6047582 置換ベンゾチエニル−ピロロトリアジンおよび癌の処置におけるその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6047582

(24)【登録日】2016年11月25日

(45)【発行日】2016年12月21日

(54)【発明の名称】置換ベンゾチエニル−ピロロトリアジンおよび癌の処置におけるその使用

(51)【国際特許分類】

   C07D 487/04 20060101AFI20161212BHJP

   A61K 31/53 20060101ALI20161212BHJP

   A61K 31/5377 20060101ALI20161212BHJP

   A61K 31/553 20060101ALI20161212BHJP

   A61K 31/541 20060101ALI20161212BHJP

   A61K 31/551 20060101ALI20161212BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20161212BHJP

【ＦＩ】

   C07D487/04 140

   C07D487/04CSP

   A61K31/53

   A61K31/5377

   A61K31/553

   A61K31/541

   A61K31/551

   A61P35/00

【請求項の数】11

【全頁数】110

(21)【出願番号】特願2014-546466(P2014-546466)

(86)(22)【出願日】2012年12月11日

(65)【公表番号】特表2015-500315(P2015-500315A)

(43)【公表日】2015年1月5日

(86)【国際出願番号】EP2012075127

(87)【国際公開番号】WO2013087647

(87)【国際公開日】20130620

【審査請求日】2015年11月25日

(31)【優先権主張番号】11193839.5

(32)【優先日】2011年12月15日

(33)【優先権主張国】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】512137348

【氏名又は名称】バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング

【氏名又は名称原語表記】Ｂａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ

(73)【特許権者】

【識別番号】300049958

【氏名又は名称】バイエル ファーマ アクチエンゲゼルシャフト

(74)【代理人】

【識別番号】100114188

【弁理士】

【氏名又は名称】小野 誠

(74)【代理人】

【識別番号】100119253

【弁理士】

【氏名又は名称】金山 賢教

(74)【代理人】

【識別番号】100124855

【弁理士】

【氏名又は名称】坪倉 道明

(74)【代理人】

【識別番号】100129713

【弁理士】

【氏名又は名称】重森 一輝

(74)【代理人】

【識別番号】100137213

【弁理士】

【氏名又は名称】安藤 健司

(74)【代理人】

【識別番号】100143823

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 英彦

(74)【代理人】

【識別番号】100151448

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 孝博

(74)【代理人】

【識別番号】100183519

【弁理士】

【氏名又は名称】櫻田 芳恵

(74)【代理人】

【識別番号】100196483

【弁理士】

【氏名又は名称】川嵜 洋祐

(74)【代理人】

【識別番号】100185959

【弁理士】

【氏名又は名称】今藤 敏和

(74)【代理人】

【識別番号】100146318

【弁理士】

【氏名又は名称】岩瀬 吉和

(74)【代理人】

【識別番号】100127812

【弁理士】

【氏名又は名称】城山 康文

(72)【発明者】

【氏名】マリー−ピエーレ・コリン

(72)【発明者】

【氏名】ディルク・ブローム

(72)【発明者】

【氏名】メラニー・エルー

(72)【発明者】

【氏名】マリオ・ロベル

(72)【発明者】

【氏名】ヴァルター・ヒュップシュ

(72)【発明者】

【氏名】クレメンス・ルスティッヒ

(72)【発明者】

【氏名】ジルヴィア・グリューネヴァルト

(72)【発明者】

【氏名】ウルフ・ベーマー

(72)【発明者】

【氏名】フェレーナ・フェーリンガー

(72)【発明者】

【氏名】ニールス・リントナー

【審査官】 村守 宏文

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００９−５１９２２２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００７−５０９０６０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１０−５４０４５５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００８−５０１７０３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００９−５１４８８２（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｐ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式(Ｉ)：

【化1】

[式中、
Ｒ^１は、水素、クロロ、メチルまたはメトキシであり、
Ｒ^２は、水素またはメトキシであり、
ただし、Ｒ^１およびＲ^２の少なくとも一方が水素以外であり、
Ｇは、基−ＣＨ_２−ＯＲ^３、−Ｃ(＝Ｏ)−ＯＲ^３、−ＣＨ_２−ＮＲ^４Ｒ^５または−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＲ^４Ｒ^６
{式中、
Ｒ^３は、水素または(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルであり、これは、所望によりシアノ、ヒドロキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシ、ヒドロキシカルボニル、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシカルボニル、アミノ、モノ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル−アミノ、ジ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノ、ピロリジノ、ピペリジノ、モルホリノ、アミノカルボニル、モノ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニル、ジ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニルまたは３個までのフルオロ原子で置換されており、
Ｒ^４は、水素または(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルであり、
Ｒ^５は、水素、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニル、(Ｃ_３−Ｃ_６)−シクロアルキルまたは４〜６員ヘテロシクロアルキルであり、
ここで、
(i)当該(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルは、所望によりシアノ、ヒドロキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシ−カルボニル、アミノカルボニル、モノ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニル、ジ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニル、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルアミノまたは３個までのフルオロ原子で置換されており、
(ii)当該(Ｃ_３−Ｃ_６)−シクロアルキルは、所望により(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、ヒドロキシ、アミノおよび(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルアミノからなる群から独立して選択される１個または２個の置換基で置換されており、
(iii)当該４〜６員ヘテロシクロアルキルは、所望により(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、ヒドロキシ、オキソ、アミノおよび(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルアミノからなる群から独立して選択される１個または２個の置換基で置換されており、
Ｒ^６は、水素、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、(Ｃ_３−Ｃ_６)−シクロアルキルまたは４〜６員ヘテロシクロアルキルであり、
ここで、
(i)当該(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルは、所望によりヒドロキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシカルボニル、アミノ、アミノカルボニル、モノ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニル、ジ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニルまたは(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル−カルボニルアミノで置換されており、
(ii)当該(Ｃ_３−Ｃ_６)−シクロアルキルは、所望により(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、ヒドロキシ、アミノおよび(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルアミノからなる群から独立して選択される１個または２個の置換基で置換されており、
(iii)当該４〜６員ヘテロシクロアルキルは、所望により(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、ヒドロキシ、オキソ、アミノおよび(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルアミノからなる群から独立して選択される１個または２個の置換基で置換されているか、
あるいは、
Ｒ^４およびＲ^５、または、Ｒ^４およびＲ^６は、それぞれ、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、単環式飽和４〜７員ヘテロシクロアルキル環を形成し、当該環は、Ｎ(Ｒ^７)、Ｏ、ＳおよびＳ(Ｏ)_２から選択される第２環ヘテロ原子を含んでもよく、そして、環炭素原子で、フルオロ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシ、アミノ、モノ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノ、ジ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される３個までの置換基で置換されていてもよく、
ここで、Ｒ^７は、水素、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、シクロプロピル、シクロブチル、ホルミル、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルまたは(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシカルボニルである。}
を表す。]
の化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物および／または溶媒和物。

【請求項2】

Ｒ^１が、水素、クロロ、メチルまたはメトキシであり、
Ｒ^２が、水素またはメトキシであり、
ただし、Ｒ^１およびＲ^２の少なくとも一方が水素以外であり、
Ｇが、基−ＣＨ_２−ＯＲ^３、−Ｃ(＝Ｏ)−ＯＲ^３、−ＣＨ_２−ＮＲ^４Ｒ^５または−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＲ^４Ｒ^６
{式中、
Ｒ^３は、水素または(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルであり、これは、所望によりヒドロキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシ、ヒドロキシカルボニル、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシカルボニル、アミノ、アミノカルボニル、モノ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニル、ジ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニルまたは３個までのフルオロ原子で置換されており、
Ｒ^４は、水素または(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルであり、
Ｒ^５は、水素、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニル、(Ｃ_３−Ｃ_６)−シクロアルキルまたは４〜６員ヘテロシクロアルキルであり、
ここで、
(i)当該(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルは、所望によりヒドロキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、モノ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニル、ジ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニルまたは(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル−カルボニルアミノで置換されており、
(ii)当該(Ｃ_３−Ｃ_６)−シクロアルキルは、所望により(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、ヒドロキシ、アミノおよび(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルアミノからなる群から独立して選択される１個または２個の置換基で置換されており、
(iii)当該４〜６員ヘテロシクロアルキルは、所望により(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、ヒドロキシ、オキソ、アミノおよび(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルアミノからなる群から独立して選択される１個または２個の置換基で置換されており、
Ｒ^６は、水素、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、(Ｃ_３−Ｃ_６)−シクロアルキルまたは４〜６員ヘテロシクロアルキルであり、
ここで、
(i)当該(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルは、所望によりヒドロキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシカルボニル、アミノ、アミノカルボニル、モノ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニル、ジ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニルまたは(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル−カルボニルアミノで置換されており,
(ii)当該(Ｃ_３−Ｃ_６)−シクロアルキルは、所望により(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、ヒドロキシ、アミノおよび(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルアミノからなる群から独立して選択される１個または２個の置換基で置換されており、
(iii)当該４〜６員ヘテロシクロアルキルは、所望により(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、ヒドロキシ、オキソ、アミノおよび(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルアミノからなる群から独立して選択される１個または２個の置換基で置換されているか、
あるいは、
Ｒ^４およびＲ^５、または、Ｒ^４およびＲ^６は、それぞれ、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、単環式飽和４〜７員ヘテロシクロアルキル環を形成し、当該環は、Ｎ(Ｒ^７)およびＯから選択される第２環ヘテロ原子を含んでもよく、そして、環炭素原子で、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、アミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される３個までの置換基で置換されていてもよく、
ここで、Ｒ^７は、水素、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、ホルミル、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルまたは(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシカルボニルである。}
を表す、請求項１に記載された式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物および／または溶媒和物。

【請求項3】

Ｒ^１が、水素、クロロ、メチルまたはメトキシであり、
Ｒ^２が、メトキシであり、
Ｇが、基−ＣＨ_２−ＯＲ^３、−ＣＨ_２−ＮＲ^４Ｒ^５または−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＲ^４Ｒ^６
{式中、
Ｒ^３は、水素または(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルであり、これは、所望によりヒドロキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシカルボニル、アミノまたはアミノカルボニルで置換されており、
Ｒ^４は、水素またはメチルであり、
Ｒ^５は、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルまたは５員または６員ヘテロシクロアルキルであり、
ここで、
(i)当該(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルは、所望によりヒドロキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、モノ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニルまたは(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニル−アミノで置換されており、
(ii)当該５員または６員ヘテロシクロアルキルは、所望によりオキソで置換されており、
Ｒ^６は、水素または(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルであり、これは、所望によりヒドロキシ、アミノまたはアミノカルボニルで置換されているか、
あるいは、
Ｒ^４およびＲ^５、または、Ｒ^４およびＲ^６は、それぞれ、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、単環式飽和４〜６員ヘテロシクロアルキル環を形成し、当該環は、Ｎ(Ｒ^７)およびＯから選択される第２環ヘテロ原子を含んでもよく、そして、環炭素原子で、メチル、オキソ、ヒドロキシ、アミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される１個または２個の置換基で置換されていてもよく、
ここで、Ｒ^７は、水素、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルまたは(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシカルボニルである。}
を表す、請求項１または２に記載の式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物および／または溶媒和物。

【請求項4】

Ｒ^１が、メチルであり、
Ｒ^２が、メトキシであり、
Ｇが、基−ＣＨ_２−ＯＲ^３または−ＣＨ_２−ＮＲ^４Ｒ^５
{式中、
Ｒ^３は、所望によりヒドロキシ、アミノまたはアミノカルボニルで置換された(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルであり、
Ｒ^４は、水素またはメチルであり、
Ｒ^５は、ヒドロキシまたはアミノ−カルボニルで置換された(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルであるか、または、アセチルまたは２−オキソピロリジン−３−イルであるか、
あるいは、
Ｒ^４およびＲ^５は、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、単環式飽和５員または６員ヘテロシクロアルキル環を形成し、当該環は、Ｎ(Ｒ^７)およびＯから選択される第２環ヘテロ原子を含んでもよく、そして、環炭素原子で、オキソ、ヒドロキシまたはアミノカルボニルで置換されていてもよく、
ここで、Ｒ^７は、水素またはアセチルである。}
を表す、請求項１、２または３に記載の式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物および／または溶媒和物。

【請求項5】

請求項１〜４の何れか１項で定義した式(Ｉ)の化合物を製造する方法であって、
式(II)：

【化2】

の６−(ヒドロキシメチル)−置換４−アミノ−５−ブロモピロロ[２,１−ｆ]−[１,２,４]トリアジンを、式(III)：

【化3】

[式中、
Ｒ^１およびＲ^２は、請求項１〜４の何れか１項に示した意味を有し、
Ｒ^８は、水素または(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルを表すか、あるいは、両方のＲ^８基が一体となって結合して、−(ＣＨ_２)_２−、−Ｃ(ＣＨ_３)_２−Ｃ(ＣＨ_３)_２−、−(ＣＨ_２)_３−、−ＣＨ_２−Ｃ(ＣＨ_３)_２−ＣＨ_２−または−Ｃ(＝Ｏ)−ＣＨ_２−Ｎ(ＣＨ_３)−ＣＨ_２−Ｃ(＝Ｏ)−架橋を形成する。]
のベンゾチオフェン−２−イル ボロネートと、パラジウム触媒および塩基の存在下でカップリングさせ、式(I-A)：

【化4】

[式中、Ｒ^１およびＲ^２は、請求項１〜４の何れか１項に示した意味を有する。]
の化合物を得て、所望により、それを、
[Ａ] 式(IV)：

【化5】

[式中、
Ｒ^１およびＲ^２は、請求項１〜４の何れか１項に示した意味を有し、
Ｘは、クロロ、ブロモまたはヨードである。]
の対応する６−(ハロメチル)誘導体に変換し、次いで、塩基の存在下、式(Ｖ)のアルコールまたは式(VII-A)のアミン：

【化6】

[式中、
Ｒ^４は、請求項１〜４の何れか１項に示した意味を有し、
Ｒ^３ＡおよびＲ^５Ａは、水素以外の請求項１〜４の何れか１項に示したＲ^３およびＲ^５の意味を有する。]
と反応させ、それぞれ式(I-B)および式(I-C1)：

【化7】

[式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３Ａ、Ｒ^４およびＲ^５Ａは、上記の意味を有する。]
の標的化合物を得ること、あるいは、
[Ｂ] 式(VI)：

【化8】

[式中、Ｒ^１およびＲ^２は、請求項１〜４の何れか１項に示した意味を有する。]
のアルデヒドに酸化し、次いで、式(VII)：

【化9】

[式中、Ｒ^４およびＲ^５は、請求項１〜４の何れか１項に示した意味を有する。]
のアミンと、酸および還元剤の存在下で反応させ、式(I-C)：

【化10】

[式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^４およびＲ^５は、請求項１〜４の何れか１項に示した意味を有する。]
の標的化合物を得ること、あるいは、
[Ｃ] 式(I-D)：

【化11】

[式中、Ｒ^１およびＲ^２は、請求項１〜４の何れか１項に示した意味を有する。]
のカルボン酸に酸化し、次いで、式(Ｖ)のアルコールまたは式(VIII)のアミン：

【化12】

[式中、
Ｒ^３Ａは、上記の意味を有し、
Ｒ^４およびＲ^６は、請求項１〜４の何れか１項に示した意味を有する。]
と縮合剤の存在下でカップリングさせ、それぞれ式(I-E)および式(I-F)：

【化13】

[式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３Ａ、Ｒ^４およびＲ^６は、上記の意味を有する。]
の標的化合物を得ること、
所望により、適切な場合は、続いて、(i)このようにして得られた式(Ｉ)の化合物を、そのエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーに分離すること、および／または、(ii)対応する溶媒および／または酸または塩基で処理することによって、式(Ｉ)の化合物を、その水和物、溶媒和物、塩および／または塩の水和物または溶媒和物に変換することを特徴とする方法。

【請求項6】

疾患を処置および／または予防するための請求項１〜４の何れか１項に定義した化合物。

【請求項7】

癌および腫瘍疾患を処置および／または予防する方法に使用するための請求項１〜４の何れか１項に定義した化合物。

【請求項8】

癌および腫瘍疾患を処置および／または予防する医薬組成物を製造するための、請求項１〜４の何れか１項に定義した化合物の使用。

【請求項9】

請求項１〜４の何れか１項に定義した化合物および１種以上の薬学的に許容される添加物を含む医薬組成物。

【請求項10】

１種以上のさらなる治療薬をさらに含む請求項９に記載の医薬組成物。

【請求項11】

癌および腫瘍疾患を処置および／または予防するための請求項９または１０に定義した医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、タンパク質チロシンキナーゼ阻害活性を有する新規置換５−(１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]−トリアジン−４−アミン誘導体、当該化合物の製造方法、当該化合物を含む医薬組成物、および、増殖性障害、特に癌および腫瘍疾患を処置するための当該化合物の使用に関する。

【背景技術】

【0002】

癌は、世界的に主要な死亡原因であり、２００８年では７６００万人の死亡原因(全死者数の約１３％)である。癌による死亡は世界中で増え続け、２０３０年には１１００万人を超えると予想されている(WHO source, Fact Sheet No. 297, February 2011)。

【0003】

癌が生じ得る多くの経路があり、これが、癌治療を困難にしている理由の１つである。細胞の形質転換が起こり得る一つの経路は、遺伝子変化後である。ヒトゲノムプロジェクトの完成は、ヒトの癌遺伝子のゲノム不安定性および不均一性を示した。これらの遺伝子変化を同定する近年のストラテジーは、癌遺伝子の発見のプロセスを加速させた。遺伝子異常は、例えば、タンパク質の過剰発現をもたらし、それ故に、これらのタンパク質の非生理学的活性化をもたらす。幾つかの腫瘍性タンパク質が由来するタンパク質のファミリーは、チロシンキナーゼ、特に受容体チロシンキナーゼ(ＲＴＫ)である。過去２０年で、多数の研究手段により、癌を引き起こす有害な細胞増殖におけるＲＴＫ介在シグナル伝達の重要性が証明された。最近には、新しいクラスの抗腫瘍化剤として、チロシンキナーゼの選択的小分子阻害剤を用いて、臨床で有望な結果が達成された[Swinney and Anthony, Nature Rev. Drug Disc. 10 (7), 507-519 (2011)]。

【0004】

線維芽細胞増殖因子(ＦＧＦ)およびその受容体(ＦＧＦＲ)は、胚発生および成体病態生理学の様々な面を包含する多様な生物学的プロセスに重要な役割を果たす、独自の異なるシグナル伝達系の一部を形成する[Itoh and Ornitz, J. Biochem. 149 (2), 121-130 (2011)]。時空間的方法において、ＦＧＦは、ＦＧＦＲ結合を介して、細胞の遊走、増殖、分化および生存を含む広範囲の細胞の機能を刺激する。

【0005】

ＦＧＦファミリーは、細胞表面に発現する４つの高度に保存された受容体チロシンキナーゼ(ＦＧＦＲ−１からＦＧＦＲ−４)に結合する１８種の分泌型ポリペプチド増殖因子を含む。さらに、ＦＧＦＲ−５は、ＦＧＦに結合できるが、キナーゼドメインを有さず、従って、細胞内シグナル伝達を欠いている。リガンド／受容体相互作用の特異性は、選択的転写開始、選択的スプライシングおよびＣ末端切断によって多くのアイソフォームを生じる幾つかの転写および翻訳プロセスによって増強される。様々なヘパラン硫酸プロテオグリカン(例えばシンデカン)は、ＦＧＦ／ＦＧＦＲ複合体の一部であり、シグナル伝達応答を誘発するＦＧＦの能力に強く影響し得る[Polanska et al., Developmental Dynamics 238 (2), 277-293 (2009)]。ＦＧＦＲは、３つの細胞外免疫グロブリン様ドメイン、一回膜貫通ドメイン、および、細胞内キナーゼを細胞内二量化チロシンキナーゼドメインからなる細胞表面受容体である。ＦＧＦの結合は、細胞内キナーゼを接近させ、互いにトランスリン酸化することを可能とする。７つのリン酸化部位が確認されている(例えば、ＦＧＦＲ−１において、Tyr463、Tyr583、Tyr585、Tyr653、Tyr654、Tyr730およびTyr766)。

【0006】

これらのホスホチロシン基の幾つかは、それ自身ＦＧＦＲによって直接リン酸化され得る下流のシグナル伝達分子のドッキング部位として作用し、多くのシグナル伝達経路の活性化をもたらす。従って、ＭＡＰＫシグナル伝達カスケードは、細胞増殖および分化に関係し、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔシグナル伝達カスケードは、細胞生存および細胞運命決定に関与する。一方、ＰＩ３ＫおよびＰＫＣシグナル伝達カスケードは、細胞極性制御に機能を有する。幾つかのＦＧＦシグナル伝達フィードバック阻害剤が現在同定されており、Ｓｐｒｙ(Sprouty)およびＳｅｆ(ＦＧＦと類似の発現)ファミリーのメンバーを含む。さらに、特定の条件において、ＦＧＦＲは、プレゴルジ膜からサイトゾルに放出される。受容体およびそのリガンドであるＦＧＦ−２は、インポーチンに関与するメカニズムによって核に共輸送され、遺伝子活性化ゲート開閉因子として作用する共通の必須転写共役因子であるＣＲＥＢ結合タンパク質(ＣＢＰ)複合体に携わっている。ＦＧＦ−２、ＦＧＦＲ−１およびＦＧＦＲ−２の免疫組織化学的発現と、その細胞質および核の腫瘍細胞局在化の間には、多くの相関関係が観察される。例えば、肺腺癌において、この関連性が核レベルで見出され、核での複合体の積極的な役割を強調する[Korc and Friesel, Curr. Cancer Drugs Targets 5, 639-651 (2009)]。

【0007】

ＦＧＦは、発育中および成体組織の双方で広く発現され、組織発育、組織再生、血管新生、腫瘍化、細胞遊走、細胞分化および細胞生存を含む、多様な正常過程および病理学的過程に重要な役割を果たす。さらに、血管新生促進因子としてのＦＧＦはまた、血管内皮増殖因子受容体−２(ＶＥＧＦＲ−２)阻害に対する抵抗性の発生現象に関与している[Bergers and Hanahan, Nat. Rev. Cancer 8, 592-603 (2008)]。

【0008】

最近のシグナル伝達ネットワークの癌ゲノムプロファイルにより、幾つかの一般的なヒトの癌の発生における異常ＦＧＦシグナル伝達の重要な役割が証明された[Wesche et al., Biochem. J. 437 (2), 199-213 (2011)]。リガンド非依存性ＦＧＦＲ構成型シグナル伝達が、多くのヒトの癌、例えば脳の癌、頭頸部癌、胃癌および卵巣癌で記載されている。ＦＧＦＲ変異型およびＦＧＦＲ遺伝子内転座が、悪性病変、例えば骨髄増殖性疾患で確認されている。興味深いことに、多くの発達障害の原因であることが見出された変異と同じ変異が腫瘍細胞でも見出されている(例えば、軟骨形成不全および致死性骨異形成でみられるＦＧＦＲ−３の二量化および構成的活性化を起こす変異は、しばしば、膀胱癌でも見出される)。二量化を促進する変異は、ＦＧＦＲからリガンド非依存性シグナル伝達を増大させるメカニズムの一つに過ぎない。ＦＧＦＲのキナーゼドメインの内部または外部に位置する他の変異は、ドメインのコンホメーションを変化させ、恒久的に活性なキナーゼを生じさせ得る。

【0009】

ＦＧＦＲ−１のゲノム位置である染色体領域8p11-12の増幅は、乳癌で一般的な限局性増幅であり、乳癌の約１０％で起こり、主にエストロゲン受容体陽性癌で起こる。ＦＧＦＲ−１増幅はまた、非小細胞肺扁平上皮癌で報告されており、卵巣癌、膀胱癌および横紋筋肉腫で発生率は低いながら見られる。同様に、約１０％の胃癌で、ＦＧＦＲ−２増幅が示され、これは予後の悪い散在型癌に関連する。さらに、ＦＧＦＲ−１からＦＧＦＲ−４に位置する多くの一塩基多型(ＳＮＰ)は、選択的な癌発症リスクの増大と相関することが分かっているか、または、予後の悪さと関連することが報告されている(例えば乳癌、大腸癌および肺腺癌におけるFGFR-4 G388R 対立遺伝子)。癌の促進についてのこれらのＳＮＰの直接的な役割は、未だ議論の的である。

【0010】

要約すると、多くのインビトロおよびインビボ試験が行われ、ＦＧＦＲ−１からＦＧＦＲ−４を重要な癌標的として確認しており、包括的なレビューはこれらの発見を要約している[例えば Heinzle et al., Expert Opin. Ther. Targets 15 (7), 829-846 (2011); Wesche et al., Biochem. J. 437 (2), 199-213 (2011); Greulich and Pollock, Trends in Molecular Medicine 17 (5), 283-292 (2011); Haugsten et al., Mol. Cancer Res. 8 (11), 1439-1452 (2010)を参照のこと]。幾つかのストラテジーは、ヒトの腫瘍における異常なＦＧＦＲ−１からＦＧＦＲ−４シグナル伝達減少に従うものであり、とりわけ、遮断抗体および小分子阻害剤を含む。幾つかの選択的小分子ＦＧＦＲ阻害剤が、現在、臨床開発中であり、例えば AZD-4547 (AstraZeneca) および BJG-398 (Novartis)がある。

【0011】

最近の癌治療で一般的に達成されている顕著な進歩にもかかわらず、高い効力、高い選択性、低い毒性および／または良好な耐容性などの改善された性質を有する新規抗癌化合物を同定する必要性が続いている。従って、本発明によって解決されるべき技術的課題は、ＦＧＦＲキナーゼに対する阻害活性を有する代替化合物を提供し、その結果、ＦＧＦＲ介在疾患、特に癌および他の増殖性障害を処置する新規治療選択肢を提供する点と考えられる。

【0012】

９員または１０員二環式ヘテロアリール置換基を有する縮合ヘテロ−５,６−二環式キナーゼ阻害剤は、それぞれ WO 2007/061737-A2 および WO 2005/097800-A1に開示されている。これらの化合物は、ｍＴＯＲ(ラパマイシンの哺乳動物標的)および／またはＩＧＦ−１Ｒ(１型インスリン様増殖因子受容体)キナーゼに対する阻害作用のために、癌および他の疾患の処置に有用であると記載された。さらに、キナーゼの阻害に関連するヘテロ−５,６−二環式鋳型構造は、とりわけ、WO 01/19828-A2、WO 2007/079164-A2およびWO 2010/051043-A1に記載されている。

【0013】

幾つかのタンパク質キナーゼに対して異なる阻害プロファイルを有する４−アミノピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン誘導体は、とりわけ、WO 00/71129-A1、WO 2007/056170-A2、WO 2007/061882-A2、WO 2007/064932-A2、WO 2009/136966-A1、および、WO 2010/126960-A1に開示されている。

【0014】

WO 2005/121147-A1、WO 2007/064883-A2およびWO 2007/064931-A2において、５位に置換ジアリール尿素基を含む４−アミノピロロ−[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン誘導体が、ＦＧＦＲ−１阻害活性を有すると記載されている。しかし、他の受容体チロシンキナーゼ、特にＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲおよびＴｉｅ−２キナーゼもまた、この特定のクラスの化合物によって、著しく阻害される。このようなマルチキナーゼ活性が、処置中の副作用のの可能性を高めるはずであると仮説立てられていたため、ＦＧＦＲキナーゼについての改善された選択性を有する新規薬剤を特定し、その結果、より耐容性の癌治療のための新規選択肢を提供することが、本発明の目的であった。

【0015】

驚くべきことに、本発明により特に５位に置換ベンゾチオフェン−２−イル基を有する４−アミノピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン誘導体が、ＦＧＦＲキナーゼの、とりわけＦＧＦＲ−１およびＦＧＦＲ−３キナーゼの強力かつ選択的な阻害を示すことが見出され、これにより、これらの化合物は、増殖性障害、例えば癌および腫瘍疾患の処置に特に有用となる。

【発明の概要】

【0016】

従って、一つの局面において、本発明は、一般式(Ｉ)：

【化1】

[式中、
Ｒ^１は、水素、クロロ、メチルまたはメトキシであり、
Ｒ^２は、水素またはメトキシであり、
ただし、Ｒ^１およびＲ^２の少なくとも一方が水素以外であり、

【0017】

Ｇは、基−ＣＨ_２−ＯＲ^３、−Ｃ(＝Ｏ)−ＯＲ^３、−ＣＨ_２−ＮＲ^４Ｒ^５または−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＲ^４Ｒ^６
{式中、
Ｒ^３は、水素または(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルであり、これは、所望によりシアノ、ヒドロキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシ、ヒドロキシカルボニル、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシカルボニル、アミノ、モノ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル−アミノ、ジ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノ、ピロリジノ、ピペリジノ、モルホリノ、アミノカルボニル、モノ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニル、ジ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニルまたは３個までのフルオロ原子で置換されており、
Ｒ^４は、水素または(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルであり、
Ｒ^５は、水素、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニル、(Ｃ_３−Ｃ_６)−シクロアルキルまたは４〜６員ヘテロシクロアルキルであり、
ここで、
(i)当該(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルは、所望によりシアノ、ヒドロキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシ−カルボニル、アミノカルボニル、モノ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル−アミノカルボニル、ジ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニル、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルアミノまたは３個までのフルオロ原子で置換されており、
(ii)当該(Ｃ_３−Ｃ_６)−シクロアルキルは、所望により(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、ヒドロキシ、アミノおよび(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルアミノからなる群から独立して選択される１個または２個の置換基で置換されており、
(iii)当該４〜６員ヘテロシクロアルキルは、所望により(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、ヒドロキシ、オキソ、アミノおよび(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルアミノからなる群から独立して選択される１個または２個の置換基で置換されており、
Ｒ^６は、水素、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、(Ｃ_３−Ｃ_６)−シクロアルキルまたは４〜６員ヘテロシクロアルキルであり、
ここで、
(i)当該(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルは、所望によりヒドロキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシカルボニル、アミノ、アミノカルボニル、モノ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニル、ジ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニルまたは(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル−カルボニルアミノで置換されており、
(ii)当該(Ｃ_３−Ｃ_６)−シクロアルキルは、所望により(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、ヒドロキシ、アミノおよび(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルアミノからなる群から独立して選択される１個または２個の置換基で置換されており、
(iii)当該４〜６員ヘテロシクロアルキルは、所望により(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、ヒドロキシ、オキソ、アミノおよび(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルアミノからなる群から独立して選択される１個または２個の置換基で置換されているか、
あるいは、
Ｒ^４およびＲ^５、または、Ｒ^４およびＲ^６は、それぞれ、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、単環式飽和４〜７員ヘテロシクロアルキル環を形成し、当該環は、Ｎ(Ｒ^７)、Ｏ、ＳおよびＳ(Ｏ)_２から選択される第２環ヘテロ原子を含んでもよく、そして、環炭素原子で、フルオロ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシ、アミノ、モノ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノ、ジ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される３個までの置換基で置換されていてもよく、
ここで、Ｒ^７は、水素、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、シクロプロピル、シクロブチル、ホルミル、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルまたは(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシカルボニルである。}
を表す。]
の６位置換５−(１−ベンゾチオフェン−２−イル)−ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４−アミン誘導体に関する。

【発明を実施するための形態】

【0018】

本発明の化合物はまた、その塩、溶媒和物および／または塩の溶媒和物の形態で存在できる。

【0019】

本発明の化合物は、式(Ｉ)の化合物およびその塩、溶媒和物および塩の溶媒和物、式(Ｉ)に含まれる下記の式(I-A)、(I-B)、(I-C)、(I-D)および(I-E)の化合物およびその塩、溶媒和物および塩の溶媒和物、および、製造工程の生成物としておよび／または具体例として下に記載された式(Ｉ)に含まれる化合物、および、式(Ｉ)に含まれる下に記載された化合物が、塩、溶媒和物および塩の溶媒和物でないならば、その塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。

【0020】

塩は、本発明の目的において、好ましくは、本発明の化合物の薬学的に許容される塩である(例えば、S. M. Berge et al., “Pharmaceutical Salts”, J. Pharm. Sci. 1977, 66, 1-19を参照のこと)。それ自体は薬学的使用に適さないが、例えば本発明の化合物の単離または精製に使用できる塩もまた含まれる。

【0021】

薬学的に許容される塩は、鉱酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、蟻酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩を含む。

【0022】

薬学的に許容される塩はまた、慣用の塩基の塩を含み、例えばおよび好ましくは、アルカリ金属塩(例えばナトリウム塩およびカリウム塩)、アルカリ土類金属塩(例えばカルシウム塩およびマグネシウム塩)、および、アンモニアまたは有機アミン、例えばおよび好ましくはエチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジメチルアミノエタノール、ジエチルアミノエタノール、プロカイン、ジシクロヘキシルアミン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、アルギニン、リジンおよび１,２−エチレンジアミンから誘導されるアンモニウム塩である。

【0023】

溶媒和物は、本発明の内容において、溶媒分子の化学量論的な配位によって、固体または液体状態で複合体を形成している、本発明の化合物の形態と示される。水和物は、配位が水で起こる場合の、溶媒和物の特定の形態である。本発明の内容において、水和物は、好ましい溶媒和物である。

【0024】

本発明の化合物は、不斉中心の性質または制限された回転の何れかによって、異性体の形態(エナンチオマー、ジアステレオマー)で存在し得る。何れの異性体も、不斉中心が(Ｒ)配置、(Ｓ)配置または(Ｒ,Ｓ)配置である状態で存在し得る。

【0025】

２個以上の不斉中心が本発明の化合物中に存在するとき、しばしば、例示された構造の幾つかのジアステレオマーおよびエナンチオマーが存在可能であること、そして、純粋なジアステレオマーおよび純粋なエナンチオマーが好ましい態様を表すことが認められるであろう。純粋な立体異性体、純粋なジアステレオマー、純粋なエナンチオマーおよびその混合物は、本発明の範囲内であることが意図される。

【0026】

二重結合または環の置換基の性質による幾何異性体は、ｃｉｓ型(＝Ｚ体)またはｔｒａｎｓ型(＝Ｅ体)で存在でき、両方の異性体の形態が、本発明の範囲内に包含される。

【0027】

本発明の化合物の全ての異性体は、分離されているか、純粋であるか、部分的に純粋であるか、またはラセミ混合物であるかにかかわらず、本発明の範囲内に包含される。当該異性体の精製および当該異性体混合物の分離は、当技術分野に既知の標準的な方法によって達成され得る。例えば、ジアステレオマー混合物は、クロマトグラフ法または結晶化によって個々の異性体に分離でき、ラセミ体は、キラルな相でのクロマトグラフによって、または分割によって、各エナンチオマーに分離できる。

【0028】

さらに、上記の化合物の全ての可能な互変異性体の形態が、本発明に含まれる。

【0029】

本発明はまた、本発明の化合物の全ての適当な同位体変異種を包含する。本発明の化合物の同位体変異種は、本発明の化合物中の少なくとも１個の原子が、同じ原子番号を有するが通常または天然に主に存在する原子質量と異なる原子質量を有する原子と交換されている化合物を意味すると理解される。本発明の化合物に組み込むことができる同位体の例は、水素の同位体、炭素の同位体、窒素の同位体、酸素の同位体、フッ素の同位体、塩素の同位体、臭素の同位体およびヨウ素の同位体、例えば^２Ｈ(重水素)、^３Ｈ(トリチウム)、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^１７Ｏ、^１８Ｏ、^１８Ｆ、^３６Ｃｌ、^８２Ｂｒ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２９Ｉおよび^１３１Ｉである。特定の本発明の化合物の同位体変異種、特に１個以上の放射性同位体が組み込まれたものは、例えば、作用メカニズムまたは体内の活性化合物の分布を調べるのに有益であり得る。製造および検出が比較的容易なため、特に^３Ｈまたは^１４Ｃ同位体で標識された化合物がこの目的に適している。さらに、重水素などの同位体の組み込みは、化合物の代謝安定性がより大きい結果として、例えば体内での半減期の延長、または必要とされる有効成分の投与量の減少などの特定の治療上の利点をもたらし得る。本発明の化合物のこのような修飾は、従って、幾つかの場合において、本発明の好ましい態様を構成し得る。本発明の化合物の同位体変異種は、当技術分野で既知の方法によって、例えば下記の方法および実施例に記載された方法によって、特定の反応剤および／または出発化合物の対応する同位体修飾を用いることによって製造できる。

【0030】

本発明の内容において、置換基および残基は、特に断りのない限り、下記の意味を有する：
(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルは、本発明の内容において、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖アルキル基を表す。例として、および好ましくは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルが挙げられる。

【0031】

(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシは、本発明の内容において、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖アルコキシ基を表す。例として、および好ましくは、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシおよびｔｅｒｔ−ブトキシが挙げられる。

【0032】

モノ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノは、本発明の内容において、１〜４個の炭素原子を含む直鎖または分枝鎖アルキル置換基を１個有するアミノ基を表す。例として、および好ましくは、メチルアミノ、エチルアミノ、ｎ−プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、ｎ−ブチルアミノおよびｔｅｒｔ−ブチルアミノが挙げられる。

【0033】

ジ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノは、本発明の内容において、同一であるかまたは異なっている、それぞれが１〜４個の炭素原子を含む直鎖または分枝鎖アルキル置換基を２個有するアミノ基を表す。例として、および好ましくは、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノ、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−メチル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノ、Ｎ−イソプロピル−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−イソプロピル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルアミノ、Ｎ−ｎ−ブチル−Ｎ−メチル−アミノおよびＮ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−メチルアミノが挙げられる。

【0034】

(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルは、本発明の内容において、カルボニル基[−Ｃ(＝Ｏ)−]を介して分子の残りに結合している、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖アルキル基を表す。例として、および好ましくは、アセチル、プロピオニル、ｎ−ブチリル、イソブチリル、ｎ−ペンタノイルおよびピバロイルが挙げられる。

【0035】

(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシカルボニルは、本発明の内容において、カルボニル基[−Ｃ(＝Ｏ)−]を介して分子の残りに結合している、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖アルコキシ基を表す。例として、および好ましくは、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｎ−プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ｎ−ブトキシカルボニルおよびｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルが挙げられる。

【0036】

モノ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニルは、本発明の内容において、カルボニル基[−Ｃ(＝Ｏ)−]を介して分子の残りに結合しており、かつ、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖アルキル置換基を１個有するアミノ基を表す。例として、および好ましくは、メチルアミノカルボニル、エチルアミノカルボニル、ｎ−プロピルアミノカルボニル、イソプロピル−アミノカルボニル、ｎ−ブチルアミノカルボニルおよびｔｅｒｔ−ブチルアミノカルボニルが挙げられる。

【0037】

ジ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニルは、本発明の内容において、カルボニル基[−Ｃ(＝Ｏ)−]を介して分子の残りに結合しており、かつ、同一であるかまたは異なっている、それぞれが１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖アルキル置換基を２個有するアミノ基を表す。例として、および好ましくは、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノカルボニル、Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノカルボニル、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノカルボニル、Ｎ−メチル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノ−カルボニル、Ｎ−イソプロピル−Ｎ−メチルアミノカルボニル、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルアミノカルボニル、Ｎ−ｎ−ブチル−Ｎ−メチルアミノカルボニルおよびＮ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−メチルアミノカルボニルが挙げられる。

【0038】

(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルアミノは、本発明の内容において、アルキル基中に１〜４個の炭素原子を含み、かつ、カルボニル基を介してＮ原子に結合している直鎖または分枝鎖アルキルカルボニル置換基を有するアミノ基を表す。例として、および好ましくは、アセチルアミノ、プロピオニルアミノ、ｎ−ブチリルアミノ、イソブチリルアミノ、ｎ−ペンタノイルアミノおよびピバロイルアミノが挙げられる。

【0039】

(Ｃ_３−Ｃ_６)−シクロアルキルは、本発明の内容において、３〜６個の環炭素原子を有する単環式、飽和炭素環を表す。例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが挙げられる。好ましくは、シクロプロピルおよびシクロブチルである。

【0040】

４〜７員ヘテロシクロアルキルおよび４〜６員ヘテロシクロアルキルは、本発明の内容において、全部で４〜７個または４〜６個の環原子をそれぞれ有し、かつ、Ｎ、Ｏ、ＳおよびＳ(Ｏ)_２のシリーズから選択される同一であるかまたは異なっている１個または２個の環ヘテロ原子を含み、かつ、環炭素原子または環窒素原子(存在するならば)を介して結合できる単環式飽和ヘテロ環を表す。１個の環窒素原子を含み、所望によりさらにＮ、ＯまたはＳ(Ｏ)_２のシリーズから選択される１個の環ヘテロ原子を含む、４〜６員ヘテロシクロアルキルが好ましい。環窒素原子を１個、かつ、所望によりＮまたはＯのシリーズから選択される環ヘテロ原子をさらに１個含む５員または６員ヘテロシクロアルキルが好ましい。例として、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ピロリジニル、ピラゾリジル、イミダゾリジニル、テトラヒドロフラニル、チオラニル、１,１−ジオキシドチオラニル、１,２−オキサゾリジニル、１,３−オキサゾリジニル、１,３−チアゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロ−チオピラニル、１,３−ジオキサニル、１,４−ジオキサニル、１,２−オキサジナニル、モルホリニル、チオモルホリニル、１,１−ジオキシドチオモルホリニル、アゼパニル、１,４−ジアゼパニルおよび１,４−オキサゼパニルが挙げられる。好ましくは、アゼチジニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、１,２−オキサゾリジニル、１,３−オキサゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、１,２−オキサジナニル、モルホリニルおよびチオモルホリニルである。特に好ましくは、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニルおよびモルホリニルである。

【0041】

ピロリジノ、ピペリジノおよびモルホリノは、本発明の内容において、特に、それぞれ、Ｎ結合ピロリジン−１−イル、ピペリジン−１−イルおよびモルホリン−４−イル環を言う。

【0042】

オキソ置換基は、本発明の内容において、二重結合を介して炭素原子に結合している酸素原子を表す。

【0043】

本発明の内容において、複数回現れる基全てについて、その意味は互いに独立である。本発明の化合物中の基が置換されているならば、特に断りのない限り、基は、一置換されていても多置換されていてもよい。同一であるかまたは異なっている１個、２個または３個の置換基による置換が好ましい。同一であるかまたは異なっている１個または２個の置換基による置換が特に好ましい。

【0044】

好ましい態様において、本発明は、
Ｒ^１が、水素、クロロ、メチルまたはメトキシであり、
Ｒ^２が、水素またはメトキシであり、
ただし、Ｒ^１およびＲ^２の少なくとも一方が水素以外であり、
Ｇが、基−ＣＨ_２−ＯＲ^３、−Ｃ(＝Ｏ)−ＯＲ^３、−ＣＨ_２−ＮＲ^４Ｒ^５または−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＲ^４Ｒ^６
{式中、
Ｒ^３は、水素または(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルであり、これは、所望によりヒドロキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシ、ヒドロキシカルボニル、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシカルボニル、アミノ、アミノカルボニル、モノ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノ−カルボニル、ジ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニルまたは３個までのフルオロ原子で置換されており、
Ｒ^４は、水素または(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルであり、
Ｒ^５は、水素、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニル、(Ｃ_３−Ｃ_６)−シクロアルキルまたは４〜６員ヘテロシクロアルキルであり、
ここで、
(i)当該(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルは、所望によりヒドロキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、モノ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニル、ジ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニルまたは(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルアミノで置換されており、
(ii)当該(Ｃ_３−Ｃ_６)−シクロアルキルは、所望により(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、ヒドロキシ、アミノおよび(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルアミノからなる群から独立して選択される１個または２個の置換基で置換されており、
(iii)当該４〜６員ヘテロシクロアルキルは、所望により(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、ヒドロキシ、オキソ、アミノおよび(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルアミノからなる群から独立して選択される１個または２個の置換基で置換されており、
Ｒ^６は、水素、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、(Ｃ_３−Ｃ_６)−シクロアルキルまたは４〜６員ヘテロシクロアルキルであり、
ここで、
(i)当該(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルは、所望によりヒドロキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシカルボニル、アミノ、アミノ−カルボニル、モノ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニル、ジ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニルまたは(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルアミノで置換されており、
(ii)当該(Ｃ_３−Ｃ_６)−シクロアルキルは、所望により(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、ヒドロキシ、アミノおよび(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルアミノからなる群から独立して選択される１個または２個の置換基で置換されており、
(iii)当該４〜６員ヘテロシクロアルキルは、所望により(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、ヒドロキシ、オキソ、アミノおよび(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルアミノからなる群から独立して選択される１個または２個の置換基で置換されているか、
あるいは、
Ｒ^４およびＲ^５、または、Ｒ^４およびＲ^６は、それぞれ、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、単環式飽和４〜７員ヘテロシクロアルキル環を形成し、当該環は、Ｎ(Ｒ^７)およびＯから選択される第２環ヘテロ原子を含んでもよく、そして、環炭素原子で、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、アミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される３個までの置換基で置換されていてもよく、
ここで、Ｒ^７は、水素、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、ホルミル、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルまたは(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシカルボニルである。}
を表す、一般式(Ｉ)の化合物に関する。

【0045】

より好ましい態様において、本発明は、
Ｒ^１が、水素、クロロ、メチルまたはメトキシであり、
Ｒ^２が、メトキシであり、
Ｇが、基−ＣＨ_２−ＯＲ^３、−ＣＨ_２−ＮＲ^４Ｒ^５または−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＲ^４Ｒ^６
{式中、
Ｒ^３は、水素または(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルであり、これは、所望によりヒドロキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシカルボニル、アミノまたはアミノカルボニルで置換されており、
Ｒ^４は、水素またはメチルであり、
Ｒ^５は、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルまたは５員または６員ヘテロシクロアルキルであり、
ここで、
(i)当該(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルは、所望によりヒドロキシ、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、モノ−(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルアミノカルボニルまたは(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルアミノで置換されており、
(ii)当該５員または６員ヘテロシクロアルキルは、所望によりオキソで置換されており、
Ｒ^６は、水素または(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルであり、これは、所望によりヒドロキシ、アミノまたはアミノカルボニルで置換されているか、
あるいは、
Ｒ^４およびＲ^５、または、Ｒ^４およびＲ^６は、それぞれ、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、単環式飽和４〜６員ヘテロシクロアルキル環を形成し、当該環は、Ｎ(Ｒ^７)およびＯから選択される第２環ヘテロ原子を含んでもよく、そして、環炭素原子で、メチル、オキソ、ヒドロキシ、アミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される１個または２個の置換基で置換されていてもよく、
ここで、Ｒ^７は、水素、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキル、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルまたは(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルコキシカルボニルである。}
を表す、一般式(Ｉ)の化合物に関する。

【0046】

異なる態様において、本発明は、
Ｒ^１が、メチルであり、
Ｒ^２が、メトキシである、
一般式(Ｉ)の化合物に関する。

【0047】

さらに異なる態様において、本発明は、
Ｇが、基−ＣＨ_２−ＯＲ^３
{式中、Ｒ^３は、水素または(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルであり、これは、所望によりヒドロキシ、アミノまたはアミノカルボニルで置換されている。}
を表す、一般式(Ｉ)の化合物に関する。

【0048】

他の異なる態様において、本発明は、
Ｇが、基−ＣＨ_２−ＮＲ^４Ｒ^５
{式中、
Ｒ^４は、水素またはメチルであり、
Ｒ^５は、所望によりヒドロキシ、アミノカルボニルまたはメチルアミノカルボニルで置換された(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルであるか、または、アセチルまたは２−オキソピロリジン−３−イルである。}
を表す、一般式(Ｉ)の化合物に関する。

【0049】

また、他の異なる態様において、本発明は、
Ｇが、基−ＣＨ_２−ＮＲ^４Ｒ^５
{式中、Ｒ^４およびＲ^５は、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、単環式飽和５員または６員ヘテロシクロアルキル環を形成し、当該環は、Ｎ(Ｒ^７)およびＯから選択される第２環ヘテロ原子を含んでもよく、そして、環炭素原子で、オキソ、ヒドロキシまたはアミノカルボニルで置換されていてもよく、
ここで、Ｒ^７は、水素、メチル、アセチルまたはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルである。}
を表す、一般式(Ｉ)の化合物に関する。

【0050】

特に好ましい態様において、本発明は、
Ｒ^１が、メチルであり、
Ｒ^２が、メトキシであり、
Ｇが、基−ＣＨ_２−ＯＲ^３または−ＣＨ_２−ＮＲ^４Ｒ^５
{式中、
Ｒ^３は、所望によりヒドロキシ、アミノまたはアミノカルボニルで置換された(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルであり、
Ｒ^４は、水素またはメチルであり、
Ｒ^５は、ヒドロキシまたはアミノカルボニルで置換された(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルであるか、または、アセチルまたは２−オキソピロリジン−３−イルであるか、
あるいは、
Ｒ^４およびＲ^５は、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、単環式飽和５員または６員ヘテロシクロアルキル環を形成し、当該環は、Ｎ(Ｒ^７)およびＯから選択される第２環ヘテロ原子を含んでもよく、そして、環炭素原子で、オキソ、ヒドロキシまたはアミノカルボニルで置換されていてもよく、
ここで、Ｒ^７は、水素またはアセチルである。}
を表す、一般式(Ｉ)の化合物に関する。

【0051】

また、それぞれの組み合わせで特記された基、または、好ましい組み合わせの基の定義は、他の組み合わせの基の定義によって、基について示された特定の組み合わせに関係なく、望み通りに置き換えられる。２個以上の上記の好ましい範囲の組み合わせが、特に好ましい。

【0052】

一般式(Ｉ)の化合物は、特定の選択されたＧ基(上記定義を参照)の性質によって主に決定される様々な合成経路によって製造できる。

【0053】

従って、他の態様において、本発明は、一般式(Ｉ)の化合物を製造する方法であって、式(II)：

【化2】

の６−(ヒドロキシメチル)−置換４−アミノ−５−ブロモピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジンを、式(III)：

【化3】

[式中、
Ｒ^１およびＲ^２は、上記の意味を有し、
Ｒ^８は、水素または(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルを表すか、あるいは、両方のＲ^８基が一体となって結合して、−(ＣＨ_２)_２−、−Ｃ(ＣＨ_３)_２−Ｃ(ＣＨ_３)_２−、−(ＣＨ_２)_３−、−ＣＨ_２−Ｃ(ＣＨ_３)_２−ＣＨ_２−または−Ｃ(＝Ｏ)−ＣＨ_２−Ｎ(ＣＨ_３)−ＣＨ_２−Ｃ(＝Ｏ)−架橋を形成する。]
のベンゾチオフェン−２−イル ボロネートと、パラジウム触媒および塩基の存在下でカップリングさせ、式(I-A)：

【化4】

[式中、Ｒ^１およびＲ^２は、上記の意味を有する。]
の化合物を得て、所望により、それを、

【0054】

[Ａ] 式(IV)：

【化5】

[式中、
Ｒ^１およびＲ^２は、上記の意味を有し、
Ｘは、クロロ、ブロモまたはヨードである。]
の対応する６−(ハロメチル)誘導体に変換し、次いで、塩基の存在下、式(Ｖ)のアルコールまたは式(VII-A)のアミン：

【化6】

[式中、
Ｒ^４は、上記の意味を有し、
Ｒ^３ＡおよびＲ^５Ａは、それぞれ水素以外の上記のＲ^３およびＲ^５の意味を有する。]
と反応させ、それぞれ、式(I-B)および式(I-C1)：

【化7】

[式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３Ａ、Ｒ^４およびＲ^５Ａは、上記の意味を有する。]
の標的化合物を得ること、あるいは、

【0055】

[Ｂ] 式(VI)：

【化8】

[式中、Ｒ^１およびＲ^２は、上記の意味を有する。]
のアルデヒドに酸化し、次いで、式(VII)：

【化9】

[式中、Ｒ^４およびＲ^５は、上記の意味を有する。]
のアミンと、酸および還元剤の存在下で反応させ、式(I-C)：

【化10】

[式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^４およびＲ^５は、上記の意味を有する。]
の標的化合物を得ること、あるいは、

【0056】

[Ｃ] 式(I-D)：

【化11】

[式中、Ｒ^１およびＲ^２は、上記の意味を有する。]
のカルボン酸に酸化し、次いで、式(Ｖ)のアルコールまたは式(VIII)のアミン：

【化12】

[式中、Ｒ^３Ａ、Ｒ^４およびＲ^６は、上記の意味を有する。]
と縮合剤の存在下でカップリングさせ、それぞれ、式(I-E)および式(I-F)：

【化13】

[式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３Ａ、Ｒ^４およびＲ^６は、上記の意味を有する。]
の標的化合物を得ること、
所望により、適切な場合は、続いて、(i) このようにして得られた式(Ｉ)の化合物を、好ましくはクロマトグラフ法を用いて、そのエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーに分離すること、および／または、(ii) 対応する溶媒および／または酸または塩基で処理することによって、式(Ｉ)の化合物を、その水和物、溶媒和物、塩および／または塩の水和物または溶媒和物に変換すること
を特徴とする方法に関する。

【0057】

反応順を逆にした工程[Ｂ]の修飾において、式(I-C)の化合物はまた、最初に、式(II)：

【化14】

の６−(ヒドロキシメチル)−置換４−アミノ−５−ブロモピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジンを、式(IX)：

【化15】

のアルデヒドに酸化し、次いで、後者を、式(VII)：

【化16】

[式中、Ｒ^４およびＲ^５は、上記の意味を有する。]
のアミンと、酸および還元剤の存在下で反応させ、式(Ｘ)：

【化17】

[式中、Ｒ^４およびＲ^５は、上記の意味を有する。]
の化合物を得て、続いて、それを式(III)：

【化18】

[式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^８は、上記の意味を有する。]
のベンゾチオフェン−２−イル ボロネートと、パラジウム触媒および塩基の存在下でカップリングさせ、式(I-C)：

【化19】

[式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^４およびＲ^５は、上記の意味を有する。]
の標的化合物を得る。

【0058】

式(I-G)：

【化20】

[式中、
Ｒ^１およびＲ^２は、上記の意味を有し、
Ｒ^５Ｂは、水素または(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルカルボニルである。]
を有する本発明の化合物は、式(IV)：

【化21】

[式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＸは、上記の意味を有する。]
の６−(ハロメチル)中間体を、アジド、例えばアジ化ナトリウムで処理し、式(XI)：

【化22】

[式中、Ｒ^１およびＲ^２は、上記の意味を有する。]
の対応する６−(アジドメチル)誘導体を得て、次いで、それを、パラジウム触媒下で水素化し、式(I-G1)：

【化23】

[式中、Ｒ^１およびＲ^２は、上記の意味を有する。]
の６−(アミノメチル)化合物とし、所望によりそれを式(XII)または(XIII)：

【化24】

[式中、Ｒ^９は、(Ｃ_１−Ｃ_４)−アルキルである。]
のカルボン酸誘導体でアシル化し、式(I-G2)：

【化25】

[式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^９は、上記の意味を有する。]
の標的化合物を得ることによって製造できる。

【0059】

上記の方法によって製造できる式(I-A)、(I-B)、(I-C)、(I-C1)、(I-D)、(I-E)、(I-F)、(I-G)、(I-G1)および(I-G2)の化合物は、それぞれ、一般式(Ｉ)の化合物の特定のサブセットを表す。

【0060】

カップリング反応(II)＋(III)→(I-A)および(X)＋(III)→(I-C)[“鈴木−宮浦カップリング”]は、一般的に、不活性溶媒中、パラジウム触媒および塩基水溶液を用いて行われれる。この目的に適したパラジウム触媒は、例えば、酢酸パラジウム(II)、塩化パラジウム(II)、塩化 ビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)、塩化 ビス(アセトニトリル)パラジウム(II)、塩化 [１,１'−ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]パラジウム(II)、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)、ビス(ジベンジリデンアセトン)パラジウム(0)、およびトリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)を含み、所望により、他のホスフィンリガンド、例えば、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２',４',６'−トリイソプロピルビフェニル(X-Phos)、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２',６'−ジメトキシビフェニル(S-Phos)、４,５−ビス(ジフェニルホスフィノ)−９,９−ジメチルキサンテン(Xantphos)、または、４−(ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ)−Ｎ,Ｎ−ジメチルアニリンと組み合わせる。また、反応条件下で触媒として活性な種を生成するパラジウム・プレ触媒、例えば(２'−アミノビフェニル−２−イル)(クロロ)パラジウム−ジシクロヘキシル(２',４',６'−トリイソプロピルビフェニル−２−イル)ホスフィンを用いることができる[例えば S. Kotha et al., Tetrahedron 58, 9633-9695 (2002); T. E. Barder et al., J. Am. Chem. Soc. 127 (13), 4685-4696 (2005); S. L. Buchwald et al., J. Am. Chem. Soc. 132 (40), 14073-14075 (2010) およびこれらに引用された参考文献を参照のこと]。

【0061】

これらのカップリング反応に適した塩基は、特に、炭酸アルカリ金属塩、例えば炭酸ナトリウム、炭酸カリウムまたは炭酸セシウム、リン酸アルカリ金属塩、例えばリン酸ナトリウムまたはリン酸カリウム、または、フッ化アルカリ金属塩、例えばフッ化カリウムまたはフッ化セシウムである。通常、これらの塩基は、水溶液として用いられる。反応は、反応条件下で不活性な有機溶媒中で行われる。好ましくは、水と混和できる有機溶媒、例えば１,２−ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、１,４−ジオキサン、アセトニトリル、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド(ＤＭＦ)またはジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)が用いられるが、他の不活性溶媒、例えばジクロロメタンまたはトルエンを用いてもよい。

【0062】

ヒドロキシからハロゲンへの変換(I-A)→(IV)において、当技術分野で周知の様々な標準的な方法および反応剤が用いられ得る。反応剤の選択は、塩化チオニル[Ｘ＝Ｃｌについて]、テトラブロモメタン／トリフェニルホスフィン[Ｘ＝Ｂｒについて]、ヨウ素／トリフェニルホスフィン[Ｘ＝Ｉについて]である。６−(クロロメチル)誘導体(IV)[Ｘ＝Ｃｌ]が、後処理に好都合で化合物が安定であるという理由で好ましい。

【0063】

製造工程(IV)＋(V)→(I-B)および(IV)＋(VII-A)→(I-C1)に適した塩基は、特に、炭酸アルカリ金属塩、例えば炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムまたは炭酸セシウム、酢酸アルカリ金属塩、例えば酢酸ナトリウムまたは酢酸カリウム、または、慣用の第３級アミン塩基、例えばトリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンまたはピリジンである。好ましくは、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(ＤＩＰＥＡ)である。反応は、不活性溶媒中、例えばテトラヒドロフラン中、または、溶媒なしで過剰のアルコール(Ｖ)またはアミン(VII-A)を用いて、＋２０℃〜＋２００℃、好ましくは＋５０℃〜＋１５０℃の範囲の温度で行われる。有利には、これらの変換は、マイクロ波反応装置によって行われる。

【0064】

反応順序(I-A)→(IV)→(I-B)、(I-A)→(IV)→(I-C1)および(I-A)→(IV)→(XI)は、２つの別個の工程、すなわち中間体化合物(IV)の単離および精製を伴って行われても、ワンポット法、すなわち製造反応で得られたままの粗製の中間体(IV)を用いて行われてもよい。

【0065】

穏やかな条件下で第１級アルコール(I-A)および(II)をそれぞれアルデヒド(VI)および(IX)に変換できる酸化剤は、１,１,１−トリアセトキシ−１,１−ジヒドロ−１,２−ベンゾヨードキソール−３(１Ｈ)−オン(“デス・マーチン・ペルヨージナン”)、第２酸化剤、例えばヨードソベンゼン−Ｉ,Ｉ−ジアセテートまたは次亜塩素酸ナトリウムと組み合わせた２,２,６,６−テトラメチルピペリジン−１−オキシル(ＴＥＭＰＯ)、および、ジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)をベースとした酸化系、例えばＤＭＳＯ／無水トリフルオロ酢酸またはＤＭＳＯ／Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド(ＤＣＣ)を含む。好ましくは、１,１,１−トリアセトキシ−１,１−ジヒドロ−１,２−ベンゾヨードキソール−３(１Ｈ)−オンである。酸化反応は、不活性溶媒中で行われ、好ましくはジクロロメタンを用いて行われる。

【0066】

還元的アミノ化反応(VI)＋(VII)→(I-C)および(IX)＋(VII)→(X) に適した還元剤は、慣用の水素化ホウ素アルカリ金属塩、例えば水素化ホウ素リチウム、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素カリウム、シアノ水素化ホウ素ナトリウムまたはトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムである。変換は、一般的に、アミン成分(VII)および／または用いられた特定の水素化ホウ素塩の反応性に応じて、酸、好ましくは酢酸の存在下で、アルコールまたはエーテル溶媒中、例えばメタノール、エタノール、イソプロパノール、テトラヒドロフランまたは１,４−ジオキサン中で、０℃〜＋８０℃の温度範囲内で行われる。

【0067】

カルボン酸(I-D)の製造は、アルコール(I-A)の１工程酸化によって、または、アルデヒド中間体(VI)のさらなる酸化によって行われ得る。第１経路において、好ましくは、触媒として２,２,６,６−テトラメチルピペリジン−１−オキシル(ＴＥＭＰＯ)基の存在下で次亜塩素酸ナトリウムを、または、触媒量のＴＥＭＰＯおよび次亜塩素酸ナトリウムと共に化学量論的な量の亜塩素酸ナトリウムを酸化剤として用い得る[H. van Bekkum et al., Synthesis, 1153-1174 (1996); M. M. Zhao et al., Org. Synth. 81, 195-203 (2005)、および、そこに引用された参考文献を参照のこと]。第２経路において、次亜塩素酸塩スカベンジャー、例えば２−メチル−２−ブテンの存在下での亜塩素酸ナトリウムによる酸化は選択肢の方法を表す[H. W. Pinnick et al., Tetrahedron 37, 2091-2096 (1981); A. Raach and O. Reiser, J. Prakt. Chem. 342 (6), 605-608 (2000)およびそこに引用された参考文献を参照のこと]。本発明の内容において、好ましいのは、２工程酸化手順(I-A)→(VI)→(I-D)である。

【0068】

製造工程(I-D)＋(V)→(I-E)[エステル形成]および(I-D)＋(VIII)→(I-F)[アミド形成]に適した縮合剤は、例えば、カルボジイミド、例えばＮ,Ｎ'−ジエチル−、Ｎ,Ｎ'−ジプロピル−、Ｎ,Ｎ'−ジイソプロピル−、Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド(ＤＣＣ)またはＮ−(３−ジメチルアミノプロピル)−Ｎ'−エチルカルボジイミド (ＥＤＣ)、ホスゲン誘導体、例えばＮ,Ｎ'−カルボニルジイミダゾール(ＣＤＩ)またはクロロ蟻酸イソブチル、α−クロロエナミン、例えば１−クロロ−２−メチル−１−ジメチルアミノ−１−プロペン、リン化合物、例えば無水プロパンホスホン酸、シアノホスホン酸ジエチル、塩化 ビス(２−オキソ−３−オキサゾリジニル)ホスホリル、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス(ジメチルアミノ)ホスホニウム ヘキサフルオロホスフェート(ＢＯＰ)またはベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス(ピロリジノ)ホスホニウム ヘキサフルオロホスフェート(ＰｙＢＯＰ)、および、ウロニウム化合物、例えばＯ−(ベンゾトリアゾール−１−イル)−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウム テトラフルオロボレート(ＴＢＴＵ)、Ｏ−(ベンゾトリアゾール−１−イル)−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート(ＨＢＴＵ)、２−(２−オキソ−１−(２Ｈ)−ピリジル)−１,１,３,３−テトラメチルウロニウム テトラフルオロボレート(ＴＰＴＵ)、Ｏ−(７−アザベンゾトリアゾール−１−イル)−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート(ＨＡＴＵ)またはＯ−(１Ｈ−６−クロロベンゾトリアゾール−１−イル)−１,１,３,３−テトラメチルウロニウム テトラフルオロボレート(ＴＣＴＵ)を含み、適切な場合は、さらなる補助剤、例えば１−ヒドロキシベンゾトリアゾール(ＨＯＢｔ)またはＮ−ヒドロキシスクシンイミド(ＨＯＳｕ)、および／または塩基、例えば炭酸アルカリ金属塩、例えば炭酸ナトリウムまたは炭酸カリウム、または、有機アミン塩基、例えばトリエチルアミン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン(ＮＭＭ)、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(ＤＩＰＥＡ)、ピリジンまたは４−Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン(ＤＭＡＰ)と組み合わせる。好ましいのは、Ｏ−(７−アザベンゾトリアゾール−１−イル)−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート(ＨＡＴＵ)またはＯ−(ベンゾトリアゾール−１−イル)−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウム テトラフルオロボレート(ＴＢＴＵ)を、適切な場合は、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(ＤＩＰＥＡ)および／または１−ヒドロキシベンゾトリアゾール(ＨＯＢｔ)と組み合わせて用いることである。

【0069】

製造工程(I-D)＋(V)→(I-E)および(I-D)＋(VIII)→(I-F)に不活性な溶媒は、例えば、エーテル、例えばジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチル メチル エーテル、テトラヒドロフラン、１,４−ジオキサンまたは１,２−ジメトキシエタン、炭化水素、例えばベンゼン、トルエン、キシレン、ヘキサンまたはシクロヘキサン、ハロゲン化炭化水素、例えばジクロロメタン、トリクロロメタン、四塩化炭素、１,２−ジクロロエタン、トリクロロエチレンまたはクロロベンゼン、または、他の溶媒、例えばアセトン、アセトニトリル、酢酸エチル、ピリジン、ジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド(ＤＭＦ)、Ｎ,Ｎ'−ジメチルプロピレン尿素(ＤＭＰＵ)またはＮ−メチルピロリジノン(ＮＭＰ)である。また、これらの溶媒の混合物を使用できる。好ましくは、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミドまたはその混合物を用いることである。反応は、一般的に、０℃〜＋６０℃の温度範囲で、好ましくは＋１０℃〜＋４０℃で行われる。

【0070】

第１級または第２級アミン部分が、式(Ｉ)の標的化合物中のＧ基の一部を形成する場合、時には、上記の製造反応において、遊離アミンの代わりに反応要素としてこのアミンの保護誘導体を用いることが適切であり得る。この目的のために、慣用の一時的なアミノ保護基、例えばアシル基(例えばアセチルまたはトリフルオロアセチル)またはカルバメート型保護基(例えばＢｏｃ基、Ｃｂｚ基またはＦｍｏｃ基)を用いてもよい。好ましくは、Ｂｏｃ(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)基が用いられる。同様に、Ｇ基の一部であるヒドロキシ官能基は、前駆体化合物および工程中間体において、例えばテトラヒドロピラニル(ＴＨＰ)エーテルとして、または、シリル エーテル誘導体、例えばトリメチルシリルまたはｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル エーテルとして、一時的にブロックされ得る。

【0071】

次いで、これらの保護基は、水での後処理および精製の手順の間に同時に切断され得るか、または、当技術分野で周知の標準的な方法を用いて、連続した別個の反応工程で除去される。対応する遊離アミンまたはアルコールからの当該保護された中間体の製造は、同様に、文献[例えば、T. W. Greene and P. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, New York, 1999を参照のこと]に記載された一般的な手順に従って、容易に達成される。

【0072】

保護された(すなわちアシル化した)アミン誘導体の特定のタイプは、それ自体、顕著なＦＧＦＲ阻害活性を有する。従って、このような化合物はまた、上で定義した一般式(Ｉ)に包含される。

【0073】

本発明の化合物の製造は、下記の合成スキームによって説明され得る：
スキーム１

【化26】

【0074】

スキーム２

【化27】

【0075】

スキーム３

【化28】

【0076】

スキーム４

【化29】

【0077】

スキーム５

【化30】

【0078】

出発化合物である式(II)の４−アミノ−５−ブロモ−６−(ヒドロキシメチル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジンは、４−アミノ−６−シアノピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン(XIV)を酸媒介アルコール分解によってエステル(XV)とし、続いて、トリエチル水素化ホウ素リチウムを用いて６−(ヒドロキシメチル)誘導体(XVI)に還元し、１,３−ジブロモ−５,５−ジメチルヒダントインでジブロモ化し、最後に、ｎ−ブチルリチウムとのハロゲン−金属交換によって、７位を選択的に脱ブロモ化し、続いて、メタノールで反応停止させることから、容易に利用できる(下記のスキーム６を参照のこと)。４−アミノ−６−シアノピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン(XIV)の製造は、以前に記載されている[国際特許出願 WO 2007/064883-A2 (中間体AX／工程３)を参照のこと]。

【0079】

スキーム６

【化31】

【0080】

式(III)のベンゾチオフェン−２−イル ボロネートは、好都合には、式(XVIII)の置換チオフェノール誘導体から出発して製造できる(下記のスキーム７を参照のこと)。ブロモアセタール(XIX)でアルキル化し、続いてポリリン酸介在環化して、式(XXI)のベンゾチオフェン中間体を得る。これを次いで２位でメタレーションし、トリアルキル ボレートと反応させる。アルカリで後処理し、式(IIIa)の遊離の(ベンゾチオフェン−２−イル)ボロン酸を得る。これは、望ましいならば、当技術分野で既知の標準的な手順によって、式(IIIb)の環状ボロネート、例えばいわゆるＭＩＤＡ ボロネートに変換してもよい[例えば、D. M. Knapp et al., J. Am. Chem. Soc. 131 (20), 6961-6963 (2009)を参照のこと]。

【0081】

スキーム７

【化32】

[P. A. Ple and L. J. Marnett, J. Heterocyclic Chem. 25 (4), 1271-1272 (1988); A. Ventu-relli et al., J. Med. Chem. 50 (23), 5644-5654 (2007)を参照のこと]。

【0082】

式(V)、(VII)、(VII-A)、(VIII)、(XVIII)、(XIX)および(XXII)の化合物は、市販されているか、文献既知であるか、または、利用可能な出発物質から文献に記載された標準的な方法を適合させることによって容易に製造できる。出発物質を製造するための詳細な手順および参考文献は、実施例の出発物質および中間体の製造についての章で見出され得る。

【0083】

本発明の化合物は、有益な薬理学的性質を有し、ヒトおよび他の哺乳動物の障害を予防および処置するのに用いられ得る。

【0084】

本発明の化合物は、受容体チロシンキナーゼ、特にＦＧＦＲキナーゼ、最も顕著にはＦＧＦＲ−１およびＦＧＦＲ−３キナーゼの活性または発現の強力な阻害剤である。従って、他の態様において、本発明は、処置を必要とする患者において、ＦＧＦＲキナーゼ活性が関連するまたは介在する障害を処置する方法であって、該患者に、有効量の上で定義した式(Ｉ)の化合物を投与することを含む方法を提供する。或る態様において、ＦＧＦＲキナーゼ活性が関連する障害は、増殖性障害、特に癌および腫瘍疾患である。

【0085】

本発明の内容において、用語“処置”または“処置する”は、疾患、障害、状態または容態を、その発症および／または進行および／または症候を阻害し、遅延し、軽減し、緩和し、阻止し、減少させまたはその退縮を起こすことを含む。用語“予防”または“予防する”は、疾患、障害、状態または容態を、その発症および／または進行および／または症候を、有する、罹患する、または経験するリスクを減少させることを含む。用語“予防”(prevention)は、予防(prophylaxis)を含む。障害、疾患、状態または容態の処置または予防は、部分的であっても完全であってもよい。

【0086】

用語“増殖性障害”は、望ましくないまたは制御されていない細胞増殖を含む障害を含む。本発明の化合物は、細胞増殖および／または細胞分割を予防し、阻害し、遮断し、軽減し、減少させ、制御することなど、および／または、アポトーシスを生じさせることに利用できる。本方法は、ヒトを含む哺乳動物を含む処置を必要とする対象に、該障害を処置または予防するのに有効な本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩、異性体、多形、代謝物、水和物または溶媒和物を或る量で投与することを含む。

【0087】

この明細書を通して、単純にするために、単数表現を複数表現より好んで用いているが、一般的に、特に断りのない限り、単数表現は複数表現を含むことを意味する。例えば、“患者において疾患を処置する方法であって、有効量の式(Ｉ)の化合物を患者に投与することを含む方法”は、１種より多い疾患の同時処置、および、１種より多い式(Ｉ)の化合物の投与を含むことを意味する。

【0088】

本発明の化合物で処置および／または予防できる増殖性障害は、特に、癌および腫瘍疾患のグループを含むが、これらに限定されない。これらは、特に、下記の疾患を意味すると理解されるが、それらに限定されない：乳癌および乳房の腫瘍(乳管および小葉型、また非浸潤性のもの)、呼吸管の腫瘍(小細胞肺癌および非小細胞肺癌、小細胞癌および非小細胞癌、気管支癌、気管支腺腫、胸膜肺芽腫)、脳の腫瘍(例えば脳幹の腫瘍、および視床下部の腫瘍、星状細胞腫、神経膠芽腫、髄芽腫、上衣腫、神経外胚葉腫瘍および松果体腫瘍)、消化器(食道、胃、胆嚢、小腸、大腸、直腸、肛門)の腫瘍、肝臓の腫瘍(とりわけ肝細胞癌、胆管細胞癌、および、肝細胞・胆管細胞混合型腫瘍)、頭および頸部(喉頭、下咽頭、上咽頭、中咽頭、口唇および口腔)の腫瘍、皮膚癌(扁平上皮癌、カポジ肉腫、悪性黒色腫、メルケル細胞皮膚癌および非黒色腫皮膚癌)、軟部組織の腫瘍(とりわけ軟部組織肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、リンパ肉腫および横紋筋肉腫)、眼の腫瘍(とりわけ眼球内黒色腫、ぶどう膜黒色腫および網膜芽細胞腫)、内分泌腺および外分泌腺(例えば甲状腺および副甲状腺、膵臓および唾液腺)の腫瘍、尿路の腫瘍(膀胱、陰茎、腎臓、腎盂および尿管の腫瘍)、生殖器の腫瘍(女性における子宮内膜、子宮頸、卵巣、膣、外陰部および子宮の癌、および、男性における前立腺および精巣の癌)、ならびに、その遠隔転移。これらの障害はまた、固形癌および循環血液細胞としての増殖性血液疾患、例えばリンパ腫、白血病、および、骨髄増殖性疾患、例えば急性骨髄腫、急性リンパ芽球性、慢性リンパ性、慢性骨髄性および有毛細胞白血病、および、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫および中枢神経系のリンパ腫を含む。

【0089】

本発明の化合物の活性および選択性プロファイルのために、本発明の化合物は、胸部(乳房)、肺、胃、膀胱および卵巣の癌および腫瘍疾患の処置に特に適当であると考えられる。さらに、本発明の化合物は、全般的な腫瘍転移の予防または抑制に特に適している。

【0090】

本発明の化合物および方法で処置および／または予防できる他の増殖性障害は、乾癬、ケロイドおよび他の皮膚に影響を与える過形成、水疱性類天疱瘡、多形紅斑および疱疹状皮膚炎を含む表皮下水疱形成を伴う水疱性障害、線維性障害、例えば肺線維症、アテローム性動脈硬化症、再狭窄および肝硬変、メサンギウム細胞増殖性障害、糸球体症、糸球体腎炎、糖尿病性腎症、悪性腎硬化症および多発性嚢胞腎疾患を含む腎臓疾患、良性前立腺過形成(ＢＰＨ)、血管新生のまたは血管増殖性障害および血栓性微小血管障害症候群を含む。

【0091】

本発明の化合物はまた、眼疾患、例えば加齢黄斑変性(ＡＭＤ)、萎縮型黄斑変性、虚血性網膜静脈閉塞症、糖尿病性黄斑浮腫、糖尿病網膜症、未熟児網膜症および他の網膜症の処置および／または予防に有用である。

【0092】

本発明の化合物を投与することによって処置および／または予防し得る他の状態は、婦人科疾患、例えば子宮内膜症、筋腫および卵巣嚢腫、脂肪生成、胆汁代謝、リン酸代謝、カルシウム代謝および／または骨ミネラル化に関連する代謝障害、骨格障害、例えば低身長症、軟骨形成不全およびパイフェル症候群、軟骨疾患、例えば変形性関節症および多発性関節炎、関節リウマチ、禿頭症および移植拒絶反応を含む。

【0093】

上記の疾患は、ヒトにおいて、よく特徴づけられているが、他の哺乳動物においても、比較可能な病因で存在し、本発明の化合物および方法で処置できる。

【0094】

従って、本発明は、さらに、障害、特に上記の障害を処置および／または予防するための本発明の化合物の使用に関する。

【0095】

本発明は、さらに、障害、特に上記の障害を処置および／または予防する医薬組成物を製造するための、本発明の化合物の使用に関する。

【0096】

本発明は、さらに、障害、特に上記の障害を処置および／または予防する方法における、本発明の化合物の使用に関する。

【0097】

本発明は、さらに、有効量の少なくとも１種の本発明の化合物を用いることによって、障害、特に上記の障害を処置および／または予防する方法に関する。

【0098】

本発明の化合物を、唯一の薬剤として投与してもよく、または、組み合わせが望ましくないおよび／または許容されない副作用を起こさない限り、１種以上のさらなる治療薬と組み合わせて投与してもよい。このような併用治療は、上で定義した式(Ｉ)の化合物および１種以上のさらなる治療薬を含む一つの医薬投与製剤の投与、ならびに、それぞれ別個の医薬投与製剤における式(Ｉ)の化合物およびさらなる治療薬の投与を含む。例えば、式(Ｉ)の化合物および１つの治療薬を、１個の(固定化された)経口投与組成物、例えば錠剤またはカプセル剤で、一緒に患者に投与してもよく、または、それぞれの薬物を別個の投与製剤で投与してもよい。

【0099】

別個の投与製剤を用いるとき、式(Ｉ)の化合物と１種以上のさらなる治療薬を、基本的に同時に(すなわち共に)投与しても、別個に時間差で(すなわち連続で)投与してもよい。

【0100】

特に、本発明の化合物は、他の抗癌剤、例えばアルキル化剤、代謝拮抗薬、植物誘発抗癌剤、ホルモン治療薬、トポイソメラーゼ阻害剤、チューブリン阻害剤、キナーゼ阻害剤、標的化薬物、抗体、抗体−薬物コンジュゲート(ＡＤＣ)、免疫剤、生物学的応答修飾剤、抗血管新生化合物、および、他の抗増殖性細胞分裂阻害剤および／または細胞毒との固定化された組み合わせまたは別個の組み合わせで用いられ得る。この点で、下記は、本発明の化合物と組み合わせて用いられ得る第２薬物の例の非限定的な一覧である：
アバレリックス、アビラテロン、アクラルビシン、アファチニブ、アフリベルセプト、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アルファラディン(alpharadin)、アルトレタミン、アミノグルテチミド、アモナファイド(amonafide)、アムルビシン、アムサクリン、アナストロゾール、アンドロムスチン(andromustine)、アルグラビン、アスパラギナーゼ、アキシチニブ、５−アザシチジン、バシリキシマブ、ベロテカン、ベンダムスチン、ベバシズマブ、ベキサロテン、ビカルタミド、ビサントレン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ボスチニブ、ブリバニブアラニンエステル、ブセレリン、ブスルファン、カバジタキセル、CAL-101、ホリナートカルシウム、レボホリナートカルシウム、カンプトテシン、カペシタビン、カルボプラチン、カルモフール、カルムスチン、カツマキソマブ、セジラニブ、セルモロイキン、セツキシマブ、クロラムブシル、クロルマジノン、クロルメチン、シドホビル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロン酸、クロファラビン、コンブレタスタチン、クリサンタスパーゼ、クリゾチニブ、シクロホスファミド、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダルベポエチン アルファ、ダーリナパーシン(darinaparsin)、ダサチニブ、ダウノルビシン、デシタビン、デガレリクス、デニロイキンジフチトクス、デノスマブ、デスロレリン、塩化ジブロスピジウム(dibrospidium chloride)、ドセタキセル、ドビチニブ、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、デュタステリド、エクリズマブ、エドレコロマブ、エフロルニチン、エリプチニウム アセテート、エルトロンボパグ、エンドスタチン、エノシタビン、エピムビシン(epimbicin)、エピルビシン、エピチオスタノール、エポエチン アルファ、エポエチン ベータ、エポチロン、エプタプラチン(eptaplatin)、エリブリン、エルロチニブ、エストラジオール、エストラムスチン、エトポシド、エベロリムス、エキサテカン、エキセメスタン、エクシスリンド、ファドロゾール、フェンレチニド、フィルグラスチム、フィナステリド、フラボピリドール、フルダラビン、５−フルオロウラシル、フルオキシメステロン、フルタミド、ホレチニブ、ホルメスタン、ホテムスチン、フルベストラント、ガニレリクス、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツズマブ、ギマテカン、ギメラシル、グルホスファミド、グルトキシム(glutoxim)、ゴセレリン、ヒストレリン、ヒドロキシ尿素、イバンドロン酸、イブリツモマブ チウキセタン、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、イミキモド、インプロスルファン、インテダニブ(intedanib)、インターフェロン アルファ、インターフェロン アルファ−２ａ、インターフェロン アルファ−２ｂ、インターフェロン ベータ、インターフェロン ガンマ、インターロイキン−２、イピリムマブ、イリノテカン、イキサベピロン、ランレオチド、ラパチニブ、ラソフォキシフェン、レナリドミド、レノグラスチム、レンチナン、レンバチニブ、レスタウルチニブ、レトロゾール、リュープロレリン、レバミゾール、リニファニブ、リンスチニブ(linsitinib)、リスリド、ロバプラチン(lobaplatin)、ロムスチン、ロニダミン、ルルトテカン、マホスファミド、マパツムマブ(mapatumumab)、マシチニブ、マソプロコール、メドロキシプロゲステロン、メゲストロール、メラルソプロール、メルファラン、メピチオスタン、メルカプトプリン、メトトレキサート、アミノレブリン酸メチル、メチルテストステロン、ミファムルチド、ミフェプリストン、ミルテホシン、ミリプラチン、ミトブロニトール、ミトグアゾン、ミトラクトール、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、モルグラモスチム、モテサニブ、ナンドロロン、ネダプラチン、ネララビン、ネラチニブ、ニロチニブ、ニルタミド、ニモツズマブ(nimotuzumab)、ニムスチン、ニトラクリン、ノラトレキセド、オファツムマブ、オプレルベキン、オキサリプラチン、パクリタキセル、パリフェルミン、パミドロン酸、パニツムマブ、パゾパニブ、ペグアスパルガーゼ、ペグ−エポエチン ベータ、ペグフィルグラスチム(pegfilgastrim)、ペグ−インターフェロン アルファ−２ｂ、ペリトレキソール、ペメトレキセド、ペムツモマブ(pemtumomab)、ペントスタチン、ペプロマイシン、ペルホスファミド、ペリホシン、ペルツズマブ、ピシバニール、ピラムビシン(pirambicin)、ピラルビシン、プレリキサフォル、プリカマイシン、ポリグルサム(poliglusam)、リン酸ポリエストラジオール、ポナチニブ、ポルフィマー ナトリウム、プララトレキサート、プレドニムスチン、プロカルバジン、プロコダゾール、PX-866、キナゴリド、ラロキシフェン、ラルチトレキセド、ラニビズマブ、ラニムスチン、ラゾキサン、レゴラフェニブ、リセドロン酸、リツキシマブ、ロミデプシン、ロミプロスチム、ルビテカン、サラカチニブ、サルグラモスチム、サトラプラチン、セルメチニブ、シプロイセル−Ｔ、シロリムス、シゾフィラン、ソブゾキサン、ソラフェニブ、ストレプトゾシン、スニチニブ、タラポルフィン、タミバロテン、タモキシフェン、タンズチニブ、タソネルミン、テセロイキン、テガフール、テラタニブ(telatinib)、テモポルフィン、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、テストラクトン、テストステロン、テトロホスミン、サリドマイド、チオテパ、チマルファシン、チオグアニン、ティピファニブ、チボザニブ、トセラニブ(toceranib)、トシリズマブ、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラベクテジン、トラスツズマブ、トレオスルファン、トレチノイン、トリアピン、トリロスタン、トリメトレキサート、トリプトレリン、トロホスファミド、ウベニメクス、バルルビシン、バンデタニブ、バプレオチド、バルリチニブ(varlitinib)、バタラニブ、ベムラフェニブ、ビダラビン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンフルニン、ビノレルビン、ボロシキシマブ、ボリノスタット、ジノスタチン、ゾレドロン酸およびゾルビシン。

【0101】

一般的に、下記の目的は本発明の化合物と他の抗癌剤との組み合わせ剤で達成できる：
・活性な化合物単独での処置と比べて、腫瘍の増殖を遅らせる、腫瘍の大きさを減少させる、または、腫瘍を完全に除去する活性の改善；
・用いられる化学療法剤を、単剤治療よりも低い投与量で用いることが可能：
・個々の投与と比較して、少ない副作用で、より耐容性の治療が可能；
・より広範囲の癌および腫瘍疾患の処置が可能；
・治療に対して、より速い応答速度を達成；
・標準的な治療と比べて、より長い患者の生存時間。

【0102】

従って、さらなる態様において、本発明は、少なくとも１種の本発明の化合物、および、障害、特に上記障害を処置および／または予防する１種以上のさらなる治療薬を含む医薬組成物に関する。
癌の処置において、本発明の化合物はまた、放射線治療および／または外科的処置と組み合わせて用いられ得る。

【0103】

さらに、式(Ｉ)の化合物を、そのまま、または、研究や診断における組成物で、または、当技術分野で周知の分析参照標準として利用し得る。

【0104】

本発明の化合物が医薬としてヒトおよび他の哺乳動物に投与されるとき、それらは、それ自身で、または、１種以上の薬学的に許容される添加物と組み合わせた、例えば０.１％〜９９.５％(より好ましくは０.５％〜９０％)の有効成分を含む医薬組成物として与えられる。

【0105】

従って、他の局面において、本発明は、慣用的には１種以上の不活性な非毒性の薬学的に適当な添加物と共に、少なくとも１種の本発明の化合物を含む医薬組成物、および、障害、特に上記障害の処置および／または予防におけるその使用に関する。

【0106】

本発明の化合物は、全身におよび／または局所に作用し得る。この目的のために、本発明の化合物は、適当な方法で、例えば経口、非経腸、肺、鼻、舌、舌下、頬側、直腸、皮膚、経皮、結膜、耳または局所経路で、あるいは、インプラントまたはステントとして投与できる。
これらの適用経路において、本発明の化合物は、適当な適用形態で投与できる。

【0107】

経口投与に適当なものは、従来技術に従って機能し、本発明の化合物を素早くおよび／または修飾された方法で送達する適用形態であって、結晶形、非晶形および／または溶解された形態の本発明の化合物を含む適用形態であり、例えば、錠剤(コートされていないか、あるいは、例えば腸溶性コーティング、または、不溶性であるかまたは遅れて溶解し、本発明の化合物の放出を制御するコーティングを有するコートされた錠剤)、口内で素早く崩壊する錠剤、または、フィルム／ウェハ、フィルム／凍結乾燥物、カプセル剤(例えば硬または軟ゼラチンカプセル剤)、糖衣錠、顆粒剤、ペレット、散剤、エマルジョン、懸濁液、エアロゾルまたは溶液である。

【0108】

非経腸適用は、吸収段階を避けて(静脈内、動脈内、心臓内、脊髄内または腰椎内)、または、吸収を含めて(筋肉内、皮下、皮内、経皮または腹腔内)、行うことができる。有用な非経腸適用形態は、溶液、懸濁液、エマルジョン、凍結乾燥物および滅菌処理した粉末の形態の、注射液および注入製剤を含む。

【0109】

他の適用経路に適当な形態は、例えば、吸入用医薬形態(例えば粉末吸入器、ネブライザー)、点鼻薬、溶液またはスプレー、舌、舌下または頬側投与用錠剤またはカプセル剤(例えばトローチ、ロゼンジ)、坐剤、耳用および眼用製剤(例えば滴剤、軟膏)、膣用カプセル剤、水性懸濁液(ローション、振盪混合物)、親油性懸濁液、軟膏、クリーム、ミルク、ペースト、フォーム、細粉、経皮治療系(例えばパッチ)、インプラントおよびステントを含む。

【0110】

好ましい態様において、上で定義した式(Ｉ)の化合物を含む医薬組成物を、経口投与に適当な形態で提供する。他の好ましい態様において、上で定義した式(Ｉ)の化合物を含む医薬組成物を、静脈内投与に適当な形態で提供する。

【0111】

本発明の化合物は、それ自身既知の方法で、不活性な非毒性の薬学的に適当な添加物と混合することによって、列挙された適用形態に変換できる。これらの添加物は、とりわけ、担体(例えば微晶性セルロース、乳糖、マンニトール)、溶媒(例えば液体ポリエチレングリコール)、乳化剤(例えばドデシル硫酸ナトリウム)、界面活性剤(例えばポリオキシソルビタン オレート)、分散剤(例えばポリビニルピロリドン)、合成および天然ポリマー(例えばアルブミン)、安定剤(例えば抗酸化剤、例えばアスコルビン酸)、着色料(例えば無機顔料、例えば酸化鉄)、および、味覚および臭気マスキング剤を含む。

【0112】

本発明の化合物の好ましい投与量は、患者に耐容性であって重篤な副作用を起こさない最大量である。例としては、本発明の化合物は、非経腸で、約０.００１mg/kg〜約１mg/kg体重、好ましくは約０.０１mg/kg〜約０.５mg/kg体重で投与され得る。経口投与では、例示的な投与量範囲は、約０.０１〜１００mg/kg体重、好ましくは約０.０１〜２０mg/kg体重、より好ましくは約０.１〜１０mg/kg体重である。上記の値の範囲の間に入る値もまた、本発明の一部であることが意図される。

【0113】

にもかかわらず、特定の患者、組成物および投与方法において、患者に毒性でなく、望ましい治療応答を達成するのに有効な量の有効成分を得るように、本発明の医薬組成物中の有効成分投与の実際の投与量と時間経過は変化し得る。従って、適切な場合は、特に患者の年齢、性別、体重、食習慣および全身の健康状態、特定の化合物のバイオアベイラビリティーおよび薬力学的性質、および、投与方法および投与経路、投与を行う時間または時間間隔、選択される投与レジメ、個々の患者の有効成分に対する応答、関与する特定の疾患、疾患の程度または合併症もしくは重症度、同時処置の種類(すなわち本発明の化合物と他の共投与される治療薬の相互作用)、および他の関連の状況の関数として、上記の量から逸脱することも必要であり得る。

【0114】

従って、幾つかの場合では上記の最少量より少ない量で十分に管理し得るが、他の場合では記載された上限を超えなければならない。処置は、化合物の最適な投与量より少ない投与量で開始することができる。その後、その状況下で最適な効果に至るまで、投与量を少しずつ増加させ得る。利便性のために、総１日投与量を分割して、各１回分ずつを１日の間で分けて投与してもよい。

【0115】

下記の例示的態様は、本発明を説明する。本発明は、実施例に限定されない。
下記の試験および実施例におけるパーセンテージは、特に断りの無い限り、重量パーセントであり；重量部である。液体／液体溶液について記載された溶媒比、希釈比、および濃度は、それぞれ容積に基づく。

【0116】

Ａ. 実施例
略号および頭字語：

【表1】

【0117】

【表2】

【0118】

ＬＣ−ＭＳおよびＧＣ−ＭＳ法：
方法１(ＬＣ−ＭＳ)：
装置＝Micromass Quattro Premier と Waters UPLC Acquity；カラム＝Thermo Hypersil GOLD 1.9μ, 50mm×1mm；溶出液Ａ＝１Ｌの水＋０.５mlの５０％蟻酸水溶液, 溶出液Ｂ＝１Ｌのアセトニトリル＋０.５mlの５０％蟻酸水溶液；濃度勾配＝０.０分 ９０％ Ａ→０.１分 ９０％ Ａ→１.５分 １０％ Ａ→２.２分 １０％ Ａ；温度＝５０℃；流速＝０.３３ml/分；ＵＶ検出＝２１０nm.

【0119】

方法２(ＬＣ−ＭＳ)：
装置＝Waters Acquity SQD UPLC System；カラム＝Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ, 50mm×1mm；溶出液Ａ＝１Ｌの水＋０.２５mlの９９％蟻酸, 溶出液Ｂ＝１Ｌのアセトニトリル＋０.２５mlの９９％蟻酸；濃度勾配＝０.０分 ９０％ Ａ→１.２分 ５％ Ａ→２.０分 ５％ Ａ；オーブン＝５０℃；流速＝０.４０ml/分；ＵＶ検出＝２１０〜４００nm.

【0120】

方法３(ＬＣ−ＭＳ)：
装置＝Micromass Quattro Micro と HPLC Agilent 1100シリーズ；カラム＝YMC-Triart C18 3μ, 50mm×3mm；溶出液Ａ＝１Ｌの水＋０.０１mol炭酸アンモニウム, 溶出液Ｂ＝１Ｌのアセトニトリル；濃度勾配＝０.０分 １００％ Ａ→２.７５分 ５％ Ａ→４.５分 ５％ Ａ；オーブン＝４０℃；流速＝１.２５ml/分；ＵＶ検出＝２１０nm.

【0121】

方法４(ＬＣ−ＭＳ)：
装置＝Waters Acquity SQD UPLC System；カラム＝Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ, 30mm×2mm；溶出液Ａ＝１Ｌの水＋０.２５mlの９９％蟻酸, 溶出液Ｂ＝１Ｌのアセトニトリル＋０.２５mlの９９％蟻酸；濃度勾配＝０.０分 ９０％ Ａ→１.２分 ５％ Ａ→２.０分 ５％ Ａ；オーブン＝５０℃；流速＝０.６０ml/分；ＵＶ検出＝２０８〜４００nm.

【0122】

方法５(ＬＣ−ＭＳ)：
装置＝Micromass Quattro Premier と Waters UPLC Acquity；カラム＝Thermo Hypersil GOLD 1.9μ, 50mm×1mm；溶出液Ａ＝１Ｌの水＋０.５mlの５０％蟻酸水溶液, 溶出液Ｂ＝１Ｌのアセトニトリル＋０.５mlの５０％蟻酸水溶液；濃度勾配＝０.０分 ９７％ Ａ→０.５分 ９７％ Ａ→３.２分 ５％ Ａ→４.０分 ５％ Ａ；温度＝５０℃；流速＝０.３ml/分；ＵＶ検出＝２１０nm.

【0123】

方法６(ＧＣ−ＭＳ)：
装置＝Micromass GCT, GC6890；カラム＝Restek RTX-35, 15m×200μm×0.33μm；ヘリウムの一定流量＝０.８８mL/分；オーブン＝７０℃；入口＝２５０℃；濃度勾配＝７０℃, ３０℃／分→３１０℃(３分間維持).

【0124】

方法７(ＬＣ−ＭＳ):
装置 ＭＳ＝Waters SQD；装置 ＨＰＬＣ＝Waters UPLC；カラム＝Zorbax SB-Aq (Agilent), 50mm×2.1mm, 1.8μm；溶出液Ａ＝水＋０.０２５％蟻酸, 溶出液Ｂ＝アセトニトリル＋０.０２５％蟻酸；濃度勾配＝０.０分 ９８％ Ａ→０.９分 ２５％ Ａ→１.０分 ５％ Ａ→１.４分 ５％ Ａ→１.４１分 ９８％ Ａ→１.５分 ９８％ Ａ；オーブン＝４０℃；流速＝０.６０ml/分；ＵＶ検出＝ＤＡＤ, ２１０nm.

【0125】

一般的な精製方法(下記の表ＩおよびIIを参照)：
精製法１(ＰＭ１)：
装置 ＭＳ＝Waters；装置 ＨＰＬＣ＝Waters；カラム＝Waters X-Bridge C18, 18mm×50mm, 5μm；溶出液Ａ＝水＋０.０５％トリエチルアミン, 溶出液Ｂ＝アセトニトリルまたはメタノール＋０.０５％トリエチルアミン；濃度勾配溶出；流速＝４０ml/分；ＵＶ検出＝ＤＡＤ, ２１０〜４００nm.

【0126】

精製法２(ＰＭ２)：
装置 ＭＳ＝Waters；装置 ＨＰＬＣ＝Waters；カラム＝Phenomenex Luna 5μ C18(2) 100A, AXIA Tech., 50mm×21.2mm；溶出液Ａ＝水＋０.０５％蟻酸, 溶出液Ｂ＝アセトニトリルまたはメタノール＋０.０５％蟻酸；濃度勾配溶出；流速＝４０ml/分；ＵＶ検出＝ＤＡＤ, ２１０〜４００nm.

【実施例】

【0127】

出発物質および中間体：
中間体１Ａ
２−メトキシ−４−メチルアニリン

【化33】

ＴＨＦ(１.３２Ｌ)中の５−メチル−２−ニトロアニソール(２６５ｇ, １.５８mol)および１０％ Ｐｄ／Ｃ(３９.７５ｇ)の混合物を、室温で、１atmの水素下で、一夜撹拌した。珪藻土で濾過し、蒸発させ、２１６.１ｇの粗生成物を得た。これをさらに精製することなく次の工程に用いた。
LC-MS (方法３): R_t = 2.39分; MS (ESIpos): m/z = 138 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 6.45-6.63 (m, 3H), 4.46 (s, 2H), 3.72 (s, 3H), 2.16 (s, 3H) ppm.

【0128】

中間体２Ａ
２−メトキシ−４−メチルベンゼンチオール

【化34】

【0129】

方法１：
水(２５ml)中の亜硝酸ナトリウム(７ｇ, １０１.４mmol)の溶液を、濃塩酸(３０ml)および水(８５ml)中の中間体１Ａ(１３.７ｇ, １００mmol)の冷却溶液(０℃〜５℃)に滴下した。０℃で１０分間撹拌した後、酢酸ナトリウム(１５ｇ, １８２.８mmol)を加えた。得られた混合物を水(１４０ml)中のＯ−エチルジチオ炭酸カリウム(３０ｇ, １８７.１mmol)の熱い溶液(７０℃〜８０℃)に滴下し、７０℃から８０℃の間で１時間撹拌し、室温まで冷却した。混合物を酢酸エチルで２回抽出し、合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させた。残渣を、エタノール(３００ml)中１.３Ｍの水酸化カリウム溶液に溶かした。ブドウ糖(８ｇ)を加え、得られた混合物を３時間還流した。次いで、エタノール溶媒を蒸発させ、残渣を水で希釈し、６Ｎ 硫酸水溶液で酸性にした。亜鉛粉末(１５ｇ)を注意深く加え、得られた混合物を５０℃で３０分間加熱した。混合物を室温まで冷却し、ジクロロメタンで希釈し、濾過した。濾液をジクロロメタンで２回抽出し、合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させ、１４.３ｇの粗生成物を得た。これをさらに精製することなく次の工程に用いた。

【0130】

方法２：
２.９ＬのＴＨＦに、１.１Ｌの水中の３５５ml(６.６７mol)の濃硫酸の熱い溶液を加えた。５０℃で、２９３ｇ(１.３３mol)の塩化 ２−メトキシ−４−メチルベンゼンスルホニルを撹拌しながら加えた。次いで、５２１ｇ(７.９７mol)の亜鉛粉末を、少しずつ注意深く加え(発泡する)、５０℃〜５５℃の温度を維持するために、僅かな発熱反応物を水浴中で冷却した。続いて混合物を５５℃で３時間撹拌した。反応の進行を、ＴＬＣ(シリカゲル, 石油エーテル／酢酸エチル ９５：５)によってモニターした。反応混合物を１３.６Ｌの水に注ぎ、６.８Ｌのジクロロメタンを加え、混合物を５分間撹拌した。残った亜鉛を傾斜して、相を分離した後、水相を６.８Ｌのジクロロメタンで１回以上抽出した。合わせた有機相を１０％ 塩水で洗浄し、乾燥し、４０℃で、減圧下で蒸発させ、２３７ｇの粗生成物を得た。この物質をさらに精製することなく次の工程に用いた。分析用サンプルを石油エーテル／酢酸エチル(９７：３)を溶出液として、シリカゲルのクロマトグラフィーによって得た。
LC-MS (方法１): R_t = 1.21分; MS (ESIneg): m/z = 153 (M-H)^-
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.17 (d, 1H), 6.81 (s, 1H), 6.66 (d, 1H), 4.63 (br. s, 1H), 3.80 (s, 3H), 2.26 (s, 3H) ppm.

【0131】

中間体３Ａ
１−[(２,２−ジエトキシエチル)スルファニル]−２−メトキシ−４−メチルベンゼン

【化35】

２３７ｇの中間体２Ａの粗製の物質、２８７ｇ(１.４６mol)のブロモアセトアルデヒド−ジエチルアセタール、および、８６２ｇ(２.６５mol)の炭酸セシウムを、２ＬのＤＭＦに懸濁した。反応温度を、最初に４０℃まで上昇させ、環境温度で一夜撹拌を続けた。反応混合物を１０Ｌの水と２.７Ｌの酢酸エチルの層間に分配した。水相をさらなる２.７Ｌの酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を１０％ 塩水で洗浄し、乾燥し、蒸発させた。得られた油性残渣を、石油エーテル／酢酸エチル(９５：５)を溶出液として、シリカゲルのクロマトグラフィーによって精製した。
収量：２３６ｇの油状物(理論値の６６％)
GC-MS (方法６): R_t = 6.03分; MS (EIpos): m/z = 270 (M)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.16 (d, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.73 (d, 1H), 4.55 (t, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.52-3.64 (m, 2H), 3.39-3.51 (m, 2H), 2.96 (d, 2H), 2.33 (s, 3H), 1.09 (t, 6H) ppm.

【0132】

中間体４Ａ
７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン

【化36】

１３ｇのポリリン酸および１５０mlのクロロベンゼンの混合物に、還流しながら、５.２ｇ(１９.２mmol)の中間体３Ａの溶液を滴下し、一夜還流を続けた。冷却後、有機層を傾斜し、残渣とフラスコをＤＣＭで２回濯いだ。合わせた有機相を減圧で蒸発させた。残渣(３.７６ｇ)について、イソヘキサン／０〜１０％ 酢酸エチルを溶出液として、シリカゲルのクロマトグラフィーを行った。
収量：１.６９ｇの油状物(理論値の４９％)
GC-MS (方法６): R_t = 5.20分; MS (EIpos): m/z = 178 (M)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.68 (d, 1H), 7.34 (d, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.78 (s, 1H), 3.93 (s, 3H), 2.43 (s, 3H) ppm.

【0133】

中間体５Ａ
(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ボロン酸

【化37】

アルゴン雰囲気下、２６.７ｇ(１５０mmol)の中間体４Ａを２７０mlのＴＨＦに溶解し、−７０℃まで冷却した。−７０℃から−６５℃の間で、６６ml(１６５mmol)のヘキサン中２.５Ｎのｎ−ブチルリチウム溶液を、２０分以内で滴下し、その結果、白色の沈殿物が形成した。−７０℃で１時間撹拌した後、４１.５ml(１８０mmol)のホウ酸トリイソプロピルを、この温度で、１０分以内で加えた(その結果、濃厚懸濁液を得た)。−７０℃で１時間撹拌を続けた後、反応混合物を室温で一夜温めた。次いで、４００mlの飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、層を分離し、水層をＴＨＦで１回以上抽出した。合わせた有機相を減圧下で蒸発させた。このようにして得られた残渣に、２００mlの水および８６mlの２Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液を加えた。溶液をＤＣＭで２回洗浄し、３５mlの３Ｍ 硫酸で酸性にして、得られた懸濁液を１時間激しく撹拌した。沈殿物を吸引濾過し、４５℃で、真空で一夜乾燥した。
収量：２８.２５ｇの無色の固体(ＬＣ−ＭＳによる純度９４％, 理論値の８０％)
LC-MS (方法２): R_t = 0.87分; MS (ESIpos): m/z = 223 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.17 (d, 1H), 6.81 (s, 1H), 6.66 (d, 1H), 4.63 (br. s, 1H), 3.80 (s, 3H), 2.26 (s, 3H) ppm.

【0134】

中間体６Ａ
２−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)−６−メチル−１,３,６,２−ジオキサアザボロカン−４,８−ジオン

【化38】

６.３ｇ(２８.４mmol)の中間体５Ａおよび４.２ｇ(２８.４mmol)の２,２'−(メチルイミノ)ジ酢酸を、４５mlのＤＭＳＯおよび４００mlのトルエンの混合物に溶解し、ディーン・スターク・トラップを用いて、１６時間還流した。蒸発後、残渣を酢酸エチルに溶かし、水で３回および塩水で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、約２００mlの体積まで蒸発させた。白色固体が沈殿し、これを濾過し、酢酸エチルで洗浄し、真空で乾燥し、第１収穫物(５.５２ｇ)の表題化合物を得た。母液を蒸発させ、シリカゲルの層で、シクロヘキサン／０〜１００％ 酢酸エチルを溶出液として用いて、フラッシュクロマトグラフィーを行った後、第２収穫物(３.３２ｇ)を得た。
収量：８.８４ｇ(ＬＣ−ＭＳによる全純度９２.５％, 理論値の８７％)
LC-MS (方法２): R_t = 0.93分; MS (ESIpos): m/z = 334 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.42 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.76 (s, 1H), 4.40 (d, 2H), 4.17 (d, 2H), 3.92 (s, 3H), 2.63 (s, 3H), 2.42 (s, 3H) ppm.

【0135】

中間体７Ａ
４−アミノピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−カルボン酸エチル

【化39】

エタノール(１２４.８ml)中の４−アミノピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−カルボニトリル(３.９ｇ, ２４.５mmol；ＰＣＴ国際特許出願 WO 2007/064883に記載された製法)の溶液を、濃硫酸(６２.４ml)と共に、８０℃で一夜撹拌した。室温まで冷却した後、反応混合物を８００ｇの氷に注ぎ、濃水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ ６〜７とした。酢酸エチル(５００ml)およびジクロロメタン(５００ml)を懸濁液に加え、得られた混合物を珪藻土で濾過した。有機層を水層から分離した。固体を熱水(１Ｌ)に溶解し、水層を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させた。残渣をイソプロパノール／ジエチルエーテル混合物で磨砕し、固体を濾過し、２.５ｇ(理論値の４９％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.59分; MS (ESIpos): m/z = 206 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 8.11-7.97 (m, 3H), 7.88 (s, 1H), 7.34 (br. s, 1H), 4.27 (q, 2H), 1.30 (t, 3H) ppm.

【0136】

中間体８Ａ
(４−アミノピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル)メタノール

【化40】

ＴＨＦ(３０ml)中の中間体７Ａ(３.０ｇ, １４.５mmol)の氷冷した溶液を、ＴＨＦ(５８ml)中１Ｍのトリエチル水素化ホウ素リチウム溶液で処理し、室温で４５分間撹拌した。反応混合物を０℃まで冷却し、メタノールで反応停止させ、室温までゆっくりと温め、珪藻土に吸着させた。シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し(ジクロロメタン／メタノール ２０：１→４：１の濃度勾配)、２.２１ｇ(理論値の９２.５％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法３): R_t = 1.46分; MS (ESIpos): m/z = 164 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.75 (s, 1H), 7.64 (br. s, 2H), 7.50 (br. d, 1H), 6.79 (br. d, 1H), 5.01 (t, 1H), 4.50 (d, 2H) ppm.

【0137】

中間体９Ａ
(４−アミノ−５,７−ジブロモピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル)メタノール

【化41】

ＴＨＦ(１００ml)中の中間体８Ａ(５ｇ, ３０.４mmol)の溶液を、１,３−ジブロモ−５,５−ジメチルヒダントイン(９.５８ｇ, ３３.５mmol)で処理し、室温で２時間撹拌した。沈殿物を濾過し、６.６０ｇ(理論値の６４％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.56分; MS (ESIpos): m/z = 321/323/325 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 8.23 (br. s, 1H), 7.96 (s, 1H), 6.94 (br. s, 1H), 5.09 (br. s, 1H), 4.43 (s, 2H) ppm.

【0138】

中間体１０Ａ
(４−アミノ−５−ブロモピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル)メタノール

【化42】

ＴＨＦ(８００ml)中の中間体９Ａ(３.７ｇ, １１.５mmol)の懸濁液を、完全に溶解するまで、撹拌しながら加熱した。混合物を−７８℃に冷却し、ヘキサン中１.６Ｍのｎ−ブチルリチウム溶液(２０ml, ３２.１mmol)を滴下した。５分後、さらに１.６Ｍのｎ−ブチルリチウム溶液(１.５ml, ２.２９mmol)を加えた。得られた混合物を−７８℃で５分間撹拌し、次いでメタノール(５ml)で反応停止させ、室温まで温めた。反応混合物を、飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液および酢酸エチルで希釈した。相の分離後、有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。合わせた水層を酢酸エチルで再度抽出した。合わせた有機層を再度飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させ、２.８７ｇの粗生成物を得た。これをさらに精製することなく次の工程に用いた。
LC-MS (方法３): R_t = 1.73分; MS (ESIpos): m/z = 243/245 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 8.41-7.89 (br. s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.13-6.48 (br. s, 1H), 5.11 (t, 1H), 4.45 (d, 2H) ppm.

【0139】

中間体１１Ａ
６−(クロロメチル)−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４−アミン塩酸塩

【化43】

ジクロロメタン(９ml)中の実施例３２(３００mg, 純度９０％, ７９３μmol)の懸濁液を、塩化チオニル(１１６μｌ, １.５９mmol)で処理し、室温で４０分間撹拌した。次いで、揮発成分を減圧下で蒸発させ、３８２mgの粗製の表題化合物を得た。これをさらに精製することなく次の工程に用いた。
LC-MS (方法２): R_t = 1.15分; MS (ESIpos): m/z = 359/361 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 8.84-9.09 (br. s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.95-7.21 (br. s, 1H), 6.88 (s, 1H), 4.78 (s, 2H), 3.97 (s, 3H), 2.46 (s, 3H) ppm.

【0140】

中間体１２Ａ
６−(アジドメチル)−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４−アミン

【化44】

ジクロロメタン(８.７ml)中の実施例３２(３００mg, ７７３μmol)の懸濁液を、塩化チオニル(８４μｌ, １.１６mmol)で処理し、室温で３０分間撹拌した。蒸発後、残渣をＤＭＦ(８.７ml)に溶解し、アジ化ナトリウム(１.００ｇ, １５.４mmol)およびヨウ化ナトリウム(５８０mg, ３.８mmol)で処理した。混合物を８０℃で３時間撹拌した。酢酸エチルで希釈した後、混合物を、水で、そして飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させた。シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し(シクロヘキサン／２５〜１００％ 酢酸エチルの濃度勾配)、２３２mg(理論値の８２％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法４): R_t = 1.12分; MS (ESIpos): m/z = 366 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.97-7.95 (m, 2H), 7.38 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.86 (s, 1H), 4.42 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 2.45 (s, 3H) ppm.

【0141】

中間体１３Ａ
４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−カルボアルデヒド

【化45】

ジクロロメタン(１９ml)中の実施例３２(３５０mg, ９０２μmol)の溶液を、デス・マーチン・ペルヨージナン(１,１,１−トリアセトキシ−１,１−ジヒドロ−１,２−ベンゾヨードキソール−３(１Ｈ)−オン, ４９７mg, １.１７mmol)を少しずつ加えて処理した。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液の１：１混合物で反応停止させた。得られた混合物を３０分間撹拌した。相分離後、水層をジクロロメタンで３回抽出した。合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させた。シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し(シクロヘキサン／０〜５０％ 酢酸エチルの濃度勾配)、２０５mg(理論値の６５％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法５): R_t = 2.16分; MS (ESIpos): m/z = 339 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 9.89 (s, 1H), 8.42-8.22 (br. s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 6.88 (s, 1H), 6.17-5.85 (br. s, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.46 (s, 3H) ppm.

【0142】

中間体１４Ａ
４−アミノ−５−ブロモピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−カルボアルデヒド

【化46】

ジクロロメタン(２０ml)中の中間体１０Ａ(１ｇ, ４.１１mmol)の溶液を、デス・マーチン・ペルヨージナン(１,１,１−トリアセトキシ−１,１−ジヒドロ−１,２−ベンゾヨードキソール−３(１Ｈ)−オン, ２.２６ｇ, ５.３４mmol)を少しずつ加えて処理した。反応混合物を室温で２０分間撹拌し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液の１：１混合物で反応停止させた。得られた混合物を室温で４５分間撹拌した。沈殿物を濾過し、水相をジクロロメタンで３回抽出した。合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させた。シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し(シクロヘキサン／０〜１００％ 酢酸エチルの濃度勾配)、４８０mg(理論値の４０％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.55分; MS (ESIpos): m/z = 241/243 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 9.93 (s, 1H), 8.64-8.42 (br. s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.34-7.03 (br. s, 1H) ppm.

【0143】

中間体１５Ａ
４−[(４−アミノ−５−ブロモピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル)メチル]ピペラジン−２−オン

【化47】

ＴＨＦ(２６ml)中の中間体１４Ａ(４７８mg, １.９８mmol)の溶液を、２−オキソ−ピペラジン(９９２mg, ９.９１mmol)、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(２.１０ｇ, ９.９１mmol)および酢酸(２２７μｌ, ３.９６mmol)で処理した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を、６５mgのテストランの反応混合物と合わせて、メタノールで反応停止させ、珪藻土に吸着させた。シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し(ジクロロメタン／メタノール １００：９)、５２５mg(理論値の７０％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法３): R_t = 1.81分; MS (ESIpos): m/z = 325/327 (M+H)^+
1H-NMR (500 MHz, CDCl₃): δ = 7.85 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 5.91 (br. s, 1H), 3.64 (s, 2H), 3.39-3.34 (m, 2H), 3.23 (s, 2H), 2.71 (t, 2H) ppm.

【0144】

中間体１６Ａ
２−(５−クロロ−７−メトキシ−１−ベンゾチオフェン−２−イル)−６−メチル−１,３,６,２−ジオキサアザボロカン−４,８−ジオン

【化48】

表題化合物を、４−クロロ−２−メトキシベンゼンチオール[J.O. Jilek et al., Collection of Czechoslovak Chemical Communications, Vol. 43, 1978, p. 1747-1759]から、中間体３Ａ、４Ａ、５Ａおよび６Ａについて記載された手順に従って製造した。
LC-MS (方法２): R_t = 0.96分; MS (ESIpos): m/z = 354 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.58 (d, 1H), 7.51 (s, 1H), 6.98 (d, 1H), 4.42 (d, 2H), 4.19 (d, 2H), 3.97 (s, 3H), 2.65 (s, 3H) ppm.

【0145】

中間体１７Ａ
５,７−ジメトキシ−１−ベンゾチオフェン

【化49】

アセトン(２０ml)中の１−ベンゾチオフェン−５,７−ジオール(１.１６ｇ, ６.９８mmol)の溶液に、アルゴン下、炭酸カリウム(２.８９ｇ, ２０.９mmol)およびヨードメタン(９１２μｌ, １４.６mmol)を加えた。得られた混合物を１８時間還流しながら撹拌した。室温まで冷却した後、混合物を、メタノール中７Ｍのアンモニア溶液(１０ml)で３０分間処理し、シリカゲルに吸着させた。シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し(シクロヘキサン／酢酸エチル ４０：１)、０.５２ｇ(理論値の３２％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法４): R_t = 1.02分; MS (ESIpos): m/z = 195 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.69 (d, 1H), 7.35 (d, 1H), 7.02 (d, 1H), 6.57 (d, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.81 (s, 3H) ppm.

【0146】

中間体１８Ａ
(５,７−ジメトキシ−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ボロン酸

【化50】

アルゴン雰囲気下、ヘキサン中１.６Ｍのｎ−ブチルリチウム溶液(１.８４ml, ２.９５mmol)を、−７０℃で、乾燥ＴＨＦ(５ml)中の中間体１７Ａ(５２０mg, ２.６８mmol)の溶液に滴下した。−７０℃で１時間後、トリイソプロピル ボレート(７４２μｌ, ３.２１mmol)を加え、室温までゆっくりと温めながら、混合物を１６時間撹拌した。ジクロロメタンおよび飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、１Ｍの塩酸を添加することによってｐＨ値を６に調節した。有機相を分離し、水相をジクロロメタンで抽出した。合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、蒸発させた。得られた残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し(最初にジクロロメタン／メタノール ４０：１で、次いでメタノールで、最後にメタノール／１,４−ジオキサン中４Ｍの塩化水素 １０：１で溶出)、６３１mg(純度７１％, 理論値の７１％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法４): R_t = 0.83分; MS (ESIpos): m/z = 239 (M+H)⁺.

【0147】

中間体１９Ａ
６−(ブロモメチル)−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４−アミン臭化水素酸塩

【化51】

ジクロロメタン(８０ml)中の実施例２８(４ｇ, １０.９mmol)の溶液を、酢酸中３３％の臭化水素溶液(５.６２ml, ３２.６mmol)で処理し、室温で２２時間撹拌した。揮発成分を減圧下で蒸発させ、５.８１ｇの粗製の表題化合物を得た。これをさらに精製することなく次の工程に用いた。
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 8.68-8.94 (br. s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.79-7.07 (br. s, 1H), 4.71 (s, 2H), 3.97 (s, 3H), 2.46 (s, 3H) ppm.

【0148】

製造例
実施例１
３−{[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メトキシ}プロパン−１−オール塩酸塩

【化52】

ＴＨＦ(２ml)中の中間体１１Ａ(１００mg, ２５３μmol)、プロパン−１,３−ジオール(５７７mg, ７.５９mmol)およびＤＩＰＥＡ(２０９μｌ, １.２７mmol)の溶液を、マイクロ波反応器中、１５０℃で１５分間加熱した。次いで、反応混合物を室温まで冷却し、水で希釈し、酢酸エチルおよびＴＨＦの混合物で２回抽出した。合わせた有機相を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で、そして飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させた。残渣を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した(Reprosil C18, 濃度勾配 ５０〜７０％ アセトニトリル／０.２％ＴＦＡ水溶液)。合わせた生成物のフラクションを１Ｍ 塩酸(２ml)で処理し、最後に蒸発乾固し、２１mg(理論値の１７％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法４): R_t = 0.88分; MS (ESIpos): m/z = 399 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 8.58-8.86 (m, 1H), 8.09 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.86 (s, 1H), 4.41 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.43 (q, 4H), 2.45 (s, 3H), 1.63 (quin, 2H) ppm.

【0149】

実施例２
(２Ｓ)−１−{[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メトキシ}プロパン−２−オール

【化53】

ＴＨＦ(１.８ml)中の中間体１１Ａ(８０mg, ２０２μmol)、(２Ｓ)−プロパン−１,２−ジオール(５０８mg, ６.６８mmol)およびＤＩＰＥＡ(１００μｌ, ６０７μmol)の溶液を、マイクロ波反応器中、１５０℃で１５分間加熱した。次いで、反応混合物を室温まで冷却し、水で希釈し、酢酸エチルおよびＴＨＦの混合物で２回抽出した。合わせた有機相を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で、そして飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させた。残渣を分取ＨＰＬＣによって精製し(Daicel Chiralpak AZ-H, イソヘキサン／エタノール １：１)、１３mg(理論値の１６％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.95分; MS (ESIpos): m/z = 399 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.93 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.60-8.00 (br. s, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.57-6.11 (br. s, 1H), 4.53 (d, 1H), 4.46 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.64-3.75 (m, 1H), 3.24-3.30 (m, 1H), 3.15-3.21 (m, 1H), 2.45 (s, 3H), 0.99 (d, 3H) ppm.

【0150】

実施例３
(２Ｓ)−２−{[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メトキシ}プロパン−１−オール

【化54】

ＴＨＦ(１.８ml)中の、中間体１１Ａ(８０mg, ２０２μmol)、(２Ｓ)−プロパン−１,２−ジオール(５０８mg, ６.６８mmol)およびＤＩＰＥＡ(１００μｌ, ６０７μmol)の溶液を、マイクロ波反応器中、１５０℃で１５分間加熱した。次いで、反応混合物を室温まで冷却し、水で希釈し、酢酸エチルおよびＴＨＦの混合物で２回抽出した。合わせた有機相を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で、そして飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させた。残渣を分取ＨＰＬＣによって精製し(Daicel Chiralpak AZ-H, イソヘキサン／エタノール １：１)、１１mg(理論値の１３％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.93分; MS (ESIpos): m/z = 399 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.92 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.54-8.11 (br. s, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.49-6.21 (br. s, 1H), 4.45-4.57 (m, 3H), 3.96 (s, 3H), 3.40-3.49 (m, 1H), 3.33-3.40 (m, 1H), 3.22-3.30 (m, 1H), 2.45 (s, 3H), 0.99 (d, 3H) ppm.

【0151】

実施例４
{[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メトキシ}酢酸エチル

【化55】

中間体１１Ａ(５００mg, １.２７mmol)、グリコール酸エチル(１１.９ml, １２６mmol)およびＤＩＰＥＡ(１.０５ml, ６.３２mmol)の混合物を、７０℃で９時間加熱した。次いで、反応混合物を室温まで冷却し、シリカゲルカラムに注ぎ、０〜１００％ 酢酸エチル／シクロヘキサンの濃度勾配で溶出した。生成物のフラクションを合わせて、減圧下で蒸発させ、残渣をＲＰ−ＨＰＬＣによって再度精製した(Reprosil C18, 濃度勾配 ２０〜４０％ アセトニトリル／０.２％ＴＦＡ水溶液)。生成物のフラクションを再度合わせて、蒸発乾固し、残渣をメタノールに溶解し、アニオン交換カートリッジ(StratoSpheres SPE, PL-HCO₃ MP-樹脂)で濾過した。カートリッジをメタノールで溶出し、濾液を蒸発させ、２３mg(理論値の４％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 1.06分; MS (ESIpos): m/z = 427 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.93 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.79-8.13 (br. s, 3H), 7.38 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.64-6.02 (br. s, 1H), 4.55 (s, 2H), 4.07 (s, 2H), 4.02 (q, 2H), 3.95 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 1.12 (t, 3H) ppm.

【0152】

実施例５
{[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メトキシ}酢酸

【化56】

実施例４の化合物(５０mg, 純度７５％, ８８μmol)を、ＴＨＦ(３ml)および１Ｍの水酸化リチウム水溶液(３ml)の混合物中で、室温で３０分間撹拌した。次いで、混合物を、１ＭのＴＦＡ水溶液で、ｐＨ ２〜３まで酸性にし、約２mlの体積になるまで減圧下で濃縮した。アセトニトリルを加え、溶液を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって分離した(Reprosil C18, 濃度勾配 ３０〜５０％ アセトニトリル／０.２％ＴＦＡ水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、蒸発乾固し、９mg(理論値の２６％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.86分; MS (ESIpos): m/z = 399 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 8.04-8.44 (br. s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.03-6.44 (br. s, 1H), 4.54 (s, 2H), 4.01 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 2.45 (s, 3H) ppm.

【0153】

実施例６
２−{[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メトキシ}アセトアミド

【化57】

実施例４の化合物(３８mg, ８８μmol)を、メタノール中７Ｍのアンモニア溶液(６ml)に溶解し、マイクロ波反応器中、１３５℃で６０分間加熱した。揮発成分を減圧下で除去し、残渣を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した(Reprosil C18, 濃度勾配 ３０〜５０％ アセトニトリル／０.２％ＴＦＡ水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、蒸発乾固し、残渣をメタノールに溶解し、アニオン交換カートリッジ(StratoSpheres SPE, PL-HCO₃ MP-樹脂)で濾過した。カートリッジをメタノールで溶出し、濾液を蒸発させた。残渣を１,４−ジオキサンに懸濁し、最後に凍結乾燥し、２５mg(理論値の７２％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.83分; MS (ESIpos): m/z = 398 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.96 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.71-8.15 (br. s, 2H), 7.38 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.25 (br. s, 1H), 7.16 (br. s, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.58-6.06 (br. s, 1H), 4.53 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.79 (s, 2H), 2.45 (s, 3H) ppm.

【0154】

実施例７
２−{[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メトキシ}エタノール塩酸塩

【化58】

実施例３２(１１０mg, ３２３μmol)の溶液を、塩化チオニル(４７μｌ, ６４６μmol)で、撹拌しながら処理した。混合物を室温でさらに２０分間撹拌し、蒸発させた。残渣をエチレングリコール／ＴＨＦ(１：１, ２ml)に溶解し、ＤＩＰＥＡ(２８１μｌ, １.６mmol)で処理し、１００℃で３時間撹拌した。蒸発後、残渣を酢酸エチルに溶解し、溶液を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で、そして飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させた。シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し(０.１％アンモニア水溶液を含む酢酸エチル)、１,４−ジオキサン中４Ｎの塩化水素溶液から凍結乾燥し、８１mg(理論値の５０％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.88分; MS (ESIpos): m/z = 385 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 9.05-8.61 (br. s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.25-6.81 (br. s, 1H), 6.86 (s, 1H), 4.46 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.52-3.45 (m, 2H), 3.44-3.37 (m, 2H), 2.46 (s, 3H) ppm.

【0155】

実施例８
６−[(２−アミノエトキシ)メチル]−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４−アミン 二塩酸塩

【化59】

ジクロロメタン(３ml)中の実施例３２(５０mg, １４６μmol)の溶液を、塩化チオニル(２１μｌ, ２９３μmol)で処理した。混合物を室温で一夜撹拌し、蒸発させた。残渣を(２−ヒドロキシエチル)カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル(２ml)およびＤＩＰＥＡ(２１３μｌ, ７３４μmol)と混合し、溶液を、８０℃で２時間、続いて１００℃で６時間撹拌した。蒸発後、残渣を１,４−ジオキサン中４Ｎの塩化水素溶液(２ml)に溶解し、室温で２時間撹拌した。混合物を再度蒸発させ、残渣を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した(Reprosil C18, 濃度勾配 １０〜９５％ アセトニトリル／０.１％蟻酸水溶液)。生成物のフラクションを合わせ、蒸発させ、残渣を１,４−ジオキサン中４Ｎの塩化水素溶液から凍結乾燥し、３３mg(理論値の４３％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.66分; MS (ESIpos): m/z = 384 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 9.00-8.44 (br. s, 1H), 8.11 (s, 2H), 7.97 (br. s, 2H), 7.41 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 6.96-6.50 (br. s, 1H), 6.87 (s, 1H), 4.54 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.61-3.55 (m, 2H, 水のピークと重複), 3.01-2.93 (m, 2H), 2.46 (s, 3H) ppm.

【0156】

実施例９
Ｎ−{[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メチル}アセトアミド

【化60】

メタノール(１０ml)中の中間体１２Ａ(８０mg, ２１８μmol)、１０％ Ｐｄ／Ｃ(８０mg)および無水酢酸(５０μｌ)の懸濁液を、１atmの水素下、室温で１時間撹拌した。混合物を珪藻土で濾過し、濾液を蒸発させた。シリカゲルのカラムクロマトグラフィーを行い(シクロヘキサン／５０〜１００％ 酢酸エチルの濃度勾配)、５６mg(理論値の６７％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.78分; MS (ESIpos): m/z = 382 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 8.18 (t, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 4.21 (d, 2H), 3.95 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 1.81 (s, 3H) ppm.

【0157】

実施例１０
２−({[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メチル}アミノ)エタノール 二塩酸塩

【化61】

ＴＨＦ(０.９５ml)中の中間体１３Ａ(８０mg, ２３６μmol)の溶液を、２−アミノエタノール(７１μｌ, １.１８mmol)、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(２５０mg, １.１８mmol)および酢酸(２７μｌ, ４７２μmol)で処理し、混合物を６０℃で９０分間撹拌した。反応混合物を１Ｎ 塩酸で反応停止させ、蒸発させた。残渣を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した(Reprosil C18, 濃度勾配 １０〜９５％ アセトニトリル／０.１％ＴＦＡ水溶液)。１,４−ジオキサン中４Ｎの塩化水素溶液から凍結乾燥し、５４mg(理論値の４７％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.66分; MS (ESIpos): m/z = 384 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, D₂O): δ = 8.06 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 4.39 (s, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.68 (t, 2H), 3.05 (t, 2H), 2.49 (s, 3H) ppm.

【0158】

実施例１１
４−{[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メチル}ピペラジン−２−オン

【化62】

ＴＨＦ(２ml)中の中間体１３Ａ(５０mg, １４８μmol)の溶液を、ピペラジン−２−オン(７４mg, ７３９μmol)、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(１５７mg, ７３９μmol)および酢酸(１７μｌ, ２９６μmol)で処理し、混合物を６０℃で１６時間撹拌した。この後、反応混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって直接分離した(Reprosil C18, 濃度勾配 ２０〜４０％ アセトニトリル／０.２％ＴＦＡ水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、蒸発乾固し、残渣をメタノールに溶解し、アニオン交換カートリッジ(StratoSpheres SPE, PL-HCO₃ MP-樹脂)で濾過した。カートリッジをメタノールで溶出し、濾液を蒸発させ、２８mg(理論値の４５％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.73分; MS (ESIpos): m/z = 423 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.92 (s, 1H), 7.9 (br. s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.7 (br. s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.53 (s, 2H), 3.09 (br. s, 2H), 2.87 (s, 2H), 2.45 (s, 3H) ppm.

【0159】

実施例１２
ｒａｃ−Ｎ^２−{[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メチル}アラニンアミド

【化63】

ＴＨＦ(１.９ml)中の中間体１３Ａ(４８mg, １４２μmol)の溶液を、Ｄ,Ｌ−アラニンアミド塩酸塩(８８mg, ７０９μmol)、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(１５０mg, ７０９μmol)および酢酸(１６μｌ, ２８４μmol)で処理し、混合物を６０℃で１６時間撹拌した。この後、反応混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって直接分離した(Reprosil C18, 濃度勾配 ３０〜５０％ アセトニトリル／０.２％蟻酸水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、１Ｍのアンモニア水溶液で中和し、減圧下で濃縮した。残った水溶液を１,４−ジオキサンで１：１希釈し、凍結乾燥して、２０mg(理論値の３５％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法４): R_t = 0.57分; MS (ESIpos): m/z = 411 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, メタノール-d₄): δ = 7.84 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.83-3.96 (m, 2H), 3.36 (q, 1H), 2.49 (s, 3H), 1.27 (d, 3H) ppm.

【0160】

実施例１３
Ｎ^２−{[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メチル}−Ｎ−メチルグリシンアミド

【化64】

ＴＨＦ(２ml)中の中間体１３Ａ(５０mg, １４８μmol)の溶液を、Ｎ−メチル−グリシンアミド塩酸塩(９２mg, ７３９μmol)、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(１５７mg, ７３９μmol)および酢酸(１７μｌ, ２９６μmol)で処理し、混合物を６０℃で１６時間撹拌した。この後、反応混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって直接分離した(Reprosil C18, 濃度勾配 ２０〜４０％ アセトニトリル／０.２％ＴＦＡ水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、蒸発乾固し、残渣をメタノールに溶解し、アニオン交換カートリッジ(StratoSpheres SPE, PL-HCO₃ MP-樹脂)で濾過した。カートリッジをメタノールで溶出し、濾液を蒸発させ、７mg(理論値の１０％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法４): R_t = 0.58分; MS (ESIpos): m/z = 411 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): とりわけ δ = 7.91 (s, 1H), 7.9 (br. s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.60-7.66 (m, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.7 (br. s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.65 (d, 2H), 3.04 (d, 2H), 2.45 (s, 3H) ppm.

【0161】

実施例１４
Ｎ^２−{[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メチル}−Ｎ^２−メチルグリシンアミド

【化65】

ＴＨＦ(２ml)中の中間体１３Ａ(４８mg, １４２μmol)の溶液を、Ｎ^２−メチルグリシンアミド塩酸塩(８８mg, ７０９μmol)、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(１５０mg, ７０９μmol)および酢酸(１６μｌ, ２８４μmol)で処理し、混合物を６０℃で１６時間撹拌した。この後、反応混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって直接分離した(Reprosil C18, 濃度勾配 ３０〜５０％ アセトニトリル／０.２％蟻酸水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、１Ｍのアンモニア水溶液で中和し、真空下で濃縮した。残った水溶液を１,４−ジオキサンで１：１希釈し、凍結乾燥した。得られた生成物を酢酸エチルに溶解し、塩水で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、蒸発乾固した。残渣を分取ＴＬＣによって精製し(シリカゲル, ジクロロメタン／メタノール中７Ｍのアンモニア ２０：１)、４mg(理論値の６％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法４): R_t = 0.58分; MS (ESIpos): m/z = 411 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.92-7.94 (m, 2H), 7.36 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.09-7.14 (m, 1H), 7.04-7.09 (m, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.7 (br. s, 1H), 3.94-3.96 (m, 5H), 3.57 (s, 2H), 2.83 (s, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.15 (s, 3H) ppm.

【0162】

実施例１５
Ｎ−{[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メチル}グリシン酸エチル 二塩酸塩

【化66】

ＴＨＦ(４ml)中の中間体１３Ａ(１５０mg, ４４３μmol)の溶液を、グリシン酸エチル 二塩酸塩(３０９mg, ２.２２mmol)、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(４６９mg, ２.２２mmol)および酢酸(５１μｌ, ８８７μmol)で処理し、混合物を６０℃で１６時間撹拌した。この後、反応混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって直接分離した(Reprosil C18, 濃度勾配 ３０〜５０％ アセトニトリル／０.２％ＴＦＡ水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、１Ｍ 塩酸で希釈し、蒸発乾固し、３８mg(理論値の１７％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.69分; MS (ESIpos): m/z = 426 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 9.40 (br. s, 2H), 8.1 (br. s, 1H), 7.99 (s, 2H), 7.43 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 6.88 (s, 1H), 5.9 (br. s, 1H), 4.22 (br. s, 2H), 4.05 (q, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.90 (br. s, 2H), 2.46 (s, 3H), 1.15 (t, 3H) ppm.

【0163】

実施例１６
Ｎ^２−{[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メチル}グリシンアミド

【化67】

実施例１５の生成物(３２mg, ６５μmol)をメタノール中７Ｍのアンモニア溶液(２ml)に溶解し、溶液を６０℃で３３時間撹拌した。この後、反応混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって直接分離した(Reprosil C18, 濃度勾配 ２０〜４０％ アセトニトリル／０.２％ＴＦＡ水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、蒸発乾固し、残渣をメタノールに溶解し、アニオン交換カートリッジ(StratoSpheres SPE, PL-HCO₃ MP-樹脂)で濾過した。カートリッジをメタノールで溶出し、濾液を蒸発させ、４mg(理論値の１６％)の表題化合物を得た。
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.90 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.47-7.98 (br. s, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.22 (br. s, 1H), 6.97 (br. s, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.73 (br. s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.67 (s, 2H), 3.03 (s, 2H), 2.45 (s, 3H) ppm.

【0164】

実施例１７
１−({[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メチル}アミノ)−２−メチルプロパン−２−オール 二塩酸塩

【化68】

ＴＨＦ(２ml)中の中間体１３Ａ(５０mg, １４８μmol)の溶液を、１−アミノ−２−メチルプロパン−２−オール塩酸塩(９３mg, ７３９μmol)、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(１５７mg, ７３９μmol)および酢酸(１７μｌ, ２９６μmol)で処理し、混合物を６０℃で１６時間撹拌した。この後、反応混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって直接分離した(Reprosil C18, 濃度勾配 ３０〜５０％ アセトニトリル／０.２％ＴＦＡ水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、１Ｍ 塩酸で希釈し、蒸発乾固し、３０mg(理論値の４２％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.70分; MS (ESIpos): m/z = 412 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, メタノール-d₄): δ = 8.24 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 6.87 (s, 1H), 4.33 (s, 2H), 4.00 (s, 3H), 2.83 (s, 2H), 2.50 (s, 3H), 1.20 (s, 6H) ppm.

【0165】

実施例１８
ｒａｃ−１−{[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メチル}ピロリジン−３−オール 二塩酸塩

【化69】

ＴＨＦ(２ml)中の中間体１３Ａ(５０mg, １４８μmol)の溶液を、ｒａｃ−３−ヒドロキシピロリジン(６４mg, ７３９μmol)、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(１５７mg, ７３９μmol)および酢酸(１７μｌ, ２９６μmol)で処理し、混合物を６０℃で１６時間撹拌した。この後、反応混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって直接分離した(Reprosil C18, 濃度勾配 ３０〜５０％ アセトニトリル／０.２％ＴＦＡ水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、１Ｍ 塩酸(２ml)で処理し、蒸発乾固し、２５mg(理論値の３５％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.67分; MS (ESIpos): m/z = 410 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, メタノール-d₄): δ = 8.24-8.32 (m, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.5-7.55 (m, 1H), 7.37 (s, 1H), 6.87 (s, 1H), 4.43-4.64 (m, 3H), 4.00 (s, 3H), 3.52-3.72 (m, 1H), 3.2-3.4 (s, 1H), 2.99-3.17 (m, 2H), 2.51 (s, 3H), 2.01-2.29 (m, 1H), 1.88-2.01 (m, 1H) ppm.

【0166】

実施例１９
ｒａｃ−１−{[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メチル}プロリンアミド 二塩酸塩

【化70】

ＴＨＦ(２ml)中の中間体１３Ａ(５０mg, １４８μmol)の溶液を、Ｄ,Ｌ−プロリンアミド塩酸塩(１１１mg, ７３９μmol)、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(１５７mg, ７３９μmol)および酢酸(１７μｌ, ２９６μmol)で処理し、混合物を６０℃で１６時間撹拌した。この後、反応混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって直接分離した(Reprosil C18, 濃度勾配 ２０〜４０％ アセトニトリル／０.２％ＴＦＡ水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、１Ｍ 塩酸で希釈し、蒸発乾固し、３５mg(理論値の４６％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法４): R_t = 0.61分; MS (ESIpos): m/z = 437 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 9.65 (br. s, 1H), 8.25 (br. s, 1H), 8.03 (s, 2H), 7.99 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.88 (s, 1H), 6.0 (br. s, 1H), 4.37 (m, 2H), 4.05 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.47 (br. s, 1H), 3.09 (br. s, 1H), 2.47 (s, 3H), 2.28-2.39 (m, 1H), 1.72-1.96 (m, 3H) ppm.

【0167】

実施例２０
３−({[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メチル}アミノ)プロパン−１−オール 二塩酸塩

【化71】

ＴＨＦ(２ml)中の中間体１３Ａ(５０mg, １４８μmol)の溶液を、３−アミノ−１−プロパノール(５５mg, ７３９μmol)、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(１５７mg, ７３９μmol)および酢酸(１７μｌ, ２９６μmol)で処理し、混合物を６０℃で１６時間撹拌した。この後、反応混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって直接分離した(Reprosil C18, 濃度勾配 ３０〜５０％ アセトニトリル／０.２％ＴＦＡ水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、１Ｍ 塩酸で希釈し、蒸発乾固し、２８mg(理論値の３９％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法４): R_t = 0.59分; MS (ESIpos): m/z = 398 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, メタノール-d₄): δ = 8.20 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 6.87 (s, 1H), 4.31 (s, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.62 (t, 2H), 3.09 (t, 2H), 2.51 (s, 3H), 1.82 (quin, 2H) ppm.

【0168】

実施例２１
１−(４−{[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メチル}ピペラジン−１−イル)エタノン

【化72】

ＴＨＦ(１.６ml)中の中間体１３Ａ(４１mg, １２１μmol)の溶液を、Ｎ−アセチル−ピペラジン(７８mg, ６０６μmol)、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(１２８mg, ６０６μmol)および酢酸(１４μｌ, ２４２μmol)で処理し、混合物を６０℃で３時間撹拌した。この後、反応混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって直接分離した(Reprosil C18, 濃度勾配 ３０〜５０％ アセトニトリル／０.２％ＴＦＡ水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、蒸発乾固し、残渣をメタノールに溶解し、アニオン交換カートリッジ(StratoSpheres SPE, PL-HCO₃ MP-樹脂)で濾過した。カートリッジをメタノールで溶出し、濾液を蒸発させ、３１mg(理論値の５７％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法４): R_t = 0.61分; MS (ESIpos): m/z = 451 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.88 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.54-8.13 (m, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.40-6.06 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.48 (s, 2H), 3.37 (br. s, 4H), 2.45 (s, 3H), 2.30-2.36 (m, 2H), 2.22-2.29 (m, 2H), 1.95 (s, 3H) ppm.

【0169】

実施例２２
４−{[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メチル}ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル トリフルオロ酢酸塩

【化73】

メタノール(２ml)中の中間体１３Ａ(７０mg, ２０７μmol)の溶液を、ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル(１１６mg, ６２１μmol)、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(６５mg, １.０３mmol)および酢酸(３７μｌ, ６２１μmol)で処理した。反応混合物を６０℃で１６時間撹拌した。室温まで冷却した後、混合物について分取ＲＰ−ＨＰＬＣを直接行った(Reprosil C18, 濃度勾配 ３０〜５０％ アセトニトリル／０.２％ＴＦＡ水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、蒸発乾固し、１２０mg(理論値の９０％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.83分; MS (ESIpos): m/z = 509 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 9.7 (br. s, 1H), 8.1 (br. s, 1H), 8.01 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.88 (s, 1H), 5.8 (br. s, 1H), 4.33 (br. s, 2H), 3.86-4.00 (m, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.24-3.39 (m, 2H), 2.99-3.10 (m, 2H), 2.76-2.95 (m, 2H), 2.46 (s, 3H), 1.36 (s, 9H) ppm.

【0170】

実施例２３
５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)−６−(モルホリン−４−イルメチル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４−アミン

【化74】

ＴＨＦ(１.６ml)中の中間体１３Ａ(４１mg, １２１μmol)の溶液を、モルホリン(５３mg, ６０６μmol)、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(１２８mg, ６０６μmol)および酢酸(１４μｌ, ２４２μmol)で処理し、混合物を６０℃で３時間撹拌した。この後、反応混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって直接分離した(Reprosil C18, 濃度勾配 ３０〜５０％ アセトニトリル／０.２％ＴＦＡ水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、蒸発乾固し、残渣をメタノールに溶解し、アニオン交換カートリッジ(StratoSpheres SPE, PL-HCO₃ MP-樹脂)で濾過した。カートリッジをメタノールで溶出し、濾液を蒸発させ、２７mg(理論値の５４％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法４): R_t = 0.64分; MS (ESIpos): m/z = 410 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.91 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.6-8.1 (br. s, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.71 (br. s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.52 (br. t, 4H), 3.44 (s, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.32 (br. s, 4H) ppm.

【0171】

実施例２４
Ｎ−[２−({[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メチル}アミノ)エチル]アセトアミド トリフルオロ酢酸塩

【化75】

メタノール(２ml)中の中間体１３Ａ(５０mg, １４８μmol)の溶液を、Ｎ−(２−アミノエチル)アセトアミド(２３mg, ２２２μmol)、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(４６mg, ７３９μmol)および酢酸(１７μｌ, ２９６μmol)で処理し、混合物を６０℃で１６時間撹拌した。この後、反応混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって直接分離した(Reprosil C18, 濃度勾配 ３０〜５０％ アセトニトリル／０.２％ＴＦＡ水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、蒸発乾固し、１７mg(理論値の２１％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.65分; MS (ESIpos): m/z = 425 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 8.92 (br. s, 2H), 8.25 (br. s, 1H), 8.04-8.08 (m, 1H), 8.03 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 6.88 (s, 1H), 6.1 (br. s, 1H), 4.18 (br. s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.27 (q, 2H), 2.88-2.98 (m, 2H), 2.46 (s, 3H), 1.81 (s, 3H) ppm.

【0172】

実施例２５
５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)−６−(ピペラジン−１−イルメチル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４−アミン 三塩酸塩

【化76】

１,４−ジオキサン(２ml)中の実施例２２(１０９mg, １７５μmol)の懸濁液を、１,４−ジオキサン中４Ｎの塩化水素溶液(４ml)で処理した。２時間撹拌した後、懸濁液を蒸発乾固し、９８mg(定量的)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.70分; MS (ESIpos): m/z = 409 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, メタノール-d₄): δ = 8.33 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 6.86 (s, 1H), 4.28 (s, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.60-3.77 (m, 4H), 3.3-3.5 (m, 4H), 2.50 (s, 3H) ppm.

【0173】

実施例２６
ｒａｃ−１−({[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メチル}アミノ)プロパン−２−オール 二塩酸塩

【化77】

メタノール(２ml)中の中間体１３Ａ(５０mg, １４８μmol)の溶液を、ｒａｃ−１−アミノプロパン−２−オール(３３mg, ４４３μmol)、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(４６mg, ７３９μmol)および酢酸(２５μｌ, ４４３μmol)で処理し、混合物を６０℃で１６時間撹拌した。この後、反応混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって直接分離した(Reprosil C18, 濃度勾配 ３０〜５０％ アセトニトリル／０.２％ＴＦＡ水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、１Ｍ 塩酸で希釈し、蒸発乾固し、２５mg(理論値の３６％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.69分; MS (ESIpos): m/z = 398 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 9.22 (br. s, 1H), 9.02 (br. s, 1H), 8.4 (br. s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.88 (s, 1H), 6.3 (br. s, 1H), 4.10-4.17 (m, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.81-3.90 (m, 1H), 2.79-2.88 (m, 1H), 2.59-2.69 (m, 1H), 2.46 (s, 3H), 1.03 (d, 3H) ppm.

【0174】

実施例２７
(３Ｓ)−３−({[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メチル}アミノ)ピロリジン−２−オン 二塩酸塩

【化78】

メタノール(２ml)中の中間体１３Ａ(５０mg, １４８μmol)の溶液を、(３Ｓ)−３−アミノピロリジン−２−オン(４４mg, ４４３μmol)、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(４６mg, ７３９μmol)および酢酸(２５μｌ, ４４３μmol)で処理し、混合物を６０℃で１６時間撹拌した。この後、反応混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって直接分離した(Reprosil C18, 濃度勾配 ３０〜５０％ アセトニトリル／０.２％ＴＦＡ水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、１Ｍ 塩酸で希釈し、蒸発乾固し、２５mg(理論値の３６％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.64分; MS (ESIpos): m/z = 423 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, メタノール-d₄): δ = 8.22 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 6.87 (s, 1H), 4.39-4.61 (m, 2H), 4.07 (dd, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.25-3.41 (m, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.32-2.44 (m, 1H), 1.98-2.11 (m, 1H) ppm.

【0175】

実施例２８
６−(エトキシメチル)−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４−アミン

【化79】

ジクロロメタン(５ml)中の実施例３２の化合物(２００mg, ５８７μmol)を、塩化チオニル(６４μｌ, ８８１μmol)で処理した。混合物を１５分間撹拌し、蒸発させた。残渣をエタノール(５ml)中で１時間還流し、次いで、ＤＩＰＥＡ(２０４μｌ, １.１７mmol)で処理し、再度一夜還流した。反応混合物を蒸発させ、残渣をカラムクロマトグラフィーによって精製し(シリカゲル, ジクロロメタン／メタノール ９８：２→９５：５)、２０２mg(理論値の９０％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法５): R_t = 2.32分; MS (ESIpos): m/z = 369 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 8.31-7.59 (br. s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 6.20-5.50 (br. s, 1H), 4.41 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.41 (q, 2H), 2.45 (s, 3H), 1.08 (t, 3H) ppm.

【0176】

実施例２９
４−{[４−アミノ−５−(５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メチル}ピペラジン−２−オン

【化80】

アルゴン下、脱気したＴＨＦ(０.４３ml)中の中間体１５Ａ(７０mg, ２１５μmol)の溶液を、(５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ボロン酸(６２mg, ３２３μmol)および(２'−アミノビフェニル−２−イル)(クロロ)パラジウム−ジシクロヘキシル(２',４',６'−トリイソプロピルビフェニル−２−イル)ホスフィン(１：１, １６mg, ２２μmol, S. L. Buchwald et al., J. Am. Chem. Soc. 132 (40), 14073-14075 (2010)を参照のこと)に加えた。脱気した０.５Ｍのリン酸カリウム水溶液(０.８６ml)を加え、得られた混合物を４０℃で一夜撹拌した。この後、反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和塩化ナトリウム水溶液(１：１)で希釈した。水相を酢酸エチルで３回抽出し、合わせた有機相を蒸発させ、残渣を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した(Reprosil C18, 濃度勾配 １０〜９５％ アセトニトリル／０.１％ＴＦＡ水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、蒸発乾固し、残渣をメタノールに溶解し、アニオン交換カートリッジ(StratoSpheres SPE, PL-HCO₃ MP-樹脂)で濾過した。カートリッジをメタノールで溶出し、濾液を蒸発させ、２５mg(理論値の３０％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法３): R_t = 2.31分; MS (ESIpos): m/z = 393 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.92 (s, 1H), 7.88 (d, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.70 (br. s, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.24 (d, 1H), 3.53 (s, 2H), 3.15-3.04 (m, 2H), 2.88 (s, 2H), 2.44 (s, 3H) ppm.

【0177】

実施例３０
４−{[４−アミノ−５−(７−メトキシ−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]−メチル}ピペラジン−２−オン

【化81】

アルゴン下、脱気したＴＨＦ(０.３１ml)中の中間体１５Ａ(５０mg, １５４μmol)の溶液を、(７−メトキシ−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ボロン酸[米国特許第6 025 382号, 実施例７５／パートＣ](４７mg, ２３１μmol)および(２'−アミノビフェニル−２−イル)(クロロ)パラジウム−ジシクロヘキシル(２',４',６'−トリイソプロピルビフェニル−２−イル)ホスフィン(１：１, １２mg, １５μmol, S. L. Buchwald et al., J. Am. Chem. Soc. 132 (40), 14073-14075 (2010)を参照のこと)に加えた。脱気した０.５Ｍのリン酸カリウム水溶液(０.６２ml)を加え、得られた混合物を４０℃で３.５時間撹拌した。この後、２相を分離し、水相を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で、続いて飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させた。粗生成物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した(Reprosil C18, 濃度勾配 １０〜９５％ アセトニトリル／０.１％ＴＦＡ水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、蒸発乾固し、残渣をメタノールに溶解し、アニオン交換カートリッジ(StratoSpheres SPE, PL-HCO₃ MP-樹脂)で濾過した。カートリッジをメタノールで溶出し、濾液を蒸発させ、２１mg(理論値の３３％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.68分; MS (ESIpos): m/z = 409 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.92 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.71 (br. s, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.39 (t, 1H), 6.99 (d, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.53 (s, 2H), 3.15-3.05 (m, 2H), 2.88 (s, 2H) ppm.

【0178】

実施例３１
４−{[４−アミノ−５−(５−クロロ−７−メトキシ−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メチル}ピペラジン−２−オン

【化82】

アルゴン下、脱気したＴＨＦ(０.４３ml)中の中間体１５Ａ(７０mg, ２１５μmol)の溶液を、中間体１６Ａ(１１４mg, ３２３μmol)および(２'−アミノビフェニル−２−イル)−(クロロ)パラジウム−ジシクロヘキシル(２',４',６'−トリイソプロピルビフェニル−２−イル)ホスフィン(１：１, １６mg, ２２μmol, S. L. Buchwald et al., J. Am. Chem. Soc. 132 (40), 14073-14075 (2010)を参照のこと)に加えた。脱気した０.５Ｍのリン酸カリウム水溶液(０.８６ml)を加え、得られた混合物を４０℃で１時間、続いて６０℃で４.５時間撹拌した。この後、反応混合物を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和塩化ナトリウム水溶液(１：１)で希釈した。水相を酢酸エチルで３回抽出し、合わせた有機相を蒸発させ、残渣を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した(Reprosil C18, 濃度勾配 １０〜９５％ アセトニトリル／０.１％ＴＦＡ水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、蒸発乾固し、残渣をメタノールに溶解し、アニオン交換カートリッジ(StratoSpheres SPE, PL-HCO₃ MP-樹脂)で濾過した。カートリッジをメタノールで溶出し、濾液を蒸発させ、２２mg(理論値の２２％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法３): R_t = 2.40分; MS (ESIpos): m/z = 443 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.93 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.71 (br. s, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.05 (d, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.52 (s, 2H), 3.14-3.04 (m, 2H), 2.88 (s, 2H) ppm.

【0179】

実施例３２
[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メタノール

【化83】

ＴＨＦ／水混合物(１０：１, ８０ml)中の、中間体１０Ａ(純度７０％, ２.５２ｇ, ７.２６mmol)、中間体６Ａ(３.６３ｇ, １０.９mmol)およびフッ化セシウム(５.５１ｇ, ３６.３mmol)の懸濁液を、アルゴン下で脱気した。４−(ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ)−Ｎ,Ｎ−ジメチルアニリン−ジクロロパラジウム(２：１, １７６mg, ０.２４８mmol)を加え、得られた混合物を再度脱気し、５０℃で１６時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、有機層を分離し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、蒸発させた。残渣をメタノールに懸濁し、得られた固体を濾過し、真空で乾燥し、１.９７ｇ(純度９０％, 理論値の７２％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.85分; MS (ESIpos): m/z = 340 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.91 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.06 (t, 1H), 4.49 (d, 2H), 3.95 (s, 3H), 2.45 (s, 3H)ppm.

【0180】

実施例３３
４−{[４−アミノ−５−(５,７−ジメトキシ−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]メチル}ピペラジン−２−オン

【化84】

脱気したＴＨＦ／水(１０：１, ２ml)中の中間体１５Ａ(４５.５mg, １４０μmol)、中間体１８Ａ(４０mg, １６８μmol)およびフッ化セシウム(１０６mg, ７００μmol)の溶液に、アルゴン下、(２'−アミノビフェニル−２−イル)(クロロ)パラジウム−ジシクロヘキシル(２',４',６'−トリイソプロピル−ビフェニル−２−イル)ホスフィン(１：１, ７.７mg, ９.８μmol, S. L. Buchwald et al., J. Am. Chem. Soc. 132 (40), 14073-14075 (2010)を参照のこと)を加えた。得られた混合物を再度脱気して、アルゴン下、６０℃で９時間撹拌した。この後、反応混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって分離した(Reprosil C18, 濃度勾配 ２０〜４０％ アセトニトリル／０.１％ＴＦＡ水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、蒸発乾固し、残渣をメタノールに溶解し、アニオン交換カートリッジ(StratoSpheres SPE, PL-HCO₃ MP-樹脂)で濾過した。カートリッジをメタノールで溶出し、濾液を蒸発させ、２０mg(理論値の３１％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法４): R_t = 0.70分; MS (ESIpos): m/z = 439 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): とりわけ δ = 7.92 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.05 (d, 1H), 6.62 (d, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 3.54 (s, 2H), 3.07-3.13 (m, 2H), 2.88 (s, 2H) ppm.

【0181】

実施例３４
４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−カルボン酸

【化85】

ＴＨＦ／水の混合物(１０：１, ６６ml)中の中間体１３Ａ(１.３ｇ, ３.８４mmol)の溶液を、ＴＨＦ中２Ｍの２−メチル−２−ブテン溶液(１５.４ml, ３０.７mmol)で処理し、リン酸二水素ナトリウム(３.１８ｇ, ２３.１mmol)および塩化ナトリウム(２.０９ｇ, ２３.０mmol)で処理した。混合物を室温で２０分間撹拌した。得られた懸濁液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機相を、１Ｍ 水酸化ナトリウム水溶液で抽出した。水相を、１Ｍ 塩酸でｐＨ ３まで酸性にして、酢酸エチルで抽出した。有機相を塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させ、２９４mgの表題化合物(純度９０％, 理論値の１９％)を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.87分; MS (ESIpos): m/z = 355 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 12.3-12.6 (br. s, 1H), 8.1-8.2 (br. s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 5.45-5.55 (br. s, 1H), 3.95 (s, 3H), 2.45 (s, 3H) ppm.

【0182】

実施例３５
４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−カルボキサミド

【化86】

ＤＭＦ(３ml)中の実施例３４(純度９０％, ５５mg, １４０μmol)の溶液を、撹拌しながら、室温で、ＴＢＴＵ(４９mg, １５４μmol)およびＤＩＰＥＡ(３６μｌ, ２７９μmol)で処理した。３０分後、メタノール中７Ｍのアンモニア溶液(０.２ml, １.４mmol)を加え、得られた混合物を、室温でさらに３０分間撹拌した。次いで、混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって直接分離した(Reprosil C18, 濃度勾配 ２０〜４０％ アセトニトリル／０.２％トリフルオロ酢酸水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、飽和重炭酸ナトリウム水溶液の添加によってアルカリ性にした。溶液を酢酸エチルで抽出し、有機相を塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させ、３０mgの表題化合物(理論値の６１％)を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.80分; MS (ESIpos): m/z = 354 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 8.18 (s, 1H), 7.95-8.15 (br. s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.38-7.43 (br. s, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.16-7.21 (br. s, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.4-5.6 (br. s, 1H), 3.95 (s, 3H), 2.45 (s, 3H) ppm.

【0183】

実施例３６
４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)−Ｎ,Ｎ−ジメチルピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−カルボキサミド

【化87】

ＤＭＦ(３ml)中の実施例３４(純度９０％, ５８mg, １４８μmol)の溶液を、撹拌しながら、室温で、ＴＢＴＵ(５８mg, １８０μmol)およびＤＩＰＥＡ(５７μｌ, ３２７μmol)で処理した。３０分後、ＴＨＦ中２Ｍのジメチルアミン溶液(１６μｌ, ３２μmol)を加え、得られた混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって直接分離した(Reprosil C18, 濃度勾配 ３０〜５０％ アセトニトリル／０.２％トリフルオロ酢酸水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、アセトニトリルを減圧下で蒸発させた。生成物を残った水溶液から一夜結晶化させた。結晶を濾過して取り、高真空下で乾燥し、１０mg(理論値の１６％)の表題化合物を得た。濾液を、飽和重炭酸ナトリウム水溶液の添加によってアルカリ性にした。溶液を酢酸エチルで抽出し、有機相を塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させ、第２バッチの８.６mg(理論値の１５％)の表題化合物を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.86分; MS (ESIpos): m/z = 382 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.9-8.2 (br, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.83 (s, 1H), 5.85-6.15 (br, 1H), 3.95 (s, 3H), 2.86 (s, 3H), 2.78 (s, 3H), 2.44 (s, 3H) ppm.

【0184】

実施例３７
４−アミノ−Ｎ−エチル−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−カルボキサミド

【化88】

ＤＭＦ(３ml)中の実施例３４(純度９０％, ５８mg, １４８μmol)の溶液を、撹拌しながら、室温で、ＴＢＴＵ(５８mg, １８０μmol)およびＤＩＰＥＡ(５７μｌ, ３２７μmol)で処理した。３０分後、ＴＨＦ中２Ｍのエチルアミン溶液(１６μｌ, ３２μmol)を加え、得られた混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって直接分離した(Reprosil C18, 濃度勾配 ３０〜５０％ アセトニトリル／０.２％トリフルオロ酢酸水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、飽和重炭酸ナトリウム水溶液を添加することによってアルカリ性にした。溶液を酢酸エチルで抽出し、有機相を塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させ、１８mgの表題化合物(理論値の３２％)を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.89分; MS (ESIpos): m/z = 382 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.9-8.2 (br, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.02 (t, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.45-5.65 (br, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.09-3.18 (quin, 2H), 2.45 (s, 3H), 1.01 (t, 3H) ppm.

【0185】

実施例３８
[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル](４−メチルピペラジン−１−イル)メタノン

【化89】

ＤＭＦ(３ml)中の実施例３４(純度９０％, ５８mg, １４８μmol)の溶液を、撹拌しながら、室温で、ＴＢＴＵ(５８mg, １８０μmol)およびＤＩＰＥＡ(５７μｌ, ３２７μmol)で処理した。３０分後、１−メチルピペラジン(３６μｌ, ３３μmol)を加え、得られた混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって直接分離した(Reprosil C18, 濃度勾配 １０〜３０％ アセトニトリル／０.２％トリフルオロ酢酸水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、次いで、飽和重炭酸ナトリウム水溶液の添加によってアルカリ性にした。溶液を酢酸エチルで抽出し、有機相を塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させ、２６mgの表題化合物(理論値の４０％)を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.57分; MS (ESIpos): m/z = 437 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 7.95-8.15 (br, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.95-6.20 (br, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.43-3.52 (m, 1H), 3.11-3.18 (m, 1H), 2.44 (s, 3H), 2.09-2.18 (m, 1H), 1.95 (s, 3H), 1.80-1.90 (m, 1H), 1.40 (s, 4H) ppm.

【0186】

実施例３９
４−{[４−アミノ−５−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ[２,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−６−イル]カルボニル}ピペラジン−２−オン

【化90】

ＤＭＦ(３ml)中の実施例３４(純度９０％, ５８mg, １４８μmol)の溶液を、撹拌しながら、室温で、ＴＢＴＵ(５８mg, １８０μmol)およびＤＩＰＥＡ(５７μｌ, ３２７μmol)で処理した。３０分後、２−オキソピペラジン(３３mg, ３３μmol)を加え、得られた混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって直接分離した(Reprosil C18, 濃度勾配 ２０〜４０％ アセトニトリル／０.２％トリフルオロ酢酸水溶液)。生成物のフラクションを合わせて、飽和重炭酸ナトリウム水溶液の添加によってアルカリ性にした。溶液を酢酸エチルで抽出し、有機相を塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させ、２２mgの表題化合物(理論値の３４％)を得た。
LC-MS (方法２): R_t = 0.69分; MS (ESIpos): m/z = 437 (M+H)^+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): とりわけ δ = 8.0-8.2 (br. s, 1H), 8.02 (s, 1H), 8.00 (s, 2H), 7.34 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.83 (s, 1H), 5.95-6.15 (br. s, 1H), 3.97 (br. s, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.60-3.85 (br. m, 1H), 3.44 (br. s, 1H), 2.90-3.15 (br. m, 1H), 2.9 (br. s, 1H), 2.44 (s, 3H) ppm.

【0187】

表Ｉ中の実施例４０〜４５を製造するための一般的な手順：
０.１mmolの中間体１９Ａを、５当量のそれぞれのアルコール成分および７当量のＤＩＰＥＡで処理した。得られた混合物を１３０℃で一夜振盪した。室温まで冷却した後、反応混合物を０.６mlのＤＭＦで処理し、再度一夜振盪し、濾過した。生成物を、示された精製方法によって、濾液から単離した。

【0188】

【表3】

【0189】

【表4】

【0190】

表II中の実施例４６〜７６を製造するための一般的な手順：
１.５mmolのそれぞれのアミン成分を、ＴＨＦ中の０.１mmolの中間体１９Ａの溶液で、続いて４当量のＤＩＰＥＡで処理した。得られた混合物を室温で一夜振盪した。次いで、溶媒を真空で除去し、残渣をＤＭＦで処理し、濾過した。生成物を、示された精製方法によって、濾液から単離した。

【0191】

【表5】

【0192】

【表6】

【0193】

【表7】

【0194】

【表8】

【0195】

【表9】

【0196】

【表10】

【0197】

【表11】

【0198】

【表12】

【0199】

【表13】

【0200】

【表14】

【0201】

【表15】

【0202】

Ｂ. 生物学的活性の評価
略号および頭字語：

【表16】

【0203】

本発明の化合物の活性の証明は、当技術分野で周知のインビトロ、エクスビボおよびインビボアッセイで達成され得る。例えば、本発明の化合物の活性を証明するために、下記のアッセイを用い得る。

【0204】

Ｂ−１. ＦＧＦＲ−１高ＡＴＰキナーゼアッセイ
本発明の化合物の、ＦＧＦＲ−１と共に予めインキュベート後の高濃度ＡＴＰでのＦＧＦＲ−１阻害活性を、次の段落に記載する通りにＴＲ−ＦＲＥＴをベースとするＦＧＦＲ−１高ＡＴＰアッセイを用いて定量化した：
ＳＦ９昆虫細胞中でバキュロウイルス発現系を用いて発現させ、グルタチオン・アガロースアフィニティークロマトグラフィーによって精製した、タグ付組み換えＦＧＦＲ−１融合タンパク質[グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ(ＧＳＴ)(Ｎ末端)、Ｈｉｓ６タグ、トロンビン切断部位、およびアミノ酸G400〜R800(GenBankエントリー番号NM_015850)のヒトＦＧＦＲ−１の細胞内部分の融合]を、Proqinase (製品番号0101-0000-1)から購入し、酵素として用いた。キナーゼ反応の基質として、ビオチン化ペプチド ビオチン−Ahx−AAEEEYFFLFAKKK(アミド型のＣ末端)を用いた。これは、例えばBiosyntan (Berlin-Buch, Germany)から購入できる。

【0205】

通常、試験化合物は、同じマイクロタイタープレートで、２０μＭ〜０.１ｎＭの範囲の１１種の異なる濃度で(例えば２０μＭ、５.９μＭ、１.７μＭ、０.５１μＭ、０.１５μＭ、４４ｎＭ、１３ｎＭ、３.８ｎＭ、１.１ｎＭ、０.３３ｎＭおよび０.１ｎＭ)、各濃度について二組試験した。希釈シリーズを、アッセイ前に、ＤＭＳＯ中の１００倍濃度ストック溶液として別個に調製した；正確な濃度は、用いられたピペッターに依存して変化する。アッセイのために、５０ｎｌのＤＭＳＯ中の試験化合物のストック溶液を、それぞれ、黒色の低容量３８４ウェルマイクロタイタープレート(Greiner Bio-One, Frickenhausen, Germany)にピペットで入れた。２μｌの水性アッセイ緩衝液[８ｍＭのＭＯＰＳ(ｐＨ ７.０)、１０ｍＭの酢酸マグネシウム、１.０ｍＭのジチオスレイトール、０.０５％(w/v)のウシ血清アルブミン(ＢＳＡ)、０.０７％(v/v)のTween-20、０.２ｍＭのＥＤＴＡ]中の上記ＦＧＦＲ−１融合タンパク質の溶液を加え、混合物を２２℃で１５分間インキュベートして、予め試験化合物を酵素に結合させた。次いで、３μｌのアッセイ緩衝液中のアデノシン三リン酸(ＡＴＰ, ３.３ｍＭ；５μｌのアッセイ容量中の最終濃度＝２ｍＭ)および基質(０.１６μＭ；５μｌのアッセイ容量中の最終濃度＝０.１μＭ)の溶液を添加することによって、キナーゼ反応を開始させ、得られた混合物を、反応時間１５分間、２２℃でインキュベートした。ＦＧＦＲ−１融合タンパク質の濃度を、酵素ロットの活性に応じて調節し、アッセイが直線範囲内(典型的な濃度は０.０５μg/mlの範囲であった)となるように適切に選択した。５μｌのＨＴＲＦ検出反応剤溶液[ＥＤＴＡ水溶液(５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ(ｐＨ ７.５)中の５０ｍＭのＥＤＴＡ、０.１％(w/v)のＢＳＡ)中の２５ｎＭのストレプトアビジン-XL665(Cis Biointernational)および１ｎＭのPT66-Eu-キレート、すなわちユーロピウムキレート標識抗ホスホチロシン抗体(Perkin-Elmer; PT66-Tb-クリプテート(Cis Biointernational)を代わりに用いてもよい)]を添加することによって、反応を停止させた。

【0206】

得られた混合物を２２℃で１時間インキュベートして、ホスホリル化ビオチン化ペプチドと検出反応剤で錯体を形成させた。続いて、Ｅｕキレートからストレプトアビジン-XL665への共鳴エネルギー移動を測定することによって、ホスホリル化基質の量を測定した。これについては、３５０nmで励起後、６２０nmおよび６６５nmでの蛍光放出を、ＴＲ−ＦＲＥＴリーダー[例えば Rubystar (BMG Labtechnologies, Offenburg, Germany) または Viewlux (Perkin-Elmer)]で測定した。６６５nmおよび６２０nmでの放出の比を、ホスホリル化した基質の量についての測定値とした。データを正規化し(阻害剤なしでの酵素反応＝０％阻害、酵素がない以外他のアッセイ成分全て＝１００％阻害)、社内ソフトウェアを用いて、４変数フィットによって、ＩＣ_５０値を計算した。

【0207】

このアッセイから得られた個々の本発明の化合物についてのＩＣ_５０値を、下記の表１Ａに挙げる。

【表17】

【0208】

【表18】

【0209】

最も近い先行技術(国際特許出願WO 2007/061737-A2およびそれに記載された実施例化合物)の代表例と考えられる選択された８−アミノ−１−(ベンゾチオフェン−２−イル)イミダゾ[１,５−ａ]ピラジン誘導体および関連化合物を、公表された手順に従って合成し、比較の目的のために、ＦＧＦＲ−１高ＡＴＰアッセイで試験した。これらの化合物について得られたＩＣ_５０値を、下記の表１Ｂに挙げる。

【0210】

【表19】

【表20】

【0211】

表１Ａおよび１Ｂに特記されたＩＣ_５０値は、本発明の化合物が、選択された先行技術化合物よりも、約１〜３桁強力にＦＧＦＲ−１キナーゼ活性を阻害することを証明している。

【0212】

Ｂ−２. ＦＧＦＲ−３キナーゼアッセイ
ＦＧＦＲ−３と共に予めインキュベートした後の本発明の化合物のＦＧＦＲ−３阻害活性を、次の段落に記載する通りにＴＲ−ＦＲＥＴをベースとするＦＧＦＲ−３アッセイを用いて定量化した：
ＳＦ９昆虫細胞中でバキュロウイルス発現系を用いて発現させ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼアフィニティークロマトグラフィーによって精製した、タグ付組み換えＦＧＦＲ−３融合タンパク質[グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ(ＧＳＴ)(Ｎ末端)、Ｈｉｓ６タグ、トロンビン切断部位、およびアミノ酸R397〜T806 (NCBI/タンパク質エントリー番号NP_000133.1)のヒトＦＧＦＲ−３の細胞内部分の融合]を、Proqinas (製品番号1068-0000-1)から購入し、酵素として用いた。キナーゼ反応の基質として、ビオチン化ペプチド ビオチン-Ahx-AAEEEYFFLFAKKK (アミド型のＣ末端)を用いた。これは、例えばBiosyntan (Berlin-Buch, Germany)から購入できる。

【0213】

通常、試験化合物は、同じマイクロタイタープレートで、２０μＭ〜０.１ｎＭの範囲の１１種の異なる濃度で(例えば２０μＭ、５.９μＭ、１.７μＭ、０.５１μＭ、０.１５μＭ、４４ｎＭ、１３ｎＭ、３.８ｎＭ、１.１ｎＭ、０.３３ｎＭおよび０.１ｎＭ)、各濃度について二組試験した。希釈シリーズを、アッセイ前に、ＤＭＳＯ中の１００倍濃度ストック溶液として別個に調製した；正確な濃度は、用いられたピペッターに依存して変化する。アッセイのために、５０ｎｌのＤＭＳＯ中の試験化合物のストック溶液を、それぞれ、黒色の低容量３８４ウェルマイクロタイタープレート(Greiner Bio-One, Frickenhausen, Germany)にピペットで入れた。２μｌの水性アッセイ緩衝液[８ｍＭのＭＯＰＳ(ｐＨ ７.０)、１０ｍＭの酢酸マグネシウム、１.０ｍＭのジチオスレイトール、０.０５％(w/v)のウシ血清アルブミン(ＢＳＡ)、０.０７％(v/v)のTween-20、０.２ｍＭのＥＤＴＡ]中の上記ＦＧＦＲ−３融合タンパク質の溶液を加え、混合物を２２℃で１５分間インキュベートして、予め試験化合物を酵素に結合させた。次いで、３μｌのアッセイ緩衝液中のアデノシン三リン酸(ＡＴＰ, １６.７μＭ；５μｌアッセイ容量中の最終濃度＝１０μＭ)および基質(０.８μＭ；５μｌのアッセイ容量中の最終濃度＝０.５μＭ)の溶液を添加することによって、キナーゼ反応を開始させ、得られた混合物を、反応時間６０分間、２２℃でインキュベートした。ＦＧＦＲ−３融合タンパク質の濃度を、酵素ロットの活性に応じて調節し、アッセイが直線範囲内(典型的な濃度は０.０３μg/mlの範囲であった)となるように適切に選択した。５μｌのＨＴＲＦ検出反応剤溶液[ＥＤＴＡ水溶液(５０ｍＭのＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ(ｐＨ ７.５)中の５０ｍＭのＥＤＴＡ、０.１％(w/v)のＢＳＡ)中の１００ｎＭのストレプトアビジン-XL665 (Cis Biointernational)および１ｎＭのPT66-Tb-クリプテート、すなわちテルビウム−クリプテート標識抗ホスホチロシン抗体(Cis Biointernational; PT66-Eu-キレート(Perkin-Elmer)を代わりに用いてもよい)]を添加することによって、反応を停止させた。

【0214】

得られた混合物を２２℃で１時間インキュベートして、ホスホリル化ビオチン化ペプチドと検出反応剤で錯体を形成させた。続いて、Ｔｂキレートからストレプトアビジン-XL665への共鳴エネルギー移動を測定することによって、ホスホリル化基質の量を測定した。これについては、３５０nmで励起後、６２０nmおよび６６５nmでの蛍光放出を、ＴＲ−ＦＲＥＴリーダー[例えば Rubystar (BMG Labtechnologies, Offenburg, Germany) または Viewlux (Perkin-Elmer)]で測定した。６６５nmおよび６２０nmでの放出の比を、ホスホリル化した基質の量についての測定値とした。データを正規化し(阻害剤なしでの酵素反応＝０％阻害、酵素がない以外他のアッセイ成分全て＝１００％阻害)、社内ソフトウェアを用いて、４変数フィットによって、ＩＣ_５０値を計算した。

【0215】

このアッセイから得られた個々の本発明の化合物についてのＩＣ_５０値を、下記の表２Ａに挙げる。

【表21】

【0216】

【表22】

【0217】

最も近い先行技術(国際特許出願WO 2007/061737-A2およびそれに記載された実施例化合物)の代表例と考えられる選択された８−アミノ−１−(ベンゾチオフェン−２−イル)イミダゾ[１,５−ａ]ピラジン誘導体および関連化合物を、公表された手順に従って合成し、比較の目的のために、ＦＧＦＲ−３アッセイで試験した。これらの化合物について得られたＩＣ_５０値を、下記の表２Ｂに挙げる。

【0218】

【表23】

【0219】

【表24】

【0220】

表２Ａおよび２Ｂに特記されたＩＣ_５０値は、本発明の化合物が選択された先行技術化合物より約３〜１０００倍強力にＦＧＦＲ−３キナーゼ活性を阻害することを証明している。

【0221】

Ｂ−３. ＦＧＦＲ−４高ＡＴＰキナーゼアッセイ
ＦＧＦＲ−４と共に予めインキュベートした後の本発明の化合物の高濃度ＡＴＰでのＦＧＦＲ−４阻害活性を、次の段落に記載する通りにＴＲ−ＦＲＥＴをベースとするＦＧＦＲ−４高ＡＴＰアッセイを用いて定量化した：
ＳＦ９昆虫細胞中でバキュロウイルス発現系を用いて発現させ、グルタチオン・アガロースアフィニティークロマトグラフィーによって精製した、タグ付組み換えＦＧＦＲ−４融合タンパク質[グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ(ＧＳＴ)(Ｎ末端)、Ｈｉｓ６タグ、トロンビン切断部位、およびアミノ酸R391〜T802 (GenBankエントリー番号NM_002011)のヒトＦＧＦＲ−４の細胞内部分の融合]を、Proqinase (製品番号0127-0000-3)から購入し、酵素として用いた。キナーゼ反応の基質として、ビオチン化ペプチド ビオチン−Ahx−AAEEEYFFLFAKKK(アミド型のＣ末端)を用いた。これは、例えばBiosyntan (Berlin-Buch, Germany)から購入できる。

【0222】

通常、試験化合物は、同じマイクロタイタープレートで、２０μＭ〜０.１ｎＭの範囲の１１種の異なる濃度で(例えば２０μＭ、５.９μＭ、１.７μＭ、０.５１μＭ、０.１５μＭ、４４ｎＭ、１３ｎＭ、３.８ｎＭ、１.１ｎＭ、０.３３ｎＭおよび０.１ｎＭ)、各濃度について二組試験した。希釈シリーズを、アッセイ前に、ＤＭＳＯ中の１００倍濃度ストック溶液として別個に調製した；正確な濃度は、用いられたピペッターに依存して変化する。アッセイのために、５０ｎｌのＤＭＳＯ中の試験化合物のストック溶液を、それぞれ、黒色の低容量３８４ウェルマイクロタイタープレート(Greiner Bio-One, Frickenhausen, Germany)にピペットで入れた。２μｌの水性アッセイ緩衝液[８ｍＭのＭＯＰＳ(ｐＨ ７.０)、１０ｍＭの酢酸マグネシウム、１.０ｍＭのジチオスレイトール、０.０５％(w/v)のウシ血清アルブミン(ＢＳＡ)、０.０７％(v/v)のTween-20、０.２ｍＭのＥＤＴＡ]中の上記ＦＧＦＲ−４融合タンパク質の溶液を加え、混合物を２２℃で１５分間インキュベートして、予め試験化合物を酵素に結合させた。次いで、３μｌのアッセイ緩衝液中のアデノシン三リン酸(ＡＴＰ, ３.３ｍＭ；５μｌのアッセイ容量中の最終濃度＝２ｍＭ)および基質(０.８μＭ；５μｌのアッセイ容量中の最終濃度＝０.５μＭ)の溶液を添加することによって、キナーゼ反応を開始させ、得られた混合物を、反応時間６０分間、２２℃でインキュベートした。ＦＧＦＲ−４融合タンパク質の濃度を、酵素ロットの活性に応じて調節し、アッセイが直線範囲内(典型的な濃度は０.０３μg/mlの範囲であった)となるように適切に選択した。５μｌのＨＴＲＦ検出反応剤溶液[ＥＤＴＡ水溶液(５０ｍＭのＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ(ｐＨ ７.５)中の５０ｍＭのＥＤＴＡ、０.１％(w/v)のＢＳＡ)中の１００ｎＭのストレプトアビジン-XL665 (Cis Biointernational)および１ｎＭのPT66-Tb-クリプテート、すなわちテルビウム−クリプテート標識抗ホスホチロシン抗体(Cis Biointernational; PT66-Eu-キレート(Perkin-Elmer)を代わりに用いてもよい)]を添加することによって、反応を停止させた。

【0223】

得られた混合物を２２℃で１時間インキュベートして、ホスホリル化ビオチン化ペプチドと検出反応剤で錯体を形成させた。続いて、Ｔｂキレートからストレプトアビジン-XL665への共鳴エネルギー移動を測定することによって、ホスホリル化基質の量を測定した。これについては、３５０nmで励起後、６２０nmおよび６６５nmでの蛍光放出を、ＴＲ−ＦＲＥＴリーダー[例えば Rubystar (BMG Labtechnologies, Offenburg, Germany) または Viewlux (Perkin-Elmer)]で測定した。６６５nmおよび６２０nmでの放出の比を、ホスホリル化した基質の量についての測定値とした。データを正規化し(阻害剤なしでの酵素反応＝０％阻害、酵素がない以外他のアッセイ成分全て＝１００％阻害)、社内ソフトウェアを用いて、４変数フィットによって、ＩＣ_５０値を計算した。

【0224】

Ｂ−４. ｍＴＯＲキナーゼアッセイ(比較の目的のため)
本発明の化合物のｍＴＯＲ阻害活性は、次の段落に記載する通りにＴＲ−ＦＲＥＴをベースとするｍＴＯＲアッセイを用いて定量化した：
昆虫細胞中で発現させ、グルタチオン・セファロースアフィニティークロマトグラフィーによって精製した、タグ付組み換えｍＴＯＲ融合タンパク質[アミノ酸1360〜2549のヒトｍＴＯＲと融合したグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ(ＧＳＴ)]を、Invitrogen (カタログ番号4753)から購入し、酵素として用いた。キナーゼ反応の基質として、ＧＦＰおよび４Ｅ−ＢＰ１の組み換え融合タンパク質(Invitrogenから購入, カタログ番号PV4759)を用いた。

【0225】

試験化合物をＤＭＳＯに溶解して、１０ｍＭのストック溶液を作る。これらの溶液を最初に１００％のＤＭＳＯによって１０倍希釈し、１００％ＤＭＳＯ中１ｍＭの溶液を得て、次に、５０％のＤＭＳＯによって１００倍希釈し、５０％ＤＭＳＯ中１０μＭの溶液を得る。

【0226】

アッセイのために、０.５μｌの５０％ＤＭＳＯ中１０μＭの試験化合物の溶液を、黒色の低容量３８４ウェルマイクロタイタープレート(Greiner Bio-One, Frickenhausen, Germany)にピペットで入れた。２μｌの水性アッセイ緩衝液[５０ｍＭのＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ(ｐＨ ７.５)、５ｍＭの塩化マグネシウム、１.０ｍＭのジチオスレイトール、１ｍＭのＥＧＴＡ、０.０１％(v/v)のTriton-X100、０.０１％(w/v)のウシ血清アルブミン(ＢＳＡ)]中の上記ｍＴＯＲ融合タンパク質の溶液を加え、混合物を２２℃で１５分間インキュベートして、予め試験化合物を酵素に結合させた。次いで、２.５μｌのアッセイ緩衝液中のアデノシン三リン酸(ＡＴＰ, ８０μＭ；５μｌのアッセイ容量中の最終濃度＝４０μＭ)および基質(０.６μＭ；５μｌのアッセイ容量中の最終濃度＝０.３μＭ)の溶液の添加によって、キナーゼ反応を開始させ、得られた混合物を反応時間６０分間、２２℃でインキュベートした。ｍＴＯＲ融合タンパク質の濃度を、アッセイが直線範囲内(５μｌのアッセイ容量中の典型的な最終濃度は１.２５ng/μlであった)となるように適切に選択した。５μｌの３０ｍＭのＥＤＴＡ(１０μｌのアッセイ容量中の最終濃度＝１５ｍＭ)およびＦＲＥＴ緩衝液中の２ｎＭのＴｂキレート標識抗４Ｅ−ＢＰ１[ｐＴ４６]ホスホ特異的抗体[Invitrogen カタログ番号PV4755](１０μｌのアッセイ容量中の最終濃度＝１ｎＭ)の添加によって、反応を停止させた。

【0227】

得られた混合物を２２℃で１時間インキュベートして、ホスホリル化基質とＴｂキレート標識抗体で錯体を形成させた。続いて、ＴｂキレートからＧＦＰへの共鳴エネルギー移動を測定することによって、ホスホリル化基質の量を測定した。これについては、３４０nmで励起後、４９５nmおよび５２０nmでの蛍光放出を、Envision 2104 multilabel reader (Perkin-Elmer)で測定した。 ５２０nmおよび４９５nmでの放出の比を、ホスホリル化した基質の量についての測定値とした。データを正規化し(阻害剤なしでの酵素反応＝０％阻害、酵素がない以外他のアッセイ成分全て＝１００％阻害)、平均値(１つの濃度で反復して試験したならば)、または、ＩＣ_５０値(社内ソフトウェアを用いた４変数フィットによる)を計算した。

【0228】

個々の本発明の化合物についての１μＭでの平均阻害値を、下記の表３に挙げる。

【表25】

【表26】

(阻害効果検出できず＝１μＭで阻害効果が検出できなかった)。

【0229】

表３中のデータは、本発明の化合物が、ｍＴＯＲキナーゼに対して、あったとしても弱い阻害効果しか有さないことを示し、これらの化合物で観察される薬理学的活性に寄与するとは考えられない。

【0230】

Ｂ−５. 増殖因子介在細胞増殖の阻害
ヒト臍帯静脈内皮細胞(ＨＵＶＥＣ)を Cellsystems (FC-0003)から購入し、２％のウシ胎児血清(ＦＢＳ)を含むVasculife VEGF完全培地(Cellsystems, LL-1020)中で３７℃で５％ ＣＯ_２で増殖させた。細胞を最大７継代で増殖アッセイに用いた。

【0231】

ＨＵＶＥＣ細胞をaccutase (PAA, L11-007)を用いて回収し、９６ウェルプレート(Falcon MICROTEST 組織培養プレート９６ウェル平底, BD 353075、または、μCLEAR-PLATE, 黒色, ９６ウェル, Greiner Bio-One, No. 655090)のカラム２〜１２に、１００μｌのVasculife VEGF完全培地中２５００細胞／ウェルの細胞密度で播種し、残りの空のカラム１をブランクとした。細胞を、３７℃、５％ ＣＯ_２で少なくとも６時間インキュベートした。次いで、細胞をＰＢＳで１回洗浄し、ヘパリン、アスコルビン酸塩およびＬ−グルタミン(Vasculife Life Factors Kitの構成成分, Cellsystems, LL-1020)、および、０.２％のＦＢＳを含むVasculife基本培地(Cellsystems, LM-0002)中で一夜飢餓状態とした。

【0232】

約１８時間後、飢餓培地を廃棄し、細胞を、１００μｌの飢餓培地中、１０ｐＭ〜３０μＭの範囲の９種の連続対数または半対数濃度の試験化合物、および、５、１０または２０ng/mlのｈＦＧＦ−２(組み換えヒトＦＧＦベーシック, R&D Systems, 233-FB)に、７２時間曝露した。ＤＭＳＯ中１０ｍＭの試験化合物ストック溶液を、ＤＭＳＯで２００×最終濃度に希釈し、全てのウェルで最終ＤＭＳＯ濃度を０.５％とした。コントロールは、飢餓培地のみの中で増殖させた細胞と、０.５％のＤＭＳＯを含むｈＦＧＦ−２含有飢餓培地中で増殖させた細胞からなる。細胞増殖を測定するために、５μｌのAlamar Blue溶液(Biosource, DAL1100)をそれぞれのウェルに加え(１：２０希釈)、細胞を、３７℃、５％ ＣＯ_２でさらに４時間インキュベートした後、Spectrafluor Plus Tecan plate reader (XFLUOR4 version 4.20)で蛍光を測定した(励起５３５nm, 放出５９５nm)。幾つかの実験において、ＡＴＰ測定キット(BIAFFIN GmbH, LBR-T100)を製造者の指示に従って用いた。各実験において、サンプルを三組アッセイして、標準偏差を決定した。データを分析するためにGraphPad Prism 5 softwareを用いて、ＩＣ_５０値を得た。全ての試験化合物を独立した実験で２〜１０回アッセイし、類似の結果を得た。

【0233】

下記の表４に挙げるデータは、対応する平均ｐＩＣ_５０値から得られる代表的な本発明の化合物についてのＩＣ_５０値を表す。

【表27】

【0234】

【表28】

【0235】

本発明の化合物の大部分は、血管内皮増殖因子(ＶＥＧＦ−Ａ_１６５アイソフォーム)を媒介増殖因子として(ＦＧＦ−２の代わりに)用いたとき、この増殖アッセイで約１０〜１００倍低下した阻害活性を示し、ＶＥＧＦＲキナーゼに対するＦＧＦＲへのこれらの化合物の著しい選択性を示した。

【0236】

Ｂ−６. ヒト異種移植および同系腫瘍モデル
本発明の化合物をインビボでプロファイルするために、異なる腫瘍モデルを行った。ヒト、ラットまたはマウスの腫瘍細胞をインビトロで培養し、免疫不全または免疫適格性マウス、または、免疫不全ラットの何れかに移植した。腫瘍確立後に処置を開始し、腫瘍担持動物を、種々の経路(経口、静脈内、腹腔内、または皮下)を介して物質で処置した。物質を、単剤治療または他の薬理学的物質との併用治療として試験した。腫瘍が平均サイズ１２０mm²に達するまで腫瘍担持動物の処置を行った。ノギスを用いて２方向で腫瘍を測定し、腫瘍体積を式：(長さ×幅^２)／２によって計算した。物質の有効性を実験終了時にＴ／Ｃ比[Ｔ＝処置群の最終腫瘍重量；Ｃ＝コントロール群の最終腫瘍重量]を用いて評価した。コントロール群と処置群の有効性の統計学的有意性を、ＡＮＯＶＡ分散検定を用いて決定した。全ての動物試験をドイツの規制ガイドラインに従って行った。

【0237】

本発明は特定の具体的態様に言及して開示したが、他の態様および本発明の変法も、本発明の精神および範囲を逸脱せずに、他の当業者によって考案され得る。請求の範囲は、このような態様および等価の変法を全て含むと解釈されることを意図される。

【0238】

Ｃ. 医薬組成物に関する例
本発明の医薬組成物は、下記の通り説明できる。
滅菌処理された静脈内投与用溶液：
望ましい本発明の化合物の５mg/ml溶液は、滅菌処理された注射用水を用いて調製でき、必要であればｐＨを調節する。溶液は、投与のために、滅菌処理された５％のブドウ糖で１〜２mg/mlに希釈され、約６０分に亘って静脈内点滴として投与される。

【0239】

静脈内投与用凍結乾燥粉末：
滅菌処理された製剤は、(i)１００〜１０００mgの凍結乾燥粉末としての望ましい本発明の化合物、(ii)３２〜３２７mg/mlのクエン酸ナトリウム、および、(iii)３００〜３０００mgのデキストラン ４０で製造できる。製剤は、滅菌処理された注射用食塩水または５％のブドウ糖で、１０〜２０mg/mlの濃度に再構成され、これは、さらに食塩水または５％のブドウ糖で０.２〜０.４mg/mlに希釈され、静脈内にボラスとして投与されるか、または、１５〜６０分に亘って静脈内点滴によって投与される。

【0240】

筋肉内投与用懸濁液：
下記の溶液または懸濁液を筋肉内注射用に製造できる：
５０mg/mlの望ましい水不溶性の本発明の化合物；５mg/mlのカルボキシメチルセルロース ナトリウム；４mg/mlのTween 80；９mg/mlの塩化ナトリウム；９mg/mlのベンジルアルコール。

【0241】

ハードシェルカプセル：
１００mgの望ましい粉末状の本発明の化合物、１５０mgの乳糖、５０mgのセルロースおよび６mgのステアリン酸マグネシウムを、標準的な２ピース硬ゼラチンカプセルにそれぞれ充填することによって、多数の単位カプセルを製造する。

【0242】

軟ゼラチンカプセル：
可消化油、例えば大豆油、綿実油またはオリーブ油中の、望ましい本発明の化合物の混合物を調製し、容積型移送式ポンプによって融解ゼラチンに注入して、１００mgの有効成分を含む軟ゼラチンカプセルを形成する。カプセルを洗浄し、乾燥する。望ましい本発明の化合物を、ポリエチレングリコール、グリセリンおよびソルビトールの混合物に溶解し、水混和性医薬ミックスを調製できる。

【0243】

錠剤：
投与単位が、１００mgの望ましい本発明の化合物、０.２mgのコロイド状二酸化ケイ素、５mgのステアリン酸マグネシウム、２７５mgの微晶性セルロース、１１mgの澱粉および９８.８mgの乳糖であるように、多数の錠剤を慣用の手順によって調製する。嗜好性を向上し、上品さおよび安定性を改善し、または、吸収を遅らせるために、適切な水性および非水性コーティングを適用してもよい。

【0244】

眼への局所適用のための溶液または懸濁液(点眼薬):
滅菌製剤を、５mlの滅菌食塩水中で再構成された、１００mgの凍結乾燥粉末としての望ましい本発明の化合物で調製できる。保存料として、塩化ベンザルコニウム、チメロサール、硝酸フェニル水銀などを、約０.００１重量％〜１重量％の範囲で用いてもよい。