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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】6045519
(24)【登録日】2016年11月25日
(45)【発行日】2016年12月14日
(54)【発明の名称】タンパク質キナーゼ阻害剤としての化合物および組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 31/506 20060101AFI20161206BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20161206BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20161206BHJP
C07D 401/14 20060101ALI20161206BHJP
C07D 403/04 20060101ALI20161206BHJP
C07D 405/14 20060101ALI20161206BHJP
【ＦＩ】
A61K31/506ZMD
A61P35/00
A61P43/00 111
A61P43/00 121
C07D401/14CSP
C07D403/04
C07D405/14
【請求項の数】6
【全頁数】71
(21)【出願番号】特願2014-21339(P2014-21339)
(22)【出願日】2014年2月6日
(62)【分割の表示】特願2012-527014(P2012-527014)の分割
【原出願日】2010年8月27日
(65)【公開番号】特開2014-98022(P2014-98022A)
(43)【公開日】2014年5月29日
【審査請求日】2014年2月24日
【審判番号】不服2015-17262(P2015-17262/J1)
【審判請求日】2015年9月18日
(31)【優先権主張番号】61/238,073
(32)【優先日】2009年8月28日
(33)【優先権主張国】US
(31)【優先権主張番号】61/313,039
(32)【優先日】2010年3月11日
(33)【優先権主張国】US
(73)【特許権者】
【識別番号】503261524
【氏名又は名称】アイアールエム・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー
【氏名又は名称原語表記】ＩＲＭ，ＬＬＣ
(73)【特許権者】
【識別番号】504389991
【氏名又は名称】ノバルティス アーゲー
(74)【代理人】
【識別番号】100101454
【弁理士】
【氏名又は名称】山田 卓二
(74)【代理人】
【識別番号】100062144
【弁理士】
【氏名又は名称】青山 葆
(74)【代理人】
【識別番号】100106518
【弁理士】
【氏名又は名称】松谷 道子
(74)【代理人】
【識別番号】100067035
【弁理士】
【氏名又は名称】岩崎 光隆
(74)【代理人】
【識別番号】100156144
【弁理士】
【氏名又は名称】落合 康
(72)【発明者】
【氏名】フアン・シェンリン
(72)【発明者】
【氏名】シャンミン・ジン
(72)【発明者】
【氏名】リウ・ズオシェン
(72)【発明者】
【氏名】ダニエル・プーン
(72)【発明者】
【氏名】ジョン・イー・テリュー
(72)【発明者】
【氏名】ワン・ヨンキン
(72)【発明者】
【氏名】ワン・シン
(72)【発明者】
【氏名】ヨンピン・シェ
【合議体】
【審判長】
蔵野 雅昭
【審判官】
山本 吾一
【審判官】
渕野 留香
(56)【参考文献】
【文献】
国際公開第２０１０／０５６６６２（ＷＯ，Ａ１）
【文献】
国際公開第２０１０／１００１２７（ＷＯ，Ａ１）
【文献】
国際公開第２００９／０１６４６０（ＷＯ，Ａ１）
【文献】
国際公開第２００７／１２３８９２（ＷＯ，Ａ１）
【文献】
国際公開第２００７／１０５０５８（ＷＯ，Ａ１）
【文献】
特開２０１３−５０３１３９（ＪＰ，Ａ）
【文献】
特表２０１２−５０３１３９（ＪＰ，Ａ）
【文献】
特表２０１２−５３００９９（ＪＰ，Ａ）
【文献】
特表２０１２−５１２８３７（ＪＰ，Ａ）
【文献】
特表２０１１−５２８６９８（ＪＰ，Ａ）
【文献】
特表２０１１−５１９９４０（ＪＰ，Ａ）
【文献】
特表２０１１−５１５３７１（ＪＰ，Ａ）
【文献】
米国特許出願公開第２０１１／００４６３７０（ＵＳ，Ａ１）
【文献】
特許第５４７５８８８（ＪＰ，Ｂ２）
(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）
C07D
ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）、ＣＡｐｌｕｓ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(５−クロロ−２−フルオロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチルを活性成分として含む、癌の処置剤であって、さらなる治療剤と逐次投与することにより特徴付けられる、処置剤。
【請求項2】
癌が、肺癌、膵臓癌、膀胱癌、結腸癌、骨髄障害、前立腺癌、甲状腺癌、黒色腫、腺腫ならびに卵巣、眼、肝臓、胆管および神経系の癌から成る群から選択される、請求項１に記載の処置剤。
【請求項3】
さらなる治療剤が抗癌剤、鎮痛剤、制吐剤、抗鬱剤または抗炎症剤を含む、請求項１または２に記載の処置剤。
【請求項4】
さらなる治療剤が異なるＲａｆキナーゼ阻害剤またはＭＥＫ、ｍＴＯＲ、ＨＳＰ９０、ＡＫＴ、ＰＩ３Ｋ、ＣＤＫ９、ＰＡＫ、タンパク質キナーゼＣ、ＭＡＰキナーゼ、ＭＡＰＫキナーゼもしくはＥＲＫの阻害剤である、請求項３に記載の処置剤。
【請求項5】
ＭＥＫ阻害剤が：ＡＳ７０３０２６；ＭＳＣ１９３６３６９Ｂ；ＧＳＫ１１２０２１２；ＡＺＤ６２４４；ＰＤ−０３２５９０１；ＡＲＲＹ−４３８１６２；ＲＤＥＡ１１９；ＧＤＣ０９４１；ＧＤＣ０９７３；ＴＡＫ−７３３；ＲＯ５１２６７６６；およびＸＬ−５１８から選択される、請求項４に記載の処置剤。
【請求項6】
ＭＥＫ阻害剤がＡＲＲＹ−４３８１６２である、請求項５に記載の処置剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照本出願は、２００９年８月２８出願の米国仮出願６１／２３８,０７３および２０１０年３月１１日出願の米国仮出願６１／３１３,０３９に基づく優先権を主張する。これらの出願の全部の開示を、全体的に引用することにより、あらゆる目的のために、本明細書に包含させる。
【0002】
発明の背景発明の分野
本発明は、新規化合物群、かかる化合物を含む医薬組成物および異常なまたは脱制御されたキナーゼ活性と関連する疾患または障害、特にＢ−Ｒａｆの異常な活性化が関与する疾患または障害を処置または予防するためのかかる化合物の使用法を提供する。
【背景技術】
【0003】
背景タンパク質キナーゼ類は、広範囲の細胞過程の制御および細胞機能の制御の維持に中心的役割を有するタンパク質の大きなファミリーを表す。これらのキナーゼ類の一部についての非限定的リストは：受容体チロシンキナーゼ類、例えば血小板由来増殖因子受容体キナーゼ(ＰＤＧＦ−Ｒ)、神経増殖因子受容体、ｔｒｋＢ、Ｍｅｔおよび線維芽細胞増殖因子受容体、ＦＧＦＲ３；非受容体チロシンキナーゼ類、例えばＡｂｌおよび融合キナーゼＢＣＲ−Ａｂｌ、Ｌｃｋ、Ｃｓｋ、Ｆｅｓ、Ｂｍｘおよびｃ−ｓｒｃ；およびセリン／スレオニンキナーゼ類、例えばＢ−Ｒａｆ、ｓｇｋ、ＭＡＰキナーゼ類(例えば、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６など)およびＳＡＰＫ２α、ＳＡＰＫ２βおよびＳＡＰＫ３を含む。異常キナーゼ活性が、良性および悪性増殖性障害ならびに免疫系および神経系の不適切な活性化に起因する疾患を含む多くの疾患状態において観察されている。
【0004】
本発明の新規化合物は、Ｂ−Ｒａｆまたはその変異形態(例えばＶ６００Ｅ)の活性を阻害し、それ故、Ｂ−Ｒａｆ関連疾患の処置に有用であると予測される。
【発明の概要】
【0005】
発明の概要一つの面において、本発明は、式Ｉ：
【化1】
ＹはＮおよびＣＲ６から選択され；
Ｒ１は水素、−Ｘ１Ｒ８ａ、−Ｘ１ＯＸ２Ｒ８ａ、−Ｘ１Ｃ(Ｏ)ＮＲ８ａＲ８ｂ、−Ｘ１ＮＲ８ａＸ２Ｒ８ｂ、−Ｘ１ＮＲ８ａＣ(Ｏ)Ｘ２ＯＲ８ｂ、−Ｘ１ＮＲ８ａＣ(Ｏ)Ｘ２ＮＲ８ａＲ８ｂ、−Ｘ１ＮＲ８ａＳ(Ｏ)０−２Ｒ８ｂから選択され；ここで、各Ｘ１は独立してＣ１−４アルキレンであり；Ｘ１は、場合によりヒドロキシ、ハロ、シアノ、Ｃ１−４アルキル、ハロ置換Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシおよびハロ置換Ｃ１−４アルコキシから独立して選択される基で置換されている１〜３個の水素を有してよく；ここで、Ｘ２は結合およびＣ１−４アルキレンから選択され；ここで、Ｒ８ａおよびＲ８ｂは独立して水素、Ｃ１−６アルキル、ハロ置換Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、ヘテロアリールおよびＣ３−８ヘテロシクロアルキルから選択され；ここで、Ｒ８ａまたはＲ８ｂのシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリールは、場合によりアミノ、シアノ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロ置換Ｃ１−４アルキルおよびハロ置換Ｃ１−４アルコキシから独立して選択される基で置換されている１〜３個の水素を有してよく；ただし、Ｒ１が−Ｘ１ＮＨＣ(Ｏ)ＯＲ８ｂおよび−Ｘ１ＮＲ８ａＳ(Ｏ)０−２Ｒ８ｂから選択されるとき、Ｒ８ｂは水素ではなく；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は独立して水素、ハロ、シアノ、Ｃ１−４アルキル、ハロ置換Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシおよびハロ置換Ｃ１−４アルコキシから選択され；ただし、Ｒ５がフルオロであり、Ｒ１が水素、−Ｘ１Ｒ８ａ、−Ｘ１ＯＸ２Ｒ８ａ、−Ｘ１Ｃ(Ｏ)ＮＲ８ａＲ８ｂ、−Ｘ１ＮＲ８ａＸ２Ｒ８ｂ、−Ｘ１ＮＲ８ａＣ(Ｏ)Ｘ２ＯＲ８ｂおよび−Ｘ１ＮＲ８ａＳ(Ｏ)０−２Ｒ８ｂから選択されるとき、Ｒ３およびＲ６は両方とも水素ではなく；
【0006】
Ｒ４は−Ｒ９および−ＮＲ１０Ｒ１１から選択され；ここで、Ｒ９はＣ１−６アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリール；ここで、Ｒ９の該アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールは、場合によりハロ、シアノ、Ｃ１−４アルキル、ハロ置換Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシおよびハロ置換Ｃ１−４アルコキシから独立して選択される基で置換されている１〜３個の水素を有してよく；そしてＲ１０およびＲ１１は独立して水素およびＲ９から選択され；Ｒ７は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ３−５シクロアルキルおよびＣ３−５ヘテロシクロアルキルから選択され；ここで、Ｒ７の該アルキル、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルは場合によりハロ、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１−４アルキル、ハロ置換Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシおよびハロ置換Ｃ１−４アルコキシから独立して選択される基で置換されている１〜３個の水素を有してよい。〕
の化合物およびそのＮ−オキシド誘導体、プロドラッグ誘導体、被保護誘導体、互変異性体、個々の異性体および異性体混合物；およびかかる化合物の薬学的に許容される塩および溶媒和物(例えば水和物)を提供する。
【0007】
第二の面において、本発明は、式Ｉの化合物またはそのＮ−オキシド誘導体、個々の異性体および異性体混合物；またはその薬学的に許容される塩を、１種以上の適当な添加物と共に含む、医薬組成物を提供する。
【0008】
第三の面において、本発明は、動物におけるキナーゼ活性、特にＢ−Ｒａｆ活性の阻害が疾患の病状および／または症状を予防、阻止または改善する疾患を処置する方法であって、該動物に治療有効量の式Ｉの化合物またはそのＮ−オキシド誘導体、個々の異性体および異性体混合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。
【0009】
第四の面において、本発明は、動物におけるキナーゼ活性、特にＢ−Ｒａｆ活性、特に変異Ｂ−ｒａｆ(例えばＶ６００Ｅ)が疾患の病状および／または症状に関与する疾患の処置用医薬の製造における、式Ｉの化合物の使用を提供する。
【0010】
第五の面において、本発明は、式Ｉの化合物およびそのＮ−オキシド誘導体、プロドラッグ誘導体、被保護誘導体、個々の異性体および異性体混合物およびその薬学的に許容される塩の製造方法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【0012】
発明の詳細な記載定義
基としておよび他の基、例えばハロ置換アルキルおよびアルコキシの構造要素としての“アルキル”は直鎖でも分枝鎖でもよい。Ｃ１−４−アルコキシはメトキシ、エトキシなどを含む。ハロ置換Ｃ１−４アルキルは、水素の何れかがハロゲンで置換されていてよいアルキル基(分枝または非分枝)を意味する。例えば、ハロ置換Ｃ１−４アルキルはトリフルオロメチル、ジフルオロエチル、ペンタフルオロエチルなどであり得る。同様に、ヒドロキシ置換Ｃ１−６アルキルは、水素の何れかがヒドロキシルで置換されていてよいアルキル基(分枝または非分枝)を意味する。例えば、ヒドロキシ置換Ｃ１−６アルキルは２−ヒドロキシエチルなどを含む。同様に、シアノ置換Ｃ１−６アルキルは、水素の何れかがシアノで置換されていてよいアルキル基(分枝または非分枝)を意味する。
【0013】
“アリール”は、６〜１０個の環炭素原子を含む、単環式または縮合二環式芳香環を意味する。例えば、アリールはフェニルまたはナフチル、好ましくはフェニルであり得る。“アリーレン”は、アリール基由来の二価基を意味する。
【0014】
“シクロアルキル”は、示す数の環原子を含む、飽和または部分的不飽和の、単環式、縮合二環式または架橋多環式環を意味する。例えば、Ｃ３−１０シクロアルキルはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどを含む。
【0015】
“ヘテロアリール”は、１個以上の環員がヘテロ原子である場合の、上にアリールとして定義したものである。例えば、ヘテロアリールはピリジル、インドリル、インダゾリル、キノキサリニル、キノリニル、ベンゾフラニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾ[１,３]ジオキソール、イミダゾリル、ベンゾ−イミダゾリル、ピリミジニル、フラニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピラゾリル、チエニルなどを含む。
【0016】
“ヘテロシクロアルキル”は、示す環炭素の１個以上が、−Ｏ−、−Ｎ＝、−ＮＲ−、−Ｃ(Ｏ)−、−Ｓ−、−Ｓ(Ｏ)−または−Ｓ(Ｏ)２−(式中、Ｒは水素、Ｃ１−４アルキルまたは窒素保護基である)で置き換わっている、本明細書で定義したシクロアルキルを意味する。例えば、本発明の化合物を記載するために本明細書で使用するＣ３−８ヘテロシクロアルキルは、２Ｈ−ピラン、４Ｈ−ピラン、ピペリジン、１,４−ジオキサン、モルホリン、１,４−ジチアン、チオモルホリノ、イミダゾリジン−２−オン、テトラヒドロフラン、ピペラジン、１,３,５−トリチアン、ピロリジン、ピロリジニル−２−オン、ピペリジン、ピペリジノン、１,４−ジオキサ−８−アザ−スピロ[４.５]デク−８−イルなどを含む。
【0017】
“ハロゲン”(またはハロ)はクロロ、フルオロ、ブロモまたはヨードを意味する。“ｐＭＥＫ”はリン酸化Ｍｅｋを意味する。
“ｐＥＲＫ”はリン酸化ＥＲＫを意味する。
【0018】
“処置”、“処置する”および“処置し”は、疾患および／またはその随伴症状を軽減または寛解させる方法を意味する。本発明の化合物は、Chemdraw Ultra(Version 10.0)および／またはChemAxon Name Generator(JChem Version 5.3.1.0)を使用して命名する。
【0019】
好ましい態様の記載本発明は、キナーゼ関連疾患、特にＢ−Ｒａｆキナーゼ関連疾患；例えば、転移性黒色腫、固形腫瘍、脳腫瘍、例えば多形神経膠芽腫(ＧＢＭ)、急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)、前立腺癌、胃癌、乳頭様甲状腺癌腫、卵巣低悪性度癌および結腸直腸癌の処置のための化合物、組成物および方法を提供する。
【0020】
一つの態様において、式Ｉの化合物を参照して、Ｒ１は−Ｘ１Ｒ８ａおよび−Ｘ１ＮＨＣ(Ｏ)ＯＲ８ｂから選択され；ここで、各Ｘ１は独立してＣ１−４アルキレンであり；Ｘ１は、場合によりヒドロキシ、ハロ、シアノ、Ｃ１−４アルキルおよびハロ置換Ｃ１−４アルキルから選択される基で置換されている１〜３個の水素を有してよく；ここで、Ｒ８ａおよびＲ８ｂは独立して水素およびＣ１−６アルキルから選択され；ただし、Ｒ１が−Ｘ１ＮＨＣ(Ｏ)ＯＲ８ｂであるとき、Ｒ８ｂは水素ではない。
【0021】
他の態様は、式Ｉａ：【化2】
の化合物である。
【0022】
さらなる態様において、Ｒ４が−Ｒ９であり；ここで、Ｒ９がＣ１−３アルキルおよびＣ３−８シクロアルキルから選択され；ここで、Ｒ９の該アルキルまたはシクロアルキルは場合によりハロおよびハロ置換Ｃ１−４アルキルから独立して選択される基で置換されている１〜３個の水素を有してよい。
【0023】
さらなる態様において、Ｒ２が水素およびフルオロから選択され；Ｒ３がクロロ、フルオロおよびメチルから選択され；Ｒ５が水素、クロロおよびフルオロから選択され；ＹがＮおよびＣＲ６から選択され；Ｒ６が水素およびフルオロから選択される。
【0024】
さらなる態様は、次のものから選択される化合物である：Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(３−クロロ−５−メタンスルホンアミドフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−[(４−{３−[２−フルオロ−３−(プロパン−１−スルホンアミド)フェニル]−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル}ピリミジン−２−イル)アミノ]プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(２−フルオロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−[(４−{３−[３−クロロ−５−(プロパン−１−スルホンアミド)フェニル]−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル}ピリミジン−２−イル)アミノ]プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(２,６−ジフルオロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−[(４−{３−[２,６−ジフルオロ−３−(プロパン−１−スルホンアミド)フェニル]−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル}ピリミジン−２−イル)アミノ]プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−{[４−(３−{２−フルオロ−３−[(３,３,３−トリフルオロプロパン)スルホンアミド]フェニル}−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イル]アミノ}プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(３−クロロ−２−メタンスルホンアミドピリジン−４−イル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(３−フルオロ−２−メタンスルホンアミドピリジン−４−イル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(２−クロロ−３−エタンスルホンアミド−４,５−ジフルオロフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(２,４−ジフルオロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[１−(プロパン−２−イル)−３−(２,４,５−トリフルオロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(３−メタンスルホンアミドフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(３−エタンスルホンアミド−２,４−ジフルオロフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−２−({４−[３−(５−クロロ−２−フルオロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロピル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(５−クロロ−２−フルオロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１−(オキサン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−[(４−{３−[２,４−ジフルオロ−３−(プロパン−１−スルホンアミド)フェニル]−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル}ピリミジン−２−イル)アミノ]プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(３−シクロプロパンスルホンアミド−２,５−ジフルオロフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(５−クロロ−３−シクロプロパンスルホンアミド−２−フルオロフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；およびＮ−[(２Ｓ)−１−[(４−{３−[５−クロロ−２−フルオロ−３−(プロパン−１−スルホンアミド)フェニル]−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル}ピリミジン−２−イル)アミノ]プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル。
【0025】
他の態様は、式Ｉｂ：【化3】
の化合物である。
【0026】
さらなる態様は、次のものから選択される化合物である化合物である：Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(５−クロロ−２−フルオロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(２,５−ジフルオロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(５−クロロ−２−フルオロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(２−フルオロ−３−メタンスルホンアミド−５−メチルフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(２−クロロ−３−メタンスルホンアミド−５−メチルフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(２−クロロ−５−フルオロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｒ)−１−({４−[３−(５−クロロ−２−フルオロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(２,５−ジクロロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル；およびＮ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(５−クロロ−２−フルオロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル。
【0027】
他の態様は、次のものから選択される化合物である：Ｎ−[５−クロロ−３−(４−{２−[(２−シアノエチル)アミノ]ピリミジン−４−イル}−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−３−イル)−２−フルオロフェニル]メタンスルホンアミド；Ｎ−{５−クロロ−３−[４−(２−{[２−(ジメチルアミノ)エチル]アミノ}ピリミジン−４−イル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−３−イル]−２−フルオロフェニル}メタンスルホンアミド；Ｎ−(５−クロロ−２−フルオロ−３−{４−[２−(メチルアミノ)ピリミジン−４−イル]−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−３−イル}フェニル)メタンスルホンアミド；およびＮ−{３−[４−(２−アミノピリミジン−４−イル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−３−イル]−５−クロロ−２−フルオロフェニル}メタンスルホンアミド。
【0028】
さらなる態様は、下の実施例および表から選択される化合物である。
【0029】
さらなる態様は、次のものから選択される中間体化合物である：３−ブロモ−５−クロロ−２−フルオロアニリン；シアノ−(２−メチルチオ−ピリミジン−４−イル)−酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル；１−イソプロピル−４−(２−(メチルチオ)ピリミジン−４−イル)−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン；２−((２−ベンジリデン−１−エチルヒドラジニル)メチレン)−マロノニトリル；１−(３−アミノ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)エタノン；１−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)エタノン；１−(３−ヨード−１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)エタノン；１−(３−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)エタノン；３−(ジメチルアミノ)−１−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)プロプ−２−エン−１−オン；３−(ジメチルアミノ)−１−(３−ヨード−１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)プロプ−２−エン−１−オン；３−(ジメチルアミノ)−１−(３−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)プロプ−２−エン−１−オン；４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−アミン；４−(３−ヨード−１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−アミン；４−(３−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−アミン；４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−オール；２−クロロ−４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン；１−(４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル；１−(４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸(Ｒ)−メチル；１−(４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−ｔｅｒｔ−ブチル；３−(４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパンニトリル；４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−Ｎ−メチルピリミジン−２−アミン；Ｎ１−(４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イル)−Ｎ２,Ｎ２−ジメチルエタン−１,２−ジアミン；Ｎ−(３−ブロモ−２,４−ジフルオロフェニル)プロパン−１−スルホンアミド；３−フルオロ−４−ヨードピリジン−２−アミン；３−クロロ−４−ヨードピリジン−２−アミン；３−ブロモ−２,５,６−トリフルオロアニリン；２,４−ジブロモ−３,６−ジクロロアニリン；３−ブロモ−２−クロロ−５−メチルアニリン；３−ブロモ−２,５−ジフルオロアニリン；３−ブロモ−５−クロロ−２−フルオロ安息香酸；３−ブロモ−５−クロロ−２−フルオロフェニルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル；３−ブロモ−２−フルオロ−５−メチルフェニルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル；５−クロロ−２−フルオロ−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)フェニルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル；２,６−ジフルオロ−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)フェニルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル；Ｎ−(２,４−ジフルオロ−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)フェニル)プロパン−１−スルホンアミド；２−(２−フルオロ−３−ニトロフェニル)−４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン；２,５−ジフルオロ−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)アニリン；２−クロロ−５−フルオロ−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)アニリン；２,５−ジクロロ−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)アニリン；２−クロロ−５−メチル−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)アニリン；２−フルオロ−５−メチル−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)フェニルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル；３−フルオロ−４−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)ピリジン−２−アミン；２,３,６−トリフルオロ−５−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)アニリン；３−クロロ−４−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)ピリジン−２−アミン；３−クロロ−５−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)アニリン；および３−メトキシ−２−メチル−５−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)アニリン。
【0030】
本発明はまた本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩の全ての適当な同位体置換体も含む。本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩の同位体置換体は、少なくとも１個の原子が、同じ原子番号を有するが、原子質量が通常天然で見られる原子質量と異なる原子に置き換わっているものと定義する。本発明の化合物およびその薬学的に許容される塩に取り込みうる同位体の例は、水素、炭素、窒素および酸素の同位体、例えば２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３５Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌおよび１２３Ｉを含むが、これらに限定されない。本発明の化合物およびその薬学的に許容される塩のある同位体置換体、例えば、放射活性同位体、例えば３Ｈまたは１４Ｃが取り込まれているものは、薬物および／または基質組織分布試験に有用である。具体例として、３Ｈおよび１４Ｃ同位体はその製造の容易さおよび検出能のために使用できる。他の例において、２Ｈのような同位体での置換は、例えば大きな代謝安定性に起因するある種の治療的利点、例えばインビボ半減期の延長または必要投与量の減少をもたらし得る。本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩の同位体置換体は、一般に適当な反応材の適当な同位体置換体を使用して、慣用法により製造できる。
【0031】
あるＲａｆ阻害剤は、野生型Ｂ−Ｒａｆ細胞におけるＭＥＫおよびＥＲＫシグナリングの亢進に加えて、また癌細胞株で細胞増殖を誘発し、線維芽細胞の形質転換および増殖を誘発する。下流シグナリングの誘発は、以前に公開されたＲａｆ経路フィードバックループにあるとされている。しかしながら、ｐＭＥＫおよびｐＥＲＫの誘発は、Ｒａｆ阻害剤処置数分以内に、報告されたフィードバックリン酸化事象がＢ−ＲａｆおよびＣ−Ｒａｆで観察される前にすら起こり得る。シグナリングおよび細胞増殖の誘発は、両方とも二相性パターンで起こり、低化合物濃度(０.０１−０.１μM)で最大誘発を起こし、高化合物濃度(１−１０μM)であまり大きくない誘発を起こす。このような二相性パターンはまた精製野生型Ｂ−ＲａｆまたはＣ−Ｒａｆを用いる生化学アッセイでも観察されており、２個のシグナリングサブユニットの相互作用を含む機構を示唆する。加えて、Ｒａｆ二量体化が、Ｒａｆ分子のトランスリン酸化を介してではなく、恐らく、該キナーゼの立体構造的活性化により、ｐＭＥＫを上方制御できる。このモデルに一致して、Ｒａｆ阻害剤処置は細胞においてＢ−Ｒａｆ／Ｃ−Ｒａｆ二量体形成を誘発する。加えて、ｓｉＲＮＡでのＡ−またはＢ−Ｒａｆのノックダウンは、ｐＭＥＫおよびｐＥＲＫのＲａｆ阻害剤誘発を抑制できず、Ｃ−Ｒａｆのノックダウンのみがこの誘発を僅かに減少させる。顕著には、Ｋ−Ｒａｓ変異細胞におけるＫ−Ｒａｓのノックダウンもまたこの誘発を僅かに減少させ、この作用が主にＲａｓにより仲介されないことを暗示する。これらを合わせて、このデータは、１個のＲａｆ分子に結合する阻害剤が、二量体化および該二量体におけるパートナーＲａｆ分子の立体構造的活性化を誘発するモデルを示唆する。これは、なぜ野生型Ｒａｆおよび変異Ｒａｓ腫瘍が選択的Ｒａｆキナーゼ阻害剤に非感受性であるかを説明でき、また、強い分裂促進的シグナリングの誘発が正常組織の過増殖をもたらし得るため毒性についての重要な暗示も有するはずである。Ｒａｆ阻害剤誘発機構の理解が、改善された阻害剤の設計をもたらし得る。
【0032】
Ｒａｆ阻害剤との組み合わせにおけるＭＥＫ阻害剤の添加は、ＥＲＫシグナリングの阻害と、その結果としての細胞増殖および形質転換の減少をもたらす。ＭＥＫ阻害剤処置単独では、臨床において用量制限的毒性をもたらすため、ＲａｆとＭＥＫ阻害剤の組合せは、優れた処置戦略を提示し得る。
【0033】
本発明はまた本明細書に記載のＢ−Ｒａｆ阻害剤と他の薬剤との組合せも含む。特に、本発明はＭＥＫ１／２阻害剤の組合せを提供する。図１は、ＭＥＫ小分子阻害剤の添加がＲａｆ小分子阻害剤による誘発されたＥＲＫシグナリング、細胞増殖および形質転換を逆転できることを説明する。例えば、式Ｉの化合物(本発明の化合物９、すなわち：(１−(４−(３−(５−クロロ−２−フルオロ−３−(メチルスルホンアミド)フェニル)−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル)は、図１のＳＷ６２０細胞を使用したCell Titer Gloアッセイの負の阻害として見られる、細胞増殖の誘発をもたらし得る。Ｙ軸は負および正の阻害を示す。各実験は、１０〜０.００２μMの間の一連の９連続希釈として示す。化合物Ａ１(Ｎ−(４−メチル−３−(１−(６−(４−メチルピペラジン−１−イルアミノ)ピリミジン−４−イル)−１Ｈ−イミダゾール−２−イルアミノ)フェニル)−３−(トリフルオロメチル)ベンズアミド)は対照であり、Ａ３はＭＥＫ阻害剤(ＰＤ０３２５９０１)である。化合物９を、ＭＥＫ阻害剤Ａ３の非存在下ならびに１μM、０.１μMおよび０.０１μMの存在下で試験する。
【0034】
薬理学および有用性本発明の化合物は、キナーゼ類の活性を阻害し、それ故に、キナーゼ類が疾患の病状および／または症状に関与する疾患または障害の処置に有用である。ここに記載する化合物および組成物により阻害され、ここに記載する方法が有用であるキナーゼ類の例は、Ｂ−Ｒａｆの変異形態を含むＢ−Ｒａｆを含むが、これに限定されない。
【0035】
マイトージェン活性化タンパク質キナーゼ(ＭＡＰＫ)経路は、細胞増殖、生存、分化および遊走を制御するために協調する多くのエフェクター分子の活性を仲介する。細胞の、例えば、増殖因子、サイトカインまたはホルモンによる刺激は、原形質膜関連ＲａｓをＧＴＰ結合にし、それにより活性化してＲａｆを動員する。この相互作用は、ＭＡＰＫ／ＥＲＫ(ＭＥＫ)の直接リン酸化をもたらすＲａｆのキナーゼ活性を誘発し、それが細胞外シグナル関連キナーゼ(ＥＲＫ)をリン酸化する。続いて、活性化ＥＲＫが多様なエフェクター分子、例えば、キナーゼ類、ホスファターゼ類、転写因子および細胞骨格タンパク質をリン酸化する。それ故、Ｒａｓ−Ｒａｆ−ＭＥＫ−ＥＲＫシグナリング経路は、細胞表面受容体から核にシグナルを伝達し、例えば、細胞増殖および生存に必須である。このシグナリングカスケードの制御は、Ｒａｓ(Ｋ−Ｒａｓ、Ｎ−ＲａｓおよびＨ−Ｒａｓを含む)、Ｒａｆ(Ａ−Ｒａｆ、Ｂ−Ｒａｆ、Ｃ−Ｒａｆ／Ｒａｆ−１)、ＭＥＫ(ＭＥＫ−１およびＭＥＫ−２)およびＥＲＫ(ＥＲＫ−１およびＥＲＫ−２)の複数アイソフォームによりさらに富化される。ヒト癌の１０〜２０％が発癌性Ｒａｓ変異体を担持し、多くのヒト癌が活性化増殖因子受容体を有するため、この経路は介入のための理想的な標的である。
【0036】
多くのシグナリング経路におけるＲａｆの本質的役割および位置は、哺乳動物細胞における調節解除され、かつ優性な阻害性Ｒａｆ変異体を使用した試験ならびに生物設計上の生化学的および遺伝学的技術を用いた試験により証明されている。過去には、抗腫瘍剤標的としてのＲａｆに対する焦点は、Ｒａｓの下流エフェクターとしてのその機能に絞られていた。しかしながら、最近の発見は、Ｒａｆが発癌性Ｒａｓ対立遺伝子を必要とせずにある種の腫瘍の形成に顕著な役割を有し得ることを示唆する。特に、Ｂ−ＲａｆおよびＮ−Ｒａｓの活性化対立遺伝子が、黒色腫の〜７０％、乳頭様甲状腺癌腫の４０％、卵巣低悪性度癌の３０％および結腸直腸癌の１０％で見出されている。Ｋ−Ｒａｓの変異が膵臓癌の約９０％で起こる。ほとんどのＢ−Ｒａｆ変異はキナーゼドメイン内に見つかり、一置換(Ｖ６００Ｅ)が少なくとも８０％を占める。変異Ｂ−Ｒａｆタンパク質は、ＭＥＫに対する上昇したキナーゼ活性を介してまたはＣ−Ｒａｆの活性化を介してＲａｆ−ＭＥＫ−ＥＲＫ経路を活性化する。
【0037】
それ故、Ｂ−Ｒａｆに対するキナーゼ阻害剤は、多くのタイプのヒト癌、特に転移性黒色腫、固形腫瘍、脳腫瘍、例えば多形神経膠芽腫(ＧＢＭ)、急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)、肺癌；乳頭様甲状腺癌腫、卵巣低悪性度癌および結腸直腸癌の新しい治療機会を提供する。数種のＲａｆキナーゼ阻害剤がインビトロおよび／またはインビボアッセイで腫瘍細胞増殖を阻害する効果を示すとして報告されている(例えば、米国特許６,３９１,６３６、６,３５８,９３２、６,０３７,１３６、５,７１７,１００、６,４５８,８１３、６,２０４,４６７および６,２６８,３９１参照)。他の特許および特許出願は白血病(例えば、米国特許６,２６８,３９１、６,２０４,４６７、６,７５６,４１０および６,２８１,１９３；および放棄された米国特許出願２００２０１３７７７４および２００１０００６９７５参照)または乳癌(例えば、米国特許６,３５８,９３２、５,７１７,１００、６,４５８,８１３、６,２６８,３９１、６,２０４,４６７および６,９１１,４４６参照)の処置のためのＲａｆキナーゼ阻害剤の使用を示唆する。データは、Ｒａｆキナーゼ阻害剤がＭＡＰＫ経路を介してシグナリングを顕著に阻害でき、Ｂ−Ｒａｆ(Ｖ６００Ｅ)腫瘍の劇的退縮に至ることを証明する。
【0038】
本発明の化合物は、これらの癌細胞におけるシグナルカスケードを遮断することによりＢ−Ｒａｆキナーゼが関与する細胞過程を阻害し、最終的に細胞の静止および／または死を誘発する。
【0039】
前記によって、本発明は、さらに肺癌、前立腺癌、胃癌、膵臓癌、膀胱癌、結腸癌、骨髄障害、前立腺癌、甲状腺癌、黒色腫、腺腫ならびに卵巣、眼、肝臓、胆管および神経系の癌の予防または処置方法を提供する。さらに、本発明は、処置を必要とする対象における上に記載した疾患または障害のいずれかを予防または処置する方法であって、該対象に治療有効量(下の“投与および医薬組成物”参照)の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。上の使用の何れにおいても、必要投与量は投与方式、処置する特定の状態および望む処置によって異なる。
【0040】
投与および医薬組成物一般に、本発明の化合物は、治療有効量を、当業者に通常でかつ許容される既知の方式で、単独でまたは１種以上の治療剤と組み合わせて投与する。治療有効量は、疾患の重症度、対象の年齢および相対的健康、使用する化合物の効力および他の因子によって大きく変わり得る。一般に、満足のいく結果が、約０.０３〜３０mg／kg体重の１日投与量での全身投与で得られることが示される。大型哺乳動物、例えばヒトにおける指示される１日量は、約０.５mg〜約２０００mgの範囲であり、簡便には、例えば１日４回までの分割量でまたは遅延形態で投与する。経口投与に適当な単位投与形態は、約１〜５００mgの有効成分を含む。
【0041】
本発明の化合物は、医薬組成物として任意の簡便な経路で、特に経腸的に、例えば、経口的に、例えば、錠剤またはカプセル剤の形でまたは非経腸的に、例えば、注射用溶液または懸濁液の形で、局所的に、例えば、ローション、ゲル、軟膏またはクリームの形でまたは経鼻または坐薬形態で投与できる。遊離形または薬学的に許容される塩形態の本発明の化合物を少なくとも１種の薬学的に許容される担体または希釈剤医薬組成物は、混合、造粒またはコーティング法による簡便な方法で製造できる。例えば、経口組成物は、有効成分をａ)希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／またはグリシン；ｂ)滑剤、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸、そのマグネシウムまたはカルシウム塩および／またはポリエチレングリコール；錠剤についてはまたｃ)結合剤、例えば、ケイ酸アルミニウム・マグネシウム、デンプンペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよびまたはポリビニルピロリドン；所望によりｄ)崩壊剤、例えば、デンプン類、寒天、アルギン酸またはそのナトリウム塩または起沸性混合物；および／またはｅ)吸収剤、着色剤、香味剤および甘味剤と共に含む錠剤またはゼラチンカプセル剤である。注射用組成物は、等張水溶液または懸濁液であってよく、坐薬は脂肪エマルジョンまたは懸濁液から製造できる。組成物は滅菌してよくおよび／またはアジュバント、例えば防腐剤、安定化剤、湿潤剤または乳化剤、溶解促進剤、浸透圧調整用塩および／または緩衝剤を添加してよい。加えて、それらはまた他の治療的に価値ある物質を含み得る。例えば、本発明の化合物は、マイクロエマルジョン前濃縮物(ＭＥＰＣ)に製剤できる。式Ｉの化合物は、５６％PEG400、２９％cremophor ELおよび１５％オレイン酸の混合物中で４０mg／mlで調製できる。この混合物を、式Ｉの化合物無しで、最初にボルテックス処理／振盪により製造する。本発明の化合物を添加し、超音波を使用して粉末を媒体に分散させる。この混合物を８０℃で水浴中、約１時間撹拌しながら、１５分間毎に超音波処理して加熱する。この混合物は、室温で約１週間物理的および化学的に安定である。
【0042】
経皮適用のための適当な製剤は、有効量の本発明の化合物を担体と含む。担体は、宿主の皮膚を経る通過を助けるための吸収性の薬理学的に許容される溶媒を含み得る。例えば、経皮デバイスは、裏打ち部材、化合物を所望により担体と共に含む貯蔵部、場合により該化合物を宿主の皮膚に制御されかつ予定された速度で長時間にわたり送達するための速度制御バリアおよび該デバイスを皮膚に固定するための手段を含むバンデージの形である。マトリクス経皮製剤も使用し得る。例えば、皮膚および眼への局所適用に適当な製剤は、好ましくは当分野で既知の水溶液剤、軟膏剤、クリーム剤またはゲル剤である。これらは可溶化剤、安定化剤、張性増加剤、緩衝剤および防腐剤を含んでよい。
【0043】
本発明の化合物は、治療有効量を１種以上の治療剤と組み合わせて投与できる(組合せ剤)。例えば、他の抗腫瘍剤または抗増殖剤、例えば、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、挿入(intercalating)抗生物質、増殖因子阻害剤、細胞サイクル阻害剤、酵素、トポイソメラーゼ阻害剤、生物学的応答修飾剤、抗体、細胞毒、抗ホルモン剤、抗アンドロゲン、抗血管形成剤、キナーゼ阻害剤、パンキナーゼ阻害剤または増殖因子阻害剤と相乗効果が生じ得る。
【0044】
本発明の化合物は、治療有効量で、コーンデンプン、ポテトデンプン、タピオカデンプン、デンプンペースト、アルファ化デンプン、糖類、ゼラチン、天然ゴム類、合成ゴム類、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸、トラガカント、グアーガム、セルロース、エチルセルロース、酢酸セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶性セルロース、ケイ酸アルミニウム・マグネシウム、ポリビニルピロリドン、タルク、炭酸カルシウム、粉末化セルロース、デキストレート類、カオリン、マンニトール、ケイ酸、ソルビトール、寒天−寒天、炭酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ポラクリリンカリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、粘土、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、鉱油、軽油、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、他のグリコール類、ラウリル硫酸ナトリウム、水素化植物油、ピーナッツ油、綿実油、ヒマワリ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、ダイズ油、ステアリン酸亜鉛、オレイン酸ナトリウム、オレイン酸エチル、ラウリン酸エチル、シリカおよびこれらの組合せから選択される１種以上の適当な添加物と組み合わせて投与できる。
【0045】
本発明の一態様は、さらに対象に付加的治療剤を投与することを含む。該付加的治療剤は抗癌剤、鎮痛剤、制吐剤、抗鬱剤または抗炎症剤を含む。さらに、該付加的治療剤は異なるＲａｆキナーゼ阻害剤またはＭＥＫ、ｍＴＯＲ、ＨＳＰ９０、ＡＫＴ、ＰＩ３Ｋ、ＣＤＫ９、ＰＡＫ、タンパク質キナーゼＣ、ＭＡＰキナーゼ、ＭＡＰＫキナーゼもしくはＥＲＫの阻害剤であり、対象に本発明の化合物と同時に投与する。
【0046】
例えば、Ｒａｆ阻害剤と組み合わせたＭＥＫ阻害剤の添加は、ＥＲＫシグナリングの顕著な阻害と、その結果としての細胞増殖および形質転換の減少をもたらす。ＭＥＫ阻害剤処置単独が臨床において用量制限的毒性をもたらすため、ＲａｆとＭＥＫ阻害剤の組合せは、優れた処置戦略を示し得る。ＭＥＫ阻害剤の例はAS703026(EMD Serono)；MSC1936369B(EMD Serono)；GSK1120212(GlaxoSmithKline)；AZD6244(Memorial Sloan-Kettering Cancer Center)；PD-0325901(Pfizer)；ARRY-438162(Array BioPharma)；RDEA119(Ardea Biosciences, Inc.)；GDC0941(Genentech)；GDC0973(Genentech)；TAK-733(Millennium Pharmaceuticals, Inc.)；RO5126766(Hoffmann-La Roche)；およびXL-518(Exelixis)である。
【0047】
本発明の他の態様は、治療有効量の発明の概要の化合物(Ｒａｆ阻害剤)および少なくとも１種のＭＥＫタンパク質キナーゼ阻害剤を含む組合せおよび癌の処置方法である。
【0048】
本発明の化合物を他の治療剤と共に投与するとき、併用化合物の投与量は当然用いる併用剤のタイプ、用いる特定の薬物、処置すべき状態などにより変わる。
【0049】
本発明はまた、ａ)遊離形または薬学的に許容される塩形態のここに開示される本発明の化合物である第一剤およびｂ)少なくとも１種の併用剤を含む組合せ剤、例えばキットも提供する。キットはその投与のための指示を含み得る。
【0050】
用語“共投与”または“組合せ投与”またはここで使用する類似のものは、選択した複数治療剤の一患者への投与を包含することを意図し、複数薬物が必ずしも同一投与経路でまたは同時に投与されるものではない処置レジメンを含むことを意図する。
【0051】
ここで使用する用語“組合せ剤”は、１種を超える有効成分の混合または組合せ由来の製品を意味し、これらの有効成分が固定されたおよび固定されていない組合せの両方を包含する。用語“固定された組合せ”は、複数有効成分、例えば式Ｉの化合物と併用剤が、両方とも一患者に同時に一つのものまたは投与量として投与されることを意味する。用語“固定されていない組合せ”は、複数有効成分、例えば式Ｉの化合物と併用剤を、両方とも一患者に、別々の物として、一緒に、同時にまたは特定の時間制限なく逐次的に投与され、ここで、かかる投与が患者体内で２化合物の治療有効レベルを提供することを意味する。後者はまたカクテル療法、例えば３種以上の有効成分の投与にも適用される。
【0052】
本発明の化合物の製造方法本発明はまた本発明の化合物の製造方法も包含する。記載する反応において、反応性官能基、例えばヒドロキシ基、アミノ基、イミノ基、チオまたはカルボキシ基を、これらが最終生成物に望まれるとき、望まない反応への参加を避けるために保護する必要があるかもしれない。慣用の保護基を標準的実務に従い使用でき、例えば、T.W. Greene and P. G. M. Wuts in “Protective Groups in Organic Chemistry”, John Wiley and Sons, 1991を参照のこと。
【0053】
式Ｉの化合物を、次の反応スキームＩのとおりに進行させることにより製造できる：【化4】
【0054】
式２の化合物は、式３の化合物と式４のアルキル化剤の適当な溶媒(例えば、ＤＭＦ、ＤＭＳＯなど)および適当な塩基(例えば、炭酸カリウム、水素化ナトリウムなど)存在下での反応により製造できる。反応は約０℃から約１５０℃の範囲の温度で進行し、終了まで最大約２４時間かかり得る。反応混合物を場合により何らかの保護基を除去するためにさらに反応させる。
【0055】
式Ｉの化合物はまた次の反応スキームIIのとおりに進行させることにより製造できる：【化5】
【0056】
式Ｉの化合物はまた次ののとおりに進行させることにより製造できる反応スキームIII：【化6】
【0057】
式Ｉの化合物はまた、式７の化合物を式８の化合物と反応させて、式９の化合物を産生する類似の鈴木反応プロトコルにより製造できる。Ｒ９０基の脱保護に続き、反応スキームIIに記載するスルホニル化反応により、式Ｉａの化合物を産生する。
【0058】
例えば錫反応材(スティルカップリング)または亜鉛反応材(根岸カップリング)を使用する他の有機金属カップリング反応も、反応スキームIIIに記載するホウ素反応材を使用する鈴木カップリング反応に変えて用いられることは当業者には当然である。
【0059】
式７の化合物を、次の反応スキームIVのとおりに進行させることにより製造できる：【化7】
【0060】
この場合は、Ｍは脱離基(例えば、クロロ、ブロモ、ヨード、メタンスルホニルなど)であり、Ｒ５０は脱離基(例えば、ヨード、ブロモ、クロロ、トリフルオロメタンスルホニルオキシなど)であり、Ｒ７は発明の概要に定義したとおりである。式７の化合物を、式１０のアミン化合物と式１１の化合物を反応させることにより製造できる。反応は適当な塩基(例えば、トリエチルアミン、炭酸カリウムなど)の存在下、溶媒中、例えばイソプロパノール、ＤＭＳＯ、ＮＭＰまたはジオキサン中、約２５〜約１２０℃の温度で行う。数例では、新たに導入したＲ１基のさらなる変換をその後に行い、最終的に意図するＲ１基に至る。
【0061】
Ｍがメタンスルホニルである式１１の化合物の下位群の式１１ａの化合物を、次の反応スキームＶのとおりに進行させることにより製造できる：【化8】
【0062】
Ｒ５０がクロロ、ブロモまたはヨードである式１２の化合物を、その後、式１３のアミン化合物と適当なジアゾ化剤系(例えば、銅(Ｉ)ハライド塩と組み合わせた亜硝酸、ヨウ化銅(Ｉ)／ヨウ化メチレンと組み合わせた亜硝酸イソアミル、アセトニトリル中の三フッ化ホウ素、ヨウ素およびヨウ化カリウムと組み合わせた亜硝酸イソアミルなど)と反応させることにより製造できる。反応は約０〜約８０℃の温度で行い、終了まで約１〜６時間かかる。
【0063】
式１３の化合物は、反応スキームＩで記載したとおり、式１４の化合物と式３の化合物を反応させることにより製造できる。
【0064】
式１４の化合物は、式１５のエナミノニトリル化合物を、ヒドラジンまたはヒドラジン塩を用いて適当な溶媒(例えば、エタノールなど)中で環化させることにより製造できる。反応は約２５〜約１００℃の温度で行い、終了まで約１時間から約２４時間かかり得る。
【0065】
あるいは、式１３の化合物を、式１５の化合物から、一工程法で、式１５の化合物を一置換ヒドラジンＲ７ＮＨ−ＮＨ２と反応させることにより製造できる。反応は約２５〜約１００℃の温度で行い、終了まで約１時間から約２４時間かかり得る。
【0066】
式１５の化合物を、次に、式１６の化合物と、ＤＭＦ ＤＭＡまたはブレデレック反応材を、場合により共溶媒、例えばＤＭＦの存在下、約５０〜約１５０℃の温度で反応させることにより製造できる。反応は終了まで約１〜約２４時間かかる。
【0067】
式１６の化合物は、式１７の化合物を、適当な酸(例えば、ｐ−トルエンスルホン酸など)で、適当な不活性溶媒(例えば、トルエンなど)の存在下処理することにより製造できる。反応は約５０〜約１２０℃の温度で行い、終了まで約１〜約２４時間かかる。
【0068】
最後に、式１７の化合物を、４−クロロ−２−(メチルチオ)ピリミジンとシアノ酢酸ｔｅｒｔ−ブチルを、適当な塩基(例えば、水素化ナトリウムなど)および適当な溶媒(例えば、ＤＭＳＯなど)の存在下、約２５〜約８０℃の温度で反応させることにより製造できる。反応は終了まで約１〜約２４時間かかる。
【0069】
Ｍがハロゲンである式１１の化合物の下位群である式１１ｂの化合物を、次の反応スキームVIのとおりに進行させることにより製造できる：【化9】
【0070】
式２０の化合物を、続いて、式２２の化合物とグアニジンまたはグアニジン塩(例えば、塩酸グアニジンまたは炭酸グアニジン)の、場合により塩基(例えば、水酸化リチウムなど)存在下、適当な溶媒(例えば、ｓｅｃ−ブタノール、ＮＭＰなど)中、約５０〜約１８０℃の温度で、約２〜約４８時間の反応により製造できる。
【0071】
式２２の化合物を、式２３の化合物とＤＭＦ ＤＭＡまたはブレデレック反応材を、場合により共溶媒、例えばＤＭＦの存在下、約５０〜約１５０℃の温度で反応させることにより製造できる。反応は終了まで約１〜約２４時間かかる。
【0072】
Ｒ５０がクロロ、ブロモまたはヨードである式２３の化合物は、式２４のアミン化合物と適当なジアゾ化剤系(例えば、銅(Ｉ)ハライド塩と組み合わせた亜硝酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびヨウ化カリウムと組み合わせた亜硝酸ナトリウムまたは三フッ化ホウ素−ＴＨＦ、ヨウ素、ヨウ化カリウムおよびアセトニトリルと組み合わせた亜硝酸イソアミル)の反応により製造できる。反応は約０〜約８０℃の温度で行い、終了まで約１〜６時間かかる。
【0073】
式２４の化合物を、次いで、式２５の化合物と有機金属反応材、例えばメチルリチウム、メチルリチウム−リチウムブロマイド複合体またはメチルマグネシウムハライド反応材を、不活性溶媒中、例えばＴＨＦ、エーテルまたはシクロプロピルメチルエーテル中、約０〜約１００℃の温度で反応させ、続いて水性反応停止溶液で処理することにより製造する。反応は終了まで約２〜約４８時間かかる。
【0074】
式２５の化合物は、反応スキームＩに記載のとおり式２６の化合物と式３の化合物を反応させることにより製造できる。あるいは、式２５の化合物を、２個のＲ”基が一体となって酸不安定保護基(例えば、イミン、例えばベンジリデンまたはカルバミン酸エステル、例えばカルバミン酸ｔ−ブチル)を形成する式２７の化合物から製造できる。反応は、式２７の化合物を水性酸溶液(例えば、濃塩酸など)で、溶媒中、例えばエタノール中、約２５〜約１００℃の温度で処理することにより行う。好ましくは２個のＲ”基は、一体となってイミン、例えばベンジリデンを形成する。
【0075】
式２７の化合物を、次に、式２８の化合物と、２個のＲ”基が一体となって酸不安定保護基(例えば、イミン、例えばベンジリデンまたはカルバミン酸エステル、例えばカルバミン酸ｔ−ブチル)を形成する式２９の化合物を反応させることにより製造する。反応は溶媒(例えばトルエン、メタノールまたはエタノール)中、約２５〜約１２０℃の温度で、場合により触媒、例えばＤＭＡＰの存在下で行い、終了まで約１〜約２４時間かかる。場合により、本反応は、不活性溶媒(例えば、ＴＨＦなど)中、塩基(例えばｎ−ブチルリチウムなど)の存在下、約−８０〜約２５℃の温度で、約０.５〜約１２時間かけて行う。
【0076】
式２９の化合物を当業者に既知の方法により製造できる。例えば、２個のＲ”基が一体となってベンジリデン基を形成する式２９の化合物を、ベンズアルデヒドと一置換ヒドラジンＲ７ＮＨＮＨ２の、溶媒中、例えばエタノールまたはトルエン中、約１〜約２４時間、約２５〜約１２０℃の温度での反応により製造できる。あるいは、本反応を、塩基(例えば酢酸ナトリウムまたはトリエチルアミン)と組み合わせた一置換ヒドラジン塩(例えば、塩酸塩またはシュウ酸塩など)を使用して実施できる。
【0077】
式８または式８ａの化合物は、次の反応スキームVIIに記載のとおり製造できる：【化10】
【0078】
式７０の化合物は、次の反応スキームVIIIに記載するとおりに製造できる：【化11】
【0079】
式７１の化合物は、次に、式７３の化合物のヒドロキシ基の適当な脱離基への変換と、続くアジドアニオンへの置換から成る、２工程法により製造できる。第一工程について、適当な反応材は、三臭化リンまたはメタンスルホニルクロライドと適当な塩基、例えばトリエチルアミンの組合せを含む。反応は適当な溶媒(例えば、ジクロロメタンなど)中、約０〜約５０℃の温度で行う。第二工程について、置換は、アジド剤(例えば、ナトリウムアジドなど)を用いて、適当な溶媒(例えば、ＤＭＦまたはＤＭＳＯ)中、約２５〜約１５０℃の温度で行う。反応は終了まで約１〜約２４時間かかる。あるいは、本変換を、式７３の化合物のホスフィン剤(例えば、トリフェニルホスフィンなど)およびアゾジカルボキシレート剤(例えば、ジエチルアゾジカルボキシレートなど)で、アジ化水素酸(その場でアジド塩、例えばナトリウムアジドおよび酸から形成)の存在下に処理することにより一工程で実施できる。反応は約−８０℃〜約７５℃の温度で行い、終了まで約１〜約２４時間かかる。
【0080】
式７３の化合物は、式７４の化合物をクロロホルメート(例えば、クロロギ酸メチルなど)、あるいはアルコキシカルボニル化剤、例えばジカルボン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルで処理することにより製造できる。反応は不活性溶媒(例えば、ジクロロメタンなど)中、約−８０〜約２５℃の温度で行い、終了まで約１〜約１２時間かかる。塩基、例えばトリエチルアミンを場合により使用してよい。本反応はまた溶媒、例えばＴＨＦまたはジオキサンおよび塩基性水溶液、例えば重炭酸ナトリウム水溶液から成る２相系で、約２５℃の温度で、約２〜約１６時間で行ってもよい。
【0081】
式７０の化合物はまた次の反応スキームIXに記載するとおりにも製造できる：【化12】
【0082】
式７０の化合物は一エナンチオマーであるかまたはエナンチオマー混合物であり、式７０の化合物の一エナンチオマーを、式７４または式７７の化合物の適当な一エナンチオマーから出発して得ることができることは、当業者が理解するところである。
【0083】
式Ｉａの化合物の合成の詳細な例は、下の実施例に見ることができる。
【0084】
本発明の化合物を製造するための付加的工程本発明の化合物は、遊離塩基形態の化合物を薬学的に許容される無機または有機酸と反応させることにより、薬学的に許容される酸付加塩として製造できる。あるいは、薬学的に許容される塩基付加塩の本発明の化合物を、遊離酸形態の化合物を薬学的に許容される無機または有機塩基と反応させることにより、製造できる。
【0085】
あるいは、塩形態の本発明の化合物を、塩の出発物質または中間体を使用して製造できる。
【0086】
遊離酸または遊離塩基形態の本発明の化合物を、それぞれ対応する塩基付加塩または酸付加塩形態から製造できる。例えば酸付加塩形態の本発明の化合物を、対応する遊離塩基に、適当な塩基(例えば、水酸化アンモニウム溶液、水酸化ナトリウムなど)で処理することにより変換できる。塩基付加塩形態の本発明の化合物を、対応する遊離酸に適当な酸(例えば、塩酸など)で処理することにより製造できる。
【0087】
酸化されていない形態の本発明の化合物を、本発明の化合物のＮ−オキシドから、還元剤(例えば、硫黄、二酸化硫黄、トリフェニルホスフィン、水素化ホウ素リチウム、水素化ホウ素ナトリウム、三塩化リン、三臭化リンなど)で、適当な不活性有機溶媒(例えばアセトニトリル、エタノール、水性ジオキサンなど)中、０〜８０℃で処理することにより製造できる。
【0088】
本発明の化合物のプロドラッグ誘導体を、当業者に既知の方法により製造できる(例えば、さらなる詳細については、Saulnier et al., (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985を参照のこと)。例えば、適当なプロドラッグを、誘導体化されていない本発明の化合物を、適当なカルバミル化剤(例えば、１,１−アシルオキシアルキルカルバノクロリダート、炭酸パラ−ニトロフェニルなど)で処理することにより製造できる。
【0089】
本発明の化合物の被保護誘導体を、当業者に既知の方法により製造できる。保護基の創成およびその除去に適用可能な技術の詳細な記載は、T. W. Greene, “Protecting Groups in Organic Chemistry”, 3rd edition, John Wiley and Sons, Inc., 1999に見ることができる。
【0090】
本発明の化合物を、簡便には、溶媒和物(例えば、水和物)として製造できまたはそれが本発明の工程中に形成する。本発明の化合物の水和物は、簡便には、水／有機溶媒混合物から、有機溶媒、例えばジオキシン、テトラヒドロフランまたはメタノールを使用して、再結晶により製造できる。
【0091】
本発明の化合物を、本化合物のラセミ混合物を光学活性分割剤と反応させて、ジアステレオ異性化合物の対を形成させ、ジアステレオマーを分離し、光学的に純粋なエナンチオマーを回収することにより、その個々の立体異性体として製造できる。エナンチオマーの分割は、本発明の化合物の共有結合したジアステレオマー誘導体を使用して実施できるが、分離可能な複合体が好ましい(例えば、結晶性ジアステレオマー塩)。複数ジアステレオマーは異なる物理特性(例えば、融点、沸点、溶解度、反応性性など)を有し、これらの差異を利用して容易に分割できる。ジアステレオマーは、クロマトグラフィーによりまたは好ましくは、溶解度の差異に基づく分離／分割技術により分割できる。光学的に純粋なエナンチオマーを、次いで、分割剤と共に、ラセミ化をもたらさない何らかの実際的な方法により回収する。化合物のラセミ混合物からの立体異性体の分割に適用可能な技術のより詳細な記載は、Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, “Enantiomers, Racemates and Resolutions”, John Wiley And Sons, Inc., 1981に見ることができる。
【0092】
要約すると、式Ｉの化合物は、次のものを含む方法により製造できる：(ａ) 反応スキームＩ〜IXのもの；および
(ｂ) 場合により本発明の化合物の薬学的に許容される塩への変換；
(ｃ) 場合により塩形態の本発明の化合物の非塩形態への変換；
(ｄ) 場合により酸化されていない形態の本発明の化合物の薬学的に許容されるＮ−オキシドへの変換；
(ｅ) 場合によりＮ−オキシド形態の本発明の化合物のその酸化されていない形態への変換；
(ｆ) 場合により異性体混合物からの本発明の化合物の個々の異性体、例えば立体異性体の分割；
(ｇ) 場合により誘導体化されていない本発明の化合物の薬学的に許容されるプロドラッグ誘導体への変換；および
(ｈ) 場合によりプロドラッグ誘導体の本発明の化合物のその誘導体化されていない形態への変換。
【0093】
出発物質の製造が特に記載されていない限り、その化合物は既知であるかまたは当分野で既知のもしくは下の実施例に記載する方法に準じて製造できる。
【0094】
当業者は、上の変換が本発明の化合物の製造のための代表的な方法に過ぎず、他の既知方法を同様に使用できることを認識する。
【実施例】
【0095】
本発明を、本発明に従う式Ｉの化合物の製造を説明する、次の中間体および実施例化合物により説明するが、限定しない。
【0096】
使用する略語は次の通りである：ベンジルオキシカルボニル(Ｃｂｚ)；ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル(ＢＯＣ)；細胞増殖(ＣＰ)；ジクロロメタン(ＤＣＭ)；Ｎ,Ｎ−ジ−イソプロピルエチルアミン(ＤＩＰＥＡ)；[１,１’−ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(II)(ＰｄＣｌ２(ｄｐｐｆ))；１,２−ジメトキシエタン(ＤＭＥ)；Ｎ,Ｎ−ジメチルアセトアミド(ＤＭＡ)；Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン(ＤＭＡＰ)；Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド(ＤＭＦ)；Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール(ＤＭＦ ＤＭＡ)；ジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)；酢酸エチル(ＥｔＯＡｃ)；高速液体クロマトグラフィー(ＨＰＬＣ)；酢酸イソプロピル(ｉＰｒＯＡｃ)；メタンスルホニル(Ｍｓ)；２−メチルテトラヒドロフラン(２−メチルＴＨＦ)；Ｎ−メチルピロリジノン(ＮＭＰ)；テトラヒドロフラン(ＴＨＦ)；薄層クロマトグラフィー(ＴＬＣ)；およびパラ−トルエンスルホン酸(ｐＴｓＯＨ)。
【0097】
中間体. シアノ−(２−メチルチオ−ピリミジン−４−イル)−酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル【化13】
【0098】
中間体. (２−メチルチオ−ピリミジン−４−イル)−アセトニトリル【化14】
【0099】
中間体. ４−(２−(メチルチオ)ピリミジン−４−イル)−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン【化15】
Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール(３０mL)を中間体(２−メチルチオ−ピリミジン−４−イル)−アセトニトリル(２.６２ｇ、１５.７mmol)に添加し、混合物を１００℃で１６時間加熱した。冷却した反応混合物を濃縮し、残留物を精製せずに使用した。
【0100】
工程２. ４−(２−(メチルチオ)ピリミジン−４−イル)−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン。先の工程からの粗３−(ジメチルアミノ)−２−(２−(メチルチオ)ピリミジン−４−イル)アクリロニトリル(全量)およびヒドラジン一水和物(２.３６mL、４７mmol)の無水エタノール(７５ml)中の混合物を８０℃で１６時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、濃縮した。反応混合物を酢酸エチルおよび塩水に分配した。有機層を分離し、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー(２〜５％メタノールのジクロロメタン溶液溶離剤)で精製して、４−(２−(メチルチオ)ピリミジン−４−イル)−１Ｈ−ピラゾール−３−アミンを得た：1H NMR 400 MHz (DMSO-d6) δ 11.9 (s, 1H), 8.3 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.23 (s, br 1H), 6.43 (s, 1H), 5.74 (s, 1H), 2.53 (s, 3H);MS m/z:208.0 (M + 1)。
【0101】
中間体. １−イソプロピル−４−(２−(メチルチオ)ピリミジン−４−イル)−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン：【化16】
【0102】
次のものを同様に製造した：１−エチル−４−(２−(メチルチオ)ピリミジン−４−イル)−１Ｈ−ピラゾール−３−アミンおよび１−メチル−４−(２−(メチルチオ)ピリミジン−４−イル)−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン。
【0103】
中間体. ４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−２−(メチルチオ)ピリミジン：【化17】
【0104】
次のものを同様に製造した：４−(３−ヨード−１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−２−(メチルチオ)ピリミジン；４−(３−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−２−(メチルチオ)ピリミジン；および４−(３−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−２−(メチルチオ)ピリミジン。
【0105】
中間体. ４−(３−ヨード−１−(テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−２−(メチルチオ)ピリミジン。【化18】
【0106】
中間体. ４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−２−(メチルスルホニル)ピリミジン：【化19】
【0107】
次のものを同様に製造した：４−(３−ヨード−１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−２−(メチルスルホニル)ピリミジン；および４−(３−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−２−(メチルスルホニル)ピリミジン。
【0108】
中間体. １−ベンジリデン−２−イソプロピルヒドラジン【化20】
【0109】
次のものを同様に製造した：１−ベンジリデン−２−エチルヒドラジンをエチルヒドラジンオキサレートから出発して、メタノールおよびトリエチルアミンをそれぞれエタノールおよび酢酸ナトリウムの代わりに使用した；そして１−ベンジリデン−２−メチルヒドラジンをメチルヒドラジンから出発して、メタノールを溶媒として使用し、塩基を添加しなかった。
【0110】
中間体. ２−((２−ベンジリデン−１−イソプロピルヒドラジニル)メチレン)−マロノニトリル：【化21】
【0111】
中間体. ２−((２−ベンジリデン−１−エチルヒドラジニル)メチレン)−マロノニトリル：【化22】
【0112】
２−((２−ベンジリデン−１−メチルヒドラジニル)−メチレン)マロノニトリルを同様に製造した。
【0113】
中間体. ３−アミノ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル【化23】
【0114】
次のものを同様に製造した：３−アミノ−１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル；および３−アミノ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル。
【0115】
中間体. １−(３−アミノ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)エタノン【化24】
【0116】
次のものを同様に製造した：１−(３−アミノ−１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)エタノン；および１−(３−アミノ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)エタノン。
【0117】
中間体. １−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)エタノン【化25】
【0118】
次のものを同様に製造した：１−(３−ヨード−１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)エタノン；および１−(３−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)エタノン。
【0119】
中間体. ３−(ジメチルアミノ)−１−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)プロプ−２−エン−１−オン：【化26】
【0120】
次のものを同様に製造した：３−(ジメチルアミノ)−１−(３−ヨード−１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)プロプ−２−エン−１−オン；および３−(ジメチルアミノ)−１−(３−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)プロプ−２−エン−１−オン。
【0121】
中間体. ４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−アミン【化27】
【0122】
次のものを同様に製造した：４−(３−ヨード−１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−アミン；および４−(３−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−アミン。
【0123】
中間体. ４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−オール【化28】
【0124】
次のものを同様に製造した：４−(３−ヨード−１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−オール；および４−(３−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−オール。
【0125】
中間体. ２−クロロ−４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン【化29】
【0126】
次のものを同様に製造した：２−クロロ−４−(３−ヨード−１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン；および２−クロロ−４−(３−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン。
【0127】
中間体. １−ヒドロキシプロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル【化30】
【0128】
次のものを同様に製造した：１−ヒドロキシプロパン−２−イルカルバミン酸(Ｒ)−メチルを、(Ｒ)−アリノールを(Ｓ)−アラニノールの代わりに使用して；および１−ヒドロキシプロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−１,１−ジメチルエチルを、二炭酸ジ−ｔ−ブチルをクロロギ酸メチルに使用して。
【0129】
中間体. １−アジドプロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル：【化31】
【0130】
次のものを同様に製造した：１−アジドプロパン−２−イルカルバミン酸(Ｒ)−メチル；および１−アジドプロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−１,１−ジメチルエチル。
【0131】
中間体. １−アミノプロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル【化32】
【0132】
次のものを同様に製造した：１−アミノプロパン−２−イルカルバミン酸(Ｒ)−メチル；および１−アミノプロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−１,１−ジメチルエチル。
【0133】
中間体. １−(４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル：【化33】
【0134】
次のものを同様に製造した：１−(４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸(Ｒ)−メチル；１−(４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−ｔｅｒｔ−ブチル；３−(４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパンニトリル；４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−Ｎ−メチルピリミジン−２−アミン；およびＮ１−(４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イル)−Ｎ２,Ｎ２−ジメチルエタン−１,２−ジアミン。
【0135】
中間体. Ｎ−(３−ブロモ−２,４−ジフルオロフェニル)プロパン−１−スルホンアミド【化34】
【0136】
中間体. ３−フルオロ−４−ヨードピリジン−２−アミン【化35】
【0137】
３−クロロ−４−ヨードピリジン−２−アミンを同様に製造した。
【0138】
中間体. ３−ブロモ−２,５,６−トリフルオロアニリン【化36】
【0139】
中間体. ２,４−ジブロモ−３,６−ジクロロアニリン【化37】
【0140】
中間体. １,３−ジブロモ−２,５−ジクロロベンゼン【化38】
【0141】
中間体. ３−ブロモ−２−クロロ−５−フルオロアニリン【化39】
２,６−ジブロモ−４−フルオロ−１−クロロベンゼン(８６５mg、３mmol)、ベンゾフェノンイミン(０.６１ml、３.６mmol)、Ｐｄ２(ｄｂａ)３(１３７mg、０.１５mmol)、ナトリウムｔ−ブトキシド(４３２mg、４.５mmol)、(Ｓ)−ＢＩＮＡＰ(２８０mg、０.４５mmol)およびトルエン(３０ml)の混合物を８０℃で１６時間加熱した。混合物を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機相を塩水で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。粗生成物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー(４０：１〜２０：１ ヘキサン／酢酸エチル溶離剤)で精製して、表題化合物を粉末として得た。MS m/z 388.9 (M + 1)。
【0142】
工程２. ３−ブロモ−２−クロロ−５−フルオロアニリン。３−ブロモ−２−クロロ−Ｎ−(ジフェニルメチレン)−５−フルオロアニリン(１.１６ｇ)のＴＨＦ(２０ml)溶液を２Ｎ塩酸(１.５ml、１当量)で処理し、混合物をｒｔで２時間撹拌した。混合物を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機相を塩水で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。粗残留物をシリカゲル(４０：１〜１５：１ ヘキサン／酢酸エチル溶離剤)でクロマトグラフィーして、ベンゾフェノンで汚染された表題化合物を得た。MS m/z 223.9 (M + 1)。
【0143】
次のものを同様に製造した：３−ブロモ−２,５−ジクロロアニリン；３−ブロモ−２−クロロ−５−メチルアニリン；および３−ブロモ−２,５−ジフルオロアニリン。【化40】
【0144】
中間体. ３−ブロモ−５−クロロ−２−フルオロ安息香酸【化41】
【0145】
次のものを同様に製造した：３−ブロモ−２,６−ジフルオロ安息香酸；および３−ブロモ−２−フルオロ−５−メチル安息香酸。
【0146】
中間体. ３−ブロモ−５−クロロ−２−フルオロフェニルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル【化42】
【0147】
次のものを同様に製造した：３−ブロモ−２,６−ジフルオロフェニルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル；および３−ブロモ−２−フルオロ−５−メチルフェニルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル。
【0148】
中間体. ３−ブロモ−５−クロロ−２−フルオロアニリン【化43】
【0149】
中間体. ５−ブロモ−３−メトキシ−２−メチルアニリン：【化44】
【0150】
中間体. ５−クロロ−２−フルオロ−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)フェニルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル：【化45】
【0151】
次のものを同様に製造した：５−クロロ−２−フルオロ−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)アニリン；２,６−ジフルオロ−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)フェニルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル；Ｎ−(２,４−ジフルオロ−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)フェニル)プロパン−１−スルホンアミド；２−(２−フルオロ−３−ニトロフェニル)−４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン；２,５−ジフルオロ−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)アニリン；２−クロロ−５−フルオロ−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)アニリン；２,５−ジクロロ−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)アニリン；２−クロロ−５−メチル−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)アニリン；２−フルオロ−５−メチル−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)フェニルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル；３−フルオロ−４−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)ピリジン−２−アミン；２,３,６−トリフルオロ−５−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)アニリン；３−クロロ−４−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)ピリジン−２−アミン；３−クロロ−５−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)アニリン；３−メトキシ−２−メチル−５−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)アニリン。
【0152】
中間体. ２−フルオロ−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)アニリン：【化46】
【0153】
実施例１Ｎ−[(２Ｓ)−１−[(４−{３−[２,６−ジフルオロ−３−(プロパン−１−スルホンアミド)フェニル]−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル}ピリミジン−２−イル)アミノ]プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル(表１の化合物７)
【化47】
【0154】
実施例２Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(２−クロロ−５−フルオロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル(表１の化合物１５)
【化48】
粗中間体２−クロロ−５−フルオロ−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)アニリン(２１４mg)、中間体１−(４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル(６８mg、０.１４mmol)、テトラキス(トリフェニルホスフィン)−パラジウム(０)(１６mg)、２Ｍ 炭酸ナトリウム水溶液(３ml)、トルエン(１８ml)およびエタノール(３ml)の混合物を８５℃で１６時間加熱した。混合物を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機抽出物を塩水で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー(６０：１〜４０：１ ＤＣＭ／メタノール溶離剤)で精製して、１−(４−(１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチルで汚染された表題化合物(４６mg)を得た。MS m/z 462.1 (M + 1)。
【0155】
工程２. １−(４−(３−(２−クロロ−５−フルオロ−３−(メタンスルホンアミド)フェニル)−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル。工程１のアニリン生成物(４６mg)、ピリジン(２ml)、トリエチルアミン(１mL)、ＤＣＭ(４ml)およびメタンスルホニルクロライド(２３μl、０.３mmol)の混合物をｒｔで１６時間撹拌した。粗反応混合物を濃縮し、残留物をトルエン(９ml)、エタノール(１ml)、炭酸ナトリウム(２ｇ)および水(１０ml)の混合物に溶解した。撹拌している混合物を８５℃で１６時間加熱した。工程１のとおりの後処理により、粗生成物を得て、それをシリカゲルクロマトグラフィー(６０：１〜４０：１ ＤＣＭ／メタノール溶離剤)で精製して、表題化合物を得た。
【0156】
実施例３Ｎ−[(２Ｓ)−１−[(４−{３−[５−クロロ−２−フルオロ−３−(プロパン−１−スルホンアミド)フェニル]−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル}ピリミジン−２−イル)アミノ]プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル(表１の化合物１)
【化49】
粗中間体５−クロロ−２−フルオロ−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)フェニルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル(２.０ｇ)、中間体１−(４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル(６００mg、１.３４mmol)、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(０)(１５０mg、０.１３mmol)、２Ｍ 炭酸ナトリウム水溶液(６.７ml、１３.５mmol)、トルエン(８０mL)およびエタノール(６mL)の混合物を８０℃で１６時間加熱した。混合物を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機抽出物を塩水で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー(８０：１〜６０：１ ＤＣＭ／メタノール溶離剤)で精製して、トリフェニルホスフィンオキシドで汚染された表題化合物を得た。MS m/z 562.1 (M + 1)。
【0157】
工程２. １−(４−(３−(３−アミノ−５−クロロ−２−フルオロフェニル)−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル。部分的に精製した１−(４−(３−(５−クロロ−２−フルオロ−３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)フェニル)−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル(１.１５ｇ)のＤＣＭ(５０mL)およびＴＦＡ(２０mL)溶液をｒｔで１時間撹拌した。溶媒を除去し、重炭酸ナトリウム水溶液を添加した。混合物を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機抽出物を重炭酸ナトリウムおよび塩水で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。生成物をシリカゲルクロマトグラフィー(６０：１〜４０：１ ＤＣＭ／メタノール溶離剤)により得た;MS m/z 462.1 (M + 1)。
【0158】
工程３. Ｎ−[(２Ｓ)−１−[(４−{３−[５−クロロ−２−フルオロ−３−(プロパン−１−スルホンアミド)フェニル]−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル}ピリミジン−２−イル)アミノ]プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル。１−(４−(３−(３−アミノ−５−クロロ−２−フルオロフェニル)−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル(４１mg、０.０９mmol)、トリエチル(trietlyl)アミン(１ml)およびＤＣＭ(４ml)の混合物をプロパンスルホニルクロライド(４０mg、０.２７mmol)で処理した。混合物をｒｔで１６時間撹拌した。粗混合物を濃縮し、残留物をトルエン(９ml)、エタノール(１ml)、炭酸ナトリウム(２ｇ)および水(１０ml)の混合物に溶解した。撹拌している混合物を８５℃で１６時間加熱した。工程１のとおりの後処理により、粗生成物を得て、それをシリカゲルクロマトグラフィー(６０：１〜４０：１ ＤＣＭ／メタノール溶離剤)で精製して、表題化合物を得た。
【0159】
実施例４Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(５−クロロ−２−フルオロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１−(オキサン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル(表１の化合物３３)および
Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(５−クロロ−２−フルオロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル(表１の化合物３１)
【化50】
実施例３、工程１の方法に従い、中間体４−(３−ヨード−１−(テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−２−(メチルチオ)ピリミジンおよび中間体５−クロロ−２−フルオロ−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)アニリンから出発して製造した。MS m/z 420.0 (M + 1)。
【0160】
工程２. Ｎ−(５−クロロ−２−フルオロ−３−(４−(２−(メチルチオ)ピリミジン−４−イル)−１−(テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−３−イル)フェニル)メタンスルホンアミド)およびＮ−(５−クロロ−２−フルオロ−３−(４−(２−(メチルチオ)ピリミジン−４−イル)−１−(テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−３−イル)フェニル)−Ｎ−(メチルスルホニル)メタンスルホンアミド。５−クロロ−２−フルオロ−３−(４−(２−(メチルチオ)ピリミジン−４−イル)−１−(テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−３−イル)アニリン(２３３mg、０.５５mmol)およびトリエチルアミン(２mL)のジクロロメタン(１０mL)溶液に、メタンスルホニルクロライド(０.１３mL、１.６６mmol)を添加した。混合物を室温で１６時間撹拌し、表題化合物の混合物を得た(ＬＣＭＳ分析)。酢酸エチルを添加し、混合物を水および塩水で洗浄し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗表題混合物を得て、それを精製せずに使用した。MS m/z モノ−スルホンアミド498.0 (M + 1)；ビス−スルホンアミド576.0 (M + 1)
【0161】
工程３. Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(５−クロロ−２−フルオロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１−(オキサン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル。工程２からの粗生成物混合物をＴＨＦ−Ｈ２Ｏ(１：１、３０mL)に溶解し、ｒｔでOxone(登録商標)(１.６８ｇ、２.７５mmol)で処理した。混合物をｒｔで１６時間撹拌し、酢酸エチルを添加した。有機層を重炭酸ナトリウム水溶液、水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗残留物をＮＭＰ(５mL)に溶解し、中間体１−アミノプロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル(１４６mg、１.１mmol)および炭酸ナトリウム(２３３mg、２.２mmol)で処理した。混合物を撹拌しながら１１０℃で１６時間加熱した。冷却した反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水および塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲル(２％メタノールのジクロロメタン溶液溶離剤)でクロマトグラフィーして、表題化合物を得た。
【0162】
工程４. Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(５−クロロ−２−フルオロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル。(２Ｓ)−１−(４−(３−(５−クロロ−２−フルオロ−３−(メチルスルホンアミド)フェニル)−１−(テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸メチル(９４mg、０.１６mmol)のＭｅＯＨ(１５mL)溶液に、濃塩酸(０.５mL)を添加した。混合物をｒｔで１６時間撹拌した。重炭酸ナトリウム水溶液を添加して、ｐＨを９に調節し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を重炭酸ナトリウム水溶液および塩水で洗浄した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー(３０：１〜１５：１ ジクロロメタン／メタノール溶離剤)で精製して、表題化合物を得た。
【0163】
実施例５Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(５−クロロ−２−フルオロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル(表１の化合物９)
【化51】
【0164】
次のものがまた反応混合物から単離された：Ｎ−[(２Ｓ)−２−({４−[３−(５−クロロ−２−フルオロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロピル]カルバミン酸メチル(表１の化合物３２)；Ｎ−{３−[４−(２−アミノピリミジン−４−イル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−３−イル]−５−クロロ−２−フルオロフェニル}メタンスルホンアミド(表１の化合物３０)。
【0165】
実施例６Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(５−クロロ−２−フルオロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル(表１の化合物９)
【化52】
メカニカルスターラー、温度計および添加漏斗を備えた反応器に、窒素下パージ下、イソプロピルヒドラジン塩化水素塩(７１２ｇ、６.４３mol)、酢酸ナトリウム(５２８ｇ、６.４３mol)および５０％エタノール(４５００mL)を仕込んだ。混合物を２０℃で５分間撹拌した。ベンズアルデヒド(６８３ｇ、６.４３mol)を、バッチ温度を２３℃以下に維持しながら添加した。混合物を２０℃で２０時間以上撹拌した。トルエン(６５００mL)を添加し、撹拌を５分間維持した。有機層を分離した。飽和重炭酸ナトリウム水溶液(４８００mL)を、激しく撹拌している有機層に添加した(注：水層のｐＨは８.０)。有機層を分離し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液(３０００mL)で洗浄した。有機層を分離し、真空下(５０→２０torr),４０℃で濃縮して、表題化合物を黄色油状物として得た(精製せずに使用した)。
【0166】
工程２. ２−((２−ベンジリデン−１−イソプロピルヒドラジニル)メチレン)−マロノニトリル。メカニカルスターラー、温度計および添加漏斗を備えたフラスコに、窒素下パージ下、(エトキシエチリジン)マロノニトリル(７５５ｇ、６.１８mol)、ＤＭＡＰ(１５０ｇ、１.２３mol)およびエタノール(６４００mL)を仕込んだ。混合物を撹拌して、暗色橙色溶液を得て、２０℃から１２℃への吸熱が観察された。１−ベンジリデン−２−イソプロピルヒドラジン(１１０１ｇ、粗製)１５分間かけてゆっくり添加して、３２℃までの発熱および橙色懸濁液を得た。橙色懸濁液を５０℃に加熱し、５０℃で３０分間維持して、暗色褐色懸濁液を得た。エタノール(３２００mL)を混合物に添加し、混合物を２０℃に冷却し、２０℃で１時間維持した。スラリーを濾過し、固体ケーキをエタノール(３０００mL)で濯いだ。固体を回収し、４０℃／５torrの真空下、３時間乾燥させて、表題化合物を黄色固体として得た。ＨＰＬＣ純度＞９９％。
【0167】
工程３. ３−アミノ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル。メカニカルスターラー、温度計、凝縮器および添加漏斗を備えたフラスコに、窒素パージ下、２−((２−ベンジリデン−１−イソプロピルヒドラジニル)メチレン)−マロノニトリル(６３２.６ｇ、２.６５mol)、ＭｅＯＨ(２.５Ｌ)および濃(１２Ｎ) ＨＣｌ(３２９.０mL、３.９４mol)を仕込んだ。混合物を６３℃に加熱し、６３℃で３０分間維持して、橙色溶液を得た。混合物を１５℃に冷却した。ヘプタン(４Ｌ)およびＭＴＢＥ(１Ｌ)を添加し、混合物を５分間撹拌した。水(７.５Ｌ)を、１５℃〜２５℃で、３０分間かけて、連続的に添加した。水添加完了後、混合物を１０分間、２５℃で撹拌した。ヘプタン／ＭＴＢＥ層を分離した。水層を、洗浄液として(４：１ ｖ／ｖ) ヘプタン／ＭＴＢＥ混合物(２×５Ｌ)を使用し、各洗浄を１０分間、２５℃で撹拌することに実施した。層を分離した。固体塩化ナトリウム(１Kg)を水層に添加した。飽和炭酸カリウム水溶液を水層にゆっくり添加して、ＣＯ２発生を制御し、ｐＨを〜９.０に調節した。水層を２回ＣＨ２Ｃｌ２(１×２.２Ｌ、１×８００mL)で抽出した。合わせたＣＨ２Ｃｌ２層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を真空下(２００torr)、３０℃の浴温度で残存重量が〜１Kgとなるまで濃縮した。ヘプタン(６.０Ｌ)をゆっくり(〜２０分間)かけてＣＨ２Ｃｌ２溶液に撹拌しながら添加し、スラリーを形成させた。混合物を真空下(６０torr)、内部温度２５℃で残存容積が〜６.２Ｌとなるまで濃縮した。スラリーを１５℃に冷却し、この温度で１０分間維持した。生成物を濾過し、固体をヘプタン(１Ｌ)で洗浄した。固体を真空下(５torr)、３０℃で４時間乾燥させて、表題化合物を黄色固体として得た。ＨＰＬＣ純度＞９９％。
【0168】
工程４. １−(３−アミノ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−エタノン。メカニカルスターラー、温度計、還流凝縮器、加熱／冷却装置、添加漏斗および窒素注入口／排出口を備えたフラスコに、３−アミノ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル(２７４ｇ、１.８２mole)およびシクロペンチルメチルエーテル(２６００mL)を２０℃で窒素下に仕込んだ。懸濁液を−１０℃に冷却した。１.５Ｍ メチルリチウム／リチウムブロマイド複合体のジエチルエーテル溶液(６.０Ｌ、９.００mol)を２.５時間かけて、−１０℃〜０℃で滴下した。メチルリチウム添加完了時、反応懸濁液を５℃〜１０℃に急速に温め、この温度範囲に１時間維持した。混合物を０℃に冷却し、２Ｎ ＨＣｌ(６.０Ｌ)を５〜１０℃で滴下した。(上層)有機層を分離し、２Ｎ ＨＣｌ(５００mL)で抽出した。合わせた水層をｒｔで１６時間以上撹拌した。混合物を１５℃に冷却し、５０％ＮａＯＨ(２６０.０ｇ)で塩基性化して、〜１１.０のｐＨを得た。混合物をＣＨ２Ｃｌ２(１×２.０Ｌ、１×１Ｌ)で抽出した。合わせたＣＨ２Ｃｌ２層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空下濃縮して、黄色固体(２７８ｇ)を得た。固体を、６５℃に加熱して、ＥｔＯＡｃ(７５０mL)に溶解した。溶液をｒｔに冷却し、スラリーを得た。ヘプタン(１５００mL)を、４０分間かけて、ｒｔでゆっくり添加した。スラリーを−１０℃に冷却し、−１０℃で３０分間維持した。スラリーを濾過し、フィルターケーキをヘプタン(３００mL)で濯いだ。固体を真空下(５torr)、４０℃で３時間乾燥させて、表題化合物を明褐色固体として得た。ＨＰＬＣ純度＞９９％。Ｍ.Ｐ. １３６−１３９℃。
【0169】
工程５. １−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−エタノン。メカニカルスターラー、温度計および添加漏斗を備えたフラスコに、窒素パージ下、１−(３−アミノ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−エタノン(２５０.０ｇ、１.４９mol)およびアセトニトリル(３７２５mL)を仕込んだ。混合物を−２０℃に冷却した。ＢＦ３.ＴＨＦ(３１３.１ｇ、２.２３mol)を、内部温度を＜−１０℃に維持しながら滴下した。亜硝酸イソアミル(２２７.５ｇ、１.９４mol)を、内部温度を＜−１０℃に維持しながら滴下した。混合物を１０℃に温め１０℃で３０分間撹拌した。混合物を、Ｉ２(２８.５ｇ、０.１１２mol)、ＫＩ(３７１.９ｇ、２.２４mol)およびアセトニトリル(１１６０mL)の混合物を含むフラスコに、１０〜１５℃で激しく撹拌しながらゆっくり添加した。添加は窒素ガス発生とわずかな発熱を引き起こした。混合物をｒｔで３０分間撹拌した。ＨＰＬＣはジアゾニウム中間体が残っていないことを示した。重亜硫酸ナトリウム(１５７.１ｇ、１.５１mol)の８％塩化ナトリウム溶液(４３６０mL)を１５〜２０℃で添加した。混合物を飽和炭酸カリウムで〜８.５のｐＨに塩基性化した。上層のアセトニトリル層を分離し、真空下濃縮して、油状残留物を得た。油状物をｉＰｒＯＡｃ(２７７０mL)に溶解し、飽和炭酸ナトリウム水溶液(１１００mL)で洗浄した。ｉＰｒＯＡｃ層を分離し、残量〜１.５Ｌまで濃縮した。懸濁液を得た。懸濁液にヘプタン(５.５Ｌ)を３０分間かけて、２０℃で添加した。懸濁液をヘプタン完了後、１０分間、２０℃で撹拌した。スラリーを濾過し、固体をヘプタン(１Ｌ)で濯ぎ、２０℃で、真空下(５torr)、１６時間乾燥させて、表題化合物を得た。ＭＰ：９０−９２℃。
【0170】
工程６. ３−(ジメチルアミノ)−１−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−プロプ−２−エン−１−オン。メカニカルスターラー、温度計および添加漏斗を備えたフラスコに、窒素パージ下、１−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−エタノン(６４０ｇ、２.３０mol)およびＤＭＦ(６.４Ｌ)を仕込んだ。得られた橙色溶液を１２０℃に加熱した。ブレデレック反応材(５９８.６ｇ、３.４３mol)を一度に添加した。添加により混合物温度が１１４℃に下がり、溶液は、暗い橙色に変わった。混合物を１２０℃で２０分間撹拌した。混合物をｒｔに冷却し、５mmHgで、６０℃で濃縮して、油状残留物を得た。残留物を７４℃に加熱することによりｉＰｒＯＡｃ(２４００mL)に溶解した。混合物を３５℃に冷却し、撹拌して、スラリーを得た。ヘプタン(６０００mL)を３５℃〜ｒｔで１時間かけて添加した。混合物を−１５℃に冷却し、濾過し、固体を真空で、４０℃で３時間乾燥させて、表題化合物を固体として得た。ＨＰＬＣ純度＞９８％。ＭＰ：１０６−１０９℃。
【0171】
工程７. ４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−ピリミジン−２−アミン。メカニカルスターラー、温度計、Dean-Starkトラップおよび凝縮器を備えたフラスコに、窒素パージ下、(Ｅ)−３−ジメチルアミノ−１−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−プロプ−２−エン−１−オン(７３５ｇ、２.２mol)、炭酸グアニジン(５９６ｇ、３.３mol)およびＮＭＰ(５２００mL)を仕込んだ。混合物を１３０℃に加熱し、１３０℃で５時間維持した。(注：すべての低沸点画分をDean-Starkトラップで回収した)。混合物を８０℃に冷却し、１５％塩化ナトリウム水溶液(７５００mL)を、８０℃〜３５℃で〜１時間かけて添加した。生成物が、塩化ナトリウム水溶液添加のおよそ中程で沈殿し始めた。混合物をさらにｒｔに冷却し、３０分間維持した。固体生成物を濾過により回収し、真空で、６５℃で１６時間乾燥させて、表題化合物を固体として得た。ＨＰＬＣ純度＞９９％。ＭＰ：１６７−１６９℃。
【0172】
工程８. ４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−ピリミジン−２−オール。メカニカルスターラーおよび温度計を備えたフラスコに、窒素パージ下、ＴＦＡ(７４８.８mL)を仕込んだ。４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−ピリミジン−２−アミン(３００ｇ、０.９１mol)を、冷水浴を使用して３０℃以下の内部温度を維持しながら、少しずつ固体として添加した。混合物をｒｔで１０分間撹拌して、溶液を得た。混合物を２０℃に冷却し、亜硝酸ナトリウム(７９.７ｇ、１.２７mol)を、急速に撹拌しながら、５時間かけて、２２〜２８℃で少しずつ添加した。(注：幾分かのガス発生が観察され、穏やかな発熱反応があり、それは冷水浴を使用して容易に制御された)。ＤＣＭ(１２Ｌ)を添加し、混合物を２７℃に温めた。水(４４００mL)を添加した(注：開始時にガス発生)。飽和炭酸カリウム溶液(〜１５００mL)をｐＨ〜９.０に塩基性化するために混合物に添加した(注：大量のガスが発生した)。混合物に重亜硫酸ナトリウム(３２ｇ、０.３０mol)の水(１００mL)溶液を添加した。混合物を２７℃で１５分間撹拌し、ｐＨを〜９.０に再調節した。ＤＣＭ層を分離し、真空下(２００−１００mmHg)、４０℃の浴温度で、残留物の重量が〜２３００ｇ(〜１７５０mL)になるまで濃縮した。残留物にＭＴＢＥ(１５００mL)を２０℃で添加した。混合物を１０分間、２０℃で撹拌し、濾過した。固体を１６時間、３０℃で真空下(５torr)乾燥させて、表題化合物を灰白色固体として得た。ＨＰＬＣ純度＞９９％。ＭＰ：２１６−２１８℃。
【0173】
工程９. ２−クロロ−４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−ピリミジン。スターラー、温度計、凝縮器、添加漏斗および窒素注入口／排出口を備えたフラスコに、４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−ピリミジン−２−オール(３１１ｇ、９４２mmol)を仕込んだ。固体にアセトニトリル(２５００mL)を２０℃で添加した。混合物を撹拌して、懸濁液を得た。懸濁液にＤＩＰＥＡ(２４６.２mL、１.４１mol)、ＤＭＦ(２１８.８mL、２.８３mol)を添加した。得られた懸濁液を５分間、２０℃で撹拌した。懸濁液にＰＯＣｌ３(２１７ｇ、１.４１mol)を２０〜４０℃で添加して、橙色溶液を得た。混合物を８０℃に温め、８０℃で３時間維持した。混合物を１０℃に冷却し、水酸化アンモニウム(６２２mLの２８％)の脱イオン水(５５５０mL)溶液を温度を２０℃以下に維持しながら、１.５時間かけてゆっくり添加した。水酸化アンモニウム完了後、得られた懸濁液を４０分間、１０〜２０℃で撹拌した。固体生成物を濾過により回収し、一夜、４０℃で真空下(５torr)乾燥させて、表題化合物を褐色固体として得た。ＨＰＬＣ純度＞９９％。
【0174】
工程１０. ２−(メトキシカルボニルアミノ)プロピルカルバミン酸(Ｓ)−ベンジル。(Ｓ)−１,２−ジアミノプロパンジヒドロクロライド(５０ｇ、３４０mmol)のジクロロメタン(５００mL)懸濁液に、炭酸カリウム(１１９０mmol)を添加した。懸濁液を撹拌し、ｆ濾過して、濾液を集めた。濾液を０〜５℃に冷却し、クロロギ酸ベンジル(５１ml、３５７mmol)を滴下中、撹拌した。添加終了後、反応混合物を３時間、０〜５℃で撹拌し、ｒｔに温め、ｒｔで一夜撹拌した。この混合物にトリエチルアミン(７１ml、５１０mmol)を滴下し、混合物を０〜５℃に冷却した。クロロギ酸メチル(２８ml、３５７mmol)を０〜５℃でゆっくり添加し、混合物をｒｔに温め、一夜撹拌した。混合物を水に注いだ。有機揮発物を真空下除去した。得られた水性スラリーを濾過して固体を集め、フィルターケーキを酢酸エチルで洗浄して、白色固体(６５ｇ、９２−９４％ＨＰＬＣ純度)を得た。酢酸エチルからの複数回の再結晶により、表題化合物を白色固体として得た。ＨＰＬＣ純度９９.５％。
【0175】
工程１１. １−アミノプロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル塩酸塩。２−(メトキシカルボニルアミノ)プロピルカルバミン酸(Ｓ)−ベンジルのメタノール溶液を、５％パラジウム／Ｃ触媒で、５０〜６０psiで水素化した。反応混合物を濾過し、濾液を真空下濃縮して、無色油状物を得た。６０ｇの無色油状物を２００mLの無水ジクロロメタンに溶解し、溶液を氷−水浴で０〜５℃に冷却した。メタノール中のＨＣｌ溶液(約７５mL)を溶液のｐＨが＜１になるまで滴下した。得られた懸濁液を０〜５℃で３０分間撹拌し、固体を濾過により回収した。固体をジクロロメタン、ヘキサンで洗浄して、表題化合物を白色固体として得た。
【0176】
工程１２. ３−ブロモ−５−クロロ−２−フルオロベンズアルデヒド。２,２,６,６−テトラメチルピペリジン(３２７ｇ、９８％、２.２７４mol)およびＴＨＦ(１.９Ｌ、ＨＰＬＣグレード)の溶液を、−７５℃(ドライアイス−メタノール浴)に、アルゴン雰囲気下冷却した。１.６Ｍ ｎ−ＢｕＬｉ／ヘキサン溶液(１.４７Ｌ、２.３５mol)を、混合物に、−７２〜−６７℃で１時間かけて添加した。混合物を−７２〜−６７℃で３０分間撹拌して、淡黄色懸濁液を得た。２−ブロモ−４−クロロ−１−フルオロベンゼン(４３５ｇ、９７％、２.０２mol)を混合物に−７２〜−６７℃で３０分間かけてゆっくり添加し、混合物を−７２〜−６７℃でさらに３０分間撹拌した。ジメチルホルムアミド(２３０ｇ、９９.５％、３.１４mol)を混合物に−７０〜−６５℃で３０分間かけてゆっくり添加し、混合物を−７０〜−６５℃で３０分間撹拌して、明褐色溶液を得た。冷却浴を外し、飽和塩化アンモニウム溶液(７２０mL)を少しずつ−６０〜−３０℃で１５分間かけて添加して、濁った混合物を得た。６Ｎ塩酸を、急速に混合物に−３０〜１０℃で１５分間かけてｐＨ１まで添加し、酢酸エチル(２.０Ｌ)を１０〜２０℃で添加した。層を分離し、水層を酢酸エチル(１×３００mL)で抽出した。合わせた有機抽出物を水(１×８００mL)および塩水(１×５００mL)で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過した。濾液を真空下濃縮して(６０−６５℃)、表題化合物を黄褐色粘性油状物として得て、それは数時間静置後に固化した。1H NMR (CDCl3):δ 7.76-8.30 (m, 2H), 10.0-10.8 (br s, 1H);MS m/z 238.0 (M+1)。
【0177】
工程１３. ３−ブロモ−５−クロロ−２−フルオロ安息香酸。撹拌している３−ブロモ−５−クロロ−２−フルオロベンズアルデヒド(４１５ｇ)、ｔｅｒｔ−ブタノール(１.２Ｌ)および水(１.２Ｌ)の混合物を３０℃に温め、過マンガン酸カリウム(３３５ｇ、２.１２mol)を４０〜４５℃の浴中１時間かけてバッチに添加した(５回)。暗色紫色内容物を、段階的に４５〜５０℃で３０分間、５０〜５５℃で３０分間および５５〜６０℃で３０分間加熱して、紫色−褐色懸濁液を得た。反応混合物を２０℃に冷却し、飽和亜硫酸ナトリウム溶液を過酸化物試験で負になるまで２２〜２７℃で添加した。温水(２.５Ｌ、〜５０℃)および飽和炭酸ナトリウム溶液(１００mL)を、連続的に混合物に１５分間かけて添加した。暗色懸濁液を１cmのセライト床を通して濾過し、フィルターケーキを温水(４×１Ｌ、〜５０℃)で洗浄した。合わせた濾液を６Ｎ塩酸溶液でｐＨ１まで酸性化して、黄色油状懸濁液を得た。酢酸エチル(３Ｌ)を混合物に添加し、混合物を１０分間撹拌した。(上層)有機層を水(１.２Ｌ)で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空下濃縮して(６０−６５℃)、濃黄色懸濁液を得た。ヘキサン(７００mL)を残留物に添加し、懸濁液を５〜１０℃に冷却した。固体を濾過により回収し、フィルターケーキを真空下(６５℃)、一夜乾燥させて、表題化合物を黄色固体として得た。ｍｐ １５０−１５２℃；ＨＰＬＣ純度(２２５nm)：９７.５％；1H NMR (d6-DMSO):δ 7.82 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 13.82 (br s, 1H);MS m/z 254 (M+H)。
【0178】
工程１４. ３−ブロモ−５−クロロ−２−フルオロフェニルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル。３−ブロモ−５−クロロ−２−フルオロ安息香酸(２４３ｇ、９７.５％、０.９３５mol)、トリエチルアミン(１０５ｇ、９９.５％、１.０２mol)およびｔｅｒｔ−ブタノール(１.４Ｌ)の混合物を７４℃に加熱した。ジフェニルホスホリルアジド(２６０ｇ、９７％、０.９１６mol)のトルエン(９６０mL)溶液を、混合物に７５−７９℃で１時間かけて、ゆっくり添加した(穏やかに還流)。混合物を３０分間かけてゆっくり８３℃に加熱し、８３〜８４℃(穏やかに還流)を１時間維持した。内容物を真空下(６５−７０℃)濃縮して、粘性油状物を得た。トルエン(２Ｌ)および水(１.５Ｌ)を連続的にバッチに添加し、混合物を３５℃で１５分間撹拌した。水層を廃棄した。有機層を飽和重炭酸ナトリウム溶液(４００mL)および水(４００mL)で洗浄した。有機層を真空下(６０−６５℃)、〜３５０mL残留物(〜９４％純度)まで濃縮した。１０％酢酸エチル／ヘキサン(〜１.２Ｌ、ｖ／ｖ)をバッチに添加し、混合物を５０℃で１５分間加熱して、明黄色均質溶液を得た。酢酸エチル／ヘキサン溶液を、４Ｌパイレックス・ブフナー漏斗(粗フリットディスク使用、４０〜６０μm、直径１６cm、高さ１８cm)上に予め製造したシリカゲル(１.８kg、７０−２００メッシュ)／ヘキサン床に移した。カルバミン酸ｔ−ブチル生成物を３−５％酢酸エチル／ヘキサン(総量〜５Ｌ、ｖ／ｖ)でゆっくり溶出(重力による)して、表題化合物を灰白色固体として得た。ｍｐ ８７−８８℃；ＨＰＬＣ純度(２２５nm)：９７−９８％；1H NMR (d6-DMSO):δ 1.48 (s, 9H), 7.48-7.49 (m, 1H), 7.80-7.82 (m, 1H), 9.42 (s, 1H);MS m/z 325 (M+H)。
【0179】
工程１５. １−(４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル。メカニカルスターラー、温度計および凝縮器を備えた４首フラスコに、窒素パージ下、２−クロロ−４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−ピリミジン(３００.０ｇ)、１−アミノプロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル塩酸塩(１７４.３ｇ),炭酸ナトリウム(３６５.７ｇ)およびＤＭＳＯ(２４００mL)を仕込んだ。混合物を撹拌しながら、１８時間、９０℃の内部温度で加熱した。混合物を４０℃に冷却した。トルエン(３８７０mL)を３７〜４３℃で撹拌しながら添加した。水(７２００mL)を３７〜４３℃で添加した。トルエン層を３７〜４３℃で分離した。トルエン層に、１５％塩化ナトリウム水溶液(３８７０mL)を添加し、水層のｐＨを、３７〜４３℃で１０％クエン酸水溶液を添加することによりｐＨ〜５.０に調節した。ｐＨ調節には〜２０mLの１０％クエン酸水溶液が必要であった。トルエン層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液(２８８０mL)で３７〜４３℃で洗浄した。表題化合物含有トルエン層を工程１７に投入した。
【0180】
工程１６. ５−クロロ−２−フルオロ−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)フェニルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル。メカニカルスターラー、温度計、凝縮器および加熱マントルを備えたフラスコに、窒素パージ下、３−ブロモ−５−クロロ−２−フルオロフェニルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル(３３.０ｇ)、ビス(ピナコラト)ジボロン(４４７.０ｇ)、酢酸カリウム(４０５.６ｇ)およびトルエン(２７００mL)を仕込んだ。混合物をｒｔで１５分間撹拌し、ＰｄＣｌ２(ｄｐｐｆ)(５０.４ｇ)を添加した。混合物を１０８±２℃で加熱した(注：混合物は、５０〜６０℃で暗色に変わった)。３−ブロモ−５−クロロ−２−フルオロフェニルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル(４１４ｇ)のトルエン(１７７０mL)溶液を１０８±２℃で７０分間かけて添加した。混合物を１０８±２℃で１５時間維持した。混合物を窒素流下ｒｔに冷却し、セライトを通して濾過した。表題化合物含有濾液を工程１７に投入した。
【0181】
工程１７. １−(４−(３−(５−クロロ−２−フルオロ−３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)フェニル)−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル。フラスコに１−(４−(３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル(３８７０mlトルエン溶液、〜３８２ｇ、０.８６１mol)および５−クロロ−２−フルオロ−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)フェニルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル(４４７０mlトルエン溶液、〜４６７.０ｇ、１.２６mol)を仕込んだ。得られた褐色溶液に、炭酸ナトリウム(３４９.８ｇ、３.３０mol)の水(１４００mL)溶液を添加した。混合物にＰｄＣｌ２(ｄｐｐｆ)(３４.５ｇ、０.０４７mol)を添加した。混合物を撹拌しながら８０℃に温め、この温度に２時間維持した。混合物を４０℃に冷却し、セライトを通して濾過した。濾液の層を分離した。表題化合物含有トルエン層を直接工程１８に投入した。
【0182】
工程１８. １−(４−(３−(３−アミノ−５−クロロ−２−フルオロフェニル)−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル。フラスコに、１−(４−(３−(５−クロロ−２−フルオロ−３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)フェニル)−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル(〜７.３Ｌトルエン溶液、〜４８３.３ｇ、０.８６mol)を２０℃で、窒素雰囲気下に仕込んだ。溶液に１２Ｎ ＨＣｌ(５７４.３mL、６.９５mol)を〜２０分間かけて、２５℃以下の温度を維持しながら添加した。ＨＣｌ添加により１９℃から２４℃への発熱が起こった。混合物を２０〜２３℃で１時間撹拌した。反応混合物に水(３１００mL)を添加した。混合物を１０分間、２０℃で撹拌した。水層を分離し、２−メチルＴＨＦ(３１００mL)で洗浄した。水層に、飽和炭酸カリウム水溶液(〜７７８mL)をゆっくり添加した。水層のｐＨは〜８.５であった。水層を２−メチルＴＨＦ(３８２５mL)で抽出した。２−メチルＴＨＦ層を真空下(６０mmHg、４０℃)濃縮した。残留物を２−メチルＴＨＦ(〜３８００mL)で希釈して表題化合物の溶液を得て、それを直接工程１９に投入した。ＨＰＬＣ純度：９５％。
【0183】
工程１９. １−(４−(３−(５−クロロ−２−フルオロ−３−(Ｎ−(メチルスルホニル)メチルスルホンアミド)フェニル)−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル。フラスコに１−(４−(３−(３−アミノ−５−クロロ−２−フルオロフェニル)−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル(〜３.８ＬメチルＴＨＦ溶液、〜３９６.５ｇ、０.８６mol)を２０℃で仕込んだ。溶液にトリエチルアミン(４３５.０ｇ、４.３mol)を添加した。溶液を０〜−５℃に冷却した。溶液にメタンスルホニルクロライド(２４６.０ｇ、２.１５mol)を２０分間かけて、０〜−５℃で撹拌しながら滴下した。混合物を１８〜２０℃に温め、この温度で２０分間維持した。反応混合物に水(２１１５mL)を３０分間かけて、１８〜２０℃で添加した。混合物を添加完了後１０分間、２０℃で撹拌した。ｐＨを２Ｎ ＨＣｌ(〜１２３０mL)で６.０〜６.５に調節した。その後ｐＨを飽和重炭酸ナトリウム水溶液で７〜７.５に調節した。混合物を１０分間、２０℃で撹拌した。層を分離した。表題化合物含有２−メチルＴＨＦ層を工程２０に直接使用した。
【0184】
工程２０. Ｎ−[(２Ｓ)−１−({４−[３−(５−クロロ−２−フルオロ−３−メタンスルホンアミドフェニル)−１−(プロパン−２−イル)−１Ｈ−ピラゾール−４−イル]ピリミジン−２−イル}アミノ)プロパン−２−イル]カルバミン酸メチル。フラスコに１−(４−(３−(５−クロロ−２−フルオロ−３−(Ｎ−(メチルスルホニル)メチルスルホンアミド)フェニル)−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)プロパン−２−イルカルバミン酸(Ｓ)−メチル(〜３.８ＬメチルＴＨＦ溶液、〜５３１.５ｇ、０.８６mol)を仕込んだ。溶液に３Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液(１７８２.８mL、５.３４mol)を１５〜２０℃で撹拌しながら添加した。混合物を２０〜２３℃で３０分間激しく撹拌し、次いで撹拌を停止した。水層を廃棄した。２Ｎ ＨＣｌ(〜４１０mL)を有機層に添加して、ｐＨを６.０〜６.５に調節した、飽和重炭酸ナトリウム水溶液(〜３００mL)を添加して、ｐＨを〜８.５に調節した。水層を廃棄した。有機層を１５％塩化ナトリウム水溶液(２０００mL)で洗浄した。有機層を真空下(８０torr)、４５℃の浴温度で濃縮して、褐色溶液(７８０ｇ)を得た。溶液を２−メチルＴＨＦ(３５００mL)で希釈し、PICA HP 120N活性化炭素(９０ｇ、CDH858)の２−メチルＴＨＦ(１Ｌ)懸濁液を添加した。得られた黒色懸濁液を６０℃に温め、６０℃で１６時間維持した。１６時間維持後、Ｐｄ含量は３０９ppmであった。混合物を２０℃に冷却し、セライトパッド(２−メチルＴＨＦで予め湿潤)を通して濾過した。反応フラスコを２−メチルＴＨＦ(５００mL)で濯いだ。この濯ぎ液を、ＰＩＣＡ／セライトのフィルターケーキを通して注いだ。濾液にＰＬ−ＴＭＴ樹脂(９０ｇ)を添加した。得られた懸濁液を撹拌しながら６０℃に加熱し、この温度に４時間維持した。４時間、６０℃の後、Ｐｄ含量は２.３ppmであった。混合物を２０℃に冷却し、一夜２０℃で撹拌した。混合物をセライトパッド(２−メチルＴＨＦで予め湿潤)を通して濾過した。濾液を真空下(１００〜８０torr)、４０〜４５℃で濃縮して、橙色油状物を得た。この残存油状物を３Ｌの純エタノール(200 proof)に７８℃に温めながら溶解した。得られた透明橙色溶液を２０℃に３時間かけて冷却し、沈殿を形成させた。混合物を０℃に冷却し、１時間、０℃に維持した。混合物を濾過し、フィルターケーキをエタノール(３００mL)で洗浄した。固体を１４時間、４０℃で乾燥させて、表題化合物を得た；ＭＰ：１８６−１８９℃。
【0185】
次の表１の化合物を上の実施例に準じて、適当な出発物質を使用して製造した：【表1】
【表2】
【0186】
【表3】
【表4】
【0187】
【表5】
【表6】
【0188】
【表7】
【表8】
【0189】
【表9】
【表10】
【表11】
【0190】
実施例１２２Ｂ−ＲａｆＶ６００Ｅ／Ｍｅｋ増幅型ルミネッセンスプロキシミティホモジニアスアッセイ(Ｂ−ＲａｆＶ６００Ｅ生化学)
Ｂ−Ｒａｆ(Ｖ６００Ｅ；４ｐＭ)およびビオチニル化Ｍｅｋ(キナーゼ死亡；１０nM)を、２倍最終濃度でアッセイ緩衝液(５０mM Ｔｒｉｓ、ｐＨ７.５、１５mM ＭｇＣｌ２、０.０１％ＢＳＡおよび１mM ＤＴＴ)中で合わせ、１００％ＤＭＳＯに希釈した０.５μlの４０倍の本発明の化合物を含むアッセイプレート(Greiner白色３８４ウェルアッセイプレート#781207)のウェルあたり１０μlで分配した。プレートを６０分間、室温でインキュベートした。
【0191】
Ｂ−Ｒａｆキナーゼ活性反応を、ウェルあたりアッセイ緩衝液で希釈した１０μlの２倍ＡＴＰ(１０μM)の添加により開始させた。３時間後、反応を１０μlの停止反応材(６０mM ＥＤＴＡ、０.０１％Tween 20)添加により停止させた。リン酸化生成物をウサギ抗ｐ−ＭＥＫ(Cell Signaling, #9121)抗体およびAlpha Screen IgG(ProteinA)検出キット(PerkinElmer #6760617R)を使用して、３０μlを、ビーズ緩衝液(５０mM Ｔｒｉｓ、ｐＨ７.５、０.０１％Tween 20)中の抗体(１：２０００希釈)および検出ビーズ(両方のビーズの１：１０００希釈)混合物のウェルに添加することにより測定した。添加は、検出ビーズを光から保護するため、暗条件下で行った。蓋をプレートの上に置き、プレートを１時間、室温でインキュベートした。ルミネッセンスをPerkinElmer Envision装置で読んだ。５０％阻害する各化合物の濃度(ＩＣ５０)を、XL Fitデータ解析ソフトウエアを使用する非線形回帰により計算した。
【0192】
遊離形または薬学的に許容される塩形態の本発明の化合物は、例えば、本明細書に記載するインビトロ試験により示されるとおり、価値ある薬理学的特性を有する。例えば、本発明の化合物好ましくはＶ６００Ｅ Ｂ−Ｒａｆに対して１×１０−１０〜１×１０−５Ｍの範囲、好ましくは５００nM未満、２５０nM未満、１００nM未満および５０nM未満のＩＣ５０を示す。
【0193】
例えば、ルミネッセンスプロキシミティホモジニアスアッセイにおける本発明の化合物のいくつかのＩＣ５０データを下の表に示す。
【0194】
実施例１２３Ａ３７５細胞増殖アッセイ(Ａ３７５ ＣＰ)
Ａ３７５は、Ｂ−ＲａｆＶ６００Ｅ変異を担持する黒色腫細胞株である。ルシフェラーゼを発現するように操作したＡ３７５−ｌｕｃ細胞を、３８４ウェル白色透明底プレートに、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ中１,５００細胞／５０μl／ウェルとして播種する。適当な濃度で１００％ＤＭＳＯに溶解した本発明の化合物を、自動Pin Tool(１００nl)により細胞に移す。細胞を２日間、２５℃でインキュベートし、２５μlのBrightGloＴＭを各ウェルに添加し、プレートをルミネッセンスにより読む。５０％阻害する各化合物の濃度(ＩＣ５０)を、XL Fitデータ解析ソフトウエアを使用する非線形回帰により計算した。
【0195】
遊離形または薬学的に許容される塩形態の本発明の化合物は、例えば、本明細書に記載するインビトロ試験で示されるとおり、価値ある薬理学的特性を示す。例えば、本発明の化合物は、好ましくは野生型およびＶ６００Ｅ Ｂ−Ｒａｆに対して５００nM未満、２５０nM未満、１００nM未満および５０nM未満の範囲のＩＣ５０を示す。
【0196】
例えば、Ａ３７５細胞増殖アッセイにおける本発明の化合物のいくつかのＩＣ５０データを下の表に示す。
【0197】
実施例１２４免疫アッセイ
細胞を、組織培養処理プレートの９６ウェルあたり、１６４０ ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ中、３０×１０３細胞で播種し、３７℃および５％ＣＯ２で２４時間インキュベートし、化合物を添加した。試験化合物をＤＭＳＯで連続的に希釈し、細胞(最終ＤＭＳＯ濃度０.１％)に添加し、３７℃および５％ＣＯ２で３時間インキュベートした。ｐＭＥＫおよびｐＥＲＫレベルをサンドイッチ免疫アッセイキット(Meso Scale Discovery)を使用して測定した。培養上清を除き、細胞を冷溶解緩衝液(キット中に存在)を添加し、３０分間、穏やかに振盪することにより溶解した。ｐＭＥＫ１／２(Ser217/221)およびｐＥＲＫ１／２(Thr/Tyr202/204, Thr/Tyr185/187)検出のために、溶解物を、キットに入った遮断した抗体被覆プレートに添加し、一夜、４℃で振盪しながらインキュベートした。プレートを洗浄し、ホスホタンパク質を備えられた標識抗体を使用して検出し、Sector 6000装置で読んだ。
【0198】
実施例１２５ＳＷ６２０細胞生存能アッセイ
ＳＷ６２０細胞を、黒色壁、透明底組織培養処理プレートにおいて、９６ウェルあたり、１６４０ ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ中１５００細胞の密度で播種した。試験化合物をＤＭＳＯで連続的に希釈し、細胞(最終ＤＭＳＯ濃度０.１％)に添加し、３７℃および５％ＣＯ２で４日間インキュベートした。細胞生存能測定のために、細胞プレートを室温にし、培養培地を除去し、２００μlの細胞Titer-Glo試薬(Promega、キットの中身を製造者のプロトコルに従い混合し、増殖培地で１：２希釈した)を各ウェルに添加した。プレートを５分間振盪し、室温で５分間インキュベートし、ルミネッセンスを測定した(Trilux, Perkin Elmer)。
【0199】
実施例１２６Ｒａｔ１軟アガロースアッセイ
Ｒａｔ１細胞を、９６ウェルあたり、１％アガロース(Lonza)中１０００細胞密度で懸濁させた。アガロース／細胞混合物を固化させた。試験化合物をＤＭＳＯで連続的に希釈し、アガロース細胞混合物(最終ＤＭＳＯ濃度０.２％)の上に添加し、３７℃および５％ＣＯ２でインキュベートした。１７日間後、コロニー増殖を、細胞をalamarBlue(TREK Diagnostics)とインキュベートし、代謝活性をSpectramaxプレートリーダー(Molecular Devices, Inc；吸光度測定５６２nm)で測定した。
【0200】
実施例１２７肝臓ミクロソームクリアランスアッセイ
インビトロミクロソームクリアランスアッセイを、化合物の肝臓代謝安定性と関連するリスクの可能性を評価するために設計する。試験化合物(１μＭ)を、様々な動物種(マウス、ラット、サル、イヌおよびヒト)由来の肝臓ミクロソーム(０.５mg／mL)およびＮＡＤＰＨ(１mM)の１００mM リン酸カリウム緩衝液と、３７℃でインキュベートした。特定の反応時間(０、５、１０および３０分間)に、反応物を定量除き、質量分析内部標準含有アセトニトリル添加により反応を停止させた。サンプルを遠心し、上清をＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより分析した。インビトロ代謝半減期(ｔ１／２、分)および固有クリアランス(CLint、μL／分／mg)は、反応混合物からの親化合物の消失により決定される試験化合物の代謝の速度および程度に基づく。これらの値を評価して、肝臓代謝クリアランス速度(CLh、mL／分／kg)および除去率(ＥＲ、その種の予測肝臓代謝クリアランス対肝臓血流の比)を予測し得る。一般に、インビトロで高い予測CLintまたはＥＲを有する化合物は、インビボで暴露制限的代謝(exposure-limiting metabolism)の高いリスクがあると見なされる。
【0201】
本発明の化合物のいくつかの測定した排泄速度を下の表に示す。【表12】
【表13】
【0202】
実施例１２８Ａ５４９ ｐ３８α ＭＡＰキナーゼBright-Gloレポーター遺伝子アッセイ
Ａ５４９細胞を、ＩＬ−８プロモーター駆動レポーターであるｐＧＬ３−ＩＬ８−Ｌｕｃで安定にトランスフェクトした。細胞を、３８４ウェル固体白色プレート(４０μl／ウェル、５％ＣＤ−ＦＢＳ、１×Ｐ／Ｓ、ＤＭＥＭ)に４×１０５／mlで播種し、一夜(１８〜２０時間)、３７℃でインキュベートした。試験化合物をＤＭＳＯで連続的に希釈し、５０nlの試験溶液を添加してインキュベートした(最終ＤＭＳＯ濃度０.１％)。試験化合物と３０分間インキュベーション後、細胞を１ng／ml ＩＬ−１ベータ(１０μlの５ng／ml溶液／ウェル)で刺激した。Bright-Glo(２５μl／ウェル)を添加して、刺激７〜８時間後にルシフェラーゼ発現を測定した。本発明の化合物のいくつかのＩＣ５０データデータを、下の表に示す。
【0203】
【表14】
【0204】
実施例１２９インビボ薬物動態アッセイ
完全薬物動態試験：雄Balb/cマウス(ｎ＝３、体重２２〜２５ｇ)または雄Wistarラット(ｎ＝３、体重２５０〜３００ｇ)に、試験化合物を外側尾静脈への静脈内投与または矯正喫食による経口投与で投与した。製剤は典型的に７５％ＰＥＧ３００および２５％Ｄ５Ｗ中、化合物の２.５mg／mL溶液であった。各５０μLの６サンプルを投与後２４時間まで連続的に採取した。血液サンプルを遠心して血漿を分離した。血漿サンプルをＬＣ−ＭＳ／ＭＳで分析し、定量した。
【0205】
急速薬物動態試験：雄Balb/cマウス(ｎ＝３、体重２２〜２５ｇ)または雄Wistarラット(ｎ＝３、体重２５０〜３００ｇ)に、試験化合物を外側尾静脈への静脈内投与(IV)または胃管による経口投与(PO)で投与した。製剤は典型的に７５％ＰＥＧ３００および２５％Ｄ５Ｗ中、化合物の２.５mg／mL溶液であった。各５０μLの６サンプルを投与後２４時間まで連続的に採取した。血液サンプルを遠心して血漿を分離し、投与経路毎に各辞典で３匹の動物分をまとめてプールした。血漿サンプルをＬＣ−ＭＳ／ＭＳで分析し、定量した。
【0206】
完全および加速薬物動態試験の両方について、次のパラメータを、Winnonlin 5.0ソフトウエア(Pharsight, Mountain View, CA, USA)を使用する非コンパートメント回帰分析により計算した：血漿クリアランス(Ｃｌ)、血漿最大濃度(Ｃｍａｘ)、濃度時間曲線下血漿面積(ＡＵＣ０−ｉｎｆ)および経口バイオアベイラビリティ％(Ｆ％)。
【0207】
マウスでの本発明の化合物のいくつかの薬物動態パラメータを下の表に示す。【表15】
【表16】
【0208】
遊離形または薬学的に許容される塩形態の式Ｉの化合物は、例えば、本明細書に記載するインビトロおよびインビボ試験により示されるとおり、価値ある薬理学的特性を有する。例えば、式Ｉの化合物は、好ましくはＡ３７５ ＣＰ細胞増殖アッセイにおいて２５０nMまたはそれより良い、好ましくは２００nM未満、１５０nM未満、１００nM未満および５０nM未満の範囲のＩＣ５０を示す。
【0209】
Ｒ１の２−(メトキシカルボニルアミノ)−１−プロピル基が、好ましいレベルの活性およびｐ３８を含む他のキナーゼ類を超える選択性を提供する。例えば、化合物９と２９の間に活性の３０倍を超える増加があり、それぞれＡ３７５ ＩＣ５０は２nMおよび７６nMである。
【0210】
式Ｉｂの化合物のフェニル置換パターンは、Ｒ５位にフルオロまたはクロロおよびＲ３位にフルオロ、クロロまたはメチルで、代謝安定性(マウスおよびヒトでのＥＲ)について最適化する。比較のために、例えば、化合物９および６のＥＲ(ヒト)はそれぞれ＜０.２１および０.６９である。
【0211】
Ｒ１の２−(メトキシカルボニルアミノ)−１−プロピル基、Ｒ３／Ｒ５置換パターンおよびＲ４のメチル基の組合せは、総薬剤暴露(ＡＵＣ)に驚くべき影響を有する。例えば、ＡＵＣが、１０mg／kgの経口投与量で３０±４マイクロモル＊時間である化合物９(化合物１、３、４、６および７と比較)を参照のこと。
【0212】
実施例１３０インビボ有効性１４日間Ａ３７５マウス異種移植片モデル
Ａ３７５細胞を、３７℃インキュベーターで、５％ＣＯ２で２〜４週間無菌条件下で増殖させた。細胞を１０％ＦＢＳを添加したＲＰＭＩ−１６４０培地で培養した。細胞を週に２回、０.０５％トリプシン／ＥＤＴＡを使用して継代した。インプラントの日に、細胞をＨＢＳＳ(ハンクス平衡塩類溶液)中に回収した。Ｆｅ雄Ｎｕ／Ｎｕマウス(Charles River、試験開始時１０〜１１週齢)に、１日目に右脇腹に５０％マトリゲル、０.２mL ＳＱ中５×１０６ Ａ３７５細胞／マウスでインプラントした。インプラント１９日後、マウスを６群(１群あたり９匹のマウス)に無作為に分け、平均腫瘍容積２１５mm３および平均体重２４ｇであった。試験化合物を１９日目から開始して１４日間、投与あたり０.２mLで、所望の投与量レベルを得るために適当に濃度で製剤した化合物を１日２回(BID)投与した。臨床観察を毎日行った。腫瘍容積および体重を週に２回測定した。エンドポイント：いずれかのマウスまたは群で最初の２５％を超える体重減少および／または３０００mm３を超える腫瘍容積。
【0213】
化合物９(２０％ＰＥＧ３００／３％ＥＴＰＧＳ／７７％水中に製剤)を、上のプロトコルに従い、下の投与レジメンで投与した：グループ１：媒体、ｑｄ×１４
グループ２：１mg／kg 化合物９、ｂｉｄ×１４
グループ３：３mg／kg 化合物９、ｂｉｄ×１４
グループ４：１０mg／kg 化合物９、ｂｉｄ×１４
グループ５：２０mg／kg 化合物９、ｂｉｄ×１４
【0214】
腫瘍容積結果を最初の投与から１４日後に評価した。部分応答は、対照腫瘍増殖の２０〜５０％の腫瘍増殖と定義する。安定疾患は、最初の腫瘍サイズの±２０％内の最終腫瘍容積と定義する。部分的寛解は、最初の腫瘍容積の＜８０％である最終腫瘍容積と定義する。グループ２：部分的応答
グループ３：病態安定
グループ４：部分的寛解
グループ５：部分的寛解
【0215】
ここに記載する実施例および態様は単に説明の目的のためのみであって、それに照らした種々の修飾または変化が当業者には示唆され、本明細書および添付する特許請求の範囲内に包含させることは理解されるべきである。ここに引用する全ての刊行物、特許および特許出願は全ての目的のために引用により本明細書に包含させる。
【図1】