特許 6144254 ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンナノファイバを用いた疾患の治療

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6144254

(24)【登録日】2017年5月19日

(45)【発行日】2017年6月7日

(54)【発明の名称】ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンナノファイバを用いた疾患の治療

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/715 20060101AFI20170529BHJP

   A61P 31/22 20060101ALI20170529BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20170529BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20170529BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20170529BHJP

   A61K 9/70 20060101ALI20170529BHJP

   A61K 9/14 20060101ALI20170529BHJP

   A61K 9/10 20060101ALI20170529BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20170529BHJP

   A61K 9/06 20060101ALI20170529BHJP

   A61K 9/107 20060101ALI20170529BHJP

   A61K 9/12 20060101ALI20170529BHJP

   A61L 27/20 20060101ALI20170529BHJP

   A61K 36/02 20060101ALI20170529BHJP

   A61K 31/722 20060101ALI20170529BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/715

   A61P31/22

   A61P1/04

   A61P17/00

   A61P29/00

   A61K9/70

   A61K9/14

   A61K9/10

   A61K9/08

   A61K9/06

   A61K9/107

   A61K9/12

   A61L27/20

   A61K36/02

   A61K31/722

【請求項の数】36

【全頁数】114

(21)【出願番号】特願2014-505398(P2014-505398)

(86)(22)【出願日】2012年4月16日

(65)【公表番号】特表2014-514309(P2014-514309A)

(43)【公表日】2014年6月19日

(86)【国際出願番号】US2012033782

(87)【国際公開番号】WO2012142581

(87)【国際公開日】20121018

【審査請求日】2015年4月16日

(31)【優先権主張番号】61/476,237

(32)【優先日】2011年4月15日

(33)【優先権主張国】US

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】501250337

【氏名又は名称】マリン ポリマー テクノロジーズ，インコーポレーテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110000338

【氏名又は名称】特許業務法人ＨＡＲＡＫＥＮＺＯ ＷＯＲＬＤ ＰＡＴＥＮＴ ＆ ＴＲＡＤＥＭＡＲＫ

(72)【発明者】

【氏名】ヴォルナキス，ジョン，エヌ．

(72)【発明者】

【氏名】フィンキールシュタイン，セルジオ

【審査官】 鈴木 理文

(56)【参考文献】

【文献】 Abstr. Paper. Am. Chem. Soc.，２０１０年，Vol.239，p.527-CHED

【文献】 J. Immunol.，２００６年，Vol.177，pp.8658-8666

【文献】 J. Allergy Clin. Immunol.，２００７年，Vol.119 No.4，pp.1022-1025

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３１／７１５

Ａ６１Ｋ ９／０６

Ａ６１Ｋ ９／０８

Ａ６１Ｋ ９／１０

Ａ６１Ｋ ９／１０７

Ａ６１Ｋ ９／１２

Ａ６１Ｋ ９／１４

Ａ６１Ｋ ９／７０

Ａ６１Ｋ ３１／７２２

Ａ６１Ｋ ３６／０２

Ａ６１Ｌ ２７／２０

Ａ６１Ｐ １／０４

Ａ６１Ｐ １７／００

Ａ６１Ｐ ２９／００

Ａ６１Ｐ ３１／２２

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＨＳＶ感染を有するヒト対象に、ＨＳＶ感染の治療のために局所投与するための量のポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンの短ファイバ（ｓＮＡＧナノファイバ）を含む組成物であって、
（ｉ）５０％を超える上記ｓＮＡＧナノファイバは、長さが約１から１５μｍの間であるか、あるいは、
（ｉｉ）上記ｓＮＡＧナノファイバの長さが約１５μｍ未満であり、上記ｓＮＡＧナノファイバは、８０％以上のＮ−アセチルグルコサミン単糖類を含む、組成物。

【請求項2】

上記量が、以下の（ｉ）〜（ｉｖ）のうちの１つ以上を充足するための効果的な量である、請求項１に記載の組成物。
（ｉ）上記ＨＳＶ感染又は上記ＨＳＶ感染の１以上の症状の重症度の軽減、
（ｉｉ）上記ＨＳＶ感染又は上記ＨＳＶ感染の１以上の症状の持続時間の短縮、
（ｉｉｉ）上記ＨＳＶ感染の負荷又はＨＳＶの数の削減、及び、
（ｉｖ）上記ＨＳＶ感染に関連する１以上の症状の根絶。

【請求項3】

ＨＳＶ感染によって引き起こされる疾患が進行する危険性のあるヒト対象に、ＨＳＶ感染によって引き起こされる疾患を予防するために局所投与するための量のポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンの短ファイバ（ｓＮＡＧナノファイバ）を含む組成物であって、
（ｉ）５０％を超える上記ｓＮＡＧナノファイバは、長さが約１から１５μｍの間であるか、あるいは、
（ｉｉ）上記ｓＮＡＧナノファイバの長さが約１５μｍ未満であり、上記ｓＮＡＧナノファイバは、８０％以上のＮ−アセチルグルコサミン単糖類を含む、組成物。

【請求項4】

上記量は、上記ＨＳＶ感染によって引き起こされる疾患、及び／又は、上記ＨＳＶ感染によって引き起こされる疾患の１以上の症状の発生、進行または再発を防止するために効果的な量である、請求項３に記載の組成物。

【請求項5】

ＨＳＶ感染によって引き起こされる疾患を有するヒト対象に、ＨＳＶ感染によって引き起こされる疾患の治療のために局所投与するための量のポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンの短ファイバ（ｓＮＡＧナノファイバ）を含む組成物であって、
（ｉ）５０％を超える上記ｓＮＡＧナノファイバは、長さが約１から１５μｍの間であるか、あるいは、
（ｉｉ）上記ｓＮＡＧナノファイバの長さが約１５μｍ未満であり、上記ｓＮＡＧナノファイバは、８０％以上のＮ−アセチルグルコサミン単糖類を含む、組成物。

【請求項6】

上記量が、以下の（ｉ）〜（ｉｖ）のうちの１つ以上を充足するための効果的な量である、請求項５に記載の組成物。
（ｉ）上記ＨＳＶ感染によって引き起こされる疾患又は上記ＨＳＶ感染によって引き起こされる疾患の１以上の症状の重症度の軽減、
（ｉｉ）上記ＨＳＶ感染によって引き起こされる疾患又は上記ＨＳＶ感染によって引き起こされる疾患の１以上の症状の持続時間の短縮、
（ｉｉｉ）上記ＨＳＶ感染によって引き起こされる疾患又は上記ＨＳＶ感染によって引き起こされる疾患の１以上の症状の進行阻止、及び、
（ｉｖ）上記ＨＳＶ感染によって引き起こされる疾患に関連する症状数の減少。

【請求項7】

（ｉ）５０％を超える上記ｓＮＡＧナノファイバが、長さが約１から１０μｍの間であるか、あるいは、
（ｉｉ）上記ｓＮＡＧナノファイバの長さが約１０μｍ未満であり、上記ｓＮＡＧナノファイバは、８０％以上のＮ−アセチルグルコサミン単糖類を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項8】

上記ＨＳＶ感染又は上記ＨＳＶ感染によって引き起こされる疾患は、局所的なＨＳＶ感染又は局所的なＨＳＶ感染によって引き起こされる疾患である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項9】

上記対象の皮膚又は粘膜に投与される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項10】

上記ＨＳＶ感染又は上記ＨＳＶ感染によって引き起こされる疾患の症状のある部位又はその近傍に局所投与される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項11】

上記ＨＳＶ感染又は上記ＨＳＶ感染によって引き起こされる疾患の症状は、発疹、病斑、ヘルペス、水疱、丘疹又は小胞である、請求項１０に記載の組成物。

【請求項12】

上記ＨＳＶ感染又は上記ＨＳＶ感染によって引き起こされる疾患は、口唇ヘルペス、陰部ヘルペスまたは帯状疱疹である、請求項３〜１１のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項13】

上記ＨＳＶ感染又は上記ＨＳＶ感染によって引き起こされる疾患は、口唇ヘルペスの再発である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項14】

上記ｓＮＡＧナノファイバは、膜、粉、懸濁液、溶液、軟膏、クリーム、スプレー又はゲルとして形成されている、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項15】

上記ｓＮＡＧナノファイバは、平均の長さが約１０μｍ未満である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項16】

上記ｓＮＡＧナノファイバは、平均の長さが約１μｍから１０μｍの間である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項17】

上記ｓＮＡＧナノファイバは、平均の長さが、約２μｍから８μｍの間であるか、あるいは、約４μｍから７μｍの間である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項18】

９０％を超える上記ｓＮＡＧナノファイバは、長さが約１から１５μｍの間である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項19】

上記ｓＮＡＧナノファイバの長さが、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）分析によって測定される、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項20】

上記ｓＮＡＧナノファイバは、微小藻類のポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミン由来である、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項21】

上記ｓＮＡＧナノファイバは、甲殻類のポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミン由来ではない、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項22】

上記ｓＮＡＧナノファイバは、９０％または９５％を超える量のＮ−アセチルグルコサミン単糖類を含む、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項23】

上記ｓＮＡＧナノファイバは、１００％の量のＮ−アセチルグルコサミン単糖類を含む、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項24】

上記ｓＮＡＧナノファイバは、溶出試験、筋肉内移植試験、皮内反応試験、及び／又は、全身性試験において試験したときに、非反応性である、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項25】

上記ｓＮＡＧナノファイバは、筋肉内移植試験において試験したときに、非反応性である、請求項２４に記載の組成物。

【請求項26】

上記ｓＮＡＧナノファイバは、ＭＴＴ分析において、血清欠乏ヒト臍帯静脈内皮細胞の代謝率を上昇させ、及び／又は、トリパンブルー排除試験において、血清欠乏ヒト臍帯静脈内皮細胞のアポトーシスを救済しない、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項27】

別の抗ウイルス剤を含んでいない、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項28】

別の抗ウイルス剤と共に投与されない、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項29】

別の抗炎症剤を含んでいない、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項30】

免疫システムを増強する別の薬剤を含んでいない、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項31】

別の活性成分を含んでいない、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項32】

別の療法と共同では投与されない、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項33】

上記ｓＮＡＧナノファイバが、約１００μｍの長さの微小藻類のポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンファイバの微細構造を有している、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項34】

上記ｓＮＡＧナノファイバが、約１００μｍの長さの微小藻類のポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンファイバの化学的構造及び物理的構造を有する、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項35】

上記化学的構造及び上記物理的構造は、赤外線（ＩＲ）スペクトル、元素分析および走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）分析により測定される、請求項３４に記載の組成物。

【請求項36】

上記ｓＮＡＧナノファイバの赤外線（ＩＲ）スペクトルが、約１００μｍの長さの微小藻類のポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンと同等であるか、あるいは、実質的に同等である、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【発明の詳細な説明】

【0001】

１．序論
本発明は、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン及び／又はその誘導体の短ファイバ（ｓＮＡＧナノファイバ）を含む組成物、並びに、疾患の治療における当該組成物の使用に関する。

【0002】

２．背景技術
ディフェンシンは、小さく（３〜４ｋＤａ）、システインリッチなカチオンペプチドであり、動物、昆虫及び植物中において見られ、そのジスルフィド結合のパターンに基づいて、異なるファミリー（α、β及びθ）に分類されている。これらの小さいペプチドは、先天性免疫の重要なエフェクターであり、結果として、種々の疾患に対する体内の戦闘において重要な役割を果たす。

【0003】

現時点において、多くの疾患が不治であるか、又は、可能な治療が最適状態には及んでいない。これは、治療が部分的にのみ効果的であるため、又は、治療に関連する副作用のためである。このような疾患は、例えば、癌、いくつかのウイルス疾患、いくつかの真菌性疾患、炎症性腸疾患（例えば、クローン病）、並びに、乾癬及び皮膚炎のような皮膚病を含む。これらの疾患に対する効果的な治療の要求が存在し、この治療が、単独で又は標準的な療法と組み合わせて利用することが可能であり、安全で効果的であることが求められている。

【0004】

３．概要
一つの局面において、ディフェンシン生成及び／又は分泌を増加させる、感染症及び／又は疾患を予防及び／又は治療する有益な方法を、ここに記載する。この方法は、ポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミン及び／又はその誘導体の短ファイバ（本明細書においては「ｓＮＡＧナノファイバ」と称する）を含む組成物を、対象に投与することを含む。このような感染症及び／又は疾患の例は、固形癌、皮膚癌、ウイルス感染症、酵母感染症、真菌感染症、炎症性腸疾患、クローン病、乾癬、及び、皮膚炎を含むが、これに限定されない。

【0005】

一実施形態において、対象におけるウイルス感染症を治療する方法を、ここに記載する。この方法は、ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物を、ウイルス感染症（例えばＨＳＶ感染症）にかかった（診断された）患者に投与することを含む。他の実施形態において、ヒト対象におけるウイルス疾患を予防する方法を、ここに記載する。この方法は、ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物を、ウイルス疾患が進行する危険性のある（例えば、ヘルペス又は病斑のようなＨＳＶ感染の症状のある）対象に投与することを含む。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ組成物を、対象に局所的に（例えば、皮膚又は粘膜に）投与する。特定の実施形態において、対象はヒトである。

【0006】

他の実施形態において、対象における固形癌を治療する方法を、ここに記載する。この方法は、ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物を、固形癌と診断された対象に投与することを含む。特定の実施形態において、固形癌の全て又は一部が対象から除去され（例えば、外科的除去）、そして、固形癌の全て又は一部が除去される前、除去される間及び／又は除去された後に、ｓＮＡＧナノファイバを固形癌部位に投与する。特定の実施形態において、対象はヒトである。

【0007】

他の実施形態において、対象における皮膚癌を治療する方法を、ここに記載する。この方法は、ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物を、皮膚癌と診断されたヒト対象に局所投与することを含む。特定の実施形態において、皮膚癌の全て又は一部が対象から除去され（例えば、外科的除去）、そして、皮膚癌の全て又は一部が除去される前、間及び／又は後に、ｓＮＡＧナノファイバを皮膚癌部位に投与する。特定の実施形態において、対象はヒトである。

【0008】

他の実施形態において、対象における炎症性腸疾患を治療する方法を、ここに記載する。この方法は、ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物を、炎症性腸疾患の対象（例えば、炎症性腸疾患と診断された対象）に投与することを含む。特定の実施形態において、対象におけるクローン病の治療方法を、ここに記載する。この方法は、ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物を、クローン病の対象（例えば、クローン病と診断された対象）に投与することを含む。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ組成物を、対象に局所（例えば、座薬により直腸に）投与する。特定の実施形態において、対象はヒトである。

【0009】

ここに記載した方法において検討するｓＮＡＧナノファイバは、以下の５．１の項に示すように、種々の長さ、幅及び分子量であってもよい。ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバの大部分（さらに、ある実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％若しくは９９％）、又は、ｓＮＡＧナノファイバの１００％は、その長さが、約１μｍから１５μｍの間である。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバの大部分（さらに、ある実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％若しくは９９％）、又は、ｓＮＡＧナノファイバの１００％は、その長さが、約２μｍから１０μｍの間、約４μｍから７μｍの間、約４μｍから１０μｍの間、又は、約５μｍから１０μｍの間である。ここに示した長さのｓＮＡＧナノファイバは、例えば、以下の５．２の項に示したように得られる。

【0010】

ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン又はその誘導体の放射線照射、例えば、ガンマ線照射により生成される。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、乾燥ファイバの形態（例えば、５０〜２０００ｋｇｙ）における、ポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンの放射線照射、又は、ウエットファイバの形態（例えば、１００〜５００ｋｇｙ）における、ポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンの放射線照射により生成される。

【0011】

ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、微小藻類由来である。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、甲殻類由来ではない。さらに他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、微小藻類、甲殻類（例えば、エビ）、菌類、又は、他の何れかのもの由来であってもよい。

【0012】

ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、Ｎ−アセチルグルコサミン単糖類及び／又はグルコサミン単糖類を含み、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は９９％より多いｓＮＡＧナノファイバの単糖類は、Ｎ−アセチルグルコサミン単糖類である。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、Ｎ−アセチルグルコサミン単糖類及び／又はグルコサミン単糖類を含み、７０％より多いｓＮＡＧナノファイバの単糖類は、Ｎ−アセチルグルコサミン単糖類である。

【0013】

ある実施形態において、ここに記載した方法において用いるｓＮＡＧナノファイバは、生体適合性試験に非反応性である。例えば、ここに記載した方法において用いるｓＮＡＧナノファイバは、溶出試験、筋肉内移植試験、皮内反応試験、又は、全身性試験において試験したときに、非反応性である。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物は、溶出試験、筋肉内移植試験、皮内反応試験、又は、全身性試験において試験したときに、非反応性である。他の実施形態において、ここに記載した方法において用いるｓＮＡＧナノファイバは、溶出試験、筋肉内移植試験、皮内反応試験、又は、全身性試験において試験したときに、グレード０又は１である。さらに他の実施形態において、ここに記載した方法において用いるｓＮＡＧナノファイバは、溶出試験、筋肉内移植試験、皮内反応試験、又は、全身性試験において試験したときに、最も穏やかに反応する。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ、又は、このようなナノファイバを含む組成物は、筋肉内移植試験により決定される場合、非反応性である。ある実施形態において、ここに記載した組成物は、例えば、投与部位において、アレルギー反応又は炎症を引き起こさない。他の実施形態において、ここに記載した組成物は、例えば、投与した部位において、最も穏やかなアレルギー反応又は最も穏やかな炎症を引き起こす。

【0014】

ある実施形態において、ここに記載した方法において使用するｓＮＡＧナノファイバは、ＭＴＴ分析において、血清欠乏ヒト臍帯静脈内皮細胞の代謝率を上昇させ、及び／又は、トリパンブルー排除試験において、血清欠乏ヒト臍帯静脈内皮細胞のアポトーシスを救済しない。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、ＭＴＴ分析において、血清欠乏ヒト臍帯静脈内皮細胞の代謝率を上昇させ、かつ、トリパンブルー排除試験において、血清欠乏ヒト臍帯静脈内皮細胞のアポトーシスを救済しない。

【0015】

ここに記載した組成物の検討した投与方法は、例えば皮膚の局所のように局所的；創傷部位、手術部位、ウイルス感染部位、真菌感染部位、若しくは、感染症状（例えば、腫物、水疱、発疹、創傷）部位に局所的；皮膚、粘膜（例えば、膣、肛門、喉、目、耳）、若しくは、他の組織表面のような体表面に局所的な投与である。ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ又はこのようなナノファイバを含む組成物は、手当用品、包帯、マット、スプレー、液体、懸濁液（例えば、濃厚懸濁液）、膜、粉、軟膏、クリーム、ペースト、座薬、又は、ゲルのような形態である。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ又はこのようなナノファイバを含む組成物は、懸濁液、クリーム、液体溶液、ゲル、軟膏、膜、粉、スプレー、又は、座薬のような形態である。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ又はこのようなナノファイバを含む組成物は、懸濁液（例えば、濃厚懸濁液）の形態である。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、固形物又はバリア形成物ではない。

【0016】

他の曲面において、ここに記載した方法において使用するための組成物を、ここに記載する。特定の実施形態において、組成物は、ｓＮＡＧナノファイバを含む。ある実施形態において、ここに記載した組成物は、ｓＮＡＧナノファイバと１以上の活性添加成分とを含む。この活性添加成分は、固形癌、皮膚癌、ウイルス感染、ウイルス疾患、酵母感染、真菌感染、真菌性疾患、炎症性腸疾患、クローン病、皮膚炎、及び、乾癬の、予防及び／又は治療に有用なものである。ある実施形態において、ここに記載した組成物は、いずれの抗菌添加剤（例えば、抗生物質）も含まない。特定の実施形態において、ここに記載した組成物は、唯一の活性成分としてｓＮＡＧナノファイバを含み、他にいずれの活性添加成分を含まない。

【0017】

ある実施形態において、ここに記載した組成物は、１以上のさらなる療法と共同投与してもよい。他の実施形態において、ここに記載した組成物は、他のいずれの療法とも共同では投与しない。

【0018】

３．１ 専門用語
ここで使用する限り、用語「ｓＮＡＧナノファイバ」、「ｓＮＡＧ」、「タリデルム（Taliderm）」又は「タリム（Talymed）」（以前は「タリデルム」として知られた）は、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン及び／又はその誘導体の短ファイバに関して、交換可能に使用される。好ましい実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン及び／又はその誘導体の短ファイバの全体からなる。タリデルム又はタリムは、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン及び／又はその誘導体の短ファイバの全体からなる膜である、ｓＮＡＧナノファイバの例である。

【0019】

ここで使用する限り、用語「約」は、任意の値の周囲の範囲を意味しており、結果値が、明白に記載された値と同一又は実質的に同一であること（例えば、１０％、５％又は１％内）を意味している。一実施形態において、用語「約」は、任意の値又は範囲の１０％以内であることを意味している。他の実施形態において、用語「約」は、任意の値又は範囲の５％以内であることを意味している。他の実施形態において、用語「約」は、任意の値又は範囲の１％以内であることを意味している。

【0020】

ここで使用する限り、用語「疾患」及び「病気」は、対象の状態に関して交換可能に用いられる。ここに記載した方法に基づき治療又は予防可能な疾患／病気の例は、固形癌、皮膚癌、ウイルス疾患、酵母疾患、真菌疾患、炎症性腸疾患、クローン病、皮膚炎、及び、乾癬を含むが、これに限定されない。ウイルス疾患、酵母疾患、及び、真菌疾患との関連で、疾患は、ウイルス、酵母又は真菌それぞれの感染の結果による病理状態である。

【0021】

ここで使用する限り、用語「感染」は、細胞又は対象において、病原体（例えば、ウイルス、酵母又は真菌）の増殖及び／又は存在による侵入を意味している。

【0022】

ここで使用する限り、数値用語「ｌｏｇ」は、ｌｏｇ_１０に関する。

【0023】

ここで使用する限り、用語「対象」及び「患者」は、動物（例えば、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、トリ、シチメンチョウ、ウズラ、ネコ、イヌ、ネズミ、ラット、ウサギ、ギニーピッグ等）に関して、交換可能に用いられる。いくつかの実施形態において、対象は、非霊長類及び霊長類のような哺乳動物である（例えば、サル及びヒト）。特定の実施形態において、対象はヒトである。

【0024】

ここで使用する限り、用語「効果的な量」は、ｓＮＡＧナノファイバ又はその組成物を対象に投与することとの関連でｓＮＡＧナノファイバ又はその組成物の量に関し、有益な効果又は治療効果が結果として得られる量である。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ又はその組成物の「効果的な量」は、ｓＮＡＧナノファイバ又はその組成物の量に関し、以下に示す効果のうち、少なくとも１、２、３、４又はそれ以上を達成するために十分な量である：（ｉ）対象若しくは対象集団における、疾患又はそれに関連する症状の重大性の縮小又は回復；（ｉｉ）対象若しくは対象集団における、疾患又はそれに関連する症状の持続期間の短縮；（ｉｉｉ）対象若しくは対象集団における、疾患又はそれに関連する症状の進行阻止；（ｉｖ）対象若しくは対象集団における、疾患又はそれに関連する症状の後退；（ｖ）対象若しくは対象集団における、疾患又はそれに関連する症状の発生又は攻撃阻止；（ｖｉ）対象若しくは対象集団における、疾患又はそれに関連する症状の再発防止；（ｖｉｉ）対象若しくは対象集団から、他の対象若しくは対象集団への、疾患の拡大防止又は低減；（ｖｉｉｉ）対象若しくは対象集団における、疾患に関連する臓器損傷の減少；（ｉｘ）対象若しくは対象集団の入院発生の減少；（ｘ）対象若しくは対象集団の入院期間の短縮；（ｘｉ）対象若しくは対象集団の生存率の上昇；（ｘｉｉ）対象若しくは対象集団の疾患の排除；（ｘｉｉｉ）対象若しくは対象集団の他の療法における予防又は治療効果の強化又は改善；（ｘｉｖ）対象の細胞、組織、臓器から、対象の他の細胞、組織、臓器への病原体拡散防止；（ｘｖ）対象若しくは対象集団における疾患の症状数の減少；（ｘｖｉ）病原体（例えば、ウイルス、真菌又は酵母）による感染の除去；（ｘｖｉｉ）感染に関連した１以上の症状の根絶；（ｘｖｉｉｉ）感染根絶に要求される期間の短縮；（ｘｉｘ）感染根絶に要求される期間の短縮；（ｘｘ）感染及び／又はこれに関連する１以上の症状の重症度の低減又は改善；（ｘｘｉ）感染及び／又はこれに関連する１以上の症状の再発防止；（ｘｘｉｉ）病原体における、例えばウイルス数等の測定値の減少又は除去；（ｘｘｉｉｉ）１つの対象から他の対象、又は、１つの臓器若しくは組織から他の臓器若しくは組織への病原体拡散の低減又は除去；（ｘｘｉｖ）病原体における、例えばウイルス数等の測定値の上昇防止；（ｘｘｖ）感染又はこれに関連する１以上の症状の発展又は攻撃防止；（ｘｘｖｉ）感染に関連した症状数の減少；（ｘｘｖｉｉ）感染に関連した炎症の安定化又は減少；（ｘｘｖｉｉｉ）１以上のディフェンシンタンパク質及び／又はディフェンシン様タンパク質の発現誘導；（ｘｘｉｘ）１以上のＴｏｌｌ様レセプターの発現誘導；（ｘｘｘ）病原体感染若しくはこれに関連した１以上病状の解消又は減退に有益な１以上の蛋白質の発現誘導；（ｘｘｘｉ）病原体感染又はこれに関連した疾患に関連した臓器不全の減退；（ｘｘｘｉｉ）病原体感染に起因する又は関連した状態の発現、発展又は再発の防止；（ｘｘｘｉｉｉ）死亡率低下；（ｘｘｘｉｖ）癌及び／又はこれに関連した１以上の症状の進展抑制；（ｘｘｘｖ）癌細胞群の減少又は除去；（ｘｘｘｖｉ）腫瘍又は新生物の成長低下；（ｘｘｘｖｉｉ）腫瘍サイズ（例えば、量又は直径）の縮小；（ｘｘｘｖｉｉｉ）初期、局所的及び／又は転移性癌の根絶、除去又は制御；（ｘｘｘｉｘ）転移数又はサイズの減少；（ｘｘｘｘ）患者の腫瘍フリー生存率の上昇；（ｘｘｘｘｉ）再発フリー生存率の上昇；（ｘｘｘｘｉｉ）寛解した患者数の増加；（ｘｘｘｘｉｉｉ）ＰＳＡ濃度、直腸内触診、超音波（例えば、経直腸超音波）、骨のスキャン、コンピュータ断層撮影スキャン、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）、動的コントラスト促進ＭＲＩ（ＤＣＥ−ＭＲＩ）又は陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャンのような、当業者が可能な従来の方法により測定した、腫瘍サイズが維持される、拡大しない、又は、標準的な療法投与後の腫瘍よりも拡大量が少ない；（ｘｘｘｉｖ）患者における寛解期間の延長；（ｘｘｘｘｖ）癌患者の症状フリー生存率の上昇；（ｘｘｘｘｖｉ）腫瘍又は腫瘍周囲炎又は浮腫の安定化又は減少；（ｘｘｘｘｖｉｉ）腫瘍代謝又は潅流の抑制又は減少；並びに／又は（ｘｘｘｉｉｉ）例えば、アンケート等のような当業者に公知の方法により評価した生活の質の向上。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバの「効果的な量」は、例えば、以下の５．６の項目に記載した特定のｓＮＡＧナノファイバ組成物の量に関連する。

【0025】

ここで使用する場合、用語「ヒト早産児」は、妊娠期間３７週未満で生まれたヒト乳児に関する。

【0026】

ここで使用する場合、用語「ヒト乳児」は、１歳までのヒトの新生児に関する。

【0027】

ここで使用する場合、用語「ヒト早産児」は、妊娠期間３７未満（例えば、妊娠３７週、３６週、３５週、３４週、３３週、３２週、３１週、３０週、２９週、２８週、又は、２８週よりも少ない週数未満）で生まれた１歳までのヒトの新生児に関する。

【0028】

ここで使用する場合、用語「ヒト幼児」は、１歳から３歳までのヒトに関する。

【0029】

ここで使用する場合、用語「ヒト小児」は、１歳から１８歳までのヒトに関する。

【0030】

ここで使用する場合、用語「ヒト成人」は、１８歳以上のヒトに関する。

【0031】

ここで使用する場合、用語「ヒト老人」は、６５歳以上のヒトに関する。

【0032】

ここで使用する場合、用語「低発現」は、（例えば、遺伝子による生成されるタンパク質又はペプチドのレベルに基づく）遺伝子発現との関連で、「標準的」な遺伝子発現よりも発現が少ないことに関する。特定の実施形態において、「低発現」は、「標準的」な遺伝子発現よりも、９９％未満、９５％未満、９０％未満、８５％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０%未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、又は２０％未満の遺伝子発現に関する。他の特定の実施形態において、「低発現」は、「標準的」な遺伝子発現の、約２０倍、約１５倍、約１０倍、約５倍、約４倍、約３倍、約２倍、又は、約１．５倍少ない遺伝子発現に関する。

【0033】

ここで使用する場合、用語「大多数」は、例えば５０．５％、５１％、５５％等を含む５０％よりも多いことに関する。

【0034】

ここで使用する場合、用語「療法群」及び「療法」は、病原体感染、疾患若しくはその症状、又は、ここに記載した疾患（例えば、クローン病、炎症性腸疾患、乾癬、皮膚炎及び固形癌）の予防及び／又は治療において使用可能な、いずれかの手順、方法、組成物、化合物、及び／又は、試薬に関してもよい。病原体は、ウイルス、真菌、又は、酵母であり得る。ある実施形態において、用語「療法群」及び「療法」は、薬剤療法、アジュバント療法、放射線療法、手術、生物学的療法、支持療法、及び／又は、病原体感染、疾患若しくはその症状、又はここに記載した疾患の治療及び／又は予防に有用な他の療法に関する。ある実施形態において、用語「療法」は、ｓＮＡＧナノファイバ又はその薬学組成物以外の療法に関する。特定の実施形態において、「追加療法」及び「追加療法群」は、ｓＮＡＧナノファイバ又はその薬学組成物を用いた治療以外の療法に関する。特定の実施形態において、療法には、アジュバント療法としてのｓＮＡＧナノファイバの使用を含む。例えば、薬学療法、生物学的療法、手術及び／又は支持療法と組み合わせたｓＮＡＧナノファイバの使用である。

【0035】

４．図面の簡単な説明
〔図１〕ナノファイバが、Ｅｔｓ１の上流レギュレータであるＡｋｔ１活性化を刺激する。（Ａ）は、ＮＡＧ応答によるリン酸化Ａｋｔ及び血清欠乏ＥＣのｓＮＡＧ刺激のウエスタンブロット分析である。（Ｂ）は、スクランブルコントロール（ＳＣＲ）又はＡｋｔ１ ｓｈＲＮＡレンチウイルスの何れかに感染したＥＣのＲＴ−ＰＣＲ分析、及び、ローディングコントロールとしてのＥｔｓ１及びＳ２６の発現評価である。（Ｃ）は、ｓＮＡＧナノファイバからＡｋｔ１、Ｅｔｓ１及びディフェンシンへ信号伝達する信号伝達経路の概略図である。

【0036】

〔図２〕Ａｋｔ１欠損動物における遅延した創傷治癒が、タリデルム治療により部分的に救済されている。（Ａ）は、タリデルムにより治療した又は治療していない、ＷＴ及びＡＫＴ１欠損創傷マウスの、代表的な図である。（Ｂ）は、創傷３日後のマウスにおける、代表的なマウス皮膚部分のＨ＆Ｅ染色である。

【0037】

〔図３〕ｓＮＡＧナノファイバが、一次内皮細胞におけるサイトカイン及びディフェンシン発現を刺激する。（Ａ）は、ａ−ディフェンシンに対する直接抗体を用いた、ｓＮＡＧにより治療した又は治療していないＥＣの免疫組織化学である。（Ｂ）は、ＥＣのナノファイバ治療（血清欠乏、５μｇ／ｍＬ又は１０μｇ／ｍＬのｓＮＡＧによる治療）が、α−ディフェンシン１−３の分泌をもたらしたことを示すＥＬＩＳＡである。

【0038】

〔図４〕ｓＮＡＧナノファイバが、Ａｋｔ１依存様式による一次内皮細胞におけるディフェンシン発現を刺激する。（Ａ）及び（Ｂ）は、ｓＮＡＧ（「ｓｎａｇ」）、ＰＤ９８０５９（ＭＡＰＫインヒビター、「ＰＤ」）、ウォルトマンニン（ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ）（ＰＩ３Ｋインヒビター、「ｗｔｍ」）、又は、スクランブルコントロール（「ＳＣＲ」）若しくはＡｋｔ１（「ＡＫＴ１」）ｓｈＲＮＡレンチウイルスによる感染、のいずれかの処理をした又は処理をしない血清欠乏ＥＣ（「ｓｓ」）の量的ＲＴ−ＰＣＲ分析、並びに、遺伝子発現の分析を示している。

【0039】

〔図５〕ｓＮＡＧナノファイバが、マウスケラチン生成細胞におけるβ−ディフェンシン３発現を刺激する。（Ａ）は、３日目における、ＷＴ及びＡｋｔ１欠損動物からのパラフィン包埋マウス皮膚創傷部位の、β−ディフェンシン３（右手上部パネルにおいて明るい染色として見られる；例えば濃白矢印を参照）及びＩｎｖｏｌｕｃｒｉｎ抗体での免疫蛍光染色である。（Ｂ）は、ＮＩＨＩｍａｇｅＪソフトウェアを用いた、β−ディフェンシン３免疫蛍光染色の定量化である（ＴＸ＝タリデルム；Ａｋｔ１＝Ａｋｔ１欠損）。（Ｃ）は、β−ディフェンシン３（明るい染色として見られる；例えば濃白矢印を参照）及びＴＯＰＲＯ−３（核染色；例えば薄白矢印を参照）により治療した及び治療していない、ＷＴ及びＡｋｔ１欠損ケラチン生成細胞の免疫蛍光染色である。ＷＴ及びＡｋｔ１タリデルムで治療した創傷におけるβ−ディフェンシン３染色の増加に注目する。

【0040】

〔図６〕Ａｋｔ１依存転写因子結合部位である。Ａｋｔ１依存転写因子結合部位の概略図である。Ｇｅｎｏｍａｔｉｘソフトウェアを用いて、転写開始部位の５００塩基上流を、ＤＥＦ１、４及び５のｍＲＮＡにおける保存部位として分析した（ＥＴＳ−黒楕円；ＦＫＨＤ−縞模様楕円；ＣＲＥＢ−白楕円；ＮＦＫＢ−格子縞楕円）。

【0041】

〔図７〕ｓＮＡＧ処理が、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるディフェンシンの発現及び分泌をもたらす。（Ａ）は、示した時間ｓＮＡＧ（５０μｇ／ｍＬ）で処理した血清欠乏（ＳＳ）一次内皮細胞のＲＴＰＣＲ分析、ならびに、β−ディフェンシン３及びα−ディフェンシン１の発現の評価である。（Ｂ）は、血清欠乏（非処理）又はｓＮＡＧナノファイバで処理した（１０μｇ／ｍＬで５時間）内皮細胞の免疫蛍光標識である。抗体は、α−ディフェンシン５（ＦＩＴＣ、左手上部パネル）、β−ディフェンシン３（テキサスレッド、右手上部パネル）に対する直接抗体である。核はＴＯＰＲＯ−３（青、左手下部パネル）で染色された。右手下部パネルは、三重オーバーレイを表している。（ｃ）は、血清欠乏（非処理）又はｓＮＡＧナノファイバで処理した（１０μｇ／ｍＬで５時間）ケラチン生成細胞（ＨａＣａｔ）の免疫蛍光標識である。抗体は、α−ディフェンシン５（ＦＩＴＣ、左手上部パネル）、β−ディフェンシン３（テキサスレッド、右手上部パネル）に対する直接抗体である。核はＴＯＰＲＯ−３（青、左手下部パネル）で染色した。

【0042】

〔図８〕ｓＮＡＧ誘導ディフェンシン発現がＡｋｔ１に依存する。（Ａ）は、ｓＮＡＧによる３時間の処理若しくは非処理、ＰＤ０９８０５９（「ＰＤ」）による処理（５０μＭ）若しくは非処理、ウォルトマンニン（「ＷＴＭ」）による処理（１００ｎｍ）若しくは非処理の、血清欠乏内皮細胞から単離した全長ＲＮＡからの、α−ディフェンシン１に対するプライマーを用いた量的ＲＴ−ＰＣＲ分析である。（Ｂ）は、ｓＮＡＧによる３時間の処理若しくは非処理、ＰＤ９８０５９による処理（５０μｍ）若しくは非処理、ウォルトマンニン（「ＷＴＭ」）による処理（１００ｎｍ）若しくは非処理の、血清欠乏内皮細胞から単離した全長ＲＮＡからのβ−ディフェンシン３の定量化であり、Ｓ２６に関連して示す。（Ｃ）は、示した時間ｓＮＡＧにより刺激した血清欠乏内皮細胞（ＳＳ）におけるリン酸化−Ａｋｔのウエスタンブロット分析である。ラインは、除去されたレーンを示している。（Ｄ）は、スクランブルコントロール（ＳＣＲ）又はＡｋｔ１ ｓｈＲＮＡレンチウイルスに感染し、ｓＮＡＧにより処理又は非処理の血清欠乏内皮細胞の量的ＲＴ−ＰＣＲ分析であり、α−ディフェンシン ４発現により評価した。定量化はＳ２６に対して示す。（Ｅ）は、スクランブルコントロール（ＳＣＲ）又はＡｋｔ１ ｓｈＲＮＡレンチウイルスに感染し、ｓＮＡＧにより処理又は非処理の血清欠乏内皮細胞から単離した全長ＲＮＡから発現したβ−ディフェンシン３の定量化である。定量化はＳ２６に対して示す。全ての実験を、少なくとも３通り行い、少なくとも独立して３回繰り返し、ｐ値を示した。

【0043】

〔図９〕ｉｎ ｖｉｖｏにおけるｓＮＡＧ誘導ディフェンシン発現が、Ａｋｔ１を要求する。（Ａ）は、創傷後３日目に回収された、ＷＴ（ｎ＝３）及びＡｋｔ１マウスからの、パラフィン包埋皮膚創傷部位である。創傷部に、非処理又はｓＮＡＧ膜による処理のいずれかを行った。β−ディフェンシン３（緑、右手上部パネルにおいて明るい染色部として見られる。例えば濃白矢印参照）、Ｉｎｖｏｌｕｃｒｉｎ（赤）、及び、Ｔｏｐｒｏ（青、核染色、例えば薄白矢印）に対する直接抗体を用いて、免疫蛍光を行った。（Ｂ）は、３日目に回収した、ｓＮＡＧで処理したＷＴからのパラフィン包埋部位である。βディフェンシン３（緑、明るい染色として見られる；例えば濃白色矢印参照）、Ｉｎｖｏｌｕｃｒｉｎ（赤）及びＴｏｐｒｏ（青、核染色；例えば薄白矢印参照）に対する直接抗体を用いて、免疫蛍光を行った。この低倍率（２０×）は、β−ディフェンシン３を発現する内皮層をより良く示すためでもある。スケールバーは５０μｍである。（Ｃ）は、ＮＩＨ ＩｍａｇｅＪソフトウェアを用いて行った、パラフィン包埋部位から発現したβ−ディフェンシン３発現の定量化である。実験を独立して３回繰り返し、ｐ値を示す。

【0044】

〔図１０〕ｓＮＡＧ処理により、野生型マウスにおいて、創口閉鎖が向上する。ｓＮＡＧ膜により処理した又は非処理のＣ５７Ｂ１６野生型動物由来の創傷組織部位のＨ＆Ｅ染色である。創傷後の日数を各パネルの左側に示す。濃い黒線は、創口閉鎖を示すケラチン生成細胞層に沿っている。黒矢印は、創面の縁を示す。

【0045】

〔図１１〕ｓＮＡＧ処理により、Ａｌｔ１依存様式における微生物感染が減少する。（Ａ）は、ＷＴマウスのＳ．アウレアス（ａｕｒｅｕｓ）感染創傷部位の組織グラム染色である。ＷＴマウスを、４ｍｍ生検穿孔機を用いて傷つけた。創傷後すぐにマウスに１×１０^９ｃｆｕ／ｍＬを接種させた。感染３０分後に、処理群のマウスをタリデルムで処理した。皮膚サンプルを処理の５日後に採取し、分析のために区分化した。組織グラム染色を行った。暗紫染色は、グラム陽性微生物及び微生物を呑食した好中球を示している。領域を２０倍及び４０倍に拡大して示す。（Ｂ）は、ＷＴマウス及びＡｋｔ１欠損マウス（ｎ＝３）のパラフィン包埋Ｓ．アウレアス感染創傷の組織グラム染色である。感染創傷をｓＮＡＧ膜で処理又は非処理し、創面を３日目及び５日目に分析のために回収した。暗紫染色は、創面中のグラム陽性微生物の存在を示す。黒矢印はグラム陽性染色の例を示す。ｓＮＡＧ処理したＷＴ動物においてはなかったが、非処理ＷＴにおいては陽性染色の蓄積が見られたことに注目する。スケールバーは５０μｍである。（Ｃ）は、処理又は非処理のＷＴマウス（ｎ＝３）及びＡｋｔ１マウス（ｎ＝３）の両方を用いて、創傷５日後のＣＦＵｓのＳ．アウレアス感染創傷を定量化した。ｓＮＡＧで処理した野生型マウスにおいては、Ａｋｔ１欠損動物と比較して、創面中の微生物の顕著な減少（ｐ＜．０１）が見られる。全ての実験を独立して３回繰り返し、ｐ値を示す。（Ｄ）は、図１１Ｃに示したのと同様の方法で、創傷３日後における感染した創傷部位から定量化したＣＦＵである。感染創傷のｓＮＡＧ処理により、３日目のＷＴ動物及びＡｋｔ１欠損動物の両方においてＣＦＵの顕著な減少が見られたが、ＷＴ動物は約１０倍の差が見られたのに対して、Ａｋｔ１動物においては約２倍の差が見られた。（Ｅ）は、種々の量のｓＮＡＧナノファイバで処理した又は非処理のＳ．アウレアス培地におけるＣＦＵｓの定量化である。各実験を独立して３回行い、ｐ値を示した。（Ｆ）は、β−ディフェンシン３ペプチド（１．０μＭ）で処理した又は非処理のＷＴマウス（ｎ＝３）において、創傷３日後に回収したＳ．アウレアス感染創傷の組織グラム染色である。β−ディフェンシン３ペプチドで処理した感染創傷におけるグラム陽性染色が減少したことに注目する。（Ｇ）は、β−ディフェンシン３ペプチドで処理した又は非処理の、Ｓ．アウレアス感染ＷＴマウス（ｎ＝３）からのＣＦＵｓの定量化である。ペプチドで処理した感染創傷は、ＣＦＵにおいて顕著な減少（ｐ＜．０５）を示す。スケールバーは５０μｍである。各実験を独立して３回行い、ｐ値を示す。

【0046】

〔図１２〕Ｓ．アウレアス感染創傷のｓＮＡＧ処理によるディフェンシン発現の迅速な誘導。（Ａ）は、ｓＮＡＧ処理したＷＴマウス（ｎ＝３）及び非処理のＷＴマウス（ｎ＝３）の両方において、３日目に回収したＳ．アウレアス感染創傷からのパラフィン包埋組織部位を、β−ディフェンシン３（緑、右手上部パネル及び下部中央パネルにおいて明るい染色が見られた、例えば濃白矢印参照）、ケラチン生成細胞層を特徴づけるためのＩｎｖｏｌｕｃｒｉｍ（赤）、及び、Ｔｏｐｒｏ（青、核染色、例えば薄白矢印参照）に対する直接抗体を用いた免疫蛍光の対象とした。ケラチンの非特異的染色が、二次抗体でのみ染色されており、一次コントロールではないことが示された。スケールバーは５０μｍである。（Ｂ）は、ＮＩＨ ＩｍａｇｅＪソフトウェアを用いた、パラフィン包埋部位におけるβ−ディフェンシン３発現の定量化である。ｓＮＡＧで処理したＳ．アウレアス感染創傷においては、β−ディフェンシン３染色の顕著な上昇（ｐ＜．０５）がみられる。実験を独立して３回繰り返し、ｐ値を示す。

【0047】

〔図１３〕β−ディフェンシン３に対する抗体が、ｓＮＡＧ処理の抗菌効果を妨げる。（Ａ）は、３日目に回収した、ＷＴマウス（ｎ＝３）のｓＮＡＧ処理したパラフィン包埋Ｓ．アウレアス感染創傷の組織グラム染色である。ｓＮＡＧ処理した創傷は、ｓＮＡＧ処理の前に、β−ディフェンシン３抗体又はコントロールのヤギＩｇＧ抗体のアイソタイプで処理した。代表的な図は、β−ディフェンシン３の直接抗体で処理したマウスの創面において、グラム陽性染色の蓄積（黒矢印）の増加を示す。スケールバーは２０μｍである。（Ｂ）は、ｓＮＡＧ処理の前にβ−ディフェンシン３抗体（ｎ＝３）又はコントロールのＩｇＧ抗体（ｎ＝３）により処理した、Ｓ．アウレアス感染ＷＴマウスからのＣＦＵｓの定量化である。β−ディフェンシン３適用により、ＣＦＵが顕著に増加した（ｐ＜．０５）。

【0048】

〔図１４〕ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン（「ｐＧｌｃＮＡｃ」）ファイバの化学的構造及び物理的構造に対する放射線照射の効果。（Ａ）は、ｐＧｌｃＮＡｃの分子量と、放射線レベル／放射線照射のための形成との間の相関である。（Ｂ）は、非放射線照射ｐＧｌｃＮＡｃスラリーの赤外線スペクトル（上部ライン）、１００ｋＧｙで放射線照射したｐＧｌｃＮＡｃスラリーの赤外線スペクトル（下部ライン）、２００ｋＧｙで放射線照射したｐＧｌｃＮＡｃスラリーの赤外線スペクトル（中央ライン）である。（Ｃ）は、ｐＧｌｃＮＡｃの走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）分析である。（Ｄ）は、ｓＮＡＧの走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）分析である。

【0049】

〔図１５〕ｐＧｌｃＮＡｃが代謝率に影響しなかった。各期間（例えば、２４時間及び４８時間）において、４つの棒グラフ（左から右）のそれぞれは、以下に一致する；血清欠乏（ＳＳ）、ＶＥＧＦ、並びに、５０μｇ／ｍＬ及び１００μｇ／ｍＬにおけるｐＧｌｃＮＡｃ（ＮＡＧ）。

【0050】

〔図１６〕ｐＧｌｃＮＡｃが、血清欠乏により引き起こされる細胞死から、ヒト臍静脈内皮細胞（ＥＣ）を保護したことを示す。各期間（例えば、２４時間、４８時間及び７２時間）において、５つの棒グラフ（左から右）のそれぞれは、以下に一致する；血清欠乏（ＳＳ）、ＶＥＧＦ、並びに、５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ及び２５０μｇ／ｍＬにおけるｐＧｌｃＮＡｃ（ＮＡＧ）。

【0051】

〔図１７〕ｓＮＡＧが代謝率の著しい増加を引き起こした。５つの棒グラフ（左から右）のそれぞれは、以下に一致する；血清欠乏（ＳＳ）、ＶＥＧＦ、並びに、５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ及び２００μｇ／ｍＬにおけるｓＮＡＧ。

【0052】

〔図１８〕ｓＮＡＧが、血清欠乏により引き起こされる細胞死からＥＣを保護しなかった。各期間（例えば２４時間及び４８時間）において、５つの棒グラフ（左から右）のそれぞれは、以下に一致する；血清欠乏（ＳＳ）、ＶＥＧＦ、並びに、５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ及び２００μｇ／ｍＬにおけるｓＮＡＧ。

【0053】

〔図１９〕痛みの強さの数値スケール。

【0054】

〔図２０〕マウスモデルにおける３％ＤＳＳ（硫酸ナトリウムデキストラン）誘引炎症性腸疾患（特に、潰瘍性大腸炎）のために用意した実験の概略。

【0055】

〔図２１〕ｓＮＡＧ処理が、炎症性腸疾患の動物モデルにおいて、炎症を減少させた。（Ａ）は、飲料水を介して３％ ＤＳＳを７日間（０日目から７日目）投与し、かつ、直腸座薬を介して生理食塩水（１００μＬ）を０日目から３日目まで投与した１０匹のマウスのコントロール群における、腸上皮組織領域のＨ＆Ｅ染色である。（Ｂ）は、飲料水を介して３％ ＤＳＳを７日間（０日目から７日目）投与し、かつ、直腸座薬を介してｓＮＡＧ（ｓＮＡＧを総量で１２μｇ／μＬ含む１００μＬ）を０日目から３日目まで投与した１０匹のマウスの試験群における、腸上皮組織領域のＨ＆Ｅ染色である。薄い矢印及び括弧書きは浮腫部位を示しており、濃い矢印は白血球炎症部位を示している。

【0056】

〔図２２〕ｓＮＡＧ処理が、炎症性腸疾患の動物モデルにおいて、線維形成を減少させた。（Ａ）は、飲料水を介して３％ ＤＳＳを７日間（０日目から７日目）投与し、かつ、直腸座薬を介して生理食塩水（１００μＬ）を０日目から３日目まで投与した１０匹のマウスのコントロール群における、腸上皮組織領域の線維染色である。（Ｂ）は、飲料水を介して３％ ＤＳＳを７日間（０日目から７日目）投与し、かつ、直腸座薬を介してｓＮＡＧ（ｓＮＡＧを総量で１２μｇ／μＬ含む１００μＬ）を０日目から３日目まで投与した１０匹のマウスの試験群における、腸上皮組織領域の線維染色である。

【0057】

５．詳細な説明
本発明の発明者らは、ｓＮＡＧナノファイバが、ディフェンシンの発現を刺激し、先天性免疫反応を促進するであろうことを見出した。ディフェンシンは、先天性免疫において重要な役割を果たすことは広く受け入れられている。下記の項目６．１及び６．２に記載した実施例において実証したように、本発明の発明者らは、ｓＮＡＧナノファイバが、ｉ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの創傷回復モデルにおいて、内皮細胞におけるα型ディフェンシンとβ型ディフェンシンとの両方、並びに、ケラチン生成細胞におけるβ型ディフェンシンの発現を増加させることを見出した。

【0058】

さらに、下記の項目６．１及び６．２に記載した実施例において実証したように、いずれかの特定の作用メカニズムの結合なしに、Ａｋｔ１は、ｉ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの創傷回復におけるｓＮＡＧ依存ディフェンシン発現にとって、重要であることを示す。

【0059】

本発明の発明者らは、いくつかのＴｏｌｌ様レセプターが、ヒト内皮細胞のｓＮＡＧ処理により上方制御され得ることを見出した。Ｔｏｌｌ様レセプター（「ＴＬＲｓ」又は「ＴＬＲ」）は、高度に保存されたレセプターであり、先天性免疫を活性化する。最近の研究は、ＴＬＲ活性化、特に、ＴＬＲｓの刺激に対するヒトディフェンシン発現が、ディフェンシン合成の促進につながり得ることに関連している。それゆえに、活性のいずれのメカニズムにも結び付かずに、ｓＮＡＧナノファイバが全身性免疫の刺激剤として作用するかもしれない。

【0060】

したがって、有用であり得る１つ以上のディフェンシン及びＴｏｌｌ様レセプターの発現及び／又は分泌を促進することによって、感染及び疾患を予防及び／又は治療するための新規な方法としての、ｓＮＡＧナノファイバの使用をここに記載する。ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバを用いたウイルス、酵母又は真菌感染の治療は、患者における病原体数を減少させる。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバの使用は、創傷のウイルス、真菌又は酵母感染を根絶する、低減させる、又は、予防する一方で、同時に、創口閉鎖を向上させる。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバを、例えば、このような疾患の１以上の症状を軽減することにより、皮膚炎又は乾癬のような皮膚の状態の治療に用いることができる。さらに他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバを、例えば、このような疾患の１以上の症状を軽減することにより、炎症性腸疾患（例えばクローン病）の治療に用いることができる。

【0061】

本発明者らは、事実、ｓＮＡＧナノファイバがウイルス感染治療に効果的であり得ることを見出した。特に、本発明者らは、ｓＮＡＧナノファイバをヒト患者に局所投与したときに、ＨＳＶ感染の治療に効果的であることを見出した。下記の実施例８は、ヒト患者において、ｓＮＡＧナノファイバのヘルペスへの局所投与が、ヘルペスに関連する痛みを軽減し、さらに、ヘルペスの持続期間を短縮したことを示している。ヘルペスは、典型的には、ＨＳＶ−１感染により引き起こされる。それゆえに、ウイルス感染、特に局所ウイルス感染を治療するための、ｓＮＡＧナノファイバの使用を、ここに記載する。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバを患者に局所（例えば、ＨＳＶ感染部位若しくはＨＳＶ感染症状部位、又は、感染症状の発生が知られている部位）投与することによって、ＨＳＶ感染（例えばヘルペス又は創傷）を治療するための、ｓＮＡＧナノファイバの使用を、ここに記載する。

【0062】

本発明者らは、また、ｓＮＡＧナノファイバが炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療に効果的であり得ることを見出した。特に、本発明者らは、ｓＮＡＧナノファイバを腸に投与したときに（座薬を介する等）、ＩＢＤ動物モデルにおけるＩＢＤの治療に効果的であることを見出した。下記の実施例９は、ｓＮＡＧナノファイバの投与が、ＩＢＤマウスモデルにおいて、ＩＢＤに関連する炎症及び線維形成を低減したことを示す。それゆえに、潰瘍性大腸炎及びクローン病のようなＩＢＤを治療するための、ｓＮＡＧナノファイバの使用について、ここに記載する。特定の実施形態において、患者に対してｓＮＡＧナノファイバを局所（例えば、座薬、クリーム、懸濁液、液体溶液、ゲル又は軟膏を介して肛門又は腸に）投与することによって、ＩＢＤ（例えば、潰瘍性大腸炎又はクローン病）を治療するための、ｓＮＡＧナノファイバの使用についてここに記載する。

【0063】

５．１ ｓＮＡＧナノファイバ
ｓＮＡＧナノファイバ組成物をここに記載する。ｓＮＡＧナノファイバは、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン及び／又はその誘導体のファイバを含んでおり、例えば、走査型電子顕微鏡（「ＳＥＭ」）のような、当業者に公知のいずれかの方法により測定した長さは概ね３０μｍより短く、少なくとも１μｍである。このようなｓＮＡＧナノファイバは、例えば、本明細書に記載したように得ることができる。

【0064】

ある実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバ（さらに、ある実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％若しくは１００％、又は、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％若しくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバ）は、例えばＳＥＭのような、当業者に公知の何れかの方法により測定した長さが、約３０、２５、２０、１５、１２、１０、９、８、７、６、５、４又は３μｍより短く、少なくとも１μｍである。特定の実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバ（さらに、ある実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％若しくは１００％、又は、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％若しくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバ）は、例えばＳＥＭのような、当業者に公知の何れかの方法により測定した長さが、約１５μｍ又は約１２μｍより短く、少なくとも１μｍである。特定の実施形態において、全て（１００％）のｓＮＡＧナノファイバは、例えばＳＥＭのような、当業者に公知の何れかの方法により測定した長さが、約１５μｍ又は約１０μｍより短く、少なくとも１μｍである。ある実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバ（さらに、ある実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％若しくは１００％、又は、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％若しくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバ）は、例えばＳＥＭのような、当業者に公知の何れかの方法により測定した長さが、１４、１３、１２、１１、１０、９、８又は７μｍ以下であり、少なくとも１μｍである。ある実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバ（さらに、ある実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％若しくは１００％、又は、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％若しくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバ）は、例えばＳＥＭのような、当業者に公知の何れかの方法により測定した長さが、１〜１５、２〜１５、２〜１４、１〜１２、２〜１２、１〜１０、２〜１０、３〜１２、３〜１０、４〜１２、４〜１０、５〜１２、５〜１０、１〜９、２〜９、３〜９、１〜８、２〜８、３〜８、４〜８、１〜７、２〜７、３〜７、４〜７、１〜６、１〜５、１〜４、又は、１〜３μｍである。

【0065】

特定の実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバ（さらに、ある実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％若しくは１００％、又は、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％若しくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバ）は、例えばＳＥＭのような、当業者に公知の何れかの方法により測定した長さが、約８、７、６、５、４、３又は２μｍである。他の特定の実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバ（さらに、ある実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％若しくは１００％、又は、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％若しくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバ）は、例えばＳＥＭのような、当業者に公知の何れかの方法により測定した長さが、約２〜１０μｍ、約３〜８μｍ、約４〜７μｍ、約４〜１０μｍ、又は、約５〜１０μｍである。他の特定の実施形態において、全て（１００％）のｓＮＡＧナノファイバは、例えばＳＥＭのような、当業者に公知の何れかの方法により測定した長さが、約２〜１０μｍ、約３〜８μｍ、約４〜７μｍ、約４〜１０μｍ、又は、約５〜１０μｍである。

【0066】

ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、電子顕微鏡により決定した厚み及び／又は直径が０．００５〜５μｍの範囲である。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、平均又はいずれかの範囲（例えば、０．０２〜２μｍ、０．０２〜１μｍ、０．０２〜０．７５μｍ、０．０２〜０．５μｍ、０．０２〜０．５μｍ、０．０５〜１μｍ、０．０５〜０．７５μｍ、０．０５〜０．５μｍ、０．１〜１μｍ、０．１〜０．７５μｍ、０．１〜０．５μｍ等）における厚み及び／又は直径が、約０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．２５、０．３、０．３５、０．４、０．４５、０．５、０．５５、０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．２、２．４、２．６、２．８、３又は４μｍである。特定の実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバ（さらに、ある実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％若しくは１００％、又は、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％若しくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバ）は、厚み又は直径が、約０．０２〜１μｍである。他の特定の実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバ（さらに、ある実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％若しくは１００％、又は、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％若しくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバ）は、厚み又は直径が、約０．０５〜０．５μｍである。特定の実施形態において、全て（１００％）のｓＮＡＧナノファイバは、厚み又は直径が、約０．０２〜１μｍ又は約０．０５〜０．５μｍである。ある実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバ（さらに、ある実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％若しくは１００％、又は、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％若しくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバ）は、厚み又は直径が、約０．０２〜２μｍ、０．０２〜１μｍ、０．０２〜０．７５μｍ、０．０２〜０．５μｍ、０．０２〜０．５μｍ、０．０５〜１μｍ、０．０５〜０．７５μｍ、０．０５〜０．５μｍ、０．１〜１μｍ、０．１〜０．７５μｍ、又は、０．１〜０．５μｍである。

【0067】

ある実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバ（さらに、ある実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％若しくは１００％、又は、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％若しくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバ）は、長さが１〜１５μｍの間である、又は、長さが１〜１０μｍ、２〜１０μｍ、３〜１０μｍ、４〜１０μｍ、４〜７μｍ、５〜１０μｍ若しくは５〜１５μｍの間若しくはその範囲内であり、かつ、厚み又は直径が、約０．０２〜１μｍである。

【0068】

ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバの分子量は、１００ｋＤａ、９０ｋＤａ、８０ｋＤａ、７５ｋＤａ、７０ｋＤａ、６５ｋＤａ、６０ｋＤａ、５５ｋＤａ、５０ｋＤａ、４５ｋＤＡ、４０ｋＤａ、３５ｋＤａ、３０ｋＤａ又は２５ｋＤａより小さい。ある実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバ（さらに、ある実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％若しくは１００％、又は、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％若しくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバ）は、分子量が、１００ｋＤａ、９０ｋＤａ、８０ｋＤａ、７５ｋＤａ、７０ｋＤａ、６５ｋＤａ、６０ｋＤａ、５５ｋＤａ、５０ｋＤａ、４５ｋＤａ、４０ｋＤａ、３５ｋＤａ、３０ｋＤａ又は２５ｋＤａより小さい。他の実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバ（さらに、ある実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％若しくは１００％、又は、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％若しくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバ）は、分子量が、約５ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜８０ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜８０ｋＤａ、２０ｋＤａ〜７５ｋＤａ、約２５ｋＤａ〜約７５ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜約８０ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜約７５ｋＤａ、約４０ｋｄａ〜約８０ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約７５ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約７０ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜約７０ｋＤａ又は約５５ｋＤａ〜約６５ｋＤａの間である。ある実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバ（さらに、ある実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％若しくは１００％、又は、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％若しくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバ）は、分子量が、約６０ｋＤａである。

【0069】

ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバの１％〜５％、５％〜１０％、５％〜１５％、２０％〜３０％又は２５％〜３０％は、脱アセチル化されている。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバの１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％又は３０％は、脱アセチル化されている。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバの３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％又は１％未満は、脱アセチル化されている。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバの１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％以上、又は、全て（１００％）は、脱アセチル化されている。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバの１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又は１００％未満は、脱アセチル化されている。

【0070】

ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバの７０％〜８０％、７５％〜８０％、７５％〜８５％、８５％〜９５％、９０％〜９５％、９０％〜９９％又は９５％〜１００％は、アセチル化されている。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバの７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％又は１００％は、アセチル化されている。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバの７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、９９．５％又は９９．９％より多くは、アセチル化されている。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバの１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％若しくは９９％以上、又は、全て（１００％）は、アセチル化されている。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバの１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％未満は、アセチル化されている。

【0071】

ある実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバ（さらに、ある実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％若しくは１００％のｓＮＡＧナノファイバ）は、２〜１２μｍ、２〜１０μｍ、４〜１５μｍ、４〜１０μｍ、５〜１５μｍ若しくは５〜１０μｍの間又は範囲内であり、このようなｓＮＡＧナノファイバの少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％は、アセチル化されている。

【0072】

ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、少なくとも１つのグルコサミン単糖類を含んでおり、さらに、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は９９％のＮ−アセチルグルコサミン単糖類を含んでいてもよい。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、少なくとも１つのＮ−アセチルグルコサミン単糖類を含んでおり、さらに、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は９９％のグルコサミン単糖類を含んでいてもよい。

【0073】

ある局面において、ｓＮＡＧナノファイバは、ＭＴＴ分析において、血清欠乏ヒト臍帯静脈内皮細胞（「ＥＣ」）の代謝率を上昇させる。ＭＴＴ分析は、細胞増殖（細胞成長）のための、臨床試験及び標準比色分析（色の変化を測定する分析）である。簡単に言うと、黄色ＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム臭化物、テトラゾール）は、生細胞のミトコンドリアにおいて、紫ホルマザンに変換される。ミトコンドリア還元酵素が活性であるときにのみこの変換は生じ、それゆえに、この変換は、細胞の生存数（生細胞の数）に直接関連する。ＭＴＴ分析は、下記の実施例６に記載しており、ＥＣ細胞の代謝率に対するｓＮＡＧナノファイバの効果を評価するために用いている。細胞の代謝率は、また、当業者に周知の他の技術により決定してもよい。

【0074】

他の局面において、ｓＮＡＧナノファイバは、トリパンブルー排除試験において、血清欠乏ＥＣのアポトーシスを救済しない。トリパンブルー排除試験は、細胞懸濁液に存在する生存細胞数を決定するために用いられる、色素排除試験である。生細胞が、トリパンブルー、エオシン又はプロピジウムのような特定の色素を排除する完全細胞膜を有している一方で、死亡細胞が有していないという原理に基づいている。トリパンブルー分析は、下記の実施例６に記載しており、ＥＣ細胞の細胞生存能力に対するｓＮＡＧナノファイバの効果を評価するために用いている。細胞の生存能力は、また、当業者に周知の他の技術により決定してもよい。

【0075】

ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物を記載しており、このｓＮＡＧナノファイバは、ＭＴＴ分析における血清欠乏ヒト臍帯静脈内皮細胞の代謝率を上昇させる、及び／又は、トリパンブルー排除試験における血清欠乏ヒト臍帯静脈内皮細胞のアポトーシスを救済しない。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、ＭＴＴ分析における血清欠乏ヒト臍帯静脈内皮細胞の代謝率を上昇させ、かつ、トリパンブルー排除試験における血清欠乏ヒト臍帯静脈内皮細胞のアポトーシスを救済しない。

【0076】

特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは生体適合性がある。溶出試験、筋肉注入、又は、動物対象への皮内若しくは全身注射のような処置を含むが、これらに限定されない種々の技術によって、生体適合性を決定してもよい。このような試験は、米国特許番号６，６８６，３４２（例えば実施例１０参照）に記載されており、当該文献の全てを参照としてここに組み込む。生体適合性試験のいくつかは、下記の実施例７に記載しており、ｓＮＡＧナノファイバがこのような試験に反応しないことを示している。

【0077】

ある実施形態において、ここに記載した方法において使用されるｓＮＡＧナノファイバは、生体適合性試験又は試験群において、反応しない。例えば、ここに記載した方法において使用されるｓＮＡＧナノファイバは、溶出試験、筋肉注入試験、皮内試験、及び／又は、全身性試験において試験したときに、反応しない。他の実施形態において、ここに記載した方法において使用されるｓＮＡＧナノファイバは、溶出試験、筋肉注入試験、皮内試験又は全身性試験において試験したときに、試験結果がグレード０又はグレード１である。さらに他の実施形態において、ここに記載した方法において使用されるｓＮＡＧナノファイバは、溶出試験、筋肉注入試験、皮内試験、及び／又は、全身性試験において試験したときに、最も穏やかに反応する。ある実施形態において、ここに記載した組成物は、アレルギー反応又は炎症を引き起こさない。他の実施形態において、ここに記載した組成物は、例えば適用部位において、最も穏やかなアレルギー反応又は最も穏やかな炎症を引き起こす。試験結果に関連する試験及び評価は、その全てを参照としてここに組み込む米国特許番号６，６８６，３４２及び下記の項目６．８に記載されている。

【0078】

特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、筋肉注入試験において試験したときに、反応しない。ある局面において、筋肉注入試験は、下記の項目６．８．３に記載したような、筋肉注入試験−ＩＳＯ４週間注入である。ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、溶出試験により決定する場合に、生物学的反応性を全く示さない（溶出試験グレード＝０）。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、筋肉注入試験により決定される試験スコアが「０」と同等である、及び／又は、最も無視できる刺激性である。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、Ｋｌｉｇｍａｎ試験において皮内反応を導かない（例えば、グレードＩ反応）、及び／又は、Ｋｌｉｇｍａｎ試験により決定される弱いアレルゲン性能力を有している。下記の実施例７に、ｓＮＡＧナノファイバが、筋肉注入試験、皮内注入試験及びＫｌｉｇｍａｎ試験において、反応しないことを示す。

【0079】

ある局面において、ｓＮＡＧナノファイバは免疫中性である（例えば、免疫反応を導かない）。

【0080】

いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは生体分解性である。ｓＮＡＧナノファイバは、好ましくは、患者に適用又は注入した後、約１日、２日、３日、５日、７日（１週）、８日、１０日、１２日、１４日（２週）、１７日、２１日（３週）、２５日、２８日（４週）、３０日、１月、３５日、４０日、４５日、５０日、５５日、６０日、２月、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、３月、９５日、１００日又は４月以内に分解される。

【0081】

ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、検出可能な異物反応を引き起こさない。異物反応は、損傷部位における滲出物の蓄積、その領域の創傷清拭するための炎症細胞の湿潤、及び、肉芽組織の形成を含む、創傷治癒中に生じ得る。異物の存在の持続は、完全治癒を妨げ得る。創傷治癒において生じる再吸収及び再建というよりむしろ、異物巨細胞の形成、異物のカプセル化及び慢性炎症によって、異物反応は特徴づけられる。カプセル化は、異物周囲に堆積した、硬く無血管性のコラーゲンシェルに関し、宿主組織から有効に分離される。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバを用いた部位（例えば、創傷部位又は創傷の微生物感染部位）の治療は、治療の１日、３日、５日、７日、１０日又は１４日後の、検出可能な異物反応を導かない。このような一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバを用いた部位（例えば創傷）の治療は、治療の１日、３日、５日、７日、１０日又は１４日後の、異物カプセル化を導かない。

【0082】

いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、（ｉ）大多数のファイバの長さが約１〜１５μｍのファイバ群を含み、並びに、（ｉｉ）（ａ）ＭＴＴ分析における血清欠乏ＥＣの代謝率を上昇させる及び／又はトリパンブルー排除試験における血清欠乏ＥＣのアポトーシスを救済せず、及び、（ｂ）筋肉注入試験において試験したときに反応しない。ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、（ｉ）大多数のファイバの長さが約１〜１２μｍであるファイバ群を含み、並びに、（ｉｉ）（ａ）ＭＴＴ分析における血清欠乏ＥＣの代謝率を上昇させる及び／又はトリパンブルー排除試験における血清欠乏ＥＣのアポトーシスを救済せず、及び、（ｂ）筋肉注入試験において試験したときに反応しない。ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、（ｉ）大多数のファイバの長さが１〜１０μｍの間（又は範囲内）であるファイバ群を含み、並びに、（ｉｉ）（ａ）ＭＴＴ分析における血清欠乏ＥＣの代謝率を上昇させる及び／又はトリパンブルー排除試験における血清欠乏ＥＣのアポトーシスを救済せず、及び、（ｂ）筋肉注入試験において試験したときに反応しない。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、（ｉ）大多数のファイバの長さが約４〜１０μｍであるファイバ群を含み、並びに、（ｉｉ）（ａ）ＭＴＴ分析における血清欠乏ＥＣの代謝率を上昇させる及び／又はトリパンブルー排除試験における血清欠乏ＥＣのアポトーシスを救済せず、及び、（ｂ）筋肉注入試験において試験したときに反応しない。ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、（ｉ）大多数のファイバの長さが約４〜７μｍであるファイバ群を含み、並びに、（ｉｉ）（ａ）ＭＴＴ分析における血清欠乏ＥＣの代謝率を上昇させる及び／又はトリパンブルー排除試験における血清欠乏ＥＣのアポトーシスを救済せず、及び、（ｂ）筋肉注入試験において試験したときに反応しない。

【0083】

ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、当業者が決定する場合、Ｓ．アウレアスのような微生物の成長又は生存に直接影響しない。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、下記の項目６．２．２．５に記載した方法により決定する場合、Ｓ．アウレアスのような微生物の成長又は生存に直接影響しない。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける微生物の成長又は生存に直接影響しない。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、（例えばｉｎ ｖｉｔｒｏにおける）グラム陰性菌の成長又は生存に直接影響しない。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、（例えばｉｎ ｖｉｔｒｏにおける）グラム陽性菌の成長又は生存に直接影響しない。さらに他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、（例えばｉｎ ｖｉｔｒｏにおける）グラム陽性菌又はグラム陰性菌のいずれかの成長又は生存に直接影響しない。

【0084】

いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、（ｉ）大多数のファイバの長さが約１〜１５μｍ、１〜１２μｍ、１〜１０μｍ、４〜１０μｍ、４〜１５μｍ、５〜１０μｍ、５〜１５μｍ又は４〜７μｍの間（又は範囲内）であるファイバ群を含み、（ｉｉ）ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるスタフィロコッカスアウレアス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）菌株の細菌成長又は生存に影響せず、並びに、（ｉｉｉ）生体適合性試験（例えば、筋肉注入試験）において試験したときに反応しない。

【0085】

ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、ｓＮＡＧナノファイバ組成物で処理又は暴露した細胞、組織又は臓器において、特定の発現（例えば、ＲＴ−ＰＣＲ、マイクロアレイ又はＥＬＩＳＡにより決定したＲＮＡ又はタンパク質発現）パターンを引き起こさない。特に、いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ又はｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、１以上のディフェンシンタンパク質、１以上のディフェンシン様タンパク質、及び／又は、１以上のＴｏｌｌ様レセプターの発現を誘引する。さらに他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ又はｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、抗菌効果を有することが知られている１以上のタンパク質の発現を誘引する。

【0086】

ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ又はｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、１以上のα−ディフェンシン（例えばＤＥＦＡ１（例えばα−ディフェンシン１）、ＤＥＦＡ１Ｂ、ＤＥＦＡ３、ＤＥＦＡ４、ＤＥＦＡ５、ＤＥＦＡ６）、１以上のβ−ディフェンシン（例えばＤＥＦＢ１（例えばβ−ディフェンシン１）、ＤＥＦＢ２、ＤＥＦＢ４、ＤＥＦＢ１０３Ａ、ＤＥＦＢ１０４Ａ、ＤＥＦＢ１０５Ｂ、ＤＥＦＢ１０７Ｂ、ＤＥＦＢ１０８Ｂ、ＤＥＦＢ１１０、ＤＥＦＢ１１２、ＤＥＦＢ１１４、ＤＥＦＢ１１８、ＤＥＦＢ１１９、ＤＥＦＢ１２３、ＤＥＦＢ１２４、ＤＥＦＢ１２５、ＤＥＦＢ１２６、ＤＥＦＢ１２７、ＤＥＦＢ１２８、ＤＥＦＢ１２９、ＤＥＦＢ１３１、ＤＥＦＢ１３６）、及び／又は、１以上のθ−ディフェンシン（例えばＤＥＦＴ１Ｐ）の発現を誘導する。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ又はｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、１以上のＤＥＦＡ１、ＤＥＦＡ３、ＤＥＦＡ４、ＤＥＦＡ５、ＤＥＦＢ１、ＤＥＦＢ３、ＤＥＦＢ１０３Ａ、ＤＥＦＢ１０４Ａ、ＤＥＦＢ１０８Ｂ、ＤＥＦＢ１１２、ＤＥＦＢ１１４、ＤＥＦＢ１１８、ＤＥＦＢ１１９、ＤＥＦＢ１２３、ＤＥＦＢ１２４、ＤＥＦＢ１２５、ＤＥＦＢ１２６、ＤＥＦＢ１２８、ＤＥＦＢ１２９及びＤＥＦＢ１３１の発現を誘導する。ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ又はｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、１以上のＴｏｌｌレセプター（例えば、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１及び／又はＴＬＲ１２）の発現を誘導する。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ又はｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、１以上のＩＬ−１、ＣＥＡＣＡＭ３、ＳＰＡＧ１１、ＳＩＧＩＲＲ（ＩＬ１様レセプター）、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＩＲＡＫ４、ＴＢＫ１、ＴＲＡＦ６及びＩＫＫｉの発現を誘導する。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ又はｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、１以上のＩＲＡＫ２、ＳＩＧＩＲＲ、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ１０及びＴＲＡＦ６の発現を誘導する。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ又はｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、上記列挙した遺伝子産物の少なくとも１つの発現を誘導する。

【0087】

いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ又はｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、ｓＮＡＧナノファイバで処理する前の対象の細胞、組織又は臓器における、上記列挙した１以上の遺伝子の発現レベル（例えば、上記列挙した遺伝子の１以上の公知の平均発現レベル）と比較して、約０．２５倍、０．５倍、１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１２倍、１５倍又は２０倍以上の、上記列挙した１以上の遺伝子の発現を誘導する。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ又はｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、ｓＮＡＧナノファイバで処理する前の対象の細胞、組織又は臓器における、上記列挙した１以上の遺伝子の発現レベル（例えば、上記列挙した遺伝子の１以上の公知の平均発現レベル）の１０％、２５％、５０％、７５％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２２５％、２５０％、２７５％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、９００％又は１０００％の、上記列挙した１以上の遺伝子の発現を誘導する。

【0088】

いくつかの実施形態において、長いポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン、キチン及び／又はキトサンではないｓＮＡＧナノファイバは、当業者に公知の方法又はここに記載した方法により決定した場合、１以上の上記列挙した遺伝子の発現を誘引する。いくつかの実施形態において、長いポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン、キチン及び／又はキトサンではないｓＮＡＧナノファイバは、当業者に公知の方法又はここに記載した方法により決定した場合、上記列挙した遺伝子の発現を引き起こさない、又は、ｓＮＡＧナノファイバにより引き起こされる１以上の上記列挙した遺伝子の発現よりも低いレベルの発現（例えば、１．２５倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍若しくは１０倍以上低い）を誘導する。

【0089】

ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ又はｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、下記の表Ｉ、ＩＩ，ＩＩＩ，Ｖ、ＶＩＩＩ及びＩＸ、項目６．２〜６．５に示した１以上の遺伝子発現特性に一致した、同様の、概ね同一の又は同等の遺伝子発現特性を誘導する。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ又はｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、下記の表Ｉ、ＩＩ，ＩＩＩ，Ｖ、ＶＩＩＩ及びＩＸ、項目６．２〜６．５において、ｓＮＡＧ処理により上方制御された１以上の遺伝子発現を誘導する。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ又はｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、下記の表Ｉ、ＩＩ，ＩＩＩ，Ｖ、ＶＩＩＩ及びＩＸ、項目６．２〜６．５において、ｓＮＡＧ処理により上方制御された遺伝子の大多数又は全ての発現を誘導する。いくつかのこれら実施形態においては、細胞、組織又は臓器をｓＮＡＧナノファイバにより処理した、１時間、２時間、４時間、５時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２４時間、４８時間、３日又は５日後に、当業者に公知の方法又はここに記載した方法によって遺伝子発現を測定する。

【0090】

ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ又はｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、長いポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマー又はファイバにより引き起こされる特性とは異なる遺伝子発現特性を誘導する。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバにより誘導される遺伝子発現特性は、下記の表Ｉ、ＩＩ，ＩＩＩ，Ｖ、ＶＩＩＩ及びＩＸ、項目６．２〜６．５に示されたものに一致する、同様である、概ね同一である又は同等である一方で、長いポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマー又はファイバにより誘導される遺伝子発現特性は、下記の表ＶＩＩＩ及び／又はＩＸ、項目６．５に示されたものに一致する、同様である、概ね同一である又は同等である。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ又はｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、キチン又はキトサンが誘導する遺伝子発現特性とは異なる遺伝子発現特性を誘導する。

【0091】

特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン及び／又はその誘導体に放射線照射することによって得られる。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン及びその誘導体に関しては、下記の項目５．１．１を参照し、放射線照射を用いたｓＮＡＧナノファイバを生成するための方法に関しては、下記の項目５．２を参照する。例えばｓＮＡＧナノファイバのように、短縮したポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンファイバ及び／又は短縮したポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン誘導体ファイバを形成するために、放射線照射は、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンナノファイバ及びポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン誘導体ファイバの長さの短縮に用いられる。特に、放射線照射は、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン又はその誘導体の長さ及び分子量を、そのマクロ構造を邪魔することなく減ずる。ｓＮＡＧナノファイバの赤外線スペクトル（ＩＲ）は、放射線照射されていないポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミン又はその誘導体と同様である、概ね同一である又は同等である。

【0092】

一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバは、キチン又はキトサン由来ではない。他の実施形態に反して、ここに記載した組成物は、キチン若しくはキトサン由来である、又は、ｓＮＡＧナノファイバは、キチン若しくはキトサン由来である。

【0093】

５．１．１ ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン及びその誘導体
ＵＳ特許番号５，６２２，８３４、５，６２３，０６４、５，６２４，６７９、５，６８６，１１５、５，８５８，３５０、６，５９９，７２０、６，６８６，３４２、７，１１５，５８８、及び、ＵＳ特許公開番号２００９／０１１７１７５（それぞれ参照としてここに組み込む）は、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン及びその誘導体、並びに、これらの生成方法について記載されている。いくつかの実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンは、β−１→４構造である。他の実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンは、α−１→４構造である。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン及びその誘導体は、ポリマー形式又はファイバ形式であり得る。

【0094】

ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンは、例えば、微小藻類、好ましくは珪藻植物より生成することが可能であり、かつ、精製されてもよい。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの生成出発源として使用される珪藻植物は、Ｃｏｓｃｉｎｏｄｉｓｃｕｓ ｇｅｎｕｓ、Ｃｙｃｌｏｔｅｌｌａ ｇｅｎｕｓ及びＴｈａｌａｓｓｉｏｓｉｒａ ｇｅｎｕｓのメンバーを含むが、これに限定されない。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンは、公知の機械力法及び化学／生物学的方法（例えば、米国特許番号５，６２２，８３４、５，６２３，０６４、５，６２４，６７９、５，６８６，１１５、５，８５８，３５０、６，５９９，７２０、６，６８６，３４２及び７，１１５，５８８を参照、それぞれの全てを参照としてここに組み込む）を含む、多くの異なる方法を介して、珪藻植物菌株から得ることができる。ある実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンは、アワビ、甲殻類、昆虫、真菌又は酵母の１つ以上に由来しない。

【0095】

一実施形態において、ポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンは、ａ）細胞体及びポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマーファイバを含む微小藻類を、十分な時間でＮ−アセチルグルコサミンポリマーファイバを細胞体から分離可能な生物因子（フッ化水素のような）で処理することによって、ポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマーファイバを細胞体から放出させる工程、ｂ）ポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマーファイバを細胞体から分離する工程、及び、ｃ）分離されたポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマーファイバから不純物を除去し、ポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマーを単離及び精製する工程を含む処理により得られる。

【0096】

他の実施形態において、ポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンは、アワビ、甲殻類、昆虫、真菌又は酵母の１つ以上に由来してもよい。ある実施形態において、ここに記載した組成物は、キチン又はキトサンを含まない。

【0097】

ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの単糖類単位の１以上は、脱アセチル化されていてもよい。ある実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの１％〜５％、５％〜１０％、５％〜１５％、２０％〜３０％又は２５％〜３０％は、脱アセチル化されている。いくつかの実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％又は３０％は、脱アセチル化されている。他の実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％又は１％未満は、脱アセチル化されている。いくつかの実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％以上、又は、全て（１００％）は、脱アセチル化されている。他の実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又は１００％未満は、脱アセチル化されている。

【0098】

ある実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン組成物は、アセチル化グルコサミン（例えばＮ−アセチルグルコサミン）単糖類を、７０％〜８０％、７５％〜８０％、７５％〜８５％、８５％〜９５％、９０％〜９５％、９０％〜９９％又は９５％〜１００％含む。いくつかの実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン組成物は、アセチル化グルコサミン（例えばＮ−アセチルグルコサミン）単糖類を、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％含む。他の実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン組成物は、アセチル化グルコサミンを、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、９９．５％又は９９．９％より多く含む。いくつかの実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン組成物は、アセチル化グルコサミンを、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％若しくは９９％以上含む、又は、全て（１００％）において含む。他の実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン組成物は、アセチル化グルコサミンを、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又は１００％以下含む。

【0099】

いくつかの実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン組成物は、少なくとも１つのグルコサミン単糖類を含み、さらに、Ｎ−アセチルグルコサミン単糖類を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は９９％含んでもよい。他の実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン組成物は、少なくとも１つのＮ−アセチルグルコサミン単糖類を含み、さらに、グルコサミン単糖類を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は９９％含んでもよい。

【0100】

ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン誘導体は、また、ここに記載した組成物において用いられ得る。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン誘導体及びこのような誘導体を生成する方法は、米国特許番号５，６２３，０６４（例えば項目５．４参照）に記載されており、その全てを参照としてここに組み込む。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン誘導体は、部分的に若しくは完全に脱アセチル化されたポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン、又は、その脱アセチル化された誘導体を含んでもよいが、これに限定されない。さらに、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンは、硫酸化、リン酸化及び／又は硝酸化により誘導体化されてもよい。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン誘導体は、例えば、硫酸化ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン誘導体、リン酸化ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン誘導体、又は、硝酸化ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン誘導体を含む。さらに、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの単糖類単位の１以上は、１以上のスルホニル基、１以上のＯ−アシル基を含んでもよい。さらに、脱アセチル化ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの１以上の単糖類は、Ｎ−アシル基を含んでもよい。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン又はその脱アセチル化誘導体の１以上の単糖類は、Ｏ−アルキル基を含んでもよい。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの単糖類単位の１以上は、アルカリ誘導体であってもよい。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの脱アセチル化誘導体の単糖類単位の１以上は、Ｎ−アルキル基を含んでもよい。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの脱アセチル化誘導体の単糖類単位の１以上は、少なくとも１つのデオキシハロゲン誘導体を含んでもよい。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの脱アセチル化誘導体の単糖類単位の１以上は、塩を形成してもよい。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの脱アセチル化誘導体の単糖類単位の１以上は、金属キレートを形成してもよい。特定の実施形態において、金属は亜鉛である。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの脱アセチル化誘導体の単糖類単位の１以上は、Ｎ−アルキリデン基又はＮ−アリ−リデン基を含んでもよい。一実施形態において、上記誘導体は酢酸塩誘導体である。他の実施形態において、上記誘導体は酢酸塩誘導体ではない。一実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン又は脱アセチル化ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンは、乳酸により誘導体化される。他の実施形態において、上記誘導体は、乳酸により誘導体化されない。

【0101】

５．２ ｓＮＡＧナノファイバの生成方法
ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマー若しくはファイバ、並びに、上記ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマー若しくはファイバ誘導体のいずれかは、乾燥ポリマー若しくはファイバ、又は、ポリマー膜若しくはファイバ膜として、放射線照射することができる。代替として、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマー若しくはファイバ、並びに、上記ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマー若しくはファイバ誘導体のいずれかは、湿った状態で放射線照射することができる。放射線照射によりｓＮＡＧナノファイバを生成する方法、及び、そのように生成したｓＮＡＧナノファイバは、米国特許公開番号２００９／０１１７１７５に記載されており、その全てを参照としてここに組み込む。

【0102】

ある実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマー又はファイバは、放射線照射のために、懸濁液／スラリー又はウエットケーキの形態にする。放射線照射は、手当用品のような最終形態に上記ポリマー又はファイバを成形する前、同時又は後に、行うことができる。一般に、懸濁液／スラリー及びウエットケーキの、上記ポリマー又はファイバ含有量は様々であり、例えば、蒸留水１ｍＬあたり約０．５ｍｇ〜約５０ｍｇのポリマー又はファイバをスラリー成形のために用い、蒸留水１ｍＬあたり約５０ｍｇ〜約１０００ｍｇのポリマー又はファイバをウエットケーキ成形のために用いる。ポリマー又はファイバを、まず、凍結乾燥、液体窒素凍結及び粉砕し、懸濁液／スラリー又はウエットケーキの成形のために、より影響されやすくしてもよい。また、懸濁液／スラリーをろ過して水を取り除くことによって、ウエットケーキを形成してもよい。ある局面において、上記ポリマー又はファイバを、蒸留水１ｍＬあたり約０．５ｍｇ、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１２ｍｇ、１５ｍｇ、１８ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ若しくは５０ｍｇ、又は、上記実施形態のいずれかの範囲（例えば１〜１０ｍｇ／ｍＬ、５〜１５ｍｇ／ｍｌ、２〜８ｍｇ／ｍｌ、２０〜５０ｍｇ／ｍｌ等）のポリマー又はファイバを含む懸濁液として、放射線照射する。他の局面において、ポリマー又はファイバを、蒸留水１ｍＬあたり約５０〜１０００ｍｇのポリマー又はファイバを含むウエットケーキとして、放射線照射する。特定の実施形態において、ウエットケーキは、蒸留水１ｍＬあたり約５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００若しくは１，０００ｍｇ、又は、いずれかの範囲（例えば１００〜５００ｍｇ／ｍｌ、３００〜６００ｍｇ／ｍｌ、５０〜１，０００ｍｇ／ｍｌ等）のポリマー又はファイバを含む。

【0103】

放射線照射は、好ましくは、ガンマ線、電子ビーム線又はＸ線の形式である。放射線照射の２つの発生源は、好ましくは、放射線核種及び電気である。特定の実施形態において、放射線核種はコバルト６０及びセシウム１３７である。これらの核種の両方はガンマ線を放出し、質量のない光子である。ガンマ線のエネルギーは、０．６６〜１．３ＭｅＶである。電気を用いるとき、電子を生成し、１０ＭｅＶ又はそれより高くなるまでエネルギーを高める。ポリマー又はファイバに放射線を照射してその長さを減じるとき、１０ＭｅＶの電子による、約３．７ｃｍの一方向照射、又は、約８．６ｃｍの二方向照射に限定することによって、水と同様の密度を有する材料への侵入深さを考慮する。侵入深さはより低い電子エネルギーにおいて減少する。電子ビーム経路に金属ターゲット（通常タングステン又はタンタル）を配置することによって、電子エネルギーをＸ線に変換することができる。Ｘ線への返還は、エネルギーが５ＭｅＶまでの電子に限定される。Ｘ線は、質量のない光子でありガンマ線と同様に、ポリマー又はファイバに侵入することができる。電子エネルギーからＸ線エネルギーへの変換は、わずか約８％の効率である。変換効率の低さを補うために、Ｘ線生成設備として高出力の電子ビーム装置が必要である。

【0104】

特定の実施形態において、放射線照射はガンマ線照射である。

【0105】

放射線照射の吸収線量は、グレイ（ｇｙ）又はキログレイ（ｋｇｙ）で測定され、製品の単位質量あたりのエネルギー吸収である。乾燥ポリマー又はファイバのために、好ましい吸収線量は、約５００〜２，０００ｋｇｙの放射線照射であり、最も好ましくは約７５０〜１，２５０ｋｇｙ又は約９００〜１，１００ｋｇｙの放射線照射である。ウエットポリマー又はファイバのために、好ましい吸収線量は、約１００〜５００ｋｇｙの放射線照射であり、最も好ましくは約１５０〜２５０ｋｇｙ又は約２００〜２５０ｋｇｙの放射線照射である。

【0106】

放射線照射量は、ポリマー又はファイバの長さにおけるその効果に関して記載することができる。特定の実施形態において、好ましく使用される放射線照射量は、ポリマー又はファイバそれぞれの開始時の長さの約１０％〜９０％のいずれかに、ポリマー又はファイバの長さを減じる放射線照射量である。特定の実施形態において、平均の長さを、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％若しくは約９０％、又は、いずれかの範囲（例えば２０〜４０％、３０〜７０％等）に減じる。代替として、好ましく使用される放射線照射量は、ポリマー又はファイバの長さを、１〜１００μｍのいずれかに減ずる放射線照射量である。特定の実施形態において、また、開始時のファイバの長さに応じて、ポリマー又はファイバの長さを、約１５μｍ未満、約１４μｍ未満、約１３μｍ未満、約１２μｍ未満、約１１μｍ未満、約１０μｍ未満、約８μｍ未満、約７μｍ未満、約５μｍ未満、約４μｍ未満、約３μｍ未満、約２μｍ未満又は約１μｍ未満に減じる。ある実施形態において、大多数の（さらに、ある実施形態において、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％若しくは１００％、又は、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％若しくは９５％〜９９％の）ポリマー又はファイバの長さを、約２０μｍ未満、約１５μｍ未満、約１２μｍ未満、約１０μｍ未満、約８μｍ未満、約７μｍ未満又は約５μｍ未満に減じる。ある実施形態において、ポリマー又はファイバの放射線照射を、大多数の（さらに、ある実施形態において、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％若しくは１００％、又は、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％若しくは９５％〜９９％の）ファイバの長さを、約１〜２０μｍ、約１〜１５μｍ、約２〜１５μｍ、約１〜１２μｍ、約２〜１２μｍ、約１〜１０μｍ、約２〜１０μｍ、約１〜８μｍ、約２〜８μｍ、約１〜７μｍ、約２〜７μｍ、約３〜８μｍ、約４〜１０μｍ、約４〜７μｍ、約５〜１０μｍ、約１〜５μｍ、約２〜５μｍ、約３〜５μｍ、約４〜１０μｍ又は上述の長さ範囲のいずれかに減ずることもまた、本発明の範疇である。

【0107】

放射線照射量は、ポリマー又はファイバの分子量に対するその効果に関して記載することもできる。特定の実施形態において、好ましく使用される放射線照射量は、開始時のポリマー又はファイバの分子量を、約１０％〜９０％のいずれかに減ずる放射線照射量である。特定の実施形態において、平均分子量を、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％若しくは約９０％、又は、いずれかの範囲（例えば、２０〜４０％、３０〜７０％等）に減ずる。代替として、好ましく使用される放射線照射量は、ポリマー又はファイバの分子量を、１，０００〜１，０００，０００ダルトンのいずれかに減ずる放射線照射量である。特定の実施形態において、また、開始時の分子量に応じて、ポリマー又はファイバの平均分子量を、１，０００，０００ダルトン未満、７５０，０００ダルトン未満、５００，０００ダルトン未満、３００，０００ダルトン未満、２００，０００ダルトン未満、１００，０００ダルトン未満、９０，０００ダルトン未満、８０，０００ダルトン未満、７０，０００ダルトン未満、６０，０００ダルトン未満、５０，０００ダルトン未満、２５，０００ダルトン未満、１０，０００ダルトン未満又は５０００ダルトン未満に減ずる。ある実施形態において、平均分子量を、少なくとも５００ダルトン、１，０００ダルトン、２，０００ダルトン、３，５００ダルトン、５，０００ダルトン、７，５００ダルトン、１０，０００ダルトン、２５，０００ダルトン、５０，０００ダルトン、６０，０００ダルトン又は１００，０００ダルトンに減ずる。上記平均分子量の何れかの範囲として、例えば、ある実施形態において、ポリマー又はファイバの放射線照射により減じる範囲が、１０，０００〜１００，０００ダルトン、１，０００〜２５，０００ダルトン、５０，０００〜５００，０００ダルトン、２５，０００〜１００，０００ダルトン、３０，０００〜９０，０００ダルトン、約４０，０００〜８０，０００ダルトン、約２５，０００〜７５，０００ダルトン、約５０，０００〜７０，０００ダルトン又は約５５，０００〜６５，０００ダルトン等のいずれかである場合も、発明の範疇に含まれる。ある実施形態において、ポリマー又はファイバの放射線照射は、大多数及びある実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％若しくは１００％、又は、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％若しくは９５％〜９９％のファイバの分子量を、約２０，０００〜１００，０００ダルトン、約２５，０００〜７５，０００ダルトン、約３０，０００〜９０，０００ダルトン、約４０，０００〜８０，０００ダルトン、約５０，０００〜７０，０００ダルトン又は約５５，０００〜６５，０００ダルトンの範囲の何れかに減ずる。ある実施形態において、ポリマー又はファイバの放射線照射は、大多数及びある実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％若しくは１００％、又は、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％若しくは９５％〜９９％のファイバの分子量を、約６０，０００ダルトンに減ずる。

【0108】

放射線照射に続いて、スラリーをろ過して乾燥させる、及び、ウエットケーキを乾燥させることが可能であり、これにより、本発明の実施に有用な組成物（例えば、手当用品及びここに記載した他の組成物）を形成することができる。

【0109】

５．３ ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物
ｓＮＡＧナノファイバを、ここに記載したように局所投与するために、種々の組成物に成形してもよい。

【0110】

ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、クリーム、膜、フィルム、液体溶液、懸濁液（例えば濃厚懸濁液）、粉、ペースト、軟膏、座薬、ゲル化組成物、噴霧剤、ゲル又はスプレーとして形成してもよい。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、極薄膜として形成する。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、手当用品、マット又は包帯として形成する。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、硬くない、又は、障壁形成されていない。投与前の液体中の溶液若しくは懸濁液に適した硬い形状もまた検討する。このような組成物を、（臀部、膝、肩のための）整形インプラント（ピン、ネジ等）、心臓血管インプラント（ステント、カテーテル等）及び抗菌活性に効果的な同様のもののような、移植可能な装置に組み込む又は移植可能な装置で被覆することも可能である。

【0111】

ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、１以上の薬学的に許容される賦形剤を含んでいてもよい。適切な賦形剤は、水、生理食塩水、食塩水、ぶどう糖、グリセロース、エタノール及び同様のもの、又は、これらの組み合わせを含んでもよい。適切な賦形剤は、また、でんぷん、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、米、小麦、石灰粉末、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロール・モノステアレート、油（ピーナツ油、大豆油、鉱物油、ごま油のような、石油、動物油、野菜油又は合成源油）、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、プロピレン、グリコール等も含む。さらに、ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、１以上の湿潤剤、乳化剤、ｐＨ緩衝化剤及び他の薬剤を含んでもよい。ｓＮＡＧナノファイバ組成物は、例えば、局所投与に適した生理学的に許容されるキャリアのような、生理学的に許容されるキャリアに組み込まれてもよい。用語「薬学的に許容される」は、連邦若しくは州政府の規制当局、米国薬局方に列挙された規制当局、又は、一般的に認識された薬局方によって、動物及びより具体的にはヒトにおいて使用することが承認されていることを意味する。適切な薬学キャリアは、Ｅ．Ｗ． Ｍａｒｔｉｎ による「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている。

【0112】

組成物中のｓＮＡＧナノファイバの終量は様々であってよい。例えば、（例えば患者に投与するために調製した）組成物中のｓＮＡＧナノファイバの終量は、約５０ｗ／ｖ％以上、約６０ｗ／ｖ％以上、約７０ｗ／ｖ％以上、約７５ｗ／ｖ％以上、約８０ｗ／ｖ％以上、約８５ｗ／ｖ％以上、約９０ｗ／ｖ％以上、約９５ｗ／ｖ％以上、約９８ｗ／ｖ％以上又は約９９ｗ／ｖ％以上であってもよい。一実施形態において、組成物中のｓＮＡＧナノファイバの量は、約９５％、約９８％、約９９％又は約１００％である。また、（例えば、患者に投与するために調製した）組成物中のｓＮＡＧナノファイバの量は、約５０ｗ／ｖ％〜１００ｗ／ｖ％、約６０ｗ／ｖ％〜１００ｗ／ｖ％、約７０ｗ／ｖ％〜１００ｗ／ｖ％、約７５ｗ／ｖ％〜１００ｗ／ｖ％、約８０ｗ／ｖ％〜１００ｗ／ｖ％、約９０ｗ／ｖ％〜１００ｗ／ｖ％、約９５ｗ／ｖ％〜１００ｗ／ｖ％、約７０ｗ／ｖ％〜９５ｗ／ｖ％、約７５ｗ／ｖ％〜９５ｗ／ｖ％、約８０ｗ／ｖ％〜９５ｗ／ｖ％、約９０ｗ／ｖ％〜９５ｗ／ｖ％、約７０ｗ／ｖ％〜９０ｗ／ｖ％、約７５ｗ／ｖ％〜９０ｗ／ｖ％又は約８０ｗ／ｖ％〜９０ｗ／ｖ％であってもよい。組成物は、ｓＮＡＧナノファイバの３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％又は９９％より多い溶液を含んでいてもよい。

【0113】

ｓＮＡＧナノファイバ組成物は、創傷包帯中に形成してもよい。ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ組成物を、バリア、膜又はフィルムの形式の創傷包帯として形成する。代替として、ｓＮＡＧナノファイバ組成物を、バリア、膜又はフィルムのように、手当用品の基材に添加してもよい。バリア、膜又はフィルムは、様々な標準サイズで供給することが可能であり、さらに、切断して治療する領域に合わせた大きさにすることができる。基剤は、包帯又はガーゼのような従来の手当用品材料から形成することが可能であり、患者に適用する前に、ポリマー又はファイバを添加又は被覆する。代替として、ｓＮＡＧナノファイバを、糸、マイクロビーズ、ミクロスフェア若しくは微小線維により形成したバリア、膜若しくはフィルムとして形成することが可能であり、又は、組成物をバリア形成マットとして形成することができる。ある実施形態において、手当用品の少なくとも７５％、８５％、９０％又は９５％がｓＮＡＧナノファイバにより構成されている。ある局面において、手当用品は、ガーゼ又は包帯のような従来の手当用品材料を含んでいない。このような実施形態においては、ｓＮＡＧナノファイバ自身を創傷包帯として形成する。

【0114】

ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、さらに、適切な天然又は合成ポリマー又はファイバを含んでいてもよい。適切なポリマー又はファイバの例には、セルロースポリマー、キサン、ポリアラミド、ポリアミド、ポリイミド、ポリアミド／イミド、ポリアミドヒドラジド、ポリヒドラジド、ポリイミダゾール、ポリベンゾオキサゾール、ポリエステル／アミド、ポリエステル／イミド、ポリカーボネート／アミド、ポリカーボネート／イミド、ポリスルホン／アミド、ポリスルホンイミド等、並びに、これらのコポリマー及び混合物が含まれる。ポリマー又はファイバの他の適切な部類には、ポリフッ化ビニリデン及びポリアクリロニトリルが含まれる。これらのポリマー又はファイバの例には、米国特許番号ＲＥ ３０，３５１、４，７０５，５４０、４，７１７，３９３、４，７１７，３９４、４，９１２，１９７、４，８３８，９００、４，９３５，４９０、４，８５１，５０５、４，８８０，４４２、４，８６３，４９６、４，９６１，５３９、並びに、欧州特許出願０ ２１９ ８７８に記載されたものが含まれ、これらを参照として組み込む。ポリマー又はファイバは、少なくとも１つの、セルロースポリマー、ポリアミド、ポリアラミド、ポリアミド／イミド又はポリイミドのいずれかを含むことができる。ある実施形態において、ポリマー又はファイバは、ポリアラミド、ポリエステル、ウレタン及びポリテトラフルオロエチレンを含む。一実施形態において、ここに記載した組成物は、一種類以上のポリマーを含む（例えば、ｓＮＡＧナノファイバ及びセルロース）。

【0115】

ある局面において、ｓＮＡＧナノファイバは、組成物中の唯一の活性成分である。

【0116】

他の実施形態において、組成物は、例えば、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗酵母剤、化学療法薬剤又は他のいずれかの薬剤のような、１以上の添加活性成分を含む。いくつかの実施形態において、添加活性成分は、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗酵母剤、ディフェンシンペプチド、ディフェンシン様ペプチド若しくはＴｏｌｌレセプター様ペプチド、又は、成長因子の１つ以上である。特定の実施形態において、添加活性成分は、ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＣＣ、ＰＤＧＦ−ＤＤ、ＦＧＦ−１、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−１０、ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、（ＨＢ−ＥＧＦ）、アンフィレグリン（ａｍｐｈｉｒｅｇｕｌｉｎ）、エピレグリン（ｅｐｉｒｅｇｕｌｉｎ）、ベータセルリン（ｂｅｔａｃｅｌｌｕｌｉｎ）、ニューレグリン（ｎｅｕｒｅｇｕｌｉｎｓ）、エピゲン（ｅｐｉｇｅｎ）、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ， ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅ、胎盤成長因子（ＰＬＧＦ）、アンジオポイエチン（ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ）−１、アンジオポイエチン−２、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）及びマクロファージ刺激タンパク質（ＭＳＰ）の１つ以上のような、成長因子である。他の実施形態において、添加活性成分は、免疫システム、痛み止め剤又は解熱剤を増強する薬剤である。

【0117】

ある実施形態において、添加活性成分は抗ウイルス剤である。当業者に公知のいずれかの抗ウイルス剤を、ｓＮＡＧナノファイバ組成物において使用してもよい。抗ウイルス剤の限定されない例には、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、融合タンパク質、抗体、核酸分子、有機分子、無機分子及び小分子が含まれ、これらは、そのレセプターへのウイルスの付着、細胞中へのウイルスの内在化、ウイルスの複製、又は、細胞からのウイルスの放出を、抑制及び／又は減ずる。特に、抗ウイルス剤には、ヌクレオシド類似物（例えば、ジドブジン、アシクロビル、ガングシクロビル、ビダラビン、イドクスリジン、トリフルリジン及びリバビリン）、ホスミシン、アマンタジン、ペラミビル（ｐｅｒａｍｉｖｉｒ）、リマンタジン（ｒｉｍａｎｔａｄｉｎｅ）、サクイナビル（ｓａｑｕｉｎａｖｉｒ）、インジナビル（ｉｎｄｉｎａｖｉｒ）、リトナビル（ｒｉｔｏｎａｖｉｒ）、α−インターフェロン及び他のインターフェロン、ＡＺＴ、ザナミビル（Ｒｅｌｅｎｚａ（登録商標））、及び、オセルタミビル（Ｔａｍｉｆｌｕ（登録商標））が含まれるが、これに限定されない。他の抗ウイルス剤は、例えば、Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＦｌｕＭｉｓｔ（登録商標）（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ）、Ｆｌｕｖｉｒｉｎ（登録商標）（Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、Ｆｌｕｌａｖａｌ（登録商標）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、Ａｆｌｕｒｉａ（登録商標）（ＣＳＬ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｉｅｓ Ｉｎｃ．）、Ａｇｒｉｆｌｕ（登録商標）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）又はＦｌｕｚｏｎｅ（登録商標）（Ａｖｅｎｔｉｓ Ｐａｓｔｅｕｒ）のような、インフルエンザウイルスワクチンを含む。

【0118】

ある実施形態において、添加活性成分は抗がん剤である。特定の実施形態において、抗がん剤は化学療法薬剤である。当業者に公知のいずれかの抗がん剤を、ｓＮＡＧナノファイバ組成物中で使用してもよい。抗がん剤の例には、アシビチン（ａｃｉｖｉｃｉｎ）、アントラサイクリン、アントラマイシン、アザシチジン（Ｖｉｄａｚａ）、ビスホスホネート（例えば、パミドロネート（Ａｒｅｄｒｉａ）、クロンドロネートナトリウム（Ｂｏｎｅｆｏｓ）、ゾレドロン酸（Ｚｏｍｅｔａ）、アレンドロネート（Ｆｏｓａｍａｘ）、エチドロネート、イバンドロネート、シマドロネート、リセドロメート及びチルドロメート）、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン（Ａｒａ−Ｃ）、ダウノルビシン塩酸塩、デシタビン（Ｄａｃｏｇｅｎ）、脱メチル化剤、ドセタキセル、ドキソルビシン、ＥｐｈＡ２インヒビター、エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、ファザラビン（ｆａｚａｒａｂｉｎｅ）、フルオロウラシル、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、ヒストン脱アセチル酵素インヒビター（ＨＤＡＣｓ）、インターロイキンＩＩ（組み換えインターロイキンＩＩ又はｒＩＬ２を含む）、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ、レナリドミド（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ）、抗−ＣＤ２抗体（例えば、シプリツマブ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｉｎｃ．、国際公開番号ＷＯ ０２／０９８３７０、その全てを参照としてここに組み込む））、メルファラン、メトトレキサート、マイトマイシン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ピューロマイシン、リボプリン（ｒｉｂｏｐｒｉｎｅ）、スピロプラチン（ｓｐｉｒｏｐｌａｔｉｎ）、テガフル、テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、ボロゾール（ｖｏｒｏｚｏｌｅ）、ゼニプラチン（ｚｅｎｉｐｌａｔｉｎ）、ジノスタチン（ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）及びゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）塩酸塩が含まれる。

【0119】

ｓＮＡＧナノファイバ組成物中で使用し得る添加活性成分の他の例には、脈管形成インヒビター、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アポトーシス遺伝子モジュレーター、アポトーシスレギュレーター、ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト、ベータラクタム誘導体、カゼインキナーゼインヒビター（ＩＣＯＳ）、エストロゲンアゴニスト、エストロゲンアンタゴニスト、グルタチオンインヒビター、ＨＭＧ ＣｏＡ還元酵素インヒビター、免疫刺激ペプチド、インスリン様成長因子−１レセプターインヒビター、インターフェロンアゴニスト、インターフェロン、インターロイキン、親油性プラチナ化合物、マトリリシン（ｍａｔｒｉｌｙｓｉｎ）インヒビター、マトリクスメタロプロテイナーゼインヒビター、不適合二本鎖ＲＮＡ、一酸化窒素モジュレーター、オリゴヌクレオチド、プラチナ化合物、タンパク質キナーゼＣインヒビター、タンパク質チロシンリン酸化酵素インヒビター、プリンヌクレオシドリン酸化酵素インヒビター、ｒａｆアンタゴニスト、情報伝達インヒビター、情報伝達モジュレーター、翻訳インヒビター、チロシンキナーゼインヒビター、及び、ウロキナーゼレセプターアンタゴニストが含まれるが、これに限定されない。

【0120】

ある実施形態において、添加活性成分は抗脈管形成剤である。抗脈管形成剤の限定されない例には、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、共役剤、ＴＮＦ−αに特異的に結合するような抗体（例えば、ヒト、ヒト化した、キメラ、モノクローナル、ポリクローナル、Ｆｖｓ、ＳｃＦｖｓ、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ）２フラグメント及びそのフラグメントに結合する抗原）、核酸分子（例えば、アンチセンス分子又は三重螺旋）、有機分子、無機分子及び小分子が含まれ、脈管形成を減ずる又は抑制する。抗脈管形成剤の他の例は、例えば、米国公開番号２００５／０００２３４Ａ１の段落２７７〜２８２に見られ、その全てを参照としてここに組み込む。他の実施形態において、添加活性成分は、抗脈管形成剤ではない。

【0121】

いくつかの実施形態において、添加活性成分は、抗炎症剤である。抗炎症剤の限定されない例には、非ステロイド抗炎症剤（ＮＳＡＩＤｓ）（例えば、セレコキシブ（ＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標））、ジクロフェナク（ＶＯＬＴＡＲＥＮ（登録商標））、エトドラク（ＬＯＤＩＮＥ（登録商標））、フェノプロフェン（ＮＡＬＦＯＮ（登録商標））、インドメタシン（ＩＮＤＯＣＩＮ（登録商標））、ケトララック（ＴＯＲＡＤＯＬ（登録商標））、オキサプロジン（ＤＡＹＰＲＯ（登録商標））、ナブメントン（ＲＥＬＡＦＥＮ（登録商標））、スリンダック（ＣＬＩＮＯＲＩＬ（登録商標））、トルメンチン（ＴＯＬＥＣＴＩＮ（登録商標））、ロフェコキシブ（ＶＩＯＸＸ（登録商標））、ナプロセン（ＡＬＥＶＥ（登録商標）、ＮＡＰＲＯＳＹＮ（登録商標））、ケトプロフェン（ＡＣＴＲＯＮ（登録商標））及びナブメトン（ＲＥＬＡＦＥＮ（登録商標）））、ステロイド抗炎症薬（例えば、グルココルチコイド、デキサメタゾン（ＤＥＣＡＤＲＯＮ（登録商標））、コルチコステロイド（例えば、メチルプレドニゾロン（ＭＥＤＲＯＬ（登録商標）））、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン（ＰＲＥＤＮＩＳＯＮＥ（登録商標）及びＤＥＬＴＡＳＯＮＥ（登録商標））及びプレドニゾロン（ＰＲＥＬＯＮＥ（登録商標）及びＰＥＤＩＡＰＲＥＤ（登録商標）））、抗コリン作用薬（例えば、硫酸アトロピン、硝酸メチルアトロピン及び臭化イプラトロピウム（ＡＴＲＯＶＥＮＴ（登録商標）））、ベータ２−アゴニスト（例えば、アブテロール（ＶＥＮＴＯＬＩＮ（登録商標）及びＰＲＯＶＥＮＴＩＬ（登録商標））、ビトルテロール（ＴＯＲＮＡＬＡＴＥ（登録商標））、レバルブテロール（ＸＯＰＯＮＥＸ（登録商標））、メタプロテレノール（ＡＬＵＰＥＮＴ（登録商標））、ピルブテロール（ＭＡＸＡＩＲ（登録商標））、ターブトライン（ＢＲＥＴＨＡＩＲＥ（登録商標）及びＢＲＥＴＨＩＮＥ（登録商標））、アルブテロール（ＰＲＯＶＥＮＴＩＬ（登録商標）、ＲＥＰＥＴＡＢＳ（登録商標）及びＶＯＬＭＡＸ（登録商標））、フォルモテロール（ＦＯＲＡＤＩＬ ＡＥＲＯＬＩＺＥＲ（登録商標））及びサルメテロール（ＳＥＲＥＶＥＮＴ（登録商標）及びＳＥＲＥＶＥＮＴ ＤＩＳＫＵＳ（登録商標）））、並びに、メチルキサンチン（例えば、テオフィリン（ＵＮＩＰＨＹＬ（登録商標）、ＴＨＥＯ−ＤＵＲ（登録商標）、ＳＬＯ−ＢＩＤ（登録商標）及びＴＥＨＯ−４２（登録商標）））が含まれる。

【0122】

ある実施形態において、添加活性成分は、アルキル化剤、ニトロソウレア、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、トポイソメラーゼＩＩインヒビター又は分裂インヒビターである。アルキル化剤には、ブスルファン、シスプラチン、カルボプラチン、クロルムブチル、シクロホスファミド、イフォスファミド、デカルバジン、メクロレタミン、メファレン及びテモゾロミドが含まれるが、これに限定されない。ニトロソウレアには、カルムスチン（ＢＣＮＵ）及びロムスチン（ＣＣＮＵ）が含まれるが、これに限定されない。代謝拮抗剤には、５−フルオロウラシル、カペシタビン、メトトレキサート、ゲムシタビン及びフルダラビンが含まれるが、これに限定されない。アントラサイクリンには、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン及びミトザントロンが含まれるが、これに限定されない。トポイソメラーゼＩＩインヒビターには、トポテカン、イリノテカン、エトピシド（ＶＰ−１６）及びテニポシドが含まれるが、これに限定されない。分裂インヒビターには、テキサン（パクリタキシル、ドセタキシル）及びビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン及びビノレルビン）が含まれるが、これに限定されない。

【0123】

ｓＮＡＧナノファイバ組成物は、コラーゲンを含んでいてもよいが、ある局面において、ｓＮＡＧナノファイバ組成物はコラーゲンを含んでいない。

【0124】

ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ組成物は別の療法を含んでいない。ある実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ組成物は、いかなる別の抗ウイルス剤、抗がん剤、抗菌剤、抗酵母剤、抗炎症剤、化学療法剤、抗脈管形成剤、ディフェンシンペプチド、ディフェンシン様ペプチド、Ｔｏｌｌレセプター様ペプチド又は成長因子も含んでいない。

【0125】

いくつかの実施形態において、別の活性成分は、抗微生物剤（例えば、抗生物質、ディフェンシンペプチド、ディフェンシン様ペプチド若しくはＴｏｌｌレセプター様ペプチド）又は成長因子ではない。特定の実施形態において、別の活性成分は、ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＣＣ、ＰＤＧＦ−ＤＤ、ＦＧＦ−１、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−１０、ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、（ＨＢ−ＥＧＦ）、アンフィレグリン、エピレグリン、ベータセルリン、ニューレグリン、エピゲン、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅ、胎盤成長因子（ＰＬＧＦ）、アンジオポイエチン−１、アンジオポイエチン−２、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）及びマクロファージ刺激タンパク質（ＭＳＰ）のような成長因子ではない。ある実施形態において、別の活性成分は、免疫システム、鎮痛剤又は解熱剤を促進する薬剤ではない。

【0126】

ある実施形態において、別の活性成分は、抗生物質の下記分類の１つから選択される抗生物質ではない：マイクロライド（例えば、エリスロマイシン、アジスロマイシン）、アミノグリコシド（例えば、アミカシン、ゲンタマイシン、ネオマイシン、ストレプトマイシン）、セファロスポリン（例えば、セファドロキシル、セファクロール、セファタキシン、セフェピン）、フルオロキノロン（例えば、チプロフロキサシン、レボフロキサシン）、ペニシリン（例えば、ペニシリン、アンピシリン、アモキシリン）、テトラサイクリン（例えば、テトラサイクリン、ドキシサイクリン）、及び、カルバペネン（例えば、メロペネン、イミペネン）。いくつかの実施形態において、別の活性成分は、バンコマイシン、サルファ剤（例えば、コトリモキサゾール／トリメトプリムスルファメトキサゾール）、テトラサイクリン（例えば、ドキシサイクリン、ミノサイクリン）、クリンダマイシン、オキサソリジノン（例えば、リンゾリド）、ダプトマイシン、テイコプラニン、クイヌプリスチン／ダルフォプリスチン（シネルシド）、タイゲサイクリン、アリシン、バシトラシン、ニトロフラントイン、過酸化水素、ノボビオシン、ネチルマイシン、メチルグリオキサル、ビーディフェンシン−１、トブラマイシン、クロルヘキシジンジグルコネート、クロルヘキシジングルコネート、レボフロキサシン、亜鉛、及び／又は、銀ではない。

【0127】

他の局面において、ｓＮＡＧナノファイバ組成物は、有意な量のタンパク質材料を含んでいない。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ組成物のタンパク質含有量は、０．１ｗ％、０．５ｗ％又は１ｗ％以下である。他の実施形態において、上記組成物のタンパク質含有量はクマシー染色により検出されない量である。

【0128】

一実施形態において、亜鉛もｓＮＡＧナノファイバ組成物に含まれている。その抗微生物特性に加えて、亜鉛は、創傷治癒においても機能する（Ａｎｄｒｅｗｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｄｖ Ｗｏｕｎｄ Ｃａｒｅ １２：１３７−８参照）。亜鉛を、好ましくは、酸化亜鉛、硫酸亜鉛、酢酸亜鉛又はグルコン酸亜鉛のような、塩の形態で添加する。

【0129】

５．４ 予防及び療法のための使用
ある実施形態において、ここに記載した組成物は、感染及び／又は疾患の予防及び／又は治療に使用可能であり、ディフェンシン生成及び／又は分泌の増加に有益である。このような疾患は、ディフェンシン欠乏の結果として引き起こされ得る、又は、ディフェンシンの存在量の増加が効果的であり得る。

【0130】

特定の実施形態において、ここに記載した組成物は、１以上のディフェンシンペプチドの無発現若しくは低発現レベルに関連する疾患、又は、１以上のディフェンシンペプチドをコードする遺伝子若しくは遺伝子群の変異／欠失／低遺伝子コピー数（「ＧＣＮ」）
に関連する疾患、の治療及び／又は予防に用いられる。変異／欠失／低ＧＣＮ／無発現又は低発現若しくは発現が改変され得るディフェンシン遺伝子の例には、公知のα−ディフェンシン（例えば、ＤＥＦＡ１、ＤＥＦＡ１Ｂ、ＤＥＦＡ３、ＤＥＦＡ４、ＤＥＦＡ５、ＤＥＦＡ６）のいずれか、公知のβ−ディフェンシン（例えば、ＤＥＦＢ１、ＤＥＦＢ２、ＤＥＦＢ４、ＤＥＦＢ１０３Ａ、ＤＥＦＢ１０４Ａ、ＤＥＦＢ１０５Ｂ、ＤＥＦＢ１０７Ｂ、ＤＥＦＢ１０８Ｂ、ＤＥＦＢ１１０、ＤＥＦＢ１１２、ＤＥＦＢ１１４、ＤＥＦＢ１１８、ＤＥＦＢ１１９、ＤＥＦＢ１２３、ＤＥＦＢ１２４、ＤＥＦＢ１２５、ＤＥＦＢ１２６、ＤＥＦＢ１２７、ＤＥＦＢ１２８、ＤＥＦＢ１２９、ＤＥＦＢ１３１、ＤＥＦＢ１３６）のいずれか、及び、公知のθ−ディフェンシン（例えば、ＤＥＦＴ１Ｐ）のいずれかが含まれる。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、上記列挙した１以上の遺伝子における、無発現、低発現若しくは発現の改変、又は、変異／欠失／低ＧＣＮ、に関連する疾患又は感染の治療又は予防に用いる。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、１以上の、ＤＥＦＡ１、ＤＥＦＡ３、ＤＥＦＡ４、ＤＥＦＡ５、ＤＥＦＢ１、ＤＥＦＢ３、ＤＥＦＢ１０３Ａ、ＤＥＦＢ１０４Ａ、ＤＥＦＢ１０８Ｂ、ＤＥＦＢ１１２、ＤＥＦＢ１１４、ＤＥＦＢ１１８、ＤＥＦＢ１１９、ＤＥＦＢ１２３、ＤＥＦＢ１２４、ＤＥＦＢ１２５、ＤＥＦＢ１２６、ＤＥＦＢ１２８、ＤＥＦＢ１２９及びＤＥＦＢ１３１における、無発現、低発現若しくは発現の改変、又は、変異／欠失／低ＧＣＮ、に関連する疾患又は感染の治療又は予防に用いる。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、１以上のＴｏｌｌレセプター（例えば、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１及び／又はＴＬＲ１２）における、無発現、低発現若しくは発現の改変、又は、変異／欠失／低ＧＣＮ、に関連する疾患又は感染の治療又は予防に用いる。さらに他の実施形態において、ここに記載した組成物を、１以上のＩＬ−１、ＣＥＡＣＡＭ３、ＳＰＡＧ１１、ＳＩＧＩＲＲ（ＩＬ１−ｌ様レセプター）、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＩＲＡＫ４、ＴＢＫ１、ＴＲＡＦ６及びＩＫＫｉにおける、無発現、低発現若しくは発現の改変、又は、変異／欠失／低ＧＣＮ、に関連する疾患又は感染の治療又は予防に用いる。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、１以上のＲＡＫ２、ＳＩＧＩＲＲ、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ１０及びＴＲＡＦ６における、無発現、低発現若しくは発現の改変、又は、変異／欠失／低ＧＣＮ、に関連する疾患又は感染の治療又は予防に用いる。

【0131】

遺伝子の低発現レベルは、「標準的な」発現レベルよりも低い（例えば、１．２５倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上低い）レベルである。遺伝子の改変された発現レベルは、「標準的な」発現レベルとは異なる（例えば、２０％、２５％、３０％、５０％、７５％、１００％、１５０％、２００％、２５０％、３００％以上異なる）レベルである。ある実施形態において、ここに記載した組成物を投与した患者における、１以上のディフェンシン遺伝子（例えば、上記列挙したディフェンシン遺伝子）の発現は、１以上のディフェンシン遺伝子の「標準的な」発現の、９０％未満、７５％未満、６０％未満、５０％未満、３０％未満、２０％未満であってもよい。１以上のディフェンシン遺伝子の「標準的な」発現とは、（ｉ）治療する疾患又は感染の症状を示さない又は診断されていない患者において見られる公知の平均発現レベル、（ｉｉ）治療する疾患又は感染の症状を示さない又は診断されていない対象の３、５、１０、２０、２５、５０又はそれ以上において検出される平均発現レベル、及び／又は、（ｉｉｉ）疾患又は感染に攻撃される前に、ここに記載した組成物を投与した患者において検出される発現レベル、である。

【0132】

他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、固形腫瘍癌の治療のために用いる。作用のいずれの機構にも結びつけることなく、アルファ及びベータディフェンシン（例えば、ベータ−ディフェンシン１）により誘引されるｓＮＡＧナノファイバの能力は、ｓＮＡＧナノファイバの抗がん活性に寄与することであってもよい。ヒトアルファ及びベータディフェンシン（例えば、ベータ−ディフェンシン１）は、抗がん活性を有することを示している。ここに記載した組成物により治療可能な固形腫瘍癌には、骨及び結合組織肉腫、脳腫瘍、乳癌、卵巣癌、腎臓癌、すい臓癌、食道癌、胃癌、卵巣癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、咽喉癌及び中皮腫）、肝臓癌、及び、前立腺癌が含まれるが、これに限定されない。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、ウイルス感染に起因する又は関連した癌の治療のために用いる。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、カポジ肉腫の治療のために用いる。ある実施形態において、ここに記載した組成物を投与することによる固形腫瘍を有する対象の治療は、以下の１つ以上の結果をもたらす：固形腫瘍サイズの縮小；固形腫瘍の転移抑制；固形腫瘍の再発防止；固形腫瘍に関連する１以上の症状の持続期間の短縮及び／又は重症度の軽減；固形腫瘍に関連する症状数の削減；固形腫瘍サイズ増大の抑制；固形腫瘍の癌細胞増殖の削減／抑制；固形腫瘍に関連する臓器不全の低減；対象の入院発生率の低下；対象の入院期間の短縮；対象の生存率の上昇；及び／又は対象における他の療法の予防又は治療効果の強調又は向上。

【0133】

他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を皮膚癌の治療に用いる。ここに記載した組成物により治療できる皮膚癌の例には、黒色腫、基底細胞癌及び扁平上皮細胞癌が含まれるが、これに限定されない。ある実施形態において、ここに記載した組成物を投与することによる皮膚癌を有する対象の治療は、以下の１つ以上の結果をもたらす：皮膚癌サイズの縮小；皮膚癌の転移抑制；皮膚癌の再発防止；皮膚癌に関連する１以上の症状の持続期間の短縮及び／又は重症度の軽減；皮膚癌に関連する症状数の削減；皮膚癌に関連する臓器不全の低減；対象の入院発生率の低下；対象の入院期間の短縮；対象の生存率の上昇；及び／又は対象における他の療法の予防又は治療効果の強調又は向上。

【0134】

他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療のために用いる。作用のいずれの機構にも結びつけることなく、アルファ及びベータディフェンシンにより誘引されるｓＮＡＧナノファイバの能力は、ｓＮＡＧナノファイバの抗ＩＢＤ活性に寄与し得る。アルファ及びベータディフェンシンは抗ＩＢＤ活性を有することが示されている。ＩＢＤには、クローン病及び潰瘍性大腸炎が含まれるが、これに限定されない。ある実施形態において、ここに記載した組成物を投与することによるＩＢＤを有する対象の治療は、以下の１つ以上の結果をもたらす：ＩＢＤの再発防止；ＩＢＤに関連する１以上の病状の持続期間の短縮及び／又は重症度の軽減；ＩＢＤに関連する症状数の削減；対象の入院発生率の低下；対象の入院期間の短縮；及び／又は対象における他の療法の予防又は治療効果の強調又は向上。ＩＢＤの行くつかの症状には、腹痛、嘔吐、下痢、直腸出血、骨盤領域における重篤な内部痙攣／筋肉痙攣、体重減少、並びに、関節炎、壊疽性膿皮症及び／又は原発性硬化性胆管炎のような種々の関連する不具合又は疾患が含まれる。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物は、上記列挙した症状若しくは当該分野で公知の他の症状の１つ以上の攻撃若しくは進行を防ぐ、又は、１以上のこれらの症状の持続期間を短縮及び／若しくは重症度を軽減する。一実施形態において、ここに記載した組成物を、潰瘍性大腸炎の治療のために用いる。潰瘍性大腸炎の症状には、上記列挙したＩＢＤの症状が含まれてもよく、また、頻繁な粘液様排便及び血便、しぶり、並びに／又は、発熱が含まれていてもよい。下記の実施例９は、ＩＢＤの動物モデルにおいて得たデータに基づいて、ｓＮＡＧナノファイバがＩＢＤの治療に効果的であることを示す。ＩＢＤ治療のために用いることが可能なｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、ここに記載したｓＮＡＧ組成物であってもよい。一実施形態において、ＩＢＤ治療のために用いることができるｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、実施例９に記載した組成物と同一又は同様である。

【0135】

特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、クローン病（例えば、回腸クローン病）の治療のために用いる。作用のいずれの機構にも結びつけることなく、アルファ及びベータディフェンシンにより誘引されるｓＮＡＧナノファイバの能力は、ｓＮＡＧナノファイバの抗クローン病活性に寄与し得る。アルファ及びベータディフェンシンは、抗クローン病活性を有することが示されている。ある実施形態において、ここに記載した組成物を投与することによるクローン病を有する対象の治療は、以下の１つ以上の結果をもたらす：クローン病の再発防止；クローン病に関連する１以上の症状の持続期間の短縮及び／又は重症度の軽減；クローン病に関連する症状数の削減；対象の入院発生率の低下；対象の入院期間の短縮；及び／又は対象における他の療法の予防又は治療効果の強調又は向上。クローン病のいくつかの症状には、腹痛、嘔吐、下痢、直腸出血、骨盤領域における重篤な内部痙攣／筋肉痙攣、体重減少、並びに、関節炎、壊疽性膿皮症及び原発性硬化症胆管炎のような種々の関連する不具合又は疾患が含まれる。クローン病の症状には、また、頻繁な粘液様排便及び時々の脂肪便、発熱、婁孔形成、膨満、鼓脹、かゆみ及び痛みのような肛門周囲の不快感、便失禁、口腔内アフター性潰瘍、並びに／又は、体重減少も含まれる。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物は、上記列挙した症状若しくは当該分野において公知の他の症状の１つ以上の攻撃若しくは侵攻を防ぐ、又は、１以上のこれらの症状の持続期間を短縮及び／若しくは重症度を軽減する。

【0136】

いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、粘膜炎の予防及び／又は治療のために用いる。粘膜炎は、消化管内面の粘膜における痛みを伴う炎症及び潰瘍形成である。粘膜炎は、例えば口腔内（例えば、口腔粘膜）のように、消化管に沿ったいずれにでも発生し得る。したがって、いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、粘膜炎を治療するために、患者（例えば、粘膜炎と診断された又は粘膜炎の症状を示した患者）に局所投与する（例えば、口腔内の炎症領域若しくは潰瘍領域への局所投与、又は、クリーム、座薬、懸濁液、液体溶液、ゲル若しくは軟膏を介する等による肛門若しくは直腸領域への局所投与）。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、（例えば、口腔内における）粘膜炎が原因の若しくは粘膜炎に関連した炎症若しくは潰瘍部位又はその近接部位に投与する。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、粘膜炎が小康状態になるまで（例えば、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、２週間、３週間、４週間、４週間以上）、毎日投与する（例えば、１日１回又は２回）ことができる。ある実施形態において、ここに記載した組成物を投与することによる粘膜炎を有する対象の治療は、以下の１つ以上の結果をもたらす：粘膜炎の頻繁な再発の防止又は抑制；粘膜炎に関連する１以上の症状（例えば、痛み、潰瘍形成）の持続期間の短縮及び／又は重症度の軽減；粘膜炎に関連する症状数の削減；対象の入院発生率の低下；対象の入院期間の短縮；及び／又は対象における他の療法の予防又は治療効果の強調又は向上。

【0137】

他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、ウイルス感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の予防及び／又は治療のために用いる。作用のいずれの機構にも結びつけることなく、アルファ及びベータディフェンシン（例えば、ベータ−ディフェンシン１）により誘引されるｓＮＡＧナノファイバの能力は、ｓＮＡＧナノファイバの抗ウイルス活性に寄与し得る。ベータディフェンシン（ベータ−ディフェンシン１）は、抗ウイルス活性を有することが示されている。ここに記載した組成物を用いて予防及び／又は治療される感染又は疾患の原因となり得るウイルスの例には、呼吸器合胞体ウイルス(RSV)、インフルエンザウイルス(インフルエンザAウイルス、インフルエンザBウイルス又はインフルエンザＣウイルス)、ヒトメタスーモウイルス(HMPV)、ライノウイルス、パラインフルエンザウイルス、ＳＡＲＳコロナウイルス、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)、肝炎ウイルス(A、B、C)、エボラウイルス、単純ヘルペスウイルス(例えば、HSV-1、HSV-2、HSV-6、HSV-7)、水痘ウイルス、水痘帯状ヘルペスウイルス、ヒトパピローマウイルス(HPV)、パラポックスウイルス、麻疹ウイルス、エコーウイルス、アデノウイルス、エプスタインバーウイルス、コクサッキーウイルス、エンテロウイルス、風疹ウイルス、大痘瘡ウイルス及び小痘瘡ウイルス、が含まれるが、これに限定されない。ある実施形態において、ここに記載した組成物を投与することによる、対象におけるウイルス感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の予防は、以下の１つ以上の結果をもたらす：ウイルス感染に起因する若しくは関連する疾患の進行若しくは攻撃の予防；及び／又は、ウイルス感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の、対象から他の対象又は対象群への拡大の予防。ある実施形態において、ここに記載した組成物を投与することによるウイルス感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患を有する対象の治療は、以下の１つ以上の結果をもたらす：ウイルス感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の再発防止；ウイルス感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の症状数の削減；ウイルス感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患に関連する臓器不全の低減：ウイルス感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の重症度の軽減及び／又は持続期間の短縮；ウイルス感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の１以上の症状の重症度の軽減及び／又は持続期間の短縮；ウイルス負荷又はウイルス数の削減（例えば、約０．２５ｌｏｇ、０．５ｌｏｇ、０．７５ｌｏｇ、１ｌｏｇ、１．５ｌｏｇ、２ｌｏｇｓ、２．５ｌｏｇｓ、３ｌｏｇｓ、４ｌｏｇｓ、５ｌｏｇｓ、６ｌｏｇｓ、７ｌｏｇｓ、８ｌｏｇｓ、９ｌｏｇｓ又は１０ｌｏｇｓ以上）；対象の入院発生率の低減；対象の入院期間の短縮；対象の生存率の上昇；対象における他の療法の予防又は治療効果の強調又は向上；対象の細胞、組織、臓器から、対象の他の細胞、組織、臓器へのウイルス拡散防止；ウイルス感染に起因する若しくは関連する疾患又はその１以上の症状の進行抑制又は攻撃抑制；及び／又は、対象から他の対象若しくは対象群への、ウイルス感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の拡散防止。

【0138】

特定の一実施形態において、ここに記載した組成物を、ＨＩＶ感染又はＨＩＶ感染に起因する若しくは関連する疾患の予防及び／又は治療のために使用しない。

【0139】

ウイルス感染の症状には、発熱、悪寒、頭痛、肩こり、神経過敏、腺肥大、下痢、吐き気、嘔吐、ウイルス感染に関連する皮膚若しくは粘膜異常（例えば、発疹、潰瘍形成、ヘルペス、病斑、腫物、赤み、かゆみ、丘疹、気胞、吹出物、水膨れ、痂皮）及び／若しくはこのような異常に関連する痛み、腹痛、ヘルペス、耳痛、咳、体重減少、倦怠感、全身痛、並びに／又は、他の風邪様症状が含まれるが、これに限定されない。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物は、上記列挙した症状又は当該分野において公知の他の症状の１つ以上の攻撃又は進行を抑制する、又は、１つ以上のこれらの症状の持続期間を短縮及び／又は重症度を軽減する。

【0140】

他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、創傷（例えば、切開、裂傷、侵入、擦り傷又は火傷のような開放創）のウイルス感染を予防及び／又は治療するために用いる。他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、創傷のウイルス感染を予防及び／又は治療するために使用しない。開放創及び閉塞創の２つのタイプの創傷が存在する。開放創は、創傷の原因となる目的物により分類される。例えば、切開又は切開創（手術創傷を含む）は、ナイフ、カミソリ又はガラスの破片のような清潔で先の鋭い目的物により生じる。裂傷は、硬い組織の上にある柔らかい組織に対する鈍い衝突により生じる変則的な創傷（例えば、頭蓋骨を被覆する皮膚の裂傷）、又は、出産により生じるような皮膚若しくは他の組織の裂けである。擦り傷又はかすり傷は、皮膚（表皮）の最表層が削り取れる表面的な創傷である。穿刺創傷は、爪又は針のような、皮膚に穴をあける目的物により生じる。侵入創傷は、体内に入ったナイフのような目的物によって生じる。銃創は、体内を通過する（例えば、射入口）及び／又は体を通過した銃弾（例えば、射出口）又は同様の発射体により生じる。医学に関する場合、全ての刺創及び銃創は開放創とみなす。開放創には、また、熱損傷、化学損傷又は電気損傷により誘引される火傷も含む。閉塞創には、挫傷（打撲としてより一般的に知られており、鈍い力で皮下の組織が損傷することにより生じる）、血塊（血腫とも呼ばれ、血管損傷に続いて皮下に血液が集まることにより生じる）及び圧縮傷（長期間加えられる非常に大きな力又は極度の力により生じる）を含む。

【0141】

ある実施形態において、ここに記載したｓＮＡＧ組成物を、患者（例えば、ウイルス感染と診断された患者又はウイルス感染の症状を示した患者）における局所ウイルス感染の予防及び／又は治療に用いる。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、皮膚、粘膜（例えば、目、耳、喉、膣、肛門）又は他の組織表面における、ウイルス感染又はウイルス感染の症状の予防及び／又は治療に用いる。ある実施形態において、ここに記載した組成物を、皮膚、粘膜（例えば、目、耳、喉、口腔、膣、肛門）又は他の組織の表面に直接投与する。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、ウイルス感染（例えば、単純ヘルペスウイルス感染又は帯状疱疹性感染）の（小胞、吹出物又は水疱のような）小胞段階、潰瘍段階又は痂皮段階の治療に用いる。他の実施形態において、ここに記載した組成物を、ウイルス感染（例えば、単純ヘルペスウイルス感染又は帯状疱疹性感染）の前兆段階、紅斑／斑段階又は丘疹／水腫段階の治療に用いる。ある実施形態において、ここに記載した組成物を、ウイルス感染部位若しくはその近傍、又は、ウイルス感染症状部位若しくはその近傍（例えば、ウイルス感染に関連するヘルペス、病斑、水疱、吹出物、潰瘍、発疹、腫物又は痂皮）に投与する。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を投与することによる、局所ウイルス感染を有する患者の治療は、以下の１つ以上の結果をもたらす：局所ウイルス感染の症状（例えば、痒み、病斑、潰瘍、水疱、丘疹、発疹、痂皮、又は、ここに記載した若しくは当業者に公知の局所ウイルス感染の他のいずれかの症状）の重症度の軽減及び／又は持続期間の短縮；局所ウイルス感染の症状に関連する痛みの軽減；局所ウイルス感染に関連する症状数の削減；局所ウイルス感染の症状の再発予防又は再発頻度の低減；対象から他の対象への局所ウイルス感染拡大予防；ここに記載した若しくは当業者に公知の局所ウイルス感染の１以上の症状の攻撃予防若しくは進行予防；及び／又は対象における他の療法（例えば、他の抗ウイルス療法）の予防効果若しくは治療効果の強調若しくは向上。特定の実施形態において、ここに記載したｓＮＡＧ組成物を、局所ウイルス感染の治療において使用するために、障壁のない形状に形成する。例えば、ここに記載した組成物を、局所ウイルス感染の治療に使用するために、液体溶液、懸濁液（例えば濃厚懸濁液）、クリーム又は軟膏の形状に形成する。一実施形態において、ここに記載したｓＮＡＧ組成物は、局所ウイルス感染の治療に使用するとき、固形ではない。さらに他の実施形態において、ここに記載したｓＮＡＧ組成物は、局所ウイルス感染の治療に使用するために、障壁形成形状及び／又は固形である。下記の実施例８は、ヒト患者から得られたデータに基づいて、ｓＮＡＧナノファイバが局所ウイルス感染の治療に効果的であることを示す。特に実施例８は、ヒト患者において、ＨＳＶ感染が原因となる又はＨＳＶ感染に関連するヘルペスのようなＨＳＶ感染の治療に、ｓＮＡＧナノファイバが、効果的であることを示す。局所ウイルス感染の治療に用いることができるｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、ここに記載したｓＮＡＧ組成物のいずれかであり得る。一実施形態において、局所ウイルス感染（例えばＨＳＶ）の治療に用いることができるｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、実施例８に記載した組成物と同一又は同様であり得る。

【0142】

ここに記載した組成物を用いて局所治療可能なウイルス感染に関連する皮膚のウイルス感染及び疾患／状態は、麻疹（はしか）、風疹（三日ばしか）、水疱瘡（水痘）、第５病（パルボウイルスによる伝染性紅斑）、バラ疹、感染性単核球症若しくは腺熱（ＥＢウイルス（エプスタイン−バーウイルス））、エンテロウイルス感染、バラ色粃糠疹（ヘルペス６又は７が原因である可能性）、手足口病（コクサッキー感染による）、ギアノット−クロスティ症候群（小児に生じる一般的な肢端長大症；ＥＢウイルス若しくはＢ型肝炎による感染性単球増加が最も多い原因である）、ラテロトラシック発疹（幼児期又はＡＰＥＣの非対称屈曲周囲発疹）、疱瘡、牛痘、疣贅状表皮発育異常症、ＨＩＶ感染及び／若しくはカポジ肉腫に起因する又は関連する皮膚症状、リケッチア症、黄熱病（フラビウイルス感染による）、単純ヘルペス（ヘルペス及び陰部ヘルペス）、疱疹湿疹、帯状ヘルペス（帯状疱疹）、ヘルパンギーナ/水疱性口内炎（口腔内潰瘍）、伝染性軟属腫、ウイルス性疣贅（例えば、いぼ、陰部疣贅若しくはコンジローム、扁平細胞乳頭腫）、疱疹性ひょう疽、剣状ヘルペス、羊痘、並びに、ミルカー小瘤含むが、これに限定されない。

【0143】

特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、単純ヘルペスウイルス（例えばＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２）の感染、又は、単純ヘルペス（例えばＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２）が原因となる病状若しくは状態の、予防及び／又は治療に用いる。単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ−１）の症状には、口、喉、唇（例えば、口腔周囲ヘルペス）における水疱若しくは病斑が含まれてもよく、また、単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ−２）の症状には、生殖器外部表面における水疱若しくは病斑が含まれてもよい。ＨＳＶの両方の型は、皮膚の感覚神経に潜在状態で存在する。このウイルスは、攻撃中に神経を下降して拡散し、増殖して皮膚又は粘膜に表れ、臨床病斑の原因となる。それぞれの攻撃後、ウイルスは神経線維に引っ込み、再び休止状態となる。活性段階中は、ウイルスの放出が顕著であり、病斑はより伝染性が強い。１型の一次感染は、主に、乳児及び早期小児において起こり、たいてい穏やか又は無症状である。大勢の子供、すなわち、世界の後進領域の１００％に至る子供が、５歳までに感染する。２型は、通常、思春期後の性的後天性であり、無症候性であることは稀である。ウイルスは、臨床攻撃中及びその後数日若しくは数週間中に、唾液及び生殖器分泌物中で減少する。活性病斑からの減少量は、不活性状態よりも１００〜１，０００倍多い。ＨＳＶの拡散は、通常、感染分泌物への直接接触である。免疫が不完全なところは、感染がより頻繁に生じ、さらに、より明白でかつ持続性がある。再発は、軽度の外傷；鼻かぜを含む他の感染症、紫外線（太陽光露光）；ホルモン因子（月経前のほてりの発生）；感情的ストレス；顔面に行う手術若しくは処置（歯科医術を含む）により誘引され得る。したがって、いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、ＨＳＶ−１感染、又は、ＨＳＶ−１感染に関連した病斑若しくはヘルペスの治療のために、局所投与する（例えば、口腔投与又は口腔周囲投与）。他の実施形態において、ここに記載した組成物を、ＨＳＶ−２感染、又は、ＨＳＶ−２感染に関連した生殖器病斑の治療のために局所投与する（例えば、膣のような生殖器領域への局所投与）。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物の投与による、ＨＳＶ感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患を有する患者の治療は、以下の１つ以上の結果をもたらす：ＨＳＶ感染（例えば、ヘルペス、病斑又はここに記載した若しくは当業者に公知のＨＳＶ感染の他の症状）の重症度の軽減及び／又は持続期間の短縮；ＨＳＶ感染に関連する症状数の削減、ＨＳＶ感染の症状（例えば、ヘルペス若しくは病斑）に関連する痛みの軽減；ＨＳＶ感染の症状の再発予防若しくは再発頻度の低減；対象から他の対象へのＨＳＶ感染の拡散予防；ＨＳＶ感染の１以上の症状進行の攻撃予防；及び／又は対象における他の療法の予防若しくは治療効果の強調若しくは向上。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、ＨＳＶ感染又はＨＳＶ感染の症状を有する、ヒト乳児、ヒト幼児、ヒト小児、ヒト成人及び／又はヒト老人に投与する。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、表面領域（例えば、皮膚若しくは粘膜における口腔周囲、口腔若しくは生殖器領域）がうずき、痒み又は腫れ始めたときに、当該表面領域に局所投与する（表面領域におけるうずき、痒み又は腫れが、ＨＳＶ感染（例えばＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２）に関連する場合）。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、ヘルペス又は病斑領域又はその周囲領域（皮膚又は粘膜における口腔周囲、口腔又は生殖器）に局所投与する（ヘルペス又は病斑がＨＳＶ感染（例えばＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２）に関連する場合）。実施例８は、ｓＮＡＧナノファイバ組成物を患者のヘルペス部位に局所適用したときに、ヒト患者におけるＨＳＶ感染に関連するヘルペスの治療に効果的であることを示し、また、ｓＮＡＧナノファイバ組成物によるＨＳＶ関連ヘルペスの治療が、ヘルペスの重症度の軽減若しくは持続期間の短縮、及び、ヘルペスに関連する痛みの軽減をもたらすことも示す。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、ＨＳＶ（例えば、ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２）感染の小胞（気胞、吹出物若しくは水疱のような）段階、潰瘍段階又は痂皮段階を治療するために用いる。他の実施形態において、ここに記載した組成物を、感染におけるＨＳＶ（例えば、ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２）の前兆段階、紅斑／斑段階、又は、丘疹／水腫段落を治療するために用いる。ある実施形態において、ここに記載した組成物を、ＨＳＶ感染の治療において、抗ウイルス薬（例えば、アシクロビル又はここに記載した若しくは当業者に公知の他のいずれかの抗ウイルス薬）と組み合わせて投与する。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、ＨＳＶ感染の症状が小康状態になるまで、毎日（例えば１日１回又は２回）投与することができる（例えば、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、２週間、３週間、４週間又は４週間以上）。

【0144】

特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、水痘ウイルス感染、又は、水痘ウイルスに起因する病状若しくは状態（帯状ヘルペス、帯状疱疹又は水疱瘡）を、予防及び／又は治療するために用いる。水痘感染は通常幼児期に生じ、神経細胞、通常、感覚細胞にウイルスがまかれる（Ｓｈｉｎｇｌｅｓ、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ Ｓｕｍｍａｒｉｅｓ（２００８）参照）。帯状ヘルペス又は帯状疱疹は、単一の皮膚分節分布により特徴づけられる。これらは、通常１つの皮膚分節に制限され、そのため中線を超えず、皮膚分節の全てに影響しない場合もある。帯状ヘルペスの症状は、斑及び丘疹からなり、かつ、皮膚分節分布内（もっとも一般的には胸）の小胞病斑及び痛みに発展する発疹を含むが、これに限定されない。発疹は７〜１０日間続く場合が多く、２〜４週間で完治し得る。より広範な疾患が免疫不全患者（例えば、リンパ腫及びＨＩＶ）に起こり得る。帯状ヘルペスはいずれの年代にも起こり得るが、老人がより一般的であり、かつ、（水痘の影響は両方の性別で平等であるが）わずかに女性がより一般的である。皮膚合併症には、二次感染、傷痕化及び色素新着変化が含まれ得る。老人は、帯状ヘルペスの合併症（特にヘルペス後神経痛）がより起こり易い。したがって、いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、帯状ヘルペス又は水痘の治療のために局所投与する（例えば、皮膚に投与する）。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、発疹部位又は発疹近傍部位（例えば、皮膚の斑又は丘疹）に投与する（発疹が帯状ヘルペス感染に関連する場合）。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物の投与による、帯状ヘルペス感染又はこれに起因する疾患を有する対象の治療は、以下の１つ以上の結果をもたらす：帯状ヘルペス感染の症状（例えば、発疹又はここに記載した若しくは当業者に公知の帯状ヘルペス感染の他のいずれかの症状）の重症度の軽減及び／又は持続期間の短縮；帯状ヘルペス感染に関連する症状数の削減；帯状ヘルペス感染の症状に関連する痛みの低減；帯状ヘルペス感染症状の再発予防又は再発頻度の低減；対象から他の対象への帯状ヘルペス感染の拡散予防；帯状ヘルペス感染症状の攻撃予防若しくは進行予防；及び／又は対象における他の療法（例えば、他の抗ウイルス療法）の予防効果若しくは治療効果の強調若しくは向上。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、帯状ヘルペス感染又は帯状ヘルペス感染の症状を有する、ヒト乳児、ヒト幼児、ヒト小児、ヒト成人及び／又はヒト老人に投与する。ある実施形態において、ここに記載した組成物を、帯状ヘルペス感染の治療において、抗ウイルス薬（例えば、アシクロビル又はここに記載した若しくは当業者に公知の他のいずれかの抗ウイルス薬）と組み合わせて投与する。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、帯状ヘルペス感染の症状が小康状態になるまで、毎日（例えば、１日１回又は２回）投与することができる（例えば、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、２週間、３週間、４週間又は４週間以上）。

【0145】

他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、伝染性軟属腫の予防及び／又は治療に用いる。伝染性軟属腫は、一般に及びたいてい乳児及び早期小児に影響し、成人には稀にしか影響しない（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ Ｓｕｍｍａｒｉｅｓ（２００８）の伝染性軟属腫を参照）。伝染性軟属腫の症状には、特に、腋窩、鼠径又は膝裏のような温暖湿潤部の小さい丘疹群を含むが、これに限定されない。丘疹領域の大きさは１〜６ｍｍであり、白、ピンク又は茶色であってもよい。これらは、蝋状でピンクがかった外見であり、かつ、窪んでいる場合が多い（表面の中央のくぼみ）。これらが消滅すると、炎症、痂皮又はかさぶたになる。これらは、いずれの固体においても、２、３百個又は数百個になる。この疾患は数ヶ月持続し、２、３年間持続する場合もある。まれに、非常に小さいくぼみのような傷跡（硬化）を残すことがある。伝染性軟属腫は、直接的な皮膚接触により、ヒトからヒト、通常小児間で拡散され得、及び、成人における性接触によっても感染伝染し得る。病斑は、アトピー性湿疹の小児及びＨＩＶ感染患者において、より多くなる及びより持続する傾向である。小児において、顔及び胴体に病斑が表れやすい。したがって、いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、伝染性軟属腫感染を治療するために局所投与する（例えば、皮膚に投与）。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、発疹（例えば、皮膚の斑又は丘疹）部位又は発疹近傍部位に投与する（発疹が伝染性軟属腫感染に関連する場合）。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物の投与による、伝染性軟属腫又はこれに起因する若しくは関連する疾患を有する対象の治療は、以下の１つ以上の結果をもたらす：伝染性軟属腫の症状（例えば、発疹又はここに記載した若しくは公知の伝染性軟属腫の他のいずれかの症状）の重症度の軽減及び／又は持続期間の短縮；伝染性軟属腫の症状数の削減；伝染性軟属腫の症状に関連する痛みの低減；伝染性軟属腫の症状の再発予防又は再発頻度の低減；対象から他の対象への伝染性軟属腫拡散の予防；伝染性軟属腫の症状の攻撃予防若しくは進行の予防；及び／又は対象における他の療法の予防若しくは治療効果の強調若しくは向上。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、伝染性軟属腫又は伝染性軟属腫の症状を有する、ヒト乳児、ヒト幼児、ヒト小児、ヒト成人及び／又はヒト老人に投与する。ある実施形態において、ここに記載した組成物を、伝染性軟属腫感染の治療において、公知の療法（例えば、圧迫、穿孔、掻爬、凍結療法、サリチル酸及びポドフィリンのような瘤塗装；イミキモドクリームのような免疫調節剤、１％ヒドロコルチゾンクリーム；又はフシジン酸クリーム２％）と組み合わせて投与する。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、伝染性軟属腫感染の症状が小康状態になるまで、毎日（例えば、１日１回又は２回）投与することができる（例えば、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、２週間、３週間、４週間又は４週間以上）。

【0146】

他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、ヒトパピローマウイルス又はヒトパピローマウイルスに関連する疣若しくは瘤の予防及び／又は治療に用いる。８０以上のＨＰＶサブタイプが知られており（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ Ｓｕｍｍａｒｉｅｓ （Ｊｕｎｅ ２００９）の疣及び瘤を参照）、そのうちの２０は生殖管に影響し得る。ＨＰＶ感染の存在及び様子は、感染部位により異なる。例えば、足底の疣は、圧迫点領域に生じ、また、持ち上がるよりもむしろ平たくなる。疣は、幼児期に生じることが最も一般的であり、直接接触又は自動予防接種により拡散する；疣が現れるまで１２か月かかることもある。ＨＰＶ疣は、免疫抑制に関連して最も頻度が高く、最も厄介であり、疣が濡れているとき又は疣の傷（例えばひっかき傷）から出血しているときに、より感染しやすい。ＨＰＶ感染は、小児よりも成人においてより持続する。したがって、いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、ＨＰＶ感染又はＨＰＶ感染に関連する疣若しくは瘤を治療するために、局所投与する。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、疣若しくは瘤の領域又はその近傍領域に投与する（疣又は瘤がＨＰＶに起因する又は関連する場合）。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物の投与による、ＨＰＶ感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患を有する患者の治療は、以下の１以上の結果をもたらす：ＨＰＶ感染の症状（例えば、疣、瘤、又は、ここに記載した若しくは当業者に公知の他のいずれかのＨＰＶ感染の症状）の重症度の軽減及び／又は持続期間の短縮ＨＰＶ感染に関連する症状数の削減；ＨＰＶ感染症状に関連する痛みの低減；ＨＰＶ感染の症状の再発予防又は再発頻度の低減；対象から他の対象へのＨＰＶ感染の拡散予防；ＨＰＶ感染症状の攻撃予防若しくは進行予防；及び／又は対象における他の療法の予防若しくは治療効果の強調若しくは向上。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、ＨＰＶ感染又はＨＰＶ感染の症状を有する、ヒト乳児、ヒト幼児、ヒト小児、ヒト成人及び／又はヒト老人に投与する。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、ＨＰＶ感染の症状が小康状態になるまで、毎日（例えば、１日１回又は２回）投与することができる（例えば、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、２週間、３週間、４週間又は４週間以上）。

【0147】

他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、羊痘の予防及び／又は治療に用いる。羊痘は、ヒツジ及びヤギから感染する（Ｈｅａｌｔｈ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ Ａｇｅｎｃｙ（２０１０）の羊痘を参照）羊痘は、感染に接触した主に若い子羊及びヤギが互いに感染するパラポックスウイルスが原因である。（又は牧草において残留するウイルスから感染する可能性もある）。ヒト病斑は、感染物質の直接接種が原因である。これは、農業従事者、屠殺者、獣医、子羊からの人工栄養により育てられた子供、及び、もしかするとヒツジを放牧する牧草で遊ぶ子供にさえ、生じ得る。パラポックスウイルスの潜伏期間は５日又は６日である。羊痘病斑はたいてい独立しているが、複数の病斑が生じることもある。羊痘病斑はたいてい小さく、硬く、赤色又は赤みがかった青色であり、上部が平らで薄く血の色がついた吹出物又は水疱を形成するために広がったしこりを形成する。完全に進行した病斑は、たいてい直径２又は３ｃｍであるが、５ｃｍになることもあり、白い皮膚の下で膿になるが、これを切開すると、その下の硬い赤い組織が現れる。病斑は、初期段階の間は炎症性の場合があり、たいてい敏感である。これは、たいてい、指、手又は前腕に生じるが、顔に生じることもある。赤いリンパ線が肘から腋までの内側に生じることもある。羊痘に関連する軽い発熱が生じることもある。したがって、いくつかの実施形態においては、ここに記載した組成物を、羊痘を治療するために局所投与する（例えば、皮膚に投与する）。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、病斑、吹出物又は水疱の部位又はその周辺部位に投与する（病斑、吹出物又は水疱は羊痘に起因する又は関連する）。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物の投与による羊痘を有する対象の治療は、以下の１以上の結果をもたらす：羊痘（例えば、病斑、吹出物、水疱、又は、ここに記載した若しくは当業者に公知の羊痘の他のいずれかの症状）の重症度の軽減及び／又は持続期間の短縮；羊痘に関連する症状数の削減；羊痘の症状に関連する痛みの軽減；羊痘の症状の再発予防又は再発頻度の低減；対象から他の対象への羊痘の拡散予防；羊痘の症状の攻撃又は進行予防；及び／又は対象における他の療法の予防若しくは治療効果の強調若しくは向上。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、羊痘又は羊痘の症状を有するヒト乳児、ヒト幼児、ヒト小児、ヒト成人及び／又はヒト老人に投与する。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、羊痘の症状が小康状態になるまで、毎日（例えば、１日１回又は２回）投与することができる（例えば、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、２週間、３週間、４週間又は４週間以上）。

【0148】

ある実施形態において、ここに記載した組成物を、発疹が生じるウイルス感染の治療に用いる。発疹が生じるウイルス感染の例には、麻疹（はしか）、風疹（三日はしか）、水疱瘡（水痘ウイルス）、第５病（パルボウイルスによる伝染性紅斑）、バラ疹（ヘルペスウイルス６による突発性紅斑）、バラ色粃糠疹（ヘルペスウイルス６及び７が原因である可能性もあるが、原因不明）、エコーウイルス及びアデノウイルス感染、感染性単球増加若しくは腺熱のＥＢウイルス、並びに、初期ＨＩＶ感染が含まれるが、これに限定されない。ある実施形態において、ここに記載した組成物を、ウイルス感染に関連する非特異的発疹（例えば、紅斑染み皮疹のような紅斑発疹）の治療に用いる。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、ウイルス感染に起因する若しくは関連する発疹部位、又は、ウイルス感染に起因する若しくは関連する発疹部位近傍に、投与する。ある実施形態において、ここに記載した組成物は、発疹の重症度を軽減する、発疹の持続期間を短縮する、及び／又は、ウイルス感染に起因する発疹に関連する痛みを軽減する。

【0149】

他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、手足口病又はコクサッキーウイルス若しくはエンテロウイルスに起因する感染の予防及び／又は治療に用いる。手足口病は、発症率が高く、症状が穏やかで短期間であり、夏の期間に幼い小児が最も頻繁に罹患する（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ Ｓｕｍｍａｒｉｅｓ（Ｍａｒｃｈ ２０１０）の手足口病を参照）。手足口病は、コクサッキーウイルスＡ１６が原因であるが、エンテロウイルス７１も原因となり得る。このようなウイルスの潜伏期間は３〜５日である。手足口病の症状には、痛みを伴うこともある、手及び足における小さく平坦な水疱並びに口の潰瘍が含まれ、この病気は、軽い発熱又は臀部の発疹（幼い幼児において）を伴うこともある。したがって、いくつかの実施形態においては、ここに記載した組成物を、手足口病、又は、コクサッキーウイルス感染若しくはエンテロウイルス感染に起因する若しくは関連する症状の治療のために、局所投与する（例えば、皮膚に投与）。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、水疱、潰瘍又は発疹の部位又はその近傍部位に投与する（この水疱、潰瘍又は発疹は、手足口病、又は、コクサッキーウイルス感染若しくはエンテロウイルス感染に起因する若しくは関連する症状に関連する）。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物の投与による手足口病を有する対象の治療は、以下の１以上の結果をもたらす：手足口病の症状（例えば、発疹、水疱、潰瘍、又は、ここに記載した若しくは当業者に公知の手足口病の他の症状）の重症度の軽減及び／又は持続期間の短縮；手足口病の症状数の削減；手足口病の症状に関連する痛みの軽減；手足口病の症状の再発予防又は再発頻度の低減；対象から他の対象への手足口病の拡散予防
；手足口病の症状の攻撃若しくは進行予防；及び／又は対象における他の療法の予防若しくは治療効果の強調若しくは向上。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、手足口病又は手足口病の症状を有するヒト乳児、ヒト幼児、ヒト小児、ヒト成人、及び／又は、ヒト老人に投与する。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、手足口病の症状が小康状態になるまで、毎日（例えば、１日１回又は２回）投与することができる（例えば、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、２週間、３週間、４週間又は４週間以上）。

【0150】

他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、ジアノッティ（Crosti-Gianotti）症候群の予防及び／又は治療に用いる。ジアノッティ症候群は、数週間継続する丘疹性発疹を伴う、ウイルス感染に対する皮膚反応である。この症状は、小児の小水疱性丘疹性肢端皮膚病、小児の丘疹性肢端皮膚病、及び、小児の丘疹性皮膚炎としても知られている。ジアノッティ症候群は、Ｂ型肝炎ウイルス、ＥＢウイルス、コクサッキーウイルス、エコーウイルス又は呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳウイルス）により引き起こされ得る。
ジアノッティ症候群は、子供に６か月から１２か月影響する。この症状において、くすんだ赤い斑点の過度な発疹が、３日又は４日以上進行し得る。これらは、たいてい、最初に大腿部及び臀部に現れ、その後腕の外側に表れて、最終的には顔に現れ、非対称なパターンであることが多い（Ｃｈｕｈ， Ｃｕｔｉｓ ６８（３）：２０７−１３（２００１）参照）。斑点は直径５〜１０ｍｍであり得、深紅色又は紫色（毛細血管からの血液の漏れのため、特に足において）であり得、さらに、流体で充たされた水疱に発展し得る。したがって、いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、ジアノッティ症候群の治療のために局所投与する（例えば、皮膚に投与）。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、赤い斑点、皮疹若しくは発疹部位又はその近傍部位に投与する（この赤い斑点、皮疹及び発疹は、ジアノッティ症候群、又は、Ｂ型肝炎ウイルス、ＥＢウイルス、コクサッキーウイルス、エコーウイルス若しくは呼吸器合胞体ウイルスに金する感染に関連する）。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物の投与による、ジアノッティ症候群を有する対象の治療は、以下の１以上の結果をもたらす：ジアノッティ症候群の症状（例えば、赤い斑点、皮疹、発疹、又は、ここに記載した若しくは当業者に公知のジアノッティ症候群の他のいずれかの症状）の重症度の軽減及び／又は持続期間の短縮；ジアノッティ症候群に関連する症状数の削減；ジアノッティ症候群の症状に関連する痛みの低減；ジアノッティ症候群の症状の再発予防又は再発頻度の軽減；対象から他の対象へのジアノッティ症候群の拡散予防；ジアノッティ症候群の症状の攻撃若しくは進行予防；及び／又は対象における他の療法の予防若しくは治療効果の強調若しくは向上。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、ジアノッティ症候群又はその症状を有する、ヒト乳児（特に６から１２月齢の乳児）、ヒト幼児、ヒト小児、ヒト成人及び／又はヒト老人に投与する。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、ジアノッティ症候群の症状が小康状態になるまで、毎日（例えば、１日１回又は２回）投与することができる（例えば、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、２週間、３週間、４週間又は４週間以上）。

【0151】

他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、剣状ヘルペス又は「スクラム疹」の予防及び／又は治療のために用いる。剣状ヘルペスは、まず、直接的な皮膚間接触により伝染し、擦り傷が入口の侵入を容易にし得る（Becker et al., Am J Sports Med. 16(6):665-9 (1988)参照）。剣状ヘルペスの大半の病斑は、頭又は顔に生じ、その後、胴体及び四肢に生じる。剣状ヘルペスの症状には、前駆的な痒み又は灼熱感に続く、約１〜２週間以上経過後に痂皮を伴って治癒する紅斑性の基部上の小胞群が含まれるが、これに限定されない。他のもっと稀な剣状ヘルペスの症状には、頭痛、倦怠感、咽頭痛及び熱が含まれるが、これに限定されない。再発症状の発見が初期感染に続いくこともある。ウイルス免疫蛍光検査により、正確な診断を行うことができ、培養物は、完全な小胞をそっと破り、紅斑性の基部を横切って先端を拭きとるように、しっかりと擦ることにより得ることができる。したがって、いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、剣状ヘルペス感染に局所投与する（例えば、皮膚に投与）。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、痒み、病斑、小胞又は痂皮の部位又はその近傍部位に投与する（痒み、病斑、小胞又は痂皮の部位は、剣状ヘルペス感染に起因する又は関連する）。ある実施形態において、ここに記載した組成物を、剣状ヘルペス感染の治療において、抗ウイルス薬（例えば、アシクロビル又はここに記載した若しくは当業者に公知の他のいずれかの抗ウイルス薬）と組み合わせて投与する。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物の投与による、剣状ヘルペスを有する患者の治療は、以下の１以上の結果をもたらす：剣状ヘルペスの症状（例えば、痒み、病斑、小胞、痂皮又はここに記載した若しくは当業者に公知のＨＰＶ感染の他のいずれかの症状）の重症度の軽減及び／又は持続期間の短縮；剣状ヘルペスに関連する症状数の削減；剣状ヘルペスの症状に関連する痛みの軽減；剣状ヘルペスの症状の再発予防；対象から他の対象への剣状ヘルペスの拡散予防；剣状ヘルペスの症状の攻撃若しくは進行の予防；及び／又は対象における他の療法の予防若しくは治療効果の強調若しくは向上。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、剣状ヘルペス又は剣状ヘルペスの症状を有するヒト乳児、ヒト幼児、ヒト小児、ヒト成人及び／又はヒト老人に投与する。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、予防及び／又は治療を目的として、アスリート（例えばプロアスリート）に投与する。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、剣状ヘルペスの症状が小康状態になるまで、毎日（例えば、１日１回又は２回）投与することができる（例えば、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、２週間、３週間、４週間又は４週間以上）。

【0152】

他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、ウイルス感染に関連する一般的な疣（例えば、足底疣贅、カルスにおける疣）の予防及び／又は治療に用いる。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、ウイルス感染に起因する若しくは関連する疣の部位、又は、ウイルス感染に起因する若しくは関連する疣の近傍部位に投与する。ある実施形態において、ここに記載した組成物は、疣の数を削減する、疣の重症度を軽減する、疣の持続期間を短縮する、及び／又は、ウイルス感染に起因する疣に関連する痛みを軽減する。

【0153】

ある実施形態において、ここに記載した組成物を、免疫不全患者（例えば、ＨＩＶ感染患者）におけるウイルス感染の予防及び／又は治療に用いる。

【0154】

いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、胃腸炎（例えば、ウイルス感染に起因する若しくは関連する胃腸炎、又は、原虫感染に起因する若しくは関連する胃腸炎）の治療に用いる。胃腸炎の原因になり得るウイルスの例には、ロタウイルス、ノロウイルス、アデノウイルス及びアストロウイルスが含まれるが、これに限定されない。胃腸炎の原因になり得る原虫の例には、ランブル鞭毛虫、クリプトスポリジウム及び赤痢アメーバが含まれるが、これに限定されない。一実施形態において、ここに記載された組成物を、（例えば、クリーム又は座薬として）胃腸炎の治療のために直腸に投与する。ここに記載した組成物の投与による、胃腸炎を有する対象の治療は、以下の１以上の結果をもたらす：胃腸炎の再発予防；胃腸炎に関連する１以上の症状の持続期間の短縮及び／又は重症度の軽減；胃腸炎に関連する症状数の削減；対象の入院発生率の低下；対象の入院期間の短縮；及び／又は対象における他の療法の予防若しくは治療効果の強調若しくは向上。

【0155】

他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、真菌感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の予防及び／又は治療に用いる。作用のいずれのメカニズムにも縛られることなく、ベータディフェンシン（例えば、ベータ−ディフェンシン）を誘引するｓＮＡＧナノファイバの能力は、ｓＮＡＧナノファイバの抗真菌活性に寄与し得る。ベータディフェンシン（例えば、ベータ−ディフェンシン１）は、抗真菌活性を有することが示されている。ここに記載された組成物を用いて予防及び／又は治療される感染又は疾患の原因となる真菌の例には、ブラストミセス属、パラコクシジオイデス、スポロトリクス属、クリプトコッカス属、カンジダ属、アスペルギルス属、ヒストプラズマ属、クリプトコッカス属、ビボラリス属（Bipolaris）、クラドフィアロフォラ属（Cladophialophora）、クラドスポリウム属、ドレヒスレラ属（Drechslera）、エクソフィアラ属、フォンセセア属、フィアロフォラ属（Phialophora）、キシロヒファ属（Xylohypha）、オクロコニス属（Ochroconis）、リノクラディエラ属（Rhinocladiella）、スコレコベシディウム属（Scolecobasidium）、及び、ワンジエラ属（Wangiella）が含まれるが、これに限定されない。ある実施形態において、ここに記載した組成物の投与による、対象における真菌感染、又は、真菌感染に起因する若しくは関連する疾患の予防は、以下の１以上の結果をもたらす：真菌感染に起因する又は関連する疾患の進行又は攻撃の予防；及び／又は対象から他の対象若しくは対象群への、真菌感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の拡散予防。ある実施形態において、ここに記載した組成物の投与による、真菌感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の治療は、以下の１以上の結果をもたらす：真菌感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の再発予防；真菌感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患に関連する症状数の削減；真菌感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患に関連する臓器不全の削減；真菌感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の持続期間の短縮及び／又は重症度の軽減；真菌感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の１以上の症状の持続期間の短縮及び／又は重症度の軽減；真菌細胞数の削減；対象の入院発生率の低減；対象の入院期間の短縮；対象の生存率の向上；対象における他の療法の予防又は治療効果の強調又は向上；対象の細胞、組織、器官から、対象の他の細胞、組織、器官への真菌の拡散予防；真菌感染に起因する若しくは関連する疾患又は真菌感染の１以上の症状の進行又は攻撃の予防；及び／又は、真菌感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の、対象から他の対象若しくは対象群への拡散予防。

【0156】

いんきんを伴う真菌感染の症状には、鼠蹊部の痒み及び／又は赤い鱗状の発疹が含まれ得る。水虫の症状には、鱗屑付着、皮膚剥離、足の痒み及び／又は黄色がかった足指の爪が含まれ得る。膣感染症の症状には、痒み及び炎症、排尿時のヒリヒリ感、並びに／又は、濃いおりものが含まれ得る。真菌性胃腸炎の症状には、嘔吐及び／又は下痢が含まれ得る。肺の真菌感染の症状には、熱、咳及び／又は肺炎の症状が含まれ得る。口腔内酵母感染（鶇鵝口瘡、カンジダ症）の症状には、口腔内又は舌における黄白色の病斑群／腫物群が含まれ得る。生殖器（膣、外陰部、ペニス等）のカンジダ症の症状には、痒み、ヒリヒリ感、痛み、炎症及び／又は分泌物が含まれる。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物は、上記列挙した症状又は当業者に公知の症状の１以上の攻撃若しくは進行を予防する、又は、これらの１以上の症状の持続期間を短縮する及び／又は重症度を軽減する。

【0157】

いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、水虫、いんきん、たむし又は爪、頭皮若しくは髪の真菌感染の、予防及び／又は治療に用いる。これらの真菌感染は、皮膚の発赤、剥皮、水疱及び鱗屑付着、痒み、感染した爪の変形及び脆性、並びに／又は、痛みやすい髪の原因になり得る。これらは、白癬菌属、小胞子菌属及び表皮菌属を含む真菌属である皮膚糸状菌に起因する。皮膚糸状菌は、ケラチンを栄養源とし、ほとんど皮膚下には侵入しない。水虫（足白癬）は足指間に見られ、足裏まで達する場合もある。いんきん（股部白癬）は、鼠蹊部から大腿部内側まで広がることもある。頭皮及び髪感染（頭部白癬）は、毛幹が影響を受け、子供を中心に影響する。指又は足指感染（爪白癬）は、典型的には足指の爪が影響を受けるが、指の爪もまた影響を受ける。体部のたむし（体部白癬）は体のいたるところに見られる。毛瘡（須毛白癬）は顔のひげ部分が影響を受ける。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、上記列挙した真菌感染症（水虫、足、いんきん、爪、頭皮及び髪感染症のような）のいずれかの治療のために、局所投与する。一実施形態において、ここに記載した組成物を、皮膚の発赤、剥皮、水疱若しくは鱗屑付着部、痒み部、又は、爪の変形若しくは脆性部、又はその近傍部位に投与する（このような症状が真菌感染に関連する）。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物による、上記列挙した真菌感染の１つを有する患者の治療は、以下の１以上の結果をもたらす：真菌感染の症状（痒み、発赤、剥皮、水疱又はここに記載した若しくは当業者に公知の他のいずれかの真菌感染の症状）の重症度の軽減及び／又は持続期間の短縮；真菌感染の症状数の削減；真菌感染の症状に関連する痛みの軽減；真菌感染の症状の再発予防；対象から他の対象への真菌感染の拡散予防；真菌感染の症状の攻撃又は進行予防；及び／又は、対象における他の療法（例えば抗真菌療法）の予防及び／又は治療効果の強調又は向上。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、上記列挙した真菌感染又はその症状の１つを有する、ヒト乳児、ヒト幼児、ヒト小児、ヒト成人及び／又はヒト老人に投与する。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、真菌感染の症状が小康状態になるまで、毎日（例えば、１日１回又は２回）投与することができる（例えば、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、２週間、３週間、４週間又は４週間以上）。

【0158】

いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、スポロトリクム症の予防及び／又は治療に用いる。スポロトリクム症は、皮膚糸状菌ではない、真菌スポロトリックスシェンキイに起因する状態である。これは、この真菌が通常存在する、とげのある植物、松葉及びミズゴケにより擦傷した皮膚及び皮下組織の感染である。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、アポロトリコシス（Aporotrichosis）の治療のために局所投与する。一実施形態において、ここに記載した組成物を、スポロトリクム症感染部位又はその近傍部位に投与する。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物の投与による、スポロトリクム症を有する対象の治療は、以下の１以上の結果をもたらす：スポロトリクム症の症状の重症度の軽減及び／又は持続期間の短縮；スポロトリクム症の症状数の削減；スポロトリクム症の症状に関連する痛みの軽減；スポロトリクム症の症状の再発頻度の低減；対象から他の対象へのスポロトリクム症の拡散予防；スポロトリクム症の症状の攻撃又は進行予防；及び／又は、対象における他の療法（例えば、抗真菌療法）の予防及び／又は治療効果の強調又は向上。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、スポロトリクム症の症状が小康状態になるまで、毎日（例えば、１日１回又は２回）投与することができる（例えば、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、２週間、３週間、４週間又は４週間以上）。

【0159】

他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、創傷（例えば、切傷、裂傷、貫通、擦り傷又は熱傷のような、開放創）の真菌感染の予防及び／又は治療に用いる。他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、創傷の真菌感染の予防及び／又は治療に用いない。

【0160】

他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、酵母感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の予防及び／又は治療に用いる。作用のいずれのメカニズムに縛られることなく、ｓＮＡＧナノファイバのベータディフェンシンを誘導する能力は、ｓＮＡＧナノファイバの抗酵母活性に寄与し得る。ベータディフェンシンは、抗酵母活性を有することが示されている。ここに記載した組成物により予防及び／又は治療する感染又は疾患の原因となり得る酵母の例には、アシクロコニディウム属（Aciculoconidium）、ボトリオアスカス属（Botryoascus）、ブレタノマイセス属（Brettanomyces）、ブレラ属（Bullera）、ブレロマイセス属（Bulleromyces）、カンジダ属（Candida）、シテロマイセス属（Citeromyces）、クラビスポラ属（Clavispora）、クリプトコッカス属（Cryptococcus）、シストフィロバシディウム属（Cystofilobasidium）、デバロマイセス属（Debaromyces）、デバリオマイセス属（Debaryomyces）、デッケラ属（Dekkera）ディポダスカス属（Dipodascus）、エンドマイセス（Endomyces）、エンドマイコプシス属（Endomycopsis）エリスロバシディウム属（Erythrobasidium）、フェロマイセス属（Fellomyces）、フィロバシディウム属（Filobasidium）、グイリエルモンデラ属（Guilliermondella）、ハンセニアスポラ属（Hanseniaspora）、ハンセヌラ属（Hansenula）、ハセガワエア属（Hasegawaea）、ハイフォピキア属（Hyphopichia）、イッサチエンキア属（Issatchenkia）、クロエケラ属（Kloeckera）、クルイベロマイセス属（Kluyveromyces）、コマガタエラ属（Komagataella）、ルーコスポリディウム属（Leucosporidium）、リポマイセス属（Lipomyces）、ロデロマイセス属（Lodderomyces）、マラセジア属（Malassezia）、マスチゴマイセス属（Mastigomyces）、メチニコウイア属（Metschnikowia）ムラキア属（Mrakia）、ナドソニア属（Nadsonia）、オクトスポロマイセス属（Octosporomyces）、オオスポリディウム属（Oosporidium）、パチソレン属（Pachysolen）、ペタソスポラ属（Petasospora）、ファフィア属（Phaffia）、ピキア属（Pichia）、スードジマ属（Pseudozyma）、ロドスポリジウム属（Rhodosporidium）、ロドトルラ属（Rhodotorula）、サッカロマイセス属（Saccharomyces）、サッカロマイコデス属（Saccharomycodes）、サッカロマイコプシス属（Saccharomycopsis）、スキゾブラストスポリオン属（Schizoblastosporion）、スキゾサッカロマイセス属（Schizosaccharomyces）、スキワニオマイセス属（Schwanniomyces）、セレノノチラ属（Selenotila）、シロバジディウム属（Sirobasidium）、スポリディオボラス属（Sporidiobolus）、スポロボロマイセス属（Sporobolomyces）、ステファノアスカス属（Stephanoascus）、ステリグマトマイセス属（Sterigmatomyces）、シリンゴスポラ属（Syringospora）、トルラスポラ属（Torulaspora）、トルロプシス属（Torulopsis）、トレメロイド属（Tremelloid）、トリコスポロン属（Trichosporon）、トリゴノプシス属（Trigonopsis）、ウデニオマイセス属（Udeniomyces）、ワルトマイセス属（Waltomyces）、ウィッカーハミア属（Wickerhamia）、ウィリオプシス属（Williopsis）、ウインガエ属（Wingea）、ヤロウィア属（Yarrowia）、ジゴファボスポラ属（Zygofabospora）、ジゴリポマイセス（Zygolipomyces）、又は、ジゴサッカロマイセス属（Zygosaccharomyces）が含まれるが、これに限定されない。ある実施形態において、ここに記載した組成物の投与による、対象の酵母感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の予防は、以下の１以上の結果をもたらす：酵母感染に起因する又は関連する疾患の進行又は攻撃の予防；及び／又は、対象から他の対象若しくは対象群への、酵母感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の拡散予防。ある実施形態において、ここに記載した組成物の投与による、酵母感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患を有する対象の治療は、以下の１以上の結果をもたらす：酵母感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の再発予防；酵母感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患に関連する症状数の削減；酵母感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患に関連する臓器不全の減少；酵母感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の持続期間の短縮及び／又は重症度の軽減；酵母感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の１以上の症状の持続期間の短縮及び／又は重症度の軽減；酵母細胞数の削減；対象の入院発生率の低下；対象の入院期間の短縮；対象の生存率の上昇；対象における他の療法の予防又は治療効果の強調又は向上；対象の細胞、組織、臓器から、対象の他の細胞、組織、臓器への酵母拡散の予防；酵母感染又はその１以上の症状に起因する又は関連する疾患の進行又は攻撃の予防；及び／又は、対象から他の対象群への、酵母感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の拡散防止。

【0161】

いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、カンジダ症の予防及び／又は治療に用いる。カンジダ症は一般的なウイルス感染症であり、正常細菌叢の一種であるカンジダアルビカンス及び他のカンジダ属の菌の異常増殖に起因する。口腔内において、カンジダ症は、「鵝口瘡」と呼ばれる、発赤及び白いパッチの原因となる。小児において、カンジダはおむつかぶれの原因になり得る。女性において、生殖器の痒み及びおりものの原因となり得、「酵母感染」に属するものとされる。カンジダ症は、また、爪の感染症を含む様々な他の感染症の原因になり得、特に免疫不全者において、全身が侵される場合もある。これは、現在、米国において、４番目に最も一般的な、院内感染敗血症の原因である。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、カンジダ症の治療のために、局所投与する（例えば、皮膚に局所投与又は膣内のような生殖器領域に局所投与）。一実施形態において、ここに記載した組成物を、発赤、白いパッチ又は生殖器の痒み（このような症状はカンジダ症に関連する）部位又はその近傍部位に投与する。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物の投与によるカンジダ症を有する対象の治療は、以下の１以上の結果をもたらす：カンジダ症の症状の重症度の軽減及び／又は持続期間の短縮；カンジダ症の症状数の削減；カンジダ症の症状に関連する痛みの軽減；カンジダ症の症状の再発予防又は再発頻度の低減；対象から他の対象へのカンジダ症拡散予防；カンジダ症の症状の攻撃又は進行予防；及び／又は、対象における他の療法（例えば、抗酵母療法）の予防及び／又は治療効果の強調又は向上。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、カンジダ感染の症状が小康状態になるまで、毎日（例えば、１日１回又は２回）投与することができる（例えば、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、２週間、３週間、４週間又は４週間以上）。

【0162】

いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、癜風の予防及び／又は治療に用いる。癜風の症状には、皮膚における多色のパッチ又は病斑が含まれるが、これに限定されない。これは、比較的若い成人に良く見られる症状である。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、癜風の治療のために局所投与する。一実施形態において、ここに記載した組成物を、癜風感染部位又はその近傍部位に投与する。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物の投与による、癜風を有する対象の治療は、以下の１以上の結果をもたらす：癜風の症状の重症度の軽減及び／又は持続期間の短縮；癜風の症状数の削減；癜風の症状に関連する痛みの軽減；癜風の症状の再発予防又は再発頻度の低減；対象から他の対象への癜風の拡散予防；癜風の症状の攻撃又は進行の予防；及び／又は、対象における他の療法（例えば、抗酵母療法）の予防及び／又は治療効果の強調又は向上。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、癜風感染の症状が小康状態になるまで、毎日（例えば、１日１回又は２回）投与することができる（例えば、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、２週間、３週間、４週間又は４週間以上）。

【0163】

いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、骨髄炎の予防及び／又は治療に用いる。骨髄炎は、骨又は骨髄の感染症であり、細菌又は菌類に起因し得る。骨髄炎は、硬化症の輪の溶解性中心を示すＸ線の結果に基づいて診断され得、さらに、材料の培養物は、特定の病原体を同定するための骨生検から得ることができる。したがって、いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、骨髄炎を治療するために、骨髄炎を有する（例えば、診断された）患者に投与する。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、真菌感染に起因する骨髄炎の治療のために用いる。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、細菌に起因しない感染を治療するために用いる。さらに他の実施形態において、ここに記載した組成物を、いずれかの感染（細菌感染を含むが、これに限定されない）に起因する骨髄炎の治療のために用いる。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、手術後の患者の組織表面（例えば、骨の表面又は骨の表面近傍）に局所投与する。例えば、ここに記載した組成物を、膝交換手術後の膝領域、臀部交換手術後の臀部領域、又は、肘交換手術後の肘領域に投与することができる。ある実施形態において、ここに記載した組成物の投与による、骨髄炎を有する対象の治療は、以下の１以上の結果をもたらす：骨髄炎に関連する１以上の症状（例えば、痛み、炎症）の持続期間の短縮及び／又は重症度の軽減；骨髄炎に関連する症状数の削減；骨髄炎の頻度又は再発の予防又は低減；対象の入院発生率の低減；対象の入院期間の短縮；及び／又は、対象における他の療法の予防又は治療効果の強調又は向上。

【0164】

他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、創傷（例えば、切傷、裂傷、貫通、擦り傷又は熱傷のような開放創）の酵母感染の予防及び／又は治療に用いる。他の実施形態において、ここに記載した組成物を、創傷の酵母感染の予防及び／又は治療に用いない。

【0165】

特定の実施形態において、ここに記載したｓＮＡＧ組成物を用いて、ウイルス感染、真菌感染又は酵母感染（ここに記載したウイルス、真菌又は酵母感染のいずれかのような）を治療する対象は、細菌感染を有さない。他の実施形態において、ここに記載したｓＮＡＧ組成物を用いて、ウイルス、真菌又は酵母感染（ここに記載したウイルス、真菌又は酵母感染のいずれかのような）を治療する対象は、細菌感染と、ウイルス、真菌又は酵母感染との両方を有する。いくつかの実施形態において、このような感染は、対象の臓器において同一位置にある。他の実施形態において、このような感染は、対象の臓器において異なる位置にある。

【0166】

ある実施形態において、ここに記載した組成物を皮膚病の治療に用いる。作用のいずれのメカニズムに縛られることなく、ｓＮＡＧナノファイバのベータディフェンシンを誘引する能力は、皮膚病の治療におけるｓＮＡＧナノファイバの活性に寄与し得る。ベータディフェンシンは、皮膚病において活性を有することが示されている。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎）の治療に用いる。特定の実施形態において、上記組成物を、ヒトの早産児、ヒト乳児、ヒト幼児又はヒト小児におけるアトピー性皮膚炎の予防及び／又は治療に用いる。他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を乾癬（例えば、尋常性乾癬、紅皮症乾癬、膿疱性乾癬、爪乾癬又は粒状乾癬）の治療に用いる。特定の実施形態において、上記組成物を、ヒトの早産児、ヒト乳児、ヒト幼児又はヒト小児における乾癬の治療に用いる。ある実施形態において、ここに記載した組成物の投与による、皮膚病を有する患者の治療は、以下の１以上の結果をもたらす：皮膚病の再発予防；皮膚病に関連する症状数の削減；皮膚病に関連する１以上の症状の重症度の軽減又は持続期間の短縮；対象の入院発生率の低減；対象の入院期間の短縮；及び／又は、対象における他の療法の予防又は治療効果の強調又は向上。

【0167】

皮膚病の症状には、発疹（例えば、でこぼこした発疹）、水疱、皮膚の赤み、腫物、痒み、皮膚病斑、じくじくした部分、及び／又は、傷を含むがこれに限定されない。このような症状は、首、手首、前腕、大腿部又は足首に表れることが多いが、生殖器領域にもまた表れる。アトピー性皮膚炎の一般的な症状には、乾燥、痒み及び／又は皮膚の発赤が含まれるがこれに限定されない。皮膚病の症状には、斑（例えば、銀白色の鱗状皮膚で覆われた、炎症を起こした皮膚の隆起領域）、痒み、腫物、痛み、小膿疱（例えば、非感染性の膿で充たされた隆起した瘤）、皮膚の平坦な炎症性パッチ、小さい鱗状の病斑、及び／又は、爪の肥厚部及び変色が含まれるが、これに限定されない。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物は、１以上の上記列挙した症状又は当業者に公知の他の症状の攻撃又は進行を予防する、又は、１以上のこれらの症状の持続期間の短縮及び／又は重症度を軽減する。

【0168】

特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、細菌感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の予防及び／又は治療に使用しない。一実施形態において、ここに記載した組成物を、Ｓ．アウレアス感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の予防及び／又は治療に使用しない。他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、創傷（例えば、切傷、裂傷、貫通、擦り傷又は熱傷のような開放創）の細菌感染の予防／又は治療に使用しない。

【0169】

特定の実施形態において、ここに記載した組成物の投与により治療及び／又は予防する疾患は、創傷（例えば、切傷、裂傷、貫通、擦り傷又は熱傷のような開放創）ではない。

【0170】

５．５ 患者集団
ある実施形態において、ここに記載した組成物を、例えば、疾患又は感染を有さない対象のような、無症状の対象に投与してもよい。一実施形態において、ここに記載した組成物を、疾患にかかる又は感染するリスクのある無症状の対象に投与する。

【0171】

一実施形態において、ここに記載したｓＮＡＧナノファイバ組成物を、疾患又は感染が診断された患者に投与してもよい。他の実施形態において、ここに記載した組成物を、疾患又は感染の１以上の症状が現れた患者に投与してもよい。ある実施形態において、患者は、ここに記載した組成物の投与前に、疾患又は感染を診断する。

【0172】

ある実施形態において、ここに記載した組成物を、感染が診断された患者に投与する。例えば、ここに記載した組成物を、患者から得た生体サンプルにおいて病原体（例えば、ウイルス、真菌又は酵母）を検出したときに、患者に投与してもよい。一実施形態において、生体サンプルを、ここに記載した組成物により治療する部位若しくは領域、又は、ここに記載した組成物を投与する領域から得る。一実施形態において、感染を検出するために、感染が疑われる部位を綿棒で拭き取り、細胞又は膿を回収してもよい。他の実施形態において、感染を検出するために、感染が疑われる部位（例えば、創傷）から流体を吸引する。さらに他の実施形態において、感染を検出するために組織生検を行う。感染が疑われる部位が創傷である実施形態において、感染を検出するために創傷培養を行ってもよい。他の実施形態において、生体サンプルを、患者の血液、尿、唾液又は糞便から得てもよい。いくつかの実施形態において、血液又は尿検査を、感染を検出するために行ってもよい（例えば、感染が血液又は他の組織／臓器に拡散していることが疑われるとき）。いくつかの実施形態において、回収したサンプル（例えば、細胞、組織又は流体）において、ＰＣＲのようなＤＮＡ検出方法を使用して、１以上の細菌型の存在を試験する。他の実施形態において、免疫蛍光分析、血清学、培養（例えば、血液寒天培養）、又は、当業者に公知の及び／若しくは当業者が実施している他のいずれかの試験を、感染の検査室診断のために用いてもよい。

【0173】

他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、例えば、癌、ＩＢＤ、クローン病、皮膚炎、乾癬又は感染（例えば、ウイルス、酵母若しくは真菌感染）のような疾患が診断された、又は、これらの１以上の症状が現れた患者に投与する。ある実施形態において、患者は、ここに記載した組成物の投与前に、疾患（例えば、上記列挙した疾患の１つ）が診断される、又は、疾患の１以上の症状が現れる。疾患は、患者の症状の評価及び／又は患者の生体サンプル中の病原体の検出（例えば、上述したように）を含む、当業者に公知のいずれかの方法により診断されてもよい。一実施形態において、ここに記載した組成物を、治療医又は他の医療の専門家によって、疾患が診断された患者に投与してもよい。他の実施例において、患者は、疾患の１以上の症状の検出に、ここに記載した組成物を用いてもよい。

【0174】

ある実施形態において、ここに記載した組成物を投与する対象は、１以上のディフェンシンペプチド又は１以上のディフェンシンペプチドをコードする遺伝子が変位／欠損したものが発現しない又は発現レベルが低い対象である。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を投与する対象は、１以上のα−ディフェンシン（例えば、ＤＥＦＡ１、ＤＥＦＡ１Ｂ、ＤＥＦＡ３、ＤＥＦＡ４、ＤＥＦＡ５、ＤＥＦＡ６）、１以上のβ−ディフェンシン（例えば、ＤＥＦＢ１、ＤＥＦＢ２、ＤＥＦＢ４、ＤＥＦＢ１０３Ａ、ＤＥＦＢ１０４Ａ、ＤＥＦＢ１０５Ｂ、ＤＥＦＢ１０７Ｂ、ＤＥＦＢ１０８Ｂ、ＤＥＦＢ１１０、ＤＥＦＢ１１２、ＤＥＦＢ１１４、ＤＥＦＢ１１８、ＤＥＦＢ１１９、ＤＥＦＢ１２３、ＤＥＦＢ１２４、ＤＥＦＢ１２５、ＤＥＦＢ１２６、ＤＥＦＢ１２７、ＤＥＦＢ１２８、ＤＥＦＢ１２９、ＤＥＦＢ１３１、ＤＥＦＢ１３６）、及び／又は、１以上のθ−ディフェンシン（例えば、DEFT1P）を発現しない、発現レベルが低い又は発現レベルが変化した患者である。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を投与する対象は、ＤＥＦＡ１、ＤＥＦＡ３、ＤＥＦＡ４、ＤＥＦＡ５、ＤＥＦＢ１、ＤＥＦＢ３、ＤＥＦＢ１０３Ａ、ＤＥＦＢ１０４Ａ、ＤＥＦＢ１０８Ｂ、ＤＥＦＢ１１２、ＤＥＦＢ１１４、ＤＥＦＢ１１８、ＤＥＦＢ１１９、ＤＥＦＢ１２３、ＤＥＦＢ１２４、ＤＥＦＢ１２５、ＤＥＦＢ１２６、ＤＥＦＢ１２８、ＤＥＦＢ１２９及びＤＥＦＢ１３１の１以上を発現しない、発現レベルの低い又は発現レベルが変化した対象である。ある実施形態において、ここに記載した組成物を投与する対象は、１以上のＴｏｌｌレセプター（例えば、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１及び／又はＴＬＲ１２）を発現しない、発現レベルの低い又は発現レベルの変化した対象である。さらに他の実施形態において、ここに記載した組成物を投与する対象は、ＩＬ−１、ＣＥＡＣＡＭ３、ＳＰＡＧ１１、ＳＩＧＩＲＲ（ＩＬ１様レセプター）、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＩＲＡＫ４、ＴＢＫ１、ＴＲＡＦ６及びＩＫＫｉの１以上を発現しない、発現レベルの低い又は発現レベルの変化した対象である。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を投与する対象は、ＩＲＡＫ２、ＳＩＧＩＲＲ、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ１０及びＴＲＡＦ６の１以上を発現しない、発現レベルの低い又は発現レベルの変化した対象である。遺伝子の低い発現レベルとは、正常な発現レベルよりも低い（例えば、１．２５倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上低い）レベルである。遺伝子の変化した発現レベルとは、正常な発現レベルと異なる（２０％、２５％、３０％、５０％、７５％、１００％、１５０％、２００％、２５０％、３００％異なる）レベルである。１以上のディフェンシンの正常な発現とは、（ｉ）治療する疾患又は感染の、症状を現さない又は診断されていない対象において公知の平均発現レベル、（ｉｉ）治療する疾患又は感染の、症状を現さない又は診断されていない３、５、１０、２０、２５、５０又はそれ以上の患者において検出された平均発現レベル、及び／又は、（ｉｉｉ）疾患又は感染の攻撃前にここに記載した組成物を投与した患者において検出された発現レベル、である。

【0175】

ある実施形態において、ここに記載した組成物を、骨及び結合組織肉腫、脳腫瘍、乳癌、卵巣癌、腎臓癌、膵臓癌、食道癌、胃癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、咽頭癌及び中皮腫）、肝臓癌、並びに、前立腺癌のような、固形腫瘍癌と診断された患者に投与する。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、カポジ肉腫と診断された患者に投与する。

【0176】

ある実施形態において、ここに記載した組成物を、黒色腫、基底細胞癌及び扁平上皮癌のような皮膚癌と診断された患者に投与する。

【0177】

ある実施形態において、ここに記載した組成物を、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎）を有する（例えば、診断された）、又は、炎症性腸疾患の症状の１、２若しくはそれ以上を現す患者に投与する。

【0178】

ある実施形態において、ここに記載した組成物を、クローン病（例えば、回腸クローン病）を有する（例えば、診断された）、又は、クローン病の症状の１以上を現す患者に投与する。

【0179】

ある実施形態において、ここに記載した組成物を、ウイルスに起因する疾患又はウイルスに関連する感染（例えば、ここに記載したウイルスに起因するいずれかの疾患又はここに記載したウイルスに関連する感染のような）を有する（例えば、診断された）患者、例えば、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、インフルエンザウイルス（インフルエンザＡウイルス、インフルエンザＢウイルス又はインフルエンザＣウイルス）、ヒト後肺炎ウイルス（ＨＭＰＶ）、ライノウイルス、パラインフルエンザウイルス、ＳＡＲＳコロナウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、肝炎ウイルス（Ａ，Ｂ，Ｃ）、エボラウイルス、単純疱疹ウイルス（例えば、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２）、風疹、大痘瘡、及び／又は、小痘瘡に感染した患者に投与する。ある実施形態において、ここに記載した組成物を、ウイルスに起因する疾患又はウイルスに関連する感染（例えば、ここに記載したウイルスに起因するいずれかの疾患又はここに記載したウイルスに関連する感染）の１、２又はそれ以上の症状を現す患者に投与する。

【0180】

ある実施形態において、ここに記載した組成物を、ウイルスに感染した創傷（例えば、切傷、裂傷、穿孔、擦り傷又は熱傷のような開放創）を有する（例えば、診断された）患者に投与する。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、ウイルスに感染した創傷と診断された患者に投与しない。

【0181】

ある実施形態において、ここに記載した組成物を、例えば、ブラストマイセス（Blastomyces）、パラコクシジオイデス（Paracoccidiodes）、スポロスリックス（Sporothrix）、クリプトコッカス、カンジダ、アスペルギラス（Aspergillus）、ヒストプラズマ（Histoplasma）、クリプトコッカス、バイポラリス（Bipolaris）、クラドフィアロフォラ（Cladophialophora）、クラドスポリウム（Cladosporium）、ドレクスレラ（Drechslera）、エクソフィアラ（Exophiala）、フォンセカエラ（Fonsecaea）、フィアロフォラ（Phialophora）、キシロヒファ（Xylohypha）、オクロコニス（Ochroconis）、リノクラディエラ（Rhinocladiella）、スコレコバシヂウム（Scolecobasidium）、及び／又は、ワンジエラ（Wangiella）に感染した患者のように、真菌に起因する疾患又は真菌に関連する感染（ここに記載した真菌に起因するいずれかの疾患又は関連する感染）を有する（例えば、診断された）患者に投与する。ある実施形態において、ここに記載した組成物を、真菌に起因する疾患又は真菌に関連する感染（ここに記載したウイルスに起因するいずれかの疾患又はここに記載した真菌に関連する感染のような）の１、２又はそれ以上の症状を現す患者に投与する。

【0182】

ある実施形態において、ここに記載した組成物を、真菌に感染した創傷（例えば、切傷、裂傷、穿孔、擦り傷又は熱傷のような開放創）を有する（例えば、診断された）患者に投与する。ある実施形態において、ここに記載した組成物を、真菌に感染した創傷と診断された患者に投与しない。

【0183】

ある実施形態において、ここに記載した組成物を、アシクロコニディウム属（Aciculoconidium）、ボトリオアスカス属（Botryoascus）、ブレタノマイセス属（Brettanomyces）、ブレラ属（Bullera）、ブレロマイセス属（Bulleromyces）、カンジダ属（Candida）、シテロマイセス属（Citeromyces）、クラビスポラ属（Clavispora）、クリプトコッカス属（Cryptococcus）、シストフィロバシディウム属（Cystofilobasidium）、デバロマイセス属（Debaromyces）、デバリオマイセス属（Debaryomyces）、デッケラ属（Dekkera）ディポダスカス属（Dipodascus）、エンドマイセス（Endomyces）、エンドマイコプシス属（Endomycopsis）エリスロバシディウム属（Erythrobasidium）、フェロマイセス属（Fellomyces）、フィロバシディウム属（Filobasidium）、グイリエルモンデラ属（Guilliermondella）、ハンセニアスポラ属（Hanseniaspora）、ハンセヌラ属（Hansenula）、ハセガワエア属（Hasegawaea）、ハイフォピキア属（Hyphopichia）、イッサチエンキア属（Issatchenkia）、クロエケラ属（Kloeckera）、クルイベロマイセス属（Kluyveromyces）、コマガタエラ属（Komagataella）、ルーコスポリディウム属（Leucosporidium）、リポマイセス属（Lipomyces）、ロデロマイセス属（Lodderomyces）、マラセジア属（Malassezia）、マスチゴマイセス属（Mastigomyces）、メチニコウイア属（Metschnikowia）ムラキア属（Mrakia）、ナドソニア属（Nadsonia）、オクトスポロマイセス属（Octosporomyces）、オオスポリディウム属（Oosporidium）、パチソレン属（Pachysolen）、ペタソスポラ属（Petasospora）、ファフィア属（Phaffia）、ピキア属（Pichia）、スードジマ属（Pseudozyma）、ロドスポリジウム属（Rhodosporidium）、ロドトルラ属（Rhodotorula）、サッカロマイセス属（Saccharomyces）、サッカロマイコデス属（Saccharomycodes）、サッカロマイコプシス属（Saccharomycopsis）、スキゾブラストスポリオン属（Schizoblastosporion）、スキゾサッカロマイセス属（Schizosaccharomyces）、スキワニオマイセス属（Schwanniomyces）、セレノノチラ属（Selenotila）、シロバジディウム属（Sirobasidium）、スポリディオボラス属（Sporidiobolus）、スポロボロマイセス属（Sporobolomyces）、ステファノアスカス属（Stephanoascus）、ステリグマトマイセス属（Sterigmatomyces）、シリンゴスポラ属（Syringospora）、トルラスポラ属（Torulaspora）、トルロプシス属（Torulopsis）、トレメロイド属（Tremelloid）、トリコスポロン属（Trichosporon）、トリゴノプシス属（Trigonopsis）、ウデニオマイセス属（Udeniomyces）、ワルトマイセス属（Waltomyces）、ウィッカーハミア属（Wickerhamia）、ウィリオプシス属（Williopsis）、ウインガエ属（Wingea）、ヤロウィア属（Yarrowia）、ジゴファボスポラ属（Zygofabospora）、ジゴリポマイセス（Zygolipomyces）、及び／又は、ジゴサッカロマイセス属（Zygosaccharomyces）に感染した患者のように、酵母に起因する疾患又は酵母に関連する感染を有する（例えば、診断された）患者に投与する。

【0184】

ある実施形態において、ここに記載した組成物を、酵母に感染した創傷（例えば、切傷、裂傷、穿孔、擦り傷又は熱傷のような開放創）を有する（例えば、診断された）患者に投与する。ある実施形態において、ここに記載した組成物を、酵母に感染した創傷と診断された患者に投与しない。

【0185】

ある実施形態において、ここに記載した組成物を、皮膚病を有する（例えば、診断された）又は皮膚病の１、２若しくはそれ以上の症状を現す患者に投与する。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎）と診断された、又は、皮膚炎の１、２若しくはそれ以上の症状を現す患者に投与する。他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、感染と診断された又は感染の１、２若しくはそれ以上の症状を現す患者に投与する。

【0186】

いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、免疫不全患者、及び／又は、重大若しくは慢性的な疾患若しくは感染（例えば、ＨＩＶ陽性患者、又は、癌治療若しくは移植手術の結果として免疫不全となった患者）に感受性のある患者に投与する。一実施形態において、ここに記載した組成物を、嚢胞性線維症と診断された患者に投与する。

【0187】

いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、疾患若しくは感染の症状が明らかになる前、又は、疾患若しくは感染が重症化する前（例えば、患者が治療又は入院を要求する前）に、疾患又は感染を有する患者に投与する。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、疾患若しくは感染の症状が明らかになった後、又は、疾患若しくは感染が重症化した後（例えば、患者が治療又は入院を要求した後）に、疾患又は感染を有する患者に投与する。

【0188】

いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を投与する対象は動物である。ある実施形態において、この動物はトリである。ある実施形態において、この動物はイヌである。ある実施形態において、この動物はネコである。ある実施形態において、この動物はウマである。ある実施形態において、この動物はウシである。ある実施形態において、この動物は、例えば、ウマ、ブタ、マウス、又は、好ましくはヒトである霊長類のような哺乳動物である。

【0189】

ある実施形態において、ここに記載した組成物を投与する対象は、ヒト成人である。ある実施形態において、ここに記載した組成物を投与する対象は、５０歳を超えるヒト成人である。ある実施形態において、ここに記載した組成物を投与する対象は、ヒト老人対象である。

【0190】

ある実施形態において、ここに記載した組成物を投与する対象は、ヒト幼児である。ある実施形態において、ここに記載した組成物を投与する対象は、ヒト小児である。ある実施形態において、ここに記載した組成物を投与する対象は、ヒト乳児である。ある実施形態において、ここに記載した組成物を投与する対象は、ヒト早産児である。

【0191】

特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、細菌感染又はこれに起因する若しくは関連する疾患の予防及び／又は治療のために、対象に投与しない。一実施形態において、ここに記載した組成物を、Ｓ．アウレアス感染又はこのような感染に起因する若しくは関連する疾患の予防及び／又は治療のために、対象に投与しない。他の特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、創傷（例えば、切傷、裂傷、穿孔、擦り傷又は熱傷のような開放創）の細菌感染の予防及び／又は治療のために、対象に投与しない。

【0192】

特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、創傷（例えば、切傷、裂傷、穿孔、擦り傷又は熱傷のような開放創）の治療のために、対象に投与しない。

【0193】

５．６ 投与形態
ある実施形態において、感染及び／若しくは疾患、又はその症状を治療又は予防するための方法であって、ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物を、このような治療を必要とする患者に局所投与する方法について、ここで記載する。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ組成物を、感染又は疾患の危険性が上昇した組織又は臓器に局所適用する。

【0194】

いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ及び／又はｓＮＡＧナノファイバ組成物の効果的な量を、対象に投与する。

【0195】

いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物を、患者の感染若しくは疾患部位、又は、感染若しくは疾患が影響した部位、に局所投与する。さらに他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物を、患者の感染若しくは疾患部位及びその周囲の部位、又は、感染若しくは疾患が影響した部位に、局所投与する。さらに他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物を、患者の感染若しくは疾患部位の近傍、又は、感染若しくは疾患が影響した部位の近傍に、適用する。さらに他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物を、感染又はそのような感染に関連する疾患の危険性の高い部位に、局所投与する。

【0196】

ここに記載したｓＮＡＧナノファイバ組成物を、局所投与の多くの適切な方法の何れかにより投与してもよい。このような方法は、当業者に公知であり、皮膚、他のいずれかの体表面（例えば、粘膜表面）、吸入、鼻腔内、膣内、直腸内、頬又は舌下への局所投与が含まれるが、これに限定されない。局所投与形態は、治療又は予防する感染又は疾患に応じて変化し得る。ｓＮＡＧナノファイバ組成物は、局所投与の種々の形態に合わせて形成することができる。

【0197】

特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、例えば、このような治療を必要とする患者の皮膚、又は、このような治療を必要とする患者の他の組織に、局所適用する。いくつかの実施形態において、この組成物を、疾患若しくは感染部位、及び／又は、疾患若しくは感染部位近傍に、直接適用してもよい。いくつかの実施形態において、この組成物を、疾患又は感染が進行するかもしれない部位（例えば、開放創）に、直接適用してもよい。

【0198】

一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ組成物を、患者の皮膚に適用する。例えば、このような組成物を、皮膚の疾患又は感染を治療又は予防するために、患者の皮膚に局所適用してもよい。

【0199】

他の実施形態において、ここに記載した組成物を、患者の粘膜表面に局所適用してもよい。例えば、このような組成物を、口又は歯肉の疾患又は感染を治療又は予防するために、口腔粘膜に局所適用してもよい。

【0200】

いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、患者の生殖器、泌尿器又は肛門表面／領域に局所適用してもよい。例えば、このような組成物を、生殖器、泌尿器又は肛門疾患又は感染を治療又は予防するために、生殖器、泌尿器又は肛門表面／領域に局所適用してもよい。

【0201】

局所投与の上記列挙した方法は、懸濁液（例えば、濃厚懸濁液）、クリーム、軟膏、ゲル、溶液、膜、スプレー、ペースト、粉、又は、ここに記載した若しくは当業者に公知の他のいずれかの形態でのｓＮＡＧナノファイバの投与を含んでもよい。ｓＮＡＧナノファイバはまた、例えば、患者の皮膚の局在化した疾患又は感染を治療するために、包帯又は帯具に適用してもよい。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物は、固体又は障壁形成物ではない。

【0202】

いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、患者の口腔内及び／又は呼吸器系にスプレーとして適用してもよい。例えば、このような組成物を、口、鼻、歯肉、喉又は肺の疾患又は感染を治療又は予防するために、スプレーとして適用してもよい。そのような一実施形態において、この組成物を吸入器として投与するために構築してもよい。

【0203】

いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、患者の直腸、膣又は尿道に座薬として適用してもよい。例えば、このような組成物を、消化管、尿管又は生殖管の疾患又は感染を治療又は予防するために、座薬として適用してもよい。

【0204】

いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、注射器、又は、患者に組成物を局所運搬するために適した塗布器の他の形式（例えば、へら、綿棒、スクイーズチューブのようなチューブ）で局所適用してもよい。例えば、懸濁液（例えば、濃厚懸濁液）、溶液、クリーム、軟膏又はゲルのような形態のここに記載した組成物を、塗布器（例えば、注射器）を介して、患者の皮膚、粘膜又は他の組織表面に局所投与することができる。

【0205】

他の実施形態において、ここに記載した組成物を、外科手術部位に適用してもよい。例えば、このような組成物を、外科手術の対象となる又は外科手術の対象となっている組織又は臓器の表面に、スプレー塗布してもよいし、クリーム、懸濁液（例えば、濃厚懸濁液）、溶液、軟膏、ゲル、膜若しくは粉として適用してもよいし、又は、被覆してもよい。一実施形態において、ここに記載した組成物を、外科的切開部位、組織摘出部位、又は、外科縫合若しくは縫合糸部位に適用する。ここに記載した組成物のこのような投与は、外科手術後感染の予防、又は、外科手術を必要とした疾患の再発の予防をしてもよい。例えば、ここに記載した組成物を、ウイルス、酵母又は真菌感染が高リスクで引き起こされることが知られている外科手術の間又は後に用いてもよい。感染が高リスクで引き起こされることが知られている外科手術には、腸切除、胃腸外科手術、腎臓手術等が含まれる。ここに記載した組成物を、上記列挙した又は他の外科手術のいずれかの部位に適用してもよい。

【0206】

さらに他の実施形態において、患者の疾患又は感染を予防又は治療するために、ここに記載した組成物で、例えば、口腔衛生製品、カテーテル、手術器具又は他の製品のような、装置を被覆することによって、患者において使用又は患者に挿入してもよい。

【0207】

特定の実施形態において、ここに記載した組成物を固形腫瘍又は皮膚癌の部位に局所適用する。いくつかの実施形態において、この組成物を固形腫瘍又はその皮膚癌に直接適用する。いくつかの実施形態において、この組成物を固形腫瘍又は皮膚癌の部位であって、腫瘍又は皮膚癌の全て又は一部が除去（例えば、外科的除去）された部位に直接適用する。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物を、固形腫瘍又は皮膚癌を切除又は除去した部位及び／又はその周囲に局所投与する。これらのいくつかの実施形態において、このような組成物を、固形腫瘍が切除された臓器又は組織表面に、スプレー塗布してもよいし、懸濁液、溶液、クリーム、軟膏、ゲル、膜若しくは粉として適用してもよいし、被覆してもよい。特定の実施形態において、ここに記載した組成物を、固形腫瘍又は皮膚癌が除去又は切除された部位及びその周囲にスプレー塗布又は被覆する。

【0208】

いくつかの実施形態において、ここで検討した方法は、患者における、疾患又は感染の検出／診断を含む工程を含む。いくつかの実施形態において、検出／診断は、患者の生体サンプルにおける１以上の病原体（例えば、ウイルス、真菌又は酵母）の試験又は分析を含む。他の実施経あ値において、診断は、患者が疾患（例えば、ＩＢＤ、クローン病、癌、皮膚炎、乾癬、又は、ウイルス、真菌若しくは酵母感染に関連する疾患）の１以上の症状を有しているか否かを評価することを含む。

【0209】

ここに記載した組成物は、持続した放出特性を示してもよいし、及び／又は、このような組成物の持続的な放出をもたらす形態で投与されてもよい。いくつかの実施形態において、上記５．１の項目に記載したｓＮＡＧナノファイバの生物分解時間が長時間であること、及び、ｓＮＡＧナノファイバのこれらの特性は、ここに記載した組成物の持続した放出に導く又は貢献し得る。さらに他の実施形態において、ここに記載した組成物を、当業者に公知のいずれかの方法を用いて、持続した放出能力を示すように形成する。ここに記載した組成物は、患者にこの組成物を投与した後、約６時間、１２時間、１８時間、２４時間（１日）、２日、３日、５日、７日（１週間）、１０日間、１４日間（２週間）、３週間又は４週間と同等期間、又は、これを超える長時間、持続した放出を示してもよい。

【0210】

検討した治療体制には、ｓＮＡＧナノファイバ組成物の単回投与若しくは単回適用；ｓＮＡＧナノファイバ組成物の二回投与若しくは二回適用；又は、ｓＮＡＧナノファイバ組成物の複数回投与若しくは複数回適用の体制を含む。投与又は適用は、１時間毎、１日毎、１週間毎又は１月毎の投与であってもよい。例えば、ｓＮＡＧナノファイバ組成物の投与は、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１週間に１回、１週間に２回、１週間に３回、１日おき、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、１月に１回、又は、２ヶ月に１回行ってもよい。

【0211】

ｓＮＡＧナノファイバ組成物を、２日間、３日間、４日間、５日間、１週間、２週間、３週間、１ヵ月間、２ヵ月間、３ヵ月間、４ヵ月間、５ヵ月間、６ヵ月間、９ヵ月間、１年間、１．５年間、２年間、２．５年間、３年間、４年間、５年間、７年間、１０年間若しくは１０年間以上と同等又はそれ以上、継続して投与してもよい。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ組成物を、２日間、３日間、４日間、５日間、１週間、２週間、３週間、１ヵ月間、２ヵ月間、３ヵ月間、４ヵ月間、５ヵ月間、６ヵ月間、９ヵ月間若しくは１年間と同等又はそれ以上継続して、１日１回又は２回、患者に投与する。このような一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ組成物は、治療期間中の副作用の原因ではない、又は、穏やかな副作用のみの原因である。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバ組成物は、炎症（例えば、穏やかな又は重大な炎症）又はアレルギー（例えば、穏やかな又は重大なアレルギー）の原因ではない。

【0212】

組成物中のｓＮＡＧナノファイバの濃度は変化し得る。一般に、ｓＮＡＧナノファイバの効果的な量を、ここに記載した疾患を治療するための、ここに記載した組成物において使用する。効果的な量は、例えば、疾患を治療するために効果的な量、又は、疾患の１以上の症状の減少若しくは根絶するために効果的な量のように、ここに記載した１以上の効果に達するために十分な量であり得る。例えば、組成物は、患者に局所投与するために適した形態において、組成物の１回投与／適用あたり、ｓＮＡＧナノファイバを約０．２〜２０ｍｇ／ｃｍ^２含んでもよい。ある実施形態において、ここに記載した組成物は、患者に局所運搬するために適した形態において、組成物の１回投与／適用あたり、約０．２５〜２０ｍｇ／ｃｍ^２、約０．５〜２０ｍｇ／ｃｍ^２、約１〜０ｍｇ／ｃｍ^２、約１〜１５ｍｇ／ｃｍ^２、約１〜１２ｍｇ／ｃｍ^２、約１〜１０ｍｇ／ｃｍ^２、約１〜８ｍｇ／ｃｍ^２、約１〜５ｍｇ／ｃｍ^２、約２〜８ｍｇ／ｃｍ^２、又は、約２〜６ｍｇ／ｃｍ^２のｓＮＡＧナノファイバを含んでいる。いくつかの実施形態において、ここに記載した組成物は、患者に局所運搬するために適した形態において、組成物の１回投与／適用あたり、約５〜５０ｍｇ／ｍＬのｓＮＡＧナノファイバを含むことができる。ある実施形態において、ここに記載した組成物は、患者に局所運搬するために適した形態において、組成物の１回投与／適用あたり、約５〜４０ｍｇ／ｍｌ、約５〜３５ｍｇ／ｍｌ、約１０〜５０ｍｇ／ｍｌ、約１０〜４０ｍｇ／ｍｌ、約１０〜３５ｍｇ／ｍｌ、約１０〜３０ｍｇ／ｍｌ、約１５〜４０ｍｇ／ｍｌ、約１５〜３５ｍｇ／ｍｌ、約１５〜３０ｍｇ／ｍｌ又は約２０〜３０ｍｇ／ｍｌのｓＮＡＧナノファイバを含む。特定の実施形態において、ここに記載した組成物は、患者に局所運搬するために適した形態において、組成物の１回投与／適用あたり、約１０ｍｇ／ｍＬ、１２ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ又は３０ｍｇ／ｍＬのｓＮＡＧナノファイバを含む。ある実施形態において、ここに記載した組成物は、患者において治療するための表面（例えば、皮膚、粘膜表面又は他の組織表面）に、０．５ｃｍ^２又は１ｃｍ^２あたり、約５０〜１００μＬ、５０〜２００μＬ、５０〜２５０μＬ、５０〜３００μＬ、５０〜３５０μＬ、５０〜４００μＬ、５０〜４５０μＬ、５０〜５００μＬ、１００〜２００μＬ、１００〜３００μＬ、１００〜４００μＬ、１００〜５００μＬの範囲内の量の全溶液又は懸濁液（ｓＮＡＧナノファイバを含む）を含むことができる。全溶液又は懸濁液は、生理食塩水、バッファ、溶液（例えば、ハンクス緩衝液）又は他の生理学的に交換可能な溶液を含むことができる。

【0213】

５．７ 組み合わせ療法
種々の実施形態において、ここに記載したｓＮＡＧナノファイバ又はその組成物を、１以上の他の療法と組み合わせて対象に投与してもよい。１以上の他の療法は、疾患の治療若しくは予防に有益であり得る、又は、疾患に関連する症状若しくは状態を改善し得る。
ある実施形態において、この療法は、５分未満空けて、３０分未満空けて、１時間空けて、約１時間空けて、約１〜約２時間空けて、約２〜約３時間空けて、約３〜約４時間空けて、約４〜約５時間空けて、約５〜約６時間空けて、約６〜約７時間空けて、約７〜約８時間空けて、約８〜約９時間空けて、約９〜約１０時間空けて、約１０〜約１１時間空けて、約１１〜約１２時間空けて、約１２〜約１８時間空けて、１８〜２４時間空けて、２４〜３６時間空けて、３６〜４８時間空けて、４８〜５２時間空けて、５２〜６０時間空けて、６０〜７２時間空けて、７２〜８４時間空けて、８４〜９６時間空けて、又は、９６〜１２０時間空けて、適用する。特定の実施形態において、２以上の療法を、同一特許訪問内に投与する。

【0214】

ある実施形態において、１以上の療法は外科手術である。特定の実施形態において、外科手術を、固形腫瘍又は皮膚癌の全て又は一部を除去するために行い、さらに、ここに記載した組成物を外科手術前、外科手術中及び／又は外科手術後に、腫瘍の部位に投与する。ある実施形態において、１以上の療法は、放射線療法である。

【0215】

ある実施形態において、１以上の療法は抗ウイルス剤である。当業者に公知の抗ウイルス剤を、ここに記載したｓＮＡＧナノファイバ又はその組成物と組み合わせて用いてもよい。抗ウイルス剤の限定されない例には、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、融合タンパク質抗体、核酸分子、有機分子、無機分子及び小分子が含まれ、これらは、ウイルスのレセプターへの付着、ウイルスの細胞内在化、ウイルスの複製、又は、細胞からのウイルスの放出を、抑制及び／又は低下させる。特定の実施形態において、抗ウイルス剤は、ヌクレオシド類似物（例えば、ジドブジン、アシクロビル、ガングシロビル、ビダラビン、イドクスウリジン、トリフルリジン及びリバビリン）、フォスカルネ（foscarnet）、アマンタジン、ペラミビル、リマンタジン、サクイナビル、インジナビル、リトナビル、アルファ−インターフェロン及び他のインターフェロン、ＡＺＴ、ザナミビル（リレンザ（登録商標））、並びに、オセルタミビル（タミフル（登録商標））を含むが、これに限定されない。他の抗ウイルス剤は、例えば、Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＦｌｕＭｉｓｔ（登録商標）（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ）、Ｆｌｕｖｉｒｉｎ（登録商標）（Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、Ｆｌｕｌａｖａｌ（登録商標）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、Ａｆｌｕｒｉａ（登録商標）（ＣＳＬ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｉｅｓ Ｉｎｃ．）、Ａｇｒｉｆｌｕ（登録商標）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）又はＦｌｕｚｏｎｅ（登録商標）（Ａｖｅｎｔｉｓ Ｐａｓｔｅｕｒ）のような、インフルエンザウイルスワクチンを含む。

【0216】

ある実施形態において、１以上の療法は抗がん剤である。特定の実施形態において、抗がん剤は化学療法薬である。当業者に公知の抗がん剤の何れかを、ここに記載したｓＮＡＧナノファイバ又はその組成物と組み合わせて用いてもよい。抗がん剤の例には、アシビチン；アントラサイクリン；アントラマイシン；アザシチジン（Ｖｉｄａｚａ）；ビスホスホネート（例えば、パミドロネート（Ａｒｅｄｒｉａ）、クロンドロネートナトリウム（Ｂｏｎｅｆｏｓ）、ゾレドロン酸（Ｚｏｍｅｔａ）、アレンドロネート（Ｆｏｓａｍａｘ）、エチドロネート、イバンドロネート、シマドロネート、リセドロメート及びチルドロメート）；カルボプラチン；クロラムブシル；シスプラチン；シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）；ダウノルビシン塩酸塩；デシタビン（Ｄａｃｏｇｅｎ）；ジメチル化剤；ドセタキセル；ドキソルビシン；ＥｐｈＡ２インヒビター；エトポシド；ファザラビン；フルオロウラシル；ゲムシタビン；ヒストン脱アセチル化インヒビター（ＨＤＡＣｓ）；インターロイキンＩＩ（インターロイキンＩＩの組換体又はｒＩＬ２を含む）、インターフェロンアルファ；インターフェロンベータ；インターフェロンガンマ；レナリドミド（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ）；抗ＣＤ２抗体（例えば、シプリツマブ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｉｎｃ．：国際公開番号ＷＯ０２／０９８３７０の全てを参照としてここに組み込む））。

【0217】

癌療法の他の例は、脈管形成インヒビター；アンチセンスオリゴヌクレオチド；アポトーシス遺伝子モジュレーター；アポトーシスレギュレーター；ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト；ベータラクタム誘導体；カゼインキナーゼインヒビター（ＩＣＯＳ）；エストロゲンアゴニスト；エストロゲンアンタゴニスト；グルタチオンインヒビター；ＨＭＧ ＣｏＡ還元酵素インヒビター；免疫刺激ペプチド；インスリン様成長因子−１レセプターインヒビター；インターフェロンアゴニスト；インターフェロン；インターロイキン；親油性プラチナ化合物；マトリリシンインヒビター；マトリクスメタロプロテイナーゼインヒビター；二重鎖不一致ＲＮＡ；一酸化窒素モジュレーター；オリゴヌクレオチド；プラチナ化合物；プロテインキナーゼＣインヒビター；タンパク質チロシンホスファターゼインヒビター；プリンヌクレオシドホスホリラーゼインヒビター；ｒａｆアンタゴニスト；情報伝達インヒビター；情報伝達モジュレーター；翻訳インヒビター；チロシンキナーゼインヒビター；及びウロキナーゼレセプターアンタゴニストを含むがこれに限定されない。

【0218】

いくつかの実施形態において、ここに記載したｓＮＡＧナノファイバ又はその組成物と組み合わせて用いる療法は、抗脈管形成剤である。抗脈管形成剤の限定されない例には、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、配合体、抗体（例えば、ヒト、ヒト化、キメラ、モノクローナル、ポリクローナル、Ｆｖｓ、ＳｃＦｖｓ、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ）２フラグメント、及び、これらの抗体結合フラグメント）であり、このような抗体は、脈管形成を低下させる又は抑制する、ＴＮＦ−α、核酸分子（例えば、アンチセンス分子又は三重螺旋）、有機分子、無機分子、及び、小分子に特異的に結合する。抗脈管形成剤の他の例は、米国公開番号２００５／０００２９３４Ａ１のパラグラフ２７７〜２８２において見ることができ、この文献の全てを参照としてここに組み込む。他の実施形態において、本発明に従って使用する療法は、抗脈管形成剤ではない。

【0219】

いくつかの実施形態において、ここに記載したｓＮＡＧナノファイバ又はその組成物と組み合わせて用いる療法は、抗炎症剤である。抗炎症剤の限定されない例には、非ステロイド抗炎症剤（ＮＳＡＩＤｓ）（例えば、セレコキシブ（ＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標））、ジクロフェナク（ＶＯＬＴＡＲＥＮ（登録商標））、エトドラク（ＬＯＤＩＮＥ（登録商標））、フェノプロフェン（ＮＡＬＦＯＮ（登録商標））、インドメタシン（ＩＮＤＯＣＩＮ（登録商標））、ケトララック（ＴＯＲＡＤＯＬ（登録商標））、オキサプロジン（ＤＡＹＰＲＯ（登録商標））、ナブメントン（ＲＥＬＡＦＥＮ（登録商標））、スリンダック（ＣＬＩＮＯＲＩＬ（登録商標））、トルメンチン（ＴＯＬＥＣＴＩＮ（登録商標））、ロフェコキシブ（ＶＩＯＸＸ（登録商標））、ナプロセン（ＡＬＥＶＥ（登録商標）、ＮＡＰＲＯＳＹＮ（登録商標））、ケトプロフェン（ＡＣＴＲＯＮ（登録商標））及びナブメトン（ＲＥＬＡＦＥＮ（登録商標）））、ステロイド抗炎症剤（例えば、グルココルチコイド、デキサメタゾン（ＤＥＣＡＤＲＯＮ（登録商標）））、コルチコステロイド（例えば、メチルプレドニゾロン（ＭＥＤＲＯＬ（登録商標）））、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン（ＰＲＥＤＮＩＳＯＮＥ（登録商標）及びＤＥＬＴＡＳＯＮＥ（登録商標））及びプレドニゾロン（ＰＲＥＬＯＮＥ（登録商標）及びＰＥＤＩＡＰＲＥＤ（登録商標）））、抗コリン作用薬（例えば、硫酸アトロピン、硝酸メチルアトロピン及び臭化イプラトロビウム）、ベータ２−アゴニスト（例えば、アブテロール（ＶＥＮＴＯＬＩＮ（登録商標）及びＰＲＯＶＥＮＴＩＬ（登録商標））、ビトルテロール（ＴＯＲＮＡＲＡＴＥ（登録商標））、レバルブテロール（ＸＯＰＯＮＥＸ（登録商標））、メタプロテレノール（ＡＬＵＰＥＮＴ（登録商標））、ピルブテロール（ＭＡＸＡＩＲ（登録商標））、テルブトライン（ＢＲＥＴＨＡＩＲＥ（登録商標）及びＢＲＥＴＨＩＮＥ（登録商標））、アルブテロール（ＰＲＯＶＥＮＴＩＬ（登録商標）、ＲＥＰＥＴＡＢＳ（登録商標）及びＶＯＬＭＡＸ（登録商標））、フォルモテロール（ＦＯＲＡＤＩＬ ＡＥＲＯＬＩＺＥＲ（登録商標））及びサルメテロール（ＳＥＲＥＶＥＮＴ（登録商標）及びＳＥＲＥＶＥＮＴ ＤＩＳＫＵＳ（登録商標）））、並びに、メチルキサンチン（例えば、テオフィリン（ＵＮＩＰＨＹＬ（登録商標）、ＴＨＥＯ−ＤＵＲ（登録商標）、ＳＬＯ−ＢＩＤ（登録商標）及びＴＥＨＯ−４２（登録商標）））が含まれる。

【0220】

ある実施形態において、ここに記載したｓＮＡＧナノファイバ又はその組成物と組み合わせて用いる療法は、アルキル化剤、ニトロソウレア、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、トポイソメラーゼＩＩインヒビター、又は、分裂抑制剤である。アルキル化剤は、ブスルファン、シスプラチン、カルボプラチン、コロルムブシル、シクロホスファミド、イフォスファミド、デカルバジン、メクロレタミン、メファレン及びテモゾロミドを含むがこれに限定されない。ニトロソウレアはカルムスチン（ＢＣＮＵ）及びロムスチン（ＣＣＮＵ）が含まれるが、これに限定されない。代謝拮抗剤には、５−フルオロウラシル、カペシタビン、メトトレキサート、ゲムシタビン、シタラビン及びフルダラビンが含まれるが、これに限定されない。アントラサイクリンには、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン及びミトキサントロンが含まれるが、これに限定されない。トポイソメラーゼＩＩインヒビターには、トポテカン、イリノテカン、エトピシド（ＶＰ−１６）及びテニポシドが含まれるが、これに限定されない。分裂抑制剤には、テキサン（パクリタキシル、ドセタキシル）及びビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン及びビノレルビン）が含まれるが、これに限定されない。

【0221】

いくつかの実施形態において、ここに記載したｓＮＡＧナノファイバ又はその組成物と組み合わせて用いる療法は、抗痛薬（例えば、鎮痛剤）である。いくつかの実施形態において、ここに記載したｓＮＡＧナノファイバ又はその組成物と組み合わせて用いる療法は、抗熱薬である。

【0222】

５．８ キット
ここに記載したｓＮＡＧナノファイバ組成物の１以上を含む医薬パック又はキットもまた、ここで提供する。このパック又はキットは、ここに記載した組成物を含む１以上の構成要素を充填した１以上の容器を含んでいてもよい。この組成物は、組成物が汚染されることなく容易に除去することができるように、防水及び殺菌された容器中に密封収容されていることが好ましい。容器を形成する材料は、アルミ箔、プラスチック又は容易に殺菌される他の従来の材料を含んでいてもよい。キットは、組成物の１回投与又は複数回投与のための材料を含むことができ、好ましくは、各投与のための材料が、防水及び殺菌された容器中に独立して提供されている。

【0223】

他の実施形態において、二重区画を有する容器を提供する。第１区画は、ここに記載した上記ｓＮＡＧナノファイバ組成物のいずれかを収容する一方、第２区画は、ｓＮＡＧナノファイバ組成物と組み合わせて使用する他の試薬のような他の活性剤を収容する。現場又は診療室において、患者に投与するために、第１区画内の組成物を第２区画内の試薬と容易に組み合わせることができる。

【0224】

キットは、また、ここに記載したｓＮＡＧナノファイバ組成物の１以上を投与するため、及び／又は、ｓＮＡＧナノファイバ組成物と組み合わせて使用するための他の試薬のような他の活性剤を投与するための、塗布器を含むことができる。一実施形態において、キットは、ｓＮＡＧナノファイバ組成物の局所投与のための塗布器を含む。ｓＮＡＧナノファイバ組成物の局所投与のための塗布器の例には、注射器、ヘラ、チューブ（スクイーズチューブ）及び綿棒が含まれるが、これに限定されない。

【0225】

さらに、救急使用又は軍使用のために設計したキットもまた、ハサミ、外科用メス、鉗子、止血用具、弾性又は非弾性包帯等のような、使い捨ての事前殺菌器具を含むことができる。

【0226】

このようなキット又はパックには、任意で、医薬品又は生物学的製品の製造、使用又は販売を統制する政府機関が規定する形式の注意書きを記載することができ、このような注意書きは、ヒトに投与するための製造、使用又は販売の機関による承認を反映する。例えば、キットは、ＦＤＡ承認に関する注意書き及び／又は使用上の注意を含むことができる。

【0227】

ここに包含するキットは、上述した適用及び方法において使用することができる。

【0228】

６．実施例
６．１ 実施例１：創傷治癒及びＡｋｔ１／Ｅｔｓ−１依存経路を介したディフェンシン発現を促進する海洋珪藻植物由来ｓＮＡＧナノファイバ
この実施例は、ｓＮＡＧナノファイバが、皮膚創傷治癒及びディフェンシン発現を促進すること、並びに、Ａｋｔ１→Ｅｔｓ１経路が、ｓＮＡＧナノファイバによる皮膚創傷治癒の調節において中心的役割を果たすことを実証する。

【0229】

６．１．１ 材料及び方法
ｓＮＡＧナノファイバ（特にタリデルム）を、海洋ポリマー技術により製造及び提供し、創傷治癒に適した絆創膏に成形した。野生型Ｃ５７Ｂｌａｃｋ及びＡｋｔ１欠損マウスを、サウスカロライナ医科大学の動物施設に保管した。８〜１２週齢の範囲の野生型及びＡｋｔ１欠損マウスを、５０％純酸素及び５０％イソフルレンガスにより麻酔した。マウスを傷つけた直後に、Ｎａｉｒ除毛ローションを背部に塗布し、不要な毛を除去した。生検切除穿孔器を用いて、背面の肌の４ｍｍ円形領域を除去した。０日目にタリデルムを各創傷部に配置するか、創傷部を処置せずに放置した。１、３、５及び７日目に、創傷部の撮影、測定及び８ｍｍ生検穿孔器を用いた切除を行い、創傷部とその周囲の皮膚が完全に除去されたことを裏付けた。タリデルム治療を行った及び行っていない野生型及びＡｋｔ１欠損マウスの創傷部を、Ｈ＆Ｅ及び免疫蛍光染色のために、パラフィン包埋した。

【0230】

パラフィン包埋切片を切断し、染色するために顕微鏡スライド上に配置した。スライドをキシレンで洗浄してパラフィンを除去し、段階的なアルコールシリーズを通して再水和した。その後、切片を０．１％ Ｔｒｉｔｏｎ×１００中でインキュベートし、浸透させた。切片を、沸騰した抗原賦活溶液中でインキュベートした。ヤギ一次抗体、β−ディフェンシン３ １：４００希釈液中でインキュベートする前に、１％動物血清を用いて固定した。その後、４℃の湿度チャンバ中、一晩、一次抗体中でインキュベートした。免疫蛍光ロバ−α−ヤギ４８８二次抗体 １：２００希釈液を用いた後、ＴＯＰＲＯ−３により核染色した。共焦点顕微鏡を用いて、画像を記録した。

【0231】

ヘマトキシリン及びエオシン染色を用いて、表皮、真皮、筋肉及び血管のような基本構造を可視化し、創傷の方向と大まかな位置を決定した。また、Ａｋｔ１に依存しない方法において、タリデルムにより刺激した細胞型を同定するために、Ｈ＆Ｅ染色を用いた。

【0232】

他の材料及び方法は、以下の図面の説明及び結果の欄に記載し、当業者に公知の方法に従って行った。

【0233】

６．１．２ 結果
ｓＮＡＧナノファイバによる、Ｅｔｓ１の上流レギュレータであるＡｋｔ１活性化の刺激。図１Ａは、ＮＡＧ及び血清欠乏ＥＣのｓＮＡＧ刺激に応答するリン酸化Ａｋｔのウエスタンブロット分析を示す。図１Ｂは、スクランブルコントロール又はＡｋｔ１ ｓｈＲＮＡレンチウイルスの何れかに感染したＥＣのＲＴ−ＰＣＲ分析、並びに、ローディングコントロールとしてのＥｔｓ１及びＳ２６の発現分析を示す。図１Ｃは、ｓＮＡＧナノファイバからＡｋｔ１、Ｅｔｓ１及びディフェンシンに信号を伝達する情報伝達経路を図示している。

【0234】

Ａｋｔ１欠損マウスにおける創傷治癒の遅延が、タリデルム（ｓＮＡＧ）治療により部分的に救済された。図２Ａは、タリデルムで治療した及び治療していない、負傷したＷＴ及びＡｋｔ１欠損マウスの代表的な画像を示す。図２Ｂは、負傷３日目の代表的なマウス皮膚切片のＨ＆Ｅ染色を示す。野生型及びＡｋｔ１の創傷切除物のＨ＆Ｅ染色は、ケラチン生成細胞の増殖及び移動のタリデルム依存増大を示した。破線は、創傷の縁部を超えるケラチン生成細胞増殖領域を示す。野生型及びＡｋｔ１治療創傷部の両方において、野生型及びＡｋｔ１コントロールと比較して、創傷の縁部を超える再上皮形成の証拠が見られた。このことは、タリデルムが、Ａｋｔ１経路から独立して、ケラチン生成細胞の補充を促進することを示している。タリデルムは、創傷の縁部を超える、表皮の完全な再上皮形成を誘引するが、野生型と比較して、下部組織における再血管新生は実質的に不足したままである。このことは、Ａｋｔ１動物における、相当量の出血と赤血球の浸潤の証拠である。

【0235】

ｓＮＡＧナノファイバは一次内皮細胞におけるサイトカイン及びディフェンシン発現を刺激する。図３Ａは、ａ−ディフェンシンに対する直接抗体を用いて、ｓＮＡＧで治療した又は治療していないＥＣの免疫組織化学を示す。図３Ｂは、ＥＣのナノファイバ治療がα−ディフェンシン１〜３の分泌をもたらすことを示す、ＥＬＩＳＡを現している。

【0236】

ｓＮＡＧナノファイバは、Ａｋｔ１依存態様において、一次内皮細胞のディフェンシン発現を刺激する。図４Ａ及び４Ｂは、ｓＮＡＧで治療した又は治療していない、Ｄ９８０５９（ＭＡＰＫインヒビター）、ウォルトマンニン（ＰＩ３Ｋインヒビター）、又は、スクランブルコントロール若しくはＡｋｔ１ ｓｈＲＮＡレンチウイルス感染により、治療した又は治療していない、血清欠乏ＥＣの量的ＲＴ−ＰＣＲ分析を示しており、示した遺伝子の発現を評価した。

【0237】

ｓＮＡＧナノファイバは、マウスのケラチン生成細胞における、β−ディフェンシン３の発現を刺激する。図５Ａは、３日目のＷＴ及びＡｋｔ１欠損動物からのパラフィン包埋マウス皮膚創傷切片における、β−ディフェンシン３及びインボルクリン抗体の免疫蛍光染色を示す。皮膚創傷治癒モデルを、ＷＴ及びＡｋｔ１欠損マウスの両方において作成し、ｉｎ ｖｉｖｏでタリデルムの効果を評価した。これらの発見は、Ａｋｔ１依存態様において、タリデルム治療動物におけるβ−ディフェンシン３の発現が増加したことを示す。創傷治癒においてディフェンシン発現を増加させるタリデルムの能力は、創傷感染の治療及び制御のための重要な意味を有している。図５Ｂは、ＮＩＨＩｍａｇｅＪ ソフトウェアを用いた、β−ディフェンシン３免疫蛍光染色の定量化を示す。図５Ｃは、β−ディフェンシン３及びＴＯＰＲＯ−３で治療した及び治療していない、ＷＴ及びＡｋｔ１欠損ケラチン生成細胞の、免疫蛍光染色を示す。ＷＴ及びＡｋｔ１のタリデルム治療創傷において、βディフェンシン３の緑色染色が増加したことに注目する。創傷切片の免疫蛍光標識は、Ａｋｔ１依存態様において、タリデルム治療創傷におけるβ−ディフェンシン３の発現の増加が示されたことを説明する。Ａｋｔ１治療創傷において、β−ディフェンシン３の相応の増加が示されたけれども、野生型治療創傷においては、より顕著な増加が示された。このことは、β−ディフェンシン３発現の増加は、ナノファイバの適用のみではなく、Ａｋｔ１経路に少なくとも部分的に依存することを示している。β−ディフェンシン３発現は、ケラチン生成細胞特異的な発現を示すケラチン生成細胞に限定されると考えられる。

【0238】

Ａｋｔ１依存転写因子結合部位。図６は、Ａｋｔ１依存転写因子結合部位の模式図を示す。Ｇｅｎｏｍａｔｉｘソフトウェアを用いて、転写開始部位の５００塩基対上流において、ＤＥＦ１、４及び５のｍＲＮＡにおける保存部位を分析した。

【0239】

６．１．３ 結論
提供したデータは、Ｅｔｓ１のｓＮＡＧナノファイバ刺激が、これらのナノファイバによるＡｋｔ１の活性化によってもたらされることを示す。ナノファイバ治療は、ＩＬ−１（Ｅｔｓ１の標的として知られている）、ＶＥＧＦ及び種々のディフェンシン（β３、α１、α４及びα５）のような細胞内補給を含む、遺伝子発現の顕著な増加をもたらした。小さい抗細菌ペプチドが化学誘引物質として作用することが近年示されている。ｓｈＲＮＡを用いてノックダウンした、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ１経路及びＡｋｔ１の両方の薬理学的抑制は、これらの化学走化性因子の発現の減少をもたらした。Ａｋｔ１欠損マウスは、タリデルムナノファイバにより部分的に救済される、創傷治癒が遅れた表現型を示した。タリデルムで治療した創傷は、また、Ａｋｔ１依存ディフェンシン発現の増加も示した。

【0240】

タリデルムで治療した創傷におけるβ−ディフェンシン３発現及びケラチン生成細胞の増殖は、効果的な創傷治癒製品としてのタリデルムの有益な使用を実証する。タリデルムは、ｓＮＡＧナノファイバの機能におけるＡｋｔ１の本質的な役割を提案する、Ａｋｔ１に依存する態様でのケラチン生成細胞における抗細菌ペプチド発現の増加に作用する。このことは、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ１経路の抑制及びｓｈＲＮＡを用いたＡｋｔ１のノックダウンが化学走化性因子の発現低下をもたらす、実験室での他の研究の結果（Ｂｕｆｆ、Ｍｕｉｓｅ−Ｈｅｌｍｅｒｉｃｋｓ、未発表）と相互に関連がある。

【0241】

β−ディフェンシン３発現の増加は、Ａｋｔ１依存性であるが、８ｍｍ創傷切除部のＨ＆Ｅ染色は、タリデルムが創傷部の再上皮形成において、Ａｋｔ１から独立して作用することを示した（図２Ｂ）。新しいケラチン生成細胞は創傷縁部の全体にかかっているにも関わらず、下部組織では、血管成長において同様の刺激が実証されなかった。このことは、Ａｋｔ１欠乏が、血管の漏れ及び真皮中の大量の浮遊赤血球の責任であることを示唆している。このことは、血管新生の増加において、タリデルムはＡｋｔ１経路依存性であることを提案している。

【0242】

要約すると、（ｉ）ｓＮＡＧナノファイバ（タリデルムのような）が脈管形成を部分的に刺激することによって、創傷治癒を促進する；（ｉｉ）内皮細胞のｓＮＡＧナノファイバ治療が細胞運動性及びサイトカイン分泌の変化を導くＡｋｔ１／Ｅｔｓ１依存経路を活性化する；（ｉｉｉ）タリデルムで治療した創傷が、Ａｋｔ１に依存した態様において、β−ディフェンシン３発現の増加を示す；（ｉｖ）Ａｋｔ１欠損動物のタリデルム治療が、ケラチン生成細胞増殖／移動の顕著な増加を導き、この表現型を部分的に救済する；及び（ｖ）バイオインフォマティクス分析が、Ｅｔｓ１は創傷治癒及びサイトカイン分泌の増加を導くｓＮＡＧ活性化経路におそらく含まれることを示す。

【0243】

これらの発見を総合して、ｓＮＡＧナノファイバによる皮膚創傷治癒の調節におけるＡｋｔ１→Ｅｔｓ１経路の中心的役割を提案し、創傷治癒を強調するための新規で効果的な方法としてのこれらのナノファイバの使用を支持する。

【0244】

６．２ 実施例２：ｓＮＡＧナノファイバは、ディフェンシン発現を増加させ、動的閉創を向上させ、かつ、間接的ディフェンシン依存抗細菌効果を有する。

【0245】

この実施例は、ｓＮＡＧナノファイバが、間接的及びディフェンシン依存的に、ｉｎ ｖｉｖｏでのスタフィロコッカスアウレアスに対する強力な抗細菌効果を有することを実証する。この実施例は、また、ｓＮＡＧナノファイバが、Ａｋｔ−１に依存する態様において、ｉｎ ｖｉｔｒｏのケラチン生成細胞及び内皮細胞並びにｉｎ ｖｉｖｏの皮膚創傷におけるディフェンシン発現を誘引し、かつ、閉創速度を向上させることを示す。

【0246】

６．２．１ 材料及び方法
薬理学的抑制、ＥＬＩＳＡ：ヒト臍帯静脈ＥＣ（Ｌｏｎｚａ）を内皮基礎培地２（Ｌｏｎｚａ）中で、５％二酸化炭素雰囲気下、３７℃に維持した。内皮基礎培地２（ＥＭＢ２）を、Ｌｏｎｚａの手順に記載されたＳｉｎｇｌｅＱｕｏｔｓでＥＣ成長培地２に添加し、かつ、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を添加した。血清飢餓を、８０〜９０％コンフルエントで、０．１％ウシ胎仔血清（Ｖａｌｌｅｙ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ）を添加したＥＢＭ２において２４時間行った後、殺菌水中の、高度に生成されたｐＧｌｃＮＡｃ（５０μｇ／ｍＬ）ナノファイバ（ｓＮＡＧ）（Ｍａｒｉｎｅ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｄａｎｖｅｒｓ、Ｍａｓｓ．、 ＵＳＡ提供）で刺激した。この研究において用いたｐＧｌｃＮＡｃ珪藻植物由来ナノファイバは、より長い形態（ＮＡＧ）由来の短い生体分解性のファイバであり、平均長さが４〜７μｍ、及び、ポリマー分子量が約６０，０００Ｄａである。ＰＤ０９８０５９（５０μＭ）又はウォルトマンニン（ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ）（１００μＭ）を用いた抑制のために、ｓＮＡＧ（５０μｇ／ｍＬ）で３時間刺激する前に、４５分間細胞を前治療した。

【0247】

統計分析：各量的実験を、少なくとも３重で、少なくとも３回独立して行った。全ての統計分析を、マイクロソフトＥｘｃｅｌの計算手段、標準偏差及びｓｔｕｄｅｎｔ ｔ−ｔｅｓｔを用いて行った。

【0248】

レンチウイルス感染：Ａｋｔ１に対するＭｉｓｓｏｎ ｓｈＲＮＡレンチウイルスコンストラクトを、Ｓｉｇｍａ／Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。スクランブルｐＬＫＯ．１ｓｈＲＮＡベクターをＡｄｄｇｅｎｅから購入した。レンチウイルスを２９３Ｔ細胞中で増殖させ、上記添加したＤＭＥＭ中で維持した。レンチウイルス製造を、Ａｄｄｇｅｎｅから購入したｐｓＰＡＸ２及びｐＭＤ２．Ｇパッケージングベクターを用いて、Ａｄｄｇｅｎｅからのレンチウイルス分子製造手順に従って行った。標的細胞の感染のために、７．５×１０^５個の細胞を１００ｍｍ^２プレート上に載置し、一晩インキュベートした。翌日、細胞を、１μｇ／ｍＬポリブレンの終濃度で、スクランブルコントロール又はＡｋｔ１ｓｈＲＮＡレンチウイルスのいずれかに形質導入した。形質導入後、内皮細胞を一晩血清飢餓とし、ｓＮＡＧ（５０ｇ／ｍＬ）で３時間刺激した。全ての感染をＲＴ−ＰＣＲによる適切なノックダウンにより観察した。

【0249】

ＲＴ−ＰＣＲ：半量的ＲＴ−ＰＣＲのために、生産者の取扱説明書に従って、ＲＮＡを、ＲＮＡｓｏｌ（ＴＥｌｔｅｓｔ，Ｉｎｃ．）を用いて抽出した。
生産者の取扱説明書にしたがって、ｃＤＮＡをＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ Ｆｉｒｓｔ Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）により、Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）を用いて２μｇ全長ＲＮＡから合成した。ＰＣＲ反応物は、ｃＤＮＡ及び１．２５μＭの適切なプライマー対（Ｓｉｇｍａ−Ｐｒｏｌｉｇｏ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）の同量を含んでいた。この分析で使用した全てのプライマー配列を下記表に示す。

【0250】

【表1】

【0251】

サイクル条件は、９４℃で５分間；９４℃で１分間を３０〜３５サイクル、５５〜６５℃（プライマーＴｍに基づく）で１分間、７２℃で１分間；７２℃で７分間とし、４℃で冷却した。使用した各プライマー対のためのサイクル数を、分析の線形範囲内になるように、経験的に決定した。全ての半定量的ＲＴ−ＰＣＲを、内部コントロールとしてリボソームタンパク質サブユニットＳ２６プライマーを用いて行った。反応産物をＢｉｏＲａｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）において可視化した。いずれもＳｔｒａｔａｇｅｎｅから購入したＢｒｉｌｌｉａｎｔ ＣＹＢＲ ｇｒｅｅｎ ＱＰＣＲ ｋｉｔとＭｘ３０００Ｐ Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｓｙｓｔｅｍとを組み合わせて使用し、リアルタイムＰＣＲを行った。リボソームサブユニットＳ２６を検出するプライマーを内部コントロールとして用いた。

【0252】

切除創傷治癒モデル：野生型Ｃ５７Ｂ１／６及びＡｋｔ１−／−[４３]を、全ての実験において用いた。Ａｋｔ１欠損動物を、全タンパク質の発現を妨げる、翻訳開始部位への挿入変位誘発法を用いて作製した。８〜１２週齢の麻酔したオスマウス成体に損傷を与えた。２つの完全な厚さ皮膚創傷を、各横腹に同一の２つの創傷を形成するために、４ｍｍ生検穿孔器（Ｍｉｌｔｅｘ）を用いて形成した。Ｏ_２／イソフルラン吸入麻酔器（ＶｅｔＥｑｕｉｐ，Ｉｎｃ．）を用いてマウスを麻酔した。イソフルランを誘導中に４％、手術中に２％用いた。手術前に、毛を脱毛し、洗浄して７０％エタノールで殺菌した。創傷部に対して、蒸留水で湿らせたｓＮＡＧ膜で治療又は治療せずに放置の何れかを行った。３日目及び５日目に、動物を安楽死させ、８ｍｍ生検穿孔器（Ｍｉｌｔｅｘ）を用いて、周囲の皮膚を含めて全ての創傷部を回収した。創傷部を４℃で一晩、４％パラフォルムアルデヒドで固定し、パラフィン包埋して分析のために切り出した。

【0253】

ヘマトキシリン及びエオシン染色（Ｈ＆Ｅ）：全てのＨ＆Ｅ染色を、サウスカロライナ医科大学の組織学中央施設の、再生医療及び細胞生物学部門において行った。簡単に、切片をキシレン中で洗浄し、段階的なアルコールシリーズを通して再水和し、ヘマトキシリン中の後酸アルコール中に載置した。サンプルをアンモニア水中に載置し、エタノールですすぎ、段階的なアルコールを通して脱水する前にエオシンに暴露し、キシレンで洗浄した。切片をＣｙｔｏｓｅａｌ−ＸＹＬ（Ｒｉｃｈａｒｄ−Ａｌｌａｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて標本化した。Ｈ＆Ｅ切片を、オリンパスＢＸ４０顕微鏡（４ｘ対物レンズ、０．１３）を用いて可視化し、オリンパスカメラ（モデルＤＰ２５）及びＤＰ２−ＢＳＷ取得ソフトウェアを用いて記録した。

【0254】

細菌接種、組織グラム染色、コロニー形成ユニット定量化：８〜１２週齢のオスマウスに、上述と同様に損傷を与えた。スタフィロコッカスアウレアス（ＡＴＣＣ２５９２３）の単一コロニーを選別し、３７℃で一晩培養し、ＯＤ_６００＝０．５３の吸光度に調節した。Ｓ．アウレアス １ｍＬを、１０，０００ｒｐｍで遠心し、殺菌ＰＢＳ中に再懸濁し、各創傷に摂取させるために１５ｍＬを用いた。接種後３０分間、治療グループにｓＮＡＧ膜を塗布する。損傷を与えてから３及び５日後にマウスを安楽死させ、８ｍｍ生検穿孔機を用いて創傷部を回収した。１動物あたり１つの創傷部を、４℃で一晩４％パラフォルムアルデヒド中に固定し、他の創傷部を、細菌定量化（下記参照）のために、抗生物質を含まないＬＢ培地で培養及び載置した。組織グラム染色のための創傷部を、パラフィン包埋し、切片化した。切片をキシレンで洗浄し、アルコールシリーズを通して再水和し、生産者により記載された取り扱い説明書にしたがって、組織グラム染色（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いて染色した。

【0255】

培養のために、創傷切片を０．５ｍＬの細菌培地に載置し、３７℃で３０分間振とうさせながらインキュベートした。コロニー形成ユニット（ＣＦＵ）を、３７℃で一晩載置した希釈シリーズを用いて定量化した。１プレートあたり／１希釈率あたりのコロニー数を計測し、ＣＦＵ／ｍＬを算出した。

【0256】

ｓＮＡＧ治療した細菌培養物のＣＦＵ／ｍＬを決定するために、溶液中のＳ．アウレアス培養物を、種々の濃度のｓＮＡＧ（１０．８ｍｇ／ｍＬのｓＮＡＧを１０μＬ及び２０μＬ）で、３時間処理した。培養物を３７℃で一晩載置した後、ＣＦＵ／ｍＬを決定した。

【0257】

β−ディフェンシン３ペプチド適用：３つの試験濃度（１．０μＭ、２．５μＭ、５．０μＭ）の生物学的に活性なヒトβ−ディフェンシン３ペプチド（Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， Ｉｎｃ．）について、上述した感染創傷治癒モデルにおける細菌成長に対する効果を試験した。各濃度において細菌成長に対して負に影響したため、最も低濃度を分析のために選択した。各創傷をＳ．アウレアスに感染させた後、１０μＬのペプチドを適用した。３日後、創傷を回収し、区分化のために包埋してグラム染色、又は、上述の通りＣＦＵ／ｍＬ定量化のために培養した。

【0258】

β−ディフェンシン３抗体遮断：野生型オスマウスに損傷を与え、上述したように、１５μＬのＳ．アウレアスに感染させた。接種後、一方の創傷部を０．２μｇ／ｍＬのβ−ディフェンシン３抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）で治療し、他方を０．２μｇ／ｍＬの標準ヤギＩｇＧコントロール抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）で治療した。ｓＮＡＧ膜を抗体治療後０日目の全てのマウスに適用した。抗体を２４時間毎に適用した。マウスを３日目に安楽死させ、８ｍｍ生検穿孔機を用いて創傷部を回収した。創傷部を４℃で一晩４％パラフォルムアルデヒド中に固定し、パラフィン包埋して切片化し、組織グラム染色を用いて分析した。ＣＦＵ／ｍＬ定量化を、上述したように、３日目に回収した創傷部において行った。

【0259】

免疫蛍光、顕微鏡：パラフィン包埋組織切片をキシレン及び段階的なアルコールシリーズを通して再水和した。切片を０．０１％ Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００で治療し、抗原が明らかな溶液（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いて、５分間加圧調理器内で抗原回復の対象とし、冷却した。皮膚切片を、β−ディフェンシン３ヤギポリクローナル抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）、インボルクリンウサギポリクローナル抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）及びＴＯ−ＰＲＯ３ヨウ素（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）で標識した。切片を、４℃で一晩、一次抗体中でインキュベートし、かつ、室温で１時間、適切な二次免疫蛍光抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でインキュベートした。各抗体のコントロール切片を一次抗体なしで染色した。組織切片を、オリンパスＦｌｕｒｏＶｉｅｗ共焦点レーザー顕微鏡（モデルＩＸ７０）を用いて可視化し、オリンパスカメラ（モデルＦＶ５−ＺＭ）及びＦｌｕｏｖｉｅｗ５．０取得ソフトウェアを用いて、周囲温度で記録した。全ての組織切片を、６０×油浸レンズ（オリンパス油浸油）を用いてイメージ化した。

【0260】

ＨＵＶＥＣｓを培地中で、血清飢餓又はｓＮＡＧの５時間治療のいずれかを行い、α−ディフェンシン５（ＦＩＴＣ）、β−ディフェンシン３（Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ）又はＴＯＰＲＯ３（Ｂｌｕｅ）に対する抗体で染色した。免疫蛍光顕微鏡を用いて画像を得た。
細胞培養物のディフェンシン発現をＺｅｉｓｓ Ａｘｉｏｖｅｒｔ １００Ｍ共焦点顕微鏡を用いて可視化し、水を媒体として用いて、ＬＳＭ ５１０カメラ（Ｚｅｉｓｓ Ｆｌｕｏｒ ６３ｘＷ／１．２Ａ対物）を用いて、周囲温度で記録した。

【0261】

ウエスタンブロット分析：内皮細胞をｓＮＡＧ（５０μＬ／ｍＬ）で刺激する前に、与えられた時間経過するまで血清飢餓にした。その後、細胞を溶解し、ウエスタンブロット分析の対象とした。ウエスタンブロット分析に用いた抗体は、下記の通りである：ＰＩ３Ｋの抗−ｐ８５サブユニット及びリン酸化特異的Ａｋｔ抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）。

【0262】

６．２．２ 結果
６．２．２．１ ｓＮＡＧで刺激したときディフェンシンを発現及び分泌するケラチン生成細胞及び内皮細胞
この実施例は、ｓＮＡＧ治療がディフェンシン、先天性免疫反応の一部である抗細菌小ペプチドの発現を調節することを実証する。

【0263】

ｉｎ ｖｉｔｒｏでディフェンシン発現におけるｓＮＡＧ治療の効果を調査するために、培地中のヒト臍帯静脈内皮一次細胞を用いた。内皮細胞は、ｓＮＡＧで刺激した時、α型及びβ型の両方のディフェンシンを発現した。図７Ａに示すように、ｓＮＡＧで治療した内皮細胞は、刺激１時間以内に、β−ディフェンシン３及びα−ディフェンシン１ ｍＲＮＡ発現の上方制御を示した。ｓＮＡＧ治療によるα−ディフェンシン４及び５の同様の上方調節もまた観察した（データ示さず）。２５以上の異なるディフェンシン遺伝子を含むカスタム遺伝子アレイを、一次内皮細胞中のα型ディフェンシンの発現、及び、ケラチン生成細胞中のβ型ディフェンシンの発現を確認するために用いた。内皮細胞のｓＮＡＧ刺激が、α−ディフェンシン１、４及び５、並びに、β−ディフェンシン３について、特異的に発現を増加させることが示された。さらに、ヒトケラチン生成細胞のｓＮＡＧ刺激は、β−ディフェンシン様遺伝子、表１に列挙したいくつかの発現を増加させた。これらの発見は、ｓＮＡＧ刺激に応じた、少なくとも３つのα−ディフェンシン遺伝子及びβディフェンシン３の、一次内皮細胞中での発現、並びに、複数のβ−ディフェンシン遺伝子の一次ケラチン生成細胞中での発現を示唆する。

【0264】

表Ｉ：ｓＮＡＧにより情報調節される多数のディフェンシン遺伝子を明らかにする遺伝子アレイ分析

【0265】

【表2】

【0266】

ｓＮＡＧ依存ディフェンシン発現がタンパク質レベルでも起こっているか否かを試験するために、ｓＮＡＧ刺激内皮細胞を、α及びβの両方のディフェンシンに対する抗体を用いた免疫蛍光の対象とした。図７Ｂに示すように、β−ディフェンシン３及びα−ディフェンシン５の両方が、この細胞型において、ｓＮＡＧ刺激に対して上方制御された。しかしながら、ｓＮＡＧによる一次ヒトケラチン生成細胞（ＨａＣａｔ）の刺激は、α−ディフェンシンの発現増加を引き起こさず、β−ディフェンシン３の発現増加のみを引き起こした（図７Ｃ）。総合すると、これらの実験は、ｓＮＡＧ刺激は、一次ケラチン生成細胞及び一次内皮細胞の両方において、ディフェンシンペプチドの上方制御をもたらすことを示唆する。

【0267】

６．２．２．２ ｓＮＡＧ−依存ディフェンシン発現のＡｋｔ１の要求
近年発表されたデータは、一次内皮細胞のｓＮＡＧ刺激が、インテグリン活性化、Ｅｔｓ１発現及びＭＡＰキナーゼ活性化の増加をもたらすことを示している（Ｖｏｕｒｎａｋｉｓ，Ｊ．Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｊ Ｖａｓｃ Ｒｅｓ．４５（３）：２２２−３２）。この発見は、内皮細胞及びショウジョウバエにおいて、Ａｋｔ１をＥｔｓ１の上流に位置付ける。ディフェンシン発現に寄与する情報伝達経路の決定を開始するために、ｓＮＡＧ刺激前に、内皮細胞を血清飢餓とし、ＰＩ３Ｋ（ウォルトマンニン）又はＭＡＰキナーゼ（ＰＤ０９８０５９）に対する薬理的インヒビターで前処理した。量的リアルタイムＰＣＲ分析は、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路又はＭＡＰキナーゼ経路の何れかの抑制後に、α−ディフェンシン１のｍＲＮＡレベルが、大きく減少したことを示した（図８Ａ）。β−ディフェンシン３のＲＴ−ＰＣＲ分析は、また、これらの経路の抑制により同様に減少することを示した（図８Ｂ）。短期間の内皮細胞のｓＮＡＧ治療が、Ａｋｔ１のリン酸化、その活性化の標準指標を導いた（図８Ｃ）。Ａｋｔ１が確かにディフェンシン発現に要求されることを確認するために、Ａｋｔ１に対するｓｈＲＮＡのレンチウイルス運搬を用いた。スクランブルコントロール（ＳＣＲ）又はＡｋｔ１ ｓｈＲＮＡに感染させた後、ｓＮＡＧで治療した、血清欠乏内皮細胞の定量的ＲＴ−ＰＣＲによって、Ａｋｔ１発現がｓＮＡＧ依存α−ディフェンシン発現に要求されることを確認した（図８Ｄ）。βディフェンシンは、内皮細胞において発現することが知られているので、Ａｋｔ１に対するｓｇＲＮＡのレンチウイルス運搬を、ヒトケラチン生成細胞（ＨａＣａｔ）において使用した。スクランブルコントロール（ＳＣＲ）に感染した血清欠乏ケラチン生成細胞のｓＮＡＧ治療は、Ａｋｔ１ノックダウンにより排除したβ−ディフェンシン３発現の顕著な増加を引き起こした（図８Ｅ）。これらの結果は、ｓＮＡＧ治療が内皮細胞におけるＡｋｔ１を活性化することを説明し、ｓＮＡＧ依存ディフェンシン発現が内皮細胞及びケラチン生成細胞の両方において、Ａｋｔ１を要求することを示唆している。

【0268】

６．２．２．３ ｉｎ ｖｉｖｏでのディフェンシン発現を増加させる皮膚創傷のｓＮＡＧ治療
ｉｎ ｖｉｖｏでのディフェンシン発現のＡｋｔ１依存を確認するために、切除創傷治癒モデルにおいて、野生型及びＡｋｔ１欠損動物を用いた。多くの哺乳動物（ヒト、ウサギ及びハムスター）の白血球はα−ディフェンシンを発現するが、マウス白血球はα−ディフェンシンを発現しない。それゆえに、これらのマウスモデルにおいて、β−ディフェンシン発現に注目した。生物分解性の薄膜のような、乾燥形態のｓＮＡＧを用いた３日間の皮膚創傷の治療は、野生型動物のケラチン生成細胞におけるβ−ディフェンシン３発現の統計的に顕著な増加をもたらした（図９Ａ）。インボルクリン（Ｗａｔｔ，Ｆ．Ｍ．，１９８３，Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．８１（１ Ｓｕｐｐｌ）：１００ｓ−３ｓ）染色（赤）を、ケラチン生成細胞の細胞層を標識するために用い、β−ディフェンシン３の発現が表皮層に制限されていることが示された。ｓＮＡＧ発現がＡｋｔ１に依存しているか否かを評価するために、Ａｋｔ１欠損動物モデルを用いて同様の分析を行った。ｓＮＡＧ膜で治療したＡｋｔ１欠損動物からの創傷部において、β−ディフェンシン３発現誘導の顕著な減少が示された（図９Ａ）。β−ディフェンシン３を発現する表皮層をより良く可視化するために、図９Ｂは、３日目に回収したｓＮＡＧ治療野生型創傷部の代表的な画像を示している。皮膚創傷のｓＮＡＧ治療は、主に皮膚の基底層の上におけるβ−ディフェンシン３の発現を誘導する（図９Ｂ）。図９ｃに示す量的分析は、ｓＮＡＧ治療した野生型動物におけるβディフェンシン３の発現が約５倍増加したこと、及び、Ａｋｔ１がこの増加に要求されることを示した。

【0269】

６．２．２．４ ＷＴ動物における閉創速度を上げるｓＮＡＧ治療
先の結果は、糖尿病マウスモデルにおける閉創速度が、ｓＮＡＧ治療に反応して上がったことを示した。ｓＮＡＧが、野生型動物において同様に影響することを試験した。膜の形状のｓＮＡＧで治療した又は治療しないままとした切除創傷を野生型動物から作製した。組織切片を損傷を与えてから１、３及び５日後に取得し、Ｈ＆Ｅ染色の対象にした。図１０に示すように、野生型創傷のｓＮＡＧ治療は、損傷を与えて３日後には、実線に示されるように、完全な閉創をもたらした。これは、コントロールの創傷よりも２日間早く起こった。Ａｋｔ１欠損動物は閉創の遅れを示し、これらの動物は、損傷を与えてから７日までは、完全に創傷が閉じなかった。Ａｋｔ１欠損動物の閉創の遅れは、ｓＮＡＧ治療により救済されなかった（データ示さず）。これらの発見は、ｓＮＡＧはディフェンシン発現を誘引するだけではなく、野生型マウスにおける創傷治癒速度も上げる、新規で効果的な療法であり得ることを示唆する。

【0270】

６．２．２．５ ｓＮＡＧのＳ．アウレアスに対する抗細菌効果
ディフェンシンペプチドは、グラム陽性及びグラム陰性細菌に対して活性な抗細菌特性を有することが知られている。ｓＮＡＧによる内皮細胞の治療は、ディフェンシン発現（α−及びβ−の両方）を増加させ、ｓＮＡＧの皮膚創傷の治療は、ｉｎ ｖｉｖｏでのβ−ディフェンシン３の発現を大幅に増加させるので、細菌感染創傷におけるｓＮＡＧ治療の抗細菌効果を分析した。

【0271】

ｓＮＡＧが皮膚創傷における細菌量を減少させるか否かを決定するために、野生型及びＡｋｔ１欠損動物を、皮膚創傷治癒、その後のスタフィロコッカスアウレアス感染の対象にした。感染した創傷部を感染３及び５日後にｓＮＡＧ治療した、又は、治療しないままとした。図１１Ａ及び１１Ｂに組織グラム染色を示すように、ｓＮＡＧで治療した野生型動物の創傷においては、治療していない創傷と比較して、損傷を与えて５日後のグラム陽性染色が顕著に減少した。対照的に、損傷を与えてから５日後の、Ａｋｔ１欠損動物の治療していない創傷部由来のグラム染色組織は、グラム陽性を染色する好中球の蓄積を示し（図１１Ｂ）、これらの動物における細菌消滅能力の欠如、これらがｓＮＡＧ治療によって救済されないことが示された。これらの発見は、Ａｋｔ１欠損動物は、ｓＮＡＧ治療により救済されない免疫クリアランス機構の欠陥を有することを示唆している。

【0272】

コロニー形成ユニット（ＣＦＵ）におけるｓＮＡＧ特異的細菌変化を定量するために、野生型及びＡｋｔ１欠損マウスの両方において、ｓＮＡＧ治療した又は治療していない感染創傷部を回収し、培養した。図１１に示すように、損傷が与えられてから５日後に、ｓＮＡＧで治療した野生型動物における細菌数が顕著に減少した（１０倍）。しかしながら、Ａｋｔ１欠損動物において検出された細菌数は、野生型と比較して少なかったが、ｓＮＡＧ治療は、Ａｋｔ１欠損動物における細菌の絶対数にあまり影響しなかった。感染３日後に、ｓＮＡＧで治療した野生型マウスにおけるＣＦＵが、治療していないコントロールと比較して、同様に１０倍減少した（図１１Ｄ）。ｓＮＡＧで治療したＡｋｔ１欠損マウスは、治療していないＡｋｔ１欠損マウスと比較して、ＣＦＵが２倍減少した。一般に、Ａｋｔ１欠損動物は、創傷部の細菌数がより低く、ディフェンシン発現に加えて、他の作用にＡｋｔ１依存効果が反映されている可能性がある。これらの発見は、ｓＮＡＧ治療が、野生型マウスにおける感染した皮膚創傷における細菌数を顕著に減少させるが、Ａｋｔ１欠損マウスではその効果がなく、ディフェンシンが抗細菌反応を媒介する可能性を示唆していることを示している。

【0273】

ｓＮＡＧ治療の抗細菌効果が、細菌成長又はその生存率に対するナノファイバの直接的な効果のためではないことを示すために、Ｓ．アウレアス細菌培養物を、ｓＮＡＧの異なる量の溶液で３時間処置し、コロニー形成ユニットを決定した。図１１Ｅに示すように、ｓＮＡＧ治療は、Ｓ．アウレアスの成長に対して直接的な効果を有しておらず、ｓＮＡＧが細菌成長を直接的に抑制せず、ディフェンシンの上方制御を介して作用し得ることを示している。

【0274】

６．２．２．６ ディフェンシンペプチドの添加が模倣するｓＮＡＧの抗細菌効果
ディフェンシンペプチドの添加が、ｓＮＡＧ治療により示されるのと同様に細菌感染を阻止できるか否かを決定するために、野生型マウスに損傷を与え、上述したようにＳ．アウレアスに感染させた後、３日間、生物学的に活性なヒトβ−ディフェンシン３ペプチド（１．０μｍ）で治療した。組織生検を組織グラム染色を用いて染色し、ＣＦＵを定量した。図１１Ｆ〜Ｇは、これらの実験結果を示している。β−ディフェンシン３ペプチドで治療した感染マウスは細菌数が減少し、生存細菌は、ｓＮＡＧで治療した野生型マウスで示されたのと同様に、約７．５倍減少した（図１１Ｇ）。

【0275】

ディフェンシン発現が誘引されるメカニズムの１つは、細菌ＬＰＳによる刺激を通してであり、Ｔｏｌｌ様レセプターの活性化を通してである可能性もある（Ｓｅｌｓｔｅｄ，Ｍ．Ｅ． ａｎｄ Ａ．Ｊ．Ｏｕｅｌｌｅｔｔｅ，２００５，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．６（６）：５５１−７．）。試験期間内に細菌感染単独でβ−ディフェンシン発現を誘引し得るか否かを試験するために、損傷を与えてから３日後に、野生型動物からの感染した創傷におけるβ−ディフェンシンの発現を評価した。図１２Ａに示すように、細菌感染単独では、ｃＮＡＧ治療において示されたのと同様の、感染から３日以内のβ−ディフェンシンの発現は誘引されなかった。しかしながら、野生型動物においては、感染した創傷のｓＮＡＧ治療が、同様の期間内のβ−ディフェンシンの発現を約３倍〜５倍増加させた（図１２Ｂ）。これらの発見は、ｓＮＡＧ治療が、Ｓ．アウレアスに感染した創傷において顕著な細菌駆除をもたらすディフェンシン発現を急速に誘引することを示している。

【0276】

６．２．２．７ ｓＮＡＧの抗細菌効果を阻害するβディフェンシン３に対する抗体
ディフェンシンは分泌されたタンパク質であるので、本発明者らは、β−ディフェンシン３に対する抗体が抗細菌活性を阻害する可能性があるという仮説を立てた。この仮説を試験するために、上述したように創傷部を作製し、Ｓ．アウレアスに感染させ、ｓＮＡＧで治療した。創傷部を、β−ディフェンシン３抗体又はアイソタイプコントロールの何れかを、３日間、１日１回適用して処置した。創傷切片を得て、グラム陽性細菌のために染色した。図１３Ａに示すように、β−ディフェンシン抗体で治療した創傷由来の切片は、アイソタイプコントロール抗体で治療したものよりもグラム陽性細菌を多く有していた。示した各切片は、痂皮直下の創傷領域由来であった。これらの創傷におけるＣＦＵの定量化は、Ｓ．アウレアス感染創傷におけるＳＮＡＧ治療前のβ−ディフェンシン３の中和は、細菌数の顕著な増加をもたらすことを示した。ＩｇＧアイソタイプコントロールで処置した動物は、生存細胞が約５倍減少した（図１３Ｂ）。総合すると、これらの結果は、ｓＮＡＧ治療が創傷治癒速度を上げることのみならず、内因性抗細菌反応もまた促進し、創傷感染を減少させると同時に早朝治癒を強調する新規な療法としてのこのナノファイバの使用を支持することが示された。

【0277】

６．２．３ 結論
ここに記載した発見は、海洋珪藻植物由来のナノファイバであるｓＮＡＧが、創傷感染を減少させると同時に創傷治癒を強調する、新規で効果的な方法として使用し得ることを証明する。このデータは、このＦＤＡ承認済みの材料が、現時点では止血剤として使用されているが、一次内皮細胞におけるα型及びβ型の両方のディフェンシンの発現を刺激し、一次ケラチン生成細胞においてβ型ディフェンシンの上方制御を刺激することを証明する。

【0278】

ディフェンシンは、先天性免疫システムの必須成分である。これらのペプチドは、グラム陽性及び陰性細菌、真菌並びに他のウイルスに対して活性な、抗細菌特性を有している。ディフェンシンは、小さく（３〜４ｋＤａ）、システインリッチなカチオン性ペプチドであり、哺乳動物、昆虫及び植物において見られ、そのジスルフィド結合のパターンに基づいて異なるファミリー（α、β及びθ）に分類される。αディフェンシンは、好中球に特異的であると考えられ、非常に高濃度で見られる（総細胞タンパク質の約５〜７％を含む）（Ｇａｎｚ，Ｔ． ａｎｄ Ｒ．Ｉ．Ｌｅｈｒｅｒ，１９９４，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．６（４）：５８４−９）。また、αディフェンシンは、抗細菌反応中に分泌される（Ｇａｎｚ，Ｔ．，１９８７，Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．５５（３）：５６８−７１）。ウサギ歯槽マクロファージは、ウサギ好中球に匹敵するレベルのα−ディフェンシンを有していることも示されている（Ｇａｎｚ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４３（４）：１３５８−６５．）。β−ディフェンシンは、ケラチン生成細胞、粘膜上皮細胞のような上皮細胞型 （Ｈａｒｄｅｒ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎａｔｕｒｅ ３８７（６６３６）：８６１； ａｎｄ Ｈａｒｄｅｒ， Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７６（８）：５７０７−１３）、口腔組織及び唾液分泌物（Ｍａｔｈｅｗｓ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．６７（６）：２７４０−５）、並びに、肝臓において見られ、感染又は炎症性刺激に対する反応において上方制御されることができる（Ｇａｎｚ，Ｔ． ａｎｄ Ｒ．Ｉ．Ｌｅｈｒｅｒ，１９９４，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．６（４）：５８４−９）．ヒトβ−ディフェンシン１（ｈＤＥＦＢ１）は、上皮組織における最も重要な抗細菌ペプチドの１つである。ディフェンシン発現及び分泌は、創傷治療を付与するために非常に重要である。ディフェンシンによる抗細菌作用は、先天性免疫の一部であると考えられ、非特異的でかつ広範囲である。それゆえに、後天性の細菌抵抗性は、抗生物質の乱用に見られるように、問題ではない。

【0279】

ここに記載したデータはまた、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの両方において、Ａｋｔ１がディフェンシン発現に要求されることを示す。ｓＮＡＧ治療は、野生型コントロール動物において、皮膚創傷のスタフィロコッカスアウレアス感染を減少させるが、同様に治療したＡｋｔ１欠損マウスにおいては同様ではない。また、野生型皮膚創傷のｓＮＡＧ刺激が閉創速度を上げることに注目することも重要である。β−ディフェンシンの抗体による遮断は、ｓＮＡＧの抗細菌活性の減少をもたらす。これらの発見を総合すると、ディフェンシン発現の調節におけるＡｋｔ１の中心的な役割は、細菌感染駆除を担うこと、及び、ｓＮＡＧ治療が野生型動物におけるこれら経路を活性化することであることが示された。

【0280】

データは、感染した創傷のｓＮＡＧ治療が、ディフェンシン発現の誘引によって、患者において少なくとも部分的に、細菌数を顕著に減少させることを示唆している。スタフィロコッカスアウレアスは、皮膚及び鼻において頻繁にコロニー形成が発見される細菌である。スタフィロコッカスアウレアスは、しばしば術後創傷感染の原因となり、未だに院内感染の一般的な原因である。病院内でのＳ．アウレアス感染は長年医療関係者を悩ましており、治療のための抗生物質の広範囲の使用が、抗生物質耐性負担を引き起こしている。ここに記載したデータは、スタフィロコッカスアウレアスに感染した創傷のｓＮＡＧによる治療が、細菌数を顕著の減少させることを示している。例えば、図１１Ａ及び１１Ｂに示す、治療したＷＴマウスにおける暗紫のグラム染色の欠如は、Ｓ．アウレアス感染がこれらの創傷から除去されたことを示している。ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの両方におけるデータは、創傷治療において、細菌感染を減少させ、それにより創傷治癒を強調するために、ｓＮＡＧ（特に、タリデルム）を使用する強力な証拠を提供する。

【0281】

コントロール実験は、ｓＮＡＧの抗細菌効果が、細菌に対する材料の直接的な作用のためではなく、Ａｋｔ１活性化によるディフェンシンの調節のような下流への影響のためであることを示している。ディフェンシンが、先天性免疫及び抗細菌活性機能において重要な役割を担っていることは、広く受け入れられている。これらの機能の証拠のほとんどは、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける精製ディフェンシンペプチドと組み合わせた実験、又は、図１１に示すように、精製した活性ペプチドを直接適用する同様の実験における、細菌の直接的な殺傷である（Ｓｅｌｓｔｅｄ，Ｍ．Ｅ． ａｎｄ Ａ．Ｊ．Ｏｕｅｌｌｅｔｔｅ，２００５，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．６（６）：５５１−７）。このデータは、ｓＮＡＧを局所投与した野生型動物におけるディフェンシン発現の誘引が、抗細菌反応をもたらすことを示している。ヒトディフェンシン５遺伝子を発現する形質転換マウスモデルは、Ｓ．ティフィムリウムに対して抵抗性を有しており、このような野生型動物に死をもたらす感染が、抗細菌反応の調節におけるディフェンシンの重要性を示唆していることが、近年示されている（Ｓａｌｚｍａｎ，Ｎ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｎａｔｕｒｅ ４２２（６９３１）：５２２−６）。

【0282】

ディフェンシンのα−サブタイプが、好中球において特異的に発現する一方で、β型ディフェンシンの源は上皮であることが受け入れられている。培養物及び皮膚創傷治癒モデルの両方のヒトケラチン生成細胞において、ｓＮＡＧに反応して誘引されるβ型ディフェンシン発現が、検出された。ｉｎ ｖｉｖｏデータは、β−ディフェンシン３が、ｓＮＡＧで治療した後、最基底層において主に発現することを説明する。これは、ヒトβ−ディフェンシン２が皮膚の突起及び顆粒層に位置することを示す以前のデータと矛盾がない（Ｏｒｅｎ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｅｘｐ Ｍｏｌ Ｐａｔｈｏｌ．７４（２）：１８０−２）。皮膚は、絶えず怪我及び感染に接するものであり、その機能は、機械的な障壁だけではなく、感染に対して活性な防御を増加させる可能性を維持することでもある。皮膚の外側の層におけるβ−ディフェンシンの発現は、皮膚の先天性免疫における役割を支持する。しかしながら、データは、ｓＮＡＧは、内皮細胞において２つの異なるα−ディフェンシン（１、４及び５）の発現を特異的に刺激することを示している。このことは、ＲＴ−ＰＣＲ、遺伝子アレイ分析、免疫蛍光及びＥＬＩＳＡ（データ示さず）により示されている。組織修復における内皮細胞と白血球との間の相互作用は、創傷治癒における初期の及び最も重要な段階の１つである。脈管構造からの白血球の溢出段階は、化学走化性因子により開始され、それゆえに、α−ディフェンシンがｓＮＡＧにより誘引されること、及び、必要な好中球／内皮細胞相互作用に寄与するかもしれないことは、興味深い。さらに近年、ディフェンシンが、樹状細胞（Ｈｕｂｅｒｔ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，２００７，ＦＡＳＥＢ Ｊ．２１（１１）：２７６５−７５）及びＴ細胞、単球、並びに、マクロファージ（Ｇａｒｃｉａ，Ｊ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｃｅｌｌ Ｔｉｓｓｕｅ Ｒｅｓ．３０６（２）：２５７−６４）及びケラチン生成細胞（Ｎｉｙｏｎｓａｂａ，Ｆ．， ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１２７（３）：５９４−６０４）における、化学走化活性を示すことによる適応性の免疫反応に対する貢献を含む、微生物細胞の抑制を超える生物学的活性を示すことが明らかになっている。最近の研究は、ヒトベータディフェンシン１及び２が、ＣＣ−ケモカインレセプター６（ＣＣＲ６）を介して、未成熟樹状細胞及びＴ細胞を化学的に誘引する能力を有すること（Ｙａｎｇ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８６（５４３９）：５２５−８）、及び、ヒトベータディフェンシン２が、ＣＣＲ６レセプターを介して、ＴＮＦαで処置した好中球を化学的に誘引する能力を有すること（Ｎｉｙｏｎｓａｂａ， Ｆ．， Ｈ． Ｏｇａｗａ， ａｎｄ Ｉ． Ｎａｇａｏｋａ， ２００４， Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １１１（３）：２７３−８１）が示している。ヒトβ−ディフェンシン２及び３は、また、マクロファージ、単球及び好中球において発現するレセプターであるＣＣＲ２との相互作用によって、走化性を誘引することも示されている（Ｒｏｈｒｌ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１０）。興味深いことに、データは、ｓＮＡＧ治療が、内皮細胞におけるα及びβの両方のディフェンシン発現を誘引することを示している。これらを総合すると、最近のデータは、ディフェンシンが、その抗細菌特性によってのみならず、適切な治癒のために他の細胞型では必須の化学走化性によっても、創傷治癒を媒介するかもしれないことを示唆している。しかしながら、β−ディフェンシン３単独の適用は、閉創の向上をもたらさず（図示せず）、ディフェンシン単独の局所投与が、化学的誘引、細胞要求及び閉創のために要求される細胞内相互作用を支持しないことをほのめかしている。

【0283】

野生型及びＡｋｔ１ノックアウト動物を用いたｉｎ ｖｉｖｏデータにより、ｓＮＡＧ誘引β−ディフェンシン３発現におけるＡｋｔ１の要求が確認された。マウス白血球は、他の多くの哺乳動物の白血球のようにα−ディフェンシンを発現しないので（Ｇａｎｚ，Ｔ．，２００４，Ｃ Ｒ Ｂｉｏｌ．３２７（６）：５３９−４９）、ｉｎ ｖｉｖｏでの浸潤性免疫細胞の染色は不可能である。アルファディフェンシン１〜３による、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのエアウェイ上皮細胞の治療は、ＰＩ３Ｋ及びＭＡＰＫ経路の活性化を要求する、容量及び時間に依存して増加する細胞移動の原因となる（Ａａｒｂｉｏｕ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，２００４，Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．３０（２）：１９３−２０１）。内皮細胞のｓＮＡＧ刺激がＭＡＰＫの活性化をもたらすことが示されており（Ｖｏｕｒｎａｋｉｓ，Ｊ．Ｎ．， ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｊ Ｖａｓｃ Ｒｅｓ．４５（３）：２２２−３２）、さらに、ここに記載したデータにおいて、ＭＥＫの薬理学的抑制もまた、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのディフェンシンの発現を抑制することが示されている。これらの発見は、両方の経路がｓＮＡＧによるディフェンシン発現の調節に影響を与えるが、Ａｋｔ１の除去が、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの両方においてその発現を顕著に減少させることを示唆している。骨髄性細胞において、β−ディフェンシン１の発現は、転写レベルにおいて、ＥｔｓファミリーメンバーＰＵ．１により部分的に制御される（Ｙａｎｅｖａ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６（１１）：６９０６−１７； ａｎｄ Ｍａ，Ｙ．，Ｑ．Ｓｕ， ａｎｄ Ｐ．Ｔｅｍｐｓｔ，１９９８，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７３（１５）：８７２７−４０）。ＰＵ．１は、Ｂ細胞系においてＡｋｔ１の下流の標的である（Ｒｉｅｓｋｅ，Ｐ． ａｎｄ Ｊ．Ｍ．Ｐｏｎｇｕｂａｌａ，２００１，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７６（１１）：８４６０−８）。一次内皮細胞において、ショウジョウバエ気管成長の間、Ａｋｔ１は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの両方において、Ｅｔｓ１の上流であることが示されている（Ｌａｖｅｎｂｕｒｇ，Ｋ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，２００３，ＦＡＳＥＢ Ｊ． １７（１５）：２２７８−８０）。細胞のｓＮＡＧ刺激は、内皮細胞の移動に要求されるＥｔｓ１の発現増加をもたらす（おそらくＡｋｔ１を介して）（Ｖｏｕｒｎａｋｉｓ，Ｊ．Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｊ Ｖａｓｃ Ｒｅｓ．４５（３）：２２２−３２）。

【0284】

ここまで、ｓＮＡＧ治療により、下記の一連の下流の活性化がもたらされている；止血、細胞移動、細胞増殖、閉創向上、及び、ここに記載したような抗細菌機能をもたらす先天性免疫反応の刺激。

【0285】

慢性的な創傷及び創傷感染による合併症を有する患者群内の糖尿病患者を劇的に増加すると仮定すると、新規な臨床治療への要求が高まっている。ここに、海洋由来のｐＧｌｃＮＡｃナノファイバの、創傷治癒速度の向上のみならず、先天性免疫を刺激することにより抗細菌活性を提供する作用を説明する。これらの観察の明白な重要性は、院内感染への適用である。手術創傷感染において、統計的に全ての手術患者の８％未満を示す、院内感染に支配される。これらの型の感染の直接原価は、１年間に約４５０億ドルである。ディフェンシンが先天性免疫システムの一部であると仮定すると、これらの経路の活性化は、細菌感染の抗生物質から独立した駆除を可能にするのと同様に、耐性有機物の生成を排除するだろう。病院環境におけるｓＮＡＧの使用は、多くの費用を負担し、抗生物質耐性種の生産を顕著に減少させる。総合すると、これらの発見は、海洋由来のｐＧｌｃＮＡｃナノファイバが、診療の舞台において非常に有益であることを示している。

【0286】

６．３ 実施例３：ｓＮＡＧナノファイバによる、ディフェンシン及びＴｏｌｌレセプター遺伝子の発現数の上方制御
この実施例は、ディフェンシン及びＴｏｌｌ様レセプターの数が、ヒト内皮細胞のｓＮＡＧ治療によって、上方制御されることを証明する。

【0287】

材料及び方法：ヒトチッププローブをエポキシスライドに印刷した。ＨＵＶＥＣ細胞を、項目６．２に記載した通り培養し、ｓＮＡＧナノファイバ（“ｓＮＡＧ”）で５時間処理した。ＲＮＡを生産者の取扱説明書にしたがって、ＲＮＡｓｏｌ（Ｔｅｌｔｅｓｔ，Ｉｎｃ．）を用いて抽出し、Ａｍｉｎｏ Ａｌｌｙｌ ＭｅｓｓａｇｅＡＭＰ（登録商標）ＩＩ ａＲＮＡ増幅キット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて増幅し、標識した。ａＲＮＡとハイブリダイズさせるために、スライドをＲＴ Ｏ／Ｎでブロッキング溶液（ｄＨ_２Ｏ １０００ｍｌ中のＳｉｇｍａ Ｔｒｉｓバッファ生理食塩水 ｐＨ８．０、１％ ＢＳＡｗ／ｖ、０．０５％ ＮａＮ_３）中に浸漬して準備し、洗浄して乾燥させた。標識した標的ａＲＮＡを含む、ｓＮＡＧ治療細胞からのサンプルを、スライド（６５μｌ／スライド；９５℃で５分間変性；０．１％ ＳＤＳ及び５×ＳＳＣ及び１％ ＢＳＡ中で、３７℃で４８時間ハイブリダイズ）とハイブリダイズさせ、洗浄して乾燥させた。スライドをスキャニングし、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ スキャンアレイ装置及びＳｃａｎＡｒｒａｙ ＥｘｐｒｅｓｓソフトウェアＶ３．０， ｕｐｄａｔｅｄを用いてハイブリダイゼーションを検出した。上方制御遺伝子を同定するために、マイクロアレイデータをＡｇｉｌｅｎｔ ＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇ ＧＸ ｖ．１１ バイオインフォメーションデータ分析を用いて分析した。

【0288】

分析対象遺伝子：ＩＬ−１、ＣＥＡＣＡＭ３、ＳＰＡＧ１１、ディフェンシン（“ＤＥＦＡ”＝α−ディフェンシン及び“ＤＥＦＢ”＝β−ディフェンシン）；Ｔｏｌｌ様レセプター（“ＴＬＲ”）、ＳＩＧＩＲＲ（単ＩＧ ＩＬ−１−関連レセプター）及びＴＲＡＦ６ （ファクター６に関連するＴＮＦレセプター）。ポジティブコントロール：１４３３Ｚ （チロシン−３−モノハイドロゲナーゼ／トリプトファン５モノハイドロゲナーゼアクチションタンパク質）；ＧＡＰＤ（グリセルアルデヒド−３−脱水素酵素リン酸塩）；ＲＰＬ１３Ａ（リボソームタンパク質Ｌ１３ａ）；ＵＢＣ（ユビキチンＣ）；ＡＣＴＢ（アクチンＢ）。

【0289】

結果：マイクロアレイ遺伝子チップ分析及びマイクロアレイのＱ−ＰＣＲ検証の結果を下記表ＩＩ〜ＶＩに示す。カスタム遺伝子チップを用いて、ヒト内皮細胞のｓＮＡＧ治療により上方制御されるディフェンシン及びＴｏｌｌ様レセプターの数を決定した。

【0290】

Ｔｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲｓ）細菌成分の特異的な分子パターンを認識して、先天性免疫の活性化を導く、高度に保存されたレセプターである。興味深いことに、ショウジョウバエは適応性免疫システムが欠乏しているが、細菌感染に対して抵抗性がある（Ｉｍｌｅｒ，Ｊ．Ｌ． ａｎｄ Ｊ．Ａ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ，２０００，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，３（１）：１６−２２）。この宿主防御は、ＴＬＲｓによって誘引される抗細菌ペプチドｄＴｏｌｌ及び１８−ｗｈｅｅｌｅｒを合成することによって、防御を提供する先天性免疫システムによりもたらされる （Ｌｅｍａｉｔｒｅ，Ｂ．， ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｃｅｌｌ ８６（６）：９７３−８３； ａｎｄ Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｍ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，１９９７，ＥＭＢＯ Ｊ．１６（２０）：６１２０−３０）。最近の研究も、ＴＬＲ活性化のためのヒトディフェンシン発現に繋がっている。ヒトβ−ディフェンシン２は、ＴＬＲ−２に依存する態様において、気道上皮細胞において誘引されることが示されている（Ｈｅｒｔｚ，Ｃ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１（１２）：ｐ．６８２０−６）。Ｔｏｌｌ様レセプター４は、単球において、クラミジア肺炎病原体に反応してヒトβ−ディフェンシン２誘導を媒介することが示されている（Ｒｏｍａｎｏ Ｃａｒｒａｔｅｌｌｉ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，２００９，ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５７（２）：１１６−２４）。重要なことに、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路が、細胞内の病原体に対する反応を制御する、ＴＬＲ情報伝達の主要成分である（Ｗｅｉｃｈｈａｒｔ，Ｔ． ａｎｄ Ｍ．Ｄ．Ｓａｅｍａｎｎ，２００８，Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ．６７ Ｓｕｐｐｌ ３：ｉｉｉ７０−４）。ＴＬＲｓの刺激がディフェンシン合成の増加を誘引することは知られているので、この研究は、Ａｋｔ１の活性化を介して、先天性免疫及び細菌駆除の刺激剤としての、ｓＮＡＧの能力を示唆する。

【0291】

表ＩＩ：ｓＮＡＧ刺激に反応して上方制御されるいくつかの遺伝子のリスト

【0292】

【表3】

【0293】

表ＩＩＩ：ディフェンシンマイクロアレイ遺伝子発現
（ｓＮＡＧ １０μｇ／ｍＬ ５時間に対するＨＵＶＥＣ反応）

【0294】

【表4】

【0295】

表ＩＶ：ＤＥＦＣＢ３マイクロアレイ遺伝子検証
（ＡＢプリズム７０００；ｓＮＡＧ（１０μｇ／ｍＬ） ５時間 ＨＵＶＥＣ）

【0296】

【表5】

【0297】

表Ｖ：Ｔｏｌｌ様レセプターマイクロアレイ遺伝子発現

【0298】

【表6】

【0299】

表ＶＩ：ＴＬＲ１及び４のリアルタイムＱ−ＰＣＲ遺伝子検証
（ＨＵＶＥＣ、ｓＮＡＧ １０μｇ／ｍＬ ５時間）

【0300】

【表7】

【0301】

６．４ 実施例４：遺伝子発現プロファイルが異なるｓＮＡＧ及びＮＡＧ長ファイバ
この実施例は、ｓＮＡＧナノファイバが、遺伝子発現に対するその効果において、ｐ−ＧｌｃＮＡｃ長ファイバと異なり、特に、ディフェンシン及びＴｏｌｌ様レセプターのいくつかの発現に対するその効果において異なることを証明する。

【0302】

材料及び方法：ヒトディフェンシンチッププローブ（濃度：２０μＭ、量：１８〜２０、溶液：ＳＳＣベースのスポッティングバッファ）を、標準的な方法を用いて、エポキシスライド上に印刷した。ＨＵＶＥＣ及びＨａＣａｔ細胞を、項目６．２に記載した通り培養し、長ファイバ（「ＬＮＡＧ」）又はｓＮＡＧナノファイバ（「ｓＮＡＧ」）の何れかで２時間又は２０時間処理した。ＲＮＡを、生産者の取扱説明書に従って、ＲＮＡｓｏｌ（Ｔｅｌｔｅｓｔ，Ｉｎｃ．）を用いて抽出し、アミノアリルＭｅｓｓａｇｅＡＭＰＴＭ ＩＩ ａＲＮＡ増幅キット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて増幅した。ＲＮＡ増幅中、ＬＮＡＧで処理した細胞からのａＲＮＡ及びｓＮＡＧで処理した細胞からのａＲＮＡを、Ｃｙ３又はＣｙ５蛍光染色を用いて異なる標識を付与した。ａＲＮＡとハイブリダイズするために、スライドを、ＲＴ Ｏ／Ｎにおいてブロッキング溶液（ｐＨ８．０、１０００ｍｌのｄＨ_２Ｏ中のＳｉｇｍａ Ｔｒｉｓ生理食塩水バッファ、１％ＢＳＡｗ／ｖ、ＮａＮ_３ ０．０５％）中に浸漬した後、洗浄して乾燥させて準備した。異なる標識が付与されたＬＮＡＧ処理細胞及びｓＮＡＧ処理細胞からの標的ａＲＮＡを同量含むサンプルを混合し、スライド（６５μｌ／スライド；９５℃で５分間変性；０．１％ＳＤＳ及び５ＸＳＳＣ及び１％ＢＳＡ中で、３７℃で４８時間ハイブリダイズ）とハイブリダイズさせ、洗浄して染色した。以下の表ＶＩＩにおける実施例のグラフにより、実験の構成を説明する：
表ＶＩＩ：

【0303】

【表8】

【0304】

Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒスキャンアレイ装置及びＳｃａｎＡｒｒａｙ ＥｘｐｒｅｓｓソフトウェアＶ３．０，ｕｐｄａｔｅｄを用いてスライドをスキャンし、ハイブリダイゼーションを検出した。各スライドＣｙ５、Ｃｙ３に対して、組成物の蛍光発光を可視化した。上方制御及び下方制御遺伝子を同定するために、Ａｇｉｌｅｎｔ ＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇ ＧＸ ｖ．１１生物情報データ分析を用いてマイクロアレイデータを分析した。分析対象の遺伝子は、ＤＥＦＡ１、ＤＥＦＡ３、ＤＥＦＡ４、ＤＥＦＡ５、ＤＥＦＡ６、ＤＥＦＢ１、ＤＥＦＢ０１３Ａ、ＤＥＦＢ１０４Ａ、ＤＥＦＢ１０５Ｂ、ＤＥＦＢ１０８Ｂ、ＤＥＦＢ１１２、ＤＥＦＢ１１４、ＤＥＦＢ１１８、ＤＥＦＢ１１９、ＤＥＦＢ１２３、ＤＥＦＢ１２４、ＤＥＦＢ１２５、ＤＥＦＢ１２６、ＤＥＦＢ１２７、ＤＥＦＢ１２８、ＤＥＦＢ１２９、ＤＥＦＢ１３１及びＤＥＦＢ４（“ＤＥＦＡ”＝α−ディフェンシン及び“ＤＥＦＢ”＝β−ディフェンシン）；ＴＬＲ１、ＴＬＲ１０、ＴＬ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７及びＴＬＲ８（“ＴＬＲ”＝Ｔｏｌｌレセプター）；ＳＩＧＩＲＲ（単ＩＧ ＩＬ−１関連レセプター）；ＩＲＡＫ２（ＩＬ−１レセプター関連キナーゼ１）；ＴＲＡＦ６（因子６に関連するＴＮＦレセプター）；Ｄ１０６Ａ（β−ディフェンシン１０６）、Ｄ１０７Ａ（β−ディフェンシン１０７）とした。ネガティブコントロールを３つのランダム配列（１、２、３）とした。ポジティブコントロールを１４３３Ｚ（チロシン−３−モノハイドロゲナーゼ／トリプトファン５モノハイドロゲナーゼアクチションタンパク質）；ＧＡＰＤ（グリセロアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素）；ＲＰＬ１３Ａ（リボソームタンパク質Ｌ１３ａ）；ＵＢＣ （ユビキチンＣ）；ＡＣＴＢ（アクチンＢ）とした。

【0305】

結果：マイクロアレイ遺伝子チップ分析の結果を、下記表ＶＩＩＩおよびＩＸに示す。表ＶＩＩＩは、ＬＮＡＧファイバ又はｓＮＡＧナノファイバのいずれかに２時間又は２４時間露出した後の、ヒト臍帯静脈内皮細胞（“ＨＵＶＥＣ”）における遺伝子発現を示す。表ＩＸは、ＬＮＡＧファイバ又はｓＮＡＧナノファイバのいずれかに２時間又は２４時間露出した後の、ヒトケラチン生成細胞系（ＨａＣａｔ）における遺伝子発現を示す。この結果は、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン長ファイバ（“ＬＮＡＧ”）により誘導される遺伝子発現プロファイルが、ｓＮＡＧナノファイバ（“ｓＮＡＧ”）により誘導される遺伝子発現プロファイルとは異なることを証明している。特に、ＬＮＡＧとｓＮＡＧとは、ディフェンシン遺伝子及びＴｏｌｌレセプター遺伝子の発現におけるその効果において異なっている。

【0306】

表ＶＩＩＩ：ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）におけるマイクロアレイディフェンシン遺伝子発現、倍率変化

【0307】

【表9】

【0308】

【表10】

【0309】

６．５ 実施例５：ｓＮＡＧ膜の放射線照射の効果
ｓＮＡＧ膜の調製方法。ｓＮＡＧ膜は、以前に記載されたように生成した（Ｖｏｕｒｎａｋｉｓ ｅｔ ａｌ．、米国特許番号５，６２３，０６４及び５，６２４，６７９を参照、その章の要旨の全てを参照としてここに組み込む）、微小藻類ｐＧｌｃＮＡｃ由来である。簡単に述べると、微小藻類を、定義された成長培地を用いて、独自の生物反応条件において培養した。高密度培養物から微小藻類を回収した後、ファイバを徐々に分離して単離して精製し、注入のために水中に懸濁した純ファイバの群が得られた（ｗｆｉ）。ファイバを濃縮及びオーブン乾燥させて絆創膏に形成し、包装してガンマ線照射により滅菌した。ファイバサイズは平均２０〜５０ｎｍ×１〜２ｎｍ×〜１００μｍとした。ファイバの束を、化学及び物理試験パラメータを用いて個別に質を制御し、放出前に各束が厳格な純度基準に満たすようにした。最終的な束は、タンパク質、金属イオン及び他の成分が実質的に含まれないことが要求された。その後、ファイバを放射線照射により短くし、ｓＮＡＧ膜を生成した。簡単に述べると、最初の材料は、１ｍｇ／ｍＬの濃度のｐＧｌｃＮＡｃスラリーを６０ｇ含んでいた。ｐＧｌｃＮＡｃスラリーの濃度を、０．２μｍフィルター中で５ｍＬろ過することによって、確認した。１５ｇのｐＧｌｃＮＡｃを含む１５ＬのｐＧｌｃＮＡｃスラリーを、ウエットケーキが形成されるまで溶かした。その後、ウエットケーキをフォイルポーチ中に移し、対応する容器においてガンマ線照射し、２００ｋＧｙガンマ線照射の対象にした。他の放射線照射条件を、ｐＧｌｃＮＡｃ組成物におけるその効果を試験するために行い、図１４Ａに反映させた。

【0310】

ｐＧｌｃＮＡｃ膜における放射線照射の効果。放射線照射はｐＧｌｃＮＡｃの分子量を減らす一方で、放射線はファイバの微細構造を乱さなかった。ｐＧｌｃＮＡｃを、：乾燥状態として、凍結乾燥材料；乾燥膜として；濃縮スラリーとして（重量対体積＝３０：７０）；及び希釈スラリーとして（５ｍｇ／ｍＬ）の異なる状態下で放射線照射した。適した分子量減少（分子量５００，０００〜１，０００，０００ダルトンまで）に、乾燥ポリマーは１，０００ｋｇｙの放射線照射量で達し、ウエットポリマーは２００ｋｇｙの放射線照射量で達した（図１４Ａ）。

【0311】

放射線照射の間中のファイバの化学及び物理構造を、赤外線（ＩＲ）スペクトル（図１４Ｂ）、元素分析及び走査型電子顕微鏡（ＳＥＭｓ）分析により確認することで、維持した。放射線照射したファイバの顕微鏡観察は、粒子長の減少を示した（図１４Ｃ及び１４Ｄ）大多数のファイバは長さが約１５μｍ未満であり、平均長さは約４μｍであった。

【0312】

６．６ 実施例６：ｓＮＡＧナノファイバ及びｐＧｌｃＮＡｃファイバの長い形態における、臍帯静脈内皮細胞の代謝率及び血清欠乏に対するその効果の違い
材料及び方法。保管された、複数のドナーからのヒト臍帯血内皮細胞（ＥＣ）（Ｃａｍｂｒｅｘ）を、Ｃａｍｂｒｅｘの手順に記載されたように、ＥＣ成長培地２ＳｉｎｇｌｅＱｕｏｔｓを添加した内皮基礎培地２（Ｃａｍｂｒｅｘ）中で、５％ ＣＯ_２、３７℃に維持した。血清欠乏を０．１％ウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）を添加したＲＰＭＩ−１６４０中で８０〜９０％コンフルエントで２４時間行った後、ＶＥＧＦ１６５（２０ ｎｇ／ｍｌ， Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、又は、図中の説明で示す量の、滅菌水中の高度に精製したｐＧｌｃＮＡｃナノファイバ若しくはｓＮＡＧナノファイバ（Ｍａｒｉｎｅ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｄａｎｖｅｒｓ，Ｍａｓｓ．，ＵＳＡにより提供）で刺激した。細胞増殖／生存能力評価のために、２つの異なる評価を用いた：血球計を用いて直接細胞数を計数することによるトリパンブルー排除、及び、製造者（Ｐｒｏｍｅｇａ）により示された手順におけるＭＴＴ［３−（４，５−ジメチルチアゾール−２イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム臭化物］分析。

【0313】

結果−ｐＧｌｃＮＡｃ：
ｐＧｌｃＮＡｃは代謝率に影響を及ぼさなかった。図１５に示すように、ｐＧｌｃＮＡｃは、ＭＴＴ分析により測定されたより高い代謝率をもたらし、このポリマー材料は、細胞増殖の顕著な増大を引き起こさなかったことが示された。

【0314】

ｐＧｌｃＮＡｃは、血清欠乏により誘引される細胞死からＥＣを保護した。ｐＧｌｃＮＡｃファイバが、ＥＣに直接影響するかどうかを試験するために、血清欠乏ＥＣ細胞をＶＥＧＦ又は異なる濃度のｐＧｌｃＮＡｃファイバで処理した。図１６の血清欠乏後４８時間及び７２時間に示すように、載置した細胞総数（コントロール）と比較して、４８時間又は７２時間後の細胞数は約２倍減少した。４８時間後において、細胞数の減少は、ＶＥＧＦ又は５０若しくは１００μｇ／ｍＬのいずれかのｐＧｌｃＮＡｃファイバの添加によって、救済された。７２時間後において、細胞数の減少は、ＶＥＧＦ又は１００μｇ／ｍＬのｐＧｌｃＮＡｃファイバの添加によって、救済された。これらの結果は、ＶＥＧＦと同様に、ｐＧｌｃＮＡｃファイバによる処理が血清欠乏により引き起こされる細胞死を抑制することを示した。

【0315】

結果−ｓＮＡＧ
ｓＮＡＧは、代謝率の顕著な増加を引き起こした。ＭＴＴ分析によって測定されたように、５０、１００又は２００μｇ／ｍＬのｓＮＡＧは、ＶＥＧＦよりも高いＥＣ代謝率をもたらした（図１７）。

【0316】

ｓＮＡＧは、血清欠乏により引き起こされる細胞死からＥＣを保護しなかった。ｓＮＡＧファイバがＥＣに直接影響を及ぼすかどうかを試験するために、血清欠乏ＥＣ細胞を、ＶＥＧＦ又は異なる濃度のｓＮＡＧファイバで処理した。図１８に示すように、血清欠乏４８時間において、載置した細胞総数（コントロール）と比較して、細胞数が約２倍減少した。細胞数の減少は、ＶＥＧＦの添加によって救済されたが、５０、１００又は２００μｇ／ｍＬのｓＮＡＧファイバの添加では救済されなかった。これらの結果は、ＶＥＧＦとは異なり、ｓＮＡＧナノファイバによる処理は、血清欠乏により引き起こされる細胞死を抑制できないことを示した。

【0317】

結果：上述した結果は、ｓＮＡＧが、長い形態のｐＧｌｃＮＡｃとは異なり、ＭＴＴ分析における血清欠乏ＥＣの代謝率は増加させるが、トリパンブルー排除試験における血清欠乏ＥＣのアポトーシスは救済しないことを証明する。

【0318】

６．７ 実施例７．ｓＮＡＧの臨床前試験
６．７．１ 被験物質
上記項目６．２．１に記載したとおり生成したｓＮＡＧを含む被験物質を用いた。被験物質は、Marine Polymer Technologies, Incにより無菌状態で提供された。

【0319】

６．７．２ 生適合性試験−Ｌ９２９ ＭＥＭ 回避試験−ＩＳＯ １０９９３−５
被験物質の生適合性試験を、マウス繊維芽細胞Ｌ９２９哺乳動物細胞において行った。被験物質の暴露後４８時間において、Ｌ９２９細胞における生物学的反応性は観察されなかった（グレード０）。ポジティブコントロール物質（グレード４）及びネガティブコントロール物質（グレード０）から得た、観察した細胞反応を、適した試験系で確認した。手順の評価基準に基づくと、被験物質は、無毒であり、国際標準化機構（ＩＳＯ）１０９９３−５ガイドラインの溶出試験の要求にかなうものであった。下記表Ｘを参照。

【0320】

表Ｘ：

【0321】

【表11】

【0322】

６．７．３ 筋肉内移植試験−ＩＳＯ−４週間移植
６．７．３．１ 材料及び方法
局所毒性効果に対する被験物質の能力を評価するために、筋肉内移植試験−ＩＳＯ−４週間移植（筋肉内移植試験）を用いた。簡単に述べると、ニュージーランド白ウサギの脊椎傍筋肉組織に、４週間、被験物質を移植した。その後、ポジティブコントロールであるサージセル（Ｓｕｒｇｉｃｅｌ）（Ｊｏｈｎｓｏｎ ａｎｄ Ｊｏｈｎｓｏｎ、ＮＪ）及びネガティブコントロールである高密度ポリエチレン（ネガティブコントロールプラスチック）の、２つのコントロール物質を用いて、被験物質を別々に評価した。

【0323】

被験物質及びコントロール物質の準備。被験物質を、幅約１ｍｍ、長さ１０ｍｍと測定した。２つのコントロール物質を準備した。ポジティブコントロールであるサージセル（Ｃ１）を、幅約１ｍｍ、長さ１０ｍｍと測定し、滅菌したものを得た。ネガティブコントロールであるプラスチック（Ｃ２）を、幅約１ｍｍ、長さ１０ｍｍと測定し、７０％エタノール中に浸漬して滅菌した。

【0324】

投与前手順。移植前に各動物の体重を測定した。試験当日、動物の背側を毛を含まないように挟み、抜け毛をバキュームにより除去した。各動物を適切に麻酔した。移植前に、領域を手術調整溶液で拭き取った。

【0325】

分量投与。４つの被験物質のストリップを、外科手術により各ウサギの脊椎傍筋肉中の、正中線から約２．５ｃｍ及び脊柱に平行、並びにそれぞれから約２．５ｃｍの位置のそれぞれに移植した。被験物質ストリップを脊柱側に移植した。同様の方法で、ポジティブコントロール物質ストリップ（サージセル）を、各動物の対側筋肉中に移植した。２つのネガティブコントロールストリップ（ネガティブコントロールプラスチック）を、尾骨（尾に向けて）から被験物質に対して及びＣ１コントロール移植部位に対して、脊柱の何れかの側に移植した（全部で４ストリップ）。少なくとも８つの被験物質ストリップ及び８つのそれぞれのコントロール物質ストリップの全てが、評価のために要求された。

【0326】

投与後の手順。動物を４週間維持した。動物を、この期間毎日観察し、移植部位の適切な治癒及び毒性の臨床的症状を確認した。観察には、全ての臨床兆候を含めた。観察期間の最後に、動物の体重を測定した。各動物に催眠剤を注入して安楽死させた。出血させずに組織を切断するために、十分な時間経過させた。

【0327】

肉眼観察。各動物からの、被験物質又はコントロール物質が移植された脊椎傍筋肉を、まとめて摘出した。外科用メスを用いて、移植部位の周囲を注意深く切り取ることによって、筋肉組織を除去し、組織を取り除いた。組織病理学的評価のために、この組織の完全性を崩壊させ得る過剰に侵襲的な手段を用いずに、摘出した移植組織を肉眼で検査した。１０％中性緩衝ホルマリンを収容した、適切に標識された容器内に、組織を載置した。

【0328】

組織病理学。ホルマリン固定の後、それぞれの移植部位をより大きい塊の組織から切除した。移植材料を含む移植部位を顕微鏡検査した。部位において、炎症、被包、出血、壊死及び変色の兆候を、下記の尺度を用いて検査した：
０＝正常
１＝穏やか
２＝中程度
３＝顕著
顕微鏡観察の後、移植材料をｉｎ ｓｉｔｕに残し、移植部位を含む組織スライスを処理した。ヘマトキシリン及びエオシン染色切片の組織学的スライドを、Ｔｏｘｉｋｏｎによって準備した。光学顕微試験により、スライドを評価及び等級づけした。

【0329】

移植効果の病理学評価。生物反応の下記カテゴリーを、各移植部位の顕微観察によって評価した：
１．炎症性反応：
ａ．多形核白血球
ｂ．リンパ球
ｃ．好酸球
ｄ．プラズマ細胞
ｅ．マクロファージ
ｆ．巨細胞
ｇ．壊死
ｈ．変性
２．治癒反応：
ａ．線維形成
ｂ．脂肪湿潤。

【0330】

反応の各カテゴリーを、下記尺度を用いて格付けした：
０＝正常
０．５＝極僅か
１＝穏やか
２＝中程度
３＝顕著。

【0331】

複雑領域の相対的な大きさを、移植／組織境界面から、正常組織及び正常血管分布により特徴付けられる影響を受けていない領域までの、領域幅を評価することによって、記録した。複雑領域の相対的な大きさを、下記尺度を用いて記録した：
０＝０ｍｍ、領域なし
０．５＝０．５ｍｍ以下、極僅か
１＝０．６〜１．０ｍｍ、穏やか
２＝１．１〜２．０ｍｍ、中程度
３＝２．０ ｍｍより大きい、顕著。

【0332】

筋肉内移植試験を、下記参照に基づいて行った：
１．ＩＳＯ １０９９３−６、１９９４、医療機器の生物学的評価−Ｐａｒｔ ６：移植後の局所効果のための試験
２．ＩＳＯ １０９９３−１２、２００２、医療機器の生物学的評価−Ｐａｒｔ １２：サンプル調整及び関連材料
３．ＡＳＴＭ Ｆ９８１−０４、２００４、筋肉及び骨における材料の効果に関して、手術により移植する生体材料の適合性を評価する標準的技法
４．ＡＳＴＭ Ｆ７６３−０４、２００４、移植材料の短期間検査のための標準的技法
５．ＩＳＯ／ＩＥＣ １７０２５、２００５、試験及び実験室検定の能力のための一般的要件。

【0333】

筋肉内移植試験の結果を、下記基準に基づいて評価した：
１．算出した評価：各移植部位について、総合得点を決定する。各動物からの試験部位の平均得点を、その動物からのコントロール部位の平均得点と比較する。全ての動物の試験部位とコントロール部位との間の平均得点差を算出し、初期生物反応性評価を下記の通り割り当てた：
０〜１．５ 反応なし＊
＞１．５〜３．５ 穏やかな反応
＞３．５〜６．０ 中程度の反応
＞６．０ 顕著な反応
＊マイナスの計算結果はゼロ（０）として報告。

【0334】

２．評価の修正：算出した生物反応性レベルを病理学観察者が再考する。全ての因子（例えば、相対的サイズ、反応性のパターン、炎症性対消散）の観察に基づいて、病理学観察者は生物反応性評価を訂正してもよい。評価の修正のための正当性は、経験的報告書に存在する（試験材料の生体適合性に関する記述された経験的報告書が病理学観察者により提供される）。

【0335】

６．７．３．２ 結果
結果は、試験物質が、移植から４週間、ポジティブコントロールであるサージセルと比較して反応性を示さなかったこと（生物反応性評価は０．２）、並びに、ネガティブコントロールである高密度ポリエチレン（ネガティブコントロールプラスチック）と比較して反応性を示さなかったこと（生物反応性評価は０．０）を、示唆している。

【0336】

臨床観察。下記の表ＸＩは、４週間の期間、炎症、カプセル化、出血、壊死又は変色の顕著な兆候を示さなかった、試験物質及びコントロール移植部位の肉眼評価の結果を示している。いくつかの試験部位及びポジティブコントロールであるサージセルの大多数は、肉眼では見られず、連続切片を肉眼評価のために提出した。

【0337】

表ＸＩ：

【0338】

【表12】

【0339】

移植部位観察（顕微鏡）。下記の表ＸＩＩは、コントロール物質移植部位のそれぞれと比較して、炎症性、線維形成、出血、壊死又は変色の顕著な兆候を示さなかった、試験物質移植部位の顕微鏡評価の結果を示している。４週間の期間の生物反応性評価（動物３体の平均）は、０．２（Ｃ１−サージセル）及び０．０（Ｃ２−ネガティブコントロールプラスチック）であり、コントロール移植部位のいずれかと比較して反応性を示さなかった。病理学者は、予期せず与えられた試験材料の性質ではない、ｉｎ ｓｉｔｕ試験物質周囲における、穏やかな多様性及び組織球性（マクロファージ）侵入が存在したことに注目した。

【0340】

表ＸＩＩ：

【0341】

【表13】

【0342】

表ＸＩＩ（コントロール）：

【0343】

【表14】

【0344】

表ＸＩＩ（コントロール）：

【0345】

【表15】

【0346】

６．７．４ 皮内注入試験−ＩＳＯ１０９９３−１０
注入（ＮａＣｌ）のためのＵＳＰ ０．９％ 塩化ナトリウム及び試験物質の綿実油（ＣＳＯ）抽出物について、ニュージーランド白ウサギにおける皮内注入後の炎症発生に対する能力を評価した。試験物質注入部位は、コントロール物質注入部位よりも顕著に優れた生物学的反応性を示さなかった。慣例の基準に基づけば、試験物質は炎症性に関して無視してよいと考えられ、ＩＳＯ １０９９３−１０ガイドラインの要求を満たしている。結果を以下の表ＸＩＩＩに示す。

【0347】

表ＸＩＩＩ：

【0348】

【表16】

【0349】

６．７．５ クリグマン（Ｋｌｉｇｍａｎ）最大化試験−ＩＳＯ １０９９３−１０
注入（ＮａＣｌ）のためのＵＳＰ ０．９％ 塩化ナトリウム及び試験物質の綿実油（ＣＳＯ）抽出物は、Ｈａｒｔｌｅｙギニーピッグにおける、誘発（０％感作）した後に導入段階を行ったとき、皮内反応を誘発しなかった。それゆえに、クリグマンの評価システムにより定義する場合、これは、グレードＩ反応であり、試験物質は、弱いアレルギー反応性を有するものとして分類される。慣例の基準に基づけば、グレードＩの感作率は顕著であるとは考えられず、かつ、試験物質は、ＩＳＯ １０９９３−１０ガイドラインンの要求を満たしている。結果を以下の表ＸＩＶに示す。

【0350】

表ＸＩＶ：

【0351】

【表17】

【0352】

６．８ 実施例８：ヒト患者におけるウイルス感染治療に効果的なｓＮＡＧナノファイバ
この実施例は、ｓＮＡＧナノファイバが、特に、ｉｎ ｖｉｖｏで単純疱疹ウイルスに対して、有力な抗ウイルス効果を有することを証明する。特に、この実施例は、ｓＮＡＧナノファイバをヒト患者のヘルペス感染部位に局所投与したときに、ＨＳＶ感染が関連するヘルペスの治療に効果的であることを示す。特に、この実施例は、ｓＮＡＧナノファイバを含む組成物によるヒト患者の局所治療により、ＨＳＶ感染に関連する痛みを軽減し、かつ、ヘルペス症状の持続期間を短縮させることを証明する。

【0353】

単純疱疹ウイルス感染
単純疱疹円唇化は、人口の２０〜４０％に影響すると見積もられる一般的な感染である（Ｓｐｒｕａｎｃｅ、１９９２；Ｌｏｗｈａｇｅｎ、２００２）。これらの感染の大多数は、単純疱疹タイプＩによるものであり、単純疱疹タイプＩＩに由来するのはより少ない。

【0354】

最も多くの個体が、人生の早い時期にヘルペス歯肉口内炎を伴う初期感染を経験する。初期感染の後、ウイルスは、三叉神経知覚神経において、慢性的な潜伏感染を確立させる。ウイルスの再活性化は、一般的であり、典型的には、唇の朱色の境界線に沿ったヘルペス円唇化が現れる。単純疱疹による初期感染は、長期間のウイルス増殖及び放出によって特徴づけられる（Ｈａｒｍｅｎｂｅｒｇ、２０１０）。ウイルス複製が終息した後、病斑は急速に治癒する。ヘルペス円唇化の再発は、一般に、後天性免疫反応のために、初期感染よりも急速に治癒する。残念ながら、活発な免疫反応は、痛み、発赤及び腫物を含む臨床症状を引き起こす顕著な炎症をもたらす。

【0355】

ヘルペスの再発は、明確に区分された段階により特徴づけられる（Ｈａｒｍｅｎｂｅｒｇ、２０１０）。予期される一連の段階は下記のように生じる：前兆、発赤、丘疹、小胞、潰瘍、硬い痂皮、乾いて剥離しつつある腫物の残留物及び標準的な治癒した皮膚。この疾患は、小胞、潰瘍及び痂皮段階の間が最も深刻であり、潰瘍性又は古典的な病斑としても見られる。

【0356】

ヘルペス円唇化の現在の治療法は、口腔内又は局所抗ウイルス薬物療法による、ウイルス複製の減少を、主に対象にしている。残念ながら、ウイルス複製段階は、感染再発においてかなり短期間であるため、これらの薬物療法は、あまり成功せず、ヘルペス病斑の治癒期間を約１０％縮める程度である（Ｈａｒｍｅｎｂｅｒｇ、２０１０）。

【0357】

研究目的
初期の終点。この実験の初期の目的は、口周囲のヘルペス円唇化病斑の治療におけるｓＮＡＧナノファイバの効果を調査すること、並びに、ｓＮＡＧナノファイバで治療した対象における、口周囲のヘルペス円唇化病斑の治療における、ｓＮＡＧナノファイバの効果を調査することであった。

【0358】

封入基準
下記の全ての基準を満たす患者が、研究対象に加えるために適任であった。

【0359】

１．年齢１８歳以上の概ね健康な男性又は女性
２．直近１２か月以内に、唇及び／又は唇周囲の皮膚に３回以上ヘルペスが再発した病歴により定義される、ヘルペス円唇化の再発を有する。

【0360】

３．典型的なヘルペス病斑（例えば、小胞、潰瘍又は硬い痂皮）が発達する再発症状の５０％以上の間である。

【0361】

４．唇の発生部位における、発赤、痛み、発熱、うずき、腫物又は締まった感覚を含む前駆症状により定義された病歴が進行するほとんどのヘルペス再発を有する。

【0362】

５．研究のための初期ヘルペス再発が、粘膜を含まない、唇から１ｃｍの位置又はそれ以内に位置しなければならない。

【0363】

実験材料
それぞれ２００μＬ（ｓＮＡＧ濃度 ５０ｍｇ／ｍＬ）含む５つのプラスチックチューブに、ｓＮＡＧナノファイバを、供給した。

【0364】

投与
１０人の対象（ヒト患者）が実験に参加した。ｓＮＡＧナノファイバ（使用したｓＮＡＧナノファイバの大多数は、長さ約１〜１５μｍであった）を、連続して５晩、１晩１回、就寝直前にヘルペスに添加した。

【0365】

実験評価及び日記
実験チームは、表ＸＶに示すヘルペス臨床評価尺度に基づいて、実験に参加した対象の疱疹性潰瘍を評価した。

【0366】

表ＸＶ：ヘルペス臨床評価

【0367】

【表18】

【0368】

【表19】

【0369】

対象には、ヘルペス再発の日付及び時間、各治療投与時間、痛みの程度を記録するよう指示した。痛みを、０＝痛み無し及び１０＝深刻な痛みのような１０段階の尺度（０から１０）を用いて評価した。図１９は、実験に使用した痛み強度の数値尺度を示している。表ＸＶＩは、調査者に提示した質問及び測定した治療効果の尺度を含む、実験終了時の調査者による治療の総合評価を示している。表ＸＶＩＩは、対象に提示した質問及び測定した治療効果の尺度を含む、実験終了時の対象による治療の総合評価を示している。表ＸＶＩＩは、また、対象への「このヘルペス再発は以前よりも早く治癒したか？」の質問、及び、この質問に対する対象による「はい」又は「いいえ」の回答を示している。
表ＸＶＩ：実験終了時の調査者による治療の総合評価

【0370】

【表20】

【0371】

表ＸＶＩＩ：実験終了時の対象による治療の総合評価

【0372】

【表21】

【0373】

結果及び議論
１０人の患者を上述した実験に加え、実験を終了した。調査チームは、これらの患者のヘルペスの臨床評価が確定した後、患者が所定の治療を行ったことを確認した。

【0374】

実験終了時の調査者による、この実験に加えた１０人の患者の治療の総合評価を、表ＸＶＩＩＩに示した。実験終了時に、調査者に下記質問「このヘルペス再発の臨床経過に基づいて、治療効果に対するあなたの評価は？」を質問した。調査者の反応を表ＸＶＩＩＩに表す。

【0375】

表ＸＶＩＩＩ：

【0376】

【表22】

【0377】

したがって、調査者は、単純疱瘡ウイルスに起因することが知られているヘルペスの、ｓＮＡＧナノファイバによる局所治療が、かなり効果的な療法であることを見出した。

【0378】

この実験に加えた１０人の対象による療法の効果の評価を、表ＸＩＸに表す。患者はｓＮＡＧナノファイバの局所投与（上述した通り）を受け、治療適用及び痛みの程度を記録した。患者は質問に答え、結果を報告した。患者に下記質問「ヘルペス再発に基づいて、治療効果に対するあなたの評価は？」、「このヘルペス再発は以前よりも早く治癒したか？」を質問した。対象の反応を表ＸＩＸに表す。

【0379】

表ＸＩＸ：

【0380】

【表23】

【0381】

この実験結果は、ｓＮＡＧナノファイバの適用により、再発したヘルペス円唇化の持続期間を短縮し、これに関連する痛みを軽減することを証明する。調査者及び患者の両方が、この療法が、この状態の治療においてかなり効果的であったと報告した。

【0382】

この実験結果は、ヘルペス円唇化への適用だけではなく、陰部ヘルペス及び帯状疱疹を含むがこれに限定されない、ウイルスに起因する腫瘍形成に対する治療能力も示している。

【0383】

次に、ｓＮＡＧナノファイバの局所適用の効果を、プラシーボコントロール実験において、２５ｍｇ／ｍＬの濃度のｓＮＡＧナノファイバを用いて評価した。

【0384】

参照文献
Ｓｐｒｕａｎｃｅ ＳＬ．Ｔｈｅ ｎａｔｕｒａｌ ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｆ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｏｒａｌ−ｆａｃｉａｌ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｓｅｍｉｎ Ｄｅｒｍａｔｏｌ １９９２；１１：２００−２０６．
Ｌｏｗｈａｇｅｎ ＧＢ，Ｂｏｎｄｅ Ｅ，Ｅｒｉｋｓｓｏｎ Ｂ，Ｎｏｒｄｉｎ Ｐ，Ｔｕｎｂａｃｋ Ｐ，Ｋｒａｎｔｚ Ｉ．Ｓｅｌｆ−ｒｅｐｏｒｔｅｄ ｈｅｒｐｅｓ ｌａｂｉａｌｉｓ ｉｎ ａ Ｓｗｅｄｉｓｈ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ ２００２；３４：６６４−６６７．
Ｈａｒｍｅｎｂｅｒｇ Ｊ，Ｏｂｅｒｇ Ｂ，Ｓｐｒｕａｎｃｅ Ｓ．Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ ｌｅｓｉｏｎｓ ｂｙ ｅｐｉｓｏｄｉｃ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｈｅｒｐｅｓ ｌａｂｉａｌｉｓ：Ａ ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗ．Ａｃｔａ Ｄｅｒｍ Ｖｅｎｅｒｅｏｌ．２０１０ Ｍａｒ；９０（２）：１２２−３０．
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６．９ 実施例９：ｉｎ ｖｉｖｏの炎症性腸疾患の治療に効果的なｓＮＡＧナノファイバ
この実施例は、ｓＮＡＧナノファイバが、炎症性腸疾患の進行治療及び／又は予防に効果的であることを示す。特に、この実施例は、ｓＮＡＧナノファイバの直腸投与が、疾患の動物モデルにおいて化学的に誘引した炎症性腸疾患に関連する炎症の治療及び／又は予防に効果的であることを示す。

【0385】

炎症性腸疾患
死亡率及び生活の質に顕著に影響する一般的な慢性炎症性疾患の１つは、クローン病及び潰瘍性大腸炎（ＵＣ）を含む炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である。この疾患の病理生理学に関連して、例えば、初期の要因は何なのか、並びに、疾患がどのように慢性炎症、損傷した組織の効果のない回復及び治癒不全に進行するのかのような、２つの主要な疑問点がある。近年、２番目の疑問点への関心が高まり、疾患の効果的な治療及び生活の質の向上を実現可能な衝撃的な新たな発見につながっている。

【0386】

材料及び方法
この実験に用いたモデルは、マウスに７日間飲料水を介して３％ＤＳＳ（デキストラン硫酸ナトリウム）の投与からなるＤＳＳ−誘引潰瘍性大腸炎モデルである。炎症反応のピークを７日目に観察し、その後、損傷した直腸組織の修復期間、並びに、直腸疾患への最終的な再生若しくは進行及び線維形成の進行を観察した。

【0387】

実験計画を示すチャートを図２０に表す。０日目から７日目に、この実験に使用する動物（マウス）の全てに、飲料水を介してＤＳＳを投与した。動物の１グループ（Ｎ＝１０）に、ｓＮＡＧナノファイバ １００μＬ（濃度１２ｍｇ／ｍＬ；使用した大多数のｓＮＡＧナノファイバの長さは約１〜１５μｍである）を、実験１日目及び３日目に直腸投与した（試験グループ）。動物の第２グループ（Ｎ＝１０）に、生理食塩水コントロールを、実験０日目及び３日目に直腸投与した（コントロールグループ）。全てのマウスを７日目に安楽死させ、それらの炎症反応を、腸内上皮の組織学的分析により評価した。組織学的分析を、Ｈ＆Ｅ染色のような腸内上皮切片の染色を介して行った。

【0388】

腸内上皮切片のＨ＆Ｅ染色のプロトコル。脱パラフィン処理のために、切片を、まず、キシレン中で３０分間インキュベートした後、エタノール濃度を減少させてインキュベートした（１００％×２ ３分間、９５％ ３分間、７５％ ３分間、５０％ ３分間）。切片を流水中に５分間放置し、余分なエタノールを除去した。その後、切片をヘマトキシリン中に２０秒間浸漬し、浄水中に１〜２浸漬して洗浄した。切片を続けてエオシン中で４５秒間インキュベートし、再度浄水中で洗浄した。その後、切片を、エタノール濃度を上昇させてインキュベートした後（８０％ ３０秒間、９０％ ３０秒間及び１００％ ２分間）、キシレンで９分間インキュベートした。続いて、切片をＤＰＸ封入剤で封入し、カバースリップ下に載置した。

【0389】

結果及び議論
図２１及び２２は、炎症性腸疾患のＤＳＳ誘引マウスモデルにおいて、ｓＮＡＧナノファイバによる治療が：コントロールマウスと比較して、炎症反応の顕著な減少（発表された組織学的基準により判断）；並びに、腸内上皮を含む支持組織を再生するための再生メカニズムと協調して作用する、ＤＳＳ大腸炎の亜急性段階における予防効果、をもたらすことを示す。

【0390】

特に、図２１は、改善した組織学的発見が、ｓＮＡＧナノファイバ投与マウスにおいては炎症過程に関連したが、コントロールマウスにおいては関連しなかったことを示す。特に、ｓＮＡＧ処理グループマウスでは、浮腫の減少（図２１Ａ及び２１Ｂを参照；浮腫領域を薄い矢印及び括弧書きで示す）、及び、白血球浸潤の減少（図２１Ａ及び２１Ｂを参照；白血球湿潤は濃い矢印で示す）が現れたが、コントロールマウスでは現れなかった。

【0391】

図２２は、ｓＮＡＧナノファイバで処理したマウス及びコントロールマウスからの切片における、線維形成のための染色を示す。ｓＮＡＧ処理マウスとコントロールマウスとの間の炎症反応の違いは明らかである。特に、コントロールグループは、線維形成の増加兆候を示す（図２２Ａ参照）一方で、ｓＮＡＧ処理したグループは示さなかった（図２２Ｂ参照）。

【0392】

表されたデータは、ｓＮＡＧナノファイバが、疾患の動物モデルにおける炎症性腸疾患に関連する炎症の治療及び／又は予防に効果的であることを示す。これらの発見は、ＩＢＤ患者の治療における、ｓＮＡＧナノファイバの治療適用の可能性を証明する。さらに、有利なことに、ｓＮＡＧナノファイバを（座薬を介して直腸に投与のように）局所投与により部分的に適用可能であり、それゆえに（全身投与剤に一般的な）全身性の副作用を避けることができる。

【0393】

７．参照文献の組み込み
この明細書に記載した論文、特許及び特許出願のような全ての参照文献の開示の全てを、まるで個々の論文又は特許出願のそれぞれが、特に及び個別に、参照として組み込むことが示されているように、参照としてここに組み込む。本発明は、明確な理解の目的のための図面及び実施例により、いくつかの詳細が記載されているが、本発明の教示の観点から、単に当業者に明らかにするためのものであり、特定の変更及び修正は、特許請求の範囲に記載した精神又は範囲から離れることなく加えられ得る。

【図面の簡単な説明】

【0394】

【図1】ナノファイバが、Ｅｔｓ１の上流レギュレータであるＡｋｔ１活性化を刺激する。（Ａ）は、ＮＡＧ応答によるリン酸化Ａｋｔ及び血清欠乏ＥＣのｓＮＡＧ刺激のウエスタンブロット分析である。（Ｂ）は、スクランブルコントロール（ＳＣＲ）又はＡｋｔ１ ｓｈＲＮＡレンチウイルスの何れかに感染したＥＣのＲＴ−ＰＣＲ分析、及び、ローディングコントロールとしてのＥｔｓ１及びＳ２６の発現評価である。（Ｃ）は、ｓＮＡＧナノファイバからＡｋｔ１、Ｅｔｓ１及びディフェンシンへ信号伝達する信号伝達経路の概略図である。

【図2A】Ａｋｔ１欠損動物における遅延した創傷治癒が、タリデルム治療により部分的に救済されている。（Ａ）は、タリデルムにより治療した又は治療していない、ＷＴ及びＡＫＴ１欠損創傷マウスの、代表的な図である。

【図2B】Ａｋｔ１欠損動物における遅延した創傷治癒が、タリデルム治療により部分的に救済されている。（Ｂ）は、創傷３日後のマウスにおける、代表的なマウス皮膚部分のＨ＆Ｅ染色である。

【図3】ｓＮＡＧナノファイバが、一次内皮細胞におけるサイトカイン及びディフェンシン発現を刺激する。（Ａ）は、ａ−ディフェンシンに対する直接抗体を用いた、ｓＮＡＧにより治療した又は治療していないＥＣの免疫組織化学である。（Ｂ）は、ＥＣのナノファイバ治療（血清欠乏、５μｇ／ｍＬ又は１０μｇ／ｍＬのｓＮＡＧによる治療）が、α−ディフェンシン１−３の分泌をもたらしたことを示すＥＬＩＳＡである。

【図4】ｓＮＡＧナノファイバが、Ａｋｔ１依存様式による一次内皮細胞におけるディフェンシン発現を刺激する。（Ａ）及び（Ｂ）は、ｓＮＡＧ（「ｓｎａｇ」）、ＰＤ９８０５９（ＭＡＰＫインヒビター、「ＰＤ」）、ウォルトマンニン（ＰＩ３Ｋインヒビター、「ｗｔｍ」）、又は、スクランブルコントロール（「ＳＣＲ」）若しくはＡｋｔ１（「ＡＫＴ１」） ｓｈＲＮＡレンチウイルスによる感染、のいずれかの処理をした又は処理をしない血清欠乏ＥＣ（「ｓｓ」）の量的ＲＴ−ＰＣＲ分析、並びに、遺伝子発現の分析を示している。

【図5A】ｓＮＡＧナノファイバが、マウスケラチン生成細胞におけるβ−ディフェンシン３発現を刺激する。（Ａ）は、３日目における、ＷＴ及びＡｋｔ１欠損動物からのパラフィン包埋マウス皮膚創傷部位の、β−ディフェンシン３（右手上部パネルにおいて明るい染色として見られる；例えば濃白矢印を参照）及びＩｎｖｏｌｕｃｒｉｎ抗体での免疫蛍光染色である。

【図5B】ｓＮＡＧナノファイバが、マウスケラチン生成細胞におけるβ−ディフェンシン３発現を刺激する。（Ｂ）は、ＮＩＨＩｍａｇｅＪソフトウェアを用いた、β−ディフェンシン３免疫蛍光染色の定量化である（ＴＸ＝タリデルム；Ａｋｔ１＝Ａｋｔ１欠損）。

【図5C】ｓＮＡＧナノファイバが、マウスケラチン生成細胞におけるβ−ディフェンシン３発現を刺激する。（Ｃ）は、β−ディフェンシン３（明るい染色として見られる；例えば濃白矢印を参照）及びＴＯＰＲＯ−３（核染色；例えば薄白矢印を参照）により治療した及び治療していない、ＷＴ及びＡｋｔ１欠損ケラチン生成細胞の免疫蛍光染色である。ＷＴ及びＡｋｔ１タリデルムで治療した創傷におけるβ−ディフェンシン３染色の増加に注目する。

【図6】Ａｋｔ１依存転写因子結合部位である。Ａｋｔ１依存転写因子結合部位の概略図である。Ｇｅｎｏｍａｔｉｘソフトウェアを用いて、転写開始部位の５００塩基上流を、ＤＥＦ１、４及び５のｍＲＮＡにおける保存部位として分析した（ＥＴＳ−黒楕円；ＦＫＨＤ−縞模様楕円；ＣＲＥＢ−白楕円；ＮＦＫＢ−格子縞楕円）。

【図7】ｓＮＡＧ処理が、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるディフェンシンの発現及び分泌をもたらす。（Ａ）は、示した時間ｓＮＡＧ（５０μｇ／ｍＬ）で処理した血清欠乏（ＳＳ）一次内皮細胞のＲＴＰＣＲ分析、ならびに、β−ディフェンシン３及びα−ディフェンシン１の発現の評価である。（Ｂ）は、血清欠乏（非処理）又はｓＮＡＧナノファイバで処理した（１０μｇ／ｍＬで５時間）内皮細胞の免疫蛍光標識である。抗体は、α−ディフェンシン５（ＦＩＴＣ、左手上部パネル）、β−ディフェンシン３（テキサスレッド、右手上部パネル）に対する直接抗体である。核はＴＯＰＲＯ−３（青、左手下部パネル）で染色された。右手下部パネルは、三重オーバーレイを表している。（ｃ）は、血清欠乏（非処理）又はｓＮＡＧナノファイバで処理した（１０μｇ／ｍＬで５時間）ケラチン生成細胞（ＨａＣａｔ）の免疫蛍光標識である。抗体は、α−ディフェンシン５（ＦＩＴＣ、左手上部パネル）、β−ディフェンシン３（テキサスレッド、右手上部パネル）に対する直接抗体である。核はＴＯＰＲＯ−３（青、左手下部パネル）で染色した。

【図8A】ｓＮＡＧ誘導ディフェンシン発現がＡｋｔ１に依存する。（Ａ）は、ｓＮＡＧによる３時間の処理若しくは非処理、ＰＤ０９８０５９（「ＰＤ」）による処理（５０μＭ）若しくは非処理、ウォルトマンニン（「ＷＴＭ」）による処理（１００ｎｍ）若しくは非処理の、血清欠乏内皮細胞から単離した全長ＲＮＡからの、α−ディフェンシン１に対するプライマーを用いた量的ＲＴ−ＰＣＲ分析である。

【図8B】ｓＮＡＧ誘導ディフェンシン発現がＡｋｔ１に依存する。（Ｂ）は、ｓＮＡＧによる３時間の処理若しくは非処理、ＰＤ９８０５９による処理（５０μｍ）若しくは非処理、ウォルトマンニン（「ＷＴＭ」）による処理（１００ｎｍ）若しくは非処理の、血清欠乏内皮細胞から単離した全長ＲＮＡからのβ−ディフェンシン３の定量化であり、Ｓ２６に関連して示す。

【図8C】ｓＮＡＧ誘導ディフェンシン発現がＡｋｔ１に依存する。（Ｃ）は、示した時間ｓＮＡＧにより刺激した血清欠乏内皮細胞（ＳＳ）におけるリン酸化−Ａｋｔのウエスタンブロット分析である。ラインは、除去されたレーンを示している。

【図8D】ｓＮＡＧ誘導ディフェンシン発現がＡｋｔ１に依存する。（Ｄ）は、スクランブルコントロール（ＳＣＲ）又はＡｋｔ１ ｓｈＲＮＡレンチウイルスに感染し、ｓＮＡＧにより処理又は非処理の血清欠乏内皮細胞の量的ＲＴ−ＰＣＲ分析であり、α−ディフェンシン ４発現により評価した。定量化はＳ２６に対して示す。

【図8E】ｓＮＡＧ誘導ディフェンシン発現がＡｋｔ１に依存する。（Ｅ）は、スクランブルコントロール（ＳＣＲ）又はＡｋｔ１ ｓｈＲＮＡレンチウイルスに感染し、ｓＮＡＧにより処理又は非処理の血清欠乏内皮細胞から単離した全長ＲＮＡから発現したβ−ディフェンシン３の定量化である。定量化はＳ２６に対して示す。全ての実験を、少なくとも３通り行い、少なくとも独立して３回繰り返し、ｐ値を示した。

【図9】ｉｎ ｖｉｖｏにおけるｓＮＡＧ誘導ディフェンシン発現が、Ａｋｔ１を要求する。（Ａ）は、創傷後３日目に回収された、ＷＴ（ｎ＝３）及びＡｋｔ１マウスからの、パラフィン包埋皮膚創傷部位である。創傷部に、非処理又はｓＮＡＧ膜による処理のいずれかを行った。β−ディフェンシン３（緑、右手上部パネルにおいて明るい染色部として見られる。例えば濃白矢印参照）、Ｉｎｖｏｌｕｃｒｉｎ（赤）、及び、Ｔｏｐｒｏ（青、核染色、例えば薄白矢印）に対する直接抗体を用いて、免疫蛍光を行った。（Ｂ）は、３日目に回収した、ｓＮＡＧで処理したＷＴからのパラフィン包埋部位である。βディフェンシン３（緑、明るい染色として見られる；例えば濃白色矢印参照）、Ｉｎｖｏｌｕｃｒｉｎ（赤）及びＴｏｐｒｏ（青、核染色；例えば薄白矢印参照）に対する直接抗体を用いて、免疫蛍光を行った。この低倍率（２０×）は、β−ディフェンシン３を発現する内皮層をより良く示すためでもある。スケールバーは５０μｍである。（Ｃ）は、ＮＩＨ ＩｍａｇｅＪソフトウェアを用いて行った、パラフィン包埋部位から発現したβ−ディフェンシン３発現の定量化である。実験を独立して３回繰り返し、ｐ値を示す。

【図10】ｓＮＡＧ処理により、野生型マウスにおいて、創口閉鎖が向上する。ｓＮＡＧ膜により処理した又は非処理のＣ５７Ｂ１６野生型動物由来の創傷組織部位のＨ＆Ｅ染色である。創傷後の日数を各パネルの左側に示す。濃い黒線は、創口閉鎖を示すケラチン生成細胞層に沿っている。黒矢印は、創面の縁を示す。

【図11A】ＳＮＡＧ処理により、Ａｌｔ１依存様式における微生物感染が減少する。（Ａ）は、ＷＴマウスのＳ．アウレアス感染創傷部位の組織グラム染色である。ＷＴマウスを、４ｍｍ生検穿孔機を用いて傷つけた。創傷後すぐにマウスに１×１０^９ｃｆｕ／ｍＬを接種させた。感染３０分後に、処理群のマウスをタリデルムで処理した。皮膚サンプルを処理の５日後に採取し、分析のために区分化した。組織グラム染色を行った。暗紫染色は、グラム陽性微生物及び微生物を呑食した好中球を示している。領域を２０倍及び４０倍に拡大して示す。

【図11B】ｓＮＡＧ処理により、Ａｌｔ１依存様式における微生物感染が減少する。（Ｂ）は、ＷＴマウス及びＡｋｔ１欠損マウス（ｎ＝３）のパラフィン包埋Ｓ．アウレアス感染創傷の組織グラム染色である。感染創傷をｓＮＡＧ膜で処理又は非処理し、創面を３日目及び５日目に分析のために回収した。暗紫染色は、創面中のグラム陽性微生物の存在を示す。黒矢印はグラム陽性染色の例を示す。ｓＮＡＧ処理したＷＴ動物においてはなかったが、非処理ＷＴにおいては陽性染色の蓄積が見られたことに注目する。スケールバーは５０μｍである。

【図11C】ＳＮＡＧ処理により、Ａｌｔ１依存様式における微生物感染が減少する。（Ｃ）は、処理又は非処理のＷＴマウス（ｎ＝３）及びＡｋｔ１マウス（ｎ＝３）の両方を用いて、創傷５日後のＣＦＵｓのＳ．アウレアス感染創傷を定量化した。ｓＮＡＧで処理した野生型マウスにおいては、Ａｋｔ１欠損動物と比較して、創面中の微生物の顕著な減少（ｐ＜．０１）が見られる。全ての実験を独立して３回繰り返し、ｐ値を示す。

【図11D】ＳＮＡＧ処理により、Ａｌｔ１依存様式における微生物感染が減少する。（Ｄ）は、図１１Ｃに示したのと同様の方法で、創傷３日後における感染した創傷部位から定量化したＣＦＵである。感染創傷のｓＮＡＧ処理により、３日目のＷＴ動物及びＡｋｔ１欠損動物の両方においてＣＦＵの顕著な減少が見られたが、ＷＴ動物は約１０倍の差が見られたのに対して、Ａｋｔ１動物においては約２倍の差が見られた。

【図11E】ＳＮＡＧ処理により、Ａｌｔ１依存様式における微生物感染が減少する。（Ｅ）は、種々の量のｓＮＡＧナノファイバで処理した又は非処理のＳ．アウレアス培地におけるＣＦＵｓの定量化である。各実験を独立して３回行い、ｐ値を示した。

【図11F】ＳＮＡＧ処理により、Ａｌｔ１依存様式における微生物感染が減少する。（Ｆ）は、β−ディフェンシン３ペプチド（１．０μＭ）で処理した又は非処理のＷＴマウス（ｎ＝３）において、創傷３日後に回収したＳ．アウレアス感染創傷の組織グラム染色である。β−ディフェンシン３ペプチドで処理した感染創傷におけるグラム陽性染色が減少したことに注目する。

【図11G】ＳＮＡＧ処理により、Ａｌｔ１依存様式における微生物感染が減少する。（Ｇ）は、β−ディフェンシン３ペプチドで処理した又は非処理の、Ｓ．アウレアス感染ＷＴマウス（ｎ＝３）からのＣＦＵｓの定量化である。ペプチドで処理した感染創傷は、ＣＦＵにおいて顕著な減少（ｐ＜．０５）を示す。スケールバーは５０μｍである。各実験を独立して３回行い、ｐ値を示す。

【図12】Ｓ．アウレアス感染創傷のｓＮＡＧ処理によるディフェンシン発現の迅速な誘導。（Ａ）は、ｓＮＡＧ処理したＷＴマウス（ｎ＝３）及び非処理のＷＴマウス（ｎ＝３）の両方において、３日目に回収したＳ．アウレアス感染創傷からのパラフィン包埋組織部位を、β−ディフェンシン３（緑、右手上部パネル及び下部中央パネルにおいて明るい染色が見られた、例えば濃白矢印参照）、ケラチン生成細胞層を特徴づけるためのＩｎｖｏｌｕｃｒｉｍ（赤）、及び、Ｔｏｐｒｏ（青、核染色、例えば薄白矢印参照）に対する直接抗体を用いた免疫蛍光の対象とした。ケラチンの非特異的染色が、二次抗体でのみ染色されており、一次コントロールではないことが示された。スケールバーは５０μｍである。（Ｂ）は、ＮＩＨ ＩｍａｇｅＪソフトウェアを用いた、パラフィン包埋部位におけるβ−ディフェンシン３発現の定量化である。ｓＮＡＧで処理したＳ．アウレアス感染創傷においては、β−ディフェンシン３染色の顕著な上昇（ｐ＜．０５）がみられる。実験を独立して３回繰り返し、ｐ値を示す。

【図13】β−ディフェンシン３に対する抗体が、ｓＮＡＧ処理の抗菌効果を妨げる。（Ａ）は、３日目に回収した、ＷＴマウス（ｎ＝３）のｓＮＡＧ処理したパラフィン包埋Ｓ．アウレアス感染創傷の組織グラム染色である。ｓＮＡＧ処理した創傷は、ｓＮＡＧ処理の前に、β−ディフェンシン３抗体又はコントロールのヤギＩｇＧ抗体のアイソタイプで処理した。代表的な図は、β−ディフェンシン３の直接抗体で処理したマウスの創面において、グラム陽性染色の蓄積（黒矢印）の増加を示す。スケールバーは２０μｍである。（Ｂ）は、ｓＮＡＧ処理の前にβ−ディフェンシン３抗体（ｎ＝３）又はコントロールのＩｇＧ抗体（ｎ＝３）により処理した、Ｓ．アウレアス感染ＷＴマウスからのＣＦＵｓの定量化である。β−ディフェンシン３適用により、ＣＦＵが顕著に増加した（ｐ＜．０５）。

【図14A】ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン（「ｐＧｌｃＮＡｃ」）ファイバの化学的構造及び物理的構造に対する放射線照射の効果。（Ａ）は、ｐＧｌｃＮＡｃの分子量と、放射線レベル／放射線照射のための形成との間の相関である。

【図14B】ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン（「ｐＧｌｃＮＡｃ」）ファイバの化学的構造及び物理的構造に対する放射線照射の効果。（Ｂ）は、非放射線照射ｐＧｌｃＮＡｃスラリーの赤外線スペクトル（上部ライン）、１００ｋＧｙで放射線照射したｐＧｌｃＮＡｃスラリーの赤外線スペクトル（下部ライン）、２００ｋＧｙで放射線照射したｐＧｌｃＮＡｃスラリーの赤外線スペクトル（中央ライン）である。

【図14C】ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン（「ｐＧｌｃＮＡｃ」）ファイバの化学的構造及び物理的構造に対する放射線照射の効果。（Ｃ）は、ｐＧｌｃＮＡｃの走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）分析である。

【図14D】ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン（「ｐＧｌｃＮＡｃ」）ファイバの化学的構造及び物理的構造に対する放射線照射の効果。（Ｄ）は、ｓＮＡＧの走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）分析である。

【図15】ｐＧｌｃＮＡｃが代謝率に影響しなかった。各期間（例えば、２４時間及び４８時間）において、４つの棒グラフ（左から右）のそれぞれは、以下に一致する；血清欠乏（ＳＳ）、ＶＥＧＦ、並びに、５０μｇ／ｍＬ及び１００μｇ／ｍＬにおけるｐＧｌｃＮＡｃ（ＮＡＧ）。

【図16】ｐＧｌｃＮＡｃが、血清欠乏により引き起こされる細胞死から、ヒト臍静脈内皮細胞（ＥＣ）を保護したことを示す。各期間（例えば、２４時間、４８時間及び７２時間）において、５つの棒グラフ（左から右）のそれぞれは、以下に一致する；血清欠乏（ＳＳ）、ＶＥＧＦ、並びに、５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ及び２５０μｇ／ｍＬにおけるｐＧｌｃＮＡｃ（ＮＡＧ）。

【図17】ｓＮＡＧが代謝率の著しい増加を引き起こした。５つの棒グラフ（左から右）のそれぞれは、以下に一致する；血清欠乏（ＳＳ）、ＶＥＧＦ、並びに、５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ及び２００μｇ／ｍＬにおけるｓＮＡＧ。

【図18】ｓＮＡＧが、血清欠乏により引き起こされる細胞死からＥＣを保護しなかった。各期間（例えば２４時間及び４８時間）において、５つの棒グラフ（左から右）のそれぞれは、以下に一致する；血清欠乏（ＳＳ）、ＶＥＧＦ、並びに、５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ及び２００μｇ／ｍＬにおけるｓＮＡＧ。

【図19】痛みの強さの数値スケールを示す。

【図20】マウスモデルにおける３％ＤＳＳ（硫酸ナトリウムデキストラン）誘引炎症性腸疾患（特に、潰瘍性大腸炎）のために用意した実験の概略。

【図21】ｓＮＡＧ処理が、炎症性腸疾患の動物モデルにおいて、炎症を減少させたことを示す。（Ａ）は、飲料水を介して３％ ＤＳＳを７日間（０日目から７日目）投与し、かつ、直腸座薬を介して生理食塩水（１００μＬ）を０日目から３日目まで投与した１０匹のマウスのコントロール群における、腸上皮組織領域のＨ＆Ｅ染色である。（Ｂ）は、飲料水を介して３％ ＤＳＳを７日間（０日目から７日目）投与し、かつ、直腸座薬を介してｓＮＡＧ（ｓＮＡＧを総量で１２μｇ／μＬ含む１００μＬ）を０日目から３日目まで投与した１０匹のマウスの試験群における、腸上皮組織領域のＨ＆Ｅ染色である。薄い矢印及び括弧書きは浮腫部位を示しており、濃い矢印は白血球炎症部位を示している。

【図22】ｓＮＡＧ処理が、炎症性腸疾患の動物モデルにおいて、線維形成を減少させたことを示す。（Ａ）は、飲料水を介して３％ ＤＳＳを７日間（０日目から７日目）投与し、かつ、直腸座薬を介して生理食塩水（１００μＬ）を０日目から３日目まで投与した１０匹のマウスのコントロール群における、腸上皮組織領域の線維染色である。（Ｂ）は、飲料水を介して３％ ＤＳＳを７日間（０日目から７日目）投与し、かつ、直腸座薬を介してｓＮＡＧ（ｓＮＡＧを総量で１２μｇ／μＬ含む１００μＬ）を０日目から３日目まで投与した１０匹のマウスの試験群における、腸上皮組織領域の線維染色である。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図6】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図8D】

【図8E】

【図9】

【図10】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【図11D】

【図11E】

【図11F】

【図11G】

【図12】

【図13】

【図14A】

【図14B】

【図14C】

【図14D】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】