特許 6126542 新規組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6126542

(24)【登録日】2017年4月14日

(45)【発行日】2017年5月10日

(54)【発明の名称】新規組成物

(51)【国際特許分類】

   A01N 25/30 20060101AFI20170424BHJP

   A01N 59/00 20060101ALI20170424BHJP

   A01P 3/00 20060101ALI20170424BHJP

【ＦＩ】

   A01N25/30

   A01N59/00 Z

   A01P3/00

【請求項の数】4

【外国語出願】

【全頁数】17

(21)【出願番号】特願2014-27208(P2014-27208)

(22)【出願日】2014年2月17日

(65)【公開番号】特開2014-159420(P2014-159420A)

(43)【公開日】2014年9月4日

【審査請求日】2015年1月16日

(31)【優先権主張番号】1302867.5

(32)【優先日】2013年2月19日

(33)【優先権主張国】GB

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】514040848

【氏名又は名称】ライフクリーン・インターナショナル・アー・ベー

(74)【代理人】

【識別番号】110001173

【氏名又は名称】特許業務法人川口國際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】スタッファン・サンドストレーム

(72)【発明者】

【氏名】カール−グスタフ・ミリンゲル

【審査官】 早乙女 智美

(56)【参考文献】

【文献】 米国特許出願公開第２００８／００６７４７０（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 特開２００５−２８１６５１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表平０６−５０５２０７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許出願公開第２００９／００２８９６５（ＵＳ，Ａ１）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ０１Ｎ

Ａ０１Ｐ

Ａ６１Ｌ

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｐ

ＣＡｐｌｕｓ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

胞子形成菌の胞子を除去するための、約１から約４のｐＨを有する酸性水系組成物であって、
約１００から約２０００ｐｐｍの溶存二酸化塩素と、濡れ効果および胞子可溶化効果を有する界面活性剤系とを含み、該界面活性剤系は、酸性のｐＨにおいて酸化に安定な２種以上の炭化水素イオン性界面活性剤を含み、該炭化水素イオン性界面活性剤の内、２種以上の界面活性剤は、４個以上の炭素原子の炭化水素鎖長差を有し、２種以上の界面活性剤が、６から１８個の炭素原子を含むアルキル基を有するアミンオキシドである、組成物。

【請求項2】

１種の界面活性剤がＣ８アミンオキシドであり、１種の界面活性剤がＣ１２アミンオキシドである、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

１種の界面活性剤がオクチルジメチルアミンオキシドであり、１種の界面活性剤がラウリルジメチルアミンオキシドである、請求項２に記載の組成物。

【請求項4】

界面活性剤の量が、約０．２％（体積／体積）であり、ならびに本質的に等しい量のオクチルジメチルアミンオキシドおよびラウリルジメチルアミンオキシドを含む、請求項３に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、細菌の胞子形成の阻害に効果があるように適合された二酸化塩素の新規組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

二酸化塩素は公知の殺菌剤であり、１９５０年代から水洗浄および水処理に用いられている。二酸化塩素は周知の不安定な化合物であり、この理由は二酸化塩素が強力な酸化剤であるためである。二酸化塩素は一般的に、水溶液中に保存されている間は不安定であると考えられていることから、多くの技術的開示は、使用時に二酸化塩素を製造するためのシステムおよび装置を教示している。一般に用いられるものの一つは、速やかに使用可能な二酸化塩素製剤を製造するために、亜塩素酸ナトリウムの溶液と、強力な酸性溶液、例えば塩酸を含む酸性溶液とを組み合わせることである。ＷＯ２００７／０７９２８７（ＣＤＧ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．）は、製品の貯蔵寿命を延ばすべく、低濃度の二酸化塩素溶液を安定化するための方法を開示している。Ｗ０２００９／０５８５３０（Ｅｃｏｌａｂ）は、アニオン性界面活性剤と共に低濃度の二酸化塩素を示す組成物を開示しており、この組成物はコクシジウム寄生虫の不活性化における効果を示す。

【0003】

米国特許出願第２００９／００２８９６５号（Ｃｌｉｎｉｍａｘ Ｌｉｍｉｔｅｄ）は、使用時に二酸化塩素溶液を製造することができる多液型組成物を開示している。生じた組成物は、低濃度の二酸化塩素に加えて洗浄剤としてのラウリル硫酸ナトリウムを含み、ｐＨを約５．０に保持する。たとえ本文献が有望な結果を示したとされていても、ヘルスケア環境の現場で試験される場合には、関連製品および別の二酸化塩素放出製品は、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の胞子への効果が限定されると思われる（ＳＤ Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ他、ｉｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ、２０１２年、第８２巻、６４−６７頁参照）。この問題はＳ．Ａｌｉ他、ｉｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ、２０１１年、第７９巻、７８−７９頁でも確認されており、この文献では、胞子懸濁液のチューブ上で試験される際にたとえ市販の殺胞子製剤が殺胞子の必要条件を明白に満たしても市販の殺胞子製剤は表面上の胞子を十分に除去できないことが報告されている。効果的な殺菌剤ならびに表面に結合したクロストリジウム・ディフィシルおよび類似の病理学的胞子形成微生物の胞子に対する効果を確認する試験方法の両方が欠けていることは明らかである。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【特許文献1】国際公開第２００７／０７９２８７号

【特許文献2】国際公開第２００９／０５８５３０号

【特許文献3】米国特許出願第２００９／００２８９６５号明細書

【非特許文献】

【0005】

【非特許文献1】ＳＤ Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ他、ｉｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ、２０１２年、第８２巻、６４−６７頁

【非特許文献2】Ｓ．Ａｌｉ他、ｉｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ、２０１１年、第７９巻、７８−７９頁

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

従って、病院環境における表面上のクロストリジウム・ディフィシル等の病原性細菌の病原性胞子の形態である胞子も効果的に阻害するように適合された、適度に安定であるとともに低濃度である二酸化塩素溶液を提供することが強く望まれている。有利には、そのような殺菌溶液は、腐食性を弱めるとともに二酸化塩素に関する一般的な衛生的制限を考慮しつつ、特別に設計された衛生化領域への任意の移転を必要とすることなく人が多い病院環境内においても露出した表面への投与に便利であると同時に、保存および取り扱いが安全でなければならない。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明は、最も一般的な言葉では、胞子形成菌の胞子を除去するための酸性水系組成物であって、約１００から約２０００ｐｐｍの溶存二酸化塩素、濡れ効果および胞子可溶化効果の両方を有する界面活性剤系を含む酸性水系組成物に関する。本発明の組成物用の二酸化塩素の濃度範囲についての別の代表例は約１００から約１６００ｐｐｍであり、約１００から約１０００ｐｐｍであり、約５００から約１０００ｐｐｍである。本発明に係る組成物中の二酸化塩素の適切な濃度の例は約１００ｐｐｍであり、約２００ｐｐｍであり、約３００ｐｐｍであり、約４００ｐｐｍであり、約５００ｐｐｍであり、約６００ｐｐｍであり、約７００ｐｐｍであり、約８００ｐｐｍであり、約９００ｐｐｍであり、約１０００ｐｐｍであり、約１１００ｐｐｍであり、約１２００ｐｐｍであり、約１３００ｐｐｍであり、約１４００ｐｐｍであり、約１５００ｐｐｍであり、約１６００ｐｐｍである。ここで用語「約」は、組成物製品中の二酸化塩素の濃度が組成物製品の製造からその使用までにわずかに低下する可能性があるためという実態を示す。組成物は約１から約４のｐＨを一般的に有する。組成物は、ガラス、木材、金属および様々なプラスチック材料で形成された物体の表面上の、特に病院環境における表面上の細菌の胞子、特にクロストリジウム・ディフィシル等のクロストリジウム属の細菌種の胞子の除去に発明的な方法で適合されている。組成物は、キャビティもしくはマイクロキャビティまたは従来の殺菌剤が届き難い別の不規則な表面構造に付着する胞子の除去に特に適合されている。組成物は、１０分未満の短い接触時間でも組成物の殺菌能力を最大化しつつ殺菌プロセス中の環境への影響を最小化するように更に適合されている。本発明に文脈において用語除去は、胞子が破壊されており生き延びて増殖することができないことを意味する。

【0008】

これらの目的のために、組成物は、胞子に対して適度に強力な酸化攻撃を発揮する能力を備える有効量の二酸化塩素ならびに比較的低濃度でも二酸化塩素の殺菌能力を補助することにより様々な補完効果を備える界面活性剤を含む界面活性剤系を含む。従って、本発明の組成物は、組成物の濡れ効果に寄与する能力を備える１種以上の界面活性剤および胞子可溶化効果に寄与する１種以上の界面活性剤を含む。

【0009】

本文脈において「濡れ効果」は、組成物が表面へ塗布され表面に対して広がって密着膜を形成することに容易に適用可能であることを意味する。本発明の意味において「濡れ効果」は、二酸化塩素組成物が表面のキャビティに対して適切に広がり、溶存二酸化塩素と胞子との間での適切な除去接触を可能にすることに寄与する。

【0010】

また、本発明の全文脈において「可溶化効果」は、組成物が胞子の表面への付着を弱めるまたは除去する能力があることを意味する。「可溶化効果」は、表面から胞子を除去することを含む、組成物の「一般的な界面活性」効果に関し、二酸化塩素との接触を補助するのに寄与して胞子に化学的酸化攻撃を受けさせる。

【0011】

更に本文脈において、界面活性剤が「濡れ効果」に寄与するという用語は、界面活性剤が特定の「可溶化効果」も有することを除外せず、逆もまた同じである。意図する意味は、１種以上の界面活性剤が可溶化効果よりも濡れ効果により顕著に寄与しており、１種以上の界面活性剤が濡れ効果よりもより顕著な可溶化効果を有することである。

【0012】

更に大まかにいうと、特に列挙した二酸化塩素含有組成物において濡れ効果および可溶化効果を効果的に発揮するという要求を満たすために、界面活性剤系は、約１から約４の酸性ｐＨにおいて酸化に対して安定な２種以上の炭化水素イオン性界面活性剤を含み、これらの炭化水素イオン性界面活性剤の内、２種以上の界面活性剤が炭化水素鎖の長さにおいて差異を有する。適切な差異の例は４個以上の炭素原子である。

【0013】

本文脈において「炭化水素イオン性界面活性剤」は、炭化水素イオン性界面活性剤が酸性ｐＨにおいてイオン性であり、直鎖のまたは分岐した炭化水素鎖を含むと定義される。炭化水素鎖は飽和または不飽和であることができ、それにより直鎖または分岐したアルキル、アルケニルまたはアルキニルと称され得る。炭化水素鎖は、任意の表面活性に寄与するもしくは該表面活性を高めるまたは安定性を生じさせる基で更に置換され得る。炭化水素鎖は、アルコキシ鎖のように１個以上のヘテロ原子で更に中断され得る。イオン性界面活性剤についての文脈において、当業者は、何が炭化水素鎖を示すか、および炭化水素イオン性界面活性剤をベースとする様々な種類の界面活性剤がイオン基をもたらす同じ化学構造をベースとする場合に鎖長を変更することができることを明確に理解する。

【0014】

本文脈において「安定性」は、界面活性剤が約１−４の酸性ｐＨにおいて実質的に分解されず、界面活性剤が二酸化塩素により酸化され易くない、即ち「二酸化塩素に安定」であることを意味する。別の文脈において安定性は、輸送および保存中でも化学分解から実質的に安定であるが、沈殿、混濁または界面活性剤の機能もしくは組成物の任意の一般的な外観に影響を及ぼす任意の別の現象等の溶液中における任意の形態の物理的不安定化からも実質的に安定であることを意味する。

【発明を実施するための形態】

【0015】

一般的な態様において、本発明に係る二酸化塩素を含む組成物は、酸性ｐＨにおいて酸化に対して安定な２種以上の炭化水素イオン性界面活性剤を含む界面活性剤系を含み、２種以上の界面活性剤は、前述した望ましい特性を備えた界面活性剤系をもたらすために様々な鎖長の炭化水素鎖を有する。

【0016】

一態様において、本発明に係る組成物は、約１から約４のｐＨを有し、約１００から約２０００ｐｐｍの溶存二酸化塩素、濡れ効果および胞子可溶化効果を有する界面活性剤系を含む、胞子形成菌の胞子を除去するための酸性水系組成物に関し、界面活性剤系は、約１から約４のｐＨにおいて酸化に対して安定な２種以上の炭化水素イオン性界面活性剤を含み、これらの炭化水素イオン性界面活性剤の内、前記２種以上の界面活性剤が炭化水素鎖の長さにおいて４個以上の炭素原子の差異を有する。

【0017】

一態様において、２種以上の界面活性剤は、約０．０１から約２％（体積／体積）の量で存在し、例えば０．０２％から約２％（体積／体積）で存在し、約０．１から約１％（体積／体積）で存在する。

【0018】

一態様において、２種以上の界面活性剤は、約１から約４の範囲のｐＨにおいてカチオン性界面活性剤である。

【0019】

一態様において、本発明に係る組成物は、低いｐＨおよび二酸化塩素の存在下で安定なアミンオキシド等の２種以上のカチオン性界面活性剤を含む。本発明での使用に適したアミンオキシドとしてアルキルジ（低級アルキル）アミンオキシドが挙げられ、アルキルジ（低級アルキル）アミンオキシドでは、アルキル基は６−２０個の炭素原子を有することができ、好ましくは８−１８個の炭素原子を有することができ、飽和または不飽和の直鎖または分岐した鎖を有することができる。低級アルキル基は、１から７個の炭素原子を有する。例としてＣ８アミンオキシドおよびＣ１２アミンオキシドが挙げられ、一態様において、組成物は、Ｃ８アミンオキシドである１種の界面活性剤およびＣ１２アミンオキシドである１種の界面活性剤を含む。そのような界面活性剤の例として、オクチルジメチルアミンオキシドおよびラウリルジメチルアミンオキシドが挙げられる。

【0020】

別のアミンオキシドとしてアルキル（ジヒドロキシ低級アルキル）アミンオキシドが挙げられ、アルキル基は６−２０個の炭素原子を有することができ、好ましくは８−１８個の炭素原子を有することができ、飽和または不飽和の直鎖または分岐した鎖を有することができる。低級アルキル基は１から７個の炭素原子を有する。

【0021】

更に別のアミンオキシドとして、６−２０個の炭素原子を含む、好ましくは６から１２個の炭素原子を含むアルキル基を有するアルキルモルホリンオキシドが挙げられる。

【0022】

本発明の一態様において、組成物は、約１００から約２０００ｐｐｍの二酸化塩素、前述したように濡れ効果および可溶化効果の両方を確立するために様々な鎖長の炭化水素鎖を有する約０．１から約２（体積／体積）％の２種のカチオン性界面活性剤を含み、各カチオン性界面活性剤は、等しい量でまたはほぼ等しい量で組成物中に存在することができる。各カチオン性界面活性剤は、４個以上の炭素原子で鎖長が異なることができる。

【0023】

一態様において、組成物は約１００から約１６００ｐｐｍの二酸化塩素を含み、界面活性剤の量は、本質的に等しい量のオクチルジメチルアミンオキシドおよびラウリルジメチルアミンオキシドを含む約０．２％（体積／体積）である。

【0024】

本発明の一態様において、組成物は、約１から約４の範囲のｐＨにおいて安定なアニオン性界面活性剤である２種以上の界面活性剤を含む。アニオン性界面活性剤は、濡れ効果および可溶化効果の両方に寄与するように選択される。

【0025】

本発明の一態様において、組成物は、約１００から約１６００ｐｐｍの二酸化塩素、前述したように濡れ効果および可溶化効果の両方を確立するために様々な鎖長の炭化水素鎖を有する約０．１から約１（体積／体積）％の２種のアニオン性界面活性剤を含み、各アニオン性界面活性剤は、等しい量でまたはほぼ等しい量で組成物中に存在することができる。各アニオン性界面活性剤は、４個以上の炭素原子で鎖長が異なることができる。

【0026】

本発明の一態様において、２種以上のアニオン性界面活性剤は、アルキルサルフェート、アルキル鎖中に６から２５個の炭素原子またはアルキル鎖中に８から１９個の炭素原子を有する、アルキルスルホネート、アルキルアリールスルホネート（アルキルベンゼンスルホネート）およびアリールスルホネートの可溶性塩から成る群から選択される。

【0027】

一態様において、アニオン性界面活性剤は、アルキル鎖中に６から１９個の炭素原子を有するアルキル−ジフェニルオキシド−ジスルホネートまたはアルキル−フェニル／ジフェニル−スルホネートのナトリウム塩である。アニオン性界面活性剤の一例として、アルキルジフェニルオキシドジスルホネートおよび／またはアルキル（スルホフェノキシ）ベンゼンスルホネートが挙げられる。一例として、Ｄｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙから商品名Ｄｏｗｆａｘ３Ｂ２で販売されている製品に含まれるデシル（スルホフェノキシ）二ナトリウム塩が挙げられる。一例として、Ｄｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙから商品名Ｄｏｗｆａｘ８３９０で販売されている製品に含まれるモノおよびジヘキサデシルジスルホン化ジフェニルオキシド二ナトリウム塩が挙げられる。

【0028】

一態様において本発明は、表面と有効量の二酸化塩素および界面活性剤系中の２種以上の界面活性剤を含む組成物とを接触させることによる、表面上の胞子形成菌の胞子の除去方法に関し、１種以上の界面活性剤が、組成物が表面の全域に安全に密着して広がるために濡れ効果に寄与し、更に、１種以上の界面活性剤が、胞子に二酸化塩素の効果をより受けやすくさせるために胞子表面に直接的にまたは間接的に影響を及ぼすという意味で胞子の可溶化効果に寄与する。本文脈において、有効量は、本明細書で言及された任意の濃度または濃度範囲を意味する。また本文脈において、２種以上の界面活性剤は概説したように選択されることができ、本明細書の前記箇所において例示した任意の組成物で用いることができる。特に、２種以上の界面活性剤は炭化水素鎖の長さにおいて著しい差異を有しており、著しい差異は２から１２個の炭素基の差異を意味する。例示する差異は４個の炭素基である。更に本文脈において、表面に接触することは、胞子により汚染された表面または胞子により汚染されるリスクがあると考えられている表面を十分に覆うためのまたは該表面を十分に覆うことを目的とする本発明の係る組成物の表面への任意の投与または塗布を含む。本方法の特に好ましい有用性は、クロストリジウム属の胞子の除去であり、特にクロストリジウム・ディフィシルの胞子の除去である。

【0029】

説明した方法の一態様において、表面上の胞子形成菌の胞子の除去は、例えば１０分以下の限られた接触時間または例えば９分、８分、７分、６分、５分、４分、３分、２分、３０秒以下等の１分以下の接触時間中に既に開示したように有効量の任意の組成物を表面に接触させることに関する。

【0030】

任意の特定の理論に束縛されるものではないが、二酸化塩素および補完効果を備える様々な界面活性剤の説明した系の組み合わせを含む本発明は、表面に結合している胞子の除去に必須であると思われることが明らかである。組成物を表面の全領域に広げるための適切な濡れ効果に加えて、界面活性効果が、胞子と表面との間の接着が破壊されることにより得られる。更に、本発明に係る組成物は、胞子表面への直接的な可溶化効果を有すると思われ、該可溶化効果は胞子の完全性の欠如をもたらし、胞子を二酸化塩素の酸化攻撃の影響を受けやすくさせることができ、二酸化塩素の酸化攻撃を強化することができる。

【0031】

以下の例示的箇所において、試験は本発明の組成物および方法を用いて概説されており、該試験は、特に流行性事象中の臨床環境で通常直面する条件を超えるように設計された汚染レベルでの非常に厳密な条件において表面上の胞子の除去に対する有効性を検証する。

【実施例】

【0032】

［実施例１］
二酸化塩素組成物の製造
二酸化塩素は、該二酸化塩素の気体の爆発性に起因して従来の方法では気体で保存され得ないが、一般的に水に高溶解性である。しかしながら、二酸化塩素は極めて揮発性であり、二酸化塩素には、著しく失うことなく高濃度の二酸化塩素溶液を製造し、輸送し、保存することについて問題が残っている。本発明の文脈において、水系二酸化塩素組成物は、ＥＰＡ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ Ｍａｎｕａｌ Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ Ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔｓ ａｎｄ Ｏｘｉｄａｎｔ、１９９９年４月、第４章Ｃｈｌｏｒｉｎｅ Ｄｉｏｘｉｄｅ、４−１から４−４１頁に概説されている様々なプロトコルに従って製造され得る。

【0033】

本発明の１００から２０００ｐｐｍの溶存二酸化塩素を有する組成物を製造するために、二酸化塩素を、９％（重量／体積）のＨＣｌと、強酸性環境下で速やかに反応して二酸化塩素ＣｌＯ_２およびＮａＣｌを生成する７％（重量／体積）のＮａＣｌＯ_２（亜塩素酸ナトリウム）とを混合することによって製造する。

【0034】

約１６００ｐｐｍの二酸化塩素を含むプロトタイプのストック溶液５リットルを、３００ｍｌの９％（重量／体積）ＨＣｌと、４．４リットルの高純度水（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｍｉｌｌｉ−Ｑ）で希釈した３００ｍｌの７％（重量／体積）ＮａＣｌＯ_２（亜塩素酸ナトリウム）とを混合して調製した。

【0035】

製造時と以下の実施例に係る表面試験時との間での濃度の低下を補うために、ストック溶液を故意に約１０−２０％過剰な二酸化塩素で製造した。このため、１００−１６００ｐｐｍの範囲である試験中の例示した溶液の濃度値は名目値と見なされるべきであり、２０％まで変化する可能性があり、例えば該溶液の示されている濃度値から１０−２０％変化する可能性がある。

【0036】

［実施例２Ａ］
試験用の溶液を、
１８００ｍＬのストック溶液、
１．８ｍＬのＭａｃａｔ（登録商標）ＡＯ−８（約３０％オクチルジメチルアミンオキシド）、
１．８ｍＬのＭａｃａｔ（登録商標）ＡＯ−１２（約３０％ラウリルジメチルアミンオキシド）
を混合して、約０．１％（体積／体積）のＡＯ−８および約０．１％（体積／体積）のＡＯ−１２を含む、二酸化塩素が約１６００ｐｐｍでｐＨが約１の試験溶液にすることにより、ストック溶液から製造した。

【0037】

［実施例２Ｂ］
複数の試験溶液を、二酸化塩素の濃度が異なる実施例２Ａのカチオン性界面活性剤を用いて、実施例１に従って製造したストック溶液から製造した。

【0038】

実施例２の溶液からのアリコートを、約０．１％（体積／体積）のＡＯ−８および０．１％（体積／体積）のＡＯ−１２を含有するＭｉｌｌｉＱ水で２倍、４倍、８倍、１６倍に更に希釈した。試験溶液の最終セットは、１６００、８００、４００、２００および１００ｐｐｍのＣｌＯ_２および全量で０．２％（体積／体積）の界面活性剤を含有していた。

【0039】

［実施例３］
試験用の第２の溶液を、１０００ｍｌのストック溶液と、１ｍＬのＤＯＷＦＡＸ（登録商標）３Ｂ２（約３８％のベンゼンスルホン酸，デシル（スルホフェノキシ）−，二ナトリウム塩および約８％のベンゼンスルホン酸，オキシビス（デシル）−，二ナトリウム塩）ならびに１ｍＬのＤＯＷＦＡＸ（登録商標）８３９０（３８．５％のモノおよびジヘキサデシルジスルホン化ジフェニルオキシド二ナトリウム塩）とを混合して、約１６００ｐｐｍの二酸化塩素を含む約１のｐＨの試験溶液にすることにより、ストック溶液から製造した。

【0040】

［実施例４］
本実施例では、本発明に係る組成物が表面上の胞子形成菌に関する除去能力を示すかどうかを調べるための方法が概説されている。本実施例はまた、従来の抗菌剤とも比較し、従来の抗菌剤が相対的に無効果であることも裏付ける。

【0041】

表面上のクロストリジウム・ディフィシルの胞子の除去

【0042】

方法および材料

【0043】

胞子懸濁液
Ｃディフィシル胞子ＰＣＲリボタイプ０２３（ＥＣＤＣ／Ｃａｒｄｉｆｆ ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ）を凍結試料からＦａｓｔｉｄｉｏｕｓ Ａｎａｅｒｏｂｅ Ａｇａｒ（ＦＡＡＡＰ）が入っているプレートに移し、２日にわたり嫌気条件下で培養した。培養物を大気条件に移し、Ｃディフィシルのコロニーに胞子形成させた。胞子を採取して滅菌水（逆浸透（ＲＯ））中に溶解し、アルコールショック（７０％）に曝し、洗浄し、遠心分離し、胞子の懸濁液として回収した。胞子を、Ｂｕｒｋｅｒチャンバ中において、懸濁液中の約８０％の胞子に匹敵する２．４×１０^８個の胞子（即ち、試験表面上の胞子）まで計数した。

【0044】

寒天プレート
本実験において、Ｆａｓｔｉｄｉｏｕｓ Ａｎａｅｒｏｂｅ Ａｇａｒ（ＦＡＡＡＰ）にタウロコレート（１ｇ／ｌ）を添加し（ろ過に関するコントロールを除く）、Ｃ．ディフィシルに対する選択的寒天プレートを用いた。

【0045】

表面の調製
調製では、０．１ｍｌの胞子懸濁液を顕微鏡スライド、真ちゅうまたは銅の滅菌プレートに移した。胞子懸濁液が乾燥したら、０．２ｍｌの以下の溶液を添加した：
実施例２Ａに従って製造した溶液、
Ｖｉｒｋｏｎ １％、
エタノール ７０％、
滅菌ＲＯ水。

【0046】

溶液に１０分暴露した後、ガラスおよびプレートをそれぞれ５００ｍｌのガラスフラスコに移して希釈するとともに殺菌を中断した。フラスコを２００ｒｐｍで２０分にわたり回転させた。

【0047】

培養
回転させた各フラスコから０．１ｍｌを寒天プレートに移した（培養１）。試料をチューブ中において二段階で１／１０に希釈した。各チューブから、０．１ｍｌを寒天プレートに移した（培養２および３）。

【0048】

フラスコ中の溶液をろ過し、１００ｍｌの緩衝ペプトン水（ＰＥＮＡＬ）で３回すすいだ。ろ過を二段階で行なった。最初に１ｍｌをろ過し、次いでフラスコ中の溶液の残量（約２４９ｍｌ）をろ過した。ろ液を寒天プレート上で培養した（培養４および５）。

【0049】

２回、４０ｍｌの試料をろ液から採取した。これらを遠心分離して上清を廃棄し、沈殿物を０．１ｍｌの０．８５％ＮａＣｌ溶液中に再懸濁した。全量を寒天プレート上に移した。

【0050】

生存可能な胞子がガラスおよびプレートの表面上に残存しているかどうかを評価するために、これらに湿ったコットンチップを擦り付けた（「二重のＳ」形状に沿って全て擦り付けた）。チップを、何度か繰り返して１／１０に希釈した２ｍｌの前希釈ＰＹブロス中で培養し、寒天プレート（０．２ｍｌ／プレート）上で培養した（培養６から９）。

【0051】

全ての培養プレートを、２日にわたり３６℃の嫌気条件下で培養した。

【0052】

結果を以下の表１に示す。

【0053】

表１では、結果を、３種の異なる表面（ガラス、真ちゅう、銅）および４種の異なる試験溶液に対する培養１から９に関して示す。丸括弧内の結果は、フラスコ中におけるＣＦＵ（コロニー形成単位）の全量、即ち試験溶液による処理を生き延びてフラスコの回転中に表面から離れた胞子の量に関する。表１はまた、試験溶液の処理を生き延びているがフラスコの回転中に表面に付着したままである胞子の量に関する、未希釈のＰＹブロス中におけるＣＦＵの量も示す。

【0054】

表１は、実施例２に関する試験溶液がＣディフィシルの胞子を除去する優れた能力を有することを示す。また、実施例２Ａに係る試験溶液が、表面に付着し、この結果、除去が困難であるまたは従来の除去剤の影響を受け難い胞子を除去する能力を有することも重要である。

【0055】

表１の結果に加えて、ろ液から採取した試料からの培養では増殖が見られなかったことを確認した。

【0056】

【表1】

【0057】

［実施例５］
胞子懸濁液を有する滅菌顕微鏡スライド（ガラス表面）を実施例４に従って調製した。

【0058】

１６００、８００、４００、２００および１００ｐｐｍのＣｌＯ_２ならびに全量で０．２％（体積／体積）の界面活性剤を含有する、実施例２Ｂで調製した溶液を、実施例４に従ってガラス表面に塗布した。

【0059】

ガラススライドを実施例４と同じように処理し、試料を実施例４と同じように採取して培養した。

【0060】

結果を、１６００、８００、４００、２００および１００ｐｐｍのＣｌＯ_２を含む溶液に関して表２に示す。結果を表１と同じように示す。

【0061】

１００ｐｐｍのような極めて低濃度の二酸化塩素を有する本発明の組成物は、エタノールおよびＶｉｒｋｏｎ等の従来の薬剤と比較してＣディフィシルの胞子の除去効果が改善されていることは明らかである。結果はまた、本発明に係る組成物が様々な種類の表面上で組成物の効果を発揮する能力を有することも示す。

【0062】

表２の結果に加えて、ろ液から採取した試料からの培養では増殖が見られなかったことを確認した。

【0063】

【表2】

【0064】

［実施例６］
表面上のＣディフィシルの胞子の除去に関して、様々な種類および組み合わせの界面活性剤と二酸化塩素との組み合わせを評価するため、実施例６を設計した。以下の試験溶液を用いた：
滅菌ＲＯ水、
エタノール７０％、
１６００ｐｐｍの二酸化塩素を含む溶液ＬＣ１、
１６００ｐｐｍの二酸化塩素ならびに０．２％（体積／体積）のＲＤ１およびＲＤ２を含む溶液ＬＣ１＿１２、
１６００ｐｐｍの二酸化塩素ならびに０．２％（体積／体積）のＲＤ３およびＲＤ４を含む溶液ＬＣ１＿３４、
８００ｐｐｍの二酸化塩素を含む溶液ＬＣ２、
８００ｐｐｍの二酸化塩素および０．２％（体積／体積）のＲＤ１を含む溶液ＬＣ２＿１、
８００ｐｐｍの二酸化塩素および０．２％（体積／体積）のＲＤ２を含む溶液ＬＣ２＿２、
８００ｐｐｍの二酸化塩素および０．２％（体積／体積）のＲＤ３を含む溶液ＬＣ２＿３、
８００ｐｐｍの二酸化塩素および０．２％（体積／体積）のＲＤ３を含む溶液ＬＣ２＿４、
８００ｐｐｍの二酸化塩素ならびに０．２％（体積／体積）のＲＤ１およびＲＤ２を含む溶液ＬＣ２＿１２、
１６００ｐｐｍの二酸化塩素ならびに０．２％（体積／体積）のＲＤ３およびＲＤ４を含む溶液ＬＣ２＿３４。

【0065】

溶液を実施例２、２Ａおよび３に従って調製した。ＲＤ１およびＲＤ２は実施例３のアニオン性界面活性剤、商標ＤＯＷＦＡＸ３Ｂ２およびＤＯＷＦＡＸ８３９０をそれぞれ示す。ＲＤ３およびＲＤ４は、実施例２Ａのカチオン性界面活性剤、商標ＡＯ−８ＭａｃａｔおよびＡＯ−１２Ｍａｃａｔを示す。

【0066】

胞子懸濁液を実施例４に従って製造して計数した：
リボタイプ２５；８．０×１０^９個の胞子／ｍＬ（ガラス表面上に８．０×１０^８個の胞子）懸濁液中の約８０％の胞子。

【0067】

ガラス表面を、０．１ｍｌの胞子懸濁液を顕微鏡スライドに移すことにより調製した。懸濁液が乾燥した後、０．２ｍｌの試験溶液を１から１０分の塗布時間にわたりスライドに添加した。その後、ガラス表面を２５０ｍｌの０．８５％ＮａＣｌ溶液が入った５００ｍｌのガラスフラスコ中に配置し、２００ｒｐｍで２０分にわたり回転させた。

【0068】

観測したＣＦＵに関する培養の結果を表４に示し、該結果は、フラスコ中のＣＦＵの数および未希釈のＰＹブロス中のＣＦＵの数も丸括弧で示しており、回転中に表面から離れた、生き延びている胞子の数および回転中に表面から離れずに生き延びた胞子の数もそれぞれ示している。

【0069】

表３の結果に加え、ろ液から採取した試料からの培養では増殖が見られなかったことを確認した。表３は、胞子除去効果は、様々な補完効果を備える２種の界面活性剤を組み合わせた場合、単一の界面活性剤を含む溶液と比較して改善されたことを示す。

【0070】

【表3】

【0071】

［実施例７］
実施例７は、本発明に係る二酸化塩素溶液への様々な接触による試験を概説する。胞子懸濁液を、実施例４に従って製造して計数した：
リボタイプ２５；９．６×１０^８個の胞子／ｍＬ（ガラス表面上に９．６×１０^７個の胞子））懸濁液中の約８０％の胞子。

【0072】

ガラス表面を、０．１ｍｌの胞子懸濁液を顕微鏡スライドに移すことにより調製した。懸濁液が乾燥した後、０．２ｍｌの試験溶液を１から１０分の塗布時間にわたりスライドに添加した。その後、ガラス表面を２５０ｍｌの０．８５％ＮａＣｌ溶液が入った５００ｍｌのガラスフラスコ中に配置し、２００ｒｐｍで２０分にわたり回転させた。

【0073】

試験溶液は、
滅菌ＲＯ水 １０分、
エタノール７０％ １０分、
二酸化塩素１６００ １分、
二酸化塩素１６００ ２分、
二酸化塩素１６００ ３分、
二酸化塩素１６００ ４分、
二酸化塩素１６００ ５分、
二酸化塩素１６００ ６分、
二酸化塩素１６００ ７分、
二酸化塩素１６００ ８分、
二酸化塩素１６００ ９分、
二酸化塩素１６００ １０分であった。

【0074】

二酸化塩素を含む試験溶液を実施例２Ｂに従って調製し、該試験溶液は、１６００ｐｐｍの二酸化塩素ならびに同量のオクチルジメチルアミンオキシドおよびラウリルジメチルアミンオキシドを含む０．２％（体積／体積）のカチオン性界面活性剤を含む。回転後、フラスコの内容物を、実施例４による手順および寒天プレートを用いて処理して培養した。

【0075】

観測したＣＦＵに関する培養の結果を表４に示し、該結果は、フラスコ中のＣＦＵの数および未希釈のＰＹブロス中のＣＦＵの数も丸括弧で示しており、回転中に表面から離れた、生き延びている胞子の数および回転中に表面から離れずに生き延びた胞子の数もそれぞれ示している。

【0076】

表４の結果に加えて、ろ液から採取した試料からの培養では増殖が見られなかったことを確認した。

【0077】

表４の結果は、試験溶液は、非常に短い接触時間でも胞子の高い汚染表面に対して高効率であることを示す。また、１分以下の短い接触時間で、試験溶液は二酸化塩素に胞子除去効果を発揮させるための適切な効能を備える。

【0078】

胞子懸濁液（リボタイプ２５：４．８×１０^８個の胞子／ｍＬ（ガラス表面上に４．８×１０^７個の胞子）懸濁液中の約８０％の胞子）に基づく繰り返し試験は、同じ試験溶液を用いて１５秒の短い接触時間での有効性を示す。

【0079】

【表4】

【0080】

［実施例８］
実施例８は、実施例２Ａに従って製造した様々な濃度の界面活性剤を有する８００および１６００ｐｐｍの二酸化塩素溶液を用いた試験を概説する。胞子懸濁液を、実施例４に従って製造して計数した：
リボタイプ２５；８．０×１０^８個の胞子／ｍＬ（ガラス表面上に８．０×１０^７個の胞子）懸濁液中の約８０％の胞子。

【0081】

ガラス表面を、０．１ｍｌの胞子懸濁液を顕微鏡スライドに移すことにより調製した。懸濁液が乾燥した後、０．２ｍｌの試験溶液を２分の塗布時間にわたりスライドに添加した。その後、ガラス表面を２５０ｍｌの０．８５％ＮａＣｌ溶液が入った５００ｍｌのガラスフラスコ中にそれぞれ配置し、２００ｒｐｍで２０分にわたり回転させた。

【0082】

試験溶液は、
滅菌ＲＯ水、
エタノール７０％、
１６００ｐｐｍの二酸化塩素を含むＬＣ１Ａ＿２、
１６００ｐｐｍの二酸化塩素ならびに２％（体積／体積）のＲＤ３およびＲＤ４を含むＬＣ１Ｂ＿２、
１６００ｐｐｍの二酸化塩素ならびに０．０２％（体積／体積）のＲＤ３およびＲＤ４を含むＬＣ１Ｃ＿２、
１６００ｐｐｍの二酸化塩素ならびに０．２％（体積／体積）のＲＤ３およびＲＤ４を含むＬＣ１Ｅ＿２、
８００ｐｐｍの二酸化塩素を含むＬＣ２Ａ＿２、
８００ｐｐｍの二酸化塩素ならびに２％（体積／体積）のＲＤ３およびＲＤ４を含むＬＣ２Ｂ＿２、
８００ｐｐｍの二酸化塩素ならびに０．０２％（体積／体積）のＲＤ３およびＲＤ４を含むＬＣ２Ｃ＿２、
８００ｐｐｍの二酸化塩素ならびに０．２％（体積／体積）のＲＤ３およびＲＤ４を含むＬＣ２Ｅ＿２であった。

【0083】

ＲＤ３およびＲＤ４は、実施例２Ａのカチオン性界面活性剤、Ｍａｃａｔ（登録商標）ＡＯ−８およびＭａｃａｔ（登録商標）ＡＯ−１２を示す。

【0084】

回転後、フラスコの内容物を、実施例４による手順および寒天プレートを用いて処理して培養した。

【0085】

観測したＣＦＵに関する培養の結果を表５に示し、該結果は、フラスコ中のＣＦＵの数および未希釈のＰＹブロス中のＣＦＵの数も丸括弧で示しており、回転中に表面から離れた、生き延びている胞子の数および回転中に表面から離れずに生き延びた胞子の数もそれぞれ示している。

【0086】

表５の結果に加えて、ろ液から採取した試料からの培養では増殖が見られなかったことを確認した。

【0087】

表５は、０．２％（体積／体積）の濃度の二酸化塩素溶液が、二酸化塩素の両方の試験強度（８００および１６００ｐｐｍ）における高濃度および低濃度の両方の界面活性剤と比較して、表面上の胞子を除去するのにより有利な性能を有することを示す。結果はまた、二酸化塩素がその除去効果を発揮するのを補助する本界面活性剤の効能を裏付ける。

【0088】

【表5】