特許 6076801 血球分析装置および血球分析方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6076801

(24)【登録日】2017年1月20日

(45)【発行日】2017年2月8日

(54)【発明の名称】血球分析装置および血球分析方法

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/49 20060101AFI20170130BHJP

   G01N 33/72 20060101ALI20170130BHJP

   G01N 21/27 20060101ALI20170130BHJP

【ＦＩ】

   G01N33/49 K

   G01N33/72 A

   G01N33/49 A

   G01N21/27 B

【請求項の数】11

【全頁数】27

(21)【出願番号】特願2013-72990(P2013-72990)

(22)【出願日】2013年3月29日

(65)【公開番号】特開2014-196958(P2014-196958A)

(43)【公開日】2014年10月16日

【審査請求日】2015年3月26日

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】390014960

【氏名又は名称】シスメックス株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100111383

【弁理士】

【氏名又は名称】芝野 正雅

(72)【発明者】

【氏名】山田 和宏

(72)【発明者】

【氏名】河島 康之

(72)【発明者】

【氏名】田端 誠一郎

【審査官】 三木 隆

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１０／１２６８３８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００９／００１８６８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 米国特許出願公開第２００６／０１３４００３（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 特開昭６０−１１５８５８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開昭５８−１１５３４６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 実開昭６３−１３２３５７（ＪＰ，Ｕ）

【文献】 Determination of micro-litre volumes with high accuracy for flow cytometric blood cell counting，Meas Sci Technol，２０１０年，Vol.21 No.7 Page.074006,1-9

【文献】 Microfluidic structures for flow cytometric analysis of hydrodynamically focussed blood cells fabricated by ultraprecision micromachining，Lab on a chip，２００９年，Vol. 9, No. 7, pp. 972-81

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｇ０１Ｎ ３３／４９

Ｇ０１Ｎ ２１／２７

Ｇ０１Ｎ ３３／７２

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

血球を含む測定試料を流すためのフローセルと、
４００ｎｍ以上４３５ｎｍ以下の第１の波長を有する光を出射する第１光源と、
６１０ｎｍ以上７５０ｎｍ以下の第２の波長を有する光を出射する第２光源と、
前記フローセルを通過する血球に前記第１光源からの光を照射することにより得られる第１散乱光を受光する第１受光部と、
前記フローセルを通過する血球に前記第２光源からの光を照射することにより得られる第２散乱光を受光する第２受光部と、
記憶部と、を備え、
前記第１受光部および前記第２受光部からそれぞれ出力される第１検出信号を第１時間帯に取得して前記記憶部に記憶し、
さらに、前記第１受光部および前記第２受光部からそれぞれ出力される検出信号のうち、少なくとも前記第１受光部から出力された信号が赤血球を除外するための所定の閾値以下である検出信号を除いた第２検出信号を前記第１時間帯と異なる第２時間帯に取得して前記記憶部に記憶し、
前記記憶部に記憶した前記第１検出信号を処理して、測定試料に含まれる血球から、少なくとも、赤血球を弁別し、前記記憶部に記憶した前記第２検出信号を処理して、測定試料に含まれる血球から白血球を弁別する、
ことを特徴とする血球分析装置。

【請求項2】

請求項１に記載の血球分析装置において、
前記第１受光部および前記第２受光部からそれぞれ出力される前記第１検出信号に基づいて、測定試料に含まれる血球から、赤血球と血小板を分類する、
ことを特徴とする血球分析装置。

【請求項3】

請求項１または２に記載の血球分析装置において、
前記第１散乱光は、前記第１の波長の光を血球に照射することにより生じる前方散乱光であり、前記第２散乱光は、前記第２の波長の光を血球に照射することにより生じる前方散乱光である、
ことを特徴とする血球分析装置。

【請求項4】

請求項１ないし３の何れか一項に記載の血球分析装置において、
前記フローセルを流れる血球毎に、前記第１散乱光の強度と前記第２散乱光の強度とを取得し、測定試料に含まれる血球から、少なくとも、赤血球および白血球を弁別する、
ことを特徴とする血球分析装置。

【請求項5】

請求項４に記載の血球分析装置において、
画像を表示可能な表示部を備え、
前記フローセルを流れる血球毎に取得した前記第１散乱光の強度に関する情報と前記第２散乱光の強度に関する情報に基づいて、前記第１散乱光の強度および前記第２散乱光の強度を２軸とするスキャッタグラムを作成し、作成した前記スキャッタグラムを前記表示部に表示する、
ことを特徴とする血球分析装置。

【請求項6】

血球を含む測定試料をフローセルに流すステップと、
前記フローセルを通過する血球に対し、４００ｎｍ以上４３５ｎｍ以下の第１の波長の光を照射することにより得られる散乱光と、６１０ｎｍ以上７５０ｎｍ以下の第２の波長の光を照射することにより得られる散乱光とに関する第１情報を取得して記憶する処理を第１時間帯において実行するステップと、
前記フローセルを通過する血球に対し、前記第１の波長の光を照射することにより得られる散乱光と、前記第２の波長の光を照射することにより得られる散乱光とに関する情報のうち、少なくとも前記第１の波長の光を照射することにより得られた散乱光の強度が赤血球を除外するための所定の閾値以下の情報を除いた第２情報を取得して記憶する処理を前記第１時間帯とは異なる第２時間帯において実行するステップと、
記憶した前記第１情報を処理して、測定試料に含まれる血球から、少なくとも、赤血球を弁別し、記憶した前記第２情報を処理して、測定試料に含まれる血球から白血球を弁別するステップと、を含む、
ことを特徴とする血球分析方法。

【請求項7】

請求項６に記載の血球分析方法において、
前記第１情報に基づいて、測定試料に含まれる血球から、赤血球と血小板を分類する、
ことを特徴とする血球分析方法。

【請求項8】

請求項６または７に記載の血球分析方法において、
前記散乱光は、前方散乱光である、
ことを特徴とする血球分析方法。

【請求項9】

請求項６ないし８の何れか一項に記載の血球分析方法において、
前記第１情報は、散乱光の強度に関する情報であり、
前記第２情報は、散乱光の強度に関する情報である、
ことを特徴とする血球分析方法。

【請求項10】

請求項９に記載の血球分析方法において、
前記フローセルを流れる血球毎に、前記第１情報を取得し、測定試料に含まれる血球から、少なくとも、赤血球を弁別するステップを含む、
ことを特徴とする血球分析方法。

【請求項11】

請求項９または１０に記載の血球分析方法において、
前記フローセルを流れる血球毎に取得した前記第１情報に基づいて、スキャッタグラムを作成し、作成した前記スキャッタグラムを表示するステップをさらに含む、
ことを特徴とする血球分析方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、血球を含む試料の流れに光を照射して、血球の分析を行う血球分析装置および血球分析方法に関する。

【背景技術】

【0002】

特許文献１には、低角前方散乱光と高角前方散乱光という散乱角が異なる２種類の前方散乱光を取得し、その屈折率から赤血球のヘモグロビン濃度および容積の算出を行う手法が記載されている。しかしながら、血液検体中の血球から赤血球を正確に弁別する技術については記載がされていない。

【0003】

一方、特許文献２には、血液検体中の網状赤血球および白血球を特異的に染色することにより、検体中の血球を、赤血球、網状赤血球、白血球、血小板に分類する技術が記載されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【特許文献1】特公平８−２０４４２号公報

【特許文献2】特開平１０−２６６２０号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

しかしながら、上記特許文献２の手法では、網状赤血球や白血球を蛍光染色するための染色剤が用いられている。血球を染色する際には、血液検体が所定の容器に分注され、さらに、この容器に染色剤が分注されて測定試料が調製される。この場合には、測定試料の調製のために染色剤の分注工程が必要となるため、より少ない工程で簡易に、血球から赤血球を弁別できる手法が求められている。

【0006】

このような課題に鑑み、本発明は、簡易な工程で高精度に、血液検体中の血球から赤血球を弁別することが可能な血球分析装置および血球分析方法を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明の第１の態様は、血球分析装置に関する。この態様に係る血球分析装置は、血球を含む測定試料を流すためのフローセルと、４００ｎｍ以上４３５ｎｍ以下の第１の波長を有する光を出射する第１光源と、６１０ｎｍ以上７５０ｎｍ以下の第２の波長を有する光を出射する第２光源と、前記フローセルを通過する血球に前記第１光源からの光を照射することにより得られる第１散乱光を受光する第１受光部と、前記フローセルを通過する血球に前記第２光源からの光を照射することにより得られる第２散乱光を受光する第２受光部と、記憶部と、を備える。そして、血球分析装置は、前記第１受光部および前記第２受光部からそれぞれ出力される第１検出信号を第１時間帯に取得して前記記憶部に記憶し、さらに、前記第１受光部および前記第２受光部からそれぞれ出力される検出信号のうち、少なくとも前記第１受光部から出力された信号が赤血球を除外するための所定の閾値以下である検出信号を除いた第２検出信号を前記第１時間帯と異なる第２時間帯に取得して前記記憶部に記憶し、前記記憶部に記憶した前記第１検出信号を処理して、測定試料に含まれる血球から、少なくとも、赤血球を弁別し、前記記憶部に記憶した前記第２検出信号を処理して、測定試料に含まれる血球から白血球を弁別する。

【0008】

本態様に係る血球分析装置によれば、４００ｎｍ以上４３５ｎｍ以下の第１の波長の光をフローセルに照射することにより生じる散乱光と、６１０ｎｍ以上７５０ｎｍ以下の第２の波長の光をフローセルに照射することにより生じる散乱光が、それぞれ、第１受光部と第２受光部によって受光される。ここで、各波長の光により生じる散乱光の特性は、粒子の種類毎に異なる。すなわち、同じ大きさの粒子であっても、粒子の種類が異なれば、各波長の光により生じる散乱光の特性が互いに異なる。特に、赤血球は、ヘモグロビンを含むため、波長に応じて光の吸収が大きく変化し、これにより、赤血球により生じる散乱光が、波長に応じて大きく変化する。このため、第１受光部および第２受光部からそれぞれ出力される検出信号は、赤血球とその他の血球とで、信号の状態に差が生じ易い。よって、これらの検出信号に基づいて、赤血球とその他の血球とが明確に区分可能となる。このように、本態様に係る血球分析装置によれば、第１受光部と第２受光部からの第１検出信号を記憶部に記憶して処理することにより、簡易な工程で高精度に、測定試料中の血球から、少なくとも、赤血球を弁別することができる。また、本態様に係る血球分析装置では、さらに、第１受光部および第２受光部からそれぞれ出力される検出信号のうち、少なくとも第１受光部から出力された信号が赤血球を除外するための所定の閾値以下である検出信号を除いた第２検出信号を前記第１検出信号とは異なる時間帯に取得して記憶部に記憶し、記憶した前記第２検出信号を処理して、測定試料に含まれる血球から白血球が弁別される。よって、本態様に係る血球分析装置では、第１検出信号および第２検出信号のそれぞれ異なる信号に基づいて赤血球の弁別と白血球の弁別を行い、また、白血球の弁別では、白血球の解析に不要な血球の検出信号を分析対象から除外することで、解析処理の負荷軽減を図りながら、効率的に、測定試料に含まれる血球から白血球を弁別することができる。

【0009】

本態様に係る血球分析装置において、前記第１受光部および前記第２受光部からそれぞれ出力される前記第１検出信号に基づいて、測定試料に含まれる血球から、赤血球と血小板を分類するよう構成され得る。この場合、赤血球とその他の血球とで信号の状態に差が生じ易いため、赤血球と血小板においても、信号の状態に差が生じ易い。このため、測定試料中の血球から、赤血球と血小板を分類することが可能となる。

【0013】

本態様に係る血球分析装置において、前記第１散乱光は、前記第１の波長の光を血球に照射することにより生じる前方散乱光とすることができ、また、前記第２散乱光は、前記第２の波長の光を血球に照射することにより生じる前方散乱光とすることができる。

【0014】

また、本態様に係る血球分析装置は、前記フローセルを流れる血球毎に、前記第１散乱光の強度と前記第２散乱光の強度とを取得し、測定試料に含まれる血球から、少なくとも、赤血球および白血球を弁別するよう構成され得る。

【0015】

この場合、血球分析装置は、画像を表示可能な表示部を備え、前記フローセルを流れる血球毎に取得した前記第１散乱光の強度に関する情報と前記第２散乱光の強度に関する情報に基づいて、前記第１散乱光の強度および前記第２散乱光の強度を２軸とするスキャッ
タグラムを作成し、作成した前記スキャッタグラムを前記表示部に表示するよう構成され得る。こうすると、ユーザは、各血球の分布状態を把握することができる。

【0016】

本発明の第２の態様は、血球分析方法に関する。この態様に係る血球分析方法は、血球を含む測定試料をフローセルに流すステップと、前記フローセルを通過する血球に対し、４００ｎｍ以上４３５ｎｍ以下の第１の波長の光を照射することにより得られる散乱光と、６１０ｎｍ以上７５０ｎｍ以下の第２の波長の光を照射することにより得られる散乱光とに関する第１情報を取得して記憶する処理を第１時間帯において実行するステップと、前記フローセルを通過する血球に対し、前記第１の波長の光を照射することにより得られる散乱光と、前記第２の波長の光を照射することにより得られる散乱光とに関する情報のうち、少なくとも前記第１の波長の光を照射することにより得られた散乱光の強度が赤血球を除外するための所定の閾値以下の情報を除いた第２情報を取得して記憶する処理を前記第１時間帯とは異なる第２時間帯において実行するステップと、記憶した前記第１情報を処理して、測定試料に含まれる血球から、少なくとも、赤血球を弁別し、記憶した前記第２情報を処理して、測定試料に含まれる血球から白血球を弁別するステップと、を含む。

【0017】

本態様に係る血球分析方法によれば、第１の態様と同様の効果が奏され得る。すなわち、第１情報と第２情報に基づいて、簡易な工程で高精度に、測定試料に含まれる血球から、少なくとも、赤血球および白血球を弁別することができる。

【発明の効果】

【0018】

以上のとおり、本発明によれば、簡易な工程で高精度に、血液検体中の血球から赤血球および白血球を弁別することが可能な血球分析装置および血球分析方法を提供することができる。

【0019】

本発明の効果ないし意義は、以下に示す実施の形態の説明により更に明らかとなろう。ただし、以下に示す実施の形態は、あくまでも、本発明を実施化する際の一つの例示であって、本発明は、以下の実施の形態により何ら制限されるものではない。

【図面の簡単な説明】

【0020】

【図1】実施の形態に係る血球分析装置の外観を示す斜視図である。

【図2】実施の形態に係る測定ユニットの構成を模式的に示す図である。

【図3】実施の形態に係る光学検出器の構成を模式的に示す図である。

【図4】実施の形態に係るフローセル、ビームストッパ、ピンホールおよびフォトダイオードの構成を示す図である。

【図5】実施の形態に係る測定ユニットの構成を示す図である。

【図6】実施の形態に係る情報処理ユニットの構成を示す図である。

【図7】解析例１に係る同一血球から取得された各波長のデータを対応付ける方法を説明する図である。

【図8】解析例１に係る赤血球に含まれるヘモグロビンの吸収特性を示す図、解析例１と比較例における粒子分析のシミュレーション結果を示す図、および、前方散乱光に基づくスキャッタグラムを示す図である。

【図9】解析例１に係る血球分析装置による解析処理を示すフローチャートである。

【図10】解析例２に係る被検者から採取された血液検体に基づいて作成されたスキャッタグラムを示す図、および、被検者から採取された血液検体に基づいて行われた白血球の分類結果を示す図である。

【図11】解析例２に係る血球分析装置による解析処理を示すフローチャートである。

【図12】解析例３に係る血球分析装置による解析処理を示すフローチャートである。

【発明を実施するための形態】

【0021】

本実施の形態は、血液に関する検査および分析を行うための血球分析装置とその光照射光学系に本発明を適用したものである。以下、本実施の形態に係る血球分析装置について、図面を参照して説明する。

【0022】

図１は、本実施の形態に係る血球分析装置１の外観を示す斜視図である。

【0023】

血球分析装置１は、血液検体に含まれる白血球、赤血球、血小板等を検出し、各血球を計数する多項目血球分析装置である。血球分析装置１は、測定ユニット２と、測定ユニット２の前面側に配置された搬送ユニット３と、情報処理ユニット４とを備えている。患者から採取された末梢血である血液検体は、検体容器（採血管）Ｔに収容される。複数の検体容器ＴがサンプルラックＬに支持され、このサンプルラックＬが搬送ユニット３により搬送されて、血液検体が測定ユニット２へ供給される。

【0024】

情報処理ユニット４は、表示部４１と入力部４２を備えており、測定ユニット２と、搬送ユニット３と、ホストコンピュータ５（図２参照）に対して、通信可能に接続されている。情報処理ユニット４は、測定ユニット２と搬送ユニット３の動作を制御し、測定ユニット２で行われた測定結果に基づいて解析を行い、解析結果をホストコンピュータ５（図２参照）に送信する。情報処理ユニット４は、パーソナルコンピュータからなっている。

【0025】

図２は、測定ユニット２の構成を模式的に示す図である。

【0026】

測定ユニット２は、ハンド部２１と、検体容器セット部２２と、バーコードユニット２３と、検体吸引部２４と、試料調製部２５と、検出部２６とを備えている。検体吸引部２４は、ピアサ２４ａを備えており、検体容器Ｔから検体を吸引する。試料調製部２５は、混合チャンバＭＣとヒータＨを備えており、検体に試薬または希釈液を混和することにより測定に用いられる測定試料を調製する。検出部２６は、光学検出器Ｄを備えており、測定試料から血球を検出する。測定ユニット２の各部は、情報処理ユニット４からの指示に基づいて制御される。

【0027】

搬送ユニット３により位置Ｐ１に位置付けられた検体容器Ｔは、ハンド部２１により把持され、サンプルラックＬから上方向に抜き出される。そして、ハンド部２１が揺動されることにより、検体容器Ｔ内の検体が撹拌される。攪拌が終了した検体容器Ｔは、ハンド部２１により、位置Ｐ１に位置付けられた検体容器セット部２２にセットされる。しかる後、この検体容器Ｔは、検体容器セット部２２により位置Ｐ２まで搬送される。

【0028】

検体容器Ｔが位置Ｐ２に位置付けられると、位置Ｐ２の近傍に設置されたバーコードユニット２３により、検体容器Ｔに貼付されたバーコードラベルから検体番号が読み取られる。しかる後、この検体容器Ｔは、検体容器セット部２２により位置Ｐ３まで搬送される。検体容器Ｔが位置Ｐ３に位置付けられると、検体吸引部２４によりピアサ２４ａを介して検体容器Ｔから所定量の検体が吸引される。検体の吸引が終了すると、この検体容器Ｔは、検体容器セット部２２により前方に搬送され、ハンド部２１により元のサンプルラックＬの支持位置に戻される。ピアサ２４ａを介して吸引された検体は、ピアサ２４ａが混合チャンバＭＣの位置へ移送された後、検体吸引部２４により混合チャンバＭＣに所定量だけ吐出される。

【0029】

試料調製部２５は、第１試薬を収容する容器２５１と、第２試薬を収容する容器２５２と、希釈液を収容する容器２５３に、チューブを介して接続されている。また、試料調製部２５はコンプレッサ（図示せず）に接続されており、このコンプレッサにより発生される圧力により容器２５１〜２５３から、それぞれ、第１試薬と、第２試薬と、希釈液を分取することが可能となっている。第１試薬と第２試薬を用いる場合、試料調製部２５は、混合チャンバＭＣ内で、血液検体と試薬とを混合し、この混合液を所定時間だけヒータＨにより加温して、測定試料を調製する。第１試薬と第２試薬を用いない場合、試料調製部２５は、混合チャンバＭＣ内で、血液検体と希釈液とを混合して、測定試料を調製する。なお、第１試薬と第２試薬を用いない場合でも、適宜、混合液を加温しても良い。試料調
製部２５で調製された測定試料は、検出部２６の光学検出器Ｄに供給される。

【0030】

なお、第１試薬は、核酸を染色可能な蛍光色素を含有し、第２試薬で処理された血液試料中の有核細胞の核酸を蛍光染色するための試薬である。第２試薬は、赤血球を溶血させ、白血球の細胞膜に上記の蛍光色素が透過できる程度の損傷を与えるための試薬である。

【0031】

検出部２６は、シース液を収容する容器２６１に、チューブを介して接続されている。また、検出部２６はコンプレッサ（図示せず）に接続されており、このコンプレッサにより発生される圧力により容器２６１からシース液を分取することが可能となっている。

【0032】

図３（ａ）、（ｂ）は、光学検出器Ｄの光学系の構成を模式的に示す図である。便宜上、図３（ａ）には、互いに直交するＸＹＺ座標軸が示されている。Ｘ軸方向は、紙面上下方向、Ｚ軸方向は紙面左右方向である。図３（ａ）は、光学検出器Ｄの光学系をＹ軸負方向に見た図、図３（ｂ）は、光学検出器Ｄの光学系をＸ軸正方向に見た図である。

【0033】

また、図４（ａ）は、フローセルＤ１の構成を模式的に示す図、図４（ｂ）は、ビームストッパ２０３の構成を模式的に示す図、図４（ｃ）は、ピンホール２０４の構成を模式的に示す図、図４（ｄ）は、フォトダイオード２０５の構成を模式的に示す図である。

【0034】

図３（ａ）を参照して、光学検出器Ｄは、フローセルＤ１と、シースフロー系Ｄ２と、光照射光学系Ｄ３と、前方散乱光受光光学系Ｄ４と、側方散乱光受光光学系Ｄ５と、蛍光受光光学系Ｄ６を有している。

【0035】

シースフロー系Ｄ２は、フローセルＤ１内に測定試料をシース液に包まれた状態で送り込み、フローセルＤ１中に液流を発生させるように構成されている。図３（ｂ）に示すように、フローセルＤ１は、測定試料を細孔部Ｄ１３に向かって上方へ噴射する試料ノズルＤ１１と、シース液供給口Ｄ１２と、廃液口Ｄ１４を備える。細孔部Ｄ１３内に、測定試料が流れる流路Ｄ１５が形成される。

【0036】

光照射光学系Ｄ３は、半導体レーザ１０１、１０３と、コリメータレンズ１０２、１０４と、ダイクロイックミラー１０５と、シリンドリカルレンズ１０６と、コンデンサレンズ１０７を備えている。

【0037】

半導体レーザ１０１は、発光部（図示せず）の半導体層の積層方向がＸ軸方向に一致するよう配置される。したがって、半導体レーザ１０１から出射されるレーザ光の広がり角は、Ｘ軸方向において最大となり、Ｙ軸方向において最小となる。半導体レーザ１０１は、所定波長のレーザ光（以下、「赤レーザ光ＲＬ」という）をＺ軸正方向に出射する。半導体レーザ１０１の出射波長は、６１０〜７５０ｎｍの範囲に含まれるよう設定される。半導体レーザ１０１の出射光軸は、光照射光学系Ｄ３の光軸Ｏに一致している。

【0038】

コリメータレンズ１０２は、半導体レーザ１０１から出射された赤レーザ光ＲＬを平行光に変換する。

【0039】

半導体レーザ１０３は、発光部（図示せず）の半導体層の積層方向がＺ軸方向に一致するよう配置される。したがって、半導体レーザ１０３から出射されるレーザ光の広がり角は、Ｚ軸方向において最大となり、Ｙ軸方向において最小となる。半導体レーザ１０３は、所定波長のレーザ光（以下、「青レーザ光ＢＬ」という）をＸ軸負方向に出射する。半導体レーザ１０３の出射波長は、４００〜４３５ｎｍの範囲に含まれるよう設定される。半導体レーザ１０３の出射光軸は、光照射光学系Ｄ３の光軸Ｏに交差する。

【0040】

コリメータレンズ１０４は、半導体レーザ１０３から出射された青レーザ光ＢＬを平行光に変換する。

【0041】

ダイクロイックミラー１０５は、コリメータレンズ１０２を透過した赤レーザ光ＲＬを透過し、コリメータレンズ１０４を透過した青レーザ光ＢＬを反射する。ダイクロイックミラー１０５は、ダイクロイックミラー１０５によって反射された青レーザ光ＢＬの進行方向が、図３（ｂ）に示すように、Ｚ軸方向からややＹ軸方向に傾くように、配置されている。

【0042】

シリンドリカルレンズ１０６は、ダイクロイックミラー１０５を経由した赤レーザ光ＲＬと青レーザ光ＢＬをＸ軸方向にのみ収束させる。コンデンサレンズ１０７は、シリンドリカルレンズ１０６を透過した赤レーザ光ＲＬと青レーザ光ＢＬを集光する。コンデンサレンズ１０７は、赤レーザ光ＲＬと青レーザ光ＢＬをＹ軸方向に収束させてフローセルＤ１の流路Ｄ１５（図４（ａ）参照）の位置に合焦させ、また、赤レーザ光ＲＬと青レーザ光ＢＬをＸ軸方向に収束させて流路Ｄ１５の手前（Ｚ軸負側）の位置に合焦させる。したがって、コンデンサレンズ１０７によってＸ軸方向に収束された光は、合焦位置から流路Ｄ１５の位置に達するまでに、やや広がる。よって、流路Ｄ１５には、図４（ａ）に示すように、Ｘ軸方向に細長いビーム形状で、赤レーザ光ＲＬと青レーザ光ＢＬが照射される。

【0043】

図３（ｂ）に示すように、ダイクロイックミラー１０５によって反射された青レーザ光ＢＬは、Ｚ軸方向からＹ方向にやや傾いた方向に進むため、流路Ｄ１５に対する青レーザ光ＢＬの照射位置ＥＰ１は、赤レーザ光ＲＬの照射位置ＥＰ２よりもＹ軸正方向にずれている。赤レーザ光ＲＬの照射位置ＥＰ２は、光軸Ｏ上にある。

【0044】

前方散乱光受光光学系Ｄ４は、前方集光レンズ２０１と、絞り２０２と、ビームストッパ２０３と、ピンホール２０４と、フォトダイオード２０５を備える。フローセルＤ１から前方（Ｚ軸正方向）へと向かう赤レーザ光ＲＬおよび青レーザ光ＢＬの散乱光（前方散乱光）は、それぞれ、前方集光レンズ２０１によってピンホール２０４の位置に集光され、その後、ピンホール２０４を通って、フォトダイオード２０５により受光される。フォトダイオード２０５は、受光した前方散乱光のピーク値に基づいて前方散乱光信号を出力する。

【0045】

前方集光レンズ２０１は、その光軸が、光照射光学系Ｄ３の光軸ＯからＹ軸正方向にずれるように配置されている。したがって、赤レーザ光ＲＬの前方散乱光（以下、「赤散乱光ＲＳ」という）の中心を通る光線は、前方集光レンズ２０１を透過した後、Ｚ軸正方向からややＹ軸負方向に傾く方向に進む。また、青レーザ光ＢＬの前方散乱光（以下、「青散乱光ＢＳ」という）の中心を通る光線は、前方集光レンズ２０１を透過した後、Ｚ軸正方向からややＹ軸正方向に傾く方向に進む。

【0046】

図４（ｃ）に示すように、ピンホール２０４には、Ｙ軸方向に並ぶ２つの孔２０４ａ、２０４ｂが形成されている。孔２０４ａ、２０４ｂの径Ｗ２は、それぞれ、青散乱光ＢＳ、赤散乱光ＲＳの収束スポットの径よりもやや大きく設定されている。赤散乱光ＲＳは、Ｙ軸正側の孔２０４ｂの位置に集光され、孔２０４ｂを通り抜ける。また、青散乱光ＢＳは、Ｙ軸負側の孔２０４ａの位置に集光され、孔２０４ｂを通り抜ける。

【0047】

図４（ｄ）に示すように、フォトダイオード２０５には、Ｙ軸方向に並ぶ２つの受光面２０５ａ、２０５ｂが配置されている。受光面２０５ａ、２０５ｂは、Ｚ軸方向において同じ位置にあり、それぞれ、Ｘ−Ｙ平面に平行である。フォトダイオード２０５上において、受光面２０５ａ、２０５ｂは、同一平面上に配置されている。ピンホール２０４の孔
２０４ａを通り抜けた青散乱光ＢＳは、受光面２０５ａに照射され、孔２０４ｂを通り抜けた赤散乱光ＲＳは、受光面２０５ｂに照射される。

【0048】

なお、前方散乱光受光光学系Ｄ４の倍率は、受光面２０５ａ、２０５ｂに照射される際の青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳの間隔が、受光面２０５ａの中心と受光面２０５ｂの中心との間隔に一致するように設定される。これにより、青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳは、図４（ｄ）に示すように、それぞれ、受光面２０５ａ、２０５ｂの中央に照射される。

【0049】

図３（ａ）、（ｂ）に戻り、フローセルＤ１に照射された赤レーザ光ＲＬ、青レーザ光ＢＬのうち、粒子（血球、等）に照射されずにフローセルＤ１を透過したレーザ光（以下、「直接光」という）は、前方集光レンズ２０１によってビームストッパ２０３上に集光される。ビームストッパ２０３は、光を透過しない薄板状の部材によって構成されている。図４（ｂ）に示すように、ビームストッパ２０３は、半円状の開口２０３ａ、２０３ｂと、これら開口２０３ａ、２０３ｂ間に形成された遮光部２０３ｃとを備える。遮光部２０３ｃのＸ軸方向の幅Ｗ１は一定である。この遮光部２０３ｃ上に、直接光が集光される。上記のように、コンデンサレンズ１０７は、Ｘ軸方向におけるレーザ光の焦点位置がＹ軸方向におけるレーザ光の焦点位置よりも手前（Ｚ軸負側）となるようにレーザ光を収束させる。このため、直接光は、Ｘ軸方向の焦点位置がＹ軸方向の焦点位置よりも手前（Ｚ軸負側）となるように、前方集光レンズ２０１によって集光される。ビームストッパ２０３は、入射面が、直接光のＸ軸方向の焦点位置に位置付けられるように配置される。したがって、直接光は、図４（ｂ）に示すように、Ｙ軸方向に長いビーム形状で、遮光部２０３ｃ上に照射される。

【0050】

フローセルＤ１からの赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳは、大部分が、ビームストッパ２０３の開口２０３ａ、２０３ｂを通過し、一部が、遮光部２０３ｃによって遮光される。遮光部２０３ｃによる前方散乱光の遮光量は、遮光部２０３ｃの幅Ｗ１によって決まる。このため、遮光部２０３ｃの幅Ｗ１は、なるべく小さいことが望ましい。しかしながら、遮光部２０３ｃの幅Ｗ１は、直接光を確実に遮光できるよう、直接光のＸ軸方向の幅の１０倍程度に設定される。

【0051】

側方散乱光受光光学系Ｄ５は、コリメータレンズＤ５１と、ダイクロイックミラーＤ５２と、側方集光レンズＤ５３と、フォトダイオードＤ５４を備える。フローセルＤ１から側方（Ｘ軸正方向）へと向かう散乱光（側方散乱光）は、コリメータレンズＤ５１にて平行光に変換される。上記のように、フローセルＤ１には、赤レーザ光ＲＬと青レーザ光ＢＬが照射されるため、各レーザ光に基づく２つの側方散乱光が生じる。コリメータレンズＤ５１は、これら２つの側方散乱光をそれぞれ平行光に変換する。平行光に変換された２つの側方散乱光は、ダイクロイックミラーＤ５２で反射され、さらに、側方集光レンズＤ５３により集光されて、フォトダイオードＤ５４により受光される。

【0052】

フォトダイオードＤ５４は、フォトダイオード２０５と同様、各波長の側方散乱光をそれぞれ受光する２つの受光面Ｄ５４ａ、Ｄ５４ｂを有する。受光面Ｄ５４ａ、Ｄ５４ｂはＹ軸方向に並び、Ｚ軸方向において同じ位置にある。フォトダイオードＤ５４上において、受光面Ｄ５４ａ、Ｄ５４ｂは、同一平面上に配置されている。フォトダイオードＤ５４は、受光した各波長の側方散乱光のピーク値に基づいて側方散乱光信号を出力する。

【0053】

なお、側方散乱光受光光学系Ｄ５の倍率は、受光面Ｄ５４ａ、Ｄ５４ｂに照射される際の青レーザ光ＢＬの散乱光と赤レーザ光ＲＬの散乱光との間隔が、受光面Ｄ５４ａの中心と受光面Ｄ５４ｂの中心との間隔に一致するように設定される。これにより、これら散乱光は、それぞれ、受光面Ｄ５４ａ、Ｄ５４ｂの中央に照射される。

【0054】

蛍光受光光学系Ｄ６は、分光フィルタＤ６１と、蛍光集光レンズＤ６２と、アバランシェフォトダイオードＤ６３と、コリメータレンズＤ６４と、ミラーＤ６５を備える。フローセルＤ１からＸ軸正方向へと向かう蛍光は、コリメータレンズＤ５１にて平行光に変換され、ダイクロイックミラーＤ５２を透過し、さらに分光フィルタＤ６１に通されて、蛍光集光レンズＤ６２により集光される。また、フローセルＤ１からＸ軸負方向へと向かう蛍光は、コリメータレンズＤ６４にて平行光に変換され、ミラーＤ６５によって反射される。ミラーＤ６５によって反射された蛍光は、再び、コリメータレンズＤ６４とフローセルＤ１を通ってコリメータレンズＤ５１に入射する。その後、この蛍光は、ダイクロイックミラーＤ５２を透過し、さらに分光フィルタＤ６１に通されて、蛍光集光レンズＤ６２により集光される。こうして、蛍光集光レンズＤ６２により集光された蛍光は、アバランシェフォトダイオードＤ６３に受光される。アバランシェフォトダイオードＤ６３は、受光した蛍光のピーク値に基づいて蛍光信号（ＳＦＬ）を出力する。蛍光信号の取得の際には、通常、半導体レーザ１０１、１０３の何れか一方が駆動される。

【0055】

なお、図３（ａ）、（ｂ）に示す光学系において、前方集光レンズ２０１は、アクロマティックレンズからなっており、赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳの２つの波長に対して色収差を補正する機能を備えている。このため、赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳは、同一平面上に配置された受光面２０５ａ、２０５ｂ上に適正に照射される。同様に、側方集光レンズＤ５３も、アクロマティックレンズからなっており、赤レーザ光ＲＬと青レーザ光ＢＬに基づく２つの側方散乱光の波長に対して色収差を補正する機能を備えている。このため、これら２つの側方散乱光は、同一平面上に配置された受光面Ｄ５４ａ、Ｄ５４ｂ上に適正に照射される。

【0056】

図２に戻り、光学検出器Ｄにより取得された前方散乱光信号と、側方散乱光信号と、蛍光信号は、情報処理ユニット４に送信される。情報処理ユニット４は、受信したこれら信号に基づいて解析を実行する。

【0057】

図５は、測定ユニット２の構成を示す図である。

【0058】

測定ユニット２は、図２に示す検体吸引部２４、試料調製部２５および検出部２６の他、センサ部２７と、駆動部２８と、制御部２９を備える。センサ部２７は、検体容器ＴおよびサンプルラックＬの位置を検出するためのセンサ等を含み、駆動部２８は、検体の測定を行うための機構を含む。図２に示すバーコードユニット２３は、センサ部２７に含まれる。

【0059】

制御部２９は、ＣＰＵ２９１と、メモリ２９２と、通信インターフェース２９３と、Ｉ／Ｏインターフェース２９４を含んでいる。

【0060】

ＣＰＵ２９１は、メモリ２９２に記憶されているコンピュータプログラムを実行する。メモリ２９２は、ＲＯＭ、ＲＡＭ、ハードディスク等からなる。また、ＣＰＵ２９１は、通信インターフェース２９３を介して、情報処理ユニット４との間でデータの送受信を行う。また、ＣＰＵ２９１は、Ｉ／Ｏインターフェース２９４を介して、測定ユニット２内の各部を制御すると共に、各部から出力された信号を受信して処理する。検出部２６により得られた血液検体の測定データは、ＣＰＵ２９１により処理され、メモリ２９２に格納される。血液検体に対する測定が終了すると、メモリ２９２に格納された測定データが、通信インターフェース２９３を介して、情報処理ユニット４に送信され、情報処理ユニット４において解析処理が行われる。

【0061】

図６は、情報処理ユニット４の構成を示す図である。

【0062】

情報処理ユニット４は、パーソナルコンピュータからなり、本体４０と、表示部４１と、入力部４２から構成されている。本体４０は、ＣＰＵ４０１と、ＲＯＭ４０２と、ＲＡＭ４０３と、ハードディスク４０４と、読出装置４０５と、画像出力インターフェース４０６と、入出力インターフェース４０７と、通信インターフェース４０８を有する。

【0063】

ＣＰＵ４０１は、ＲＯＭ４０２に記憶されているコンピュータプログラムおよびＲＡＭ４０３にロードされたコンピュータプログラムを実行する。ＲＡＭ４０３は、ＲＯＭ４０２およびハードディスク４０４に記録されているコンピュータプログラムの読み出しに用いられる。また、ＲＡＭ４０３は、これらのコンピュータプログラムを実行するときに、ＣＰＵ４０１の作業領域としても利用される。

【0064】

ハードディスク４０４には、オペレーティングシステム、ＣＰＵ４０１に実行させるためのコンピュータプログラム、およびコンピュータプログラムの実行に用いるデータが記憶されている。また、ハードディスク４０４には、後述の解析処理を実行させるためのプログラム４０４ａが記憶されている。読出装置４０５は、ＣＤドライブまたはＤＶＤドライブ等によって構成されており、記録媒体４０５ａに記録されたコンピュータプログラムおよびデータを読み出すことができる。なお、上記プログラム４０４ａが記録媒体４０５ａに記録されている場合には、読出装置４０５により記録媒体４０５ａから読み出されたプログラム４０４ａが、ハードディスク４０４に記憶される。

【0065】

画像出力インターフェース４０６は、画像データに応じた映像信号を表示部４１に出力し、表示部４１は、画像出力インターフェース４０６から出力された映像信号に基づいて画像を表示する。ユーザは入力部４２を介して指示を入力し、入出力インターフェース４０７は、入力部４２を介して入力された信号を受け付ける。通信インターフェース４０８は、測定ユニット２と、搬送ユニット３と、ホストコンピュータ５に接続されており、ＣＰＵ４０１は、通信インターフェース４０８を介して、これら装置との間で指示信号およびデータの送受信を行う。

【0066】

ところで、図３（ａ）、（ｂ）に示す光学検出器Ｄは、血液検体に試薬が混和された測定試料がフローセルＤ１に流される場合の他、試薬が混和されない測定試料がフローセルＤ１に流される場合にも、血球分析のための信号を取得するために用いられる。試薬が混和されない測定試料がフローセルＤ１に流される場合、半導体レーザ１０１、１０３が駆動され、青レーザ光ＢＬと赤レーザ光ＲＬが、それぞれ、照射位置ＥＰ１、ＥＰ２に照射される。そして、照射位置ＥＰ１、ＥＰ２から生じた青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳが、それぞれ、フォトダイオード２０５の受光面２０５ａ、２０５ｂにより受光され、フォトダイオード２０５から、青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳに基づく前方散乱光信号が出力される。こうして取得された２種類の前方散乱光信号に基づいて、血球の分類と計数が行われる。

【0067】

以下、これら２種類の前方散乱光信号に基づく血球の分類および計数の処理について説明する。なお、以下の解析処理では、青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳに基づく前方散乱光信号が用いられているが、青レーザ光ＢＬと赤レーザ光ＲＬからそれぞれ生じる２種類の側方散乱光に基づく側方散乱光信号を、同様の解析に用いることも可能である。

【0068】

＜解析例１＞
本解析例は、赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳを用いて、赤血球と他の血球とを分類する処理に関するものである。なお、本解析例では、測定試料の調製において、検体容器Ｔから吸引された検体には希釈液のみが混和され、染色剤や溶血剤等の試薬は混和されない。

【0069】

図３（ｂ）に示すように、青レーザ光ＢＬの照射位置ＥＰ１と赤レーザ光ＲＬの照射位
置ＥＰ２は、互いに、Ｙ軸方向にずれている。また、測定試料は、流路Ｄ１５をＹ軸正方向に流れる。したがって、流路Ｄ１５を流れる血球に赤レーザ光ＲＬが照射されてから、この血球に青レーザ光ＢＬが照射されるまでには、所定のタイムラグがある。このため、青レーザ光ＢＬと赤レーザ光ＲＬからそれぞれ生じる２種類の前方散乱光に基づく前方散乱光信号を解析に用いる場合には、同一の血球から生じた２種類の前方散乱光信号から取得された２種類のデータ（以下、「前方散乱光データ」という）を互いに対応付ける必要がある。

【0070】

図７（ａ）、（ｂ）は、２種類の前方散乱光データを対応付ける方法を説明する図である。図７（ａ）は、粒子濃度が低い場合に赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳが検出されるタイミングを示すタイミングチャート、図７（ｂ）は、粒子濃度が高い場合（通常濃度の血液試料を用いた場合）に赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳが検出されるタイミングを示すタイミングチャートである。

【0071】

図７（ａ）を参照して、測定試料の濃度が低い場合、赤散乱光ＲＳの検出タイミングと青散乱光ＢＳの検出タイミングは離散的になる。この場合、通常、一つの血球に対する赤散乱光ＲＳの検出タイミングと青散乱光ＢＳの検出タイミングとの間の期間に、次の血球に対する赤散乱光ＲＳの検出タイミングが入ることはない。したがって、赤散乱光ＲＳの検出タイミングの次に到来する青散乱光ＢＳの検出タイミングが、同一血球に対する検出タイミングとして対応づけられる。図７（ａ）の例では、検出タイミングＴ２１〜Ｔ２５が、それぞれ、検出タイミングＴ１１〜Ｔ１５に対応づけられる。同一血球に対する検出タイミングの時間差は、何れの血球の場合も略同じである。したがって、たとえば、互いに対応付けられた２つの検出タイミングの時間差の平均値Δｔを、各血球に対する赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳの検出タイミングの時間差として用いることができる。

【0072】

図７（ｂ）を参照して、粒子濃度が高い場合（通常濃度の血液試料を用いる場合）には、赤散乱光ＲＳの検出タイミングと青散乱光ＢＳの検出タイミングが混在し合うことになる。この場合、同一の血球に対する赤散乱光ＲＳの検出タイミングと青散乱光ＢＳの検出タイミングとを対応付けることが難しい。しかしながら、フローセルＤ１を流れる測定試料の速度は、粒子濃度が高い場合と粒子濃度が低い場合とで殆ど変わらない。よって、粒子濃度が低い場合に取得された時間差Δｔを、粒子濃度が高い場合の同一血球に対する赤散乱光ＲＳの検出タイミングと青散乱光ＢＳの検出タイミングの時間差として用いることができる。図７（ｂ）の例では、時間差Δｔを用いることにより、検出タイミングＴ２ｎ、Ｔ２ｍが、それぞれ、検出タイミングＴ１ｎ、Ｔ１ｍに対応づけられる。

【0073】

本解析例では、青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳを用いた血球分析が行われる前に、粒子濃度の低い試料がフローセルＤ１に流され、時間差Δｔが取得される。そして、こうして取得された時間差Δｔが、青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳを用いた血球分析が行われる場合に用いられ、青散乱光ＢＳに基づいて取得された前方散乱光データと赤散乱光ＲＳに基づいて取得された前方散乱光データが互いに対応づけられる。この対応付けは、図５に示す測定ユニット２の制御部２９において行われる。制御部２９のＣＰＵ２９１は、検出部２６（光学検出器Ｄ）から受信した赤散乱光ＲＳおよび青散乱光ＢＳに基づく２種類の前方散乱光データを、順次、時間差Δｔを用いて対応づけて、メモリ２９２に格納する。

【0074】

なお、時間差Δｔの取得方法は、上述の方法に限られるものではない。たとえば、フローセルＤ１を流れる測定試料の速度は、測定試料の温度によって変化する。したがって、フローセルＤ１を流れる測定試料の温度を測るための検出器をフローセルＤ１中に配置しておき、検出された温度に基づいて時間差Δｔのデフォルト値を調整して、時間差Δｔを取得するようにしても良い。

【0075】

次に、赤血球により生じる前方散乱光と、赤血球以外の血球（血小板や白血球）により生じる前方散乱光との違いについて説明する。

【0076】

光が照射されることにより粒子から生じる散乱光は、その粒子の粒径と屈折率とにより定まる（Ｍｉｅ散乱理論）。ここで、屈折率は、実数部と虚数部とからなる複素数により表すことができる。すなわち、複素屈折率をｍ、屈折率をｎ_ｒ、吸収をｎ_ｉとすると、複素屈折率ｍは、以下の式により算出することができる。

【0077】

ｍ＝ｎ_ｒ＋ｉｎ_ｉ

【0078】

上記式によれば、複素屈折率ｍは吸収ｎ_ｉに応じて変化するため、光に対する粒子の吸収度合いが異なれば、屈折率も異なることになる。よって、異なる種類の粒子が互いに異なる吸収度合いを有する場合、これら粒子に対して光を照射すると、生じる散乱光も互いに異なったものとなる。

【0079】

図８（ａ）は、赤血球に含まれるヘモグロビンの吸収特性を示す図である。横軸は、ヘモグロビンに照射される光の波長を示し、縦軸は、吸収係数（任意単位）を示している。

【0080】

図８（ａ）には、酸素化ヘモグロビン（ＨｂＯ_２）と脱酸素化ヘモグロビン（Ｈｂ）の吸収係数がそれぞれ示されている。赤血球中のヘモグロビンは、酸素化ヘモグロビンと、脱酸素化ヘモグロビンとが混在した状態にあり、一般的には、静脈血のヘモグロビン酸素飽和度は約７５％、すなわち、酸素化ヘモグロビンと脱酸素化ヘモグロビンの存在比率が３対１となっている。このため、血液検体に含まれる赤血球では、酸素化ヘモグロビンの性質が支配的となる。

【0081】

図８（ａ）に示すように、波長が４００〜４３５ｎｍの範囲では、酸素化ヘモグロビン（ＨｂＯ_２）の吸収係数は、他の波長帯に比べて数段大きくなっている。一方、波長が６１０〜７５０ｎｍの範囲では、酸素化ヘモグロビン（ＨｂＯ_２）の吸収係数は、他の波長帯に比べて数段小さくなっている。すなわち、青レーザ光ＢＬに対する赤血球の吸収度合いと、赤レーザ光ＲＬに対する赤血球の吸収度合いとの差は、大きいものとなる。他方、赤血球以外の血球（血小板や白血球）はヘモグロビンを含んでいないため、青レーザ光ＢＬに対する赤血球以外の血球の吸収度合いと、赤レーザ光ＲＬに対する赤血球以外の血球の吸収度合いとの差は、小さいものとなる。

【0082】

以上のことから、赤血球と、赤血球以外の血球（血小板や白血球）とでは、青レーザ光ＢＬに対する吸収度合いと、赤レーザ光ＲＬに対する吸収度合いとの差が顕著に異なるため、青レーザ光ＢＬが照射される場合に生じる青散乱光ＢＳの強度と、赤レーザ光ＲＬが照射される場合に生じる赤散乱光ＲＳの強度との差も異なるものとなる。具体的には、赤血球では、青散乱光ＢＳの強度は、赤散乱光ＲＳの強度よりも小さくなり易く、赤血球以外の他の血球では、青散乱光ＢＳの強度と赤散乱光ＲＳの強度は、同程度になり易い。

【0083】

図８（ｂ）、（ｃ）は、それぞれ、本解析例と比較例における粒子分析のシミュレーション結果を示す図である。

【0084】

本シミュレーションは、上記光学検出器Ｄにおいて、前方散乱光受光光学系Ｄ４のＮＡを０．２２に、ビームストッパ２０３の遮光部２０３ｃの幅Ｗ１を０．３ｍｍに、フローセルＤ１とビームストッパ２０３との間を６ｍｍに、フローセルＤ１に照射されるビームのＹ軸方向の幅を１０μｍとして行われた。また、本シミュレーションでは、赤血球と同様の性質を有する粒子と、血小板と同様の性質を有する粒子とが設定され、これら粒子に対して所定波長のレーザ光を照射することにより生じる前方散乱光の強度がシミュレーシ
ョンにより算出された。

【0085】

本解析例のシミュレーションでは、赤血球と血小板に相当する粒子に、波長６４０ｎｍの赤レーザ光ＲＬと波長４０５ｎｍの青レーザ光ＢＬを照射し、各粒子により生じる６４０ｎｍと４０５ｎｍの前方散乱光信号が、図８（ｂ）に示すようにスキャッタグラム上にプロットされている。比較例のシミュレーションでは、赤血球と血小板に相当する粒子に、約６３２ｎｍの波長のレーザ光を照射し、各粒子により生じる低角（２〜３度）と高角（８〜２０度）の前方散乱光信号が、図８（ｃ）に示すようにスキャッタグラム上にプロットされている。

【0086】

図８（ｂ）、（ｃ）に示すスキャッタグラムには、それぞれ、赤血球に相当する粒子が分布するマップＭ１、Ｍ２が示されている。マップＭ１、Ｍ２は、体積の値がＶ３０〜Ｖ１５０であり、ヘモグロビン濃度の値がＨＣ２２〜ＨＣ４６である８１個の粒子に基づいて作成されており、各粒子は、マップＭ１、Ｍ２の格子の交点にプロットされている。なお、健常者の赤血球では、概ね、体積がＶ６０〜Ｖ１２０であり、ヘモグロビン濃度がＨＣ３１〜ＨＣ３７である。また、図８（ｂ）、（ｃ）に示すスキャッタグラムには、それぞれ、血小板に相当する粒子が分布する分布線Ｃ１１、Ｃ１２が示されている。分布線Ｃ１１、Ｃ１２は、体積の値がＶ０．５〜Ｖ３３である４つの粒子に基づいて作成されている。

【0087】

図８（ｂ）、（ｃ）に示すように、赤血球と血小板に相当する粒子に対して行ったシミュレーション結果から、被検者から採取される赤血球も、マップＭ１、Ｍ２内に分布すると考えられ、被検者から採取される血小板も、分布線Ｃ１１、Ｃ１２上に分布すると考えられる。

【0088】

本解析例において、赤血球の分布を示すマップＭ１は、血小板の分布を示す分布線Ｃ１１よりも、左上に位置しており、マップＭ１と分布線Ｃ１１とが重なり合わない。これは、図８（ａ）を参照して説明したように、赤血球に含まれるヘモグロビンにより青レーザ光ＢＬが吸収され、青散乱光ＢＳの強度が赤散乱光ＲＳに比べて小さくなっているためと考えられる。一方、比較例において、赤血球の分布を示すマップＭ２は、血小板の分布を示す分布線Ｃ１２と、左右方向において同様の位置にあり、マップＭ２に分布線Ｃ１２が重なっている。

【0089】

本解析例の場合、被検者から採取される血小板の体積が大きいと、この血小板は、分布線Ｃ１１の延長線Ｃ１１ａに位置付けられることになる。しかしながら、延長線Ｃ１１ａはマップＭ１と交わらないため、この血小板はマップＭ１と重なることはない。このため、本解析例では、血小板の体積が大きい場合でも、赤血球と血小板を弁別する精度が高められる。一方、比較例の場合、被検者から採取される血小板の体積が大きいと、この血小板は、分布線Ｃ１２の延長線Ｃ１２ａに位置付けられることになる。この場合、延長線Ｃ１２ａはマップＭ２と交わるため、この血小板はマップＭ２と重なる惧れがある。このため、比較例では、血小板の体積が大きい場合、赤血球と血小板を弁別する精度が悪くなる惧れがある。

【0090】

なお、血小板と白血球は、概ね同様の屈折率を有していると考えられ、ヘモグロビンを有しないという点でも同様の性質を有している。このため、白血球から生じる前方散乱光信号も、概ね分布線Ｃ１１、Ｃ１２上に位置すると考えられる。なお、白血球は血小板に比べて大きいため、白血球は血小板よりも、赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳの値が大きい領域に位置付けられる。本解析例では、白血球がマップＭ１と重なりにくいため、赤血球と白血球を弁別する精度が高められる。一方、比較例では、白血球がマップＭ２と重なりやすいため、赤血球と白血球を弁別する精度が悪くなる惧れがある。

【0091】

よって、本解析例のように青レーザ光ＢＬと赤レーザ光ＲＬを用いると、図８（ｂ）に示すように、赤血球と、赤血球以外の血球（血小板や白血球）とを精度良く弁別することが可能になる。

【0092】

図８（ｄ）は、本解析例において、実際の測定試料から得られる赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳに基づくスキャッタグラムを示す図である。縦軸と横軸は、それぞれ、フォトダイオード２０５から出力される赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳの信号を示しており、各血球から得られた赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳの信号をパラメータとして、各血球がスキャッタグラム上にプロットされている。

【0093】

この場合、赤血球を示す点は領域Ａ１近傍に分布しており、血小板を示す点は、領域Ａ２近傍に分布しており、白血球を示す点は領域Ａ３近傍に分布している。また、赤血球が分布する領域Ａ１は、分布曲線Ｃ１上に位置しており、血小板が分布する領域Ａ２と白血球が分布する領域Ａ３は、分布曲線Ｃ２上に位置している。また、分布曲線Ｃ２は、図８（ｂ）に示す分布線Ｃ１１と延長線Ｃ１１ａに対応するものであり、分布曲線Ｃ１と分布曲線Ｃ２とは、互いに異なる角度で伸びているため、交わることがない。図８（ｄ）のように分布曲線Ｃ１と分布曲線Ｃ２とが互いに離れるのは、上記のように、赤血球がヘモグロビンを有しており、ヘモグロビンの吸収係数が波長によって大きく変わるためであると考えられる。

【0094】

このように、実測値において、分布曲線Ｃ１上に位置する赤血球が分布する領域Ａ１と、分布曲線Ｃ２上に位置する赤血球以外の血球が分布する領域Ａ２、Ａ３が重なりにくいことが分かる。なお、赤散乱光ＲＳの信号を示す閾値Ｖ１は、後述するようにノイズを含む信号を除くために用いられる。

【0095】

図９は、本解析例の血球分析装置１による解析処理を示すフローチャートである。

【0096】

血球分析装置１が起動されると、まず、図７（ａ）、（ｂ）を参照して説明したように、赤散乱光ＲＳの検出タイミングと青散乱光ＢＳの検出タイミングの時間差に基づいて、時間差Δｔが取得される（Ｓ１１）。そして、取得された時間差Δｔは、測定ユニット２のメモリ２９２に記憶される。なお、時間差Δｔは、たとえば、フローセルＤ１に粒子濃度が低い精度管理用試料を流すことにより取得されても良く、あるいは、フローセルＤ１中に配置された温度を測るための検出器が検出する温度に基づいてデフォルト値を修正することにより取得されても良い。

【0097】

解析処理が開始されると、上述したように検体容器Ｔが測定ユニット２に取り込まれ、位置Ｐ３に位置付けられる。そして、測定ユニット２のＣＰＵ２９１は、ピアサ２４ａにより検体容器Ｔから検体を吸引し、試料調製部２５により吸引した検体から測定試料を調製する（Ｓ１２）。この場合の測定試料の調製は、赤血球を溶血する試薬や、白血球を染色する試薬等が混和されることなく行われる。

【0098】

次に、ＣＰＵ２９１は、赤レーザ光ＲＬと青レーザ光ＢＬをフローセルＤ１に照射し、測定試料をフローセルＤ１に流す（Ｓ１３）。これにより、同一の血球から生じた２種類の前方散乱光（赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳ）が生じ、これら前方散乱光がフォトダイオード２０５により受光される。ＣＰＵ２９１は、フォトダイオード２０５から出力される２種類の前方散乱光信号に基づく前方散乱光データを取得する。そして、ＣＰＵ２９１は、経過時間のカウントを開始する（Ｓ１４）。

【0099】

続いて、ＣＰＵ２９１は、赤散乱光ＲＳの信号が図８（ｄ）に示す閾値Ｖ１以下である
かを判定する（Ｓ１５）。なお、閾値Ｖ１は微小な値に設定されており、ノイズを含む信号を除くために用いられる。赤散乱光ＲＳの信号が閾値Ｖ１より大きいと（Ｓ１５：ＮＯ）、ＣＰＵ２９１は、上記時間差Δｔに基づいて、同一の血球から生じた２種類の前方散乱光データを互いに対応付けて、メモリ２９２に記憶する（Ｓ１６）。他方、赤散乱光ＲＳの信号が閾値Ｖ１以下であると（Ｓ１５：ＹＥＳ）、ＣＰＵ２９１は、この場合の血球についての２種類の前方散乱光データを記憶せず、処理をＳ１７に進める。

【0100】

こうして、所定時間が経過するまで、血球ごとにＳ１５、Ｓ１６の処理が繰り返し行われる（Ｓ１７）。所定時間が経過することにより測定が終了すると（Ｓ１７：ＹＥＳ）、ＣＰＵ２９１は、メモリ２９２に記憶した前方散乱光データを、情報処理ユニット４に送信する（Ｓ１８）。

【0101】

一方、情報処理ユニット４のＣＰＵ４０１は、測定ユニット２から前方散乱光データを受信すると（Ｓ２１：ＹＥＳ）、図８（ｄ）に示すようなスキャッタグラムを作成し、表示部４１に表示する（Ｓ２２）。続いて、ＣＰＵ４０１は、作成したスキャッタグラム上に領域Ａ１を設定する（Ｓ２３）。こうして、ＣＰＵ４０１は、スキャッタグラム上の領域Ａ１に含まれる点を測定試料に含まれる赤血球として区分し、領域Ａ１に含まれる点に基づいて赤血球の解析処理を行い（Ｓ２４）、解析結果を表示部４１に表示する（Ｓ２５）。

【0102】

なお、Ｓ２３で設定される領域Ａ１は、あらかじめ決められた固定領域であっても良く、固定領域に基づいて微調整された領域であっても良い。ここで、領域Ａ１の境界は、たとえば、直線や曲線の数式により定義される。

【0103】

また、ここでは、説明の便宜上、作成したスキャッタグラム上に領域Ａ１が設定され、このスキャッタグラム上の領域Ａ１に含まれる点が赤血球に対応する点として区分されたが、スキャッタグラムは、必ずしも図形またはグラフとして作成される必要はなく、領域Ａ１の設定と領域Ａ１に含まれる点の区分は、データ処理によって行われるようにしても良い。

【0104】

以上、本解析例によれば、染色剤や溶血剤等の試薬を用いることなく、血球を、赤血球とその他の血球に良好に分類することができる。上記のように、赤血球は、波長により吸収係数が大きく変化するヘモグロビンを含むため、赤血球と他の血球では、赤散乱光ＲＳの強度と青散乱光ＢＳの強度が、大きく異なる。このため、図８（ｄ）のスキャッタグラムに示すように、赤血球が分布する領域Ａ１と、血小板および白血球が分布する領域Ａ２、Ａ３とが大きく離れるようになる。赤血球は、図８（ｄ）のスキャッタグラム上に模式的に示した分布曲線Ｃ１に沿うように分布し、血小板と白血球は、分布曲線Ｃ２に沿うように分布する。上記のように、分布曲線Ｃ１と分布曲線Ｃ２との間には、大きな開きが生じ、且つ、分布曲線Ｃ１と分布曲線Ｃ２とが交差することもない。よって、横軸を青散乱光ＢＳの強度とし、縦軸を赤散乱光ＲＳの強度とするスキャッタグラムでは、図８（ｄ）に示すように、赤血球が分布する領域Ａ１と、血小板および白血球が分布する領域Ａ２、Ａ３とが大きく離れるようになる。したがって、本解析例によれば、染色剤や溶血剤等の試薬を用いることなく、血球を、赤血球とその他の血球に、良好に分類することができる。

【0105】

このように、本解析例によれば、実施の形態に記載の血球分析装置１を用いることにより、染色剤や溶血剤等の試薬を用いることなく、簡易な工程により、良好に、測定試料に含まれる血球から、赤血球を弁別し計数することができる。また、測定試料に含まれる血球から、赤血球と血小板を分類することができる。さらに、測定試料に含まれる血球から、血小板を弁別し計数することもできる。

【0106】

なお、本解析例によれば、図８（ｄ）に示すように、赤血球の他、血小板と白血球を弁別することが可能である。しかしながら、白血球の血球数は、赤血球と血小板の血球数に比べてかなり少ないため、本解析例により白血球を弁別して精度の高い解析結果を得ようとする場合には、測定時間を長くして、測定結果に含まれる白血球の数を高める必要がある。しかし、測定時間を長くすると、赤血球と血小板の血球数が多くなり過ぎ、赤血球と血小板の弁別が非効率となる。よって、本解析例は、測定時間を制限しながら、赤血球と血小板を効率的に弁別・分類する際に用いて好適なものである。白血球については、追って示す解析例２を用いることにより、効率的に、弁別・分類することが可能である。

【0107】

また、本解析例によれば、染色剤や溶血剤等の試薬を用いる必要がないため、血液検体に試薬を混和する工程を省略することができる。よって、簡易な工程で良好に、血球を区分することができる。

【0108】

また、本解析例によれば、染色剤や溶血剤等の試薬を用いる必要がないため、コストの削減を図ることができる。さらに、試薬の消費を削減でき、且つ、試薬を含む測定試料が廃棄されることを抑制できるため、環境に配慮した分析手法を実現することができる。

【0109】

また、本解析例によれば、図７（ａ）、（ｂ）を参照して説明したように、同一血球から取得された赤散乱光ＲＳおよび青散乱光ＢＳに基づくデータが互いに対応づけられるため、血球の濃度が高く、各散乱光に基づくデータが混在する場合にも、解析処理を適正に行うことができる。

【0110】

また、本実施の形態に係る光学検出器Ｄでは、図３（ｂ）に示すように、青レーザ光ＢＬの照射位置ＥＰ１と赤レーザ光ＲＬの照射位置ＥＰ２が流路Ｄ１５に平行な方向にずれているため、別途、青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳとを分離する素子を配さなくとも、前方散乱光受光光学系Ｄ４の倍率を調整することにより、青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳを、それぞれ、フォトダイオード２０５の受光面２０５ａ、２０５ｂに集光させることができる。同様に、側方散乱光受光光学系Ｄ５の倍率を調整することにより、青レーザ光ＢＬに基づく散乱光と赤レーザ光ＲＬに基づく散乱光を、それぞれ、フォトダイオードＤ５４の受光面Ｄ５４ａ、Ｄ５４ｂに集光させることができる。

【0111】

また、本実施の形態に係る光学検出器Ｄによれば、一つのフォトダイオード２０５に受光面２０５ａ、２０５ｂが配置されているため、光学検出器Ｄの構成を簡素にすることができる。同様に、一つのフォトダイオードＤ５４に受光面Ｄ５４ａ、Ｄ５４ｂが配置されているため、光学検出器Ｄの構成を簡素にすることができる。

【0112】

また、本実施の形態に係る光学検出器Ｄによれば、受光面２０５ａ、２０５ｂが同一平面上に配置されるため、フォトダイオード２０５の構成を簡素にすることができる。同様に、受光面Ｄ５４ａ、Ｄ５４ｂが同一平面上に配置されるため、フォトダイオードＤ５４の構成を簡素にすることができる。

【0113】

また、本実施の形態に係る光学検出器Ｄによれば、前方集光レンズ２０１が、赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳの２つの波長に対して色収差を補正する機能を備えているため、赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳを、受光面２０５ａ、２０５ｂ上に適正に照射することができる。同様に、側方集光レンズＤ５３も、赤レーザ光ＲＬと青レーザ光ＢＬに基づく２つの側方散乱光の波長に対して色収差を補正する機能を備えているため、これら２つの側方散乱光を、受光面Ｄ５４ａ、Ｄ５４ｂ上に適正に照射することができる。

【0114】

＜解析例２＞
上記解析例１では、赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳを用いて、測定試料に含まれる血球から赤血球を弁別する処理について説明した。本解析例では、赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳを用いて、測定試料に含まれる血球から白血球を弁別し、白血球を３つの分類に区分する処理について説明する。なお、本解析例でも、上記解析例１と同様、測定試料の調製において、検体容器Ｔから吸引された検体には希釈液のみが混和され、染色剤や溶血剤等の試薬は混和されない。

【0115】

上記のように、白血球はヘモグロビンを持たないため、白血球に対する赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳの強度変化に寄与するパラメータは、粒径が支配的となる。すなわち、粒径が異なれば、図８（ｄ）のスキャッタグラムに模式的に示された分布曲線Ｃ２上における血球の分布位置が異なることとなる。本解析例では、かかる分布位置の差異に基づいて、白血球が、リンパ球、単球および顆粒球（好中球、好酸球、好塩基球）に区分される。

【0116】

また、上記解析例１において説明したとおり、赤血球が分布する領域Ａ１（分布曲線Ｃ１）は、白血球を含む他の血球が分布する領域Ａ２、Ａ３（分布曲線Ｃ２）から大きく離れている。このため、白血球を分類および計数する際に、赤血球が分布する領域Ａ１に含まれるデータを処理対象から除外することが可能である。本解析例では、フォトダイオード２０５から出力される前方散乱光信号のうち、赤血球が分布する領域Ａ１に対応する前方散乱光信号については、前方散乱光データの取得が禁止され、これにより、処理負荷の軽減が図られる。

【0117】

図１０（ａ）〜（ｃ）は、本解析例において、異なる被検者から採取された３つの血液検体に基づいて作成されたスキャッタグラムを示す図である。縦軸と横軸は、それぞれ、フォトダイオード２０５から出力される赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳの信号を示している。なお、この場合の測定試料の調製では、赤血球の解析と同様の希釈液による希釈が行われ、この場合の測定試料の測定では、赤血球の解析を行う場合と同様の測定時間で測定が行われている。

【0118】

本解析例では、青散乱光ＢＳの信号が所定の閾値Ｖ２以下である血球は、解析処理に用いられない。具体的には、フォトダイオード２０５から出力される青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２以下であると、この血球から取得された２種類の前方散乱光信号はメモリ２９２には記憶されない。これにより、図１０（ａ）〜（ｃ）に示すように、各検体に基づいて作成されるスキャッタグラムには、青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２以下である領域Ａ１０に、血球がプロットされなくなる。なお、閾値Ｖ２は、領域Ａ１０に、大部分の赤血球が含まれる値に設定される。これにより、領域Ａ１０以外の領域に、大部分の白血球が含まれることになる。こうして、図１０（ａ）〜（ｃ）に示すように、領域Ａ１０に含まれる血球が除かれることにより、赤血球が分布する領域Ａ１も大きく除かれることになる。

【0119】

図１０（ｄ）〜（ｆ）は、異なる被検者から採取された８つの血液検体に基づいて行われた白血球の分類結果を示す図である。図１０（ｄ）〜（ｆ）の縦軸と横軸は、ぞれぞれ、本解析例に基づく処理によって得られた結果と、染色剤や溶血剤等の試薬を用いて測定試料を調製する解析手法（比較手法）によって得られた結果を示している。

【0120】

本解析例では、図１０（ａ）〜（ｃ）と同様に、閾値Ｖ２以下の血球が解析の対象から除外される。そして、領域Ａ３１〜Ａ３３内の血球数を、それぞれ、３つの分類（リンパ球、単球および顆粒球）の血球数として取得し、全体の血球数に占める各分類の血球数の比率を求める。図１０（ｄ）〜（ｆ）の縦軸には、それぞれ、本解析例におけるリンパ球と、単球と、顆粒球とが全体の血球数に占める比率（％）が示されている。一方、比較手法においても、この手法に従って白血球を３つの種類に分類し、全体の血球数に占める各分類の血球数の比率を求める。図１０（ｄ）〜（ｆ）の横軸には、それぞれ、この装置に
おけるリンパ球と、単球と、顆粒球とが全体の血球数に占める比率（％）が示されている。こうして、図１０（ｄ）〜（ｆ）には、本解析例による比率と比較手法による比率とをパラメータとして、それぞれ、８つの検体に対応する比率を示す点がプロットされる。

【0121】

また、図１０（ｄ）〜（ｆ）には、それぞれ、８つの検体の比率を示す点の近似直線Ｌ１〜Ｌ３と、ｘ（横軸の値）とｙ（縦軸の値）からなる近似直線Ｌ１〜Ｌ３の式が示されている。また、図１０（ｄ）〜（ｆ）には、本解析例による結果と、比較手法による結果との相関係数Ｒ^２の値が示されている。近似直線の傾きと相関係数の値は、何れも１に近づくほど、本解析例による結果と比較手法による結果との相関性が高くなる。

【0122】

図１０（ｄ）〜（ｆ）に示すように、近似直線Ｌ１〜Ｌ３の傾きは、それぞれ、１．１７３５、０．９４３６、１．１８３であり、相関係数Ｒ^２の値は、それぞれ、０．９３９７、０．４９４８、０．９１４９であるため、リンパ球と顆粒球では、本解析例の結果と比較手法の結果との相関性は、比較的高いことが分かる。このことから、本解析例によれば、リンパ球と顆粒球の結果は、染色剤や溶血剤等の試薬を用いて測定試料を調製する比較手法と、同程度の精度を有することが分かる。

【0123】

なお、単球では、近似直線Ｌ２に対する各点の収束度合いがやや低いため、本解析例の結果と比較手法の結果との相関性は、やや低いことが分かる。しかしながら、本解析例の解析処理は、赤血球の解析手法（赤血球用の希釈と測定時間）に基づいて行われているため、本解析例の解析処理が、白血球の解析手法（白血球用の希釈と測定時間）に基づいて行われれば、本解析例と比較手法との相関性は高められる可能性がある。

【0124】

図１１は、本解析例の血球分析装置１による解析処理を示すフローチャートである。図１１に示すフローチャートは、図９に示す上記解析例１のフローチャートにおいて、Ｓ１５の替わりにＳ１０１が追加され、Ｓ２３の替わりにＳ２０１が追加されている。

【0125】

測定ユニット２のＣＰＵ２９１は、上記解析例１と同様にして、Ｓ１１〜Ｓ１４の処理を行う。続いて、ＣＰＵ２９１は、青散乱光ＢＳの信号が図１０（ａ）〜（ｃ）に示す閾値Ｖ２以下であるかを判定する（Ｓ１０１）。青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２より大きいと（Ｓ１０１：ＮＯ）、ＣＰＵ２９１は、上記時間差Δｔに基づいて、同一の血球から生じた２種類の前方散乱光データを互いに対応付けて、メモリ２９２に記憶する（Ｓ１６）。他方、青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２以下であると（Ｓ１０１：ＹＥＳ）、ＣＰＵ２９１は、この血球についての２種類の前方散乱光データを記憶せず、処理をＳ１０２に進める。

【0126】

こうして、所定時間が経過するまで、血球ごとにＳ２０１、Ｓ１６の処理が繰り返し行われる（Ｓ１７）。なお、この場合の所定時間は、赤血球よりも数段個数の少ない白血球をより多く検出するために、上記解析例１のＳ１７（図９参照）で設定される所定時間よりも長く設定される。所定時間が経過することにより測定が終了すると（Ｓ１７：ＹＥＳ）、ＣＰＵ２９１は、メモリ２９２に記憶した前方散乱光データを、情報処理ユニット４に送信する（Ｓ１８）。

【0127】

一方、情報処理ユニット４のＣＰＵ４０１は、測定ユニット２から前方散乱光データを受信すると（Ｓ２１：ＹＥＳ）、図１０（ａ）〜（ｃ）に示すようなスキャッタグラムを作成し、表示部４１に表示する（Ｓ２２）。続いて、ＣＰＵ４０１は、作成したスキャッタグラム上に領域Ａ３１〜Ａ３３（領域Ａ３）を設定する（Ｓ２０１）。こうして、ＣＰＵ４０１は、領域Ａ３１〜Ａ３３に含まれる点を測定試料に含まれるリンパ球、単球および顆粒球（好中球、好酸球、好塩基球）として区分し、領域Ａ３１〜Ａ３３に含まれる点に基づいて白血球の解析処理を行い（Ｓ２４）、解析結果を表示部４１に表示する（Ｓ２
５）。

【0128】

なお、Ｓ２０１で設定される領域Ａ３１〜Ａ３３は、あらかじめ決められた固定領域であっても良く、固定領域に基づいて微調整された領域であっても良い。ここで、領域Ａ３１〜Ａ３３の境界は、たとえば、直線や曲線の数式により定義される。

【0129】

また、ここでは、説明の便宜上、作成したスキャッタグラム上に領域Ａ３１〜Ａ３３が設定され、このスキャッタグラム上の領域Ａ３１〜Ａ３３に含まれる点が、それぞれ、リンパ球、単球および顆粒球に対応する点として区分されたが、スキャッタグラムは、必ずしも図形またはグラフとして作成される必要はなく、領域Ａ３１〜Ａ３３の設定と領域Ａ３１〜Ａ３３に含まれる点の区分は、データ処理によって行われるようにしても良い。

【0130】

以上、本解析例によれば、染色剤や溶血剤等の試薬を用いることなく、白血球を、リンパ球、単球および顆粒球（好中球、好酸球、好塩基球）に区分し計数することができる。また、図３（ａ）、（ｂ）に示す構成の光学検出器Ｄを用いることにより、染色剤や溶血剤等の試薬を用いることなく、簡易な工程により、良好に、測定試料に含まれる血球から、白血球を弁別し、白血球を３つの分類に区分し計数することができる。

【0131】

また、本解析例によれば、青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２以下であると、この血球の前方散乱光データはメモリ２９２に記憶されない。これにより、白血球の解析処理に不要な前方散乱光データが記憶されないため、解析処理の負荷軽減を図りながら、効率的に、測定試料に含まれる血球から、白血球を弁別し計数することができる。

【0132】

＜解析例３＞
上記解析例２では、赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳを用いて、測定試料に含まれる血球から白血球を弁別し、白血球を３つの分類に区分する処理について説明した。本解析例では、赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳを用いて測定試料に含まれる血球から、赤血球を弁別する処理と、白血球を弁別し、白血球を３つの分類に区分する処理を、一つの測定試料を用いて同時に行う処理について説明する。なお、本解析例でも、上記解析例１、２と同様、測定試料の調製において、検体容器Ｔから吸引された検体には希釈液のみが混和され、染色剤や溶血剤等の試薬は混和されない。

【0133】

図１２は、本解析例の血球分析装置１による解析処理を示すフローチャートである。図１２に示すフローチャートは、図１１に示す上記解析例２のフローチャートにおいて、Ｓ１４、Ｓ１０１の間にＳ１１１〜Ｓ１１３が追加され、Ｓ２２、Ｓ２０１の替わりにＳ２１１〜Ｓ２１４が追加されている。

【0134】

測定ユニット２のＣＰＵ２９１は、上記解析例１、２と同様にして、Ｓ１１〜Ｓ１４の処理を行う。続いて、ＣＰＵ２９１は、図９のＳ１５と同様、赤散乱光ＲＳの信号が図８（ｄ）に示す閾値Ｖ１以下であるかを判定する（Ｓ１１１）。赤散乱光ＲＳの信号が閾値Ｖ１より大きいと（Ｓ１１１：ＮＯ）、ＣＰＵ２９１は、図９のＳ１６と同様、上記時間差Δｔに基づいて、同一の血球から生じた２種類の前方散乱光データを互いに対応付けて、メモリ２９２に記憶する（Ｓ１１２）。他方、赤散乱光ＲＳの信号が閾値Ｖ１以下であると（Ｓ１１１：ＹＥＳ）、ＣＰＵ２９１は、この場合の血球についての２種類の前方散乱光データを記憶せず、処理をＳ１０４に進める。

【0135】

こうして、所定時間が経過するまで、血球ごとにＳ１１１、Ｓ１１２の処理が繰り返し行われる（Ｓ１１３）。所定の時間が経過すると（Ｓ１１３：ＹＥＳ）、処理がＳ１０１へ進められる。なお、フローセルＤ１への測定試料の供給は継続される。

【0136】

次に、ＣＰＵ２９１は、上記解析例２と同様、青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２以下であるかを判定する（Ｓ１０１）。青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２より大きいと（Ｓ１０１：ＮＯ）、前方散乱光データをメモリ２９２に記憶し（Ｓ１６）、青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２以下であると（Ｓ１０１：ＹＥＳ）、この血球についての２種類の前方散乱光データを記憶しない。所定時間が経過することにより測定が終了すると（Ｓ１７：ＹＥＳ）、ＣＰＵ２９１は、Ｓ１１２においてメモリ２９２に記憶した前方散乱光データと、Ｓ１６においてメモリ２９２に記憶した前方散乱光データとを、情報処理ユニット４に送信する（Ｓ１８）。

【0137】

一方、情報処理ユニット４のＣＰＵ４０１は、測定ユニット２から前方散乱光データを受信すると（Ｓ２１：ＹＥＳ）、Ｓ１１２で取得された前方散乱光データに基づいて、図８（ｄ）に示すようなスキャッタグラムを作成し、表示部４１に表示する（Ｓ２１１）。そして、ＣＰＵ４０１は、Ｓ２１１で作成したスキャッタグラム上に領域Ａ１を設定する（Ｓ２１２）。続いて、ＣＰＵ４０１は、Ｓ１６で取得された前方散乱光データに基づいて、図１０（ａ）〜（ｃ）に示すようなスキャッタグラムを作成し、表示部４１に表示する（Ｓ２１３）。そして、ＣＰＵ４０１は、Ｓ２１３で作成したスキャッタグラム上に領域Ａ３１〜Ａ３３（領域Ａ３）を設定する（Ｓ２１４）。

【0138】

次に、ＣＰＵ４０１は、Ｓ２１１で作成したスキャッタグラムとＳ２１２で設定した領域Ａ１に基づいて、上記解析例１と同様にして、赤血球の解析処理を行い、Ｓ２１３で作成したスキャッタグラムとＳ２１４で設定した領域Ａ３１〜Ａ３３に基づいて、上記解析例２と同様にして、白血球の解析処理を行う（Ｓ２４）。そして、ＣＰＵ４０１は、解析結果を表示部４１に表示する（Ｓ２５）。

【0139】

以上、本解析例によれば、染色剤や溶血剤等の試薬を用いることなく、測定試料に含まれる血球から、赤血球を弁別することができ、且つ、白血球を弁別し、白血球を、リンパ球、単球および顆粒球（好中球、好酸球、好塩基球）に区分し計数することができる。

【0140】

また、本解析例によれば、１回の測定工程において、白血球の弁別に必要な前方散乱光データと、赤血球の弁別に必要な前方散乱光データの両方を取得することができる。これにより、同一の測定試料を用いて、白血球の弁別と、白血球以外の他の血球（赤血球）の弁別とを行うことができるため、白血球の弁別と、白血球以外の他の血球の弁別とを行うために、個別に測定試料の調製を行う必要がなくなる。

【0141】

＜変更例＞
以上、本発明の実施の形態および解析例について説明したが、本発明の実施形態はこれらに限定されるものではない。

【0142】

たとえば、上記解析例１では、図８（ｄ）に示すスキャッタグラム上に領域Ａ１を設定することにより、血球が、赤血球とその他の血球に分類されたが、さらに、このスキャッタグラム上に領域Ａ２、Ａ３を設定することにより、それぞれ、血小板と白血球を分類しても良い。さらに、このスキャッタグラム上に、図１０（ａ）〜（ｃ）に示す領域Ａ３１〜Ａ３３を設定することにより、白血球（リンパ球、単球および顆粒球）が３つに分類されるようにしても良い。

【0143】

また、測定に用いる光学系も、図３（ａ）、（ｂ）に記載された構成に限らず、異なる波長の光をフローセルＤ１に照射でき、各波長の光の散乱光をそれぞれ受光できる構成であれば、他の構成であってもよい。たとえば、図３（ａ）、（ｂ）の光学系では、一つにフォトダイオード２０５に２つの受光面２０５ａ、２０５ｂが配置されたが、前方散乱光受光光学系Ｄ４に青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳの光路を分離させる手段を配置し、光路が
分離された青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳをそれぞれ個別に受光する２つのフォトダイオードが配置されても良い。

【0144】

また、フローセルＤ１に照射される２つの光の波長も上記に記載された波長に限られず、ヘモグロビンの吸収係数がそれぞれ異なるように波長を適宜選択してもよい。たとえば、青レーザ光ＢＬと同様に赤血球の吸収度合いの高い黄レーザ光（出射波長５５０〜６００ｎｍ）を青レーザ光ＢＬに替えて用いてもよい。さらに、散乱光の特性が血球毎に異なるのであれば、他の波長が用いられても良い。ただし、青レーザ光ＢＬの波長を上記実施の形態に示された波長に設定することにより、上記のように、各血球の分布をより明確に区分し、各血球を計数することができる。

【0145】

また、解析例１では、赤散乱光ＲＳの強度に対してのみ閾値Ｖ１が設定され、前方散乱光データの取得が制限されたが、さらに青散乱光ＢＳの強度に対しても閾値を設定して前方散乱光データの取得が制限されても良い。また、解析例２では、青散乱光ＢＳの強度に対してのみ閾値Ｖ２が設定され、前方散乱光データの取得が制限されたが、さらに赤散乱光ＲＳの強度に対しても閾値を設定して前方散乱光データの取得が制限されても良い。

【0146】

また、上記解析例１〜３では、表示部４１にスキャッタグラムが表示されたが、スキャッタグラムは必ずしも表示されなくても良い。ただし、スキャッタグラムが表示された方が、各血球の分離具合を視覚により確認できるため、解析結果の評価を円滑に行うことができる。

【0147】

また、上記実施の形態では、第１試薬と第２試薬が混和されない測定試料だけでなく、これら試薬が混和された測定試料に対しても測定可能なように、血球分析装置１が構成された。しかしながら、血球分析装置１は、必ずしも、第１試薬と第２試薬が混和された測定試料を処理するための構成を備えずとも良く、たとえば、上記解析例１〜３に従って、第１試薬と第２試薬が混和されない測定試料のみを測定可能なように、血球分析装置１が構成されても良い。この場合、図２に示す測定ユニット２から、第１試薬を収容する容器２５１と、第２試薬を収容する容器２５２が省略される。また、図３（ａ）に示す光学検出器Ｄから、蛍光受光光学系Ｄ６が省略され、ダイクロイックミラーＤ５２が全反射ミラーに変更される。こうすると、血球分析装置１の構成を簡素にすることができる。また、容器２５１、２５２が省略されるため、試料調製部２５に容器２５１、２５２を接続する手間が省略されると共に、コストの削減を図ることができる。

【0148】

この他、本発明の実施の形態は、特許請求の範囲に示された技術的思想の範囲内において、適宜、種々の変更が可能である。

【符号の説明】

【0149】

１ … 血球分析装置
２ … 測定ユニット
４ … 情報処理ユニット
４１ … 表示部
２６ … 検出部
Ｄ … 光学検出器
Ｄ１ … フローセル
Ｄ１５ … 流路
１０１、１０３ … 半導体レーザ
２０５ … フォトダイオード
２０５ａ、２０５ｂ … 受光面

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図9】

【図11】

【図12】

【図8】

【図10】