特許 6132848 ヒトＬＭＮＡを標的とするオリゴヌクレオチド類似体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6132848

(24)【登録日】2017年4月28日

(45)【発行日】2017年5月31日

(54)【発明の名称】ヒトＬＭＮＡを標的とするオリゴヌクレオチド類似体

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/7125 20060101AFI20170522BHJP

   C12N 15/113 20100101ALI20170522BHJP

   C07K 5/11 20060101ALI20170522BHJP

   C07K 7/06 20060101ALI20170522BHJP

   C07K 7/08 20060101ALI20170522BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20170522BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20170522BHJP

   A61K 47/50 20170101ALI20170522BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/7125ZNA

   C12N15/00 G

   C07K5/11

   C07K7/06

   C07K7/08

   A61P43/00 105

   A61K48/00

   A61P43/00 111

   A61K47/48

【請求項の数】22

【全頁数】101

(21)【出願番号】特願2014-546150(P2014-546150)

(86)(22)【出願日】2012年12月7日

(65)【公表番号】特表2015-505839(P2015-505839A)

(43)【公表日】2015年2月26日

(86)【国際出願番号】US2012068606

(87)【国際公開番号】WO2013086441

(87)【国際公開日】20130613

【審査請求日】2015年12月1日

(31)【優先権主張番号】61/568,590

(32)【優先日】2011年12月8日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】512304135

【氏名又は名称】サレプタ セラピューティクス， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】コール， リスザード

(72)【発明者】

【氏名】ベストウィック， リチャード キース

【審査官】 上條 肇

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１０／０４８５８６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２０１０−５３２１６８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１１／０６０３２０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００７／０４７９１３（ＷＯ，Ａ２）

【文献】 Science Translational Medicine，２０１１年１０月，Vol.3, Issue 106，p.1-11

【文献】 Gene Tools, LLC - Morpholino Antisense Oligos From Gene Tools: Superior Technology, Comprehensive Service，The Internet Archive [online]，Internet Archive，２０１１年１１月，ＵＲＬ，https://web.archive.org/web/20111105131436/http://www.gene-tools.com/

【文献】 Gregory,S.G. et al.，Homo sapiens chromosome 1, GRCh37.p5 Primary Assembly.，Genbank [online]，National Center for Biotechnology Information，２０１１年 ７月，Accession No.NC_000001 REGION: 156082546，ＵＲＬ，http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NC_000001.10?report=gbwithparts&log$=seqview&sat=16&satkey=3691223&from=156082546&to=156140089

【文献】 Nature Medicine，２００５年，Vol.11, No.4，p.440-445

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３１／７０８８ − ３１／７１３

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡの異常なスプライシングをモジュレートするのに使用するための、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物であって、前記オリゴヌクレオチドは、モルホリノサブユニット、および１つのサブユニットのモルホリノ窒素と隣接するサブユニットの５’環外炭素とを接合するリン含有サブユニット間連結から構成され、かつ以下：
（ｉ）実質的に荷電していない、ヌクレアーゼ耐性骨格を有し、
（ｉｉ）哺乳動物宿主細胞による取込みが可能であり、
２５〜４０塩基を含有し、かつ
配列番号４、５、１０、１１、１３、１４および１６のいずれか１つを含む標的化配列を有し、
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、リンカー部分を介して細胞透過性ペプチドに共有結合的に付着しており、前記リンカー部分は、グリシン、システイン、プロリン、６−アミノヘキサン酸（Ａｈｘ）、β−アラニン（Ｂ）およびＡｈｘ−Ｂから選択され、前記細胞透過性ペプチドは、配列番号３９〜５４から選択される、組成物。

【請求項2】

前記オリゴヌクレオチド中の前記モルホリノサブユニットが、下記の構造：

【化43】

に従ってリン含有サブユニット間連結によって接合しており、
式中、Ｚは、ＳまたはＯであり、
Ｘ＝ＮＲ^１Ｒ^２またはＯＲ^６であり、
Ｙ_１＝ＯまたはＮＲ^７であり、
Ｐｊは、プリンまたはピリミジン塩基対合部分であり、そして
それぞれの前記連結は、以下：
（ａ）荷電していない連結（ａ）であって、ここで、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^６、およびＲ^７のそれぞれは、水素および低級アルキルから独立に選択される、荷電していない連結（ａ）；
（ｂ１）カチオン性連結（ｂ１）であって、ここで、Ｘ＝ＮＲ^１Ｒ^２であり、Ｙ_１＝Ｏであり、ＮＲ^１Ｒ^２は、Ｒ^１Ｒ^２＝−ＣＨＲＣＨＲＮ（Ｒ^３）（Ｒ^４）ＣＨＲＣＨＲ−であるように、任意選択で置換されているピペラジノ基を表し、
各Ｒ^４は、Ｈ、ＣＨ_３であるかまたは存在せず、かつ
Ｒ^３は、Ｈ、低級アルキル、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、Ｚ−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および［Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ］_ｍＨから選択され、ここで、Ｚは、カルボニル（Ｃ（Ｏ））または直接結合であり、Ｌは、アルキル、アルコキシ、およびアルキルアミノから選択される結合を有する長さが１８原子までの任意選択のリンカーであり、Ｒ’は、天然アミノ酸またはその１もしくは２炭素ホモログの側鎖であり、かつｍは、１〜６である、カチオン性連結（ｂ１）；
（ｂ２）カチオン性連結（ｂ２）であって、ここで、Ｘ＝ＮＲ^１Ｒ^２であり、Ｙ_１＝Ｏであり、Ｒ^１＝ＨまたはＣＨ_３であり、かつＲ^２＝ＬＮＲ^３Ｒ^４Ｒ^５であり、ここで、Ｌ、Ｒ^３、およびＲ^４は、上記のように定義され、かつＲ^５は、Ｈ、低級アルキル、または低級（アルコキシ）アルキルである、カチオン性連結（ｂ２）；ならびに
（ｂ３）カチオン性連結（ｂ３）であって、ここで、Ｙ_１＝ＮＲ^７であり、Ｘ＝ＯＲ^６で
あり、かつＲ^７＝ＬＮＲ^３Ｒ^４Ｒ^５であり、ここで、Ｌ、Ｒ^３、およびＲ^４およびＲ^５は、上記のように定義され、かつＲ^６は、Ｈまたは低級アルキルである、カチオン性連結（ｂ３）；
から選択され、
少なくとも１つの前記連結は、カチオン性連結（ｂ１）、カチオン性連結（ｂ２）、およびカチオン性連結（ｂ３）から選択される、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

（ｉ）タイプ（ａ）の連結におけるＲ^１およびＲ^２のそれぞれが、メチルである；
（ｉｉ）少なくとも１つの連結が、タイプ（ｂ１）のものであり、各Ｒが、Ｈであり、Ｒ^４が、Ｈ、ＣＨ_３、または電子対であり、かつＲ^３が、Ｈ、ＣＨ_３、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、およびＣ（Ｏ）−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択される；
（ｉｉｉ）少なくとも１つの連結が、タイプ（ｂ１）のものであり、各Ｒが、Ｈであり、Ｒ^４が、電子対であり、かつＲ^３が、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２およびＣ（Ｏ）−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択される；
（ｉｖ）少なくとも１つの連結が、タイプ（ｂ１）のものであり、各Ｒが、Ｈであり、Ｒ^４が、電子対であり、かつＲ^３が、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２およびＣ（Ｏ）−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択される；そして任意選択で、Ｒ^３が、Ｃ（Ｏ）−Ｌ−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ_２であり、Ｌが、構造−（ＣＨ_２）_ｎ−を有する炭化水素であり、ｎが、１〜１２である；または
（ｖ）少なくとも１つの連結が、タイプ（ｂ１）のものであり、各Ｒが、Ｈであり、かつＲ^３およびＲ^４のそれぞれが独立に、ＨまたはＣＨ_３である、請求項２に記載の組成物。

【請求項4】

前記細胞透過性ペプチドが、前記リンカー部分を介してそのＣ末端において前記オリゴヌクレオチドの５’端または３’端に付着している、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項5】

アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物であって、前記オリゴヌクレオチドは、ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡの異常なスプライシングをモジュレートし、前記オリゴヌクレオチドは、骨格を含み、前記骨格は、サブユニット間連結によって接合されているモルホリノ環構造の配列を含み、前記サブユニット間連結は、１つのモルホリノ環構造の３’端と隣接するモルホリノ環構造の５’端とを接合し、各モルホリノ環構造は、前記オリゴヌクレオチドが、配列番号４、５、１０、１１、１３、１４および１６のいずれか１つを含む標的化配列を含む標的核酸に配列特異的様式で結合することができるように、塩基対合部分に結合しており、前記サブユニット間連結は、以下の一般構造（Ｉ）：

【化44】

またはその塩もしくは異性体を有し、前記サブユニット間連結（Ｉ）のそれぞれは、独立に、連結（Ａ）または連結（Ｂ）であり、
ここで連結（Ａ）について：
Ｗは、それぞれの出現において独立に、ＳまたはＯであり、
Ｘは、それぞれの出現において独立に、−Ｎ（ＣＨ_３）_２、−ＮＲ^１Ｒ^２、−ＯＲ^３または、

【化45】

であり、
Ｙは、それぞれの出現において独立に、Ｏまたは−ＮＲ^２であり、
Ｒ^１は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
Ｒ^２は、それぞれの出現において独立に、水素または−ＬＮＲ^４Ｒ^５Ｒ^７であり、
Ｒ^３は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^４は、それぞれの出現において独立に、水素、メチル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｚ−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２または−［Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ］_ｍＨであり、ここで、Ｚは、カルボニル（Ｃ（Ｏ））または直接結合であり、Ｒ’は、天然アミノ酸またはその１もしくは２炭素ホモログの側鎖であり、かつｍは、１〜６であり、
Ｒ^５は、それぞれの出現において独立に、水素、メチルまたは電子対であり、
Ｒ^６は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
Ｒ^７は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルまたはＣ_１〜Ｃ_６アルコキシアルキルであり、
Ｌは、アルキル、アルコキシまたはアルキルアミノ基、またはこれらの組合せを含む長さが１８原子までの任意選択のリンカーであり、そして
連結（Ｂ）について：
Ｗは、それぞれの出現において独立に、ＳまたはＯであり、
Ｘは、それぞれの出現において独立に、−ＮＲ^８Ｒ^９または−ＯＲ^３であり、
Ｙは、それぞれの出現において独立に、Ｏまたは−ＮＲ^１０であるか、あるいは
ＹおよびＷは、それぞれＯであり、
Ｒ^８は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ_２〜Ｃ_１２アルキルであり、
Ｒ^９は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アラルキルまたはアリールであり、
Ｒ^１０は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルまたは−ＬＮＲ^４Ｒ^５Ｒ^７であり、
ここで、Ｒ^８およびＲ^９は接合して、５〜１８員の単環式または二環式複素環を形成し得るか、あるいはＲ^８、Ｒ^９またはＲ^３はＲ^１０と接合して、５〜７員の複素環を形成し得、そしてＸが４−ピペラジノであるとき、Ｘは、下記の構造（ＩＩＩ）：

【化46】

を有し、式中、
Ｒ^１１は、それぞれの出現において独立に、Ｃ_２〜Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アミノアルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルカルボニル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルであり、かつ
Ｒは、それぞれの出現において独立に、電子対、水素またはＣ_１〜Ｃ_１２アルキルであり、かつ
Ｒ^１２は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アミノアルキル、−ＮＨ_２、−ＮＲ^１３Ｒ^１４、−ＮＲ^１３Ｒ^１４Ｒ^１５、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルカルボニル、オキソ、−ＣＮ、トリフルオロメチル、アミジル、アミジニル、アミジニルアルキル、アミジニルアルキルカルボニルグアニジニル、グアニジニルアルキル、グアニジニルアルキルカルボニル、コレート、デオキシコレート、アリール、ヘテロアリール、複素環、−ＳＲ^１３またはＣ_１〜Ｃ_１２アルコキシであり、ここで、Ｒ^１３、Ｒ^１４およびＲ^１５は、それぞれの出現において独立に、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルであり、そして
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、リンカー部分を介して細胞透過性ペプチドに共有結合的に付着しており、前記リンカー部分は、グリシン、システイン、プロリン、６−アミノヘキサン酸（Ａｈｘ）、β−アラニン（Ｂ）およびＡｈｘ−Ｂから選択され、前記細胞透過性ペプチドは、配列番号３９〜５４から選択される、医薬組成物。

【請求項6】

前記標的化配列が、配列番号４、５、１０、１１、１３、１４および１６のいずれか１つからなる、請求項１または５に記載の医薬組成物。

【請求項7】

前記標的化配列が、配列番号４からなる、請求項６に記載の医薬組成物。

【請求項8】

前記標的化配列が、配列番号５からなる、請求項６に記載の医薬組成物。

【請求項9】

前記標的化配列が、配列番号１０からなる、請求項６に記載の医薬組成物。

【請求項10】

前記標的化配列が、配列番号１１からなる、請求項６に記載の医薬組成物。

【請求項11】

前記標的化配列が、配列番号１３からなる、請求項６に記載の医薬組成物。

【請求項12】

前記標的化配列が、配列番号１４からなる、請求項６に記載の医薬組成物。

【請求項13】

前記標的化配列が、配列番号１６からなる、請求項６に記載の医薬組成物。

【請求項14】

式：

【化47】

の化合物またはその薬学的に許容される塩であって、式中：
Ｒは、リンカー部分を介して付着した細胞透過性ペプチドであり、前記リンカー部分は、グリシン、システイン、プロリン、６−アミノヘキサン酸（Ａｈｘ）、β−アラニン（Ｂ）およびＡｈｘ−Ｂから選択され、前記細胞透過性ペプチドは、配列番号３９〜５４から選択され、
各Ｐｊは、プリンまたはピリミジン塩基対合部分であり、一緒になって標的化配列を形成し、前記標的化配列は、
ａ）配列番号４（ＣＴＧＡＧＣＣＧＣＴＧＧＣＡＧＡＴＧＣＣＴＴＧＴＣ）、ここでＸは２３である、
ｂ）配列番号５（ＧＣＴＣＣＴＧＡＧＣＣＧＣＴＧＧＣＡＧＡＴＧＣＣＴ）、ここでＸは２３である、
ｃ）配列番号１０（ＡＧＡＴＧＧＧＴＣＣＡＣＣＣＡＣＣＴＧＧＧＣＴＣＣ）、ここでＸは２３である、
ｄ）配列番号１１（ＧＡＧＧＡＧＡＴＧＧＧＴＣＣＡＣＣＣＡＣＣＴＧＧＧ）、ここでＸは２３である、
ｅ）配列番号１３（ＡＡＧＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＧＡＴＧＧＧＴＣＣＡＣＣ）、ここでＸは２３である、
ｆ）配列番号１４（ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＧＡＴＧＧＧＴＣＣ）、ここでＸは２３である、および
ｇ）配列番号１６（ＡＣＴＧＧＡＧＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＧ）、ここでＸは２３である、から選択される、化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項15】

前記標的化配列が配列番号４（ＣＴＧＡＧＣＣＧＣＴＧＧＣＡＧＡＴＧＣＣＴＴＧＴＣ）であり、Ｘが２３である、請求項１４に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項16】

前記標的化配列が配列番号５（ＧＣＴＣＣＴＧＡＧＣＣＧＣＴＧＧＣＡＧＡＴＧＣＣＴ）であり、Ｘが２３である、請求項１４に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項17】

前記標的化配列が配列番号１０（ＡＧＡＴＧＧＧＴＣＣＡＣＣＣＡＣＣＴＧＧＧＣＴＣＣ）であり、Ｘが２３である、請求項１４に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項18】

前記標的化配列が配列番号１１（ＧＡＧＧＡＧＡＴＧＧＧＴＣＣＡＣＣＣＡＣＣＴＧＧＧ）であり、Ｘが２３である、請求項１４に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項19】

前記標的化配列が配列番号１３（ＡＡＧＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＧＡＴＧＧＧＴＣＣＡＣＣ）であり、Ｘが２３である、請求項１４に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項20】

前記標的化配列が配列番号１４（ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＧＡＴＧＧＧＴＣＣ）であり、Ｘが２３である、請求項１４に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項21】

前記標的化配列が配列番号１６（ＡＣＴＧＧＡＧＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＧ）であり、Ｘが２３である、請求項１４に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項22】

請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物、請求項５〜１３のいずれか１項に記載の医薬組成物、または請求項１４〜２１のいずれか１項に記載の化合物を含む、ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡの異常なスプライシングをモジュレートすることにおいて使用するための、医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

配列表に関する記述
本出願と関連する配列表は、紙のコピーの代わりにテキスト形式で提供され、参照により本明細書に組み込まれている。配列表を含有するテキストファイルの名称は、１２０１７８＿４９４ＷＯ＿ ＳＥＱＵＥＮＣＥ＿ＬＩＳＴＩＮＧ．ｔｘｔである。テキストファイルは約１４ＫＢであり、２０１２年１２月６日に作製され、ＥＦＳウェブを介して電子的に提出されている。

【0002】

技術分野
本発明は全般的に、ヒトラミンＡを標的とするアンチセンス化合物に関する。

【背景技術】

【0003】

ハッチンソン−ギルフォード早老症候群（ＨＧＰＳ）は、早発の動脈硬化および血管平滑筋細胞（ＳＭＣ）の変性によって特徴付けられる稀な遺伝性障害である。ＨＧＰＳは、罹患した小児において加速度的な早期加齢として最も著しく現れる。ＨＧＰＳを有する小児は、進行性の症状、例えば、成長遅滞、脱毛症、皮下脂肪の喪失、および骨の異常を有する。平均寿命は１２歳であり、死亡の最も一般の原因は、心筋梗塞または脳卒中である。

【0004】

大部分のＨＧＰＳの症例は、ラミンＡ（ＬＭＮＡ）遺伝子における単一点変異に起因し、ラミンＡの切断されたスプライシング変異体であるプロジェリンの生成をもたらす。単一点変異は、ラミンＡ（ＬＭＮＡ）遺伝子のエキソン１１における新規のサイレント置換（１８２４Ｃ＞Ｔ、Ｇｌｙ６０８Ｇｌｙ）である。置換は潜在的スプライスドナー部位を活性化し、これは５０個のアミノ酸の内部欠失を伴うドミナントネガティブ変異体であるラミンＡタンパク質の産生をもたらす。プロジェリンと称される変異タンパク質は、核膜上に蓄積し、特徴的な核の小疱形成をもたらす（ＳｃａｆｆｉｄｉおよびＭｉｓｔｅｌｉ、２００５年；Ｃａｏ、Ｂｌａｉｒら、２０１１年）。

【0005】

異常なスプライシングは、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴヌクレオチド（ＰＭＯ）、またはさらに具体的には、スプライススイッチングオリゴヌクレオチド（ｓｐｌｉｃｅ−ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ）（ＳＳＯ）を使用して補正することができることは公知である。ＳＳＯは、部位において、または部位の近くにおいてハイブリダイズすることによって異常なスプライシング部位をブロックし、それによって細胞のスプライシング機構によって認識されることを防止する。好ましいＳＳＯは、ヌクレアーゼに対して耐性であり、このように得られた二本鎖構造は、リボヌクレアーゼＨによるＲＮＡ切断の可能性を排除する。サラセミアおよびデュシェンヌ型筋ジストロフィーについて、ＳＳＯはスプライシングパターンをインビトロおよびインビボの両方で効果的に修復することが示されてきた（Ｋｉｎａｌｉ、Ａｒｅｃｈａｖａｌａ−Ｇｏｍｅｚａら、２００９年；Ｓｖａｓｔｉ、Ｓｕｗａｎｍａｎｅｅら、２００９年）。ＨＧＰＳと関連するＬＭＮＡの異常なスプライシングは、細胞培養物（ＳｃａｆｆｉｄｉおよびＭｉｓｔｅｌｉ、２００５年）において、ならびに関連する動物モデル（Ｏｓｏｒｉｏ、Ｎａｖａｒｒｏら、２０１１年）においての両方で、活性化された潜在的スプライス部位を標的とした修飾されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用して、異常なスプライシング事象の補正によって低減されることが示されてきた。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0006】

【非特許文献1】Ｓｃａｆｆｉｄｉ，Ｐ．およびＴ．Ｍｉｓｔｅｌｉ．Ｎａｔ Ｍｅｄ（２００５）１１（４）：４４０〜５

【非特許文献2】Ｋｉｎａｌｉ，Ｍ．、Ｖ．Ａｒｅｃｈａｖａｌａ−Ｇｏｍｅｚａら、Ｌａｎｃｅｔ Ｎｅｕｒｏｌ（２００９）８（１０）：９１８〜２８

【非特許文献3】Ｓｖａｓｔｉ，Ｓ．、Ｔ．Ｓｕｗａｎｍａｎｅｅら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ（２００９）１０６（４）：１２０５〜１０

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

ＨＧＰＳにおけるＬＭＮＡの役割を考慮すると、ＬＭＮＡプレｍＲＮＡのスプライシングをモジュレートし、プロジェリンの発現を排除するオリゴヌクレオチドが必要とされている。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明の実施形態は全般的に、ＬＭＮＡプレｍＲＮＡの異常なスプライシングをモジュレートする組成物に関する。例えば、一実施形態にしたがって、ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡの異常なスプライシングをモジュレートするのに使用するためのアンチセンスオリゴヌクレオチドが提供され、このオリゴヌクレオチドは、モルホリノサブユニット、および１つのサブユニットのモルホリノ窒素と隣接するサブユニットの５’環外炭素とを接合するリン含有サブユニット間連結から構成され、かつ
（ｉ）実質的に荷電していない、ヌクレアーゼ耐性骨格を有し、
（ｉｉ）哺乳動物宿主細胞による取込みが可能であり、
（ｉｉｉ）約１２〜４０のヌクレオチド塩基を含有し、かつ
（ｉｖ）ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１０、イントロン１０、エキソン１１、またはこれらの組合せに対して相補的である少なくとも約１２の連続的なサブユニットの標的化配列を有する。

【0009】

より特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの標的化配列は、ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位の上流の塩基に対して相補的である。他の特定の実施形態において、標的化配列は、ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位の下流の塩基に対して相補的である。また他の特定の実施形態において、標的化配列は、ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位と重複しない。

【0010】

さらなる実施形態において、本発明の方法において使用されるオリゴヌクレオチド中の標的化配列は、１８２４Ｃ＞Ｔ変異と重複しない。

【0011】

別の特定の実施形態において、標的化配列の最も３’側の塩基は、ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位の約１〜３０塩基下流であるＬＭＮＡエキソン１１中の塩基に対して相補的である。

【0012】

別の特定の実施形態において、標的化配列の最も３’側の塩基は、ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位の約１〜３０塩基下流であるＬＭＮＡエキソン１１中の塩基に対して相補的である。

【0013】

また別の特定の実施形態において、標的化配列の最も３’側の塩基は、ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位の約１０〜４０塩基上流であるＬＭＮＡエキソン１１中の塩基に対して相補的である。

【0014】

また別の特定の実施形態において、標的化配列の最も３’側の塩基は、ＬＭＮＡエキソン１１の約１〜６０塩基上流であるＬＭＮＡイントロン１０中の塩基に対して相補的である。

【0015】

別の特定の実施形態において、標的化配列の最も３’側の塩基は、ＬＭＮＡイントロン１０の約１〜３０塩基上流であるＬＭＮＡエキソン１０中の塩基に対して相補的である。

【0016】

また別の特定の実施形態において、標的化配列は、ＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１０および１１のスプライスドナー（ＳＤ）部位またはスプライスアクセプター（ＳＡ）部位のスプライスジャンクションと重複する領域に対して相補的であり、かつプロセシングを受ける前のｍＲＮＡのエキソン領域の一部およびイントロン領域の一部に対して相補的である。

【0017】

オリゴヌクレオチドの標的化配列は、本発明のさらにより特定の実施形態において、配列番号３〜３４のいずれか１つの、少なくとも１２の連続的な塩基に対して相補的であるか、または配列番号３〜３４のいずれか１つに対して少なくとも９０％同一であるか、または配列番号３〜３４のいずれか１つを含むか、または配列番号３〜３４のいずれか１つからなる。

【0018】

オリゴヌクレオチドの標的化配列は、本発明のさらにより特定の実施形態において、配列番号３〜７もしくは１４〜１６のいずれか１つの、少なくとも１２の連続的な塩基に対して相補的であるか、または配列番号３〜７もしくは１４〜１６のいずれか１つに対して少なくとも９０％同一であるか、または配列番号３〜７もしくは１４〜１６のいずれか１つを含むか、または配列番号３〜７もしくは１４〜１６のいずれか１つからなる。

【0019】

オリゴヌクレオチドの標的化配列は、本発明のさらにより特定の実施形態において、配列番号４の、少なくとも１２の連続的な塩基に対して相補的であるか、または配列番号４に対して少なくとも９０％同一であるか、または配列番号４を含むか、または配列番号４からなる。

【0020】

本発明の他のより特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの標的化配列は、配列番号１１の、少なくとも１２の連続的な塩基に対して相補的であるか、または配列番号１１に対して少なくとも９０％同一であるか、または配列番号１１を含むか、または配列番号１１からなる。

【0021】

他の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴヌクレオチド（ＰＭＯ）、または１つもしくは複数のピペラジン含有サブユニット間連結を含むＰＭＯ（ＰＭＯプラス）、またはＰＭＯ−Ｘオリゴヌクレオチドである。

【0022】

本発明の特定の実施形態による例示的なモルホリノサブユニットは、下記の構造：

【0023】

【化1】

【0024】

に従ってホスホロジアミデート連結によって接合しており、式中、
Ｚは、ＳまたはＯであり、
Ｘ＝ＮＲ^１Ｒ^２またはＯＲ^６であり、
Ｙ＝ＯまたはＮＲ^７であり、
それぞれの前記連結は、以下：
（ａ）荷電していない連結（ａ）［Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^６、およびＲ^７のそれぞれは、水素および低級アルキルから独立に選択される］；
（ｂ１）カチオン性連結（ｂ１）［Ｘ＝ＮＲ^１Ｒ^２であり、Ｙ＝Ｏであり、ＮＲ^１Ｒ^２は、Ｒ^１Ｒ^２＝−ＣＨＲＣＨＲＮ（Ｒ^３）（Ｒ^４）ＣＨＲＣＨＲ−であるように、任意選択で置換されているピペラジノ基を表し、
各Ｒ^４は、Ｈ、ＣＨ_３であるかまたは存在せず、
Ｒ３は、Ｈ、低級アルキル、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、Ｚ−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および［Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ］_ｍＨから選択され、Ｚは、カルボニル（Ｃ（Ｏ））または直接結合であり、Ｌは、アルキル、アルコキシ、およびアルキルアミノから選択される結合を有する長さが１８原子までの任意選択のリンカーであり、Ｒ’は、天然アミノ酸またはその１もしくは２炭素ホモログの側鎖であり、ｍは、１〜６である］；
（ｂ２）カチオン性連結（ｂ２）［Ｘ＝ＮＲ^１Ｒ^２であり、Ｙ＝Ｏであり、Ｒ^１＝ＨまたはＣＨ_３であり、Ｒ^２＝ＬＮＲ^３Ｒ^４Ｒ^５であり、Ｌ、Ｒ^３、およびＲ^４は、上記のように定義され、Ｒ^５は、Ｈ、低級アルキル、または低級（アルコキシ）アルキルである］、ならびに
（ｂ３）カチオン性連結（ｂ３）［Ｙ＝ＮＲ^７であり、Ｘ＝ＯＲ^６であり、Ｒ７＝ＬＮＲ^３Ｒ^４Ｒ^５であり、Ｌ、Ｒ^３、およびＲ^４およびＲ^５は、上記のように定義され、Ｒ^６は、Ｈまたは低級アルキルである］
から選択され、
少なくとも１つの前記連結は、カチオン性連結（ｂ１）、（ｂ２）、および（ｂ３）から選択される。

【0025】

上記の構造のより特定の実施形態において、タイプ（ａ）の連結におけるＲ^１およびＲ^２のそれぞれは、メチルである。

【0026】

上記の構造の別の特定の実施形態において、少なくとも１つの連結は、タイプ（ｂ１）のものであり、各Ｒは、Ｈであり、Ｒ^４は、Ｈ、ＣＨ_３、または電子対であり、Ｒ^３は、Ｈ、ＣＨ_３、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、およびＣ（Ｏ）−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択される。

【0027】

上記の構造の別の特定の実施形態において、少なくとも１つの連結は、タイプ（ｂ１）のものであり、各Ｒは、Ｈであり、Ｒ^４は、電子対であり、Ｒ^３は、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２およびＣ（Ｏ）−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択される。

【0028】

上記の構造のまた別の特定の実施形態において、少なくとも１つの連結は、タイプ（ｂ１）のものであり、各Ｒは、Ｈであり、Ｒ^４は、電子対であり、Ｒ^３は、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２およびＣ（Ｏ）−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択される。

【0029】

上記の構造のまた別の特定の実施形態において、Ｒ^３は、Ｃ（Ｏ）−Ｌ−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２であり、Ｌは、構造−（ＣＨ_２）_ｎ−を有する炭化水素であり、ｎは、１〜１２である。

【0030】

上記の構造の別の特定の実施形態において、少なくとも１つの連結は、タイプ（ｂ１）のものであり、各Ｒは、Ｈであり、Ｒ^３およびＲ^４のそれぞれは独立に、ＨまたはＣＨ_３である。

【0031】

本発明の他の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、細胞透過性ペプチド、例えば、アルギニンに富んだペプチドに共有結合的に付着している。より特定の実施形態において、アルギニンに富んだペプチドは、１つまたは２つのアミノ酸リンカーを介して、そのＣ末端においてオリゴヌクレオチドの５’端に付着している。代わりに、別の実施形態において、ペプチドは、１つまたは２つのアミノ酸リンカーを介して、そのＣ末端においてオリゴヌクレオチドの３’端に付着している。好ましい実施形態において、細胞透過性ペプチドは、グリシンアミノ酸を介して、オリゴヌクレオチドに連結している。

【0032】

本発明のさらなる実施形態において、骨格を含むオリゴヌクレオチドを提供し、骨格は、サブユニット間連結によって接合されているモルホリノ環構造の配列を含み、サブユニット間連結は、１つのモルホリノ環構造の３’端と隣接するモルホリノ環構造の５’端とを接合し、各モルホリノ環構造は、オリゴヌクレオチドが、配列番号１〜３４のいずれか１つにおいて記載した配列の少なくとも１２塩基に対して相補的であるか、または配列番号３〜３４の任意の１つもしくは複数を含む標的化配列を含む標的核酸に配列特異的様式で結合することができるように、塩基対合部分に結合し、サブユニット間連結は、下記の一般構造（Ｉ）：

【0033】

【化2】

【0034】

またはその塩もしくは異性体を有し、サブユニット間連結（Ｉ）のそれぞれは、独立に、連結（Ａ）または連結（Ｂ）であり、
連結（Ａ）について：
Ｗは、それぞれの出現において独立に、ＳまたはＯであり、
Ｘは、それぞれの出現において独立に、−Ｎ（ＣＨ_３）_２、−ＮＲ^１Ｒ^２、−ＯＲ^３または、

【0035】

【化3】

【0036】

であり、
Ｙは、それぞれの出現において独立に、Ｏまたは−ＮＲ^２であり、
Ｒ^１は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
Ｒ^２は、それぞれの出現において独立に、水素または−ＬＮＲ^４Ｒ^５Ｒ^７であり、
Ｒ^３は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^４は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｚ−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２または−［Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ］_ｍＨであり、Ｚは、カルボニル（Ｃ（Ｏ））または直接結合であり、Ｒ’は、天然アミノ酸またはその１もしくは２炭素ホモログの側鎖であり、ｍは、１〜６であり、
Ｒ^５は、それぞれの出現において独立に、水素、メチルまたは電子対であり、
Ｒ^６は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
Ｒ^７は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルまたはＣ_１〜Ｃ_６アルコキシアルキルであり、
Ｌは、アルキル、アルコキシまたはアルキルアミノ基、またはこれらの組合せを含む長さが１８原子までの任意選択のリンカーであり、
連結（Ｂ）について：
Ｗは、それぞれの出現において独立に、ＳまたはＯであり、
Ｘは、それぞれの出現において独立に、−ＮＲ^８Ｒ^９または−ＯＲ^３であり、
Ｙは、それぞれの出現において独立に、Ｏまたは−ＮＲ^１０であり、
Ｒ^８は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ_２〜Ｃ_１２アルキルであり、
Ｒ^９は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アラルキルまたはアリールであり、
Ｒ^１０は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルまたは−ＬＮＲ^４Ｒ^５Ｒ^７であり、
Ｒ^８およびＲ^９は接合して、５〜１８員の単環式または二環式複素環を形成し得るか、あるいはＲ^８、Ｒ^９またはＲ^３はＲ^１０と接合して、５〜７員の複素環を形成し得、Ｘが４−ピペラジノであるとき、Ｘは、下記の構造（ＩＩＩ）：

【0037】

【化4】

【0038】

を有し、式中、
Ｒ^１１は、それぞれの出現において独立に、Ｃ_２〜Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アミノアルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルカルボニル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルであり、
Ｒは、それぞれの出現において独立に、電子対、水素またはＣ_１〜Ｃ_１２アルキルであり、
Ｒ^１２は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アミノアルキル、−ＮＨ_２、−ＮＲ^１３Ｒ^１４、−ＮＲ^１３Ｒ^１４Ｒ^１５、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルカルボニル、オキソ、−ＣＮ、トリフルオロメチル、アミジル、アミジニル、アミジニルアルキル、アミジニルアルキルカルボニルグアニジニル、グアニジニルアルキル、グアニジニルアルキルカルボニル、コレート、デオキシコレート、アリール、ヘテロアリール、複素環、−ＳＲ^１３またはＣ_１〜Ｃ_１２アルコキシであり、Ｒ^１３、Ｒ^１４およびＲ^１５は、それぞれの出現において独立に、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルであり、
サブユニット間連結の少なくとも１つは、連結（Ｂ）である。

【0039】

上記の構造のいくつかの実施形態において、サブユニット間連結の少なくとも５％は、連結（Ｂ）である。関連する実施形態において、サブユニット間連結の１０％〜５０％は、連結（Ｂ）である。別の関連する実施形態において、各連結（Ｂ）は、それぞれの出現において同じ構造を有する。上記の構造のまた別の特定の実施形態において、各Ｙおよび各Ｗは、Ｏである。

【0040】

本発明のまた他の実施形態は、ヒトＬＭＮＡ遺伝子におけるエキソン１０またはエキソン１１の１つまたは複数の塩基に対して相補的であり、かつ配列番号３〜３４のいずれか１つにおいて記載した配列に対して相補的である少なくとも１２の連続的な塩基を含有する、標的化配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。

【0041】

本発明のさらなる実施形態は、骨格を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供し、骨格は、タイプ（Ａ）、（Ｂ）、またはこれらの組合せのサブユニット間連結によって接合されているモルホリノ環構造の配列を含み、各モルホリノ環構造は、オリゴヌクレオチド化合物が、配列番号１〜３４のうちの少なくとも１２塩基に対して相補的であるか、または配列番号３〜３４の任意の１つもしくは複数を含む、標的配列を含む標的核酸に配列特異的様式で結合することができるように、塩基対合部分を支持し、オリゴヌクレオチドは、３’末端、５’末端を含み、下記の構造（ＸＶＩＩ）：

【0042】

【化5】

【0043】

またはその塩もしくは異性体を有し、
連結（Ａ）について：
Ｗは、それぞれの出現において独立に、ＳまたはＯであり、
Ｘは、それぞれの出現において独立に、−Ｎ（ＣＨ_３）_２、−ＮＲ^１Ｒ^２、−ＯＲ^３または、

【0044】

【化6】

【0045】

であり、
Ｙは、それぞれの出現において独立に、Ｏまたは−ＮＲ^２であり、
Ｒ^１は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
Ｒ^２は、それぞれの出現において独立に、水素または−ＬＮＲ^４Ｒ^５Ｒ^７であり、
Ｒ^３は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^４は、それぞれの出現において独立に、水素、メチル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｚ−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２または−［Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ］_ｍＨであり、Ｚは、カルボニル（Ｃ（Ｏ））または直接結合であり、Ｒ’は、天然アミノ酸またはその１もしくは２炭素ホモログの側鎖であり、ｍは、１〜６であり、
Ｒ^５は、それぞれの出現において独立に、水素、メチルまたは電子対であり、
Ｒ^６は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
Ｒ^７は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルまたはＣ_１〜Ｃ_６アルコキシアルキルであり、
Ｌは、アルキル、アルコキシまたはアルキルアミノ基、またはこれらの組合せを含む長さが１８原子までの任意選択のリンカーであり、
連結（Ｂ）について：
Ｗは、それぞれの出現において独立に、ＳまたはＯであり、
Ｘは、それぞれの出現において独立に、−ＮＲ^８Ｒ^９または−ＯＲ^３であり、
Ｙは、それぞれの出現において独立に、Ｏまたは−ＮＲ^１０であり、
Ｒ^８は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ_２〜Ｃ_１２アルキルであり、
Ｒ^９は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アラルキルまたはアリールであり、
Ｒ^１０は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルまたは−ＬＮＲ^４Ｒ^５Ｒ^７であり、
Ｒ^８およびＲ^９は接合して、５〜１８員の単環式または二環式複素環を形成し得るか、あるいはＲ^８、Ｒ^９またはＲ^３はＲ^１０と接合して、５〜７員の複素環を形成し得、Ｘが４−ピペラジノであるとき、Ｘは、下記の構造（ＩＩＩ）：

【0046】

【化7】

【0047】

を有し、式中、
Ｒ^１０は、それぞれの出現において独立に、Ｃ_２〜Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アミノアルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルカルボニル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルであり、
Ｒ^１１は、それぞれの出現において独立に、電子対、水素またはＣ_１〜Ｃ_１２アルキルであり、
Ｒ^１２は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アミノアルキル、−ＮＨ_２、−ＮＲ^１３Ｒ^１４、−ＮＲ^１３Ｒ^１４Ｒ^１５、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルカルボニル、−ＣＮ、トリフルオロメチル、アミジル、アミジニル、アミジニルアルキル、アミジニルアルキルカルボニル、グアニジニル、グアニジニルアルキル、グアニジニルアルキルカルボニル、コレート、デオキシコレート、アリール、ヘテロアリール、複素環、−ＳＲ^１３またはＣ_１〜Ｃ_１２アルコキシであり、Ｒ^１３、Ｒ^１４およびＲ^１５は、それぞれの出現において独立に、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルであり、
Ｒ^１７は、それぞれの出現において独立に、非存在、水素またはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^１８およびＲ^１９は、それぞれの出現において独立に、非存在、水素、細胞透過性ペプチド、天然もしくは非天然のアミノ酸、Ｃ_２〜Ｃ_３０アルキルカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^２１またはＲ^２０であり、
Ｒ^２０は、それぞれの出現において独立に、グアニジニル、ヘテロシクリル、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルキル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキル；Ｃ_６〜Ｃ_３０アリール、Ｃ_７〜Ｃ_３０アラルキル、Ｃ_３〜Ｃ_３０アルキルカルボニル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキルカルボニル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキルアルキルカルボニル、Ｃ_７〜Ｃ_３０アリールカルボニル、Ｃ_７〜Ｃ_３０アラルキルカルボニル、Ｃ_２〜Ｃ_３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキルオキシカルボニル、Ｃ_７〜Ｃ_３０アリールオキシカルボニル、Ｃ_８〜Ｃ_３０アラルキルオキシカルボニル、または−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ^２２）_２
であり、
Ｒ^２１は、１個もしくは複数の酸素またはヒドロキシル部分またはこれらの組合せを含むＣ_１〜Ｃ_３０アルキルであり、
各Ｒ^２２は独立に、Ｃ^６〜Ｃ^１２アリールオキシであり、
Ｂは、塩基対合部分であり、
Ｌ^１は、アルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、アルキルアミノ、アミド、エステル、カルボニル、カルバメート、ホスホロジアミデート、ホスホロアミデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏａｍｉｄａｔｅ）、ホスホロチオエート、ピペラジンおよびホスホジエステルから選択される結合を含む長さが１８原子までの任意選択のリンカーであり、
ｘは、０以上の整数であり、
Ｒ^１８またはＲ^１９の少なくとも１つは、Ｒ^２０であり、ただし、Ｒ^１７およびＲ^１８の両方が非存在ではない。

【0048】

本発明のこのような態様および他の態様は、下記の詳細な説明を参照することによって明らかである。このために、様々な参照文献を、本明細書において記載するが、これらはより詳細に、特定の背景的情報、手順、化合物および／または組成物を記載しており、それぞれは参照によりその全体が本明細書に組み込まれている。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡの異常なスプライシングをモジュレートするのに使用するためのアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドは、モルホリノサブユニット、および１つのサブユニットのモルホリノ窒素と隣接するサブユニットの５’環外炭素とを接合するリン含有サブユニット間連結から構成され、かつ以下：
（ｉ）実質的に荷電していない、ヌクレアーゼ耐性骨格を有し、
（ｉｉ）哺乳動物宿主細胞による取込みが可能であり、
（ｉｉｉ）約１２〜４０のヌクレオチド塩基を含有し、かつ
（ｉｖ）ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１０、イントロン１０、エキソン１１、またはこれらの組合せに対して相補的である少なくとも約１２の連続的なサブユニットの標的化配列を有する、オリゴヌクレオチド。
（項目２）
前記標的化配列が、ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位の上流の塩基に対して相補的である、項目１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目３）
前記標的化配列が、ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位の下流の塩基に対して相補的である、項目１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目４）
前記標的化配列が、前記ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位と重複しない、項目１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目５）
前記標的化配列が、１８２４Ｃ＞Ｔ変異と重複しない、項目１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目６）
前記標的化配列の最も３’側の塩基が、ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位の約１〜３０塩基下流であるＬＭＮＡエキソン１１中の塩基に対して相補的である、項目１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目７）
前記標的化配列の最も３’側の塩基が、ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位の約１０〜４０塩基上流であるＬＭＮＡエキソン１１中の塩基に対して相補的である、項目１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目８）
前記標的化配列の最も３’側の塩基が、ＬＭＮＡエキソン１１の約１〜６０塩基上流であるＬＭＮＡイントロン１０中の塩基に対して相補的である、項目１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目９）
前記標的化配列の最も３’側の塩基が、ＬＭＮＡイントロン１０の約１〜３０塩基上流であるＬＭＮＡエキソン１０中の塩基に対して相補的である、項目１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１０）
前記標的化配列が、ＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１０および１１のスプライスドナー（ＳＤ）部位またはスプライスアクセプター（ＳＡ）部位のスプライスジャンクションと重複する領域に対して相補的であり、かつプロセシングを受ける前の前記ｍＲＮＡのエキソン領域の一部およびイントロン領域の一部に対して相補的である、項目１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１１）
前記標的化配列が、配列番号３〜３４のいずれか１つを含む、項目１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１２）
前記標的化配列が、配列番号３〜７または１４〜１６のいずれか１つを含む、項目１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１３）
前記標的化配列が、配列番号４から本質的になる、項目１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１４）
前記標的化配列が、配列番号１１から本質的になる、項目１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１５）
前記オリゴヌクレオチドが、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴヌクレオチド（ＰＭＯ）、１つもしくは複数のピペラジン含有サブユニット間連結を含むＰＭＯ（ＰＭＯプラス）またはＰＭＯ−Ｘオリゴヌクレオチドである、項目１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１６）
前記オリゴヌクレオチドが、約１０％〜５０％のサブユニット間カチオン性連結を含有する、項目１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１７）
前記オリゴヌクレオチド中の前記モルホリノサブユニットが、下記の構造：

【化43】

に従ってホスホロジアミデート連結によって接合しており、
式中、Ｚは、ＳまたはＯであり、
Ｘ＝ＮＲ^１Ｒ^２またはＯＲ^６であり、
Ｙ＝ＯまたはＮＲ^７であり、そして
それぞれの前記連結は、以下：
（ａ）荷電していない連結（ａ）であって、ここで、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^６、およびＲ^７のそれぞれは、水素および低級アルキルから独立に選択される、荷電していない連結（ａ）；
（ｂ１）カチオン性連結（ｂ１）であって、ここで、Ｘ＝ＮＲ^１Ｒ^２であり、Ｙ＝Ｏであり、ＮＲ^１Ｒ^２は、Ｒ^１Ｒ^２＝−ＣＨＲＣＨＲＮ（Ｒ^３）（Ｒ^４）ＣＨＲＣＨＲ−であるように、任意選択で置換されているピペラジノ基を表し、
各Ｒ^４は、Ｈ、ＣＨ_３であるかまたは存在せず、かつ
Ｒ^３は、Ｈ、低級アルキル、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、Ｚ−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および［Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ］_ｍＨから選択され、ここで、Ｚは、カルボニル（Ｃ（Ｏ））または直接結合であり、Ｌは、アルキル、アルコキシ、およびアルキルアミノから選択される結合を有する長さが１８原子までの任意選択のリンカーであり、Ｒ’は、天然アミノ酸またはその１もしくは２炭素ホモログの側鎖であり、かつｍは、１〜６である、カチオン性連結（ｂ１）；
（ｂ２）カチオン性連結（ｂ２）であって、ここで、Ｘ＝ＮＲ^１Ｒ^２であり、Ｙ＝Ｏであり、Ｒ^１＝ＨまたはＣＨ_３であり、かつＲ^２＝ＬＮＲ^３Ｒ^４Ｒ^５であり、ここで、Ｌ、Ｒ^３、およびＲ^４は、上記のように定義され、かつＲ^５は、Ｈ、低級アルキル、または低級（アルコキシ）アルキルである、カチオン性連結（ｂ２）；ならびに
（ｂ３）カチオン性連結（ｂ３）であって、ここで、Ｙ＝ＮＲ^７であり、Ｘ＝ＯＲ^６で
あり、かつＲ^７＝ＬＮＲ^３Ｒ^４Ｒ^５であり、ここで、Ｌ、Ｒ^３、およびＲ^４およびＲ^５は、上記のように定義され、かつＲ^６は、Ｈまたは低級アルキルである、カチオン性連結（ｂ３）；
から選択され、
少なくとも１つの前記連結は、カチオン性連結（ｂ１）、カチオン性連結（ｂ２）、およびカチオン性連結（ｂ３）から選択される、項目１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１８）
タイプ（ａ）の連結におけるＲ^１およびＲ^２のそれぞれが、メチルである、項目１７に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１９）
少なくとも１つの連結が、タイプ（ｂ１）のものであり、各Ｒが、Ｈであり、Ｒ^４が、Ｈ、ＣＨ_３、または電子対であり、かつＲ^３が、Ｈ、ＣＨ_３、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、およびＣ（Ｏ）−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択される、項目１７に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２０）
少なくとも１つの連結が、タイプ（ｂ１）のものであり、各Ｒが、Ｈであり、Ｒ^４が、電子対であり、かつＲ^３が、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２およびＣ（Ｏ）−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択される、項目１７に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２１）
少なくとも１つの連結が、タイプ（ｂ１）のものであり、各Ｒが、Ｈであり、Ｒ^４が、電子対であり、かつＲ^３が、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２およびＣ（Ｏ）−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択される、項目１７に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２２）
Ｒ^３が、Ｃ（Ｏ）−Ｌ−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ_２であり、Ｌが、構造−（ＣＨ_２）_ｎ−を有する炭化水素であり、ｎが、１〜１２である、項目２１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２３）
少なくとも１つの連結が、タイプ（ｂ１）のものであり、各Ｒが、Ｈであり、かつＲ^３およびＲ^４のそれぞれが独立に、ＨまたはＣＨ_３である、項目１７に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２４）
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、細胞透過性ペプチドに共有結合的に付着している、項目１から２３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２５）
前記細胞透過性ペプチドが、アルギニンに富んだペプチドである、項目２４に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２６）
前記アルギニンに富んだペプチドが、１つまたは２つのアミノ酸リンカーを介してそのＣ末端において前記オリゴヌクレオチドの５’端に付着している、項目２５に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２７）
前記ペプチドが、１つまたは２つのアミノ酸リンカーを介してそのＣ末端において前記オリゴヌクレオチドの３’端に付着している、項目２５に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２８）
アンチセンスオリゴヌクレオチド、または前記アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物であって、前記オリゴヌクレオチドは、ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡの異常なスプライシングをモジュレートし、前記オリゴヌクレオチドは、骨格を含み、前記骨格は、サブユニット間連結によって接合されているモルホリノ環構造の配列を含み、前記サブユニット間連結は、１つのモルホリノ環構造の３’端と隣接するモルホリノ環構造の５’端とを接合し、各モルホリノ環構造は、前記オリゴヌクレオチドが、配列番号１〜３４のい
ずれか１つにおいて記載した配列の少なくとも１２塩基に対して相補的であるか、または配列番号３〜３４の任意の１つもしくは複数を含む標的化配列を含む標的核酸に配列特異的様式で結合することができるように、塩基対合部分に結合しており、前記サブユニット間連結は、以下の一般構造（Ｉ）：

【化44】

またはその塩もしくは異性体を有し、前記サブユニット間連結（Ｉ）のそれぞれは、独立に、連結（Ａ）または連結（Ｂ）であり、
ここで連結（Ａ）について：
Ｗは、それぞれの出現において独立に、ＳまたはＯであり、
Ｘは、それぞれの出現において独立に、−Ｎ（ＣＨ_３）_２、−ＮＲ^１Ｒ^２、−ＯＲ^３または、

【化45】

であり、
Ｙは、それぞれの出現において独立に、Ｏまたは−ＮＲ^２であり、
Ｒ^１は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
Ｒ^２は、それぞれの出現において独立に、水素または−ＬＮＲ^４Ｒ^５Ｒ^７であり、
Ｒ^３は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^４は、それぞれの出現において独立に、水素、メチル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｚ−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２または−［Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ］_ｍＨであり、ここで、Ｚは、カルボニル（Ｃ（Ｏ））または直接結合であり、Ｒ’は、天然アミノ酸またはその１もしくは２炭素ホモログの側鎖であり、かつｍは、１〜６であり、
Ｒ^５は、それぞれの出現において独立に、水素、メチルまたは電子対であり、
Ｒ^６は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
Ｒ^７は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルまたはＣ_１〜Ｃ_６アルコキシアルキルであり、
Ｌは、アルキル、アルコキシまたはアルキルアミノ基、またはこれらの組合せを含む長さが１８原子までの任意選択のリンカーであり、そして
連結（Ｂ）について：
Ｗは、それぞれの出現において独立に、ＳまたはＯであり、
Ｘは、それぞれの出現において独立に、−ＮＲ^８Ｒ^９または−ＯＲ^３であり、
Ｙは、それぞれの出現において独立に、Ｏまたは−ＮＲ^１０であり、
Ｒ^８は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ_２〜Ｃ_１２アルキルであり、
Ｒ^９は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２
アラルキルまたはアリールであり、
Ｒ^１０は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルまたは−ＬＮＲ^４Ｒ^５Ｒ^７であり、
ここで、Ｒ^８およびＲ^９は接合して、５〜１８員の単環式または二環式複素環を形成し得るか、あるいはＲ^８、Ｒ^９またはＲ^３はＲ^１０と接合して、５〜７員の複素環を形成し得、そしてＸが４−ピペラジノであるとき、Ｘは、下記の構造（ＩＩＩ）：

【化46】

を有し、式中、
Ｒ^１１は、それぞれの出現において独立に、Ｃ_２〜Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アミノアルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルカルボニル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルであり、かつ
Ｒは、それぞれの出現において独立に、電子対、水素またはＣ_１〜Ｃ_１２アルキルであり、かつ
Ｒ^１２は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アミノアルキル、−ＮＨ_２、−ＮＲ^１３Ｒ^１４、−ＮＲ^１３Ｒ^１４Ｒ^１５、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルカルボニル、オキソ、−ＣＮ、トリフルオロメチル、アミジル、アミジニル、アミジニルアルキル、アミジニルアルキルカルボニルグアニジニル、グアニジニルアルキル、グアニジニルアルキルカルボニル、コレート、デオキシコレート、アリール、ヘテロアリール、複素環、−ＳＲ^１３またはＣ_１〜Ｃ_１２アルコキシであり、ここで、Ｒ^１３、Ｒ^１４およびＲ^１５は、それぞれの出現において独立に、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルであり、そして
前記サブユニット間連結の少なくとも１つは、連結（Ｂ）である、オリゴヌクレオチドまたは医薬組成物。
（項目２９）
前記サブユニット間連結の少なくとも５％が、連結（Ｂ）である、項目２８に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目３０）
前記サブユニット間連結の１０％〜５０％が、連結（Ｂ）である、項目２８に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目３１）
各連結（Ｂ）が、それぞれの出現において同じ構造を有する、項目２８に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目３２）
各Ｙおよび各Ｗが、Ｏである、項目２８に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目３３）
前記標的化配列が、配列番号３〜７または１４〜１６のいずれか１つを含む、項目２８に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目３４）
前記標的化配列が、配列番号４から本質的になる、項目２８に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目３５）
前記標的化配列が、配列番号１１から本質的になる、項目２８に記載のオリゴヌクレオチド。

【図面の簡単な説明】

【0049】

【図1A】図１Ａは、ホスホロジアミデート連結を有する例示的なモルホリノオリゴマー構造を示す。

【図1B】図１Ｂは、図１Ａにおけるようなモルホリノオリゴマーを示すが、骨格連結は、（ピペラジノ）ホスホロジアミデート連結の形態で、１つの正に荷電している基を含有する。

【図1C】図１Ｃは、本発明の一実施形態によるアルギニンに富んだペプチドおよびアンチセンスオリゴマーの結合体を示す。

【図1D】図１Ｄ〜Ｇは、Ｄ〜Ｇと呼称される、例示的なモルホリノオリゴヌクレオチドの繰り返しサブユニットセグメントを示す。

【図1E】図１Ｄ〜Ｇは、Ｄ〜Ｇと呼称される、例示的なモルホリノオリゴヌクレオチドの繰り返しサブユニットセグメントを示す。

【図1F】図１Ｄ〜Ｇは、Ｄ〜Ｇと呼称される、例示的なモルホリノオリゴヌクレオチドの繰り返しサブユニットセグメントを示す。

【図1G】図１Ｄ〜Ｇは、Ｄ〜Ｇと呼称される、例示的なモルホリノオリゴヌクレオチドの繰り返しサブユニットセグメントを示す。

【図2】図２は、プロジェリンおよびラミンＡ／Ｃの免疫蛍光スクリーニングについての結果を示す。

【図3】図３は、ラミンＡおよびプロジェリンのウエスタン分析についての結果を示す。

【図4】図４は、ラミンＡおよびプロジェリンのＲＴ−ｑＰＣＲ分析についての結果を示す。

【図5】図５は、ラミンＡ、ラミンＣおよびプロジェリンのウエスタン分析についての結果を示す。

【発明を実施するための形態】

【0050】

本発明は、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド、およびこれを含有する医薬組成物ならびにインビトロ方法に関し、このオリゴヌクレオチドは、例えば、ＬＭＮＡプレｍＲＮＡのスプライシングをモジュレートすることによって、変異体ＬＭＮＡタンパク質ｍＲＮＡの発現を阻害する。

【0051】

定義
他に定義しない限り、本明細書において使用する全ての技術および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと同様または同等である任意の方法および材料を、本発明の実施または試験において使用することができるが、好ましい方法および材料を記載する。本発明の目的のために、下記の用語を、下記で定義する。

【0052】

冠詞「ａ」および「ａｎ」は、本明細書において、冠詞の文法的対象の１つまたは複数（すなわち、少なくとも１つ）について言及するために使用される。例として、「１つの要素」は、１つの要素または複数の要素を意味する。

【0053】

「約」とは、参照の分量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、サイズ、量、重量または長さに対して、３０％、２５％、２０％、２５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％または１％ほど変動する、分量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、サイズ、量、重量または長さを意味する。

【0054】

「コード配列」とは、遺伝子のポリペプチド産物のためのコードに寄与する任意の核酸配列を意味する。対照的に、「非コード配列」という用語は、遺伝子のポリペプチド産物のためのコードに寄与しない任意の核酸配列を指す。

【0055】

本明細書を通して、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という語は、記述したステップもしくは要素、またはステップもしくは要素の群を含むことを暗示するが、任意の他のステップもしくは要素、またはステップもしくは要素の群を排除することを暗示しないと理解される。

【0056】

「からなる」とは、「からなる」という語句に続く何らかを含み、これらに限定されることを意味する。したがって、「からなる」という語句は、列挙された要素が必要とされまたは必須であり、他の要素が存在し得ないことを示す。「から本質的になる」とは、この語句の後に列挙した任意の要素を含むことを意味し、列挙された要素について開示において特定された活性もしくは作用を妨害せず、またはこの活性もしくは作用に寄与しない他の要素に限定される。したがって、「から本質的になる」という語句は、列挙された要素が必要とされ、または必須であるが、他の要素は任意選択であり、他の要素が列挙された要素の活性または作用に具体的に影響を与えるかどうかによって、存在しても、または存在しなくてもよいことを示す。

【0057】

「相補的」および「相補性」という用語は、塩基対合則によって関連するポリヌクレオチド（すなわち、ヌクレオチドの配列）を指す。例えば、配列「Ａ−Ｇ−Ｔ」は、配列「Ｔ−Ｃ−Ａ」に対して相補的である。相補性は、「部分的」であり得、ここでは、核酸の塩基のいくつかのみが、塩基対合則によってマッチする。あるいは、核酸の間に「完全な」または「全体的」相補性が存在し得る。核酸鎖の間の相補性の程度は、核酸鎖の間のハイブリダイゼーションの効率および強度に対して有意な効果を有する。完全な相補性が所望であることが多い一方で、いくつかの実施形態は、標的ＲＮＡに関して、１つまたは複数ではあるが、好ましくは６つ、５つ、４つ、３つ、２つ、または１つのミスマッチを含むことができる。オリゴマー内の任意の場所におけるバリエーションが含まれる。特定の実施形態において、オリゴマーの末端近くの配列におけるバリエーションは一般に、内部におけるバリエーションより好ましく、存在する場合、典型的には、５’末端および／または３’末端の約６ヌクレオチド、５ヌクレオチド、４ヌクレオチド、３ヌクレオチド、２ヌクレオチドまたは１ヌクレオチド以内である。

【0058】

「細胞透過性ペプチド」または「ＣＰＰ」という用語は互換的に使用され、輸送ペプチド、担体ペプチド、またはペプチド伝達ドメインとまた称されるカチオン性細胞透過性ペプチドを指す。ペプチドは、本明細書に示されているように、所与の細胞培養集団の、中間の全ての整数を含めて、細胞の３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％において細胞透過を誘発する能力を有し、全身投与によってインビボで複数の組織内での巨大分子のトランスロケーションを可能とする。

【0059】

「アンチセンスオリゴマー」または「アンチセンス化合物」または「アンチセンスオリゴヌクレオチド」または「オリゴヌクレオチド」という用語は互換的に使用され、環状サブユニットの配列を指し、これはそれぞれが、サブユニット間連結によって連結される塩基対合部分を担持し、サブユニット間連結は、塩基対合部分がワトソン−クリック塩基対合によって核酸（典型的にはＲＮＡ）中の標的配列にハイブリダイズし、標的配列内で核酸：オリゴマーヘテロ二重鎖を形成することを可能とする。環状サブユニットは、リボースもしくは別のペントース糖、または特定の実施形態において、モルホリノ基（下記のモルホリノオリゴマーの記載を参照されたい）をベースとし得る。また意図されるのは、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、および２’−Ｏ−メチルオリゴヌクレオチド、および当技術分野において公知の他のアンチセンス薬剤である。

【0060】

このようなアンチセンスオリゴマーは、ｍＲＮＡの翻訳をブロックもしくは阻害し、または天然のプレｍＲＮＡスプライスプロセシングを阻害し、または標的とされたｍＲＮＡの分解を誘発するように設計することができ、このようなアンチセンスオリゴマーは、ハイブリダイズする標的配列に「向けられ」または「標的として」いると言われてもよい。特定の実施形態において、標的配列は、ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドン、プロセシングを受ける前のｍＲＮＡの３’もしくは５’スプライス部位、または分岐点の周囲の領域、またはこれらを含む領域である。標的配列は、エキソン内またはイントロン内または組合せであり得る。スプライス部位のための標的配列は、プロセシングを受ける前のｍＲＮＡ中の通常のスプライスアクセプタージャンクションの１〜約２５塩基対下流にその５’端を有するｍＲＮＡ配列を含み得る。スプライスのための好ましい標的配列は、スプライス部位を含むプロセシングを受ける前のｍＲＮＡの任意の領域であるか、またはエキソンコード配列内に完全に含有され、またはスプライスアクセプター部位もしくはドナー部位にまたがる。オリゴマーが上記の様式で標的の核酸を標的としているとき、オリゴマーはより一般に、生物学的に関連する標的、例えば、本発明において、ラミンＡタンパク質をコードするヒトＬＭＮＡ遺伝子プレｍＲＮＡを「標的として」いると言われる。例示的な標的化配列は、配列番号３〜３４を含む。

【0061】

含まれるのは、配列番号３〜３４の１つもしくは複数を含む、配列番号３〜３４の１つもしくは複数から本質的になる、または配列番号３〜３４の１つもしくは複数からなるアンチセンスオリゴヌクレオチドである。また含まれるのは、配列番号３〜３４の任意の１つに対して８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％（中間の全ての整数を含めて）の配列同一性もしくは配列相同性を有する改変体オリゴマー、および／または約１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０のヌクレオチドだけこれらの配列と異なる改変体、好ましくは、細胞におけるプロジェリン発現をモジュレートする改変体を含めた、これらのアンチセンスオリゴマーの改変体である。また含まれるのは、例えば、２〜５の荷電していない連結毎に約１つまで、例えば、１０の荷電していない連結毎に約４〜５つの本明細書に記載の適切な数のカチオン性連結もしくは他の修飾された連結を含み、かつ／またはまた本明細書に記載されているような付着したＡｒｇに富んだ細胞透過性輸送ペプチドを含む、配列番号３〜３４の任意の１つまたは複数のオリゴヌクレオチドである。

【0062】

「モルホリノオリゴマー」または「ＰＭＯ」（ホスホロアミデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄａｔｅ）モルホリノオリゴマーまたはホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー）という用語は、モルホリノサブユニット構造から構成されるオリゴヌクレオチド類似体を指し、（ｉ）構造は、１〜３個の原子長、好ましくは２個の原子長であり、好ましくは荷電しておらず、またはカチオン性であり、１つのサブユニットのモルホリノ窒素と隣接するサブユニットの５’環外炭素とを接合する、リン含有連結によって一緒に連結されており、（ｉｉ）各モルホリノ環は、塩基特異的水素結合によって、ポリヌクレオチド中の塩基に結合するのに有効なプリンまたはピリミジンまたは同等の塩基対合部分を担持する。バリエーションが結合または活性を妨害しない限り、この連結に対してバリエーションを作製することができる。例えば、リンに付着している酸素は、硫黄で置換し得る（チオホスホロジアミデート）。５’酸素は、アミノまたは低級アルキル置換アミノで置換されていてもよい。リンに付着しているペンダント窒素は、置換されていないか、（任意選択で置換された）低級アルキルで一置換、または二置換されていてもよい。下記のカチオン性連結についての考察をまた参照されたい。プリンまたはピリミジン塩基対合部分は典型的には、アデニン、シトシン、グアニン、ウラシル、チミンまたはイノシンである。モルホリノオリゴマーの合成、構造、および結合特徴は、これらの全てが参照により本明細書中に組み込まれている米国特許第５，６９８，６８５号、同第５，２１７，８６６号、同第５，１４２，０４７号、同第５，０３４，５０６号、同第５，１６６，３１５号、同第５，５２１，０６３号、および同第５，５０６，３３７号、ならびにＰＣＴ公開第ＰＣＴ／ＵＳ０７／１１４３５号（カチオン性連結）ならびにＵＳ０８／０１２８０４（改善された合成）において詳述されている。

【0063】

「ＰＭＯ＋」は、従前記載されてきた任意の数の（１−ピペラジノ）ホスフィニリデンオキシ、（１−（４−（ω−グアニジノ−アルカノイル））−ピペラジノ）ホスフィニリデンオキシ連結（Ａ２およびＡ３）を含むホスホロジアミデートモルホリノオリゴマーを指す（例えば、参照により本明細書中にその全体が組み込まれているＰＣＴ公開ＷＯ／２００８／０３６１２７を参照されたい）。

【0064】

「ＰＭＯ−Ｘ」は、少なくとも１つの（Ｂ）連結、または開示されている末端修飾、ならびに参照によりその全体が本明細書中に組み込まれているＷＯ２０１１／１５０４０８およびＵＳ２０１２／００６５１６９において開示されているようなものの少なくとも１つを含む、本明細書において開示されているホスホロジアミデートモルホリノオリゴマーを指す。本明細書において有用なさらなるＰＭＯ−Ｘホスホロジアミデートモルホリノオリゴマーは、参照により本明細書中にその全体が組み込まれている２０１１年１１月１８日に出願された米国特許仮出願第６１／５６１，８０６号において見出し得る。

【0065】

「ホスホロアミデート」基は、３個の付着した酸素原子および１個の付着した窒素原子を有するリンを含み、一方、「ホスホロジアミデート」基は、２個の付着した酸素原子および２個の付着した窒素原子を有するリンを含む。本明細書および同時係属中の米国特許出願第６１／３４９，７８３号および同第１１／８０１，８８５号に記載されているオリゴマーの荷電していないまたは修飾されたサブユニット間連結において、１個の窒素は、常に骨格鎖に対してペンダントである。ホスホロジアミデート連結における第２の窒素は典型的には、モルホリノ環構造における環窒素である。

【0066】

「チオホスホロアミデート（Ｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄａｔｅ）」または「チオホスホロジアミデート」連結は、それぞれホスホロアミデートまたはホスホロジアミデート連結であり、１個の酸素原子、典型的には骨格に対してペンダントである酸素は、硫黄で置き換えられている。

【0067】

「サブユニット間連結」は、２つのモルホリノサブユニット、例えば、構造（Ｉ）を接続している連結を指す。

【0068】

「荷電している」、「荷電していない」、「カチオン性」および「アニオン性」は、本明細書において使用する場合、概ね中性のｐＨ、例えば、約６〜８での化学部分の主な状態を指す。例えば、この用語は、生理学的ｐＨ、すなわち、約７．４での化学部分の主な状態を指し得る。

【0069】

「オリゴヌクレオチド類似体」という用語は、（ｉ）修飾された骨格構造、例えば、天然のオリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドにおいて見出される標準的なホスホジエステル連結以外の骨格、ならびに（ｉｉ）任意選択で、修飾された糖部分、例えば、リボース部分でもデオキシリボース部分でもなくモルホリノ部分を有するオリゴヌクレオチドを指す。オリゴヌクレオチド類似体は、ワトソン−クリック塩基対合によって標準的なポリヌクレオチド塩基に水素結合をすることができる塩基を支持し、類似体骨格は、オリゴヌクレオチド類似体分子と、標準的なポリヌクレオチド（例えば、一本鎖ＲＮＡまたは一本鎖ＤＮＡ）中の塩基との間のこのような水素結合を配列特異的様態で可能にする様式で塩基を提示する。好ましい類似体は、実質的に荷電していない、リン含有骨格を有するものである。

【0070】

オリゴヌクレオチド類似体中の実質的に荷電していないリン含有骨格は、サブユニット連結の大部分、例えば、その連結の５０〜１００％、典型的には少なくとも６０％〜１００％、または７５％または８０％が荷電しておらず、単一のリン原子を含有するものである。アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド類似体は、約８〜４０のサブユニット、典型的には約８〜２５のサブユニット、好ましくは約１２〜２５のサブユニット（中間の全ての整数および範囲を含めた）を含有し得る。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、下記で定義するように、標的配列に対して正確な配列相補性または概ねの相補性を有し得る。

【0071】

オリゴヌクレオチドの「サブユニット」は、１つのヌクレオチド（またはヌクレオチド類似体）単位を指す。この用語は、付着したサブユニット間連結を伴う、または伴わないヌクレオチド単位を指し得るが、「荷電しているサブユニット」に言及するとき、電荷は典型的には、サブユニット間連結（例えば、ホスフェートもしくはホスホロチオエート連結またはカチオン性連結）内にある。

【0072】

プリンまたはピリミジン塩基対合部分は典型的には、アデニン、シトシン、グアニン、ウラシル、チミンまたはイノシンである。また含まれるのは、塩基、例えば、ピリジン−４−オン、ピリジン−２−オン、フェニル、プソイドウラシル、２，４，６−トリメ１１５トキシベンゼン、３−メチルウラシル、ジヒドロウリジン、ナフチル、アミノフェニル、５−アルキルシチジン（例えば、５−メチルシチジン）、５−アルキルウリジン（例えば、リボチミジン）、５−ハロウリジン（例えば、５−ブロモウリジン）または６−アザピリミジンまたは６−アルキルピリミジン（例えば、６−メチルウリジン）、プロピン、クエソシン、２−チオウリジン、４−チオウリジン、ワイブトシン、ワイブトキソシン、４−アセチルチジン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン、５’−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウリジン、β−Ｄ−ガラクトシルクエオシン、１−メチルアデノシン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアノシン、３−メチルシチジン、２−メチルアデノシン、２−メチルグアノシン、Ｎ６−メチルアデノシン、７−メチルグアノシン、５−メトキシアミノメチル−２−チオウリジン、５−メチルアミノメチルウリジン、５−メチルカルボニルメチルウリジン（ｍｅｔｈｙｌｃａｒｂｏｎｙｈｎｅｔｈｙｌｕｒｉｄｉｎｅ）、５−メチルオキシウリジン、５−メチル−２−チオウリジン、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデノシン、β−Ｄ−マンノシルクエオシン、ウリジン−５−オキシ酢酸、２−チオシチジン、トレオニン誘導体およびその他である（Ｂｕｒｇｉｎら、１９９６年、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３５巻、１４０９０頁；Ｕｈｌｍａｎ ＆ Ｐｅｙｍａｎ、上述）。「修飾塩基」とは、この態様において、上記で例示したような、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）、およびウラシル（Ｕ）以外のヌクレオチド塩基を意味する。このような塩基は、アンチセンス分子中の任意の位置において使用することができる。オリゴマーの使用によって、ＴｓおよびＵｓは互換的であることを当業者は認識する。例えば、他のアンチセンス化学物質、例えば、よりＲＮＡ様である２’−Ｏ−メチルアンチセンスオリゴヌクレオチドによって、Ｔ塩基は、Ｕと示し得る（例えば、配列表を参照されたい）。

【0073】

「アミノ酸サブユニット」または「アミノ酸残基」は、α−アミノ酸残基（−ＣＯ−ＣＨＲ−ＮＨ−）またはβ−アミノ酸残基または他のアミノ酸残基（例えば、−ＣＯ−（ＣＨ_２）_ｎＣＨＲ−ＮＨ−）を指すことができ、Ｒは、側鎖（水素を含み得る）であり、ｎは、１〜７、好ましくは１〜４である。

【0074】

「天然アミノ酸」という用語は、天然に見出されるタンパク質中に存在するアミノ酸、例えば、タンパク質生合成の間に利用される２０種の（Ｌ）−アミノ酸、ならびにその他、例えば、４−ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリシン、デスモシン、イソデスモシン、ホモシステイン、シトルリンおよびオルニチンを指す。「非天然アミノ酸」という用語は、天然に見出されるタンパク質において存在しないアミノ酸を指し、例には、β−アラニン（β−Ａｌａ）、６−アミノヘキサン酸（Ａｈｘ）および６−アミノペンタン酸が含まれる。「非天然アミノ酸」のさらなる例には、これらに限定されないが、当業者には公知の（Ｄ）−アミノ酸、ノルロイシン、ノルバリン、ｐ−フルオロフェニルアラニン、エチオニンなどが含まれる。

【0075】

「単離した」とは、その天然の状態において材料に通常伴う構成要素が実質的または本質的にない材料を意味する。例えば、「単離したポリヌクレオチド」または「単離したオリゴヌクレオチド」は、本明細書において使用する場合、天然の状態においてポリヌクレオチドに隣接する配列から精製または取り出されたポリヌクレオチド、例えば、フラグメントに通常隣接する配列から取り出されたＤＮＡフラグメントを指し得る。

【0076】

「有効量」は、インビトロでプロジェリンの発現をモジュレートするのに有効なアンチセンスオリゴマーの量に関する。

【0077】

「増強する」もしくは「増強すること」または「増大する」もしくは「増大すること」または「刺激する」もしくは「刺激すること」とは一般に、非アンチセンス化合物または対照化合物によってもたらされる反応と比較して、細胞においてより大きな生理学的反応（すなわち、下流の効果）を生じさせ、またはもたらす１つまたは複数のアンチセンス化合物または組成物の能力を指す。「増大した」または「増強された」量は典型的には、「統計的に有意な」量であり、非アンチセンス化合物（薬剤が存在しないこと）または対照化合物によってもたらされる量の１．１倍、１．２倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍またはそれを超える倍（例えば、５００倍、１０００倍）（中間および１超の、全ての整数および小数点を含めた、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８など）である増大を含み得る。

【0078】

「低減する」または「阻害する」という用語は全般的に、診断の技術分野における通例の技術によって測定して、関連する生理学的反応または細胞反応を「減少させる」１種または複数種の本発明のアンチセンス化合物の能力に関し得る。関連する生理学的反応または細胞反応（インビボもしくはインビトロ）は、当業者には明らかであり、例えば、ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質レベルによって測定した、プロジェリンの発現における低減を含み得る。反応における「減少」は、非アンチセンス化合物または対照組成物によって生じる反応と比較して「統計的に有意」であり得、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の減少（中間の全ての整数を含めた）を含み得る。

【0079】

「標的配列」という用語は、それに対してオリゴヌクレオチドまたはアンチセンス薬剤が向けられる標的ＲＮＡの一部、すなわち、オリゴヌクレオチドが、相補的配列のワトソン−クリック塩基対合によってハイブリダイズする配列を指す。特定の実施形態において、標的配列は、イントロンおよびエキソン両方の標的配列を含むプレｍＲＮＡの連続的な領域であり得る。特定の他の実施形態において、標的配列は、もっぱらイントロンまたはエキソン配列からなる。

【0080】

「標的化配列」または「アンチセンス標的化配列」という用語は、ＲＮＡゲノムにおける標的配列に対して相補的（さらに、実質的に相補的であることを意味する）である、オリゴヌクレオチドまたは他のアンチセンス薬剤における配列を指す。アンチセンス化合物の全配列、または一部のみが、標的配列に対して相補的であり得る。例えば、２０〜３０の塩基を有するオリゴヌクレオチドにおいて、約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、または２９は、標的領域に対して相補的である標的化配列であり得る。典型的には、標的化配列は、連続的な塩基で形成されてもよいが、代わりに、例えば、オリゴヌクレオチドの反対の末端から一緒に置かれたときに、標的配列をまたがる配列を構成する、非連続的な配列で形成されてもよい。

【0081】

標的配列および標的化配列は、ハイブリダイゼーションが逆平行構成で起こるとき、互いに「相補的」であると記載される。標的化配列は、標的配列に対して「概ねの」または「実質的な」相補性を有し得、まだ本発明の目的のために機能し得る。すなわち、標的化配列は、まだ機能的に「相補的」であり得る。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１０ヌクレオチド中、標的配列と最大で１つのミスマッチ、好ましくは２０ヌクレオチド中、最大で１つのミスマッチを有し得る。代わりに、オリゴヌクレオチドは、本明細書に記載されている例示的なアンチセンス標的化配列と、少なくとも９０％の配列相同性、好ましくは少なくとも９５％の配列相同性を有し得る。

【0082】

オリゴマーが生理学的条件下で標的にハイブリダイズする場合、オリゴヌクレオチドは、実質的に４５℃超、好ましくは少なくとも５０℃、典型的には６０℃〜８０℃またはより高いＴｍを伴い、標的ポリヌクレオチドに「特異的にハイブリダイズ」する。このようなハイブリダイゼーションは好ましくは、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件に相当する。所与のイオン強度およびｐＨで、Ｔｍは、標的配列の５０％が相補的ポリヌクレオチドにハイブリダイズする温度である。また、このようなハイブリダイゼーションは、標的配列に対するアンチセンスオリゴマーの「概ねの」または「実質的な」相補性によって、ならびに正確な相補性によって起こり得る。

【0083】

「相同性」は、同一であるか、または保存的置換を構成する、アミノ酸の百分率数を指す。相同性は、配列比較プログラム、例えば、ＧＡＰを使用して決定し得る（Ｄｅｖｅｒａｕｘら、１９８４年、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１２巻、３８７〜３９５頁）。このように、本明細書において引用したものと同様または実質的に異なる長さの配列は、アラインメント中にギャップを挿入することによって比較することができ、このようなギャップは、例えば、ＧＡＰによって使用される比較アルゴリズムによって決定することができる。

【0084】

「配列同一性」または、例えば、「５０％同一の配列」を含むという用語は、本明細書において使用する場合、配列が、比較のウィンドウに亘り、ヌクレオチド１つずつのベースでまたはアミノ酸１つずつのベースで同一である程度を指す。したがって、「配列同一性の百分率」は、比較のウィンドウに亘り２つの最適に整列した配列を比較し、同一の核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）または同一のアミノ酸残基（例えば、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＣｙｓおよびＭｅｔ）が両方の配列において起こる位置の数を決定して、マッチした位置の数を得て、マッチした位置の数を比較のウィンドウにおける位置の総数（すなわち、ウィンドウサイズ）で割り、結果を１００で乗じて、配列同一性の百分率を得ることによって計算し得る。

【0085】

２つ以上のポリヌクレオチドまたはポリペプチドの間の配列関係を記載するのに使用される用語には、「参照配列」、「比較ウィンドウ」、「配列同一性」、「配列同一性の百分率」および「実質的な同一性」が含まれる。「参照配列」は、長さが、少なくとも８または１０であるが、１５〜１８であることが頻繁であり、少なくとも２５のヌクレオチドおよびアミノ酸残基を含めたモノマー単位であることが多い。２つのポリヌクレオチドはそれぞれ、（１）２つのポリヌクレオチドの間で同様の配列（すなわち、完全なポリヌクレオチド配列の一部のみ）、および（２）２つのポリヌクレオチドの間で相違している配列を含み得るため、２つ（またはそれ超）のポリヌクレオチドの間の配列比較は典型的には、２つのポリヌクレオチドの配列を、「比較ウィンドウ」に亘り比較することによって行い、配列類似性の局所領域を同定および比較する。「比較ウィンドウ」は、少なくとも６、通常では約５０〜約１００、より通常では約１００〜約１５０の連続的な位置の概念的セグメントを指し、その中で、２つの配列を最適に整列させた後に、配列を同じ数の連続的な位置の参照配列と比較する。比較ウィンドウは、参照配列（付加も欠失も含まない）と比較して、２つの配列の最適なアラインメントについて約２０％以下の付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含み得る。

【0086】

比較ウィンドウを整列させるための配列の最適なアラインメントは、選択した様々な方法のいずれかによって生じる、アルゴリズムのコンピュータ化した実行（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓソフトウェアパッケージリリース７．０におけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ、ＵＳＡ）によって、または点検および最良のアラインメント（すなわち、比較ウィンドウに亘り最も高い相同性百分率をもたらす）によって行い得る。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９７年、Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２５巻：３３８９頁によって開示されているような、プログラムのＢＬＡＳＴファミリーをまた参照し得る。配列分析の詳細な考察は、Ａｕｓｕｂｅｌら、「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ、１９９４〜１９９８年、第１５章のユニット１９．３において見出すことができる。

【0087】

「ヌクレアーゼ−耐性」オリゴマー分子（オリゴマー）は、ハイブリダイズされていない形態またはハイブリダイズされた形態で、その骨格が、体内の一般の細胞外および細胞内のヌクレアーゼによるヌクレアーゼ切断に対して実質的に耐性であるものを指す。すなわち、オリゴマーは、オリゴマーが曝露される体内の通常のヌクレアーゼ条件下でヌクレアーゼ切断を殆ど示さないか、または全く示さない。

【0088】

薬剤が細胞膜を横切る受動拡散以外の機構によって細胞に入ることができるとき、薬剤は、「哺乳動物細胞によって能動的に取り込まれる」。薬剤は、例えば、ＡＴＰ−依存性輸送機構による哺乳動物細胞膜を横切る薬剤の輸送をいう「能動輸送」によって、または輸送タンパク質への薬剤の結合を必要とし、次いで、これによって膜を横切る結合した薬剤の通過を促進する輸送機構による細胞膜を越えるアンチセンス薬剤の輸送をいう「促進輸送」によって輸送し得る。能動輸送および促進輸送の両方のために、オリゴヌクレオチド類似体は好ましくは、下記に定義されているような実質的に荷電していない骨格を有する。

【0089】

「ヘテロ二重鎖」は、アンチセンスオリゴヌクレオチドと標的ＲＮＡの相補的部分との間の二重鎖を指す。「ヌクレアーゼ−耐性ヘテロ二重鎖」は、ヘテロ二重鎖が、細胞内および細胞外ヌクレアーゼ、例えば、二本鎖ＲＮＡ／ＲＮＡまたはＲＮＡ／ＤＮＡ複合体を切断することができるリボヌクレアーゼＨによるインビボの分解に対して実質的に耐性であるように、その相補的標的へのアンチセンスオリゴマーの結合によって形成されるヘテロ二重鎖を指す。

【0090】

本明細書において使用する場合、「体液」という用語は、尿、唾液、血漿、血液、脊髄液、または生物由来の他の試料、例えば、皮膚細胞または皮膚細片を含めた被験体から得た種々の試料タイプを包含し、その中に懸濁した細胞または細胞フラグメント、または液体媒体およびその溶質を指し得る。

【0091】

「相対量」という用語は、比較が試験測定と対照測定との間で行われる場合に使用される。反応における複合体を形成する試薬の相対量は、対照標本と反応する量と比較した、試験標本と反応する量である。対照標本は、同じアッセイにおいて別々に試行し得、またはこれは、同じ試料の部分（例えば、組織切片における悪性領域の周囲の正常組織）であり得る。

【0092】

野生型遺伝子または遺伝子産物は、集団において最も頻繁に観察されるものであり、このように、遺伝子の「通常型」または「野生型」形態が適宜設計される。

【0093】

下記の化学用語は、他に示さない限り、下記の意味を有する。

【0094】

「アミノ」は、−ＮＨ_２ラジカルを指す。

【0095】

「シアノ」または「ニトリル」は、−ＣＮラジカルを指す。

【0096】

「ヒドロキシ」または「ヒドロキシル」は、−ＯＨラジカルを指す。

【0097】

「イミノ」は、＝ＮＨ置換基を指す。

【0098】

「グアニジニル」は、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２置換基を指す。

【0099】

「アミジニル」は、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２置換基を指す。

【0100】

「ニトロ」は、−ＮＯ_２ラジカルを指す。

【0101】

「オキソ」は、＝Ｏ置換基を指す。

【0102】

「チオキソ」は、＝Ｓ置換基を指す。

【0103】

「コレート」は、下記の構造：

【0104】

【化8】

【0105】

を指す。

【0106】

「デオキシコレート」は、下記の構造：

【0107】

【化9】

【0108】

を指す。

【0109】

「アルキル」は、飽和または不飽和（すなわち、１つまたは複数の二重結合および／または三重結合を含有）であり、１〜３０個の炭素原子を有し、単結合によって分子の残部に付着している、直鎖状または分岐状の炭化水素鎖ラジカルを指す。１〜３０個の任意の数の炭素原子を含むアルキルが含まれる。３０個までの炭素原子を含むアルキルは、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルキルと称され、同様に、例えば、１２個までの炭素原子を含むアルキルは、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルである。他の数の炭素原子を含むアルキル（および本明細書において定義される他の部分）は、同様に表される。アルキル基には、これらに限定されないが、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_２０アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１５アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_４アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_３アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_２アルキル、Ｃ_２〜Ｃ_８アルキル、Ｃ_３〜Ｃ_８アルキルおよびＣ_４〜Ｃ_８アルキルが含まれる。代表的なアルキル基には、これらに限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、１−メチルエチル（イソ−プロピル）、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓ−ブチル、ｎ−ペンチル、１，１−ジメチルエチル（ｔ−ブチル）、３−メチルヘキシル、２−メチルヘキシル、エテニル、プロパ−１−エニル、ブタ−１−エニル、ペンタ−１−エニル、ペンタ−１，４−ジエニル、エチニル、プロピニル、ブタ−２−イニル、ブタ−３−イニル、ペンチニル、ヘキシニルなどが含まれる。本明細書において他に特に断りのない限り、アルキル基は、下記のように任意選択で置換されていてもよい。

【0110】

「アルキレン」または「アルキレン鎖」は、分子の残部をラジカル基に連結している直鎖状または分岐状の二価炭化水素鎖を指す。アルキレンは、飽和または不飽和（すなわち、１つまたは複数の二重結合および／または三重結合を含有）であり得る。代表的なアルキレンには、これらに限定されないが、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキレン、Ｃ_１〜Ｃ_８アルキレン、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキレン、Ｃ_１〜Ｃ_４アルキレン、Ｃ_１〜Ｃ_３アルキレン、Ｃ_１〜Ｃ_２アルキレン、Ｃ_１アルキレンが含まれる。代表的なアルキレン基には、これらに限定されないが、メチレン、エチレン、プロピレン、ｎ−ブチレン、エテニレン、プロペニレン、ｎ−ブテニレン、プロピニレン、ｎ−ブチニレンなどが含まれる。アルキレン鎖は、単結合または二重結合を介して分子の残部に、および単結合または二重結合を介してラジカル基に付着している。分子の残部への、およびラジカル基へのアルキレン鎖の付着点は、鎖中の１個の炭素または任意の２個の炭素を介してでよい。本明細書において他に特に断りのない限り、アルキレン鎖は、下記のように任意選択で置換されていてもよい。

【0111】

「アルコキシ」は、式−ＯＲ_ａのラジカルを指し、Ｒ_ａは、定義されているようなアルキルラジカルである。本明細書において他に特に断りのない限り、アルコキシ基は、下記のように任意選択で置換されていてもよい。

【0112】

アルコキシアルキル」は、式−Ｒ_ｂＯＲ_ａのラジカルを指し、Ｒ_ａは、定義されているようなアルキルラジカルであり、Ｒ_ｂは、定義されているようなアルキレンラジカルである。本明細書において他に特に断りのない限り、アルコキシアルキル基は、下記のように任意選択で置換されていてもよい。

【0113】

「アルキルカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ_ａのラジカルを指し、Ｒ_ａは、上記に定義されているようなアルキルラジカルである。本明細書において他に特に断りのない限り、アルキルカルボニル基は、下記のように任意選択で置換されていてもよい。

【0114】

「アルキルオキシカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ_ａのラジカルを指し、Ｒ_ａは、定義されているようなアルキルラジカルである。本明細書において他に特に断りのない限り、アルキルオキシカルボニル基は、下記のように任意選択で置換されていてもよい。

【0115】

「アルキルアミノ」は、式−ＮＨＲ_ａまたは−ＮＲ_ａＲ_ａのラジカルを指し、各Ｒ_ａは独立に、上記に定義されているようなアルキルラジカルである。本明細書において他に特に断りのない限り、アルキルアミノ基は、下記のように任意選択で置換されていてもよい。

【0116】

「アミジル」は、式−Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ_ａのラジカルを指し、Ｒ_ａは、本明細書に定義されているようなアルキルまたはアリールラジカルである。本明細書において他に特に断りのない限り、アミジル基は、下記のように任意選択で置換されていてもよい。

【0117】

「アミジニルアルキル」は、式−Ｒ_ｂ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２のラジカルを指し、Ｒ_ｂは、上記に定義されているようなアルキレンラジカルである。本明細書において他に特に断りのない限り、アミジニルアルキル基は、下記のように任意選択で置換されていてもよい。

【0118】

「アミジニルアルキルカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ_ｂ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２のラジカルを指し、Ｒ_ｂは、上記に定義されているようなアルキレンラジカルである。本明細書において他に特に断りのない限り、アミジニルアルキルカルボニル基は、下記のように任意選択で置換されていてもよい。

【0119】

「アミノアルキル」は、式−Ｒ_ｂ−ＮＲ_ａＲ_ａのラジカルを指し、Ｒ_ｂは、上記に定義されているようなアルキレンラジカルであり、各Ｒ_ａは独立に、水素またはアルキルラジカルである。

【0120】

「チオアルキル」は、式−ＳＲ_ａのラジカルを指し、Ｒ_ａは、上記に定義されているようなアルキルラジカルである。本明細書において他に特に断りのない限り、チオアルキル基は、任意選択で置換されていてもよい。

【0121】

「アリール」は、水素、６〜３０個の炭素原子および少なくとも１つの芳香族環を含む炭化水素環系に由来するラジカルを指す。アリールラジカルは、単環式、二環式、三環式または四環式環系であり得、これは縮合または架橋環系を含み得る。アリールラジカルには、これらに限定されないが、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレン、アントラセン、アズレン、ベンゼン、クリセン、フルオランテン、フルオレン、ａｓ−インダセン、ｓ−インダセン、インダン、インデン、ナフタレン、フェナレン、フェナントレン、プレイアデン、ピレン、およびトリフェニレンの炭化水素環系に由来するアリールラジカルが含まれる。本明細書において他に特に断りのない限り、「アリール」または接頭辞「ａｒ−」（例えば、「アラルキル」中）という用語は、任意選択で置換されているアリールラジカルを含むことを意味する。

【0122】

「アラルキル」は、式−Ｒ_ｂ−Ｒ_ｃのラジカルを指し、Ｒ_ｂは、上記に定義されているようなアルキレン鎖であり、Ｒ_ｃは、１つまたは複数の上記に定義されているようなアリールラジカル、例えば、ベンジル、ジフェニルメチル、トリチルなどである。本明細書において他に特に断りのない限り、アラルキル基は、任意選択で置換されていてもよい。

【0123】

「アリールカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ_ｃのラジカルを指し、Ｒ_ｃは、１つまたは複数の上記に定義されているようなアリールラジカル、例えば、フェニルである。本明細書において他に特に断りのない限り、アリールカルボニル基は、任意選択で置換されていてもよい。

【0124】

「アリールオキシカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ_ｃのラジカルを指し、Ｒ_ｃは、１つまたは複数の上記に定義されているようなアリールラジカル、例えば、フェニルである。本明細書において他に特に断りのない限り、アリールオキシカルボニル基は、任意選択で置換されていてもよい。

【0125】

「アラルキルカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ_ｂ−Ｒ_ｃのラジカルを指し、Ｒ_ｂは、上記に定義されているようなアルキレン鎖であり、Ｒ_ｃは、１つまたは複数の上記に定義されているようなアリールラジカル、例えば、フェニルである。本明細書において他に特に断りのない限り、アラルキルカルボニル基は、任意選択で置換されていてもよい。

【0126】

「アラルキルオキシカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ_ｂ−Ｒ_ｃのラジカルを指し、Ｒ_ｂは、上記に定義されているようなアルキレン鎖であり、Ｒ_ｃは、１つまたは複数の上記に定義されているようなアリールラジカル、例えば、フェニルである。本明細書において他に特に断りのない限り、アラルキルオキシカルボニル基は、任意選択で置換されていてもよい。

【0127】

「アリールオキシ」は、式−ＯＲ_ｃのラジカルを指し、Ｒ_ｃは、１つまたは複数の上記に定義されているようなアリールラジカル、例えば、フェニルである。本明細書において他に特に断りのない限り、アリールカルボニル基は、任意選択で置換されていてもよい。

【0128】

「シクロアルキル」は、縮合または架橋環系を含み得、飽和または不飽和であり、単結合によって分子の残部に付着している、安定的な非芳香族、単環式または多環式の炭素環式環を指す。代表的なシクロアルキルには、これらに限定されないが、３〜１５個の炭素原子および３〜８個の炭素原子を有するシクロアルキル（ｃｙｃｌｏａｋｌｙｌｓ）が含まれ、単環式シクロアルキル（ｃｙｃｌｃｏａｌｋｙｌ）ラジカルには、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルが含まれる。多環式ラジカルには、例えば、アダマンチル、ノルボルニル、デカリニル、および７，７−ジメチル−ビシクロ［２．２．１］ヘプタニルが含まれる。本明細書において他に特に断りのない限り、シクロアルキル基は、任意選択で置換されていてもよい。

【0129】

「シクロアルキルアルキル」は、式−Ｒ_ｂＲ_ｄのラジカルを指し、Ｒ_ｂは、上記に定義されているようなアルキレン鎖であり、Ｒ_ｄは、上記に定義されているようなシクロアルキルラジカルである。本明細書において他に特に断りのない限り、シクロアルキルアルキル基は、任意選択で置換されていてもよい。

【0130】

「シクロアルキルカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ_ｄのラジカルを指し、Ｒ_ｄは、上記に定義されているようなシクロアルキルラジカルである。本明細書において他に特に断りのない限り、シクロアルキルカルボニル基は、任意選択で置換されていてもよい。

【0131】

シクロアルキルオキシカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ_ｄのラジカルを指し、Ｒ_ｄは、上記に定義されているようなシクロアルキルラジカルである。本明細書において他に特に断りのない限り、シクロアルキルオキシカルボニル基は、任意選択で置換されていてもよい。

【0132】

「縮合された」は、現存する環構造に縮合している本明細書に記載されている任意の環構造を指す。縮合環が、ヘテロシクリル環またはヘテロアリール環であるとき、縮合ヘテロシクリル環または縮合ヘテロアリール環の一部となる現存する環構造上の任意の炭素原子は、窒素原子で置き換えられていてもよい。

【0133】

「グアニジニルアルキル」は、式−Ｒ_ｂ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２のラジカルを指し、Ｒ_ｂは、上記に定義されているようなアルキレンラジカルである。本明細書において他に特に断りのない限り、グアニジニルアルキル基は、下記のように任意選択で置換されていてもよい。

【0134】

「グアニジニルアルキルカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ_ｂ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２のラジカルを指し、Ｒ_ｂは、上記に定義されているようなアルキレンラジカルである。本明細書において他に特に断りのない限り、グアニジニルアルキルカルボニル基は、下記のように任意選択で置換されていてもよい。

【0135】

「ハロ」または「ハロゲン」は、ブロモ、クロロ、フルオロまたはヨードを指す。

【0136】

「ハロアルキル」は、１つまたは複数の上記に定義されているようなハロラジカルで置換されている上記に定義されているようなアルキルラジカル、例えば、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、フルオロメチル、トリクロロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、１，２−ジフルオロエチル、３−ブロモ−２−フルオロプロピル、１，２−ジブロモエチルなどを指す。本明細書において他に特に断りのない限り、ハロアルキル基は、任意選択で置換されていてもよい。

【0137】

「ペルハロ」または「ペルフルオロ」は、各水素原子がそれぞれ、ハロ原子またはフッ素原子によって置き換えられている部分を指す。

【0138】

「ヘテロシクリル」または「複素環式環」は、２〜２３個の炭素原子、ならびに窒素、酸素、リンおよび硫黄からなる群から選択される１〜８個のヘテロ原子を含む安定的な３員〜２４員の非芳香族環ラジカルを指す。本明細書において他に特に断りのない限り、ヘテロシクリルラジカルは、単環式、二環式、三環式または四環式環系であり得、これは、縮合または架橋環系を含み得る。ヘテロシクリルラジカル中の窒素、炭素または硫黄原子は、任意選択で酸化し得る。窒素原子は、任意選択で四級化し得る。ヘテロシクリルラジカルは、部分的または完全に飽和し得る。このようなヘテロシクリルラジカルの例には、これらに限定されないが、ジオキソラニル、チエニル［１，３］ジチアニル、デカヒドロイソキノリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリジニル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、オクタヒドロインドリル、オクタヒドロイソインドリル、２−オキソピペラジニル、２−オキソピペリジニル、２−オキソピロリジニル、オキサゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、キヌクリジニル、チアゾリジニル、テトラヒドロフリル、トリチアニル、テトラヒドロピラニル、チオモルホリニル、チアモルホリニル、１−オキソ−チオモルホリニル、１，１−ジオキソ−チオモルホリニル、１２−クラウン−４、１５−クラウン−５、１８−クラウン−６、２１−クラウン−７、アザ−１８−クラウン−６、ジアザ−１８−クラウン−６、アザ−２１−クラウン−７、およびジアザ−２１−クラウン−７が含まれる。本明細書において他に特に断りのない限り、ヘテロシクリル基は、任意選択で置換されていてもよい。

【0139】

「ヘテロアリール」は、水素原子、１〜１３個の炭素原子、窒素、酸素、リンおよび硫黄からなる群から選択される１〜６個のヘテロ原子、ならびに少なくとも１つの芳香族環を含む５員〜１４員の環系ラジカルを指す。本発明の目的のために、ヘテロアリールラジカルは、単環式、二環式、三環式または四環式環系であり得、これは、縮合または架橋環系を含み得る。ヘテロアリールラジカルにおける窒素、炭素または硫黄原子は、任意選択で酸化し得、窒素原子は、任意選択で四級化し得る。例には、これらに限定されないが、アゼピニル、アクリジニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾインドリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾフラニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキセピニル、１，４−ベンゾジオキサニル、ベンゾナフトフラニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾジオキシニル、ベンゾピラニル、ベンゾピラノニル、ベンゾフラニル、ベンゾフラノニル、ベンゾチエニル（ベンゾチオフェニル）、ベンゾトリアゾリル、ベンゾ［４，６］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル、カルバゾリル、シンノリニル、ジベンゾフラニル、ジベンゾチオフェニル、フラニル、フラノニル、イソチアゾリル、イミダゾリル、インダゾリル、インドリル、インダゾリル、イソインドリル、インドリニル、イソインドリニル、イソキノリル、インドリジニル、イソオキサゾリル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、２−オキソアゼピニル、オキサゾリル、オキシラニル、１−オキシドピリジニル、１−オキシドピリミジニル、１−オキシドピラジニル、１−オキシドピリダジニル、１−フェニル−１Ｈ−ピロリル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、フタラジニル、プテリジニル、プリニル、ピロリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、キノリニル、キヌクリジニル、イソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、チアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、トリアジニル、およびチオフェニル（すなわち、チエニル）が含まれる。本明細書において他に特に断りのない限り、ヘテロアリール基は、任意選択で置換されていてもよい。

【0140】

全ての上記の基は、置換されていても、または置換されていなくてもよい。「置換されている」という用語は、本明細書において使用する場合、上記の基のいずれか（すなわち、アルキル、アルキレン、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキルカルボニル、アルキルオキシカルボニル、アルキルアミノ、アミジル、アミジニルアルキル、アミジニルアルキルカルボニル、アミノアルキル、アリール、アラルキル、アリールカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルキルカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、アリールオキシ、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルカルボニル、シクロアルキルアルキルカルボニル、シクロアルキルオキシカルボニル、グアニジニルアルキル、グアニジニルアルキルカルボニル、ハロアルキル、ヘテロシクリルおよび／またはヘテロアリール）を意味し、さらに官能化してもよく、少なくとも１個の水素原子は、非水素原子置換基への結合で置き換えられている。本明細書において特に断りのない限り、置換されている基は、オキソ、−ＣＯ_２Ｈ、ニトリル、ニトロ、ヒドロキシル、チオオキシ、アルキル、アルキレン、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキルカルボニル、アルキルオキシカルボニル、アリール、アラルキル、アリールカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルキルカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、アリールオキシ、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルカルボニル、シクロアルキルアルキルカルボニル、シクロアルキルオキシカルボニル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、ジアルキルアミン、アリールアミン、アルキルアリールアミン、ジアリールアミン、Ｎ−オキシド、イミド、およびエナミン；基、例えば、トリアルキルシリル基、ジアルキルアリールシリル基、アルキルジアリールシリル基、トリアリールシリル基におけるケイ素原子、ペルフルオロアルキルまたはペルフルオロアルコキシ、例えば、トリフルオロメチルまたはトリフルオロメトキシから選択される１個または複数の置換基を含み得る。「置換されている」はまた、１個または複数個の水素原子が、高次結合（例えば、二重結合または三重結合）によって、ヘテロ原子、例えば、オキソ、カルボニル、カルボキシル、およびエステル基における酸素；ならびに基、例えば、イミン、オキシム、ヒドラゾン、およびニトリルなどの基における窒素に置き換えられている上記の基のいずれかを意味する。例えば、「置換されている」は、１個または複数個の水素原子が、−ＮＲ_ｇＣ（＝Ｏ）ＮＲ_ｇＲ_ｈ、−ＮＲ_ｇＣ（＝Ｏ）ＯＲ_ｈ、−ＮＲ_ｇＳＯ_２Ｒ_ｈ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ_ｇＲ_ｈ、−ＯＲ_ｇ、−ＳＲ_ｇ、−ＳＯＲ_ｇ、−ＳＯ_２Ｒ_ｇ、−ＯＳＯ_２Ｒ_ｇ、−ＳＯ_２ＯＲ_ｇ、＝ＮＳＯ_２Ｒ_ｇ、および−ＳＯ_２ＮＲ_ｇＲ_ｈで置き換えられている上記の基のいずれかを含む。「置換されている」はまた、１個または複数個の水素原子が、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ_ｇ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ_ｇ、−ＣＨ_２ＳＯ_２Ｒ_ｇ、−ＣＨ_２ＳＯ_２ＮＲ_ｇＲ_ｈ、−ＳＨ、−ＳＲ_ｇまたは−ＳＳＲ_ｇで置き換えられている上記の基のいずれかを意味する。上記において、Ｒ_ｇおよびＲ_ｈは、同じまたは異なり、独立に、水素、アルキル、アルコキシ、アルキルアミノ、チオアルキル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ハロアルキル、ヘテロシクリル、Ｎ−ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリール、Ｎ−ヘテロアリールおよび／またはヘテロアリールアルキルである。さらに、上記の置換基のそれぞれはまた、上記の置換基の１つまたは複数で任意選択で置換されていてもよい。さらに、上記の基のいずれかは、１個もしくは複数個の内部酸素原子または硫黄原子を含むように置換されていてもよい。例えば、アルキル基は、１個または複数個の内部酸素原子で置換され、エーテルまたはポリエーテル基を形成し得る。同様に、アルキル基は、１個または複数個の内部硫黄原子で置換され、チオエーテル、ジスルフィドなどを形成し得る。アミジル部分は、２個までのハロ原子で置換されていてもよく、一方、上記の他の基は、１個または複数個のハロ原子で置換されていてもよい。アルキル基を例外として、全ての他の基はまた、アミノまたはモノアルキルアミノ（ｍｏｎｏａｌｋｌｙａｍｉｎｏ）で置換されていてもよい。アルキルおよびアルキルカルボニル基を例外として、全ての他の基はまた、グアニジニルまたはアミジニル（ａｍｉｄｙｎｙｌ）で置換されていてもよい。上記の基のいずれかのための任意選択の置換基はまた、アリールホスホリル、例えば、−Ｒ_ａＰ（Ａｒ）_３を含み、Ｒａは、アルキレンであり、Ａｒは、アリール部分、例えば、フェニルである。

【0141】

「低級アルキル」は、メチル、エチル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、イソアミル、ｎ−ペンチル、およびイソペンチルによって例示されるような、１〜６個の炭素原子のアルキルラジカルを指す。特定の実施形態において、「低級アルキル」基は、１〜４個の炭素原子を有する。他の実施形態において、「低級アルキル」基は、１〜２個の炭素原子を有し、すなわち、メチルまたはエチルである。類似して、「低級アルケニル」は、アリルおよびブテニルによって例示されるような、２〜６個、好ましくは、３個または４個の炭素原子のアルケニルラジカルを指す。

【0142】

「非妨害」置換基は、その意図した標的に結合する本明細書に記載のアンチセンスオリゴマーの能力に悪影響を与えないものである。このような置換基には、小さなおよび／または相対的に極性のない基、例えば、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ、またはフルオロが含まれる。

【0143】

ＬＭＮＡ標的化
例には、下記で考察する、配列番号１および／または２を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドが含まれる。

【0144】

特定のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、野生型配列（配列番号１）および／または配列番号２において示されるような、ＨＧＰＳ患者において見出される配列を含めた、ヒトＬＭＮＡ遺伝子におけるエキソン１１の１つまたは複数の塩基に対して相補的である標的化配列を含み得る。これらの標的配列を、下記の表１において示す。

【0145】

【表1】

【0146】

例には、表１における配列番号１および２において下線を引かれたＬＭＮＡエキソン１１の潜在的スプライス部位

【0147】

【化10】

【0148】

に対してまた相補的であるものを含めて、ＬＭＮＡエキソン１１（配列番号１または２）に対して完全に相補的であるアンチセンスオリゴヌクレオチドが含まれる。特定のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、最も３’側の塩基が、配列番号１または２における下線を引かれた潜在的スプライス部位の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、もしくは３０塩基下流である、ＬＭＮＡエキソン１１における塩基に対して相補的であり（表１を参照されたい）、または潜在的スプライス部位の１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９もしくは４０上流である、ＬＭＮＡエキソン１１における塩基に対して相補的である標的化配列を含み得る。このタイプの例示的なオリゴヌクレオチドは、配列番号３〜１６として下記で列挙したものの中にある。特定のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、最も３’側の塩基が、ＬＭＮＡエキソン１１配列番号１または２の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４，１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９，５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９または６０塩基上流である、ＬＭＮＡイントロン１０における塩基に対して相補的である標的化配列を含み得る（表１を参照されたい）。特定のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、最も３’側の塩基が、ＬＭＮＡイントロン１０の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４，１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０塩基上流である、ＬＭＮＡエキソン１０における塩基に対して相補的である標的化配列を含み得る。特定の実施形態は、これらのアンチセンス薬剤の組合せの使用に関する。特定の実施形態は、配列番号１および／または２の全てまたは一部（例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、もしくは４０塩基）を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。

【0149】

アンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、プロセシングを受ける前のＬＭＮＡ ｍＲＮＡ、例えば、エキソン、イントロン、エキソン−イントロンジャンクション、またはスプライスジャンクションにおける種々の領域（複数可）に対して標的化され得るか、または相補的であることができる。例えば、特定のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＬＭＮＡプレｍＲＮＡのエキソン１０および１１のスプライスドナー（ＳＤ）部位またはスプライスアクセプター（ＳＡ）部位のスプライスジャンクションと重複する領域（標的配列）に対して相補的である標的化配列を含み得、これは、プロセシングを受ける前のｍＲＮＡのエキソン領域の一部（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５のヌクレオチド）およびイントロン領域の一部（例えば、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５のヌクレオチド）に対して相補的である。上記のタイプの例示的な標的化配列は、配列番号１７〜３４として下記に列挙する。

【0150】

選択されたアンチセンス標的化配列は、より短く、例えば、約１２の塩基、またはより長く、例えば、約４０の塩基で作製することができ、配列が、スプライシング、および／または標的とのハイブリダイゼーションの際に他の形態の阻害をもたらすのに十分に相補的であり、かつ標的ＲＮＡと４５℃以上のＴｍを有するヘテロ二重鎖を形成する限り、少数のミスマッチを含む。

【0151】

特定の実施形態において、標的配列とアンチセンス標的化配列との間の相補性の程度は、安定的な二重鎖を形成するのに十分である。アンチセンスオリゴマーと標的ＲＮＡ配列との相補性の領域は、８〜１１の塩基ほど短くあり得るが、好ましくはこれらの範囲の中間の全ての整数および範囲を含めて、１２〜１５の塩基以上、例えば、１２〜２０の塩基、１２〜２５の塩基、または１５〜２５の塩基である。約１４〜１５の塩基のアンチセンスオリゴマーは一般に、標的ｍＲＮＡにおいて独特の相補的配列を有するのに十分に長い。特定の実施形態において、下記で考察するように、必要な結合Ｔｍを達成するのに最小の長さの相補的塩基を必要とし得る。

【0152】

特定の実施形態において、４０の塩基ほどの長さのオリゴマーが適切であり得、少なくとも最小数の塩基、例えば、１０〜１２の塩基は、標的配列に対して相補的である。しかし、一般に、細胞における促進された取込みまたは能動的取込みは、約３０未満のオリゴマーの長さで最適化される。下記でさらに記載するＰＭＯオリゴマーについて、結合安定性および取込みの最適なバランスは一般に、１８〜３０の塩基の長さで起こる。含まれるのは、約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０の塩基からなるアンチセンスオリゴマー（例えば、ＰＮＡ、ＬＮＡ、２’−ＯＭｅ、ＭＯＥ、ＰＭＯ）であり、少なくとも約６、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０の連続的および／または非連続的な塩基は、配列番号１および／もしくは２の標的配列、またはその改変体を含めた本明細書に記載されている標的配列に対して相補的である。

【0153】

特定の実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、ＬＭＮＡプレｍＲＮＡ核酸標的配列に対して１００％相補的であり得、またはアンチセンスオリゴマーは、オリゴマーと標的配列との間で形成されるヘテロ二重鎖が、インビボで起こり得る、細胞ヌクレアーゼの作用、および他のモードの分解または置き換えに耐えるのに十分に安定的である限り、ミスマッチを含み、例えば、改変体を収容し得る。ヌクレアーゼによる切断により感受性ではないオリゴマー骨格を下記で考察する。存在する場合、ミスマッチは、中央よりもハイブリッド二重鎖の末端領域に向かってより不安定にしにくくなる。許容されるミスマッチの数は、二重鎖の安定性のよく理解された原理によって、オリゴマーの長さ、二重鎖中のＧ：Ｃ塩基対の百分率、および二重鎖中のミスマッチ（複数可）の位置に依存する。このようなアンチセンスオリゴマーは、必ずしも標的配列に対して１００％相補的でないが、核酸標的の生物活性、例えば、プロジェリンタンパク質（複数可）の発現がモジュレートされるように、標的配列に安定的および特異的に結合させるのに有効である。

【0154】

オリゴマーと標的配列との間で形成される二重鎖の安定性は、結合Ｔｍ、および細胞の酵素切断に対する二重鎖の感受性の関数である。相補的配列ＲＮＡに関して、アンチセンス化合物のＴｍは、従来の方法、例えば、Ｈａｍｅｓら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８５年、１０７〜１０８頁によって記載されたものによって、またはＭｉｙａｄａ Ｃ．Ｇ．およびＷａｌｌａｃｅ Ｒ．Ｂ．、１９８７年、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．、第１５４巻、９４〜１０７頁において記載されているように測定し得る。特定の実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、相補的配列ＲＮＡに関して、体温を超えた、好ましくは５０℃超の結合Ｔｍを有し得る。６０〜８０℃の範囲またはそれを超えるＴｍが好ましい。周知の原理によると、相補性をベースとするＲＮＡハイブリッドに関して、オリゴマー化合物のＴｍは、二重鎖中のＣ：Ｇ対の塩基の比を増大させることによって、かつ／またはヘテロ二重鎖の長さ（塩基対での）を増大させることによって上昇させることができる。同時に、細胞の取込みを最適化する目的のために、オリゴマーのサイズを限定することが有利であり得る。この理由のために、２５塩基以下の長さで高いＴｍ（５０℃以上）を示す化合物は一般に、高いＴｍ値のために２５超の塩基を必要とするものより好ましい。

【0155】

特定の実施形態、例えば、ＰＭＯオリゴマーにおいて、オリゴマーのアンチセンス活性は、図１Ｃにおいて例示するような荷電していない、およびカチオン性のホスホロジアミデート連結の混合物を使用することによって増強し得る。オリゴマー中のカチオン性連結の総数は、１〜１０（中間の全ての整数を含めて）で変動し、オリゴマーを通して散在させることができる。好ましくは荷電している連結の数は、少なくとも２つ、および総骨格連結の半分以下、例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、または８つの間の正に荷電している連結であり、好ましくはそれぞれの荷電している連結は、骨格に沿って少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの荷電していない連結によって分離されている。本発明の好ましいカチオン性連結は、表３において示すように、ａｐｎ連結Ｂ１０を含む。

【0156】

ヒトＬＭＮＡプレｍＲＮＡを標的とするための例示的なアンチセンス配列を、下記の表２において示す。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、これらの標的化配列の全てまたは一部を含み得る。

【0157】

【表2】

【0158】

アンチセンスオリゴヌクレオチド化合物
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは典型的には、（ａ）哺乳動物細胞によって能動的に取り込まれる能力を有し、（ｂ）取り込まれると、標的ＲＮＡと約４５℃超のＴｍを有する二重鎖を形成する。特定の実施形態において、オリゴマー骨格は、実質的に荷電していなくてもよく、好ましくは、細胞膜を横切る能動輸送または促進輸送のための基質として認識し得る。標的ＲＮＡと安定的な二重鎖を形成するオリゴマーの能力はまた、標的に関するアンチセンスオリゴマーの長さおよび相補性の程度、Ｇ：Ｃ塩基マッチとＡ：Ｔ塩基マッチとの比、ならびに任意のミスマッチの塩基の位置を含めた、オリゴマー骨格の他の特色に関し得る。細胞ヌクレアーゼに抵抗するアンチセンスオリゴマーの能力は、生存、および細胞の細胞質への薬剤の最終的な送達を促進し得る。含まれるのは、本明細書に記載されているＰＭＯ、ＰＭＯ＋（ＰＭＯプラス）、ＰＭＯ−Ｘ、ＬＮＡ、ＰＮＡ、および／または２’Ｏ−Ｍｅをベースとする化学物質から構成されるアンチセンスオリゴマーである。一般に、ＰＮＡおよびＬＮＡ化学物質は、ＰＭＯおよび２’Ｏ−Ｍｅオリゴマーと比較してこれらの相対的に高い標的結合強度によって、より短い標的化オリゴマーを利用する。

【0159】

ペプチド核酸（ＰＮＡ）は、骨格が、ピリミジンまたはプリン塩基が付着しているＮ−（２−アミノエチル）グリシン単位からなるデオキシリボース骨格と構造的に同形である、ＤＮＡの類似体である。天然ピリミジンおよびプリン塩基を含有するＰＮＡは、ワトソン−クリック塩基対合則に従って相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズし、塩基対認識に関してＤＮＡを模倣する（Ｅｇｈｏｌｍ、Ｂｕｃｈａｒｄｔら、１９９３年）。ＰＮＡの骨格は、ホスホジエステル結合よりむしろペプチド結合によって形成され、ＰＮＡをアンチセンス用途に良好に適しているものとする（下記の構造を参照されたい）。骨格は荷電しておらず、通常の熱安定性を超えるものを示すＰＮＡ／ＤＮＡまたはＰＮＡ／ＲＮＡ二重鎖がもたらされる。ＰＮＡは、ヌクレアーゼまたはプロテアーゼによって認識されない。

【0160】

ＰＮＡは、当技術分野において公知の任意の技術を使用して合成的に生成される。ＰＮＡは、ポリアミド骨格が下記で示すようなＤＮＡの伝統的なホスフェートリボース環を置き換えたＤＮＡ類似体である。

【0161】

【化11】

【0162】

天然のＲＮＡまたはＤＮＡ構造への過激な構造的変化に関わらず、ＰＮＡは、ヘリックス形態で、ＤＮＡまたはＲＮＡへの配列特異的結合が可能である。ＰＮＡの特徴は、相補的ＤＮＡまたはＲＮＡへの高い結合親和性、一塩基ミスマッチによってもたらされる不安定化効果、ヌクレアーゼおよびプロテアーゼへの耐性、塩濃度およびホモプリンＤＮＡとの三重鎖形成と無関係であるＤＮＡまたはＲＮＡとのハイブリダイゼーションを含む。Ｐａｎａｇｅｎｅ（商標）は、その専売のＢｔｓ ＰＮＡモノマー（Ｂｔｓ；ベンゾチアゾール−２−スルホニル基）および専売のオリゴマー化工程を開発してきた。Ｂｔｓ ＰＮＡモノマーを使用したＰＮＡオリゴマー化は、脱保護、カップリングおよびキャッピングの反復的サイクルから構成される。この技術に対するＰａｎａｇｅｎｅの特許には、ＵＳ６９６９７６６、ＵＳ７２１１６６８、ＵＳ７０２２８５１、ＵＳ７１２５９９４、ＵＳ７１４５００６およびＵＳ７１７９８９６が含まれる。ＰＮＡ化合物の調製を教示する代表的な米国特許には、これらに限定されないが、それぞれが参照により本明細書中に組み込まれている米国特許第５，５３９，０８２号；同第５，７１４，３３１号；および同第５，７１９，２６２号が含まれる。ＰＮＡ化合物のさらなる教示は、Ｎｉｅｌｓｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９１年、２５４巻、１４９７頁において見出すことができる。

【0163】

オリゴヌクレオチド化合物はまた、「ロックド核酸」サブユニット（ＬＮＡ）を含有し得る。ＬＮＡの構造は、当技術分野において公知である。例えば、Ｗｅｎｇｅｌら、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ（１９９８年）４５５頁；Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ（１９９８年）５４巻、３６０７頁、およびＡｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍ． Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９９年）３２巻、３０１頁）；Ｏｂｉｋａら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ（１９９７年）３８巻、８７３５頁；（１９９８年）３９巻、５４０１頁、およびＢｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００８年）１６巻、９２３０頁。例示的で非限定的ＬＮＡ構造を、下記で例示する。

【0164】

【化12】

【0165】

本発明の化合物は、１つまたは複数のＬＮＡを組み込み得る。場合によっては、化合物は、全体的にＬＮＡから構成され得る。個々のＬＮＡヌクレオシドサブユニットの合成、およびオリゴヌクレオチド中へのこれらの組込みのための方法は、当技術分野において公知である：米国特許第７，５７２，５８２号；同第７，５６９，５７５号；同第７，０８４，１２５号；同第７，０６０，８０９号；同第７，０５３，２０７号；同第７，０３４，１３３号；同第６，７９４，４９９号および同第６，６７０，４６１号。典型的なサブユニット間リンカーは、ホスホジエステルおよびホスホロチオエート部分を含む。代わりに、リン非含有リンカーを用い得る。好ましい一実施形態は、ＬＮＡ含有化合物であり、各ＬＮＡサブユニットは、ＤＮＡサブユニット（すなわち、デオキシリボースヌクレオチド）によって分離している。さらに好ましい化合物は、交互になっているＬＮＡおよびＤＮＡサブユニットから構成され、サブユニット間リンカーは、ホスホロチオエートである。

【0166】

好ましいオリゴマー構造は、上記のような荷電していない連結によって接合されている、塩基対合部分を担持するモルホリノをベースとするサブユニットを用いる。特に好ましいのは、実質的に荷電していないホスホロジアミデート−連結モルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）である。アンチセンスオリゴマーを含めたモルホリノオリゴヌクレオチドは、例えば、これらの全てが参照により組み込まれている、共有の米国特許第５，６９８，６８５号、同第５，２１７，８６６号、同第５，１４２，０４７号、同第５，０３４，５０６号、同第５，１６６，３１５号、同第５，１８５、４４４号、同第５，５２１，０６３号、および同第５，５０６，３３７号において、ならびにＰＣＴ出願第ＵＳ０８／０８８３３９号において詳述されている。

【0167】

モルホリノをベースとするサブユニットの特定の特性には、オリゴマー形態で安定的な荷電していない骨格連結によって連結される能力；形成されたポリマーが、高いＴｍを有する標的ＲＮＡを含めた相補的塩基標的核酸と、１０〜１４の塩基ほど短いオリゴマーさえともハイブリダイズすることができるように、ヌクレオチド塩基（例えば、アデニン、シトシン、グアニンまたはウラシル）を支持する能力；オリゴマーが哺乳動物細胞中に能動的に輸送される能力；ならびにリボヌクレアーゼ分解に抵抗するオリゴマー：ＲＮＡヘテロ二重鎖の能力が含まれる。

【0168】

モルホリノをベースとするサブユニットの特性には、１）オリゴマー形態で安定的な荷電していない、または正に荷電している骨格連結によって連結される能力；２）形成されたポリマーが、相対的に短いオリゴヌクレオチド（例えば、１０〜１５の塩基）における約４５℃超のＴｍ値の標的ＲＮＡを含めた相補的塩基標的核酸とハイブリダイズすることができるように、ヌクレオチド塩基（例えば、アデニン、シトシン、グアニン、チミジン、ウラシルおよびヒポキサンチン）を支持する能力；３）オリゴヌクレオチドが哺乳動物細胞中に能動的または受動的に輸送される能力；ならびに４）それぞれ、リボヌクレアーゼおよびリボヌクレアーゼＨ分解に抵抗するアンチセンスオリゴヌクレオチド：ＲＮＡヘテロ二重鎖の能力が含まれる。

【0169】

リン含有骨格連結を有するモルホリノオリゴヌクレオチドの例を、図１Ａ〜１Ｃにおいて例示する。本発明の一態様によって、その骨格連結の好ましくは１０％〜５０％において正に荷電している基を含有するように修飾された、好ましいホスホロジアミデート−連結モルホリノオリゴヌクレオチドを、図１Ｃに示す。特許請求した主題のアンチセンスオリゴヌクレオチドについての例示的な骨格構造は、それぞれ荷電していないまたは正に荷電しているリン含有サブユニット連結によって連結している図１Ａ〜１Ｃにおいて示すモルホリノサブユニットタイプを含む。図１Ｄは、５原子繰返し単位骨格を形成するリン含有連結を示し、モルホリノ環は、１原子ホスホアミド連結によって連結している。図１Ｅは、６原子繰返し単位骨格を生じさせる連結を示す。この構造において、５’モルホリノ炭素をリン基と連結する原子Ｙは、硫黄、窒素、炭素、または好ましくは酸素であり得る。リンからペンダントであるＸ部分は、フッ素、アルキルもしくは置換アルキル、アルコキシもしくは置換アルコキシ、チオアルコキシもしくは置換チオアルコキシ、または非置換、一置換、もしくは二置換窒素（モルホリンもしくはピペリジンなどの環状構造を含む）であり得る。アルキル、アルコキシおよびチオアルコキシは好ましくは、１〜６個の炭素原子を含む。Ｚ部分は硫黄または酸素であり、好ましくは酸素である。

【0170】

図１Ｆおよび１Ｇにおいて示される連結は、７原子単位長さの骨格のために設計される。図１Ｆにおいて、Ｘ部分は、図１Ｅにおける通りであり、Ｙ部分は、メチレン、硫黄、または好ましくは、酸素であり得る。図１Ｇにおいて、Ｘ部分およびＹ部分は、図１Ｅにおける通りである。特に好ましいモルホリノオリゴヌクレオチドは、図１Ｅにおいて示される形態のモルホリノサブユニット構造から構成されるものを含み、Ｘ＝ＮＨ_２、Ｎ（ＣＨ_３）_２、または１−ピペラジンまたは他の荷電している基であり、Ｙ＝Ｏであり、Ｚ＝Ｏである。

【0171】

上で述べたように、実質的に荷電していないオリゴヌクレオチドを、本発明の一態様によって修飾し、例えば、２〜５の荷電していない連結毎に約１まで、例えば、１０の荷電していない連結毎に約４〜５の荷電している連結を含み得る。特定の実施形態において、骨格連結の約２５％がカチオン性であるとき、アンチセンス活性における最適な改善を見ることができる。特定の実施形態において、増強は、少数、例えば、１０〜２０％のカチオン性連結において見ることができ、またはカチオン性連結の数は、５０〜８０％の範囲内、例えば、約６０％である。加えられたカチオン性骨格の電荷によって見られる増強は、場合によっては、アンチセンスオリゴヌクレオチドの「中央領域」骨格連結近くに大量の電荷を分配することによってさらに増強し得、例えば、８つのカチオン性骨格連結を有する２０マーのオリゴヌクレオチドにおいて、これらの荷電している連結の少なくとも７０％は、１０の真ん中の連結において局在化している。

【0172】

特定の実施形態において、混合物または荷電していない骨格連結およびカチオン性骨格連結を有するオリゴヌクレオチドの合成に関して上および下で引用した参照文献において詳述した方法を用いて、アンチセンス化合物は、段階的固相合成によって調製することができる。場合によっては、さらなる化学部分をアンチセンス化合物に加えて、例えば、薬物動態を増強し、または化合物の捕獲または検出を促進することが望ましくあり得る。このような部分は典型的には、標準的な合成法によってオリゴマーの末端に共有結合的に付着させ得る。例えば、ポリエチレングリコール部分または他の親水性ポリマー、例えば、１０〜１００のモノマーサブユニットを有するものの付加は、溶解度の増強において有用であり得る。１つまたは複数の荷電している基、例えば、アニオン性の荷電している基、例えば、有機酸は、細胞取込みを増強し得る。

【0173】

レポーター部分、例えば、フルオレセインまたは放射標識した基を、検出の目的のために付着し得る。代わりに、オリゴマーに付着したレポーター標識は、標識抗体またはストレプトアビジンを結合することができるリガンド、例えば、抗原またはビオチンであり得る。アンチセンス化合物の付着または修飾のための部分の選択において、一般に当然ながら、生体適合性であり、望ましくない副作用を伴わずに被験体において耐容性を示す可能性が高い基の化合物を選択することが望ましい。

【0174】

上で述べたように、アンチセンス化合物のいくつかは、上記のタイプの荷電していない連結が散在する選択した数のカチオン性連結を含有するように構築することができる。サブユニット間連結（荷電していないおよびカチオン性の両方）は好ましくは、構造：

【0175】

【化13】

【0176】

を有するリン含有連結であり、式中、
Ｗは、ＳまたはＯであり、好ましくはＯであり、
Ｘ＝ＮＲ^１Ｒ^２またはＯＲ^６であり、
Ｙ＝ＯまたはＮＲ^７であり、
オリゴマー中のそれぞれの前記連結は、
（ａ）荷電していない連結（ａ）［Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^６およびＲ^７のそれぞれは、水素および低級アルキルから独立に選択される］；
（ｂ１）カチオン性連結（ｂ１）［Ｘ＝ＮＲ^１Ｒ^２であり、Ｙ＝Ｏであり、ＮＲ^１Ｒ^２は、Ｒ^１Ｒ^２＝−ＣＨＲＣＨＲＮ（Ｒ^３）（Ｒ^４）ＣＨＲＣＨＲ−であるように、任意選択で置換されているピペラジノ基を表し、
各Ｒは独立に、ＨまたはＣＨ_３であり、
Ｒ^４は、Ｈ、ＣＨ_３、または電子対であり、
Ｒ^３は、Ｈ、低級アルキル、例えば、ＣＨ_３、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、Ｚ−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および［Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ］_ｍＨから選択され、Ｚは、Ｃ（Ｏ）または直接結合であり、Ｌは、アルキル、アルコキシ、およびアルキルアミノから選択される結合を有する長さが１８原子まで、好ましくは１２原子まで、より好ましくは長さが８原子までの任意選択のリンカーであり、Ｒ’は、天然アミノ酸またはその１もしくは２炭素ホモログの側鎖であり、ｍは、１〜６、好ましくは１〜４である］；
（ｂ２）カチオン性連結（ｂ２）［Ｘ＝ＮＲ^１Ｒ^２であり、Ｙ＝Ｏであり、Ｒ^１＝ＨまたはＣＨ_３であり、Ｒ^２＝ＬＮＲ^３Ｒ^４Ｒ^５であり、Ｌ、Ｒ^３、およびＲ^４は、上記に定義されている通りであり、Ｒ^５は、Ｈ、低級アルキル、または低級（アルコキシ）アルキルである］、ならびに
（ｂ３）カチオン性連結（ｂ３）［Ｙ＝ＮＲ^７であり、Ｘ＝ＯＲ^６であり、Ｒ^７＝ＬＮＲ^３Ｒ^４Ｒ^５であり、Ｌ、Ｒ^３、Ｒ^４およびＲ^５は、上記に定義されている通りであり、Ｒ^６は、Ｈまたは低級アルキルである］
から選択され、
少なくとも１つの前記連結は、カチオン性連結（ｂ１）、（ｂ２）、および（ｂ３）から選択される。

【0177】

特定の実施形態において、オリゴマーは、少なくとも２つのタイプ（ａ）の連続的な連結（すなわち、荷電していない連結）を含み得る。さらなる実施形態において、オリゴマー中の連結の少なくとも５％は、カチオン性連結（すなわち、タイプ（ｂ１）、（ｂ２）、または（ｂ３））であり、例えば、１０％〜６０％、好ましくは２０〜５０％の連結は、カチオン性連結であり得る。

【0178】

一実施形態において、少なくとも１つの連結は、タイプ（ｂ１）のものであり、好ましくは、各Ｒは、Ｈであり、Ｒ^４は、Ｈ、ＣＨ_３、または電子対であり、Ｒ^３は、Ｈ、低級アルキル、例えば、ＣＨ_３、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、およびＣ（Ｏ）−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択される。Ｒ^３の後者の２つの実施形態は、それぞれ、ピペラジン環に直接付着しているか、またはリンカー基Ｌに対してペンダントであるグアニジノ部分を提供する。合成の容易さのために、Ｒ^３中の変数Ｚは好ましくは、示すように、Ｃ（Ｏ）（カルボニル）である。

【0179】

リンカー基Ｌは、上で述べたように、アルキル（例えば、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−）、アルコキシ（−Ｃ−Ｏ−）、およびアルキルアミノ（例えば、−ＣＨ_２−ＮＨ−）から選択されるその骨格において結合を含有するが、ただし、Ｌにおける末端原子（例えば、カルボニルまたは窒素に隣接するもの）は、炭素原子である。分岐状連結（例えば、−ＣＨ_２−ＣＨＣＨ_３−）が可能であるが、リンカーは、好ましくは非分岐状である。一実施形態において、リンカーは、炭化水素リンカーである。このようなリンカーは、構造−（ＣＨ_２）_ｎ−を有してもよく、ｎは、１〜１２、好ましくは２〜８、より好ましくは２〜６である。

【0180】

モルホリノサブユニットは、構造：

【0181】

【化14】

【0182】

を有してもよく、式中、Ｐｉは、塩基対合部分であり、上記で示した連結は、（ｉ）の窒素原子と隣接するサブユニットの５’炭素とを接続する。塩基対合部分Ｐｉは、同一でも異なってもよく、一般に標的核酸に結合する配列を提供するように設計される。モルホリノサブユニットを連結する上記の連結タイプ（ｂ１）、（ｂ２）および（ｂ３）の実施形態の使用を、以下、図示によって例示し得る。

【0183】

【化15】

【0184】

好ましくは、オリゴマー中の全てのカチオン性連結は、同じタイプのもの、すなわち、全てタイプ（ｂ１）、全てタイプ（ｂ２）、または全てタイプ（ｂ３）である。

【0185】

さらなる実施形態において、カチオン性連結は、下記で示したような連結（ｂ１’）および（ｂ１’’）から選択され、（ｂ１’’）は、本明細書において「Ｐｉｐ」連結と称され、（ｂ１’’）は、本明細書において「ＧｕＸ」連結と称される。

【0186】

【化16】

【0187】

上記構造において、Ｗは、ＳまたはＯであり、好ましくはＯであり、Ｒ^１およびＲ^２のそれぞれは、水素および低級アルキルから独立に選択され、好ましくはメチルであり、Ａは、（ｂ１’）および（ｂ１’’）における１個または複数個の炭素原子上の水素または非妨害置換基を表す。好ましくは、ピペラジン環中の環炭素は、置換されていない。しかし、これらは、非妨害置換基、例えば、メチルまたはフッ素を含み得る。好ましくは、最大で１個または２個の炭素原子は、このように置換されている。さらなる実施形態において、連結の少なくとも１０％は、タイプ（ｂ１’）または（ｂ１’’）のものであり、例えば、連結の１０％〜６０％、好ましくは２０％〜５０％は、タイプ（ｂ１’）または（ｂ１’’）であり得る。

【0188】

特定の実施形態において、オリゴマーは、上記のタイプ（ｂ１’）の連結を含有しない。代わりに、オリゴマーは、タイプ（ｂ１）の連結を含有せず、各Ｒは、Ｈであり、Ｒ^３は、ＨまたはＣＨ_３であり、Ｒ^４は、Ｈ、ＣＨ_３、または電子対である。

【0189】

モルホリノサブユニットはまた、下記でさらに記載するように、リンをベースとしないサブユニット間連結によって連結し得、少なくとも１つの連結は、上記のようなペンダントカチオン基で修飾されている。

【0190】

これらの非修飾の状態で荷電していないが、ペンダントアミン置換基をまた担持することができる他のオリゴヌクレオチド類似体連結を使用することができる。例えば、モルホリノ環上の５’窒素原子は、スルファミド連結または尿素連結（リンは、それぞれ、炭素または硫黄で置き換えられている）において用いられ、上記の構造（ｂ３）における５’−窒素原子と類似した様式で修飾することができる。

【0191】

完全なカチオン性連結オリゴマーを含めた任意の数のカチオン性連結を有するオリゴマーを提供する。しかし好ましくは、オリゴマーは、部分的に荷電している（例えば、１０％〜８０％）。好ましい実施形態において、連結の約１０％〜６０％、好ましくは２０％〜５０％は、カチオン性である。

【0192】

一実施形態において、カチオン性連結は、骨格に沿って散在している。部分的に荷電しているオリゴマーは好ましくは、少なくとも２つの連続的な荷電していない連結を含有する。すなわち、オリゴマーは好ましくは、その全体の長さに沿って厳密に交互になっているパターンを有さない。

【0193】

また考慮されるのは、カチオン性連結のブロックおよび荷電していない連結のブロックを有するオリゴマーである。例えば、荷電していない連結の中央ブロックは、カチオン性連結のブロックが隣接してもよく、または逆もまた同じである。一実施形態において、オリゴマーは、ほぼ等しい長さの５’、３’および中央領域を有し、中央領域におけるカチオン性連結の百分率は、約５０％超、好ましくは約７０％超である。

【0194】

アンチセンス適用において使用するためのオリゴマーは一般に、長さが約１０〜約４０のサブユニット、より好ましくは約１０〜３０のサブユニット、および典型的には１５〜２５の塩基の範囲である。例えば、アンチセンス化合物のために有用な長さである１９〜２０のサブユニットを有する本発明のオリゴマーは理想的に、２〜１０つ、例えば、４〜８つのカチオン性連結、および残りの荷電していない連結を有し得る。１４〜１５のサブユニットを有するオリゴマーは理想的に、２〜７つ、例えば、３つ、４つ、または５つのカチオン性連結、および残りの荷電していない連結を有し得る。

【0195】

各モルホリノ環構造は、塩基対合部分を支持し、典型的には細胞におけるまたは処置されている被験体における選択したアンチセンス標的にハイブリダイズするように設計される塩基対合部分の配列を形成する。塩基対合部分は、天然ＤＮＡまたはＲＮＡにおいて見出されるプリンまたはピリミジン（例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＵ）、あるいは類似体、例えば、ヒポキサンチン（ヌクレオシドイノシンの塩基構成要素）または５−メチルシトシンであり得る。

【0196】

上で述べたように、特定の実施形態は、ＰＭＯ−Ｘオリゴマーおよび修飾された末端基を有するものを含めた、新規なサブユニット間連結を含むオリゴマーを対象とする。いくつかの実施形態において、これらのオリゴマーは、対応する無修飾オリゴマーよりＤＮＡおよびＲＮＡに対してより高い親和性を有し、他のサブユニット間連結を有するオリゴマーと比較して、改善された細胞送達、効力、および／または組織分布特性を示す。一実施形態において、オリゴマーは、本明細書に定義されているようなタイプ（Ｂ）の少なくとも１つのサブユニット間連結を含む。オリゴマーはまた、１つまたは複数の本明細書に定義されているようなタイプ（Ａ）のサブユニット間連結を含み得る。様々な連結タイプおよびオリゴマーの構造的特徴および特性は、下記の考察においてより詳細に記載する。これらおよび関連するオリゴマーの合成は、参照によりその全体が組み込まれている共有の米国特許出願第１３／１１８，２９８号に記載されている。

【0197】

連結（Ａ）
アンチセンス活性の増強、体内分布および／または他の望ましい特性は、様々なサブユニット間連結を有するオリゴマーを調製することによって最適化することができることを出願人等は見出した。例えば、オリゴマーは、１つまたは複数のタイプ（Ａ）のサブユニット間連結を任意選択で含み得、特定の実施形態において、オリゴマーは、少なくとも１つのタイプ（Ａ）の連結を含む。いくつかの他の実施形態において、タイプ（Ａ）の各連結は、同じ構造を有する。タイプ（Ａ）の連結は、参照により本明細書にその全体が組み込まれている共有の米国特許第７，９４３，７６２号に開示されている連結を含み得る。連結（Ａ）は、下記の構造（Ｉ）：

【0198】

【化17】

【0199】

またはその塩もしくは異性体を有し、ここで、３’および５’は、モルホリノ環（すなわち、下記で考察する構造（ｉ））のそれぞれ３’端および５’端への付着点を示し、式中、
Ｗは、それぞれの出現において独立に、ＳまたはＯであり、
Ｘは、それぞれの出現において独立に、−Ｎ（ＣＨ_３）_２、−ＮＲ^１Ｒ^２、−ＯＲ^３または、

【0200】

【化18】

【0201】

であり、
Ｙは、それぞれの出現において独立に、Ｏまたは−ＮＲ^２であり、
Ｒ^１は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
Ｒ^２は、それぞれの出現において独立に、水素または−ＬＮＲ^４Ｒ^５Ｒ^７であり、
Ｒ^３は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^４は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｚ−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２または−［Ｃ（＝Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ］_ｍＨであり、Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）−または直接結合であり、Ｒ’は、天然アミノ酸またはその１もしくは２炭素ホモログの側鎖であり、ｍは、１〜６であり、
Ｒ^５は、それぞれの出現において独立に、水素、メチルまたは電子対であり、
Ｒ^６は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
Ｒ^７は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルまたはＣ_１〜Ｃ_６アルコキシアルキルであり、
Ｌは、アルキル、アルコキシまたはアルキルアミノ基、またはこれらの組合せを含む長さが１８原子までの任意選択のリンカーである。

【0202】

いくつかの例において、オリゴマーは、少なくとも１つのタイプ（Ａ）の連結を含む。いくつかの他の実施形態において、オリゴマーは、少なくとも２つのタイプ（Ａ）の連続的な連結を含む。さらなる実施形態において、オリゴマー中の連結の少なくとも５％は、タイプ（Ａ）である、例えば、いくつかの実施形態において、連結の５％〜９５％、１０％〜９０％、１０％〜５０％、または１０％〜３５％は、連結タイプ（Ａ）であり得る。いくつかの特定の実施形態において、少なくとも１つのタイプ（Ａ）連結は、−Ｎ（ＣＨ_３）_２である。他の実施形態において、タイプ（Ａ）の各連結は、−Ｎ（ＣＨ_３）_２である。他の実施形態において、少なくとも１つのタイプ（Ａ）連結は、ピペリジン（ｐｉｐｅｒｉｚｉｎ）−１−イル、例えば、非置換ピペラジン−１−イル（例えば、Ａ２またはＡ３）である。他の実施形態において、タイプ（Ａ）の各連結は、ピペリジン−１−イル、例えば、非置換ピペラジン−１−イルである。

【0203】

いくつかの実施形態において、Ｗは、それぞれの出現において独立に、ＳまたはＯであり、特定の実施形態において、Ｗは、Ｏである。

【0204】

いくつかの実施形態において、Ｘは、それぞれの出現において独立に、−Ｎ（ＣＨ_３）_２、−ＮＲ^１Ｒ^２、−ＯＲ^３である。いくつかの実施形態において、Ｘは、−Ｎ（ＣＨ_３）_２である。他の態様において、Ｘは、−ＮＲ^１Ｒ^２であり。他の例において、Ｘは、−ＯＲ^３である。

【0205】

いくつかの実施形態において、Ｒ^１は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１は、水素である。他の実施形態において、Ｘは、メチルである。

【0206】

いくつかの実施形態において、Ｒ^２は、それぞれの出現において、水素である。他の実施形態において、Ｒ^２は、それぞれの出現において、−ＬＮＲ^４Ｒ^５Ｒ^７である。いくつかの実施形態において、Ｒ^３は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ_１〜Ｃ_６アルキルである。他の実施形態において、Ｒ^３は、メチルである。また他の実施形態において、Ｒ^３は、エチルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^３は、ｎ−プロピルまたはイソプロピルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^３は、Ｃ_４アルキルである。他の実施形態において、Ｒ^３は、Ｃ_５アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^３は、Ｃ_６アルキルである。

【0207】

特定の実施形態において、Ｒ^４は、それぞれの出現において独立に、水素である。他の実施形態において、Ｒ^４は、メチルまたはエチルである。また他の実施形態において、Ｒ^４は、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２であり、他の実施形態において、Ｒ^４は、−Ｚ−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２である。また他の実施形態において、Ｒ^４は、−［Ｃ（＝Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ］_ｍＨである。一実施形態において、Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）−であり、別の実施形態において、Ｚは、直接結合である。Ｒ’は、天然アミノ酸の側鎖である。いくつかの実施形態において、Ｒ’は、天然アミノ酸の側鎖の１または２炭素ホモログである。

【0208】

ｍは、１〜６の整数である。ｍは、１であり得る。ｍは、２であり得る。ｍは、３であり得る。ｍは、４であり得る。ｍは、５であり得る。ｍは、６であり得る。

【0209】

いくつかの実施形態において、Ｒ^５は、それぞれの出現において独立に、水素、メチルまたは電子対である。いくつかの実施形態において、Ｒ^５は、水素である。他の実施形態において、Ｒ^５は、メチルである。また他の実施形態において、Ｒ^５は、電子対である。

【0210】

いくつかの実施形態において、Ｒ^６は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^６は、水素である。他の実施形態において、Ｒ^６は、メチルである。

【0211】

他の実施形態において、Ｒ^７は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルまたはＣ_２〜Ｃ_６アルコキシアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ７は、水素である。他の実施形態において、Ｒ^７は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^７は、Ｃ_２〜Ｃ_６アルコキシアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^７は、メチルである。他の実施形態において、Ｒ^７は、エチルである。また他の実施形態において、Ｒ^７は、ｎ−プロピルまたはイソプロピルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^７は、Ｃ_４アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^７は、Ｃ_５アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^７は、Ｃ_６アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^７は、Ｃ_２アルコキシアルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^７は、Ｃ_３アルコキシアルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^７は、Ｃ_４アルコキシアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^７は、Ｃ_５アルコキシアルキルである。他の実施形態において、Ｒ^７は、Ｃ_６アルコキシアルキルである。

【0212】

リンカー基Ｌは、上で述べたように、アルキル（例えば、−ＣＨ２−ＣＨ２−）、アルコキシ（例えば、−Ｃ−Ｏ−Ｃ−）、およびアルキルアミノ（例えば、−ＣＨ２−ＮＨ−）から選択されるその骨格において結合を含有するが、ただし、Ｌにおける末端原子（例えば、カルボニルまたは窒素に隣接するもの）は、炭素原子である。分岐状連結（例えば、−ＣＨ２−ＣＨＣＨ３−）が可能であるが、リンカーは一般に非分岐状である。一実施形態において、リンカーは、炭化水素リンカーである。このようなリンカーは、構造（ＣＨ２）_ｎ−を有してもよく、ｎは、１〜１２であり、好ましくは２〜８であり、より好ましくは２〜６である。

【0213】

任意の数の連結タイプ（Ａ）を有するオリゴマーを提供する。いくつかの実施形態において、オリゴマーは、タイプ（Ａ）の連結を含有しない。特定の実施形態において、連結の５パーセント、１０パーセント、２０パーセント、３０パーセント、４０パーセント、５０パーセント、６０パーセント、７０パーセント、８０パーセントまたは９０パーセントは、連結（Ａ）である。選択した実施形態において、連結の１０〜８０パーセント、２０〜８０パーセント、２０〜６０パーセント、２０〜５０パーセント、２０〜４０パーセント、または２０〜３５パーセントは、連結（Ａ）である。

【0214】

連結（Ｂ）
いくつかの実施形態において、オリゴマーは、少なくとも１つのタイプ（Ｂ）の連結を含む。例えば、オリゴマーは、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つまたはそれより多いタイプ（Ｂ）の連結を含み得る。タイプ（Ｂ）連結は、隣接してもよく、またはオリゴマーを通して散在し得る。連結タイプ（Ｂ）は、下記の構造（Ｉ）：

【0215】

【化19】

【0216】

またはその塩もしくは異性体を有し、式中、
Ｗは、それぞれの出現において独立に、ＳまたはＯであり、
Ｘは、それぞれの出現において独立に、−ＮＲ^８Ｒ^９または−ＯＲ^３であり、
Ｙは、それぞれの出現において独立に、Ｏまたは−ＮＲ^１０であり、
Ｒ^３は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^８は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ_２〜Ｃ_１２アルキルであり、
Ｒ^９は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アラルキルまたはアリールであり、
Ｒ^１０は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルまたは−ＬＮＲ^４Ｒ^５Ｒ^７であり、
Ｒ^８およびＲ^９は接合して、５〜１８員の単環式または二環式複素環を形成し得るか、あるいはＲ^８、Ｒ^９またはＲ^３はＲ^１０と接合して、５〜７員の複素環を形成し得、Ｘが４−ピペラジノであるとき、Ｘは、下記の構造（ＩＩＩ）：

【0217】

【化20】

【0218】

を有し、式中、
Ｒ^１１は、それぞれの出現において独立に、Ｃ_２〜Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アミノアルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルカルボニル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルであり、
Ｒは、それぞれの出現において独立に、電子対、水素またはＣ_１〜Ｃ_１２アルキルであり、
Ｒ^１２は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アミノアルキル、−ＮＨ_２、−ＮＲ^１３Ｒ^１４、−ＮＲ^１３Ｒ^１４Ｒ^１５、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルカルボニル、オキソ、−ＣＮ、トリフルオロメチル、アミジル、アミジニル、アミジニルアルキル、アミジニルアルキルカルボニルグアニジニル、グアニジニルアルキル、グアニジニルアルキルカルボニル、コレート、デオキシコレート、アリール、ヘテロアリール、複素環、−ＳＲ^１３またはＣ_１〜Ｃ_１２アルコキシであり、Ｒ^１３、Ｒ^１４およびＲ^１５は、それぞれの出現において独立に、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルである。

【0219】

いくつかの例において、オリゴマーは、１つのタイプ（Ｂ）の連結を含む。いくつかの他の実施形態において、オリゴマーは、２つのタイプ（Ｂ）の連結を含む。いくつかの他の実施形態において、オリゴマーは、３つのタイプ（Ｂ）の連結を含む。いくつかの他の実施形態において、オリゴマーは、４つのタイプ（Ｂ）の連結を含む。また他の実施形態において、タイプ（Ｂ）の連結は、連続的である（すなわち、タイプ（Ｂ）連結は、互いに隣接している）。さらなる実施形態において、オリゴマー中の連結の少なくとも５％は、タイプ（Ｂ）である。例えば、いくつかの実施形態において、連結の５％〜９５％、１０％〜９０％、１０％〜５０％、または１０％〜３５％は、連結タイプ（Ｂ）であり得る。

【0220】

他の実施形態において、Ｒ^３は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ_１〜Ｃ_６アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^３は、メチルであり得る。いくつかの実施形態において、Ｒ^３は、エチルであり得る。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^３は、ｎ−プロピルまたはイソプロピルであり得る。また他の実施形態において、Ｒ^３は、Ｃ_４アルキルであり得る。いくつかの実施形態において、Ｒ^３は、Ｃ_５アルキルであり得る。いくつかの実施形態において、Ｒ^３は、Ｃ_６アルキルであり得る。

【0221】

いくつかの実施形態において、Ｒ^８は、それぞれの出現において独立に、水素またはＣ_２〜Ｃ_１２アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^８は水素である。また他の実施形態において、Ｒ^８はエチルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^８はｎ−プロピルまたはイソプロピルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^８はＣ_４アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^８はＣ_５アルキルである。他の実施形態において、Ｒ^８はＣ_６アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^８はＣ_７アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^８はＣ_８アルキルである。他の実施形態において、Ｒ^８はＣ_９アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^８はＣ_１０アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^８はＣ_１１アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^８はＣ_１２アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^８は、Ｃ_２〜Ｃ_１２アルキルであり、Ｃ_２〜Ｃ_１２アルキルは、１つまたは複数の二重結合（例えば、アルケン）、三重結合（例えば、アルキン）または両方を含む。いくつかの実施形態において、Ｒ^８は、非置換Ｃ_２〜Ｃ_１２アルキルである。

【0222】

いくつかの実施形態において、Ｒ^９は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アラルキルまたはアリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^９は水素である。また他の実施形態において、Ｒ^９はＣ_１〜Ｃ_１２アルキルである。他の実施形態において、Ｒ^９はメチルである。また他の実施形態において、Ｒ^９はエチルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^９はｎ−プロピルまたはイソプロピルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^９はＣ_４アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^９はＣ_５アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^９はＣ_６アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^９はＣ_７アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^９はＣ_８アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^９はＣ_９アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^９はＣ_１０アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^９はＣ_１１アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^９はＣ_１２アルキルである。

【0223】

いくつかの他の実施形態において、Ｒ^９はＣ_１〜Ｃ_１２アラルキルである。例えば、いくつかの実施形態において、Ｒ^９は、ベンジルであり、ベンジルは、フェニル環またはベンジルの炭素上で任意選択で置換されていてもよい。置換基は、これに関して、アルキルおよびアルコキシ基、例えば、メチルまたはメトキシを含む。いくつかの実施形態において、ベンジル基は、ベンジルの炭素においてメチルで置換されている。例えば、いくつかの実施形態において、Ｒ^９は、下記の構造（ＸＩＶ）：

【0224】

【化21】

【0225】

を有する。

【0226】

他の実施形態において、Ｒ^９は、アリールである。例えば、いくつかの実施形態において、Ｒ^９は、フェニルであり、フェニルは、任意選択で置換されていてもよい。置換基は、これに関して、アルキルおよびアルコキシ基、例えば、メチルまたはメトキシを含む。他の実施形態において、Ｒ^９は、フェニルであり、フェニルは、クラウンエーテル部分、例えば、１２〜１８員のクラウンエーテルを含む。一実施形態において、クラウンエーテルは１８員であり、さらなるフェニル部分をさらに含み得る。例えば、一実施形態において、Ｒ^９は、下記の構造（ＸＶ）またはＸＶＩ）：

【0227】

【化22】

【0228】

の１つを有する。

【0229】

いくつかの実施形態において、Ｒ^１０は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルまたは−ＬＮＲ^４Ｒ^５Ｒ^７であり、Ｒ^４、Ｒ^５およびＲ^７は、連結（Ａ）に関して上記に定義されている通りである。他の実施形態において、Ｒ^１０は水素である。他の実施形態において、Ｒ^１０はＣ_１〜Ｃ_１２アルキルであり、他の実施形態において、Ｒ^１０は−ＬＮＲ^４Ｒ^５Ｒ^７である。いくつかの実施形態において、Ｒ^１０はメチルである。また他の実施形態において、Ｒ^１０はエチルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１０はＣ_３アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１０はＣ_４アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^１０はＣ_５アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１０はＣ_６アルキルである。他の実施形態において、Ｒ^１０はＣ_７アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^１０はＣ_８アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１０はＣ_９アルキルである。他の実施形態において、Ｒ^１０はＣ_１０アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^１０はＣ_１１アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１０はＣ_１２アルキルである。

【0230】

いくつかの実施形態において、Ｒ^８およびＲ^９は接合して、５〜１８員の単環式または二環式複素環を形成する。いくつかの実施形態において、複素環は、５員または６員の単環式複素環である。例えば、いくつかの実施形態において、連結（Ｂ）は、下記の構造（ＩＶ）：

【0231】

【化23】

【0232】

を有する。

【0233】

他の実施形態において、複素環は、二環式、例えば、１２員二環式複素環である。複素環は、ピペリジニルであり得る。複素環は、モルホリノであり得る。複素環は、ピペリジニル（ｐｉｐｅｒｉｚｉｎｙｌ）であり得る。複素環は、デカヒドロイソキノリンであり得る。代表的な複素環には、以下：

【0234】

【化24】

【0235】

が含まれる。

【0236】

いくつかの実施形態において、Ｒ^１１は、それぞれの出現において独立に、Ｃ_２〜Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アミノアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルである。

【0237】

いくつかの実施形態において、Ｒ^１１はＣ_２〜Ｃ_１２アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１１はエチルである。他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_３アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^１１はイソプロピルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_４アルキルである。他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_５アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１１はＣ_６アルキルである。他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_７アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１１はＣ_８アルキルである。他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_９アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_１０アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_１１アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１１はＣ_１２アルキルである。

【0238】

他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_１〜Ｃ_１２アミノアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１１はメチルアミノである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１１はエチルアミノである。他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_３アミノアルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_４アミノアルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_５アミノアルキルである。他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_６アミノアルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_７アミノアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１１はＣ_８アミノアルキルである。他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_９アミノアルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_１０アミノアルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_１１アミノアルキルである。他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_１２アミノアルキルである。

【0239】

他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_１〜Ｃ_１２アルキルカルボニルである。また他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_１アルキルカルボニルである。他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_２アルキルカルボニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１１はＣ_３アルキルカルボニルである。また他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_４アルキルカルボニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１１はＣ_５アルキルカルボニルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_６アルキルカルボニルである。他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_７アルキルカルボニルである。また他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_８アルキルカルボニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１１はＣ_９アルキルカルボニルである。また他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_１０アルキルカルボニルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１１はＣ_１１アルキルカルボニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１１はＣ_１２アルキルカルボニルである。また他の実施形態において、Ｒ^１１は、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｎＣＯ_２Ｈであり、ｎは１〜６である。例えば、いくつかの実施形態において、ｎは、１である。他の実施形態において、ｎは、２である。また他の実施形態において、ｎは、３である。いくつかの他の実施形態において、ｎは、４である。また他の実施形態において、ｎは、５である。他の実施形態において、ｎは、６である。

【0240】

他の実施形態において、Ｒ^１１は、アリールである。例えば、いくつかの実施形態において、Ｒ^１１は、フェニルである。いくつかの実施形態において、フェニルは、例えば、ニトロ基で置換されている。

【0241】

他の実施形態において、Ｒ^１１は、ヘテロアリールである。例えば、いくつかの実施形態において、Ｒ^１１は、ピリジニルである。他の実施形態において、Ｒ^１１は、ピリミジニルである。

【0242】

他の実施形態において、Ｒ^１１は、ヘテロシクリルである。例えば、いくつかの実施形態において、Ｒ^１１は、ピペリジニル、例えば、ピペリジン−４−イルである。

【0243】

いくつかの実施形態において、Ｒ^１１は、エチル、イソプロピル、ピペリジニル、ピリミジニル、コレート、デオキシコレート、または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｎＣＯ_２Ｈであり、ｎは、１〜６である。

【0244】

いくつかの実施形態において、Ｒは、電子対である。他の実施形態において、Ｒは、水素であり、他の実施形態において、Ｒは、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒはメチルである。いくつかの実施形態において、Ｒはエチルである。他の実施形態において、ＲはＣ_３アルキルである。また他の実施形態において、Ｒはイソプロピルである。いくつかの他の実施形態において、ＲはＣ_４アルキルである。また他の実施形態において、ＲはＣ_５アルキルである。いくつかの実施形態において、ＲはＣ_６アルキルである。他の実施形態において、ＲはＣ_７アルキルである。また他の実施形態において、ＲはＣ_８アルキルである。他の実施形態において、ＲはＣ_９アルキルである。いくつかの実施形態において、ＲはＣ_１０アルキルである。また他の実施形態において、ＲはＣ_１１アルキルである。いくつかの実施形態において、ＲはＣ_１２アルキルである。

【0245】

いくつかの実施形態において、Ｒ^１２は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アミノアルキル、−ＮＨ_２、−ＮＲ^１３Ｒ^１４、−ＮＲ^１３Ｒ^１４Ｒ^１５、オキソ、−ＣＮ、トリフルオロメチル、アミジル、アミジニル、アミジニルアルキル、アミジニルアルキルカルボニルグアニジニル、グアニジニルアルキル、グアニジニルアルキルカルボニル、コレート、デオキシコレート、アリール、ヘテロアリール、複素環、−ＳＲ^１３またはＣ_１〜Ｃ_１２アルコキシであり、Ｒ^１３、Ｒ^１４およびＲ^１５は、それぞれの出現において独立に、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルである。

【0246】

いくつかの実施形態において、Ｒ^１２は水素である。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はＣ_１〜Ｃ_１２アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はＣ_１〜Ｃ_１２アミノアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２は−ＮＨ_２である。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２は−ＮＲ^１３Ｒ^１４である。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２は−ＮＲ^１３Ｒ^１４Ｒ^１５である。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はＣ_１〜Ｃ_１２アルキルカルボニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はオキソである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２は−ＣＮである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はトリフルオロメチルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はアミジルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はアミジニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はアミジニルアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はアミジニルアルキルカルボニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２は、グアニジニル、例えば、モノメチルグアニジニル（ｍｅｔｈｙｌｇｕａｎｉｄｙｎｙｌ）またはジメチルグアニジニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はグアニジニルアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はアミジニルアルキルカルボニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はコレートである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はデオキシコレートである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はアリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２は複素環である。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２は−ＳＲ^１３である。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はＣ_１〜Ｃ_１２アルコキシである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はジメチルアミンである。

【0247】

他の実施形態において、Ｒ^１２はメチルである。また他の実施形態において、Ｒ^１２はエチルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はＣ_３アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はイソプロピルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はＣ_４アルキルである。他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_５アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_６アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_７アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はＣ_８アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_９アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はＣ_１０アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_１１アルキルである。他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_１２アルキルである。また他の実施形態において、アルキル部分は、１個または複数個の酸素原子で置換され、エーテル部分、例えば、メトキシメチル部分を形成する。

【0248】

いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はメチルアミノである。他の実施形態において、Ｒ^１２はエチルアミノである。また他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_３アミノアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はＣ_４アミノアルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_５アミノアルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_６アミノアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はＣ_７アミノアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はＣ_８アミノアルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_９アミノアルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_１０アミノアルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_１１アミノアルキルである。他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_１２アミノアルキルである。いくつかの実施形態において、アミノアルキルは、ジメチルアミノアルキルである。

【0249】

また他の実施形態において、Ｒ^１２はアセチルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_２アルキルカルボニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はＣ_３アルキルカルボニルである。また他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_４アルキルカルボニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はＣ_５アルキルカルボニルである。また他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_６アルキルカルボニルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_７アルキルカルボニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はＣ_８アルキルカルボニルである。また他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_９アルキルカルボニルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_１０アルキルカルボニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はＣ_１１アルキルカルボニルである。他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_１２アルキルカルボニルである。アルキルカルボニルは、カルボキシ部分で置換されており、例えば、アルキルカルボニルは、置換されて、コハク酸部分（すなわち、３−カルボキシアルキルカルボニル）を形成する。他の実施形態において、アルキルカルボニルは、末端−ＳＨ基で置換されている。

【0250】

いくつかの実施形態において、Ｒ^１２は、アミジルである。いくつかの実施形態において、アミジルは、例えば、−ＳＨ、カルバメート、またはこれらの組合せでさらに置換されているアルキル部分を含む。他の実施形態において、アミジルは、アリール部分、例えば、フェニルで置換されている。特定の実施形態において、Ｒ^１２は、下記の構造（ＩＸ）：

【0251】

【化25】

【0252】

を有してもよく、式中、Ｒ^１６は、それぞれの出現において独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルコキシ、−ＣＮ、アリールまたはヘテロアリールである。

【0253】

いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はメトキシである。他の実施形態において、Ｒ^１２はエトキシである。また他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_３アルコキシである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はＣ_４アルコキシである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はＣ_５アルコキシである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_６アルコキシである。他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_７アルコキシである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_８アルコキシである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はＣ_９アルコキシである。他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_１０アルコキシである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１２はＣ_１１アルコキシである。また他の実施形態において、Ｒ^１２はＣ_１２アルコキシである。

【0254】

特定の実施形態において、Ｒ^１２は、ピロリジニル、例えば、ピロリジン−１−イルである。他の実施形態において、Ｒ^１２は、ピペリジニル、例えば、ピペリジン−１−イルまたはピペリジン−４−イルである。他の実施形態において、Ｒ^１２は、モルホリノ、例えば、モルホリン−４−イルである。他の実施形態において、Ｒ^１２は、フェニルであり、さらにさらなる実施形態において、フェニルは、例えば、ニトロ基で置換されている。また他の実施形態において、Ｒ^１２は、ピリミジニル、例えば、ピリミジン−２−イルである。

【0255】

他の実施形態において、Ｒ^１３、Ｒ^１４およびＲ^１５は、それぞれの出現において独立に、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１３、Ｒ^１４またはＲ^１５は、メチルである。また他の実施形態において、Ｒ^１３、Ｒ^１４またはＲ^１５はエチルである。他の実施形態において、Ｒ^１３、Ｒ^１４またはＲ^１５はＣ_３アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^１３、Ｒ^１４またはＲ^１５はイソプロピルである。他の実施形態において、Ｒ^１３、Ｒ^１４またはＲ^１５はＣ_４アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１３、Ｒ^１４またはＲ^１５はＣ_５アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１３、Ｒ^１４またはＲ^１５はＣ_６アルキルである。他の実施形態において、Ｒ^１３、Ｒ^１４またはＲ^１５はＣ_７アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^１３、Ｒ^１４またはＲ^１５はＣ_８アルキルである。他の実施形態において、Ｒ^１３、Ｒ^１４またはＲ^１５はＣ_９アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１３、Ｒ^１４またはＲ^１５はＣ_１０アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１３、Ｒ^１４またはＲ^１５はＣ_１１アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^１３、Ｒ^１４またはＲ^１５はＣ_１２アルキルである。

【0256】

上で述べたように、いくつかの実施形態において、Ｒ^１２は、アリール部分で置換されているアミジルである。これに関しては、Ｒ^１６のそれぞれの出現は、同一でも異なってもよい。これらの実施形態のいくつかにおいて、Ｒ^１６は、水素である。他の実施形態において、Ｒ^１６は、−ＣＮである。他の実施形態において、Ｒ^１６は、ヘテロアリール、例えば、テトラゾリル（ｔｒｅｔｒａｚｏｌｙｌ）である。特定の他の実施形態において、Ｒ^１６は、メトキシである。他の実施形態において、Ｒ^１６は、アリールであり、アリールは、任意選択で置換されている。任意選択の置換基には、これに関して、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルコキシ、例えば、メトキシ；トリフルオロメトキシ；ハロ、例えば、クロロ；およびトリフルオロメチルが含まれる。

【0257】

他の実施形態において、Ｒ^１６はメチルである。また他の実施形態において、Ｒ^１６はエチルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１６はＣ_３アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１６はイソプロピルである。また他の実施形態において、Ｒ^１６はＣ_４アルキルである。他の実施形態において、Ｒ^１６はＣ_５アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^１６はＣ_６アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１６はＣ_７アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１６はＣ_８アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^１６はＣ_９アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１６はＣ_１０アルキルである。他の実施形態において、Ｒ^１６はＣ_１１アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１６はＣ_１２アルキルである。

【0258】

いくつかの実施形態において、Ｒ^１６はメトキシである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１６はエトキシである。また他の実施形態において、Ｒ^１６はＣ_３アルコキシである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１６はＣ_４アルコキシである。他の実施形態において、Ｒ^１６はＣ_５アルコキシである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１６はＣ_６アルコキシである。また他の実施形態において、Ｒ^１６はＣ_７アルコキシである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１６はＣ_８アルコキシである。また他の実施形態において、Ｒ^１６はＣ_９アルコキシである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１６はＣ_１０アルコキシである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１６はＣ_１１アルコキシである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１６はＣ_１２アルコキシである。

【0259】

いくつかの他の実施形態において、Ｒ^８およびＲ^９は接合して、１２〜１８員のクラウンエーテルを形成する。例えば、いくつかの実施形態において、クラウンエーテルは、１８員であり、他の実施形態において、クラウンエーテルは、１５員である。特定の実施形態において、Ｒ^８およびＲ^９は接合して、下記の構造（Ｘ）または（ＸＩ）：

【0260】

【化26】

【0261】

の１つを有する複素環を形成する。

【0262】

いくつかの実施形態において、Ｒ^８、Ｒ^９またはＲ^３は、Ｒ^１０と接合して、５〜７員の複素環を形成する。例えば、いくつかの実施形態において、Ｒ^３はＲ^１０と接合して、５〜７員の複素環を形成する。いくつかの実施形態において、複素環は、５員である。他の実施形態において、複素環は、６員である。他の実施形態において、複素環は、７員である。いくつかの実施形態において、複素環は、下記の構造（ＸＩＩ）：

【0263】

【化27】

【0264】

によって表され、式中、Ｚ’は、５〜７員の複素環を表す。構造（ＸＩ）の特定の実施形態において、Ｒ^１２は、それぞれの出現において水素である。例えば、連結（Ｂ）は、下記の構造（Ｂ１）、（Ｂ２）または（Ｂ３）：

【0265】

【化28】

【0266】

の１つを有し得る。

【0267】

特定の他の実施形態において、Ｒ^１２は、アリールホスホリル部分、例えば、トリフェニルホスホリル（ｐｈｏｓｐｏｒｙｌ）部分でさらに置換されている、Ｃ_１〜Ｃ_１２アルキルカルボニルまたはアミジルである。この構造を有する連結の例には、Ｂ５６およびＢ５５が含まれる。

【0268】

特定の実施形態において、連結（Ｂ）は、構造Ａ１〜Ａ５のいずれかを有さない。表３は、タイプ（Ａ）および（Ｂ）の代表的な連結を示す。

【0269】

【表3-1】

【0270】

【表3-2】

【0271】

【表3-3】

【0272】

【表3-4】

【0273】

【表3-5】

【0274】

【表3-6】

【0275】

【表3-7】

【0276】

【表3-8】

【0277】

【表3-9】

【0278】

【表3-10】

【0279】

【表3-11】

【0280】

【表3-12】

【0281】

下記の配列および考察において、連結についての上記の名称が使用されることが多い。例えば、ＰＭＯ^ａｐｎ連結を含む塩基は、^ａｐｎＢとして例示され、Ｂは、塩基である。他の連結は、同様に呼称する。さらに、省略された呼称を使用してもよく、例えば、上記の括弧内の省略された呼称を使用し得る（例えば、^ａＢは、^ａｐｎＢを指す）。他の容易に同定可能な略語をまた使用し得る。

【0282】

上で述べたように、本開示はまた、修飾された末端基を含むオリゴマーを提供する。様々な化学部分によるオリゴマーの３’端および／または５’端の修飾は、オリゴマーに対して有益な治療特性（例えば、増強された細胞送達、効力、および／または組織分布など）を提供することを出願人等は見出した。様々な実施形態において、修飾された末端基は、疎水性部分を含み、一方、他の実施形態において、修飾された末端基は、親水性部分を含む。修飾された末端基は、上記の連結を伴って、または伴わずに存在し得る。例えば、いくつかの実施形態において、オリゴマーは、１つまたは複数の修飾された末端基およびタイプ（Ａ）の連結、例えば、Ｘが−Ｎ（ＣＨ_３）_２である連結を含む。他の実施形態において、オリゴマーは、１つまたは複数の修飾された末端基およびタイプ（Ｂ）の連結、例えば、Ｘが４−アミノピペリジン−１−イル（すなわち、ＡＰＮ）である連結を含む。また他の実施形態において、オリゴマーは、１つまたは複数の修飾された末端基、ならびに連結（Ａ）および（Ｂ）の混合物を含む。例えば、オリゴマーは、１つまたは複数の修飾された末端基（例えば、トリチルまたはトリフェニルアセチル）、ならびにＸが−Ｎ（ＣＨ_３）_２である連結およびＸが４−アミノピペリジン−１−イルである連結を含み得る。修飾された末端基および修飾された連結の他の組合せはまた、オリゴマーに対して都合よい治療特性を提供する。

【0283】

一実施形態において、末端修飾を含むオリゴマーは、下記の構造（ＸＶＩＩ）：

【0284】

【化29】

【0285】

またはその塩もしくは異性体を有し、式中、連結（Ａ）および（Ｂ）のいずれかについて、Ｘ、ＷおよびＹは、上記に定義されている通りであり、
Ｒ^１７は、それぞれの出現において独立に、非存在、水素またはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^１８およびＲ^１９は、それぞれの出現において独立に、非存在、水素、細胞透過性ペプチド、天然もしくは非天然のアミノ酸、Ｃ_２〜Ｃ_３０アルキルカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^２１またはＲ^２０であり、
Ｒ^２０は、それぞれの出現において独立に、グアニジニル、ヘテロシクリル、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルキル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキル；Ｃ_６〜Ｃ_３０アリール、Ｃ_７〜Ｃ_３０アラルキル、Ｃ_３〜Ｃ_３０アルキルカルボニル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキルカルボニル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキルアルキルカルボニル、Ｃ_７〜Ｃ_３０アリールカルボニル、Ｃ_７〜Ｃ_３０アラルキルカルボニル、Ｃ_２〜Ｃ_３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキルオキシカルボニル、Ｃ_７〜Ｃ_３０アリールオキシカルボニル、Ｃ_８〜Ｃ_３０アラルキルオキシカルボニル、または−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ^２２）_２であり、
Ｂは、塩基対合部分であり、
Ｌ^１は、アルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、アルキルアミノ、アミド、エステル、カルボニル、カルバメート、ホスホロジアミデート、ホスホロアミデート、ホスホロチオエート、ピペラジンおよびホスホジエステルから選択される、結合を含む長さが１８原子までの任意選択のリンカーであり、
ｘは、０以上の整数であり、Ｒ^１８またはＲ^１９の少なくとも１つは、Ｒ^２０であり、
Ｒ^１８またはＲ^１９の少なくとも１つは、Ｒ^２０であり、ただし、Ｒ^１７およびＲ^１８の両方が非存在ではない。

【0286】

修飾された末端基を有するオリゴマーは、任意の数のタイプ（Ａ）および（Ｂ）の連結を含み得る。例えば、オリゴマーは、連結タイプ（Ａ）のみを含み得る。例えば、各連結中のＸは、−Ｎ（ＣＨ_３）_２であり得る。代わりに、オリゴマーは、連結（Ｂ）のみを含み得る。特定の実施形態において、オリゴマーは、連結（Ａ）および（Ｂ）の混合物を含み、例えば、１〜４つのタイプ（Ｂ）の連結および連結の残りはタイプ（Ａ）である。これに関しては、連結には、これらに限定されないが、Ｘがタイプ（Ｂ）についてアミノピペリジニルであり、タイプ（Ａ）についてジメチルアミノである連結が含まれる。

【0287】

いくつかの実施形態において、Ｒ^１７は、非存在である。いくつかの実施形態において、Ｒ^１７は、水素である。いくつかの実施形態において、Ｒ^１７は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１７は、メチルである。また他の実施形態において、Ｒ^１７は、エチルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１７は、Ｃ_３アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１７は、イソプロピルである。他の実施形態において、Ｒ^１７は、Ｃ_４アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^１７は、Ｃ_５アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^１７は、Ｃ_６アルキルである。

【0288】

他の実施形態において、Ｒ^１８は、非存在である。いくつかの実施形態において、Ｒ^１８は、水素である。いくつかの実施形態において、Ｒ^１８は、下記でより詳細に記載するような細胞透過性ペプチドである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１８は、天然または非天然のアミノ酸、例えば、トリメチルグリシンである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１８は、Ｒ^２０である。

【0289】

他の実施形態において、Ｒ^１９は、非存在である。いくつかの実施形態において、Ｒ^１９は、水素である。いくつかの実施形態において、Ｒ^１９は、下記でより詳細に記載するような細胞透過性ペプチドである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１９は、天然または非天然のアミノ酸、例えば、トリメチルグリシンである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１９は、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^１７であり、例えば、Ｒ^１９は、下記の構造：

【0290】

【化30】

【0291】

を有し得る。

【0292】

他の実施形態において、Ｒ^１８またはＲ^１９は、Ｃ_２〜Ｃ_３０アルキルカルボニル、例えば、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｎＣＯ_２Ｈであり、ｎは、１〜６、例えば、２である。他の例において、Ｒ^１８またはＲ^１９は、アセチルである。

【0293】

いくつかの実施形態において、Ｒ^２０は、それぞれの出現において独立に、グアニジニル、ヘテロシクリル、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルキル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキル；Ｃ_６〜Ｃ_３０アリール、Ｃ_７〜Ｃ_３０アラルキル、Ｃ_３〜Ｃ_３０アルキルカルボニル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキルカルボニル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキルアルキルカルボニル、Ｃ_６〜Ｃ_３０アリールカルボニル、Ｃ_７〜Ｃ_３０アラルキルカルボニル、Ｃ_２〜Ｃ_３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキルオキシカルボニル、Ｃ_７〜Ｃ_３０アリールオキシカルボニル、Ｃ_８〜Ｃ_３０アラルキルオキシカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^２１、または−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ^２２）_２であり、Ｒ^２１は、１個もしくは複数の酸素またはヒドロキシル部分またはこれらの組合せを含むＣ_１〜Ｃ_３０アルキルであり、各Ｒ^２２は、Ｃ^６〜Ｃ^１２アリールオキシである。

【0294】

特定の他の実施形態において、Ｒ^１９は、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^２１であり、Ｒ^１８は、水素、グアニジニル、ヘテロシクリル、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルキル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキル；Ｃ_６〜Ｃ_３０アリール、Ｃ_３〜Ｃ_３０アルキルカルボニル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキルカルボニル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキルアルキルカルボニル、Ｃ_７〜Ｃ_３０アリールカルボニル、Ｃ_７〜Ｃ_３０アラルキルカルボニル、Ｃ_２〜Ｃ_３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキルオキシカルボニル、Ｃ_７〜Ｃ_３０アリールオキシカルボニル、Ｃ_８〜Ｃ_３０アラルキルオキシカルボニル、または−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ^２２）_２であり、各Ｒ^２２は、Ｃ^６〜Ｃ^１２アリールオキシである。

【0295】

他の実施形態において、Ｒ^２０は、それぞれの出現において独立に、グアニジニル、ヘテロシクリル、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルキル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキル；Ｃ_６〜Ｃ_３０アリール、Ｃ_３〜Ｃ_３０アルキルカルボニル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキルカルボニル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキルアルキルカルボニル、Ｃ_７〜Ｃ_３０アリールカルボニル、Ｃ_７〜Ｃ_３０アラルキルカルボニル、Ｃ_２〜Ｃ_３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキルオキシカルボニル、Ｃ_７〜Ｃ_３０アリールオキシカルボニル、Ｃ_８〜Ｃ_３０アラルキルオキシカルボニル、または−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ^２２）_２である。一方、他の例において、Ｒ^２０は、それぞれの出現において独立に、グアニジニル、ヘテロシクリル、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルキル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキル；Ｃ_６〜Ｃ_３０アリール、Ｃ_７〜Ｃ_３０アラルキル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキルカルボニル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキルアルキルカルボニル、Ｃ_７〜Ｃ_３０アリールカルボニル、Ｃ_７〜Ｃ_３０アラルキルカルボニル、Ｃ_２〜Ｃ_３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキルオキシカルボニル、Ｃ_７〜Ｃ_３０アリールオキシカルボニル、Ｃ_８〜Ｃ_３０アラルキルオキシカルボニル、または−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ^２２）_２である。

【0296】

いくつかの実施形態において、Ｒ^２０は、グアニジニル、例えば、モノメチルグアニジニルまたはジメチルグアニジニルである。他の実施形態において、Ｒ^２０は、ヘテロシクリルである。例えば、いくつかの実施形態において、Ｒ^２０は、ピペリジン−４−イルである。いくつかの実施形態において、ピペリジン−４−イルは、トリチルまたはＢｏｃ基で置換されている。他の実施形態において、Ｒ^２０は、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキルである。他の実施形態において、Ｒ^２０は、Ｃ_６〜Ｃ_３０アリールである。

【0297】

いくつかの実施形態において、Ｒ^２０は、Ｃ_７〜Ｃ_３０アリールカルボニルである。例えば、いくつかの実施形態において、Ｒ^２０は、下記の構造（ＸＶＩＩＩ）：

【0298】

【化31】

【0299】

を有し、式中、Ｒ^２３は、それぞれの出現において独立に、水素、ハロ、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルコキシ、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ_７〜Ｃ_３０アラルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはヘテロシクロアルキル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌａｌｋｙｌ）であり、１つのＲ^２３は、別のＲ^２３と接合して、ヘテロシクリル環を形成し得る。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲ^２３は、水素であり、例えば、いくつかの実施形態において、各Ｒ^２３は、水素である。他の実施形態において、少なくとも１つのＲ^２３は、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルコキシであり、例えば、いくつかの実施形態において、各Ｒ^２３は、メトキシである。他の実施形態において、少なくとも１つのＲ^２３は、ヘテロアリールであり、例えば、いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲ^２３は、下記の構造（ＸＶＩＩＩａ）または（ＸＶＩＩＩｂ）：

【0300】

【化32】

【0301】

の１つを有する。

【0302】

また他の実施形態において、１つのＲ^２３は別のＲ^２３と接合して、ヘテロシクリル環を形成する。例えば、一実施形態において、Ｒ^２０は、５−カルボキシフルオレセインである。

【0303】

他の実施形態において、Ｒ^２０は、Ｃ_７〜Ｃ_３０アラルキルカルボニルである。例えば、様々な実施形態において、Ｒ^２０は、下記の構造（ＸＩＸ）、（ＸＸ）または（ＸＸＩ）：

【0304】

【化33】

【0305】

の１つを有し、式中、Ｒ^２３は、それぞれの出現において独立に、水素、ハロ、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルコキシ、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ_７〜Ｃ_３０アラルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはヘテロシクロアルキルであり、１つのＲ^２３は、別のＲ^２３と接合して、ヘテロシクリル環を形成し得、Ｘは、−ＯＨまたはハロであり、ｍは、０〜６の整数である。いくつかの特定の実施形態において、ｍは、０である。他の実施形態において、ｍは、１であり、一方、他の実施形態において、ｍは、２である。他の実施形態において、少なくとも１つのＲ^２３は、水素であり、例えば、いくつかの実施形態において、各Ｒ^２３は、水素である。いくつかの実施形態において、Ｘは、水素である。他の実施形態において、Ｘは、−ＯＨである。他の実施形態において、Ｘは、Ｃｌである。他の実施形態において、少なくとも１つのＲ^２３は、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルコキシ、例えば、メトキシである。

【0306】

また他の実施形態において、Ｒ^２０は、Ｃ_７〜Ｃ_３０アラルキル、例えば、トリチルである。他の実施形態において、Ｒ^２０は、メトキシトリチルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^２０は、下記の構造（ＸＸＩＩ）：

【0307】

【化34】

【0308】

を有し、式中、Ｒ^２３は、それぞれの出現において独立に、水素、ハロ、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルコキシ、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ_７〜Ｃ_３０アラルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはヘテロシクロアルキルであり、１つのＲ^２３は、別のＲ^２３と接合して、ヘテロシクリル環を形成し得る。例えば、いくつかの実施形態において、各Ｒ^２３は、水素である。他の実施形態において、少なくとも１つのＲ^２３は、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルコキシ、例えば、メトキシである。

【0309】

また他の実施形態において、Ｒ^２０は、Ｃ_７〜Ｃ_３０アラルキルであり、Ｒ^２０は、下記の構造（ＸＸＩＩＩ）：

【0310】

【化35】

【0311】

を有する。

【0312】

いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲ^２３は、ハロ、例えば、クロロである。いくつかの他の実施形態において、１つのＲ^２３は、パラ位におけるクロロである。

【0313】

他の実施形態において、Ｒ^２０は、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルキルである。例えば、いくつかの実施形態において、Ｒ^２０は、Ｃ_４〜Ｃ_２０アルキルであり、１つまたは複数の二重結合を任意選択で含む。例えば、いくつかの実施形態において、Ｒ^２０は、三重結合、例えば、末端三重結合を含むＣ_４〜１０アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^２０は、ヘキシン−６−イルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^２０は、下記の構造（ＸＸＩＶ）、（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）または（ＸＸＶＩＩ）：

【0314】

【化36】

【0315】

の１つを有する。

【0316】

また他の実施形態において、Ｒ^２０は、Ｃ_３〜Ｃ_３０アルキルカルボニル、例えば、Ｃ_３〜Ｃ_１０アルキルカルボニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^２０は、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｐＳＨまたは−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｐＳＳＨｅｔであり、ｐは、１〜６の整数であり、Ｈｅｔは、ヘテロアリールである。例えば、ｐは、１であり得、またはｐは、２であり得る。他の例において、Ｈｅｔは、ピリジニル、例えば、ピリジン−２−イルである。他の実施形態において、Ｃ_３〜Ｃ_３０アルキルカルボニルは、さらなるオリゴマーで置換されており、例えば、いくつかの実施形態において、オリゴマーは、オリゴマーを別のオリゴマーの３’位に連結する、３’位におけるＣ_３〜Ｃ_３０アルキルカルボニルを含む。このような末端修飾は、本開示の範囲内に含まれる。

【0317】

他の実施形態において、Ｒ^２０は、アリールホスホリル部分、例えば、トリフェニルホスホリルでさらに置換されているＣ_３〜Ｃ_３０アルキルカルボニルである。このようなＲ^２０基の例には、表２における構造３３が含まれる。

【0318】

他の例において、Ｒ_２０は、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキルカルボニル、例えば、Ｃ_５〜Ｃ_７アルキルカルボニルである。これらの実施形態において、Ｒ_２０は、下記の構造（ＸＸＶＩＩＩ）：

【0319】

【化37】

【0320】

を有し、式中、Ｒ^２３は、それぞれの出現において独立に、水素、ハロ、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルコキシ、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ_７〜Ｃ_３０アラルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはヘテロシクロアルキルであり、１つのＲ^２３は別のＲ^２３と接合して、ヘテロシクリル環を形成し得る。いくつかの実施形態において、Ｒ^２３は、ヘテロシクリルアルキルであり、例えば、いくつかの実施形態において、Ｒ^２３は、下記の構造：

【0321】

【化38】

【0322】

を有する。

【0323】

いくつかの他の実施形態において、Ｒ^２０は、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキルアルキルカルボニルである。他の実施形態において、Ｒ^２０は、Ｃ_２〜Ｃ_３０アルキルオキシカルボニルである。他の実施形態において、Ｒ^２０は、Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキルオキシカルボニルである。他の実施形態において、Ｒ^２０は、Ｃ_７〜Ｃ_３０アリールオキシカルボニルである。他の実施形態において、Ｒ^２０は、Ｃ_８〜Ｃ_３０アラルキルオキシカルボニルである。他の実施形態において、Ｒ^２０は、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ^２２）_２であり、各Ｒ^２２は、Ｃ^６〜Ｃ^１２アリールオキシであり、例えば、いくつかの実施形態において、Ｒ^２０は、下記の構造（Ｃ２４）：

【0324】

【化39】

【0325】

を有する。

【0326】

他の実施形態において、Ｒ^２０は、１個または複数個のハロ原子を含む。例えば、いくつかの実施形態において、Ｒ^２０は、上記のＲ^２０部分のいずれかのペルフルオロ類似体を含む。他の実施形態において、Ｒ^２０は、ｐ−トリフルオロメチルフェニル、トリフルオロメチルトリチル、ペルフルオロペンチルまたはペンタフルオロフェニルである。

【0327】

いくつかの実施形態において、３’末端は、修飾を含み、他の実施形態において、５’末端は、修飾を含む。他の実施形態において、３’末端および５’末端の両方は、修飾を含む。したがって、いくつかの実施形態において、Ｒ^１８は、非存在であり、Ｒ^１９は、Ｒ^２０である。他の実施形態において、Ｒ^１９は、非存在であり、Ｒ^１８は、Ｒ^２０である。また他の実施形態において、Ｒ^１８およびＲ^１９は、各Ｒ^２０である。

【0328】

いくつかの実施形態において、オリゴマーは、３’修飾または５’修飾に加えて細胞透過性ペプチドを含む。したがって、いくつかの実施形態において、Ｒ^１９は、細胞透過性ペプチドであり、Ｒ^１８は、Ｒ^２０である。他の実施形態において、Ｒ^１８は、細胞透過性ペプチドであり、Ｒ^１９は、Ｒ^２０である。上記のさらなる実施形態において、細胞透過性ペプチドは、アルギニンに富んだペプチドである。

【0329】

いくつかの実施形態において、５’末端基（すなわち、Ｒ^１９）をオリゴマーに連結するリンカーＬ^１は、存在または非存在であり得る。リンカーは、任意の数の官能基および長さを含み、ただし、リンカーは、５’末端基をオリゴマーに連結するその能力を保持し、かつリンカーは、配列特異的様式で標的配列に結合するオリゴマーの能力を妨害しない。一実施形態において、Ｌは、ホスホロジアミデートおよびピペラジン結合を含む。例えば、いくつかの実施形態において、Ｌは、下記の構造（ＸＸＩＸ）：

【0330】

【化40】

【0331】

を有し、式中、Ｒ^２４は、非存在、水素またはＣ_１〜Ｃ_６アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^２４は、非存在である。いくつかの実施形態において、Ｒ^２４は、水素である。いくつかの実施形態において、Ｒ^２４は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^２４は、メチルである。他の実施形態において、Ｒ^２４は、エチルである。また他の実施形態において、Ｒ^２４は、Ｃ_３アルキルである。いくつかの他の実施形態において、Ｒ^２４は、イソプロピルである。また他の実施形態において、Ｒ^２４は、Ｃ_４アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^２４は、Ｃ_５アルキルである。また他の実施形態において、Ｒ^２４は、Ｃ_６アルキルである。

【0332】

また他の実施形態において、Ｒ^２０は、Ｃ_３〜Ｃ_３０アルキルカルボニルであり、Ｒ^２０は、下記の構造（ＸＸＸ）：

【0333】

【化41】

【0334】

を有し、式中、Ｒ^２５は、水素または−ＳＲ^２６であり、Ｒ^２６は、水素、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールであり、ｑは、０〜６の整数である。

【0335】

上記のいずれかのさらなる実施形態において、Ｒ^２３は、それぞれの出現において独立に、水素、ハロ、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_３０アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはヘテロシクロアルキルである。

【0336】

いくつかの他の実施形態において、オリゴマーの３’末端のみが、上で述べた基の１つに結合体化している。いくつかの他の実施形態において、オリゴマーの５’末端のみが、上で述べた基の１つに結合体化している。他の実施形態において、３’末端および５’末端の両方は、上で述べた基の１つを含む。末端基は、上で述べた基の任意の１つ、または表４において例示した特定の基のいずれかから選択し得る。

【0337】

【表4-1】

【0338】

【表4-2】

【0339】

【表4-3】

【0340】

【表4-4】

【0341】

【表4-5】

【0342】

ペプチド輸送体
いくつかの実施形態において、対象オリゴマーは、ペプチド輸送体部分、例えば、細胞中へのオリゴマーの輸送を増強するのに有効な細胞透過性ペプチド輸送部分に結合体化している。例えば、いくつかの実施形態において、ペプチド輸送体部分は、アルギニンに富んだペプチドである。さらなる実施形態において、輸送部分は、オリゴマーの５’末端または３’末端に付着している。このようなペプチドがいずれかの末端に結合体化しているとき、反対の末端は本明細書に記載の修飾された末端基へのさらなる結合体化のために利用可能である。

【0343】

上記のいくつかの実施形態において、ペプチド輸送部分は、Ｘ’サブユニット、Ｙ’サブユニット、およびＺ’サブユニットから選択される６〜１６のサブユニットを含み、
（ａ）各Ｘ’サブユニットは、独立に、リシン、アルギニンまたはアルギニン類似体を表し、前記類似体は、構造Ｒ^３３Ｎ＝Ｃ（ＮＨ_２）Ｒ^３４の側鎖を含むカチオン性α−アミノ酸であり、Ｒ^３３は、ＨまたはＲであり、Ｒ^３４は、Ｒ^３５、ＮＨ_２、ＮＨＲ、またはＮＲ_３４であり、Ｒ^３５は、低級アルキルまたは低級アルケニルであり、酸素または窒素をさらに含み得、Ｒ^３３およびＲ^３４は、一緒に環を形成し得、側鎖は、Ｒ^３３またはＲ^３４を介して前記アミノ酸に連結しており、
（ｂ）各Ｙ’サブユニットは、独立に、中性アミノ酸−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨＲ）_ｎ−ＮＨ−を表し、ｎは、２〜７であり、各Ｒは独立に、Ｈまたはメチルであり、
（ｃ）各Ｚ’サブユニットは、独立に、中性アラルキル側鎖を有するα−アミノ酸を表し、
ペプチドは、（Ｘ’Ｙ’Ｘ’）_ｐ、（Ｘ’Ｙ’）_ｍ、および（Ｘ’Ｚ’Ｚ’）_ｐの１つによって表される配列を含み、ｐは、２〜５であり、ｍは、２〜８である。

【0344】

選択した実施形態において、各Ｘ’について、側鎖部分は、アミノ酸サブユニットアルギニン（Ａｒｇ）におけるように、グアニジルである。さらなる実施形態において、各Ｙ’は、−ＣＯ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＨＲ−ＮＨ−であり、ｎは、２〜７であり、Ｒは、Ｈである。例えば、ｎが５であり、ＲがＨであるとき、Ｙ’は、本明細書においてＡｈｘとして略される６−アミノヘキサン酸サブユニットであり、ｎが２であり、ＲがＨであるとき、Ｙ’は、β−アラニンサブユニットである。

【0345】

特定の実施形態において、このタイプのペプチドには、単一のＹ’サブユニットと交互になっているアルギニン二量体を含むものが含まれ、Ｙ’は、Ａｈｘである。例には、式（ＲＹ’Ｒ）_ｐまたは式（ＲＲＹ’）_ｐを有するペプチドが含まれ、Ｙ’は、Ａｈｘである。一実施形態において、Ｙ’は、６−アミノヘキサン酸サブユニットであり、Ｒは、アルギニンであり、ｐは、４である。

【0346】

さらなる実施形態において、各Ｚ’は、フェニルアラニンであり、ｍは、３または４である。

【0347】

いくつかの実施形態において、結合体化されたペプチドは、リンカーＡｈｘ−Ｂを介してオリゴマーの末端に連結しており、Ａｈｘは、６−アミノヘキサン酸サブユニットであり、Ｂは、β−アラニンサブユニットである。

【0348】

選択した実施形態において、各Ｘ’について、側鎖部分は、グアニジル（ＨＮ＝Ｃ（ＮＨ_２）ＮＨ−）、アミジニル（ＨＮ＝Ｃ（ＮＨ_２）Ｃ−）、２−アミノジヒドロピリミジル、２−アミノテトラヒドロピリミジル、２−アミノピリジニル、および２−アミノピリミドニル（ａｍｉｎｏｐｙｒｉｍｉｄｏｎｙｌ）からなる群から独立に選択され、グアニジルおよびアミジニルから好ましくは選択される。一実施形態において、側鎖部分は、アミノ酸サブユニットアルギニン（Ａｒｇ）におけるように、グアニジルである。

【0349】

いくつかの実施形態において、Ｘ’サブユニットが、Ｙ’サブユニットの間を介在せず、またはＸ’サブユニットの間に単一で散在していないという点で、Ｙ’サブユニットは、いずれにしても連続的である。しかし、いくつかの実施形態において、連結サブユニットは、Ｙ’サブユニットの間に存在し得る。一実施形態において、Ｙ’サブユニットは、ペプチド輸送体の末端において存在する。他の実施形態において、Ｙ’サブユニットは、Ｘ’サブユニットに隣接している。さらなる実施形態において、各Ｙ’は、−ＣＯ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＨＲ−ＮＨ−であり、ｎは、２〜７であり、Ｒは、Ｈである。例えば、ｎが５であり、ＲがＨであるとき、Ｙ’は、本明細書においてＡｈｘとして略される６−アミノヘキサン酸サブユニットである。この基の選択された実施形態において、各Ｘ’は、アルギニンサブユニットにおけるように、グアニジル側鎖部分を含む。このタイプの例示的なペプチドは、単一のＹ’サブユニットと交互になっているアルギニン二量体を含むものを含み、Ｙ’は好ましくは、Ａｈｘである。例には、式（ＲＹ’Ｒ）_４または式（ＲＲＹ’）_４を有するペプチドが含まれ、Ｙ’は好ましくは、Ａｈｘである。いくつかの実施形態において、核酸類似体は、好ましくはＣ末端において、末端Ｙ’サブユニットに連結している。他の実施形態において、リンカーは、構造ＡｈｘＢのものであり、Ａｈｘは、６−アミノヘキサン酸サブユニットであり、Ｂは、β−アラニンサブユニットである。

【0350】

上記のようなペプチド輸送部分は、付着した輸送部分の非存在下でのオリゴマーの取込みと比べて、および疎水性サブユニットＹ’を欠いている付着した輸送部分による取込みと比べて、付着したオリゴマーの細胞侵入を大いに増強することが示されてきた。このような増強された取込みは、疎水性サブユニットＹ’を欠いている付着した輸送部分による薬剤の取込みと比べて、哺乳動物細胞中への化合物の取込みにおける少なくとも２倍の増大、または他の実施形態において、４倍の増大によって証明され得る。いくつかの実施形態において、取込みは、結合体化されていない化合物と比べて、少なくとも２０倍または少なくとも４０倍増強される。

【0351】

ペプチド輸送部分のさらなる利益は、アンチセンスオリゴマーとその標的核酸配列との間の二重鎖を安定化させるその予想される能力である。理論に束縛されるものではないが、二重鎖を安定化させるこの能力は、正に荷電している輸送部分と負に荷電している核酸との間の静電相互作用に起因し得る。いくつかの実施形態において、多すぎる数の荷電しているサブユニットは配列特異性の低減をもたらし得るため、輸送体中の荷電しているサブユニットの数は、上で述べたように１４未満であるか、または他の実施形態において、８〜１１である。

【0352】

本開示はまた、ペプチド輸送部分および核酸類似体の結合体を組み込む。上で述べたように、ペプチド輸送部分は一般に、核酸類似体の細胞透過を増強するのに有効である。核酸類似体とペプチド輸送部分の残りとの間にグリシン（Ｇ）またはプロリン（Ｐ）アミノ酸サブユニットを含むこと（例えば、担体ペプチドのカルボキシまたはアミノ末端において）は、結合体の毒性を低減させ、一方、有効性は、ペプチド輸送部分と核酸類似体との間に異なる連結を有する結合体と比べて、同じままであるか、または改善されることを出願人等はまた発見した。このように、現在開示されている結合体はより良好な治療ウィンドウを有し、他のペプチド−オリゴマー結合体より有望な薬物候補である。

【0353】

毒性を低減させることに加えて、核酸類似体と担体ペプチドとの間のグリシンまたはプロリンアミノ酸サブユニットの存在は、さらなる利点を提供すると考えられる。例えば、グリシンは安価であり、ラセミ化の可能性を伴わずに核酸類似体（または、任意選択のリンカー）に容易にカップリングする。同様に、プロリンは、ラセミ化を伴わずに容易にカップリングし、またヘリックス形成剤ではない担体ペプチドを提供する。プロリンの疎水性はまた、細胞の脂質二重層との担体ペプチドの相互作用に関して特定の利点を与え得、複数のプロリンを含む担体ペプチド（例えば、特定の実施形態において）は、Ｇ−四重体形成に抵抗し得る。最終的に、特定の実施形態において、プロリン部分がアルギニンアミノ酸サブユニットに隣接しているとき、アルギニン（ａｒｇｉｎｅ）−プロリンアミド結合が一般のエンドペプチダーゼによって切断可能でないため、プロリン部分は、結合体に対して代謝安定性を与える。

【0354】

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドへのペプチドの結合体化は、参照によりその全体が組み込まれているＰＣＴ公開ＷＯ２０１２／１１５０９６０に記載の通りである。特定の実施形態において、例えば、ペプチドが結合体化したオリゴヌクレオチドは、ＣＰＰとアンチセンスオリゴヌクレオチドとの間のリンカーとしてグリシンを利用する。例えば、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、アルギニンに富んだペプチド、例えば、（Ａｒｇ）６Ｇｌｙ（オリゴヌクレオチドに連結している６つのアルギニンおよび１つのグリシン）にカップリングすることができる。一例として、このペプチドはＰＭＯに結合体化することができ、「Ｒ６−Ｇ−ＰＭＯ」として公知である。

【0355】

様々なリンカー（Ｃ、Ｇ、Ｐ、Ａｈｘ、Ｂ）を含むさらなる例示的なアルギニンに富んだ細胞透過性ペプチド輸送体を、下記の表５において示す。上記の表２において開示するように、好ましい細胞透過性ペプチド輸送体は、グリシンリンカー（Ｒ_６Ｇ）を介して３’末端においてＰＭＯに結合体化している配列番号４５である。５’末端へのＲ_６Ｇの連結はまた、好ましい一実施形態である。

【0356】

【表5】

【0357】

インビトロでの使用方法
別の局面において、本発明は、インビトロで細胞または組織を処理して、有益な様式で１種またはそれより多いｍＲＮＡアイソフォームおよび／または変異体タンパク質の発現を低減するために、本明細書に記載のＬＭＮＡおよび／またはＨＧＰＳを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用する方法に関する。本発明によってモジュレートされ得る細胞または組織は、好ましくは哺乳動物細胞であるか、またはより好ましくはヒト細胞である。このような細胞は、健常な状態のものであっても、病的な状態であってもよい（例えば、プロジェリンを発現する細胞）。特定の局面において、この細胞は、早老性ラミノパシー（ｐｒｏｇｅｒｏｉｄ ｌａｍｉｎｏｐａｔｈｙ）をもたらすプロジェリンを発現する細胞である。

【0358】

したがって、特定の実施形態は、概して異常にスプライシングされたＬＭＮＡ ｍＲＮＡの発現をインビトロで低減するための方法に関し、この方法は、細胞と本明細書に記載の１つまたは複数のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはそれを含む組成物とを接触させ、それによってプロジェリンの発現を低減させるステップを含む。これらおよび関連する方法は、本明細書に記載されかつ当該分野で公知の変異体ＬＭＮＡ ｍＲＮＡアイソフォームの任意の１つまたは複数の発現を低減するために使用され得る。

【0359】

上記インビトロ方法は、薬学的に許容される担体と組み合わせてオリゴヌクレオチドを含む組成物を使用し得る。「薬学的に許容される」という語句は、本明細書において、合理的な利益／リスク比と釣り合った、過剰な毒性も刺激もアレルギー反応も他の問題も合併症も伴わない、妥当な医学的判断の範囲内で、細胞および/または組織と接触させる使用に適した化合物、材料、組成物、および／または剤形を指すために用いられる。

【0360】

「薬学的に許容される担体」という語句は、薬学的に許容される材料、組成物またはビヒクル、例えば、液体または固体充填剤、希釈剤、賦形剤、製造助剤（例えば、滑沢剤、タルクマグネシウム、ステアリン酸カルシウムもしくはステアリン酸亜鉛、もしくはステアリン酸（ｓｔｅｒｉｃ ａｃｉｄ））、または溶媒封入材料を意味する。各担体は、製剤の他の成分と適合性であり、接触させる細胞または組織に対して傷害性でないという意味で「許容され」なくてはならない。

【0361】

薬学的に許容される担体としての役割を果たすことができる材料のいくつかの例には、これらに限定されないが、（１）糖、例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース；（２）デンプン、例えば、トウモロコシデンプンおよびバレイショデンプン；（３）セルロース、およびその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース；（４）トラガカント粉末；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）賦形剤、例えば、カカオバターおよび坐剤ろう；（９）油、例えば、ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油；（１０）グリコール、例えば、プロピレングリコール；（１１）ポリオール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール；（１２）エステル、例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル；（１３）寒天；（１４）緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質を含まない水；（１７）等張食塩水；（１８）リンゲル液；（１９）エチルアルコール；（２０）ｐＨ緩衝化溶液；（２１）ポリエステル、ポリカーボネートおよび／またはポリ無水物；ならびに（２２）医薬製剤中で用いられる他の無毒性の適合性物質が含まれる。

【0362】

本明細書において引用される全ての刊行物および特許出願は、それぞれの個々の刊行物または特許出願が特におよび個々に参照により組み込まれていることが示されるかのように参照により本明細書に組み込まれている。

【0363】

理解を明確にするために上記の発明を例示および例として少し詳しく記載してきたが、添付の特許請求の範囲の精神または範囲を逸脱することなく、特定の変更および修正をそれに行い得ることは、本発明の教示に鑑みて当業者には容易に明らかであろう。下記の実施例は、限定のためではなく例示としてのみ提供する。当業者は、本質的に同様の結果を得るために変更または修正することができる種々の重大でないパラメーターを容易に認識する。

【0364】

【表6-1】

【0365】

【表6-2】

【実施例】

【0366】

（実施例１）
ＬＭＮＡを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用したＨＧＰＳ細胞の処理
２種の初代線維芽細胞系統であるＨＧＰＳ線維芽細胞（ＨＧＡＤＦＮ１６７）および対照線維芽細胞（ＨＧＦＤＦＮ１６８）を使用した。ＨＧＰＳおよび対照細胞を、約１０，０００個の細胞／ウェルの密度で２４ウェルディッシュ中に播種した。ラミン−ＡプレｍＲＮＡのエキソン１１および／または１０を標的としたモルホリノオリゴヌクレオチドを、遊離取込みによって、またはｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ（例えば、Ａｍａｘａ）によって、培養したＨＧＰＳ細胞中に個々に導入した。遊離取込みのために、細胞を、２５μＭまたは５０μＭまたは８０ｕＭのＰＭＯオリゴヌクレオチドを含有する培地中で１〜２週間培養した。次いで、これらの細胞を、抗プロジェリン抗体または抗ラミンＡ／Ｃ抗体を伴う免疫蛍光によってスクリーニングした。プロジェリン染色の蛍光強度を、Ｚｅｉｓｓ蛍光顕微鏡およびＳＰＯＴプログラムを使用して定量化した。実験は三連で行い、プロジェリンの下方調節において効果を示したＰＭＯを、さらなる分析のために選択した。分析は、プロジェリン特異的プライマーによる定量的ＲＴ−ＰＣＲ、および抗プロジェリン抗体によるウエスタンブロッティング分析を含んだ。

【0367】

（実施例２）
ＬＭＮＡを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理の後のＨＧＰＳ細胞の蛍光免疫染色
蛍光免疫染色：免疫蛍光のために、細胞を４ウェルチャンバースライド上に播種した。４％パラホルムアルデヒド／ＰＢＳ中で室温にて１５分間固定化した後、細胞を０．５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００／ＰＢＳで室温にて５分間透過処理し、それに続いてブロック溶液中で４℃にて一晩インキュベートした（ブロック溶液：４％ＢＳＡ／ＴＢＳ）。細胞を、マウスモノクローナル抗ラミンＡ／Ｃ（ＭＡＢ３２１１、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ）およびウサギポリクローナル抗プロジェリン（カスタムペプチド抗体、Ｙｅｎｚｍ）で、翌日３時間室温にて染色した。一次抗体を、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ−標識二次抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で検出した。ＤＡＰＩを含有するＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ封入剤を乗せたスライドを、Ｚｅｉｓｓ蛍光顕微鏡で観察した。曝露時間および取得の設定を、実験の各セットの初めに確立し、全ての処理について一定に維持した。実験の結果を、図２において記載する。オリゴヌクレオチドのいくつかは、プロジェリンを有意に下方調節した。

【0368】

（実施例３）
ＬＭＮＡを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理の後のＨＧＰＳ細胞のＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティング分析
ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティング分析：処理された細胞を集め、ＰＢＳ中で２回すすぎ、次いでＬａｅｍｍｌｉ ＳＤＳ−ＰＡＧＥローディングバッファー中で溶解した。試料を９５℃にて１５分間加熱し、次いで１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上にロードした。ウエスタンブロット分析に関して、タンパク質を、ニトロセルロース膜上に移した。膜を５％ミルク／ＴＢＳＴで４℃にて一晩ブロックし、４％ＢＳＡ／ＴＢＳＴに希釈した一次抗体と共に室温にて１〜３時間インキュベートした。ＴＢＳＴで洗浄した後、膜を１％ミルク／ＴＢＳＴに１：５０００で希釈した二次抗体中で室温にて１時間インキュベートした。化学発光は、ＥＣＬウエスタンブロッティング検出キット（Ｐｉｅｒｃｅ）で検出した。使用した一次抗体は、マウスモノクローナル抗ラミンＡ／Ｃ（ＭＡＢ３２１１、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ）、ウサギポリクローナル抗プロジェリン（カスタムペプチド抗体、Ｙｅｎｚｍ）およびウサギポリクローナル抗アクチン（汎アクチン、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を含む。実験の結果を、図３において記載する。６９９（配列番号４）に相当するオリゴヌクレオチドは、ＬＭＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位から取り出されており、ＬＭＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位と重複しないにも関わらず、実験においてプロジェリンの有意な下方調節を示した。

【0369】

（実施例４）
ＬＭＮＡを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理の後のＨＧＰＳ細胞の定量的ＲＴ−ＰＣＲ分析
定量的ＲＴ−ＰＣＲ：定量的ＲＴ−ＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）実験を行い、オリゴヌクレオチド６９９（配列番号４）および７０６（配列番号１１）による処理に続いて、１６４線維芽細胞（ｐ１３、古典的ＨＧＰＳ）におけるプロジェリン、ラミンＡおよびβ−アクチンの発現レベルを測定した。全ての反応は、製造業者の指示によって、ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎミックス（Ｑｉａｇｅｎ）を使用してＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ７９００ＨＴ ＦａｓｔリアルタイムＰＣＲシステムにて三連で行った。反応条件は、以下の通りであった。５０℃にて２分を１サイクル；９５℃にて１５分を１サイクル；ならびに９５℃にて１５秒、５７℃にて１分、および７２℃にて４５秒を４０サイクル。β−アクチンフォワードプライマーについての配列は、ＴＣＴＴＴＧＣＡＧＣＣＡＣＡＴＴＣＣＣＧであり、リバースプライマーは、ＧＧＣＴＴＧＣＧＧＧＴＧＴＴＡＡＡＡＧＣである。プロジェリン／ラミンＡを増幅するためのフォワードプライマーの配列は、ＧＣＡＡＣＡＡＧＴＣＣＡＡＴＧＡＧＧＡＣＣＡである。プロジェリン特異的リバースプライマーおよびラミンＡ特異的リバースプライマーについて、末位から２番目の塩基において変異を導入して、特異性を増大させることによって、増幅困難な変異系戦略により設計した。プロジェリン特異的プライマー配列は、ＣＡＴＧＡＴＧＣＴＧＣＡＧＴＴＣＴＧＧＧＧＧＣＴＣＴＧＧＡＣであり、ラミンＡについての特異的プライマー配列は、ＣＡＴＧＡＴＧＣＴＧＣＡＧＴＴＣＴＧＧＧＧＧＣＴＣＴＧＧＡＴである。実験の結果を、図４において記載する。

【0370】

（実施例５）
ＬＭＮＡを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理の後のＨＧＰＳ細胞のＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティング分析
ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティング分析：処理された細胞を集め、ＰＢＳ中で２回すすぎ、次いでＬａｅｍｍｌｉ ＳＤＳ−ＰＡＧＥローディングバッファー中で溶解した。試料を９５℃にて１５分間加熱し、次いで１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上にロードした。ウエスタンブロット分析に関して、タンパク質を、ニトロセルロース膜上に移した。膜を５％ミルク／ＴＢＳＴで４℃にて一晩ブロックし、４％ＢＳＡ／ＴＢＳＴに希釈した一次抗体と共に室温にて１〜３時間インキュベートした。ＴＢＳＴで洗浄した後、膜を１％ミルク／ＴＢＳＴに１：５０００で希釈した二次抗体中で室温にて１時間インキュベートした。化学発光は、ＥＣＬウエスタンブロッティング検出キット（Ｐｉｅｒｃｅ）で検出した。使用した一次抗体は、マウスモノクローナル抗ラミンＡ／Ｃ（ＭＡＢ３２１１、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ）、ウサギポリクローナル抗プロジェリン（カスタムペプチド抗体、Ｙｅｎｚｍ）および西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合体化抗アクチン（Ｓｉｇｍａ）を含む。実験の結果を、図５において記載する。オリゴヌクレオチド６９９（配列番号４）は、これがＬＭＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位から取り出され、ＬＭＮＡのエキソン１１潜在的スプライス部位と重複しないにも関わらず、プロジェリンの下方調節およびラミンＡの上方調節を起こした。

【0371】

【化42】

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図1E】

【図1F】

【図1G】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]