特許 6144775 腎臓病の治療に使用されるアーテミシニンおよびその誘導体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6144775

(24)【登録日】2017年5月19日

(45)【発行日】2017年6月7日

(54)【発明の名称】腎臓病の治療に使用されるアーテミシニンおよびその誘導体

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/366 20060101AFI20170529BHJP

   A61K 31/357 20060101ALI20170529BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20170529BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/366

   A61K31/357

   A61P13/12

【請求項の数】13

【全頁数】39

(21)【出願番号】特願2015-546867(P2015-546867)

(86)(22)【出願日】2012年12月12日

(65)【公表番号】特表2016-507486(P2016-507486A)

(43)【公表日】2016年3月10日

(86)【国際出願番号】EP2012075306

(87)【国際公開番号】WO2014090306

(87)【国際公開日】20140619

【審査請求日】2015年12月10日

(73)【特許権者】

【識別番号】508018093

【氏名又は名称】クイーン マリー アンド ウエストフィールド カレッジ， ユニバーシティー オブ ロンドン

(74)【代理人】

【識別番号】110000671

【氏名又は名称】八田国際特許業務法人

(72)【発明者】

【氏名】ティエマーマン，クリストフ

【審査官】 磯部 洋一郎

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１２／０３３２６６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２００４／０２８４７６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１０／１３５４２７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１２／１６８４５０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１０／１３２８２１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 International Journal of Toxicology, 2007, Vol.26, p.373-380

【文献】 XI-LI WU，EFFECT OF ARTEMISININ 以下省略，CHINESE JOURNAL OF INTEGRATIVE MEDICINE，CHINESE ASSOCIATION OF TRADITIONAL 以下備考，２０１１年 ４月２１日，V17 N4，P277-282，AND WESTERN MEDICINE

【文献】 Acta. Biochim Biophys. Sin., 2010, Vol.42, p.916-923

【文献】 MIRSHAFIEY ABBAS，PHARMACEUTICAL BIOLOGY，２００８年，V46 N9，P639-646

【文献】 Seminars in Nephrology, 2008, Vol.28(4), p.395-408

【文献】 International Immunopharmacology, 2006, Vol.6, p.1243-1250

【文献】 International Journal of Oncology, 2011, Vol.39, p.279-285

【文献】 International Immunopharmacology, 2008, Vol.8, p.379-389

【文献】 移植, 2007, Vol.42（総会臨時号）, p.368

【文献】 日本薬学会年会要旨集, 2001, Vol.121(1), p.204

【文献】 炎症と免疫, 2006, Vol.14(1), p.95-103

【文献】 Journalof Cellular Physiology, 2005, Vol.204, p.792-799

【文献】 Neurochem Res., 2007, Vol.32, p.1547-1551

【文献】 Nature Biotechnology, 2010, Vol.28(3), p.249-257

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３１／３６６

Ａ６１Ｋ ３１／３５７

Ａ６１Ｐ １３／１２

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記の化学式Ｉで示される化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルを含み、腎損傷の１２時間後以降に投与される、急性腎損傷の治療剤：

【化1】

ただし、Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、Ｈまたはアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルから選択される置換されてもよい基であり、Ｒ^３およびＲ^４は結合してカルボニル（＝Ｏ）を形成する；または、
Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、Ｈまたはアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルから選択される置換されてもよい基であり、Ｒ^３はＨであり、かつＲ^４はＨまたは−ＯＲ^５であり、この際Ｒ^５はＨまたはアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルから選択される置換されてもよい基である。

【請求項2】

Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、Ｈまたは置換されてもよい炭素数１〜１０のアルキルであり、Ｒ^３およびＲ^４は結合してカルボニル（＝Ｏ）基を形成する；または、
Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、Ｈまたは置換されてもよい炭素数１〜１０のアルキルであり、Ｒ^３はＨであり、かつＲ^４はＨまたは−ＯＲ^５であり、この際Ｒ^５はＨまたはアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルから選択される置換されてもよい基である、
請求項１に記載の治療剤。

【請求項3】

Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、Ｈまたは置換されてもよい炭素数１〜３のアルキルであり、Ｒ^３およびＲ^４は結合してカルボニル（＝Ｏ）基を形成する；または、
Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、Ｈまたは置換されてもよい炭素数１〜３のアルキルであり、Ｒ^３はＨであり、かつＲ^４はＨまたは−ＯＲ^５であり、この際Ｒ^５はＨまたはアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルから選択される置換されてもよい基である、
請求項１または２に記載の治療剤。

【請求項4】

Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、Ｈまたは置換されてもよいメチルであり、Ｒ^３およびＲ^４は結合してカルボニル（＝Ｏ）基を形成する；または、
Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、Ｈまたは置換されてもよいメチルであり、Ｒ^３はＨであり、かつＲ^４はＨまたは−ＯＲ^５であり、この際Ｒ^５はＨまたはアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルから選択される置換されてもよい基である、
請求項１〜３のいずれか１項に記載の治療剤。

【請求項5】

Ｒ^１およびＲ^２は、共に独立して、メチルであり、Ｒ^３およびＲ^４は結合してカルボニル（＝Ｏ）基を形成する；または、
Ｒ^１およびＲ^２は、共に独立して、メチルであり、Ｒ^３はＨであり、かつＲ^４は−ＯＲ^５であり、この際Ｒ^５はＨまたはアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルから選択される置換されてもよい基である、
請求項１〜４のいずれか１項に記載の治療剤。

【請求項6】

前記Ｒ^５はＨ、アルキルまたはアリールアルキルであり、前記アルキルおよび／またはアリールアルキルは、１つ以上のハロ（ｈａｌｏ）、＝Ｏ、ＣＯＯＲ^６、ＯＲ^６およびＣＯＲ^６で置換されてもよく、この際Ｒ^６はＨまたは炭素数１〜６のアルキルである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の治療剤。

【請求項7】

前記Ｒ^５はＨ、−ＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_３、−ＣＯ（ＣＨ_２）_２ＣＯＯＨおよび−ＣＨ_２Ｃ_６Ｈ_６ＣＯＯＨからなる群より選択される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の治療剤。

【請求項8】

前記化合物は、アーテスネート（ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ）、アーテミシニン（ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ）、アーテメター（ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）、ジヒドロアーテミシニン（ｄｉｈｙｄｒｏａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ）、アルテリン酸（ａｒｔｅｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）およびアルテモチル（ａｒｔｅｍｏｔｉｌ）からなる群より選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の治療剤。

【請求項9】

請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルと、製薬上許容される賦形剤と、を含有し、腎損傷の１２時間後以降に投与される、急性腎損傷の治療に使用される薬剤組成物。

【請求項10】

追加の薬学的に活性な薬剤をさらに含有する、請求項９に記載の薬剤組成物。

【請求項11】

急性腎損傷の診断後に投与される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の治療剤。

【請求項12】

前記急性腎損傷は、血清クレアチニンレベルの測定によって診断される、請求項１１に記載の治療剤。

【請求項13】

クレアチニンの血清濃度（ｔｈｅ ｓｅｒｕｍ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ）が１．５ｍｇ／ｄｌを上回る場合において前記急性腎損傷と診断される、請求項１１または１２に記載の治療剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、抗マラリア化合物であるアーテミシニンおよびその誘導体を用いた、腎臓病（特に急性腎損傷）の治療に関する。また本発明は、腎臓手術および腎臓移植におけるアーテミシニンおよびその誘導体の使用にも関する。

【背景技術】

【0002】

一般的に、腎臓病は、腎不全（腎機能障害）および腎疾患を含む。腎臓病は、腎臓が毒素および／または老廃物を血液から適切にろ過できないような腎臓の機能不全を意味する。腎臓病は、急性腎損傷または慢性腎臓病でありうる。

【0003】

急性腎損傷（ＡＫＩ、急性腎臓病（ＡＫＤ）としても知られる、および急性腎不全）は、数時間または数日で起こる腎臓機能の急速な喪失を意味する。考えられる原因は多数あるが、最も一般的なのは、重度感染症（敗血症）、（腎臓もしくは他臓器の移植または冠動脈バイパス移植手術後に続発する脱水、出血、心不全または肝不全、虚血／再灌流傷害（ＩＲＩ）において見られる）腎臓への血流不足、（ネフローゼ薬およびＸ線造影剤による）毒性、（悪性腫瘍または膀胱疾患における）尿路閉塞の合併症、および腎炎のような特定の腎臓病に起因するものである。ＡＫＩは、血液中の尿素窒素および／もしくはクレアチニンの増加、または腎臓の十分量の尿を生産する能力の低下、などの特徴的な検査所見に基づいて診断される。ＡＫＤは、腎臓の排泄機能の急速な喪失に特徴づけられ、通常、窒素代謝の最終生成物（尿素および／もしくはクレアチニン）の蓄積もしくは尿排出量またはその双方によって診断される。

【0004】

ＡＫＩは、病院の患者でよく見られる合併症であり、重病患者ではとりわけよく見られる。調査によれば、ＡＫＩによる死亡率は４４〜５３％の範囲であると見積もられている。この罹患率にも関わらず、ＡＫＩに対する特異的な治療法は無く、多くの既存の治療介入は罹患している疾患の管理に頼っている。初期診断ではＡＫＩの副作用の緩和を助けることはできるが、依然として腎臓移植治療が求められている。ＡＫＩは、代謝性アシドーシス、高カリウムレベル、尿毒症、体液バランスの変化および他臓器系への影響を含む多くの合併症を引き起こしうる。Ｂｅｌｌｏｍｏらは、ＡＫＩについての包括的な見解を示している（Ｂｅｌｌｏｍｏ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｌａｎｃｅｔ，３８０：７５６−７６６）。

【0005】

ＡＫＩおよび続発する線維症の双方の低減を目的とした治療介入は、まれな状況では、（ＡＫＩに先立って）前治療として供されてもよく、または以前虚血性であった（previously ischaemic）血管床の再灌流に供されてもよいが、一度ＡＫＩが起きてから供されてクレアチニンの顕著な増加につながる医療介入は、きわめてまれである。ゆえに、ＡＫＩの早期検出を助けるバイオマーカーを開発するために、現在まで多くの努力がなされてきた。しかしながら、腎損傷が起きた後でも、ＡＫＩに関連する合併症を予防し、かつ腎臓に及ぼす永久的な損傷を低減できる効果的なＡＫＩの予防法および治療法が、技術分野では依然必要とされている。

【0006】

慢性腎臓病（ＣＫＤ）は、慢性腎疾患としても知られ、数か月または数年にわたる腎機能の進行性喪失である。腎機能悪化の症状は明確ではなく、全体的に体調が優れないことや食欲減退を経験することを含みうる。慢性腎臓病は、しばしば、高血圧または糖尿病を抱えている人々や慢性腎臓病を有する近親者がいる人々など、腎障害のおそれがあると知られる人々のスクリーニングの結果として診断される。慢性腎臓病は、循環器疾患、貧血または心膜炎などの認識される合併症の一つを引き起こしたときに特定されることもある。

【0007】

慢性腎臓病は、クレアチニンの血液検査によって特定される。クレアチニンが高レベルであることは、糸球体ろ過速度の低下およびその結果として腎臓の老廃物排泄機能の低下を意味する。ＣＫＤの初期段階ではクレアチニンレベルは正常であり、検尿（尿サンプル検査）で腎臓が尿中へのタンパク質または赤血球の損失を許していることが示された場合に、その症状が発見される。腎損傷の根本原因を厳重に調査するため、腎機能不全について改善可能な原因があるか否かを突き止めるために、様々な種類の医用画像、血液検査、およびしばしば腎臓生検（腎臓組織から少量のサンプルを採取すること）が採用されている。近年の専門的なガイドラインでは、慢性腎臓病の重症度が５段階に分類されており、ステージ１は最も穏やかで通常はわずかな症状しか生じないが、ステージ５は無治療ならば平均余命の短い重症疾患である。ステージ５のＣＫＤは、確立された（established）慢性腎臓病とも呼ばれており、今では時代遅れの語となっている末期腎疾患（ＥＳＲＤ）、慢性腎機能障害（ＣＫＦ）、または慢性腎不全（ＣＲＦ）と同義である。

【0008】

今まで、慢性腎臓病の悪化を遅らせる特異的な治療法は無かった。血管炎のようなＣＫＤを引き起こす根本原因がある場合は、損傷を遅らせることを目的とした治療法を用いて直接的に治療してもよい。より進行したステージでは、貧血および骨疾患に対する治療法が必要とされるであろう。重症なＣＫＤでは、腎機能代替療法の一つが必要とされる；これは透析でもよいが、理想的には腎臓移植が選ばれる。

【0009】

アーテスネート（artesunate）は、抗マラリア薬であり、アーテミシニン（artemisinin）（チンハオスとしても知られる）の誘導体であり、本来は中国薬草であるクソニンジン（Artemisia annua L）から単離される化合物である。この化合物のファミリーはセスキテルペン乳酸であり、アーテスネートは（徐脈、電図異常、胃腸障害、発熱などの）副作用をもたらすことが知られているが、熱帯性マラリアの治療のために他の薬理活性物質と組み合わせて使用されることが一般的である。

【0010】

米国特許出願公開第２０１１／００７７２５８号明細書では、アーテミシニン誘導体と血管拡張を促進するアジュバントとを組み合わせて用いるマラリアの治療方法が開示されている。米国特許出願公開第２００８／０１３９６４２号明細書では、アーテミシニン誘導体、ならびにこれらの製造および免疫抑制における使用が開示されている。国際公開第２０１０／１１０７４７号明細書では、ぜんそくおよび慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の治療のためのアーテミシニン誘導体の使用が開示されている。米国特許出願公開第２０１０／０１３７２４６号明細書は、１つ以上のＴｏｌｌ様受容体、Ｓｒｃファミリーキナーゼ、ＮＦ−κＢ分子、プロテアーゼまたはプロテアソームを調節する抗炎症組成物に関する。

【0011】

Ｓｕｎらは、単離したラット心筋の虚血／再灌流傷害に対するアーテミシニン前治療の効果を開示している（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．（２００７），Ｚｈｏｎｇｇｕｏ Ｚｈｏｎｇ Ｙａｏ Ｚａ Ｚｈｉ，３２（１５）：１５４７−５１）。Ｗａｎｇらは、ラットにおけるエンドトキシン誘発ブドウ膜炎に対するアーテスネートの効果を開示している（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１１），Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ，５２（２）：９１６−９）。Ｌｉらは、ＴＬＲ４、ＴＬＲ９のｍＲＮＡ発現および転写因子ＮＦ−κＢの活性化を低下させることで、敗血症モデルマウスを加熱滅菌された大腸菌の接種から守るアーテスネートの能力を開示している。

【発明の概要】

【0012】

驚くべきことに本発明者らは、アーテスネートおよびこれに関連する化合物の投与が、たとえば冠動脈バイパス手術（または他のいかなるＡＫＩの原因）の後に診断された後でも、急性腎損傷を含む腎臓病から防御できることを発見した。今まで、一貫して再現性良く防御性を示す特異的な薬ベースの治療介入は無かったことから、本発明の知見はとりわけ驚くべきものであり有用なものである。

【0013】

したがって、本発明の第１の態様として、腎臓病の治療に使用される、下記の化学式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルが提供される。

【0014】

【化1】

【0015】

ただし、Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、Ｈまたはアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルから選択される置換されてもよい基であり、Ｒ^３およびＲ^４は結合してカルボニル（＝Ｏ）を形成している；または、Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、Ｈまたはアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルから選択される置換されてもよい基であり、Ｒ^３はＨであり、Ｒ^４はＨまたは−ＯＲ^５であり、この際Ｒ^５はＨまたはアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルから選択される置換されてもよい基である。本発明のこの態様は、我々にとっての腎臓病の治療における、アーテミシニンおよびその誘導体、またはこれらの薬学的に許容される塩もしくはエステルにまで及ぶ。また、本発明のこの態様は、腎臓病の治療を必要とする患者に、化学式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルを投与することによる、腎臓病の治療方法にも及ぶ。文脈上他の意味に解釈すべき場合を除き、「化学式Ｉの化合物」との語は、全体として、製薬上許容される塩またはエステルを含む。

【0016】

腎臓病は、腎臓が毒素および／または老廃物を血液から適切にろ過できないような腎臓の機能不全を意味する。「腎臓病」との語は、全体として、急性腎損傷、慢性腎臓病、腎機能障害および／または尿毒症を含む。急性腎損傷は、他の疾患によって引き起こされるＡＫＩだけでなく、肝腎障害症候群、肝臓疾患に関連する急性腎損傷の一種、横紋筋融解症に関連する急性腎損傷および心腎臓症候群誘発性ＡＫＩを含む。

【0017】

Ｂｅｌｌｏｍｏ ｅｔ ａｌ．（２００４），Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｃａｒｅ，８（４）：Ｒ２０４−Ｒ２１２で記載されているように、Ａｃｕｔｅ Ｄｉａｌｙｓｉｓ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅ（ＡＤＱＩ）は、ＡＫＩの合意定義を立案した。筆者らは、血清クレアチニン（増加）、尿排出量（減少）、またはその双方の変化によりＡＫＩを診断することができ、これらは標準的な診断物質であることを発見した。腎臓機能の生理学的マーカーは、血清クレアチニン、クレアチニンクリアランス、血中尿素窒素（すべて糸球体ろ過速度（ＧＦＲ）に対して特異的である）、血管造影、血中酸素濃度依存性ＭＲＩ、超音波（すべて腎血流量に対して特異的である）、尿排出量、流入−排出機能、検尿、浸透圧、尿中／血漿中クレアチニン比（すべて尿細管機能に対して特異的である）を含む。

【0018】

ＡＫＩは、閉塞もその原因となりうるが、たとえば火傷、肺血性ショック、出血性ショックを伴う外傷、下痢、心臓または腎臓手術のように、明らかで直接的な原因を有しうる。ＡＫＩは、血管炎、糸球体腎炎、間質性腎炎などの他の疾患に続発しうる。これらの最も一般的な原因は、重度感染症（敗血症）、（腎臓もしくは他臓器の移植または冠動脈バイパス移植手術後に続発する脱水、出血、心不全または肝不全、虚血／再灌流傷害（ＩＲＩ）において見られる）腎臓への血流不足、（ネフローゼ薬およびＸ線造影剤による）毒性、（悪性腫瘍または膀胱疾患における）尿路閉塞の合併症である。また、腎炎のような特異的な腎臓病も原因となりうる。大手術（特に冠動脈バイパス移植手術）を受ける患者の３０％が急性腎損傷を罹患すると見積もられている。したがって、「ＡＫＩ」との語は、たとえば火傷誘発性ＡＫＩまたは外傷出血誘発性ＡＫＩのような原因によって誘発されるＡＫＩを含む。

【0019】

腎機能代替療法は、腎臓病を治療するために一般的に用いられ、血液透析、腹膜透析、血液ろ過および腎臓移植を含んでもよい。

【図面の簡単な説明】

【0020】

【図1】蘇生時に、（ｉ）外科手術のみ施されたラット（偽、ｎ＝４）、（ｉｉ）外科手術および出血ショック後に賦形剤で治療されたラット（１０％ＤＭＳＯ，１ｍｌ／ｋｇ ｉ．ｖ．，ＨＳコントロール，ｎ＝１０）、または（ｉｉｉ）外科手術および出血ショック後にアーテスネートで治療されたラット（１，３または１０ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．，ＨＳ＋アーテスネート１ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝６，ＨＳ＋アーテスネート３ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝７，ＨＳ＋アーテスネート１０ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝８）における、ＭＡＰの変化を示す。データは平均値±ＳＥＭとして表す。★Ｐ＜０．０５ 偽対ＨＳコントロール。

【図2】蘇生時に、（ｉ）外科手術のみ施されたラット（偽、ｎ＝４）、（ｉｉ）外科手術および出血ショック後に賦形剤で治療されたラット（１０％ＤＭＳＯ，１ｍｌ／ｋｇ ｉ．ｖ．，ＨＳコントロール，ｎ＝１０）、または（ｉｉｉ）外科手術および出血ショック後にアーテスネートで治療されたラット（１，３または１０ｍｇ／ｋｇｉ．ｖ．，ＨＳ＋アーテスネート１ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝６，ＨＳ＋アーテスネート３ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝７，ＨＳ＋アーテスネート１０ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝８）における、（ａ）尿素および（ｂ）クレアチニンの血清レベル、ならびに（ｃ）クレアチニンクリアランスの変化を示す。データは平均値±ＳＥＭとして表す。★Ｐ＜０．０５対ＨＳコントロール。

【図3】蘇生時に、（ｉ）外科手術のみ施されたラット（偽、ｎ＝４）、（ｉｉ）外科手術および出血ショック後に賦形剤で治療されたラット（１０％ＤＭＳＯ，１ｍｌ／ｋｇ ｉ．ｖ．，ＨＳコントロール，ｎ＝１０）、または（ｉｉｉ）外科手術および出血ショック後にアーテスネートで治療されたラット（１，３または１０ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．，ＨＳ＋アーテスネート１ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝６，ＨＳ＋アーテスネート３ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝７，ＨＳ＋アーテスネート１０ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝８）における、（ａ）ＡＳＴ、（ｂ）ＡＬＴおよび（ｃ）ＣＫの血清レベルの変化を示す。データは平均値±ＳＥＭとして表す。★Ｐ＜０．０５対ＨＳコントロール。

【図4】（ｉ）外科手術のみ施され賦形剤で治療されたラット（偽＋１０％ＤＭＳＯ，ｎ＝４）、（ｉｉ）火傷を受けて賦形剤で治療されたラット（火傷＋１０％ＤＭＳＯ，ｎ＝１０）、または（ｉｉｉ）火傷を受けてアーテスネートで治療されたラット（火傷＋アーテスネート，ｎ＝９）における、（ａ）尿素および（ｂ）クレアチニンの血清レベルを示す。データは平均値±ＳＥＭとして表し、＊Ｐ＜０．０５（火傷＋１０％ＤＭＳＯと比較時）。

【図5】（ｉ）外科手術のみ施され賦形剤で治療されたラット（偽＋１０％ＤＭＳＯ，ｎ＝４）、（ｉｉ）火傷を受けて賦形剤で治療されたラット（火傷＋１０％ＤＭＳＯ，ｎ＝１０）、または（ｉｉｉ）火傷を受けてアーテスネートで治療されたラット（火傷＋アーテスネート，ｎ＝９）における、（ａ）ＡＳＴおよび（ｂ）ＡＬＴの血清レベルを示す。データは平均値±ＳＥＭとして表し、＊Ｐ＜０．０５（火傷＋１０％ＤＭＳＯと比較時）。

【図6】糸球体および尿細管機能に対する３０分虚血後の再灌流時間（２４、４８、７２時間）の影響を示す。（各時点での異なる動物のセットにおける）糸球体機能の指標として血清尿素（Ａ）、血清クレアチニン（Ｂ）および推定クレアチニンクリアランス（Ｃ）を、尿細管機能の指標としてナトリウム分画排泄率（Ｄ）を測定した。再灌流開始２４時間後に、全パラメータにおいて機能不全のピークが現れた。虚血前：ｎ＝４；再灌流２４時間：ｎ＝４；再灌流４８時間：ｎ＝８；再灌流７２時間：ｎ＝４。データはｎ回観測の平均値±ｓｅｍとして表し、★★Ｐ＜０．０００１（対虚血前）、★Ｐ＜０．００１（対虚血前）。

【図7】腎損傷に対する３０分虚血後の再灌流時間（２４、４８、７２時間）の影響を示す。ラットの腎臓組織の各組織Ｈ＆Ｅ画像は、腎虚血なしの群（虚血前、Ａ）、または腎虚血３０分後に再灌流を２４時間（Ｂ）、４８時間（Ｃ）または７２時間（Ｄ）行ったラットから採取した。ＩｍａｇｅＪソフトウェアを用いて背景の白部分のパーセンテージ測定のために、各群につき３つの別個の腎臓からランダムに選択した１０領域を選択して分析し（合計領域＝３０）、領域あたりの組織表面積（Ｅ）として表した。データはｎ回観測の平均値±ｓｅｍとして表し、★Ｐ＜０．０５（対虚血前）。

【図8】ＩκＢα、ＮＦ−κＢおよび内皮一酸化窒素合成酵素（ｅＮＯＳ）の活性化に対する、３０分虚血後の再灌流時間（２４、４８、７２時間）の影響を示す。ＩκＢα（Ａ）の活性化は、再灌流工程中のＩκＢα上のＳｅｒ^{３２／３６}のリン酸化により測定した。ＩκＢαの活性化は、ＮＦ−κＢのｐ６５サブユニット（Ｂ）の核転座を引き起こす。ｅＮＯＳの活性化（Ｃ）は、再灌流工程中のＳｅｒ^１１７７のリン酸化により測定した。データはｎ回観測の平均値±ｓｅｍとして表し、★Ｐ＜０．０５（対虚血前）。

【図9】再灌流過程における、腎機能不全の生化学的マーカーである、ラット由来の血清尿素（Ａ）およびクレアチニン（Ｂ）のレベルの測定を示す（ｎ＝４）。血清尿素（Ｃ）およびクレアチニンレベル（Ｄ）は、偽手術（偽＋賦形剤，ｎ＝８）、または腎虚血／再灌流（ＩＲＩ＋賦形剤，ｎ＝８；ＩＲＩ＋アーテスネート０．３ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．，ｎ＝７）のいずれかに続いて再灌流４８時間後に測定した。賦形剤またはアーテスネートは、再灌流開始２４時間後、すなわち機能不全のピークで投与した（Ａ＆Ｂ参照）。データは、ｎ回観測の平均値±ＳＥＭで表す。偽／治療群とＩＲＩ＋賦形剤群との比較のため、データをｏｎｅ−ｗａｙ ＡＮＯＶＡおよびＤｕｎｎｅｔｔテストにより分析した；★Ｐ＜０．０５（対ＩＲＩ＋賦形剤）。

【図10】再灌流過程における、糸球体機能不全の生化学マーカーである、ラット由来のクレアチニンクリアランス（Ａ）測定を示す（ｎ＝４）。推定クレアチニンクリアランス（Ｂ）は、偽手術（偽＋賦形剤，ｎ＝８）、または腎虚血／再灌流（ＩＲＩ＋賦形剤，ｎ＝８；ＩＲＩ＋アーテスネート０．３ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．，ｎ＝７）のいずれかに続いて再灌流４８時間後に測定した。賦形剤またはアーテスネートは、再灌流開始２４時間後、すなわち機能不全のピークで投与した（Ａ参照）。データは、ｎ回観測の平均値±ＳＥＭで表す。偽／治療群とＩＲＩ＋賦形剤群との比較のため、データをｏｎｅ−ｗａｙ ＡＮＯＶＡおよびＤｕｎｎｅｔｔテストにより分析した；★Ｐ＜０．０５（対ＩＲＩ＋賦形剤）。

【図11】再灌流過程における、尿細管機能不全の生化学マーカーである、ラット由来の（繰り返し測定された）ナトリウム分画排泄率（Ａ）を示す。ナトリウム分画排泄率（Ｂ）は、偽手術（偽＋賦形剤，ｎ＝８）、または腎虚血／再灌流（ＩＲＩ＋賦形剤，ｎ＝８；ＩＲＩ＋アーテスネート０．３ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．，ｎ＝７）のいずれかに続いて再灌流４８時間後に測定した。賦形剤またはアーテスネートは、再灌流開始２４時間後、すなわち機能不全のピークで投与した（Ａ参照）。データは、ｎ回観測の平均値±ＳＥＭで表す。偽／治療群とＩＲＩ＋賦形剤群との比較のため、データをｏｎｅ−ｗａｙ ＡＮＯＶＡおよびＤｕｎｎｅｔｔテストにより分析した；★Ｐ＜０．０５（対ＩＲＩ＋賦形剤）。

【発明を実施するための形態】

【0021】

本発明の一実施形態では、化学式Ｉに記載の化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルにおいて、Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、Ｈまたは置換されてもよい炭素数１〜１０のアルキルであり、Ｒ^３およびＲ^４は結合してカルボニル（＝Ｏ）基を形成する；または、Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、Ｈまたは置換されてもよい炭素数１〜１０のアルキルであり、Ｒ^３はＨであり、かつＲ^４はＨまたは−ＯＲ^５であり、この際Ｒ^５はＨまたはアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルから選択される置換されてもよい基である。

【0022】

本発明の他の実施形態では、化学式Ｉに記載の化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルにおいて、Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、Ｈまたは置換されてもよい炭素数１〜１０のアルキルであり、Ｒ^３およびＲ^４は結合してカルボニル（＝Ｏ）基を形成する。

【0023】

本発明の他の実施形態では、化学式Ｉに記載の化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルにおいて、Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、Ｈまたは置換されてもよい炭素数１〜１０のアルキルであり、Ｒ^３はＨであり、かつＲ^４はＨまたは−ＯＲ^５であり、この際Ｒ^５はＨまたはアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルから選択される置換されてもよい基である。

【0024】

本発明のさらなる実施形態では、化学式Ｉに記載の化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルにおいて、Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、Ｈまたは置換されてもよい炭素数１〜３のアルキルであり、Ｒ^３およびＲ^４は結合してカルボニル（＝Ｏ）基を形成する；または、Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、Ｈまたは置換されてもよい炭素数１〜３のアルキルであり、Ｒ^３はＨであり、かつＲ^４はＨまたは−ＯＲ^５であり、この際Ｒ^５はＨまたはアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルから選択される置換されてもよい基である。

【0025】

本発明のさらなる実施形態では、化学式Ｉに記載の化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルにおいて、Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、Ｈまたは置換されてもよいメチルであり、Ｒ^３およびＲ^４は結合してカルボニル（＝Ｏ）基を形成する；または、Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、Ｈまたは置換されてもよいメチルであり、Ｒ^３はＨであり、かつＲ^４はＨまたは−ＯＲ^５であり、この際Ｒ^５はＨまたはアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルから選択される置換されてもよい基である。

【0026】

本発明のさらなる実施形態では、化学式Ｉに記載の化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルにおいて、Ｒ^１およびＲ^２は、共に独立して、メチル（−ＣＨ_３）であり、Ｒ^３およびＲ^４は結合してカルボニル（＝Ｏ）基を形成する；または、Ｒ^１およびＲ^２は共にメチル基であり、Ｒ^３はＨであり、かつＲ^４はＨまたは−ＯＲ^５であり、この際Ｒ^５はＨまたはアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルから選択される置換されてもよい基である。

【0027】

本発明のさらなる実施形態では、化学式Ｉに記載の化合物において、Ｒ^１およびＲ^２は共に置換されてもよいメチルであり、Ｒ^３およびＲ^４は結合してカルボニル（＝Ｏ）基を形成する；または、Ｒ^１およびＲ^２は共にメチル基であり、Ｒ^３はＨであり、かつＲ^４はＨまたは−ＯＲ^５であり、この際Ｒ^５はＨ、−ＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_３、−ＣＯ（ＣＨ_２）_２ＣＯＯＨおよび−ＣＨ_２Ｃ_６Ｈ_４ＣＯＯＨからなる群より選択される。

【0028】

ある実施形態では、Ｒ^５はＨ、アルキルまたはアリールアルキルであり、前記アルキルおよび／またはアリールアルキルは、１つ以上のハロ（halo）、＝Ｏ、ＣＯＯＲ^６、ＯＲ^６およびＯＣＯＲ^６で置換されてもよく、この際Ｒ^６はＨまたは炭素数１〜６のアルキルである。たとえば、本発明の一実施形態では、化学式Ｉに記載の化合物において、Ｒ^１およびＲ^２は共にメチルであり、Ｒ^３およびＲ^４は結合してカルボニル（＝Ｏ）基を形成する；または、Ｒ^１およびＲ^２は共にメチルであり、Ｒ^３はＨであり、かつＲ^４は−ＯＲ^５であり、この際Ｒ^５はＨ、アルキルまたはアリールアルキルであり、前記アルキルおよび／またはアリールアルキルは、１つ以上のハロ（halo）、＝Ｏ、ＣＯＯＲ^６、ＯＲ^６およびＯＣＯＲ^６で置換されてもよく、この際Ｒ^６はＨまたは炭素数１〜６のアルキルである。

【0029】

本発明のある実施形態では、Ｒ^５はＨ、−ＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_３、−ＣＯ（ＣＨ_２）_２ＣＯＯＨおよび−ＣＨ_２Ｃ_６Ｈ_４ＣＯＯＨからなる群より選択されてもよい。

【0030】

ある実施形態では、Ｒ^５はカルボキシルを有し、化学式Ｉの化合物はカルボン酸塩またはエステルとして任意に用いられる。ある実施形態では、前記エステルは炭素数１〜６のアルキルエステルのような単純なアルキルエステルであり、この際炭素数１〜６のアルキルは１つ以上のハロ（halo）、ヒドロキシルまたは炭素数１〜４のアルコキシ基で置換されてもよい。化学式Ｉの化合物がエステルであるとき、メチル、エチル、プロピルもしくはブチルエステル、または２−メトキシエチルエステルもしくはエチレングリコールエステルであってもよい。

【0031】

ここで用いられるように、「アルキル」、「アルケニル」および「アルキニル」との語は、直鎖、分岐鎖および環状である一価のヒドロカルビルラジカル、ならびにこれらの組み合わせを含み、非置換の場合はＣおよびＨのみを含む。例としては、メチル、エチル、イソブチル、シクロヘキシル、シクロペンチルエチル、２−プロペニル、３−ブチニルなどが挙げられる。かような各基における炭素原子の合計数をここで記載することもあり、たとえば、基が炭素原子を１０個まで含む場合は、炭素数１〜１０と表す。たとえば、ヘテロ基において炭素原子がヘテロ原子（たとえば、Ｎ、Ｏ、Ｓ）に置換される場合、基を記載する数は、たとえば炭素数１〜６として依然書かれるとしても、基中の炭素原子の数と、記載される環または鎖において炭素原子の置換として含まれるかようなヘテロ原子の数とを足した合計を表す。

【0032】

ある実施形態では、本発明のアルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、炭素数１〜１０（アルキル）または炭素数２〜１０（アルケニルもしくはアルキニル）である。あるいは、これらは、炭素数１〜８（アルキル）または炭素数２〜８（アルケニルもしくはアルキニル）である。あるいは、これらは、炭素数１〜４（アルキル）または炭素数２〜４（アルケニルもしくはアルキニル）であることもある。１つの基は、２種類以上の多重結合または２つ以上の多重結合を有することができる；かような基は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有するときは「アルケニル」との語の定義内に含まれ、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有するときは「アルキニル」との語の定義内に含まれる。

【0033】

アルキル、アルケニルまたはアルキニル基の典型的な任意の置換基は、ハロ（halo）、＝Ｏ、＝Ｎ−ＣＮ、＝Ｎ−ＯＲ、＝ＮＲ、ＯＲ、ＮＲ_２、ＳＲ、ＳＯ_２Ｒ、ＳＯ_２ＮＲ_２、ＮＲＳＯ_２Ｒ、ＮＲＣＯＮＲ_２、ＮＲＣＯＯＲ、ＮＲＣＯＲ、ＣＮ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＲ_２、ＯＣＯＲ、ＣＯＲおよびＮＯ_２を含むが、これらに制限されない。この際各Ｒは、独立して、Ｈ、炭素数１〜８のアルキル、炭素数２〜８のヘテロアルキル、炭素数１〜８のアシル、炭素数２〜８のヘテロアシル、炭素数２〜８のアルケニル、炭素数２〜８のヘテロアルケニル、炭素数２〜８のアルキニル、炭素数２〜８のヘテロアルキニル、炭素数６〜１０のアリールまたは炭素数５〜１０のヘテロアリールであり、各Ｒはハロ（halo）、＝Ｏ、＝Ｎ−ＣＮ、＝Ｎ−ＯＲ’、＝ＮＲ’、ＯＲ’、ＮＲ’_２、ＳＲ’、ＳＯ_２Ｒ’、ＳＯ_２ＮＲ’_２、ＮＲ’ＳＯ_２Ｒ’、ＮＲ’ＣＯＮＲ’_２、ＮＲ’ＣＯＯＲ’、ＮＲ’ＣＯＲ’、ＣＮ、ＣＯＯＲ’、ＣＯＮＲ’_２、ＯＯＣＲ’、ＣＯＲ’およびＮＯ_２で置換されてもよい。この際各Ｒ’は、独立して、Ｈ、炭素数１〜８のアルキル、炭素数２〜８のヘテロアルキル、炭素数１〜８のアシル、炭素数２〜８のヘテロアシル、炭素数６〜１０のアリールまたは炭素数５〜１０のヘテロアリールである。アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、炭素数１〜８のアシル、炭素数２〜８のヘテロアシル、炭素数６〜１０のアリールまたは炭素数５〜１０のヘテロアリールで置換されてもよい。ある実施形態では、アルキル、アルケニルまたはアルキニル基は、１つ以上のハロ（halo）、＝Ｏ、ＣＯＯＲ^６、ＯＲ^６およびＯＣＯＲ^６で置換され、この際Ｒ^６はＨまたは炭素数１〜６のアルキルである。

【0034】

ここで用いられる「アルキル」は、シクロアルキルおよびシクロアルキルアルキル基を含むが、「シクロアルキル」との語は、環炭素原子を介して連結する炭素環式非芳香族基を示すのに用いられてもよく（すなわち、分子に連結するその開殻価電子（open valence）が環炭素上にある）、「シクロアルキルアルキル」との語は、アルキレンリンカーを通じて分子に連結する炭素環式非芳香族基を示すのに用いられてもよい。同様に、「ヘテロシクリル」は、環員としてヘテロ原子を少なくとも１つ有し、ＣまたはＮのような環原子を介して分子に連結する非芳香族環基を示すのに用いられうる；また、「ヘテロシクリルアルキル」は、リンカーを通じて他の分子に連結されるかような基を示すのに用いられうる。シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルおよびヘテロシクリルアルキル基に適切な大きさや置換基は、上記アルキル基で述べたものと同様である。ここで用いられるものとして、これらの語は、環が芳香族でない限り、１つまたは２つの二重結合を有する環も含む。

【0035】

ここで用いられるものとして、「アシル」は、カルボニル炭素原子（−Ｃ（Ｏ）−）の２つの開殻価電子のうち１つと結合しているアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアリールアルキルラジカルを有する基を包含し、ヘテロアシルは、カルボニル炭素以外の少なくとも１つの炭素が、（たとえばＮ、ＯおよびＳから選択される）ヘテロ原子によって置換された対応する基を意味する。カルボニルの他方の開殻価電子は、ベースの分子にアシル基またはヘテロアシル基を連結することができる。ゆえに、ヘテロアシルは、−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロアリールだけでなく、たとえば−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲや−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ_２を含む。

【0036】

アシルおよびヘテロアシル基は、カルボニル炭素原子の開殻価電子を通じて接続されたいかなる基または分子にも結合される。ある実施形態では、これらはホルミル、アセチル、ピバロイルおよびベンゾイルを含む炭素数１〜８のアシル基、ならびにメトキシアセチル、エトキシカルボニルおよび４−ピリジノイルを含む炭素数２〜８のヘテロアシル基である。ヒドロカルビル基、アリール基およびアシルまたはヘテロアシル基を含むかような基のヘテロ体は、アシルまたはヘテロアシル基の各対応成分に対して一般的に適した置換基としてここに示される置換基で置換されてもよい。

【0037】

「芳香族」部分または「アリール」部分は、公知の芳香族特性を有する単環式または融合二環式の部分を意味する；たとえば、フェニルおよびナフチルを含む。同様に、「ヘテロ芳香族」および「ヘテロアリール」は、環員として（たとえばＯ、Ｓ、Ｎから選択される）ヘテロ原子を１つ以上含むかような単環式または融合二環式系を意味する。６員環だけでなく５員環では、ヘテロ原子を含有しても芳香族性は許容される。典型的なヘテロ芳香族系は、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、チエニル、フラニル、ピロリル、ピラゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イミダゾリルなどの単環式の炭素数５〜６の芳香族基、およびインドリル、ベンゾイミダゾリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、イソキノリル、キノリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾフラニル、ピラゾロピリジル、キナゾリニル、キノザリニル、シンノリニルなどの炭素数８〜１０の二環基を形成するために、上記の単環基のうち１つとフェニル環または任意のヘテロ芳香族単環基とが融合して形成される融合二環式の部分を含む。環系全体の電子分布に関して芳香族的性質を有するいかなる単環系または融合環二環系もこの定義に含まれる。この定義は、分子残基に直接接続する少なくとも１つの環が芳香族的性質を有する二環基も含む。ある実施形態では、環系は５〜１２の環員原子を含む。ある実施形態では、単環式ヘテロアリールは５〜６の環員を含み、二環式ヘテロアリールは８〜１０の環員を含む。

【0038】

アリールおよびヘテロアリール部分は、炭素数１〜８のアルキル、炭素数２〜８のアルケニル、炭素数２〜８のアルキニル、炭素数５〜１２のアリール、炭素数１〜８のアシルおよびこれらのヘテロ体を含む種々の置換基で置換されてもよく、各置換基自身もさらに置換されてもよい；アリールおよびヘテロアリール部分の他の置換基は、ハロ（halo）、ＯＲ、ＮＲ_２、ＳＲ、ＳＯ_２Ｒ、ＳＯ_２ＮＲ_２、ＮＲＳＯ_２Ｒ、ＮＲＣＯＮＲ_２、ＮＲＣＯＯＲ、ＮＲＣＯＲ、ＣＮ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＲ_２、ＯＣＯＲ、ＣＯＲおよびＮＯ_２を含み、この際各Ｒは、独立して、Ｈ、炭素数１〜８のアルキル、炭素数２〜８のアルケニル、炭素数２〜８のアルキニル、炭素数６〜１０のアリール、炭素数５〜１０のヘテロアリール、炭素数７〜１２のアリールアルキルまたは炭素数６〜１２のヘテロアリールアルキルであり、各Ｒは上記アルキル基で述べたように置換されてもよい。ある実施形態では、これらは１つ以上のハロ（halo）、＝Ｏ、ＣＯＯＲ^６、ＯＲ^６およびＯＣＯＲ^６で置換され、この際Ｒ^６はＨまたは炭素数１〜６のアルキルである。アリールまたはヘテロアリール基上の置換基は、当然に、かような置換基の各タイプまたは置換基の各構成要素に適するとここで示される基でさらに置換されてもよい。よって、たとえば、アリールアルキル置換基は、アリール部分上でアリール基にとって典型的であるとここで示される置換基で置換されてもよいし、アルキル部分上でアルキル基にとって典型的または適するとここで示される置換基で置換されてもよい。

【0039】

同様に、「アリールアルキル」および「ヘテロアリールアルキル」は、置換または非置換、飽和または不飽和、環式または非環式のリンカーを含む、アルキレンなどの連結基を通じて、これらの結合点に結合する芳香族およびヘテロ芳香族の環系を意味する。リンカーは炭素数１〜８のアルキルまたはこれらのヘテロ体でもよい。これらのリンカーはカルボニル基を有してもよく、ゆえにアシルまたはヘテロアシル部分として置換基を提供することが可能となる。アリールアルキル基中のアリールまたはヘテロアリール環は、上記アリール基で述べたものと同じ置換基で置換されていてもよい。アリールアルキル基は、上記アリール基で定義した基で置換されてもよいフェニル環と、非置換または１つもしくは２つの炭素数１〜４のアルキル基で置換された炭素数１〜４のアルキレンとを含んでもよい。この際、アルキル基は、任意に環を巻いてシクロプロパン、ジオキソラン、オキサシクロペンタンなどの環を形成してもよい。同様に、ヘテロアリールアルキル基は、アリール基上の典型的な置換基として上述した基で置換されてもよい炭素数５〜６の単環式ヘテロアリール基と、非置換または１つもしくは２つの炭素数１〜４のアルキル基で置換されている炭素数１〜４のアルキレンとを含んでもよい。または、ヘテロアリールアルキル基は、置換されてもよいフェニル環もしくは炭素数５〜６の単環式ヘテロアリールと、非置換または１つもしくは２つの炭素数１〜４のアルキル基で置換された炭素数１〜４のヘテロアルキレンとを含んでもよい。この際、アルキル基は、任意に環を巻いてシクロプロパン、ジオキソランまたはオキサシクロペンタンのような環を形成してもよい。

【0040】

アリールアルキル基が置換されてもよいと記載されるとき、基のアルキル部分またはアリールもしくはヘテロアリール部分のいずれかに置換基があればよい。アルキル部分上に存在してもよい置換基は、一般的には上記アルキル基で述べたものと同じである；アリールまたはヘテロアリール部分上に存在してもよい置換基は、一般的には上記アリール基で述べたものと同じである。ある実施形態では、アリールアルキルまたはヘテロアリールアルキルは、１つ以上のハロ（halo）、＝Ｏ、ＣＯＯＲ^６、ＯＲ^６およびＯＣＯＲ^６で置換され、この際Ｒ^６はＨまたは炭素数１〜６のアルキルで置換されている。

【0041】

ここで用いられる「アリールアルキル」基は、置換されていない場合はヒドロカルビル基であり、環およびアルキレンもしくは同様のリンカー中の炭素原子の合計数により記載される。よって、ベンジル基は炭素数７のアリールアルキル基であり、フェニルエチルは炭素数８のアリールアルキルである。

【0042】

ここで用いられる「アルキレン」は、二価のヒドロカルビル基を意味する；これは二価なので、２つの他の基に同時に連結できる。アルキレンは−（ＣＨ_２）_ｎ−を意味し、この際、ｎは１〜８であり、好ましくはｎは１〜４であり、特定された場合にかかわらす、アルキレンはその他の基で置換されてもよく、その他の長さでもよい。アルキレンの開殻価電子は鎖の反対側の末端にある必要はない。よって、シクロプロパン−１，１−ジイルが環状基であるように、−ＣＨ（Ｍｅ）−および−Ｃ（Ｍｅ）_２−も「アルキレン」の語の範囲内に含まれる。アルキレン基が置換されている場合、置換基はここで述べるようなアルキル基上に典型的に存在するものも含む。

【0043】

一般的に、アルキル、アルケニル、アルキニル、アシルもしくはアリールもしくはアリールアルキル基、または置換基に含まれるこれらの基のいずれかのヘテロ体は、これら自身がさらなる置換基によって置換されていてもよい。置換基について特記しない限り、これらの置換基の性質は、基本の置換基自身に関して列挙したものと類似している。よって、たとえば、Ｒ’の実施形態がアルキルの場合、Ｒ’が化学的な道理にかない、アルキルに本来課されるサイズ制限を損なわないときは、このアルキルはＲ’の実施形態で列挙されている残りの置換基で置換されてもよい；たとえば、アルキルまたはアルキニルで置換されたアルキルは、これらの実施形態について炭素原子の上限を単純に拡張しうる。しかしながら、アリール、アミノ、アルコキシ、＝Ｏなどで置換されたアルキルは本発明の範囲内に含まれ、これらの置換基の原子は、示されているアルキル、アルケニルなどの基を記載するのに用いられる数にはカウントされない。置換基の数が特定されない場合、かようなアルキル、アルケニル、アルキニル、アシルまたはアリール各基は、開殻価電子に準じた置換基の数で置換されてもよい；特に、これらの基のいずれも、たとえば開殻価電子のいずれかまたは全てがフッ素原子で置換されてもよい。

【0044】

ここで用いられる「置換されてもよい」とは、特定の基または記載されている基が非水素置換基を有しないこと、または基もしくは基が１つ以上の非水素置換基を有することを指す。特記しない限り、存在しうるかような置換基の合計数は、記載されている基の非置換体上に存在する水素原子の数と等しく、ある実施形態では、基上に許容される置換基の数は基中の炭素原子の数と等しい。カルボニル酸素（＝Ｏ）のように、任意の置換基が二重結合を介して接続する場合、基は２つの開殻価電子を占有し、含まれうる他の置換基の合計数は他の開殻価電子の数に応じて減少する。

【0045】

ここで用いられる「ハロ（halo）」は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を含む。「ヘテロ」原子は、窒素、酸素、硫黄、リン、ホウ素、塩素、臭素およびヨウ素からなる群より選択される。好ましくは、ヘテロ原子は窒素、酸素および硫黄からなる群より選択される。

【0046】

化学式Ｉで記載される典型的な化合物は、アーテスネート（artesunate）、アーテミシニン（artemisinin）、アーテメター（artemether）、ジヒドロアーテミシニン（dihydroartemisinin）（ＤＨＡまたはアルテニモル（artenimol）としても知られ、アーテスネートのプロドラッグの活性代謝産物であり、経口投与されうる）、アルテリン酸（artelinic acid）およびアルテモチル（artemotil）（アーテエター（arteether）としても知られる）である。化合物は、（Ｒ^３およびＲ^４の立体異性に関して）α体、β体のいずれでもよい。

【0047】

【化2】

【0048】

【化3】

【0049】

アーテミシニンの体系的（国際純正応用化学連合、ＩＵＰＡＣ）名称は、（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１２Ｓ，１２ａＲ）−オクタヒドロ−３，６，９−トリメチル−３，１２−エポキシ−１２Ｈ−ピラノ［４，３−ｊ］−１，２−ベンゾジオキセピン−１０（３Ｈ）−オンである。ジヒドロアーテミシニンの体系的（ＩＵＰＡＣ）名称は、（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１２Ｓ，１２ａＲ）−デカヒドロ−３，６，９−トリメチル−３，１２−エポキシ−１２Ｈ−ピラノ［４，３−ｊ］−１，２−ベンゾジオキセピン−１０−オールである。アルテリン酸の体系的（ＩＵＰＡＣ）名称は、４−［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）−デカヒドロ−３，６，９−トリメチル−３，１２−エポキシ−１２Ｈ−ピラノ［４，３−ｊ］−１，２−ベンゾジオキセピン−１０−イル］オキシ］メチル安息香酸である。簡潔にするため、「化学式Ｉの化合物」の意味は、（アーテスネート、アーテミシニン、アーテメター、ジヒドロアーテミシニン、アルテリン酸およびアルテモチルなどの）ここで開示されている特定の化合物を含む、上記の好ましい狭義の定義を含む。

【0050】

したがって、本発明の一実施形態では、腎臓病の治療（特に、ＣＫＤの治療だけでなくＡＫＩの治療）に用いられる、アーテミシニンもしくはその誘導体またはその製薬上許容される塩もしくはエステルが提供される。一実施形態では、アーテミシニン誘導体は、アーテスネート、アーテメター、ジヒドロアーテミシニン、アルテリン酸およびアルテモチルからなる群より選択される。

【0051】

本発明の一実施形態では、化学式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルは、腎臓病の治療で用いるために提供されてもよい。

【0052】

本発明で用いられる化合物は、当業者にとって公知のいかなる適した方法によっても得ることができる。たとえば、Ｒｏらは、人工酵母における抗マラリア前駆体であるアーテミシニン酸の合成を開示している（Ｒｏ ｅｔ ａｌ．（２００６），Ｎａｔｕｒｅ，４４０（７０８６）：９４０−３）。Ｖａｎ Ｈｅｒｐｅｎらは、アーテミシニン酸の合成に用いられるベンサミアナタバコ（Nicotinia benthamiana）の人工体を開示している（Ｖａｎ Ｈｅｒｐｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１０），ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，５（１２）：ｅ１４２２２）。あるいは、たとえばＫｏｈｌｅｒらが開示しているように、植物であるクソニンジン（Artemisia annua L）（チンハオス）から、当業者にとって公知のいかなる適した方法によってもアーテミシニンは得られうる（Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ，（１９９７），Ｊ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ａ，７８５（１−２）：３５３−６０）。また、米国特許出願公開第２００８／０１３９６４２号明細書でも、アーテミシニン誘導体の合成が開示されている。

【0053】

アーテスネートは、ジヒドロアーテミシニン（ＤＨＡ、アーテミシニン化合物の活性代謝産物）から、これを塩基性媒体中でコハク酸無水物と反応させることによっても合成できる。塩基／溶媒としてピリジン、重炭酸ナトリウムのクロロホルム溶液、触媒ＤＭＡＰ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン）およびトリエチルアミンの１，２−ジクロロエタン溶液が用いられ、収率は１００％に達する。大量製造は、ジクロロメタン中で、ピリジン、触媒量のＤＭＡＰおよびコハク酸無水物の混合物でＤＨＡを処理することに関連する。アーテスネートを定量的収率で得るため、ジクロロメタン混合物を６〜９時間撹拌する。生成物はさらにジクロロメタンで再結晶する。通常、α−アーテスネートが形成される（融点１３５〜１３７℃）。

【0054】

アーテミシニンおよびその誘導体を得るための他の方法は、当業者にとっても明らかである。ジヒドロアーテミシニンのようなアーテミシニンおよびその誘導体は、シグマアルドリッチ（Ｐｏｏｌｅ，Ｄｏｒｓｅｔ，英国）のような供給元から入手できる。

【0055】

本発明の実施形態では、化学式Ｉの化合物またはこれらの塩もしくは誘導体は、１つ以上の薬学的に活性な薬剤と組み合わせて投与されてもよい。

【0056】

本発明の第２の態様では、腎臓病の治療に使用される、化学式Ｉの化合物またはその塩もしくはエステル誘導体と、製薬上許容される賦形剤とを含有する薬剤組成物が提供される。本発明のこの態様は、腎臓病の治療に使用される、アーテミシニンまたはその誘導体およびそのエステルと、製薬上許容される賦形剤とを含有する薬剤組成物にまで及ぶ。また、本発明のこの態様は、腎臓病の治療を必要とする患者に本発明の薬剤組成物を投与することによる、腎臓病の治療方法にまで及ぶ。

【0057】

製薬上許容される賦形剤は、結合剤、充填剤、コーティング、崩壊剤、可溶化剤および溶媒を含む。

【0058】

化学式Ｉの化合物は、製薬上許容される塩の形で存在してもよく、例としては、塩酸塩（ＨＣｌ）、メシル酸塩、マレイン酸塩、塩化物、臭化物、クエン酸塩、酒石酸塩、硫酸塩、リン酸塩が挙げられ、任意の好ましいカチオン（ナトリウム、カルシウム、ベンザチン、マグネシウム、アンモニア、亜鉛、カリウムなど）を含む。化学式Ｉの化合物の多くは、カルボン酸基を含んでもよい；かような化合物については、カルボン酸を脱プロトン化してカルボン酸塩を形成することにより、塩を形成することができる。

【0059】

薬剤組成物は、１つ以上のさらなる薬学的に活性な薬剤を含んでもよい。

【0060】

薬剤組成物は、当業者にとって好ましいと考えられるいかなる経路で投与のために適応されてもよい。たとえば、薬剤組成物は（口腔または舌下などの）経口、非経口、静脈内、筋肉内、くも膜下もしくは腹腔内投与、または吸入による投与に適応されてもよい。かような組成物は、製薬分野において公知のいかなる方法により（たとえば、無菌条件下で有効成分とキャリアまたは賦形剤とを混合させることにより）調製されてもよい。

【0061】

経口投与に適応される薬剤組成物は、カプセルまたは錠剤；粉末または顆粒；溶液、シロップまたは懸濁液（水溶液もしくは非水溶液；または可食性の泡もしくはホイップ；またはエマルション）などのように不連続単位として存在してもよい。ジヒドロアーテミシニン（ＤＨＡ）は脂溶性であるため、経口投与に特に有用でありうる。

【0062】

錠剤または硬ゼラチンカプセルに好適な賦形剤は、ラクトース、トウモロコシデンプンまたはその誘導体、ステアリン酸またはその誘導体などである。柔カプセル剤と共に使用される好適な賦形剤は、たとえば植物油、ワックス、脂、半固体または液体ポリオールなどである。

【0063】

溶液およびシロップの調製において使用されうる賦形剤は、たとえば水、ポリオール、糖などである。懸濁液の調製においては、水中油型または油中水型懸濁液を提供するために、油（たとえば植物油）が用いられる。

【0064】

吸入による投与に適応される薬剤組成物は、定量加圧エアロゾル、噴霧器または吸入器の各種の方法によって生成される微粒子のダストやミストなどである。

【0065】

非経口投与に適用される薬剤組成物は、対象患者の血液と実質的に等張な製剤を与える抗酸化剤、緩衝液、静菌薬、溶質を含む水性または非水性の無菌注射液；および懸濁剤、増粘剤を含む水性および非水性の無菌懸濁液などである。注射可能な溶液に使用されうる賦形剤は、たとえば、水、アルコール、ポリオール、グリセリン、植物油などである。組成物は、一回服用または複数回服用のコンテナ（たとえば密封されたアンプルやバイアル）中に存在してもよく、使用直前に無菌液体（たとえば注射用水）の添加のみ要される凍結乾燥状態で保管されてもよい。即席の注射溶液および懸濁液は、無菌の粉末、顆粒および錠剤から調製されてもよい。

【0066】

薬剤組成物は、防腐剤、可溶化剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、着色剤、着臭剤、塩（本発明の物質はこれら自身が製薬上許容される塩の形で提供されてもよい）、緩衝液、コーティング剤または抗酸化剤を含有してもよい。薬剤組成物は、本発明の物質に加えて治療有効成分を含有してもよい。

【0067】

かような組成物は、人間向けまたは獣医学向けに製剤化されてもよい。文脈上明白に他の意味に解釈すべき場合を除き、本出願は、動物だけでなく人間に対して等しく適用されるとして解釈されるべきである。

【0068】

化学式Ｉの化合物を含有する本発明の任意の組成物を調製する際、化学式Ｉの化合物の溶解性を向上させるために、当業者はいかなる必要な手順を踏んでもよい。たとえば、Ａｎｓａｒｉ ｅｔ ａｌ．（２００９），Ａｒｃｈ Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ Ｖｏｌ．，３２（１）：１５５−６５で記載されているように、化学式Ｉの化合物はシクロデキストリン包接錯体などの包接錯体の形で存在してもよい。したがって、化学式Ｉの化合物は、包接錯体（たとえばシクロデキストリン包接錯体またはヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン錯体）の形で存在してもよい。溶解性向上のためのその他の技術、たとえば（ラウリル硫酸ナトリウムなどの）界面活性剤や（エタノールまたはＤＭＳＯなどの）共溶媒の使用は、当業者にとって明らかである。

【0069】

本発明の薬剤組成物の用量は幅広い範囲内で変えることができ、治療する疾患または障害、治療を受ける個人の年齢および状態などに依存し、最終的には医師が適切な使用量を決定するであろう。たとえば、化学式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルは、０．１〜５０ｍｇ／ｋｇ、０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ、０．１〜３ｍｇ／ｋｇまたは０．３〜３ｍｇ／ｋｇの量で投与されてもよい。ある実施形態では、アーテスネートは５０、３０、２５、２０、１５、１０、５または１ｍｇ／ｋｇ以下の量で投与される。化学式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルは、一度にこれらの用量を投与されてもよい。あるいは、化学式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルは、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回投与されてもよく、この際、各ボーラス投与量は上記の用量より（むしろ１日の累積用量より）少ないことが好ましい。ある実施形態では、１日３回または１日２回または１日１回のみより多く、化合物は投与されない。ある実施形態では、少なくとも６時間おいて、好ましくは少なくとも１２時間おいて用量は与えられる。化合物はボーラス投与として投与されてもよく、あるいは当業者により適切と考えられる期間にわたって（たとえば点滴により）投与されてもよい。ある実施形態では、化学式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルは、単回ボーラス投与用量、または１日１回、１日２回、１日３回もしくはそれ以上として、０．１〜５ｍｇ／ｋｇ（または０．１〜３ｍｇ／ｋｇ）の量で投与されてもよい。

【0070】

重要なことに、本発明者らは驚くべきことに、症状が発症した後でも、（本発明の）化学式Ｉの化合物（および薬剤組成物）が急性腎損傷の治療に有効であることを発見した。たとえば、本発明者らは、（血清クレアチニンの顕著な増加を引き起こす）ＡＫＩから２４時間後の投与が、血清クレアチニンレベルを損傷前のレベルまで低下させ、これにより回復時間を短縮化させるのであろうことを発見した。

【0071】

したがって、本発明の第３の態様では、腎臓病の治療に使用される（特にＡＫＩの治療に用いられる）、本発明の化学式Ｉの化合物または薬剤組成物が提供され、この際、化学式Ｉの化合物（または薬剤組成物）は腎損傷の１２時間後に投与される。化学式Ｉの化合物（または薬剤組成物）は、腎損傷の発症の少なくとも６、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４０、４４、４８、５２、５６、６０、７２もしくは９６時間またはそれ以上の時間で任意に投与される。たとえば、化学式Ｉの化合物（または薬剤組成物）は、腎損傷の６〜９６時間後、１２〜７２時間後、２４〜７２時間後または２４〜４８時間後に投与されてもよい。化学式Ｉの化合物（または薬剤組成物）は、腎損傷から最長で１２０時間後（たとえば、腎損傷から最長で９６、７２または４８時間後）に投与されてもよい。

【0072】

あるいは、化学式Ｉの化合物（または薬剤組成物）は、腎損傷の任意時間後（たとえば、血清クレアチニン、血清尿素または尿排出量などのＡＫＩに関連する公知因子を測定する下記のＡＫＩの診断の任意時間後）に投与されてもよい。

【0073】

本発明のこの態様は、腎臓病の治療を必要とする患者に、本発明の化学式Ｉの化合物または薬剤組成物を投与することを含むＡＫＩの治療方法に及ぶものであり、この際、化学式Ｉの化合物は、腎損傷の６、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４０、４４、４８、５２、５６、６０、７２もしくは９６時間またはそれ以上の時間後に投与される。たとえば、化学式Ｉの化合物（または薬剤組成物）は、腎損傷の６〜９６時間後、１２〜７２時間後、２４〜７２時間後または２４〜４８時間後に投与することができる。化学式Ｉの化合物（または薬剤組成物）は、腎損傷から最長で１２０時間後（たとえば、腎損傷から最長で９６、７２または４８時間後）に投与されてもよい。あるいは、化学式Ｉの化合物（または薬剤組成物）は、腎損傷の任意時間後（たとえば、血清クレアチニン、血清尿素または尿排出量などのＡＫＩに関連する公知因子を測定する下記のＡＫＩの診断の任意時間後）に投与されてもよい。

【0074】

ゆえに、本発明に記載のＡＫＩの治療方法は、任意の公知の診断マーカーを使用することなどにより（たとえば血清クレアチニンおよび／もしくは尿素濃度、ならびに／または尿排出量を測定することにより）、ＡＫＩを診断する工程をさらに含んでもよい。ＡＫＩが存在する場合（もしくは存在する疑いがある場合、または患者がＡＫＩを発症するおそれがあると判断される場合）、必要に応じて化学式Ｉの化合物（または薬剤組成物）が投与される。特に、クレアチニンおよび／もしくは尿素レベルが予想水準を上回る場合、ならびに／または尿産生もしくは糸球体ろ過速度（ＧＦＲ）が低下して予想水準を下回る場合、化学式Ｉの化合物（または薬剤組成物）が患者に投与される。

【0075】

一定の患者集団について、血清クレアチニン、血清尿素または尿産生の正常水準または予想水準は当業者にとって公知であり、これらの因子（およびその他）からＡＫＩが存在するか否かを決定することができるであろう。Ｂｅｌｌｏｍｏ ｅｔ ａｌ．（２００４），Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｃａｒｅ，８（４）：Ｒ２０４−Ｒ２１２では、正常水準およびＡＫＩが存在するか否かの決定方法が開示されている。たとえば、血清クレアチニンの増加が１．５倍を上回り、糸球体ろ過速度（ＧＦＲ）が２５％低下し、および／または尿排出量レベルが６時間かけて０．５ｍｌ／ｋｇ／ｈを下回る場合、患者はＡＫＩのおそれがあると示唆される。血清クレアチニンの増加が２倍を上回り、糸球体ろ過速度（ＧＦＲ）が５０％低下し、および／または尿排出量レベルが１２時間かけて０．５ｍｌ／ｋｇ／ｈを下回る場合、患者にはＡＫＩが存在することが示唆される。血清クレアチニンの増加が３倍を上回り（または血清クレアチニン濃度が４ｍｇ／ｄｌ（３５０μｍｏｌ／ｌ）以上であり）、糸球体ろ過速度（ＧＦＲ）が７５％低下し、および／または尿排出量レベルが２４時間かけて０．３ｍｌ／ｋｇ／ｈを下回る場合、患者は腎不全を患っていることが示唆される。

【0076】

好ましい正常基準値のクレアチニンレベルは表１に供される。

【0077】

【表1】

【0078】

たとえば、血清クレアチニンレベルが、黒人男性では１．８ｍｇ／ｄｌ（１５９μｍｏｌ／ｌ）以上、その他の男性では１．５ｍｇ／ｄｌ（１３２μｍｏｌ／ｌ）以上、黒人女性では１．３５ｍｇ／ｄｌ（１２０μｍｏｌ／ｌ）以上、またはその他の女性では１．２ｍｇ／ｄｌ（１０６μｍｏｌ／ｌ）以上の場合、ＡＫＩが存在するか患者はＡＫＩのおそれがある。

【0079】

したがって、本発明の一態様では、治療方法は血清クレアチニンレベルの測定を含み、正常な基準値レベルを上回る（たとえば正常な予想基準値レベルの１．５倍もしくは２倍もしくはそれ以上となる）または上記の閾値を上回る場合、化学式Ｉの化合物（または薬剤組成物）は患者に投与される。

【0080】

腎損傷は、たとえば手術、特に（腎臓移植手術などの）腎臓手術および（開胸手術および冠動脈バイパス手術などの）心臓手術、外傷性出血（外傷性ショック）、敗血症、造影剤腎症（Ｘ線造影剤腎症）、腎毒性薬剤誘発性ＡＫＩ、（たとえば下痢に続発する）血液量減少、虚血（たとえば腎動脈の急性閉塞に誘発される虚血）、敗血症、急性心不全、肝腎障害症候群、（敗血性ショックを伴う肺炎などの）肺炎、腎臓閉塞、炎症性実質性疾患、血管炎、糸球体腎炎、間質性腎炎、悪性高血圧症、腎盂腎炎、両側性皮質壊死、アミロイド症、悪性疾患誘発性ＡＫＩ、タンパク尿症など、（腎前性か否かにかかわらず）複数の因子によって引き起こされてもよい。ＡＫＩに寄与しうる腎毒性薬剤は、阻害剤、（ヨウ素化Ｘ線造影剤などの）Ｘ線造影剤、アミノグリコシド、アンフォテリシン、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤＳ）、β−ラクタム抗生物質、スルホンアミド、アシクロビル、メトトレキサート、シスプラチン、シクロスポリン、タクロリムス、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシン受容体阻害薬などである。実際、１つ以上の上記原因がＡＫＩに寄与しうる。

【0081】

一般的に、ＡＫＩは、腎臓機能が極度に喪失するまでは無症候性であり、他の症状と併せて診断されるか、冠動脈バイパス移植手術または腎臓移植手術を受ける患者のようにリスクのある集団において診断されることが多い。その他の診断方法も当業者にとっては公知だが、クレアチニンおよび尿素は標準的な診断物質である。本発明者らは、驚くべきことに、ＡＫＩが発症した後でもＡＫＩが治癒することを発見した。ゆえに、本発明の化学式Ｉの化合物および薬剤組成物は、ＡＫＩの予防だけでなく、疾患発症後の治療において早期回復を助けて起こりうる下流の合併症の回避を助けることにも有用である。

【0082】

一般的に、本発明の実施形態では、（上述のとおり）他の適切な投与経路は当業者にとって明らかであるが、本発明の化学式Ｉの化合物または薬剤組成物は静脈投与に使用される。

【0083】

本発明の第４の態様では、腎臓病の治療に使用される薬剤の製造における、化学式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルの使用が提供される。本発明の他の態様では、腎臓病の治療に使用される薬剤の製造に使用される、アーテミシニンおよびその誘導体またはその製薬上許容される塩もしくはエステルの使用が開示される。一実施形態では、アーテミシニン誘導体は、アーテスネート、アーテメター、ジヒドロアーテミシニン、アルテリン酸およびアルテモチルからなる群より選択される。化合物または薬剤組成物は、急性腎損傷の診断後、または患者が急性腎損傷を発症するおそれがあるとの診断後に投与されることを目的としたものでもよい。あるいは、化合物または薬剤組成物は、腎損傷の１２時間後（または実際には、腎損傷の少なくとも６、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４０、４４、４８、５２、５６、６０、７２もしくは９６時間後、またはそれ以上の時間後）に投与されてもよい。

【0084】

本発明の第５の態様では、化学式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルと、１つ以上のさらなる薬学的に活性な薬剤とを含有するパーツを有する、必要とする患者への同時、個別および連続投与のためのキットが提供される。パーツのキットは、使用のための説明書を任意に含んでもよい。化学式Ｉの化合物は単位剤形（unit-dosage form）で存在してもよい。本発明のパーツのキットは、腎臓病の治療に使用されることを目的とするものである。

【0085】

さらなる薬学的に活性な化合物は、キサンチン誘導体（ペントキシフィリンなど、たとえば０．１〜４００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量である）、重炭酸ナトリウム、ビタミンＤ、エリスロポエチン（たとえば１０００ＩＵ／ｋｇの用量範囲で投与される）、グリシルレチン酸誘導体（カルベノキソロンなど、たとえば０．０１〜３０ｍｇ／ｋｇの用量範囲である）、およびＰＰＡＲ−γアゴニスト（ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、シグリタゾン、プロスタグランジンＡ１もしくはプロスタグランジンＤ２（たとえば０．０３〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量である）または１５−デオキシデルタ１２，１４−プロスタグランジンＪ２（１５Ｄ−ＰＧＪ２、たとえば０．１〜３ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で静脈に投与される）などを含む。

【0086】

あるいは、本発明の化学式Ｉの化合物または薬剤組成物は、腎臓病の治療のために使用される単独の薬学的に活性な成分または組成物として単独で投与されてもよい。

【0087】

本発明の第１態様の化合物は、腎臓の全部もしくは一部の虚血再灌流（ischaemia-reperfusion）を引き起こす外科手術、腎臓移植もしくは腎臓および膵臓移植（および冠動脈バイパス移植（ＣＡＢＧ）手術においても）、特に、虚血で引き起こされるいかなる損傷を低減するための手術または移植時における腎臓の灌流において、有用である。本発明の第１態様の化合物は、腎機能代替療法においても有用である。ゆえに、本発明はそのような方法に使用される化学式Ｉの化合物を提供する。

【0088】

本発明の実施形態では、化学式Ｉの化合物またはその塩もしくは誘導体は、１つ以上の薬学的に活性な薬剤と組み合わせて投与されてもよい。ゆえに、本発明の薬剤組成物は、１つ以上のさらなる薬学的に活性な薬剤を含有する。

【0089】

本発明のその他の態様では、腎臓移植方法またはＣＡＢＧ手術方法における、本発明の化学式Ｉの化合物の使用または薬剤組成物の使用が提供される。ある実施形態では、本発明の化学式Ｉの化合物または薬剤組成物は、手術終了後（たとえば、ドナー腎臓が移植された後や、腎臓が挿入される切り口が（たとえば縫合により）閉じられた後）に投与される。特に、化合物または薬剤組成物は、手術または腎損傷の少なくとも６、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４０、４４、４８、５２、５６、６０、７２もしくは９６時間後、またはそれを超える時間後に投与される。たとえば、化学式Ｉの化合物（または薬剤組成物）は、手術または腎損傷の６〜９６、１２〜７２、２４〜７２または２４〜４８時間後に投与されることを目的とするものでもよい。化学式Ｉの化合物（または薬剤組成物）は腎損傷から最長で１２０時間後、たとえば腎損傷から最長９６、７２または４８時間後に投与されることを目的とするものでもよい。

【0090】

腎臓移植手術の場合、本発明の化学式Ｉの化合物または薬剤組成物は、ドナー患者もしくはレシピエント患者またはその双方に投与されてもよい。化学式Ｉの化合物（または薬剤組成物）は、腎臓の全部または一部の虚血再灌流の上記時間後に、患者に投与されてもよい。本発明のある実施形態では、化学式Ｉの化合物（または薬剤組成物）は、急性腎損傷の診断後または急性腎損傷のおそれの診断後に患者に投与される。

【0091】

本発明のさらなる態様では、（本発明の）化学式Ｉの化合物（または薬剤組成物）を患者に投与することを含む腎臓移植方法およびＣＡＢＧ手術方法についても提供される。化学式Ｉの化合物（または薬剤組成物）は、術前、術中および／または術後に投与されてもよい。一般的に、「手術方法」とは、通常は手術を行った病院または医療施設で患者の回復を観察する術後処置を含むのに対し、「術後」とは侵襲的方法の完了後（手術後）を意味する。

【0092】

術後に本発明の化学式Ｉの化合物または薬剤組成物が投与される方法では、化合物または組成物は、通常は手術完了の１２時間以上後、たとえば手術の６、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４０、４４、４８、５２、５６、６０、７２もしくは９６時間後、またはそれを超える時間後に投与される。一般的に、化学式Ｉの化合物（または薬剤組成物）は、術後（すなわち手術後）から最長で１２０時間後（たとえば手術から最長で９６、７２または４８時間後）に投与されることを目的とするものでもよい。

【0093】

腎臓移植方法またはＣＡＢＧ手術方法において、手術が完了した後（たとえばドナー腎臓の移植後）、たとえば血清クレアチニン、血清尿素および／もしくは尿排出量、またはその他の適切なＡＫＩの診断マーカーの測定によって、患者はＡＫＩについて観察される。患者がＡＫＩの症状を有する場合、またはＡＫＩが存在すると診断される場合、または患者がＡＫＩを発症するおそれがあると判断される場合、その後、ＡＫＩを治療するために本発明の化学式Ｉの化合物または薬剤組成物が投与されてもよい。これは、全ての患者を予防的に治療するというよりむしろ、手術後にＡＫＩが発症するか否か、または患者がＡＫＩを発症するおそれが高まるか否かについて評価するために待つことによる患者への不要な薬剤投与と関連する問題を回避する。

【0094】

本発明の方法では、化学式Ｉの化合物（または薬剤組成物）は、通常、静脈内に投与される。

【0095】

腎臓移植方法は、「腎臓移植ガイドライン」（Ｋａｌｂｌｅ ｅｔ ａｌ．，（２００６），Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｕｒｏｌｏｇｙ）内で記載されている方法など、当業者にとって公知の好ましい方法でよい。本発明の腎臓移植方法は、腎臓と膵臓とが同時に移植される腎臓・膵臓移植方法を含む。腎臓移植の基本的方法は、（ドナー患者由来の）ドナー腎臓をレシピエント患者に外科的に移植する工程を含む。

【0096】

ＣＡＢＧの基本的方法は、患者の体の他の箇所（通常は胸部または脚部（たとえば乳腺動脈内））から血管を採取して、存在する動脈内の狭窄部または閉塞の上流または下流の冠状動脈に取り付ける工程を含む。この新しい血管はグラフトとして知られる。グラフトは、狭窄または閉塞された冠状動脈部周辺で血流を迂回させる。通常、今後確実にこの手術が繰り返されないよう、医師は複数のグラフトを行う。グラフト血管の移植後、胸骨および切り口は縫合糸により閉じられる。ＣＡＢＧの方法は当業者にとって明らかである。

【0097】

腎臓移植方法では、ドナー腎臓は化学式Ｉの化合物を含有する溶液を用いて灌流されてもよく、したがって、本発明の方法はそのような工程を含んでもよい。たとえば、かような溶液は、化学式Ｉの化合物を含む再灌流溶液またはその製薬上許容される塩もしくはエステルと、１つ以上の増量剤とを含有してもよい。一実施形態では、増量剤は晶質もしくはコロイドまたは晶質とコロイドとの組み合わせである。

【0098】

晶質は、ナトリウムイオン、塩化物イオン、乳酸イオン、カリウムイオンおよびカルシウムイオンからなる群より選択される少なくとも２つのイオンを含有する塩の水溶液である。ある実施形態では、晶質は、ナトリウムイオン、塩化物イオン、乳酸イオン、カリウムイオンおよびカルシウムイオンからなる群より選択される少なくとも３つのイオンを含有する水溶液である。ある実施形態では、晶質は、ナトリウムイオン、塩化物イオン、乳酸イオン、カリウムイオンおよびカルシウムイオンからなる群より選択される少なくとも４つのイオンを含有する水溶液である。ある実施形態では、晶質は、ナトリウムイオン、塩化物イオン、乳酸イオン、カリウムイオンおよびカルシウムイオンを含有する水溶液である。晶質は、重炭酸イオンおよび／またはグルコースも含有してもよい。

【0099】

晶質の例としては、（生理食塩水、乳酸リンゲル液もしくはハートマン液などの）無機塩または水溶性分子の水溶液が挙げられる。通常、乳酸リンゲル液１Ｌには以下のものが含有される：
−ナトリウムイオン 約１３０ｍＥｑ＝１３０ｍｍｏｌ／Ｌ
−塩化物イオン 約１０９ｍＥｑ＝１０９ｍｍｏｌ／Ｌ
−乳酸 約 ２８ｍＥｑ＝ ２８ｍｍｏｌ／Ｌ
−カリウムイオン 約 ４ｍＥｑ＝ ４ｍｍｏｌ／Ｌ
−カルシウムイオン 約 ３ｍＥｑ＝１．５ｍｍｏｌ／Ｌ。

【0100】

通常、ナトリウム、塩化物、カリウムおよび乳酸は、ＮａＣｌ（塩化ナトリウム）、ＮａＣ_３Ｈ_５Ｏ_３（乳酸ナトリウム）、ＣａＣｌ_２（塩化カルシウム）およびＫＣｌ（塩化カリウム）に由来する。しかしながら、必要なイオン濃度に達するためにその他の成分が使用されてもよいことは、当業者にとって公知である。乳酸リンゲル液は、通常はアルカリ化溶液であるが、ｐＨが６〜７の範囲（たとえば６．５）にあってもよい。

【0101】

（乳酸ナトリウム化合物としても知られる）ハートマン液１Ｌには、以下のものが含有されうる：
−ナトリウムイオン １３１ｍＥｑ＝１３１ｍｍｏｌ／Ｌ
−塩化物イオン １１１ｍＥｑ＝１１１ｍｍｏｌ／Ｌ
−乳酸 ２９ｍＥｑ＝ ２９ｍｍｏｌ／Ｌ
−カリウムイオン ５ｍＥｑ＝ ５ｍｍｏｌ／Ｌ
−カルシウムイオン ４ｍＥｑ＝ ２ｍｍｏｌ／Ｌ。

【0102】

したがって、一実施形態では、再灌流溶液は、化学式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルと、晶質増量剤とを含有し、晶質増量剤は、ナトリウムイオン、塩化物イオン、乳酸イオン、カリウムイオンおよびカルシウムイオンからなる群より選択される少なくとも３つのイオンを含有する水溶液である。他の実施形態では、再灌流溶液は、化学式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルと、晶質増量剤とを含有し、晶質増量剤は、ナトリウムイオン、塩化物イオン、乳酸イオン、カリウムイオンおよびカルシウムイオンからなる群より選択される少なくとも４つのイオンを含有する水溶液である。さらに他の実施形態では、再灌流溶液は、化学式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルと、晶質増量剤とを含有し、晶質増量剤はナトリウムイオン、塩化物イオン、乳酸イオン、カリウムイオンおよびカルシウムイオンを含有する水溶液である。

【0103】

これらの実施形態では、イオンは、当業者にとって公知のいかなる好ましい濃度で存在してもよい。たとえば、ナトリウムイオンは約１００〜約１５０ｍｍｏｌ／Ｌの濃度で存在してもよい。塩化物イオンは約９０〜約１２０ｍｍｏｌ／Ｌの濃度で存在してもよい。乳酸イオンは約２０〜約３０ｍｍｏｌ／Ｌの濃度で存在してもよい。カリウムイオンは約２〜約６ｍｍｏｌ／Ｌの濃度で存在してもよい。カルシウムイオンは約１〜約５ｍｍｏｌ／Ｌの濃度で存在してもよい。（存在するのであれば）重炭酸イオンは約１０〜約５０ｍｍｏｌ／Ｌの濃度で存在してもよい。（存在するのであれば）グルコースは約２〜約１０重量％、たとえば約３〜約６重量％の濃度で存在してもよい。

【0104】

したがって、他の実施形態では、再灌流溶液は、化学式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルを含み、水溶液には以下のものが含有される：
−ナトリウムイオン 約１００〜約１５０ｍｍｏｌ／Ｌ
−塩化物イオン 約９０〜約１２０ｍｍｏｌ／Ｌ
−乳酸 約２０〜 約３０ｍｍｏｌ／Ｌ
−カリウムイオン 約２〜 約６ｍｍｏｌ／Ｌ
−カルシウムイオン 約１〜 約５ｍｍｏｌ／Ｌ。

【0105】

当業者にとっては明らかであろうが、上記の水溶液は好ましい晶質増量剤の例である。

【0106】

あるいは、再灌流溶液は、コロイド増量剤を含んでもよく、または上記晶質増量剤とコロイド増量剤との混合物を含んでもよい。好ましいコロイド増量剤の例としては、ゼラチン、コハク化ゼラチン、アルブミン、デキストラン（たとえば、デキストラン４０、デキストラン７０もしくはデキストラン７５）、血液、またはエーテル化デンプン（ヒドロキシエキルデンプン、テトラスターチ、ヘタスターチもしくはペンタスターチとしても知られる）が挙げられる。通常、コロイドはこれらの成分を含有する水溶液である。たとえば、コロイドは、ゼラチン、コハク化ゼラチン、アルブミン、デキストラン、血液およびエーテル化デンプンからなる群より選択される少なくとも１つの成分を含んでもよい。

【0107】

市販で入手可能なコロイドとしては、Ｈａｅｍａｃｃｅｌ（登録商標）（Ｐｉｒａｍａｌ、尿素結合を介して架橋された分解ゼラチンポリペプチド含有）、Ｇｅｌｏｆｕｓｉｎｅ（登録商標）（Ｂｒａｕｎ、コハク化ゼラチン（修飾流動性ゼラチン、平均分子量３００００）４０ｇ（４％）、Ｎａ^＋１５４ｍｍｏｌ、Ｃｌ⁻１２０ｍｍｏｌ／Ｌ）、Ｇｅｌｏｐａｓｍａ（登録商標）（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｋａｂｉ、部分的に加水分解およびコハク化されたゼラチン（修飾液状ゼラチン）（無水ゼラチンとして）３０ｇ（３％）、Ｎａ^＋１５０ｍｍｏｌ、Ｋ^＋５ｍｍｏｌ、Ｍｇ^２＋１．５ｍｍｏｌ、Ｃｌ⁻１００ｍｍｏｌ、乳酸３０ｍｍｏｌ／Ｌ）、Ｉｓｏｐｌｅｘ（登録商標）（Ｂｅａｃｏｎ、コハク化ゼラチン（修飾流動性ゼラチン、平均分子量３００００）４０ｇ（４％）、Ｎａ^＋１４５ｍｍｏｌ、Ｋ^＋４ｍｍｏｌ、Ｍｇ^２＋０．９ｍｍｏｌ、Ｃｌ⁻１０５ｍｍｏｌ、乳酸２５ｍｍｏｌ／Ｌ）、Ｖｏｌｐｅｘ（登録商標）（Ｂｅａｃｏｎ、コハク化ゼラチン（修飾流動性ゼラチン、平均分子量３００００）４０ｇ（４％）、Ｎａ^＋１５４ｍｍｏｌ、Ｃｌ⁻１２５ｍｍｏｌ／Ｌ）、Ｖｏｌｕｖｅｎ（登録商標）（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｋａｂｉ、６％ヒドロキシエチルデンプン（重量平均分子量１３００００）含有０．９％塩化ナトリウム注射液）、Ｖｏｌｕｌｙｔｅ（登録商標）（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｋａｂｉ、６％ヒドロキシエチルデンプン（重量平均分子量１３００００）含有０．６％塩化ナトリウム静脈点滴、Ｎａ^＋１３７ｍｍｍｏｌ、Ｋ^＋４ｍｍｏｌ、Ｍｇ^２＋１．５ｍｍｏｌ、Ｃｌ⁻１１０ｍｍｏｌ、酢酸３４ｍｍｏｌ／Ｌ含有）、Ｖｅｎｏｆｕｎｄｉｎ（登録商標）（Ｂｒａｕｎ、６％ヒドロキシエチルデンプン（重量平均分子量１３００００）含有０．９％塩化ナトリウム注射液）、Ｔｅｔｒａｓｐａｎ（登録商標）（Ｂｒａｕｎ、６％または１０％ヒドロキシエチルデンプン（重量平均分子量１３００００）含有０．６２５％塩化ナトリウム、Ｎａ^＋１４０ｍｍｏｌ、Ｋ^＋４ｍｍｏｌ、Ｍｇ^２＋１ｍｍｏｌ、Ｃｌ⁻１１８ｍｍｏｌ、Ｃａ^２＋２．５ｍｍｏｌ、酢酸２４ｍｍｏｌ、マレイン酸５ｍｍｏｌ／Ｌ含有）、ＨＡＥＳ−ｓｔｅｒｉｌ（登録商標）（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｋａｂｉ、１０％ペンタスターチ（重量平均分子量２０００００）含有０．９％塩化ナトリウム静脈点滴）、Ｈｅｍｏｈｅｓ（登録商標）（Ｂｒａｕｎ、６％または１０％ペンタスターチ（重量平均分子量２０００００）含有０．９％塩化ナトリウム静脈点滴）、ＨｙｐｅｒＨＡＥＳ（登録商標）（Ｆｒｅｎｅｓｉｕｓ Ｋａｂｉ、６％ヒドロキシエチルデンプン（重量平均分子量２０００００）含有７．２％塩化ナトリウム静脈点滴）およびＲｅｓｃｕｅＦｌｏｗ（登録商標）（Ｖｉｔａｌｉｎｅ、６％デキストラン７０静脈点滴含有７．５％塩化ナトリウム静脈点滴）が挙げられる。

【0108】

したがって、一実施形態では、再灌流溶液は、化学式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルと、コロイド増量剤および／もしくは晶質増量剤とを含有し、コロイド増量剤はゼラチン、コハク化ゼラチン、アルブミン、デキストラン、血液およびエーテル化デンプンからなる群より選択される１つ以上の成分を含み、晶質増量剤はナトリウムイオン、塩化物イオン、乳酸イオン、カリウムイオンおよびカルシウムイオンからなる群より選択される少なくとも３つのイオンを含む水溶液である。

【0109】

さらなる実施形態では、再灌流溶液は、化学式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルと、コロイド増量剤および／もしくは晶質増量剤とを含み、コロイド増量剤はゼラチン、コハク化ゼラチン、アルブミン、デキストラン、血液およびエーテル化デンプンからなる群より選択される１つ以上の成分を含み、晶質増量剤は以下のものを含む：
−ナトリウムイオン 約１００〜１５０ｍｍｏｌ／Ｌ
−塩化物イオン 約９０〜１２０ｍｍｏｌ／Ｌ
−乳酸 約２０〜 ３０ｍｍｏｌ／Ｌ
−カリウムイオン 約２〜 ６ｍｍｏｌ／Ｌ
−カルシウムイオン 約１〜 ５ｍｍｏｌ／Ｌ。

【0110】

臓器に供される再灌流溶液の量は、当業者によって決定されてもよい。

【0111】

再灌流溶液は水溶液である。各成分の濃度は、要求に応じて当業者によって決定されてもよい。たとえば、化学式Ｉの化合物（またはその製薬上許容される塩もしくはエステル）の濃度は、１０^−６〜１０^−２Ｍ（たとえば１０^−５〜３×１０^−３Ｍ）でもよい。ある実施形態では、化学式Ｉの化合物（またはその製薬上許容される塩もしくはエステル）は、１０^−２Ｍ以下の濃度で存在する。ある実施形態では、化学式Ｉの化合物（またはその製薬上許容される塩もしくはエステル）は、１０^−６Ｍまたは１０^−５Ｍ以上の濃度で存在する。

【0112】

再灌流溶液は低張、高張または等張のいずれでもよい。ある実施形態では、増量剤（および／または再灌流溶液）は等張溶液である。

【0113】

再灌流溶液は、当業者にとって好ましいと思われる追加成分を含有してもよい。たとえば、再灌流溶液は、マンニトール、ヘモグロビン（たとえば２〜９ｇ／Ｌの用量範囲）、ＰＥＧ化ヘモグロビン（たとえばＭＰ４ＯＸ（登録商標）（４ｇ／Ｌ ＰＥＧ−Ｈｂ含有乳酸化電解液、Ｓａｎｇａｒｔ））、ＰＥＧ化カルボキシヘモグロビン（たとえばＭＰ４ＣＯ（登録商標）（４３ｍｇ／ｍＬ ＰＥＧ化カルボキシヘモグロビン［≧９０％ＣＯヘモグロビン飽和］含有生理的酢酸電解液、Ｓａｎｇａｒｔ））、血小板（たとえば５０×１０^８／Ｌ以上の用量）、フィブリノゲン（たとえば５０ｍｇ／ｋｇの用量）、抗繊維素溶解薬、リコンビナント活性化凝固因子ＶＩＩ（ｒＦＶＩＩａ）およびプロトロンビン複合体からなる群より選択される１つ以上の追加成分を含んでもよい。

【0114】

化学式Ｉの化合物を含有する水溶液を調製する際、化学式Ｉの化合物の溶解性を向上させるために、当業者はいかなる必要な工程を踏んでもよい。たとえば、Ａｎｓａｒｉ ｅｔ ａｌ．（２００９）， Ａｒｃｈ Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ Ｖｏｌ．，３２（１）：１５５−６５で示されているように、化学式Ｉの化合物は、シクロデキストリン包接錯体などの包接錯体の形で存在してもよい。したがって、化学式Ｉの化合物は、包接錯体（たとえばシクロデキストリン包接錯体またはヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン錯体）の形で存在してもよい。溶解性を向上させるためのその他の技術、たとえば（ラウリル硫酸ナトリウムなどの）界面活性剤や（エタノールまたはＤＭＳＯなどの）共溶媒の使用は、当業者にとって明らかである。

【0115】

本発明の腎臓移植方法は、罹患した一方または双方の腎臓の除去を含んでもよい。あるいは、罹患した腎臓はレシピエント患者内に残ったままでもよい。

【0116】

ここで記載される腎臓移植方法は、全腎移植だけでなく部分腎移植も含む。

【0117】

本発明のさらなる態様では、化学式Ｉの化合物を含む溶液（たとえば上記の再灌流溶液）に腎臓を浸漬する（bathing）ことを含む灌流方法が提供される。この方法は生体外で行われる。腎臓はドナー患者（生きている患者または死体のいずれか）から得られる。したがって、本発明の灌流方法によりドナー腎臓が灌流される腎臓移植方法についても提供される。腎臓の灌流は、ドナー患者に移植する前、間および／または後で起こる。

【0118】

本発明のさらなる態様では、尿毒症の治療に使用される、化学式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステル、または本発明の薬剤組成物についても提供される。尿毒症は、尿やその他の老廃物が血中に滞留することを意味する。尿毒症は、腎臓病によって引き起こされるが、他の要因、たとえば、（たとえば高タンパク食や胃腸出血に起因する）肝臓での尿素産生の増加、（たとえば心停止もしくは低血圧または膀胱破裂による腎臓への血流減少に起因する）尿素排出量の減少、脱水または腎臓感染にもよっても引き起こされる。しかしながら、通常、本発明のこの態様は、腎臓病関連の尿毒症（たとえばＡＫＩ関連尿毒症）に関する。本発明のこの態様は、尿毒症の治療を必要とする患者に、本発明の化学式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステル、または薬剤組成物を投与することによる、尿毒症の治療方法にも及ぶ。

【0119】

本発明の他の態様では、化学式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルを含有する透析液が提供される。本発明のさらなる態様では、透析に使用される化学式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルが提供される。本発明のこの態様は、透析液の製造における、化学式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルの使用にも及ぶ。

【0120】

透析液は、腎臓の透析に使用される溶液である。透析液は、半透膜のろ過される血液とは逆側を流れる。通常、透析液は水溶液であり、ナトリウム、塩化物、乳酸および重炭酸などのイオンを含有してもよい。溶液は、グルコースもしくは（イコデキストリンなどの）デキストリン、または類似する化合物を含有してもよい。イコデキストリンは、デンプン誘導体であり、水溶液の状態でコロイド浸透圧剤（osmotic agent）として使用される、分岐型水溶性グルコース重合体（α−（１→４）および１０％未満のα−（１→６）グリコシド結合によりデキストランの形をなす、重量平均分子量１３０００〜１９０００Ｄａ、数平均分子量５０００〜６５００Ｄａ）である。存在してもよい他のイオンとしては、カルシウムおよびマグネシウムイオンが挙げられるが、通常はナトリウム、塩化物、乳酸および重炭酸イオンより低濃度である。

【0121】

透析にはいくつか種類があるが、本発明の透析では、通常、血液透析または腹膜透析が使用されるであろう。

【0122】

市販で入手可能は透析液の例としては、Ｅｘｔｒａｎｅａｌ（登録商標）（Ｂａｘｅｒ、イコデキストリン含有透析液）、Ｇａｍｂｒｉｓｏｌ Ｔｒｉｏ（登録商標）（Ｇａｍｂｒｏ、グルコース含有透析液）およびＰｈｙｓｉｏｎｅａｌ（Ｂａｘｅｒ、グルコース含有透析液）が挙げられる。

【0123】

一例として、Ｅｘｔｒａｎｅａｌ（登録商標）（イコデキストリン）は、コロイド浸透圧剤であるイコデキストリンを含有する腹膜透析液である。イコデキストリンは、デンプン誘導体であり、α（１−４）グリコシド結合および１０％未満のα（１−６）グリコシド結合で結合した、重量平均分子量１３０００〜１９０００Ｄａおよび数平均分子量５０００〜６５００Ｄａである水溶性のグルコース重合体である。１００ｍＬのＥｘｔｒａｎｅａｌには、イコデキストリン（７．５ｇ）、塩化ナトリウム（５３５ｍｇ）、乳酸ナトリウム（４４８ｍｇ）、塩化カルシウム（２５．７ｍｇ）、塩化マグネシウム（５．０８ｍｇ）がそれぞれ含有される。１Ｌあたりの電解質の含量は以下の通りである：
−ナトリウム ：１３２ｍＥｑ／Ｌ
−カルシウム ：３．５ｍＥｑ／Ｌ
−マグネシウム：０．５ｍＥｑ／Ｌ
−塩化物 ： ９６ｍＥｑ／Ｌ
−乳酸 ： ４０ｍＥｑ／Ｌ。

【0124】

したがって、本発明のある実施形態では、透析液は、化学式Ｉの化合物に加え、ナトリウム、塩化物、乳酸および重炭酸からなる群より選択される少なくとも２つのイオンをさらに含有してもよい。本発明のある実施形態では、透析液は、化学式Ｉの化合物に加え、ナトリウム、塩化物、乳酸および重炭酸からなる群より選択される少なくとも３つのイオンをさらに含有してもよい。本発明の他の実施形態では、透析液は、化学式Ｉの化合物に加え、ナトリウム、塩化物、乳酸および重炭酸イオンを含有してもよい。

【0125】

本発明のさらなる実施形態として、透析液はカルシウムおよび／またはマグネシウムイオンをさらに含有してもよい。ある実施形態では、カルシウムおよびマグネシウムイオンは、もし存在するのであれば、ナトリウム、塩化物、乳酸および重炭酸イオンのそれぞれより少ない濃度で存在する。

【0126】

本発明のある実施形態では、透析液は浸透圧剤（osmotic agent）を含有してもよい。浸透圧剤の例としては、グルコース、ポリグルコースまたはアミノ酸などが挙げられる。ポリグルコース透析液は、Ｇｒｚｅｇｏｒｚｅｗｓｋａ ｅｔ ａｌ．（２００１）， Ａｄｖ Ｐｅｒｉｔ Ｄｉａｌに記載されている。アミノ酸は、必須アミノ酸、非必須アミノ酸のいずれでもよく、Ｌ−、Ｄ−アイソフォームのいずれでもよい。本発明のある実施形態では、透析液は、グルコース、ポリグルコース、アミノ酸、イコデキストリンおよび重炭酸イオンからなる群より選択される少なくとも１つの成分を含んでもよい。たとえば、透析液は、化学式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩もしくはエステルと、ナトリウム、塩化物および乳酸イオンからなる群より選択される少なくとも２つのイオンと、グルコース、ポリグルコース、アミノ酸、イコデキストリンおよび重炭酸からなる群より選択される少なくとも１つの成分とを含有してもよい。

【0127】

ナトリウムイオンは、約１００〜約１５０ｍＥｑ／Ｌの濃度で存在してもよい。塩化物イオンは、約７５〜約１２５ｍＥｑ／Ｌの濃度で存在してもよい。乳酸イオンは、約１０〜約５０ｍＥｑ／Ｌの濃度で存在してもよい。重炭酸イオンは、約１０〜約５０ｍＥｑ／Ｌの濃度で存在してもよい。カルシウムイオンは、５ｍＥｑ／Ｌより低い濃度、たとえば約１〜約５ｍＥｑの濃度で存在してもよい。マグネシウムイオンは、５ｍＥｑより低い濃度、たとえば約０．１〜約２ｍＥｑの濃度で存在してもよい。

【0128】

イコデキストリンは、約５０〜１００ｇ／Ｌの量で存在してもよい。グルコースは、約５〜５０ｇ／Ｌの量で存在してもよい。

【0129】

化学式Ｉの化合物は、透析中または腎臓病中の損傷からの腎臓の保護に供する濃度で存在してもよい。たとえば、化学式Ｉの化合物またはその許容される塩もしくはエステルは、１０^−６〜１０^−２Ｍ（たとえば１０^−５〜３×１０^−３Ｍ）の量で存在してもよい。ある実施形態では、化学式Ｉの化合物（またはその製薬上許容される塩もしくはエステル）は、１０^−２Ｍ以下の濃度で存在してもよい。ある実施形態では、化学式Ｉの化合物（またはその製薬上許容される塩もしくはエステル）は、１０^−６Ｍまたは１０^−５Ｍ以上の濃度で存在してもよい。

【0130】

本発明の一実施形態では、急性腎損傷の治療に使用されるアーテスネートが提供される。アーテスネートは静脈内投与に使用され、腎損傷後（またはＡＫＩ診断後）１２時間以上で投与されてもよい。ＡＫＩの治療方法は、０．１〜３ｍｇ／ｋｇの量のアーテスネートを、ＡＫＩの治療を必要とする患者の静脈内に投与することを含む。腎臓移植方法は、腎臓病のリスクを最小限にするため、術前、術中および／または術後にドナー患者にアーテスネートを投与することを含む。あるいは、腎臓移植方法は、術後の血清クレアチニンレベル測定を含んでもよく、腎臓病を発症しているまたはＡＫＩ発症のおそれがあると判断される患者にアーテスネートは投与されるべきである。

【0131】

本発明の第１態様の特徴は、本発明の第２態様以降に準用する。

【0132】

本発明は、後述の実施例を参照して記述されるが、これらは参照のみを目的として提示されており、本発明の範囲はこれらに制限されるものではない。実施例では、図面の番号について言及される。

【実施例】

【0133】

本研究において準拠した動物プロトコルは、Ｈｅｒ Ｍａｊｅｓｔｙ’ｓ Ｓｔａｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆｆｉｃｅより出版された動物実験に関する英国内務省ガイドライン（科学的手続）（１９８６年施行）および米国学術研究会議の実験動物の管理・使用に関するガイドラインの双方の派生に対応する、地域の動物実験委員会（Animal Use and Care Committee）によって承認された。

【0134】

＜１．ラットにおける外傷性出血に誘発される臓器の損傷および機能障害に対するアーテスネートの効果の評価＞
［１．１ 外科手術］
雄ウィスターラット（２７１±５ｇ）３５匹を、チオペンタール（１２０ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．，ＬＩＮＫ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｌｔｄ．，Ｗｅｓｔ Ｓｕｓｓｅｘ，英国）で麻酔し、必要に応じてチオペンタールの補充注射（〜１０ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．）により麻酔状態を保った。サーモスタット制御された保温マット（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ Ｌｔｄ．， Ｋｅｎｔ，英国）の上に動物を置き、恒温ブランケットに接続した直腸プローブにより体温を３７±１℃に維持した。気道の開通性を維持して自発呼吸を促進するため、短いポリエチレンチューブ［内径（ＩＤ）１．６７ｍｍ， Ｐｏｒｔｅｘ，Ｋｅｎｔ，英国］を気管内腔に挿入することにより気管切開を行った。左大腿動脈にカニューレ（ＩＤ０．４０ｍｍ，Ｐｏｒｔｅｘ）を挿入し、平均動脈血圧（ＭＡＰ）およびパルス波形からの心拍数（ＨＲ）の偏差の測定のため、圧力変換器（ＳＰ８４４血圧センサー，Ｍｅｍｓｃａｐ，米国）に連結した。これらは両方とも、実験期間において、ウィンドウズ（登録商標）ＸＰを起動するインテル標準コンピュータにインストールされたデータ収集システム（Ｐｏｗｅｒｌａｂ ８ＳＰ， Ｃｈａｒｔ ｖ５．５．３，ＡＤ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｈａｓｔｉｎｇｓ，英国）上に表示された。ヘパリン処理シリンジを用いた採血を容易にするため、右頸動脈にカニューレ（ＩＤ０．５８ｍｍ，Ｐｏｒｔｅｘ）を挿入した。乳酸リンゲル液（ＲＬ）、出血液、試験化合物および／または賦形剤の投与のため、右頸静脈にカニューレ（ＩＤ０．４０ｍｍ，Ｐｏｒｔｅｘ）を挿入した。また、尿の回収のため、膀胱にもカニューレ（ＩＤ０．７６ｍｍ，Ｐｏｒｔｅｘ）を挿入した。外科手術を完了後、１５分間かけて心臓血管のパラメータを安定化させた。

【0135】

［１．２ 出血および蘇生］
安定化後、ＭＡＰが１０分間で３５±５ｍｍＨｇまで低下するよう、右頸動脈に挿入したカニューレを介して血液を採取した。この時点以降、代償期での採血（交感神経反応により採血に応じてＭＡＰが上昇する）または非代償期での乳酸リンゲル液の静脈内注射（動物は高ＭＡＰを上昇・維持できなくなる）のいずれかにより、ＭＡＰを３５±５ｍｍＨｇに９０分間維持した。出血時における平均採血量は、９．８±０．２ｍｌであった（全出血群にわたってｎ＝３１）。出血開始９０分後、２０ｍｌ／ｋｇ乳酸リンゲル液を１０分間静脈内注射し、次いで出血液と１００ｕ／ｍｌヘパリン加生理食塩水との半量混合物を５０分間静脈内注射することにより、蘇生を行った。１時間蘇生後、体液補充として乳酸リンゲル液点滴の静脈注射（１．５ｍｌ／ｋｇ／ｈ）を開始し、さらに３時間維持した。

【0136】

［１．３ 臓器の損傷／機能障害の定量化］
蘇生の兆候から数時間後、実験を終結するため心臓を除去した後、右頸動脈から血液１．２ｍＬを採取し、血清ゲルチューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ，Ｎｕｍｂｒｅｃｈｔ，ドイツ）に移した。サンプルを遠心（９９００ｒｐｍ×３分）して血清を分離し、２４時間以内に尿素、クレアチニン、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）およびクレアチニンキナーゼ（ＣＫ）を測定した（Ｉｄｅｘｘ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｌｔｄ．，Ｗｅｓｔ Ｙｏｒｋｓｈｉｒｅ，英国）。糸球体の機能障害の指標であるクレアチニンクリアランスを見積もるため、実験終盤３時間で回収された尿について、クレアチニンレベルを分析し、以下のように算出した。

【0137】

【数1】

【0138】

［１．４ 実験計画］
ラットを下記の群にランダムに割り当てた：
（ｉ） 偽（ｎ＝４）
（ｉｉ） ＨＳコントロール（ｎ＝１０）
（ｉｉｉ） ＨＳ＋アーテスネート１ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝６）
（ｉｖ） ＨＳ＋アーテスネート３ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）
（ｖ） ＨＳ＋アーテスネート１０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８）。

【0139】

偽手術ラットについては、出血または蘇生せずに同一の外科手術を施した。蘇生時、１０％ＤＭＳＯ（１ｍｌ／ｋｇ ｉ．ｖ．）またはアーテスネート（１、３または１０ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．）のいずれかを動物に施した。

【0140】

［１．５ 材料］
特記しない限り、全ての化合物はシグマアルドリッチ社（Ｐｏｏｌｅ，Ｄｏｒｓｅｔ，英国）から購入した。全てのストック溶液は、非発熱性生理食塩水［０．９％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌ：Ｂａｘｔｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｔｄ．，Ｔｈｅｔｆｏｒｄ，Ｎｏｒｆｏｌｋ，英国］で調製した。乳酸リンゲル液についても、Ｂａｘｔｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｔｄ．から購入した。チオペンタール（Ｔｈｉｏｖｅｔ^ＴＭ）は、Ｌｉｎｋ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｈｏｒｓｈａｍ，英国から購入した。マルチパリン（ヘパリン注射液 Ｂ．Ｐ．，５０００ｉｕ／ｍｌ）は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｓｔｏｋｅ−ｏｎ−Ｔｒｅｎｔ，英国から購入し、マルチパリン０．１ｍｌを０．９％（ｗ／ｖ）塩化ナトリウム４．９ｍｌに添加して濃度１００ｕ／ｍｌとし、マルチパリン５ｍｌを０．９％（ｗ／ｖ）塩化ナトリウム１Ｌに添加して、濃度２５ｕ／ｍｌとした。アーテスネートについても、シグマアルドリッチ社（Ｐｏｏｌｅ，Ｄｏｒｓｅｔ，英国）から購入した。

【0141】

［１．６ 統計的分析］
表および図に記載される全数値は、ｎ個観測に対する平均値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表す。各データポイントは、最大１０個体の動物から得られた生化学的測定値を示す。統計的分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５．０３（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，米国）を用いて実施した。繰り返し測定を伴わないデータは、Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ ｐｏｓｔ ｈｏｃ ｔｅｓｔに基づくｏｎｅ−ｗａｙ ＡＮＯＶＡにより評価した。繰り返し測定を伴うデータは、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ’ｓ ｐｏｓｔ ｈｏｃ ｔｅｓｔに基づくｔｗｏ−ｗａｙ ＡＮＯＶＡにより評価した。０．０５未満のＰ値は有意であるとみなした。

【0142】

［１．７ 出血性ショックに起因する循環不全に対するアーテスネートの効果］
偽手術ラットと比較して、賦形剤で治療したＨＳラットは、蘇生期間においてＭＡＰの有意な低下を示した（Ｐ＜０．０５、図１）。蘇生段階におけるアーテスネート投与（１、３または１０ｍｇ／ｋｇ）は、蘇生段階における出血に起因するＭＡＰの低下が弱まった（Ｐ＞０．０５、図１）。

【0143】

［１．８ 出血性ショックに誘発される臓器の損傷および機能障害に対するアーテスネートの効果］
偽手術ラットと比較して、賦形剤で治療したＨＳラットは、血清尿素（Ｐ＜０．００１、図２Ａ）およびクレアチニン（Ｐ＜０．００１、図２Ｂ）の有意な増加が見られた；偽手術ラットと比較して、クレアチニンクリアランスは有意に減少し（Ｐ＜０．００５、図２Ｃ）、腎臓および糸球体の機能障害の発症を示した。３ｍｇ／ｋｇアーテスネートを用いたＨＳラットの治療は、ＨＳラットと比較して、血清尿素（Ｐ＜０．０５、図２Ａ）およびクレアチニン（Ｐ＜０．００５、図２Ｂ）の増加が有意に弱まった；一方、１０ｍｇ／ｋｇアーテスネートを用いた治療は、血清クレアチニン（Ｐ＜０．００５、図２Ｂ）の増加およびクレアチニンクリアランス（Ｐ＜０．００５、図２Ｃ）の減少が有意に弱まった。１ｍｇ／ｋｇアーテスネートを用いたＨＳラットの治療は、血清尿素（Ｐ＞０．０５、図２Ａ）およびクレアチニン（Ｐ＞０．０５、図２Ｂ）の増加またはクレアチニンクリアランス（Ｐ＞０．０５、図２Ｃ）の減少に対して有意な効果を有しなかった。

【0144】

偽手術ラットと比較して、賦形剤で治療したＨＳラットは、血清ＡＳＴ（Ｐ＜０．００５、図３Ａ）、ＡＬＴ（Ｐ＜０．００５、図３Ｂ）およびクレアチニンキナーゼ（Ｐ＜０．０５、図３Ｃ）の有意な増加が見られ、肝損傷および骨格筋損傷の発症を示した。アーテスネート（３、１０ｍｇ／ｋｇの両方）を用いたＨＳラットの治療は、血清ＡＳＴ（Ｐ＜０．０５、図３Ａ）、ＡＬＴ（Ｐ＜０．００５、図３Ｂ）およびクレアチニンキナーゼ（Ｐ＜０．０５、図３Ｃ）の増加を有意に弱めた。１ｍｇ／ｋｇアーテスネートを用いた治療は、ＡＳＴ（Ｐ＞０．０５、図３Ａ）、ＡＬＴ（Ｐ＞０．０５、図３Ｂ）またはクレアチニンキナーゼ（Ｐ＞０．０５、図３Ｃ）の増加に対して有意な効果を有しなかった。

【0145】

＜２．ラットにおける火傷に誘発される臓器の損傷および機能障害に対するアーテスネートの効果の評価＞
［２．１．外科手術］
重さ３００〜３５０ｇの雄ウィスターラット（Ｈａｒｌａｎ，Ｕｄｉｎｅ，イタリア）２２匹を、チオペンタール（Ｅｕｔａｓｉｌ^ＴＭ，６０ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．；Ｓａｎｏｆｉ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｉａ，Ａｌｇｅｓ，ポルトガル）で麻酔し、必要に応じて補給した。麻酔したラット（の背部および腹部）を剃毛し、サーモスタット制御された保温マット（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ Ｌｔｄ．，Ｋｅｎｔ，英国）の上に置き、恒温ブランケットに接続した直腸プローブにより体温を３７±１℃に維持した。気道の開通性を維持し、自発呼吸を促進するため、気管切開を行った。火傷に３０分先立ち、３．２節に記載のように、ラットを賦形剤または薬剤で治療した。火傷を誘発するため、人工泡鋳型（synthetic foam template）を用いて、背部の剃毛した肌を９９℃のお湯に１０秒間浸漬させることにより、６０％の第３度火傷を誘発した。その後、ラットを乾燥し、保温マットの上に置いた。火傷の６時間後、麻酔薬の過剰摂取によりラットを剖検し、臓器の損傷および機能障害の分析のために血清サンプルを採取した。

【0146】

［２．２ 実験計画］
ラットを下記の群にランダムに割り当てた：
（ｉ） 偽手術（ｎ＝４）
（ｉｉ） 火傷＋１０％ＤＭＳＯ（ｎ＝１０）
（ｉｉｉ） 火傷＋アーテスネート（ｎ＝９）。

【0147】

偽手術ラットについては、火傷させずに（室温の水に浸漬させて）同様の外科手術を施した。火傷３０分前および火傷３０分後に１０％ＤＭＳＯ（１ｍｌ／ｋｇ ｉ．ｖ．）またはアーテスネート（３ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．）のいずれかを動物に施した。

【0148】

［２．３ 材料］
特記しない限り、全ての化合物は、シグマアルドリッチＱｕｉｍｉｃａ Ｓ．Ａ．（Ｓｉｎｔｒａ，ポルトガル）から購入した。チオペンタール（Ｅｕｔａｓｉｌ^ＴＭ）は、Ｓａｎｏｆｉ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｉａ（Ｍｉｒａｆｌｏｒｅｓ， Ａｌｇｅｓ，ポルトガル）から購入した。全てのストック溶液は、非発熱性生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ、Ｂ．Ｂｒａｕｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｄａ，Ｑｕｅｌｕｚ，ポルトガル）で調製した。

【0149】

［２．４ 統計的分析］
各データポイントは、最大１０個体の動物から得られた測定値を表す。データはＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ ｔｅｓｔを用いて評価した。

【0150】

［２．５ 火傷に誘発される腎機能障害に対するアーテスネートの効果］
偽手術ラットと比較して、火傷を受けて賦形剤で治療されたラットは、血清尿素（Ｐ＜０．０５、図４Ａ）およびクレアチニン（Ｐ＜０．０５、図４Ｂ）の有意な増加が見られ、腎機能障害の発症を示した。３ｍｇ／ｋｇアーテスネートを用いた火傷ラットの治療は、火傷ラットと比較して、血清尿素（Ｐ＜０．０５、図４Ａ）およびクレアチニン（Ｐ＜０．０５、図４Ｂ）の増加を有意に弱めた。

【0151】

［２．６ 火傷に誘発される肝損傷に対するアーテスネートの効果］
偽手術ラットと比較して、火傷を受けて賦形剤で治療されたラットは、血清アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）（Ｐ＜０．０５、図５Ａ）およびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）（Ｐ＜０．０５、図５Ｂ）の有意な増加が見られ、肝損傷の発症を示した。３ｍｇ／ｋｇアーテスネートを用いた火傷ラットの治療は、火傷に誘発される血清ＡＳＴ（Ｐ＞０．０５、図５Ａ）およびＡＬＴ（Ｐ＞０．０５、図５Ｂ）の増加に対して有意な効果を有しなかった。

【0152】

［２．７ 要約］
賦形剤を用いた火傷を受けたラットの治療は、（血清尿素およびクレアチニンの増加で示されるように）有意な腎機能障害、および（血清ＡＳＴおよびＡＬＴの増加で示されるように）有意な肝損傷を引き起こした。

【0153】

３ｍｇ／ｋｇアーテスネートを用いた火傷ラットの治療は、火傷に起因する、（血清尿素およびクレアチニンを用いて測定される）腎機能障害の有意な減少をもたらした。しかしながら、３ｍｇ／ｋｇアーテスネートを用いた火傷ラットの治療は、火傷に誘発される（血清ＡＳＴおよびＡＬＴを用いて測定される）肝損傷に対して有意な効果を有しなかった。

【0154】

＜３．０ 急性腎損傷および細胞内タンパク質の活性化に対する時間の効果＞
［３．１ 急性腎損傷 −外科手術および臓器損傷／機能障害の定量化］
本実験は、２４０〜２９０ｇの重さを有し、標準の餌および水を不断で摂取した雄ウィスターラット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌｔｄ，Ｍａｒｇａｔｅ，英国）６３匹について行った。動物は、ケタミン（１５０ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（１５ｍｇ／ｋｇ）の国際薬局方混合物（mixture i.p.）（１．５ｍｌ／ｋｇ）で麻酔した。毛を剃り、肌を７０％アルコール（ｖ／ｖ）で消毒した。次に、動物を３７℃に設定した恒温ブランケット上に置いた。手術開始に先立ち、動物に０．１ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．ブプレノルフィン（０．１ｍｌ／ｋｇ）を施した。次に、正中線開腹を実施した。（腎動脈、静脈および神経からなる）右腎茎を分離し、滅菌済の４−０シルク編み縫合糸（Ｐｅａｒｓａｌｌｓ Ｌｔｄ．，Ｔａｕｎｔｏｎ，英国）で結紮した。次に、右腎臓を外科的に除去した。左腎茎を分離し、時間０のときに非外傷性の微小血管クランプを用いて締め付けた。片側性腎虚血から３０分後、クランプを取り除いて再灌流した。再灌流については、３７℃で生理食塩水８ｍｌ／ｋｇを腹部に注射し、全ての切り口が２層で縫合された後（Ｅｔｈｉｃｏｎ Ｐｒｏｌｅｎｅ ４−０）、確実にリフローするようさらに５分間腎臓を観察した。その後、動物を恒温ブランケット上で回復させ、回復後にケージに移した。実験終了の２４時間前に、ラットを代謝ケージに入れて尿を回収し、続いて推定クレアチニンクリアランスおよびナトリウム分画排泄率の両方を測定した。実験終了時点で、心穿刺により血液を非ヘパリン処理シリンジに採取して、１．３ｍｌ血清ゲルチューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ，ドイツ）に移した。血液を９９００ｇで５分遠心して血清を分離した。血清中の全ての生化学マーカーおよび尿について、営利の獣医学試験研究所（ＩＤＥＸＸ Ｌｔｄ，Ｗｅｓｔ Ｓｕｓｓｅｘ，英国）にて盲検法で測定した。心臓を除去した後、左腎臓を除去した。左腎臓の半分を瞬間凍結して−８０℃で保存し、残り半分を１０％中性緩衝ホルマリン中で保存した。

【0155】

［３．２ 実験計画（タイムコース）］
ラットを下記の群にランダムに割り当てた：
（ｉ） 虚血前（ｎ＝４）
（ｉｉ） 再灌流２４時間（ｎ＝４）
（ｉｉｉ） 再灌流４８時間（ｎ＝８）
（ｖ） 再灌流７２時間（ｎ＝４）。

【0156】

［３．３ 組織学的評価およびスコアリング］
腎臓を１０％中性緩衝ホルマリン中で４８時間固定した後、７０％エタノールで脱水した。組織をパラフィンに包埋し、切片厚さのばらつきを最小限にするため、単独の試験者により４μｍの厚さで切片を切り出した。スライドをキシレンで脱パラフィン処理し、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色し、Ｋｅｙｅｎｃｅ Ｂｉｏｚｅｒｏ ＢＺ−８０００ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ（Ｏｎｔａｒｉｏ，カナダ）で観察した。糸球体の収縮、尿細管の膨張、好塩基球増加症、壊死および内腔の詰まりなどの組織学的特徴を記録した。１スライドにつき１０枚のランダム画像を撮影し、腎損傷のマーカーとしてＩｍａｇｅＪを用いて合計の組織表面積を定量した。

【0157】

［３．４ ウェスタンブロット分析］
ウェスタンブロットは、上記［２２］のとおりに実施した。各マーカーにつきウェスタンブロット分析の個別実験を３回実施し、別々の組織について各ウェスタンブロット実験を行った。簡潔に述べると、先に瞬間凍結したラット腎臓サンプルをホモジナイズし、４℃にて４０００ｇで５分遠心した。上清を除去し、４℃にて１５０００ｇで４０分遠心し、細胞質画分を得た。ペレット状の核は抽出バッファーで再懸濁した。懸濁液を４℃にて１５０００ｇで２０分遠心した。得られた核タンパク質を含む上清を慎重に取り出し、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）タンパク質アッセイを用いて、下記の製造元の指示に従い、タンパク質含量を測定した。８％ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）でタンパク質を分離して、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）膜に転写し、次いで一次抗体（マウス抗トータルＩκＢα １：１０００希釈液；マウス抗ｐＩκＢα Ｓｅｒ^{３２／３６} １：１０００希釈液；ウサギ抗トータルｅＮＯＳ １：２００希釈液；ヤギ抗ｐｅＮＯＳ Ｓｅｒ^１１７７ １：２００希釈液；ウサギ抗ＮＦ−κＢ ｐ６５ １：１０００希釈液）と共にインキュベートした。次に、ブロットをホースラディッシュペルオキシダーゼが結合した二次抗体（１：１００００希釈）と共にインキュベートし、ＥＣＬ検出システムを用いて発現させた。オートラジオグラフィーにより免疫反応性のあるバンドを可視化した。ゲルローディングの均一性を評価するため、膜を剥離してβアクチンモノクローナル抗体（１：５０００希釈）と共にインキュベートし、続いて抗マウス抗体（１：１００００希釈）と共にインキュベートした。バンドのデンシトメトリー分析はＧｅｌ Ｐｒｏ（登録商標）Ａｎａｌｙｚｅｒ ４．５，２０００ソフトウェア（Ｍｅｄｉａ Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ，Ｓｉｌｖｅｒ Ｓｐｒｉｎｇ，ＭＤ，米国）を用いて実施し、光学濃度分析は偽群に対する増加倍率として表した。偽群では、ゲルの免疫反応性のあるバンドをそれぞれ測定し、第１の免疫反応性バンド（標準偽サンプル）に対して正規化し、同じ群に属する全ての結果を平均値±ＳＥＭとして表した。これは、第１の免疫反応性バンドを数値１としたときの偽群に対するＳＥＭを与える。ゲルローディングの均一性を評価するため、膜を剥離してβアクチンモノクローナル抗体と共にインキュベートし、続いて抗マウス抗体と共にインキュベートした。相対的なバンド強度を評価し、並行するβアクチン発現に対して正規化した。次いで、偽動物と比較した相対タンパク質発現を確立するため、各群は対応する偽データに対して調整した。

【0158】

［３．５ 材料］
特記しない限り、全ての化合物は、シグマアルドリッチ社（Ｐｏｏｌｅ，Ｄｏｒｓｅｔ，英国）から購入した。全てのストック溶液は、非発熱性生理食塩水（０．９％［ｗ／ｖ］ＮａＣｌ；Ｂａｘｔｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｔｄ．，Ｔｈｅｔｆｏｒｄ，Ｎｏｒｆｏｌｋ，英国）から購入した。乳酸リンゲル液は、Ｂａｘｔｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｔｄ．から購入した。ウェスタンブロット分析用抗体はＳａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｉｎｃ．（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，ドイツ）から購入した。

【0159】

［３．６ 統計的分析］
表および図に記載される全数値は、ｎ回観測の平均値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表す。各データポイントは、最大１１個体の動物から得られた生化学的測定値を表す。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０ｂ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，米国）を用いて統計的分析を実施した。繰り返し測定を伴わないデータは、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ’ｓ ｍｕｌｔｉｐｌｅ−ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｐｏｓｔ ｈｏｃ ｔｅｓｔに基づくｏｎｅ−ｗａｙ ＡＮＯＶＡにより評価した。０．０５未満のＰ値は有意であるとみなした。

【0160】

［３．７ 結果］
基準値（虚血前）と比較して、片側性腎虚血を３０分受けたラットは、再灌流２４時間で（血清尿素およびクレアチニンの増加により測定される）腎臓、（推定クレアチニンクリアランスの減少として測定される）糸球体、および（ナトリウム分画排泄率の上昇として測定される）尿細管の有意な機能障害を発症し、次いで治療介入なしで腎臓、糸球体および尿細管機能の漸進的な回復が見られた（図６）。基準値（虚血前）と比較して、片側性腎虚血を３０分受けたラットは、再灌流４８時間で有意な腎損傷の組織学的兆候（方法を参照）が生じた（図７）。これらの結果は、急性腎損傷の発症を示している。基準値（虚血前）と比較して、片側性腎虚血を３０分受けたラットは、再灌流４８時間で有意なＩκＢα上のＳｅｒ^{３２／３６}のリン酸化、そしてＩＫＫ複合体の活性化が見られた（図８Ａ）。続いて、再灌流４８時間で、ＩＫＫ複合体の活性化は有意なＮＦ−κＢサブユニットｐ６５の核移行を引き起こした（図８Ｂ）。さらに、再灌流４８時間で、基準値と比較してｅＮＯＳ上のＳｅｒ^１１７７のリン酸化が有意に減少した（図８Ｃ）。

【0161】

＜４．０ 片側性腎虚血／再灌流の回復ラットモデルにおけるアーテスネートの遅延投与の効果＞
［４．１ 外科手術］
ウィスターラット（２４０〜２７０ｇ、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ，Ｍａｒｇａｔｅ，英国）３１匹を本実験に用いた。ラットをケタミン（１００ｍｇ／ｍｌ）およびキシラジン（２０ｍｇ／ｍｌ）の混合物（２：１；１．５ｍｌ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）で麻酔し、ケタミン／キシラジンの補充注射（２００μｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．）により麻酔状態を維持した。ブプレノルフィンを０．１ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．（０．５ｍｌ／ｋｇ）の量で投与した。ラットを３７℃に設定したサーモスタット制御された保温マット（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ Ｌｔｄ．，Ｋｅｎｔ，英国）上に置いた。その後、正中線開腹を行った。解剖学上の右腎臓を除去し、腎動脈および腎静脈について以下の永久的結紮を行った。（腎動脈、静脈および神経からなる）左腎茎を分離して、非外傷性微小血管クランプを用いて０〜３０分締め付けた。体温計で直腸温度を測定する方法により、虚血時の体温を３５±１℃に維持した。片側性腎虚血３０分後、クランプを外して再灌流を４８時間行った。腎臓のクランプを外した後、３７℃で生理食塩水２ｍｌを腹部に注射して全ての切り口を２層で縫合してから、確実にリフローさせるため、さらに５分間腎臓を観察した。その後、恒温ブランケット上でラットを麻酔から回復させ、ケージに戻した。剖検２４時間前にラットをそれぞれ代謝ケージに置いて尿を回収した。再灌流４８時間終了時に、チオペンタール（１２０ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．，ＬＩＮＫ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｌｔｄ．，Ｗｅｓｔ Ｓｕｓｓｅｘ，英国）でラットを再度麻酔した。

【0162】

［４．２ サンプル回収］
経時実験では、再灌流段階を通じて、ラットから連続的な血液サンプルを回収した。再灌流期間に続いて、心穿刺を介して心臓の右心室から約３．５ｍｌの血液を非ヘパリン処理５ｍｌシリンジに採取し、すぐに１．３ｍｌ血清ゲルチューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ，ドイツ）に移した。血液を９９００ｇで３分間遠心して血清を分離し、次いでこれを分析まで−８０℃で保存した。肺、肝臓および腎臓について、各臓器の一部を切除し、液体窒素で瞬間凍結して−８０℃で保存し、（必要であれば）残りを分析まで１０％ホルマリン中に置いた。血清中の全ての生化学マーカーおよび尿について、営利の獣医学試験研究所（ＩＤＥＸＸ Ｌｔｄ，Ｗｅｓｔ Ｓｕｓｓｅｘ，英国）にて盲検法により測定した。血清の尿素およびクレアチニンは腎機能障害の指標として用いた。クレアチニンクリアランスは糸球体機能障害の指標として用い、以下のように算出した。

【0163】

【数2】

【0164】

ナトリウム分画排泄率は、尿細管機能障害の指標として用い、以下のように算出した。

【0165】

【数3】

【0166】

［４．３ 実験計画］
動物をランダムに７つの実験群に分け、再灌流２４時間で１ｍｌ／ｋｇ ｉ．ｖ．ボーラス投与として重炭酸ナトリウム、再灌流２４時間でｉ．ｖ．ボーラス投与として０．３ｍｇ／ｋｇアーテスネート、のいずれかで治療した（表２および表３参照、ｎは実験した動物の個体数を表す）。

【0167】

【表2】

【0168】

【表3】

【0169】

［４．４ 材料および薬剤調製］
重炭酸ナトリウムはシグマアルドリッチ社から購入し、１０ｍｌチューブとして−２０℃で保存した。生理食塩水はＢａｘｔｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｔｄ（ＵＫＦ７１２４）から入手した。実験開始に先立ち、アーテスネート（Ｇｕｉｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃｏ Ｌｔｄ，中国）を３ｍｇ／ｍｌ当量に調製し、１か月以内は−２０℃で保存した。注射日には１当量を冷凍庫から取り出し、必要な濃度に希釈した（以下参照）。

【0170】

アーテスネート０．３ｍｇ／ｋｇ：ｉ．ｖ．ボーラス投与量０．３ｍｇ／ｋｇ
化合物は１ｍｌ／ｋｇの量で投与する。

【0171】

ゆえに、各ラットの重さが２５０ｇであると想定した場合の化合物の濃度は以下のとおりである：
ｐ．ｏ．ボーラス濃度＝０．３ｍｇ／ｍｌ
ストック濃度＝１ｍｌ当量中３ｍｇ／ｍｌ

【0172】

希釈因子：３÷０．３＝１０
ボーラス投与量に対してラット１匹あたり１ｍｌ、すなわち重炭酸ナトリウム９００μｌにつき３ｍｇ／ｍｌアーテスネートストック１００μｌが要される。

【0173】

［４．５ 統計的評価］
表および図の全数値は、ｎ回観測の平均値±ＳＥＭとして表し、ｎは実験した動物の個体数を表す。全ての統計的分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，米国）を用いて計算した。生化学的データは、２つより多くの群を表すデータについてはｏｎｅ−ｗａｙ ＡＮＯＶＡにより分析し、次いで、コントロール賦形剤を用いた偽／治療群との比較のためにＤｕｎｎｅｔｔ’ｓ ｐｏｓｔ ｈｏｃ ｔｅｓｔを行った。０．０５未満のＰ値は有意であるとみなした。

【0174】

［４．６ 虚血および再灌流に起因する腎機能障害に対する時間およびアーテスネートの効果］
基準値（再灌流０時間）と比較して、片側性腎虚血を３０分受けたラットは、再灌流２４時間で腎機能障害のピークに達し、その後治療介入なしで腎機能が漸進的に回復した（図９Ａ−Ｂ）。

【0175】

偽手術ラットと比較して、片側性腎虚血３０分および再灌流４８時間を施されたラットは、血清尿素（５．７５±０．２８→３４．１３±２．２３ｍｍｏｌ／Ｌ）（Ｐ＜０．０５、図９Ｃ）、および血清クレアチニン（３５．６０±１．２６→２０５．９０±２２．２３μｍｏｌ／Ｌ）（Ｐ＜０．０５、図９Ｄ）の有意な増加を示した。これらの結果は、急性腎損傷の発症を示している。虚血／再灌流のみ受けたラットと比較して、再灌流２４時間（機能障害のピーク）で０．３ｍｇ／ｋｇアーテスネートを用いた治療は、血清尿素（３４．１３±２．２３→２１．６３±１．５１ｍｍｏｌ／Ｌ）（Ｐ＜０．０５、図９Ｃ）、および血清クレアチニン（２０５．９０±２２．２３→１１５．４±９．７２μｍｏｌ／Ｌ）（Ｐ＜０．０５、図９Ｄ）を有意に弱めた。

【0176】

［４．７ 虚血および再灌流に起因する糸球体機能障害に対する時間およびアーテスネートの効果］
基準値（再灌流０時間）と比較して、片側性腎虚血を３０分受けたラットは、再灌流２４時間で糸球体機能障害のピークに達し、その後治療介入なしで糸球体機能が漸進的に回復した（図１０Ａ）。

【0177】

偽手術ラットと比較して、片側性腎虚血３０分および再灌流４８時間を受けたマウスは、推定クレアチニンクリアランスの有意な増加を示した（０．５１±０．０２→０．０８±０．０１ｍｌ／ｍｉｎ／１００ｇｂｗ）（Ｐ＜０．０５、図１０Ｂ）。これらの結果は、急性腎損傷の発症を示している。虚血／再灌流のみを受けたラットと比較して、再灌流２４時間（機能障害のピーク）で０．３ｍｇ／ｋｇアーテスネートを用いた治療は、推定クレアチニンクリアランスを有意に弱めた（０．０８±０．０１→０．１４±０．０２ｍｌ／ｋｇ／１００ｇｂｗ）（Ｐ＜０．０５、図１０Ｂ）。

【0178】

［４．８ 虚血および再灌流に起因する尿細管機能障害に対する時間およびアーテスネートの効果］
基準値（再灌流０時間）と比較して、片側性腎虚血を３０分受けたラットは、再灌流２４時間で尿細管機能障害のピークに達し、その後治療介入なしで糸球体機能が漸進的に回復した（図１１Ａ）。

【0179】

偽手術ラットと比較して、片側性腎虚血３０分および再灌流４８時間を受けたマウスは、ナトリウム分画排泄率の有意な上昇を示した（０．５９±０．０７→４．４５±０．６５％）（Ｐ＜０．０５、図１１Ｂ）。これらの結果は急性腎損傷の発症を示している。虚血／再灌流のみを受けたラットと比較して、再灌流２４時間（機能障害のピーク）で０．３ｍｇ／ｋｇアーテスネートを用いた治療は、ナトリウム分画排泄率を有意に弱めた（４．４５±０．６５→１．９０±０．１７％）（Ｐ＜０．０５、図１１Ｂ）。

【0180】

［４．９ 要約および結論］
右腎摘出術後に片側腎虚血を３０分受けたマウスは、（血清クレアチニンおよび尿素の増加で示される）腎機能障害、（推定クレアチニンクリアランスの減少で示される）糸球体機能、および（ナトリウム分画排泄率の上昇で示される）尿細管機能障害の一時的な向上を示した。機能障害のピークは再灌流開始２４時間後で起こり、漸進的に減少して、再灌流開始７２時間後に機能回復をもたらした。

【0181】

腎、糸球体および尿細管機能障害のピーク（再灌流開始２４時間後）で、０．３ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．）の用量のアーテスネートを用いた治療は、２４時間以内に腎、糸球体および尿細管機能の顕著な改善をもたらした。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】