特許 6076832 メントール誘導体、並びにこれを用いた冷感剤、ＴＲＰＭ８活性化剤、冷感付与方法及びＴＲＰＭ８活性化方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6076832

(24)【登録日】2017年1月20日

(45)【発行日】2017年2月8日

(54)【発明の名称】メントール誘導体、並びにこれを用いた冷感剤、ＴＲＰＭ８活性化剤、冷感付与方法及びＴＲＰＭ８活性化方法

(51)【国際特許分類】

   C07C 43/23 20060101AFI20170130BHJP

   A61K 8/34 20060101ALI20170130BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20170130BHJP

   A61Q 11/00 20060101ALI20170130BHJP

   A61K 47/10 20060101ALI20170130BHJP

   C09K 3/00 20060101ALI20170130BHJP

【ＦＩ】

   C07C43/23 CCSP

   A61K8/34

   A61Q19/00

   A61Q11/00

   A61K47/10

   C09K3/00 B

【請求項の数】5

【全頁数】13

(21)【出願番号】特願2013-109587(P2013-109587)

(22)【出願日】2013年5月24日

(65)【公開番号】特開2014-227390(P2014-227390A)

(43)【公開日】2014年12月8日

【審査請求日】2016年3月16日

(73)【特許権者】

【識別番号】000000918

【氏名又は名称】花王株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】110000084

【氏名又は名称】特許業務法人アルガ特許事務所

(74)【代理人】

【識別番号】100077562

【弁理士】

【氏名又は名称】高野 登志雄

(74)【代理人】

【識別番号】100096736

【弁理士】

【氏名又は名称】中嶋 俊夫

(74)【代理人】

【識別番号】100117156

【弁理士】

【氏名又は名称】村田 正樹

(74)【代理人】

【識別番号】100111028

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 博人

(72)【発明者】

【氏名】白井 智大

(72)【発明者】

【氏名】組橋 堅太郎

【審査官】 小川 由美

(56)【参考文献】

【文献】 特開平０２−２９０８２７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０４−２６７８７０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００７−２６１９９３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２０１３−１３６７３３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 Zanarotti, Antonio，Synthesis and reactivity of lignin model quinone methides. Biomimetic synthesis of 8.0.4' neolignan，Journal of Chemical Research, Synopses，１９８３年，(12)，306-7

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｃ，Ａ６１Ｋ，Ｃ０９Ｋ３

ＣＡｐｌｕｓ（ＳＴＮ）

ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記式（１）

【化1】

〔式（１）中、Ｒ¹は、水素原子、ヒドロキシ基又は炭素数１〜３のアルコキシ基を示し、Ｒ²は、水素原子又はヒドロキシ基を示し、Ｒ³は、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数２〜６のアルケニル基又は炭素数１〜３のアルコキシ基を示し、Ｒ⁴は、水素原子又は炭素数１〜３のアルコキシ基を示す。〕
で表される化合物。

【請求項2】

請求項１に記載の化合物を有効成分とする冷感剤。

【請求項3】

請求項１に記載の化合物を有効成分とするＴＲＰＭ８活性化剤。

【請求項4】

請求項１に記載の化合物を用いる非治療的な冷感付与方法。

【請求項5】

請求項１に記載の化合物を用いる非治療的なＴＲＰＭ８活性化方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、メントール誘導体、並びにこれを用いた冷感剤、ＴＲＰＭ８活性化剤、冷感付与方法及びＴＲＰＭ８活性化方法に関する。

【背景技術】

【0002】

使用中や使用後における清涼感を付与することを目的として、化粧品、ヘアケア製品、トイレタリー製品、入浴剤、医薬品等の各種製品に、冷感物質がしばしば配合されており、斯様な冷感物質として、メントールが広く用いられている。
メントールによる冷感付与は、皮膚や粘膜組織中に存在する知覚神経終末にメントールが直接作用することにより生じると考えられており、この冷感付与に関するメカニズムの検討が進められてきた。

【0003】

まず、ラットの感覚神経のうち、弱い冷却刺激に応答して内向きのイオン電流を生じるニューロンが、メントールに対しても同様の応答性を示すことが発見された（非特許文献１）。この発見により、メントールの刺激による冷感が内向きのカルシウム電流により引き起こされるものであることが明らかとなった。

【0004】

そして、メントール及び冷刺激に応答性を示す受容体として、三叉神経ニューロンからＣＭＲ−１（ｃｏｌｄ ａｎｄ ｍｅｎｔｈｏｌ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）が同定された（非特許文献２）。この受容体はＴＲＰＭ８と呼ばれており（非特許文献３）、ＴＲＰイオンチャネルファミリーに属する興奮性のイオンチャネルであるこの受容体が、前述のカルシウム電流を引き起こすと考えられる。

【0005】

これらの報告によって、感覚神経に存在するＴＲＰＭ８にメントールが結合して内向き電流が発生することにより、メントールによる冷感が生じることが明らかとなっている。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0006】

【非特許文献1】ＲＥＩＤ，Ｇ．＆ＦＬＯＮＴＡ，Ｍ．Ｌ．（２００２），Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．，３２４，ｐ１６４−１６８

【非特許文献2】ＭＣＫＥＭＹ，Ｄ．Ｄ．，ＮＥＵＨＡＵＳＳＥＲ，Ｗ．Ｍ．＆ＪＵＬＩＵＳ，Ｄ．（２００２），Ｎａｔｕｒｅ，４１６，ｐ５２−５６

【非特許文献3】ＰＥＩＥＲ，Ａ．Ｍ．，ＭＯＱＲＩＣＨ，Ａ．，ＨＥＲＧＡＲＤＥＮ，Ａ．Ｃ．，ＲＥＥＶＥ，Ａ．Ｊ．，ＡＮＤＥＲＳＳＯＮ，Ｄ．Ａ．，ＳＴＯＲＹ，Ｇ．Ｍ．，ＥＡＲＬＥＹ，Ｔ．Ｊ．，ＤＲＡＧＯＮＩ，Ｉ．，ＭＣＩＮＴＹＲＥ，Ｐ．，ＢＥＶＡＮ，Ｓ．＆ＰＡＴＡＰＯＵＴＩＡＮ，Ａ．（２００２），Ｃｅｌｌ，１０８，ｐ７０５−７１５

【非特許文献4】ＢＥＨＲＥＮＤＴ，Ｈ．−Ｊ．，ＧＥＲＭＡＮＮ，Ｔ．，ＧＩＬＬＥＮ，Ｃ．，ＨＡＴＴ，Ｈ．＆ＪＯＳＴＯＣＫ，Ｒ．（２００４），Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１４１，ｐ７３７−７４５

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

しかしながら、メントールは、多量に使用した場合に、皮膚や粘膜への刺激や特有の不快な刺激臭等が問題となるため、使用量が制限されることがある。
また、メントールの他に、リナロール、ゲラニオール、ヒドロキシシトロネラール等もＴＲＰＭ８を活性化することが知られているが（非特許文献４）、近年では強い清涼感やその持続性が要求される傾向があり、これらによるＴＲＰＭ８活性化作用では斯かる要求を充分には満足できない。

【0008】

したがって、本発明は、強い冷感を付与することができる新規化合物、並びにこれを用いた冷感剤、ＴＲＰＭ８活性化剤、冷感付与方法及びＴＲＰＭ８活性化方法に関する。

【課題を解決するための手段】

【0009】

本発明者らは、８，４'−オキシネオリグナン類似構造を有する特定の新規メントール誘導体が、優れたＴＲＰＭ８活性化作用を有し強い冷感を付与できることを見出し、本発明を完成した。

【0010】

すなわち、本発明は、下記式（１）

【0011】

【化1】

【0012】

〔式（１）中、Ｒ¹は、水素原子、ヒドロキシ基又は炭素数１〜３のアルコキシ基を示し、Ｒ²は、水素原子又はヒドロキシ基を示し、Ｒ³は、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数２〜６のアルケニル基又は炭素数１〜３のアルコキシ基を示し、Ｒ⁴は、水素原子又は炭素数１〜３のアルコキシ基を示す。〕
で表される化合物（以下、化合物（１）とも称する）を提供するものである。

【0013】

また、本発明は、化合物（１）を有効成分とする冷感剤を提供するものである。
更に、本発明は、化合物（１）を有効成分とするＴＲＰＭ８活性化剤を提供するものである。
更に、本発明は、化合物（１）を用いる非治療的な冷感付与方法を提供するものである。
更に、本発明は、化合物（１）を用いる非治療的なＴＲＰＭ８活性化方法を提供するものである。

【発明の効果】

【0014】

本発明の化合物は、優れたＴＲＰＭ８活性化作用を有し強い冷感を付与することができる。

【発明を実施するための形態】

【0015】

本発明の化合物は、下記式（１）

【0016】

【化2】

【0017】

〔式（１）中、Ｒ¹は、水素原子、ヒドロキシ基又は炭素数１〜３のアルコキシ基を示し、Ｒ²は、水素原子又はヒドロキシ基を示し、Ｒ³は、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数２〜６のアルケニル基又は炭素数１〜３のアルコキシ基を示し、Ｒ⁴は、水素原子又は炭素数１〜３のアルコキシ基を示す。〕
で表されるものである。斯かる化合物は新規化合物である。
式（１）中、Ｒ¹は、水素原子、ヒドロキシ基又は炭素数１〜３のアルコキシ基を示すが、水素原子、炭素数１〜３のアルコキシ基が好ましく、より好ましくは水素原子である。上記アルコキシ基は直鎖状でも分枝状でもよく、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基が挙げられる。
Ｒ²は、水素原子又はヒドロキシ基を示すが、水素原子が好ましい。

【0018】

Ｒ³は、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数２〜６のアルケニル基又は炭素数１〜３のアルコキシ基を示すが、水素原子、炭素数２〜６のアルケニル基が好ましく、ＴＲＰＭ８活性化作用の観点から、炭素数２〜６のアルケニル基がより好ましい。
また、上記アルキル基の炭素数は、好ましくは１〜３である。一方、アルケニル基の炭素数は、好ましくは２〜４であり、より好ましくは２又は３であり、更に好ましくは３である。

【0019】

また、上記Ｒ³で示されるアルキル基、アルケニル基、アルコキシ基は直鎖状でも分枝状でもよく、アルキル基としては例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ネオペンチル基、ｎ−ヘキシル基等が挙げられる。
また、上記アルケニル基としては例えば、ビニル基、１−プロペニル基、２−プロペニル基、イソプロペニル基、１−ブテニル基、２−ブテニル基、３−メチル−１−ブテニル基、１−ペンテニル基、１−ヘキセニル基等が挙げられる。斯様なアルケニル基の中でも、ＴＲＰＭ８活性化作用の観点から、末端二重結合を有するアルケニル基が好ましい。
また、上記アルコキシ基としては例えば、Ｒ¹で示されるアルコキシ基として例示したものが挙げられる。

【0020】

Ｒ⁴は、水素原子又は炭素数１〜３のアルコキシ基を示すが、ＴＲＰＭ８活性化作用の観点から、炭素数１〜３のアルコキシ基が好ましい。斯かるアルコキシ基としては、Ｒ¹で示されるものと同様のものが挙げられ、メトキシ基が好ましい。

【0021】

また、式（１）の構造から明らかなように、化合物（１）は少なくとも５つの不斉炭素原子を有し、斯かる不斉炭素原子に由来して、化合物（１）には３２種の立体異性体が存在する。化合物（１）は、これら立体異性体のいずれでもよく、これら異性体の混合物であってもよいが、ＴＲＰＭ８活性化作用の観点から、メントールに由来する構造がｌ−メントールに由来するもの又はｄ−メントールに由来するものであるのが好ましい。なお、上記ｌ−メントールに由来する構造をもつ化合物は、下記式（１−１）で表され、上記ｄ−メントールに由来する構造をもつ化合物は、下記式（１−２）で表される。

【0022】

【化3】

【0023】

（式中、各記号は前記と同義である。）

【0024】

次に、化合物（１）の合成方法について説明する。
化合物（１）は、Ｋ．Ｋｏｎｙａ，Ｚｓ．Ｖａｌｇａ＆Ｓ．Ａｎｔｕｓ，Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００１，８（６），４５４−４５９に記載の方法等の常法を適宜組み合わせれば合成できる。また、Ａ．Ｉｓｏｇａｉ，Ｓ．Ｍｕｒａｋｏｓｈｉ，Ａ．Ｓｕｚｕｋｉ＆Ｓ．Ｔａｍｕｒａ，Ａｇｒ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９７３，３７（４），８８９−８９５などに記載の方法に準じ、天然物から単離、或いは単離したネオリグナン類の７位炭素に結合している基−ＯＨに、メントールを常法に従って付加することによっても調製できる。
斯様な方法として、例えば、以下の合成方法が挙げられる。なお、斯かる方法においては、後述する工程（ｉ）〜（vi）に、保護反応や脱保護反応、光学分割を必要に応じて適宜組み合わせて行ってもよい。

【0025】

【化4】

【0026】

（式中、各記号は前記と同義である。）

【0027】

工程（ｉ）は、原料化合物（ａ）とグリニャール試薬（ｂ）を反応させ、中間体（ｃ）を得る工程である。
原料化合物（ａ）としては、バニリン、５−ヒドロキシバニリン、シリンガアルデヒド等が挙げられる。
また、グリニャール試薬（ｂ）としては、エチルマグネシウムブロマイド等が挙げられる。

【0028】

工程（ii）は、酸化剤を用いて、中間体（ｃ）の基−ＯＨを基＝Ｏに変換し、中間体（ｄ）を得る工程である。酸化剤としては、二酸化マンガン等が挙げられる。
工程（iii）は、中間体（ｄ）をα臭素化し、中間体（ｅ）を得る工程である。

【0029】

工程（iv）は、中間体（ｅ）と化合物（ｆ）を塩基存在下で反応させ、中間体（ｇ）を得る工程である。
化合物（ｆ）としては、例えば、６−メトキシオイゲノール、４−（１−プロペニル）シリンゴール、オイゲノール、イソオイゲノール等が挙げられる。
また、塩基としては、炭酸カリウム等が挙げられる。

【0030】

工程（ｖ）は、中間体（ｇ）の７位炭素に結合している基＝Ｏを、基−ＯＨに変換し、中間体（ｈ）を得る工程である。
なお、本反応を水素化アルミニウムリチウム等の強い還元剤存在下で行えば、中間体（ｈ）のエリトロ体が得られ、一方、水素化ホウ素ナトリウム等の弱い還元剤とクラウンエーテルの存在下で行えば、中間体（ｈ）のトレオ体が得られる。

【0031】

工程（vi）は、ｌ−メントールやｄ−メントール等のメントールを用いて、中間体（ｈ）の７位炭素に結合している基−ＯＨにメントールを付加し、化合物（１）を得る工程である。なお、本反応は、必要に応じて塩酸等の強酸存在下で行ってもよい。

【0032】

なお、前記各工程において、各反応生成物の単離は、必要に応じて、ろ過、洗浄、乾燥、再結晶、再沈殿、遠心分離、各種溶媒による抽出、中和、クロマトグラフィー等の通常の手段を適宜組み合わせて行えばよい。

【0033】

前記のようにして得られる化合物（１）は、後記実施例に示すように、優れたＴＲＰＭ８活性化作用を有し強い冷感を付与することができる。また冷感持続性にも優れる。
したがって、化合物（１）は、冷感剤及びＴＲＰＭ８活性化剤（以下、冷感剤等とも称する）としてそのまま用いることができ、また、冷感剤等を製造するための素材として使用することができる。なお、上記冷感剤等は仮にメントールを含んでいなくても上記効果を得ることが可能である。

【0034】

次に、本発明の冷感剤及びＴＲＰＭ８活性化剤について説明する。
本発明の冷感剤等は、前記化合物（１）を有効成分とするものである。

【0035】

前記冷感剤等は、ヒト又は動物用の医薬品、化粧料、飲食品、口腔用組成物、ペットフード、他の嗜好品（タバコ等）等として使用できる。

【0036】

前記冷感剤等を医薬品として使用する場合、任意の投与形態で投与され得る。投与形態は、経粘膜、経皮等の非経口投与と経口投与とに大別される。
また、前記医薬品の剤型は特に限定されない。非経口投与用の医薬品の剤型としては、例えば、液剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤、パップ剤、エアゾール剤、ローション剤、ファンデーション等の皮膚外用剤の他、点眼剤、点鼻剤等が挙げられる。
一方、経口投与用の医薬品の剤型としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、粉剤、丸剤、糖衣錠、内服液、懸濁液、シロップ剤等が挙げられる。
また、前記医薬品は、消炎鎮痛剤、殺菌消毒剤、収斂剤、抗生物質等の他の薬効成分を１種又は２種以上含んでいてもよい。

【0037】

また、前記冷感剤等を化粧料として使用する場合、その形態は特に限定されない。例えば、皮膚外用剤（虫除けスプレー等）、洗浄剤、化粧水、乳液、スキンクリーム、ファンデーション、口紅、頭皮用化粧料、毛髪化粧料（シャンプー、ヘアトニック等）、入浴剤等とすることができる。
また、前記化粧料は、化合物（１）の他に、油剤、セラミド類、擬似セラミド類、ステロール類、保湿剤、抗酸化剤、紫外線吸収剤、美白剤、アルコール類、キレート剤、ｐＨ調整剤、防腐剤等を１種又は２種以上含んでいてもよい。

【0038】

また、前記冷感剤等を飲食品として使用する場合、その形態は特に限定されない。例えば、キャンディ、ガム、タブレット、カプセル、飲料水等が挙げられる。

【0039】

また、前記冷感剤等を口腔用組成物として使用する場合、その形態は特に限定されず、例えば、歯磨剤、洗口液、歯肉マッサージクリーム等が挙げられる。

【0040】

また、前記冷感剤等に含まれる化合物（１）の含有量は特に限定されないが、経口投与のための医薬品、飲食品、口腔用組成物又はペットフードである場合、ＴＲＰＭ８活性化作用の観点から、下限として、０．１ｐｐｍ以上が好ましく、１ｐｐｍ以上がより好ましく、１０ｐｐｍ以上が更に好ましく、５０ｐｐｍ以上が更に好ましい。一方、その上限としては、下限と同様の観点から、１００００ｐｐｍ以下が好ましく、１０００ｐｐｍ以下が更に好ましく、７５０ｐｐｍ以下が更に好ましい。具体的には、ＴＲＰＭ８活性化作用の観点から、０．１ｐｐｍ以上が好ましく、１〜１００００ｐｐｍがより好ましく、１０〜１０００ｐｐｍが更に好ましく、５０〜７５０ｐｐｍが特に好ましい。
一方、非経口投与のための医薬品、化粧料又は他の嗜好品である場合は、ＴＲＰＭ８活性化作用の観点から、下限として、０．００１質量％以上が好ましく、０．０１質量％以上がより好ましい。一方、その上限としては、下限と同様の観点から、１０質量％以下が好ましい。具体的には、ＴＲＰＭ８活性化作用の観点から、０．００１質量％以上が好ましく、０．０１〜１０質量％がより好ましい。
なお、前記冷感剤等の投与又は摂取対象者としては、それを必要としている者であれば特に限定されない。

【0041】

次に、本発明の冷感付与方法、ＴＲＰＭ８活性化方法について説明する。
本発明の冷感付与方法、ＴＲＰＭ８活性化方法は、前記化合物（１）を用いるものである。
また、斯かる冷感付与、ＴＲＰＭ８活性化方法の態様としては、化合物（１）の塗布・服用等が挙げられる。また、前記化合物（１）を用いるに際し、該化合物（１）として前記冷感剤等を用いてもよい。

【0042】

また、これら方法は、ヒト若しくは非ヒト動物、又はそれらに由来する検体における使用であり得、また治療的な使用であっても非治療的な使用であってもよい。ここで、「非治療的」とは、医療行為を含まない概念、すなわち人間を手術、治療又は診断する方法を含まない概念、より具体的には、医師又は医師の指示を受けた者が人間に対して手術、治療又は診断を実施する方法を含まない概念である。斯様な非治療的使用としては、エステティシャンによる施術が挙げられる。

【0043】

上述した実施形態に関し、本発明は更に以下の化合物等を開示する。

【0044】

＜１＞上記式（１）で表される化合物。

【0045】

＜２＞上記式（１）で表される化合物を有効成分とする冷感剤。
＜３＞上記式（１）で表される化合物を有効成分とするＴＲＰＭ８活性化剤。
＜４＞上記式（１）で表される化合物を用いる冷感付与方法。
＜５＞上記式（１）で表される化合物を投与又は摂取する冷感付与方法。
＜６＞上記式（１）で表される化合物を用いるＴＲＰＭ８活性化方法。
＜７＞上記式（１）で表される化合物を投与又は摂取するＴＲＰＭ８活性化方法。
＜８＞非治療的な方法である＜４＞〜＜７＞のいずれか１に記載の方法。
＜９＞冷感剤を製造するための、上記式（１）で表される化合物の使用。
＜１０＞ＴＲＰＭ８活性化剤を製造するための、上記式（１）で表される化合物の使用。
＜１１＞冷感付与に使用するための、上記式（１）で表される化合物。
＜１２＞ＴＲＰＭ８活性化に使用するための、上記式（１）で表される化合物。
＜１３＞前記＜１＞〜＜１２＞において、Ｒ¹は、好ましくは水素原子、炭素数１〜３のアルコキシ基であり、より好ましくは水素原子である。
＜１４＞前記＜１＞〜＜１２＞において、Ｒ²は、好ましくは水素原子である。
＜１５＞前記＜１＞〜＜１２＞において、Ｒ³は、好ましくは水素原子、炭素数２〜６のアルケニル基、より好ましくは炭素数２〜６のアルケニル基であり、更に好ましくは末端二重結合を有する炭素数２〜６のアルケニル基である。
＜１６＞前記＜１＞〜＜１２＞において、Ｒ⁴は、好ましくは炭素数１〜３のアルコキシ基であり、より好ましくはメトキシ基である。

【実施例】

【0046】

後述する実施例で得られた化合物の分析条件は以下の通りである。

【0047】

＜ＮＭＲスペクトル＞
¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、ＣＨＣｌ₃（７．２４）を内部標準物質として用いて、Ｂｒｕｋｅｒ社製Ａｖａｎｃｅ−６００により測定した。
¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトルは、ＣＨＣｌ₃（７７．０）を内部標準物質として用いて、Ｂｒｕｋｅｒ社製Ａｖａｎｃｅ−６００により測定した。

【0048】

単離例
下記の単離スキームに従い、下記式で表されるエリトロ−Δ８'−４，７−ジヒドロキシ−３，３'，５'−トリメトキシ−８−Ｏ−４'−ネオリグナン（以下、エリトロ体（１）とも称する）をニクズクより単離した。

【0049】

【化5】

【0050】

ニクズク（Ｍｙｒｉｓｔｉｃａ ｆｒａｇｒａｎｓ Ｈｏｕｔｔ．）の種子４００ｇに、５０ｖｏｌ％エタノール水溶液を４Ｌ添加し、室温で２日間浸漬して抽出した後、濾過して粗抽出液を得た。これを減圧濃縮後、エタノール２Ｌを添加し、不溶物を濾過した。濾液を減圧濃縮後、水と酢酸エチルを各２Ｌ添加して分液を行い、酢酸エチル層を減圧乾燥して固形分１３．１５ｇを得た。このうち５．００ｇをシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、エリトロ体（１）を含む画分１．１０ｇを得た。これを更に逆相ＨＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ−３）によって精製し、エリトロ体（１）を得た。

【0051】

実施例１
単離例１で得られたエリトロ体（１）（１１．０ｍｇ）を６０℃で融解したｌ−メントール（１９０ｍｇ）に溶解後、濃塩酸（２μＬ）を添加して６０℃で３時間反応させた。冷却後、酢酸エチルと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチル層を減圧濃縮後、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、Δ８'−７−（ｌ−メントキシ）−４−ヒドロキシ−３，３'，５'−トリメトキシ−８−Ｏ−４'−ネオリグナン（以下、混合物（２）とも称する）（８．９ｍｇ）を、ジアステレオマー比３６：２６：２６：１２で得た。

【0052】

実施例２
実施例１と同様にして、エリトロ体（１）（１３．５ｍｇ）を６０℃で融解したｄ−メントール（１３４ｍｇ）に溶解後、濃塩酸（２μＬ）を添加して６０℃で３時間反応させた。冷却後、酢酸エチルと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチル層を減圧濃縮後、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、Δ８'−７−（ｄ−メントキシ）−４−ヒドロキシ−３，３'，５'−トリメトキシ−８−Ｏ−４'−ネオリグナン（以下、混合物（３）とも称する）（９．５ｍｇ）を、ジアステレオマー比３６：２６：２６：１２で得た。

【0053】

得られた混合物（２）および（３）のＮＭＲスペクトルと化学構造を以下に示す。なお、混合物（２）および（３）は互いにエナンチオマーの関係にあるため、ＮＭＲスペクトルは一致する。

【0054】

¹HNMR (600 MHz, CDCl₃) δ 7.19 (d, J = 1.7 Hz, 0.12H), 7.06 (dd, J = 8.1, 1.7 Hz, 0.12H), 6.95 (m, 0.26H), 6.92 (d, J = 1.6 Hz, 0.26H), 6.88-6.76 (m, 2.24H), 6.38 (s, 0.24H), 6.36 (s, 0.52H), 6.26 (s, 0.72H), 5.98-5.86 (m, 1H), 5.58-5.44 (br, 1H), 5.11-5.01 (m, 2H), 4.71 (d, J = 5.8 Hz, 0.26H), 4.69 (d, J = 3.8 Hz, 0.12H), 4.60 (d, J = 4.2 Hz, 0.26H), 4.47 (d, J = 6.4 Hz, 0.36H), 4.37 (m, 0.26H), 4.35 (m, 0.12H), 4.31 (m, 0.36H), 4.22 (m, 0.26H), 3.88 (s, 0.36H), 3.86 (s, 0.78H), 3.84 (s, 0.78H), 3.80 (s, 1.08H), 3.78 (s, 1.56H), 3.76 (s, 0.72H), 3.71 (s, 1.56H), 3.66 (s, 2.16H), 3.45 (td, J = 10.5, 4.1 Hz, 0.26H), 3.33-3.24 (m, 2H), 3.16 (td, J = 10.5, 4.1 Hz, 0.12H), 2.98 (td, J = 10.5, 4.1 Hz, 0.36H), 2.91 (td, J = 10.5, 4.1 Hz, 0.26H), 2.60-2.51 (m, 0.26H), 2.30-2.18 (m, 1.1.36H), 2.12-2.07 (m, 0.26H), 1.86 (m, 0.12H), 1.70-1.46 (m, 2H), 1.33 (d, J = 6.3 Hz, 1.08H), 1.32-0.67 (m, 14.06), 0.46 (d, J = 6.9 Hz, 0.78H), 0.31 (d, J = 7.0 Hz, 1.08H);
¹³CNMR (150 MHz, CDCl₃) δ 153.5, 153.4, 153.2, 153.1, 146.1, 145.9, 145.8, 145.6, 144.8, 144.7, 144.3 (2C), 137.5, 137.4 (2C), 137.3, 135.7, 135.2, 134.9 (2C), 134.8, 134.7 (2C), 134.6 (2C), 132.8, 132.7, 131.6, 121.9, 121.5, 120.6, 120.3, 115.9, 115.8 (2C), 115.7, 113.4, 113.2, 113.1 (2C), 110.7, 110.5, 110.4, 110.0, 105.8, 105.6, 105.5 (2C), 83.2, 82.9, 81.4(2C), 80.9, 80.8, 80.3, 80.0, 79.8, 79.6, 74.6 (2C), 56.1, 55.9 (2C), 55.8 (4C), 55.7, 49.3, 48.8, 48.4, 42.2, 41.9, 40.5 (3C), 40.4, 39.9, 39.5, 34.6 (3C), 34.5, 31.6 (2C), 31.4, 31.2, 25.2, 25.1, 24.9, 24.8, 22.9 (2C), 22.8, 22.7, 22.5 (2C), 22.4, 22.3, 21.5, 21.4, 21.3 (2C), 16.5, 16.4, 15.9 (2C), 14.9, 14.8.

【0055】

【化6】

【0056】

試験例１ ＴＲＰＭ８活性化作用確認試験
以下の手順に従い、試験サンプルのＴＲＰＭ８活性化作用におけるＥＣ₅₀値を測定した。
（１）ヒトＴＲＰＭ８安定発現株の作製
ヒトＴＲＰＭ８安定発現ＨＥＫ２９３細胞株を作製するため、ヒトＴＲＰＭ８遺伝子のクローニングを行った。全長ヒトＴＲＰＭ８遺伝子は、ヒト前立腺組織全ＲＮＡ（ＣＯＳＭＯＢＩＯ社製）より、ＲＴ−ＰＣＲ法を用いて増幅した。
得られたＰＣＲ産物をエントリーベクターｐＥＮＴＲ−Ｄ／ＴＯＰＯ（インビトロジェン社製）へクローニングした後、ｐＣＤＮＡ３．２−Ｖ５／ＤＥＳＴ（インビトロジェン社製）へサブクローニングし、リポフェクトアミン２０００（インビトロジェン社製）によりＨＥＫ２９３細胞へ形質導入した。形質導入された細胞を、４５０μｇ／ｍＬのＧ−４１８（プロメガ社）を含有するＤＭＥＭ培地中で増殖させて選抜した。ＨＥＫ２９３細胞は内在性のＴＲＰＭ８を発現しないため、ＴＲＰＭ８形質導入株に対するコントロールとして使用できる。

【0057】

（２）カルシウムイメージング
ＨＥＫ２９３細胞へ形質導入したＴＲＰＭ８活性の測定は、蛍光カルシウムイメージング法により行った。
まず、培養したＴＲＰＭ８発現細胞をポリ−Ｄ−リジンコートされた９６ウェルプレート（ＢＤファルコン社製）へ播種（３０，０００細胞／ウェル）し、３７℃で一晩インキュベートした後、培養液を除去し、Ｆｌｕｏ４−ＡＭ液（同仁化学社製；カルシウムキットＩＩ）を添加し、３７℃で３０〜６０分間インキュベートした。その後、９６ウェル穴プレートを蛍光プレートリーダー（ＦＤＳＳ３０００；浜松ホトニクス社製）にセットし、装置庫内温度を３２℃とした状態で、励起波長４８０ｎｍで励起したときのＦｌｕｏ４による蛍光イメージを、ＣＣＤカメラを用いて検出波長５２０ｎｍにより捕捉した。
測定は１秒毎に計４分間行い、測定開始１５秒後に、ＦＤＳＳ３０００内蔵の分注器から試験サンプル（下記表１に示す各化合物を１０ｍＭ濃度でそれぞれエタノールに溶解したストック液を作成し、さらにハンクスリンガー液に終濃度の３倍の濃度で溶解させたもの）を添加し、蛍光強度の変化によりＴＲＰＭ８の活性を評価した。

【0058】

（３）ＴＲＰＭ８活性化の評価
ＴＲＰＭ８活性は、試験サンプル添加後の蛍光強度比の最大値を用いて評価した。下記の式を用いて蛍光強度比を算出した。
蛍光強度比＝各時点の蛍光強度／測定開始時蛍光強度
各処理群あたり２ウェルで評価を行い、その平均値を用いた。

【0059】

（４）ＴＲＰＭ８活性化作用の評価結果
以下の表１に示す各試験サンプルのＴＲＰＭ８活性化作用を、終濃度１ｎＭから１μＭの範囲で上記方法により測定した。測定結果より、最小二乗法を用いてヒルの式に近似した容量依存曲線を求め、これよりＥＣ₅₀値を算出した。各試験サンプルのＴＲＰＭ８活性化作用におけるＥＣ₅₀値は以下の表１に示すとおりであった。

【0060】

【表1】

【0061】

前記表１に示すように、実施例で得られた各化合物は優れたＴＲＰＭ８活性化作用を有する。したがって、これら実施例で得られた各化合物によれば強い冷感を付与することができる。