特許 6017534 抗真菌剤の製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6017534

(24)【登録日】2016年10月7日

(45)【発行日】2016年11月2日

(54)【発明の名称】抗真菌剤の製造方法

(51)【国際特許分類】

   C07K 1/10 20060101AFI20161020BHJP

   C07K 7/56 20060101ALN20161020BHJP

   C07K 5/12 20060101ALN20161020BHJP

   C12P 21/04 20060101ALN20161020BHJP

【ＦＩ】

   C07K1/10

   !C07K7/56

   !C07K5/12

   !C12P21/04

【請求項の数】14

【全頁数】15

(21)【出願番号】特願2014-503064(P2014-503064)

(86)(22)【出願日】2012年3月26日

(65)【公表番号】特表2014-510116(P2014-510116A)

(43)【公表日】2014年4月24日

(86)【国際出願番号】EP2012055284

(87)【国際公開番号】WO2012136498

(87)【国際公開日】20121011

【審査請求日】2015年1月14日

(31)【優先権主張番号】61/471,218

(32)【優先日】2011年4月4日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】505371232

【氏名又は名称】クセリア ファーマシューティカルズ エーピーエス

【氏名又は名称原語表記】Ｘｅｌｌｉａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ＡｐＳ

(74)【代理人】

【識別番号】100105957

【弁理士】

【氏名又は名称】恩田 誠

(74)【代理人】

【識別番号】100068755

【弁理士】

【氏名又は名称】恩田 博宣

(74)【代理人】

【識別番号】100142907

【弁理士】

【氏名又は名称】本田 淳

(72)【発明者】

【氏名】グネス、セルビ

(72)【発明者】

【氏名】ハルヴォルセン、ハラルド

【審査官】 濱田 光浩

(56)【参考文献】

【文献】 特開平１０−３２４６９５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 Org. Process Res. Dev., 2009, 13 (2), pp 310-314

【文献】 Chem. Eur. J., 2009, Vol. 15, p. 9394-9403

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｋ １／００

Ｃ０７Ｋ ５／００

Ｃ０７Ｋ ７／００

Ｃ１２Ｐ ２１／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ミカファンギン又はその塩を製造するためのワンポット方法であって、以下の順序の工程、すなわち、
ａ）式（ＩＩＩ）の化合物又はその塩を、ヒドロキシベンゾトリアゾール類及びエチル−２−シアノ−２−（ヒドロキシイミノ）アセタートからなる群から選択されるカップリング添加剤と溶媒中で混合する工程、

【化1】

ｂ）カップリング試薬を、工程ａ）で得られた混合物に添加する工程であって、前記カップリング試薬がカルボジイミドである工程、
ｃ）塩基及び式（ＩＩ）の化合物又はその塩を、工程ｂ）で得られた混合物に添加する工程を含む方法。

【化2】

【請求項2】

前記カップリング添加剤が、１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾールである、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記カップリング添加剤が、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾールである、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記カップリング添加剤が、エチル−２−シアノ（ヒドロキシイミノ）アセタートである、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

前記カップリング試薬が、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）又はその塩である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

前記カップリング試薬が、ＥＤＣの塩酸塩である、請求項５に記載の方法。

【請求項7】

工程ａ）で使用される溶媒が、ＤＭＦである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

工程ｃ）で使用される塩基が、ＤＩＰＥＡである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記塩基が、化学式ＩＩの化合物を添加する前に、工程ｂ）で得られた混合物に添加される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記塩基が、化学式ＩＩの化合物を添加した後で、工程ｂ）で得られた混合物に添加される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

工程ｃ）で得られたミカファンギン塩が沈殿される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

工程ｃ）で得られたミカファンギン塩が、貧溶媒を使用することにより沈殿される、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

前記貧溶媒が、酢酸エチルである、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

工程ｃ）で得られたミカファンギン塩が、メタノール及びアセトンを添加することにより反応を停止させた後で沈殿される、請求項１１に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ミカファンギン又はその塩を調製するための改善された方法に関する。

【背景技術】

【0002】

ミカファンギンは、式（Ｉ）により表わされる、抗真菌活性を有するエキノキャンディンである。

【0003】

【化1】

ミカファンギンは、ニューモカンジンＡ０、１−［（４Ｒ，５Ｒ）−４，５−ジヒドロキシ−Ｎ２−［４−［５−［４−（ペンチルオキシ）フェニル］−３−イソオキサゾリル］ベンゾイル］−Ｌ−オルニチン］−４−［（４Ｓ）−４−ヒドロキシ−４−［４−ヒドロキシ−３−（スルホオキシ）フェニル］−Ｌ−トレオニン］としても知られている。更に、ミカファンギンナトリウムは、ＦＫ−４６３として知られている。ケミカルアブストラクツにより割り当てられている登録番号は、ミカファンギンの場合は２３５１１４−３２−６であり、ミカファンギンナトリウムの場合は２０８５３８−７３−２である。

【0004】

ミカファンギンの抗真菌活性は、１，３−β−Ｄ−グルカンシンターゼを阻害し、したがって真菌細胞溶解をもたらす能力によるものである。したがって、ミカファンギンは、種々の感染症、特に、例えばアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、クリプトコックス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）、アクチノミセス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ）、ヒストプラスマ（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）、皮膚糸状菌（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈｙｔｅ）、マラセジア（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ）、及びフザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）の菌株により引き起こされる感染症の治療に有用である。ミカファンギンは、カンジダにより引き起こされる感染症の治療及び予防に使用される、承認薬Ｍｙｃａｍｉｎｅ（登録商標）及びＦｕｎｇｕａｒｄ（登録商標）の有効成分である。

【0005】

ミカファンギンは、エキノキャンディン系の２番目に承認された抗真菌剤であり、今や、重篤な真菌感染症の化学療法に世界中で使用されている。
ミカファンギン及びその調製は、藤沢薬品工業に付与された特許文献１に開示されている。ミカファンギンを調製する方法は、一般論文である非特許文献１にも開示されている。従来技術に開示されている方法によると、ミカファンギンは、真菌コレオフォマ・エンペトリ（Ｃｏｌｅｏｐｈｏｍａ ｅｍｐｅｔｒｉ）Ｆ−１１８９９から単離された天然産物ＦＲ−９０１３７９から得ることができる。ＦＲ−９０１３７９を酵素的に脱アシル化し、その後４−［５−（４−ペンチルオキシ）フェニル）イソオキサゾール−３−イル］安息香酸のアミドカップリングにより、ミカファンギンを生成することができる。

【0006】

ミカファンギンを調製する方法は、Ｆｒｏｍｔｌｉｎｇら（上記参照）にも開示されている。ＦＲ−９０１３７９の脱アシル化後に得られるペプチドコアを、Ｆｒｏｍｔｌｉｎｇらに従って、活性化された側鎖１−［４−［５−（４−ペンチルオキシ）フェニル）イソオキサゾール−３−イル］ベンゾイル］ベンゾトリアゾール３−オキシドにより再アシル化する。

【0007】

ミカファンギンナトリウムを製造するための種々の方法は、非特許文献２にも開示されている。
ミカファンギン生産の向上は、特許文献２に記載されている。この方法は、単離されたミカファンギン側鎖、つまり１−［４−［５−（４−ペンチルオキシ）フェニル）イソオキサゾール−３−イル］ベンゾイルオキシ］−１Ｈ−１，２，３−ベンゾトリアゾールを、脱アシル化ミカファンギンペプチドコアに付加する工程も含む。

【0008】

非特許文献３には、最適化された産業的ミカファンギン生産方法が開示されており、この方法は活性化ミカファンギン側鎖を単離することも含む。
上記で参照した従来技術に開示されているミカファンギンを調製する方法の場合は全て、全公知方法が、ミカファンギンペプチドコア、つまりＦＲ−９０１３７９との反応の前に活性化ミカファンギン側鎖を分離することを前提としていることを共通の特徴とする。したがって、従来技術の方法は全て、単離形態の活性化ミカファンギン側鎖を介して進行する。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0009】

【特許文献1】米国特許第６１０７４５８号明細書

【特許文献2】米国特許第７１９９２４８号明細書

【非特許文献】

【0010】

【非特許文献1】Ｏｈｉｇａｓｈｉら、「Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｍｉｃａｆｕｎｇｉｎ，ａ Ｎｏｖｅｌ Ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅ Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ Ａｇｅｎｔ」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、日本、６４巻、１２号、２００６年１２月

【非特許文献2】Ｈａｓｈｉｍｏｔｏら、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ（２００９年）６２巻、２７〜３５頁

【非特許文献3】Ｏｈｉｇａｓｈｉら、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、２００５年、９巻、１７９〜１８４頁

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0011】

本発明の目的は、ミカファンギンを調製するための、改善された、産業的に効率化された方法を提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0012】

本発明の目的は、１つの態様によると、ワンポット法でのミカファンギン側鎖の活性化及び上記ミカファンギン側鎖のミカファンギンペプチドコアへのカップリングを含む方法を使用することにより達成される。すなわち、本発明の方法は、その関連反応混合物から活性化ミカファンギン側鎖を単離することなく、ミカファンギンペプチドコアをアシル化することを含む。別の態様では、本発明は、１つの反応混合物中で、ミカファンギン側鎖を活性化し、ミカファンギンコアペプチドとカップリングさせることを含む。したがって、活性化ミカファンギン側鎖を単離する工程を必要としない方法が提供される。

【0013】

ミカファンギン側鎖としての酸性化合物を、ミカファンギンコアとしてのペプチドコアにカップリングすると、種々の望ましくない副生成物がもたらされる場合がある。Ｏｈｉｇａｓｈｉら、２００６年（上記参照）を参照すると、ミカファンギンコアには多数の官能基が存在するため、アシル化反応では副反応を抑制する必要があることが、特に考察されている。更に、Ｏｈｉｇａｓｈｉら、２００６年には、この方法では中間体の精製条件を最適化する必要性があることが教示されている。従来技術の教示にも関わらず、本発明者らは、驚くべきことに、ミカファンギン側鎖のカップリングを活性化し、活性化ミカファンギン側鎖を単離する別の分離工程を必要とせずに、ミカファンギンコアに直接カップリングすることができ、不純物生成が最小限である良好な結合が達成されたことを発見した。本発明の方法は、活性化ミカファンギン側鎖の分離を前提とする従来技術の方法と比較して有利である。例えば、ワンポット方法は、分離工程を省略することによりプロセス所要時間がより短くなるという点で産業的観点からより効率的である。加えて、活性化ミカファンギン側鎖がより良好に利用されるため、分離／精製工程による生成物の喪失がなく、全体的により良好な収率がもたらされることになる。

【0014】

より詳しくは、本発明は、以下の順序の工程を含む、ミカファンギン又はその塩を製造するためのワンポット方法を提供する：
ａ）式（ＩＩＩ）の化合物又はその塩を、

【0015】

【化2】

ヒドロキシベンゾトリアゾール類（hydroxybenzotriazols）及びエチル−２−シアノ−２−（ヒドロキシイミノ）アセタートからなる群から選択されるカップリング添加剤と溶媒中で混合する工程、
ｂ）カップリング試薬を、工程ａ）で得られた混合物に添加する工程であって、上記カップリング試薬がカルボジイミドである工程、
ｃ）塩基及び式（ＩＩ）の化合物又はその塩を、工程ｂ）で得られた混合物に添加する工程。

【0016】

【化3】

本発明の１つの実施形態によると、カップリング添加剤は、１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾールである。

【0017】

本発明の別の実施形態によると、カップリング添加剤は、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾールである。
本発明の更なる実施形態によると、カップリング添加剤は、エチル−２−シアノ（ヒドロキシイミノ）アセタートである。

【0018】

本発明の別の実施形態によると、カップリング試薬は、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）又はその塩であり、好ましくは、ＥＤＣの塩酸塩である。

【0019】

本発明の別の実施形態によると、上記の工程ａ）で使用される溶媒は、ＤＭＦである。
本発明の更に別の実施形態によると、本発明の工程ｃ）で使用される塩基は、ＤＩＰＥＡである。

【0020】

本発明の更に別の実施形態によると、塩基は、化学式ＩＩの化合物を添加する前に、工程ｂ）で得られた混合物に添加される。
本発明の更に別の実施形態によると、塩基は、化学式ＩＩの化合物を添加した後で、工程ｂ）で得られた混合物に添加される。

【0021】

本発明の更に別の実施形態によると、工程ｃ）で得られたミカファンギン塩は、沈殿される。
本発明の更に別の実施形態によると、工程ｃ）で得られたミカファンギン塩は、貧溶媒を使用して沈殿される。

【0022】

本発明の更に別の実施形態によると、工程ｃ）で得られたミカファンギン塩は、酢酸エチルを使用して沈殿される。
本発明の更に別の実施形態によると、工程ｃ）で得られたミカファンギン塩は、メタノール及びアセトンを添加することにより反応を停止させた後で沈殿される。

【図面の簡単な説明】

【0023】

【図1】実施例１に記載の反応、つまりミカファンギン側鎖及びＨＯＢｔに代表されるカップリング添加剤の個別反応を示す反応スキームを示す図である。

【図2】実施例２に記載の反応、つまりミカファンギンペプチドコア及び図１に示されている反応の生成物の個別反応を示す反応スキームを示す図である。

【図3】実施例３及び実施例４に記載の反応、つまり、ミカファンギン側鎖の活性化及びミカファンギンペプチドコアとの反応を、本発明によるワンポット方法で実施する反応の反応スキームを示す図である。

【図4a】実施例２に開示されている段階的プロセスの生成物のクロマトグラムを表わす図である。

【図4b】実施例３に開示されているワンポット方法の生成物のクロマトグラムを表わす図である。

【図4c】実施例４に開示されているワンポット方法の生成物のクロマトグラムを表わす図である。

【発明を実施するための形態】

【0024】

本発明によると、ミカファンギンは、以下の構造を含む任意の化合物又はその塩である。

【0025】

【化4】

「その塩」という表現は、ミカファンギンの調製及び／又は精製のために有用であり得るミカファンギンの任意の塩、又は医薬製剤の有効成分として有用なミカファンギンの任意の薬学的に許容される塩を包含することが意図されている。この点で、ミカファンギンの塩の非限定的なリストは、ナトリウム塩、カリウム塩、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）塩等である。

【0026】

本発明によると、ミカファンギンは、まずａ）ミカファンギン側鎖をカップリング添加剤と混合し、ｂ）その後、カップリング試薬を、工程ａ）の混合物に添加し、最後にｃ）この混合物に、塩基及び上記に示されている式ＩＩの化合物、つまりミカファンギンペプチドコアを添加することにより、ワンポットで調製される。

【0027】

酸性形態のミカファンギン側鎖は、化学名４−［５−（４−ペンチルオキシ）フェニル］イソオキサゾール−３−イル］安息香酸を有する化合物である。ケミカルアブストラクツにより割り当てられている登録番号は１７９１６２−５５−１であり、Ｆｕｊｉｓａｗａにより割り当てられた名称は、ＦＲ−１９５７５２である。この化合物は、本明細書ではミカファンギン側鎖とも呼ばれ、酸性形態は、式ＩＩＩにより表わすことができる。

【0028】

【化5】

ミカファンギンペプチドコアは、式ＩＩにより表わされる。

【0029】

【化6】

用語「ミカファンギンペプチドコア」は、本明細書で使用される場合、式ＩＩの化合物の塩も包含することが意図されている。例えば、上記の化合物のナトリウム塩は、ＦＲ−１７９６４２としても知られている（Ｆｒｏｍｔｌｉｎｇら、Ｄｒｕｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｕｔｕｒｅ、１９９８年、２３巻、１２号、１２７３〜１２７８頁）。

【0030】

ミカファンギンでは、ミカファンギン側鎖は、アミド結合によりミカファンギンペプチドコアに結合されている。アミド結合を形成するための、すなわちカルボン酸及びアミンを反応させるための種々の方法は、従来技術に開示されており、ペプチドの合成に使用されている。ほとんどの場合、アミド結合の形成には、カップリング試薬及びカップリング添加剤を使用したカルボン酸の活性化を使用することが必要である。Ｍａｄｅｌｅｉｎｅ Ｍ．Ｊｏｕｌｌｉｅ及びＫｅｎｎｅｔｈ Ｍ．Ｌａｓｓｅｎ、Ａｒｋｉｖｏｃ、２０１０年（ｖｉｉｉ）、１８９〜２５０頁、並びにＥｒｉｃ Ｖａｌｅｕｒ及びＭａｒｋ Ｂｒａｄｌｅｙ、２００９年、Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．、３８巻、６０６〜６３１頁を参照されたい。非常に単純なペプチド構造が、ワンポット法でのアミド結合形成により調製されている例も存在する。水性エタノール混合液中でペプチドを調製するための方法である、Ｐｕら、２００９年、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、１３巻、３２１〜３１４頁を参照されたい。

【0031】

しかしながら、従来技術には、ミカファンギンペプチドコア等の複雑な分子のアミン基をカルボン酸とカップリングするためのワンポット法は、全く示唆されていない。
本明細書で使用される場合、用語「ミカファンギンペプチドコア」又は「ミカファンギンコア」は、上記に示されている式ＩＩにより表わされるＦＲ−９０１３７９からパルミトイル部分を酵素的に脱アシル化することにより生じる化合物である。Ｆｕｊｉｓａｗａは、ミカファンギンペプチドコアにＦＲ−１７９６４２という名称を割り当て、ミカファンギンペプチドコアのナトリウム塩にはＦＲ−１３３３０３という名称を割り当てた。ケミカルアブストラクツにより割り当てられているこの化合物の登録番号は、１６８１１０−４４−９である。本明細書で使用される場合、ミカファンギンペプチドコアは、この化合物並びにこの化合物の塩、例えばナトリウム塩ＦＲ−１３３３０３を包含することが意図されている。

【0032】

本発明によるワンポット法の最初の工程は、ミカファンギン側鎖及びカップリング添加剤の混合である。上記のように混合した後、カップリング試薬を混合物に添加すると、ミカファンギン側鎖の活性化及び反応添加剤との反応が生じる。

【0033】

用語「カップリング添加剤」は、本明細書で使用される場合、活性化ミカファンギン側鎖の反応性を増強し、ミカファンギンペプチドコアの一級アミンとのカップリングを促進する任意の化合物を表わす。カップリング添加剤を使用する利点は、副生成物の形成が低減されることである。

【0034】

非常に多くのカップリング添加剤が存在する（Ｖａｌｅｕｒ及びＢｒａｄｌｅｙによる、Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．、２００９年、３８巻、６０６〜６３１頁を参照）。用語ヒドロキシベンゾトリアゾール類は、ヒドロキシベンゾトリアゾール、ヒドロキシアザベンゾトリアゾール類（hydroxyazabenzotriazols）、及びその置換誘導体を包含することが意図されている。例えば、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール、６−クロロ−１−ヒドロキシベンゾトリアゾール等である。

【0035】

本発明の方法によると、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）及びエチル２−シアノ−２−（ヒドロキシイミノ）アセタート（Ｏｘｙｍａ Ｐｕｒｅ（商標）、ＣＡＳ番号３８４９−２１−６、以降、Ｏｘｙｍａ）が有用であることが示されている。上記カップリング添加剤を使用すると、不純物形成が低減され、所望のミカファンギンの収率が高くなる。

【0036】

用語「カップリング試薬」は、本発明により使用される場合、カップリング添加剤の存在下で、ミカファンギン側鎖のカルボン酸を活性化することが可能であり、それによりミカファンギンコア構造のアミンとの反応を促進する任意の化合物である。

【0037】

本発明によるカップリング試薬としては、以下の式：Ｒａ−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−Ｒｂにより表されるカルボジイミド誘導体を使用することができ、式中、Ｒａ及びＲｂは、同じであるか又は異なっており、各々独立して脂肪族基、ヘテロ脂肪族基、炭素環基、又は複素環基であり、上記基は全て任意に置換されている。本発明の１つの態様によると、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）が、カップリング試薬として使用される。本方法の好ましい態様によると、ＥＤＣの塩酸塩が、カップリング試薬として使用される。

【0038】

カルボジイミドをカップリング試薬として使用することができることは、従来技術において公知である。例えば、Ｖａｌｅｕｒ及びＢｒａｄｌｅｙ、Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ ２００８年６月を参照されたい。ミカファンギン側鎖の負荷電酸素は、求核基として理想的に作用し、ジイミド基の中央炭素を攻撃するであろう。カップリング添加剤としてＯｘｙｍａを使用し、カップリング試薬としてＥＤＣを使用する本発明の方法が以下に示されている。スキーム１を参照されたい。

【0039】

ワンポット反応に好適な溶媒には、極性非プロトン有機溶媒が含まれる。好適な溶媒の非限定的なリストには、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等、及びそれらの混合物が含まれる。

【0040】

ワンポット反応に好適な塩基には、ミカファンギンペプチドコアのアミン基にプロトンを付加することができる有機又は無機塩基が含まれる。好適な塩基の非限定的リストには、ＤＩＰＥＡ、ＮａＨＣＯ_３、Ｎａ_２ＣＯ_３等が含まれる。

【0041】

ミカファンギン側鎖の活性化に好適な温度は、０℃〜４０℃、好ましくは２０℃〜３０℃である。
ミカファンギン側鎖のミカファンギンペプチドコアへのカップリングに好適な温度は、−５℃〜１０℃、好ましくは０℃である。また、上記温度は、塩基を添加する前に達成されていることが好ましい。

【0042】

ワンポット法の好適な総反応時間は、約４時間〜２０時間である。好ましくは、ミカファンギン側鎖の活性化には２〜４時間、活性化ミカファンギンのミカファンギンペプチドコアへのカップリングには、９０分〜２時間である。

【0043】

カップリング試薬は、カップリング添加剤及びミカファンギン側鎖を混合した後に添加されることが重要である。
下記の反応スキーム１は、本発明のワンポット方法中に生じるミカファンギン側鎖の活性化及び活性化ミカファンギン側鎖のミカファンギンペプチドコアとの反応を示す。

【0044】

【化7】

ミカファンギン側鎖をミカファンギンペプチドコアにカップリングした後、その生成物をミカファンギンの塩として沈殿させてもよい。用語「ミカファンギン塩」は、この点では、任意の薬学的に活性な塩であってもよく、又はミカファンギンの更なる精製に有用な塩であってもよい。後者の場合、ミカファンギンの塩は、例えば、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）塩であってもよい。ミカファンギンの任意の薬学的に許容される塩は、本発明により調製されたミカファンギン生成物を使用して、更に調製されていてもよい。有用な薬学的に許容される塩は、ナトリウム塩及びカリウム塩からなる群から選択されていてもよい。

【0045】

本発明により調製されたミカファンギンは、任意に、当業者に周知の方法を使用して更に精製されていてもよい。本発明の１つの実施形態によると、本発明の工程ｃ）の生成物は、ミカファンギンのＤＩＰＥＡ塩に変換され、その後ミカファンギンのナトリウム塩等の、ミカファンギンの薬学的に許容される塩に変換され、クロマトグラフィーにより更に精製される。

【0046】

本発明により調製されているミカファンギンは、ヒト及び動物を含む哺乳動物の感染症の治療及び予防に有用な医薬組成物の製造に使用することができる。上記医薬組成物は、当技術分野で周知の標準的技術を使用して調製することができる。この医薬組成物は、滅菌等の従来の医薬品操作に供することもできる。

【0047】

例えば、医薬組成物は、単独で又は別の有効成分と組み合わせて、薬学的に許容される賦形剤と共に、所定量の精製ミカファンギンを含む用量単位の形態に調製されていてもよい。用語「薬学的に許容される賦形剤」は、その必要性のある患者に対する、医薬組成物に含まれるミカファンギンの送達を達成又は増強するのに好適な１つ又は複数の製剤物質を指す。「薬学的に許容される賦形剤」は、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、及び緩衝剤等のアジュバントの存在により表わすこともできる。ラクトースは、特に凍結乾燥形態のミカファンギンに好適な安定剤の例である。当業者であれば、ミカファンギンのような抗真菌性化合物を含む医薬製剤の調製に利用可能な種々の医薬賦形剤を十分に認知しているであろう。本発明による組成物は、非経口投与、例えば静脈内投与を可能にするように調製することができる。

【0048】

本発明による組成物を必要とする患者に、ミカファンギンの好適な用量を投与することができる。ヒト又は哺乳動物に好適な１日用量は、患者の状態及び他の要因に応じて広く変動する場合がある。１日用量は、当業者であれば日常的な方法を使用して決定することができ、それらは、Ｍｙｃａｍｉｎｅ（登録商標）を投与する場合、感染症の治療及び予防に一般的に使用される。

【0049】

当業者であれば、以下の例から、本発明の多数の利点を認識するであろう。下記の実験及び結果は、非限定的な例に過ぎないことが更に理解されるべきである。
実施例１：活性化ミカファンギン側鎖の生成
ＦＲ−１９５７５２（１０．０ｇ）及びＨＯＢｔ（５．２ｇ）（１２％の水を含む）を、ＤＭＦ（１４２ｍｌ）に懸濁し、５分間撹拌した。ＥＤＣ ＨＣｌ（６．６ｇ）を懸濁物に添加した。反応混合物を２５℃で４時間撹拌した。反応混合物を、４２６ｍｌのアセトニトリル（ＡＣＮ）に注ぎ、２５℃で１８時間撹拌した。白色懸濁物をろ過し、フィルタ上で２時間乾燥させた。単離収量は１２．６ｇ（９５％）であり、ＨＰＬＣ純度は９８．０％であった。

【0050】

実施例２：活性化ミカファンギン側鎖のミカファンギンペプチドコアへのカップリング
ＦＲ−１７９６４２（１０．０ｇ）を、２５℃で１０分間撹拌することにより乾燥ＤＭＦ（２００ｍｌ）に懸濁した。混合物を０℃に冷却した。ミカファンギン側鎖（４．５０ｇ）及び実施例１に記載の活性化された酸を添加し、その後ＤＩＰＥＡ（２．２５ｍｌ）を添加した。物質は全て５分後に溶解し、混合物を０℃で９０分間撹拌した。メタノール（５０ｍｌ）及びアセトン（１００ｍ）の混合物を添加し、温度を１０℃に上昇させた。混合物を、この温度で６０分間撹拌した。酢酸エチル（１０００ｍｌ）を、２．５時間にわたってゆっくりと添加した。その結果生じた懸濁物を１５時間撹拌し、微細な粗ガラス焼結フィルタ板を備えたＡｌｄｒｉｃｈ社製の１０００ｍｌガラス加圧フィルタを使用した加圧ろ過により生成物を収集した。ろ過ケーキを、酢酸エチル（１５００ｍｌ）で洗浄し、フィルタ上で１５分間乾燥させた。２５℃の減圧キャビネットで更に３時間乾燥させることにより、１２．８ｇ（８６％）の白色固形物を得た。

【0051】

実施例３：ミカファンギン側鎖の活性化及びミカファンギンペプチドコアへのカップリング
ＦＲ−１９５７５２（３９４ｍｇ）及びＨＯＢｔ水和物（１９７ｍｇ）を、２５℃でＤＭＦ（１５ｍｌ）に懸濁した。ＥＤＣ ＨＣｌ（１６６ｍｇ）を添加し、混合物を、２５℃で４時間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、ＤＩＰＥＡ（０．２２３ｍｌ）を添加し、その後ＦＲ−１７９６４２（１．００ｇ）を添加した。混合物を０℃で９０分間撹拌した。メタノール（２．５ｍｌ）及びアセトン（５ｍｌ）の混合物を添加し、混合物を１０℃に加熱し、６０分間撹拌した。酢酸エチル（１００ｍｌ）を３０分間にわたって添加し、その結果生じた懸濁物を１０℃で１６時間撹拌した。固形生成物を、ろ過で収集し、酢酸エチル（１５０ｍｌ）で洗浄し、フィルタ上で１５分間乾燥させた。２５℃の減圧キャビネットで更に２時間乾燥させることにより、１．４７ｇ（収率９８％）の白色固形物を得た。ＨＰＬＣ純度は９６．６％であった。

【0052】

実施例４：ミカファンギン側鎖の活性化及びミカファンギンペプチドコアへのカップリング
ＦＲ−１９５７５２（２．０６ｇ）及びＯｘｙｍａ（８３４ｍｇ）を、２５℃でＤＭＦ（６０ｍｌ）に懸濁した。ＥＤＣ ＨＣｌ（１．０７ｇ）を添加し、混合物を、２５℃で２時間撹拌した。反応混合物は、鮮やかな黄色溶液になった。黄色溶液を０℃に冷却し、ＤＩＰＥＡ（１．１ｍｌ）を添加し、その後ＦＲ−１７９６４２（５．００ｇ）を添加した。混合物を０℃で９０分間撹拌した。メタノール（１５ｍｌ）及びアセトン（３０ｍｌ）の混合物を添加し、混合物を１０℃に加熱し、６０分間撹拌した。酢酸エチル（３００ｍｌ）を３０分間にわたって添加し、その結果生じた懸濁物を１０℃で２０時間撹拌した。固形生成物を、ろ過で収集し、酢酸エチル（１００ｍｌ）で洗浄し、フィルタ上で１５分間乾燥させた。２５℃の減圧キャビネットで更に２時間乾燥させることにより、６．６８ｇ（収率９０％）の白色に近い固形物を得た。

【0053】

実施例５：実施例２〜４のクロマトグラムの比較
実施例２〜４の粗生成物のＨＰＬＣクロマトグラムを、ＨＰＬＣ（逆相クロマトグラフィー）により分析した。表１は、３つの異なる方法を比較するＨＰＬＣクロマトグラムの結果を示す（図４ａ〜４ｃを参照）。実施例２は、段階的プロセスであり、実施例３及び４は、それぞれＨＯＢｔ及びＯｘｙｍａをカップリング添加剤として使用したワンポット法である。Ｏｘｙｍａは、粗生成物のクロマトグラムには存在しない。反応混合物では、Ｏｘｙｍａは、８．５分に出現する。

【0054】

【表1】

方法３及び４は、より少ない溶媒が使用されているため、より効率的であり、活性化された酸の分離が回避されるため、反応時間が低減される。ワンポット法における重量比での収率は、顕著に優れており、従来技術の方法の場合には８２％に過ぎなかったのと比較して、実施例３及び４では、それぞれ９８％及び９５％である。これらの例から明らかなように、本出願によるワンポット法は、段階的な従来技術の方法と同様に純粋なミカファンギンの生産を可能にするが、図４ａ〜ｃに示されているように、収率はより良好であり、粗生成物の純度は、ほぼ同じである。

【図1】

【図4a】

【図4b】

【図4c】

【図2】

【図3】