特許 5986891 ＭＩＦ分泌抑制剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5986891

(24)【登録日】2016年8月12日

(45)【発行日】2016年9月6日

(54)【発明の名称】ＭＩＦ分泌抑制剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 36/53 20060101AFI20160823BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20160823BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20160823BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20160823BHJP

【ＦＩ】

   A61K36/53

   A61P43/00 111

   A61P29/00

   A61P17/00

【請求項の数】3

【全頁数】7

(21)【出願番号】特願2012-244392(P2012-244392)

(22)【出願日】2012年11月6日

(65)【公開番号】特開2014-91729(P2014-91729A)

(43)【公開日】2014年5月19日

【審査請求日】2015年6月11日

(73)【特許権者】

【識別番号】593106918

【氏名又は名称】株式会社ファンケル

(74)【代理人】

【識別番号】100122954

【弁理士】

【氏名又は名称】長谷部 善太郎

(74)【代理人】

【識別番号】100162396

【弁理士】

【氏名又は名称】山田 泰之

(72)【発明者】

【氏名】榎本 有希子

【審査官】 春田 由香

(56)【参考文献】

【文献】 特開２００８−００７４１１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２０１０−００１２６４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００８−０３７８７１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０８−３３３２６７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開昭６４−０８３０２２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平１０−２９１９２９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００３−２６１４５４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０７−１８７９８８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 小坂 邦男，宮崎 寿次，小野 誠，ローズマリーから得られた美白成分，FRAGRANCE JOURNAL，２０００年 ９月１５日，第２８巻，第９号，ｐ．５９−６４

【文献】 シミ形成に関与する肌タンパク「ＭＩＦ」を抑制 美白の新たなメカニズムを解明 2012 年3 月発売の新製品へ応用，［online］，株式会社ファンケル，２０１２年 １月 ６日，[２０１６年３月１４日検索]，インターネット，ＵＲＬ，http://www.fancl.jp/news/pdf/20120106mif.pdf

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３６／００−３６／９０６８

Ａ６１Ｋ ８／００− ８／９９

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＰｕｂＭｅｄ

ＣｉＮｉｉ

医中誌ＷＥＢ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ローズマリーの１，３ブチレングリコール抽出物を有効成分とするマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）分泌抑制用組成物。

【請求項2】

ローズマリーの１，３ブチレングリコール抽出物が、全草又は花の抽出物である請求項１に記載のＭＩＦ分泌抑制用組成物。

【請求項3】

請求項１又は２に記載のＭＩＦ分泌抑制用組成物を含有するＭＩＦ分泌抑制用の皮膚外用剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）分泌抑制剤、炎症性疾患の改善剤に関する。

【背景技術】

【0002】

マクロファージ遊走阻止因子（以下、ＭＩＦと記載する）は、炎症・免疫のメディエーターの１つであり、マクロファージの遊走を制御し、炎症部位にマクロファージを集め、貪食能を高める液性因子である。ＭＩＦは慢性関節リウマチ(非特許文献１：Expert Opin Ther Targets, 7, 2, 153-164, 2003)、腎炎(非特許文献２：Expert Opin Ther Targets, 7, 2, 153-164, 2003)、アトピー性皮膚炎(非特許文献３：Biochem Biophys Res Commun, 240, 11, 173-8, 1997)、乾癬（非特許文献４：B J Dermatol, 141, 1061-66, 1999)、潰瘍性大腸炎、敗血症、接触性皮膚炎(非特許文献５：Eur J Immunol, 33, 1478-87, 2003)、紫外線による炎症(非特許文献６：J Invest Dermatol, 112, 2, 210-15, 1999)、遅延性アレルギー(非特許文献７：Pro Natl Acad Sci USA, 93, 7849-54, 1996)などの急性・慢性炎症疾患(J End, 179, 15-23, 2003)、関節炎、移植片拒絶反応、腫瘍成長、血管新生、貧血、脳脊髄炎等の炎症性疾患の病理過程に関与しており、ＭＩＦを阻害することにより、これら炎症性疾患を軽減させることが期待される。
ＭＩＦの活性阻害剤は種々開発されている（特許文献１：特表２００３−５１３０６５号公報、特許文献２：特表２００５−５００２６６号公報、特許文献３：特表２００６−５１７９７７号公報）。
本発明者は、ＭＩＦの分泌抑制に着目し、ＭＩＦの分泌抑制剤に関する研究開発を継続している。本発明者は、ヒメジョオン又はその抽出物をＭＩＦの分泌抑制剤とする技術(特許文献４：特開２００９−２０３２２１号)、ヒルガオ又はその抽出物をＭＩＦの分泌抑制剤とする技術(特許文献５：特開２０１０−７０４８３号)、マユマメ又はその抽出物をＭＩＦの分泌抑制剤とする技術(特許文献６：特開２０１０−７０４８４号)、アジョワン又はその抽出物をＭＩＦの分泌抑制剤とする技術(特許文献７：特開２０１０−７０４８５号)、トウガシ又はその抽出物をＭＩＦの分泌抑制剤とする技術(特許文献８：特開２０１０−７０４８６号)、シナヤグルマカエデ又はその抽出物をＭＩＦの分泌抑制剤とする技術(特許文献９：特開２０１０−７０４８７号)、を提案した。
一方、本発明で使用するローズマリー（学名：Rosmarinus officinalis L.）は、地中海沿岸地方原産で、シソ科に属する常緑性低木である。ローズマリーの薬効については様々な研究がなされている。消臭効果や抗菌作用、抗酸化作用（非特許文献８：駒沢女子大学 研究紀要 30 pp.31-38 19970）、神経成長因子の生成を高める作用（非特許文献９：Biol Pharm Bull. 2003 Nov;26(11):1620-2.）、生体防御機構を活性化させる作用（非特許文献１０：J Biol Chem. 2004 Mar 5;279(10):8919-29）効果があることなどが報告されている。
またローズマリーは、皮膚外用剤としても種々の用途に使用されている。真皮コラーゲン線維束再構築剤（特許文献１０：特開２０１１−２４６３５４号公報）としての用途、ローズマリー油を皮脂溶解剤（特許文献１１：特開２０１１−２０７８１９号公報）として用いる用途、一重項酸素消去剤（特許文献１２：特開２０１２−１８４３５７号公報）として用いる用途、アトピー性皮膚炎を治療するための治療用水和ゲル剤に配合する用途（特許文献１３：特開２００８−３７８７１号公報）、化粧料に抗菌性を付与するための用途（特許文献１４：特開２００７−８９０９号公報）など、様々の用途が提案されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0003】

【特許文献1】特表２００３−５１３０６５号公報

【特許文献2】特表２００５−５００２６６号公報

【特許文献3】特表２００６−５１７９７７号公報

【特許文献4】特表２００９−２０３２２１号公報

【特許文献5】特表２０１０−７０４８３号公報

【特許文献6】特表２０１０−７０４８４号公報

【特許文献7】特表２０１０−７０４８５号公報

【特許文献8】特表２０１０−７０４８６号公報

【特許文献9】特表２０１０−７０４８７号公報

【特許文献10】特開２０１１−２４６３５４号公報

【特許文献11】特開２０１１−２０７８１９号公報

【特許文献12】特開２０１２−１８４３５７号公報

【特許文献13】特開２００８−３７８７１号公報

【特許文献14】特開２００７−８９０９号公報

【非特許文献】

【0004】

【非特許文献1】Expert Opin Ther Targets, 7, 2, 153-164, 2003

【非特許文献2】Expert Opin Ther Targets, 7, 2, 153-164, 2003

【非特許文献3】Biochem Biophys res Commun, 240, 11, 173-8, 1997

【非特許文献4】B J Dermatol, 141, 1061-66, 1999

【非特許文献5】Eur J Immunol, 33, 1478-87, 2003

【非特許文献6】J Invest Dermatol, 112, 2, 210-15, 1999

【非特許文献7】Pro Natl Acad Sci USA, 93, 7849-54, 1996

【非特許文献8】駒沢女子大学 研究紀要 30 pp.31-38 19970）

【非特許文献9】Biol Pharm Bull. 2003 Nov;26(11):1620-2.

【非特許文献10】J Biol Chem. 2004 Mar 5;279(10):8919-29

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

本発明は新しいＭＩＦ分泌抑制剤を提供することを課題とする。

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明の主な構成は、次のとおりである。
（１）ローズマリーの１，３ブチレングリコール抽出物を有効成分とするマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）分泌抑制用組成物。
（２）ローズマリーの１，３ブチレングリコール抽出物が、全草又は花の抽出物である（１）に記載のＭＩＦ分泌抑制用組成物。
（３）（１）１又は（２）に記載のＭＩＦ分泌抑制用組成物を含有するＭＩＦ分泌抑制用の皮膚外用剤。

【発明の効果】

【0007】

本発明により、ＭＩＦ異常分泌に伴うアトピー性皮膚炎等の新たな治療剤または予
防剤の提供が可能となる。
また、ＭＩＦの異常分泌や関与が推定されている、乾癬や紫外線による皮膚炎症、血管腫、蕁麻疹、敗血症、呼吸器炎症、潰瘍性大腸炎、慢性関節リウマチ、腎炎、接触性皮膚炎、遅延性アレルギーなどの急性・慢性炎症疾患、関節炎、移植片拒絶反応、腫瘍成長、血管新生、貧血、脳脊髄炎、その他菌感染による炎症への治療や予防に使用することが可能となる。さらに又本発明のＭＩＦ分泌抑制剤は、皮膚外用剤として皮膚の炎症部位に塗布することで、マクロファージ遊走阻止因子の働きを抑えて、炎症部位におけるマクロファージの機能を抑制し、炎症を治療することができる。

【図面の簡単な説明】

【0008】

【図1】ケラチノサイトを用いたＵＶＢ誘導性ＭＩＦ分泌抑制試験結果のグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0009】

本発明で使用するローズマリーは前述したように民間療法に広く利用されており、またハーブとして食用されており、園芸植物としても栽培されている。

【0010】

ローズマリー抽出物としてはローズマリーの全草、あるいは葉をそのまま粉砕し、あるいは乾燥させた後に粉砕して、水あるいはエタノール等のアルコール、エーテル、アセトン、１，３−ブチレングリコール、１，２−ペンタンジオール、プロピレングリコール、酢酸エチルなどの有機溶媒により抽出した粗抽出物、および粗抽出物を分配抽出やカラムクロマトなどの各種クロマトグラフィーなどで段階的に精製して得られた抽出物画分を含む。これらは単独で用いても良く、また２種以上混合して用いても良い。
ローズマリーの全草、あるいは葉を生のまま抽出操作に供しても良いが、細切、乾燥、粉砕等の処理を行なった後、抽出を行なう方が効率がよい。抽出は抽出溶媒に浸漬して行なうことができる。抽出効率を上げる為に、抽出溶媒を攪拌したり、抽出溶媒中で破砕均一化したり、抽出溶媒中で圧力をかけることもできる。抽出温度は5〜100℃程度が適切であり、抽出時間は5分〜1ヶ月程度である。これらの条件は適宜設定することができる。
前記ローズマリー抽出物はそのまま、また、水、エタノール等の有機溶媒に溶解又は分散させた状態で、ＭＩＦ分泌抑制剤、炎症性疾患の改善剤、特に皮膚の炎症性疾患改善剤として使用できる。また、必要に応じて抽出溶媒を留去し、その乾燥物を用いてもよい。
一方、すでにローズマリー抽出物も市販されている。「ローズマリー抽出液ＢＧ」丸善製薬株式会社製のブチレングリコール抽出エキスが市販されており、これを本発明の実施に当たって使用することも可能である。

【0011】

ローズマリー抽出物は、乾燥物として、0.0001〜1000mg／日の範囲で適用することができ、さらに、この範囲に限らず、対象、適用形態、症状に応じてその量を適宜設定することができる。
本発明のローズマリー抽出物の配合量としては、0.0001〜10質量％程度が好ましいが、用いる剤型、使用対象等の様々の条件に応じて、100質量％までの広範囲でその配合量を適宜設定できる。

【0012】

本発明の製剤は、経口で又は非経口で投与することができる。
本発明の製剤は、例えば水溶液、油剤、乳液、懸濁液等の液剤、ゲル、クリーム等の半固形剤、粉末、顆粒、カプセル、マイクロカプセル、固形等の固形剤の形態で適用可能である。従来から公知の方法でこれらの形態に調製し、ローション剤、乳剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏、硬膏、ハップ剤、エアゾル剤、坐剤、注射剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、丸剤、シロップ剤、トローチ剤等の種々の剤型とすることができる。これらを身体に塗布、貼付、噴霧、飲用等により適用することができる。特にこれら剤型の中で、皮膚外用剤であるローション剤、乳剤、クリーム剤、軟膏剤、硬膏剤、ハップ剤、エアゾル剤等が適している。通常、医薬において使用される製剤化方法にしたがって、これらの剤型、組成物として製造することができる。
以下、実施例に基づき本発明を詳細に説明する。

【実施例】

【0013】

〔ローズマリー抽出物のケラチノサイトを用いたＵＶＢ誘導性ＭＩＦ分泌抑制試験〕
ＭＩＦは皮膚の構成細胞の一つであるケラチノサイトで強く発現することが知られている。そして、ケラチノサイトにUVBを照射することにより、ＭＩＦの分泌が促進されることが知られている(J Invest Dermatol, 112, 2, 210-15, 1999)。
ケラチノサイトにＵＶＢを照射したときのＭＩＦの分泌をローズマリー抽出物が抑制するか否かを試験した。
なお本試験で用いたローズマリー抽出物は、次のものを用いた。
製品名「ローズマリー抽出液ＢＧ」丸善製薬株式会社製、ローズマリーエキス濃度1.7%、溶媒ブチレングリコール、溶媒濃度49.15%

【0014】

＜試験方法＞
１．ヒトケラチノサイトを1.0×10⁴ cells/cm²でφ35mm dishに播種し、EpiLife-KG2培地(倉敷紡績製)で3日間培養した。EpilLife-KG2・BPE(-)培地に各サンプルを所定の抽出物濃度を添加したサンプル添加培地に交換し、1晩培養後、HANKS(-)存在下でＵＶＢを2.0W/m²、15mJ/cm²照射し、サンプル含有EpilLife-KG2・BPE(-)培地に交換し、24時間培養した。培養上清を回収し、hMIF ELISA kit を用いて、定法に従い上清中ＭＩＦ量を測定し、ＭＩＦ分泌量を算出した。さらに、細胞をCell lysys bufferで溶解し、溶解液中のたんぱく質量をプロテインアッセイキットで測定し、dishあたりのタンパク質量を算出した。

【0015】

２．ＵＶＢ照射した試料無添加で溶媒添加（0.1%ＢＧ）処理群の単位タンパク質当たりのＭＩＦ分泌率を100%とした。
ＭＩＦ分泌率(%)を求める式を以下に示す。

ＭＩＦ分泌率（％）＝(Ｍ_x／Ｐ_x)／(Ｍ₀／Ｐ₀)×100
Ｍ₀：ＵＶＢ照射・サンプルＡ無添加で溶媒添加（0.1%ＢＧ）のＭＩＦ分泌量_、
Ｐ₀：Ｍ₀測定時のタンパク質量_、
Ｍ_x：各試料のＭＩＦ分泌量_、
Ｐ_x：各試料のタンパク質量

【0016】

＜結果＞
ＭＩＦ分泌抑制率の測定結果を表１、図１に示す。なお、本試験における試料無添加群とローズマリー抽出物添加群の細胞のタンパク質の量を比較したところ、両群に差は認められなかった。したがって、ローズマリーの細胞毒性は認められないものと判断した。

【0017】

【表1】

【0018】

以上の試験結果から、ケラチノサイトにローズマリー抽出物を添加することにより、紫外線誘導性のＭＩＦの分泌が顕著に抑制された。抑制はローズマリー抽出液の添加量に依存していた。
したがって、ＭＩＦの分泌量が増加することによって皮膚の症状が悪化することが知られている紫外線による皮膚障害・炎症、アトピー性皮膚炎、乾癬、接触性皮膚炎等のＭＩＦが関与する皮膚の炎症性疾患に対して改善効果が期待できる。

【図1】