特許 6062065 過敏性腸症候群を治療するためのアルピニア種抽出物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6062065

(24)【登録日】2016年12月22日

(45)【発行日】2017年1月25日

(54)【発明の名称】過敏性腸症候群を治療するためのアルピニア種抽出物

(51)【国際特許分類】

   A61K 36/9062 20060101AFI20170116BHJP

   A61K 31/122 20060101ALI20170116BHJP

   A61K 31/352 20060101ALI20170116BHJP

   A61P 1/12 20060101ALI20170116BHJP

【ＦＩ】

   A61K36/9062

   A61K31/122

   A61K31/352

   A61P1/12

【請求項の数】13

【全頁数】34

(21)【出願番号】特願2015-549978(P2015-549978)

(86)(22)【出願日】2013年12月30日

(65)【公表番号】特表2016-504341(P2016-504341A)

(43)【公表日】2016年2月12日

(86)【国際出願番号】CN2013090950

(87)【国際公開番号】WO2014101873

(87)【国際公開日】20140703

【審査請求日】2015年8月24日

(31)【優先権主張番号】61/747,216

(32)【優先日】2012年12月29日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】515163667

【氏名又は名称】メディカル アンド ファーマシューティカル インダストリー テクノロジー アンド ディベロップメント センター

(74)【代理人】

【識別番号】100106002

【弁理士】

【氏名又は名称】正林 真之

(74)【代理人】

【識別番号】100120891

【弁理士】

【氏名又は名称】林 一好

(74)【代理人】

【識別番号】100165157

【弁理士】

【氏名又は名称】芝 哲央

(74)【代理人】

【識別番号】100126000

【弁理士】

【氏名又は名称】岩池 満

(72)【発明者】

【氏名】チェン ジュイ チン

(72)【発明者】

【氏名】リン チェ イー

(72)【発明者】

【氏名】フン チー シェン

(72)【発明者】

【氏名】ウー ペイ ファン

(72)【発明者】

【氏名】チェン フェン

【審査官】 鶴見 秀紀

(56)【参考文献】

【文献】 中国特許出願公開第１０１００２７６２（ＣＮ，Ａ）

【文献】 Chinese Traditional and Herbal Drugs，２００９年，40(1)，pp.29-32

【文献】 J.Nat.Prod.，２００２年，Vol.65，pp.1468-1474

【文献】 Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，２０１２年，Vol.22，pp.1660-1663

【文献】 China Pharamacy，２０１０年，Vol.21,No.39，pp.3649-3650

【文献】 Modern Food Science and Technology，２０１２年，Vol.28,No.8，pp.940-944，Abstract 表１

【文献】 Nat.Prod.Res.Dev.，２００８年，20(1)，pp.82-86，Abstract,Tab.1 No.40

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３６／００−３６／９０６８

Ａ６１Ｋ ３１／００−３１／８０

Ａ６１Ｐ １／１２

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

実質的に、トイクレノン又はイザルピニンと、オキシフィレノジオールＡ、６−α−ヒドロキシ−７−エピ−α−シペロン、７−エピ−トイクレノン及びテクトクリシンからなる群から選択される少なくとも１種類の活性化合物とからなる、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）を治療する医薬品を製造するためのアルピニア種（Ａｌｐｉｎｉａ ｓｐｐ．）の抽出物の使用。

【請求項2】

前記アルピニア種がアルピニアオキシフィラ（Ａｌｐｉｎｉａ ｏｘｙｐｈｙｌｌａ）、アルピニアゼルムベット（Ａｌｐｉｎｉａ ｚｅｒｕｍｂｅｔ）、アルピニアハイナネンシス（Ａｌｐｉｎｉａ ｈａｉｎａｎｅｎｓｉｓ）又はアルピニアガランガ（Ａｌｐｉｎｉａ ｇａｌａｎｇａ）のいずれかである、請求項１に記載の使用。

【請求項3】

前記抽出物が、
（ａ）超臨界流体（ＳＦＣ）、水、酢酸エチル又はｎ−ヘキサンからなる群から選択される第１の溶媒で前記アルピニア種を抽出するステップ、及び
（ｂ）ステップ（ａ）の抽出物を乾燥させるステップを含む方法によって調製される、請求項２に記載の使用。

【請求項4】

前記ＳＦＣが、二酸化炭素、水、メタン、エタン、プロパン、エチレン、プロピレン、メタノール、エタノール又はアセトンのいずれかである、請求項３に記載の使用。

【請求項5】

前記ステップ（ａ）が、さらに、メタノール又はエタノールである前記ＳＦＣの共溶媒を含む、請求項４に記載の使用。

【請求項6】

前記第１の溶媒が水、酢酸エチル又はｎ−ヘキサンのいずれかであり、前記抽出が、前記アルピニア種を前記第１の溶媒と約１：１０から１：５０の重量比で混合することによって実施される、請求項３に記載の使用。

【請求項7】

前記方法が、さらに、
（ａ−１）前記ステップ（ｂ）に進む前に、水、Ｃ_１〜４アルコール、アセトン、酢酸エチル又はｎ−ヘキサンのいずれかである第２の溶媒を前記抽出物に添加するステップを含む、請求項６に記載の使用。

【請求項8】

前記方法が、さらに、
（ａ−２）前記ステップ（ａ−１）の抽出物を前記ステップ（ｂ）の前にカラムクロマトグラフィーに供するステップを含む、請求項７に記載の使用。

【請求項9】

前記カラムクロマトグラフィーが、カラムを水、３０％（ｖ／ｖ）エタノール及び９５％（ｖ／ｖ）エタノールで順次溶出させ、溶出物を乾燥させて前記抽出物を生成することによって実施される、請求項８に記載の使用。

【請求項10】

前記方法が、さらに、
（ｃ）ステップ（ｂ）の乾燥生成物を水、Ｃ_１〜４アルコール、アセトン、酢酸エチル又はｎ−ヘキサンのいずれかである第２の溶媒に溶解させるステップ、及び
（ｄ）ステップ（ｃ）の生成物を濃縮又は乾燥させるステップ
を含む、請求項３に記載の使用。

【請求項11】

前記第１の溶媒が水であり、前記第２の溶媒が９５％（ｖ％）エタノールである、請求項１０に記載の使用。

【請求項12】

前記方法が、さらに、
（ｆ）カラムをｎ−ヘキサン、酢酸エチル及び７０〜８０％（ｖ／ｖ）エタノールで溶出させることによってステップ（ｄ）の生成物をカラムクロマトグラフィーに供するステップを含む、請求項１１に記載の使用。

【請求項13】

ステップ（ｆ）の生成物がトイクレノンを含む、請求項１２に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、過敏性腸症候群（ＩＢＳ：ｉｒｒｉｔａｂｌｅ ｂｏｗｅｌ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）の治療に関する。より詳細には、本開示発明は、ＩＢＳの治療における薬剤としての、アルピニア種（Ａｌｐｉｎｉａ ｓｐｐ．）から得られる抽出物の使用に関する。

【背景技術】

【0002】

過敏性腸症候群（ＩＢＳ）は、容易に測定される生理学的異常とあまり関連づけられていない一般的な機能性消化管障害である。ＩＢＳの症候は、腸管の運動反応性の量的差の結果、及び刺激又は自発性収縮に対する感受性の増大である。したがって、ＩＢＳは、けいれん性腸症候群（ｂｏｗｌ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、粘液性腸症候群又は神経性腸症候群とも呼ばれるが、ＩＢＳをけいれん性大腸炎や潰よう性大腸炎（例えば、クローン病）と混同してはならない。基本的な神経腸病学的（ｎｅｕｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ）機序、並びに脳−腸軸における努力（ｅｆｆｏｒｔｓ）及び伝達物質の役割の理解の進歩にもかかわらず、ＩＢＳの信頼できる生物学的マーカーはまだ特定されていない。

【0003】

産業界向けのガイダンス（非特許文献１）によれば、２つの主要なＩＢＳの徴候及び症候は、異常排便及び腹痛である。したがって、化合物又は組成物が両方のＩＢＳ症候、すなわち、異常排便と腹痛及び／又は腹部不快感を改善又は軽減する能力を示したときにのみ、かかる化合物又は組成物は、潜在的ＩＢＳ医薬品とみなすことができる。

【0004】

治療上、ＩＢＳの治療に一般に使用される医薬品としては、５−ヒドロキシトリプタミン３（５−ＨＴ_３：５−ｈｙｄｒｏｘｙｔｒｙｐｔａｍｉｎｅ ３）受容体拮抗物質（例えば、オンダンセトロン、アロセトロン、シランセトロン及び／又はグラニセトロン）、５−ヒドロキシトリプタミン４（５−ＨＴ_４：５−ｈｙｄｒｏｘｙｔｒｙｐｔａｍｉｎｅ ４）受容体作動物質（例えば、テガセロド）、鎮けい剤、筋弛緩薬及び三環系抗うつ薬が挙げられる。そのうち、アロセトロンは、約５０％のＩＢＳ患者において臨床症状を改善することが報告されたが、３０〜３５％のＩＢＳ患者に便秘、虚血大腸炎（ｉｓｃｈｅｍｉａ ｃｏｌｉｔｉｓ）などの副作用を招いたとも言われている。５−ＨＴ_４受容体作動物質（すなわち、テガセロド）に関しては、ＩＢＳに対して一応の治療効果を示したが、ＩＢＳ患者が循環器疾患を発症するリスクがかなり増加し、その後、ＦＤＡ（Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ：米国食品医薬品局）の指示により２００７年に市場から撤退した。

【0005】

上記に鑑みて、ＩＢＳを治療する新しい方法及び／又は薬剤を特定することに引き続き関心が寄せられている。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0006】

【非特許文献1】米国食品医薬品局（ＦＤＡ）、「過敏性腸症候群−治療薬物の臨床評価（Ｉｒｒｉｔａｂｌｅ Ｂｏｗｅｌ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ−Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ ｆｏｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0007】

以下は、基本的理解を読者に提供するための本開示の簡単な概要である。この概要は、本開示の広範な概観ではなく、本発明の重要／重大な要素を特定するものでもなく、本発明の範囲を叙述するものでもない。その唯一の目的は、本明細書に開示した幾つかの概念を後述のより詳細な説明の前置きとして簡単な形で示すことである。

【0008】

本開示は、少なくとも部分的には、抽出物の形のアルピニア種植物が、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）と診断された又は疑いのある対象の治療において有効な薬剤として作用し得るという発見に基づく。したがって、本発明の一態様は、対象におけるＩＢＳを治療する医薬品を製造するためのアルピニア種の抽出物（以下、アルピニア種抽出物）に関する。この医薬品は、ＩＢＳに付随する異常排便及び腹痛の症候を改善するのに有効である。

【0009】

本発明の実施形態によれば、アルピニア種は、アルピニアオキシフィラ（Ａｌｐｉｎｉａ ｏｘｙｐｈｙｌｌａ）、アルピニアゼルムベット（Ａｌｐｉｎｉａ ｚｅｒｕｍｂｅｔ）、アルピニアハイナネンシス（Ａｌｐｉｎｉａ ｈａｉｎａｎｅｎｓｉｓ）又はアルピニアガランガ（Ａｌｐｉｎｉａ ｇａｌａｎｇａ）のいずれかとすることができる。アルピニア種抽出物は、アルピニア種の植物の一成分、具体的には、アルピニア種の新鮮な果実又は乾燥果実から調製される。

【0010】

本発明の実施形態によれば、アルピニア種抽出物は、
（ａ）超臨界流体（ＳＦＣ：ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｌｕｉｄ）、水、Ｃ_１〜４アルコール、アセトン、酢酸エチル及びｎ−ヘキサンからなる群から選択される第１の溶媒でアルピニア種を抽出するステップ、及び
（ｂ）ステップ（ａ）の抽出物を乾燥させるステップ
を含む方法によって調製される。

【0011】

本開示の一部の実施形態によれば、第１の溶媒は、二酸化炭素、水、メタン、エタン、プロパン、エチレン、プロピレン、メタノール、エタノール及びアセトンからなる群から選択されるＳＦＣである。一例においては、ＳＦＣは液体二酸化炭素である。本開示の別の実施形態によれば、方法は、さらに、ＳＦＣの共溶媒を含むことができる。共溶媒はメタノール又はエタノールとすることができる。

【0012】

本開示の任意の実施形態によれば、方法は、さらに、（ａ−１）ステップ（ｂ）に進む前に、水、Ｃ_１〜４アルコール、アセトン、酢酸エチル又はｎ−ヘキサンのいずれかである第２の溶媒を抽出物に添加するステップを含むことができる。一例においては、第１の溶媒は水であり、第２の溶媒は９５％（ｖ％）エタノールである。

【0013】

一部の実施形態においては、方法は、さらに、（ａ−２）ステップ（ｂ）に進む前にステップ（ａ−１）の抽出物をカラムクロマトグラフィーに供するステップを含むことができる。

【0014】

別の実施形態においては、方法は、さらに、（ｃ）ステップ（ｂ）の乾燥生成物を水、Ｃ_１〜４アルコール、アセトン、酢酸エチル又はｎ−ヘキサンのいずれかである第２の溶媒に溶解させるステップ、及び（ｄ）ステップ（ｃ）の生成物を濃縮又は乾燥させるステップを含むことができる。

【0015】

第１の溶媒が５０％（ｖ％）エタノールであり、第２の溶媒が９５％（ｖ％）エタノールである例においては、方法は、さらに、（ｅ）ステップ（ｄ）の前にカラムを２０％（ｖ％）エタノール、９５％（ｖ％）エタノール及びアセトンで順次溶出させることによってステップ（ｃ）の溶液をカラムクロマトグラフィーに供するステップを含む。

【0016】

第１の溶媒が水であり、第２の溶媒が９５％（ｖ％）エタノールである例においては、方法は、さらに、（ｆ）ステップ（ｄ）の前にカラムをｎ−ヘキサン、酢酸エチル及び７０〜８０％（ｖ％）エタノールで順次溶出させることによってステップ（ｃ）の溶液をカラムクロマトグラフィーに供するステップを含む。

【0017】

本開示の実施形態によれば、ステップ（ｂ）及び（ｄ）のそれぞれの生成物、並びにカラムクロマトグラフィーから収集される溶出物を濃縮又は乾燥して、ＩＢＳを治療するための医薬品として使用することができる。

【0018】

本発明の別の一態様は、ＩＢＳに付随する異常排便及び腹痛の症候を改善するために、有効量の、特にアルピニア種の水抽出物からの、本発明のアルピニア種抽出物を対象に投与することによって、かかる治療を必要とする対象におけるＩＢＳを治療する方法に関する。

【0019】

本開示の実施形態によれば、アルピニアオキシフィラの抽出物は、トイクレノン又はイザルピニンと、オキシフィレノジオールＡ、６−α−ヒドロキシ−７−エピ−α−シペロン、７−エピ−トイクレノン及びテクトクリシンからなる群から選択される少なくとも１種類の活性化合物とを含む。

【0020】

アルピニア種抽出物、特にアルピニアオキシフィラ抽出物から単離された化合物のうち６種類は、ＩＢＳの典型的な症候、すなわち、便通の変化に付随する腹痛を改善する能力を有することが確認され、したがって、ＩＢＳを治療する医薬品の調製のための活性薬剤として使用される潜在的リード化合物である。本開示の特定の実施形態によれば、オキシフィレノジオールＡ、６−α−ヒドロキシ−７−エピ−α−シペロン、７−エピ−トイクレノン、トイクレノン及びテクトクリシンは、それぞれ抗異常排便活性を有するが、トイクレノン及びイザルピニンは、抗腹痛活性（又は抗内臓過敏）を有することが立証された。したがって、トイクレノン又はイザルピニンと、オキシフィレノジオールＡ、６−α−ヒドロキシ−７−エピ−α−シペロン、７−エピ−トイクレノン及びテクトクリシンからなる群から選択される少なくとも１種類の化合物との組合せは、ＩＢＳの症候を改善する能力のある抽出物を生じることになるであろう。

【0021】

本開示の付随的な特徴及び効果の多くは、以下の詳細な説明を参照してより理解されるであろう。

【0022】

本発明のこれら及び他の特徴、態様及び効果は、以下の説明、添付の特許請求の範囲、及び添付図面を参照してより理解されるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0023】

【図1A】本発明の一実施形態による下痢スコアで表される実施例１．１．２の精製水抽出物の用量依存的抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図1B】本発明の一実施形態による３０分で排せつされた便の数で表される実施例１．１．２の精製水抽出物の用量依存的抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図1C】本発明の一実施形態による下痢スコアで表される実施例１．１．３の精製水抽出物の抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図1D】本発明の一実施形態による３０分で排せつされた便の数で表される実施例１．１．３の精製水抽出物の抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図1E】本発明の一実施形態による下痢スコアで表される実施例１．１．１．１の水抽出物ペースト及び実施例１．２．１．１のエタノール抽出物ペーストのそれぞれの抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図1F】本発明の一実施形態による３０分で排せつされた便の数で表される実施例１．１．１．１の水抽出物ペースト及び実施例１．２．１．１のエタノール抽出物ペーストのそれぞれの抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図2A】本発明の一実施形態による下痢スコアで表される実施例１．１．１．１の水抽出物ペーストの用量依存的抗異常排便効果を示す棒グラフである。Ｎ＝１０マウス／群であり、＊はｐ＜０．０５を示す。

【図2B】本発明の一実施形態による３０分で排せつされた便の数で表される実施例１．１．１．１の水抽出物ペーストの用量依存的抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図2C】本発明の一実施形態による下痢スコアで表される実施例１．２．１．１のエタノール抽出物ペーストの用量依存的抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図2D】本発明の一実施形態による３０分で排せつされた便の数で表される実施例１．２．１．１のエタノール抽出物ペーストの用量依存的抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図2E】本発明の一実施形態による下痢スコアで表される実施例１．１．１．１の水抽出物ペースト及び実施例１．２．１．１のエタノール抽出物ペーストのそれぞれの抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図2F】本発明の一実施形態による３０分で排せつされた便の数で表される実施例１．１．１．１の水抽出物ペースト及び実施例１．２．１．１のエタノール抽出物ペーストのそれぞれの抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図2G】本発明の一実施形態による下痢スコアで表される実施例１．１．１．１．１の精製水抽出物ペーストのそれぞれの抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図2H】本発明の一実施形態による３０分で排せつされた便の数で表される実施例１．１．１．１．１の精製水抽出物ペーストのそれぞれの抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図2I】本発明の一実施形態による下痢スコアで表される実施例１．２．１．１．２の精製エタノール抽出物ペーストのそれぞれの抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図2J】本発明の一実施形態による３０分で排せつされた便の数で表される実施例１．２．１．１．２の精製エタノール抽出物ペーストのそれぞれの抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図2K】本発明の一実施形態による下痢スコアで表される実施例１．３．１のアセトン抽出物及び実施例１．４．１の酢酸エチル抽出物のそれぞれの抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図2L】本発明の一実施形態による３０分で排せつされた便の数で表される実施例１．３．１のアセトン抽出物及び実施例１．４．１の酢酸エチル抽出物のそれぞれの抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図3A】本発明の一実施形態による実施例１．１．２の水抽出物粉体の抗内臓過敏効果を示す折れ線グラフである。＊は、ＰＤＣ−１８５０と５−ＨＴＰのラットの有意差（ｐ＜０．０５）を示し、＃はベースラインと５−ＨＴＰのラットの有意差（ｐ＜０．０５）を示す。

【図3B】本発明の一実施形態による実施例１．１．３の水抽出物粉体の抗内臓過敏効果を示す折れ線グラフである。＊は、ＰＤＣ−１９１８と５−ＨＴＰのラットの有意差（ｐ＜０．０５）を示し、＃はベースラインと５−ＨＴＰのラットの有意差（ｐ＜０．０５）を示す。

【図3C】本発明の一実施形態によるグラニセトロンの抗内臓過敏効果を示す折れ線グラフである。＊は、グラニセトロンと５−ＨＴＰのラットの有意差（ｐ＜０．０５）を示し、＃はベースラインと５−ＨＴＰのラットの有意差（ｐ＜０．０５）を示す。

【図4A】本発明の一実施形態による３０ｍｇ／ｋｇの用量における実施例１．１．１．１の水抽出物ペーストの抗内臓過敏効果を示す折れ線グラフである。＊はｐ＜０．０５を示し、＃はベースラインと５−ＨＴＰのラットの有意差（ｐ＜０．０５）を示す。

【図4B】本発明の一実施形態による１００ｍｇ／ｋｇの用量における実施例１．１．１．１の水抽出物ペーストの抗内臓過敏効果を示す折れ線グラフである。＊はｐ＜０．０５を示し、＃はベースラインと５−ＨＴＰのラットの有意差（ｐ＜０．０５）を示す。

【図4C】本発明の一実施形態による２００ｍｇ／ｋｇの用量における実施例１．１．１．１．１の精製水抽出物ペーストの抗内臓過敏効果を示す折れ線グラフである。

【図5A】本発明の一実施形態による１００ｍｇ／ｋｇの用量における実施例１．２．１．１のエタノール抽出物ペーストの抗内臓過敏効果を示す折れ線グラフである。＊はｐ＜０．０５を示し、＃はベースラインと５−ＨＴＰのラットの有意差（ｐ＜０．０５）を示す。

【図5B】本発明の一実施形態による３００ｍｇ／ｋｇの用量における実施例１．２．１．１のエタノール抽出物ペーストの抗内臓過敏効果を示す折れ線グラフである。＊はｐ＜０．０５を示し、＃はベースラインと５−ＨＴＰのラットの有意差（ｐ＜０．０５）を示す。

【図5C】本発明の一実施形態による１０μｇ／ｋｇの用量におけるグラニセトロンの抗内臓過敏効果を示す折れ線グラフである。＊はｐ＜０．０５を示し、＃はベースラインと５−ＨＴＰのラットの有意差（ｐ＜０．０５）を示す。

【図5D】本発明の一実施形態による１００ｍｇ／ｋｇの用量における実施例１．２．１．１．２の精製エタノール抽出物ペーストの抗内臓過敏効果を示す折れ線グラフである。

【図6A】本発明の一実施形態による実施例１．３．１のアセトン抽出物の抗内臓過敏効果を示す折れ線グラフである。Ｎ＝３ラット／群であり、１匹の特定のラットの結果を示す。

【図6B】本発明の一実施形態による実施例１．４．１の酢酸エチル抽出物の抗内臓過敏効果を示す折れ線グラフである。Ｎ＝３ラット／群であり、１匹の特定のラットの結果を示す。

【図7A】本発明の一実施形態による下痢スコアで表される実施例２．１の水抽出物ペースト及び実施例２．２のエタノール抽出物ペーストのそれぞれの抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図7B】本発明の一実施形態による３０分で排せつされた便の数で表される実施例２．１の水抽出物ペースト及び実施例２．２のエタノール抽出物ペーストのそれぞれの抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図8A】本発明の一実施形態による実施例２．１の水抽出物ペーストの抗内臓過敏効果を示す折れ線グラフである。

【図8B】本発明の一実施形態による実施例２．２のエタノール抽出物ペーストの抗内臓過敏効果を示す折れ線グラフである。

【図9A】本発明の一実施形態による下痢スコアで表される実施例３．１．１及び３．１．２の水抽出物のそれぞれの抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図9B】本発明の一実施形態による３０分で排せつされた便の数で表される実施例３．１．１及び３．１．２の水抽出物のそれぞれの抗異常排便効果を示す棒グラフである。Ｎ＝１０マウス／群であり、＊はｐ＜０．０５を示す。

【図9C】本発明の一実施形態による実施例３．１．２のエタノール抽出物ペースト（すなわち、ＰＤＣ−１８８５）の抗内臓過敏効果を示す折れ線グラフである。Ｎ＝６ラット／群であり、＊はｐ＜０．０５を示す。＃はベースラインと５−ＨＴＰのラットの有意差（ｐ＜０．０５）を示す。

【図10A】本発明の一実施形態による下痢スコアで表される実施例３．１．３の水抽出物ペースト及び実施例３．２．１．１のエタノール抽出物のそれぞれの抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図10B】本発明の一実施形態による３０分で排せつされた便の数で表される実施例３．１．３の水抽出物ペースト及び実施例３．２．１．１のエタノール抽出物のそれぞれの抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図10C】本発明の一実施形態による実施例３．１．３の水抽出物ペースト（すなわち、ＰＤＣ−２４６９）の抗内臓過敏効果を示す折れ線グラフである。

【図10D】本発明の一実施形態による実施例３．２．１．１のエタノール抽出物ペースト（すなわち、ＰＤＣ−２４７０）の抗内臓過敏効果を示す折れ線グラフである。

【図11A】本発明の一実施形態による下痢スコアで表される実施例４．１の水抽出物ペースト及び実施例４．２のエタノール抽出物のそれぞれの抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図11B】本発明の一実施形態による３０分で排せつされた便の数で表される実施例４．１の水抽出物ペースト及び実施例４．２のエタノール抽出物のそれぞれの抗異常排便効果を示す棒グラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。

【図11C】本発明の一実施形態による実施例４．１の水抽出物ペースト（すなわち、ＰＤＣ−２４７３）の抗内臓過敏効果を示す折れ線グラフである。

【図12A】本発明の一実施形態による下痢スコアで表される実施例５．１、５．２、５．３及び５．４の化合物のそれぞれの抗異常排便効果を示す棒グラフである。Ｎ＝５マウス／群であり、＊はｐ＜０．０５を示す。

【図12B】本発明の一実施形態による３０分で排せつされた便の数で表される実施例５．１、５．２、５．３及び５．４の化合物のそれぞれの抗異常排便効果を示す棒グラフである。Ｎ＝５マウス／群であり、＊はｐ＜０．０５を示す。

【図12C】本発明の一実施形態による下痢スコアで表される実施例５．５の化合物の抗異常排便効果を示す棒グラフである。Ｎ＝５マウス／群であり、＊はｐ＜０．０５を示す。

【図12D】本発明の一実施形態による３０分で排せつされた便の数で表される実施例５．５の化合物の抗異常排便効果を示す棒グラフである。Ｎ＝５マウス／群であり、ｐ＜０．０５を示す。

【発明を実施するための形態】

【0024】

添付図面に関連した下記詳細な説明は、本実施例の説明として意図されたものであって、本実施例が構築又は利用され得る唯一の形態を示すものではない。この説明では、実施例の機能、並びに実施例を構築及び操作するステップの配列について述べる。しかし、同じ又は等価な機能及び配列を、異なる実施例によって達成することもできる。

【0025】

別段の記載がない限り、本開示で使用する科学及び技術用語は、当業者によって一般に理解され、使用されている意味を有するものとする。状況によって必要とされない限り、単数形の用語はその複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むことが理解されるであろう。具体的には、本明細書及び特許請求の範囲で使用される単数形「１つの（ａ及びａｎ）」は、特に明示しない限り、その複数形を含む。さらに、本明細書及び特許請求の範囲で使用される「少なくとも１つの（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ）」及び「１つ以上の（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）」という用語は、同じ意味であり、１、２、３又はそれ以上を含む。

【0026】

本発明の広範な範囲を記述した数値範囲及びパラメータは近似ではあるが、具体例で示した数値はできるだけ正確に報告している。しかし、どの数値も、それぞれの試験測定に見られる標準偏差に必然的に起因するある誤差を本質的に含む。さらに、本明細書では「約」という用語は、一般に、所与の値又は範囲の１０％、５％、１％又は０．５％以内を意味する。あるいは、「約」という用語は、当業者が考えたときに、平均値の許容標準誤差以内を意味する。作用／実施例以外においては、又は特に明示しない限り、本明細書に開示した材料の量、持続時間、温度、操作条件、量比などの数値範囲、量、値及び割合はすべて、すべての場合において「約」という用語で修飾されていると理解すべきである。したがって、本開示及び添付の特許請求の範囲に記載された数値パラメータは、それと反対のことが示されない限り、所望のとおりに変わり得る近似値である。いずれにせよ、各数値パラメータは、報告された有効数字の数に照らして、通常の丸め技術を適用することによって、少なくとも解釈されるべきである。

【0027】

本明細書では「治療」という用語は、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）に付随する症候、二次障害又は症状を部分的に若しくは完全に防止する、改善する、緩和する、及び／又は管理することを包含する。本明細書では「治療」という用語は、ＩＢＳの１つ以上の症候、二次障害又は特徴を部分的に若しくは完全に軽減する、改善する、緩和する、その発症を遅延させる、その進行を阻止する、その重症度を低下させる、及び／又はその発生率を低下させる目的で、本開示の方法によって調製されたアルピニア種抽出物、又はそれから単離された化合物を、ＩＢＳに付随する症候、ＩＢＳに続発する障害、又はＩＢＳになりやすい体質の対象に適用又は投与することを指す。ＩＢＳに付随する症候、二次障害及び／又は症状としては、とう痛、腹部不快感、異常排便回数、便の異常な硬さ、下痢、及び便秘が挙げられるが、それだけに限定されない。治療は、ＩＢＳに付随する症候、二次障害及び／又は症状を生じるリスクを低下させる目的で、かかる症候、障害及び／又は症状の初期徴候のみを示す対象に施すことができる。治療は、一般に、１つ以上の症候又は臨床マーカーが減少した場合に、本明細書に定義されたように「有効」である。あるいは、治療は、症候、障害又は症状の進行が減少又は停止した場合に「有効」である。

【0028】

本明細書では「有効量」という用語は、上で定義した所望の「有効な治療」を得るのに十分な成分又は医薬品の量を指す。具体的治療有効量は、治療する特定の症状、患者の身体的条件（例えば、患者の体重、年齢又は性別）、治療するほ乳動物又は動物のタイプ、治療期間、（もしあれば）併用療法の性質、及び使用する具体的製剤などの因子に応じて変わる。有効量は、化合物又は組成物の任意の毒性又は有害作用よりも治療上有益な効果がまさる量でもある。有効量は、例えば、医薬品の全質量（例えば、グラム、ミリグラム又はマイクログラム）、又は医薬品の質量と体重の比、例えばミリグラム／キログラム（ｍｇ／ｋｇ）で表すことができる。当業者は、動物モデルから決定される用量に基づく（アルピニア種抽出物、それから単離される化合物などの）医薬品のヒト等価用量（ＨＥＤ：ｈｕｍａｎ ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ ｄｏｓｅ）を計算することができる。例えば、ヒト対象に使用される最大安全投与量を推定する際に、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって出版された「成人の健康なボランティアにおける治療法のための初期臨床試験における最大安全開始用量の推定（Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍａｘｉｍｕｍ Ｓａｆｅ Ｓｔａｒｔｉｎｇ Ｄｏｓｅ ｉｎ Ｉｎｉｔｉａｌ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌｓ ｆｏｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｉｎ Ａｄｕｌｔ Ｈｅａｌｔｈｙ Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ）」と題する産業界向けのガイダンスに従うことができる。

【0029】

「対象」という用語は、本開示の方法によってアルピニア種抽出物及び／又はそれから単離される化合物を用いて治療可能であるヒト種を含めた動物を指す。「対象」という用語は、一方の性別を特に指定しない限り、雄性と雌性の両方を指し、任意の年齢とすることができ、例えば、子供でも成体でもよいものとする。

【0030】

本明細書では「新鮮」という用語は、収穫後にまだ加工されていない、又は最小限の加工しかされていない（例えば、切断若しくはスライス及び／又は包装され）、かつ実質的な乾燥によって保存されていない、植物成分を指す。さらに、「新鮮」という用語は、必ずしも厳格な時間依存性を必要としない。そうではなく、「新鮮」という用語は、乾燥植物成分と非乾燥植物成分を単に区別するのに使用される。

【0031】

本明細書では「乾燥」という用語は、植物成分を脱水したときに、一般に認められるある範囲の含水量を指す。乾燥は、天日乾燥、オーブン乾燥及び凍結乾燥を含めて、当該技術分野で公知の任意の手段によって行うことができる。乾燥植物成分の含水量は、１から２０重量％の範囲とすることができるが、典型的な範囲は２から５％である。

【0032】

本明細書では「アルピニア種の抽出物」又は「アルピニア種抽出物」という用語は、アルピニア種植物、特にアルピニアオキシフィラ、アルピニアゼルムベット、アルピニアハイナネンシス及びアルピニアガランガからなる群から選択されるアルピニア種植物由来の植物成分を本明細書に記載の手順に従って適切な溶媒と接触させることによって調製される組成物を指す。「抽出物」という用語は、粗製抽出物及び加工又は精製抽出物を包含することを理解されたい。具体的には、粗製抽出物は、選択した植物成分を少なくとも１種類の抽出剤（すなわち、抽出溶媒）と接触させる単純な抽出によって調製される。幾つかの任意の例においては、こうして得られた粗製抽出物を１つ以上の分離及び／又は精製ステップに供し（ｓｕｂｊｅｃｔ ｔｏ）、純化（ｐｕｒｉｆｉｅｄ）、加工又は精製（ｒｅｆｉｎｅｄ）抽出物を得る。植物抽出物は、溶液、濃縮物、留出物などの液体とすることができ、又はペースト、粒状、粉体などの溶媒を除去した固体とすることができる。

【0033】

本発明は、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）に罹患した対象を治療する方法、及び該方法を実施するのに使用される薬剤又は栄養補助食品を提供する。

【0034】

本発明の一態様は、したがって、ＩＢＳの治療、特にＩＢＳに付随する症候の改善に有効な活性薬剤の発見に関する。「改善」又は「改善する」という用語は、理学的検査の結果に基づく、症候の寛解、鎮静又は軽減、患者の身体的な幸福の改善などの任意の客観的又は対象パラメータを含めて、障害又は症状の治療における成功の任意の徴候を指す。

【0035】

本発明の実施形態によれば、方法は、ＩＢＳと診断された対象又はＩＢＳの疑いのある対象に、有効量のアルピニア種の抽出物又はそれから精製された化合物を投与するステップを含む。対象は、病歴、理学的検査及び基本調査をＩＢＳ診断に取り入れたＲｏｍｅＩＩ又はＲｏｍｅＩＩＩプロセスによってＩＢＳの罹患を診断することができる。

【0036】

ある実施形態においては、アルピニア種抽出物を対象に経口投与する。しかし、本開示はそれに限定されない。

【0037】

本開示の実施形態によれば、ＩＢＳの治療用に適したアルピニア種抽出物は、実施例に記載したプロセスに従って調製される。本開示の実施例によれば、アルピニア種植物から収集される植物成分、特に果実を細かく刻み、適切な溶媒（単数又は複数）で抽出して、粗製抽出物（単数又は複数）を得る。本発明のある実施形態においては、アルピニアオキシフィラの新鮮な果実又は乾燥果実を使用して、本発明の抽出物を調製する。続いて、粗製抽出物を濃縮及び／又は乾燥（例えば、凍結乾燥）して、粗製抽出物粉体又はペーストを製造することができる。あるいは、それをカラムクロマトグラフィー、沈殿などの更なる精製に供し、精製抽出物又は純化化合物を製造することができる。

【0038】

アルピニア種の抽出に適した溶媒の例としては、二酸化炭素、水、メタン、エタン、プロパン、エチレン、プロピレン、メタノール、エタノール、アセトンなどの超臨界流体（ＳＦＣ）；水；メタノール、エタノール、プロパノール、ｎ−ブタノール、ｉｓｏ−ブタノール、ｔｅｒ−ブタノールなどのＣ_１〜４アルコール；アセトン；酢酸エチル及びｎ−ヘキサンが挙げられるが、それだけに限定されない。本発明のある実施形態によれば、アルピニア種の新鮮な果実又は乾燥果実を細かく刻み、水で抽出する。一方、幾つかの他の実施形態においては、それらを水と１０〜９５％（ｖ／ｖ）エタノールからなるアルコール溶液で抽出する。例えば、アルコール溶液は、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０及び９５％（ｖ／ｖ）エタノールのいずれかとすることができる。更なる実施形態においては、アルピニア種の新鮮な果実又は乾燥果実を細かく刻み、アセトンで抽出する。更なる実施形態においては、酢酸エチルを抽出溶媒として使用する。本開示の実施形態によれば、アルピニア種の細かく刻んだ果実を抽出溶媒と１：５、１：７、１：９、１：１０、１：１２、１：１５、１：１７、１：２０、１：２２、１：２５、１：２７、１：３０、１：３２、１：３５、１：３７、１：４０、１：４２、１：４５、１：４７、１：５０などの約１：５から約１：５０、好ましくは１：５、１：７、１：１０、１：１５、１：２０、１：２２、１：２５、１：２７、１：３０、１：３２、１：３５などの約１：１０から１：３５の重量比で混合する。別の実施形態においては、ＳＦＣを抽出剤として使用し、メタノール、エタノールなどの共溶媒の添加を必要とする場合もあれば、必要としない場合もある。

【0039】

任意の実施形態においては、ＩＢＳに付随する症候を改善する医薬品として、粗製抽出物をろ過し、濃縮し、及び／又は乾燥させ、そのまま使用する。

【0040】

任意の実施形態においては、粗製水抽出物などの粗製抽出物を、さらに、極性が逆の溶媒（例えば、２０〜９５％（ｖ％）エタノール）を添加し、それによって沈殿を生成させることによって処理する。次いで、上清及び／又は沈殿を濃縮し、及び／又は乾燥させることができ、それをＩＢＳを治療するための医薬品として使用することもできる。

【0041】

更に別の一実施形態においては、粗製水抽出物から得られる乾燥上清及び／又は沈殿をカラムクロマトグラフィーの使用による更なる精製に供することができる。次いで、カラムクロマトグラフィー溶出物を濃縮及び乾燥させて、ＩＢＳを治療する医薬品の調製用に適した精製抽出物粉体を製造する。カラムクロマトグラフィーに使用される溶離剤の非限定的例としては、水、１０％、１５％、２０％、２５％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％（ｖ／ｖ）エタノールを含めて、ただしそれだけに限定されない１０〜９５％（ｖ／ｖ）エタノール、及びアセトンが挙げられるが、それだけに限定されない。一実施例においては、カラムを水、３０％及び９５％エタノールで順次溶出させる。別の一実施例においては、カラムを２０％、５０％及び９５％エタノールで順次溶出させる。別の一実施例においては、カラムを２０％及び９５％エタノール並びにアセトンで順次溶出させる。更に別の一実施例においては、カラムを４０％、７０％及び９５％エタノール並びにアセトンで順次溶出させる。

【0042】

本発明の別の一態様は、アルピニアオキシフィラの粗製水抽出物ペーストなど、上述したように調製されたアルピニア種抽出物から単離された化合物に関する。

【0043】

本開示の実施形態によれば、本開示の実施例に記載の手順に従って、アルピニア種抽出物をシリカゲルクロマトグラフィー及び／又は高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ：ｈｉｇｈ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）などの一連のカラムクロマトグラフィーに供し、種々の画分を生成する。次いで、各画分を試験し、その中の活性化合物（単数又は複数）の構造をＭＳ、^１Ｈ−ＮＭＲ及び^１３Ｃ−ＮＭＲ分析を含めて、ただしそれだけに限定されないスペクトル分析によって確認する。次いで、各画分から同定された化合物を、ＩＢＳに付随する症候、すなわち異常排便及び腹痛を改善する効果があるかどうか試験する。これらの化合物は、ＩＢＳの治療に適切な医薬品を開発するための潜在的リード化合物である。

【0044】

具体的実施例においては、同定される化合物は以下のいずれかである。

【0045】

【化1】

【0046】

本開示は、したがって、ＩＢＳを治療するための薬剤組成物に関する。一部の実施形態においては、本開示のアルピニア種抽出物又は活性化合物を、適切な薬学的に許容される担体又は賦形剤と組み合わせることによって薬剤組成物に処方することができ、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏剤、溶液剤、坐剤、注射剤などの固体、半固体又は液体に処方することができる。したがって、活性化合物の投与は、経口、口腔、直腸、非経口（ｐａｒｅｎｔａｌ）、腹腔内投与などを含めて、種々の方法で実施することができる。医薬剤形においては、アルピニア種抽出物又は活性化合物を、単独で、又は別の公知の薬学的活性薬剤と組み合わせて投与して、ＩＢＳを治療することができる。当業者は、各経路における使用に適した種々の剤形に精通している。任意の所与の症例における最も適切な経路は、治療する疾患又は症状の性質又は重症度に依存することに留意しなければならない。

【0047】

一部の実施形態においては、この開示の薬剤組成物は、経口投与用固体剤形である。かかる固体剤形は、カプセル剤、サシェ、錠剤、丸剤、ロゼンジ、散剤又は顆粒剤とすることができる。かかる剤形においては、アルピニア種抽出物、上記化合物のいずれかなどの活性成分を少なくとも１種類の薬学的に許容される賦形剤と混合する。記述した固体剤形のいずれかは、場合によっては、腸溶コーティング、成分のいずれかの放出速度を変更するためのコーティングなどのコーティング及びシェルを含むことができる。かかるコーティングの例は、当該技術分野で周知である。一実施例においては、この開示の薬剤組成物は、急速放出錠剤などの錠剤である。さらに別の一実施例においては、この開示の薬剤組成物を徐放性剤形に処方する。別の一実施例においては、この開示の薬剤組成物は、軟及び硬ゼラチンカプセルに包まれた散剤である。

【0048】

一部の実施形態においては、本開示の薬剤組成物は、経口投与用液体剤形である。液剤は、さらに、所望のｐＨを維持する緩衝剤を含むことができる。液体投与製剤を軟ゼラチンカプセルに充填することもできる。例えば、液体としては、アルピニア種抽出物若しくは上述した化合物のいずれか、又はその薬学的に許容される誘導体、塩若しくは溶媒和化合物、又はその組合せを含む、溶液、懸濁液、乳濁液、マイクロエマルジョン、沈殿又は任意の所望の液体媒体が挙げられる。液体は、放出により薬物含有乳濁液又は分散相を形成するようにアルピニア種抽出物又は上述した活性化合物の溶解性を改善するように設計することができる。

【0049】

一部の実施形態においては、この開示の薬剤組成物は、皮下、ボーラス注射、筋肉内、腹腔内及び静脈内注射を含めて、ただしそれだけに限定されない注射による投与などの非経口投与に適切な製剤である。薬剤組成物は、油性又は水性媒体中の等張性懸濁液、溶液又は乳濁液として処方することができ、懸濁剤、安定剤、分散剤などの調合剤を含むことができる。あるいは、組成物は、使用前に、無菌の発熱物質を含まない水又は等張食塩水と一緒に、粉体、結晶又は凍結乾燥固体などの乾燥剤形で提供することができる。それらは、無菌アンプル又はバイアル中に存在することができる。

【0050】

以下の実施例は、本発明のある態様を解明し、当業者が本発明を実施するのを助けるように提供される。これらの実施例は、本発明の範囲を決して限定するものとみなすべきではない。更なる説明なしに、当業者は、本明細書の記述に基づき、本発明を最大限に利用することができると考えられる。本明細書に引用する刊行物すべてを参照によりその全体を本明細書に援用する。

【実施例】

【0051】

実施例１ アルピニアオキシフィラの抽出物の調製
１．１ 粗製水抽出物
（中国、ハイナン（Ｈａｉｎａｎ）から購入した）アルピニアオキシフィラの乾燥粉砕果実を煮沸し、逆浸透（ＲＯ：ｒｅｖｅｒｓｅ ｏｓｍｏｔｉｃ）水中でアルピニアオキシフィラと水の１：１０（ｗ／ｗ）の比で約１時間還流して、粗製抽出物を製造した。アルピニアオキシフィラの一部をろ別するように、粗製水抽出物を３５０メッシュ篩でふるい分けた。ろ液を保持し、アルピニアオキシフィラの一部を前述と同様に更に水抽出に供し、両方の抽出で収集されたろ液を混合して、粗製水抽出物を得た。

【0052】

１．１．１ 粗製水抽出物粉体（ＰＤＣ−２０１４）
実施例１．１の粗製水抽出物を凍結乾燥によって濃縮して、粗製水抽出物粉体（ＰＤＣ−２０１４）を得た。

【0053】

１．１．１．１ 水抽出物ペースト（ＰＤＣ−２３６３）
粗製水抽出物粉体（ＰＤＣ−２０１４）をさらに９５％（ｖ％）エタノールで液状に戻し、ろ過し（Ｎｏ：２ろ紙）、次いでろ液を濃縮乾固させて水抽出物ペースト（ＰＤＣ−２３６３）を得た。

【0054】

１．１．１．１．１ 精製水抽出物ペーストＡ（ＰＤＣ−２５２９）及びＢ（ＰＤＣ−２５３０）
水抽出物ペースト（ＰＤＣ−２３６３）を２０％（ｖ％）エタノールで液状に戻し、次いでＨＰ−２０ Ｄｉａｉｏｎカラムに充填して精製した。カラムを２０％（ｖｏｌ）エタノール、９５％（ｖｏｌ）エタノール及びアセトンで順次溶出させた。２０％エタノールからの溶出物を濃縮して精製ペーストＡ（ＰＤＣ−２５２９）を得た。一方、９５％エタノール及びアセトンからそれぞれ収集した溶出物を混合し、濃縮して、精製ペーストＢ（ＰＤＣ−２５３０）を得た。

【0055】

１．１．２ 精製水抽出物（ＰＤＣ−１８５０）
９５％（ｖｏｌ）エタノールを実施例１．１の粗製水抽出物に体積比１：１で添加し、次いで混合物を３５０メッシュ篩でふるい分けた。ろ液を遠心分離し、濃縮し、凍結乾燥させて、ペースト（ＰＤＣ−１８５０）を得た。

【0056】

１．１．３ 精製水抽出物（ＰＤＣ−１９１８）
９５％（ｖｏｌ）エタノールを実施例１．１の粗製水抽出物に体積比１：１で添加し、次いで混合物を３５０メッシュ篩でふるい分けた。ろ液を遠心分離し、その体積がその当初の体積の１／３になるまで濃縮した。

【0057】

水を上記濃縮水抽出物に体積比１：１で添加し、次いで混合物をＤｉａｉｏｎ ＨＰ−２０カラム（Ｄｉａｉｏｎ、三菱化学）に充填した。濃縮物と乾燥カラム充填材の重量比は約１：２０である。カラムを３ベッド体積のＲＯ水、１ベッド体積の３０％（ｖ／ｖ）エタノール、及び３ベッド体積の９５％（ｖｏｌ）エタノールで順次溶出させた。２つのアルコール溶出物をそれぞれ収集し、混合して１つにした。次いで、エタノールが実質的に除去されるまで混合溶出物を減圧濃縮し、次いで残留物を凍結乾燥させて、精製水抽出物ペースト（ＰＤＣ−１９１８）を得た。

【0058】

１．２ 粗製エタノール抽出物
（中国、ハイナンから購入した）アルピニアオキシフィラの乾燥粉砕果実を５０％（ｖ％）エタノールとアルピニアオキシフィラとエタノールの１：１０（ｗ／ｗ）の比で約１時間混合して、粗製エタノール抽出物を製造した。粗製エタノール抽出物を３５０メッシュ篩でふるい分け、アルピニアオキシフィラのろ別された果実を前述と同様に５０％（ｖ％）エタノールでもう一度抽出し、両方の抽出で収集された溶液を混合して粗製エタノール抽出物を得た。

【0059】

１．２．１ 粗製エタノール抽出物粉体（ＰＤＣ−１９４１）
実施例１．２の粗製エタノール抽出物を３５０メッシュ篩でふるい分け、溶媒が実質的に除去されるまでろ液を減圧濃縮し、次いで残留物を凍結乾燥して、粗製エタノール抽出物粉体（ＰＤＣ−１９４１）を得た。

【0060】

１．２．１．１ エタノール抽出物ペースト（ＰＤＣ−２３６４）
実施例１．２．１の粗製エタノール抽出物粉体を９５％エタノールで液状に戻し、Ｎｏ：２ろ紙でろ過し、次いでろ液を濃縮乾固させてエタノール抽出物ペースト（ＰＤＣ−２３６４）を得た。

【0061】

１．２．１．１．１ 精製エタノール抽出物ペーストＡ（ＰＤＣ−２３７１）、Ｂ（ＰＤＣ−２３７２）、Ｃ（ＰＤＣ−２３７３）及びＤ（ＰＤＣ−２３７４）
エタノール抽出物ペースト（ＰＤＣ−２３６４）を４０％（ｖ％）エタノールで液状に戻し、次いでＨＰ−２０ Ｄｉａｉｏｎカラムに充填して更に精製した。カラムを４０％（ｖｏｌ）、７０％（ｖｏｌ）及び９５％（ｖｏｌ）エタノール、続いてアセトンで順次溶出させた。４０％及び７０％エタノールからそれぞれ収集された溶出物を濃縮し、凍結乾燥して、ペーストＡ（ＰＤＣ−２３７１）及びＢ（ＰＤＣ−２３７２）を得た。一方、９５％エタノール及びアセトンからそれぞれ収集された溶出物を濃縮して、精製ペーストＣ（ＰＤＣ−２３７３）及びＤ（ＰＤＣ−２３７４）を得た。

【0062】

１．２．１．１．２ 精製エタノール抽出物ペーストＥ（ＰＤＣ−２５３１）及びＦ（ＰＤＣ−２５３２）
エタノール抽出物ペースト（ＰＤＣ−２３６４）を２０％（ｖ％）エタノールで液状に戻し、次いでＨＰ−２０ Ｄｉａｉｏｎカラムに充填して更に精製した。カラムを２０％（ｖｏｌ）及び９５％（ｖｏｌ）エタノールで順次溶出させた。溶出物をそれぞれ濃縮して、精製ペーストＥ（ＰＤＣ−２５３１）及びＦ（ＰＤＣ−２５３２）を得た。

【0063】

１．３ 粗製アセトン抽出物
エタノールをアセトンに変えた以外は実施例１．２に記載の類似手順に従ってアルピニアオキシフィラの粗製アセトン抽出物を調製した。

【0064】

１．３．１ 粗製アセトン抽出物ペースト（ＰＤＣ−２４７９）
実施例１．３の粗製アセトン抽出物を溶媒が実質的に除去されるまで減圧濃縮し、次いで残留物を凍結乾燥して、粗製アセトン抽出物ペーストを得た。

【0065】

１．４ 粗製酢酸エチル抽出物
エタノールを酢酸エチルに変えた以外は実施例１．２に記載の類似手順に従ってアルピニアオキシフィラの粗製酢酸エチル抽出物を調製した。

【0066】

１．４．１ 粗製酢酸エチル抽出物ペースト（ＰＤＣ−２４７８）
実施例１．４の粗製アセトン抽出物を溶媒が実質的に除去されるまで減圧濃縮し、次いで残留物を凍結乾燥して、粗製アセトン抽出物ペーストを得た。

【0067】

１．５ 超臨界流体（ＳＣＦ）抽出物
この特定の実施例においては、共溶媒（例えば、エタノール）を改変してもしなくてもアルピニアオキシフィラを超臨界温度及び圧力下で超臨界流体（例えば、二酸化炭素）で抽出した。

【0068】

１．５．１ ＳＣＦ抽出物Ａ
アルピニアオキシフィラの乾燥粉砕果実を圧力セルに入れ、次いで圧力及び温度をそれぞれ３００バール及び５０℃に設定した圧力セルの加熱域に二酸化炭素を液体として温度５℃未満でポンプ注入した。次いで、流体を第１及び第２の分離器に連続的に膨張させて、抽出材料をＣＯ_２から分離した。第１及び第２の分離器の圧力及び温度をそれぞれ６０及び４５バール並びに４５及び２０℃に設定した。抽出は終了するまで約１５０分間かかり、それによってＳＣＦ抽出物Ａを生成した。

【0069】

１．５．２ ＳＣＦ抽出物Ｂ
共溶媒エタノールも抽出手順に含まれた以外は実施例１．５．１に記載の類似ステップに従ってＳＣＦ抽出物Ｂを調製した。ＳＣＦ抽出物Ｂを製造した。

【0070】

実施例２ アルピニアハイナネンシスの抽出物の調製
２．１ 水抽出物ペースト（ＰＤＣ−２４７１）
アルピニアハイナネンシスの水抽出物ペーストを、実施例１．１、１．１．１及び１．１．１．１に順次記載の類似手順に従って調製した。

【0071】

２．２ エタノール抽出物ペースト（ＰＤＣ−２４７２）
アルピニアハイナネンシスの粗製エタノール抽出物を、実施例１．２、１．２．１、１．２．１．１に順次記載の類似手順に従って調製した。

【0072】

実施例３ アルピニアガランガの抽出物の調製
３．１ 粗製水抽出物
アルピニアガランガの粗製水抽出物を実施例１．１に記載の類似手順に従って調製した。

【0073】

３．１．１ 粗製水抽出物粉体（ＰＤＣ−２１４７）
実施例３．１の粗製水抽出物を水抽出物粉体が得られるまで減圧濃縮した。

【0074】

３．１．２ 水抽出物ペースト（ＰＤＣ−１８８５）
９５％（ｖ％）エタノールを実施例３．１の粗製水抽出物に体積比１：１で添加すると、沈殿が形成された。次いで、沈殿を除去するように、混合物を１０，０００ｒｐｍの速度で５分間遠心分離した。上部の透明溶液を収集し、溶媒が実質的に除去されるまで更に減圧濃縮した。さらに、残留物を凍結乾燥に供して、水抽出物ペーストを得た。

【0075】

３．１．３ 水抽出物ペースト（ＰＤＣ−２４６９）
実施例３．１．１の粗製水抽出物粉体を９５％（ｖ％）エタノールで液状に戻し（エタノール３０ｍＬ中粉体１ｇ）、混合物を少なくとも１時間超音波処理し、次いでＮｏ：２ろ紙によってろ過し、次いでろ液を減圧濃縮して、水抽出物ペーストを得た。

【0076】

３．２ 粗製エタノール抽出物
アルピニアガランガの粗製エタノール抽出物を実施例１．２に記載の類似手順に従って調製した。

【0077】

３．２．１ 粗製エタノール抽出物粉体
実施例３．２の粗製エタノール抽出物を溶媒が実質的に除去されるまで減圧濃縮し、次いで残留物を凍結乾燥して、粗製エタノール抽出物粉体を得た。

【0078】

３．２．１．１ エタノール抽出物ペースト（ＰＤＣ−２４７０）
実施例３．２．１の粗製エタノール抽出物粉体を９５％エタノールで液状に戻し、Ｎｏ：２ろ紙でろ過し、次いでろ液を濃縮乾固させてエタノール抽出物ペーストを得た。

【0079】

実施例４ アルピニアゼルムベットの抽出物の調製
４．１ 水抽出物ペースト（ＰＤＣ−２４７３）
アルピニアゼルムベットの粗製水抽出物ペーストを、実施例１．１、１．１．１及び１．１．１．１に順次記載の類似手順に従って調製した。

【0080】

４．２ エタノール抽出物ペースト（ＰＤＣ−２４７４）
アルピニアゼルムベットのエタノール抽出物ペーストを、実施例１．２、１．２．１及び１．２．１．１に順次記載の類似手順に従って調製した。

【0081】

実施例５ 実施例１のアルピニアオキシフィラ由来の活性化合物の精製及び同定
純粋化合物をクロマトグラフィーによって単離し、精製し、続いてそのそれぞれの構造をＭＳ及びＮＭＲによって確認し、同定した。

【0082】

５．１ ６−α−ヒドロキシ−７−エピ−α−シペロン（化合物ＰＤＣ−２４６０）の同定

【0083】

【化2】

【0084】

実施例１．１．１．１の水抽出物ペーストを、ｎ−ヘキサン及び酢酸エチルでカラムを溶出させることによってシリカゲルろ過（Ｍｅｒｃｋ、台湾）に供し、７画分（ＦＲ−１、ＦＲ−２、ＦＲ−３、ＦＲ−４、ＦＲ−５、ＦＲ−６及びＦＲ−７）を得た。続いて、全７画分のうち第２の画分（すなわち、ＦＲ−２）をＲＰ−１８ゲルカラム（Ｍｅｒｃｋ、台湾）に充填し、８０％ＭｅＯＨで溶出させ、更なる６画分を得た（ＦＲ−２１、ＦＲ−２２、ＦＲ−２３、ＦＲ−２４、ＦＲ−２５及びＦＲ−２６）。ＦＲ−２５とＦＲ−１の両画分を混合し、混合画分を別のＲＰ−１８ゲルカラムに充填し、８０％ＭｅＯＨで溶出させて、更なる３画分を得た（ＦＲ−２５（１）１、ＦＲ−２５（１）２及びＦＲ−２５（１）３）。ＦＲ−２５（１）２画分を別のシリカゲル精製に供し、別の５画分を得た（ＦＲ−２５（１）２１、ＦＲ−２５（１）２２、ＦＲ−２５（１）２３、ＦＲ−２５（１）２４及びＦＲ−２５（１）２５）。化合物ＰＤＣ−２４６０を第３の画分ＦＲ−２５（１）２３から分取ＨＰＬＣ分析によって精製した。

【0085】

ＭＳ：Ｍｗ．２３４（Ｂｒｕｋｅｒ ＭＳ）［Ｍ−Ｈ］⁻（２３３）。（Ｃ_１５Ｈ_２２Ｏ_２）

【0086】

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、６００ＭＨｚ）δ１．６０（１Ｈ、ｍ、Ｈ−１）、１．８３（１Ｈ、ｍ、Ｈ−１）、２．４２（１Ｈ、ｍ、Ｈ−２）、２．６２（１Ｈ、ｍ、Ｈ−２）、４．９０（１Ｈ、ｓ、Ｈ−６）、２．５３（１Ｈ、ｂｒ、ｓ、Ｈ−７）、１．５２（１Ｈ、ｍ、Ｈ−８）、２．１９（１Ｈ、ｍ、Ｈ−８）、１．３５（１Ｈ、ｍ、Ｈ−９）、１．４７（１Ｈ、ｍ、Ｈ−９）、４．３８（１Ｈ、ｓ、Ｈ−１２）、４．８１（１Ｈ、ｓ、Ｈ−１２）、１．７３（３Ｈ、ｓ、Ｈ−１３）、１．３８（３Ｈ、ｓ、Ｈ−１４）及び１．８８（３Ｈ、ｓ、Ｈ−１５）。

【0087】

^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、１５０ＭＨｚ）δ３８．８４（Ｃ−１）、３４．１７（Ｃ−２）、１９９．９０（Ｃ−３）、１３２．１１（Ｃ−４）、１５９．９４（Ｃ−５）、６９．６０（Ｃ−６）、４７．６４（Ｃ−７）、１８．５７（Ｃ−８）、３５．０２（Ｃ−９）、３５．０３（Ｃ−１０）、１４５．２５（Ｃ−１１）、１１１．４６（Ｃ−１２）、２２．９６（Ｃ−１３）、２５．７２（Ｃ−１４）、１０．４３（Ｃ−１５）。

【0088】

５．２ ７−エピ−トイクレノン（化合物ＰＤＣ−２４５３）の同定

【0089】

【化3】

【0090】

実施例５．１の全７画分のうち第４の画分（すなわち、ＦＲ−４）をＲＰ−１８ゲルカラム（Ｍｅｒｃｋ、台湾）に充填し、７０％ＭｅＯＨで溶出させ、更なる５画分を得た（ＦＲ−４１、ＦＲ−４２、ＦＲ−４３、ＦＲ−４４及びＦＲ−４５）。ＦＲ−４３画分を別のＲＰ−１８ゲルカラムに充填し、７０％ＭｅＯＨで溶出させて、更なる６画分を得た（ＦＲ−４３１、ＦＲ−４３２、ＦＲ−４３３、ＦＲ−４３４、ＦＲ−４３５及びＦＲ−４３６）。ＦＲ−４３２とＦＲ−４３３の両画分を混合し、混合画分を別のシリカゲル精製に供して、更なる７画分を得た（ＦＲ−４３２（４３３）１、ＦＲ−４３２（４３３）２、ＦＲ−４３２（４３３）３、ＦＲ−４３２（４３３）４、ＦＲ−４３２（４３３）５、ＦＲ−４３２（４３３）６及びＦＲ−４３２（４３３）７）。化合物ＰＤＣ−２４５３を第４の画分ＦＲ−４３２（４３３）４から分取ＨＰＬＣ分析によって精製した。

【0091】

ＭＳ：Ｍｗ．２３４（Ｂｒｕｋｅｒ ＭＳ）［Ｍ−Ｈ］⁻（２３３）。（Ｃ_１５Ｈ_２２Ｏ_２）

【0092】

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、６００ＭＨｚ）δ２．１０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１５Ｈｚ、Ｈ−１）、２．２６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１５Ｈｚ、Ｈ−１）、５．８６（１Ｈ、ｂｒ、ｓ、Ｈ−３）、２．２８（１Ｈ、ｂｒ、ｄ、Ｊ＝１３Ｈｚ、Ｈ−５）、１．５２（１Ｈ、ｍ、Ｈ−６）、２．３４（１Ｈ、ｍ、Ｈ−６）、１．７５（１Ｈ、ｍ、Ｈ−８）、２．０５（１Ｈ、ｍ、Ｈ−８）、１．４２（１Ｈ、ｍ、Ｈ−９）、１．４５（１Ｈ、ｍ、Ｈ−９）、５．０８（２Ｈ、ｂｒ、ｓ、Ｈ−１２）、１．８３（３Ｈ、ｓ、Ｈ−１３）、０．９５（３Ｈ、ｓ、Ｈ−１４）、１．９１（３Ｈ、ｓ、Ｈ−１５）。

【0093】

^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、１５０ＭＨｚ）δ５４．０９（Ｃ−１）、１９８．９５（Ｃ−２）、１２６．９２（Ｃ−３）、１６２．２４（Ｃ−４）、４４．８７（Ｃ−５）、３３．０５（Ｃ−６）、７４．６９（Ｃ−７）、３１．５５（Ｃ−８）、３７．６３（Ｃ−９）、３７．４３（Ｃ−１０）、１４６．０２（Ｃ−１１）、１１４．１３（Ｃ−１２）、１８．６３（Ｃ−１３）、１６．８９（Ｃ−１４）、２１．９６（Ｃ−１５）。

【0094】

５．３ トイクレノン（化合物ＰＤＣ−２４６４）の同定

【0095】

【化4】

【0096】

実施例５．１の全７画分のうち第３の画分（すなわち、ＦＲ−３）をＲＰ−１８ゲルカラム（Ｍｅｒｃｋ、台湾）に充填し、７０％ＭｅＯＨで溶出させ、更なる６画分を得た（ＦＲ−３１、ＦＲ−３２、ＦＲ−３３、ＦＲ−３４、ＦＲ−３５及びＦＲ−３６）。ＦＲ−３４画分を別のＲＰ−１８ゲルカラムに充填し、７０％ＭｅＯＨで溶出させて、更なる６画分を得た（ＦＲ−３４１、ＦＲ−３４２、ＦＲ−３４３、ＦＲ−３４４、ＦＲ−３４５及びＦＲ−３４６）。ＦＲ−３４３とＦＲ−４の両画分を混合し、混合画分を別のシリカゲル精製に供して、更なる７画分を得た（ＦＲ−３４１（４）１、ＦＲ−３４１（４）２、ＦＲ−３４１（４）３、ＦＲ−３４１（４）４、ＦＲ−３４１（４）５、ＦＲ−３４１（４）６及びＦＲ−３４１（４）７）。ＦＲ−３４１（４）４を別のＲＰ−１８ゲルカラム上に添加し、７０％ＭｅＯＨで溶出させて、更なる６画分を得た（ＦＲ−３４１（４）４１、ＦＲ−３４１（４）４２、ＦＲ−３４１（４）４３、ＦＲ−３４１（４）４４、ＦＲ−３４１（４）４５及びＦＲ−３４１（４）４６）。ＦＲ−３４１（４）４４画分をさらにシリカゲル精製に供し、化合物ＰＤＣ−２４６４を第６の画分（ｆａｃｔｉｏｎ）（すなわち、ＦＲ−３４１（４）４６）から分取ＨＰＬＣによって精製した。

【0097】

ＭＳ：Ｍｗ．２３４（Ｂｒｕｋｅｒ ＭＳ）［Ｍ−Ｈ］⁻（２３３）（Ｃ_１５Ｈ_２２Ｏ_２）

【0098】

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、６００ＭＨｚ）δ２．２６（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．５Ｈｚ、Ｈ−１）、５．８８（１Ｈ、ｂｒ、ｓ、Ｈ−３）、２．９３（１Ｈ、ｍ、Ｈ−５）、１．６４（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝１３．１Ｈｚ、Ｈ−６）、１．７８（１Ｈ、ｍ、Ｈ−６）、１．４６（１Ｈ、ｍ、Ｈ−８）、１．９２（１Ｈ、ｍ、Ｈ−８）、１．３６（１Ｈ、ｍ、Ｈ−９）、１．８４（１Ｈ、ｍ、Ｈ−９）、４．８５（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝１．４Ｈｚ、Ｈ−１２）、５．０７（１Ｈ、ｓ、Ｈ−１２）、１．８３（３Ｈ、ｓ、Ｈ−１３）、０．８７（３Ｈ、ｓ、Ｈ−１４）、１．８３（３Ｈ、ｓ、Ｈ−１５）。

【0099】

^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、１５０ＭＨｚ）δ５４．０４（Ｃ−１）、１９９．１２（Ｃ−２）、１２７．１２（Ｃ−３）、１６３．２７（Ｃ−４）、４２．６１（Ｃ−５）、３３．４２（Ｃ−６）、７４．３３（Ｃ−７）、３０．８９（Ｃ−８）、３５．２６（Ｃ−９）、３７．１２（Ｃ−１０）、１５１．６８（Ｃ−１１）、１０９．５１（Ｃ−１２）、１９．０２（Ｃ−１３）、１５．８０（Ｃ−１４）、２１．８７（Ｃ−１５）。

【0100】

５．４ オキシフィレノジオール（Ｏｘｙｐｈｅｌｌｅｎｏｄｉｏｌ）Ａ（化合物ＰＤＣ−２４５４）の同定

【0101】

【化5】

【0102】

実施例５．１の全７画分のうち第４の画分（すなわち、ＦＲ−４）をＲＰ−１８ゲルカラムに充填し、７０％ＭｅＯＨで溶出させ、更なる５画分を得た（ＦＲ−４１、ＦＲ−４２、ＦＲ−４３、ＦＲ−４４及びＦＲ−４５）。ＦＲ−４４画分を別のＲＰ−１８ゲルカラムに充填し、７０％ＭｅＯＨで溶出させて、更なる５画分を得た（ＦＲ−４４１、ＦＲ−４４２、ＦＲ−４４３、ＦＲ−４４４及びＦＲ−４４５）。化合物ＰＤＣ−２４５４を第２の党派（すなわち、ＦＲ−４４２）から分取ＨＰＬＣによって精製した。

【0103】

ＭＳ：Ｍｗ．２３８（Ｂｒｕｋｅｒ ＭＳ）［Ｍ−Ｈ］⁻（２３７）（Ｃ_１４Ｈ_２２Ｏ_３）

【0104】

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、６００ＭＨｚ）δ２．１８（１Ｈ、ｍ、Ｈ−１）、２．４５（１Ｈ、ｍ、Ｈ−１）、１．６３（１Ｈ、ｍ、Ｈ−２）、１．７５（１Ｈ、ｍ、Ｈ−２）、４．１５（１Ｈ、ｂｒ、ｓ、Ｈ−４）、２．６０（１Ｈ、ｍ、Ｈ−６）、１．９２（２Ｈ、ｍ、Ｈ−７）、２．２６（１Ｈ、ｍ、Ｈ−８）、２．４５（１Ｈ、ｍ、Ｈ−８）、２．１８（Ｈ、ｍ、Ｈ−１１）、０．８６（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、Ｈ−１２）、１．０２（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、Ｈ−１３）、１．１８（３Ｈ、ｓ、Ｈ−１４）。

【0105】

^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、１５０ＭＨｚ）δ２１．４０（Ｃ−１）、３２．０８（Ｃ−２）、７２．３１（Ｃ−３）、７５．０８（Ｃ−４）、１５７．８１（Ｃ−５）、４０．００（Ｃ−６）、２２．２１（Ｃ−７）、３４．９４（Ｃ−８）、１９９．９５（Ｃ−９）、１３２．４１（Ｃ−１０）、２９．７６（Ｃ−１１）、１９．１１（Ｃ−１２）、２１．５３（Ｃ−１３）、２１．７２（Ｃ−１４）。

【0106】

５．５ テクトクリシン（化合物ＰＤＣ−２５２１）の同定

【0107】

【化6】

【0108】

実施例５．１の全７画分のうち第１の画分（すなわち、ＦＲ−１）をＲＰ−１８ゲルカラムに充填し、７５％ＭｅＯＨで溶出させ、更なる５画分を得た（ＦＲ−１１、ＦＲ−１２、ＦＲ−１３、ＦＲ−１４及びＦＲ−１５）。ＦＲ−１２画分をさらに分取ＨＰＬＣ分析に供し、化合物ＰＤＣ−２５２１を得た。

【0109】

ＭＳ：２６８（Ｂｒｕｋｅｒ ＭＳ）［Ｍ＋Ｈ］^＋（２６９）（Ｃ_１６Ｈ_１２Ｏ_４）

【0110】

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、６００ＭＨｚ）δ６．６６（１Ｈ、ｄ、Ｈ−３）、６．３６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、Ｈ−６）、６．４９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、Ｈ−８）、７．８７〜７．８９（１Ｈ、ｍ、Ｈ−２’）、７．４９〜７．５５（１Ｈ、ｍ、Ｈ−３’）、７．４９〜７．５５（１Ｈ、ｍ、Ｈ−４’）、７．４９〜７．５５（１Ｈ、ｍ、Ｈ−５’）、７．８７〜７．８９（１Ｈ、ｍ、Ｈ−６’）、３．８７（１Ｈ、ｓ、ＯＭＥ）。

【0111】

^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、１５０ＭＨｚ）δ１６３．９８（Ｃ−２）、１０５．８３（Ｃ−３）、１８２．５１（Ｃ−４）、１６２．１０（Ｃ−５）、９８．１７（Ｃ−６）、１６５．５５（Ｃ−７）、９２．６６（Ｃ−８）、１５７．７５（Ｃ−９）、１０５．６７（Ｃ−１０）、１３１．２４（Ｃ−１’）、１２６．２８（Ｃ−２’）、１２９．０８（Ｃ−３’）、１３１．８５（Ｃ−４’）、１２９．０８（Ｃ−５’）、１２６．２８（Ｃ−６’）、５５．８２（ＯＭＥ）。

【0112】

５．６ イザルピニン（化合物ＰＤＣ−２５２４）の同定

【0113】

【化7】

【0114】

実施例５．１の全７画分のうち第１の画分（すなわち、ＦＲ−１）をＲＰ−１８ゲルカラムに充填し、７５％ＭｅＯＨで溶出させ、更なる５画分を得た（ＦＲ−１１、ＦＲ−１２、ＦＲ−１３、ＦＲ−１４及びＦＲ−１５）。ＦＲ−１２画分をさらに分取ＨＰＬＣ分析に供し、化合物ＰＤＣ−２５２４を得た。

【0115】

ＭＳ：２８４（Ｂｒｕｋｅｒ ＭＳ）［Ｍ＋Ｈ］^＋（２８５）（Ｃ_１６Ｈ_１２Ｏ_５）

【0116】

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、６００ＭＨｚ）δ６．３６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、Ｈ−６）、６．４９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、Ｈ−８）、８．１９〜８．１７（１Ｈ、ｍ、Ｈ−２’）、７．４６〜７．５１（１Ｈ、ｍ、Ｈ−３’）、７．４６〜７．５１（１Ｈ、ｍ、Ｈ−４’）、７．４６〜７．５１（１Ｈ、ｍ、Ｈ−５’）、８．１９〜８．１７（１Ｈ、ｍ、Ｈ−６’）、３．８７（１Ｈ、ｓ、ＯＭＥ）。

【0117】

^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、１５０ＭＨｚ）δ１４５．２０（Ｃ−２）、１３６．５４（Ｃ−３）、１７５．４１（Ｃ−４）、１６０．７４（Ｃ−５）、９８．０１（Ｃ−６）、１６５．８８（Ｃ−７）、９２．１８（Ｃ−８）、１５６．９６（Ｃ−９）、１０３．９７（Ｃ−１０）、１３０．６４（Ｃ−１’）、１２７．５７（Ｃ−２’）、１２８．６１（Ｃ−３’）、１３０．２８（Ｃ−４’）、１２８．６１（Ｃ−５’）、１２７．５７（Ｃ−６’）、５５．８７（ＯＭＥ）。

【0118】

実施例６ アルピニア種抽出物は、ｄｌ−５−ヒドロキシトリプトファン（５−ＨＴＰ：５−Ｈｙｄｒｏｘｙｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ）によって誘発された異常排便及び／又は内臓過敏を効果的に治療する。
セロトニンは、腸管神経系における主要かつ重要なモノアミン型神経伝達物質である。体内のセロトニンの９５パーセントは腸、主にエンテロクロマフィン様（ＥＣＬ：ｅｎｔｅｒｏｃｈｒｏｍａｆｆｉｎ ｌｉｋｅ）細胞及び腸ニューロン中に見られ、残りは中枢神経系（ＣＮＳ：ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ）に見られる。セロトニンは、胃腸管とＣＮＳの間の突出した内臓ニューロンの感受性を高めることができ、腸のすべての統合機能に関与する。

【0119】

セロトニンは、ＩＢＳにおける新たな神経調節物質として作用するので、セロトニンに転化されるｄｌ−５−ヒドロキシトリプトファン（５−ＨＴＰ）を、ＩＢＳに付随する異常排便症候を治療する実施例１から４のアルピニア種抽出物の効力を評価するためにこの実施例ではＩＢＳ刺激剤として使用した。一方、発病又はＩＢＳにおける決定的因子である内臓過敏（ＶＨ：ｖｉｓｃｅｒａｌ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）を、行動反応動物モデルと共に、それぞれＩＢＳに付随する腹痛症候を治療する実施例１から４のアルピニア種抽出物の効力を評価するために使用し、５−ＨＴＰをＩＢＳ刺激剤として使用した。

【0120】

実験手順は、Ｒｉｃｅｒｃａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＬＣ（台湾）、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｙａｎｇ−Ｍｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（台湾）又はＦｕ−Ｊｅｎ Ｃａｔｈｏｌｉｃ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（台湾）の動物実験委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ））によって認可され、国の動物愛護規則に従って実施された。

【0121】

５−ＨＴＰによって誘発された下痢及び／又は異常排便を評価するための動物モデル
雄のＩＣＲマウス（ＢｉｏＬＡＳＣＯ Ｔａｉｗａｎ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、台湾）を空調された動物シェルター内で２２℃から２４℃の室温で湿度レベル（４０％から５０％）を制御して１２時間明暗サイクルで飼育した。各マウスは、試験開始時、３０から３４ｇの重さであった。水道水及び標準実験室げっ歯類固形飼料を自由に摂らせた。

【0122】

各群は１０匹のマウスからなり、試験群の各マウスに１日目に本発明のアルピニア種抽出物を２回経口投与し（すなわち、５００ｍｇ／ｋｇ、１，０００ｍｇ／ｋｇ又は２，０００ｍｇ／ｋｇ）、２日目に３回目を投与した。３回目のアルピニア種抽出物投与からちょうど６０分後に５−ＨＴＰ（腹腔内、１０ｍｇ／ｋｇ）を１回投与した。幾つかの場合においては、本発明のアルピニア種抽出物を経口の代わりに腹腔内に投与した。比較のために、塩酸ロペラミド（経口；２ｍｇ／ｋｇ）、塩酸オンダンセトロン（ｏｎｄａｎｓｔｅｒｏｎ）（経口；２ｍｇ／ｋｇ）又は塩酸グラニセトロン（ｇｒａｎｉｓｅｒｔｏｎ）（経口；２ｍｇ／ｋｇ）を５−ＨＴＰ投与のちょうど３０分前に対照動物にそれぞれ１回投与した。５−ＨＴＰ注射の３０分後、各動物の排便が観察され、３０分間の排せつ便数及び下痢スコアそれぞれをそれに応じて記録した。下痢スコアは、０から３の任意のスコア尺度によって便の硬さを記述するように設計され、０は固体の便であり、１は緩い便であり、２は少し液状の便であり、３は水っぽい便である。

【0123】

５−ＨＴＰによって誘発された内臓過敏を評価するための動物モデル
雄のスプレーグドーリーラット（ＢｉｏＬＡＳＣＯ Ｔａｉｗａｎ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、台湾）を空調された動物シェルター内で２２℃から２４℃の室温で湿度レベル（４０％から５０％）を制御して１２時間明暗サイクルで飼育した。各ラットは、試験開始時、２００から３５０ｇの重さであった。水道水及び標準実験室げっ歯類固形飼料を自由に摂らせた。

【0124】

別段の記載がない限り、各群は６匹のラットを含み、動物を絶食させずに実験を実施した。植物抽出物及び正の対照薬物を動物に経口又は腹腔内投与した。１日目、エーテル麻酔をして、筋電図（ＥＭＧ：ｅｌｅｃｔｒｏｍｙｏｇｒａｍ）電極を各動物の外腹斜筋に移植し、次いで、動物を移植処置からさらに６日間回復させた。８日目、動物に５−ＨＴＰ（１０ｍｇ／ｋｇ）を１回皮下注射して、内臓過敏を誘発し、結腸直腸の膨張（ＣＲＤ：ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｄｉｓｔｅｎｔｉｏｎ）に対するその反応をＥＭＧによって記録した。賦形剤群の動物に、対応する実験群の同じ賦形剤と共に食塩水を経口投与し、一方、実験群の動物には実施例１のアルピニアオキシフィラ抽出物又は別の抗ＶＨ薬（例えば、グラニセトロン１０ｍｇ／ｋｇ）を指定の時間及び投与量で経口投与した。

【0125】

異常屈筋反射（ＡＷＲ：Ａｂｎｏｒｍａｌ Ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ Ｒｅｆｌｅｘ）を測定することによって慢性内臓過敏を評価するための動物モデル
このモデルでは、内臓運動反射に類似した不随意運動反射であるＡＷＲを測定することによって行動反応を調べた。ＡＷＲの等級を刺激強度によって決定した。

【0126】

雄のスプレーグドーリーラット（ＢｉｏＬＡＳＣＯ Ｔａｉｗａｎ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、台湾）を空調された動物シェルター内で２２℃から２４℃の室温で湿度レベル（４０％から５０％）を制御して１２時間明暗サイクルで飼育した。各ラットは、試験開始時、２００から３５０ｇの重さであった。水道水及び標準実験室げっ歯類固形飼料を自由に摂らせた。別段の記載がない限り、各群は６匹のラットを含み、動物を絶食させずに実験を実施した。植物抽出物及び正の対照薬物を動物に経口又は腹腔内投与した。

【0127】

行動学的研究を既報の手順に従って評価した（アル−カエア（ＡＬ−ＣＨＡＥＲ）ら、胃腸病学（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ）２０００，１１９：１２７６−１２８５）。手短に述べると、次いで、ラットを高いプレキシガラス台上のルサイト小部屋（２０×８×８ｃｍ）に収容し、覚醒させ、順応させた（１時間）。動物に５−ＨＴＰ（１０ｍｇ／ｋｇ）を１回皮下注射して、内臓過敏を誘発し、ＡＷＲを測定することによって行動反応を調べた。ＡＷＲの測定は、盲検観察者による動物反応の目視観察、及びＡＷＲスコアの割当てからなる：０、行動反応なし；１、短時間の頭部運動、続いて静止；２、腹部を台から持ち上げない腹筋の軽度の収縮；３、腹筋の強い収縮、腹部が台から持ち上がる；４、体の湾曲と骨盤構造の持ち上げによって現れる腹筋の激しい収縮。行動測定を２名の盲検観察者によって繰り返した。

【0128】

結果をすべて平均±ＳＴＤとして表し、ｎは各群の動物を指す。各群の動物間の差を一元配置ＡＮＯＶＡ、続いてダネット検定によって比較した。０．０５以下のｐ値を統計的に有意とみなした。

【0129】

６．１ 実施例１のアルピニアオキシフィラは、ＩＢＳに付随する異常排便及び腹痛の治療に有効である。
ＩＢＳに付随する異常排便の治療に対する実施例１のアルピニアオキシフィラの効果を図１及び２に示す。下痢スコアを測定し、排せつ便数を３０分間数えることによって効果をそれぞれ評価した。図１から明らかなように、実施例１．１．２、１．１．３、１．１．１．１、１．１．１．１．１、１．２．１．１及び１．２．１．１．２の水及びアルコール抽出物は、オピオイド受容体作動物質ロペラミド又は５−ＨＴ_３受容体拮抗物質（例えば、オンダンセトロン又はグラニセトロン）に匹敵する１，０００ｍｇ／ｋｇの最小用量で経口投与したときに、ＩＢＳに付随する異常排便の改善に有効である。ＩＢＳに付随する異常排便の改善は、実施例１．１．１．１のアルピニアオキシフィラ抽出物を腹腔内投与したときにより大きく、３０ｍｇ／ｋｇの低用量で抗異常排便作用を発揮するのに十分であり、経口投与するときに必要な用量の約１／１０の１００ｍｇ／ｋｇでかなりの効果が認められた（図２Ａから２Ｊ）。同様に、アルピニアオキシフィラのアセトン抽出物又は酢酸エチル抽出物も、ＩＢＳに付随する異常排便を改善することができた（図２Ｋ及び２Ｌ）。

【0130】

実施例１の抽出物の抗異常排便効果を、ＩＢＳに付随する症候の改善に関して、別の一般に処方される鎮けい剤、例えばメペンゾラートとも比較した。実施例１．１．１．１と１．２．１．１の両方の抽出物は、メペンゾラート（５０ｍｇ／ｋｇ、３回経口投与）よりも関連症候の緩和に有効であった（結果示さず）。

【0131】

実施例１のアルピニアオキシフィラ抽出物の抗腹痛効果を図３から６に示す。図３及び４に示したように、実施例１．１．２（すなわち、ＰＤＣ−１８５０）及び実施例１．１．３（すなわち、ＰＤＣ−１９１８）の精製水抽出物粉体、実施例１．１．１．１の水抽出物ペースト（すなわち、ＰＤＣ−２３６３）、並びに実施例１．１．１．１．１の精製水抽出物ペースト（すなわち、ＰＤＣ−２５３０）はすべて、５−ＨＴＰによって誘発された内臓過敏を軽減することができ（すなわち、賦形剤対照に比べて）、その効果は、５−ＨＴ_３受容体拮抗物質（例えば、グラニセトロン又はオンダンセトロン）よりもはるかに大きい。同様に、アルピニアオキシフィラの５０％エタノール抽出物（すなわち、実施例１．２．１．１、すなわちＰＤＣ−２３６４、及び実施例１．２．１．１．２、すなわちＰＤＣ−２５３２）（図５Ａ、５Ｂ及び５Ｄ）、並びにアルピニアオキシフィラのＥＡ（すなわち、実施例１．４．１、すなわちＰＤＣ−２４７８）及びアセトン抽出物（すなわち、実施例１．３．１、すなわちＰＤＣ−２４７９）（図６Ａ及び６Ｂ）は、それぞれ、同じ抗５−ＨＴＰ誘発内臓過敏効果を示した。

【0132】

ＡＷＲスコアによって測定された行動反応を表１及び２に要約する。

【0133】

【表1】

【0134】

【表2】

【0135】

表１に示したように、実施例１．１．１．１の水抽出物ペースト（すなわち、ＰＤＣ−２３６３）で処理したラットのＡＷＲスコアは、対照ラット又はグラニセトロン処理を受けたラットよりもかなり低い。実施例１．１．１．１のアルピニアオキシフィラ抽出物が腹痛の軽減に有効であることが明らかである。

【0136】

同様に、表２において、実施例１．２．１．１．２の精製エタノール抽出物ペースト（すなわち、ＰＤＣ−２５３２）で処理したラットのＡＷＲスコアは、対照ラットよりもかなり低い。アルピニアオキシフィラの精製エタノール抽出物ペースト（すなわち、実施例１．２．１．１．２）が腹痛の軽減に有効であることが明らかである。

【0137】

総合すると、これらの結果は、上記方法によって調製されたアルピニアオキシフィラ抽出物が、ＩＢＳに付随する症候、特に異常排便及び腹痛の治療に有用であることを示している。

【0138】

６．２ 実施例２のアルピニアハイナネンシス抽出物は、ＩＢＳに付随する異常排便及び腹痛の治療に有効である。
ＩＢＳに付随する症候の治療に対する実施例２のアルピニアハイナネンシス抽出物の効果を上記類似手順に従って評価する。結果を図７及び８に示す。アルピニアハイナネンシスの水（すなわち、ＰＤＣ−２４７１）及びエタノール抽出物（すなわち、ＰＤＣ−２４７２）の両方は、対照動物に比べて、ＩＢＳ動物における下痢スコア及び／又は排せつ便数、並びに５−ＨＴＰによって誘発された内臓過敏を低下させることができた（図８Ａ及び８Ｂ）。

【0139】

６．３ 実施例３のアルピニアガランガ抽出物は、ＩＢＳに付随する異常排便及び腹痛の治療に有効である。
ＩＢＳに付随する症候に対する実施例３のアルピニアガランガ抽出物の効果を図９及び１０に示す。アルピニアガランガの水抽出物（すなわち、ＰＤＣ−２１４７及びＰＤＣ−１８８５）は、対照動物（図９Ｃ）に比べて、ＩＢＳ動物における下痢スコア及び／又は排せつ便数（図９Ａ及び９Ｂ参照）、並びに５−ＨＴＰによって誘発された内臓過敏を低下させることができた。同様の効果は、アルピニアガランガのエタノール抽出物でも認められた（図１０）。

【0140】

６．４ 実施例４のアルピニアゼルムベット抽出物は、ＩＢＳに付随する異常排便及び腹痛の治療に有効である。
ＩＢＳに付随する症候に対する実施例４のアルピニアゼルムベット抽出物の効果を図１１に示す。水抽出物（すなわち、ＰＤＣ−２４７３）とエタノール抽出物（すなわち、ＰＤＣ−２４７４）の両方は、対照動物（図１１Ｃ）に比べて、ＩＢＳ動物における下痢スコア及び／又は排せつ便数（図１１Ａ及び１１Ｂ参照）、並びに５−ＨＴＰによって誘発された内臓過敏を低下させることができた。

【0141】

実施例７ 実施例５の化合物は、ＩＢＳに付随する異常排便を効果的に治療する。
実施例１．１．１．１のアルピニアオキシフィラの水抽出物ペースト（すなわち、ＰＤＣ−２３６３）から単離された精製化合物の抗異常排便効果を、実施例６の同じ動物モデルを使用して、類似手順で評価した。結果を図１２に示す。

【0142】

精製化合物ＰＤＣ−２４５３、ＰＤＣ−２４５４、ＰＤＣ−２４６０及びＰＤＣ−２４６４はそれぞれ、５−ＨＴＰによって誘発された下痢（図１２Ａ）を抑制し、排せつ便数（図１２Ｂ）を減少させることができる。同様の抗異常排便効果は、化合物ＰＤＣ−２５２１でも認められた（図１２Ｃ及び１２Ｄ）。したがって、これらの化合物は、ＩＢＳの治療薬を開発するための潜在的候補である。

【0143】

実施例８ 実施例５の化合物は、ＩＢＳに付随する腹痛を効果的に治療する。
実施例５の化合物の抗腹痛効果も、ＡＷＲスコアによって測定される動物の行動反応を調べることによって検討し、表３に要約した。

【0144】

【表3】

【0145】

表３に示すように、実施例５．３（すなわち、ＰＤＣ−２４６４）又は実施例５．８（すなわち、ＰＤＣ−２５２４）の化合物で処理されたラットのＡＷＲスコアは、対照ラットよりもかなり低い。アルピニアオキシフィラから単離された活性化合物は、腹痛の軽減に有効であることが明らかである。

【0146】

実施形態の上記記述は、単なる例示にすぎず、種々の改変を当業者が成し得ることが理解されるであろう。上記明細書、実施例及びデータは、本発明の例示的実施形態の構造及び使用の完全な記述である。本発明の種々の実施形態をある程度詳細に、又は１つ以上の個々の実施形態を参照して上述したが、当業者は、開示された実施形態に本発明の精神又は範囲から逸脱することなく多数の変更を加えることができる。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図1E】

【図1F】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図2E】

【図2F】

【図2G】

【図2H】

【図2I】

【図2J】

【図2K】

【図2L】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【図6A】

【図6B】

【図7A】

【図7B】

【図8A】

【図8B】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図10D】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【図12D】