特許 6030565 ミニエマルション、同ミニエマルションを形成するための方法および医薬品の製造における同ミニエマルションの使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6030565

(24)【登録日】2016年10月28日

(45)【発行日】2016年11月24日

(54)【発明の名称】ミニエマルション、同ミニエマルションを形成するための方法および医薬品の製造における同ミニエマルションの使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 9/107 20060101AFI20161114BHJP

   A61K 9/12 20060101ALI20161114BHJP

   A61K 47/34 20060101ALI20161114BHJP

   A61K 47/24 20060101ALI20161114BHJP

   A61K 47/44 20060101ALI20161114BHJP

   A61K 31/167 20060101ALI20161114BHJP

   A61P 25/04 20060101ALI20161114BHJP

【ＦＩ】

   A61K9/107

   A61K9/12

   A61K47/34

   A61K47/24

   A61K47/44

   A61K31/167

   A61P25/04

【請求項の数】23

【全頁数】39

(21)【出願番号】特願2013-542311(P2013-542311)

(86)(22)【出願日】2011年12月9日

(65)【公表番号】特表2013-544852(P2013-544852A)

(43)【公表日】2013年12月19日

(86)【国際出願番号】AU2011001589

(87)【国際公開番号】WO2012075534

(87)【国際公開日】20120614

【審査請求日】2014年12月9日

(31)【優先権主張番号】2010905441

(32)【優先日】2010年12月10日

(33)【優先権主張国】AU

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】513146147

【氏名又は名称】エヌエス テクノロジーズ プロプライエタリー リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＮＳ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ ＰＴＹ ＬＴＤ

(74)【代理人】

【識別番号】100105957

【弁理士】

【氏名又は名称】恩田 誠

(74)【代理人】

【識別番号】100068755

【弁理士】

【氏名又は名称】恩田 博宣

(74)【代理人】

【識別番号】100142907

【弁理士】

【氏名又は名称】本田 淳

(72)【発明者】

【氏名】チラグクマール、デサイ

【審査官】 山中 隆幸

(56)【参考文献】

【文献】 中国特許出願公開第１８７２０７２（ＣＮ，Ａ）

【文献】 特開昭６３−０７２３３５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００６−２７３８２１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００６−３４２１４０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００６−００８７００（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１０−５１３３６３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００７−０９１７１３（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ９／００− ９／７２

Ａ６１Ｋ４７／００−４７／４８

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ミニエマルションを形成するための方法であって、前記方法は：
ａ．水の中に分散された際に形成される親水性界面活性剤のミセルを含む水相であって、４０℃以下の温度にある水相を提供する工程；
ｂ．前記水相の中に親油性界面活性剤を分散させて第一相であって４０℃以下の温度にて親水性界面活性剤及び親油性界面活性剤のミセルを含む第一相を提供する工程；
ｃ．脂質を含む第二相を提供する工程；
ｄ．ミニエマルションを形成するために、４０℃以下の温度かつ低エネルギーの方法にて、連続混合の際に、滴下法にて、或いは連続フローまたは連続ストリームとして前記第二相を前記第一相に添加する工程；
を含み、
工程（ｄ）にて前記第一相と前記第二相とを組み合わせる前に、前記第一相であって、前記親水性界面活性剤と前記水と前記親油性界面活性剤とを含む第一相が形成され、
前記ミニエマルションが、１μｍ以下の平均径を有する乳化粒子であって、４℃よりも高い温度にて３ヶ月以上安定である乳化粒子を含み、かつ前記低エネルギーの方法は、２０，０００ｒｐｍまでの速度にて、かつ１，０００ｋＰａ未満の気圧にて混合する工程を含む、方法。

【請求項2】

工程ａ．〜ｄ．が、標準大気圧で実施される、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記ミニエマルションが、１０％（ｗ／ｗ）未満の界面活性剤を含む、請求項１または２に記載の方法。

【請求項4】

前記ミニエマルションが、１％（ｗ／ｗ）〜５％（ｗ／ｗ）の間の親油性界面活性剤を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項5】

前記ミニエマルションが、０．５％（ｗ／ｗ）〜５％（ｗ／ｗ）の間の親水性界面活性剤を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項6】

前記ミニエマルションが、０．５％（ｗ／ｗ）〜４０％（ｗ／ｗ）の間の脂質を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

前記乳化粒子が、１０ｎｍ〜９００ｎｍの間の平均径を有する、請求項１または６に記載の方法。

【請求項8】

前記乳化粒子が、６００ｎｍの平均径を有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項9】

前記乳化粒子が、４℃よりも高い温度で少なくとも１年間は安定である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

前記連続混合が、５，０００ｒｐｍ〜２０，０００ｒｐｍの間の速度で、ロータホモジナイザーにより実施される、請求項１乃至９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項11】

前記ミニエマルションが、生理活性薬剤をさらに含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項12】

前記ミニエマルションが、０．２％（ｗ／ｗ）〜１５％（ｗ／ｗ）の間の生理活性薬剤を含む、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

親水性界面活性剤と、親油性界面活性剤と、０．２％（ｗ／ｗ）〜１５％（ｗ／ｗ）の間の生理活性薬剤とを含むミニエマルションであって、前記ミニエマルションは、１μｍ以下の平均径を有する乳化粒子であって４℃よりも高い温度で少なくとも１年間は安定である乳化粒子を含む、ミニエマルション。

【請求項14】

前記ミニエマルションは２５℃にて安定である、請求項１３に記載のミニエマルション。

【請求項15】

生理活性薬剤のための送達系を形成させるための方法であって、前記方法は：
ａ．水の中に分散された際に形成される親水性界面活性剤のミセルを含む水相であって、４０℃以下の温度にある水相を提供する工程；
ｂ．前記水相の中に親油性界面活性剤を分散させて第一相であって４０℃以下の温度にて親水性界面活性剤及び親油性界面活性剤のミセルを含む第一相を提供する工程；
ｃ．脂質および生理活性薬剤を含む第二相を提供する工程；
ｄ．ミニエマルションを形成するために、４０℃以下の温度かつ低エネルギーの方法にて、連続混合の際に、滴下法にて、或いは連続フローまたは連続ストリームとして前記第二相を前記第一相に添加する工程；
を含み、
工程（ｄ）にて前記第一相と前記第二相とを組み合わせる前に、前記第一相であって、前記親水性界面活性剤と前記水と前記親油性界面活性剤とを含む第一相が形成され、前記送達系が、１μｍ以下の平均径を有する乳化粒子であって、４℃よりも高い温度にて３ヶ月以上安定である乳化粒子を含み、かつ前記低エネルギーの方法は、２０，０００ｒｐｍまでの速度にて、かつ１，０００ｋＰａ未満の気圧にて混合する工程を含む、方法。

【請求項16】

前記生理活性薬剤が、親油性医薬品である、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

前記親油性医薬品がリドカインである、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

前記送達系は、局所的、経腸的、または非経口的に投与されるものである、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項19】

前記局所的投与が、エアゾールまたはスプレーを介するものである、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

生理活性薬剤のための送達系を形成するための方法であって、前記方法は：
ａ．水の中に分散されたポリソルベート８０を含む水相であって、４０℃以下の温度にある水相を提供する工程；
ｂ．４０℃以下の温度にて前記水相の中にホスホチジルコリンを分散させて第一相を提供する工程；
ｃ．ダイズ油およびリドカインを含む第二相を提供する工程；
ｄ．０．５％（ｗ／ｗ）〜５％（ｗ／ｗ）の間のポリソルベート８０、１％（ｗ／ｗ）〜５％（ｗ／ｗ）の間のホスホチジルコリン、０．５％（ｗ／ｗ）〜２５％（ｗ／ｗ）の間のダイズ油、および０．２％（ｗ／ｗ）〜５％（ｗ／ｗ）の間のリドカインを含むミニエマルションを形成するために、４０℃以下の温度かつ低エネルギーの方法にて、連続混合の際に、滴下法にて、或いは連続フローまたは連続ストリームとして前記第二相を前記第一相に添加する工程；を含み、
工程（ｄ）にて前記第一相と前記第二相とを組み合わせる前に、前記第一相であって、前記ポリソルベート８０と前記水と前記ホスホチジルコリンとを含む第一相が形成され、前記送達系が、１μｍ以下の平均径を有する乳化粒子であって、４℃よりも高い温度にて３ヶ月以上安定である乳化粒子を含み、かつ前記低エネルギーの方法は、２０，０００ｒｐｍまでの速度にて、かつ１，０００ｋＰａ未満の気圧にて混合する工程を含む、方法。

【請求項21】

ポリソルベート８０と、ホスホチジルコリンと、ダイズ油と、リドカインとを含むミニエマルションであって、前記ミニエマルションは、１μｍ以下の平均径を有する乳化粒子であって４℃よりも高い温度で少なくとも１年間は安定である乳化粒子を含む、ミニエマルション。

【請求項22】

前記ミニエマルションは２５℃にて安定である、請求項２１に記載のミニエマルション。

【請求項23】

対象の必要に応じて、前記対象における疼痛を処置または緩和させるための医薬品の製造における請求項２１または２２に記載のミニエマルションの使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本明細書の開示は、ミニエマルションを形成させる方法および生理活性薬剤のための送達系としてのそのミニエマルションの使用に関する。特に、本明細書の開示は、親水性界面活性剤および親油性界面活性剤を含む第一相ならびに脂質を含む第二相から１μｍ未満の乳化粒子を有するミニエマルションを形成させる方法に関する。

【背景技術】

【0002】

エマルションは、２種の不混和性の液体からなる分散系であって、そこでは、一方の液体の小さな液滴が、第二の液体の中に分散されている。１μｍ未満の範囲にある液滴サイズを有するエマルションは、文献においては、ミニエマルション、ナノエマルション、マイクロエマルションなどと呼ばれていることが多い。これらの「ミニエマルション」は、分散法または、たとえば、高剪断力撹拌、高圧ホモジナイザー、および超音波発生器などの高エネルギー乳化方法によって形成される。

【0003】

ミニエマルションは、医薬品および化粧品配合物として、大きな関心を持たれている。医薬品産業においては、薬物の効率的で効き目のある送達が主要問題である。多くの有望な薬物が、送達させることが困難なために、最終製品に到達できないということは、よく知られている。薬物送達に関わる問題は、その薬物の物理的または化学的性質、たとえば使用認可などの行政的な問題、医薬品添加物、および工学的問題などに関連する傾向がある。薬物送達に関わる主たる挑戦課題のいくつかは、溶解度の低さ、インビトロでの低安定性（保存期間）およびインビボでの低安定性（半減期）、バイオアベイラビリティの低さ、（全身送達が原因の）容認できない副作用、および規制当局の問題などである。

【0004】

薬物送達の系または配合では、以下の特性を有しているべきである：製造が容易であること、可能な限り多くの薬物に適用可能であること、物理的に安定であること、医薬品添加物が規制当局によって許容され認可を受けられること、ならびに、規制当局によって認可される大規模な製造が可能なこと。ミニエマルションは、熱力学的安定性（長い保存期間）、形成の容易さ、高表面積（高い溶解能）および極めて小さい液滴サイズなどを含めて、薬物送達において理想的となる性質を有している。

【0005】

しかしながら、利用可能なミニエマルション配合物に伴う問題も存在している。非有効化合物のレベルが高いことが、化粧品および薬物送達システムにおいて障害となっており、多くのミニエマルションは、高い界面活性剤濃度を有していて、ほとんどの場合においては、安定性を維持させるために、高い含量のアルコール、溶媒、および共溶媒を有している。さらに、多くのミニエマルションは、高圧および高温のような高エネルギープロセスを使用して作製される。たとえば、安定性を得るために高温が使用されるが、そのことによって商業生産のコストが高くなる。さらに、小バッチを作製するためにしか有用でない超音波乳化法のようなプロセスを使用して作製したミニエマルションは、商業的なスケールアップの際にそのエマルションを再現することが困難であるということを意味している。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

したがって、製品を配合するために実施可能なミニエマルションを作製するために現在利用することが可能な方法には、制約がある。そのため、生理活性薬剤のための送達系として使用するミニエマルションの、改良された方法および配合物が必要とされている。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本明細書において開示された方法は、低エネルギーの方法によって形成されるミニエマルション配合物に関し、それは、大規模な商業生産に適し、低い界面活性剤含量を有し、冷蔵なしで最長３年間は安定であり、そして各種の経路によって生理活性薬剤を広範囲に送達するために使用できる。したがって、本明細書において開示された方法は、いくつかの態様においては、生理活性薬剤のための送達系として使用するのに適したミニエマルションを提供する。

【0008】

第一の態様においては、以下の工程を含む、ミニエマルションを形成させるための方法が開示される：
ａ． 水の中に分散された親水性界面活性剤を含む水相を提供する工程；
ｂ． 前記水相の中に親油性界面活性剤を分散させて第一相を提供する工程；
ｃ． 脂質を含む第二相を提供する工程；
ｄ． ミニエマルションを形成させるのに適した方法でその第二相をその第一相に添加する工程；
ここで、前記ミニエマルションが、１μｍ未満の平均径を有する乳化粒子を含むようにする。

【0009】

当業者に公知のミニエマルションを形成させるために適用される各種の方法、たとえば、撹拌またはその他の適切な混合手段が、そのミニエマルションを形成させるために使用可能であろうということは、理解されるであろう。ミニエマルションを形成させるために適用される方法が、低エネルギーの方法であることが好ましい。したがって、一つの実施態様においては、ミニエマルションを形成させるために適用されるその方法には、連続混合の際の連続フロー（ｆｌｏｗ）または連続ストリーム（ｓｔｒｅａｍ）として、第二相を第一相に添加することが含まれる。また別の実施態様においては、ミニエマルションを形成させるために適用されるその方法には、連続混合の際に、調節した流量で、第二相を第一相に添加することが含まれる。さらなる実施態様においては、ミニエマルションを形成させるために適用される方法には、連続混合の際に、滴下法で第二相を第一相に添加することが含まれる。一般的に、その連続混合は、約５，０００ｒｐｍ〜約２０，０００ｒｐｍの間の速度で、スターラにより実施される。

【0010】

したがって、本明細書の開示によるミニエマルションは、高い温度や圧力が無くても形成させることができる。一つの実施態様においては、工程ａ．〜ｄ．を、約８０℃未満、好ましくは約６０℃未満の温度で実施するが、より好ましくは工程ａ．〜ｄ．を、４０℃以下の温度で実施する。また別の実施態様においては、工程ａ．〜ｄ．を、約１，０００ｋＰａ未満、好ましくは約５００ｋＰａ未満の気圧で実施するが、より好ましくは工程ａ．〜ｄ．を、標準大気圧（約１０１ｋＰａ）で実施する。さらにまた別の実施態様においては、その方法は冷却工程を含まない。特定の実施態様においては、工程ｄ．を、４０℃以下の温度、標準大気圧（約１０１ｋＰａ）で実施する。

【0011】

したがって、一つの実施態様においては、以下の工程を含む、ミニエマルションを形成させるための方法が開示される：
ａ． 水の中に分散された親水性界面活性剤を含む水相を提供する工程；
ｂ． 前記水相の中に親油性界面活性剤を分散させて第一相を提供する工程；
ｃ． 脂質を含む第二相を提供する工程；
ｄ． ミニエマルションを形成させるのに適した方法でその第二相をその第一相に添加する工程；
ここで、工程ｄ．は、４０℃以下の温度および標準大気圧（約１０１ｋＰａ）で実施するが、ここで前記ミニエマルションには１μｍ未満の平均径を有する乳化粒子が含まれる。

【0012】

第一相を形成させるのに各種の親水性または親油性界面活性剤を使用してもよいということは、認識されるであろう。当業者に公知の各種の親水性界面活性剤が使用できるであろうが、一つの実施態様においてはその親水性界面活性剤が以下のものからなる群より選択される：ポリオキシエチレンアルキルエーテル；ソルビタン脂肪酸エステル；ポリオキシエチレンアルキルフェノール；ポリオキシエチレングリコールエステル；ポリオキシプロピレングリコールアルキルエーテル；ポリグリセロール脂肪酸エステル；ポリオキシエチレングリセリド；ポリオキシエチレンステロール；ポリオキシエチレン植物油；ポリオキシエチレン硬化植物油；プロピレングリコールアルギネート；脂肪酸の塩；ラウリルマクロゴールグリセリド；およびそれらの混合物。

【0013】

同様にして、当業者に公知の各種の親油性界面活性剤を使用することも可能である。しかしながら、一つの実施態様においては、その親油性界面活性剤が次のものからなる群より選択される：脂肪酸；アセチル化グリセロール脂肪酸エステル；低級アルコール脂肪酸エステル；脂肪酸のエステル交換反応生成物；硬化植物油；トリグリセリドおよびポリアルキレンポリオール；ステロールおよびステロール誘導体；ペンタエリスリトール脂肪酸エステルおよびポリアルキレングリコールエーテル；モノグリセリドおよびアセチル化；レシチンおよび水素化レシチン；リゾレシチンおよび水素化リゾレシチン；リゾリン脂質およびそれらの誘導体；リン脂質およびそれらの誘導体；およびそれらの混合物。一つの態様においては、その親水性界面活性剤が、ノニオン性界面活性剤たとえばポリソルベート８０であり、その親油性界面活性剤がホスホチジルコリンである。

【0014】

いくつかの実施態様においては、その方法が、低い界面活性剤含量を有するミニエマルションに関する。一つの実施態様においては、そのミニエマルションが、１０％（ｗ／ｗ）未満の界面活性剤を含んでいる。また別の実施態様においては、そのミニエマルションが、約１％（ｗ／ｗ）〜約５％（ｗ／ｗ）の間の親油性界面活性剤と、約０．５％（ｗ／ｗ）〜約５％（ｗ／ｗ）の間の親水性界面活性剤とを含んでいる。一つの実施態様においては、その方法がさらに、第一または第二相のいずれかに溶媒を添加することを含んでいてもよい。

【0015】

いくつかの実施態様においては、その方法が、高い油含量を有するミニエマルションに関する。一つの実施態様においては、そのミニエマルションが、少なくとも約０．５％（ｗ／ｗ）、またはたとえば約０．５％（ｗ／ｗ）〜約４０％（ｗ／ｗ）、約０．５％（ｗ／ｗ）〜約１５％（ｗ／ｗ）、もしくは約１５％（ｗ／ｗ）〜約２５％（ｗ／ｗ）の油、または約２５％（ｗ／ｗ）〜約４０％（ｗ／ｗ）の油を含んでいる。

【0016】

脂質は、当業者に公知のいかなる脂質であってもよく、たとえば、植物由来の脂質、動物由来の脂質、および鉱油が挙げられる。その脂質が、６個以上の炭素の脂肪族尾部を有する中鎖もしくは長鎖の脂肪酸を含む植物油であれば好ましい。本発明の方法において使用するのに好適な植物油の例としては、以下のものが挙げられる：ヤシ油、ヒマシ油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、綿実油、オリーブ油、パーム油、ナタネ油、カノーラ油を含む、サフラワー油、ダイズ油、流動パラフィン、およびヒマワリ油ならびにそれらの誘導体。一つの実施態様においては、その油がダイズ油である。また別の実施態様においては、その脂質が、動物由来の脂質たとえばホスファチジルコリンである。

【0017】

それらの乳化粒子は、一般的には１μｍ以下のサイズを有する、多種多様な形状および構造を有することができる。一つの態様においては、乳化粒子が、１μｍ未満の平均粒径を有している。一つの実施態様においては、その平均粒径が、約２５０ｎｍ〜１μｍの間である。また別の実施態様においては、平均粒径の範囲が、約３００ｎｍ〜約７００ｎｍである。さらにまた別の実施態様においては、その平均粒径が約６００ｎｍである。さらなる実施態様においては、そのミニエマルションの中の粒子の少なくとも７０％が、１μｍ以下の直径を有している。もっとさらなる実施態様においては、そのミニエマルションの中の粒子の少なくとも７５％が、１μｍ未満の直径を有している。

【0018】

したがって、一つの態様においては、以下の工程を含む、ミニエマルションを形成させるための方法が開示される：
ａ． 水の中に分散された親水性界面活性剤を含む水相を提供する工程；
ｂ． 前記水相の中に親油性界面活性剤を分散させて第一相を提供する工程；
ｃ． 脂質を含む第二相を提供する工程；
ｄ． ミニエマルションを形成させるのに適した方法でその第二相をその第一相に添加する工程；
ここで、その平均粒径の範囲は約２５０ｎｍ〜約７００ｎｍである。

【0019】

また別の態様においては、以下の工程を含む、ミニエマルションを形成させるための方法が開示される：
ａ． 水の中に分散された親水性界面活性剤を含む水相を提供する工程；
ｂ． 前記水相の中に親油性界面活性剤を分散させて第一相を提供する工程；
ｃ． 脂質を含む第二相を提供する工程；
ｄ． ミニエマルションを形成させるのに適した方法でその第二相をその第一相に添加する工程；
ここでそのミニエマルションの中の粒子の少なくとも７０％が、１μｍ以下の直径を有している。

【0020】

本明細書において開示された方法は、冷蔵なしで最高３年間までは安定であるミニエマルションを提供する。したがって、そのミニエマルションは、４℃よりも高い温度で貯蔵しても、合着することなく、粒径を維持している。一つの実施態様においては、そのミニエマルションが、４℃よりも高い温度で、少なくとも１ヶ月、好ましくは少なくとも６ヶ月は安定であり、より好ましくはそのミニエマルションが、４℃よりも高い温度で少なくとも１年は安定である。また別の実施態様においては、そのミニエマルションが、４℃よりも高い温度で少なくとも２年は安定である。また別の実施態様においては、そのミニエマルションが、４℃よりも高い温度で少なくとも２年を超えて安定である。

【0021】

第二の態様においては、以下の工程から本質的になる、ミニエマルションを形成させるための方法が開示される：
ａ． 水の中に分散された親水性界面活性剤を含む水相を提供する工程；
ｂ． 前記水相の中に親油性界面活性剤を分散させて第一相を提供する工程；
ｃ． 脂質を含む第二相を提供する工程；
ｄ． ミニエマルションを形成させるのに適した方法でその第二相をその第一相に添加する工程；
ここで、前記ミニエマルションが、１μｍ未満の平均径を有する乳化粒子を含むようにする。

【0022】

一つの実施態様においては、その方法の工程は、特に、多層化されるかおよび／または球状の乳化粒子が形成されるように実施される。この実施態様に従うと、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）が、工程（ｄ）よりも前に実施される。したがって、親水性界面活性剤、水および親油性界面活性剤を含む第一相が形成され、そして脂質を含む第二相が形成され、その後で、工程（ｄ）においてその第一相と第二相とが組み合わされる。

【0023】

したがって、一つの態様においては、以下の工程を含む、ミニエマルションを形成させるための方法が開示される：
ａ． 水の中に分散された親水性界面活性剤を含む水相を提供する工程；
ｂ． 前記水相の中に親油性界面活性剤を分散させて第一相を提供する工程；
ｃ． 脂質を含む第二相を提供する工程；
ｄ． ミニエマルションを形成させるのに適した方法でその第二相をその第一相に添加する工程；
ここで、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）が工程（ｄ）よりも前に実施され、そして、前記ミニエマルションが、１μｍ未満の平均径を有する乳化粒子を含む。

【0024】

また別の実施態様においては、以下の工程を含む、ミニエマルションを形成させるための方法が開示される：
ａ． 水の中に分散された親水性界面活性剤を含む水相を提供する工程；
ｂ． 前記水相の中に親油性界面活性剤を分散させて第一相を提供する工程；
ｃ． 脂質を含む第二相を提供する工程；
ｄ． ミニエマルションを形成させるのに適した方法でその第二相をその第一相に添加する工程；
ここで、前記ミニエマルションが、１μｍ未満の平均径を有する乳化粒子を含み、そしてここで前記乳化粒子が、多層化されるかおよび／または球状である。

【0025】

いくつかの態様においては、本明細書に記載されたミニエマルションを、１種または複数の生理活性薬剤のための送達系として使用してもよい。当業者のよく理解するところではあるが、第一相、第二相または両方の相を介して生理活性薬剤をミニエマルションの中に組み込むことができるが、一つの実施態様においては、第二相はさらに生理活性薬剤を含む。また別の実施態様においては、そのミニエマルションに、約０．２％（ｗ／ｗ）〜１５％（ｗ／ｗ）の間で生理活性薬剤を含む。

【0026】

したがって、第三の態様においては、以下の工程を含む、生理活性薬剤のための送達系を形成させるための方法が開示される：
ａ． 水の中に分散された親水性界面活性剤を含む水相を提供する工程；
ｂ． 前記水相の中に親油性界面活性剤を分散させて第一相を提供する工程；
ｃ． 脂質および生理活性薬剤を含む第二相を提供する工程；
ｄ． ミニエマルションを形成させるのに適した方法でその第二相をその第一相に添加する工程；
ここで、前記送達系が、１μｍ未満の平均径を有する乳化粒子を含むようにする。

【0027】

一つの実施態様においては、以下の工程を含む、生理活性薬剤のための送達系を形成させるための方法が開示される：
ａ． 水の中に分散された親水性界面活性剤、および生理活性薬剤を含む水相を提供する工程；
ｂ． 前記水相の中に親油性界面活性剤を分散させて第一相を提供する工程；
ｃ． 脂質を含む第二相を提供する工程；
ｄ． ミニエマルションを形成させるのに適した方法でその第二相をその第一相に添加する工程；
ここで、前記送達系が、１μｍ未満の平均径を有する乳化粒子を含むようにする。

【0028】

本明細書に記述された送達系を、各種の生理活性薬剤を送達させるために使用できることは、理解されるであろう。一つの実施態様においては、その生理活性薬剤が、親油性の医薬品である。また別の実施態様においては、その生理活性薬剤が、リドカインまたはリグノカインである。

【0029】

１μｍ以下の粒子を有していることの結果として、その送達系は、各種の経路、たとえば、局所的、経腸的、経鼻的または非経口的に生理活性薬剤を投与するために使用することができる。一つの実施態様においては、局所的投与は、エアゾールまたはスプレーを介するものである。

【0030】

第四の態様においては、以下の工程を含む、生理活性薬剤のための送達系を形成させるための方法が開示される：
ａ． 水の中に分散されたポリソルベート８０を含む水相を提供する工程；
ｂ． 前記水相の中にホスホチジルコリンを分散させて第一相を提供する工程；
ｃ． ダイズ油およびリドカインを含む第二相を提供する工程；
ｄ． 約０．５％（ｗ／ｗ）〜約５％（ｗ／ｗ）の間のポリソルベート８０、約１％（ｗ／ｗ）〜約５％（ｗ／ｗ）の間のホスホチジルコリン、約０．５％（ｗ／ｗ）〜約２５％（ｗ／ｗ）の間のダイズ油、および約０．２％（ｗ／ｗ）〜約５％（ｗ／ｗ）の間のリドカインを含むミニエマルションを形成させるのに適した方法で、第二相を第一相に添加する工程；
ここで、前記送達系が、１μｍ未満の平均径を有する乳化粒子を含むようにする。

【0031】

第五の態様においては、以下の工程からなる、生理活性薬剤のための送達系を形成させるための方法が開示される：
ａ． 水の中に分散されたポリソルベート８０を含む水相を提供する工程；
ｂ． 前記水相の中にホスホチジルコリンを分散させて第一相を提供する工程；
ｃ． ダイズ油およびリドカインを含む第二相を提供する工程；
ｄ． 約０．５％（ｗ／ｗ）〜約５％（ｗ／ｗ）の間のポリソルベート８０、約１％（ｗ／ｗ）〜約５％（ｗ／ｗ）の間のホスホチジルコリン、約０．５％（ｗ／ｗ）〜約２５％（ｗ／ｗ）の間のダイズ油、および約０．２％（ｗ／ｗ）〜約５％（ｗ／ｗ）の間のリドカインを含むミニエマルションを形成させるのに適した方法で、第二相を第一相に添加する工程；
ここで、前記送達系が、１μｍ未満の平均径を有する乳化粒子を含むようにする。

【0032】

一つの態様においては、上述の方法によって製造された乳化粒子を含む組成物が開示されている、ということは理解されるであろう。
さらなる態様においては、上述の送達系を、対象の必要に応じて、その対象における治療または疼痛緩和において有用な組成物に処方する。

【図面の簡単な説明】

【0033】

【図1】蛍光顕微鏡によるミニエマルションの写真である（４００倍）。

【図2】蛍光顕微鏡によるミニエマルションの写真である（４００倍）。

【図3】位相差光学顕微鏡によるミニエマルションの写真である（１０００倍）。

【図4】室温および４℃で３２２日間貯蔵されたミニエマルション中のリグノカインの安定性。

【図5】１５０ｇおよび１ｋｇのバッチサイズで調製されたミニエマルションの粒径分布。

【図6】１５０ｇのバッチサイズで調製されたミニエマルションの粒径分布のグラフ。

【図7】１ｋｇのバッチサイズで調製されたミニエマルションの粒径分布のグラフ。

【図8A】１ｋｇのバッチサイズで調製し、室温で３０ヶ月間貯蔵したミニエマルションの粒径分布。

【図8B】１ｋｇのバッチサイズで調製し、室温で３０ヶ月間貯蔵したミニエマルションの粒径分布。

【図9A】４０％（ｗ／ｗ）の脂質を含むように調製したミニエマルションの粒径分布。

【図9B】４０％（ｗ／ｗ）の脂質を含むように調製したミニエマルションの粒径分布。

【図10】ＮＳスプレーおよびキシロカインスプレーを受けた患者からの最終疼痛スコアの分布。

【図11】ＮＳスプレーおよびキシロカインスプレーを受けた患者からの平均患者満足度スコア（９５％ＣＩ；１＝極めて満足、５＝極めて不満足）。

【発明を実施するための形態】

【0034】

本明細書の開示は特定の例に挙げた方法に限定されるものではなく、変更してもよいことは言うまでもない、ということを理解されたい。本明細書において使用される用語は、特定の実施態様のみを説明するためのものであって、限定的にする意図はないということもまた理解されたく、限定は、添付の請求項によってのみ限定されるものとする。

【0035】

これより前または後とは関係なく、本明細書において引用されたすべての公刊物、特許および特許出願は、参照することにより、そのすべてを本明細書に取り入れたものとする。しかしながら、本明細書において言及される公刊物は、その公刊物の中に報告されているプロトコルおよび反応剤を記述し開示する目的で引用されたものであって、その開示された方法との関連で使用されるものである。本明細書における開示はいずれも、本明細書において開示されたものが、先発明があるとして、そのような開示にもっと古い日付を付与する権利を与えるものではない、ということを容認するとは受け取ってはならない。

【0036】

本明細書中および添付の特許請求項の中において、いくつかの用語が、以下の意味合いを有すると定義されるべきであることについて言及する。
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、その「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語の後に何が続こうとも、それらを含むが、それらに限定される訳ではないということを意味している。したがって、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語を使用するということは、そこに列挙された要素が必要であるかまたは必須ではあるが、他の要素も任意要素であって、存在していてもよいしあるいは存在していなくてもよいということを示している。「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という用語は、その「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という文言に何が続いていても、それらを含み、且つそれらに限定されるということを意味している。したがって、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という文言は、そこに列挙された要素が必要であるかまたは必須ではあり、その他の要素は存在しなくてもよいということを示している。「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という用語は、この文言の後に列挙された各種の要素を含んでおり、その列挙されている要素のための開示において特定されている活動または作用に対して干渉したり寄与したりすることがないその他の要素に限定されることを意味している。したがって、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という文言は、そこに列挙された要素が必要であるかまたは必須ではあるが、その他の要素は任意要素であり、そこに列挙された要素の活動または作用にそれらが影響を及ぼすか否かに依存して、存在していても、存在していなくてもよい。

【0037】

本明細書および添付の請求項において使用する場合、単数の形の「ａ］、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、文脈において明らかにそうではないと規定されている場合以外は、複数の指示対象も含まれるということに注意しなければならない。したがってたとえば、「（一つの）生理活性薬剤（ａ ｂｉｏａｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔ）」と言及した場合には、それには、２種または複数のそのような薬剤の混合物も含まれる。

【0038】

本明細書において範囲は、「約（ａｂｏｕｔ）」一つの特定値から、および／または「約（ａｂｏｕｔ）」他の特定値までとして表現されてもよい。そのように範囲が表現された場合、また別の態様にも、一つの特定値から、および／または他の特定値までが含まれる。同様にして、数値が先行詞の「約（ａｂｏｕｔ）」を使用することによって、近似値として表現された場合には、その特定の数値が、また別の態様を形成するということを、理解されたい。範囲のそれぞれの端点は、他の端点との相関にあるか、または他の端点とは独立しているかのいずれであっても、重要であるということをさらに理解されたい。

【0039】

「任意の（ｏｐｔｉｏｎａｌ）」または「場合によっては（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）」という用語は、その次に記載されている事象または状況が起きるかもしれないし、起きないかもしれないということ、そして、その記述には、その事象または状況が起きた場合と、それが起きなかった場合とが含まれるということを意味している。

【0040】

成分の重量パーセントは、そうではないと具体的に記載されている場合を除き、その成分が含まれている配合物または組成物の全重量を基準にしている。
「生理活性薬剤（ｂｉｏａｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔ）」とは、生物活性を有する薬剤を指している。生物学的薬剤は、疾病、障害、感染などを、処置し、診断し、治療し、緩和させ、防止し（すなわち、予防的に）、寛解させ、調節するか、またはその他好ましい影響を与えるために使用することができる。生理活性薬剤には、対象物または、所定の生理的な環境に置かれると生理活性となるか、または生理活性が高くなるプロドラッグの構造または機能に影響する物質もまた含まれる。

【0041】

「低エネルギーの方法（ｌｏｗ−ｅｎｅｒｇｙ ｍａｎｎｅｒ）」とは、高温への加熱、冷却、または高圧の使用などを含まないプロセスを指している。本発明の方法において有用なミニエマルションを形成させるために適用される低エネルギーの方法の例としては、室温すなわち約２５℃で実施されるもの、顕著な加熱工程すなわち約４０℃よりも高い加熱する工程および／または冷却工程を必要としないもの、ならびにほぼ海面での標準大気圧すなわち約１０１．３２５ｋＰａで実施されるもの、が挙げられる。

【0042】

「冷蔵（ｒｅｆｒｉｇｅｒａｔｉｏｎ）」という用語は、室温より低い、すなわち約２５℃未満の温度で、マイクロエマルションを貯蔵することを指している。より詳しくは、冷蔵は、マイクロエマルションを１０℃以下、特に４℃以下で貯蔵することを指している。したがって、「冷蔵なしで（ｗｉｔｈｏｕｔ ｒｅｆｒｉｇｅｒａｔｉｏｎ）」という用語は、少なくとも４℃よりは高い温度を指している。

【0043】

最も広い態様においては、ミニエマルションを形成させるための方法が開示される。その方法には、水と１種または複数の親水性界面活性剤とを組み合わせることによって水相を調製することが含まれる。一つの実施態様においては、その界面活性剤成分に親水性界面活性剤が含まれる。また別の実施態様においては、その界面活性剤成分が単一の親水性界面活性剤からなり、また別の実施態様においては、その親水性界面活性剤成分が、２種以上の親水性界面活性剤を含んでいる。親水性界面活性剤は、以下のものからなる群から選択すればよいが、これらに限定される訳ではない：ポリオキシエチレンアルキルエーテル；ソルビタン脂肪酸エステル（ポリソルベートとも呼ばれる）；ポリオキシエチレンアルキルフェノール；ポリオキシエチレングリコールエステル；ポリオキシプロピレングリコールアルキルエーテル；ポリグリセロール脂肪酸エステル；ポリオキシエチレングリセリド；ポリオキシエチレンステロール；ポリオキシエチレン植物油；ポリオキシエチレン硬化植物油；プロピレングリコールアルギネート；脂肪酸の塩；ライイリルマクロゴールグリセリド（ｌａｉｉｒｙｌ ｍａｃｒｏｇｏｌｇｌｙｃｅｒｉｄｅｓ）、またはそれらの混合物。その親水性界面活性剤がノニオン性界面活性剤であるのが好ましい。本発明の方法において使用するのに適した適切な親水性ノニオン性界面活性剤の非限定的な例としては、ソルビタン脂肪酸エステル（ポリソルベート）、ポリオキシエチレングリコール、ポリオキシエチレングリコールアルキルエーテル、およびポリオキシプロピレングリコールアルキルエーテルが挙げられる。一つの実施態様においては、使用されるノニオン性界面活性剤が、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０（登録商標））である。

【0044】

親水性界面活性剤と水とを組み合わせてから、その溶液を加工して、親水性界面活性剤を分散させる。親水性界面活性剤は、当業界で公知のいかなる混合手段を用いて分散させてもよい。好適な混合手段の例については、以下において記述する。一つの実施態様においては、撹拌によって親水性界面活性剤を分散させる。また別の実施態様においては、約５，０００ｒｐｍ〜約１０，０００ｒｐｍの間の速度で撹拌することによって親水性界面活性剤を分散させる。この溶液を分散させると、水相が形成される。

【0045】

「第一相」は、水相の中に親油性界面活性剤を分散させることによって形成される。親油性界面活性剤は、以下のものからなる群より選択すればよいが、それらに限定される訳ではない：脂肪酸；ソルビタン脂肪酸エステル；アセチル化グリセロール脂肪酸エステル；低級アルコール脂肪酸エステル；脂肪酸のエステル交換反応生成物、グリセリド、植物油、硬化植物油、トリグリセリドおよびポリアルキレンポリオール；ステロールおよびステロール誘導体；ペンタエリスリトール脂肪酸エステルおよびポリアルキレングリコールエーテル；モノグリセリドおよびアセチル化、たとえば、モノ−およびジ−アセチル化モノグリセリド；レシチンおよび水素化レシチン；リゾレシチンおよび水素化リゾレシチン；リゾリン脂質およびそれらの誘導体；リン脂質およびそれらの誘導体；またはそれらの混合物。その親油性界面活性剤がリン脂質であれば好ましい。リン脂質は、両親媒性の分子であって、界面活性剤として機能することができる。使用するのに好適なリン脂質としては、ホスファチジン酸（ホスファチデート）、ホスファチジルエタノールアミン（ケファリン）、ホスファチジルコリン（レシチン）、ホスファチジルセリン、およびホスファイノシチドが挙げられる。各種のリン脂質の混合物を使用してもよい。一つの実施態様においては、そのリン脂質がレシチンである。また別の実施態様においては、そのリン脂質が、ホスファチジルコリン増強レシチン（エピクロン（Ｅｐｉｋｕｒｏｎ）（商標））である。リン脂質は、以下において記載するように、ミキサーによって分散させてもよい。一つの実施態様においては、そのリン脂質を、スターラを使用して、約１０，０００ｒｐｍ〜約２０，０００ｒｐｍの間の速度で分散させる。

【0046】

任意の特定の理論または仮説に捕らわれることを望むものではないが、本願発明者らは、親油性界面活性剤を水相に添加することによって、親水性界面活性剤が存在しているために、堅牢な多層化／球状のミセル構造またはリポソーム構造が作り出されるのだろうと考えている。この多層ミセル構造が、界面の表面積を増大させ、それによって、乳化プロセスの際に界面活性剤に近づくのが容易となると考えられる。

【0047】

したがって、いくつかの態様においては、同方法の工程は、多層化／球状のミセル構造の形成を促進させるために、特定の順序で実施する。これらの態様に従えば、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を、工程（ｄ）より前に実施する。したがって、親水性界面活性剤、水および親油性界面活性剤を含む第一相が形成され、そして脂質を含む第二相が形成され、その後で、工程（ｄ）においてその第一相と第二相とが組み合わされる。さらに、一つの実施態様においては、そのミニエマルションに、多層化／球状の乳化粒子が含まれる。

【0048】

従来技術のミニエマルションには、安定性を維持する目的で、一般的には高い界面活性剤濃度（１０％より大）が含まれている。たとえば、国際公開第２０１０／０９３５２３号パンフレットには、約１０％〜約２０重量％の共界面活性剤および約１５％〜約４０重量％の界面活性剤を含むマイクロエマルションが記載されている。同様にして、国際公開第２０１０／０９２５９６号パンフレットには、１５〜９６％（ｖ／ｖ）の範囲の界面活性剤／共界面活性剤濃度を有するマイクロエマルションが記載されている。第一相中および得られる本明細書に記載されたミニエマルションの中の界面活性剤の量は、言うまでもないことではあるが、使用した界面活性剤のタイプおよびその他の因子、たとえば意図している用途に応じて変化するが、ミニエマルションには一般的には、低い濃度の界面活性剤が使用されている。ミニエマルションには、２％（ｗ／ｗ）、４％（ｗ／ｗ）、５％（ｗ／ｗ）、６％（ｗ／ｗ）、８％（ｗ／ｗ）、または１０％（ｗ／ｗ）の界面活性剤を含むことが可能である（開示されている百分率の間のすべての範囲が含まれる）。一つの実施態様においては、そのミニエマルションが、１０％（ｗ／ｗ）未満の界面活性剤を含んでいる。また別の実施態様においては、そのミニエマルションが、約１％（ｗ／ｗ）〜約５％（ｗ／ｗ）の間の親油性界面活性剤と、約０．５％（ｗ／ｗ）〜約５％（ｗ／ｗ）の間の親水性界面活性剤とを含んでいる。

【0049】

臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）とは、その濃度より上では、ミセルが自発的に形成される、界面活性剤の濃度と定義される。系の中に界面活性剤（または各種の界面活性物質）を導入すると、それらが最初に界面の中に分配され、ａ）界面のエネルギーを低下させることによって、およびｂ）界面活性剤の疎水性部分を水との接触から除くことによって、系の自由エネルギーが低下される。

【0050】

次いで、界面活性剤による表面の被覆が増大し、表面自由エネルギー（表面張力）が減少し、界面活性剤がミセルの中に凝集し始めると、それによって、界面活性剤の疎水性部分の水との接触面積が減少することによって、系の自由エネルギーが再び減少する。ＣＭＣに到達すると、界面活性剤をさらにいくら添加しても、ミセルの数が増大するだけとなるであろう（理想的な場合）。

【0051】

これらのミセルまたはリポソーム構造によって、第二相を添加したときに、界面で親油性界面活性剤が脂質に対して容易に利用できるようになり、乳化粒子の形成を促進する。一般的に使用されるノニオン性界面活性剤とそれらのＣＭＣ値の表を、次に提供する。

【0052】

【表1】

いかなる仮説にも拘束されることを望むものではないが、一般的に、最終的な系においては、界面活性剤の濃度はＣＭＣよりも高い。しかしながら、当業者が認めるように、系の中での界面活性剤の複雑な挙動のため、および溶媒の存在および温度の違いによって、ＣＭＣ値が変化するので、特定の範囲を示すことはできない。

【0053】

本明細書に記載された方法には、脂質を含む「第二相」を調製することもまた含まれる。脂質は、当業者に公知のいかなる脂質であってもよく、たとえば、植物由来の脂質、動物由来の脂質、および鉱油が挙げられる。その脂質が、６個以上の炭素の脂肪族尾部を有する中鎖もしくは長鎖の脂肪酸を含む植物油であれば好ましい。本発明の方法において使用するのに好適な植物油の例としては、以下のものが挙げられる：ヤシ油、ヒマシ油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、綿実油、オリーブ油、パーム油、ナタネ油、カノーラ油を含む、サフラワー油、ダイズ油、およびヒマワリ油ならびにそれらの誘導体。一つの実施態様においては、その油がダイズ油である。また別の実施態様においては、その脂質が、動物由来の脂質たとえばホスファチジルコリンである。

【0054】

そのミニエマルションには、０．５％（ｗ／ｗ）、２％（ｗ／ｗ）、５％（ｗ／ｗ）、１０％（ｗ／ｗ）、１５％（ｗ／ｗ）、２０％（ｗ／ｗ）、２５％（ｗ／ｗ）、３０％（ｗ／ｗ）、または４０％（ｗ／ｗ）の脂質を含むことができる（開示されている百分率の間のすべての範囲が含まれる）。一つの実施態様においては、そのミニエマルションが、少なくとも約０．５％（ｗ／ｗ）、またはたとえば約０．５％（ｗ／ｗ）〜約４０％（ｗ／ｗ）、約０．５％（ｗ／ｗ）〜約１５％（ｗ／ｗ）、もしくは約１５％（ｗ／ｗ）〜約２５％（ｗ／ｗ）の油、または約２５％（ｗ／ｗ）〜約４０％（ｗ／ｗ）の油を含んでいる。

【0055】

場合によっては、第一相または第二相のいずれかに溶媒を添加することによって、脂質の分散を助けてもよい。好適な溶媒は、当業者には周知である。適切な溶媒の例としては、以下のものが挙げられる：アセトン（２−プロパノン、プロパン−２−オン）、１−ブタノール（ｎ−ブチルアルコール）、２−ブタノール（ブタン−２−オール）、エタノール（エチルアルコール）、酢酸エチル（酢酸エチルエステル）、ヘプタン（ｎ−ヘプタン）、３−メチル−１−ブタノール（イソアミルアルコール、イソペンチルアルコール）、メチルエチルケトン（２−ブタノン、ＭＥＫ、ブタン−２−オン）、２−メチル−１−プロパノール（イソブチルアルコール、２−メチルプロパン−１−オール）、ペンタン（ｎ−ペンタン）、１−ペンタノール（アミルアルコール、ペンタン−１−オール）、１−プロパノール（プロパン−１−オール、プロピルアルコール）、２−プロパノール（プロパン−２−オール、イソプロピルアルコール、ＩＰＡ）。溶媒が水混和性（親水性）溶媒、たとえば、プロパノール、イソプロピルアルコール、エタノール、またはアセトンであるのが好ましい。一つの実施態様においては、その第一相または第二相に、約５ｇ〜約２０ｇの間のプロパノールがさらに含まれる。

【0056】

第一相および第二相が調製できたら、第二相を第一相に、水中油型ミニエマルションを形成させるために採用した方法で添加する。ミニエマルションを形成させるために採用される適切な方法は、当業者には周知であろう。ミニエマルションを形成させるために適用される方法、および本明細書に記載されたミニエマルションを形成させるために使用されるその他のプロセスは、好ましくは、低エネルギーである。一般的に、１μｍ以下の平均サイズを有する粒子を製造するためには、高エネルギープロセスが必要である。たとえば、一般的にエネルギーの散逸（エネルギー消費）が２倍になると、従来からの配合物を使用した場合、平均粒径が約２５％低下する原因となる。

【0057】

エネルギー消費は、各種の形態で起こり得て、たとえば、バッチにおいてミニエマルションの剪断力抵抗性に打ち勝つためにスターラによって必要とされるエネルギー、加熱および冷却のためのエネルギー、および／または圧力低下に打ち勝つための動力などの可能性がある。たとえば、国際公開第２００８／１２８７７９号パンフレットには、高エネルギー剪断プロセスたとえば、高圧ホモジナイゼーションまたは超音波処理を使用して、油相を水相と混合することによってマイクロエマルションを形成させることが記載されている。相の一方が、室温では流動しないかまたは流動があまりにも遅いような場合、乳化させるための加熱を必要とすることが多い。国際公開第２００６／０２４０９５号パンフレットには、水中油型のマイクロエマルションを得るために、連続混合を用いて、４０〜９９℃、好ましくは４５〜９５℃、より好ましくは６５〜８５℃の範囲で加熱する工程が記載されている。加熱されたエマルションは、典型的には、連続相の粘度がより低く、したがって抗力が低いために、安定性が低い。抗力は、液滴が移動し、その結果合着して、より大きな、多くの場合望ましくない液滴または液滴の凝集物となったり、さらには相分離して層になったりすることを停止させるかまたは抵抗するために必要である。乳化させた後では、液滴は浮力のために上昇してくる傾向がある。したがって、急速冷却工程が必要となることもあり、その場合もエネルギーを消費する。

【0058】

それとは対照的に、本明細書に記載された方法では、安定したミニエマルションを形成させるための、顕著な加熱を必要とせず（したがって、冷却も必要としない）、あるいは圧力を必要としない。したがって、開示されているミニエマルションは、高温の不在下で、形成させることが可能である。一般的に、本明細書に記載されたミニエマルションの形成は、約８０℃未満、好ましくは約６０℃未満の温度で、より好ましくは４０℃以下の温度で実施する。さらに、本明細書において開示された方法では高温を使用しないので、必要とされるような冷却工程も存在しない。補助的な工程、たとえば、材料の消毒などでは、高温が含まれる可能性はあるが、そのような工程がミニエマルションの形成にはまったく関わらないことは、当業者には認識されることであろう。

【0059】

本明細書において開示されたミニエマルションは、高圧が存在しなくても、形成させることができる。典型的には、本明細書に記載されたミニエマルションの形成は、約１，０００ｋＰａ未満、好ましくは約５００ｋＰａ未満の圧力、より好ましくは標準大気圧（約１０１ｋＰａ）を有するチャンバーで実施される。一つの実施態様においては、第二相の第一相への添加を、４０℃以下の温度および標準大気圧（約１０１ｋＰａ）で実施する。

【0060】

したがって、本発明の方法において使用されるミニエマルションを形成させるために適用される方法では、従来からのミニエマルション形成において使用される場合に比較して、エネルギー消費量がかなり低い。たとえば、一つの態様においては、そのミニエマルションを、マグネチックスターラ、オーバーヘッドスターラ、またはその他適切な撹拌手段を使用する撹拌によって形成させることができる。また別の態様においては、ミキサーの手段によってミニエマルションを形成させることができる。一つの態様においては、たとえば、第一相を含む連続ミキサーに対して、第二相を滴下の方式で添加する。その連続ミキサーには、静的および／または動的ミキサーも含めて、各種好適な混合手段を含むことができる。そのミキサーは、機械的または非機械的混合部品を含むいかなるミキサーとすることも可能である。

【0061】

その連続ミキサーには、流れの中に乱流を作って、それにより第一相と第二相とを混合して、ミニエマルションを形成させるような、静的な混合アームを有するスターラが含まれていてもよい。他の態様においては、その連続ミキサーが、乳化機、乳化装置、またはホモジナイザー（たとえば、インラインもしくは連続ホモジナイザー、またはロータ／ステータホモジナイザー）を含んでいる。例としては、充填床乳化機、スクリーン、および膜乳化機が挙げられるが、これらに限定される訳ではない。一つの態様においては、その連続ミキサーが、所望の毎分回転数（ｒｐｍ）たとえば約５，０００ｒｐｍ〜約２０，０００ｒｐｍで、相を混合することが可能な混合部品を有するスターラである。一つの実施態様においては、第二相を第一相に、連続混合の際の連続フローまたは連続ストリームとして添加する。また別の実施態様においては、第二相を第一相に、連続混合の際に、調節した流れの下で添加する。さらなる実施態様においては、その連続混合で、約２０，０００ｒｐｍまでの速度でのロータホモジナイザーを用いる。

【0062】

一般的には、本明細書において開示された方法によって、各種の乳化粒子を製造することができる。それらの乳化粒子は、多種多様な形状および構造を有することが可能で、たとえば、約１０ｎｍ〜１μｍのサイズを有する球状、多層化、マイクロカプセル、ミクロスフェア、ナノ粒子、ナノカプセルおよびナノスフィア、さらには、一般的には、約１μ未満である粒子が挙げられる。ミニエマルションには、約１０ｎｍ〜約９００ｎｍ、約２０ｎｍ〜約８００ｎｍ、および約５０ｎｍ〜約８５０ｎｍの間の平均サイズを有する粒子を含むことができる（ここに開示された範囲の間のいかなる範囲も含む）。しかしながら、本明細書において開示された方法によって製造したミニエマルションは、一般的に、２５０ｎｍ〜１μｍの間の平均粒径を有している。一つの態様においては、そこで開示されている乳化粒子が、１μｍ未満の平均粒径を有している。一つの実施態様においては、平均粒径の範囲が、約２５０ｎｍ〜約１μｍである。さらにまた別の実施態様においては、平均粒径の範囲が、約３００ｎｍ〜約７００ｎｍである。さらにまた別の実施態様においては、その平均粒径が約６００ｎｍである。さらなる実施態様においては、ミニエマルションの中の少なくとも７０％、最も好ましくは少なくとも７５％の粒子が１μｍ以下である。

【0063】

粒径分布は、当業者に公知のレーザー回折法によって測定する。場合によっては、必要に応じて、粒径をさらに小さくするために、ミニエマルションを超音波処理および／または高圧ホモジナイゼーションにかけるか、および／または混合時間を増やしてもよい。

【0064】

上記の方法によって形成させたミニエマルションは、冷蔵をしなくても、長期間にわたって安定である。エマルションが不安定になると、それが分離したり、合着してその成分の相となって、脂質または油の層が目に見えるようになったりする。粒径が大きくなるということは、そのエマルションが不安定になってきていることも示している。さきに述べたように、粒径の測定方法は、当業者には公知である。したがって、長期間経過した後でも、ミニエマルションが依然として１μｍ以下の平均粒径を有しているという点で本明細書に記載されたミニエマルションは安定である。一つの実施態様においては、本明細書に記載されたミニエマルションは、冷蔵しなくても少なくとも１ヶ月から約３年までは安定である。ミニエマルションが、冷蔵しなくても、少なくとも約１年は安定であるのが好ましい。ミニエマルションが、冷蔵しなくても、少なくとも約２年は安定であれば、より好ましい。一つの実施態様においては、約３年後でも、その粒子の少なくとも７０％が１μｍ以下である。また別の実施態様においては、約３年後には、その平均粒径の増大が、０．０５μｍ未満である。

【0065】

一つの態様においては、前述の方法によって得られたミニエマルションを、１種の生理活性薬剤を含むか、または多数の生理活性薬剤を組み合わせて含むように配合してもよい。本明細書に記載された方法を用いて、広く各種の生理活性薬剤を使用することができる。本明細書に記載されたミニエマルションの中には、液状または固形の生理活性薬剤を組み入れることができる。生理活性薬剤には、有効成分の塩を含むこともできる。したがって、生理活性薬剤は、酸性塩、塩基性塩、または両性塩とすることができる。それらは、ノニオン性分子、極性分子、プロドラッグ、溶媒和化合物、多形、または水素結合を作ることが可能な分子錯体とすることができる。生理活性薬剤は、組成物の中に、たとえば、無電荷の分子、分子錯体、塩、エーテル、エステル、アミド、ポリマー薬物抱合体、またはその他の形態で含まれて、有効な生物的または生理的な活性を与えることができる。

【0066】

本明細書における系の中に組み入れることが可能な生理活性薬剤の例としては、以下のものが挙げられるが、それらに限定される訳ではない：ペプチド、タンパク質たとえばホルモン、酵素、抗体、抗体断片など、核酸たとえばアプタマー、ｓｉＲＮＡ、ＤＮＡ、ＲＮＡ、アンチセンス核酸など、アンチセンス核酸類似体など、低分子量化合物、または高分子量化合物。開示されたミニエマルションの中で使用することが考えられる生理活性薬剤としては、以下のものが挙げられる：タンパク同化薬、制酸薬、抗喘息薬、抗コレステロール血症薬および抗脂血症薬、抗凝血薬、抗痙攣薬、止瀉薬、制吐薬、抗感染症薬（抗バクテリア薬および抗菌薬を含む）、抗炎症剤、抗躁病薬、代謝拮抗薬、制吐薬、抗悪性腫瘍薬、抗肥満薬、解熱薬および鎮痛薬、鎮痙薬、抗血栓薬、鎮咳薬、抗尿酸血症薬、抗血管増殖薬、抗血管内皮増殖薬、抗狭心症薬、抗ヒスタミン薬、食欲減退薬、生物学的製剤、脳血管拡張薬、冠動脈拡張薬、気管支拡張薬、細胞毒性薬、鬱血除去薬、利尿薬、診断薬、赤血球造血薬、去痰薬、消化管鎮静薬、高血糖性薬、催眠薬、低血糖症薬、免疫調節薬、イオン交換樹脂、緩下薬、ミネラルサプリメント、粘液溶解薬、神経筋薬、末梢血管拡張薬、向精神薬、鎮静薬、興奮薬、甲状腺薬および抗甲状腺薬、組織増殖薬、血管増殖薬、血管内皮増殖薬、子宮弛緩薬、ビタミン、または抗原性物質。

【0067】

その他の生理活性薬剤としては、以下のものが挙げられる：アンドロゲン阻害薬、多糖類、増殖因子、ホルモン、抗血管新生因子、デキストロメトルファン、臭化水素酸デキストロメトルファン、ノスカピン、クエン酸カルベタペンタン、塩酸クロフェジアノール、マレイン酸クロルフェニラミン、酒石酸フェニンダミン、マレイン酸ピリラミン、コハク酸ドキシラミン、クエン酸フェニルトロキサミン、塩酸フェニレフリン、塩酸フェニルプロパノールアミン、塩酸プソイドエフェドリン、エフェドリン、リン酸コデイン、硫酸コデイン モルヒネ、ミネラルサプリメント、コレスチラミン、Ｎ−アセチルプロカインアミド、アセトアミノフェン、アスピリン、イブプロフェン、塩酸フェニルプロパノールアミン、カフェイン、グアイフェネシン、水酸化アルミニウム、水酸化マグネシウム、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、アミノ酸、ホルモン、インターフェロン、サイトカイン、およびワクチン。

【0068】

ミニエマルションの中で生理活性薬剤として使用することが可能な代表的な薬物としては以下のものが挙げられるが、それらに限定される訳ではない：ペプチド薬物、タンパク質薬物、脱感作物質、抗原、抗感染症薬たとえば抗生物質、抗菌薬、抗ウイルス薬、抗バクテリア薬、駆虫薬、抗真菌性物質およびそれらの組合せ、抗アレルギー薬、アンドロゲン性ステロイド、鬱血除去薬、催眠薬、ステロイド性抗炎症剤、抗コリン作動薬、交感神経興奮薬、鎮静薬、縮瞳薬、精神興奮薬、トランキライザー、ワクチン、エストロゲン、プロゲステロン薬、体液剤（ｈｕｍｏｒａｌ ａｇｅｎｔ）、プロスタグランジン、鎮痛薬、鎮痙薬、抗マラリア薬、抗ヒスタミン薬、心臓作用薬、非ステロイド系抗炎症剤、抗パーキンソン病薬、血圧降下薬、ベータアドレナリン遮断薬、アルファアドレナリン拮抗薬、栄養剤、アヘンアルカロイド、およびベンゾフェナントリジンアルカロイド。その薬剤はさらに、興奮薬、鎮静薬、催眠薬、鎮痛薬、抗痙攣薬、などとして作用することが可能な物質とすることもできる。

【0069】

その他の生理活性薬剤としては、抗生物質を含む生理活性薬剤も挙げられるが、それらに限定される訳ではない。抗生物質はたとえば、以下のものの１種また複数とすることができる：アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、アンサマイシン、ゲルダナマイシン、ハービマイシン、カルバセフェム、ロラカルベフ、カルバペネム、エルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、メロペネム、セファロスポリン（第一世代）、セファドロキシル、セファゾリン、セファロチンもしくはセファロシン、セファレキシン、セファロスポリン（第二世代）、セファクロル、セファマンドール、セフォキシチン、セフプロジル、セフロキシム、セファロスポリン（第三世代）、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セファロスポリン（第四世代）、セフェピム、セファロスポリン（第五世代）、セフトビプロール、グリコペプチド、テイコプラニン、バンコマイシン、マクロライド、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリトロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、トロレアンドマイシン、テリトロマイシン、スペクチノマイシン、モノバクタム、アズトレオナム、ペニシリン、アモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、カルベニシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリン、ピペラシリン、チカルシリン、ポリペプチド、バシトラシン、コリスチン、ポリミキシンＢ、キノロン、シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、スルホンアミド、マフェニド、プロントジル（初期）、スルファセタミド、スルファメチゾール、スルファニルイミド（初期）、スルファサラジン、スルフイソオキサゾール、トリメトプリム、トリメトプリム−スルファメトキサゾール（コトリモキサゾール）（ＴＭＰ−ＳＭＸ）、テトラサイクリン（デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、テトラサイクリン、などを含む）、アルスフェナミン、クロラムフェニコール、クリンダマイシン、リンコマイシン、エタンブトール、ホスホマイシン、フシジン酸、フラゾリドン、イソニアジド、リネゾリド、メトロニダゾール、ムピロシン、ニトロフラントイン、プラテンシマイシン、ピラジナミド、キヌプリスチン／ダルフォプリスチン、リファンピシン（米国においてはリファンピン）、チニダゾール、またはそれらの組合せ。

【0070】

生理活性薬剤は、たとえば以下に示すものとすることができる：免疫調節薬、たとえばサイトカイン、インターロイキン、インターフェロン、コロニー刺激因子、潰瘍壊死因子など；アレルゲンたとえば、ネコのふけ、カバノキの花粉、ハウスダストダニ、草木の花粉など；以下の様な細菌性生物の抗原：たとえば、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｒｏｇｅｎｅｓ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｅｒｉａｅ）、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）、ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、ミュータンス菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ）、パラインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、野兎病菌（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）、ペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ）、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ）、レジオネラ菌（Ｌｅｇｉｏｉｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、らい菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ）、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ）、寄生細菌（Ｌｅｐｔｓｐｉｒｏｓｉｓ ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓ）、ライム病菌（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｄｏｒｆｅｒｉ）、腸炎原因菌（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）など；以下のようなウイルスの抗原：天然痘、インフルエンザＡおよびＢ、呼吸器合胞体、パラインフルエンザ、麻疹、ＨＩＶ、ＳＡＲＳ、水疱帯状疱疹、単純ヘルペス１および２、サイトメガロウイルス、エプスタイン−バー、ロタウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、パピローマウイルス、小児麻痺ウイルス、流行性耳下腺炎、狂犬病、風疹、コクサッキーウイルス、ウマ脳炎、日本脳炎、黄熱病、リフトバレー熱、リンパ球性脈絡髄膜炎、Ｂ型肝炎など；以下のような真菌、原虫、および寄生生物の抗原：クリプトコッカス症病原体（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｃ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ヒストプラスマ症病原体（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、ノカルディア・アステロイデス（Ｎｏｃａｒｄｉａ ａｓｔｅｒｏｉｄｓ）、リケッチア・リケッチイ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｒｉｃｋｅｔｓｉｉ）、リケッチア・チフィ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｔｙｐｈｉ）、肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、オウム病クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄａ ｐｓｉｔｔａｃｉ）、トラコーマクラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、トリパナソーマ・ブルセイ（Ｔｒｙｐａｎａｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ）、赤痢アメーバ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、トキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）、膣トリコマナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、マンソン住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉ）など。これらの抗原は、完全死滅化生物体（ｗｈｏｌｅ ｋｉｌｌｅｄ ｏｒｇａｎｉｓｍ）、ペプチド、タンパク質、糖タンパク質、炭水化物、またはそれらの組合せの形態にあってよい。

【0071】

さらなる特異的な態様においては、鎮痛薬たとえば、アセトアミノフェン、アセチルサリチル酸など；麻酔薬たとえば、リドカイン、リグノカイン、キシロカインなど；食欲減退薬たとえば、デキサドリン、酒石酸フェンジメトラジンなど；抗関節炎薬たとえば、メチルプレドニゾロン、イブプロフェンなど；抗喘息薬たとえば、硫酸テルブタリン、テオフィリン、エフェドリンなど；抗生物質たとえば、スルフイソオキサゾール、ペニシリンＧ、アンピシリン、セファロスポリン、アミカシン、ゲンタマイシン、テトラサイクリン、クロラムフェニコール、エリスロマイシン、クリンダマイシン、イソニアジド、リファンピンなど；抗真菌性たとえば、アンホテリシンＢ、ナイスタチン、ケトコナゾールなど；抗菌薬たとえば、セトリミドなど；抗ウイルス薬たとえば、アシクロビル、アマンタジンなど；抗癌薬たとえば、シクロホスファミド、メトレキセート、エトレチネートなど；抗凝血薬たとえば、ヘパリン、ワルファリンなど；抗痙攣薬たとえば、フェニトインナトリウム、ジアゼパムなど；抗うつ薬たとえば、イソカルボキサジド、アモキサピンなど；抗ヒスタミン薬たとえば、ジフェンヒドラミン・ＨＣｌ、マレイン酸クロルフェニラミンなど；ホルモンたとえば、インスリン、黄体ホルモン、エストロゲン、コルチコイド、グルココルチコイド、アンドロゲンなど；トランキライザーたとえば、トラジン、ジアゼパム、クロルプロマジン・ＨＣｌ、レセルピン、クロルジアゼポキシド・ＨＣｌなど；鎮痙薬たとえば、ベラドンナアルカロイド、塩酸ジシクロミン、パパベリンなど；ビタミンおよびミネラルたとえば、必須アミノ酸、カルシウム、鉄、カリウム、亜鉛、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤなど；心血管作動薬たとえば、プラゾシン・ＨＣｌ、ニトログリセリン、プロプラノロール・ＨＣｌ、ヒドララジン・ＨＣｌ、パンクレリパーゼ、コハク酸デヒロドゲナーゼなど；ペプチドおよびタンパク質たとえば、ＬＨＲＨ、ソマトスタチン、カルシトニン、成長ホルモン、グルカゴン様ペプチド、成長放出因子、アンジオテンシン、ＦＳＨ、ＥＧＦ、骨形態発生タンパク質（ＢＭＰ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、インターフェロン、インターロイキン、コラーゲン、フィブリノーゲン、インスリン、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、エンブレル（Ｅｎｂｒｅｌ）（登録商標）、リツクサム（Ｒｉｔｕｘａｍ）（登録商標）、ハーセプチン、アルファ−グルコシダーゼ、セラザイム（Ｃｅｒａｚｙｍｅ）／セレドーズ（Ｃｅｒｅｄｏｓｅ）（登録商標）、バソプレシン、ＡＣＴＨ、ヒト血清アルブミン、ガンマグロブリン、構造タンパク質、血液製剤タンパク質、複合タンパク質、酵素、抗体、モノクローナル抗体、抗体断片など；プロスタグランジンたとえば、プロスタグランジンＥ１、プロスタグランジンＩ２、プロスタグランジンＥ２など；核酸；炭水化物；脂肪；麻薬たとえば、モルヒネ、コデインなど；精神治療薬；非ステロイド系抗炎症剤たとえば、イブプロフェン、ジクロフェナクなど；降圧薬たとえば、フェントラミン・ＨＣｌなど；抗マラリア薬、Ｌ−ドパ、利尿薬たとえば、フロセミド、スピロノラクトンなど；抗潰瘍薬たとえば、ランチジン・ＨＣｌ、シメチジン・ＨＣｌなど。

【0072】

ある種の態様においては、その生理活性薬剤を、医薬品組成物中の一成分として存在させることができる。医薬品組成物は、たとえば単位剤形または放出制御剤形なども含め、所望の剤形で、そして薬学の分野では公知の各種の方法によって、都合よく製剤することもできる。一般的には、医薬品組成物は、生理活性薬剤を、液状キャリア、または微細な固体状キャリア、またはその両方と、均質かつ密接に組み合わせることによって製剤する。使用される医薬品キャリアは、たとえば、固体状、液状、またはガス状とすることができる。固体状キャリアの例としては、ラクトース、白土、スクロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、ステアリン酸マグネシウム、およびステアリン酸が挙げられる。液状キャリアの例は、シュガーシロップ、ラッカセイ油、オリーブ油、および水である。ガス状キャリアの例としては、二酸化炭素および窒素が挙げられる。生理活性薬剤と混合することが可能なその他の薬学的に許容されるキャリアまたは成分としては、たとえば以下のものを挙げることができる：脂肪酸、糖、塩、水溶性ポリマーたとえばポリエチレングリコール、タンパク質、多糖類またはカルボキシメチルセルロース、界面活性剤、可塑剤、高分子量もしくは低分子量のポリマーまたは塩または糖のようなポロシゲン（ｐｏｒｏｓｉｇｅｎ）、または疎水性の低分子量化合物たとえばコレステロールもしくはワックス。

【0073】

ミニエマルションの中に生理活性薬剤を組み入れるための方法は、その生理活性薬剤の性質に依存することになるであろう。たとえば、親油性の薬剤は一般的に、脂質の中に溶解させ、脂質の液滴の中で脂質と共に分散されるであろうし、それに対して親水性の薬剤は一般的に、水相の中に溶解されるであろう。しかしながら、親水性薬剤および親油性薬剤を、ポリマー、脂質および／または界面活性剤に化学的または物理的に結合させてもよい。ミニエマルションの中に生理活性薬剤を組み入れる方法は、当業者には周知のものである（たとえば、ヘンドリクソン、Ｒ．（Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎ，Ｒ．）編、レミントン（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ）：「調剤の科学と実務（Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ）」、第２１版；リッピンコット・ウィリアムス・＆・ウィルキンス（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ）：ボルチモア（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ）、ＭＤ、２００５を参照されたい）。

【0074】

一つの実施態様においては、その第二相に脂質および生理活性薬剤が含まれる。本明細書に開示された方法が、一つの態様においては、乳化粒子のサイズの割には、高い濃度の生理活性薬剤を与えるということは明かであろう。前に記述したように、本明細書に記載されているミニエマルションには、最高４０％（ｗ／ｗ）までの油を含むことができる。油含量がこのように高いために、高い濃度の生理活性薬剤をミニエマルションの中に組み入れることが可能となる。たとえば、ミニエマルションには、０．１％（ｗ／ｗ）、０．５％（ｗ／ｗ）、２％（ｗ／ｗ）、３％（ｗ／ｗ）、５％（ｗ／ｗ）、１０％（ｗ／ｗ）、１５％（ｗ／ｗ）、３０％（ｗ／ｗ）または４０％（ｗ／ｗ）の生理活性薬剤を含むことができる（開示されている百分率の間のすべての範囲が含まれる）。一つの実施態様においては、そのミニエマルションに、少なくとも約０．２％（ｗ／ｗ）、またはたとえば約０．２％（ｗ／ｗ）〜約８％（ｗ／ｗ）、または約１０％（ｗ／ｗ）〜約１５％（ｗ／ｗ）の生理活性薬剤が含まれる。

【0075】

一つの特定な態様においては、その好ましい生理活性薬剤が「疎水性化合物」または「親油性化合物」である。「疎水性化合物」という用語は、限定された水溶解度を有する化合物を指している。「親油性化合物」という用語は、脂質と相互作用を持ちやすいことを特徴とする化合物を指している。そのような化合物の例としては、形式電荷を担持する能力がある基（たとえば、カルボン酸およびアミノ基）を持たないか、またはヒドロキシル基のような極性基を持たない有機分子が挙げられる。そのような化合物は、アミノ酸ベースのもの（たとえば、アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド、およびタンパク質）であってよく、そこでは、アミノ酸が、完全にまたは圧倒的に疎水性である（たとえば、ロイシン、バリンなど）。各種の医薬品用途で有用な疎水性の生理活性薬剤の例としては、以下のものが挙げられる：プロパニジド、プロポフォール、アルファジオン、リドカイン、リグノカイン、エキノマイシン、硝酸ミコナゾール、タキサン（タキシンまたはタキソイドとも呼ばれる）たとえばパクリテキセルおよびドセタキセル、ポドフィロトキシン、カンプトテシンたとえばカンプトテシン、９−アミノカンプトテシン、９−ニトロカンプトテシン、カンプトテシン−１１（「イリノテカン」）、トポテカン、ビンカアルカロイドおよびそれらの類似体（ビンクリスチン、ビノレルビン、ビンデシン、ビントリポール、ビンキサルチン、アンシタビン）、親油性アントラサイクリン、デカルバジン、ロニダミン、ピロキサントロン、アントラピラゾール、エトポシド、ブレオマイシン、６−アミノクリセン、ナベルビン、トリブチリン、テニポシド、白金ベースの薬剤、プラジカンテル、シクロスポリンＡ、１８−ヒドロキシデオキシコルチコステロン、ラパマイシン、プレドニゾロン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、プルプリン、エチオプルプリンスズ、ポルフィリン、パラアミノ安息香酸、ジアゼパム、デルタ９−テトラヒドロカンナビノール、ＢＢＢ−ＭＤＰＰ、ベラパミル、およびニフェジピン。一つの実施態様においては、その生理活性薬剤が、リドカインまたはリグノカインである。

【0076】

また別の実施態様においては、その第一相に生理活性薬剤が含まれる。この場合においては、好ましい生理活性薬剤は、「親水性化合物」または「疎油性化合物」である。「親水性化合物」という用語は、水に溶解可能な化合物を指している。各種の医薬品用途で有用な親水性の生理活性薬剤の例は、当業者には周知であって、たとえばリグノカイン・ＨＣｌである。

【0077】

したがって、一つの態様においては、前述の方法およびミニエマルションから、生理活性薬剤のための送達系を形成することができる。それらの乳化粒子のサイズが１μｍ以下であるために、本明細書に記載された送達系は、局所、経腸または非経口の経路によって投与することができる。たとえば、その送達系は、経口、経鼻、静脈内、筋肉内、皮下、舌下、クモ膜下、腹腔内、腫瘍内、局所、経皮、または皮内で、投与することができる。投与経路は、各種の因子たとえば、環境や治療の目標に依存させることができる。本明細書において開示された医薬製剤／組成物の中に組み入れることが可能な医薬品的に好適な物質としては以下のものが挙げられるが、それらに限定される訳ではない：吸収促進剤、ｐＨ調節剤および緩衝剤、浸透圧調節剤、保存剤、安定剤、抗酸化剤、界面活性剤、増粘剤、共溶媒、皮膚軟化剤、分散剤、着香剤、着色剤および湿潤剤、ならびにリガンド／パイロット（ｐｉｌｏｔｅ）／標的分子。送達系は、液体、粉体、エアゾール、カプセル、錠剤、坐剤、クリーム、ゲル、および軟膏などの形態であってよい。液体のタイプの例としては、ローションおよびスプレーが挙げられる。特定の実施態様においては、その送達系が、スプレーとして、またはエアゾールとして投与するように配合される。適切な配合物を調製するための方法は、当業者には周知である（たとえば、ヘンドリクソン、Ｒ．（Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎ，Ｒ．）編、レミントン（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ）：「調剤の科学と実務（Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ）」、第２１版；リッピンコット・ウィリアムス・＆・ウィルキンス（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ）：ボルチモア（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ）、ＭＤ、２００５を参照されたい）。

【0078】

一つの特定な例においては、ミニエマルションの処方を痛覚または侵害受容を抑制することが可能な組成物とすることもできるが、そこで生じている疼痛が、疾病、炎症、外傷、または心身症のいずれの結果であってもよい。したがって、その組成物は、疼痛緩和の必要がある対象に対する有効量として投与されるであろう。本明細書において対象に対して用いられる、「疼痛緩和の必要がある（ｉｎ ｎｅｅｄ ｏｆ ｐａｉｎ ｒｅｌｉｅｆ）」という文言には、その組成物を投与する時点で軽度ないしは重度の疼痛を受けている対象、さらには疼痛緩和剤を投与しないと、たとえば約１〜約２時間以内、特には約３０分以内に、軽度ないしは重度の疼痛を切迫して発症すると合理的に予想することが可能な対象も包含される。

【0079】

「有効量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）」という用語は、対象に対して投与したときに、疼痛緩和を起こさせるかまたは維持するのに十分な量、すなわち疼痛緩和量を指している。組成物の有効な疼痛緩和量、投与量の決定は、各種の因子のなかでも、対象の体重および処置するべき疼痛の程度に依存する。

【0080】

本明細書で使用するとき、「有効疼痛緩和濃度（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｐａｉｎ ｒｅｌｉｅｖｉｎｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）」または「有効疼痛緩和血漿中濃度（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｐａｉｎ ｒｅｌｉｅｖｉｎｇ ｐｌａｓｍａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）」という用語は、対象を含めて標準化試験において試験したときに、疼痛の重症度のスコアが、疼痛緩和を示す平均スコアに達するような、対象における血漿レベルを意味するものとする。以下において記載される一つのそのような試験においては、患者が、１０（疼痛の重症度の軽減なし）から０（完全に疼痛緩和）までの尺度で疼痛を評価し、所定の値以上の平均スコアになれば、有効な疼痛緩和を構成したものとみなされる。本明細書において例を挙げているように、そのような試験において５．０以下、より好ましくは、２．０以下の平均スコアであれば、有効な疼痛緩和を構成したものとみなされる。しかしながら、当業者のよく認識するところであるが、疼痛の重症度およびそのような疼痛からの緩和を評価するのには、他のアプローチ方法を使用することも可能である。

【0081】

したがって、本明細書に記載されたミニエマルション法の一つの態様には、検出可能な疼痛緩和を与える配合で、リドカインを含むミニエマルションを対象に投与するような、疼痛緩和のための治療方法が含まれる。「検出可能な疼痛緩和（ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ ｐａｉｎ ｒｅｌｉｅｆ）」という文言は、その配合物が、先に述べたような標準方法によって測定することが可能な有効な疼痛緩和をもたらすということを意味している。たとえば、前述のような試験システムにおいて、０〜１０のスケールで５．０以下、より好ましくは、２．０以下の平均スコアを達成するような配合物は、検出可能な疼痛緩和をもたらすとみなされる。この開示は、それが本明細書において定義される薬物動態学的なプロファイルを示す限りにおいては、なにか特定のタイプの配合物の使用に限定されるものではない。一つの実施態様においては、そのミニエマルションが、疼痛緩和に使用するための、リドカインまたはリグノカインを含むエアゾールスプレーに処方される。

【0082】

本明細書に記載されたミニエマルションまたは送達系は、所望するいかなる対象にでも投与することができる。その対象は、脊椎動物たとえば、哺乳類、魚類、鳥類、は虫類、または両生類とすることができる。本明細書において開示された方法の対象は、たとえば、ヒト、ヒト以外の霊長類、ウマ、ブタ、ウサギ、イヌ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ネコ、モルモット、またはげっ歯動物とすることができる。この用語は、特定の年齢または性を意味している訳ではない。したがって、成人および新生児の対象、さらには胎児も、男女の別なく、包含されるものとする。

【0083】

ここで、以下の非限定的な例だけを参照して、本明細書の開示をさらに説明することとする。しかしながら、以下に示す例は説明のためだけのものであると理解すべきであり、いかなる点においても、上述の開示の普遍性に制限を加えると受け取ってはならない。

【実施例】

【0084】

実施例１：ミニエマルションの調製法
以下のプロセスを使用して、各種の濃度の界面活性剤を用いて１００ｇのミニエマルションを調製した。

【0085】

【表2】

調製品Ａ：
１．ポリソルベート８０をミニエマルションの調製に必要なＷＦＩの８０％に添加し、撹拌して分散させた。

【0086】

２．次いで、そのＴｗｅｅｎ８０（登録商標）の水溶液の中にレシチンを添加し、ロータホモジナイザーを２分間または分散するまで使用したホモジナイゼーションによって分散させた。

【0087】

調製品Ｂ：
１．ダイズ油
ＡとＢとの混合：
１０，０００ｒｐｍの速度でロータホモジナイザーを使用して、連続ホモジナイゼーションを行ないながら、調製品Ａの中に調製品Ｂを一滴ずつ（徐々に）添加した。残りのＷＦＩを添加して、所定重量になるようにした。そうして得られた混合物を、ロータホモジナイザーを１８，０００ｒｐｍの速度で１０分間使用して、ホモジナイズさせた。

【0088】

実施例２：異なった界面活性剤濃度を有するミニエマルションの安定性
実施例１において調製したミニエマルションを、１ヶ月後に、表１に示したような種々のパラメータを使用して安定性についてのスコア付けをした。表１からも判るように、界面活性剤の全濃度は、ミニエマルションの総合的な安定性には顕著な影響を与えなかった。

【0089】

【表3】

実施例３：超音波処理有りおよび無しで調製したミニエマルション
以下の配合に従い、実施例１に従って１ｋｇバッチのミニエマルションを調製したが、ただし、調製品Ｂを調製品Ａに添加する際に、滴下による添加ではなく、ペリスタポンプを使用した。

【0090】

【表4】

次いでそうして得られたミニエマルションを、磁気撹拌、２、４、または１０分間のホモジナイザー処理、そして５分間の超音波処理にかけたが、それぞれのステージで粒径分析のための試料を採取した。簡単に説明すれば、マグネチックスターラを１０分間使用してエマルションを撹拌してから、第一の試料を採取した。次いでそのエマルションを、ロータホモジナイザーを１０分間使用してホモジナイズさせたが、試料は、２、４、および１０分に採取した。次いで、そのエマルションを超音波処理に５分かけて、さらに加工して、最終の試料を採取した。

【0091】

粒径は、マスターサイザ（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ）２０００（マルベルン（Ｍａｌｖｅｒｎ）製）によって分析し、中央粒径（分布の５０％がそれより上にあり、５０％がそれより下にあるような直径（ｄ（０．５））を求めた。表２に見られるように、マグネチックスターラだけの撹拌では、０．６８０μｍのｄ（０．５）が得られた。さらに、ホモジナイゼーションおよび／または超音波処理を用いてもｄ（０．５）には顕著な低下がなかったが、このことは、本発明の方法では、低エネルギーの方法を用いてミニエマルションを製造することが可能であるということを示唆している。

【0092】

【表5】

実施例４：多層化ミセル構造の形成および評価
分散された親水性界面活性剤に親油性界面活性剤を添加すると、多層化ミセル構造が形成されるという仮説があった。次のようにして、蛍光色素を含む１００ｇのミニエマルションを調製した。

【0093】

【表6】

調製品Ａ：
１．フルオレセインナトリウム（水可溶性）を５０ｇの水の中に溶解させた。

【0094】

２．フルオレセインナトリウムを含むその５０ｇの水の中に、Ｔｗｅｅｎ８０（登録商標）をマグネチックスターラ上で添加して、分散させた。
３．そのＴｗｅｅｎ８０（登録商標）の水溶液にレシチンを添加し、ロータホモジナイザーを１０分間または分散するまで使用したホモジナイゼーションによって分散させた。

【0095】

調製品Ｂ：
１．温水（４０℃）中で２０分間超音波処理することにより、ローダミンをダイズ油の中に溶解させた。

【0096】

２．次いでその油を０．２μｍのフィルターを通して濾過して、未溶解のローダミン粒子をすべて除去した。
ＡとＢとの混合：
マグネチックスターラにより中程度の速度（５）で連続撹拌しながら、調製品Ｂを調製品Ａの中に、一滴ずつ（徐々に）添加した。このステージで試料を採取して、蛍光顕微鏡を使用して画像化した（図１）。

【0097】

残りの水を添加して、所定重量になるようにした。マグネチックスターラを用いて１０分間（最大速度、１０）その最終混合物を撹拌した。ホモジナイゼーションプロセスは省略し、その代わりに調製物を中程度の速度で撹拌すると、より大きな粒径が得られたが、それは、蛍光顕微鏡により、４００倍の倍率で、より容易に観察することができる。

【0098】

次いで、蛍光顕微鏡法を使用して、そのようにして得られた調製物の試料を画像化した（図２）。図１および２からも判るように、その調製物は、レシチンと内部に脂質を含むＴｗｅｅｎ８０（登録商標）との多層化／球状構造を含んでいる。同様のプロセスを使用して、光学顕微鏡法のための試料も調製したが、ただし、水相からフルオレセインナトリウムを除外した（図３）。この多層化構造が界面の表面積を増やし、乳化プロセスの間に、界面のところで界面活性剤がより容易に利用可能となっていると考えられる。

【0099】

さらに、それらの粒子が球状であるが、このことは、それらの粒子が界面活性剤分子によって完全に覆われていて、他の形態の粒子に比較して、粒子の相互作用に利用可能な表面が最小になっているということを意味している。

【0100】

最後に、この実施例は、そのミニエマルションが、親水性薬剤（フルオレセインナトリウム）および親油性薬剤（ローダミン）を組み入れる能力を有していることを示している。

【0101】

実施例５：代替的なミニエマルション調製物
上述の配合物において以下の変更を加えたものも調製したが、それらは３〜６ヶ月間安定であった。

【0102】

【表7】

調製品Ａ：
１．Ｔｗｅｅｎ８０（登録商標）を、撹拌によりＷＦＩの８０％の中に溶解させた。

【0103】

２．そのＴｗｅｅｎ８０（登録商標）の水溶液の中に１．０ｇのレシチンを添加し、ロータホモジナイザーを５分間使用して、ホモジナイズすることにより分散させた。
調製品Ｂ：
１．残りのレシチンを、油に添加し、次いでイソプロピルアルコールを添加し、４０℃で２０分間超音波処理をして、レシチンを溶解させ、溶媒を除去した。

【0104】

ＡとＢとの混合：
１０，０００ｒｐｍでロータホモジナイザーを使用して連続ホモジナイゼーションを行ないながら、調製品Ａの中に調製品Ｂを一滴ずつ（徐々に）添加した。次いで、残りのＷＦＩを添加して、所定重量になるようにした。

【0105】

【表8】

調製品Ａ：
１．Ｔｗｅｅｎ８０（登録商標）を、撹拌によりＷＦＩの８０％の中に溶解させた。

【0106】

２．そのＴｗｅｅｎ８０（登録商標）の水溶液の中にグリセリルモノステアレートを添加し、十分に混合した。
調製品Ｂ：
１．ダイズ油
ＡとＢとの混合：
１０，０００ｒｐｍでロータホモジナイザーを使用して連続ホモジナイゼーションを行ないながら、調製品Ａの中に調製品Ｂを一滴ずつ（徐々に）添加した。残りのＷＦＩを添加して、所定重量になるようにした。

【0107】

【表9】

調製品Ａ：
１．Ｔｗｅｅｎ８０（登録商標）を、撹拌によりＷＦＩの８０％の中に溶解させた。

【0108】

２．そのＴｗｅｅｎ８０（登録商標）の水溶液の中に１．０ｇのＳｐａｎ２０（登録商標）を添加し、ロータホモジナイザーを５分間使用して、ホモジナイズすることにより分散させた。

【0109】

調製品Ｂ：
１．残りのＳｐａｎ２０（登録商標）を油に添加し、４０℃で２０分間撹拌して、Ｓｐａｎ２０（登録商標）を溶解させた。

【0110】

ＡとＢとの混合：
調製品Ａの中に調製品Ｂを一滴ずつ（徐々に）添加し、そして１０，０００ｒｐｍでロータホモジナイザーを使用して、連続ホモジナイゼーションを行なった。残りのＷＦＩを添加して、所定重量になるようにした。

【0111】

実施例６：ミニエマルションの調製法
以下のようにして、リグノカインを含むミニエマルション１５０ｇを調製した。

【0112】

【表10】

調製品Ａ：
１．５０ｇのＷＦＩの中にＴｗｅｅｎ８０（登録商標）を添加し、ロータホモジナイザーを使用して、１０，０００〜１５，０００ｒｐｍで５分間ホモジナイズさせた。

【0113】

２．そのＴｗｅｅｎ８０（登録商標）の水溶液にホスホチジルコリンを添加し、ホモジナイザーによって２分間または分散するまで、分散させた。
３．その水溶液を、オートクレーブ中１２１℃で１５分かけて滅菌した。

【0114】

調製品Ｂ：
１．ダイズ油を、２１５℃で２時間かけるか、または０．２μｍのフィルターを通して濾過することによって滅菌した。

【0115】

２．温水（４０℃）中で２０分間超音波処理することにより、リグノカインを滅菌した油の中に溶解させた。
ＡとＢとの混合：
調製品Ａの中に調製品Ｂを、０．２μｍの滅菌フィルターを通過させることにより、一滴ずつ（徐々に）添加し、そして１０，０００ｒｐｍでロータホモジナイザーを使用して、連続ホモジナイゼーションを行なった。残りのＷＦＩを添加して、所定重量になるようにした。その最終的な混合物を、ロータホモジナイザーを１８，０００ｒｐｍで１０分間使用して、ホモジナイズさせた。

【0116】

実施例７：室温および４℃における安定性−リグノカインの濃度
時間の経過でリグノカインが分解されていないことを確認するために、実施例６における方法に従って形成させた、二つの別々のバッチ（「バッチ１」および「バッチ２」）について、室温および４℃（すなわち、冷蔵有りと冷蔵無し）で３２２日の間貯蔵したときの、リグノカイン安定性の試験を行った。安定性は、所定のタイムポイントで、調製品中のリグノカインの濃度をＨＰＬＣによって測定することによって試験し、これを、その調製物を形成させる際に添加された実際の量と比較した。簡単に説明すれば、それぞれのタイムポイントで、液液抽出によって、調製物の試料からリグノカインを抽出した。その方法は、異なった溶媒系を使用することによって最適化し、薬局方のガイドラインに従ってバリデーションも行った。

【0117】

ステップ１：
２５ｍＬのメスフラスコの中に０．５ｇのエマルションを秤り込んだ。そのエマルション試料をイソプロピルアルコールの中に溶解させてから、追加のイソプロピルアルコールを用いて定容した（溶液Ａ）。次いで、溶液Ａの２ｍＬアリコートを、ネジ蓋式の試験管に移してから、４ｍＬのジクロロメタンを添加した。試験管を４〜５回反転させることによって、その混合物を穏やかに振盪した。

【0118】

ステップ２：
その溶媒混合物に４ｍＬの０．１ＭのＨＣｌを加えた。５分間穏やかに振盪し、次いで１０００ｒｐｍの遠心分離に５分間かけることによって、０．１ＭのＨＣｌの中にリグノカインを抽出した。上側の水層を取り出し、２０ｍＬのメスフラスコの中に集めた（溶液Ａ／１）。ステップ２をさらに２回繰り返し、合計３回実施した。

【0119】

ステップ３：
０．１ＭのＨＣｌを用いて、溶液Ａ／１を定容した。０．５μｍのフィルターを通して少量の試料を濾過し、ＨＰＬＣ分析のために注入した。ＨＰＬＣ条件は次の通りである：
１．移動相：
・ ２５ｍＭリン酸（２．８８３ｇ）： ６０％：６００ｍＬ
・ メタノール ４０％：４００ｍＬ
・ 全容積 １０００％：１Ｌ
２．流速： １ｍＬ／分
３．波長： ２１０ｎｍ
４．カラム（オールテック（Ａｌｌｔｅｃｈ））： アポロ（Ａｐｏｌｌｏ） Ｃ１８、５μｍ、長さ：５０ｍｍ、ＩＤ：４．６ｍｍ
５．積分パラメータ： 計数除外面積：１００００
閾値：３
ピーク幅：０．０５
試料中のリグノカイン濃度を、調製品の中の最初のリグノカイン濃度と比較して百分率として表した。図４に見られるように、リグノカインの分解は、室温で貯蔵した調製物と４℃で貯蔵した調製物とでは、ほぼ同じ速度で起きていた。したがって、この結果は、記載された方法で調製したミニエマルションは、長い保存期間を有しているということを示しているが、その理由は、それが安定であって、長期間にわたって室温で貯蔵しても薬剤の濃度が維持されているからである。

【0120】

実施例８：室温および４℃における安定性−粒径
実施例６および７の記述に従って調製したバッチ１および２について、室温および４℃（すなわち、冷蔵有りと冷蔵無し）で２３６日の間貯蔵したときの安定性を、粒径を測定することによって試験した。粒径は、マスターサイザ（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ）２０００（マルベルン（Ｍａｌｖｅｒｎ）製）によって分析し、中央粒径（分布の５０％がそれより上、５０％がそれより下になる粒径（ｄ（０．５））および、分布の９０％がそれより下になる粒径（ｄ（０．９））を測定した。以下の表３および４に見られるように、室温で貯蔵した調製物と４℃で貯蔵した調製物の間では、平均分布ｄ（０．５）およびｄ（０．９）における差はほとんど認められなかった。

【0121】

【表11】

【0122】

【表12】

実施例９：ミニエマルションの特性：粒径の報告
実施例６に記載した方法で調製したミニエマルションの試料を、マスターサイザ（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ）２０００（マルベルン（Ｍａｌｖｅｒｎ）製）によって分析した。実施例６における方法を使用して１ｋｇのスケールアップバッチも調製し（ただし、調製品Ｂの調製品Ａへの添加では、滴下による添加ではなく、ペリスタポンプを使用した）、分析した。簡単に説明すれば、１００ｍＬの脱イオン水の中に２〜３滴のエマルションを滴下により添加した。試験の結果を図５〜７に示す。１５０ｇバッチから分析した粒子のほとんど１００％（９９．２４％）が、１μｍ未満または以下の粒径を有していた。これは、１ｋｇバッチの場合（８５．００％）よりもやや高い。さらに、１５０ｇバッチにおける粒子のほぼ５０％が、２００ｎｍ〜１μｍの間にあり、１ｋｇバッチにおける粒子のほぼ８５％が、２００ｎｍ〜１μｍにあった。

【0123】

１５０ｋｇバッチにおける粒子は、１ｋｇバッチ（ｄ（０．５）＝０．６１９μｍ）におけるものよりも、平均してやや小さい（ｄ（０．５）＝０．２０２μｍ）が、これは、技法的なサンプリングの問題のためだと考えられる。それにも関わらず、これらの結果は、このミニエマルションは、粒径に顕著な影響を与えることなく、商業的なバッチサイズへ満足のいくレベルでスケールアップできるであろうということを示している。

【0124】

実施例１０：１ｋｇのバッチサイズで調製したミニエマルションの安定性
スケールアップした形態においてもエマルションが依然として安定していることを確認するために、１ｋｇバッチの安定性についても試験をした。安定性に関わるいくつかのパラメータについて調べ、その結果を表５に示した。

【0125】

粒径は、マスターサイザ（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ）２０００（マルベルン（Ｍａｌｖｅｒｎ）製）によって分析し、中央粒径（分布の５０％がそれより上にあり、５０％がそれより下にあるような直径（ｄ（０．５））を求めた。実施例７において記載したＨＰＬＣ法を使用して、リグノカインの濃度（％（ｗ／ｗ））およびリグノカインの％力価検定を測定した。

【0126】

過酸化物値は、英国薬局方（Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）、第ＩＶ巻、補遺ＸＦ ２０１０（ロンドン（Ｌｏｎｄｏｎ）：英国保健省出版局（Ｈｅｒ Ｍａｊｅｓｔｙ’ｓ Ｓｔａｔｉｏｎｅｒｙ Ｏｆｆｉｃｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ））からの標準化方法Ａを使用して求めた。簡単に説明すれば、２５０ｍＬの共栓付き三角フラスコの中に２．５０ｇのエマルションを入れた。２容のクロロホルムＲと３容の氷酢酸との混合物３０ｍＬを添加し、エマルションが溶解するまでフラスコを振盪させた。次いで、０．５ｍＬの飽和ヨウ化カリウム溶液Ｒを添加し、正確に１分間フラスコを再度振盪させてから、３０ｍＬの水を添加した。連続的に激しく振盪させながら、その溶液の中に０．０１Ｍのチオ硫酸ナトリウムを、黄色がほとんど消えるまで、徐々に滴定しながら添加した。次いで、５ｍＬのデンプン溶液を添加して、色が消えるまで激しく振盪しながら滴定を続けた（ｎ_１ｍＬの０．０１Ｍチオ硫酸ナトリウム）。次いで同じ条件下でブランク試験を実施した（ｎ_２ｍＬの０．０１Ｍチオ硫酸ナトリウム）。ブランク滴定で使用する０．０１Ｍチオ硫酸ナトリウムの容量が０．１ｍＬを超えてはいけない。
計算

【0127】

【数1】

エマルションのｐＨはデジタルｐＨメータによって測定した。エマルション試料を測定する前に、標準緩衝剤溶液（ｐＨ４および７）を使用してｐＨメータの較正を行った。ｐＨは、デュオテスト（Ｄｕｏ ｔｅｓｔ）ｐＨメータを使用して試験した。

【0128】

【表13】

表５からも見られるように、１５ヶ月の期間を過ぎても、いずれのパラメータも顕著に変化することはなかったが、このことは、このエマルションが、１ｋｇにスケールアップしたとしても、２年以上にわたって安定であることを示している。

【0129】

重要な点は、時間が経過してもその平均粒径が大きくならないということである。粒径の増大は、エマルションの不安定性の重要な指標である。しかしながら、室温で３０ヶ月（９１４日）経過後でも、粒径の増大は無視できる（図８）。したがって、これらの結果は、このエマルションが室温で２年６ヶ月を超えても安定であることを示している。

【0130】

油の酸化は、エマルションの不安定性のもう一つの指標である。先に見たように、時間が経過しても過酸化物値が大きく変化することはなかったが、このことは、エマルション中で油の酸化が起きていないことを示している。ペルオキシドの値に小さな変動が見られるが、これは分析の本来的性質によるものである。さらに、すべての数値は、注射製剤についての薬局方の標準に適合している。

【0131】

実施例１１：４０％（ｗ／ｗ）の脂質を含むミニエマルション調製物
以下のようにして、リグノカイン・ＨＣｌ、サリチル酸およびユーカリ油を含む１００ｇのミニエマルションを調製した。

【0132】

【表14】

調製品Ａ：
１．リグノカイン・ＨＣｌおよび安息香酸を２０ｇの水の中に溶解させた。

【0133】

２．２０ｇのリグノカイン・ＨＣｌおよび安息香酸を含むＷＦＩの中にＴｗｅｅｎ８０（登録商標）を添加し、ロータホモジナイザーを使用し、１０，０００〜１５，０００ｒｐｍで５分間かけてホモジナイズさせた。

【0134】

３．そのＴｗｅｅｎ８０（登録商標）の水溶液にホスホチジルコリンを添加し、ロータホモジナイザーを２０分間または分散するまで使用したホモジナイゼーションによって分散させた。

【0135】

調製品Ｂ：
１．４０℃でヤシ油を融解させ、おだやかに撹拌しながら流動パラフィンと混合した。
２．サリチル酸を、２ｍＬのイソプロピルアルコールと共に温水（４０℃）中で２０分間超音波処理にかけて、その油の中に溶解させた。

【0136】

ＡとＢとの混合：
１０，０００ｒｐｍでロータホモジナイザーを使用して連続ホモジナイゼーションを行ないながら、調製品Ａの中に調製品Ｂを一滴ずつ（徐々に）添加した。残りのＷＦＩを添加して、所定重量になるようにした。その最終混合物を、１８，０００ｒｐｍで１０分間かけてホモジナイズさせた（このプロセスの間に、ほとんどのイソプロピルアルコールが蒸発したものと推定される）。

【0137】

そのミニエマルションの試料を、マスターサイザ（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ）２０００（マルベルン（Ｍａｌｖｅｒｎ）製）によって分析した。簡単に説明すれば、１００ｍＬの脱イオン水の中に２〜３滴のエマルションを滴下により添加した。この試験の結果を図９に示す。

【0138】

この実施例もまた、このミニエマルションが、親水性薬剤（リグノカイン・ＨＣＬ）と親油性薬剤（サリチル酸）とを組み入れる能力を有していることを示している。
実施例１２：疼痛治療に対するミニエマルションの使用
実施例９および１０で述べた、スケールアップした１ｋｇバッチを使用して、皮膚のドナー部位（ｄｏｎｏｒ ｓｉｔｅ）で包帯交換を受ける患者における疼痛を処置した。このエマルションをスプレー（「ＮＳスプレー」）として投与し、従来からの４％のキシロカインを含む疼痛スプレー（「キシロカインスプレー」）と比較試験した。

【0139】

患者をランダムに割り付けて、キシロカインスプレーまたはＮＳスプレーいずれかの処置を受けるようにした。その手順の１時間後に、患者が最終疼痛スコアを提出して、彼らの総合的な満足度の評価付けを行った。患者は、１０（疼痛の激しさの抑制がまったく無し）から０（完全な疼痛緩和）までの尺度で疼痛のスコア付けをし、所定値に等しいかそれよりも大きい平均スコアを、有効な疼痛緩和を構成したとみなす。この試験において５．０以下、より好ましくは、２．０以下の平均スコアであれば、有効な疼痛緩和を構成したものとみなされる。

【0140】

実施例１３：疼痛スコア分析
すべての患者が、彼らの最終疼痛スコアで５未満の疼痛スコアを記録した（図１０）。図１０からも判るように、ＮＳスプレー処置は、キシロカインスプレーに比較して、疼痛を抑制することではわずかに、より効果的であった。

【0141】

患者らはさらに、その処置にどの程度満足したかについて、１〜５の尺度で質問された（ここで、１は極めて満足、５は極めて不満足である）。ＮＳスプレーを用いて処置された患者は、１．４の平均満足度スコアを与えた（図１１）。したがって、患者らはＮＳスプレーの処置に極めて満足しており、ＮＳスプレーが、少なくとも標準処置とは同程度に疼痛を制御し、おそらくは、より長い持続効果を有していた。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図9A】

【図9B】

【図10】

【図11】