特許 6069336 腎の脱神経を包含する治療効果を増強するための組織および細胞の局所的調節

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6069336

(24)【登録日】2017年1月6日

(45)【発行日】2017年2月1日

(54)【発明の名称】腎の脱神経を包含する治療効果を増強するための組織および細胞の局所的調節

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/395 20060101AFI20170123BHJP

   A61K 9/06 20060101ALI20170123BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20170123BHJP

   A61P 25/02 20060101ALI20170123BHJP

   A61K 51/00 20060101ALI20170123BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/395

   A61K9/06

   A61K9/08

   A61P25/02 105

   A61K49/02 A

【請求項の数】14

【全頁数】55

(21)【出願番号】特願2014-537336(P2014-537336)

(86)(22)【出願日】2012年10月19日

(65)【公表番号】特表2014-530876(P2014-530876A)

(43)【公表日】2014年11月20日

(86)【国際出願番号】US2012061205

(87)【国際公開番号】WO2013059735

(87)【国際公開日】20130425

【審査請求日】2014年6月13日

(31)【優先権主張番号】61/548,822

(32)【優先日】2011年10月19日

(33)【優先権主張国】US

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】511255915

【氏名又は名称】マーケイター メドシステムズ， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】スワード， カーク ピー．

【審査官】 天野 貴子

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１０／１２４１２０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特開２０１１−１８９１３５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００５−５３８９８３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００７−５０９９５３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００４−５００３６０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 Brain Research，１９７４年，vol.81, no.3，p.519-532，要約，[平成２８年３月２２日検索]、インターネット，ＵＲＬ，http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0006899374908488

【文献】 The Journal of Cell Biology，１９７８年，vol.79, no.1，p.121-131，doi:10.1083/jcb.79.1.121，ＵＲＬ，http://jcb.rupress.org/content/79/1/121.full.pdf+html

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３１／３９５

Ａ６１Ｋ ９／０６

Ａ６１Ｋ ９／０８

Ａ６１Ｋ ５１／００

Ａ６１Ｐ ２５／０２

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

局所組織の生理機能を調節することに使用するための、液体、ゲル、または半固体を含む調製物であって、
該調製物が、該組織に送達され、
該調製物が、該局所組織のｐＨを高くすることによって該局所組織の生理機能を緩衝化するために８．５〜９．５の間のｐＨを有し、
該調製物が、該調製物の送達によって調節された生理条件で該調製物の指標効果を有するが、中性の生理条件では指標効果を有さない治療剤を含み、
該指標効果が、該局所組織の非ニューロン細胞型に対して実質的な細胞毒性を引き起こすことなく、該局所組織を脱神経することを含み、そして、
該治療剤が、アルカリ性に緩衝化した形態のグアネチジン一硫酸塩、またはグアネチジンヘミ硫酸塩を含む、調製物。

【請求項2】

前記調製物が、該調製物の送達によって調節された生理条件で追加の指標効果または強化された指標効果を有するが、中性の生理条件では該追加の指標効果や強化された指標効果を有さない治療剤をさらに包含する、請求項１に記載の使用するための調製物。

【請求項3】

前記ゲルが、ヒドロゲルを含む、請求項１に記載の使用するための調製物。

【請求項4】

前記ヒドロゲルが、前記組織で再吸収するときにプロトンを消費する、請求項３に記載の使用するための調製物。

【請求項5】

前記ヒドロゲルが、アルカリ性である、請求項３に記載の使用するための調製物。

【請求項6】

前記調製物が、造影剤を包含する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用するための調製物。

【請求項7】

組織への取り込みを強化するための治療剤であって、
中心と外縁とを有する該組織の帯を生じさせることによって、該組織のｐＨが、調節され、
ここで、該帯は、調節する前の該組織の調節前ｐＨと比較して、または中性ｐＨと比較して調節されたｐＨを含み、該調節されたｐＨは８より高く、
該帯は、該帯の該中心で最もよく調節され、かつ該帯の該外縁で該組織の該調節前ｐＨまたは中性ｐＨまで低下させるｐＨの勾配を含み、
該帯において、該調節前ｐＨまたは中性ｐＨで組織へと起こる取り込みと比較して該治療剤の強化された取り込みが起こり、該強化された取り込みは、該組織の非ニューロン細胞型に対して実質的な細胞毒性を引き起こすことなく、該組織の脱神経を引き起こし、そして、
該治療剤が、アルカリ性に緩衝化した形態のグアネチジン一硫酸塩、またはグアネチジンヘミ硫酸塩を含む、治療剤。

【請求項8】

前記治療剤が、前記帯に送達される、請求項７に記載の治療剤。

【請求項9】

前記強化された取り込みが、予め選択した量によって、前記調節前ｐＨから調節された前記調節されたｐＨを有する前記帯の部分内で起こる、請求項７に記載の治療剤。

【請求項10】

前記強化された取り込みが、予め選択した量によって、中性ｐＨから調節された前記調節されたｐＨを有する前記帯の部分内で起こる、請求項７に記載の治療剤。

【請求項11】

前記予め選択した量が、０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、−０．５、−１．０、−１．５、−２．０、−２．５、−３．０、−３．５、−４．０、−４．５、０．５から５．０、１．５から４．５、２．０から４．０、約０．５、−０．５から−５．０、−１．５から−４．５、−２．０から−４．０、約０．５、約１．０、約１．５、約２．０、約２．５、約３．０、約３．５、約４．０、約４．５、約−０．５、約−１．０、約−１．５、約−２．０、約−２．５、約−３．０、約−３．５、約−４．０、および約−４．５のうち１つまたは複数の、前記調節されたｐＨと前記調節前ｐＨとの間のｐＨの差、または前記調節されたｐＨと前記中性ｐＨとの間のｐＨの差である、請求項９または１０に記載の治療剤。

【請求項12】

前記調節されたｐＨが、前記帯外側の前記組織よりも低いｐＨ、該帯外側の該組織よりも高いｐＨ、調節する前の該組織のｐＨよりも低いｐＨ、または調節する前の該組織のｐＨよりも高いｐＨである、請求項７に記載の治療剤。

【請求項13】

前記調節されたｐＨが、前記帯外側の組織のｐＨよりもアルカリ性である、請求項７に記載の治療剤。

【請求項14】

前記調節されたｐＨが、最大で１１、または少なくとも８および最大で１０である、請求項７に記載の治療剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０１１年１０月１９日に提出された米国特許仮出願第６１／５４８，８２２号の利益を主張し、その仮出願は、本明細書で参照によりその全体が援用される。

【背景技術】

【0002】

医薬品および生物学的治療剤は、それらが送達されるかまたは取り込まれる組織の局所的生理状態に応じて様々に細胞と相互作用する。例えばｐＨが変化すると、数ある理由のなかでも特に医薬品の膜透過性または極性化のために細胞への薬物摂取の差が生じ得る。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0003】

ｐＨ差は、細胞培養アッセイでは薬物の作用を変更し得ることが公になっているが、より迅速な薬物摂取、より迅速なクリアランス、または作用の改善を可能にする体内でのｐＨの局所的または部分的な改変は、未だ試みられていない。

【課題を解決するための手段】

【0004】

本明細書において、グアネチジン一硫酸塩という医薬品の局所投与によってこの作用をもたらす組成物、方法、デバイス、およびシステムが提供され、グアネチジン一硫酸塩はまた、２−（オクタヒドロ−１−アゾシニル）エチルグアニジンサルフェート；ヘプタメチレンイミン、１−（２−グアニジノエチル）−；Ｎ−（２−ペルヒドロアゾシン−１−イルエチル）グアニジン；アゾシン，１−（（２−（アミノイミノメチル）アミノ）エチル）オクタヒドロ−；（２−（ヘキサヒドロ−（２Ｈ）−アゾシン−１−イル）エチル）グアニジニウムサルフェート；アゾシン，１−（２−グアニジノエチル）オクタヒドロ−；グアニジン，［２−（ヘキサヒドロ−１（２Ｈ）−アゾシニル）−エチル］−，サルフェート（１：１）；２−［２−（アゾカン−１−イル）エチル］グアニジン；アバプレシン；オクタジン（Ｏｋｔａｄｉｎ）；ドポン（Ｄｏｐｏｍ）；Ｎ−（２−グアニジノエチル）ヘプタメチレンイミンサルフェート；ユーテンソール（Ｅｕｔｅｎｓｏｌ）；エシミル（Ｅｓｉｍｉｌ）；ドパム；２−（１−Ｎ，Ｎ−ヘプタメチレンイミノ）エチルグアニジン；グアニジン，（２−（ヘキサヒドロ−１（２Ｈ）−アゾシニル）エチル）−，サルフェート（１：１）；グアネチジナム（Ｇｕａｎｅｔｈｉｄｉｎｕｍ）［国際一般名−ラテン語］；オクタテンジン（Ｏｋｔａｔｅｎｚｉｎ）；オクタテンシン（Ｏｋｔａｔｅｎｓｉｎ）；イスメリン（Ｉｓｍｅｌｉｎ）（商標）；グアニジン，（２−（ヘキサヒドロ−１（２Ｈ）−アゾシニル）エチル）−；グアネチジーナ（Ｇｕａｎｅｔｉｄｉｎａ）［国際一般名−スペイン語］；オクタテンシン（Ｏｃｔａｔｅｎｓｉｎｅ）；（２−（ヘキサヒドロ−１（２Ｈ）−アゾシニル）エチル）グアニジンハイドロゲンサルフェート；サノテンシン（Ｓａｎｏｔｅｎｓｉｎ）；２−［２−（アゾカン−１−イル）エチル］グアニジン；硫酸；２−（１−アザシクロオクチル）エチルグアニジン；硫酸イスメリン；グアネチジンサルフェート；（２−（オクタヒドロ−１−アゾシニル）エチル）グアニジン；イスメリン；または化学式はＣ_１０Ｈ_２２Ｎ_４・Ｈ_２Ｏ_４Ｓであり図１６に示す分子構造を有する（２−（ヘキサヒドロ−１（２Ｈ）−アゾシニル）エチル）グアニジンサルフェート（１：１）としても公知である。また本明細書において、グアネチジンヘミサルフェートという医薬品の局所投与によってこの作用をもたらす組成物、方法、デバイス、およびシステムも提供される。

【0005】

本発明は、一般的に、疾患を処置するための医薬調製物、医療用デバイスを包含するシステムおよび診断剤または治療剤、ならびに方法に関する。より特定には、本発明の実施形態は、局所的または全身に送達される治療剤または診断剤の治療指数を調節するための局所組織環境の改変に関する。さらにより特定には、本発明の実施形態は、体内の動脈および静脈周辺の外膜および血管周囲組織における交感神経の活動を抑制する能力の改善に関する。

【0006】

本発明の特定の態様は、高血圧、心不全、睡眠時無呼吸、インスリン抵抗性、または炎症を処置するために、腎動脈周辺の局所組織環境を調節して、より効果的な医薬品による脱神経を可能にする能力である。

【0007】

本明細書において、全開示が参照により組み込まれるところの米国特許出願第１２／７６５，７０８号および同第１２／７６５，７２０号に記載の発明の実施に関する方法、システム、および組成物が提供される。

【0008】

本明細書において、薬物治療の改善方法が示される。一般的に、本方法の実施形態は、生理的な組織状態の調節による薬物治療指数の改善を包含する。特定には、本方法の実施形態は、組織のｐＨを局所で調節することに基づいて、組織に送達された薬剤（ａｇｅｎｔ）の治療指数を強化するために、または直接的な治療効果を有するために、局所薬物またはバッファー送達により局所組織のｐＨを調節する工程を含む。

【0009】

本明細書において、高ｐＨ状態におけるグアネチジンの神経変性作用に対する特異的な改善を包含する方法、およびそのような状態をもたらす方法が提供される。これらの方法は、腎動脈の周りの外膜および血管周囲組織に位置する腎神経の変性に特に有用である。これらの神経は、高血圧状態の開始とその維持に重要であり、腎動脈の脱神経は、血圧の低下、心不全の改善、インスリン抵抗性および睡眠時無呼吸の低減に関して有益な効果があることが示されており、さらに血管の炎症性疾患の改善に関しても有益な効果があることが推測される。

【0010】

グアネチジンのｉｎ ｖｉｔｒｏの研究では、収集し培養したラット上頸神経節のニューロンに対してグアネチジン一硫酸塩が細胞毒性を示す細胞培養条件について記載している（Ｊｏｈｎｓｏｎ ＥＭおよびＡｌｏｅ Ｌ． Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｕａｎｅｔｈｉｄｉｎｅ ｉｎ ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ ｎｅｕｒｏｎｓ ｂｙ ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９７４年；８１巻：５１９〜５３２頁；Ｗａｋｓｈｕｌｌ Ｅ、Ｊｏｈｎｓｏｎ ＭＩ、Ｂｕｒｔｏｎ Ｈ． Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ ｏｆ ａｎ ａｍｉｎｅ ｕｐｔａｋｅ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｒａｔ ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ ｎｅｕｒｏｎｓ ｗｈｉｃｈ ｕｓｅ ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ａｓ ｔｈｅｉｒ ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ、Ｊ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １９７８年；７９巻：１２１〜１３１頁）。Ｊｏｈｎｓｏｎ、Ｗａｋｓｈｕｌｌらによる実験では、１００μＭ濃度のグアネチジンに４０〜４８時間曝露した場合、グアネチジンは、７．０〜７．２のｐＨで弱い細胞毒性活性を有し、ｐＨ８．０で強い細胞毒性活性を有することが見出された。

【0011】

グアネチジンのニューロンへの細胞毒性のｉｎ−ｖｉｖｏ試験では、ブタに、濃度が８．３ｍｇ／ｍＬでありｐＨが８．５〜９．５であるグアネチジンヘミサルフェートを血管周囲に注射したところ腎脱神経が起こるが、５．５〜６．５のｐＨで８．３ｍｇ／ｍＬのグアネチジン一硫酸塩を血管周囲に注射したところ、同様の脱神経が起こらないことが示されている。

【0012】

血管周囲および外膜の空間への注射に関して、注射可能な薬剤は、参照により本明細書に組み込まれるところの米国特許第７，７４４，５８４号で記載している方法で追跡し、さらに薬剤は、好ましくは、参照により本明細書に組み込まれるところの米国特許第７，６９１，０８０号で記載しているものと同様にカテーテルで注射する。しかしながら、その他のカテーテルまたは針を使用して組織内に薬剤を局所注射して、本明細書に記載する効果と同様の効果を生じさせることができることが認識されている。

【0013】

本明細書において、注射またはその他の手段によって生理的なｐＨを局所で調節する組成物、デバイス、システム、および方法が提供される（例えば電気信号または特定の金属物質の存在下で例えば局所のｐＨを調節できることが公知である）。いくつかの実施形態では、本方法は、治療剤のグアネチジン一硫酸塩が送達される間に、その前に、またはその後に、脱神経の標的である神経の周りの組織におよそ９のｐＨで存在する組成物を注射する工程を含む。腎動脈の周りの組織にこの組成物を注射または注入して（以下の図１１を参照）、およそ７．３〜７．４の中性の生理的ｐＨを有する間質液と置き換える。

【0014】

本発明のその他の方法は、局所張度もしくは容量オスモル濃度を調節する薬剤と共に、またはそのような薬剤の前もしくは後に送達される製剤中の医薬品の細胞による取り込みを強化するために、局所張度または容量オスモル濃度を調節する工程を包含する。例えば、高張塩類溶液の送達は、浸透により細胞による液体の放出を引き起こす。同様に、低張溶液の送達は、細胞がその周囲からさらなる液体を吸収しながら膨潤を引き起こし得る。細胞周辺の間質に注入した薬剤は、局所組織の張度に依存して潜在的に取り込みの改善をもたらし得る。この挙動は、膜受容体タンパク質に結合するかまたはチャネルもしくは孔を介して細胞に入る薬剤の能力に起因しており、治療剤によって異なる。

【0015】

本発明の追加の方法は、組織生理機能の局所改変と協調する治療剤の適用は包含しないが、それは、治療目的を達成するための局所調節に直接依存する。例えば、高張塩類溶液、洗浄剤、エタノールなどの溶媒、強酸、および強塩基はそれぞれ、局所生理機能の調節と共に細胞への損傷、変性または破壊を引き起こし得る。また本発明で記載する方法によるこれらの薬剤の送達は、本明細書に記載した限局性の神経破壊などの目的を達成するのにも有用である。溶液のｐＨの調節は、アルカリ性または酸性緩衝剤により達成することができる。緩衝剤としては、これらに限定されないが、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化マグネシウム、硫酸、塩酸、クエン酸、酢酸、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、ホウ酸、リン酸二水素カリウム、ジエチルバルビツール酸、３−｛［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝プロパンスルホン酸、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルグリシン、２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール、３−［Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸、４−２−ヒドロキシエチル−１−ピペラジンエタンスルホン酸、２−｛［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝エタンスルホン酸、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）、ジメチルアルシン酸、サリンソジウムシトレート（ｓａｌｉｎｅ ｓｏｄｉｕｍ ｃｉｔｒａｔｅ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸、またはグリシンが挙げられる。

【0016】

本発明のさらに別の態様では、新規の組成物が記載される。局所組織への送達におけるグアネチジンの性能を改善することにおいて、ｐＨの調整が必要とされる場合がある。本発明の組成物は、７より高いｐＨで１μｇ／ｍＬから５０ｍｇ／ｍＬの濃度範囲のグアネチジン製剤を包含する。本発明の特定の態様では、製剤の濃度は、１〜３０ｍｇ／ｍＬの間であり、塩化ナトリウム含量は、０．７％〜０．９％の間であるが、それよりも高いまたは低い濃度も使用することができ、ｐＨは、所望のｐＨが達成されて経時的に維持できるようになるまで、水酸化ナトリウムなどのアルカリ性バッファーまたは上記したその他のバッファーで緩衝化することによって約９．５に調整されるが、少なくとも８〜１１の間である。

【0017】

米国特許出願第１０／７６５，７２０号で記載している薬剤に加えて、１０／７６５，７２０号、さらに本発明に示される方法で送達する場合、追加の薬剤が有用である。これらの薬剤としては、ナトリウムチャネルを介して細胞に入る毒素、例えばテトロドトキシンおよびバトラコトキシン、カリウムチャネルを介して細胞に入る毒素、例えばマウロトキシン、アジトキシン、カリブドトキシン、マルガトキシン、スロトキシン、シクラトキシン（ｓｙｃｌｌａｔｏｘｉｎ）、およびヘフトキシン、ならびにカルシウムチャネルを介して細胞に入る毒素、例えばカルシセプチン、タイカトキシン、カルシクルジン、およびＰｈＴｘ３が挙げられる。

【0018】

本明細書および参照された特許出願で記載する方法の利益を享受するその他の薬剤としては、アドレナリン遮断薬および刺激因子（例えばドキサゾシン、グアナドレル、グアネチジン、フェノキシベンザミン（ｐｈｅｏｘｙｂｅｎｚａｍｉｎｅ）、プラゾシン＋ポリチアジド、テラゾシン、メチルドパ、クロニジン、グアナベンズ、グアンファシン）；アルファ−／ベータ−アドレナリン遮断薬（例えばラベタロール）；アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤（例えばベナゼプリル、カプトプリル（ｃａｔｏｐｒｉｌ）、エナラプリル、エナラプリラート、フォシノプリル、リシノプリル、モエキシプリル、キナプリル、ラミプリル、およびカルシウムチャネル遮断薬と利尿薬との組合せ；ＡＣＥ受容体アンタゴニスト（例えばロサルタン）；ベータ遮断薬（例えばアセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、カルテオロール、エスモロール、フィモロール（ｆｉｍｏｌｏｌ）、ピンドロール、プロプラノロール、ペンブトロール（ｐｅｎｂａｔｏｌｏｌ）、メトプロロール、ナドロール、ソタロール）；カルシウムチャネル遮断薬（例えばアミロリド、アムロジピン、ベプリジル、ジルチアゼム、イスラジピン、ニフェジピン、ベラパミル、フェロジピン、ニカルジビン、ニモジピン）；Ｉ〜ＩＶ群の抗不整脈薬（例えばブレチリウム、ジソピラミド、エンカイニド、フレカイニド、リドカイン、メキシレチン、モリシジン、プロパフェノン、プロカインアミド、キニジン、トカイニド、エスモロール、プロプラノロール、アセブトロール、アミオダロン、ソタロール、ベラパミル、ジルチアゼム、ピンドロール、ブプラノロール塩酸塩、トリクロルメチアジド、フロセミド、プラゾシン塩酸塩、メトプロロール酒石酸塩、カルテオロール塩酸塩、オクスプレノロール塩酸塩、およびプロプラノロール塩酸塩）；ならびにその他の抗不整脈薬および強心薬（例えばアデノシン、ジゴキシン；メチルジゴキシン（ｍｅｔｉｌｄｉｇｏｘｉｎ）、カフェイン、ドパミン塩酸塩、ドブタミン塩酸塩、オクトパミン塩酸塩、ジプロフィリン、ユビデカレノン、ジギタリス）、ならびに脱感覚神経薬（ｓｅｎｓｏｒｙ ｄｅｎｅｒｖａｔｉｏｎ ａｇｅｎｔ）、例えばカプサイシンが挙げられる。

【0019】

同様に部分的または完全な交感神経切除をもたらすその他の薬剤も示されており、本明細書において記載しているような治療剤として使用することができる。そのような薬剤としては、免疫性交感神経切除薬、例えば抗神経成長因子（抗ＮＧＦ）；自己免疫性交感神経切除薬、例えば抗ドパミンベータ−ヒドロキシラーゼ（抗ＤβＨ）および抗アセチルコリンエステラーゼ（抗ＡＣｈｅ）；化学的交感神経切除薬、例えば６−ヒドロキシルドパミン（６−ＯＨＤＡ）、トシル酸ブレチリウム、グアナクリン、およびＮ−（２−クロロエチル）−Ｎ−エチル−２−ブロモベンジルアミン（ＤＳＰ４）；ならびに免疫毒素による交感神経切除薬、例えばＯＸ７−ＳＡＰ、１９２−ＳＡＰ、抗ドパミンベータ−ヒドロキシラーゼサポリン（ＤＢＨ−ＳＡＰ）、および抗ドパミンベータ−ヒドロキシラーゼ免疫毒素（ＤＨＩＴ）が挙げられる。これらの薬剤の詳細な記載は、Ｐｉｃｋｌｏ Ｍ Ｊ、Ｊ Ａｕｔｏｎｏｍ Ｎｅｒｖ Ｓｙｓ １９９７年；６２巻：１１１〜１２５頁に見出される。フェノールおよびエタノールも化学的交感神経切除をなすのに使用されており、これらも本発明の方法において有用である。その他の交感神経遮断薬としては、アルファ−２−アゴニスト、例えばクロニジン、グアンファシン、メチルドパや、ベタニジン、グアネチジン、グアノキサン、デブリソキン、グアノクロル、グアナゾジン、グアノキサベンズなどのグアニジン誘導体；イミダゾリン（ｉｍａｄａｚｏｌｉｎｅ）受容体アゴニスト、例えばモキソニジン、リルメニジン（ｒｅｌｍｅｎｉｄｉｎｅ）など；神経節遮断薬またはニコチンアンタゴニスト、例えばメカミラミン、トリメタファンなど；ＭＡＯＩ阻害剤、例えばパルギリンなど；アドレナリン取り込み阻害薬、例えばレシンナミン、レセルピンなど；チロシンヒドロキシラーゼ阻害剤、例えばメチロシンなど；アルファ−１遮断薬、例えばプラゾシン、インドラミン、トリマゾシン、ドキサゾシン、ウラピジルなど；非選択的アルファ遮断薬、例えばフェントラミンなど；セロトニンアンタゴニスト、例えばケタンセリンなど；およびエンドセリンアンタゴニスト、例えばボセンタン、アンブリセンタン、シタキセンタンなどが挙げられる。

【0020】

加えて、神経を硬化させる薬剤を使用して、神経溶解または交感神経遮断を起こすこともできる。血管周囲の神経損傷を引き起こす硬化薬としては、キナクリン、クロロキン、テトラデシル硫酸ナトリウム、オレイン酸エタノールアミン、モルイン酸ナトリウム、ポリドカノール、フェノール、エタノール、または高張液が挙げられる。

【0021】

そのような薬剤は、被験体の様々な位置での脱神経に使用することができる。本明細書に記載した多くは腎脱神経を対象にしているが、本明細書の発明は、この位置またはこれらの神経に限定されないものとする。少なくとも気管支神経の脱神経、または経気管支鏡による脱神経などのその他の標的神経も意図される。

【0022】

薬剤の送達、調節因子の送達（あらゆる順番で）：本明細書において、局所的に神経を脱神経させる治療剤を被験体に送達する方法であって、被験体に治療剤を送達する工程、および脱神経の標的である神経の周りの組織の局所ｐＨを調節するのに効果的である調節因子または組成物を送達する工程を含む、方法が提供される。治療剤および／または調節因子もしくは組成物の送達は、例えば本明細書において記載しているような１つまたは複数のデバイスを使用して経管的に行ってもよい。前記組成物のそのような送達は、薬剤送達の間に、その前に、またはその後であってもよい。治療剤は、グアネチジン、または本明細書に記載した別の治療剤であってもよい。そのような調節により、組織のｐＨを、非限定的な例として少なくとも７、７〜１１の間、または８〜１０の間、または８．５〜９．５の間に変化させることができる。いくつかの実施形態では、調節因子は、バッファーまたは緩衝剤である。いくつかの実施形態では、本組成物は、バッファーまたは緩衝剤を含む。いくつかの実施形態では、治療剤を送達する工程および調節因子または組成物を送達する工程は、同じ注射デバイスを使用して、または別個の注射デバイスを使用して、同時に、並行して、または逐次的になされる。

【0023】

調節因子の単独での送達：別の実施形態では、本方法は、治療剤を必要とすることなく、脱神経の標的である神経の周りの組織のｐＨを局所調節する組成物の送達を含む。そのような実施形態では、本組成物それ自身が、標的神経を脱神経させるという治療的目的を達成する。

【0024】

緩衝化した薬剤の送達：別の実施形態では、本方法は、神経の周りの組織への送達の前に、ｐＨ調節された組成物の送達を含む。そのような組成物は、ｐＨ調節因子と治療剤とを含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、組成物は、治療剤とｐＨ調節因子とを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、非限定的な例として、少なくとも７、７〜１１の間、８〜１０の間、または８．５〜９．５の間のｐＨの治療剤を含む。いくつかの実施形態では、治療剤のみを含む水溶液（調節因子は含まず）は、治療剤および調節因子の水溶液を含む組成物よりも酸性である。いくつかの実施形態では、治療剤のみを含む水溶液（調節因子は含まず）は、治療剤および調節因子の水溶液を含む組成物よりもアルカリ性である。ｐＨ調節因子は、組成物を、標的ｐＨに、非限定的な例として少なくとも７、７〜１１の間、８〜１０の間、または８．５〜９．５の間に調整するバッファー、アルカリ性バッファー、例えばＮａＯＨ、または別のバッファーであってもよい。ｐＨ調節因子は、酸、酸性物質（ａｃｉｄｉｃ ａｇｅｎｔ）、または酸もしくは酸性物質の塩であってもよい。そのような実施形態では、本組成物は、治療剤と、本組成物のｐＨを非限定的な例として少なくとも７、７〜１１の間、８〜１０の間、または８．５〜９．５の間に調節するｐＨ調節因子とを含む。そのような組成物を、脱神経の標的である神経の周りの組織に送達することができる。いくつかの実施形態では、前記組成物の単回の注射が、１つまたは複数の標的神経を脱神経させることにおいて効果的であり得る。いくつかの実施形態では、治療剤は、グアネチジン、グアネチジン一硫酸塩、もしくはグアネチジンヘミサルフェート、または本明細書の他所に記載されたあらゆる薬剤（すなわち治療剤）を含む。いくつかの実施形態では、調節因子は、バッファーまたは緩衝剤である。いくつかの実施形態では、バッファーは、水酸化ナトリウムを含む。

【0025】

グアネチジンヘミサルフェート薬剤の送達：いくつかの実施形態では、本方法は、アルカリ性であるｐＨを有する水溶液の治療剤を含む組成物の送達を含む。いくつかの実施形態では、本方法は、酸性であるｐＨを有する水溶液中の治療剤を含む組成物の送達を含む。そのような実施形態では、ｐＨ調節因子は、組成物が送達される組織で神経を脱神経させることにおいて治療剤の有効性を強化するｐＨを必ずしも達成しない。そのような組成物は、非限定的な例として、少なくとも７、７〜１１の間、８〜１０の間、または８．５〜９．５の間のｐＨを有する水溶液中に治療剤を含んでいてもよい。本明細書において、８より高いｐＨを有するグアニジンを含有する組成物が提供される。いくつかの実施形態では、グアニジンは、グアネチジンである。いくつかの実施形態では、グアネチジンは、一硫酸塩を包含する。いくつかの実施形態では、グアネチジンは、脱神経用に構成した溶液におけるヘミ硫酸塩を包含する。いくつかの実施形態では、グアネチジンは、脱神経に適した溶液におけるヘミ硫酸塩を包含する。いくつかの実施形態では、ｐＨは９より高い。いくつかの実施形態では、ｐＨは１０より高い。

【0026】

いくつかの実施形態では、本組成物は、アルカリ性バッファーをさらに含む。いくつかの実施形態では、アルカリ性バッファーは、ＮａＯＨを含む。いくつかの実施形態では、アルカリ性バッファーは、ＮａＯＨを、グアニジン濃度に対して５０％またはそれよりも高いモル濃度比（ｍｏｌａｒ ｒａｔｉｏ）で含む。いくつかの実施形態では、アルカリ性バッファーは、ＮａＯＨを、グアニジンと等モル濃度でまたはそれよりも高いモル濃度で含む。

【0027】

いくつかの実施形態では、本組成物は、造影剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、本組成物は、塩化ナトリウムをさらに含む。いくつかの実施形態では、塩化ナトリウムは、０．７％〜０．９％の溶液である。いくつかの実施形態では、グアネチジン一硫酸塩は、０．１ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／Ｍｒの濃度で存在する。いくつかの実施形態では、グアネチジン一硫酸塩は、１ｍｇ／ｍＬ〜２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。

【0028】

本明細書において、液体、ゲル、または半固体を含む調製物の組織への送達を含む、局所組織の生理機能を調節する方法が提供される。いくつかの実施形態では、本調製物は、局所組織のｐＨを高くするかまたは低くすることによって局所組織の生理機能を緩衝化する。いくつかの実施形態では、本調製物は、そのような調製物の送達によって調節された生理条件で調製物の指標効果（ｉｎｄｅｘ ｅｆｆｅｃｔ）を有するが、中性の生理条件では指標効果を有さない治療剤を含む。いくつかの実施形態では、本調製物はさらに、そのような調製物の送達によって調節される生理条件で追加の指標効果または強化された指標効果を有するが、中性の生理条件ではそのような追加の指標効果や強化された指標効果を有さない治療剤を包含する。いくつかの実施形態では、ゲルは、ヒドロゲルを含む。いくつかの実施形態では、ヒドロゲルは、組織で再吸収するときにプロトンを消費する。いくつかの実施形態では、ヒドロゲルは、アルカリ性である。いくつかの実施形態では、本調製物は、グアネチジン一硫酸塩を包含する。いくつかの実施形態では、本調製物は、８より高いｐＨを有する。いくつかの実施形態では、本調製物は、造影剤を包含する。

【0029】

本明細書において、十分に低いまたは高いｐＨを有する酸または塩基の限局性送達により、限局性神経損傷または破壊を生じさせる工程を含む、腎脱神経を生じさせる方法が提供される。

【0030】

本明細書において、他の局所組織を温存しながらニューロンの破壊を生じさせる非等張または非等モル浸透圧溶液の限局性送達を含む、腎脱神経を生じさせる方法が提供される。

【0031】

本明細書において、腎動脈外膜および血管周囲組織への、８より高いｐＨのグアネチジン一硫酸塩の調製物または８より高いｐＨのグアネチジンヘミサルフェートの調製物の送達を含む高血圧を処置する方法が提供される。

【0032】

いくつかの実施形態では、本方法は、血管内の側（ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ ａｓｐｅｃｔ）からの送達をさらに含む。

【0033】

本明細書において、腎動脈外膜および血管周囲組織への、８より高いｐＨのグアネチジン一硫酸塩の調製物または８より高いｐＨのグアネチジンヘミサルフェートの調製物の送達を含む心不全を処置する方法が提供される。

【0034】

本明細書において、腎動脈外膜および血管周囲組織への、８より高いｐＨのグアネチジン一硫酸塩の調製物または８より高いｐＨのグアネチジンヘミサルフェートの調製物の送達を含むインスリン抵抗性を処置する方法が提供される。

【0035】

本明細書において、腎動脈外膜および血管周囲組織への、８より高いｐＨのグアネチジン一硫酸塩の調製物または８より高いｐＨのグアネチジンヘミサルフェートの調製物の送達を含む全身性炎症を処置する方法が提供される。

【0036】

本明細書において、腎動脈外膜および血管周囲組織への、８より高いｐＨのグアネチジン一硫酸塩の調製物または８より高いｐＨのグアネチジンヘミサルフェートの調製物の送達を含む睡眠時無呼吸を処置する方法が提供される。

【0037】

本明細書において、以下のもの：高張塩類溶液、洗浄剤、溶媒、エタノール、強酸、強塩基、緩衝剤、アルカリ性緩衝剤、酸性緩衝剤、０．７％〜０．９％の間の塩化ナトリウム含量を有する組成物、約９．５のｐＨを有する組成物、アルカリ性緩衝剤で緩衝化することによって約９．５に調整されたｐＨを有する組成物、水酸化ナトリウムで緩衝化することによって約９．５に調整されたｐＨを有する組成物、または８〜１１の間のｐＨを有する組成物から選択される薬剤の限局性送達を含む、腎脱神経を生じさせる方法が提供される。

【0038】

いくつかの実施形態では、緩衝剤は、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化マグネシウム、硫酸、塩酸、クエン酸、酢酸、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、ホウ酸、リン酸二水素カリウム、ジエチルバルビツール酸、３−｛［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝プロパンスルホン酸、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルグリシン、２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール、３−［Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸、４−２−ヒドロキシエチル−１−ピペラジンエタンスルホン酸、２−｛［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝エタンスルホン酸、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）、ジメチルアルシン酸、サリンソジウムシトレート（ｓａｌｉｎｅ ｓｏｄｉｕｍ ｃｉｔｒａｔｅ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸、およびグリシンのうち１つまたは複数を含む。

【0039】

本明細書において、以下のもの：７より高いｐＨの１μｇ／ｍＬから５０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度のグアネチジン、７より高いｐＨの１ｍｇ／ｍＬから３０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度のグアネチジン、０．７％〜０．９％の間の塩化ナトリウム含量を有するグアネチジンを含む組成物、約９．５のｐＨを有するグアネチジンを含む組成物、アルカリ性緩衝剤で緩衝化することによって約９．５に調整されたｐＨを有するグアネチジンを含む組成物、水酸化ナトリウムで緩衝化することによって約９．５に調整されたｐＨを有するグアネチジンを含む組成物、または８〜１１の間のｐＨを有するグアネチジンを含む組成物から選択される薬剤の限局性送達を含む、腎脱神経を生じさせる方法が提供される。

【0040】

本明細書において、ナトリウムチャネルを介して細胞に入る第一の毒素（そのような第一の毒素は、テトロドトキシンおよびバトラコトキシンのうち１つまたは複数を含む）、カリウムチャネルを介して細胞に入る第二の毒素（そのような第二の毒素は、マウロトキシン（ａｕｒｏｔｏｘｉｎ）、アジトキシン、カリブドトキシン、マルガトキシン、スロトキシン、シクラトキシン、およびヘフトキシンのうち１つまたは複数を含む）、および／またはカルシウムチャネルを介して細胞に入る第三の毒素（そのような第三の毒素は、カルシセプチン、タイカトキシン、カルシクルジン、およびＰｈＴｘ３のうち１つまたは複数を含む）の限局性送達を含む、腎脱神経を生じさせる方法が提供される。

【0041】

本明細書において、アドレナリン遮断薬、アンドロゲン阻害剤、アドレナリン刺激剤、アルファ−／ベータ−アドレナリン遮断薬、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、ＡＣＥ受容体アンタゴニスト、ベータ遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、Ｉ〜ＩＶ群の抗不整脈薬、抗不整脈薬、強心薬、アルファ−２−アゴニスト、グアニジン誘導体、イミダゾリン受容体アゴニスト、神経節遮断薬、ニコチンアンタゴニスト、神経節遮断薬、ニコチンアンタゴニスト、ＭＡＯＩ阻害剤、アドレナリン取り込み阻害薬、チロシンヒドロキシラーゼ阻害剤、アルファ−１遮断薬、非選択的アルファ遮断薬、セロトニンアンタゴニスト、エンドセリンアンタゴニスト、硬化薬、または脱感覚神経薬を含む薬剤の限局性送達を含む、腎脱神経を生じさせる方法が提供される。

【0042】

本明細書において、ドキサゾシン、グアナドレル、グアネチジン、フェノキシベンザミン、プラゾシン＋ポリチアジド、テラゾシン、メチルドパ、クロニジン、グアナベンズ、グアンファシン、ラベタロール、ベナゼプリル、カプトプリル、エナラプリル、エナラプリラート、フォシノプリル、リシノプリル、モエキシプリル、キナプリル、ラミプリル、およびカルシウムチャネル遮断薬と利尿薬との組合せ、ロサルタン、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、カルテオロール、エスモロール、フィモロール、ピンドロール、プロプラノロール、ペンブトロール、メトプロロール、ナドロール、ソタロール、アミロリド、アムロジピン、ベプリジル、ジルチアゼム、イスラジピン、ニフェジピン、ベラパミル、フェロジピン、ニカルジビン、ニモジピン、ブレチリウム、ジソピラミド、エンカイニド、フレカイニド、リドカイン、メキシレチン、モリシジン、プロパフェノン、プロカインアミド、キニジン、トカイニド、エスモロール、プロプラノロール、アセブトロール、アミオダロン、ソタロール、ベラパミル、ジルチアゼム、ピンドロール、ブプラノロール塩酸塩、トリクロルメチアジド、フロセミド、プラゾシン塩酸塩、メトプロロール酒石酸塩、カルテオロール塩酸塩、オクスプレノロール塩酸塩、およびプロプラノロール塩酸塩、アデノシン、ジゴキシン；メチルジゴキシン、カフェイン、ドパミン塩酸塩、ドブタミン塩酸塩、オクトパミン塩酸塩、ジプロフィリン、ユビデカレノン、ジギタリス、カプサイシン、抗神経成長因子、抗ドパミンベータ−ヒドロキシラーゼ、抗アセチルコリンエステラーゼ、６−ヒドロキシルドパミン（６−ＯＨＤＡ）、トシル酸ブレチリウム、グアナクリン、およびＮ−（２−クロロエチル）−Ｎ−エチル−２−ブロモベンジルアミン（ＤＳＰ４）、ＯＸ７−ＳＡＰ、１９２−ＳＡＰ、抗ドパミンベータ−ヒドロキシラーゼサポリン（ＤＢＨ−ＳＡＰ）、および抗ドパミンベータ−ヒドロキシラーゼ免疫毒素（ＤＨＩＴ）、フェノール、エタノール、クロニジン、グアンファシン、メチルドパ、ベタニジン、グアノキサン、デブリソキン、グアノクロル、グアナゾジン、グアノキサベンズ、モキソニジン、リルメニジン、メカミラミン、トリメタファン、パルギリン、レシンナミン、レセルピン、メチロシン、プラゾシン、インドラミン、トリマゾシン、ドキサゾシン、ウラピジル、フェントラミン、ケタンセリン、ボセンタン、アンブリセンタン、シタキセンタン、キナクリン、クロロキン、テトラデシル硫酸ナトリウム、オレイン酸エタノールアミン、モルイン酸ナトリウム、ポリドカノール、または高張液を含む薬剤の限局性送達を含む、腎脱神経を生じさせる方法が提供される。

【0043】

いくつかの実施形態では、薬剤それ自身またはそのような薬剤を含む組成物は、少なくとも７のｐＨ、最大で１１のｐＨ、少なくとも７および最大で１１のｐＨ、少なくとも８および最大で１０のｐＨ、そのような薬剤が送達される神経を脱神経させるのに効果的であるｐＨ、またはそのような薬剤が送達される神経を脱神経させるのに効果的であるレベルに調整されたｐＨを有する。

【0044】

本明細書において、組織への治療剤の取り込みを強化する方法であって、中心と外縁とを有する組織の帯（ｚｏｎｅ）を生じさせることにより組織のｐＨを調節する工程を含み、該帯は、調節する前の組織の調節前ｐＨと比較して、または中性ｐＨと比較して調節されたｐＨを含み、ここで、帯は該帯の中心で最もよく調節され、かつ該帯の外縁で組織の調節前ｐＨまたは中性ｐＨまで低下させるｐＨの勾配を含み、該帯において、調節前ｐＨまたは中性ｐＨで組織の中へと起こる取り込みと比較して治療剤の強化された取り込みが起こる、方法が提供される。

【0045】

本明細書において、組織への治療剤の取り込みを強化する方法であって、− 中心と外縁とを有する組織の帯を生じさせることにより組織のｐＨを調節する工程と、− 該帯へと治療剤を送達する工程とを含み；該帯は、調節する前の組織の調節前ｐＨと比較して、または中性ｐＨと比較して調節されたｐＨを含み、ここで、帯は該帯の中心で最もよく調節され、かつ該帯の外縁で組織の調節前ｐＨまたは中性ｐＨまで低下させるｐＨの勾配を含み、該帯において、調節前ｐＨまたは中性ｐＨで組織へと起こる取り込みと比較して治療剤の強化された取り込みが起こる、方法が提供される。

【0046】

いくつかの実施形態では、本方法は、帯へと治療剤を送達する工程を含む。いくつかの実施形態では、治療剤が全身に送達され、組織のｐＨを調節することにより、帯における治療剤の集積が強化されるか、または帯における治療指数が改善される。

【0047】

いくつかの実施形態では、強化された取り込みは、予め選択した量によって、調節前ｐＨから調節された調節されたｐＨを有する帯の部分内で起こる。いくつかの実施形態では、強化された取り込みは、予め選択した量によって、中性ｐＨから調節した調節されたｐＨを有する帯の部分内で起こる。いくつかの実施形態では、予め選択した量は、０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、−０．５、−１．０、−１．５、−２．０、−２．５、−３．０、−３．５、−４．０、−４．５、０．５から５．０、１．５から４．５、２．０から４．０、約０．５、−０．５から−５．０、−１．５から−４．５、−２．０から−４．０、約０．５、約１．０、約１．５、約２．０、約２．５、約３．０、約３．５、約４．０、約４．５、約−０．５、約−１．０、約−１．５、約−２．０、約−２．５、約−３．０、約−３．５、約−４．０、および約−４．５のうち１つまたは複数の、調節されたｐＨと調節前ｐＨとの間のｐＨの差、または調節されたｐＨと中性ｐＨとの間のｐＨの差である。いくつかの実施形態では、調節されたｐＨは、帯外側の組織よりも低いｐＨ、帯外側の組織よりも高いｐＨ、調節する前の組織のｐＨよりも低いｐＨ、または調節する前の組織のｐＨよりも高いｐＨである。いくつかの実施形態では、調節されたｐＨは、帯外側の組織のｐＨよりも酸性であるか、または、帯外側の組織のｐＨよりもアルカリ性である。調節されたｐＨが、少なくとも７、最大で１１、少なくとも７および最大で１１、少なくとも８および最大で１０、またはそのような治療剤が送達される神経を脱神経させるのに効果的である所定のｐＨである、請求項４２に記載の方法。いくつかの実施形態では、治療剤は、グアネチジンを含む。いくつかの実施形態では、グアネチジンは、一硫酸塩またはヘミ硫酸塩を包含する。いくつかの実施形態では、少なくとも７、最大で１１、少なくとも７および最大で１１、少なくとも８および最大で１０の調節されたｐＨ、またはそのような治療剤が送達される神経を脱神経させるのに効果的である所定のｐＨ。
参考による組み込み

【0048】

本明細書に記載した全ての出版物および特許出願は、それぞれ個々の出版物または特許出願が具体的かつ個々に参照により組み込まれることが示されるのと同じ程度に参照により本明細書に組み込まれる。

【0049】

以下の例示的な実施形態を示す詳細な記載と添付の図面を参照することにより、提供される組成物、システム、デバイス、および方法の特徴および利点がよりよく理解される。
一つの実施形態において、本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
８より高いｐＨを有するグアニジンを含む組成物。
（項目２）
前記グアニジンが、グアネチジンである、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記グアネチジンが、一硫酸塩を包含する、項目２に記載の組成物。
（項目４）
前記グアネチジンが、脱神経用に形成された溶液中のヘミ硫酸塩を包含する、項目２に記載の組成物。
（項目５）
前記グアネチジンが、脱神経に適した溶液中のヘミ硫酸塩を包含する、項目２に記載の組成物。
（項目６）
前記ｐＨが９より高い、項目１に記載の組成物。
（項目７）
前記ｐＨが１０より高い、項目１に記載の組成物。
（項目８）
アルカリ性バッファーをさらに含む、項目１に記載の組成物。
（項目９）
前記アルカリ性バッファーが、ＮａＯＨを含む、項目１に記載の組成物。
（項目１０）
前記アルカリ性バッファーが、ＮａＯＨを、前記グアニジンの濃度に対して５０％またはそれよりも高いモル濃度比で含む、項目１に記載の組成物。
（項目１１）
前記アルカリ性バッファーが、ＮａＯＨを、前記グアニジンと等モル濃度でまたはそれよりも高いモル濃度で含む、項目１に記載の組成物。
（項目１２）
造影剤をさらに含む、項目１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１３）
塩化ナトリウムをさらに含む、項目１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１４）
前記塩化ナトリウムが、前記溶液の０．７％〜０．９％である、項目１３に記載の組成物。
（項目１５）
前記グアネチジン一硫酸塩が、０．１ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、項目３に記載の組成物。
（項目１６）
前記グアネチジン一硫酸塩が、１ｍｇ／ｍＬ〜２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、項目３に記載の組成物。
（項目１７）
局所組織の生理機能を調節する方法であって、液体、ゲル、または半固体を含む調製物を該組織に送達する工程を含む、方法。
（項目１８）
前記調製物が、前記局所組織のｐＨを高くするかまたは低くすることによって前記局所組織の生理機能を緩衝化する、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記調製物が、該調製物の送達によって調節された生理条件で該調製物の指標効果を有するが、中性の生理条件では指標効果を有さない治療剤を含む、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記調製物が、該調製物の送達によって調節された生理条件で追加の指標効果または強化された指標効果を有するが、中性の生理条件では該追加の指標効果や強化された指標効果を有さない治療剤をさらに包含する、項目１８に記載の方法。
（項目２１）
前記ゲルが、ヒドロゲルを含む、項目１７に記載の方法。
（項目２２）
前記ヒドロゲルが、前記組織で再吸収するときにプロトンを消費する、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記ヒドロゲルが、アルカリ性である、項目２１に記載の方法。
（項目２４）
前記調製物が、グアネチジン一硫酸塩を包含する、項目１７〜２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記調製物が、８より高いｐＨを有する、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記調製物が、造影剤を包含する、項目２４に記載の方法。
（項目２７）
十分に低いまたは高いｐＨを有する酸または塩基の限局性送達により、限局性神経損傷または破壊を生じさせる工程を含む、腎脱神経を生じさせる方法。
（項目２８）
他の局所組織を温存しながらニューロンの破壊を生じさせる非等張または非等モル浸透圧溶液の限局性送達を含む、腎脱神経を生じさせる方法。
（項目２９）
腎動脈外膜および血管周囲組織への、８より高いｐＨのグアネチジン一硫酸塩の調製物または８より高いｐＨのグアネチジンヘミサルフェートの調製物の送達を含む、高血圧を処置する方法。
（項目３０）
血管内の側からの送達をさらに含む、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
腎動脈外膜および血管周囲組織への、８より高いｐＨのグアネチジン一硫酸塩の調製物または８より高いｐＨのグアネチジンヘミサルフェートの調製物の送達を含む、心不全を処置する方法。
（項目３２）
腎動脈外膜および血管周囲組織への、８より高いｐＨのグアネチジン一硫酸塩の調製物または８より高いｐＨのグアネチジンヘミサルフェートの調製物の送達を含む、インスリン抵抗性を処置する方法。
（項目３３）
腎動脈外膜および血管周囲組織への、８より高いｐＨのグアネチジン一硫酸塩の調製物または８より高いｐＨのグアネチジンヘミサルフェートの調製物の送達を含む、全身性炎症を処置する方法。
（項目３４）
腎動脈外膜および血管周囲組織への、８より高いｐＨのグアネチジン一硫酸塩の調製物または８より高いｐＨのグアネチジンヘミサルフェートの調製物の送達を含む、睡眠時無呼吸を処置する方法。
（項目３５）
洗浄剤、溶媒、エタノール、強酸、強塩基、緩衝剤、アルカリ性緩衝剤、酸性緩衝剤、０．７％〜０．９％の間の塩化ナトリウム含量を有する組成物、約９．５のｐＨを有する組成物、アルカリ性緩衝剤で緩衝化することによって約９．５に調整されたｐＨを有する組成物、水酸化ナトリウムで緩衝化することによって約９．５に調整されたｐＨを有する組成物、または８〜１１の間のｐＨを有する組成物から選択される薬剤の限局性送達を含む、腎脱神経を生じさせる方法。
（項目３６）
前記緩衝剤が、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化マグネシウム、硫酸、塩酸、クエン酸、酢酸、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、ホウ酸、リン酸二水素カリウム、ジエチルバルビツール酸、３−｛［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝プロパンスルホン酸、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルグリシン、２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール、３−［Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸、４−２−ヒドロキシエチル−１−ピペラジンエタンスルホン酸、２−｛［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝エタンスルホン酸、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）、ジメチルアルシン酸、サリンソジウムシトレート（ｓａｌｉｎｅ ｓｏｄｉｕｍ ｃｉｔｒａｔｅ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸、およびグリシンのうち１つまたは複数を含む、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
以下のもの：７より高いｐＨの１μｇ／ｍＬから５０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度のグアネチジン、７より高いｐＨの１ｍｇ／ｍＬから３０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度のグアネチジン、０．７％〜０．９％の間の塩化ナトリウム含量を有するグアネチジンを含む組成物、約９．５のｐＨを有するグアネチジンを含む組成物、アルカリ性緩衝剤で緩衝化することによって約９．５に調整されたｐＨを有するグアネチジンを含む組成物、水酸化ナトリウムで緩衝化することによって約９．５に調整されたｐＨを有するグアネチジンを含む組成物、または８〜１１の間のｐＨを有するグアネチジンを含む組成物から選択される薬剤の限局性送達を含む、腎脱神経を生じさせる方法。
（項目３８）
テトロドトキシンおよびバトラコトキシンのうち１つまたは複数を含む、ナトリウムチャネルを介して細胞に入る第一の毒素、
マウロトキシン、アジトキシン、カリブドトキシン、マルガトキシン、スロトキシン、シクラトキシン、およびヘフトキシンのうち１つまたは複数を含む、カリウムチャネルを介して細胞に入る第二の毒素、および／または
カルシセプチン、タイカトキシン、カルシクルジン、およびＰｈＴｘ３のうち１つまたは複数を含む、カルシウムチャネルを介して細胞に入る第三の毒素
を局所的にの限局性送達を含む、腎脱神経を生じさせる方法。
（項目３９）
アドレナリン遮断薬、アンドロゲン阻害剤、アドレナリン刺激剤、アルファ−／ベータ−アドレナリン遮断薬、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、ＡＣＥ受容体アンタゴニスト、ベータ遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、Ｉ〜ＩＶ群の抗不整脈薬、抗不整脈薬、強心薬、アルファ−２−アゴニスト、グアニジン誘導体、イミダゾリン受容体アゴニスト、神経節遮断薬、ニコチンアンタゴニスト、神経節遮断薬、ニコチンアンタゴニスト、ＭＡＯＩ阻害剤、アドレナリン取り込み阻害薬、チロシンヒドロキシラーゼ阻害剤、アルファ−１遮断薬、非選択的アルファ遮断薬、セロトニンアンタゴニスト、エンドセリンアンタゴニスト、硬化薬、または脱感覚神経薬を含む薬剤の限局性送達を含む、腎脱神経を生じさせる方法。
（項目４０）
ドキサゾシン、グアナドレル、グアネチジン、フェノキシベンザミン、プラゾシン＋ポリチアジド、テラゾシン、メチルドパ、クロニジン、グアナベンズ、グアンファシン、ラベタロール、ベナゼプリル、カプトプリル、エナラプリル、エナラプリラート、フォシノプリル、リシノプリル、モエキシプリル、キナプリル、ラミプリル、およびカルシウムチャネル遮断薬と利尿薬との組合せ、ロサルタン、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、カルテオロール、エスモロール、フィモロール、ピンドロール、プロプラノロール、ペンブトロール、メトプロロール、ナドロール、ソタロール、アミロリド、アムロジピン、ベプリジル、ジルチアゼム、イスラジピン、ニフェジピン、ベラパミル、フェロジピン、ニカルジビン、ニモジピン、ブレチリウム、ジソピラミド、エンカイニド、フレカイニド、リドカイン、メキシレチン、モリシジン、プロパフェノン、プロカインアミド、キニジン、トカイニド、エスモロール、プロプラノロール、アセブトロール、アミオダロン、ソタロール、ベラパミル、ジルチアゼム、ピンドロール、ブプラノロール塩酸塩、トリクロルメチアジド、フロセミド、プラゾシン塩酸塩、メトプロロール酒石酸塩、カルテオロール塩酸塩、オクスプレノロール塩酸塩、およびプロプラノロール塩酸塩、アデノシン、ジゴキシン；メチルジゴキシン、カフェイン、ドパミン塩酸塩、ドブタミン塩酸塩、オクトパミン塩酸塩、ジプロフィリン、ユビデカレノン、ジギタリス、カプサイシン、抗神経成長因子、抗ドパミンベータ−ヒドロキシラーゼ、抗アセチルコリンエステラーゼ、６−ヒドロキシルドパミン（６−ＯＨＤＡ）、トシル酸ブレチリウム、グアナクリン、およびＮ−（２−クロロエチル）−Ｎ−エチル−２−ブロモベンジルアミン（ＤＳＰ４）、ＯＸ７−ＳＡＰ、１９２−ＳＡＰ、抗ドパミンベータ−ヒドロキシラーゼサポリン（ＤＢＨ−ＳＡＰ）、および抗ドパミンベータ−ヒドロキシラーゼ免疫毒素（ＤＨＩＴ）、フェノール、エタノール、クロニジン、グアンファシン、メチルドパ、ベタニジン、グアノキサン、デブリソキン、グアノクロル、グアナゾジン、グアノキサベンズ、モキソニジン、リルメニジン、メカミラミン、トリメタファン、パルギリン、レシンナミン、レセルピン、メチロシン、プラゾシン、インドラミン、トリマゾシン、ドキサゾシン、ウラピジル、フェントラミン、ケタンセリン、ボセンタン、アンブリセンタン、シタキセンタン、キナクリン、クロロキン、テトラデシル硫酸ナトリウム、オレイン酸エタノールアミン、モルイン酸ナトリウム、ポリドカノール、または高張液を含む薬剤の限局性送達を含む、腎脱神経を生じさせる方法。
（項目４１）
前記薬剤それ自身または該薬剤を含む組成物が、少なくとも７のｐＨ、最大で１１のｐＨ、少なくとも７および最大で１１のｐＨ、少なくとも８および最大で１０のｐＨ、該薬剤が送達される神経を脱神経させるのに効果的であるｐＨ、または該薬剤が送達される神経を脱神経させるのに効果的であるレベルに調整されるｐＨを有する、項目３９または項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記薬剤が送達される組織が、少なくとも７のｐＨ、最大で１１のｐＨ、少なくとも７および最大で１１のｐＨ、少なくとも８および最大で１０のｐＨ、該薬剤が送達される神経を脱神経させるのに効果的であるｐＨに調節される、項目３９または４０に記載の方法。
（項目４３）
前記薬剤の前記組織への送達の前に、その後に、またはその間に、該組織が調節される、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記薬剤それ自身または該薬剤を含む組成物が、最大で７のｐＨ、少なくとも３のｐＨ、最大で７および少なくとも３のｐＨ、最大で６および少なくとも４のｐＨ、該薬剤が送達される神経を脱神経させるのに効果的である酸性ｐＨ、または該薬剤が送達される神経を脱神経させるのに効果的であるレベルに調整される酸性ｐＨを有する、項目３９または４０に記載の方法。
（項目４５）
前記薬剤が送達される組織が、最大で７のｐＨ、少なくとも３のｐＨ、最大で７および少なくとも３のｐＨ、最大で６および少なくとも４のｐＨ、該薬剤が送達される神経を脱神経させるのに効果的である酸性ｐＨに調節される、項目３９または４０に記載の方法。
（項目４６）
前記薬剤の前記組織への送達の前に、その後に、またはその間に、該組織が調節される、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
組織への治療剤の取り込みを強化する方法であって、
中心と外縁とを有する該組織の帯を生じさせることにより該組織のｐＨを調節する工程
を含み、
ここで、該帯は、調節する前の該組織の調節前ｐＨと比較して、または中性ｐＨと比較して調節されたｐＨを含み、
帯は、該帯の該中心で最もよく調節され、かつ該帯の該外縁で該組織の該調節前ｐＨまたは中性ｐＨまで低下させるｐＨの勾配を含み、
該帯において、該調節前ｐＨまたは中性ｐＨで組織へと起こる取り込みと比較して治療剤の強化された取り込みが起こる、方法。
（項目４８）
前記帯に前記治療剤を送達する工程を含む、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記治療剤が全身に送達され、前記組織のｐＨの調節により、前記帯における該治療剤の集積が強化されるか、または該帯における治療指数が改善される、項目４７に記載の方法。
（項目５０）
前記強化された取り込みが、予め選択した量によって、前記調節前ｐＨから調節された前記調節されたｐＨを有する前記帯の部分内で起こる、項目４７に記載の方法。
（項目５１）
前記強化された取り込みが、予め選択した量によって、中性ｐＨから調節された前記調節されたｐＨを有する前記帯の部分内で起こる、項目４７に記載の方法。
（項目５２）
前記予め選択した量が、０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、−０．５、−１．０、−１．５、−２．０、−２．５、−３．０、−３．５、−４．０、−４．５、０．５から５．０、１．５から４．５、２．０から４．０、約０．５、−０．５から−５．０、−１．５から−４．５、−２．０から−４．０、約０．５、約１．０、約１．５、約２．０、約２．５、約３．０、約３．５、約４．０、約４．５、約−０．５、約−１．０、約−１．５、約−２．０、約−２．５、約−３．０、約−３．５、約−４．０、および約−４．５のうち１つまたは複数の、前記調節されたｐＨと前記調節前ｐＨとの間のｐＨの差、または前記調節されたｐＨと前記中性ｐＨとの間のｐＨの差である、項目４８または４９に記載の方法。
（項目５３）
前記調節されたｐＨが、前記帯外側の前記組織よりも低いｐＨ、該帯外側の該組織よりも高いｐＨ、調節する前の該組織のｐＨよりも低いｐＨ、または調節する前の該組織のｐＨよりも高いｐＨである、項目４７に記載の方法。
（項目５４）
前記調節されたｐＨが、前記帯外側の組織のｐＨよりも酸性であるか、または、該帯外側の組織のｐＨよりもアルカリ性である、項目４７に記載の方法。該調節されたｐＨが、少なくとも７、最大で１１、少なくとも７および最大で１１、少なくとも８および最大で１０、または前記治療剤が送達される神経を脱神経させるのに効果的である所定のｐＨである、項目４７に記載の方法。
（項目５５）
前記治療剤が、グアネチジンを含む、項目４７に記載の方法。
（項目５６）
前記グアネチジンが、一硫酸塩またはヘミ硫酸塩を包含する、項目５５に記載の方法。
（項目５７）
前記調節されたｐＨが、少なくとも７、最大で１１、少なくとも７および最大で１１、少なくとも８および最大で１０、または前記治療剤が送達される神経を脱神経させるのに効果的である所定のｐＨである、項目４７に記載。

【図面の簡単な説明】

【0050】

【図1A】図１Ａは、本発明の方法およびシステムでの使用に適した管内注射用カテーテルの概略的な斜視図である。

【0051】

【図1B】図１Ｂは、図１Ａのライン１Ｂ−１Ｂに沿った断面図である。

【0052】

【図1C】図１Ｃは、図１Ａのライン１Ｃ−１Ｃに沿った断面図である。

【0053】

【図2A】図２Ａは、展開した注射針と共に示した図１Ａ〜１Ｃのカテーテルの概略的な斜視図である。

【0054】

【図2B】図２Ｂは、図２Ａのライン２Ｂ〜２Ｂに沿った断面図である。

【0055】

【図3】図３は、本発明の方法に従って体の管腔の周りの外膜の空間へと治療剤を注射する図１Ａ〜１Ｃの管内カテーテルの概略的な斜視図である。

【0056】

【図4A】図４Ａ〜４Ｄは、本発明の方法において有用な管内注射用カテーテルの膨張過程の断面図である。

【図4B】図４Ａ〜４Ｄは、本発明の方法において有用な管内注射用カテーテルの膨張過程の断面図である。

【図4C】図４Ａ〜４Ｄは、本発明の方法において有用な管内注射用カテーテルの膨張過程の断面図である。

【図4D】図４Ａ〜４Ｄは、本発明の方法において有用な管内注射用カテーテルの膨張過程の断面図である。

【0057】

【図5A】図５Ａ〜５Ｃは、本発明の方法において有用な膨張した管内注射用カテーテルの断面図であり、これは複数の管腔径を取り扱う（ｔｒｅａｔ）能力を図示する。

【図5B】図５Ａ〜５Ｃは、本発明の方法において有用な膨張した管内注射用カテーテルの断面図であり、これは複数の管腔径を取り扱う（ｔｒｅａｔ）能力を図示する。

【図5C】図５Ａ〜５Ｃは、本発明の方法において有用な膨張した管内注射用カテーテルの断面図であり、これは複数の管腔径を取り扱う（ｔｒｅａｔ）能力を図示する。

【0058】

【図6】図６は、本発明の方法およびシステムにおいて有用なニードル注射用カテーテルの斜視図である。

【0059】

【図7】図７は、引き込んだ配置にある注射針を共に示した図６のカテーテルの断面図である。

【0060】

【図8】図８は、本発明に従う治療剤または診断剤を送達するために注射針を管腔組織に向かって横方向に送り出した状態を示す図７に類似した断面図である。

【0061】

【図9】図９は、血管周囲組織、外膜、および血管壁要素間の関係を図示した、動脈と周辺組織との概略図である。

【0062】

【図10A】図１０Ａは、腎臓と、血液を腎臓に送る動脈構造との概略図である。

【0063】

【図10B】図１０Ｂは、腎動脈周辺の大動脈近傍の叢（ｐｌｅｘｉ）または神経節から出て腎臓まで通じる交感神経を示した図１０Ａの概略図である。

【0064】

【図10C】図１０Ｃは、図１０Ｂのライン１０Ｃ−１０Ｃに沿った断面図である。

【0065】

【図11A】図１１Ａ〜１１Ｃは、本発明に従って薬剤を交感神経に順次送達するために外膜に向かって送り出した注射針を共に示す、図４Ａおよび４Ｄに類似した断面図である。

【図11B】図１１Ａ〜１１Ｃは、本発明に従って薬剤を交感神経に順次送達するために外膜に向かって送り出した注射針を共に示す、図４Ａおよび４Ｄに類似した断面図である。

【図11C】図１１Ａ〜１１Ｃは、本発明に従って薬剤を交感神経に順次送達するために外膜に向かって送り出した注射針を共に示す、図４Ａおよび４Ｄに類似した断面図である。

【0066】

【図11D】図１１Ｄは、図１１Ａのライン１１Ｄ−１１Ｄに沿った断面図である。

【0067】

【図11E】図１１Ｅは、図１１Ｂのライン１１Ｅ−１１Ｅに沿った断面図である。

【0068】

【図11F】図１１Ｆは、図１１Ｃのライン１１Ｆ−１１Ｆに沿った断面図である。

【0069】

【図12】図１２は、本発明の方法を達成するのに使用することができる一実施形態のカテーテルを表し、図の左側では、鞘状の萎んだ形状（断面図）から膨張して展開した形状（断面図）に上から下へ連続的に展開しており、図の右の画像では、そのような実施形態の写真が示される。

【0070】

【図13】図１３は、一実施形態のカテーテルが管腔または血管壁を通じて展開した状態の血管の断面を表し、さらに組織への薬剤の送達を示し、加えて、いくつかの実施形態では、薬剤が送達された位置からの距離が増すにつれて、薬物濃度が減少し、送達される薬剤のｐＨがより中性になることを示す。

【0071】

【図14】図１４は、薬剤の送達地点からの距離が増すにつれてどのように薬物濃度が減少して、ｐＨがより中性になり得るかを示す、図１３に記載の断面で表したものと類似した別の実施形態の図を表す。

【0072】

【図15】図１５は、ｘ軸における注射部位からの距離の増加に対する正規化した濃度およびｐＨを示す２つの時点、すなわち上のプロットにおける時点１（Ｔ１）、および下のプロットにおける時点２（Ｔ２）（時点１の後）における一連の２つのプロットであり、ｐＨおよび濃度は共にｙ軸に表し、さらに存在する治療帯を表し、この治療帯において、濃度は、いくつかの最大の正規化濃度のうち少なくとも０．２５であり、ｐＨは少なくとも８である。

【0073】

【図16】図１６は、硫酸グアネチジンの化学構造を表す。

【0074】

【図17A】図１７Ａ〜１７Ｌは、アラマーブルーで約４または２４時間インキュベートすることによる、４８時間目、すなわち２日目（左の列は、図１７Ａ、１７Ｃ、１７Ｅ、１７Ｇ、１７Ｉ、および１７Ｋのプロットを包含する）および７日目（右の列は、図１７Ｂ、１７Ｄ、１７Ｆ、１７Ｈ、１７Ｊ、および１７Ｌのプロットを包含する）の３連でなされた生存率試験の結果を示す。

【図17B】図１７Ａ〜１７Ｌは、アラマーブルーで約４または２４時間インキュベートすることによる、４８時間目、すなわち２日目（左の列は、図１７Ａ、１７Ｃ、１７Ｅ、１７Ｇ、１７Ｉ、および１７Ｋのプロットを包含する）および７日目（右の列は、図１７Ｂ、１７Ｄ、１７Ｆ、１７Ｈ、１７Ｊ、および１７Ｌのプロットを包含する）の３連でなされた生存率試験の結果を示す。

【図17C】図１７Ａ〜１７Ｌは、アラマーブルーで約４または２４時間インキュベートすることによる、４８時間目、すなわち２日目（左の列は、図１７Ａ、１７Ｃ、１７Ｅ、１７Ｇ、１７Ｉ、および１７Ｋのプロットを包含する）および７日目（右の列は、図１７Ｂ、１７Ｄ、１７Ｆ、１７Ｈ、１７Ｊ、および１７Ｌのプロットを包含する）の３連でなされた生存率試験の結果を示す。

【図17D】図１７Ａ〜１７Ｌは、アラマーブルーで約４または２４時間インキュベートすることによる、４８時間目、すなわち２日目（左の列は、図１７Ａ、１７Ｃ、１７Ｅ、１７Ｇ、１７Ｉ、および１７Ｋのプロットを包含する）および７日目（右の列は、図１７Ｂ、１７Ｄ、１７Ｆ、１７Ｈ、１７Ｊ、および１７Ｌのプロットを包含する）の３連でなされた生存率試験の結果を示す。

【図17E】図１７Ａ〜１７Ｌは、アラマーブルーで約４または２４時間インキュベートすることによる、４８時間目、すなわち２日目（左の列は、図１７Ａ、１７Ｃ、１７Ｅ、１７Ｇ、１７Ｉ、および１７Ｋのプロットを包含する）および７日目（右の列は、図１７Ｂ、１７Ｄ、１７Ｆ、１７Ｈ、１７Ｊ、および１７Ｌのプロットを包含する）の３連でなされた生存率試験の結果を示す。

【図17F】図１７Ａ〜１７Ｌは、アラマーブルーで約４または２４時間インキュベートすることによる、４８時間目、すなわち２日目（左の列は、図１７Ａ、１７Ｃ、１７Ｅ、１７Ｇ、１７Ｉ、および１７Ｋのプロットを包含する）および７日目（右の列は、図１７Ｂ、１７Ｄ、１７Ｆ、１７Ｈ、１７Ｊ、および１７Ｌのプロットを包含する）の３連でなされた生存率試験の結果を示す。

【図17G】図１７Ａ〜１７Ｌは、アラマーブルーで約４または２４時間インキュベートすることによる、４８時間目、すなわち２日目（左の列は、図１７Ａ、１７Ｃ、１７Ｅ、１７Ｇ、１７Ｉ、および１７Ｋのプロットを包含する）および７日目（右の列は、図１７Ｂ、１７Ｄ、１７Ｆ、１７Ｈ、１７Ｊ、および１７Ｌのプロットを包含する）の３連でなされた生存率試験の結果を示す。

【図17H】図１７Ａ〜１７Ｌは、アラマーブルーで約４または２４時間インキュベートすることによる、４８時間目、すなわち２日目（左の列は、図１７Ａ、１７Ｃ、１７Ｅ、１７Ｇ、１７Ｉ、および１７Ｋのプロットを包含する）および７日目（右の列は、図１７Ｂ、１７Ｄ、１７Ｆ、１７Ｈ、１７Ｊ、および１７Ｌのプロットを包含する）の３連でなされた生存率試験の結果を示す。

【図17I】図１７Ａ〜１７Ｌは、アラマーブルーで約４または２４時間インキュベートすることによる、４８時間目、すなわち２日目（左の列は、図１７Ａ、１７Ｃ、１７Ｅ、１７Ｇ、１７Ｉ、および１７Ｋのプロットを包含する）および７日目（右の列は、図１７Ｂ、１７Ｄ、１７Ｆ、１７Ｈ、１７Ｊ、および１７Ｌのプロットを包含する）の３連でなされた生存率試験の結果を示す。

【図17J】図１７Ａ〜１７Ｌは、アラマーブルーで約４または２４時間インキュベートすることによる、４８時間目、すなわち２日目（左の列は、図１７Ａ、１７Ｃ、１７Ｅ、１７Ｇ、１７Ｉ、および１７Ｋのプロットを包含する）および７日目（右の列は、図１７Ｂ、１７Ｄ、１７Ｆ、１７Ｈ、１７Ｊ、および１７Ｌのプロットを包含する）の３連でなされた生存率試験の結果を示す。

【図17K】図１７Ａ〜１７Ｌは、アラマーブルーで約４または２４時間インキュベートすることによる、４８時間目、すなわち２日目（左の列は、図１７Ａ、１７Ｃ、１７Ｅ、１７Ｇ、１７Ｉ、および１７Ｋのプロットを包含する）および７日目（右の列は、図１７Ｂ、１７Ｄ、１７Ｆ、１７Ｈ、１７Ｊ、および１７Ｌのプロットを包含する）の３連でなされた生存率試験の結果を示す。

【図17L】図１７Ａ〜１７Ｌは、アラマーブルーで約４または２４時間インキュベートすることによる、４８時間目、すなわち２日目（左の列は、図１７Ａ、１７Ｃ、１７Ｅ、１７Ｇ、１７Ｉ、および１７Ｋのプロットを包含する）および７日目（右の列は、図１７Ｂ、１７Ｄ、１７Ｆ、１７Ｈ、１７Ｊ、および１７Ｌのプロットを包含する）の３連でなされた生存率試験の結果を示す。

【0075】

【図18A】図１８Ａ〜１８Ｄは、図１８Ｄにおけるグアネチジン一硫酸塩と図１８Ｃにおけるグアネチジンヘミサルフェートとの間の差を表し、一硫酸塩（ｍｏｎｏｓｕｌａｔｅ）は、より低いｐＨを有し、特定の前臨床試験では不確定または無効な結果を有することが見出され、ヘミ硫酸塩は、より高いｐＨを有し、特定の前臨床試験では優れた前臨床の結果を有することが見出された。

【図18B】図１８Ａ〜１８Ｄは、図１８Ｄにおけるグアネチジン一硫酸塩と図１８Ｃにおけるグアネチジンヘミサルフェートとの間の差を表し、一硫酸塩（ｍｏｎｏｓｕｌａｔｅ）は、より低いｐＨを有し、特定の前臨床試験では不確定または無効な結果を有することが見出され、ヘミ硫酸塩は、より高いｐＨを有し、特定の前臨床試験では優れた前臨床の結果を有することが見出された。

【図18C】図１８Ａ〜１８Ｄは、図１８Ｄにおけるグアネチジン一硫酸塩と図１８Ｃにおけるグアネチジンヘミサルフェートとの間の差を表し、一硫酸塩（ｍｏｎｏｓｕｌａｔｅ）は、より低いｐＨを有し、特定の前臨床試験では不確定または無効な結果を有することが見出され、ヘミ硫酸塩は、より高いｐＨを有し、特定の前臨床試験では優れた前臨床の結果を有することが見出された。

【図18D】図１８Ａ〜１８Ｄは、図１８Ｄにおけるグアネチジン一硫酸塩と図１８Ｃにおけるグアネチジンヘミサルフェートとの間の差を表し、一硫酸塩（ｍｏｎｏｓｕｌａｔｅ）は、より低いｐＨを有し、特定の前臨床試験では不確定または無効な結果を有することが見出され、ヘミ硫酸塩は、より高いｐＨを有し、特定の前臨床試験では優れた前臨床の結果を有することが見出された。

【0076】

【図19A】図１９Ａは、末梢交感神経のニューロンを模擬した細胞系における４８時間にわたるグアネチジン曝露によるＬＣ５０レベルを示す、高ｐＨにおけるグアネチジン効果のｉｎ ｖｉｔｒｏでの確認を提供し、第一のカラムではＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞をｐＨ６．３で４時間試験し、第二のカラムではＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞をｐＨ９．３で４時間試験し、第三のカラムではＰＣ−１２細胞をｐＨ６．３で４時間試験し、第四のカラムではＰＣ−１２細胞をｐＨ９．３で４時間試験した。

【0077】

【図19B】図１９Ｂは、一次末梢交感神経ニューロンにおける４８時間にわたるグアネチジン曝露によるＬＣ５０レベルを示す、高ｐＨのグアネチジン効果のｉｎ ｖｉｔｒｏでの確認を提供し、第一のカラムではＳＣＧ細胞を中性ｐＨで試験し、第二のカラムではＳＣＧ細胞をｐＨ９．３で１時間試験した。

【0078】

【図20A】図２０Ａは、緩衝化して、例えば溶液中のグアネチジンヘミサルフェートのｐＨレベルにｐＨを高めた、溶液中のグアネチジン一硫酸塩の一実施形態の組成を表す。

【0079】

【図20B】図２０Ｂは、グアネチジンヘミサルフェートのｐＨに達することが可能なグアネチジン一硫酸塩（ｇｕａｎｅｔｈｉｄｎｅ）の緩衝化を表し、ここで、ＮａＯＨで緩衝化したグアネチジン一硫酸塩（イスメリン）の１０ｍｇ／ｍＬのデータは、菱形のマーカーを有する破線（チャートの左下から始まる）のデータで示し、１７％のｉｓｏＶＵＥ３７０を含むＮａＯＨで緩衝化したグアネチジン一硫酸塩（イスメリン）の１０ｍｇ／ｍＬのデータは、四角形のマーカーを有する実線のデータ（チャートの左下でｘ軸の０．０において約６．３ｐＨから始まる）で示し、０．９％食塩水中のＮａＯＨで緩衝化した１０ｍｇ／ｍＬのグアネチジンヘミサルフェートは、三角形のマーカーと、ｘ軸の１．０において１０を上回るｐＨから始まる破線とで示し、１７％のＩｓｏＶＵＥ３７０中のＮａＯＨで緩衝化した１０ｍｇ／ｍＬのグアネチジンヘミサルフェートは、丸のマーカーと、ｘ軸の１．０において約９．３のｐＨから始まる実線とで示す。

【発明を実施するための形態】

【0080】

本出願は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれるところの、２０１０年４月２２日付けで出願され、ＵＳ２０１１／０１０４０６０として公開された共有に係る先行出願第１２／７６５，７０８号からの図１〜８および全てのテキストを包含する。以下の記載および図１〜８では、血管周囲の空間または外膜の組織へと神経調節物質を送達するのに適した微細針を有するカテーテルの３つの代表的な実施形態が提供される。カテーテルおよびその製作方法のより詳細な記載は、それらの全開示が参照により本明細書に組み込まれるところの米国特許第７，１４１，０４１号；同第６，５４７，８０３号；同第７，５４７，２９４号；同第７，６６６，１６３号、および同第７，６９１，０８０号に提供される。

【0081】

図１Ａ〜２Ｂに示すように、微細加工した管内カテーテル１０は、アクチュエーター本体１２ａと中央縦軸１２ｂとを有するアクチュエーター１２を包含する。アクチュエーター本体は、程度の差はあるが、開口部またはスリット１２ｄを有して実質的にその長さ方向に沿って伸びているＵ型またはＣ型の輪郭を形成する。微細針１４は、以下でより詳細に論じられるように、アクチュエーターが作動していない状態（たたまれた状態）のときに（図１Ｂ）、アクチュエーター本体内に配置する。アクチュエーターが稼働して作動した状態（広がった（ｕｎｆｕｒｌｅｄ）状態）になると（図２Ｂ）、微細針はアクチュエーター本体の外側に移動する。

【0082】

アクチュエーターは、その近位端１２ｅおよび遠位端１２ｆで、治療用カテーテル２０のリード端部１６および先端部１８によりそれぞれキャップしていてもよい。カテーテルの先端部は、放射線不透過性コーティングまたはマーカーを使用することにより体の管腔の内部にアクチュエーターを配置する手段として役立つ。またカテーテルの先端は、また、アクチュエーターの遠位端１２ｆにおいてシールを形成する。カテーテルのリード端部は、アクチュエーターの近位端１２ｅで必要な（流体工学的な、機械的な、電気的な、または光学的な）相互連絡をもたらす。

【0083】

止め輪（ｒｅｔａｉｎｉｎｇ ｒｉｎｇ）２２ａおよび２２ｂは、それぞれアクチュエーターの遠位および近位端に配置する。カテーテルの先端は、止め輪２２ａにつながれ、一方でカテーテルのリードは、止め輪２２ｂにつながれる。止め輪は、薄い、およそ１０〜１００ミクロン（μｍ）の、実質的に可撓性であるが比較的非膨張性の材料、例えばパリレン（Ｐａｒｙｌｅｎｅ）（タイプＣ、ＤまたはＮ）、または金属、例えば、アルミニウム、ステンレス鋼、金、チタンもしくはタングステンで作製される。止め輪は、アクチュエーターの各末端で、可撓性であるが比較的非膨張性の、実質的に「Ｕ」型または「Ｃ」型の構造を形成する。カテーテルは、例えば突合わせ溶接、超音波溶接、一体型のポリマー封止（ｉｎｔｅｇｒａｌ ｐｏｌｙｍｅｒ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ）またはエポキシもしくはシアノアクリレートなどの接着剤によって止め輪につながっていてもよい。

【0084】

アクチュエーター本体は、止め輪２２ａと止め輪２２ｂとの間に配置した中央拡張性セクション２４をさらに含む。拡張性セクション２４は、活性化流体がその領域に供給されたときに迅速に拡張するための内部開口領域２６を包含する。中央セクション２４は、薄い、半可撓性であるが比較的非膨張性であるか、または可撓性であるが比較的非膨張性の拡張性材料、例えばパリレン（タイプＣ、ＤまたはＮ）、シリコーン、ポリウレタンまたはポリイミドなどのポリマーで作製される。中央セクション２４は、作動すると、いくぶんバルーンデバイスのように拡張性である。

【0085】

中央セクションは、開口領域２６に活性化流体が適用される際に、最大約２００ｐｓｉの圧力に耐えることができる。活性化流体が開口領域２６から除去される場合、中央セクションが実質的にその元の形状および位置（作動していない状態）に戻るという点で、中央セクションを作製する材料は、可撓性であるが比較的非膨張性であるか、または半可撓性であるが比較的非膨張性である。したがって、この意味において、中央セクションは、本質的に安定な構造を有していないバルーンとは大きく異なっている。

【0086】

アクチュエーターの開口領域２６は、カテーテルのリード端部からアクチュエーターの近位端まで伸長している送達用の導管、チューブまたは流体経路２８に接続する。活性化流体は、送達用チューブを介して開口領域に供給される。送達用チューブは、Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標）またはその他の不活性プラスチックで作製してもよい。活性化流体は、塩類溶液または放射線不透過性色素であってもよい。

【0087】

微細針１４は、中央セクション２４のほぼ中央に配置されていてもよい。しかしながら、以下で考察されるように、特に複数の微細針が使用される場合は必ずしもこの限りではない。微細針は、中央セクションの外表面２４ａに固着する。微細針は、シアノアクリレートなどの接着剤によって表面２４ａに固着する。あるいは、微細針は、金属製メッシュ様またはポリマーメッシュ様構造物３０によって表面２４ａに接続される可能性もあり（図２Ａを参照）、そのような構造物それ自身は、接着剤で表面２４ａに固着する。メッシュ様構造物は、例えば鋼またはナイロンで作製されていてもよい。

【0088】

微細針は、鋭い先端１４ａとシャフト１４ｂとを含む。微細針の先端は、挿入用エッジまたはポイントを提供し得る。シャフト１４ｂは、中空であってもよく、上記先端は、患者への神経調節物質または薬物の注射を許容する出口ポート１４ｃを有し得る。しかしながら、微細針が、その他のタスクを達成するための神経プローブのように構成される可能性もあるため、微細針は必ずしも中空である必要はない。示した通り、微細針は、表面２４ａからほぼ垂直に伸長する。したがって、記載したように、微細針は、それが挿入されている管腔の軸に対して実質的に垂直に移動して、体の管腔壁の直接的な穿刺または突破を可能にする。

【0089】

微細針はさらに、神経調節物質または薬物の供給管、チューブまたは流体経路１４ｄを包含しており、それにより、微細針が、カテーテルのリード端部において適切な流体の相互連絡部と流体連通するように配置される。この供給チューブは、シャフト１４ｂと一体化して形成してもよいし、または後に例えばエポキシなどの接着剤によってシャフトにつながれる別個のピースとして形成してもよい。微細針１４は、例えばシアノアクリレートなどの接着剤で供給チューブに固着させてもよい。

【0090】

針１４は、３０ゲージまたはより低いゲージの鋼鉄製の針であってもよい。あるいは微細針は、ポリマー、その他の金属、金属合金または半導体材料から微細加工されていてもよい。例えば針は、パリレン、ケイ素またはガラスで作製されていてもよい。微細針および製作方法は、その開示全体が参照により本明細書に組み込まれるところの２００１年６月８日付けで出願された「微細加工された外科デバイス」（”Ｍｉｃｒｏｆａｂｒｉｃａｔｅｄ Ｓｕｒｇｉｃａｌ Ｄｅｖｉｃｅ”）という表題の米国特許出願第０９／８７７，６５３号に記載されている。

【0091】

カテーテル２０は、使用において、体の開口部（例えば気管支または洞の処置のため）を介して、または経皮穿刺部位（例えば動脈または静脈の処置のため）を介して挿入され、特定の標的とした領域３４に到達するまで患者の身体通路３２内を移動する（図３を参照）。標的とした領域３４は、組織損傷の部位であってもよいし、または、より一般的には、治療剤もしくは診断剤の移動が可能になるように典型的には１００ｍｍもしくはそれ未満でその損傷部位に隣接している。カテーテルベースの介入手順で周知のように、カテーテル２０は、前もって患者に挿入されたガイドワイヤー３６に続き得る。必要に応じて、カテーテル２０はまた、自然開口部を介して体に挿入されたガイドワイヤーまたは内視鏡を包含する前もって挿入されたガイドカテーテル（図示せず）の通路に続き得る。

【0092】

カテーテル２０の操作の間に、Ｘ線透視検査または磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）の周知の方法を使用して、カテーテルを画像化し、標的領域におけるアクチュエーター１２および微細針１４の位置決定を補助することができる。患者の体内でカテーテルがガイドされるとき、体の管腔壁に外傷をつくらないように、微細針はたたまれた状態のままか、またはアクチュエーター本体の内部に保持される。

【0093】

標的領域３４に位置決定された後、カテーテルの移動を停止し、アクチュエーターの開口領域２６に活性化流体が供給され、拡張性セクション２４が急速に広げられ、微細針１４がアクチュエーター本体１２ａの縦の中心軸１２ｂに対して実質的に垂直方向に移動することにより、体の管腔壁３２ａが穿刺される。微細針がそのたたまれた状態からその広がった状態に移るのに、およそ１００ミリ秒〜５秒を要するのみであり得る。

【0094】

微細針の孔は、体の管腔組織３２ｂ、加えて体の管腔の周りの外膜、中膜、または内膜に入るように設計されていてもよい。加えて、アクチュエーターは作動前に「パックされている」または停止しているので、体の管腔壁への貫入に対してより正確な配置および制御が得られる。

【0095】

微細針が作動して薬剤が微細針を介して標的領域に送達されたら、アクチュエーターの開口領域２６から活性化流体が排出され、それにより拡張性セクション２４がその元のたたまれた状態に戻る。さらにそれによって、微細針も体の管腔壁から引き抜かれる。引き抜かれた微細針は再び、アクチュエーターに収められる。

【0096】

流れを計量して、生体組織試料を採取し、ｐＨを測定するために、様々な微細加工されたデバイスを針、アクチュエーター、およびカテーテルへと一体形にすることができる。例えばデバイス１０は、微細針を介して流量ならびに展開された神経調節物質のｐＨを測定するための電気センサーを包含することができる。またデバイス１０は、血管壁を位置決定するための血管内超音波センサー（ＩＶＵＳ）と、当技術分野で周知のように、標的領域を調べるための光ファイバーとを包含していてもよい。そのような完全なシステムのために、高完全性の電気的、機械的、および流体の連絡部が提供され、それにより信頼性をもって電力、エネルギー、および神経調節物質または生物学的作用物質を移動させる。

【0097】

一例として、微細針は、約２００〜３，０００ミクロン（μｍ）の間の全体の長さを有していてもよい。シャフト１４ｂおよび供給チューブ１４ｄの内部断面の寸法は、およそ２０〜２５０μｍであってもよく、一方でそのチューブおよびシャフトの外部断面の寸法は、約１００〜５００μｍの間であってもよい。アクチュエーター本体の全体の長さは、約５〜５０ミリメートル（ｍｍ）の間であってもよく、一方でアクチュエーター本体の外部および内部断面の寸法は、それぞれ約０．４〜４ｍｍの間、および０．５〜５ｍｍの間であってもよい。アクチュエーターの中央セクションがそれを通して広がるところのギャップまたはスリットは、約４〜４０ｍｍの長さと約５０μｍ〜４ｍｍの断面寸法を有していてもよい。活性化流体用の送達用チューブの直径は、１００〜５００μｍの間であってもよい。カテーテルのサイズは、１．５〜１５フレンチ（Ｆｒ）の間であってもよい。

【0098】

図４Ａ〜４Ｄを参照すると、エラストマーの構成要素は、図１〜３の管内カテーテルの壁に一体化されている。図４Ａ〜Ｄでは、そのような構造物の加圧の進行が、圧力が増加する順で表示されている。図４Ａでは、体の管腔Ｌ内にバルーンが配置される。管腔壁Ｗが、管腔と、特定の管腔の解剖学的構造に応じて管腔周辺組織Ｔまたは外膜Ａ^＊とを隔てている。圧力は中間（ｎｅｕｔｒａｌ）であり、非膨張性の構造は、針１４が収められている図１の形状と類似した、Ｕ型の内巻きの形状の（ｉｎｖｏｌｕｔｅｄ）バルーン１２を形成する。この図では針が表示されているが、切刃、レーザーもしくは光ファイバーチップ、高周波トランスミッターを包含するその他の作業要素、またはその他の構造物を、針の代わりに置き換えてもよい。しかしながら、そのような全ての構造に関して、エラストマーのパッチ４００は通常、内巻きの形状のバルーン１２を間にして針１４の反対側に配置される。

【0099】

バルーン１２の動作は、陽圧化により起こる。図４Ｂでは、圧力（＋ΔＰ_１）がかけられると、可撓性であるが比較的非膨張性の構造物の変形が始まり、それによりバルーンの内巻きの形状（ｉｎｖｏｌｕｔｉｏｎ）から円形の圧力容器（ｒｏｕｎｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｖｅｓｓｅｌ）のより低いエネルギー状態への逆転が起こる。図４Ｃのより高い圧力の＋ΔＰ_２では、可撓性であるが比較的非膨張性のバルーン材料はその丸い形状に達し、エラストマーのパッチは伸張を始めている。最終的に、さらにより高い圧力の＋ΔＰ_３の図４Ｄでは、エラストマーのパッチが伸張して管腔径全体に収まることにより、針の先端に抵抗力を付与して、針を管腔壁を通って外膜Ａへとスライドさせる。この図で意図される体の管腔についての典型的な寸法は、０．１ｍｍ〜５０ｍｍの間、より多くの場合は０．５ｍｍ〜２０ｍｍの間、ほとんどの場合は１ｍｍ〜１０ｍｍの間である。管腔と外膜との間の組織の厚さは、典型的には０．００１ｍｍ〜５ｍｍの間、より多くの場合は０．０１ｍｍ〜２ｍｍの間、および、ほとんどの場合は０．０５ｍｍ〜１ｍｍの間である。バルーンを作動させるのに有用な圧力＋ΔＰは、典型的には０．１気圧から２０気圧の範囲、より典型的には０．５から２０気圧の範囲、および、多くの場合は１から１０気圧の範囲である。

【0100】

図５Ａ〜５Ｃで図示されているように、図４Ａ〜４Ｄに示されるデュアルモジュラス構造により、管内医療用デバイスを低い圧力（すなわち、体組織に損傷を与え得る圧力よりも低い圧力）で作動させて、針などの作業要素を管腔壁と接触するように、またはそれを通過するように配置する。一定圧力での膨張によって、エラストマー材料は、管腔径に調和して十分な密着を達成する。デュアルモジュラスバルーン１２は、図５Ａ、５Ｂ、および５Ｃの３つの異なる管腔径において、パッチ４００が徐々に大きく膨張することにより圧力＋ΔＰ_３に対して膨張し、径に関係なく、血管壁を通過する針の最適な密着をもたらす。したがって、全身での、一連の径以内にある管腔において同じカテーテルを使用することができる可変径システムが作製される。ほとんどの医療製品は、それらが使用され得る管腔における極めて厳密な制約（典型的には０．５ｍｍ以内）に限定されるため、そのようなシステムは有用である。本発明で記載されるようなシステムは、それらが有用となる管腔の径において数ミリメートルレベルの変動があっても順応することができる。

【0101】

上記のカテーテル設計およびそのバリエーションは、それらの全開示が参照により本明細書に組み込まれるところの公開された米国特許第６，５４７，８０３号；同第６，８６０，８６７号；同第７，５４７，２９４号；同第７，６６６，１６３号、および同第７，６９１，０８０号で記載されている。本出願の譲受人に譲渡された同時係属中の特許出願第１０／６９１，１１９号は、心臓の外膜組織および心膜組織への直接注射により送達された物質が、心臓組織内で、注射の部位から離れた位置でさえも急速かつ均一に分配するその能力について記載している。この同時係属中の特許出願の全開示も参照により本明細書に組み込まれる。本発明の治療剤または診断剤を送達するのに適した代替の針カテーテルの設計を以下に記載する。そのような特定のカテーテル設計は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれるところの米国特許第７，１４１，０４１号で記載されており、特許請求されている。

【0102】

ここで図６を参照すると、本発明の原理に従って作製された針の注射用カテーテル３１０は、遠位端３１４および近位３１６を有するカテーテル本体３１２を含む。通常、ガイドワイヤーの管腔３１３は、カテーテルの遠位ノーズ３５２内に提供されるが、オーバーザワイヤーやガイドワイヤーの配置を必要としない実施形態も本発明の範囲内である。２ポートのハブ３２０は、カテーテル本体３１２の近位端３１６に取り付けられ、例えばシリンジ３２４を使用して含水流体を送達するための第一のポート３２２と、例えばシリンジ３２８を使用して神経調節物質を送達するための第二のポート３２６とを包含する。往復可能な、方向を変えられる（ｄｅｆｌｅｃｔａｂｌｅ）針３３０は、カテーテル本体３１２の遠位端の近くにマウントされ、図６では該針が側方に送り出される配置で示されている。

【0103】

ここで図７を参照すると、カテーテル本体３１２の近位端３１４は、針３３０、往復可能なピストン３３８、および含水流体送達用チューブ３４０を保持するメインの管腔３３６を有する。ピストン３３８は、レール３４２にわたってスライドするようにマウントされ、針３３０に固定される。したがって、チューブ３４０の管腔３４１を通って加圧された含水流体を蛇腹構造物３４４に送達することにより、針が、カテーテルノーズ３５２中に形成された方向を変えられる通路３５０を通過するように、ピストン３３８は、遠位先端に向かって軸方向に進めることができる。

【0104】

図８で認めることができるように、カテーテル３１０は、血管ＢＶにおいて、ガイドワイヤーＧＷの上に従来の方式で位置決定されていてもよい。ピストン３３８が遠位に進むことにより、針３３０が、血管においてそれが存在する場合、カテーテル近傍の管腔の周りの組織Ｔに向かって進む。続いて、図８で例証されるように、心臓組織中に薬剤のプルームＰを導入するために、シリンジ３２８を用いてポート３２６を介して治療剤または診断剤を導入することができる。プルームＰは、上記したように組織損傷の領域内に存在するか、またはその近傍に存在する。

【0105】

針３３０は、カテーテル本体３１２の全長に伸長してもよいし、または、より一般的には、チューブ３４０中の治療剤もしくは診断剤が送達される管腔３３７に向けてのみ部分的に伸長する。針の近位端は、針を介した薬剤の加圧送達を可能とするように、管腔３３７と共にスライディングシールを形成することができる。

【0106】

針３３０は、弾性材料、典型的には弾性または超弾性金属からなり、典型的には、ニチノールまたはその他の超弾性金属である。あるいは、針３３０は、方向を変えられる通路を通過するときに成形される非弾性的に変形可能な、または展性の金属から形成され得る。しかしながら、非弾性的に変形可能な金属は、一般的に、それらが方向を変えられる通路を通過した後にまっすぐな形状を保持しないため、非弾性的に変形可能な金属の使用はあまり好ましくない。

【0107】

蛇腹構造物３４４は、心棒にパリレンまたは別の順応性ポリマー（ｃｏｎｆｏｒｍａｌ ｐｏｌｙｍｅｒ）層を堆積させ、続いて心棒をポリマーシェル構造内から分離させることによって作製することもできる。あるいは、蛇腹３４４をエラストマー材料で作製して、バルーン構造物を形成してもよい。さらなる代替例において、加圧含水流体の非存在下でその中の閉鎖位置に蛇腹を動かすために、蛇腹の中、その上、またはその上方でスプリング構造物を利用することができる。

【0108】

治療用材料が針３３０を通って送達された後、図８で示されるように、針を引き込み、カテーテルをさらなる薬剤の送達のために再配置するか、または引き込む。いくつかの実施形態では、針は、単に蛇腹３４４から含水流体を吸引することにより引き込まれる。その他の実施形態では、針の引き込みは、例えばピストン３３８の遠位面と遠位先端３５２の近位壁（図示せず）との間に固定されたリターンスプリングによって補助されてもよいし、および／またはピストンに取り付けられ、管腔３４１を通るプルワイヤーによって補助されてもよい。

【0109】

血管周囲の空間は、動脈または静脈のいずれかの「血管壁」外面にわたる潜在的な空間である。図９を参照すると、典型的な動脈壁の断面が示されており、この図において、内皮Ｅは、血管管腔Ｌに露出する壁の層である。内皮の下に存在するのは基底膜ＢＭであり、このＢＭもまた内膜Ｉで取り囲まれている。この内膜もまた内弾性板ＩＥＬで取り囲まれており、その上に中膜Ｍが配置される。この中膜は、また、外弾性板（ＥＥＬ）で被覆され、このＥＥＬは、集合的にＷとして示される動脈壁を外膜層Ａから隔てる外部バリアとして作用する。通常、血管周囲の空間は、外膜内の領域とその外側を含む外弾性板ＥＥＬの外側にあるあらゆる空間とみなされる。

【0110】

ここで図１０Ａ〜Ｃを参照すると、腎動脈の位置および構造が示される。図１０Ａでは、大動脈（Ａｏ）から分岐して血液を腎臓に送る右腎動脈（ＲＲＡ）および左腎動脈（ＬＲＡ）と共に、大動脈が体の中心動脈として示されている。例えば、右腎動脈は、酸素化した血液を右腎（ＲＫ）に送る。図１０Ｂでは、大動脈から腎臓に通じる神経（Ｎ）が表示されている。神経は、腎動脈を取り囲んで、ほぼ平行に通っているが、いくらか蛇行した大動脈から腎臓に分岐する経路に沿って示されている。続いて図１０Ｃに、図１０Ｂのライン１０Ｃ−１０Ｃに沿った断面が示されている。腎動脈のこの断面図からわかるように、大動脈から腎臓に通じる神経（Ｎ）は、外弾性板（ＥＥＬ）の近傍で、ただしＥＥＬの外側で動脈の外膜（Ａ）を通る。この図１０Ｃに動脈全体の断面が示され、この図において、管腔（Ｌ）は、内部から外側にかけて内皮（Ｅ）、内膜（Ｉ）、内弾性板（ＩＥＬ）、中膜（Ｍ）、外弾性板（ＥＥＬ）、最後に外膜（Ａ）で取り囲まれている。

【0111】

図１１Ａ〜Ｆで図示されているように、本発明の方法は、図１〜５によって図示されたものと類似した注射または注入用カテーテルを図１０Ｃで図示されたように血管へと配置し、神経調節物質のプルーム（Ｐ）が腎動脈の外膜（Ａ）を神経支配する神経（Ｎ）と接触するように該外膜に該薬剤を注射するのに使用することができる。図１１Ａで認めることができるように、針が血管壁を削って傷害を引き起こすことなくアクチュエーターが体の血管を進むことができるように、アクチュエーターが針を遮蔽している図４Ａと同じ状態のカテーテルは、中膜（Ｍ）、外膜（Ａ）、および外膜内かつ中膜のちょうど外側に神経（Ｎ）を有する動脈に挿入される。図１１Ｄに図１１Ａのライン１１Ｄ−１１Ｄに沿った断面が示される。この断面から、治療機器は、図１〜３に示されたものと同様に、カテーテル（２０）に取り付けられたアクチュエーター（１２）と、アクチュエーター内に配置された針（１４）とを有することがわかる。

【0112】

図１１Ｂおよび１１Ｅを参照して、本発明者らは、図１１Ａおよび１１Ｄのシステムと同じシステムを示しており、ここでも同様に、図１１Ｅは、図１１Ｂのライン１１Ｅ−１１Ｅに沿った断面図である。しかしながら、図１１Ｂおよび１１Ｅでは、アクチュエーターが流体で満たされることにより、アクチュエーターの広がりと拡張が起こり、針の孔が中膜を貫通して神経がある外膜へと至る。針が外膜に貫通したら、放射線不透過性造影剤などの診断剤もしくはグアネチジンなどの神経調節物質のいずれか、または診断剤と治療剤との組合せからなるプルーム（Ｐ）がＥＥＬを通って外膜に送達される。プルーム（Ｐ）は、外膜内で円周方向および縦方向に移動し始め、外膜を通過する神経線維と接触するようになる。この時点で、医師が治療効果を認識し始める可能性がある。通常、注射の存在および注射の位置を診断するのに使用されるプルームＰは、１０から１００μｌの範囲であり、より多くの場合はおよそ５０μｌである。プルームは通常、以下の４つの結果：（１）針が外膜へと貫通し、プルームが、血管の周辺およびで血管の外側に沿って滑らかなパターンで拡散し始めるという結果、（２）プルームが動脈の側枝路を辿るという結果（この場合、針の孔は、外膜中ではなく側枝に配置されている）、（３）プルームが、カテーテルが配置されている動脈路を辿るという結果（これは、針が血管壁を貫通せず、流体が漏出してメインの血管管腔に戻ることを示す）、または（４）きつく圧縮されたプルームが形成されて、血管周辺で縦方向もしくは円柱状に拡散しないという結果（これは、針の孔が、ＥＥＬから内部へ、中膜または内膜の内側に配置されることを示す）のうち１つを示す。したがってプルームは、施術する医師にとって、注射の継続か、アクチュエーターの収縮と新しい処置部位への再配置かの妥当性を決定するのに有用である。

【0113】

図１１Ｃおよび１１Ｆにおいて、図１１Ｆは図１１Ｃのライン１１Ｆ−１１Ｆに沿った断面図であるが、適切な組織注射位置を診断するのにプルームが使用された後、さらなる注射を行って、血管を神経調節物質で囲むことが可能であることが理解できる。最終的なプルームＰ^＊の範囲は通常、動脈を取り囲んで完全に環状になっており、通常、注射体積が３００μｌ〜３ｍＬの間である場合、縦方向に少なくとも１ｃｍ移動する。多くの場合において、患者の高血圧に対する治療的有用性を評するためには、この体積よりも少ない体積しか要しない可能性がある。いくつかの実施形態では、最終的な所望の治療的有用性を達成するには、この体積よりも多いまたは少ない体積が使用される。いくつかの実施形態では、動脈１本あたりの神経調節物質の総量は、２μｇから７５０ｍｇである。いくつかの実施形態では、動脈１本あたりの神経調節物質の総量は、１０μｇから５００ｍｇである。いくつかの実施形態では、動脈１本あたりの神経調節物質の総量は、１０μｇから２００ｍｇである。いくつかの実施形態では、動脈１本あたりの神経調節物質の総量は、１００μｇから２００ｍｇである。いくつかの実施形態では、動脈１本あたりの神経調節物質の総量は、５００μｇから２００ｍｇである。いくつかの実施形態では、動脈１本あたりの神経調節物質の総量は、５００μｇから２００ｍｇである。いくつかの実施形態では、動脈１本あたりの神経調節物質の総量は、１ｍｇから２００ｍｇである。いくつかの実施形態では、動脈１本あたりの神経調節物質の総量は、１ｍｇから１００ｍｇである。いくつかの実施形態では、動脈１本あたりの神経調節物質の総量は、約１０ｍｇから約１００ｍｇである。いくつかの実施形態では、動脈１本あたりの神経調節物質の総量は、約２０ｍｇから約８０ｍｇである。いくつかの実施形態では、動脈１本あたりの神経調節物質の総量は、約４０ｍｇから約８０ｍｇである。いくつかの実施形態では、動脈１本あたりの神経調節物質の総量は、約４５ｍｇから約７５ｍｇである。いくつかの実施形態では、動脈１本あたりの神経調節物質の総量は、約５０ｍｇから約６０ｍｇである。本明細書で使用される用語「約」は、送達される薬剤の総量について述べられる際に使用される場合、送達される量に応じて、＋／−５％、＋／−１０％、＋／−１５％、＋／−２５％、＋／−５０％、＋／−０．５μｇ、＋／−１μｇ、＋／−１０μｇ、＋／−５０μｇ、＋／−１ｍｇ、＋／−３ｍｇ、または＋／−５ｍｇの変動を意味する。

【0114】

いくつかの実施形態では、約２ｍＬから約８ｍＬのグアネチジンなどの神経調節物質の溶液は、動脈１本あたり約５ｍｇ／ｍＬから約１５ｍｇ／ｍＬの濃度で送達される。この時点で、神経調節物質はすでに動脈全体を取り巻く神経に浸透しており、それにより化学的脱神経、神経調節による脱神経、または生物学的な脱神経が生じ、神経シグナル伝達がブロックされる。本明細書で使用される用語「約」は、送達される薬剤の総体積について述べられる際に使用される場合、＋／−５％、＋／−１０％、＋／−１５％、＋／−２５％、＋／−５０％、＋／−０．５ｍＬ、＋／−１ｍＬ、または＋／−２ｍＬの変動を意味する。本明細書で使用される用語「約」は、送達される薬剤の濃度について述べられる際に使用される場合、＋／−１％、＋／−５％、＋／−１０％、＋／−１５％、＋／−２５％、または＋／−５０％の変動を意味する。

【0115】

本明細書において、グアネチジン一硫酸塩という医薬品の局所投与によってこの作用をもたらす組成物、方法、デバイス、およびシステムが提供され、グアネチジン一硫酸塩はまた、２−（オクタヒドロ−１−アゾシニル）エチルグアニジンサルフェート；ヘプタメチレンイミン、１−（２−グアニジノエチル）−；Ｎ−（２−ペルヒドロアゾシン−１−イルエチル）グアニジン；アゾシン，１−（（２−（アミノイミノメチル）アミノ）エチル）オクタヒドロ−；（２−（ヘキサヒドロ−（２Ｈ）−アゾシン−１−イル）エチル）グアニジニウムサルフェート；アゾシン，１−（２−グアニジノエチル）オクタヒドロ−；グアニジン，［２−（ヘキサヒドロ−１（２Ｈ）−アゾシニル）−エチル］−，サルフェート（１：１）；２−［２−（アゾカン−１−イル）エチル］グアニジン；アバプレシン；オクタジン；ドポン；Ｎ−（２−グアニジノエチル）ヘプタメチレンイミンサルフェート；ユーテンソール；エシミル；ドパム；２−（１−Ｎ，Ｎ−ヘプタメチレンイミノ）エチルグアニジン；グアニジン，（２−（ヘキサヒドロ−１（２Ｈ）−アゾシニル）エチル）−，サルフェート（１：１）；グアネチジナム［国際一般名−ラテン語］；オクタテンジン；オクタテンシン；イスメリン（商標）；グアニジン，（２−（ヘキサヒドロ−１（２Ｈ）−アゾシニル）エチル）−；グアネチジーナ［国際一般名−スペイン語］；オクタテンシン；（２−（ヘキサヒドロ−１（２Ｈ）−アゾシニル）エチル）グアニジンハイドロゲンサルフェート；サノテンシン；２−［２−（アゾカン−１−イル）エチル］グアニジン；硫酸；２−（１−アザシクロオクチル）エチルグアニジン；硫酸イスメリン；グアネチジンサルフェート；（２−（オクタヒドロ−１−アゾシニル）エチル）グアニジン；イスメリン；または化学式はＣ_１０Ｈ_２２Ｎ_４・Ｈ_２Ｏ_４Ｓであり図１６に示す分子構造を有する（２−（ヘキサヒドロ−１（２Ｈ）−アゾシニル）エチル）グアニジンサルフェート（１：１）としても公知である。本明細書において、グアネチジンヘミサルフェートという医薬品の局所投与によってこの作用をもたらす組成物、方法、デバイス、およびシステムが提供される。

【0116】

本発明は、一般的に、疾患を処置するための医薬調製物、医療用デバイスを包含するシステムおよび診断剤または治療剤、ならびに方法に関する。より具体的には、本発明の実施形態は、局所的または全身に送達される治療剤または診断剤の治療指数を調節するための局所組織環境の改変に関する。さらにより具体的には、本発明の実施形態は、体内の動脈および静脈周辺の外膜および血管周囲組織における交感神経の活動を抑制する能力の改善に関する。

【0117】

本発明の特定の態様は、高血圧、心不全、睡眠時無呼吸、インスリン抵抗性、または炎症を処置するために、腎動脈周辺の局所組織環境を調節して、医薬品によるより効果的な脱神経を可能にする能力である。

【0118】

本明細書において、その全開示が参照により組み込まれるところの米国特許出願第１２／７６５，７０８号および同第１２／７６５，７２０号に記載の発明の実施に関する方法、システム、および組成物が提供される。

【0119】

本明細書において、薬物治療の改善方法が示される。一般的に、本方法の実施形態は、生理的な組織状態の調節による薬物治療指数の改善を包含する。具体的には、本方法の実施形態は、組織のｐＨを局所で調節することに基づいて、組織に送達された薬剤の治療指数を強化するために、または直接的な治療効果を有するために、局所の薬物またはバッファーの送達により局所組織のｐＨの調節を含む。この作用は、薬剤の分子構造のプロトン付加、およびプロトン化部分または非プロトン化部分における細胞の高いまたは低い親和性に応じて、より高いまたはより低いｐＨでより効果的に細胞膜を通過する薬剤の能力に基づき得る。

【0120】

本明細書において、高ｐＨの状態におけるグアネチジンの神経変性作用に対する特異的な改善を包含する方法、およびそのような状態をもたらす方法が提供される。これらの方法は、腎動脈の周りの外膜および血管周囲組織に位置する腎神経の変性に特に有用である。これらの神経は、高血圧状態の開始時とその持続時に重要であり、腎動脈の脱神経は、血圧の低下、心不全の改善、インスリン抵抗性および睡眠時無呼吸の低減に関して有益な効果があることが示されており、さらに血管の炎症性疾患の改善に関しても有益な効果があることが推測される。

【0121】

グアネチジンのｉｎ ｖｉｔｒｏの研究では、収集し培養したラット上頸神経節ニューロンに対してグアネチジン一硫酸塩が細胞毒性である細胞培養条件について記載されている（Ｊｏｈｎｓｏｎ ＥＭおよびＡｌｏｅ Ｌ． Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｕａｎｅｔｈｉｄｉｎｅ ｉｎ ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ ｎｅｕｒｏｎｓ ｂｙ ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９７４年；８１巻：５１９〜５３２頁；Ｗａｋｓｈｕｌｌ Ｅ、Ｊｏｈｎｓｏｎ ＭＩ、Ｂｕｒｔｏｎ Ｈ． Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ ｏｆ ａｎ ａｍｉｎｅ ｕｐｔａｋｅ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｒａｔ ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ ｎｅｕｒｏｎｓ ｗｈｉｃｈ ｕｓｅ ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ａｓ ｔｈｅｉｒ ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ、Ｊ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １９７８年；７９巻：１２１〜１３１頁）。Ｊｏｈｎｓｏｎ、Ｗａｋｓｈｕｌｌらによる実験では、１００μＭ濃度のグアネチジンに４０〜４８時間にわたり曝露した場合、グアネチジンは、７．０〜７．２のｐＨで弱い細胞毒性活性を有し、ｐＨ８．０で強い細胞毒性活性を有することが見出された。

【0122】

グアネチジンのニューロンへの細胞毒性のｉｎ−ｖｉｖｏ試験では、ブタに、濃度が８．３ｍｇ／ｍＬでありｐＨが８．５〜９．５であるグアネチジンヘミサルフェートを血管周囲に注射したところ腎脱神経が起こるが、５．５〜６．５のｐＨで８．３ｍｇ／ｍＬのグアネチジン一硫酸塩を血管周囲に注射したところ、同様の脱神経が起こらないことが示されている。

【0123】

血管周囲および外膜の空間への注射に関して、注射剤は、参照により本明細書に組み込まれるところの米国特許第７，７４４，５８４号で記載されている方法で追跡され、さらに薬剤は、好ましくは、参照により本明細書に組み込まれるところの米国特許第７，６９１，０８０号で記載されているカテーテルに類似したカテーテルで注射される。しかしながら、その他のカテーテルまたは針を使用して組織内に薬剤を局所注射することによって、本明細書において記載される効果に類似した効果を達成できることが認識されている。

【0124】

本明細書において、注射またはその他の手段によって生理的なｐＨを局所で調節する組成物、デバイス、システム、および方法が提供される（例えば電気シグナルまたは特定の金属物質の存在下で例えば局所のｐＨを調節できることが公知である）。いくつかの実施形態では、本方法は、治療剤のグアネチジン一硫酸塩が送達される間に、その前に、またはその後に、脱神経の標的である神経の周りの組織におよそ９のｐＨで存在する組成物を注射する工程を含む。腎動脈の周りの組織にこの組成物を注射または注入して（以下の図１１を参照）、およそ７．３〜７．４の中性の生理的ｐＨを有する間質液を置き換える。

【0125】

本発明のその他の方法は、局所張度もしくは容量オスモル濃度を調節する薬剤と共に、またはこのような薬剤の前もしくは後に送達される製剤中の医薬品の細胞による取り込みを強化するために、局所張度または容量オスモル濃度の調節を包含する。例えば、高張塩類溶液の送達は、浸透により、細胞による液体の放出を引き起こす。同様に、低張溶液の送達は、細胞がその周囲からさらなる液体を吸収しながら膨潤を引き起こし得る。細胞周辺の間質に点滴注入した薬剤は、局所組織の張度に依存して取り込みの改善を潜在的に有する。この挙動は、膜受容体タンパク質に結合するかまたはチャネルもしくは孔を介して細胞に入る薬剤の能力に起因しており、治療剤によって異なる。

【0126】

本発明の追加の方法は、組織生理機能の局所改変と協調する治療剤の適用は包含しないが、それは、治療目的を達成するための局所調節に直接依存する。例えば、高張塩類溶液、洗浄剤、エタノールなどの溶媒、強酸、および強塩基はそれぞれ、局所生理機能の調節と共に細胞への損傷、変性または破壊を引き起こし得る。また本発明で記載される方法によるこれらの薬剤の送達は、本明細書に記載された局所神経破壊などの目的を達成するのにも有用である。溶液のｐＨの調節は、アルカリ性または酸性緩衝剤により達成することができる。緩衝剤としては、これらに限定されないが、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化マグネシウム、硫酸、塩酸、クエン酸、酢酸、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、ホウ酸、リン酸二水素カリウム、ジエチルバルビツール酸、３−｛［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝プロパンスルホン酸、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルグリシン、２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール、３−［Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸、４−２−ヒドロキシエチル−１−ピペラジンエタンスルホン酸、２−｛［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝エタンスルホン酸、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）、ジメチルアルシン酸、サリンソジウムシトレート（ｓａｌｉｎｅ ｓｏｄｉｕｍ ｃｉｔｒａｔｅ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸、またはグリシンが挙げられる。

【0127】

本発明のさらに別の態様では、新規の組成物が記載される。局所組織への送達におけるグアネチジンの性能を改善することにおいて、ｐＨの調整が必要とされる場合がある。本発明の組成物は、７より高いｐＨで１μｇ／ｍＬから５０ｍｇ／ｍＬの濃度範囲のグアネチジンの製剤を包含する。本発明の特定の態様では、製剤の濃度は、１〜３０ｍｇ／ｍＬの間であり、塩化ナトリウム含量は、０．７％〜０．９％の間であるが、それよりも高いまたは低い濃度も使用することができ、ｐＨは、所望のｐＨが達成されて長期間維持できるようになるまで、水酸化ナトリウムなどのアルカリ性バッファーまたは上記したその他のバッファーで緩衝化することによって約９．５に調整されるが、少なくとも８〜１１の間に調整される。

【0128】

米国特許出願第１０／７６５，７２０号で記載されている薬剤に加えて、１０／７６５，７２０号、さらに本発明に示される方法で送達される場合、追加の薬剤が有用である。これらの薬剤としては、ナトリウムチャネルを介して細胞に入る毒素、例えばテトロドトキシンおよびバトラコトキシン、カリウムチャネルを介して細胞に入る毒素、例えばマウロトキシン、アジトキシン、カリブドトキシン、マルガトキシン、スロトキシン、シクラトキシン、およびヘフトキシン、ならびにカルシウムチャネルを介して細胞に入る毒素、例えばカルシセプチン、タイカトキシン、カルシクルジン、およびＰｈＴｘ３が挙げられる。

【0129】

本明細書および参照された特許出願で記載される方法の利益を享受するその他の薬剤としては、アドレナリン遮断薬および刺激因子（例えばドキサゾシン、グアナドレル、グアネチジン、フェノキシベンザミン、プラゾシンおよびポリチアジド、テラゾシン、メチルドパ、クロニジン、グアナベンズ、グアンファシン）；アルファ−／ベータ−アドレナリン遮断薬（例えばラベタロール）；アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤（例えばベナゼプリル、カプトプリル、エナラプリル、エナラプリラート、フォシノプリル、リシノプリル、モエキシプリル、キナプリル、ラミプリル、およびカルシウムチャネル遮断薬と利尿薬との組合せ；ＡＣＥ受容体アンタゴニスト（例えばロサルタン）；ベータ遮断薬（例えばアセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、カルテオロール、エスモロール、フィモロール、ピンドロール、プロプラノロール、ペンブトロール、メトプロロール、ナドロール、ソタロール）；カルシウムチャネル遮断薬（例えばアミロリド、アムロジピン、ベプリジル、ジルチアゼム、イスラジピン、ニフェジピン、ベラパミル、フェロジピン、ニカルジビン、ニモジピン）；Ｉ〜ＩＶ群の抗不整脈薬（例えばブレチリウム、ジソピラミド、エンカイニド、フレカイニド、リドカイン、メキシレチン、モリシジン、プロパフェノン、プロカインアミド、キニジン、トカイニド、エスモロール、プロプラノロール、アセブトロール、アミオダロン、ソタロール、ベラパミル、ジルチアゼム、ピンドロール、ブプラノロール塩酸塩、トリクロルメチアジド、フロセミド、プラゾシン塩酸塩、メトプロロール酒石酸塩、カルテオロール塩酸塩、オクスプレノロール塩酸塩、およびプロプラノロール塩酸塩）；ならびに混合型の抗不整脈薬および強心薬（例えばアデノシン、ジゴキシン；メチルジゴキシン、カフェイン、ドパミン塩酸塩、ドブタミン塩酸塩、オクトパミン塩酸塩、ジプロフィリン、ユビデカレノン、ジギタリス）、ならびに脱感覚神経薬、例えばカプサイシンが挙げられる。

【0130】

同様に部分的または完全な交感神経切除をもたらすその他の薬剤も示されており、本明細書において記載されているような治療剤として使用することができる。そのような薬剤としては、免疫性交感神経切除薬、例えば抗神経成長因子（抗ＮＧＦ）；自己免疫性交感神経切除薬、例えば抗ドパミンベータ−ヒドロキシラーゼ（抗Ｄ．ベータ．Ｈ）および抗アセチルコリンエステラーゼ（抗ＡＣｈｅ）；化学的交感神経切除薬、例えば６−ヒドロキシルドパミン（６−ＯＨＤＡ）、トシル酸ブレチリウム、グアナクリン、およびＮ−（２−クロロエチル）−Ｎ−エチル−２−ブロモベンジルアミン（ＤＳＰ４）；ならびに免疫毒素による交感神経切除薬、例えばＯＸ７−ＳＡＰ、１９２−ＳＡＰ、抗ドパミンベータ−ヒドロキシラーゼサポリン（ＤＢＨ−ＳＡＰ）、および抗ドパミンベータ−ヒドロキシラーゼ免疫毒素（ＤＨＩＴ）が挙げられる。これらの薬剤の詳細な記載は、Ｐｉｃｋｌｏ Ｍ Ｊ、Ｊ Ａｕｔｏｎｏｍ Ｎｅｒｖ Ｓｙｓ １９９７年；６２巻：１１１〜１２５頁に見出される。フェノールおよびエタノールも化学的交感神経切除をなすのに使用されており、これらも本発明の方法において有用である。その他の交感神経遮断薬としては、アルファ−２−アゴニスト、例えばクロニジン、グアンファシン、メチルドパや、ベタニジン、グアネチジン、グアノキサン、デブリソキン、グアノクロル、グアナゾジン、グアノキサベンズなどのグアニジン誘導体；イミダゾリン受容体アゴニスト、例えばモキソニジン、リルメニジンなど；神経節遮断薬またはニコチンアンタゴニスト、例えばメカミラミン、トリメタファンなど；ＭＡＯＩ阻害剤、例えばパルギリンなど；アドレナリン取り込み阻害薬、例えばレシンナミン、レセルピンなど；チロシンヒドロキシラーゼ阻害剤、例えばメチロシンなど；アルファ−１遮断薬、例えばプラゾシン、インドラミン、トリマゾシン、ドキサゾシン、ウラピジルなど；非選択的アルファ遮断薬、例えばフェントラミンなど；セロトニンアンタゴニスト、例えばケタンセリンなど；およびエンドセリンアンタゴニスト、例えばボセンタン、アンブリセンタン、シタキセンタンなどが挙げられる。

【0131】

加えて、神経を硬化させる薬剤を使用して、神経溶解または交感神経遮断を起こすこともできる。血管周囲の神経損傷を引き起こす硬化薬としては、キナクリン、クロロキン、テトラデシル硫酸ナトリウム、オレイン酸エタノールアミン、モルイン酸ナトリウム、ポリドカノール、フェノール、エタノール、または高張液が挙げられる。

【0132】

図１２では、本発明の方法を達成するのに使用できるカテーテルが表示される。図１２の右側において、カテーテルの鞘状のエンベロープ内に微細針が保持されている鞘状の形状（上）のカテーテルが写真で示される。カテーテルは、萎んだ状態、かつ針がバルーン内に収められた状態で、動脈へと導入される。バルーン壁は針（微細針）を収め、デバイスの導入または除去の間に動脈壁を保護する。カテーテルのバルーンが膨張すると、図１２の左側の断面で示されるように、微細針は鞘状のエンベロープから押し出され、血管壁を通って展開が可能になる。図１２の左側の図は、針が収められているとき（左上）から膨張して針が動脈壁に押し入る間（左下）までのバルーン輪郭の断面を示す。バルーンが膨張すると、一般的にカテーテル長軸に対して垂直に（すなわち一般的にカテーテルの長さに沿った軸に垂直に）針が外側に押し出される。図１２の右側（下）の画像は、拡張したカテーテルを、展開された針と、壁（例えば気管支またはその他の管腔壁、例えば動脈壁）へと針をスライドさせるための対抗する力を付与する裏当てバルーン（ｂａｃｋｉｎｇ ｂａｌｌｏｏｎ）と共に示す。脱神経、具体的には腎脱神経の場合、腎神経は外膜および血管周囲組織内にあるため、治療剤送達に理想的な位置は外弾性板の外側である。

【0133】

ここで図１３を参照すると、図１１および１２と同様に類似の血管断面が示される。例えば上記したような微細針が、腎動脈または腎静脈などの血管壁を通って展開される。当然ながら、その他の経皮手段を介して腎動脈または静脈の外膜および血管周囲の空間に到達することもできるが、本明細書において記載されているようなカテーテルほど正確ではない。どのように外膜および血管周囲組織に接近するかにかかわらず、局所組織の生理に影響を与える媒体の送達と共に、その前に、またはその後に、治療剤を送達してもよい。本明細書において記載される本方法の特定の実施形態は、脱神経剤のグアネチジンと共に、８〜１０の範囲のｐＨ、または７〜１３の範囲のｐＨ、または約８〜約１０のｐＨ、または約８．５〜約９．５のｐＨ、または約８．３のｐＨ、または約９．３のｐＨを有する高ｐＨの溶液の、血管周囲の空間への注射を含む。グアネチジンは、好ましくは、その塩のグアネチジン一硫酸塩として水性形態で送達される。いくつかの実施形態では、グアネチジンは、グアネチジンヘミサルフェートとして水性形態で送達される。この実施形態で送達された組成物は、好ましくはおよそ１０ｍｇ／ｍＬのグアネチジン一硫酸塩を含有するが、１ｍｇ／ｍＬ〜３０ｍｇ／ｍＬの範囲内で含有していてもよいし、または１μｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの範囲内であってもよい。本組成物はさらに、塩化ナトリウムを、好ましくは０．７％〜０．９％の範囲で含有するが、０％から３％のいずれかで塩化ナトリウムを含有していてもよい。さらに本組成物は、好ましくは８〜１０のｐＨを有するか、または本明細書の上記で記載された７のｐＨに関するその他のｐＨ範囲のいずれかを有し、さらにオムニパーク、ビジパーク、またはイソブエ（Ｉｓｏｖｕｅ）（ただしその他の周知のコントラスト剤も本組成物で使用することができる）などの放射線不透過性造影剤を含有していてもよい。本明細書で使用される用語「約」は、ｐＨについて言及される場合、＋／−０．５ｐＨ、＋／−０．３ｐＨ、＋／−０．２ｐＨ、または＋／−０．１ｐＨを意味する。

【0134】

図１３および１４では、破線は、薬物濃度の一致したレベルまたは組織のｐＨの一致したレベルを示す。薬剤が組織に送達されると、薬剤が送達された地点から、送達位置から離れた地点にかけて、薬剤濃度は減少する。したがって、例えば数ミリリットルが注入される場合、濃度は、注入部位では高く、注入部位からの数センチメートルの地点ではそれより低い。同様に、針を介してアルカリ性組成物が送達される場合、局所組織のｐＨは、注入部位では高く、それより離れた組織では７．０〜７．３の中性ｐＨに低下する。また図１３および１４の破線からも組織の一致したｐＨを表わすことができ、注射部位から離れた線は中性に近く、注射部位に近い線は高ｐＨを示す。

【0135】

ここで図１５を参照すると、時点Ｔ１およびＴ２における一連の２つのプロットが表示されており、ここで、Ｔ２は、Ｔ１より後のいつかの時点である。正規化した濃度１．０（例えば１００μｇ／ｍＬ）および１０のｐＨの治療剤を注射した後の時点Ｔ１において、薬剤濃度は注射部位からの距離に伴いゼロに向けて低下し、局所組織のｐＨは注射部位からの距離に伴い中性ｐＨに向けて低下する。例証の目的で、治療帯は、８より高いｐＨを有する組織の領域における少なくとも０．２５の有効濃度（例えば２５μｇ／ｍＬ）によって定義される。図１５の図解プロットからわかるように、薬物が注射部位から離れて分配されるにつれて、局所の濃度が低下して遠方の濃度が上昇し、それと並行して生理的な排出と間質液の交換により組織が中和されるにつれてｐＨがゆっくり中性ｐＨに近づくために、この治療帯は、時間によって変化する。一例として、グアネチジンの場合、神経を破壊するにはｐＨ８で２０〜３０μｇ／ｍＬの濃度が効果的であるが、ｐＨ７では、１００μｇ／ｍＬの濃度でさえも神経は維持される。これは、グアネチジンが非プロトン化状態で神経に侵入する能力が、そのプロトン化状態と比較して強化されたことによる可能性が最も高い。したがって、治療帯（ここでグアネチジンはアルカリ性の環境にあり、プロトン化されないかまたは単一プロトン化される可能性がより高い）にある神経は破壊されるが、治療帯の外側（ここでグアネチジンはより中性の環境にあり、単一または二重プロトン化される可能性がより高い）の神経は維持される。さらに、グアネチジンは神経を特異的に標的とし、ｐＨは、その他の組織を破壊する作用を引き起こすほど高くないために、治療帯にあるその他の組織は犠牲にならない。

【0136】

本明細書において、組織への治療剤の取り込みを強化する方法であって、中心と外縁とを有する組織の帯を生じさせることにより組織のｐＨを調節する工程を含み、該帯は、調節する前の組織の調節前ｐＨと比較して、または中性ｐＨと比較して、調節されたｐＨを含み、ここで、帯は該帯の中心で最もよく調節され、かつ帯の外縁で組織の調節前ｐＨまたは中性ｐＨまで低下させるｐＨの勾配を含み、ここで、該帯において、調節前ｐＨまたは中性ｐＨで組織へと起こる取り込みと比較して、治療剤の強化された取り込みが起こる、方法が提供される。いくつかの実施形態では、帯は、治療帯を含む。いくつかの実施形態では、帯の部分は、図１５で示されるような治療帯である。そのような方法は図１３〜１５に表されており、本明細書において記載される通りである。

【0137】

本明細書において、組織への治療剤の取り込みを強化する方法であって、− 中心と外縁とを有する組織の帯を生じさせることにより組織のｐＨを調節する工程と、− 該帯へと治療剤を送達する工程とを含み；該帯は、調節する前の組織の調節前ｐＨと比較して、または中性ｐＨと比較して、調節されたｐＨを含み、ここで、帯は該帯の中心で最もよく調節され、かつ該帯の外縁で組織の調節前ｐＨまたは中性ｐＨまで低下させるｐＨの勾配を含み、該帯において、調節前ｐＨまたは中性ｐＨで組織へと起こる取り込みと比較して治療剤の強化された取り込みが起こる、方法が提供される。いくつかの実施形態では、帯は、治療帯を含む。いくつかの実施形態では、帯の部分は、図１５で示されるような治療帯である。そのような方法は図１３〜１５に表されており、本明細書において記載される通りである。

【0138】

いくつかの実施形態では、本方法は、帯へと治療剤を送達する工程を含む。いくつかの実施形態では、治療剤が全身に送達され、組織のｐＨを調節することにより、帯における治療剤の集積が強化されるか、または帯における治療指数が改善される。

【0139】

いくつかの実施形態では、強化された取り込みは、予め選択した量によって、調節前ｐＨから調節された調節されたｐＨを有する帯の部分内で起こる。いくつかの実施形態では、強化された取り込みは、予め選択した量によって、中性ｐＨから調節された調節されたｐＨを有する帯の部分内で起こる。いくつかの実施形態では、帯の部分は、図１５およびその記載で示されるような治療帯である。いくつかの実施形態では、予め選択した量は、０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、−０．５、−１．０、−１．５、−２．０、−２．５、−３．０、−３．５、−４．０、−４．５、０．５から５．０、１．５から４．５、２．０から４．０、約０．５、−０．５から−５．０、−１．５から−４．５、−２．０から−４．０、約０．５、約１．０、約１．５、約２．０、約２．５、約３．０、約３．５、約４．０、約４．５、約−０．５、約−１．０、約−１．５、約−２．０、約−２．５、約−３．０、約−３．５、約−４．０、および約−４．５のうち１つまたは複数の、調節されたｐＨと調節前ｐＨとの間のｐＨの差、または調節されたｐＨと中性ｐＨとの間のｐＨの差である。いくつかの実施形態では、調節されたｐＨは、帯外側の組織よりも低いｐＨ、帯外側の組織よりも高いｐＨ、調節する前の組織のｐＨよりも低いｐＨ、または調節する前の組織のｐＨよりも高いｐＨである。いくつかの実施形態では、調節されたｐＨは、帯外側の組織のｐＨよりも酸性であるか、または、帯外側の組織のｐＨよりもアルカリ性である。調節されたｐＨが、少なくとも７、最大で１１、少なくとも７および最大で１１、少なくとも８および最大で１０、またはそのような治療剤が送達される神経を脱神経させるのに効果的である所定のｐＨである、請求項４２に記載の方法。いくつかの実施形態では、治療剤は、グアネチジンを含む。いくつかの実施形態では、グアネチジンは、一硫酸塩またはヘミ硫酸塩を包含する。いくつかの実施形態では、調節されたｐＨは、少なくとも７、最大で１１、少なくとも７および最大で１１、少なくとも８および最大で１０、またはそのような治療剤が送達される神経を脱神経させるのに効果的である所定のｐＨである。

【0140】

上記の段落の別の要点は、局所の生理機能（ｐＨ）を調節して治療剤（グアネチジン）を送達することにより、組織の調節と薬物濃度が有効である境界において特定の効果を局所化することができる本発明の重要な態様を例証することである。高血圧処置のためのグアネチジンによる腎動脈の脱神経の場合と同様に、体内の腸間膜、肝臓、またはその他の系に至る神経などの遠位の神経に影響を与えずに、腎動脈を取り囲む神経の局所的および集中的な脱神経を生じさせることが望ましい。薬物は生理的なｐＨでは永続的な神経破壊を起こさないため、最終的に薬物が血流や泌尿器系を介して分配して遠位の組織に到達したとしても同じことが言える。したがって、本明細書で記載された新規の組成物および新規の方法を用いれば、遠隔領域での合併症を起こすことなく永続的な効果を対象の局所組織に集中させることができる。

【0141】

本明細書において、ｐＨを調整することによって神経の周りの組織をプライミングして、該神経に送達される、または該神経の周りの該組織に送達される脱神経組成物または治療剤の有効性を強化する方法が提供される。本明細書において、神経の周りの組織のｐＨを調整して、該神経に送達される、または該神経の周りの該組織に送達される脱神経組成物または治療剤の有効性を強化する方法が提供される。いくつかの実施形態では、組織のｐＨは、アルカリ性に調整される。いくつかの実施形態では、組織のｐＨは、酸性に調整される。いくつかの実施形態では、組織のｐＨは、中性ｐＨに調整される。そのような組織のｐＨを調整することができる複数の方法があり、これらはいずれも本明細書に包含されるものとし、そのうちいくつかの例を本明細書でより詳細に考察するが、そのような例に範囲を限定されないものとする。

【0142】

薬剤の送達、調節因子の送達（あらゆる順番で）：本明細書において、局所的に神経を脱神経させる治療剤を被験体に送達する方法であって、被験体に治療剤を送達する工程、および脱神経の標的である神経の周りの組織の局所のｐＨを調節するのに効果的である調節因子または組成物を送達する工程を含む、方法が提供される。治療剤および／または調節因子もしくは組成物の送達は、例えば本明細書において記載されているような１つまたは複数のデバイスを使用して経管的に行ってもよい。そのような上記組成物の送達は、薬剤送達の間に、その前に、またはその後に行ってもよい。治療剤は、グアネチジン、または本明細書に記載された別の治療剤であってもよい。そのような調節により、組織のｐＨを、非限定的な例として少なくとも７、７〜１１の間、または８〜１０の間、または８．５〜９．５の間に変化させることができる。いくつかの実施形態では、調節因子は、バッファーまたは緩衝剤である。いくつかの実施形態では、本組成物は、バッファーまたは緩衝剤を含む。いくつかの実施形態では、治療剤の送達と調節因子または組成物の送達とは、同じ注射デバイスを使用して、または別個の注射デバイスを使用して、同時に、並行して、または逐次的になされる。

【0143】

調節因子の単独での送達：別の実施形態では、本方法は、治療剤を必要とすることなく、脱神経の標的である神経の周りの組織のｐＨを局所で調節する組成物の送達を含む。そのような実施形態では、本組成物それ自身が、標的神経を脱神経させるという治療的目的を達成する。

【0144】

緩衝化した薬剤の送達：別の実施形態では、本方法は、神経の周りの組織への送達の前に、ｐＨ調節されている組成物の送達を含む。そのような組成物は、ｐＨ調節因子と治療剤とを含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、組成物は、治療剤とｐＨ調節因子とを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、非限定的な例として、少なくとも７、７〜１１の間、８〜１０の間、または８．５〜９．５の間のｐＨの治療剤を含む。いくつかの実施形態では、治療剤のみを含む水溶液（調節因子は含まず）は、治療剤と調節因子との水溶液を含む組成物よりも酸性である。いくつかの実施形態では、治療剤のみを含む水溶液（調節因子は含まず）は、治療剤と調節因子との水溶液を含む組成物よりもアルカリ性である。ｐＨ調節因子は、組成物を、標的ｐＨに、非限定的な例として少なくとも７、７〜１１の間、８〜１０の間、または８．５〜９．５の間に調整するバッファー、アルカリ性バッファー、例えばＮａＯＨ、または別のバッファーであってもよい。ｐＨ調節因子は、酸、酸性物質、または酸もしくは酸性物質の塩であってもよい。そのような実施形態では、本組成物は、治療剤と、本組成物のｐＨを非限定的な例として少なくとも７、７〜１１の間、８〜１０の間、または８．５〜９．５の間に調節するｐＨ調節因子とを含む。そのような組成物を、脱神経の標的である神経の周りの組織に送達することができる。いくつかの実施形態では、上記組成物の単回の注射が、１つまたは複数の標的神経を脱神経させることにおいて効果的であり得る。いくつかの実施形態では、治療剤は、グアネチジン、グアネチジン一硫酸塩、もしくはグアネチジンヘミサルフェート、または本明細書の他所に記載されたあらゆる薬剤（すなわち治療剤）を含む。いくつかの実施形態では、調節因子は、バッファーまたは緩衝剤である。いくつかの実施形態では、バッファーは、水酸化ナトリウムを含む。

【0145】

グアネチジンヘミサルフェート薬剤の送達：いくつかの実施形態では、本方法は、アルカリ性のｐＨを有する水溶液中の治療剤を含む組成物の送達を含む。いくつかの実施形態では、本方法は、酸性のｐＨを有する水溶液中の治療剤を含む組成物の送達を含む。そのような実施形態では、ｐＨ調節因子は、組成物が送達される組織で神経を脱神経させることにおいて治療剤の有効性を強化するｐＨを必ずしも達成しない。そのような組成物は、非限定的な例として、少なくとも７、７〜１１の間、８〜１０の間、または８．５〜９．５の間のｐＨを有する水溶液中に治療剤を含んでいてもよい。

【0146】

本明細書において、８より高いｐＨを有するグアニジン含有組成物が提供される。いくつかの実施形態では、グアニジンは、グアネチジンである。いくつかの実施形態では、グアネチジンは、一硫酸塩を包含する。いくつかの実施形態では、グアネチジンは、脱神経用に形成された（ｃｏｎｆｉｇｕｒｅｄ）溶液中のヘミ硫酸塩を包含する。いくつかの実施形態では、グアネチジンは、脱神経に適した溶液中のヘミ硫酸塩を包含する。いくつかの実施形態では、ｐＨは９より高い。いくつかの実施形態では、ｐＨは１０より高い。

【0147】

いくつかの実施形態では、本組成物は、アルカリ性バッファーをさらに含む。いくつかの実施形態では、アルカリ性バッファーは、ＮａＯＨを含む。いくつかの実施形態では、アルカリ性バッファーは、ＮａＯＨを、５０％またはそれよりも高い、グアニジン濃度に対するモル濃度比で含む。いくつかの実施形態では、アルカリ性バッファーは、ＮａＯＨを、グアニジンと等モル濃度でまたはそれよりも高いモル濃度で含む。

【0148】

いくつかの実施形態では、本組成物は、造影剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、本組成物は、塩化ナトリウムをさらに含む。いくつかの実施形態では、塩化ナトリウムは、溶液の０．７％〜０．９％である。いくつかの実施形態では、グアネチジン一硫酸塩は、０．１ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態では、グアネチジン一硫酸塩は、１ｍｇ／ｍＬ〜２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。

【0149】

本明細書において、液体、ゲル、または半固体を含む調製物の組織への送達を含む、局所組織の生理機能を調節する方法が提供される。いくつかの実施形態では、本調製物は、局所組織のｐＨを高くするかまたは低くすることによって局所組織の生理機能を緩衝化する。いくつかの実施形態では、本調製物は、そのような調製物の送達によって調節された生理条件で調製物の指標効果を有するが、中性の生理条件では指標効果を有さない治療剤を含む。いくつかの実施形態では、本調製物はさらに、そのような調製物の送達によって調節された生理条件で追加の指標効果または強化された指標効果を有するが、中性の生理条件ではそのような追加の指標効果や強化された指標効果を有さない治療剤を包含する。いくつかの実施形態では、治療剤が全身に送達され、組織は、局所で調節された組織における治療剤の蓄積の強化または治療指数の改善に作用するように、局所のｐＨ変化で調節される。いくつかの実施形態では、ゲルは、ヒドロゲルを含む。いくつかの実施形態では、ヒドロゲルは、組織で再吸収するときにプロトンを消費する。いくつかの実施形態では、ヒドロゲルは、アルカリ性である。いくつかの実施形態では、本調製物は、グアネチジン一硫酸塩を包含する。いくつかの実施形態では、本調製物は、８より高いｐＨを有する。いくつかの実施形態では、本調製物は、造影剤を包含する。いくつかの実施形態では、本調製物は、本明細書において記載されているような組成物である。いくつかの実施形態では、本調製物は、本明細書において記載される組成物を含む。

【0150】

本明細書において、十分に低いまたは高いｐＨを有する酸または塩基の限局性送達により、限局性神経損傷または破壊を生じさせる工程を含む、腎脱神経を生じさせる方法が提供される。

【0151】

本明細書において、他の局所組織を温存しながらニューロンの破壊を生じさせる非等張または非等モル浸透圧溶液の限局性送達を含む、腎脱神経を生じさせる方法が提供される。

【0152】

本明細書において、腎動脈外膜および血管周囲組織への、８より高いｐＨのグアネチジン一硫酸塩の調製物または８より高いｐＨのグアネチジンヘミサルフェートの調製物の送達を含む高血圧を処置する方法が提供される。

【0153】

いくつかの実施形態では、本方法は、血管内の側からの送達をさらに含む。本明細書で記載されているような送達デバイスを使用することができ、または別の送達デバイスを使用することもできる。送達は、経管的であってもよい。

【0154】

本明細書において、腎動脈外膜および血管周囲組織への、８より高いｐＨのグアネチジン一硫酸塩の調製物または８より高いｐＨのグアネチジンヘミサルフェートの調製物の送達を含む心不全を処置する方法が提供される。

【0155】

本明細書において、腎動脈外膜および血管周囲組織への、８より高いｐＨのグアネチジン一硫酸塩の調製物または８より高いｐＨのグアネチジンヘミサルフェートの調製物の送達を含むインスリン抵抗性を処置する方法が提供される。

【0156】

本明細書において、腎動脈外膜および血管周囲組織への、８より高いｐＨのグアネチジン一硫酸塩の調製物または８より高いｐＨのグアネチジンヘミサルフェートの調製物の送達を含む全身性炎症を処置する方法が提供される。

【0157】

本明細書において、腎動脈外膜および血管周囲組織への、８より高いｐＨのグアネチジン一硫酸塩の調製物または８より高いｐＨのグアネチジンヘミサルフェートの調製物の送達を含む睡眠時無呼吸を処置する方法が提供される。

【0158】

本明細書において、以下のもの：高張塩類溶液、洗浄剤、溶媒、エタノール、強酸、強塩基、緩衝剤、アルカリ性緩衝剤、酸性緩衝剤、０．７％〜０．９％の間の塩化ナトリウム含量を有する組成物、約９．５のｐＨを有する組成物、アルカリ性緩衝剤で緩衝化することによって約９．５に調整されたｐＨを有する組成物、水酸化ナトリウムで緩衝化することによって約９．５に調整されたｐＨを有する組成物、または８〜１１の間のｐＨを有する組成物から選択される薬剤の限局性送達を含む、脱神経を生じさせる方法が提供される。いくつかの実施形態では、脱神経は、腎神経の脱神経である。いくつかの実施形態では、本方法は、腎脱神経を生じさせる。いくつかの実施形態では、脱神経は、肺の近くの神経などの非腎神経の脱神経である。

【0159】

いくつかの実施形態では、緩衝剤は、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化マグネシウム、硫酸、塩酸、クエン酸、酢酸、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、ホウ酸、リン酸二水素カリウム、ジエチルバルビツール酸、３−｛［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝プロパンスルホン酸、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルグリシン、２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール、３−［Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸、４−２−ヒドロキシエチル−１−ピペラジンエタンスルホン酸、２−｛［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝エタンスルホン酸、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）、ジメチルアルシン酸、サリンソジウムシトレート（ｓａｌｉｎｅ ｓｏｄｉｕｍ ｃｉｔｒａｔｅ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸、およびグリシンのうち１つまたは複数を含む。

【0160】

本明細書において、以下のもの：７より高いｐＨの１μｇ／ｍＬから５０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度のグアネチジン、７より高いｐＨの１ｍｇ／ｍＬから３０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度のグアネチジン、０．７％〜０．９％の間の塩化ナトリウム含量を有するグアネチジンを含む組成物、約９．５のｐＨを有するグアネチジンを含む組成物、アルカリ性緩衝剤で緩衝化することによって約９．５に調整されたｐＨを有するグアネチジンを含む組成物、水酸化ナトリウムで緩衝化することによって約９．５に調整されたｐＨを有するグアネチジンを含む組成物、または８〜１１の間のｐＨを有するグアネチジンを含む組成物から選択される薬剤の限局性送達を含む、脱神経を生じさせる方法が提供される。いくつかの実施形態では、脱神経は、腎神経の脱神経である。いくつかの実施形態では、本方法は、腎脱神経を達成する。いくつかの実施形態では、脱神経は、肺の近くの神経などの非腎神経の脱神経である。

【0161】

本明細書において、ナトリウムチャネルを介して細胞に入る第一の毒素（そのような第一の毒素は、テトロドトキシンおよびバトラコトキシンのうち１つまたは複数を含む）、カリウムチャネルを介して細胞に入る第二の毒素（そのような第二の毒素は、マウロトキシン、アジトキシン、カリブドトキシン、マルガトキシン、スロトキシン、シクラトキシン、およびヘフトキシンのうち１つまたは複数を含む）、および／またはカルシウムチャネルを介して細胞に入る第三の毒素（そのような第三の毒素は、カルシセプチン、タイカトキシン、カルシクルジン、およびＰｈＴｘ３のうち１つまたは複数を含む）の限局性送達を含む、脱神経を生じさせる方法が提供される。いくつかの実施形態では、脱神経は、腎神経の脱神経である。いくつかの実施形態では、本方法は、腎脱神経を達成する。いくつかの実施形態では、脱神経は、肺の近くの神経などの非腎神経の脱神経である。

【0162】

本明細書において、アドレナリン遮断薬、アンドロゲン阻害剤、アドレナリン刺激剤、アルファ−／ベータ−アドレナリン遮断薬、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、ＡＣＥ受容体アンタゴニスト、ベータ遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、Ｉ〜ＩＶ群の抗不整脈薬、抗不整脈薬、強心薬、アルファ−２−アゴニスト、グアニジン誘導体、イミダゾリン受容体アゴニスト、神経節遮断薬、ニコチンアンタゴニスト、神経節遮断薬、ニコチンアンタゴニスト、ＭＡＯＩ阻害剤、アドレナリン取り込み阻害薬、チロシンヒドロキシラーゼ阻害剤、アルファ−１遮断薬、非選択的アルファ遮断薬、セロトニンアンタゴニスト、エンドセリンアンタゴニスト、硬化薬、または脱感覚神経薬を含む薬剤の限局性送達を含む、脱神経を生じさせる方法が提供される。いくつかの実施形態では、脱神経は、腎神経の脱神経である。いくつかの実施形態では、本方法は、腎脱神経を達成する。いくつかの実施形態では、脱神経は、肺の近くの神経などの非腎神経の脱神経である。

【0163】

本明細書において、ドキサゾシン、グアナドレル、グアネチジン、フェノキシベンザミン、プラゾシン＋ポリチアジド、テラゾシン、メチルドパ、クロニジン、グアナベンズ、グアンファシン、ラベタロール、ベナゼプリル、カプトプリル、エナラプリル、エナラプリラート、フォシノプリル、リシノプリル、モエキシプリル、キナプリル、ラミプリル、およびカルシウムチャネル遮断薬と利尿薬との組合せ、ロサルタン、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、カルテオロール、エスモロール、フィモロール、ピンドロール、プロプラノロール、ペンブトロール、メトプロロール、ナドロール、ソタロール、アミロリド、アムロジピン、ベプリジル、ジルチアゼム、イスラジピン、ニフェジピン、ベラパミル、フェロジピン、ニカルジビン、ニモジピン、ブレチリウム、ジソピラミド、エンカイニド、フレカイニド、リドカイン、メキシレチン、モリシジン、プロパフェノン、プロカインアミド、キニジン、トカイニド、エスモロール、プロプラノロール、アセブトロール、アミオダロン、ソタロール、ベラパミル、ジルチアゼム、ピンドロール、ブプラノロール塩酸塩、トリクロルメチアジド、フロセミド、プラゾシン塩酸塩、メトプロロール酒石酸塩、カルテオロール塩酸塩、オクスプレノロール塩酸塩、およびプロプラノロール塩酸塩、アデノシン、ジゴキシン；メチルジゴキシン、カフェイン、ドパミン塩酸塩、ドブタミン塩酸塩、オクトパミン塩酸塩、ジプロフィリン、ユビデカレノン、ジギタリス、カプサイシン、抗神経成長因子、抗ドパミンベータ−ヒドロキシラーゼ、抗アセチルコリンエステラーゼ、６−ヒドロキシルドパミン（６−ＯＨＤＡ）、トシル酸ブレチリウム、グアナクリン、およびＮ−（２−クロロエチル）−Ｎ−エチル−２−ブロモベンジルアミン（ＤＳＰ４）、ＯＸ７−ＳＡＰ、１９２−ＳＡＰ、抗ドパミンベータ−ヒドロキシラーゼサポリン（ＤＢＨ−ＳＡＰ）、および抗ドパミンベータ−ヒドロキシラーゼ免疫毒素（ＤＨＩＴ）、フェノール、エタノール、クロニジン、グアンファシン、メチルドパ、ベタニジン、グアノキサン、デブリソキン、グアノクロル、グアナゾジン、グアノキサベンズ、モキソニジン、リルメニジン、メカミラミン、トリメタファン、パルギリン、レシンナミン、レセルピン、メチロシン、プラゾシン、インドラミン、トリマゾシン、ドキサゾシン、ウラピジル、フェントラミン、ケタンセリン、ボセンタン、アンブリセンタン、シタキセンタン、キナクリン、クロロキン、テトラデシル硫酸ナトリウム、オレイン酸エタノールアミン、モルイン酸ナトリウム、ポリドカノール、または高張液を含む薬剤の限局性送達を含む、脱神経を生じさせる方法が提供される。いくつかの実施形態では、脱神経は、腎神経の脱神経である。いくつかの実施形態では、本方法は、腎脱神経を達成する。いくつかの実施形態では、脱神経は、肺の近くの神経などの非腎神経の脱神経である。

【0164】

いくつかの実施形態では、薬剤それ自身またはそのような薬剤を含む組成物は、少なくとも７のｐＨ、最大で１１のｐＨ、少なくとも７および最大で１１のｐＨ、少なくとも８および最大で１０のｐＨ、そのような薬剤が送達される神経を脱神経させるのに効果的であるｐＨ、またはそのような薬剤が送達される神経を脱神経させるのに効果的であるレベルに調整されたｐＨを有する。

【実施例】

【0165】

（実施例１）
ｉｎ ｖｉｔｒｏでのｐＨおよびグアネチジン一硫酸塩濃度に対する神経および平滑筋細胞の応答

【0166】

グアネチジン一硫酸塩とｐＨとの相互作用の研究を、交感神経ニューロン性細胞型ならびに血管周囲細胞型および血管細胞型で行った。以下の細胞型を調べた：
・ ＳＨ−ＳＹ５Ｙ：プレート培養したが誘導しなかったヒト神経芽細胞腫系ＳＨ−ＳＹ５Ｙ、
・ 誘導ＳＨ−ＳＹ５Ｙ：レチノイン酸で誘導して軸索が成長している交感神経細胞に分化したＳＨ−ＳＹ５Ｙ、
・ ｒＰＣ−１２：プレート培養したが誘導しなかった接着性ラットＰＣ−１２細胞、
・ 誘導ｒＰＣ−１２：ＮＧＦで誘導して軸索が成長している交感神経細胞に分化したＰＣ−１２、
・ ラットＳＣＧ：初代ラット上頸神経節細胞、
・ ｈＡｏＳＭＣ：初代ヒト大動脈平滑筋細胞。

【0167】

細胞を、０、１、１０、１００もしくは１０００μｇ／ｍＬのグアネチジン一硫酸塩（ＧＮＴ）、または１０μｇ／ｍＬのＧＮＴ、および１７％のＩｓｏＶＵＥ３７０で、ｐＨ６．３およびｐＨ９．３で処理した。４時間で、反復培養では２４時間で、培地を同じ薬物濃度を有する通常の増殖培地で置き換えた。試験方法を以下のようにして段階的に行った：ｐＨ６．３またはｐＨ９．３のいずれかのグアネチジン一硫酸塩の組成物（０、１、１０、１００もしくは１０００μｇ／ｍＬのグアネチジン一硫酸塩、または、１０μｇ／ｍＬのＧＮＴおよび１７％のＩｓｏＶＵＥ３７０の濃度で）で細胞を処理する；４時間または２４時間待ち、次に培地を、ｐＨ調節していないグアネチジン一硫酸塩の組成物（０、１、１０、１００もしくは１０００μｇ／ｍＬのグアネチジン一硫酸塩、または、１０μｇ／ｍＬのＧＮＴおよび１７％のＩｓｏＶＵＥ３７０の濃度で）で置き換える；４８時間で、アラマーブルー（約４時間インキュベート）によって、細胞を生存率に関して試験する；ｐＨ調節していないグアネチジン一硫酸塩を、標準的な増殖培地に交換する；７日目に、アラマーブルー（約４時間インキュベート）によって、細胞を生存率に関して試験する。図１７Ａ〜１７Ｌに、ｘ軸において１０＋ＩＶと表示された、１０μｇ／ｍＬのＧＮＴおよび１７％のＩｓｏＶＵＥ３７０に関するデータを示す。ラットＳＣＧ細胞を用いてさらなる試験を行い、ｐＨ９．３曝露で１時間またはｐＨ７．３（通常の増殖培地）で２４時間の効果を調べた。これらの細胞は、２４時間でのみ調べた。ｐＨまたは薬物添加の直前に細胞を顕微鏡法で調べ、４８時間で再度調べた。観察を記録して写真を撮った。

【0168】

上記したように、４８時間（２日目）および７日目にアラマーブルーと約４時間インキュベートすることによって、細胞を生存率に関して試験した。薬物の毒性およびｐＨの馴化を、増殖培地のみの陰性対照および通常の増殖培地中の１％トリトン（ＴＸ−１００）の陽性対照に対して比較した。全ての条件を３連で行った。米国薬局方（ＵＳＰ）グアネチジン一硫酸塩参照標準（ＣＡＳ６４５−４３−２）からグアネチジン試料を調製した。

【0169】

腎動脈の交感神経の高周波アブレーションは、薬物抵抗性高血圧において血圧を低下させることが示されている。（Ｄｏｕｍａｓ Ｍ、Ｄｏｕｍａ Ｓ． Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ、Ｌａｎｃｅｔ、２００９年；３７３巻：１２２８〜１２２９頁）。腎脱神経と高血圧とを結びつける生理的なメカニズムは、腎臓の交感神経によるノルエピネフリン（ＮＥ）生成の減少である。（ＤｉＢｏｎａ ＧＦ、Ｅｓｌｅｒ Ｍ． Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ：ｔｈｅ ａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｒｅｎａｌ ｄｅｎｅｒｖａｔｉｏｎ、Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｇｕｌ Ｉｎｔｅｇｒ Ｃｏｍｐ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２０１０年２月；２９８巻（２号）：Ｒ２４５〜５３頁。２００９年１２月２日に電子出版）。完全な腎脱神経により、ブタ（４５２±８３から１５±２７ｎｇ／ｇに減少）およびイヌ（２６０±１９から２４±１２ｎｇ／ｇに減少）において腎臓組織中のＮＥ含量の約９０％の減少が生じる。（Ｃｏｎｎｏｒｓ ＢＡ、Ｅｖａｎ ＡＰ、Ｗｉｌｌｉｓ ＬＲ、Ｓｉｍｏｎ ＪＲ、Ｆｉｎｅｂｅｒｇ ＮＳ、Ｌｉｆｓｈｉｔｚ ＤＡ、Ｓｈａｌｈａｖ ＡＬ、Ｐａｔｅｒｓｏｎ ＲＦ、Ｋｕｏ ＲＬ、Ｌｉｎｇｅｍａｎ ＪＥ． Ｒｅｎａｌ ｎｅｒｖｅｓ ｍｅｄｉａｔｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｃｏｎｔｒａｌａｔｅｒａｌ ｒｅｎａｌ ｂｌｏｏｄ ｆｌｏｗ ａｆｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｏｒｐｏｒｅａｌ ｓｈｏｃｋｗａｖｅ ｌｉｔｈｏｔｒｉｐｓｙ、Ｎｅｐｈｒｏｎ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２００３年；９５巻（４号）：６７〜７５頁；Ｍｉｚｅｌｌｅ ＨＬ、Ｈａｌｌ ＪＥ、Ｗｏｏｄｓ ＬＬ、Ｍｏｎｔａｎｉ ＪＰ、Ｄｚｉｅｌａｋ ＤＪ、Ｐａｎ ＹＪ． Ｒｏｌｅ ｏｆ ｒｅｎａｌ ｎｅｒｖｅｓ ｉｎ ｃｏｍｐｅｎｓａｔｏｒｙ ａｄａｐｔａｔｉｏｎ ｔｏ ｃｈｒｏｎｉｃ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｓｏｄｉｕｍ ｉｎｔａｋｅ、Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１９８７年２月；２５２巻（２分冊のうち第２分冊）：Ｆ２９１〜８頁）。

【0170】

圧力の減少が報告されており、処置後１５〜３０日で脱神経された腎動脈からのＮＥのスピルオーバーによる平均４７％の低下（Ｎ＝１０人の患者）が報告された。（Ｄｏｕｍａｓ ２００９年）。腎臓の交感神経は、腎動脈外膜に存在する。

【0171】

特定の実験では、ブタ腎動脈外膜から腎臓皮質におけるグアネチジンによる脱神経によるＮＥの４９〜５８％の低下ならびに神経の変質および線維化の組織学的証拠が示されており、本明細書では、ｐＨ９．３のグアネチジン＋ＩｓｏＶＵＥと比較して、ｐＨ６．３のグアネチジン＋ＩｓｏＶＵＥでは脱神経が起こらなかったことに基づき、この効果はｐＨ依存性であることが示される。

【0172】

グアネチジン一硫酸塩は、２９６．３９ｇ／ｍｏｌの分子量を有する。１０ｍｇ／ｍＬの濃度が、３３．７ｍｍｏｌ／Ｌ（３３．７ｍＭ）のモル濃度になる。０．２ｍＭ（６０μｇ／ｍＬ）またはそれより高い濃度が、ｉｎ ｖｉｔｒｏで軸索退縮を引き起こすことが示されている。（Ｈｉｌｌ ＣＥら Ｕｓｅ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｏ ｅｘａｍｉｎｅ ｔｈｅ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｇｕａｎｅｔｈｉｄｉｎｅ ａｎｄ ６−ｈｙｄｒｏｘｙｄｏｐａｍｉｎｅ、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １９７３年；２３巻：１６２０〜７４頁）。

【0173】

グアネチジンは、培養中の初代ラット上頸神経節ニューロンにおいてｐＨ依存性の効果を有し、すなわちｐＨ８．０で１００μｇ／ｍＬから細胞毒性を示すがｐＨ７．２で細胞毒性がなくなることが示されている（Ｊｏｈｎｓｏｎ ＥＭおよびＡｌｏｅ Ｌ． Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｕａｎｅｔｈｉｄｉｎｅ ｉｎ ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ ｎｅｕｒｏｎｓ ｂｙ ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９７４年；８１巻：５１９〜５３２頁；Ｗａｋｓｈｕｌｌ Ｅ、Ｊｏｈｎｓｏｎ ＭＩ、Ｂｕｒｔｏｎ Ｈ． Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ ｏｆ ａｎ ａｍｉｎｅ ｕｐｔａｋｅ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｒａｔ ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ ｎｅｕｒｏｎｓ ｗｈｉｃｈ ｕｓｅ ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ａｓ ｔｈｅｉｒ ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ、Ｊ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １９７８年；７９巻：１２１〜１３１頁）。

【0174】

アラマーブルーは、生細胞の自然の還元力を利用してリザズリンを蛍光分子のレゾルフィンに変換する、立証済みの細胞生存率の指標である。アラマーブルーの活性成分（リザズリン）は、青色で実質的に非蛍光性の非毒性細胞透過性化合物である。リザズリンは、細胞に入るとレゾルフィンに還元され、これが極めて明るい赤色蛍光を発する。生存細胞は連続的にリザズリンをレゾルフィンに変換するため、生存率、すなわち細胞毒性の定量的尺度が得られる。

【0175】

神経節後交感神経ニューロンの挙動を再現するという試みにおいて、ラット褐色細胞腫細胞（ＰＣ−１２）、ヒト神経芽細胞腫細胞（ＳＨ−ＳＹ５Ｙ）、および初代ラット上頸神経節（ラットＳＣＧ）細胞をこれらの実験で使用した。これらの実験において、いずれの細胞型も増殖して軸索を形成することができた。アラマーブルーとのインキュベート後、全ての試料で蛍光単位（ＦＵ）を測定した。

【0176】

図１７Ａ〜１７Ｌは、アラマーブルーと約４時間インキュベートすることによる、４８時間、すなわち２日目（左の列は、図１７Ａ、１７Ｃ、１７Ｅ、１７Ｇ、１７Ｉ、および１７Ｋのプロットを包含する）および７日目（右の列は、図１７Ｂ、１７Ｄ、１７Ｆ、１７Ｈ、１７Ｊ、および１７Ｌのプロットを包含する）の３連でなされた生存率試験の結果を示す。以下に示される図１７Ａ〜１７Ｌのデータは、以下の方程式により計算され、式中、ＦＵ_試料は、バックグラウンドを差し引いた試料の蛍光であり、ＦＵ_陰性対照は、バックグラウンドを差し引いた増殖培地中の細胞の蛍光であり、ＦＵ_陽性対照は、バックグラウンドの蛍光を差し引いた１％トリトン曝露後の細胞の蛍光（全ての細胞の死滅）である。方程式は、以下の通りである：％＝１００×（（ＦＵ_試料−ＦＵ_陽性対照）／（ＦＵ_陰性対照−ＦＵ_陽性対照））。

【0177】

図１７Ａは、ｐＨ６．３で４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、白菱形のマーカーを有する一番上の線）、ｐＨ６．３で２４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒菱形のマーカーを有する上から２番目の線）、ｐＨ９．３で４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、白四角のマーカーを有する上から３番目の線）、およびｐＨ９．３で２４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒四角のマーカーを有する一番下の線）の場合の、２日目のｒＰＣ−１２における正常細胞と比較したアラマーブルーの蛍光％を示す。

【0178】

図１７Ｂは、ｐＨ６．３で４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、白菱形のマーカーを有する一番上の線）、ｐＨ６．３で２４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒菱形のマーカーを有する上から２番目の線）、ｐＨ９．３で４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、白四角のマーカーを有する上から３番目の線）、およびｐＨ９．３で２４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒四角のマーカーを有する一番下の線）の場合の、７日目のｒＰＣ−１２における正常細胞と比較したアラマーブルーの蛍光％を示す。

【0179】

図１７Ｃは、ｐＨ６．３で４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、白菱形のマーカーを有する一番上の線）、ｐＨ６．３で２４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒菱形のマーカーを有する上から２番目の線）、ｐＨ９．３で４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、白四角のマーカーを有する上から３番目の線）、およびｐＨ９．３で２４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒四角のマーカーを有する一番下の線）の場合の、２日目の誘導したｒＰＣ−１２における正常細胞と比較したアラマーブルーの蛍光％を示す。

【0180】

図１７Ｄは、ｐＨ６．３で４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、白菱形のマーカーを有する一番上の線）、ｐＨ６．３で２４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒菱形のマーカーを有する上から２番目の線）、ｐＨ９．３で４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、白四角のマーカーを有する上から３番目の線）、およびｐＨ９．３で２４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒四角のマーカーを有する一番下の線）の場合の、７日目の誘導したｒＰＣ−１２における正常細胞と比較したアラマーブルーの蛍光％を示す。

【0181】

図１７Ｅは、ｐＨ６．３で４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、白菱形のマーカーを有する一番上の線）、ｐＨ６．３で２４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒菱形のマーカーを有する上から２番目の線）、ｐＨ９．３で４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、白四角のマーカーを有する上から３番目の線）、およびｐＨ９．３で２４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒四角のマーカーを有する一番下の線）の場合の、２日目のＳＨ−ＳＹ５Ｙにおける正常細胞と比較したアラマーブルーの蛍光％を示す。

【0182】

図１７Ｆは、ｐＨ６．３で４時間にわたるグアネチジン（０μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における白菱形のマーカーを有する一番上の線）、ｐＨ６．３で２４時間にわたるグアネチジン（０μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒菱形のマーカーを有する上から２番目の線）、ｐＨ９．３で４時間にわたるグアネチジン（０μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒菱形のマーカーとオーバーラップした白四角のマーカーを有する一番上の線）、およびｐＨ９．３で２４時間にわたるグアネチジン（０μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒四角のマーカーを有する一番下の線）の場合の、７日目のＳＨ−ＳＹ５Ｙにおける正常細胞と比較したアラマーブルーの蛍光％を示す。

【0183】

図１７Ｇは、ｐＨ６．３で４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、白菱形のマーカーを有する一番上の線）、ｐＨ６．３で２４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒菱形のマーカーを有する上から２番目の線）、ｐＨ９．３で４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、白四角のマーカーを有する上から３番目の線）、およびｐＨ９．３で２４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒四角のマーカーを有する一番下の線）の場合の、２日目の誘導したＳＨ−ＳＹ５Ｙにおける正常細胞と比較したアラマーブルーの蛍光％を示す。

【0184】

図１７Ｈは、ｐＨ６．３で４時間にわたるグアネチジン（０μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、白菱形のマーカーを有する上から２番目の線）、ｐＨ６．３で２４時間にわたるグアネチジン（０μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒菱形のマーカーを有する上から３番目の線）、ｐＨ９．３で４時間にわたるグアネチジン（０μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、白四角のマーカーを有する一番下の線）、およびｐＨ９．３で２４時間にわたるグアネチジン（０μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒四角のマーカーを有する一番上の線）の場合の、７日目の誘導したＳＨ−ＳＹ５Ｙにおける正常細胞と比較したアラマーブルーの蛍光％を示す。

【0185】

図１７Ｉは、ｐＨ６．３で４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、白菱形のマーカーを有する上から３番目の線）、ｐＨ６．３で２４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒菱形のマーカーを有する上から４番目の線）、ｐＨ９．３で４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、白四角のマーカーを有する上から一番下の線であり、２４時間のｐＨ９．３のデータとオーバーラップする）、ｐＨ９．３で２４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒四角のマーカーを有する一番下の線であり、ｐＨ９．３で４時間のものとオーバーラップする）、ｐＨ７．３（中性）で２４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、星型のマーカーを有する一番上の線）、およびｐＨ９．３で１時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒丸マーカーを有する上から２番目の線）の場合の、２日目のラットＳＣＧにおける正常細胞と比較したアラマーブルーの蛍光％を示す。

【0186】

図１７Ｊは、ｐＨ６．３で４時間にわたるグアネチジン（０μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、白菱形のマーカーを有する上から３番目の線）、ｐＨ６．３で２４時間にわたるグアネチジン（０μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒菱形のマーカーを有する一番上の線）、ｐＨ９．３で４時間にわたるグアネチジン（０μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、白四角のマーカーを有する上から２番目の線）、およびｐＨ９．３で２４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒四角のマーカーを有する一番下の線）の場合の、７日目のラットＳＣＧにおける正常細胞と比較したアラマーブルーの蛍光％を示す。

【0187】

図１７Ｋは、ｐＨ６．３で４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、白菱形のマーカーを有する一番上の線）、ｐＨ６．３で２４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒菱形のマーカーを有する上から２番目の線）、ｐＨ９．３で４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、白四角のマーカーを有する上から３番目の線）、およびｐＨ９．３で２４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒四角のマーカーを有する一番下の線）の場合の、２日目のｈＡｏＳＭＣにおける正常細胞と比較したアラマーブルーの蛍光％を示す。

【0188】

図１７Ｌは、ｐＨ６．３で４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、白菱形のマーカーを有する一番上の線）、ｐＨ６．３で２４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒菱形のマーカーを有する上から２番目の線）、ｐＨ９．３で４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、白四角のマーカーを有する上から３番目の線）、およびｐＨ９．３で２４時間にわたるグアネチジン（１μｇ／ｍＬのグアネチジン濃度における、黒四角のマーカーを有する一番下の線）の場合の、７日目のｈＡｏＳＭＣにおける正常細胞と比較したアラマーブルーの蛍光％を示す。

【0189】

ＬＣ５０は、細胞の５０％が死に至る薬物の濃度である。上記で示され図１７Ａ〜１７Ｌで示されるようなデータからの計算により、表１で示されるようなＬＣ５０値が得られた。ｐＨ効果が薬物の添加なしに５０％より低い生存細胞をもたらす場合、ＬＣ５０チャートには「０」と表示される。ＬＣ５０がゼロと最低用量（１μｇ／ｍＬ）との間であった場合、ＬＣ５０値は、「＜１」と記入される。２４時間のｐＨ曝露について計算は行わなかったが、これは、そのような長時間の曝露ではＬＣ５０はゼロであることが多く、さらにｉｎ ｖｉｖｏでは２４時間のｐＨ曝露は起こりにくく、ｐＨは、２４時間よりもかなり早い段階で注射した組織で中和される可能性があると予想されるためである。

【表1】

【0190】

図１９Ａは、末梢交感神経ニューロンを模擬した細胞系における４８時間にわたるグアネチジン曝露によるＬＣ５０レベルを示す高ｐＨにおけるグアネチジン効果のｉｎ ｖｉｔｒｏでの確認を提供し、第一のカラムではＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞をｐＨ６．３で４時間試験し、第二のカラムではＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞をｐＨ９．３で４時間試験し、第三のカラムではＰＣ−１２細胞をｐＨ６．３で４時間試験し、第四のカラムではＰＣ−１２細胞をｐＨ９．３で４時間試験した。図１９Ｂは、一次末梢交感神経ニューロンにおける４８時間にわたるグアネチジン曝露によるＬＣ５０レベルを示す、高ｐＨのグアネチジン効果のｉｎ ｖｉｔｒｏでの確認を提供し、第一のカラムではＳＣＧ細胞を中性ｐＨで試験し、第二のカラムではＳＣＧ細胞をｐＨ９．３で１時間試験した。図１９Ａおよび１９Ｂでは、ｙ軸は、μｇ／ｍＬの単位で示される。

【0191】

ｐＨ９．３への長時間の曝露（２４時間）により、研究した細胞型の大半においてある程度の量の分解が起きるが、ｐＨ６．３への２４時間の曝露は、細胞への作用は限定的である。ｐＨ９．３またはｐＨ６．３への４時間の曝露では、これらの実験で研究したニューロン細胞系それぞれに対するグアネチジンの毒性濃度において明らかな差が認められる。この結果は、細胞が、４８時間の薬物曝露の直後または７日目に調べられるかどうかにも当てはまる。研究したいずれの細胞型においても、グアネチジンは、ｐＨ６．３よりもｐＨ９．３において一桁低い濃度で細胞に対して毒性を示した。

【0192】

ラットＳＣＧ細胞におけるｐＨ９．３で１時間の曝露による追跡研究から、グアネチジンの用量依存性毒性が示された。

【0193】

ｐＨ９．３のグアネチジンを用いたｉｎ ｖｉｖｏの実験では、２８および６０日目に１０ｍｇ／ｍＬで投与したｐＨ９．３のグアネチジンにより有意な識別可能な神経毒性が起こったが、１０ｍｇ／ｍＬで投与したｐＨ６．３のグアネチジンを用いたｉｎ ｖｉｖｏの実験では、９０日目で腎臓の交感神経の有意な変化は起こらなかった。

【0194】

これは、ｉｎ ｖｉｖｏで、ｐＨ９．３のグアネチジン注射後、グアネチジンのニューロンにおける取り込みおよび／またはニューロンへの細胞傷害作用を強化するのに十分な長い期間、組織のｐＨがアルカリ性を保つことを示す。しかしながら、非ニューロン細胞型では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｐＨ９．３のグアネチジンの細胞毒性は明らかでなかったことにも留意すべきである。

【0195】

最終的に、動脈１本あたり５０ｍｇの用量を、１０ｍｇ／ｍＬで投与したｐＨ９．３のグアネチジンの注射によるｉｎ ｖｉｖｏ実験により、組織のグアネチジン濃度が、２４時間で、腎動脈では４．３±２．９μｇ／ｇ（組織の重量あたりのグアネチジンの量で示される）および腎臓の血管周囲組織では１．９±１．０μｇ／ｇになった。これらの濃度は上記で報告されたＬＣ５０レベルにかなり匹敵する。これらの平均組織濃度は観察されたＬＣ５０値よりもわずかに低いが、これは、グアネチジンは、神経細胞で濃縮されることが公知であるが、神経細胞は、そのような初期の濃度研究で評価される組織塊全体のうちほんのわずかな部分にすぎないため、そのｉｎ ｖｉｖｏの研究では効果が平均化された可能性がある。

【0196】

まとめると、これらの研究は、グアネチジンは、ｐＨ６．３の場合と比較して、ｐＨ９．３で、改善されたニューロンの細胞毒性を有することを示す。グアネチジン応答性の毒性は、研究した細胞系の大半で、ｐＨ６．３とｐＨ９．３の両方で用量依存性の効果を示し、ｐＨ９．３よりもｐＨ６．３方が少なくとも１０倍高いＬＣ５０を示した。加えて、ｐＨ６．３への曝露の時間は、ｐＨ９．３への曝露の時間よりも作用が少なく、低いグアネチジン濃度またはグアネチジン非存在下で、ｐＨ９．３への曝露時間を長くすると毒性作用を引き起こした。

【0197】

（実施例２）
動物実験および追跡研究

【0198】

特定の前臨床試験で試験したグアネチジンは、神経損傷があることを示したが、これらの研究で試験したグアネチジンの形態はグアネチジンヘミサルフェートであった。緩衝化していないｐＨ（６．３またはそれ未満）でグアネチジン一硫酸塩を使用した動物実験におけるその後の試験では、安全な結果が得られたが、有意な脱神経を示すことはできなかった。グアネチジンヘミサルフェートを使用してうまく脱神経を示す範囲のｐＨにグアネチジン一硫酸塩を緩衝化することが可能である。図２０Ｂで示されるような滴定実験は、どのようにグアネチジン一硫酸塩を水酸化ナトリウムで緩衝化して、脱神経が成功した研究で使用されるグアネチジンヘミサルフェートと同じｐＨを達成することができるかを示す。このグアネチジン一硫酸塩のアルカリ性に緩衝化した形態を使用して、そのような神経の周りの組織にそのような組成物を送達することにより神経を脱神経させることができる。そのような送達は、例えば本明細書に記載されたデバイスを使用して経管的になされてもよいし、または別の方法で脱神経しようとする神経（または複数の神経）の周りの組織に送達してもよい。グアネチジン効果は、ｐＨ依存性であり、ｐＨが高いほど神経毒性が増加する。中性ｐＨのグアネチジンは、神経をブロックすることができるが、脱神経はしない。グアネチジン（緩衝化した一硫酸塩またはヘミ硫酸塩のどちらでも）の局所ｐＨの上昇は、神経を破壊し周辺組織を温存する。したがって、グアネチジンヘミサルフェートを含む組成物、または高いｐＨを有する緩衝化したグアネチジン一硫酸塩を代わりに含む組成物は、脱神経において効果的であり、加えて安全である。この効果は、その薬物の局部または全身性の作用なしで正確な局所の脱神経を可能にする。

【0199】

水性一硫酸塩の形態は、グアネチジン１分子あたり２つの遊離の水素イオンを有する（遊離の水素は、分かれてＳＯ_４^２−および２Ｈ^＋になる硫酸塩分子に由来する）。しかしながら、ヘミ硫酸塩の水性形態は、グアネチジン１分子あたり１つの遊離の水素イオンのみを有する。このため、一硫酸塩の水溶液では主として二重プロトン化形態（したがって酸性ｐＨ）が生じるが、ヘミ硫酸塩では主として単一プロトン化形態（したがってアルカリ性ｐＨ）が生じる。その水溶液から水素イオンを除去すると、より高いｐＨが生じ、グアネチジンへのプロトン化が少なくなる。

【0200】

図１８Ａ〜１８Ｄは、図１８Ｄのグアネチジン一硫酸塩と図１８Ｃのグアネチジンヘミサルフェートとの間の差を表し、一硫酸塩の形態は、水溶液中でより低いｐＨを有し、特定の前臨床試験では不確定または無効な結果を有することが見出され、ヘミ硫酸塩の形態は、水溶液中でより高いｐＨを有し、特定の前臨床試験では肯定的な前臨床の結果を有することが見出された。

【0201】

図２０Ａは、緩衝化して、例えば溶液中の同じ濃度のグアネチジン分子をもたらすグアネチジンヘミサルフェートと等しいｐＨレベルまでｐＨを高めた、グアネチジン一硫酸塩の一実施形態の組成を表す。図２０Ｂは、グアネチジンヘミサルフェートのｐＨに達することが可能なグアネチジン一硫酸塩の緩衝化を表す。ＮａＯＨで緩衝化したグアネチジン一硫酸塩（イスメリン）の１０ｍｇ／ｍＬのデータは、菱形のマーカーを有する破線（チャート左下から始まる）のデータで示され、１７％のｉｓｏＶＵＥ３７０を含む、ＮａＯＨで緩衝化したグアネチジン一硫酸塩（イスメリン）の１０ｍｇ／ｍＬのデータは、四角形のマーカーを有する実線のデータ（チャート左下のｘ軸の−０．０においての約６．３ｐＨから始まる）で示され、０．９％食塩水中の、ＮａＯＨで緩衝化した１０ｍｇ／ｍＬのグアネチジンヘミサルフェートは、三角形のマーカーと、ｘ軸の１．０においての１０を超えるｐＨから始まる破線とで示され、１７％のＩｓｏＶＵＥ３７０中の、ＮａＯＨで緩衝化した１０ｍｇ／ｍＬのグアネチジンヘミサルフェートは、丸のマーカーと、ｘ軸の０．０においての約９．３のｐＨから始まる実線とで示される。

【0202】

このチャートにおいて、ｘ軸は、グアネチジン一硫酸塩（２つの［Ｈ＋］プロトン毎に１つの［Ｇｎｔ］分子を有することが示される）またはグアネチジンヘミサルフェート（１つの［Ｈ＋］プロトン毎に１つの［Ｇｎｔ］分子を有することが示される）のいずれかへのバッファー［ＯＨ−］分子またはグアネチジン［Ｇｎｔ］分子の付加を示す。このチャートにおいて、基準のグアネチジンヘミサルフェート（緩衝化していない）は、各［Ｇｎｔ］［Ｈ＋］［Ｈ＋］に正確に１つの付加した［Ｇｎｔ］を有し［ＯＨ−］イオンを有さないため、ｘ軸上で１．０の値で存在するが、追加の［Ｇｎｔ］分子も［ＯＨ−］イオンも有さない基準のグアネチジン一硫酸塩（緩衝化していない）は、０．０の値で存在する。バッファー（この場合はＮａＯＨ）が添加されると、プロトンは、［Ｇｎｔ］分子から分離して、［Ｇｎｔ］を脱プロトン化し、組織へと送達すると神経破壊を引き起こすその能力を高める可能性が高い。グアネチジン一硫酸塩組成物が、同じ濃度のグアネチジンヘミサルフェートと溶液中で同じｐＨに達するためには、等モルのＮａＯＨ添加（または公知のバッファーによる同等の緩衝化）を必要とする。続いて等モルの緩衝化したグアネチジン一硫酸塩またはグアネチジンヘミサルフェートのいずれかをさらに緩衝化して、溶液のｐＨをさらに高めることができる。本組成物に総体積の１７％の比率で造影剤（一例としてＩｓｏＶＵＥ３７０）を添加すると、図２０Ｂの１．０よりも高い緩衝化レベルでｐＨが低下し、広範囲なバッファーの変動（例えばｘ軸において１．０〜２．０の間）にわたり９〜１０の間の安定なｐＨをもたらす。

【0203】

緩衝化したグアネチジン一硫酸塩の特定の実施形態は、造影剤添加前では１０〜１０．５のｐＨを有し、１７％の体積を造影剤で置き換えた後は、９〜９．５のｐＨを有する。緩衝化したグアネチジン一硫酸塩は、０．７％〜０．９０％のＮａＣｌ溶液中の、４０．５ｍＭ溶液である１２ｍｇ／ｍＬのグアネチジン一硫酸塩（Ｇｎｔ・Ｈ_２ＳＯ_４）および等モル量のＮａＯＨ（４０．５ｍＭ、または１．６ｍｇ／ｍＬ）からなる。ＩｓｏＶＵＥ３７０で１７％希釈することにより、１０ｍｇ／ｍＬのＧｎｔ・Ｈ_２ＳＯ_４、０．７２％のＮａＣｌ、１．３５ｍｇ／ｍＬのＮａＯＨ、および１７％のＩｓｏＶＵＥ３７０を含み、９〜９．５のｐＨを有する最終組成物が作製される。この組成物は、一例として提供されたものであり、限定することを意図しない。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【図11D】

【図11E】

【図11F】

【図16】

【図18C】

【図18D】

【図20A】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図17A】

【図17B】

【図17C】

【図17D】

【図17E】

【図17F】

【図17G】

【図17H】

【図17I】

【図17J】

【図17K】

【図17L】

【図18A】

【図18B】

【図19A】

【図19B】

【図20B】