特許 6153303 ゴキブリ集合誘引物質、ならびにゴキブリ集合誘引物質を含むゴキブリ誘引剤及びゴキブリ駆除剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6153303

(24)【登録日】2017年6月9日

(45)【発行日】2017年6月28日

(54)【発明の名称】ゴキブリ集合誘引物質、ならびにゴキブリ集合誘引物質を含むゴキブリ誘引剤及びゴキブリ駆除剤

(51)【国際特許分類】

   A01N 63/00 20060101AFI20170619BHJP

   A01N 43/54 20060101ALI20170619BHJP

   A01N 59/14 20060101ALI20170619BHJP

   A01P 7/04 20060101ALI20170619BHJP

   A01P 19/00 20060101ALI20170619BHJP

   A01M 1/20 20060101ALN20170619BHJP

   A01M 1/02 20060101ALN20170619BHJP

【ＦＩ】

   A01N63/00 Z

   A01N43/54 F

   A01N59/14

   A01P7/04

   A01P19/00

   !A01M1/20 A

   !A01M1/02 A

【請求項の数】9

【全頁数】19

(21)【出願番号】特願2012-170543(P2012-170543)

(22)【出願日】2012年7月31日

(65)【公開番号】特開2014-28782(P2014-28782A)

(43)【公開日】2014年2月13日

【審査請求日】2015年7月13日

(73)【特許権者】

【識別番号】000207584

【氏名又は名称】大日本除蟲菊株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100077012

【弁理士】

【氏名又は名称】岩谷 龍

(72)【発明者】

【氏名】西村 至央

(72)【発明者】

【氏名】佐久間 正幸

(72)【発明者】

【氏名】上野 民夫

【審査官】 阿久津 江梨子

(56)【参考文献】

【文献】 特公昭４６−１８５１８（ＪＰ，Ｂ１）

【文献】 特開昭６１−１３２１３０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許第５６６５３７０（ＵＳ，Ａ）

【文献】 再公表特許第２０１５／０９８６８１（ＪＰ，Ａ１）

【文献】 中国特許出願公開第１０２６９６６８４（ＣＮ，Ａ）

【文献】 特開平６−２４９２３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平４−３４２５１１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００２−３１６９０１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００２−２８４６１０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開昭５９−１６８４８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平６−２５２７９（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ０１Ｍ １／０２

Ａ０１Ｍ １／２０

Ａ０１Ｎ ４３／５４

Ａ０１Ｎ ５９／１４

Ａ０１Ｎ ６３／００

Ａ０１Ｐ ７／０４

Ａ０１Ｐ １９／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

分子式がＣ_１３Ｈ_１６Ｏ_３（分子量２２０）であり、
ＵＶ吸収スペクトルにおいて２５８ｎｍ付近及び３１８ｎｍ付近に吸収極大をもち、
ジクロロメタンに溶解する、ゴキブリ集合誘引物質又はその塩。

【請求項2】

シリカゲルカラム（COSMOSIL 5SL-II、ナカライテスク株式会社製、φ４．６×１５０ｍｍ）を用い、移動相溶媒に酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（１／９９（ｖ／ｖ））を使用して（１ｍL／分）、順相ＨＰＬＣで、ＵＶ検出器（ＳＰＤ−１０ＭＡＶＰ、島津製作所）で２５４ｎｍの吸収をモニタした際に、９．５分から１０．５分の溶出時間にＵＶ吸収ピークが見られる、請求項１記載のゴキブリ集合誘引物質又はその塩。

【請求項3】

ワモンゴキブリの虫体及び／又は糞から得られる請求項１又は２記載のゴキブリ集合誘引物質又はその塩。

【請求項4】

ワモンゴキブリの虫体及び／又は糞に対して、（Ａ）有機溶媒による抽出工程と、（Ｂ）該抽出工程により得られた抽出物を、順相系シリカゲルカラムクロマトグラフィー、逆相系シリカゲルカラムクロマトグラフィー及びイオン交換樹脂カラムクロマトグラフィーを組み合わせた分離精製工程を実施することにより得られる、請求項１〜３のいずれか記載のゴキブリ集合誘引物質又はその塩。

【請求項5】

前記抽出工程（Ａ）が以下の（１）〜（２）、前記分離精製工程（Ｂ）が以下の（３）〜（８）である請求項４記載のゴキブリ集合誘引物質又はその塩。
（１）ワモンゴキブリの虫体及び／又は糞をｎ−ヘキサンで洗浄した後、その残渣をメタノール／ジクロロメタン混合溶媒で抽出し、溶媒を除去し抽出物を得る工程；
（２）前記工程（１）で得た抽出物をジクロロメタンに溶解させ、続いて炭酸ナトリウム水溶液との液−液分配法により得られたジクロロメタン層を分離して、溶媒を除去し、ジクロロメタン抽出物を得る工程；
（３）前記工程（２）で得た抽出物を、順相系シリカゲルカラムクロマトグラフィーで、ジクロロメタン／ｎ−ヘキサン混合溶媒、続いて酢酸エチル／ｎ−ヘキサン混合溶媒を展開溶媒として用いる分離を繰り返し、酢酸エチル／ｎ−ヘキサン分画溶液から溶媒を除去し、酢酸エチル／ｎ−ヘキサン溶出物を得る工程；
（４）前記工程（３）で得た溶出物を、イオン交換樹脂によるカラムクロマトグラフィーで、移動相をメタノール／水混合溶媒で分離し、メタノール／水溶出物を得る工程；
（５）前記工程（４）で得た溶出物を、移動相が酢酸エチル／ｎ−ヘキサン混合溶媒である順相系ＨＰＬＣで分画し、分取したフラクションから溶媒を除去し溶出物を得る工程；
（６）前記工程（５）で得た溶出物を、移動相がメタノールである逆相系ＨＰＬＣで分画し、溶出物を得る工程；
（７）前記工程（６）で得た溶出物を、移動相がイソプロパノール／メタノール混合溶媒である逆相系ＨＰＬＣで分画し、溶出物を得る工程；
（８）前記工程（７）で得た溶出物を、移動相が酢酸エチル／ｎ−ヘキサン混合溶媒である順相系ＨＰＬＣで分画し、分取したフラクションから溶媒を除去する工程。

【請求項6】

ワモンゴキブリの虫体及び／又は糞に対して、（Ａ）有機溶媒による抽出工程と、（Ｂ）該抽出工程により得られた抽出物を、順相系シリカゲルカラムクロマトグラフィー、逆相系シリカゲルカラムクロマトグラフィー及びイオン交換樹脂カラムクロマトグラフィーを組み合わせた分離精製工程を実施することで得られる、請求項１〜５のいずれかに記載のゴキブリ集合誘引物質又はその塩の精製方法。

【請求項7】

前記抽出工程（Ａ）が以下の（１）〜（２）、前記分離精製工程（Ｂ）が以下の（３）〜（８）である請求項６記載のゴキブリ集合誘引物質又はその塩の精製方法。
（１）ワモンゴキブリの虫体及び／又は糞をｎ−ヘキサンで洗浄した後、その残渣をメタノール／ジクロロメタン混合溶媒で抽出し、溶媒を除去し抽出物を得る工程；
（２）前記工程（１）で得た抽出物をジクロロメタンに溶解させ、続いて炭酸ナトリウム水溶液との液−液分配法により得られたジクロロメタン層を分離して、溶媒を除去し、ジクロロメタン抽出物を得る工程；
（３）前記工程（２）で得た抽出物を、順相系シリカゲルカラムクロマトグラフィーで、ジクロロメタン／ｎ−ヘキサン混合溶媒、続いて酢酸エチル／ｎ−ヘキサン混合溶媒を展開溶媒として用いる分離を繰り返し、酢酸エチル／ｎ−ヘキサン分画溶液から溶媒を除去し、酢酸エチル／ｎ−ヘキサン溶出物を得る工程；
（４）前記工程（３）で得た溶出物を、イオン交換樹脂によるカラムクロマトグラフィーで、移動相をメタノール／水混合溶媒で分離し、メタノール／水溶出物を得る工程；
（５）前記工程（４）で得た溶出物を、移動相が酢酸エチル／ｎ−ヘキサン混合溶媒である順相系ＨＰＬＣで分画し、分取したフラクションから溶媒を除去し溶出物を得る工程；
（６）前記工程（５）で得た溶出物を、移動相がメタノールである逆相系ＨＰＬＣで分画し、溶出物を得る工程；
（７）前記工程（６）で得た溶出物を、移動相がイソプロパノール／メタノール混合溶媒である逆相系ＨＰＬＣで分画し、溶出物を得る工程；
（８）前記工程（７）で得た溶出物を、移動相が酢酸エチル／ｎ−ヘキサン混合溶媒である順相系ＨＰＬＣで分画し、分取したフラクションから溶媒を除去する工程。

【請求項8】

請求項１〜５のいずれかに記載のゴキブリ集合誘引物質又はその塩を含むゴキブリ誘引剤。

【請求項9】

請求項１〜５のいずれかに記載のゴキブリ集合誘引物質又はその塩を含むゴキブリ駆除剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ゴキブリ集合誘引物質、ならびにゴキブリ集合誘引物質を含有するゴキブリ誘引剤及びゴキブリ駆除剤に関するものである。

【背景技術】

【0002】

ゴキブリ類は代表的な衛生害虫であり、一般家庭はもちろん産業上の様々な場所に侵入して大きな被害を与えている。そのため、多くの駆除方法が用いられているが、棲息場所が人間生活と密着しているため、殺虫剤の使用は制限され、また狭い隙間等に隠れる習性を持ち、繁殖力が強いことから従来の捕虫器や食毒剤では効果的な駆除が得られていないのが現状である。近年、ゴキブリ類のフェロモンの研究が進み、その防除への利用が検討され始めた（特許文献１、２及び３）。フェロモンとは生物自身が分泌して同種の他個体に作用する化学物質であり、極微量で強力な誘引等の活性を示すことが知られている。

【0003】

昆虫のフェロモンとしては、性フェロモン、集合フェロモン等が知られている。性フェロモンとは、一方の性の個体が分泌・放出して異性にだけ作用するフェロモンをいう。他方、集合フェロモンは、同種の他個体を集合させる情報化学物質のうち、性フェロモンを除いたものをいう。すなわち、オス及び／又はメスが生産して、オス・メス両方を集めるものを意味する。

【0004】

集合フェロモンという用語が最初に使われたのはチャバネゴキブリである。チャバネゴキブリは、腹部末端からフェロモンを分泌してシェルター（隠れ家）を標識する。フェロモンは体表にも存在していて、同種個体の認知にも使われている。チャバネゴキブリの集合フェロモンには、匂いとして作用する１−ジメチルアミノ−２メチル−２−プロパノールなどの誘引フェロモンの他に、接触化学的に作用する拘束フェロモン（arrestant）が含まれていて、その構成成分の一部は同定されている（非特許文献１）。ブラベルスゴキブリ（Blaberus craniifer）は、頭部の大腮線から集合フェロモンを分泌する。活性炭で捕集した匂い成分からウンデカン、テトラデカン、エチルカプロン酸に誘引活性が確認されている。

【0005】

上記ゴキブリフェロモン類を誘引剤として捕虫器や食毒剤に用いれば、ゴキブリ駆除効果を高め得ることが期待される。しかしながら、これまで知られている誘引物質、例えば、ペリプラノン類、ボルニルアセテート、テルペノイド類などでは、効果の持続性に乏しく、時には正反対の忌避因子にも変わり得るため、実用的には十分といえないものであった。また、性フェロモンは、成虫の、一方の性だけにしか効果が無いため、幼虫／成虫及びメス／オスの区別なく、全ての同種個体に効果のあるゴキブリ集合フェロモンに対する期待が高まっていた。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【特許文献1】特開平６−２４９２３号公報

【特許文献2】特開平６−２５２７９号公報

【特許文献3】特開２００２−２８４６１０号公報

【非特許文献】

【0007】

【非特許文献1】鈴木昭憲、荒井綜一編『農芸化学の事典』朝倉書店：ｐ１８３−１８６

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

本発明はゴキブリ集合フェロモン、並びに該ゴキブリ集合フェロモンを含むゴキブリ集合誘引剤又はゴキブリ駆除剤を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0009】

本発明者等は、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、ワモンゴキブリの虫体及び糞に、ゴキブリ集合誘引物質が含まれることを見出し、さらに研究を続け、本発明を完成させるに至った。

【0010】

すなわち、本発明は以下に関する。
〔１〕Ｃ_１３Ｈ_１６Ｏ_３の分子式（分子量２２０）であるゴキブリ集合誘引物質又はその塩。
〔２〕ワモンゴキブリの虫体及び／又は糞から得られる前記〔１〕記載のゴキブリ集合誘引物質又はその塩。
〔３〕ワモンゴキブリの虫体及び／又は糞に対して、（Ａ）有機溶媒による抽出工程と、（Ｂ）該抽出工程により得られた抽出物を、順相系シリカゲルカラムクロマトグラフィー、逆相系シリカゲルカラムクロマトグラフィー及びイオン交換樹脂カラムクロマトグラフィーを組み合わせた分離精製工程を実施することにより得られ、Ｃ_１３Ｈ_１６Ｏ_３の分子式（分子量２２０）である、ゴキブリ集合誘引物質又はその塩。
〔４〕前記抽出工程（Ａ）が以下の（１）〜（２）、前記分離精製工程（Ｂ）が以下の（３）〜（８）である前記〔３〕記載のゴキブリ集合誘引物質又はその塩。
（１）ワモンゴキブリの虫体及び／又は糞をｎ−ヘキサンで洗浄した後、その残渣をメタノール／ジクロロメタン混合溶媒で抽出し、溶媒を除去し抽出物を得る工程；
（２）前記工程（１）で得た抽出物をジクロロメタンに溶解させ、続いて炭酸ナトリウム水溶液との液−液分配法により得られたジクロロメタン層を分離して、溶媒を除去し、ジクロロメタン抽出物を得る工程；
（３）前記工程（２）で得た抽出物を、順相系シリカゲルカラムクロマトグラフィーで、ジクロロメタン／ｎ−ヘキサン混合溶媒、続いて酢酸エチル／ｎ−ヘキサン混合溶媒を展開溶媒として用いる分離を繰り返し、酢酸エチル／ｎ−ヘキサン分画溶液から溶媒を除去し、酢酸エチル／ｎ−ヘキサン溶出物を得る工程；
（４）前記工程（３）で得た抽出物を、イオン交換樹脂によるカラムクロマトグラフィーで、移動相をメタノール／水混合溶媒で分離し、メタノール／水溶出物を得る工程；
（５）前記工程（４）で得た溶出物を、移動相が酢酸エチル／ｎ−ヘキサン混合溶媒である順相系ＨＰＬＣで分画し、分取したフラクションから溶媒を除去し溶出物を得る工程；
（６）前記工程（５）で得た溶出物を、移動相がメタノールである逆相系ＨＰＬＣで分画し、溶出物を得る工程；
（７）前記工程（６）で得た溶出物を、移動相がイソプロパノール／メタノール混合溶媒である逆相系ＨＰＬＣで分画し、溶出物を得る工程；
（８）前記工程（７）で得た溶出物を、移動相が酢酸エチル／ｎ−ヘキサン混合溶媒である順相系ＨＰＬＣで分画し、分取したフラクションから溶媒を除去する工程。
〔５〕ワモンゴキブリの虫体及び／又は糞に対して、（Ａ）有機溶媒による抽出工程と、（Ｂ）該抽出工程により得られた抽出物を、順相系シリカゲルカラムクロマトグラフィー、逆相系シリカゲルカラムクロマトグラフィー及びイオン交換樹脂カラムクロマトグラフィーを組み合わせた分離精製工程を実施することで得られるＣ_１３Ｈ_１６Ｏ_３の分子式（分子量２２０）であるゴキブリ集合誘引物質又はその塩の精製方法。
〔６〕前記抽出工程（Ａ）が以下の（１）〜（２）、前記分離精製工程（Ｂ）が以下の（３）〜（８）である前記〔５〕記載のＣ_１３Ｈ_１６Ｏ_３の分子式（分子量２２０）であるゴキブリ集合誘引物質又はその塩の精製方法。
（１）ワモンゴキブリの虫体及び／又は糞をｎ−ヘキサンで洗浄した後、その残渣をメタノール／ジクロロメタン混合溶媒で抽出し、溶媒を除去し抽出物を得る工程；
（２）前記工程（１）で得た抽出物をジクロロメタンに溶解させ、続いて炭酸ナトリウム水溶液との液−液分配法により得られたジクロロメタン層を分離して、溶媒を除去し、ジクロロメタン抽出物を得る工程；
（３）前記工程（２）で得た抽出物を、順相系シリカゲルカラムクロマトグラフィーで、ジクロロメタン／ｎ−ヘキサン混合溶媒、続いて酢酸エチル／ｎ−ヘキサン混合溶媒を展開溶媒として用いる分離を繰り返し、酢酸エチル／ｎ−ヘキサン分画溶液から溶媒を除去し、酢酸エチル／ｎ−ヘキサン溶出物を得る工程；
（４）前記工程（３）で得た溶出物を、イオン交換樹脂によるカラムクロマトグラフィーで、移動相をメタノール／水混合溶媒で分離し、メタノール／水溶出物を得る工程；
（５）前記工程（４）で得た溶出物を、移動相が酢酸エチル／ｎ−ヘキサン混合溶媒である順相系ＨＰＬＣで分画し、分取したフラクションから溶媒を除去し溶出物を得る工程；
（６）前記工程（５）で得た溶出物を、移動相がメタノールである逆相系ＨＰＬＣで分画し、溶出物を得る工程；
（７）前記工程（６）で得た溶出物を、移動相がイソプロパノール／メタノール混合溶媒である逆相系ＨＰＬＣで分画し、溶出物を得る工程；
（８）前記工程（７）で得た溶出物を、移動相が酢酸エチル／ｎ−ヘキサン混合溶媒である順相系ＨＰＬＣで分画し、分取したフラクションから溶媒を除去する工程。
〔７〕前記〔４〕に記載の工程（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）若しくは（７）で得られる抽出物及び溶出物を含むゴキブリ誘引剤。
〔８〕前記〔４〕に記載の工程（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）若しくは（７）で得られる抽出物及び溶出物を含むゴキブリ駆除剤。

【発明の効果】

【0011】

本発明によれば、優れたゴキブリ集合誘引効果を有するゴキブリ集合誘引物質及びその塩を得ることができ、該ゴキブリ集合誘引物質を使用して、高いゴキブリ誘引効果を有するゴキブリ誘引剤及びゴキブリ駆除剤を提供することができる。

【図面の簡単な説明】

【0012】

【図1】本発明のゴキブリ集合誘引活性物質のＧＣ−ＦＩ^＋−ＭＳ測定によるマススペクトルである。

【図2】ゴキブリ集合誘引活性を確認する生物試験に用いるリニアトラックオルファクトメーター（線形通路付き嗅覚計）の概略図である。

【図3】本発明の全精製工程のフローチャート及び得られた画分のゴキブリ集合誘引活性についての比較試験の結果である。図中のボックスの上段が、画分名、中段が粗抽出物に対する重量比（％）、下段が粗抽出物に対する相対力価（％）を表す。

【図4】粗抽出物とＣ_１３Ｈ_１６Ｏ_３の分子式をもつ集合誘引物質に対するゴキブリ集合誘引活性試験の結果である。縦軸は、余剰比係数（ＥＰＩ）を表し、横軸は、その画分を得るために用いた糞の重量を表すDose値である。

【図5】風洞試験の装置の概略図である。

【図6】風洞試験のスタート地点の容器である。

【図7】風洞試験のスタート地点の容器の断面図である。

【発明を実施するための形態】

【0013】

本発明において「ゴキブリ」とは、分類学上の昆虫網ゴキブリ目に属する種類のうち、シロアリを除く昆虫を意味し、例えば、チャバネゴキブリ（Blattella germanica）、ワモンゴキブリ（Periplaneta americana）、クロゴキブリ（Periplaneta fuliginosa）、ヤマトゴキブリ（Periplaneta japonica）等が含まれるが、これらには限定されない。

【0014】

本発明において、「ゴキブリ集合誘引」とは、ゴキブリの成虫／幼虫又はオス／メスの区別に関わらず同種個体を寄り集まらせることを意味する。本発明において、「同種個体」とは、前記の「ゴキブリ」を意味する。本発明において、「ゴキブリ集合誘引物質」とは、ゴキブリ集合誘引活性を有する物質を意味し、以後「ゴキブリ集合誘引化合物」又は「ゴキブリ集合フェロモン」ともいう。

【0015】

本発明は、Ｃ_１３Ｈ_１６Ｏ_３の分子式（分子量２２０）であるゴキブリ集合誘引活性物質及びその塩に関する。塩としては、特に限定されないが、酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩、アミノ酸付加塩等が挙げられる。酸付加塩としては、特に限定されず、例えば、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩等の有機酸塩が挙げられ、金属塩としては、特に限定されず、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、亜鉛塩等が挙げられ、有機アミン付加塩としては、特に限定されず、例えば、トリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、エタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、プロカイン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩、モルホリン塩、ピペリジン塩等の付加塩が挙げられ、薬理学的に許容されるアミノ酸付加塩としては、特に限定されず、例えば、リジン塩、グリシン塩、フェニルアラニン塩等の付加塩等が挙げられる。

【0016】

前記ゴキブリ集合誘引活性物質は、図１に示したマススペクトルを有し、Ｃ_１３Ｈ_１６Ｏ_３の分子式であり、分子量は２２０である。また、前記ゴキブリ集合誘引活性物質は、ＵＶ吸収スペクトルにおいて２５８ｎｍ付近及び３１８ｎｍ付近に吸収極大をもつ。前記ゴキブリ集合誘引活性物質は、後記する精製方法によりワモンゴキブリの虫体及び／又は糞から得られる。

【0017】

前記ゴキブリ集合誘引活性物質を、ワモンゴキブリの虫体及び／又は糞を原料とする前記ゴキブリ集合誘引活性物質の精製方法は、（Ａ）有機溶媒を用いた抽出工程、及び（Ｂ）カラムクロマトグラフィーを用いた分離精製工程を含む。

【0018】

前記工程（Ａ）で用いる有機溶媒は、極性有機溶媒及び無極性有機溶媒のいずれも用いることができる。前記極性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、アミルアルコール、ヘキサノール、ヘプタノール、オクタノール等のアルコール類；メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、アセトン、アセチルアセトン、又はシクロヘキサノン等のケトン類；アセトニトリル、プロピオニトリル、ベンゾニトリル等のニトリル類；ギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸等の有機酸等が挙げられる。前記無極性有機溶媒としては、例えば、ｎ−ペンタン、ｎ−ヘキサン、ｎ−ヘプタン、ｎ−オクタン、ｎ−ノナン、ｎ−デカン、２−メチルヘキサン、３−メチルヘキサン、２，２，４−トリメチルペンタン、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロヘプタン等の飽和炭化水素類；クロロメタン、ジクロロメタン、トリクロロメタン、四塩化炭素、クロロエタン、ジクロロエタン、トリクロロエタン等のハロゲン化アルキル類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジ−ｎ−ブチルエーテル、ｔ−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン、アニソール又はベラトロール等のエーテル類；酢酸メチル、酢酸エチル、プロピオン酸エチル、安息香酸エチル又はフタル酸ジメチル等のエステル類；γ−ブチロラクトン等のラクトン類等が挙げられる。これらを単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。２種以上を組み合わせるときの混合比率は特に限定されず、組み合わせる溶媒の種類、又は抽出する化合物の種類により適宜選択される。本発明において、アルコール類、飽和炭化水素類及び／又はハロゲン化アルキル類が好ましい。

【0019】

前記有機溶媒のうち、ｎ−ヘキサン、ジクロロメタン及びメタノール／ジクロロメタン混合溶媒を用いることが好ましい。該メタノール／ジクロロメタン混合溶媒の混合比率は任意の値とすることができるが、好ましくは１／９９〜５／９５（ｖ／ｖ）である。

【0020】

前記工程（Ａ）は、好適には、以下の（１）及び（２）の工程を含む：
（１）ワモンゴキブリの虫体及び／又は糞をｎ−ヘキサンで洗浄した後、メタノール／ジクロロメタン混合溶媒で抽出し、溶媒を除去して抽出物を得る工程；
（２）前記工程（１）で得た抽出物をジクロロメタンに溶解させ、続いて炭酸ナトリウム水溶液を加えて液−液分配法により得られたジクロロメタン層を分離して、溶媒を除去し、ジクロロメタン抽出物を得る工程。

【0021】

前記工程（１）において、ｎ−ヘキサンによる洗浄方法、及びメタノール／ジクロロメタン溶液による抽出方法は、特に限定されないが、固液抽出により行うことが好ましい。固液抽出は、常法に従って行うことができ、例えば、固体の供試サンプル（虫体及び／又は糞）に、溶媒（ｎ−ヘキサン又はメタノール／ジクロロメタン溶液）を加えた後、吸引濾過又は自然流下による濾過により固体サンプルと溶媒を分離させることで行うことができる。また、メタノール／ジクロロメタン）抽出溶液の溶媒の除去は、例えば、ロータリーエバポレータを用いた減圧留去により行うことができる。

【0022】

前記工程（２）において、工程（１）で得られた抽出物をジクロロメタンに溶解させた溶液に加える１Ｎ炭酸ナトリウム水溶液の量は、特に限定されないが、通常、前記ジクロロメタン溶液と１Ｎ炭酸ナトリウム水溶液との比率が、１／１（ｖ／ｖ）となるように加える。１Ｎ炭酸ナトリウム水溶液を加えた後は、常法に従い液−液分配を行うことができる。常法に従い、ジクロロメタン層と、炭酸ナトリウム水溶液層を分離し、ジクロロメタン層の溶媒を除去し抽出物を得る。ジクロロメタン層の溶媒の除去方法は特に限定されず、例えば、ロータリーエバポレータを用いた減圧留去により行うことができる。

【0023】

前記工程（Ｂ）は、順相系シリカゲルクロマトグラフィー、逆相系シリカゲルクロマトグラフィー及びイオン交換樹脂カラムクロマトグラフィーによる精製工程を組み合わせていてよい。

【0024】

前記工程（Ｂ）で用いる溶媒は、プロトン性溶媒、非プロトン性溶媒のいずれも用いることができる。前記プロトン性溶媒としては、水；メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、アミルアルコール、ヘキサノール、ヘプタノール、オクタノール等のアルコール類；ギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸等の有機酸等が挙げられる。前記非プロトン性溶媒としては、例えば、ｎ−ペンタン、ｎ−ヘキサン、ｎ−ヘプタン、ｎ−オクタン、ｎ−ノナン、ｎ−デカン、２−メチルヘキサン、３−メチルヘキサン、２，２，４−トリメチルペンタン、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロヘプタン等の飽和炭化水素類；クロロメタン、ジクロロメタン、トリクロロメタン、四塩化炭素、クロロエタン、ジクロロエタン、トリクロロエタン等のハロゲン化アルキル類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジ−ｎ−ブチルエーテル、ｔ−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン、アニソール又はベラトロール等のエーテル類；メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、アセトン、アセチルアセトン、又はシクロヘキサンノン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル、プロピオン酸エチル、安息香酸エチル又はフタル酸ジメチル等のエステル類；アセトニトリル、プロピオニトリル、ベンゾニトリル等のニトリル類；γ−ブチロラクトン等のラクトン類等を挙げることができる。これらを単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。２種以上を組み合わせるときの混合比率は特に限定されず、組み合わせる溶媒の種類、又は抽出する化合物の種類により適宜選択される。本発明においては、水、アルコール類、飽和炭化水素、エステル類、及び／又はニトリル類が好ましい。

【0025】

本発明の好ましい態様において、工程（Ｂ）は以下の（３）〜（８）の工程を含む：
（３）前記工程（２）で得た抽出物を、順相系シリカゲルカラムクロマトグラフィーで、ジクロロメタン／ｎ−ヘキサン混合溶媒、続いて酢酸エチル／ｎ−ヘキサン混合溶媒を展開溶媒として用いる分離を繰り返し、酢酸エチル／ｎ−ヘキサン分画溶液から溶媒を除去し、酢酸エチル／ｎ−ヘキサン溶出物を得る工程；
（４）前記工程（３）で得た溶出物を、イオン交換樹脂によるカラムクロマトグラフィーで、移動相をメタノール／水混合溶媒で分離し、メタノール／水溶出物を得る工程；
（５）前記工程（４）で得た溶出物を、移動相が酢酸エチル／ｎ−ヘキサン混合溶媒である順相系ＨＰＬＣで分画し、分取したフラクションから溶媒を除去し溶出物を得る工程；
（６）前記工程（５）で得た溶出物を、移動相がメタノールである逆相系ＨＰＬＣで分画し、溶出物を得る工程；
（７）前記工程（６）で得た溶出物を、移動相がイソプロパノール／メタノール混合溶媒である逆相系ＨＰＬＣで分画し、溶出物を得る工程；
（８）前記工程（７）で得た溶出物を、移動相が酢酸エチル／ｎ−ヘキサン混合溶媒である順相系ＨＰＬＣで分画し、分取したフラクションから溶媒を除去する工程。

【0026】

前記工程（３）〜（８）において、各工程で得られた各分画溶液は、後記するリニアトラックオルファクトメーターを用いた生物試験に供し、ゴキブリ集合誘引活性の高い画分を選択して、次の工程／又は操作に用いる。

【0027】

前記工程（３）の順相系シリカゲルクロマトグラフィーは、好ましくはシリカゲルを充填したオープンカラムクロマトグラフィーである。シリカゲルを充填したオープンカラムによる抽出物の分画は、常法に従って行うことができる。例えば、抽出物を、カラムに充填したシリカゲルの上に載せ、減圧下で溶媒を流すことで行うことができる。また、得られた抽出溶液から、溶媒を除去する方法は特に限定されず、例えば、ロータリーエバポレータを用いた減圧留去により行うことができる。

【0028】

前記工程（３）で用いるジクロロメタン／ｎ−ヘキサン混合溶媒の混合比率は、任意の値とすることができるが、好ましくは５／９５〜４０／６０（ｖ／ｖ）、精製効率を高めるために、より好ましくは５／９５〜２０／８０（ｖ／ｖ）、さらに好ましくは８／９２〜１５／８５（ｖ／ｖ）である。また、酢酸エチル／ｎ−ヘキサン混合溶媒の混合比率は、任意の値とすることができるが、好ましくは０．５／９９．５〜１５／８５（ｖ／ｖ）、精製効率を高めるために、より好ましくは０．５／９９．５〜１０／９０（ｖ／ｖ）である。

【0029】

前記工程（４）のイオン交換樹脂を充填したオープンカラムによる溶出物の分画は、常法に従って行うことができる。例えば、乾固した溶出物を、メタノールなどの溶媒に再溶解させ、イオン交換樹脂とともに懸濁したままカラムにのせ、順次溶媒を流すことで行うことができる。得られた溶出溶液の溶媒除去方法又は濃縮方法は、特に限定されず、例えば、ロータリーエバポレータを用いた減圧留去又は減圧濃縮により行うことができる。イオン交換樹脂は、好ましくはポーラスポリマービーズ（例えばＣＨＰ２０Ｐ、三菱化学株式会社製）である。

【0030】

前記工程（４）において、メタノール／水の混合比率は、任意の値とすることができるが、好ましくは１００／０〜７０／３０（ｖ／ｖ）、精製効率を高めるために、より好ましくは１００／０〜８０／２０（ｖ／ｖ）である。

【0031】

前記工程（４）の好ましい態様では、前記工程（３）で得た溶出物を、イオン交換樹脂を充填したオープンカラムで、移動相をメタノール／水（８５／１５（ｖ／ｖ））、続いてメタノール／水（９５／５（ｖ／ｖ））として分離する。

【0032】

前記工程（５）において、酢酸エチル／ｎ−ヘキサンの混合比率は、任意の値とすることができるが、好ましくは１／９９〜１０／９０（ｖ／ｖ）であり、精製効率を高めるために、より好ましくは１／９９〜５／９５（ｖ／ｖ）である。

【0033】

前記工程（５）において、順相系ＨＰＬＣによる精製は、例えば、以下の方法により行うことができる。順相カラムを装着させたＨＰＬＣを用い、移動相に酢酸エチル／ｎ−ヘキサン混合溶液を使用し、前記工程（４）で得た溶出物を、前記順相カラムを通過させることにより行うことができる。前記順相カラムは、例えば、シリカゲルカラム（COSMOSIL 5SL-II、ナカライテスク株式会社製、φ４．６×１５０ｍｍ）を用いることができる。詳細な精製条件は、実施例に記載した。

【0034】

前記工程（６）において、移動相は、メタノール又はアセトニトリルを用いることができ、メタノール／アセトニトリルの混合溶媒を用いることもできる。混合比率は特に限定されず、任意の値とすることができるが、好ましくは１００％メタノールである。

【0035】

前記工程（６）において、逆相系ＨＰＬＣによる精製は、例えば、以下の方法により行うことができる。逆相カラムを装着させたＨＰＬＣを用い、移動相に１００％メタノールを使用し、前記工程（５）で分取した溶出溶液を、前記逆相カラムを通過させることにより行うことができる。前記逆相カラムは、例えば、ＯＤＳカラム（COSMOSIL 5AR-II、ナカライテスク株式会社製、φ４．６×１５０ｍｍ）を用いることができる。詳細な精製条件は、実施例に記載した。

【0036】

前記工程（７）において、イソプロパノール／メタノールの混合比率は、任意の値とすることができるが、好ましくは２０／８０〜８０／２０（ｖ／ｖ）、精製効率を高めるために、より好ましくは３５／６５〜６５／３５（ｖ／ｖ）である。

【0037】

前記工程（７）において、ＨＰＬＣによる精製は、例えば、以下の方法により行うことができる。逆相カラムを装着させたＨＰＬＣを用い、移動相にイソプロパノール／メタノール（５０／５０（ｖ／ｖ））溶液を使用し、前記工程（６）で得た溶出物を、前記逆相カラムを通過させることにより行うことができる。前記逆相カラムは、例えば、COSMOSIL πNAPカラム（ナカライテスク株式会社製、φ４．６×１５０ｍｍ）を用いることができる。詳細な精製条件は、実施例に記載した。

【0038】

前記工程（８）において酢酸エチル／ｎ−ヘキサンの混合比率は、任意の値とすることができるが、好ましくは０．５／９９．５〜１０／９０（ｖ／ｖ）であり、精製効率を高めるために、より好ましくは０．５／９９．５〜５／９５（ｖ／ｖ）である。

【0039】

前記工程（８）において、ＨＰＬＣによる精製は、例えば、以下の方法により行うことができる。順相カラムを装着させたＨＰＬＣを用い、移動相に酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（１／９９（ｖ／ｖ））溶液を使用し、前記工程（７）で得た溶出物を、前記順相カラムを通過させることにより行うことができる。前記順相カラムは、例えば、シリカゲルカラム（COSMOSIL 5SL-II、ナカライテスク株式会社製、φ４．６×１５０ｍｍ）を用いることができる。詳細な精製条件は、実施例に記載した。また、溶媒の除去方法は、特に限定されず、例えば、ロータリーエバポレータを用いた減圧留去により行うことができる。

【0040】

本発明の精製法により得られる化合物は、ゴキブリ集合誘引活性を有する。ゴキブリ集合誘引活性は、リニアトラックオルファクトメーター（図２）を用いた生物試験により確認することができる。

【0041】

オルファクトメーターとは、一般的に、昆虫の揮発性成分への反応を観察するために用いられる生物検定装置をいい、装置分岐部で誘引成分を含む気流に被験昆虫が誘引されるようにした装置である（日林誌、89(2)2007『揮発性成分のニホンキバチ成虫に対する誘引活性試験を行うオルファクトメーターの作成』p135-137、農業環境研究叢書 第１７号『農業生態系の保全に向けた生物機能の活用』p108-134）。

【0042】

生物試験を具体的に説明する。図２の中央の筒の上部の１から吸引すると、左右の筒の上部（２ａ及び２ｂ）から空気が入り、横筒を通ってそれぞれ中央の筒上部へと流れる気流が発生する仕組みとなっている。左筒がコントロール側、右筒がサンプル側である。図２の筒に吊下げた金属製のディスクである３にサンプルを塗布し、中央の筒下部の４に供試虫（７〜１０日齢の幼虫）を入れ、中央の筒上部からポンプでゆっくり吸引する（２．５Ｌ／分）。２５±１℃、相対湿度４０〜６０％、全暗の条件で、供試虫を５分間自由に行動させ、その後コントロール側及びサンプル側に移動した供試虫を数える。その後、下記式から余剰比係数（ＥＰＩ値）を算出する。

【数1】

（式中、ＮＳはサンプル側に移動した供試虫の数、ＮＣはコントロール側に移動した供試虫の数である。）

【0043】

本発明の別の態様は、分子式がＣ_１３Ｈ_１６Ｏ_３（分子量２２０）であり、図１に示すマススペクトルを有するゴキブリ集合誘引物質を含むゴキブリ駆除剤に関する。

【0044】

本発明のゴキブリ駆除剤における前記ゴキブリ集合誘引物質の配合量は、ゴキブリ集合誘引効果が発揮されれば特に限定されず、剤形や適用方法、使用場所に応じて適宜選択することができる。通常２．０×１０^−７ｐｐｍ〜１ｐｐｍ（２．０×１０^−１１〜１．０×１０^−４重量％）であり、好ましくは４．０×１０^−６ｐｐｍ〜０．５ｐｐｍ（４．０×１０^−１０〜５．０×１０^−５重量％）である。

【0045】

本発明のさらに別の態様は、前記工程（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）若しくは（７）で得られた抽出物又は溶出物を含むゴキブリ駆除剤に関する。前記ゴキブリ集合誘引物質のみならず、前記工程（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）若しくは（７）で得られた抽出物又は溶出物（以下、工程（１）で得られた抽出物を粗抽出物ともいう。）も、ゴキブリ集合誘引物質として優れたゴキブリ集合誘引効果を有する。これらの抽出物又は溶出物の内、高いゴキブリ集合誘引効果を示すこと、及び操作が簡易であることから、工程（１）で得られた抽出物を用いることが好ましい。

【0046】

本発明のゴキブリ駆除剤における前記工程（１）で得られた抽出物の配合量は、ゴキブリ集合誘引効果が発揮されれば特に限定されず、剤形や適用方法、使用場所に応じて適宜選択することができる。通常３ｐｐｍ〜２０００００ｐｐｍ（３．０×１０^−４〜２０重量％）であり、好ましくは５０ｐｐｍ〜２００００ｐｐｍ（５．０×１０^−３〜２重量％）である。

【0047】

本発明の好ましい態様では、例えば、本発明のゴキブリ集合誘引物質を、殺虫剤を含む食毒剤に混入したり、粘着式捕虫器に使用したりしてもよく、粉剤、粒剤、エアゾール剤、液剤、シートなどの各種ゴキブリ駆除剤に適宜適用して駆除効果の増強を図ることができる。

【0048】

前記殺虫剤としては、特に限定されないが、例えば、ピレトリン、アレスリン、フラメトリン、レスメトリン、フェノトリン、ペルメトリン、フタルトリン、イミプロトリン、シフェノトリン、ペルメトリン、フェンバレレート、エトフェンプロクス、プラレトリン、フェンフルトリン、トランスフルトリン等のピレスロイド剤；フェニトロチオン、トリクロルホン、ジクロルボス、ピリダフェンチオン、ダイナジノン、フェンチオン等の有機リン剤；カルバリル、メチルカルバミン酸−２−（１−メチルプロピル）フェニル（ＢＰＭＣ）、プロポキサー、セビン等のカーバメート剤；メトキサジアゾン等のオキサジアゾール系殺虫剤；テトラヒドロ−５，５−ジメチル−２（１Ｈ）−ピリミジノイン〔３−〔４−（トリフルオロメチル）フェニル〕−１−〔２−〔４−（トリフルオロメチル）フェニル〕エテニル〕−２−プロペニリデン〕ヒドラゾン等のヒドラゾン系殺虫剤；ヒドラメチルノン、ホウ酸、ホウ酸塩等が挙げられ、これらは、マイクロカプセル化又はサイクロデキストリンで包接化されてもよい。食毒剤を調製するために用いられる担体としては、ケイ酸、カオリン、タルク等の各種鉱物質粉末；木粉、とうもろこし粉、小麦粉、でんぷん等の各種植物質粉末；糖蜜、脱脂粉乳、魚粉等の成分；又は、アビオン等の賦形剤、固着剤等を挙げることができる。また、粘着式捕虫器に使用される基材としては、天然ゴム系、又は、ポリブテン、ポリイソブテンを主体とし、ロジン、パラフィンワックス等で粘着力を高めた合成ゴム系粘着物を例示できる。その他、必須ではないが、芳香剤、防臭剤、殺菌剤、安定剤、溶剤等の補助成分を適宣配合することによって、効力の優れた多目的組成物が得られる。

【0049】

こうして得られたゴキブリ駆除剤は、台所、倉庫、冷蔵庫の裏等、ゴキブリが排廻する場所に適用すれば、チャバネゴキブリ、ワモンゴキブリ等に対し高い駆除効果を奏するものである。本発明のゴキブリ駆除剤の形態は特に限定されず、液剤又は固剤とすることができる。

【0050】

前記液剤の調製において用いられる担体としては、特に限定されないが、例えば、水；メタノール、エタノール等のアルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；テトラヒドロフラン、ジオキサン等のエーテル類；ヘキサン、ケロシン、パラフィン、石油ベンジン等の脂肪族炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；酢酸エチル等のエステル類；ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類等を挙げることができる。前記液剤は、さらに、通常の塗膜形成剤、乳化剤、分散剤、展着剤、湿潤剤、安定剤、噴射剤等の添加剤を配合することができ、塗布形態、接着剤形態、乳剤、分散剤、懸濁剤、ローション、ペースト、クリーム、噴霧剤、エアゾール等の形態で利用することができる。

【0051】

前記添加剤としては、例えばニトロセルロース、アセチルセルロース、アセチルブチリルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース等のセルロース誘導体；酢酸ビニル樹脂等のビニル系樹脂；アルキッド系樹脂、ユリア系樹脂、エポキシ系樹脂、ポリエステル系樹脂、ウレタン系樹脂、シリコン系樹脂、アクリル系樹脂、塩化ゴム、ポリビニルアルコール等の塗膜形成剤；石鹸類；ポリオキシエチレンオレイルエーテル等のポリオキシエチレン脂肪アルコールエーテル；ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル等のポリオキシエチレンアルキルアリールエーテル；ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、脂肪酸グリセリド、ソルビタン脂肪酸エステル、高級アルコールの硫酸エステル、ドデシルベンゼンスルホン酸ソーダ等のアルキルアリールスルホン酸塩等の界面活性剤；液化石油ガス、ジメチルエーテル、フルオロカーボン、液化炭酸ガス等の噴射剤；カゼイン、ゼラチン、アルギン酸等を挙げることができる。

【0052】

前記固剤の調製において用いられる担体としては、例えばケイ酸、カオリン、活性炭、ベントナイト、珪藻土、タルク、クレー、炭酸カルシウム、陶磁器粉等の鉱物質粉末；木粉、大豆粉、小麦粉、澱粉等の植物質粉末；又はシクロデキストリン等の包接化合物等を挙げることができる。さらに、該固剤の調製において、例えばトリシクロデカン、シクロドデカン、２，４，６−トリイソプロピル−１，３，５−トリオキサン、トリメチレンノルボルネン等の昇華性担体；又はパラジクロロベンゼン、ナフタレン、樟脳等の昇華性防虫剤等を用い、上記誘引活性物質を溶融混合または擂潰混合後に成型して昇華性固剤とすることもできる。

【0053】

また、本発明のゴキブリ集合誘引物質は、例えばポリビニルアルコールやカルボキシメチルセルロース等を用いたスプレードライ法；ゼラチン、ポリビニルアルコール、アルギン酸等を用いた液中硬化法；コアセルベーション法等に従いマイクロカプセル化した形態に調製することもでき、ベンジリデン−Ｄ−ソルビトール、カラギーナン等のゲル化剤を用いてゲルの形態に調製することもできる。さらに、本発明のゴキブリ集合誘引物質に犬猫忌避剤、鳥の忌避剤、蛇の忌避剤、殺虫・殺ダニ剤、効力増強剤、酸化防止剤、齧歯類動物駆除及び忌避剤、昆虫成長制御物質、摂餌物質、他の誘引活性成分、殺菌剤、防黴剤、防腐剤、着香料、着色料、誤食防止剤等を配合することもできる。

【0054】

本発明の別の態様は、分子式がＣ_１３Ｈ_１６Ｏ_３（分子量２２０）であり、図１に示すマススペクトルを有するゴキブリ集合誘引物質を含むゴキブリ誘引剤に関する。本発明のゴキブリ誘引剤に用いる前記分子量２２０の化合物は、ワモンゴキブリの虫体又は糞から精製して得ることもでき、化学合成により得ることもできる。

【0055】

本発明のさらに別の態様は、前記精製工程（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）若しくは（７）で得られた抽出物又は溶出物を含むゴキブリ誘引剤に関する。

【0056】

本発明のゴキブリ誘引剤の剤形、添加剤、担体等は、前記ゴキブリ駆除剤と同様であって良い。

【実施例】

【0057】

次に、実験例、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により何ら限定されるものではなく、多くの変形が本発明の技術的思想内で当分野において通常の知識を有する者により可能である。

【0058】

本実施例において、ゴキブリ集合誘引活性は、上記したリニアトラックオルファクトメーター（線形通路付き嗅覚計）（図２）を用いた生物試験により行った。

【0059】

各精製工程におけるそれぞれの画分の生物試験の結果を図３に「相対力価（％）」として示した。「相対力価（％）」は、それぞれの画分の用量（単位：ミリグラム糞当量ＭＧＦＥ）と生物試験の結果から得た余剰比係数（ＥＰＩ）の用量・反応関係のプロビット分析から求められる数値で、基準試料の力価を１００％としたときの当該画分試料の力価（％）である。相対力価は基準試料の中央有効用量（ＥＤ５０）値を当該試料のＥＤ５０値で割った数値に相当する。図３は基準試料を１％ ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２画分としたときのそれぞれの画分の相対力価（％）を示す。

【0060】

〔ＧＣ−ＥＩ^＋−ＭＳ測定(EI^＋:Electron Ionization、positive mode)〕
測定条件：
ＧＣ：7890A（Agilent社製）
・カラム：HP-5MS、30ｍ×0.25ｍｍID、膜厚0.25μｍ
・オーブン：60℃（2分）→10℃／分→290℃（5分）
・注入口温度：２３０℃
・Heガス流量：1ｍＬ／分（定流量モード）
・注入量：１μＬ
・注入法：スプリットレスモード (パージ:1分)
ＭＳ:JMS-T100GCV（日本電子製）
・イオン源：EI/FI/FD共用イオン
・イオン化法：EI⁺ (70eV, 300μA)
・イオン源温度：２３０℃
・スペクトル記録間隔：０．４秒 （待ち時間；0.003秒）
・測定質量範囲：m/z 35-500
・質量校正：PFK
・精密質量解析用キャリブラント：ペンタメチルシクロトリシロキサン m/z207.0329
〔ＧＣ−ＦＩ^＋−ＭＳ測定(FI^＋:Field Ionization、positive mode)〕
測定条件：
ＧＣ：7890A（Agilent社製）
・カラム：HP-5MS、30ｍ×0.25ｍｍID、膜厚0.25μｍ
・オーブン：60℃（2分）→10℃／分→290℃（5分）
・注入口温度：２３０℃
・Heガス流量：1ｍＬ／分（定流量モード）
・注入量：２μＬ
・注入法：スプリットレスモード (パージ:1分)
ＭＳ:JMS-T100GCV（日本電子製）
・イオン源：EI/FI/FD共用イオン
・イオン化法：FI⁺ (0-40mA)
・イオン源温度：OFF
・カソード電圧：-10000V
・スペクトル記録間隔：０．４秒 （待ち時間；0.03秒）
・測定質量範囲：m/z 35-500
・質量校正：PFK
・精密質量解析用キャリブラント：オクタメチルシクロテトラシロキサン m/z281.05169

【0061】

〔実施例１〕
ゴキブリ集合誘引化合物（ゴキブリ集合フェロモン）の精製及び同定

【0062】

工程（１）
ワモンゴキブリの幼虫ないしは成虫を飼育している箱から糞を回収し、集合誘引物質の材料として−２０℃で冷凍保存した。試料１ｋｇを５Ｌのガラスカラムに詰め、１０Ｌの溶媒にて順次抽出を行なった。まず、減圧下、１００％ｎ−ヘキサンで試料を洗浄した後、メタノール／ジクロロメタン（１／９９（ｖ／ｖ））混合溶液で自然流下にて抽出した。最後に１００％メタノールで残りを抽出した。それぞれの画分のワモンゴキブリ若齢幼虫の集合誘引活性を、リニアトラックオルファクトメーターによる生物試験で確認したところ、メタノール／ジクロロメタン（１／９９（ｖ／ｖ））混合溶液画分に活性が集中した。以下これを粗抽出物という。

【0063】

工程（２）
粗抽出物を乾固して１００％ジクロロメタンに再溶解させた後、同量の１Ｎ炭酸ナトリウム水溶液を用いて常法により液々分配を行ない、ジクロロメタン画分と酸性画分を得た。生物試験を行なったところ、ジクロロメタン画分に活性が集中した。

【0064】

工程（３）
前記ジクロロメタン画分に対して、シリカゲルオープンカラム（Wakogel C-200、和光純薬工業株式会社）で段階溶出を行なった。試料に対して、溶質重量の３倍のシリカゲルと同量の焼成珪藻土（Celite 545、ナカライテスク株式会社）を加え懸濁した後、ロータリーエバポレータを用いて粉体になるまで試料を乾燥した。これを、カラムに詰めた溶質重量の１０倍のシリカゲルの上にのせ、減圧下、以下の３種の溶媒をそれぞれ溶質重量の約２００倍量用いて順次溶出した。得られたジクロロメタン／ｎ−ヘキサン（１０／９０（ｖ／ｖ））混合溶液、酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（５／９５（ｖ／ｖ））混合溶液、及び１００％酢酸エチル溶出画分を生物試験したところ、活性は酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（５／９５（ｖ／ｖ））混合溶液画分に集中した。

【0065】

この酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（５／９５（ｖ／ｖ））混合溶液画分について、再度、シリカゲルオープンカラムで精製した。担体量を溶質重量の３０倍量、溶媒量を６００倍量にして、ジクロロメタン／ｎ−ヘキサン（２０／８０（ｖ／ｖ））混合溶液、酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（１／９９（ｖ／ｖ））混合溶液、１００％酢酸エチルで段階溶出を行なったところ、酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（１／９９（ｖ／ｖ））混合溶液画分にのみ活性が認められた。

【0066】

工程（４）
酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（１／９９（ｖ／ｖ））混合溶液画分に対して、ポーラスポリマービーズ（ＣＨＰ２０Ｐ、三菱化学株式会社）のオープンカラムによる精製を行なった。試料を乾固した後、１００％メタノールに再溶解させ、溶質量の３倍量のポリマービーズとともに懸濁したままカラムにのせた。メタノール／水（８５／１５（ｖ／ｖ））、メタノール／水（９５／５（ｖ／ｖ））、さらに１００％メタノールによる段階溶出を行ない、溶出液を濃縮後、ジクロロメタンに転溶した。生物試験の結果、メタノール／水（９５／５（ｖ／ｖ））混合溶液画分に活性が集中した。

【0067】

工程（５）
活性化合物を含むメタノール／水（９５／５（ｖ／ｖ））混合溶液画分をさらにＨＰＬＣ（ＬＣ−１０ＡＴ、島津製作所）で精製した。まずシリカゲルカラム（ＣＯＳＭＯＳＩＬ ５ＳＬ−II、ナカライテスク株式会社、φ４．６×１５０ｍｍ）を用いて順相で精製を行なった。移動相溶媒に酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（２／９８（ｖ／ｖ））を使用し（１ｍＬ／分）、ＵＶ検出器（ＳＰＤ−１０ＭＡＶＰ、島津製作所）で２５４ｎｍの吸収をモニタした。０．５分ごとに分取した各画分の生理活性を調べたところ、６．５分から７分の画分に活性が集中した。

【0068】

工程（６）
次に、ＯＤＳカラム（ＣＯＳＭＯＳＩＬ ５ＡＲ−II、ナカライテスク株式会社、φ４．６×１５０ｍｍ）を用いて逆相で精製を行なった。移動相には１００％メタノールを使用し、０．２ｍＬ／分で緩やかに展開した。同様に分画し、生物試験を行なったところ、活性は１０分から１１分の画分に集中した。

【0069】

工程（７）
さらにＣＯＳＭＯＳＩＬ πＮＡＰカラム（φ４．６×１５０ｍｍ、ナカライテスク株式会社）による精製を行なった。πＮＡＰはシリガゲル担体をナフチル基で化学修飾した固定相である。移動相にはイソプロパノール／メタノール（５０／５０（ｖ／ｖ））を用いた（０．２ｍＬ／分）。ＵＶ吸収ピークを参照しながら分画を行ない、得られた画分を生物試験したところ、１２分から１３分の画分にのみ活性があった。

【0070】

工程（８）
この画分について、酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（１／９９（ｖ／ｖ））でシリカゲルカラムによる順相ＨＰＬＣで再度精製したところ、９．５分から１０．５分の溶出時間にＵＶ吸収ピークが見られた。このピークを分取して生物試験を行なったところ、この画分にのみ活性が認められた。

【0071】

前記工程（８）で得られた分取画分をＧＣ（Ｎ６８９０、アジレント・テクノロジー株式会社、ＨＰ−５カラム）で分析をしたところ、単一のピークを与えた。極性カラムであるＨＰ−ＦＦＡＰカラム（アジレント・テクノロジー株式会社）で分析した場合でも、単一のピークであった。なお同じ分析条件で行なった分取ＧＣと分取した画分の生物試験から、誘引活性を有する化合物のピークは、今回の精製で得られた単一ピークと完全に一致することを確認した。

【0072】

この化合物のＧＣ−ＥＩ^＋−ＭＳ測定から、主要なフラグメントとして、ｍ／ｚ＝５９、１６２、２２０を観測した。また、分子イオンを選択的に検出するＧＣ−ＦＩ^＋−ＭＳ測定により、２２０のフラグメントのみが検出されたことから、分子量を示すＭ^＋は２２０と判明し、さらにその精密質量解析から、本化合物の分子式はＣ_１３Ｈ_１６Ｏ_３であることを確認した。ＦＩ^＋−ＭＳ測定マススペクトルの結果を図１に示す。

【0073】

〔試験例１〕
上記の実施例１の工程（１）、（４）及び（８）で得た画分について、後記する方法で試料を調製し、風洞試験に供した。風洞は５０×５０×１５０ｃｍの容積で、図５のように５ａｂに整流部器、５ｂに圧力緩衝器を持ち、６の位置から室外へ排気する。実験は、風洞の床面から５ｃｍ高いステージ（４０×１３０ｃｍ）の上で行なった。スタート地点は風下側のステージ端から２０ｃｍ上流の図５の７の位置とし、さらに９０ｃｍ離れた８に試料を塗布した濾紙を設置しゴール地点とした。供試虫である８〜９齢のワモンゴキブリ幼虫を一匹ずつ図６の容器の筒９に入れ、図５の７に置いた。供試虫は、図６の容器の上部の穴１０から下段に移り、下段の開放部分１１から自発的に外に出ることができる。脱出時から３分間の行動を観察し、ゴールに到達した回数を計測した。ゴール地点８には、図５に示したように、試料を染み込ませた濾紙（試験区）と溶媒のみを塗布した濾紙（対照区）を設置した。供試虫の全身が濾紙に上がった場合、「到達」と判断した。照明は天井から垂らした電灯を用い、風洞の上に置いた乳白色のアクリル板にて光が均一になるようにした。照度は風洞内で７±０．５ｌｘであった。試験は、風速２５ｃｍ／ｓ（ゴール地点）、２５±２℃の条件で実施した。風洞試験の結果を表１に示す。
〔比較例１〕試験区と対照区ともに溶媒に浸漬後、その溶媒を乾燥させた濾紙（５０×１００mm）を用いた。溶媒にはジクロロメタン１ｍＬを用い、送風ドライヤーで乾燥後、５分間以上静置した。
〔比較例２〕比較例１と同様に行なった。
〔比較例３〕試料に揮散調節剤であるポリエチレングリコール#３００(PEG)が含まれる場合、ポリエチレングリコールの効果を検証する必要がある。そのため、１μＬのポリエチレングリコールを１ｍＬのジクロロメタンに添加し、その溶液に濾紙を浸漬した。乾燥は、比較例１と同様の方法で行なった。この濾紙を対照区と試験区に設置し誘引性がないことを確認した。
〔実施例２〕工程（１）で得た抽出物をジクロロメタンに再溶解させ、１ＭＧＦＥ／ｍＬに調製した。１ｍＬの調製液を濾紙に吸収させ、送風ドライヤーで乾燥した。乾燥時間は２分未満であった。乾燥後、５分間以上静置したものを試験区濾紙として試験に用いた。対照区濾紙は、１ｍＬのジクロロメタンを吸収させた後、試験区濾紙と同様に乾燥させたものであった。
〔実施例３〕工程（１）で得た抽出物をジクロロメタンに再溶解させ、１０ＭＧＦＥ／ｍＬに調製した以外は、実施例２と同様に行なった。
〔実施例４〕工程（１）で得た抽出物をジクロロメタンに再溶解させ、１００ＭＧＦＥ／ｍＬに調製した以外は、実施例２と同様に行なった。
〔実施例５〕工程（４）で得た溶出物をジクロロメタンに再溶解させ、１ＭＧＦＥ／ｍＬに調製した以外は、実施例２と同様に行なった。
〔実施例６〕工程（４）で得た溶出物をジクロロメタンに開放部分１１溶解させ、１０ＭＧＦＥ／ｍＬに調製した以外は、実施例２と同様に行なった。
〔実施例７〕工程（４）で得た溶出物をジクロロメタンに再溶解させ、１００ＭＧＦＥ／ｍＬに調製した以外は、実施例２と同様に行なった。
〔実施例８〕工程（８）で得た集合誘引物質をジクロロメタンに再溶解させ、１ＭＧＦＥ／ｍＬに調製した。その調製液に揮散調節剤として１μＬ／ｍＬになるようにポリエチレングリコール#３００(PEG)を添加した。この揮散剤入りの調製液１ｍＬを濾紙に吸収させ、送風ドライヤーで乾燥させた。乾燥時間は２分未満であった。乾燥後、５分間以上静置したものを試験に用いた。対照区には、同量のポリエチレングリコールを添加したジクロロメタンを吸収させた後、試験区と同様に乾燥させた濾紙を用いた。
〔実施例９〕工程（８）で得た集合誘引物質をジクロロメタンに再溶解させ、１０ＭＧＦＥ／ｍＬに調製した以外は、実施例８と同様に行なった。
〔実施例１０〕工程（８）で得た集合誘引物質をジクロロメタンに再溶解させ、１００ＭＧＦＥ／ｍＬに調製した以外は、実施例８と同様に行なった。
なお、「ＭＧＦＥ」は、上記の各検体（抽出物・溶出物・集合誘引物質）を得るために用いたゴキブリの糞の量を示し、例えば上記「１００ＭＧＦＥ／ｍＬ」は、ジクロロメタン溶液１ｍＬ中に、出発物質のゴキブリの糞１００ｍｇから得た各検体が溶解していることを表している。

【0074】

【表1】

【0075】

上記表１から、実施例２〜１０は、比較例１、２及び３よりも多くの供試虫を誘引し、本発明のゴキブリ集合誘引物質が有効であることが示された。

【0076】

次に、本発明のゴキブリ集合誘引物質を用いた各種製剤化の具体例を示す。
〔実施例１１〕（食毒剤）
ヒドラメチルノン５部、ホウ酸１５部、脱脂粉乳１０部、ゴマ油５部、グリセリン１５部、でんぷん２５部、米ぬか２０部、精製水５部からなる混合物に、工程（８）で得た集合誘引物質０．１ｐｐｍになるように加えてよく混練したものを約１０ｇずつ搾り出して成形し、食毒剤を調製した。

【0077】

〔実施例１２〕（捕獲器）
米ぬか３０部、魚粉１５部及びでんぷん糊剤５０部を精製水５部で練ったものに、工程（1）で得た粗抽出物が１つの錠剤あたり１００ｐｐｍとなるよう添加含有させたものを直径１５ｍｍで２ｍｍ厚の円盤状に打ち抜き、錠剤（重さ１ｇ）を作製した。
次にポリブテン（分子量９００）９５部、ポリイソブチレン（分子量１２０万）５部からなる粘着組成物を調製し、この組成物を８×１５ｃｍの広さ、厚さ１ｍｍのボール紙に厚さ０．５ｍｍに塗着して粘着板を得た。この粘着板の中央に、先に作製した錠剤を置き、ゴキブリ誘引捕獲器を得た。

【産業上の利用可能性】

【0078】

本発明により得られるゴキブリ集合誘引物質又はその又はその抽出物又はその抽出物は、優れたゴキブリ集合誘引効果を有し、該ゴキブリ集合誘引物質又はその粗抽出物を用いることにより、ゴキブリ誘引剤又はゴキブリ駆除剤を提供することができる。

【符号の説明】

【0079】

１ 吸引口
２ａ 吸入口（コントロール側）
２ｂ 吸入口（サンプル側）
３ サンプルを塗布した金属製ディスク
４ 供試虫設置場所
５ａ 整流器
５ｂ 圧力緩衝器
６ 排気口
７ 風洞試験スタート地点
８ 風洞試験ゴール地点
９ 筒
１０ 穴
１１ 開放部分

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】