特許 6109165 ヘルペスウイルスワクチンおよび使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6109165

(24)【登録日】2017年3月17日

(45)【発行日】2017年4月5日

(54)【発明の名称】ヘルペスウイルスワクチンおよび使用方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/245 20060101AFI20170327BHJP

   A61K 39/39 20060101ALI20170327BHJP

   A61P 31/22 20060101ALI20170327BHJP

【ＦＩ】

   A61K39/245ZNA

   A61K39/39ZMD

   A61P31/22

【請求項の数】11

【全頁数】118

(21)【出願番号】特願2014-519232(P2014-519232)

(86)(22)【出願日】2012年7月2日

(65)【公表番号】特表2014-523433(P2014-523433A)

(43)【公表日】2014年9月11日

(86)【国際出願番号】US2012045290

(87)【国際公開番号】WO2013006569

(87)【国際公開日】20130110

【審査請求日】2015年7月1日

(31)【優先権主張番号】61/503,945

(32)【優先日】2011年7月1日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】506115514

【氏名又は名称】ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア

(74)【代理人】

【識別番号】230104019

【弁護士】

【氏名又は名称】大野 聖二

(74)【代理人】

【識別番号】230111590

【弁護士】

【氏名又は名称】金本 恵子

(74)【代理人】

【識別番号】100105991

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 玲子

(74)【代理人】

【識別番号】100119183

【弁理士】

【氏名又は名称】松任谷 優子

(74)【代理人】

【識別番号】100114465

【弁理士】

【氏名又は名称】北野 健

(74)【代理人】

【識別番号】100156915

【弁理士】

【氏名又は名称】伊藤 奈月

(74)【代理人】

【識別番号】100149076

【弁理士】

【氏名又は名称】梅田 慎介

(72)【発明者】

【氏名】スペクター，デボラ，エイチ．

(72)【発明者】

【氏名】モレロ，クリストファー，エス．

(72)【発明者】

【氏名】クライニャク，キンバーリー，エー．

【審査官】 上條 のぶよ

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００２−５２０３７３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００３−５０８４９５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００５−０１５４８７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００２−５２４５３２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００２−５０６０４５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 Journal of Virology，２０１１年 ４月，Vol.85, No.7，p.3461-3472

【文献】 Vaccine，２０１１年 ６月１５日，Vol.29, No.27，p.4453-4459

【文献】 Journal of Infectious Diseases，２００９年，Vol.200, No.7，p.1088-1095

【文献】 New England Journal of Medicine，２００２年，Vol.347, No.21，p.1652-1661

【文献】 Clinical Infectious Diseases，２００５年，Vol.40, No.9，p.1271-1281

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３９／００−４４

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

１又は２以上のヘルペスウイルス（ＨＶ）ワクチンと説明書からなる、このような治療または予防を必要としている患者におけるＨＶ感染の治療または予防における使用のためのキットであって、前記ＨＶワクチンのそれぞれが
（i）不活性化ＨＶ；
（ii）リポ多糖（ＬＰＳ）に由来するアジュバント；および
（iii）アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバント；を含み、 前記ＨＶワクチンのそれぞれが容器中の単位剤型で提供され、
前記リポ多糖に由来するアジュバントが、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）であり；
前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、水酸化アルミニウムアジュバント又はリン酸アルミニウムアジュバントであり；および、
前記使用が、治療有効量または予防的有効量のワクチンを投与することを含み、プライムＨＳＶ ＤＮＡワクチンの投与を含まない、キット。

【請求項2】

前記ＨＶが、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）である、請求項１に記載のキット。

【請求項3】

前記ＨＶが、ＨＳＶ１であるか、または前記ＨＶが、ＨＳＶ２である、請求項１に記載のキット。

【請求項4】

前記ＨＶが、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２である、請求項１に記載のキット。

【請求項5】

さらに、以下の少なくとも１以上を含む、請求項４に記載のキット；
前記不活性化ＨＶが、複製を減少させるＤＮＡ変異を含む；
前記不活性化ＨＶが、化学的不活性化ＨＶである；
前記不活性化ＨＶが、放射線不活性化ＨＶである；
前記不活性化ＨＶが、ＨＶの不活性化単一株である；
前記不活性化ＨＶが、ＨＳＶ１の不活性化単一株、またはＨＳＶ２の不活性化単一株である；
前記不活性化ＨＶが、ＨＶの２種以上の不活性化株の組合せである；
前記不活性化ＨＶが、ＨＳＶ１の２種以上の不活性化株の組合せ、またはＨＳＶ２の２種以上の不活性化株の組合せである；
前記不活性化ＨＶが、ＨＳＶ１の１種または複数の不活性化株およびＨＳＶ２の１種または複数の不活性化株の組合せである；
筋内投与用製剤である；
皮内投与用製剤である；
粘膜投与用製剤である；
鼻腔内投与用製剤である；
直腸内投与用製剤である；
腟内投与用製剤である；
局所投与用製剤である；
経皮膚的投与用製剤である；
皮下投与用製剤である；または
ＨＶ感染に対する前記ワクチンのレシピエントを、１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１１年、１２年、１３年、１４年、１５年、１６年、１７年、１８年、１９年、２０年、またはそれを超える年までワクチン接種する。

【請求項6】

さらに、以下の少なくとも１以上を含む、請求項４に記載のキット；
前記リポ多糖に由来するアジュバントが、リピドＡアジュバントである；
前記リポ多糖に由来するアジュバントが、（Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカノイル部分を有さないリピドＡアジュバントである；
前記リポ多糖に由来するアジュバントが、１−ホスフェート部分を有さないリピドＡアジュバントである；
前記リポ多糖に由来するアジュバントが、３−Ｏ−デスアシル−４’−モノホスホリルリピドＡである；
前記リポ多糖に由来するアジュバントが、合成ＭＰＬ類似体アジュバントである；または
前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、水酸化アルミニウムアジュバントである。

【請求項7】

ヘルペスウイルス（ＨＶ）ワクチンを調製する方法であって、
（ｉ）ＨＶ−細胞混合物と、硫酸化またはスルホン化多糖とを接触させるステップであって、前記ＨＶ−細胞混合物が、ＨＶ粒子、細胞および細胞のポーションを含むステップと、
（ｉｉ）前記ＨＶ粒子を前記細胞から分離し、それによって単離したＨＶ粒子を形成するステップと、
（ｉｉｉ）前記単離したＨＶ粒子を不活性化し、それによって不活性化ＨＶ粒子を形成するステップと、
（ｉｖ）前記不活性化ＨＶ粒子と、リポ多糖に由来するアジュバントおよびアルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントとを合わせ、それによってＨＶワクチンを形成するステップと
を含み、
前記リポ多糖に由来するアジュバントが、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）であり；
前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、水酸化アルミニウムアジュバント又はリン酸アルミニウムアジュバントである方法。

【請求項8】

前記ＨＶはＨＳＶである、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

さらに、以下の少なくとも１以上を含む、請求項８に記載の方法；
前記ＨＳＶが、ＨＳＶ１である；
前記ＨＳＶが、ＨＳＶ２である；
前記ＨＳＶが、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２である；
前記硫酸化またはスルホン化多糖が、デキストラン硫酸、ヘパリン、およびヘパラン硫酸から選択される；
前記ＨＶ粒子を、１０^７から１０^１０（ｐｆｕ／マイクログラムタンパク質）の濃度で単離する；
前記ＨＶワクチンが、１０^７から１０^１０（ｐｆｕ当量／マイクログラムタンパク質）の不活性化ＨＶを含む；
前記分離するステップが、遠心分離、ポリエチレングリコール沈殿、濾過、ゲル濾過、限外濾過、タンジェンシャルフロー限外濾過、またはアフィニティークロマトグラフィーを含む；
前記不活性化するステップが、前記ＨＶと、架橋剤、酸化剤、還元剤、熱、放射線、界面活性剤、ｐＨ変更剤、ならびにフロクマリン、アジリジン、エチレンイミン、バイナリーエチレンイミン、およびβ−プロピオラクトンから選択される化学剤から選択される１種または複数の作用剤とを接触させるステップを含む；
前記不活性化するステップが、前記ＨＶと化学剤とを接触させることを含み、前記化学剤が、アジリジン、エチレンイミン、バイナリーエチレンイミン、またはβ−プロピオラクトンである；
前記不活性化するステップが、前記ＨＶと放射線とを接触させることを含み、前記放射線が、紫外線、電子ビーム線、赤外線、またはγ線である；
前記不活性化するステップが、前記ＨＶと架橋剤とを接触させることを含み、前記架橋剤が、アルデヒド架橋剤、ホルムアルデヒド、またはホルマリンである；
前記不活性化するステップが、前記ＨＶと酸化剤とを接触させることを含み、前記酸化剤が、過ヨウ素酸ナトリウムまたは過酸化水素である；
前記不活性化するステップが、前記ＨＶと還元剤とを接触させることを含み、前記還元剤が、ａｌｄｒｉｔｈｉｏｌ−２である；
前記不活性化するステップが、前記ＨＶと界面活性剤とを接触させることを含み、前記界面活性剤が、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００、ＮＰ−４０、またはＴｗｅｅｎ−２０である；
前記不活性化するステップが、前記ＨＶと、紫外線およびフロクマリンを含む１種または複数の作用剤とを接触させるステップを含む；または
前記不活性化するステップが、前記ＨＶと、紫外線ならびにソラレン、４’−アミノメチル−４，５’，８−トリメチルソラレン、アンゲリシン、キサントトキシン、ベルガプテン、およびノダケネチンから選ばれるフロクマリンを含む１種または複数の作用剤とを接触させるステップを含む。

【請求項10】

前記ＨＶ感染が、ヘルペス性歯肉口内炎、口唇ヘルペス、陰部ヘルペス、ヘルペス性ひょう疽、剣状ヘルペス、ヘルペスウイルス脳炎、ヘルペスウイルス髄膜炎、ヘルペス性食道炎、ヘルペス性角膜炎、ベル麻痺、モラレー髄膜炎、ヘルペスルグベイオルム、疱疹性湿疹、ヘルペス神経痛、およびヘルペス後神経痛から選択される疾患を引き起こす、請求項１に記載のキット。

【請求項11】

以下の少なくとも１以上を含む、請求項１に記載のキット；
ウイルス排出の低減を含む；
病変の出現の頻度の低減を含む；
病変の出現の期間の低減を含む；
筋内投与を含む；
皮内投与を含む；
粘膜投与を含む；
鼻腔内投与を含む；
直腸内投与を含む；
腟内投与を含む；
局所投与を含む；
経皮膚的投与を含む；および
皮下投与を含む。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願への相互参照
本出願は、参照により本明細書中にその全体が全ての目的のために組み込まれている２０１１年７月１日に出願された米国仮特許出願第６１／５０３，９４５号の利益を主張するものである。

【0002】

連邦政府の助成を受けた研究開発の下で行われた発明への権利についての記載
本発明は、米国国立衛生研究所により授与された１Ｒ２１ＡＩ０７３５８５の下での政府支援により行われた。政府は、本発明に一定の権利を有する。

【0003】

コンパクトディスクで提出した「配列リスト」、表、またはコンピュータプログラムリストの添付への言及
ファイル８８６５４−００６７１０ＰＣ−８４４１４７＿ＳＴ２５．ＴＸＴに記載された配列リスト（２０１２年７月２日に作成、４，０７７バイト、機械フォーマットＩＢＭ−ＰＣ、ＭＳ−Ｗｉｎｄｏｗｓオペレーティングシステム）は、全ての目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれている。

【背景技術】

【0004】

米国において、単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ−２）は、成人の１６．２％に影響を与えている最も一般の性感染症の１つである（Ｘｕ、Ｆ．ら、Ｓｅｒｏｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ Ｈｅｒｐｅｓ Ｓｉｍｐｌｅｘ Ｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ ２ Ａｍｏｎｇ Ｐｅｒｓｏｎｓ Ａｇｅｄ １４〜４９ Ｙｅａｒｓ− Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ、２００５〜２００８年、Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ（２０１０年））。ＨＳＶ−２感染は、新生児（Ｋｉｍｂｅｒｌｉｎ、Ｄ．Ｗ．、Ｈｅｒｐｅｓ、１４：１１〜１６頁（２００７年））および免疫機能が低下した宿主において（Ｄｕｐｕｉｓ、Ｓ．ら、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．、３３：３８８〜３９１頁（２００３年））有意な罹患率と死亡率をもたらし得る。さらに、ＨＳＶ−２感染は生殖器病変の主要な原因であり、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）獲得の危険性の増加と関連付けられてきた（Ｆｒｅｅｍａｎ、Ｅ．Ｅ．ら、ＡＩＤＳ、２０：７３〜８３頁（２００６年）；Ｗａｌｄ、Ａ．およびＫ．Ｌｉｎｋ、Ｊ． Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．、１８５：４５〜５２頁（２００２年））。ＨＳＶ−２は生殖器上皮において複製され、それに続いて後根神経節への逆行性軸索輸送が起こり、ここにウイルスは留まり、周期的な再活性化を伴う生涯に亘る潜伏感染を確立し得る。しかし、顕著であることは、大部分のＨＳＶ−２感染が無症候性であり、それにも関わらずこれらの個体は高頻度でウイルスを排出することである。その結果、ＨＳＶ−２は、生殖器病変の病歴を有さない個体から一般に伝染する（ＭｅｒｔｚＧ．Ｊ．、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．、１９８：１０９８〜１１００頁（２００８年））。ＨＳＶ−１感染はまた、初感染性器ヘルペス疾患の重大な原因であり、その発生率は米国および欧州において増加してきた（Ｗａｌｄ、Ａ．、２００６年、Ｇｅｎｉｔａｌ ＨＳＶ−１ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ．Ｓｅｘ Ｔｒａｎｓｍ．Ｉｎｆｅｃｔ、８２：１８９〜１９０頁）。とりわけ、Ｈｅｒｐｅｖａｃワクチン治験の陰性対照群において、ＨＳＶ−１は、感染についてＨＳＶ−２より高い発病率を有した（それぞれ、３．２％対１．５％）（Ｂｅｌｓｈｅ、Ｒ．Ｂ．ら、Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ａ ｔｒｉａｌ ｏｆ ａ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖａｃｃｉｎｅ．Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２０１２年、３６６（１）：３４〜４３頁）。

【0005】

いかなる理論に束縛されるものではないが、ＨＳＶ−２に対する防御免疫の相関は未知であると考えられる。ＨＳＶ−２／ＨＩＶ−１の同時感染者における研究によって、ＣＤ４＋Ｔ細胞の喪失が、ＨＳＶ−２排出の増加と相関することが示されてきた（Ｓｃｈａｃｋｅｒ、Ｔ．ら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．、１７８：１６１６〜１６２２頁（１９９８年））。さらに、中和抗体応答を誘発する予防ワクチンは、殺菌免疫をもたらさなかった（Ｃｏｒｅｙ、Ｌ．ら、Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．、２８２：３３１〜３４０頁（１９９９年））。ヒト研究はまた、ＨＳＶ−２の複製および排出の低減におけるＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞の役割を明らかにしてきた。一次感染の間、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、急性神経節感染を予防し得る（Ｋｏｅｌｌｅ、Ｄ．Ｍ．およびＬ．Ｃｏｒｅｙ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．、５９：３８１〜３９５頁（２００８年））。さらに、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、生殖器病変に浸潤し（ウイルス排除と相関する）（Ｋｏｅｌｌｅ、Ｄ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．ｎｖｅｓｔ．、１０１：１５００〜１５０８頁（１９９８年））、ＨＳＶ−２再活性化の間に生殖器皮膚の神経終末において蓄積することが見出されてきた（Ｚｈｕ、Ｊ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、２０４：５９５〜６０３頁（２００７年））。一般に利用されるＨＳＶ−２マウスおよびモルモットモデルにおいて、細胞性免疫の役割はより明確でなく、またはデータがあいまいであった。マウスにおけるＴ細胞欠乏研究は、膣内（ｉ．ｖａｇ．）のＨＳＶ−２負荷に対する防御におけるＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔの両方の役割を示唆した（Ｍｉｌｌｉｇａｎ、Ｇ．Ｎ．およびＤ．Ｉ．Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、２２９：２５９〜２６８頁（１９９７年）；Ｍｉｌｌｉｇａｎ、Ｇ． Ｎ．、Ｄ． Ｉ．ＢｅｒｎｓｔｅｉｎおよびＮ．Ｂｏｕｒｎｅ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６０：６０９３〜６１００頁（１９９８年）；Ｐａｒｒ、Ｍ．Ｂ．およびＥ．Ｌ．Ｐａｒｒ、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、７２：２６７７〜２６８５頁（１９９８年））。Ｔ細胞が媒介する粘膜からのウイルスの排除は、ＩＦＮ−γによって大部分が決まり（Ｍｉｌｌｉｇａｎ、Ｇ．Ｎ．およびＤ．Ｉ．Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、２２９：２５９〜２６８頁（１９９７年））、ＩＦＮ−γの非存在下で活性化するＴ細胞はＨＳＶ−２感染に対して防御的ではない（Ｊｏｈｎｓｏｎ、Ａ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、８４：８〜１５頁（２０１０年））。

【0006】

多くの戦略が試みられてきたが、本開示まで、成功したＨＳＶ−２ワクチンは開発されてこなかった（Ｋｏｅｌｌｅ、Ｄ．Ｍ．およびＬ．Ｃｏｒｅｙ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．、５９：３８１〜３９５頁（２００８年））。中和抗体を生じさせるために、糖タンパク質ｇＤおよびｇＢがワクチン抗原として広範に使用されてきた（Ｃｏｒｅｙ、Ｌ．ら、Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．、２８２：３３１〜３４０頁（１９９９年）；Ｓｔｒａｕｓ、Ｓ．Ｅ．ら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．、１７６：１１２９〜１１３４頁（１９９７年））。ＨＳＶ−２について一致しないカップルにおける２つの臨床治験における試験によって、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ（ＧＳＫ）により製造された最も有望なワクチンの候補は、ＭＰＬおよびａｌｕｍと共に製剤された分泌型ｇＤタンパク質からなった。しかし、これはＨＳＶ−１および−２血清陰性の女性においてのみ効果的であった（Ｓｔａｎｂｅｒｒｙ、Ｌ．Ｒ．ら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３４７：１６５２〜１６６１頁（２００２年））。８，３２３人のＨＳＶ−１および−２血清陰性の女性におけるその後の第３相研究（Ｈｅｒｐｅｖａｃ治験）は、このコホートにおいてＨＳＶ−２に対する有意な防御を示すことができなかった。ｇＤ２の分泌型は、膜貫通ドメインの欠失の結果として切断されている（Ｈｉｇｇｉｎｓ、Ｔ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．、１８２：１３１１〜１３２０頁（２０００年））。Ｓｔｒａｓｓｅｒらによる従前の研究は、ｇＤ２の完全長またはサイトゾルポーションと比較したときに、分泌型が、マウスおよびモルモットの両方において急性疾患からの最良の防御を実現したことを示した（Ｓｔｒａｓｓｅｒ、 Ｊ． Ｅ．ら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．、１８２：１３０４〜１３１０頁（２０００年））。

【0007】

ＨＳＶ−２についての複製欠損ウイルスワクチンはまた動物モデルにおいて成功したため、臨床治験パイプラインにある。ＵＬ５（ＤＮＡヘリカーゼ）、ＵＬ２９（一本鎖ＤＮＡ結合タンパク質）は、ＨＳＶ−２複製のために必要とされる多くのタンパク質の中に含まれる（Ｃｈａｌｌｂｅｒｇ、Ｍ．Ｄ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８３：９０９４〜９０９８頁（１９８６年）；Ｋｎｉｐｅ、Ｄ．Ｍ．、Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓ．、３７：８５〜１２３頁（１９８９年））。ＵＬ５およびＵＬ２９を欠いている変異体ウイルスは、マウス（Ｄａ Ｃｏｓｔａ、Ｘ．ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、７４：７９６３〜７９７１頁（２０００年）；Ｄａ Ｃｏｓｔａ、Ｘ．Ｊ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９６：６９９４〜６９９８頁（１９９９年））およびモルモットモデル（Ｈｏｓｈｉｎｏ、Ｙ．ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、７９：４１０〜４１８頁（２００５年）；Ｈｏｓｈｉｎｏ、Ｙ．ら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．、２００：１０８８〜１０９５頁（２００９年）；Ｈｏｓｈｉｎｏ、Ｙ．ら、Ｖａｃｃｉｎｅ、２６：４０３４〜４０４０頁（２００８年））において有望な免疫原性およびそれに続く防御を示してきた。過去において、不活性化ＨＳＶ−２ワクチンをまたヒトにおいて試験したが、正確なデータ解釈のために必要とされる対照を欠いていることによって、その後に中止された（（Ｗｈｉｔｌｅｙ、Ｒ．Ｊ．、Ｈｅｒｐｅｓ Ｓｉｍｐｌｅｘ Ｖｉｒｕｓｅｓ、２４６１〜２５０９頁、Ｉｎ Ｄ．Ｍ．ＫｎｉｐｅおよびＰ．Ｍ．Ｈｏｗｌｅｙ（編）、Ｆｉｅｌｄｓ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、第４版、第２巻、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＷｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（２００１年））において概説されている）。本明細書において提供するのは、当技術分野でのこれらおよび他の問題の解決である。

【発明の概要】

【0008】

第１の態様において提供するのは、不活性化ＨＶ、リポ多糖（ＬＰＳ）に由来するアジュバントおよびアルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントを含むヘルペスウイルス（ＨＶ）ワクチンである。

【0009】

第２の態様において提供するのは、ヘルペスウイルス（ＨＶ）ワクチンを調製する方法であり、方法は、ＨＶ−細胞混合物と、硫酸化またはスルホン化多糖とを接触させるステップであって、ＨＳＶ−細胞混合物が、ＨＶ粒子、細胞および細胞のポーションを含むステップと；ＨＳＶ粒子を細胞から分離し、それによって単離したＨＶ粒子を形成するステップと；単離したＨＶ粒子を不活性化し、それによって不活性化ＨＶ粒子を形成するステップと；不活性化ＨＶ粒子と、リポ多糖に由来するアジュバントおよびアルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントとを合わせ、それによってＨＶワクチンを形成するステップとを含む。

【0010】

第３の態様において提供するのは、治療または予防を必要とする患者においてＨＶ感染を治療または予防する方法である。方法は、治療有効量または予防的有効量の本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＶワクチンを投与することを含む。

【0011】

第４の態様において提供するのは、治療または予防を必要とする患者において疾患を治療または予防する方法である。方法は、治療有効量または予防的有効量の本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＶワクチンを投与することを含む。

【0012】

第５の態様において提供するのは、本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＶワクチン、および患者にＨＶワクチンを投与するための説明書を含むキットである。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】プラスミドワクチンからのＨＳＶ−２ＯＲＦの発現、およびｇＤ２ｔタンパク質の精製を示す図である。Ａ．２９３ＦＴ細胞を、示したような各ＨＳＶ−２ＯＲＦプラスミド、または空の親ベクター（ｐＶＡＸ）で一過性にトランスフェクトし、抗−ＦＬＡＧ Ｍ２モノクローナル抗体を使用したＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロット分析のために、トランスフェクションの４８時間後に細胞を収集した。Ｂ．２９３ＦＴ細胞にｇＤ２ｔプラスミドをトランスフェクトし、示したトランスフェクション後の日に細胞および培地を収集した。トランスフェクトしていない２９３ＦＴ細胞および培地を実験の２日目に収集した（２９３）。培地を抗−ＦＬＡＧ Ｍ２アフィニティークロマトグラフィーに供し、結合した材料をＳＤＳ−ＰＡＧＥ緩衝液に可溶化し、型共通の抗−ｇＤモノクローナル抗体ＤＬ６を使用して相当する細胞ライセートと一緒に分析した。Ｃ．ｐｃ３Δｎｅｏ−ｇＤ２ｔでトランスフェクトされた２９３ＦＴ細胞からの培地からのｇＤ２ｔタンパク質を、抗−ＦＬＡＧ Ｍ２カラムによって精製し、３ｘＦＬＡＧペプチドと共に溶出し、ｇＤ２ｔ含有画分を合わせ、示した容量をＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびクマシーブルー染色によって分析した。

【図2A-C】ｇＤ２ｔプラスミドによる同時免疫化を伴うまたは伴わない、ＵＬ５および／またはＵＬ３０プラスミドによる免疫化の後のＨＳＶ−２に対するＢＡＬＢ／ｃマウスの防御を示す図である。Ａ．実験１。２５μｇのｐＶＡＸ ＤＮＡ（−ｇＤ２ｔ）またはｇＤ２ｔ ＤＮＡ（＋ｇＤ２ｔ）と一緒に、示したＨＳＶ−２遺伝子（２５μｇのＤＮＡ）で免疫化され、次いで、１０×ＬＤ₅₀のＨＳＶ−２株Ｇの致死的なｉ．ｖａｇ．負荷を与えられたマウス（ｎ＝８）の２１日間の生存。Ｂ．ｉ．ｖａｇ．負荷後の免疫化されたマウスにおける疾患の重症度。レジェンドにおいて示されている記号は、材料および方法において記載する疾患の重症度スケールを使用した各ワクチン群についての群平均疾患スコアを示し、誤差棒は、平均値の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。Ｃ．ｉ．ｖａｇ．負荷に続く膣ウイルス排出。材料および方法において記載したように、示した負荷後の日において、各マウスの腟内を拭き取り、拭き取り検体を１ｍｌのＤＮＧ中に置き、ベロ細胞上の標準的プラークアッセイまで冷凍した。記号は、群平均Ｌｏｇ１０ＰＦＵを表し、棒は、ＳＥＭを表し、点線は、アッセイの感受性限界を示す。プラークを生じないアッセイには、グラフ化および統計解析のために、検出限界の２分の１の力価（またはこの実験について拭き取り検体毎に５ＰＦＵ）を割り当てた。明確にするために、ｇＤ２ｔ ＤＮＡを伴い、または伴わずに同時免疫化された群について括弧で示す。

【図2D-E】Ｄ．実験２：マウス（ｎ＝８）を、ｇＤ２ｔ ＤＮＡを伴い、または伴わずに、ＵＬ５＋ＵＬ３０で同時免疫化した。マウスは、２０μｇのｐＶＡＸまたはｇＤ２ｔ ＤＮＡと一緒に、それぞれ２０μｇのＵＬ５およびＵＬ３０を受けた。２１日間のＩ．ｖａｇ．負荷および生存を、Ａにおけるように示す。Ｅ．Ｂにおけるような負荷に続く疾患の重症度。Ｆ．Ｃにおけるような負荷に続く膣ウイルス排出。

【図3A】保存されている必須遺伝子によるＤＮＡ免疫化は、抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を誘発することを示す図である。Ａ．２つの別々の実験において、脾細胞を、未処理（Ｎａｉｖｅ）、収集の７日前に足蹠にＨＳＶ−２感染した（ＨＳＶ−２）、またはｐＶＡＸでｉ．ｄ．免疫化された（ｐＶＡＸ）、ＢＡＬＢ／ｃマウスから単離した。ＩＣＰ２７プラスミドでトランスフェクトされたＢＡＬＢ ＳＶ４０細胞（ＩＣＰ２７細胞；灰色の棒）または公知のＨ−２^dＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープのＩＣＰ２７ペプチド（ＩＣＰ２７ペプチド、黒色の棒）で脾細胞を刺激し、ＩＦＮ−γを産生するＣＤ８＋Ｔ細胞を、細胞内サイトカイン染色によって分析した。

【図3B-C】Ｂ、Ｃ．単独でまたは示された組合せのｐＶＡＸ、ＵＬ５、またはＵＬ３０ＤＮＡプラスミドで免疫化された個々のＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝４）からの脾細胞を、２つの別々の実験において、ＵＬ５またはＵＬ３０プラスミドでトランスフェクトされたＢＡＬＢ ＳＶ４０細胞で刺激した。収集の７日前に足蹠にＨＳＶ−２感染した１匹のマウスをまた分析した（ＨＳＶ−２）。プロットしたのは、ｐｃＤＮＡ３をトランスフェクトされたＳＶ４０ＢＡＬＢ細胞による刺激からバックグラウンド染色値を減じた後の各マウスからの値である。ラインは、群平均を表し、塗り潰された記号は、個々のマウスについての値を示す。

【図4】ｇＤ２ｔタンパク質と比較した、ＦＩ−ＨＳＶ２による免疫化後のＨＳＶ−２に対する防御を示す図である。１０⁷ＰＦＵ当量のＦＩ−ＨＳＶ２、および等しい容量のＦＩ−Ｍｏｃｋウイルス調製物、または５μｇの精製したｇＤ２ｔタンパク質で、マウス（ｎ＝８）を２回ｓ．ｃ．免疫化し、材料および方法において記載したようにそれぞれの免疫化はＭＰＬおよびａｌｕｍアジュバントと一緒であった。Ａ．各ワクチン群の負荷後２１日の生存。Ｂ．図２Ｂにおけるような負荷に続く疾患の重症度。Ｃ．図２Ｃにおけるような負荷に続く膣ウイルス排出。Ｄ．負荷後２日目の各マウスの膣ウイルス力価。各記号は、各マウスのＬｏｇ₁₀ＰＦＵ力価を表し、水平のラインは、群平均を表し、点線は、アッセイ検出限界を示す（拭き取り検体毎に２ＰＦＵと等しい）。

【図5A-B】プライム−ブースト免疫化の後のＨＳＶ−２に対する防御を示す図である。Ａ．プライム−ブースト免疫化、負荷、および負荷後アウトカム測定のタイムライン。マウスを、示した週において、ｐＶＡＸ、ｇＤ２ｔ ＤＮＡ、またはＵＬ５、ＵＬ３０、およびｇＤ２ｔ ＤＮＡのカクテルでｉ．ｄ．プライムした。各ＤＮＡプライム群からの８匹のマウスを、示した週において、１０⁷ＰＦＵ当量のＦＩ−ＨＳＶ２、等しい容量のＦＩ−Ｍｏｃｋウイルス調製物、または５μｇのｇＤ２ｔタンパク質サブユニット（ｇＤ２ｔ ＳＵ）と一緒にＭＰＬ／Ａｌｕｍで２回ｓ．ｃ．ブーストした。Ｂ．プライム−ブーストの組合せを与えたマウスの負荷後生存。ＵＬ５、ＵＬ３０、ｇＤ２ｔ ＤＮＡ−ｇＤ２ｔタンパク質群における１匹のマウスは、重症の耳感染を発症し、負荷の日の前に屠殺した。

【図5C-D】Ｃ．図２Ｂにおけるようなｉ．ｖａｇ．負荷に続くプライム−ブースト免疫化されたマウスにおける疾患の重症度。各パネルは、Ｍｏｃｋ（ＦＩ−Ｍｏｃｋ）（左）、ｇＤ２ｔタンパク質（中央）、またはＦＩ−ＨＳＶ２（右）のブーストによる、同じブーストタイプを与えた免疫化群を示す。Ｄ．図２Ｃにおけるようなｉ．ｖａｇ．負荷に続く膣ウイルス排出。免疫化群は、一緒に示した同じブーストタイプを与えられ、各パネルにおいて示したｐＶＡＸ−ＦＩ−Ｍｏｃｋ群は比較の目的のためである。

【図6A-B】ＭＰＬおよびＡｄｊｕ−Ｐｈｏｓ中のＦＩ−ＨＳＶ２およびＤＮＡプラスミドの単一の製剤後のＨＳＶ−２排出に対する防御を示す図である。Ａ、Ｂ．マウスの群を、１０⁷ＰＦＵ当量のＦＩ−ＨＳＶ２、１２．５μｇのＭＰＬ、および５４μｇのＡｄｊｕ−Ｐｈｏｓ（ＡｄＰ）で免疫化した。いくつかの群は、２０μｇまたは５０μｇのそれぞれのプラスミドＵＬ５、ＵＬ３０、およびｇＤ２ｔを受けた。さらに、陰性対照群は、ＭＰＬ、Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓと混合した６０μｇのｐＶＡＸ ＤＮＡ、および他の群において使用したＦＩ−ＨＳＶ２と等しい容量のＦＩ−Ｍｏｃｋを受けた。４週間後、マウスにさらなる免疫化を与え、３週間（Ａ）または９週間（Ｂ）休み、次いで、上記のようにＨＳＶ−２でｉ．ｖａｇ．負荷した。２日目および４日目に、マウスの膣のＨＳＶ−２排出のために拭き取ったが、データは図４Ｄのレジェンドにおけるように同様に（アッセイ感受性の限界は、拭き取り検体毎に４ＰＦＵ（Ａ）および２．２２ＰＦＵ（Ｂ）であったことを除いて）示す。

【図6C-D】（Ｃ、Ｄ）免疫化されたマウスにおける負荷前のウイルス特異的抗体レベル。破線は、感受性のアッセイ限界を表し、アッセイ限界未満の個々の力価は、計算およびグラフ化の目的のためにアッセイ限界の２分の１の値を割り当てた。（Ｃ）短期間（左のパネル）または長期間（右のパネル）の負荷前の、デキストラン硫酸に由来するＨＳＶ−２（ウェル毎に２．３５×１０⁶ＰＦＵ）に対するＥＬＩＳＡによって測定したＩｇＧ力価。エンドポイント力価は、血清の最も高いフィットスプライン内挿した相互希釈として定義したが、ここではビリオン−コーティングしたウェルのＡ₄₀₅は等しい質量のベロ細胞ライセートでコーティングしたウェル中の同じ血清希釈のＡ₄₀₅の２倍と等しかった。（Ｄ．）長期間の負荷前のウイルス中和抗体力価。エンドポイント中和力価を、上記のようにフィットスプライン内挿を使用したインプットＰＦＵ（５０ＰＦＵのデキストラン硫酸に由来するＨＳＶ−２）の数における５０％の低減をもたらした最も高い相互血清希釈として計算した。感受性限界未満の力価を表すデータポイントは、視感度の増加のためにずれていた。^(*)Ｐ＜０．０５；^(**)Ｐ＜０．０１；および^(***)Ｐ＜０．００１の有意性スコアを、クラスカル−ワリスおよびダンの多重比較検定によって決定した。

【図7】ＭＰＬおよびＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌまたはＡｄｊｕ−Ｐｈｏｓ中のＦＩ−ＨＳＶ２による免疫化後の、ＨＳＶ−２負荷および再負荷に対する防御を示す図である。マウスの群を、示したように、１０⁷ＰＦＵ当量のＦＩ−ＨＳＶ２、１２．５μｇのＭＰＬ、および５４μｇのＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（Ａｌｈ）または４５０μｇのＡｄｊｕ−Ｐｈｏｓ（ＡｄＰ）でｉ．ｍ．またはｓ．ｃ．免疫化した。さらに、陰性対照群は、ＭＰＬ、Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓと混合した６０μｇのｐＶＡＸ ＤＮＡ、および他の群において使用したＦＩ−ＨＳＶ２と等しい容量のＦＩ−Ｍｏｃｋを受けた。４週間後、マウスにさらなる免疫化を与え、３週間休み、次いで、上記のようにＨＳＶ−２でｉ．ｖａｇ．負荷した。Ａ．アッセイ感受性の限界は拭き取り検体毎に１０ＰＦＵであったことを除いて、図４Ｃにおけるような、負荷後２日目（左のパネル）または４日目（右のパネル）の膣ウイルス排出。感受性限界（複数可）未満のデータポイントは、ＡおよびＣの両方についてのパネルにおいて視感度の増加のためにずれていた。Ｂ、Ｃ．ＨＳＶ−２負荷に対して生存したマウスを以前の通りメドロキシプロゲステロン処理し、負荷の１７週間後に、これらのマウスを再負荷し、未処理群のマウスを１０×ＬＤ₅₀のＨＳＶ−２でｉ．ｖａｇ．負荷した。マウスを、上記のように２日目および４日目に膣のＨＳＶ−２排出のために拭き取った。未処理群についての膣のＨＳＶ−２力価を示す（パネルＢ）。負荷および再負荷に続く各マウスにおける膣のＨＳＶ−２排出を、ＨＳＶ−２負荷の２日目をｘ軸上に、および再負荷の２日目をｙ軸上に、膣のＨＳＶ−２力価としてプロットする（パネルＣ）。各ＦＩ−ＨＳＶ２免疫化群を、明確にするために別々のパネルにおいて示し、両方のアッセイについての検出限界は、拭き取り検体毎に１０ＰＦＵであった。各グラフ上のオーバーラップするデータポイントの数を示す。^(*)Ｐ＜０．０５；^(**)Ｐ＜０．０１；および^(***)Ｐ＜０．００１の有意性スコアを、クラスカル−ワリスおよびダンの多重比較検定によって決定した。

【図8】ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ中で製剤されたＦＩ−ＨＳＶ２による免疫化は、ＨＳＶ−２複製、疾患、およびＤＲＧにおける潜在ウイルス量に対する防御のために必要とされることを示す図である。マウスの群（ｎ＝８）を、ＭＰＬおよびＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（５４μｇのＡｌと等しい）またはＤＰＢＳ中のデキストラン硫酸に由来するＦＩ−ＨＳＶ２（１μｇのタンパク質）でｓ．ｃ．またはｉ．ｍ．免疫化した。さらに、陰性対照群は、ＭＰＬおよびＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌ中の、他の群において使用されたＦＩ−ＨＳＶ２と等しい容量のＦＩ−Ｍｏｃｋを受けた。２回の注射は４週間の間隔を開けて与えられ、マウスに３週間後に負荷した。Ａ．アッセイ感受性の限界は拭き取り検体毎に２．２ＰＦＵであったことを除いて、図６Ａ、Ｂにおけるような負荷後２日目（左のパネル）または４日目（右のパネル）の膣ウイルス排出。Ｂ．負荷後１〜１４日目の疾患スコア（図４に記載したスケールを使用）を、個々のマウスについて合計した（各記号は、１匹のマウスについての値を示す）。Ｃ．ＤＲＧにおけるＨＳＶ−２潜在ＤＮＡ量に対する防御。負荷の４週間後、それぞれの生存しているマウスおよび４匹の未処理マウスからの腰仙部ＤＲＧを取り出し、プールし、冷凍し、各プールからのＤＲＧ ＤＮＡを抽出し、分光光度法によって定量化した。相互汚染セーフガード、試料の保存、ＤＲＧ ＤＮＡ抽出、ならびにｇＧ２に特異的なプライマーおよびプローブを使用したＴａｑＭａｎ定量的ＰＣＲ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ．）によって決定したＨＳＶ−２のコピー数は従前に記載された通りであった［１９］。各反応は３００ｎｇのＤＲＧ ＤＮＡを含有したが、各マウスについてのＤＮＡ量は、３００ｎｇのＤＲＧ ＤＮＡ毎のＨＳＶ−２ＤＮＡコピー数として表す。ラインは、アッセイについての検出限界を表す（３００ｎｇのＤＲＧ ＤＮＡ毎に２コピーのＨＳＶ−２ＤＮＡ）。各テンプレートの均一性は、マウスアジプシン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｘ０４６７３．１）：センスプライマー（ＴＧＴ ＧＧＣ ＡＡＴ ＧＧＣ ＡＡＡ ＡＡＧ Ｃ）（配列番号：１４）、アンチセンスプライマー（ＴＧＴ ＴＡＣ ＣＡＴ ＴＴＧ ＴＧＡ ＴＧＴ ＴＴＴ ＣＧＡ Ｔ）（配列番号：１５）、およびプローブ（６−ＦＡＭ−ＣＧＴ ＣＴＡ ＴＡＣ−ＺＥＮ−ＣＣＧ ＡＧＴ ＧＴＣ ＡＴＣ ＣＴＡ ＣＣＧ ＧＡ−Ｉｏｗａ Ｂｌａｃｋ Ｆ Ｑｕｅｎｃｈｅｒ）（配列番号：１６）のＴａｑＭａｎ定量化によって確実にした。

【図9】ＭＰＬ／ＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌまたはＤＰＢＳ中のＦＩ−ＨＳＶ２でｓ．ｃ．またはｉ．ｍ．免疫化したマウスにおけるウイルス特異的抗体およびＴ細胞のレベルを示す図である。Ａ、Ｂ．免疫化されたマウスにおけるウイルス特異的抗体レベル。Ａ．ＨＳＶ−２ビリオンに対するＥＬＩＳＡを使用して、免疫化されたマウスの血清中の負荷前の総ＩｇＧ（左のパネル）またはＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａアイソタイプ（右のパネル）を測定した。平均エンドポイント相互力価およびＳＤを、図６Ｃにおけるように、各免疫化群について示す。Ｂ．ウイルス中和抗体力価を、図６Ｄにおけるように、ＨＳＶ−２ビリオンに対して測定した。Ｃ．ＩＦＮ−γを産生するウイルス特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞（左のパネル）およびＣＤ８＋Ｔ細胞（右のパネル）の平均および標準誤差を、細胞内サイトカイン染色によって測定した。材料および方法において記載したように、免疫化され、次いでインビボで再刺激されマウス（ｎ＝４）からの脾細胞を集め、第２の注射の３週間後にアッセイした。

【図10】免疫化群、およびＨＳＶ−２負荷または再負荷に対する防御有効性を評価するマウス実験についてのタイムラインを示す図である。アジュバントＡｄｊｕ−Ｐｈｏｓ（ＡｄＰ）またはＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（ＡｌＨ）を、ホルマリン不活性化ＨＳＶ−２（ＦＩ−ＨＳＶ２）およびモノホスホリルリピドＡを有する製剤においてそれぞれ試験した。ワクチンを、アジュバント中および示した経路で筋内（ｉ．ｍ．）または皮下（ｓ．ｃ．）経路によって投与した。シリンジは、ワクチン接種の週を示し、血液のドロップは、血液採取の週を示し、点線の矢印は、致死的なＨＳＶ−２負荷の週を示す。このように得られたデータを、図７によって表す。

【図11】総ビリオン特異的ＩｇＧ、および中和力価を示す図である。

【図12】免疫化群、ならびにホルマリン不活性化ＨＳＶ−２（ＦＩ−ＨＳＶ２）と共に製剤されたときの、筋内（ｉ．ｍ．）または皮下（ｓ．ｃ．）免疫化のためにＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌ Ａｌｕｍ（ＡｌＨ）と一緒にモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）のアジュバントの作用を評価するマウス実験についてのタイムラインを示す図である。シリンジは、ワクチン接種の週を示し、血液のドロップは、血液採取の週を示し、青色の矢印は、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）アッセイのためのインビボの再刺激（第６．５週）または収集（第７週）の週を示し、点線の矢印は、致死的なＨＳＶ−２負荷の週を示す。ＤＰＢＳ、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水。このように得られたデータを、図８および９によって表す。

【図13】細胞内サイトカイン染色アッセイのための実験法を示す図である。示したデータは図９Ｃに相当し、図はまたバックグラウンド染色レベルを示す。

【図14】免疫化群、およびＨＳＶ−２による負荷または再負荷に対する防御有効性を評価するモルモット実験についてのタイムラインを示す図である。ホルマリン不活性化（ＦＩ−）ＨＳＶ−２またはＭｏｃｋビリオン（ＦＩ−Ｍｏｃｋ）を、モノホスホリルリピドＡおよびＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌと共に製剤し、次いで筋内（ｉ．ｍ．）または皮下（ｓ．ｃ．）経路によって投与した。シリンジは、ワクチン接種の週を示し、血液のドロップは、血液採取の週を示し、点線の矢印は、亜致死性ＨＳＶ−２負荷の週を示す。ＰＦＵ ｅｑｕｉｖ、ＰＦＵ当量。

【図15】一次（急性相）ＨＳＶ−２感染の間の、免疫化されたモルモットの肛門生殖器疾患に対する防御を示す図である。各記号は、膣内の負荷後０〜１４日目の個々（Ｉｎｄｉｖ．）のモルモットの合計した疾患スコアを表し、棒は群平均を表す。１日に少なくとも１つの病変を示したモルモットの記号を括弧でくくる。クラスカル−ワリスおよびダンの多重比較検定による統計的有意性をアスタリスクによって示し、有意レベルをレジェンドに示す。

【図16】負荷後２日目および７日目の膣のＨＳＶ−２排出レベルを示す図である。膣内拭き取り検体を採取し、プラークアッセイによって感染性ウイルスの定量化のために保存した。各記号は、個々（Ｉｎｄｉｖ．）のモルモットのＬｏｇＰＦＵ／拭き取り検体を表し、棒は群平均を表す。クラスカル−ワリスおよびダンの多重比較検定による統計的有意性をアスタリスクによって示し、有意レベルをレジェンドに示す。点線は、アッセイ検出限界を示し、ボックスは、７日目のこの免疫化群におけるウイルスの殆ど完全な排除を示す。

【図17】デキストラン硫酸洗浄に由来するＨＳＶ−２を使用したＥＬＩＳＡによって測定したＨＳＶ−２ビリオン特異的ＩｇＧを示す図である。各記号は、群平均Ｌｏｇ１０エンドポイント力価を表し、棒は、ＳＥＭを示す。矢印は、免疫化の週（０週目および４週目）または負荷の週（７週目）を示す。

【図18】ＨＳＶ−２による再負荷に続く免疫化されたモルモットの肛門生殖器疾患に対する防御を示す図である。各記号は、膣内の再負荷（第１の負荷の１８週間後に与える）後０〜１４日目の個々（Ｉｎｄｉｖ．）のモルモットの合計した疾患スコアを表し、棒は群平均を表す。１日に少なくとも１つの病変を示したモルモットの記号を示し（Ｌｅｓ）、未処理群における動物の全てが病変を示す（Ａｌｌ Ｌｅｓ）。クラスカル−ワリスおよびダンの多重比較検定による統計的有意性をアスタリスクによって示し、有意性レベルは下記の通りである。^*Ｐ＜０．０５；^**Ｐ＜０．０１；^***Ｐ＜０．００１；ＮＳ、有意差なし。

【図19】再負荷後２日目および７日目の膣のＨＳＶ−２排出レベルを示す図である。膣内拭き取り検体を採取し、プラークアッセイによって感染性ウイルスの定量化のために保存した。各記号は、個々（Ｉｎｄｉｖ．）のモルモットのＬｏｇＰＦＵ／拭き取り検体を表し、棒は群平均を表す。点線は、アッセイ検出限界を表す。クラスカル−ワリスおよびダンの多重比較検定による統計的有意性をアスタリスクによって示し、有意性レベルは下記の通りである。^*Ｐ＜０．０５；^**Ｐ＜０．０１；^***Ｐ＜０．００１。

【図20】負荷後２日目（ｘ軸）および再負荷後２日目（ｙ軸）の、個々（Ｉｎｄｉｖ．）のモルモットについての膣のＨＳＶ−２排出のＸＹプロットを示す図である。値は拭き取り検体毎のＬｏｇ１０ＰＦＵとして計算する。点線は、感受性のアッセイ限界を示す。

【図21】実験スキーム、ならびにＵ．Ｓから単離した相同（株Ｇ）または非相同（株１８６ｓｙｎ＋−１および株８９−３９０）ＨＳＶ−２株に対して防御するホルマリン不活性化ＨＳＶ−２（ＦＩ−ＨＳＶ２）の有効性を試験するためのタイムラインを示す図である。シリンジは、ワクチン接種の週を示し、血液のドロップは、血液採取の週を示し、点線の矢印は、亜致死性ＨＳＶ−２負荷（第７週）または繰返し負荷（第９週）の週を示す。繰返し負荷は、負荷後２日目に膣内の拭き取り検体からの検出可能なＨＳＶ−２を有さない動物においてのみ行ったことに留意されたい。ＰＦＵ ｅｑ．、ＰＦＵ当量；ＭＰＬ、モノホスホリルリピドＡ；Ａｌｕｍ、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ；高い、５×１０⁵ＰＦＵ負荷；低い、２．５×１０⁴ＰＦＵ負荷；ＦＩ−Ｍｏｃｋ、ホルマリン不活性化ｍｏｃｋビリオン調製物；ｓ．ｃ．、皮下。

【図22】免疫化されたモルモットの肛門生殖器疾患に対する防御（負荷および繰返し負荷データを合わせる）を示す図である。各記号は、膣内の負荷後０〜１４日目の個々（Ｉｎｄｉｖ．）のモルモットの合計した疾患スコアを表し、棒は群平均を表す。疾患スコアリング判断基準をレジェンドに一覧表示する。１日に少なくとも１つの病変を示したモルモットの記号を括弧でくくる。クラスカル−ワリスおよびダンの多重比較検定による統計的有意性をアスタリスクによって示し、有意レベルをレジェンドに示す。ＦＩ−ＨＳＶ２により免疫化された動物は病変を発症しなかった。

【図23】ＨＳＶ−２の相同（株Ｇ）または非相同（１８６ｓｙｎ＋−１および８９−３９０）株による負荷後２日目および７日目の、膣のＨＳＶ−２排出レベルを示す図である。膣内拭き取り検体を採取し、プラークアッセイによる感染性ウイルスの定量化のために保存した。各記号は、個々（Ｉｎｄｉｖ．）のモルモットのＬｏｇＰＦＵ／拭き取り検体を表し、棒は群平均を表す。点線は、アッセイ検出限界を表す。ボックスは、７日目までの殆ど完全なウイルス排除を示す。有意レベルを伴うクラスカル−ワリスおよびダンの多重比較検定による統計的有意性を、レジェンドに示す。

【発明を実施するための形態】

【0014】

Ｉ．定義
本明細書において使用される略語は、化学および生物学の技術分野におけるこれらの通常の意味を有する。本明細書において記載する化学構造および式は、化学の技術分野において公知の化学的価数の標準的ルールによって構築する。

【0015】

「ａ」または「ａｎ」という用語は、本明細書において使用される場合、１つまたは複数を意味する。さらに、「［ｎ］で置換されている」というフレーズは、本明細書において使用する場合、特定の基を指名した置換基の任意または全ての１つまたは複数で置換し得ることを意味する。

【0016】

本発明の化合物の記載は、当業者には公知の化学結合の原理によって限定される。したがって、基がいくつかの置換基の１つまたは複数で置換し得る場合、化学結合の原理に従うように、かつ周囲条件、例えば、水性条件、中性条件、およびいくつかの公知の生理学的条件下で、固有に不安定でなく、および／または不安定でない可能性が高いと当業者には公知である化合物を与えるように、このような置換は選択される。

【0017】

「治療する」または「治療」という用語は、任意の客観的または主観的パラメーター、例えば、軽減；緩解；症状の減少、または傷害、病理もしくは状態を患者にとってより耐えられるものとすること；変性または減退の速度の遅延；変性の最終ポイントをより衰弱させるものでなくすること；患者の肉体的または精神的健康の改善を含めた、傷害、疾患、病理または状態の治療または寛解における成功の任意の表示を指す。症状の治療または寛解は、身体検査、神経精神の検査、および／または精神医学的評価の結果を含めた、客観的または主観的パラメーターに基づくことができる。例えば、本明細書において提示する特定の方法は、ＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８からなる群から選択されるＨＶ）感染の発生率を減少させること、ＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８からなる群から選択されるＨＶ）感染の１つまたは複数の症状を低減させること、あるいはＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８からなる群から選択されるＨＶ）の伝播を防止することによって、ＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８からなる群から選択されるＨＶ）感染を首尾よく治療する。本明細書に記載されている組成物または方法のいくつかの実施形態において、ＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８からなる群から選択されるＨＶ）感染を治療することは、ＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８からなる群から選択されるＨＶ）の成長もしくは伝播の速度を遅延させること、または病変の出現を低減させることを含む。「治療すること」という用語、およびその活用は、傷害、病理、状態、または疾患の予防を含む。「予防すること」または「予防」という用語は、本明細書に記載のような予防的または防止的組成物の投与に続く、疾患もしくは状態の１つもしくは複数の症状の予防、または疾患もしくは状態の任意の症状の出現、重症度、もしくは期間の減少を含めた、対象または患者（例えば、疾患または状態を発症する危険性がある対象または患者）を疾患または状態（例えば、ＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８からなる群から選択されるＨＶ）感染）を発症し、罹患し、または有することから防御することにおける成功の任意の表示を指す。

【0018】

「有効量」は、化合物が存在しないこと対して、化合物が記述される目的を達成するのに十分な量である（例えば、そのためにこれが投与される作用を達成する、疾患を治療する、ＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８からなる群から選択されるＨＶ）の伝播を低減させる、疾患または状態の１つまたは複数の症状（例えば、病変、ウイルス産生、溶菌サイクル）を低減させる）。「有効量」の一例は、疾患の症状（複数可）の治療、予防、または低減の一因となるのに十分な量であり、これは「治療有効量」ともまた称することができる。症状（複数可）の「低減」（およびこのフレーズの文法的同等物）は、症状（複数可）の重症度もしくは頻度の減少、または症状（複数可）の消失を意味する。組成物（ワクチン）の「予防的有効量」は、対象に投与したときに、意図する予防効果（例えば、傷害、疾患（例えば、ＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８からなる群から選択されるＨＶ）感染）、病理もしくは状態の開始（または再出現）を予防または遅延させ、あるいは傷害、疾患、病理、もしくは状態、またはこれらの症状の開始（または再出現）の可能性を低減させる）を有する組成物の量である。完全な予防効果は、１回の用量の投与によって必ずしも起こらず、一連の用量の投与（例えば、プライム−ブースト）の後のみに起こり得る。このように、予防的有効量は、１つまたは複数の投与で投与し得る。正確な量は治療の目的によって決まり、公知の技術を使用して当業者によって確認可能である（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ（第１〜３巻、１９９２年）；Ｌｌｏｙｄ、Ｔｈｅ Ａｒｔ、 Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ（１９９９年）；Ｐｉｃｋａｒ、Ｄｏｓａｇｅ Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（１９９９年）；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、２００３年、Ｇｅｎｎａｒｏ（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＷｉｌｋｉｎｓを参照されたい）。

【0019】

「対照」または「対照実験」は、その明白な通常の意味によって使用され、実験の手順、試薬、または変数の省略以外は、実験の対象または試薬を平行実験におけるように処理する実験を指す。いくつかの場合において、対照は、実験効果の評価における比較の標準として使用する。いくつかの実施形態において、対照は、本明細書（実施形態を含めた）に記載の組成物（例えば、ワクチン）の非存在下での、ＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８からなる群から選択されるＨＶ）感染、あるいはＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８からなる群から選択されるＨＶ）感染の１つまたは複数の症状の尺度である。

【0020】

「接触させること」とは、その明白な通常の意味によって使用され、少なくとも２つの別個の種（例えば、組成物、ワクチン、ウイルス、生体分子、または細胞）が、反応、相互作用または物理的に触れるように十分に近位となることを可能にする工程を指す。しかし、このように得られた反応生成物は、加えた試薬の間の反応から、または反応混合物中で生成することができる、加えた試薬の１つもしくは複数からの中間体から直接生成することができることを認識すべきである。いくつかの実施形態において、接触させることは、放射線（例えば、ＵＶ、γ）が、物体（例えば、ウイルス、ウイルス構成要素、ウイルスタンパク質、ウイルス核酸）と相互作用することを可能にすることを指す。

【0021】

「接触させること」という用語は、２つの種が反応、相互作用、または物理的に触れることを可能にすることを含んでもよく、２つの種は、本明細書に記載のような組成物（例えば、ワクチン）、および細胞、ウイルス、ウイルス粒子、タンパク質、酵素、または患者でよい。いくつかの実施形態において、接触させることは、本明細書に記載されている組成物が、シグナル経路に関与するタンパク質または酵素と相互作用することを可能とすることを含む。いくつかの実施形態において、接触させることは、本明細書に記載されている組成物が、ＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８からなる群から選択されるＨＶ）と相互作用することを可能にすることを含む。いくつかの実施形態において、接触させることは、本明細書に記載されている作用剤が、ＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８からなる群から選択されるＨＶ）と相互作用し、ＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８からなる群から選択されるＨＶ）を不活性化することを可能にすることを含む。

【0022】

本明細書に定義されているように、「阻害」、「阻害する」、「阻害すること」などという用語は、タンパク質−阻害剤または相互作用に関して、タンパク質の活性または機能に悪影響を与える（例えば、減少させる）ことを意味する。いくつかの実施形態において、阻害とは、疾患または疾患の症状の低減を指す。いくつかの実施形態において、阻害は、ウイルス（例えば、ＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８からなる群から選択されるＨＶ））の成長、増殖、または伝播の低減を指す。いくつかの実施形態において、阻害は、ウイルス（例えば、ＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８からなる群から選択されるＨＶ））による対象の感染を予防することを指す。いくつかの実施形態において、阻害は、シグナル伝達経路またはシグナル経路の活性の低減を指す。このように、阻害は、少なくとも部分的に、刺激を部分的もしくは完全に遮断すること、活性化を減少させ、防止し、または遅延させること、あるいはシグナル経路もしくは酵素活性、またはタンパク質の量を不活性化させ、脱感作し、または下方制御することを含む。

【0023】

「モジュレーター」という用語は、標的（例えば、分子、細胞、ウイルス粒子、タンパク質）または標的の機能または標的の物理的状態のレベルを増加または減少させる組成物を指す。

【0024】

「モジュレートする」という用語は、その明白な通常の意味によって使用され、１つまたは複数の特性を変化または変動させる作用を指す。「モジュレーション」とは、１つまたは複数の特性を変化または変動させる工程を指す。例えば、標的に対するモジュレーターの作用に適用されるように、モジュレートするとは、標的の特性もしくは機能または標的の量を増加または減少させることによって変化させることを意味する。

【0025】

「患者」または「それを必要としている対象」とは、本明細書において提供するような医薬組成物の投与によって治療することができる疾患もしくは状態を患っている、または起こしやすい生物を指す。非限定的例には、ヒト、他の哺乳動物、ウシ、ラット、マウス、イヌ、サル、ヤギ、ヒツジ、ウシ、シカ、および他の哺乳動物ではない動物が含まれる。いくつかの実施形態において、患者は、ヒトである。いくつかの実施形態において、患者またはそれを必要としている対象またはそれを必要としている患者とは、疾患または状態（例えば、ＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８からなる群から選択されるＨＶ）感染、またはＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８からなる群から選択されるＨＶ）と関連する疾患）を発症し、罹患し、または有する危険性がある生物（例えば、ヒト）を指す。

【0026】

「疾患」または「状態」とは、本明細書において提供する組成物（例えば、ワクチン）または方法で治療することができる、患者または対象の状態または健康状態を指す。いくつかの実施形態において、疾患は、ＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８からなる群から選択されるＨＶ）に関連する（例えば、これらによって引き起こされる）疾患である。疾患、障害、または状態の例には、これらに限定されないが、ヘルペス性歯肉口内炎、口唇ヘルペス、陰部ヘルペス、ヘルペス性ひょう疽、剣状ヘルペス、ヘルペスウイルス脳炎、ヘルペスウイルス髄膜炎、ヘルペス性食道炎、ヘルペス性角膜炎、ベル麻痺、モラレー髄膜炎、ヘルペスルグベイオルム（herpes rugbeiorum）、疱疹性湿疹、ヘルペス神経痛、またはヘルペス後神経痛が含まれる。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、ＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８からなる群から選択されるＨＶ）感染を指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、ヘルペス性歯肉口内炎を指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、口唇ヘルペスを指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、陰部ヘルペスを指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、ヘルペス性ひょう疽を指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、剣状ヘルペスを指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、ヘルペスウイルス脳炎を指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、ヘルペスウイルス髄膜炎を指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、ヘルペス性食道炎を指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、ヘルペス性角膜炎を指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、ベル麻痺を指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、モラレー髄膜炎を指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、ヘルペスルグベイオルムを指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、疱疹性湿疹を指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、ヘルペス神経痛を指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、ヘルペス後神経痛を指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、ＨＳＶ１感染を指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、ＨＳＶ２感染を指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２感染を指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、ＨＨＶ−３感染を指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、ＨＨＶ−４感染を指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、ＨＨＶ−５感染を指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、ＨＨＶ−６感染を指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、ＨＨＶ−７感染を指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、ＨＨＶ−８感染を指す。いくつかの場合において、「疾患」または「状態」とは、ＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）感染を指す。

【0027】

「薬学的に許容される添加剤」および「薬学的に許容される担体」とは、活性剤の投与および対象による吸収を助ける物質を指し、患者に対して有意な有害である毒性学的影響をもたらすことなしに、本発明の組成物に含めることができる。薬学的に許容される添加剤の非限定的例には、水、ＮａＣｌ、生理食塩水溶液、乳酸加リンゲル、通常のスクロース、通常のグルコース、結合剤、充填剤、崩壊剤、滑沢剤、コーティング、甘味剤、フレーバー、塩類溶液（例えば、リンゲル液）、アルコール、油、ゼラチン、炭水化物（ラクトース、アミロースまたはデンプンなど）、脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリジン、および着色料などが含まれる。このような調製物は、無菌化し、必要に応じて、本発明の化合物と有害に反応しない助剤、例えば、滑沢剤、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与えるための塩、緩衝液、着色剤、および／または芳香族物質などと混合することができる。当業者は、他の医薬添加剤が本発明において有用であることを認識する。

【0028】

「調製物」という用語は、担体として封入材料を有する活性化合物の製剤を含むことを意図し、他の担体を有する、または有さない活性構成要素が、担体に囲まれているカプセル剤を提供する（このようにして担体は、活性構成要素と関連している）。同様に、カシェ剤およびロゼンジ剤が含まれる。錠剤、散剤、カプセル剤、丸剤、カシェ剤、およびロゼンジ剤は、経口投与に適した固体剤形として使用することができる。

【0029】

本明細書において使用する場合、「投与すること」という用語は、対象への経口投与、坐剤としての投与、局所接触、静脈内、腹腔内、筋内、病巣内、くも膜下腔内、鼻腔内、皮内、粘膜、直腸内、膣内、局所、経皮膚的（例えば、Ｃｏｍｂａｄｉｅｒｅ、ＰＬｏＳ ＯＮＥ５（５）：ｅ１０８１８におけるように）、もしくは皮下投与、または徐放性装置、例えば、ミニ浸透圧ポンプの埋込みを意味する。投与は、非経口および経粘膜的（例えば、口腔内頬側、舌下、口蓋、歯肉、経鼻、膣、直腸、または経皮的）を含めた任意の経路による。非経口投与には、例えば、静脈内、筋内、細動脈内、皮内、皮下、腹腔内、脳室内、および頭蓋内が含まれる。送達の他のモードには、これらに限定されないが、リポソーム製剤、静脈内注入、経皮的パッチなどの使用が含まれる。「同時投与する」とは、本明細書に記載されている組成物が、１つまたは複数のさらなる治療、例えば、ＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）感染治療、例えば、抗ウイルス薬（例えば、アシクロビル、ファムシクロビル、バラシクロビル）または異なるＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチン（例えば、ＤＮＡワクチン、異なる遺伝子を含むＤＮＡワクチン、単離したタンパク質ワクチン、異なる不活性化ウイルスワクチン）の投与と同時に、直前に、または直後に投与されることを意味する。本発明の組成物（例えば、ワクチン）は、患者に単独で投与することができ、または同時投与することができる。同時の投与は、個々にまたは組み合わせた化合物の同時または逐次投与を含むことを意味し（複数の組成物）、プライム−ブースト法におけるワクチン投与を含む。このように、調製物はまた、所望であるときに、他の活性物質と合わせることができる（例えば、代謝退化を低減し、免疫応答を増加させるため（例えば、アジュバント））。本発明の組成物は、アプリケータースティック、溶液剤、懸濁剤、乳剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤、ペースト剤、ゼリー、ペイント、散剤、およびエアゾールとして製剤して、経皮的に、局所経路によって、経皮膚的に送達することができる。

【0030】

「ＨＶワクチンを投与する（または投与すること）」という用語は、対象においてＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）感染を予防または治療する組成物を投与することを意味する。投与は、機構によって限定されることなく、ＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンが、対象において免疫応答を誘導し、あるいは疾患（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８感染）の１つまたは複数の症状を低減するための十分な時間を許容することを含み得る。

【0031】

出願を通してその選択肢は、マーカッシュ群（例えば、複数の可能性のあるアミノ酸を含有する各アミノ酸の位置）で記載されることに留意すべきである。マーカッシュ群の各メンバーは、別々に考慮すべきであり、それによって別の実施形態を含み、マーカッシュ群は、単一のユニットとして読まないことが特に意図される。

【0032】

「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、本明細書において互換的に使用し、アミノ酸残基のポリマーを指す。

【0033】

「ペプチジル」および「ペプチジル部分」という用語は、一価ペプチドを意味する。

【0034】

「アミノ酸」という用語は、天然および合成アミノ酸、ならびにアミノ酸類似体を指す。天然アミノ酸は、遺伝コードによってコードされたもの、ならびに後に修飾されるそれらのアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタメート、およびＯ−ホスホセリンである。アミノ酸類似体とは、天然アミノ酸と同じ基礎的な化学構造、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、およびＲ基に結合しているα−炭素を有する化合物（例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウム）を指す。このような類似体は、修飾したＲ基（例えば、ノルロイシン）または修飾したペプチド骨格を有するが、天然アミノ酸と同じ基本的な化学構造を保持する。アミノ酸模倣物とは、アミノ酸の一般化学構造と異なる構造を有するが、天然アミノ酸と同様の様式で機能する化合物を指す。アミノ酸模倣物を含むオリゴマーは、ペプチド模倣物である。ペプチド模倣物部分は、一価ペプチド模倣物である。

【0035】

アミノ酸は、本明細書において、これらの一般に公知の３文字記号によって、またはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ生化学命名委員会によって推奨される１文字記号によって称し得る。ヌクレオチドは、同様に、これらの一般に受け入れられている単一文字のコードによって称し得る。

【0036】

アミノ酸またはヌクレオチド塩基の「位置」は、Ｎ−末端（または５’−末端）に対するその位置に基づいて、参照配列において各アミノ酸（またはヌクレオチド塩基）を逐次的に同定する番号によって表示する。最適なアライメントを決定するときに考慮しなければいけない欠失、挿入、切断、融合などによって、一般に、Ｎ−末端から単純にカウントすることによって決定される試験配列におけるアミノ酸残基の番号は、参照配列におけるその相当する位置の番号と必ずしも同じではない。例えば、バリアントが、整列した参照配列に対して欠失を有する場合、バリアントには、欠失の部位において参照配列における位置に相当するアミノ酸はない。整列した参照配列において挿入が存在する場合、その挿入は、参照配列における付番したアミノ酸の位置に相当しない。切断または融合の場合、参照配列または整列した配列において、相当する配列における任意のアミノ酸に相当しない一連のアミノ酸が存在し得る。

【0037】

「に関して付番した」または「に相当する」という用語は、所与のアミノ酸またはポリヌクレオチド配列の付番との関連において使用されるとき、所与のアミノ酸またはポリヌクレオチド配列を参照配列と比較するときの、特定の参照配列の残基の付番を指す。

【0038】

「保存的置換」とは、アミノ酸に関して使用するように、化学的に同様のアミノ酸によるアミノ酸の置換を指す。置換がなされているポリペプチドの構造特性および／または機能特性を保持することが多いアミノ酸置換は、当技術分野において公知であり、例えば、Ｈ．ＮｅｕｒａｔｈおよびＲ．Ｌ． Ｈｉｌｌ、１９７９年、「Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋが記載している。最も一般に起こる交換は、イソロイシン／バリン、チロシン／フェニルアラニン、アスパラギン酸／グルタミン酸、リシン／アルギニン、メチオニン／ロイシン、アスパラギン酸／アスパラギン、グルタミン酸／グルタミン、ロイシン／イソロイシン、メチオニン／イソロイシン、トレオニン／セリン、トリプトファン／フェニルアラニン、チロシン／ヒスチジン、チロシン／トリプトファン、グルタミン／アルギニン、ヒスチジン／アスパラギン、ヒスチジン／グルタミン、リシン／アスパラギン、リシン／グルタミン、リシン／グルタミン酸、フェニルアラニン／ロイシン、フェニルアラニン／メチオニン、セリン／アラニン、セリン／アスパラギン、バリン／ロイシン、およびバリン／メチオニンである。下記の８つの群はそれぞれ、互いに保存的置換であるアミノ酸を含有する。１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リシン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；７）セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）；および８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（１９８４年）を参照されたい）。いくつかの実施形態において、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、または少なくとも４０の保存的置換が存在し得る。いくつかの実施形態において、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、または４０の保存的置換が存在し得る。

【0039】

「アミノ酸置換セット」または「置換セット」という用語は、アミノ酸置換の群を指す。置換セットは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、またはそれ超のアミノ酸置換を有することができる。

【0040】

「単離された」という用語は、それが通常関連している構成要素（他のタンパク質、核酸、細胞など）から部分的または完全に分離した核酸、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、タンパク質、または他の構成要素を指す。いくつかの実施形態において、単離ポリペプチドまたはタンパク質は、組換えポリペプチドまたはタンパク質である。

【0041】

核酸（例えば、ポリヌクレオチド）、ポリペプチド、または細胞は、人工もしくは遺伝子操作されており、または人工もしくは遺伝子操作されたタンパク質または核酸に由来しており、もしくはこれを含有するとき、「組換え」である（例えば、非天然または非野生型）。例えば、天然において見られるようなポリヌクレオチドに通常隣接するヌクレオチド配列と関連しないように、ベクターまたは任意の他の異種位置（例えば、組換え生物のゲノム）に挿入されるポリヌクレオチドは、組換えポリヌクレオチドである。組換えポリヌクレオチドからインビトロまたはインビボで発現するタンパク質は、組換えポリペプチドの一例である。同様に、天然では現れないポリヌクレオチド配列、例えば、天然の遺伝子のバリアントは、組換えである。

【0042】

「核酸」または「オリゴヌクレオチド」または「ポリヌクレオチド」または本明細書において使用する文法的同等物は、少なくとも２つのヌクレオチドが一緒に共有結合していることを意味する。「核酸」という用語は、一本鎖、二本鎖、または複数鎖のＤＮＡ、ＲＮＡおよびその類似体（誘導体）を含む。オリゴヌクレオチドは典型的には、長さが約５、６、７、８、９、１０、１２、１５、２５、３０、４０、５０またはそれ超のヌクレオチドから、長さが約１００ヌクレオチドまでである。核酸およびポリヌクレオチドは、より長い長さ、例えば、２００、３００、５００、１０００、２０００、３０００、５０００、７０００、１０，０００などを含めた任意の長さのポリマーである。特定の実施形態において、本明細書における核酸は、ホスホジエステル結合を含有する。他の実施形態において、例えば、ホスホロアミデート、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、またはＯ−メチルホスホロアミジット連鎖（Ｅｃｋｓｔｅｉｎ、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、 Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）；ならびにペプチド核酸骨格および連鎖を含む代わりの骨格を有し得る核酸類似体が含まれる。他の類似体核酸は、米国特許第５，２３５，０３３号および同第５，０３４，５０６号、ならびにＡＳＣシンポジウムシリーズ５８０、チャプター６および７、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、ＳａｎｇｈｕｉおよびＣｏｏｋ（編）に記載されたものを含めた、陽性骨格；非イオン骨格、および非リボース骨格を有するものを含む。１つまたは複数の炭素環式糖を含有する核酸はまた、核酸の１つの定義内に含まれる。リボース−ホスフェート骨格の修飾は、種々の理由のために、例えば、生理的環境におけるこのような分子の安定性および半減期を増加させるために、またはバイオチップ上のプローブとして行い得る。天然の核酸および類似体の混合物を作製することができ、代わりに、異なる核酸類似体の混合物、ならびに天然の核酸および類似体の混合物を作製し得る。

【0043】

特定の核酸配列はまた、「スプライスバリアント」を包含する。同様に、核酸がコードする特定のタンパク質は、この核酸のスプライスバリアントがコードする任意のタンパク質を包含する。「スプライスバリアント」とは、名称が示唆するように、遺伝子の選択的スプライシングの産物である。転写の後、異なる（代わりの）核酸スプライス産物が異なるポリペプチドをコードするように、最初の核酸転写物をスプライスし得る。スプライスバリアントの産生のための機構は変化するが、エキソンの選択的スプライシングを含む。読み過し転写によって同じ核酸に由来する代わりのポリペプチドはまた、この定義に包含される。スプライス産物の組換え形態を含めたスプライシング反応の任意の産物は、この定義に含まれる。

【0044】

核酸は、別の核酸配列との機能的関係に置かれたときに「作動可能に連結」している。例えば、プレ配列または分泌リーダーのためのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与する前タンパク質として発現する場合は、ポリペプチドのためのＤＮＡに作動可能に連結しており；プロモーターまたはエンハンサーは、配列の転写に影響を与える場合、コード配列に作動可能に連結しており；あるいはリボソーム結合部位は、翻訳を促進するために位置している場合、コード配列に作動可能に連結している。一般に、「作動可能に連結」しているとは、連結されているＤＮＡ配列が互いに近くにあり、分泌リーダーの場合は、隣接しており、読み取り相にあることを意味する。しかし、エンハンサーは、隣接している必要がない。連結は、都合のよい制限部位におけるライゲーションによって達成される。このような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが通常の実施に従って使用される。

【0045】

「同一性」または「同一性パーセント」は、２つ以上のポリペプチド配列との関連において、比較ウィンドウに亘って、または配列比較アルゴリズムを使用して、もしくは手作業アライメントおよび目視検査によって測定した指定した領域に亘って、最大の一致について比較および整列されるとき、同じであり、または参照配列に対して特定の領域に亘って同じである特定のパーセンテージのアミノ酸残基を有する（例えば、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８８％の同一性、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の同一性を共有する）２つ以上の配列またはサブ配列を指す。

【0046】

配列同一性の比較および決定のための配列の最適なアライメントは、配列比較アルゴリズムによって、または目視検査によって決定することができる（一般に、Ａｕｓｕｂｅｌら、下記を参照されたい）。目視検査によって配列を最適に整列させ、配列同一性を決定するとき、配列同一性パーセントは、参照配列と同一の試験配列の残基の数を非ギャップ位置の数で割り、１００を乗じたものとして計算する。配列比較アルゴリズムを使用するとき、試験および参照配列をコンピュータに入力し、サブ配列座標および配列アルゴリズムプログラムパラメーターを指定する。次いで、配列比較アルゴリズムによって、参照配列に対する試験配列についての配列同一性パーセントを、当技術分野において公知のようなプログラムパラメーター、例えば、ＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ２．０に基づいて計算する。例えば、Ｓｍｉｔｈおよび Ｗａｔｅｒｍａｎの局所相同性アルゴリズム（１９８１年、Ａｄｖ． Ａｐｐｌ． Ｍａｔｈ．２：４８２）によって、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ、１９７０年、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性アライメントアルゴリズムによって、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ、１９８８年、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５：２４４４の類似法のための探索によって、またはこれらのアルゴリズムのコンピュータ化されたインプリメンテーション（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓソフトウェアパッケージ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）によって、比較を行うことができる。このように、アライメントは、欠失および／または付加を有する配列、ならびに置換を有する配列、ならびに天然、例えば、多形または対立遺伝子バリアント、および人造のバリアントについて行うことができる。

【0047】

「実質的な配列同一性」または「実質的な同一性」というフレーズは、２つのポリペプチド配列との関連において、参照配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する配列を指す。同一性パーセントは、７０％〜１００％の任意の整数でよい。１００％の配列同一性を有する２つのポリペプチド配列は、「同一」と言われる。ポリペプチド配列は、本明細書に記載の方法、例えば、上記のような標準的パラメーターを使用したＢＬＡＳＴを使用して決定して、配列が、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％またはそれ超の配列同一性を有するとき、参照配列に対して「実質的な配列同一性」を有すると言われる。

【0048】

「発現」という用語は、これらに限定されないが、転写、転写後修飾、翻訳、翻訳後修飾、および分泌を含めた、ポリペプチドの産生に関与する任意のステップを含む。

【0049】

２つの配列が天然で関連していない場合、アミノ酸またはペプチドは、それが作動可能に連結している別の配列と「非相同」である。

【0050】

「用量」および「投与量」という用語は、本明細書において互換的に使用される。用量は、各投与において個体に与える活性成分の量を指す。本明細書において提供する本方法および組成物について、用量とは一般に、疾患（例えば、ＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）感染）治療の量を指してもよい。用量は、所与の治療のための通常の用量の範囲、投与の頻度；個体のサイズおよび耐性；状態の重症度；副作用のリスク；ならびに投与経路を含めたいくつかの要因によって変化する。当業者は、上記の要因によって、または治療的進展に基づいて用量を修正することができることを認識する。「剤形」という用語は、医薬品または医薬組成物の特定のフォーマットを指し、投与経路によって決まる。例えば、剤形は、噴霧のための液体形態（例えば、吸入剤のため）、例えば、経口送達のための錠剤もしくは液体、または例えば、注射のための食塩水中でよい。

【0051】

「ヘルペスウイルス」または「ヘルペス−ウイルス」または「ＨＶ」という用語は、ヒトヘルペスウイルスを指し、状況によって、ヒトヘルペスウイルス−１（ＨＨＶ−１、単純ヘルペスウイルス−１、ＨＳＶ１、ＨＳＶ−１）、ＨＨＶ−２（単純ヘルペスウイルス−２、ＨＳＶ２、ＨＳＶ−２）、ＨＨＶ−３（水痘帯状疱疹ウイルス、ＶＺＶ）、ＨＨＶ−４（エプスタイン−バーウイルス、ＥＢＶ）、ＨＨＶ−５（サイトメガロウイルス、ＣＭＶ、ＨＣＭＶ）、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、ＨＨＶ−８（カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ＫＳＨＶ）を含めたヒトヘルペスウイルスの１つ、それ超、または全てを指すために使用し得る。いくつかの実施形態において、ヘルペスウイルスは、ＨＨＶ−１である。いくつかの実施形態において、ヘルペスウイルスは、ＨＨＶ−２である。いくつかの実施形態において、ヘルペスウイルスは、ＨＨＶ−３である。いくつかの実施形態において、ヘルペスウイルスは、ＨＨＶ−４である。いくつかの実施形態において、ヘルペスウイルスは、ＨＨＶ−５である。いくつかの実施形態において、ヘルペスウイルスは、ＨＨＶ−６である。いくつかの実施形態において、ヘルペスウイルスは、ＨＨＶ−７である。いくつかの実施形態において、ヘルペスウイルスは、ＨＨＶ−８である。いくつかの実施形態において、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８という用語のそれぞれは、それぞれのＨＨＶの全ての株を指してもよい。いくつかの実施形態において、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８という用語のそれぞれは、そのＨＨＶの単一の株を指してもよい。いくつかの実施形態において、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、およびＨＨＶ−８という用語のそれぞれは、その特定のＨＨＶの変異体を含み得る。いくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＳＶ（ＨＨＶ−１および／またはＨＨＶ−２）である。

【0052】

「単純ヘルペスウイルス」および「ＨＳＶ」という用語は、それらの一般の意味で使用され、二本鎖ＤＮＡウイルスである単純ヘルペスウイルス１（ＨＳＶ１、ＨＳＶ−１、ＨＨＶ−１）および単純ヘルペスウイルス２（ＨＳＶ２、ＨＳＶ−２、ＨＨＶ−２）を指す。いくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２の全ての株を含む。いくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ１またはＨＳＶ２の単一の株を指してもよい。いくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ１および／またはＨＳＶ２の複数の株を含む。いくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ１および／またはＨＳＶ２の変異体を含む。「ＨＳＶ１」および「ＨＳＶ２」という用語は、それらの明白な通常の意味で使用される。いくつかの実施形態において、ＨＳＶ１は、ＨＳＶ１の全ての株を含む。いくつかの実施形態において、ＨＳＶ１は、ＨＳＶ１の変異体を含む。いくつかの実施形態において、ＨＳＶ２は、ＨＳＶ２の全ての株を含む。いくつかの実施形態において、ＨＳＶ２は、ＨＳＶ２の変異体を含む。

【0053】

「不活性化する」、「不活性化すること」という用語、およびその他の動詞の形態は、ウイルス、またはウイルスを修飾する工程を記載するとき、ヒトにおいて存続可能な感染を確立し、複製し、第２のヒトを感染させることができるウイルス粒子を生じさせることができないウイルス、ならびにこのようなウイルスを生じさせる工程を指す。いくつかの実施形態において、不活性化ウイルスは、ウイルスが複製することを防止する変異を含む。いくつかの実施形態において、不活性化ウイルスは、ウイルスが対象（例えば、ヒト）に感染することを防止する変異を含む。いくつかの実施形態において、不活性化ウイルスは、ウイルスが細胞（例えば、ヒト細胞）に感染することを防止する変異を含む。いくつかの実施形態において、ウイルスを不活性化することは、ウイルスと、ウイルスがヒトにおいて存続可能な感染を確立して第２のヒトを感染することができるウイルス粒子を生じさせることができないようにする作用剤とを接触させることを含む。いくつかの実施形態において、ウイルスを不活性化することは、ウイルスと、架橋剤とを接触させることを含む。いくつかの実施形態において、ウイルスを不活性化することは、ウイルスと、酸化剤とを接触させることを含む。いくつかの実施形態において、ウイルスを不活性化することは、ウイルスと、還元剤とを接触させることを含む。いくつかの実施形態において、ウイルスを不活性化することは、ウイルスと、熱とを接触させることを含む。いくつかの実施形態において、ウイルスを不活性化することは、ウイルスと、放射線とを接触させることを含む。いくつかの実施形態において、ウイルスを不活性化することは、ウイルスと、界面活性剤とを接触させることを含む。いくつかの実施形態において、ウイルスを不活性化することは、ウイルスと、ｐＨ変更剤とを接触させることを含む。いくつかの実施形態において、ウイルスを不活性化することは、ウイルスと、化学剤とを接触させることを含む。いくつかの実施形態において、ウイルスを不活性化することは、ウイルスと、フロクマリンとを接触させることを含む。いくつかの実施形態において、ウイルスを不活性化することは、ウイルスと、アジリジンとを接触させることを含む。いくつかの実施形態において、ウイルスを不活性化することは、ウイルスと、エチレンイミンとを接触させることを含む。いくつかの実施形態において、ウイルスを不活性化することは、ウイルスと、バイナリーエチレンイミンとを接触させることを含む。いくつかの実施形態において、ウイルスを不活性化することは、ウイルスと、β−プロピオラクトンとを接触させることを含む。

【0054】

「リポ多糖に由来するアジュバント」および「ＬＰＳに由来するアジュバント」という用語は、ワクチン製剤の部分として一般に用いられるリポ多糖、またはリポ多糖に由来する分子を指す。ＬＰＳに由来するアジュバントは、リポ多糖分子の非存在に対して、ワクチンまたはワクチン接種の方法の構成要素として対象に投与されたときに対象の免疫応答を増加させるように設計し得る。いくつかの実施形態において、ＬＰＳに由来するアジュバントは、ＬＰＳのポーションを含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＳに由来するアジュバントは、ＬＰＳを含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＳに由来するアジュバントは、ＬＰＳの修飾したポーションを含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＳに由来するアジュバントは、ＬＰＳのポーションである構成要素、およびＬＰＳのポーションでない別の構成要素を含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＳに由来するアジュバントは、ＬＰＳのポーションに相当するが、化学的に合成された構成要素を含む。「リポ多糖」および「ＬＰＳ」という用語は、生物学、生化学、および免疫学におけるそれらの明白な意味によって使用され、一緒に共有結合されている１種または複数の脂質および１種または複数の多糖を含む分子を指す。いくつかの実施形態において、ＬＰＳは、グラム−陰性菌の外膜の構成要素である。いくつかの実施形態において、ＬＰＳに由来するアジュバントは、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）アジュバントである。

【0055】

「アジュバント」という用語は、免疫学におけるその明白な通常の意味によって使用され、ワクチンの構成要素として一般に使用される物質を指す。アジュバントは、ワクチンの部分として１種または複数の特異的抗原と共に対象に投与されたときに、対象において抗原特異的免疫応答を増加し得る。いくつかの実施形態において、アジュバントは、抗原への免疫応答を促進する。いくつかの実施形態において、アジュバントは、抗原への免疫応答を延長する。いくつかの実施形態において、アジュバントは、抗原への免疫応答を増強する。いくつかの実施形態において、アジュバントは、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバント、スクアレン、リポ多糖に由来するアジュバント、細菌細胞壁構成要素、分子ケージ、核酸、油、ビロソーム、ＱＳ２１、およびＭＦ５９からなる群から選択される。

【0056】

「アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバント」という用語は、アルミニウムを含むアジュバントを指す。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、水酸化アルミニウムを含む。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、水酸化アルミニウムである。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、リン酸アルミニウムを含む。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、リン酸アルミニウムである。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、硫酸アルミニウムカリウムを含む。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、硫酸アルミニウムカリウムである。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバントである。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、リン酸アルミニウムアジュバントである。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、硫酸アルミニウムカリウムアジュバントである。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、Ａｌｕｍである。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、ＣＡＳ番号２１６４５−５１−２である。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、水酸化アルミニウムゲルである。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、白色のゼラチン状沈殿物の形態の水酸化アルミニウムゲルである。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、ＣＡＳ番号７７８４−３０−７である。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、リン酸アルミニウムゲルである。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、白色のゼラチン状沈殿物の形態のリン酸アルミニウムゲルである。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、Ｉｍｊｅｃｔ Ａｌｕｍアジュバント（商標）ではない。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、水酸化マグネシウムを有さない水酸化アルミニウムである。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（商標）である。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、Ａｄｊｕ−ｐｈｏｓ（商標）である。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、Ａｄｊｕｐｈｏｓ（商標）である。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、アモルファス水酸化アルミニウムであり、結晶性水酸化アルミニウムではない。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、アモルファスアルミニウムを含み、結晶性アルミニウムを含まない。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、結晶性水酸化アルミニウムであり、アモルファス水酸化アルミニウムでない。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、結晶性アルミニウムを含み、アモルファスアルミニウムを含まない。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、結晶性水酸化酸化アルミニウム（aluminum oxyhydroxide）を含む。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、結晶性水酸化酸化アルミニウムである。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、アモルファスヒドロキシリン酸アルミニウムを含む。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、アモルファスヒドロキシリン酸アルミニウムである。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、水酸化酸化アルミニウムを含み、ヒドロキシ炭酸アルミニウムを含まない。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、水酸化酸化アルミニウムであり、ヒドロキシ炭酸アルミニウムでない。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、水酸化酸化アルミニウムを含み、水酸化マグネシウムを含まない。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、水酸化酸化アルミニウムであり、水酸化マグネシウムでない。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、いくつかのヒドロキシルが硫酸アニオンで置き換えられているアモルファス水酸化アルミニウムを含まない。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、ベーマイト様パターンの水酸化酸化アルミニウムを含む。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、ベーマイト様パターンの水酸化酸化アルミニウムである。上記のアルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントのいくつかの実施形態において、記載は、ワクチンへ含まれる前のアルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントについてである。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、ヒトへの投与のためにＦＤＡによって承認されているアルミニウム含有アジュバントである。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、ヒトへの投与のためにＦＤＡによって承認されている水酸化アルミニウムアジュバントである。いくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、ヒトへの投与についてＦＤＡによって承認されているリン酸アルミニウムアジュバントである。

【0057】

「水酸化アルミニウムアジュバント」という用語は、本明細書において使用する場合、水酸化アルミニウムを含む水酸化アルミニウムアジュバントを指し、認可を受けたヒトワクチンにおいて現在使用されている。いくつかの実施形態において、「水酸化アルミニウムアジュバント」とは、本明細書において使用する場合、認可を受けたヒトワクチンにおいて現在使用されている水酸化アルミニウムアジュバントを指し、Ｈｅｍ Ｓ．Ｌ．、Ｖａｃｃｉｎｅ ２３（２００７年）４９８５〜４９８６頁におけるこの用語の使用に従って使用される。いくつかの実施形態において、水酸化アルミニウムアジュバントは、ＣＡＳ番号２１６４５−５１−２を含む。いくつかの実施形態において、水酸化アルミニウムアジュバントは、水酸化アルミニウムゲルである。いくつかの実施形態において、水酸化アルミニウムアジュバントは、白色のゼラチン状沈殿物の形態の水酸化アルミニウムゲルである。いくつかの実施形態において、水酸化アルミニウムアジュバントは、水酸化アルミニウムを含み、水酸化マグネシウムを含まない。いくつかの実施形態において、水酸化アルミニウムアジュバントは、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（商標）である。いくつかの実施形態において、水酸化アルミニウムアジュバントは、結晶性水酸化アルミニウムを含み、アモルファス水酸化アルミニウムを含まない。いくつかの実施形態において、水酸化アルミニウムアジュバントは、結晶性アルミニウムを含み、アモルファスアルミニウムを含まない。いくつかの実施形態において、水酸化アルミニウムアジュバントは、結晶性水酸化酸化アルミニウムを含む。いくつかの実施形態において、水酸化アルミニウムは、結晶性水酸化酸化アルミニウムである。いくつかの実施形態において、水酸化アルミニウムアジュバントは、水酸化酸化アルミニウムを含み、ヒドロキシ炭酸アルミニウムを含まない。いくつかの実施形態において、水酸化アルミニウムアジュバントは、水酸化酸化アルミニウムであり、ヒドロキシ炭酸アルミニウムでない。いくつかの実施形態において、水酸化アルミニウムアジュバントは、いくつかのヒドロキシルが硫酸アニオンで置き換えられているアモルファス水酸化アルミニウムを含まない。いくつかの実施形態において、水酸化アルミニウムアジュバントは、ベーマイト様パターンの水酸化酸化アルミニウムを含む。上記の水酸化アルミニウムアジュバントのいくつかの実施形態において、記載は、ワクチンへ含まれる前の水酸化アルミニウムアジュバントについてである。

【0058】

「リン酸アルミニウムアジュバント」という用語は、本明細書において使用する場合、リン酸アルミニウムを含むリン酸アルミニウムアジュバントを指し、認可を受けたヒトワクチンにおいて現在使用されている。いくつかの実施形態において、「リン酸アルミニウムアジュバント」とは、本明細書において使用する場合、認可を受けたヒトワクチンにおいて現在使用されているリン酸アルミニウムアジュバントを指し、Ｈｅｍ Ｓ．Ｌ．、Ｖａｃｃｉｎｅ ２３（２００７年） ４９８５〜４９８６頁におけるこの用語の使用に従って使用される。いくつかの実施形態において、リン酸アルミニウムアジュバントは、ＣＡＳ番号７７８４−３０−７を含む。いくつかの実施形態において、リン酸アルミニウムアジュバントは、リン酸アルミニウムゲルである。いくつかの実施形態において、リン酸アルミニウムアジュバントは、白色のゼラチン状沈殿物の形態のリン酸アルミニウムゲルである。いくつかの実施形態において、リン酸アルミニウムアジュバントは、Ａｄｊｕｐｈｏｓ（商標）である。いくつかの実施形態において、リン酸アルミニウムアジュバントは、Ａｄｊｕｐｈｏｓ（商標）である。いくつかの実施形態において、リン酸アルミニウムアジュバントは、アモルファスヒドロキシリン酸アルミニウムを含む。上記のリン酸アルミニウムアジュバントのいくつかの実施形態において、記載は、ワクチンへ含まれる前のリン酸アルミニウムアジュバントについてである。

【0059】

「リピドＡアジュバント」という用語は、リポ多糖分子の残部から単離されたリポ多糖のリピドＡポーションを含むアジュバントを指す。リピドＡアジュバントは、ＬＰＳに由来するアジュバントの一例である。いくつかの実施形態において、リピドＡは、脂肪酸分子に共有結合している２つのグルコサミン分子を含み、各グルコサミン分子に共有結合している１つのホスフェート分子を含む。いくつかの実施形態において、リピドＡは、６個の脂肪酸分子を含む。いくつかの実施形態において、リピドＡは、それぞれが１０〜１６個の炭素原子を含む６個の脂肪酸分子を含む。

【0060】

「ＴＬＲ４」および「トール様受容体４」という用語は、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｏ００２０６、Ｅｎｔｒｅｚ７０９９、ＲｅｆＳｅｑ ＮＭ＿００３２６６．３、および／またはＮＰ＿００３２５７．１と関連するヒト遺伝子、ｍＲＮＡ、および／またはタンパク質を指す。

【0061】

「結合する」、「結合した」、「結合すること」という用語、および他のその動詞の形態は、酵素学および生化学におけるそれらの明白な通常の意味によって使用され、任意選択で相互作用し得る２つの組成物の間の１つまたは複数の相互作用または接触の形成を指す。結合は、分子間または分子内でよい。

【0062】

「硫酸アルミニウムカリウムアジュバント」という用語は、硫酸アルミニウムカリウムを含むアジュバントを指す。

【0063】

「ワクチン」という用語は、医学および免疫学におけるその明白な通常の意味によって使用され、抗原構成要素への免疫応答を誘発する、対象（例えば、ヒト）への投与のための抗原構成要素を含む組成物を指す。いくつかの実施形態において、ワクチンは、治療的である。いくつかの実施形態において、ワクチンは、予防的である。いくつかの実施形態において、ワクチンは、１種または複数のアジュバントを含む。

【0064】

「複製を減少させるＤＮＡ変異」という用語は、ウイルスに適用されるように、複製を減少させるＤＮＡ変異を含まない同一のウイルスに対して、ウイルスの複製の減少をもたらすウイルスゲノムの変異を指す。いくつかの実施形態において、複製を減少させるＤＮＡ変異は、ウイルス複製を防止する。

【0065】

「化学的不活性化」という用語は、ウイルス（例えば、ＨＶ、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）の不活性化に適用されるように、ウイルスと、化学剤とを接触させることを含む、ウイルスを不活性化する方法（本明細書に定義されているような）を指し、接触させることは、ウイルスの不活性化をもたらす。

【0066】

「架橋剤」という用語は、化学および生化学におけるその明白な意味によって使用され、２種以上の化学種（例えば、タンパク質、核酸、糖、細胞、化合物、任意のこれらの組合せ）の間で共有結合（例えば、不可逆的、可逆的）が形成されることをもたらし、かつ２種以上の組成物を接続することができる作用剤（例えば、化学物質、生物学的作用物質）を指す。いくつかの実施形態において、２種以上の組成物は、共有結合によって直接接続している。いくつかの実施形態において、２種以上の組成物は、１つもしくは複数の架橋剤分子、または１つもしくは複数の架橋剤分子のポーションへの共有結合によって接続している。いくつかの実施形態において、組成物は、架橋剤または架橋剤のポーションではない中間体分子または原子に、共有結合によって接続している。

【0067】

「酸化剤」という用語は、化学におけるその明白な通常の意味によって使用され、酸化還元反応において第２の物質から電子を除去する物質を指す。

【0068】

「還元剤」という用語は、化学におけるその明白な通常の意味によって使用され、酸化還元反応において第２の物質に電子を供与する物質を指す。

【0069】

「放射線」という用語は、物理学におけるその明白な通常の意味によって使用され、電離および非電離放射線の両方を含む。放射線のいくつかの例には、これらに限定されないが、ＵＶ、赤外、α、β、γ、Ｘ線、可視、マイクロ波が含まれる。

【0070】

「アルデヒド架橋剤」という用語は、化学におけるその明白な通常の意味によって使用され、本明細書に定義されているような架橋剤を指し、共有結合の形成に関与している架橋剤部分の１つまたは複数は、アルデヒドである。いくつかの実施形態において、反応性部分の全て（例えば、２つ）は、アルデヒドである。いくつかの実施形態において、１つの反応性部分はアルデヒドであり、１つまたは複数の反応性部分はアルデヒドでない。

【0071】

「ホルマリン」という用語は、化学におけるその明白な通常の意味によって使用され、ホルムアルデヒド（例えば、３７％、質量による）を含む水溶液を指す。ホルマリンの構成要素は典型的には、ウイルスを不活性化する十分の量で存在するように設計される。いくつかの実施形態において、ホルマリンは、メタノールを含み得る。いくつかの実施形態において、ホルマリンは、メタノールを含まない。

【0072】

「ウイルス排出」という用語は、医学およびウイルス学におけるその明白な通常の意味によって使用され、感染細胞からのウイルスの産生および放出を指す。いくつかの実施形態において、ウイルスは、対象の細胞から放出される。いくつかの実施形態において、ウイルスは、感染した対象から環境中に放出される。いくつかの実施形態において、ウイルスは、対象内の細胞から放出される。

【0073】

「病変」という用語は、医学におけるその明白な通常の意味によって使用され、対象の組織に対する異常または損傷を指す。

【0074】

「硫酸化多糖」という用語は、生化学および糖生物学におけるその明白な通常の意味によって使用され、２つ以上の共有結合した単糖類（窒素含有単糖類を含めた）を指し、単糖類の１つまたは複数は、硫酸化されている。いくつかの実施形態において、硫酸化多糖は、合成的に作製もしくは修飾された硫酸化多糖、または合成的に硫酸化された多糖でよい。例には、これらに限定されないが、ヘパリン、ヘパラン硫酸、およびデキストラン硫酸が含まれる。

【0075】

「スルホン化多糖」という用語は、生化学および糖生物学におけるその明白な通常の意味によって使用され、２つ以上の共有結合した単糖類（窒素含有単糖類を含めた）を指し、単糖類の１つまたは複数は、スルホン化されている。いくつかの実施形態において、スルホン化多糖は、合成的に作製もしくは修飾されたスルホン化多糖、または合成的にスルホン化された多糖でよい。

【0076】

「ウイルス粒子」という用語は、ウイルス学におけるその明白な通常の意味によって使用され、ウイルスゲノム（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、一本鎖、二本鎖）、ウイルスキャプシドおよび関連タンパク質を含むビリオンを指し、エンベロープウイルス（例えば、ＨＶ、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）の場合、エンベロープは、脂質および任意選択で宿主細胞膜の構成要素、および／またはウイルスタンパク質を含む。

【0077】

「プラーク形成単位」という用語は、ウイルス学におけるその明白な通常の意味によって使用され、試料の単位体積毎のプラークの数に基づいた測定単位を指す。いくつかの実施形態において、単位は、感受性細胞の単層を感染させるときに、形成することができるプラークの数に基づく。プラーク形成単位同等物は、不活性化ウイルスの測定単位である。いくつかの実施形態において、プラーク形成単位同等物は、不活性化の前の試料についてのプラーク形成単位に由来する。

【0078】

「プライム−ブースト」または「プライムブースト」という用語は、ワクチン投与の方法論に適用されるように、ウイルス学および免疫学におけるその明白な通常の意味によって使用され、ワクチンまたはワクチン構成要素の第１の用量を対象または患者に投与し、投与を開始し（プライム）、後の時間（例えば、数時間、数日、数週間、数カ月後）に、第２のワクチンを同じ患者または対象に投与する（ブースト）、ワクチン投与の方法を指す。第１および第２のワクチンは、同一でも異なってもよいが、同じ疾患または状態（例えば、ＨＶ、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８による感染）の治療または予防において有用な免疫応答を両方とも誘発することを意図する。いくつかの実施形態において、プライムは、１種もしくは複数のウイルス遺伝子またはそのポーションを含むＤＮＡワクチンであり、ブーストは、１種もしくは複数のウイルス遺伝子またはそのポーション、１種もしくは複数のウイルスタンパク質またはそのポーション、あるいは１種もしくは複数の不活性化または弱毒性ウイルスを含むＤＮＡワクチンである。いくつかの実施形態において、プライムは、１種もしくは複数の弱毒性または不活性化ウイルスであり、ブーストは、１種もしくは複数のウイルス遺伝子またはそのポーション、１種もしくは複数のウイルスタンパク質またはそのポーション、あるいは１種もしくは複数の不活性化または弱毒性ウイルスを含むＤＮＡワクチンである。いくつかの実施形態において、プライムは、１種もしくは複数のウイルスタンパク質またはそのポーションであり、ブーストは、１種もしくは複数のウイルス遺伝子またはそのポーション、１種もしくは複数のウイルスタンパク質またはそのポーション、あるいは１種もしくは複数の不活性化または弱毒性ウイルスを含むＤＮＡワクチンである。いくつかの実施形態において、プライムは、不活性化ウイルス（例えば、ＨＶ、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）を含むワクチンであり、ブーストは、プライムと同じワクチンの第２の用量である。

【0079】

「関連する」または「と関連する」という用語は、疾患（例えば、ウイルスが関連する疾患、ＨＶが関連する疾患、ＨＳＶが関連する疾患、ＨＨＶ−１が関連する疾患、ＨＨＶ−２が関連する疾患、ＨＨＶ−３が関連する疾患、ＨＨＶ−４が関連する疾患、ＨＨＶ−５が関連する疾患、ＨＨＶ−６が関連する疾患、ＨＨＶ−７が関連する疾患、またはＨＨＶ−８が関連する疾患）を記載するために本明細書において使用する場合、疾患が、または疾患の症状が、関連する疾患として記載されているもの、または疾患と関連すると記載されているものによって引き起こされることを意味する。例えば、ＨＳＶ２またはＨＳＶ２感染と関連する疾患は、ＨＳＶ２またはＨＳＶ２感染から（完全にまたは部分的に）もたらされる疾患であり得る。本明細書において使用する場合、疾患と関連しているとして記載されているものは、原因物質である場合、疾患の治療についての標的であり得る。例えば、ＨＳＶ２またはＨＳＶ２感染と関連する疾患は、本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶ２ワクチンで治療し得る。例えば、ＨＳＶ２と関連する疾患は、ＨＳＶ２またはＨＳＶ２感染を有さない対象と比較して、ＨＳＶ２またはＨＳＶ２感染を有する対象が発症するより高い危険性がある疾患でよい。

【0080】

「単離された核酸配列製剤」という用語は、タンパク質（例えば、ウイルスタンパク質）の非存在下で核酸を有する製剤を指す。極微量のタンパク質が単離された核酸配列製剤中に存在し得ることを当業者は理解する。いくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、ＷＯ２００７１０６４０４に記載されている核酸である（例えば、ｐＤＮＡ）。いくつかの実施形態において、上記の記載は、ワクチンへの組込み前の単離された核酸配列の形成に適用する。

【0081】

「核酸ワクチン」という用語は、抗原構成要素が単離された核酸配列製剤であるワクチンを指す。「ＤＮＡワクチン」という用語は、抗原構成要素がＤＮＡ配列（「ＤＮＡ抗原構成要素」）であるワクチンを指す。単離された核酸配列製剤の抗原構成要素（例えば、ＤＮＡ抗原構成要素）が発現するとき、抗原タンパク質が産生されるように、単離された核酸配列製剤の抗原構成要素（例えば、ＤＮＡ抗原構成要素）は、抗原タンパク質をコードする単離された核酸配列製剤（例えば、「ＤＮＡ配列」）でよい。ＤＮＡ抗原構成要素は、相当するタンパク質に翻訳することができるＤＮＡ配列（コード配列）を任意選択で含む、ＤＮＡプラスミド（例えば、ｐＶＡＸ）でよく、コード配列は、対象（例えば、ヒト）に投与されたときに、タンパク質に特異的な免疫応答をもたらすことができるタンパク質に翻訳される。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、ワクチンＤＮＡプラスミドを含み、ＤＮＡプラスミドは、ＷＯ２００７１０６４０４に記載されているコード配列を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、コード配列にライゲーションされていないｐＶＡＸプラスミドである。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、コード配列にライゲーションされているｐＶＡＸプラスミドである。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、ＨＳＶ２ゲノムからのコード配列にライゲーションされているｐＶＡＸプラスミドである。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、ＨＣＭＶゲノムからのコード配列にライゲーションされているｐＶＡＸプラスミドである。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、ＨＳＶ１ゲノムからのコード配列にライゲーションされているｐＶＡＸプラスミドである。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、ヒトにおいて抗原を発現することができるプラスミドであり、抗原は、ＨＳＶ２タンパク質のポーションである。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、ヒトにおいて抗原を発現することができるプラスミドであり、抗原は、ＨＳＶ１タンパク質のポーションである。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、ヒトにおいて抗原を発現することができるプラスミドであり、抗原は、ＨＳＶタンパク質のポーションである。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、ヒトにおいて抗原を発現することができるプラスミドであり、抗原は、ＨＶ（例えば、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）タンパク質のポーションである。

【0082】

「ワクチン接種する」という用語、またはさらなるその動詞の形態は、対象（例えば、ヒト）へのワクチンの投与、および抗原特異的免疫応答を誘発することを指し、抗原は、ワクチンに含まれている。「ワクチン接種する」という用語はまた、投与された抗原に対して抗原特異的免疫応答を誘発することを指し得る。いくつかの実施形態において、ワクチン接種することは、疾患または感染病原体（例えば、ＨＶ、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）に対する予防を実現する。

【0083】

「ポーション」という用語は、全体の一部を指し、これはまた全体でよい。いくつかの実施形態において、ポーションは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％である。いくつかの実施形態において、ポーションは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％である。他に示さない限り、「約」という用語は、数値との関連において、公称値±公称値の１０％を示す。いくつかの実施形態において、「約」は、公称値でよい。

【0084】

ＩＩ．組成物
第１の態様において提供するのは、不活性化ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）、リポ多糖（ＬＰＳ）に由来するアジュバントおよびアルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントを含む、ヘルペスウイルス（ＨＶ）（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８））ワクチンである。

【0085】

ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、ＬＰＳに由来するアジュバントは、ＭＰＬであり、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバントまたはリン酸アルミニウムアジュバントであり、ワクチンは、単離された核酸配列製剤を含まない。ワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＶは、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）である。ワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ１である。ワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ２である。ワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２である。ワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＶは、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）である。ＨＶワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−１である。ＨＶワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−２である。ＨＶワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−３である。ＨＶワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−４である。ＨＶワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−５である。ＨＶワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−６である。ＨＶワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−７である。ＨＶワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−８である。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、サルモネラミネソタＬＰＳに由来する。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、サルモネラミネソタＲｅ５９５ＬＰＳに由来する。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、Ｒ５９５ＬＰＳに由来する。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、リピドＡアジュバントである。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、（Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカノイル部分を有さないリピドＡアジュバントである。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、１−ホスフェート部分を有さないリピドＡアジュバントである。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、モノホスホリルリピドＡである。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、３−Ｏ−デスアシル−４’−モノホスホリルリピドＡである。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、ＴＬＲ４タンパク質に結合することができる。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、合成ＭＰＬ類似体アジュバントである。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバントである。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、リン酸アルミニウムアジュバントである。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、硫酸アルミニウムカリウムアジュバントである。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、結晶性水酸化アルミニウムを含み、アモルファス水酸化アルミニウムまたはヒドロキシ炭酸アルミニウムまたは水酸化マグネシウムを含まない。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、白色のゼラチン状沈殿物の形態のリン酸アルミニウムゲルを含む。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、白色のゼラチン状沈殿物の形態の水酸化アルミニウムゲルを含む。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）は、複製を減少させるＤＮＡ変異を含む。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）は、化学的不活性化によって形成される。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）は、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）と、架橋剤、酸化剤、還元剤、熱、放射線、界面活性剤、ｐＨ変更剤、ならびにフロクマリン、アジリジン、エチレンイミン、バイナリーエチレンイミン、およびβ−プロピオラクトンから選択される化学剤から選択される１種または複数の作用剤とを接触させることによって形成される。いくつかの実施形態において、化学剤は、アジリジンである。いくつかの実施形態において、化学剤は、エチレンイミンである。いくつかの実施形態において、化学剤は、バイナリーエチレンイミンである。いくつかの実施形態において、化学剤は、β−プロピオラクトンである。いくつかの実施形態において、放射線は、紫外線である。いくつかの実施形態において、放射線は、電子ビーム線である。いくつかの実施形態において、放射線は、赤外線である。いくつかの実施形態において、放射線は、γ線である。いくつかの実施形態において、架橋剤は、アルデヒド架橋剤である。いくつかの実施形態において、架橋剤は、ホルムアルデヒドである。いくつかの実施形態において、架橋剤は、ホルマリンである。いくつかの実施形態において、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。いくつかの実施形態において、酸化剤は、過酸化水素である。いくつかの実施形態において、還元剤は、ａｌｄｒｉｔｈｉｏｌ−２である。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００である。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、ＮＰ−４０である。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ−２０である。いくつかの実施形態において、不活性化ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）は、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）と、紫外線およびフロクマリンを含む１種または複数の作用剤とを接触させることによって形成される。いくつかの実施形態において、フロクマリンは、ソラレンである。いくつかの実施形態において、フロクマリンは、４’−アミノメチル−４，５’，８−トリメチルソラレンである。いくつかの実施形態において、フロクマリンは、アンゲリシンである。いくつかの実施形態において、フロクマリンは、キサントトキシンである。いくつかの実施形態において、フロクマリンは、ベルガプテンである。いくつかの実施形態において、フロクマリンは、ノダケネチンである。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）は、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）の不活性化単一株である。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）は、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）の２種以上の不活性化株の組合せである。いくつかの実施形態において、不活性化ＨＶは、ＨＳＶ１の不活性化単一株である。いくつかの実施形態において、不活性化ＨＶは、ＨＳＶ２の不活性化単一株である。いくつかの実施形態において、不活性化ＨＶは、ＨＳＶ１の２種以上の不活性化株の組合せである。いくつかの実施形態において、不活性化ＨＶは、ＨＳＶ２の２種以上の不活性化株の組合せである。いくつかの実施形態において、不活性化ＨＶは、ＨＳＶ１の１種または複数の不活性化株およびＨＳＶ２の１種または複数の不活性化株の組合せである。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンは、筋内投与のために製剤される。ＨＶ（例えば、ＨＳ

Ｖ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンは、皮内投与のために製剤される。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンは、粘膜投与のために製剤される。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンは、鼻腔投与のために製剤される。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンは、直腸投与のために製剤される。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンは、腟内投与のために製剤される。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンは、局所投与のために製剤される。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンは、皮下投与のために製剤される。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンは、経皮膚的投与のために製剤される。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、抗原性の単離された核酸配列製剤である。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、ＤＮＡワクチンである。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、抗原性の単離された核酸配列製剤である。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、ワクチンは、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）感染に対するワクチンのレシピエントを、１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１１年、１２年、１３年、１４年、１５年、１６年、１７年、１８年、１９年、２０年、またはそれを超える年までワクチン接種する。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、ワクチンは、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）の１種または複数の株に対するワクチンを投与された患者を防御する。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、ワクチンは、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）の１種または複数の株のためのワクチンを投与された患者を治療する。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、ワクチンは、ワクチンを投与された患者が、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）の１種または複数の株に感染し、罹患し、得ること、または有することを予防する。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、ワクチンは、ワクチンを投与された患者が、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）の複数の株に感染し、罹患し、得ること、または有することを予防する。いくつかの実施形態において、ヘルペスウイルス（ＨＶ）（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８））ワクチンは、不活性化ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）、リポ多糖（ＬＰＳ）に由来するアジュバントおよびアルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントを含み、ＬＰＳに由来するアジュバントは、ＭＰＬであり、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバントまたはリン酸アルミニウムアジュバントであり、ワクチンは、単離された核酸配列製剤を含まない。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、抗原性の単離された核酸配列製剤である。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、ＤＮＡワクチンである。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、抗原性の単離された核酸配列製剤である。

【0086】

別の態様において提供するのは、不活性化ＨＳＶ、リポ多糖（ＬＰＳ）に由来するアジュバントおよびアルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントを含む単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ワクチンである。

【0087】

ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ１である。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ２である。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２である。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、サルモネラミネソタＬＰＳに由来する。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、サルモネラミネソタＲｅ５９５ＬＰＳに由来する。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、Ｒ５９５ＬＰＳに由来する。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、リピドＡアジュバントである。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、（Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカノイル部分を有さないリピドＡアジュバントである。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、（Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカノイル部分を含まないリピドＡアジュバントである。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、１−ホスフェート部分を有さないリピドＡアジュバントである。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、１−ホスフェート部分を含まないリピドＡアジュバントである。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）である。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、３−Ｏ−デスアシル−４’−モノホスホリルリピドＡである。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、ＴＬＲ４タンパク質に結合することができる。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、合成ＭＰＬ類似体アジュバントである。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバントである。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、リン酸アルミニウムアジュバントである。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、硫酸アルミニウムカリウムアジュバントである。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、複製を減少させるＤＮＡ変異を含む。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ウイルス複製を防止する、複製を減少させるＤＮＡ変異を含む。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、化学的不活性化によって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、架橋剤、酸化剤、還元剤、熱、放射線、界面活性剤、ｐＨ変更剤、ならびにフロクマリン、アジリジン、エチレンイミン、バイナリーエチレンイミン、およびβ−プロピオラクトンから選択される化学剤から選択される１種または複数の作用剤とを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、アジリジンとを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、エチレンイミンとを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、バイナリーエチレンイミンとを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、β−プロピオラクトンとを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、紫外線とを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、電子ビーム線とを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、赤外線とを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、γ線とを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、アルデヒド架橋剤とを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、ホルムアルデヒドとを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、ホルマリンとを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、過ヨウ素酸ナトリウムとを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、過酸化水素とを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、ａｌｄｒｉｔｈｉｏｌ−２とを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００とを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、ＮＰ−４０とを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、Ｔｗｅｅｎ−２０とを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、紫外線およびフロクマリンを含めた２種以上の作用剤とを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、紫外線およびソラレンとを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、紫外線および４’−アミノメチル−４，５’，８−トリメチルソラレンとを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、紫外線およびアンゲリシンとを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、紫外線およびキサントトキシンとを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、紫外線およびベルガプテンとを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶと、紫外線およびノダケネチンとを接触させることによって形成される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶ１の不活性化単一株である。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶ２の不活性化単一株である。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶ１の２種以上の不活性化株の組合せである。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶ２の２種以上の不活性化株の組合せである。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、不活性化ＨＳＶは、ＨＳＶ１の１種または複数の不活性化株、およびＨＳＶ２の１種または複数の不活性化株の組合せである。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、ワクチンは、筋内投与のために製剤される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、ワクチンは、皮内投与のために製剤される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、ワクチンは、粘膜投与のために製剤される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、ワクチンは、鼻腔内投与のために製剤される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、ワクチンは、直腸内投与のために製剤される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、ワクチンは、腟内投与のために製剤される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、ワクチンは、局所投与のために製剤される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、ワクチンは、皮下投与のために製剤される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、ワクチンは、非経口投与のために製剤される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、ワクチンは、経口投与のために製剤される。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、ワクチンは、経皮膚的投与のために製剤される。

【0088】

いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための化学剤は、アジリジンである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための化学剤は、エチレンイミンである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための化学剤は、バイナリーエチレンイミンである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための化学剤は、β−プロピオラクトンである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための放射線は、紫外線である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための放射線は、電子ビーム線である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための放射線は、赤外線である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための放射線は、γ線である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための架橋剤は、アルデヒド架橋剤である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための架橋剤は、ホルムアルデヒドである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための架橋剤は、ホルマリンである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための架橋剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための酸化剤は、過酸化水素である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための還元剤は、ａｌｄｒｉｔｈｉｏｌ−２である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための界面活性剤は、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための界面活性剤は、ＮＰ−４０である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ−２０である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するためのフロクマリンは、ソラレンである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するためのフロクマリンは、４’−アミノメチル−４，５’，８−トリメチルソラレンである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するためのフロクマリンは、アンゲリシンである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するためのフロクマリンは、キサントトキシンである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するためのフロクマリンは、ベルガプテンである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するためのフロクマリンは、ノダケネチンである。

【0089】

ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、ＬＰＳに由来するアジュバントは、ＭＰＬであり、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバントまたはリン酸アルミニウムアジュバントであり、ワクチンは、単離された核酸配列製剤を含まない。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、抗原性の単離された核酸配列製剤である。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、ＤＮＡワクチンである。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、抗原性の単離された核酸配列製剤である。ＨＳＶワクチンのいくつかの実施形態において、ワクチンは、ＨＳＶ感染に対するワクチンのレシピエントを、１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１１年、１２年、１３年、１４年、１５年、１６年、１７年、１８年、１９年、２０年、またはそれを超える年までワクチン接種する。ＨＳＶ１ワクチンのいくつかの実施形態において、ＬＰＳに由来するアジュバントは、ＭＰＬであり、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバントまたはリン酸アルミニウムアジュバントであり、ワクチンは、単離された核酸配列製剤を含まない。ＨＳＶ１ワクチンのいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、抗原性の単離された核酸配列製剤である。ＨＳＶ１ワクチンのいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、ＤＮＡワクチンである。ＨＳＶ１ワクチンのいくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、抗原性の単離された核酸配列製剤である。ＨＳＶ１ワクチンのいくつかの実施形態において、ワクチンは、ＨＳＶ１感染に対するワクチンのレシピエントを、１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１１年、１２年、１３年、１４年、１５年、１６年、１７年、１８年、１９年、２０年、またはそれを超える年までワクチン接種する。ＨＳＶ２ワクチンのいくつかの実施形態において、ＬＰＳに由来するアジュバントは、ＭＰＬであり、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバントまたはリン酸アルミニウムアジュバントであり、ワクチンは、単離された核酸配列製剤を含まない。ＨＳＶ２ワクチンのいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、抗原性の単離された核酸配列製剤である。ＨＳＶ２ワクチンのいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、ＤＮＡワクチンである。ＨＳＶ２ワクチンのいくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、抗原性の単離された核酸配列製剤である。ＨＳＶ２ワクチンのいくつかの実施形態において、ワクチンは、ＨＳＶ２感染に対するワクチンのレシピエントを、１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１１年、１２年、１３年、１４年、１５年、１６年、１７年、１８年、１９年、２０年、またはそれを超える年までワクチン接種する。

【0090】

ＩＩＩ．医薬組成物および方法
第２の態様において提供するのは、ヘルペスウイルス（ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８））ワクチンを調製する方法であり、方法は、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）−細胞混合物と、硫酸化またはスルホン化多糖とを接触させるステップであって、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）−細胞混合物が、ＨＶ粒子、細胞および細胞のポーションを含むステップと；ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）粒子を細胞から分離し、それによって単離したＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）粒子を形成するステップと；単離したＨＶ粒子を不活性化し、それによって不活性化ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）粒子を形成するステップと；不活性化ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）粒子と、リポ多糖に由来するアジュバントおよびアルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントとを合わせ、それによってＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンを形成するステップとを含む。

【0091】

ＨＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＳＶである。ＨＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ１である。ＨＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ２である。ＨＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２である。ＨＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−１である。ＨＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−２である。ＨＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−３である。ＨＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−４である。ＨＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−５である。ＨＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−６である。ＨＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−７である。ＨＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−８である。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）ワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、硫酸化またはスルホン化多糖は、デキストラン硫酸、ヘパリン、およびヘパラン硫酸から選択される。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）粒子を、１０⁷から１０¹⁰（ｐｆｕ／マイクログラムタンパク質）の濃度で単離する。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンは、１０⁷から１０¹⁰（ｐｆｕ当量／マイクログラムタンパク質）の不活性化ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）を含む。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）ワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、分離するステップは、遠心分離、ポリエチレングリコール沈殿、濾過、ゲル濾過、限外濾過、タンジェンシャルフロー限外濾過、またはアフィニティークロマトグラフィーを含む。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、サルモネラミネソタＬＰＳに由来する。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、サルモネラミネソタＲｅ５９５ＬＰＳに由来する。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、Ｒ５９５ＬＰＳに由来する。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、リピドＡアジュバントである。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、（Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカノイル部分を有さないリピドＡアジュバントである。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、１−ホスフェート部分（ＭＰＬ）を有さないリピドＡアジュバントである。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、３−Ｏ−デスアシル−４’−モノホスホリルリピドＡである。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）アジュバントである。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、合成ＭＰＬ類似体アジュバントである。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、ＴＬＲ４タンパク質に結合することができる。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバントである。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、リン酸アルミニウムアジュバントである。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、硫酸アルミニウムカリウムアジュバントである。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）ワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、結晶性水酸化アルミニウムを含み、アモルファス水酸化アルミニウムまたはヒドロキシ炭酸アルミニウムまたは水酸化マグネシウムを含まない。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、白色のゼラチン状沈殿物の形態のリン酸アルミニウムゲルを含む。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、白色のゼラチン状沈殿物の形態の水酸化アルミニウムゲルを含む。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）ワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）と、架橋剤、酸化剤、還元剤、熱、放射線、界面活性剤、ｐＨ変更剤、ならびにフロクマリン、アジリジン、エチレンイミン、バイナリーエチレンイミン、およびβ−プロピオラクトンから選択される化学剤から選択される１種または複数の作用剤とを接触させるステップを含む。方法のいくつかの実施形態において、化学剤は、アジリジンである。方法のいくつかの実施形態において、化学剤は、エチレンイミンである。方法のいくつかの実施形態において、化学剤は、バイナリーエチレンイミンである。方法のいくつかの実施形態において、化学剤は、β−プロピオラクトンである。方法のいくつかの実施形態において、放射線は、紫外線である。方法のいくつかの実施形態において、放射線は、電子ビーム線である。方法のいくつかの実施形態において、放射線は、赤外線である。方法のいくつかの実施形態において、放射線は、γ線である。方法のいくつかの実施形態において、架橋剤は、アルデヒド架橋剤である。方法のいくつかの実施形態において、架橋剤は、ホルムアルデヒドである。方法のいくつかの実施形態において、架橋剤は、ホルマリンである。方法のいくつかの実施形態において、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。方法のいくつかの実施形態において、酸化剤は、過酸化水素である。方法のいくつかの実施形態において、還元剤は、ａｌｄｒｉｔｈｉｏｌ−２である。方法のいくつかの実施形態において、界面活性剤は、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００である。方法のいくつかの実施形態において、界面活性剤は、ＮＰ−４０である。方法のいくつかの実施形態において、界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ−２０である。方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）と、紫外線およびフロクマリンを含めた１種または複数の作用剤とを接触させるステップを含む。方法のいくつかの実施形態において、フロクマリンは、ソラレンである。方法のいくつかの実施形態において、フロクマリンは、４’−アミノメチル−４，５’，８−トリメチルソラレンである。方法のいくつかの実施形態において、フロクマリンは、アンゲリシンである。方法のいくつかの実施形態において、フロクマリンは、キサントトキシンである。方法のいくつかの実施形態において、フロクマリンは、ベルガプテンである。方法のいくつかの実施形態において、フロクマリンは、ノダケネチンである。

【0092】

第３の態様において提供するのは、治療または予防を必要としている患者においてＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）感染を治療または予防する方法であり、方法は、治療有効量または予防的有効量の本明細書（実施形態を含めた）に記載されているＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいずれか１つを投与することを含む。

【0093】

方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＳＶである。方法のいくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ１である。方法のいくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ２である。方法のいくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２である。方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−１である。方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−２である。方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−３である。方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−４である。方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−５である。方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−６である。方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−７である。方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−８である。方法のいくつかの実施形態において、ＨＶ感染は、ヘルペス性歯肉口内炎、口唇ヘルペス、陰部ヘルペス、ヘルペス性ひょう疽、剣状ヘルペス、ヘルペスウイルス脳炎、ヘルペスウイルス髄膜炎、ヘルペス性食道炎、ヘルペス性角膜炎、ベル麻痺、モラレー髄膜炎、ヘルペスルグベイオルム、疱疹性湿疹、ヘルペス神経痛、およびヘルペス後神経痛から選択される疾患を引き起こす。方法のいくつかの実施形態において、方法は、治療する方法である。方法のいくつかの実施形態において、方法は、予防する方法である。方法のいくつかの実施形態において、方法は、ウイルス排出の低減を含む。方法のいくつかの実施形態において、方法は、病変の出現の頻度の低減を含む。方法のいくつかの実施形態において、方法は、病変の出現の期間の低減を含む。方法のいくつかの実施形態において、方法は、筋内投与を含む。方法のいくつかの実施形態において、方法は、皮内投与を含む。方法のいくつかの実施形態において、方法は、粘膜投与を含む。方法のいくつかの実施形態において、方法は、鼻腔内投与を含む。方法のいくつかの実施形態において、方法は、直腸内投与を含む。方法のいくつかの実施形態において、方法は、腟内投与を含む。方法のいくつかの実施形態において、方法は、局所投与を含む。方法のいくつかの実施形態において、方法は、経皮膚的投与を含む。方法のいくつかの実施形態において、方法は、皮下投与を含む。方法のいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、患者に投与されない。方法のいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、ＤＮＡ配列である。方法のいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、核酸ワクチンである。方法のいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、ＤＮＡワクチンである。方法のいくつかの実施形態において、方法は、プライムＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ＤＮＡワクチンの投与を含まない。方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ＤＮＡワクチンの投与を含まない。方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＨＳＶ ＵＬ３０、ＵＬ５、ｇＤ２、ｇＤ２ｔ、またはそのポーションから選択される遺伝子を含むＤＮＡワクチンの投与を含まない。方法のいくつかの実施形態において、方法の投与は、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンの単回投与からなる。方法のいくつかの実施形態において、方法の投与は、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのプライム−ブースト投与からなる。方法のいくつかの実施形態において、方法の投与は、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのプライム−ブースト−ブースト投与からなる。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、疾患を治療することを含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、疾患を予防することを含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、疾患を治療することである。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、疾患を予防することである。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、治療有効量の本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＶワクチンを投与することを含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、予防的有効量の本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＶワクチンを投与することを含む。

【0094】

第４の態様において提供するのは、治療または予防を必要としている患者において疾患を治療または予防する方法であり、方法は、治療有効量または予防的有効量の本明細書（実施形態を含めた）に記載されているＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）ワクチンのいずれか１つを投与することを含む。

【0095】

方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）に関連する疾患である。方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＳＶである。方法のいくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ１である。方法のいくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ２である。方法のいくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２である。方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−１である。方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−２である。方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−３である。方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−４である。方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−５である。方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−６である。方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−７である。方法のいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−８である。方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ヘルペス性歯肉口内炎、口唇ヘルペス、陰部ヘルペス、ヘルペス性ひょう疽、剣状ヘルペス、ヘルペスウイルス脳炎、ヘルペスウイルス髄膜炎、ヘルペス性食道炎、ヘルペス性角膜炎、ベル麻痺、モラレー髄膜炎、ヘルペスルグベイオルム、疱疹性湿疹、ヘルペス神経痛、およびヘルペス後神経痛からなる群から選択される。方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ヘルペス性歯肉口内炎である。方法のいくつかの実施形態において、疾患は、口唇ヘルペスである。方法のいくつかの実施形態において、疾患は、陰部ヘルペスである。方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ヘルペス性ひょう疽である。方法のいくつかの実施形態において、疾患は、剣状ヘルペスである。方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ヘルペスウイルス脳炎である。方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ヘルペスウイルス髄膜炎である。方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ヘルペス性食道炎である。方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ヘルペス性角膜炎である。方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ベル麻痺である。方法のいくつかの実施形態において、疾患は、モラレー髄膜炎である。方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ヘルペスルグベイオルムである。方法のいくつかの実施形態において、疾患は、疱疹性湿疹である。方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ヘルペス神経痛である。方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ヘルペス後神経痛である。方法のいくつかの実施形態において、疾患は、アルツハイマー病である。方法のいくつかの実施形態において、方法は、治療する方法である。方法のいくつかの実施形態において、方法は、予防する方法である。方法のいくつかの実施形態において、方法は、ウイルス排出の低減を含む。方法のいくつかの実施形態において、方法は、病変の出現の頻度の低減を含む。方法のいくつかの実施形態において、方法は、病変の出現の期間の低減を含む。方法のいくつかの実施形態において、方法は、筋内投与を含む。方法のいくつかの実施形態において、方法は、皮内投与を含む。方法のいくつかの実施形態において、方法は、粘膜投与を含む。方法のいくつかの実施形態において、方法は、鼻腔内投与を含む。方法のいくつかの実施形態において、方法は、直腸内投与を含む。方法のいくつかの実施形態において、方法は、腟内投与を含む。方法のいくつかの実施形態において、方法は、局所投与を含む。方法のいくつかの実施形態において、方法は、経皮膚的投与を含む。方法のいくつかの実施形態において、方法は、皮下投与を含む。方法のいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、患者に投与されない。方法のいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、ＤＮＡ配列である。方法のいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、核酸ワクチンである。方法のいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、ＤＮＡワクチンである。方法のいくつかの実施形態において、方法は、プライムＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ＤＮＡワクチンの投与を含まない。方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ＤＮＡワクチンの投与を含まない。方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＨＳＶ ＵＬ３０、ＵＬ５、ｇＤ２、ｇＤ２ｔ、またはそのポーションから選択される遺伝子を含むＤＮＡワクチンの投与を含まない。方法のいくつかの実施形態において、方法の投与は、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンの単回投与からなる。方法のいくつかの実施形態において、方法の投与は、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのプライム−ブースト投与からなる。方法のいくつかの実施形態において、方法の投与は、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのプライム−ブースト−ブースト投与からなる。方法のいくつかの実施形態において、患者は、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）ワクチンの投与に続いて、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）の１種または複数の株に対して防御される。方法のいくつかの実施形態において、患者は、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）ワクチンの投与に続いて、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）の１種または複数の株に感染し、罹患し、有し、または得ることを予防する。方法のいくつかの実施形態において、患者は、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）ワクチンの投与に続いて、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）の複数の株に感染し、罹患し、有し、または得ることを予防する。方法のいくつかの実施形態において、患者は、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）ワクチンの投与に続いて、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）の１種または複数の株の治療を受ける。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、疾患を治療することを含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、疾患を予防することを含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、疾患を治療することである。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、疾患を予防することである。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、治療有効量の本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＶワクチンを投与することを含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、予防的有効量の本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＶワクチンを投与することを含む。

【0096】

第５の態様において提供するのは、本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンのいずれか１つ、および患者にＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンを投与するための説明書を含むキットである。キットのいくつかの実施形態において、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）ワクチンを、プライム−ブースト投与において投与する。キットのいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−１である。キットのいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−２である。キットのいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−３である。キットのいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−４である。キットのいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−５である。キットのいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−６である。キットのいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−７である。キットのいくつかの実施形態において、ＨＶは、ＨＨＶ−８である。キットのいくつかの実施形態において、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）ワクチンは、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）の１種または複数の株について、患者を治療する。ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、またはＨＨＶ−８）

【0097】

別の態様において提供するのは、治療または予防を必要としている患者においてＨＳＶ感染を治療または予防する方法である。方法は、治療有効量または予防的有効量の本明細書（実施形態を含めた）に記載されているＨＳＶワクチンを投与することを含む。

【0098】

ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ１である。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ２である。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２である。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、ＨＳＶ感染は、ヘルペス性歯肉口内炎、口唇ヘルペス、陰部ヘルペス、ヘルペス性ひょう疽、剣状ヘルペス、ヘルペスウイルス脳炎、ヘルペスウイルス髄膜炎、ヘルペス性食道炎、ヘルペス性角膜炎、ベル麻痺、モラレー髄膜炎、ヘルペスルグベイオルム、疱疹性湿疹、ヘルペス神経痛、およびヘルペス後神経痛からなる群から選択される疾患を引き起こす。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＨＳＶ感染を治療することを含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＨＳＶ感染を予防することを含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＨＳＶ感染を治療することである。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＨＳＶ感染を予防することである。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、治療有効量の本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンを投与することを含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、予防的有効量の本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンを投与することを含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ウイルス排出の低減を含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、病変の出現の頻度の低減を含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、病変の出現の期間の低減を含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンの筋内投与を含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンの皮内投与を含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンの粘膜投与を含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンの鼻腔内投与を含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンの直腸内投与を含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンの腟内投与を含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンの局所投与を含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンの皮下投与を含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンの経皮膚的投与を含む。

【0099】

ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＨＳＶ ＤＮＡワクチン（例えば、ＨＳＶ１ＤＮＡワクチン、ＨＳＶ２ＤＮＡワクチン、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２ＤＮＡワクチン）の投与を含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、プライムＨＳＶ ＤＮＡワクチン（例えば、ＨＳＶ１ＤＮＡワクチン、ＨＳＶ２ＤＮＡワクチン、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２ＤＮＡワクチン）の投与を含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＵＬ３０遺伝子またはこの遺伝子のポーションを含むＨＳＶ ＤＮＡワクチンの投与を含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＵＬ５遺伝子またはこの遺伝子のポーションを含むＨＳＶ ＤＮＡワクチンの投与を含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ｇＤ２遺伝子またはこの遺伝子のポーションを含むＨＳＶ ＤＮＡワクチンの投与を含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ｇＤ２ｔ遺伝子またはこの遺伝子のポーションを含むＨＳＶ ＤＮＡワクチンの投与を含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＨＳＶタンパク質ワクチン（例えば、ＨＳＶ１タンパク質ワクチン、ＨＳＶ２タンパク質ワクチン、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２タンパク質ワクチン）の投与を含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ｇＤ２ｔタンパク質を含むＨＳＶタンパク質ワクチンの投与を含む。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＨＳＶ ＤＮＡワクチン（例えば、ＨＳＶ１ＤＮＡワクチン、ＨＳＶ２ＤＮＡワクチン、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２ＤＮＡワクチン）の投与を含まない。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、プライムＨＳＶ ＤＮＡワクチン（例えば、ＨＳＶ１ＤＮＡワクチン、ＨＳＶ２ＤＮＡワクチン、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２ＤＮＡワクチン）の投与を含まない。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＵＬ３０遺伝子またはこの遺伝子のポーションを含むＨＳＶ ＤＮＡワクチンの投与を含まない。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＵＬ５遺伝子またはこの遺伝子のポーションを含むＨＳＶ ＤＮＡワクチンの投与を含まない。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ｇＤ２遺伝子またはこの遺伝子のポーションを含むＨＳＶ ＤＮＡワクチンの投与を含まない。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ｇＤ２ｔ遺伝子またはこの遺伝子のポーションを含むＨＳＶ ＤＮＡワクチンの投与を含まない。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＨＳＶタンパク質ワクチン（例えば、ＨＳＶ１タンパク質ワクチン、ＨＳＶ２タンパク質ワクチン、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２タンパク質ワクチン）の投与を含まない。ＨＳＶ感染を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ｇＤ２ｔタンパク質を含むＨＳＶタンパク質ワクチンの投与を含まない。ＤＮＡワクチンまたは核酸配列を含まない組成物または方法を記載するとき、このような組成物または方法は、除外されている、または欠いていると記載された核酸組成物（例えば、ＤＮＡワクチン、核酸ワクチン、抗原性の核酸、核酸配列、または他の核酸組成物）を含む組成物の意図的な添加を含まないことが意図されることを当業者は理解する。いくつかの実施形態において、核酸組成物を含まない組成物または方法は、微量の核酸組成物を含んでもよく、または組成物の別の構成要素中に含まれ、微量の核酸は、核酸への、または核酸からもしくは核酸によって発現するタンパク質への抗原特異的免疫応答を誘発するのに必要な量より少ない量である。いくつかの実施形態において、微量の核酸は、約１２．５、１０、９、８．５、８、７、６、５、４、３、２、１、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、０．００９、０．００８、０．００７、０．００６、０．００５、０．００４、０．００３、０．００２、０．００１マイクログラム未満の核酸である。いくつかの実施形態において、微量の核酸は、ワクチンの用量毎に約１２．５、１０、９、８．５、８、７、６、５、４、３、２、１、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、０．００９、０．００８、０．００７、０．００６、０．００５、０．００４、０．００３、０．００２、０．００１マイクログラム未満の核酸である。いくつかの実施形態において、微量の核酸は、ｉ．ｍ．投与されるワクチンの用量毎に約１２．５、１０、９、８．５、８、７、６、５、４、３、２、１、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、０．００９、０．００８、０．００７、０．００６、０．００５、０．００４、０．００３、０．００２、０．００１マイクログラム未満の核酸である。いくつかの実施形態において、微量の核酸は、１２．５、１０、９、８．５、８、７、６、５、４、３、２、１、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、０．００９、０．００８、０．００７、０．００６、０．００５、０．００４、０．００３、０．００２、０．００１マイクログラム未満の核酸である。いくつかの実施形態において、微量の核酸は、ワクチンの用量毎に１２．５、１０、９、８．５、８、７、６、５、４、３、２、１、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、０．００９、０．００８、０．００７、０．００６、０．００５、０．００４、０．００３、０．００２、０．００１マイクログラム未満の核酸である。いくつかの実施形態において、微量の核酸は、ｉ．ｍ．投与されるワクチンの用量毎に１２．５、１０、９、８．５、８、７、６、５、４、３、２、１、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、０．００９、０．００８、０．００７、０．００６、０．００５、０．００４、０．００３、０．００２、０．００１マイクログラム未満の核酸である。いくつかの実施形態において、微量の核酸は、１マイクログラムである。いくつかの実施形態において、微量の核酸は、０．５マイクログラムである。いくつかの実施形態において、微量の核酸は、ＷＯ２００７１０６４０４におけるＤＮＡワクチンに記載される量未満の量であり、またはＷＯ２００７１０６４０４における免疫応答を誘発するために投与される。方法のいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、患者に投与されない。方法のいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、ＤＮＡ配列である。方法のいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、核酸ワクチンである。方法のいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、ＤＮＡワクチンである。

【0100】

別の態様において提供するのは、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ワクチンを調製する方法であり、方法は、ＨＳＶ−細胞混合物と、硫酸化またはスルホン化多糖とを接触させるステップであって、ＨＳＶ−細胞混合物が、ＨＳＶ粒子、細胞および細胞のポーションを含むステップと；ＨＳＶ粒子を細胞から分離し、それによって単離したＨＳＶ粒子を形成するステップと；単離したＨＳＶ粒子を不活性化し、それによって不活性化ＨＳＶ粒子を形成するステップと；不活性化ＨＳＶ粒子と、リポ多糖に由来するアジュバントおよびアルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントとを合わせ、それによってＨＳＶワクチンを形成するステップとを含む。

【0101】

ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ１である。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ２である。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、ＨＳＶは、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２である。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、硫酸化またはスルホン化多糖は、デキストラン硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸からなる群から選択される。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、ＨＳＶ粒子を、１０⁷〜１０¹⁰（ｐｆｕ／マイクログラムタンパク質）の濃度で単離する。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、１０⁷〜１０¹⁰（ｐｆｕ当量／マイクログラムタンパク質）の不活性化ＨＳＶを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、分離するステップは、遠心分離、ポリエチレングリコール沈殿、濾過、ゲル濾過、限外濾過、タンジェンシャルフロー限外濾過、またはアフィニティークロマトグラフィーからなる群から選択される。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、サルモネラミネソタＬＰＳに由来する。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、サルモネラミネソタＲｅ５９５ＬＰＳに由来する。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、Ｒ５９５ＬＰＳに由来する。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、リピドＡアジュバントである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、（Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカノイル部分を有さないリピドＡアジュバントである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、１−ホスフェート部分を有さないリピドＡアジュバントである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、（Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカノイル部分を含まないリピドＡアジュバントである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、１−ホスフェート部分を含まないリピドＡアジュバントである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）である。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、３−Ｏ−デスアシル−４’−モノホスホリルリピドＡである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、合成ＭＰＬ類似体アジュバントである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、リポ多糖に由来するアジュバントは、ＴＬＲ４タンパク質に結合することができる。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバントである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、リン酸アルミニウムアジュバントである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、硫酸アルミニウムカリウムアジュバントである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバントを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、リン酸アルミニウムアジュバントを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、硫酸アルミニウムカリウムアジュバントを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバントである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、リン酸アルミニウムアジュバントである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、硫酸アルミニウムカリウムアジュバントである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、結晶性水酸化アルミニウムを含み、アモルファス水酸化アルミニウムまたはヒドロキシ炭酸アルミニウムまたは水酸化マグネシウムを含まない。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、白色のゼラチン状沈殿物の形態のリン酸アルミニウムゲルを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントは、白色のゼラチン状沈殿物の形態の水酸化アルミニウムゲルを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、架橋剤、酸化剤、還元剤、熱、放射線、界面活性剤、ｐＨ変更剤、ならびにフロクマリン、アジリジン、エチレンイミン、バイナリーエチレンイミン、およびβ−プロピオラクトンから選択される化学剤からなる群から選択される１種または複数の作用剤とを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、アジリジンとを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、エチレンイミンとを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、バイナリーエチレンイミンとを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、β−プロピオラクトンとを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、紫外線とを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、電子ビーム線とを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、赤外線とを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、γ線とを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、アルデヒド架橋剤とを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、ホルムアルデヒドとを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、ホルマリンとを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、過ヨウ素酸ナトリウムとを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、過酸化水素とを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、ａｌｄｒｉｔｈｉｏｌ−２とを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００とを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、ＮＰ−４０とを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、Ｔｗｅｅｎ−２０とを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、紫外線およびフロクマリンとを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、紫外線およびソラレンとを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、紫外線および４’−アミノメチル−４，５’，８−トリメチルソラレンとを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、紫外線およびアンゲリシンとを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、紫外線およびキサントトキシンとを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、紫外線およびベルガプテンとを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、紫外線およびノダケネチンとを接触させるステップを含む。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、アジリジンとを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、エチレンイミンとを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、バイナリーエチレンイミンとを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、β−プロピオラクトンとを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、紫外線とを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、電子ビーム線とを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、赤外線とを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、γ線とを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、アルデヒド架橋剤とを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、ホルムアルデヒドとを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、ホルマリンとを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、過ヨウ素酸ナトリウムとを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、過酸化水素とを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、ａｌｄｒｉｔｈｉｏｌ−２とを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形

態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００とを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、ＮＰ−４０とを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、Ｔｗｅｅｎ−２０とを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、紫外線およびフロクマリンとを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、紫外線およびソラレンとを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、紫外線および４’−アミノメチル−４，５’，８−トリメチルソラレンとを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、紫外線およびアンゲリシンとを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、紫外線およびキサントトキシンとを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、紫外線およびベルガプテンとを接触させるステップである。ＨＳＶワクチンを調製する方法のいくつかの実施形態において、不活性化するステップは、ＨＳＶと、紫外線およびノダケネチンとを接触させるステップである。

【0102】

いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための化学剤は、アジリジンである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための化学剤は、エチレンイミンである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための化学剤は、バイナリーエチレンイミンである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための化学剤は、β−プロピオラクトンである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための放射線は、紫外線である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための放射線は、電子ビーム線である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための放射線は、赤外線である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための放射線は、γ線である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための架橋剤は、アルデヒド架橋剤である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための架橋剤は、ホルムアルデヒドである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための架橋剤は、ホルマリンである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための架橋剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための酸化剤は、過酸化水素である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための還元剤は、ａｌｄｒｉｔｈｉｏｌ−２である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための界面活性剤は、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための界面活性剤は、ＮＰ−４０である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するための界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ−２０である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するためのフロクマリンは、ソラレンである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するためのフロクマリンは、４’−アミノメチル−４，５’，８−トリメチルソラレンである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するためのフロクマリンは、アンゲリシンである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するためのフロクマリンは、キサントトキシンである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するためのフロクマリンは、ベルガプテンである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶを不活性化するためのフロクマリンは、ノダケネチンである。

【0103】

別の態様において提供するのは、治療または予防を必要とする患者において疾患を治療または予防する方法である。方法は、治療有効量または予防的有効量の本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンを投与することを含む。いくつかの実施形態において、疾患の予防を必要としている患者は、疾患を発症し、罹患し、得る、または有する危険性のある患者である。

【0104】

疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ＨＳＶ１と関連する。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ＨＳＶ１によって引き起こされる。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ＨＳＶ２と関連する。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ＨＳＶ２によって引き起こされる。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ヘルペス性歯肉口内炎、口唇ヘルペス、陰部ヘルペス、ヘルペス性ひょう疽、剣状ヘルペス、ヘルペスウイルス脳炎、ヘルペスウイルス髄膜炎、ヘルペス性食道炎、ヘルペス性角膜炎、ベル麻痺、モラレー髄膜炎、ヘルペスルグベイオルム、疱疹性湿疹、ヘルペス神経痛、およびヘルペス後神経痛からなる群から選択される。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ヘルペス性歯肉口内炎である。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、疾患は、口唇ヘルペスである。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、疾患は、陰部ヘルペスである。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ヘルペス性ひょう疽である。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、疾患は、剣状ヘルペスである。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ヘルペスウイルス脳炎である。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ヘルペスウイルス髄膜炎である。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ヘルペス性食道炎である。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ヘルペス性角膜炎である。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ベル麻痺である。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、疾患は、モラレー髄膜炎である。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ヘルペスルグベイオルムである。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、疾患は、疱疹性湿疹である。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ヘルペス神経痛である。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、疾患は、ヘルペス後神経痛である。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、疾患は、アルツハイマー病である。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、疾患を治療することを含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、疾患を予防することを含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、疾患を治療することである。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、疾患を予防することである。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、治療有効量の本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンを投与することを含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、予防的有効量の本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンを投与することを含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ウイルス排出の低減を含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、病変の出現の頻度の低減を含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、病変の出現の期間の低減を含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンの筋内投与を含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンの皮内投与を含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンの粘膜投与を含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンの鼻腔内投与を含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンの直腸内投与を含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンの腟内投与を含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンの局所投与を含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンの皮下投与を含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、本明細書（実施形態を含めた）に記載のＨＳＶワクチンの経皮膚的投与を含む。

【0105】

疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＨＳＶ ＤＮＡワクチン（例えば、ＨＳＶ１ＤＮＡワクチン、ＨＳＶ２ＤＮＡワクチン、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２ＤＮＡワクチン）の投与を含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、プライムＨＳＶ ＤＮＡワクチン（例えば、ＨＳＶ１ＤＮＡワクチン、ＨＳＶ２ＤＮＡワクチン、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２ＤＮＡワクチン）の投与を含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＵＬ３０遺伝子またはこの遺伝子のポーションを含むＨＳＶ ＤＮＡワクチンの投与を含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＵＬ５遺伝子またはこの遺伝子のポーションを含むＨＳＶ ＤＮＡワクチンの投与を含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ｇＤ２遺伝子またはこの遺伝子のポーションを含むＨＳＶ ＤＮＡワクチンの投与を含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ｇＤ２ｔ遺伝子またはこの遺伝子のポーションを含むＨＳＶ ＤＮＡワクチンの投与を含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＨＳＶタンパク質ワクチン（例えば、ＨＳＶ１タンパク質ワクチン、ＨＳＶ２タンパク質ワクチン、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２タンパク質ワクチン）の投与を含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ｇＤ２ｔタンパク質を含むＨＳＶタンパク質ワクチンの投与を含む。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＨＳＶ ＤＮＡワクチン（例えば、ＨＳＶ１ＤＮＡワクチン、ＨＳＶ２ＤＮＡワクチン、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２ＤＮＡワクチン）の投与を含まない。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、プライムＨＳＶ ＤＮＡワクチン（例えば、ＨＳＶ１ＤＮＡワクチン、ＨＳＶ２ＤＮＡワクチン、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２ＤＮＡワクチン）の投与を含まない。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＵＬ３０遺伝子またはこの遺伝子のポーションを含むＨＳＶ ＤＮＡワクチンの投与を含まない。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＵＬ５遺伝子またはこの遺伝子のポーションを含むＨＳＶ ＤＮＡワクチンの投与を含まない。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ｇＤ２遺伝子またはこの遺伝子のポーションを含むＨＳＶ ＤＮＡワクチンの投与を含まない。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ｇＤ２ｔ遺伝子またはこの遺伝子のポーションを含むＨＳＶ ＤＮＡワクチンの投与を含まない。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ＨＳＶタンパク質ワクチン（例えば、ＨＳＶ１タンパク質ワクチン、ＨＳＶ２タンパク質ワクチン、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２タンパク質ワクチン）の投与を含まない。疾患を治療または予防する方法のいくつかの実施形態において、方法は、ｇＤ２ｔタンパク質を含むＨＳＶタンパク質ワクチンの投与を含まない。ＤＮＡワクチンまたは核酸配列を含まない組成物または方法を記載するとき、このような組成物または方法は、除外されている、または欠いていると記載された核酸組成物（例えば、ＤＮＡワクチン、核酸ワクチン、抗原性の核酸、核酸配列、または他の核酸組成物）を含む組成物の意図的な添加を含まないことが意図されることを当業者は理解する。いくつかの実施形態において、核酸組成物を含まない組成物または方法は、微量の核酸組成物を含んでもよく、または組成物の別の構成要素中に含まれ、微量の核酸は、核酸への、または核酸からもしくは核酸によって発現するタンパク質への抗原特異的免疫応答を誘発するのに必要な量より少ない量である。いくつかの実施形態において、微量の核酸は、約１２．５、１０、９、８．５、８、７、６、５、４、３、２、１、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、０．００９、０．００８、０．００７、０．００６、０．００５、０．００４、０．００３、０．００２、０．００１マイクログラム未満の核酸である。いくつかの実施形態において、微量の核酸は、ワクチンの用量毎に約１２．５、１０、９、８．５、８、７、６、５、４、３、２、１、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、０．００９、０．００８、０．００７、０．００６、０．００５、０．００４、０．００３、０．００２、０．００１マイクログラム未満の核酸である。いくつかの実施形態において、微量の核酸は、ｉ．ｍ．投与されるワクチンの用量毎に約１２．５、１０、９、８．５、８、７、６、５、４、３、２、１、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、０．００９、０．００８、０．００７、０．００６、０．００５、０．００４、０．００３、０．００２、０．００１マイクログラム未満の核酸である。いくつかの実施形態において、微量の核酸は、１２．５、１０、９、８．５、８、７、６、５、４、３、２、１、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、０．００９、０．００８、０．００７、０．００６、０．００５、０．００４、０．００３、０．００２、０．００１マイクログラム未満の核酸である。いくつかの実施形態において、微量の核酸は、ワクチンの用量毎に１２．５、１０、９、８．５、８、７、６、５、４、３、２、１、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、０．００９、０．００８、０．００７、０．００６、０．００５、０．００４、０．００３、０．００２、０．００１マイクログラム未満の核酸である。いくつかの実施形態において、微量の核酸は、ｉ．ｍ．投与されるワクチンの用量毎に１２．５、１０、９、８．５、８、７、６、５、４、３、２、１、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、０．００９、０．００８、０．００７、０．００６、０．００５、０．００４、０．００３、０．００２、０．００１マイクログラム未満の核酸である。いくつかの実施形態において、微量の核酸は、１マイクログラムである。いくつかの実施形態において、微量の核酸は、０．５マイクログラムである。いくつかの実施形態において、微量の核酸は、ＷＯ２００７１０６４０４におけるＤＮＡワクチンに記載される量未満の量であり、またはＷＯ２００７１０６４０４における免疫応答を誘発するために投与される。方法のいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、患者に投与されない。方法のいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、ＤＮＡ配列である。方法のいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、核酸ワクチンである。方法のいくつかの実施形態において、単離された核酸配列製剤は、ＤＮＡワクチンである。

【0106】

別の態様において提供するのは、薬学的に許容される添加剤、および本明細書（実施形態を含めた）に記載されている組成物（例えば、ワクチン）のいずれかを含む医薬組成物である。

【0107】

本明細書（実施形態および実施例を含めた）に記載されている組成物は、患者に単独で投与することができ、または同時投与することができる。同時の投与とは、個々にまたは組み合わせた（複数の組成物）、組成物の同時または逐次投与を含むことを意味する。このように、調製物はまた、所望であるとき、他の活性物質と合わせることができる（例えば、代謝退化を低減させ、免疫応答を増加させるため（例えば、アジュバント））。ワクチン組成物の同時の投与の一例は、プライム−ブースト投与方法である。

【0108】

本発明の組成物は、多種多様の経口、非経口および局所剤形で調製および投与することができる。経口調製物には、患者による摂取に適した錠剤、丸剤、散剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ロゼンジ剤、カシェ剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー、懸濁剤などが含まれる。本発明の組成物はまた、注射によって、すなわち、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、十二指腸内、または腹腔内に投与することができる。また、本明細書に記載されている組成物は、吸入によって、例えば、鼻腔内に投与することができる。さらに、本発明の組成物は、経皮的に投与することができる。複数の投与経路（例えば、筋内、経口、経皮的、粘膜、鼻腔内、直腸内、膣内、皮下、経皮膚的、局所、皮内）を使用して、本発明の組成物を投与することができることがまた認識される。したがって、本発明はまた、薬学的に許容される添加剤、および本明細書（実施形態を含めた）に記載されている１種または複数の組成物を含む医薬組成物を提供する。

【0109】

本発明の組成物から医薬組成物を調製するために、薬学的に許容される担体は、固体または液体でよい。固形調製物には、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ剤、坐剤、および分散性顆粒剤が含まれる。固体担体は、賦形剤、香味剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤、または封入材料としてまた作用し得る１種または複数の物質でよい。

【0110】

散剤において、担体は、微粉化した活性構成要素（例えば、本明細書において提供する組成物）を有する混合物中の微粉化した固体である。錠剤において、活性構成要素を、適切な割合の必要な結合特性を有する担体と混合し、所望の形状およびサイズに圧縮する。散剤および錠剤は好ましくは、５％〜７０％の活性化合物を含有する。

【0111】

適切な固体添加剤には、これらに限定されないが、炭酸マグネシウム；ステアリン酸マグネシウム；タルク；ペクチン；デキストリン；デンプン；トラガカント；低融点ワックス；カカオバター；炭水化物；これらに限定されないが、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含めた糖、トウモロコシ、コムギ、コメ、ジャガイモ、または他の植物からのデンプン；セルロース、例えば、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、またはカルボキシルメチルセルロースナトリウム；ならびにアラビアゴムおよびトラガカントを含めたゴム；ならびにこれらに限定されないが、ゼラチンおよびコラーゲンを含めたタンパク質が含まれる。必要に応じて、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸、またはその塩、例えば、アルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤または可溶化剤を加えてもよい。

【0112】

糖衣錠コアは、また、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、ｃａｒｂｏｐｏｌゲル、ポリエチレングリコール、および／もしくは二酸化チタン、ラッカー溶液、および適切な有機溶媒または溶媒混合物を含有し得る、適切なコーティング、例えば、濃縮糖液と共に提供される。染料または顔料を、製品の同定のために、または活性組成物の量（すなわち、投与量）を特徴付けるために錠剤または糖衣錠コーティングに加えてもよい。本発明の医薬調製物はまた、例えば、ゼラチンでできた押込嵌めカプセル剤、ならびにゼラチンおよびコーティング、例えば、グリセロールまたはソルビトールでできたソフト密閉カプセル剤を使用して、経口的に使用することができる。

【0113】

坐剤を調製するために、低融点ワックス、例えば、脂肪酸グリセリドまたはカカオバターの混合物を最初に融解し、撹拌することによるなどして活性組成物をその中に均一的に分散させる。次いで、融解した均一な混合物を便利なサイズのモールド中に注ぎ、冷却し、それによって凝固させる。

【0114】

液体調製物には、溶液剤、懸濁剤、および乳剤、例えば、水または水／プロピレングリコール溶液が含まれる。非経口注射のために、液体調製物は、ポリエチレングリコール水溶液中の溶液中で製剤することができる。

【0115】

非経口用途が必要または所望であるとき、本発明の化合物のための特に適切な混合物は、注射剤、無菌溶液剤（好ましくは油性溶液または水溶液）、および懸濁剤、乳剤、またはインプラント（坐剤を含めた）である。特に、非経口投与のための担体には、デキストロースの水溶液、食塩水、純水、エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、落花生油、ゴマ油、ポリオキシエチレン−ブロックポリマーなどが含まれる。アンプル剤は、便利な単位投与量である。本発明の組成物はまた、リポソーム中に組込み、または経皮的なポンプもしくはパッチによって投与することができる。本発明における使用に適した医薬混合物は当業者には周知であり、例えば、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１７版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂ． Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ）およびＷＯ９６／０５３０９（これらの両方の教示は、参照により本明細書に組み込まれている）に記載されている。

【0116】

経口使用に適した水溶液は、活性構成要素（例えば、実施形態、実施例を含めて本明細書に記載されている組成物）を水に溶解し、適切な着色料、フレーバー、安定剤、および増粘剤を所望の通り加えることによって調製することができる。経口使用に適した水性懸濁剤は、粘稠材料、例えば、天然または合成ガム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガムおよびアラビアゴム、ならびに分散化剤または湿潤剤、例えば、天然のホスファチド（例えば、レシチン）、アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物（例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン）、酸化エチレンと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、酸化エチレンと脂肪酸およびヘキシトールに由来する部分エステルとの縮合生成物（例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトール）、または酸化エチレンと脂肪酸およびヘキシトール無水物に由来する部分エステルとの縮合生成物（例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン）と共に、微粉化した活性構成要素を水に分散させることによって作製することができる。水性懸濁剤はまた、１種もしくは複数の保存剤、例えば、エチルまたはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシベンゾエート、１種もしくは複数の着色剤、１種もしくは複数の香味剤および１種もしくは複数の甘味剤、例えば、スクロース、アスパルテームまたはサッカリンを含有することができる。製剤は、モル浸透圧濃度について調節することができる。

【0117】

また含まれるのは、使用の直前に、経口投与のための液体調製物に変換されることを意図した固形調製物である。このような液体形態には、溶液剤、懸濁剤、および乳剤が含まれる。これらの調製物は、活性構成要素に加えて、着色料、フレーバー、安定剤、緩衝液、人工および天然甘味剤、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含有し得る。

【0118】

油懸濁剤は、増粘剤、例えば、蜜蝋、固形パラフィンまたはセチルアルコールを含有することができる。甘味剤を加えて、口当たりがよい経口調製物を提供することができる（例えば、グリセロール、ソルビトールまたはスクロース）。これらの製剤は、抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸を添加することによって貯蔵することができる。注射可能な油ビヒクルの一例として、Ｍｉｎｔｏ、 Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｅｘｐ． Ｔｈｅｒ． ２８１：９３〜１０２頁、１９９７年を参照されたい。本発明の医薬製剤はまた、水中油型乳剤の形態でよい。油性相は、上記の植物性油もしくは鉱油、またはこれらの混合物でよい。適切な乳化剤には、天然ゴム、例えば、アラビアゴムおよびトラガカントガム、天然のホスファチド、例えば、ダイズレシチン、脂肪酸およびヘキシトール無水物に由来するエステルまたは部分エステル、例えば、モノオレイン酸ソルビタン、およびこれらの部分エステルと酸化エチレンとの縮合生成物、例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンが含まれる。乳剤はまた、シロップ剤およびエリキシル剤の製剤におけるように、甘味剤および香味剤を含有することができる。このような製剤はまた、粘滑剤、保存剤、または着色剤を含有することができる。

【0119】

医薬調製物は、好ましくは単位剤形である。このような形態において、調製物を、適当な量の活性構成要素を含有する単位用量に再分割する。単位剤形は、パッケージ化された調製物でよく、パッケージは、分離した量の調製物、例えば、パック入り錠剤、カプセル剤、およびバイアルまたはアンプル中の散剤を含有する。また、単位剤形は、カプセル剤、錠剤、カシェ剤、またはロゼンジ剤自体でよく、あるいはパッケージ化された形態の適当な数のこれらのいずれかでよい。

【0120】

いくつかの組成物は、水中で限定された溶解度を有してもよく、したがって、組成物において表面活性物質または他の適当な共溶媒を必要とし得る。このような共溶媒には、ポリソルベート２０、６０および８０；プルロニックＦ−６８、Ｆ−８４およびＰ−１０３；シクロデキストリン；ポリオキシル３５ヒマシ油；または当業者には公知の他の薬剤が含まれる。このような共溶媒は典型的には、約０．０１重量％から約２重量％の間のレベルで用いられる。

【0121】

単純な水溶液の粘度より大きな粘度は、製剤を分注することにおいて可変性を減少させ、製剤の懸濁剤もしくは乳剤の構成要素の物理的分離を減少させ、かつ／またはその他の点で製剤を改善するのに望ましくてもよい。このような粘度上昇剤には、例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、コンドロイチン硫酸およびその塩、ヒアルロン酸およびその塩、上記の組合せ、ならびに当業者には公知の他の薬剤が含まれる。このような薬剤は典型的には、約０．０１重量％から約２重量％の間のレベルで用いられる。上記のアジュバントのいずれかの許容される量の決定は、当業者によって容易に確認される。

【0122】

本発明の組成物は、持続放出および／または快適性を実現する構成要素をさらに含み得る。このような構成要素には、高分子量のアニオン性粘液模倣物（mucomimetic）ポリマー、ゲル化多糖および微粉化した薬物担体基質が含まれる。これらの構成要素は、米国特許第４，９１１，９２０号；同第５，４０３，８４１号；同第５，２１２，１６２号；および同第４，８６１，７６０号においてより詳細に考察されている。これらの特許の全内容は、全ての目的のために全内容が参照により本明細書中に組み込まれている。

【0123】

本発明により提供される医薬組成物は、活性成分（例えば、実施形態を含めて本明細書に記載されている組成物）を、治療有効量または予防的有効量で、すなわち、その意図する目的を達成するのに有効な量で含有する組成物を含む。特定の用途について有効な実際の量は、とりわけ、治療を受ける状態によって決まる。疾患を治療する方法において投与されるとき、このような組成物は、所望の結果、例えば、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）感染の予防、ＨＳＶ（例えば、ＨＳＶ１および／もしくはＨＳＶ２）感染の予防、ならびに／あるいは病徴（例えば、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）感染、ＨＳＶ（例えば、ＨＳＶ１および／もしくはＨＳＶ２）感染）の低減、排除、または進行の遅延を達成するのに有効な量の活性成分を含有する。本発明の組成物の治療有効量または予防的有効量の決定は、特に、本明細書における詳細な開示に照らして、当業者の能力が十分に対応できる範囲にある。

【0124】

哺乳動物に投与される投与量および頻度（単回または多回用量）は、種々の要因、例えば、哺乳動物が別の疾患を患っているかどうか、およびその投与経路；レシピエントのサイズ、年齢、性別、健康、体重、肥満度指数、および食事；治療を受ける疾患（例えば、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）感染、ＨＳＶ（例えば、ＨＳＶ１および／もしくはＨＳＶ２）感染）の症状の性質および程度、併用療法の種類、治療を受けている疾患からの合併症または他の健康が関連する問題によって変化させることができる。他の治療的投与計画または薬剤を、出願人等の発明の方法および組成物と併せて使用することができる。確立した投与量（例えば、頻度および期間）の調節および操作は、当業者の能力が十分に対応できる範囲にある。

【0125】

本明細書に記載されている任意の組成物について、治療有効量は、細胞培養アッセイから最初に決定することができる。標的濃度は、本明細書に記載の方法または当技術分野において公知の方法を使用して測定した、本明細書に記載の方法を達成することができる活性組成物（複数可）のそれらの濃度である。

【0126】

当技術分野で周知のように、ヒトにおいて使用するための治療有効量または予防的有効量はまた、動物モデルから決定することができる。例えば、ヒトについての用量を製剤して、動物において有効であると見出されてきた濃度を達成することができる。ヒトにおける投与量は、上記のように、組成物の有効性をモニターし、投与量を上方または下方に調節することによって調節することができる。上記の方法および他の方法に基づいて、ヒトにおける最大有効性を達成するための用量を調節することは、当業者の能力が十分に対応できる範囲にある。

【0127】

投与量は、患者の要求および用いられる組成物によって変化し得る。患者に投与される用量は、本発明の状況において、患者において有益な治療的または予防的反応を時間と共にもたらすのに十分であるべきである。用量のサイズはまた、任意の有害な副作用の存在、性質、および程度によって決定される。特定の状況についての適正な投与量の決定は、専門家の技能の範囲内である。一般に、治療は、化合物の適量より低いより小さな投与量から開始する。この状況下でその後、最適な作用に到達するまで、投与量を少しずつ増加させる。

【0128】

投与量および間隔は、個別に調節して、治療または予防される特定の臨床適応症に有効な投与する組成物のレベルを実現することができる。これによって、個体の病態の重症度と釣り合った治療的または予防的投与計画が実現される。

【0129】

本明細書において提供する教示を利用して、実質的な毒性をもたらさず、かつそれにも関わらず特定の患者が示す臨床症状の治療に有効な、有効な予防的または治療的処置の投与計画を計画することができる。この計画は、要因、例えば、組成物の効力、相対的バイオアベイラビリティー、患者の体重、不利な副作用の存在および重症度、選択した薬剤の好ましい投与方法ならびに毒性プロファイルを考慮することによる、活性組成物の注意深い選択が伴うべきである。

【0130】

特定の組成物についての毒性と治療効果との間の比率は、その治療係数であり、ＬＤ₅₀（集団の５０％において致死的な組成物の量）とＥＤ₅₀（集団の５０％において有効な組成物の量）との間の比率として表すことができる。高い治療係数を示す組成物が好ましい。細胞培養アッセイおよび／または動物試験から得た治療係数データは、ヒトにおける使用のための投与量範囲の製剤において使用することができる。このような組成物の投与量は好ましくは、毒性を殆ど伴わない、または毒性を伴わないＥＤ₅₀を含む一連の血漿濃度範囲内にある。投与量は、用いる剤形および利用する投与経路によって、この範囲内で変化し得る。例えば、Ｆｉｎｇｌら、ＴＨＥ ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＣＡＬ ＢＡＳＩＳ ＯＦ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ、Ｃｈ．１、ｌ頁、１９７５年を参照されたい。正確な製剤、投与経路および投与量は、患者の状態、および組成物が使用される特定の方法に照らして、個々の医師が選択することができる。

【0131】

ＩＶ．投与
本発明の組成物は、アプリケータースティック、溶液剤、懸濁剤、乳剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤、ペースト剤、ゼリー、ペイント、散剤、およびエアゾールとして製剤して、経皮的に、局所経路によって、経皮膚的に送達することができる。「本発明の組成物」、「本明細書（実施形態を含めた）に記載の組成物」、「本明細書（実施形態を含めた）に記載されている組成物」、「本明細書において提供する組成物」などという用語は、互換的に使用される。

【0132】

本発明の医薬組成物は、塩として提供することができ、これらに限定されないが、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸などを含めた多くの酸と共に形成することができる。本明細書に記載されている医薬組成物は、本明細書に記載されている組成物上で見出される特定の置換基によって、相対的に無毒性の酸もしくは塩基で調製される化合物の塩または組成物でよい。本発明の組成物が相対的に酸性の官能性を含有するとき、このような組成物の中性形態と、十分な量の所望の塩基（無溶媒または適切な不活性溶媒中）とを接触させることによって、塩基付加塩を得ることができる。薬学的に許容される塩基付加塩の例には、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミノ、もしくはマグネシウム塩、または同様の塩が含まれる。本発明の組成物が相対的に塩基性の官能性を含有するとき、このような組成物の中性形態と、十分な量の所望の酸（無溶媒または適切な不活性溶媒中）とを接触させることによって、酸付加塩を得ることができる。薬学的に許容される酸付加塩の例には、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、一水素炭酸、リン酸、一水素リン酸、二水素リン酸、硫酸、一水素硫酸、ヨウ化水素酸、または亜リン酸などに由来するもの、および比較的無毒性の有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸などに由来する塩が含まれる。また含まれるのは、アミノ酸の塩、例えば、アルギン酸塩など、および有機酸、例えば、グルクロン酸またはガラクツロン酸などの塩である（例えば、Ｂｅｒｇｅら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ６６：１〜１９頁（１９７７年）を参照されたい）。本発明の特定の組成物は、組成物が塩基付加塩または酸付加塩に変換されることを可能とする、塩基性および酸性の官能性の両方を含有する。当業者には公知の他の薬学的に許容される担体は、本発明に適している。塩は、相当する遊離塩基の形態である水性溶媒または他のプロトン性溶媒中でより可溶性である傾向がある。

【0133】

組成物の中性形態は、通常の様式で、塩と塩基または酸とを接触させ、親組成物を単離することによって再生し得る。組成物の親形態は、特定の物理的性質、例えば、極性溶媒中の溶解度において様々な塩の形態と異なるが、その他の点では、本発明の目的のために塩は組成物の親形態と等しい。

【0134】

別の実施形態において、本発明の組成物は、非経口投与、例えば、静脈内（ＩＶ）投与または体腔もしくは臓器の内腔中への投与に有用である。投与のための製剤は一般に、薬学的に許容される担体に溶解した本発明の組成物の溶液を含む。用いることができる許容されるビヒクルおよび溶媒の中には、水およびリンゲル液、等張塩化ナトリウムがある。さらに、無菌の不揮発性油は、溶媒または懸濁媒として通常に用いることができる。この目的のために、合成モノ−またはジグリセリドを含めて任意の無刺激性不揮発性油を用いることができる。さらに、脂肪酸、例えば、オレイン酸は、注射剤の調製において同様に使用することができる。これらの溶液は無菌であり、一般に望ましくない物体を含まない。これらの製剤は、通常の周知の滅菌法によって無菌化し得る。製剤は、生理学的条件に近づける必要に応じて薬学的に許容される補助物質、例えば、ｐＨ調整剤および緩衝剤、毒性調節剤、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどを含有し得る。これらの製剤における本発明の組成物の濃度は、選択した特定の投与方法および患者のニーズに従って、広範に変化することができ、液量、粘度、体重などに主に基づいて選択される。ＩＶ投与のために、製剤は、無菌の注射可能な調製物、例えば、無菌の注射可能な水性または油性の懸濁剤でよい。この懸濁剤は、それらの適切な分散化剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して公知技術によって製剤することができる。

【0135】

本明細書に記載されている組成物は、互いに、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）またはＨＳＶ（例えば、ＨＳＶ１および／もしくはＨＳＶ２）感染と関連する疾患の治療において有用であると公知である他の活性剤と組み合わせて、あるいは単独では有効ではなくてもよいが、活性剤（例えば、ＬＰＳに由来するアジュバント、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバント）の有効性に寄与し得る補助剤と組み合わせて使用することができる。

【0136】

いくつかの実施形態において、同時の投与は、第２の活性剤の０．５時間、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１６時間、２０時間、または２４時間以内に、１種の活性剤を投与することを含む。同時の投与は、２種の活性剤を、同時に、概ね同時に（例えば、互いに、約１分、５分、１０分、１５分、２０分、もしくは３０分以内）、または任意の順序で逐次的に投与することを含む。いくつかの実施形態において、同時の投与は、同時製剤、すなわち、両方の活性剤を含む単一の医薬組成物を調製することによって達成することができる。他の実施形態において、活性剤は、別々に製剤することができる。別の実施形態において、活性剤および／または補助剤は、互いに連結または結合し得る。いくつかの実施形態において、同時の投与は、互いに、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、もしくは１２週間以内に、または互いに、１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、７カ月、８カ月、９カ月、１０カ月、１１カ月、１２カ月以内に、プライム−ブースト法においてワクチンを投与することを含む。いくつかの実施形態において、プライム−ブースト投与は、４週間の間隔を開ける。

【0137】

非限定的例として、本明細書に記載されている組成物は、これらに限定されないが、ＨＳＶ ＤＮＡワクチン（ＨＳＶ ＤＮＡワクチンは、ＨＳＶ（例えば、ＨＳＶ１またはＨＳＶ２）遺伝子（例えば、ＵＬ１、ＵＬ２、ＵＬ３、ＵＬ４、ＵＬ５、ＵＬ６、ＵＬ７、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ１０、ＵＬ１１、ＵＬ１２、ＵＬ１３、ＵＬ１４、ＵＬ１５、ＵＬ１６、ＵＬ１７、ＵＬ１８、ＵＬ１９、ＵＬ２０、ＵＬ２１、ＵＬ２２、ＵＬ２３、ＵＬ２４、ＵＬ２５、ＵＬ２６、ＵＬ２７、ＵＬ２８、ＵＬ２９、ＵＬ３０、ＵＬ３１、ＵＬ３２、ＵＬ３３、ＵＬ３４、ＵＬ３５、ＵＬ３６、ＵＬ３７、ＵＬ３８、ＵＬ３９、ＵＬ４０、ＵＬ４１、ＵＬ４２、ＵＬ４３、ＵＬ４４、ＵＬ４５、ＵＬ４６、ＵＬ４７、ＵＬ４８、ＵＬ４９、ＵＬ５０、ＵＬ５１、ＵＬ５２、ＵＬ５３、ＵＬ５４、ＵＬ５５、ＵＬ５６、ＵＳ１、ＵＳ２、ＵＳ３、ＵＳ４、ＵＳ５、ＵＳ６、ＵＳ７、ＵＳ８、ＵＳ９、ＵＳ１０、ＵＳ１１、ＵＳ１２、ＲＳ１、ＩＣＰ０、ＬＲＰ１、ＬＲＰ２、ＲＬ１、またはＬＡＴ）の１つまたは複数の１つまたは複数のポーションを含む）、ＨＳＶタンパク質ワクチン（ＨＳＶタンパク質ワクチンは、ＨＳＶ（例えば、ＨＳＶ１またはＨＳＶ２）タンパク質（例えば、ＨＳＶ遺伝子ＵＬ１、ＵＬ２、ＵＬ３、ＵＬ４、ＵＬ５、ＵＬ６、ＵＬ７、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ１０、ＵＬ１１、ＵＬ１２、ＵＬ１３、ＵＬ１４、ＵＬ１５、ＵＬ１６、ＵＬ１７、ＵＬ１８、ＵＬ１９、ＵＬ２０、ＵＬ２１、ＵＬ２２、ＵＬ２３、ＵＬ２４、ＵＬ２５、ＵＬ２６、ＵＬ２７、ＵＬ２８、ＵＬ２９、ＵＬ３０、ＵＬ３１、ＵＬ３２、ＵＬ３３、ＵＬ３４、ＵＬ３５、ＵＬ３６、ＵＬ３７、ＵＬ３８、ＵＬ３９、ＵＬ４０、ＵＬ４１、ＵＬ４２、ＵＬ４３、ＵＬ４４、ＵＬ４５、ＵＬ４６、ＵＬ４７、ＵＬ４８、ＵＬ４９、ＵＬ５０、ＵＬ５１、ＵＬ５２、ＵＬ５３、ＵＬ５４、ＵＬ５５、ＵＬ５６、ＵＳ１、ＵＳ２、ＵＳ３、ＵＳ４、ＵＳ５、ＵＳ６、ＵＳ７、ＵＳ８、ＵＳ９、ＵＳ１０、ＵＳ１１、ＵＳ１２、ＲＳ１、ＩＣＰ０、ＬＲＰ１、ＬＲＰ２、ＲＬ１、またはＬＡＴから発現されるタンパク質）の１つまたは複数の１つまたは複数のポーションを含む）、不活性化ＨＳＶなどを含めた、別のＨＳＶワクチンと同時投与（例えば、プライム−ブースト）することができる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されている組成物は、ＨＳＶ ＤＮＡワクチン（ＨＳＶ ＤＮＡワクチンは、ＨＳＶ（例えば、ＨＳＶ１またはＨＳＶ２）遺伝子（例えば、ＵＬ１、ＵＬ２、ＵＬ３、ＵＬ４、ＵＬ５、ＵＬ６、ＵＬ７、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ１０、ＵＬ１１、ＵＬ１２、ＵＬ１３、ＵＬ１４、ＵＬ１５、ＵＬ１６、ＵＬ１７、ＵＬ１８、ＵＬ１９、ＵＬ２０、ＵＬ２１、ＵＬ２２、ＵＬ２３、ＵＬ２４、ＵＬ２５、ＵＬ２６、ＵＬ２７、ＵＬ２８、ＵＬ２９、ＵＬ３０、ＵＬ３１、ＵＬ３２、ＵＬ３３、ＵＬ３４、ＵＬ３５、ＵＬ３６、ＵＬ３７、ＵＬ３８、ＵＬ３９、ＵＬ４０、ＵＬ４１、ＵＬ４２、ＵＬ４３、ＵＬ４４、ＵＬ４５、ＵＬ４６、ＵＬ４７、ＵＬ４８、ＵＬ４９、ＵＬ５０、ＵＬ５１、ＵＬ５２、ＵＬ５３、ＵＬ５４、ＵＬ５５、ＵＬ５６、ＵＳ１、ＵＳ２、ＵＳ３、ＵＳ４、ＵＳ５、ＵＳ６、ＵＳ７、ＵＳ８、ＵＳ９、ＵＳ１０、ＵＳ１１、ＵＳ１２、ＲＳ１、ＩＣＰ０、ＬＲＰ１、ＬＲＰ２、ＲＬ１、またはＬＡＴ）の１つまたは複数の１つまたは複数のポーションを含む）、ＨＳＶタンパク質ワクチン（ＨＳＶタンパク質ワクチンは、ＨＳＶ（例えば、ＨＳＶ１またはＨＳＶ２）タンパク質（例えば、ＨＳＶ遺伝子ＵＬ１、ＵＬ２、ＵＬ３、ＵＬ４、ＵＬ５、ＵＬ６、ＵＬ７、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ１０、ＵＬ１１、ＵＬ１２、ＵＬ１３、ＵＬ１４、ＵＬ１５、ＵＬ１６、ＵＬ１７、ＵＬ１８、ＵＬ１９、ＵＬ２０、ＵＬ２１、ＵＬ２２、ＵＬ２３、ＵＬ２４、ＵＬ２５、ＵＬ２６、ＵＬ２７、ＵＬ２８、ＵＬ２９、ＵＬ３０、ＵＬ３１、ＵＬ３２、ＵＬ３３、ＵＬ３４、ＵＬ３５、ＵＬ３６、ＵＬ３７、ＵＬ３８、ＵＬ３９、ＵＬ４０、ＵＬ４１、ＵＬ４２、ＵＬ４３、ＵＬ４４、ＵＬ４５、ＵＬ４６、ＵＬ４７、ＵＬ４８、ＵＬ４９、ＵＬ５０、ＵＬ５１、ＵＬ５２、ＵＬ５３、ＵＬ５４、ＵＬ５５、ＵＬ５６、ＵＳ１、ＵＳ２、ＵＳ３、ＵＳ４、ＵＳ５、ＵＳ６、ＵＳ７、ＵＳ８、ＵＳ９、ＵＳ１０、ＵＳ１１、ＵＳ１２、ＲＳ１、ＩＣＰ０、ＬＲＰ１、ＬＲＰ２、ＲＬ１、またはＬＡＴから発現されるタンパク質）の１つまたは複数の１つまたは複数のポーションを含む）、不活性化ＨＳＶなどからなる群から選択される別のＨＳＶワクチンと同時投与（例えば、プライム−ブースト）されない。

【0138】

本発明の医薬組成物は、通常の周知の滅菌法によって無菌化してもよく、または無菌状態下にて生成してもよい。水溶液は、使用のためにパッケージ化することができ、または無菌状態下にて濾過し、凍結乾燥することができ、凍結乾燥した調製物は、投与前に無菌水溶液と合わせる。組成物は、生理学的条件に近づけるのに必要とされるような薬学的に許容される補助物質、例えば、ｐＨ調整剤および緩衝剤、張性調整剤、湿潤剤など、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、モノラウリン酸ソルビタン、およびオレイン酸トリエタノールアミンを含有することができる。

【0139】

経口投与に適した製剤は、（ａ）溶液剤、例えば、賦形剤、例えば、水、食塩水、またはＰＥＧ４００に懸濁した有効量のパッケージ化された化合物または薬物；（ｂ）カプセル剤、サシェ剤、または錠剤（それぞれが、液体、固体、顆粒またはゼラチンとして所定の量のＨＳＶ（例えば、ＨＳＶ１および／またはＨＳＶ２）ワクチン組成物を含有する）；（ｃ）適当な液体中の懸濁剤；ならびに（ｄ）適切な乳剤を含むことができる。錠剤形態は、ラクトース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、リン酸カルシウム、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、微結晶性セルロース、ゼラチン、コロイド状二酸化ケイ素、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、および他の添加剤、着色料、充填剤、結合剤、賦形剤、緩衝剤、湿潤剤、保存剤、香味剤、色素、崩壊剤、および医薬的に適合性の担体の１つまたは複数を含むことができる。ロゼンジ剤形態は、フレーバー、例えば、スクロース中のＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）ワクチン組成物、またはＨＳＶ（例えば、ＨＳＶ１および／もしくはＨＳＶ２）ワクチン組成物を含むことができ、香錠は、不活性な基剤、例えば、ゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアカシア中の、例えば、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）ワクチン組成物、またはＨＳＶ（例えば、ＨＳＶ１および／もしくはＨＳＶ２）ワクチン組成物を含み、乳剤、ゲル剤などは、例えば、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）ワクチン組成物、またはＨＳＶ（例えば、ＨＳＶ１および／もしくはＨＳＶ２）ワクチン組成物に加えて、当技術分野において公知の担体を含有する。

【0140】

単独または他の適切な構成要素と組み合わせた一般に好まれる組成物は、エアゾール製剤に作製することができ（すなわち、これらは「噴霧」することができ）、吸入によって投与することができる。エアゾール製剤は、加圧式の許容される噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素など中に置くことができる。

【0141】

直腸投与のための適切な製剤は、坐剤基剤と共に、例えば、有効量のパッケージ化されたＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）ワクチン組成物、またはＨＳＶ（例えば、ＨＳＶ１および／もしくはＨＳＶ２）ワクチン組成物を含む坐剤を含む。適切な坐剤基剤は、天然または合成のトリグリセリドまたはパラフィン炭化水素を含む。さらに、例えば、一般に好まれるＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）ワクチン組成物、またはＨＳＶ（例えば、ＨＳＶ１および／もしくはＨＳＶ２）ワクチン組成物と、例えば、液体トリグリセリド、ポリエチレングリコール、およびパラフィン炭化水素を含めた基剤との組合せを含有するゼラチン製直腸カプセル剤を使用することがまた可能である。

【0142】

例えば、関節内（関節における）、膣内、直腸内、静脈内、筋内、腫瘍内、皮内、腹腔内、および皮下経路による非経口投与に適切な製剤は、水性および非水性の等張性無菌注射液（抗酸化剤、緩衝液、制菌剤、および製剤を意図するレシピエントの血液と等張性にする溶質を含有することができる）、ならびに水性および非水性の無菌懸濁剤（懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、および保存剤を含むことができる）を含む。注射液および懸濁剤はまた、無菌の散剤、顆粒剤、および錠剤から調製することができる。本発明の実施において、組成物は、例えば、静脈内注入により、経口的、局所的、腹腔内、膀胱内、またはくも膜下腔内に投与することができる。非経口投与、経鼻投与、経口投与、および静脈内投与は、投与の好ましい方法である。組成物の製剤は、単位用量または複数用量のシール容器、例えば、アンプルおよびバイアル中に提示することができる。

【0143】

医薬調製物は好ましくは、単位剤形である。このような形態において、調製物は、適当な量の活性構成要素、例えば、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）ワクチン組成物、またはＨＳＶ（例えば、ＨＳＶ１および／もしくはＨＳＶ２）ワクチン組成物を含有する単位用量に再分割される。単位剤形は、パッケージ化された調製物でよく、パッケージは、分離した量の調製物、例えば、パック入り錠剤、カプセル剤、およびバイアルまたはアンプル中の散剤を含有する。また、単位剤形は、カプセル剤、錠剤、カシェ剤、またはロゼンジ剤自体でよく、あるいはパッケージ化された形態の適当な数のこれらのいずれかでよい。組成物は、必要に応じてまた、他の適合性の治療剤を含有することができる。

【0144】

ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）感染、またはＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）感染と関連する疾患の治療のための治療上の使用において、ＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）ワクチン組成物は、患者の必要性、治療を受ける状態の重症度、および用いられるＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）ワクチン組成物によって変化し得る。例えば、投与量は、特定の患者において診断されたＨＶ（例えば、ＨＳＶ、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＨＨＶ−３、ＨＨＶ−４、ＨＨＶ−５、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、もしくはＨＨＶ−８）に関連する疾患のタイプおよびステージを考慮して経験的に決定することができる。患者に投与する用量は、本発明の状況において、時間と共に患者において有益な治療的または予防的反応に影響を及ぼすのに十分であるべきである。用量のサイズはまた、特定の患者における組成物の投与に伴う任意の有害な副作用の存在、性質、および程度によって決定される。特定の状況についての適正な投与量の決定は、専門家の技能の範囲内である。一般に、治療は、組成物の適量より少ないより小さな投与量から開始する。その後、この状況下で最適な作用に到達するまで、投与量を少しずつ増加させる。便宜のため、１日総投与量を分割し、必要に応じて日中にポーションで投与し得る。

【0145】

いくつかの実施形態において、対象において単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ−２）感染を予防または治療する方法を提供する。方法は、それを必要としている対象にＤＮＡワクチンを投与することを含み、ＤＮＡワクチンは、ウイルス複製に必要とされる少なくとも１つの保存されているＨＳＶ−２遺伝子のポーションをコードするＤＮＡ配列を含む。

【0146】

いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）アジュバントをさらに含む。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、ａｌｕｍアジュバントをさらに含む。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、不活性化全ＨＳＶ−２を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、ホルマリン−不活性化ＨＳＶ−２（ＦＩ−ＨＳＶ−２）を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮＡ配列は、ＨＳＶ−２からのＤＮＡポリメラーゼの少なくともポーションをコードする。いくつかの実施形態において、ＤＮＡポリメラーゼは、ＨＳＶ−２ＵＬ３０ＤＮＡポリメラーゼである。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、ＨＳＶ−２分泌型糖タンパク質Ｄ２（ｇＤ２ｔ）の少なくともポーションをコードするＤＮＡ分子を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、ＨＳＶ−２分泌型糖タンパク質Ｄ２（ｇＤ２ｔ）の少なくともポーションをコードするＤＮＡ分子をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＤＮＡ配列は、ＨＳＶ−２からのヘリカーゼの少なくともポーションをコードする。いくつかの実施形態において、ヘリカーゼは、ＨＳＶ−２ＵＬ５ヘリカーゼである。いくつかの実施形態において、方法の投与ステップは、プライム−ブースト免疫化である。

【0147】

別の実施形態において、ウイルス複製に必要とされる少なくとも１つの保存されているＨＳＶ−２遺伝子のポーションをコードするＤＮＡ配列を含むＤＮＡワクチンを提供する。

【0148】

いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）アジュバントをさらに含む。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、ａｌｕｍアジュバントをさらに含む。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、不活性化全ＨＳＶ−２を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、ホルマリン−不活性化ＨＳＶ−２（ＦＩ−ＨＳＶ−２）を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮＡ配列は、ＨＳＶ−２からのＤＮＡポリメラーゼの少なくともポーションをコードする。いくつかの実施形態において、ＤＮＡポリマーは、ＨＳＶ−２ＵＬ ３０ＤＮＡポリメラーゼである。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、ＨＳＶ−２分泌型糖タンパク質Ｄ２（ｇＤ２ｔ）の少なくともポーションをコードするＤＮＡ分子を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、ＨＳＶ−２分泌型糖タンパク質Ｄ２（ｇＤ２ｔ）の少なくともポーションをコードするＤＮＡ分子をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＤＮＡ配列は、ＨＳＶ−２からのヘリカーゼの少なくともポーションをコードする。いくつかの実施形態において、ヘリカーゼは、ＨＳＶ−２ ＵＬ５ヘリカーゼである。

【0149】

したがって、本明細書に記載されている方法およびワクチンのいくつかの実施形態において、アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバント（ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌまたはａｄｊｕ−ｐｈｏｓ）およびモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）と混合したホルマリン−不活性化ヘルペスウイルスを、防御免疫応答を生じさせるワクチンとして提供する。

【0150】

いくつかの実施形態において、デキストラン硫酸を用いて、感染細胞から高力価のヘルペスウイルスを放出させ、調製物における細胞材料の量を非常に低減させた。このように得られたウイルスをそれに続いて精製し、ホルムアルデヒドで不活性化する。

【0151】

本発明者らは、単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ−２）に対するいくつかのワクチンの組合せを、生殖器疾患のマウスおよびモルモットモデルの両方において開発および試験してきた。これらのワクチンにおいて含まれるのは、アジュバントモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）およびＡｌｕｍの様々な製剤であった。本発明者らは、ＭＰＬ／Ａｌｕｍと一緒にＦＩ−ＨＳＶ２からなる多価ワクチンが、ｇＤ２タンパク質サブユニット／ＭＰＬ／Ａｌｕｍワクチン接種より防御的であることができるかについて問うた。

【0152】

したがって、本発明者らは、生殖器疾患のマウスモデルにおいて、ｇＤ２ｔタンパク質による免疫化と比較して、ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｌｕｍによる免疫化が、疾患およびウイルス排出の両方に対して有意により高いレベルの防御を実現したことを見出した。実際は、１つの実験において、ＦＩ−ＨＳＶ−２のみで免疫化された８匹のマウスのうち２匹は、負荷後の任意の日において検出可能なウイルスを排出しなかった。初期の実験の全てはＰｉｅｒｃｅからのＩｍｊｅｃｔ Ａｌｕｍで行ったが、これは、結晶性およびアモルファスのアルミニウム相の両方からなり、臨床応用に適したａｌｕｍの詳細に明らかにされた形態ではない。したがって、本発明者らは、ＭＰＬおよび水酸化アルミニウム（Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ）またはリン酸アルミニウム（Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓ）アジュバント（これらの両方は、臨床ワクチンにおける使用について認可を受けた）と共に製剤したワクチンの防御有効性を試験した。本発明者らはまた、免疫化の様々な経路を試験した。試験免疫化群は、１）ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（皮下に与える）；２）ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（筋肉内に与える）；および３）ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓ（筋肉内に与える）であった。

【0153】

ＨＳＶ−２による膣内の負荷に続いて、ＦＩ−ＨＳＶ２を受けている群における平均力価は、３Ｌｏｇだけ低減した。さらに、各ＦＩ−ＨＳＶ２群における８匹のマウスの半分以上は、検出限界以下のレベルにウイルス排出が低減した。まとめると、アルミニウム含有アジュバントＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌまたはＡｄｊｕ−Ｐｈｏｓと一緒のＦＩ−ＨＳＶ２およびＭＰＬによる免疫化は、少なくともＩｍｊｅｃｔ ａｌｕｍによってもたらされるものと同じぐらいロバストであった、ＨＳＶ−２疾患および排出に対する防御をもたらした。この実験において、各群においてＦＩ−ＨＳＶ２により免疫化されたマウスの数匹は、試験した任意の日において検出可能な排出がなかった（＜１０ＰＦＵ）。

【0154】

理論に束縛されるものではないが、ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｌｕｍによって実現された負荷に対する高レベルの防御がまた、長期間の再負荷に対して有効であるかについて問うことは重要であると考えられる。この目的のために、ＦＩ−ＨＳＶ２により免疫化されたマウスを、第１の負荷の１７週間後に同じ１０×ＬＤ₅₀用量のＨＳＶ−２で再負荷した。際立って、ＦＩ−ＨＳＶ２群における再負荷したマウスのうち２匹のみは、検出可能な低レベルのウイルスを有し、２日目に検出可能なウイルスを示したＦＩ−ＨＳＶ２／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ群（ｓ．ｃ．）におけるマウスは、後に２１日目に死亡した。ＦＩ−ＨＳＶ２／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ群（ｉ．ｍ．）において、８匹のマウスのうち５匹は、負荷後または再負荷後２日目に検出可能なウイルスを有さず、この群において２匹のさらなるマウスは負荷後に非常に低レベルの排出を有し（１０¹〜１０^1.5ＰＦＵ）、再負荷後に検出可能なウイルスを有さなかったことは特に注目すべきである。

【0155】

まとめると、本発明者らは、ＭＰＬおよびアルミニウム含有アジュバントと共に製剤したＦＩ−ＨＳＶ２による免疫化が、ＨＳＶ−２疾患に対して殆ど完全な防御を誘発することを見出した。さらに、これらのワクチンは、膣のＨＳＶ−２排出に対して強力および持続性のある防御を実現し、数匹の動物は負荷または長期間の再負荷に続いて殺菌免疫を示した。

【0156】

本発明者らはまた、急性および再発性のＨＳＶ−２生殖器疾患のモルモットモデルにおけるホルマリン−不活性化−ＨＳＶ−２（ＦＩ−ＨＳＶ２）／ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌワクチンを評価し、これを、ＭＰＬ／Ａｌｕｍ中のｇＤ２ｔサブユニットタンパク質ワクチンと比較した。負荷の後、両方の群は、ｍｏｃｋ−免疫化された動物と比較して、急性ウイルス性疾患およびウイルス排出に対する高度に有意な防御を示した。ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌで免疫化された１０匹のモルモットのうち１匹のみが、急性相病変および負荷後９日目まで持続したウイルス排出を有した。この動物のみが、１００日の期間に亘り再発性病変を発症し、一方では、ｇＤ２ｔサブユニットタンパク質／ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌにおける１０匹の動物のうちの３匹は、再発性病変を発症した。再発性病変または膣のＨＳＶ−２疾患に対する防御が、ＤＲＧにおける潜在ウイルスゲノムの数、または再活性化後の免疫における差異と関連しているかどうかを決定するために、それぞれの生存しているモルモットからの腰仙部ＤＲＧを収集した。ＨＳＶ−２ＤＮＡのレベルを、リアルタイム定量的ＰＣＲによって定量化した。急性および再発性病変の両方を有したＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌで免疫化された単一のモルモットのみが、検出可能なＨＳＶ−２ＤＮＡ（８４コピー）を有した。対照的に、１０匹のｇＤ２ｔサブユニットＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌで免疫化されたモルモットのうち４匹は、検出可能なＨＳＶ−２ＤＮＡレベルを有した。まとめると、これらの研究は、ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌワクチンをモルモットに与えたとき、群中の１匹の「ノンレスポンダー」動物を例外として、急性および再発性両方の病変の発生に対する完全な防御、ＤＲＧにおける検出不可能なレベルのＨＳＶ−２ＤＮＡ、より低い累積的急性疾患スコア、およびより低い数の再発性疾患を有する日が存在したことを示した（Ｍｏｒｅｌｌｏ、 Ｃ． Ｓ．ら、２０１１年、Ｖｉｒｏｌ．、８５：３４６１〜３４７２頁）。

【0157】

Ｖ．選択した実施形態
実施形態１．不活性化ＨＳＶ、リポ多糖（ＬＰＳ）に由来するアジュバントおよびアルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントを含む、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ワクチン。
実施形態２．前記ＬＰＳに由来するアジュバントが、ＭＰＬであり、前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、水酸化アルミニウムアジュバントまたはリン酸アルミニウムアジュバントであり、前記ワクチンが、単離された核酸配列製剤を含まない、実施形態１に記載のワクチン。
実施形態３．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ１である、実施形態１〜２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態４．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ２である、実施形態１〜２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態５．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２である、実施形態１〜２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態６．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、サルモネラミネソタＬＰＳに由来する、実施形態１〜２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態７．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、サルモネラミネソタＲｅ５９５ＬＰＳに由来する、実施形態１〜２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態８．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、Ｒ５９５ＬＰＳに由来する、実施形態１〜８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態９．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、リピドＡアジュバントである、実施形態１〜８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態１０．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、（Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカノイル部分を有さないリピドＡアジュバントである、実施形態１〜８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態１１．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、１−ホスフェート部分を有さないリピドＡアジュバントである、実施形態１〜８および１０のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態１２．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）である、実施形態１〜８および１０〜１１のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態１３．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、３−Ｏ−デスアシル−４’−モノホスホリルリピドＡである、実施形態１〜８および１０〜１１のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態１４．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、ＴＬＲ４タンパク質に結合することができる、実施形態１から〜１３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態１５．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、合成ＭＰＬ類似体アジュバントである、実施形態１〜１４のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態１６．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、水酸化アルミニウムアジュバントである、実施形態１〜１５のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態１７．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、リン酸アルミニウムアジュバントである、実施形態１〜１５のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態１８．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、結晶性水酸化アルミニウムを含み、アモルファス水酸化アルミニウムまたはヒドロキシ炭酸アルミニウムまたは水酸化マグネシウムを含まない、実施形態１から〜１５のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態１９．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、白色のゼラチン状沈殿物の形態のリン酸アルミニウムゲルを含む、実施形態１〜１５のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２０．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、白色のゼラチン状沈殿物の形態の水酸化アルミニウムゲルを含む、実施形態１〜１５のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２１．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、硫酸アルミニウムカリウムアジュバントである、実施形態１〜１５のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２２．前記不活性化ＨＳＶが、複製を減少させるＤＮＡ変異を含む、実施形態１〜２１のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２３．前記不活性化ＨＳＶが、化学的不活性化によって形成される、実施形態１〜２１のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２４．前記不活性化ＨＳＶが、前記ＨＳＶと、架橋剤、酸化剤、還元剤、熱、放射線、界面活性剤、ｐＨ変更剤、ならびにフロクマリン、アジリジン、エチレンイミン、バイナリーエチレンイミン、およびβ−プロピオラクトンから選択される化学剤から選択される１種または複数の作用剤とを接触させることによって形成される、実施形態１〜２１のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２５．前記化学剤が、アジリジンである、実施形態２４に記載のワクチン。
実施形態２６．前記化学剤が、エチレンイミンである、実施形態２４に記載のワクチン。
実施形態２７．前記化学剤が、バイナリーエチレンイミンである、実施形態２４に記載のワクチン。
実施形態２８．前記化学剤が、β−プロピオラクトンである、実施形態２４に記載のワクチン。
実施形態２９．前記放射線が、紫外線である、実施形態２４〜２８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態３０．前記放射線が、電子ビーム線である、実施形態２４〜２８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態３１．前記放射線が、赤外線である、実施形態２４〜２８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態３２．前記放射線が、γ線である、実施形態２４〜２８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態３３．前記架橋剤が、アルデヒド架橋剤である、実施形態２４〜３２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態３４．前記架橋剤が、ホルムアルデヒドである、実施形態２４〜３２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態３５．前記架橋剤が、ホルマリンである、実施形態２４〜３２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態３６．前記酸化剤が、過ヨウ素酸ナトリウムである、実施形態２４〜３５のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態３７．前記酸化剤が、過酸化水素である、実施形態２４〜３５のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態３８．前記還元剤が、ａｌｄｒｉｔｈｉｏｌ−２である、実施形態２４〜３７のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態３９．前記界面活性剤が、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００である、実施形態２４〜３８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態４０．前記界面活性剤が、ＮＰ−４０である、実施形態２４〜３８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態４１．前記界面活性剤が、Ｔｗｅｅｎ−２０である、実施形態２４〜３８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態４２．前記不活性化ＨＳＶが、前記ＨＳＶと、紫外線およびフロクマリンを含む１種または複数の作用剤とを接触させることによって形成される、実施形態１〜４１のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態４３．前記フロクマリンが、ソラレンである、実施形態１〜４２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態４４．前記フロクマリンが、４’−アミノメチル−４，５’，８−トリメチルソラレンである、実施形態１〜４２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態４５．前記フロクマリンが、アンゲリシンである、実施形態１〜４２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態４６．前記フロクマリンが、キサントトキシンである、実施形態１〜４２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態４７．前記フロクマリンが、ベルガプテンである、実施形態１〜４２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態４８．前記フロクマリンが、ノダケネチンである、実施形態１〜４２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態４９．前記不活性化ＨＳＶが、ＨＳＶ１の不活性化単一株である、実施形態１〜４８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態５０．前記不活性化ＨＳＶが、ＨＳＶ２の不活性化単一株である、実施形態１〜４８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態５１．前記不活性化ＨＳＶが、ＨＳＶ１の２種以上の不活性化株の組合せである、実施形態１〜４８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態５２．前記不活性化ＨＳＶが、ＨＳＶ２の２種以上の不活性化株の組合せである、実施形態１〜４８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態５３．前記不活性化ＨＳＶが、ＨＳＶ１の１種または複数の不活性化株およびＨＳＶ２の１種または複数の不活性化株の組合せである、実施形態１〜４８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態５４．筋内投与のために製剤される、実施形態１〜５３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態５５．皮内投与のために製剤される、実施形態１〜５３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態５６．粘膜投与のために製剤される、実施形態１〜５３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態５７．鼻腔内投与のために製剤される、実施形態１〜５３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態５８．直腸内投与のために製剤される、実施形態１〜５３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態５９．腟内投与のために製剤される、実施形態１〜５３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態６０．局所投与のために製剤される、実施形態１〜５３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態６１．経皮膚的投与のために製剤される、実施形態１〜５３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態６２．皮下投与のために製剤される、実施形態１〜５３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態６３．前記単離された核酸配列製剤が、抗原性の単離された核酸配列製剤である、実施形態２〜６２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態６４．前記単離された核酸配列製剤が、ＤＮＡワクチンである、実施形態２〜６２のいずれか一つに記載のＨＳＶワクチン。
実施形態６５．前記ＤＮＡワクチンが、抗原性の単離された核酸配列製剤である、実施形態６４に記載のＨＳＶワクチン。
実施形態６６．ＨＳＶ感染に対する前記ワクチンのレシピエントを、１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１１年、１２年、１３年、１４年、１５年、１６年、１７年、１８年、１９年、２０年、またはそれを超える年までワクチン接種する、実施形態１〜６５のいずれか一つに記載のＨＳＶワクチン。
実施形態６７．治療有効量または予防的有効量の実施形態１〜６６のいずれか一つに記載のＨＳＶワクチンを投与することを含む、このような治療または予防を必要としている患者においてＨＳＶ感染を治療または予防する方法。
実施形態６８．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ１である、実施形態６７に記載の方法。
実施形態６９．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ２である、実施形態６７に記載の方法。
実施形態７０．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２である、実施形態６７に記載の方法。
実施形態７１．前記ＨＳＶ感染が、ヘルペス性歯肉口内炎、口唇ヘルペス、陰部ヘルペス、ヘルペス性ひょう疽、剣状ヘルペス、ヘルペスウイルス脳炎、ヘルペスウイルス髄膜炎、ヘルペス性食道炎、ヘルペス性角膜炎、ベル麻痺、モラレー髄膜炎、ヘルペスルグベイオルム、疱疹性湿疹、ヘルペス神経痛、およびヘルペス後神経痛から選択される疾患を引き起こす、実施形態６７〜７０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態７２．治療有効量を含む、実施形態６７〜７１のいずれか一つに記載の方法。
実施形態７３．予防的有効量を含む、実施形態６７〜７１のいずれか一つに記載の方法。
実施形態７４．前記疾患を治療することを含む、実施形態６７〜７３のいずれか一つに記載の方法。
実施形態７５．前記疾患を予防することを含む、実施形態６７〜７３のいずれか一つに記載の方法。
実施形態７６．ウイルス排出の低減を含む、実施形態６７〜７５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態７７．病変の出現の頻度の低減を含む、実施形態６７〜７６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態７８．病変の出現の期間の低減を含む、実施形態６７〜７７のいずれか一つに記載の方法。
実施形態７９．筋内投与を含む、実施形態６７〜７８のいずれか一つに記載の方法。
実施形態８０．皮内投与を含む、実施形態６７〜７８のいずれか一つに記載の方法。
実施形態８１．粘膜投与を含む、実施形態６７〜７８のいずれか一つに記載の方法。
実施形態８２．鼻腔内投与を含む、実施形態６７〜７８のいずれか一つに記載の方法。
実施形態８３．直腸内投与を含む、実施形態６７〜７８のいずれか一つに記載の方法。
実施形態８４．腟内投与を含む、実施形態６７〜７８のいずれか一つに記載の方法。
実施形態８５．局所投与を含む、実施形態６７〜７８のいずれか一つに記載の方法。
実施形態８６．経皮膚的投与を含む、実施形態６７〜７８のいずれか一つに記載の方法。
実施形態８７．皮下投与を含む、実施形態６７〜７８のいずれか一つに記載の方法。
実施形態８８．単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ワクチンを調製する方法であって、
ＨＳＶ−細胞混合物と、硫酸化またはスルホン化多糖とを接触させるステップであって、前記ＨＳＶ−細胞混合物が、ＨＳＶ粒子、細胞および細胞のポーションを含むステップと、
前記ＨＳＶ粒子を前記細胞から分離し、それによって単離したＨＳＶ粒子を形成するステップと、
前記単離したＨＳＶ粒子を不活性化し、それによって不活性化ＨＳＶ粒子を形成するステップと、
前記不活性化ＨＳＶ粒子と、リポ多糖に由来するアジュバントおよびアルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントとを合わせ、それによってＨＳＶワクチンを形成するステップとを含む方法。
実施形態８９．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ１である、実施形態８８に記載の方法。
実施形態９０．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ２である、実施形態８８に記載の方法。
実施形態９１．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２である、実施形態８８に記載の方法。
実施形態９２．前記硫酸化またはスルホン化多糖が、デキストラン硫酸、ヘパリン、およびヘパラン硫酸から選択される、実施形態８８〜９１のいずれか一つに記載の方法。
実施形態９３．前記ＨＳＶ粒子を、１０⁷から１０¹⁰（ｐｆｕ／マイクログラムタンパク質）の濃度で単離される、実施形態８８〜９２のいずれか一つに記載の方法。
実施形態９４．前記ＨＳＶワクチンが、１０⁷から１０¹⁰（ｐｆｕ当量／マイクログラムタンパク質）の不活性化ＨＶを含む、実施形態８８〜９３のいずれか一つに記載の方法。
実施形態９５．前記分離するステップが、遠心分離、ポリエチレングリコール沈殿、濾過、ゲル濾過、限外濾過、タンジェンシャルフロー限外濾過、またはアフィニティークロマトグラフィーを含む、実施形態８８〜９４のいずれか一つに記載の方法。
実施形態９６．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、サルモネラミネソタＬＰＳに由来する、実施形態８８〜９５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態９７．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、サルモネラミネソタＲｅ５９５ＬＰＳに由来する、実施形態８８〜９５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態９８．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、Ｒ５９５ＬＰＳに由来する、実施形態８８〜９５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態９９．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、リピドＡアジュバントである、実施形態８８〜９８のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１００．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、（Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカノイル部分を有さないリピドＡアジュバントである、実施形態８８〜９８のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１０１．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、モノホスホリルリピドＡである、実施形態８８〜９８および１００のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１０２．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、１−ホスフェート部分を有さないリピドＡアジュバントである、実施形態８８〜９８および１００のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１０３．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、３−Ｏ−デスアシル−４’−モノホスホリルリピドＡである、実施形態８８〜９８、１００および１０２のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１０４．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、合成ＭＰＬ類似体アジュバントである、実施形態８８〜９８および１００〜１０３のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１０５．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、ＴＬＲ４タンパク質に結合することができる、実施形態８８〜１０４のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１０６．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、水酸化アルミニウムアジュバントである、実施形態８８〜１０５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１０７．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、リン酸アルミニウムアジュバントである、実施形態８８〜１０５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１０８．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、結晶性水酸化アルミニウムを含み、アモルファス水酸化アルミニウムまたはヒドロキシ炭酸アルミニウムまたは水酸化マグネシウムを含まない、実施形態８８〜１０５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１０９．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、白色のゼラチン状沈殿物の形態のリン酸アルミニウムゲルを含む、実施形態８８〜１０５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１１０．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、白色のゼラチン状沈殿物の形態の水酸化アルミニウムゲルを含む、実施形態８８〜１０５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１１１．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、硫酸アルミニウムカリウムアジュバントである、実施形態８８〜１０５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１１２．前記不活性化するステップが、前記ＨＳＶと、架橋剤、酸化剤、還元剤、熱、放射線、界面活性剤、ｐＨ変更剤、ならびにフロクマリン、アジリジン、エチレンイミン、バイナリーエチレンイミン、およびβ−プロピオラクトンから選択される化学剤から選択される１種または複数の作用剤とを接触させるステップを含む、実施形態８８〜１１１のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１１３．前記化学剤が、アジリジンである、実施形態１１２に記載の方法。
実施形態１１４．前記化学剤が、エチレンイミンである、実施形態１１２に記載の方法。
実施形態１１５．前記化学剤が、バイナリーエチレンイミンである、実施形態１１２に記載の方法。
実施形態１１６．前記化学剤が、β−プロピオラクトンである、実施形態１１２に記載の方法。
実施形態１１７．前記放射線が、紫外線である、実施形態１１２〜１１６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１１８．前記放射線が、電子ビーム線である、実施形態１１２〜１１６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１１９．前記放射線が、赤外線である、実施形態１１２〜１１６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１２０．前記放射線が、γ線である、実施形態１１２〜１１６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１２１．前記架橋剤が、アルデヒド架橋剤である、実施形態１１２〜１２０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１２２．前記架橋剤が、ホルムアルデヒドである、実施形態１１２〜１２０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１２３．前記架橋剤が、ホルマリンである、実施形態１１２〜１２０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１２４．前記酸化剤が、過ヨウ素酸ナトリウムである、実施形態１１２〜１２３のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１２５．前記酸化剤が、過酸化水素である、実施形態１１２〜１２３のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１２６．前記還元剤が、ａｌｄｒｉｔｈｉｏｌ−２である、実施形態１１２〜１２５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１２７．前記界面活性剤が、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００である、実施形態１１２〜１２６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１２８．前記界面活性剤が、ＮＰ−４０である、実施形態１１２〜１２６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１２９．前記界面活性剤が、Ｔｗｅｅｎ−２０である、実施形態１１２〜１２６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１３０．前記不活性化するステップが、前記ＨＳＶと、紫外線およびフロクマリンを含む１種または複数の作用剤とを接触させるステップを含む、実施形態１１２〜１２９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１３１．前記フロクマリンが、ソラレンである、実施形態１１２〜１３０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１３２．前記フロクマリンが、４’−アミノメチル−４，５’，８−トリメチルソラレンである、実施形態１１２〜１３０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１３３．前記フロクマリンが、アンゲリシンである、実施形態１１２〜１３０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１３４．前記フロクマリンが、キサントトキシンである、実施形態１１２〜１３０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１３５．前記フロクマリンが、ベルガプテンである、実施形態１１２〜１３０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１３６．前記フロクマリンが、ノダケネチンである、実施形態１１２〜１３０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１３７．それを必要としている対象に、ＤＮＡワクチンを投与することを含み、前記ＤＮＡワクチンが、ウイルス複製に必要とされる少なくとも１つの保存されているＨＳＶ遺伝子のポーションをコードするＤＮＡ配列を含む、対象において単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染を予防または治療する方法。
実施形態１３８．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ１である、実施形態１３７に記載の方法。
実施形態１３９．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ２である、実施形態１３７に記載の方法。
実施形態１４０．前記ＤＮＡワクチンが、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）アジュバントをさらに含む、実施形態１３７〜１３９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１４１．前記ＤＮＡワクチンが、ａｌｕｍアジュバントをさらに含む、実施形態１３７〜１４０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１４２．前記ＤＮＡワクチンが、不活性化全ＨＳＶ−２を含む、実施形態１３７〜１４１のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１４３．前記ＤＮＡワクチンが、ホルマリン−不活性化ＨＳＶ−２（ＦＩ−ＨＳＶ−２）を含む、実施形態１３７〜１４１のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１４４．前記ＤＮＡ配列が、ＨＳＶ−２からのＤＮＡポリメラーゼの少なくともポーションをコードする、実施形態１３７〜１４１のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１４５．前記ＤＮＡポリメラーゼが、ＨＳＶ−２ ＵＬ３０ＤＮＡポリメラーゼである、実施形態１４４に記載の方法。
実施形態１４６．前記ＤＮＡワクチンが、ＨＳＶ−２分泌型糖タンパク質Ｄ２（ｇＤ２ｔ）の少なくともポーションをコードするＤＮＡ分子をさらに含む、実施形態１４４に記載の方法。
実施形態１４７．前記ＤＮＡ配列が、ＨＳＶ−２からのヘリカーゼの少なくともポーションをコードする、実施形態１３７〜１４６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１４８．前記ヘリカーゼが、ＨＳＶ−２ ＵＬ５ヘリカーゼである、実施形態１４７に記載の方法。
実施形態１４９．前記投与が、プライム−ブースト免疫化である、実施形態１３７〜１４８のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１５０．ウイルス複製に必要とされる少なくとも１つの保存されているＨＳＶ遺伝子のポーションをコードするＤＮＡ配列を含むＤＮＡワクチン。
実施形態１５１．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ１である、実施形態１５０に記載のＤＮＡワクチン。
実施形態１５２．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ２である、実施形態１５０に記載のＤＮＡワクチン。
実施形態１５３．モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）アジュバントをさらに含む、実施形態１５０〜１５２のいずれか一つに記載のＤＮＡワクチン。
実施形態１５４．ａｌｕｍアジュバントをさらに含む、実施形態１５０〜１５３のいずれか一つに記載のＤＮＡワクチン。
実施形態１５５．不活性化全ＨＳＶ−２を含む、実施形態１５０〜１５４のいずれか一つに記載のＤＮＡワクチン。
実施形態１５６．ホルマリン−不活性化ＨＳＶ−２（ＦＩ−ＨＳＶ−２）を含む、実施形態１５０〜１５４のいずれか一つに記載のＤＮＡワクチン。
実施形態１５７．前記ＤＮＡ配列が、ＨＳＶ−２からのＤＮＡポリメラーゼの少なくともポーションをコードする、実施形態１５０〜１５４のいずれか一つに記載のＤＮＡワクチン。
実施形態１５８．前記ＤＮＡ配列が、ＨＳＶ−２ＵＬ３０ＤＮＡポリメラーゼである、実施形態１５７に記載のＤＮＡワクチン。
実施形態１５９．前記ＤＮＡワクチンが、ＨＳＶ−２分泌型糖タンパク質Ｄ２（ｇＤ２ｔ）の少なくともポーションをコードするＤＮＡ分子をさらに含む、実施形態１５７に記載のＤＮＡワクチン。
実施形態１６０．前記ＤＮＡ配列が、ＨＳＶ−２からのヘリカーゼの少なくともポーションをコードする、実施形態１５０〜１５９のいずれか一つに記載のＤＮＡワクチン。
実施形態１６１．前記ヘリカーゼが、ＨＳＶ−２ＵＬ５ヘリカーゼである、実施形態１６０に記載のＤＮＡワクチン。
実施形態１６２．治療有効量または予防的有効量の実施形態１〜６６のいずれか一つに記載のＨＳＶワクチンを投与することを含む、このような治療または予防を必要としている患者において疾患を治療または予防する方法。
実施形態１６３．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ１である、実施形態１６２に記載の方法。
実施形態１６４．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ２である、実施形態１６２に記載の方法。
実施形態１６５．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２である、実施形態１６２に記載の方法。
実施形態１６６．前記疾患が、ヘルペス性歯肉口内炎、口唇ヘルペス、陰部ヘルペス、ヘルペス性ひょう疽、剣状ヘルペス、ヘルペスウイルス脳炎、ヘルペスウイルス髄膜炎、ヘルペス性食道炎、ヘルペス性角膜炎、ベル麻痺、モラレー髄膜炎、ヘルペスルグベイオルム、疱疹性湿疹、ヘルペス神経痛、およびヘルペス後神経痛からなる群から選択される、実施形態１６２〜１６５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１６７．前記疾患が、ヘルペス性歯肉口内炎である、請求項１６６に記載の方法。
実施形態１６８．前記疾患が、口唇ヘルペスである、請求項１６６に記載の方法。
実施形態１６９．前記疾患が、陰部ヘルペスである、請求項１６６に記載の方法。
実施形態１７０．前記疾患が、ヘルペス性ひょう疽である、請求項１６６に記載の方法。
実施形態１７１．前記疾患が、剣状ヘルペスである、請求項１６６に記載の方法。
実施形態１７２．前記疾患が、ヘルペスウイルス脳炎である、請求項１６６に記載の方法。
実施形態１７３．前記疾患が、ヘルペスウイルス髄膜炎である、請求項１６６に記載の方法。
実施形態１７４．前記疾患が、ヘルペス性食道炎である、請求項１６６に記載の方法。
実施形態１７５．前記疾患が、ヘルペス性角膜炎である、請求項１６６に記載の方法。
実施形態１７６．前記疾患が、ベル麻痺である、請求項１６６に記載の方法。
実施形態１７７．前記疾患が、モラレー髄膜炎である、請求項１６６に記載の方法。
実施形態１７８．前記疾患が、ヘルペスルグベイオルムである、請求項１６６に記載の方法。
実施形態１７９．前記疾患が、疱疹性湿疹である、請求項１６６に記載の方法。
実施形態１８０．前記疾患が、ヘルペス神経痛である、請求項１６６に記載の方法。
実施形態１８１．前記疾患が、ヘルペス後神経痛である、請求項１６６に記載の方法。
実施形態１８２．前記疾患が、アルツハイマー病である、請求項１６６に記載の方法。
実施形態１８３．治療有効量のＨＳＶワクチンを含む、実施形態１６２〜１８２のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１８４．予防的有効量のＨＳＶワクチンを含む、実施形態１６２〜１８２のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１８５．前記疾患を治療することを含む、実施形態１６２〜１８３のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１８６．前記疾患を予防することを含む、実施形態１６２〜１８４のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１８７．ウイルス排出の低減を含む、実施形態１６２〜１８６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１８８．病変の出現の頻度の低減を含む、実施形態１６２〜１８７のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１８９．病変の出現の期間の低減を含む、実施形態１６２〜１８８のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１９０．筋内投与を含む、実施形態１６２〜１８９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１９１．皮内投与を含む、実施形態１６２〜１８９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１９２．粘膜投与を含む、実施形態１６２〜１８９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１９３．鼻腔内投与を含む、実施形態１６２〜１８９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１９４．直腸内投与を含む、実施形態１６２〜１８９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１９５．腟内投与を含む、実施形態１６２〜１８９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１９６．局所投与を含む、実施形態１６２〜１８９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１９７．経皮膚的投与を含む、実施形態１６２〜１８９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１９８．皮下投与を含む、実施形態１６２〜１８９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１９９．プライムＨＳＶ ＤＮＡワクチンの投与を含まない、実施形態１６２〜１９８のいずれか一つに記載の方法。
実施形態２００．ＨＳＶ ＤＮＡワクチンの投与を含まない、実施形態１６２〜１９９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態２０１．ＵＬ３０、ＵＬ５、Ｄ２、ｇＤ２ｔ、またはそのポーションから選択される遺伝子を含むＤＮＡワクチンの投与を含まない、実施形態１６２〜１９８のいずれか一つに記載の方法。
実施形態２０２．不活性化ＨＶ、リポ多糖（ＬＰＳ）に由来するアジュバントおよびアルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントを含むヘルペスウイルス（ＨＶ）ワクチン。
実施形態２０３．前記ＬＰＳに由来するアジュバントが、ＭＰＬであり、
前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、水酸化アルミニウムアジュバントまたはリン酸アルミニウムアジュバントであり、
前記ワクチンが、単離された核酸配列製剤を含まない、実施形態２０２に記載のワクチン。
実施形態２０４．前記ＨＶが、ＨＨＶ−３である、実施形態２０２〜２０３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２０５．前記ＨＶが、ＨＨＶ−４である、実施形態２０２〜２０３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２０６．前記ＨＶが、ＨＨＶ−５である、実施形態２０２〜２０３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２０７．前記ＨＶが、ＨＨＶ−６である、実施形態２０２〜２０３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２０８．前記ＨＶが、ＨＨＶ−７である、実施形態２０２〜２０３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２０９．前記ＨＶが、ＨＨＶ−８である、実施形態２０２〜２０３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２１０．前記ＨＶが、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）である、実施形態２０２〜２０３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２１１．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ１である、実施形態２１０に記載のワクチン。
実施形態２１２．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ２である、実施形態２１０に記載のワクチン。
実施形態２１３．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２である、実施形態２１０に記載のワクチン。
実施形態２１４．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、サルモネラミネソタＬＰＳに由来する、実施形態２０２〜２１３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２１５．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、サルモネラミネソタＲｅ５９５ＬＰＳに由来する、実施形態２０２〜２１３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２１６．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、Ｒ５９５ＬＰＳに由来する、実施形態２０２〜２１３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２１７．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、リピドＡアジュバントである、実施形態２０２〜２１６のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２１８．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、（Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカノイル部分を有さないリピドＡアジュバントである、実施形態２０２〜２１６のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２１９．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、モノホスホリルリピドＡである、実施形態２０２〜２１６のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２２０．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、１−ホスフェート部分を有さないリピドＡアジュバントである、実施形態２０２〜２１６および２１８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２２１．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、３−Ｏ−デスアシル−４’−モノホスホリルリピドＡである、実施形態２０２〜２１６および２１８〜２２０のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２２２．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、ＴＬＲ４タンパク質に結合することができる、実施形態２０２〜２２１のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２２３．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、合成ＭＰＬ類似体アジュバントである、実施形態２０２〜２２２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２２４．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、水酸化アルミニウムアジュバントである、実施形態２０２〜２２３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２２５．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、リン酸アルミニウムアジュバントである、実施形態２０２〜２２３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２２６．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、ａｄｊｕ−ｐｈｏｓである、実施形態２０２〜２２３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２２７．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌである、実施形態２０２〜２２３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２２８．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、硫酸アルミニウムカリウムアジュバントである、実施形態２０２〜２２３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２２９．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、結晶性水酸化アルミニウムを含み、アモルファス水酸化アルミニウムまたはヒドロキシ炭酸アルミニウムまたは水酸化マグネシウムを含まない、実施形態２０２〜２２３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２３０．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、白色のゼラチン状沈殿物の形態のリン酸アルミニウムゲルを含む、実施形態２０２〜２２３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２３１．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、白色のゼラチン状沈殿物の形態の水酸化アルミニウムゲルを含む、実施形態２０２〜２２３のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２３２．前記不活性化ＨＶが、複製を減少させるＤＮＡ変異を含む、実施形態２０２〜２３１のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２３３．前記不活性化ＨＶが、化学的不活性化によって形成される、実施形態２０２〜２３１のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２３４．前記不活性化ＨＶが、前記ＨＶと、架橋剤、酸化剤、還元剤、熱、放射線、界面活性剤、ｐＨ変更剤、ならびにフロクマリン、アジリジン、エチレンイミン、バイナリーエチレンイミン、およびβ−プロピオラクトンから選択される化学剤から選択される１種または複数の作用剤とを接触させることによって形成される、実施形態２０２〜２３１のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２３５．前記化学剤が、アジリジンである、実施形態２３４に記載のワクチン。
実施形態２３６．前記化学剤が、エチレンイミンである、実施形態２３４に記載のワクチン。
実施形態２３７．前記化学剤が、バイナリーエチレンイミンである、実施形態２３４に記載のワクチン。
実施形態２３８．前記化学剤が、β−プロピオラクトンである、実施形態２３４に記載のワクチン。
実施形態２３９．前記放射線が、紫外線である、実施形態２３４〜２３８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２４０．前記放射線が、電子ビーム線である、実施形態２３４〜２３８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２４１．前記放射線が、赤外線である、実施形態２３４〜２３８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２４２．前記放射線が、γ線である、実施形態２３４〜２３８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２４３．前記架橋剤が、アルデヒド架橋剤である、実施形態２３４〜２４２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２４４．前記架橋剤が、ホルムアルデヒドである、実施形態２３４〜２４２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２４５．前記架橋剤が、ホルマリンである、実施形態２３４〜２４２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２４６．前記酸化剤が、過ヨウ素酸ナトリウムである、実施形態２３４〜２４５のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２４７．前記酸化剤が、過酸化水素である、実施形態２３４〜２４５のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２４８．前記還元剤が、ａｌｄｒｉｔｈｉｏｌ−２である、実施形態２３４〜２４５のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２４９．前記界面活性剤が、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００である、実施形態２３４〜２４６のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２５０．前記界面活性剤が、ＮＰ−４０である、実施形態２３４〜２４６のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２５１．前記界面活性剤が、Ｔｗｅｅｎ−２０である、実施形態２３４〜２４６のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２５２．前記不活性化ＨＶが、前記ＨＶと、紫外線およびフロクマリンを含む１種または複数の作用剤とを接触させることによって形成される、実施形態２３４〜２５１のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２５３．前記フロクマリンが、ソラレンである、実施形態２３４〜２５２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２５４．前記フロクマリンが、４’−アミノメチル−４，５’，８−トリメチルソラレンである、実施形態２３４〜２５２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２５５．前記フロクマリンが、アンゲリシンである、実施形態２３４〜２５２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２５６．前記フロクマリンが、キサントトキシンである、実施形態２３４〜２５２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２５７．前記フロクマリンが、ベルガプテンである、実施形態２３４〜２５２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２５８．前記フロクマリンが、ノダケネチンである、実施形態２３４〜２５２のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２５９．前記不活性化ＨＶが、ＨＶの不活性化単一株である、実施形態２０２〜２５８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２６０．前記不活性化ＨＶが、ＨＶの２種以上の不活性化株の組合せである、実施形態２０２〜２５８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２６１．前記不活性化ＨＶが、ＨＳＶ１の不活性化単一株である、実施形態２５９に記載のワクチン。
実施形態２６２．前記不活性化ＨＶが、ＨＳＶ２の不活性化単一株である、実施形態２５９に記載のワクチン。
実施形態２６３．前記不活性化ＨＶが、ＨＳＶ１の２種以上の不活性化株の組合せである、実施形態２６０に記載のワクチン。
実施形態２６４．前記不活性化ＨＶが、ＨＳＶ２の２種以上の不活性化株の組合せである、実施形態２６０に記載のワクチン。
実施形態２６５．前記不活性化ＨＶが、ＨＳＶ１の１種または複数の不活性化株およびＨＳＶ２の１種または複数の不活性化株の組合せである、実施形態２０２〜２５８のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２６６．筋内投与のために製剤される、実施形態２０２〜２６５のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２６７．皮内投与のために製剤される、実施形態２０２〜２６５のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２６８．粘膜投与のために製剤される、実施形態２０２〜２６５のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２６９．鼻腔内投与のために製剤される、実施形態２０２〜２６５のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２７０．直腸内投与のために製剤される、実施形態２０２〜２６５のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２７１．腟内投与のために製剤される、実施形態２０２〜２６５のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２７２．局所投与のために製剤される、実施形態２０２〜２６５のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２７３．経皮膚的投与のために製剤される、実施形態２０２〜２６５のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２７４．皮下投与のために製剤される、実施形態２０２〜２６５のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２７５．前記単離された核酸配列製剤が、抗原性の単離された核酸配列製剤である、実施形態２０２〜２７４のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態２７６．前記単離された核酸配列製剤が、ＤＮＡワクチンである、実施形態２０３〜２７５のいずれか一つに記載のＨＶワクチン。
実施形態２７７．前記ＤＮＡワクチンが、抗原性の単離された核酸配列製剤である、実施形態２７６に記載のＨＶワクチン。
実施形態２７８．ＨＶ感染に対する前記ワクチンのレシピエントを、１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１１年、１２年、１３年、１４年、１５年、１６年、１７年、１８年、１９年、２０年、またはそれを超える年までワクチン接種する、実施形態２０２〜２７７のいずれか一つに記載のＨＶワクチン。
実施形態２７９．ヘルペスウイルス（ＨＶ）ワクチンを調製する方法であって、
ＨＶ−細胞混合物と、硫酸化またはスルホン化多糖とを接触させるステップであって、前記ＨＶ−細胞混合物が、ＨＶ粒子、細胞および細胞のポーションを含むステップと、
前記ＨＶ粒子を前記細胞から分離し、それによって単離したＨＶ粒子を形成するステップと、
前記単離したＨＶ粒子を不活性化し、それによって不活性化ＨＶ粒子を形成するステップと、
前記不活性化ＨＶ粒子と、リポ多糖に由来するアジュバントおよびアルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントとを合わせ、それによってＨＶワクチンを形成するステップと
を含む方法。
実施形態２８０．前記ＨＶが、ＨＨＶ−１である、実施形態２７９に記載の方法。
実施形態２８１．前記ＨＶが、ＨＨＶ−２である、実施形態２７９に記載の方法。
実施形態２８２．前記ＨＶが、ＨＨＶ−３である、実施形態２７９に記載の方法。
実施形態２８３．前記ＨＶが、ＨＨＶ−４である、実施形態２７９に記載の方法。
実施形態２８４．前記ＨＶが、ＨＨＶ−５である、実施形態２７９に記載の方法。
実施形態２８５．前記ＨＶが、ＨＨＶ−６である、実施形態２７９に記載の方法。
実施形態２８６．前記ＨＶが、ＨＨＶ−７である、実施形態２７９に記載の方法。
実施形態２８７．前記ＨＶが、ＨＨＶ−８である、実施形態２７９に記載の方法。
実施形態２８８．前記ＨＶが、ＨＳＶである、実施形態２７９に記載の方法。
実施形態２８９．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ１である、実施形態２８８に記載の方法。
実施形態２９０．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ２である、実施形態２８８に記載の方法。
実施形態２９１．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２である、実施形態２８８に記載の方法。
実施形態２９２．前記硫酸化またはスルホン化多糖が、デキストラン硫酸、ヘパリン、およびヘパラン硫酸から選択される、実施形態２７９〜２９１のいずれか一つに記載の方法。
実施形態２９３．前記ＨＶ粒子を、１０⁷から１０¹⁰（ｐｆｕ／マイクログラムタンパク質）の濃度で単離する、実施形態２７９〜２９２のいずれか一つに記載の方法。
実施形態２９４．前記ＨＶワクチンが、１０⁷から１０¹⁰（ｐｆｕ当量／マイクログラムタンパク質）の不活性化ＨＶを含む、実施形態２７９〜２９３のいずれか一つに記載の方法。
実施形態２９５．前記分離するステップが、遠心分離、ポリエチレングリコール沈殿、濾過、ゲル濾過、限外濾過、タンジェンシャルフロー限外濾過、またはアフィニティークロマトグラフィーを含む、実施形態２７９〜２９４のいずれか一つに記載の方法。
実施形態２９６．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、サルモネラミネソタＬＰＳに由来する、実施形態２７９〜２９５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態２９７．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、サルモネラミネソタＲｅ５９５ＬＰＳに由来する、実施形態２７９〜２９５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態２９８．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、Ｒ５９５ＬＰＳに由来する、実施形態２７９〜２９５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態２９９．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、リピドＡアジュバントである、実施形態２７９〜２９８のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３００．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、（Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカノイル部分を有さないリピドＡアジュバントである、実施形態２７９〜２９８のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３０１．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、モノホスホリルリピドＡである、実施形態２７９〜２９８および３００のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３０２．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、１−ホスフェート部分を有さないリピドＡアジュバントである、実施形態２７９〜２９８および３００のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３０３．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、３−Ｏ−デスアシル−４’−モノホスホリルリピドＡである、実施形態２７９〜２９８および３００〜３０２のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３０４．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、合成ＭＰＬ類似体アジュバントである、実施形態２７９〜２９８および３００〜３０３のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３０５．前記リポ多糖に由来するアジュバントが、ＴＬＲ４タンパク質に結合することができる、実施形態２７９〜３０４のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３０６．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、水酸化アルミニウムアジュバントである、実施形態２７９〜３０５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３０７．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、リン酸アルミニウムアジュバントである、実施形態２７９〜３０５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３０８．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、結晶性水酸化アルミニウムを含み、アモルファス水酸化アルミニウムまたはヒドロキシ炭酸アルミニウムまたは水酸化マグネシウムを含まない、実施形態２７９〜３０５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３０９．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、白色のゼラチン状沈殿物の形態のリン酸アルミニウムゲルを含む、実施形態２７９〜３０５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３１０．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、白色のゼラチン状沈殿物の形態の水酸化アルミニウムゲルを含む、実施形態２７９〜３０５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３１１．前記アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントが、硫酸アルミニウムカリウムアジュバントである、実施形態２７９〜３０５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３１２．前記不活性化するステップが、前記ＨＶと、架橋剤、酸化剤、還元剤、熱、放射線、界面活性剤、ｐＨ変更剤、ならびにフロクマリン、アジリジン、エチレンイミン、バイナリーエチレンイミン、およびβ−プロピオラクトンから選択される化学剤から選択される１種または複数の作用剤とを接触させるステップを含む、実施形態２７９〜３１１のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３１３．前記化学剤が、アジリジンである、実施形態３１２に記載の方法。
実施形態３１４．前記化学剤が、エチレンイミンである、実施形態３１２に記載の方法。
実施形態３１５．前記化学剤が、バイナリーエチレンイミンである、実施形態３１２に記載の方法。
実施形態３１６．前記化学剤が、β−プロピオラクトンである、実施形態３１２に記載の方法。
実施形態３１７．前記放射線が、紫外線である、実施形態３１２〜３１６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３１８．前記放射線が、電子ビーム線である、実施形態３１２〜３１６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３１９．前記放射線が、赤外線である、実施形態３１２〜３１６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３２０．前記放射線が、γ線である、実施形態３１２〜３１６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３２１．前記架橋剤が、アルデヒド架橋剤である、実施形態３１２〜３２０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３２２．前記架橋剤が、ホルムアルデヒドである、実施形態３１２〜３２０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３２３．前記架橋剤が、ホルマリンである、実施形態３１２〜３２０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３２４．前記酸化剤が、過ヨウ素酸ナトリウムである、実施形態３１２〜３２３のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３２５．前記酸化剤が、過酸化水素である、実施形態３１２〜３２３のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３２６．前記還元剤が、ａｌｄｒｉｔｈｉｏｌ−２である、実施形態３１２〜３２５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３２７．前記界面活性剤が、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００である、実施形態３１２〜３２６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３２８．前記界面活性剤が、ＮＰ−４０である、実施形態３１２〜３２６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３２９．前記界面活性剤が、Ｔｗｅｅｎ−２０である、実施形態３１２〜３２６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３３０．前記不活性化するステップが、前記ＨＶと、紫外線およびフロクマリンを含む１種または複数の作用剤とを接触させるステップを含む、実施形態３１２〜３２９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３３１．前記フロクマリンが、ソラレンである、実施形態３１２〜３３０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３３２．前記フロクマリンが、４’−アミノメチル−４，５’，８−トリメチルソラレンである、実施形態３１２〜３３０のいずれか一つに記載のワクチン。
実施形態３３３．前記フロクマリンが、アンゲリシンである、実施形態３１２〜３３０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３３４．前記フロクマリンが、キサントトキシンである、実施形態３１２〜３３０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３３５．前記フロクマリンが、ベルガプテンである、実施形態３１２〜３３０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３３６．前記フロクマリンが、ノダケネチンである、実施形態３１２〜３３０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３３７．治療有効量または予防的有効量の実施形態２０２〜２７８のいずれか一つに記載のＨＶワクチンを投与することを含む、このような治療または予防を必要とする患者においてＨＶ感染を治療または予防する方法。
実施形態３３８．前記ＨＶが、ＨＨＶ−１である、実施形態３３７に記載の方法。
実施形態３３９．前記ＨＶが、ＨＨＶ−２である、実施形態３３７に記載の方法。
実施形態３４０．前記ＨＶが、ＨＨＶ−３である、実施形態３３７に記載の方法。
実施形態３４１．前記ＨＶが、ＨＨＶ−４である、実施形態３３７に記載の方法。
実施形態３４２．前記ＨＶが、ＨＨＶ−５である、実施形態３３７に記載の方法。
実施形態３４３．前記ＨＶが、ＨＨＶ−６である、実施形態３３７に記載の方法。
実施形態３４４．前記ＨＶが、ＨＨＶ−７である、実施形態３３７に記載の方法。
実施形態３４５．前記ＨＶが、ＨＨＶ−８である、実施形態３３７に記載の方法。
実施形態３４６．前記ＨＶが、ＨＳＶである、実施形態３３７に記載の方法。
実施形態３４７．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ１である、実施形態３４６に記載の方法。
実施形態３４８．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ２である、実施形態３４６に記載の方法。
実施形態３４９．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２である、実施形態３４６に記載の方法。
実施形態３５０．前記ＨＶ感染が、ヘルペス性歯肉口内炎、口唇ヘルペス、陰部ヘルペス、ヘルペス性ひょう疽、剣状ヘルペス、ヘルペスウイルス脳炎、ヘルペスウイルス髄膜炎、ヘルペス性食道炎、ヘルペス性角膜炎、ベル麻痺、モラレー髄膜炎、ヘルペスルグベイオルム、疱疹性湿疹、ヘルペス神経痛、およびヘルペス後神経痛から選択される疾患を引き起こす、実施形態３３７〜３４９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３５１．治療有効量または予防的有効量の実施形態２０２〜２７８のいずれか一つに記載のＨＶワクチンを投与することを含む、このような治療または予防を必要としている患者において疾患を治療または予防する方法。
実施形態３５２．前記疾患が、ＨＶが関連する疾患である、実施形態３５１に記載の方法。
実施形態３５３．前記ＨＶが、ＨＳＶである、実施形態３５１〜３５２のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３５４．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ１である、実施形態３５３に記載の方法。
実施形態３５５．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ２である、実施形態３５３に記載の方法。
実施形態３５６．前記ＨＳＶが、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２である、実施形態３５３に記載の方法。
実施形態３５７．前記疾患が、ヘルペス性歯肉口内炎、口唇ヘルペス、陰部ヘルペス、ヘルペス性ひょう疽、剣状ヘルペス、ヘルペスウイルス脳炎、ヘルペスウイルス髄膜炎、ヘルペス性食道炎、ヘルペス性角膜炎、ベル麻痺、モラレー髄膜炎、ヘルペスルグベイオルム、疱疹性湿疹、ヘルペス神経痛、およびヘルペス後神経痛からなる群から選択される、実施形態３５１〜３５６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３５８．前記疾患が、ヘルペス性歯肉口内炎である、実施形態３５０または３５７のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３５９．前記疾患が、口唇ヘルペスである、実施形態３５０または３５７のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３６０．前記疾患が、陰部ヘルペスである、実施形態３５０または３５７のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３６１．前記疾患が、ヘルペス性ひょう疽である、実施形態３５０または３５７のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３６２．前記疾患が、剣状ヘルペスである、実施形態３５０または３５７のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３６３．前記疾患が、ヘルペスウイルス脳炎である、実施形態３５０または３５７のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３６４．前記疾患が、ヘルペスウイルス髄膜炎である、実施形態３５０または３５７のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３６５．前記疾患が、ヘルペス性食道炎である、実施形態３５０または３５７のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３６６．前記疾患が、ヘルペス性角膜炎である、実施形態３５０または３５７のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３６７．前記疾患が、ベル麻痺である、実施形態３５０または３５７のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３６８．前記疾患が、モラレー髄膜炎である、実施形態３５０または３５７のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３６９．前記疾患が、ヘルペスルグベイオルムである、実施形態３５０または３５７のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３７０．前記疾患が、疱疹性湿疹である、実施形態３５０または３５７のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３７１．前記疾患が、ヘルペス神経痛である、実施形態３５０または３５７のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３７２．前記疾患が、ヘルペス後神経痛である、実施形態３５０または３５７のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３７３．前記疾患が、アルツハイマー病である、実施形態３５０または３５７のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３７４．治療方法である、実施形態３３７〜３７３のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３７５．予防方法である、実施形態３３７〜３７３のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３７６．治療有効量のＨＶワクチンを含む、実施形態３３７〜３７５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３７７．予防的有効量のＨＶワクチンを含む、実施形態３３７〜３７５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３７８．ウイルス排出の低減を含む、実施形態３３７〜３７７のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３７９．病変の出現の頻度の低減を含む、実施形態３３７〜３７８のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３８０．病変の出現の期間の低減を含む、実施形態３３７〜３７９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３８１．筋内投与を含む、実施形態３３７〜３８０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３８２．皮内投与を含む、実施形態３３７〜３８０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３８３．粘膜投与を含む、実施形態３３７〜３８０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３８４．鼻腔内投与を含む、実施形態３３７〜３８０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３８５．直腸内投与を含む、実施形態３３７〜３８０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３８６．腟内投与を含む、実施形態３３７〜３８０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３８７．局所投与を含む、実施形態３３７〜３８０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３８８．経皮膚的投与を含む、実施形態３３７〜３８０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３８９．皮下投与を含む、実施形態３３７〜３８０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３９０．単離された核酸配列製剤が、前記患者に投与されない、実施形態３３７〜３８９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３９１．前記単離された核酸配列製剤が、ＤＮＡ配列である、実施形態３９０に記載の方法。
実施形態３９２．前記単離された核酸配列製剤が、核酸ワクチンである、実施形態３９０に記載の方法。
実施形態３９３．前記単離された核酸配列製剤が、ＤＮＡワクチンである、実施形態３９０に記載の方法。
実施形態３９４．プライムＨＶ ＤＮＡワクチンの投与を含まない、実施形態３３７〜３８９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３９５．ＨＶ ＤＮＡワクチンの投与を含まない、実施形態３３７〜３８９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３９６．ＨＳＶ ＵＬ３０、ＵＬ５、ｇＤ２、ｇＤ２ｔ、またはそのポーションから選択される遺伝子を含むＤＮＡワクチンの投与を含まない、実施形態３３７〜３８９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３９７．前記ＨＶワクチンの単回投与からなる、実施形態３３７〜３９６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３９８．前記ＨＶワクチンのプライム−ブースト投与からなる、実施形態３３７〜３９６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態３９９．前記ＨＶワクチンのプライム−ブースト−ブースト投与からなる、実施形態３３７〜３９６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態４００．実施形態２０２〜２７８のいずれか一つに記載のＨＶワクチン、および患者に前記ＨＶワクチンを投与するための説明書を含むキット。
実施形態４０１．前記ＨＶワクチンを、プライム−ブースト投与において投与する、実施形態４００に記載のキット。
実施形態４０２．前記ＨＶワクチンが、前記ＨＶワクチンを投与された対象を前記ＨＶの複数の株から防御する、実施形態１〜６６、１５０〜１６１、および２０２〜２７８のいずれか一つに記載のＨＶワクチン。
実施形態４０３．前記ＨＶワクチンが、前記ＨＶの複数の株からの前記ＨＶワクチンを投与された対象をワクチン接種する、実施形態１〜６６、１５０〜１６１、および２０２〜２７８のいずれか一つに記載のＨＶワクチン。
実施形態４０４．前記ＨＶワクチンが、前記ＨＶの複数の株のための前記ＨＶワクチンを投与された対象を治療する、実施形態１〜６６、１５０〜１６１、および２０２〜２７８のいずれか一つに記載のＨＶワクチン。
実施形態４０５．前記患者が、前記投与に続いて前記ＨＶの１種または複数の株に対してワクチン接種される、実施形態６７〜８７、１３７〜１４９、１６２〜２０１、および３３７〜３９９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態４０６．前記患者が、前記投与に続いて前記ＨＶの１種または複数の株に対して防御される、実施形態６７〜８７、１３７〜１４９、１６２〜２０１、および３３７〜３９９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態４０７．前記患者が、前記投与に続いて前記ＨＶの１種または複数の株について治療される、実施形態６７〜８７、１３７〜１４９、１６２〜２０１、および３３７〜３９９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態４０８．前記ＨＶワクチンが、前記ＨＶの複数の株からの前記ＨＶワクチンを投与された対象をワクチン接種する、実施形態４００〜４０１のいずれか一つに記載のキット。
実施形態４０９．前記ＨＶワクチンが、前記ＨＶの複数の株からの前記ＨＶワクチンを投与された対象を防御する、実施形態４００〜４０１のいずれか一つに記載のキット。
実施形態４１０．前記ＨＶワクチンが、前記ＨＶの複数の株のための前記ＨＶワクチンを投与された対象を治療する、実施形態４００〜４０１のいずれか一つに記載のキット。

【実施例】

【0158】

とりわけ、ウイルス複製に必要とされる保存されているＨＳＶ−２遺伝子をコードするＤＮＡワクチン、ならびにモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）およびアルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバントと一緒に不活性化全ＨＳＶ−２からなるワクチンを使用する方法を提供する。ＨＳＶ−２のＤＮＡポリメラーゼ（ＵＬ３０）またはヘリカーゼ（ＵＬ５）遺伝子による免疫化は、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘発することが見出され、分泌型糖タンパク質Ｄ２（ｇＤ２ｔ）をコードするＤＮＡとのＵＬ３０の同時免疫化は、ｇＤ２ｔ ＤＮＡ単独による免疫化と比較したとき、致死的な膣内（ｉ．ｖａｇ．）負荷の後に疾患に対する僅かに増加した防御をもたらした。疾患、死亡、およびウイルス排出に対する防御は、ｇＤ２ｔタンパク質サブユニットワクチンと比較したときに、ホルマリン−不活性化全ＨＳＶ−２（ＦＩ−ＨＳＶ２）で免疫化されたマウスにおいてより大きかった。ＵＬ５、ＵＬ３０、ｇＤ２ｔ ＤＮＡおよびＦＩ−ＨＳＶ２によるプライム−ブースト免疫化は、膣疾患に対する殆ど完全な防御をもたらした。リン酸アルミニウム（Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓ）アジュバント中のＤＮＡワクチン、ＦＩ−ＨＳＶ２、およびＭＰＬによる単一製剤による免疫化は、ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓ単独に対して防御の増強を与えなかった。最も際立って、ＭＰＬおよびＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌアジュバントと一緒のＦＩ−ＨＳＶ２による筋内の免疫化は、負荷およびそれに続く長期間（１７週間）の再負荷の両方の後に、マウスの大部分において検出不可能なレベルのＨＳＶ−２排出をもたらした（＜１０ＰＦＵ）。

【0159】

理論に束縛されるものではないが、ウイルス複製のために必須であり、進化的に保存されているウイルスの生活環の初期に発現される遺伝子は、細胞性免疫応答のための有益なワクチン標的であり得ると考えられている。別のヘルペスウイルス負荷モデルであるマウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）を使用して、本発明者らは、保存されている必須遺伝子であるＤＮＡポリメラーゼおよびヘリカーゼをコードするＤＮＡワクチンに対して生じたＣＤ８＋Ｔ細胞応答が防御的であったことを示した（Ｍｏｒｅｌｌｏ、 Ｃ． Ｓ．ら、Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．、８１：７７６６〜７７７５頁（２００７年））。ＤＮＡ免疫化を不活性化ウイルスおよびアジュバントブーストと合わせたときに、マウスは、全身的負荷に続いて標的器官におけるウイルス複製に対して完全に防御された（Ｍｏｒｅｌｌｏ、 Ｃ． Ｓ．ら、Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．、７９：１５９〜１７５頁（２００５年）；Ｍｏｒｅｌｌｏ、 Ｃ． Ｓ．、Ｍ． Ｙｅ．、およびＤ． Ｈ． Ｓｐｅｃｔｏｒ．、Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．、７６：４８２２〜４８３５頁（２００２年））。重要なことに、マウスは、全身的プライム−ブースト免疫化の後で粘膜の負荷に対して殆ど完全に防御された（Ｍｏｒｅｌｌｏ、 Ｃ． Ｓ．ら、Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．、７９：１５９〜１７５頁（２００５年））。

【0160】

上記の研究に基づいて、本発明者らは、相同ＨＳＶ−２ワクチン標的および同様のプライム−ブースト戦略が、マウスにおけるｉ．ｖａｇ．のＨＳＶ−２負荷に対して効果的であり得るかについて試験した。ウイルスＤＮＡ複製に必要とされる遺伝子であるＵＬ３０（ＨＳＶ−２ＤＮＡポリメラーゼ）およびＵＬ５（ヘリカーゼ）をコードするＤＮＡワクチンを、単独で、または切断型糖タンパク質Ｄ２（ｇＤ２ｔ）プラスミドと一緒に試験した。ＤＮＡでプライムした動物を、続いてＭＰＬ／Ａｌｕｍを伴うｇＤ２ｔタンパク質、またはＭＰＬ／Ａｌｕｍと一緒のホルマリン不活性化ＨＳＶ−２（ＦＩ−ＨＳＶ２）でブーストした。比較のために、さらなる群は、ＧＳＫ治験において投与されたもの（ＭＰＬ／ａｌｕｍ単独と共に製剤された精製したｇＤ２ｔタンパク質）のワクチンと同様のワクチンを受けた。本発明者らはまた、ＤＮＡの存在下または非存在下で、アジュバントおよびＦＩ−ＨＳＶ２からなる単一の製剤ワクチンを試験した。ｉ．ｖａｇ．のＨＳＶ−２負荷に続いて、ワクチンの防御的有効性を、急性疾患およびウイルス排出のアウトカム、ならびにそれに続く負荷に対する防御に関して比較した。

【0161】

本発明者らの結果によって、下記について明らかになった。１）ＨＳＶ−２遺伝子をコードするＤＮＡをワクチンとして単独で使用したとき、ミックス中にｇＤ２ｔプラスミドを含むことは、致死性および疾患に対する防御、ならびにＨＳＶ−２負荷からもたらされるウイルス排出の低減を実現するために決定的であった。２）ＭＰＬ／ａｌｕｍを伴うｇＤ２ｔタンパク質で免疫化されたマウスは、ＦＩ−ＨＳＶ−２およびＭＰＬ／ａｌｕｍを受けたマウスと比較して、より多くの死亡、より高い疾患スコア、およびウイルス排出のレベルの増加を有した。３）マウスがｇＤ２ｔ、ＵＬ５およびＵＬ３０ＤＮＡを含有するＤＮＡワクチンで最初に免疫化されたとき、ＭＰＬ／Ａｌｕｍ中のＦＩ−ＨＳＶ−２のブーストは、ＭＰＬ／ａｌｕｍ中のｇＤ２ｔタンパク質のブーストよりも、ｉ．ｖａｇ．のＨＳＶ−２負荷に続く疾患およびウイルス排出に対してより大きな防御を実現した。４）ＭＰＬ／Ａｌｕｍ中のＦＩ−ＨＳＶ−２のみを含有する最適化されたワクチンは、致死的な粘膜（ｉ．ｖａｇ．）の短期間の負荷および長期間の再負荷後に、ＨＳＶ−２ウイルス排出に対して殆ど完全な防御を実現した。５）ＭＰＬ／Ａｌｕｍ中のＦＩ−ＨＳＶ−２への空ベクターＤＮＡ、またはＨＳＶ−２遺伝子をコードするＤＮＡの添加は、単一の製剤ワクチンの有効性を低減させた。

【0162】

最初の研究は、マウスモデルを使用したサイトメガロウイルスに対するワクチンの開発に焦点を合わせた。本発明者らは、マウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）複製に対する防御の増加が、強力なアジュバント、例えば、Ａｌｕｍ中の死滅全ウイルス（ホルマリン−不活性化）を含んだワクチンによって、ＣＤ８＋−Ｔ−細胞が媒介する免疫応答、および複数のエピトープに対する防御的抗体応答を拡大することによって達成できるかについての可能性を探究し始めた。本発明者らの結果は、ａｌｕｍ中のホルマリン−不活性化マウスサイトメガロウイルス（ＦＩ−ＭＣＭＶ）による従前のワクチン接種が、マウスが高用量の毒性ウイルスで負荷されたとき、ＭＣＭＶ遺伝子をコードする様々なＤＮＡによる比較上のワクチン接種より、脾臓および特に唾液腺においてウイルスの力価のより大きな低減を実現したことを示した（Ｍｏｒｅｌｌｏら、２００２年；Ｍｏｒｅｌｌｏら、２００５年）。

【0163】

単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ−２）感染は、生涯に亘り再発性の生殖器疾患、無症候性ウイルス排出、および伝染をもたらし得る。今日までにワクチンによる臨床的に有意な防御は示されてこなかった。ここで、本発明者らは、生殖器ＨＳＶ−２感染のマウスモデルを使用して、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）およびａｌｕｍアジュバントと共に製剤したホルマリン−不活性化全ＨＳＶ−２（ＦＩ−ＨＳＶ２）からなるワクチンの有効性を試験した。ワクチン構成要素を、単独で、あるいは切断型糖タンパク質Ｄ２（ｇＤ２ｔ）をコードするＤＮＡワクチン、ならびにウイルス複製に必要とされる２つの保存されているＨＳＶ−２遺伝子であるＵＬ５（ＤＮＡヘリカーゼ）およびＵＬ３０（ＤＮＡポリメラーゼ）と一緒にプライム−ブースト免疫化として投与した。本発明者らの結果を、下記を示す。１）ｍｏｃｋ免疫化された対照と比較して、ＦＩ−ＨＳＶ２およびＭＰＬ／Ａｌｕｍで免疫化されたマウスは、疾患負担および総ウイルス排出に対する防御を一貫して示し、一方、ＭＰＬ／ａｌｕｍを伴うｇＤ２ｔタンパク質で免疫化されたマウスはそうではなかった；２）生殖器疾患およびウイルス複製に対する防御は、プライム−ブースト免疫化におけるブーストのタイプと相関し、ＤＮＡプライムにより利点はあまりもたらされなかった；３）ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌアジュバント中のＦＩ−ＨＳＶ２による筋内（ｉ．ｍ．）免疫化は、致死的な膣内（ｉ．ｖａｇ．）の短期間の負荷および長期間の再負荷後に、膣のＨＳＶ−２排出に対する殆ど完全な防御を実現した；４）リン酸アルミニウム（Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓ）アジュバント中のＤＮＡワクチン、ＦＩ−ＨＳＶ２、およびＭＰＬによる単一製剤による免疫化は、ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓ単独に対して防御を増加させなかった；５）ＦＩ−ＨＳＶ２へのＭＰＬ／Ａｌｕｍの添加は、疾患、ウイルス複製、および後根神経節（ＤＲＧ）における潜在ウイルス量に対する最適な防御のために必要とされた。最もとりわけ、ＦＩ−ＨＳＶ２ ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌの最適化されたワクチン製剤（ｉ．ｍ．に与える）は、動物の大部分における検出可能な膣のＨＳＶ−２排出、および全ての動物のＤＲＧにおけるＨＳＶ−２潜在ＤＮＡに対して完全に防御した。

【0164】

Ａ．材料および方法
細胞およびウイルス。ベロ細胞（ＡＴＣＣ ＣＬＬ−８１）は、ＡＴＣＣから購入し、５％熱−不活性化ウシ胎仔血清（ＨＩ−ＦＢＳ）、５％熱−不活性化子ウシ血清（ＨＩ−ＮＣＳ）、１００Ｕペニシリンおよび１００μｇのストレプトマイシン（１ｍｌ毎）、ならびに２ｍＭのさらなるＬ−グルタミンを補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で増殖させた。２９３ＦＴ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、上記のような１０％ＨＩ−ＦＢＳ、１ｘＭＥＭ非必須アミノ酸、ペニシリン、ストレプトマイシン、およびさらなるグルタミンで補充したＤＭＥＭ（１リットル毎に４．５ｇのグルコース）中で増殖させた。血清および補充物は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓからであった。

【0165】

ＨＳＶ−２株Ｇ（Ｅｊｅｒｃｉｔｏ、 Ｐ． Ｍ．ら、Ｊ． Ｇｅｎ． Ｖｉｒｏｌ．、２：３５７〜３６４頁（１９６８年））はＤａｖｉｄ Ｍ．Ｋｎｉｐｅからの寄贈であり、上記のように０．１のＭＯＩでのコンフルエントなベロ単層の感染によって増殖させ、３３℃にて７２時間インキュベートし、次いで、細胞内ウイルスを収集した（Ｄｕｄｅｋ、 Ｔ．ら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、３７２：１６５〜１７５頁（２００８年））。このＨＳＶ−２ストックは、酢酸メドロキシプロゲステロン処理された（下記を参照されたい）ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて、ｉ．ｖａｇ．感染に続いて、ベロ細胞上で２．０８×１０⁸ＰＦＵの力価（１ｍｌ毎）および概ね５×１０³ＰＦＵのＬＤ₅₀を有した。

【0166】

細胞に結合した細胞外ウイルスから調製されたＦＩ−ＨＳＶ２を、０．０５〜０．１のＭＯＩでのコンフルエントなベロ細胞単層の感染、および３３℃での３日間のインキュベーションに続いて得た。細胞をフラスコから取り出し、ペレット化し、７分の１の容量の感染した培地に再懸濁させ、Ｍｉｓｏｎｉｘカップホーン超音波処理器中で超音波処理した。超音波処理物を、５００×ｇでの５分間の遠心分離によって清澄化した。このように得られたペレットを、トリス−緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）に再懸濁し、Ｔｅｎｂｒｏｅｃｋホモジナイザーでホモジナイズした。ホモジネートを上記のように遠心分離によって清澄化し、このように得られた上清を第１の上清と合わせた。合わせた上清を、４０００×ｇで１５分間再び清澄化し、上清中のウイルスを、ＳＷ−２７ローターにおいて２５，０００ＲＰＭにて１時間、トリス−緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）中の２５％（ｗ／ｖ）ソルビトールのクッションを通した超遠心分離によって濃縮した。ペレットをＴＢＳに一晩再懸濁させ、ウイルスを上記のように超遠心分離によって再ペレット化し、ペレットをＴＢＳに再懸濁させた。このように得られた調製物を、ベロ細胞上のプラークアッセイによって感染性ウイルスについて、およびＢＳＡ（Ｐｉｅｒｃｅ）標準物質を伴うＢｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）によってタンパク質含有量について分析した。不活性化のために、３７％（ｗ／ｖ）ホルムアルデヒドストック溶液を、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に２０００倍に希釈し、等しい容量をウイルスに加えた（１：４０００または０．００９％の最終ホルムアルデヒド希釈）。転倒型ミクシングによる３７℃での７２時間のインキュベーションの後に、等モルの亜硫酸水素ナトリウムを加えて、残留ホルムアルデヒドをクエンチし、０．１ｍｌのホルマリンで処理したウイルスを使用して、ベロ細胞を感染させ、検出可能な感染性が存在しないことを確認した。不活性化ウイルスを、アリコートにして−８０℃にて保存した。調製物は、１ｍｌ毎に７×１０⁷ＰＦＵ当量の力価、および１μｇのタンパク質毎に４×１０⁴ＰＦＵの事前不活性化タンパク質含有量を有した。ＦＩ−Ｍｏｃｋを、上記のようなｍｏｃｋ感染したベロ細胞および培地から並行して調製した。

【0167】

培地を感染後５日目に収集したこと以外は、上記のＦＩ−ＨＳＶ２に関する限りは、感染し、インキュベートしたベロ細胞のウイルス含有培地からＦＩ−ＨＳＶ２を調製した。培地を遠心分離（最初、５００×ｇで５分間、続いて４０００×ｇで１５分間）によって２回清澄化した。結果として生じた上清中のウイルスを、ＤＰＢＳ中の２５％（ｗ／ｖ）スクロースのクッションを通すこと以外は上記のように超遠心分離によって濃縮した。ウイルスペレットを、氷上で一晩ＤＰＢＳに再懸濁させ、合わせたウイルスを力価測定し、タンパク質含有量について分析し、不活性化し、クエンチし、感染性が存在しないことを確認し、上記のようにアリコートにして保存した。細胞外ＦＩ−ＨＳＶ２は、１ｍｌ毎に３×１０⁸ＰＦＵ当量の最終力価、および不活性化の前に、１μｇのタンパク質毎に１０⁵ＰＦＵのタンパク質含有量を有した。ＦＩ−Ｍｏｃｋを、上記のようなｍｏｃｋ感染したベロ細胞の培地から並行して調製した。

【0168】

上記のように、ベロ細胞をデキストラン硫酸で洗浄することによって感染したベロ細胞からウイルスを放出させ、洗浄液を低速遠心分離によって清澄化し、超遠心分離によってクッションを通してウイルスをペレット化することによってＦＩ−ＨＳＶ２をまた調製した（Ｍｏｒｅｌｌｏ、 Ｃ． Ｓ．ら、２０１１、Ｉｄ．）。

【0169】

プラスミドの構築および発現。ゲノムＤＮＡを、ＤＮｅａｓｙ ＢｌｏｏｄおよびＴｉｓｓｕｅ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用してＨＳＶ−２株Ｇ感染したベロ細胞から調製し、ＫＯＤ Ｈｏｔ−Ｓｔａｒｔ ＤＮＡポリメラーゼ（Ｎｏｖａｇｅｎ／ＣＮ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してＰＣＲ反応におけるテンプレートとして使用した。下記のＯＲＦを増幅した。ＤＮＡポリメラーゼ（ＵＬ３０）、ヘリカーゼ−プライマーゼ（ＵＬ５）、ＵＳ６遺伝子の細胞外ポーションに相当する切断型ｇＤ２（ｇＤ２ｔ）（ａａ１〜３２７）、およびＩＣＰ２７（ＵＬ５４）（完全な一覧については表１を参照されたい）。ＨＳＶ−２特異的プライマーは、株ＨＧ５２ゲノム配列（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｚ８６０９９．２）に基づいて設計し、センスプライマーは開始ＡＵＧの近位にＫｏｚａｋコンセンサス配列（ＧＣＣ ＡＣＣ）を導入するように設計した（研究において使用した全てのプライマーの配列については表２を参照されたい）。

【0170】

【表1】

【0171】

【表2】

【0172】

ＦＤＡガイドラインに従ってＤＮＡワクチン開発のために設計されたｐＶＡＸ１プラスミドベクターは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した。これにおけるＯＲＦの発現は、強力な構成性ＨＣＭＶ主要ＩＥプロモーター／エンハンサーによって推進される。このベクターは、２ステップのＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ突然変異生成技術（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）によって修飾された。第１に、点変異を生じさせ、ベクターにおける単一のＨｉｎｃＩＩ制限部位を除去した（中間ベクターｐＶＡＸ１．１を生じさせる）。第２に、マルチクローニング部位を、独特のＨｉｎｃＩＩ部位、それに続くＦＬＡＧタグコード配列および３つのインフレーム終止コドンを含有するように修飾した（使用した突然変異生成プライマー配列については表２を参照されたい）。最終的なベクター（ｐＶＡＸ１．２と命名し、下記でｐＶＡＸと省略する）は、カルボキシ末端ＦＬＡＧ−タグをつけたＨＳＶ−２ＯＲＦのクローニングおよび発現のための基礎であった。

【0173】

ＰＣＲ産物をＨｉｎｃＩＩ−消化ｐＶＡＸ１．２ベクターにライゲーションし、このように得られたクローンを、ＨＳＶ−２ＯＲＦ（Ｅｔｏｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）の制限酵素消化および配列決定によってスクリーニングした。ｇＤ２タンパク質サブユニットワクチンの精製のために、ｇＤ２ｔ−ＦＬＡＧ ＯＲＦを、ｐｃＤＮＡ３をベースとするベクターｐｃ３Δｎｅｏ中にサブクローン化した（Ｙｅ、 Ｍ．、Ｃ． Ｓ． ＭｏｒｅｌｌｏおよびＤ． Ｈ． Ｓｐｅｃｔｏｒ．、Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．、７６：２１００〜２１１２頁（２００２年））。ＵＬ５、ＵＬ３０、およびＩＣＰ２７ＯＲＦをまた、下記のセルベースＣＤ８＋Ｔ細胞アッセイにおいて使用するためのｐｃ３Δｎｅｏ中にサブクローン化した。

【0174】

ＨＳＶ−２ＨＧ５２参照配列と比較して、株Ｇからのクローン化ＵＬ５（ヘリカーゼ−プライマーゼ）は、３つのサイレント変異を含有し、クローン化ｇＤ２ｔは、単一のサイレント変異を含有した。クローン化ＵＬ３０配列は、結果として生じた推定上のアミノ酸の変化（Ｇ２５−Ａ（Ａｌａ−Ｔｈｒ）、Ｃ４３−Ａ（Ｐｒｏ−Ｓｅｒ）、およびＴ１７９−Ｃ（Ｌｅｕ−Ｐｒｏ））を伴って、参照株との３塩基の差異を含有した。ＨＳＶ−２株多型とＰＣＲクローニング人為産物を識別するために、１．４ｋｂのＵＬ３０ＯＲＦの５’末端を、ＨＳＶ−２株Ｇに感染したベロ細胞ＤＮＡから増幅し、ＰＣＲ産物を直接配列決定した。ＵＬ３０クローンにおける３つの差異全ては、株Ｇ ＰＣＲ産物において見出されたが、これはこれらがＨＳＶ−２株Ｇにおいて存在することを示す。ＩＣＰ２７クローンは、１つの株差異、Ａ４９２−Ｃ（Ｌｙｓ−Ａｓｎ）を含有した。

【0175】

プラスミドは、Ｑｉａｇｅｎ Ｅｎｄｏ−Ｆｒｅｅ ＭｅｇａまたはＧｉｇａ陰イオン交換カラムによって精製した。ＤＮＡを、１ｍｌの内毒素非含有Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８）毎に約２．５〜３ｍｇまで再懸濁させ、アリコートにして−２０℃にて保存した。注射の直前に、ＤＮＡを解凍し、内毒素非含有トリス−緩衝生理食塩水（ｐＨ８）に希釈した。

【0176】

完全長ＯＲＦ−ＦＬＡＧ融合タンパク質の発現を、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用した２９３ＦＴ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中への一過性トランスフェクション、それに続くウエスタンブロットによって確認した。ブロットを、各ＨＳＶ−２ＯＲＦ上に融合したカルボキシ−末端ＦＬＡＧタグに対する抗−ＦＬＡＧマウスモノクローナル抗体（Ｍ２、Ｓｉｇｍａ）でプローブした。ｐＶＡＸ１．２−ｇＤ２ｔをトランスフェクトされた細胞からのライセート、または培地を含有するブロットを、抗−ＦＬＡＧまたは抗−ｇＤマウスモノクローナル抗体ＤＬ６（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．）でプローブした。ＤＬ６は、ＨＳＶ−１／２共通のｇＤの保存されている線状エピトープ（ａａ２７２〜２７９）に結合する。図１Ａは、各ＨＳＶ−２ＯＲＦについての結果として生じた特異的タンパク質バンドが予想された位置に移動したことを示す（下記のような予想された分子量：ＵＬ５、９９ｋＤａ；ＵＬ３０、１３７ｋＤａ；ｇＤ２ｔ、４５ｋＤａ；およびＩＣＰ２７、５５．９ｋＤａを伴う）。

【0177】

ｇＤ２タンパク質の調製。１０ｃｍの組織培養皿中の２９３ＦＴ細胞を、上記のように一過性にトランスフェクトした。翌日、細胞に０．４％（ｖ／ｖ）の哺乳動物プロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｓｉｇｍａ Ｐ１８６０）を含有する培地を供給し、トランスフェクションの３日後に培地を集め、プロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｓｉｇｍａ Ｐ８３４０）を１％最終濃度まで加え、培地を遠心分離によって清澄化した。ｇＤ２ｔ ＯＲＦの分泌効率性を特性決定するために、ｐＶＡＸ−ｇＤ２ｔベクターの発現の時間経過を実施し、全細胞ライセートおよび抗−ＦＬＡＧイムノアフィニティー精製された培地の両方を、ウエスタンブロット分析に供した（図１Ｂ）。ｇＤ−特異的モノクローナル抗体ＤＬ６を使用して、本発明者らは、早くもトランスフェクション後２日目にｇＤ２ｔタンパク質が培地において検出可能であったことを見出したが、培地におけるピークレベルは２日後に起こった。

【0178】

ｇＤ２ｔタンパク質サブユニットワクチンの調製のために、本発明者らは、引き続いてＳＶ４０ｏｒｉ−含有ベクターｐｃ３Δｎｅｏ−ｇＤ２ｔによる２９３ＦＴ細胞の大規模なトランスフェクションを行い、次いで、ｇＤ２ｔ含有培地を抗−ＦＬＡＧイムノアフィニティークロマトグラフィーに供した。分泌された切断型ｇＤ２を含有する培地の清澄化の後に、抗−ＦＬＡＧ Ｍ２スラリーのカラムへの充填の前に、下記の濃度を得るように結合緩衝液を加えた。５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、および０．１％（ｖ／ｖ）Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００。次いで、カラムを５０ｍＭのトリス−緩衝生理食塩水＋０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、次いで、５０ｍＭのトリス−緩衝生理食塩水で洗浄し、その後、メーカーのガイドラインに従って、１ｍｌのトリス−緩衝生理食塩水（５０ｍＭ）毎に１００μｇの３ｘＦＬＡＧペプチド（Ｓｉｇｍａ）と共に溶出させた。切断型ｇＤ２タンパク質を含有する画分を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび一晩のクマシーブルー染色（ＧｅｌＣｏｄｅ Ｂｌｕｅ、Ｐｉｅｒｃｅ）によって同定した。氷上での一晩の保存の後、ｇＤ２タンパク質を含有する画分を混合し、アリコートにして−８０℃にて保存した。純度およびｇＤ２タンパク質濃度を、定量化の目的のために同じゲル上で移動するウシ血清アルブミン標準を伴う上記のようなＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび染色によって決定した。図１Ｃは、ｇＤ２ｔ−含有溶出液および定量化の目的のために使用したＢＳＡ標準の、代表的なクマシーブルー染色したＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。Ｉｍａｇｅ−Ｊソフトウェア（ＮＩＨ）を使用して、ＢＳＡ濃度の標準曲線を光学密度によって生じさせ、ｇＤ２タンパク質濃度を内挿した。タンパク質収量は、１ｍｌの培地毎に概ね５μｇのｇＤ２ｔであった。興味深いことに、分泌型ｇＤ２ｔタンパク質の大部分がカルボキシ−末端フラグメントを切断されていたことを本発明者らはまた見出した。このように得られたタンパク質はＦＬＡＧタグを喪失していたが、ゲル上の移動におけるシフトを示さなかった。これらの知見は、ＨＳＶ−２が感染したＨｅｐ２細胞（しかし、ベロ細胞ではない）の培地が、分泌型ではあるが完全にグリコシル化された形態のｇＤ２を含有したことを示したＭｕｒａｔａらの知見と同様であった（Ｍｕｒａｔａ、 Ｔ．ら、Ｊ． Ｇｅｎ． Ｖｉｒｏｌ．、８３：２７９１〜２７９５頁（２００２年））。本発明者らのｇＤ２ｔタンパク質をベースとする免疫化のために、切断されていないＦＬＡＧ−タグ精製タンパク質のみを使用した。

【0179】

マウスの免疫化および負荷。特定の病原菌を有さないヘリコバクター属の種ＰＣＲ陰性ＢＡＬＢ／ｃ雌性マウスは、３〜５週齢でＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入し、マイクロ隔離飼育器のケージに収容した。マウスは免疫化または感染の前に、少なくとも２週間順応させた。

【0180】

ＤＮＡをベースとする免疫化のために、内毒素非含有ＴＢＳ中の３０μｌのＤＮＡをマウスの尾に２週間に３回皮内（ｉ．ｄ．）に注射した（ＤＮＡ用量について結果を参照されたい）。プラスミドとの同時免疫化のために、注射の前にプラスミドＤＮＡを一緒に混合した。

【0181】

タンパク質をベースとするワクチン接種のために、サルモネラミネソタＲｅ５９５（サルモネラミネソタＲｅ５９５）からのＭＰＬ（ＭＰＬ）は、Ｓｉｇｍａから購入し、１ｍｌの０．５％トリエタノールアミン毎に１ｍｇまで再懸濁し、従前に記載（Ｂａｌｄｒｉｄｇｅ、 Ｊ． Ｒ．、およびＲ．、Ｔ．Ｃｒａｎｅ、Ｍｅｔｈｏｄｓ、１９：１０３〜１０７頁（１９９９年））されたように超音波処理によって乳化し、使用するまで４℃にて保存した。ＦＩ−ＨＳＶ２または精製したｇＤ２サブユニットストックを解凍し、ＤＰＢＳ（タンパク質ワクチンのみの実験）または内毒素非含有ｄｄＨ２Ｏ（ＤＮＡプライム−タンパク質ワクチンブースト実験）に希釈し、ＭＰＬを加えた。Ｉｍｊｅｃｔ ａｌｕｍ（Ｐｉｅｒｃｅ）を混合しながら滴下で添加し、次いで注射前に室温で３０分さらに混合した。

【0182】

タンパク質をベースとするワクチンのみの実験のために、マウスは、概ね中背部において３週間の間隔をおいて２回の１）１０⁷ＰＦＵ当量の細胞内および細胞外ＦＩ−ＨＳＶ２（概ね２５０μｇのタンパク質）、２）等しい容量のＦＩ−Ｍｏｃｋ、または３）５μｇのｇＤ２サブユニットの皮下（ｓ．ｃ．）注射を受けた。各用量はまた、１２．５μｇのＭＰＬおよびＩｍｊｅｃｔ ａｌｕｍ（Ｐｉｅｒｃｅ）（７２５μｇのＡｌと等しい）を含有した。最後のタンパク質をベースとするワクチン接種の４週間後にマウスを負荷した。

【0183】

ＤＮＡプライム−タンパク質ベースワクチンブースト実験のために、マウスを３回の尾へのｉ．ｄ．注射（２週間の間隔を開ける）によって、１）５０μｇのｐＶＡＸ、２）５０μｇのｇＤ２ｔ ＤＮＡ、または３）それぞれ２０μｇのＵＬ５、ＵＬ３０、およびｇＤ２ｔ ＤＮＡのカクテルでプライムした。最後のＤＮＡ注射の５週間後に、各ＤＮＡプライム群からのマウスを、１）１０⁷ＰＦＵ当量の細胞外ＦＩ−ＨＳＶ２（８．３μｇのタンパク質を含有）、２）等しい容量のＦＩ−Ｍｏｃｋ、または３）５μｇのｇＤ２サブユニットでｓ．ｃ．ブーストした。各用量はまた、１２．５μｇのＭＰＬおよびＩｍｊｅｃｔ ａｌｕｍ（１２５μｇのＡｌ（ＯＨ）３および４３．３μｇのＡｌと等しい）を含有した。マウスは、第１のブーストの３週間後に第２のブーストを受け、次いで、４週間後に負荷した。

【0184】

ＤＮＡワクチンをＡｄｊｕ−Ｐｈｏｓアジュバント中のＦＩ−ＨＳＶ２と合わせた実験のために、マウスに下記のようなＭＰＬ／Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓアジュバント中のデキストラン硫酸洗浄に由来するＦＩ−ＨＳＶ２（またはデキストラン硫酸洗浄に由来するＦＩ−Ｍｏｃｋ）による各四頭筋中への４０μｌの両側性筋肉内（ｉ．ｍ．）注射を与えた。それぞれの免疫化は、全部で１２．５μｇのＭＰＬ、Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓ（Ａｃｃｕｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＆ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗｅｓｔｂｕｒｙ、ＮＹ）（９０μｇのＡｌと等しい）、および１）１０⁷ＰＦＵ当量のＦＩ−ＨＳＶ２（０．３４μｇのタンパク質）、２）６０μｇのｐＶＡＸ ＤＮＡおよび上記のＦＩ−ＨＳＶ２の容量と等しい容量のＦＩ−Ｍｏｃｋ、３）６０μｇのｐＶＡＸ ＤＮＡおよび１０⁷ＰＦＵ当量のＦＩ−ＨＳＶ２、４）それぞれ２０μｇのＵＬ５、ＵＬ３０、およびｇＤ２ｔ ＤＮＡならびに１０⁷ＰＦＵ当量のＦＩ−ＨＳＶ２、または５）それぞれ５０μｇのＵＬ５、ＵＬ３０、およびｇＤ２ｔ ＤＮＡならびに１０⁷ＰＦＵ当量のＦＩ−ＨＳＶ２を含有した。Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓを最初に、５００×ｇで５分間遠心分離することによって２倍に濃縮し、それに続いて総容量の２分の１と等しい緩衝液上清を除去した。ＭＰＬおよび（加える場合）ＤＮＡ（複数可）を添加する前に、ＦＩ−ＨＳＶ２またはＦＩ−Ｍｏｃｋを、混合しながら濃縮されたＡｄｊｕ−Ｐｈｏｓに１時間吸着させた。４週間後にマウスにさらなる注射を与えた。上記の群１、２、および５からのマウスへの短期間のｉ．ｖａｇ．負荷を第２の注射の３週間後に与え、残りのマウスに、第２の注射の９週間後に長期間のｉ．ｖａｇ．負荷を与えた。

【0185】

ＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌまたはＡｄｊｕ−Ｐｈｏｓアジュバント、注射経路、ならびに負荷および再負荷に対する防御を比較する実験のために、１０⁷ＰＦＵ当量（それぞれ、第１または第２の免疫化のために、９．５μｇまたは１３．５μｇのタンパク質）の細胞外ＦＩ−ＨＳＶ２（またはＦＩ−Ｍｏｃｋ）および１２．５μｇのＭＰＬを与えた。上記のように、ＦＩ−ＨＳＶ２またはＦＩ−Ｍｏｃｋを、ＭＰＬおよびＤＮＡ（使用する場合）の添加の前に、それぞれ、５４μｇまたは４５０μｇのＡｌと等しいＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（Ａｃｃｕｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＆ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗｅｓｔｂｕｒｙ、ＮＹ）または２倍に濃縮したＡｄｊｕ−Ｐｈｏｓに最初に吸着させた。マウスの群を、下記の構成要素および免疫化経路によって免疫化した。１）Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓ中の６０μｇのｐＶＡＸ ＤＮＡおよびＦＩ−Ｍｏｃｋ（ｉ．ｍ．に与える）、２）Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ中のＦＩ−ＨＳＶ２（ｓ．ｃ．に与える）、３）Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ中のＦＩ−ＨＳＶ２（ｉ．ｍ．に与える）、または４）Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓ中のＦＩ−ＨＳＶ２（ｉ．ｍ．に与える）。マウスは４週間後に同一の免疫化を受け、次いで３週間後にｉ．ｖａｇ．負荷された。ＨＳＶ−２負荷から生き残ったマウスをメドロキシプロゲステロン処理し、上記のように第１の負荷の１７週間後に再負荷した。８匹の未処理マウスの群を同時に負荷して、再負荷ウイルスの感染性を示した。

【0186】

膣内ウイルス負荷、疾患スコアリング、およびウイルス排出の定量化。負荷に対して−７日目および−１日目に、マウスの発情周期を同期化させ、膣ＨＳＶ感染への感受性を増加させるために、３ｍｇの酢酸メドロキシプロゲステロン（Ｄｅｐｏ−Ｐｒｏｖｅｒａ、Ｓｉｇｍａ Ｍ１６２９）の皮下注射を受けた（Ｐａｒｒ、Ｍ． Ｂ．ら、Ｌａｂ． Ｉｎｖｅｓｔ．、７０：３６９〜３８０頁（１９９４年））。マイクロピペットによる５×１０⁴ＰＦＵのＨＳＶ−２株Ｇ（約１０ＬＤ₅₀用量）によるｉ．ｖａｇ．負荷の前に、マウスからＤＰＢＳで湿らせたポリエステル先端で拭き取り検体を取った（ＭｉｃｒｏＰｕｒ １００１Ｄ、ＰｕｒＦｙｂｒ Ｓｏｌｏｎ、Ｒｈｉｎｅｌａｎｄｅｒ、ＷＩ）。マウスを膣の炎症の重症度について、０（膣炎なし）、１（軽度の膨れまたは発赤のみ）、２（中等度の膨れもしくはびらん）、３（重症の生殖器の軟化（genital maceration））、または４（中枢神経系の合併症もしくは死亡）で２１日間毎日スコア化し、半分のスコアを中間の疾患レベルに与えた。後肢麻痺が発見されたマウスには、４のスコアを与え、直ちに屠殺した。

【0187】

膣ウイルス排出を測定するために、ＤＰＢＳ＋１％ＨＩ−ＮＣＳ＋０．１％（ｗ／ｖ）グルコース（ＤＮＧ）で事前に湿らせたポリエステル先端の拭き取り検体（上記）を使用して、負荷後１〜５（または６）日目に膣内拭き取り検体試料を集めた。拭き取り検体を、プラークアッセイによるベロ細胞単層上の滴定まで１ｍｌのＤＮＧ中に−８０℃にて保存した。

【0188】

プラークアッセイのために、拭き取り検体を３７℃の水浴中で素早く解凍し、ＤＮＧ中の段階希釈の前に３０秒間フルスピードでボルテックス混合した。２４ウェルプレート中のベロ細胞のコンフルエントな単層を、５０〜６０ＲＰＭのオービットシェーカー上で３７℃にてウェル毎に０．２５ｍｌのＤＮＧの感染容量で１時間感染させた。吸着後、接種材料を除去し、単層を１％ＨＩ−ＮＣＳおよび０．３５％無菌アガロースを有する０．５ｍｌのＤＭＥＭで覆った。３７℃および７％ＣＯ２での第２のインキュベーション後、ＤＰＢＳ中のホルマリンを、４％ホルマリンの最終濃度に加え、プレートを２５℃で少なくとも３時間固定した。アガロースの覆いを吸引し、単層をクリスタルバイオレットで染色した。各アッセイの感受性のアッセイ限界を下記に表し、プラークを生じないアッセイに、グラフ化および計算の目的のために検出限界の２分の１の力価を割り当てた。

【0189】

細胞内サイトカイン染色。最終の注射の２週間後に、ＤＮＡ免疫化によって誘発された抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルを、上記のように測定した（Ｍｏｒｅｌｌｏ、Ｃ．Ｓ．ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、８１：７７６６〜７７７５（２００７年））。ＢＡＬＢ ＳＶ４０（Ｈ−２^d）細胞を、９６ウェルプレートにおいて８０％コンフルエントまで増殖させ、ウェル毎に０．５μｇのプラスミドＤＮＡおよび１．２５μｌのＦｕｇｅｎｅ６（Ｒｏｃｈｅ）でトランスフェクトした。

【0190】

トランスフェクション後４８時間で、免疫化されたマウスからの脾細胞を収集し、赤血球を溶解した（ＢＤ Ｐｈａｒｍ Ｌｙｓｅ）。８×１０⁵個の脾細胞を、ブレフェルジンＡ（ＧｏｌｇｉＰｌｕｇ；ＢＤ）の存在下でトランスフェクトされた細胞の２連ウェルに加え、３７℃および７％ＣＯ₂で８時間刺激した。陽性対照として、２×１０⁶個の脾細胞を、１ｍｌ毎に５０ｎｇのＰＭＡおよび１μｇのイオノマイシンで刺激した。２×１０⁶個の脾細胞の２連ウェルをまた、０．１μＭの以前に公表されたＩＣＰ２７のＨ−２^dＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープで刺激した（ＨＧＰＳＬＹＲＴＦ（配列番号：１３）；ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ、ＮＪ（Ｈａｙｎｅｓ、Ｊ．Ｒ．ら、Ｖａｃｃｉｎｅ、２４：５０１６〜５０２６頁（２００６年））。

【0191】

染色のために、２連ウェルを９６ウェル丸底プレートの１つのウェル中に合わせ、ＰＢＳで１回洗浄した。死細胞に対して生細胞を鑑別するために、生存性確認色素（viability dye）（ウェル毎に５０μｌ）を、１０分間３７℃で細胞に加えた（ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ ｆｉｘａｂｌｅ ｖｉｏｌｅｔ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）。Ｆｃブロック（ＣＤ１６／３２；ＢＤ）を加え（ウェル毎に２μｇ）、脾細胞を１０分間４℃でインキュベートし、Ｆｃ受容体への非特異的結合を防止した。脾細胞を表面マーカーであるＣＤ８−Ａｘ４８８（クローン５３−６．７；ＢＤ）およびＣＤ４−Ａｘ６４７（クローンＲＭ４−５；ＢＤ）のために４℃にて３０分間染色し、次いで、透過処理し、ＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍキットを使用して固定した。ＣＤ３−ＰＥ−Ｃｙ５（クローン１４５−２Ｃ１１；ＢＤ）およびＩＦＮ−γ−ＰＥ（クローンＸＭＧ１．２；ＢＤ）を、細胞内染色中に４℃で４５分間含めた。Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ＡＩＤＳ ＲｅｓｅａｒｃｈおよびＶｅｔｅｒａｎｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎおよびＶＡ Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡのＲｅｓｅａｒｃｈ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｃｏｒｅ Ｆａｃｉｌｉｔｙにおいて、５０，０００個のＣＤ３＋Ｔ生細胞からのデータを、ＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏフローサイトメーターで集め、ＢＤ ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアで分析した。

【0192】

Ｂ．ｇＤ２ｔ ＤＮＡと一緒の、保存されている必須ＨＳＶ−２遺伝子によるＤＮＡ免疫化は、致死的な膣内（ｉ．ｖａｇ．）負荷に対して防御的である。
ＭＣＭＶモデルを使用した本発明者らの従前のＤＮＡ免疫化研究によって、ヘルペスウイルスの中に保存されている２つの必須遺伝子であるＤＮＡポリメラーゼ（ＭＣＭＶ Ｍ５４）およびヘリカーゼ／プライマーゼサブユニット（ＭＣＭＶ Ｍ１０５）を発現するプラスミドによるワクチン接種は、脾臓におけるウイルス複製に対する防御を誘発したことが示された。この防御は、免疫優性遺伝子ＩＥ１−ｐｐ８９によってもたらされるものと同じほど高かった（Ｍｏｒｅｌｌｏ、Ｃ．Ｓ．ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、８１：７７６６〜７７７５頁（２００７年））。これらの２つのＭＣＭＶ遺伝子によるＤＮＡ免疫化はまた、ＭＣＭＶ感染によって誘発されるものより高い一次および負荷後のＣＤ８＋Ｔ細胞レベルをもたらした（Ｍｏｒｅｌｌｏ、Ｃ．Ｓ．ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、８１：７７６６〜７７７５頁（２００７年））。ＭＣＭＶ糖タンパク質Ｂおよび２つの非構造タンパク質をコードするプラスミドの混合物で免疫化され、続いてａｌｕｍ中のホルマリン−不活性化ＭＣＭＶによるブーストされたマウスは、ＭＣＭＶによる全身的負荷に対する長期間の完全な防御、および粘膜の負荷に対する殆ど完全な防御を示したことを本発明者らはまた示した（Ｍｏｒｅｌｌｏ、Ｃ．Ｓ．ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、７９：１５９〜１７５頁（２００５年））。

【0193】

マウスおよびモルモットモデルの両方における防御的作用が切断型の分泌型ｇＤ２ＤＮＡについて記載されてきたため（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ、Ｄ．Ｉ．ら、Ｖａｃｃｉｎｅ、１７：１９６４〜１９６９頁（１９９９年）；Ｆｏｔｏｕｈｉ、Ｆ．ら、Ｆｅｍｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｄ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、５４：１８〜２６頁（２００８年）；Ｈｉｇｇｉｎｓ、Ｔ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．、１８２：１３１１〜１３２０頁（２０００年）；Ｈｏｓｈｉｎｏ、Ｙ．ら、Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．、７９：４１０〜４１８頁（２００５年）；Ｓｔｒａｓｓｅｒ、Ｊ．Ｅ．ら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．、１８２：１３０４〜１３１０頁（２０００年））、本発明者らは、保存されている必須ＨＳＶ−２遺伝子をｇＤ２ｔ ＤＮＡと一緒に使用して、防御のレベルを増大させることができるかを決定することに興味があった。今日までのヒトの治験におけるＤＮＡのみのワクチンの限定された成功を考慮して、本発明者らは、ＤＮＡ免疫化が、ＭＰＬおよびａｌｕｍアジュバントと一緒に死滅全ＨＳＶ−２ワクチンにより誘発される防御および免疫応答を増大させることができるかについてアセスメントすることをさらに探究した。

【0194】

本発明者らの最初の実験において、本発明者らは、切断型ＨＳＶ−２糖タンパク質Ｄ（ｇＤ２ｔ）をコードするＤＮＡの存在下および非存在下での、ＤＮＡポリメラーゼ（ＵＬ３０）およびヘリカーゼ／プライマーゼ（ＵＬ５）についての相当する保存されているＨＳＶ−２遺伝子の防御有効性を調査した。１群毎に８匹のマウスを、５０μｇのｐＶＡＸ（ｐＶＡＸ群）、それぞれ２５μｇのｐＶＡＸおよびｇＤ２ｔ ＤＮＡ（ｇＤ２ｔ群）、２５μｇのｐＶＡＸおよび２５μｇのＵＬ５またはＵＬ３０ＤＮＡ（それぞれ、ＵＬ５もしくはＵＬ３０群）、あるいは２５μｇのＵＬ５またはＵＬ３０ＤＮＡおよび２５μｇのｇＤ２ｔ ＤＮＡ（それぞれ、ＵＬ５＋ｇＤ２ｔおよびＵＬ３０＋ｇＤ２ｔ群）でｉ．ｄ．免疫化した。マウスを酢酸メドロキシプロゲステロンで処理し、ｉ．ｖａｇ．のＨＳＶ−２感染に対する感受性を増加させ、最後のＤＮＡ免疫化の３週間後に、マウスに５×１０⁴ＰＦＵ（概ね１０×ＬＤ₅₀）のＨＳＶ−２株Ｇの致死的なｉ．ｖａｇ．負荷を与えた。マウスを負荷の２１日後まで生存についてモニターし、負荷後１２日まで材料および方法において記載したような上記の重症度スケールを使用して疾患の重症度についてスコア化した。膣内拭き取り検体を負荷後１〜６日目に集め、ＨＳＶ−２排出を測定した。

【0195】

ＵＬ５またはＵＬ３０ＤＮＡ単独による免疫化は、ｐＶＡＸ対照に対して２１日間の生存を増加させなかったが、ｇＤ２ｔ ＤＮＡと一緒のこれらのＤＮＡは、生存によって測定して、ｇＤ２ｔ ＤＮＡ単独によって生じたものと同様の防御をもたらしたことを本発明者らは見出した（図２Ａ）。同様に、ＵＬ５またはＵＬ３０単独で免疫化されたマウスにおける肛門生殖器疾患の重症度は、ｐＶＡＸ群におけるものと同様であった（図２Ｂ）。ｇＤ２ｔ ＤＮＡを受けている群における平均疾患の重症度は、ｐＶＡＸ対照に対して低減し、疾患の重症度は、負荷後４日目または５日目に１．２〜１．７でピークとなり、次いで１１日目に減少した。１１日目に、ｇＤ２ｔ群において、およびＵＬ５＋ｇＤ２ｔ群において、１匹のマウスが死亡した（図２Ｂ）。全てのワクチン群のうち、ＵＬ３０＋ｇＤ２ｔ ＤＮＡによる免疫化は、１２日を通した最も低いピーク疾患（平均１．２）および総疾患負担をもたらし、死亡をもたらさなかった。

【0196】

膣のＨＳＶ−２排出を、ベロ細胞単層上のプラークアッセイによって測定した。負荷後１日目に、ｐＶＡＸ、ＵＬ５、またはＵＬ３０で免疫化したマウスは、拭き取り検体毎に１０^4.4ＰＦＵの平均ＨＳＶ−２力価を有し、一方、ｇＤ２ｔ ＤＮＡ免疫化群における平均力価は１から１．４Ｌｏｇだけ低減した（図２Ｃ）。力価は、免疫化群の全てにおいて負荷後２日目にピークとなり、ｐＶＡＸ免疫化群は、１０^5.5ＰＦＵを排出し、他の免疫化群は、０．５から１．５ｌｏｇの力価の低減を有した。ＵＬ３０＋ｇＤ２ｔ群は、１日目および２日目の両方において最も低い力価を有した。負荷後３日目までに、ｐＶＡＸ対照を含めた全ての群は、１０⁴ＰＦＵの同様の力価を有した。この後に、ｇＤ２ｔ ＤＮＡを受けている群の全てにおける排出は、ｇＤ２ｔを受けていない群に対してクリアランス速度の増加を示した。まとめると、ＵＬ３０＋ｇＤ２ｔ ＤＮＡによる免疫化は、感染の初期において最も低い疾患および最も低い排出レベルの両方をもたらしたが、３〜６日目の排出は、ｇＤ２ｔ ＤＮＡのみを受けているマウスにおけるものと同一であった。

【0197】

第２の免疫化実験を行い、疾患またはウイルス排出に対する増強された防御がＵＬ５およびＵＬ３０ＤＮＡによる同時免疫化によって達成できるかを試験した。８匹のマウスの群を、５０μｇのｐＶＡＸ（ｐＶＡＸ群）または２５μｇのｇＤ２ｔ＋２５μｇのｐＶＡＸ ＤＮＡ（ｇＤ２ｔ群）で免疫化した。ＵＬ５＋ＵＬ３０群について、それぞれ２０μｇのＵＬ５およびＵＬ３０ＤＮＡを、２０μｇのｐＶＡＸ（ＵＬ５＋ＵＬ３０群）または２０μｇのｇＤ２ｔ ＤＮＡ（ＵＬ５＋ＵＬ３０＋ｇＤ２ｔ群）で免疫化した。免疫化されたマウスを酢酸メドロキシプロゲステロンで処理し、上記のように最後の免疫化の３週間後にｉ．ｖａｇ．負荷した。死亡、疾患、および膣のＨＳＶ−２排出をアセスメントした。

【0198】

図２Ｄは、ｐＶＡＸで免疫化されたマウスのどれもが負荷後２１日目を通して生存しなかったことを示する。ｇＤ２ｔ ＤＮＡを加えることなしに、ワクチン中でＵＬ５およびＵＬ３０ＤＮＡを合わせることはまた、ｐＶＡＸ、ＵＬ５、またはＵＬ３０ＤＮＡ単独で免疫化された群において観察されたものに対して、死亡（図２Ｄ）、疾患（図２Ｅ）に対する防御を増加させず、またはＨＳＶ−２排出（図２Ｆ）を低減しなかった。ｇＤ２ｔ ＤＮＡをＵＬ５およびＵＬ３０ワクチンに加えたとき、結果として生じたウイルス力価は、ｇＤ２ｔ ＤＮＡ単独で免疫化された群のものと同様であった（図２Ｆ）。

【0199】

Ｃ．保存されている必須遺伝子によるＤＮＡ免疫化は、抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を誘発する。
ｇＤ２ｔ ＤＮＡの非存在下でＵＬ５およびＵＬ３０ＤＮＡによって誘発される防御が存在しないことを考慮して、ワクチン接種がＣＤ８＋Ｔ細胞を誘発したかを決定することは重要であった。マウスをＵＬ５またはＵＬ３０プラスミドで２週間に３回免疫化した。最終の免疫化の２週間後に、マウスを屠殺し、それらの脾臓を収集した。脾細胞を、それぞれ、抗原をコードするプラスミドまたは空ｐｃＤＮＡ３プラスミドで一過性にトランスフェクトしたＢＡＬＢ ＳＶ４０刺激細胞の存在下で８時間刺激し、細胞内サイトカイン染色アッセイを行った。

【0200】

本発明者らは、最初に２つの独立した実験を行い、抗原を発現しているＢＡＬＢ ＳＶ４０トランスフェクタントの使用を検証し、ＣＤ８＋Ｔ細胞を刺激してＩＦＮ−γを産生させた。これらの研究のために、本発明者らは、ＢＡＬＢ／ｃマウスの足蹠において２×１０⁶ＰＦＵのＨＳＶ−２株Ｇで感染させ、７日後に感染したマウスおよび対照未処理マウスから脾細胞を単離した。別の対照として、皮内に骨格ベクターＤＮＡ（ｐＶＡＸ）で免疫化したマウスから脾細胞を集めた。ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて、ｐｃＤＮＡ３−ＩＣＰ２７でトランスフェクトされたＢＡＬＢ ＳＶ４０細胞（ＩＣＰ２７細胞）、または公知のＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープに相当するＩＣＰ２７ペプチドで脾細胞を刺激した（Ｈａｙｎｅｓ、Ｊ．Ｒ．ら、Ｖａｃｃｉｎｅ、２４：５０１６〜５０２６頁（２００６年））。図３Ａは、ＩＣＰ２７ペプチドで刺激されたときのＣＤ８＋Ｔ細胞の平均１．０％と比較して、ＩＣＰ２７細胞で刺激されたときに、ＨＳＶ−２に感染したマウスからのＣＤ８＋Ｔ細胞の平均０．６％がＩＦＮ−γ陽性であったことを示した。バックグラウンドレベルのＩＦＮ−γ陽性ＣＤ８＋Ｔ細胞のみが、刺激のタイプに関わらず、対照未処理マウスまたはｐＶＡＸ ＤＮＡ免疫化されたマウスからの脾細胞において検出された。

【0201】

次の実験において、２群のマウス（ｎ＝４）に６０μｇの総プラスミドＤＮＡ：ｐＶＡＸ、ＵＬ５、またはＵＬ３０の皮内注射を与えた。図３Ｂは、ＵＬ５またはＵＬ３０で免疫化されたマウスが、ＵＬ５（平均＝０．８７５％）またはＵＬ３０（平均＝０．８２５％）に対して変化するレベルのＣＤ８＋Ｔ細胞応答を有したことを示す。ＨＳＶ−２に感染したマウスからの脾細胞は、ＩＣＰ２７細胞で刺激されたときに、ＩＣＰ２７ペプチドで刺激されるより、より低い頻度のＩＣＰ２７特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞が検出されたため、これらの数は過小評価である可能性がある（図３Ａ）。それにも関わらず、ＨＳＶ−２に感染したマウスにおいていずれかのタンパク質に特異的なＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞はまた観察されなかったため、ＵＬ５およびＵＬ３０は、新規なワクチン標的抗原を表す。

【0202】

繰返し実験において、それぞれ６０μｇのＵＬ５およびＵＬ３０による組合せ群を含めた（図３Ｃ）。ＵＬ５またはＵＬ３０単独で免疫化されたマウスにおけるＣＤ８＋Ｔ細胞応答は、第１の実験より低かった（それぞれ、平均＝０．６００％および０．３２５％）。第３の実験が、それぞれ、０．８７５％および０．７５０％の平均ＵＬ５およびＵＬ３０の応答をもたらしたため、実験の間の可変性はトランスフェクトされた刺激細胞の一貫性のない性質によるものである可能性がある。マウスがＵＬ５およびＵＬ３ＤＮＡにより同時免疫化されたとき、ＵＬ５およびＵＬ３０両方へのＣＤ８＋Ｔ細胞応答が検出可能であった（それぞれ、平均＝０．３７５％および０．４２５％）。要約すれば、保存されている必須ＨＳＶ−２遺伝子プラスミドＵＬ５およびＵＬ３０は、ＩＦＮ−γ産生によって測定すると、中程度のＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘発する。

【0203】

Ｄ．ＭＰＬ／Ａｌｕｍと一緒のＦＩ−ＨＳＶ２による免疫化は、ＨＳＶ−２疾患および排出に対して高度に防御的である。
ＭＰＬ／Ａｌｕｍアジュバントを含有するＧＳＫ ｇＤ２ワクチンを含めた、ＨＳＶ−２エンベロープ糖タンパク質によるサブユニットワクチン接種は、臨床治験において一貫したレベルの防御を示してこなかったため、本発明者らは、ＭＰＬ／Ａｌｕｍと一緒のＦＩ−ＨＳＶ２からなる多価ワクチンが、ｇＤ２タンパク質サブユニット／ＭＰＬ／Ａｌｕｍワクチン接種より防御的であり得るかどうかを問うた。ＦＩ−ＨＳＶ２ワクチンのために、材料および方法において記載したように、ＨＳＶ−２を感染したベロ細胞および細胞外上清から収集し、ソルビトールクッションを通してペレット化し、ＤＰＢＳで洗浄し、ホルマリンで不活性化した。さらに、ＦＩ−Ｍｏｃｋビリオン調製物を、ｍｏｃｋ−感染したベロ細胞を使用して並行して作製した。分泌型ｇＤ２ｔタンパク質を、ｐｃ３Δｎｅｏ−ｇＤ２ｔベクターで一過性にトランスフェクトした２９３ＦＴ細胞の細胞外上清上で抗−ＦＬＡＧイムノアフィニティークロマトグラフィーを使用して調製した。

【0204】

マウス（ｎ＝８）を皮下（ｓ．ｃ．）免疫化し、次いで３週間後に下記の１つでブーストした。１０⁷ＰＦＵ当量のＦＩ−ＨＳＶ２、上記のＦＩ−ＨＳＶ２と等しい容量のＦＩ−Ｍｏｃｋ、または５μｇのｇＤ２ｔタンパク質（各ワクチンは、ＭＰＬ／Ａｌｕｍを含む）。マウスを最後のワクチン接種の４週間後に上記のように負荷した。

【0205】

本発明者らは、ＦＩ−Ｍｏｃｋにより免疫化されたマウスの８匹全てが負荷後２１日目までに死亡し、一方、ＦＩ−ＨＳＶ２により免疫化されたマウスの８匹全てが生存していることを見出した（図４Ａ）。ｇＤ２ｔタンパク質免疫化された群において、５匹のマウスが生存していた。ｇＤ２ｔタンパク質で免疫化されたマウスにおけるピーク平均疾患スコアは、負荷後１２日目まで概ね１．０であり、次いで僅かに上昇した（図４Ｂ）。対照的に、ＦＩ−ＨＳＶ２により免疫化された群におけるピーク平均疾患スコアは、負荷後５日目に０．５であり、さらに２日のみで０．３〜０．４の平均スコアがあった。この群における個々のマウスについての最大疾患スコアは、１．０のスコアを有する１匹のマウスについての１日のみを除いて、０．５であった。このように、致死的なＨＳＶ−２負荷後の、肛門生殖器領域における一過性の低レベルの炎症のみが、ＦＩ−ＨＳＶ２免疫化動物において起こった。

【0206】

負荷後１日目〜６日目の膣ウイルス排出のレベルを図４Ｃに示す。ピーク平均ウイルス力価が、ＦＩ−Ｍｏｃｋ群について負荷後２日目に、およびｇＤ２ｔタンパク質群について３日目に観察された。ＦＩ−ＨＳＶ２群における平均ウイルス力価は、ＦＩ−Ｍｏｃｋ群と比較して、２．１から３．７Ｌｏｇだけ低減した。負荷後１日目に、ｇＤ２ｔタンパク質群は、負荷後３日目までにＦＩ−Ｍｏｃｋ群に対して２７分の１の平均力価の低減を有したが、これらの群は、同様のレベルのウイルス排出を示した（図４Ｃ）。

【0207】

それぞれ、ＦＩ−Ｍｏｃｋ群およびｇＤ２ｔタンパク質群において観察された１０^5.7および１０⁵ＰＦＵのピーク平均ウイルス力価と比較して、ＦＩ−ＨＳＶ２により免疫化されたマウスにおける平均力価は、観察期間に亘り１０^1.5から１０^2.2ＰＦＵの間の範囲であった。負荷後２日目に、ＦＩ−ＨＳＶ２により免疫化されたマウスにおけるウイルス排出の平均レベルは、ＦＩ−Ｍｏｃｋ群におけるものより３６００分の１低かった。しかし、図４Ｄにおいて示すように、ｇＤ２ｔタンパク質およびＦＩ−ＨＳＶ２群における個々のマウスにおける膣のＨＳＶ−２排出に対する防御は、かなりの可変性を示した。個々のＦＩ−ＨＳＶ２により免疫化されたマウスにおけるウイルス力価は、概ね１０⁴ＰＦＵからアッセイ防御の限界（拭き取り検体毎に２ＰＦＵ）未満の範囲であった。ＦＩ−ＨＳＶ２により免疫化されたマウスの２匹は、負荷後３日目から６日目の間に低レベルの炎症（０．５の重症度スコア）を示したが、負荷後６日目までを通して任意に日に検出可能なウイルスを有さなかった。まとめると、ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｌｕｍによる免疫化は、ｇＤ２ｔタンパク質による免疫化と比較して、疾患およびウイルス排出の両方に対して高レベルの防御を実現した。

【0208】

Ｅ．ＵＬ５、ＵＬ３０、およびｇＤ２ｔ ＤＮＡ−ＦＩ−ＨＳＶ２によるプライム−ブースト免疫化は、ＨＳＶ−２生殖器疾患に対して殆ど完全な防御を実現する。
本発明者らは、負荷後に標的器官において検出不可能なレベルのウイルスを伴う、マウスにおける全身的または粘膜のＭＣＭＶ負荷に対するＤＮＡプライム−不活性化全ウイルスブースト戦略を首尾よく使用してきた（Ｍｏｒｅｌｌｏ、Ｃ．、Ｓ．ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、７９：１５９〜１７５頁（２００５年）；ＭｏｒｅｌｌｏＣ．Ｓ．、Ｍ．ＹｅおよびＤ． Ｈ． Ｓｐｅｃｔｏｒ．、Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．、７６：４８２２〜４８３５頁（２００２年））。したがって、本発明者らは、この戦略がまた高レベルの防御を実現するかどうかを試験し、単独もしくは組み合わせた、ＤＮＡ、タンパク質サブユニット、またはＦＩ−ＨＳＶ２による免疫化の様々な有効性を比較することを進めた。

【0209】

マウス（ｎ＝８）を、下記の１つでＤＮＡプライムした。図５Ａに示されるスケジュールを使用して、１）５０μｇのｐＶＡＸ、２）５０μｇのｇＤ２ｔ ＤＮＡ、または３）それぞれ２０μｇのＵＬ５、ＵＬ３０、およびｇＤ２ｔ ＤＮＡのカクテル。最後のＤＮＡ注射の５週間後、各ＤＮＡプライム群からのマウスを、ＭＰＬ／Ａｌｕｍと共に製剤した下記の１つでｓ．ｃ．ブーストした。１）１０⁷ＰＦＵ当量のＦＩ−ＨＳＶ２、２）等しい容量のＦＩ−Ｍｏｃｋ、または３）５μｇのｇＤ２サブユニット。マウスは、第１のブーストの３週間後に第２のブーストを受け、次いで、上記のように４週間後に致死的にｉ．ｖａｇ．負荷を受けた。

【0210】

負荷後２１日間の生存を、図５Ｂに要約する。ｐＶＡＸでプライムしたマウスにおいて、ＦＩ−Ｍｏｃｋ調製物によるブーストは、死亡に対する防御を与えなかった。ＦＩ−Ｍｏｃｋでブーストしたマウスにおいて、ｇＤ２ｔ ＤＮＡによる以前の免疫化によって、８匹のマウスのうち５匹の生存がもたらされ、ｇＤ２ｔ ＤＮＡプライムにＵＬ５およびＵＬ３０ＤＮＡを加えることによって、生存動物はより少なかった（８匹のうち３匹）。ｇＤ２ｔタンパク質によるブーストは、ｐＶＡＸおよびｇＤ２ｔ ＤＮＡでプライムした群において死亡に対して完全に防御的であった。ｇＤ２ｔタンパク質でブーストし、ＵＬ５、ＵＬ３０、ｇＤ２ｔ ＤＮＡでプライムした群における１匹のマウスは、負荷後に死亡し（および１匹が負荷前に耳感染で死亡）、６匹の生存動物のみが残った。ＦＩ−ＨＳＶ２によるブーストは、ｇＤ２ｔタンパク質と比較したときに、死亡に対する同様の防御を与え、ｐＶＡＸおよびＵＬ５、ＵＬ３０、およびｇＤ２ｔ ＤＮＡ群のそれぞれにおいて１匹のマウスが負荷に屈した。

【0211】

各プライム−ブーストの組合せによるマウスにおける疾患の重症度を、負荷後１２日目までを通してスコア化した（図５Ｃ）。ＦＩ−Ｍｏｃｋでブーストしたマウスのうち、ｐＶＡＸでプライムしたマウスの全ては負荷後１１日目までに死亡し、一方、ｇＤ２ｔ ＤＮＡ、またはＵＬ５、ＵＬ３０、およびｇＤ２ｔ ＤＮＡの組合せによるプライムは、負荷後７日目に０．９〜１の同様のピーク平均疾患スコアを与え、次いで１０日目までに平均０．２５〜０．５未満へと概ね回復した（図５Ｃ、左）。しかし、ｇＤ２ｔ ＤＮＡ（３匹のマウス）およびＵＬ５、ＵＬ３０、およびｇＤ２ｔ ＤＮＡ（５匹のマウス）における後期の死亡は、示した平均スコアの増加をもたらした。

【0212】

ｇＤ２ｔタンパク質でブーストしたマウスにおけるピーク平均疾患スコアは、ｇＤ２ｔ ＤＮＡでプライムしたマウスにおいて最も低く（０．３）、このレベルの疾患は負荷後３から７日目の間に続いた（図５Ｃ、中央）。ｐＶＡＸ、またはＵＬ５、ＵＬ３０、およびｇＤ２ｔ ＤＮＡの組合せでプライムし、次いでｇＤ２ｔタンパク質でブーストした群におけるピーク疾患は、０．９および０．７の同様のレベルを有した。

【0213】

ＦＩ−ＨＳＶ２でブーストした群は全て、負荷後４日目に疾患におけるピークを示し、ＵＬ５、ＵＬ３０、ｇＤ２ｔ ＤＮＡ−ＦＩ−ＨＳＶ２群において０．３の最も低いピークを示した（図５Ｃ、右）。この後者の群におけるマウスにおいて観察された疾患の最も高いレベルは、１日間の１のスコアであった。残りのマウスは、負荷後８日目までに疾患から完全に回復するまで０または０．５の疾患スコアを有した。しかし、この群における、負荷後２日目の単一の０．５スコアを除いて観察可能な膣疾患を有さなかった１匹のマウスは、２０日目に死亡した。

【0214】

一般に、膣疾患に対する防御は、ブーストのタイプに最も密接に関連しているようであった。ｇＤ２ｔタンパク質でブーストした群は、ＨＳＶ−２ＤＮＡおよびＦＩ−Ｍｏｃｋブーストを受けた群より防御を示し、ＦＩ−ＨＳＶ−２ブーストを受けている群は、最も高いレベルの防御を示した。ｇＤ２ｔ ＤＮＡ−ｇＤ２ｔタンパク質またはＵＬ５、ＵＬ３０、ｇＤ２ｔ ＤＮＡ−ＦＩ−ＨＳＶ２を与えられたプライムブースト群において最良の防御がもたらされ、疾患のピークレベルは同様であったが、後者の群においてより低い総疾患負担があった。

【0215】

膣のＨＳＶ−２排出を、プラークアッセイによって負荷後１〜１０日目に膣内拭き取り検体から測定した。ｐＶＡＸでプライムし、Ｍｏｃｋでブーストした群におけるウイルス排出は、負荷後２日目に１０^5.5ＰＦＵでピークとなり、ウイルスは、これらのマウスの全てにおいて負荷後７日目にまだ検出可能であった（図５Ｄ、左）。ｇＤ２ｔ ＤＮＡ、またはＵＬ５、ＵＬ３０、およびｇＤ２ｔ ＤＮＡの組合せでプライムし、Ｍｏｃｋでブーストしたマウスは、負荷後１日目に概ね１０分の１低い力価を最初に有したが、後者の群のみが２日目にこの減少を示した。ｐＶＡＸでプライムしたマウスに対する膣ウイルス排出の減少は、負荷後５日目までにより明らかであり、７日目までに、ｇＤ２ｔ ＤＮＡでプライムしたマウスの１匹のみにおいてウイルスは検出可能であり、ＵＬ５、ＵＬ３０、ｇＤ２ｔ ＤＮＡでプライムしたマウスにおいては検出可能でなかった。

【0216】

ｇＤ２ｔタンパク質によるブーストは、ｐＶＡＸ−ＦＩ−Ｍｏｃｋ群に対して、ＨＳＶ−２排出における１．５から２Ｌｏｇのより大きな最初の減少をもたらした一方、ｇＤ２ｔ ＤＮＡ−ｇＤ２ｔタンパク質群のみは、負荷後３から５日目を通じて減少したレベルのウイルス排出を維持した。後者の群において、ウイルス感染はより急速に排除され、負荷後６日目までに８匹のマウスのうち７匹においてウイルスレベルは検出限界以下であった（図５Ｄ、中央）。注目すべきは、この群における８匹のマウスのうち２匹は、拭き取り検体のいずれにおいても検出可能なウイルスを有さなかった（拭き取り検体毎に＜１０ＰＦＵ）。

【0217】

ＦＩ−ＨＳＶ２によるブーストは、ｐＶＡＸ−ＦＩ−Ｍｏｃｋ対照に対して、ＤＮＡでプライムした群のそれぞれにおいて、負荷後１日目に２から２．２５Ｌｏｇのウイルス排出の最も大きな最初の減少をもたらすことが見出された（図５Ｄ、右）。負荷後２日目に、ｐＶＡＸ−ＦＩ−ＨＳＶ２群における平均ＨＳＶ−２排出レベルは、対照より概ね３．５Ｌｏｇより低く、この群において６日目までにウイルスは検出限界において平均レベルまで急速に排除された。ピークのＨＳＶ−２排出は、ｇＤ２ｔ ＤＮＡ−ＦＩ−ＨＳＶ２群において同様であったが、ピークは感染における早期に起こり、ウイルス排出はさらに１日持続性であった。しかし、ｇＤ２ｔ ＤＮＡ−ＦＩ−ＨＳＶ２群における８匹のマウスのうち３匹は、全時間経過を通して検出可能な排出を有さなかった。最終的に、ＵＬ５、ＵＬ３０、ｇＤ２ｔ ＤＮＡ−ＦＩ−ＨＳＶ２群における３日目の１０^3.6ＰＦＵのピーク力価は、他のＦＩ−ＨＳＶ２群におけるより僅かに高かく、この群におけるウイルスは、負荷後６〜７日目まで概ね１０²ＰＦＵのレベルで持続した。

【0218】

Ｆ．単一の製剤としてのＡｄｊｕ−Ｐｈｏｓ中のプラスミドＤＮＡおよびＦＩ−ＨＳＶ２による同時免疫化は、Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓ中のＦＩ−ＨＳＶ２単独より有効でない。
プライム−ブースト戦略は高度に防御的であると判明した一方、単一の製剤におけるＤＮＡおよびＦＩ−ＨＳＶ２の同時注射は、ワクチンの製造および臨床適用の両方について高度に有利である。さらに、２つのプラットフォームの組合せは、ワクチン構成要素に対する協同的な防御的応答をもたらし得る。Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓは、Ｂ型肝炎ウイルス抗原をコードするプラスミドＤＮＡおよびタンパク質と一緒に送達されたときに、それぞれ、ＤＮＡおよびタンパク質に対してＴｈ１およびＴｈ２タイプの免疫応答の両方を誘発した、臨床的に承認されたリン酸アルミニウムアジュバントである（Ｋｗｉｓｓａ、Ｍ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、８１：５０２〜５１０頁（２００３年））。したがって、マウスの群（ｎ＝８）に、ＵＬ５、ＵＬ３０、およびｇＤ２ｔをコードする１０⁷ＰＦＵ当量のＦＩ−ＨＳＶ２＋／−ＤＮＡプラスミド（それぞれ５０μｇ）と共に製剤したＭＰＬ／Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓの筋肉内注射を与えた。陰性対照群は、ＭＰＬ／Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓで製剤されたｐＶＡＸおよびＦＩ−Ｍｏｃｋを受けた。マウスに第１の注射の４週間後に第２の注射を与え、次いで、メドロキシプロゲステロン処理し、上記のように負荷した。

【0219】

負荷後２日目に、対照マウス（ｐＶＡＸ＋ＦＩ−Ｍｏｃｋ）の全てはＨＳＶ−２を排出し、平均力価は１０^4.2ＰＦＵであった（図６Ａ、左のパネル）。ＦＩ−ＨＳＶ２を受けたマウスの群は、有意に低減した平均力価を有した（概ね３Ｌｏｇ、Ｐ＜０．００１およびＰ＜０．０１、クラスカル−ワリス、およびダンの多重比較検定）。さらに、ＦＩ−ＨＳＶ２（ＤＮＡなし）を受けている群におけるマウスの半分は、検出限界未満であったＨＳＶ−２排出のレベルを有した。４日目まで、８匹のこれらの動物のうち７匹、およびＵＬ５、ＵＬ３０、ｇＤ２ｔ＋ＦＩ−ＨＳＶ２により免疫化された群の半分は、検出限界以下であった排出のレベルを有した（図６Ａ、右のパネル）。対照的に、ｐＶＡＸ＋ＦＩ−Ｍｏｃｋにより免疫化された動物の平均力価は、１０^3.8ＰＦＵで上昇したままであった。ＵＬ５、ＵＬ３０、ｇＤ２ｔ ＤＮＡおよびＦＩ−ＨＳＶ２ＭＰＬ／Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓによる免疫化は、ＦＩ−ＨＳＶ２ＭＰＬ／Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓ単独より有意に良好ではなかった。

【0220】

別の実験において、単一の製剤によって誘発された免疫応答の持続性を、第２の免疫化の後、負荷の前に９週間待つことによって調査した。短期間の負荷に含まれる従前の３つの群（ｐＶＡＸ＋ＦＩ−Ｍｏｃｋ、ＦＩ−ＨＳＶ２、およびＦＩ−ＨＳＶ２＋５０μｇの各ＵＬ５、ＵＬ３０、ｇＤ２ｔ）に加えて、ＭＰＬ／Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓにおいて製剤した２つのさらなる群を加えた。１）先行するＤＮＡ実験において使用される用量を試験するためのＦＩ−ＨＳＶ２＋２０μｇの各ＵＬ５、ＵＬ３０、ｇＤ２ｔ ＤＮＡプラスミド、ならびに２）対照としての役割を果たすＦＩ−ＨＳＶ２＋６０μｇのｐＶＡＸ ＤＮＡプラスミド。負荷後２日で、ｐＶＡＸ＋ＦＩ−Ｍｏｃｋ群は、１０^4.7ＰＦＵの平均力価を有し、一方、ＦＩ−ＨＳＶ２単独（ＤＮＡなし）を受けた群は、力価の殆ど４Ｌｏｇの低減を有した（１０^0.96ＰＦＵ）（図６Ｂ、左のパネル）。陰性対照動物と比較して、ＵＬ５、ＵＬ３０、ｇＤ２ｔ ＤＮＡ（２０μｇまたは５０μｇ）を受けた群は、同様の概ね３Ｌｏｇの低減を有した（それぞれ、１０^1.7および１０^2.0）。４日目までに、ＦＩ−ＨＳＶ２のみの群において８匹のマウスのうち６匹は、検出限界未満のウイルス力価を有し、一方、それぞれ、２０μｇおよび５０μｇのＵＬ５、ＵＬ３０、ｇＤ２ｔ ＤＮＡ＋ＦＩ−ＨＳＶ２群において８匹の動物のうち１匹または２匹のみが、検出限界未満のウイルスを排出した（図６Ｂ、右のパネル）。抗原性のＤＮＡ＋ＦＩ−ＨＳＶ２を受けた群のそれぞれについて、２日目および４日目のウイルス排出の低減は、ｐＶＡＸ ＦＩ−Ｍｏｃｋ群と比較して統計的に有意であった（Ｐ＜０．００１からＰ＜０．０５、クラスカル−ワリスおよびダンの多重比較検定）。しかし、ｐＶＡＸ＋ＦＩ−ＨＳＶ２を受けた群は、いずれの日においてもウイルス排出において統計的に有意な低減を有さなかった（それぞれ、１０^2.7および１０^2.3の平均力価）。

【0221】

まとめると、これらのデータは、ＭＰＬ／Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓを伴う単一の製剤中のＦＩ−ＨＳＶ２およびプラスミドＤＮＡの組合せが、ＦＩ−ＨＳＶ２単独ほどＨＳＶ−２排出の防止において効果的ではないことを示唆する。これらの結果はまた、同じタイプの免疫化および長期間の負荷を受けた動物においてＨＳＶ−２疾患スコアに観察された。非常により重要には、ＦＩ−ＨＳＶ２により免疫化された動物は、短期間および長期間の負荷の両方においてウイルス排出および疾患の両方に対して最良の防御を有したが、これはＦＩ−ＨＳＶ２が、持続性があり高度に防御的な免疫応答を誘発することを示唆する。

【0222】

Ｇ．ＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌまたはＡｄｊｕ−Ｐｈｏｓアジュバント中のＦＩ−ＨＳＶ２による免疫化は、負荷および再負荷に続いて、ＨＳＶ−２複製に対して高度に防御的である。
上記の実験において、本発明者らは、試験したウイルス排出に対する最良の防御がＦＩ−ＨＳＶ２単独による免疫化によって実現したことを見出した。本発明者らは次に、これらの結果を確認し、ＦＩ−ＨＳＶ２による免疫化を改善できるかを決定することを模索した。第１の考察の１つは、Ｉｍｊｅｃｔ ａｌｕｍが、結晶性およびアモルファスのアルミニウム相の両方からなり、臨床応用に適したａｌｕｍの詳細に明らかにされた形態ではないことであった。水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムアジュバントの両方は、ワクチンにおける使用のために認可を受けているため、Ｉｍｊｅｃｔ ａｌｕｍの不明確な態様が防御の一因となった可能性を排除するために、より臨床的に関連性のある形態のａｌｕｍ、例えば、ＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌまたはＡｄｊｕ−Ｐｈｏｓを試験することが重要であった。本発明者らはまた、免疫化の経路が結果として生じた防御に影響を与えることができるかを試験することを模索した。

【0223】

この目的のために、ａｌｕｍのタイプおよび注射経路は下記の通りであったことを除いては、上記のように１０⁷ＰＦＵ当量のＦＩ−ＨＳＶ２およびＭＰＬで８匹のマウスの群を免疫化した。１）ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（ｓ．ｃ．に与える）；２）ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（ｉ．ｍ．に与える）；または３）ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓ（ｉ．ｍ．に与える）。対照群は、ＦＩ−Ｍｏｃｋ／ＭＰＬ／Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓ（ｉ．ｍ．に与える）を受けた。マウスは第１の注射の４週間後に第２の注射を与えられ、次いで、メドロキシプロゲステロン処理され、上記のように負荷された。

【0224】

ｐＶＡＸ ＦＩ−Ｍｏｃｋ群における２匹のマウスは負荷の前に死亡し、負荷後１２日目までにこの群における残りのマウスは、ＨＳＶ−２疾患に罹患した。ＦＩ−ＨＳＶ２免疫化された群のいずれにおいても死亡はなかった。この群において感染の徴候を示した数匹の動物について、軽度の紅斑または膨れのみが観察された。ＦＩ−ＨＳＶ２群における平均疾患スコアは負荷後７日目に０．２〜０．２５の同様のレベルでピークとなり、疾患の完全な回復が、１１日目までに各群における８匹のマウスのうち７匹において観察された。

【0225】

負荷後２日目に、ｐＶＡＸ ＦＩ−Ｍｏｃｋ対照群における平均ＨＳＶ−２力価は、１０^4.3ＰＦＵであり、ＦＩ−ＨＳＶ２を受けている群における平均力価は、３Ｌｏｇだけ低減した（図７Ａ、左のパネル）。さらに、各ＦＩ−ＨＳＶ２群におけるマウスの半分以上は、検出限界以下のレベルまでにウイルス排出が低減した。ｐＶＡＸ ＦＩ−Ｍｏｃｋ対照群におけるＨＳＶ−２力価は負荷後４日目に１０⁴ＰＦＵレベルに留まった一方、ＦＩ−ＨＳＶ２免疫化されたマウスのいずれにおいても、ウイルスは検出されず、または非常に低レベルのウイルスのみが検出可能であった（図７Ａ、右のパネル）。ＦＩ−ＨＳＶ２群のそれぞれについてのウイルス排出の低減は、ｐＶＡＸ ＦＩ−Ｍｏｃｋ群に対して、負荷後毎日において統計的に有意であった（Ｐ＜０．０５からＰ＜０．００１、クラスカル−ワリスおよびダンの多重比較検定）。しかし、防御された群の間で有意差は見られなかった（図７Ａ）。まとめると、アルミニウム含有アジュバントＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌまたはＡｄｊｕ−Ｐｈｏｓと一緒のＦＩ−ＨＳＶ２およびＭＰＬによる免疫化は、少なくともＩｍｊｅｃｔ ａｌｕｍによってもたらされるものと同じぐらいロバストであった、ＨＳＶ−２疾患および排出に対する防御をもたらした。

【0226】

この実験において、各群におけるＦＩ−ＨＳＶ２により免疫化されたマウスの数匹は、試験したいずれの日においても検出可能な排出（＜１０ＰＦＵ）を有さなかった。重要な疑問は、ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｌｕｍによって提供される負荷に対する高レベルの防御がまた長期間の再負荷に対して有効であるかどうかであった。この目的のために、これまでのようにＦＩ−ＨＳＶ２により免疫化されたマウスをメドロキシプロゲステロンで処理し、次いで、同じ１０×ＬＤ₅₀用量のＨＳＶ−２による第１の負荷の１７週間後に再負荷した。再負荷のための対照として、８匹のマウスの未処理群を、マウスの残りと同じＨＳＶ−２接種材料で同時に感染させた。

【0227】

第１のメドロキシプロゲステロン処理の後、ＦＩ−ＨＳＶ２／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ／ｓ．ｃ．マウスの１匹が死亡し、次いで、この群において再負荷のために７匹のマウスが残った。負荷後１４日目までに未処理マウスの全てが死亡し、再負荷後２１日目に、ＦＩ−ＨＳＶ２／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ／ｓ．ｃ．マウスの７匹のマウスのうち１匹が死亡した。他のマウスのいずれも、負荷後２１日を通して軽度の紅斑または膨れを超えたＨＳＶ−２疾患を示さなかった。

【0228】

未処理群に与えたＨＳＶ−２の再負荷用量によって、負荷後２日目および４日目の両方において、概ね１０⁴ＰＦＵのウイルス排出レベルがもたらされ（図７Ｂ）、負荷後のそれぞれの日においてｐＶＡＸ ＦＩ−Ｍｏｃｋ群におけるものと同様であった（図７Ａ、左および右）。際立って、ＦＩ−ＨＳＶ２群（ｎ＝２３）における再負荷されたマウスの２匹のみは、検出可能な低レベルのウイルスを有した。２１日目に死亡したＦＩ−ＨＳＶ２／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ／ｓ．ｃ．群におけるマウスは、２日目に検出可能なウイルスを有した（例えば、図７Ｃを参照されたい）。ＦＩ−ＨＳＶ２／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ／ｉ．ｍ．群において、８匹のマウスのうち５匹は、負荷後または再負荷後２日目に検出可能なウイルスを有さず、この群における２匹のさらなるマウスは、負荷後に非常に低レベルの排出を有し（１０¹〜１０^1.5ＰＦＵ）、再負荷後に検出可能なウイルスを有さなかった（図７Ｃ、中央）ことに特に注目すべきである。再負荷後４日目に、ＦＩ−ＨＳＶ２群のいずれにおいてもウイルスは検出可能ではなかった。まとめると、本発明者らは、ＭＰＬ、および種々のａｌｕｍアジュバントのいずれかと共に製剤したＦＩ−ＨＳＶ２による免疫化は、ＨＳＶ−２疾患に対する殆ど完全な防御を誘発することを見出した。さらに、これらのワクチンは、膣のＨＳＶ−２排出に対して強力で持続性のある防御を実現し、数匹の動物は、負荷または長期間の再負荷に続いて殺菌免疫を示す。

【0229】

Ｈ．分析
この研究において、本発明者らは、各構成要素が単独でまたはプライム−ブーストワクチンとして与えられたときの、ＨＳＶ−２生殖器感染に対する２つのワクチン構成要素の防御特性を試験した。プライム構成要素は、マウスおよびモルモットモデルの両方において防御的作用を実現することが示されてきた、免疫原性ｇＤ２ｔタンパク質をコードするＤＮＡからなった（Ｂｏｕｒｎｅ、Ｎ．ら、Ｖａｃｃｉｎｅ、１４：１２３０〜１２３４頁（１９９６年）；Ｂｏｕｒｎｅ、Ｎ．ら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．、１７３：８００〜８０７頁（１９９６年）；Ｈｉｇｇｉｎｓ、Ｔ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．、１８２：１３１１〜１３２０頁（２０００年）；Ｓｔｒａｓｓｅｒ、Ｊ．Ｅ．ら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．、１８２：１３０４〜１３１０頁（２０００年））。従前の研究は、ＭＣＭＶがコードするこれらのカウンターパートが、マウスにおけるＭＣＭＶの全身的負荷に対して個々に防御的であったことを示してきたため、本発明者らはまた、保存されている必須タンパク質であるＨＳＶ−２ＤＮＡポリメラーゼ（ＵＬ３０）およびヘリカーゼ／プライマーゼ（ＵＬ５）をコードするＤＮＡを試験した（Ｍｏｒｅｌｌｏ、Ｃ．Ｓ．ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、８１：７７６６〜７７７５頁（２００７年））。ブースト構成要素は、いくつかのａｌｕｍ化合物の１つおよびＭＰＬと製剤したホルマリン不活性化ＨＳＶ−２（ＦＩ−ＨＳＶ−２）、またはｇＤ２ｔタンパク質およびＭＰＬおよびａｌｕｍを含有した。

【0230】

ＵＬ５およびＵＬ３０遺伝子の両方によるＤＮＡ免疫化は、ＩＦＮ−γ産生によって測定されるようにＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘発したが、どちらの遺伝子も、ｇＤ２ｔをコードするＤＮＡがまた含まれない限りは、疾患またはウイルス排出に対して防御的でなかった。本発明者らおよびその他の者は、ｇＤ２ｔ ＤＮＡ免疫化がｇＤ２に特異的な高レベルの中和抗体を生じさせることを示してきたため（Ｆｌｏ、Ｊ．、Ｖａｃｃｉｎｅ，２１：１２３９〜１２４５頁（２００３年）；Ｈｏｓｈｉｎｏ、Ｙ．ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、７９：４１０〜４１８頁（２００５年））、この抗体は、生殖器の負荷に対して、ＵＬ５またはＵＬ３０に対するＣＤ８Ｔ細胞より少なくとも局所的により防御的であり得た。しかし、ｇＤ２ｔ ＤＮＡ単独またはｇＤ２ｔおよびＵＬ５で免疫化されたマウスに対して、ｇＤ２ｔ ＤＮＡおよびＵＬ３０で免疫化された群は、１２日を通して最も低いピーク疾患（平均１．２）および疾患負担、ならびに１日目および２日目にウイルス排出の最も大きな低減を有した。ＵＬ５およびＵＬ３０ＤＮＡの組合せは、プラスミド単独により誘発される、またはｇＤ２ｔ ＤＮＡの同時の投与を伴って、もしくは伴わずに与えられたときに誘発される防御をさらに増大しないようであった。

【0231】

プライム−ブースト免疫化を受けているマウスにおいて、ＨＳＶ−２膣疾患に対する防御は、ブーストのタイプと最も密接に関連し、ＦＩ−ＨＳＶ−２／ＭＰＬ／Ａｌｕｍブーストを受けている群は、ＭＰＬ／Ａｌｕｍ中のｇＤ２ｔタンパク質を受けた群より高いレベルの防御を示し、両方のブーストは、ＨＳＶ−２ＤＮＡ単独による免疫化より防御を実現した。ＦＩ−ＨＳＶ−２／ＭＰＬ／Ａｌｕｍによるブーストはまた、ピークウイルス排出の最も大きな減少を実現した。ＦＩ−ＨＳＶ２群における平均ウイルス力価は、負荷後１週間目の間、ｍｏｃｋ群より３．５〜４．２Ｌｏｇだけ低く、ｇＤ２ｔタンパク質免疫化されたマウスより２．８〜３．５Ｌｏｇだけ低かった。本発明者らがＤＮＡプライムと、ＦＩ−ＨＳＶ２またはｇＤ２ｔタンパク質ブーストとを合わせたとき、本発明者らは、ＵＬ５、ＵＬ３０、ｇＤ２ｔ ＤＮＡプライムおよびＦＩ−ＨＳＶ２ブーストの組合せが、ＨＳＶ−２生殖器疾患に対する殆ど完全な防御を与えたことを見出した。

【0232】

空ベクターでプライムし、次いでＦＩ−ＨＳＶ−２／ＭＰＬ／Ａｌｕｍでブーストした群において高レベルの防御が観察されたため、不活性化ウイルスワクチンの組成物を修飾することによって単一のワクチンとしてのその有効性を改善できるかを決定するように本発明者らは促された。プライム−ブースト研究の完了後、Ｉｍｊｅｃｔ ａｌｕｍが結晶性およびアモルファスのアルミニウム相の両方からなり、臨床応用に適したａｌｕｍの詳細に明らかにされた形態ではないことを本発明者らは学んだ（Ｈｅｍ、Ｓ．Ｌ．ら、Ｖａｃｃｉｎｅ、２５：４９８５〜４９８６頁（２００７年））。これによって、Ｉｍｊｅｃｔ ａｌｕｍの不明確な態様が防御の一因となったという懸念が生じ、これによって臨床ワクチンにおいて使用されるより詳細に明らかにされたａｌｕｍアジュバントであるＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌおよびＡｄｊｕ−Ｐｈｏｓを本発明者らが試験することは必須であった。

【0233】

両方のワクチン構成要素に対して免疫応答が誘発されたという点で、Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓは、ＤＮＡプラスミドおよびタンパク質抗原の同時送達のための成功した製剤であることが従前示されてきた（Ｋｗｉｓｓａ、Ｍ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、８１：５０２〜５１０頁（２００３年））。本発明者らが単一の注射においてＵＬ５、ＵＬ３０、およびｇＤ２ｔをコードするプラスミドＤＮＡとＡｄｊｕ−Ｐｈｏｓ中のＦＩ−ＨＳＶ２とを合わせたとき、またはＡｄｊｕ−Ｐｈｏｓ中でＦＩ−ＨＳＶ２単独を与えたとき、マウスは、短期間の負荷後にＨＳＶ−２排出から有意に防御された（最後の免疫化に続いて３週間）ことを本発明者らは見出した。ＤＮＡの添加は、ＦＩ−ＨＳＶ単独によって誘発されたものに対して防御をさらに増強せず、驚いたことに、防御を減少し得た。ＤＮＡが空ベクターまたはコードされたウイルス抗原であるに関わらず、長期間の負荷の後にこの作用はより明らかであった（ブースト後９週間）。Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）を発現するプラスミドＤＮＡと共に製剤されたリン酸アルミニウムアジュバントは、ＨＢｓＡｇ−特異的ＩＦＮ−γ分泌細胞および細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞の両方を誘発することができるが、この製剤と２種の異種タンパク質のいずれかとの同時の投与が、ＩＦＮ−γ陽性細胞のレベルに影響を与えることなくＣＤ８＋Ｔ細胞溶解活性を抑止したことをＫｗｉｓｓａらは示した（Ｋｗｉｓｓａ、Ｍ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、８１：５０２〜５１０頁（２００３年））。ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｄｊｕ−ＰｈｏｓワクチンへのｐＶＡＸ ＤＮＡの添加が、防御有効性の減少をもたらした一方、総ＩｇＧ、ＩｇＧ１、およびＩｇＧ２ａレベルは影響されなかった。ＦＩ−ＨＳＶ２によって誘発される異なる防御の免疫相関は、ｐＶＡＸ ＤＮＡ添加によって減少し得、ＨＳＶ−２抗原を発現するプラスミド（ＵＬ５、ＵＬ３０、およびｇＤ２ｔ）の同時の投与が防御の低下を部分的に償い得たことが可能であることをこれは示唆する。いずれにしても、ＦＩ−ＨＳＶ２ＭＰＬ／Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓ製剤単独は、印象的なレベルの防御を実現し、２日目に８匹の動物のうち４匹、および４日目に８匹の動物のうち６匹が、検出限界以下のウイルスを排出した。

【0234】

したがって、本発明者らは、筋肉内に与えられたＭＰＬおよびＡｄｊｕ−Ｐｈｏｓと共に製剤したＦＩ−ＨＳＶ２を含有するワクチンの有効性を、筋肉内または皮下に与えられたＭＰＬおよびＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌと共に製剤したＦＩ−ＨＳＶ−２と比較した。ＨＳＶ−２による負荷に続いて、ＦＩ−ＨＳＶ２群のいずれにおいても死亡は起こらず、生殖器疾患は最小であった。実際は、各群におけるマウスの半分以上について、ウイルス排出が検出限界以下のレベルへ低減したが、これはこれらの動物が殺菌免疫を有し得ることを示唆するため、数匹のマウスにおいて見られる軽度の紅斑および膨れは、炎症反応によるものであり得た。防御は持続性があり、かつマウスが第２の負荷に耐性であるかを決定するために、第１の負荷の１７週間後に、第１の負荷のために与えた同じ１０×ＬＤ₅₀用量のＨＳＶ−２でマウスを再負荷した。ＦＩ−ＨＳＶ２群において再負荷されたマウスの内２匹のみが検出可能な低レベルのウイルスを有したことは特に注目すべきであった。全体的に、最良の防御はＦＩ−ＨＳＶ２／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ／ｉ．ｍ．群において見られ、８匹のマウスのうち５匹が、第１の負荷の後または４カ月後に亘って与えられた再負荷後に検出可能なウイルスを有さず、この群における２匹のさらなるマウスは、第１の負荷後に非常に低レベルの排出を有し、再負荷後に検出可能なウイルスを有さなかった。これらの結果はまた、ｇＤ２ｔ ＤＮＡまたはタンパク質で免疫化されたマウスにおける本発明者らの結果（第１の負荷の後にウイルス排出から最も防御されたマウスは、それに続く再負荷後に最も高い排出レベルを示した）と著しく対照的である。これらの刺激的な結果によって、適当なアジュバントと共に製剤される不活性化ウイルスワクチンについてさらなる考察を行うことを余儀なくされる。

【0235】

最近、本発明者らは、実験の結果を報告したが、ここでは本発明者らは、急性および再発性疾患の両方を研究することができるモデルであるモルモットにおいて、ｉ．ｖａｇ．のＨＳＶ−２負荷に対するその防御有効性について同様のプライム−ブースト戦略を評価した（Ｍｏｒｅｌｌｏ、Ｃ．Ｓ．ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、８５：３４６１〜３４７２頁（２０１１年））。モルモットを、３種のプラスミドＤＮＡ：ｇＤ２ｔ ＤＮＡおよびＵＬ５およびＵＬ３０、またはＨＳＶ−２の２つのさらなる保存されている必須遺伝子（ＵＬ２９およびＵＬ５２）でプライムした。これらの群の両方を、続いてＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ中のホルマリン−不活性化ＨＳＶ−２（ＦＩ−ＨＳＶ２）でブーストした。防御に対するＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／ａｌｕｍ単独の寄与のための対照として、第３の群をプラスミド骨格ＤＮＡ（ｐＶＡＸ）でプライムし、ＦＩ−ＨＳＶ−２でブーストした。比較の目的のために、第４のワクチン群は、精製したｇＤ２ｔタンパク質およびＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌを受けた。ＵＬ５、ＵＬ３０、ｇＤ２ｔ ＤＮＡ−ＦＩ−ＨＳＶ２群は、ｍｏｃｋ対照と比較して、再発性病変を有する日の９７％の低減を示した。他の免疫化された群に対して、この群はまた、再発性疾患を有する日の最も高い低減を有し、後根神経節において最も低い平均ＨＳＶ−２ＤＮＡ量を含有した。しかし、ＦＩ−ＨＳＶ２−ＭＰＬ−ＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌワクチンをｐＶＡＸでプライムしたモルモットに与えたときに、群における１匹の「ノンレスポンダー」動物を除いて、急性および再発性の病変の両方の発症に対して完全に防御されたことを本発明者らは留意した。この群はまた、ＵＬ５、ＵＬ３０、ｇＤ２ｔ ＤＮＡ−ＦＩ−ＨＳＶ２群についてのものと匹敵する、ＤＲＧ中の検出不可能なレベルのＨＳＶ−２ＤＮＡ、より低い累積的急性疾患スコア、およびより少ない再発性疾患を有する日数を有した。負荷および長期間の再負荷後のマウスにおけるウイルス排出に対する、ならびにモルモットにおける急性および再発性の疾患に対する防御における、ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌの成功に基づいて、このワクチン接種戦略は、動物モデルにおいて弱毒性または複製欠損ＨＳＶ−２ワクチンによって生じるものと少なくとも同じぐらい有効である、ＨＳＶ−２に対する広範で持続性のある免疫を実現することが可能である。不活性化ＨＳＶ−２の使用はまた、潜伏感染の確立または野生型ウイルスとの組換えの可能性を有する弱毒性ウイルスワクチンの安全上の懸念を排除する。

【0236】

本発明者らは、ＤＮＡプライム−不活性化ウイルスブースト戦略を、急性および再発性疾患の両方を研究するためのモデルであるモルモットにおいて、膣内（ｉ．ｖａｇ．）のＨＳＶ−２負荷に対するその有効性について最近評価した［１９］。モルモットをｇＤ２ｔ、ＵＬ５、およびＵＬ３０をコードするプラスミドでプライムし、次いで、ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ中のホルマリン−不活性化ＨＳＶ−２（ＦＩ−ＨＳＶ２）でブーストした。ｉ．ｖａｇ．負荷の後、この群は、ｍｏｃｋ対照と比較して再発性病変を有する日の９７％の低減を示し、再発性疾患を伴う日の最も高い低減を有し、後根神経節において最も低い平均ＨＳＶ−２ＤＮＡ量を含有した。しかし、ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ構成要素単独（ｐＶＡＸ空ベクターＤＮＡ−ＦＩ−ＨＳＶ２群）は、１匹の「ノンレスポンダー」動物を例外として、急性および再発性両方の病変ならびにＤＲＧにおける検出可能なＨＳＶ−２ＤＮＡに対して完全な防御を誘発した。累積的急性疾患スコア、および再発性疾患を有する日の数をまた、ＵＬ５、ＵＬ３０、ｇＤ２ｔ ＤＮＡ−ＦＩ−ＨＳＶ２群と匹敵した。

【0237】

本明細書において開示されているのは、ＤＮＡ、ＦＩ−ＨＳＶ２、およびアジュバントによって与えられる免疫および防御をさらに特性決定するためのマウスモデルの使用である。本発明者らはまた、投与を単純化および促進し、かつ防御的反応を増加させるための単一の製剤ワクチンを試験した。

【0238】

Ｉ．材料および方法
ワクチン
ＦＩ−ＨＳＶ２およびホルマリン不活性化ｍｏｃｋ調製物（ＦＩ−Ｍｏｃｋ）は、それぞれ、ＨＳＶ−２感染または非感染細胞から調製した。細胞外ウイルスを精製し、上記のように不活性化し［１９］、ＥＬＩＳＡ抗原のために上記のようにデキストラン硫酸洗浄に由来するウイルスを精製し［１９］、次いでホルマリン不活性化した。細胞内ウイルスを、ウイルス含有細胞外培地中で超音波処理したＨＳＶ−２に感染したベロ細胞の清澄化した上清から得た。上記のように、ウイルスをそれに続いてペレット化し、不活性化した［１９］。任意の調製物の不活性化の後に、感染性ウイルスは検出されなかった。各実験のために使用した調製物を、各図のレジェンドにおいて表す。全てのＦＩ−ＨＳＶ２免疫化は、１０⁷ＰＦＵ当量および１２．５μｇのＭＰＬ（Ｓｉｇｍａ Ｌ６８９５）を含有した。Ａｌｕｍは、Ｔｈｅｒｍｏ Ｐｉｅｒｃｅ（Ｉｍｊｅｃｔ ａｌｕｍ）またはＡｃｃｕｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＆ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ａｄｊｕ−ＰｈｏｓおよびＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌ）から購入したが、Ａｌ用量は図のレジェンドに記載する。ＨＳＶ−２株Ｇ ＵＬ５、ＵＬ３０、およびｇＤ２ｔ（ａａ１〜３２７）を発現するプラスミド、ならびにｇＤ２ｔタンパク質サブユニットワクチンを、上記のように構築および調製した［１９］。

【0239】

マウスおよび倫理に関する記述
雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスは、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入し、マイクロ隔離飼育器のケージに収容し、使用する前に少なくとも２週間順応させた。研究は米国国立衛生研究所のＧｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓにおける推奨に厳密に従って行った。脊椎動物の使用の全ては、カリフォルニア大学動物実験委員会（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ）によって承認された。

【0240】

膣内のＨＳＶ−２負荷モデル
マウスを酢酸メドロキシプロゲステロン（Ｄｅｐｏ−Ｐｒｏｖｅｒａ、Ｓｉｇｍａ Ｍ１６２９）で処理し［２０］、マイクロピペットによる５×１０⁴ＰＦＵのＨＳＶ−２株Ｇ（約１０ＬＤ₅₀用量）の滴下の直前に、ＤＰＢＳで湿らせたポリエステル先端の拭き取り検体（ＭｉｃｒｏＰｕｒ １００１Ｄ、ＰｕｒＦｙｂｒ Ｓｏｌｏｎ、Ｒｈｉｎｅｌａｎｄｅｒ、ＷＩ）でｉ．ｖａｇ．の拭き取りを行った。負荷のために使用したＨＳＶ−２調製物は、上記に記載した［１９］。

【0241】

肛門生殖器疾患を、図４のレジェンドに記載したようにスコア化した。感染性ウイルスの膣ウイルス排出を、プラークアッセイによって測定した［１９］が、各アッセイの感受性の限界を、各図において表す。

【0242】

抗体の定量化：ＨＳＶ−２ビリオン特異的ＩｇＧ
ＥＬＩＳＡは、ＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ）、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２ａに特異的なアルカリホスファターゼヤギ抗マウスコンジュゲート（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ）を使用したこと以外は上記の通りであり［１９］、エンドポイント力価をフィットスプライン内挿した（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５．０ｄ）。

【0243】

中和抗体アッセイ
補体−依存性ＨＳＶ−２中和抗体を、従前に記載したようにプラーク低減アッセイによって測定した［２１］。

【0244】

細胞内サイトカイン染色
第２の注射の１１日後に、足蹠におけるＨＳＶ−２注射によってマウスをインビボで再刺激した。４日後、脾細胞を細胞毎に１０ＰＦＵのＨＳＶ−２（または、等容量のｍｏｃｋ調製物）でインビトロにて２時間刺激した。ブレフェルジンＡをさらに８時間加えた。

【0245】

染色のために、生存性確認色素（ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ ｆｉｘａｂｌｅ ｖｉｏｌｅｔ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）およびＦｃブロック（ＣＤ１６／３２；ＢＤ）を、４℃で３０分間加えた。表面マーカーＣＤ８−Ａｘ４８８（クローン５３〜６．７；ＢＤ）およびＣＤ４−Ａｘ６４７（クローンＲＭ４〜５；ＢＤ）を、４℃で３０分間加え、次いで細胞を透過処理し、ＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍキットを使用して固定した。ＣＤ３−ＰＥ−Ｃｙ５（クローン１４５〜２Ｃ１１；ＢＤ）およびＩＦＮ−γ−ＰＥ（クローンＸＭＧ１．２；ＢＤ）を、４℃で４５分間の細胞内染色中に含めた。Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ＡＩＤＳ ＲｅｓｅａｒｃｈおよびＶｅｔｅｒａｎｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎおよびＶＡ Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡのＲｅｓｅａｒｃｈ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｃｏｒｅ Ｆａｃｉｌｉｔｙにおいて、５０，０００〜１００，０００個のＣＤ３＋Ｔ生細胞からのデータを、ＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏフローサイトメーターで集め、ＢＤ ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアで分析した。

【0246】

統計解析
クラスカル−ワリス分析によって全てのデータ群についての統計的有意性を決定し、ダンの多重比較検定（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５．０ｄ）によってワクチン群の全ての対を比較した。有意性スコア、^(*)Ｐ＜０．０５；^(**)Ｐ＜０．０１；^(***)Ｐ＜０．００１；および（ｎｓ）、有意差なし。

【0247】

Ｊ．ＦＩ−ＨＳＶ２は、ｇＤ２サブユニットよりＨＳＶ−２生殖器疾患および排出に対してより一貫した防御を実現する
タンパク質をベースとする「ブースト」ワクチン構成要素の防御有効性を調査するために、マウスを、ＦＩ−ＨＳＶ２、ＦＩ−Ｍｏｃｋ、またはｇＤ２ｔタンパク質（それぞれ、ＭＰＬ／Ｉｍｊｅｃｔ Ａｌｕｍを加える）で２回免疫化し、ｉ．ｖａｇ．負荷した。ＦＩ−ＨＳＶ２は、死亡に対して完全に防御的であり（図４Ａ）、肛門生殖器疾患（図４Ｂ）膣ウイルス排出（図４Ｃ）の両方はＦＩ−Ｍｏｃｋ対照より下へと有意に低減した（Ｐ＜０．００１）。２日目に、ＦＩ−ＨＳＶ２マウスにおける膣ウイルス力価の低減は、ＦＩ−Ｍｏｃｋと比較して３．６Ｌｏｇだけ低減した（Ｐ＜０．００１）が、ＦＩ−ＨＳＶ２およびｇＤ２ｔが媒介する防御は可変性であった（図４Ｃ）。

【0248】

次に、本発明者らは、ＤＮＡプライム（ｇＤ２ｔ ＤＮＡ単独、またはＵＬ５およびＵＬ３０ＤＮＡを伴う）、それに続くＭＰＬ／Ａｌｕｍ中の上記のブーストタイプの防御有効性を調査した（タイムラインについて図５Ａを参照されたい）。ｇＤ２ｔまたはＦＩ−ＨＳＶ２によるブーストは、死亡に対して同様の防御を与え（図５Ｂ）、ｐＶＡＸ−ＦＩ−Ｍｏｃｋと比較して、ＦＩ−ＨＳＶ２でブーストした群の３つ全ては、総疾患負担（ｐＶＡＸでプライムした群についてＰ＜０．０１、および他についてＰ＜０．００１）（図５Ｃ）、ならびに総ウイルス排出（ｐＶＡＸについてＰ＜０．００１、ｇＤ２ｔ ＤＮＡについてＰ＜０．０１、ならびにＵＬ５、ＵＬ３０、およびｇＤ２ｔ ＤＮＡについてＰ＜０．０５）（図５Ｄ）において有意な低減を有した。ｇＤ２ｔ ＤＮＡ−ｇＤ２ｔタンパク質群はまた、有意に低減した疾患負担および総ウイルス排出（Ｐ＜０．００１）を示した。総排出は、ｇＤ２ｔタンパク質と比較してＦＩ−ＨＳＶ２でブーストしたマウスにおいてより低かったが、差異は統計的に有意でなかった。

【0249】

Ｋ．単一の製剤としての試験したプラスミドＤＮＡおよびＭＰＬ／Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓ中のＦＩ−ＨＳＶ２による同時免疫化は、ＦＩ−ＨＳＶ２が媒介する防御を増強しなかった。
リン酸アルミニウム（Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓ）中での同時送達に続いてプラスミドＤＮＡおよびタンパク質の両方に対して免疫応答が誘発されたことが示されたため、本発明者らは、ワクチン構成要素を単一の製剤中に合わせることができるかを次に試験した［２２］。マウスに、ＵＬ５、ＵＬ３０、およびｇＤ２ｔ ＤＮＡを伴い、または伴わずに、ＦＩ−ＨＳＶ２およびＭＰＬ／Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓを注射した。短期間の負荷の２日後、両方のワクチン接種された群は、陰性対照群と比較して有意に低減した力価を有した（それぞれ、Ｐ＜０．０１およびＰ＜０．００１）（図６Ａ、左）。ＦＩ−ＨＳＶ２単独群において、２日目に４匹の動物において、および４日目に６匹の動物においてウイルスは検出されなかった（図６Ａ、右）。

【0250】

本発明者らは次に、反応の持続性を試験し、長期間の負荷の２日後に、ＦＩ−ＨＳＶ２単独群は、力価においてＭｏｃｋに対して有意な４Ｌｏｇの低減を有し（Ｐ＜０．００１）、検出不可能なウイルスの割合は、短期間の負荷後のものと同様であった（図６Ｂ）。４日目に、ｐＶＡＸ ＦＩ−ＨＳＶ２マウスの全ては、検出可能なウイルスを有した。

【0251】

短期間の負荷前のＨＳＶ−２特異的ＩｇＧのレベルは、両方のワクチン接種された群において同様に高く、長期間負荷された動物において１．５〜２．５分の１に減少した（図６Ｃ左対右）。驚いたことに、長期間の負荷前の中和抗体力価は、抗原性のＤＮＡを受けた動物において有意にＭｏｃｋを超えたのみであった（ｐＶＡＸ ＦＩ−Ｍｏｃｋと比較してＰ＜０．００１）（図６Ｃ）。

【0252】

Ｌ．ＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌまたはＡｄｊｕ−Ｐｈｏｓアジュバント中のＦＩ−ＨＳＶ２による免疫化は、負荷および再負荷に続いてＨＳＶ−２複製に対して高度に防御的である。
ウイルス排出に対する最良の防御が、ＦＩ−ＨＳＶ２ＭＰＬ／Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓ免疫化されたマウスにおいて観察された。本発明者らは、次に２つの免疫化経路（筋内（ｉ．ｍ．）および皮下（ｓ．ｃ．））を比較し、アジュバントＡｄｊｕ−ＰｈｏｓおよびＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（Ｉｍｊｅｃｔと比較した詳細に明らかにされた水酸化アルミニウム）に加えて、第２の負荷に対するそれに続く防御をアセスメントした。

【0253】

負荷後２日目に、全てのＦＩ−ＨＳＶ２群におけるウイルス排出は、ｍｏｃｋ対照と比較して３Ｌｏｇだけ有意に低減した（Ｐ＜０．０１またはＰ＜０．０５）（図７Ａ、左）。各ＦＩ−ＨＳＶ２群におけるマウスの半分以上は、検出限界以下の排出レベルを有した。負荷後４日目まで、ＦＩ−ＨＳＶ２免疫化されたマウスのいずれにおいても、非常に低レベルのウイルスが検出可能であり、または検出可能でなかった（図７Ａ、右）。

【0254】

ＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌまたはＡｄｊｕ−Ｐｈｏｓ中のＦＩ−ＨＳＶ２でｉ．ｍ．免疫化されたマウスは、Ｍｏｃｋより統計的に高い、同様の高レベルのウイルス特異的ＩｇＧを有した（それぞれ、Ｐ＜０．００１およびＰ＜０．０１）（図１１、左）。Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ中のＦＩ−ＨＳＶ２（ｉ．ｍ．）は、ｓ．ｃ．と比較して有意により高いＩｇＧを誘発した（Ｐ＜０．０５）。全ての群は排出に対して有意に防御されたが、ｓ．ｃ．ではなくｉ．ｍ．で与えられたＦＩ−ＨＳＶ２は、有意な中和抗体力価を誘発した（Ｐ＜０．０１）（図１１、右）。

【0255】

ＦＩ−ＨＳＶ２を受けている動物の殆ど半分は、検出可能な排出を有さなかった。そのため本発明者らは、この高レベルの防御がまた再負荷に対して有効であるかを次に試験した。長期間の再負荷後、ＦＩ−ＨＳＶ２で免疫化された２３匹のマウスの２匹のみが、検出可能な膣ウイルスを有し（図７Ｃ、ｙ軸）、これは未処理対照と比較して低いレベルであった（図７Ｂ）。際立って、８匹のＦＩ−ＨＳＶ２／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ／ｉ．ｍ．マウスのうち５匹は、負荷後または再負荷後２日目に検出可能なウイルスを有さなかった（図７Ｃ、中央）。

【0256】

Ｍ．ＦＩ−ＨＳＶ２ワクチンへのＬＰＳに由来するアジュバント／アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバント（例えば、ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ）の添加は、ＨＳＶ−２複製、疾患、およびＤＲＧにおける潜在ウイルス量に対する防御のために必要とされる。
本発明者らは、ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ中のＦＩ−ＨＳＶ２の製剤が最適な防御のために必要であるかを次に決定し、防御に対する免疫化経路の上記の作用を確認した。負荷後２日目に、ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ中のＦＩ−ＨＳＶ２で免疫化したマウスは、Ｍｏｃｋに対して平均ウイルス力価において統計的に有意な約４Ｌｏｇの低減を有し（Ｐ＜０．００１）、それぞれ、ｉ．ｍ．またはｓ．ｃ．免疫化された８匹の動物のうち５匹または２匹は、検出可能なウイルスを有さなかった（図８Ａ、左）。対照的に、ＤＰＢＳ中のＦＩ−ＨＳＶ２による免疫化に続く排出レベルは、Ｍｏｃｋより有意差があるとは言えなかった。ｉ．ｍ．注射群において、ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌは、ＤＰＢＳより有意により低いウイルスレベルを実現した（Ｐ＜０．０５）。４日目に、ＦＩ−ＨＳＶ２ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ群は、非常に同様の平均力価を有し、それぞれの８匹の動物の６匹は検出可能なウイルスを有さなかった（図８Ａ、右）。

【0257】

ＦＩ−ＨＳＶ２ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌでｉ．ｍ．免疫化したマウスは、非常に僅かな紅斑を超える任意の疾患に対して完全に防御されていた（Ｐ＜０．００１）（図８Ｂ）。ＦＩ−ＨＳＶ２ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（ｓ．ｃ．）およびＤＰＢＳ（ｉ．ｍ．）群はまた、対照に対して疾患から有意に防御された（Ｐ＜０．０１）一方で、ＤＰＢＳ（ｓ．ｃ．）群はそうではなかった。ＤＰＢＳ群のそれぞれにおいて２匹のマウスが死亡した。

【0258】

負荷後４週間目に、生存しているマウスおよび４匹の未処理マウスからのＤＲＧを収集し、リアルタイムｑＰＣＲによって潜在ＨＳＶ−２ＤＮＡレベルを定量化した（図８Ｃ）。興味深いことに、ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ中のＦＩ−ＨＳＶ２により免疫化（ｉ．ｍ．）した動物は、検出可能なＨＳＶ−２ＤＮＡを有さなかった。ＦＩ−ＨＳＶ２ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（ｓ．ｃ．）群からの２匹のマウスのみが、検出可能なＨＳＶ−２ＤＮＡを有し、１４ゲノムコピーを有するマウスは２日目に最も高い力価を有し、１８コピーを有するマウスは、ウイルスは検出可能でなかった。

【0259】

ＦＩ−ＨＳＶ２ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌによるｉ．ｍ．免疫化は、ウイルス特異的総ＩｇＧ（図９Ａ、左）および中和抗体（図９Ｂ）の最も高い力価を誘発し、ＩｇＧ力価はＦＩ−ＨＳＶ２／ＤＰＢＳ（ｉ．ｍ．）群におけるより概ね１０倍高かった（図９Ａ、左）。ｓ．ｃ．ではなくｉ．ｍ．で与えられたＦＩ−ＨＳＶ２ＤＰＢＳは、対照に対して有意なＩｇＧレベルを誘発した（Ｐ＜０．０５）。ＦＩ−ＨＳＶ２（ｓ．ｃ．）免疫化へのＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌの添加は、ＩｇＧレベルを７．６倍増加させ、Ｍｏｃｋを超えて有意なレベルに増加させた（Ｐ＜０．０１）。本発明者らは、注射経路またはＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌの添加が、ＨＳＶ−２特異的抗体応答をＴｈ１（ＩｇＧ２ａ）またはＴｈ２（ＩｇＧ１）応答に向けて偏らせたかどうかを試験した。ＦＩ−ＨＳＶ２群へのＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌの添加は、それらのそれぞれのＤＰＢＳ群と比較して有意に増加したＩｇＧ１応答を与えた（ｉ．ｍ．：Ｐ＜０．０１およびｓ．ｃ．：Ｐ＜０．０５）が、これはＴｈ２バイアスを示唆する（図９Ａ、右）。

【0260】

図９Ｂは、最も高いレベルの中和抗体力価が、ＦＩ−ＨＳＶ２によるｉ．ｍ．ワクチン接種からもたらされたことを示す（ＦＩ−Ｍｏｃｋと比較してＰ＜０．００１）。ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（ｉ．ｍ．）の添加は、ＤＰＢＳ（ｉ．ｍ．）群と比較して中和力価の２．４倍の増加（有意差なし）を与え、いずれのｓ．ｃ．群もＦＩ−Ｍｏｃｋと統計的に異ならなかった。

【0261】

最終的に、ＩＣＳアッセイを行い、不活性化ウイルスに対するＩＦＮ−γ＋Ｔ細胞応答を分析した（図９Ｃ）。対照群（ネット平均＝０．０５％）と比較して、低レベルのＨＳＶ−２特異的ＣＤ４＋ＩＦＮ−γ＋Ｔ細胞が、ワクチン接種されてインビボで再刺激されたマウスの脾細胞において検出された（０．１５から０．４３％のネット平均範囲）。しかし、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答はバックグラウンドを超えて検出可能ではなかった。ｇＤ２をスパンするオーバーラップペプチドのプールによる脾細胞の刺激は、バックグラウンドを超えたいかなるＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞応答をもたらさなかった。

【0262】

Ｎ．分析
この研究において、ＨＳＶ−２疾患および排出に対する最良の防御は、不活性化ＨＳＶ２／ＬＰＳに由来するアジュバント／アルミニウムをベースとする鉱物塩アジュバント（例えば、ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ）のｉ．ｍ．注射によって得られたことが決定された。このワクチンは、軽度の炎症以外のＨＳＶ−２疾患を予防し、ウイルス排出を３〜４Ｌｏｇだけ低減し、２回の負荷後でさえ動物の大部分を検出可能な膣ウイルスから防御し、ＤＲＧにおけるＨＳＶ−２ＤＮＡに対する完全な防御を実現した。これらの実験における高レベルの有効性は、ＭＰＬ／ＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌまたはＭＰＬ／Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓを有する製剤に依存した。ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓによる長期間の負荷実験は、同様の高レベルの防御がブースト後３週間目および９週間目において観察されたため、反応は持続性があったことを示した。

【0263】

異なる経路でのＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌによる免疫化は、免疫応答に影響を与えたが、このように得られた高レベルの防御に影響を与えなかった（図７〜９、１１）。２つの独立した実験において、ｉ．ｍ．免疫化は、ｓ．ｃ．およびｍｏｃｋ群と比較して、有意により高いレベルのウイルス中和抗体を誘発した（図１１および９Ｂ）。インフルエンザ［２３］、ジフテリアおよび破傷風（ＤＴ）［２４］、ならびにその他［２５、２６］についてのワクチンの臨床試験は、ｉ．ｍ．対ｓ．ｃ．投与を比較してきた。一般に、いずれかの経路で同様のレベルの抗体力価が達成されたが、ｉ．ｍ．注射に続いて全体的により少ない有害事象（局所および／または全身的）が観察された。

【0264】

ＨＳＶ−２サブユニットワクチンを比較する最近の研究と同様に［２７］、本発明者らは、中和抗体、総ＩｇＧ、ＩｇＧサブタイプ、またはＴ細胞応答を含めて、免疫の単一の尺度が、防御と相関しないことを見出した。本発明者らは、ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（ｉ．ｍ．）が、同様のアッセイによって測定されるように、複製欠損ＨＳＶ−２ワクチンで免疫化されたＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて観察されたものと同様のレベルのウイルス特異的ＣＤ４＋ＩＦＮ−γ＋Ｔ細胞を誘発したことを見出した［２１、２８］。一般に、ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌによる免疫化は、ピークウイルス複製における約４Ｌｏｇの低減（複製欠損ウイルスワクチン［２８］、実験的アジュバントを伴うサブユニットワクチン［２９］、および弱毒性生ワクチン［３０、３１］で免疫化されたマウスにおけるものと同様の低減）を一貫してもたらした。最もとりわけ、ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（ｉ．ｍ．）免疫化されたマウスの大部分は、検出可能なウイルス排出を有さなかったが、これらのマウスが殺菌免疫を有し得たことをこれは示唆する。

【0265】

単一の糖タンパク質サブユニットと比較して、全ウイルスワクチンの潜在的な利点は、ウイルス粒子との関連において、抗体標的の広範な多様性を提供することである。本発明者らは、ＦＩ−ＨＳＶ２が媒介する防御が大部分はＦＩ−ＨＳＶ２に由来するｇＤ２に対する応答のためであったという可能性を考えた。しかし、図４において使用された細胞内ＦＩ−ＨＳＶ２は、ｇＤ２ｔタンパク質群における５μｇと比較して２．９μｇのｇＤ２を含有したが、これはｇＤ２が防御へのカギではなかったことを示す。それに続くデキストラン硫酸洗浄に由来するＦＩ−ＨＳＶ２調製物は、用量毎に２０ｎｇのみのｇＤ２を含有し、最も高い防御を誘発した。このように、ＦＩ−ＨＳＶ２からの最適な防御は、ナノグラム量のｇＤ２タンパク質によって可能性が低かった（しかしむしろ、ビリオンが関連する抗原に対する総応答）。

【0266】

ＦＩ−ＨＳＶ２／ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌが、負荷および長期間の再負荷後のウイルス排出に対してマウスを、および急性および再発性疾患に対してモルモットを防御することを本発明者らは今や示した［１９］。動物モデルにおける防御は、潜伏感染の確立または野生型ウイルスとの組換えの可能性を有する戦略である、弱毒性または複製欠損ＨＳＶ−２ワクチンによって生じるものと少なくとも同じ高さであるようである。不活性化ウイルスによるワクチン接種は多くの安全上の懸念を排除する一方、第一世代の不活性化ＨＳＶ−２ワクチンの主要な批評は、誘発された応答の耐久性が乏しいことであった。しかし、本発明者らは、アジュバント、例えば、ＭＰＬ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌを有する製剤がこの定説に挑戦することを示す。これらの刺激的な結果は、現代の臨床的に承認されたアジュバントと共に製剤された不活性化ＨＳＶ−２ワクチンをさらに考察することを要求する。

【0267】

Ｏ．参考文献
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【0268】

本明細書に記載されている実施例および実施形態は、例示のために過ぎず、それを考慮した様々な改変または変更が当業者に示唆され、本出願の精神および権限ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれることが理解される。本明細書において引用した全ての公開資料、特許、および特許出願は、全ての目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれている。

【図1】

【図2A-C】

【図2D-E】

【図3A】

【図3B-C】

【図4】

【図5A-B】

【図5C-D】

【図6A-B】

【図6C-D】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]