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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】6147249
(24)【登録日】2017年5月26日
(45)【発行日】2017年6月14日
(54)【発明の名称】神経因性疼痛の治療において使用するためのカンナビノイド
(51)【国際特許分類】
A61K 31/05 20060101AFI20170607BHJP
A61P 25/02 20060101ALI20170607BHJP
【ＦＩ】
A61K31/05
A61P25/02 101
【請求項の数】5
【全頁数】14
(21)【出願番号】特願2014-510885(P2014-510885)
(86)(22)【出願日】2012年5月18日
(65)【公表番号】特表2014-513715(P2014-513715A)
(43)【公表日】2014年6月5日
(86)【国際出願番号】GB2012051129
(87)【国際公開番号】WO2012160358
(87)【国際公開日】20121129
【審査請求日】2015年5月1日
(31)【優先権主張番号】1108506.5
(32)【優先日】2011年5月20日
(33)【優先権主張国】GB
【前置審査】
(73)【特許権者】
【識別番号】508368987
【氏名又は名称】ジーダブリュー・ファーマ・リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＧＷ ＰＨＡＲＭＡ ＬＩＭＩＴＥＤ
(74)【代理人】
【識別番号】110000796
【氏名又は名称】特許業務法人三枝国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】マイオーネ サバティーノ
(72)【発明者】
【氏名】ロッシ フランチェスコ
(72)【発明者】
【氏名】ガイ ジェフリー
(72)【発明者】
【氏名】ストット コリン
(72)【発明者】
【氏名】菊地 哲朗
【審査官】
横山 敏志
(56)【参考文献】
【文献】
特表２０１０−５２４９１２（ＪＰ，Ａ）
【文献】
特表２００９−５４１４７９（ＪＰ，Ａ）
【文献】
国際公開第２００９／００１０８１（ＷＯ，Ａ１）
【文献】
特表２００５−５１２９４３（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）
Ａ６１Ｋ３１／００−３１／８０
Ａ６１Ｋ４５／００
Ａ６１Ｐ２５／０２
Ａ６１Ｐ２５／０４
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
純粋、合成、又は単離された状態のカンナビジバリン（ＣＢＤＶ）を含むアロデニアを治療するための医薬組成物（但し、ＣＢＤＶ以外のカンナビノイドを含まない）。
【請求項2】
前記ＣＢＤＶが、アロデニアを軽減するための効果的なヒトの１日量である５ｍｇ〜１００ｍｇで存在する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項3】
前記効果的なヒトの１日量が１０ｍｇ〜５０ｍｇである、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項4】
前記ＣＢＤＶが長期の治療期間での使用のために包装される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項5】
前記長期の治療期間が少なくとも７日間である、請求項４に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、神経因性疼痛の治療において使用するためのカンナビノイドに関する。好ましくはカンナビノイドは、カンナビゲロール（ＣＢＧ）、カンナビクロメン（ＣＢＣ）、カンナビジバリン（ＣＢＤＶ）又はテトラヒドロカンナビバリン（ＴＨＣＶ）のうちの１つ又は複数のフィトカンナビノイドである。より好ましくはフィトカンナビノイドは、大麻植物抽出物から単離及び／又は精製される。
【背景技術】
【0002】
疼痛は患者が診療を求める最も一般的な理由の１つであり、結果として、疼痛は１年当たり多大なる日数の労働損失を引き起こす。疼痛の３つの一般的なクラスが存在する：侵害受容性疼痛、神経因性疼痛及び心因性疼痛。図１は、種々の疼痛の種類と、罹患する病態、例えばアロデニア及び多発性硬化症との間の関係を示す。
【0003】
侵害受容性疼痛においては、侵害受容器と呼ばれる感覚神経終末の刺激によって、疼痛の感覚がもたらされる。かかる疼痛は多くの場合、傷害又は外科処置の後に生ずる。疼痛のシグナルは、侵害受容器によって脳へと伝達される。多くの場合、この疼痛は、局在し、一定であり、うずく又はずきずきする（aching or throbbing）感じを有する。組織に対する損傷が治癒すると、疼痛は通常消散する。オピオイドによる治療は多くの場合、侵害受容性疼痛を消散させる。
【0004】
心因性疼痛は、心理的因子と関連する疼痛疾患である。幾つかの種類の精神的又は感情的な問題が疼痛を引き起こす可能性がある。これらの問題は、疼痛を増大又は長期化させる可能性もある。頭痛、筋肉痛、背痛及び胃痛は、最も一般的な種類の心因性疼痛のうちの一部である。この疼痛疾患を有する人は実際上、本当の疼痛を有する。疼痛について全ての身体的原因が除外される場合に、その診断が為される。
【0005】
神経因性疼痛は、末梢神経系又は中枢神経系の傷害又は機能障害の結果として起こるものである。疼痛は傷害によって誘発されることがあるが、必ずしも神経系それ自体の傷害によってという訳ではない。神経因性疼痛は慢性であることが多く、多くの場合、オピオイドによる治療に対して抵抗性を有する。
【0006】
神経因性疼痛は、神経、脊髄又は脳における異常によって引き起こされ、慢性の種類の非悪性疼痛であり、推定有病率は人口の１％を超える。これらの患者における疼痛の軽減を最適化することは、患者が自身の人生のコントロールを取り戻すことを助ける上で重要である。
【0007】
神経因性疼痛の最も一般的な原因は、神経の傷害又は機能不全である。末梢神経又は脊髄から下行する神経の傷害又は機能不全によって、脊髄において神経インパルスの脱抑制が引き起こされ、結果として疼痛が引き起こされる。神経因性疼痛は、脊髄傷害及び多発性硬化症等の病態においては、末梢ではなく中枢を介する場合もある。
【0008】
したがって、神経因性疼痛は、末梢神経系が影響を受けるか又は中枢神経系が影響を受けるかに応じて、末梢神経因性疼痛及び中枢神経因性疼痛という２つの更なるクラスへと細分類することができる。
【0009】
末梢神経因性疼痛を有する患者は多くの場合、焼けるような痛み又は電気的な痛みのような感じがする疼痛を経験するが、これらの疼痛を極低温又ピン及び針のような感じがすると説明する者もいる。疼痛は、活動によって、又は患部の上に衣服を着けることによって悪化する場合がある。疼痛は毎日のパターンによって変化する場合もあり、このことは、１日の或る特定の時間に疼痛がより悪い状態にあることを意味し得る。
【0010】
アロデニアは末梢神経因性疼痛の一種である。これは、例えば患部を指先で払うような典型的には痛みを伴わない刺激に対する痛みを伴う応答である。疼痛は、刺激の繰返しによって増大する傾向があり、患部から拡散する可能性がある。アロデニアの疼痛は、皮膚、関節、骨、筋肉又は内蔵に対して静的に又は動的に適用される化学的、熱的（低温又は高温）又は機械的な低強度又は高強度の刺激に応答して誘起され得る。アロデニアの疼痛の存在は、神経因性疼痛を引き起こした特定の疾病による手段より、末梢神経因性疼痛を患っている患者を分類するより好適な手段であると考えられる。
【0011】
神経因性疼痛を患う患者の生活の質が神経因性疼痛によって大きく影響を受ける可能性があることは明らかである。疼痛は、労働及び社会活動、並びに患者が経験する睡眠の量及び質を妨げる可能性がある。神経因性疼痛の軽減のための治療の成功は、患者が経験している疼痛の量、及び患者の生活の質の両方を改善するはずである。
【0012】
医薬品の薬物の使用は、神経因性疼痛に対する最も一般的な治療である。鎮痛剤、抗うつ剤及び抗痙攣剤は、一般的に使用される薬剤のクラスである。抗痙攣剤である薬剤カルバマゼピンは現在のところ、神経因性疼痛に適応を有する、唯一のＦＤＡに承認されている薬剤である。市場流通後の研究によって、カルバマゼピンを服用してる患者において造血機能障害（blood dyscrasias）のリスクが５倍〜８倍増大することが示唆されている。患者の７％では、その白血球数が２５％減少することが示されている。
【0013】
医薬としての大麻の使用は長い間知られており、１９世紀には、大麻の調製が、ヒステリー、せん妄、てんかん、神経性不眠症、片頭痛、疼痛及び月経困難症の治療に有用である催眠鎮静剤として推奨された。
【0014】
最近まで、患者への大麻の投与は、引き続き飲み込むことができる抽出液による大麻の調製によって、又は患者が乾燥した植物材料の煙を吸うことによって大麻の蒸気を吸入することによってのみ行うことできた。最近の方法は、有効摂取用量の最大９０％を除去する可能性がある胃及び肝臓の関連する初回通過効果を迂回するものを含むカンナビノイドを患者に送達し、患者が健康に有害なタール及び関連する発癌性物質を肺中に吸入しなければならないことを回避する新たな方法を見出すことを試みている。
【0015】
特定の規定の比率のカンナビノイドを含有する配合物を、薬学的担体及び薬学的賦形剤と組み合わせて、純粋な、合成の若しくは単離されたカンナビノイドから、又は大麻植物由来の抽出物から構築することができる。
【0016】
カンナビノイドは、細胞においてカンナビノイド受容体を活性化することが知られる化学物質の一群である。フィトカンナビノイドは、大麻植物由来のカンナビノイドである。エンドカンナビノイドは、ヒト及び他の動物において見出される内因性カンナビノイドである。フィトカンナビノイドは、植物から単離するか、又は合成的に製造することができる。植物からフィトカンナビノイドを単離する場合、フィトカンナビノイドを、他の天然の化合物、例えば他の微量カンナビノイド及び植物分子、例えばテルペンの全てが除去される程度まで精製することができる。この精製によって、９９％（ｗ／ｗ）を超える標的カンナビノイドの純度がもたらされる。
【0017】
精製された化合物として投与されたカンナビノイドカンナビジオール（ＣＢＤ）が神経因性疼痛を部分的に軽減することができることが過去に示されている（非特許文献１）。このことは、ラットの坐骨神経の慢性の絞扼（constriction）傷害の神経因性疼痛モデルを使用して、熱的痛覚過敏症及び機械的痛覚過敏症並びに機械的アロデニアによる試験物質の有効性を試験して示された。これらの動物モデルは、神経因性疼痛に対する試験化合物の有効性を予測するために使用される。
【0018】
更に最近、本出願人が、彼らの特許付与された英国特許（特許文献１）において、規定された比率のＣＢＤ対ＴＨＣを含む植物抽出物が、単独の精製された成分より、末梢神経因性疼痛を治療する上でより効果的であることを示した。効果的であるＣＢＤ対ＴＨＣの比率は、２０：１〜２８：１である。
【0019】
特許文献２は、ＴＨＣ対ＣＢＤの比率が約１：１である大麻の抽出物の使用を記載している。抽出物は、ヘルペス後神経痛を特徴とする末梢神経因性疼痛の治療において有益であることが見出された。
【0020】
神経因性疼痛は多くの場合、多様かつ複雑な一連の疼痛刺激と関連しており、それによって、治療に対する応答が予測不可能であるため、効果的に治療することが困難である。
【0021】
驚くべきことに、本出願人らは、カンナビノイドカンナビゲロール（ＣＢＧ）、カンナビクロメン（ＣＢＣ）、カンナビジバリン（ＣＢＤＶ）及びテトラヒドロカンナビバリン（ＴＨＣＶ）の投与が神経因性疼痛の動物モデルの治療において効果的であることを見出した。神経因性疼痛は従来の鎮痛治療、例えばオピエート及び非ステロイド抗炎症剤に対して抵抗性を有すると考えられるため、本明細書中で記載される動物研究は、臨床状況に関する重要な知見を示す。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0022】
【特許文献1】英国特許第２４３９３９３号
【特許文献2】国際出願ＰＣＴ／ＧＢ２００６／００４０６３号
【非特許文献】
【0023】
【非特許文献1】Costa et al., 2004
【発明の概要】
【0024】
本発明の第１の態様によれば、神経因性疼痛の治療において使用するための、フィトカンナビノイド：カンナビクロメン（ＣＢＣ）、カンナビゲロール（ＣＢＧ）、カンナビジバリン（ＣＢＤＶ）及び／又はテトラヒドロカンナビバリン（ＴＨＣＶ）のうちの１つ又は複数のフィトカンナビノイドが提供される。
【0025】
本発明の第２の態様によれば、神経因性疼痛の治療において使用するための薬物の製造におけるフィトカンナビノイド：カンナビクロメン（ＣＢＣ）、カンナビゲロール（ＣＢＧ）、カンナビジバリン（ＣＢＤＶ）及び／又はテトラヒドロカンナビバリン（ＴＨＣＶ）のうちの１つ又は複数のフィトカンナビノイドの使用が提供される。
【0026】
本発明の第３の態様によれば、神経因性疼痛を有する患者を治療する方法であって、有効量の、カンナビクロメン（ＣＢＣ）、カンナビゲロール（ＣＢＧ）、カンナビジバリン（ＣＢＤＶ）及び／又はテトラヒドロカンナビバリン（ＴＨＣＶ）の群から採用される１つ又は複数のフィトカンナビノイドを投与することを含む、神経因性疼痛を有する患者を治療する方法が提供される。
【0027】
これらのカンナビノイドを、ＴＨＣ及び／又はＣＢＤと組み合わせて使用することもできる。
【0028】
好ましくは、神経因性疼痛は末梢神経因性疼痛であり、更に好ましくは、末梢神経因性疼痛はアロデニアである。
【0029】
好ましくは、カンナビノイドは、神経因性疼痛を軽減するための効果的な用量で存在する。
【0030】
カンナビノイドの低用量は、１０ｍｇ未満のカンナビノイドの効果的なヒトの１日量と定義され、カンナビノイドの高用量は、５０ｍｇ以上のカンナビノイドの効果的なヒトの１日量と定義される。中間用量は、１０ｍｇ〜５０ｍｇであると定義される。
【0031】
好ましくは、カンナビノイドの効果的なヒトの１日量は５ｍｇ〜１００ｍｇである。更に好ましくは、カンナビノイドの効果的なヒトの１日量は１０ｍｇ〜５０ｍｇである。より好ましくはさらに、カンナビノイドの効果的なヒトの１日量は１２ｍｇ〜２４ｍｇである。
【0032】
好ましくは、カンナビノイドは長期の治療期間での使用のために包装される。より好ましくは、３日間を超える長期間がより好ましく、より好ましくはさらに、長期の治療期間は少なくとも７日間である。
【0033】
本発明の更なる実施の形態において、１つ又は複数のフィトカンナビノイドは、神経因性疼痛の治療において使用される１つ又は複数の他の現在承認されている医薬物質と組み合わせて使用される。これらの医薬物質は、例えば鎮痛剤、抗うつ剤及び抗痙攣剤を含む。
【0034】
本発明の実施形態を、添付の図面を参照して以下で更に記載する。
【図面の簡単な説明】
【0035】
【図1】存在する疼痛の種々の種類を示す図である。
【図2】ＳＮＩマウスにおける機械的引込め閾値に対するＣＢＣ（２．５ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）による治療の効果を示す図である。
【図3】ＳＮＩマウスにおける熱的引込め潜時に対するＣＢＣ（２．５ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）による治療の効果を示す図である。
【図4】ＳＮＩマウスにおける機械的引込め閾値に対するＣＢＧ（２．５ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）による治療の効果を示す図である。
【図5】ＳＮＩマウスにおける熱的引込め潜時に対するＣＢＧ（２．５ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）による治療の効果を示す図である。
【図6】ＳＮＩマウスにおける機械的引込め閾値に対するＣＢＤＶ（２．５ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）による治療の効果を示す図である。
【図7】ＳＮＩマウスにおける熱的引込め潜時に対するＣＢＤＶ（２．５ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）による治療の効果を示す図である。
【図8】ＳＮＩマウスにおける機械的引込め閾値に対するＴＨＣＶ（２．５ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）による治療の効果を示す図である。
【図9】ＳＮＩマウスにおける熱的引込め潜時に対するＴＨＣＶ（２．５ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）による治療の効果を示す図である。
【図10】ＳＮＩマウスにおける機械的引込め閾値に対するＣＢＤ（２．５ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）による治療の効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0036】
末梢神経因性疼痛は、種々の部位で及び種々の疾病状態において多数の多様なメカニズムを開始する複数の病因的因子によって引き起こされる。神経部分傷害（ＳＮＩ）は、その典型的な兆候が熱的痛覚過敏症及び接触性アロデニアに代表される神経因性疼痛において進展する坐骨神経の部分的な結紮及び処置からなる。
【0037】
慢性の疼痛症状は、Ｐｌａｎｔａｒ Ｔｅｓｔ Ａｐｐａｒａｔｕｓ（Ugo Basile, Varese, Italy）を使用して温度受容性応答（熱的痛覚過敏症を示す）の、及びＤｙｎａｍｉｃ Ｐｌａｎｔａｒ Ａｅｓｔｈｅｓｉｏｍｅｔｅｒ（Ugo Basile, Varese, Italy）によって機械的な足引込め閾値（機械的アロデニアを示す）の変化を介して測定される。侵害受容性応答は、様々な治療を行った（ビヒクル又は薬剤の種々の組合せ）マウスの群における外科処置の前後に測定した。
【0038】
以下の実施例は、神経因性疼痛を低減する能力を有することが過去には実証されていない４つの異なるカンナビノイド、すなわちＣＢＧ、ＣＢＣ、ＣＢＤＶ及びＴＨＣＶを使用して得られた結果を詳述する。カンナビノイドを、神経因性疼痛の治療において有用であることが過去に実証されているカンナビノイドＣＢＤと比較した。
【実施例】
【0039】
実施例１：神経因性疼痛の２つの動物モデルにおけるカンナビノイドの効果材料及び方法
試験したカンナビノイドは、ＣＢＧ、ＣＢＣ、ＣＢＤＶ及びＴＨＣＶであった。加えて、カンナビノイドＣＢＤがこの実施例において使用した神経因性疼痛の動物モデルにおいて正の結果を過去に示しているため、このカンナビノイドを使用した。カンナビノイドは、精製された大麻植物の全植物抽出物から調製した。カンナビノイドは、腹腔内（ｉ．ｐ．）投与のためにリンゲル液／０．５％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に溶解した。
【0040】
雄性ＣＤ−１マウス（３５ｇ〜４０ｇ）を、制御された照明（１２ｈ：１２ｈの明：暗サイクル。午前６時に点灯する）及び環境条件（室温２０℃〜２２℃、湿度５５％〜６０％）下で、ケージ当たり３匹、実験の開始前に少なくとも１週間収容した。マウス用の固形飼料及び水道水は自由に利用可能であった。実験手順は、ナポリ第二大学（Second University of Naples）の倫理委員会によって承認された。動物の世話は、ＩＡＳＰ及び実験研究における動物の使用及び保護に関する欧州共同体（Ｅ．Ｃ． Ｌ３５８／１ １８／１２／８６）ガイドラインに従った。動物の苦痛を最小限に抑え、使用した動物の数を低減するために、あらゆる努力を行った。
【0041】
外科処置後の値との比較のためのベースラインを確立するために、外科処置の前に行動試験を行った。単神経障害を、Bourquin and Decosterd (2006)の方法に従って誘導した。
【0042】
マウスを、ペントバルビタールナトリウム（６０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を用いて麻酔した。右の後肢を、側臥位に固定し、僅かに上げた。切開を、大腿骨を目印として使用して、中央の腿のレベルで行った。坐骨神経を、三枝分岐（trifurcation）より遠位の中央の腿のレベルで露出させ、結合組織から解放した。坐骨神経の３つの末梢枝（腓腹神経、総腓骨神経及び脛骨神経）を、神経構造を伸張させることなく露出させた。
【0043】
脛骨神経及び総腓骨神経の両方を、ともに結紮及び処置した。湾曲した先端を有する顕微外科処置用ピンセットを、脛骨神経及び総腓骨神経の下に慎重に配置して、神経の周りに糸（５．０シルク、Ethicon, Johnson, and Johnson Intl, Brussels, Belgium）を滑らせた。両方の神経の密接な結紮を行った。腓腹神経を、いかなる神経の伸張又は神経の外科処置器具との接触をも回避することによって、慎重に保存した。筋肉及び皮膚を、シルク５．０の縫合部を有する２つの相異なる層中に閉じ込めた。
【0044】
強く再現性があり長時間持続する熱的痛覚過敏症及び機械的アロデニア様の行動は、傷害を受けていない腓腹神経皮膚領域において測定可能である。ＳＮＩモデルは、傷害を受けた神経及び傷害を受けていない神経等の病変部より遠位に傷害を受けた神経線維及び傷害を受けていない神経線維の混合が存在しない明確な解剖学的分布という利点をもたらし、領域を、更なる解析（すなわち、行動評価）のために容易に特定及び操作することができる。
【0045】
擬似手順は、神経の結紮及び離断を含まない同じ外科処置からなるものであった。
【0046】
マウスの群を以下のとおりに分割した。試験した各カンナビノイドが、それぞれ以下のマウスの群を有する：ｉ）無処置対照マウス（ｎ＝８）、
ｉｉ）ビヒクルで治療した擬似手術マウス（ｎ＝８）、
ｉｉｉ）カンナビノイドで治療した擬似手術マウス（ｎ＝８）、
ｉｖ）ビヒクルで治療したＳＮＩマウス（ｎ＝８）、
ｖ）カンナビノイドで治療したＳＮＩマウス（ｎ＝８）。
【0047】
カンナビノイドを、１４日間毎日投与した。試験した全てのカンナビノイドの用量は２．５ｍｇ／Ｋｇ及び５．０ｍｇ／Ｋｇであった。ビヒクル溶液は、０．５％のＤＭＳＯを含むリンゲル溶液であった。
【0048】
侵害受容性の行動機械的アロデニアを、Ｄｙｎａｍｉｃ Ｐｌａｎｔａｒ Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｍｅｔｅｒ（Ugo Basile, Varese, Italy）を使用することによって測定した。マウスを、金属メッシュ表面上に位置する閉鎖空間の２つの区画のうちの１つにおいて自由に運動させた。マウスを、いずれの測定を行う前にも、試験環境に順応させた。その後、機械的刺激を、自動試験装置によって試験チャンバーの床の下からマウスの後足の足底の表面に送達した。鋼ロッド（２ｍｍ）を電子的浮力（１０秒で０ｇ〜３０ｇ）を用いて押した。動物がその後足を引っ込めると、機械的刺激が自動的に取り除かれ、力を０．１ｇの桁に四捨五入して（to the nearest 0.1 g）記録した。
【0049】
熱的痛覚過敏症を、Ｐｌａｎｔａｒ Ｔｅｓｔ Ａｐｐａｒａｔｕｓ（Ugo Basile, Varese, Italy）を使用することによって評価した。実験日に各動物を、ガラスの床を有するプラスチックのケージ（２２ｃｍ×１７ｃｍ×１４ｃｍ（長さ×幅×高さ））に配置した。６０分の馴化期間の後、後足の足底の表面を、ガラスの床を通じて放射熱のビームに曝露した。放射熱源は、赤外電球（Osram、ｈａｌｏｇｅｎ−ｂｅｌｌａｐｈｏｔ ｂｕｌｂ、８Ｖ、５０Ｗ）からなっていた。光電池は、足の動きが反射光を遮った時に、足から反射された光を検出し、ランプを消した。足引込め潜時は、０．１秒の桁に四捨五入して自動的に表示された。終了（cut-off）時間は、組織の損傷を防ぐために２０秒であった。
【0050】
熱的感受性及び機械的感受性に関する侵害受容性応答を、熱的足引込め潜時（ＰＷＬ）（単位：秒）及び機械的足引込め閾値（ＰＷＴ）（単位：グラム）として表した。
【0051】
外科処置手順の前後の両方において応答を測定しており、各マウスがそれ自身の対照としての役割を果たした。ＰＷＬ及びＰＷＴは、治療内容を知らない観察者によって定量化された。
【0052】
統計解析行動データ及び分子データは、平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍとして示した。スチューデント・ニューマン・クールの事後検定を後で行うＡＮＯＶＡを使用して、群間の統計的有意性を決定した。Ｐ＜０．０１を統計的に有意とみなした。
【0053】
結果機械的引込め閾値
図２、図４、図６、図８及び図１０は、試験したカンナビノイド（それぞれ、ＣＢＣ、ＣＢＧ、ＣＢＤＶ、ＴＨＣＶ、及びＣＢＤ（比較用））に関して得られた機械的引込め閾値データを示す。棒グラフは、動物にその後足を引っ込めさせるのに必要とされる重量（単位：グラム）を示す。明らかなように、試験したカンナビノイドの全てが、ＳＮＩを有する動物についてその動物がその足を引っ込めるまでに適用される重量を増大させることが可能であり、それによって、種々の度合いで、神経部分傷害後３日目、７日目及び１４日目に機械的アロデニアを防ぐことが可能であった。５．０ｍｇ／ｋｇの用量のカンナビノイドの投与を受けた動物においてより大きな効果が観察されたため、鎮痛効果は用量依存的であった。
【0054】
熱的引込め潜時図３、図５、図７、図９及び図１１は、試験したカンナビノイド（それぞれ、ＣＢＣ、ＣＢＧ、ＣＢＤＶ、ＴＨＣＶ、及びＣＢＤ（比較用））に関して得られた熱的引込め潜時データを示す。棒グラフは、動物がその足を熱源から引っ込めるまでの時間（単位：秒）を示す。明らかなように、試験したカンナビノイドの全てが、ＳＮＩを有する動物についてその動物がその足を引っ込めるまでの時間を増大させることが可能であり、それによって、種々の度合いで、神経部分傷害後３日目、７日目及び１４日目に熱的痛覚過敏症を防ぐことが可能であった。
【0055】
カンナビノイドＣＢＣ、ＣＢＧ、ＴＨＣＶ及びＣＢＤに関しては、２．５ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇで治療した動物が同様の引込め潜時を有していた、又はより低い用量で最大の効果に到達しているため、効果は用量依存的ではないようである。
【0056】
しかしながら、カンナビノイドＣＢＤＶに関しては、用量依存的な効果が観察された。２．５ｍｇ／ｋｇの用量で治療した動物は、神経傷害後３日目に対照群と同様の引込め潜時を有していた。しかしながら、５．０ｍｇ／ｋｇの用量で治療した動物は、この群による神経傷害後１４日目に無処置対照動物及び擬似対照動物と同様の引込め潜時を有する程度まで、足を熱源から引っ込めるまでの時間を増大させることが可能であった。
【0057】
データの組合せ試験したカンナビノイドの有効性の度合いの差異を確認するために、以下の表に、この実施例において生成されたデータを表形式で記載する。
【0058】
以下の表１に、マウスにおける機械的引込め閾値に対するカンナビノイドによる治療の効果を記載する。
【0059】
【表1】
【0060】
上の表１から明らかなように、２．５ｍｇ／ｋｇの用量のカンナビノイドのほとんどが、動物がその足を引っ込めるまでに適用される重量の僅かな増大を示し、この効果は、３日目から７日目を経て１４日目まで経時的に増大するようである。しかしながら、２．５ｍｇ／ｋｇの用量のカンナビノイドＣＢＤＶを用いると、３日目の時点でさえも機械的引込め閾値は劇的に増大し、このカンナビノイドが迅速に効果を示すことが可能であることを示唆するが、他のカンナビノイドは効果を示すのに１週間以上を要する。
【0061】
５．０ｍｇ／ｋｇの用量では、ＴＨＣＶを除くカンナビノイドの全てが、動物がその足を引っ込めるまでに適用される重量を増大させることが可能であった。カンナビノイドＣＢＣ及びＣＢＤは７日目に大きな増大を示した。しかしながら、この閾値は１４日目の時点で再び減少した。
【0062】
驚くべきことに、これらのデータは、試験した両方の用量で、カンナビノイドＣＢＤＶが全てのカンナビノイドの中で最も高い機械的引込め閾値を有することが示されたことを実証する。カンナビノイドＣＢＧ及びＴＨＣＶも、これらはかなり高い機械的引込め閾値を有していたため、良好な効力を示した。しかしながら、カンナビノイドＣＢＣ及びＣＢＤは、この用量での神経因性疼痛の治療において相対的に効果が小さいことが示された。この知見によって、カンナビノイドＣＢＤＶ、ＴＨＣＶ及びＣＢＧが、この実験において使用された動物モデルによって引き起こされる神経因性疼痛を治療するその能力においてＣＢＤよりも優れていることが実証される。
【0063】
以下の表２に、マウスにおける熱的引込め潜時に対するカンナビノイドによる治療の効果を記載する。
【0064】
【表2】
【0065】
表２から明らかなように、２．５ｍｇ／ｋｇの用量のカンナビノイドのほとんどが、動物がその足を引っ込めるまでの時間の僅かな増大を示し、この効果は、３日目から７日目を経て１４日目まで経時的に増大するようである。３日目の時点では、２．５ｍｇ／ｋｇの用量のＣＢＧのみが熱的引込め潜時の幾らかの増大を有するようである。カンナビノイドＴＨＣＶに関しては、７日目の時点で大きく増大するようであり、引き続き、更に７日後には減少する。
【0066】
５．０ｍｇ／ｋｇの用量では、カンナビノイドＣＢＣ、ＣＢＧ及びＣＢＤが、３日目の時点で、動物がその足を引っ込めるまでの時間を増大させることが可能であった。しかしながら、カンナビノイドによる１週間の治療の後、全ての試験群が熱的引込め潜時の増大を示した。ＴＨＣＶ及びＣＢＤＶの両方が、１４日間の治療後に大きな増大を示し、カンナビノイドの有効性が経時的に増大することを示唆した。
【0067】
驚くべきことに、これらのデータは、２．５ｍｇ／ｋｇの用量では、カンナビノイドＣＢＧが全てのカンナビノイドの中で最も高い熱的引込め潜時を有することが示されたことを実証する。カンナビノイドＣＢＤＶ及びＴＨＣＶも、これらはかなり高い熱的引込め潜時を有していたため、良好な効力を示した。しかしながら、カンナビノイドＣＢＣ及びＣＢＤは、この用量での神経因性疼痛の治療において相対的に効果が小さいことが示された。５．０ｍｇ／ｋｇの用量では、カンナビノイドＣＢＤＶ及びＴＨＣＶの両方が最も効果的であることが示された。この知見によって、カンナビノイドＣＢＤＶ、ＴＨＣＶ及びＣＢＧが、この実験において使用された動物モデルによって引き起こされる神経因性疼痛を治療するその能力においてＣＢＤよりも優れていることが実証される。
【0068】
ヒト等価用量（ＨＥＤ）は、以下の式を使用して評価することができる：ＨＥＤ＝動物用量（ｍｇ／ｋｇ）×（動物のＫｍ／ヒトのＫｍ）
マウスのＫｍは３であり、ラットの値は６であり、ヒトのＫｍは３７である。
したがって、およそ６０ｋｇのヒトに関しては、マウスにおける２．５ｍｇ／ｋｇの用量は、約１２ｍｇのヒトの１日量に等しいと考えられる。