特許 6016953 二重のＡＬＫおよびＦＡＫ阻害剤としての縮合二環式２，４−ジアミノピリミジン誘導体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6016953

(24)【登録日】2016年10月7日

(45)【発行日】2016年10月26日

(54)【発明の名称】二重のＡＬＫおよびＦＡＫ阻害剤としての縮合二環式２，４−ジアミノピリミジン誘導体

(51)【国際特許分類】

   C07D 239/48 20060101AFI20161013BHJP

   A61K 31/506 20060101ALI20161013BHJP

   A61K 9/20 20060101ALI20161013BHJP

   A61K 9/48 20060101ALI20161013BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20161013BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20161013BHJP

【ＦＩ】

   C07D239/48CSP

   A61K31/506

   A61K9/20

   A61K9/48

   A61P43/00 111

   A61P35/00

【請求項の数】22

【全頁数】44

(21)【出願番号】特願2014-561069(P2014-561069)

(86)(22)【出願日】2013年3月6日

(65)【公表番号】特表2015-509540(P2015-509540A)

(43)【公表日】2015年3月30日

(86)【国際出願番号】US2013029304

(87)【国際公開番号】WO2013134353

(87)【国際公開日】20130912

【審査請求日】2016年1月4日

(31)【優先権主張番号】61/607,305

(32)【優先日】2012年3月6日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】509021085

【氏名又は名称】セファロン、インク．

(74)【代理人】

【識別番号】100104411

【弁理士】

【氏名又は名称】矢口 太郎

(72)【発明者】

【氏名】オールウェイン、シャウン ピー．

(72)【発明者】

【氏名】クルボアジエ、ローラン

(72)【発明者】

【氏名】ジェイコブズ、マーティン、ジェイ．

(72)【発明者】

【氏名】オット、グレゴリー アール．

【審査官】 三上 晶子

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１０−５０７６６５（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ２３９／００−２３９／９６

Ａ６１Ｋ ９／００− ９／７２

Ａ６１Ｋ ４７／００− ４７／４８

Ａ６１Ｋ ３１／３３− ３３／４４

Ａ６１Ｐ １／００− ４３／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）

【化1】

の化合物またはその塩。

【請求項2】

請求項１記載の式Ｉの化合物。

【請求項3】

前記塩が酸付加塩である請求項１記載の式（Ｉ）の化合物の塩。

【請求項4】

前記塩がトリベンゼンスルホン酸塩である請求項１記載の式（Ｉ）の化合物の塩。

【請求項5】

７．６２±０．２°２Θ、１３．１１±０．２°２Θ、１３．７６±０．２°２Θ、および１４．０５±０．２°２Θから選択される１若しくはそれ以上のピークを有するＸＲＰＤパターンを有する請求項４記載の式（Ｉ）の化合物のトリベンゼンスルホン酸塩。

【請求項6】

６．８５±０．２°２Θ、７．６２±０．２°２Θ、８．０１±０．２°２Θ、１３．１１±０．２°２Θ、１３．７６±０．２°２Θ、１４．０５±０．２°２Θ、および１４．６０±０．２°２Θから選択される１若しくはそれ以上のピークを有するＸＲＰＤパターンを有する請求項４記載の式（Ｉ）の化合物のトリベンゼンスルホン酸塩。

【請求項7】

７．６２±０．２°２Θ、１３．１１±０．２°２Θ、１３．７６±０．２°２Θ、１４．０５±０．２°２Θ、１７．１０±０．２°２Θ、１７．８６±０．２°２Θ、および１８．１０±０．２°２Θから選択される１若しくはそれ以上のピークを有するＸＲＰＤパターンを有する請求項４記載の式（Ｉ）の化合物のトリベンゼンスルホン酸塩。

【請求項8】

前記塩が三塩酸塩・二水和物である請求項１記載の式（Ｉ）の化合物の塩。

【請求項9】

５．４２±０．２°２Θ、８．８６±０．２°２Θ、１４．０６±０．２°２Θ、１７．５２±０．２°２Θ、および１８．５１±０．２°２Θから選択される１若しくはそれ以上のピークを有するＸＲＰＤパターンを有する請求項８記載の式（Ｉ）の化合物の三塩酸塩・二水和物。

【請求項10】

５．４２±０．２°２Θ、５．９１±０．２°２Θ、８．８６±０．２°２Θ、１０．８０±０．２°２Θ、１１．７９±０．２°２Θ、１４．０６±０．２°２Θ、１４．７２±０．２°２Θ、１７．０２±０．２°２Θ、１７．５２±０．２°２Θ、および１８．５１±０．２°２Θから選択される１若しくはそれ以上のピークを有するＸＲＰＤパターンを有する請求項８記載の式（Ｉ）の化合物の三塩酸塩・二水和物。

【請求項11】

請求項１〜１０のいずれかに記載の化合物または塩と、薬学的に許容され得る賦形剤とを有する、薬学的組成物。

【請求項12】

請求項１１記載の薬学的組成物において、前記組成物は、錠剤またはカプセル剤の形態である薬学的組成物。

【請求項13】

対象におけるＡＬＫまたはＦＡＫ媒介性の症状または障害を処置する薬剤を製造するための、治療的に有効量の請求項１〜１０のいずれかに記載の化合物または塩の使用。

【請求項14】

請求項１３記載の使用において、前記ＡＬＫまたはＦＡＫ媒介性の症状または障害は、未分化大細胞型リンパ腫（ａｎａｐｌａｓｔｉｃ ｌａｒｇｅ ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ：ＡＬＣＬ）、非小細胞肺ガン（ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ：ＮＳＣＬＣ）、神経芽細胞腫、神経膠芽細胞腫、前立腺ガン、扁平上皮ガン（ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ＳＣＣ）、および乳ガンから選択される、使用。

【請求項15】

請求項１３記載の使用において、前記ＡＬＫまたはＦＡＫ媒介性の症状または障害は、ＡＬＫ陽性未分化大細胞型リンパ腫、ＥＭＬ４−ＡＬＫ陽性非小細胞肺ガン、神経芽細胞腫、神経膠芽細胞腫、アンドロゲン非依存性前立腺ガン、乳ガン、および頭頸部扁平上皮ガン（ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ：ＨＮＳＣＣｓ）から選択される、使用。

【請求項16】

請求項１３記載の使用において、前記ＡＬＫまたはＦＡＫ媒介性の症状または障害は、ＡＬＫ陽性未分化大細胞型リンパ腫、ＥＭＬ４−ＡＬＫ陽性非小細胞肺ガン、神経芽細胞腫、アンドロゲン非依存性前立腺ガン、乳ガン、および頭頸部扁平上皮ガンから選択される、使用。

【請求項17】

請求項１３記載の使用において、前記ＡＬＫまたはＦＡＫ媒介性の症状または障害は、ＡＬＫ陽性未分化大細胞型リンパ腫、ＥＭＬ４−ＡＬＫ陽性非小細胞肺ガン、神経芽細胞腫、および神経膠芽細胞腫から選択される、使用。

【請求項18】

請求項１３記載の使用において、前記ＡＬＫまたはＦＡＫ媒介性の症状または障害は、ＡＬＫ陽性未分化大細胞型リンパ腫、ＥＭＬ４−ＡＬＫ陽性非小細胞肺ガン、および神経芽細胞腫から選択される、使用。

【請求項19】

請求項１３記載の使用において、前記ＡＬＫまたはＦＡＫ媒介性の症状または障害は、ＡＬＫ陽性未分化大細胞型リンパ腫およびＥＭＬ４−ＡＬＫ陽性非小細胞肺ガンから選択される、使用。

【請求項20】

請求項１３記載の使用において、前記ＡＬＫまたはＦＡＫ媒介性の症状または障害は、アンドロゲン非依存性前立腺ガン、乳ガン、および頭頸部扁平上皮ガンから選択される、使用。

【請求項21】

請求項１３記載の使用において、前記ＡＬＫまたはＦＡＫ媒介性の症状または障害は、ＡＬＫ媒介性の症状または障害である、使用。

【請求項22】

請求項１３記載の使用において、前記ＡＬＫまたはＦＡＫ媒介性の症状または障害は、ＦＡＫ媒介性の症状または障害である、使用。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

未分化リンパ腫キナーゼ（ａｎａｐｌａｓｔｉｃ Ｌｙｍｐｈｏｍａ Ｋｉｎａｓｅ：ＡＬＫ）は、細胞膜貫通受容体チロシンキナーゼであり、インスリン受容体サブファミリーに属する。ＡＬＫの最も豊富な発現は、新生児脳において起こり、脳の発達におけるＡＬＫについての可能性のある役割を示唆する（Ｄｕｙｓｔｅｒ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００１，２０，５６２３−５６３７（非特許文献１））。

【0002】

ＡＬＫは、特定の腫瘍の進行にも関係する。例えば、おおよそ６０パーセントの未分化大細胞型リンパ腫（ａｎａｐｌａｓｔｉｃ ｌａｒｇｅ ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａｓ：ＡＬＣＬ）は、ヌクレオホスミン（ｎｕｃｌｅｏｐｈｏｓｍｉｎ：ＮＰＭ）とＡＬＫの細胞内ドメインとから成る融合タンパク質を生じさせる染色体変異に関連する（Ａｒｍｉｔａｇｅ，Ｊ．Ｏ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，６^ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１，２２５６−２３１６（非特許文献２）；Ｋｕｔｏｋ Ｊ．Ｌ．& Ａｓｔｅｒ Ｊ．Ｃ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，２００２，２０，３６９１−３７０２（非特許文献３））。この変異タンパク質であるＮＰＭ−ＡＬＫは、下流のエフェクタの活性化を介してそのガン化特性の要因となる、構造的に活性チロシンキナーゼドメインを有する（Ｆａｌｉｎｉ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１９９９，９４，３５０９−３５１５（非特許文献４）；Ｍｏｒｒｉｓ，Ｓ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．，２００１，１１３，２７５−２９５（非特許文献５）；Ｄｕｙｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．；Ｋｕｔｏｋ & Ａｓｔｅｒ）。さらに、ガン化しているＥＭＬ４−ＡＬＫ融合遺伝子は、非小細胞肺ガン（ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ−ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ：ＮＳＣＬＣ）の患者において特定されてきた（Ｓｏｄａ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２００７，４４８，５６１−５６６（非特許文献６））。前記ガン化しているＥＭＬ４−ＡＬＫ融合タンパク質は、ＡＬＫ阻害剤治療についての標的を見込んでいるＡＬＫ融合タンパク質のリストにおける別のものを表す。実験データにより、構造的に活性なＡＬＫの異常な発現がＡＬＣＬの発病に直接関係し、ＡＬＫの阻害がＡＬＫ＋リンパ腫細胞の増殖を顕著に弱めることを説明されてきた（Ｋｕｅｆｅｒ，Ｍｕ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，１９９７，９０，２９０１−２９１０（非特許文献７）；Ｂａｉ，Ｒ．Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，１９９８，１８，６９５１−６９６１（非特許文献８）；Ｂａｉ，Ｒ．Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０００，９６，４３１９−４３２７（非特許文献９）；Ｅｒｇｉｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．，２００１，２９，１０８２−１０９０（非特許文献１０）；Ｓｌｕｐｉａｎｅｋ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００１，６１，２１９４−２１９９（非特許文献１１）；Ｔｕｒｔｕｒｒｏ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００２，８，２４０−２４５（非特許文献１２））。構造的に活性化されたキメラＡＬＫも、約６０％の、主に子供および若い成人に影響を及ぼす、ゆっくり増殖する肉腫である炎症性筋繊維芽細胞腫瘍（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｉｃ ｔｕｍｏｒｓ：ＩＭＴｓ）において説明されてきた（Ｌａｗｒｅｎｃｅ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，２０００，１５７，３７７−３８４（非特許文献１３）；Ｄｕｙｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．）。

【0003】

さらに、ＡＬＫおよびその推定リガンドであるプレイオトロフィンは、ヒトの神経膠芽細胞腫において過剰発現される（Ｓｔｏｉｃａ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００１，２７６，１６７７２−１６７７９（非特許文献１４））。マウスの研究では、ＡＬＫの欠失により、神経膠芽細胞腫の腫瘍増殖が低下し、動物の生存が延長される（Ｐｏｗｅｒｓ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００２，２７７，１４１５３−１４１５８（非特許文献１５）；Ｍｅｎｔｌｅｉｎ，Ｒ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，２００２，８３，７４７−７５３（非特許文献１６））。

【0004】

ＡＬＫ阻害剤は、ＡＬＣＬ、ＩＭＴ、増殖性障害、神経膠芽細胞腫、および可能性のある他の固形腫瘍についての現在の化学療法と組み合わせたいずれかの場合に、持続的な治癒を可能にすることが期待されるであろう。または、単独の治療剤として、それらの患者におけるガンの再発を防止するための維持的役割に使用され得る。種々のＡＬＫ阻害剤、例えば、インダゾロイソキノリン（国際公開第２００５／００９３８９号パンフレット（特許文献１））、チアゾールアミドおよびオキサゾールアミド（国際公開第２００５／０９７７６５号パンフレット（特許文献２））、ピロロピリミジン（国際公開第２００５０８０３９３号パンフレット（特許文献３））、ならびにピリミジンジアミン（国際公開第２００５／０１６８９４号パンフレット（特許文献４））が報告されてきた。

【0005】

国際公開第２００８／０５１５４７号パンフレット（特許文献５）には、２，４−ジアミノピリミジンの縮合二環式誘導体が、ＡＬＫおよびｃ−Ｍｅｔの阻害剤として開示されている。前記’５４７出願に開示された第一選択の薬剤候補は、ＣＥＰ−２８１２２であり、ＣＥＰ−２８１２２は、マウスの異種移植片モデルにおけるＳＵＰ−Ｍ２およびＫａｒｐａｓ−２９９のＡＬＫ−依存性腫瘍に対して、経口活性を有する強力なＡＬＫ阻害剤である。ＣＥＰ−２８１２２は、その開発がＣＥＰ−２８１２２処置されたサルにおいて重篤な肺毒性の予期しない発生により終了されるまで、ＩＮＤ可能な研究に発展していた。

【0006】

【化1】

【0007】

ＣＥＰ−２８１２２
接着班キナーゼ（Ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｋｉｎａｓｅ：ＦＡＫ）は、進化において保存されてきた、インテグリン受容体からのシグナル伝達の重要なトランスデューサとして機能するＥＣＭ（細胞外マトリックス）との細胞接触部位である接着班、ならびに、複数の受容体チロシンキナーゼ、例えば、ＥＧＦ−Ｒ、ＨＥＲ２、ＩＧＦ−Ｒ１、ＰＤＧＦ−Ｒ、およびＶＥＧＦ−Ｒ２、およびＴＩＥ−２に局在する、非受容体チロシンキナーゼである（Ｐａｒｓｏｎｓ，ＪＴ；Ｓｌａｃｋ−Ｄａｖｉｓ，Ｊ；Ｔｉｌｇｈｍａｎ，Ｒ；Ｒｏｂｅｒｔｓ，ＷＧ．Ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｋｉｎａｓｅ：ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００８，１４，６２７−６３２（非特許文献１７）；Ｋｙｕ−Ｈｏ Ｈａｎ，Ｅ；ＭｃＧｏｎｉｇａｌ，Ｔ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｋｉｎａｓｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒ−ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｄｒｕｇ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．Ａｎｔｉ−ｃａｎｃｅｒ Ａｇｅｎｔｓ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００７，７，６８１−６８４（非特許文献１８））。インテグリン活性化ＦＡＫは、他の基質をリン酸化し、複数のシグナル伝達経路を誘引し得る、Ｓｒｃと二成分複合体を形成する。複数のＳＨ２−およびＳＨ３−ドメインエフェクタタンパク質によるシグナル変換の媒介におけるＦＡＫ結合およびリン酸化の中心的な役割を与えられる（Ｍｉｔｒａ，ＳＫ；Ｈａｎｓｏｎ，ＤＡ；Ｓｃｈｌａｅｐｅｒ，ＤＤ．Ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｋｉｎａｓｅ：ｉｎ ｃｏｍｍａｎｄ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｃｅｌｌ ｍｏｔｉｌｉｔｙ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，２００５，６，５６−６８（非特許文献１９））。活性化されたＦＡＫは、正常および悪性の細胞において、細胞の接着、遊走、形態形成、増殖、および生存の媒介における中心的な役割を果たす（Ｍｉｔｒａ ｅｔ ａｌ．２００５；ＭｃＬｅａｎ，ＧＷ；Ｃａｒｒａｇｈｅｒ，ＮＯ；Ａｖｉｚｚｉｅｎｙｔｅ，Ｅ；ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｋｉｎａｓｅ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ−ａ ｎｅｗ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｙ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ，２００５，５，５０５−５１５（非特許文献２０）；およびＫｙｕ−Ｈｏ Ｈａｎ ａｎｄ ＭｃＧｏｎｉｇａｌ，２００７）。腫瘍では、ＦＡＫの活性化は、ガン細胞の特徴の１つである、足場非依存性細胞の生存を媒介する。さらに、ＦＡＫの過剰発現および活性化は、これらの悪性腫瘍における向上した浸潤性および転移性の表現型ならびに腫瘍の血管新生に関連すること（Ｏｗｅｎｓ，ＬＶ；Ｘｕ，Ｌ；Ｃｒａｖｅｎ，ＲＪ；ｅｔ ａｌ．Ｏｖｅｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｋｉｎａｓｅ（ｐ１２５ ＦＡＫ）ｉｎ ｉｎｖａｓｉｖｅ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｒｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１９９５，５５，２７５２−２７５５（非特許文献２１）；Ｔｒｅｍｂｌａｙ，Ｌ；Ｈａｕｃｋ，Ｗ．Ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｋｉｎａｓｅ（ｐｐ１２５ＦＡＫ）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｐａｘｉｌｌｉｎ ａｎｄ ｐ５０ＣＳＫ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，１９９６，６８，１６４−１７１（非特許文献２２）；Ｋｏｒｎｂｅｒｇ，ＩＪ．Ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｋｉｎａｓｅ ｉｎ ｏｒａｌ ｃａｎｃｅｒｓ．Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ，１９９８，２０：６３４−６３９（非特許文献２３）；Ｍｃ Ｃｌｅａｎ ｅｔ ａｌ ２００５；Ｋｙｕ−Ｈｏ Ｈａｎ ａｎｄ ＭｃＧｏｎｉｇａｌ，２００７）、ならびに、乏しい予後およびより短い転移のない生存に相関することが明らかである。

【0008】

複数の実証実験の研究が、ｓｉＲＮＡ（Ｈａｌｄｅｒ，Ｊ；Ｋａｍａｔ，ＡＡ；Ｌａｎｄｅｎ，ＣＮ；ｅｔ ａｌ．Ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｋｉｎａｓｅ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｕｓｉｎｇ ｉｎ ｖｉｖｏ ｓｈｏｒｔ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｉｎ ｎｅｕｔｒａｌ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｆｏｒ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００６，１２，４９１６−４９２４（非特許文献２４））、ドミナントネガティブのＦＡＫを使用して、種々の固形腫瘍において行われた。小分子ＦＡＫ阻害剤（Ｈａｌｄｅｒ，Ｊ；Ｌｉｎ，ＹＧ；Ｍｅｒｒｉｔｔ，ＷＭ；ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＴＡＥ２２６ ｉｎ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００７，６７，１０９７６−１０９８３（非特許文献２５）；Ｒｏｂｅｒｔｓ，ＷＧ；Ｕｎｇ，Ｅ；Ｗｈａｌｅｎ，Ｐ；ｅｔ ａｌ．Ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ ａ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＰＦ−５６２，２７１．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００８，６８，１９３５−１９４４（非特許文献２６）；Ｂａｇｉ ＣＭ；Ｒｏｂｅｒｔｓ ＧＷ；ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｅｎ ＣＪ．Ｄｕａｌ ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｋｉｎｓｅ／Ｐｙｋ２ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｈａｓ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｂｏｎｅ ｔｕｍｏｒｓ−ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｂｏｎｅ ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ，２００８，１１２，２３１３−２３２１（非特許文献２７））が、特にアンドロゲン非依存性前立腺ガン、乳ガン、およびＨＮＳＣＣｓについての、抗腫瘍／抗血管新生戦略としてのＦＡＫ阻害の治療的使用についての前臨床支援を提供してきた。ヌードラットでのヒト乳ガンの前臨床モデル（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１）において、小分子のＦＡＫ阻害剤（ＰＦ−５６２，２７１）の投与は、原発腫瘍の増殖および内脛骨腫瘍の拡散を阻害し、腫瘍誘導性骨損失を回復させた（Ｂａｇｉ ｅｔ ａｌ．，２００８）。Ｒｏｂｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．，（２００８）は、ＰＦ−５６２，２７１が骨転移を阻害し、骨吸収を防止し、骨転移を有する、および、骨転移を有しない、乳ガン患者およびアンドロゲン非依存性前立腺ガン患者における骨形成を向上させるのを示した。このことは、これらの特定の悪性腫瘍におけるＦＡＫ阻害の更なる利点を支持する。

【0009】

まとめると、異常なＡＬＫの活性化およびＦＡＫの構造的な活性化を、ヒトにおける特定種のガンの開始および進行と結びつける、明確な遺伝学的および生物学的証拠が存在する。かなりの証拠が、ＡＬＫ−およびＦＡＫ−陽性の腫瘍細胞が増殖および生存をするのにこれらのガン化遺伝子を必要とし、ＦＡＫの場合には、離れた部位に浸潤および転移するのに必要とすることを示す。一方、ＡＬＫおよびＦＡＫ両方のシグナル伝達の阻害は、腫瘍細胞の増殖停止またはアポトーシスをもたらし、客観的な細胞減少効果をもたらす。ＦＡＫ阻害は、特に骨転移の散在および溶骨性疾患により特徴付けられる特定のガンにおける、腫瘍運動性、浸潤、および転移拡散の減衰ももたらす。ＦＡＫ活性化は、腫瘍細胞を化学療法誘因性のアポトーシスから保護し、腫瘍の耐性に寄与する。（ｓｉＲＮＡよるか、または、薬理学的に）ＦＡＫ活性の調節は、生体内における化学療法剤（例えば、ドキソルビシン、ドセタキセル、およびゲムシタビン）の活性を増強する。このことは、特定のガンにおける合理的な組み合わせ治療の有用性を示唆する。ＡＬＫおよびＦＡＫは、健常な成人における最も正常な組織において、最小限に発現され、ガン化中、および／または、悪性進行の初期段階中の特定のガンにおいて、活性化および／または調節不全にされる。その結果として、正常な細胞に対する二重のＡＬＫおよびＦＡＫ阻害剤による処置の的確な作用は、最少であるはずであり、このことは、好ましい治療指数を形成する。

【0010】

ガンを処置するための、さらに安全で効果的なＡＬＫおよび／またはＦＡＫの阻害剤についての必要性が存在する。
この出願の発明に関連する先行技術文献情報としては、以下のものがある（国際出願日以降国際段階で引用された文献及び他国に国内移行した際に引用された文献を含む）。
（先行技術文献）
（特許文献）
（特許文献１） 国際公開第２００８／０５１５４７号
（特許文献２） 国際公開第２００５／０８０３９３号

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0011】

本発明は、式（Ｉ）

【化2】

【0012】

の化合物またはその塩形態を提供する。

【0013】

前記式（Ｉ）の化合物は、ＡＬＫおよびＦＡＫの阻害活性を有し、ＡＬＫ−またはＦＡＫ−媒介性の傷害または症状を処置するのに使用され得る。

【0014】

本発明は、少なくとも１つの薬学的に許容され得る賦形剤と共に、少なくとも１つの本発明の化合物を有する、薬学的組成物をさらに提供する。

【図面の簡単な説明】

【0015】

【図1】図１は、ＣＥＰ−３７４４０を調製するためのプロセスの模式的な概要を示す。

【図2】図２は、結晶質ＣＥＰ−３７４４０トリベンゼンスルホン酸塩のＸＲＰＤパターンを示す。

【図3】図３は、結晶質ＣＥＰ−３７４４０三塩酸塩・二水和物のＸＲＰＤパターンを示す。

【図4】図４は、マウスにおけるＳｕｐ−Ｍ２ ＡＬＣＬ腫瘍異種移植片での、経口でのＣＥＰ−３７４４０の抗腫瘍活性を示す。

【図5】図５は、ＣＥＰ−３７４４０を経口的に投与された、Ｓｕｐ−Ｍ２ ＡＬＣＬ腫瘍異種移植片を有するマウスの体重を示す。

【図6】図６は、経口投与後の、Ｓｕｐ−Ｍ２ ＡＬＣＬ腫瘍異種移植片を有するマウスにおける、ＣＥＰ−３７４４０の血漿および腫瘍におけるレベルを示す。

【図7】図７は、マウスにおけるＫａｒｐａｓ−２９９腫瘍異種移植片での、経口でのＣＥＰ−３７４４０の抗腫瘍活性を示す。

【図8】図８は、ＣＥＰ−３７４４０を経口的に投与された、Ｋａｒｐａｓ−２９９腫瘍異種移植片を有するマウスの体重を示す。

【図9】図９は、経口投与後の、Ｋａｒｐａｓ−２９９腫瘍異種移植片を有するマウスにおける、ＣＥＰ−３７４４０の血漿および腫瘍におけるレベルを示す。

【図10】図１０は、マウスにおけるＮＣＩ−Ｈ２２２８ ＮＳＣＬ腫瘍異種移植片での、経口でのＣＥＰ−３７４４０の抗腫瘍活性を示す。

【図11】図１１は、マウスにおけるＮＣＩ−Ｈ３１２２ ＮＳＣＬ腫瘍異種移植片での、経口でのＣＥＰ−３７４４０の抗腫瘍活性を示す。

【図12】図１２は、経口投与後の、ＮＣＩ−Ｈ２２２８ ＮＳＣＬ腫瘍異種移植片を有するマウスにおける、ＣＥＰ−３７４４０の血漿および腫瘍におけるレベルを示す。

【図13】図１３は、経口投与後の、ＮＣＩ−Ｈ３１２２ ＮＳＣＬ腫瘍異種移植片を有するマウスにおける、ＣＥＰ−３７４４０の血漿および腫瘍におけるレベルを示す。

【図14】図１４は、ＣＥＰ−３７４４０を経口的に投与された、ＮＣＩ−Ｈ２２２８ ＮＳＣＬ腫瘍異種移植片を有するマウスの体重を示す。

【図15】図１５は、ＣＥＰ−３７４４０を経口的に投与された、ＮＣＩ−Ｈ３１２２ ＮＳＣＬ腫瘍異種移植片を有するマウスの体重を示す。

【図16】図１６は、マウスにおけるＮＣＩ−Ｈ２２２８ ＮＳＣＬ腫瘍異種移植片での、経口でのＣＥＰ−３７４４０の抗腫瘍活性および長期腫瘍抑制を示す。

【図17】図１７は、ＣＥＰ−３７４４０を経口的に投与された、ＮＣＩ−Ｈ２２２８ ＮＳＣＬ腫瘍異種移植片を有するマウスの体重を示す。

【図18】図１８は、恒常的なＦＡＫ活性化を有するＰＣ−３前立腺腫瘍異種移植片を有するヌードマウスにおける、経口でのＣＥＰ−３７４４０およびＰＦ−５６２２７１の抗腫瘍活性を示す。

【図19】図１９は、ＨＣＣ−８２７ヒトＮＳＣＬガン腫異種移植片（ＥＭＬ４−ＡＬＫ陰性）を有するヌードマウスにおける、経口でのＣＥＰ−３７４４０およびＰＦ−５６２２７１の抗腫瘍活性を示す。

【図20】図２０は、ＣＥＰ−３７４４０またはＰＦ−５６２２７１を経口的に投与された、ＨＣＣ−８２７ヒトＮＳＣＬガン腫異種移植片（ＥＭＬ４−ＡＬＫ陰性）を有するヌードマウスの体重を示す。

【図21】図２１は、Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２ヒトＨＮＳＣＣガン腫異種移植片（ＥＭＬ４−ＡＬＫ陰性）を有する重症複合免疫不全マウスにおける、経口でのＣＥＰ−３７４４０およびＰＦ−５６２２７１のＦＡＫの腫瘍薬力学的阻害および抗腫瘍活性を示す。

【発明を実施するための形態】

【0016】

Ｉ．定義
本明細書で使用する時、下記の用語は、特に断らない限り、それらに基づく意味を有する。

【0017】

「薬学的組成物」は、ヒトに投与するのに適した、安全性／有効性のプロファイルを有する組成物を意味する。

【0018】

「薬学的に許容され得る賦形剤」は、生理学的に許容され得る材料を意味し、前記材料は、ヒトに投与された場合に、典型的には、アレルギー性または他の不都合な反応、例えば、異常亢進、めまい等を生じない。

【0019】

「薬学的に許容され得る塩」は、ヒトに投与するのに適した、安全性／有効性のプロファイルを有する塩を意味する。

【0020】

「対象」は、哺乳類のメンバーを意味する。哺乳類の例は、これらに限定されるものではないが、ヒト、霊長類、チンパンジー、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、ウマ、家畜、イヌ、ネコ、ヒツジ、およびウシを含む。

【0021】

「治療的に有効量」は、特定の対象または対象群において処置される障害または症状に関連する兆候の悪化を改善または阻害をするのに十分な化合物量を意味する。適切な剤型、投与量、および投与経路の決定は、薬学および医学の分野における当業者のレベル内であることが、理解されるべきである。

【0022】

「処置」は、処置される障害に関連するか、または、同障害により引き起こされる少なくとも１つの兆候または特徴の、急性的若しくは予防的減弱または緩和を意味する。例えば、処置は、障害の兆候の減弱または障害の完全な根絶を含み得る。

【0023】

ＩＩ．化合物
本発明は、式（Ｉ）

【化3】

【0024】

の化合物またはその塩形態を提供する。前記式（Ｉ）の化合物は、化学名２−［［５−クロロ−２［［（６Ｓ）−６−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］−１−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル］アミノ］ピリミジン−４−イル］アミノ］−Ｎ−メチル−ベンズアミドを有し、ＣＥＰ−３７４４０としても知られている。我々は、前記式（Ｉ）の化合物が、ＣＥＰ−２８１２２および他の関連化合物と比較して、驚くべき、予期しない特性を有することを見出してきた。

【0025】

前記式（Ｉ）の化合物の塩形態は、好ましくは、薬学的に許容され得る。前記式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容され得る酸塩形態は、これらに限定されるものではないが、無機酸、例えば、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸由来の塩およびそれらの混合物、ならびに、有機酸、例えば、脂肪族のモノ−およびジカルボン酸、フェニル置換されたアルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、アルカン二酸、芳香族酸、ならびに脂肪族および芳香族のスルホン酸由来の塩を含む。したがって、このような酸塩は、これらに限定されるものではないが、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、カプリル酸塩、イソ酪酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、安息香酸メチル、ジニトロ安息香酸塩、フタル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、およびそれらの混合物を含む。ある実施形態では、前記酸塩は、ベンゼンスルホン酸塩および塩化物から選択される。ある実施形態では、前記酸塩は、塩化物である。ある実施形態では、前記酸塩は、トリベンゼンスルホン酸塩である。ある実施形態では、前記トリベンゼンスルホン酸塩は、７．６２、１３．１１、１３．７６、および１４．０５±０．２°２Θから選択される１若しくはそれ以上のピークを有するＸＲＰＤパターンにより特徴付けられる。ある実施形態では、前記トリベンゼンスルホン酸塩は、６．８５、７．６２、８．０１、１３．１１、１３．７６、１４．０５、および１４．６０±０．２°２Θから選択される１若しくはそれ以上のピークを有するＸＲＰＤパターンにより特徴付けられる。ある実施形態では、前記トリベンゼンスルホン酸塩は、７．６２、１３．１１、１３．７６、１４．０５、１７．１０、１７．８６、および１８．１０±０．２°２Θから選択される１若しくはそれ以上のピークを有するＸＲＰＤパターンにより特徴付けられる。ある実施形態では、前記酸塩は、三塩酸である。ある実施形態では、前記酸塩は、三塩酸塩・二水和物である。ある実施形態では、前記三塩酸塩・二水和物は、５．４２、８．８６、１４．０６、１７．５２、および１８．５１±０．２°２Θから選択される１若しくはそれ以上のピークを有するＸＲＰＤパターンにより特徴付けられる。ある実施形態では、前記三塩酸塩・二水和物は、５．４２、５．９１、８．８６、１０．８０、１１．７９、１４．０６、１４．７２、１７．０２、１７．５２、および１８．５１±０．２°２Θから選択される１若しくはそれ以上のピークを有するＸＲＰＤパターンにより特徴付けられる。ある実施形態では、前記酸塩は、三塩酸・一水和物である。

【0026】

前記酸付加塩は、前記式（Ｉ）の化合物を、十分な量の所望の酸と接触させて、従来の方法で前記塩を産生することにより調製されてもよい。前記式（Ｉ）の化合物の遊離塩基形態は、前記塩形態を塩基と接触させ、従来の方法で遊離塩基を単離することにより再生されてもよい。

【0027】

本発明は、任意の物理的形状、例えば、非晶質または結晶質の固体、任意の多形体、任意の純粋な状態における、前記式（Ｉ）の化合物およびそれらの塩形態を含む。結晶質の多形体は、非溶解型および溶解型、例えば、水和型を含む。有機化合物、例えば、前記式（Ｉ）の化合物の結晶質および非晶質型を調製する方法は、当業者に周知である。

【0028】

ＩＩＩ．薬学的組成物
本発明は、薬学的に許容され得る賦形剤と共に、本発明の化合物（例えば、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩）を有する薬学的組成物をさらに提供する。本発明の化合物から薬学的組成物を調製するために、薬学的に許容され得る賦形剤は、固体または液体のいずれかであることができる。賦形剤は、例えば、キャリア、希釈剤、着香料、バインダ、保存料、錠剤の崩壊剤、または封入材料として作用し得る、１若しくはそれ以上の物質であることができる。前記薬学的組成物は、２若しくはそれ以上の本発明の化合物（例えば、２若しくはそれ以上の式（Ｉ）の化合物の異なる塩形態）を含んでもよい。好ましくは、前記薬学的組成物は、治療的に有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩形態を含む。一実施形態では、前記組成物は、ＡＬＫ−またはＦＡＫ−媒介性の障害または症状を処置するのに有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩形態を含む。好ましくは、本発明の薬学的組成物は、ＡＬＫ−またはＦＡＫ−媒介性の障害に関連する兆候または疾患の症状を、量的または質的に測定された場合に、低下させるであろう。前記組成物は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩形態および薬学的に許容され得る賦形剤に加えて、別の治療化合物、例えば、ガンの処置に有用な化合物も含んでもよい。

【0029】

本発明の化合物は、任意の形態、例えば、シロップ剤、エリキシル剤、懸濁液、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、ロゼンジ、トローチ、水溶液、クリーム、軟膏、ローション、ゲル、エマルジョン等で、薬学的組成物として配合され得る。固体状の調製物は、粉末、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ剤、坐剤、および分散顆粒を含む。好ましくは、前記薬学的組成物は、錠剤またはカプセル剤である。一実施形態では、前記薬学的組成物は、錠剤である。別の実施形態では、前記薬学的組成物は、カプセル剤である。

【0030】

粉末において、前記賦形剤は、微粉化された活性成分を含む混合物における微粉化された固形物でもよい。錠剤において、前記活性成分は、適切な割合において、必要な結合特性を有する賦形剤と混合され、所望の形状およびサイズに固められ得る。適切な賦形剤は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、乳糖、ペクチン、デキストリン、でんぷん、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、ココアバター等を含む。

【0031】

前記薬学的組成物は、好ましくは、１％から９５％（ｗ／ｗ）の活性化合物を含む。より好ましくは、前記薬学的組成物は、５％から７０％（ｗ／ｗ）の活性化合物を含む。

【0032】

坐剤を調製するために、低融点ワックス、例えば、脂肪酸グリセリドまたはココアバターの混合物が溶融され、前記活性成分が、撹拌によりそれに均質に分散され得る。ついで、前記溶融した均質な混合物は、都合のよいサイズの型に注入され、冷却されることにより、凝固され得る。

【0033】

液体状の調製物は、溶液、懸濁液、およびエマルジョンを含む。例えば、静脈内、筋肉内、皮内、および皮下の経路等よる非経口投与に適した配合物は、水性および非水性の等張性滅菌注射液を含む。前記注射液は、酸化防止剤、バッファ、静菌剤、ならびに、目的のレシピエントの血液と等張性の配合物にする媒質、ならびに、懸濁剤、溶解剤、増粘剤、安定剤、および保存剤を含み得る水性および非水性の滅菌懸濁液を含み得る。この発明の実施において、組成物は、例えば、静脈内注入により、経口、局所、末梢血管内、膀胱内、またはくも膜腔内に投与され得る。前記化合物の配合物は、ユニットドーズまたはマルチドーズで密封された容器、例えば、アンプルおよびバイアルに存在し得る。注射の溶液および懸濁液は、前述の種類の滅菌された粉末、顆粒、および錠剤から調製され得る。

【0034】

単独または、他の適切な成分との組み合わせにおける本発明の化合物は、吸入により投与されるエアロゾル配合物（すなわち、それらは噴霧され得る。）に製造され得る。エアロゾル配合物は、圧縮された許容され得る噴霧剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素等内に入れられ得る。

【0035】

薬学的に許容され得る賦形剤は、一部において、投与される特定の組成物ならびに前記組成物を投与するのに使用される特定の方法により決定される。したがって、本発明の薬学的組成物の幅広い各種の適切な配合物が存在する（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ ｅｄ．，Ｇｅｎｎａｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｅｄｓ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００を参照のこと。）。

【0036】

前記薬学的組成物における活性成分の量は、特定の用途に基づいて、例えば１ｍｇから１，０００ｍｇ、５ｍｇから５００ｍｇ、１０ｍｇから３００ｍｇ、または２５ｍｇから２５０ｍｇで変動または調節され得る。

【0037】

対象に対して投与される用量は、好ましくは、経時的に対象における有益な治療的応答を達成するのに十分である。前記有益な用量は、対象の症状、体重、表面積、または副作用の感受性に応じて、対象間で変動し得る。投与は、単独投与または分割投与により達成され得る。

【0038】

ＩＶ．処置方法
別の態様では、本発明は、対象におけるＡＬＫ−またはＦＡＫ−媒介性の障害または症状を処置する方法であって、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩形態を、前記対象に投与する工程を有する方法を提供する。別の態様では、本発明は、対象におけるＡＬＫ−またはＦＡＫ−媒介性の障害または症状の処置に使用するための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩形態を提供する。別の態様では、本発明は、対象におけるＡＬＫ−またはＦＡＫ−媒介性の障害または症状を処置するための医薬の調製に使用するための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩形態を提供する。好ましくは、前記式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩形態は、薬学的に許容され得る賦形剤を有する薬学的組成物として、前記対象に投与される。好ましくは、前記式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩形態は、治療的に有効量で前記対象に投与される。一実施形態では、前記ＡＬＫ−またはＦＡＫ−媒介性の症状または障害は、ガンである。別の実施形態では、前記ＡＬＫ−またはＦＡＫ−媒介性の症状または障害は、未分化大細胞型リンパ腫（ａｎａｐｌａｓｔｉｃ ｌａｒｇｅ ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ：ＡＬＣＬ）、非小細胞肺ガン（ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ：ＮＳＣＬＣ）、神経芽細胞腫、神経膠芽細胞腫、前立腺ガン、扁平上皮ガン（ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ＳＣＣ）、および乳ガンから選択される。ある実施形態では、前記ＡＬＫ−またはＦＡＫ−媒介性の症状または障害は、ＡＬＫ−陽性ＡＬＣＬ、ＥＭＬ４−ＡＬＫ−陽性ＮＳＣＬＣ、神経芽細胞腫、神経膠芽細胞腫、アンドロゲン非依存性前立腺ガン、乳ガン、および頭頸部扁平上皮ガン（ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ：ＨＮＳＣＣｓ）から選択される。ある実施形態では、前記ＡＬＫ−またはＦＡＫ−媒介性の症状または障害は、ＡＬＫ−陽性ＡＬＣＬ、ＥＭＬ４−ＡＬＫ−陽性ＮＳＣＬＣ、神経芽細胞腫、アンドロゲン非依存性前立腺ガン、乳ガン、およびＨＮＳＣＣｓら選択される。ある実施形態では、前記ＡＬＫ−またはＦＡＫ−媒介性の症状または障害は、ＡＬＫ−陽性ＡＬＣＬ、ＥＭＬ４−ＡＬＫ−陽性ＮＳＣＬＣ、神経芽細胞腫、および神経膠芽細胞腫から選択される。ある実施形態では、前記ＡＬＫ−またはＦＡＫ−媒介性の症状または障害は、ＡＬＫ−陽性ＡＬＣＬ、ＥＭＬ４−ＡＬＫ−陽性ＮＳＣＬＣ、および神経芽細胞腫から選択される。ある実施形態では、前記ＡＬＫ−またはＦＡＫ−媒介性の症状または障害は、ＡＬＫ−陽性ＡＬＣＬおよびＥＭＬ４−ＡＬＫ−陽性ＮＳＣＬＣから選択される。ある実施形態では、前記ＡＬＫ−またはＦＡＫ−媒介性の症状または障害は、アンドロゲン非依存性前立腺ガン、乳ガン、およびＨＮＳＣＣｓから選択される。ある実施形態では、前記ＡＬＫ−またはＦＡＫ−媒介性の症状または障害は、ＡＬＫ−媒介性の症状または障害である。ある実施形態では、前記ＡＬＫ−またはＦＡＫ−媒介性の症状または障害は、ＦＡＫ−媒介性の症状または障害である。ある実施形態では、前記ＡＬＫ−またはＦＡＫ−媒介性の症状または障害は、筋繊維芽細胞腫である。ある実施形態では、前記ＡＬＫ−またはＦＡＫ−媒介性の症状または障害は、ＴＰＭ３−ＡＬＫまたはＴＰＭ４−ＡＬＫ発ガン遺伝子を有する筋繊維芽細胞腫である。ある実施形態では、前記ＡＬＫ−またはＦＡＫ−媒介性の症状または障害は、ＴＰＭ３−ＡＬＫ発ガン遺伝子を有する筋繊維芽細胞腫である。ある実施形態では、前記ＡＬＫ−またはＦＡＫ−媒介性の症状または障害は、ＴＰＭ４−ＡＬＫ発ガン遺伝子を有する筋繊維芽細胞腫である。

【0039】

前記ＡＬＫ−またはＦＡＫ−媒介性の障害または症状は、前記障害または症状の性質に応じて、本発明の化合物を使用して、予防的、急性的、または慢性的に処置され得る。好ましくは、これらの方法それぞれにおける対象は、ヒトである。

【0040】

別の実施形態では、本発明は、対象における増殖性障害を処置する方法であって、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩形態を、前記対象に投与する工程を有する方法を提供する。別の態様では、本発明は、対象における増殖性障害を処置するのに使用するための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩形態を提供する。別の態様では、本発明は、対象における増殖性障害を処置するための医薬の調製において使用するための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩形態を提供する。好ましくは、前記式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩形態は、薬学的に許容され得る賦形剤を有する薬学的組成物において、前記対象に投与される。好ましくは、前記式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩形態は、薬学的に許容され得る量で前記対象に投与される。ある実施形態では、前記増殖性障害は、ＡＬＫ−またはＦＡＫ−媒介性である。ある実施形態では、前記増殖性障害は、ガンである。ある実施形態では、前記増殖性障害は、未分化大細胞型リンパ腫（ａｎａｐｌａｓｔｉｃ ｌａｒｇｅ ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ：ＡＬＣＬ）、非小細胞肺ガン（ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ：ＮＳＣＬＣ）、神経芽細胞腫、神経膠芽細胞腫、前立腺ガン、扁平上皮ガン（ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ＳＣＣ）、および乳ガンから選択される。ある実施形態では、前記増殖性障害は、ＡＬＫ−陽性ＡＬＣＬ、ＥＭＬ４−ＡＬＫ−陽性ＮＳＣＬＣ、神経芽細胞腫、神経膠芽細胞腫、アンドロゲン非依存性前立腺ガン、乳ガン、および頭頸部扁平上皮ガン（ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ：ＨＮＳＣＣｓ）から選択される。ある実施形態では、前記増殖性障害は、ＡＬＫ−陽性ＡＬＣＬ、ＥＭＬ４−ＡＬＫ−陽性ＮＳＣＬＣ、神経芽細胞腫、アンドロゲン非依存性前立腺ガン、乳ガン、およびＨＮＳＣＣｓから選択される。ある実施形態では、前記増殖性障害は、ＡＬＫ−陽性ＡＬＣＬ、ＥＭＬ４−ＡＬＫ−陽性ＮＳＣＬＣ、神経芽細胞腫、および神経膠芽細胞腫から選択される。ある実施形態では、前記増殖性障害は、ＡＬＫ−陽性ＡＬＣＬ、ＥＭＬ４−ＡＬＫ−陽性ＮＳＣＬＣ、および神経芽細胞腫から選択される。ある実施形態では、前記増殖性障害は、ＡＬＫ−陽性ＡＬＣＬおよびＥＭＬ４−ＡＬＫ−陽性ＮＳＣＬＣから選択される。ある実施形態では、前記増殖性障害は、アンドロゲン非依存性前立腺ガン、乳ガン、およびＨＮＳＣＣｓから選択される。

【0041】

前記増殖性障害は、前記障害または症状の性質に応じて、本発明の化合物を使用して、予防的、急性的、または慢性的に処置され得る。好ましくは、これらの方法それぞれにおける対象は、ヒトである。

【0042】

治療用途において、本発明の化合物は、幅広い各種の経口および非経口の剤形で調製および投与され得る。このため、本発明の化合物は、注射により、すなわち、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、十二指腸内、または腹腔内に投与され得る。ある実施形態では、本発明の化合物は、静脈内または皮下に投与される。本明細書に記載の化合物は、吸入により、例えば、鼻腔内にも投与され得る。さらに、本発明の化合物は、経皮的に投与され得る。別の実施形態では、本発明の化合物は、経口的に送達される。前記化合物は、直腸的、舌下的にまたは吹送法によっても送達され得る。

【0043】

具体的な状況についての適切な用量の決定は、当業者の範囲内である。一般的には、処置は、前記化合物の最適な用量未満である、より少ない用量で開始される。その後、前記用量は、その環境下において最適な効果が達成されるまで、少量ずつ増加される。便宜上、１日あたりの総用量は、分割されてもよく、必要に応じて、日内で部分的に投与されてもよい。典型的な用量は、１日あたりに約１ｍｇから約１，０００ｍｇ、例えば、１日あたりに約５ｍｇから約５００ｍｇである。ある実施形態では、前記用量は、１日あたりに約１０ｍｇから約３００ｍｇ、例えば、１日あたりに約２５ｍｇから約２５０ｍｇである。

【0044】

Ｖ．化学
ＣＥＰ−２８１２２
（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）−３−［５−クロロ−２−（（Ｓ）−１−メトキシ−７−モルホリン−４−イル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾシクロヘプテン−２−イルアミノ）−ピリミジン−４−イルアミノ］−ビシクロ［２．２．１］ヘプト−５−エン−２−カルボン酸アミド（ＣＥＰ−２８１２２）は、国際公開２００８／０５１５４７号パンフレット（Ａｈｍｅｄ ｅｔ ａｌ．）の実施例８８２に記載のように調製される。
ＣＥＰ−３７４４０
２−（５−クロロ−２−｛（Ｓ）−６−［４−（２−ヒドロキシ−エチル）−ピペラジン−１−イル］−１−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾシクロヘプテン−２−イルアミノ｝−ピリミジン−４−イルアミノ）−Ｎ−メチル−ベンズアミドの合成は、図１に基づいて、工程１〜８に概説される手順にしたがって行われ得る。

【0045】

工程１：５−メトキシ−１−メチレン−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン：室温でのＴＨＦ（２５０ｍＬ）における、５−メトキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ナフタレン−１−オン（２５ｇ、０．１４ｍｏｌ）およびメチルトリフェニルホスホニウムヨウ化物（１．１３当量）のスラリに、カリウム ｔ−ブトキシド（１．６当量）を、触って温かいより高くない温度を維持するような割合で添加した。前記反応を、１時間撹拌し、濃縮した。ついで、前記反応を、３倍量のヘキサンと共沸して、過剰のｔ−ブタノールを除去した。新たにヘキサンを、前記溶液に添加し、オーバーナイト静置させて、粉砕した。赤褐色の固形物を、ろ過により除去し、ろ液を、水で２回洗浄し、濃縮した。ＩＳＣＯ（３３０ｇのＳｉＯ_２カートリッジ：段階的にヘキサンおよび、ついで、ＤＣＭ）におけるクロマトグラフィによる精製により、淡い黄色のオイルとして、表題の化合物を取得する（２４ｇ、９９％）。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）７．２９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．４９（ｓ，１Ｈ），４．９８（ｓ，１Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），２．７７（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），２．５３−２．５０（ｍ，２Ｈ），１．９３−１．８７（ｍ，２Ｈ）。

【0046】

工程２：１−メトキシ−５，７，８，９−テトラヒドロ−ベンゾシクロヘプテン−６−オン：１５０ｍＬのＭｅＯＨにおける５−メトキシ−１−メチレン−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン（２３．８ｇ、０．１３７ｍｏｌ）を、３００ｍＬのＭｅＯＨにおける硝酸タリウム（ＩＩＩ）三水和物（１．０当量）の新鮮に調製された溶液に、一部添加した。１分間撹拌し、４００ｍＬのクロロホルムを添加した。前記溶液をろ過し、有機物を、ジクロロメタンと水間で分割した。前記有機物を乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、濃縮した。クロマトグラフィ（ＩＳＣＯ、３３０ｇのシリカカートリッジ；段階的溶出ヘキサン（５分）、ついで、１００％ジクロロメタンへの７分の勾配（２０分））による精製により、淡い黄色のオイルとして、最も極性の生成物として、表題の化合物を取得する（２６ｇ、９７％）。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）７．１６（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．７３（ｓ，２Ｈ），３．０５−３．０１（ｍ，２Ｈ），２．５５（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），２．０１−１．９６（ｍ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ＝１９１（Ｍ＋Ｈ）＋

【0047】

工程３：１−メトキシ−２−ニトロ−５，７，８，９−テトラヒドロ−ベンゾシクロヘプテン−６−オン：０℃でのアセトニトリル（５０ｍＬ）および無水トリフルオロ酢酸（１００ｍＬ）における硝酸カリウムに、５０ｍＬのアセトニトリルにおける１−メトキシ−５，７，８，９−テトラヒドロ−ベンゾシクロヘプテン−６−オン（２５ｇ、０．１３１ｍｏｌ）を滴下して添加した。前記反応を、室温に温めながら、２．５時間撹拌した。前記反応を、ロータリーエバポレータにおいて加熱することなく濃縮した。ＭｅＯＨを添加し、簡単に撹拌した。再濃縮し、ジクロロメタンと飽和重炭酸ナトリウム水溶液間で分割することにより後処理した。有機層を分離し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、クロマトグラフィＩＳＣＯ（３３０ｇのシリカカートリッジ：勾配溶出−６０分にわたる、１０から５０％ ＥＡ：ＨＥＸ）により濃縮および精製をして、２つの異性体を取得した。表題の化合物は、後者の溶出であった（１０．７グラム、収率３４．６％）。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）７．７０（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），３．８０（ｓ，２Ｈ），３．１３−３．０９（ｍ，２Ｈ），２．６０（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），２．１０−２．０３（ｍ，２Ｈ）。

【0048】

工程４：２−［４−（１−メトキシ−２−ニトロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾシクロヘプテン−６−イル）−ピペラジン−１−イル］−エタノール：塩化メチレン（８７０ｍｌ）における１−メトキシ−２−ニトロ−５，７，８，９−テトラヒドロ−ベンゾシクロヘプテン−６−オン（１５．０９ｇ、６４．１５ｍｍｏｌ）を、２−ピペラジン−１−イル−エタノール（３当量）、続けて、酢酸（１０当量）で処理した。前記混合物を、５０℃で２時間撹拌し、０℃に冷却し、トリアセトキシホウ化水素ナトリウム（４当量）を添加し、ついで、室温に温め、撹拌した。数時間後、開始材料が未だに存在した。０．４当量の更なるトリアセトキシホウ化水素ナトリウムを添加し、ついで、６時間後に再度添加した。オーバーナイト撹拌した。飽和重炭酸ナトリウムの水溶液および氷の溶液に注ぎ、１Ｎ 水酸化ナトリウムによりｐＨ１０の塩基性にし、２×ジクロロメタンで抽出し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過および濃縮した。この材料を、エタノールに溶解し、ＨＣｌ／エタノールを添加した。得られた沈殿物を、２時間粉砕し、ついで、ろ過した。前記固形物を、ＮａＯＨ、続けて、重炭酸ナトリウムを使用して遊離塩基にし、ジクロロメタンに抽出して、表題の化合物を取得した（１９ｇ、収率８５％）。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）７．５６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），３．６３−３．０６（ｍ，２Ｈ），３．２９−３．２４（ｍ，１Ｈ），３．００−２．８６（ｍ，３Ｈ），２．７２−２．６７（ｍ，２Ｈ），２．６０−２．５１（ｍ，８Ｈ），２．４６−２．３７（ｍ，２Ｈ），２．１２−２．０７（ｍ，２Ｈ），１．８７−１．７８（ｍ，１Ｈ），１．３７−１．２９（ｍ，１Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ＝３５０（Ｍ＋Ｈ）＋

【0049】

工程５：２−［４−（２−アミノ−１−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾシクロヘプテン−６−イル）−ピペラジン−１−イル］−エタノール。２−［４−（１−メトキシ−２−ニトロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾシクロヘプテン−６−イル）−ピペラジン−１−イル］−エタノール（１９．０ｇ、５４．４ｍｍｏｌ）を、２つのバッチに分割し、全量のエタノール（２３２ｍＬ）に溶解した。１０％のＰｄ／Ｃ（１．７４ｇ、１．６４ｍｍｏｌ）を半分に分割した。前記反応を、５０ｐｓｉで３〜４時間水素化した。各反応混合物を、セライトを通してろ過し、Ｐｄを除去した。前記ろ液を組み合わせ、ついで、濃縮した。表題の化合物を、泡状の固形物として単離した（１７．２５ｇ、収率９９％）。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）６．７６（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．５３（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），３．７２（ｂｒｏａｄ ｓ，３Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），３．６４（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），３．２６−３．２０（ｍ，１Ｈ），２．８４−２．７２（ｍ，５Ｈ），２．６２−２．５６（ｍ，８Ｈ），２．４２−２．３５（ｍ，２Ｈ），２．４０−２．３７（ｍ，１Ｈ），１．８１−１．７４（ｍ，１Ｈ），１．７０（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），１．４１−１．３３（ｍ，１Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ＝３２０（Ｍ＋Ｈ）＋

【0050】

工程６：２−［４−（（Ｓ）−２−アミノ−１−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾシクロヘプテン−６−イル）−ピペラジン−１−イル］−エタノール：３４グラムのラセミ体２−［４−（２−アミノ−１−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾシクロヘプテン−６−イル）−ピペラジン−１−イル］−エタノールを、注入量：０．５ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬのエタノールで２２０ｎｍの波長をモニタする、１５％ メタノール（０．２％ ＤＥＡ）／ＣＯ_２、流量８０ｍＬ／分での１００ｂａｒ溶出による、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪ−Ｈ（３×１５ｃｍ）８０８０４１カラムを使用するＳＦＣ（超臨界液ＣＯ_２）クロマトグラフィを使用して分離した。１６．９グラムの（Ｒ）−エナンチオマおよび１７グラムの表題の化合物を、（Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪ−Ｈ分析用カラムを使用して測定された）化学純度>９９％および不斉収率（ｅｅ）>９９％で単離した。ＮＭＲおよび質量は、前記ラセミ材料と同等であった。第１の溶出異性体の絶対配置は、ビス−ｐ−ブロモベンジル誘導体：４−ブロモ−安息香酸 ２−｛４−［（Ｒ）−２−（４−ブロモ−ベンゾイルアミノ）−１−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾシクロヘプテン−６−イル］−ピペラジン−１−イル｝−エチルエステルの異常分散を使用する小分子Ｘ線により、（Ｒ）型として、明確に指定された。したがって、第２の溶出エナンチオマを、（Ｓ）型であると決定した。

【0051】

工程７：２−（２，５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ）−Ｎ−メチル−ベンズアミド：ＤＭＦ（０．５Ｌ）における２−アミノ−Ｎ−メチル−ベンズアミド（２４．４ｇ、０．１６ｍｏｌ）に、２，４，５−トリクロロ−ピリミジン（３９ｇ、１．３当量）および炭酸カリウム（１．３当量）を添加した。アルゴン下において７５℃で５時間撹拌し、ついで、室温でオーバーナイト撹拌した。１Ｌの水に注ぎ、沈殿物を、ろ過により単離し、１：１ アセトニトリル：水で洗浄し、続けて、気流中および真空下で乾燥させて、黄色の固形物として、表題の化合物を取得した（３８ｇ、収率７８％）。１１．７０（ｓ，１Ｈ），８．７４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．２８（ｓ，１Ｈ），３．０６（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，３Ｈ）

【0052】

工程８：２−（５−クロロ−２−｛（Ｓ）−６−［４−（２−ヒドロキシ−エチル）−ピペラジン−１−イル］−１−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾシクロヘプテン−２−イルアミノ｝−ピリミジン−４−イルアミノ）−Ｎ−メチル−ベンズアミド：密封された容器に、２−［４−（（Ｓ）−２−アミノ−１−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾシクロヘプテン−６−イル）−ピペラジン−１−イル］−エタノール（２．６９ｇ、８．４１ｍｍｏｌ）および２−（２，５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ）−Ｎ−メチル−ベンズアミド（２．００ｇ、６．７３ｍｍｏｌ）を、１−メトキシ−２−プロパノール（１２０ｍＬ、１２００ｍｍｏｌ）において組み合わせ、続けて、メタンスルホン酸（２．４４ｍＬ、３７．７ｍｍｏｌ）を添加した。ついで、前記反応を、９０℃で１８時間加熱した。前記反応混合物を、分離ロートに添加し、曇ったｐｐｔが形成されるまで、飽和重炭酸塩で希釈した。これを、ジクロロメタン ３×で抽出した。ついで、有機層を、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過および濃縮をした。残渣を、吸い出して乾燥させ、ついで、ＩＳＣＯフラッシュカラムにおいてクロマトグラフした。それを、順相カラム上のジクロロメタンに注入し、０〜１０％（ジクロロメタン：ＭｅＯＨにおける１０％ ＮＨ_４ＯＨ）の勾配において溶出した。所望の生成物を、９〜１０％付近で溶出した。１０％勾配を、生成物が完全に溶出するまで保持した。組み合わせた画分を濃縮し、Ｇｉｌｓｏｎ逆相ＨＰＬＣ勾配溶出０〜４０％ ＣＨ_３ＣＮにおいてクロマトグラフした。順相シリカおよび逆相ＨＰＬＣを使用して、クロマトグラフィを繰り返し、必要に応じて更なる精製を達成した。全ての材料の中和および濃縮をした後、得られた固形物を、ＥｔＯＡｃ中で泡を取り除くことにより取得し、濃縮して複数回乾燥させ、表題の化合物を取得した（１．１ｇ、２８％）。１１．０２（ｓ，１Ｈ），８．６９（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），８．１３（ｓ，１Ｈ），８．０８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５９−７．５０（ｍ，２Ｈ），７．４１（ｓ，１Ｈ），７．１３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），６．２１（ｓ，１Ｈ），３．７４（ｍ，３Ｈ），３．６６−３．６３（ｍ，２Ｈ），３．２９−３．２３（ｍ，１Ｈ），３．０６（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，３Ｈ），２．９２−２．７２（ｍ，５Ｈ），２．６６−２．５５（ｍ，８Ｈ），２．４８−２．３９（ｍ，２Ｈ），２．１６−２．１０（ｍ，２Ｈ），１．８７−１．７７（ｍ，１Ｈ），１．４２−１．３２（ｍ，１Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ＝５８０（Ｍ＋Ｈ）＋

【0053】

ＣＥＰ−３７４４０非晶質ＨＣｌ塩
２−（５−クロロ−２−｛６−［４−（２−ヒドロキシ−エチル）−ピペラジン−１−イル］−１−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾシクロヘプテン−２−イルアミノ｝−ピリミジン−４−イルアミノ）−Ｎ−メチル−ベンズアミド・塩酸：２−（５−クロロ−２−｛６−［４−（２−ヒドロキシ−エチル）−ピペラジン−１−イル］−１−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾシクロヘプテン−２−イルアミノ｝−ピリミジン−４−イルアミノ）−Ｎ−メチル−ベンズアミド（４．９０ｇ、８．４５ｍｍｏｌ）およびエタノールにおける２．５Ｍ ＨＣｌ（１３．５ｍＬ、３３．８ｍｍｏｌ）を、それらがエタノール（１６４ｍＬ）に溶解されるまで加熱した。前記反応を、エタノールから２回濃縮し、ついで、少量のエタノールにおいて、完全に溶解されるまで温めた。この溶液を、撹拌（<１００ｒｐｍ）しながら、ゆっくり冷却した。固体の沈殿物が、前記溶液が冷却される前にすぐに形成された。この混合物を、室温になるまで撹拌し、ついで、ろ過した。固形物を、エタノール、続けて、エーテルで洗浄し、ついで、高真空下で直接吸い出して乾燥させて、２−（５−クロロ−２−｛６−［４−（２−ヒドロキシ−エチル）−ピペラジン−１−イル］−１−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾシクロヘプテン−２−イルアミノ｝−ピリミジン−４−イルアミノ）−Ｎ−メチル−ベンズアミド・塩酸（５．３グラム、定量収率）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ ８．５５（ｓ，１Ｈ），８．１７（ｓ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），７．３６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），４．００−３．９５（ｍ，４Ｈ），３．８３−３．７２（ｍ，５Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ），３．６５−３．５９（ｍ，２Ｈ），３．４７−３．３８（ｍ，５Ｈ），２．９５（ｓ，３Ｈ），２．７２−２．６５（ｍ，１Ｈ），２．４４−２．３８（ｍ，１Ｈ），２．２９−２．２８（ｍ，１Ｈ），２．１９−２．１２（ｍ，１Ｈ），１．５９−１．４９（ｍ，１Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ＝５８０（Ｍ＋Ｈ）＋。

【0054】

ＣＥＰ−３７４４０塩のスクリーニング
塩のスクリーニング実験を、（ａ）２７種類の酸（酢酸、アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、クエン酸、Ｄ−グルコン酸、ＤＬグルタミン酸、ＤＬ−乳酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グリコール酸、馬尿酸、臭化水素酸（４８％水溶液）、塩酸（２．５Ｍ、ＥｔＯＨ）、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−酒石酸、Ｌ−ピログルタミン酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、オルトリン酸、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物、プロピオン酸、コハク酸、および硫酸）を使用するメタノール、（ｂ）９種類の酸（ベンゼンスルホン酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、臭化水素酸（４８％水溶液）、ナフタレン−２−スルホン酸、ｏ−リン酸（８５％）、硫酸、ｐ−トルエンスルホン酸、および塩酸（エタノール））を使用するジクロロメタンおよびテトラヒドロフラン、ならびに、（ｃ）ベンゼンスルホン酸、臭化水素酸（４８％水溶液）、ｏ−リン酸、硫酸、ｐ−トルエンスルホン酸、および塩酸（エタノール）を使用するクロロホルム、アセトン、酢酸エチル、および１−プロパノールにおいて行った。多くの実験において、塩形態が提供されたが、少しの実験においてのみ、結晶質の塩がもたらされ、２つの塩形態：トリベンゼンスルホン酸塩形態および三塩酸・二水和物形態のみが、結晶質で、安定で、再現可能であった。薬学的観点から、前記三塩酸・二水和物が、前記トリベンゼンスルホン酸塩に対して好ましい。ＨＣｌは、一般的に安全であると認識されている（ｇｅｎｅｒａｌｌｙ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ａｓ ｓａｆｅ：ＧＲＡＳ）分類１の酸付加塩であり、一方、ベンゼンスルホン酸は、ＧＲＡＳでない分類２の酸付加塩であるためである（Ｓｔａｈｌ，Ｈ．Ｐ．& Ｗｅｒｍｕｔｈ，Ｃ．Ｇ．，Ｅｄｉｔｏｒｓ，２００２ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｓａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ．Ｖｗｅｒｌａｇ ＨｅｌｖｅｔｉｃａＣｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ）。毒性がほとんどないことに加えて、ＨＣｌは、ベンゼンスルホン酸より低分子量を有し、より高いＡＰＩ／酸比およびより低い有効用量を提供する。

【0055】

粉末Ｘ線回折パターンを、ＣｕＫα放射を使用して、４５ｋＶおよび４０ｍＡにおいて、Ｘ’ｃｅｌｅｒａｔｏｒ検出器を備えるＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ Ｘ Ｐｅｒｔ Ｐｒｏ回折計において記録した。Ｋ_α１放射を、高度に配向した結晶（Ｇｅ１１１）入射ビームモノクロメータにより取得した。１０ｍｍビームマスクならびに、固定した（１／４°）発散スリットおよび散乱防止（１／８°）スリットを、前記入射ビーム側に挿入した。固定した５ｍｍの受光スリットおよび０．０４ラジアン・ソーラ・ブロックを、回折ビーム側に挿入した。前記Ｘ線粉末パターンのスキャンを、おおよそ０．５°／分のスキャン速度をもたらす、０．００８０°のステップサイズおよび９６．０６秒の計測時間により、約２から４０°２θまで収集した。サンプルを、測定のために、シリコンのゼロバックグラウンド（ｚｅｒｏ ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ：ＺＢＧ）プレート上に広げた。前記サンプルを、ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ ＰＷ３０６４スピナーを使用して回転させた（１５回転／分）。データ収集前のＳｉ参照基準の測定により、２θについての値および、２８．４４<２θ<２８．５０の許容範囲の十分範囲内であり、１５０ｃｐｓの最小ピーク高さより有意に高かった強度がもたらされた。

【0056】

ＣＥＰ−３７４４０トリベンゼンスルホン酸塩
ＣＥＰ−３７４４０の遊離塩基（５００ｍｇ、０．８６２ｍｍｏｌ）を、室温で５分撹拌することにより、６ｍＬのテトラヒドロフランに溶解した。この溶液を、ガラス製の２０ｍＬのシンチレーションバイアル（１６×６０ｍｍ）における、ベンゼンスルホン酸（５４５．６ｍｇ、３．４５ｍｍｏｌ）に、一度に１ｍＬ添加した。サンプルを、（室温において）添加中に、撹拌バーを使用して混合した。ＣＥＰ−３７４４０の溶液を全て添加した時点で、オイルと固形物が見られた。前記サンプルを、ＨＥＬ Ｐｏｌｙｂｌｏｃｋ（商標）ユニットにおいて、５〜７℃で１９時間撹拌した。前記固形物を、吸引ろ過で単離した。前記固形物を、ハウス真空下において、５０℃で５時間乾燥させて、８３５ｍｇ（８０％回収）のわずかに黄色の固形物を取得した。ＨＰＬＣ純度、アッセイおよび化合物の色は、１．５ｍＬの水に６１６ｍｇを懸濁させ、得られたスラリを室温で３０分間撹拌することにより改善された。前記固形物を吸引ろ過により単離し、フィルタパッド上の固形物を、１ｍＬの水で洗浄した。白色の固形物を、ハウス真空下において、５０℃で６８時間乾燥させて、４０６ｍｇを収集した（６７％回収）。トリベンゼンスルホン酸塩は、約２０〜３３ｍｇ／ｍＬの水溶性を有する。

【0057】

結晶質トリベンゼンスルホン酸塩のＸ線回折データ特性を、表１および図２に示す。

【0058】

【表1】

【0059】

ＣＥＰ−３７４４０三塩酸・二水和物
２００ｍｇのＣＥＰ−３７４４０遊離塩基を含む２０ｍＬのシンチレーションバイアルに、ｎ−ブチルアルコール（５ｍＬ）を、室温で添加した。５分間撹拌した後、前記遊離塩基は、溶液となった。ついで、ＨＣｌ（ＥｔＯＨにおける２．５Ｍ、０．４３５ｍＬ、３．１５当量）を添加し、白色の固形物（非晶質のＨＣｌ塩）の直接沈殿物を得た。得られたスラリを、８５℃に２０分にわたって加熱した（注記：おおよそ６０℃で、溶液に固形物が残っていなかった。）。８０℃と８５℃間の溶液を撹拌することにより、３０分後に自己核形成をもたらされた。前記自己核形成により、白色の固形物の更なる沈殿物がもたらされた。前記反応を合計２時間撹拌した後、得られたスラリを、５℃に１時間にわたって冷却した。０〜５℃のスラリを、更に１時間撹拌し、ついで、ろ過し、最少量の冷えたｎ−ブチルアルコールで洗浄した。ついで、前記固形物を、５５℃でオーバーナイト乾燥させた。ＲＨ３０〜７０％の空気に静置して、２０８ｍｇのＣＥＰ−３７４４０−３ＨＣｌ−２Ｈ_２Ｏを取得した。

【0060】

結晶質三塩酸塩・二水和物のＸ線回折パターン特性を、表２および図３に示す。前記塩は、ＲＨ３０〜８０％で安定であるが、ＲＨ３０％未満で三塩酸・一水和物型に可逆的に変換され、ＲＨ８０％を超えると高度に水和された非晶質型に不可逆的に変換される。

【0061】

【表2】

【0062】

ＶＩ．生物学
Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｙ系ラットにおけるＣＥＰ−２８１２２の、４週間の回復期間を含む１３週間の経口毒性および毒物動態学研究
２０匹のラット／性別の３つの処置群を、３０、７５、および１５０ｍｇの遊離塩基／ｋｇ／日の各用量レベルで、ＣＥＰ−２８１２２を投与した（モノ−メタンスルホン酸、モノ−ＨＣｌの塩形態として投与した）。２０匹の動物／性別の１つの更なる群は、コントロールとしての役割を果たし、媒体である蒸留水を与えられた。前記薬剤または媒体を、経口の強制飼養により全ての群に、１０ｍＬ／ｋｇ／投与の用量で、１日１回９１日の連続日数投与した。投与期間後、５匹の動物／性別／群を、４週間の回復期間において維持した。さらに、３匹の動物／性別の１つの群および９匹の動物／性別／群の３つの群は、毒物動態学（ＴＫ）の動物としての役割を果たし、前記主要な研究群と同じ方法および同じ用量レベルで、媒体または薬剤を与えられた。

【0063】

罹患、死亡、傷害、ならびに食餌および水の利用性についての観察を、全ての動物について、少なくとも毎日２回行った。臨床的観察を、主要な研究動物において毎週行った。投与の開始前（週−１）および研究中毎週、全ての動物について、体重の測定および記録をした。摂食量を、主要な研究動物について、毎週測定および記録した。

【0064】

眼底検査を、主要な研究動物について、予備試験ならびに終了および回復剖検前に行った。所定の臨床病理学的評価用の血液サンプルを、主要な研究動物から、４週目の終わりならびに終了および回復剖検において収集した。尿分析評価用の尿サンプルを、主要な研究動物から、終了および回復剖検前に収集した。前記薬剤の血漿濃度を決定するための血液サンプルを、所定のＴＫ動物から、１日目、４週目、１３週目の所定の時点で収集した。最後の血液収集後に、前記ＴＫ動物を安楽死させ、死体を廃棄した。終了および回復期間の最後に、剖検を行った。臓器の重量を記録し、選択された組織を、顕微鏡試験した。

【0065】

カニクイザルにおけるＣＥＰ−２８１２２の、６週間の回復期間を含む１３週間の経口毒性および毒物動態学研究
ＣＥＰ−２８１２２溶液を、注射用滅菌水（ｓｔｅｒｉｌｅ ｗａｔｅｒ ｆｏｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ：ＳＷＦＩ）に、ＣＥＰ−２８１２２のモノ−メタンスルホン酸、モノ−ＨＣｌの塩を溶解することにより、毎週調製して、所望の投与濃度レベルを達成した。

【0066】

４０匹の実験的に野生のカニクイザル（２０匹のオスおよび２０匹のメス）（研究の開始時（１日目）において、前記オスについては２．５から４．４歳齢および前記メスについては２．５から４．０歳齢、ならびに、前記オスについては２．１から３．３ｋｇおよび前記メスについては２．０から３．１ｋｇ）を、３つの投与群および媒体コントロール群の１つに割り当てた。５匹の動物／性別を、各投与群に割り当て、０（媒体）、２０、４０、または８０ｍｇ／ｋｇの経口投与を、９１日まで毎日与えた。最初の２週間の投与中に、８０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた複数の動物における発作の発生により、前記高用量を、６０ｍｇ／ｋｇ／日に低下させた。３匹の動物／性別／群は、投与期間（９２日）の最後で終了するためのスケジュールを立てた。２匹の動物／性別／群を、６週間の非投与回復期間に割り当て、１３４日で終了した。

【0067】

前記動物を、臨床兆候（ケージサイド観察および摂食量［１日２回］、ならびに投与後観察［各投与日における投与の１〜２時間後］）、体重（２週目および１週目、毎週、７日目に開始した後毎週、ならびに剖検前）、心電図、眼科試験、および血圧測定（研究前ならびに１週目、４週目、および１３週目）、心エコー測定（１１週目）、臨床病理的指標、例えば、血清化学、血液学、および凝集（投与開始前１週以内および１週目、４週目、１０週目、および１３週目の最後付近；回復期間の最後付近における残った動物から；ならびに、トロポニンＩ（研究前；投与前ならびに１週目、４週目、および１３週目における投与後２、４、および２４時間、ならびに、回復期の最後付近での一時点）の変化について評価した。尿分析用の尿サンプルのみを、剖検中の膀胱穿刺術により取得した。尿分析および尿化学分析用の尿サンプルを、週−１、１週目、４週目、および１３週目に特注のステンレス鋼ケージパンならびに回復期間の最後付近における残った動物からの排水によっても取得した。

【0068】

血液サンプルを、１日目ならびに４週目および１３週目中の種々の時点で、毒物動態学分析用に収集した。２１匹の動物（３匹／性別／群１、２匹のオス／３匹のメス／群２、３匹のオス／２匹のメス／群３、および２匹のオス／３匹のメス／群４）を、最後の投与後１日で安楽死させた。残りの１４匹の動物（群１および２からそれぞれ２匹／性別、１匹のオス／２匹のメス／群３、ならびに２匹のオス／１匹のメス／群４）を、更なる投与を行うことなく研究を継続し、前記最後の投与後のおおよそ６週間で安楽死させた。終了時に、完全な剖検を、全ての動物について行い、組織を収集、保存、処理、および、米国獣医病理学会公認の獣医病理学者により顕微鏡的に試験した。

【0069】

カニクイザルにおけるＣＥＰ−２８１２２の、４週間の回復期間を含む４週間の経口毒性および毒物動態学研究
ＣＥＰ−２８１２２（モノ−メタンスルホン酸、モノ−ＨＣｌの塩）を、カニクイザルの群（５匹／性別／群）に、０（媒体コントロール）、３、１０、２０、または４０ｍｇ／ｋｇ／日の投与レベルで、経口強制飼養により投与した。４週間の処置期間後、３匹の動物／性別／群を終了し、２匹／性別／群を、４週間の処理を行わない回復期間に入れた。

【0070】

下記のパラメータおよび終点：臨床兆候（死亡／瀕死のチェック、ケージサイド観察、および摂食量、ならびに投与後観察）、体重、各種の生理学的試験、肺評価、眼科学、心電図、血圧、および心拍数の測定、臨床病理的パラメータ（血液学、凝集、臨床化学、尿分析、尿化学、およびトロポニンＩ分析）、毒物動態学パラメータ、剖検全体の所見、臓器重量、ならびに組織病理学的試験を、この研究において評価した。

【0071】

Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラットにおけるＣＥＰ−３７４４０の、４週間の回復期間を含む４週間の経口毒性および毒物動態学研究
オスおよびメスのラット（１５匹／性別／群）を、４つの処置群および媒体コントロール群（ｐＨ調節された逆浸透水）に割り当てた。前記ＣＥＰ−３７４４０を、下記表に示すように、三塩酸塩・二水和物として投与した。動物を、経口強制飼養により投与した。

【0072】

【表3】

【0073】

毒性評価は、死亡、臨床的観察、体重、体重変化、摂食量、眼科試験、ならびに臨床病理学および解剖病理学に基づいている。血液サンプルを、毒物動態学評価用に収集した。

【0074】

カニクイザルにおけるＣＥＰ−３７４４０の、４週間の回復期間を含む４週間の経口毒性および毒物動態学研究
オスおよびメスのカニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）を、５匹のサル／性別／群から成る４つの群（３つの処置群および１つの媒体コントロール群）に割り当てた。この研究において評価した用量レベルは、０（ｐＨ調節された逆浸透水）、２．５、７．５、および２０ｍｇ／ｋｇ／日とした。投与量を、５ｍＬ／ｋｇとした。ＣＥＰ−３７４４０を、三塩酸・二水和物の塩形態として投与した。投与期の完了後、３匹のサル／性別／群を安楽死させ、２匹のサル／性別／群を、さらに４週間、処置を行わない回復期において継続した。

【0075】

抗腫瘍活性研究−全体的なプロトコル
腫瘍を有するマウスを、種々の処置群（８〜１０匹のマウス／群）にランダム化し、媒体（ＰＥＧ−４００）または、示された用量（ｍｇ／ｋｇの遊離塩基当量で表される）および示された投与頻度（ｂｉｄまたはｑｉｄ）において、１００μＬの投与量でのＰＥＧ−４００に配合された試験化合物のいずれかにより、経口的に投与した。各腫瘍の長さ（Ｌ）および幅（Ｗ）を、ノギスで測定した。マウスの体重を２〜３日毎に測定した。ついで、腫瘍の体積を、０．５２３６^＊Ｌ^＊Ｗ^＊（Ｌ＋Ｗ）／２の式により算出した。腫瘍の体積およびマウスの体重の統計学的分析を、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｒａｎｋ Ｓｕｍ試験を使用して行った。血漿および腫瘍のサンプルを、最後の投与後２時間で、各用量レベルにおいて取得した。血漿および腫瘍のライゼートにおける化合物レベルを、ＬＣＭＳ／ＭＳにより測定した。

【0076】

マウスにおけるＮＰＭ−ＡＬＫ陽性Ｓｕｐ−Ｍ２およびＫａｒｐａｓ−２９９ ＡＬＣＬ腫瘍異種移植片モデルでの抗腫瘍活性
ＣＥＰ−３７４４０を、ＮＰＭ−ＡＬＫ陽性Ｓｕｐ−Ｍ２ ＡＬＣＬ腫瘍異種移植片を含むマウスに対して、ＰＥＧ４００のｑｄまたはｂｉｄにおいて，１２日間ｐｏ投与した。重症複合免疫不全マウスにおける第２の、より抵抗性のＮＰＭ−ＡＬＫ−陽性ＡＬＣＬ（Ｋａｒｐａｓ−２９９）腫瘍異種移植片モデルにおける、ＣＥＰ−３７４４０（非晶質ＨＣｌ塩）の抗腫瘍活性も評価した。

【0077】

マウスにおけるＥＭＬ４−ＡＬＫ陽性（ＮＣＩ−Ｈ２２２８およびＮＣＩ−Ｈ３１２２）ＮＳＣＬＣ腫瘍異種移植片での、経口投与による抗腫瘍活性
ヒトの肺ガン細胞株であるＮＣＩ−Ｈ２２２８およびＮＣＩ−Ｈ１６５０（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ、バージニア州）、ならびにＮＣＩ−Ｈ３１２２（Ｇｉｏｒｇｉｏ Ｉｎｇｈｉｒａｍｉ博士、Ｕｎｉｖ．ｏｆ Ｔｏｒｉｎｏ、イタリアにより親切に提供された）を、１０％ ウシ胎児血清（ｆａｔａｌ ｂｏｖｏｎｅ ｓｅｒｕｍ：ＦＢＳ、Ｃａｔ＃ ＳＨ３００７００３、Ｈｙｃｌｏｎｅ Ｌｏｇａｎ、ユタ州）を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地において増殖させた。ＥＭＬ４−ＡＬＫ変異３ａ／ｂを内部に有するＮＣＩ−Ｈ２２２８細胞およびＮＣＩ−Ｈ３１２２細胞は、先に報告した、蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションおよび逆転写ＰＣＲにより決定されるＥＭＬ４−ＡＬＫ変異１を含む（Ｋｏｉｖｕｎｅｎ ＪＰ，Ｍｅｒｍｅｌ Ｃ，Ｚｅｊｎｕｌｌａｈｕ Ｋ，Ｍｕｒｐｈｙ Ｃ，Ｌｉｆｓｈｉｔｓ Ｅ，Ｈｏｌｍｅｓ ＡＪ，ｅｔ ａｌ．ＥＭＬ４−ＡＬＫ ｆｕｓｉｏｎ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ａｎ ＡＬＫ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００８，１４：４２７５−８）。

【0078】

重症複合免疫不全マウスのメスであるＳｃｉｄ／Ｂｅｉｇｅマウス（６〜８週、Ｔａｃｏｎｉｃ、Ｈｕｄｓｏｎ、ニューヨーク州）における、ＥＭＬ４−ＡＬＫ陽性およびＥＭＬ４−ＡＬＫ陰性ＮＳＣＬＣ皮下腫瘍異種移植片の発生を、標準的な研究室給餌におけるマイクロアイソレータユニット（Ｔｅｋｌａｄ Ｌａｂｃｈｏｗ、Ｈａｒｌａｎ Ｔｅｋｌａｄ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ウィスコンシン州）において、５匹／ケージを維持した。動物を、湿度および温度管理された条件下において収容した。明かり／暗闇サイクルを、１２時間間隔に設定した。マウスを、実験操作前の少なくとも１週間隔離した。全ての動物研究を、Ｃｅｐｈａｌｏｎ Ｉｎｃの所内動物実験委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ：ＩＡＣＵＣ）により承認されたプロトコル（＃０３−０２３）に基づいて行われた。簡潔に、ＥＭＬ４−ＡＬＫ陽性および陰性のＮＳＣＬＣ細胞を収集し、５×１０^７個／ｍＬの密度でＲＰＭＩ−１６４０培地に再懸濁させた。細胞懸濁液（５×１０^６個）のアリコート（１００μＬ）を、２３ｇのニードル（２３Ｇ１、Ｃａｔ＃３０５１４５、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｌａｎｋｌｉｎ、ニュージャージー州）により、各マウスの左わき腹の皮下に接種した。前記マウスを、前記腫瘍異種移植片の体積が２００〜５００ｍｍ^３に達するまでモニタした。

【0079】

前記腫瘍を有するマウスを、種々の処置群（８〜１０匹のマウス／群）にランダム化し、媒体（ＰＥＧ−４００）または、示された用量、ｂｉｄにおいて、１００μＬの投与量で、ＰＥＧ−４００に配合されたＣＥＰ−３７４４０の非晶質ＨＣｌ塩のいずれかを投与した。各腫瘍の長さ（Ｌ）および幅（Ｗ）を、ノギスで測定した。マウスの体重を２日から３日毎に測定した。腫瘍の体積を、０．５２３６^＊Ｌ^＊Ｗ^＊（Ｌ＋Ｗ）／２の式により算出した。パーセント腫瘍増殖阻害（ｐａｒｃｅｎｔ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ：％ＴＧＩ）を、下記：（処置終了時のコントロール群の腫瘍体積−処置終了時の処置群の腫瘍体積）／処置終了時のコントロール群の腫瘍体積、のように算出した。部分的な腫瘍抑制（Ｐａｒｔｉａｌ ｔｕｍｏｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ：ＰＲ）を、処置開始時の処置群のそれより小さい、処置終了時での前記処置群の腫瘍体積として規定した。完全な腫瘍抑制（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｔｕｍｏｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ：ＣＲ）を、処置開始時の処置群の腫瘍体積の５％未満である、処置終了時の処置群の腫瘍体積として規定した。腫瘍体積およびマウスの体重の統計学的分析を、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｒａｎｋ Ｓｕｍ試験により行った。血漿および腫瘍のサンプルを、最後の投与後２時間で、各用量レベルにおいて取得した。血漿および腫瘍のライゼートにおける化合物レベルを、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより測定した。

【0080】

ホルモン非依存性前立腺ガン腫、ＮＳＣＬガン腫、およびＨＮＳＣガン腫のヒト腫瘍異種移植片における抗腫瘍活性研究
ヒト前立腺ガン腫細胞株であるＣＷＲ２２およびＰＣ３、ならびにヒト頭頸部扁平上皮ガン腫細胞株であるＤｅｔｒｏｉｔ５６２を、アメリカ培養細胞系統保存期間（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ：ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、バージニア州）から取得した。ＣＷＲ２２細胞を、１０％ ウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ：ＦＢＳ、Ｃａｔ＃ ＳＨ３００７００３、Ｈｙｃｌｏｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｎｃ、Ｌｏｇａｎ、ユタ州）を添加したＲＰＭＩ（ＡＴＣＣ、Ｃａｔ＃３０−２００１）において培養した。ＰＣ３を、１０％のＦＢＳを添加したＦ１２培地（ＡＴＣＣ、Ｃａｔ＃３０−２００４）において培養した。Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２を、１０％のＦＢＳを添加したＥＭＥＭ（ＡＴＣＣ、Ｃａｔ＃３０−２００３）において培養した。ヒト非小細胞肺ガン細胞株であるＨＣＣ−８２７およびヒト乳ガン細胞株であるＢＴ４７４も、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、バージニア州）から購入し、１０％のＦＢＳを含むＲＰＭＩ（Ｃａｔ＃１０−０４０、Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ Ｉｎｃ、Ｍａｎａｓｓａｓ、バージニア州）において培養した。ウサギホスホ−ＦＡＫ（Ｔｙｒ３９７）（Ｃａｔ＃３２８３）およびＦＡＫ抗体（Ｃａｔ＃３２８５）を、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｂｅｖｅｒｌｙ、マサチューセッツ州）から購入した。

【0081】

ＳＣＩＤ／Ｂｅｉｇｅ若しくはＮｕ／ＮｕマウスのメスであるＳＣＩＤ／Ｂｅｉｇｅ（６〜８週、Ｔａｃｏｎｉｃ、Ｈｕｄｓｏｎ、ニューヨーク州）またはＮｕ／Ｎｕマウス（６〜８週、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、マサチューセッツ州）における、皮下でのヒト腫瘍異種移植片の発生を、標準的な研究室給餌におけるマイクロアイソレータユニット（Ｔｅｋｌａｄ Ｌａｂｃｈｏｗ、Ｈａｒｌａｎ Ｔｅｋｌａｄ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ウィスコンシン州）において、５匹／ケージを維持した。動物を、湿度および温度管理された条件下において収容した。明かり／暗闇サイクルを、１２時間間隔に設定した。マウスを、実験操作前の少なくとも１週間隔離した。実験は、Ｃｅｐｈａｌｏｎ Ｉｎｃの所内動物実験委員会により承認された（プロトコル０３−０２３）。簡潔に、前記細胞を収集し、５×１０^７個／ｍＬの密度でＲＰＭＩ培地に再懸濁させた。細胞懸濁液（４×１０^６個または５×１０^６個）のアリコート（１００μＬ）を、２３ｇのニードル（２３Ｇ１、Ｃａｔ＃３０５１４５、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｌａｎｋｌｉｎ、ニュージャージー州）により、各マウスの左わき腹の皮下に接種した。ついで、前記マウスを、毎日モニタした。

【0082】

前記腫瘍を有するマウスを、種々の処置群（８〜１０匹のマウス／群）にランダム化し、媒体（ＰＥＧ−４００）または、示された用量（ｍｇ／ｋｇの遊離塩基当量で表される）および示された投与頻度において、１００μＬの投与量で、ＰＥＧ−４００に配合されたＣＥＰ−３７４４０のいずれかにより、経口的に投与した。各腫瘍の長さ（Ｌ）および幅（Ｗ）を、ノギスで測定した。マウスの体重を２〜３日毎に測定した。ついで、腫瘍の体積を、０．５２３６^＊Ｌ^＊Ｗ^＊（Ｌ＋Ｗ）／２の式により算出した。腫瘍の体積およびマウスの体重の統計学的分析を、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｒａｎｋ Ｓｕｍ試験を使用して行った。血漿および腫瘍のサンプルを、最後の投与後２時間で、各用量レベルにおいて取得した。血漿および腫瘍のライゼートにおける化合物レベルを、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより測定した。ＴＧＩ値を、各ＣＥＰ−３７４４０処置群の腫瘍体積（ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ：ＴＶ）を媒体処置群のそれらと比較することにより、研究の最後において、下記式：［１−（化合物処置群の最終日ＴＶ／媒体処置群の最終日ＴＶ）］^＊１００により算出した。

【0083】

ＶＩＩ．結果
ＣＥＰ−３７４４０およびＣＥＰ−２８１２２についての生物学的データを表３にまとめ、以下に表示および検討をする。

【0084】

【表4】

【0085】

これらのデータは、ＣＥＰ−３７４４０およびＣＥＰ−２８１２２の両方が、強力なＡＬＫ阻害剤であることを示す。ただし、ＣＥＰ−３７４４０は、ＣＥＰ−３７４４０がはるかにより強力なＦＡＫ阻害剤であり、タンパク質結合を低下させ、ヒトの血漿における活性を向上させ、本質的な溶解性を向上させ（吸収を容易にし）、脂溶性を低下させ（より高い脂溶性は、向上した毒性に関連する。）、代謝安定性を向上させ（より低い用量でのより高い血中濃度を容易にし、より低い用量は、身体における生体異物負荷を低下させる。−薬剤および代謝物に対するより少ない暴露ならびに代謝系、例えば、肝臓におけるより小さい負荷）、特にＣＹＰ３Ａ４およびＣＹＰ２Ｃ９に関するＰ４５０阻害を低下させる（共に投与した薬剤の正常な代謝およびクリアランスの妨害を低下させる）ことによる薬剤−薬剤相互作用についての性能を低下させ、改善された経口での生体有効性および生体内におけるより低いクリアランス割合（より低い用量でのより高い血中濃度）を有する点において、ＣＥＰ−２８１２２と比較して有利である。ＣＥＰ−２８１２２と比較したＣＥＰ−３７４４０の好ましい特性は驚くべきものであり、予期しなかったことである。

【0086】

Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラットにおけるＣＥＰ−２８１２２の、４週間の回復期間を含む１３週間の経口毒性および毒物動態学研究
研究中の薬剤関連死ならびに体重、摂食量、または心臓のトロポニン濃度における薬剤関連作用はなかった。血液学パラメータにおける薬剤関連作用は、メスにおける赤血球、ヘモグロビン、およびヘマトクリットにおける、最小限で非有害な低下、ならびに、両性別における血小板における、最小限で非有害な増加に限られた。他の統計学的差異が観察されたが、大きさ若しくは変化の方向および／または用量依存性の欠落のために、意味のないものと見なした。

【0087】

血小板は、１５０ｍｇ／ｋｇ／日でのオスおよびメスにおける回復において、緩やかに上昇したままであった。凝集パラメータにおける可能性のある薬剤関連作用は、１５０ｍｇ／ｋｇ／日を受けたオスにおけるプロトロンビン時間（ｐｒｏｔｈｒｏｍｂｉｎ ｔｉｍｅ：ＰＴ）および部分トロンボプラスチン時間（ｐａｒｔｉａｌ ｔｈｒｏｍｂｏｐｌａｓｔｉｎ ｔｉｍｅ：ＡＰＴＴ）の延長、ならびに、全ての用量レベルでのメスにおけるＡＰおよびＡＰＴＴの短縮（メスについての値は、予測された範囲内であった。）に限られた。回復期間の最後での、意味のある変化の事象はなかった。

【0088】

臨床化学パラメータにおける薬剤関連変化は、中程度に限られたが、≧７５ｍｇ／ｋｇ／日を受けたオスにおける、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ａｌａｎｉｎｅ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ：ＡＬＴ）、総ビリルビン、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ａｓｐａｒｔａｔｅ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ：ＡＳＴ）、γ−グルタミルトランスフェラーゼ（γ−ｇｌｕｔａｍｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ：ＧＧＴ）、およびソルビトール脱水素酵素（ＳＤＨ）において、矛盾が高まる。これらの作用は、それらの４週での合間のサンプル収集時より、１３週の投与期間の最後において明白であり、単独の動物における作用にほとんど起因していた。ＡＳＴおよびＡＬＴも、１５０ｍｇ／ｋｇ／日を受けたメスにおいて向上したが、これらの作用は、前記オスにおいて観察されたより、概ね非常に低い大きさであった。特に、メスは、全ての用量レベルにおいて、統計学的に有意な、用量依存性で、進行性のコレステロール増加を示した。回復期間の最後において、ＡＳＴ、ＡＬＴ、およびＳＤＨは、投与期間中に７５ｍｇ／ｋｇ／日を受けた個々のオスにおいて向上したままであった。ＡＳＴ、ＡＬＴ、およびＳＤＨは、投与中に１５０ｍｇ／ｋｇ／日を受けたメスにおいてより低い大きさであったのに対して、投与中に１５０ｍｇ／ｋｇ／日を受けたオスにおいて、中程度に向上したままであった。

【0089】

総タンパク質およびグロブリンは、≧７５ｍｇ／ｋｇ／日を受けたオス、および、≧３０ｍｇ／ｋｇ／日を受けたメスにおいて、用量依存的に向上した。アルブミンも、≧７５ｍｇ／ｋｇ／日を受けたメスにおいて統計学的に向上したが、値は、予測された範囲内のままであった。カルシウムの統計学的向上は、向上したアルブミンおよび総タンパク質に対して、二次的であると見なされた。他の散発性の統計学的差異が終了時に観察され、変化の大きさ若しくは方向および／または用量依存性の欠落のために、意味のないものと見なされた。前記回復期間の最後において、総タンパク質、グロブリン、アルブミン、またはカルシウムにおける投与の作用はなかった。

【0090】

終了時における１５０ｍｇ／ｋｇ／日でのオスおよびメスにおいて、尿の量は増加し、比重は低下した。他の顕著な変化は、終了時または回復時における尿分析パラメータにおいて観察されなかった。

【0091】

（コントロールに対して）増加した肝臓重量が、≧３０ｍｇ／ｋｇ／日を受けたメス、および、≧７５ｍｇ／ｋｇ／日を受けたオスにおいて見られた（オスは、７５ｍｇ／ｋｇ／日において、コントロールに対して、胸腺重量も低下した。）。増加した腎臓、脾臓、および副腎の重量が、≧７５ｍｇ／ｋｇ／日の用量において、両性別に見られた。心臓重量も、≧７５ｍｇ／ｋｇ／日の用量において、中程度に増加した。ただし、相間的な心臓の顕微鏡所見がなく、この所見の毒物学的重要性は不明である。オスの腎臓、心臓、および脾臓における作用は、４週間の回復期間の最後まで持続した。メスにおける持続性の薬剤関連作用の証明はなかった。１３週の投与期間の最後に、腎臓の褐色または黒色の変色が、１５０ｍｇ／ｋｇ／日を受けたオスおよび７５ｍｇ／ｋｇ／日を受けたメスにおいて、肉眼で見える状態で観察された。１５０ｍｇ／ｋｇ／日を受けた１匹のオスは、回復の最後に尿細管の色素に顕微鏡的に相関する腎臓に病巣を有した。１３週の投与期間の最後に、薬剤関連顕微鏡的変化は、≧３０ｍｇ／ｋｇ／日を受けた動物の腎臓、副腎、肝臓、肺、褐色脂肪組織、腸間膜リンパ節、脾臓、および甲状腺において明らかであった。副腎、肝臓、肺、褐色脂肪組織、腸間膜リンパ節、脾臓、および甲状腺における所見は、低い重症性および、４週間の回復期間中の回復の実質的な証拠により、有害であるとは見なされない。≧７５ｍｇ／ｋｇ／日を受けた動物の腎臓において明らかな進行性の神経病変は、高い罹患および４週の回復期間を通した持続のために、有害であると見なされる。蓄積された薬剤であると推定される着色も、回復時の複数の組織において明らかであるが、有害であるとは見なされない。

【0092】

特に被膜下の軸状皮質におけるレンズ状繊維の最少から中程度の膨張が、投与期間中に≧７５ｍｇ／ｋｇ／日を受けた動物の回復において認められた。この所見は、これらの動物の臨床上の白内障に相当する。ただし、レンズ状繊維の膨張は、酢酸に関連する細胞膨張から生じるＤａｖｉｄｓｏｎ’ｓ流体による人工物の固定であり得る。被膜下の皮質領域におけるレンズ繊維の膨張が、この研究における一部のコントロール動物におけるより少ない程度に対して、処置された動物（例えば、上記列記された動物および臨床上の白内障の記録がない他の処置された動物）に見られた。さらに、外周前部の皮質パターンにおけるレンズ繊維の膨張が、７５および１５０ｍｇ／ｋｇ／日で処置された少数の動物に見られたが、眼底検査の所見とは対応しなかった。この所見は、Ｄａｖｉｄｓｏｎ’ｓ固定に対する二次的な人工物と見なされた。これらの理由により、この研究において観察されたレンズ繊維の膨張は、人工物と解釈され、顕微鏡的所見とは記録されなかった。ただし、前記人工物により隠された腎臓の生存中の変化の可能性は、完全には除外できなかった。

【0093】

上記結果に基づいて、この研究に関する最大無作用量（Ｎｏ Ｏｂｓｅｒｖａｂｌｅ Ａｄｖｅｒｓｅ Ｅｆｆｅｃｔ Ｌｅｖｅｌ：ＮＯＡＥＬ）は、３０ｍｇ／ｋｇ／日と見なされ、≧７５ｍｇ／ｋｇ／日の用量での４週間の回復期間を通して持続した腎臓における有害な組織病理学的作用により限定された。

【0094】

カニクイザルにおけるＣＥＰ−２８１２２の、６週間の回復期間を含む１３週間の経口毒性および毒物動態学研究
毎日の経鼻胃強制飼養による９１日間の連続日数のＣＥＰ−２８１２２の、２０、４０、および８０／６０ｍｇ／ｋｇの用量レベルでの投与により、８０／６０ｍｇ／ｋｇで投与された２匹の動物および同様に２匹の更なる動物（一方は、４０ｍｇ／ｋｇで投与され、他方は、２０ｍｇ／ｋｇで投与された）において、全ての用量レベルにおいて、複数の有害な薬物関連事象、例えば、罹患および死亡がもたらされた。早期に剖検を受けた更なる動物が存在したが、これは、ＣＥＰ−２８１２２の投与には関連しなかった。８０ｍｇ／ｋｇの投与により、９日目および／または１０日目に、２匹の動物について発作がもたらされ、この群内の全ての動物において、６０ｍｇ／ｋｇに用量レベルを低下させた。摂食量、体重、眼科検査、凝集パラメータ、尿分析パラメータ、および心拍数におけるＣＥＰ−２８１２２関連の変化は存在せず、血圧またはトロポニンＩの最終的なＣＥＰ−２８１２２関連の変化は存在しなかった。

【0095】

早期に剖検を受けた動物についての病歴は、概ね、２つの分類に分けられ得る：１）数日／数週間にわたる健康状態が徐々に減退した動物、および２）早期の剖検の日における投与後の短期間までに、前記薬剤を臨床的に許容していたことが明らかな動物。前者の分類における動物について、凝固障害、急性相応答、重度の脱水、および／または肝毒性の示唆的な臨床病理学的変化が存在した。一方、後者の分類における動物は、大部分が臨床病理学的変化が存在しなかった。急性な罹患（投与の１〜３分以内）の病歴が存在したが、分類２の動物内の死亡（投与の１５分以内）は、薬剤の点滴注入または肺への吸引を示唆しており、肺内への投与は組織病理学に基づいて特定され得なかった。罹患／死亡の急速な開始の理由を決定することはできなかったが、肺からの薬物吸収を除外することはできなかった。

【0096】

早期に死亡した動物において、薬物関連組織病理学的所見が、肺、肝臓、脾臓、腸間膜リンパ節、および腎臓において特定された。肺において、肺水腫と一致する全体的および組織学的な所見は、全ての投与群において特定され、９２日目または１３４日目に生存していた動物における所見より、あるとすれば、概ねより重症であった。

【0097】

生存している動物において、全ての用量レベル（２０、４０、および８０／６０ｍｇ／ｋｇ）に存在する、ＣＥＰ−２８１２２関連の臨床兆候が存在し、嘔吐、低下した活性、丸まった外観、および水様便を含んだ。概ね、これらの臨床兆候は、用量依存性ではなかった。これらの臨床兆候は、研究の回復期中には検出されなかった。８０／６０ｍｇ／ｋｇで投与された動物における、肝臓作用を示唆する、ＣＥＰ−２８１２２関連の向上したアラニンアミノトランスフェラーゼ（ａｌａｎｉｎｅ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ：ＡＬＴ）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ａｓｐａｒｔａｔｅ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ：ＡＳＴ）が存在した。ただし、これらの値は、回復期間の最後には、ベースラインに戻った。肝臓における最終的な組織学的相関は存在しなかった。

【0098】

血液学的パラメータにおけるＣＥＰ−２８１２２関連の変化は、８０／６０ｍｇ／ｋｇで投与された動物において、２８日目に始まり、研究の投与期中の残りの時点全体を通して持続した、リンパ球の減少に限られた。リンパ球数は、回復期間の最後までに、ベースラインに戻った。

【0099】

９２日目において、薬物関連の組織病理学的所見は、肺、肝臓、脾臓、腸間膜リンパ節、および腎臓において特定された。肺水腫と一致する組織学的所見および、早期に死亡した動物において特定されたそれらと類似する、より慢性の肺傷害が、９２日目および１３４日目に見られ、用量比例的ではなく、概ね、早期に死亡した動物より、発生率および／または重症度が低かった。肝臓、脾臓、および腸間膜リンパ節におけるマクロファージ内の用量比例的な好酸球の粒状性が、２０ｍｇ／ｋｇのＣＥＰ−２８１２２を投与された１匹の動物における最少の変化を含めて、４０および８０／６０ｍｇ／ｋｇのＣＥＰ−２８１２２を投与された動物において、典型的に特定された。この所見は、１匹の高用量動物の肝臓における肝細胞の単一細胞の壊死に関連したが、１３４日目以降の向上した発生率および好酸球粒状性の変化とのその関連は、前記薬剤の投与との関連を示唆した。腎臓における尿細管上皮内の用量比例的な、褐色顆粒色素が、全ての薬剤処置群において特定され、早期に死亡した動物において最少から中程度であったのに対して、最少から緩やかであり、尿細管上皮の変性／壊死に関連しなかった。

【0100】

９２日目において、ＣＥＰ−２８１２２の投与に関する臓器重量の増加および／または割合が、４０および８０／６０ｍｇ／ｋｇのＣＥＰ−２８１２２（肝臓および腎臓）、ならびに２０、４０、および８０／６０ｍｇ／ｋｇのＣＥＰ−２８１２２（肺）を投与されたオスの動物における、肝臓、肺、および腎臓について特定された。これらの増加は、クッパー細胞および肝臓における肝細胞内の好中球の粒状性、肺における肺水腫、および腎臓の尿細管上皮における褐色の色素沈着に関連した。

【0101】

１３４日目において、薬剤関連の組織病理学的所見が、肺、肝臓、脾臓、腸管膜および下顎骨リンパ節、ならびに腎臓において特定された。肺水腫と一致する組織学的変化は、同様に持続したが、最終的な剖検動物と比較した全ての投与群において重症度がわずかに低下し、同様に用量比例的ではなかった。より慢性の肺傷害と一致する最少変化は、１匹の高用量動物に存在した。

【0102】

肝臓、脾臓、ならびに腸間膜および下顎骨リンパ節におけるマクロファージ内の好酸球の粒状性が、４０および／または８０／６０ｍｇ／ｋｇのＣＥＰ−２８１２２を投与された動物において、典型的に特定され、脾臓を除いて、１より多い群が影響を受けた場合、用量比例的であった。肝臓におけるこの変化は、９２日目におけるそれより概ね重症であった。脾臓について、８０／６０ｍｇ／ｋｇ群についての９２日目と比較して、重症度が低下し、２０および４０ｍｇ／ｋｇ群における単独発生における重症度が変動した。肝臓および脾臓内での好酸球粒状化の領域内の褐色の顆粒沈着の度合いは、概ね、より早い時点と比較して、これらの回復群について向上した。９２日目と比較して、腎臓における尿細管上皮細胞内での用量比例的な褐色の顆粒沈着は、概ね、持続したが、４０ｍｇ／ｋｇのＣＥＰ−２８１２２を投与された動物においてはほとんど重症ではなく、８０／６０ｍｇ／ｋｇのＣＥＰ−２８１２２を投与された動物において持続し、より重症であった。尿細管上皮の最少の変性／壊死は、８０／６０ｍｇ／ｋｇのＣＥＰ−２８１２２を投与された一部の動物において、最も重度の色素沈着を伴って特定された。

【0103】

１３４日目において、ＣＥＰ−２８１２２の投与に関する臓器重量および／または割合の増加が、メスにおいて、肝臓および腎臓について特定され、４０および／または８０／６０ｍｇ／ｋｇのＣＥＰ−２８１２２を投与された動物においてであり、終了時における剖検動物と同様に相関した。

【0104】

肺水腫は、この研究において重要な関心事項であった。多くの例において、肺水腫の発生は、急速な悪化および死亡の前において無症候性であった。さらに、肺水腫の発生に対する容易に検出される心循環系成分が存在しなかった。このため、この所見を、非心臓性の肺水腫と分類した。急速な開始および心循環系作用の欠如は、臨床状態における肺水腫の診断または予防をするのを非常に困難にし、ＣＥＰ−２８１２２をヒトに使用するのに危険にさせるであろう。

【0105】

カニクイザルにおけるＣＥＰ−２８１２２の、４週間の回復期間を含む４週間の経口毒性および毒物動態学研究
３、１０、２０、および４０ｍｇ／ｋｇ／日の用量レベルでの、毎日１回で４週間の経口強制飼養によるＣＥＰ−２８１２２の投与により、罹患または死亡のいずれももたらされなかった。評価されたいずれかの用量レベルにおける、摂食量、体重、（聴診による）肺、眼、ＥＣＧｓ、血圧、心拍数、血液学、凝集、尿分析、尿化学、トロポニンＩ、または全体的な病理学的観察における、ＣＥＰ−２８１２２関連作用は存在しなかった。

【0106】

ＣＥＰ−２８１２２関連の組織学的作用は、用量レベル≧１０ｍｇ／ｋｇ／日で発生した。これらの所見は、肺内での空胞化細胞（推定的な肺胞上皮）における最少または緩やかな多病巣性の増加ならびに最少のＩＩ型肺細胞過形成から成った（２０ｍｇ／ｋｇ／日の用量レベルのみ）。この増加した空胞化細胞は、用量レベル≧１０ｍｇ／ｋｇ／日での動物からの、増加した肺重量および肺重量比と相関したが、聴診により臨床的観察または臨床的な肺所見のいずれとも相関しなかった。４週間の回復期後に、肺内の空胞化細胞の増加は、より低い発生率および／または重症度であるにも関わらず、用量レベル≧２０ｍｇ／ｋｇ／日での動物において未だに存在した。この所見の完全な解決は、１０ｍｇ／ｋｇ／日の用量レベルでは起こった。前記ＩＩ型肺細胞過形成は、２０ｍｇ／ｋｇで投与され、４週間の回復期後の動物からは検出されず、重症度における最少の全体的な低下もサポートした。

【0107】

可能性のあるＣＥＰ−２８１２２関連作用には、２０および４０ｍｇ／ｋｇの用量レベルでの動物における投与後嘔吐およびトリグリセリド（４０ｍｇ／ｋｇ用量レベルのみ）のわずかな増加が含まれた。これらの観察は、回復期間中には検出されなかった。２９日目において１０ｍｇ／ｋｇ／日で投与された１匹のメスの網膜層における組織病理学的変化は、不確かなＣＥＰ−２８１２２関連作用と見なされた。眼下試験における相関はなかった。

【0108】

より低用量でのこの４週間の研究により、ＣＥＰ−２８１２２による肺毒性を避けることができないでろうことが説明された。特に関心事項は、肺の傷害が前駆的な兆候（聴診）なしに起こったという事実であった。４週間および１３週間のサルでの研究における肺毒性の発生および持続に基づいて、ＣＥＰ−２８１２２は、ヒトへの使用が危険すぎ、開発努力を終了したとまとめられた。

【0109】

Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｙ系ラットにおけるＣＥＰ−３７４４０の、４週間の回復期間を含む４週間の経口毒性および毒物動態学研究
薬剤関連の臨床的観察は、投与期または回復期中には見られなかった。むしろまれに現れた臨床的観察は一時的であり、コントロールと同等の発生率であり、瀕死の動物に関連し、未知の強制飼養エラーに関連するか、または、死亡若しくは犠牲が薬剤関連とは見なされなかった動物において発生した。このため、臨床的観察は、薬剤関連とは見なされなかった。

【0110】

３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられたオスおよびメスは、投与期の全ての間隔中に、コントロールより重量が少なかった。投与期の１日目から２８日目中に、オスは、コントロールより３１％少なかった。投与期の１日目から２８日目中に、メスは、コントロールより６５％少なかった。３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられたオスおよびメスは、回復期の全ての間隔中に、コントロールと同じか、またはそれ以上の重量となった。回復期の１日目から２８日目中に、オスは、コントロールより２４％多かった。回復期の１日目から２８日目中に、メスは、コントロールより２９％多かった。３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられたオスおよびメスは、投与期の全ての間隔中に、コントロールより摂食量が少なかった。これらの差異は、オスにおいては４から１０％以下の範囲であり、メスにおいては１２から２４％以下の範囲であった。摂食量における薬剤関連作用は、回復期中に見られなかった。減少した平均最終体重が、３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられたオスおよびメスにおいて、最終的な犠牲において観察され（それぞれ、０．９０×および０．７９×）、メスにおいて統計学的に有意であった。

【0111】

薬剤関連の眼科所見は、投与期または回復期中に見られなかった。薬剤関連作用は、１０ｍｇ／ｋｇ／日まで、臨床病理学的な試験結果において観察されなかった。複数の小さい臨床病理学的作用が、３０ｍｇ／ｋｇ／日において観察され、最少から緩やかな大きさであった。これらの所見は、有害または毒性学的に重要であると見なされなかった。

【0112】

３０ｍｇ／ｋｇ／日での薬剤血液学および凝集所見は、下記のものを含んだ。
・投与期の２９日目におけるメスにおいて、穏やかにより少ない赤血球量（すなわち、赤血球数、ヘモグロビン、およびヘマトクリット）
・投与期の１５日目および２９日目におけるオス、ならびに、投与期の１５日目におけるメスにおいて、穏やかにより少ない完全な網状赤血球数
・投与期の１５日目および２９日目におけるオスにおいて、穏やかにより少ない完全な好中球数
・投与期の２９日目におけるメスにおいて、穏やかにより少ない完全な好酸球数
・投与期の１５日目および２９日目におけるオスにおいて、最少により高いフィブリノゲン

【0113】

血小板数は、影響を受けていないことが明らかであった。赤血球量、完全な網状赤血球、好中球、および好酸球の数の減少は、穏やかな骨髄の抑制／毒性を反映し得るが、相間的な組織病理学的所見は、骨髄において観察されなかった。これらの所見は、回復期の最後において可逆性を示した。３０ｍｇ／ｋｇ／日で与えられたメスにおける、回復期の最後におけるより高い平均血球体積は、おそらく、典型的により大きいサイズのより若い赤血球のより高い割合のためである。

【0114】

３０ｍｇ／ｋｇ／日での薬剤関連の臨床化学的所見は、下記のものを含んだ。
・投与期の２９日目でのメスにおける穏やかにより少ないアルブミン
・投与期の１５日目および２９日目でのメスにおける最少により高いグロブリン
・投与期の１５日目および２９日目でのメスにおけるより低いアルブミン対グロブリン比
・投与期の１５日目および２９日目でのオスおよびメスにおける最少により高いコレステロール
・投与期の２９日目でのオスにおける穏やかにより高い血清カルシウム濃度
・投与期の２９日目でのオスおよびメスにおける最少により低い血清塩化物

【0115】

より低いアルブミンおよびアルブミン対グロブリン比ならびにより高いグロブリンは、炎症と一致し、組織学的に観察された胸腔の慢性的な炎症に関連している場合がある。より高いコレステロールは、これらの動物において観察された摂食量および体重増加量の低下に関連している場合がある。より低い血清塩化物は、おそらく、より高い尿排泄のためであった。より高いカルシウムについてのメカニズムは不明であった。薬剤関連作用は、任意の用量レベルにおけるトロポニンＩ濃度において観察されなかった。全ての臨床化学的所見は、回復期の最後において、可逆性を示した。

【0116】

３０ｍｇ／ｋｇ／日での薬剤関連の尿化学的所見は、下記のものを含んだ。
・投与期の１５日目および２９日目でのオスおよびメスにおける最少により高い尿の塩化物排出
・投与期の１５日目および２９日目でのオスおよびメスにおける、塩化物についての最少により高い尿分別クリアランス

【0117】

より低い血清塩化物は、おそらく、３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた動物の尿における、塩化物のより高い総排出およびより高い尿分別クリアランスに関連した。相間的な組織病理学的所見は、これらの動物の腎臓において観察されなかった。全ての尿化学所見は、回復期の最後において、可逆性を示した。任意の用量レベルにおける尿分析試験結果において、明らかな作用は観察されなかった。

【0118】

他の臨床病理学的試験結果における統計学的に有意または他の方法で顕著な差異は偶発的であった。それらは、通常、大きさが小さく、用量に対する相関関係を欠いていたか、または、経時的および性別間において矛盾したためである。

【0119】

７匹の予定外の死亡は、投与期中の毒性動物において起こった。前記予定外の死亡は、前記薬剤によるものではなかった。１匹のコントロールのオスおよび３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた１匹のメスは、採血後まもなく死んだ。これらは、薬剤関連作用を示唆する臨床的または解剖学的な病理学的所見を欠いているため、事故死と見なした。３匹の動物は、強制飼養関連の傷害と一致する肉眼で見えるおよび／または顕微鏡的所見を有した。前記３匹の動物は、２５日目に瀕死の状態で犠牲にした１ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた１匹のメス、９日目に死亡していることが発見された３ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた１匹のメス、および投与期の２５日目に瀕死の状態で犠牲にした１０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた１匹のメスを含む。死亡の原因は、１０日目に死亡していることが発見された３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた１匹のオスおよび投与期の１５日目に瀕死の状態で犠牲にした１０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた１匹のメスについては、明らかではなかった。全ての他の投与期および全ての回復期における毒性動物は、それらの予定通りの犠牲まで生存した。

【0120】

最終的な犠牲において、（最終的な体重に対して調節された）平均臓器重量において統計的に有意な増加が、３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられたオスの肝臓および１０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられたオスの前立腺で起こった。これらの変化は、顕微鏡的相関、性別間の一致（肝臓のみ）、および／または用量応答の証明を欠いているため、薬剤関連ではないと見なされた。調節された平均胸腺重量は、１０％より大きく減少し、３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられたオス（０．８６×）および１０ｍｇ／ｋｇ／日（０．８５×）または３０ｍｇ／ｋｇ／日（０．７９×）を与えられたメスにおいて、用量依存性であった。統計学的な有意性または顕微鏡的な相関を欠いており、これらの群における前記薬剤に対する胸腺重量の減少の相関関係は、不確かである。最終的な犠牲における全ての他の臓器重量の変化および回復犠牲における全ての臓器重量の変化は、おそらく、通常の生物学的変化によるものであり、前記薬剤の直接的な作用とは見なされなかった。

【0121】

心臓における癒着および肺における癒着または腫瘤の肉眼で確認できる所見が、３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられたメスにおける最終的な犠牲において観察された。心臓における癒着が、３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた１匹のメスにおける回復犠牲において観察された。これらの肉眼で見える所見は、心臓および肺における繊維症の顕微鏡的所見および／または慢性的な炎症と相関し、薬剤関連と見なされた。全ての他の肉眼で見える所見は、自発的、偶発的であるか、または、事故死に関連すると見なされ、前記薬剤によるものではなかった。

【0122】

最終的な犠牲において、胸腔の慢性的な炎症と一致する顕微鏡的所見が、３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられたメスの心臓および肺の漿膜表面上、ならびに、胸腺周囲の結合組織内に存在した。心臓の漿膜／心外膜の表面および肺の肋膜／肋膜下の表面の慢性的な炎症および／または線維症が、３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた５／１０匹のメスにおいて観察された。前記所見は、心臓および肺の漿膜表面に沿って拡散した多病巣性であり、わずかな炎症性細胞で厚くなっている繊維症から、より重度の慢性的な炎症に変わった。慢性から慢性−活性炎症も、３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた４／１０匹のメスにおける、胸腺周囲の緩い血管結合組織において観察された。回復犠牲において、心臓および肺の漿膜表面における慢性的な炎症および／または線維症が、３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた２／５匹のメスにおいて観察された。回復犠牲における所見は、わずかな炎症を有する漿膜表面の厚くなっている繊維症が拡散した多病巣性により特徴付けられ、部分的な解決を示唆する。胸腔における慢性的な炎症の所見が、３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた合計７／１５匹のメスでの、予定通りの犠牲において観察されたためであり、これらの所見についての別の原因の肉眼で見えるか、または、顕微鏡的な証明を欠いていたためである。３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられたメスにおける、心臓および肺の漿膜表面上ならびに胸腺周囲の繊維脂肪組織における線維症および／または炎症は、おそらく、最も薬剤関連であると見なされ、肋膜および心膜の滲出液に対して二次的に、漿膜炎症を生じた可能性がある。

【0123】

肺における肺胞マクロファージの発生率の小さな増加が、３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられたメスにおける最終的な犠牲において観察され、おそらく、最も薬剤関連であると見なされた。肺胞のマクロファージの発生率の向上は、回復犠牲において観察されなかった。この所見は可逆性であると示唆された。予定通りおよび予定外の犠牲における全ての他の顕微鏡的所見は、自発的、偶発的であると見なされ、または、事故死に関連し、前記薬剤によるものではないと見なされた。

【0124】

先に行われたＣＥＰ−３７４４０による、１０日用量範囲所見研究において、ラットに対する１０、３０、または６０ｍｇ／ｋｇ／日での強制飼養による前記薬剤の毎日の投与は、１０ｍｇ／ｋｇ／日において十分に許容された。骨髄（低細胞性）、脾臓、胸腺、およびリンパ節（リンパ球の減少）；ならびに肺（肺胞マクロファージの増加）における解剖学的病理学的所見と組み合わせた体重についての薬剤関連の有害な所見は、≧３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた動物において観察された。薬剤関連変化は、１０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた動物において観察されなかった。最近の研究では、有害な薬剤関連所見が、３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられたオスおよびメスにおいて観察された。これらの所見は、オスおよびメスにおいてより低い体重増加が得られ、オスおよびメスにおいてより低い摂食量が得られ、胸腔の慢性的な炎症と一致するメスにおける顕微鏡的所見が得られた。

【0125】

薬剤関連作用は、１０ｍｇ／ｋｇ／日までの臨床病理学的な試験結果において観察されなかった。複数の小さな臨床病理学的作用が、３０ｍｇ／ｋｇ／日において観察され、それは、最少から穏やかな大きさであった。これらの所見は、有害で、毒性学的に重要であると見なされないか、または、生存中の他の有害性または解剖学的病理学的な所見と決定的に相関しなかった。

【0126】

赤血球量、完全な網状赤血球、好中球、および好酸球の数は、穏やかな骨髄抑制／毒性を反映している場合があるが、相間的な組織病理学的所見は、骨髄において観察されなかった。これらの所見は、回復期の最後において、可逆性を示した。３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられたメスにおける回復期の最後でのより高い平均血球体積は、おそらく、典型的により大きいサイズのより若い赤血球のより高い割合のためである。

【0127】

より低いアルブミンおよびアルブミン対グロブリン比ならびにより高いグロブリンは、炎症と一致し、組織学的に観察された胸腔の慢性的な炎症に関連している場合がある。より高いコレステロールは、これらの動物において観察された摂食量および体重増加の減少に関連している場合がある。より低い血清塩化物は、おそらく、より高い尿排泄のためであった。より高いカルシウムについてのメカニズムは不明であった。薬剤関連作用は、任意の用量レベルにおけるトロポニンＩ濃度において観察されなかった。全ての臨床化学的所見は、回復期の最後において、可逆性を示した。

【0128】

より低い血清塩化物は、おそらく、３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた動物の尿における、塩化物のより高い総排出およびより高い尿分別クリアランスに関連した。相間的な組織病理学的所見は、これらの動物の腎臓において観察されなかった。全ての尿化学所見は、回復期の最後において、可逆性を示した。

【0129】

まとめると、≦１０ｍｇ／ｋｇ／日での２８日間の、ラットに対するＣＥＰ−３７４４０の経口投与は、臨床的に十分許容され得た。胸腔の慢性的な炎症と一致する顕微鏡的所見は、３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられたメスに存在した。体重変化および摂食量の低下は、３０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられたオスおよびメスに存在した。これらの所見に基づいて、この研究における最大無作用量（ｎｏ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ａｄｖｅｒｓｅ ｅｆｆｅｃｔ ｌｅｖｅｌ：ＮＯＡＥＬ）は、１０ｍｇ／ｋｇ／日であった。

【0130】

カニクイザルにおけるＣＥＰ−３７４４０の、４週間の回復期間を含む４週間の経口毒性および毒物動態学研究
全ての動物が、それらの予定通りの犠牲まで生存した。

【0131】

薬剤関連の臨床的観察は、投与期または回復期中に見られなかった。むしろまれに現れた臨床的観察は一時的であるか、または、コントロールと同等の発生率であった。このため、それらは、薬剤関連とは見なされなかった。

【0132】

投与期または回復期中に、体重または体重増加における薬剤関連作用は見られなかった。薬剤関連の異常な眼科的所見は見られなかった。さらに、血圧測定中に、薬剤関連の観察は見られなかった。

【0133】

ＰＲ間隔、ＱＲＳ持続、ＱＴ間隔、補正ＱＴ（ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ ＱＴ：ＱＴｃ）間隔、ＲＲ間隔、または心拍数の薬剤関連変化は、２．５、７．５、または２０．０ｍｇのＣＥＰ−３７４４０／ｋｇ体重／日（ｍｇ／ｋｇ／日）を与えられた動物において、投与期の３日目および２７日目または回復期の２８日目においては観察されなかった。ＣＥＰ−３７４４０によるリズム異常または質的なＥＣＧの変化は、ＥＣＧの質的評価中に観察されなかった。

【0134】

２０．０ｍｇ／ｋｇ／日までのＣＥＰ−３７４４０の投与は、投与期または回復期の最後における臨床病理学的な試験結果に作用を有しなかった。

【0135】

少しの個々の動物は、投与期中における（白血球および完全な好中球数、フィブリノゲン、およびＣ−反応性タンパク質におけるわずかから顕著な増加を含む）炎症と一致する臨床病理学的所見を有したが、これらの動物は、通常、コントロールを含む全ての群にわたって分散していた。その点については、これらの所見は、前記薬剤には関連しないと見なされた。それらが、用量関連パターンを欠いており、多くの場合、経時的に（特に白血球数について）矛盾しており、一部のコントロール動物を含んだためである。

【0136】

最終的な犠牲において、最終的な体重または臓器重量における統計学的に有意な変化はなかった。予定通りの最終的または回復犠牲において存在する全ての臓器重量の変化は、通常の生物学的変化によるものであり、偶発的および前記薬剤に関連しないと見なされた。

【0137】

明らかな薬剤関連の肉眼で見られる所見は、最終的または回復犠牲において存在しなかった。最終的な犠牲において、７．５ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた全て（３／３匹）のオスおよび２０．０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた２／３匹のメスは、胃の粘膜表面上に、単独から少数の、赤色から暗赤色の病巣を示した。２０．０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた１匹のオスにおける胃の漿膜は、小さい赤色領域を示した。顕微鏡的相関は、被膜の筋肉層内の平滑筋変性の存在の有無における、粘膜および／または粘膜下組織／被膜の筋層内の限局性出血であった。１匹のコントロールのメスにおける同様の所見の存在は、これらの所見が偶発的で、前記薬剤に関連しないことを示唆する。

【0138】

明らかな薬剤関連の顕微鏡的所見は、最終的または回復犠牲において存在しなかった。ＣＥＰ−３７４４０を与えられた一部の動物における胃の粘膜または漿膜において肉眼で見える所見は、被膜の筋肉層内の平滑筋変性の存在の有無における、粘膜および／または粘膜下組織／被膜の筋層内の限局性出血の顕微鏡的所見と概ね相関した。しかしながら、最近の研究におけるＣＥＰ−３７４４０投与に対する肉眼で見える所見と顕微鏡的所見との関連は、コントロール物質を与えられたメスの胃における、類似およびより重度の顕微鏡的所見の存在、および、胃の平滑筋変性がカニクイザルにおける公知のバックグラウンド所見であるという事実を仮定すると不確かである。他の顕微鏡的所見が、１若しくはそれ以上の動物の胃において存在したが、前記薬剤に対するその関連は、その低い重症度および／または発生率、明確な用量応答の欠落、またはコントロール動物における同時に起こる存在のために不確かである。

【0139】

最終的または回復犠牲における全ての残りの顕微鏡的所見、例えば、２０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた２匹のメスの肺における、肺胞マクロファージの最少の、病巣浸潤は、通常の生物学的変化によるものであり、偶発的と見なされた。

【0140】

まとめると、２８日間の連続日数における２０ｍｇ／ｋｇ／日までの用量におけるカニクイザルに対する経口によるＣＥＰ−３７４４０の投与は、十分許容でき、薬剤関連作用は、任意の用量レベルにおいて観察されなかった。明らかに、肺水腫の何等の証拠も存在しなかった。ＣＥＰ−３７４４０は、ヒトの臨床試験に使用するのに安全であると決定された。ＣＥＰ−２８１２２と比較したＣＥＰ−３７４４０の優れた安全性プロファイル、および、特に肺毒性がないことは、驚くべきことであり、予期しなかったことであった。

【0141】

マウスにおけるＮＰＭ−ＡＬＫ陽性Ｓｕｐ−Ｍ２およびＫａｒｐａｓ−２９９ ＡＬＣＬ腫瘍異種移植片モデルでの抗腫瘍活性
顕著な抗腫瘍活性は、１０ｍｇ／ｋｇ以下、ｂｉｄでのＣＥＰ−３７４４０による１２日間の処置後に観察されなかった。部分的な腫瘍抑制が、３０ｍｇ／ｋｇ、ｑｄでのＣＥＰ−３７４４０による１２日間の処置後に観察された。完全または完全に近い腫瘍抑制が、３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ、または、５５ｍｇ／ｋｇ、ｑｄでのＣＥＰ−３７４４０による１２日間の処置後に観察された（図４）。ＣＥＰ−３７４４０の投与は、全ての投与計画において、明確な毒性および顕著な化合物関連のマウスの体重減少なしに、十分に許容される（図５）。ＣＥＰ−３７４４０の用量関連レベルは、最終的な投与後２時間で収集された血漿および腫瘍のライゼートにおいて見出される（図６）。ＣＥＰ−３７４４０は、３０ｍｇ／ｋｇ、ｂｉｄおよび５５ｍｇ／ｋｇ、ｑｄの用量レベルでの腫瘍においては観察できないことに留意されたい。それらの動物は、腫瘍を有しない、完全な腫瘍抑制を有したためである。ＣＥＰ−３７４４０レベルは、ＰＫ／ＰＤ研究における１回の経口投与後２時間でのレベルより、血漿においておおよそ２〜３倍高く、腫瘍において１０倍以上高い。このことは、１０および３０ｍｇ／ｋｇでのｂｉｄまたはｑｄによる経口投与計画による、血漿および腫瘍におけるいくらかの化合物の蓄積を示唆している。

【0142】

Ｋａｒｐａｓ−２９９腫瘍異種移植片において、顕著な抗腫瘍活性が、３０ｍｇ／ｋｇ、ｑｄにおいて観察された。完全または完全に近い腫瘍抑制が、３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄまたは５５ｍｇ／ｋｇ、ｑｄでの１２日間の処置後に観察された（図７）。ＣＥＰ−３７４４０の投与は、投与計画において、明確な毒性および顕著な体重減少なしに、十分許容される（図８）。ＣＥＰ−３７４４０の用量関連レベルは、最終的な投与後２時間で収集された血漿および腫瘍のライゼートにおいて観察される（図９）。ＣＥＰ−３７４４０は、５０ｍｇ／ｋｇ、ｑｄの用量レベルでの腫瘍においては観察できないことに留意されたい。それらの動物は、腫瘍を有しない、完全な腫瘍抑制を有したためである。

【0143】

マウスにおけるＥＭＬ４−ＡＬＫ陽性（ＮＣＩ−Ｈ２２２８およびＮＣＩ−Ｈ３１２２）ＮＳＣＬＣ腫瘍異種移植片での、経口投与による抗腫瘍活性
ＮＣＩ−Ｈ２２２８腫瘍異種移植片モデルについて、３０ｍｇ／ｋｇ、ｑｄおよびｂｉｄ、ならびに５５ｍｇ／ｋｇ、ｑｄ ｐｏでの１２日間のＣＥＰ−３７４４０（ＨＣｌ塩）による処置により、腫瘍抑制がもたらされる（図１０）。ＮＣＩ−Ｈ３１２２腫瘍異種移植片モデルについて、３０ｍｇ／ｋｇ、ｂｉｄまたは５５ｍｇ／ｋｇ、ｑｄ ｐｏでの１２日間のＣＥＰ−３７４４０（ＨＣｌ塩）による処置により、腫瘍静止および部分的な抑制がもたらされる（図１１）。ＮＣＩ−Ｈ２２２８腫瘍異種移植片において観察された改善された抗腫瘍作用は、おそらく、ＣＥＰ−３７４４０のより高い腫瘍分布のためである（図１２および図１３）。これらの腫瘍を有するマウスにおける処置は、ＮＣＩ−Ｈ３１２２の腫瘍を有するマウスにおける処置は、ＮＣＩ−Ｈ３１２２の腫瘍を有するマウスにおける３０ｍｇ／ｋｇ、ｂｉｄ投与を除いて（図１５）、明確な毒性または化合物関連の体重減少なしに、十分許容される（図１４および図１５）。

【0144】

５５ｍｇ／ｋｇ ｑｄ ｐｏでのＮＣＩ−Ｈ２２２８の腫瘍を有するマウスの４週間の更なる処置により、１００％の動物における持続性の完全な腫瘍抑制が提供される（図１６）。前記更なる処置は、明確な毒性および顕著な体重減少なしに、十分許容される（図１７）。持続性の腫瘍抑制は、１００％のマウスにおいて、処置の中止後４０日間、いずれのマウスにおける腫瘍の再現なしに観察された（図１６）。

【0145】

このことは、ＣＥＰ−３７４４０によるおおよそ６週間の処置後に、腫瘍が完全に根絶され、マウスが効果的に「治癒」されていることを示唆するため重要である。

【0146】

ホルモン非依存性前立腺ガン腫、ＮＳＣＬガン腫、およびＨＮＳＣガン腫のヒト腫瘍異種移植片における抗腫瘍活性研究
確立されたＦＡＫ陽性ＰＣ−３前立腺腫瘍の異種移植片において、３６日の期間にわたるＣＥＰ−３７４４０の投与により、５５％の腫瘍増殖阻害（ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ：ＴＧＩ）および１０％の発生率の完全な腫瘍抑制がもたらされる。このモデルにおけるＰＦ−５６２２７１の同等の用量のそれ（６９％のＴＧＩおよび２５％の発生率の部分的な腫瘍抑制）と類似するプルファイルであった（図１８）。全ての投与計画は、明確な毒性または顕著な体重減少が観察されず、十分許容される。

【0147】

非小細胞肺（Ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ Ｃｅｌｌ Ｌｕｎｇ：ＮＳＣＬ）ガン腫
ＣＥＰ−３７４４０は、研究の２８日目までの、５５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄにおいて８０％のＴＧＩおよび６０％の発生率の（３０％の完全および３０％の部分的な）腫瘍抑制による薬剤関連抗腫瘍活性、ならびに、３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄにおける顕著な活性（６０％のＴＧＩおよび部分的な腫瘍抑制についての証拠）を説明する（図１９）。顕著な抗腫瘍活性（６６％のＴＧＩ）が、５５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄでのＰＦ−５６２２７１により観察されるが、中程度の腫瘍増殖のリバウンドが、２３日目に始まって観察された。ＣＥＰ−３７４４０およびＰＦ−５６２２７１両方の投与は、明確な毒性または顕著な体重減少が観察されず、十分許容される（図２０）。ＣＥＰ−３７４４０により達成された顕著な活性は、このＥＭＬ４−ＡＬＫ陰性の腫瘍異種移植片モデルにおけるＥＧＦ−Ｒのリン酸化（活性化）を阻害することの結果ではないことに留意されたい。

【0148】

頭頸部扁平上皮ガン腫（Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｓｑｕａｍｏｕｓ Ｃｅｌｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ＨＮＳＣＣ）
確立されたＤｅｔｒｏｉｔ５６２ ＨＮＳＣＣ異種移植片を有するＳＣＩＤマウスにおいて、ＣＥＰ−３７４４０およびＰＦ−５６２２７１は、総ＦＡＫ発現レベルにおける作用なしに、ＦＡＫ活性化の阻害についての明確な腫瘍薬力学的作用を説明した（図２１）。２８日の期間にわたって、ＣＥＰ−３７４４０およびＰＦ−５６２２７１により、腫瘍静止ならびに、２０％の発生率（ＣＥＰ−３７４４０、３０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）および３０％の発生率（ＣＥＰ−３７４４０およびＰＦ−５６２２７１、５５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ）の部分的な腫瘍抑制がもたらされる。ＣＥＰ−３７４４０（両用量）により観察された活性の大きさは、ＰＦ−５６２２７１の５５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄにより観察されたそれ（Ｒｏｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，２００８）と同等である。投与計画は、罹患または死亡が観察されず、十分許容される。

【0149】

これらの研究は、それらが、ホルモン非依存性前立腺ガン腫、ＮＳＣＬガン腫、およびＨＮＳＣＣの確立された異種移植片モデルにおいて、ＣＥＰ−３７４４０が顕著なＦＡＫ薬力学的阻害およびＡＬＫ非依存性抗腫瘍活性、例えば、客観的な腫瘍応答を示すため、重要である。

【0150】

本明細書に記載の実施例および実施形態は、説明の目的のみについてのものであり、それらを考慮した種々の改良または変更が、当業者に示唆され、この出願の精神および範囲ならびに添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれるであろうことが理解される。本明細書において引用された全ての刊行物、特許、および特許出願は、全ての目的について、この参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】