特許 6042995 ブルトン型チロシンキナーゼの阻害薬

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6042995

(24)【登録日】2016年11月18日

(45)【発行日】2016年12月14日

(54)【発明の名称】ブルトン型チロシンキナーゼの阻害薬

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/4725 20060101AFI20161206BHJP

   C07D 401/14 20060101ALI20161206BHJP

   A61K 9/72 20060101ALI20161206BHJP

   A61P 11/06 20060101ALI20161206BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20161206BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20161206BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20161206BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/4725

   C07D401/14CSP

   A61K9/72

   A61P11/06

   A61K47/26

   A61K45/00

   A61P43/00 121

   A61P43/00 111

【請求項の数】12

【全頁数】72

(21)【出願番号】特願2015-542318(P2015-542318)

(86)(22)【出願日】2013年11月27日

(65)【公表番号】特表2016-503419(P2016-503419A)

(43)【公表日】2016年2月4日

(86)【国際出願番号】EP2013074803

(87)【国際公開番号】WO2014083026

(87)【国際公開日】20140605

【審査請求日】2015年5月19日

(31)【優先権主張番号】61/731,510

(32)【優先日】2012年11月30日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】591003013

【氏名又は名称】エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー

【氏名又は名称原語表記】Ｆ． ＨＯＦＦＭＡＮＮ−ＬＡ ＲＯＣＨＥ ＡＫＴＩＥＮＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ

(74)【代理人】

【識別番号】110001508

【氏名又は名称】特許業務法人 津国

(72)【発明者】

【氏名】イヤー、ラマン・マハデヴァン

(72)【発明者】

【氏名】レイン，ドラマン・イブラヒム

(72)【発明者】

【氏名】ロペス−タピア，フランシスコ・ハビアー

(72)【発明者】

【氏名】フィリップス、ジョナサン・イー

(72)【発明者】

【氏名】スティーヴンソン、クリストファー

【審査官】 上條 のぶよ

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１２／０２０００８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１１／１６０９２０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２００９−５３２４８９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１０／０７４１１３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２０１２−５１９２００（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１２／１５６３３４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２０１１−５１１０２７（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３１／００−３３／４４

Ａ６１Ｋ ９／００−７２

Ａ６１Ｋ ４５／００−０８

Ａ６１Ｋ ４７／００−４８

Ｃ０７Ｄ ４０１／１４

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

哺乳動物における喘息又は関連する病態を処置又は改善するための医薬組成物であって、薬理学的有効量の化合物６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンが吸入によって投与されるように用いられる、該化合物を含む医薬組成物。

【請求項2】

該化合物６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンが乾燥粉末として吸入によって投与されるように用いられる、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項3】

微粒子化された６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンと微粒子化乳糖とを含む製剤。

【請求項4】

微粒子化乳糖が、Lactohale（商標）LH 300又はRespitose（商標）ML 006である、請求項３に記載の製剤。

【請求項5】

哺乳動物における喘息又は関連する病態を処置又は改善するための、薬理学的有効量で吸入によって投与されるように用いられる、請求項３又は４に記載の製剤。

【請求項6】

式Ｉ：

【化48】

で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩。

【請求項7】

請求項１に記載の化合物又はその製剤と、以下からなる群より選択される治療薬剤のいずれか１つ又は複数との組み合わせを含む医薬組成物：
（ａ）５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）阻害薬又は５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）拮抗薬、
（ｂ）ＬＴＢ_４、ＬＴＣ_４、ＬＴＤ_４及びＬＴＥ_４の拮抗薬を含む、ロイコトリエン拮抗薬（ＬＴＲＡ）、
（ｃ）Ｈ１及びＨ３拮抗薬を含む、ヒスタミン受容体拮抗薬、
（ｄ）充血除去剤使用のための、α_１−及びα_２−アドレナリン受容体作動血管収縮交感神経様作用薬、
（ｅ）短期又は長期作用β_２作動薬、
（ｆ）ＰＤＥ阻害薬、例えば、ＰＤＥ３、ＰＤＥ４及びＰＤＥ５阻害薬
（ｇ）テオフィリン
（ｈ）クロモグリク酸ナトリウム、
（ｉ）非選択的及び選択的なＣＯＸ−１又はＣＯＸ−２阻害薬の両方であるＣＯＸ阻害薬（ＮＳＡＩＤ）、
（ｊ）経口及び吸入糖質コルチコステロイド、
（ｋ）内因性炎症性実体に対して活性なモノクローナル抗体、
（ｌ）抗腫瘍壊死因子（抗ＴＮＦ−α）剤、
（ｍ）ＶＬＡ−４拮抗薬を含む、接着分子阻害薬、
（ｎ）キニン−Ｂ_１−及びＢ_２−受容体拮抗薬、
（ｏ）免疫抑制剤、
（ｐ）マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）の阻害薬、
（ｑ）タキキニンＮＫ_１、ＮＫ_２及びＮＫ_３受容体拮抗薬、
（ｒ）エラスターゼ阻害薬、
（ｓ）アデノシンＡ２ａ受容体作動薬、
（ｔ）ウロキナーゼの阻害薬、
（ｕ）ドーパミン受容体に作用する化合物、例えば、Ｄ２作動薬、
（ｖ）ＮＦκＢ経路のモデュレーター、例えば、ＩＫＫ阻害薬、
（ｗ）ｐ３８ＭＡＰキナーゼ又はｓｙｋキナーゼのような、サイトカインシグナル伝達経路のモジュレーター、
（ｘ）粘液溶解薬又は鎮咳薬として分類され得る薬剤、
（ｙ）抗生物質、
（ｚ）ＨＤＡＣ阻害薬、
（ａａ）ＰＩ３キナーゼ阻害薬、
（ｂｂ）ＣＸＣＲ２拮抗薬、及び
（ｃｃ）ムスカリン拮抗薬。

【請求項8】

哺乳動物における喘息又は関連する病態を処置又は改善するための請求項７に記載の医薬組成物であって、薬学的有効量の前記組み合わせが吸入によって投与されるように用いられる医薬組成物。

【請求項9】

吸入による喘息の処置における使用のための、化合物６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン。

【請求項10】

吸入による喘息の処置のための、化合物６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンを含む医薬組成物。

【請求項11】

吸入による喘息の処置のための医薬の調製のための、化合物６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンの使用。

【請求項12】

喘息の処置における使用のための、請求項７に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

発明の分野
本出願は、Ｂｔｋを阻害し、かつ異常なＢ細胞活性化によって引き起こされる自己免疫性及び炎症性疾患の処置に有用である、新規化合物の使用に関する。

【0002】

発明の背景
プロテインキナーゼは、ヒトの酵素の最も大きなファミリーの１つを構成し、タンパク質にリン酸基を付加することによって、多くの異なるシグナル伝達プロセスを調節する（T. Hunter, Cell 1987 50:823-829）。具体的には、チロシンキナーゼは、チロシン残基のフェノール部分でタンパク質をリン酸化する。チロシンキナーゼファミリーは、細胞の成長、移動及び分化を制御するメンバーを含む。異常なキナーゼ活性は、癌、自己免疫性及び炎症性疾患を含む、様々なヒトの疾患に関与している。プロテインキナーゼは、細胞のシグナル伝達の重要な調節因子の１つであるので、これらは、小分子キナーゼ阻害薬で細胞機能をモジュレートするためのターゲットを提供し、そのために良好な薬物設計ターゲットとなる。キナーゼ媒介性の疾患過程の処置に加えて、選択的かつ効果的なキナーゼ活性阻害薬はまた、細胞のシグナル伝達プロセスの調査及び治療上関心の高い他の細胞ターゲットの同定にも有用である。

【0003】

Ｂ細胞が、自己免疫性及び／又は炎症性疾患の病因において重要な役割を果たしているという確かな証拠がある。リツキサン（Rituxan）のようなＢ細胞を枯渇させるタンパク質ベースの治療薬は、関節リウマチのような自己抗体によって生じる炎症性疾患に対して効果的である（Rastetter et al. Annu Rev Med 2004 55:477）。従って、Ｂ細胞活性化においてある役割を果たすプロテインキナーゼの阻害薬は、自己抗体産生のようなＢ細胞媒介性の疾患病理に対する有用な治療薬であるはずである。

【0004】

Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）を介するシグナル伝達は、成熟した抗体産生細胞への増殖及び分化を含む、一定範囲のＢ細胞応答を制御する。ＢＣＲは、Ｂ細胞活性に対する重要な調節点であり、そして、異常なシグナル伝達は、無秩序なＢ細胞の増殖及び病原性自己抗体の形成を引き起こし、これが多数の自己免疫性及び／又は炎症性疾患を招く恐れがある。ブルトン型チロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）は、膜近位のＢＣＲのすぐ下流にある、非ＢＣＲ関連キナーゼである。Ｂｔｋの欠如は、ＢＣＲシグナル伝達を遮断することが知られており、従って、Ｂｔｋの阻害は、Ｂ細胞媒介性の疾患過程を遮断する有用な治療アプローチであり得る。

【0005】

Ｂｔｋは、チロシンキナーゼのＴｅｃファミリーのメンバーであり、初期Ｂ細胞の発生ならびに成熟Ｂ細胞の活性化及び生存の重要な調節因子であることが知られている（Khan et al. Immunity 1995 3:283; Ellmeier et al. J. Exp. Med. 2000 192:1611）。ヒトにおけるＢｔｋの突然変異は、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症（ＸＬＡ）状態を招く（Rosen et al. New Eng. J. Med. 1995 333:431 及び Lindvall et al. Immunol. Rev. 2005 203:200 に概説されている）。これらの患者は免疫不全状態であり、Ｂ細胞の成熟障害、免疫グロブリン及び末梢Ｂ細胞レベルの減少、Ｔ細胞非依存性免疫応答の低下ならびにＢＣＲ刺激後のカルシウム動員の減衰を示す。

【0006】

また、自己免疫性及び炎症性疾患においてＢｔｋがある役割を果たしているという証拠が、Ｂｔｋ欠損マウスモデルによって提供された。全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の前臨床マウスモデルにおいて、Ｂｔｋ欠損マウスは、疾患進行の著しい改善を示す。加えて、Ｂｔｋ欠損マウスは、コラーゲン誘発関節炎に耐性を示す（Jansson and Holmdahl Clin. Exp. Immunol. 1993 94:459）。選択的Ｂｔｋ阻害薬は、マウスの関節炎モデルにおいて、用量依存的効果を示すことが実証された（Z. Pan et al., Chem. Med Chem. 2007 2:58-61）。

【0007】

Ｂｔｋはまた、疾患過程に関与し得るＢ細胞以外の細胞によっても発現される。例えば、Ｂｔｋは、肥満細胞によって発現され、そして、Ｂｔｋ欠損骨髄由来の肥満細胞は、抗原誘発脱顆粒障害を示す（Iwaki et al. J. Biol. Chem. 2005 280:40261）。研究は、アレルギー性喘息の発生に大いに関与する他の細胞タイプの調節におけるＢｔｋの重要な役割を明らかにした。特に、Ｂｔｋの欠如は、アレルギー性サイトカインの産生及び脱顆粒に関するＦｃεＲＩ依存性の肥満細胞応答を著しく損なう（Iyer et al. J. Biol. Chem. 2011 286:9503-13; Hata et al. J. Exp. Med. 1998 187:1235-47）。Ｂｔｋがヒト好塩基球のＩｇＥ媒介性活性化に必要であったことも示された（MacGlashan et al. Int. Immunopharmacol 2011 11:475-9）。これは、Ｂｔｋがアレルギー及び喘息のような病的な肥満細胞応答を処置するために有用であり得ることを示す。

【0008】

自然免疫シグナル伝達は、喘息の発症（Wu et al., Am J Respir Crit Care Med 2008; 178:1123-1129）とその疾患の急性増悪（Johnston et al., Br. Med. J. 1995; 310:1225-1229）におけるその潜在的役割の両方の観点から、喘息の自然歴において重要な役割を果たしているとの認識が高まっている。Toll様受容体（ＴＬＲ）のようなパターン認識受容体は、アレルゲン感作ならびに気道炎症、リモデリング及び過反応性において一定の役割を果たしていることが示された（Hammad et al Nat Med. 2009;15(4):410-6.）。Ｂｔｋは、これらの受容体の下流の先天的なシグナル伝達に関与する。例えば、Ｂｔｋは、インビトロにおけるＴＬＲシグナル伝達の完全活性化に必要であることが示されている（Liu et al., Nat Immunol. 2011; 12(5):416-24）。インビボでは、Ｂｔｋは、ＴＬＲ３シグナル伝達の開始に重要な役割を果たしていることが示されている（Lee et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2012; 109(15):5791-6）。これらのデータは、Ｂｔｋが、ＴＬＲ、特にＴＬＲ３媒介性の先天性免疫応答疾患過程を処置するために有用であり得ることを示している。

【0009】

また、Ｂｔｋ活性が欠如したＸＬＡ患者由来の単球は、刺激後にＴＮＦα産生の低下を示す（Horwood et al. J Exp Med 197:1603, 2003）。従って、ＴＮＦα媒介性の炎症は、小分子Ｂｔｋ阻害薬によってモジュレートされ得る。また、Ｂｔｋは、アポトーシスにおいて一定の役割を果たすことが報告されており（Islam and Smith Immunol. Rev. 2000 178:49）、従って、Ｂｔｋ阻害薬は、ある種のＢ細胞リンパ腫及び白血病の処置に有用であろう（Feldhahn et al. J. Exp. Med. 2005 201:1837）。

【0010】

発明の概要
本出願は、本明細書において後述されるような、Ｂｔｋ阻害性化合物６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オン、２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリル、及び６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン、その製剤、ならびにそれを用いて吸入することによる喘息の処置の方法を開示する。

【0011】

本出願は、哺乳動物における喘息又は関連する病態を処置又は改善する方法であって、薬理学的有効量の６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オンを吸入によって投与することを含む方法を提供する。

【0012】

本出願は、哺乳動物における喘息又は関連する病態を処置又は改善する方法であって、薬理学的有効量の２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリルを吸入によって投与することを含む方法を提供する。

【0013】

本出願は、哺乳動物における喘息又は関連する病態を処置又は改善する方法であって、薬理学的有効量の６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンを吸入によって投与することを含む方法を提供する。

【0014】

本出願は、哺乳動物における喘息又は関連する病態を処置又は改善する方法であって、薬理学的有効量の６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オン；２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリル；又は６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンを吸入によって投与することを含む方法を提供する。

【0015】

本出願は、吸入による喘息の処置における使用のための、化合物６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オン；２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリル；又は６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンを提供する。

【0016】

本出願は、吸入による喘息の処置のための医薬の調製のための、化合物６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オン；２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリル；又は６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンの使用を提供する。

【0017】

本出願は、吸入による喘息の処置のための、化合物６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オン；２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリル；又は６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンの使用を提供する。

【0018】

本出願は、微粒子化された６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オンと微粒子化乳糖とを含む製剤を提供する。

【0019】

本出願は、微粒子化された２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリルと微粒子化乳糖とを含む製剤を提供する。

【0020】

本出願は、微粒子化された６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンと微粒子化乳糖とを含む製剤を提供する。

【0021】

本出願は、微粒子化された６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オンと微粒子化乳糖；微粒子化された２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリルと微粒子化乳糖；又は微粒子化された６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンと微粒子化乳糖とを含む製剤を提供する。

【0022】

本出願は、式Ｉ：

【化1】

で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0023】

【図1】微粒子化の前後の粉末Ｘ線回折パターン。上の曲線は、微粒子化後である。下の曲線は、微粒子化前である。

【図2】ｍＯＶＡ３６用の化合物１の粒度分布。

【表1】

【表2】

【図3】ｍＯＶＡ４０用の化合物１の粒度分布。

【表3】

【表4】

【0024】

発明の詳細な説明
定義
語句「ａ」又は「an」実体は、本明細書において使用される場合、その実体の１つ又は複数を指し；例えば、「ａ」化合物は、１つもしくは複数の化合物又は少なくとも１つの化合物を指す。従って、用語「ａ」（又は「an」）、「１つ又は複数」、及び「少なくとも１つ」は、本明細書において互換的に使用され得る。

【0025】

本明細書において使用される場合、請求項の移行句で用いられるか請求項の本体で用いられるかに関わらず、用語「含む（comprise(s)）」及び「含んでいる（comprising）」は、非制限的な意味を有すると解釈されるものとする。すなわち、当該用語は、語句「少なくとも有する（having at least）」又は「少なくとも含む（including at least）」と同意義として解釈されるものとする。プロセスに関して使用されるとき、用語「含んでいる（comprising）」は、当該プロセスが少なくとも列挙された工程を含むが、追加の工程を含み得ることを意味する。化合物又は組成物に関して使用されるとき、用語「含む（comprising）」は、当該化合物又は組成物が少なくとも列挙された特徴又は成分を含むが、追加の特徴又は成分も含み得ることを意味する。

【0026】

本明細書において使用される場合、そうでないと具体的に指示しない限り、「又は（or）」という語は、「どちらか一方（either）／又は（or）」という「排他的」な意義ではなく、「及び／又は」という「包括的」な意義で使用される。

【0027】

任意の可変部が、本出願において用いられる又は特許請求される化合物を描写及び記載する任意の部分又は式に２回以上現れる場合、各出現におけるその定義は他の出現毎のその定義とは独立している。また、置換基及び／又は可変部の組み合わせは、そのような化合物が安定な化合物で生じる場合にのみ許容される。

【0028】

結合の末端における記号「＊」又は結合を通って描かれる「−−−」は、各々、官能基又は他の化学部分が、それが一部である分子の残りの部分へ結合する点を指す。従って、例えば：

【化2】

である。

【0029】

環系内に向かって描かれる結合（明確な頂点で連結される場合とは対照的に）は、当該結合が適切な環原子のいずれかに接続され得ることを示す。

【0030】

用語「場合による（optional）」又は「場合により（optionally）」は、本明細書において使用される場合、その後に続いて記載される事象又は状況が起こってもよいが、起こる必要はないこと、そして、その記載は、その事象又は状況が起こる場合と、起こらない場合とを含むことを意味する。例えば、「場合により置換されている（optionally substituted）」は、場合により置換されている部分が、水素原子又は置換基を含有し得ることを意味する。

【0031】

用語「about」は、本明細書において、約、その辺りに、ほぼ又は前後を意味するために使用される。用語「約」が数値範囲と併せて使用される場合、それは、記載される数値の上限及び下限を延長することによって範囲を変更する。一般に、用語「約」は、本明細書において、記載の数値の上下２０％の変動で数値を変更するために使用される。

【0032】

本明細書において使用される技術及び科学用語は、特に規定しない限り、本出願が関連する技術分野の当業者に一般的に理解される意味を有する。本明細書において、当業者に公知の種々の方法及び材料を参照する。薬理学の一般原理を記載する標準的な参考文献は、Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10^th Ed., McGraw Hill Companies Inc., New York (2001) を含む。当業者に公知の任意の好適な材料及び／又は方法は、本発明を実施する際に利用することができる。以下の記載及び実施例において参照する材料、試薬などは、特に断りのない限り、販売業者から入手することが可能である。

【0033】

Ｂｔｋの阻害薬
本出願は、本明細書において記載されるような、Ｂｔｋ阻害性化合物６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オン（化合物１）、２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリル（化合物２）、及び６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン（化合物３）、その製剤、それを用いて吸入することによる喘息の処置の方法、ならびにそれを用いて吸入することによる喘息の処置のための使用を開示する。

【0034】

本出願は、あらゆる種類、原因又は病因の喘息、特に、アトピー性喘息、非アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、アトピー性気管支ＩｇＥ媒介喘息、気管支喘息、本態性喘息、真性喘息、内因性喘息、外因性喘息、気管支炎性喘息、気腫性喘息、運動誘発性喘息、アレルゲン誘導性喘息、冷気誘導性喘息、職業性喘息、夜間喘息、季節性喘息、咳型喘息、慢性喘息、間欠性喘息、軽度の持続性喘息、中度の持続性喘息、重度の持続性喘息、好中球性喘息、好酸球性喘息、混合型喘息、顆粒球の関与が乏しい喘息（paucigranulocytic asthma）、高Ｔｈ２喘息（Th2-high asthma）、低Ｔｈ２喘息（Th2-low asthma）、小児喘息、細菌、真菌、原生動物又はウイルス感染によって引き起こされる病原体誘発性喘息、初期喘息、ゼーゼーと言うベビー症候群（wheezy baby syndrome）及び細気管支炎からなる群より選択されるメンバーである喘息の処置における使用のための化合物１、２及び３に関する。

【0035】

本出願は、哺乳動物における喘息又は関連する病態を処置又は改善する方法であって、薬理学的有効量の６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オンを吸入によって投与することを含む方法を提供する。

【0036】

本出願は、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オンが乾燥粉末として吸入によって投与される、上記方法を提供する。

【0037】

本出願は、哺乳動物における喘息又は関連する病態を処置又は改善する方法であって、薬理学的有効量の２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリルを吸入によって投与することを含む方法を提供する。

【0038】

本出願は、２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリルが乾燥粉末として吸入によって投与される、上記方法を提供する。

【0039】

本出願は、哺乳動物における喘息又は関連する病態を処置又は改善する方法であって、薬理学的有効量の６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンを吸入によって投与することを含む方法を提供する。

【0040】

本出願は、６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンが乾燥粉末として吸入によって投与される、上記方法を提供する。

【0041】

本出願は、哺乳動物における喘息又は関連する病態を処置又は改善する方法であって、薬理学的有効量の６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オン、２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリル、又は６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンを吸入によって投与することを含み、当該化合物のいずれかが乾燥粉末として吸入によって投与される方法を提供する。

【0042】

本出願は、乾燥粉末として吸入することによる哺乳動物における喘息又は関連する病態を処置又は改善する際に使用するための、化合物６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オン；２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリル；又は６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンを提供する。

【0043】

本出願は、乾燥粉末として吸入することによる哺乳動物における喘息又は関連する病態を処置又は改善するための医薬の調製のための、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オン；２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリル；又は６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンの使用を提供する。

【0044】

本出願は、乾燥粉末として吸入することによる喘息の処置のための、化合物６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オン；２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリル；又は６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンの使用を提供する。

【0045】

本出願は、微粒子化された６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オンと微粒子化乳糖とを含む製剤を提供する。

【0046】

本出願は、微粒子化された６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オンとLactohale LH 300とを含む製剤を提供する。

【0047】

本出願は、微粒子化された６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オンとRespitose ML 006とを含む製剤を提供する。

【0048】

本出願は、微粒子化された６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オンと微粒子化乳糖；微粒子化された６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オンとLactohale LH 300；又は微粒子化された６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オンとRespitose ML 006とを含む製剤を提供する。

【0049】

本出願は、哺乳動物における喘息又は関連する病態を処置又は改善する方法であって、薬理学的有効量の微粒子化された６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オンと微粒子化乳糖とを含む製剤を吸入によって投与することを含む方法を提供する。

【0050】

本出願は、微粒子化された６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オンと微粒子化乳糖とを含む製剤の使用であって、薬理学的有効量の当該製剤の吸入による哺乳動物における喘息又は関連する病態を処置又は改善するための使用を提供する。

【0051】

本出願は、微粒子化された２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリルと微粒子化乳糖とを含む製剤を提供する。

【0052】

本出願は、微粒子化された２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリルとLactohale LH 300とを含む製剤を提供する。

【0053】

本出願は、微粒子化された２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリルとRespitose ML 006とを含む製剤を提供する。

【0054】

本出願は、微粒子化された２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリルと微粒子化乳糖；微粒子化された２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリルとLactohale LH 300；又は微粒子化された２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリルとRespitose ML 006とを含む製剤を提供する。

【0055】

本出願は、哺乳動物における喘息又は関連する病態を処置又は改善する方法であって、薬理学的有効量の微粒子化された２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリルと微粒子化乳糖とを含む製剤を吸入によって投与することを含む方法を提供する。

【0056】

本出願は、微粒子化された２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリルと微粒子化乳糖とを含む製剤の使用であって、薬理学的有効量の当該製剤の吸入による哺乳動物における喘息又は関連する病態を処置又は改善するための使用を提供する。

【0057】

本出願は、微粒子化された６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンプロピオニトリルと微粒子化乳糖とを含む製剤を提供する。

【0058】

本出願は、微粒子化された６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンプロピオニトリルとLactohale LH 300とを含む製剤を提供する。

【0059】

本出願は、微粒子化された６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンとRespitose ML 006とを含む製剤を提供する。

【0060】

本出願は、微粒子化された６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンプロピオニトリルと微粒子化乳糖；微粒子化された６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンプロピオニトリルとおよそLactohale LH 300；又は微粒子化された６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンとRespitose ML 006とを含む製剤を提供する。

【0061】

本出願は、哺乳動物における喘息又は関連する病態を処置又は改善する方法であって、薬理学的有効量の微粒子化された６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンと微粒子化乳糖とを含む製剤を吸入によって投与することを含む方法を提供する。

【0062】

本出願は、微粒子化された６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンと微粒子化乳糖とを含む製剤の使用であって、薬理学的有効量の当該製剤の吸入による哺乳動物における喘息又は関連する病態を処置又は改善するための使用を提供する。

【0063】

本出願は、式Ｉ：

【化3】

で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。

【0064】

本出願は、化合物６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オン、２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリル、又は６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンのいずれか１つの化合物又はその製剤と、以下からなる群より選択される治療薬剤のいずれか１つ又は複数との組み合わせを提供する：
（ａ）５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）阻害薬又は５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）拮抗薬、
（ｂ）ＬＴＢ_４、ＬＴＣ_４、ＬＴＤ_４及びＬＴＥ_４の拮抗薬を含む、ロイコトリエン拮抗薬（ＬＴＲＡ）、
（ｃ）Ｈ１及びＨ３拮抗薬を含む、ヒスタミン受容体拮抗薬、
（ｄ）充血除去剤使用のための、α_１−及びα_２−アドレナリン受容体作動血管収縮交感神経様作用薬、
（ｅ）短期又は長期作用β_２作動薬、
（ｆ）ＰＤＥ阻害薬、例えば、ＰＤＥ３、ＰＤＥ４及びＰＤＥ５阻害薬
（ｇ）テオフィリン
（ｈ）クロモグリク酸ナトリウム、
（ｉ）非選択的及び選択的なＣＯＸ−１又はＣＯＸ−２阻害薬の両方であるＣＯＸ阻害薬（ＮＳＡＩＤ）、
（ｊ）経口及び吸入糖質コルチコステロイド、
（ｋ）内因性炎症性実体に対して活性なモノクローナル抗体、
（Ｉ）抗腫瘍壊死因子（抗ＴＮＦ−α）剤、
（ｍ）ＶＬＡ−４拮抗薬を含む、接着分子阻害薬、
（ｎ）キニン−Ｂ_１−及びＢ_２−受容体拮抗薬、
（ｏ）免疫抑制剤、
（ｐ）マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）の阻害薬、
（ｑ）タキキニンＮＫ_１、ＮＫ_２及びＮＫ_３受容体拮抗薬、
（ｒ）エラスターゼ阻害薬、
（ｓ）アデノシンＡ２ａ受容体作動薬、
（ｔ）ウロキナーゼの阻害薬、
（ｕ）ドーパミン受容体に作用する化合物、例えば、Ｄ２作動薬、
（ｖ）ＮＦκＢ経路のモジュレーター、例えば、ＩＫＫ阻害薬、
（ｗ）ｐ３８ＭＡＰキナーゼ又はｓｙｋキナーゼのような、サイトカインシグナル伝達経路のモジュレーター、
（ｘ）粘液溶解薬又は鎮咳薬として分類され得る薬剤、
（ｙ）抗生物質、
（ｚ）ＨＤＡＣ阻害薬、
（ａａ）ＰＩ３キナーゼ阻害薬、
（ｂｂ）ＣＸＣＲ２拮抗薬、及び
（ｃｃ）ムスカリン拮抗薬。

【0065】

本出願は、哺乳動物における喘息又は関連する病態を処置又は改善する方法であって、薬理学的有効量の上記組み合わせを吸入によって投与することを含む方法を提供する。

【0066】

本出願は、炎症性障害の処置のための医薬の製造における、上記化合物又は製剤のいずれかの使用を提供する。

【0067】

本出願は、自己免疫性障害の処置のための医薬の製造における、上記化合物又は製剤のいずれかの使用を提供する。

【0068】

本出願は、吸入による喘息の処置のための医薬の製造における、上記化合物又は製剤のいずれかの使用を提供する。

【0069】

本出願は、炎症性障害の処置のための、上記化合物又は製剤のいずれかの使用を提供する。

【0070】

本出願は、自己免疫性障害の処置のための、上記化合物又は製剤のいずれかの使用を提供する。

【0071】

本出願は、吸入による喘息の処置のための、上記化合物又は製剤のいずれかの使用を提供する。

【0072】

本出願は、炎症性障害の処置における使用のための、上記化合物又は製剤を提供する。

【0073】

本出願は、自己免疫障害の処置における使用のための、上記化合物又は製剤を提供する。

【0074】

本出願は、吸入による喘息の処置のための、上記化合物又は製剤を提供する。

【0075】

本出願は、本明細書において記載されるような、方法、製剤、化合物又は組成物を提供する。

【0076】

化合物及び調製
本出願に包含され、かつ本出願の範囲内にある代表的化合物の例は、以下の表に提供される。以下のこれらの実施例及び調製は、当業者が本発明をより明確に理解し、実施することができるようにするために提供される。これらは、本発明の範囲を限定するものとしてではなく、単にその例示的及び代表的なものとして考慮されるべきである。

【0077】

一般に、本出願において使用される命名法は、ＩＵＰＡＣ体系的命名法の作成のためのBeilstein Instituteコンピューターシステムである、AUTONOM（商標）v.4.0に基づいている。描かれた構造とその構造に与えられた名称に相違がある場合、描かれた構造が優先されるものとする。加えて、構造又は構造の一部分の立体化学が、例えば、太線又は破断線で示されていない場合は、その構造又は構造の一部分は、その立体異性体の全てを包含すると解釈されるものとする。

【0078】

化合物１、２及び３の発見
肺中で局所的にその作用を発揮する吸入薬の設計は、一般に、当該化合物が、強力であること及び全身曝露を最小限に抑えるための適正な薬物動態特性（すなわち、高いクリアランス及び低いアベイラビリティ）を有することが必要である（Tayab et al, Expert Opin. Drug Deliv. (2005), 2(3), 519-532）。乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）で送達することが意図される薬物については、好適な安定で結晶性の固体形態が同定される必要がある（Selby et al, Future Med. Chem. (2011), 3(13), 1679-1701）。加えて、低可溶性の化合物は、毒性研究において、望ましくない有害効果を伴う可能性を有する（Forbes et al, Adv Drug Del. Rev (2011), 63, 69-87）。これらの概念を踏まえて、RocheのＢｔｋ阻害薬コレクションをスクリーニングして、吸入のための好適な候補薬を同定した。

【0079】

最初に、Rocheの１９１８個のＢｔｋ化合物コレクションから、それらの高い効力（ＦＲＥＴ ＩＣ_５０＜５０nM及び／又はＨＷＢ ＩＣ_５０＜１μM）及び高い溶解度（ＬＹＳＡ溶解度＞２００μg/mL）に従って、３３個の化合物のセットを選択した。また、低いクリアランス（ラットＣｌ＜４０mL/分/kg又はラットミクロソームCLint＜２５μl/分/mgタンパク質）、ＧＳＨアッセイにおけるフラグ、又は化合物バンクにおける低いアベイラビリティ（＜１０mg）を有する化合物を除外した。

【0080】

第二に、３３個の化合物セットの追加データ（例えば、不足しているラットのＰＫデータ、結晶化度情報、刺激を受けた肺液中の溶解度）を取得した後、主にラットにおけるそれらの高いインビボクリアランス（ラットＣｌ＞４０mL/分/kg）に従って、１１個の化合物サブセットをさらに選択した。

【0081】

最後に、それらの結晶化度及び喘息に関連するインビトロアッセイにおける高い効力に基づき、潜在的な吸入候補薬として化合物１、２及び３を選択した。

【0082】

表Ｉは、本出願において開示される化合物の例を描いたものである：

【0083】

【表5】

【0084】

一般合成スキーム
本出願の化合物は、任意の従来手段によって調製することができる。これらの化合物を合成するための好適なプロセスは、実施例に提供される。一般に、本出願の化合物は、以下のスキームに従って調製することができる。

【0085】

化合物１は、スキーム１に示すように、市販の出発物質から７工程で調製した。

【0086】

【化4】

【0087】

化合物２は、スキーム２、３及び４に示すように、市販の出発物質から１９工程で調製した。

【0088】

【化5】

【0089】

【化6】

【0090】

【化7】

【0091】

化合物３は、スキーム５、６及び７に示すように、化合物Ａ及び市販の出発物質から１０工程で調製した。５−ブロモ−１−メチル−３−（５−（モルホリン−４−カルボニル）ピリジン−２−イルアミノ）ピリジン−２（１Ｈ）−オンＡの調製は、文献（国際公開公報第２０１１１４０４８８（Ａ１）号）に記載されている。

【0092】

【化8】

【0093】

【化9】

【0094】

【化10】

【0095】

医薬組成物及び投与
本出願の化合物は、吸入による送達のために好適な多様な投与剤形と担体で製剤化することができる。好ましい投与様式は、苦痛の程度及び活性成分に対する患者の応答に従って調整され得る簡便な一日投与レジメンを使用する、吸入を介する投与様式である。

【0096】

本出願の化合物（１つ又は複数）ならびにそれらの薬学的に使用可能な塩は、１つ又は複数の慣用の賦形剤、担体又は希釈剤と一緒に、医薬組成物及び単位剤形の形態にすることができる。医薬組成物及び単位剤形は、追加の活性化合物又は成分と共に又はそれを伴わず、従来の割合の従来の成分から構成することができ、単位剤形は、用いられるべき意図される一日用量範囲に見合った、任意の好適な有効量の活性成分を含有し得る。医薬組成物は、粉末として用いられ得る。

【0097】

用語「賦形剤」は、本明細書において使用される場合、一般に安全で、非毒性でかつ生物学的にもその他の面でも望ましくないことのない、医薬組成物を調製する際に有用である化合物を指し、動物用ならびにヒト用の薬学的用途に許容され得る賦形剤を含む。本出願の化合物は単独で投与することができるが、一般に、意図する投与経路及び標準的な薬務に関して選択される、１つ又は複数の好適な薬学的賦形剤、希釈剤又は担体との混合物で投与されるだろう。

【0098】

「薬学的に許容し得る」は、一般に安全で、非毒性でかつ生物学的にもその他の面でも望ましくないことのない、医薬組成物を調製する際に有用であるものを意味し、動物用ならびにヒト用の薬学的用途に許容され得るものを含む。

【0099】

また、活性成分の「薬学的に許容し得る塩」形態は、まず望ましい薬物動態特性を非塩形態においては存在していなかった活性成分に付与することができ、さらに体内でのその治療活性に関して活性成分の薬力学に正の影響をも与えることができる。化合物の「薬学的に許容し得る塩」という表現は、薬学的に許容され得かつ親化合物の所望の薬理学的活性を有する塩を意味する。そのような塩は、（１）無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸など）と形成される酸付加塩；又は有機酸（例えば、酢酸、フマル酸、コハク酸、マレイン酸、酒石酸、Ｌ（＋）−酒石酸、Ｄ（−）−酒石酸、クエン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸（naphtoic acid）、プロピオン酸、ｐ−トルエンスルホン酸（p-toluensulfonic acid）、ケイ皮酸、１，２−ジベンゼンアクリル酸（1,2-dibenzenacrylic acid）、パモ酸、ピロメリット酸、セバシン酸、メシチレンスルホン酸、ビフェニルジスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸、ステアリン酸、ラウリン酸、（＋）−カンファー酸、アスコルビン酸、グルタル酸など）と形成される酸付加塩；あるいは（２）親化合物中に存在する酸性プロトンが金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン又はアルミニウムイオンによって置換される場合；又は有機塩基（例えば、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミンなど）と配位する場合のいずれかで形成される塩を含む。

【0100】

別の態様において、本出願は、例えば乾燥粉末、エアロゾル、懸濁液又は液体組成物としての、吸入によって患者に投与するのに適合した剤形に関する。１つの実施態様において、本出願は、乾燥粉末としての、吸入によって患者に投与するのに適合した剤形に関する。さらなる実施態様において、本出願は、噴霧器を介する吸入によって患者に投与するのに適合した剤形に関する。

【0101】

吸入によって肺に送達するための乾燥粉末組成物は、典型的には、微粒子化粉末としての本出願の多形又は塩を、微粒子化粉末としての１つ又は複数の薬学的に許容し得る賦形剤と一緒に含む。乾燥粉末での使用のために特に適した薬学的に許容し得る賦形剤は、当業者に公知であり、乳糖、デンプン、マンニトールならびに単糖、二糖及び多糖を含む。微粒子化粉末は、例えば、微粒子化及び粉砕によって調製することができる。一般に、低サイズ化された（例えば、微粒子化された）化合物は、約１〜約１０ミクロンのＤ_（５０）値（例えば、レーザー回折を使用して測定される）によって定義することができる。

【0102】

乾燥粉末は、複数（未計量の用量）の医薬を乾燥粉末形態で保存するための好適なリザーバーを有する、リザーバー乾燥粉末吸入器（ＲＤＰＩ）を介して患者に投与することができる。ＲＤＰＩは、典型的には、リザーバーから送達位置への各医薬の用量を計量するための手段を含む。例えば、計量手段は計量カップを含み得、それはカップがリザーバーからの医薬で満たされ得る第一の位置から、計量された医薬用量が吸入のために患者に利用可能になる第二の位置まで移動可能である。

【0103】

代替的に、乾燥粉末は、多用量乾燥粉末吸入器（ＭＤＰＩ）での使用のために、カプセル（例えば、ゼラチン又はプラスチック）、カートリッジ又はブリスターパックで提供することができる。ＭＤＰＩは、複数の規定された用量（又はその一部）の医薬を含有する（又はそうでなければ担持する）多用量パック内に医薬が含まれた吸入器である。乾燥粉末がブリスターパックとして提供される場合、ブリスターパックは、医薬を乾燥粉末形態で格納するための複数のブリスターを含む。ブリスターは、典型的には、医薬がそこから容易に放出されるように規則的に配置される。例えば、ブリスターは、一般に、円盤型ブリスターパック上に円状に配置することができるか、又はブリスターは、例えばストリップ又はテープを含む形態の細長いものとすることができる。各カプセル、カートリッジ又はブリスターは、例えば、本出願の多形又は塩を２０μg〜１０mg含有し得る。

【0104】

エアロゾルは、本出願の多形又は塩を液化推進剤に懸濁又は溶解することによって形成することができる。好適な推進剤は、ハロカーボン類、炭化水素類及び他の液化ガスを含む。代表的な推進剤は、トリクロロフルオロメタン（推進剤１１）、ジクロロフルオロメタン（推進剤１２）、ジクロロテトラフルオロエタン（推進剤１１４）、テトラフルオロエタン（ＨＦＡ−１３４ａ）、１，１−ジフルオロエタン（ＨＦＡ−１５２ａ）、ジフルオロメタン（ＨＦＡ−３２）、ペンタフルオロエタン（ＨＦＡ−１２）、ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＡ−２２７ａ）、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロブタン、ペルフルオロペンタン、ブタン、イソブタン及びペンタンを含む。本出願の多形又は塩を含むエアロゾルは、典型的には、定量式吸入器（ＭＤＩ）を介して患者に投与されるだろう。そのようなデバイスは、当業者に公知である。

【0105】

エアロゾルは、製剤の物理安定性を改善する、バルブ性能を改善する、溶解度を改善する、又は風味を改善するために、界面活性剤、潤滑剤、共溶剤及び他の賦形剤のような、ＭＤＩと共に典型的に使用される追加の薬学的に許容し得る賦形剤を含有し得る。

【0106】

従って、本出願のさらなる態様として、本出願の多形又は塩と、推進剤としてのフルオロカーボン又は水素含有クロロフルオロカーボンとを、場合により界面活性剤及び／又は共溶剤と組み合わせて含む、薬学的エアロゾル製剤が提供される。

【0107】

本出願の別の態様によれば、推進剤が１，１，１，２−テトラフルオロエタン、１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロ−ｎ−プロパン及びそれらの混合物から選択される、薬学的エアロゾル製剤が提供される。

【0108】

本出願の製剤は、好適な緩衝剤の添加によって緩衝することができる。

【0109】

吸入器又は吹送器における使用のためのカプセル及びカートリッジ（例えばゼラチンの）は、本出願の多形又は塩と乳糖又はデンプンのような好適な粉末基剤との吸入用粉末混合物を含有させて製剤化することができる。各カプセル又はカートリッジは、一般に、本出願の多形又は塩を２０μg〜１０mg含有し得る。代替的に、本出願の多形又は塩は、乳糖のような賦形剤なしで提供することができる。

【0110】

本出願に係る局所組成物中の活性な多形又は塩の割合は、調製しようとする製剤の正確な種類に依存するが、一般に、０．００１〜１０重量％の範囲内であろう。一般に、調製品のほとんどの種類について、使用される割合は、０．００５〜１％、例えば０．０１〜０．５％の範囲内であろう。しかしながら、吸入又は吹送用の粉末では、使用される割合は、通常、０．１〜５％の範囲内であろう。

【0111】

エアロゾル製剤は、好ましくは、エアロゾルの各定用量すなわち「一吹き（puff）」が、本出願の多形又は塩を２０μg〜１０mg、好ましくは２０μg〜２０００μg、より好ましくは約２０μg〜５００μg含有するように配置される。投与は、１日１回又は１日数回、例えば２、３、４又は８回とすることができ、例えば１回当たり１、２又は３用量を与える。エアロゾルを用いた全１日用量は、１０μg〜１０mg、好ましくは２０μg〜２０００μgの範囲内であろう。吸入器又は吹送器中のカプセル及びカートリッジによって送達される全１日用量及び定用量は、一般に、エアロゾル製剤で送達される量の２倍であろう。

【0112】

懸濁エアロゾル製剤の場合では、微粒子（例えば、微粒子化された）薬物の粒径は、エアロゾル製剤の投与時に実質的に全ての薬物が肺へ吸入することができるようにすべきであり、従って、１００ミクロン未満、望ましくは２０ミクロン未満、特に１〜１０ミクロンの範囲、例えば１〜５ミクロン、より好ましくは２〜３ミクロンであろう。

【0113】

本出願の製剤は、例えば、超音波処理又は高剪断ミキサーを用いて、本出願の医薬及び多形又は塩を、適当な容器内で、選択された推進剤中に分散又は溶解させることによって調製することができる。当該プロセスは、望ましくは、制御された湿度条件下で行われる。

【0114】

本出願に係るエアロゾル製剤の化学及び物理安定性ならびに薬学的受容性は、当業者に周知の技術によって決定することができる。従って、例えば、成分の化学安定性は、例えば製品の長期保存後に、ＨＰＬＣアッセイによって決定することができる。物理安定性データは、他の従来の分析技術から、例えば、漏れ試験によって、バルブ送達アッセイ（作動毎の平均射出重量）によって、用量再現性アッセイ（作動毎の活性成分）及び噴霧分散分析によって得るとができる。

【0115】

本出願に係る懸濁エアロゾル製剤の安定性は、従来技術によって、例えば、バックライト散乱装置を使用して凝集粒度分布を測定することによって、又はカスケードインパクションによって若しくは「ツインインピンジャー」分析プロセスによって粒度分布を測定することによって測定することができる。本明細書において使用される場合、「ツインインピンジャー」アッセイについての言及は、British Pharmacopaeia 1988, pages A204-207, Appendix XVII C に定義されているように、「装置Ａを使用する加圧吸入において放出される用量の蓄積の決定（Determination of the deposition of the emitted dose in pressurized inhalations using apparatus A）」を意味する。そのような技術は、エアロゾル製剤の「呼吸可能な画分」を計算できるようにする。「呼吸可能な画分」を計算するために使用される１つの方法は、上述のツインインピンジャー法を使用して作動毎に送達される活性成分の総量に対するパーセンテージとして表される、作動毎に下方の衝突チャンバーにおいて回収される活性成分の量である「微粒子画分」を参照することによる方法である。

【0116】

用語「定量式吸入器」すなわちＭＤＩは、缶、缶を覆う固定キャップ、及びキャップ中に位置する製剤計量バルブを含むユニットを意味する。ＭＤＩシステムは、好適なチャネリングデバイスを含む。好適なチャネリングデバイスは、例えば、バルブアクチュエータと、医薬が充填キャニスターから計量バルブを介して患者の鼻又は口腔へ送達され得る際に通る円筒状又は円錐状の通路（例えば、マウスピースアクチュエータ）とを含む。

【0117】

ＭＤＩキャニスターは、一般に、使用される推進剤の蒸気圧に耐え得る容器、例えば、プラスチック、又はプラスチックでコーティングされたガラスボトル、又は好ましくは金属缶、例えば、場合により陽極酸化、ラッカーコーティング及び／又はプラスチックコーティングすることができるアルミニウム又はその合金（例えば、内部表面の一部又は全てが、場合により１つ又は複数の非フルオロカーボンポリマーと組み合わされた１つ又は複数のフルオロカーボンポリマーでコーティングされている、国際公開公報第９６／３２０９９号を参照することによって本明細書に組み入れられる）を含み、その容器は計量バルブで密閉されている。キャップは、超音波溶接、ネジ式継手（screw fitting）又は圧着を介して缶上に固定することができる。本明細書において教示されるＭＤＩは、当技術分野の方法によって調製することができる（例えば、Byron（上記）及び国際公開公報第９６／３２０９９号を参照されたい）。好ましくは、キャニスターには、キャップアセンブリが装着されており、ここで、薬物計量バルブはキャップ中に位置し、前記キャップは適当な位置で圧着されている。

【0118】

本出願の１つの実施態様において、缶の金属性の内部表面は、より好ましくは非フルオロポリマーとブレンドされている、フルオロポリマーでコーティングされる。本出願の別の実施態様において、缶の金属性の内部表面は、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）とポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）のポリマーブレンドでコーティングされる。本出願のさらなる実施態様において、缶の金属性の内部表面全体は、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）とポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）のポリマーブレンドでコーティングされる。計量バルブは、作動毎に所定量の製剤を送達し、かつバルブを通る推進剤の漏出を防止するためのガスケットを組み込むように設計される。ガスケットは、例えば、低密度ポリエチレン、クロロブチル、ブロモブチル、ＥＰＤＭ、黒色及び白色のブタジエン−アクリロニトリルゴム、ブチルゴムならびにネオプレンのような任意の好適なエラストマー材料を含み得る。好適なバルブは、エアロゾル産業において周知の製造業者、例えば、Valois, France （例えば、ＤＦ１０、ＤＦ３０、ＤＦ６０）、Bespak pic, UK （例えば、ＢＫ３００、ＢＫ３５７）及び3M-Neotechnic Ltd, UK（例えば、Spraymiser（商標））から市販されている。様々な実施態様において、ＭＤＩはまた、特に限定されないが、ＭＤＩを保存及び含有するためのオーバーラップパッケージ（米国特許第６，１１９，８５３号；第６，１７９，１１８号；第６，３１５，１１２号；第６，３５２，１５２号；第６，３９０，２９１号；及び第６，６７９，３７４号に記載されているものを含む）、ならびに用量計数ユニット（例えば、特に限定されないが、米国特許第６，３６０，７３９号及び第６，４３１，１６８号に記載されているもの）のような他の構造体と併せて使用することができる。

【0119】

薬学的エアロゾル製造の当業者に周知である従来のバルク製造法及び機構が、充填キャニスターの工業生産のための大規模バッチの調製に用いられ得る。従って、例えば、懸濁エアロゾル製剤を調製するための１つのバルク製造法においては、計量バルブをアルミニウム缶上に圧着させ、空のキャニスターを形成する。微粒子医薬を投入槽に加え、液化推進剤を任意の賦形剤と一緒に投入槽を通じて製造槽に圧送充填する。薬物懸濁液を混合した後に充填機に再循環させ、次に、薬物懸濁液のアリコートを計量バルブを通じてキャニスターに充填する。溶液エアロゾル製剤を調製するためのバルク製造法の１つの例として、計量バルブをアルミニウム缶上に圧着させ、空のキャニスターを形成する。液化推進剤を任意の賦形剤及び溶解した医薬と一緒に、投入槽を通じて製造槽に圧送充填する。

【0120】

ある代替プロセスでは、液化製剤のアリコートを、製剤が確実に気化しないように十分に冷却された条件下で開口したキャニスターに加え、次に、計量バルブをキャニスター上に圧着させる。

【0121】

典型的には、薬学的用途に調製されたバッチでは、各充填キャニスターは、放出試験の前に、秤量され、バッチ番号でコード化され、保存用トレイにパッケージングされる。本出願の多形又は塩を含む懸濁剤及び液剤はまた、噴霧器を介して患者に投与することができる。噴霧のために利用される液剤又は懸濁剤は、水、食塩水、アルコール類又はグリコール類、例えば、エタノール、イソプロピルアルコール、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど又はそれらの混合物のような、任意の薬学的に許容し得る液体とすることができる。食塩溶液は、投与後に薬理活性をほとんど示さないか又は全く示さない塩を利用する。有機塩（例えば、アルカリ金属又はアンモニウムハロゲン塩、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム）、又は有機塩（例えば、カリウム、ナトリウム及びアンモニウム塩）、又は有機酸（例えば、アスコルビン酸、クエン酸、酢酸、酒石酸など）のいずれもがこの目的のために使用することができる。

【0122】

他の薬学的に許容し得る賦形剤が懸濁剤又は液剤に加えられ得る。本出願の多形又は塩は、無機酸（例えば、塩酸、硝酸、硫酸及び／又はリン酸）；有機酸（例えば、アスコルビン酸、クエン酸、酢酸及び酒石酸など）、錯化剤（例えば、ＥＤＴＡ又はクエン酸及びその塩）；又は抗酸化剤（例えば、ビタミンＥ又はアスコルビン酸のような抗酸化剤）の添加によって安定化することができる。これらは、本出願の多形又は塩を安定化させるために、単独で又は一緒に使用することができる。塩化ベンザルコニウム又は安息香酸及びその塩のような保存剤が加えられ得る。界面活性剤は、特に懸濁剤の物理安定性を改善するために加えられ得る。これらは、レシチン、ジオクチルスルホコハク酸二ナトリウム、オレイン酸及びソルビタンエステルを含む。

【0123】

適応症及び処置の方法
本明細書において記載されるように、化合物１、２及び３は、ブルトン型チロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）を阻害する。上流キナーゼによるＢｔｋの活性化は、ホスホリパーゼ−Ｃγの活性化をもたらし、これが前炎症性メディエーターの放出を刺激する。化合物１、２及び３は、喘息の処置に有用である。本出願は、化合物１、２又は３を、吸入による送達のための喘息の処置に有用な薬学的に許容し得る担体、賦形剤又は希釈剤と混合して含有する、医薬組成物又は製剤をさらに開示する。

【0124】

本出願は、本明細書において記載されるような化合物１、２又は３の吸入を介する、Ｂｔｋ活性の阻害に応答する喘息を有する患者を処置する方法を提供する。

【0125】

本出願は、吸入を介するＢｔｋ活性の阻害に応答する喘息を有する患者を処置するための、本明細書において記載されるような化合物１、２又は３の使用を提供する。

【0126】

本出願は、吸入を介するＢｔｋ活性の阻害に応答する喘息を有する患者を処置するための医薬の製造のための、本明細書において記載されるような化合物１、２又は３の使用を提供する。

【0127】

本出願は、吸入を介するＢｔｋ活性の阻害に応答する喘息を有する患者を処置する際に使用するための、本明細書において記載されるような化合物１、２又は３を提供する。

【0128】

本出願は、本明細書において上述される発明を提供する。

【0129】

併用処置
誤解を避けるために、本明細書における「処置」への言及は、治癒的、緩和的及び予防的な処置への言及を含む。

【0130】

本出願の別の実施態様によれば、本出願の化合物１、２若しくは３又はその組成物はまた、特に限定されないが、（ｉ）気管支収縮、（ｉｉ）炎症、（ｉｉｉ）アレルギー、（ｉｖ）気道リモデリング、（ｖ）息切れ、咳のような徴候及び症状を含む、病態生理学的に関連する疾患過程の処置などのいくつかの特に望ましい治療最終結果を得るために患者に共投与される１つ又は複数の追加の治療薬剤との組み合わせとして使用することができる。

【0131】

本明細書において使用されるように、用語「共投与」、「共投与された」及び「組み合わせて」は、本出願の化合物１、２又は３及び１つ又は複数の他の治療薬剤について言及する場合、以下を意味し、指し、かつ含むことを意図する：
・ 処置を必要とする患者への本出願の化合物１、２又は３と治療薬剤のそのような組み合わせの同時投与（そのような成分が単一剤形に一緒に製剤化されており、前記成分を前記患者へ実質的に同時に放出する場合）
・ 処置を必要とする患者への本出願の化合物１、２又は３と治療薬剤のそのような組み合わせの実質的に同時投与（そのような成分が別個の剤形に互いに別々に製剤化されており、前記患者によって実質的に同時に摂取されると前記成分が前記患者へ実質的に同時に放出される場合）
・ 処置を必要とする患者への本出願の化合物１、２又は３と治療薬剤のそのような組み合わせの連続投与（そのような成分が別個の剤形に互いに別々に製剤化されており、前記患者によって各投与間で有意な時間間隔をあけて連続的な時間で摂取されると前記成分が前記患者へ実質的に異なる時間で放出される場合）；及び
・ 処置を必要とする患者への本出願の化合物１、２又は３と治療薬剤のそのような組み合わせの連続投与（そのような成分が単一剤形に一緒に製剤化されており、制御された様式で前記成分を放出すると、前記成分が前記患者によって同じ及び／又は異なる時間で同時に、連続的に及び／又は重複的に投与される（各部分は同じ経路又は異なる経路のいずれかによって投与することができる）場合）。

【0132】

化合物１、２若しくは３、又はその薬学的に許容し得る塩、その誘導形態又は組成物と組み合わせて使用することができる他の治療薬剤の好適な例は、特に限定されないが、以下を含む：
（ａ）５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）阻害薬又は５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）拮抗薬、
（ｂ）ＬＴＢ_４、ＬＴＣ_４、ＬＴＤ_４及びＬＴＥ_４の拮抗薬を含む、ロイコトリエン拮抗薬（ＬＴＲＡ）、
（ｃ）Ｈ１及びＨ３拮抗薬を含む、ヒスタミン受容体拮抗薬、
（ｄ）充血除去剤使用のための、α_１−及びα_２−アドレナリン受容体作動血管収縮交感神経様作用薬、
（ｅ）短期又は長期作用β_２作動薬、
（ｆ）ＰＤＥ阻害薬、例えば、ＰＤＥ３、ＰＤＥ４及びＰＤＥ５阻害薬
（ｇ）テオフィリン
（ｈ）クロモグリク酸ナトリウム、
（ｉ）非選択的及び選択的なＣＯＸ−１又はＣＯＸ−２阻害薬の両方であるＣＯＸ阻害薬（ＮＳＡＩＤ）、
（ｊ）経口及び吸入糖質コルチコステロイド、
（ｋ）内因性炎症性実体に対して活性なモノクローナル抗体、
（Ｉ）抗腫瘍壊死因子（抗ＴＮＦ−α）剤、
（ｍ）ＶＬＡ−４拮抗薬を含む、接着分子阻害薬、
（ｎ）キニン−Ｂ_１−及びＢ_２−受容体拮抗薬、
（ｏ）免疫抑制剤、
（ｐ）マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）の阻害薬、
（ｑ）タキキニンＮＫ_１、ＮＫ_２及びＮＫ_３受容体拮抗薬、
（ｒ）エラスターゼ阻害薬、
（ｓ）アデノシンＡ２ａ受容体作動薬、
（ｔ）ウロキナーゼの阻害薬、
（ｕ）ドーパミン受容体に作用する化合物、例えば、Ｄ２作動薬、
（ｖ）ＮＦκＢ経路のモデュレーター、例えば、ＩＫＫ阻害薬、
（ｗ）ｐ３８ＭＡＰキナーゼ又はｓｙｋキナーゼのような、サイトカインシグナル伝達経路のモジュレーター、
（ｘ）粘液溶解薬又は鎮咳薬として分類され得る薬剤、
（ｙ）抗生物質、
（ｚ）ＨＤＡＣ阻害薬、
（ａａ）ＰＩ３キナーゼ阻害薬、
（ｂｂ）ＣＸＣＲ２拮抗薬、及び
（ｃｃ）ムスカリン拮抗薬。

【0133】

本出願は、化合物１、２又は３と以下との組み合わせを提供する：
− Ｈ３拮抗薬、
− β_２作動薬、
− ムスカリン拮抗薬
− ＰＤＥ４阻害薬、
− ステロイド類、特に、糖質コルチコステロイド、
− アデノシンＡ２ａ受容体作動薬、
− ｐ３８ＭＡＰキナーゼ又はｓｙｋキナーゼのような、サイトカインシグナル伝達経路のモデュレーター、又は
− ＬＴＢ_４、ＬＴＣ_４、ＬＴＤ_４及びＬＴＥ_４の拮抗薬を含む、ロイコトリエン拮抗薬（ＬＴＲＡ）。

【0134】

本出願は、化合物１、２又は３と以下との組み合わせを提供する：
− 糖質コルチコステロイド、特に、全身性副作用が低減された吸入糖質コルチコステロイド（プレドニゾン、プレドニゾロン、フルニソリド、トリアムシノロンアセトニド、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ブデソニド、プロピオン酸フルチカゾン、シクレソニド及びフランカルボン酸モメタゾンを含む）、又は
− β２作動薬（特に、サルブタモール、テルブタリン、バンブテロール、フェノテロール、サルメテロール、ホルモテロール、ツロブテロール及びそれらの塩を含む）、又は
− ムスカリン拮抗薬（臭化チオトロピウム、臭化イプラトロピウム、臭化ウメクリジニウム、グリコピロレート、臭化オキシトロピウム、臭化アクリジウム（aclidium bromide）、臭化ダロトロピウム及びＰＦ−３６３５６５９を含む）。

【0135】

本出願は、喘息の処置における使用のための、上述されるような組み合わせを提供する。

【0136】

本出願は、喘息の処置のための、上述されるような組み合わせの使用を提供する。

【0137】

実施例
一般的な略語
一般的に使用される略語は、以下を含む：アセチル（Ａｃ）、アゾ−ビス−イソブチリルニトリル（ＡＩＢＮ）、気圧（Ａｔｍ）、９−ボラビシクロ［３．３．１］ノナン（９−ＢＢＮ又はＢＢＮ）、２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（ＢＩＮＡＰ）、tert−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ピロ炭酸ジ−tert−ブチル又はｂｏｃ無水物（ＢＯＣ_２Ｏ）、ベンジル（Ｂｎ）、ブチル（Ｂｕ）、ケミカルアブストラクト登録番号（Chemical Abstracts Registration Number）（ＣＡＳＲＮ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ又はＺ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、三フッ化ジエチルアミノ硫黄（ＤＡＳＴ）、ジベンジリデンアセトン（ｄｂａ）、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノン−５−エン（ＤＢＮ）、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１，２−ジクロロエタン（ＤＣＥ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）、アゾジカルボン酸ジエチル（ＤＥＡＤ）、アゾジカルボン酸ジ−イソ−プロピル（ＤＩＡＤ）、水素化ジ−イソ−ブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ又はＤＩＢＡＬ−Ｈ）、ジ−イソ−プロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、１，１’−ビス−（ジフェニルホスフィノ）エタン（ｄｐｐｅ）、１，１’−ビス−（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（ｄｐｐｆ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ）、２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）、エチル（Ｅｔ）、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、エタノール（ＥｔＯＨ）、２−エトキシ−２Ｈ−キノリン−１−カルボン酸エチルエステル（ＥＥＤＱ）、ジエチルエーテル（Ｅｔ_２Ｏ）、エチルイソプロピルエーテル（ＥｔＯｉＰｒ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート酢酸（ＨＡＴＵ）、酢酸（ＨＯＡｃ）、１−Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、イソ−プロパノール（ＩＰＡ）、塩化イソプロピルマグネシウム（ｉＰｒＭｇＣｌ）、ヘキサメチルジシラザン（ＨＭＤＳ）、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣＭＳ）、リチウムヘキサメチルジシラザン（ＬｉＨＭＤＳ）、メタ−クロロペルオキシ安息香酸（ｍ−ＣＰＢＡ）、メタノール（ＭｅＯＨ）、融点（ｍｐ）、ＭｅＳＯ_２−（メシル又はＭｓ）、メチル（Ｍｅ）、アセトニトリル（ＭｅＣＮ）、ｍ−クロロ過安息香酸（ＭＣＰＢＡ）、質量スペクトル（ｍｓ）、メチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、メチルテトラヒドロフラン（ＭｅＴＨＦ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）、ｎ−ブチルリチウム（ｎＢｕＬｉ）、Ｎ−カルボキシ無水物（ＮＣＡ）、Ｎ−クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、クロロクロム酸ピリジニウム（ＰＣＣ）、ジクロロ−（（ビス−ジフェニルホスフィノ）フェロセニル）パラジウム（ＩＩ）（Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（Ｐｄ（ＯＡｃ）_２）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３）、ジクロム酸ピリジニウム（ＰＤＣ）、フェニル（Ｐｈ）、プロピル（Ｐｒ）、イソ−プロピル（ｉ−Ｐｒ）、ポンド／平方インチ（ｐｓｉ）、ピリジン（ｐｙｒ）、１，２，３，４，５−ペンタフェニル−１’−（ジ−tert−ブチルホスフィノ）フェロセン（Ｑ−Ｐｈｏｓ）、室温（周囲温度、ｒｔ又はＲＴ）、sec−ブチルリチウム（ｓＢｕＬｉ）、tert−ブチルジメチルシリル又はｔ−ＢｕＭｅ_２Ｓｉ（ＴＢＤＭＳ）、フッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ）、トリエチルアミン（ＴＥＡ又はＥｔ_３Ｎ）、２，２，６，６−テトラメチルピペリジン１−オキシル（ＴＥＭＰＯ）、トリメチルシリルエトキシメチル（ＳＥＭ）、トリフラート又はＣＦ_３ＳＯ_２−（Ｔｆ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、１，１’−ビス−２，２，６，６−テトラメチルヘプタン−２，６−ジオン（ＴＭＨＤ）、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、トリメチルシリル又はＭｅ_３Ｓｉ（ＴＭＳ）、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（ＴｓＯＨ又はｐＴｓＯＨ）、４−Ｍｅ−Ｃ_６Ｈ_４ＳＯ_２−又はトシル（Ｔｓ）、及びＮ−ウレタン−Ｎ−カルボキシ無水物（ＵＮＣＡ）。アルキル部分と共に使用される場合、接頭語ノルマル（ｎ）、イソ（ｉ−）、第二級（sec−）、第三級（tert−）及びネオを含む従来の命名法はそれらの慣用の意味を有する（J. Rigaudy and D. P. Klesney, Nomenclature in Organic Chemistry, IUPAC 1979Pergamon Press, Oxford.）。

【0138】

一般条件
本出願の化合物は、市販の出発物質から開始して、当業者に公知の一般的な合成技術及び手順を利用することによって調製することができる。以下の概説は、そのような化合物を調製するための好適な反応スキームである。さらなる例示については、特定の実施例に見いだすことができる。

【0139】

特定の略語
ｂｏｃ tert−ブトキシカルボニル
ＣＨ_２Ｃｌ_２ ジクロロメタン
Ｃｓ_２ＣＯ_３ 炭酸セシウム
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＨＡＴＵ Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ヒューニッヒ塩基（Hunig's Base） Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＨＣｌ 塩化水素
ＬＣ−ＭＳ 液体クロマトグラフィー質量分析
ＨＰＬＣ 高圧液体クロマトグラフィー
ＭｅＯＨ メチルアルコール
ＭｇＳＯ_４ 硫酸マグネシウム
ｎＢｕＬｉ ｎ−ブチルリチウム
ＮａＣｌ 塩化ナトリウム
Ｎａ_２ＣＯ_３ 炭酸ナトリウム
ＮａＯＭｅ ナトリウムメトキシド
Ｎａ_２ＳＯ_４ 硫酸ナトリウム
ＮＨ_４ＯＨ 水酸化アンモニウム
ＮＭＰ １−メチル−２−ピロリジノン
ＮＭＲ 核磁気共鳴
Ｐｄ（ＯＡｃ）_２ 酢酸パラジウム（ＩＩ）
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＬＣ 薄層クロマトグラフィー
ＴＭＳＣｌ 塩化トリメチルシリル。

【0140】

一般的な実験詳細
試薬は、Aldrich、Oakwood、Matrix又は他の販売業者から購入し、さらに精製することなく使用した。加熱にマイクロ波照射を使用する反応は、Personal Chemistry Emrys Optimizer System又はCEM Discovery Systemのいずれかを使用して実施した。数ミリグラム〜数グラムスケールの精製は、シリカゲルフラッシュカラムの溶離などの当業者に公知の方法によって実施し；また、場合によっては、数グラムのシリカゲルが予め充填されたディスポーザブルカラム（RediSep）を使用してCombiFlash systemで溶離させることによる、分取フラッシュカラム精製も行った。また、Biotage（商標）及びISCO（商標）は、中間体の精製のために本出願において使用され得るフラッシュカラム装置である。

【0141】

化合物の同定及び純度の確認のために、ＬＣ／ＭＳ（液体クロマトグラフィー／質量分析）スペクトルを以下のシステムを使用して記録した。質量スペクトルの測定のために、当該システムは、Micromass Platform II 分光計：ＥＳイオン化（ポジティブモード）（質量範囲：１５０〜１２００）から構成される。同時クロマトグラフィー分離は、以下のＨＰＬＣシステムで達成した：ES Industries Chromegabond WR C-18 3u 120Å（３．２×３０mm）カラムカートリッジ；移動相Ａ：水（０．０２％ＴＦＡ）及び相Ｂ：アセトニトリル（０．０２％ＴＦＡ）；勾配１０％Ｂ〜９０％Ｂで３分間；１分間の平衡時間；流速２mL／分。

【0142】

また、後述される化合物を、当業者に周知の方法を使用した逆相ＨＰＬＣによって精製した。場合によっては、Shimadzu分取ＨＰＬＣシステム及びLeap自動注入装置に取り付けられたGilson 215コレクターを制御するPE Sciex 150 EX Mass Specを使用して、分取ＨＰＬＣ精製を実施した。ＬＣ／ＭＳ検出を使用して陽イオン検出で流れてくる溶離液から化合物を回収した：Ｃ−１８カラム（２．０×１０cm、２０mL／分で溶離）からの化合物の溶離は、適切な線形勾配モードを使用して、溶媒（Ａ）０．０５％ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ及び溶媒（Ｂ）０．０３５％ＴＦＡ／アセトニトリルで１０分かけて実施した。ＨＰＬＣシステムへの注入のために、粗試料をメタノール、アセトニトリル及びＤＭＳＯの混合物に溶解した。

【0143】

化合物は、Brukerの４００MHz ＮＭＲ分光計を使用した^１Ｈ−ＮＭＲ、又はＬＣＭＳのいずれかによって特性決定した。

【0144】

本出願の化合物は、公知の技術に従って合成することができる。以下の実施例及び参考文献は、本出願の理解を助けるために提供される。しかしながら、実施例は、本出願を限定することを意図するものではなく、その真の範囲は、添付の特許請求の範囲において明記される。実施例中の最終生成物の名称は、Isis AutoNom 2000を使用して生成した。

【0145】

調製例
化合物１の調製
工程１． ６−ニトロ−３’，６’−ジヒドロ−２’Ｈ−［３，４’］ビピリジニル−１’−カルボン酸tert−ブチルエステルの調製

【化11】

【0146】

方法Ａ
５００mLの丸底フラスコ中、５−ブロモ−２−ニトロピリジン（６．５６ｇ、３２．３mmol）及び４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−５，６−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ）−カルボン酸tert−ブチル（１０ｇ、３２．３mmol）をジオキサン（１６０ml）と合わせて、明黄色の溶液を得た。Ｃｓ_２ＣＯ_３（２１．１ｇ、６４．７mmol）及び水（６ml）を加えた。反応混合物をアルゴンで脱気した後、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（２．２７ｇ、３．２３mmol）を加えた。反応混合物を８０℃まで加熱し、１５時間撹拌した。反応混合物を５００mLのＨ_２Ｏに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２００mL）で抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２２０ｇ、ヘキサン中の１０％〜４０％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、ピンクの固体を与えた。得られた固体をエーテルでトリチュレートして、所望の生成物を固体（４．８ｇ）として与えた。トリチュレーションからの濾液と第一のクロマトグラフィーからの混合した画分を合わせ、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２２０ｇ、ヘキサン中の２０％〜４０％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、追加の生成物（２．２ｇ）を与えた。¹H NMR (400 MHz, CHCl₃-d) δ ppm 1.52 (s, 9 H) 2.59 (d, J=1.52 Hz, 2 H) 3.72 (t, J=5.56 Hz, 2 H) 4.19 (d, J=3.03 Hz, 2 H) 6.35 (br. s., 1 H) 7.97 (dd, J=8.46, 2.40 Hz, 1 H) 8.27 (d, J=8.34 Hz, 1 H) 8.67 (d, J=2.27 Hz, 1 H)。

【0147】

方法Ｂ
機械撹拌器、加熱マントル、冷却器、温度計を備えた１２．０Ｌの三口フラスコに、５−ブロモ−２−ニトロピリジン（３２２ｇ、１．５９mol）、炭酸カリウム（６５８ｇ、４．７６mol）、４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−５，６−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ）−カルボン酸tert−ブチル（５００ｇ、１．６２mol）、１，４−ジオキサン（３．２４kg、３．１４ｌ）及び水（３１４ｇ、３１４ml）を投入した。その溶液を真空引きし、次にＮ_２を放出することによって３回脱気した。強いＮ_２流下で、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ｉｉ）ジクロリド（１１．１ｇ、１５．９mmol）を加えた。反応混合物を８０℃で５時間撹拌した。加熱を停止し、反応混合物を周囲温度で一晩撹拌した。その混合物を４０℃まで加熱し、次に、木炭（２００ｇ、１６．７mol）を加えた。その混合物を４０℃で１時間撹拌した。その混合物を３０℃まで冷却し、次に、セライト（Celite）（商標）に通して濾過し、大量のジオキサンで洗浄した。合わせた濾液及び洗浄物に、過酸化水素（５０．０ｇ、４５．０ml、４４１mmol）を加え、その混合物を周囲温度で１時間撹拌した。帯赤色の溶液を室温で４８時間保存し、次に、低容量溶液になるまで真空下５０℃で濃縮した（約３２２６ｇの重量）。その溶液を１２Ｌの三口フラスコに移し、Ｎ_２下、室温で一晩保存した。その溶液を４０℃まで加熱し、次に、水（３．３８kg、３．３８ｌ、１８８mol）にゆっくり加えた。固体が晶出した。加熱を停止し、混合物を室温まで放冷した。混合物を８℃まで冷却し、２時間撹拌した。固体を濾過し、１：２ ジオキサン／水、続いて、水で洗浄した。固体を真空によって３０分間乾燥させた。その固体を乾燥トレイに移し、次に、真空オーブン中、５０℃／２６インチＨｇでＮ_２抽気しながら一定重量まで乾燥させて、４６０ｇ（９５％）の所望の生成物を与えた。¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.43 (s, 9 H) 2.55 (d, J=1.89 Hz, 2 H) 3.47 - 3.73 (m, 2 H) 4.08 (d, J=2.64 Hz, 2 H) 6.57 (br. s., 1 H) 8.20 - 8.26 (m, 1 H) 8.27 - 8.33 (m, 1 H) 8.77 (d, J=1.89 Hz, 1 H)。

【0148】

工程２． ６−アミノ−３’，４’，５’，６’−テトラヒドロ−２’Ｈ−［３，４’］ビピリジニル−１’−カルボン酸tert−ブチルエステルの調製

【化12】

【0149】

方法Ａ
５００mLの丸底フラスコ中、ＥｔＯＨ（３００ml）及び酢酸エチル（７５ml）中の４−（６−ニトロピリジン−３−イル）−５，６−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ）−カルボン酸tert−ブチル（４．９ｇ、１６．０mmol）をパラジウム担持炭素（１．３２ｇ、１．２４mmol）と合わせた。反応混合物を水素で２回排気し、次に、水素充填バルーンを付けて一晩撹拌した。ＬＣ／ＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。反応混合物を窒素でパージし、セライトに通して濾過した。そのセライトケーキをＥｔＯＡｃで数回洗浄した。その無色の合わせた濾液及び洗浄物にＣＨ_２Ｃｌ_２を加え、その溶液を蒸発乾固した。再度ＣＨ_２Ｃｌ_２を加え、その溶液を真空下で濃縮して、定量的収率の所望の生成物を与えた。(M+H)⁺ = 278 m/e。

【0150】

方法Ｂ
反応器の前処理：２０Ｌの水素化反応器に、１０ｇのＰｄ／Ｃ及び８Ｌの酢酸エチルを投入した。その混合物を６０℃で４時間撹拌した。加熱を停止し、懸濁液を室温まで冷ました。その懸濁液を流し出した。２０Ｌの水素化反応器に、酢酸エチル（２．３kg、２．５６ｌ）中の４−（６−ニトロピリジン−３−イル）−５，６−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ）−カルボン酸tert−ブチル（４６０ｇ、１．５１mol）の懸濁液を投入した。ＥｔＯＨ（２．０２kg、２．５６ｌ）を使用して、懸濁液を含有するフラスコからの残渣を水素化反応器にすすぎ入れた。次に、Ｐｄ／Ｃ（１６０ｇ、７５．４mmol）を加えた。その懸濁液をＮ_２で３回、そしてＨ_２で３回脱気した後、反応物を５００psiの水素下、６０℃で３時間撹拌した。反応器の内容物を流し出し、セライト（商標）に通して濾過し、大量の酢酸エチルで洗浄した。合わせた濾液及び洗浄物を、冷蔵室にて、Ｎ_２下で一晩保存し、次に、真空下４０℃で濃縮乾固して、灰色の固体を得た。ＭＴＢＥ（１．５３kg、２．０６ｌ、１７．３mol）を加え、その溶液を真空下で低容量まで濃縮して、７００mlの溶媒を除去した。Ｎ−ヘプタン（７０５ｇ、１．０３ｌ、７．０４mol）を加え、その溶液を真空下で濃縮して、４００mlの溶媒を除去した。再度Ｎ−ヘプタン（７０５ｇ、１．０３ｌ、７．０４mol）を加え、その溶液を真空下で濃縮して、移動性のスラリーを得た。そのスラリーを室温で３０分間撹拌し、次に、９℃まで冷却し、そこで４５分間撹拌した。次に、その懸濁液を濾過し、冷ヘプタンで洗浄した。そのオフホワイトの固体を乾燥トレイに移し、真空オーブン中、３０℃／２６インチＨｇでＮ_２抽気しながら週末にわたり乾燥させた。その濾液から３８１ｇ（９１％）の所望の生成物が与えられた。¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.18 - 1.53 (m, 11 H) 1.66 (d, J=11.33 Hz, 2 H) 2.76 (br. s., 2 H) 4.04 (d, J=12.46 Hz, 2 H) 5.67 (s, 2 H) 6.38 (d, J=8.69 Hz, 1 H) 7.25 (dd, J=8.50, 2.45 Hz, 1 H) 7.76 (d, J=2.27 Hz, 1 H)。

【0151】

工程３． ６−（６−クロロ−２−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−ピリダジン−４−イルアミノ）−３’，４’，５’，６’−テトラヒドロ−２’Ｈ−［３，４’］ビピリジニル−１’−カルボン酸tert−ブチルエステルの調製

【化13】

【0152】

方法Ａ
４−ブロモ−６−クロロ−２−メチルピリダジン−３（２Ｈ）−オン（３．５９ｇ、１６．０mmol）、４−（６−アミノピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチル（４．４５ｇ、１６．０mmol）、４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（６９６mg、１．２mmol）及び炭酸セシウム（１８．３ｇ、５６．２mmol）をアルゴン雰囲気下でジオキサン（１５０ml）に懸濁した。最後に、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（５５１mg、６０２μmol）を加えた。反応混合物を９０℃で一晩加熱した。その反応混合物をセライトで濾過し、そのセライトケーキをジオキサンで数回洗浄した。合わせた濾液及び洗浄物を真空下で濃縮した。得られた固体をＥｔＯＡｃでトリチュレートし、エーテルで洗浄し、真空オーブン中、５０℃で一晩乾燥させて、４．５７ｇの所望の生成物を白色の固体として与えた。合わせた濾液及び洗浄物を蒸発乾固し、ＣＨ_２Ｃｌ_２（４ml）に溶解し、次に、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１２０ｇ Analogixカラム、ヘキサン中の２０％〜５０％ＥｔＯＡｃで２０分間かけて）によって精製して、追加の５８２mgを与えた。総収率（５．１５ｇ、１２．３mmol、収率７６．４％）。(M+H)⁺ = 420 m/e; ¹H NMR (400 MHz, CHCl₃-d) δ ppm 1.50 (s, 9 H) 1.54 - 1.69 (m, 3 H) 1.83 (d, J=13.64 Hz, 2 H) 2.67 (tt, J=12.38, 3.66 Hz, 1 H) 2.83 (t, J=13.14 Hz, 2 H) 3.82 (s, 3 H) 6.89 (d, J=8.59 Hz, 1 H) 7.51 (dd, J=8.46, 2.40 Hz, 1 H) 8.25 (d, J=2.27 Hz, 1 H) 8.27 (br. s., 1 H) 8.30 (s, 1 H)。

【0153】

方法Ｂ
機械撹拌器、Ｎ_２バブラー及び温度計を備えた１２Ｌの三口フラスコに、４−（６−アミノピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチル（３８１ｇ、１．３７mol）、続いて、ＴＨＦ（２．３５kg、２．６７ｌ）を投入した。これら試薬が溶液になるまで反応混合物を撹拌した。ＴＨＦ中の２．５Ｍナトリウムtert−ペントキシド（５７７ml、１．４４mol）をその溶液に滴下した。温度が２２℃から２５℃に変化した。その反応混合物を３０分間撹拌した。ＴＨＦ（１．１７kg、１．３３ｌ）中の４−ブロモ−６−クロロ−２−メチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（３２２ｇ、１．４４mol）の溶液を総容量１６４０mLで調製した。８２０mLの４−ブロモ−６−クロロ−２−メチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オンの溶液（０．５当量）を、４−（６−アミノピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチルに３０分間かけてゆっくり加えた（水浴にいくらの氷を加えることによって反応物の温度を３０℃未満に維持しながら）。その反応混合物を３０分間以上撹拌した。ＴＨＦ中の２．５Ｍナトリウムtert−ペントキシド（２７５ml、６８７mmol）を反応混合物に加え、次に、その混合物をさらに２０分間撹拌した。４１０mL超の４−ブロモ−６−クロロ−２−メチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オンの溶液（０．２５当量）を、温度を３０℃未満に維持しながらゆっくり加え、次に、その反応混合物を２０分間撹拌した。ＴＨＦ中の２．５Ｍナトリウムtert−ペントキシド（１３７ml、３４３mmol）をその反応混合物に加え、次に、その混合物をさらに２０分間撹拌した。最終４１０mLの４−ブロモ−６−クロロ−２−メチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オンの溶液（０．２５当量）を、温度を３０℃未満に維持しながら加え、次に、その反応混合物をさらに２０分間撹拌した。ＴＨＦ中の２．５Ｍナトリウムtert−ペントキシド（１３７ml、３４３mmol）をその反応混合物に加え、次に、その赤色の混合物をさらに１時間２０分間撹拌した。クエン酸（２６４ｇ、１．３７mol）を水（１．１４kg、１．１４ｌ）に溶解することによって調製した６００mlのクエン酸の溶液（約２０％溶液）を、温度を３０℃未満に維持しながらその反応物にゆっくり加え、反応物のｐＨを４．６にした。その反応混合物が黄色の懸濁液に変化した。水（８００ml）を加えた。その混合物を５０℃まで加熱し、２時間撹拌した。その反応混合物を一晩かけて室温まで冷まし、撹拌しやすい良好な黄色の懸濁液を得た。その懸濁液を２０ＬのBuchiフラスコに移し、真空下４０℃で濃縮して、約３．２Ｌの溶媒を除去した。そのスラリーを室温で３時間撹拌し、次に、テーブルトップロートを使用して固体を濾過し、水で洗浄した。そのオフホワイトの固体を吸引によって１時間乾燥させた。その固体を、真空オーブン中、６０℃／２６インチＨｇでＮ_２抽気しながら一定重量まで乾燥させて、４８８ｇ（８４％）の所望の生成物を得た。¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.42 (s, 9 H) 1.50 (dd, J=12.65, 3.59 Hz, 2 H) 1.74 (d, J=11.33 Hz, 2 H) 2.58 - 2.96 (m, 3 H) 3.68 (s, 3 H) 4.07 (d, J=12.09 Hz, 2 H) 7.48 (d, J=8.69 Hz, 1 H) 7.67 (dd, J=8.50, 2.45 Hz, 1 H) 8.27 (d, J=2.27 Hz, 1 H) 8.33 (s, 1 H) 9.62 (s, 1 H)。

【0154】

工程４． ６−クロロ−２−メチル−４−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−２Ｈ−ピリダジン−３−オンの調製

【化14】

【0155】

方法Ａ
４−（６−（６−クロロ−２−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロピリダジン−４−イルアミノ）ピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチル（２．０ｇ、４．７６mmol）を、ギ酸（４０．０ml）と３７％ホルムアルデヒド（８０．０ml）の溶媒混合物に溶解した。反応が完了したことがＬＣＭＳ分析によって決定されるまで、その反応混合物を７０℃で一晩撹拌し、次に、周囲温度まで冷ました。水を加え、得られた水性混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２で洗浄し、ＣＨ_２Ｃｌ_２層を廃棄した。水層のｐＨを固体Ｋ_２ＣＯ_３でｐＨ＝１２に慎重に調整すると、固体が沈殿した。その固体を濾過によって回収し、水で洗浄し、真空オーブン中、５０℃で７２時間かけて乾燥させて、１．４ｇの所望の生成物を与えた。(M+H)⁺ = 334 m/e. ¹H NMR (300 MHz, CHCl₃-d) δ ppm 1.84 (dd, J=8.31, 3.02 Hz, 4 H) 1.99 - 2.19 (m, 2 H) 2.35 (s, 3 H) 2.42 - 2.68 (m, 1 H) 3.02 (d, J=12.09 Hz, 2 H) 3.81 (s, 3 H) 6.86 (d, J=8.31 Hz, 1 H) 7.52 (dd, J=8.50, 2.46 Hz, 1 H) 8.16 - 8.33 (m, 3 H)。

【0156】

方法Ｂ
機械撹拌器、Ｎ_２バブラー、温度計、冷却器及び加熱マントルを備えた５．０Ｌの三口フラスコに、４−（６−（６−クロロ−２−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロピリダジン−４−イルアミノ）ピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチル（４８８ｇ、１．１６mol）を投入した。このフラスコに、ギ酸（２．３４kg、１．９５ｌ）を加えた。反応混合物が暗色の溶液になった。その溶液を５５℃まで加熱し、１時間撹拌した。脱保護が完了したことがＨＰＬＣによって判断された。３７％ホルムアルデヒド水溶液（４７２ｇ、４３３ml、５．８１mol）をその混合物に加えた。その反応混合物を８５℃まで加熱し、３時間撹拌した。加熱を停止し、その反応混合物を一晩かけて室温まで放冷し、次に、真空下７０℃で濃縮して、暗色の油状物を得た。その油状物を１２Ｌの三口フラスコに移し、そこにＩＰＡ（５９３ｇ、７６１ml）を加えた。固体が晶出した。その固体に２０％Ｋ_２ＣＯ_３水溶液（ｐＨ８．３にするために全部で２６５０ml）を加えると、塩基の添加の間に混合物は溶液になり、次に、ｐＨ７で、再び白色の懸濁液になった。その懸濁液を６５℃で３時間加熱し、次に、一晩かけて周囲温度までゆっくり冷ました。テーブルトップロートを使用して固体を濾過によって回収した。その白色の固体を水で洗浄した。その固体をヘプタンで洗浄し、吸引によって乾燥させ、次に、真空オーブン中、７５℃／２６インチＨｇでＮ_２抽気しながら一晩さらに乾燥させて、３６７ｇ（９４％）の所望の生成物を与えた。¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.57 - 1.76 (m, 4 H) 1.94 (td, J=11.24, 3.59 Hz, 2 H) 2.18 (s, 3 H) 2.38 - 2.47 (m, 1 H) 2.85 (d, J=11.33 Hz, 2 H) 3.68 (s, 3 H) 7.48 (d, J=8.69 Hz, 1 H) 7.58 - 7.71 (m, 1 H) 8.26 (d, J=2.64 Hz, 1 H) 8.33 (s, 1 H) 9.61 (s, 1 H)。

【0157】

工程５． ２−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−４−ヨード−ピリジン−３−カルバルデヒドの調製

【化15】

【0158】

方法Ａ
１Ｌの丸底フラスコ中、６−tert−ブチル−８−フルオロフタラジン−１（２Ｈ）−オン（５．６ｇ、２５．４mmol）をＴＨＦ（３００ml）と合わせて、無色の溶液を得た。水素化ナトリウム（１．１２ｇ、２８．０mmol）を加えた。その反応混合物を周囲温度で１０分間撹拌した。２−フルオロ−４−ヨードニコチンアルデヒド（７．０２ｇ、２８．０mmol）を加え、その反応混合物を周囲温度で１時間撹拌した。反応が完了したことがＬＣＭＳ分析によって決定された。その反応混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌでクエンチした。その反応混合物を２００mLのＨ_２Ｏに注ぎ、ＣＨ_２Ｃｌ_２で３回抽出した。有機層をブラインで洗浄し、次に、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空下で濃縮した。得られた鮮やかな黄色の固体を濾過用ロートに移し、フラスコを少量のＥｔＯＡｃで２回洗浄して、その固体をロートへ完全に移した。液体は濾過した。その固体をＥｔ_２Ｏで２回トリチュレートし、真空下で乾燥させて、所望の生成物をクリーム色の固体（８．０９ｇ、１７．９mmol、収率７０．５％）として与えた。(M+H)⁺ = 452 m/e. ¹H NMR (400 MHz, CHCl₃-d) δ ppm 1.44 (s, 9 H) 7.49 - 7.54 (m, 1 H) 7.54 (d, J=1.77 Hz, 1 H) 8.03 (d, J=5.31 Hz, 1 H) 8.30 (d, J=2.53 Hz, 1 H) 8.37 (d, J=5.31 Hz, 1 H) 9.98 (s, 1 H)。

【0159】

方法Ｂ
５０Ｌのジャケット付反応器に、６−tert−ブチル−８−フルオロフタラジン−１（２Ｈ）−オン（７９９ｇ、３．６３mol）及びＴＨＦ（５．２８kg、６．００ｌ）を投入した。この黄色の懸濁液を、温度を＜２９℃に維持しながら、ＴＨＦ中の１Ｍ ＬｉＨＭＤＳ溶液（４．００ｌ、４．００mol）で３０分間かけて滴下処理した。添加が完了した後、その褐色の溶液を約２２℃で４０分間撹拌した。その反応物を６０℃まで加熱した。反応物が温度に達したら、ＴＨＦ（５．２８kg、６．００ｌ）中の２−フルオロ−４−ヨードニコチンアルデヒド（１．００kg、３．９９mol）のゆっくりとした添加を開始した。注記：アルデヒド溶液の添加から約１０分で、橙色−赤色の懸濁液が生じた。添加が完了したら、反応物は暗褐色の溶液になった。その反応物を６５℃で１５分間加熱した。加熱を「オフ」に切り替えた。

【0160】

その反応物を室温まで放冷し、室温で一晩かき混ぜた。水（６Ｌ）をその反応混合物に一度に加えると、発熱（２０〜２６℃）が観察された。その混合物を約５０分間かき混ぜた。ＴＨＦの大部分（１７Ｌ）を真空下（浴温度：４２℃）で除去して、橙色の懸濁液を生成した。２−プロパノール（４．６８kg、６．００ｌ）をフラスコに加え、混合物を６０℃で１５分間加熱した。その反応混合物をかき混ぜながら一晩かけて室温まで冷ました。その生成物を粗目のフリット付きテーブルトップロートに通して濾過し、１．６ＬのＩＰＡ（３．２Ｌ）で２回洗浄し、吸引によって乾燥させた。湿潤ケーキ（２．１５５kgの橙色の固体）を、真空オーブン中、約２７インチＨｇ／５０℃で窒素抽気しながら乾燥させて、１．３１kg（７９％）の所望の生成物を明褐色の固体として得た。

【0161】

工程６． ２−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−３−カルバルデヒド

【化16】

【0162】

方法Ａ
６−クロロ−２−メチル−４−（５−（１−メチルピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イルアミノ）ピリダジン−３（２Ｈ）−オン（１．４ｇ、４．１９mmol）、ビス（ピナコラト）ジボロン（１．１７ｇ、４．６１mmol）及び酢酸カリウム（１．２３ｇ、１２．６mmol）をジオキサン（６０ml）に懸濁した。その反応混合物をアルゴン下で脱気した。Ｘ−ＰＨＯＳ（３００mg、６２９μmol）及び酢酸パラジウム（ＩＩ）（４７．１mg、２１０μmol）を加え、その反応混合物を、窒素雰囲気下、１００℃（外部温度）で１時間撹拌した。アリコートをサンプリングして、それをメタノールに溶解し、出発塩化物の消失とボロン酸（Ｍ＋１＝３４４）の同時出現を観測しながら、しかし脱塩素化副生成物（Ｍ＋１＝３００）の量が最小限に抑えられるように注意することによって、反応をＬＣＭＳにより注意深くモニタリングした。１時間後に反応が完了した。加熱浴の温度を８０℃まで下げて、フラスコを加熱浴から引き上げたが、撹拌は続けた。２−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−４−ヨードニコチンアルデヒド（１．８９ｇ、４．１９mmol）及び炭酸カリウム（１．７４ｇ、１２．６mmol）、続いて、水（６．００ml）を加えた。トリシクロヘキシルホスフィン（１１８mg、４１９μmol）及びビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（１２１mg、２１０μmol）を加えた。その反応混合物を激しく撹拌しながら８０℃で加熱して、２時間撹拌し、次に、その反応混合物を周囲温度まで冷ました。その反応混合物を水に注ぎ、穏やかに振盪しながらＥｔＯＡｃ（２×）に抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ抽出物をブラインで洗浄した。水相をＣＨ_２Ｃｌ_２で３回抽出した。ＣＨ_２Ｃｌ_２及び酢酸エチル層を合わせて、合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空下で濃縮した。その粗物質を５０mlのＣＨ_２Ｃｌ_２中でスラリーにし、２００mlのＥｔ_２Ｏを加えた。その固体を濾過し、Ｅｔ_２Ｏで洗浄した。第二のバッチの固体が沈殿し、濾過によって回収して、エーテルで洗浄した。両方のバッチは、所望の生成物と一致した類似のＬＣＭＳ及び^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを有し、これらを合わせて１．６２ｇの生成物を与えた。(M+H)⁺ = 623 m/e. ¹H NMR (300 MHz, CHCl₃-d) δ ppm 1.42 (s, 9 H) 1.88 (br. s., 3 H) 2.39 (br. s., 3 H) 2.46 - 2.64 (m, 1 H) 3.05 (br. s., 2 H) 3.89 (s, 3 H) 6.91 (d, J=8.31 Hz, 1 H) 7.38 - 7.66 (m, 3 H) 7.76 (d, J=5.29 Hz, 1 H) 8.19 - 8.38 (m, 3 H) 8.81 (s, 1 H) 8.87 (d, J=5.29 Hz, 1 H) 10.11 (s, 1 H)。

【0163】

方法Ｂ
反応器に、６−クロロ−２−メチル−４−（５−（１−メチルピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イルアミノ）ピリダジン−３（２Ｈ）−オン（４５０ｇ、１．３５mol）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ（１，３，２−ジオキサボロラン）（５１３ｇ、２．０２mol）、トリシクロヘキシルホスフィン（２２．７ｇ、８０．９mmol）、Ｐｄ（ｄｂａ）_２（２３．３ｇ、４０．４mmol）及び酢酸カリウム（２６５ｇ、２．７mol）を投入した。２−メチルテトラヒドロフラン（１０．０ｌ）を真空で加えた。１０で設定して撹拌を開始した。真空引きして、反応器を窒素で２回充填し戻した。反応混合物を、Ｎ_２雰囲気下、７８℃（内部）／８０℃（周囲（cir.））まで加熱した。その反応混合物を一晩加熱した。その反応器を１０℃まで冷却した。反応温度が４０℃以下まで下がったら、温度を３０℃に設定した。２−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−４−ヨードニコチンアルデヒド（５７８ｇ、１．２８mol）、炭酸カリウム（３７３ｇ、２．７mol）及び水（１．００ｌ）を反応混合物に加えた。その反応物を７４℃（内部温度）／７８℃（周囲）まで加熱し、穏やかな還流を達成した。その反応混合物を還流で一晩加熱した。その反応混合物を４０℃（周囲）／３８℃（反応）まで冷却した。その反応混合物に、水（３．００ｌ）中の（Ｒ）−２−アセトアミド−３−メルカプトプロパン酸（３３．０ｇ、２０２mmol）溶液を加えた。その反応混合物を３８℃（内部）／４０℃（周囲）で３時間撹拌した。水（６Ｌ）を加え、次に、９．５ＬのＭｅＴＨＦを蒸留した（周囲温度、４０℃以下）。撹拌しながら混合物の温度を２３℃に維持して、ＩＰＡ（３Ｌ）を加えた。一晩かけて非常にゆっくり濾過した後、固体を濾過によって回収した（Chem glassの５０Ｌフィルター）。反応器に、Ｈ_２Ｏ（５Ｌ）を投入した。次に、そのフィルターケーキを反応器からの水で洗浄した。濾過をゆっくり続けた。そのフィルターケーキをＩＰＡ（６Ｌ）で洗浄し、その間、フィルターが小さな粒子で完全に覆われた。その物質を大きなテーブルトップフィルターに移し、次に、ＩＰＡによる濾過を続けた。その固体をｎヘプタンで洗浄した。小さな粒径を有する生成物のいくらかが濾過されて得られ、そのようにしてその後も生成物が回収された。その固体を一晩風乾して、完全に乾燥されていない標記化合物（７９７ｇ）を得たが、これを工程６の方法Ｂでそのまま使用した。

【0164】

工程６． ６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−｛３−ヒドロキシメチル−４−［１−メチル−５−（１’−メチル−１’，２’，３’，４’，５’，６’−ヘキサヒドロ−［３，４’］ビピリジニル−６−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−２Ｈ−フタラジン−１−オン

【化17】

【0165】

方法Ａ
２５０mLの丸底フラスコ中、２−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−４−（１−メチル−５−（５−（１−メチルピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−３−イル）ニコチンアルデヒド（１．６２ｇ、２．６mmol）を脱水ＣＨ_２Ｃｌ_２（４５ml）及び脱水ＭｅＯＨ（２０mL）と合わせて、褐色の溶液を得た。水素化ホウ素ナトリウム（１７７mg、４．６８mmol）を加え、反応物を周囲温度で１時間撹拌した後、飽和ＮＨ_４Ｃｌでクエンチした。その反応混合物を５０mLのＨ_２Ｏで希釈し、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３×１５０mL）で抽出した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空下で濃縮した。その粗物質をフラッシュクロマトグラフィー［シリカゲル、８０ｇ、ＣＨ_２Ｃｌ_２中の０％〜５０％（６０：１０：１ ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＭｅＯＨ：ＮＨ_４ＯＨ）］によって精製して、わずかに不純な泡状物を与えた。その泡状物を３０mlのＥｔ_２Ｏ及び１０mlのＥｔＯＡｃ中でスラリーにし、次に、重い撹拌子を用いてゆっくり１時間撹拌すると、白色の固体が生じた。その固体を濾過によって回収し、真空下５０℃で４８時間乾燥させて、所望の生成物を白色の固体（８８０mg）として与えた。(M+H)⁺ = 625 m/e. ¹H NMR (300 MHz, CHCl₃-d) δ ppm 1.44 (s, 9 H) 1.87 (br. s., 3 H) 2.15 (br. s., 2 H) 2.39 (br. s., 3 H) 2.52 (t, J=7.74 Hz, 1 H) 3.04 (br. s., 2 H) 3.82 - 3.91 (m, 1 H) 3.93 (s, 3 H) 4.46 - 4.63 (m, 2 H) 6.93 (d, J=8.69 Hz, 1 H) 7.42 - 7.59 (m, 3 H) 7.64 (d, J=4.91 Hz, 1 H) 8.15 - 8.39 (m, 3 H) 8.70 (s, 1 H) 8.73 (d, J=4.91 Hz, 1 H)。

【0166】

方法Ｂ
２−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−４−（１−メチル−５−（５−（１−メチルピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−３−イル）ニコチンアルデヒド（７９７ｇ、１．２８mol）を、ＤＣＭ（７．３６kg、５．５８ｌ）及びＭｅＯＨ（１．２６kg、１．５９ｌ）に溶解した。その溶液を、室温で一晩かけて、活性炭（１０重量％）、セライト（商標）（１０重量％）及びQuadraPure TU（５重量％）で処理した。その混合物をセライトパッドに通して濾過した。その溶液に、温度を１５〜１８℃の間に維持しながら、ＮａＢＨ_４（２４．２ｇ、６４０mmol）を６回に分けて１時間かけて加えた。その反応物を水（５Ｌ）でクエンチした。その混合物を３０分間撹拌し、次に、相を分離した。水層をＤＣＭ（２Ｌ）で１回抽出し、仕上げ濾過して（polish filtered）、合計９ＬのＤＣＭ溶液を得た。ＤＣＭを真空下３０℃で蒸留し、同時に、ＭＥＫ（５Ｌ）及びＭｅＯＨ（５Ｌ）を溶液に加えた。ＤＣＭの大部分を除去した後、温度を４０℃まで昇温させ、ＤＣＭが残っていないことを確認した（４０℃にてＭｅＯＨで追い出した）；生成物がこの温度で晶出した。温度を８０℃まで昇温させた。追加のＭＥＫ（５Ｌ）を加えた。ＭｅＯＨを真空下８０℃で除去した。その混合物を８０℃で３時間加熱し、次に、一晩かけて室温までゆっくり冷ました。固体を濾過し、ＭＥＫで洗浄し、真空下で週末にわたり乾燥させて、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−（３−（ヒドロキシメチル）−４−（１−メチル−５−（５−（１−メチルピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−３−イル）ピリジン−２−イル）フタラジン−１（２Ｈ）−オン（４７１ｇ、７５４mmol、収率５８．９％）を得た。ＤＳＣは、多形の混合物（無水物とＭｅＯＨ溶媒和物）を示し、依然としてボラン錯体（３％）が残っていた。

【0167】

再結晶
６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−（３−（ヒドロキシメチル）−４−（１−メチル−５−（５−（１−メチルピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−３−イル）ピリジン−２−イル）フタラジン−１（２Ｈ）−オン（５４０ｇ、８６４mmol）（先のバッチ＋上記方法Ｂに記載されるものと同様に調製された３つのより小さいバッチからの物質）を１２Ｌの丸底フラスコに投入し、ＭｅＯＨ（２．１４kg、２．７ｌ）及びメチルエチルケトン（５．４ｌ）を加えた。３％のボラン錯体を分解するために、その懸濁液を３時間かけて６４〜６６℃（内部）まで加熱し、穏やかなＭｅＯＨ還流を与えた。３時間後、ボラン錯体がわずか約１％だけ残った。その溶液からＭｅＯＨを留去した（温度を６８〜７０℃（内部）／８０〜８５℃（加熱マントル）まで昇温させ、ＭｅＯＨを追加のＭＥＫで追い出した）。再度、６８〜７０℃（内部）で１０時間、次に、室温までゆっくり冷ました。そのスラリーを７０〜７５℃で５〜６時間加熱すると、ＤＳＣは、混合物の形態を示した。そのスラリーを再度７０〜７５℃（内部）／９０〜９５℃（加熱マントル）まで加熱し、ＭｅＯＨを完全に除去した（さらなるＭＥＫを加えた）。内部温度が７６〜７７℃に達した後、蒸留を止め（最終ＭＥＫ、６容量（約３Ｌ））、そのスラリーを７５℃（内部）で１０時間寝かし；次に、ゆっくり室温まで冷ました。ＤＳＣによるその形態の確認後、物質を濾過によって回収し、ＭＥＫ（４００mL）で洗浄し、真空下５０℃で一晩乾燥させた。ＮＭＲは、０．２３％の残留ＭＥＫを示した。その固体を乾燥皿に移し、真空下５０℃で一晩乾燥させて、９９．４４％のＨＰＬＣ純度及び１５ppmの残留Ｐｄを有する標記化合物（５０３ｇ、８０５mmol、収率６２９３．１％）を得た。¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.38 (s, 9 H) 1.52 - 1.77 (m, 4 H) 1.87 - 2.01 (m, 2 H) 2.18 (s, 3 H) 2.33 - 2.46 (m, 1 H) 2.84 (d, J=11.33 Hz, 2 H) 3.79 (s, 3 H) 4.47 (dd, J=15.86, 5.29 Hz, 2 H) 4.76 - 4.88 (m, 1 H) 7.45 (d, J=8.69 Hz, 1 H) 7.58 - 7.66 (m, 2 H) 7.77 (dd, J=13.22, 1.51 Hz, 1 H) 7.89 (d, J=1.89 Hz, 1 H) 8.18 (d, J=2.27 Hz, 1 H) 8.53 (d, J=2.64 Hz, 1 H) 8.56 (s, 1 H) 8.63 (d, J=4.91 Hz, 1 H) 9.45 (s, 1 H)。

【0168】

化合物１のフマル酸塩：フマル酸６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−（３−（ヒドロキシメチル）−４−（１−メチル−５−（５−（１−メチルピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−３−イル）ピリジン−２−イル）フタラジン−１（２Ｈ）−オンの調製

【化18】

【0169】

６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−（３−（ヒドロキシメチル）−４−（１−メチル−５−（５−（１−メチルピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−３−イル）ピリジン−２−イル）フタラジン−１（２Ｈ）−オン（６３９mg、１．０２mmol）をアセトン（１５ml）と混合した。そのスラリーにフマル酸（１２５mg、１．０７mmol）を加えた。その溶液を１時間撹拌した。生じた固体を濾過し、次に、真空オーブン中、５０℃で一晩真空下に置いた。黄色の固体を回収し（７１８．０mg）、還流アセトン（２５０ml）から再結晶して、フマル酸６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−（３−（ヒドロキシメチル）−４−（１−メチル−５−（５−（１−メチルピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−３−イル）ピリジン−２−イル）フタラジン−１（２Ｈ）−オン（７１８mg、９６９μmol、収率９４．８％）をほぼ非晶質の固体として得た。(M+H)⁺ = 625 m/e。

【0170】

化合物２の調製
工程１． ２，４，６−トリフルオロ−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンズアミドの調製

【化19】

【0171】

塩化カルシウム乾燥管を備えたフラスコに、２，４，６−トリフルオロ安息香酸（２５ｇ、１４２mmol）を投入し、脱水ジクロロメタン（２２０mL）に取った。その物質を０℃まで冷却し（氷浴）、これにシリンジで塩化オキサリル（１３．２ml；１５６mmol）を加えた。次に、脱水ジメチルホルムアミド（１０４mg；１．４２mmol）を加え、適度なバブリングが観察された。１５分後、冷却浴を取り外し、混合物を５時間激しく撹拌した。揮発性物質を揮散させ（ロータリーエバポレーター）、残留物を脱水ジクロロメタン（１５０ml）に取り、０℃まで冷却した（氷浴）。この溶液に、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール（２７．２ml、２８４mmol）をゆっくりとした滴下によって加えた。添加が完了した後、冷却浴を取り外し、混合物を一晩かけて周囲温度まで温めた。上述したような反応を同じスケールで繰り返して、合わせた反応生成物を以下のように後処理した：不均一混合物を吸引濾過し、ジクロロメタン（およそ３００ml）ですすいだ。この第一の濾液を取り置きし、濾過された固体をゆっくりとした重力濾過を使用してジクロロメタン（５００ml）ですすいだ（２回目）。第二の濾過からのジクロロメタンを揮散させて、非常に純粋な生成物を白色の結晶性固体（２２．９ｇ）として提供した。第一の濾過からのジクロロメタン溶液を揮散して、不純な褐色の残留物を提供した。この物質をジクロロメタン（２００ml）及び水（２５０ml）に取り、分液ロート中で振盪した。有機相を回収し、水相をジクロロメタン（２×１２０ml）で逆抽出した。ジクロロメタン相を合わせて、乾燥させ（硫酸マグネシウム）、濾過して、揮散させた。粗残留物を温ジクロロメタン／ヘキサンからのトリチュレーションによって精製して、追加の所望の生成物を黄色の固体（４３．８ｇ）として提供した。(M+H)⁺ = 246 m/e。

【0172】

工程２． ４，４−ジメチル−２−（２，４，６−トリフルオロ−フェニル）−４，５−ジヒドロ−オキサゾールの調製

【化20】

【0173】

脱水ジクロロメタン（４００mL）中の２，４，６−トリフルオロ−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンズアミド（４３．８ｇ、１７７．１mmol）の溶液に、塩化チオニル（５８．９ml、４１５mmol）をゆっくりとした滴下によって２５分間かけて加えた（添加を通して反応フラスコを部分的に氷浴に浸漬した）。添加が完了した後、その物質を周囲温度で一晩撹拌した。次に、その物質をロータリーエバポレーター上に置き、濃縮した（容量のおよそ７０％を除去）。残留物をエーテル（２００ml）に取り、固体沈殿物（３９．９４ｇのオフホワイトの固体）を濾過によって回収した。エーテル濾液を取り置き、固体物質を水（１２０ml）に取り、水酸化ナトリウム水溶液（２Ｎ、５５ml）で処理した。酢酸エチル（１２０ml）を加え、混合物を分液ロートに移し、振盪した。有機相を回収し、等量の水で洗浄した。酢酸エチル相を回収し、水相を酢酸エチル（２×１００ml）で逆抽出した。合わせた有機相を合わせて、乾燥させ（硫酸マグネシウム）、濾過して、揮散させて、標記化合物を純粋なオフホワイトの固体（３３．９８ｇ）として提供した。(M+H)⁺ = 230 m/e。

【0174】

工程３． ２−（２，４−ジフルオロ−６−メチル−フェニル）−４，４−ジメチル−４，５−ジヒドロ−オキサゾールの調製

【化21】

【0175】

脱水テトラヒドロフラン（１５０ml）中の４，４−ジメチル−２−（２，４，６−トリフルオロフェニル）−４，５−ジヒドロオキサゾール（１６．８ｇ、７３．３mmol）の冷却（氷浴）溶液に、臭化メチルマグネシウムの溶液（７３．３ml、エーテル中３Ｍ）をゆっくりとした滴下によって加えた。その混合物を０℃で２時間撹拌し、次に、６時間かけて周囲環境まで温めた。飽和塩化アンモニウム水溶液（３０ml）の添加によって反応を注意深くクエンチし、その物質を水（２００ml）及び酢酸エチル（１５０ml）に取り、分液ロートに移し、有機相を回収した。有機相を水（２００ml）で洗浄し、酢酸エチル相を回収した。水相を酢酸エチル（２×１２０ml）で逆抽出し、有機相を合わせて、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過して、揮散させて、所望の生成物を明黄色の油状物（１６．３１ｇ）として提供した。(M+H)⁺ = 226 m/e。

【0176】

工程４． ２−［４−（４，４−ジメチル−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−２−イル）−３−フルオロ−５−メチル−フェニル］−２−メチル−プロピオニトリルの調製

【化22】

【0177】

脱水テトラヒドロフラン（１３０ml）中の２−（２，４−ジフルオロ−６−メチルフェニル）−４，４−ジメチル−４，５−ジヒドロオキサゾール（１４．８４ｇ、６５．９mmol）及びブチロニトリル（９．１１ｇ、１３２mmol）の溶液を含有するフラスコを、アルゴン雰囲気下、−１５〜−２０℃まで冷却した（アセトニトリル／ドライアイス浴）。カリウムビス（トリメチルシリル）アミドの溶液（１７１ml、トルエン中０．５Ｍ）をゆっくりとした滴下によって加えた。その混合物を−１５℃で３０分間撹拌し、次に、１．５時間かけて１５℃まで徐々に温めた。その物質を飽和塩化アンモニウム水溶液（１００ml）の添加によってクエンチした。水（８０ml）及びジエチルエーテル（５０ml）を加え、その物質を分液ロートに移し、有機相を回収した。これを等量の水で洗浄し、有機相を回収した。水相をエーテル（２×１００ml）で逆抽出し、合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過して、揮散させた。その物質を、６０％酢酸エチル／ヘキサンで溶離するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、半純粋な生成物を明るい黄色の油状物（１３．５２ｇ、７５％純粋）として提供した。この物質をその後の工程に「そのまま」使用した。(M+H)⁺ = 275 m/e。

【0178】

工程５． ヨウ化２−（４−（２−シアノプロピル−２−イル）−２−フルオロ−６−メチルフェニル）−３，４，４−トリメチル−４，５−ジヒドロオキサゾール−３−イウムの調製

【化23】

【0179】

脱水アセトニトリル（２３７ml）中の２−［４−（４，４−ジメチル−４，５−ジヒドロ−オキサゾール−２−イル）−３−フルオロ−５−メチル−フェニル］−２−メチル−プロピオニトリル（２３．８６ｇ、６０％純粋、５２．２mmol）の溶液に、ヨウ化メチル（３７ｇ、２６１mmol）を１０分間かけて滴下によって加えた。その混合物を６３℃に加熱した油浴に移し、一晩撹拌した。フラスコを周囲温度まで冷まし、次に、氷浴で冷ました。固体として沈殿した生成物をデカンテーションによって回収して、標記化合物をオフホワイトの固体生成物として得て、これは静置すると明黄色に変化し（２１．４９ｇ）、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。

【0180】

工程６． ４−（シアノ−ジメチル−メチル）−２−フルオロ−６−メチル−安息香酸の調製

【化24】

【0181】

フラスコに、ヨウ化２−（４−（２−シアノプロピル−２−イル）−２−フルオロ−６−メチルフェニル）−３，４，４−トリメチル−４，５−ジヒドロオキサゾール−３−イウム（２１．９ｇ、５２．７mmol）を投入し、メタノール（８９ml）に取った。このスラリーに、水（１７８ml）中の水酸化ナトリウム（１０．５ｇ、２６３mmol）の溶液を加え、その物質を油浴中８０℃で加熱した。その混合物を６０分間激しく撹拌し、次に、トルエン（１２０ml）を加えた。その混合物を油浴中で５分間撹拌及び振盪した。熱い間にその物質を分液ロートに移し、水相を回収した。これを１．５Ｎ塩酸水溶液で酸性化した（ｐＨ＝１まで）。酢酸エチル（２５ml）及び水（５ml）を加え、その混合物を分液ロート中で振盪した。有機相を回収し、水相を酢酸エチル（２×４０ml）で逆抽出した。合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過して、揮散させて、不純物を含む標記化合物を明黄色の固体（５．４ｇ）として提供した。(M-H)- = 220 m/e。

【0182】

工程７． ４−（シアノ−ジメチル−メチル）−２−フルオロ−６−メチル−ベンズアミドの調製

【化25】

【0183】

脱水テトラヒドロフラン（１００ml）に取った４−（２−シアノプロパン−２−イル）−２−フルオロ−６−メチル安息香酸（１４ｇ、３５mmol、７５％純粋）に、１，１’−カルボニルジイミダゾール（１１．２ｇ、６９．１mmol）を四等分に分け１５分間かけて加えた。その混合物を２．５時間撹拌し、次に、２８％水酸化アンモニウム水溶液（２０．４ml）を滴下によって加えたた。その物質を４時間撹拌し、次に、減圧下で濃縮して、揮発性物質の９０％を除去した。残留物を水（８０ml）及びジクロロメタン（８０ml）に取り、分液ロート中で振盪した。有機相を回収し、水相をジクロロメタン（３×６０ml）で逆抽出した。合わせた有機相を乾燥させ（硫酸マグネシウム）、濾過して、揮散させ、得られた半固体を温ジクロロメタン／ヘキサンからのトリチュレーションによって精製して、不純物を含む標記化合物をオフホワイトの固体（１０．７１ｇ、８０％純粋）として提供した。(M+H)⁺ = 221 m/e。

【0184】

工程８． ４−（シアノ−ジメチル−メチル）−Ｎ−［１−ジメチルアミノ−メタ−（Ｅ）−イリデン］−２−フルオロ−６−メチル−ベンズアミドの調製

【化26】

【0185】

２５０mlの丸底フラスコに、テトラヒドロフラン（６１ml）中の４−（２−シアノプロパン−２−イル）−２−フルオロ−６−メチルベンズアミド（８．７１ｇ、３１．６mmol、８０％純粋）及びジメチルホルムアミドジメチルアセタール（７．２６ml、５１．４mmol）を入れ、不均一な黄色の懸濁液を提供した。その反応混合物を６３℃まで加熱し（油浴）、３時間撹拌した。その混合物をロータリーエバポレーターで濃縮し、次に、ヘキサン（８０ml）に取った。白色の沈殿物が生じるまで、これを数分間激しく撹拌した。その沈殿物を濾過によって回収し、ヘキサンで十分にすすいで、標記化合物を白色の固体（７．０２ｇ）として得た。(M+H)⁺ = 276 m/e。

【0186】

工程９． ２−（８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリルの調製

【化27】

【0187】

４−（シアノ−ジメチル−メチル）−Ｎ−［１−ジメチルアミノ−メタ−（Ｅ）−イリデン］−２−フルオロ−６−メチル−ベンズアミド（１０．６６ｇ、３８．７mmol）を脱水テトラヒドロフラン（１００ml）に取り、５５℃に加熱した油浴中に入れた。カリウムtert−ブトキシドの溶液（５８．１ml、テトラヒドロフラン中１Ｍ）を滴下ロートから１５分間かけて滴下した。その反応混合物を６２℃まで加熱し、２時間撹拌した。生じた固体の塊を周囲温度まで冷まし、濃塩酸（５．３ml）で滴下処理した。水（３０ml）を加え、その物質を分液ロートに移した。有機相を回収し、ブライン溶液（２５ml）で洗浄した。水相を酢酸エチル（２５ml）で逆抽出し、有機物を合わせて、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過して、揮散させた。残留物を温ジクロロメタン／ヘキサンから結晶化して、所望の生成物をオフホワイトの固体（５．９１ｇ）として提供した。(M+H)⁺ = 231 m/e。

【0188】

工程１０． ２−［２−（３−ブロモ−２−ホルミル−フェニル）−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル］−２−メチル−プロピオニトリルの調製

【化28】

【0189】

脱水ジメチルスルホキシド（８ml）中の２−（８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリル（２５０mg、１．０９mmol）、２，６−ジブロモベンズアルデヒド（４５９mg、１．７４mmol）及び重炭酸ナトリウム（１８２mg、２．１７mmol）の溶液を真空下に置き、アルゴンを充填し戻した（２回以上繰り返す）。これにヨウ化銅（２０７mg、１．０９mmol）を加え、フラスコを排気し、アルゴンを充填し戻した（２回以上繰り返す）。その混合物を油浴中で１１０℃まで加熱し、３．５時間撹拌した。フラスコを周囲環境まで冷まし、酢酸エチル（４０ml）及び水（４０ml）に取った。その二相性物質をセライトのプラグに通して濾過し、酢酸エチルで十分にすすいだ。その濾液を分液ロートに移し、有機相を回収した。これを等量の５０％希釈ブライン溶液で洗浄し、酢酸エチル相を回収した。水相を酢酸エチル（２×３０ml）で逆抽出した。合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過して、揮散させた。その残留物を、１％メタノール／ジクロロメタンで溶離するシリカゲルＨＰＬＣによって精製して、所望の生成物を明黄色の固体（２８５mg）として提供した。(M+H)⁺ = 413 / 415 m/e。

【0190】

工程１１： ５−ニトロ−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸メチルエステルの調製

【化29】

【0191】

１０mLの一口丸底フラスコに、５−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（４．０ｇ、２５．５mmol）及び無水ＭｅＯＨ（４０．０ml）を投入した。反応混合物を氷／水冷却浴中で０℃まで冷却した。この混合物に、塩化チオニル（７．８８ｇ、４．８３ml、６６．２mmol）を滴下した。添加が完了した後、浴を取り外し、反応混合物を還流で２時間加熱した。次に、その反応混合物を減圧下で濃縮乾固して、所望の生成物（４．３６ｇ、８９．３％）を得た。(M+Na)⁺ = 198.9 m/e。

【0192】

工程１２： ２−メチル−５−ニトロ−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸メチルエステルの調製

【化30】

【0193】

１００mLの一口丸底フラスコに、５−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸メチル（３．８９ｇ、２２．７mmol）、無水ＤＭＦ（３０ml）、炭酸カリウム（６．２８ｇ、４５．５mmol）を投入した。ＭｅＩ（４．１９ｇ、１．８５ml、２９．６mmol）を加え、反応混合物を室温で１８時間撹拌した。次に、混合物を水（１５０mL）で希釈し、ＤＣＭ（３×７５mL）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、真空下で濃縮した。その粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、AnaLogix system、SF40-240g カラム、ヘキサン中の１０％〜５０％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、所望の生成物を異性体混合物（３．７５ｇ）として得た。M⁺ = 185.0 m/e。

【0194】

工程１３： （２−メチル−５−ニトロ−２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−メタノールの調製

【化31】

【0195】

温度計及び窒素注入口を備えた２５０mLの三口フラスコ中、ＬｉＢＨ_４（８８２mg、４０．５mmol）をＴＨＦ（３０mL）と合わせて白色の懸濁液を得て、氷浴を使用して０℃まで冷却した。この混合物に、内部温度を０℃に維持しながら、ＴＨＦ（１０mL）に溶解した１−メチル−３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボン酸メチル（３．７５ｇ、２０．３mmol）をゆっくり加えた。添加が完了した後、冷却浴を取り外し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。次に、数滴のＭｅＯＨを加え、反応混合物を２時間撹拌した。氷浴を使用してその反応物を０℃まで冷却し、ＥｔＯＡｃ（２０mL）を加え、続いて、水（１００mL）をゆっくり添加した。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１００mL）で抽出した。合わせた抽出物をブライン（１００mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、真空下で濃縮した。その粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、Analogix system SF40-240g、ヘキサン中の３０％〜６０％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、標記化合物（２．０９ｇ、６５．７％）及びその異性体（２４９mg、７．８２ｇ）を別々に得た。(M+H)⁺ = 157.9 m/e。

【0196】

工程１４： ５−ブロモメチル−１−メチル−３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾールの調製

【化32】

【0197】

２５０mLの丸底フラスコ中、（２−メチル−５−ニトロ−２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−メタノール（２．０９ｇ、１３．３mmol）をＣＨＣｌ_３（８０mL）と合わせて、白色の懸濁液を得た。氷浴を使用して反応物を０℃まで冷却し、ＰＢｒ_３（３．６ｇ、１．２５mL、１３．３mmol）を滴下した。冷却浴を取り外し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。次に、その反応物を０℃まで冷却し、ＤＣＭ（１００mL）で希釈した。ｐＨが８．５に達するまで、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５０mL）を加えた。水性物を分離し、ＤＣＭ（３×７５mL）で抽出した。有機層を合わせて、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、次に、真空下で濃縮して、粗物質を得て、これを次に工程にそのまま使用した（２．４８ｇ、８４．７％）。¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 3.96 (s, 3 H) 4.85 (s, 2 H) 7.15 (s, 1 H)。

【0198】

工程１５： ５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾールの調製

【化33】

【0199】

５０mLの丸底フラスコ中、５−（ブロモメチル）−１−メチル−３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール（２．４８ｇ、１１．３mmol）をＴＨＦ（６０ml）と合わせて、明黄色の溶液を得た。この混合物に、アゼチジン（８０４mg、９４６μl、１４．１mmol）、次に、ＤＩＰＥＡ（１．７５ｇ、２．３６ml、１３．５mmol）を滴下した。その反応混合物を室温で２４時間撹拌し、次に、それをＥｔＯＡｃ（１００mL）で希釈し、水（２００mL）で洗浄した。水層をＥｔＯＡｃ（２×７５mL）で逆抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、真空下で濃縮した。その粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２４０ｇ、ＤＣＭ中の１％〜５％ＭｅＯＨ）によって精製して、標記化合物（２．２１ｇ、７５．１％）を得た。(M)⁺ = 196.9 m/e。

【0200】

工程１６： ５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミンの調製

【化34】

【0201】

１００mLの丸底フラスコ中、５−（アゼチジン−１−イルメチル）−１−メチル−３−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール（１．６６ｇ、８．４６mmol）をＥｔＯＨ（５０mL）と合わせて、白色の懸濁液を得た。反応混合物をアルゴンで３回真空フラッシュし、次に、水素雰囲気下で一晩撹拌した。その反応混合物をセライトパッドに通して濾過し、エタノールで洗浄し、濃縮して、標記化合物を得た。(M+H)⁺ = 166.9 m/e。

【0202】

工程１７： ４−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−６−クロロ−２−メチル２Ｈ−ピリダジン−３−オンの調製

【化35】

【0203】

２５mLの丸底フラスコ中、５−（アゼチジン−１−イルメチル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（１．０ｇ、６．０２mmol）、４−ブロモ−６−クロロ−２−メチルピリダジン−３（２Ｈ）−オン（１．３４ｇ、６．０２mmol）、Ｃｓ_２ＣＯ_３（６．８６ｇ、２１．１mmol）及び４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（５２２mg、９０２μmol）をジオキサン（５０ml）と合わせた。得られた反応混合物をアルゴンで３回真空フラッシュし、次に、Ｐｄ_２ｄｂａ_３（４１３mg、４５１μmol）を加え、それを９０℃で１８時間加熱した。室温まで冷ました後、それを５０mLのジクロロメタン及び水で希釈した。水層をＤＣＭ（２×２５mL）で逆抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、次に、真空下で濃縮して、ほぼ乾燥させた。沈殿物を濾別し、エーテルで洗浄し、次に、一晩風乾して、０．９３ｇの標記化合物をオフホワイトの固体として得た。濾液を濃縮し、次に、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２４ｇ、ＤＣＭ中の２％〜７％ＭｅＯＨ）によって精製した。生成物を含有する画分を回収して合わせ、次に、濃縮して、ほぼ乾燥させた。得られた固体を濾別し、エーテルで洗浄して、追加の２６５mgの標記化合物を得た（合計１．１９ｇ、６４．１％）。¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.96 (t, J=6.99 Hz, 2 H) 3.11 (t, J=6.99 Hz, 4 H) 3.48 (s, 2 H) 3.63 (s, 3 H) 3.71 (s, 3 H) 6.07 (s, 1 H) 7.68 (s, 1 H) 9.53 (s, 1 H)。

【0204】

工程１８． ２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ホルミル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリルの調製

【化36】

【0205】

４−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−６−クロロ−２−メチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（２１９mg、０．７１mmol）、ビス（ピナコラト）ジボロン（２３４mg、０．９２mmol）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（ｘ−ｐｈｏｓ、５１mg、０．１０６mmol）及び酢酸カリウム（２０９mg、２．１３mmol）を脱水ジオキサン（６．６ml）に取り、真空下に置き、アルゴンを充填し戻した（工程を５回繰り返した）。この混合物に酢酸パラジウム（１７．４mg、０．０７７mmol）を加え、フラスコを排気し、アルゴンを充填し戻した（工程を５回繰り返した）。その混合物を１００℃で加熱し、１６分間撹拌した。フラスコを周囲環境まで冷まし、このフラスコの粗内容物を濾過して（セライトに通して、３mlのジオキサンですすいだ）、以下の試薬の真空脱気した溶液を含有する第二のフラスコに入れた（アルゴンバルーン下、１１０℃の油浴中に浸漬した）：ｎ−ブタノール（０．８２５ml）、ジオキサン（３．４４ml）及び水（２．５８ml）の混合物中の２−（２−（３−ブロモ−２−ホルミルフェニル）−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロイソキノリン−６−イル）−２−メチルプロパンニトリル（２７５mg、０．６６５mmol）、炭酸カリウム（４６０mg、３．３mmol）、トリシクロヘキシルホスフィン（５７．１mg、０．２０４mmol）及びビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（５７．４mg、０．０９９８mmol）。フラスコを１時間撹拌及び加熱し、次に、周囲温度まで冷ました。その粗物質をセライトのショートプラグに通して濾過し、酢酸エチル（４０mL）で十分にすすいだ。濾液に水（４０ml）を加え、その物質を分液ロート中で振盪した。有機相を回収し、水相を酢酸エチル（２×２０ml）で逆抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過して、揮散させた。得られた粗物質を、１％〜１３％メタノール／ジクロロメタンで溶離するシリカゲル分取ＨＰＬＣ（Analogix SF15-24g カラム）によって精製して、所望の生成物を黄色−褐色の固体（２８２mg）として提供した。(M-H)^- = 646 m/e。

【0206】

工程１９． ２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ヒドロキシメチル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリルの調製

【化37】

【0207】

メタノール（１０ml）及びジクロロメタン（１０ml）中の２−（２−｛３−［５−（５−アゼチジン−１−イルメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリダジン−３−イル］−２−ホルミル−フェニル｝−８−フルオロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−イソキノリン−６−イル）−２−メチル−プロピオニトリル（７９２mg、１．３１mmol）の溶液を氷浴中で冷却した。この黄色の均一な溶液に、水（１．５ml）中の水素化ホウ素ナトリウム（２４７mg、６．５３mmol）の溶液を加えた。その混合物を２分間撹拌し、次に、周囲温度まで温めた。約５分間撹拌した後、ＬＣ／ＭＳは、完全な変換を示した。水（６０ml）及びジクロロメタン（５０ml）を加えた。有機相を回収し、等容量の５０％希釈ブライン溶液で洗浄した。水相をジクロロメタン（２×４０ml）で逆抽出した。合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過して、揮散させた。得られた粗物質を、１％〜１５％メタノール／ジクロロメタンで溶離するシリカゲル分取ＨＰＬＣ（Analogix SF15-24g カラム）によって精製して、黄色の泡状固体を提供した。酢酸ｏ−プロピル／ヘキサンからのさらなる結晶化は生成物を与え、これを２：１ エーテル／酢酸イソ−プロピルからさらにトリチュレートした。酢酸ｏ−プロピルが得られた生成物中に検出された。ナノピュア（Nanopure）水（８〜１０滴）を加え、得られた混合物を超音波処理器中に２分間入れ、真空オーブンを使用して揮発性物質を揮散させて、４７１mgの標記化合物をオフホワイトの粉状物として提供した。(M+H)⁺ = 609 m/e, ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃-d) δ ppm 1.81 (s, 6 H) 2.12 (quin, J = 7.20 Hz, 2H) 3.27 (t, J = 7.0 Hz, 4 H) 3.55 (s, 2 H) 3.81 (s, 3 H) 3.88 (s, 3 H) 4.03 - 4.19 (m, 1 H) 4.22 - 4.44 (m, 2 H) 5.94 (s, 1 H) 6.61 (dd, J=7.36, 2.08 Hz, 1 H) 7.21 (dd, J=12.09, 1.89 Hz, 1 H) 7.35 (d, J=7.55 Hz, 1 H) 7.41 (dd, J=7.74, 1.32 Hz, 1 H) 7.52 (d, J=1.51 Hz, 1 H) 7.56 (t, J=7.74 Hz, 1 H) 7.65 (dd, J=7.55, 1.51 Hz, 1 H) 7.82 (s, 1 H) 7.91 (s, 1 H)。

【0208】

化合物３の調製
工程１． （５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−［５−（モルホリン−４−カルボニル）−ピリジン−２−イル］−カルバミン酸tert−ブチルエステルの調製

【化38】

【0209】

２５０mLの丸底フラスコ中、５−ブロモ−１−メチル−３−（５−（モルホリン−４−カルボニル）ピリジン−２−イルアミノ）ピリジン−２（１Ｈ）−オン（１０ｇ、２５．４mmol）をＴＨＦ（１２５ml）に溶解した。水素化ナトリウム（１．１２ｇ、２８．０mmol）を１０分間かけて少しずつ加え、１０分間撹拌した。次に、二炭酸ジ−tert−ブチル（６．１２ｇ、６．５１ml、２８．０mmol）を加えた。その赤色の懸濁液は撹拌できなかったので、更に２０mlのＴＨＦを加えた。それを７０℃まで加熱し、一晩撹拌した。懸濁液が褐色に変化した。その反応物を室温まで冷まし、次に、１２５mlの水及び１２５mlの酢酸エチルを加え、層を分離した。有機層を１００mlのブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮して、１１．８ｇの橙色−褐色の粉状物を得た。８０mlの酢酸エチルを加え、低可溶性の物質を濾別した。濾液を蒸発させて、褐色の泡状物を得た。フィルターロート上に回収された粉状物は、出発物質と生成物の両方を含有しており、濾液も同様であった。粉状物と濾液を合わせて、塩化メチレンに溶解し、蒸発させて、約２０％の出発物質と一緒に標記化合物を得た（１０．７１ｇ、２１．７mmol、収率８５．４％）。(M+H)⁺= 494.9 m/e。

【0210】

工程２． （５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−（５−ホルミル−ピリジン−２−イル）−カルバミン酸tert−ブチルエステルの調製

【化39】

【0211】

ＴＨＦ（１８０ml）中のビス（シクロペンタジエニル）ジルコニウムクロリドヒドリド（９．３７ｇ、３６．３mmol）のスラリーに、５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル（５−（モルホリン−４−カルボニル）ピリジン−２−イル）カルバミン酸tert−ブチル（１３．７ｇ、２７．８mmol）及びテトラヒドロフラン（３５０ml）の溶液を全て一度に加えた。その橙色の溶液を室温で２時間撹拌した。ＬＣＭＳは、１．５時間後に反応がほとんど完了したことを示した。その反応混合物を１８０mlの酢酸エチル中の１１０ｇのシリカに注ぎ、１０分間撹拌した。それを濾過し、濃縮して、標記化合物（１０．７ｇ、２６．２mmol、収率９４．４％）を明褐色の粉状物として得た。(M-BOC)⁺= 309.9 m/e。

【0212】

工程３． （５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イル｝−カルバミン酸tert−ブチルエステルの調製

【化40】

【0213】

２５０mLの丸底フラスコ中、５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル（５−ホルミルピリジン−２−イル）カルバミン酸tert−ブチル（５ｇ、１２．２mmol）を、塩化メチレン（１２２ml）、続いて、２−メトキシエタナミン（２．３ｇ、２．６６ml、３０．６mmol）、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（６．４９ｇ、３０．６mmol）及び酢酸（１．４７ｇ、１．４ml、２４．５mmol）に懸濁した。その黄色の濁った溶液を４０℃で一晩加熱した。それは発泡して、一晩かけて暗緑色になった（ＬＣＭＳは、反応が一晩で完了したことを示した）。その反応混合物を室温まで冷まし、次に、５０mlの塩化メチレンと共に分液ロートに移し、１００mlの飽和ＮａＨＣＯ_３で抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、６．１ｇの暗緑色の油状物を得て、これを塩化メチレン及びメタノールに溶解し、セライト上で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（AnaLogix IntelliFlash 280、５０ｇシリカゲルカラム、１０〜７５％「マジック塩基（magic base）」（ＤＣＭ中の１４％ＭｅＯＨ＋０．１４％ＮＨ_４ＯＨ）／塩化メチレン）による精製は、１．０４ｇの緑色−青色泡状物を与え、これをメタノールに３回再溶解し、次に、濃縮し、最後に高真空ポンプで一晩乾燥させて、標記化合物（１．０ｇ、２．１４mmol、収率１７．５％）を緑色−青色の泡状物として得た。混合した画分１０〜２７もまた蒸発させて、２．５ｇの暗緑色の油状物を得て、これを再度塩化メチレン及びメタノールに溶解して、セライト上で濃縮した。さらなるフラッシュクロマトグラフィー（AnaLogix IntelliFlash 280、８０ｇシリカゲルカラム、１〜１０％メタノール／塩化メチレン、次に、７５％「マジック塩基」（ＤＣＭ中の１４％ＭｅＯＨ＋０．１４％ＮＨ_４ＯＨ）／ＤＣＭ）による精製は、更に１．２ｇの標記化合物を緑色−青色の油状物として与えた。(M+H)⁺ = 469.0 m/e。

【0214】

工程４． ５−ブロモ−３−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−１−メチル−１Ｈ−ピリジン−２−オンの調製

【化41】

【0215】

ＤＣＭ（２５ml）を含有する２５０mlの丸底フラスコ中の５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル（５−（（２−メトキシエチルアミノ）メチル）ピリジン−２−イル）カルバミン酸tert−ブチル（２．２ｇ、４．７１mmol）に、ＴＦＡ（７．４ｇ、５ml、６４．９mmol）を加えた。その反応物を２時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完了していないことを示した。その反応物をさらに１．５時間撹拌し続けた。ＬＣＭＳは、反応がまだ完了していないが進行していることを示した。３時間以上撹拌した後、反応が完了した。溶媒を蒸発させ、残渣を一晩真空下に置き、次に、ＤＣＭに溶解した。飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液を加え、その混合物を激しく撹拌した。固体が生じた。ガスの発生が全て止むまで、混合物を撹拌した。固体は有機層に再溶解した。層を分離した。水層をＤＣＭで１回抽出した。有機層を合わせて、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、次に、真空下で濃縮して、標記化合物（１．８ｇ、４．９mmol）を得た。(M)⁺ = 366.9m/e。

【0216】

工程５． ２−（６−tert−ブチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−６−クロロ−ベンズアルデヒド オンの調製

【化42】

【0217】

方法Ａ
６−tert−ブチル−３，４−ジヒドロイソキノリン−１（２Ｈ）−オン（１０．８１ｇ、５３．２mmol）、２−ブロモ−６−クロロベンズアルデヒド（１５．２ｇ、６９．１mmol）、Ｘａｎｔｐｈｏｓ（３．０８ｇ、５．３２mmol）及び炭酸セシウム（４３．３ｇ、１３３mmol）をジオキサン（２１６ml）に懸濁した。その反応混合物をアルゴンで脱気した。最後に、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（２．２９ｇ、３．９９mmol）を加えた。その反応混合物を１００℃（外部温度）で３．５時間撹拌した。その反応混合物全体を室温まで冷まし、セライトプラグに通して濾過した。それをジオキサン（１００ml）で洗浄し、濾液を濃縮した。粗物質を酢酸エチルで処理し：沈殿物を濾別して、１３．８ｇの黄色の固体を得て、濾液を濃縮して、１９．４６ｇの橙色の固体を得た。黄色の固体（フィルターケーキ）をジクロロメタンに懸濁し、次に、濾過し、ジクロロメタン（１００ml）で洗浄した。濾液を真空下で濃縮して、標記化合物（１１．６８ｇ）を黄色の固体として得た。(M)⁺ = 341.9 m/e。

【0218】

方法Ｂ
１ＬのAtlas反応器に、６−tert−ブチル−３，４−ジヒドロイソキノリン−１（２Ｈ）−オン（８０ｇ、３９４mmol）、２−ブロモ−６−クロロベンズアルデヒド（９０．７ｇ、４１３mmol）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（１．７７ｇ、７．８７mmol）、Ｘａｎｔｐｈｏｓ（６．８３ｇ、１１．８mmol）及びＫ_２ＣＯ_３（１０９ｇ、７８７mmol）を投入した。次に、反応器を排気し、窒素を充填し戻した。このシーケンスを３回繰り返した。ＤＭＦ（６０４ｇ、６４０ml）を加え、次に、反応器を９０℃で１６．５時間加熱し、次に、約７０℃まで冷ました。水（３容量；２４０mL）を加えて、生成物を粉砕した。７０℃で２時間寝かした後、反応器を室温まで冷ました（塩を含む水層が観察された）。その物質を濾過によって回収し、水、次に水／ＩＰＡで洗浄して、ある程度の無機物を除去し、次に、週末にわたり風乾して、２−（６−tert−ブチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−６−クロロベンズアルデヒド（１２３．５ｇ、３６１mmol、収率９１．８％）を９７％のＨＰＬＣ純度の帯黄色の固体として得た。分析は、その物質中にＰｄの残渣を示した。８０℃に加熱しながらその物質を６５０mLのＤＭＦに溶解し、次に、１６ｇのＮ−アセチル−Ｌ−システインを含有する水溶液２４０mLをゆっくり加えた。その混合物を８０℃でさらに５時間撹拌し；このプロセスの間に結晶化が観察された。その混合物をゆっくり周囲温度まで冷ました。その物質を濾過によって回収し、水／ＩＰＡで洗浄し、次に、真空オーブン中、８０℃で一晩乾燥させた。９９．５＋％のＨＰＬＣ純度で１０９ｇの標記化合物が回収された。

【0219】

工程６． ６−tert−ブチル−２−（３−クロロ−２−ヒドロキシメチル−フェニル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンの調製

【化43】

【0220】

方法Ａ
２−（６−tert−ブチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−６−クロロベンズアルデヒド（３．０４ｇ、８．８９mmol）をＴＨＦ（４６．１ml）及びＭｅＯＨ（４．６１ml）に溶解した。その混合物を−４０℃（外部温度）まで冷却した。水素化ホウ素ナトリウム（４０４mg、１０．７mmol）を少しずつ加えた（３×５０mg、次に、２５mg）。その反応混合物を０℃まで放温し、次に、０℃で３０分間撹拌した。塩化アンモニウム溶液を加え、その反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機相を水、ブラインで洗浄し、次に、硫酸ナトリウムで乾燥させた。濾過後、それを真空下で濃縮して、標記化合物２．３８ｇを明黄色の泡状物として得た。(M)⁺ = 344.0 m/e。

【0221】

方法Ｂ
１ＬのAtlas反応器に、２−（６−tert−ブチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−６−クロロベンズアルデヒド（８０ｇ、２３４mmol）を投入し、その物質を室温でＤＣＭ（６３４ｇ、４８０ml）に溶解した。ＩＰＡ（２５０ｇ、３２０ml）をその溶液に加え、これをその後、約２℃まで冷却した。ＮａＢＨ_４（４．４３ｇ、１１７mmol）を１５分間かけて少しずつ加え、その間に温度が約９℃まで急上昇した。その反応混合物を約２℃で１時間撹拌して、清澄な均一溶液を得て、次にこれを水（３２０ｇ、３２０ml）でクエンチした。約６０〜８０℃で加熱してＤＣＭを留去した。ＤＣＭの除去が完了した後、生成物がＩＰＡ／Ｈ_２Ｏ溶液（１／１、約８容量）から晶出し、相分離の必要はなかった。８０℃で３〜４時間寝かした後、その混合物をゆっくり周囲温度まで冷まし、一晩撹拌した。その物質を濾過によって回収し、ＩＰＡ／Ｈ_２Ｏ（１／１）で洗浄し、真空オーブン中、８０℃で週末にわたり乾燥させて、ＨＰＬＣによる純度が９９．４％である標記化合物（７７．７ｇ、２２６mmol）を得た。

【0222】

工程７． 酢酸２−（６−tert−ブチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−６−クロロ−ベンジルエステルの調製

【化44】

【0223】

２５０mLの丸底フラスコ中、６−tert−ブチル−２−（３−クロロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−１（２Ｈ）−オン（２１．９ｇ、６３．７mmol）を、ＤＣＭ（６００ml）中、無水酢酸（３２．５ｇ、３０．０ml、３１８mmol）及びピリジン（１５．１ｇ、１５．５ml、１９１mmol）と合わせて、無色の溶液を得た。その反応混合物を一晩撹拌した。その粗反応混合物を真空下で濃縮して、黄褐色の油状物を得た。その残渣をＤＣＭに溶解し、次に、水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（０％〜２５％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘで１０分間、次に、２５％で保持して２０分間）によって精製して、標記化合物（２２．９ｇ、５９．３mmol）を得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.32 - 1.45 (m, 9 H) 2.06 (s, 3 H) 3.05 (dt, J=15.73, 4.77 Hz, 1 H) 3.35 (ddd, J=15.98, 10.93, 5.43 Hz, 1 H) 3.79 (dt, J=11.94, 5.27 Hz, 1 H) 3.95 - 4.14 (m, 1 H) 5.07 - 5.39 (m, 2 H) 7.21 (dd, J=7.71, 1.39 Hz, 1 H) 7.27 (d, J=1.77 Hz, 1 H) 7.36 - 7.47 (m, 3 H) 8.06 (d, J=8.08 Hz, 1 H)。

【0224】

工程８． 酢酸２−（６−tert−ブチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ベンジルエステルの調製

【化45】

【0225】

酢酸２−（６−tert−ブチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−６−クロロベンジル（５ｇ、１３．０mmol）を加熱しながらジオキサン（５０．０ml）に溶解し、Ｘ−ＰＨＯＳ（６１８mg、１．３mmol）、酢酸カリウム（２．６ｇ、２６．５mmol）、ビス（ピナコラト）ジボロン（４．２８ｇ、１６．８mmol）を加えた。真空下で超音波処理することによって懸濁液を再度脱気し、アルゴンを充填し戻した。最後に、酢酸パラジウム（ＩＩ）（１４５mg、６４８μmol）を加え、その混合物を７５℃（外部温度）で２時間撹拌した。２時間後、反応は完了していなかった。酢酸パラジウム（ＩＩ）及びＸ−Ｐｈｏｓの追加のアリコートを加えた。その反応物を７５℃で更に３時間撹拌した。ＬＣＭＳは、ある程度の残留出発物質とある程度の脱クロロ副生成物を示した。７５℃での加熱を一晩続け、次に、反応混合物を室温まで冷ました。その反応混合物をセライトに通して濾過し、ジオキサンで洗浄した。その濾液を真空下で濃縮して、褐色のゴム状物を得て、これをジクロロメタン（５ml）に溶解し、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２２０Ｇ、ヘキサン中の１０％〜１００％ＥｔＯＡｃ［１０％で保持して５分間、次に、１００％で１５分間］）によって精製して、約６０％の標記化合物と約４０％の脱クロロ副生成物を含有する黄色のゴム状物を得て、これを次の工程にそのまま使用した。生成物 (M+H)⁺ = 478.1 m/e。脱クロロ副生成物 (M+H)⁺ = 452.0 m/e。

【0226】

工程９． 酢酸２−（６−tert−ブチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−６−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−ベンジルエステルの調製

【化46】

【0227】

酢酸２−（６−tert−ブチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ベンジル（５．８ｇ、７．２９mmol）及び５−ブロモ−３−（５−（（２−メトキシエチルアミノ）メチル）ピリジン−２−イルアミノ）−１−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オン（２．６８ｇ、７．２９mmol）を２５０mlの丸底フラスコ中で合わせた。三塩基性リン酸カリウム（３．０９ｇ、１４．６mmol）、続いて、Ｘ−ＰＨＯＳ（３４８mg、７２９μmol）及びビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（２１０mg、３６４μmol）を加えた。溶媒溶液であるＢｕＯＨ（６０ml）及び水（１５．０ml）を加えた。反応混合物をアルゴンで２回フラッシュした。容器に蓋をし、１００℃（外部温度）で１．５時間加熱した。ＤＣＭ及び水を加え、ＤＣＭ相を分離し、セライトに通して濾過し、クロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０％〜５％メタノールの勾配を使用して２０分間、続いて、ＤＣＭ中の５０％マジック塩基を使用して更に３０分）によって精製して、脱アセテート及びある程度の不純物と一緒に標記化合物を得た。その混合物を次の工程にそのまま使用した。生成物 (M+H)⁺ = 638.1 m/e。脱アセテート副生成物 (M+H)⁺ = 596.1 m/e。

【0228】

工程１０． ６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンの調製

【化47】

【0229】

ＴＨＦに溶解した酢酸２−（６−tert−ブチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−６−（５−（５−（（２−メトキシエチルアミノ）メチル）ピリジン−２−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−イル）ベンジル（３．１８ｇ、４．９９mmol）に、室温で、水酸化ナトリウム（２４．９ml、２４．９mmol）を加えた。その反応混合物を６０℃で２時間加熱した。ＬＣＭＳは、出発物質がまだ存在していることを示した。その反応混合物を６０℃で一晩撹拌したところ、ＬＣＭＳは、反応が完了したことを示した。それを室温まで冷まし、飽和ＮａＨＣＯ_３及びＤＣＭで希釈した。層を分離した。水層をＤＣＭで３回抽出した。有機物をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、次に、真空下で濃縮した。その残渣をエーテルでトリチュレートすると、ゴム状物に変化した。溶媒を蒸発させ、次に、残渣が溶解するまでＥｔＯＡｃを加えた。Ｅｔ_２Ｏを加えた。固体が生じ、その後、ゴム状物に変化した。溶媒を蒸発させて、３．１８ｇの粗収量を得た。その固体を、５０℃（外部温度）に置かれた撹拌子を備える丸底フラスコに入れた。３０mlのアセトンをゆっくり加えた。全てが溶液になった。容器をTeflonストッパーで閉じた。その反応混合物を約３０分間撹拌し、次に、固体が生じ始めた。その混合物を５０℃で７２時間撹拌した。７２時間後、粘性の懸濁液を室温まで冷ました。その固体を濾過し、氷冷アセトンで洗浄し、真空オーブン中、５０℃で２時間、次に、室温で一晩置いて、標記化合物を得た。(M+H)⁺ = 596.1 m/e。
¹H NMR (400 MHz, CHCl₃-d) δ ppm 1.39 (s, 9 H) 2.70 - 2.90 (m, 2 H) 3.11 - 3.22 (m, 1 H) 3.25 - 3.34 (m, 1 H) 3.37 (s, 3 H) 3.51 - 3.60 (m, 2 H) 3.72 (s, 3 H) 3.78 (s, 2 H) 3.81 - 3.89 (m, 1 H) 4.12 (ddd, J=12.25, 9.85, 4.67 Hz, 1 H) 4.28 - 4.47 (m, 2 H) 4.63 (d, J=10.61 Hz, 1 H) 6.83 (d, J=8.59 Hz, 1 H) 7.27 (dd, J=7.45, 1.64 Hz, 2 H) 7.31 (d, J=1.52 Hz, 1 H) 7.41 - 7.53 (m, 4 H) 7.60 (dd, J=8.59, 2.27 Hz, 1 H) 7.93 (s, 1 H) 8.11 (d, J=8.08 Hz, 1 H) 8.18 (d, J=2.02 Hz, 1 H) 8.70 (d, J=2.27 Hz, 1 H)。

【0230】

製剤データ
ＰＤ実験（ｍＯＶＡ３６）用の化合物１の製剤
１０．６ｇの化合物１を、Jet-O-Mizerジェットミル中、９０psiのフィード圧及び粉砕圧で微粒子化した。そのようにして得られた微粒子化された物質を、それぞれ図１及び２に示すように、粉末Ｘ線回折パターン及び粒度分布によって分析した。微粒子化プロセスの間、多形体の変化は観察されなかった。８０パーセントの粒子は、５μm以下のサイズであり、吸入送達に好適な範囲の平均粒径（ｄ５０％＝２．８８μm）であった。その物質をインビボ実験ｍＯＶＡ３６に使用した。図１及び２を参照されたい。

【0231】

ＰＤ実験（ｍＯＶＡ４０、ｍＰｏｌｙＩＣ−３−１２及びｍＰｏｌｙＩＣ−３−１２）用の化合物１の製剤
８．６ｇの２−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−４−（１−メチル−５−（５−（１−メチルピペリジン−４−イル）ピリジン−２−イルアミノ）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−３−イル）ニコチンアルデヒドを、Jet-O-Mizerジェットミル中、８０psiで微粒子化した。平均粒径（ｄ５０％）は３．０５μmであり、９０％の粒子が≦６μmであった（図３）。この物質（３０% w/w）及び乳糖（Lactohale LH 300、７０% w/w）を、Turbulaミキサー中、２２rpmで１５分間混合した。乳糖成分のｄ５０％及びｄ９０％の粒径は、それぞれ＜５μm及び≦１０μmであった（DFE Pharma specifications (# 001/October 2011）。このようにして得られたブレンドをインビボ実験ｍＯＶＡ４０、ｍＰｏｌｙＩＣ−３−１２及びｍＰｏｌｙＩＣ−５−１２に使用した。図３を参照されたい。

【0232】

ＰＤ実験ｍＯＶＡ２０用の化合物１の製剤
バッファー中の２つの異なる濃度（０．１５及び１．５mg/mL）の化合物１の混合物を以下のように調製した。

【0233】

濃度１．５mg/mLの化合物１の溶液１０mLの調製
化合物１のフマル酸塩（１７．８mg）を２mLのプロピレングリコール（ＰＧ）と混合した。薬物が完全に溶解するまで、その調製物を約２０〜３０分間超音波処理した。十分量の精製水を１０．０ｇまで加えた。得られた混合物をボルテックスによって撹拌して清澄で均一な溶液を得た（ｐＨ４．４）。

【0234】

濃度０．１５mg/mLの化合物１の溶液１０mLの調製
上記のように調製した１．０ｇの１．５mg/mL溶液をバイアルに入れた。十分量のビヒクル（２０％ＰＧ／８０％水）を１０．０ｇまで加えた。得られた混合物をボルテックスによって撹拌した。

【0235】

ＰＤ実験ｍＯＶＡ５０用の化合物２の製剤
バッファー中の３つの異なる濃度（０．１５、０．５及び１．５mg/mL）の化合物２の混合物を以下のように調製した：

【0236】

濃度１．５mg/mLの化合物２の溶液の調製
化合物２（１．６５mg）をバイアルに入れた。十分量のビヒクル（２０％ＰＧ／８０％水）を１．１ｇまで加えた。その調製物を約２分間超音波処理した。微細な懸濁液が達成された（ｐＨ４．８３３）。

【0237】

濃度０．５mg/mLの化合物２の溶液の調製
上記のように調製した０．１７４０ｇの１．５mg/mL懸濁液をバイアルに入れた。十分量のビヒクル（２０％ＰＧ／８０％水）を０．５２１ｇまで加え、調製物を混合した。

【0238】

濃度０．１５mg/mLの化合物２の溶液の調製
上記のように調製した０．０７７１６ｇの１．５mg/mL懸濁液をバイアルに入れた。十分量のビヒクル（２０％ＰＧ／８０％水）を０．７７１７ｇまで加えた。得られた調製物のｐＨは、４．７１であった。

【0239】

ＰＤ実験ｍＯＶＡ４９用の化合物３の製剤
バッファー中の３つの異なる濃度（０．１５、０．５及び１．５mg/mL）の化合物３の混合物を以下のように調製した

【0240】

ビヒクル（３０mL）の調製

【表6】

【0241】

１．ビーカーに、０．０６ｇのポリソルベート８０を直接量り取る。
２．約２６ｇの水を加え、溶解するまで撹拌する。
３．クエン酸、クエン酸ナトリウム及び塩化ナトリウムを加える。
溶解するまで撹拌する。３０mLとする十分量。
５．ｐＨ＝４．６８にする。

【0242】

濃度１．５mg/mLの化合物３の溶液の調製
化合物３（１．５９）をバイアルに入れた。上記で調製したような十分量のビヒクルを１．０６ｇまで加えた。その調製物を約２分間超音波処理した。微細な懸濁液が達成された（ｐＨ４．８５）。

【0243】

濃度０．５mg/mLの化合物２の溶液の調製
上記のように調製した０．１６７７３ｇの１．５mg/mL懸濁液をバイアルに入れた。上記で調製したような十分量のビヒクルを０．５０７３５ｇまで加え、調製物を混合した。

【0244】

濃度０．１５mg/mLの化合物２の溶液の調製
上記のように調製した０．０６６７５ｇの１．５mg/mL懸濁液をバイアルに入れた。上記で調製したような十分量のビヒクルを０．６５６０８ｇまで加えた。得られた調製物のｐＨは、４．７０であった。

【0245】

生物学的実施例
Ｂｔｋ Ｂｉａｃｏｒｅ結合アッセイ
Biacore T-100で分析を実施した。Ｂｔｋキナーゼを、バキュロウイルス中、ビオチンリガーゼを用いて、ａｖｉタグ化及び共発現して、単一部位ビオチン化Ｂｔｋを生成した（Avidity, LLC）。ビオチン化ターゲットを、約１００００レゾナンスユニットの密度（１ru〜１pgタンパク質／mm2）で、Biacoreストレプトアビジンセンサーチップ（Series S Sensor Chip SA）上に捕捉した。１００％ＤＭＳＯ中に試験化合物を粉状物から１０mMストックに可溶化し、０．７８nM〜１００nMの範囲で８点２重シリーズ（8 point, 2-fold series）に希釈した。その化合物を１００秒の結合時間で注入し、解離を２０分間続けた。実験を２５℃で実施し、再生バッファーは利用せず、そのため、１チップ当たり２つ以下の高親和性化合物を分析した。ランニングバッファーは、５０mM Ｈｅｐｅｓ ｐＨ７．２、１５０mM ＮａＣｌ、１０mM ＭｇＣｌ２、２mM ＭｎＣｌ２、１mM ＴＣＥＰ、１％ＰＥＧ３３５０、５％ＤＭＳＯから構成した。Biacore BIAevaluationソフトウェアを使用し、１：１（Langmuir）結合用の単一モードを使用して動力学分析を実施した。これらの実験からのデータは、化合物１、化合物２及び化合物３の解離速度（off rate）が非常に遅く、得られたＫＤがＦＲＥＴアッセイと非常によく一致したことを示した（表１）。

【0246】

ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害のＴＲ−ＦＲＥＴ（時間分解ＦＲＥＴ）アッセイ
このＢＴＫ競合アッセイは、ＦＲＥＴ（Forster／蛍光共鳴エネルギー移動）技術を使用して、不活性状態のブルトン型チロシンキナーゼに対する化合物の効力（ＩＣ_５０）を測定する。ＢＴＫ−Ｅｕ錯体を氷上で１時間インキュベートした後、５０nM ＢＴＫ−Bioease（商標）：１０nM Ｅｕ−ストレプトアビジン（Perkin-Elmer Catalog# AD0062）の開始濃度で使用した。アッセイバッファーは、２０mM ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．１５）、０．１mM ＤＴＴ、１０mM ＭｇＣｌ_２、０．５mg/ml ＢＳＡと３％ Kinase Stabilizer（Fremont Biosolutions, Catalog # STB-K02）から構成した。１時間後、上記の反応混合物をアッセイバッファー中で１０倍希釈して、５nM ＢＴＫ：１nM Ｅｕ−ストレプトアビジン錯体（ドナーのフルオロフォア）を作製した。次に、１８μlの０．１１nM ＢＴＫ−Ｅｕと０．１１nM Kinase Tracer 178（Invitrogen, Catalog # PV5593）の混合物を、非陰性対照としてのＢＴＫ−Ｅｕ単独と共に、３８４ウェル平底プレート（Greiner, 784076）に分注した。アッセイで試験する化合物を１０×濃度として調製し、半対数増分の段階希釈をＤＭＳＯ中で実施して、１０点曲線を生成した。ＦＲＥＴ反応を開始するために、ＤＭＳＯ中に１０×ストックとして調製した化合物をプレートに加え、プレートを１４℃で１８〜２４時間インキュベートした。

【0247】

インキュベーション後、プレートをBMG Pherastar Fluorescentプレートリーダー（又は等価物）で読み取り、これを使用してユーロピアムドナーのフルオロフォア（６２０nm発光）及びＦＲＥＴ（６６５nm発光）からの発光エネルギーを測定した。陰性対照ウェルの値を平均化して、平均最小値を得た。陽性「非阻害薬」対照ウェルを平均化して、平均最大値を得た。最大ＦＲＥＴのパーセントを以下の式を使用して計算した：
最大ＦＲＥＴ％＝１００×［（ＦＳＲ_化合物−ＦＳＲ_{平均最小値}）／（ＦＳＲ_{平均最大値}−ＦＳＲ_{平均最小値}）］
式中、ＦＳＲ＝ＦＲＥＴシグナル比。最大ＦＲＥＴ％の曲線をActivity Base（Excel）にプロットし、ＩＣ５０（％）、ヒル勾配、ｚ’及びＣＶ％を決定した。平均ＩＣ_５０及び標準偏差は、Microsoft Excelを使用して、２連曲線（２つの独立した希釈物からの単一阻害曲線）から誘導されるだろう。

【0248】

ＦＲＥＴからのデータは、化合物１、化合物２及び化合物３が非常に強力なＢｔｋ阻害薬であったことを示した（表１）。

【0249】

【表7】

【0250】

ヒト肥満細胞活性化に及ぼす化合物１〜３の効果
異なるドナー由来の１００万個のヒト臍帯血由来ＣＤ３４＋造血幹細胞（ＨＳＣ）（AllCells #CB008F-S, Emeryville, CA）を、無血清完全培地（サプリメントを加えたStemPro-34； Invitrogen, Carlsbad, CA）中、組み換えｈ−ＳＣＦ（１００ng/ml）及びｈ−ＩＬ６（５０ng/ml）と共に８週間培養した。第一週目の培養の間、ＨＳＣの分化を支援するために組み換えｈ−ＩＬ３（１０ng/ml）も含めた。８週間の培養後、組み換えｈ−ＩＬ−４（１０ng/ml）で５日間にわたり細胞を刺激した。肥満細胞の分化過程の確認をＦＡＣＳによってルーチン的に行って、ｃ−ｋｉｔ及びＦｃεＲＩの発現をチェックし；分化した細胞は、ルーチン的には９０％を超えるｃ−ｋｉｔ陽性、ＦｃεＲＩ陽性であった。

【0251】

分化した肥満細胞を、０．１μg/mlの抗ＮＰ ＩｇＥ（Serotec, Raleigh, NC）により３７℃で一晩感作した。細胞を洗浄し、次に、化合物１により３７℃で１時間処理した。処理後、細胞を１μg/mlのＮＰ（３０）−ＢＳＡ（Biosearch Technologies, Novato CA）と３０分間（ヒスタミン及び脂質メディエーターの評価のために）又は一晩（サイトカインの評価のために）交差結合させた。培養上清を回収し、ヒスタミン（Oxford Biomedical Research, Rochester Hills, MI）、ＰＧＤ２及びＬＴＣ４（Cayman Chemical Company, Ann Arbor MI）、ならびにＩＬ−５及びＩＬ−１３（Bio-Rad Bio-Plex Pro サイトカイン定量キット）の放出をキットの説明書に従ってアッセイした。化合物１、化合物２及び化合物３は、上清へのこれらのメディエーターの放出を濃度依存的に最大１００％の効果まで低下させ、そのＩＣ_５０値を表２に報告する。興味深いことに、グルココルチコイドでの細胞の処理は、これらの応答のいずれも減衰しなかった。

【0252】

【表8】

【0253】

ヒトＢ細胞抗体産生に及ぼす化合物１〜３の効果
ヒトの全Ｂ細胞を、バフィーコート白血球パック（New York Blood Center）由来のRosetteSepヒトＢ細胞濃縮カクテル（#28921, Vancouver, BC）で、製造業者のプロトコールに従って濃縮した。濃縮したＢ細胞の純度（およそ８０％）を、ＣＤ１９＋染色してＦＡＣＳによってチェックした。Ｂ細胞を、ＲＰＭＩ−１６４０ベースの条件培地（ＩｇＧ／ＩｇＭを生成するＢ細胞の活性化用に、５０ng/ml ＩＬ−２、５０ng/ml ＩＬ−１０及び１μg/ml 抗ＩｇＤ；ＩｇＥを生成するＢ細胞の活性化用に、１０ng/ml ＩＬ−４、１０ng/ml ＩＬ−１０、２５ng/ml ＩＬ−２１及び１μg/ml 抗ＣＤ４０）中に、化合物１（１nM〜１０μM）と一緒に懸濁した（１０万個の細胞／ウェル／１００μl）。細胞を３７℃で１０日間（ＩｇＧ／ＩｇＭ産生のために）又は１４日間（ＩｇＥ産生のために）培養した。培養上清を、Bethyl Laboratoryのプロトコール（#E80-104, #E80-100, #E80-108, Montgomery, TX）に従って、ＩｇＭ、ＩｇＧ及びＩｇＥの分析用に回収した。化合物１は、上清中に測定されたＩｇＭ、ＩｇＧ及びＩｇＥのレベルを濃度依存的に最大１００％の効果まで低下させ、そのＩＣ５０値を表Ｘに報告する。興味深いことに、グルココルチコイドでの細胞の処理は、ＩｇＭ又はＩｇＧ応答を減衰せず、実際には、上清中のＩｇＥレベルの有意な増加を誘発し、これは過去の報告と一致した［Zieg et al. JACI, 1994, 94: 222; Hemady et al. JACI 1985, 75:304; Wu et al. JCI 1991, 87: 870］。化合物２及び化合物３は、ＩｇＭ及びＩｇＧ産生に対して類似の阻害効果を有した（表３）。

【0254】

【表9】

【0255】

アレルギー性気道疾患のモデルにおける化合物１〜３の効果
オボアルブミン誘発アレルギー性気道疾患のマウスモデルを用いて、アレルゲン誘発気管支収縮及びアレルゲン誘発気道炎症に及ぼす化合物１の効果を評価した。簡潔に述べると、マウス（雄；ＢＡＬＢ／ｃ；７〜９週齢）を、０．２mlのミョウバン（水中の２％Ａｌ（ＯＨ）３、Serva, Heidelberg, Germany）中の１０μgのオボアルブミン（ＯＶＡ）で、０日目と１４日目に、腹腔内（i.p.）免疫化した。対照動物にはミョウバンのみを与えた。２１〜２３日目に、肺内の炎症過程を確立するために、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の１％ＯＶＡ（１０mg/ml）の噴霧化（Proneb Ultra II, PARI Respiratory Equipment, Midlothian, VA）エアロゾルに；又は対照としてＰＢＳ単独に、動物を２０分間曝露させた。鼻腔内投与を使用した研究では、各エアロゾル化ＯＶＡ接種の１時間前に、マウスにイソフルランで麻酔をかけ、ビヒクル（２０％プロピレングリコール）又は化合物１（０．３mg/kg）を鼻腔内（i.n.）投与した。

【0256】

吸入送達を使用する研究では、化合物１をジェットミル（MC One Jet Mill, Jetpharma USA Inc., South Plainfield, NJ）によって微粒子化し、Wrightダストフィード乾燥粉末エアロゾル発生器を使用して乾燥粉末エアロゾルを発生させた。微粒子化された薬物粉状物を、液圧プレスを使用しおよそ１０００psiで円筒状リザーバーに充填して、Wrightダストフィードによるインプットとして使用される粉状物の圧縮ケーキを生成した。ダストフィードはエアロゾルを生じ、これが解砕のための超音波ノズルを通ってサイクロンに入り、非呼吸域粒子及び凝集体が除去される。サイクロンアウトプットをＴＳＥ鼻部限局齧歯動物曝露システムに通した。マウスの投与群を、エアロゾル試験環境に５、１５又は４５分間曝露させた。ＴＳＥは、動物用に２４ポート及びサンプリング用に３つのサンプリングポート：リアルタイムのエアロゾル濃度（Microdust pro）、重量エアロゾル濃度（アブソリュートフィルター）及び粒径（カスケードインパクター）を有した。曝露の間、マウスの解剖用に設計されたガラス管中に動物を拘束した。その曝露システムは、空気物質収支による空間的均一性及び経時的安定性を満たした。各ポートへの気流及びポート間の流量は、インプット流量を１７リッター／分で設定し、２％未満で変動した。曝露毎の粒度分布を、８段階式カスケードインパクターでエアロゾルサンプルを回収することによって評価した。エアロゾルを、カスケードインパクターによって、１リッター／分の気流量で４５分間サンプリングした。インパクターデータを数学的に評価し、６−tert−ブチル−２−［２−ヒドロキシメチル−３−（５−｛５−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−ピリジン−２−イルアミノ｝−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンの空気動力学的質量中央粒子径（ＭＭＡＤ）及び幾何学的標準偏差（ＧＳＤ）を仮定対数正規分布のグラフ分析を使用して決定した。化合物１の推定蓄積用量を０．０２６リッター／分のマウスの分時拍出量を使用して計算し、肺蓄積率をＭＭＡＤから決定した。マウスに投与した４５分後に、エアロゾル化又は静脈内投与されたＯＶＡへ曝露させた。

【0257】

急性気管支収縮に及ぼす化合物１の効果を評価するために、対照（ミョウバン注射及び食塩水接種した）マウスとＯＶＡ感作及び接種したマウスに１５０mg/kgペントバルビタールで麻酔をかけ（i.p.）、気管カニューレを外科的に準備し、コンピューター制御された人工呼吸器（flexiVent, SCIREQ Inc.；１回換気量＝１０ml/kg；１５０回の呼吸／分の呼吸速度；３cmＨ２Ｏの呼吸終末陽圧）で機械的に換気した。０．９％食塩水中の７．５mg/ml（３０mg/kg）のオボアルブミン１００μlの尾静脈注射の前に及び注射後７分間にわたって１０秒毎に、呼吸抵抗（Ｒ）を測定した（SnapShot150摂動）。flexiWareソフトウェア（バージョン７．１）を使用してデータをデジタル的に記録した。ベースラインと抗原誘発Ｒのピークとの差をＲの増加率として計算し、ＯＶＡ誘発急性気管支収縮の低下率として表２に報告した。ここに報告した２つの研究では、ＯＶＡの静脈内（i.v.）投与は、Ｒの約６０〜８０％の増加を誘発し、これは、鼻腔内（i.n.）投与又は乾燥粉末製剤として吸入によって送達された場合に、化合物１によって効果的に阻害された。

【0258】

【表10】

【0259】

気道炎症に及ぼす化合物１の効果を研究するために、３回の１％ＯＶＡ接種後に、最終ＯＶＡ接種を、ＰＢＳ中の５％ＯＶＡのエアロゾル溶液（５０mg/ml）又はＰＢＳ単独として２０分間行った。５％ＯＶＡ接種の２４時間後に、マウスにペントバルビタール（７５μlの５０mg/ml溶液：１５０mg/kg）で麻酔をかけ、気管カニューレを外科的に準備した（18 gauge Angiocath, Becton Dickinson, Sandy, Utah, USA）。肺を洗浄し、以前に記載されたように総細胞及び分化した細胞をカウントすることによって気道炎症を評価した［Harris et al., 2012, Mucosal Immunology］。データを、ＯＶＡで誘発された気道好酸球増多の低下率として表３に報告する。ここに報告した研究において、エアロゾル化ＯＶＡは、洗浄液に回収された好酸球数の２８８％の増加を誘発し、これは乾燥粉末製剤として吸入によって送達された化合物１によって効果的に阻害された。

【0260】

【表11】

【0261】

ステロイド耐性気道炎症のモデルにおける化合物１の効果
合成型の二本鎖ＲＮＡのポリイノシン−ポリシチジル酸（Poly I:C）によって誘発された気道炎症に及ぼす化合物１の効果を評価した。用いたモデルは、急性ウイルス感染の効果を模倣することを意図しており、これはステロイド耐性の気道好中球増加を引き起こすことが知られている［Harris et al., 2012, Mucosal Immunology］。この実験を実施するために、マウス（雄；ＢＡＬＢ／ｃ；７〜９週齢）にイソフルランで麻酔をかけ、食塩水又はpoly I:C（３０μｇ）を鼻腔内（i.n.）投与し、２４時間後に気道炎症を以前に記載されたように評価した［Harris et al., 2012, Mucosal Immunology］。化合物１は、poly I:Cで誘発された気道好中球増加を用量依存的に阻害した（表６）。これらの好中球の低下は、洗浄液中の好中球走化性因子のレベルの低下と一致した（表４）。

【0262】

【表12】

【0263】

ＤＭＰＫデータ
ラット、イヌ及びカニクイザル（cyno）における化合物１の薬物動態は、低い経口バイオアベイラビリティ及び高い血漿クリアランスによって特徴付けられた（表７）。マウスでは、それは中程度の血漿クリアランス及び低い経口バイオアベイラビリティによって特徴付けられた。ラット及びイヌにおける化合物２及び３の薬物動態は、低い経口バイオアベイラビリティ及び高い血漿クリアランスによって特徴付けられた（表８及び９）。

【0264】

【表13】

【0265】

【表14】

【0266】

【表15】

【0267】

以上の出願は、明確化及び理解を目的として、説明及び例によっていくらか詳しく記載されている。当業者にとって、添付の特許請求の範囲内で変更及び変形を実施できることは明らかであろう。従って、上記の記載は、例示的であって、限定的ではないことを意図したものであることを理解されるべきである。従って、本発明の範囲は、上記の記載を参照して決定されるべきではなく、以下に添付される特許請求の範囲を参照して、そのような特許請求の範囲に権利付与された均等物の全範囲と合わせて決定されるべきである。

【0268】

本出願に引用された特許、特許出願及び刊行物は全て、個々の特許、特許出願又は刊行物が各々個別に示されたかのように同程度まであらゆる目的で、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。

【図1】

【図2】

【図3】