特許 6122667 卵殻膜含有微粉末、錠剤、卵殻膜含有微粉末の製造方法および錠剤の製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6122667

(24)【登録日】2017年4月7日

(45)【発行日】2017年4月26日

(54)【発明の名称】卵殻膜含有微粉末、錠剤、卵殻膜含有微粉末の製造方法および錠剤の製造方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/54 20150101AFI20170417BHJP

   A23L 5/00 20160101ALI20170417BHJP

   A23L 15/00 20160101ALI20170417BHJP

   A61K 8/02 20060101ALI20170417BHJP

   A61K 8/19 20060101ALI20170417BHJP

   A61K 8/98 20060101ALI20170417BHJP

   A61K 9/20 20060101ALI20170417BHJP

   A61K 9/28 20060101ALI20170417BHJP

   A61K 33/06 20060101ALI20170417BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20170417BHJP

【ＦＩ】

   A61K35/54

   A23L5/00

   A23L15/00

   A61K8/02

   A61K8/19

   A61K8/98

   A61K9/20

   A61K9/28

   A61K33/06

   A61P1/16

【請求項の数】5

【全頁数】16

(21)【出願番号】特願2013-48943(P2013-48943)

(22)【出願日】2013年3月12日

(65)【公開番号】特開2013-216652(P2013-216652A)

(43)【公開日】2013年10月24日

【審査請求日】2013年11月25日

【審判番号】不服2016-3615(P2016-3615/J1)

【審判請求日】2016年3月8日

(31)【優先権主張番号】特願2012-57842(P2012-57842)

(32)【優先日】2012年3月14日

(33)【優先権主張国】JP

(73)【特許権者】

【識別番号】502451878

【氏名又は名称】長谷部 由紀夫

(74)【代理人】

【識別番号】110000121

【氏名又は名称】アイアット国際特許業務法人

(72)【発明者】

【氏名】長谷部 由紀夫

【合議体】

【審判長】 村上 騎見高

【審判官】 蔵野 雅昭

【審判官】 穴吹 智子

(56)【参考文献】

【文献】 特開平２−２３１４２６号公報

【文献】 特開２００３−１４６８９５号公報

【文献】 特開２０１０−４６００６号公報

【文献】 特開２００７−１６７０３１号公報

【文献】 特開２００８−１１８８８７号公報

【文献】 特開２００９−１２０６１７号公報

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

A61K35/00-35/76

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

体積最大粒子径が２０μｍ以下であり、体積平均粒子径が６μｍ以下である卵殻膜含有微粉末を、標準食に対し１％含有させた添加食であり、これを摂取することにより、血液及び肝臓中のチォバルビツール酸反応性物質濃度を低下させ、四塩化炭素により誘発される過酸化脂質の生成を抑制し、四塩化炭素誘発性の肝臓の炎症及び障害を抑制するものであることを特徴とする四塩化炭素誘発性肝障害改善用卵殻膜含有添加食。

【請求項2】

卵殻膜含有微粉末が卵殻膜成分のみを含むものであることを特徴とする請求項１に記載の四塩化炭素誘発性肝障害改善用卵殻膜含有添加食。

【請求項3】

卵殻膜含有微粉末が卵殻膜成分と卵殻カルシウム成分のみを含むものであることを特徴とする請求項１に記載の四塩化炭素誘発性肝障害改善用卵殻膜含有添加食。

【請求項4】

卵殻の内面から剥離して取り出された卵殻膜を少なくとも含む卵殻膜含有原料をガス中で相互に衝突させて微粉砕し、この微粉砕により作製された卵殻膜含有微粉末を、目開き２０μｍ以下の篩で分級して粗大粒子を除去して体積最大粒子径が２０μｍ以下であり、体積平均粒子径が６μｍ以下である卵殻膜含有微粉末を製造し、この製造された卵殻膜含有微粉末を標準食に少なくとも１％含有率で添加して製造され、これは摂取されることにより、血液及び肝臓中のチォバルビツール酸反応性物質濃度を低下させ、四塩化炭素により誘発される過酸化脂質の生成を抑制し、四塩化炭素誘発性の肝臓の炎症及び障害を抑制するものであることを特徴とする四塩化炭素誘発性肝障害改善用卵殻膜含有添加食の製造方法。

【請求項5】

卵殻の内面に卵殻膜が付着した状態の卵殻及び卵殻膜を少なくとも含む卵殻膜含有原料をガス中で相互に衝突させて微粉砕し、この微粉砕により作製された卵殻膜含有微粉末を、目開き２０μｍ以下の篩で分級して粗大粒子を除去して体積最大粒子径が２０μｍ以下であり、体積平均粒子径が６μｍ以下である卵殻膜含有微粉末を製造し、この製造された卵殻膜含有微粉末を標準食に少なくとも１％含有率で添加して製造され、これは摂取されることにより、血液及び肝臓中のチォバルビツール酸反応性物質濃度を低下させ、四塩化炭素により誘発される過酸化脂質の生成を抑制し、四塩化炭素誘発性の肝臓の炎症及び障害を抑制するものであることを特徴とする四塩化炭素誘発性肝障害改善用卵殻膜含有添加食の製造方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、卵殻膜含有微粉末、錠剤、卵殻膜含有微粉末の製造方法および錠剤の製造方法に関するものである。

【背景技術】

【0002】

ヒトの皮膚は、表面にある上皮層と、その下の結合組織性の真皮層からなっている。上皮層を構成するタンパク質は主としてケラチンであり、ケラチンは皮膚の保護作用を有し、また上皮層に含まれるメラニン（色素）は紫外線に対する防護作用を有する。一方、真皮層を構成するタンパク質は主としてコラーゲンであり、他にエラスチン、アルブミン、グロブリン、ムチンよりなっている。

【0003】

真皮層を構成するコラーゲンは、主としてα１（Ｉ）型コラーゲン［以下「（Ｉ）型コラーゲン」という］およびα１（ＩＩＩ）型コラーゲン［以下「（ＩＩＩ）型コラーゲン」という］である。（Ｉ）型コラーゲンは主として皮膚の構造維持、また（ＩＩＩ）型コラーゲンは主として皮膚への柔軟性の付与とそれぞれ異なった機能を果たしている。

【0004】

皮膚における（Ｉ）型コラーゲンと（ＩＩＩ）型コラーゲンの割合は定常的ではなく、加齢に伴って変化する。（ＩＩＩ）型コラーゲンは胎児型コラーゲンとも呼ばれるように皮膚の老化と密接な関係があり、胎児のときに最も多く、１０代から減り始め、その後は減少の一途をたどる。例えば、１５週の胎児の皮膚では（ＩＩＩ）型コラーゲンの方が（Ｉ）型コラーゲンよりも多いが、成人では、（Ｉ）型コラーゲン／（ＩＩＩ）型コラーゲンの比率が約３になっているといわれている。

【0005】

皮膚における（ＩＩＩ）型コラーゲンの割合を増すことができれば、加齢による皮膚の老化を止め、肌荒れを防止し、皮膚を滑らかで、柔らかく、シットリとした状態に保つことができる。かかる点から、コラーゲン、特に（ＩＩＩ）型コラーゲンの生成を促進することのできる化粧料や栄養剤（ビタミン剤など）の開発が色々試みられ、実用化されている。

【0006】

卵殻膜は、鶏卵などの鳥類の卵の卵殻の内側にある膜で、内外２枚からなり、外卵殻膜は卵殻内面に密着し、内卵殻膜は卵白を包んでいる。卵殻膜は、強靭な繊維性のタンパク質よりなりなり、オポケラチンとオポムシンを主成分とする。卵殻膜は、昔から相撲部屋で擦り傷などの手当にも使われていたように、皮膚の再生を促進する働きを有することが知られており、最近になって、特に胎児性コラーゲンとも称される（ＩＩＩ）型コラーゲンの生成を促進させる作用を有することが報告されている。

【0007】

このような卵殻膜を用いた技術としては、たとえば、本願出願人により、粉末状に粉砕した卵殻膜を含む錠剤や菓子類などが提案されている（特許文献１、２）。たとえば、特許文献１記載の錠剤には、キューピー株式会社が市販する卵殻膜粉末が用いられている。この卵殻膜粉末は７０メッシュで９０％以上通過した粒度を有するものである（非特許文献１）。なお、７０メッシュは、メッシュの規格にもよるが目開きで約２１３μｍ前後に相当する。また、特許文献２記載の菓子類では、１５０メッシュ（目開き１０４μｍ）の標準篩を通過する粒子の含有割合が７０質量％以上である卵殻膜粉末が用いられている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0008】

【特許文献1】特許第３８６２６００号

【特許文献2】特開２００９−１６５４２１号公報

【非特許文献】

【0009】

【非特許文献1】キューピー株式会社、ＥＭパウダー３００の製品カタログhttp://www.kewpie.co.jp/finechemical/products/pdf/01d/em300/em300_pamph.pdf#search='ＥＭパウダー３００'

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0010】

一方、卵殻膜は、繊維状の蛋白質を主成分とし、網目状の構造を有している。そして、この蛋白質は酸、アルカリ、プロテアーゼに対し比較的安定で水に不溶である（非特許文献１）。すなわち、卵殻膜を構成する材料自体は上述したように網目構造の繊維質を主成分として構成され、水等に溶解し難いため、本来的に、人体に消化吸収され難い。このため、更なる消化吸収効率の改善が求められている。

【0011】

消化吸収効率を改善するためには、たとえば、（１）卵殻膜を酸、アルカリ等により加水分解処理したり、あるいは、（２）より細かく粉砕して卵殻膜粒子の単位体積当たりの表面積を大きくすることで、単位時間当たりの卵殻膜の成分を溶解・溶出させる効率を上げる方法なども挙げられる。しかしながら、加水分解処理では、化学反応を利用するため、加水分解の過程において卵殻膜中に含まれる各種の有効成分が劣化・変性するというデメリットも生じやすい。この点を考慮すると、卵殻膜を機械的に粉砕する方が有利であると考えられる。

【0012】

一方、卵殻膜をより細かく粉砕した場合の効果を調査すべく、本願出願人は、卵殻膜の消化吸収効率を向上させるために、７０メッシュで分級処理して得られた卵殻膜と、１５０メッシュで分級処理して得られた卵殻膜とについて比較調査した。しかしながら、両者の間には有意な差異は全く見られなかった。すなわち、卵殻膜の消化吸収効率は、粒径に対して単純に比例して増加しない。このため、特許文献１，２に例示されたレベルで、粒径を変化させて卵殻膜を粉砕しても、更なる消化吸収効率の向上は望めない。

【0013】

本発明は上記事情に鑑みてなされたものであり、従来よりも更に消化吸収効率が改善された卵殻膜含有微粉末およびこれを用いた錠剤、ならびに、当該卵殻膜含有微粉末の製造方法およびこれを用いた錠剤の製造方法を提供することを課題とする。

【課題を解決するための手段】

【0014】

上記課題は以下の本発明により達成される。すなわち、
本発明の四塩化炭素誘発性肝障害改善用卵殻膜含有微粉末添加食は、体積最大粒子径が２０μｍ以下であり、体積平均粒子径が６μｍ以下である卵殻膜含有微粉末を、標準食に対し１％含有させた添加食であり、これを摂取することにより、血液及び肝臓中のチォバルビツール酸反応性物質濃度を低下させ、四塩化炭素により誘発される過酸化脂質の生成を抑制し、四塩化炭素誘発性の肝臓の炎症及び障害を抑制するものであることを特徴とする。

【0015】

本発明の卵殻膜含有微粉末の一実施形態は、卵殻膜成分のみを含むことが好ましい。

【0016】

本発明の卵殻膜含有微粉末の他の実施形態は、卵殻膜成分と卵殻カルシウム成分のみを含むことが好ましい。

【0017】

本発明の卵殻膜含有微粉末の他の実施形態は、食品添加用から選択されることが好ましい。

【0018】

本発明の四塩化炭素誘発性肝障害改善用卵殻膜含有微粉末添加食の製造方法において、第一の方法は、 卵殻の内面から剥離して取り出された卵殻膜を少なくとも含む卵殻膜含有原料をガス中で相互に衝突させて微粉砕し、この微粉砕により作製された卵殻膜含有微粉末を、目開き２０μｍ以下の篩で分級して粗大粒子を除去して体積最大粒子径が２０μｍ以下であり、体積平均粒子径が６μｍ以下である卵殻膜含有微粉末を製造し、この製造された卵殻膜含有微粉末を標準食に少なくとも１％含有率で添加して製造され、これは摂取されることにより、血液及び肝臓中のチォバルビツール酸反応性物質濃度を低下させ、四塩化炭素により誘発される過酸化脂質の生成を抑制し、四塩化炭素誘発性の肝臓の炎症及び障害を抑制するものであることを特徴とする。

【0019】

本発明の四塩化炭素誘発性肝障害改善用卵殻膜含有微粉末添加食の製造方法において、第二の方法は、卵殻の内面に卵殻膜が付着した状態の卵殻及び卵殻膜を少なくとも含む卵殻膜含有原料をガス中で相互に衝突させて微粉砕し、この微粉砕により作製された卵殻膜含有微粉末を、目開き２０μｍ以下の篩で分級して粗大粒子を除去して体積最大粒子径が２０μｍ以下であり、体積平均粒子径が６μｍ以下である卵殻膜含有微粉末を製造し、この製造された卵殻膜含有微粉末を標準食に少なくとも１％含有率で添加して製造され、これは摂取されることにより、血液及び肝臓中のチォバルビツール酸反応性物質濃度を低下させ、四塩化炭素により誘発される過酸化脂質の生成を抑制し、四塩化炭素誘発性の肝臓の炎症及び障害を抑制するものであることを特徴とする。

【0020】

本発明の錠剤の一実施形態は、賦形剤を含有することが好ましい。

【0021】

本発明の錠剤の他の実施形態は、卵殻膜成分を１０〜４０質量％の割合で含有することが好ましい。

【0022】

本発明の錠剤の他の実施形態は、皮膚の老化、肌荒れ、皮膚疾病から選択される少なくとも１種の症状の予防剤あるいは治療剤であることが好ましい。

【0023】

本発明の錠剤の他の実施形態は、育毛、発毛促進および脱毛防止から選択される少なくとも１種の剤であることが好ましい。

【0024】

第一の本発明の卵殻膜含有微粉末の製造方法は、卵殻の内面から剥離して取り出された卵殻膜を少なくとも含む卵殻膜含有原料をガス中で相互に衝突させて微粉砕する微粉砕工程を、少なくとも経て作製されることを特徴とする。

【0025】

第二の本発明の卵殻膜含有微粉末の製造方法は、卵殻の内面に卵殻膜が付着した状態の卵殻および卵殻膜を少なくとも含む卵殻膜含有原料をガス中で相互に衝突させて微粉砕する微粉砕工程を、少なくとも経て作製されることを特徴とする。

【0026】

第一および第二の本発明の卵殻膜含有微粉末の製造方法の一実施形態は、微粉砕工程を経た後に、目開き２０μｍ以下の篩で分級して粗大粒子を除去する分級工程を実施することが好ましい。

【0027】

第一および第二の本発明の卵殻膜含有微粉末の製造方法の他の実施形態は、微粉砕工程が、第一の微粉砕処理と、第二の微粉砕処理とを含み、第一の微粉砕処理を終えた後の原料粉末を高圧蒸気で滅菌処理した後、第二の微粉砕処理を行うことが好ましい。

【0028】

本発明の錠剤の製造方法は、本発明の卵殻膜含有微粉末を少なくとも含む打錠用原料を用いて、打錠することで裸錠を形成する裸錠形成工程を少なくとも経て錠剤を製造することが好ましい。

【0029】

本発明の錠剤の製造方法の一実施形態は、裸錠に対して保護コーティング処理を行う保護コーティング工程をさらに実施することが好ましい。

【0030】

本発明の錠剤の製造方法の一実施形態は、打錠用原料が、卵殻膜含有微粉末と、賦形剤とを含むことが好ましい。

【発明の効果】

【0031】

本発明によれば、従来よりも更に消化吸収効率が改善された卵殻膜含有微粉末およびこれを用いた錠剤、ならびに、当該卵殻膜含有微粉末の製造方法およびこれを用いた錠剤の製造方法を提供することができる。

【発明を実施するための形態】

【0032】

（卵殻膜含有微粉末）
第一の本実施形態の卵殻膜含有微粉末は、体積平均粒子径が６μｍ以下であることを特徴とする。また、第二の本実施形態の卵殻膜含有微粉末は、体積最大粒子径が２０μｍ以下であることを特徴とする。なお、本願明細書において、卵殻膜含有微粉末の「体積平均粒子径」および「体積最大粒子径」は、レーザー回折式粒度分布測定機（ＬＭＳ−３０、株式会社セイシン企業製）を用いて測定した値を意味する。ここで、「体積平均粒子径」は、粒度分布における小粒径側からの累積値が５０％における粒子径を意味する。また、卵殻膜含有微粉末の粒子径の測定に際しては、卵殻膜含有微粉末を界面活性剤を用いて水に分散させた測定試料を用いた。

【0033】

卵殻膜含有微粉末の体積平均粒子径が６μｍ以下、または、体積最大粒子径が２０μｍ以下となるように、卵殻膜含有微粉末の粒度分布を制御することにより、７０メッシュあるいは１５０メッシュで分級処理して得られた従来の卵殻膜粉末（最大粒子径で１００〜２００μｍの卵殻膜粉末）よりも更に消化吸収効率を改善することができる。

【0034】

このような効果が得られる理由は定かではないが、本発明者は以下のように推定している。すなわち、最大粒子径で１００〜２００μｍ前後、平均粒子径で数十〜百数十μｍオーダの従来の卵殻膜粉末では、これらの粒径域レベルで最大粒子径あるいは平均粒子径を変化させて、より細かく粉砕しても消化吸収効率は殆ど改善しない。この理由は、卵殻膜は、繊維状の蛋白質を主成分とした強固な網目状の構造を有しており、これらの粒径域レベルで粉砕された卵殻膜粒子においては、未だに強固な網目構造が維持されているためであると考えられる。すなわち、強固な網目構造が維持されているため、卵殻膜が経口摂取された場合でも胃液や唾液等の各種の消化液によって分解・溶解が促進され難いためであると考えられる。

【0035】

また、一般的に、粒径が小さくなるほど、粒子の単位体積当たりの表面積はより大きくなる。このため、粒子が消化液に対して可溶性または易溶性の物質のみから構成されるのであれば、粒径が小さくなるに従い消化吸収効率が改善されるものと期待される。しかしながら、上述した粒径域においては、粒径が変化しても消化吸収効率は殆ど改善されない。このことからは、卵殻膜が粉砕される過程で生成した破断面・粉砕面などの一部分が消化液に対して溶解し易くなったに過ぎず、強固な網目構造を維持した状態の卵殻膜粒子の本体部は相変わらず消化液に対して不溶状態または難溶状態を維持しているものと推測される。

【0036】

一方、本実施形態の卵殻膜含有微粉末では、従来の卵殻膜粉末と比べて、大幅に消化吸収効率が改善する。このような消化吸収効率の改善は、単純に粒径が小さくなったことに起因するものでは無く、卵殻膜を微粉化する過程において、卵殻膜微粒子全体において、卵殻膜が本来有する繊維状の強固な網目状の構造が破壊され、卵殻膜微粒子全体が消化液に対してより溶解し易くなったためであると推測される。

【0037】

なお、消化吸収効率をより一層改善する観点からは、卵殻膜含有微粉末の体積平均粒子径が６μｍ以下、かつ、体積最大粒子径が２０μｍ以下であることがより好ましい。

【0038】

本実施形態の卵殻膜含有微粉末には、微粉化された卵殻膜成分が少なくとも含まれるが、この他に微粉化された卵殻カルシウム成分が含まれていてもよい。この場合、本実施形態の卵殻膜含有微粉末は、卵殻膜成分のみを含む形態（第一形態）、あるいは、卵殻膜成分および卵殻カルシウムのみを含む形態（第二形態）のいずれかであることが特に好ましい。第一形態の卵殻膜含有微粉末の場合は、純粋に卵殻膜成分のみを含むため、錠剤、食品、化粧品等、各種の用途に幅広く本実施形態の卵殻膜含有微粉末を利用することができる。なお、第一形態の卵殻膜含有微粉末および第二形態の卵殻膜含有微粉末のいずれにおいても、製造過程等において混入する不純物成分が含まれることは許容される。

【0039】

一方、卵殻膜は、卵殻の内側にある膜であり、卵殻膜は、卵殻カルシウムから構成される卵殻から隔離されて取り出される。また、卵殻膜成分を含有する錠剤を製造する場合、錠剤の硬度向上剤として卵殻カルシウムが利用できる。これに加えて、卵殻カルシウムは、人が摂取するカルシウム源としても好適である。これらの点を考慮すると、錠剤等の最終製品が、卵殻膜成分と卵殻カルシウム成分とを同時に含む場合、当該最終製品の製造には、第二形態の卵殻膜含有微粉末を用いることが特に好ましい。この場合、一連の製造過程において、卵殻膜を、卵殻カルシウムから隔離するプロセスを省くことができるため、製造工程の簡略化および低コスト化が図れる。

【0040】

本実施形態の卵殻膜含有微粉末を構成する卵殻膜は、鳥類の卵の卵殻の内側にある膜（外卵殻膜および／または内卵殻膜）であればいずれも使用できる。そのうちでも、鶏卵の卵殻膜が、入手の容易性、コストなどの点から好ましく用いられる。本実施形態の卵殻膜含有微粉末を製造する場合、市販の卵殻膜粉末、または、市販の卵殻膜粉末および卵殻カルシウムを利用し、これを、体積平均粒子径が６μｍ以下、および／または、体積最大粒子径が２０μｍ以下まで微粉砕すればよい。あるいは、卵殻に卵殻膜が付着した状態の原料を用いたり、当該原料と卵殻膜粉末とを併用することもできる。なお、卵殻膜粉末としては、たとえば、ＥＭパウダー３００（キューピー株式会社製）が利用できる。また、本実施形態の卵殻膜含有微粉末の製造方法の詳細については後述する。

【0041】

本実施形態の卵殻膜含有微粉末の用途としては特に限定されないが、経口摂取される用途、すなわち、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤などの経口剤用、あるいは、菓子類、健康食品、保存食品、加工食品などの食品添加用などに利用することが好ましい。また、必要に応じて、皮膚への塗布用、毛髪への塗布用、睫毛への塗布用および眉毛への塗布用などにも利用してもよい。

【0042】

しかしながら、卵殻膜を高濃度で均一に含有し、保存時、流通時、服用時などに変形・崩壊が生じず、取扱い性に優れ、かつ、経口で簡単に服用できる観点からは、本実施形態の卵殻膜含有微粉末は、錠剤に用いられることが特に好ましい。

【0043】

（錠剤）
以下に、本実施形態の卵殻膜含有微粉末を用いた錠剤について説明する。本実施形態の錠剤は、本実施形態の卵殻膜含有微粉末と、賦形剤とを含有する。

【0044】

本実施形態の錠剤に含まれる微粉末状の卵殻膜成分の含有量は特に制限されない。しかしながら、粒子への造粒および打錠が円滑に行われ、錠剤を経口で摂取（服用）した際のコラーゲン、特に（ＩＩＩ）型コラーゲンの生成促進作用が高くなって皮膚の老化や肌荒れ防止効果や皮膚疾病の予防および／または治療効果がより優れたものになり、育毛、発毛促進、脱毛防止効果が高くなり、生体内で生成した活性酸素の低減または消去能が高くなるなどの観点から、錠剤の全質量に対して、卵殻膜成分を１０〜４０質量％の割合で含有することが好ましく５〜２５質量％の割合で含有することがより好ましい。

【0045】

卵殻膜成分の含有量を１０質量％以上とすることにより、コラーゲンの生成促進効果、育毛、発毛促進、脱毛防止効果、活性酸素の低減または消去能を得るために、多量の錠剤を摂取する必要がなくなる。一方、錠剤における卵殻膜の含有量が４０質量％以下とすることにより、粒子への造粒および打錠が容易となり、錠剤を製造しやすくなる。

【0046】

本実施形態の錠剤には、錠剤を形成するために各種の添加剤として、たとえば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等を適宜添加できる。

【0047】

賦形剤は、有効成分が少ない場合に取扱うのに適当な量となるように添加される添加剤である。賦形剤としては、公知の賦形剤が適宜利用できるが、化工澱粉および乳糖の少なくとも１種が用いられることが好ましい。賦形剤の含有量は、賦形性の観点から卵殻膜成分の質量に対して０.５〜３質量倍であることが好ましく、１〜２.５質量倍であることがより好ましい。化工澱粉としては、焙焼デキストリン（白色デキストリン、黄色デキストリンなど）などのデキストリン類、酸化澱粉（次亜塩素酸酸化澱粉など）、低粘性変性澱粉（酸浸漬澱粉、酵素処理澱粉など）などを挙げることができ、これらの１種または２種以上を用いることができる。これらの中でも、化工澱粉としては、デキストリンが好ましく用いられ、具体例としては、日食株式会社製の「ワキシａ」、松谷化学株式会社製の「パインファイバー」などを挙げることができる。化工澱粉として、「ワキシａ」と「パインファイバー」を併用することが、打錠がより円滑に行われる点からより好ましい。「ワキシａ」と「パインファイバー」を併用する場合は、両者を、１：４〜４：１の質量比で用いることが好ましい。

【0048】

また、賦形剤として、化工澱粉（特に「ワキシａ」および「パインファイバー」）と乳糖を併用する場合は、化工澱粉：乳糖の使用割合（質量比）が、１：５〜５：１であることが好ましく、１：３〜３：１であることがより好ましい。

【0049】

結合剤は、錠剤原料を構成する粉体同士を結着させる目的で用いられる添加剤である。結合剤としては、公知の結合剤が適宜利用できるが、たとえば、デンプン糊、アラビアゴム糊、ヒドロキシプロピルセルロースなどを挙げることができる。

【0050】

崩壊剤は、唾液などの水分を吸収することで膨張するなどして錠剤を崩壊させることで、卵殻膜成分等の有効成分の放出を容易にするために添加される添加剤である。崩壊剤としては、公知の崩壊剤が適宜利用できるが、たとえば、セルロース類などを用いることができる。なお、デンプンは崩壊剤としての機能も有する。

【0051】

滑沢剤は、錠剤原料を構成する粉体の流動性を高めて、打錠時の圧縮成形を容易とする目的で用いられる添加剤である。滑沢剤としては、公知の滑沢剤が適宜利用できるが、たとえば、ステアリン酸マグネシウム、ショ糖脂肪酸エステルなどのワックス類やタルク、ビタミンＣなどを挙げることができる。

【0052】

さらに、本実施形態の錠剤は、錠剤の硬度を高くし、錠剤の変形や傷つきを防止して、包装時、保存時、流通時などにおける錠剤の取り扱い性を向上し、摂取性を良好なものにするために、硬度向上剤として卵殻カルシウムを含有することが特に好ましい。錠剤が卵殻カルシウムを含む場合、錠剤の製造に用いる原料としては、第一形態の卵殻膜含有微粉末および卵殻カルシウムを少なくとも用いるか、あるいは、第二形態の卵殻膜含有微粉末を少なくとも用いることができる。

【0053】

卵殻カルシウムは、鶏卵などの鳥類の卵の殻を粉砕・乾燥してなる微粉末であり、人が摂取可能な卵殻カルシウムであればいずれも使用できる。卵殻カルシウムとしては、例えば、従来から市販されているキューピー株式会社製「カルホープ」、太陽化学株式会社製の卵殻カルシウムなどをそのまま用いることができる。なお、第二態様の卵殻膜含有微粉末を用いて錠剤を製造する場合、これらの卵殻カルシウムの使用を省略してもよい。錠剤中に含まれる卵殻カルシウムの含有量は、錠剤の全質量に対して、５〜２０質量％であることが好ましく、８〜１５質量％であることがより好ましい。

【0054】

本実施形態の錠剤は、卵殻膜の体内での吸収を速め、皮膚におけるコラーゲンの生成、特に（ＩＩＩ）型コラーゲンの生成を促進させて、皮膚の老化や肌荒れをより効果的に防止して皮膚を滑らかで、柔らかく、シットリとした状態にするために、湿疹、炎症、ヤケドなどの皮膚疾患の予防および／または治癒効果をより高めるために、また育毛、発毛促進、脱毛防止効果をより優れたものにするために、さらに生体内に生成した活性酸素の低減または消去能をより高くするために、卵殻膜成分と共に、β−カロチン、ビタミン類およびローヤルゼリーのうちの少なくも１種を含有することが好ましく、β−カロチン、ビタミン類およびローヤルゼリーの３者を含有することがより好ましい。

【0055】

本実施形態の錠剤中に含有させるビタミンの種類は特に制限されず、人が摂取可能なビタミンであればいずれでもよく、ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＦ、ビタミンＫなどの脂溶性ビタミン類、ビタミンＢ、ビタミンＣ、ビタミンＨ、ビタミンＬなどの水溶性ビタミン類などを挙げることができ、これらのビタミン類の１種または２種以上を含有することができる。β−カロチンおよびビタミン類の含有量は、ヒトが摂取するのに適するそれぞれのビタミンの量に応じて適宜決めることができる。

【0056】

また、ローヤルゼリーの含有量は、本実施形態の錠剤の上記した作用効果を十分に発揮させ得る点、コストなどの点から、卵殻膜成分の全質量に対して０．１〜１．５質量倍であることが好ましく、０．２〜１質量倍であることがより好ましく、０．５〜０．８質量倍であることが更に好ましい。

【0057】

本実施形態の錠剤は、錠剤中に含まれる成分の変質や分解を防止し、また錠剤表面の耐傷つき性の向上などの目的で、コーティング皮膜で覆われていることが好ましい。コーティング皮膜は、錠剤のコーティング皮膜として従来から用いられているのと同様の皮膜形成材料から形成することができる。皮膜形成材料としては、特に限定されるものではないが、例えば、岐阜セラック株式会社製の「セラック」（トラック３０）などが利用できる。

【0058】

また、本実施形態の錠剤は、経口での摂取をし易くするために、糖衣で覆われていることが好ましい。その際の糖衣としては、錠剤に従来から用いられている糖衣であればいずれでもよい。本実施形態の錠剤は、商品価値を高めるために、必要に応じて、適当な色に着色してあってもよい。また、着色後に、艶だし処理を行ってもよい。

【0059】

本実施形態の錠剤の大きさは特に制限されず、適宜決めることができるが、一般には、直径が約７〜１０ｍｍ程度の円形や楕円形の錠剤とするのが、取り扱い性、服用のし易さなどの点から好ましい。

【0060】

さらに、本実施形態の錠剤は、例えば、錠剤１個の重さが約３５０〜４００ｍｇ程度であることが好ましく、このような錠剤１個中に卵殻膜成分が約３５〜４０ｍｇの量で含まれることが好ましい。

【0061】

例えば、本実施形態の錠剤１個当たり、卵殻膜成分が約３５〜４０ｍｇの割合で含有されると仮定する。この場合、成人では、当該錠剤を１日当たり１〜２個摂取すると（１日当たり卵殻膜成分を合計で３５〜７０ｍｇ摂取すると）、皮膚におけるコラーゲン、特に（ＩＩＩ）型コラーゲンの生成が促進されて、皮膚の老化や肌荒れが防止され、皮膚を滑らかで、柔らかく、シットリとした状態にすることができ、湿疹、炎症、サケドなどの皮膚疾患の予防や治癒が促進され、育毛、発毛促進、脱毛の防止、白髪の減少などがなされ、生体内に生成した活性酸素が消去または低減されて種々の疾病の予防や回復を促進することができる。

【0062】

（卵殻膜含有微粉末の製造方法）
本実施形態の卵殻膜含有微粉末は、卵殻膜含有原料をガス中で相互に衝突させて微粉砕する微粉砕工程を、少なくとも経て作製される。このような微粉砕工程では、ノズルから噴射される高圧の空気あるいは蒸気等のガスを超高速ジェットとして粒子に衝突させ、粒子どうしの衝撃によって数ミクロンのレベルの微粒子にまで粉砕する粉砕装置、いわゆるジェットミルが用いられる。このような粉砕方法は、従来の回転刃などの硬質の破砕部材を原料と衝突させて粉砕する粉砕方法と比べて、粉砕時に、破砕部材と原料との接触・衝突などに起因する摩擦熱が殆ど発生しない。このため、卵殻膜中に含まれるアミノ酸や蛋白質などの熱により変性・劣化・分解しやすい成分へのダメージが少ない。すなわち、製造過程で、卵殻膜中の有効成分が失われにくくなる。これに加えて、原料を粉砕するために、破砕部材ではなく高圧ガスを使うため、粉砕装置由来の不純物が卵殻膜含有微粉末に混入することも無い。

【0063】

一方、破砕部材を原料と衝突させて粉砕する粉砕方法では、３０μｍレベルよりも小さく粉砕することは困難である。このような粉砕方法で原料を粉砕した場合の粉砕限界粒径は、たとえば、カッターミルでは５００μｍ前後、解砕機では１５０μｍ前後、アトマイザーでは５０μｍ前後、インペラーミルでは７０μｍ前後、コントラプレックスミル、ボールミルおよびＡＣＭパルペライザーミルでは３０μｍ前後である。このため、仮に、目開き２０μｍ程度の篩を用いて分級処理しても、本実施形態の卵殻膜含有微粉末を殆ど得ることができず、収率も極めて低い。また、上述した粉砕方法では、粉砕時に加熱された粉末が、粉砕後に冷却される段階で、空気中の水分を吸湿しやすくなる。その結果、雑菌・カビが繁殖しやすくなり易いというデメリットもある。

【0064】

なお、微粉砕工程に用いる卵殻膜含有原料としては、（１）卵殻の内面から剥離して取り出された卵殻膜を少なくとも含む原料（第一形態の卵殻膜含有原料）、および／または、（２）卵殻の内面に卵殻膜が付着した状態の卵殻および卵殻膜を少なくとも含む原料（第二形態の卵殻膜含有原料）のいずれかを用いることができる。ここで、卵殻の内面から剥離して取り出された卵殻膜を少なくとも含む卵殻膜含有原料としては、たとえば、ＥＭパウダー３００（キューピー株式会社製）を用いることができる。また、後述する錠剤の製造等のように、後工程において、卵殻カルシウムと卵殻膜とを同時に使用する場合、生産性の観点から、第二形態の卵殻膜含有原料を用いることが好ましい。

【0065】

微粉砕工程では、ジェットミルにより、卵殻膜含有原料の体積平均粒子径が４０μｍ以下となるまで粉砕することが好ましく、２０μｍ以下となるまで粉砕することがより好ましく、１０μｍ以下となるまで粉砕することがさらに好ましい。また、この場合、体積最大粒子径は２０μｍ以下となるまで粉砕することが好ましい。一方、ジェットミルにより粉砕された卵殻膜含有原料の体積平均粒子径の下限は特に限定されないが、生産性等の実用上の観点からは４μｍ以上が好ましく、５μｍ以上がより好ましい。

【0066】

ジェットミルにより粉砕された後の卵殻膜含有原料については、体積最大粒子径が２０μｍ以下、および／または、体積平均粒子径が６μｍ以下であれば、これをそのまま本実施形態の卵殻膜含有微粉末として利用できる。一方、粒度分布において粒径２０μｍを超える粗大粒子を含む場合、微粉砕工程を経た後に、目開き２０μｍ以下の篩で分級して粗大粒子を除去する分級工程をさらに実施してもよい。

【0067】

また、本実施形態の卵殻膜含有微粉末の製造方法では、必要に応じてその他の工程・プロセスを実施してもよい。たとえば、微粉砕工程が、第一の微粉砕処理と、第二の微粉砕処理とを含み、第一の微粉砕処理を終えた後の原料粉末を高圧蒸気で滅菌処理した後、第二の微粉砕処理を行ってもよい。卵殻膜含有原料がジェットミルにより粉砕されて微細化される過程においては、卵殻膜の抗菌性が低下しやすくなるが、上述したように滅菌処理を行うことで本実施形態の卵殻膜含有微粉末にカビや細菌の繁殖を防ぐのが容易となる。

【0068】

以上に説明したプロセスを経て作製された本実施形態の卵殻膜含有微粉末は、後述する経口用の錠剤・散剤・顆粒剤・液剤の製造、各種の加工食品の製造、疾病予防・治療・美容等の目的で皮膚に塗布するための液剤・乳液・クリームの製造、マスカラやトリートメント液などのように毛髪・眉毛・睫毛等に塗布するための液剤・乳液・クリームの製造に用いることができる。

【0069】

（錠剤の製造方法）
本実施形態の錠剤は、本実施形態の卵殻膜含有微粉末を少なくとも含む打錠用原料を用いて、公知の錠剤製造方法を適宜利用して製造することができる。具体的には、打錠用原料を用いて、打錠することで裸錠を形成する裸錠形成工程（打錠工程）を少なくとも経て本実施形態の錠剤を製造することができる。

【0070】

なお、打錠用原料には、本実施形態の卵殻膜含有微粉末の他に、卵殻膜成分以外の有効成分、たとえば、β−カロチン、ビタミン類およびローヤルゼリーが含まれていてもよい。これに加えて、通常、賦形剤、結合剤、崩壊剤等から選択される少なくとも１種の添加剤が含まれるが、賦形剤が少なくとも含まれることが好ましい。また、硬度向上剤として、卵殻カルシウムがさらに含まれていてもよい。

【0071】

裸錠形成工程では、公知の打錠法が利用でき、たとえば、所定の原料を秤量・混合して得られた打錠用原料をそのまま打錠する直接打錠法で実施してもよく、打錠用原料を顆粒に造粒する造粒工程を経てから打錠する顆粒打錠法で実施してもよい。

【0072】

造粒工程では、たとえば、以下の手順で、打錠用原料を顆粒化することができる。まず、打錠用原料１００質量部に対してアルコール（エタノール）を約１０質量部〜２０質量部の割合で添加してアルコール含有混合物を作製する。次に、このアルコール含有混合物を用いて従来既知の造粒法、例えば、撹拌造粒法、転動造粒法、噴霧造粒法などの造粒方法を採用して造粒を行う。そして、得られた粒子を、たとえば、４０℃〜７０℃程度の温度で加熱する乾燥工程を行うことで打錠用の顆粒を得ることができる。なお、得られた打錠用の顆粒は、篩を用いて分級して粒度を揃えてから打錠することが好ましい。

【0073】

裸錠形成工程で用いる打錠装置は、医薬などの分野で錠剤を製造するのに従来から用いられているのと同様の打錠装置を採用して行うことができる。なお、打錠に際して造粒工程および乾燥工程を経て得られた打錠用の顆粒にビタミンＣおよびショ糖脂肪酸エステルなどの滑沢剤を添加して打錠を行うことが好ましい。この場合、粒子の流動性および滑艶性が高まり、打錠をより円滑に行うことができる。ここで、滑沢剤としてビタミンＣおよびショ糖脂肪酸エステルを用いる場合、その添加量は以下の通りとすることが好ましい。すなわち、打錠時におけるビタミンＣの添加量は、乾燥状態の打錠用の顆粒１００質量部に対して８〜１０質量部であることが好ましい。また、ショ糖脂肪酸エステルの添加量は、乾燥状態の打錠用の顆粒１００質量部に対して０．１〜３．０質量部であることが好ましい。

【0074】

裸錠形成工程を経て得られた裸錠は、これをそのまま本実施形態の錠剤としてもよいが、裸錠に対して保護コーティング処理を行う保護コーティング工程をさらに実施してもよい。保護コーティング工程に用いるコーティング剤の種類は、上記したように特に制限されず、例えば岐阜セラック株式会社製の「セラック」などが用いられる。保護コーティング層のコーティング量は特に制限されないが、一般に、錠剤１個に対し、１〜５ｍｇ程度であることが好ましい。

【0075】

なお、保護コーティングされた錠剤は、そのままで製品として流通、販売してもよいが、錠剤を服用し易くするために糖衣を施すことが好ましい。糖衣を施す糖衣コーティング工程は、１段で行ってもよいが、表面の仕上がりを綺麗にするためには、錠剤を粘度の高い糖分含有ペースト状物で被覆した後、乾燥し、さらに粘度の低い糖分含有ペースト状物や糖分含有液で再度被覆する多段による方法が好ましく採用される。

【0076】

糖衣材料の種類は特に制限されず、錠剤への糖衣処理に従来から用いられている糖衣材料などのいずれもが使用でき、例えば、グラニュー糖、アラビアガムやゼラチンなどの増粘剤、卵殻カルシウム、焼成牛骨粉などを含有する糖衣材料を用いることができる。

【0077】

糖衣を施した錠剤は、そのまま流通、販売してもよいが、さらに着色を施すことにより、より綺麗で商品価値の高いものとすることができる。その際の着色方法は特に制限されず、錠剤の表面に着色を施す従来既知の方法と同様にして行うことができる。また、着色後に艶だし処理を行うことによって、錠剤の外観を一層良好なものにすることができる。艶だしは、例えばカルナウバロウなどのような艶だし剤を用いて行うことができる。これにより得られる本実施形態の錠剤は、選別、計量、包装などを行うことによって出荷される。

【実施例】

【0078】

以下に、本発明を実施例を挙げて説明するが、本発明は以下の実施例にのみ限定されるものではない。

【0079】

＜＜消化実験＞＞
（１）卵殻膜含有粉末サンプルＡの準備
卵殻膜含有粉末サンプルＡとして、キューピー株式会社のＥＭパウダー３００を用いた。このサンプルは、７０メッシュ（目開きで約２１３μｍ前後）で９０％以上通過した粒度を有するものである。なお、粒径を測定したところ体積最大粒子径は２１３μｍ、体積平均粒子径は３５μｍであった。

【0080】

（２）卵殻膜含有粉末サンプルＢの準備
卵殻膜含有粉末サンプルＢとして、ＥＭパウダー３００をジェットミルで粉砕したものを用いた。なお、ジェットミルとしてはシングルトラックジェットミル（株式会社セイシン企業製、ＦＳ−４）を用いて、風量：１．２ｍ^３／ｍｉｎ、動力：１１ｋｗにて、体積最大粒子径が３２５メッシュ（目開きで約４５μｍ）程度となるまで粉砕を実施した。

【0081】

（３）卵殻膜含有粉末サンプルＣの準備
卵殻膜含有粉末サンプルＣを以下として、ＥＭパウダー３００をジェットミルで粉砕したものを用いた。なお、ジェットミルとしてはシングルトラックジェットミル（株式会社セイシン企業製、ＦＳ−４）を用いて、風量：１．２ｍ^３／ｍｉｎ、動力：１１ｋｗにて、体積最大粒子径が８００メッシュ（目開きで約２０μｍ）程度となるまで粉砕を実施した。なお、粉砕後の粒径を測定したところ体積最大粒子径は１９．６μｍ、体積平均粒子径は５．８μｍであった。

【0082】

（４）消化テスト
２００倍に希釈した卵殻膜含有粉末サンプルＡの懸濁液０．８ｍｌを入れた試験管４本を準備した。次に、各々の試験管に消化酵素（豚膵臓由来のパクレアチン）を加えて３７℃でそれぞれ０分、３０分、６０分および１８０分加温した。その後、１００℃で５分間加熱し、反応停止後、１５００ｒｐｍで１０分間遠心分離処理を行った後、上澄の可溶性タンパク質をＢｒａｄｆｏｒｄ法により測定した。測定結果は、牛血清アルブミンを標準にして換算した。なお、ブランクとして、懸濁液の代わりに０．１Ｍのリン酸緩衝液を用いた。また、同様のテストを、卵殻膜含有粉末サンプルＢ、Ｃについても実施した。

【0083】

（５）評価結果
各卵殻膜含有粉末サンプルの懸濁液に消化酵素を加えて３７℃で加温した際に、検出された可溶性タンパク質を加温時間に対して整理した結果を表１に示す。表１から明らかなように卵殻膜含有粉末サンプルＣを分散させた懸濁液に消化酵素を加えた場合、卵殻膜含有粉末サンプルＡ，Ｂを分散させた懸濁液に消化酵素を加えた場合と比べて、約２０％前後も可溶性タンパク質の検出量が大きいことが分かった。これに対して、卵殻膜含有粉末サンプルＡを分散させた懸濁液に消化酵素を加えた場合と、卵殻膜含有粉末サンプルＢを分散させた懸濁液に消化酵素を加えた場合とでは、可溶性タンパク質の検出量に差異は見られなかった。

【0084】

【表1】

【0085】

＜＜錠剤の作製＞＞
（１）打錠用の顆粒の製造：
卵殻膜含有粉末サンプルＣ：２０．０
質量部、日食株式会社製「ワキシａ 」：１０．０質量部、松谷化学株式会社製「パインファイバー」：２０．０質量部、乳糖（メグレ社製）：２５．９質量部、卵殻カルシウム（キューピー株式会社製「カルホープ」）：１０質量部、β
− カロチン：５．０質量部、ビタミンＢ：２０．０５質量部、ビタミンＥ：０．０５質量部およびナイアシン：２．０質量部をＶ型混合機を用いて混合して原料混合物を調製した。次いで、その原料混合物９３．０質量部に対して、エチルアルコール１５質量部を混合し、これにより得られた混合物を、湿式造粒装置を用いて造粒し、次いで温度５０℃
で約１６時間乾燥して、打錠用の顆粒を製造した。

【0086】

（２）打錠：
次に、打錠用の顆粒１００質量部に対して、ビタミンＣを９質量部およびショ糖脂肪酸エステルを１質量部の割合で混合し、それにより得られた混合物を、打錠装置を使用して、１粒が２００ｍｇの裸錠を製造した。

【0087】

（３）保護コーティング：
次に、裸錠の表面に、コーティング装置を使用して、岐阜セラック株式会社製「セラック」の水溶液を塗布し、温度４０℃
で２時間乾燥して、保護コーティングされた錠剤（保護コーティング錠）を得た。

【0088】

（４）糖衣被覆：
十分に乾燥させた保護コーティング錠の表面に、糖衣被覆装置を使用して、糖衣用ペーストＡ（グラニュー糖７０質量部、アラビアガム３質量部、ゼラチン４質量部、卵殻カルシウム３質量部および水６５質量部を混合したペースト）を被覆した後、温度約４０℃で約４
時間乾燥した。その後、糖衣用ペーストＡに水を加えて希釈した糖衣用ペーストＢを調製した。さらに、糖衣用ペーストＡでコーティング処理および乾燥処理された錠剤の表面に、糖衣被覆装置を使用して、糖衣用ペーストＢを、被覆した後、温度約４０℃で約４
時間乾燥した。これにより糖衣用ペーストでコーティングされた錠剤（糖衣コーティング錠）を得た。

【0089】

（５）色付け：
糖衣コーティング錠の表面に、三栄源社製「ＳＲレッドＫ３」を含む着色液を塗布した後、４０〜５０℃で４時間乾燥して、赤色に着色した錠剤（着色錠）を製造した。

【0090】

（６）艶だし：
着色錠の表面に、カルナウバロウを用いて、艶だしを行った。これにより得られた錠剤１個の質量は４００ｍｇであり、錠剤１個当たり卵殻膜成分を約４０ｍｇの割合で含有していた。

【0091】

（７）選別−計量−包装：
艶出し処理を行った錠剤を選別して不良品を除き、製品検査後に計量し、乾燥剤を同封
した二重袋で包装した。なお、錠剤は、十分な硬度および形状保持性を有しており、選別
、検査、包装時に変形したり、崩壊したりすることがなく、取り扱い性に優れていた。

【0092】

＜＜卵殻膜粉末の摂取による肝障害に対する効果＞＞
（１）実験目的
鶏卵卵殻膜は、食品産業における副産物としてほとんどが廃棄されており、その有効利用が望まれている。この実験以前に、正常ラット肝臓におけるトランスクリプトーム（transcriptome）解析において、卵殻膜摂取が肝線維化に関わる遺伝子の発現に影響を与えることを見いだした。そこで、今回は、四塩化炭素誘発性肝障害ラットを用い、卵殻膜成分の長期摂取が肝障害の進行に対して効果があるかどうかを、他の研究者と共に検討した。

【0093】

（２）実験方法
３週齢Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラットを1週間予備飼育後、無作為に３群（Ｎ＝６）に分け、標準食（Ａ、Ｂ群）および卵殻膜粉末１％添加食（Ｃ群）で１３週間飼育した。Ｂ、Ｃ群には５０％四塩化炭素を１ｋｇにつき１ミリリットル（＝１ｍｌ／ｋｇ）の割合で、その体重に合わせ、週２回連続皮下投与し、肝障害を誘導した。Ａ群にはオリーブ油（１ｍｌ／ｋｇ）
をその体重に合わせ、同様に投与した。実験終了時に１２時間絶食後、頸動脈から採血し、肝臓等を摘出した。肝機能や脂質代謝に関わる血漿指標を測定した。肝臓から抽出したＲＮＡを実験群毎にプールした後、ＤＮＡマイクロアレイ解析（Rat Genome 230 v2.0, Affymetrix）に供し、炎症、線維化、酸化ストレス、脂質代謝関連の遺伝子の発現に注目して解析を行った。

【0094】

（３）結果
Ｃ群では、四塩化炭素投与により生じた、ａ．体重減少、ｂ．肝臓および腎臓の腫大、ｃ．上昇したアスパラギン酸アミノトランスファーゼ（aspartate aminotransferase（ＡＳＴ））や上昇したアラニンアミノトランスファーゼ（alanine aminotransferase（ＡＬＴ））の各活性、のそれぞれについて改善効果が認められた。同様に血漿中脂質、血漿Fischer ratioおよび肝臓中脂質のいずれも回復傾向を示した。一方、Ｂ群と比べ、Ｃ群に７９個の遺伝子が発現増加し、３３個の遺伝子が発現減少していた。これらの遺伝子に対してネットワーク解析を行った結果、卵殻膜摂取による肝臓への脂質蓄積抑制は、SREBP-1c調節シグナルの調節因子であるＳＨＰを介した経路等複数の経路が関わっていることが示唆された。さらに、Ｃ群では、抗炎症、抗酸化酵素のHeme Oxygenase- 1、その上流の調節遺伝子ＡＰ−１、ＪＵＮの発現が上昇している事が明らかとなった。これは四塩化炭素により誘発された酸化ストレスから生体を保護するための応答であることが推察された。

【0095】

＜＜８００メッシュの卵殻膜微粉末の摂取効果＞＞
（１）実験目的
これまでに、ラットにおいて鶏卵卵殻膜成分の長期摂取が四塩化炭素誘発性肝障害を改善することが報告されている。また、トランスクリプトーム解析によりその作用には酸化ストレス低減が関与している可能性が示されている。そこで、今回は、そのメカニズムを更に明瞭にするため、長期および短期の卵殻膜の摂取が生体内過酸化脂質生成に影響を及ぼすかを、他の研究者と共に検討した。

【0096】

（２）実験方法
３週齢Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラットを1週間予備飼育後、無作為に３群（Ｎ＝６）に分け、標準食（Ａ、Ｂ群）および卵殻膜微粉末添加食（Ｃ群）を長期（１３週間）および短期（７週間）の間、給餌した。Ｂ、Ｃ群には、オリーブ油に溶解した５０％四塩化炭素（１ｍｌ／ｋｇ）をその体重に合わせ、週２回連続皮下投与し、酸化ストレスおよび肝障害を誘導した。Ａ群にはオリーブ油（１ｍｌ／ｋｇ）
をその体重に合わせ、同様に投与した。

【0097】

なお、長期の摂取実験では、Ｃ群に、７０メッシュ卵殻膜微粉末１％を含む食餌で１３週間飼育した。７０メッシュ卵殻膜微粉末とは、ＥＭパウダー３００をジェットミルで粉砕し、７０メッシュ（目開きで約２１３μｍ前後）で９０％以上通過した粒度を有するものであり、体積最大粒子径は２１３μｍ（ミクロン）、体積平均粒子径は３５μｍのものである。短期の摂取実験では、Ｃ群に、より微少な８００メッシュの卵殻膜微粉末２％を含む食餌で７週間飼育した。８００メッシュの卵殻膜微粉末とは、ＥＭパウダー３００をジェットミルで粉砕し、体積最大粒子径が８００メッシュ（目開きで約２０μｍ）程度となるまで粉砕を実施したもので、粉砕後の体積最大粒子径は１９．６μｍ、体積平均粒子径は５．８μｍのものである。そして、実験終了時に１２時間絶食後、頸動脈から採血し、肝臓等を摘出した。肝機能指標や体内抗酸化酵素、およびチオバルビツール酸反応性物質（ＴＢＡＲＳ）値をそれぞれ測定した。

【0098】

（３）結果
いずれの飼育期間においても、Ｃ群では、四塩化炭素投与により生じた、ａ．体重減少、ｂ．肝臓および腎臓の腫大、ｃ．上昇したアスパラギン酸アミノトランスファーゼ（aspartate aminotransferase（ＡＳＴ））や上昇したアラニンアミノトランスファーゼ（alanine aminotransferase（ＡＬＴ））の各活性、のそれぞれについて改善効果が認められた。一方、血漿中のスーパーオキサイドジスムターゼ（superoxide dismutase）やカタラーゼ（catalase）など抗酸化酵素の濃度は変化しなかったが、血漿および肝臓中のチオバルビツール酸反応性物質（ＴＢＡＲＳ（Thiobarbituric acid reactive substances））の濃度が、卵殻膜長期摂取と卵殻膜短期摂取の各実験では、それぞれ約１５から２５％低下した。以上の結果から、卵殻膜は、四塩化炭素により誘発した過酸化脂質の生成を抑えることで、結果的に肝臓の炎症拡大、さらには、進行する肝障害を抑制している可能性が推察された。また、粒子径は小さい方、特に上述の８００メッシュの卵殻膜微粉末、が効果的であることが明らかになった。すなわち、体積平均粒子径が６μｍ以下または／および体積最大粒子径が２０μｍ以下の卵殻膜含有微粉末は、酸化ストレス抑制作用が大きく、肝臓の炎症、障害を大きく抑制する。