特許 6019288 脂質異常症または高脂血症の表現型を簡易的に分類または判定する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6019288

(24)【登録日】2016年10月14日

(45)【発行日】2016年11月2日

(54)【発明の名称】脂質異常症または高脂血症の表現型を簡易的に分類または判定する方法

(51)【国際特許分類】

   G01N 27/447 20060101AFI20161020BHJP

   G01N 33/92 20060101ALI20161020BHJP

【ＦＩ】

   G01N27/447 315Z

   G01N27/447 301A

   G01N27/447 315F

   G01N27/447 325B

   G01N33/92 Z

【請求項の数】9

【全頁数】11

(21)【出願番号】特願2012-116943(P2012-116943)

(22)【出願日】2012年5月7日

(65)【公開番号】特開2013-234981(P2013-234981A)

(43)【公開日】2013年11月21日

【審査請求日】2015年3月19日

(73)【特許権者】

【識別番号】308001776

【氏名又は名称】株式会社明日香特殊検査研究所

(73)【特許権者】

【識別番号】504013775

【氏名又は名称】学校法人 埼玉医科大学

(72)【発明者】

【氏名】松田 武英

(72)【発明者】

【氏名】井上 郁夫

【審査官】 黒田 浩一

(56)【参考文献】

【文献】 特開平１１−２３０９３７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０８−３２０３１３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００５−１２１６１９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００４−２５８０１４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 MUNIZ, M，Measurement of Plasma Lipoproteins by Electrophoresis on Polyacrylamide Gel，CLIM. CHEM，１９７７年，Vol.23 No.10，p.1826-1833，ＵＲＬ，www.clinchem.org/content/23/10/1826.full.pdf

【文献】 金澤敏行 他，ポリアクリルアミドゲルディスク電気泳動法による血清リポ蛋白質の分析および評価，機器・試薬，２０１０年，Vol.33、No.3，p.399-402

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｇ０１Ｎ ２７／２６−４９

Ｇ０１Ｎ ３０／００−３０／９６

Ｇ０１Ｎ ３３／４８−３３／９８

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

被検体中のリポ蛋白質を分離分析し、結果を濃度波形で表す分析法であるポリアクリルアミドゲルディスク電気泳動法において算出された高低比重リポ蛋白質ＶＬＤＬ、中間比重リポ蛋白質ＩＤＬ、低比重リポ蛋白質ＬＤＬ、小粒子リポ蛋白質ｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬ、高比重リポ蛋白質ＨＤＬの分画％とＩＤＬ、ＬＤＬ、ｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬおよびＨＤＬの濃度波形のピーク値または設定した範囲における最大位置の吸光度ＯＤの数値と、生化学の自動分析装置等で測定した当該被検体中の総コレステロールＴＣの定量値を使用し脂質異常症または高脂血症の表現型を簡易的に分類または判定する方法

【請求項2】

リポ蛋白質の濃度波形の内ＶＬＤＬの分画％が３０％以上でかつＨＤＬの分画％が１０％以上あり、かつＩＤＬ、ＬＤＬおよびｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬの濃度波形のピーク値または設定した範囲における最大位置の吸光度ＯＤ値が何れも０．１以下であることをもってＶ型高脂血症とし、リポ蛋白質の濃度波形の内ＶＬＤＬの分画％が３０％以上でかつＬＤＬおよびｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬの濃度波形のピーク値または設定した範囲で最大位置の吸光度ＯＤ値が何れも０．１以下でありかつＩＤＬの分画％が１０％以上あることをもってＩＩＩ型高脂血症とし、リポ蛋白質の濃度波形の内ＶＬＤＬの分画％が１５〜２５％でありかつ生化学の自動分析装置等で測定した被検体中の総コレステロール値ＴＣが２２０ｍｇ／ｄＬ以上であることを持ってＩＩｂ型高脂血症とすることを特徴とする請求項１の脂質異常症または高脂血症の表現型を簡易的に分類または判定する方法

【請求項3】

リポ蛋白質の濃度波形の内ＶＬＤＬの分画％が１５％未満でありかつ生化学の自動分析装置等で測定した被検体中の総コレステロール値ＴＣが ２２０ｍｇ／ｄＬ以上であることをもってＩＩａ型高脂血症とすることを特徴とする請求項１の脂質異常症または高脂血症の表現型を簡易的に分類または判定する方法

【請求項4】

リポ蛋白質の濃度波形の内ＶＬＤＬの分画％が２０％以上であり、Ｖ型高脂血症およびＩＩＩ型高脂血症およびＩＩｂ型高脂血症でないことをもってＩＶ型高脂血症とすることを特徴とする請求項２の脂質異常症または高脂血症の表現型を簡易的に分類または判定する方法

【請求項5】

ＩＤＬの分画％が１０％以上であることをもってＩＤＬの増加を伴うＩＶ型高脂血症とすることを特徴とする請求項４の脂質異常症または高脂血症の表現型を簡易的に分類または判定する方法

【請求項6】

ｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬの分画％が６％以上であることをもってｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬの増加を伴うＩＶ型高脂血症とすることを特徴とする請求項４の脂質異常症または高脂血症の表現型を簡易的に分類または判定する方法

【請求項7】

ＩＤＬの分画％が１０％以上ありかつｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬの分画％が６％以上であることをもってＩＤＬおよびｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬの増加を伴うＩＶ型高脂血症とすることを特徴とする請求項４の脂質異常症または高脂血症の表現型を簡易的に分類または判定する方法

【請求項8】

リポ蛋白質の濃度波形においてＩＤＬ、ＬＤＬ、ｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬ、ＨＤＬの波形がないかまたは濃度波形のピーク値または設定した範囲における最大位置の吸光度ＯＤ値が何れも０．０３以下であることをもってＩ型高脂血症とすることを特徴とする請求項１の脂質異常症または高脂血症の表現型を簡易的に分類または判定する方法

【請求項9】

リポ蛋白質の表現型の判定基準に係るアルゴリズムをコンピュータに記憶させ、検体毎に個々演算処理し得られた表現型の結果を、リポ蛋白分画検査報告書作成時に合わせて印刷または表示することを特徴とする請求項１〜８のいずれか１項の脂質異常症または高脂血症の表現型を簡易的に分類または判定する方法

【発明の詳細な説明】

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

ヒトの血清または血漿中のリポ蛋白質を分析した結果から、脂質異常症または高脂血症の表現型を分類しまたは判定する分野。

【背景技術】

【0002】

１９６５年フリードリクソン等はヒトの血清又は血漿中の脂質である中性脂肪（トリグリセライド、ＴＧ）や総コレステロール（ＴＣ）を化学的測定法で測定した結果とリポ蛋白質の蘆紙電気泳動結果が脂質正常者に比べ異常な患者いわゆる高脂血症者の脂質の型が５種類ありその型をＩ型、ＩＩａ型、ＩＩｂ型、ＩＩＩ型、ＩＶ型、Ｖ型と名づけた。
その後世界保健機構ＷＨＯでも高脂血症者の脂質の表現型分類をＩ型、ＩＩａ型、ＩＩｂ型、ＩＩＩ型、ＩＶ型、Ｖ型として承継し、現在も高脂血症治療の基準とされている（非特許文献１）。

【0003】

我国においても当初はＷＨＯの高脂血症者の表現型の分類または型判定であるＩ型、ＩＩａ型、ＩＩｂ型、ＩＩＩ型、ＩＶ型、Ｖ型を襲踏していた（非特許文献５）が、２００２年日本動脈硬化学会は「動脈硬化性疾患診療ガイドライン」を出版し（非特許文献２）、高脂血症の表現型とは別に、１）高コレステロール血症、２）高ＬＤＬコレステロール血症、３）低ＨＤＬコレステロール血症、４）高トリグリセリド血症の診療ガイドラインを決めた。また２００７年改訂版では２００２年版で低ＨＤＬコレステロール血症と言う名称を使用した関係で高脂血症と言う言葉は不適切であると判断され脂質異常症と改められた（非特許文献３）。

【0004】

非特許文献１では、カイロマイクロン（ＣＭ）、低比重リポ蛋白質（ＬＤＬ）、超低比重リポ蛋白質（ＶＬＤＬ）、Ｆｌｏａｔｉｎｇ β−ＬＰが存在するかしないかで高脂血症の表現型を判別するとされている。一方非特許文献４は、ズダンＢ前染色法によるポリアクリルアミドディスク電気泳動法の濃度波形が紹介されておりＴｙｐｅＩ、ＴｙｐｅＩＩ、ＴｙｐｅＩＩＢ、ＴｙｐｅＩＩＩ、ＴｙｐｅＩＶ、ＴｙｐｅＶと表記されている。我国でもポリアクリルアミドディスク電気泳動法の濃度波形とＴＣ値およびＴＧ値とアポ蛋白質の存在比率から高脂血症の型判定が出来ると紹介されている（非特許文献５）。何れにしても各型の判定方法には決まった数字等は記述はなされておらず判定は診察する医師に任されていた。

【0005】

近年多くの強力な高脂血症治療薬が発売され、脂質の測定法もより高度化してきた。その中でポリアクリルアミドディスク電気泳動法（Ｄｉｓｃ−ＰＡＧＥ法）の濃度波形の解析に画像からの濃度測定法（特許文献１）が使用され、リポ蛋白質の分析も画像により報告されるようになって、医師は患者毎に生化学の自動分析装置による脂質の測定値（ＴＣ、ＴＧ等）と電気泳動像の写真と濃度波形を見ながら診断を下せる状態になってきた（非特許文献６、非特許文献７）。非特許文献７によるとリポ蛋白質はＣＭ、ＶＬＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬの他に動脈硬化の悪玉と呼ばれている不安定なリポ蛋白質である中間比重リポ蛋白質（ＩＤＬ、ｍｉｄ−ｂａｎｄ）や小粒子ＬＤＬ（ｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬ）が容易に検出できると紹介されている。この不安定なリポ蛋白質であるＩＤＬやｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬを正常なＬＤＬと区別する方法として、濃度波形上のいくつかのＬＤＬを特定するため相対移動度と言う手法（ＶＬＤＬを０としＨＤＬを１とするときのＬＤＬの移動度の割合）が役立っている（非特許文献７）。これによるとＩＤＬの相対移動度はＲＭ０．１０〜０．１８、ｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬはＲＭ０．４０以上と記載されている。

【0006】

一方特許文献３にはＨＰＬＣ法でリポ蛋白質を分析をする方法が記載されており、特許文献４にはアガロースゲル電気泳動法に、ＴＣ染色とＴＧ染色を施した濃度波形から当該メーカが設定したプロトコールにより複雑な判定経路を経てコンピュータで自動的に高脂血症の表現型を判定すると記載されている。

【参考文献】

【0007】

【特許文献1】特開２００４−２５８０１４

【特許文献2】特開２００５−１２１６１９

【特許文献3】特開平８−３２０３１３

【特許文献4】特開平１１−２３０９３７

【0008】

【非特許文献1】Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄａｅｍｉａｓ ａｎｄ Ｈｙｐｅｒｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｅａｍｉａｓ，Ｂｕｌｌ，ＷＨＯ，ｖｏｌ．４３，ｐ８９１−９０８，１９７０

【非特許文献2】動脈硬化性疾患診療ガイドライン、２００２年版、日本動脈硬化学会

【非特許文献3】動脈硬化性疾患診療ガイドライン、２００７年版、日本動脈硬化学会

【非特許文献4】Ｍｎｉｚ，Ｎ：Ｍｅａｓｕｒｒｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｌａｓｍａ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｂｙ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｏｎ Ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍａｉｄｅ Ｇｅｌ．Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ，Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．１０．ｐ１８２６−１８３３，１９７７

【非特許文献5】白井厚治、斎藤康：高脂血症、ｍｅｄｉｃｉｎａ ｖｏｌ．２６，ｎｏ３，ｐ４１０−４１４，１９８９

【非特許文献6】井上郁夫：リポフォー、メタボリックシンドローム、片山茂裕編、中外医学社、ｐ１６１−１６３、２００８

【非特許文献7】日本医事新報、４５２７号、ｐ５１−５８、２０１１年１月２９日

【非特許文献8】医療と検査機器・試薬、Ｖｏｌ．３３，ｎｏ．３．ｐ３９９−４０２、２０１０

【非特許文献9】Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌ．３２，Ｎｏ．３，ｐ１３３−１３５，２０１２

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

非特許文献３にあげた動脈硬化学会の動脈硬化性疾患診療ガイドライン２００７年版を見ると高脂血症は脂質異常症と名称を変えたとあるが、高脂血症は脂質異常症の中に含まれると説明されており、治療薬の殆どが高コレステロール血症や高トリグリセライド血症等の高脂血症が効能効果としてうたわれている。診療する医師はＴＣ、ＴＧ、ＨＤＬコレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）、ＬＤＬコレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）などの測定値やリポ蛋白分画の結果等を見て総合的に診断や治療を行っている。脂質異常症や高脂血症（高脂血症等）を治療すると患者のＴＣ値やＴＧ値が下がり正常化する患者もいるが、中々治療効果をあげられない患者もいる。遺伝的体質や糖尿病・高血圧等基礎疾患による高脂血症等も多々報告されている。遺伝的または基礎疾患による高脂血症等を踏まえ診断には従来とおり高脂血症等の表現型を想定して診療に当たることが求められている。

【0010】

非特許文献３の動脈硬化性疾患診療ガイドライン２００７年版には、高脂血症等の表現型の記載はあるが、Ｉ型、ＩＩａ型、ＩＩｂ型、ＩＩＩ型、ＩＶ型、Ｖ型のそれぞれの説明はされていない。我々発明者たちは、従来の高脂血症等の表現型は、測定法の進化や治療薬の多様化等で実質利用価値が下がっていると認識し、現時点での検査法や進化した高脂血症治療薬を用いるための新しい高脂血症等の表現型が必要と考え、Ｄｉｓｃ−ＰＡＧＥ法の測定結果と生化学自動分析装置等で日常的に測定されているＴＣ、ＴＧ、ＨＤＬ−Ｃ、ＬＤＬ−Ｃやアポ蛋白質などの定量値（脂質の量の件作法）、さらに各種高脂血症や糖尿病治療薬等による診療結果を総合的に判断した結果、Ｄｉｓｃ−ＰＡＧＥ法の濃度波形とＴＣの測定値から、非常に簡単に誰でも即座に新しい形の高脂血症等の表現型を分類し判定出来る方法を発見し実用化した。

【課題を解決するための手段】

【0011】

課題を解決する手段を実践するため、特許文献１の画像からの濃度定量法をポリアクリルアミドゲルディスク電気泳動法（Ｄｉｓｃ−ＰＡＧＥ法）と共にヒトのリポ蛋白質の分析（特許文献２）に適用し得られた濃度波形を用いて高脂血症等の新しい表現型を分類または判定する方法を述べる。

【0012】

Ｄｉｓｃ−ＰＡＧＥ法は、リポ蛋白質を粒子の大きさで分離分析する測定法で脂質の質の検査法として知られ、Ｖ型高脂血症やＩＩＩ型高脂血症には独特の濃度波形が出現すると言われていたが（非特許文献５）、その判断基準等はなかった。非特許文献８に示された分離ゲルが３％のレデイメイドで脂質前染色法を使用するリポ蛋白質分析用測定キット「リポフォーＡＳ」を用いた。非特許文献８のキットを用いて分析した結果は、陰極側からＣＭ、ＶＬＤＬ、ＩＤＬ、ＬＤＬ、ｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬ、ＨＤＬに分析される。このうちＶＬＤＬ、ＩＤＬ、ＬＤＬ、ｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬ、ＨＤＬは濃度波形に図示され報告書として現在も医師の手元に届くシステムになっており日常診療に使用されている。非特許文献７のリポフォーＡＳと言う検査キットは、内因性リポ蛋白質を表すキットとして知られ、ＶＬＤＬ％値はＴＧ値と良い相関関係にあると報告されている。

【0013】

発明者たちは、高脂血症等の患者および糖尿患者らは既に高脂血症や糖尿病の治療を受けている患者が殆どであることを念頭に高脂血症の患者および糖尿病患者ら延べ約１万名について高脂血症等の表現型の判定を実施してきた。高脂血症等治療中にも係わらずＤｉｓｃ−ＰＡＧＥ法の濃度波形が脂質正常者の群と異なる高脂血症等の患者を選別していたところ、一定の傾向があることを発見しそれに基づき各高脂血症等を判定するアリゴリズムを発見した。
高脂血症等のアリゴリズムを定めるにあたって、リポ蛋白質の代謝は主に内因性リポ蛋白質と外因性リポ蛋白質に大別され、それらを区別しないと表現型の判定を狂わせる可能性がある。
内因性リポ蛋白質は主に肝臓で生成、分泌、代謝される物質で ＶＬＤＬ、ＩＤＬ、ＬＤＬ、ｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬ、ＨＤＬの一群である。この中で一番粒子径の大きいＶＬＤＬでもせいぜい粒子径は４０ｎｍ程度であるため、ＶＬＤＬが多いからと言って必ずしも血液を採血し血清分離した後の血清の乳白濁、言い換えれば乳ビ血清と呼ばれる状態にはならない。乳ビ血清とは外因性リポ蛋白質に現れるＣＭやＣＭレムナントが存在する場合に出現する。ＣＭやＣＭレムナントの粒子径は大きいもので１００ｎｍを越えるものもあるといわれ、可視光線の最小波長を３００ｎｍとするとＣＭやＣＭレムナントがあると可視光線の透過光を部分的に遮ることになり結果的に血清が白く濁る現象すなわち乳ビ血清が出現する。現実、我々発明者たちはボランティアに朝食抜きの血清に乳ビがないことを確認し、食後一定間隔で採血し性状を調べたところ、食事後２時間または３時間経つと乳ビ血清になる人がおり、この方々はＶＬＤＬの量は多少上昇するもののＩＤＬ、ＬＤＬ、ｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬ、ＨＤＬの一群には全く変化が無いことを確認している。以上により、乳ビ血清の存在は外因性リポ蛋白質代謝が深く関与しているものと判断した。リポ蛋白質を血清脂質レベルで論じた場合、ＴＧの測定値が高いと乳ビ血清になると教科書に書かかれているが、これは不完全である。ＴＧはＣＭやＣＭレムナントの中にも大量に存在するので、一般的な生化学の定量値だけ見るとＴＧが多い患者は乳ビ血清であると信じられていたことによる。実際は乳ビ血清の人の殆どの場合ＴＧは高いが、逆にＴＧが高いから乳ビ血清であるとは言えない。従って高脂血症等の表現型を論じる場合ＴＧ値をベースに話を進めると正確な判定ができないことが分かったので今回の高脂血症等のアリゴリズムの中にＴＧの値は含めないことにした。

【0014】

Ｄｉｓｃ−ＰＡＧＥ法において、Ｖ型高脂血症はＴＧとＣＭとＶＬＤＬが高くＩＤＬ、ＬＤＬやｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬが低値であると言われているが明確な基準はなかった。我々は多数の試験結果からＶ型高脂血症のアリゴリズムを設定した。
Ｖ型高脂血症のアリゴリズム
１） リポ蛋白質の濃度波形においてＶＬＤＬの分画％が３０％以上であること。
２） ＩＤＬ、ＬＤＬ、ｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬの濃度波形のピーク値または設定した範囲における最大位置の吸光度ＯＤ値がそれぞれ０．１以下であること。
３） ＨＤＬの分画％が１０％以上あること。
なおＶＬＤＬの分画％が３０％以上であることは乳ビ血清でない患者のＴＧ値が凡そ２００ｍｇ／ｄＬ、（非特許文献７）を超えている事を表し、またＩＤＬ、ＬＤＬ、ｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬの濃度波形が薄いことを吸光度ＯＤ値０．１以下で表現した。

【0015】

ＩＩＩ型高脂血症は非特許文献１で言われているＦｌｏａｔｉｎｇ β−ＬＰと同一挙動を示すＩＤＬの存在を中心にＩＩＩ型高脂血症のアリゴリズムを設定した。
ＩＩＩ型高脂面症のアリゴリズム
１） リポ蛋白質の濃度波形においてＶＬＤＬの分画％が３０％以上であること。
２） ＬＤＬと ｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬの濃度波形のピーク値または設定した範囲における最大位置の吸光度ＯＤ値がそれぞれ０．１以下であること。
３） ＩＤＬの分画％が１０％以上あること。
なおＩＩＩ型高脂血症は、Ｄｉｓｃ−ＰＡＧＥ法でＩＤＬの出現が特徴的であると言われている点について本願はＩＤＬの分画％が１０％以上あり、その他のＬＤＬとｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬの波形が薄い事を吸光度ＯＤ値が０．１以下で表すことにした。更にＩＩＩ型高脂血症は、アポＥジェノタイプまたはフェノタイプの試験でアポ蛋白質Ｅ２の存在を確認することが不可欠であると言われているが、特殊な別の検査であるため簡易判定法のアリゴリズムには入れなかった。

【0016】

ＩＩ型高脂血症はＴＣが高く比較的ＴＧが少ない状態を指し、ＴＧの存在比率からＩＩａ型とＩＩｂ型に区分される。ＴＧの量は乳ビ血清でも高くなるので前述したように本願ではＶＬＤＬの分画％とＴＣ値から、ＩＩａ型高脂血症のアリゴリズムを設定した。
ＴＣの定量値のカットオフについては非特許文献２および非特許文献３に記されている高コレステロール血症の判定基準である２２０ｍｇ／ｄＬ以上とした。
ＩＩａ型高脂血症のアリゴリズム
１） リポ蛋白質の濃度波形においてＶＬＤＬの分画％が１５％未満であること。
２） ＴＣの定量値が２２０ｍｇ／ｄＬ以上であること。
なおＩＩａ型高脂血症は、Ｄｉｓｃ−ＰＡＧＥ法において、不安定なリポ蛋白質ＩＤＬやｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬが少なく、リポ蛋白質の濃度波形において脂質の質の異常が見られない患者が一般的であり、ここではＴＣの定量値が２２０ｍｇ／ｄＬ以上でＶＬＤＬの分画％が 正常の上限値の１５％未満とした。

【0017】

ＩＩｂ型高脂血症はＩＩａ型高脂血症よりＶＬＤＬの分画％値が若干高い場合で、ＩＶ型高脂血症と重ならない部分を設定した。
ＩＩｂ型高脂血症のアリゴリズム
１） リポ蛋白質の濃度波形においてＶＬＤＬの分画％が１５〜２５％であること。
２） ＴＣの定量値が２２０ｍｇ／ｄＬ以上であること。
なおＩＩｂ型高脂血症とＩＩａ型高脂血症の差は、ＶＬＤＬの分画％値により区別した。

【0018】

ＩＶ型高脂血症はＴＣの定量値が低くＴＧの定量値が高い症例といわれているが、その境界は定かではなかった。最近はＴＣ値やＴＧ値を下げる治療薬がいくつも発売され、治療中にはＩＶ型からＩＩａまたはＩＩｂ型にまたその逆になる症例が多々見られ、高脂血症等の型判定に迷うことが多かった。
我々発明者はＤｉｓｃ−ＰＡＧＥ法において約１０，０００名の濃度波形を調査検討しそれらの特徴からＩＶ型高脂血症のアリゴリズムを導き出した。
ＩＶ型高脂血症のアリゴリズム
１） ＶまたはＩＩＩ型及びＩＩｂ型の高脂血症でないこと。
２） リポ蛋白質の濃度波形においてＶＬＤＬの分画％が２０％以上であること。
なおＩＶ型高脂血症の判定にＴＣ値の基準は設けず、Ｖ型、ＩＩＩ型、ＩＩａ型またはＩＩｂ型高脂血症に属さないものと決め、ＶＬＤＬの分画％が２０％以上と一部ＩＩｂ型高脂血症のＶＬＤＬの分画％が重なることとなったが、治療中にＩＶ型からＩＩｂ型へ相互変化する患者も多数いる関係で妥当と考えた。

【0019】

Ｄｉｓｃ−ＰＡＧＥ法において、リポ蛋白質の代謝過程では不安定なＬＤＬであるＩＤＬやｓｍａｌｌ，ｄｅｎｃｅ ＬＤＬが出現すると前述したが、ＩＶ型高脂血症では、表現型の判定に加えて不安定なリポ蛋白質の出現を合わせて判定することが可能であり、その判定のアリゴリズムの設定をＩＤＬおよびｓｍａｌｌ，ｄｅｎｃｅ ＬＤＬが存在するものとしないものを区別できるよう設定した。先ずＩＤＬの増加を伴うＩＶ型高脂血症は下記のように設定した。
ＩＤＬの増加を伴うＩＶ型高脂血症のアリゴリズム
１） ＶまたはＩＩＩ型及びＩＩｂ型の高脂血症等でないこと。
２） リポ蛋白質の濃度波形においてＶＬＤＬの分画％が２０％以上であること。
３） ＩＤＬの分画％が１０％以上あること。
なおＩＶ型高脂血症は不安定で動脈硬化の危険物質と言われたＩＤＬやｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬが良く出現する。我々発明者達はこの動脈硬化に係る危険物質の存在を明らかにするため敢えてＩＤＬの増加を伴うＩＶ型高脂血症のアリゴリズムを設定した。ＩＤＬは脂質正常者にも５％程度は存在すると言われており（非特許文献９）それらを区別しより確実にＩＤＬの存在を主張するためＩＤＬの分画％が１０％以上あるときに限りＩＤＬの増加を伴うＩＶ型高脂血症とした。

【0020】

同様にｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬの増加を伴うＩＶ型高脂血症は下記のように設定した。
ｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬの増加を伴うＩＶ型高脂血症のアリゴリズム
１） ＶまたはＩＩＩ型及びＩＩｂ型の高脂血症でないこと。
２） リポ蛋白質の濃度波形においてＶＬＤＬの分画％が２０％以上であること。
３） ｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬの分画％が６％以上あること。
なおここで言うｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬとは相対移動度ＲＭ０．４０以上を指す（非特許文献７）ので、非特許文献９に述べられている相対移動度ＲＭ０．３５の部分にもｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬの存在が疑われると書かれていることを踏まえｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬの分画％が６％以上あることとした。

【0021】

ＩＤＬおよびｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬ双方の増加を伴うＩＶ型高脂血症は下記のように設定した。
ＩＤＬ、ｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬの増加を伴うＩＶ型高脂血症のアリゴリズム
１） ＶまたはＩＩＩ型及びＩＩｂ型の高脂血症でないこと。
２） リポ蛋白質の濃度波形においてＶＬＤＬの分画％が２０％以上であること。
３） ＩＤＬの分画％が１０％以上でかつｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬの分画％が６％以上あること。

【0022】

Ｉ型高脂血症はリポ蛋白リパーゼが欠損または非常に少なく肝臓でＶＬＤＬやその他の内因性のリポ蛋白代謝が進まない状態を言い、血液中にＣＭやＣＭレムナントが溜まり時々膵炎を起こす疾患である。ＣＭやＣＭレムナントが存在すると検査技師は報告書に乳ビ＋とか乳ビ＋＋＋などとコメントを入れることが多く、ＣＭやＣＭレムナントの存在を気づくか、Ｄｉｓｃ−ＰＡＧＥ法の試料添加部分であるローディングゲルに濃い青色が残り、特許文献１の画像付の報告書を見てもＣＭやＣＭレムナントの存在を気づくので、あえてＩ型高脂血症のアリゴリズムに乳ビ血清の情報を入れなかった。
Ｉ型高脂血症のアリゴリズム
１） ＩＤＬ、ＬＤＬ、ｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬ、ＨＤＬのピーク値がそれぞれＯＤ０．０３以下であること。
なおＩ型高脂血症はＩＤＬ、ＬＤＬ、ｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬ、ＨＤＬの濃度波形が殆ど見られないことを指すので、我々発明者はその濃度をＯＤ０．０３以下とした。

【0023】

前項までは課題を解決する手段として、Ｄｉｓｃ−ＰＡＧＥ法による測定結果を例として、高脂血症等の表現型を分類しまたは判定する方法を述べてきたが、リポ蛋白質の分析には特許文献３のＨＰＬＣの分析や特許文献４のアガロースゲル電気泳動法または平板スラブ電気泳動法、密度勾配型グラジュエントゲル電気泳動法などがある。
これらはＤｉｓｃ−ＰＡＧＥ法と分析原理が違うため、濃度波形の形や分画％やリポ蛋白質の名称が変わる事がある。例えばアガロースゲル電気泳動法では陰極からｐｒｅ−β、β、αリポ蛋白質に分離分析され、ＣＭが有るとｐｒｅ−β、βの部分がブロード（Ｆｌｏａｔｉｎｇ β−ＬＰ）状になる。ｐｒｅ−βはＶＬＤＬ、βはＬＤＬ、αはＨＤＬとも呼ばれる。
前述したように高脂血症等の表現型の判定に外因性リポ蛋白質が混在すると判定を狂わせる恐れがあると指摘したが、アガロースゲル電気泳動法では外因性・内因性リポ蛋白質を区別せず分析しているので、少々分離が不鮮明ではあるがコストが安いため日常使用されている。
また特許文献４のＴＣ染色またはＴＧ染色した場合は普通ｐｒｅ−βコレステロール（またはトリグリセライド）、βコレステロール（またはトリグリセライド）、αコレスデロール（またはトリグリセライド）となるが、こじつければＶＬＤＬコレステロール（またはトリグリセライド）、ＬＤＬコレステロール（またはトリグリセライド）、ＨＤＬコレステロール（まちはトリグリセライド）と言うこともできる。本願発明は非常に簡単なアリゴリズムで高脂血症等の表現型を判定することができるため、ＨＰＬＣ法やアガロースゲル法に合わせて多少表現や数値等を変えれば、本願は色々な測定法による高脂血症等の表現型の判定に利用できることは言うまでもない。

【0024】

高脂血症等の表現型を決めるアリゴリズムが明確になれば、予めコンピュータなどにそのアリゴリズムをプログラミングしておき、検査結果報告書作成時に高脂血症等の表現型を自動的に印刷することができる。

【発明の効果】

【0025】

最近高脂血質症治療薬は多種多様販売され高脂血症等の治療に大量に使われている。結果的に高脂血症状態が解消されれば治療としては良い傾向であるが患者の状態は様々でありどの薬をどれだけ使うかは医師の専権事項である。この診断や治療に当たって医師は、ＴＣ値やＴＧ値、ＬＤＬ−Ｃ値やリポ蛋白質の電気泳動法の結果を参考にし、この患者の個人的な脂質代謝を推し量り診断し治療する。診断については遺伝的または糖尿病や高血圧など背景疾患を考慮するわけであるが、治療中の患者の現在の脂質状態はＩＶ型高脂血症であっても翌月は正常になるかも知れないし、ＩＩｂ型高脂血症になっているかも知れない。そのため治療薬の選定は患者の体質やその時々の高脂血症等の表現型を参考に適切に選択投与されなければならない。

【0026】

今までは高脂血症等の表現型に数値を示しての基準が無かったので医師は経験で凡その表現型を選択し治療薬を処方していた。しかし本願発明により高脂血症治療中の患者の高脂血症等の新しい表現型の決定は専門の医師でもどちらかを迷う程難しいと言われ、ＴＣ値とリポ蛋白質の電気泳動の検査報告書にある濃度波形により簡単に高脂血症等の表現型を判定できることは、専門医でなくとも診断のリスクを解消できる。本願発明を利用することで結果的に、治療薬の選定や患者の日常管理に多大な貢献できることは間違いない。

【図面の簡単な説明】

【0027】

【図1】はＶ型高脂血症患者Ａの濃度波形を含む報告書の一例である。

【0028】

【図2】はＩＤＬの増加を伴うＩＶ型高脂血症患者Ｂの濃度波形を含む報告書の一例である。

【0029】

【図3】はＩＩａ型高脂血症患者Ｃの濃度波形を含む報告書の一例である。

【実施例1】

【0030】

図１において（１）は患者Ａのリポ蛋白質の電気泳動の濃度波形、（２）の実線は脂質正常者の濃度波形で標準検体を示す。（３）の縦軸の目盛は、光学濃度の吸光度のＯＤが０．１の位置であることを示す部分。（４）はＶＬＤＬ、（５）はＩＤＬ、（６）はＬＤＬ、（７）はｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬ、（８）はＨＤＬの各濃度波形であり、（９）はそれぞれの濃度波形の面積比を示す。（１０）は患者ＡのＴＣ値である。波形１からＶＬＤＬの分画％は５１％でかつＩＤＬからｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬの濃度波形のピーク値または設定した範囲で最大位置の吸光度ＯＤ値が何れも０．１以下であり、ＨＤＬの分画％が１４％となっており、本実施例はＶ型高脂血症と判断した。Ｄｉｓｃ−ＰＡＧＥ法を見慣れた技術者は泳動像を見ただけでＶ型と予測できるほど典型的なパターンであるが、その判定方法を数値化することは測定や判定の個人誤差を無くす意味において価値がある。

【実施例2】

【0031】

図２において（１１）は患者Ｂのリポ蛋白質の電気泳動の濃度波形、（１４）はそれぞれの濃度波形の面積比を示す。図２の（１２）は患者ＢのＶＬＤＬでその分画％は（１４）に示されているように２２％ありかつ（１３）のＩＤＬの分画％が（１４）から１１％であり更に（１５）のＬＤＬのピークの高さはＯＤのライン０．１以上の所にありかつ（１６）に示すＴＣの値が１９５ｍｇ／ｄＬであることから本実施例はＩＤＬの増加を伴うＩＶ型高脂血症と判断した。

【実施例3】

【0032】

図３の（１７）は患者Ｃのリポ蛋白質の電気泳動の濃度波形で、（１７）はそれぞれの濃度波形の面積比を示す。（１８）は患者ＣのＴＣ値が３１７ｍｇ／ｄＬであることを示しておりかつ、（１９）のＶＬＤＬの分画％値が（１７）より９％であることが分かることからＩＩａ型高脂血症と判断した。

【実施例4】

【0033】

図には示さないがＩＩｂ型高脂血症は、ＩＩａ高脂血症に較べＶＬＤＬの分画％が多いことが特徴であり、今までのＴＧとＶＬＤＬの相関から我々はＶＬＤＬの分画％が１５−２５％であることを持ってＩＩｂ型と判断した。

【実施例5】

【0034】

ＩＩＩ型高脂血症もＶ型高脂血症と共にＤｉｓｃ−ＰＡＧＥ法の泳動像および濃度波形を見ると概ね判断できるのが特徴であるが、Ｖ型高脂血症との鑑別が重要なポイントとなる。Ｖ型高脂血症との相違点はＩＤＬが高くＬＤＬやｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬが殆どない点であることを考慮してＩＤＬの分画％が１０％以上あることで差別化した。この他にＩＩＩ型高脂血症の確定診断としては、アポＥジェノタイプまたはフェノタイプの試験でＥ２の存在を確認しておく必要があることは言うまでもないが、簡易判定基準には採用せず「ＩＩＩ型高脂血症の疑いがあります」の記載により注意喚起することにとどめた。

【符号の説明】

【0035】

（１）患者Ａのリポ蛋白質の電気泳動の濃度波形
（２）脂質正常者の濃度波形
（３）吸光度ＯＤが０．１の位置
（４）ＶＬＤＬ
（５）ＩＤＬ
（６）ＬＤＬ粒子マーカ
（７）ｓｍａｌｌ，ｄｅｎｓｅ ＬＤＬ
（８）ＨＤＬ
（９）濃度波形の面積比
（１０）患者ＡのＴＣ値
（１１）患者Ｂのリポ蛋白質の電気泳動の濃度波形
（１２）患者ＢのＶＬＤＬ
（１３）患者ＢのＶＩＤＬ
（１４）患者Ｂの濃度波形の面積比
（１５）患者ＢのＬＤＬ
（１６）患者ＢのＴＣ値
（１７）患者Ｃの濃度波形の面積比
（１８）患者ＣのＴＣ値
（１９）患者ＣのＶＬＤＬ

【図1】

【図2】

【図3】