキシヘテロアルコキシアルキル化合物での置換後、反応混合物を放置して、−２０から１０℃の温度（好ましくは、−１０から１０℃の温度である）に温める。

【0101】

トリフラート中間体からの４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の合成では、３−ヒドロキシヘテロアルコキシアルキル化合物での置換後、反応混合物を１２から９６時間（好ましくは、３６から６０時間である）、５から３５℃の温度で、好ましくは１０から２５℃の温度で撹拌する。

【0102】

３−ヒドロキシヘテロアルコキシアルキル化合物は、商業的に容易に入手できる製品、例えばオキセタン−３−オール、テトラヒドロピラン−３−オール、テトラヒドロ−４−メチルフラン−３−オール、テトラヒドロ−２，５，５−トリメチルフラン−３−オール、テトラヒドロ−２，５−ジエチル−２−メチルフラン−３−オール、テトラヒドロピラン−３−オール、テトラヒドロ−６−メトキシ−２−メチル２Ｈ−ピラン−３−オール、テトラヒドロ−２，２−ジメチル−６−フェニル２Ｈ−ピラン−３−オールなど、の中から本発明のために選択される。

【0103】

上で説明したような反応に従って得た粗製４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を減圧下で蒸発によって濃縮して淡黄色粘性塊を得、それを従来の手法、例えば抽出、沈殿、分別結晶、再結晶、クロマトグラフィーなど、で精製および単離する。

【0104】

すべての実施形態において、所望の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物は、副生成物から好ましくは二精製段階、例えば分取ＨＰＬＣおよびＣｏｍｂｉＦｌａｓｈカラムクロマトグラフィー法、によって容易に分離される。

【0105】

精製４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物は、ポリエンマクロライドであるので、保存または取り扱い中に酸化および分解する傾向がある。したがって、安定性を向上させるために、アセトン中の適切な酸化防止剤を濃縮４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物に混合した後、単離および乾燥工程に進む。

【0106】

適する酸化防止剤は、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ＤＬ−α−トコフェロール、没食子酸プロピル、アスコルビン酸パルミテート、３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシアニソール、２−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシアニソールおよびフマル酸から選択することができる。

【0107】

３，５−ジ−ｔｅｒｔ−４−ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）は、本発明での使用に適合した最も好ましい酸化防止剤である。

【0108】

上で説明したプロセスに従って得た均質反応混合物を最後に単離し、乾燥させて、本発明の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を良好な単離収率で得る。

【0109】

精製４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物は、白色粉末であり、医療装置のコーティング、取り扱い、保存および安定性のために容易に使用することができる。

【0110】

このようにして得た精製４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を、スペクトル研究、例えば核磁気共鳴（ＮＭＲ）、質量スペクトル（ＭＳ）および高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、によって分析して同定する。

【0111】

さらにもう１つの実施形態において、本発明は、１つ以上の製薬用担体／賦形剤と会合している式１の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を含む医薬組成物を提供する。４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を含む医薬組成物を、所望の治療／臨床効果を達成するために様々な製剤に調製することができる。そのような製剤の製造方法は当分野において周知であり、これらの方法において、活性成分を適する製薬用賦形剤／担体／支持体と混合して、経口投与、注射剤投与、非経口投与、局所投与にまたは植込み型医療装置へのコーティングに適する所望の製剤を生じさせる。使用される製薬用賦形剤／担体としては、希釈剤、滑沢剤、結合剤、乳化剤、崩壊剤、発泡性混合物、吸収剤、着色剤、着香剤および甘味料などが挙げられる。希釈剤は、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース、グリセロールなどから選択される。滑沢剤は、ケイ酸、タルク、ステアリン酸またはその塩、例えばステアリン酸カルシウムもしくはステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコールなどから選択される。結合剤は、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、デンプン、例えばコーンスターチ、小麦デンプンまたは米デンプン、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどから選択される。崩壊剤は、デンプン、寒天、アルギン酸またはそのナトリウム塩などから選択される。

【0112】

医療装置、例えば冠動脈ステントもしくは他の血管ステント、へのコーティングのための典型定な製剤の例を本明細書において下で説明する。製剤の他の組成物も可能であると解釈し、これらが式１の唯一可能な製剤であると考えてはならない。

【0113】

下で説明する組成物は、とりわけ動脈再狭窄を予防するための血管処置に使用することができる。ナノサイズ粒子を含有する製剤を、非経口もしくは経口経路による投与、または医療装置、例えばステントまたはバルーンカテーテル、を植え込むことによる疾患部位への直接送達による投与に使用することもでき、医療装置の場合、薬物は、ステントにまたはカテーテルのバルーンにコーティングされる。

【0114】

支持体／担体／賦形剤粒子は、４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物への結合におよび製剤からの薬物の放出速度の制御に役立つ。製剤を場合によってはナノ粒子に変換することができる。適する支持体は、脂質（単数もしくは複数）または生体分解性／非分解性ポリマー（単数もしくは複数）およびそれらのナノ粒子である。これらの支持体は安全であり、全身循環での使用歴がある。
製剤に適する支持体は、非常に多数あり、様々である。一般的な選択基準は、４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を担持することができる支持体である。

【0115】

生体分解性ポリマー支持体としては、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、ポリ（グリコール酸−ｃｏ−トリメチレンカーボネート）、ポリカプロラクトン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、エチレンビニルアルコール、ポリ（ヒドロキシバレレート）、ポリ（ヒドロキシブチレート）；ポリ（ヒドロキシブチレート−ｃｏ−バレレート）、ポリジオキサノン；ポリオルトエステル；ポリ無水物およびこれらの混合物を挙げることができるが、それらに限定されない。非分解性ポリマー支持体としては、ポリウレタン；シリコーン；ポリエステル；ポリオレフィン；ポリイソブチレンおよびエチレン−アルファオレフィンコポリマー；アクリル系ポリマーおよびコポリマー；ハロゲン化ビニルポリマーおよびコポリマー、例えばポリ塩化ビニル；ポリビニルエーテル、例えばポリビニルメチルエーテル；ポリハロゲン化ビニリデン、例えばポリフッ化ビニリデンおよびポリ塩化ビニリデン；ポリアクリロニトリル；ポリビニルケトン；ポリビニル芳香族、例えばポリスチレン；ポリビニルエステル、例えばポリ酢酸ビニル；ビニルモノマー同士のまたはビニルモノマーとオレフィンとのコポリマー、例えばエチレン−メチルメタクリレートコポリマー、アクリロニトリルスチレンコポリマー、セルロース；酢酸セルロース；酪酸セルロース；酢酸酪酸セルロース；セロファン；硝酸セルロース；プロピオン酸セルロース；セルロースエーテル；およびカルボキシメチルセルロース、ポリアミド、例えばナイロン６６およびポリ化プロラクタムならびにこれらの混合物を挙げることができるが、それらに限定されない。

【0116】

脂質支持体としては、硬化ヒマシ油、硬化パーム油、硬化大豆油、硬化綿実油、硬化落花生油、硬化ヤシ油、硬化ロート油（ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ Ｔｕｒｋｉｓｈ ｒｅｄ ｏｉｌ）、硬化オリーブ油、硬化イソブテン油およびこれらの混合物を挙げることができるが、それらに限定されない。

【0117】

もう１つの実施形態において、本発明は、哺乳動物における再狭窄および血管閉塞から成る群より選択される高増殖性血管疾患を処置する方法を提供し、この方法は、１つ以上の製薬用担体と会合している抗増殖有効量の式１の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を前記哺乳動物に経口的に、非経口的に、静脈内的に、または式１の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を含浸させた血管ステントで被覆された植込み型医療装置によって投与することによる。哺乳動物における再狭窄および血管閉塞は、感染性障害または代謝障害に起因し得る。

【0118】

さらなる実施形態において、本発明は、哺乳動物における動脈再狭窄を予防または処置する方法を提供し、この方法は、１つ以上の製薬用担体と会合している有効量の式１の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物でコーティングされた医療装置を植え込むことによる。

【0119】

さらなる実施形態において、本発明は、高増殖性血管疾患の処置のための医薬品を調製するための、式１の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の使用を提供する。

【0120】

さらなる実施形態において、本発明は、動脈再狭窄の処置のための植込み型医療装置にコーティングするための、式１の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の使用を提供する。

【0121】

４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシンおよび４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン化合物の生体適合性研究をｉｎ−ｖｉｔｒｏで試験する。細胞傷害性、溶血および血液適合性研究についての試験の詳細を実施例３にて説明し、結果を表３ａ、３ｂ、３ｃ_１および３ｃ_２に示す。

【0122】

４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシンおよび４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン化合物の作用強度研究をｉｎ−ｖｉｔｒｏで試験し、親分子、ラパマイシン、の作用強度と比較する。この試験手順を実施例４にて説明し、結果を図３ａおよび３ｂに示す。

【0123】

４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物についてのプロセスは、本発明の合成方法との関連でより良く理解されるであろう。

【実施例】

【0124】

好ましい実施形態を含む以下の実施例は、本発明の実施の例証に役立つことであろう。示す詳細は例としてのものであり、本発明の好ましい実施形態の例証的考察を目的とするものである。

【0125】

実施例１
本発明による４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の効率的生産のためのプロセスを以下の実施例にかんがみて詳細に説明することとする。

【0126】

実施例１Ａ
工程１：ラパマイシンの４２−Ｏヒドロキシのトリフルオロメタンスルホン酸脱離基への転化：
マグネティックスターラーを装着した丸底反応フラスコ（１００ｍＬ、火炎乾燥済み）に、４．２グラム（４．６ｍｍｏｌ）の乾燥ラパマイシン、２．９５グラム（２７ｍｍｏｌ）の２，６−ジメチルピリジンおよび４２ｍＬのジクロロメタンを添加した。その反応混合物を脱気し、フラスコを窒素ガスでパージし、撹拌した。

【0127】

その後、フラスコ内の反応混合物をアセトニトリル−ドライアイス浴で−３０℃の温度に冷却し、アルゴン下で１０ｍＬのジクロロメタン中の３．９６グラム（１３．８ｍｍｏｌ）のトリフルオロメタンスルホン酸（トリフル酸）無水物をその中にゆっくりと滴下した。滴下後、その反応溶液を放置して−１０℃の温度に温め、−１０℃と０℃の間の温度で３０分間撹拌して工程１のためのトリフラート中間体を得た。この反応混合物は、淡黄色粘性塊になった。ＨＰＬＣは、残留ラパマイシンが残存しないことを示し、これは反応の完了を示した。

【0128】

【化29】

【0129】

実施例１Ｂ
工程２：４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を合成するための５員３−ヒドロキシヘテロアルコキシアルキル化合物での脱離基の置換
４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル），ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−１）の調製
工程−１のトリフラート中間体が入っている反応フラスコを−３０℃の温度に再び冷却し、５．９４グラム（４６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）を添加し、続いて塩化メチレン中の１．２グラム（１３．８ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン−３−オール化合物を添加した。その反応混合物を０℃の温度で１２時間撹拌した。その後、反応混合物を放置して２５℃の温度に温め、４８時間撹拌し続けた。

【0130】

その反応混合物を減圧下での蒸発によってさらに濃縮して、淡黄色粘性塊を得た。反応塊の定量的ＨＰＬＣは、６８％の理論収率を示す。この塊を分取ＨＰＬＣ（ＭｅＯＨ（６５％）：ＡＣＮ（１５％）：Ｈ_２Ｏ（２０％））によって精製して所望の生成物を約７０％の純度で得た。ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（ヘキサン中０〜４０％ＥｔＯＡｃ）によるさらなる精製を行って、ＨＰＬＣにより９８．６％の純度を有する４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−オール）ラパマイシン化合物を得た。その後、アセトン中の安定剤ＢＨＴをこの精製化合物と均質混合し、単離および乾燥工程を行って、４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−オール）ラパマイシン化合物の白色固体粉末を得た。

【0131】

【化30】

【0132】

このようにして得た４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン化合物を分析によって同定した。

【0133】

実施例１Ｃ
工程２：４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を合成するための４員３−ヒドロキシヘテロアルコキシアルキル化合物での脱離基の置換
４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−２）の調整
工程−１のトリフラート中間体が入っている反応フラスコを−３０℃の温度に再び冷却し、５．９４グラム（４６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）を添加し、続いて塩化メチレン中の１．２５グラム（１３．８ｍｍｏｌ）のオキセタン−３−オール化合物を添加した。その反応混合物を０℃の温度で１２時間撹拌した。その後、反応混合物を放置して２５℃の温度に温め、４８時間撹拌し続けた。

【0134】

その反応混合物を減圧下での蒸発によってさらに濃縮して、淡黄色粘性塊を得た。反応塊の定量的ＨＰＬＣは、７１％の理論収率を示す。この塊を分取ＨＰＬＣ（ＭｅＯＨ（６５％）：ＡＣＮ（１５％）：Ｈ_２Ｏ（２０％））法によって精製して所望の生成物を約７５％の純度で得た。ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（ヘキサン中０〜４０％ＥｔＯＡｃ）によるさらなる精製を行って、ＨＰＬＣにより９７．７％の純度を有する４２−Ｏ−（オキサタン（ｏｘａｔａｎ）−３−イル）ラパマイシン化合物を得た。その後、アセトン中の安定剤ＢＨＴを精製化合物と均質混合し、単離および乾燥工程を行って、４２−Ｏ−（オキサタン（ｏｘａｔａｎ）−３−イル）ラパマイシン化合物の白色固体粉末を得た。

【0135】

【化31】

【0136】

このようにして得た４２−Ｏ−（オキサタン（ｏｘａｔａｎ）−３−イル）ラパマイシン化合物を分析によって同定した。

【0137】

実施例１Ｄ
工程２：４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を合成するための６員３−ヒドロキシヘテロアルコキシアルキル化合物での脱離基の置換
４２−Ｏ−（テトラヒドロピラン−３−イル），ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−３）の調製
工程−１のトリフラート中間体が入っている反応フラスコを−５０℃の温度に再び冷却し、６．０７グラム（４６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジ−ｎ−ブチルエチルアミン（ＤＮＢＥＡ）を添加し、続いて塩化メチレン中の１．１７グラム（１３．８ｍｍｏｌ）のテトラヒドロピラン−３−オール化合物を添加した。その反応混合物を−１０℃の温度で１２時間撹拌した。その後、反応混合物を放置して１５℃の温度に温め、４８時間撹拌し続けた。

【0138】

その反応混合物を減圧下での蒸発によってさらに濃縮して、淡黄色粘性塊を得た。反応塊の定量的ＨＰＬＣは、６２％の理論収率を示す。この塊を分取ＨＰＬＣ（ＭｅＯＨ（６５％）：ＡＣＮ（１５％）：Ｈ_２Ｏ（２０％））によって精製して所望の生成物を約６５％の純度で得た。ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（ヘキサン中０〜４０％ＥｔＯＡｃ）によるさらなる精製を行って、ＨＰＬＣにより９７．３％の純度を有する４２−Ｏ−（テトラヒドロピラン−３−イル）ラパマイシン化合物を得た。その後、アセトン中の安定剤ＢＨＴをこの精製化合物と均質混合し、単離および乾燥工程を行って、４２−Ｏ−（テトラヒドロピラン−３−イル）ラパマイシン化合物の白色固体粉末を得た。

【0139】

【化32】

【0140】

このようにして得た４２−Ｏ−（テトラヒドロピラン−３−イル）ラパマイシン化合物を分析によって同定した。

【0141】

同様に、実施例１の工程−２において説明した反応手順を用いることにより工程１のトリフラート中間体を対応する３−ヒドロキシヘテロアルコキシアルキル化合物で処理することによって、式（９）、（１０）、（１１）、（１４）および（１５）のその他の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を調製した。

【0142】

４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の特性評価
四連続バッチから得た４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物により反復分析で以下の値を得た。

【0143】

ＨＰＬＣ：
４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の純度を確認するために、以下の条件に従って高速液体クロマトグラフィー、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｈｙｄｒｏ−ＲＰ ８０ａ（２５０×４．６）ｍｍ、４マイクロメートルカラムを使用した。移動相は、６５：１５：２０＝メタノール：アセトニトリル：水混合物であった。検出器を２７６ｎｍに設定し、流量を１．５ｍＬ／分に調節した。カラム温度は４０℃であった。２．０μｇの４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物を５．０μＬメタノールの容量で５０分の実行時間でカラムに注入した。

【0144】

４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル），ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−１）化合物、４２−Ｏ−（オキサタン（ｏｘａｔａｎ）−３−イル），ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−２）化合物および４２−Ｏ−（テトラヒドロピラン−３−イル），ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−３）化合物についての純度は、それぞれ９８．５４％、９７．２１％および９７．３４％（３回の実行の平均値；ＳＤ＝０．２）と測定された。

【0145】

【表1】

【0146】

スペクトル研究：
^１ＨＮＭＲ研究を出発原料ラパマイシンおよびそのヘテロアルコキシアルキル化合物について行う。比較すると、明確に同定されるヘテロアリール化合物に対応する追加のプロトンピークがあることに気づく。４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシンの少数の化合物の研究について下で論ずる。

【0147】

１）４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル），ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−１）化合物
Ｉ）ラパマイシンの酸素に付いている１個のプロトン（テトラヒドロフラン環）に対応する４．３ｐｐｍのプロトン。

【化33】

Ｃ−４２−ラパマイシン誘導体
ＩＩ）３．７から３．９ｐｐｍで同定される、他の２つのメチレンエーテルに結合しているプロトン（４個のプロトン）。

【化34】

Ｃ−４２−ラパマイシン誘導体
ＩＩＩ）メチレンの２個のプロトンが、（他のピークとマージして）１．７ｐｐｍ付近で同定される。

【化35】

Ｃ−４２−ラパマイシン誘導体

【0148】

上で述べた（ポイントＩ、ＩＩおよびＩＩＩ）Ｈ−ＮＭＲデータは、テトラヒドロフラン環がラパマイシンに付いていることを明確に示している。残りのピークは、ラパマイシンと同一である。

【0149】

２）４２−Ｏ−（オキサタン（ｏｘａｔａｎ）−３−イル），ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−２）化合物
Ｉ）ラパマイシンの酸素に付いている１個のプロトン（オキサタン（ｏｘａｔａｎ）環）に対応する４．３ｐｐｍのプロトン。

【化36】

Ｃ−４２−ラパマイシン誘導体
ＩＩ）３．６から３．８ｐｐｍで同定される、他の２つのメチレンエーテルに結合しているプロトン（４個のプロトン）。

【化37】

Ｃ−４２−ラパマイシン誘導体

【0150】

上で述べた（ポイントＩおよびＩＩ）Ｈ−ＮＭＲデータは、オキサタン（ｏｘａｔａｎ）環がラパマイシンに付いていることを明確に示している。残りのピークは、ラパマイシンと同一である。

【0151】

３）４２−Ｏ−（テトラヒドロピラン−３−イル），ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−３）化合物
Ｉ）ラパマイシンの酸素に付いている１個のプロトン（テトラヒドロピラン環）に対応する４．３ｐｐｍのプロトン。

【化38】

Ｃ−４２−ラパマイシン誘導体
ＩＩ）３．５から３．７ｐｐｍ付近で同定される、他の２つのメチレンエーテルに結合しているプロトン（４個のプロトン）。

【化39】

Ｃ−４２−ラパマイシン誘導体
ＩＩＩ）２つのメチレンの４個のプロトンが、（他のピークとマージして）１．７から２．０ｐｐｍ付近で同定される。

【化40】

Ｃ−４２−ラパマイシン誘導体

【0152】

上で述べた（ポイントＩ、ＩＩおよびＩＩＩ）Ｈ−ＮＭＲデータは、テトラヒドロピラン環がラパマイシンに付いていることを明確に示している。残りのピークは、ラパマイシンと同一である。

【0153】

４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の様々な化学構造をイオントラップ型ＬＣ質量分析によってさらに検証する。結果は、４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物のすべての化学構造と一致する。

【0154】

４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル），ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−１、Ｃ_５５Ｈ_８５ＮＯ_１４）化合物、４２−Ｏ−（オキサタン（ｏｘａｔａｎ）−３−イル），ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−２、Ｃ_５４Ｈ_８３ＮＯ_１４）化合物および４２−Ｏ−（テトラヒドロピラン−３−イル），ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−３、Ｃ_５６Ｈ_８７ＮＯ_１４）化合物についてのｍ／ｚピークは、それぞれ、９８４．１３、９７０．２０および９９８．１８で観察され、これらが本発明の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の構造をさらに確証した。

【0155】

実施例２
様々な４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の安定性分析
本方法によって調製したすべての４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物は不安定であり、この故に時が経つにつれてそれらの純度は低下する。この純度損失は、上昇した温度でのほうが高かったが、純度プロフィールの明らかな変化はなかった。表２Ａは、異なる時間間隔および温度条件での様々な４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の純度を提示するものである。実施例は、密封容器内で２５℃ででさえ、４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−１）化合物の純度は、１２週間の期間に９８．７％から９４．１％に低下し、４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−２）化合物については９７．６％から９３．９％に低下し、および４２−Ｏ−（テトラヒドロピラン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−３）化合物については１２週間の期間に９７．６％から９３．５％に低下することを示す。これらの純度損失は、密封容器内で２５℃に保ったときに対して４０℃で保持したときには、まさに１２週間の間にＭｅｒｉｌｉｍｕｓ−１については９８．６％から９３．５％に、Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−２については９７．３％から９２．７％におよびＭｅｒｉｌｉｍｕｓ−３については９７．５％から９１．６％に増加された。

【0156】

本発明者らは、様々なＢＨＴ濃度を用いて、上で述べたような様々な４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の安定性研究も行った。この研究は、４０℃の温度で密封容器内で８週間行った。

【0157】

密封容器内で、実施例１において説明した手順に従って得た４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物に、１００％（ｗ／ｗ）の４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物に基づき０．１％、０．２％、０．５％および１．０％（ｗ／ｗ）の濃度の酸化防止剤、すなわちブチルヒドロキシトルエン（すなわちＢＨＴ）、をそれぞれ添加して、４０℃の温度での安定性を研究する。Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−１およびＭｅｒｉｌｉｍｕｓ−２中の様々なＢＨＴ濃度に関する研究成果は、８週間の保存の後でさえ純度の喪失がさほど有意でなかった、すなわちそれぞれ９８．３％および９７．４％であった、ことを明示する。しかし、４２−Ｏ−（テトラヒドロピラン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−３）化合物の場合、１．０％ＢＨＴ濃度ででさえ安定性が９４．９％へと大幅に低下した。比較として、４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−１）化合物、４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−２）化合物および４２−Ｏ−（テトラヒドロピラン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−３）化合物への０．０％の酸化防止剤（ＢＨＴ）の添加により結果として８週間の保存後にそれぞれ９４．７％、９３．６％および９２．３％へと純度が低下した対照試験を提供する。異なる時間間隔で確認した、４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン化合物、４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン化合物および４２−Ｏ−（テトラヒドロピラン−３−イル）ラパマイシン化合物に添加したときの異なる量の酸化防止剤の添加に伴う純度データを下に挙げる表２Ｂに要約する。

【0158】

【表2A】

【0159】

【表2B】

【0160】

これらの様々な安定性研究結果は、立体障害が４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の安定性に有意な役割を果たすことを示している。様々な４員、５員および６員４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の安定性研究成果データを比較すると、立体障害効果により安定性の順序が６員基および嵩高い分子化合物に向う方向とは逆になっている。Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−１、Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−２およびＭｅｒｉｌｉｍｕｓ−３を含むすべての４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物についての、ＢＨＴなしのおよび１．０％ＢＨＴを用いる４０℃の温度での８週間までの安定性データを図２Ａおよび２Ｂにそれぞれ示す。

【0161】

例えば、これらの所見は、４２−Ｏ−（ヘテロアルコキシアルキル）ラパマイシン化合物の安定性を維持する点での酸化防止剤の重要性に関する、ならびに生体適合性および抗増殖研究を計画するためのより熱安定性の高い４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−１）および４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−２）のさらなる選択に関する有用な詳細をもたらす。

【0162】

実施例３
４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシンおよび４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン化合物のｉｎ−ｖｉｔｒｏ生体適合性試験
３ａ．細胞傷害性試験
ｉｎ−ｖｉｔｒｏ評価を行って、４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシンおよび４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン化合物の細胞傷害性または壊死性の可能性を抽出法により確認した。この研究では、被験物質の抽出物をＬ−９２９（ＡＴＣＣ細胞株ＣＣＬ−１、ＮＣＴＣクローン９２９）ハツカネズミ（Ｍｕｓ Ｍｕｓｃｕｌｕｓ）マウス繊維芽細胞の多重培養物と接触した状態を４８時間保った。細胞を顕微鏡検査して、その総体的形態、空胞化、剥離、細胞溶解および膜完全性についての変化を評価した。試験結果を表３ａに示す。

【0163】

【表3a】

【0164】

細胞傷害性試験所見に基づき、４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−１）化合物および４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−２）化合物は、細胞に対する傷害効果を一切示さず、４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシンおよび４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン化合物は両方とも、このｉｎ−ｖｉｔｒｏ細胞傷害性試験の要件を満たしていた。

【0165】

３ｂ．溶血試験
ウサギ血液を用いてｉｎ−ｖｉｔｒｏ法により溶血試験を行って、４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−１）化合物および４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−２）化合物の溶血効果を確認した。この研究では、３つ１組の被験物質抽出物をウサギ血液と接触した状態に保ち、４時間インキュベートした。分光光度計において５４０ｎｍでの標準溶液の吸収と比較することにより、上清中の遊離した血漿ヘモグロビンの濃度を算出した。溶血指数を標準的な式によって算出した。結果を表３ｂに要約する。

【0166】

【表3b】

溶血指数＝放出されたヘモグロビン（ｍｇ／ｍＬ）／存在するヘモグロビン（ｍｇ／ｍＬ）×１００

【0167】

溶血指数計算結果は、４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン化合物抽出物については１．７、および４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン化合物抽出物については１．９であった。

【0168】

溶血指数結果に基づき、４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン化合物および４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン化合物は、非溶血性を示し、この溶血試験の要件を満たす。

【0169】

３ｃ．血液適合性試験
医療装置のために血液適合性試験を行って、４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシンおよび４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン化合物と接触する血液の生物学的安定性を評価する。被験物質とウサギ血液の相互作用を、血栓形成、凝固、血小板数および白血球数について確認した。試験結果を表３ｃおよび３ｄに示す。

【0170】

【表3c】

【0171】

【表3d】

【0172】

上記に基づき、すべてのパラメータが正常限界範囲内に入ったので、４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン化合物および４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン化合物についてのすべての血液学的所見は、それらの対応する対照と比較して有意な変化を示さなかった。そのため、４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン化合物および４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン化合物は両方とも、血液適合性であり、この血液適合性試験の要件を満たす。

【0173】

実施例４
４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン化合物および４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン化合物のｉｎ−ｖｉｔｒｏ作用強度
新規ｍＴＯＲ阻害剤４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン化合物および４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン化合物とラパマイシンの相対的抗増殖効果のｉｎ−ｖｉｔｒｏ評価をヒトおよびウサギ平滑筋細胞培養モデルで行った。このｉｎ−ｖｉｔｒｏ評価では、ヒト大動脈およびウサギ腸骨（ｉｌｌｉａｃ）動脈平滑筋細胞培養物を、細胞培養培地中５桁の濃度にわたる漸増用量の４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン化合物、４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン化合物およびラパマイシンに付した。細胞培養物の再生能力を、薬物曝露後、生存細胞を変色させるブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）着色試薬の添加により評価した。分光光度計マイクロプレートリーダー（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ、ＦＬＵＯｓｔａｒ ＯＰＴＩＭＡ）を使用して４５０ｎｍの波長で着色の程度を定量した。より高いＯＤ読取り値は、細胞ＤＮＡへのＢｒｄＵの取り込み増加を表し、したがって、より活発な増殖を表す。対照的に、より低いＯＤ値は、ＢｒｄＵに基づきより少ない取り込み、および細胞阻害へのシフトを表す。１００％非阻害成長を表す陽性対照ＯＤ値を引くことによって、成長阻害を算出した。

【0174】

４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシンおよび４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン化合物の作用強度をｉｎ−ｖｉｔｒｏで試験し、ラパマイシンの作用強度と比較した。試験結果の値を図３Ａおよび図３Ｂに示す。

【0175】

これらの結果の要約は、４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−２）化合物および４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−１）化合物が、５桁の濃度にわたってｈＡｏＳＭＣとＲｂＩＡＳＭＣ両方の平滑筋細胞の成長抑制に関して同様の作用強度を有することの例証となる。本発明の４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン化合物および４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン化合物が平滑筋細胞の成長をラパマイシンより有効に阻害することも観察された。

【0176】

実施例５
支持体としての生体分解性ポリマーの混合物８０ｍｇ ポリＬ−ラクチド、２３ｍｇ ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）と、５９ｍｇ ４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−１）とを使用する製剤を５０ｍＬの二塩化メチレン溶媒に溶解して、明澄透明溶液を得る。その後、この溶液を医療装置表面にスプレーコーティングする。ポリビニルピロリドンのような急速放出性ポリマーの最上部保護層を、場合によっては設けてもよい。その後、溶媒を真空下で除去してもよい。

【0177】

実施例６
支持体としての脂質７０ｍｇ 硬化ヒマシ油と、４７ｍｇ ４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−１）とを使用する製剤を５０ｍＬの二塩化メチレン溶媒に溶解する。その後、この明澄透明溶液を医療装置表面にスプレーコーティングする。ポリビニルピロリドンのような急速放出性ポリマーの最上部保護層を、場合によっては設けてもよい。その後、溶媒を真空下で除去してもよい。

【0178】

実施例７
支持体としての生体分解性ポリマーナノ粒子の混合物８００ｍｇ ポリＬ−ラクチド、３００ｍｇ ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）と、２５０ｍｇ ４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−１）を使用する製剤を２５ｍＬの塩化メチレンに溶解する。その後、この溶液を、６５０ｍｇ オレイン酸ナトリウムと２５０ｍｇ ビタミンＥ−ＴＰＧＳの１５０ｍＬの水溶液に、高速撹拌しながら徐々に添加する。この結果、安定した懸濁液を得る。高圧ホモジナイザーに何度も通すことによって粒径を低減させる。得られた粒径は、５０ｎｍと２５０ｎｍの間であった。

【0179】

実施例８
固体脂質ナノ粒子９００ｍｇ 硬化ヒマシ油の支持体と、２２５ｍｇ ４２−Ｏ−（テトラヒドロフラン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−１）とを使用する製剤を１５ｍＬの二塩化メチレンに溶解する。その後、この溶液を、５００ｍｇ Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ−１８８と１５０ｍｇ ビタミンＥ−ＴＰＧＳの１５０ｍＬの水溶液に、高速撹拌しながら徐々に添加する。この結果、安定した固体薬物−脂質懸濁液を得る。高圧ホモジナイザーに何度も通すことによって所望の粒径範囲を達成した。得られた粒径は、５０ｎｍと４５０ｎｍの間であった。

【0180】

同様に、４２−Ｏ−（オキセタン−３−イル）ラパマイシン（Ｍｅｒｉｌｉｍｕｓ−２）についての医薬組成物を、実施例５、６、７および８において説明したように調製する。

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】